KR20020040755A

KR20020040755A - 화장용 또는 피부약제학적 조성물에서 란네아 속 식물의하나 이상의 추출물의 용도

Info

Publication number: KR20020040755A
Application number: KR1020027000787A
Authority: KR
Inventors: 뽈리쥘르; 모제삘립; 다눅스루이
Original assignee: 추후제출; 코니스 프랑스, 에스.에이.
Priority date: 1999-07-19
Filing date: 2000-07-13
Publication date: 2002-05-30
Also published as: FR2796549B1; US6599537B1; EP1196141A1; AU6823300A; JP2003504388A; US20040018259A1; WO2001005368A1; FR2796549A1; BR0012618A; HK1045112A1; CN1361680A

Abstract

본 발명의 목적은 란네아 또는 오디나 속의 식물의 하나 이상의 추출물을 활성 물질로서, 단독으로 또는 하나 이상의 기타 활성 물질과 배합하여 사용하는 것이다. 본 발명의 추출물은 피부, 점막 및/또는 상피의 부속물 (파넬스: phaners) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 제품의 제조를 위해 사용된다.

Description

화장용 또는 피부약제학적 조성물에서 란네아 속 식물의 하나 이상의 추출물의 용도{USE OF AT LEAST ONE EXTRACT OF A PLANT OF THE GENUS LANNEA IN A COSMETIC OR DERMOPHARMACEUTICAL COMPOSITION}

란네아 코로만델리카 (Houtt.) Merr. 는 주로 인도 및 각종 아시아 지방에서 발견되는 옻나무 (Anacardiaceae) 과에서 유래하는 나무이다.

전통적인 인디안 의학 저서에서, 상기는 빈번히 란네아 그란디스와 혼동되는데, 이는 다수의 저서에서 둘 다 동일한 유의어 오디나 우디에르 록스 (Odina woodier roxb) 를 갖기 때문이다.

나무껍질은 전통적으로 벤 상처, 기타 상처, 타박상 (염좌 및 좌상) 및 설사의 치유에 특히 유용하고, 또한, 나무껍질의 수성 추출물은 낙태약으로서도 사용된다.

나무껍질과 유사한 잎은, 특히 염증, 관절염, 타박상 및 일반적으로 육체적통증의 치유에 의약으로서 사용될 수 있다.

또한, 란네아 코로만델리카 잎의 에탄올 추출물은 항염증성 활성의 표시로 여겨지는, 저장성 자극 (hypotonic stress) 에 대해 적혈구 세포막에 대한 보호적 효과를 갖는다는 것이 공지되었다 (문헌 [Gandhidasan R. 등, Fitoterapia, 62/1, 81-83, 1991] 참조).

또한, 나무껍질의 에탄올-함유 추출물은, 복강내 투여 후, 염증의 특별한 유형에 의존적인 투여량으로 매우 상당한 항염증성 활성을 갖는다는 것이 나타났고, 상기 추출물은 어떠한 통증-제거 (진통성) 또는 해열적 활성을 갖지 않는다(문헌 [Singh S. 및 Singh G.B., Phytotherapy Research, 8/5, 311-313, 1994] 참조).

대조적으로, 발명자들은 상기 언급된 치료상의 성질 이외에도, 또한, 식물의 각종 부분으로부터 수득된 추출물이 중요한 생물학적 성질을 가지므로, 이들은 화장용 및 피부약제학적 조성물에, 또는 그의 제조에 위해 직접적으로 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.

매우 예상치 못한 놀라운 증명된 효과 및 성질은 항라디칼형, 세포광보호(cytophotoprotective), 티로시나아제- 및 멜라닌형성 (탈색소) 억제 및 항프로테아제 (항엘라스타제, 항콜라게나아제) 효과로 구성된다.

따라서, 본 발명이 다루는 문제는, 특히 식물학적속 란네아, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 (동의어 오디나 우디에르) 에 속하는 식물의 하나 이상의 추출물을, 피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장: superficial body growth) 에 대해 외용적으로 사용하는 화장용 제조용 활성 주성분으로서 사용하는 것이고, 본원의 추출물 또는 추출 혼합물은 단독으로, 또는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 사용가능하다.

이하 기술된 그들의 많은 효과 덕분으로, 상기 추출물은 단독으로 또는 기타 활성 성분과 함께, 피부 노화, 피부 과색소침착 (hyperpigmentation), 색소 반점, 피부 탄성의 손실, 주름, 과민증 및 염증 (민감성 피부형의 치유), 환경 오염, 및/또는 일광에 기인한 손상등에 반작용하도록 목적되는 제품에서 유리하게 사용될 수 있다.

채집 및 건조 후, 식물의 적절한 부분을 추출 방법으로 처리하는데, 이를 위해 사용되는 용매는 물, 알콜, 케톤, 에스테르, 염소화된 용매, 폴리올 또는 서로 혼화성인 둘 이상의 상기 언급된 용매의 혼합물로 이루어진 군으로부터 유리하게 선택된다.

대안적으로, 또한 본 발명에 따른 추출물은, 또한 초임계 CO₂또는 공용매를 사용한 추출로써또는 마이크로파 방사를 기준으로하는 용매 추출 방법으로써 수득될 수 있다.

