FR2861543A1 - Pommes de terre a rendement accru en amidon par corps vegetal et leur procede de production - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne des pommes de terre ayant un rendement en tubercules de pomme de terre par corps végétal supérieur à celui de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, dans lesquelles un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est introduit, et concerne également un procédé pour produire des pommes de terre ayant un rendement en tubercules de pomme de terre par corps végétal supérieur à celui des pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, comprenant l'introduction d'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans les pommes de terre pour exprimer le gène dans les pommes de terre.
Description
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Domaine technique :
La présente invention concerne des pommes de terre ayant un rendement accru en amidon par corps végétal par augmentation du rendement en tubercules des pommes de terre et de la teneur en amidon par unité de poids de tubercules, un procédé pour produire ces pommes de terre et un procédé pour produire de l'amidon à partir de ces pommes de terre.
La présente invention concerne des pommes de terre ayant un rendement accru en amidon par corps végétal par augmentation du rendement en tubercules des pommes de terre et de la teneur en amidon par unité de poids de tubercules, un procédé pour produire ces pommes de terre et un procédé pour produire de l'amidon à partir de ces pommes de terre.
Etat de la technique :
Les glucides dans les plantes sont stockés principalement sous forme d'amidon. Concernant les quantités relatives de pommes de terre consommées pour différentes raisons au Japon, leur utilisation comme produit de départ pour l'amidon est la plus élevée et représente environ
40 %, et leurs utilisations comme aliments et aliments transformés représentent 25 % et 10 %, respectivement. La consommation d'amidon augmente tandis que la production de pommes de terre diminue d'année en année. Dans ces circonstances, il est demandé d'augmenter la teneur en amidon des tubercules de pomme de terre pour augmenter le rendement en amidon.
Les glucides dans les plantes sont stockés principalement sous forme d'amidon. Concernant les quantités relatives de pommes de terre consommées pour différentes raisons au Japon, leur utilisation comme produit de départ pour l'amidon est la plus élevée et représente environ
40 %, et leurs utilisations comme aliments et aliments transformés représentent 25 % et 10 %, respectivement. La consommation d'amidon augmente tandis que la production de pommes de terre diminue d'année en année. Dans ces circonstances, il est demandé d'augmenter la teneur en amidon des tubercules de pomme de terre pour augmenter le rendement en amidon.
Dans ce but, on a tenté d'améliorer la capacité d'assimilation du dioxyde de carbone et aussi la capacité d'accumulation des substances dans les organes de réserve de manière à synthétiser et accumuler un excès de saccharides. Cependant, même si la teneur en amidon des tubercules peut être augmentée, la quantité de tubercules obtenus est réduite dans bien des cas. La quantité d'amidon calculée par corps végétal peut être augmentée dans quelques cas seulement.
Par exemple, Beaujean et al. ont introduit le gène de la C4-phosphoénolpyruvate carboxylase (C4-PEPC) du sorgho et le gène de la malate déshydrogénase dépendante de NADP dans des pommes de terre dans le but d'augmenter l'efficacité d'assimilation du dioxyde de carbone des pommes de terre. Bien qu'une augmentation de la quantité de protéines et aussi une augmentation de l'activité par les gènes introduits aient été observées, la teneur en amidon des tubercules était inchangée (Beaujean et al., Plant Science 160,1199-1210, 2001).
Veramendi et al. ont introduit le gène de l'hexokinase 1 dans la direction antisens dans des pommes de terre dans le but d'augmenter leur teneur
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en amidon et ont réussi à réduire l'activité hexokinase des pommes de terre à 22 % par rapport à des souches sauvages. A titre de résultat, aucun changement de la teneur en amidon des tubercules n'a été observé tandis que la teneur en amidon du tissu foliaire a pu être augmentée de trois fois (Veramendi et al., Plant Physiology 121,123-134, 1999). En outre, quand le gène de transporteur de saccharose a été introduit dans la direction antisens, le rendement en tubercules a été réduit sérieusement, bien que la teneur en amidon du tissu foliaire soit augmentée de cinq fois, de sorte que la productivité d'amidon n'a pas pu être augmentée (Riesmeier JW et al., The EMBO J, 13,1-7, 1994). Ainsi, il est difficile d'augmenter à la fois la teneur en amidon des pommes de terre et leur rendement en tubercules, de sorte qu'il n'a pas encore été décrit que la quantité d'amidon par corps végétal ait augmenté remarquablement.
Description de l'invention :
Problème à résoudre par l'invention :
Le but de la présente invention est de fournir un procédé pour produire des pommes de terre ayant une teneur en amidon accrue par corps végétal en augmentant à la fois la teneur en amidon des tubercules de pomme de terre et le rendement en tubercules des pommes de terre pour augmenter la productivité d'amidon à partir des pommes de terre.
Problème à résoudre par l'invention :
Le but de la présente invention est de fournir un procédé pour produire des pommes de terre ayant une teneur en amidon accrue par corps végétal en augmentant à la fois la teneur en amidon des tubercules de pomme de terre et le rendement en tubercules des pommes de terre pour augmenter la productivité d'amidon à partir des pommes de terre.
Moyens pour résoudre le problème :
La Demanderesse a considéré que l'absorption d'azote et le métabolisme de l'azote peuvent être activés par surexpression dans des cellules de pommes de terre du gène Dofl de facteur régulateur de la transcription provenant du maïs. Le gène Dofl de facteur régulateur de la transcription provenant du maïs est un facteur régulateur positif pour le gène de la phosphoénolpyruvate carboxylase et le gène de la pyruvate acide orthophosphorique dikinase cytoplasmique. On considère qu'en augmentant simultanément ces activités enzymatiques, le flux du métabolisme du carbone est déplacé en direction du système de synthèse des aminoacides (demande de brevet japonais n 2002-40 947).
La Demanderesse a considéré que l'absorption d'azote et le métabolisme de l'azote peuvent être activés par surexpression dans des cellules de pommes de terre du gène Dofl de facteur régulateur de la transcription provenant du maïs. Le gène Dofl de facteur régulateur de la transcription provenant du maïs est un facteur régulateur positif pour le gène de la phosphoénolpyruvate carboxylase et le gène de la pyruvate acide orthophosphorique dikinase cytoplasmique. On considère qu'en augmentant simultanément ces activités enzymatiques, le flux du métabolisme du carbone est déplacé en direction du système de synthèse des aminoacides (demande de brevet japonais n 2002-40 947).
