FR2796549A1

FR2796549A1 - Utilisation d'au moins un extrait d'une plante du genre lannea dans une composition cosmetique ou dermopharmaceutique

Info

Publication number: FR2796549A1
Application number: FR9909428A
Authority: FR
Inventors: Gilles Pauly; Philippe Moser; Louis Danoux
Original assignee: Laboratoires Serobiologiques SA
Current assignee: BASF Health and Care Products France SAS
Priority date: 1999-07-19
Filing date: 1999-07-19
Publication date: 2001-01-26
Anticipated expiration: 2019-07-19
Also published as: FR2796549B1; US6599537B1; EP1196141A1; AU6823300A; JP2003504388A; US20040018259A1; WO2001005368A1; KR20020040755A; BR0012618A; HK1045112A1; CN1361680A

Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea ou Odina en tant qu'agent actif, seul ou en association avec au moins un autre agent actif, pour la préparation d'un produit cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ ou les phanères.

Description

DESCRIPTION
La présente in@ ention concerne le domaine de la cosmétique et de la pharmacologie et a pour objet l'utilisation d'au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea, préférentiellement Lannea coromandelica ou Lannea grandis. dans des préparations cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques.

Lannea coromandelica (Houtt.) Merr. est un arbre de la famille des Anacardiaceae que l'on trouve notamment en Inde et dans certains pays d'Asie.

Dans les libres de médecines traditionnelles indiennes, il est parfois confondu avec Lannea grandis. les deux ayant dans certains ouvrages le même synonyme Odina Woodier Roxb.

Les utilisations traditionnelles de l'écorce sont notamment les soins des coupures, des blessures, des contusions (entorse, foulure) et des diarrhées, l'extrait aqueux de l'écorce étant également utilisé comme abortif.

Les feuilles ont des utilisations médicinales proches de celles de l'écorce notamment en ce qui concerne le soin des inflammations, de l'arthrose, des contusions, et des douleurs corporelles en général.

Il est connu que l'extrait éthanoliquc des feuilles de Lannea coromandelica présente un effet protecteur de la membrane des globules rouges vis à vis d'un stress hypotonique. ce qui a été considéré comme une mesure d'activité anti-inflammatoire (cf. Gandhidasan R et al., Fitoterapia.

62/1,81-83, 1991).

En outre, l'extrait éthanolique de l'écorce a montré après administration intraperitonéale une activité anti-inflammatoire très importante et dose-dépendante dans différents modèles d'inflammation, cet extrait étant dénué d'acti\ité analgésique et antipy rétique (cf. Singh S et Singh GB, Phytotherap) Research, 8/5. 311-313. 1994).

Or, les inventeurs ont constaté que des extraits de différentes parties de plante présentent, en plus des propriétés thérapeutiques précitées. également des propriétés biologiques remarquables les rendant directement utilisables dans des compositions cosmétiques et dermopharmaceutiques ou pour la préparation de ces dernières.

Les activités et propriétés ainsi mises en évidence, de façon inattendue et surprenante, consistent en des activités antiradicalaire.

cytophotoprotectrice. inhibitrice de la tyrosinase et de la mélanogénèse (dépigmentante) et anti-protéases (anti-élastase. anti-collagénase).

Ainsi, la présente invention a notamment pour objet l'utilisation en tant qu'agent actif pour la préparation d'un produit cosmétique à usage topique pour la peau. les muqueuses et/ou les phanères d'au moins un extrait d'une plante appartenant au genre botanique Lannea, préférentiellement Lannea coromandelica ou Lannea grandis (synonyme Odina Woodier), cet extrait ou ce mélange d'extraits pouvant être utilisé seul ou en association avec au moins un autre agent actif
Du fait de leurs activités multiples décrites plus en détail ciaprès, ces extraits trouvcront avantageusement leur utilisation seuls ou en association avec d'autres composés actifs, dans des produits destinés à lutter notamment contre levieillissement cutané, les hyperpigmentations cutanées, les tâches de pigmentation. la perte d'élasticité de la peau, les rides. les irritations et inflammations (traitement des peaux sensibles). la pollution et/ou les agressions solaires.

Après collecte. les parties de plantes concernées sont, après séchage, soumises à un procédé d'extraction, le solvant mis en oeuvre pouvant avantageusement être choisi dans le groupe formé par l'eau. les alcools, les cétones, les esters, les solvants chlorés. les polyols ou les mélanges d'au moins deux des solvants précités miscibles.

Les extraits selon la présente invention peuvent également être obtenus, en variantes, par extraction par le CO2 supercritique. seul ou avec un co-solvant ou au moyen d'un procédé d'extraction par solvant basé sur les rayonnements micro-ondes.

Selon un mode de réalisation particulier de l'invention. l'extrait de plante peut également consister en une ou des tractions isolées purifiées, notamment par chromatographie, à partir d'un extrait brut.

A titre illustratif et non limitatif. on décrira ci-après différents exemples de procédés préférentiellement mis en oeuvre pour la réalisation des extraits de plantes mentionnés ci-dessus.

