FI96311B - Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitu tio)-7-okso-1-atsabisyklo/3.2.0/hept-2-eeni-2-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitu tio)-7-okso-1-atsabisyklo/3.2.0/hept-2-eeni-2-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI96311B
FI96311B FI905912A FI905912A FI96311B FI 96311 B FI96311 B FI 96311B FI 905912 A FI905912 A FI 905912A FI 905912 A FI905912 A FI 905912A FI 96311 B FI96311 B FI 96311B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
mmol
tert
azabicyclo
formula
group
Prior art date
Application number
FI905912A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI905912A (fi
FI96311C (fi
FI905912A0 (fi
Inventor
Alain Martel
Carol Bachand
Marcel Menard
Original Assignee
Squibb Bristol Myers Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Squibb Bristol Myers Co filed Critical Squibb Bristol Myers Co
Publication of FI905912A0 publication Critical patent/FI905912A0/fi
Publication of FI905912A publication Critical patent/FI905912A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI96311B publication Critical patent/FI96311B/fi
Publication of FI96311C publication Critical patent/FI96311C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D477/00—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D477/00—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring
    • C07D477/10—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
    • C07D477/12—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached in position 6
    • C07D477/16—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached in position 6 with hetero atoms or carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 3
    • C07D477/20—Sulfur atoms
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

- 96311
Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten 6-(l-hyd-roksietyyli)-3-(substituoitu tio)-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappojohdannaiSten valmistamiseksi 5
Tämä keksintö koskee menetelmää uusien karbape-neemiantibioottien valmistamiseksi, joiden 4-asemassa on substituoitu alkyyliryhmä, ja niiden ei-toksisten farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, joil-10 la on mikrobien vastainen aktiivisuus. Sen vuoksi nämä karbapeneemiantibiootit ja niiden farmaseuttiset koostumukset ovat käyttökelpoisia ihmisten ja eläinten bakteeri-infektioiden hoidossa, joko yksin tai yhdistelmänä muiden antibioottien kanssa. Nämä keksinnön mukaisella menetel-15 mällä valmistetut yhdisteet ovat 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitutio)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappojohdannaisia, joilla on kaava I
OH 2 l A-R2 20 CH3-CH f ~ 'co2r< 25 tai niiden myrkyttömiä farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, kuten jäljempänä on tarkemmin määritelty.
Tämän tyyppisten yhdisteiden nimistä voi perustua joko perusnimeen "karbapeneemi", joka kuuluu triviaalini-mien järjestelmään, tai Chemical Abstractsin mukaiseen 30 systemaattiseen nimeen. Tämän keksinnön yhteydessä bisyk- 2 96ό 11 li sen rakenteen asemat on numeroitu Chemical Abstractin järjestelmän mukaisesti, esimerkiksi 3-R3, 4-R2, 6-R1-7-ok-so-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo, joka kuvataan seuraavalla kaavalla 5
1 RZ
I I \i_D3 0 co2h 10 — Termiä "karbapeneemi", kuten tässä on käytetty yhdisteryhmästä puhuttaessa, käytetään erotuksetta nimen 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo kanssa. Kaikissa tapauksissa käytetty numerointijärjestel-15 mä on kuitenkin Chemical Abstractsin mukainen numerointi-järjestelmä, kuten edellä on kuvattu.
Alalla tunnetaan suuri määrä karbapeneemianti-biootteja. Tämän antibioottiluokan edelläkävijä on tiena-mysiini (US-patentti nro 3 950 357, myönnetty 13.4.1976), 20 joka eristettiin ensimmäiseksi fermentaatiosta ja jolla on laaja-alainen antibioottinen aktiivisuus. Kehitettiin imi-peneemi (US-patentti nro 4 194 047, myönnetty 18.3.1980), seuraava kemiallisesti stabiilimpi tienamysiinin johdannainen. Kliininen käyttökelpoisuus oli kuitenkin rajoitet-25 tua, koska se hajosi ihmisessä nopeasti munuaisen dehydro-peptidaasin (DHP) vaikutuksesta. Tästä syystä imipeneemiä annetaan kliinisesti yhdistelmänä DHP-inhibiittorin kanssa.
- 96311 3
OH
---½.______ tienamysiini; R=H
5 ΠΊ) S-CH2CH2-NHR imipeneemi; R=CH=NH
° C02H
Imipeneemin antibioottisen aktiivisuuden laaja-alaisuudesta huolimatta tarvitaan tehokkaampia karbapenee-10 miantibiootteja, jotka ovat sekä kemiallisesti että biologisesti imipeneemiä stabiilimpia tarttuvien tautien hoidossa. Parannettujen karbapeneemiantibioottien etsiminen jatkuu, mitä kuvastaa tällä alueella myönnettyjen ja julkaistujen patenttien suuri määrä. Lähintä karbapeneemi-15 aluetta kuvataan seuraavissa julkaisuissa ja patenteissa.
EP-patenttijulkaisussa 30 032, julkaistu 10.6. 1981, kuvataan suuri määrä karbapeneemejä, joilla on kaava R7 R* n 2 20 Ri-1 y ] /}—SR8
w C02H
25 jossa R1, R2, R6, R7 ja R8 on valittu toisistaan riippumatta ryhmästä, jonka muodostavat muun muassa vety (R1 ja R2 eivät merkitse vetyä), substituoitu ja substituoimaton alkyyli, alkenyyli ja alkynyyli, jossa on 1 - 10 hiiliatomia. Yleisessä esityksessä ei edellytetä mitään erottelua 30 erilaisten substituenttien R1, R2, R6, R7 ja R8 välillä, 96311 4 paitsi että edellytetään, että R1 ja R2 eivät merkitse vetyä.
EP-patenttijulkaisussa 45 198, julkaistu 3.2.
1982, kuvataan sarja karbapeneemejä, joilla on kaava & 10 C02H ^ jossa R1 on alkyyli, aryyli, alkyylitio, aryylitio tai asyyliaminoalkyylitioryhmä; R2 ja R3 merkitsevät toisistaan riippumatta alkoksikarbonyyli- tai syaaniryhmää tai ryh-15 mää, jolla on kaava COR1; ja R3 voi edelleen olla alkyyli-tai aryyliryhmä. Esityksessä edellytetään, että 4-asemassa on kaksi substituenttia, joista ainakin toinen on muu kuin alkyyliryhmä.
EP-patenttijulkaisussa 71 908, julkaistu 16.2.
20 1983, kuvataan sarja karbapeneemejä, joilla on kaava R7 R9\>° R‘ 25 /'»'f
C02H
jossa R6 ja R7, ja R9 ja R10 muodostavat ryhmän substituent-teja, joita ei erotella erikseen, mutta jotka ovat samoja 30 kummallekin ryhmälle. Vaikka sivulla 57 on luettelo edul-
tl f IK I Mil I I I II
96311 5 lisistä substituenteista R9:lle ja R10:lle, vain metyyli on havainnollistettu esimerkeissä.
EP-patenttijulkaisussa 160 391, julkaistu 6.11. 1985, kuvataan sarja karbapeneemejä, joilla on kaava
_ 10 C0*H
jossa R1 ja R2 ovat samat tai erilaiset, ja merkitsevät vetyatomia (edellyttäen, että R1 ja R2 eivät kumpikin ole vetyatomeja), halogeeniatomia, C2_7-alkoksikarbonyyliryhmää 15 tai substituoitua tai substituoimatonta Cj.^-alkyyli-, C2_6-alkenyyli-, C2.6-alkynyyli-, C^g-alkoksi-, C^-alkyylitio-, C3_e-sykloalkyyli-, C6.10-karbosyklistä aryyli-, aralkyyli-, aralkenyyli- tai aralkynyyliryhmää, joissa mm. ryhmät on substituoitu erilaisilla substituenteilla, tai R1 ja R2 20 muodostavat yhdessä hiiliatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, C3_8-alisyklisen renkaan. Ainoat esimerkeissä havainnollistetut substituentit R^lle ja R2:lle ovat sel-"'T' laisia, joissa R1 ja R2 merkitsevät metyyliä, metoksia, fluoria ja 1,1-dimetyyliä.
25 EP-patenttijulkaisussa 160 876, julkaistu 13.11.
1985, kuvataan sarja karbapeneemejä, joilla on kaava 6 96311 0H R9 74-r co2r4 jossa R9 on halogeeni, OR, 0S02R, OP(OR)2, SH, SR, SR, S02R, II It * 0 0 Φ 10 NH2, NHR, N(R)2, N(R)3, NHCR, NRC, joissa R on vety, C^-
II II
0 0 alkyyli, C2_6-alkenyyli, C2_6-alkynyyli, fenyyli, fenyylial-kyyli, jossa on 7 - 12 hiiliatomia, sykloalkyyli, jossa on 3-6 hiiliatomia, sykloalkyyli, Jonka renkaassa on 3 - 6 15 hiiliatomia ja alkyyliosassa 1-6 hiiliatomia, heterosyk-lisiä ryhmiä, joita ovat mm. heterosyklyyli, heterosyklyy-lialkyyli, heteroaryyli ja heteroaryylialkyyli; jolloin heterosyklinen ryhmä on jokin pitkästä luettelosta substi-tuentteja. Onneksi sivulla 29 on annettu luettelo esimerk-20 kisubstituenteista R9:lle, joka luettelo osoittaa, että R9 on kiinnittynyt karbapeneemirenkaaseen halogeenin, rikin, hapen, typen ja fosforin avulla.
EP-patenttijulkaisussa 170 019, julkaistu 5.2. v 1986, kuvataan sarja karbapeneemejä, joiden 4-asema on 25 substituoitu eetteriryhmällä ja joilla on kaava _ o OR1 >4- co2h < u i ano i i i m < . 96311 7 jossa R1 on alempi alkyyli, aryyli tai aryyli(alempi al-kyyli), ja R3 ja R4 ovat karbapeneemien tavanomaisia subs-tituentteja. Esimerkeissä havainnollistetut substituentit ovat sellaisia, joissa R1 on metyyli, etyyli, isopentyyli 5 ja fenyyli. Kuitenkin 4. - 7.10.1987 pidetyn konferenssin, Twenty-Seventh Interscience Conference, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, tiivistelmässä 759 (Abstract 759) E. Goetschi, yksi EP-170 019:n keksijöistä, kuvaa joitakin Ιβ-alkoksikarbapeneemejä, joista Ro 19-8928, jossa R1 on w 10 hydroksietyyli, erityisesti havainnollistettiin esimerkein.
Siten tämän keksinnön tavoitteena on aikaansaada uusi ryhmä antibiootteja, joilla on mikrobien vastainen aktiivisuus ja jotka ovat käyttökelpoisia ihmisten ja 15 eläinten tarttuvien tautien hoidossa.
Tämä tavoite saavutetaan keksinnön mukaisella menetelmällä uusien 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitu t io) - 7-okso-1 -at sabisyklo [3.2.0] hept - 2 -eeni - 2 -karboksyyli -happo johdannaisen valmistamiseksi, jolla johdannaisella on 20 kaava I
0H 2 w I A-R2 ch3-ch t C0zR4 8 • 96ό11 tai sen myrkyttömän farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, jossa kaavassa A on substituoimaton tai hydroksisubstituoitu haa- rautumaton tai haarautunut C2_5-alkyleeniryhmä, 5 R2 on hydroksi, halogeeni, fenyyli, syaani, atsido, aminoetyylitio, kvaternäärinen ammonioryhmä, jolla on kaava CH3 + ryhmä -NR5R6, sukkinimido-oksi, (N-formimidoyyli)-amino, guanidino, metyylikarbamoyylioksi, atsido-15 asetoksi, aminoasetoksi tai atsetidinyyli; B on haarautumaton tai haarautunut C^-alkyleeniryh- mä tai suora sidos, kun R3 on kiinnittynyt rikki-atomiin hiiliatominsa kautta; R3 on vety, hydroksi, syaani, Cj.g-alkyyli, halogeeni, 20 fenyyli, -NR5 R6 , (N-formimidoyyli)amino, guanidi no, karbamoyylioksi, karbamoyyli, N,N-dimetyyli-formimidoyyli tai heterosyklinen ryhmä, joka on kiinnittynyt C-atominsa kautta ja on atsetidinyyli, pyridiini, 1,2,3-triatsoli, imidatsoli, pipe-25 ridiini tai l-tia-2,3-diatsoli ja on mahdollises ti substituoitu Cj^-alkyylillä, tai R3 on pyrro-lidiini, joka on mahdollisesti substituoitu ryhmällä -C( =0)N(CH3)2, ja R5 ja R6 ovat toisistaan riippumatta vety tai C^-alkyyli tai R5 ja R6 30 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiin- ' ' - sa.-i *ttt M «*· ' ' - 96311 9 nittyneet, muodostavat pyrrolidiinirenkaan; R4 on vety tai poistettavissa oleva karboksin suoja- ryhmä, kuten allyyli tai p-nitrobentsyyli; R5 ja R6 ovat toisistaan riippumatta vety, C^g-alkyyli, ja 5 kun R5 on vety tai C1.4-alkyyli, R6 on substituoitu C^-alkyyli, jonka substituentti on syaani tai fe-nyyli, tai aminohapon tai peptidin happotähde, joka on S-kloori-L-alanyyli-O-kloori-L-alanyyli, Lalanyyli tai L-alanyyli-L-alanyyli, tai R5 ja R6 w 10 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiin nittyneet, muodostavat substituoimattoman tai C1.4-alkyylillä substituoidun heterosyklisen renkaan, joka on pyrrolidiini, piperatsiini, pyridiini, imidatsoli tai morfoliini.
15 Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat tehokkaita mikro-organismien inhibiittoreita ja käyttökelpoisia mikrobien vastaisina aineina ihmisten ja eläinten tarttuvien tautien hoidossa.
Termit "C^-alkyyli" ja "C^-alkyyli" käytettynä 20 tässä ja patenttivaatimuksissa (ellei tekstissä toisin ilmoiteta) tarkoittavat haarautumattoman tai haarautuneen ketjun omaavia aikyyliryhmiä, kuten metyyliä, etyyliä, propyyliä, isopropyyliä, butyyliä, iso-butyyliä, t-butyyl-iä, amyyliä, heksyyliä ja niiden kaltaisia. Näissä ryh-25 missä on edullisesti 1-4 hiiliatomia ja edullisimmin niissä on 1 tai 2 hiiliatomia. Termit "haarautumaton tai haarautunut C2_5-alkyleeniryhmä" ja "haarautumaton tai haarautunut C1.4-alkyleeniryhmä" käytettynä tässä ja patenttivaatimuksissa A:lie ja B:lle tarkoittavat vastaavasti ky-30 seisen määrän hiiliatomeja sisältäviä alkyleeniryhmiä, • 96311 10 kuten metyleenlä, etyleeniä, propyleeniä, metyylietylee-niä, butyleeniä, metyylipropyleeniä, etyylietyleeniä, di-metyylietyleeniä, pentyleeniä, metyylibutyleeniä, etyy-lipropyleeniä, heksyleeniä, metyylipentyleeniä ja niiden 5 kaltaisia. Termi "hydroksisubstituoitu haarautumaton tai haarautunut C2_5-alkyleeniryhmä" käytettynä tässä ja vaatimuksissa A:lie tarkoittaa vastaavia alkyleeniryhmiä, jotka on substituoitu hydroksilla, kuten 2-hydroksietyleeniä, 2-tai 3-hydroksipropyleeniä, 2-, 3- tai 4-hydroksibutylee-10 niä, 2- tai 3-hydroksimetyylibutyleeniä, 2-, 3-, 4- tai 5- - hydroksipentyleeniä ja niiden kaltaisia. Ellei erikseen ole toisin ilmoitettu, termin "halogeeni" tarkoitetaan tässä ja patenttivaatimuksissa käytettynä käsittävän bromin, kloorin, jodin ja fluorin, kun taas termin "halogeni-15 di" tarkoitetaan käsittävän bromidi-, kloridi- ja jodidi-anionin. Tämän keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet, jotka sisältävät substituenttina R6 aminohapon tai peptidin asyyliryhmän, ovat aktiivisempia in vivo kuin in vitro.