On prévoit donc que, quand le gène Dofl est surexprimé dans une plante, la quantité d'aminoacides qui y est synthétisée augmente, de sorte que la capacité d'assimilation de l'azote est améliorée. L'azote est le facteur
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limitant la croissance le plus important pour les plantes et on suppose que quand la capacité d'absorption de l'azote et la capacité d'assimilation de l'azote d'une plante sont améliorées par l'introduction du gène Dofl, la croissance de la plante est accélérée et une quantité accrue de ressources peut être accumulée dans la plante. Dans les pommes de terre, pendant la formation des organes de stockage, les tubercules, on suppose que de tels nutriments accumulés sont transportés dans les tubercules par translocation pour favoriser la formation des tubercules et ainsi pour augmenter le rendement en tubercules. De plus, les saccharides transportés en excès sont convertis en amidon (forme de stockage) et sont accumulés en grande quantité dans les tubercules.
La Demanderesse a produit des pommes de terre transformées dans lesquelles le gène Dofl est introduit et a confirmé une augmentation du rendement en tubercules et en même temps une augmentation de la teneur en amidon par unité de poids des tubercules. A titre de résultat, il a été confirmé que la quantité d'amidon obtenue par corps végétal de pomme de terre était augmentée. La Demanderesse est ainsi parvenue à la présente invention.
En effet, la présente invention concerne des pommes de terre ayant un rendement en tubercules par corps végétal supérieur à celui de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, où un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est introduit dans les pommes de terre.
La présente invention concerne des pommes de terre ayant une teneur en amidon dans les tubercules de pommes de terre supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, où un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est introduit dans les pommes de terre.
La présente invention concerne des pommes de terre ayant une teneur en amidon par corps végétal supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, où un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est introduit dans les pommes de terre.
La présente invention concerne des descendants des pommes de terre décrites ci-dessus qui portent un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof.
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La présente invention concerne un procédé pour produire des pommes de terre ayant un rendement en tubercules de pommes de terre par corps végétal supérieur à celui de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, comprenant l'introduction d'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans les pommes de terre pour exprimer le gène dans les pommes de terre.
La présente invention concerne un procédé pour produire des pommes de terre ayant une teneur en amidon dans les tubercules de pommes de terre supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, comprenant l'introduction d'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans les pommes de terre pour exprimer le gène dans les pommes de terre.
La présente invention concerne un procédé pour produire des pommes de terre ayant une teneur en amidon par corps végétal supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, comprenant l'introduction d'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans les pommes de terre pour exprimer le gène dans les pommes de terre.
La présente invention concerne un procédé pour produire de l'amidon comprenant la culture de telles pommes de terre ou de leurs descendants et l'obtention d'amidon à partir des tubercules produits.
Meilleur mode pour mettre en #uvre l'invention :
La protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof utilisable dans la présente invention peut être une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof provenant d'une autre espèce de plante, laquelle protéine joue le rôle de protéine de régulation majeure dans la voie d'apport de carbone ou bien, en d'autres termes, un groupe de protéines régulant une voie métabolique conduisant au 2-oxoglutarate, en particulier, une protéine régulant la voie métabolique allant d'un triose au 2-oxoglutarate dans le système de la glycolyse et le cycle de Krebs subséquent.
La protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof utilisable dans la présente invention peut être une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof provenant d'une autre espèce de plante, laquelle protéine joue le rôle de protéine de régulation majeure dans la voie d'apport de carbone ou bien, en d'autres termes, un groupe de protéines régulant une voie métabolique conduisant au 2-oxoglutarate, en particulier, une protéine régulant la voie métabolique allant d'un triose au 2-oxoglutarate dans le système de la glycolyse et le cycle de Krebs subséquent.
La protéine Dofl du maïs constitue un exemple de telles protéines que l'on préfère. En outre, une protéine liant l'ADN ayant une délétion, une substitution ou une addition d'un ou plusieurs aminoacides dans la protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est utilisable aussi dans la présente invention à condition qu'elle présente la fonction décrite
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ci-dessus. En outre, un gène capable de s'hybrider à une molécule d'acide nucléique codant la protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans des conditions stringentes peut aussi être utilisé dans la présente invention.
Le terme "conditions stringentes" désigne des conditions dans lesquelles des hybrides appelés hybrides spécifiques sont produits. Il est difficile de définir clairement les conditions stringentes car elles dépendent de la teneur en GC de chaque séquence, de la présence ou de l'absence de séquences répétées, etc. Les conditions stringentes sont par exemple des conditions dans lesquelles des molécules d'acide nucléique ayant une grande homologie, par exemple des molécules d'acide nucléique ayant une homologie d'au moins 65 % s'hybrident mais dans lesquelles des acides nucléiques ayant une plus faible homologie ne s'hybrident pas.
Les conditions stringentes sont également des conditions dans lesquelles les molécules d'acide nucléique s'hybrident à une concentration de sel correspondant à des conditions de lavage d'hybridation de Southern ordinaires (60 C, lxSSC, 0,1 % SDS, de préférence O,lxSSC, 0,1 % SDS).
Compte tenu du rôle de gène/protéine de contrôle majeur et aussi compte tenu du fait que Dofl du maïs fonctionne en fait également dans Arabidopsis thaliana comme décrit dans cette recherche, on pense que même quand une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof et son gène proviennent d'une autre espèce végétale, ils présentent une fonction équivalente à celle de Dofl du maïs également dans une plante voulue. Les termes "ayant une fonction équivalente à celle de Dofl du maïs" indiquent qu'ils ont pour fonction d'accélérer la transcription du gène de la phosphoénolpyruvate carboxylase et/ou du gène de la pyruvate acide orthophosphorique dikinase cytoplasmique.
Le gène de la famille Dof décrit ci-dessus et son ADNc peuvent être préparés relativement aisément selon des informations de séquence publiées, de la manière suivante : par exemple, concernant le gène Dofl du maïs, la séquence de bases de son ADNc est décrite dans GenBank n d'ordre X66076 (SEQ ID NOS. 1 et 2). L'ADNc de Dofl peut être obtenu relativement aisément en synthétisant une amorce de PCR pour amplifier une fraction d'ADN contenant une partie codant la protéine selon sa séquence puis en réalisant une RT-PCR avec l'ARN extrait de feuilles de maïs comme matrice.
