FR2767831A1 - Mecanismes de resistance aux bacteriophages r/m de type ic de bacteries lactiques - Google Patents

Mecanismes de resistance aux bacteriophages r/m de type ic de bacteries lactiques Download PDF

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Abstract

L'invention est relative à des polypeptides constituant des sous-unités d'un mécanisme de résistance aux bactériophages R/ M de type Ic, actif contre les phages des bactéries lactiques, et aux séquences d'acide nucléique codant pour ces polypeptides.L'expression de ces polypeptides dans une bactérie lactique permet d'augmenter sa résistance aux attaques des bactériophages.

Description

MECANISMES DE RESISTANCE AUX BACTERIOPHAGES R/M DE TYPE Ic DE
BACTERIES LACTIQUES.
L'Invention est relative à des systèmes de résistance aux bactériophages R/M de type Ic actifs sur les bactériophages des bactéries lactiques. L'obtention de bactéries lactiques résistantes à l'attaque par les bactériophages, est d'un grand intérêt dans
le domaine des fermentations industrielles.
Dans ce but, il est généralement proposé: - soit de sélectionner des mutants, naturels ou obtenus par mutagenèse, résistants aux bactériophages; - soit d'utiliser des vecteurs portant des gènes codant pour des mécanismes de résistance aux phages pour
transférer ceux-ci chez des souches initialement non-
résistantes.
Les mécanismes de résistance aux phages sont regroupés en 3 classes principales, selon l'étape du cycle de reproduction des bactériophages avec laquelle ils interfèrent: - les mécanismes regroupés sous la dénomination "mécanismes d'interférence avec l'adsorption", retardent l'adsorption du phage sur la bactérie; - les mécanismes dénommés "mécanismes d'infection abortive" (Abi), bloquent la multiplication des phages, et provoquent la mort de la bactérie infectée avant que celle-ci ne produise des particules virales capables d'infecter d'autres cellules; - les mécanismes dénommés "mécanismes de restriction/modification" (R/M), dégradent l'ADN du phage dès son entrée dans la bactérie. Ces mécanismes associent une endonucléase de restriction, et une méthylase, qui a pour fonction de protéger le génome bactérien, en modifiant les séquences de celui-ci qui pourraient constituer des séquences
cible de l'endonucléase.
3 types principaux de mécanismes R/M (types I, II, et III) ont été décrits [pour revue, cf. par exemple BICKLE et KRUGER, Microbiological Reviews, 57, pp. 434-450 (1993)]. Les caractéristiques des mécanismes R/M des types I et II sont brièvement rappelées ci-après: Les mécanismes R/M de type II sont les plus fréquents; ils sont constitués de deux enzymes distinctes, une méthylase et une endonucléase, qui sont actives
séparément, et qui reconnaissent une séquence-cible commune.
Les mécanismes R/M de type I ont été principalement découverts chez des entérobactéries, puis ont également été mis en évidence chez quelques bactéries Gram (Bacillus subtilis, et Mycobacterium pulmonis), et chez des archaebactéries. Dans ces mécanismes, la méthylase (sous-unité M, ou HsdM) et l'endonucléase (sous-unité R, ou HsdR) forment chacune une sousunité d'un complexe enzymatique multifonctionnel o elles sont associées avec une troisième protéine (sous-unité S, ou HsdS), qui est responsable de la reconnaissance de séquences spécifiques par le complexe enzymatique. Ces trois protéines sont les produits de gènes respectivement dénommés hsdM, hsdR et hsdS. Des expérimentations de complémentation génétique, et la comparaison des séquences de ces gènes ont permis de répartir les mécanismes R/M de type I en 4 familles distinctes n'ayant
qu'une très faible homologie entre elles: Ia, Ib, Ic, et Id.
D'autre part, il a été observé que les mécanismes R/M de type I pouvaient acquérir une nouvelle spécificité à la suite de recombinaisons dans le gène hsdS [FULLER-PACE et MURRAY, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, pp. 9368-9372, (1986); SHARP et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, pp. 9836-9840 (1992); GUBLER et al. EMBO J., 11, pp. 233-240,
(1992)].
Les mécanismes R/M caractérisés jusqu'à présent chez les bactéries lactiques, et dont l'utilisation a été proposée pour rendre celles- ci plus résistantes aux bactériophages sont des mécanismes R/M de type II [FITZGERALD et al. Nucleic Acids Research, 10, pp. 8171-8179, (1982); NYENGAARD et al., Gene, 136, pp. 371-372 (1993); TOWNEY et
al. Gene, 136, pp. 205-209, (1993); DAVIS et al., Appl.
Environ. Microbiol., 59, pp. 777-785, (1995); NYENGAARD et al., Gene, 157, pp. 13-18 (1995); O'SULLIVAN et al., J.
Bactériol., 177, pp. 134-143 (1995); MOINEAU et al., Appl.
Environ. Microbiol., 61, pp. 2193-2202, (1995)].
Un des inconvénients principaux de l'utilisation de ce type de mécanismes est l'apparition de phages résistants, due en particulier au fait que la méthylase du système R/M reconnaît et modifie une certaine proportion des molécules de l'ADN des phages, qui peuvent ensuite échapper à l'action de l'endonucléase. Ce phénomène apparaît en particulier lors d'utilisation prolongée en conditions de fermentation industrielle. Pour le limiter, il a été proposé d'associer plusieurs mécanismes R/M reconnaissant des séquences-cible variées [JOSEPHSEN et KLAENHAMMER, Plasmid, 23, 71-75 (1989)]; il est donc particulièrement souhaitable d'isoler de nouveaux mécanismes, de spécificité différente de
celle des mécanismes déjà connus.
Les Inventeurs ont maintenant isolé de nouveaux mécanismes R/M de type Ic, actifs chez des bactéries lactiques, et ont exprimé les gènes codant pour leurs
différents constituants.
La présente invention a pour objet un polypeptide constituant l'une des sous-unités HsdR, HsdM, ou HsdS d'un mécanisme de résistance aux bactériophages R/M de type Ic, caractérisé en ce que ledit mécanisme est actif contre les
phages des bactéries lactiques.
2'5 Selon un mode de réalisation préféré d'un polypeptide constituant une sous-unité HsdR conforme à la présente invention, il comprend la séquence (I) suivante (représentée en code 1-lettre):
KRLARK
Selon un mode de réalisation préféré d'un polypeptide constituant une sous-unité HsdM conforme à la présente invention, il comprend au moins l'une des séquences suivantes (représentées en code 1- lettre): - la séquence (II):
GLX1FYKYLS
dans laquelle X1 représente I ou L, - la séquence (III):
ENDX2NLNIPRYVDTFEEEE
dans laquelle X2 représente Y ou F Selon un mode de réalisation préféré d'un polypeptide constituant une sous-unité HsdS conforme à la présente invention, il comprend: * un domaine N-terminal d'environ 150 à 180 acides aminés, comprenant la séquence (IV) suivante:
PX3LRFX4GFTX5DDWEERKX6
dans laquelle X3 représente E ou Q, X4 représente E, P, D, ou K, X5 représente N ou D, X6 représente L ou F; * un domaine central, d'environ 50 à 80 acides aminés, comprenant la séquence (V) suivante: EtX7KGX8FFKX9LDX10TIXllQRKLDL/EQKG12QMF13KX14PE[1X5F16RKII dans laquelle X7 représente R ou Q, X8 représente S, N, ou L, X9 représente E, H, ou Q. X10 représente A, D, ou N, Xll représente A, ou V, X12 représente L ou F, X13 représente A ou S, X14 représente I ou V, X15 représente E ou G, X16 représente D ou E; * un domaine C-terminal, d'environ 160 à 200 acides aminés, comprenant la séquence (VI) suivante:
EQX15X16IGSFFKQLDX17TIX18LHQRKLX19
dans laquelle X15 représente K ou Q, X16 représente K ou Q, X17 représente N ou D, X18 représente T, A, ou V, X19 représente A, ou D; et/ou la séquence (VII)suivante:
GFLQKMFX20
dans laquelle X20 représente V ou H. La présente invention englobe en particulier: - les polypeptides HsdR répondant à l'une des séquences respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO:2 et
SEQ ID NO:4;
- les polypeptides HsdM répondant à l'une des séquences respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO:6, et
SEQ ID NO:8;
- les polypeptides HsdS répondant à l'une des séquences respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO:10,
SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16.
L'association de l'un quelconque des polypeptides HsdR, avec l'un quelconque des polypeptides HsdM et l'un quelconque des polypeptides HsdS conformes à l'invention permet d'obtenir un complexe enzymatique constituant un mécanisme R/M de type Ic actif chez les bactéries lactiques. La spécificité d'action de ce mécanisme est conditionnée par le polypeptide HsdS. Les séquences (IV), (V), (VI) et (VII) représentent des régions conservées des polypeptides HsdS chez les bactéries lactiques (et en particulier chez les lactocoques), qui sont probablement impliquées dans l'association de ces polypeptides avec les polypeptides HsdR et HsdM; ces régions conservées sont séparées par des régions variables impliquées dans la reconnaissance de
séquences nucléotidiques spécifiques.
La présente invention a également pour objet les séquences d'acide nucléique codant pour les polypeptides
définis ci-dessus, ainsi que leurs complémentaires.
Des séquences d'ADN conformes à l'invention sont par exemple représentées par: - les séquences hsdR SEQ ID NO:1, et SEQ ID NO:3, qui codent respectivement pour les polypeptides SEQ ID NO:2, et SEQ ID NO:4; - les séquences hsdM SEQ ID NO:5, et SEQ ID NO:7, qui codent respectivement pour les polypeptides SEQ ID NO:6, et SEQ ID NO:8; - les séquences hsdS SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, et SEQ ID NO:15 qui codent respectivement pour les polypeptides SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14 et
SEQ ID NO:16.
La présente invention a également pour objet des fragments d'acide nucléique d'au moins 18 pb, homologues ou complémentaires de tout ou partie d'une séquence d'acide nucléique codant pour un polypeptide HsdR, HsdM, ou HsdS
conforme à l'invention.
Ces fragments peuvent en particulier être utilisés comme sondes d'hybridation, et/ou amorces d'amplification, pour détecter et sélectionner des souches de bactéries lactiques, ou des plasmides hébergés par ces souches, contenant au moins une séquence codant pour un polypeptide HsdR, HsdM, ou HsdS conforme à l'invention, et pour isoler et/ou cloner ladite séquence à partir d'une
souche ou d'un plasmide sélectionné de la sorte.
Des sous-fragments préférés sont ceux qui sont situés dans des séquences codant pour des régions conservées entre les sous-unités HsdR, entre les sous-unités HsdM ou entre les sous-unités HsdS des mécanismes R/M de type Ic
conformes à l'invention.
Par exemple:
- pour sélectionner des souches de bactéries lactiques contenant une séquence codant pour une sous-unité HsdR, et/ou pour cloner ladite séquence, on utilisera avantageusement au moins un oligonucléotide homologue ou complémentaire d'une séquence codant pour au moins 6 acides aminés consécutifs de l'un des peptides suivants (représentés en code 1-lettre):
TGSGKT
KRLARK
LLTGFDS
qui correspondent à des régions conservées des sous-unités HsdR chez L. lactis, identifiées par les Inventeurs à partir des séquences SEQ ID NO:2 et SEQ ID NO:4 - pour sélectionner des souches de bactéries lactiques contenant une séquence codant pour une sous-unité HsdM, et/ou pour cloner ladite séquence, on utilisera avantageusement au moins un oligonucléotide homologue ou complémentaire d'une séquence codant pour au moins 6 acides aminés consécutifs de l'un des peptides suivants:
FYKYLS
LARMNL
LPHGVLFRGAAE
NLNIPRYVDTFEEEE
qui correspondent à des régions conservées des sous-unités HsdM chez L. lactis, identifiées par les Inventeurs en alignant les séquences SEQ ID NO:6 et
SEQ ID NO:8;
- pour sélectionner des souches de bactéries lactiques contenant une séquence codant pour une sous-unité HsdS, et/ou pour isoler et cloner ladite séquence, on utilisera avantageusement au moins un oligonucléotide homologue ou complémentaire d'une séquence codant pour au moins 6 acides aminés consécutifs de l'un des peptides suivants:
DDWEERK
LHQRKLDLLKEQKKGY
QKMFPKNG
PELRFA
FADDWE
IGSFFKQLD
GFLQKMF
qui correspondent à des régions conservées des sous-unités HsdS chez L. lactis, identifiées par les Inventeurs à partir des séquences SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12,
SEQ ID NO:14 et SEQ ID NO:16.
Les séquences d'ADN conformes à l'invention peuvent être utilisées pour exprimer dans une bactérie lactique un ou plusieurs mécanismes R/M de type Ic, afin
d'augmenter sa résistance aux bactériophages.
Conformément à l'invention, pour permettre l'expression dans une bactérie, en particulier une bactérie lactique, d'au moins un mécanisme de résistance aux bactériophages R/M de type Ic de bactérie lactique, on procède à la transformation de ladite bactérie avec au moins
une séquence d'ADN conforme à l'invention.
Le procédé conforme à l'invention peut être mis en euvre de différentes manières. Par exemple, si la bactérie-hôte ne contient naturellement aucune séquence codant pour l'une des sous-unités HsdR, HsdM ou HsdS, elle devra être transformée par au moins trois séquences d'ADN, dont chacune code pour l'un de ces polypeptides. Si, en revanche, la bactérie-hôte contient déjà au moins une séquence (portée par le chromosome bactérien ou par un plasmide, codant pour l'une des sous-unités HsdR, HsdM, ou HsdS, il suffira de la transformer avec une ou des
séquence(s) codant pour la ou les sous-unité(s) manquante(s).
Avantageusement, à partir d'une même souche de bactérie-hôte qui contient au moins une séquence codant pour une sous-unité HsdR et au moins une séquence codant pour une sous-unité HsdM, on peut, par transformation avec différentes séquences codant pour des sous-unités HsdS de spécificité différentes, obtenir des souches présentant des caractéristiques de résistance différentes, et limiter l'émergence de phages échappant au mécanisme de résistance. Avantageusement, pour élargir le spectre de résistance aux bactériophages, on pourra utiliser simultanément, dans une même bactérie-hôte des séquences codant pour des sous-unités HsdS de spécificité différentes; on pourra également, dans le même but, exprimer dans la bactérie transformée un mécanisme de résistance aux bactériophages choisi parmi les mécanismes Abi, et les mécanismes R/M de type II. Dans ce cas,, il est possible d'utiliser une bactérie-hôte comprenant déjà au moins une séquence codant pour un mécanisme Abi et/ou au moins une séquence codant pour un mécanisme R/M de type II, ou d'introduire à la fois dans la bactérie-hôte, la ou les séquences codant pour le(s) mécanisme(s) Abi et/ou R/M de
type II, et la ou les séquence(s) codant pour la ou les sous-
unité(s) HsdR, HsdM ou HsdS.
Dans des bactéries transformées obtenues conformément à l'invention, les séquences codant pour les mécanismes de résistance aux bactériophages et en particulier celles codant pour les sous-unités HsdR, HsdM, ou HsdS conformes à l'invention, peuvent être portées par une même molécule d'ADN (chromosome bactérien ou plasmide), ou par des molécules d'ADN différentes. Plusieurs séquences portées par une même molécule d'ADN, peuvent faire partie d'une même unité de transcription, ou bien d'unités de transcription différentes. Elles peuvent être placées sous contrôle de leur propres séquences de régulation de la transcription, ou sous
contrôle de séquences hétérologues, actives dans la bactérie-
hôte. On peut par exemple exprimer les séquences codant pour les sousunités HsdR, HsdM, ou HsdS à sous contrôle de séquences promoteur permettant une expression constitutive, ou, avantageusement, sous contrôle de séquences promoteur permettant une expression inductible, par exemple un promoteur inductible par le froid tel que celui décrit dans la Demande FR 9615731 au nom de l'INSTITUT NATIONAL DE LA
RECHERCHE AGRONOMIQUE.
Pour mettre en oeuvre le procédé selon l'invention, on peut utiliser des plasmides naturels, préalablement sélectionnés à l'aide de sondes d'acide nucléique conformes à l'invention, et contenant au moins une séquence codant pour une sous-unité HsdR, HsdM, ou HsdS d'un
mécanisme R/M de type Ic de bactérie lactique.
La présente invention a également pour objet des vecteurs recombinants, caractérisés en ce qu'ils résultent de l'insertion d'au moins une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention dans un vecteur approprié, et en particulier des vecteurs recombinants utilisables pour
transformer des bactéries conformément à l'invention.
Selon l'utilisation envisagée, on peut choisir soit des vecteurs capables de se répliquer et de se maintenir dans la bactérie-hôte sous forme de plasmide, tel que par exemple les plasmides pIL252 et pIL253 décrits par SIMON et CHOPIN, [Biochimie, 70, p. 559-566, (1988)], soit des vecteurs permettant l'intégration des inserts qu'il portent dans l'ADN chromosomique de la bactérie-hôte, tels que par exemple les vecteurs décrits dans la Demande PCT WO 94/16086 au nom de BIOTEKNOLOGISK INSTITUT et CHR. HASSEN'S LABORATORIUM DANMARK A/S, ou bien le plasmide pG+host5 décrit
2'5 par BISWAS et al. [J. Bact., 175, p. 3628-3635, (1995)].
De manière plus générale, des vecteurs plasmidiques ainsi que des vecteurs d'intégration utilisables chez les lactocoques sont décrits dans la revue de: LEENHOUTS K.J. and VENEMA G. (1993). Lactococal plasmid
vectors, In: K.G. HARDY (ed) Plasmids. A practical approach.
Second Edition. IRL Press, Oxford, p. 65-94.
Si plusieurs vecteurs sont utilisés pour introduire dans la bactérie-hôte les différentes sous-unités HsdR, HsdM, et HsdS, et éventuellement d'autres mécanismes de résistance aux bactériophage, on choisira des vecteurs
compatibles entre eux.
La présente invention peut être avantageusement mise en oeuvre dans tous les domaines o intervient une fermentation industrielle, et en particulier dans l'industrie laitière et fromagère. Des souches bactériennes possédant une résistance accrue aux bactériophages peuvent être obtenues conformément à l'invention, à partir de souches de bactéries lactiques d'intérêt industriel, soit par sélection de bactéries possédant naturellement un système R/M de type Ic grâce aux sondes d'acide nucléique conformes à l'invention, soit par transformation de bactéries-hâte à l'aide de
séquences d'acide nucléique conformes à l'invention.
La présente Invention sera mieux comprise à
l'aide du complément de description qui va suivre, qui se
réfère à des exemples de clonage de séquences codant pour des sous- unités de mécanismes R/M de type Ic, et d'utilisation de ces séquences pour accroître la résistance de bactéries hâte
aux attaques des bactériophages.
