FR2567540A1 - Procede de preparation d'un interferon leucocytaire humain alpha-2 - Google Patents
Procede de preparation d'un interferon leucocytaire humain alpha-2 Download PDFInfo
- Publication number
- FR2567540A1 FR2567540A1 FR8510816A FR8510816A FR2567540A1 FR 2567540 A1 FR2567540 A1 FR 2567540A1 FR 8510816 A FR8510816 A FR 8510816A FR 8510816 A FR8510816 A FR 8510816A FR 2567540 A1 FR2567540 A1 FR 2567540A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- interferon
- plasmid
- alpha
- human
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims abstract description 29
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 title claims description 15
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 title claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 27
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 22
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 13
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 claims abstract description 13
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 abstract description 29
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 abstract description 29
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 abstract description 25
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 10
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 7
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 6
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 abstract description 5
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 abstract description 5
- 108010078049 Interferon alpha-2 Proteins 0.000 abstract description 4
- 102100039350 Interferon alpha-7 Human genes 0.000 abstract description 3
- 101100466648 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) pvg3 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 11
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 241000108056 Monas Species 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 2
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272875 Ardeidae Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 101100148606 Caenorhabditis elegans pst-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101710127454 Interferon alpha-3 Proteins 0.000 description 1
- 241000863393 Methylophilus methylotrophus Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 244000292604 Salvia columbariae Species 0.000 description 1
- 235000012377 Salvia columbariae var. columbariae Nutrition 0.000 description 1
- 235000001498 Salvia hispanica Nutrition 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000014167 chia Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N iodine-125 Chemical compound [125I] ZCYVEMRRCGMTRW-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/78—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/811—Interferon
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/14—Lymphokine; related peptides
- Y10S930/142—Interferon
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
L'INVENTION CONCERNE L'INDUSTRIE MICROBIOLOGIQUE. UN PROCEDE D'OBTENTION D'UN INTERFERON LEUCOCYTAIRE HUMAIN ALPHA-2 COMPREND UNE CULTURE IMMERGEE D'UNE SOUCHE PRODUCTRICE CONTENANT UN PLASMIDE AVEC UN GENE INCOPORE D'INTERFERON LEUCOCYTAIRE HUMAIN ALPHA-2, SUR UN MILIEU NUTRITIF CONTENANT DES SOURCES ASSIMILABLES DE CARBONE ET D'AZOTE, DES SELS MINERAUX ET DES AGENTS DE CROISSANCE, MILIEU SOUMIS A L'AERATION EN PRESENCE D'UN ANTIBIOTIQUE, AVEC ISOLEMENT ET PURIFICATION SUBSEQUENTS DU PRODUIT VISE. DANS LE PROCEDE, CONFORME A L'INVENTION, ON UTILISE COMME SOUCHE PRODUCTRICE LA SOUCHE PSEUDOMONAS SPECIES VG-84 PORTEUSE D'UN PLASMIDE PVG3, DEPOSEE DANS LA COLLECTION DE CULTURES DE MICRO-ORGANISMES DE L'INSTITUT PANSOVIETIQUE DE RECHERCHE SCIENTIFIQUE DES ANTIBIOTIQUES SOUS LE NUMERO 1742, ET LA CULTURE EST REALISEE EN PRESENCE DE STREPTOMYCINE OU DE TETRACYCLINE OU D'UN MELANGE DE CES ANTIBIOTIQUES. L'INTERFERON LEUCOCYTAIRE HUMAIN ALPHA-2 PRESENTE UNE ACTIVITE ANTIVIRALE ET TROUVE DES APPLICATIONS EN MEDECINE.
Description
1 c 25675540
La présente invention concerne l'industrie microbio-
logique, et plus précisément, l'obtention d'un interféron
leucocytaire humain alpha-2, doué d'une activité anti-
-virale et trouvant des applications en médecine pour la prévention et le traitement d'un certain nombre de mala-
dies courantes d'étiologie virale.
Les interférons sont des protéines synthétisées par
certaines cellules de l'organisme humain en cas d'infec-
tion virale. Suivant le type de cellule productrice et les particularités structurales et fonctionnelles des interférons, ces protéines sont divisées en trois groupes
principaux: alpha ou leucocytaire (produit par les leu-
cocytes) bêta ou fibroblastique (produit par les fibro-
blastes) et gamma ou immunitaire (produit par les lympho-
cytes T).