Termin "myrkytön farmaseuttisesti hyväksyttävä suola" käy-20 tettynä tässä ja vaatimuksissa tarkoitetaan käsittävän ei-toksiset happo- ja emässuolat ja kahtaisionien suolat. Emässuolojen tarkoitetaan käsittävän epäorgaaniset metal-lisuolat, kuten natrium-, kalium-, kalsium- ja magnesium-suolat, ammoniumsuolan ja ei-toksisten amiinien suolat, 25 kuten trialkyyliamiinien, pyridiinin, pikoliinin, dibent-syyliamiinin, etanoliamiinin, N-metyylimorfoliinin ja muiden karboksyylihappojen suolojen muodostamiseen käytettyjen amiinien suolat. Happosuolojen tarkoitetaan käsittävän epäorgaaniset happosuolat, kuten vetykloridin, vetybromi-30 din, vetyjodidin, sulfaatin, fosfaatin ja niiden kaltai- - 96311 11 set, ja orgaaniset happosuolat, kuten formaatin, asetaa-tin, maleaatin, sitraatin, sukkinaatin, askorbaatln, lak-taatin, fumaraatin ja tartraatin, joita on käytetty emäksisten amiinien suolojen muodostamiseksi. Koska kaavan l 5 mukaisissa yhdisteissä voi myös olla hapan tai emäksinen ryhmä substituenteissa R2 ja R3, termin "myrkytön farmaseuttisesti hyväksyttävä suola" tarkoitetaan käsittävän näiden funktionaalisten ryhmien sopivat happo- tai emäsad-ditiosuolat, kuten happaman tai emäksisen ryhmän vetyklo-w 10 ridi-, fosfaatti-, natrium-, kalium-, ammoniumkloridi-, asetaatti- ja muut suolat, kuten edellä on kuvattu.
Karboksin suojaryhmät, joita voidaan käyttää tässä keksinnössä karboksyylihapporyhmän suojaamiseksi, ovat alan ammattimiesten hyvin tuntemia, ja mainitut ryhmät 15 voidaan edullisesti haluttaessa poistaa menetelmillä, jotka eivät aiheuta mitään olennaista molekyylin loppuosan tuhoutumista, esimerkiksi kemiallisella tai entsymaatti-sella hydrolyysillä, käsittelemällä kemiallisilla pelkis-timillä lievissä olosuhteissa, säteilyttämällä ultravio-20 lettivalolla tai katalyyttisellä hydrauksella. Esimerkkejä tällaisistä helposti poistettavissa olevista karboksin suojaryhmistä ovat mm. sellaiset ryhmät kuin Cj.g-alkyyli, """ 2,2,2-trikloorietyyli, silyyli, kuten trimetyylisilyyli ja t-butyylidimetyylisilyyli, fenyyli, rengassubstituoitu fe-25 nyyli, esim. 4-kloorifenyyli, tolyyli ja t-butyylifenyyli, fenyyli(alempi alkyyli), rengassubstituoitu fenyyli(alempi alkyyli), esim. bentsyyli, 4-metoksibentsyyli, 4-nitro-bentsyyli, bentsyylihydryyli ja trityyli, metoksimetyyli, 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli, bentsyylioksimetyyli, 30 (alempi alkanoyyli)oksi(alempi alkyyli), kuten asetoksime- - 96311 12 tyyli, propionyylioksimetyyli, alempi alkenyyli, kuten vinyyli ja allyyli, substituoimaton tai substituoitu fenyy-li-C^-alkoksikarbonyyli, kuten bentsyylioksikarbonyyli ja 4-nitrobentsyylioksikarbonyyli, ja C2_4-alkenyylioksikarbo-5 nyyli, kuten allyylioksikarbonyyli. Erityisen edullisia karboksin suojaryhmiä ovat bentsyyli, 4-nitrobentsyyli, 2-nitrobentsyyli, 2,4-dimetoksibentsyyli, 4-metoksibent-syyli ja niiden kaltaiset, ja edullisesti allyyli tai substituoitu allyyli. Muita sopivia suojaryhmiä on kuvattu 10 julkaisussa "Protective Groups in Organic Synthesis", -
Theodora W. Greene (John Wiley & Sons, 1981), kappaleessa 5 karboksin osalta, joka sisällytetään tähän viittauksella.
Aminon suojaryhmät, joita voidaan käyttää tässä 15 keksinnössä aminoryhmän suojaamiseksi, ovat alan ammattimiesten hyvin tuntemia. Esimerkkejä tavanomaisista aminon suojaryhmistä on kuvattu julkaisuissa J.W. Barton, Protective Groups in Organic Chemistry, J.F.W. McOmie, toim.,
Plenum Press, New York, N.Y., 1973, kappale 2 ja R.A.
20 Boissonnas, Advances in Organic Chemistry, 3 (1963) 159 -190. Alan ammattimiehille on ilmeistä, että kyseessä oleva aminon suojaryhmä ei ole ratkaiseva ja että tarvitsee vain valita ryhmä, joka on stabiili reaktiomenettelyn seuraa-vissa vaiheissa ja joka voidaan poistaa olosuhteissa, 25 joissa herkkä β-laktaamiydin säilyy.
Sopivia aminon suojaryhmiä ovat esimerkiksi asyy-liryhmät, kuten formyyli, asetyyli ja substituoitu asetyy-li (esim. halogenoitu asetyyli), bentsoyyli ja substituoitu bentsoyyli, alkoksikarbonyyli, halogenoitu alkoksikar-30 bonyyli, alkenyylioksikarbonyyli, aralkoksikarbonyyli, . 96311 13 halogenoitu aralkoksikarbonyyli, bentsyyli ja bentsyyli-johdannaiset, trityyli ja trityylijohdannaiset, sulfenyy-lijohdannaiset, sulfonyylijohdannaiset, diasyylijohdannai-set, kuten ftaali-imido tai sukkinimido tai niiden johdan-5 naiset, ja aldehydeistä tai ketoneista muodostetut Sohif-fin emäkset. Erityisiä esimerkkejä sopivista aminon suoja-ryhmistä ovat mm. formyyli, asetyyli, trifluoriasetyyli, triklooriasetyyli, bentsoyyli, toluoyyli, 2,2,2-trikloori-etoksikarbonyyli, isopropoksikarbonyyli, t-butoksikarbo-w 10 nyyli, syklopentyylioksikarbonyyli, sykloheksyylioksikar-bonyyli, bentsyylioksikarbonyyli, 2-nitrobentsyylioksikar-bonyyli, 4-nitrobentsyylioksikarbonyyli, 4-metoksibentsyy-lioksikarbonyyli, 4-klooribentsyylioksikarbonyyli, allyy-lioksikarbonyyli, 2-furfuryylioksikarbonyyli, trimetyyli-15 silyylietoksikarbonyyli, N-fenyylikarbamoyyli, bentsyyli, 4-nitrobentsyyli, trityyli, bentseenisulfonyyli, p-toluee-nisulfonyyli, 2-nitrofenyylisulfenyyli, fenyylitiokarbo-nyyli, trimetyylisilyyli, trietyylisilyyli, trifenyylisi-lyyli, t-butyylidimetyylisilyyli, metyylidifenyylisilyyli 20 ja diasyylipohjaiset aminon suojaryhmät, kuten ftaali-imido, sukkinimido ja niiden johdannaiset.
Kaavan I mukaisissa yhdisteissä on useita asym-^ metrisiä hiiliatomeja, ja siten ne voivat esiintyä useissa stereokemiallisissa muodoissa. Sekä isomeerien seokset 25 että yksittäiset stereoisomeerit kuuluvat keksinnön mukai sesti valmistettuihin yhdisteisiin. Edullisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat yhdisteet, joiden 1-atsabisyklo- [3.2.0]heptaanirengasrakenteessa on 4R,5S,6S-konfiguraa-tio, joka on sama stereokemiallinen konfiguraatio kuin 30 antibioottisella tienamysiinillä. Lisäksi 6-aseman hydrok- 14 9631 1 sietyylisubstituentti sisältää ja ryhmä A voi sisältää asymmetrisiä hiiliatomeja. Mainittu 6-aseman substituentti voi esiintyä joko R- tai S-konfiguraatiossa. Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden tarkoitetaan 5 käsittävän sekä R- että S-konfiguraatiot, siis 6-aseman 1-hydroksietyylisubstituentin R- ja S-isomeerit. Tämä substituentti on edullisesti R-konfiguraatiossa, siis lR-hyd-roksietyyli. Siinä tapauksessa, että substituentin A alky-leeniryhmässä on haarautunut alkyylisubstituentti tai hyd-10 roksisubstituentti, kaavan I mukaisissa yhdisteissä on vielä yksi asymmetrinen hiiliatomi. Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden tarkoitetaan käsittävän kaavan I mukaisten yhdisteiden nämä molemmat isomeerit, esimerkiksi esimerkkien 57, 58 ja 152 yhdisteet.
15 Kaavan 1 mukaisia karbapeneemiyhdisteitä valmis tetaan tämän keksinnön mukaisesti siten, että a) yhdiste, jolla on kaava Xla A-R12 R11 / 20 Ϊ—r\ XIa C02-P1 jossa R11 on 25 OH O-P2
I I
-CHCH3 tai -CHCH3 A on edellä määritelty; P1 on tavanomainen helposti pois-30 tettavissa oleva karboksin suojaryhmä, joka on -CH2-CH=CH2
Il : U-l AI» 111«! 96311 15 tai p-nitrobentsyyli; R12 on hydroksi, halogeeni, amino, atsido, 0-P3 tai N-P4; P2 ja P3 merkitsevät toisistaan riippumatta tavanomaisia hydroksin suojaryhmiä, kuten tertbu-tyylidimetyylisilyyli, trietyylisilyyli ja trimetyylisi-5 lyyli; p4 on tavanomainen aminon suojaryhmä ja L1 on -0-P( =0)(0Ph)2, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava HS-B-R3 w 10 jossa B ja R3 ovat edellä määritellyt, kaavan XUIa A-R12 R11 f 15 SSj" —S - B - R3 XUIa C02P* 20 mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa kaavassa R11, R12, R3, A, B ja P1 ovat edellä määritellyt, ja poistetaan hydroksin suojaryhmä ja aminon suojaryhmä, mikäli kaavan 'rl XUIa mukaisessa yhdisteessä niitä on; tai b) yhdiste, jolla on kaava XV 25
?”ρ2 A-OH
CH3-CH t
Γ /)-S-B-R3 XV
30 ty \ C02-P1 96311 16 jossa R3, A, B, P1 ja P2 ovat edellä määritellyt, saatetaan reagoimaan sopivan asylolntl- tai aktivointlaineen kanssa ja sen jälkeen sopivan nukleofiilin kanssa kaavan XVIIa 5 ?"P2 A-R13 ch3-ch r I A>-S-B-R3 XVIIa
0 I
,n CO2-P1 10 2 — mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa kaavassa R3, A, B, P1 ja P2 ovat edellä määritellyt ja R13 on atsido, metyylikar-bamoyylioksi, atsidoasetoksi, sukkinimido-oksi, aminoetyy-litio tai -NR5R6, jossa R5 ja R6 ovat edellä määritellyt, ja 15 poistetaan hydroksin suojaryhmä P2; ja haluttaessa suoritetaan ennen hydroksin suoja-ryhmän P2 poistamista, samanaikaisesti sen kanssa tai sen jälkeen yksi tai useampi seuraavista reaktioista: (i) pelkistetään atsidoryhmä substituenteissa R2 20 ja/tai R3 aminoryhmäksi; (ii) imidoyloidaan aminoryhmä R2 ja/tai R3 (N-formimidoyyli)aminoryhmäksi; (lii) asyloidaan aminoryhmä R2 ja/tai R3, edullisesti aminoiminometaanisulfonihapolla, guanidinoryhmäksi; 25 (iv) asyloidaan aminoryhmä R2 ryhmäksi -NR5R6, jos sa R5 on vety ja R6 on S-kloori-L-alanyyli-B-kloori-L-ala-nyyli, L-alanyyli-L-alanyyli tai L-alanyyli; (v) alkyloidaan aminoryhmä R2 ryhmäksi -NR5R6, jossa R5 on C1.4-alkyyli ja R6 on C^-alkyyli tai substituoitu 30 C1.4-alkyyli, jossa substituentti on syaani tai fenyyli; 17 . 9C311 (vi) poistetaan suojaryhmä P1, niin että saadaan yhdiste, jossa R4 on vety; (vii) esteröidään yhdiste, jossa R4 on vety; (viii) kvaternisoidaan saatu kaavan I mukainen 5 yhdiste; (ix) muutetaan saatu kaavan I mukainen yhdiste myrkyttömäksi farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolak-seen.
Kaavojen Xla ja XV mukaisia lähtöaineita voidaan w 10 valmistaa erilaisilla menetelmillä, esimerkiksi lähtien
uusista yhdisteistä, joilla on kaava II
nil A_Rl2 R11 r 15 C02-P1 jossa R11, R12 ja P1 ovat edellä määritellyt.
20 Kaavan II mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa
uusista välituotteista, joilla on kaava III
"T A-R12 R11 f |j2 25 ^-i^jrtOz-P1 λ-N 111 οκ \1β jossa R11, A, R12 ja P1 ovat edellä määritellyt, ja R18 on 30 vety tai P4, jossa P4 on edellä määritelty.
96311 18
Kaavan III mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa uusista välituotteista, joilla on kaava IV
A-R12 5 R 1\Ao!h
A
cr \1B
10 jossa R11, A, R12 ja R18 ovat edellä määritellyt. —
Kaavan IV mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa erilaisilla menetelmillä, ja havainnollisuuden vuoksi voidaan esittää yhteenveto menetelmästä kaavan IV mukaisten yhdisteiden yhden edullisen toteutusmuodon valmistamisek-15 si, joka menetelmä tarkoittaa kaavan IVa mukaisten välituotteiden valmistamista reaktiosarjalla, jota havainnollistaa reaktiokaavio I.
Tässä sarjassa tioesteri VI, joka valmistetaan vaiheessa (A) tiolista V, muutetaan silyylienolieetteriksi 20 VII vaiheessa (B), ja ilman erottamista suoritetaan kyt-kentäreaktio vaiheessa (C), jolloin saadaan atsetidinoni VIII 4-aseman poistuvan ryhmän L nukleofiilisellä korvauksella. Muodostunut välituote IX (kuvattu β-isomeerimuo-dossa) voidaan sitten hydrolysoida vaiheessa (D), jolloin 25 saadaan vastaava karboksyylihappo IVa. Reaktioiden yleinen menettely ja menetelmät, joita on havainnollistettu reak tiokaaviossa 1, on kuvattu US-patentissa nro 4 772 683, myönnetty 20.9.1988.
• 96311 19 5 Reaktiokaavio 1 - ίο ΓΤ* r" "Υ^ι S:^h2sh 0
V VI
0-P2 15 J 1
p ^ ch3-"A
a-r12 >r^>| "]—f VHI
Λ-H-H
0-P °_ 20 ^
zu VII
'· °,-p2 A-R- RV^ Γ2 l'Ri: - “A^sjy „
A-N 0 X-N
(y \ 0 \ IX IVa 30 20 • 96311
Viitaten nyt reaktiokaavioon 1, vaihe (A) kuvaa tiolin V esteröintireaktiota tioesteriksi VI. Vaiheen (A) reaktio on alan ammattimiesten hyvin tuntema, ja se voidaan toteuttaa 2-pikolyylimerkaptaanilla, jossa R on vety 5 tai metyyli, ja sopivasti aktivoidulla karboksiosalla, kuten tässä on kuvattu, jossa osassa A ja R12 ovat edellä määritellyt.
