FR2880891A1

FR2880891A1 - Pyrazolo pyridines substituees, compositions les contenant, procede de fabrication et utilisation

Info

Publication number: FR2880891A1
Application number: FR0500555A
Authority: FR
Inventors: Baptiste Ronan; Michel Tabart; Frank Halley; Eric Bacque; Catherine Souaille; Antonio Ugolini; Fabrice Viviani
Original assignee: Aventis Pharma SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 2005-01-19
Filing date: 2005-01-19
Publication date: 2006-07-21
Anticipated expiration: 2025-01-19
Also published as: SV2006002384A; FR2880891B1; ES2351160T3; DOP2006000015A; CN101146534A

Abstract

Pyrazolo pyridines substitués, compositions les contenant, procédé de fabrication et utilisation. La présente invention concerne notamment la préparation de pyrazolo pyridines substituées, des compositions les contenant, leur procédé de préparation, et leur utilisation comme médicament, en particulier en tant qu'agents anticancéreux.

Description

PYRAZOLO PYRIDINES SUBSTITUEES, COMPOSITIONS LES CONTENANT, PROCEDE DE

FABRICATION ET UTILISATION

La présente invention concerne notamment de nouveaux composés chimiques, particulièrement de nouvelles pyrazolo pyridines substituées, les compositions les contenant, et leur utilisation comme médicaments.

Plus particulièrement, l'invention concerne de nouvelles pyrazolo pyridines spécifiques présentant une activité anticancéreuse, via la modulation de l'activité de protéines, en particulier des kinases.

A ce jour, la plupart des composés commerciaux utilisés en chimiothérapie posent des problèmes importants d'effets secondaires et de tolérance par les patients. Ces effets pourraient être limités dans la mesure où les médicaments utilisés agissent sélectivement sur les cellules cancéreuses, à l'exclusion des cellules saines. Une des solutions pour limiter les effets indésirables d'une chimiothérapie peut donc consister en l'utilisation de médicaments agissant sur des voies métaboliques ou des éléments constitutifs de ces voies, exprimés majoritairement dans les cellules cancéreuses, et qui ne seraient pas ou peu exprimés dans les cellules saines.

Les protéines kinases sont une famille d'enzyme qui catalysent la phosphorylation de groupes hydroxyles de résidus spécifiques de protéines tels que des résidus tyrosine, sérine ou thréonine. De telles phosphorylations peuvent largement modifier la fonction des protéines; ainsi, les protéines kinases jouent un rôle important dans la régulation d'une grande variété de processus cellulaires, incluant notamment le métabolisme, la prolifération cellulaire, la différentiation cellulaire, la migration cellulaire ou la survie cellulaire. Parmi les différentes fonctions cellulaires dans lesquelles l'activité d'une protéine kinase est impliquée, certains processus représentent des cibles attractives pour traiter les maladies cancéreuses ainsi que d'autres maladies.

Ainsi, un des objets de la présente invention est de proposer des compositions ayant une activité anticancéreuse, en agissant en particulier vis- à-vis cle kinases. Parmi les kinases pour lesquelles une modulation de l'activité est recherchée, FAK, KDR et Tie2 sont préférées.

Ces produits répondent à la formule (I) suivante: R6

A L, Ar

Formule (I) dans laquelle: 1) A et Ar sont indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par: 10 aryle, hétéroaryle, hétérocyclyle, aryle substitué, hétéroaryle substitué, hétérocyclyle substitué cycloalkyle, cycloalkyle substitué; 2) L est sélectionné dans le groupe constitué par: liaison, CO, NH, CO-NH, NH-CO, NH-SO, NH-SO2, SO2NH, SONH, NH-CH2, CH2-NH, CH2-CONH, NH-CO-CH2, NH-CH2-CO, CO-CH2-NH, NH-CO-NH, NH-CS-NH, NH- CO-O, O-CO-NH; 3) L'un de X et Y est choisi parmi N et NO, et l'autre de Y et X est C(R5) ; 4) R5 et R6 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par: halogène, R2, CN, O(R2), OC(0) (R2), OC(0)N(R2)(R3), OS(02) (R2), N(R2)(R3), N=C(R2)(R3), N(R2)C(0)(R3), N(R2)C(0)O(R3), N(R4)C(0) N(R2)(R3), N(R4)C(S)N(R2)(R3), N(R2)S(02)(R3), C(0)(R2), C(0)O(R2), C(0) N(R2)(R3), C(=N(R3))(R2), C(=N(OR3))(R2), S(R2), S(0)(R2), S(O2)(R2), S(02)O(R2), S(02)N(R2)(R3) ; dans lequel chaque R2, R3, R4 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par H, alkyle, alkylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocyclyle, alkyle substitué, alkylène substitué, alkynyle substitué, aryle substitué, hétéroaryle substitué, cycloalkyle substitué, hétérocyclyle substitué, alkylène, alkylène substitué, alkynyle substitué ; dans lequel, lorsque R2 et R3 sont simultanément présents sur l'un des R5 ou R6, ils peuvent être liés entre eux pour former un cycle.

Des produits de formule (I) préférés répondent à la définition suivante:

A L,

Ar N H2 1 N N R6YH Formule (I) dans laquelle: 1) A et Ar sont indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par: aryle, hétéroaryle, hétérocyclyle, aryle substitué, hétéroaryle substitué, hétérocyclyle substitué ; 2) L est sélectionné dans le groupe constitué par: liaison, NHCO, NHCONH, NH, NHSO2; 3) L'un de X et Y est choisi parmi N et NO, et l'autre de Y et X est C(R5) ; 4) R5 et R6 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par: halogène, R2, CN, O(R2), OC(0) (R2), OC(0)N(R2)(R3), OS(O2)(R2), N(R2)(R3), N=C(R2)(R3), N(R2)C(0)(R3), N(R2)C(0)O(R3), N(R4)C(0)N(R2)(R3), N(R4)C(S)N(R2)(R3), N(R2)S(02)(R3), C(0)(R2), C(0)O(R2), C(0)N(R2)(R3), C(=N(R3))(R2), C(=N(OR3))(R2), S(R2), S(0)(R2), S(02)(R2), S(02)O(R2), S(02)N(R2)(R3) ; dans lequel chaque R2, R3, R4 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par H, alkyle, alkylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocyclyle, alkyle substitué, alkylène substitué, alkynyle substitué, aryle substitué, hétéroaryle substitué, cycloalkyle substitué, hétérocyclyle substitué, alkylène, alkylène substitué, alkynyle substitué ; dans lequel, lorsque R2 et R3 sont sirnultanément présents sur l'un des R5 et R6, ils peuvent être liés entre eux pour former un cycle.

Dans les produits de formule (I), Ar- L-A est avantageusement: X4 X3 Xr X2 A dans lequel chaque X1, X2, X3 et X4 est indépendamment choisi parmi N et C-R11, avec R11 ayant la même définition que R5 défini précédemment. Des substituants R11 sélectionnés dans le groupe constitué par H, F, Cl, méthyle, NH2, OCF3, et CONH2 sont préférés.

Des produits dans lesquels X est C(R5) et Y est N sont préférés.

Des substituants R5 et R6 préférés sont indépendamment sélectionnés parmi H, halogène, OMe et méthyle.

R5 et R6 sont avantageusement choisis parmi H et F. R5 est préférentiellement H. Des substituants L-A préférés sont avantageusement choisis parmi NH-CONH-A et NH-SO2-A.

Une combinaison L-A particulièrement efficace est obtenue lorsque L-A est NHCONH-A.

Des produits conformes à l'invention ont de préférence un substituant A qui est sélectionné dans le groupe constitué par phényle, pyridyle, pyrimidyle, thiényle, furyle, pyrrolyle, oxazolyle, thiazolyle, isoxazolyle, isothiazolyle, pyrazolyle, imidazolyle, indolyle, indazolyle, benzimidazolyle, benzoxazolyle, et benzothiazolyle; éventuellement substitué.

De manière plus préférée, A est choisi parmi phényle, pyrazolyle et 20 isoxazolyle; éventuellement substitué.