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Selon la présente invention, des pommes de terre ayant un rendement en tubercules accru et/ou des pommes de terre ayant une teneur en amidon accrue par unité de poids de tubercules et/ou des pommes de terre ayant une quantité d'amidon accrue par corps végétal sont produites en introduisant une construction d'acide nucléique contenant le gène Dofl du maïs dans des pommes de terre et en exprimant le gène Dofl dans les pommes de terre transformées obtenues.
Selon la présente invention, on préfère que le poids moyen des tubercules récoltés par corps végétal soit au moins 1,2 fois celui des tubercules récoltés par corps végétal initial non transformé cultivé dans les mêmes conditions. Concernant la teneur en amidon, on préfère que la teneur en amidon par corps végétal soit au moins 1,5 fois celle du corps végétal initial non transformé cultivé dans les mêmes conditions.
Les constructions d'acide nucléique utilisées dans la présente invention peuvent être préparées par un procédé bien connu dans la technique. Concernant les moyens de biologie moléculaire pour isoler la construction d'acide nucléique et pour déterminer sa séquence, on se référera à des documents de la littérature comme Sambrook et al.,
Molecular cloning-Laboratory manual, seconde édition, Cold Spring,
Harbor Laboratory Press. Quand une amplification de gène, par exemple, par le procédé PCR, est nécessaire pour préparer des constructions d'acide nucléique utilisables dans la présente invention, les techniques correspondantes sont décrites par exemple par F.M. Ausubel et al. (eds. ), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994).
Molecular cloning-Laboratory manual, seconde édition, Cold Spring,
Harbor Laboratory Press. Quand une amplification de gène, par exemple, par le procédé PCR, est nécessaire pour préparer des constructions d'acide nucléique utilisables dans la présente invention, les techniques correspondantes sont décrites par exemple par F.M. Ausubel et al. (eds. ), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994).
Les constructions d'acide nucléique utilisées dans la présente invention peuvent contenir habituellement des promoteurs appropriés qui sont fonctionnels dans les cellules végétales comme le promoteur du gène de la nopaline synthase, le promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV35S), un terminateur approprié comme le terminateur du gène de la nopaline synthase, d'autres séquences avantageuses pour l'expression, et des gènes marqueurs pour sélectionner les transformants, comme des gènes résistant à des produits chimiques, par exemple des gènes résistant à la kanamycine, à G418 et à l'hygromycine.
Le promoteur utilisable pour les constructions peut être un promoteur constitutif ou un promoteur spécifique d'organe ou spécifique de stade de croissance. Le promoteur peut être choisi selon l'hôte utilisé,
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le niveau d'expression nécessaire, l'organe dans lequel l'expression est particulièrement envisagée ou le stade de croissance. Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, un promoteur puissant qui permet une expression non spécifique de l'organe ou du stade de croissance est utilisé. Le promoteur CaMV35S est un exemple de tels promoteurs. Concernant les promoteurs spécifiques d'organe, on utilise le promoteur du gène de la phaséoline, le promoteur du gène de la patatine, etc. Dans le mode de réalisation de la présente invention que l'on préfère particulièrement, on utilise une construction qui commande le gène Dofl avec un promoteur constitutif puissant comme le promoteur CaMV35S.
Le procédé pour introduire les gènes selon la présente invention n'est pas limité particulièrement. Il est possible de choisir un procédé pour introduire les gènes dans des cellules végétales ou des corps végétaux, connus dans la technique, selon l'hôte. Par exemple, dans un mode de réalisation de la présente invention, on emploie un procédé d'introduction de gène avec Agrobacterium. Dans un tel système de transformation, on utilise de manière souhaitable un vecteur binaire.
Quand Agrobacterium est utilisé, une construction d'acide nucléique utilisée pour la transformation contient en outre une région d'ADN-T adjacente à la séquence d'ADN qui doit être introduite dans des cellules végétales. Dans un mode de réalisation préféré, la séquence importée est insérée entre les séquences frontières d'ADN-T gauche et droite.
Un agencement et une construction appropriés du vecteur transformé sur la base d'un tel ADN-T sont bien connus de l'homme du métier.
Les conditions pour infecter une plante avec Agrobacterium ayant une telle construction d'acide nucléique sont également bien connues de l'homme du métier. Pour de telles techniques et de telles conditions, on se référera à "Model Shokubutsu no Jikken Protocol (protocole expérimental de plantes modèles), Edition of Rice plant and Arabidopsis thaliana" (un volume séparé de Saibo Kokaku) édité par Shujun-sha en 1996.
Dans la présente invention, il est possible aussi d'utiliser un autre procédé d'introduction de gène. Les exemples de procédés d'introduction de gène qui peuvent être employés ici comprennent par exemple un procédé d'introduction d'ADN dans un protoplaste avec le polyéthylèneglycol ou le calcium, un procédé de transformation d'un
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protoplaste par électroporation et un procédé d'introduction avec un canon à particules.
Les cellules végétales ou analogues qui sont ainsi manipulées sont sélectionnées pour la transformation. La sélection peut être réalisée en fonction de l'expression de gènes marqueurs présents sur les constructions d'acide nucléique utilisées pour la transformation.
Par exemple, quand les gènes marqueurs sont résistants à des médicaments, ils peuvent être sélectionnés par culture de cellules végétales manipulées sur un milieu contenant une concentration appropriée d'un antibiotique, d'un herbicide ou analogue. Quand les gènes marqueurs sont des gènes de ss-glucuronidase ou des gènes de luciférase, leurs activités sont criblées pour sélectionner le transformant. Quand le transformant ainsi identifié n'est pas un corps végétal mais un protoplaste, un cal, un explant ou analogue, il est régénéré en le corps végétal.
Par exemple, quand les gènes marqueurs sont résistants à des médicaments, ils peuvent être sélectionnés par culture de cellules végétales manipulées sur un milieu contenant une concentration appropriée d'un antibiotique, d'un herbicide ou analogue. Quand les gènes marqueurs sont des gènes de ss-glucuronidase ou des gènes de luciférase, leurs activités sont criblées pour sélectionner le transformant. Quand le transformant ainsi identifié n'est pas un corps végétal mais un protoplaste, un cal, un explant ou analogue, il est régénéré en le corps végétal.