Outre l'activité anti-virale, les interférons présen-
tent également une activité anti-proliférative et influent sur les réactions immunitaires. C'est ce qui permet de considérer les produits médicamenteux à base d'interféron
comme pouvant être efficaces contre certaines Décforma-
tions malignes. On a obtenu ces derniers temps des inter-
férons humains à haut degré de pureté, qui sont une fa-
mille de 13 à 15 protéines apparentées, dont chacune est codée par son propre gène dans le chromosome 9. Toutefois, l'extraction de l'interféron leucocytaire dans le sang des donneurs ne peut assurer sa fabrication en quantités suffisantes pour son utilisation massive en clinique, car le taux d'interféron ne dépasse pas, en règle générale, unités par litre de sang, alors que sa dose unique efficace qu'on injecte par voie intraveineuse doit constituer d'après les données cliniques disponibles,
au moins 106 unités de l'activité.
On connait déjà différents procédés de préparation
d'interférons leucocytaires humains, reposant sur l'uti-
lisation de diverses souches productrices, dans lesquelles on incorpore, a l'aide de molécules vecteurs, des gènes individuels de l'interfér n humain. On utilise notamment
- 2 - 2567540
comme souches productrices celles des bactéries Escheri-
chia coli, Bacillus subtilis, Methylophilus methylotrophus, etc. (brevet européen EP n O 062 971 A2, publié en 1982,
Cl. C 12N 15/00.
Les micro-organismes contenant un plasmide avec un gène incorporé d'interféron leucocytaire humain produisent de l'interféron en les faisant incuber dans les conditions d'une culture immergée en aérobie, en contact des milieux
nutritifs aqueux contenant des sources assimilables de car-
bone et d'azote, des sels minéraux et des agents de crois-
sance. On connaît un procédé d'obtention d'un interféron leucocytaire humain alpha-2 (brevet de la Grande-Bretagne
n 20792191A, publié en 1982, C 12N 15/00 souche-294, ob-
tenue par incorporation d'un plasmide recombinant pLe IFA trp 2,5, dans lequel le gène d'interféron alpha-3 est placé
sous le contrôle des régions régulatrices de l'opéron try-
ptophanique de E.coli.
On fait incuber la souche précitée dans les condi-
tions d'une culture immergée, sur des milieux nutritifs aqueux contenant des sources de carbone et d'azote, des sels minéraux et des agents de croissance, en présence d'un antibiotique.
Pour ladite souche productrice, le rendement en inter-
féron atteint 2,5x108 unités de l'activité par litre de
liqueur de culture.
L'utilisation de E. coli comme souche productrice
industrielle présente un certain nombre d'inconvénients.
E. coli est un micro-organisme virtuellement pathogène et différentes souches de cette bactérie sont présentes en permanence dans la flore intestinale de l'homme. D'o les
exigences particulièrement sévères imposées à la purifica-
tion des produits obtenus à base de E.coli et la nécessité d'une séparation complète des protéines et endotoxines associées, ce qui rend beaucoup plus cher le procédé de
fabrication de l'interféron et réduit le rendement en pro-
duit pur. En outre, toutes les souches de E. coli connues
dans la pratique des laboratoires sont sujettes A la pha-
golyse; le nombre de phages spécifiques identifiée pour
E.coli se chiffre à plusieurs centaines.
Le procédé précité est caractérisé par une productivité relativement peu élevée de la culture, ce qui fait que l'isolement de l'interféron dans la biomasse cellulaire et sa purification ultérieure jusqu'à un état homogène
sont des opérations laborieuses.
On s'est proposé d'accroître le rendement en interfé-
ton leucocytaire humain alpha-2 et de simplifier son iso-
lement par la mise en oeuvre d'une nouvelle souche pro-
ductrice.
La solution consiste en ce que dans le procédé d'ob-
tention de l'interféron leucocytaire humain.alpha-2 par culture immergée d'une souche productrice contenant un plasmide porteur de gène d'interféron leucocytaire humain alpha-2 sur un milieu nutritif aqueux contenant des
sources assimilables de carbone et d'azotes des sels mi-
néraux et des agents de croissance, milieu soumis à une aération en présence d'un antibiotique, avec isolement et purification subséquents du produit visé on utilise, conformément, à l'invention, comme souche productrice la
souche Pseudomonas species VG-84 porteuse d'un plas-
mide pVG-3 souche déposée dans la collection de cultures-
de micro-organismes de l'Institut pansoviétique de re-
cherche scientifique des-antibiotiques sous le numéro 1742, et que la culture de la souche productrice est cons duite en présence de streptomycine ou de tétracycline ou d'un mélange de ces antibiotiques. La tétracycline est utilisée de préférence à raison de 30 à 50 mg par litre, et la streptomycine, de 50 à 150 mg par litho Le procédé revendiqtué pelmet, grce à la mise en
oeuvre de la souche hautement productive Pseudomonas spe-
cies VG-84, d'accroltre le rendement ean poduit visé et
de simplifier le procédé d'isolement de celui-ci. Le pro-
cédé en question met en oeuvre une nouveslle souche Pseudo-
monas species VG-84, dans laquelle le gène d'intexféon leucocytaire humain alpha-2 est cloné dans la composition d'un plasmide polycopié pVG 3, et placé sous le contrôle
- 4 - 2567540
des régions régulatrices du gène D du bactériophage
X1 74.