Les parties de plante utilisées dans la description des exemples sont données à titre indicatif, les extraits objets de la présente invention pouvant être réalisés à partir de toutes les parties accessibles des plantes, à savoir : les racines, les écorces (des racines, tiges et tronc), les feuilles et tiges feuillées, les graines, les fruits et les fleurs. mais préférentiellement à partir de l'écorce du tronc et/ou des feuilles.

EXEMPLE ) Des écorces du tronc de Lannea coromandclica sont concassées puis finement broyées au bro\ eur à couteaux.

Dans un réacteur muni d'un agitateur, on introduit 3 litres d'eau distillée et on réalise ensuite successivement les opérations suivantes : - ajouter 300 g d'écorce broyée dans le réacteur, - extraire sous agitation pendant 1 heure à ébullition, - refroidir à température ambiante.

- éliminer l'insoluble par centrifugation ou filtration.

- filtrer l'extrait liquide jusqu'à une porosité d'environ 0.45 m.

- recueillir le filtrat et le déshydrater par atomisation.

Le rendement en extrait sur la base de la matière sèche extraite est de 14 % par rapport aux écorces broyées.

EXEMPLE 2 Dans un réacteur muni d'un agitateur. on introduit 3 litres d'alcool méthylique à 80 % et on réalise ensuite successivement les opérations suivantes : - ajouter 300 g de feuilles sèches broyées de Lannea coromandelica dans le réacteur, - extraire sous agitation pendant 1 heure à chaud (reflux).

- refroidir à température ambiante.

- filtrer et rincer le résidu par 300 ml de méthanol à 80 %.

- mélanger les filtrats et les clarifier ensuite par filtration jusqu'à une porosité d'environ 0,45 m, - évaporer sous vide la phase méthanolique.

- déshydrater si nécessaire la solution aqueuse résultante selon les techniques habituelles connues de l'homme du métier.

Le rendement en extrait sur la base de la matière sèche extraite est de 10,3 % par rapport aux feuilles broyées.

EXEMPLE 3 Dans un réacteur muni d'un agitateur, on introduit 3 litres d'éthanol absolu et on réalise ensuite successivement les opérations suivantes : - ajouter 300 g de racines d'écorce du tronc de Lannea coromandelica broyées dans le réacteur.

- extraire sous agitation pendant 1 heure à chaud (reflux).

- refroidir à température ambiante,

- filtrer et rincer le résidu par 300 ml d'éthanol à 96 , - mélanger les filtrats et filtrer jusqu'à une porosité d'environ 0. 45 m.

- évaporer la phase éthanolique sous vide à 40 C.

- éliminer les traces de solvant par séchage des extraits dans une étuve ventilée à 40-50 C.

Le rendement en extrait est de 16.1 % par rapport aux écorces broyées.

Le tableau suivant rassemble à titre indicatif l'ensemble des extraits de Lannea coromandelica réalisés par les inventeurs. selon des procédés similaires à ceux décrits ci-dessus.

Partie <SEP> végétale <SEP> extraite <SEP> Type <SEP> d'extrait <SEP> Rendement
<tb> Ecorces <SEP> E.aqueux <SEP> 13,9
<tb> du <SEP> tronc <SEP> E. <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> % <SEP> 18.7
<tb> lot <SEP> A <SEP> E. <SEP> éthanol <SEP> 16.1
<tb> Ecorces <SEP> E. <SEP> aqueux <SEP> 11,9
<tb> du <SEP> tronc <SEP> E. <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> % <SEP> 14.1
<tb> lot <SEP> B <SEP> E. <SEP> éthanol <SEP> 14.1
<tb> E. <SEP> aqueux <SEP> 10,2
<tb> Feuilles <SEP> E. <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> % <SEP> 10.3
<tb> E. <SEP> éthanol <SEP> 12. <SEP> 1
<tb>

I) MISE EN EVIDENCE DE L'INHIBITION DE LA MELANOGENESE PAR LES EXTRAITS DE LANNEA COROMANDELICA a) Principe des tests
La mélanine qui est un pohmère biologique déterminant la couleur de la peau est produit dans les mélanocy tes épidermiques par une enzyme spécifique : la tyrosinase. Cette enzyme catalyse les deux étapes initiales de la synthèse de la mélanine : transformation de la tyrosine en DOPA (dihydroxy-phényl-alanine) puis en dopachrome. Ensuite sous l'action d'autres enzymes. le dopachrome est oxydé puis polymérisé en mélanine qui sera délivrée aux kératinocytes voisins sous forme de petites granules : les mélanosomcs.

Il a été observé, de plus, que le photovicillissement pouvait entraîner l'apparition de taches sombres disgracieuses dues à une hyperactivité de ces mélanocytes.

Les capacités des extraits de Lannea. plus particulièrement de Lannea coromandelica. à réduire l'activité des mélanocytes ont été évaluées par un test d'inhibition de la tyrosinase in tubo et un test d'inhibition de la mélanogénèse in vitro dont les principes sont résumés ci-après :
Test d'inhibition de la tyrosinase in tubo - mélange de la L-DOPA avec la tyrosinase et les extraits de Lannea coromandelica à tester.