La régénération peut être réalisée par un procédé choisi en fonction de la plante hôte utilisée, parmi les procédés connus dans la technique.
Le corps végétal ainsi obtenu peut être cultivé par un procédé courant dans les mêmes conditions que celles appliquées dans la culture du non transformant. Pour identifier la plante transformée contenant la construction d'acide nucléique de la présente invention, il est possible d'employer différentes techniques de biologie moléculaire en plus de la sélection décrite ci-dessus qui est basée sur un gène marqueur.
Par exemple, il est possible d'employer l'hybridation de Southern ou la
PCR pour détecter une fraction à insertion d'ADN recombiné et sa structure. Il est possible d'employer l'hybridation de Northern ou la
RT-PCR pour détecter et déterminer des produits de transcription d'ARN à partir des constructions d'acide nucléique introduites.
PCR pour détecter une fraction à insertion d'ADN recombiné et sa structure. Il est possible d'employer l'hybridation de Northern ou la
RT-PCR pour détecter et déterminer des produits de transcription d'ARN à partir des constructions d'acide nucléique introduites.
L'expression du gène Dofl du transformant obtenu est évaluée en déterminant la quantité de protéine Dofl ou la quantité d'ARNm.
Par exemple, la quantité de protéine Dofl peut être déterminée par le procédé de transfert de Western ou analogue et la quantité d'ARNm peut être déterminée par le procédé de transfert de Northern ou par le procédé de RT-PCR quantitative.
Après la confirmation de l'expression du gène Dofl dans les pommes de terre ainsi transformées, le rendement en tubercules et la teneur en amidon des tubercules sont déterminés. Les pommes de terre
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transformées sont cultivées dans des conditions de culture sur sol ordinaires. Les corps végétaux utilisés pour la culture sur sol sont des corps de jeunes plants obtenus par acclimatation de produits cultivés transformés ou de microtubercules induits par la culture de tissu.
Les tubercules obtenus par la culture ordinaire sont évaluées sur la base du nombre de tubercules récoltés par corps végétal et de leur poids total.
La teneur en amidon des tubercules peut être déterminée en broyant les tubercules entiers, en obtenant un extrait à partir de ceux-ci et en déterminant la teneur en amidon, par exemple par un procédé enzymatique. La préparation de l'extrait végétal et la détermination de la teneur en amidon peuvent être réalisées par exemple par un procédé de Agarie et al. (S. Agarie, Plant Science, 2002,162, 257-265).
La teneur en amidon des tubercules peut être déterminée en broyant les tubercules entiers, en obtenant un extrait à partir de ceux-ci et en déterminant la teneur en amidon, par exemple par un procédé enzymatique. La préparation de l'extrait végétal et la détermination de la teneur en amidon peuvent être réalisées par exemple par un procédé de Agarie et al. (S. Agarie, Plant Science, 2002,162, 257-265).
Le poids et la teneur en amidon des tubercules récoltés sont déterminés quand la différence significative est 5 % ou moins dans un test statistique comme un test t.
La séquence de la construction d'acide nucléique dans le génome introduit peut être hémizygote ou homozygote dans la plante transformée. En pratique, des pommes de terre plantées sont cultivées de manière végétative et le gène introduit est transmis de manière stable à la descendance quel que soit le mode de conjugaison dans la séquence.
Les pommes de terre plantées provenant des pommes de terre transformées obtenues peuvent être multipliées et conservées par un procédé ordinaire bien connu dans la technique.
L'amidon peut être produit à partir des tubercules des pommes de terre transformées par un procédé ordinaire bien connu de l'homme du métier.
Exemples :
La présente invention va être illustrée spécifiquement par les exemples suivants concernant la préparation des plantes manipulées pour exprimer le gène Dofl en excès, l'analyse des aminoacides libres, la recherche du rendement et l'analyse de l'amidon.
La présente invention va être illustrée spécifiquement par les exemples suivants concernant la préparation des plantes manipulées pour exprimer le gène Dofl en excès, l'analyse des aminoacides libres, la recherche du rendement et l'analyse de l'amidon.
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Exemple 1. Intégration du gène Dofl du maïs dans un vecteur de transformation de plantes :
Le gène Dofl a été intégré à partir du plasmide 35SC4PPDK-
Dofl-HA (The Plant Cell 1998,10 (Jan), 75-89) dans le vecteur de transformation de plante pBI121 (Clontech Co. ) comme décrit ci-dessous.
Le gène Dofl a été intégré à partir du plasmide 35SC4PPDK-
Dofl-HA (The Plant Cell 1998,10 (Jan), 75-89) dans le vecteur de transformation de plante pBI121 (Clontech Co. ) comme décrit ci-dessous.
Le plasmide 35SC4PPDK-Dofl-HA a des fractions d'ADN dans lesquelles sont conjugués une région allant de la boîte TATA au site d'initiation de la traduction du gène de la C4 pyruvate acide orthophosphorique dikinase du maïs et l'ADNc de Dofl en aval du stimulateur du virus de la mosaïque du chou-fleur 35S, 2 molécules d'ADNc de phytohémagglutinine en tandem à titre de marqueur d'épitope en aval de ceux-ci, et finalement le site de terminaison de la nopaline synthase. Les fractions d'ADN peuvent être isolées par double clivage avec les enzymes de restriction XhoI et EcoRI. De ce fait, on a tenté d'intégrer la fraction XhoI-EcoRI dans la région d'ADN-T de pBI121. Tout d'abord, pBI121 a été incisé au site HindIII et son extrémité a été rendue franche avec l'ADN polymérase de Pfu cloné de Stratagene Co. Après la liaison avec le lieur XhoI phosphorylé (Takara Shuzo Co., Ltd. ) par la T4 ADN ligase (Takara Shuzo Co., Ltd. ) puis l'incision au niveau du site XhoI, les fractions de lieur ont été retirées par filtration sur gel avec une colonne
MicroSpin S-300 de Amersham-Pharmacia Co. Après l'autocyclisation avec la T4 ADN ligase, un plasmide ayant un site XhoI à la place du site HindIII a été obtenu. Ce plasmide contenait des sites XhoI et EcoRI comme sites uniques. Le plasmide obtenu a été clivé au niveau des sites XhoI et EcoRI puis la fraction XhoI-EcoRI préparée séparément à partir de 35SC4PPDKDofl-HA a été intégrée dans le plasmide pour former pBI121Dofl (figure 1).
