FR2460332A1 - Procede, dispositif et milieu nutritif pour mettre en evidence les bacteriemies - Google Patents

Abstract

L'INVENTION CONCERNE UN PROCEDE DE DETECTION DES BACTERIEMIES OU L'ON ASPIRE LE SANG QUANTITATIVEMENT DOSE AU MOYEN D'UN SYSTEME DE PRISE DE SANG DANS UN RECIPIENT D'UN SYSTEME DE CULTURE SANGUINE MUNI D'UN SYSTEME POUR FAIRE LE VIDE OU POUR INTRODUIRE UN GAZ PARTICULIER, ET OU ON MELANGE CE SANG AVEC UN MILIEU NITRITIF LIQUIDE, CARACTERISE EN CE QUE LE SANG ASPIRE DANS LE RECIPIENT INOCULE SIMULTANEMENT LE MILIEU NUTRITIF LIQUIDE POURVU D'ADDITIFS ANTI-BACTERICIDES ET UN MILIEU NUTRITIF SOLIDE MELANGE A CELUI-CI ET EN CE QU'ENSUITE ON REALISE LA CULTURE BACTERIENNE DANS LES DEUX MILIEUX NUTRITIFS A UNE TEMPERATURE APPROPRIEE ET EN AYANT INCLINE LE RECIPIENT DE FACON APPROPRIEE, ET EN CE QU'ON LA REND VISIBLE EN AJOUTANT DES INDICATEURS COLORES.

Description

La présente invention concerne un procédé, un dispositif et un milieu

nutritif pour mettre en évidence les bactériémies par prise de sang directe et réalisation de cultures de sang dans les états fébriles d'origine incertaine, ainsi que pour la surveilllance des maladies

bactériennes d'origine connue, afin de pouvoir recon-

naître à coup sûr les affections pouvant mettre la vie

en danger et de les traiter.

Le procédé selon l'invention et le dispositif avec le milieu nutritif servent aussi bien à prélever le sang humain qu'à cultiver les microorganismes du sang aux fins d'expériences microorganismes du sang aux fins

d'expériences microbiologiques et cliniques.

Pour le diagnostic des bactériémies, on con-

naît plusieurs procédés et dispositifs, qui se distin-

guent cependant plus ou moins par leurs diverses étapes

ou leur combinaison et des éléments d'appareillage dif-

férant de façon correspondante.

On connaît d'après un prospectus eublicitai-

re le système de culture sanguine Vacutainer suivant lequel, pour rechercher les bactériémies, il convient de respecter les étapes essentielles suivantes - Prise de sang: Au moyen d'un système de prise de sang, on prélève un échantillon de sang dans la veine du malade, grâce à un élément canule protégé par la demande de brevet publiée en Allemagne sous le n0 2 332 133, une seringue stérile ou un nécessaire pour prise de sang. Le sang prélevé est mis directement dans un récipient stérile, rempli de milieu nutritif liquide, du système de culture sanguine, composé de différents volumes (petits tubes en verre, bouteilles, récipiqnts),

fermé par un bouchon de caoutchouc ou un couvercle mé-

tallique. Ces récipients pour culture sanguine connus

sont fermés par des bouchons stériles; lorsque les bou-

chons ne sont pas stériles, il est nécessaire de les décontaminer soigneusement au moyen d'un désinfectant

avant la prise de sang.

En glissant le récipient de culture sanguine dans le support de l'élément de canule, on relie le

système de culture sanguine au système de prise de sang.

Après avoir piqué la veine, on appuie le récipient au fond du support, si bien que l'on perce le bouchon et qu'ainsi on aspire -immédiatement du sang de la veine dans une mesure correspondant à l'action du vide. Avec le sang on produit une inoculation immédiate du milieu nutritif liquide. Dans la mesure o on a besoin d'autres échantillons de sang, on remplit successivement divers récipients de culture sanguine avec différents milieux nutritifs.