Vaihe (B) kuvaa reaktiota tioesterin VI ja sily-loivana aineena olevan triorganosilyylitriflaatin välillä, 10 jolloin muodostuu silyylienolieetteri VII. Vaiheen (B) re- - aktio toteutetaan inertissä orgaanisessa liuottimessa ja orgaanisen emäksen läsnä ollessa. Sopivia inerttejä orgaanisia liuottimia, joita voidaan käyttää, ovat mm. metylee-nikloridi, tetrahydrofuraani, hiilitetrakloridi, syklohek-15 saani, dioksaani, dimetoksietaani, dietyylieetteri ja klo roformi . Reaktiolämpötilat voivat olla välillä noin -40 -+30 °C. Reaktio toteutetaan sopivimmin sekoittamalla rea-genssit samalla jäähdyttäen, edullisesti lämpötilavälillä noin -15 - 0 eC, ja sen jälkeen antamalla niiden asteit-20 tain lämmetä huoneenlämpötilaan.
Silyloivina aineina olevat triorganosilyylitri-flaatit ovat hyvin tunnettuja, ja niitä ovat mm. trimetyy-lisilyylitrifluorimetaanisulfonaatti, tri-isopropyylisi-lyylitrifluorimetaanisulfonaatti,trietyylisilyylitrifluo-25 rimetaanisulfonaatti, t-butyylidimetyylisilyylitrifluori metaanisulf onaatti, t-butyylidifenyylisilyylitrifluorimetaanisulf onaatti ja 2,4,6-tri-(t-butyylifenoksi)dimetyyli-silyylitrifluorimetaanisulfonaatti. t-butyylidimetyylisi-lyylitrifluorimetaanisulfonaattia käyttämällä on saatu 30 edullisia tuloksia. Siten P on kyseessä olevan silyloivana
11 ! Iitti MK i t i «I
• 96311 21 aineena käytetyn triorganosilyylitriflaatin triorganosi-lyyliryhmä.
Sopivia orgaanisia amiiniemäksiä ovat mm. di-iso-propyylietyyliamiini, DBU (l,8-diatsabisyklo[5.4.0]undek-5 7-eeni), DBN (1,5-diatsabisyklo[4.3.0]non-5-eeni), mutta erityisen edullisia ovat tri-Cj^-alkyyliamiinit, kuten tri-metyyliamiini, trietyyliamiini, tributyyliamiini ja tri-propyyliamiini. On kuitenkin todettu, että tietyissä tapauksissa voidaan tarvita vahvempaa emästä vaiheen (A) w- 10 reaktion toteuttamiseksi.
Yleensä orgaaninen emäs ja silyloivana aineena oleva triorganosilyylitriflaatti ovat läsnä suunnilleen kaksinkertaisena molaarisena ylimääränä verrattuna tioes-teriin VI, ja emästä on lievä ylimäärä silyloivana aineena 15 olevaan triorganosilyylitriflaattiin nähden. Reaktioajat vaihtelevat tavallisesti noin yhdestä tunnista noin viiteen tuntiin, mutta yleensä suurin mahdollinen saanto saadaan noin kolmessa tunnissa. Reaktio toteutetaan edullisesti inertissä atmosfäärissä.
20 Vaiheessa (C) silyylienolieetteri VII saatetaan reagoimaan atsetidinonin VIII kanssa, jonka 4-asema on substituoitu, jolloin saadaan välituote IX. Reaktio toteu-^ tetaan Lewis-happokatalyytin ja liuottimen läsnä ollessa, joka liuotin on inertti Lewis-happokatalyytin läsnä olles-25 sa, ja edullisesti inertissä atmosfäärissä.
Sopivat edellä mainitut inertit liuottimet ovat edullisesti kuivia, ja ne muodostavat yleensä noin 10 % reaktioseoksen kokonaistilavuudesta. Dikloorimetaanin on todettu antavat tyydyttäviä tuloksia.
22 • 9C311
Sopivia Lewis-happokatalyyttejä ovat mm. sinkki-halogenidit, zirkoniumhalogenidit ja booritrifluoridi. Sinkkikloridin on todettu antavat tyydyttäviä tuloksia.
Silyylienolieetteri VII on substituoitu ryhmällä 5 -A-R12, jossa A ja R12 ovat edellä määritellyt.
3,4-disubstituoidut atsetidinonivälituotteet, kuten kaavan VIII mukaiset välituotteet, joissa P2 on tavanomainen hydroksin suojaryhmä ja L on tavanomainen poistuva ryhmä, ovat sinänsä tunnettuja, ja ne ovat avainväli-10 tuotteita karbapeneemi- ja peneemiantibioottien synteesis- ^ sä, joissa antibiooteissa on (R)-hydroksietyylisubsti-tuentti karbapeneemi- tai peneemiytimen 6-asemassa.
Kaavan VIII mukaisen yhdisteen 4-aseman substi-tuenttia merkitään symbolilla L, joka tarkoittaa poistu-15 vaa ryhmää, joka voidaan korvata silyylienolieetterin VII nukleofiilisellä substituutiolla. Tällaisia poistuvia ryhmiä ovat mm. asyylioksi (esim. asetoksi, propionyylioksi tai t-butyryylioksi), halogeeni (esim. kloori), aryylisul-fonyyli (esim. fenyylisulfonyyli), mesyyli ja tosyyli. L 20 on edullisesti asetoksi, koska 4-asetoksiatsetidinoni on helposti saatavilla oleva lähtöaine.
Atsetidinonin VIII hydroksin suojaryhmä P2 ja hyd-roksin suojaryhmä P3 kaavan VII mukaisen silyylienolieetterin substituentissa R12 voivat olla samat tai erilaiset.
25 P2 ja P3 ovat edullisesti samat ja edullisemmin P, P2 ja P3 ovat samat.
Hydroksin suojaryhmät, jotka ovat alan ammattimiesten tuntemia, ovat toivottuja, koska ne estävät sivu-reaktiot ja antavat suuremmat saannot reaktiosarjan myö-30 hemmissä vaiheissa. Sopivia hydroksin suojaryhmiä voivat 23 • 96511 olla esimerkiksi asyyliryhmät, kuten bentsyylioksikarbo-nyyli, bentshydryylioksikarbonyyli, trityylioksikarbonyy-li, p- nitrobentsyylioksikarbonyyli ja 2,2,2-trikloori-etoksikarbonyyli, aralkyyliryhmät, kuten bentsyyli, bents-5 hydryyli, trityyli tai p-nitrobentsyyli, tai triorganosi-lyyliryhmät, kuten tri-Cl.6-alkyylisilyyli (esim. trimetyy-lisilyyli, trietyylisilyyli, tri-isopropyylisilyyli, iso-propyylidimetyylisilyyli, t-butyylidimetyylisilyyli, me-tyylidi-isopropyylisilyyli tai metyylidi-t-butyylisilyy- __. 10 li), triaryylisilyyli (esim. trifenyylisilyyli, tri-p- ksyylisilyyli) tai triaralkyylisilyyli (esim. tribentsyy-lisilyyli). Esimerkkejä näistä ja muista sopivista hydrok-sin suojaryhmistä ja niiden valmistusmenetelmistä ja poistamisesta tunnetaan alalla, katso esim. Protective Groups 15 in Organic Synthesis, T.W. Greene, John Wiley & Sons, New York 1981, kappale 2.
Hydroksin suojaryhmä, joka valitaan P2:lle ja P3:lle, on edullisesti sellainen ryhmä, joka voidaan poistaa reaktiomenettelyn myöhemmässä vaiheessa. Suuria 20 triorganosilyyliryhmiä, kuten tri-isopropyylisilyyliä, t-butyylidifenyylisilyyliä tai t-butyylidimetyylisilyyliä, käytetään edullisesti, koska niillä aikaansaadaan olennai-sesti stereokontrolloitu pelkistysvaihe. Tällaiset ryhmät voidaan poistaa helposti lievissä olosuhteissa, esim. kä-25 sittelemällä metanolipitoisella HClrlla tai fluoridi- ionilla (esim. tetra-n-butyyliammoniumfluoridilla/tetra-hydrofuraanilla), jolloin herkkä β-laktaamiydin säilyy.
Vaiheen (C) reaktio toteutetaan edullisesti iner-tissä atmosfäärissä ja lämpötilassa, joka on noin -30 °C:-30 sta noin huoneenlämpötilaan. Reagenssit lisätään edullise- • 96311 24 sti samalla jäähdyttäen, noin -15 °C:ssa - noin +5 eC:ssa, ja annetaan reagoida noin 0-5 °C:ssa ja sen jälkeen haluttaessa annetaan lämmetä asteittain huoneenlämpötilaan. Reaktioseosta voidaan haluttaessa sekoittaa jopa 30 tuntia 5 suurimman mahdollisen saannon saavuttamiseksi.
Saadun välituotteen IX 6-isomeeri voidaan erottaa vastaavasta a-isomeeristä tavanomaisella kromatografiällä tai HPLC:llä, tai edullisesti kiteyttämällä, β-isomeeri voidaan vaihtoehtoisesti erottaa α-isomeeristä välituot-10 teen IX hydrolysoinnilla, kuten jäljempänä vaiheessa (D) ^ on esitetty, jolloin saadaan vastaava karboksyylihappo IVa, koska β-isomeeri kiteytyy ensin niin, että β/α-suhde on noin 2/1 tai sitä suurempi.
Vaiheessa (D) kaavan IX mukainen yhdiste hydroly-15 soidaan, jolloin saadaan vastaava karboksyylihappo IVa.
Alan ammattimiehet tuntevat hydrolysoinnin hyvin, ja se voidaan toteuttaa seuraavasti. Kaavan IX mukainen yhdiste voidaan ensin liuottaa liuottimeen, kuten tetrahydrofuraa-niin ja vesipitoiseen tetrahydrofuraaniin, ja sen jälkeen 20 lisätään samalla jäähdyttäen ylimäärä epäorgaanista emästä, kuten natriumhydroksidia. Voidaan lisätä myös vetyperoksidia. Vetyperoksidin lisääminen hydrolysointireaktioon on edullista, ja edullisemmin se voidaan lisätä ennen epäorgaanisen emäksen lisäystä. Reaktio menee tavallisesti 25 loppuun 1-2 tunnissa noin 0 °C:ssa - noin huoneenlämpö-tilassa, ja karboksyylihappo IVa saadaan, kun seos seuraa-vaksi tehdään happamaksi epäorgaanisella hapolla, kuten vetykloridihapolla.
Menettelystä kaavan lila mukaisten diatsoväli-30 tuotteiden valmistamiseksi kaavan IVa mukaisista yhdis- 25 - 56311 teistä voidaan sopivasti tehdä yhteenveto reaktiokaaviolla 2. Lyhyesti sanottuna tässä reaktiosarjassa atsetidinonin IVa karboksyylihappo-osa aktivoidaan ja korvataan monokar-boksisuojatulla magnesiummalonaatilla vaiheessa (E), jol-5 loin saadaan ketoesteri X, minkä jälkeen suoritetaan diat-sotointi vaiheessa (F), jolloin saadaan vastaava diatso-välituote lila.
26 • PCS 11 5 Reaktiokaavio 2 j-p2 A-*12 0-p2 a_r12 10 ch3-A I . ~ JJ I—r το2-ρ] κν-N E o 1
cr NH --► yj-N
(Γ IVa
X
15 2'P2 A-R12 J r n2 CH3-A “ 'rf y^2-p> -J_ i-i
CT XH
Ilia ^ 25 II «».1 llll I· I 4 ** . · 27 96511
Viitaten nyt reaktiokaavioon 2, hapon IVa reaktio ketoesteriksi X vaiheessa (E) toteutetaan sopivasti kaksivaiheisella menettelyllä. Karboksyylihappo-osa aktivoidaan ensin alan ammattimiesten hyvin tuntemalla tavanomai- .
5 sella karboksin aktivointiryhmällä ja edullisesti karbo-nyylidi-imidatsolilla inertissä liuottimessa, kuten tetra-hydrofuraanissa, dimetoksietaanissa, asetonitriilissä, bentseenissä tai tolueenissa, ja edullisesti bentseenissä tai tolueenissa tai asetonitriilin ja bentseenin seokses-w 10 sa. Reaktiolämpötilat voivat olla välillä noin -15 - noin 70 "C ja edullisesti noin 0 - 20 °C. Aktivoitu karboksivä-lituote voidaan eristää, mutta on edullista, että välituote saatetaan reagoimaan in situ inertissä atmosfäärissä toisessa vaiheessa magnesiummalonaatin kanssa, joka on 15 edullisesti kuivattu ennen käyttöä esimerkiksi atseotroop-pisesti poistamalla mahdollinen jäljelle jäänyt vesi Dean-Stark-loukulla. Magnesiummalonaatti on edullisesti mono-alkyyli- tai monoaryylimalonaatti, kuten monoallyyli- tai substituoitu allyylimalonaatti, monobentsyyli-, 2-nitro-20 bentsyyli-, 4-nitrobentsyyli-, 4-metoksibentsyyli- tai 2,4-dimetoksibentsyylimalonaatti.
Magnesiummalonaatin reaktio aktivoidun karbok-^ siosan kanssa toteutetaan inertissä liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa, dikloorimetaanissa, 25 asetonitriilissä, bentseenissä tai tolueenissa, ja edullisesti bentseenissä tai asetonitriilissä, lämpötilassa, joka on noin 0 - noin 80 °C. Reaktion annetaan edetä edullisesti noin 60 °C:ssa, kunnes reaktio on mennyt oleellisesti loppuun, mikä tapahtuu tavallisesti noin 18 tunnis-30 sa. Yleensä magnesiummalonaattia on edullisesti läsnä yli- 96311 28 määrä, joka on noin 1,1 - noin 3,0 mooliekvivalenttia yhtä ekvivalenttia kohti happoa IVa. Magnesiummalonaattiylimää-rä voidaan lisätä reaktioseokseen kerralla tai haluttaessa se voidaan lisätä asteittain, kunnes reaktio on täydelli-5 nen ja suurin mahdollinen saanto on saavutettu.
Vaiheessa (F) ketoesteri X diatsotoidaan, jolloin saadaan vastaava diatsovälituote lila. Diatsotointi on alalla hyvin tunnettu ja se voidaan toteuttaa inertissä liuottimessa, kuten asetonitriilissä, dikloorimetaanissa, 10 tolueenissa, bentseenissä tai niiden kaltaisissa. Reaktio toteutetaan edullisesti asetonitriilissä atsidin, kuten 4-karboksibentseenisulfonyyliatsidin, p-tolueenisulfonyy-liatsidin, metaanisulfonyyliatsidin tai niiden kaltaisten kanssa. Reaktio suoritetaan emäksen, kuten trietyyliamii-15 nin, dietyyliamiinin, pyridiinin, lutidiinin tai niiden kaltaisten läsnä ollessa, noin 1 - noin 30 tunnin aikana lämpötilassa, joka on noin 0 - 50 °C.
Reaktiokaaviossa 3 R12, A, P1 ja P2 ovat edellä määritellyt. Yleensä kaavan lila mukainen diatsoyhdiste 20 syklisoidaan suoraan vaiheessa (G) kaavan Ha mukaiseksi bisykliseksi ketoniksi. Vaihtoehtoisesti kaavan lila mukaisen diatsoyhdisteen 6-asemasta poistetaan haluttaessa ; suojaus vaiheessa (H) ennen syklisointia kaavan Hb mukai seksi bisykliseksi ketoniksi.
- 96311 29 5 Reaktiokaavio 3 0-P2 A-R12 OH a-R12 W 10 CH3 -/^V^CO^P3 CH3 \_/^i^Sio.-p1 I o I o /Ms H J-*.
Ox li -* CT π
Ilia IHb 15
G I
20 \ P jH t'RiZ
cxr\ ch3-A
Ar „Ar : co2-p3 co2-p3 1 ra I lb 25 IIa - 96311 30
Kaavan lila mukaisen diatsoyhdisteen syklisointi kaavan Ila mukaiseksi bisykliseksi yhdisteeksi vaiheessa (G) voidaan toteuttaa inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, etyyliasetaatissa, bentseenis-5 sä, tolueenissa, heksaanissa, sykloheksaanissa tai niiden kaltaisissa, lämpötilassa, joka on noin huoneenlämpötilasta noin 110 °C:seen, 15 minuutin - noin 5 tunnin aikana katalyytin, kuten bis-(asetyyliasetonaatti)Cu(II):n, kuparisulfaatin, kuparijauheen, rodiumasetaatin [Rh2(OAc)4:n], 10 rodium(II)oktanoaatin, Pd(0Ac)2:n, Pb(0Ac)4:n tai niiden kaltaisten läsnä ollessa ja edullisesti rodium(II)asetaa-tin tai -oktanoaatin läsnä ollessa. Vaihtoehtoisesti syklisointi voidaan toteuttaa säteilyttämällä kaavan lila mukaista yhdistettä valolähteellä Pyrex-suodattimen läpi 15 (aallonpituus yli 300 nm) liuottimessa, kuten bentseenis-sä, dietyylieetterissä tai niiden kaltaisissa, lämpötilassa, joka on noin 0 eC:sta noin huoneenlämpötilaan, 30 minuutin - noin 2 tunnin ajan.