Le plasmide pVG 3 est un hybride moléculaire d'un plasmide vecteur polycopié pAYC34 ayant un large. spectre d'hôtes et d'un plasmide pIFN-d2P2 contenant un répli-
con pBR 322 et un gène d'interféron alpha-2 et détermi-
nant la résistance des cellules à la tétracycline et à l'am-
picilline. Dans le plasmide pIFN-42-P2, le gène d'inter-
féron alpha-2 est placé sous le contrôle des régions ré-
gulatrices du gène D du bactériophage qX174. Le plasmide
vecteur pAYC34, d'une taille de 9 400 paires de nucléo-
tides, appartient au groupe d'incompatibilité Inc p-4/Q et
détermine la résistance des cellules à la streptomycine.
L'IADN desplasmidespAYC34 et pIFN-d2-P2 a été traitê-par de la restrictase Pst 1 et on a transformé-les cellules
compétentes de la souche E.coli C600 par un mélange allié.
On a sélectionné les transformants sur un milieu nutritif
contenant tous les constituants nécessaires et des anti-
biotiques: ampicilline (504g/ml), streptomycine (100kg/ml) et tétracycline (25 Ag/ml). Dans les clones-transformants on a mis en évidence l'ADN de plasmide nommé pVG 3, qui, par sa taille et sa carte de restriction, correspond à
un hybride des plasmides pAYC34 et PIFN-c42-P2. Le plas-
mide pVG3 détermine la résistance des cellules à la strép-
tomycine, comme le fait le plasmide pAYC34, et à la té-
tracycline et à l'ampicilline, comme le fait le plasmide pIFN-(2-P2. La taille du plasmide pVG3 - 14 800 paires
de nucléotides - est égale à la somme de tailles des plas-
mides pIPN-o2-P2 (5 400 paires de nucléotides) et
pAYC34 (9 400 paires de nucléotides).
Dans une souche E.coli C600 contenant un plasmide hybride pVG3 on a incorporé un plasmide de conjugaison R 751 ayant un large spectre d'hôtes. Dans une série de croisements de conjugaison, le plasmide pVG3 a été incorporé dans des bactéries du genre Pseudomonas et
d'autres bactéries gram-négatives. Les bactéries trans-
conjugantes ont été prélevées sur un milieu sélectionné spécial contenant les antibiotiques précités et on a
vérifié leur aptitude à synthétiser l'interféron.
- 5 - Les cultures obtenues par le procédé décrit ont été incubées pendant 6 à 10 h dans les conditions d'aérobiose
à une température de 300C, sur L-bouillon, jusqu'à l'ob-
tention d'un titre de 2 à 5x109 cellules/ml. Les bacté-
ries ont été prélevées par centrifugation, détruites à 1' ultra-son et on a dosé l'interféron contenu dans les
extraits cellulaires par la méthode radio-immunologique.
On a ainsi testé 18 souches de bactéries gram-négatives
des genres Escherichia, Salmonella, Pseudomonas, Methylo-
monas, Erwinia et Phizobium. La plupart des souches tes-
tees ont produit de l'interféron actif. La souche Pseudo-
monas sp. VG-84 s'est montrée la plus productive. Dans les- conditions sus-indiquées, cette souche a produit x109 à 1x1010 unités d'interféron par litre de liqueur
de culture.
La présence dans la souche p.roductive d'un plasmid.à lar-
ge spectre d'hôtes R751 détermine la synthèse des villosités
specifiques de plasmide qui constituent au collage des cellu-
les et à leur agrdgation rapide. La morphologie des cellules au cours de la fermentation et de la production d'interferon se modifie en donnant
des cellules filifonnes.