본 발명의 한 특별한 구현예에서, 또한, 식물 추출물은 특히 미정제 추출물로부터 출발하는 크로마토그래피에 의한 하나 이상의 단리된 정제 분획(들)으로 구성될 수도 있다.

상기 언급된 식물로부터 추출물의 제조를 위해 바람직하게 수반되는 각종 과정의 실시예가, 본 발명을 제한하지 않고 예증을 위해 하기에 기술된다.

실시예의 기술에서 사용되는 식물의 부분은 순전히 시범적으로 언급되며, 본 발명에 따른 추출물은 식물의 모든 이용할 수 있는 부분, 즉, 뿌리, 나무껍질 (뿌리, 자루 및 나무 줄기로부터), 잎 및 잎자루, 종자, 과실 및 꽃으로부터 수득가능하지만, 나무 줄기의 나무껍질 및/또는 잎으로부터 수득되는 것이 바람직하다.

본 발명은 일반적으로 화장품 및 약리학의 분야에 관한 것이고, 더욱 특히는 화장용 또는 피부약제학적 (dermopharmaceutical) 제제에서 란네아 (Lannea) 속, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 (Lannea coromandelica) 또는 란네아 그란디스 (Lannea grandis) 에 속하는 하나 이상의 식물 추출물의 용도에 관한 것이다.

실시예 1

란네아 코로만델리카 계통의 나무껍질을 블레이드 분쇄기내에서 거칠게 분쇄하고, 이어서 미세 분쇄하였다.

3 리터의 증류수를 교반기가 장착된 반응기에 쏟아붓고, 이어서 하기 단계를 연속적으로 수행하였다:

- 거친 분말 나무껍질 300 g 을 반응기에 혼입하고,

- 1 시간 동안 교반하면서 비등시켜 추출하고,

- 실온으로 냉각시키고,

- 원심분리 또는 여과로 불용성 물질을 분리하고,

- 액체 추출물을 약 0.45 ㎛ 의 다공성으로 여과시키고,

- 여액을 수집하고 분무(세분화)로 물을 제거한다.

추출된 건조물을 기재로 수득된 추출물은 거친 분말 나무껍질에 대해 14% 를 구성한다.

실시예 2

3 리터의 80 % 메틸 알콜을 교반기가 장착된 반응기에 쏟아붓고, 이어서 하기 단계를 연속적으로 수행하였다:

- 건조된 거친 분말 란네아 코로만델리카 잎 300 g 을 반응기에 혼입하고,

- 1 시간 동안 교반하면서 (환류하에서) 가열하여 추출하고,

- 실온으로 냉각시키고,

- 80 % 메탄올 300 ml 로 잔류물을 여과하고 헹구고,

- 여액을 혼합한 후, 그들을 약 0.45 ㎛ 의 다공성으로 여과시켜 맑게하고,

- 진공에서 메탄올 상을 증발시키고,

- 필요하다면 당업자에게 익숙한 임의의 통상적 방법으로 형성된 수용액으로부터 물을 제거한다.

추출된 건조물을 기재로 수득된 추출물은 거친 분말 잎에 대해 10.3% 를 구성한다.

실시예 3

3 리터의 무수 에탄올을 교반기가 장착된 반응기에 쏟아붓고, 이어서 하기 단계를 연속적으로 수행하였다:

- 거친 분말 란네아 코로만델리카 계통 뿌리의 나무껍질 300 g 을 반응기에 혼입하고,

- 1 시간 동안 교반하면서 (환류하에서) 가열하여 추출하고,

- 실온으로 냉각시키고,

- 96 ℃ 에서 300 ml 에탄올로 잔류물을 여과하고 헹구고,

- 여액을 혼합하고, 약 0.45 ㎛ 의 다공성으로 여과시키고,

- 40 ℃ 진공에서 에탄올 상을 증발시키고,

- 환기되는 건조 오븐내 40 - 50 ℃ 에서 추출물을 건조시킴으로써 미량의 용매를 제거한다.

수득된 추출물은 거친 분말 나무껍질에 대해 16.1 % 를 구성한다.

하기 표는 본 발명자가 상기 기술된 단계와 유사한 단계로써 수득한 모든 란네아 코로만델리카 추출물의 열거 (정보 제공을 목적으로함) 이다.

식물의 추출된 부분	추출물 유형	수율(%)
나무 줄기의 나무껍질,샘플 A	수성 추출물	13.9
	80 % 메탄올 추출물	18.7
	에탄올 추출물	16.1
나무 줄기의 나무껍질,샘플 B	수성 추출물	11.9
	80 % 메탄올 추출물	14.1
	에탄올 추출물	14.1
잎	수성 추출물	10.2
	80 % 메탄올 추출물	10.3
	에탄올 추출물	12.1

Ⅰ) 란네아 코로만델리카 추출물에 의한 멜라닌형성의 억제 증명

a)시험의 원리

멜라닌, 즉, 피부의 색조를 결정하는 생물학적 중합체는, 상피 멜라닌세포에서 특이적 효소, 티로시나아제에 의해 생성된다. 상기 효소는 멜라닌 합성에 있어서, 초기 2 개의 단계, 즉 티로신의 DOPA (디히드록시 페닐 알라닌) 로의 전환, 및 이어서 도파크로뮴 (dopachromium) 으로의 전환을 촉매화한다. 이어서, 도파크로뮴은 기타 효소의 작용하에서 산화되고, 멜라닌으로 중합되며, 이는 작은 과립, 즉 멜라노솜(melanosome)의 형태로 각질세포(keratinocyte) 로 통과해 들어간다.

