FR2550537A1 - Diastereoisomeres de derives de l'acide glycyrrhetinique, composes pharmaceutiques contenant de tels produits et procede de preparation de ces produits - Google Patents

Abstract

L'INVENTION CONCERNE DES DIASTEREOISOMERES DE DERIVES DE L'ACIDE GLYCYRRHETINIQUE, DES COMPOSES PHARMACEUTIQUES CONTENANT DE TELS PRODUITS ET UN PROCEDE DE PREPARATION DE CES PRODUITS. LES PRODUITS SELON L'INVENTION SONT DES COMPOSES DE FORMULE GENERALE: (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE -COOR ET -COOR QUI PEUVENT ETRE IDENTIQUES OU DIFFERENTS, SONT DES GROUPES ACIDES CARBOXYLIQUES LIBRES, SALIFIES OU ESTERIFIES. APPLICATION NOTAMMENT A LA FABRICATION DE COMPOSES PHARMACEUTIQUES SERVANT AU TRAITEMENT D'INFECTIONS VIRALES.

Description

i

La présente invention concerne de nouveaux diastéréoisomères de certains dérivés de l'acide glycyrrhétinique, utiles dans le domaine pharmaceutique.

Dans le fascicule de brevet britannique n 1 387 499 se trouvent décrits et revendiqués des dérivés de l'acide glicyrrhétinique de formule générale:

H ' COOR

O

COOR'

S CO-O H I

dans laquelle R désigne un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle et R' est également un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle et les sels de ces composants, dans lesquels R et/ou R' est un atome d'hydrogène Ce fascicule de brevet indique également que les composés en question possèdent

des propriétés pharmaceutiques intéressantes et en particulier une bonne action anti-inflammatoire.

Ultérieurement on a découvert que plusieurs dérivés de l'acide glycyrrhétinique, y compris ceux possédant la formule générale (I), sont très utiles pour le trai25 tement d'infections virales et de maladies résultant d'infections virales.

Les composés conformes à la formule générale (I) et dérivés de l'acide cyclohexane-1,2-dicarbocylique existent en tant que mélange de diastéreoisomères en 30 raison de la chiralité des atomes de carbone C 1 et C 2 du noyau de l'acide cyclohexane-1,2-dicarboxylique, fixés dans

la position C-3 de l'acide glycyrrhétinique.

Des résultats d'investigations complémentaires ont révélé que l'activité antivirale est de loin plus 35 importante pour un diastéréoisomère que pour l'autre Ainsi,

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à titre d'exemple, au cours d'une série d'expériences, on a trouvé qu'un diastéréoisomèredu sel disodique de l'acide mono-( 18 P glycyrrhet-3-yl)cis-cyclohexane-1,2-dicarboxylique, à savoir 3 " (cis-2 Scarboxycyclohexane-1 S-carbo5 nyloxy)-11-oxo-18 P -olean-12-en-30-olque, possède une activité antivirale contre la souche HG 5 de HSV-2, qui était environ 50 fois supérieure à l'actrittè antivirale de l'autre diastéréoisomère à savoir le sel disodique de

l'acide 3 p (cis-2 R-carboxycyclohexane- 11 R-carbonyloxy)-1110 oxo-18 p olean-12-en-30-olque.

C'est pourquoi, conformémement à la présente invention, on obtient des composés ou produits qui sont des diastéréoisonères, caractérisés en ce qu'ilsrépondent à la formule générale:

COOR

H o < C \ o H

dans laquelle-COOR 1 et -COOR 2, qui peuvent être identiques ou différents, sont des groupes acides carboxyliques libres, salifiés ou estérifiés.

Dans la mesure o -COOR 1 et -COOR 2 sont des groupes acides carboxyliques estérifiés, R 1, R 2 sont de préférence des radicaux d'hydrocarburesaliphatiques contenant jusqu'à 6 atomes de carbone, qui peuvent être

composésen chaîne longue droite normale ou ramifiés, satu30 rés ou non saturés et substitués ou non substitués.