MicroSpin S-300 de Amersham-Pharmacia Co. Après l'autocyclisation avec la T4 ADN ligase, un plasmide ayant un site XhoI à la place du site HindIII a été obtenu. Ce plasmide contenait des sites XhoI et EcoRI comme sites uniques. Le plasmide obtenu a été clivé au niveau des sites XhoI et EcoRI puis la fraction XhoI-EcoRI préparée séparément à partir de 35SC4PPDKDofl-HA a été intégrée dans le plasmide pour former pBI121Dofl (figure 1).
Exemple 2. Préparation de transformants de pommes de terre
Des pommes de terre (variété : May Queen) ont été transformées par un procédé de Gordon et al. (Plant Cell Reports, 1993, 12 : 324-327). Les plantes sans germes produites par culture d'apex de pousse ont été enracinées dans du milieu liquide MS. Une solution de saccharose à 16 % a été ajoutée. Des microtubercules ont été induits par culture à l'obscurité. Les microtubercules induits dans des conditions sans germes ont été épluchés, coupés en disques minces (disques de
Des pommes de terre (variété : May Queen) ont été transformées par un procédé de Gordon et al. (Plant Cell Reports, 1993, 12 : 324-327). Les plantes sans germes produites par culture d'apex de pousse ont été enracinées dans du milieu liquide MS. Une solution de saccharose à 16 % a été ajoutée. Des microtubercules ont été induits par culture à l'obscurité. Les microtubercules induits dans des conditions sans germes ont été épluchés, coupés en disques minces (disques de
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microtubercules) et utilisés pour l'infection avec Agrobacterium.
Les disques de microtubercules ont été précultivés dans un milieu de redifférentiation (sels inorganiques MS, vitamine B5, 3 % de saccharose,
2 mg/l de zéatine, 0,1 mg/l d'acétate d'indole, 2,5 mg/l de gomme de gellane, pH 5,8) pendant 24 h.
Les disques de microtubercules ont été précultivés dans un milieu de redifférentiation (sels inorganiques MS, vitamine B5, 3 % de saccharose,
2 mg/l de zéatine, 0,1 mg/l d'acétate d'indole, 2,5 mg/l de gomme de gellane, pH 5,8) pendant 24 h.
Le plasmide pBI121Dofl a été introduit dans Agrobacterium
C58ClRif par appariement triparental avec E. coli contenant pBI121Dofl et HB101/pRK203 de E. coli auxiliaire. Agrobacterium contenant le gène construit a été inoculé à du milieu YEP contenant 50 mg/l de kanamycine (10 g/1 de bactotryptone, 10 g/1 d'extrait de levure et 1 g/1 de glucose) et cultivé sous agitation à 28 C pendant 24 h. Le produit de la culture a été plongé dans un mélange dilué de suspension d'Agrobacterium et d'un milieu de culture (sel inorganique MS, vitamine B5, 3 % de saccharose,
2 mg/l de zéatine, 0,1 mg/l d'acétate d'indole, 1,0 mg/l de 3,5'-diméthoxy- 4'-hydroxy-acétophénone, Aldrich Co., pH 5,8) et a été laissé au repos pendant 10 min. Puis, le liquide de culture d'Agrobacterium superflu a été essuyé avec un papier filtre stérile, et le produit a été transplanté dans le milieu de culture utilisé pour la préculture. Après la co-culture à 26 C pendant 48 h (longueur du jour : 16 h), il a été transplanté dans un milieu de sélection (sels inorganiques MS, vitamine B5, 3 % de saccharose, 2 mg/l de zéatine, 0,1 mg/l d'acétate d'indole, 50 mg/l de kanamycine, 300 mg/l de sel de sodium de céfotaxime et 2,5 mg/l de gomme de gellane, pH 5,8) et la culture a été continuée dans les mêmes conditions.
C58ClRif par appariement triparental avec E. coli contenant pBI121Dofl et HB101/pRK203 de E. coli auxiliaire. Agrobacterium contenant le gène construit a été inoculé à du milieu YEP contenant 50 mg/l de kanamycine (10 g/1 de bactotryptone, 10 g/1 d'extrait de levure et 1 g/1 de glucose) et cultivé sous agitation à 28 C pendant 24 h. Le produit de la culture a été plongé dans un mélange dilué de suspension d'Agrobacterium et d'un milieu de culture (sel inorganique MS, vitamine B5, 3 % de saccharose,
2 mg/l de zéatine, 0,1 mg/l d'acétate d'indole, 1,0 mg/l de 3,5'-diméthoxy- 4'-hydroxy-acétophénone, Aldrich Co., pH 5,8) et a été laissé au repos pendant 10 min. Puis, le liquide de culture d'Agrobacterium superflu a été essuyé avec un papier filtre stérile, et le produit a été transplanté dans le milieu de culture utilisé pour la préculture. Après la co-culture à 26 C pendant 48 h (longueur du jour : 16 h), il a été transplanté dans un milieu de sélection (sels inorganiques MS, vitamine B5, 3 % de saccharose, 2 mg/l de zéatine, 0,1 mg/l d'acétate d'indole, 50 mg/l de kanamycine, 300 mg/l de sel de sodium de céfotaxime et 2,5 mg/l de gomme de gellane, pH 5,8) et la culture a été continuée dans les mêmes conditions.
Le produit a été transplanté dans le nouveau milieu de sélection toutes les deux semaines et, en même temps, les pousses redifférenciées ont été transplantées dans un milieu d'enracinement (sels inorganiques MS, vitamine B5, 3 % de saccharose, 50 mg/l de kanamycine, 100 mg/l de sel de sodium de céfotaxime et 2,5 mg/l de gomme de gellane, pH 5,8).
L'apex de pousse de la plante enracinée a été transplanté dans le nouveau milieu d'enracinement pour répéter le test de résistance 3 ou 4 fois.
Huit racines de pommes de terre transformées avec Dofl ayant une résistance stable à la kanamycine ont été sélectionnées.
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Exemple 3. Confirmation du gène introduit
L'ADN a été extrait de 8 pommes de terre résistant à la kanamycine sélectionnées et des pommes de terre non transformées.
L'ADN a été extrait de 8 pommes de terre résistant à la kanamycine sélectionnées et des pommes de terre non transformées.