또한, 광선의 작용하에서 노화는 어두운 비매력적인 반점의 출현을 유발시키고, 이는 멜라닌세포의 과잉활동에 의해 생성된다는 것이 알려졌다.

란네아 추출물, 특히 란네아 코로만델리카 추출물의 멜라닌세포의 활동을 감소시키는 능력은 시험관내의 티로시나아제의 억제 시험 및 생체외의 멜라닌형성 억제 시험으로써 평가되며, 이의 원리는 하기에 약술된다:

시험관내의 티로시나아제 억제 시험

- 티로시나아제와 L-DOPA 를 혼합하고, 란네아 코로만델리카 추출물을 시험하고,

- 475 nm 에서 도파크로뮴의 DO 를 기록하고,

- 동력학, 이어서 CI50 (효소 활성의 50 % 억제를 제공하는 추출물 농도) 을 계산한다.

B16 멜라닌세포 상의 생체외 멜라닌형성 억제

- 멜라닌세포를 성장 기질에 접종하고,

- 37 ℃, CO₂= 5% 에서 3 일간 배양하고,

- 란네아 코로만델리카 추출물을 멜라닌형성을 활성화시키는 배지로 혼입하고,

- 37 ℃, CO₂= 5% 에서 3 일간 배양하고,

- 균질화된 멜라닌세포내로 단백질 (소위, Bradford 법) 및 멜라닌(475nm 에서의 DO)을 분광학적 투여하고,

- 추출물의 최적 투여에 대해 상응하는 비 (단백질 수준/멜라닌 수준) 의 활성 지수를 계산한다.

상기 지수가 높을수록 (>1) 멜라닌형성의 억제 능력이 증대된다.

b)결과

첨부된 도면의 도1 은 수득된 결과의 특성 (란네아 코로만델리카 나무껍질의 수성 추출물을 사용하는 시험관내 티로시나아제 억제 시험) 을 나타낸다. 모든 결과 (CI50 값) 는 하기 표 1 에 표기된다.

란네아 코로만델리카 추출물에 의한 시험관내 티로시나아제 억제:값 = CI50 wt./vol. (중량/체적) %
추출된 부분	나무줄기 껍질	잎
CI50 wt./vol.%	샘플 A	샘플 B
수성 추출물	0.009%	0.0025%	0.093%
메탄올 추출물 80%	0.009%	0.007%	0.05%
에탄올 추출물 96°	0.008%	0.007%	0.130%
히드로퀴논	CI50 = 0.025 wt./vol.%

첨부된 도면의 도 2 (통계적 결과: 평균 ± 표준 편차, 2 개의 시험, 3 회 반복) 는 B16 멜라닌세포상에서 수득된 결과의 특성을 나타낸다. 도 2 에 나타낸 시험과 유사한 시험으로 수득된 모든 결과는 표 Ⅱ 에 표기된다.

란네아 코로만델리카 나무껍질의 수성 추출물에 의한 B16 멜라닌세포상의 생체외 멜라닌형성 억제. 나타낸 값: I = B16 멜라닌세포상의 활성 지수.
추출된 부분		나무줄기 껍질
	시험된 투여량wt./vol.%	샘플 A	샘플 B
수성 추출물	0.016	I = 2.9	I = 2.5
메탄올 추출물 80%	0.032	I = 2	I = 2.5
에탄올 추출물	0.016	I = 2.6	I = 2.4
아르부틴(Arbutin)	I = 3.14 (0.3% 투여량에 대해)

상기 2 개 시험 시리즈의 결과는 본 발명에 따른 란네아 코로만델리카 추출물이 상당한 멜라닌형성 억제 능력을 갖는다는 것을 나타내며; 이들 능력은 적어도 부분적으로는 티로시나아제의 억제에 기인한다.

상기 성질은 상기 추출물이 피부 과색소침착, 예컨대 노화 색소 반점의 국소적 치유에 사용될 수 있도록 한다.

Ⅱ) 란네아 코로만델리카 추출물의 항유리라디칼 성질의 증명

유리 라디칼(RLs)은 쌍으로 결합되지 않은 유리 전자의 존재를 특징으로 하는 활성화된 화학종이다. 이들은 내생적인 분자, 예컨대 불포화 지질, 특정 아미노산으로부터, 또는 전반적 대사의 자발적 효소 반응동안 또는 염증동안 유도되는 산소로부터 형성된다. 특정 스트레스 인자, 예를 들어, UV 선 또는 환경오염 또한 유리 라디칼의 형성을 촉진하고, 유리 라디칼의 임의 초과량은 생존 조직의 모든 구성성분 (지질, 단백질, 당, ADN 등) 에 손상을 일으킨다. 유리 라디칼의 이러한 독성은 산소의 존재에 의해 매우 가능화되며, 생존 유기체의 노화 또는 심지어 심각한 병리, 예컨대 피부암을 설명한다.