Le substituant A est très avantageusement substitué par un premier substituant sélectionné dans le groupe constitué par alkyle, alkyle substitué, alkylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, 0-alkyle, 0-alkyle substitué, 0-Aryle, 0-hétéroaryle, S-alkyle, S-alkyle substitué, S-Aryle, S-hétéroaryle, chacun étant éventuellement substitué par un substituant choisi parmi (C1-C3)alkyle, halogène, O-(C1-C3)alkyle.

Le substituant A est préférentiellement substitué par un deuxième substituant sélectionné dans le groupe constitué par F, Cl, Br, I, OH, SH, SO3M, COOM, CN, NO2, CON(R8)(R9), N(R8)CO(R9), (C1-C3)alkyle-OH, (C1-C3) alkyle- N(R8)(R9), (C1-C3)alkyle-(R10), (C1-C3)alkyle-COOH, N(R8)(R9) ; dans lequel R8 et R9 sont indépendamment choisis parmi H, (C1-C3)alkyle, (Cl- C3)alkyleOH, (C1-C3)alkyleNH2, (C1-C3)alkyleOOOM, (C1-C3)alkyleSO3M; dans lequel lorsque R8 et R9 sont simultanément différents de H, ils peuvent être liés pour former un cycle de 5 à 7 chaînons contenant de 0 à 3 hétéroatomes choisis parmi O, N et S; dans lequel M est H ou un cation de métal alcalin choisi parmi Li, Na et K; et dans lequel RIO est H ou un hétérocycle non aromatique éventuellement substitué, comprenant 2 à 7 atomes de carbone, et 1 à 3 hétéroatomes choisis parmi N, O et S. Des substituants A particulièrement préférés sont choisis parmi phényle et isoxazolyle; lesdits substituants A pouvant être substitués par halogène, (Cl- C4)alkyle, (CI-C3)alkyle halogéné, O-(CI-C4)alkyle, S-(C1-C4)alkyle, O-(C1-C4)alkyle halogéné, et S-(Cl-C4)alkyle halogéné. Lorsque A est disubstitué, les deux substituants de A peuvent former un cycle de 5 à 7 chaînons contenant de 0 à 3 hétéroatomes.

Un produit conforme à l'invention pourra se présenter sous forme: 1) non chirale, ou 2) racémique, ou 3) enrichie en un stéréoisomère, ou 4) enrichie en un énantiomère; et pourra être éventuellement salifié.

Un produit conforme à l'invention pourra être utilisé pour la fabrication d'un médicament utile pour traiter un état pathologique, en particulier un cancer.

La présente invention concerne aussi les compositions thérapeutiques comprenant un produit selon l'invention, en combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable selon le mode d'administration choisi. La composition pharmaceutique peut se présenter sous forme solide, liquide ou de liposomes.

Parmi les compositions solides on peut citer les poudres, les gélules, les comprirnés. Parmi les formes orales on peut aussi inclure les formes solides protégées vis-à-vis du milieu acide de l'estomac. Les supports utilisés pour les formes solides sont constitués notamment de supports minéraux comme les phosphates, les carbonates ou de supports organiques comme le lactose, les cellluloses, l'amidon ou les polymères. Les formes liquides sont constituées de solutions de suspensions ou de dispersions. Elles contiennent comme support dispersif soit l'eau, soit un solvant organique (éthanol, NMP ou autres) ou de mélanges d'agents tensioactifs et de solvants ou d'agents complexants et de solvants.

Les formes liquides seront, de préférence, injectables et de ce fait auront une formulation acceptable pour une telle utilisation.

Des voies d'administration par injection acceptables incluent les voies intraveineuse, intra-péritonéale, intramusculaire, et sous cutanée, la voie 10 intraveineuse étant habituellement préférée.

La dose administrée des composés de l'invention sera adaptée par le praticien en fonction de la voie d'administration au patient et de l'état de ce dernier.

Les composés e la présente invention peuvent être administrés seuls ou en 15 mélange avec d'autres anticancéreux. Parmi les associations possibles on peut citer: É les agents alkylants et notamment le cyclophosphamide, le melphalan, l'ifosfamide, le chlorambucil, le busulfan, le thiotepa, la prednimustine, la carmustine, la lomustine, la semustine, la steptozotocine, la decarbazine, la témozolomide, la procarbazine et l'hexaméthylmélamine É les dérivés du platine comme notamment le cisplatine, le carboplatine ou l'oxaliplatine É les agents antibiotiques comme notamment la bléomycine, la mitomycine, la dactinomycine É les agents antimicrotubules comme notamment la vinblastine, la vincristine, la vindésine, la vinorelbine, les taxoïdes (paclitaxel et docétaxel) É les anthracyclines comme notamment la doxorubicine, la daunorubicine, l'idarubicine, l'épirubicine, la mitoxantrone, la losoxantrone 25 30 2880891 7 É les inhibiteurs de topoisomérases des groupes I et II telles que l'étoposide, le teniposide, l'amsacrine, l'irinotecan, le topotecan et le tomudex É les fluoropyrimidines telles que la 5-fluorouracile, l'UFT, la floxuridine É les analogues de cytidine telles que la 5- azacytidine, la cytarabine, la gemcitabine, la 6-mercaptomurine, la 6- thioguanine É les analogues d'adénosine tels que la pentostatine, la cytarabine ou le phosphate de fludarabine É le méthotrexate et l'acide folinique É les enzymes et composés divers tels que la L-asparaginase, l'hydroxyurée, l'acide trans-rétinoique, la suramine, la dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptine ainsi que les hormones oestrogéniques, androgéniques É les agents antivasculaires tels que les dérivés de la combretastatine ou de la colchicine et leurs prodrogues.

Il est également possible d'associer aux composés de la présente invention un traitement par des radiations. Ces traitements peuvent être administrés simultanément, séparément, séquentiellement. Le traitement sera adapté par le praticien en fonction du malade à traiter.

Les produits de l'invention sont utiles comme agents inhibiteurs d'une réaction catalysée par une kinase. FAK, KDR et Tie2 sont des kinases pour lesquelles les produits de l'invention seront particulièrement utiles en tant qu'inhibiteurs.

Les raisons pour lesquelles ces kinases sont choisies sont données ciaprès:

FAK

FAK est une tyrosine kinase cytoplasmique jouant un rôle important dans la transduction du signal transmis par les intégrines, famille de récepteurs hétérodimériques de l'adhésion cellulaire. FAK et les intégrines sont colocalisés dans des structures périmembranaires appelées plaques d'adhérence. Il a été montré dans de nombreux types cellulaires que l'activation de FAK ainsi que sa phosphorylation sur des résidus tyrosine et en particulier son autophosphorylation sur la tyrosine 397 étaient dépendantes de la liaison des intégrines à leurs ligands extracellulaires et donc induites lors de l'adhésion cellulaire [Kornberg L, et al. J. Biol. Chem. 267(33): 23439-442. (1992)]. L'autophosphorylation sur la tyrosine 397 de FAK représente un site de liaison pour une autre tyrosine kinase, Src, via son domaine SH2 [Schaller et al. Mol. Cell. Biol. 14:1680-1688. 1994; Xing et al. Mol. Cell. Biol. 5:413-421. 1994]. Src peut alors phosphoryler FAK sur la tyrosine 925, recrutant ainsi la protéine adaptatrice Grb2 et induisant dans certaines cellules l'activation de la voie ras et MAP Kinase impliquée dans le contrôle de la prolifération cellulaire [Schlaepfer et al. Nature; 372:786-791. 1994; Schlaepfer et al. Prog. Biophy. Mol. Biol. 71:435-478. 1999; Schlaepfer and Hunter, J. Biol. Chem. 272:13189-13195. 1997]. L'activation de FAK peut aussi induire la voie de signalisation jun NH2-terminal kinase (JNK) et résulter dans la progression des cellules vers la phase G1 du cycle cellulaire [Oktay et al., J. Cell. Biol.145:1461-1469. 1999]. Phosphatidylinositol-3-OH kinase (P13-kinase) se lie aussi à FAK sur la tyrosine 397 et cette interaction pourrait être nécessaire à l'activation de P13-kinase [Chen and Guan, Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 91: 10148-10152. 1994; Ling et al. J. Cell. Biochem. 73:533-544.