- enregistrement de la DO à 475 nm du dopachrome, - calcul de la cinétique puis de la CI50 (concentration en extrait entraînant 50 % d'inhibition de l'activité de l'enzyme).

Test d'inhibition de la mélanogénèse in vitro sur mélanocytes B16 - ensemencement des mélanocytes dans un milieu de croissance, - incubation pendant 3 jours à 37 C, C02 = 5 %.

- mise en place des extraits de Lannea coromandelica dans un milieu activant la mélanogénèse.

- incubation pendant 3 jours à 37 C. C02 = 5 %.

- dosage spectrophotométrique des protéines (méthode dite de Bradford) et de la mélanine (DO à 475nm) dans les mélanocytes homogénéises.

- calcul d'un indice d'activité correspondant au rapport (taux de protéines taux de mélanine) pour une dose optimale d'extrait.

Ainsi, plus l'indice est élevé (> 1), plus les capacités d'inhibition de la mélanogénèse sont fortes. b) Résultats
La figure 1 des dessins annexés est caractéristique des résultats obtenus (Test d'inhibition de la tyrosinase in tubo par des extraits aqueux d'écorces de Lannea coromandelica) et l'ensemble des résultats (valeur de la CI50) sont synthétisés dans le tableau 1 ci-après.

Tableau 1 : Mise en évidence de l'inhibition de la tyrosinase in tubo par les extraits de Lannea coromandelica : valeurs = CI50 exprimés en % p/v (poids/volume).

Parties <SEP> extraites <SEP> Ecorces <SEP> du <SEP> tronc <SEP> Feuilles
<tb> CI50 <SEP> en <SEP> % <SEP> p/v <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> B
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> 0,009 <SEP> % <SEP> 0,025 <SEP> % <SEP> 0,093 <SEP> %
<tb> Extrait <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> % <SEP> 0. <SEP> 009 <SEP> % <SEP> 0.007 <SEP> % <SEP> 0.05 <SEP> %
<tb> Extrait <SEP> éthanol <SEP> 96 <SEP> 0.008% <SEP> 0.007 <SEP> % <SEP> 0,130 <SEP> %
<tb> Hydroquinone <SEP> CI50 <SEP> = <SEP> 0,025 <SEP> % <SEP> p/v
<tb>

La figure 2 des dessins annexés (Résultats statistiques : Moyenne écart type, deux essais répétés trois fois) est caractéristique des résultats obtenus sur mélanocyte B 16 et l'ensemble des résultats obtenus par des tests similaires à ceux représentés sur la figure 2, est synthétisé dans le tableau II.

Tableau II Mise en évidence de l'inhibition de la mélanogénèse in vitro sur mélanocytes B16 par les extraits aqueux d'écorces de Lannea coromandelica. Valeurs représentées : 1 = Indice d'activité sur mélanocytes B 16.

Parties <SEP> extraites <SEP> Ecorces <SEP> du <SEP> tronc
<tb> Dose <SEP> testée <SEP> % <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> B
<tb> p/v
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> 0.016 <SEP> I <SEP> = <SEP> 2,9 <SEP> I <SEP> =2.5
<tb> Extrait <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> % <SEP> 0.032 <SEP> I <SEP> = <SEP> 2 <SEP> I <SEP> = <SEP> 1,8 <SEP>
<tb> Extrait <SEP> éthanol <SEP> 0.016 <SEP> 1=2.6 <SEP> 1 <SEP> = <SEP> 2.4 <SEP>
<tb> Arbutine <SEP> 1 <SEP> = <SEP> 3.14 <SEP> (pour <SEP> la <SEP> dose <SEP> de <SEP> 0,3 <SEP> %)
<tb>

Les résultats de ces deux séries de tests démontrent que les extraits de Lannea coromandelica selon l'invention présentent de fortes capacités d'inhibition de la mélanogénèse. capacités dues au moins en partie à une inhibition de la tyrosinase.

Cette propriété permet des applications dans le traitement local des hyperpigmentations cutanées telles que les taches pigmentaires de sénescence.

II) MISE EN EVIDENCE DES CAPACITES ANTIRADICAUX LIBRES DES EXTRAITS DE LANNEA COROMANDELICA
Les radicaux libres (RL) sont des espèces chimiques activées, caractérisées par la présence d'un électron libre non apparié. Ils peuvent se former à partir des molécules endogènes comme les lipides insaturés, certains acides aminés ou l'oxygène lors des réactions enzymatiques spontanées du métabolisme général ou induites lors de l'inflammation. Certains stress comme les UV ou la pollution favorisent également leur formation et leur excès provoquent une dégradation de tous les constituants des tissus vivants (lipides, protéines, sucres, ADN, etc ...). Cette toxicité des RL est fortement potentialisée par la présence de l'oxygène et explique le vieillissement des organismes vivants ou même des pathologies graves comme les cancers de la peau.

Les capacités anti-radicaux libres des extraits de Lannea coromandelica sont évaluées par des tests chimiques et biochimiques in tubo qui recouvrent aussi bien les formes radicalaires initiales que les formes réactives induites de l'oxygène : ces tests sont réalisés sur des substrats synthétiques et aussi sur un substrat naturel : le collagène, glycoprotéine dermique très sensible à l'activité des formes réactives de l'oxygène (ou FRO).