Pour la préparation de nouveaux composés conformes à la présente invention et correspondant à la formule générale (II), on peut utiliser de l'acide 18 " ou

18 p glycyrrhétinique ou un ester de cet acide, que l'on 35 fait réagir soit avec de l'anhydride d'acide cis-cyclohe-

xane-1,2-dicarboxylique disponible dans le commerce en vue d'obtenir un mélange de diastéréoisomères qui sont séparés de façon connue par exemple au moyen d'une cristallisation fractionnaire, soit avec un isomère approprié de l'ahydride d'acide cyclohexn,-1,2-dicarboxylique. Dans la mesure o les diastéréoisomères obtenus contiennent des groupes acides carboxyliques libres,

on peut les salifier ou les estérifier de façon connue.

On réalise l'estérification de préférence par réaction avec un composé diazolque; par exemple avec du diazométhane

lorsque l'on désire obtenir un ester de méthyle, ou un alcool approprié et un acide sulfurique.

La présente invention fournit également des compositions pharmaceutiques contenant au moins l'un 15 des nouveaux composés, en mélange avec un diluant ou un

porteur pharmaceutique solide ou liquide.

On indique les exemples suivants en vue d'illustrer la présente invention:

Exemple 1

Acide 3 -(cis-2 S-Carboxycyclohexane-1 S-carbonyloxy) -11oxo-18 P-olean12-en-30-oique.

a) On a dissou 100 g de sel disodique de l'acide mono-(glycyrrehet-3-yl)cis-cyclohexane-1,2dicarboxylique(obtenu de façon classique en faisant réagir 25 de l'acide 18 P-glycyrrhétinique avec de l'anhydride d'acide cis-cyclohexane-1,2-dicarboxylique, avec neutralisation ultérieure par de l'hydrate de sodium), on a fait chauffer l'ensemble dans 600 ml d'acétone/eau ( 1/1 en volume) et on a filtré la solution On a ajouté de l'acétone au filtrat 30 chaud jusqu'à ce qu'un faible trouble persiste, 280 ml d'acétone étant requis à cet effet On a laissé refroidir la solution à la température ambiante et l'on a séparé par filtrage le solide obtenu, on l'a lavé avec de l'acétone /eau ( 85/15 en volume), puis avec de l'acétone et on l'a séché sous vide à 60 C On a obtenu une quantité de produit

de 40 g.

Un chromatogramme liquide à haute pression pris avec une colonne 25 cm x 4 mm Sphérisorb ODS 10 p avec l'utilisation du système de solvant formé par un tampon de 5 phosphate 0,1 molaire/méthanol (p H 7) ( 75/25 en volume) a révélé que le solide contenait 95 % de l'isomère s'écoulant

le plus lentement.

On a dissou le produit solide en chauffant dans 300 ml d'acétone/eau ( 1/1 en volume) et on a a10 jouté de l'acétone à la solution chaude jusqu'à ce qu'un léger trouble persiste, 90 ml d'acétone étant requis à cet effet On a laissé refroidir la solution à la température ambiante et on a séparé le produit solide par filtrage, on l'a lavé avec de l'acétone/eau ( 85/15 en volume), puis avec de l'acétone, puis on l'a fait séché jusqu'à obtenir un poids constant sous vide à 60 C La quantité de produit

obtenu était de 22,6 g.

Un chromatogramme liquide à haute pression obtenu comme indiqué ci-dessus a indiqué moins de

1 % de l'isomère s'écoulant le plus rapidement Un chromatogramme à couche mince pris en utilisant du n-butanol/ 0,88 ammoniac ( 5/1 en volume) n'a révélé aucune impureté.