EXEMPLE 1: OBTENTION DE FRAGMENTS D'ADN CODANT POUR DES
SOUS-UNITES HsdS DE MECANISMES R/M DE TYPE Ic La manipulation de l'ADN, le clonage et la transformation de cellules bactériennes sont, en l'absence de précisions contraires, effectués selon les protocoles décrits par SAMBROOK et al. [(Molecular cloning: a laboratory manual., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor
N.Y. (1989)].
GAUTIER et CHOPIN [App. Environ. Microbiol. 53, 923-927 (1987)], et CHOPIN et al., [Plasmid, 11, pp.260-263, (1984)] ont décrit l'existence de mécanismes de résistance aux phages de type R/M, respectivement associés aux plasmides
pIL 103 et pIL7.
L'ADN de pIL 103 a été digéré par EcoRI, et les fragments obtenus ont été ligaturés au site EcoRI du vecteur pIL204 [SIMON et CHOPIN, Biochimie 70, 559-566, (1988)]. Le mélange de ligation a été utilisé pour transformer des bactéries L. Lactis ssp lactis de la souche IL1403. Les colonies bactériennes ont été sélectionnées sur la base de leur résistance au phage bIL67. Un plasmide recombinant portant un insert de 3,7 kb environ a été obtenu à partir de clones bactériens résistant à l'attaque phagique. Ce plasmide
recombinant a été dénommé pIL261.
i1 De manière surprenante, le séquencage de l'insert de 3,7 kb du plasmide pIL261 n'a fait apparaitre aucune séquence présentant une homologie avec celles des mécanismes
R/M connus chez les lactocoques.
Cependant, 2 cadres de lecture orfl et orf2 ont été localisés sur ce fragment de 3,7 kb; Le cadre de lecture orfl code pour une protéine présentant une forte homologie avec des protéines RepB déjà
identifiées chez les lactocoques.
La séquence de la protéine codée par le cadre de lecture orf2 ne présente aucune homologie avec des séquences connues de protéines de bactéries lactiques; toutefois, la région centrale et la région N- terminale de cette protéine contiennent des séquences répétées possédant une certaine
homologie avec des séquences consensus répétées des sous-
unités HsdS de systèmes R/M de type Ic des entérobactéries et
des mycoplasmes.
Une séquence d'acide nucléique contenant le cadre de lecture orf2, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences
en annexe sous les numéros SEQ ID NO: 13 et SEQ ID NO: 14.
De manière similaire, le séquencage du plasmide pIL7 a permis de mettre en évidence un cadre de lecture codant pour une protéine présentant une homologie importante avec celle codée par le cadre de lecture orf2 du plasmide pIL261, et possédant également des séquences répétées rappelant celles des sous-unités HsdS des systèmes R/M de type I. Une séquence d'acide nucléique contenant ce troisième cadre de lecture, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO: 15 et SEQ
ID NO: 16.
Des sondes oligonucléotidiques, dérivées des séquences codant pour des régions conservées entre les séquences SEQ ID NO: 14 et SEQ ID NO:16 ont été utilisées pour rechercher l'existence d'autres séquences homologues de type hsdS. Ces sondes ont permis la mise en évidence de séquences de ce type, sur l'ADN chromosomique de la souche IL1403, ainsi que sur un plasmide issu de la souche de L.
lactis ssp. lactis IL420, hébergé par IL403.
La séquence de type hsdS obtenue à partir de l'ADN chromosomique de la souche IL1403, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO: 9 et SEQ ID NO: 10 La séquence de type hsdS obtenue à partir du plasmide issu de la souche de L. lactis ssp. lactis IL420, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les
numéros SEQ ID NO: 11 et SEQ ID NO: 12.
EXEMPLE 2: OBTENTION DE FRAGMENTS D ' ADN CODANT POUR DES
SOUS-UNITES HsdR ET HsdM DE MECANISMES R/M DE TYPE Ic Les régions du chromosome de la souche IL1403, et du plasmide issu de la souche IL420 sur lesquelles ont été localisées les séquences de type hsdS ont été entièrement séquencees. Ce séquencage a permis de mettre en évidence, dans les 2 cas, directement en amont de la séquence hsdS, 2 cadres de lecture ouverte, codant pour des protéines contenant respectivement des régions présentant une homologie importante avec des domaines conservés des sous-unités R et M des systèmes R/M de type Ic d'entérobactéries et de mycoplasmes. Ces 2 cadres de lecture ouverte ont été respectivement dénommés, du fait de cette homologie, hsdR et hsdM. Sur le chromosome de la souche IL1403, comme sur le plasmide issu de la souche IL420, l'ordre des cadres de
lecture ouverte est, d'amont en aval: hsdR, hsdM et hsdS.
La séquence de type hsdR obtenue à partir de l'ADN chromosomique de la souche IL1403, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID
NO: 1 et SEQ ID NO: 2.
La séquence de type hsdM obtenue à partir de l'ADN chromosomique de la souche IL1403, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID
NO: 5 et SEQ ID NO: 6.
La séquence de type hsdR obtenue à partir du plasmide issu de la souche de L. lactis ssp. lactis IL420, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO: 3 et SEQ ID NO: 4 La séquence de type hsdM obtenue à partir du plasmide issu de la souche de L. lactis ssp. lactis IL420, et la séquence du polypeptide correspondant sont respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les
numéros SEQ ID NO: 7 et SEQ ID NO: 8.
EXEMPLE 3: UTILISATION D'OLIGONUCLEOTIDES DERIVES DES
SEQUENCES HSDR, HSDM ET HSDS POUR LA DETECTION DE SOUCHES
BACTERIENNES POSSEDANT DES SOUS-UNITES DE SYSTEMES R/M DE
TYPE Ic.
Des régions des séquences hsdM du plasmide issu de la souche IL420, et du chromosome de la souche IL1403, codant pour les mêmes séquences peptidiques ont été
identifiées.
Les oligonucléotides suivants: * oligo 66: TTA GCA CGT ATG AAC TTA * oligo 67: TTG GCT CGA ATG AAT TTA représentent des séquences qui codent respectivement dans le plasmide de la souche IL420, et dans le chromosome de la souche IL1403, pour la séquence
peptidique (code 1 lettre) LARMNL.
Les oligonucléotides suivants: * oligo 68: CTC TTC AAA GGT ATC CAC * oligo 69: TTC CTC AAA GGT ATC TAC représentent des séquences complémentaires des séquences codant respectivement, dans le chromosome de la souche IL1403, et dans le plasmide de la souche IL420, pour
la séquence peptidique (code 1 lettre) VDTFEE.
Ces oligonucléotides sont utilisés comme amorces d'amplification par PCR (couples 66/69 et 67/68) sur 16
souches différentes de lactocoques.
Les conditions d'amplification utilisées sont les suivantes: l'ADN extrait de chacune des souches est mis en présence de désoxyribonucléotides triphosphate (0,2 mM de chaque), de 0,1 FM de chaque amorce, et de 2,5 Unités de Taq polymérase (PROMEGA) dans un tampon standard pour Taq polymérase (PROMEGA). La réaction s'effectue dans un volume
final de 100 Al.
Après dénaturation (94 C, 5 minutes), on effectue cycles alternant une étape de fixation des amorces à 50 C pendant 30 secondes, une étape d'extension à 72 C pendant 30 secondes, et une étape de dénaturation à 94 C pendant 30 secondes. Comme le montre le Tableau I ci-dessous, pour 8 des 16 souches testées (IL582, IL858, IL910, IL993, IL964, IL827, IL854, MG1363) on observe, avec l'un ou l'autre des 2 couples d'amorces la présence d'un produit d'amplification de
la longueur attendue (environ 670 pb).
TABLEAU I
SOUCHE AMORCES
66/69 67/68
IL827 (D) + ++
IL910 (L) ++ -
IL2967 (L) - -
CNRZ194 (C) - -
CNRZ340 (D) - -
CNRZ106 (C) - _ _ -
IL2034
IL854 (C) +/- ++
IL993 (C) - ++
IL858 (C) + ++
CNRZ10S (C)
CNRZ269 (D) -
IL582 (L) +/- ++
IL960 (L) - -
IL964 (C) +/- ++
MG1363 (L) + -
(L): ssp. lactis (D) ssp. lactis biovar. diacetylactis (C) ssp. cremoris ++ produit d'amplification nettement détectable; + produit d'amplification détectable; +/- produit d'amplification faiblement détectable;
- pas de produit d'amplification détectable.
Les produits d'amplification obtenus à partir des souches IL582, IL858, IL910, IL993, MG1363, IL827, IL854, IL964, ont été séquences. Chez les souches IL582, IL858, IL993, IL827, IL854, IL964, la séquence est très semblable à la séquence hsdM du chromosome de la souche IL1403, et chez les souches IL910 et MG1363 la séquence est très semblable à
la séquence hsdM du plasmide de la souche IL420.
EXEMPLE 4: RESISTANCE A L'ATTAQUE PHAGIQUE CONFEREE PAR LES
SOUS-UNITES HsdR, HsdM ET HsdS.
Les souches utilisées sont: les souches MG1363, et IL582 qui possèdent chacune une séquence codant pour la sous-unité M d'un système R/M de typeIc, et la souche IL1403, qui possède sur son chromosome des séquences codant
pour les 3 sous-unités R, M et S d'un système R/M de type Ic.
Les bactéries sont cultivées et infectées par les phages dans les conditions décrites par TERZAGHI et SANDINE, [Appl. Microbiol., 29, 807815, (1975)] Les résultats de l'infection sont exprimés en PFU/ml, et l'efficacité de propagation (eop) est déterminée, pour chaque essai, par le rapport entre le nombre de PFU/ml pour la souche bactérienne testée, et le nombre de PFU/ml
pour une souche bactérienne choisie comme témoin.
Le tableau II ci-dessous montre les résultats obtenus avec le phage c2 sur la souche MG1363, choisie comme
témoin, et la souche IL1403.
TABLEAU II
SOUCHE NOMBRE DE EOP
PHAGES(PFU/ML)
MG1363 109 1
IL1403 2,8x107 3x10-2 Le tableau III ci- dessous montre les résultats obtenus avec le phage bIL67 (préalablement propagé sur la souche IL1403) sur: - la souche IL1403 sans plasmides (1), et - la souche IL582 (5) choisies comme témoins, - la souche IL1403 transformée avec le plasmide issu de la souche IL420, portant des séquences hsdR, hsdM et
hsdS (2).
- la souche IL1403 transformée avec le plasmide piL7, portant une séquence hsdS (3) - la souche IL1403 transformée avec le plasmide pIL261 portant une séquence hsdS (4) - la souche IL582 transformée avec le plasmide pIL261 portant une séquence hsdS (6)
TABLEAU III
SOUCHE NOMBRE DE EOP
PHAGES(PFU/ML)
1 6x109 1 2 3x104 5x10-6 3 3,7x107O 6xlO-3 4 4x103 6x10-7 4x109 1 6 3xlO4 1,8xo10-5 Ces résultats montrent que: * Les sous-unités HsdS des différents mécanismes de résistance ont effectivement une spécificité différente: le mécanisme porté par le chromosome de la souche IL1430 est faiblement efficace contre le phage bIL67, alors qu'en revanche les sous-unités HsdS portées par les plasmides augmentent, à un degré plus ou moins élevé, la résistance à
ce phage.
* Les sous-unités HsdS codées par les plasmides pIL7 et pIL261 peuvent s'associer avec les sous-unités HsdR et HsdM codées par le chromosome de IL1430 pour reconstituer
un complexe R/M de type Ic fonctionnel.
l8
LISTE DE SEQUENCES
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 3050 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (vi) ORIGINE: (A) ORGANISME: Lactococcus lactis (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:44..3031
(D) AUTRES INFORMATIONS:/product= "HsdR"
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1:
AAAGATAACA AAAATCATGC ATTATTGAGA GGGAGAAAAA GGA ATG GCA GAA GCA 55
Met Ala Glu Ala
AAA TTT GAA GCT GCT TTG ATC AAA AAA CTA GAA GCA GAA GGA TGG ACC 103
Lys Phe Glu Ala Ala Leu Ile Lys Lys Leu Glu Ala Glu Gly Trp Thr
10 15 20
TAT CGT AAA GAT TTA TCT TAT GTC TCT ATT AAG GTC TTA GAG GGA CAC 151
Tyr Arg Lys Asp Leu Ser Tyr Val Ser Ile Lys Val Leu Glu Gly His
30 35
TGG CGT GAG GTG CTT AAT GAA AAT AAT GCT TAT AAA TTA AAT GGC AAA 199
Trp Arg Glu Val Leu Asn Glu Asn Asn Ala Tyr Lys Leu Asn Gly Lys
45 50
CCT TTG TCT GAT GTT GAA TTT GGC TTA GTG ATG CAA GAA GTT CAA AGG 247
Pro Leu Ser Asp Val Glu Phe Gly Leu Val Met Gln Glu Val Gln Arg
60 65
ATT AAA ACG CCT TAT GAT GCT CAA CTT TTA TTG GTA GGG GCA GGA GGT 295
Ile Lys Thr Pro Tyr Asp Ala Gln Leu Leu Leu Val Gly Ala Gly Gly
75 80
GTC GGC TCT ATT CCT ATA ACA CGA GAT GAC GGC TCT AAC TTA GAA GTA 343
Val Gly Ser Ile Pro Ile Thr Arg Asp Asp Gly Ser Asn Leu Glu Val
90 95 100
GAG ATT TTT TAT GAA GAT GAT GTG GCT GGT GGT CGG TCA CGC TAT GAA 391
Glu Ile Phe Tyr Glu Asp Asp Val Ala Gly Gly Arg Ser Arg Tyr Glu
110 115
GTC GTC AGC CAA GTG ATT TTT GAT GAG CTC CCT CAT GGA CTA GCG AGC 439
Val Val Ser Gln Val Ile Phe Asp Glu Leu Pro His Gly Leu Ala Ser
125 130
AAA AGA ATT ATT GAT TTA GCC TTG CTT ATT AAC GGA ATC CCA GTA GCG 487
Lys Arg Ile Ile Asp Leu Ala Leu Leu Ile Asn Gly Ile Pro Val Ala
140 145
CAT ATT GAA GAA AAA GAT GAA CAC TTA CAA AAC CAA TGG GGC GCT TTT 535