Vaihtoehtoisessa reaktiotiessä kaavan lila mukai-20 sen diatsoyhdisteen, jossa P2 on edullisesti triorganosi-lyylin suojaryhmä ja edullisimmin t-butyylidimetyylisilyy-liryhmä, suojaryhmä poistetaan vaiheessa (H) suorittamalla kaavan lila mukaiselle yhdisteelle hapan hydrolyysi liuot- — timessa, kuten asetonitriilissä, metanolissa, etanolissa, 25 tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa tai niiden kaltaisissa hapon, kuten vetykloridihapon, rikkihapon tai etikkahapon läsnä ollessa, ja edullisesti noin 3 ekvivalentin kanssa 1 N vesipitoista vetykloridihappoa, noin -10 - noin 30 °C:ssa. Reaktio toteutetaan edullisesti noin 0 °C:ssa -30 noin huoneenlämpötilassa noin 6 - noin 18 tunnin aikana, • 96311 31 ja edullisesti huoneenlämpötilassa 18 tunnin aikana. Kaavan IIib mukainen diatsoyhdiste altistetaan sen jälkeen vaiheessa (I) syklisointiolosuhteille, jotka ovat samat kuin vaiheessa (G) on esitetty edellä, jolloin saadaan 5 kaavan Hb mukainen bisyklinen ketoni.
Seuraava reaktiokaavio 4 havainnollistaa menetelmää, jolla voidaan valmistaa kaavan Ia mukaisia yhdisteitä, joissa A, B, R3, R4 ja R12 ovat edellä määritellyt, kaavan Ha tai Hb mukaista bisyklisistä ketoneista. Alan am-10 mattimies ymmärtää, että molemmat reaktiotiet ovat sopivia kaavan Ia mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi. Joka tapauksessa reaktiotien valinta riippuu käytettävästä lähtöaineesta, kuten kaavan Ha tai Hb mukaisista yhdisteistä, ja substituenttien A, B, R3 ja R12 määritelmistä. Siten 15 vaiheet (J) ja (K) toteutetaan niin, että karbapeneemiyti-men 6-aseman substituentissa on läsnä hydroksin suojaryh-mä, ja vaiheet (J') ja (K') toteutetaan niin, että karba-peneemiytimen 6-aseman substituentissa ei ole läsnä hydroksin suojaryhmää.
20 Kaavan Ia mukaiset yhdisteet sisältyvät edellä määriteltyihin keksinnön mukaisesti valmistettaviin kaavan I mukaisiin yhdisteisiin. Reaktiokaaviossa 4 annettujen w kaavojen XI ja XII mukaiset yhdisteet ovat keksinnön mu kaisessa menetelmässä (a) käytettäviä kaavan Xla mukaisia 25 yhdisteitä, ja vaiheet (K), (K’) ja (M) sisältyvät keksinnön mukaiseen menetelmään (a). Reaktiokaaviossa 4 annettujen kaavojen XIII ja XIV mukaiset yhdisteet ovat keksinnön mukaisessa menetelmässä kaavan XIIIa avulla esitettyjä yhdisteitä.
96311 32
Reaktiokaavio 4 5 I Ia 11b
J J
j'pJ A-R12 OH A-R12 10 c"3 CH' C0j-Pl ° COj-P1
XI XII
15 x x · j’pi A-R12 OH A.Ri«
CK,A. L CH3A__Z
j]T v-s-b-r3 - JXVe-.-» 20 0 COj-P1 0 COj-P1
XIII XIV
25 11 °H A-Rt2 I Γ Λ—S-B-R3 Λ— 30 0 \ COj-R< la 33 56311
Reaktiokaavion 4 menetelmiä tarkemmin käsiteltynä vaiheet (J) ja (J') kuvaavat ketoesterien Ha ja Hb asy-lointia tai aktivointia. Vaiheiden (J) ja (J') reaktio ryhmän L1 liittämiseksi on alan ammattimiesten hyvin tunte-5 ma, ja se voidaan toteuttaa difenyylikloorifosfaatin kanssa, jolloin saadaan poistuva ryhmä difenyylifosfonyylioksi välituotteiden XI ja XII 2-asemaan.
Vaiheen (J) tai (J1) asylointireaktio suoritetaan tyypillisesti inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten ^ 10 metyleenikloridissa, asetonitriilissä, dimetyyliformami- dissa, tetrahydrofuraanissa tai niiden kaltaisessa, emäksen, kuten di-isopropyylietyyliamiini, trietyyliamiini, 4-dimetyyliaminopyridiinin, imidatsolin, lutidiinin, N-me-tyylimorfoliinin, N-metyylipiperidiinin, 1,8-diatsabisyk-15 lo[5.4.0]undek-7-eenin, 1,5-diatsabisyklo[4.3.0]non-5-ee- nin tai niiden kaltaisten läsnä ollessa, lämpötilassa, joka on noin -20 - noin 40 eC, noin 0,5 - 18 tunnin aikana ja edullisesti 1-3 tunnin aikana 0 °C:ssa - huoneenlämpötilassa. Välituotteet XI ja XII voidaan haluttaessa 20 eristää, mutta ne käytetään sopivasti seuraavassa vaiheessa ilman erottamista tai puhdistamista.
Seuraavaksi kaavan XI ja XII mukaiset välituot-^ teet muutetaan vaiheissa (K) ja (K') vastaavasti välituot teiksi XIII ja XIV tavanomaisella korvausreaktiolla. Siten 25 kaavan XI tai XII mukaiset välituotteet voidaan saattaa reagoimaan vähintään ekvimolaarisen määrän kanssa merkap-taanireagenssia, jolla on kaava HS-B-R3 34 - 96311 jossa B ja R3 ovat edellä määritellyt inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten metyleenikloridissa, dioksaanis-sa, tetrahydrofuraanissa, asetonitriilissä, dimetyylifor-mamidissa, dimetyylisulfoksidissa, heksametyleenifosforma-5 midissa tai niiden kaltaisessa, ja edullisesti emäksen, kuten di-isopropyylietyyliamiinin, trietyyliamiinin, 4-dimetyyliaminopyridiinin, natriumvetykarbonaatin, kalium-karbonaatin tai niiden kaltaisten läsnä ollessa. Lämpötila ei ole ratkaiseva korvauksessa, mutta reaktio toteutetaan 10 edullisesti noin -40 - 30 °C:ssa 30 minuutin - 24 tunnin ^ aikana. Sopivimmin reaktio toteutetaan noin 0-5 °C:ssa 2-4 tunnin aikana. Vaiheen (K') korvausreaktiossa noin ekvimolaarinen määrä trimetyylisilyylikloridia voidaan mahdollisesti lisätä reaktioseokseen ennen mainitun mer-15 kaptaanireagenssin lisäystä lR-hydroksietyyliryhmän suojaamiseksi väliaikaisesti. Kun korvaus on suoritettu loppuun, trimetyylisilyylisuojaryhmä voidaan poistaa helposti, kuten tässä on kuvattu P2-suojaryhmän poistamiselle, ja edullisesti käsittelemällä etikkahapolla tetrahydrofuraa-20 nissa, tetrahydrofuraanin ja veden seoksessa ja niiden kaltaisissa noin 0 eC:ssa - huoneenlämpötilassa noin 1-4 tunnin aikana.
Vaiheessa (L) kaavan XIII mukaiselle yhdisteelle suoritetaan suojauksen poisto, jolloin saadaan kaavan XIV 25 mukainen yhdiste. Suojauksen poisto toteutetaan tavanomaisella tavalla, ja kun hydroksin suojaryhmä on triorganosi-lyyliryhmä, kuten t-butyylidimetyylisilyyli, suojauksen poisto toteutetaan edullisesti tetra(alempi alkyyli)ammo-niumfluoridin, kuten tetrabutyyliammoniumfluoridin läsnä 30 ollessa. Vaikka reaktio-olosuhteet eivät ole ratkaisevia, <i «u 5 iiiit i i i tai 96311 35 reaktio toteutetaan edullisesti noin kolmen ekvivalentin kanssa ammoniumfluoridijohdannaista ja mahdollisesti noin kuuden jääetikkaekvivalentin läsnä ollessa inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten metanolissa, etanolissa, 5 dioksaanissa, asetonitriilissä, dikloorimetaanissa, tetra-hydrofuraanissa ja niiden kaltaisissa tai niiden seoksessa. Suojauksen poisto toteutetaan tavallisesti noin -40 -30 °C:ssa ja edullisesti -15 - 0 °C:ssa noin 4 tunnin -noin 1 viikon aikana ja edullisesti noin 3 vuorokauden w 10 aikana.
Alan ammattimies ymmärtää, että lopullinen suojauksen poistovaihe, vaihe (M), vaihtelee luonnollisesti riippuen substituenteissa P1, R12 ja R3 läsnä olevista suo-jaryhmistä. Suojauksen poistovaihe (M) kaavan XIV mukaisen 15 välituotteen karboksin suojaryhmän P1 poistamiseksi, jol loin saadaan kaavan Ia mukaisia yhdisteitä, joissa R4 on vety tai näiden yhdisteiden suoloja ei-toksisen farmaseuttisesti hyväksyttävän kationin kanssa, esim. natrium-, kalium-, ammonium- tai muu tässä kuvattu kationisuola, suo-20 ritetaan tavanomaisilla menettelyillä, kuten hydrolyysil- lä, kemiallisella pelkistyksellä tai hydrauksella. Jos käytetään suojaryhmänä p-nitrobentsyyliä, joka voidaan poistaa katalyyttisellä hydrauksella, kaavan XIV mukaista välituotetta, joka on sopivassa liuottimessa, kuten vedes-25 sä, dioksaanissa, tetrahydrofuraanissa, etanolissa, iso- propanolissa, n-butanolissa tai niiden seoksissa, jotka sisältävät puskuriliuosta, kuten fosfaattipuskuria, dika-liumvetyfosfaattia, natriumbikarbonaattia, asetaattipusku-ria ja niiden kaltaista, voidaan käsitellä vetypaineessa, 30 joka on noin 1 - noin 4 atmosfääriä, niin, että läsnä on 96311 36 hydrauskatalyyttiä, kuten palladiumia hiilellä, palladium-hydroksidia hiilellä, platinaoksidia, palladiumia barium-sulfaatilla, Raney-nikkeliä ja niiden kaltaista, lämpötilassa, joka on 0 - 50 °C, noin 15 min - 4 tuntia. Kun P1 on 5 esim. ryhmä σ-nitrobentsyyli, suojauksen poistoon voidaan käyttää myös fotolyysiä.
Kun karboksin suojaryhmä P1 on allyyliryhmä, se voidaan poistaa katalyytillä, joka käsittää palladiumyh-disteen, ja edullisesti palladiumligandikompleksilla, ku-10 ten tetrakis( trifenyylifosfiini )palladium[0] ilia, bis- w (dibentsylideeniasetoni)palladium[0]illa, di-[1,2-bis- (difenyylifosfino)etaani]palladium[0]illa,tetrakis(trife-nyylifosfiitti)palladium[0]illa ja niiden kaltaisilla. Pelkistys toteutetaan edullisesti allyylin sitojan, esi-15 merkiksi amiinin, kuten N-metyylianiliinin tai morfolii-nin, aktivoidun metyleeniyhdisteen, kuten bentsoyyliase-taatin tai 2-metyyli-3-oksovaleriaanahapon, alkaanihapon tai sen suolan, kuten natriumasetaatin, natrium-2-etyyli-heksanoaatin tai niiden kaltaisen läsnä ollessa.
20 Reaktio toteutetaan tavallisesti ei-pelkistävässä liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, vedessä, etanolissa, dioksaanissa, asetonitriilissä, dikloorimetaanissa, etyyliasetaatissa tai niiden seoksissa, lämpötilassa, joka "" on 0 - 50 °C, noin 15 minuutin - 4 tunnin aikana. Kata-25 lyyttinen pelkistys toteutetaan edullisesti etyyliasetaatissa tai dikloorimetaanissa noin 0 °C:ssa niin, että läsnä on tetrakis(trifenyylifosfiini)palladium[0]ia, joka sisältää noin 1,1 molaarista ekvivalenttia kaliumetyyli-2-heksanoaattia. Samalla tavoin muut tavanomaiset karbok-30 sisuojaryhmät voidaan poistaa alan ammattimiesten tuntemilla menetelmillä.
37 , I
Kuten edellä on mainittu, kaavan XIV mukaiset yhdisteet voivat mahdollisesti sisältää lisäksi suojatun hydroksin 0-P3 ja/tai aminon N-P4, joissa suojaryhmät P3 ja P4 ovat edellä määritellyt. Siten reaktiovaihe (M) voi ha-5 luttaessa käsittää lisäksi suojauksen poistomenettelyn mainittujen suojaryhmien poistamista varten. Reaktio voidaan toteuttaa tavanomaisilla sinänsä tunnetuilla suoja-ryhmän poistomenetelmillä, kuten hydrolyysillä, pelkistyksellä ja niiden kaltaisella menetelmällä, ja se käsittää 10 menetelmät, jotka on kuvattu karboksin suojaryhmän P1 ja hydroksin suojaryhmän P2 poistamiselle.
Siinä tapauksessa, että R12 on atsido kaavan XIV ^ mukaisessa yhdisteessä, voi olla toivottavaa, että mainit tu atsido pelkistetään amiiniksi vaiheen (M) suojauksen 15 poistomenettelyssä. Pelkistys voidaan toteuttaa vesipitoisessa tai vesipitoisessa puskuroidussa liuoksessa pH:ssa noin 6 - 9 ja edullisesti vesipitoisessa liuoksessa noin -10 - 30 °C:ssa ja edullisesti noin 0-5 °C:ssa vetypai-neessa, joka on 1 - 4 atmosfääriä, niin, että läsnä on 20 hydrauskatalyytti, kuten 30-prosenttinen palladium celi-tellä, 10-prosenttinen palladium hiilellä, palladiumhyd-roksidi hiilellä, platinaoksidi, 5-prosenttinen palladium bariumsulfaatilla, 5-prosenttinen palladium alumiinioksidilla tai niiden kaltainen, ja edullisesti 5-prosenttisel-^ 25 la palladiumilla bariumsulfaatilla ja 5-prosenttisella palladiumilla alumiinioksidilla, noin 30 minuutin - 3 tunnin aikana, kunnes pelkistyminen on täydellinen.
Alan ammattimies ymmärtää, että karboksin ja/tai hydroksin ja/tai aminon suojaryhmät vaiheessa (M) voidaan 30 poistaa samaan aikaan reaktion aikana. Vaihtoehtoisesti tai haluttaessa suojaryhmät voidaan poistaa selektiivisesti asteittain. Joka tapauksessa alan ammattimiehelle on ilmeistä, että suojaryhmien poistamisjärjestys riippuu suojaryhmien laadusta ja valinnasta ja siitä, halutaanko 35 valmistaa välituote, jolla on kaava XIV vai kaava Ia, joka 96311 38 sisältää joitakin suojaryhmiä, kuten Px:n, P2:n, 0-P3:n ja N-P4:n, muiden kaavan 1 mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä (b) kaavan I mu-5 kaisla yhdisteitä valmistetaan edellä mainituista kaavan XV mukaisista yhdisteistä uusien välituotteiden kautta, joilla on kaava XVI
/"'f" C02-P1 15 jossa A, B, R3, R11 ja P1 ovat edellä määritellyt ja L2 on tavanomainen poistuva ryhmä.