Ces tests sont complétés par un test sur fibroblastes humains en culture in vitro qui évalue les capacités de cytophotoprotection des cellules vis à vis des UV-A, par les extraits de Lannea coromandelica.

Les UV-A sont choisis comme modèle d'étude car ils pénètrent jusque dans le derme et ils induisent dans la peau un stress oxydatif révélé en particulier par une lipoperoxydation des membranes cytoplasmiques. Les lipoperoxydes formés se fragmentent en malonaldialdéhyde responsable de la réticulation de nombreuses molécules biologiques comme les protéines (inhibition d'enzymes) et les bases nucléiques (mutagenèse). a) Test au DPPH
Le DPPH (diphenylpicryl-hydrazyl) est un radical libre stable et coloré en violet qui est transformé en son leucodérivé par les substances qui captent les radicaux libres (= effet "scavenger" ou "piégeur").

Le résultat est exprimé en taux de leucodérivé formé en présence de l'actif (en % par rapport au témoin sans actif).

Les résultats sont rassemblés dans le tableau III ci-après.

Tableau III : Mise en évidence de l'effet antiradicalaire des extraits de Lannea coromandelica. Test anti-DPPH : taux de leucodérivé formé (en % par rapport au témoin : moyenne sur 2 essais).

Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol <SEP> Acide
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> ascorbique
<tb> Lot <SEP> A <SEP> % <SEP> d'écorces <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP>
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,0003 <SEP> % <SEP> 27 <SEP> 34 <SEP> 31
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,001 <SEP> % <SEP> 73 <SEP> 90 <SEP> 86 <SEP> 49
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 93 <SEP> 93 <SEP> 93 <SEP> 75
<tb>

CI50 en % (p/v) 0.0007 0.0005 0.0005 0,0013 b) Test anti-radicaux hydroxylcs (HO*)
Test anti-HO* avec le désoxyribose (réaction de Fenton)
Ces tests é@ aluent les capacités d'un actif à éliminer ("piéger") les HO* produits par la réaction de Fenton (H202 en présence de fer).

HO' peut être révélé par le désoxyribose. Le désoxyribose est un composé essentiel de l'ADN qui est oxydé puis fragmenté par les HO*Le produit d'oxydation du désoxyribose est révélé par condensation avec l'acide thiobarbiturique (mesure de la densité optique à 532 nm). Cet essai est réalisé avec et sans EDTA pour déterminer les capacités de l'extrait à former des complexes inactifs avec le fer ("effet ferriprive").

Les résultats sont rassemblés dans les tableaux IV.1) et IV.2) ci-après qui mettent en évidence l'effet anti-HO* des extraits de Lannea coromandelica. Tests avec le désoxyribose (réaction de Fenton) (résultats en % d'inhibition du taux d'hy droxylation : moyenne sur 2 essais).

IV.l) Réaction de "Fenton" avec EDTA

<tb>
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol <SEP> Acide
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> ascorbique
<tb> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,03 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 3
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 29 <SEP> 25 <SEP> 23 <SEP> 45
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 1 <SEP> % <SEP> 73
<tb> CI50 <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> > <SEP> 0.1 <SEP> > <SEP> 0,1 <SEP> > <SEP> 0.1 <SEP> 0,26
<tb>
IV. 2) Réaction de "Fenton" sans EDTA

<tb>
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol <SEP> Acide
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> ascorbique
<tb> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP>
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,003 <SEP> 8 <SEP> 37 <SEP> 51
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 36 <SEP> 76 <SEP> 75 <SEP> 5
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,03 <SEP> % <SEP> 78 <SEP> 79 <SEP> 77
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 73 <SEP> 76 <SEP> 78 <SEP> 2
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 1 <SEP> % <SEP> 56
<tb>

CI50 en % (p/v) 0.017 0.005 0.003 0,9 c) Tests biochimiques ou enzymatiques * Effet anti-anions superoxydes (O2#) O2# est produit durant les stress oxydatifs par induction d'une enzyme : la xanthine ox dase (XOD) qui va dégrader l'hypoxanthine (HX) en excès lors d'un arrêt ou d'une perturbation du métabolisme énergétique dans les tissus vivants.

O2# est toxique surtout par sa capacité à former spontanément ou en présence de superoxyde dismutase (SOD) du peroxyde d'hydrogène (H202) source de HO# par la réaction de Fenton.

Les tests biochimiques sont réalisés avec de l'HX en présence de XOD et les O2# sont révélés par le luminol, par un mélange luminol et peroxydase qui détectera O2# et H202 ou par un sel de tétrazolium (NBT) qui formera un composé rouge évalué à 540 nm.

Les résultats sont rassemblés dans les tableaux V.l) et V. 2) et V. 3) ci-après, qui mettent en évidence l'effet anti-anions superoxydes O2# in tubo des extraits de Lannea coromandelica.