His Ile Glu Glu Lys Asp Glu His Leu Gln Asn Gln Trp Gly Ala Phe
155 160
GAG CAA TTA AAA GGG TAT CAC GGA GAA GGC TTA TAT GAG GGA TTA TTT 583
Glu Gln Leu Lys Gly Tyr His Gly Glu Gly Leu Tyr Glu Gly Leu Phe
170 175 180
* GCT TTT GTT CAA GTT CAA TTT ATC TTG AGT CAA CAC TCT GCC AAC TAT 631
Ala Phe Val Gln Val Gln Phe Ile Leu Ser Gln His Ser Ala Asn Tyr
190 195
TTT GCC CGT CCT AAT CGT CTT GAA AAT TAT AAC AAA ACT TTT GTT TTT 679
Phe Ala Arg Pro Asn Arg Leu Glu Asn Tyr Asn Lys Thr Phe Val Phe
205 210
GGT TGG CGA GAT GAG CAA CAG AAA GAT ATC ACT GAT GCG TTT GTC TTT 727
Gly Trp Arg Asp Glu Gln Gln Lys Asp Ile Thr Asp Ala Phe Val Phe
215 220 225
GCC CAT CAA GTG TTA GGA ATC CCT GCA CTT CAT CGA CTA GTG ACT GTG 775
Ala His Gln Val Leu Gly Ile Pro Ala Leu His Arg Leu Val Thr Val
230 235 240
AAC ATG ATT CCA GAT GCT TCC AAT AGT AAT TTG ATG GTG ATG AGA AGT 823
Asn Met Ile Pro Asp Ala Ser Asn Ser Asn Leu Met Val Met Arg Ser
245 250 255 260
TAT CAA ATT CAA GCC ACA AGA GCG ATT TTA CAG CGT ATG AAA GAA ATG 871
Tyr Gln Ile Gln Ala Thr Arg Ala Ile Leu Gln Arg Met Lys Glu Met
265 270 275
GAA CAT AAC GAC TAC ATT CAA AAG GAA GGG GGC TAT ATC TGG CAT ACC 919
Glu His Asn Asp Tyr Ile Gln Lys Glu Gly Gly Tyr Ile Trp His Thr
280 285 290
ACT GGG TCG GGT AAA ACG GTG ACT TCT TTT AAA GTA GCC CAG CTA CTA 967
Thr Gly Ser Gly Lys Thr Val Thr Ser Phe Lys Val Ala Gln Leu Leu
295 300 305
GCG GCT GCC CCT AAA GTA AAA AAT GTT TTA TTT ATT GTT GAT CGT GTG 1015
Ala Ala Ala Pro Lys Val Lys Asn Val Leu Phe Ile Val Asp Arg Val
310 315 320
GAC TTA GTG GAT CAA ACG TTA GAA AAC TTT AAA GAT TTT GCT TAC ATT 1063
Asp Leu Val Asp Gln Thr Leu Glu Asn Phe Lys Asp Phe Ala Tyr Ile
325 330 335 340
CAA TTT AAA AAT AGA ATT AAA AAA GTA AAT GGT AGG GAG TTA AAA CGA 1111
Gln Phe Lys Asn Arg Ile Lys Lys Val Asn Gly Arg Glu Leu Lys Arg
345 350 355
GAG TTG AGC CAT AAA GGT GCT TCA CAG ATC TTA TTA ATT TCT GTC CAA 1159
Glu Leu Ser His Lys Gly Ala Ser Gln Ile Leu Leu Ile Ser Val Gln
360 365 370
GGT TTA ACA AAA GCC GTT AAA AAT GGG CTA AAA AAT ACC GAT CGA AAT 1207
Gly Leu Thr Lys Ala Val Lys Asn Gly Leu Lys Asn Thr Asp Arg Asn
375 380 385
GTC ATT ATT ATG GAT GAA GCA CAT CGA AGT GCT AAT GGA GAA TCG GTT 1255
Val Ile Ile Met Asp Glu Ala His Arg Ser Ala Asn Gly Glu Ser Val
390 395 400
CAG CTT ATT AAA AGT GCC TTT CAA AAA ACG ACT TGG TTT GGG TTT ACA 1303
Gln Leu Ile Lys Ser Ala Phe Gln Lys Thr Thr Trp Phe Gly Phe Thr
405 410 415 420
GGA ACT CCT AAT TTT TAT AGT GAC GAG ATT AAT GAC GTT CAA ACC ACT 1351
Gly Thr Pro Asn Phe Tyr Ser Asp Glu Ile Asn Asp Val Gln Thr Thr
425 430 435
CGA GAC ATT TCA ACC CAT GAT ATT TTT GGG AAG AGA CTC CAT TCT TAT 1399
Arg Asp Ile Ser Thr His Asp Ile Phe Gly Lys Arg Leu His Ser Tyr
440 445 450
ACC ATC AAG GAT GCG ATT GGA GAT GGA AAC GTG TTA GGG TTT GAT ATT 1447
Thr Ile Lys Asp Ala Ile Gly Asp Gly Asn Val Leu Gly Phe Asp Ile
455 460 465
ACT TAC TTT AAT CCC ACG ATT GAA ATT GAA TCA CTT GAC GAA GAA CAT 1495
Thr Tyr Phe Asn Pro Thr Ile Glu Ile Glu Ser Leu Asp Glu Glu His
470 475 480
TCC GAA AAA GAT TAT GAA AAA GAA GTT TAT CAA AGT CAT GTT TAT CGA 1543
Ser Glu Lys Asp Tyr Glu Lys Glu Val Tyr Gln Ser His Val Tyr Arg
485 490 495 500
GAA CAA GTG GTG CAA GAC ATT TTA AAC CTT TGG GAT AAA ACG TCA AGT 1591
Glu Gln Val Val Gln Asp Ile Leu Asn Leu Trp Asp Lys Thr Ser Ser
505 510 515
GGG GCT TTG GTC GCT GGC AAA CGA GAA AAG AAT GTT TTT CAG GCG ATG 1639
Gly Ala Leu Val Ala Gly Lys Arg Glu Lys Asn Val Phe Gln Ala Met
520 525 530
TTA GCT GTT TCA GGA AAG CAA GCC GTG GTT CAT TAC TAC AAT CTT TTT 1687
Leu Ala Val Ser Gly Lys Gln Ala Val Val His Tyr Tyr Asn Leu Phe
535 540 545
AAA GAA AAA GCC CCT CAT TTG AGG GTA GCA ATG ACT TTT TCT CGA GAT 1735
Lys Glu Lys Ala Pro His Leu Arg Val Ala Met Thr Phe Ser Arg Asp
550 555 560
GAA TCT AAT CAA CCT GGA ACA AAA GAA CAG AAT GAA GCC TTA AAA AAA 1783
Glu Ser Asn Gln Pro Gly Thr Lys Glu Gln Asn Glu Ala Leu Lys Lys
565 570 575 580
GCG ATC AAA GAA TAC AGT AGT TGC TTC AAT GTC CCT AGT CTT TTA AAT 1831
Ala Ile Lys Glu Tyr Ser Ser Cys Phe Asn Val Pro Ser Leu Leu Asn
585 590 595
GCT CAA GAA CCG GCA CGG GCC TAC ATG ATT GAT ATC ACT AAA CGG CTC 1879
Ala Gln Glu Pro Ala Arg Ala Tyr Met Ile Asp Ile Thr Lys Arg Leu
600 605 610
GCT CGT AAA AAA CCA TAT AAC CAA GGA AAA GAT GAG GAC CGA TTA GAT 1927
Ala Arg Lys Lys Pro Tyr Asn Gln Gly Lys Asp Glu Asp Arg Leu Asp
615 620 625
CTA GTG ATT GTC TCG GAC CAA CTG CTG ACA GGA TTT GAC TCA AAA TAT 1975
Leu Val Ile Val Ser Asp Gln Leu Leu Thr Gly Phe Asp Ser Lys Tyr
630 635 640
ATT AAT ACG ATT TAT ATG GAT AAA CAG CTG AGA GAA GGG ATG TTA ATC 2023
Ile Asn Thr Ile Tyr Met Asp Lys Gln Leu Arg Glu Gly Met Leu Ile
645 650 655 660
CAA GCG ATG TCC CGG ACC AAT CGA ACG TTT CAC TTG AAC AGT AAA CCT 2071
Gln Ala Met Ser Arg Thr Asn Arg Thr Phe His Leu Asn Ser Lys Pro
665 670 675
CAC GGA AAA GTT CGG TTC TAT CGT CAA GGC GAA CAA ATG AAG TCT TTT 2119
His Giy Lys Val Arg Phe Tyr Arg Gln Gly Glu Gln Met Lys Ser Phe
680 685 690
GTA GAA AAT GCC CTT CGG ATT TAT ACA CGA GGG GGG AAT GAT ACG CTT 2167
Val Glu Asn Ala Leu Arg Ile Tyr Thr Arg Giy Gly Asn Asp Thr Leu
695 700 705
CAG GGA GCA GAT GAA GAC TCC AAA AAT GAA GAT ATC CAA TCC TTA GAA 2215
Gln Gly Ala Asp Glu Asp Ser Lys Asn Glu Asp Ile Gln Ser Leu Glu
710 715 720
GAC GAG CAT ATC CTG GCA GAA CCC CAA AGT CAT CAA ATC CCA AAA TTA 2263
Asp Glu His Ile Leu Ala Glu Pro Gln Ser His Gln Ile Pro Lys Leu
725 730 735 740
ACA CCC GCT GTT CAA GAA CTA AAA GCC TTT GCG GGA GAA GAT TTT AGT 2311
Thr Pro Ala Val Gln Glu Leu Lys Ala Phe Ala Gly Glu Asp Phe Ser
745 750 755
CAA ATT CCT CGT GGT GAG AAA GAT TTA AAA CAA TTT GTA AGG CTA GGG 2359
Gln Ile Pro Arg Gly Glu Lys Asp Leu Lys Gln Phe Val Arg Leu Gly
760 765 770
CTA GAA ACA CAA AAT CAG ATT CAA CAA TTG GTT CAA CAA GGC TAT GAA 2407
Leu Glu Thr Gln Asn Gln Ile Gln Gln Leu Val Gln Gln Gly Tyr Glu
775 780 785
TTA GGG AAC GAA ATT GAC CTA TTA GAT GCT CAA GGA GAG TCC ACT GGT 2455
Leu Gly Asn Glu Ile Asp Leu Leu Asp Ala Gln Gly Glu Ser Thr Gly
790 795 800
GAA AAA GTT CGA CTT GAT ATT TCT AGT TTT GAG GAG TTT GGG GCT TTG 2503
Glu Lys Val Arg Leu Asp Ile Ser Ser Phe Glu Glu Phe Gly Ala Leu
805 810 815 820
CAA GCA AGG CTT AAT GAT GCT AGA GAA AAA TTG CCC GAA GAG GAG CGT 2551
Gln Ala Arg Leu Asn Asp Ala Arg Glu Lys Leu Pro Glu Glu Glu Arg
825 830 835
CCA GAC CTC ACA GAA ATT AGA GTG GGC TTA TCT TTA TAT GAC CAT GAG 2599
Pro Asp Leu Thr Glu Ile Arg Val Gly Leu Ser Leu Tyr Asp His Glu
840 845 850
ATT ATT GAC TAC GAT TGG CTG GTT GAT CTC TTA AAC CTC TTC ATG GAT 2647
Ile Ile Asp Tyr Asp Trp Leu Val Asp Leu Leu Asn Leu Phe Met Asp
855 860 865
CAG AAA ACT CCT GAA AAC AAA GCT TCA ATT GAG AAA CAT ATT CTC CCA 2695
Gln Lys Thr Pro Glu Asn Lys Ala Ser Ile Glu Lys His Ile Leu Pro
870 875 880
TTG GAT GAA ATG AGC CAA CAA GAG ATC AAG GAT ATT ATC GTA GAT ATA 2743
Leu Asp Glu Met Ser Gln Gln Glu Ile Lys Asp Ile Ile Val Asp Ile
885 890 895 900
GAA TCT GGG GAA ATT AAG GAA CAC TTT ACG AAA GCA ACC TTG GAA GAT 2791
Glu Ser Gly Glu Ile Lys Glu His Phe Thr Lys Ala Thr Leu Glu Asp
905 910 915
CAA AGA AAG CAC AAA CGC TCG GAT CGA CAA GAG TTA AAA ATC CGT CGA 2839
Gln Arg Lys His Lys Arg Ser Asp Arg Gln Glu Leu Lys Ile Arg Arg
920 925 930
TGG GCG GCC AAT CAA AAA GTC AAT GGC AAT CGT ATT GTC CAA GCC TTC 2887
Trp Ala Ala Asn Gln Lys Val Asn Gly Asn Arg Ile Val Gln Ala Phe
935 940 945
GAT CTT TTC TTA CCA GGT CAC AGC TTA GTA GAC AAT TCT CAA TTA TCA 2935
Asp Leu Phe Leu Pro Gly His Ser Leu Val Asp Asn Ser Gln Leu Ser
950 955 960
GCG CTT GTT TCA GAA ATT GAA GCA GAG GAA AAC TTA AGC TTT TTT GGA 2983
Ala Leu Val Ser Glu Ile Glu Ala Glu Glu Asn Leu Ser Phe Phe Gly
965 970 975 980
GCC TCA GAA TTT GAG ACT GCA TTA ATG AGC TTC TTC AAT TCA CTA TAA 3031
Ala Ser Glu Phe Glu Thr Ala Leu Met Ser Phe Phe Asn Ser Leu *
985 990 995
AAAAATAAAA ATACTCGCA 3050
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 996 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:
Met Ala Glu Ala Lys Phe Glu Ala Ala Leu Ile Lys Lys Leu Glu Ala
1 5 10 15
Glu Gly Trp Thr Tyr Arg Lys Asp Leu Ser Tyr Val Ser Ile Lys Val
25 30
Leu Glu Gly His Trp Arg Glu Val Leu Asn Glu Asn Asn Ala Tyr Lys
40 45
Leu Asn Gly Lys Pro Leu Ser Asp Val Glu Phe Gly Leu Val Met Gln
55 60
Glu Val Gln Arg Ile Lys Thr Pro Tyr Asp Ala Gln Leu Leu Leu Val
70 75 80
Gly Ala Gly Gly Val Gly Ser Ile Pro Ile Thr Arg Asp Asp Gly Ser
90 95
Asn Leu Glu Val Glu Ile Phe Tyr Glu Asp Asp Val Ala Gly Gly Arg
105 110
Ser Arg Tyr Glu Val Val Ser Gln Val Ile Phe Asp Glu Leu Pro His
120 125
Gly Leu Ala Ser Lys Arg Ile Ile Asp Leu Ala Leu Leu Ile Asn Gly
135 140
Ile Pro Val Ala His Ile Glu Glu Lys Asp Glu His Leu Gln Asn Gln
150 155 160
Trp Gly Ala Phe Glu Gln Leu Lys Gly Tyr His Gly Glu Gly Leu Tyr
170 175
Glu Gly Leu Phe Ala Phe Val Gln Val Gln Phe Ile Leu Ser Gln His
185 190
Ser Ala Asn Tyr Phe Ala Arg Pro Asn Arg Leu Glu Asn Tyr Asn Lys
200 205
Thr Phe Val Phe Gly Trp Arg Asp Glu Gln Gln Lys Asp Ile Thr Asp
210 215 220
Ala Phe Val Phe Ala His Gln Val Leu Gly Ile Pro Ala Leu His Arg
225 230 235 240
Leu Val Thr Val Asn Met Ile Pro Asp Ala Ser Asn Ser Asn Leu Met
245 250 255
Val Met Arg Ser Tyr Gln Ile Gln Ala Thr Arg Ala Ile Leu Gln Arg
260 265 270
Met Lys Glu Met Glu His Asn Asp Tyr Ile Gln Lys Glu Gly Gly Tyr
275 280 285
Ile Trp His Thr Thr Gly Ser Gly Lys Thr Val Thr Ser Phe Lys Val
290 295 300
Ala Gln Leu Leu Ala Ala Ala Pro Lys Val Lys Asn Val Leu Phe Ile
305 310 315 320
Val Asp Arg Val Asp Leu Val Asp Gln Thr Leu Glu Asn Phe Lys Asp
325 330 335
Phe Ala Tyr Ile Gln Phe Lys Asn Arg Ile Lys Lys Val Asn Gly Arg
340 345 350
Glu Leu Lys Arg Glu Leu Ser His Lys Gly Ala Ser Gln Ile Leu Leu
355 360 365
Ile Ser Val Gln Gly Leu Thr Lys Ala Val Lys Asn Gly Leu Lys Asn
370 375 380
Thr Asp Arg Asn Val Ile Ile Met Asp Glu Ala His Arg Ser Ala Asn
385 390 395 400
Gly Glu Ser Val Gln Leu Ile Lys Ser Ala Phe Gln Lys Thr Thr Trp
405 410 415
Phe Gly Phe Thr Gly Thr Pro Asn Phe Tyr Ser Asp Glu Ile Asn Asp
420 425 430
Val Gln Thr Thr Arg Asp Ile Ser Thr His Asp Ile Phe Gly Lys Arg
435 440 445
Leu His Ser Tyr Thr Ile Lys Asp Ala Ile Gly Asp Gly Asn Val Leu
450 455 460
Gly Phe Asp Ile Thr Tyr Phe Asn Pro Thr Ile Glu Ile Glu Ser Leu
465 470 475 480
Asp Glu Glu His Ser Glu Lys Asp Tyr Glu Lys Glu Val Tyr Gln Ser
485 490 495
His Val Tyr Arg Glu Gln Val Val Gln Asp Ile Leu Asn Leu Trp Asp
500 505 510
Lys Thr Ser Ser Gly Ala Leu Val Ala Gly Lys Arg Glu Lys Asn Val
515 520 525
Phe Gln Ala Met Leu Ala Val Ser Gly Lys Gln Ala Val Val His Tyr
530 535 540
Tyr Asn Leu Phe Lys Glu Lys Ala Pro His Leu Arg Val Ala Met Thr
545 550 555 560
Phe Ser Arg Asp Glu Ser Asn Gln Pro Gly Thr Lys Glu Gln Asn Glu
565 570 575
Ala Leu Lys Lys Ala Ile Lys Glu Tyr Ser Ser Cys Phe Asn Val Pro
580 585 590
Ser Leu Leu Asn Ala Gln Glu Pro Ala Arg Ala Tyr Met Ile Asp Ile
595 600 605
Thr Lys Arg Leu Ala Arg Lys Lys Pro Tyr Asn Gln Gly Lys Asp Glu
610 615 620
Asp Arg Leu Asp Leu Val Ile Val Ser Asp Gln Leu Leu Thr Gly Phe
625 630 635 640
Asp Ser Lys Tyr Ile Asn Thr Ile Tyr Met Asp Lys Gln Leu Arg Glu
645 650 655
Gly Met Leu Ile Gln Ala Met Ser Arg Thr Asn Arg Thr Phe His Leu
660 665 670
Asn Ser Lys Pro His Gly Lys Val Arg Phe Tyr Arg Gln Gly Glu Gln
675 680 685
Met Lys Ser Phe Val Glu Asn Ala Leu Arg Ile Tyr Thr Arg Gly Gly
690 695 700
Asn Asp Thr Leu Gln Gly Ala Asp Glu Asp Ser Lys Asn Glu Asp Ile
*705 710 715 720
Gln Ser Leu Glu Asp Glu His Ile Leu Ala Glu Pro Gln Ser His Gln
725 730 735
Ile Pro Lys Leu Thr Pro Ala Val Gln Glu Leu Lys Ala Phe Ala Gly
740 745 750
Glu Asp Phe Ser Gln Ile Pro Arg Gly Glu Lys Asp Leu Lys Gln Phe
755 760 765
Val Arg Leu Gly Leu Glu Thr Gln Asn Gln Ile Gln Gln Leu Val Gln
770 775 780
Gin Gly Tyr Glu Leu Gly Asn Glu Ile Asp Leu Leu Asp Ala Gln Gly
785 790 795 800
Glu Ser Thr Gly Glu Lys Val Arg Leu Asp Ile Ser Ser Phe Glu Glu
805 810 815
Phe Gly Ala Leu Gln Ala Arg Leu Asn Asp Ala Arg Glu Lys Leu Pro
820 825 830
Glu Glu Glu Arg Pro Asp Leu Thr Glu Ile Arg Val Gly Leu Ser Leu
835 840 845
Tyr Asp His Glu Ile Ile Asp Tyr Asp Trp Leu Val Asp Leu Leu Asn
850 855 860
Leu Phe Met Asp Gln Lys Thr Pro Glu Asn Lys Ala Ser Ile Glu Lys
865 870 875 880
His Ile Leu Pro Leu Asp Glu Met Ser Gln Gln Glu Ile Lys Asp Ile
885 890 895
Ile Val Asp Ile Glu Ser Gly Glu Ile Lys Glu His Phe Thr Lys Ala
900 905 910
Thr Leu Glu Asp Gln Arg Lys His Lys Arg Ser Asp Arg Gln Glu Leu
915 920 925