Kaavan XVI mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, ja havainnollisuuden vuoksi reaktiokaaviossa 5 on kuvattu menetelmä 20 yhden edullisen kaavan I mukaisen toteutusmuodon valmistamiseksi, joka menetelmä tarkoittaa kaavan Ib mukaisten yhdisteiden valmistamista. Kaavan XV mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa kaavan XIII mukaisista yhdisteistä, kuten seuraavassa on esitetty. Tällöin kaavan XIII mukai-25 selle suojatulle välituotteelle, jossa R12 on O-P3, suori-tetaan selektiivinen suojauksen poisto vaiheessa (N), jolloin saadaan kaavan XV mukainen alkoholi. Karbapeneemin XV
4-aseman alkoholiosa muutetaan vaiheessa (0) kaavan XVIa mukaisiksi yhdisteiksi, joissa on tavanomainen poistuva 30 ryhmä L2, joka korvautuu herkästi nukleofiilillä vaiheessa (P), jolloin saadaan kaavan XVII mukaisia yhdisteitä. Suojaryhmien poistolla vaiheessa (L+M) saadaan kaavan Ib mukaisia yhdisteitä, joissa A, B, R3, R4 ja R13 ovat edellä määritellyt.
39 • 96311 5
Reaktiokaavio 5 S’P2 A'Ri: °'P? A ΩΗ ..Λ J ,AJ - y:—S‘B"R3 R12 = o-p3 JZj />—5-fi-R3
o/ \ , N
C02“P ΓΑ rjl
10 C02-PJ
XIII XV
15 j-p2 A-L2 CH i\ 0 ( Γ )>-S-B-R3 ---- __ λ— 20 co2-r1 XVIa 25 j'PJ i-»11 2» A-»*’
α<*\-Λ L . » :κ,Λ__J
J-4. >-5-β-ϋ· - nj-!...!' 30 ° ° V»< XVII Ib 40 96ο 11
Viitaten nyt reaktiokaavioon 5 vaihe (N) kuvaa hyd-roksin suojaryhmän poistamista kaavan XIII mukaisesta välituotteesta, jossa R12 on 0-P3, jossa P3 on tavanomainen hydroksin suojaryhmä. Suojaryhmä P3 on edullisesti triorga-5 nosilyylisuojaryhmä ja edullisimmin t-butyylidimetyylisi-lyyli. Vaiheen (N) reaktio toteutetaan inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, dioksaa-nissa, etyyliasetaatissa, dimetoksietaanissa, metyleeni-kloridissa, hiilitetrakloridissa, tolueenissa, syklohek-10 saanissa tai niiden kaltaisessa, noin 1-10 mooliekviva- lentin kanssa tetra(alempi alkyyli)fluoridia, booritri-fluoridia tai kaliumfluoridia, ja se sisältää mahdollises-ti noin 1-20 ekvimolaarista määrää (alempi alkyyliOrgaanista happoa, aromaattista happoa tai heteroaromaattis-15 ta happoa lämpötilassa, joka on noin -40 - 40 °C, noin 1 -60 tunnin aikana. Reaktio suoritetaan edullisesti tetra-hydrofuraanissa noin 3 tetrabutyyliammoniumfluoridiekviva-lentin kanssa niin, että läsnä on noin 6 etikkahappoekvi-valenttia, lämpötilassa, joka on noin -15 - 0 °C, 18 - 24 20 tunnin aikana.
Vaihe (0) kuvaa reaktiota alkoholin XV ja sopivan asyloivan aineen tai aktivoivan aineen kanssa, jolloin muodostuu kaavan XVIa mukainen välituote, jossa on poistuva ryhmä L2, joka voidaan korvata nukleofiilillä. Sopivat 25 asyloivat aineet vaihetta (0) varten voivat olla samoja aineita kuin käytettiin poistuvan ryhmän L1 valmistamiseksi reaktiokaavion 4 vaiheessa (K) tai muita aineita, joilla aikaansaadaan poistuva ryhmä käyttämällä tavanomaisia menettelyjä ja jotka ovat alalla hyvin tunnettuja. L2 voi 30 olla edullisesti mm. kloori, bromi, jodi, fluorisulfonyy- li, -0S02R14 tai -OP(R15)3 joissa R14 on alempi alkyyli, trifluorimetyyli, fenyyli tai substituoitu fenyyli, ja R15 on fenyyli tai substituoitu fenyyli, jossa mainittu subs-tituentti voi olla metyyli, isopropyyli, kloori, bromi tai 35 nitro.
41 • 96511
Vaiheen (O) reaktio voidaan suorittaa inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, diroe-toksietäänissä, dioksaanissa, etyyliasetaatissa, metylee-nikloridissa, kloroformissa, hiilitetrakloridissa, toluee-5 nissa, bentseenissä, sykloheksaanissa tai niiden kaltaisessa, asyloivan tai aktivoivan aineen kanssa ei-nukleo-fiilisen emäksen, kuten trietyyliamiinin, di-isopropyyli-etyyliamiinin, 2,6-lutidiinin, 1,8-diatsobisyklo[5.4.0]-undek-7-eenin, 1,5-diatsobisyklo[4.3.0]non-5-eenin tai 10 niiden kaltaisen läsnä ollessa lämpötilassa, joka on noin -78 °C:sta huoneenlämpötilaan. Reaktio toteutetaan edullisesti metyleenikloridissa noin 1,2 trifluorimetaanisul-fonihappoanhydridiekvivalentin kanssa niin, että läsnä on noin 1,5 - 2 di-isopropyylietyyliamiiniekvivalenttia, 15 noin -78 °C:ssa, tai tetrahydrofuraanissa trifenyylifos-fiinin ja dietyyliatsodikarboksylaatin seoksen kanssa noin -40 °C:ssa.
Haluttujen kaavan XVII mukaisten yhdisteiden valmistus toteutetaan vaiheessa (P) välituotteen poistuvan 20 ryhmän L2 nukleofiilisellä korvauksella halutulla typpeä, hiiltä, happea tai rikkiä sisältävällä nukleofiilillä R13, jossa R13 on edellä määritelty. Kaavan XVIa mukainen välituote saatetaan reagoimaan ainakin yhden ekvivalentin kanssa, ja edullisesti ylimäärän kanssa, haluttua nukleo-25 fiilistä reagenssia inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten metyleenikloridissa, tetrahydrofuraanissa, kloroformissa, hiilitetrakloridissa, dioksaanissa, etyyliasetaatissa, diglyymissä, dimetoksietaanissa, sykloheksaanissa, tolueenissa tai niiden kaltaisessa, laajalla lämpötila-30 alueella, joka on -78 - noin 30 °C, mutta edullisesti noin -15 - 5 °C, kunnes reaktio on mennyt loppuun, mikä tode-; taan tavanomaisilla toteamismenetelmillä, kuten ohutker- roskromatografiällä ja korkeapainenestekromatografiällä.
Kaavan Ib mukaisen halutun karbapeneemin valmista-35 minen suoritetaan poistamalla välituotteen XVII suojaryh- 96311 42 mät tavanomaisilla menetelmillä. Sopivia suojauksen poistomenetelmiä hydroksin, karboksin ja aminon suojaryhmille on esitetty edellä vaiheiden (L) ja (M) menettelyissä.
Kaavan I mukaisen yhdisteen substituentissa R2 ja/ 5 tai R3 mahdollisesti oleva atsidoryhmä voidaan haluttaessa pelkistää aminoryhmäksi, kuten edellä on kuvattu mahdollisen atsidoryhmän R12 pelkistyksen osalta.
Kaavan I mukaisista yhdisteistä, joissa R2 ja/tai R3 on aminoryhmä, voidaan valmistaa vastaavia kaavan I mu-10 kaisla yhdisteitä, joissa R2 ja/tai R3 on (N-formimidoyy-li)aminoryhmä, formidoyloivan aineen avulla. Reaktio voidaan toteuttaa myös ennen tavanomaisen hydroksin suoja-ryhmän P2 ja karboksin suojaryhmän R4 poistamista. Reaktio toteutetaan kuitenkin edullisesti ilman mainittuja suoja-15 ryhmiä, so. P2 on vety ja R4 on vety tai vastaavan yhdisteen suola.
Sopivia formimidoyloivia aineita ovat mm. formimi-daatit, kuten metyyliformimidaatti, etyyliformimidaatti ja bentsyyliformimidaatti, sekä formimidoyylihalogenidit, 20 kuten formimidoyylikloridi. Reaktio toteutetaan tavallisesti tavanomaisessa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa, metanolissa, etanolissa, vedessä, puskuriliuoksessa tai niiden seoksessa, lämpötilassa, joka on noin -20 - 40 °C, noin 10 minuutin - 18 tunnin aikana.
25 Reaktio toteutetaan edullisesti vesipitoisessa fosfaatti- ^ puskuriliuoksessa lievästi emäksisessä pH:ssa noin 10 - 30 minuutin aikana noin 5 °C:ssa.
Kaavan I mukainen yhdiste jossa R2 ja/tai R3 on aminoryhmä, voidaan asyloida vastaavaksi yhdisteeksi, jossa R2 30 ja/tai R3 on guanidinoryhmä, ja vastaavasti aminoryhmä R2 voidaan asyloidan aikaisemmin määritellyllä aminohappotähteellä substituoiduksi aminoksi. Sopivia asyloivia aineita ovat mm. aminoiminometaanisulfonihappo, guanidinoryhmän aikaansaamiseksi ja N-suojattujen aminohappojen aktivoidut 35 esterit haluttaessa aminohappotähteellä substituoitu ami- 96311 43 noryhmä substituentiksi R2. Asylointireaktio voidaan suorittaa erilaisissa liuotinsysteemeissä, jotka käsittävät liuottimet, kuten tetrahydrofuraanin, dioksaanin, asetöni-triilin, etanolin, metanolin, dimetyyliformamidin, veden 5 ja niiden kaltaiset sekä niiden seokset. Alan ammattimies ymmärtää, että reaktio voidaan tarvittaessa suorittaa emästä tai happoa sitovan aineen läsnä ollessa, kuten mag-nesiumoksidin, kaliumkarbonaatin, kaliumbikarbonaatin, pyridiinin, lutidiinin, 2,6-lutidiinin, 4-dimetyyliamino-10 pyridiinin, trietyyliamiinin, N,N-di-isopropyylietyyli- amiini ja niiden kaltaisten läsnä ollessa. Reaktio suoritetaan edullisesti vesipitoisessa orgaanisessa seoksessa tai vesipitoisessa puskuroidussa liuoksessa -20 - 50 °C:n lämpötilassa 15 minuutin - 18 tunnin aikana.
15 Edelleen kaavan I mukaisen yhdisteen aminoryhmä R2 voidaan alkyloida ryhmäksi -NR5R6, jossa R5 on C^-alkyyli ja R6 on C^-alkyyli tai syaani- tai fenyylisubstituoitu C^-alkyyli.
Sopivat alkyloivat aineet ovat alalla hyvin tun-20 nettuja ja käsittävät mm. (alempi alkyyli)- tai substi-tuoidut (alempi alkyyli)halogenidit, (alempi alkyyli)- tai trifluorimetaanisulfonaatit, formaldehydin, (alempi alkyyli )-tai substituoidut (alempi alkyyli)aldehydit, jotka mainitut aldehydit saatetaan reagoimaan pelkistimien, ku-— 25 ten natriumsyaaniboorihydridin, natriumboorihydridin ja niiden kaltaisten, läsnä ollessa. Reaktio voidaan suorittaa erilaisissa liuotinsysteemeissä, jotka käsittävät tetrahydrof uraanin, dioksaanin, asetonitriilin, etanolin, metanolin, dimetyyliformamidin, veden ja niiden kaltaiset 30 ja niiden seokset, noin -20 - 50 °C:n lämpötilassa 15 minuutin - 20 tunnin aikana. Kun alkyloiva aine on formaldehydi, reaktio suoritetaan edullisesti 37-prosenttisen formaldehydin kanssa natriumsyaaniboorihydridin läsnä ollessa vesipitoisessa asetonitriilissä tai vesipitoisessa pusku-35 roidussa liuoksessa lievästi happamissa olosuhteissa ja noin 0-5 °C:ssa 15 minuutin - 10 tunnin aikana.
44 9631Ί
Biologinen aktiivisuus ja stabiilisuus Tämän keksinnön mukaisten karbapeneemien tehokkaan bakteerien vastaisen aktiivisuuden ja paremman kemiallisen ja biologisen stabiilisuuden havainnollistamiseksi taulu-5 kossa I on esitetty havainnollistamistarkoituksessa tämän keksinnön esimerkkien aktiivisuuksia in vitro (MIC), kemiallinen stabiilisuus (T %) ja biologinen stabiilisuus (DHPI).
Bakteerien vastainen aktiivisuus in vitro määri-10 tettiin yhdisteen kaksinkertaisella laimennussarjalla Mueller-Hinton-agarissa ja siirrostamalla sopivasti laimennettua 18 - 24 tuntia lihaliemessä ollutta viljelmää agarin pinnalle tai lihaliemeen. Agar-levyjä ja -putkia inkuboitiin 37 eC:ssa 17 tuntia, ja alinta pitoisuutta, 15 joka aiheutti vähenemistä näkyvässä kasvussa, pidettiin minimiestokonsentraationa (MIC).
Kemiallinen stabiilisuus vesipitoisessa liuoksessa pH:ssa 7,4 ja 37 °C:ssa ilmoitetaan puoliintumisaikana (T h) tunteja kohti. Nämä arvot määritettiin menetelmällä, 20 joka on kuvattu julkaisussa Woodward et ai., J. Am. Chem.
Soc., 102 (1980) 2042.
Määritettiin biologinen stabiilisuus munuaisen de-hydropeptidaasin I [munuaisen dipeptidaasi (EC 3.4,13.11)] hajoamista vastaan, ja ilmoitetut arvot ovat 25 suhteessa imipeneemillä havaittuun hajoamiseen. Puhdas ^ sian munuaisen dipeptidaasi valmistettiin, kuten julkaisussa Hitchcock et ai., J. Anal. Biochem., 163 (1987) 219, on kuvattu, kun taas ihmisen munuaisen dipeptidaasi valmistettiin, kuten julkaisussa Campbell et ai., J. Biol.
30 Chem., 259 (1984) 14586 - 14590, on kuvattu.
Valmistettiin liuokset, jotka muodosti karbapeneemi (0,10 mM) puskurissa (50 mM), 4-morfoliinipropaanisulfoni-happo, pH 7,1. Mitattiin 2,5 ml:n erän UV/näkyvän valon spektri, ja sen jälkeen lisättiin 0,025 ml 1 M NH20H:a 8-35 laktaamisidoksen hajottamiseksi. Spektri mitattiin jälleen »tt;* ddtti I-t * '** : - 96311 45 30 minuutin kuluttua 25 eC:ssa sian dipeptidaasille ja 37 eC:ssa ihmisen dipeptidaasille ja jälleen 5-10 minuutin välein, kunnes absorbanssissa ei enää havaittu pienenemistä. Erilaista spektriä ehjän ja hajotetun β-laktaamin 5 välillä käytettiin X »„:n ja ε:η laskemiseen. Samanlaista erää karbapeneemiliuosta inkuboitiin 25 eC:ssa sian dipep-tidaasia varten ja 37 °C:ssa ihmisen dipeptidaasia varten, ja määritettiin absorbanssin muutosnopeus X BU:ssa. Sen jälkeen lisättiin entsyymiä, niin, että saatiin nopeus, 10 joka oli vähintään 10'4 absorbanssiyksikköä sekuntia kohti. Entsymaattisen hydrolyysin nopeus korjattiin spontaania hydrolyysiä varten ja sen jälkeen muutettiin ε:η kanssa yksiköksi nmol min'1 (ml entsyymiä)'1. Kaikki nopeudet on ilmoitettu suhteessa imipeneemillä havaittuun nopeuteen.