란네아 코로만델리카 추출물의 항유리라디칼 성질은 시험관내 화학적 및 생화학적 시험에 의해 평가되며, 이는 둘 다 원래의 라디칼형 형태 및 반응성 산소 유도 형태와 관련된다. 상기 시험은 합성 기질, 및 또한 천연 기질, 콜라겐, 산소의 반응 형태(또는 FRO)의 활성에 매우 민감한 피부의 당단백질 상에서 수행된다.

이들 시험은 생체외 배양에서 인간 섬유아세포에 대한 시험으로 완결되며, 이는 세포상에서 란네아 코로만델리카 추출물의 UV-A 에 대한 세포광보호 효과를평가한다.

UV-A 가 연구 모델로서 선택되는데, 이는 그들이 내피로 침투하여 특히 세포질막의 지질과산화에 반영되는 피부에의 산화 스트레스를 도입하기 때문이다. 형성된 리포퍼옥시드는 말로날디알데히드로 쪼개지고, 이는 다수의 생물학적 분자, 예를 들어, 단백질 (효소 억제), 및 뉴클레인 베이스(nuclein base) (돌연변이 유발) 의 가교에 대해 책임이 있다.

a)DPPH°시험

DPPH (디페닐 피크릴 히드라질) 은 안정한 보라색의 유리라디칼이고, 이는 그의 류코(leuco) 화합물에서 유리 라디칼을 트랩하는 물질 (= 스캐빈져 또는 미끼 효과) 의해 변성된다.

상기 결과는 류코 화합물 수준으로 표현되고, 이는 활성제의 존재하에서 형성된다 (활성 주성분을 갖지 않는 대조군에 대한 %).

상기 결과는 하기 표 Ⅲ 에 표시된다.

란네아 코로만델리카 추출물의 항라디칼 효과. 항 DPPH°시험: 형성된 류코 화합물의 수준 (대조군에 대한 %: 2 개 시험의 평균).

투여량%(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	아스코르브산
대조군	0	0	0	0
0.0003% 추출물	27	34	31
0.001% 추출물	73	90	86	49
0.01% 추출물	93	93	93	75
CI50 %(wt./vol.)	0.0007	0.0005	0.0005	0.0013

b) 항히드록실 라디칼 시험 (HO°)

데옥시리보스를 사용한 항 HO°시험 (펜톤 반응: Fenton reaction)

상기 시험은 펜톤 반응(철의 존재하 H₂O₂)으로 생성된 ("미끼") HO°를 제거하는 활성 물질의 능력을 평가한다.

HO°는 데옥시리보스에 의해 노출될 수 있다. 데옥시리보스는 ADN 의 필수 화합물이고, 이는 산화된 후, HO°에 의해 단편화된다. 데옥시리보스의 산화 생성물은 티오바르비투르산과의 축합으로 노출된다(532 nm 에서 광학 밀도의 측정). 상기 시험은 철과 활성 착화합물을 형성하는 추출물의 능력-철부족 효과(ferriprive effect)-을 결정하기 위해, EDTA 와 함께 또는 EDTA 없이 수행된다.

상기 결과는 하기 표 Ⅳ.1) 및 Ⅳ.2) 에 표기되고, 란네아 코로만델리카 추출물의 항 HO°효과를 증명한다. 데옥시리보스와의 시험(펜톤 반응) (히드록실화율의 억제 백분율 결과: 2 개 시험의 평균).

EDTA 사용 "펜톤" 반응
투여량 %(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	아스코르브산
대조군	0	0	0	0
0.03% 추출물	0	0	3
0.1% 추출물	29	25	23	45
1% 추출물				73
CI50 %(wt./vol.)	>0.1	>0.1	>0.1	0.26

EDTA 미사용 "펜톤" 반응
투여량 %(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	아스코르브산
대조군	0	0	0	0
0.003% 추출물	8	37	51
0.01% 추출물	36	76	75	5
0.03% 추출물	78	79	77	75
0.1% 추출물	73	76	78	2
1% 추출물				56
CI50 %(wt./vol.)	0.017	0.005	0.003	0.9

c)생화학적 또는 효소학적 시험

*항 음이온 수퍼옥시드 효과 (O_2ㆍ ^-)

O_2ㆍ ^-는 효소, 잔틴 옥시다아제 (XOD) 의 혼입을 통한 산화 스트레스 중 생성되고, 이는 생존 조직의 에너지 대사의 방해 또는 중단동안 과량의 히포잔틴 (hypoxanthine: HX) 을 분해한다.

O_2ㆍ ^-는 특히 과산화수소 (H₂O₂) 를 형성하는 능력때문에 유독성이고, 이는 차례로 펜톤 반응을 통해 자발적으로 또는 수퍼옥시드-디스뮤타아제 (Superoxid-Dismutase: SOD) 의 존재하에서 HO˙의 원을 형성한다.