1999]. Le complexe FAK/Src phosphoryle différents substrats comme la paxilline et p130CAS dans les fibroblastes [Vuori et al. Mol. Cell. Biol. 16: 2606-2613. 1996].

Les résultats de nombreuses études soutiennent l'hypothèse que les inhibiteurs de FAK pourraient être utiles dans le traitement du cancer. Des études ont suggéré que FAK pourrait jouer un rôle important dans la prolifération et/ou la survie cellulaires in vitro. Par exemple, dans les cellules CHO, certains auteurs ont démontré que la surexpression de p125FAK conduit à une accélération de la transition G1 à S, suggérant que p125FAK favorise la prolifération cellulaire [Zhao J.-H et al. J. Cell Biol. 143:1997-2008.

1998]. D'autres auteurs ont montré que des cellules tumorales traitées avec des oligonucleotides anti-sens de FAK perdent leur adhésion et entrent en apoptose (Xu et al, Cell Growth Differ. 4:413-418. 1996). Il a également été démontré que FAK promeut la migration des cellules in vitro. Ainsi, des fibroblastes déficients pour l'expression de FAK (souris knockout pour FAK) présentent une morphologie arrondie, des déficiences de migration cellulaire en réponse à des signaux chimiotactiques et ces défauts sont supprimés par une réexpression de FAK [DJ. Sieg et al., J. Cell Science. 112:2677-91. 1999]. La surexpression du domaine C-terminal de FAK (FRNK) bloque l'étirement des cellules adhérentes et réduit la migration cellulaire in vitro [Richardson A. and Parsons J.T. Nature. 380:538-540. 1996]. La surexpression de FAK dans des cellules CHO, COS ou dans des cellules d'astrocytome humain favorise la migration des cellules. L'implication de FAK dans la promotion de la prolifération et de la migration des cellules dans de nombreux types cellulaires in vitro, suggère le rôle potentiel de FAK dans les processus néoplasiques. Une étude récente a effectivement démontré l'augmentation de la prolifération des cellules tumorales in vivo après induction de l'expression de FAK dans des cellules d'astrocytome humain [Cary L.A. et al. J. C:ell Sci. 109:1787-94. 1996; Wang D et al. J. Cell Sci. 113:4221-4230. 2000]. De plus, des études immunohistochimiques de biopsies humaines ont démontré que FAK était surexprimé dans les cancers de la prostate, du sein, de la thyroïde, du colon, du mélanome, du cerveau et du poumon, le niveau d'expression de FAK étant directement corrélé aux tumeurs présentant le phénotype le plus agressif [Weiner TM, et al. Lancet. 342(8878):1024-1025. 1993; Owens et al. Cancer Research. 55:2752-2755. 1995; Maung K. et al. Oncogene. 18:6824-6828. 1999; Wang D et al. J. Cell Sci. 113:4221-4230.

2000].

KDR

KDR (Kinase insert Domain Receptor) aussi appelée VEGF-R2 (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2), est exprimé uniquement dans les cellules endothéliales. Ce récepteur se fixe au facteur de croissance angiogénique VEGF, et sert ainsi de médiateur à un signal transductionnel via l'activation de son domaine kinase intracellulaire. L'inhibition directe de l'activité kinase de VEGF-R2 permet de réduire le phénomène d'angiogénèse en présence de VEGF exogène (Vascular Endothelial Growth Factor: facteur de croissance vasculaire endothélial) (Strawn et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.3540-3545). Ce processus a été démontré notamment à l'aide de mutants VEGF-R2 (Millauer et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.1615-1620). Le récepteur VEGF-R2 semble n'avoir aucune autre fonction chez l'adulte que celle liée à l'activité angiogénique du VEGF. Par conséquent, un inhibiteur sélectif de l'activité kinase du VEGFR2 ne devrait démontrer que peu de toxicité.

En plus de ce rôle central dans le processus dynamique angiogénique, des résultats récents suggèrent que l'expression de VEGF contribue à la survie des cellules tumorales après des chimio- et radio-thérapies, soulignant la synergie potentielle d'inhibiteurs de KDR avec d'autres agents (Lee et al. Cancer Research, 2000, vol. 60, p.5565-5570). Tie2

Tie-2 (TEK) est un membre d'une famille de récepteurs à tyrosine kinase, spécifique des cellules endothéliales. Tie2 est le premier récepteur à activité tyrosine kinase dont on connaît à la fois l'agoniste (angiopoïetine 1 ou Ang1) qui stimule l'autophosphorylation du récepteur et la signalisation cellulaire [S. Davis et al (1996) Cell 87, 1161-1169] et l'antagoniste (angiopoïetine 2 ou Ang2) [P.C. Maisonpierre et al. (1997) Science 277, 55-60]. L'angiopoïetine 1 peut synergiser avec le VEGF dans les derniers stades de la néoangiogénèse [AsaharaT. Circ. Res. (1998) 233-240]. Les expériences de knock-out et les manipulations transgéniques de l'expression de Tie2 ou de Ang1 conduisent à des animaux qui présentent des défauts de vascularisation [D.J. Dumont et al (1994) Genes Dev. 8, 1897-1909 et C. Suri (1996) Cell 87, 1171-1180]. La liaison d'Angl à son récepteur conduit à l'autophosphorylation du domaine kinase de Tie2 qui est essentielle pour la néovascularisation ainsi que pour le recrutement et l'interaction des vaisseaux avec les péricytes et les cellules musculaires lisses; ces phénomènes contribuent à la maturation et la stabilité des vaisseaux nouvellement formés [P.C. Maisonpierre et al (1997) Science 277, 55-60]. Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 et Lin P. (1998) PNAS 95, 8829-8834, ont montré une inhibition de la croissance et de la vascularisation tumoralle, ainsi qu'une diminution des métastases de poumon, lors d'infections adénovirales ou d'injections du domaine extracellulaire de Tie-2 (Tek) dans des modèles de xénographes de tumeur du sein et de mélanome.

Les inhibiteurs de Tie2 peuvent être utilisés dans les situations où une néovascularisation se fait de façon inappropriée (c'est-à-dire dans la rétinopathie diabétique, l'inflammation chronique, le psoriasis, le sarcome de Kaposi, la néovascularisation chronique due à la dégénérescence maculaire, l'arthrite rhumatoïde, l'hémoangiome infantile et les cancers).

Définitions Le terme halogène fait référence à un élément choisi parmi F, Cl, Br, et I. Le terme alkyle fait référence à un substituant hydrocarboné saturé, linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 12 atomes de carbone. Les substituants méthyle, éthyle, propyle, 1- méthyléthyl, butyle, 1-méthylpropyl, 2-méthylpropyle, 1,1-diméthyléthyle, pentyle, 1-méthylbutyle, 2-méthylbutyle, 3-méthylbutyle, 1,1- diméthylpropyle, 1,2-diméthylpropyle, 2,2-diméthylpropyle, 1-éthylpropyle, hexyle, 1-méthylpentyle, 2-méthylpentyle, 1-éthylbutyle, 2-éthylbutyle, 3,3-diméthylbutyle, heptyle, 1-éthylpentyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle, et dodécyle sont des exemples de substituant alkyle.

Le terme alkylène fait référence à un substituant hydrocarboné linéaire ou ramifié ayant une ou plusieurs insaturations, ayant de 2 à 12 atomes de carbone. Les substituants éthylènyle, 1-méthyléthylènyle, prop1-ènyle, prop-2-ènyle, Z-1-méthylprop-1-ènyle, E-1-méthylprop-1-ènyle, Z1,2-diméthyl- prop-1-ènyle, E-1,2-diméthylprop-1-ènyle, but-1,3-diényle, 1-méthylidènylprop-2-ènyle, Z-2-méthylbut-1,3-diényle, E-2-méthylbut-1,3diényle, 2-méthyl-1-méthylidènylprop-2-ènyle, undéc-1-ènyle et undéc-10ènyle sont des exemples de substituant alkylène.