έ • 96311 46
Taulukko 1
Esimerkkiyhdistelden biologinen aktiivisuus ja stabiilisuus
Antibakt. aktiivisuus MIC* (pg/ml) Puoliin- Dipeptidaa- tumis- sihydrolyysif aika
Esim. S. pn.b E. coli! P. aer.f (T %) suht. nop. .
3 0,13 0,016 2 3,2 0,049 19 0,06 0,004 1 117 0,059 24 0,13 0,016 1 3,5 0,089 32 0,25 0,004 0,25 76 36 0,13 0,008 0,25 3,8 0,029 40 0,06 0,008 1,0 32,5 41 0,25 0,008 0,5 70 0,7h 44 0,03 0,03 8,0 89 47 0,5 0,03 1 2,5 0,3h ^ 49 0,008 0,03 63 33,5 63 0,008 0,016 1 18 0,07h 73 0,03 0,008 0,25 37 91 0,5 0,016 4,0 150 92 2,0 0,06 2,0 247 94 0,06 0,008 8,0 88 100 0,25 0,008 2,0 180 117 0,13 0,13 0,25 33 120 0,03 0,13 0,25 23 121 0,13 0,004 1 136 124 0,016 0,03 2 21 126 0,016 0,008 2 47 127 0,06 0,13 1 31 130 0,13 0,13 0,06 16 131 0,25 0,13 2 46 135 0,03 0,015 0,06 37 136 0,015 0,007 4 17 145 0,125 0,125 8 146 0,25 0,125 128 — 154 0,5 0,25 1 79
Imipe- neemi 0,002 0,03 2 15 l9h a) Pienin mahdollinen inhiboiva pitoisuus, Mueller-Hinton-lihaliemessä.
b) Streptococcus Pneumoniae, A9585 c) Escherichia coli, A15119 d) Pseudomonas Aeruginosa, A9843 e) Puoliintumisaika, 37 eC, 10~4 M, pH 7,4, tunteina.
f) Hajoamisnopeus dehydropeptidaatti-I-entsyymillä, suhteessa imipeneemiin * 1 (mitä pienempi luku, sitä stabiilimpi hajoamista vastaan) g) Suhteellinen nopeus käyttäen sian munuaisen dipeptidaa-sia.
h) Suhteellinen nopeus käyttäen ihmisen munuaisen dipep-tidaasia.
. 96311 47
Kuten muidenkin β-laktaamiantibioottien tapauksessa, yleisen kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa tunnetuilla menetelmillä farmaseuttisesti hyväksytyiksi suoloiksi, jotka tämän keksinnön tarkoituksissa ovat 5 oleellisesti ekvivalentteja yhdisteille, jotka eivät ole suolamuodossa. Siten esimerkiksi kaavan I mukainen yhdiste voidaan liuottaa sopivaan inerttiin liuottimeen ja sen jälkeen lisätä ekvivalentti määrä farmaseuttisesti hyväksyttävää happoa. Haluttu happoadditiosuola voidaan ottaa 10 talteen tavanomaisilla menetelmillä, esim. liuotinsaostuk- sella, lyofilisoinnilla, jne. Kun kaavan I mukaisessa yhdisteessä on läsnä muita emäksisiä tai happamia funktionaalisia ryhmiä, farmaseuttisesti hyväksyttävät emäsaddi-tiosuolat ja happoadditiosuolat voidaan valmistaa samalla 15 tavoin tunnetuilla menetelmillä.
Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R4 on vety, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola voidaan myös muuttaa tavanomaisilla menetelmillä vastaavaksi yhdisteeksi, jossa R4 on karboksylin suojaryhmänä oleva esteriryhmä, tai 20 kaavan I mukainen yhdiste, jossa R4 on tavanomainen karbok-syylisuojaryhmä, voidaan muuttaa vastaavaksi yhdisteeksi, jossa R4 on vety, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.
Uudet karbapeneemijohdannaiset, joilla on yleinen 25 kaava I, jossa R4 on vety, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ovat tehokkaita antibiootteja, jotka ovat aktiivisia erilaisia gram-positiivisia ja gram-nega-tiivisia bakteereita vastaan, ja niitä voidaan käyttää esimerkiksi eläinten ravinnon lisäaineina kasvun edistä-30 mistä varten, ruuan säilöntäaineina, bakteereja tappavina aineina teollisissa sovellutuksissa, esimerkiksi vesipohjaisessa maalissa ja paperitehtaiden jätevedessä inhiboimaan haitallisten bakteerien kasvua ja desinfioivina aineina tuhottaessa tai inhiboitaessa haitallisten baktee-35 rien kasvua lääketieteen välineissä ja hammashoitoväli- 96311 48 neissä. Ne ovat kuitenkin erityisen käyttökelpoisia ihmisten ja muiden eläinten gram-positiivisten tai gram-nega-tiivisten bakteerien aiheuttamien tarttuvien tautien hoidossa .
5 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja farmaseut tisesti aktiivisia yhdisteitä voidaan käyttää yksin tai formuloituina farmaseuttisina koostumuksina, jotka käsittävät aktiivisen karbapeneemiaineosan lisäksi farmaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa tai laimenninta. Yhdisteet 10 voidaan antaa eri tavoilla; niistä tärkeimpiä ovat: oraalisesti, paikallisesti tai parenteraalisesti (laskimonsi-säinen tai lihaksen sisään injektointi). Farmaseuttiset koostumukset voivat olla kiinteässä muodossa, kuten kapseleina, tabletteina, jauheina jne., tai nestemäisessä muo-15 dossa, kuten liuoksina, suspensioina tai emulsioina. Koostumukset, jotka on tarkoitettu injektoitaviksi, joka on edullinen antotapa, voidaan valmistaa yksikköannosmuotoon ampulleihin tai moniannosastioihin, ja ne voivat sisältää formulointiaineita, kuten suspendointi-, stabilointi- ja 20 dispergoivia aineita. Koostumukset voivat olla käyttövalmiissa muodossa tai jauhemuodossa, joka saatetaan käyttömuotoon antohetkellä sopivan väliaineen, kuten steriilin veden kanssa.
Annettava annostus riippuu suuressa määrin ky-25 seessä olevasta käytettävästä yhdisteestä, kyseessä ole- —^ vasta formuloidusta koostumuksesta, antotavasta, potilaan laadusta ja tilasta ja kyseessä olevasta hoidettavasta paikasta ja elimistöstä. Tietyn edullisen annostuksen ja käyttötavan valinta jätetään sitten lääkärin arvioitavak-30 si. Yleisesti yhdisteitä voidaan kuitenkin antaa parenteraalisesti tai oraalisesti nisäkäspotilaille noin 5 - 200 mg/kg/vuorokausi. Antaminen toteutetaan yleensä jaettuina annoksina, esim. kolme - neljä kertaa vuorokaudessa.
Seuraavat esimerkit havainnollistavat tämän kek-35 sinnön yksittäisiä toteutusmuotoja lukuunottamatta esi- 49 - 9631Ί merkkejä 105, 106 ja 107, jotka eivät kuulu tämän keksinnön piirin, vaikka ovat sille läheisiä. Käytetyt lyhennykset ovat tavanomaisia alan ammattimiesten hyvin tuntemia lyhennyksiä. Joitakin niistä on lueteltu alla.
5
Lyhennykset TBDMS : tert-butyylidimetyylisilyyli TBDMS-OTf : tert-butyylidimetyylisilyylitrifluori- metaanisulfonaatti 10 pet-eetteri : petrolieetteri (k.p. 20 - 60)
TsN3(TosN3) : p-tolueenisulfonyyliatsidi DPCD : ClP0(0Ph)2 tai difenyylikloorifos- faatti DIPEA : N,N-di-isopropyylietyyliamiini 15 TMSC1 : trimetyylisilyylikloridi (klooritri- metyylisilaani) DMAP : 4-N,N-dimetyyliaminopyridiini
TsNH2 : p-tolueenisulfonamidi TBAF : tetrabutyyliammoniumfluoridi 20 DEAD : dietyyliatsodikarboksylaatti HOBT : 1-hydroksibentsotriatsolihydraatti DCC : 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidi HN3 : hydratsoiinihappo w 25 Seuraavissa esimerkeissä kaikki lämpötilat on an nettu celsiusasteina. Sulamispisteet määritettiin Gallen-kamp-kapillaarisulamispistelaitteella, ja kiehumispisteet mitattiin spesifisissä paineissa (mmHg), ja molemmat lämpötilat ovat korjaamattomia. Protonimagneettiset resonans-30 sispektrit (XH NMR) saatiin Bruker AC-200:lla. Kaikki spektrit määritettiin ilmoitetuissa liuottimissa, ja kemialli-• set siirtymät on ilmoitettu yksiköinä δ alavirtaan sisäi senä standardina käytettyyn tetrametyylisilaaniin (TMS) nähden, ja protonien väliset kytkentävakiot on ilmoitettu 35 hertseinä (Hz). Piikkityypit on merkitty seuraavasti: s, 50 · 56311 singletti; d, dupletti; t, tripletti; q, kvartetti; m, multipletti; br, leveä piikki; dd, dupletin dupletti; bd, leveä dupletti, dt, tripletin dupletti; bs, leveä singletti, dq, kvartetin dupletti. Infrapuna (IR) -spektrit mää-5 ritettiin Perkin Elmer 781 -spektrometrillä 4 000 cm'x;sta 400 cm*1:iin, kalibroitiin polystyreenikalvon 1601 cm-1:n absorptioon ja ilmoitettiin senttimetrien käänteisarvoina (cm"1). Suhteelliset intensiteetit on ilmoitettu seuraavasti: s (vahva), m (medium) ja w (heikko). Optiset kierrot 10 [a]” määritettiin Perkin-Elmer 41 -polarimetrillä ilmoite tuissa liuottimissa. Ultraviolettispektrit määritettiin Hewlett Packard 8451A -diodisysteemispektrofotometrillä ilmoitetussa liuottimessa ja pitoisuudessa.
Analyyttinen ohutkerroskromatografia (TLC) toteu-15 tettiin etukäteen päällystetyillä silikageelilevyillä (60F-254, 0,25 mm) ja todettiin visuaalisesti käyttäen UV-valoa, jodihöyryä ja/tai värjäämällä yhdellä seuraavista reagensseista: (a) metanolipitoinen fosfomolybdeenihappo (2 %) ja kuumennus; (b) reagenssi (a) ja sen jälkeen 2-20 prosenttinen kobolttisulfaatti 5 M H2S04:ssa ja kuumennus. Pylväskromatografia, johon viitataan myös flash-pylväskro-matografiana, suoritettiin lasipylväässä käyttäen hienojakoista silikageeliä (40 - 63 m silikageeli-H:lla) ja paineissa, jotka olivat hiukan atmosfääristä painetta suu-25 rempia, ilmoitettujen liuottimien kanssa. Preparatiivinen — ohutkerroskromatografia toteutettiin etukäteen päällystetyillä silikageelilevyillä (60F-254,2 mm) ja todettiin visuaalisesti UV-valoa käyttäen.
Analyyttinen käänteisfaasiohutkerroskromatografia 30 toteutettiin Analtechin etukäteen päällystetyillä kään- teisfaasi-F-levyillä (250 mikronia) ja todettiin visuaalisesti käyttäen UV-valoa tai jodihöyryä.
Käänteisfaasipylväskromatografia suoritettiin lasi-pylväässä käyttäen p-Bondapak-C18- (55 - 100 m) prep 500:a.
35 Korkeapainenestekromatografia suoritettiin Waters-501- 96311 51 HPLC-pumpulla käyttäen Varian 2550 -UV-detektoria ja Va-rlan 4290 -integraattoria. Pylvään tiedot ovat seuraavat: p-Bondapak-C18-täyte, 30 cm pituus, 3,9 mm I.D., hiukkas-koko 10 μ ja liikkuva faasi on CH3CN/vesipitoinen K2HP04, 5 0,01 M, pH:ssa 7,4.
Kaikki liuottimien haihduttamiset suoritettiin alipaineessa. Tässä käytettynä termillä "heksaanit" tarkoitetaan isomeeristen C6-hiilivetyjen seosta, kuten American Chemical Society on määritellyt, petrolieetteri viittaa 10 30 - 60 °C:n fraktioihin, ja termi "inertti" atmosfääri on argon- tai typpiatmosfääri, ellei toisin ole ilmoitettu.
52 9631 1
Esimerkki 1
Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-fluorietyyli)-6-[(l’R)- 1’-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-5 laatti
F
OH
C02Na ^ 15 A. 4-fluori-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatti s n
t JL ,SH -' r'«!’l'VV
20 Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodostivat 2- merkaptometyylipyridiini (5,26 g, 4,2 mmol) ja pyridiini (4,1 ml, 50 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml), lisättiin tipoittain 4-fluoributyryylikloridia (5,23 g, 4,2 mmol), joka oli valmistettu julkaisussa F.L. Pattison et ai., J. Org.
25 Chem. :21 (1956) 887 kuvatun menettelyn mukaisesti. Seosta ^ sekoitettiin 0 °C:ssa 1 tunti, laimennettiin etyyliasetaatilla (100 ml), pestiin kylmällä vedellä (3 x 100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Raakatuot-teena oleva seos (9 g) vietiin silikageelikerroksen 30 (250 g) läpi, jolloin saatiin otsikon yhdiste (7,6 g, 85 %) öljynä; IR (CH2C12) λ>μχ: 1690 cm*1 (C=0); XH NMR (CDC13) 6: 8,55 - 8,51 (1H, m, pyridiini-H), 7,67 - 7,58 (1H, m, pyridiini-H), 7,35 - 7,31 (1H, leveä 35 d, J = 7,8 Hz, pyridiini-H), 7,2 - 7,12 (1H, m, pyridiini- *1 - «-» nm 1 i 1 ti 96311 53 H), 4,61, 4,58, 4,55, 4,37, 4,34, 4,3 (2H, dt, J = 5,8 Hz, J = 47,1 Hz, CH2-F), 4,27 (2H, s, CH2-S), 2,74 (2H, t, J = 7,2 Hz, CH2C=0) ja 2,2 - 1,92 ppm (2H, m, CH2).
B. 4-fluori-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatin 5 enolisilyylieetteri 0 ^£^2^2 QSi + 11 fT^i \ /f r<CH2)3CSxxAN^ -► ^
xsjQ
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodostivat 4-fluori-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatti (427 mg, 2,00 mmol) ja trietyyliamiini (0,6 ml, 4 mmol) CH2Cl2:ssa 15 (10 ml), lisättiin tipoittain tert-butyylidimetyylisilyy- litrifluorimetaanisulfonaattia (0,7 ml, 3 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seosta sekoitettiin 5 tuntia, laimennettiin petrolieetterillä (50 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (3 x 25 ml), suolaliuoksella (25 ml) ja kuivattiin 20 (MgS04). Liuosta käsiteltiin neutraalilla aktiivipuuhiilel- lä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,68 g, 100 %) punaisena öljynä; :H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,56 - 8,52 (1H, m, aromaattinen H), 7,67 - 7,58 {1H, m, aromaattinen H), 7,28 -~ 25 7,23 (1H, m, aromaattinen H), 7,18 - 7,11 (1H, m, aromaat tinen H), 5,02 (0,4 H, t, J = 7,5 Hz, vinyylin H), 4,85 (0,6 H, t, J = 7,2 Hz, vinyylin H), 4,40 ja 4,16 (d, 2H, dt, J = 6,7 Hz, J = 47,2 Hz, CH2F), 4,28, 4,05 (0,8 H, dt, J = 6,4 Hz, J = 47,2 Hz, CH2F), 4,05 (0,8 H, s, CH2-pyri-30 diini), 3,98 (1,2 H, s, CH2-pyridiini), 2,5 - 2,2 (2H, m, CH2), 0,98 ja 0,97 (9H, 2s, t-butyyli), 0,25 ja 0,21 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
96311 54 C. (38,48)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R)-1”-(pyridin-2-yyli)metyylitiokar-bonyyli-3"-fluoripropyyli]atsetidin-2-oni s ;j“ ^ °f'· “w V" · ·- Vvoo /-nh \si+ o 10 Kylmään (jäähaude) juuri fuusioituun ZnCl2:iin (5,45 g, 40 mmol) lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna (3S, 4R)-4-asetoksi-3- [ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]atsetidin-2-onia (5,75 g, 20 mmol) CH2Cl2:ssa (60 ml), minkä jälkeen lisättiin tipoittain silyylienoli-15 eetteriä (14 g, 40 mmol), joka oli valmistettu vaiheessa B, CH2Cl2:ssa (20 ml). Seosta sekoitettiin 20 tuntia 5 °C:ssa (kylmä huone), sen jälkeen kaadettiin kylmään kylläiseen NaHC03:n vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 100 ml). Etyyliasetaattiuutteet pestiin kyl-20 Iäisellä NH4Cl:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotinhaihdutuksen jäännöstä trituroitiin petrolieetterin kanssa ja suodatettiin, jolloin saatiin tuote (4,0 g, 45 %). Uudelleenkiteytettiin etyyliasetaatista, jolloin saatiin otsikon yhdiste; s.p. 114 - 115 eC.