Un spectre d'absorption infrarouge (Nujol mull) a révélé dès bandes principales pour max = 25 1710 (ester), 1650 (é;none), 1560 (large, CO 2 Na)cm La substance possédait un point de fusion supérieur à 360 C et une rotation optique de -l 20 = + 118 + 2 % ( 1 % dans une solution de méthénol/0,2 % de carbonate de sodium) L'acide libre correspondant possédait 30 un point de fusion de 295 297 C (décomposition) Le spectre d'absorption infrarouge (Nujol mull) possédait deux bandes principales pour max= 1740-1700 (acides + max ester), 1660 (Snone) cm b) On a mélangé 3 g de diacide diasté35 réoisomèrelibre à 30 ml de méthanol et l'on a ajouté une quantité suffisante de dichlorométhane pour obtenir une solution claire à laquelle on a ajouté un excès de diazométhane volatil Au bout de quelques minutes, on a ajouté un peu d'acide acétique afin d'éliminer le diazo5 méthane en excès, et l'on a obtenu une solution claire Puis on a concentré cette solution sur une plaque chauffante jusqu'à ce que la cristallisation commence, puis on l'a laissé refroidir à la température ambiante On a séparé par filtrage le produit solide cristallin, on l'a lavé 10 avec du méthanol et on l'a séché jusqu'à obtenir un poids constant dans un four à vide à 80 C La quantité de produit obtenu était de 3,16 g d'ester diméthylique dudit

acide diastéréoisomère.

Le produit possédait un point de fusion 15 de 197-198 C et le spectre d'absorption infrarouge (Nujol mull) présentaient des bandes principales pour max= 1740 esters C-3 et à chaîne latérale), 1710 (ester C-30) et 1655 (enone) cm 1 Le spectre de résonance magnétique

nucléaire (CDC 13) a confirmé la structure.

L'examen du produit au moyen de la chromatographie sur couche mince utilisant de l'éther de pétrole (point d'ébullition 60-80 C) /dichlorométhane/acétone -6/3/1 en volume) a montré que le produit possédait un

degré de pureté supérieur à 99 %.

c) On a mis en suspension 1 g de diacide diastéroisomèrelibre dans 20 ml de toluène sec et l'on a ajouté 0,6 ml de chlorure d'oxalyle On a agité magnétiquement le mélange résultant dans des conditions anhydres à la température ambiante pendant une heure Au bout de 30 cet invervalle de temps, le mélange obtenu par réaction

était encore une suspension On a ajouté 0,6 ml supplémentaires de chlorure d'oxalyle et l'on a maintenu en agitation le mélange réactionnel pendant toute la nuit On a fait évapo-.

rer la solution claire par une évaporation rotative et on a séché 35 le résidu dans un four à vide jusqu'à obtenir un

poids constant On a obtenu 1,07 g de chlorure diacide.

On a ajouté 1,07 g de chlorure diacide à un mélange de 2 ml de pyridine anhyde et de 0,8 ml de hexan-1-ol On a chauffé au reflux le mélange résultant dans un bain d'huile à 140 C dans des conditions anhydres pendant deux heures Un chromatogramme sur couche mince (éther de pétrole 60-80 / dichlorométhane/acétone 6:3:1

en volume) a indiqué que la réaction était complète à 95 %.

On a fait chauffer au reflux le mélange réactionnel pendant 10 une heure supplémentaire, puis on l'a laissé se refroidir.

On réintroduit le mélange réactionnel dans de la glace/ acide chlorhydrique concentré et on l'a extrait deux fois avec de l'acétate d'éthyle Puis on a ensuite lavé à l'eau distillée l'extrait obtenu avec l'acétate d'éthyle jusqu'à 15 ce que les produits de lavage soient neutres, et on l'a séché dans du sulfate de sodium anhydre, on l'a filtre et on lui a fait subir une évaporation rotative pour l'amener à l'état sec On a obtenu 1,35 g d'ester di-n-hexylique

du diacide diastéréoisomnre.

Un chromatogramme sur couche mince, effectué comme indiqué ci-dessus, a révélé que le produit

possède une pureté de 95 %.