Le terme alkynyle fait référence à un substituant hydrocarboné linéaire ou ramifié ayant au moins deux insaturations portées par une paire d'atomes de carbone vicinaux, ayant de 2 à 12 atomes de carbone. Les substituants éthynyle; prop-1-ynyle; prop-2-ynyle; et but-1-ynyle sont des exemples de substituant alkynyle.

Le terme aryle fait référence à un substituant aromatique mono-ou polycyclique ayant de 6 à 14 atomes de carbone. Les substituants phényle, napht-1-yle; napht-2-yle; anthracen-9-yl; 1,2,3,4-tétrahydronapht-5-yle; et 1,2,3,4-tétrahydronapht-6-yle sont des exemples de substituant aryle.

Le terme hétéroaryle fait référence à un substituant hétéroaromatique mono- ou polycyclique ayant de 1 à 13 atomes de carbone et de 1 à 4 hétéroatomes. Les substituants pyrrol-1-yle; pyrrol2-yle; pyrrol3-yle; furyle; thienyle; imidazolyle; oxazolyle; thiazolyle; isoxazolyle; isothiazolyle; 1,2,4-triazolyle; oxadiazolyle; thiadiazolyle; tétrazolyle; pyridyle; pyrimidyle; pyrazinyle; 1,3,5-triazinyle; indolyle; benzo[b] furyle; benzo[b]thiényle; indazolyle; benzimidazolyle; azaindolyle; quinoléyle; isoquinoléyle; carbazolyle; et acridyle sont des exemples de substituant hétéroaryle.

Le terme hétéroatome fait référence ici à un atome au moins divalent, 5 différent du carbone. N; O; S; et Se sont des exemples d'hétéroatome.

Le terme cycloalkyle fait référence à un substituant hydrocarboné cyclique saturé ou partiellement insaturé ayant de 3 à 12 atomes de carbone. Les substituants cyclopropyle; cyclobutyle; cyclopentyle; cyclopentènyle; cyclopentadiényle; cyclohexyle; cyclohexènyle; cycloheptyle; bicyclo[2.2.1]heptyle; cyclooctyle; bicyclo[2.2.2]octyle; adamantyle; et perhydronapthyle sont des exemples de substituant cycloalkyle.

Le terrne hétérocyclyle fait référence à un substituant hydrocarboné cyclique saturé ou partiellement insaturé ayant de 1 à 13 atomes de carbone et de 1 à 4 hétéroatomes. De préférence, le substituant hydrocarboné cyclique saturé ou partiellement insaturé sera monocyclique et comportera 4 ou 5 atomes de carbone et 1 à 3 hétéroatomes.

Le terme substitué fait référence à un ou plusieurs substituant différent de H, par exemple halogène; alkyle; aryle; hétéroaryle, cycloalkyle; hétérocyclyle; alkylène; aikynyle; OH; 0-alkyle; 0-alkylène; 0-aryle; O- hétéroaryle; NH2; NH-alkyle; NH-aryle; NH-hétéroaryle; Nalkyle-alkyle' ; SH; S-alkyle; S-aryle; S(02)H; S(02)-alkyle; S(02)-aryle; SO3H; S03-alkyle; S03-aryle; CHO; C(0)-alkyle; C(0)-aryle; C(0)OH; C(0)0alkyle; C(0)0-aryle; OC(0)-alkyle; OC(0)-aryle; C(0) NH2; C(0)NH-alkyle; C(0)NH-aryle; NHCHO; NHC(0)-alkyle; NHC(0)-aryle; NH-cycloalkyle; NHhétérocyclyle.

La présente invention a encore pour objet le procédé de préparation des produits de formule (I).

Les produits selon l'invention peuvent être préparés à partir de méthodes conventionnelles de chimie organique. Le schéma 1 ci-dessous est illustratif de la rnéthode utilisée pour la préparation de l'exemple 1 concernant les pyrazolo[3,4-b]pyridines. A ce titre, elle ne saurait constituer une limitation de la portée de l'invention, en ce qui concerne les méthodes de préparation des composés revendiqués.

Schéma 1: 13 LDA CN CCN TsC TsCN+ NHZNHZ NH NI H2 Boc2O 121 LDA

CN

CN Boc /

N Boc Boc + CF,

CN

Le schéma 2 ci-dessous est illustratif de la méthode utilisée pour la préparation des exemples concernant les pyrazolo[4,3-c]pyridines. A ce titre, elle ne saurait constituer une limitation de la portée de l'invention, en ce qui concerne les méthodes de préparation des composés revendiqués.

Schéma 2: Br PBr3 N NH2 ou PO rB 3

H

H2N NHZ CF3 X = C, N CF3 Suzuki H Voie alternative:

OH

N I(N Boc2O \/\N-N H NHBoc Tf2O CF3 É Suzuki puis TFA

HN OTf N Ir

N 1 Boc NHBoc Il est entendu pour l'homme du métier que, pour la mise en oeuvre des procédés selon l'invention décrits précédemment, il peut être nécessaire d'introduire des groupements protecteurs des fonctions amino, carboxyle et alcool afin d'éviter des réactions secondaires. Ces groupes sont ceux qui permettent d'être éliminés sans toucher au reste de la molécule. Comme exemples de groupes protecteurs de la fonction amino, on peut citer le carbamate de tert-butyle qui peut être régénéré au moyen d'acide trifluoroacétique ou d'iodotriméthylsilane, l'acétyle qui peut être régénéré en milieu acide (acide chlorhydrique par exemple). Comme groupes protecteurs de la fonction carboxyle, on peut citer les esters (méthoxyméthylester, benzylester par exemple). Comme groupes protecteurs de la fonction alcool, on peut citer les esters (benzoylester par exemple) qui peuvent être régénérés en milieu acide ou par hydrogénation catalytique. D'autres groupes protecteurs utilisables sont décrits par T. W. GREENE et coll. dans Protective Groups in Organic Synthesis, third edition, 1999, Wiley-Interscience. Les composés de formule (I) sont isolés et peuvent être purifiés par les méthodes connues habituelles, par exemple par cristallisation, chromatographie ou extraction.

Les énantiomères, diastéréoisomères des composés de formule (I) font également partie de l'invention.

Les composés de formule (I) comportant un reste basique peuvent être éventuellement transformés en sels d'addition avec un acide minéral ou organique, par action d'un tel acide au sein d'un solvant, par exemple organique tel un alcool, une cétone, un éther ou un solvant chloré. Les composés de formule (I) comportant un reste acide peuvent être éventuellement transformés en sels métalliques ou en sels d'addition avec des bases azotées selon les méthodes connues en soi. Ces sels peuvent être obtenus par action d'une base métallique (alcaline ou alcalinoterreuse par exemple), de l'ammoniac, d'une amine ou d'un sel d'amine sur un composé de formule (I), dans un solvant. Le sel formé est séparé par les méthodes habituelles.

Ces sels font également partie de l'invention.

Lorsqu'un produit selon l'invention présente au moins une fonction basique libre, des sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés par réaction entre ledit produit et un acide minéral ou organique. Des sels pharmaceutiquement acceptables incluent les chlorures, nitrates, sulfates, hydrogénosulfates, pyrosulfates, bisulfates, sulfites, bisulfites,phosphates, monohydrogénophosphates, dihydrogénophosphates, métaphosphates, pyrophosphates, acétates, propionates, acrylates, 4-hydroxybutyrates, caprylates, caproates, décanoates, oxalates, malonates, succinates, glutarates, adipates, pimélates, maléates, fumarates, citrates, tartrates, lactates, phénylacétates, mandélates, sébacates, subérates, benzoates, phtalates, méthanesulfonates, p-toluène sulfonate, propanesulfonates, xylènesulfonates, salicylates, cinnamates, glutamates, aspartates, glucuronates, galacturonates.

Lorsqu'un produit selon l'invention présente au moins une fonction acide libre, des sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés par réaction entre ledit produit et une base minérale ou organique. Des bases pharmaceutiquement acceptables incluent des hydroxydes de cations de métaux alcalins ou alcalino-terreux tels que Li, Na, K, Mg, Ca, des composés aminés basiques tels qu'ammoniac, arginine, histidine, pipéridine, morpholine, pipérazine, triéthylamine.