La souche Pseudomonas sp.VG-84 est déposée dans la collection de cultures de micro-organismes de l'Institut
Pansoviétique de recherche scientifique des antibioti-
ques sous le numéro 1742. Les caractéristiques culturales
et morphologiques de la souche Pseudomonas sp. VG-84 por-
teuse de plasmide pVG3 sont les suivantes:
Aspect visuel au microscope Bâtonnets mobiles gram-néga-
tifs longs de 3 à 5,/m
Morphologie sur divers mi-
lieux:
Gélose aux peptones Au bout de 24 heures de crois-
sance à une température de
'
à 30 C, forme des colonies aux bords sinueux de 3 a 4mm
de diamètre, à surface fu-
gueuse, d'une couleur vert clair. Bouillon aux peptones Au point de l'impact, 67540
croissance est modérée, essen-
tiellement sur la surface du
milieu.Sans aération, la crois-
sance est faible.
Milieu minimal M9 au glucose Au deuxième jour de la crois-
sance, forme des colonies
rondes de 2 à 3 mm de dia-
mètre, rugueuses, d'une cou-
leur grise.
Caractères physiologiques La croissance est observée et biochimiques aux températures comprises entre 25 et 35 C (l'optimum
se situe à 30 C), pH =7,0.
Le glucose et l'arabinose
servent de sources de car-
bone. Assimile parfaite-
ment l'azote. Nécessite une addition d'adénine. Résiste
A la streptcmycine et à la tétracyline.
Fbore un oignent fluorescent.
Le procédé revendiqué s'effectue de la manière sui-
vante. On fait incuber la souche Pseudomonas sp. VG-84 pendant 8 à 12 heures et à une température de 28 à 3000 C sur un milieu gélosé, après quoi on réencemence sur
un milieu nutritif aqueux et on cultive la semence pen-
dant 3 à 6 heures à une température de 280 C sous une agitation et une aération poussées. La fermentation est opérée dans un fermenteur sur un milieu nutritif aqueux quelconque contenant des sources de carbone et d'azote
assimilables, des sels minéraux et des agents de crois-
sance, notamment un milieu nutritif contenant du glucose,
un extrait ou un autolysat de levure, ou de la tryptone,.
ou de la peptone, ou des hydrolysats de la caséine ou
e levure, ou leur mélange. La fermentation est réali-
sée en présence de streptomycine ou de tétracycline ou
d'un mélange de ces antibiotiques. On utilise de préfé-
rence la tétracycline à raison de 30 à 50 mg/litre, et la streptomycine, de 50 à 150 mg/litre. La fermentation s'effectue pendant 6 à 10 heures, à une température de 28
à 32 C et à pH de 6,7 à 7,1,sous une aération poussée.
Lors de la fermentation, on mesure la densité optique -7 - A550 de la suspension bactérienne, dont la valeur atteint à 7 unités vers la fin de la fermentation. Pour leprocédé décrit, le rendement en interféron
reprisente d'après les données d'analyse radio-imrunolo-
gique ou de la détermination de l'activité anti-virale dans des cultures de fibroblastes humains, 5x109 à
1,5x10 unités par litre de liqueur de culture.
A l'issue de la fermentation, et la densité optique indiquée étant atteinte, les cellules bactériennes sont prélevées par centrifugation, remises en suspension dans une solution tampon convenable et détruites à l'ultra-son
ou par n'importe quelle autre méthode entraînant la des-
truction des cellules ou la perturbation de la continuité des membranes cellulaires, telle que la traitement par du
lysozyme, des billes de verre ou de métal, paz compres-
sion, etc. Les fragments de cellules sont séparés par
centrifugation et on isole dans le liquide surnageant, pré-
sentant un extrait de cellules, l'interféron qu'il con-
tient, par des méthodes connues de fractionnement et de purification des protéines. Le rendement en interféron homogène quant à ses caractéristiques physico-chimiques différentes va de 20 à 60%, le degré de purification étant compris entre 200 et 500 et l'activité spécifique du produit résultant de la purification étant de 4x108 unités de l'activité. L'opération de purification est
contrôlée en déterminant l'activité anti-virale de l'in-
terféron sur des cultures de fibroblastes humains infectés
du virus de la stomatite vésiculaire et par analyse radio-
-immunologique ou immuno-etzymatique. La pureté des préparations d'interféron est contrôlée par des méthodes immunologiques, électrophorétiques, de filtration sur gel et de sédimentation, ainsi qu'en identifiant les acides aminés qui le composent et en déterminant la séquence des acides aminés en bout N de la molécule. L'intetféron leucocytaire humain alpha-2 obtenu est homogène et présente tous les caractères structuraux et fonctionnels
propres à ce type d'interféron.
