FR2866348A1 - Plantes ayant une periode de dormance reduite et procedes pour leur production - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une plante ayant une période de dormance réduite, une plante ayant une période de dormance réduite et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme, et un procédé pour produire ces plantes. La teneur en 2-OG intracellulaire de la plante peut être augmentée, par exemple par surexpression d'un gène de GDH intracellulaire dans la plante. Plus spécifiquement, la teneur en 2-OG intracellulaire de la plante peut être augmentée du fait de la surexpression du gène de GDH par introduction dans la plante d'une construction d'acide nucléique capable de stimuler l'expression du gène de GDH, en particulier d'une construction d'acide nucléique capable d'exprimer le gène de GDH.

Description

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DOMAINE DE L'INVENTION La présente invention concerne les plantes ayant une période de dormance réduite et plus particulièrement des plantes ayant une période de dormance réduite et un rendement accru.

De plus, la présente invention concerne aussi des procédés pour produire des plantes ayant une période de dormances réduite, et en particulier des procédés pour produire des plantes ayant une période de dormance réduite et un rendement accru.

ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION La dormance désigne un état dans lequel la plante vivante ne germe pas même si les conditions environnementales comme l'humidité, la température, etc., sont favorables pour le bourgeonnement ou la germination des graines. La dormance est commune dans les graines, les bulbes, les arbres à feuilles caduques ou analogues. La dormance est considérée comme une fonction importante pour protéger une plante contre les environnements inférieurs et pour maintenir ses graines. Cependant, en agriculture moderne, les environnements de culture sont améliorés avec la propagation de la culture en serre ou de la multiculture, de sorte que cette dormance peut entraver largement la culture. De ce fait, des espèces de nombreuses plantes ayant une courte période de dormance ou dépourvues de dormance ont été cultivées activement et d'excellents résultats ont ainsi été obtenus.

De plus, un procédé pour interrompre la dormance des plantes a été développé au moyen d'un traitement artificiel. On considère que la dormance est due principalement à l'accumulation d'inhibiteurs de germination comme l'acide abscissique. Pour sortir de la dormance, on considère qu'une baisse d'inhibiteur de germination ou une augmentation de gibbérelline qui présente une action antagoniste des inhibiteurs de germination est nécessaire. De ce fait, on prévoit des effets d'interruption de la dormance dans les traitements des plantes avec une gibbérelline.

En fait, la gibbérelline présente un effet inducteur de germination pour les graines en dormance de l'avoine, de la laitue, etc., et les bourgeons en dormance de la pomme de terre, du pêcher, du camélia, etc. (Tomokazu Koshiba et Yuji Kamiya, "Science of new plant 2866348 2 hormone", Kodansha Ltd., 2002). En outre, il a été confirmé qu'elle a un effet remarquable pour améliorer la germination des graines de riz, de la famille du blé, de la ramie, de l'arachide de Bromus catharticus, de Bromus inermis Leyss., du radis japonais, de Brassica, de la laitue, de l'aubergine, de la langue de boeuf, de la gloxinie, de kalanchoe, de Primula, de Nigella damascene, etc., et aussi de la fraise, de Aralia cordata Thunberg, etc. (Vegetable horticulture great dictionary, Yokendo, 1977). Bien que la corrélation entre la gibbérelline et la germination ne soit pas claire, l'oignon, la ciboule, l'épinard,. les bulbes à fleurs, etc., sont également considérés comme des plantes à dormance représentatives.

La pomme de terre est aussi une plante à dormance, et le bourgeonnement de la pomme de terre ne peut pas être observé pendant les trois mois environ qui suivent la récolte. Cependant, comme décrit ci-dessus, il a été indiqué que la période de dormance peut être raccourcie par un traitement avec une gibbérelline (Tokushima Test and Research Report of Agriculture, vol. 36, p. 7-17,, 2000) et la pomme de terre est considérée comme un matériel approprié pour examiner la corrélation entre les régulateurs de dormance et les teneurs endogènes en gibbérelline.

La pomme de terre est cultivée sur environ 20 millions de ha (hectares), et son rendement moyen est de 1,48 tonne pour 10 a (ares) et son rendement total est d'environ 300 millions de tonnes. La plus grande surface cultivée est en Russie, suivie par la Chine et la Pologne, et le rendement total de ces surfaces est également de cet ordre. La surface plantée destinée aux pommes de terre au Japon représente environ 130 000 ha et son rendement est d'environ 4 millions de tonnes. Sa consommation est répartie en 44 % pour les matières premières de type amidon, 21 % pour les aliments bruts et 13 % pour les aliments industriels. Cependant, comme la libération des importations entre en vigueur pour le maïs ou le blé, des importations d'amidon à faible coût deviennent possibles. De ce fait, pour gagner cette sévère compétition des prix, il est nécessaire de garantir un système de production ayant simultanément une grande qualité et une grande quantité en améliorant encore la culture des pommes de terre. Spécifiquement, on considère qu'il est nécessaire d'augmenter l'indice d'amidon moyen de 13 % à 18 % et d'augmenter le rendement de production moyen pour 10 a de 4 à 7 tonnes, et de réduire encore les coûts de production à la moitié de leur valeur.

L'indice d'amidon au stade initial du grossissement des tubercules après la formation des tubercules est d'approximativement 0,8 %, après quoi cette valeur augmente avec le grossissement des tubercules. Ainsi, pour augmenter l'indice d'amidon des tubercules, il est important de prévoir une durée suffisante pour le grossissement des tubercules. En outre, comme l'indice d'amidon diminue rapidement quand la température du sol augmente, une température du sol (profondeur de 10 cm) de 17 à 22 C est une température optimale pour une période de grossissement des tubercules. De ce fait, il est souhaitable d'ajuster l'époque de culture de manière que la température à l'époque de la floraison qui initie la formation des tubercules soit d'environ 18 C, et plus spécifiquement, il est recommandé que la plantation de printemps soit réalisée 7 à 10 jours avant que la température de l'air atteigne 10 C et que la plantation d'automne soit réalisée 10 jours avant que la température moyenne atteigne 23 C.

D'autre part, concernant le rendement des tubercules, il est préférable de prévoir une période de grossissement de tubercules suffisante, et le rendement des pommes de terre augmente d'environ 60 à 70 kg par jour pour 10 a pendant la période de grossissement, et il est souhaitable de planter dans les champs aussi tôt que possible compte tenu de la température optimale pour l'indice d'amidon.

De plus, généralement, la durée qui s'étend des tubercules aux bourgeons (période de bourgeonnement) varie, et des variations de 15 jours ne sont pas inhabituelles. En général, par rapport au rendement de bourgeons apparus plus précocement, le rendement des bourgeons apparus plus tardivement diminue, car il n'y a pas de durée suffisante pour le grossissement des tubercules. Si le bourgeonnement est retardé de 15 jours, on estime que le rendement par plante diminue d'une valeur pouvant atteindre 24 %. De cette manière, la variation de la période de bourgeonnement est considérée comme étant un facteur significatif pour la diminution du rendement. Ainsi, un bourgeonnement rapide et uniforme à partir des tubercules, c'est-à-dire de petites variations de croissance sont un facteur essentiel pour augmenter le rendement. (Potato encyclopedia, Minoru Yoshida, Rural Culture Association, 1988).

On considère que la gibbérelline est synthétisée par deux voies: l'une est une voie de l'acide mévalonique dans laquelle la gibbérelline est synthétisée à partir de l'acide mévalonique dérivé de l'acide acétique par le biais du diphosphate d'isopentényle, et l'autre est une voie différente de l'acide mévalonique dans laquelle la gibbérelline est synthétisée par le diphosphate d'isopentényle produit à partir de l'acide pyruvique dérivé du glucose et du glycéraldéhyde-3-phosphate. Le diphosphate d'isopentényle est converti en l'hydrocarbure tétracyclique ent-kaurène par le biais du diphosphate de géranyle, du diphosphate de géranylgéranyle et du diphosphate de ent-copalyle. Puis, lent-kaurène est soumis à trois oxydations successives pour produire de l'acide entkaurénoïque, et l'acide ent-kaurénoïque est soumis à trois oxydations successives pour synthétiser GAl2. La biosynthèse suivant la synthèse de GAl2 est catalysée par la dioxygénase qui utilise le 2-oxoglutarate comme cosubstrat. Actuellement, 100 ou plus de 100 variétés de gibbérellines libres sont répertoriées, mais les gibbérellines actives qui ont une activité physiologique n'en constituent seulement qu'une partie (GAI, GA3, GA4, etc.).