- Préparation et réalisation des sous-cultu-

res:

Après que l'on ait retiré le récipient de culture sangui-

ne du support de l'élément canule et qu'on ait ainsi sé-

paré la prise de sang du système de culture sanguine, et après que l'on ait mélangé de façon intensive le sang et le milieu nutritif liquide, l'incubation du récipient de culture sanguine s'effectue à 35-370C comme préparation à

la réalisation des sous-cultures.

En disposant une unité d'aération, fermée ou non, on procède à la culture des germes aérobies et

anaérobies; après leur croissance, qui doit être con-

tr8lée plusieurs fois à des intervalles déterminés, et éventuellement après un trouble visible du milieu nu-

tritif liquide, on dispose des sous-cultures sur un mi-

lieu nutritif solide. A différents intervalles de temps on prélève dans le récipient de culture sanguine le liquide nutritif incubé mélange de germes, au moyen d'une seringue par l'intermédiaire d'une canule stérile, en

perçant la fermeture du récipient. On inocule un ou plu-

sieurs milieux nutritifs solides, qui sont disposés sur

des plaques ou bottes de Pétri séparées, et qui sont cons-

tituées de préférence de gélose avec divers additifs différenciés. Après l'inoculation des cultures de gélose, on les fait encore incuber séparément. L'ouverture des récipients de culture sanguine aux fins d'inoculation de sang s'effectue à des intervalles de temps déterminés les

3e, 6e et 10e jours après la prise de sang.

Ce n'est qu'après la croissance des germes dans les sous-cultures que l'on peut procéder de façon rigoureuse à des recherches microbiologiques sur les

différents organismes.

Les inconvénients de ce procédé connu tien-

nent à ce que les différentes étapes du procédé consis-

tant à prélever le sang et à réaliser les cultures san-

guines doivent s'effectuer avec divers appareils, si bien qu'on n'a pas de garantie sûre de pouvoir éviter les

contaminations lors du prélèvement et lors de la réali-

sation et de l'inoculation des cultures.

Pour les systèmes de culture sanguine réali-

sés selon ce procédé on connait des récipients pour cul-

ture sanguine remplis de milieu nutritif liquide et fer-

més par des couvercles en caoutchouc ou en métal.

Pour prélever le sang de la veine ainsi que

pour inoculer le sang et pour insuffler des produits ga-

zeux dans le système de culture et inoculer les milieux nutritifs liquides pour les sous-cultures, il est toujours nécessaire de transpercer ou d'ouvrir ce récipient pour culture sanguine.

Dans toutes ces étapes du procédé et en particu-

lier dans la technique de sous-culture au laboratoire, il existe des possibilités de contamination étant donné le percement ou l'ouverture du bouchon du récipient ainsi

que la manipulation avec les seringues et les canules.

Ce procédé connu a un autre inconvénient qui

tient à ce qu'on a peine à reconnaître les colonies bac-

tériennes à croissance clairsemée aussi bien dans les

milieux nutritifs liquides que sur gélose solide.

D'après d'autres prospectus publicitaires on

connaît des récipients pour culture sanguine avec systè-

mes de culture sanguine à deux phases, ce qu'on appelle

les systèmes Gibco-Bio-Cult avec plusieurs milieux nu-

tritifs, qui possèdent une fermeture de sécurité spéciale

et une paroi séparative pour séparer les milieux nutri-

tifs liquides et solides. Ces récipients de culture san-

guine évitent d'avoir à inoculer des échantillons pour des sous-cultures à divers intervalles de temps et ainsi d'avoir à ouvrir les récipients de façon répétée. Le

milieu nutritif liquide mélangé au sang s'écoule par ro-

tation du récipient dans la chambre prévue à cet effet, arrose et inocule la phase gélosée solide disposée sur la paroi séparatrice puis est reversé à nouveau dans

la chambre du récipient prévue à cec effet.