-8 -
L'avantage du procédé revendiqué par rapport au pro-
cédé connu consiste en ce que, grâce à la mise en oeuvre
d'une souche hautement productive, on obtient une activi-
té élevée au stade de fermentation, ce qui fait qu'une même quantité d'interféron peut être obtenue à partir d'un moindre volume de biomasse, d'o une réduction des frais pour l'isolement de la biomasse, de sa désintégration et de toutes les opérations subséquentes visant à obtenir un
produit homogène.
D'après les données d'une séquence automatique selon Edmann, l'interféron homogène isolé dans la biomasse de la souche productrice Pseudomonas sp. VG-84 présente une
séquence des acides aminés en bout N Cys-Asp-Leu-Pro-Glu-
-Thr-His-Sér-... et ne contient pas en bout N de résidu de méthionine, ce qui le fait, du point de vue structural, parfaitement identique à l'interféron alpha-2 produit par
les leucocytes de l'homme..
Pour mieux faire comprendre la présente invention, on
donne les exemples suivants d'exécution du procédé d'obten-
tion de l'interféron leucocytaire humain alpha-2.
Exemple 1
On fait croitre la souche Pseudomonas sp. VG-84 pen-
dant 12 heures à 280C sur une gélose inclinée de la com-
position suivante par litre: 10 g de tryptone, 5 g d'ex-
trait de levure, 80 mg d'adénine, 10 g de glucose, 150 mg de streptomycine, 50 mg de tétracycline, 15 g de gélose, le reste étant de l'eau distillée (jusqu'à un litre). La biomasse obtenue sur le milieu incliné sert de matériel de semence. On la transvase dans des flacons Erlenmeyer de 750 ml contenant 100 ml du milieu indiqué (sans gélose) et on cultive pendant 6 heures sur une secoueuse rotative
sous une agitation poussée (240 tr/mn) et à une tempéra-
ture de 2800 C. La densité optique de la culture d'ensemencement
est de 2 unités.
La culture s'effectue dans un fermenteur doté de sys-
tèmes de régulation de la-température, du pH, de la vitesse d'agitation et de l'aération, d'un capteur pour mesurer -9 - la pression partielle de l'oxygène dissous. A cet effet, on introduit la semence, à raison de 5%, dans le fermenteur
contenant un milieu nutritif aqueux de la composition sus-
-indiquée (sans gélose) et on fait incuber pendant 6 heures à une température de 28+0,5 C et à un pH de 6,7 à 6,9 sous
une aération et une agitation poussées.
Le régime d'aération et d'agitation est choisi de fa-
çon que la croissance de la culture ne soit pas limitée par la concentration d'oxygène dissous. A cette fin, la pression partielle de l'oxygène est maintenue à un niveau de 5 à 10% de la saturation. Pour la stabilisation du pH,
on utilise de l'eau ammoniacale.
La propagation de la biomasse est contrôlée enme-
surant toute une heure la densité optique de la liqueur de culture. On arrête la fermentation lorsque la densité
optique A550 atteint 5 unités.
A l'issue de la fermentation, la concentration d'in-
terféron leucocytaire humain alpha-2 constitue 1,5x101 unités de l'activité par litre de liqueur de culture. Pour déterminer la concentration de l'interféron obtenu, on
fait appel à une modification de phase solide dé l'ana-
lyse radio-immunologique avec utilisation d'anticorps po-
lyclonaux anti-interféron du lapin et d'anticorps mono-
clonaux de la souris, marqués à l'iode-125, et on déter-
mine aussi l'activité anti-virale de l'interféron d'après
l'effet protecteur qu'il exerce contre l'action cytopathi-
que du virus de la stomatite vésiculaire dans les cultures
de fibroblastes humains diploïdes. Comme produit de ré-
férence, on utilise de l'interféron normalisé MRC B69/19
(Grande-Bretagne).
Les cellules récoltées par centrifugation à l'issue
de la fermentation sont utilisées comme source d'inter-
féron. Les cellules sont mises en suspension dans une so-
lution tampon tris 0,1 M à un pH = 7,5, à raison de 1 g de cellules par 5 à 10 ml de solution tampon puis on brise les cellules dans un désintégrateur ultrasonique. Les fragments des cellules sont séparés par centrifugation à
- 10 -
000 g et on isole dans le liquide surnageant (extrait
cellulaire) l'interféron leucocytaire humain alpha-2.