생화학적 시험은 XOD 의 존재하에서 HX 를 사용하여 수행되고, O_2ㆍ ^-는 O_2ㆍ ^-및 H₂O₂를 방출시키는 루미놀, 또는 루미놀과 퍼옥시다아제의 혼합물에 의해, 또는 540 nm 에서 평가되는 적색 화합물을 형성하는 테트라졸륨 염 (NBT) 에 의해 방출된다.

결과는 하기 표 Ⅴ.1), Ⅴ.2) 및 Ⅴ.3) 에 표시되며, 이는 란네아 코로만델리카 추출물의 시험관내 항 음이온 수퍼옥시다아제 효과 O_2ㆍ ^-를 증명한다.

루미놀을 사용한 시험: 억제 백분율 결과(2 개 시험의 평균)
투여량 %(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	아스코르브산
대조군	0	0	0	0
0.0001% 추출물	36	38	40	5
0.001% 추출물	90	94	93	92
0.01% 추출물	100	100	100	100
CI50 %(wt./vol.)	0.0003	0.0003	0.0003	0.0006

루미놀 + 마이크로퍼옥시다아제를 사용한 시험: 억제 백분율 결과(2 개 시험의 평균)
투여량 %(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	아스코르브산
대조군	0	0	0	0
0.001% 추출물	1	14	2	0
0.01% 추출물	98	100	99	94
0.03% 추출물	100	100	100
CI50 %(wt./vol.)	0.0055	0.0048	0.0055	0.0058

NBT 를 사용한 시험: 억제 백분율 결과(2 개 시험의 평균)
투여량 %(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	아스코르브산
대조군	0	0	0	0
0.001% 추출물	9	16	15
0.01% 추출물	58	64	65	15
0.03% 추출물	75	82	82
0.1% 추출물	90	94	91	32
1% 추출물				65
CI50 %(wt./vol.)	0.0085	0.074	0.0073	0.5909

*유형 Ⅰ 콜라겐에 대한 항 일중항(singlet) 산소 효과

콜라겐은 피부의 당단백질이고, 이는 산소의 반응성 형태 (또는 FRO) 의 활성에 매우 민감하다. 일중항 산소 (O₂ ¹) 가 단백질 사이의 문제점인 가교를 생성한다는 것이 보여진다.

상기 시험의 원리는 광화학적 O₂ ¹-전개 시스템의 존재하에서 유형 Ⅰ 콜라겐의 수용액의 점도 측정을 기준으로한다.

UV-A 의 존재하에서 리보플라빈에 의해 생성되는 O₂ ¹은 글루코스의 존재하에서 콜라겐을 겔화시키고, 이는 점도의 증가에 반영된다. 상기 효과는 O₂ ¹을 방출하는 분자, 예컨대 티오우레아 또는 아미노구아니딘에 의해 억제된다.

점도는 "Cannon Fenske" 점도측정기의 모세관을 통한 통과흐름 시간의 측정으로 평가된다.

결과는 하기 표 Ⅵ 에 표기되고, 이는 유형 Ⅰ 콜라겐에 대한 란네아 코로만델리카 추출물의 광보호 효과를 강조한다 (억제 백분율 결과).

투여량%(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	아미노구아니딘
대조군	0	0	0
0.005% 추출물			57
0.01% 추출물	54	70
0.015% 추출물			75
CI50%(wt./vol.)	0.009	0.007	0.004

d)인간 섬유아세포에 대한 항 UVA-세포광보호 시험

이 생체외 시험은 본 발명에 따른 란네아 코로만델리카 추출물의 UV-A 에 대한 인간 섬유아세포의 세포광보호성을 산출하는 능력을 평가한다.

UV-A 가 연구 모델로서 선택되는데, 이는 그들이 내피로 침투하여 특히 세포질막의 지질과산화에 반영되는 피부에의 산화 스트레스를 도입하기 때문이다. 형성된 리포퍼옥시드는 말로날디알데히드(MDAs)로 쪼개지고, 이는 다수의 생물학적 분자, 예를 들어, 단백질 (효소 억제), 및 뉴클레인 베이스 (돌연변이유발) 의 가교에 대해 책임이 있다.

섬유아세포를 송아지 태아 혈청으로 정의되는 영양 배지에 접종했다. 란네아 코로만델리카 추출물을 접종 2 내지 3 일 후 첨가했다. 37℃/CO₂= 5% 에서 2 내지 3 일간 배양 후, 영양 배지를 염용액으로 대체하고, 섬유아세포를 UV-A 의 1 회 투여량 (15 J/cm²) 에 노출시켰다.

노출 후, 표면에 부유하는 염용액내의 MDA 수준을 결정하고, 섬유아세포의 단백질 수준을 측정한다. 단백질 수준을 브래드포드 방법으로 측정하는 한편, MDA 수준을 티오바르비투르산에 대한 반응으로 측정한다.

결과는 하기 표 Ⅶ.1 및 Ⅶ.2 에 표기되고, 이는 생체외 잔존을 통해 강조되는 인간 섬유아세포에 대한 란네아 코로만델리카 추출물의 세포광보호 효과 (조사된 대조군 제 MDA 에 대해 및 비조사된 대조군 제 (단백질) 에 대한 결과%)를 나타낸다: 1 또는 2 개의 시험이 3 회 수행됨.