Dans le but d'étudier les effets physiologiques de la gibbérelline, on a tenté d'introduire des gènes impliqués dans la synthèse de la gibbérelline dans une plante. Huang et al., ont produit un transformant en introduisant le gène de la 20-oxydase isolé à partir d'Arabidopsis dans Arabidopsis dans la direction sens, où le gène était surexprimé. Il a été décrit que ce transformant présente des teneurs accrues en GAI, GA9 et GA20, une époque de floraison avancée et une période de dormance des graines réduite, par rapport aux non transformants, mais il a été décrit aussi qu'il existe une anomalie morphologique remarquable dans une plante où l'extension des hypocotyles et des tiges a été observée (Plant Physiology, 118:773-781, 1998). De plus, Carrera et al. ont isolé à partir de pommes de terre un gène codant la GA20-oxydase (StGA20oxl), et l'ont introduit dans des pommes de terre dans la direction sens et dans la direction antisens. Il a été décrit que, quand il a été introduit dans la direction sens et surexprimé, la longueur des entre-noeuds augmentait et que l'époque de bourgeonnement à partir des tubercules était avancée (Plant Journal, 22:247-256, 2000). Cependant, dans un transformant dans lequel un gène codant la GA20-oxydase était introduit dans la direction antisens, la période de dormance était réduite et le nombre et le poids des tubercules étaient largement réduits, de sorte qu'une amélioration du rendement n'a pas été obtenue. De plus, comme on n'a pas observé de différence entre l'époque de bourgeonnement à partir de tubercules de pomme de terre dans lesquels un gène codant la GA20-oxydase était introduit dans la direction antisens et l'époque de bourgeonnement à partir de tubercules du non transformant, les auteurs ont suggéré qu'il n'y avait pas de corrélation entre la GA20-oxydase et la dormance.

D'autre part, indépendamment de l'étude décrite ci-dessus, une plante transgénique dans laquelle un gène de glutamate déshydrogénase (GDH) avait été introduit a été produite, et un gène de GDH (gdhA) dépendant de NADP dérivé de E. coli a été introduit dans le tabac et le maïs dans le but de conférer une résistance à l'herbicide phosphonoglycine. Sur la base de ces études, il a été décrit que son poids sec, sa teneur totale en aminoacides et sa teneur en glucides hydrosolubles étaient sensiblement augmentés (Lightfoot et al., Canada, CA2180786, 1996). De manière similaire, Tian et al. (Chine, CN00109779.2) ont indiqué que le tabac présentait de bons résultats de croissance à la suite de l'introduction d'un gène de GDH dépendant de NADP dérivé de Neurospora par rapport à du tabac dans lequel le gène n'avait pas été introduit. En outre, il a été décrit qu'un gène de GDH dépendant de NADP dérivé de Aspergillus nidulans a été introduit dans des tomates pour augmenter la teneur en aminoacides libres du fruit (demande de brevet japonais publiée avant examen n 2001-238 556, Kisaka et al.) et que le même gène a été introduit dans des pommes de terre de sorte que le poids et le nornbre de tubercules ont augmenté (JP2000-404 322). Cependant, aucun de ces documents ne décrit une variation de la teneur en gibbérelline, et une étude de la dormance n'a pas été réalisée dans ces documents.

Claims (1)