On obtient par purification un interféron leucocy-
taire humain alpha-2 électrophorétiquement homogène, le degré de purification étant de 210 et le rendement, en
calculant en activité, de 41%. Le produit final a une ac-
tivité unitaire de 4,0x108 unités. Les résultats de l'a-
nalyse électrophorétique de l'interféron leucocytaire hu-
main alpha-2 sont présentés sur le dessin, o a A est l'interféron avant la purification, B, l'interféron après
la purification, la masse moléculaire des protéines stan-
dards en kD figurant à droite (ltélectrophorèse est effec-
tuée dans un gel de polyacrylamide à 12,5% en présence de dodécylsulfate de sodium). En ce qui concerne l'activité
spécifique, la masse moléculaire (18,4 kD), la composi-
tion en acides aminés et d'autres indices, l'interféron leucocytaire humain alpha-2 ainsi isolé ne diffère pas
de l'interféron leucocytaire humain alpha-2 extrait d'au-
tres souches bactériennes productrices.
Exemple 2 Le procédé est réalisé comme dans l'exemple 1. La culture est effectuée en présence de streptomycine (50 mg/litre) et de tétracycline (30 mg/litre). Au bout de 6 heures de fermentation, la densité optique de la suspension bactérienne est égale à 4,2 unités et la teneur en interféron leucocytaire humain alpha-2 represente
7,5x109 unités par litre de liqueur de culture.
Exemple 3
Le procédé est réalisé comme dans l'exemple 1. La culture est effectuée en présence de tétracycline
(-50 mg/litre).
Au bout de 5,5, heures de fermentation, la densité
optique de la suspension bactérienne est égale à 5,5, uni-
tés et la teneur en interféron d'un litre de liqueur de
culture représente 9,5x109 unités.
- I1 -
Claims (2)
1 Procédé d'obtention d'un interféron leucocytaire
humain alpha-2 par culture immergée d'une souche pro-
ductrice contenant un plasmide avec un gène incorporé d'in-
terféron leucocytaire humain alpha-2, sur un milieu nu- tritif contenant des sources assimilables de carbone et d'azote, des sels minéraux et des agents de-croissance,
milieu soumis à l'aération et en présence d'un atiibio-
tique, avec isolement et purification subséquents du produit visé, procédé c a r a c t é r i s é en ce qu'à
titre de souche productrice on utilise la souche Pseudo-
moonas species VG-84 porteuse d'un plasmide pVG 3, déposée
dans la collection de cultures de micro-organismes de l'In-
stitut pansovLétique de recherche scientifique des anti-
biotiques sous le numéro 1742, et que la culture est réa-
lisée en présence de streptomycine ou de tétracyclúne
ou de leur mélange.
2 Procédé selon la revendication 10, c a r a c-
t é r i s é en ce qu'on utilise de la tétracycline à raison de 30 à 50 mg par litre et de la streptomycine
à raison de 50 à 150 mg par litre.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU843757952A SU1364343A1 (ru) | 1984-07-13 | 1984-07-13 | Способ получени человеческого лейкоцитарного интерферона альфа-2 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2567540A1 true FR2567540A1 (fr) | 1986-01-17 |
FR2567540B1 FR2567540B1 (fr) | 1988-10-14 |
Family
ID=21125646
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR8510816A Expired FR2567540B1 (fr) | 1984-07-13 | 1985-07-15 | Procede de preparation d'un interferon leucocytaire humain alpha-2 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4680260A (fr) |
JP (1) | JPS6156093A (fr) |
BG (1) | BG46981A1 (fr) |
CA (1) | CA1264294A (fr) |
CH (1) | CH666051A5 (fr) |
DE (1) | DE3524991A1 (fr) |
FR (1) | FR2567540B1 (fr) |
GB (1) | GB2163750B (fr) |
HU (1) | HU194316B (fr) |
IN (1) | IN162268B (fr) |
IT (1) | IT1201429B (fr) |
SU (1) | SU1364343A1 (fr) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2434016A3 (fr) * | 2004-01-16 | 2012-08-15 | Pfenex, Inc. | Expression de proteines mammifères dans Pseudomonas fluorescens |
US10041102B2 (en) | 2002-10-08 | 2018-08-07 | Pfenex Inc. | Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens |
US10689640B2 (en) | 2007-04-27 | 2020-06-23 | Pfenex Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5196323A (en) * | 1985-04-27 | 1993-03-23 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Process for preparing and purifying alpha-interferon |
SU1703690A1 (ru) * | 1986-04-30 | 1992-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
CN1553954A (zh) * | 2001-03-30 | 2004-12-08 | ������������ʳƷ�ۺ��о��� | 通过赋予药物抗性突变提高次级代谢物产率的方法 |
AU2005269527B2 (en) | 2004-07-26 | 2011-12-01 | Pfenex Inc. | Process for improved protein expression by strain engineering |
CA2685326A1 (fr) | 2007-04-27 | 2008-11-06 | Dow Global Technologies Inc. | Procede pour rapidement cribler des hotes microbiens et identifier certaines souches ayant un rendement et/ou une qualite d'expression des proteines heterologues ameliores |
UA100692C2 (ru) | 2007-05-02 | 2013-01-25 | Мериал Лимитед | Днк-плазмиды, имеющие повышенную экспрессию и стабильность |
US8685387B2 (en) | 2007-11-28 | 2014-04-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian E adenoviruses SAdV-39, -25.2, -26, -30, -37, and -38 |
AU2011332025B2 (en) | 2010-11-23 | 2015-06-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Subfamily E simian adenoviruses A1321, A1325, A1295, A1309 and A1322 and uses thereof |
BR112014028684A2 (pt) | 2012-05-18 | 2017-07-25 | Univ Pennsylvania | subfamília e adenovírus de símio a1302, a1320, a1331 e a1337 e usos dos mesmos |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0062971A2 (fr) * | 1981-03-27 | 1982-10-20 | Imperial Chemical Industries Plc | Micro-organismes génétiquement modifiés |
EP0089692A2 (fr) * | 1982-03-23 | 1983-09-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Alpha-interféron GX-1 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BE870188A (fr) * | 1977-09-08 | 1979-03-05 | Ici Ltd | Procede microbiologique |
US4530901A (en) * | 1980-01-08 | 1985-07-23 | Biogen N.V. | Recombinant DNA molecules and their use in producing human interferon-like polypeptides |
DE3005897A1 (de) * | 1980-02-16 | 1981-09-03 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Genprodukt eines hoeheren organismus aus einem dieses gen enhtaltenden mikroorganismus |
ATE25985T1 (de) * | 1980-06-12 | 1987-04-15 | Japan Found Cancer | Plasmid. |
CH657141A5 (de) * | 1980-07-01 | 1986-08-15 | Hoffmann La Roche | Dns-sequenzen, rekombinante expressionsvektoren zur mikrobiellen herstellung von human-leukozyten-interferonen und transformierte mikroorganismen. |
DE3122216A1 (de) * | 1981-06-04 | 1982-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur herstellung eines mikroorganismus, welcher (alpha)-galactosidase, aber keine invertase bildet, so erhaltener mikroorganismus und seine verwendung |
IE54046B1 (en) * | 1981-08-25 | 1989-05-24 | Celltech Ltd | Expression vectors |
FR2516094A1 (fr) * | 1981-11-06 | 1983-05-13 | Wellcome Found | Vecteur de clonage recombinant, micro-organisme transforme par ce vecteur, bacteriophage et procede pour produire un polypeptide heterologue |
NZ207925A (en) * | 1983-04-25 | 1988-05-30 | Genentech Inc | Yeast expression vehicle consisting of a yeast promoter and signal peptide encoding region linked to a heterologus peptide coding region; expression and culture |
-
1984
- 1984-07-13 SU SU843757952A patent/SU1364343A1/ru active
-
1985
- 1985-06-18 BG BG70723A patent/BG46981A1/xx unknown
- 1985-07-03 US US06/751,798 patent/US4680260A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-08 IT IT21468/85A patent/IT1201429B/it active
- 1985-07-08 CH CH2959/85A patent/CH666051A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-07-09 IN IN509/CAL/85A patent/IN162268B/en unknown
- 1985-07-12 HU HU852698A patent/HU194316B/hu unknown
- 1985-07-12 DE DE19853524991 patent/DE3524991A1/de not_active Withdrawn
- 1985-07-12 CA CA000486749A patent/CA1264294A/fr not_active Expired - Lifetime
- 1985-07-12 JP JP60152567A patent/JPS6156093A/ja active Pending