On a introduit 25 g de gel de silice (Merck 7734) dans une colonne On a réalisé une élution 25 de la colonne en plaçant un mélange formant solvant constitué de éther de pétrole 60-80/dichlorométhane/acétone ( 6:3:1 en volume), puis on a appliqué une solution de 1,35 g d'ester dihexylique dans le même mélange formant solvant à la colonne, à la suite de quoi on a complété la partie supérieure de la colonne avec le même mélange formant solvant On a tout d'abord collecté et séparé une fraction de 25 ml Puis on a collecté des fractions de 10 ml, que l'on a réparti en gouttes sur des plaques de chromatographie sur couche mince On a combiné les 35 fractions pures et on leur a fait subir une évaporation * rotative pour les amener à l'état sec On a obtenu 0,88 g

de l'ester dihexylique purifié.

Un chromatogramme sur couche mince (éther de pétrole 6080/dichlorométhane/acétone; 6:3:1 en volume) a révélé que le produit possédait une pureté de 99 %. On a dissou 0,88 g d'ester dihexylique dans 8 ml d'éther de pétrole 60-80 et on l'a maintenu dans un état de froid intense pendant une semaine On a filtré le produit cristallin obtenu dans un entonnoir en verre fritté froid, on l'a lavé avec une faible quantité de méthanol et on l'a séché dans un désiccateur à vide jusqu'à obtenir un poids constant La quantité obtenue était de

0,56 g.

Un chromatogramme sur couche mince, 15 obtenu comme indiqué ci-dessus, a révélé que le produit possède une pureté supérieure à 99 % La substance possédait un point de fusion de 118-121 C et le spectre infrarouge présentait des bandes principales pour)max = 17101730 (esters), 1660 (énone)cm-1. 20 Exemple 2

Acide 3 (-(cis-2 S-Carboxycyclohexane-1 S-carbonyloxy)-11oxo-18 -olean-12en-30-oqlgue.

a) On a chauffé au reflux pendant quatre heures dans un bain d'huile à une température de 140 160 C, 23,5 g d'acide 18 " -glycyrrhétinique, 17, 6 g d'anhydride cis-1,2-cyclohexane-dicarboxylique et 28,2 ml de pyridine anhydre A la suite de cela, une chromatographie sur couche mince a révélé que la réaction était complète à environ 90 % On a jouté 352,5 ml d'acétone au mélange 30 réactionnel refroidi et, tout en réalisant une agitation magnétique de la solution, on a ajouté une solution de 42,3 ml d'acide chlorhydriqueconcentré dans 112 ml d'eau

distillée à la température ambiante.

On a séparé par filtrage le précipité 35 résultant, on l'a lavé avec de l'acétone aqueuse à 70 %, puis avec de l'eau distillée jusqu'à ce que les produits dé lavage soient neutres, et on l'a fait-séché dans un

four à vide à 100 C La quantité obtenue était de 28,28 g.

On a délayé 28,28 g dudit acide indiqué ci-dessus avec 84,8 ml d'acétone et on ajouté lentement une solution de 3,64 g d'hydrate de sodium dans 84, 8 ml d'eau distillée tout en agitant, jusqu'à ce que le p H soit égal à 9 Le mélange réactionnel était encore une suspension, de sorte qu'on l'a mis à chauffer au bain-marie chaud Ceci 10 n'a entratné aucune modification, si bien que l'on a ajouté une quantité supplémentaire de 24 ml d'eau distillée et qu'on a chauffé à nouveau le mélange La solution légèrement trouble fut filtrée à chaud et, le chauffage continuant, on

a ajouté de l'acétone jusqu'à ce que la solution devienne 15 trouble Puis on l'a fait refroidir à 4 C.

Le produit solide précipité fut éliminé par filtrage, lavé avec de l'acétone/eau( 85:15 en volume), puis avec de l'acétone et fut séché dans un four à vide

jusqu'à fournir un poids constant La quantité obtenue de 20 sel disodique du diacide fut de 17,6 g.