평가되는 파라미터	MDA
시험되는 추출물	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	비타민 E
UV-A 미사용 대조군	0	0	0	0
UV-A 사용 대조군	100	100	100	100
0.0003% 추출물	96	74	84	21
0.001% 추출물	64	56	59	8

평가되는 파라미터	단백질
시험되는 추출물	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A	비타민 E
UV-A 미사용 대조군	100	100	100	100
UV-A 사용 대조군	95	95	95	96
0.0003% 추출물	100	96	97	97
0.001% 추출물	93	93	98	98

각종 시험의 결과는 란네아 코로만델리카 추출물이 유리 라디칼, 히드록실 라디칼 및 수퍼옥시드 음이온을 잘 제거 (유인) 할 수 있다는 것을 나타낸다. 항유리라디칼 활성은 유형 Ⅰ 콜라겐에 대한 광보호 시험 및 생체외 배양에서의 인간 섬유아세포에 대한 세포광보호 시험에서 관찰된다.

이들 활성은 적어도 부분적으로는 유리 라디칼 및 산소의 반응성 형태(라디칼 히드록실, 음이온 수퍼옥시드 및 일중항 산소)에 대한 유인 (또는 스캐빈져) 효과, 및 EDTA 의 존재하에서 보다 EDTA 의 부재하에서 더욱 큰 항 HO˚활성에 의해 증명되는 철의 킬레이트 결합효과 때문이다.

이들 각종 결과는 세포광보호 활성을 갖는 본 발명에 따른 란네아 코로만델리카 추출물이, 노화, 환경 스트레스, 염증, 과민증의 표지를 제어(민감성 피부형의 치유) 하기 위한 피부 또는 상피 부속물 (표면 신체 성장) 에 대한 케어 제제에 사용되기에 적당하다는 것을 명백하게 나타낸다.

Ⅲ. 란네아 코로만델리카 추출물의 항프로테아제 활성

염증동안 다형핵 호중구 (PNN) 에 의해 또는 UV-A 조사에 노출된 섬유아세포에 의해 분비되는 프로테아제는 내피의 세포외 매트릭스를 구축하는 단백질을 붕괴시킨다. 따라서, 성숙한 또는 조사된 섬유아세포가 엘라스타제 및 콜라게나아제 활성을 갖는 메탈로프로테아제를 분비하는 한편, PNN 은 엘라스틴, 프로테오글리칸 및 콜라겐에 대해 작용하는 엘라스타제 (세린 프로테아제)를 분비한다.

상기 2 개의 프로테아제 유형은 시험관내의 효소적 반응에 의해 평가되었다.

a) 항엘라스타제 시험

시험관내 시험은 복부 침샘 (세린 프로테아제) 의 엘라스타제로 2 유형의 기질을 사용하여 수행된다: 합성 색조-형성(발색성) 기질 및 콩고 레드(Congo red) 와 결합된 엘라스틴으로 구성되는 천연 기질.

배양을 실온에서 30 분간 지속하고, 410 nm 및 520 nm 에서 착색을 측정한다.

비교예로 시험되는 억제 시험 표준은 1 안티트립신이다.

결과는 하기 표 Ⅷ 및 Ⅸ 에 표기된다.

란네아 코로만델리카 추출물의 항엘라스타제 활성. 콩고 레드와 결합된 엘라스틴이사용되는 방법: 억제 백분율 결과
투여량%(wt./vol.)	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A
대조군	0	0
0.1% 추출물	0	0
0.2% 추출물	6	29
0.3% 추출물	35	100
CI50%(wt./vol.)	0.35	0.23

주: 1 α안티트립신에 대한 CI50 wt./vol.% = 0.04%

란네아 코로만델리카 추출물의 항엘라스타제 활성. 합성 기질을사용하는 방법: 억제 백분율 결과
투여량%(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A
대조군	0	0	0
0.01% 추출물	0	22	37
0.01% 추출물	56	65	67
0.01% 추출물	66	76	77
0.01% 추출물	72	82	83
CI50 %(wt./vol.)	0.028	0.023	0.019

주: 1 α안티트립신에 대한 CI50 wt./vol.% = 0.04%

b)시험관내 항콜라게나아제 시험

시험은 클로스트리디움 히스토리티쿰 (clostridium hystoliticum) 콜라게나아제 및 합성 발색성 기질을 사용하여 수행된다: FALGPA. 실온에서 30 분간 배양을 지속하고 광학적 밀도를 324 nm 에서 측정한다. 비교예에 대해 시험된 억제 시험 표준은 시스테인이다.

결과는 하기 표 Ⅹ 에 표기되고, 이는 란네아 코로만델리카 추출물의 항콜라게나아제 활성을 강조한다 (결과 억제 백분율).

투여량%(wt./vol.)	수성나무껍질 추출물샘플 A	80% 메탄올나무껍질 추출물샘플 A	에탄올나무껍질 추출물샘플 A
대조군	0	0	0
0.01% 추출물	46	0	2
0.03% 추출물	100	43	51
0.1% 추출물	100	100	100
0.3% 추출물	100	100	100
CI50 %(wt./vol.)	0.011	0.039	0.030

주: 시스테인의 CI50 wt./vol.% = 2.4%

란네아 코로만델리카 추출물이 엘라스타제 및 콜라게나아제를 잘 억제할 수 있다는 것이 상기 결과로부터 명백하다.