L'invention est également décrite par les exemples suivants, donnés à titre d'illustration de l'invention.

Les analyses LC/MS ont été réalisées sur un appareil Micromass modèle LCT relié à un appareil HP 1100. L'abondance des produits a été mesurée à l'aide d"un détecteur à barrette de diodes HP G1315A sur une gamme d'onde de 200-600 nm et un détecteur à dispersion de lumière Sedex 65. L'acquisition des spectres de masses Mass spectra a été réalisée sur une gamme, de 180 à 800. Les données ont été analysées en utilisant le logiciel Micromass MassLynx. La séparation a été effectuée sur une colonne Hypersil BDS C18, 3 pm (50 x 4.6 mm), en éluant par un gradient linéaire de 5 à 90% d'acétonitrile contenant 0,05% (v/v) d'acide trifluoroacétique (TFA) dans l'eau contenant 0,05% (v/v) TFA en 3,5 mn à un débit de 1 mL/mn. Le temps total d'analyse, incluant la période de rééquilibration de la colonne, est de 7 mn.

Les spectres MS ont été réalisés en électrospray (ES+) sur un appareil Platforrn Il (Micromass). Les principaux ions observés sont décrits.

Les points de fusion ont été mesurés en capillaire, sur un appareil Mettler FP62, gamme 30 C à 300 C, montée de 2 C par minute.

Purification par LC/MS: Les produits peuvent être purifiés par LC/MS en utilisant un système Waters FractionsLynx composé d'une pompe à gradient Waters modèle 600, d'une pompe de régénération Waters modèle 515, d'une pompe de dilution Waters Reagent Manager, d'un auto-injecteur Waters modèle 2700, de deux vannes Rheodyne modèle LabPro, d'un détecteur à barrette de diodes Waters modèle 996, d'un spectromètre de masse Waters modèle ZMD et d'un collecteur de fractions Gilson modèle 204. Le système était controlé par le logiciel Waters FractionLynx. La séparation a été effectuée alternativement sur deux colonnes Waters Symmetry (C18, 5pM, 19x50 mm, référence catalogue 186000210), une colonne étant en cours de régénération par un mélange eau/acétonitrile 95/5 (v/v) contenant 0,07% (v/v) d'acide trifluoroacétique, pendant que l'autre colonne était en cours de séparation. L'élution des colonnes a été effectuée en utilisant un gradient linéaire de 5 à 95% d'acétonitrile contenant 0,07% (v/v) d'acide trifluoroacétique dans l'eau contenant 0,07% (v/v) d'acide trifluoroacétique, à un débit de 10 mL/mn. A la sortie de la colonne de séparation, un millième de l'effluent est séparé par un LC Packing Accurate, dilué à l'alcool méthylique à un débit de 0,5 mUmn et envoyé vers les détecteurs, à raison de 75% vers le détecteur à barrette de diodes, et les 25% restants vers le spectromètre de masse. Le reste de l'effluent (999/1000) est envoyé vers le collecteur de fractions où le flux est éliminé tant que la masse du produit attendu n'est pas détectée par le logiciel FractionLynx. Les formules moléculaires des produits attendus sont fournies au logiciel FractionLynx qui déclenche la collecte du produit quand le signal de masse détecté correspond à l'ion [M+H]+ et/ou au [M+Na]+. Dans certains cas, dépendant des résultats de LC/MS analytique, quand un ion intense correspondant à [M+2H]++ a été détecté, la valeur correspondant à la moitié de la masse moléculaire calculée (MW/2) est aussi fournie au logiciel FractionLynx. Dans ces conditions, la collecte est aussi déclenchée quand le signal de masse de l'ion [M+2H]+ + et/ou [M+Na+H]++ sont détectés. Les produits ont été collectés en tube de verre tarés. Après collecte, les solvants ont été évaporés, dans un évaporateur centrifuge Savant AES 2000 ou Genevac HT8 et les masses de produits ont été déterminées par pesée des tubes après évaporation des solvants.

Exemple 1

1-[4-(3-Amino-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5trifluorométhyl-phényl)-urée 2-fluoro-3-iodo-pvridine A une solution de 0, 103mol de LDA dans 200mL de THF à -75 C sont ajoutés 10g de 2fluoropyridine dans 50mL de THF. La solution jaune est agitée pendant 3 heures à -75 C, puis sont ajoutés 26,2g d'iode dans 80mL de THF. Le mélange réactionnel est agité pendant 1,5 heures à -75 C, puis sont ajoutés 50mL d'eau à cette température. On laisse remonter la température, puis à 0 C sont ajoutés 100mL d'eau supplémentaire. La suspension est décolorée par ajout de thiosulfate de sodium. Le mélange est extrait avec le diéthyléther. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite. Le résidu huileux est purifié sur silice Si60 (40-63p) (cyclohexane / diéthyléther, 95:5). Le produit obtenu est repris dans le diéthyléther et un insoluble beige est éliminé par essorage. Après séchage sous vide, sont obtenus 10,21g de poudre blanche de 2-fluoro-3-iodopyridine. Spectre MS (ES+) : m/z= 224 [MH+] 2Fluoro-4-iodo-nicotinonitrile A une solution de 21,5mmol de LDA dans 20mL de THF à -75 C sont ajoutés 4,8g de 2-fluro-3-iodopyridine dans 20mL de THF. La solution jaune est agitée pendant 1h10 à -75 C, puis, à cette température sont ajoutés 3,9g de cyanure de para-toluène sulfonyl dans 20mL de THF. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à -75 C, puis sont ajoutés 20mL d'eau à cette température. On laisse remonter la température, puis à 0 C sont ajoutés 40mL d'eau supplémentaire. Le mélange est extrait par le diéthyléther. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite. La résine marron obtenu est purifié sur silice Si60 (40-63p) (cyclohexane / diéthyléther, 8:2). On obtient une fraction de 667mg d'une poudre jaune de 2-Fluoro-4-iodo-nicotinonitrile et une deuxième fraction de 2,1g d'une poudre jaune pâle de 2-Fluoro-3-iodo-isonicotinonitrile.

Spectre MS (ES+) : m/z= 249 [MH+] 2-Hyd razi no-4-iodo-n icoti non itri l e A une solution de 1,2g de 2-fluoro-4-iodo-nicotinonitrile dans 20mL de MeOH à 20 C sont ajoutés 2,4mL d'hydrate d'hydrazine. La suspension jaune est agitée 20min à 20 C puis filtrée.Le précipité est lavé au méthanol pour donner après séchage sous vide 947mg de poudre blanche de 2Hydrazino-4-iodo-nicotinonitrile.