RESUME DE L'INVENTION Un but de la présente invention est de fournir des plantes ayant une période de dormance réduite. En outre, un autre but de la présente invention est de fournir un procédé pour produire des plantes ayant une période de dormance réduite. De plus, un autre but de la présente invention est de fournir un 5 procédé pour réduire la période de dormance des plantes. En particulier, un but de la présente invention est de fournir des plantes ayant une période de dormance réduite et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme. De plus, un autre but encore de la présente invention est de fournir un procédé pour produire des plantes ayant une période de dormance réduite et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme. De plus, un autre but de la présente invention est de fournir un procédé pour réduire la période de dormance des plantes et pour produire des plantes ayant une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme. En particulier, un autre but de la présente invention est de fournir des plantes ayant une période de dormance réduite et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme, et ayant par conséquent un rendement accru. De plus, un but de la présente invention est de fournir un procédé pour produire des plantes ayant une période de dormance réduite et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme, et par conséquent ayant un rendement accru. La demanderesse a déjà trouvé que la teneur en 2-OG intracellulaire est augmentée par surexpression d'un gène de glutamate déshydrogénase (dans la suite en abrégé GDH) dans des cellules végétales (Kisaka et al., demande de brevet japonais n 2003-198 559). La GDH catalyse la réaction réversible d'incorporation d'ammoniac dans le 2-0G pour produire de l'acide glutamique, et inversement de libération d'ammoniac à partir d'acide glutamique pour produire le 2-0G. Cependant, en général, on considère que la GDH décompose l'acide glutamique en 2-0G et en ammoniac, plutôt que d'incorporer de l'ammoniac dans le 2-0G pour produire de l'acide glutamique dans les cellules car la GDH a une valeur de Km élevée pour l'ammoniac, de sorte que la teneur en 2-0G est augmentée. D'autre part, la demanderesse a considéré que la période de dormance peut être réduite en augmentant l'activité de gibbérelline endogène dans une plante, ce qui conduit à une époque de germination avancée, pour obtenir ainsi une souche ayant une uniformité de croissance, de sorte que le rendement peut être augmenté. Plus particulièrement, la demanderesse a trouvé que, comme la biosynthèse suivant la synthèse de GAl2 est catalysée par la dioxygénase qui utilise l'acide 2-oxoglutarique (2-0G) comme cosubstrat, le 2-0G est surproduit de manière stable par la surexpression d'un gène de glutamate déshydrogénase (GDH) de la plante et l'activité de la gibbérelline dans les tubercules peut être augmentée et que, par suite, il est possible d'obtenir réellement des souches qui ont une période de dormance réduite, une époque de bourgeonnement ou de germination avancée et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme, de sorte qu'il est possible d'obtenir des souches présentant une uniformité de la croissance. La demanderesse a constaté aussi que le rendement était augmenté. En d'autres termes, la présente invention fournit une plante ayant une teneur en 2-0G intracellulaire accrue et une période de dormance réduite par rapport à des plantes naturelles de la même espèce, et un procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce en augmentant la teneur en 2-0G intracellulaire de la plante. De plus, la présente invention fournit une plante ayant une teneur en 20G intracellulaire accrue, une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce, et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme; et un procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce et ayant une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme en augmentant la teneur en 2-0G intracellulaire de la plante. La présente invention fournit une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce par surexpression d'un gène de GDH intracellulaire, et un procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce par surexpression du gène de GDH intracellulaire dans la plante. De plus, la présente invention fournit une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce et ayant une époque de bourgeonnement et/ou de germination uniforme par surexpression d'un gène de GDH intracellulaire, et un procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce et ayant une époque de bourgeonnement et/ou de germination uniforme par surexpression du gène de GDH intracellulaire dans la plante. La plante selon la présente invention et la plante produite par le procédé selon la présente invention ont une période de dormance réduite et une époque de bourgeonnement et/ou de germination uniforme, de sorte qu'elles ont une uniformité de la croissance et donc un rendement accru. En particulier, la présente invention fournit une plante dans laquelle une construction d'acide nucléique capable de stimuler l'expression du gène de GDH a été introduite et qui peut surexprimer le gène de GDH dans les cellules, ladite plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce. De plus, la présente invention concerne un procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce par introduction dans une plante d'une construction d'acide nucléique capable de stimuler l'expression du gène de GDH pour surexprimer le gène de GDH dans les cellules végétales. En particulier, la présente invention fournit le procédé décrit ci-dessus ou la plante décrite ci-dessus où une construction d'acide nucléique contient une molécule d'acide nucléique codant le polypeptide ayant la séquence d'aminoacides décrite dans SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4. De plus, la présente invention concerne le procédé décrit ci-dessus ou la plante décrite ci-dessus où la construction d'acide nucléique contient une construction d'acide nucléique capable de s'hybrider à la molécule d'acide nucléique ayant la séquence décrite dans SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 3 dans des conditions stringentes et ladite construction d'acide nucléique code un polypeptide ayant une activité GDH. Spécifiquement, la présente invention fournit la plante décrite 35 cidessus et le procédé décrit ci-dessus pour produire la plante, où la 2866348 9 plante est la pomme de terre et la plante produite par le procédé est la pomme de terre. La dormance des plantes non seulement limite l'époque de culture mais aussi est un obstacle déterminant la croissance et le rendement de la plante. De ce fait, selon la présente invention, en réduisant la période de dormance des plantes sans provoquer de troubles significatifs, il est possible d'éliminer des limitations concernant l'époque de culture et d'avancer l'époque de bourgeonnement ou de germination, ce qui conduit à un bourgeonnement ou une germination uniforme. De ce fait, la présente invention peut permettre une croissance uniforme de la plante et par conséquent elle peut permettre une culture simple et un rendement, une croissance et une qualité élevés. BREVE DESCRIPTION DES DESSINS La figure 1 est une illustration schématique du vecteur plasmidique construit. Nos-Pro: promoteur de nopaline synthase NPTII: néomycine phosphotransférase Nos-Ter: terminateur de nopaline synthase 35S-Pro: promoteur du virus de la mosaïque du chou-fleur 35S Mtd-AN-GDH: glutamate déshydrogénase (GDH) dérivée de Aspergillus nidulans ayant un peptide de transit pour les mitochondries HPT: hygromycine phosphotransférase H: HindIII, B: BamHI, X: Xbal, Sp: Spel, E: EcoRI, LB: extrémité gauche, RB: extrémité droite La figure 2 montre les résultats de la PCR pour une pomme de terre transgénique, au moyen d'une amorce (A) spécifique du gène de AnGDH, d'une amorce (B) spécifique du gène de NPTII. Piste 1: marqueur de 100 pb, piste 2: pomme de terre non transgénique, piste 3: pomme de terre transgénique Mtd 1, piste 4: pomme de terre transgénique Mtd 2, piste 5: pomme de terre transgénique Mtd 3, piste 6: pomme de terre transgénique Mtd 5, et piste 7: pomme de terre transgénique Mtd 8. La figure 3 montre les résultats du transfert de Northern pour une pomme de terre transgénique. Une quantité totale de 10 dag d'ARN extrait de tubercules a été soumise à une électrophorèse et colorée avec le bromure d'éthidium. La longueur intégrale d'un gène de An-GDH est 2866348 10 utilisée comme sonde. Piste 1: pomme de terre non transgénique, piste 2: pomme de terre transgénique Mtd 1, piste 3: pomme de terre transgénique Mtd 2, piste 4: pomme de terre transgénique Mtd 3, piste 5: pomme de terre transgénique Mtd 5 et piste 6: pomme de terre transgénique Mtd 8. La figure 4 montre la teneur en 2-oxoglutarate (2-OG) d'une pomme de terre transgénique pour GDH (n = 3). Témoin: pomme de terre non transgénique, et Mtd8: pomrne de terre transgénique. La figure 5 montre les résultats d'analyse pour la gibbérelline provenant de tubercules de pomme de terre transgénique pour GDH. Cont: solution d'échantillon provenant de tubercules de pomme de terre non transgénique, Mtd8: solution d'échantillon provenant de tubercules de pomme de terre non transgénique, Mtd8+Dami: solution d'échantillon provenant de tubercules de pommes de terre transgéniques + solution de daminozide. Après 0-M: tubercule immédiatement après la récolte, après 2-M: tubercule 2 mois après la récolte, et après 3-M: tubercule 3 mois après la récolte. La figure 6 montre les résultats d'un test de bourgeonnement pour un tubercule de pomme de terre transgénique pour GDH. (A) Traitement à la lumière: pendant 3 jours à 24 C dans une serre puis transplanté sur de la vermiculite; (B) pas de traitement: transplantation sur de la vermiculite sans traitement à Va lumière. DESCRIPTION DES MODES DE REALISATION PREFERES Comme décrit ci-dessus, la présente invention concerne une plante (y compris sa descendance) ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce par surexpression d'un gène de GDH dans les cellules végétales, et un procédé pour produire la plante. De plus, la présente invention fournit une plante (y compris sa descendance) capable de surexprimer un gène de glutamate déshydrogénase (GDH) dans les cellules végétales, ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce et ayant une époque de bourgeonnement et/ou de germination uniforme, et un procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce et ayant une époque de bourgeonnement et/ou de germination uniforme par surexpression d'un gène de GDH dans les cellules de la plante. Dans la présente description, la "plante naturelle de la même espèce" désigne la plante qui appartient à la même espèce que celle produite par la présente invention, et qui est observée dans la nature, et dont il n'a pas été confirmé qu'elle soit manipulée artificiellement ou produite à la suite d'une manipulation artificielle. Plus spécifiquement, dans un mode de réalisation selon la présente invention, il est possible d'obtenir une plante qui peut surexprimer un gène de GDH et qui a une période de dormance réduite par rapport à celle des plantes naturelles de la même espèce en introduisant un gène capable de stimuler l'expression du gène de GDH dans la plante. Dans un mode de réalisation selon la présente invention, en introduisant une construction d'acide nucléique incluant GDH dans une plante, GDH est exprimée dans la plante transformée résultante de sorte que la teneur en 2-0G est augmentée, et que l'activité de la gibbérelline est augmentée. Il en résulte qu'il est possible d'obtenir une plante qui a une période de dormance réduite et une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme. La GDH catalyse la réaction de désamination oxydative de l'acide glutamique pour produire de l'ammoniac ainsi que la réaction inverse de production d'acide glutamique par condensation de 2-0G et d'ammoniac. Cependant, on considère généralement que la GDH catalyse la décomposition de l'acide glutamique, c'est-à-dire la réaction produisant le 2-0G et l'ammoniac in vivo préférentiellement, car la valeur de Km pour l'ammoniac est élevée. En général, un excès de gibbérelline intracellulaire ou l'augmentation rapide du niveau de gibbérelline intracellulaire peut avoir une influence néfaste sur la croissance ou le rendement. Cependant, selon la présente invention, la gibbérelline n'est pas fournie de manière extracellulaire, et au contraire le niveau de gibbérelline endogène serait augmenté par le biais de l'augmentation du niveau de 2-0G du fait de la surexpression du gène de GDH. De ce fait, selon la présente invention, l'activité de la gibbérelline endogène augmenterait lentement du fait de l'augmentation du 2-0G, ce qui conduit à une réduction de la période de dorrnance et à une synchronisation de 2866348 12 l'époque de bourgeonnement ou de germination sans avoir d'effets néfastes significatifs comme des anomalies morphologiques. Typiquement, les cultures sont récoltées simultanément pour toutes les plantes cultivées dans sensiblement les mêmes conditions pendant une durée prédéterminée, ce qui conduit au retard et à la diversité de l'époque de bourgeonnement ou de germination, ce qui peut entraîner directement un faible rendement dans la récolte. De ce fait, selon la présente invention, typiquement, il est possible d'obtenir une amélioration stable supplémentaire du rendement. Selon la présente invention, pour augmenter la teneur en 2-0G de la plante et, par suite, pour augmenter l'activité de la gibbérelline, le procédé n'est pas limité seulement à l'introduction du gène de GDH, mais il est possible aussi d'utiliser un gène d'une enzyme qui peut être différente de la GDH, qui peut produire du 2-0G à partir d'acide glutamique. Dans une plante dans laquelle un gène a été introduit, la