V.l) Test au luminol : résultats en % d'inhibition (moyenne sur 2 essais)

<tb>
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol <SEP> Acide
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> ascorbique
<tb> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb>

Extrait à 0,0001 % 36 38 40

<tb>
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,001 <SEP> % <SEP> 90 <SEP> 94 <SEP> 93 <SEP> 92
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb>

CI50 en % (p/v) 0,0003 0.0003 0,0003 0.0006 V.2) Test au luminol + microperoxydase : résultats en % d'inhibition (moyenne sur 2 essais)

<tb>
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol <SEP> Acide
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> ascorbique
<tb> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,001 <SEP> % <SEP> 1 <SEP> 14 <SEP> 2 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 98 <SEP> 100 <SEP> 99 <SEP> 94
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,03 <SEP> % <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb>

CI50 en % (p/v) 0.0055 0,0048 0.0055 0,0058

V. 3) Test au NBT : en % d'inhibition (moyenne sur 2 essais)

<tb>
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol <SEP> Acide
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> ascorbique
<tb> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,001 <SEP> % <SEP> 9 <SEP> 16 <SEP> 15
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 58 <SEP> 64 <SEP> 65 <SEP> 15
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,03 <SEP> % <SEP> 75 <SEP> 82 <SEP> 82
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 90 <SEP> 94 <SEP> 91 <SEP> 32
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 1 <SEP> % <SEP> 65
<tb>

CI50 en % {p/v) 0.0085 0.0074 0,0073 0.5909 * Effet anti-oxygène singulet sur le collagène type 1
Le collagène est une glycoprotéine dermique très sensible à l'activité des formes réactives de l'oxygène (ou FRO) et il a été démontré que l'oxygène singulet (021) provoque des pontages anarchiques entre les protéines.

Le principe de ce test est basé sur la mesure de la viscosité d'une solution aqueuse de collagène type 1 en présence d'un système photochimique générateur d'O21.

021 qui est produit par la riboflavine en présence d'UV-A, provoque en présence de glucose une gélification du collagène qui se traduit par une augmentation de la viscosité. Cet effet est inhibé par des molécules qui captent 021 comme la thiourée ou l'aminoguanidine.

La viscosité est évaluée par mesure du temps d'écoulement au travers du capillaire d'un viscosimètre dit de "Cannon-Fenske".

Les résultats sont rassemblés dans le tableau VI ci-après, qui met en évidence les effets de photoprotection des extraits de Lannea coromandelica sur le collagène typeI (résultats en % d'inhibition).

Tableau VI :

<tb>
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> méthanol <SEP> Aminoguanidine
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> 80 <SEP> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,005 <SEP> % <SEP> 57
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 54 <SEP> 70
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,015 <SEP> % <SEP> 75
<tb>

C150 en % (p/v) 0.009 0.007 0.004 d) Test de cytophotoprotection anti-UVA sur fibroblastes humains
Ce test in \ itro évalue les capacités de cytophotoprotection vis à vis des UV-A des fibroblastes humains par les extraits de Lannea coromandelica selon l'invention.

Les UV-A sont choisis comme modèle d'étude car ils pénètrent jusque dans le derme et ils induisent dans la peau un stress oxydatif révélé en particulier par une lipoperoxydation des membranes cytoplasmiques. Les lipoperoxydes formés se fragmentent en malonaldialdéhyde (MDA) responsable de la réticulation de nombreuses molécules biologiques comme les protéines (inhibition d'enzymes) et les bases nucléiques (mutagenèse).

Les fibroblastes sont ensemencés dans un milieu de culture défini avec du sérum de \eau foetal. L'extrait de Lannea coromandelica a été ajouté 2 à 3 jours après l'ensemencement. Après une incubation de 2 à 3 jours à 37 C et CO2 = 5 %, le milieu de culture est remplacé par une solution saline et les fibroblastes sont irradiés par une dose d'UV-A (15 J/cm2).

Dès la fin de l'irradiation, le taux de MDA est dosé dans la solution saline surnageante et le taux de protéines est mesuré dans les fibroblastes. Le MDA est dosé par la réaction à l'acide thiobarbiturique et les protéines selon la méthode de Bradford.

Les résultats sont rassemblés dans les tableaux VII.et VII.2 ci-après, qui permettent de mettre en é idence l'effet cytophotoprotecteur des extraits de Lannea coromandelica sur des fibroblastes humains en survie

in vitro (résultats en % par rapport au témoin irradié (MDA) et par rapport au témoin non irradié (protéines) : moyenne sur 1 ou 2 essais en triple).