Lys Ile Arg Arg Trp Ala Ala Asn Gln Lys Val Asn Gly Asn Arg Ile
930 935 940
Val Gln Ala Phe Asp Leu Phe Leu Pro Gly His Ser Leu Val Asp Asn
945 950 955 960
Ser Gln Leu Ser Ala Leu Val Ser Glu Ile Glu Ala Glu Glu Asn Leu
965 970 975
Ser Phe Phe Gly Ala Ser Glu Phe Glu Thr Ala Leu Met Ser Phe Phe
980 985 990
Asn Ser Leu *
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 3:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 3150 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:39..3116
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:
TAAAAAATGG TGGCAACTAT GGAAATGAGG GGGATCAA ATG AGT CAT TCG GAA 53
Met Ser His Ser Glu
1 5
CAA ATG ATT GAA AAC CAG TTC ATA CAG ATC TTA AGT GAG AAA GAA AAT 101
Gln Met Ile Glu Asn Gln Phe Ile Gln Ile Leu Ser Glu Lys Glu Asn
15 20
CAG TGG ACT TAT CGT CCG GAC TTG AAG TCG GAA GAA GCA CTT TGC CAA 149
Gln Trp Thr Tyr Arg Pro Asp Leu Lys Ser Glu Glu Ala Leu Cys Gln
30 35
AAC TTT AGA GGC CAT TTG AAC CGA ATA AAT TTA GCA GTA TTG GAA GAG 197
Asn Phe Arg Gly His Leu Asn Arg Ile Asn Leu Ala Val Leu Glu Glu
45 50
CAA CTA TTA ACG GAC AAA GAA TTT AAG CAA GTC AAA GTC GAG TTT TCA 245
Gln Leu Leu Thr Asp Lys Glu Phe Lys Gln Val Lys Val Glu Phe Ser
60 65
CGT TTG ACC GGA ACA CCT TTT TTA GCT TCT CAA TGG CTT AGA GGA GAA 293
Arg Leu Thr Gly Thr Pro Phe Leu Ala Ser Gln Trp Leu Arg Gly Glu
75 80 85
AAC GGG GTG GCT CAA GTT TTA TTA GAG CGA GAA GAT GGG GAA AAA GTG 341
Asn Gly Val Ala Gln Val Leu Leu Glu Arg Glu Asp Gly Glu Lys Val
95 100
ACT TTA GAA GCC TTT AGA AAT AAG GAT ATC TCA GGA GGA ACT TCT TCT 389
Thr Leu Glu Ala Phe Arg Asn Lys Asp Ile Ser Gly Gly Thr Ser Ser
110 115
TAT GAG GTA GTT CAC CAA GTG GTC CCA GAT TCC TCT AGA GTA GAT CGT 437
Tyr Glu Val Val His Gln Val Val Pro Asp Ser Ser Arg Val Asp Arg
125 130
GGA GAT GTG AGC TTG CTG ATT AAT GGG CTC CCA ATC ATT CAT ATT GAG 485
Gly Asp Val Ser Leu Leu Ile Asn Gly Leu Pro Ile Ile His Ile Glu
140 145
CTC CAA AAA GAG TCC GCT AAA GAC GGT TTC ATG CAA GCT TAT TAT CAA 533
Leu Gln Lys Glu Ser Ala Lys Asp Gly Phe Met Gln Ala Tyr Tyr Gln
155 160 165
ATT CAG CGT TAT GCA GAA GAT GGA TTT TTT AAA GGG ATT TAC GCA ACC 581
Ile Gln Arg Tyr Ala Glu Asp Gly Phe Phe Lys Gly Ile Tyr Ala Thr
175 180
ACT CAA ATC ATG GTG ATT CCC AAT AAA GTC GAT ACC CGA TAC TTT GCA 629
Thr Gln Ile Met Val Ile Pro Asn Lys Val Asp Thr Arg Tyr Phe Ala
190 195
AGA CCT AGT GAA GAT ACC GCT GAA GCC TAT GCT CGG ATG AAG AAG TTT 677
Arg Pro Ser Glu Asp Thr Ala Glu Ala Tyr Ala Arg Met Lys Lys Phe
205 210
TTA TTT AAT TGG CGG ACT GAA GAC AAT CAA ACG GTT TCC GAT TTG TTT 725
Leu Phe Asn Trp Arg Thr Glu Asp Asn Gln Thr Val Ser Asp Leu Phe
215 220 225
GAT TTT ACT CGT ACA GTT TTG CGG ATA CCC GAT GCC CAT GAA TTG ATT 773
Asp Phe Thr Arg Thr Val Leu Arg Ile Pro Asp Ala His Glu Leu Ile
230 235 240 245
AGC CAA TAT ACC ATT CTC GTC GAT GAT CCA AAA AAT CCA AAA TTC CTC 821
Ser Gln Tyr Thr Ile Leu Val Asp Asp Pro Lys Asn Pro Lys Phe Leu
250 255 260
ATG GCT TTA AGG CCT TAC CAA ATT CAT GCT ATT CGT AAG ATT CGT CCA 869
Met Ala Leu Arg Pro Tyr Gln Ile His Ala Ile Arg Lys Ile Arg Pro
265 270 275
AAA GCG GCA CAG CAT GAA GGA GGA TTC ATT TGG CAT GCG ACA GGT TCA 917
Lys Ala Ala Gln His Glu Gly Gly Phe Ile Trp His Ala Thr Gly Ser
280 285 290
GGA AAG ACC ATT ACC AGT TTT GTC GCA ACG AAA TTA TTA GCA CAA AAT 965
Gly Lys Thr Ile Thr Ser Phe Val Ala Thr Lys Leu Leu Ala Gln Asn
295 300 305
GCG ATC GGT GTC GAT CGT ACG GTC ATG GTT GTT GAT AGA ACA GAC TTA 1013
Ala Ile Gly Val Asp Arg Thr Val Met Val Val Asp Arg Thr Asp Leu
310 315 320 325
GAT GCT CAA ACG CAG GAT GAG TTT ACG AAG TTT GCC TCG GAA TAC CAT 1061
Asp Ala Gln Thr Gln Asp Glu Phe Thr Lys Phe Ala Ser Glu Tyr His
330 335 340
ACC GGA CAA ACG ACC GGA AAT TCG GTA GCC AAT ACT TTG ATT GTT GGG 1109
Thr Gly Gln Thr Thr Gly Asn Ser Val Ala Asn Thr Leu Ile Val Gly
345 350 355
ATC AAA AAT CAA AAA CAG TTG GCT CGA AAC CTC CTA TCA TCA AAA AAT 1157
Ile Lys Asn Gln Lys Gln Leu Ala Arg Asn Leu Leu Ser Ser Lys Asn
360 365 370
AAT AAT ACG ATT TTA GTG ACC ACG ATT CAA AAA CTC TCT GCG GCT ATG 1205
Asn Asn Thr Ile Leu Val Thr Thr Ile Gln Lys Leu Ser Ala Ala Met
375 380 385
CGA AGT GCC CAA CAA GAG AGT GAA GAA AAA GGC TCG AAT CAA TTT GAG 1253
Arg Ser Ala Gln Gln Glu Ser Glu Glu Lys Gly Ser Asn Gln Phe Glu
390 395 400 405
AAG CTG CGG CAA GAA CAT ATT GTT TTT ATT GTT GAT GAG GCT CAT CGT 1301
Lys Leu Arg Gln Glu His Ile Val Phe Ile Val Asp Glu Ala His Arg
410 415 420
GCG GTT AGT GAT GAG GAA ATG AAA CGA ATT AAG AAA ATA TTA CCC AAT 1349
Ala Val Ser Asp Glu Glu Met Lys Arg Ile Lys Lys Ile Leu Pro Asn
425 430 435
TCT ACC TGG TTT GGA TTA ACG GGG ACG CCT ATT TTT GAA GCA AAT AAA 1397
Ser Thr Trp Phe Gly Leu Thr Gly Thr Pro Ile Phe Glu Ala Asn Lys
440 445 450
AAG CAA GAA AAT GGA ACC TTT GCC AGA ACG ACG AGC CAG CAA TAC GGG 1445
Lys Gln Glu Asn Gly Thr Phe Ala Arg Thr Thr Ser Gln Gln Tyr Gly
455 460 465
CCA CTC CTT CAC TCC TAT ACA ACC AAA AAT GCC ATG GAT GAT GGG GCT 1493
Pro Leu Leu His Ser Tyr Thr Thr Lys Asn Ala Met Asp Asp Gly Ala
470 475 480 485
GTG TTA GGC TTT CAA GTC GAG TAT CAT TCG CTG ATT TCA GAA GAG GAT 1541
Val Leu Gly Phe Gln Val Glu Tyr His Ser Leu Ile Ser Glu Glu Asp
490 495 500
CTA GAG GTG ATT GTC ACC CAA CTC AAT AAA GGA AAG TTG CCA GGC GAT 1589
Leu Glu Val Ile Val Thr Gln Leu Asn Lys Gly Lys Leu Pro Gly Asp
505 510 515
GCC CTC CAA CAA GAG GAA TTA TTG CCT GCG GAA CTT TAT GAA AAA GAT 1637
Ala Leu Gln Gln Glu Glu Leu Leu Pro Ala Glu Leu Tyr Glu Lys Asp
520 525 530
GAA CAT ATT CGT ACC ATG TTA CAA AAA ATC TTT AAT CGG AGG AGT GTG 1685
Glu His Ile Arg Thr Met Leu Gln Lys Ile Phe Asn Arg Arg Ser Val
535 540 545
GTC AAA AAG TTC AAG GTA AAG AAT GGT TTT CCT ACG ATG TCA GCC ATT 1733
Val Lys Lys Phe Lys Val Lys Asn Gly Phe Pro Thr Met Ser Ala Ile
550 555 560 565
CTT ACC ACT CAC TCG ATT OCT CAA GCC AAA CAT ATT TAC CGG ATT TTA 1781
Leu Thr Thr His Ser Ile Ala Gln Ala Lys His Ile Tyr Arg Ile Leu
570 575 580
AAG GAA ATG AAA GAT AAT GGG ACA CTC TTG AAT GGT CGA CAA TTT GAT 1829
Lys Glu Met Lys Asp Asn Gly Thr Leu Leu Asn Gly Arg Gln Phe Asp
585 590 595
GAA CGT CAT CGA CTG ATT GAT AAA GAT TTC CCA AGA GTA GCT ATT ACC 1877
Glu Arg His Arg Leu Ile Asp Lys Asp Phe Pro Arg Val Ala Ile Thr
600 605 610
TTC TCA ACC AAT CCG GAT CGA TTA GAA AAA AAT GAA CAA GAC GAT GAA 1925
Phe Ser Thr Asn Pro Asp Arg Leu Glu Lys Asn Glu Gln Asp Asp Glu
615 620 625
TTA GTA GAG ATC ATG AAA GAG TAT GCG AAA CAG TTT GAT GCT TCT CCT 1973
Leu Val Glu Ile Met Lys Glu Tyr Ala Lys Gln Phe Asp Ala Ser Pro
630 635 640 645
TAT CAA GAT GAG AAA CTC TAC AAT CAA AAT ATT AAT AAA CGG TTG GCC 2021
Tyr Gln Asp Glu Lys Leu Tyr Asn Gln Asn Ile Asn Lys Arg Leu Ala
650 655 660
CGT AAG GAA AAG CAA TAT CAA TCG GAT GGT CAG TGG CTA GAT TTT GTT 2069
Arg Lys Glu Lys Gln Tyr Gln Ser Asp Gly Gln Trp Leu Asp Phe Val
665 670 675
ATT GTT GTC GAT CGT TTA TTG ACA GGC TTT GAT TCT CCA GCG ATT CTA 2117
Ile Val Val Asp Arg Leu Leu Thr Gly Phe Asp Ser Pro Ala Ile Leu
680 685 690
ACC CTA TAT ATT GAT CGA GAA ATG AAC TAT CAA AAG CTC CTT CAA GCG 2165
Thr Leu Tyr Ile Asp Arg Glu Met Asn Tyr Gln Lys Leu Leu Gln Ala
695 700 705
TTC TCA AGA ACC AAC CGT ATT TAT ACA GGA AAA GAT TCT GGT TTG ATT 2213
Phe Ser Arg Thr Asn Arg Ile Tyr Thr Gly Lys Asp Ser Gly Leu Ile
710 715 720 725
GTC TCT TTT AGA AAA CCC TTC ACC ATG AAA GAG AAT GTG CAA AAC ACG 2261
Val Ser Phe Arg Lys Pro Phe Thr Met Lys Glu Asn Val Gln Asn Thr
730 735 740
TTT CGT CTA TTC TCA AAT GAA AAT CAA AAC TTT GAT CAA CTG ATT CCA 2309
Phe Arg Leu Phe Ser Asn Glu Asn Gln Asn Phe Asp Gln Leu Ile Pro
745 750 755
AGA GAA TAT GAA GAA GTC AAA AAA GAA TTT ATC GAA TGT TCA ACA CTT 2357
Arg Glu Tyr Glu Glu Val Lys Lys Glu Phe Ile Glu Cys Ser Thr Leu
760 765 770
TAT AAA CAA AGC GAA GCT GAC CTA TCG GAT AAT CCC CAC GAT CTT AAA 2405
Tyr Lys Gln Ser Glu Ala Asp Leu Ser Asp Asn Pro His Asp Leu Lys
775 780 785
ACG ATG ATT GCG CAA GTG AGT GCT TAT CAG AAG CTA GGT AAG AGT TAT 2453
Thr Met Ile Ala Gln Val Ser Ala Tyr Gln Lys Leu Gly Lys Ser Tyr
790 795 800 805
AAA GCG TTC CGA AGC TAT GAT CAA TAC GAA GAG GAC TTT GAA GCA TTT 2501
Lys Ala Phe Arg Ser Tyr Asp Gln Tyr Glu Glu Asp Phe Glu Ala Phe
810 815 820
TCA GAA GTG GTG GAG CAG TTG CCA CAA TAT CGA GGT AAA ACG GAA AAT 2549
Ser Glu Val Val Glu Gln Leu Pro Gln Tyr Arg Gly Lys Thr Glu Asn
825 830 835
GTT AAA ACA AAG ATT AAA GAA ATG ATC GAG GAT GAG GAG CAT CCT GAG 2597
Val Lys Thr Lys Ile Lys Glu Met Ile Glu Asp Glu Glu His Pro Glu
840 845 850
GAG GAC TTC GAG AAG CTT TTA CAA GAG ATT GCT TTT TCT TCG CAG CTC 2645
Glu Asp Phe Glu Lys Leu Leu Gln Glu Ile Ala Phe Ser Ser Gln Leu
855 860 865
AAT GCG ACA CAT AAA GAC GTC GTG GAT AGT TTT TAT ATT AAT CAA CTT 2693
Asn Ala Thr His Lys Asp Val Val Asp Ser Phe Tyr Ile Asn Gln Leu
870 875 880 885
TTG AAA GCG ATC CAA TTA AAC GAA GCA GGG GCC GTT GAA AAA TTT GAA 2741
Leu Lys Ala Ile Gln Leu Asn Glu Ala Gly Ala Val Glu Lys Phe Glu
890 895 900
AAA GAA ATC CAA CAA AAG GAT CCT CAA ATT CAA AAG ATG TAT CAC ACC 2789
Lys Glu Ile Gln Gln Lys Asp Pro Gln Ile Gln Lys Met Tyr His Thr
905 910 915
TTG AAA GAT CAA CTC GTC AAT ACT ACT GAA GAG ATC GAT GTG GCT CAA 2837
Leu Lys Asp Gln Leu Val Asn Thr Thr Glu Glu Ile Asp Val Ala Gln
920 925 930 TTA AAA GAG ACT TCG ATT CAA AAT GAA ATT CAA AGA CTA CTT CAA AAA 2885
Leu Lys Glu Thr Ser Ile Gln Asn Glu Ile Gln Arg Leu Leu Gln Lys
935 940 945
GAA GCT GAA GAA TTT GGA TTA TCC TTC GAC TTT TTA CAG TCT GCA ATG 2933
Glu Ala Glu Glu Phe Gly Leu Ser Phe Asp Phe Leu Gln Ser Ala Met
950 955 960 965
AAT GAA TAT CAA GGC GAT AAG AAA GCG ATC CCT TAT TTA ACC CAT TTA 2981
Asn Glu Tyr Gln Gly Asp Lys Lys Ala Ile Pro Tyr Leu Thr His Leu
970 975 980
CTG GAT TCG ATG ACT CTT AGT AAA GAA GAG TTC GAA CCC AAA GCG GGT 3029
Leu Asp Ser Met Thr Leu Ser Lys Glu Glu Phe Glu Pro Lys Ala Gly
985 990 995
GAA AAA TAC AGA AGA AGA CCA AAA GTT TTA GAA GAA CGA CTA CGA CAA 3077
Glu Lys Tyr Arg Arg Arg Pro Lys Val Leu Glu Glu Arg Leu Arg Gln
1000 1005 1010
AAC TTT GAA CAA ATT CAA AAA TGG AAA GAA GAA TTA TAA TGGCGACAGG 3126
Asn Phe Glu Gln Ile Gln Lys Trp Lys Glu Glu Leu *
1015 1020 1025
TTTAAATCAA CAACTATGGG CTTC 3150
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 4:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1026 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4:
Met Ser His Ser Glu Gln Met Ile Glu Asn Gln Phe Ile Gln Ile Leu
1 5 10 15
Ser Glu Lys Glu Asn Gln Trp Thr Tyr Arg Pro Asp Leu Lys Ser Glu
25 30
Glu Ala Leu Cys Gln Asn Phe Arg Gly His Leu Asn Arg Ile Asn Leu
40 45
Ala Val Leu Glu Glu Gln Leu Leu Thr Asp Lys Glu Phe Lys Gln Val
*55 60
Lys Val Glu Phe Ser Arg Leu Thr Gly Thr Pro Phe Leu Ala Ser Gln
70 75 80
Trp Leu Arg Gly Glu Asn Gly Val Ala Gln Val Leu Leu Glu Arg Glu
90 95
Asp Gly Glu Lys Val Thr Leu Glu Ala Phe Arg Asn Lys Asp Ile Ser
105 110
Gly Gly Thr Ser Ser Tyr Glu Val Val His Gln Val Val Pro Asp Ser
120 125
Ser Arg Val Asp Arg Gly Asp Val Ser Leu Leu Ile Asn Gly Leu Pro
135 140
Ile Ile His Ile Glu Leu Gln Lys Glu Ser Ala Lys Asp Gly Phe Met
150 155 160
Gln Ala Tyr Tyr Gln Ile Gln Arg Tyr Ala Glu Asp Gly Phe Phe Lys
170 175
Giy Ile Tyr Ala Thr Thr Gln Ile Met Val Ile Pro Asn Lys Val Asp
185 190
Thr Arg Tyr Phe Ala Arg Pro Ser Glu Asp Thr Ala Glu Ala Tyr Ala
200 205
Arg Met Lys Lys Phe Leu Phe Asn Trp Arg Thr Glu Asp Asn Gln Thr
210 215 220
Val Ser Asp Leu Phe Asp Phe Thr Arg Thr Val Leu Arg Ile Pro Asp
225 230 235 240
Ala His Glu Leu Ile Ser Gln Tyr Thr Ile Leu Val Asp Asp Pro Lys
245 250 255
Asn Pro Lys Phe Leu Met Ala Leu Arg Pro Tyr Gln Ile His Ala Ile
260 265 270
Arg Lys Ile Arg Pro Lys Ala Ala Gln His Glu Gly Gly Phe Ile Trp
275 280 285
His Ala Thr Gly Ser Gly Lys Thr Ile Thr Ser Phe Val Ala Thr Lys
290 295 300
Leu Leu Ala Gin Asn Ala Ile Gly Val Asp Arg Thr Val Met Val Val
305 310 315 320
Asp Arg Thr Asp Leu Asp Ala Gln Thr Gln Asp Glu Phe Thr Lys Phe
325 330 335
Ala Ser Glu Tyr His Thr Gly Gln Thr Thr Gly Asn Ser Val Ala Asn
340 345 350
Thr Leu Ile Val Gly Ile Lys Asn Gln Lys Gln Leu Ala Arg Asn Leu
355 360 365
Leu Ser Ser Lys Asn Asn Asn Thr Ile Leu Val Thr Thr Ile Gln Lys
370 375 380
Leu Ser Ala Ala Met Arg Ser Ala Gln Gln Glu Ser Glu Glu Lys Gly
385 390 395 400
Ser Asn Gln Phe Glu Lys Leu Arg Gln Glu His Ile Val Phe Ile Val
405 410 415
Asp Glu Ala His Arg Ala Val Ser Asp Glu Glu Met Lys Arg Ile Lys
420 425 430
Lys Ile Leu Pro Asn Ser Thr Trp Phe Gly Leu Thr Gly Thr Pro Ile
435 440 445
Phe Glu Ala Asn Lys Lys Gln Glu Asn Gly Thr Phe Ala Arg Thr Thr