teneur en 2-0G augmentera et, à titre de résultat, l'activité de la gibbérelline augmentera. Par exemple, ces enzymes peuvent inclure l'aspartate aminotransférase ou l'alanine aminotransférase ou analogue. Bien que la source d'enzymes pouvant faire croître les teneurs en 2-0G, par exemple la GDH, utilisée dans la présente invention ne soit pas limitée particulièrement, une enzyme provenant du genre Aspergillus, par exemple la GDH provenant du genre Aspergillus peut être préférable encore. De préférence encore, l'enzyme est la GDH provenant de Aspergillus nidulans ou de Aspergillus awamorii. De plus, il est possible d'utiliser dans la présente invention une enzyme modifiée ou son gène ayant une délétion d'un ou plusieurs aminoacides, une substitution et une insertion, par exemple une GDH modifiée et un gène de GDH modifié, à condition que l'enzyme modifiée ait l'activité enzymatique décrite ci-dessus, par exemple une activité GDH. Pour surexprimer un ou plusieurs gènes parmi ceux-ci, l'expression des gènes endogènes des plantes peut être stimulée à la place de l'introduction directe d'une construction d'acide nucléique qui peut exprimer ces gènes. Par exemple, de tels processus incluent l'introduction d'une construction d'acide nucléique agissant en cis qui augmente l'expression de gènes endogènes, incluant un promoteur et/ou 2866348 13 un stimulateur puissants, et l'introduction d'un facteur agissant en trans qui peut stimuler l'expression de ces gènes. En outre, la localisation de la GDH dans une organelle intracellulaire de la cellule végétale n'est pas limitée au cytoplasme, mais il est possible d'utiliser une GDH localisée dans les mitochondries, la chlorophylle ou le peroxysome, etc. De ce fait, il est possible aussi d'utiliser dans la présente invention une GDH ayant un peptide signal ou de transit qui est fixé à l'extrémité N-terminale ou C-terminale pour transporter la protéine enzymatique dans ces organelles intracellulaires. Ces gènes ou ces ADNc peuvent être produits aisément par l'homme du métier selon des SEQ ID NO publiées. Par exemple, la séquence nucléotidique d'ADNc du gène de GDH de Aspergillus nidulans est publiée dans GenBank sous le numéro d'ordre X16121. La séquence nucléotidique (séquence d'ADNc) du gène de GDH dérivé de Aspergillus nidulans est montrée dans SEQ ID NO: 1 et la séquence d'aminoacides de la GDH est montrée dans SEQ ID NO: 2. Sur la base de ces séquences, dADNc de GDH peut être obtenu aisément par synthèse d'une amorphe de PCR qui peut amplifier un fragment d"ADN incluant une partie codant la séquence protéique et par la mise en oeuvre d'une RT-PCR avec l'ARN isolé à partir d'une culture d'Aspergillus nidulans comme matrice. Aspergillus nidulans peut être obtenu, y compris ceux enregistrés sous ATCC10074 ou ATCC11267 ou analogue dans la American Type Culture Collection. De plus, la séquence d'ADNc de l'ADNc de GDH de Aspergillus awamorii est publiée aussi dans GenBank sous le numéro d'ordre Y15784. Aspergillus awamorii est enregistré dans la American Type Culture Collection sous ATCC10548 ou ATCC11358 ou analogue, et l'ADNc de GDH peut être obtenu par le procédé décrit ci-dessus au moyen des souches obtenues. La séquence nucléotidique (séquence d'ADNc) du gène de GDH dérivé de Aspergillus awamorii est appelée SEQ ID NO: 3 et la séquence d'aminoacides de la GDH est montrée dans SEQ ID NO: 4. Dans la présente invention, une construction d'acide nucléique contenant des molécules d'acide nucléique qui codent un polypeptide ayant la séquence d'aminoacides décrite dans SEQ ID NO: 2 ou 4 peut être utilisée. De plus, il est possible aussi d'utiliser la construction d'acide nucléique incluant des molécules d'acide nucléique qui ont une homologie d'au moins 70 % ou plus, de préférence de 80 % ou plus, de préférence 2866348 14 encore de 90 % ou plus, avec SEQ ID NO: 1 ou 3, où la construction d'acide nucléique codant le polypeptide présente une activité GDH. Cette homologie peut être calculée au moyen d'un programme bien connu de l'homme du métier, par exemple FASTA, avec des paramètres standards. Par exemple, des programmes comme FASTA etc., sont fournis par le Center for Information Biology and DNA Data Bank of Japan, National Institute of Genetics (DDBJ/CIB) (http://www.ddbj.nig.ac.jp/Welcomej.html) (par exemple il peut être utilisé avec le chiffre: 100 et l'alignement: 100). D'autres algorithmes et programmes pour calculer une homologie parmi deux séquences ou plus sont bien connus de l'homme du métier, ainsi que les paramètres standards pour ceux-ci. Ces molécules d'acide nucléique peuvent aussi être considérées comme étant une molécule d'acide nucléique capable de s'hybrider à ces séquences dans des "conditions stringentes", en particulier aux séquences montrées dans SEQ ID NO: 1 ou 3. Les "conditions stringentes", telles qu'elles sont utilisées ici, désignent des conditions dans lesquelles des hybrides appelés spécifiques sont formés et des hybrides non spécifiques ne sont pas formés. Il est difficile d'exprimer clairement ces conditions numériquement, mais, par exemple, elles peuvent être définies comme étant des conditions dans lesquelles des molécules d'ADN ayant une homologie de 70 % ou plus sont hybridées préférentiellement et d'autres ADN ayant une homologie de 70 % ou moins ne sont pas hybridés significativement. Plus spécifiquement, elles peuvent être définies comme étant des conditions dans lesquelles l''hybridation peut survenir dans les conditions de lavages qui correspondent à des conditions de lavage normales de l'hybridation de Southern de 50 C, 2 x SSC et 0,1 % de SDS, de préférence 1 x SSC et 0,1 % de SDS, et de préférence encore 0,1 x SSC et 0,1 % de SDS. De plus, des conditions équivalentes quelconques apparaîtront à l'homme du métier (par exemple Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., 1994). Bien qu'un gène capable de s'hybrider dans ces conditions puisse contenir un ou des codons d'arrêt dans le gène ou puisse avoir une mutation dans son centre d'activité provoquant la perte d'activité, un tel gène pourrait 2866348 15 être retiré aisément en déterminant l'activité enzymatique après l'avoir lié à un vecteur d'expression disponible dans le commerce. SEQ ID NO: 1 et SEQ ID NO: 3 ont une homologie de 66 %, telle qu'elle a été calculée par Genetyx Ver3.2. De manière similaire, SEQ ID NO: 2 et 4 se sont révélées avoir une homologie de 87 %. Par exemple, l'activité GDH peut être mesurée par les procédés de Ameziane et al. (Plant and Soil, 221:47-57, 2000). Plus spécifiquement, des tissus végétaux, par exemple des feuilles, sont cryoconservés dans de l'azote liquide, broyés au moyen d'un mortier et mélangés avec un tampon d'extraction {200 mM de Tris (pH 8,0), 14 mM de ss-mercaptoéthanol, 10 mM de L-cystéine HCI, et 0,5 mM de PMSF} de 5 volumes d'échantillon de tissu en masse. Le mélange résultant est transféré dans un tube de centrifugeuse, centrifugé pendant 30 min à 12 000 tr/min à 4 C, et le surnageant est soumis à une ultrafiltration (Millipore, ultrafree 0,5 filter unit; Biomax-10), et le résidu est lavé plusieurs fois avec le tampon d'extraction. La solution d'enzyme extraite résultante est ajoutée à une solution contenant 100 mM de Tris (pH 8,5), 20 mM d'acide 2oxoglutarique, 10 mM de CaCl2, 0,2 mM de NADH et 200 mM de NH4CI. Puis, l'activité GDH peut être déterminée en mesurant la diminution d'absorbante à 340 nm. La concentration de protéine dans la solution d'enzyme brute extraite peut être mesurée par un procédé bien connu comme le procédé de Bradford, par exemple avec la sérumalbumine bovine (BSA) comme étalon. De plus, dans la présente invention, le procédé d'augmentation de l'activité de la gibbérelline en augmentant la teneur en 2-OG n'est pas limité à l'introduction du gène de GDH. Il est possible aussi de produire une plante ayant une haute activité de gibbérelline du fait de l'augmentation de la teneur en 2-OG en introduisant une enzyme qui produit le 2-OG à partir d'acide glutamique et qui peut être différente de la GDH. Les exemples de ces enzymes incluent l'aspartate aminotransférase ou l'alanine aminotransférase ou analogue. La construction d'acide nucléique utilisée dans la présente invention peut être préparée par un procédé bien connu de l'homme du métier. On peut trouver des procédés de biologie moléculaire incluant l'isolement et la détermination d'une séquence de construction d'acide nucléique dans des publications cornme Sambrook et al., Molecular 2866348 16 CloningLaboratory Manual, the 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press). A titre d'alternative, un procédé d'amplification génique comme la PCR peut être nécessaire pour produire la construction d'acide nucléique qui peut être utilisée dans la présente invention. On peut aussi trouver ces procédés dans des publications comme F.M. Ausubel et al. (Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)). La construction d'acide nucléique codant la GDH ou les enzymes décrite cidessus peut contenir généralement un promoteur approprié pour les cellules végétales, par exemple un promoteur pour le gène de la nopaline synthase, le promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur (CaMV35S) ou des terminateurs appropriés comme un terminateur pour le gène de la nopaline synthase, et d'autres séquences nécessaires ou avantageuses pour l'expression, comme un stimulateur et un gène marqueur pour le criblage de transformants comme un gène de résistance à un médicament incluant un gène de résistance à la kanamycine, un gène de résistance à G418 et un gène de résistance à l'hygromycine. Un promoteur utilisé dans une telle construction d'acide nucléique peut être un promoteur constitutif, un promoteur spécifique de tissu ou un promoteur spécifique de stade de croissance, qui peut être choisi selon le promoteur utilisé, selon l'hôte, le niveau d'expression requis, l'organe cible d'expression ou le stade de croissance. Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, il est possible d'utiliser des promoteurs forts qui sont non spécifiques de tissu et de stade de croissance, incluant par exemple le promoteur CaMV35S. Les promoteurs spécifiques de tissu incluent par exemple le promoteur du gène de phaséoline ou le promoteur du gène de patatine ou analogue. Dans le mode de réalisation particulièrement préféré de la présente invention, on utilise une construction d'acide nucléique dans laquelle le gène de GDH est commandé par un promoteur constitutif puissant comme le promoteur CaMV35S. Un procédé de transfert de gène de la présente invention n'est pas limité particulièrement et il est possible d'adopter un procédé de transfert de gène approprié pour les cellules végétales ou les plantes connu de l'homme du métier, selon l'hôte. Par exemple, dans un mode de réalisation de la présente invention, un procédé de transfert de gène utilisant Agrobacterium est utilisé. Dans un tel système de transformation, il est préférable d'utiliser un vecteur binaire. Dans le cas de l'utilisation d'Agrobacterium, une construction d'acide nucléique utilisée dans la transformation inclut en outre une région d'ADN T flanquant la séquence d'ADN qui doit être introduite. Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, la séquence introduite est insérée entre les séquences des extrémités gauche et droite de l'ADN-T. La conception et la construction appropriées d'un tel vecteur de transformation basé sur l'ADN-T sont bien connues de l'homme du métier. De plus, les conditions pour transfecter une plante avec Agrobacterium contenant une telle construction d'acide nucléique sont également bien connues de l'homme du métier. Dans la présente invention, il est possible aussi d'utiliser d'autres procédés de transfert de gène. Les exemples de procédés de transfert de gène incluent un procédé pour introduire un ADN dans un protoplaste avec le polyéthylèneglycol ou le calcium, des processus de transformation de protoplaste par électroporation, un procédé utilisant un canon à particules, et analogue. Les cellules végétales et analogues qui sont manipulées comme décrit cidessus peuvent être sélectionnées pour la transformation. Cette sélection peut être réalisée par exemple sur la base de l'expression d'un gène marqueur présent dans la construction d'acide nucléique utilisée pour la transformation. Par exemple, quand un gène marqueur est un gène de résistance à un médicament, elles peuvent être sélectionnées par culture ou croissance de cellules végétales dans un milieu de culture incluant un antibiotique ou un herbicide ou analogue à une concentration modérée. A titre d'alternative, quand un gène marqueur est un gène de ss-glucuronidase ou un gène de luciférase ou analogue, les transformants peuvent être sélectionnés par criblage par le biais de l'activité du gène marqueur. Si ces transformants identifiés sont différents du corps végétal comme des protoplastes, des cals, des expiants ou analogues, une plante entière peut être régénérée à partir de ceux-ci. Pour cette régénération, il est possible d'utiliser un procédé quelconque connu de l'homme du métier selon les plantes hôtes destinées à être utilisées. La plante ainsi obtenue peut être cultivée par un procédé courant, c'està-dire dans les mêmes conditions que pour les non 2866348 18 transformants, et pour identifier la plante transgénique contenant une construction d'acide nucléique selon la présente invention, il est possible d'utiliser différents procédés de biologie moléculaire en plus de la sélection basée sur un gène marqueur décrite ci-dessus. Par exemple, il est possible d'utiliser l'hybridation de Southern ou la PCR pour détecter la présence ou l'absence d'un fragment d'insertion d'ADN recombiné et sa structure. Il est possible d'utiliser l'hybridation de Northern ou la RT-PCR ou analogue pour détecter ou mesurer un transcrit d'ARN à partir d'une construction d'ADN d'acide nucléique