Spectre MS (ES+) : m/z= 261 [MH+] (3-Cyano-4-iodo-pyridin-2-yl)-hydrazine dicarboxylate de di-tert-butyle et N, N',N'-(3-Cyano-4-iodo-pyridin-2-yl)hydrazine tricarboxylate de tri-tert-butyle A un mélange de 234mg de 2Hydrazino-4-iodo-nicotinonitrile, 27,5mg de N,N-dinnéthyaminopyridine et 0,316mL de triéthylamine dans 11 mL de dichlorométhane à 4 C sont ajoutés 492mg de dicarbonate de di-terbutyl dans 5ml de dichlorométhane. La réaction est agitée 30min à 4 C puis on laisse remonter la température à 20 C et agite pendant 5h. De l'eau est ajoutée et le mélange extrait avec l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium puis concentrée sous pression réduite. Le résidu huileux jaune est purifié sur colonne Biotage KP-Sil de 60Â SiO2 32-63p pré-packée (éluant avec dichlorométhane / méthanol, 99,5:0,5 puis 99:1) donnant 2 fractions majoritaires, une de 110mg d'une poudre jaune de N, N',N'.-(3Cyano-4-iodo-pyridin-2-yl)-hydrazine-tricarboxylate de tri-tertbutyle (Spectre MS (ES+) : m/z= 561 [MH+] ) et une de 202mg d'une huile jaune pâle contenant du (3-Cyano-4-iodopyridin-2-yl)-hydrazine-dicarboxylate de di-tert-butyle. Cette huile jaune est re-purifié sur colonne Biotage KPSil de 60A SiO2 32-63p pré-packée (éluant avec cyclohexane / acétate d'éthyle, 95:5 puis 9:1) donnant 114mg d'une poudre beige de (3-Cyano-4iodo-pyridin-2-yl)-hydrazine-dicarboxylate de ditert-butyle, Spectre MS (ES+) : m/z= 461 [MH+] N,N',N'É-(3-cvano-4-iodo-pyridin-2-vl)-hydrazinetricarboxvlate de tri-tert-butyle A un rnélange de 925mg de 2-Hydrazino-4- iodo-nicotinonitrile, 109mg de N,N-dinnéthyaminopyridine et 2,6mL de triéthylamine dans 45mL de dichlorométhane à 4 C sont ajoutés 3,9g de di- terbutyl de dicarbonate dans 20m1 de dichlorométhane. La réaction est agitée 30min à 4 C puis on laisse remonter la température à 20 C. De l'eau est ajoutée et le mélange extrait avec l'acétate d'éthyle puis séché sur sulfate de magnésium et concentré sous pression réduite. Le résidu huileux brun est purifié sur silice Si60 (40-63p) (cichlorométhane / méthanol, 98:2) pour obtenir 1,2g d'une poudre jaune de N,N',N'-(3Cyano-4-iodo-pyridin-2-yl)-hydrazine-tricarboxylate de tritert-butyle.

PF = 138 C (Kbfler).

Spectre MS (ES+) : m/z= 561 [MH+] Couplage de Suzuki (X = C) avec un dérivé di-boc A une solution de 11Omg de (3-cyano-4-iodo-pyridin-2-yl)hydrazine dicarboxylate de di-tert-butyle et de 122mg de 1-(2-Fluoro-5trifluorométhyl- phényl)-3-[4-(4,4,5,5-tetraméthyl-1,3,2-dioxaborolan-2yl)-phényl]-urée dans 5,5mL de dioxane sont ajoutés 57mg de NaHCO3 dans 1, 7mL d'eau. Puis, 26mg cle tértakis(triphénylphosphine)palladium sont ajoutés et la réaction est chauffée au reflux à 100 C. Après 2,5h la solution jaune-clair est refroidie à 20 C et 10mL d'acétate d'éthyle sont ajoutés. La phase organique est lavée 2 fois avec 8mL d'eau puis 8mL de saumure. Après séchage sur sulfate de magnésium et concentration sous pression réduite, l'huile jaune résiduelle est purifiée sur colonne Biotage KP-Sil de 60Â SiO2 32-63p pré-packée (cyclohexane / acétate d'éthyle, 9:1). On obtient 114mg de (3-Cyano-4-{4-[3- (2-fluoro-5trifluorométhyl-phényl)-uréido]-phényl}-pyridin-2-yl)-hydrazine dicarboxylate de di-tert-butyle.

Spectre MS (ES+) : m/z= 631 [MH+] Couplage de Suzuki (X = C) avec un dérivé tri-boc A une solution de 108mg de N,N',N'-(3-cyano-4-iodo-pyridin2-yl)-hydrazine- tricarboxylate de tri-tert-butyle et de 98mg de 1-(2Fluoro-5-trifluorométhylphényl)-3-[4-(4,4,5,5-tetraméthyl-1,3,2dioxaborolan-2-yl)-phényl]-urée dans 4,5mL de dioxane sont ajoutés 45,4mg de NaHCO3 dans 1,4mL d'eau. Puis, 20,3mg de tértakis(triphénylphosphine) palladium sont ajoutés et la réaction est chauffée au reflux à 100 C. Après 2,5h la solution jaune-clair est refroidie à 20 C et 10mL d'acétate d'éthyle sont ajoutés. La phase organique est lavée 2 fois avec 8mL d'eau puis 8mL de saumure. Après séchage sur sulfate de magnésium et concentration sous pression réduite, l'huile jaune résiduelle est purifiée sur colonne Biotage KP-Sil de 60Â SiO2 32-63p pré-packée (cyclohexane / acétate d'éthyle, 9:1 puis 7:3). On obtient une fraction de 86mg de N,N',N'-(3-Cyano-4-{4-[3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)uréido]-phényl}-pyridin-2-yl)-hydrazineticarboxylate de tri-tert-butyle et une fraction de 31 mg de (3-Cyano-4-{4-[3-(2-fluoro-5-trifluorométhylphényl)-uréido]-phényl}-pyridin-2-yl)-hydrazinedicarboxylate de di-tertbutyle.

Spectre MS (ES+) : m/z= 731 [MH+] 1-[4-(3-Amino-1 H-pyrazolo[3,4-b] pyridin-4-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée (à partir du dérivé diboqué) A une solution de 111 mg de dérivé (3-Cyano-4{4-[3-(2-fluoro-5- trifluorométhyl-phényl)-uréido]-phényl}-pyridin-2-yl)hydrazinedicarboxylate de di-tert-butyle dans 4mL de dichlorométhane à 20 C sont ajoutés 0,3mL d'acide trifluoroacétique contenant 10% d'ansiole et la réaction est agitée 4h.

Le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite donnant un solide rouge orange. Ce résidu est purifié sur colonne Biotage KP-Sil de 60Â SiO2 32-63p pré-packée (gradient dichlorométhane / solution A, 95:5 à 90:10; solution A = dichlorométhane / méthanol / ammoniaque, 38:17:2). On obtient 56mg d'une poudre beige de 1-[4-(3-Amino-1 H-pyrazolo[3,4-b] pyridin-4-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl) -urée, dont les caractéristiques sont les suivantes: Spectre IR (KBr) : 3370; 3300; 1717; 1604; 1541; 1443; 1317; 1310; 1205; 1184; 1122; 1114; 1069 et 818 cm-1 Spectre de R.M.N. 1H (300 MHz, (CD3)2SO d6, b en ppm) : 4,58 (s large, 2H) ; 6,91 (d, J = 5,0 Hz, 1H) ; 7,41 (dm, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,52 (t large, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,56 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,68 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 8,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H) ; 8,62 (dd large, J = 2, 5 et 7,5 Hz, 1H) ; 9,13 (m étalé, 1H) ; 9,57 (m étalé, 1H) ; 12,25 (s large, 1H) PF = 175 C déc. (Kdfler).

De façon analogue, le 1-[4-(3-Amino-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl)phényl]- 3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée peut être obtenu à partir d'un dérivé triboqué comme suit: A une solution de 81mg de dérivé N,N',N'-(3-cyano-4-{4-[3-(2-fluoro-5-trifl uorométhyl-phényl)-uréido]phényl}-pyridin-2-yl)-hydrazinetricarboxylate de tri-tert-butyle dans 3mL de dichiorométhane à 20 C sont ajoutés 0,2mL d'acide trifluoroacétique contenant 10% d'ansiole et la réaction est agitée une nuit. Le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite donnant un solide rouge orange. Ce résidu est purifié sur colonne Biotage KP-Sil de 60Â SiO2 3263p pré-packée (gradient dichlorométhane / solution A, 95:5 puis 90:10; :solution A = dichiorométhane / méthanol / ammoniaque, 38:17:2). On obtient 27mg d'une poudre beige de 1-[4-(3-amino-1 H-pyrazolo[3,4-b] pyridin-4-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl) -urée