Les inconvénients de ce système de culture sanguine à deux phases tiennent à ce que, de par la construction du récipient avec un volume relativement important, aucune liaison directe veine-système de prise de sang-système de culture sanguine n'est possible. La prise de sang dans la veine puis donc 1'apport de sang dans ces récipients ou bouteilles pour culture sanguine s'effectue surtout à l'aide de seringues, et seulement

pour de faibles volumes de récipients au moyen de rac-

cords de caoutchouc pour le raccordement à la canule de prélèvement au moyen d'une trousse pour prise de sang. Bien que ces bouteilles pour culture sanguine à deux phases permettent une croissance plus rapide des colonies sur gélose, il existe cependant un risque de

contamination plus élevé de par la prise de sang séparée.

La description optique des formations de colonies pendant

l'incubation est également rendue plus difficile dans ce système de culture sanguine, et donc aussi la recherche microbiologique, en particulier pour les cultures à

croissance clairsemée. Il est donc nécessaire pour cer-

tains types déterminés de cultures sanguines d'arroser de façon répétée la phase gélosée à des intervalles de temps déterminés avec un mélange de sang et de milieu

nutritif liquide.

On connaît d'après les demandes de brevet publiées en Allemagne sous les N0 2221096 et 2 332 133 des dispositifs de prise de sang sous forme d'instruments appropriés et d'unités canules permettant de prélever des

échantillons sanguins.

Selon le procédé de prise de sang mentionné, l'instrument de prise de sang est constitué d'une canule

avec un support, la partie terminale interne de la ca-

nule étant entourée d'une soupape munie d'un dispositif

d'élimination de l'air. La soupape de canule peut pas-

ser d'une position o elle permet l'aération par un

passage rétréci, pour que l'on puisse avoir une indica-

tion sur le niveau du sang, à une autre position o

elle empêche le passage de l'air ou du sang.

Le support est constitué d'une partie prin-

cipale en forme de tube et d'une partie ayant une sur-

face interne conique. La partie en forme de tube sert à recevoir le récipient de culture sanguine dans lequel

on a fait le vide et qui est muni d'une fermeture trans-

perçable. La surface conique sert de butoir pour le récipient de culture lorsque l'extrémité de la canule

destinée à percer la fermeture l'a effectivement percée.

Par cette fixation le système de prise de sang et le système de culture sanguine sont reliés de façon connue.

L'unité canule protégée par la demande de bre-

vet publiée en Allemagne sous le n0 2 332 133 est consti-

tuée de façon correspondante, la partie antérieure de la

canule étant introduite dans la veine et la partie arriè-

re de la canule étant introduite dans un récipient de collecte de la culture sanguine. Cette unité canule se

caractérise par une soupape unidirectionnelle pour empê-

cher tout reflux de liquide du récipient de collecte dans

la circulation sanguine du malade, ainsi que par un mo-

yen d'indication visible du débit sanguin.

La canule possède également un support adap-

té à la forme du récipient de collecte de culture san-

guine, qui est réalisé de préférence sous la forme d'un cylindre creux pour recevoir ce récipient. Après la ponction veineuse, le système de prise de sang et le système de culture sanguine sont également reliés par l'intermédiaire de la fixation. Cette combinaison, comme celles qui sont mentionnées ci-dessus, possède également les inconvénients d'une augmentation des risques de contamination de l'ensemble du système ainsi

que d'une manipulation technique des appareils compli-

quée et coûteuse.

On connait d'après le brevet allemand n0 1 110 357 des ampoules à vide permettant de prélever le sang et d'autres liquides de façon stérile, o le col de l'ampoule fermé dans sa partie supérieure est fixé sur les bouchons portant la capsule et pressés par la partie inférieure de l'ampoule et sur la canule et qui

sont soudés à leur partie inférieure sous un vide poussé.