introduite. L'expression du gène introduit du transformant obtenu peut ensuite être évaluée en déterminant la quantité de protéine, d'ARNm ou l'activité enzymatique, par exemple, de la protéine GDH. Par exemple, la quantité de protéine peut être évaluée par un procédé de transfert de Western et analogue, et la quantité d'ARNm peut être évaluée par un procédé de transfert de Northern ou un procédé de RT-PCR quantitatif. De plus, l'activité enzymatique décrite ci-dessus dans les extraits végétaux peut être mesurée par un procédé courant. Par exemple, l'activité GDH peut être mesurée par le procédé de Ameziane et al. (Ameziane R., Bernhard K., et Lightfood D., Plant and Soil, 221:47-57, 2000). Ainsi, la teneur en 2-OG peut être évaluée encore pour la plante transformée dans laquelle l'expression du gène introduit, par exemple l'expression du gène de GDH, a été confirmée. La teneur en 2-0G peut être mesurée par exemple par un procédé enzymatique dans lequel la totalité ou une partie de la plante transformée peut être broyée et la solution extraite est préparée. La préparation d'un extrait végétal et la quantification de 2-OG peuvent être réalisées par le procédé de Usuda (Usuda H., Plant Physiol., 78:859-884, 1985). Plus spécifiquement, des échantillons peuvent être préparés à partir d'une plante par un procédé approprié. Par exemple, 20 pl d'échantillon extrait peuvent être ajoutés à 475 pl d'une solution réactionnelle {0,1 M de Tris-HCI (pH 8,5), 1,0 mM de CaCl2, 0,2 mM de NADPH et 0,2 M de NH4CI}, l'absorbance de la solution résultante peut être mesurée à 340 nm, puis 5 pl (10 unités) de GDH peuvent être ajoutés à la solution et la solution résultante peut être mise à réagir pendant 10 min à 37 C. Ensuite, l'absorbance peut être mesurée de nouveau à 340 nm. La teneur en 2-OG peut être calculée d'après la différence entre l'absorbance mesurée après addition de la solution d'enzyme et celle mesurée avant l'addition de la solution d'enzyme. Dans des conditions de culture ordinaires, la teneur en 2-OG est considérée comme étant augmentée quand la teneur en 2-OG de la partie aérienne (feuille, tige, feuille et tige, organe floral ou une partie du fruit) ou de la partie souterraine (racine ou tubercule) augmente de 1,2 fois ou plus par rapport à celle de la lignée originale de la même espèce utilisée pour l'introduction de gène (plante non transformée). Deux cas sont considérés pour la quantification de la gibbérelline. L'un est le cas où le type de gibbérelline pour l'analyse est prédéterminé. Dans ce cas, après la mise en oeuvre de la purification nécessaire, une analyse instrumentale comme un procédé CG/SM peut être réalisée. L'autre est le cas où le ou les types et la teneur en gibbérelline(s) contenus dans l'échantillon ne sont pas connus. Dans ce cas, après purification et/ou fractionnement de l'échantillon, une bio- analyse (analyse biologique) peut être réalisée selon le procédé de Chen et al., par exemple. Pour une bioanalyse, un procédé de dégouttement utilisant un riz mutant nain qui réagit sensiblement à la gibbérelline, Tanginbozu, a été utilisé principalement. En bref, des grains de riz non polis non décortiqués sont stérilisés en surface par traitement avec de l'éthanol à 70 % pendant 1 min et cle l'hypochlorite de sodium à 2 % pendant 15 min, puis lavage à l'eau stérilisée, après quoi ils sont plongés dans de l'eau stérilisée et incubés pendant 2 jours à 30 C. Ensuite, les grains germés sont stérilisés de nouveau de la même manière, semés sur un milieu gélosé (0,6 % de gélose) et incubés à 25 C pendant 5 jours à la lumière du jour pendant 16 h. Seuls les grains germés présentant une croissance uniforme sont sélectionnés, et 2 pl de la solution d'échantillon sont déversés entre la première feuille et le coléoptile. Après 5 jours supplémentaires de culture dans les mêmes conditions, la teneur en gibbérelline peut être déterminée en mesurant la longueur de la deuxième gaine foliaire. La quantification de la gibbérelline peut être réalisée par l'analyse instrumentale ou la bioanalyse. Si la teneur en gibbérelline active est augmentée par rapport aux témoins, telle qu'elle est déterminée par l'analyse instrumentale, ou si la longueur entre-noeud est favorisée de manière statistiquement significative (par exemple niveau significatif de 5 %) par rapport au témoin, telle qu'elle est déterminée par la bioanalyse, 2866348 20 il peut être possible de déterminer que l'activité de gibbérelline est augmentée. Ainsi, lorsque la plante transgénique qui a une période de dormance réduite du fait d'une augmentation de la teneur en 2-0G endogène et de l'activité de gibbérelline par rapport à des plantes non transformées à titre de témoins, est définie, il est possible de tester si les propriétés sont génétiquement stables ou non. Pour ce faire, les plantes peuvent être amenées à croître et cultivées dans des conditions conventionnelles pour obtenir leurs graines, ou pour obtenir des tubercules, par exemple, dans le cas de la pomme de terre, et la ségrégation des propriétés dans leur descendance peut être analysée pour qu'elles puissent être analysées. La présence ou l'absence de la construction d'acide nucléique introduite, sa localisation, son expression et analogue dans la descendance peuvent aussi être analysées par le même procédé que pour la génération primaire de transformants (génération Ti). Bien que les plantes transgéniques puissent être hémizygotes ou homozygotes concernant la séquence provenant de la construction d'acide nucléique introduite dans un génome, il est possible de produire des hémizygotes et des homozygotes dans les descendants en les croisant, si nécessaire. La séquence dérivée de la construction d'acide nucléique qui est intégrée dans le génome subira une ségrégation mendélienne dans la descendance. De ce fait, pour obtenir des plantes et des graines descendantes ayant des caractères stables, il est préférable d'utiliser des plantes homozygotes. En outre, dans la plupart des transformants, un gène étranger est introduit dans un locus, mais il n'est pas rare que les transformants soient des transformants à copies multiples où le gène étranger a été inséré dans une pluralité de locus géniques. Pour des raisons de stabilité du gène introduit, etc., les transformants à copie unique sont préférables encore dans la présente invention. Ainsi, les plantes transgéniques ainsi obtenues sont évaluées en ce qui concerne la période de dormance. La réduction de la période de dormance peut être évaluée en comparant la période de dormance de chacune des lignées végétales de la présente invention avec la période de dormance de l'espèce végétale standard, ou en comparant la période de 2866348 21 dormance de chacune des lignées végétales produites par la présente invention avec les périodes de dormance de la plante standard, où l'évaluation peut être réalisée avec un niveau significatif de 5 %. En général, cette "espèce végétale standard" est "la plante naturelle de la même espèce" comme décrit précédemment. Par exemple, dans le cas des pommes de terre transgéniques, après la récolte, elles sont stockées à la température ambiante (15 à 25 C) ou à une basse température (4 à 8 C) pendant environ 3 mois dans des conditions conventionnelles, puis les pommes de terre d'ensemencement sont plantées dans un sol de culture. Ensuite, la proportion de pommes de terre d'ensemencement bourgeonnantes est comparée à celle des pommes de terre non transgéniques (par exemple la plante source utilisée pour l'introduction d'une construction génétique selon la présente invention, incluant la plante naturelle de la même espèce) pour évaluer la réduction de la période de dormance. Les jours réels nécessaires pour le bourgeonnement varieraient en fonction des conditions de stockage, de la variété, des conditions de culture et analogues, mais, par exemple, si la plante transgénique et la plante transgénique issues de May Queen sont stockées à la température ambiante, 70 % ou plus des pommes cle terre de la présente invention ou des pommes de terre produites par la présente invention présentent une réduction de la période nécessaire pour le forçage de la germination de 1 à 8 semaines. De ce fait, dans le cas de la pomme de terre, en bref, quand la période nécessaire pour le forçage de la germination pour 70 la ou plus des pommes de terre dans les conditions décrites ci-dessus est réduite de 1 à 8 semaines par rapport aux pommes de terre naturelles de la même espèce, on peut considérer aussi que la période de dormance est réduite. Ainsi, comme les plantes transgéniques ont une époque de bourgeonnement ou de germination précoce et un bourgeonnement synchronisé ou une germination synchronisée par rapport à la plante non transformée, il est possible d'améliorer remarquablement la croissance ou le rendement. De plus, il est possible d'obtenir des graines à partir de la plante transgénique ainsi produite. Les graines peuvent être produites aisément par le même procédé que pour la plante non transgénique de la même espèce. Si nécessaire, les graines peuvent être conservées, stérilisées, désinfectées et analogues par des procédés conventionnels connus de l'homme du métier. En plus de l'introduction d'une construction d'acide nucléique spécifique, la période de dormance peut être modifiée en augmentant la teneur en 2- OG intracellulaire des plantes par mutagenèse par irradiation, rayons ultraviolets et/ou un mutagène (par exemple des agents alkylants comme l'éthylèneimine ou le méthanesulfonate d'éthyle) éventuellement suivie par une sélection. En particulier, indépendamment de l'introduction d'une construction d'acide nucléique, la période de dormance des plantes peut être raccourcie par l'augmentation de la teneur en 2-0G intracellulaire par stimulation de l'expression du gène de GDH, de l'aspartate aminotransférase et de l'alanine aminotransférase. Le procédé général pour la mutagenèse et les réactifs liés à ce procédé qui peuvent être utilisés pour la présente invention sont bien connus de l'homme du métier. L'évaluation pour le procédé de culture, la teneur en 2-0G, la quantité d'expression de chaque gène décrit ci-dessus, et/ou la période de dormance réduite de la plante ainsi produite peut être réalisée selon le procédé et d'une manière similaire à ce qui a été décrit pour la plante transgénique. Comme on peut le comprendre d'après la description ci-dessus, selon la présente invention, la période de dormance de la plante ayant une période de dormance peut être généralement raccourcie par rapport à la plante non transformée, par exemple les plantes naturelles de la même espèce. La présente invention peut être appliquée à la plante pour laquelle la gibbérelline est efficace pour l'interruption de sa dormance. De telles plantes incluent l'avoine, la laitue, la pomme de terre, le pêcher, le camélia, le riz, la famille du blé, le blé, l'orge, la ramie, l'arachide, Bromus catharticus, Bromus inermis Leyss., le radis (le radis japonais), Brassica, l'aubergine, la langue de boeuf, la gloxinie, kalanchoe, Primula, Nigella damascena, la fraise et Aralia cordata Thunberg, l'oignon, la ciboule, l'épinard, les bulbes à fleurs, mais elles ne sont pas limitées à ces espèces. Un exemple particulièrement préférable de plante ayant une période de dormance réduite selon la présente invention et de plante produite par la présente invention est la pomme de terre. La présente invention va être décrite spécifiquement et en détails par les modes de réalisation suivants, en ce qui concerne le procédé de production d'une plante ayant une teneur en 2-0G accrue, 2866348 23 en particulier une plante manipulée pour la surexpression du gène de GDH, la mesure de la teneur en 2-0G, l'analyse de la gibbérelline, le test de bourgeonnement et le test de rendement. EXEMPLES [Exemple 1] Isolement du gène de GDH dépendant de NADP à partir de Aspergillus nidulans (A. nidulans) et construction du vecteur plasmidique Ti (1) Isolement du gène de GIDH dépendant de NADP à partir de Aspergillus nidulans (An-GDH) A. nidulans a été inoculé à un milieu gélosé pomme de terre dextrose, cultivé à 30 C pendant une nuit, et les colonies résultantes ont été cultivées encore dans un milieu liquide de dextrose pendant 2 jours. L'ARN total a été obtenu à partir de ces, bactéries qui ont proliféré. L'ARNm a été purifié à partir de l'ARN total avec le Poly (A) Quick mRNA Isolation Kit (Stratagene Co.) puis l'ADNc du premier brin a été synthétisé avec le First-strand cDNA Synthesis Kit (Amersham Bioscience Co.). Une réaction de PCR a été réalisée avec l'ADNc du premier brin synthétisé comme matrice. La réaction de PCR a été conduite avec le système de PCR 2400 produit par Perkin Elmer de la manière suivante: 94 C3 min; 94 C-45 s, 59 C-30 s, 72 C-90 s et 35 cycles; 72 C-10 min. Les amorces utilisées étaient 5'-TCT AGA ATG TCT AAC CTT CCC GTT GAG-3' (SEQ ID NO: 5) et 5'-GAG CTC TCA CCA CCA GTC ACC CTG GTC-3' (SEQ ID NO: 6). A titre de résultat, on a trouvé une bande à environ 1,4 kpb, ce qui était en accord avec la taille prévue pour le gène en question. Les produits de PCR obtenus ont été clonés avec le TA-Cloning-Kit (Invitrogen Co.). La séquence nucléotidique du clone obtenu a été déterminée au moyen d'un séquenceur (377A de ABI Co.). La séquence nucléotidique est montrée dans SEQ ID NO: 1 et la séquence d'aminoacides de la protéine codée est montrée dans SEQ ID NO: 2. Cette séquence coïncidait avec la séquence nucléotidique connue du gène de GDH dépendant de NADP provenant de A. nidulans, qui a été appelé An- GDH. (2) Construction d'un vecteur plasmidique Ti Puis, une séquence nucléotidique codant le peptide de transit pour les mitochondries a été liée aux gènes obtenus. Le fragment nucléotidique codant le peptide de transit pour les mitochondries a été obtenu au moyen d'une PCR avec le côté 5' du gène de GDH dépendant de NAD provenant de la tomate comme