450 455 460
Ser Gln Gln Tyr Gly Pro Leu Leu His Ser Tyr Thr Thr Lys Asn Ala
465 470 475 480
Met Asp Asp Gly Ala Val Leu Gly Phe Gln Val Glu Tyr His Ser Leu
485 490 495
Ile Ser Glu Glu Asp Leu Glu Val Ile Val Thr Gln Leu Asn Lys Gly
500 505 510
Lys Leu Pro Gly Asp Ala Leu Gln Gln Glu Glu Leu Leu Pro Ala Glu
515 520 525
Leu Tyr Glu Lys Asp Glu His Ile Arg Thr Met Leu Gln Lys Ile Phe
530 535 540
Asn Arg Arg Ser Val Val Lys Lys Phe Lys Val Lys Asn Gly Phe Pro
545 550 555 560
Thr Met Ser Ala Ile Leu Thr Thr His Ser Ile Ala Gln Ala Lys His
565 570 575
Ile Tyr Arg Ile Leu Lys Glu Met Lys Asp Asn Gly Thr Leu Leu Asn
580 585 590
Gly Arg Gln Phe Asp Glu Arg His Arg Leu Ile Asp Lys Asp Phe Pro
595 600 605
Arg Val Ala Ile Thr Phe Ser Thr Asn Pro Asp Arg Leu Glu Lys Asn
610 615 620
Glu Gln Asp Asp Glu Leu Val Glu Ile Met Lys Glu Tyr Ala Lys Gln
625 630 635 640
Phe Asp Ala Ser Pro Tyr Gln Asp Glu Lys Leu Tyr Asn Gln Asn Ile
645 650 655
Asn Lys Arg Leu Ala Arg Lys Glu Lys Gln Tyr Gln Ser Asp Gly Gln
660 665 670
Trp Leu Asp Phe Val Ile Val Val Asp Arg Leu Leu Thr Gly Phe Asp
675 680 685
Ser Pro Ala Ile Leu Thr Leu Tyr Ile Asp Arg Glu Met Asn Tyr Gln
690 695 700
Lys Leu Leu Gln Ala Phe Ser Arg Thr Asn Arg Ile Tyr Thr Gly Lys
705 710 715 720
Asp Ser Gly Leu Ile Val Ser Phe Arg Lys Pro Phe Thr Met Lys Glu
725 730 735
Asn Val Gln Asn Thr Phe Arg Leu Phe Ser Asn Glu Asn Gln Asn Phe
740 745 750
Asp Gln Leu Ile Pro Arg Glu Tyr Glu Glu Val Lys Lys Glu Phe Ile
755 760 765
Glu Cys Ser Thr Leu Tyr Lys Gln Ser Glu Ala Asp Leu Ser Asp Asn
770 775 780
Pro His Asp Leu Lys Thr Met Ile Ala Gln Val Ser Ala Tyr Gln Lys
785 790 795 800
Leu Gly Lys Ser Tyr Lys Ala Phe Arg Ser Tyr Asp Gln Tyr Glu Glu
805 810 815
Asp Phe Glu Ala Phe Ser Glu Val Val Glu Gln Leu Pro Gln Tyr Arg
820 825 830
Gly Lys Thr Glu Asn Val Lys Thr Lys Ile Lys Glu Met Ile Glu Asp
835 840 845
Glu Glu His Pro Glu Glu Asp Phe Glu Lys Leu Leu Gln Glu Ile Ala
850 855 860
Phe Ser Ser Gln Leu Asn Ala Thr His Lys Asp Val Val Asp Ser Phe
865 870 875 880
Tyr Ile Asn Gln Leu Leu Lys Ala Ile Gln Leu Asn Glu Ala Gly Ala
885 890 895
Val Glu Lys Phe Glu Lys Glu Ile Gln Gln Lys Asp Pro Gln Ile Gln
900 905 910
Lys Met Tyr His Thr Leu Lys Asp Gln Leu Val Asn Thr Thr Glu Glu
915 920 925
Ile Asp Val Ala Gln Leu Lys Glu Thr Ser Ile Gln Asn Glu Ile Gln
930 935 940
Arg Leu Leu Gln Lys Glu Ala Glu Glu Phe Gly Leu Ser Phe Asp Phe
945 950 955 960
Leu Gln Ser Ala Met Asn Glu Tyr Gln Gly Asp Lys Lys Ala Ile Pro
965 970 975
Tyr Leu Thr His Leu Leu Asp Ser Met Thr Leu Ser Lys Glu Glu Phe
980 985 990
Glu Pro Lys Ala Gly Glu Lys Tyr Arg Arg Arg Pro Lys Val Leu Glu
995 1000 1005
Glu Arg Leu Arg Gln Asn Phe Glu Gln Ile Gln Lys Trp Lys Glu Glu
1010 1015 1020
Leu *
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 5:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1600 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:21..1568
(D) AUTRES INFORMATIONS:/product= "HsdM"
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5:
AGAAATAAGG AGCGAATAAA ATG GCA TTA TCA AAT GAA CAA AAA AAT AAA 50
Met Ala Leu Ser Asn Glu Gln Lys Asn Lys
1 5 10
ATG TGG GCC CTC TTA AAT CAA ACC CGA GGA CAG ATT GGT TTA ACC GCC 98
Met Trp Ala Leu Leu Asn Gln Thr Arg Gly Gln Ile Gly Leu Thr Ala
20 25
TAT AAA GAC TAC ATT TTT GGC TTA CTA TTT TAT AAA TAT TTA TCA GAA 146
Tyr Lys Asp Tyr Ile Phe Gly Leu Leu Phe Tyr Lys Tyr Leu Ser Glu
35 40
AAG GCC ACA CAA TGG CTG GGA GAA GTT TTA CGA GGA GAC ACT TGG GAA 194
Lys Ala Thr Gln Trp Leu Gly Glu Val Leu Arg Gly Asp Thr Trp Glu
50 55
AAT GTT TAT GAT CAA GAT CCT GTA AGA GCC TTA GAC TAT ATG AAA CAA 242
Asn Val Tyr Asp Gln Asp Pro Val Arg Ala Leu Asp Tyr Met Lys Gln
65 70
AAG CTC GGT TAT GCC ATC CAA CCG AAG GAA TTT TTT AAA GAT TGG GAA 290
Lys Leu Gly Tyr Ala Ile Gln Pro Lys Glu Phe Phe Lys Asp Trp Glu
80 85 90
GCT GCC ATT CAT GAA GAA CGA TTT AAC ATT CCA ATG ATT TCA GAT ACA 338
Ala Ala Ile His Glu Glu Arg Phe Asn Ile Pro Met Ile Ser Asp Thr
100 105
TTT GGC CAT TTT AAT CAG CAA ATT GCT TTT GAA GCT AAA GAT GAT TTT 386
Phe Gly His Phe Asn Gln Gln Ile Ala Phe Glu Ala Lys Asp Asp Phe
115 120
GAA GGC ATC TTT GAT GGG ATG CGT TTT GAT AGT TCA GAT TTA GGA AGT 434
Glu Gly Ile Phe Asp Gly Met Arg Phe Asp Ser Ser Asp Leu Gly Ser
130 135
AAT GCG CAA GCT CGA GCA AGT GTG ATG ATC TCG ATG ATT GAG TTA CTC 482
Asn Ala Gln Ala Arg Ala Ser Val Met Ile Ser Met Ile Glu Leu Leu
145 150
TCT GCC CCT GAG TTT GAT CTC TCT ACA GGA GGG GAC ACC GTT TCA GAT 530
Ser Ala Pro Glu Phe Asp Leu Ser Thr Gly Gly Asp Thr Val Ser Asp
160 165 170
ATC TAC GAA TAC TTG TTA GAA AAG TTT GCG ACC GTA TTG GCC TCA GAC 578
Ile Tyr Glu Tyr Leu Leu Glu Lys Phe Ala Thr Val Leu Ala Ser Asp
180 185
ATG GGA CAA TAC TAT ACT CCC AAA GAA ATT TCA GAG GTC ATG GCT CGT 626
Met Gly Gln Tyr Tyr Thr Pro Lys Glu Ile Ser Glu Val Met Ala Arg
195 200
ATT TTG ACT TTT GGT AAA GCC GAC GAA GAC AAT TTT TCT ATT TAT GAT 674
Ile Leu Thr Phe Gly Lys Ala Asp Glu Asp Asn Phe Ser Ile Tyr Asp
205 210 215
CCC GCG GTC GGT TCA GCT TCT CTC TTA ATT ACT ACC GCC AGT CAT ATG 722
Pro Ala Val Gly Ser Ala Ser Leu Leu Ile Thr Thr Ala Ser His Met
220 225 230
AAA CAT TCC AAT CAA AGG GGA GCG ATT AAA TAC TTT GGT CAA GAA AAA 770
Lys His Ser Asn Gln Arg Gly Ala Ile Lys Tyr Phe Gly Gln Glu Lys
235 240 245 250
GAT GCC ACC CCT TAC CGA TTG GCT CGA ATG AAT TTA ATG ATG CAT AAC 818
Asp Ala Thr Pro Tyr Arg Leu Ala Arg Met Asn Leu Met Met His Asn
255 260 265
ATT GAA TAC AAT GAT ATT CAG ATC CAT CAT GCG GAT ACT TTG GAA AGC 866
Ile Glu Tyr Asn Asp Ile Gln Ile His His Ala Asp Thr Leu Glu Ser
270 275 280
GAT TGG CCT GAC GGA GTC ATT GAA GGG AAA GAT ACG CCT CGA ATG TTT 914
Asp Trp Pro Asp Gly Val Ile Glu Gly Lys Asp Thr Pro Arg Met Phe
285 290 295
GAC GCA GTG ATG GCT AAT CCA CCT TAT TCT GCC CAT TGG AAT AAT AAG 962
Asp Ala Val Met Ala Asn Pro Pro Tyr Ser Ala His Trp Asn Asn Lys
300 305 310
GAT CGG GAA GAT GAC CCT CGA TTT CGT GAA TAT GGC ATT GCG CCA AAA 1010
Asp Arg Glu Asp Asp Pro Arg Phe Arg Glu Tyr Giy Ile Ala Pro Lys
315 320 325 330
ACT AAA GCG GAC TAT TCT TTC TTG TTG CAT TGT TTG TAC CAT ACC AAA 1058
Thr Lys Ala Asp Tyr Ser Phe Leu Leu His Cys Leu Tyr His Thr Lys
335 340 345
GAG AGT GGC CGT GTG GCC ATT ATT CTC CCA CAC GGG GTC TTG TTT AGA 1106
Glu Ser Gly Arg Val Ala Ile Ile Leu Pro His Gly Val Leu Phe Arg
350 355 360
GGC GCT GCG GAA GGA CGG ATT CGA AAA GCT TTG ATT GAT AAA CAT CAA 1154
Gly Ala Ala Glu Gly Arg Ile Arg Lys Ala Leu Ile Asp Lys His Gln
365 370 375
ATT GAA GCG GTA ATT GGT TTT CCA GAT AAA CTC TTT TTG AAC ACA GGC 1202
Ile Glu Ala Val Ile Gly Phe Pro Asp Lys Leu Phe Leu Asn Thr Gly
380 385 390
ATT CCC GTT TGT GTC TTA ATT CTT AAA AAG AAT CGA GCA AAC TCT GAT 1250
Ile Pro Val Cys Val Leu Ile Leu Lys Lys Asn Arg Ala Asn Ser Asp
395 400 405 410
ATT CTT TTT GTG GAC GCC AGT CAA GGC TTT GAA AAG ATG AAG AAT CAA 1298
Ile Leu Phe Val Asp Ala Ser Gln Gly Phe Glu Lys Met Lys Asn Gln
415 420 425
AAA CAA TTG CGC CCA GAA GAT ATT GAC AAG ATC ACT GAA ACA GTC ATT 1346
Lys Gln Leu Arg Pro Glu Asp Ile Asp Lys Ile Thr Glu Thr Val Ile
430 435 440
CAT CGC AAG GCG GTT GAT AAA TAT AGC CAC TTA GCA ACG CTT GAG GAA 1394
His Arg Lys Ala Val Asp Lys Tyr Ser His Leu Ala Thr Leu Glu Glu
445 450 455
GTC ATT GAG AAT GAT TAC AAC TTA AAT ATT CCG CGT TAT GTG GAT ACC 1442
Val Ile Glu Asn Asp Tyr Asn Leu Asn Ile Pro Arg Tyr Val Asp Thr
460 465 470
TTT GAA GAG GAA GAA TCG ATT GAC TTA GCG GAT ATT CAA GGT CAA ATA 1490
Phe Glu Glu Glu Glu Ser Ile Asp Leu Ala Asp Ile Gln Gly Gln Ile
475 480 485 490
GAT GAA GTA GAC GCA GAG ATT GCG AAA GCT AAT CAA ACC TTA GCA AAC 1538
Asp Glu Val Asp Ala Glu Ile Ala Lys Ala Asn Gln Thr Leu Ala Asn
495 500 505
TAC TTT AAG GAA CTG GGA GTG CTA AAA TGA AGGAAAGATT AAAGGCTCCA 1588
Tyr Phe Lys Glu Leu Gly Val Leu Lys *
510 515
GAATTAAGGT TT 1600
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 6:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 516 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6:
Met Ala Leu Ser Asn Glu Gln Lys Asn Lys Met Trp Ala Leu Leu Asn
1 5 10 S15
Gln Thr Arg Gly Gln Ile Gly Leu Thr Ala Tyr Lys Asp Tyr Ile Phe
25 30
Gly Leu Leu Phe Tyr Lys Tyr Leu Ser Glu Lys Ala Thr Gln Trp Leu
40 45
Gly Glu Val Leu Arg Gly Asp Thr Trp Glu Asn Val Tyr Asp Gln Asp
55 60
Pro Val Arg Ala Leu Asp Tyr Met Lys Gln Lys Leu Gly Tyr Ala Ile
70 75 80
Gln Pro Lys Glu Phe Phe Lys Asp Trp Glu Ala Ala Ile His Glu Glu
90 95
Arg Phe Asn Ile Pro Met Ile Ser Asp Thr Phe Gly His Phe Asn Gln
105 110
Gln Ile Ala Phe Glu Ala Lys Asp Asp Phe Glu Gly Ile Phe Asp Gly
*120 125
Met Arg Phe Asp Ser Ser Asp Leu Gly Ser Asn Ala Gln Ala Arg Ala
135 140
Ser Val Met Ile Ser Met Ile Glu Leu Leu Ser Ala Pro Glu Phe Asp
150 155 160
Leu Ser Thr Gly Gly Asp Thr Val Ser Asp Ile Tyr Glu Tyr Leu Leu
170 175
Glu Lys Phe Ala Thr Val Leu Ala Ser Asp Met Gly Gln Tyr Tyr Thr
185 190
Pro Lys Glu Ile Ser Glu Val Met Ala Arg Ile Leu Thr Phe Gly Lys
200 205
Ala Asp Glu Asp Asn Phe Ser Ile Tyr Asp Pro Ala Val Gly Ser Ala
210 215 220
Ser Leu Leu Ile Thr Thr Ala Ser His Met Lys His Ser Asn Gln Arg
225 230 235 240
Gly Ala Ile Lys Tyr Phe Gly Gln Glu Lys Asp Ala Thr Pro Tyr Arg
245 250 255
Leu Ala Arg Met Asn Leu Met Met His Asn Ile Glu Tyr Asn Asp Ile
260 265 270
Gin Ile His His Ala Asp Thr Leu Glu Ser Asp Trp Pro Asp Gly Val
275 280 285
Ile Glu Gly Lys Asp Thr Pro Arg Met Phe Asp Ala Val Met Ala Asn
290 295 300
Pro Pro Tyr Ser Ala His Trp Asn Asn Lys Asp Arg Glu Asp Asp Pro
305 310 315 320
Arg Phe Arg Glu Tyr Gly Ile Ala Pro Lys Thr Lys Ala Asp Tyr Ser
325 330 335
Phe Leu Leu His Cys Leu Tyr His Thr Lys Glu Ser Gly Arg Val Ala
340 345 350
Ile Ile Leu Pro His Gly Val Leu Phe Arg Gly Ala Ala Glu Gly Arg
355 360 365
Ile Arg Lys Ala Leu Ile Asp Lys His Gln Ile Glu Ala Val Ile Gly
370 375 380
Phe Pro Asp Lys Leu Phe Leu Asn Thr Gly Ile Pro Val Cys Val Leu
385 390 395 400
Ile Leu Lys Lys Asn Arg Ala Asn Ser Asp Ile Leu Phe Val Asp Ala
405 410 415
Ser Gln Gly Phe Glu Lys Met Lys Asn Gln Lys Gln Leu Arg Pro Glu
420 425 430
Asp Ile Asp Lys Ile Thr Glu Thr Val Ile His Arg Lys Ala Val Asp
435 440 445
Lys Tyr Ser His Leu Ala Thr Leu Glu Glu Val Ile Glu Asn Asp Tyr
450 455 460
Asn Leu Asn Ile Pro Arg Tyr Val Asp Thr Phe Glu Glu Glu Glu Ser
465 470 475 480
Ile Asp Leu Ala Asp Ile Gln Gly Gln Ile Asp Glu Val Asp Ala Glu
485 490 495
Ile Ala Lys Ala Asn Gln Thr Leu Ala Asn Tyr Phe Lys Glu Leu Gly
500 505 510
Val Leu Lys *
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 7:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1700 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:48..1661
(D) AUTRES INFORMATIONS:/product= "hdsM"
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7:
AAAGTTTTAG AAGAACGACT ACGACAAAAC TTTGAACAAA TTCAAAA ATG GAA AGA 56
Met Glu Arg
AGA ATT ATA ATG GCG ACA GGT TTA AAT CAA CAA CTA TGG GCT TCT GCG 104
Arg Ile Ile Met Ala Thr Gly Leu Asn Gln Gln Leu Trp Ala Ser Ala
10 15
GAT ATC TTA CGT GGG AAG ATG GAT GCA AGT GAG TAC AAA AAC TAT TTA 152
Asp Ile Leu Arg Gly Lys Met Asp Ala Ser Glu Tyr Lys Asn Tyr Leu
25 30 35
CTG GGA TTA ATT TTC TAT AAG TAC TTG TCT GAT GCG CAG CTG AGA GAA 200
Leu Gly Leu Ile Phe Tyr Lys Tyr Leu Ser Asp Ala Gln Leu Arg Glu
45 50
GTT TAT GAA CAA GAA AAT GGG AAG ACA GAT ACC TTC CCA GAA CGT TCC 248
Val Tyr Glu Gln Glu Asn Gly Lys Thr Asp Thr Phe Pro Glu Arg Ser
60 65
ACT CAG TAT GCA GGC TTC ATG GAA TGG TAC GAA GAA GAC AAA GAC GAT 296
Thr Gln Tyr Ala Gly Phe Met Glu Trp Tyr Glu Glu Asp Lys Asp Asp
75 80
TTA ATC GAA AAT ATC CAA CCC AAA CAA GGT TAC TTT ATC CAA CCC GAT 344
Leu Ile Glu Asn Ile Gln Pro Lys Gln Gly Tyr Phe Ile Gln Pro Asp
90 95
CAA TTG TTT TAT AGT TAC CGC ATC AAA GCA GAC AAC TAT GAA TTT AAT 392
Gln Leu Phe Tyr Ser Tyr Arg Ile Lys Ala Asp Asn Tyr Glu Phe Asn
105 110 115
TTG ACC GAT TTA CAA GCA GGT TTT AAT GAG TTG GAA CGT CAA GGA GAA 440
Leu Thr Asp Leu Gln Ala Gly Phe Asn Glu Leu Glu Arg Gln Gly Glu
125 130
GAA TTC AGT GGA TTG TTT GCG GAC ATT GAT TTA AAC TCC ACA AAA TTA 488
Glu Phe Ser Gly Leu Phe Ala Asp Ile Asp Leu Asn Ser Thr Lys Leu
140 145
GGA TCA AAT GCA CTA CTA CGT AAT GTG ACG ATC ACT GAG GTT TTG CGT 536
Gly Ser Asn Ala Leu Leu Arg Asn Val Thr Ile Thr Glu Val Leu Arg
155 160
GCC TTA GAT GAG ATT GAT TTA TTT GAA CAC AAT GGC GAT GTG ATT GGG 584
Ala Leu Asp Glu Ile Asp Leu Phe Glu His Asn Gly Asp Val Ile Gly
170 175