Tableau VII. 1)

<tb>
<tb> Paramètre <SEP> évalué <SEP> VIDA
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol
<tb> Extraits <SEP> testés <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> Vitamine <SEP> E
<tb> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> sans <SEP> UV <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Témoin <SEP> UV-A <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,0003 <SEP> % <SEP> 96 <SEP> 74 <SEP> 84 <SEP> 21
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,001 <SEP> % <SEP> 64 <SEP> 56 <SEP> 59 <SEP> 8
<tb>
Tableau VII.2)

<tb>
<tb> Paramètre <SEP> évalué <SEP> Protéines
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> Extrait <SEP> éthanol
<tb> Extraits <SEP> testés <SEP> d'écorces <SEP> méthanol <SEP> 80 <SEP> d'écorces <SEP> Vitamine <SEP> E
<tb> % <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP>
<tb> Témoin <SEP> sans <SEP> UV <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> Témoin <SEP> UV-A <SEP> 95 <SEP> 95 <SEP> 95 <SEP> 96
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,0003 <SEP> % <SEP> 100 <SEP> 96 <SEP> 97 <SEP> 97
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,001 <SEP> % <SEP> 93 <SEP> 93 <SEP> 98 <SEP> 98
<tb>

Les résultats des différents tests montrent que les extraits de Lannea coromandelica ont présenté des capacités significatives à éliminer ("piéger") les radicaux libres. le radical hydroxyle et les anions superoxydes.

Cette activité anti-radicaux libres est retrouvée dans le test de photoprotection du collagène type 1 et dans le test de cytophotoprotection des fibroblastes humains en culture in vitro.

Cette activité est due au moins en partie à un effet piégeur (ou "scavenger") vis à vis des radicaux libres et des formes réactives de l'oxygène (radical hydroxyle. anion superoxyde et oxygène singulet) et à un

effet chélateur du fer démontré par l'activité anti-HO* plus élevée en l'absence d'EDTA qu'en présence d'EDTA.

Ces différents résultats démontrent nettement que les extraits de Lannea coromandelica selon l'invention seront indiqués dans des produits pour la peau ou les phanères à activité cytophotoprotectrice, ou destinés à lutter contre le vieillissement. la pollution. l'inflammation, l'irritation (traitement des peaux sensibles).

III) MISE EN EVIDENCE DES ACTIVITES ANTIPROTEASES DES EXTRAITS DE LANNEA COROMANDELICA
Les protéases sécrétées par les polymorphonucléaires neutrophiles (PNN) lors de l'inflammation ou par les fibroblastes soumis à une irradiation par les UV-A. provoquent une dégradation des protéines qui structurent la matrice extracellulaire du derme.

Ainsi, les PNN sécrètent une élastase (sérine-protéase) active sur l'élastine, les protéoglycanes et les collagènes, tandis que les fibroblastes "âgés" ou irradiés sécrètent des métalloprotéascs présentant des activités d'élastase et de collagènase.

Les deux types de protéases ont été évalués par des réactions enzymatiques in tubo. a) Tests anti-élastase
Les tests in tubo sont réalisés avec une élastase du pancréas (sérine-protéase) à l'aide de deux types de substrats : un substrat synthétique chromogène et un substrat naturel qui est l'élastine conjuguée avec du rouge congo.

L'incubation est de 30 mn à température ambiante et la coloration est mesurée à 410 nm et à 520 nm respectivement.

L'inhibiteur étalon testé comparativement est l'al-antitrypsine.

Les résultats sont rassemblés dans les tableaux VIII et IX ciaprès.

Tableau V I II : Mise en évidence de l'activité anti-élastase des extraits de Lannea coromandelica. Méthode utilisant l'élastine conjuguée au rouge congo : résultats en % d'inhibition.

Extrait <SEP> méthanol <SEP> Extrait <SEP> éthanol
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> 80 <SEP> % <SEP> d'écorces <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,2 <SEP> % <SEP> 6 <SEP> 29
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,3 <SEP> % <SEP> 35 <SEP> 100
<tb> CI50 <SEP> en <SEP> % <SEP> p/v <SEP> 0.35 <SEP> 0. <SEP> 23
<tb>
NB : CI50 en % p/v pour l' 1 a-antitrypsine = 0.04 % Tableau IX : en évidence de l'activité anti-élastase des extraits de Lannea coromandelica. Méthode utilisant le substrat synthétique : résultats en % d'inhibition.

Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> méthanol <SEP> Extrait <SEP> éthanol
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> 80 <SEP> % <SEP> d'écorces <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 0 <SEP> 22 <SEP> 37
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,03 <SEP> % <SEP> 56 <SEP> 65 <SEP> 67
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 66 <SEP> 76 <SEP> 77
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,3 <SEP> % <SEP> 72 <SEP> 82 <SEP> 83
<tb> CI50 <SEP> en <SEP> % <SEP> p/V <SEP> 0.028 <SEP> 0.023 <SEP> 0,019
<tb>

NB : CI50 en % p/v pour l' 1 ex-antitrypsine = 0.04 (Yo b) Test anti-collagènase in tubo
Les tests sont réalisés avec une collagénase de clostridium hystoliticum et un substrat synthétique chromogène : le FALGPA.

L'incubation est de 30 mn à température ambiante et la densité optique est mesurée à 324 nm. L'inhibiteur étalon testé comparativement est la cystéine.

Les résultats sont rassemblés dans le tableau X ci-après qui met en évidence l'activité anti-collagènase des extraits de Lannea coromandelica (résultats en % d'inhibition).