Le procédé d'extraction d'ADN était un procédé de Honda et al. (Honda and Hirai, 1990, Jpn Breed 40 : L'analyse par PCR a été réalisée avec l'ADN extrait, et des amorces de la partie promotrice et de la partie terminatrice dans lesquelles le gène était inséré :
5'-TTCCATTGCC CAGCTATCTG TCACTT-3' (SEQ ID NO. 3) et
5'-TCATCGCAAG ACCGGCAACA GGATTC-3' (SEQ ID NO. 4) et des amorces pour amplifier le gène NPTII dans le vecteur :
5'-CCC CTC GGT ATC CAA TTA GAG-3' (SEQ ID NO. 5) et
5'-CGG GGG GTG GGC GAA GAA CTC CAG-3' (SEQ ID NO. 6). '
Les conditions réactionnelles étaient 94 C-3 min ; 94 C-45 s, 55 C-30 s, 72 C-90 s, 35 cycles ; 72 C-10 min. Le système de PCR 2400 de Perkin-Elmer Co. a été utilisé pour la réaction. Le produit de PCR a été soumis à une électrophorèse avec un gel d'agarose à 1 % (tampon TAE) et a été coloré avec le bromure d'éthidium.
5'-TTCCATTGCC CAGCTATCTG TCACTT-3' (SEQ ID NO. 3) et
5'-TCATCGCAAG ACCGGCAACA GGATTC-3' (SEQ ID NO. 4) et des amorces pour amplifier le gène NPTII dans le vecteur :
5'-CCC CTC GGT ATC CAA TTA GAG-3' (SEQ ID NO. 5) et
5'-CGG GGG GTG GGC GAA GAA CTC CAG-3' (SEQ ID NO. 6). '
Les conditions réactionnelles étaient 94 C-3 min ; 94 C-45 s, 55 C-30 s, 72 C-90 s, 35 cycles ; 72 C-10 min. Le système de PCR 2400 de Perkin-Elmer Co. a été utilisé pour la réaction. Le produit de PCR a été soumis à une électrophorèse avec un gel d'agarose à 1 % (tampon TAE) et a été coloré avec le bromure d'éthidium.
A titre de résultat, une bande contenant le gène Dofl d'une taille estimée (environ 1,5 kpb, figure 2a) et une bande spécifique du gène NPTII (environ 1,1 kpb, figure 2b) ont été identifiées dans les pommes de terre transformées sélectionnées. Ces bandes n'ont pas été identifiées dans les pommes de terre non transformées. D'après ces faits, on a compris que le domaine d'ADN-T contenant le gène Dofl avait été introduit dans les pommes de terre transformées.
Exemple 4. Confirmation de l'expression du gène introduit (analyse de Northern)
Huit racines de pommes de terre transformées dans lesquelles l'introduction du gène Dofl avait été confirmée ont été soumises à l'analyse de Northern pour confirmer l'expression du gène introduit.
Huit racines de pommes de terre transformées dans lesquelles l'introduction du gène Dofl avait été confirmée ont été soumises à l'analyse de Northern pour confirmer l'expression du gène introduit.
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L'ARN total a été extrait du tissu foliaire des pommes de terre transformées avec le RNeasy Plant mini Kit de Qiagen Co. un mois après la transplantation dans le sol. 10 g de l'ARN extrait ont été soumis à une électrophorèse avec un gel d'agarose à 1,2 % contenant 18 % de formaldéhyde puis colorés avec le bromure d'éthidium. Après le transfert sur une membrane en Nylon (HybondN+), le produit a été fixé avec des UV et hybridé. La longueur totale du gène Dofl a été utilisée comme sonde. Le transfert de Northern et la préparation de la sonde ont été réalisés avec le DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II et le PCR DIG Probe Synthesis Kit de Roche Diagnostics Co.
A titre de résultat, une bande spécifique du gène Dofl a été confirmée dans le tissu foliaire des pommes de terre transformées (figure 3). On a constaté que le gène Dofl introduit était transcrit et exprimé dans le tissu foliaire des pommes de terre transformées. La bande spécifique du gène Dofl n'a pas été identifiée dans les pommes de terre non transformées.
Exemple 5. Examen du rendement des pommes de terre transformées
Le rendement des pommes de terre transformées a été examiné. Pour le test, les plantes sans germes provenant des pommes de terre transformées et des pommes de terre non transformées ont été utilisées. Après l'acclimatation, 0,5 kg de sol riche (azote total 0,2 g) a été introduit dans un pot à fleurs (3,5 L) puis de la vermiculite (sans nutriments) a été ajoutée pour remplir le pot. Deux mois après le début de la culture, 0,3 kg (azote total 0,12 g) de sol riche ont été utilisés comme sol de couverture. Au cours de la culture, le nombre de pédoncules a été limité à un. Le troisième mois après la transplantation, les pommes de terre ont été récoltées et le poids de la partie aérienne, le poids des tubercules et le nombre de tubercules ont été examinés.
Le rendement des pommes de terre transformées a été examiné. Pour le test, les plantes sans germes provenant des pommes de terre transformées et des pommes de terre non transformées ont été utilisées. Après l'acclimatation, 0,5 kg de sol riche (azote total 0,2 g) a été introduit dans un pot à fleurs (3,5 L) puis de la vermiculite (sans nutriments) a été ajoutée pour remplir le pot. Deux mois après le début de la culture, 0,3 kg (azote total 0,12 g) de sol riche ont été utilisés comme sol de couverture. Au cours de la culture, le nombre de pédoncules a été limité à un. Le troisième mois après la transplantation, les pommes de terre ont été récoltées et le poids de la partie aérienne, le poids des tubercules et le nombre de tubercules ont été examinés.
On a constaté à l'examen que, par rapport aux pommes de terre non transformées, les pommes de terre transformées avec Dofl avaient un poids de la partie aérienne augmenté de 1,24 à 1,50 fois, un poids de tubercules augmenté de 1,05 à 1,40 fois et un nombre de tubercules augmenté de 1,42 à 1,90 fois (tableau 1).