GAC GCT TAT GAG TAT TTG ATT GGA GAA TTC GCG TCA AGT GCA GGT AAA 632
Asp Ala Tyr Glu Tyr Leu Ile Gly Glu Phe Ala Ser Ser Ala Gly Lys
185 190 195
AAA GCC GGT GAG TTT TAT ACG CCT CAA GCT GTT TCG AAA ATC ATG TCA 680
Lys Ala Gly Glu Phe Tyr Thr Pro Gln Ala Val Ser Lys Ile Met Ser
205 210
GAA ATT ACG TCG ATT GGA CAA GAA ACC CGT GCG CCT TTT CAT ATT TAT 728
Glu Ile Thr Ser Ile Gly Gln Glu Thr Arg Ala Pro Phe His Ile Tyr
215 220 225
GAT CCT GCG ATG GGG TCA GGT TCT TTG ATG CTT AAT ATC CGT CGG TAT 776
Asp Pro Ala Met Gly Ser Gly Ser Leu Met Leu Asn Ile Arg Arg Tyr
230 235 240
CTC AAT AAT CCA GAT CAA GTG CAC TAT CAT GGA CAA GAG TTA AAT ACG 824
Leu Asn Asn Pro Asp Gln Val His Tyr His Gly Gln Glu Leu Asn Thr
245 250 255
ACG ACC TTT AAC TTA GCA CGT ATG AAC TTA ATT CTT CAT GGA ATA GAT 872
Thr Thr Phe Asn Leu Ala Arg Met Asn Leu Ile Leu His Gly Ile Asp
260 265 270 275
AAA GAA CGC ATG AAC CTG AAT AAC GGA GAT ACT TTA GAT GCC GAT TGG 920
Lys Glu Arg Met Asn Leu Asn Asn Gly Asp Thr Leu Asp Ala Asp Trp
280 285 290
CCC TCA GAA GAA CCG TAT CAG TTT GAT TCC GTA TGC ATG AAC CCT CCT 968
Pro Ser Glu Glu Pro Tyr Gln Phe Asp Ser Val Cys Met Asn Pro Pro
295 300 305
TAT TCT GCG AAA TGG TCA GCG GCA GAT CAA TTT CTC TCT GAC CCT CGT 1016
Tyr Ser Ala Lys Trp Ser Ala Ala Asp Gln Phe Leu Ser Asp Pro Arg
310 315 320
TTT GAG CGT TTT GGA AAA TTA GCG CCT AAA TCT AAA GCG GAC TTT GCC 1064
Phe Glu Arg Phe Gly Lys Leu Ala Pro Lys Ser Lys Ala Asp Phe Ala
325 330 335
TTT CTC CTT CAC GGT TTT TAC CAT TTG AAA GAA TCG GGA ACA ATG GGG 1112
Phe Leu Leu His Gly Phe Tyr His Leu Lys Glu Ser Gly Thr Met Gly
340 345 350 355
ATT GTC CTG CCT CAT GGC GTT CTC TTT AGA GGA GCC GCG GAA GGA ACC 1160
Ile Val Leu Pro His Gly Val Leu Phe Arg Gly Ala Ala Glu Gly Thr
360 365 370
ATC CGT CAA GCC CTT TTA GAA ATG GGA GCT ATT GAT GCG GTC ATT GGC 1208
Ile Arg Gln Ala Leu Leu Glu Met Gly Ala Ile Asp Ala Val Ile Gly
375 380 385
TTG CCG GCC AAT ATC TTT TTT GGA ACG AGT ATT CCG ACA ACG GTT ATT 1256
Leu Pro Ala Asn Ile Phe Phe Gly Thr Ser Ile Pro Thr Thr Val Ile
390 395 400
ATT TTG AAG AGA AAC CGC TCT CGT CGT GAT GTC TTA TTT ATC GAT GCT 1304
Ile Leu Lys Arg Asn Arg Ser Arg Arg Asp Val Leu Phe Ile Asp Ala
405 410 415
TCT CAA GAC TTT GAA AAA CGA AAA AAT CAA AAT GTC CTG TTG GAT GAA 1352
Ser Gln Asp Phe Glu Lys Arg Lys Asn Gln Asn Val Leu Leu Asp Glu
420 425 430 435
CAT ATT GAT AAA ATT GTT TCT ATC CAC AAA AAA CGA GAA GAT ATT GAA 1400
His Ile Asp Lys Ile Val Ser Ile His Lys Lys Arg Glu Asp Ile Glu
440 445 450
AGA TAT GCT CAT GTT GCA AGT TTT GAT GAG ATC CAA GAA AAT GAC TTT 1448
Arg Tyr Ala His Val Ala Ser Phe Asp Glu Ile Gln Glu Asn Asp Phe
455 460 465
AAC TTA AAT ATC CCT CGT TAT GTA GAT ACC TTT GAG GAA GAG GAA CCG 1496
Asn Leu Asn Ile Pro Arg Tyr Val Asp Thr Phe Glu Glu Glu Glu Pro
470 475 480
GTT GAT TTG GTT GCA GTA AAT ACC AAT CTC CTT AAG ATC AAT GAA GAA 1544
Val Asp Leu Val Ala Val Asn Thr Asn Leu Leu Lys Ile Asn Glu Glu
485 490 495
TTA GTT CAA CAA GAG CAA GTG CTC TTA TCG ATG ATT GAC AAT TTT GCA 1592
Leu Val Gln Gln Glu Gln Val Leu Leu Ser Met Ile Asp Asn Phe Ala
500 505 510 515
GAA AGT GAA GAG AAT CAA GCC TTG ATT GAA TCG ATG CGT CTT CTT TTG 1640
Glu Ser Glu Glu Asn Gln Ala Leu Ile Glu Ser Met Arg Leu Leu Leu
520 525 530
AGA GGC GGT CAT GAT GAG TAA AAAGAGTCCA CAATTAAGGT TTGAAGGTTT 1691
Arg Gly Gly His Asp Glu *
TACGGATGA 1700
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 8:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 538 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8:
Met Glu Arg Arg Ile Ile Met Ala Thr Gly Leu Asn Gln Gln Leu Trp
1 5 10 15
Ala Ser Ala Asp Ile Leu Arg Gly Lys Met Asp Ala Ser Glu Tyr Lys
25 30
Asn Tyr Leu Leu Gly Leu Ile Phe Tyr Lys Tyr Leu Ser Asp Ala Gln
40 45
Leu Arg Glu Val Tyr Glu Gln Glu Asn Gly Lys Thr Asp Thr Phe Pro
55 60
Glu Arg Ser Thr Gln Tyr Ala Gly Phe Met Glu Trp Tyr Glu Glu Asp
70 75 80
Lys Asp Asp Leu Ile Glu Asn Ile Gln Pro Lys Gln Gly Tyr Phe Ile
90 95
Gln Pro Asp Gln Leu Phe Tyr Ser Tyr Arg Ile Lys Ala Asp Asn Tyr
105 110
Glu Phe Asn Leu Thr Asp Leu Gln Ala Gly Phe Asn Glu Leu Glu Arg
120 125
Gln Gly Glu Glu Phe Ser Gly Leu Phe Ala Asp Ile Asp Leu Asn Ser
135 140
Thr Lys Leu Gly Ser Asn Ala Leu Leu Arg Asn Val Thr Ile Thr Glu
150 155 160
Val Leu Arg Ala Leu Asp Glu Ile Asp Leu Phe Glu His Asn Gly Asp
170 175
Val Ile Gly Asp Ala Tyr Glu Tyr Leu Ile Gly Glu Phe Ala Ser Ser
185 190
Ala Gly Lys Lys Ala Gly Glu Phe Tyr Thr Pro Gln Ala Val Ser Lys
200 205
Ile Met Ser Glu Ile Thr Ser Ile Gly Gln Glu Thr Arg Ala Pro Phe
210 215 220
His Ile Tyr Asp Pro Ala Met Gly Ser Gly Ser Leu Met Leu Asn Ile
225 230 235 240
Arg Arg Tyr Leu Asn Asn Pro Asp Gln Val His Tyr His Gly Gln Glu
245 250 255
Leu Asn Thr Thr Thr Phe Asn Leu Ala Arg Met Asn Leu Ile Leu His
260 265 270
Gly Ile Asp Lys Glu Arg Met Asn Leu Asn Asn Gly Asp Thr Leu Asp
275 280 285
Ala Asp Trp Pro Ser Glu Glu Pro Tyr Gln Phe Asp Ser Val Cys Met
290 295 300
Asn Pro Pro Tyr Ser Ala Lys Trp Ser Ala Ala Asp Gln Phe Leu Ser
305 310 315 320
Asp Pro Arg Phe Glu Arg Phe Gly Lys Leu Ala Pro Lys Ser Lys Ala
325 330 335
Asp Phe Ala Phe Leu Leu His Gly Phe Tyr His Leu Lys Glu Ser Gly
340 345 350
Thr Met Gly Ile Val Leu Pro His Gly Val Leu Phe Arg Gly Ala Ala
355 360 365
Glu Gly Thr Ile Arg Gln Ala Leu Leu Glu Met Gly Ala Ile Asp Ala
370 375 380
Val Ile Gly Leu Pro Ala Asn Ile Phe Phe Gly Thr Ser Ile Pro Thr
385 390 395 400
Thr Val Ile Ile Leu Lys Arg Asn Arg Ser Arg Arg Asp Val Leu Phe
405 410 415
Ile Asp Ala Ser Gln Asp Phe Glu Lys Arg Lys Asn Gln Asn Val Leu
420 425 430
Leu Asp Glu His Ile Asp Lys Ile Val Ser Ile His Lys Lys Arg Glu
435 440 445
Asp Ile Glu Arg Tyr Ala His Val Ala Ser Phe Asp Glu Ile Gln Glu
450 455 460
Asn Asp Phe Asn Leu Asn Ile Pro Arg Tyr Val Asp Thr Phe Glu Glu
465 470 475 480
Glu Glu Pro Val Asp Leu Val Ala Val Asn Thr Asn Leu Leu Lys Ile
485 490 495
Asn Glu Glu Leu Val Gln Gln Glu Gln Val Leu Leu Ser Met Ile Asp
500 505 510
Asn Phe Ala Glu Ser Glu Glu Asn Gln Ala Leu Ile Glu Ser Met Arg
515 520 525
Leu Leu Leu Arg Gly Gly His Asp Glu *
530 535
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 9:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1400 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: simple (D) CONFIGURATION: linéaire (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:15..1385
(D) AUTRES INFORMATIONS:/product= "HsdS"
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 9:
CTGGGAGTGC TAAA ATG AAG GAA AGA TTA AAG GCT CCA GAA TTA AGG TTT 50
Met Lys Glu Arg Leu Lys Ala Pro Glu Leu Arg Phe
1 5 10
GAT GGT TTT ACG GAT GAT TGG GAA GAG CGT AAG TTA TTA GAC AAT GTA 98
Asp Gly Phe Thr Asp Asp Trp Glu Glu Arg Lys Leu Leu Asp Asn Val
20 25
GAA AAA GTA TTA CAT TAT CGT GGT AAA AGC CCC GCT AAG TTT GGA ATG 146
Glu Lys Val Leu His Tyr Arg Gly Lys Ser Pro Ala Lys Phe Gly Met
35 40
* GAA TGG GGT ACA GAA GGT TAT CTT GTT CTT TCT GCT TTG AAT GTT AAA 194
Glu Trp Gly Thr Glu Gly Tyr Leu Val Leu Ser Ala Leu Asn Val Lys
50 55 60
AAT GGA TAC ATT GAT AAA TCT GTT GAA GCA AAG TAT GGG GAT CAT GAA 242
Asn Gly Tyr Ile Asp Lys Ser Val Glu Ala Lys Tyr Gly Asp His Glu
70 75
TTA TTT GAC AGA TGG ATG GGG AAC AAT CGG TTA GAA AAA GGA GAT GTT 290
Leu Phe Asp Arg Trp Met Gly Asn Asn Arg Leu Glu Lys Gly Asp Val
85 90
GTT TTT ACA ACA GAA GCT CCT TTA GGC AAT GTA GCT CAA GTA CCC GAT 338
Val Phe Thr Thr Glu Ala Pro Leu Gly Asn Val Ala Gln Val Pro Asp
100 105
AAT AAC GGA TAT ATA TTA AAC CAA AGA GCG GTT GCA TTT AAA TCT TTG 386
Asn Asn Gly Tyr Ile Leu Asn Gln Arg Ala Val Ala Phe Lys Ser Leu
115 120
CAA GAA ACA GAT GAT AAT TTC TTT GCG CAA TTA CTA CGA AGT CCT ATT 434
Gln Glu Thr Asp Asp Asn Phe Phe Ala Gln Leu Leu Arg Ser Pro Ile
130 135 140
GTT CAA AAT ACA TTA AAA GCT AGT TCT TCT GGG GGA ACT GCC AAA GGT 482
Val Gln Asn Thr Leu Lys Ala Ser Ser Ser Gly Gly Thr Ala Lys Gly
150 155
ATT GGA ATG AAA GAA TTT GCT AAA CTT AAT GCT CGA GTT CCC GAA ACA 530
Ile Gly Met Lys Glu Phe Ala Lys Leu Asn Ala Arg Val Pro Glu Thr
165 170
CAT GAA GAA CAA CGA ARA ATA GGG TTA TTC TTC AAA CAG CTA GAC GAC 578
His Glu Glu Gln Arg Lys Ile Gly Leu Phe Phe Lys Gln Leu Asp Asp
180 185
ACT ATC GTT CTT CAT CAA CGT AAG TTA GAT CTT CTC AAA GAG CAG AAA 626
Thr Ile Val Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys
195 200
AAA GGA TAC TTG CAA AAA ATG TTC CCC AAA AAT GGT TCA AAA ATT CCT 674
Lys Gly Tyr Leu Gln Lys Met Phe Pro Lys Asn Gly Ser Lys Ile Pro
205 210 215 220
GAA TTG AGA TTT GCG GAG TTT GCT GAC GAT TGG GAA GAA CGT AAG TTG 722
Glu Leu Arg Phe Ala Glu Phe Ala Asp Asp Trp Glu Glu Arg Lys Leu
225 230 235
GGT GAA GTT GCA ACA TTT CTA AAC GGA CGA GCA TAT AAG CAA GAT GAA 770
Gly Glu Val Ala Thr Phe Leu Asn Gly Arg Ala Tyr Lys Gln Asp Glu
240 245 250
TTA CTG GAT TCA GGT AAA TAT AAA GTG CTT CGC GTC GGC AAT TTT TAT 818
Leu Leu Asp Ser Gly Lys Tyr Lys Val Leu Arg Val Gly Asn Phe Tyr
255 260 265
ACC AAT GAT TCT TGG TAC TAC TCT AAT ATG GAG CTT GGT GAT AAA TAT 866
Thr Asn Asp Ser Trp Tyr Tyr Ser Asn Met Glu Leu Gly Asp Lys Tyr
270 275 280
TAT GTT GAT AAA GGT GAT CTA GTT TAT ACT TGG TCA GCG ACA TTT GGC 914
Tyr Val Asp Lys Gly Asp Leu Val Tyr Thr Trp Ser Ala Thr Phe Gly
285 290 295 300
CCA CAT ATT TGG AGT GGC GAA AAA GTT ATT TAC CAT TAT CAC ATC TGG 962
Pro His Ile Trp Ser Gly Glu Lys Val Ile Tyr His Tyr His Ile Trp
305 310 315
AAA GTC GAG CTT TCT AAA TTT CTT GAT AGG AAT TTT ACA TTG CAA CTT 1010
Lys Val Glu Leu Ser Lys Phe Leu Asp Arg Asn Phe Thr Leu Gln Leu
320 325 330
TTA GAA GCG GAT AAA GCA AGA TTG TTA TCC AGT ACA AAT GGT TCA ACA 1058 Leu Glu Ala Asp Lys Ala Arg Leu Leu Ser Ser Thr Asn Gly Ser Thr
335 340 345
ATG ATT CAT GTA ACC AAG GGA GAT ATG GAA AGT AAA ATT GTT TCT ATT 1106
Met Ile His Val Thr Lys Gly Asp Met Glu Ser Lys Ile Val Ser Ile
350 355 360
CCT AAT ATT GAT GAG CAA AAA CAA ATT GGT TCA TTC TTC AAA CAA CTC 1154
Pro Asn Ile Asp Glu Gln Lys Gln Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu
365 370 375 380
GAC AAC ACT ATC ACC CTT CAT CAA CGT AAG TTA GAT TTG TTG AAA GAG 1202
Asp Asn Thr Ile Thr Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu
385 390 395
CAG AAA AAA GGA TTT CTA CAA AAA ATG TTT CAT TTA ACA AAT TTA GGA 1250
Gln Lys Lys Gly Phe Leu Gln Lys Met Phe His Leu Thr Asn Leu Gly
400 405 410
GCC TTC ACT ATG GAA ACT ATA CAA AAA TAT TTA AAG ATA ATT GTT GAA 1298
Ala Phe Thr Met Glu Thr Ile Gln Lys Tyr Leu Lys Ile Ile Val Glu
415 420 425
AGT AAT TAT CTT CAT CAA CGT AAG TTA GAC TTG CTT AAG GAG CAA AAA 1346
Ser Asn Tyr Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys
430 435 440
AGA ATT ATT ACA AAT AAT GTT TAT TCA TTT TTT GTA TAA TATAAAGCGA 1395
Arg Ile Ile Thr Asn Asn Val Tyr Ser Phe Phe Val *
445 450 455
TTTAA 1400
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 10:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 457 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 10:
Met Lys Glu Arg Leu Lys Ala Pro Glu Leu Arg Phe Asp Gly Phe Thr
1 5 10 15
Asp Asp Trp Glu Glu Arg Lys Leu Leu Asp Asn Val Glu Lys Val Leu
25 30
His Tyr Arg Gly Lys Ser Pro Ala Lys Phe Gly Met Glu Trp Gly Thr
40 45
Glu Gly Tyr Leu Val Leu Ser Ala Leu Asn Val Lys Asn Gly Tyr Ile
55 60
Asp Lys Ser Val Glu Ala Lys Tyr Gly Asp His Glu Leu Phe Asp Arg
70 75 80
Trp Met Gly Asn Asn Arg Leu Glu Lys Gly Asp Val Val Phe Thr Thr
90 95
Glu Ala Pro Leu Gly Asn Val Ala Gln Val Pro Asp Asn Asn Gly Tyr
105 110
Ile Leu Asn Gln Arg Ala Val Ala Phe Lys Ser Leu Gln Glu Thr Asp
120 125
Asp Asn Phe Phe Ala Gln Leu Leu Arg Ser Pro Ile Val Gln Asn Thr
135 140
Leu Lys Ala Ser Ser Ser Gly Gly Thr Ala Lys Gly Ile Gly Met Lys
150 155 160
Glu Phe Ala Lys Leu Asn Ala Arg Val Pro Glu Thr His Glu Glu Gln
170 175
Arg Lys Ile Gly Leu Phe Phe Lys Gln Leu Asp Asp Thr Ile Val Leu
185 190
His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gin Lys Lys Gly Tyr Leu
200 205
Gln Lys Met Phe Pro Lys Asn Gly Ser Lys Ile Pro Glu Leu Arg Phe
210 215 220
Ala Glu Phe Ala Asp Asp Trp Glu Glu Arg Lys Leu Gly Glu Val Ala
225 230 235 240
Thr Phe Leu Asn Gly Arg Ala Tyr Lys Gln Asp Glu Leu Leu Asp Ser
245 250 255
Gly Lys Tyr Lys Val Leu Arg Val Gly Asn Phe Tyr Thr Asn Asp Ser
260 265 270
Trp Tyr Tyr Ser Asn Met Glu Leu Gly Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Lys
275 280 285
Gly Asp Leu Val Tyr Thr Trp Ser Ala Thr Phe Gly Pro His Ile Trp
290 295 300
Ser Gly Glu Lys Val Ile Tyr His Tyr His Ile Trp Lys Val Glu Leu