Ces ampoules à vide servent exclusivement à la prise de sang; le sang prélevé doit ensuite être in-

troduit dans un système de culture sanguine particulier.

Pour remplir ce système de prélèvement de sang on a be-

soin de milieux nutritifs offrant aux bactéries au cours

de leur culture des conditions favorables pour leur dé-

veloppement. Les forces de défense corpusculaires et non corpusculaires présentes dans le sang permettent de tuer ou d'inactiver de grandes quantités de bactéries. Pour

réaliser les recherches sur le sang au moyen des cultu-

res de bactéries sanguines, on connaît un grand nombre de substances et de produits qui inhibent ces forces de défense. On connaît ainsi un sulfonate de polyanéthol

qui s'est révélé excellent pour cela. Il possède égale-

ment des propriétés d'inhibition de la coagulation. Les milieux connus ne conviennent cependant pas pour les

systèmes de prise de sang à deux phases, car ils possè-

dent trop peu de propriétés antibactériennes et ne per-

mettent pas de rendre visibles les colonies bactériennes

présentes dans le système de prise de sang après l'in-

cubation. L'invention a pour objet la réalisation d'un

procédé, d'un dispositif et d'un milieu nutritif per-

mettant de faire des recherches sur les bactériémies, éliminant les inconvénients des procédés, appareils et

milieux nutritifs connus, augmentant nettement la sé-

curité vis-à-vis de la contamination, facilitant la

prise de sang ainsi que la réalisation des cultures bac-

tériennes et évitant les dépenses techniques jusqu'ici élevées dues au système de prise de sang et de culture sanguine. L'invention doit donc répondre au besoin de

développer un procédé permettant de rechercher les bac-

tériémies, permettant de nettement raccourcir la durée et le processus de prise de sang dans la veine jusqu'à

ce qu'on le fasse agir sur les milieux de culture sangui-

ne liquides et solides, et de créer un dispositif dans lequel toutes les fonctions nécessaires du système de prise de sang et de culture sanguine sont rassemblées et réduites au nombre je plus faible possible d'éléments de structure appropriée, ainsi que de former le milieu nutritif de telle manière que soient développées dans

le système de prise de sang et de recherche des proprié-

tés anti-coagulantes et une activité anti-bactéricide

contre les propriétés du sang.

Selon l'invention, le procédé de détection

des bactériémies, dans lequel le sang dosé quantitati-

vement par l'intermédiaire d'un système de prise de sang dans un récipient d'un système de sulture sanguine sous vide et/ou muni d'un système spécial de remplissage pour les gaz est aspiré est aspiré et mélangé avec un milieu

nutritif liquide, se caractérise en ce que le sang as-

piré dans le récipient inocule simultanément le milieu nutritif liquide et le milieu nutritif solide mélangé

avec lui. A une température donnée, et dans une posi-

tion oblique du récipient du système de culture san-

guine, la culture bactérienne se développe ensuite dans les deux milieux nutritifs et est rendue visible par

un indicateur coloré contenu dans les milieux nutritifs.

Le dispositif selon l'invention destiné à la recherche des bactériémies, constitué d'un système de prise de sang et d'un système de culture sanguine, se

caractérise en ce que le récipient du système de cul-

ture sanguine a une forme d'ampoule à rétrécissement annulaire et en ce que la position de ce rétrécissement annulaire sur la hauteur de l'ampoule correspond au rapport quantitatif nécessaire èntre le milieu nutritif solide et le milieu nutritif liquide, de préférence au

rapport 1:3.

En outre le dispositif selon l'invention se caractérise en ce que dans le récipient du système de culture sanguine le milieu nutritif liquide et le milieu nutritif solide sont disposés l'un derrière l'autre et sont en contact l'un avec l'autre dans une position o le récipient est incliné selon un angle allant de 0 à et en ce que le volume et la position du milieu

nutritif solide sont fixés par le rétrécissement annulaire.