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Tableau 1. Résultats de l'examen du rendement des pommes de terre transformées avec Dofl (n = 3)
<tb>
<tb> Poids <SEP> de <SEP> la <SEP> partie <SEP> Poids <SEP> total <SEP> de <SEP> Nombre <SEP> total
<tb> aérienne <SEP> (g) <SEP> tubercules <SEP> (g) <SEP> de <SEP> tubercules
<tb> Non-transformant <SEP> 31,02 <SEP> 3,66 <SEP> 96,32 <SEP> 1,60 <SEP> 6,7 <SEP> ~ <SEP> 0,8
<tb> Dof1-1 <SEP> 41,85 <SEP> 4,47 <SEP> 122,80 <SEP> 11,48 <SEP> 12,7 <SEP> ~ <SEP> 1,0
<tb> Dofl-2 <SEP> 38,56 <SEP> 3,49 <SEP> 100,98 <SEP> 8,39 <SEP> 9,7 <SEP> ~ <SEP> 0,4
<tb> Dof1-3 <SEP> 45,04 <SEP> ~ <SEP> 0,33 <SEP> 132,29 <SEP> 0,96 <SEP> 10,5 <SEP> 0,2 <SEP>
<tb> Dof1-4 <SEP> 46,38 <SEP> ~ <SEP> 0,33 <SEP> 132,35 <SEP> 1,95 <SEP> 12,3 <SEP> 1,0 <SEP>
<tb> Dof1-5 <SEP> 39,39 <SEP> ~ <SEP> 2,77 <SEP> 109,53 <SEP> 9,51 <SEP> 10,7 <SEP> 1,3 <SEP>
<tb> Dofl-6 <SEP> 39,61 <SEP> 1,42 <SEP> 120,78 <SEP> 13,28 <SEP> 9,5 <SEP> ~ <SEP> 1,2
<tb> Dofl-8 <SEP> 41,83 <SEP> ~ <SEP> 1,76 <SEP> 129,02 <SEP> 12,30 <SEP> 12,3 <SEP> 0,2 <SEP>
<tb> Dof1-9 <SEP> 42,43 <SEP> ~ <SEP> 0,62 <SEP> 135,23 <SEP> 4,27 <SEP> 12,3 <SEP> 0,5
<tb>
Exemple 6. Détermination de la teneur en amidon des tubercules
Les tubercules de pommes de terres transformées et de pommes de terre non transformées ont été congelés (-80 C) immédiatement après la récolte et maintenus à l'état congelé, et leur teneur en amidon a été déterminée. Deux tubercules ont été utilisés dans chaque groupe. Les tubercules entiers ont été pulvérisés avec de l'azote liquide. L'extraction a été réalisée par un procédé de S. Agarie et al. (Plant Science 162,2002, 257-265). La teneur en amidon a été déterminée avec le F-kit starch de Roche Diagnostics Co.
<tb> Poids <SEP> de <SEP> la <SEP> partie <SEP> Poids <SEP> total <SEP> de <SEP> Nombre <SEP> total
<tb> aérienne <SEP> (g) <SEP> tubercules <SEP> (g) <SEP> de <SEP> tubercules
<tb> Non-transformant <SEP> 31,02 <SEP> 3,66 <SEP> 96,32 <SEP> 1,60 <SEP> 6,7 <SEP> ~ <SEP> 0,8
<tb> Dof1-1 <SEP> 41,85 <SEP> 4,47 <SEP> 122,80 <SEP> 11,48 <SEP> 12,7 <SEP> ~ <SEP> 1,0
<tb> Dofl-2 <SEP> 38,56 <SEP> 3,49 <SEP> 100,98 <SEP> 8,39 <SEP> 9,7 <SEP> ~ <SEP> 0,4
<tb> Dof1-3 <SEP> 45,04 <SEP> ~ <SEP> 0,33 <SEP> 132,29 <SEP> 0,96 <SEP> 10,5 <SEP> 0,2 <SEP>
<tb> Dof1-4 <SEP> 46,38 <SEP> ~ <SEP> 0,33 <SEP> 132,35 <SEP> 1,95 <SEP> 12,3 <SEP> 1,0 <SEP>
<tb> Dof1-5 <SEP> 39,39 <SEP> ~ <SEP> 2,77 <SEP> 109,53 <SEP> 9,51 <SEP> 10,7 <SEP> 1,3 <SEP>
<tb> Dofl-6 <SEP> 39,61 <SEP> 1,42 <SEP> 120,78 <SEP> 13,28 <SEP> 9,5 <SEP> ~ <SEP> 1,2
<tb> Dofl-8 <SEP> 41,83 <SEP> ~ <SEP> 1,76 <SEP> 129,02 <SEP> 12,30 <SEP> 12,3 <SEP> 0,2 <SEP>
<tb> Dof1-9 <SEP> 42,43 <SEP> ~ <SEP> 0,62 <SEP> 135,23 <SEP> 4,27 <SEP> 12,3 <SEP> 0,5
<tb>
Exemple 6. Détermination de la teneur en amidon des tubercules
Les tubercules de pommes de terres transformées et de pommes de terre non transformées ont été congelés (-80 C) immédiatement après la récolte et maintenus à l'état congelé, et leur teneur en amidon a été déterminée. Deux tubercules ont été utilisés dans chaque groupe. Les tubercules entiers ont été pulvérisés avec de l'azote liquide. L'extraction a été réalisée par un procédé de S. Agarie et al. (Plant Science 162,2002, 257-265). La teneur en amidon a été déterminée avec le F-kit starch de Roche Diagnostics Co.
A titre de résultat, la teneur en amidon des tubercules des pommes de terre transformées avec Dofl était 1,06 à 1,53 fois celle des pommes de terre non transformées. La teneur en amidon par plant de pommes de terre était au moins deux fois supérieure à celle d'un plant de pommes de terre non transformé (tableau 2).