- 1985-07-15 GB GB08517795A patent/GB2163750B/en not_active Expired
- 1985-07-15 FR FR8510816A patent/FR2567540B1/fr not_active Expired
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0062971A2 (fr) * | 1981-03-27 | 1982-10-20 | Imperial Chemical Industries Plc | Micro-organismes génétiquement modifiés |
EP0089692A2 (fr) * | 1982-03-23 | 1983-09-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Alpha-interféron GX-1 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10041102B2 (en) | 2002-10-08 | 2018-08-07 | Pfenex Inc. | Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens |
EP2434016A3 (fr) * | 2004-01-16 | 2012-08-15 | Pfenex, Inc. | Expression de proteines mammifères dans Pseudomonas fluorescens |
US10689640B2 (en) | 2007-04-27 | 2020-06-23 | Pfenex Inc. | Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3524991A1 (de) | 1986-03-13 |
BG46981A1 (en) | 1990-04-16 |
CH666051A5 (de) | 1988-06-30 |
IT1201429B (it) | 1989-02-02 |
FR2567540B1 (fr) | 1988-10-14 |
JPS6156093A (ja) | 1986-03-20 |
IN162268B (fr) | 1988-04-23 |
IT8521468A0 (it) | 1985-07-08 |
SU1364343A1 (ru) | 1988-01-07 |
HU194316B (en) | 1988-01-28 |
HUT39476A (en) | 1986-09-29 |
GB2163750B (en) | 1987-09-16 |
GB8517795D0 (en) | 1985-08-21 |
GB2163750A (en) | 1986-03-05 |
US4680260A (en) | 1987-07-14 |
CA1264294A (fr) | 1990-01-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FR2461006A1 (fr) | Procede de preparation de l-threonine | |
CN112226373B (zh) | 一株产蛋白的菌株及其应用 | |
FR2567540A1 (fr) | Procede de preparation d'un interferon leucocytaire humain alpha-2 | |
FR2540516A1 (fr) | Procede de production de proteines correspondant a la toxine diphterique | |
SU1423002A3 (ru) | Способ получени белка,понижающего содержание холестерина в крови млекопитающих животных | |
FR2559781A1 (fr) | Nouveau vecteur plasmidique hybride de e. coli conferant le pouvoir de faire fermenter le saccharose et son procede de preparation | |
WO2010047516A2 (fr) | Micro-organisme du genre corynebacterium capable de produire de la n-acetyl glucosamine et procédé permettant de produire de la n-acetyl glucosamine ou de la glucosamine au moyen d'un tel micro-organisme | |
JPS6322188A (ja) | 新規なl−アミノアシラ−ゼ | |
CN1043786C (zh) | 一种新抗菌化合物的制备方法 | |
FR2546907A1 (fr) | Procede de production de la riboflavine | |
US20040106172A1 (en) | Hydrolyzing/dehydration condensing enzymes, method for producing the enzyme and method for synthesizing amide by using the enzyme | |
CN1034589C (zh) | 生产抗肿瘤抗菌素克达西啶的方法 | |
CN108359695A (zh) | 产d-色氨酸的工程菌及构建方法及生产d-色氨酸的用途 | |
FI82074C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av humant leukocytinterferon alfa-2. | |
CN113493745B (zh) | 生产头孢菌素c的基因工程菌及其构建方法 | |
RU2712519C1 (ru) | Рекомбинантная плазмида, экспрессирующая клонированный ген нейраминидазы Vibrio cholerae, и штамм Escherichia coli - суперпродуцент нейраминидазы Vibrio cholerae | |
CN116694540B (zh) | 一株大肠埃希氏菌及其在生产苏氨酸中的应用 | |
SU1694643A1 (ru) | Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент L-треонина | |
SU904325A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
SU1449579A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани АRтнRовастеR LUтеUS - продуцента рестриктазы AI и I | |
CN113913343B (zh) | 一株泰国伯克霍尔德菌、及其应用和发酵方法 | |
US4988622A (en) | Recombinant plasmid DNA pVN 22 coding biosynthesis of human leukocyte interferon alpha-I1 and strain Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) - producer of human leukocyte interferon alpha-I1 containing same | |
RU2313576C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ КЛОНИРОВАННЫЙ ГЕН Ace VIBRIO CHOLERAE И ШТАММ ESCHERICHIA COLI-ПРОДУЦЕНТ ACCESSORY CHOLERAE ENTEROTOXIN VIBRIO CHOLERAE | |
SU1643610A1 (ru) | Штамм стрептомицета SтRертомYсеS снRомоFUSсUS - продуцент биотинсв зывающего белка | |
EP3660141A1 (fr) | Procédé de production et de purification de gramicidine s |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ST | Notification of lapse |