Le rétrécissement annulaire possède à sa surfa-

ce un anneau qui permet une séparation nette et incassa-

ble des deux parties du récipient de culture sanguine. Le diamètre du passage à travers le rétrécisseti.ent, annulaire se situe de préférence dans un intervalle allant de 6 à 10 mm, étant donné que la quantité et la position de la phase gélosée solide sont déterminées par le début du rayon de

rétrécissement transversal.

Le dispositif selon l'invention se caractérise

en outre en ce que le récipient du système de culture san-

guine est relié avec le système de prise de sang par l'in-

termédiaire d'une pièce de liaison élastique, faite de préférence d'un plastique mou transparent, pour former une unité fermée constituée d'éléments successifs, et en ce que l'axe du système de prise de sang est disposé de façon angulaire par rapport à l'axe du système de culture sanguine et de manière à pouvoir se déplacer dans toutes

les directions.

Le système de prise de sang selon l'invention se caractérise en ce que la partie inférieure du petit tube de la canule d'injection est allongée de manière que le petit tube entoure le sommet de verre cassable du récipient de culture sanguine, ce qui permet de rompre

l'extrémité de verre avant la prise de sang.

En outre la pièce de liaison élastique est dispo-

sée de façon adaptable autour de la pointe cassable du système de culture sanguine, et un couvercle de protection est de même disposé pour protéger le système de prise

de sang.

Le milieu nutritif destiné à la recherche des bactériémies, constitué d'une partie liquide et d'une partie solide, se caractérise en ce qu'il contient des substances anti-bactéricides, des substances destinées à empêcher la coagulation du sang ainsi qu'un système d'indicateurs dépendant du pH; de préférence la partie liquide du milieu nutritif contient de l'indométhazine

et de la carraghénine.

Exemple de réalisation

Les avantages du procédé et du dispositif se-

lon l'invention tiennent à ce que grâce à la combinaison théorique et pratique des systèmes de prise de sang et

de culture sanguine, on réalise une unification de plu-

sieurs étapes du procédé jusqu'ici séparées en amélio-

rant simultanément de façon quantitative le procédé de prélèvement et d'étude du sang au moyen d'un dispositif

commode et imperméable à la contamination.

En outre il est possible par l'application de milieux nutritifs riches avec additifs anti-bactéricides et de milieux nutritifs solides avec indicateurs colorés, de prélever un volume de sang plus faible pour réaliser

les cultures bactériennes. Selon la composition du mi-

lieu nutritif avec ces additifs déterminés il est possi-

ble de ne cultiver qu'un petit nombre de germes, c'est-

à-dire de ne prélever qu'une plus faible quantité de sang et ainsi d'avoir le volume le plus faible possible pour les deux parties du récipient du système de culture sanguine, par rapport aux récipients connus. Grâce à l'inoculation simultanée du milieu nutritif liquide et du

milieu nutritif solide ainsi qu'à la représentation opti-

que de la multiplication des bactéries, on aboutit à une nette simplification de l'ensemble du procédé ainsi

qu'à une réduction du travail bactériologique nécessaire.

is

L'introduction directe de sang dans la réci-

pient de culture sanguine à deux phases, l'inoculation rapide des deux milieux nutritifs après la prise de sang et l'incubation des cultures bactériennes dans le récipient de culture sanguine en deux parties sans

autre transvasement et donc sans possibilité de conta-

mination garantissent en outre un diagnostic rapide

et sûr.

Le rassemblement des milieux nutritifs liquide et solide dans le récipient de culture sanguine selon

l'invention permet, pour activer la croissance des bac-

téries dans certaines colonies, d'humecter plus ou moins la surface de la phase gélosée solide à des intervalles de temps déterminés grâce au niveau de liquide du milieu

nutritif liquide en inclinant le récipient.

Grâce au procédé selon l'invention on échap-

pe aux sous-cultures séparées en-dehors du récipient de

culture sanguine et on évite donc les dépenses de con-

ception et d'application correspondantes.