On a dissou le sel disodique indiqué ci-dessus dans 106 ml d'acétone aqueuse chaude ( 1:1 en volume) ( 6 x volume), on l'a filtré et, tout en continuant le chauffage, on a ajouté l'acétone jusqu'à ce que le mélan25 ge devienne trouble, à la suite de quoi on l'a refroidi à 4 C On a séparé par filtrage le produit solide cristallin obtenu, on l'a lavé avec environ 50 ml d'acétone/eau ( 85: 15 en volume),puis avec de l'acétone On a séché le produit obtenu dans un four à vide jusqu'à obtenir un poids cons30 tant, la quantité obtenue étant de 12,05 g Le chromatogramme liquide à haute pression a révélé que le diastéréoisomère

possédait une pureté de 97 %.

Deux recristallisations supplémentaires du sel disodique, mises en oeuvre en utilisant les conditions 35 ci-dessus, ont fourni 6,95 g de cristaux blancs.

Un chromatogramme liquide à haute pression obtenu en utilisant un mélange formant solvant de :25 en volume de tampon méthanol/phosphate 0,1 molaire (p H 7), a révélé que la substance contenait plus de 99 % du diastéréoisomère désiré. La substance possédait un point de fusion supérieur à 360 C et le spectre d'absorption infrarouge possédait des bandes principales pour Ymax= 1710 (ester),

1660 (énone); 1570 (CO 2 Na) cm -1 Le p H d'une solution 10 aqueuse de 10 % du sel disodique était égal à 8,6.

On a transformé 0,5 g du sel disodique en le diacide correspondant en traitant une solution

aqueuse de ce dernier avec de l'acide chlorhydriquedilué.

On a séparé par filtrage le précipité obtenu, on l'a lavé 15 avec de l'eau jusqu'à ce que les produits de lavage soient neutres et on l'a séché jusqu'à obtenir un poids constant dans un four à vide à 100 C La quantité obtenue fut de

0,29 g.

Le diacide possédait un point de fusion 20 de 303-305 C et le spectre infrarouge possédait des bandes principales pour Vmax = 1705-1725 (CO 2 H + ester), 1665 (énone) cm 1 Le spectre de résonance magnétique nucléaire

(d 5 pyridine) a confirmé la structure attendue.

b) On a ajouté 40 ml de méthanol sec et 25 1 ml d'acide sulfurique concentré à 2 g du sel disodique et l'on a fait chauffé au reflux le mélange résultant sur un bain-marie chaude pendant sept heures Apres cet intervalle de temps, un chromatogramme sur couche mince

(éther de pétrole 60-80/dichlorométhane/acétone: 6:3:1 en 30 volume) indiquait que la réaction était incomplète.

On a ajouté 0,4 ml d'acide sulfurique concentré au mélange réactionnel et l'on a chauffé au reflux la solution pendant une durée de quatre heures supplémentaires, intervalle de temps au bout duquel un 35 chromatogramme à couche mince indiquait que la réaction

était complète à 95 %.

On a introduit le mélange réactionnel refroidi dans de la glace/eau, et on l'a extrait avec de l'acétate d'éthyle On a répété cette procédure et on a combiné les extraits à l'écétate d'éthyle, on les a lavés à l'eau jusqu'à ce que les produits de lavage soient neutres et on les a séchés sur du sulfate de sodium anhydre. On a ensuite filtré la solution d'acétate d'éthyle desséchée et on lui a fait subir une évaporation rotative jusqu'à l'amener à l'état sec La quantité de produit obtenue a été

de 1,66 g.

On a dissou le produit indiqué ci-dessus dans du méthanol/dichlorométhane ( 2:1 en volume) et on l'a concentré sur une plaque chauffante jusqu'à ce que la cris15 tallisation commence On a séparé par filtrage le produit solide cristallin, on l'a lavé avec du méthanol et on l'a séché dans un four à vide à 80 C jusqu'à ce que l'on ait atteint un poids constant La quantité obtenue était de

1,36 g Un chromatogramme sur couche mince a révélé que le 20 produit possédait une pureté supérieure à 99 %.