Tableau X

<tb>
<tb> Extrait <SEP> aqueux <SEP> Extrait <SEP> méthanol <SEP> Extrait <SEP> éthanol
<tb> Doses <SEP> en <SEP> % <SEP> (p/v) <SEP> d'écorces <SEP> 80 <SEP> % <SEP> d'écorces <SEP> d'écorces
<tb> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A <SEP> Lot <SEP> A
<tb> Témoin <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,01 <SEP> % <SEP> 46 <SEP> 0 <SEP> 2
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,03 <SEP> % <SEP> 100 <SEP> 43 <SEP> 51
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,1 <SEP> % <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> Extrait <SEP> à <SEP> 0,3 <SEP> % <SEP> 100 <SEP> 100 <SEP> 100
<tb> CI50 <SEP> en <SEP> % <SEP> p/V <SEP> 0,011 <SEP> 0,039 <SEP> 0,030
<tb>
NB : CI50 en % p/v de la cystéine = 2,4 %
Les résultats exposés ci-dessus indiquent que les extraits de Lannea coromandelica présentent de bonnes capacités à inhiber l'élastase ainsi que des capacités élevées à inhiber la collagénase.

Ainsi, les extraits selon l'invention pourront avantageusement être utilisés pour les différentes applications découlant de l'inhibition de ces protéases, comme le raffermissement cutané, la lutte contre les effets du vieillissement de la peau (rides) et du cuir chevelu, des activités antiinflammatoires, anti-irritation.

La présente invention a également pour objet une composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères, comportant à titre d'agent actif. seul ou en association avec au moins un autre agent actif, utilisé pour sa forte activité antiradicalaire, pour ses propriétés d'inhibition de la tyrosinase et de la mélanogénèse, pour son activité anti-collagénase importante,pour sa forte activité anti-élastase et/ou pour son activité cytophotoprotectrice (notamment anti-UVA). au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea, préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.

Ledit ou lesdits extraits pouvant être utilisé(s) dans cette composition pour l'exploitation soit d'une des activités ou propriétés précitées considérée isolément, soit d'au moins deux telles activités ou propriétés ou encore de toutes ces activités ou propriétés considérées simultanément.

De manière avantageuse. la composition cosmétique selon l'invention contient entre 0,001 % et 20 % en poids, préférentiellement entre 0.1% et 3 % en poids d'un extrait de plante ou d'un mélange d'extraits de plante(s) appartenant au genre Lannea. préférentiellement de la plante Lannea grandis ou Lannea coromandelica, tel que défini ci-dessus ou obtenu par l'un des procédés décrits précédemment.

En outre, les extraits précités peuvent être employés sous toute forme galénique utilisée usuellement en cosmétique telles que les émulsions (Huile dans Eau et Eau dans Huile), lotions, laits. gels, hydrogels, crèmes. pommades, savons, bâtons, produits à pulvériser, lotions capillaires et shampooings.

Par ailleurs. lesdits extraits ou mélanges d'extraits végétaux peuvent être incorporés dans des vecteurs cosmétiques tels que par exemple les liposomes, les macro-, micro-. nanocapsules. les macro-, micro- et nanoparticules ou analogues.

A titre d'exemples illustratifs et non limitatifs d'exemples de réalisation de compositions selon l'invention, on décrira à présent différentes formulations de telles compositions ainsi que leur mode de préparation.

EXEMPLE 1
Un produit cosmétique sous forme de lotion non rincée destinée à lutter contre l'hyperpigmentation cutanée et les taches de pigmentation, pourra présenter la composition suivante : extrait méthanol 80 % d'écorce de Lannea 0,10 eau distillée 9.50 hydroxyéthylcellulose 0,50 Elestab 305 (Laboratoires Sérobiologiques) 0.50 parfum 0. 10 cremophor RH 410 0,30 eau distillée qsp 100.00
Le procédé de préparation de la lotion non rincée consiste essentiellement à dissoudre Elestab 305et hydroxyéthylcellulose dans l'eau chauffée aux environs de 50 C, à y disperser le parfum et cremophor RH 410, puis à ramener le mélange à température ambiante, à y dissoudre ensuite l'extrait de Lannea et enfin à réaliser un filtrage.

EXEMPLE 2
Un produit cosmétique sous forme de crème destinée à lutter contre le vieillissement cutané, les rides et la perte d'élasticité de la peau, pourra être constitué des deux phases suivantes : Phase grasse ceteareth 25 2.00 ceteareth 6 et alcool stéarilyque 1. 00 alcool cétylique 4,00 stéarate de glycol 4,00 pétrolatum 5,00 triglycérides capryliques /capriques 5,00 Phase aqueuse glycérine 10.00 extrait aqueux d'écorce de Lannea 3.00 eau distillée 8,50 conservateur Elestab 4112 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,40 parfum 0,30 eau distillée qsp 100,00
Le procédé de préparation de la crème précitée consiste essentiellement à porter la phase grasse à 80 C. à porter la phase aqueuse également à 80 C et à y dissoudre l'Elestab 4112. à préparer séparément la solution mère d'extrait de Lannea. à verser la phase grasse dans la phase aqueuse sous agitation turbine. puis, aux environs de 50 C, à y introduire la solution mère d'extrait de Lannea et enfin à poursuis re l'agitation jusqu'au refroidissement.