matrice. Les amorces utilisées pour la réaction de PCR étaient 5'-CTG CAG ATG AAT GCT TTA GCA GCA AC-3' (SEQ ID NO: 7) et 5'-TCT AGA TAA ACC MG MG CCT AGC TG-3' (SEQ ID NO: 8). La liaison du gène de An-GDH et d'une séquence nucléotidique codant le peptide de transit pour les mitochondries a été réalisée par PCR avec le gène de An-GDH et le gène du peptide de transit comme matrices. Les quatre amorces utilisées pour la réaction de PCR étaient 5'-TCT AGA ATG AAT GCT TTA GCA GCA AC-3' (SEQ ID NO: 9), 5'-GGG MG GTT TAG ACA TTA AAC CAA GAA GCC T-3' SEQ ID NO: 10), 5'-AGG CTT CTT GGT TTA ATG TCT AAC CTT CCC-3' (SEQ ID NO: 11) et 5'-GAG CTC TTA CGC CTC CCA TCC TCG M-3' (SEQ ID NO: 12). La séquence de peptide de transit pour les mitochondries a été ajoutée au gène de GDH obtenu, qui a été appelé Mtd-An-GDH. Le gène Mtd-An-GDH a été incorporé dans pIG121-Hm par remplacement de la partie GUS de pIG121-Hm, un vecteur plasmidique Ti pour la transformation par l'intermédiaire de Agrobacterium (figure 1). Le plasmide Ti obtenu a été introduit dans Agrobacterium tumefaciens EHA101 pour être utilisé pour la transformation de pommes de terre. [Exemple 2] Production de pomme de terre transgénique La transformation de pomme de terre (May Queen) a été réalisée par le procédé de Gordon et al. (Plant Cell Reports, 12: 324-327, 1993). Des microtubercules induits de manière stérile ont été coupés pour former des disques de tubercules et les fragments ont été placés sur un milieu gélosé MS incluant 2 mg/I de zéatine et 0,1 mg/l d'acide indoleacétique. Les fragments ont été cultivés à 25 C pendant 24 h tandis que les heures de lumière du jour étaient maintenues pendant 16 h. Du milieu YEP (10 g/I de bactotryptone, 10 g/I d'extrait de levure et 1 g/I de glucose) contenant 50 mg/I de kanamycine et 50 mg/l d'hygromycine a été inoculé avec Agrobacterium contenant des molécules d'acide nucléique 2866348 25 construites et cultivé pendant une nuit à 28 C sous agitation. La suspension d'Agrobacterium a été ajoutée aux disques de tubercule et cultivée pendant 24 h pour provoquer l'infection. En 10 min, la suspension d'Agrobacterium superflue a été retirée au moyen d'un papier filtre stérilisé, transférée dans une boîte cle Petri contenant le milieu décrit ci-dessus et cultivée pendant 24 h dans les mêmes conditions. Puis, les disques de tubercule ont été transplantés dans le milieu gélosé MS contenant 50 mg/I de kanamycine, 300 mg/I de chlorhydrate de cefotaxime, 2 mg/l de zéatine et 0,1 mg/l d'acide indoleacétique, pour sélectionner les transformants. La pousse régénérée a été transférée encore dans le milieu décrit ci-dessus et sa résistance a été confirmée. La pousse présentant une résistance à la kanamycine apparente a été transplantée dans un milieu d'enracinement gélosé MS contenant 50 mg/l de kanamycine et 300 mg/I de chlorhydrate de cefotaxime pour induire la différentiation des racines. La partie supérieure de la cane a été coupée au moins trois fois sur la plante enracinée redifférenciée, et transplantée sur un milieu de régénération-sélection pour confirmer la résistance à la kanamycine, pour exclure ainsi les chimères. Un total de 5 individus ainsi obtenus ont été acclimatés au sol pour obtenir des tubercules. [Exemple 3] Confirmation du gène introduit L'ADN a été extrait à partir de 5 lignées individuelles choisies ayant une résistance à la kanamycine et de plantes non infectées. L'ADN a été extrait par le procédé de Honda et al. (Honda et Hirai, Jpn. J Breed 40: 339-348, 1990). Une analyse par PCR a été réalisée avec l'ADN extrait comme matrice, les amorces spécifiques du gène de An-GDH 5'-TCT AGA ATG TCT AAC CTT CCC GTT GAG-3' (SEQ ID NO: 5) et 5'-GAG CTC TCA CCA CCA GTC ACC CTG GTC-3' (SEQ ID NO: 6) et les amorces pour amplifier le gène de NPTII dans le vecteur 5'-CCC CTC GGT ATC CAA TTA GAG-3' (SEQ ID NO: 13) et 5'-CGG GGG GTG GGC GAA GAA CTC CAG-3' (SEQ ID NO::14). La réaction de PCR a été conduite avec le système de PCR 2400 produit par Perkin Elmer Co. de la manière suivante: 94 C- 3 min; 94 C-45 s, 55 C-30 s, 72 C-90 s, 35 cycles; 72 C-10 min. Le produit de PCR a été soumis à une électrophorèse sur un gel d'agarose à 1 % puis coloré avec le bromure d'éthidium pour examiner la présence 2866348 26 ou l'absence d'un produit d'amplification et sa taille. A titre de résultat, des bandes spécifiques du gène de An-GDH (environ 1,5 kpb) et du gène de NPTII (environ 1,1 kpb) ont été observés dans les pommes de terre transgéniques sélectionnées (figure 2), et ces bandes n'ont pas été observées dans les plantes non infectées. A titre de résultat, il a été confirmé que la région d'ADN T incluant le gène de An- GDH était introduite dans les pommes de terre transformées. [Exemple 4] Confirmation de l'expression du gène introduit (analyse par transfert de Northern'i L'expression du gène introduit a été confirmée par la mise en oeuvre d'une analyse par transfert de Northern avec des pommes de terre transgéniques dans lesquelles l'introduction du gène de An-GDH avait été confirmée. L'ARN a été extrait des tubercules de pommes de terre transformées par un procédé au SDS-phénol. L'ARN extrait a été soumis à une électrophorèse sur un gel d'agarose à 1,2 % contenant 18 % de formaldéhyde puis coloré avec du bromure d'éthidium. Après avoir été transféré sur une membrane en nylon (HybondN+), il a été fixé avec des UV et une hybridation a été réalisée avec une sonde contenant la longueur intégrale d'un gène de An- GDH. DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II et PCR DIG Probe Synthesis Kit produits par Roche Diagnostics K.K. ont été utilisés pour le transfert de Northern et la préparation des sondes. A titre de résultat, une bancle spécifique du gène de An-GDH a été confirmée pour les tubercules des pommes de terre transgéniques (figure 3) . L'expression du gène introduit a été mise en évidence dans les tissus foliaires et les tubercules des pommes de terre transgéniques. Cette bande spécifique de An-GDH n'a pas été observée dans les pommes de terre non transformées. [Exemple 5] Expression du gène introduit (activité NIADP-GDH) 2866348 27 L'activité NADP-GDH a été déterminée pour confirmer l'expression du gène introduit avec des pommes de terre transformées dans lesquelles l'introduction d'un gène de An-GDH avait été confirmée. La mesure de l'activité a été réalisée par le procédé de Ameziane et al. (Plant and Soil, 221: 47-57, 2000). Des tissus foliaires (environ 0,2 g) des pommes de terre transgéniques ont été congelés avec de l'azote liquide puis broyés dans un mortier. Un tampon d'extrait {200 mM de Tris (pH 8,0), 14 mM de ss-mercaptoéthanol, 10 mM de L-cystéine-HCI et 0,5 mM de PMSF} de 5 volumes de l'échantillon de tissu a été ajouté. La suspension obtenue a été transférée dans un tube de centrifugeuse et centrifugée à 12 000 tr/min à 4 C pendant 30 min. Le surnageant a été soumis à une ultrafiltration (Millipore, ultrafree 0,5 filter unit, Biomax-10) et lavé trois fois avec le tampon d'extrait pour récupérer le sédiment sur le filtre et préparer une solution d'enzyme brute. L'activité a été mesurée par addition de la solution d'enzyme brute extraite précédemment à une solution réactionnelle contenant 100 mM de Tris (pH 8,5), 20 mM de 2-oxoglutarate, 10 mM de CaCl2, 0,2 mM de NADH et 200 mM de NH4CI, et l'absorbance a été mesurée à 340 nm. La concentration de protéine de la solution d'enzyme brute extraite a été mesurée par un procédé de Bradford avec la sérumalbumine bovine (BSA) comme protéine étalon. A titre de résultat, on a observé dans l'échantillon provenant de pommes de terre transgéniques une activité 20 à 50 fois plus élevée que celle des pommes de terre non transgéniques (tableau 1). Cette activité a été considérée comme étant l'activité due à l'expression du gène de An- GDH introduit, car il y avait peu d'activité NADP-GDH dans l'échantillon provenant de pommes de terre non transformées. Tableau 1. Activité NADP-GDH dans une pomme de terre transgénique et 30 une pomme de terre non transgénique Activité NADP-GDH (pmol/min/mg de protéine) Non transgénique 0,11 Transgénique Mtd 2 2,12 Mtd 5 4,64 2866348 28 Mtd 8 [Exemple 6] Détermination des teneurs en 2-oxoglutarate (2-OG) de pommes de terre dans lesquelles un gène de GDH a été introduit La teneur en 2-OG des tissus foliaires de pommes de terre transgéniques (Mtd 8) a été déterminée. Les pommes de terre ont été cultivées pendant 1 mois dans un sol rnixte constitué par 500 g de Power Soil et 500 g de vermiculite pour obtenir des plantes développées saines, et leur tissu foliaire a été utilisé comme matériel de test. Une extraction a été réalisée par le procédé de Agarei et al. (Plant Science, 162: 257-265, 2002). Après que le tissu foliaire (environ 0,1 g) a été broyé avec de l'azote liquide, 200 pl de HCO4 à 3 % lui ont été ajoutés et l'ensemble a été bien mélangé. Après une centrifugation à 12 000 tr/min pendant 10 min, le surnageant a été transféré dans un autre tube. Au sédiment restant ont été ajoutés 200 pl de HCO4 à 3 % et l'ensemble a été bien mélangé. Après une centrifugation à 12 000 tr/min pendant 10 min, le surnageant a été transféré dans le premier tube. Puis, 50 pl à 70 pI de K2CO3 5 M ont été ajoutés au surnageant récupéré pour neutraliser la solution. Après avoir confirmé que le pH de la solution était neutre avec du papier tournesol, de l'eau stérilisée a été ajoutée à la solution pour ajuster le volume à 600 pl et la solution résultante a été utilisée comme échantillon test. La détermination de la teneur en 2-OG a été réalisée selon le procédé modifié de Usuda et ail. (référence citée précédemment). L'échantillon extrait de 20 pl a été ajouté à 415 pI d'une solution réactionnelle {0,1 M de Tris-HCI (pH 8,5), 1,0 mM de CaCl2, 0,2 mM de NADPH et 0,2 M de NH4CI}. Après que l'absorbance a été mesurée à 340 nm, 5 pI (10 unités) de glutamate déshydrogénase (GDH) ont été ajoutés et la solution résultante a été mise à réagir à 37 C pendant 10 min. L'absorbance à 340 nm a été mesurée de nouveau et la teneur en 2-OG a été calculée au moyen de la différence entre la valeur d'absorbance mesurée après l'addition de la solution d'enzyme et celle mesurée avant l'addition de la solution d'enzyme. A titre de résultat, dans les pommes de terre transformées, la teneur en 2-OG était augmentée de 1,7 fois par rapport à celle des 35 pommes de terre non transformées (figure 4). [Exemple 7] Bioanalyse de la gibbérelline pour des tubercules de pomme de terre dans lesquels un gène de GDH a été introduit Un mutant nain du riz, tanginbozu, a été utilisé dans une analyse. Le procédé d'analyse était basé sur le procédé de Chen et al. (Plant Cell and Environment, 24: 469-476, 2001). Des grains de riz non polis décortiqués ont été stérilisés en surface avec de l'éthanol à 70 pendant 1 min et de l'hypochlorite de sodium à 2 % pendant 15 min puis lavés trois fois avec de l'eau stérilisée, et ont été plongés dans de l'eau stérilisée puis incubés à 30 C pendant 2 jours. Les grains germés ont été stérilisés de nouveau d'une manière similaire à celle décrite ci-dessus. Après que des boîtes de gélose à 0,6 % ont été ajoutées à de l'eau distillée et stérilisées par autoclavage, les grains en cours de germination ont été placés dans des tubes à essai de 3 cm de diamètre, remplis chacun de 25 ml de milieu gélosé. Ceci a été cultivé à 25 C pendant 5 jours tandis que les heures de lumière du jour étaient maintenues à 16 h. Seuls les grains germés ayant des pousses uniformes ont été sélectionnés, et 2 pl de solution test ont été versés entre la première feuille et le coléoptile. Après avoir été cultivés dans les mêmes conditions pendant 5 jours, la longueur de la deuxième gaine foliaire a été mesurée. Pour l'analyse, des tubercules stockés à -80 C immédiatement après la récolte, des tubercules de 2 mois après la récolte et des tubercules de 3 mois après la récolte ont été utilisés. Les tubercules récoltés ont étéstockés à l'intérieur. Tous les tubercules ont été broyés avec de l'azote liquide et extraits par addition d'acétone à 80 % à 3 volumes du poids frais. Après que les impuretés ont été retirées par centrifugation, le surnageant a été lyophilisé. De l'acétone à 20 % a été ajoutée à l'échantillon lyophilisé pour donner un poids frais de 200 pl/g. Pour examiner la spécificité de la gibbérelline, 1 mg/l de daminozide, un antagoniste de la gibbérelline, a été utilisé. Les trois groupes suivants ont été préparés: le groupe d'une solution test provenant de tubercules de pommes de terre transgéniques, le groupe d'une solution test provenant de tubercules de pommes de terre non transgéniques, et le groupe dans lequel la même quantité de daminozide a été ajoutée à la solution test des tubercules de pommes de terre transgéniques.
1. 2866348 30 A titre de résultat, il a été confirmé que, dans le cas du déversement de la solution test extraite à partir des tubercules de pommes de terre transgéniques, la longueur d'extension de la deuxième gaine foliaire était augmentée par rapport à celle extraite des tubercules de pommes de terre non transgéniques. Ceci suggérait que la teneur en gibberéline active était augmentée dans la solution test provenant des tubercules de pommes de terre transgéniques par rapport à celle provenant des tubercules de pommes de terre non transgéniques. De plus, comme l'effet de la promotion de l'extension sur la deuxième gaine foliaire était inhibé par l'addition de daminozide, l'extension de la deuxième gaine foliaire a été considérée comme étant un effet spécifique de la gibbérelline (figure 5). En outre, comme la promotion de l'extension sur la longueur de la deuxième gaine foliaire semblait être accrue quand la période de stockage des tubercules augmentait, il a été considéré que la dormance serait interrompue par une augmentation progressive de l'activité de la gibbérelline dans les tubercules pendant un stockage à long terme.