Le spectre infrarouge possédait des bandes principales pour J> = 1740 (ester), 1710 (esters) max et 1655 (énone) cm La substance possédait un point de fusion 25 de 235 237 C La chromatographie en phase gazeuse ( 1 ' colonne 1 % OV-17 à 305 C) a révélé que le produit possédait une pureté d'environ 99 % et contenait moins de 1 % du composé 18 P correspondant Un spectre de résonance

magnétique nucléaire (CDCL 3) a confirmé la structure atten30 due.

c) On a préparé le chlorure du diacide d'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple lc), mais le traitement final fut différent On a réalisé une évaporation de la solution claire, au moyen d'une évapora35 tion rotative, jusqu'à environ la moitié de son volume 1 1 initial On a ajouté du toluène sec et l'on a répété le même processus On a mis en oeuvre cette opération jusqu'à ce qu'aucun chlorure d'oxalyle ne subsiste On a concentré la solution finale à 10 ml et on l'a placée dans des con5 ditions de froid intense pendant 15 minutes Le produit solide cristallin obtenu fut séparé par filtrage et lavé avec une faible quantité de toluène sec On a utilisé le

produit pour la phase opératoire suivante sans séchage.

On a préparé l'ester di-n-hexylique 10 d'une manière analogue à celle décrite dans l'exemple lc),

la quantité obtenue étant de 0,83 g.

Un chromatogramme sur couche mince (éther de pétrole 6080/dichlorométhane/acétone; 6:3:1 en volume)

a indiqué que le produit était d'une pureté supérieure à 15 99 %.

On a dissou 0,63 g de l'ester de dihexyle dans 7 ml d'éther de pétrole et on l'a placé dans des conditions de froid intense pendant 3 semaines On a séparé par filtrage le produit cristallin obtenu, on l'a lavé au méthanol et on l'a séché dans un four à vide à 40 C jusqu'à obtenir un poids constant La quantité obtenue était de

416 mg.

La substance possédait un point de fusion de 99-101 C et le spectre infrarouge présentait des bandes 25 principales pour Vmax = 1700 1720 (esters), 1660 (énone) -1 cm CmÀ

Claims (4)

REVENDICATIONS

1 Composés caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale:

C COOR 1

H

O

C o HH dans laquelle COOR et COOR 2, qui peuvent être identiques ou différents, sont des groupes acides carboxyliques

libres, salifiés ou estérifiés.

2 Composés selon la revendication 1, 20 caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide 3 ?-(cis-2 S-carboxycyclohexane-1 S-carbonyloxy)-11-oxo-18 p olean-12-en-30oique, et du sel disodique, de l'ester diméthylique et de

l'ester di-n-hexylique de cet acide.

3 Composés suivant la revendication 1, 25 caractérisé en ce qu'il s'agit de l'acide 3 p-(cis-25-carboxycyclohexane-1 S-carbonyloxy)-11-oxo-180 olean-12-en30-olque, et du sel disodique, de l'ester diméthylique et

de l'ester di-n-hexylique de cet acide.

4 Procédé pour préparer des composés 30 selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on fait réagir l'acide 18 d ou 18 p glycyrrhétinique ou un ester de cet acide soit avec de l'anhydride d'acide cis-cyclohexane-1,2-dicarboxylique pour obtenir un mélange de diastéréoisomères que l'on sépare ensuite de façon connue, soit avec un isomère approprié de l'anhydride d'acide cyclohexane-1,2-dicarboxylique, à la suite de quoi, si on

le désire, des groupes acides carboxyliques libres contenus dans le produit sont salifiés ou estérifiés de façon connue.

Composés selon la revendication 1, 5 caractérisésen ce qu'ils sont prépares conformément au procédé selon la revendication 4. 6 Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles contiennent au moins un composé

selon la revendication 1 en mélange avec un diluant ou 10 un support pharmaceutique solide ou liquide.