25 IR (CH2C12) 3410 (NH), 1770 ja 1680 cm*1 (C=0); ~ *H NMR (CDC13) 6; 8,55 - 8,52 (1H, m, aromaattinen H), 7,68, 7,59 (1H, m, aromaattinen H), 7,33 - 7,29 (1H, leveä d, J = 7,8 Hz, aromaattinen H), 7,21 - 7,14 (1H, m, aromaattinen H), 5,86 (1H, leveä s, NH), 5,71 - 4,29 (2H, 30 2 m-kohtaa, CH2F), 4,277 (2H, s, CH2S), 4,22 - 4,11 (1H, m, H-l ’ ), 3,88 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 6,7 Hz, H-4), 3,075 - 2,97 (2H, m, H=3 ja H-l"), 2,3 - 1,8 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-2"), 1,01 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,855 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,048 ppm (6H, s, dimetyyli); il ; N f MB l;t 1 A : : 96311 55
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C21H33N203SSiF: C 57,24; H 7,55; N 6,36; S 7,28.
Todettu: C 57,01; H 7,74; N 6,17; S 7,24.
D. (3S,4S)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-5 lioksietyyli] -4- [ (1"R)-l"-karboksi-3"-fluoripropyyli]at-setidin-2-oni
jV* j|i+ <C.H^F
10 ^ ^V-|^COgH
/ H / H
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-15 3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4- [(l"R)-l"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-3"-fluori-propyyli]atsetidin-2-oni (110 mg, 0,25 mmol) THF:ssa (5 ml), käsiteltiin 30-prosenttisella H202:lla (45 μΐ, 0,5 mmol) ja 1,0 N NaOHrn vesiliuoksella (0,5 ml, 20 0,5 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seosta sekoitettiin 1 tunti, sen jälkeen laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml). Seos pestiin 1 N HCl:n vesiliuoksella (1 x 40 ml), vedellä (3 x 20 ml), suolaliuoksella (1 x 20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saa-·—· 25 tiin otsikon yhdiste (82 mg, 100 %) kiinteänä aineena, s.p. 104 - 105 °C (EtOAc); IR (CH2C12) vmax: 3410 (NH), 1770, 1750 ja 1715 cm*1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,34 (1H, leveä s, NH), 30 4,8 - 4,6 ja 4,6 - 4,35 (2H, 2 m-kohtaa, CH2F), 4,35 - 4,1 (1H, m, H-l' ), 3,95 (1H, dd, J = 1,9 Hz, J = 6,0 Hz, H-4), 3,15 - 3,12 (1H, m, H-3), 2,95 - 2,8 (1H, m, H=l"), 2,3 - 1,8 (2H, m, CH2), 1,18 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,87 (9H, s, tert-butyyli), 0,072 ja 0,063 ppm (6H, 2s, dimetyyli); 96311 56
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C15H28N04SiF: C 54,03; H 8,46; N 4,20.
Todettu; C 53,75; H 8,55; N 4,05.
E. (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-5 lioksietyyli] -4-[ (1"R)-1"- (2-fluorietyyli) -3"-allyyliok-sikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni I ni.
OS i + <CH2)2F °^1+ <ch2)2f 10 ΛΧ _^ /-Nh 0 (3S, 4S) -3- [ (1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyyliok-15 sietyyli] -4- [ (1 "R) -1" -karboksi-3 " - f luoripropyyli ] atseti- din-2-onin (0,75 g, 2,3 mmol) suspensiota CH3CH:ssa (15 ml) käsiteltiin karbonyylidi-imidatsolilla (0,39 g, 2,4 mmol) ja sekoitettiin 1 tunti 22 °C;ssa. Saatua asyyli-imidat-solia käsiteltiin vedettömällä magnesiummonoallyylimalo-20 naatilla (0,73 g, 2,4 mmol) ja sekoitettiin 50 tuntia 22 °C:ssa. Seos laimennettiin EtOAcrlla (60 ml), pestiin kylmällä 1 N HCl:n vesiliuoksella (1 x 60 ml), vedellä (2 x 60 ml), kylläisellä NaHC03;n vesiliuoksella (1 x 60 ml), vedellä (2 x 60 ml), suolaliuoksella (60 ml) ja 25 kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin jäljelle ^ jäi jäännös (1,7 g), joka vietiin silikageelikerroksen (100 g) läpi, jolloin saatiin otsikon yhdiste (heksaani -* 20 % EtOAc/heksaani) öljynä (96 mg, 10 %).
IR (CH2C12) vna*: 3410 (NH), 1770, 1715, 1655 ja 30 1630 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,01, 6,00 (1H, 2 leveä s, NH), 6,0 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,4 - 5,15 (2H, m, vinyylin H), 5,14 (0,5H, s, enolin vinyyli-H), 4,7 - 4,6 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,7 - 4,2 (2H, 2 m-kohtaa, CH2F), 35 4,21 - 4,13 (1H, m, H-l'), 3,91 (0,5 H, dd, J = 2,1 Hz, ia · au an ai nm,. : 57 96511 J = 4,4 Hz, H4), 3,88 (0,5 H, dd, J = 2,1 Hz, J = 6,9 Hz, H-4), 3,60 (1H, s, CH2CO), 3,26 - 3,17 (0,5 H, m, H-l"), 2,99 (0,5 H, dd, J = 2,2 Hz, J = 4,4 Hz, H-3), 2,95 - 2,92 (0,5 H, m, H-3), 2,55 - 2,35 (0,5 H, m, H-l"), 2,3 - 1,7 5 (2H, m, CH2), 1,175 ja 1,12 (3H, 2d, J = 6,28 Hz ja J = 6,34 Hz, CH3), 0,86 (9H, s, tert-butyyli), 0,067 ja 0,055 (6H, 2s, dimetyyli).
F. (3S,4R)-3-[(1’R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4-[ (1”R) -1" - (2-f luorietyyli) -3"-diatso-3"-10 allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni
I I
w 0Si+ (CH2)F OS i + <CH2)F
15 j~N»
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti (3S, 4R)-3-[ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]- 4-[(l"R)-l"-(2-fluorietyyli)-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-20 oksopropyyli]atsetidin-2-oni (0,20 g, 0,48 mmol) CH3CN:ssa, käsiteltiin trietyyliamiinilla (64 ml, 0,48 mmol) ja p-tolueenisulfonyyliatsidilla (95 mg, 0,48 mmol). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 1 tunti. CH3CN haihdutettiin, jolloin saatiin puolikiinteä jäännös, jota tritu-^ 25 roitiin petrolieetterin (10 ml) kanssa. Kiinteä aine pois- a tettiin suodattamalla, ja liuos vietiin silikageelipylvää-seen (6 g, 10 % EtOAc-heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (190 mg, 90 %).
IR (CH2C12) vaax: 3410 (NH), 2150 (N2), 1777, 1715 ja 30 1650 cm'1 (C-0); NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,83 (1H, m, vinyylin H), 5,90 (1H, leveä s, NH), 5,40 - 5,28 (2H, m, vinyylin H), 4,73 - 4,7 (2H, m, vinyylin CH2), 4,7 - 4,4, 4,4 - 4,2 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-F), 4,3 - 4,1 (2H, m, H-l' 35 ja H-l"), 3,90 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 5,2 Hz, H-4), 96311 58 3,06 - 3,03 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 3,5 Hz, H-3), 2,2 -2,0, 2,0 - 1,8 (2H, 2 m-kohtaa, CH2), 1,18 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,86 (9H, s, tert-butyyli), 0,061 ja 0,051 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
5 G. (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-4-[(1"R)- 1"- (2-fluorietyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni
0Si+ (CH2)F oh (CH2)2F
o^Uh P**
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-15 3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4- [(l"R)-l"-(2-fluorietyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbo-nyyli-2"-oksipropyyli]atsetidin-2-oni (170 mg, 0,390 mmol) CH3CN:ssa (2 ml), käsiteltiin 1 N HCl:n vesiliuoksella (0,78 ml, 0,78 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seosta se-20 koitettiin 4 tuntia. Liuotin poistettiin tyhjössä, ja jäännös laimennettiin Et0Ac:lla (15 ml). Orgaaninen faasi pestiin 0,1 M NaHC03:n vesiliuoksella (10 ml), vedellä (10 ml), suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin ja jäännös vietiin silikageeliker-25 roksen (5 g) läpi (1:1 etyyliasetaatti:heksaani), jolloin ^ saatiin otsikon yhdiste (130 mg, 100 %).
IR (CH2C12) \>max: 3680, 3600 (OH), 3400 (NH), 2150 (N2), 1765, 1715 ja 1650 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 (1H, leveä s, NH), 30 6,0 - 5,8 (1H, m, vinyyli-H), 5,4 - 5,29 (2H, m, vinyyli- H), 4,75 - 4,71 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,7 - 4,5, 4,5 - 4,3 (2H, 2 m-kohtaa, CH2F), 2,2 - 2,0 (2H, m, H-l’ ja H-l”), 3,88 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 6,5 Hz, H-4), 2,98 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 7,2 Hz, H-3), 2,34 (1H, d, J = 3,6 Hz, 35 OH), 2,4 - 1,8 (2H, 2 m-kohtaa, CH2) ja 1,31 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
!l I f»-t BilM I l 4-M · 96311 59 H. Allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(2"-fluorietyyli)-6-[ (1 ’R) -1' -hydroksietyyli] -3, 7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]-heptaani-2-karboksylaatti
5 OS i + <CH252F OH <CH2)2F
10 C02^\ w (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-4-[(1"R)-1"- ( 2-fluorietyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-onin (150 mg, 0,46 mmol) liuosta 15 25-prosenttisessa heksaani-etyyliasetaatissa (5 ml) ref- luksoitiin 2,5 tuntia käyttäen Rh(0Ac)2:a katalyyttinä. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon bisyklinen ketoni (140 mg, 100 %).
IR (CH2C12) v„ax: 3680, 3600 (OH), 1770, 1745 ja 20 1735 cm-1 (C=0); ‘H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,0 - 5,80 (1H, m, vi-nyyli-H), 5,4 - 5,26 (2H, m, vinyyli-H), 4,79 - 4,68 (1H, m, HCH-F), 4,69 - 4,65 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,68 (1H, s, H-2), 4,57 - 4,44 (1H, m, HCHF), 4,37 (1H, dd, J = 2,5 Hz, 25 J = 8,6 Hz, H-5), 4,38 - 4,24 (1H, m, H-l'), 3,29 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 7,2 Hz, H-6), 3,02 - 2,9 (1H, m, H-4), 2,3 - 1,7 (3H, 2 m-kohtaa ja leveä s, CH2 ja OH) ja 1,39 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
60 9631Ί I.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-fluorietyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso- l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
5 (CHj)jF 0Π <CH2)jF
%*rj\=0 —» 5 J0 1° C0?\^\
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti ( 2R, 4R, 5R,6S)-4-(2"-fluorietyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksi-etyyli]-3,7-dioksi-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karbok-15 sylaatti (0,14 g, 0,55 mmol) CH3CN:ssa (2 ml), käsiteltiin ClPO(OPh)2:lla (0,11 ml, 0,50 mmol) ja N,N-di-isopropyyli-etyyliamiinilla (0,098 ml, 0,55 mmol) ja sekoitettiin 2 tuntia. Sen jälkeen saatua enolifosfaattia käsiteltiin TMSClrlla (0,065 ml, 0,5 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyy-20 liamiinilla (0,098 ml, 0,55 mmol), sekoitettiin 15 minuuttia ja lopuksi käsiteltiin 2-pikolyylimerkaptaanilla (63 mg, 0,55 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,098 ml, 0,55 mmol). Seosta sekoitettiin 3 tuntia, laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml), pestiin H20:lla (3 x 25 10 ml) ja kuivattiin (MgS0«). Liuottimen haihdutuksella ^ saatu jäännös vietiin silikageeli (10 g) -pylvään läpi (1/1 etyyliasetaatti/heksaani). Saatu trimetyylisilyyli-eetterivälituote (170 mg) laimennettiin THFrlla (2 ml), H20:lla (1 ml), käsiteltiin AcOH:lla (30 μΐ, 0,46 mmol) ja 30 sekoitettiin 1 tunti. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml), pestiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (10 ml), vedellä (10 ml), suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04), jolloin saatiin otsikon aine (0,125 g, 69 %) öljynä; 35 IR (CH2C12) vmax: 3600 (OH), 1775 ja 1715 cm'1 (C=0); !l . H EUH l ii « : 96311 61 XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,53 - 8,51 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,71 - 7,62 (1H, m, aromaattinen H), 7,38, 7,34 (1H, leveä d, J = 7,8 Hz, aromaattinen H), 7,23 - 7,16 (1H, m, aromaattinen H), 6,0 - 5,85 (1H, m, 5 vinyyli-H), 5,47 - 5,21 (2H, m, vinyyli-H), 4,86 - 4,6 (3H, m, CH2-vinyyli ja HCHF), 4,52 - 4,44 (1H, m, HCHF), 4,26 - 4,19, 4,06, 3,99 (2H, ABq, J = 13,9 Hz, CH2-pyridii-ni), 4,28 - 4,18 (2H, m, H-l’ ja H-5), 3,85 - 3,73 (1H, m, H-4), 3,23 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,3 Hz, H-6), 2,4 - 10 1,6 (3H, m ja leveä s, CH2 ja OH) ja 1,36 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
J.Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-fluorietyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
°H <CH2)2F <CH2)2F
^cI^vO —- 20 C02\^\ COgNa
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-f 4R, 5S, 6S )-4-( 2"-fluorietyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3- [ ( pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo-25 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (125 mg, 0,320 mmol) THF:ssa (3 ml), käsiteltiin Pd(PPh3 )4:11a (10 mg) ja N-me-tyylianiliinilla (60 μΐ, 0,55 mmol). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 1,5 tuntia. Seos laimennettiin EtOAc:lla (20 ml) ja uutettiin vesipitoisella 0,05 M pH-30 arvon 7 omaavalla fosfaattipuskurilla (1 x 10 ml ja 1 x 5 ml). Vesifaasit yhdistettiin, pestiin etyyliasetaatilla (10 ml) ja vietiin p-Bondapak-C18-pylvään läpi (20 g, H20, 2 %, 5 %, 7 %, 10 %, CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (50 mg, 40 %).