따라서, 본 발명에 따른 추출물은 상기 프로테아제의 억제, 예컨대 피부의 타이트닝, 피부 및 두피의 노화(주름) 제어, 항염증성 및 항과민증 효과를 포함하는 각종 적용에 유리하게 사용된다.

또한, 본 발명은 피부, 점막 및/또는 상피의 부속물 (표면 신체 성장) 에 대한 외용적 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물에 관한 것으로, 이는 란네아 속, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스에 속하는 식물의 하나 이상의 추출물을, 활성 주성분으로서 단독으로, 또는 그의 강한 항라디칼형 효과, 그의 티로시나아제 및 멜라닌형성 억제 능력, 그의 강한 항콜라게나아제 효과, 그의 강한 항엘라스타제 효과 및/또는 그의 세포광보호 효과 (특히, UV-A 에 대해) 를 위해 사용되는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 함유한다.

이 조성물에서 상기 추출물(들)은 하나 이상의 개별적으로 간주되는 상기 효과 또는 성질, 또는 둘 이상의 상기 효과 또는 성질, 또는 심지어 동시적으로 간주되는 효과 또는 성질을 이용하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 화장용 조성물은 0.001 중량% 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 3 중량% 의 상기 언급되거나 상기 언급된 임의의 방법으로 수득되는 란네아 속, 바람직하게는 란네아 그란디스 또는 란네아 코로만델리카에 속하는 식물 추출물 또는 식물 추출물의 혼합물을 유리하게 함유한다.

또한, 상기 언급된 추출물은 화장품, 예를 들어 에멀션 (수중유 및 유중수), 페이스 로션, 바디 밀크, 겔, 히드로겔, 크림, 포마드, 비누, 스틱, 스프레이, 상피의 부속물 (표면 신체 성장) 로션 및 샴푸에 통상 사용되는 생약의 임의의 형태로 사용될 수 있다.

또한, 상기 추출물 또는 식물 추출물의 혼합물은 화장용 벡터(vector), 예컨대 리포솜, 마크로-, 마이크로- 및 나노캡슐, 마크로-, 마이크로- 및 나노입자 등에 혼입될 수 있다.

하기 실시예는 본 발명에 따른 화장용 조성물 및 그의 제제의 각종 제형물을 예증한다.

실시예 1

피부 과색소침착증 및 색소 반점을 치유하기 위한 리브-온 (leave-on) 로션의 형태인 화장용 제품은 하기 조성을 가질수도 있다:

란네아 나무껍질의 80% 메탄올 추출물 0.10

증류수 9.50

히드록시에틸 셀룰로스 0.50

Elestab 350 (Laboratoires Serobiologiques) 0.50

향료 0.10

RH 410 Cremophor 0.30

증류수 총량 100.00

리브-온 로션을 제조하는 방법은 Elestab 305 및 히드록시에틸 셀룰로스를약 50 ℃ 까지 가열된 물에 용해시키고, 향료 및 RH 410 Cremophor 를 용액에 분산시킨 후, 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 상기에 란네아 추출물을 용해시키고, 마지막으로 전체를 여과시키는 것을 필수적으로 포함한다.

실시예 2

피부 노화, 주름 및 피부 유연성의 손실을 치유하기 위한 크림의 형태인 화장용 제품은 하기 2 상으로 제조될 수 있다:

지방상

세테아레쓰 25 2.00

세테아레쓰 6 및 스테아릴 알콜 1.00

세틸 알콜 4.00

글리콜 스테아레이트 4.00

광유 5.00

카프릴산 트리글리세리드/카프린 5.00

수성상

글리세롤 10.00

수성 란네아 나무껍질 추출물 3.00

증류수 8.50

Elestab 4112 방부제 (Labo. Serobiol.) 0.40

향료 0.30

증류수 총량 100.00

상기 언급된 크림의 제조는 지방상을 80 ℃ 로 가열하고, 수성상을 80 ℃ 로 가열하고, Elestab 4112 를 용해시키고, 란네아 추출물의 모액을 별도로 제조하고, 교반(터빈 교반기)하면서 지방상을 수성상에 첨가하고, 란네아 추출물의 모액을 약 50 ℃ 에서 첨가하고, 마지막으로 전체를 교반하면서 냉각시키는 것을 필수적으로 포함한다.

실시예 3

일광 및 환경 스트레스에 노출되어 손상된 피부의 치유를 위한 민감성 피부형을 위한 크림의 형태인 화장용 제품은 하기 상으로 제조될 수 있다:

지방상:

글리콜 스테아레이트 14.00

도데칸 옥틸 6.00

디부틸 아디페이트 6.00

세테아레쓰 12 1.50

세테아레쓰 20 1.50

수성상:

PVP (폴리비닐 피롤리돈) 0.50

글리세롤 4.00

Elestab 388 (Laboratoires Serobiologiques) 2.00

란네아 나무껍질의 80% 메탄올 추출물 3.00

증류수 9.00

향료 0.20

증류수 총량 100.00

상기 언급된 크림의 제조는 지방상을 80 ℃ 로 가열하고, 수성상을 80 ℃ 로 가열하고, Elestab 388 및 PVP 를 용해시키고, 80 ℃ 에서 교반(터빈 교반기)하면서 지방상을 수성상에 첨가하고, 끝으로 전체를 교반하면서 서서히 냉각시키고, 란네아 추출물의 모분산액을 약 50 ℃ 에서 첨가하고, 마지막으로 전체를 교반하면서 냉각시키는 것을 필수적으로 포함한다.