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Tableau 2. Teneur en amidon des tubercules de pommes de terre transformées avec Dofl
<tb>
<tb> Teneur <SEP> en <SEP> amidon <SEP> Poids <SEP> de <SEP> Teneur <SEP> totale <SEP> Rappor
<tb> (pmol/g <SEP> F. <SEP> W.) <SEP> tubercules <SEP> en <SEP> amidon <SEP> t
<tb> (g) <SEP> ( mol)
<tb> Non-transformant <SEP> 35,71 <SEP> 4,26 <SEP> 96,32 <SEP> 3439,52 <SEP> 1,0
<tb> Dofl-1 <SEP> 48,80 <SEP> 3,60 <SEP> 122,80 <SEP> 5993,03 <SEP> 1,7
<tb> Dof1-3 <SEP> 37,80 <SEP> ~ <SEP> 3,14 <SEP> 132,29 <SEP> 5001,13 <SEP> 1,5
<tb> Dofl-4 <SEP> 42,12 <SEP> 2,61 <SEP> 132,25 <SEP> 5570,85 <SEP> 1,6
<tb> Dofl-9 <SEP> 54,91 <SEP> 0,05 <SEP> 135,23 <SEP> 7425,48 <SEP> 2,2
<tb>
<tb> Teneur <SEP> en <SEP> amidon <SEP> Poids <SEP> de <SEP> Teneur <SEP> totale <SEP> Rappor
<tb> (pmol/g <SEP> F. <SEP> W.) <SEP> tubercules <SEP> en <SEP> amidon <SEP> t
<tb> (g) <SEP> ( mol)
<tb> Non-transformant <SEP> 35,71 <SEP> 4,26 <SEP> 96,32 <SEP> 3439,52 <SEP> 1,0
<tb> Dofl-1 <SEP> 48,80 <SEP> 3,60 <SEP> 122,80 <SEP> 5993,03 <SEP> 1,7
<tb> Dof1-3 <SEP> 37,80 <SEP> ~ <SEP> 3,14 <SEP> 132,29 <SEP> 5001,13 <SEP> 1,5
<tb> Dofl-4 <SEP> 42,12 <SEP> 2,61 <SEP> 132,25 <SEP> 5570,85 <SEP> 1,6
<tb> Dofl-9 <SEP> 54,91 <SEP> 0,05 <SEP> 135,23 <SEP> 7425,48 <SEP> 2,2
<tb>
L'analyse des aminoacides des tissus des feuilles et des tiges des plantes cultivées dans des conditions sans germes a été réalisée, et on a constaté que la teneur totale en aminoacides des pommes de terre transformées avec Dofl était supérieure de 1,88 fois ou moins à celle des pommes de terre non transformées.
Texte libre du listage de séquences SEQ ID NO. 1 : séquence de bases de l'ADNc du gène Dofl du maïs SEQ ID NO. 2 : séquence d'aminoacides codant l'ADNc du gène Dofl du maïs SEQ ID NOS. 3 et 4 : amorces dans la partie promotrice et la partie terminatrice où le gène Dofl a été inséré SEQ ID NOS. 5 et 6 : pour amplifier le gène nptII dans le vecteur Brève description des dessins :
La figure 1 est une vue schématique de la partie du plasmide pBI121Dof1 dans laquelle Dofl a été inséré.
La figure 1 est une vue schématique de la partie du plasmide pBI121Dof1 dans laquelle Dofl a été inséré.
La figure 2 montre les résultats de l'analyse par PCR de pommes de terre transformées avec Dofl, où :
A représente la réaction de PCR avec une amorce contenant le gène Dofl,
B représente l'analyse par PCR avec une amorce spécifique du gène nptII.
A représente la réaction de PCR avec une amorce contenant le gène Dofl,
B représente l'analyse par PCR avec une amorce spécifique du gène nptII.
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La piste 1 représente un non-transformant ; la piste 2 représente Dofl-1 ; la piste 3 représente Dofl-2 ; la piste 4 représente Dofl-3 ; la piste 5 représente Dofl-4 ; la piste 6 représente Dofl-5 ; la piste 7 représente Dofl-6 ; la piste 8 représente Dofl-8 ; et la piste 9 représente Dofl-9.
La figure 3 représente l'analyse de Northern du tissu foliaire de pommes de terre transformées avec Dofl.
Les pistes 1-2 représentent le non-transformant ; la piste 3 représente Dofl-1 ; la piste 4 représente Dofl-2 ; la piste 5 représente Dofl-3 ; la piste 6 représente Dofl-4 ; la piste 7 représente Dofl-5 ; la piste 8 représente Dofl-6 ; la piste 9 représente Dofl-8 ; et la piste 10 représente Dofl-9.
Claims (14)
1. Pommes de terre ayant un rendement en tubercules de pommes de terre par corps végétal supérieur à celui de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, caractérisées en ce qu'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est introduit dans les pommes de terre.
2. Pommes de terre selon la revendication 1, caractérisées en ce que le gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille
Dof est le gène Dofl du maïs.
3. Pommes de terre ayant une teneur en amidon dans les tubercules de pommes de terre supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, caractérisées en ce qu'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est introduit dans les pommes de terre.
4. Pommes de terre selon la revendication 3, caractérisées en ce que le gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est le gène Dofl du maïs.
5. Pommes de terre ayant une teneur en amidon par corps végétal supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, caractérisées en ce qu'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est introduit dans les pommes de terre.
6. Pommes de terre selon la revendication 5, caractérisées en ce que le gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est le gène Dofl du maïs.
7. Descendants de pommes de terre selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisés en ce qu'ils portent un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof.
8. Procédé pour produire des pommes de terre ayant un rendement en tubercules de pomme de terre par corps végétal supérieur à celui de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, caractérisé en ce qu'il comprend l'introduction d'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans les pommes de terre pour exprimer le gène dans les pommes de terre.
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9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que le gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est le gène Dofl du maïs.
10. Procédé pour produire des pommes de terre ayant une teneur en amidon dans les tubercules de pommes de terre supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, caractérisé en ce qu'il comprend l'introduction d'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans les pommes de terre pour exprimer le gène dans les pommes de terre.
11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est le gène Dofl du maïs.
12. Procédé pour produire des pommes de terre ayant une teneur en amidon par corps végétal supérieure à celle de pommes de terre non transformées cultivées dans les mêmes conditions, caractérisé en ce qu'il comprend l'introduction d'un gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof dans les pommes de terre pour exprimer le gène dans les pommes de terre.
13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé en ce que le gène codant une protéine liant l'ADN appartenant à la famille Dof est le gène Dofl du maïs.
14. Procédé pour produire de l'amidon, caractérisé en ce qu'il comprend la culture de pommes de terre selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 ou de descendants selon la revendication 7 et l'obtention d'amidon à partir des tubercules produits.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2003370655A JP2005130770A (ja) | 2003-10-30 | 2003-10-30 | 植物体あたり得られるデンプン量が増加したバレイショおよびその作出法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
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