   [Exemple 8]

   Etude sur le bourgeonnement de pommes de terre transformées Le bourgeonnement de tubercules de pommes de terre transgéniques et de tubercules de pommes de terre non transgéniques de 3 mois après la récolte a été étudié. De nombreux tubercules en bourgeonnement ont été observés pour les pommes de terre transgéniques (40 tubercules parmi 42), mais aucun tubercule en bourgeonnement n'a été observé pour les pommes de terre non transgéniques (0 tubercule parmi 30). De plus, après le traitement à la lumière, un traitement de bourgeonnement a été réalisé pour 10 tubercules de pommes de terre transgéniques et 10 tubercules de pommes de terre non transgéniques à la température ambiante, 25 C, pendant 3 jours, un groupe a été transplanté dans un sol composé uniquement de vermiculite et l'autre groupe ayant le même nombre de tubercules a été maintenu en l'état. Puis, le nombre de bourgeons a été déterminé. Les tubercules transplantés ont été cultivés en serre dans un système clos maintenu à 24 C pendant le jour et à 18 C pendant la nuit, 2866348 31 et le nombre de tubercules ayant des bourgeons au-dessus du sol a été mesuré toutes les semaines.

   A titre de résultat, un bourgeonnement pour les tubercules de pommes de terre transgéniques a été observé 2 semaines après la transplantation, et tous les tubercules bourgeonnaient 3 semaines après la transplantation pour les tubercules de pommes de terre transgéniques. Au contraire, dans les pommes de terre non transgéniques, un certain bourgeonnement a été observé dans la quatrième semaine, mais un bourgeonnement de tous les tubercules n'a pas été observé même après la septième semaine (figure 6). D'après ces résultats, il a été confirmé que l'époque de bourgeonnement des tubercules de pommes de terre transgéniques était avancée et que le bourgeonnement apparaissait très uniformément.