Le rétrécissement annulaire permet, lorsque

la multiplication des bactéries est réalisée, une sépa-

ration plus facile et plus sûre des différentes par-

ties du récipient de culture sanguine, pour étudier de

façon plus approfondie les deux milieux nutritifs iso-

lés l'un de l'autre. L'anneau du rétrécissement annu-

laire permet une rupture nette en réduisant le risque

de blessure.

Le procédé et le dispositif selon l'inven-

tion sont ci-dessus représentés et illustrés par un exemple de réalisation. Le dessin ci-joint en montre

un exemple:

Les figures 1 et 2 montrent une coupe longitu-

dinale du mode de réalisation selon l'invention en re-

présentation schématique.

Dans le procédé pour étudier les bactériémies dans le sang on aspire un échantillon de sang dans la veine du malade par l'intermédiaire d'un système de prise de sang, d'un système de canule ou de seringue de construction déterminée. on le dose quantitativement dans un récipient de culture sanguin en verre muni d'un dispositif spécial pour faire le vide ou pour introduire du gaz, puis on le mélange avec le milieu nutritif liquide contenu dans le

récipient. Le sang aspiré inocule alors le milieu nutri-

tif liquide pourvu d'additifs anti-bactéricides, et simul-

tanément un milieu nutritif solide est inoculé dans le ré-

cipient de culture sanguine par le mélange de milieu nu-

tritif et de sang. On produit alors la culture bactérien-

ne à une température et une inclinaison déterminée du ré-

cipient - selon la culture bactérienne à étudier - dans les deux milieus nutritifs. Grâce à un additif ajouté de préférence au milieu nutritif solide, et constitué d'un indicateur coloré, il est possible de mettre en évidence

les bactéries qui se multiplient dans les deux milieux.

Le dispositif selon l'invention est constitué d'un système de prise de sang et d'un système de culture sanguine. Le système de culture sanguine est constitué d'un corps en verre formé de deux parties, du récipient de culture sanguine 1,2, qui selon l'invention a une forme d'ampoule composée de la partie 1 et de la partie 2. Ce récipient 1,2 possède un rétrécissement annulaire

3 qui sépare sa hauteur et son volume en un rapport dé-

terminé, de préférence 1:3.

A-la surface du rétrécissement annulaire 3 est introduit sur tout son périmètre un anneau permanent 9

qui permet par une tension définie dans le verre une sé-

paration propre et simple des deux parties du récipient de culture sanguine 1,2 en réduisant les risques de blessure. Le diamètre du rétrécissement annulaire 3 dépend du diamètre du passage de la dose d'inoculation et

se situe dans un intervalle allant de 6 à 10 mm.

Le milieu nutritif liquide et le milieu nu-

tritif solide sont disposés l'un derrière l'autre dans le récipient de culture sanguine 1;2 et sont en contact l'un avec l'autre du fait que la partie 2 du récipient de culture sanguine 1:2 contient une gélose solide 10 et que la partie 1 contient un milieu nutritif liquide 11. Grâce au rétrécissement annulaire 3 on fixe le

volume et la position de la gélose solide, qui est main-

tenue par la courbure du rétrécissement.

Le volume et donc la taille du récipient de culture sanguine 1;2 varie donc de façon correspondant

à la quantité de sang à prélever.

Grâce à la composition des milieux nutritifs avec des additifs antibactéricides déterminés contre les produits de défense propres du corps, il est possible, selon l'invention, de prélever une faible quantité de sang

et de limiter ainsi le volume et les dimensions du réci-

pient 1; 2, car une faible quantité de germes pour cul-

ture dans les cultures de sang suffit à donner des réac-

tions visibles. Le récipient de culture sanguine 1; 2 a de préférence une forme d'ampoule avec un sommet en

verre cassable 4, entouré par une pièce de liaison élas-

tique 5, par exemple un tuyau de liaison constitué d'un plastique mou transparent comme un tuyau de PVC type 60 S clair, si bien que le système de culture sanguine est ainsi relié au système de prélèvement sanguin et forme

avec lui une unité fermée formée d'éléments successifs.