물론 본 발명은 상기 실시예에 제한되는 것은 아니다. 특히 각종 원소의 조성 또는 기술적 등가물의 대체에 의해 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 변형이 가해질 수 있다.

Claims

피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장: superficial body growth) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적(dermopharmaceutical) 제품의 제조를 위한, 단독으로, 또는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 활성 주성분으로서의, 란네아(Lannea) 또는 오디나(Odina) 속에 속하는 식물의 하나 이상의 추출물의 용도.
제 1 항에 있어서, 활성 주성분이 식물 란네아 코로만델리카 (Lannea coromandelica) 및/또는 식물 란네아 그란디스 (Lannea grandis) 의 하나 이상의 추출물로 구성되는 것을 특징으로하는 용도.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 추출물(들)을 제조하는데 사용되는 부분(들)이 뿌리, 나무껍질, 잎, 잎자루, 과실, 종자 및/또는 꽃인 것을 특징으로하는 용도.
제 3 항에 있어서, 추출물을 제조하는데 사용되는 부분이 나무줄기 껍질 및 잎으로부터 선택되는 것을 특징으로하는 용도.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 건조 식물의부분으로부터의, 추출에 사용되는 용매가, 물, 알콜, 케톤, 에스테르, 폴리올, 염소화된 용매 및 둘 이상의 상기 용매의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로하는 용도.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 건조 식물의 부분으로부터의, 추출에 사용되는 용매가, 단독으로 또는 다른 용매와 함께 사용되는 초임계 CO₂인 것을 특징으로하는 용도.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 란네아 추출물이 마이크로파 조사를 기준으로하는 용매 추출 방법에 의해 수득되는 것을 특징으로 하는 용도.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출물이 미정제 추출물로부터 정제된 하나 이상의 단리된 분획(들)으로 구성되는 것을 특징으로하는 용도.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 활성 주성분 또는 추출된 활성 주성분의 혼합물이 그의 항라디칼 효과, 그의 티로시나아제 억제 및 그의 멜라닌형성 억제, 그의 세포광보호(cytophotoprotective), 항엘라스타제 및/또는 항콜라게나아제 활성의 억제를 위해 사용되는 것을 특징으로하는 용도.
피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물로서, 란네아 속의 식물, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 식물의 하나 이상의 추출물을, 강한 항라디칼 효과를 갖는 활성 주성분으로서 단독으로 또는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 함유하는 것을 특징으로하는 조성물.
피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물로서, 란네아 속의 식물, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 식물의 하나 이상의 추출물을, 티로시나아제 또는 멜라닌형성 억제 효과를 갖는 활성 주성분으로서 단독으로 또는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 함유하는 것을 특징으로하는 조성물.
피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물로서, 란네아 속의 식물, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 식물의 하나 이상의 추출물을, 강한 항콜라게나아제 효과를 갖는 활성 주성분으로서 단독으로 또는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 함유하는 것을 특징으로하는 조성물.
피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물로서, 란네아 속의 식물, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 식물의 하나 이상의 추출물을, 강한 항엘라스타제 효과를 갖는 활성 주성분으로서 단독으로 또는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 함유하는 것을 특징으로하는 조성물.
피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물로서, 란네아 속의 식물, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 식물의 하나 이상의 추출물을 특히 UV-A 에 대한, 세포광보호 효과를 갖는 활성 주성분으로서 함유하는 것을 특징으로하는 조성물.
피부, 점막 및/또는 상피 부속물 (표면 신체 성장) 에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물로서, 란네아 속의 식물, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 식물의 하나 이상의 추출물을 활성 주성분으로서, 단독으로, 또는 그의 강한 항라디칼 효과, 그의 티로시나아제 및 멜라닌형성 억제 효과, 그의 강한 항콜라게나아제 효과, 그의 강한 항엘라스타제 효과 및/또는 그의 세포광보호 효과를 위해 사용되는 하나 이상의 기타 활성 주성분과 함께 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 10 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서, 추출물 또는 식물 추출물의 혼합물이 화장용 벡터(vector), 예컨대 리포솜, 마크로-, 마이크로 및 나노캡슐, 마크로-, 마이크로- 및 나노입자 등에 혼입되는 것을 특징으로 하는, 피부에의 국소적 외용 적용을 위한 화장용 또는 피부약제학적 조성물.
제 10 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 0.001 중량% 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 3 중량% 의 하나 이상의 란네아 속에 속하는 식물, 바람직하게는 란네아 코로만델리카 또는 란네아 그란디스 식물의 추출물 또는 추출물의 혼합물을 함유하는 것을 특징으로 하는, 화장용 또는 피부약제학적 조성물.