305 310 315 320
Ser Lys Phe Leu Asp Arg Asn Phe Thr Leu Gln Leu Leu Glu Ala Asp
325 330 335
Lys Ala Arg Leu Leu Ser Ser Thr Asn Gly Ser Thr Met Ile His Val
340 345 350
Thr Lys Gly Asp Met Glu Ser Lys Ile Val Ser Ile Pro Asn Ile Asp
355 360 365
Glu Gln Lys Gln Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu Asp Asn Thr Ile
370 375 380
Thr Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys Lys Gly
385 390 395 400
Phe Leu Gln Lys Met Phe His Leu Thr Asn Leu Gly Ala Phe Thr Met
405 410 415
Glu Thr Ile Gln Lys Tyr Leu Lys Ile Ile Val Glu Ser Asn Tyr Leu
420 425 430
His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys Arg Ile Ile Thr
435 440 445
Asn Asn Val Tyr Ser Phe Phe Val *
450 455
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 11:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1308 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:44..1258
(D) AUTRES INFORMATIONS:/product= "HsdS"
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 11:
GCCTTGATTG AATCGATGCG TCTTCTTTTG AGAGGCGGTC ATG ATG AGT AAA AAG 55
Met Met Ser Lys Lys
1 5
AGT CCA CAA TTA AGG TTT GAA GGT TTT ACG GAT GAT TGG GAA GAA CGT 103
Ser Pro Gln Leu Arg Phe Glu Gly Phe Thr Asp Asp Trp Glu Glu Arg
15 20
AAG TTT GGA GAA GTT TGG AAA AAA TCA AGT GAG CGC AAT TTA AAT TTA 151
Lys Phe Gly Glu Val Trp Lys Lys Ser Ser Glu Arg Asn Leu Asn Leu
30 35
GAA TAT TCA CCG AAG CAA GTT TTA TCA GTG GCT CAA ATG AAA TTA AAT 199
Glu Tyr Ser Pro Lys Gln Val Leu Ser Val Ala Gln Met Lys Leu Asn
45 50
CCA TCT AAT AGA AAT GAA CAG GAT GAT TAT ATG AAA ACA TAT AAT GTG 247
Pro Ser Asn Arg Asn Glu Gln Asp Asp Tyr Met Lys Thr Tyr Asn Val
60 65
CTT CAT AAA GGT GAT ATT GCA TTT GAA GGT AAC AAG TCA AAG AGT TTT 295
Leu His Lys Gly Asp Ile Ala Phe Glu Gly Asn Lys Ser Lys Ser Phe
75 80 85
GCA TTT GGT AGG TTT GTT CTA GAT GAT TTA CAG GAT GGG ATA GTC TCG 343
Ala Phe Gly Arg Phe Val Leu Asp Asp Leu Gln Asp Gly Ile Val Ser
95 100
CAT GTA TTT TAT GTA TAT CGC CCT ATT TGT AAA ATG GAT ACA GAT TTT 391
His Val Phe Tyr Val Tyr Arg Pro Ile Cys Lys Met Asp Thr Asp Phe
110 115
ATG ATA GTT TAT ATA AAT AAT GAA TCT GTA ATG AAG TAT CTT TTA GTT 439
Met Ile Val Tyr Ile Asn Asn Glu Ser Val Met Lys Tyr Leu Leu Val
125 130
AAG GCA ACT ACT AAA ACT TTG ATG ATG ACT ACT TTA AAT ACT AAA GAT 487
Lys Ala Thr Thr Lys Thr Leu Met Met Thr Thr Leu Asn Thr Lys Asp
140 145
ATT GTT AAA CCA AAA CTA AAC TTA CCT AGT CTT GAA GAA CAA CAA AAG 535
Ile Val Lys Pro Lys Leu Asn Leu Pro Ser Leu Glu Glu Gln Gln Lys
155 160 165
ATC GGT TCA TTC TTC AAA CAG TTA GAT GCC ACT ATC GCT CTT CAT CAA 583
Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu Asp Ala Thr Ile Ala Leu His Gln
175 180
CGT AAG CTA GAT TTG TTG AAA GAA CAG AAA AAA GGC TAC TTC CAA AAA 631
Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys Lys Gly Tyr Phe Gln Lys
190 195
ATG TTC CCT AAA AAT GGT GCC AAA GTT CCT GAA TTG CGA TTT GCG GGG 679
Met Phe Pro Lys Asn Gly Ala Lys Val Pro Glu Leu Arg Phe Ala Gly
205 210
TTT GCT GAC GAT TGG GAA GAT CGT AAG TTA GGT GAA TTA GCT AGT TTT 727
Phe Ala Asp Asp Trp Glu Asp Arg Lys Leu Gly Glu Leu Ala Ser Phe
215 220 225
TCA AAA GGC AAT GGA TAT ACA AAA AAT GAT TTA GTC GAA TTT GGA GAT 775
Ser Lys Gly Asn Gly Tyr Thr Lys Asn Asp Leu Val Glu Phe Gly Asp
230 235 240 245
CCA ATA ATT TTA TAT GGT CGC TTA TAT ACA AAA TAT GAA ACA GTT ATT 823
Pro Ile Ile Leu Tyr Gly Arg Leu Tyr Thr Lys Tyr Glu Thr Val Ile
250 255 260
GAG AAA GTA GAT ACA TTT GTA AAT AAG AAA GAT AAA TCA ATA ATT AGT 871
Glu Lys Val Asp Thr Phe Val Asn Lys Lys Asp Lys Ser Ile Ile Ser
265 270 275
GGA GGA TCT GAA GTC ATA GTG CCT GCA TCA GGA GAA TCT TCA GAA GAT 919
Gly Gly Ser Glu Val Ile Val Pro Ala Ser Gly Glu Ser Ser Glu Asp
280 285 290
ATT TCT AGA GCT TCA GTT GTT GGG AAA TCA GGT ATA ATT TTA GGC GGA 967
Ile Ser Arg Ala Ser Val Val Gly Lys Ser Gly Ile Ile Leu Gly Gly
295 300 305
GAT TTA AAT ATA ATT AAA CCA GTA AAT TAT ATT GAT TCT ATT TTT TTA 1015
Asp Leu Asn Ile Ile Lys Pro Val Asn Tyr Ile Asp Ser Ile Phe Leu
310 315 320 325
GCT TTA ACT ATT TCT AAT GGA TCT CAA CAA AAA GAA ATG TCT AAG AGA 1063
Ala Leu Thr Ile Ser Asn Gly Ser Gln Gln Lys Glu Met Ser Lys Arg
330 335 340
GCT CAA GGA AAA TCT GTA GTT CAT CTG CAT AAC TCT GAT CTA AAA CAA 1111
Ala Gln Gly Lys Ser Val Val His Leu His Asn Ser Asp Leu Lys Gln
345 350 355
GTA AAT ATT TTA TAT CCA AAA TTA GGA GAA CAA CAA AAA ATC GGT TCA 1159
Val Asn Ile Leu Tyr Pro Lys Leu Gly Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser
360 365 370
TTC TTC AAA CAA CTA GAT AAC ACT ATC GTT CTT CAT CAA CGT AAG TTA 1207
Phe Phe Lys Gln Leu Asp Asn Thr Ile Val Leu His Gln Arg Lys Leu
375 380 385
GAT TTT TTG AAA GAG CAG AAA AAA GGC TTT TTA CAA AAG ATG TTT GTT 1255
Asp Phe Leu Lys Glu Gln Lys Lys Gly Phe Leu Gln Lys Met Phe Val
390 395 400 405
TAG GGTCTATAAT TAGATAATAA CCCCTCACAA ATCCCATTAA AATAGCCCCT 1308
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 12*
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 12:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 406 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 12:
Met Met Ser Lys Lys Ser Pro Gln Leu Arg Phe Glu Gly Phe Thr Asp
1 5 10 15
Asp Trp Glu Glu Arg Lys Phe Gly Glu Val Trp Lys Lys Ser Ser Glu
25 30
Arg Asn Leu Asn Leu Glu Tyr Ser Pro Lys Gln Val Leu Ser Val Ala
40 45
Gln Met Lys Leu Asn Pro Ser Asn Arg Asn Glu Gln Asp Asp Tyr Met
55 60
Lys Thr Tyr Asn Val Leu His Lys Gly Asp Ile Ala Phe Glu Gly Asn
70 75 80
Lys Ser Lys Ser Phe Ala Phe Gly Arg Phe Val Leu Asp Asp Leu Gln
90 95
Asp Gly Ile Val Ser His Val Phe Tyr Val Tyr Arg Pro Ile Cys Lys
105 110
Met Asp Thr Asp Phe Met Ile Val Tyr Ile Asn Asn Glu Ser Val Met
120 125
Lys Tyr Leu Leu Val Lys Ala Thr Thr Lys Thr Leu Met Met Thr Thr
135 140
* Leu Asn Thr Lys Asp Ile Val Lys Pro Lys Leu Asn Leu Pro Ser Leu
150 155 160
Glu Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu Asp Ala Thr
170 175
Ile Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys Lys
185 190
Gly Tyr Phe Gln Lys Met Phe Pro Lys Asn Gly Ala Lys Val Pro Glu
200 205
Leu Arg Phe Ala Gly Phe Ala Asp Asp Trp Glu Asp Arg Lys Leu Gly
210 215 220
Glu Leu Ala Ser Phe Ser Lys Gly Asn Gly Tyr Thr Lys Asn Asp Leu
225 230 235 240
Val Glu Phe Gly Asp Pro Ile Ile Leu Tyr Gly Arg Leu Tyr Thr Lys
245 250 255
Tyr Glu Thr Val Ile Glu Lys Val Asp Thr Phe Val Asn Lys Lys Asp
260 265 270
Lys Ser Ile Ile Ser Gly Gly Ser Glu Val Ile Val Pro Ala Ser Gly
275 280 285
Glu Ser Ser Glu Asp Ile Ser Arg Ala Ser Val Val Gly Lys Ser Gly
290 295 300
Ile Ile Leu Gly Gly Asp Leu Asn Ile Ile Lys Pro Val Asn Tyr Ile
305 310 315 320
Asp Ser Ile Phe Leu Ala Leu Thr Ile Ser Asn Gly Ser Gln Gln Lys
325 330 335
Glu Met Ser Lys Arg Ala Gln Gly Lys Ser Val Val His Leu His Asn
340 345 350
Ser Asp Leu Lys Gln Val Asn Ile Leu Tyr Pro Lys Leu Gly Glu Gln
355 360 365
Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu Asp Asn Thr Ile Val Leu
370 375 380
His Gln Arg Lys Leu Asp Phe Leu Lys Glu Gln Lys Lys Gly Phe Leu
385 390 395 400
Gln Lys Met Phe Val *
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 13:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1300 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:11..1288
(D) AUTRES INFORMATIONS:/product= "HsdS"
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 13:
GGTGGGGACT ATG GCG AAA ATA GAT GAT TCA GTT AAA AAG AGA GTT CCA 49
Met Ala Lys Ile Asp Asp Ser Val Lys Lys Arg Val Pro
1 5 10
GAA TTA AGG TTT CCG GGA TTT ACG AAT GAT TGG GAA GAG CGT AAG TTT 97
Glu Leu Arg Phe Pro Gly Phe Thr Asn Asp Trp Glu Glu Arg Lys Phe
20 25
TTT GAA AGT ATA GCT TCA ACA ATA GAT TTT AGA GGT AGA ACT CCT AAA 145
Phe Glu Ser Ile Ala Ser Thr Ile Asp Phe Arg Gly Arg Thr Pro Lys
35 40 45
AAG TTA GGC ATG GAC TGG AGT GAT TCT GGA TAT TTA GCT TTA TCC GCT 193
Lys Leu Giy Met Asp Trp Ser Asp Ser Giy Tyr Leu Ala Leu Ser Ala
55 60
TTG AAC GTA AAA AAT GGA TAT ATT GAT CCG TTA GCT GAT GCT CAC TAT 241
Leu Asn Val Lys Asn Gly Tyr Ile Asp Pro Leu Ala Asp Ala His Tyr
70 75
GGT GAT GAG AAA TTA TAC AGA AAA TGG ATG TCA GGA AGA GAA CTA AAA 289
Gly Asp Glu Lys Leu Tyr Arg Lys Trp Met Ser Gly Arg Glu Leu Lys
85 90
AAA GGA CAG GTT CTC TTT ACA ACA GAG GCT CCT ATG GGA AAT GTC GCT 337
Lys Gly Gln Val Leu Phe Thr Thr Glu Ala Pro Met Gly Asn Val Ala
100 105
CAA GTA CCT GAT GAT AAC GGA TAT ATT TTA AGT CAA AGA ACT GTA GCA 385
Gln Val Pro Asp Asp Asn Gly Tyr Ile Leu Ser Gln Arg Thr Val Ala
115 120 125
TTT GAG ACC AAA GAA GAT ATG ATG ACT AAT GAC TTC TTA GCT GTA TTA 433
Phe Glu Thr Lys Glu Asp Met Met Thr Asn Asp Phe Leu Ala Val Leu
135 140
TTA AAA TCT CCT TTA GTT TTC AAT AAT TTA TCA GCA TTA TCA AGC GGT 481
Leu Lys Ser Pro Leu Val Phe Asn Asn Leu Ser Ala Leu Ser Ser Gly
150 155
GGA ACT GCT AAA GGG GTT AGT CAA AAA TCA TTA AAA GGA CTA TCT ATA 529
Gly Thr Ala Lys Gly Val Ser Gln Lys Ser Leu Lys Gly Leu Ser Ile
165 170
ACT GTC CCA TTG GAT ATT GAC GAG CAA CAA AAA ATC GGT TCA TTC TTC 577
Thr Val Pro Leu Asp Ile Asp Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe
180 185
AAA CAT TTA GAT GAC ACT ATC GCT CTT CAT CAA CGT AAG TTG GAT TTA 625
Lys His Leu Asp Asp Thr Ile Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu
195 200 205
ÀCTC AAG GAA CAG AAA AAA GGC TAC TTG CAA AAA ATG TTC CCT AAA AAT 673
Leu Lys Glu Gln Lys Lys Gly Tyr Leu Gln Lys Met Phe Pro Lys Asn
210 215 220
GGT GCC AAA GTT CCT GAA TTG CGA TTT GCG GGG TTT GCT GAC GAT TGG 721
Gly Ala Lys Val Pro Glu Leu Arg Phe Ala Gly Phe Ala Asp Asp Trp
225 230 235
GAA GAG CGT AAG TTG GGT GAT ATA GCT CCC TTA CGT GGC GGT TAT GCA 769
Glu Glu Arg Lys Leu Gly Asp Ile Ala Pro Leu Arg Gly Gly Tyr Ala
240 245 250
TTC AAA AGC TCT AAA TTC AGG AAA ACT GGT GTG CCA ATT GTT AGA ATT 817
Phe Lys Ser Ser Lys Phe Arg Lys Thr Gly Val Pro Ile Val Arg Ile
255 260 265
TCA AAT ATT CTT TCC AGC GGG GAG GTA GGT GGA GAT TTT GCA TAT TAT 865
Ser Asn Ile Leu Ser Ser Gly Glu Val Gly Gly Asp Phe Ala Tyr Tyr
270 275 280 285
53 2767831
GAT GAA CAG GAT AAG GAT GAC AAA TAT ATT CTT CCA GAT AAA TCA GCA 913
Asp Glu Gln Asp Lys Asp Asp Lys Tyr Ile Leu Pro Asp Lys Ser Ala
290 295 300
GTC CTA GCC ATG TCA GGT GCA ACA ACA GGT AAG GTA TCT ATA CTA TCT 961
Val Leu Ala Met Ser Gly Ala Thr Thr Gly Lys Val Ser Ile Leu Ser
305 310 315
CAA ACT GAT TAT GAC AAG GTC TAT CAA AAC CAG CGA GTT GGT TAT TTT 1009
Gln Thr Asp Tyr Asp Lys Val Tyr Gln Asn Gln Arg Val Gly Tyr Phe
320 325 330
CAG TCT GTA GAC TAT ATT GAC TAC GGG TTT ATT TCC ACA ATC GTC CGT 1057
Gln Ser Val Asp Tyr Ile Asp Tyr Gly Phe Ile Ser Thr Ile Val Arg
335 340 345
TCA GAA TTA TTC ATG ATG CAA CTT GAG TCT GTT CTA GTT TCA GGC GCT 1105
Ser Glu Leu Phe Met Met Gln Leu Glu Ser Val Leu Val Ser Gly Ala
350 355 360 365
CAG CCA AAT GTA TCG TCA AAA GAA ATT GAT TCG TTT AAT TTT ATG ATT 1153
Gln Pro Asn Val Ser Ser Lys Glu Ile Asp Ser Phe Asn Phe Met Ile
370 375 380
CCC ATA TTA GTT CAG GAG CAA CAA AAA ATC GGT TCA TTC TTC AAA CAG 1201
Pro Ile Leu Val Gln Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln
385 390 395
TTA GAT GAC ACT ATC GCT CTT CAT CAA CGT AAG CTA GAT TTG TTG AAA 1249
Leu Asp Asp Thr Ile Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys
400 405 410
GAA CAG AAA AAA GGC TTT TTA CAA AAG ATG TTT GTT TAG GGTCTATAAT 1298
Glu Gln Lys Lys Gly Phe Leu Gln Lys Met Phe Val *
415 420 425
TA 1300
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 14:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 426 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 14:
Met Ala Lys Ile Asp Asp Ser Val Lys Lys Arg Val Pro Glu Leu Arg
1 5 10 15
Phe Pro Gly Phe Thr Asn Asp Trp Glu Glu Arg Lys Phe Phe Glu Ser
25 30
Ile Ala Ser Thr Ile Asp Phe Arg Gly Arg Thr Pro Lys Lys Leu Gly
40 45
Met Asp Trp Ser Asp Ser Gly Tyr Leu Ala Leu Ser Ala Leu Asn Val
55 60
Lys Asn Gly Tyr Ile Asp Pro Leu Ala Asp Ala His Tyr Gly Asp Glu
70 75 80
Lys Leu Tyr Arg Lys Trp Met Ser Gly Arg Glu Leu Lys Lys Gly Gln
90 95
Val Leu Phe Thr Thr Glu Ala Pro Met Gly Asn Val Ala Gln Val Pro
105 110
Asp Asp Asn Gly Tyr Ile Leu Ser Gln Arg Thr Val Ala Phe Glu Thr
120 125
Lys Glu Asp Met Met Thr Asn Asp Phe Leu Ala Val Leu Leu Lys Ser
135 140
Pro Leu Val Phe Asn Asn Leu Ser Ala Leu Ser Ser Gly Gly Thr Ala
150 155 160
Lys Gly Val Ser Gln Lys Ser Leu Lys Gly Leu Ser Ile Thr Val Pro
170 175
Leu Asp Ile Asp Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe Lys His Leu
185 190
Asp Asp Thr Ile Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu
200 205
Gln Lys Lys Gly Tyr Leu Gln Lys Met Phe Pro Lys Asn Gly Ala Lys
210 215 220
Val Pro Glu Leu Arg Phe Ala Gly Phe Ala Asp Asp Trp Glu Glu Arg
225 230 235 240
Lys Leu Gly Asp Ile Ala Pro Leu Arg Gly Gly Tyr Ala Phe Lys Ser
245 250 255
Ser Lys Phe Arg Lys Thr Gly Val Pro Ile Val Arg Ile Ser Asn Ile
260 265 270
Leu Ser Ser Gly Glu Val Gly Gly Asp Phe Ala Tyr Tyr Asp Glu Gln
275 280 285
Asp Lys Asp Asp Lys Tyr Ile Leu Pro Asp Lys Ser Ala Val Leu Ala
290 295 300
Met Ser Gly Ala Thr Thr Gly Lys Val Ser Ile Leu Ser Gln Thr Asp
305 310 315 320
Tyr Asp Lys Val Tyr Gln Asn Gln Arg Val Gly Tyr Phe Gln Ser Val
325 330 335
Asp Tyr Ile Asp Tyr Gly Phe Ile Ser Thr Ile Val Arg Ser Glu Leu
340 345 350
Phe Met Met Gln Leu Glu Ser Val Leu Val Ser Gly Ala Gln Pro Asn
355 360 365
Val Ser Ser Lys Glu Ile Asp Ser Phe Asn Phe Met Ile Pro Ile Leu
370 375 380
Val Gln Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu Asp Asp
385 390 395 400
Thr Ile Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys
405 410 415
Lys Gly Phe Leu Gln Lys Met Phe Val *
420 425
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 15:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 1250 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (ix) CARACTERISTIQUE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT:46..1233
(D) AUTRES INFORMATIONS:/product= "HsdS"
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 15:
AAAAAGGATA GAAGAACAAG AAAAACCAAG AAAGTGGTGG GGACT ATG GCG AAA 54
Met Ala Lys
ATA GAT GAT TCA GTT AAA AAG AAA GTT CCT GAA TTG CGA TTT AAA GGA 102
Ile Asp Asp Ser Val Lys Lys Lys Val Pro Glu Leu Arg Phe Lys Gly
10 15
TTT ACG AAT GAT TGG GAA GAG CGT AAG TTA GGA GAA TTA TCT AAT ATT 150
Phe Thr Asn Asp Trp Glu Glu Arg Lys Leu Gly Glu Leu Ser Asn Ile
25 30 35
GTT GGT GGT GGA ACA CCA AGT ACA TCG AAC CCT GAA TAC TGG GAC GGT 198
Val Gly Gly Gly Thr Pro Ser Thr Ser Asn Pro Glu Tyr Trp Asp Gly
45 50
GAT ATT GAT TGG TAT GCA CCA GCT GAA ATT GGA GAA CAA AGT TAT GTT 246
Asp Ile Asp Trp Tyr Ala Pro Ala Glu Ile Gly Glu Gln Ser Tyr Val
60 65
AGC AAA AGT AAA AAG ACT ATT ACT GAA CTA GGT CTA AAG AAG AGT TCA 294
Ser Lys Ser Lys Lys Thr Ile Thr Glu Leu Gly Leu Lys Lys Ser Ser
75 80
GCT CGA ATT TTA CCA GTA GGA ACC GTC TTA TTT ACT TCT CGT GCT GGT 342
Ala Arg Ile Leu Pro Val Gly Thr Val Leu Phe Thr Ser Arg Ala Gly
90 95
ATC GGA AAC ACC GCT ATA TTA GCC AAA GAA GCT ACA ACT AAT CAA GGG 390
Ile Gly Asn Thr Ala Ile Leu Ala Lys Glu Ala Thr Thr Asn Gln Gly
105 110 115
TTT CAA TCA ATT GTT CCT GAT CAA AAT AAA CTT GAT AGT TAT TTT ATT 438
Phe Gln Ser Ile Val Pro Asp Gln Asn Lys Leu Asp Ser Tyr Phe Ile
125 130
TTT TCA AGA ACT AAT GAG CTC AAG CGA TAT GGG GAA GTC ACT GGT GCA 486
Phe Ser Arg Thr Asn Glu Leu Lys Arg Tyr Gly Glu Val Thr Gly Ala
140 145
GGA TCT ACT TTT GTT GAG GTT TCA GGT AAG CAA ATG TCG AAA ATG TCG 534
Gly Ser Thr Phe Val Glu Val Ser Gly Lys Gln Met Ser Lys Met Ser
155 160
ATT ATG GTA CCT GAA CTT TCA GAA CAA CAA AAA ATT GGT AAC TTC TTT 582
Ile Met Val Pro Glu Leu Ser Glu Gln Gln Lys Ile Gly Asn Phe Phe
170 175
AAA GAG TTA GAC AAC ACT ATC GCT CTT CAT CAG CGT AAG TTA GAT TTG 630
Lys Glu Leu Asp Asn Thr Ile Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Asp Leu
185 190 195
TTG AAA GAA CAG AAA AAA GGC TAC TTG CAA AAA ATG TTC CCT AAA AAT 678
Leu Lys Glu Gln Lys Lys Gly Tyr Leu Gln Lys Met Phe Pro Lys Asn
205 210
GGT GCC AAA GTT CCT GAA TTG CGA TTT GCG GGG TTT GCT GAC GAT TGG 726
Gly Ala Lys Val Pro Glu Leu Arg Phe Ala Gly Phe Ala Asp Asp Trp
215 220 225
GAA GAG CGT AAG TTA GGA GAT ATT ACT AAA ATA AGC ACC GGA AAA TTA 774
Glu Glu Arg Lys Leu Gly Asp Ile Thr Lys Ile Ser Thr Gly Lys Leu
230 235 240
GAT GCA AAT GCA ATG GTT GAA AAT GGC AAG TAT GAT TTT TAT ACT TCT 822
Asp Ala Asn Ala Met Val Glu Asn Gly Lys Tyr Asp Phe Tyr Thr Ser
245 250 255
GGA ATT AAA AAA TAT AGG ATC GAT GTA GCA GCG TTT GAA GGA CCG TCC 870
Gly Ile Lys Lys Tyr Arg Ile Asp Val Ala Ala Phe Glu Gly Pro Ser
260 265 270 275
ATT ACA ATT GCA GGT AAT GGA GCA ACA GTT GGA TAC ATG CAT TTA GCG 918
Ile Thr Ile Ala Gly Asn Gly Ala Thr Val Gly Tyr Met His Leu Ala
280 285 290
GAT AAT AAG TTC AAT GCC TAT CAA CGA ACT TAT GTG CTC CAA GAG TTT 966
Asp Asn Lys Phe Asn Ala Tyr Gln Arg Thr Tyr Val Leu Gln Glu Phe
295 300 305
CTA GTA GAT AGA AGT TTT ATA TTT TCA GAA ATT GGA AAT AAG CTG CCT 1014
Leu Val Asp Arg Ser Phe Ile Phe Ser Glu Ile Gly Asn Lys Leu Pro
*310 315 320
AAA AAA ATA AAA CAG GAA GCT CGT ACA GGA AAT ATT CCG TAC ATT GTT 1062
Lys Lys Ile Lys Gln Glu Ala Arg Thr Gly Asn Ile Pro Tyr Ile Val
325 330 335
ATG GAC ATG TTG ACT GAA CTG AAG CTA TCG ATT CCT CAG AAT AAT TCA 1110
Met Asp Met Leu Thr Glu Leu Lys Leu Ser Ile Pro Gln Asn Asn Ser
340 345 350 355
GAG CAA CAA AAA ATA GGT TCA TTC TTT AAA CAG CTA GAT GAC ACT ATC 1158
Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu Asp Asp Thr Ile
360 365 370
GCT CTT CAT CAA CGT AAG TTA GCA TTT GTT GAA AGA ACA GAA AAC ACA 1206
Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Ala Phe Val Glu Arg Thr Glu Asn Thr
375 380 385
GGC TTT TTA CAA AAG ATG TTT GTT TAG GGTCTATAAT TAGATAA 1250
Gly Phe Leu Gln Lys Met Phe Val *
390 395
(2) INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 16:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 396 acides aminés (B) TYPE: acide aminé (D) CONFIGURATION: linéaire (ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 16:
Met Ala Lys Ile Asp Asp Ser Val Lys Lys Lys Val Pro Glu Leu Arg
1 5 10 15
Phe Lys Gly Phe Thr Asn Asp Trp Glu Glu Arg Lys Leu Gly Glu Leu
25 30
Ser Asn Ile Val Gly Gly Gly Thr Pro Ser Thr Ser Asn Pro Glu Tyr
40 45
Trp Asp Gly Asp Ile Asp Trp Tyr Ala Pro Ala Glu Ile Gly Glu Gln
55 60
Ser Tyr Val Ser Lys Ser Lys Lys Thr Ile Thr Glu Leu Gly Leu Lys
70 75 80
Lys Ser Ser Ala Arg Ile Leu Pro Val Gly Thr Val Leu Phe Thr Ser
90 95
Arg Ala Gly Ile Gly Asn Thr Ala Ile Leu Ala Lys Glu Ala Thr Thr
105 110
Asn Gln Gly Phe Gln Ser Ile Val Pro Asp Gln Asn Lys Leu Asp Ser
120 125
Tyr Phe Ile Phe Ser Arg Thr Asn Glu Leu Lys Arg Tyr Gly Glu Val
135 140
Thr Gly Ala Gly Ser Thr Phe Val Glu Val Ser Gly Lys Gln Met Ser
150 155 160
Lys Met Ser Ile Met Val Pro Glu Leu Ser Glu Gln Gln Lys Ile Gly
170 175
Asn Phe Phe Lys Glu Leu Asp Asn Thr Ile Ala Leu His Gln Arg Lys
185 190
Leu Asp Leu Leu Lys Glu Gln Lys Lys Gly Tyr Leu Gln Lys Met Phe
200 205
Pro Lys Asn Gly Ala Lys Val Pro Glu Leu Arg Phe Ala Gly Phe Ala
210 215 220
Asp Asp Trp Glu Glu Arg Lys Leu Gly Asp Ile Thr Lys Ile Ser Thr
225 230 235 240
Gly Lys Leu Asp Ala Asn Ala Met Val Glu Asn Gly Lys Tyr Asp Phe
245 250 255
Tyr Thr Ser Gly Ile Lys Lys Tyr Arg Ile Asp Val Ala Ala Phe Glu
260 265 270
Gly Pro Ser Ile Thr Ile Ala Gly Asn Gly Ala Thr Val Gly Tyr Met
275 280 285
His Leu Ala Asp Asn Lys Phe Asn Ala Tyr Gln Arg Thr Tyr Val Leu
290 295 300
Gln Glu Phe Leu Val Asp Arg Ser Phe Ile Phe Ser Glu Ile Gly Asn
305 310 315 320
Lys Leu Pro Lys Lys Ile Lys Gln Glu Ala Arg Thr Gly Asn Ile Pro
325 330 335
Tyr Ile Val Met Asp Met Leu Thr Glu Leu Lys Leu Ser Ile Pro Gln
340 345 350
Asn Asn Ser Glu Gln Gln Lys Ile Gly Ser Phe Phe Lys Gln Leu Asp
355 360 365
Asp Thr Ile Ala Leu His Gln Arg Lys Leu Ala Phe Val Glu Arg Thr
370 375 380
Glu Asn Thr Gly Phe Leu Gln Lys Met Phe Val *
385 390 395

Claims (7)

REVENDICATIONS
1) Polypeptide, constituant l'une des sous-
unités HsdR, HsdM, ou HsdS d'un mécanisme de résistance aux bactériophages R/M de type Ic, caractérisé en ce que ledit mécanisme est actif contre les phages des bactéries lactiques. 2) Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par: - les polypeptides constituant une sous-unité HsdR comprenant la séquence (I) suivante:
KRLARK
- les polypeptides constituant une sous-unité HsdM comprenant au moins l'une des séquences suivantes: - la séquence (II):
GLX1FYKYLS
dans laquelle X1 représente I ou L, - la séquence (III):
ENDX2NLNIPRYVDTFEEEE
dans laquelle X2 représente Y ou F - les polypeptides constituant une sous-unité HsdS comprenant: * un domaine N-terminal d'environ 150 à 180 acides aminés, comprenant la séquence (IV) suivante:
PX3LRFX4GFTX5DDWEERKX6
dans laquelle X3 représente E ou Q, X4 représente E, P. D, ou K, X5 représente N ou D, X6 représente L ou F; * un domaine central, d'environ 50 à 80 acides aminés, comprenant la séquence (V) suivante: EQX7KGXsFFKX910T/l11LQRKLDLLKEQKKX12QK13KX14PELRFAX15F16RKLG dans laquelle X7 représente R ou Q, X8 représente S, N, ou L, X9 représente E, H, ou Q, Xo10 représente A, D, ou N, Xll représente A, ou V, X12 représente L ou F, X13 représente A ou S, X14 représente I ou V, X15 représente E ou G, X16 représente D ou E; * un domaine C-terminal, d'environ 160 à 200 acides aminés, comprenant la séquence (VI) suivante:
EQX15X16IGSFFKQLDX17TIX18LHQRKLX19
dans laquelle X15 représente K ou Q, X16 représente K ou Q, X17 représente N ou D, X18 représente T, A, ou V, X19 représente A, ou D; et/ou la séquence (VII)suivante:
GFLQKMFX20
dans laquelle X20 représente V ou H. 3) Polypeptide selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par: - un polypeptide HsdR répondant à l'une des séquences respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO:2 et
SEQ ID NO:4;
- un polypeptide HsdM répondant à l'une des séquences respectivement représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO:6, et
SEQ ID NO:8;
- un polypeptide HsdS constitué par: * un domaine N-terminal d'environ 150 à 180 acides aminés dont la séquence est celle du domaine N- terminal de l'une quelconque des séquences représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros
SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14,
SEQ ID NO:16;
* un domaine central, d'environ 50 à 80 acides aminés, dont la séquence est celle du domaine central de l'une quelconque des séquences représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros SEQ ID NO:10,
SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16;
* un domaine C-terminal, d'environ 160 à 200 acides aminés, dont la séquence est celle du domaine C-terminal de l'une quelconque des séquences représentées dans la liste de séquences en annexe sous les numéros
SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14,
SEQ ID NO:16.
4) Séquence d'acide nucléique caractérisée en ce qu'elle code pour un polypeptide selon une quelconque
des revendications 1 à 3.
) Séquence d'acide nucléique selon la revendication 4 caractérisée en ce qu'elle est choisie dans le groupe constitué par: - les séquences hsdR SEQ ID NO:l, et SEQ ID NO:3; - les séquences hsdM SEQ ID NO:5, et SEQ ID NO:7; - les séquences hsdS SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11,
SEQ ID NO:13, et SEQ ID NO:15.
6) Fragment d'acide nucléique d'au moins 18 pb homologue ou complémentaire de tout ou partie d'une séquence d'acide nucléique selon une quelconque des
revendications 4 ou 5.
7) Fragment d'acide nucléique selon la revendication 6, choisi dans le groupe constitué par les oligonucléotides homologues ou complémentaires d'une séquence codant pour au moins 6 acides aminés consécutifs de l'un des peptides suivants;
TGSGKT
KRLARK
LLTGFDS
FYKYLS
LARMNL
LPHGVLFRGAAE
NLNIPRYVDTFEEEE
DDWEERK
LHQRKLDLLKEQKKGY
QKMFPKNG
PELRFA
FADDWE
IGSFFKQLD
GFLQKMF.
8) Utilisation d'au moins un fragment d'acide
nucléique selon une quelconque des revendications 6 ou 7
pour sélectionner des bactéries lactiques contenant une
séquence d'acide nucléique codant pour au moins une sous-
unité d'un mécanisme R/M de type Ic.
9) Utilisation d'au moins un fragment d'acide
nucléique selon une quelconque des revendications 6 ou 7
pour isoler et/ou cloner un acide nucléique comprenant une
séquence selon une quelconque des revendications 4 ou 5.
) Utilisation d'au moins une séquence
d'acide nucléique selon une quelconque des revendications
4 ou 5 pour permettre l'expression dans une bactérie lactique d'au moins un mécanisme de résistance aux bactériophages. 11) Bactérie transformée par au moins une séquence d'acide nucléique selon une quelconque des
revendications 4 ou 5.
12) Bactérie transformée selon la Reven-
dication 11, caractérisée en ce qu'elle est en outre capable d'exprimer un mécanisme de résistance aux bactériophages choisi parmi les mécanismes Abi, et les
mécanismes R/M de type II.
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