Exemple 2

1-[5-(3-Amino-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl)-pyridin-2-yl]-3-(2-fluoro5-trifluorométhyl-phényl)-urée Couplaqe de Suzuki (X = N) A une solution de 150mg de N,N',N'-(3-cyano-4-iodo-pyridin-2-yl)-hydrazinetricarboxylate de tri-tert-butyle et de 136mg de 1-(2-Fluoro-5trifluorométhylphényl)-3-[5-(4,4, 5, 5-tetraméthyl-1, 3, 2-d ioxaborolan2-yl)-pyridi n-2-yl]-urée dans 6,2mL de dioxane sont ajoutés 63mg de NaHCO3 dans 1,9mL d'eau. Puis, 29mg de tértakis(triphénylphosphine) palladium sont ajoutés et la réaction est chauffée au reflux à 100 C. Après 2,5h la solution jaune est refroidie à 20 C et 10mL d'acétate d'éthyle sont ajoutés. La phase organique est lavée 2 fois avec 8mL d'eau puis 8mL de saumure. Après séchage sur sulfate de magnésium et concentration sous pression réduite l'huile jaune résiduelle est purifiée sur colonne Biotage KP-Sil de 60Â SiO2 32-63p prépackée (gradient dichlorométhane / solution A, 98:2 à 95:5; solution A = dichlorométhane / méthanol / ammoniaque, 38:17:2). On obtient 67mg de N, N', N'-{3'-cyano-6[3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-uréido]-[3,4']bipyridinyl-2'-yl}hydrazine tricarboxylate de tri-tert-butyle (Spectre MS (ES+) : m/z= 732 [MH+] ) et 55mg de {3'-cyano-6-[3-(2-fluoro-5-trifl uorométhyl-phényl)uréido]-[3,4']bipyridinyl-2'-yl}-hydrazine dicarboxylate de di-tertbutyle (Spectre MS (ES+) : m/z= 632 [MH+] ).

1-[5-(3-Amino-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl)-pyridin-2-yl]-3-(2-fluoro5-trifluorométhyl-phényl)-urée A une solution de 55mg de {3'-cyano-6-[3(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)- uréido]-[3,4']bipyridinyl-2'-yl} hydrazine dicarboxylate de di-tert-butyle dans 2mL de dichlorométhane à 20 C sont ajoutés 0,15mL d'acide trifluoroacétique contenant 10% d'ansiole et la réaction est agitée 2h.

Séparément, à une solution de 67mg de dérivé N,N',N'-{3'-cyano-6-[3-(2fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-uréido]-[3,4']bipyridi nyl-2'-yl}hydrazine tricarboxylate de tri-tert-butyle dans 3mL de dichlorométhane à 20 C sont ajoutés 0,16mL d'acide trifluoroacétique contenant 10% d'ansiole et la réaction est agitée 2h.

Les milieux réactionnels rouge brun sont réunis et concentrés sous pression réduite donnant un solide rouge orange. Ce résidu est purifié sur colonne Biotage KP-Sil de 60Â SiO2 32-63p pré-packée (gradient dichlorométhane / solution A, 95:5 à 90:10 puis 70:30; solution A = dichlorométhane / méthanol / ammoniaque, 38:17:2). On obtient un produit que l'on reprend dans de l'acétate d'éthyle et lave à l'eau pour éliminer du trifluoroacétate d'ammonium. Après séchage sur sulfate de magnésium et concentration sous pression réduite on obtient 58mg d'une poudre jaune beige de 1-[5-(3-amino-1 H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl)-pyridin-2-yl]-3(2-fluoro-5-trifluorométhylphényl)-urée, dont les caractéristiques sont les suivantes: Spectre IR (KBr) : 3209; 1708; 1610; 1571; 1441; 1376; 1302; 1250; 1168; 1119; 1071; 822 et 616 cm-1 Spectre de R.M.N. 1H (300 MHz, (CD3)2SO d6, b en ppm) : 4,70 (s large, 2H) ; 7,00 (d, J = 5,0 Hz, 1H) ; 7,45 (dm, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,55 (t large, J = 9,0 Hz, 1H) ; 7,65 (d large, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 8,06 (dd, J = 2,5 et 8,5 Hz, 1H) ; 8,41 (d J = 5,0 Hz, 1H) ; 8,54 (d, J = 2,5 Hz, 1H) ; 8,67 (dd, J = 2,5 et 7,5 Hz, 1H) ; 10,15 (s large, 1H) ; 11,15 (m très étalé, 1H) ; 12,35 (m étalé, 1H) PF = >260 C (Kbfler).

Détermination de l'activité des composés Protocoles expérimentaux 1. FAK L'activité inhibitrice des composés sur FAK est déterminée par une mesure de l'inhibition de l'autophosphorylation de l'enzyme en utilisant un test de fluorescence résolue dans le temps (HTRF) .

L'ADNc complet de FAK humain, dont l'extrémité N-terminale a été marquée à l'histidine, a été cloné dans un vecteur d'expression baculovirus pFastBac 30 HTc. La protéine a été exprimée et purifiée à environ 70% d'homogénéité.

L'activité kinase est déterminée en incubant l'enzyme (6.6 pg/ml) avec différentes concentrations de composé à tester dans un tampon 50 mM Hepes pH = 7,2, 10 mM MgCl2, 100 pM Na3VO4,15 M d'ATP pendant 1 heure à 37 C. La réaction enzymatique est stoppée par l'addition de tampon Hepes pH = 7, 0 contenant 0.4 mM KF, 133 mM EDTA, 0.1 % BSA et le marquage est effectuée, pendant 1 à 2 heures à température ambiante, par l'addition dans ce tampon d'un anticorps anti-Histidine marqué avec XL665 et d'un anticorps monoclonal phosphospécifique de la tyrosine conjugué à du cryptate d'europium (Eu-K). Les caractéristiques des deux fluorophores sont disponibles dans G. Mathis et al., Anticancer Research, 1997, 17, pages 3011-3014. Le transfert d'énergie entre le cryptate d'europium excité vers le XL665 accepteur est proportionnel au degré d'autophosphorylation de FAK.

Le signal de longue durée spécifique de XL-665 est mesuré dans un compteur de plaques Packard Discovery. Tous les essais sont effectués en double exemplaire et la moyenne des deux essais est calculée. L'inhibition de l'activité d'autophosphorylation de FAK avec des composés de l'invention est exprimée en pourcentage d'inhibition par rapport à un contrôle dont l'activité est mesurée en l'absence de composé test. Pour le calcul du % d'inhibition, le ratio [signal à 665 nm/signal à 620 nm] est considéré.

2. KDR L'effet inhibiteur des composés est déterminé dans un test de phosphorylation de substrat par l'enzyme KDR in vitro par une technique de 20 scintillation (plaque 96 puits, NEN).

Le domaine cytoplasmique de l'enzyme KDR humaine a été cloné sous forme de fusion GST dans le vecteur d'expression baculovirus pFastBac. La protéine a été exprimée dans les cellules SF21 et purifiée à environ 60 % d'homogénéité.

L'activité kinase de KDR est mesurée dans 20 mM MOPS, 10 mM MgCl2, 10 mM MnCl2, 1 mM DTT, 2.5 mM EGTA, 10 mM b-glycérophosphate, pH = 7.2, en présence de 10 mM MgCl2, 100 pM Na3VO4, 1 mM NaF. 10 pI du composé sont ajoutés à 70 pI de tampon kinase contenant 100 ng d'enzyme 30 KDR à 4 C. La réaction est lancée en ajoutant 20 pl de solution contenant 2 pg de substrat (fragment SH2-SH3 de la PLCy exprimée sous forme de protéine de fusion GST), 2 pCi y 33P[ATP] et 2 pM ATP froid. Après 1 heure d'incubation à 37 C, la réaction est stoppée en ajoutant 1 volume (100 pl) de 200 mM EDTA. Le tampon d'incubation est retiré, et les puits sont lavés trois fois avec 300 pl de PBS. La radioactivité est mesurée dans chaque puits en utilisant un compteur de radioactivité Top Count NXT (Packard).

Le bruit de fond est déterminé par la mesure de la radioactivité dans quatre puits différents contenant l'ATP radioactif et le substrat seul.

Un contrôle d'activité totale est mesuré dans quatre puits différents contenant tous les réactifs (y33P-[ATP], KDR et substrat PLCy) mais en l'absence de composé.

L'inhibition de l'activité KDR avec le composé de l'invention est exprimée en pourcentage d'inhibition de l'activité contrôle déterminée en l'absence de 10 composé.