Au moyen de la pièce de liaison élastique 5, l'axe du système de prise de sang est disposé avec un certain angle par rapport au système de prise de sang

* et peut tourner dans une direction quelconque. Le sys-

tème de prise de sang est constitué de la canule d'in-

jection 6, qui est entourée d'une enveloppe de verre 7 et allongée dans sa partie inférieure de manière que cet allongement tubulaire entoure le sommet en verre cassable 4 du récipient de culture sanguine 1;2, de la pièce de liaison élastique 5 et du système de prise

de sang, est disposé un capuchon de protection adapté.

On fait le vide dans l'espace 12 ou, pour certaines cultures bactériennes spéciales, on le dote d'une atmosphère gazeuse de pression définie. Pour

effectuer la ponction dans la veine on retire le capu-

chon de protection 8 avant l'emploi du dispositif selon

l'invention et on scie l'enveloppe de verre 7 de la ca-

nule d'injection 6 et on la casse de manière à libérer la canule stérile 6. Après la piqûre dans la veine on effectue un mouvement de cisaillement du système de culture sanguine autour du système de prise de sang, la canule 6 restant immobile, jusqu'à ce que le sommet de verre 4 se brise. En déclenchant l'action du vide on produit dans la canule 6 une dépression si bien qu'un échantillon déterminé de sang, correspondant au vide produit, est aspiré automatiquement et quantitativement

dans le récipient 1; 2 du système de culture sanguine.

Simultanément à cette absorption quantitati-

vement dosée de sang s'effectue l'inoculation du milieu nutritif liquide 11 et, mélangé à celui-ci, de la phase

gélosée stérile 10.

Après retrait de la canule d'injection 6 de la veine, et son obturation par un bouchon stérile, de préférence de plastique, on procède à l'incubation en donnant une certaine inclinaison à l'ensemble du système de culture sanguine, c'est-à-dire qu'on fait

incuber les milieux nutritifs 10 et l1 à des tempéra-

tures situées de préférence dans un intervalle allant

de 35 à 370C.

L'inclinaison déterminée du récipient 1; 2 du système de culture sanguine dépent nécessairement du volume du récipient et donc du milieu nutritif 10; 11 pour aboutir à ce que le niveau du milieu nutritif

liquide Il recouvre partiellement la surface de la gé-

lose solide 10.

Grâce à l'incubation des milieux nutritifs 10; 11 on obtient line multiplication des bactéries; selon l'invention la croissance des cultures bactériennes dans les deux milieux est visible par un changement de

couleur d'un de ses indicateurs colorés ajoutés. La re-

cherche microbiologique est effectuée séparément, le système de culture sanguine étant séparé du système de prise de sang par une cassure effectuée après entaille

au niveau de l'anneau 9 du rétrécissement annulaire 3.

On obtient ainsi une séparation entre le milieuliquide 11 et le milieu solide 10 o s'effectue la croissance

bactérienne, si bien qu'on peut procéder à une inocula-

tion séparée et à un prélèvement d'échantillons-aux fins de traitement ou de recherches bactériologiques ultérieurs La séparation entre le milieu nutritif liquide 11 et la phase gélosée solide 10 s'effectue lors de la brisure du récipient 1; 2 du système de culture sanguine de manière que la partie 2 avec la gélose 10

soit dirigée vers le haut. Il est ainsi également pos- sible d'ajouter au récipient 1; 2 des quantités déter-

minées de gaz avec lesquelles on peut multiplier les souches de bactéries qui sont difficiles à détecter dans

une atmosphère d'oxygène.