   [Exemple 9]

   Etude sur le rendement de pommes de terre transformées Le rendement a été étudié au moyen des tubercules de pommes de terre transgéniques et de pommes de terre non transgéniques. 0,3 kg de Power Soli (Kureha Chemical Industry Co.) et 1 kg de vermiculite ont été ajoutés à un pot n 7 et un tubercule a été placé dans chaque pot. Dans l'étude, 8 tubercules de pommes de terre transgéniques et 8 tubercules de pommes de terre non transgéniques ont été cultivés, et le poids frais de la partie aérienne, le nombre de tubercules et le poids des tubercules ont été mesurés. Pendant la culture, le nombre de tiges a été normalisé à un par tubercule et de l'eau seulement a été ajoutée sans engrais supplémentaire.

   A titre de résultat, le poids de la partie aérienne, le poids des tubercules et le nombre de tubercules de pommes de terre transgéniques augmentaient de 1,13 fois, 1,35 fois et 1,24 fois, respectivement, par rapport à ceux des pommes de terre non transgéniques (tableau 2).

   Tableau 2. Etude sur le rendement cle pommes de terre transformées contenant un gène de GDH introduit Pomme de terre non transgénique Pomme de terre transgénique 2866348 32 Poids frais de la partie aérienne (g) 11, 9 2,1 (1,00) 13,5 2,4 (1,13) Poids des tubercules (g) 41,0 7,0 (1, 00) 55,4 6,5 (1,35) Nombre de tubercules 2,5 0,5 (1,00) 3,1 1,1 (1, 24) Références 1. Canada, CA2180786 2. Chine, CN00109779.2 3. demande de brevet japonais publiée avant examen n 2001-238556 4. Tomokazu Koshiba et Yuji Kamiya, "Science of new plant hormone", Kodansha Ltd., 2002 5. Vegetable horticulture great dictionary, Yokendo, 1977 10 6. Tokushima Test and Research Report of Agriculture, vol. 36, p. 7-17 (2000) 7. Minoru Yoshida, Potato encyclopedia, Rural Culture Association, 1988 8. Plant Physiology, vol. 118, p. 773-781 (1998) 9. Plant Journal, vol. 22, p. 247-256 (2000) 2866348 33

   REVENDICATIONS

   1. Procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce caractérisé en ce qu'il comprend une étape d'augmentation de la teneur intracellulaire en 2-0G de la plante.

   2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il produit en outre une plante ayant une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme.

   3. Procédé pour produire une plante ayant une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce, caractérisé en ce qu'il comprend l'étape de surexpression d'un gène de GDH intracellulaire dans la plante.

   4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il 15 produit en outre une plante ayant une époque de bourgeonnement ou de germination uniforme.

   5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 et 4 caractérisé en ce que l'étape de surexpression du gène de GDH intracellulaire dans la plante est réalisée par introduction dans la plante d'une construction d'acide nucléique capable de stimuler l'expression du gène de GDH.

   6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 et 4, caractérisé en ce que l'étape de surexpression du gène de GDH intracellulaire dans la plante est réalisée par introduction dans la plante d'une construction d'acide nucléique capable d'exprimer le gène de GDH.

   7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, caractérisé en ce que la construction d'acide nucléique comprend une molécule d'acide nucléique codant le polypeptide ayant la séquence d'aminoacides décrite dans SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4.

   8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, caractérisé en ce que la construction d'acide nucléique s'hybride à une molécule d'acide nucléique ayant la séquence décrite dans SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 3 dans des conditions stringentes, ladite molécule d'acide nucléique codant un polypeptide ayant une activité GDH.

   9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la plante est choisie dans le groupe consistant en 34 l'avoine, la laitue, la pomme de terre, le pêcher, le camélia, le riz, la famille du blé, le blé, l'orge, la ramie, l'arachide, Bromus catharticus, Bromus inermis Leyss., le radis, le radis japonais, Brassica, l'aubergine, la langue de boeuf, la gloxinie, kalanchoe, Primula, Nigella damascena, la fraise, Aralia cordata Thunberg, l'oignon, la ciboule, l'épinard et les bulbes à fleurs.

   10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que la plante est une pomme de terre.

   11. Plante caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être 10 obtenue par un procédé selon la revendication 1.

   12. Plante caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue par un procédé selon la revendication 2.

   13. Plante caractérisée en ce qu'elle a une période de dormance réduite par rapport à celle de plantes naturelles de la même espèce, ladite plante surexprimant un gène de GDH intracellulaire.

   14. Plante caractérisée en ce qu'elle est susceptible d'être obtenue par un procédé selon la revendication 4.

   15. Plante selon l'une quelconque des revendications 13 et 14 caractérisée en ce que le gène de GDH comprend une séquence nucléotidique codant le polypeptide ayant la séquence d'aminoacides décrite dans SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4.

   16. Plante selon l'une quelconque des revendications 13 et 14, caractérisée en ce que le gène de GDH a une séquence capable de s'hybrider à la molécule d'acide nucléique ayant la séquence décrite dans SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 3 dans des conditions stringentes, ledit gène codant un polypeptide ayant une activité GDH.

   17. Plante selon l'une quelconque des revendications 11 à 16, caractérisée en ce qu'elle est choisie dans le groupe consistant en l'avoine, la laitue, la pomme de terre, le pêcher, le camélia, le riz, la famille du blé, le blé, l'orge, la ramie, l'arachide, Bromus catharticus, Bromus inermis Leyss., le radis, le radis japonais, Brassica, l'aubergine, la langue de boeuf, la gloxinie, kalanchoe, Primula, Nigella damascena, la fraise, Aralia cordata Thunberg, l'oignon, la ciboule, l'épinard et les bulbes à fleurs.

   18. Plante selon la revendication 17, caractérisée en ce qu'il s'agit 35 d'une pomme de terre.