Le composé SU5614 (Calbiochem) (1 pM) est inclus dans chaque plaque comme contrôle d'inhibition.

3. Tie2 La séquence codante de Tie2 humain correspondant aux acides aminés du domaine intracellulaire 776-1124 a été générée par PCR en utilisant le cDNA isolé de placenta humain comme modèle. Cette séquence a été introduite dans un vecteur d'expression baculovirus pFastBacGT sous forme de protéine de fusion GST.

L'effet inhibiteur des molécules est déterminé dans un test de phosphorylation de PLC par Tie2 en présence de GST-Tie2 purifiée à environ 80% d'homogénéité. Le substrat est composé des fragments SH2-SH3 de la PLC exprimée sous forme de protéine de fusion GST.

L'activité kinase de Tie2 est mesurée dans un tampon MOPS 20mM pH 7.2, contenant 10 mM MgCl2, 10 mM MnCl2, 1 mM DTT, 10 mM de glycérophosphate. Dans une plaque 96 puits FlashPlate maintenue sur glace, on dépose un mélange réactionnel composé de 70 pl de tampon kinase contenant 100 ng d'enzyme GST-Tie2 par puits. Ensuite 10 pl de la molécule à tester diluée dans du DMSO à une concentration de 10 % maximum sont ajoutés. Pour une concentration donnée, chaque mesure est effectuée en quatre exemplaires. La réaction est initiée en ajoutant 20 pl de solution contenant 2 pg de GST-PLC, 2 pM d'ATP froid et 1 pCi d'33P[ATP]. Après 1 heure d'incubation à 37 C, la réaction est stoppée en ajoutant 1 volume (100pI) d'EDTA à 200 mM. Après élimination du tampon d'incubation, les puits sont lavés trois fois avec 300 pl de PBS. La radioactivité est mesurée sur un MicroBeta1450 Wallac.

L'inhibition de l'activité Tie2 est calculée et exprimée en pourcentage d'inhibition par rapport à l'activité contrôle déterminée en l'absence de composé.

Résultats: Tableau 1: Structure exemple FAK KDR TIE2 IC 50 IC 50 IC 50 (nM (nM) (nM) HN 1 264 50 8

F F

HN NH2

N

H

F 2 150 940 23

NH

F F

O NH

N NH2

N

H

Claims

28 REVENDICATIONS

1. Produit répondant à la formule (I) suivante: A L, dans laquelle: 1) A et Ar sont indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par: aryle, hétéroaryle, aryle substitué, hétéroaryle substitué, cycloalkyle, cycloalkyle substitué ; 2) L est sélectionné dans le groupe constitué par: liaison, CO, NH, CO-NH, NH-CO, NH-SO, NH-SO2, SO2NH, NH-CH2, CH2-NH, CH2-CO-N H, NH-CO-CH2, NH-CH2-CO, CO-CH2-N H, NH-CO-NH, NH-CS-NH, NH-CO-O, O-CO-NH; 3) L'un de X et Y est choisi parmi N et NO, et l'autre de Y et X est C(R5) ; 4) R5 et R6 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe constitué par: H, halogène, R2, CN, O(R2), OC(0)(R2), OC(0)N(R2)(R3), OS(02)(R2), N(R2)(R3), N=C(R2)(R3), N(R2)C(0) (R3), N(R2)C(0)O(R3), N(R4) C(0)N(R2)(R3), N(R4)C(S)N(R2)(R3), N(R2)S(02) (R3), C(0)(R2), C(0)O(R2), C(0)N(R2)(R3), C(=N(R3))(R2), C(=N(OR3))(R2), S(R2), S(0)(R2), S(O2)(R2), S(02)O(R2), S(O2)N(R2)(R3) ; dans lequel chaque R2, R3, R4 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par H, alkyle, alkylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocyclyle, alkyle substitué, alkylène substitué, alkynyle substitué, aryle substitué, hétéroaryle substitué, cycloalkyle substitué, hétérocyclyle substitué, alkylène, alkylène substitué, alkynyle substitué ; dans lequel, lorsque R2 et R3 sont simultanément présents sur l'un des R5 et R6, ils peuvent être liés entre eux pour former un cycle.

2. Produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que Ar-L-A est: X4 X3 \ /L\ X,-X2 A dans lequel chaque X1, X2, X3 et X4 est indépendamment choisi parmi N et C-R11, dans lequel R11 a la même définition que R5.

3. Produit selon la revendication 2, caractérisé en ce que R11 est sélectionné dans le groupe constitué par H, F, Cl, méthyle, NH2, OCF3, et CONH2.

4. Produit selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que R5 et R6 sont indépendamment sélectionnés parmi H, halogène, OMe et méthyle.

5. Produit selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que R5 est sélectionné parmi H et F. 6. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que R5 est H. 7. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que L- A est choisi parmi NH-CO-NH-A et NH-SO2-A.

8. Produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que A est sélectionné dans le groupe constitué par phényle, pyridyle, pyrimidyle, thiényle, furyle, pyrrolyle, oxazolyle, thiazolyle, isoxazolyle, isothiazolyle, pyrazolyle, imidazolyle, indolyle, indazolyle, benzimidazolyle, benzoxazolyle, et benzothiazolyle; éventuellement substitué.

9. Produit selon la revendication 8, caractérisé en ce que A est choisi parmi phényle, pyrazolyle et isoxazolyle; éventuellement substitué.

10. Produit selon l'une quelconque des revendications 7 à 9, caractérisé en ce que A est substitué par un premier substituant sélectionné dans le groupe constitué par alkyle, alkyle halogéné, alkylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, 0-alkyle, 0-Aryle, 0-hétéroaryle, S-alkyle, S-Aryle, Shétéroaryle, chacun étant éventuellement substitué par un substituant choisi parmi (C1-C3)alkyle, halogène, O-(C1-C3)alkyle.

11. Produit selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisé en ce que caractérisé en ce que A est substitué par un deuxième substituant sélectionné dans le groupe constitué par F, Cl, Br, I, OH, SH, SO3M, COOM, CN, NO2, CON(R8)(R9), N(R8)CO(R9), (C1-C3)alkyle-OH, (C1-C3) alkyle-N(R8)(R9), (C1-C3)alkyle-(R10), (C1-C3)alkyle-COOH, N(R8)(R9) ; dans lequel R8 et R9 sont indépendamment choisis parmi H, (C1-C3)alkyle, (Cl-C3)alkyleOH, (C1-C3)alkyleNH2, (C1-C3)alkyle0OOM, (C1-C3) alkyleSO3M; dans lequel lorsque R8 et R9 sont simultanément différents de H, ils peuvent être liés pour former un cycle de 5 à 7 chaînons comportant de 0 à 3 hétéroatomes choisis parmi O, N et S; dans lequel M est H ou un cation de métal alcalin choisi parmi Li, Na et K; et dans lequel R10 est H ou un hétérocycle non aromatique éventuellement substitué, comprenant 2 à 7 atomes de carbone, et 1 à 3 hétéroatomes choisis parmi N, O et S. 12. Produit selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisé en ce que A est phényle ou isoxazolyle substitué par halogène, (Cl-C4)alkyle, (C1-C3)alkyle halogéné, O-(C1-C4) alkyle, S-(CI-C4)alkyle, O-(CIC4) alkyle halogéné, S-(C1-C4)alkyle halogéné.

13. Produit selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est sous forme: 1) non chirale, ou 2) racémique, ou 3) enrichie en un stéréo-isomère, ou 4) enrichie en un énantiomère; et en ce qu'il est éventuellement salifié.

14. Composition pharmaceutique comprenant un produit selon l'une quelconque des revendications précédentes, en combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable.

15. Utilisation d'un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, comme agent inhibiteur d'une réaction catalysée par une kinase.

16. Utilisation d'un produit selon la revendication 15, caractérisée en ce que la kinase est choisie parmi FAK, KDR et Tie2.

17. Utilisation d'un produit selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour la fabrication d'un médicament utile pour traiter un état pathologique.

18. Utilisation selon la revendication 17, caractérisée en ce que l'état pathologique est le cancer.