La partie liquide et la partie solide du mi-

lieu nutritif ont, au sens de l'invention, la composi-

tion préférée suivante: Partie liquide du milieu nutritif: Eau distillée 1000 g Saccharose 100 g Peptone pancréatique 20 g Glucose 10 g Extrait animal 2,5 g Chlorure de sodium

Indométhazine 0,0028....

Carraghénine 0,01....

Partie solide du milieu nutritif: Gélose nutritive stérile I-DAB7 Glucose

Pourpre de bromocrésol (indica-

teur) Les différents composants peuvent se présenter sous d'autres proportions selon

recherché dans l'application.

99,5 g 0,5 g 0,0076 g également le but 3,0 g 0,0035 g 0,08 g

Claims (6)

REVENDICATIONS

1) Procédé de détection des bactériémies o l'on

aspire le sang quantitativement dosé au moyen d'un sys-

tème de prise de sang dans un récipient d'un système de culture sanguine muni d'un système pour faire le vide ou pour introduire un gaz particulier, et o on mélange ce sang avec un milieu nutritif liquide, caractérisé en ce que le sang aspiré dans le récipient inocule simultanément

le milieu nutritif liquide pourvu d'additifs anti-bactéri-

cides et un milieu nutritif solide mélangé à celui-ci et en ce qu'ensuite on réalise la culture bactérienne dans les deux milieux nutritifs à une température appropriée et en ayant incliné le récipient de façon appropriée, et en ce qu'on le rend visible en ajoutant des indicateurs

colorés.

2) Dispositif de détection des bactériémies, cons-

titué par un système de prise de sang et un système de culture sanguine, caractérisé en ce que le récipient de culture sanguine (1; 2) a une forme d'ampoule avec un rétrécissement annulaire (3) et en ce que la position du rétrécissement annulaire (3) sur la hauteur de l'ampoule

est adaptée au rapport quantitatif recherché entre un mi-

lieu nutritif solide et un milieu nutritif liquide

(10; 11), de préférence au rapport 1:3.

3) Dispositif selon la revendication 2, caracté-

risé en ce que le rétrécissement annulaire (3) possède

à sa surface un anneau de brisure (9 et en ce que le dia-

mètre de son passage se situe dans un intervalle allant

de 6 à 10 mm.

3? 4) - Dispositif selon la revendication 2, caracté-

risé en ce que dans le récipient du système de culture sanguine (1; 2) le milieu nutritif liquide et le milieu nutritif solide (10; 11) sont disposés l'un derrière l'autre et sont en contact l'un avec l'autre et en ce que le milieu nutritif solide (10) est fixé dans sa ]8

position par le rétrécissement annulaire (3).

) Dispositif selon la revendication 2, carac-

térisé en ce que le récipient du système de culture san-

guine (1; 2) est relié au système de prise de sang par l'intermédiaire d'une pièce de liaison élastique (5, de préférence constituée d'un plastique mou transparent,

le tout formant une unité fermée formée d'éléments suc-

cessifs, et en ce que l'axe du système de prise de sang est incliné par rapport à l'axe du système de culture

sanguine et peut se mouvoir dans toutes les directions.

6) Dispositif selon la revendication 2, caracté-

risé en ce que la partie inférieure du petit tube de la canule d'injection (6) est allongée de manière qu'elle entoure la pointe en verre cassable (4) du récipient du

système de culture sanguine (1; 2).

7) Dispositif selon les revendications 2 à 6,

caractérisé en ce qu'un capuchon de protection (8) est disposé de façon adapté autour du sommet en verre cassable

(4) du système de culture sanguine, de la pièce de liai-

son élastique (5) et du système de prise de sang.

8) Milieu nutritif nécessaire à la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il

contient, outre des substances antibactéricides, des subs-

tances destinées à empêcher la coagulation du sang ainsi qu'un système d'indicateurs dépendant du pH, et en ce que de préférence la partie liquide du milieu nutritif contient

de l'indométhazine et de la carraghénine.