EXEMPLE 3
Un produit cosmétique sous forme de crème pour les peaux sensibles et destinée à lutter contre les agressions solaires et celles liées à la pollution, pourra être constitué par les phases suivantes : Phase grasse stéarate de glycol 14,00 octyl dodécanol 6,00 adipate dibutylique 6,00 ceteareth 12 1.50

ceteareth 20 1,50 Phase aqueuse

PVP (polyvinylpyrrolidone) 0,50 glycérine 4,00 Elestab 388 (Laboratoires Sérobiologiques) 2. 00 extrait méthanol 80 % d'écorce de Lannea 3.00 eau distillée 9.00 parfum 0.20 eau distillée qsp 100,00
Le procédé de préparation de la crème précitée consiste essentiellement à porter la phase grasse à 80 C. à porter la phase aqueuse également à 80 C et à ydissoudre Elestab 388 et PVP, à verser la phase grasse dans la phase aqueuse sous agitation turbine à 80 C. puis, à refroidir progressivement sous agitation, à y introduire ensuite. aux environs de 50 C, la dispersion mère de l'extrait de Lannea et enfin à poursuivre l'agitation jusqu'au refroidissement.

Bien entendu, l'invention n'est pas limitée aux modes de réalisation décrits. Des modifications restent possibles, notamment du point de vue de la constitution des divers éléments ou par substitution d'équivalents techniques. sans sortir pour autant du domaine de protection de l'invention.

Claims

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea ou Odina en tant qu'agent actif. seul ou en association avec au moins un autre agent actif, pour la préparation d'un produit cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères.

2. Utilisation selon la revendication 1. caractérisée en ce que l'actif est constitué par au moins un extrait de la plante Lannea coromandelica et/ou de la plante Lannea grandis.

3. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que la ou les partie(s) utilisée(s) pour la préparation du ou des extraits sont les racines, les écorces, les feuilles. les tiges feuillées, les fruits, les graines et/ou les fleurs.

4. Utilisation selon la revendication 3. caractérisée en ce que les parties utilisées pour la préparation des extraits sont choisies parmi l'écorce du tronc et les feuilles.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. caractérisée en ce que le solvant mis en oeuvre pour la réalisation des extractions, préférentiellement à partir de parties de plantes séchées, est choisi dans le groupe formé par l'eau, les alcools. les cétones, les esters, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités.

6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. caractérisée en ce que le solvant mis en oeuvre pour la réalisation des extractions, préférentiellement à partir de parties de plantes séchées, est le C02 supercritique. seul ou en mélange avec un co-solvant.

7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. caractérisée en ce que l'extrait de Lannea est obtenu au moyen d'un procédé d'extraction par solvant basé sur les rayonnements micro-ondes.

8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7. caractérisée en ce que l'extrait consiste en une ou plusieurs fractions isolées et purifiées à partir d'un extrait brut.

9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8. caractérisée en ce que l'agent actif ou le mélange d'agents actifs extrait(s) est utilisé pour ses activités antiradicalaire, inhibitrice de la tyrosinase.

inhibitrice de la mélanogénèse, cytophotoprotectrice. anti-élastase et/ou anti-collagénase.

10. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères. caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif présentant une forte activité antiradicalaire, seul ou associé à au moins un autre agent actif, au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea, préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.

11. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif à acti@ ité inhibitrice de la tyrosinase ou de la mélanogénèse. seul ou associé à au moins un autre agent actif. au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea. préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.

12. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau. les muqueuses et/ou les phanères. caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif à activité anti-collagénase importante, seul ou associé à au moins un autre agent actif, au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea, préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.

13. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif à forte activité anti-élastase, seul ou associé à au moins un autre agent actif, au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea, préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.

14. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères. caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif à activité cytophotoprotectrice, notamment anti-UVA. au moins un extrait de plante appartenant au genre Lannea, préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.

15. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères. caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif, seul ou en association avec au moins un autre agent actif, utilisé pour son activité antiradicalaire. pour ses

propriétés d'inhibition de la tyrosinase et de la mélanogénèse. pour son activité anti-collagénac, pour son activité anti-élastase et/ou pour son activité cytophotoprotectrice, au moins un extrait d'une plante appartenant au genre Lannea, préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.

16. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique à usage topique pour la peau selon l'une quelconque des re@ endications 10 il 15, caractérisée en ce que les extraits ou mélanges d'extraits végétaux sont incorporés dans des \ ecteurs cosmétiques tels que par exemple les liposomes, les macro-. micro-. nanocapsules. les macro-, micro- et nanoparticules ou analogues.

17. Composition cosmétique ou dermopharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 16, caractérisée en ce qu'elle contient entre 0,001 % et 20 % en poids, préférentiellement entre 0,1 % et 3 % en poids, d'un extrait ou d'un mélange d'extraits de plante(s) appartenant au genre Lannea, préférentiellement de la plante Lannea coromandelica ou de la plante Lannea grandis.