96311 62
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,23 %, viipymäaika 15,90 minuuttia (10 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, pH 7,4); UV (H20) 266 (6300), 304 (8700); IR (Nujol) v max * 1750 ja 1600 cm** (C=0); 5 *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,47 - 8,45 (1H, m, aro maattinen H), 7,89 - 7,81 (1H, m, aromaattinen H), 7,53 -7,49 (1H, leveä d, J - 7,9 Hz, aromaattinen H), 7,39 - 7,32 (1H, m, aromaattinen H), 4,8 - 4,6, 4,55 - 4,35 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-F), 4,24, 4,17, 4,10, 4,03 (2H, ABq, J = 10 13,8 Hz, CH2-pyridiini), 4,3 - 4,17 (1H, n, H-l'), 4,10 (1H, dd, J = 9,5 Hz, J - 2,6 Hz, H-5), 3,43 (1H, dd, J = 6,1 Hz, J = 2,6 Hz, H-6), 3,41 - 3,29 (1H m, H-4) ja ^ 1,27 ppm (1H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 2 15 (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-6-[ (1 Ή) -1' -hydrok- sietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyvlihappo ψΗ CHpCHpNHp A-A. lö
CT
co2h 25 A. 4-atsido-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatti ^ (X„ * -w.„ — 0 30 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti 2-merkap- tometyylipyridiini (46,5 g, 0,372 mol) CH2Cl2:ssa, käsiteltiin pyridiinillä (37,5 ml, 0,465 mol), minkä jälkee: lisättiin tipoittain 4-atsidobutyryylikloridia (54,9 g, 0,372 mol) CH2Cl2:ssa (100 ml). Seosta sekoitettiin 35 5 °C:ssa 1 tunti, laimennettiin EtOAcilla (2 1), pestiin 1 itt.t «iin 1.1 in > . i 96311 63 kylmällä vedellä (500 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (500 ml), vedellä (500 ml), sitten 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (500 ml), vedellä (500 ml) ja suolaliuoksella. Jäännös vietiin silikageelikerroksen (900 g) läpi, jolloin 5 saatiin otsikon yhdiste (88,9 g, 91 %) öljynä.
IR (CH2C12) -u„ax: 2100 (N3) ja 1690 cm'1 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,55 - 8,52 (1H, m, aro-' maattinen H), 7,66 - 7,58 (1H, m, aromaattinen H), 7,34 -7,31 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,19 - 7,12 (1H, m, 10 aromaattinen H), 4,26 (2H, s, CH2-pyridiini), 3,335 (2H, t, J = 6,6 Hz, CH2N3), 2,688 (2H, t, J = 7,2 Hz, CH2C0) ja 2,03 - 1,87 ppm (2H, m, CH2).
B. 4-atsido-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatin tert-butyylidimetyylisilyylienolieetteri 15 0 i
I 11 ncj-L
l^^iv^SC(CH2)2N3 -* N3<CH2>2v 0S1 +
>VjO
20 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti 4-atsido- [(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatti (191 g, 0,809 mol) CH2Cl2:ssa (1 1), käsiteltiin trietyyliamiinilla (141 ml, 1,01 mol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain tert-butyy-lidimetyylisilyylitrifluorimetaanisulfonaattia (223 ml, ^ 25 0,970 mol) ja sekoitettiin 45 minuuttia noin 22 °C:ssa.
Seos jäähdytettiin (jäähaude), käsiteltiin samalla tavalla trietyyliamiinilla ja tert-butyylidimetyylisilyylitrifluo-rimetaanisulfonaatilla ja sekoitettiin 45 minuuttia. Tämä menettely toistettiin vielä kerran, ja seosta sekoitettiin 30 1 tunti. Seos jäähdytettiin (jäähaude), laimennettiin kyl mällä petrolieetterillä (2 1) ja pestiin kylmällä vedellä (4x11), IM NaHC03:n vesiliuoksella (5 x 1 1), vedellä (1 1), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Orgaanista faasia käsiteltiin puuhiilellä ja suodatettiin, jolloin 35 saatiin otsikon yhdiste (327 g, 100 %); 96311 64 *H NMR (CDC13/ 200 MHz) 6: 8,56 - 8,53 (1H, m, aromaattinen H), 7,67 - 7,59 (1H, m, aromaattinen H), 7,28 -7,25 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,18 - 7,12 (1H, m, aromaattinen H), 3,989 (0,45 H, t, J = 7,6 Hz, vinyyli-5 H), 4,828 (0,55 H, t, J = 7,2 Hz, vinyyli-H), 4,048 (0,9 H, s, CH2-pyridiini), 3,978 (1,1 H, s, CH2-pyridiini), 3,128 (1,1 H, t, J = 7,2 Hz, CH2N3), 3,004 (0,9 H, t, J = 6,9 Hz, CH3N3), 2,35 - 2,22 (2H, m, CH2), 0, 985, 0, 969 (9H, 2s, tert-butyyli), 0,251 ja 0,215 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
10 C. (3S,4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy- lioksietyyli] -4-[(l"R)-l"- (pyridin-2-yyli)metyylitiokar-bonyyli-3"-atsidopropyyli]atsetidin-2-oni I 1 1
N (CH > ' . 0Si+ 0$i + _J
os + II II I
“ x^o * v -
Juuri fuusioituun ZnCl2:iin (38,6 g, 0,284 mol) lisättiin ensin 0 °C:ssa (jäähaude) käyttäen argon-atmosfää-20 riä (3S,4R)-4-asetoksi-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyyli-silyylioksietyyli]atsetidin-2-onia (40,75 g, 0,142 mol) CH2Cl2:ssa (500 ml) ja sen jälkeen tipoittain liuos, jonka muodosti esimerkissä B valmistettu 4-atsido[(pyridin-2-yyli)metyylitiobutyraatintert-butyylidimetyylisilyylieno-25 lieetteri (100 g, 0,284 mol) 140 ml:ssa CH2Cl2:a. Seosta — sekoitettiin (jäähaude) 1 tunti, sen jälkeen sen annettiin seistä 15 tuntia 5 °C:ssa (kylmä huone). Seosta sekoitettiin jälleen 4 tuntia noin 22 °C:ssa, sitten laimennettiin kylläisellä NH4Cl:n vesiliuoksella (700 ml) ja uutettiin 30 kaksi kertaa EtOAc:lla (2 x 1 1). Orgaaniset faasit yhdistettiin, pestiin vedellä (3 x 500 ml), suolaliuoksella (500 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin jäännös, joka laimennettiin petrolieetterillä (200 ml), siihen lisättiin siemenkiteiksi otsikon yhdis-35 tettä ja annettiin kiteytyä 18 tuntia 5 eC:ssa (kylmä huo- il " - l-lfe ( t 4'«» ' * r f 7.' ί w w i I 65 ne). Kiteet otettiin talteen ja emäliuos puhdistettiin silikageeli-flash-kerroksella (500 g) [8/2 :CH2Cl2/heksaa-ni -» 50 % EtOAc/CH2Cl2], jolloin saatiin kaikkiaan 50,5 g (74 %) otsikon yhdistettä; s.p. =95-96 °C (petrolieet-5 teri).
IR (CH2C12) V'„ax: 3400 (NH), 2100 (N3), 1770 ja 1680 cm*1 (C=0); XH NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,55 - 8,52 (1H, m, aromaattinen H), 7,67 - 7,59 (1H, m, aromaattinen H), 7,34 -10 7,30 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,21 - 7,14 (1H, m, aromaattinen H), 5,93 (1H, leveä s, NH), 4,278 (2H, s, CH2-pyridiini), 4,2 - 4,09 (1H, m, H-l'), 3,839 (1H, dd, J = W 2,1 Hz, J = 6,7 Hz, H-4), 3,47 - 3,22 (2H, m, CH2-N3), 3,053 (1H, dd, J = 2,3 Hz, J = 3,3 Hz, H-3), 2,99 - 2,89 15 (1H, m, H-l"), 2,09 - 1,97 (1H, m, HCH), 1,79 - 1,65 (1H, m, HCH), 1,009 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,852 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,044 (6H, s, dimetyyli).
D. (3S,4S)-3-[(1*R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R) -l"-karboksi-3"-atsidopropyyli]atse-20 tidin-2-oni .°f+ J-J1 CSi+ / . n 'KY-JO — 'V'1···
CT H 0 {/ H
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-3 - [ (11R) -1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-30 [ (1"R)-1"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-3"-atsi- • dopropyyli]atsetidin-2-oni (4,79 g, 10 mmol) THF:ssa (50 ml), käsiteltiin 30-prosenttisella H202:lla (2,58 ml, 30,0 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 1 N NaOHrn vesiliuosta (30 ml, 30 mmol). Jäähaude poistettiin ja 35 seosta sekoitettiin 1 tunti, sen jälkeen jäähdytettiin 96311 66 jälleen (jäähaude). Reaktioseos tehtiin happamaksi 1 N HCl:n vesiliuoksella (60 ml, 60 mmol) ja uutettiin EtOAcrlla (3 x 50 ml). Orgaaniset uutteet yhdistettiin, pestiin vedellä (50 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella, ve-5 dellä (50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (3,64 g, 98 %) valkoisena kiinteänä aineena,' s.p. = 138 - 139 °C (dietyylieetteri, petrolieetteri).
IR (CH2C12) »Bax: 3410 (NH), 2100 (N3), 1770, 1740 ja 10 1710 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,57 (1H, leveä s, NH), 4,23 - 4,18 (1H, m, H-l’), 3,932 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 5,8 Hz, H-4), 3,52 - 3,36 (2H, m, CH2N3), 3,146 (1H, dd, ~ J = 1,8 Hz, J = 3,7 Hz, H-3), 2,85 - 2,74 (1H, m, H-l"), 15 2,1 - 1,94 (1H, m, HCH), 1,9 - 1,7 (1H, m, HCH), 1,1830 (3H, t, J = 6,3 Hz, CH3), 0,868 (9H, s, tert-butyyli), 0,072 ja 0,059 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
E. (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -A- [ (1"R) -1"- (2-atsidoetyyli) -3"-diatso-3"-20 allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni i *5 , i ? OS 1+ J 0S1+ J 0t|4 J „
v X X X XX
/7** ' /S M H // " h 0 " 25 —
Suspensiota, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4-[(l"R)-l" -kar-boksi-3"-atsidopropyyli]atsetidin-2-oni (3,56 g, 10 mmol) vedettömässä CH3CN:ssa typpiatmosfäärissä, käsiteltiin en-30 sin karbonyylidi-imidatsolilla (1,94 g, 12 mmol) ja se-; koitettiin 30 minuuttia. Kirkkaaseen liuokseen lisättiin monoallyylimagnesiummalonaattia (3,73 g, 12 mmol), ja seosta sekoitettiin 18 tuntia 60 °C:ssa. Sen jälkeen lisättiin lisää malonaattia (932 mg, 3 mmol), ja seosta kuu-35 mennettiin 60 °C:ssa vielä 4 tuntia. Tämä menettely tois- <1 ! au i i lii i i t st . . ; 96311 67 tettiin kaksi kertaa kuumentamalla vastaavasti 18 ja 4 tuntia. Sen jälkeen haihdutettiin asetonitriili, ja jäännös otettiin talteen EtOAc:iin (200 ml). Tämä liuos pestiin kylmällä vedellä (100 ml), 1 N HCl:n vesiliuoksel-5 la (100 ml), 10-prosenttisella Na2C03:n vesiliuoksella (100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuos haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuotteena' (3S,4R)-3-[(1’R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-li)-4- [ (l"R)-l"-( 2-atsidoetyyli )-3"-allyylioksikarbonyyli-10 2"-oksopropyyli]atsetidin-2-onia (4,2 g, 100 %). Osa tästä raakatuoteesta (1,85 g, 4,22 mmol) CH3CN:ssa (19 ml) jäähdytettiin (jäähaude), käsiteltiin peräkkäin trietyyliamii-nilla (0,6 ml, 4,3 mmol) ja p-tolueenisulfonyyliatsidilla (847 mg, 3,2 mmol), ja sekoitettiin noin 22 °C:ssa 3,5 15 tuntia. Liuotin haihdutettiin ja jäännös vietiin silika-geeli (20 g, CH2C12, 10 % EtOAc/CH2Cl2) -pylvään läpi, jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,21 g, 62 %), jossa oli mukana epäpuhtautena pieni määrä p-tolueenisulfonamidia.
IR (CH2C12) 3410 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), 20 1765, 1715 ja 1645 cm’1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,1 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,87 (1H, leveä s, NH), 5,41 - 5,29 (2H, m, vinyylin H), 4,75 - 4,7 (2H, m, CH2), 4,23 - 4,1 (2H, m, H-l' ja H-l"), 3,873 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 5,2 Hz, H-4), ^ 25 3,39 - 3,24 (2H, m, CH2N3), 3,049 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 3,7 Hz, H-3), 2,21 - 2,05 (1H, m, HCH), 1,75 - 1,60 (1H, m, HCH), 1,179 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,864 (9H, s, tert-butyyli), 0,064 ja 0,052 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
F. (3S,4R)-3-[(11R)-1'-hydroksietyyli]-4-[(1"R)-30 1"-(2-atsidoetyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli- 2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni n3 “3 —N 0 -► -N 0
//H //H
96311 68
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-li] -4- [ (l"R)-l"-( 2-atsidoetyyli ) -3" -diatso-3"-allyyliok-sikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (1,21 g, 5 2,61 mmol) EtOH:ssa (20 ml), lisättiin hitaasti 2 N HCl:n vesiliuosta (2,61 ml, 5,22 mmol). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 22 tuntia, sen jälkeen neutraloitiin pH-arvoon 7 1 M NaHC03:n vesiliuoksella. Seos väkevöitiin tyhjössä ja jäännös otettiin talteen EtOAc:iin (50 ml), 10 pestiin vedellä (20 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli (20 g) -pylvään läpi (CH2C12 -♦ 8/2:Et0Ac/CH2Cl2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (760 mg, 83 %).
15 IR (CH2C12) vom: 3600, 3500 (OH), 2150 (N2), 2100 (N3), 1765, 1715 ja 1645 cm'1 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 6,25 (1H, leveä s, NH), 6,04 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,4 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,8 (2H, m, CH2), 4,17 - 4,01 (2H, m, H-l' ja H- 20 1"), 3,844 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 6,1 Hz, H-4), 3,42 - 3,2 (2H, m, CH2N3), 3,017 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 6,7 Hz, H-3), 2,5 (1H, leveä s, OH), 2,2 - 2,0 (1H, m, HCH), 1,85 - 1,7 (1H, m, HCH) ja 1,286 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
25 G. Allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6- ^ [(l'R)-l’ -hydroksie tyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]-heptaani-2-karboksylaatti "
Il : IB·} 1:1» l;H-» · = i • 96311 69
Liuosta, jonka muodostivat (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-hyd-roksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(2-atsidoetyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (350 mg, 1 mmol) ja Rh(0Ac)2 (6 mg) EtOAc:ssa (15 ml) ja 5 heksaaneissa (5 ml), kuumennettiin 80-85 °C:ssa (haude-lämpötila) 2 tuntia. Liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (340 mg, 100 %) öljynä.
XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,05 - 5,9 (1H, m, vinyylin H), 5,5 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,77 (1H, s, 10 H-2), 4,48 - 4,6 (2H, m, CH2), 4,329 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 8,7 Hz, H-5), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l'), 3,568 (2H, t, J = 6,5 Hz, CH2N3), 3,234 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 8,0 Hz, H-6), 2,95 - 2,75 (1H, m, H-4), 2,1 - 1,9 (1H, m, HCH), 1,8 - 1,6 (1H, m, HCH) ja 1,412 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, 15 CH3).
H.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
20 I I
OH OH
—► ^χιυ>—snXP
^ \ot^? o/ w 25
Kylmää (jää-CH3OH-haude) allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaattia (338 mg, 1 mmol), joka oli CH3CN:ssa (8 ml), käsiteltiin peräkkäin 30 C1P0( 0Ph)2: Ha (0,23 ml, 1,1 mmol) ja N, N-di-isopropyyli- etyyliamiinilla (0,19 ml, 1,1 mmol) ja sekoitettiin 45 minuuttia. Sen jälkeen saatua enolifosfaattia käsiteltiin trimetyylisilyylikloridilla (0,14 ml, 1,1 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,19 ml, 1,1 mmol), ja se-35 koitettiin vielä 45 minuuttia. Sen jälkeen saatua suojat- 70 -96311 tua enolifosfaattia käsiteltiin 2-pikolyylimerkaptaanilla (250 mg, 2,0 mmol) CH3CN:ssa (1 ml) ja N,N-di-isopropyyli-etyyliamiinilla (0,34 ml, 2,0 mmol) ja sen jälkeen sekoitettiin 2 tuntia. Reaktioseos laimennettiin EtOAcrlla 5 (30 ml), pestiin kylmällä vedellä (10 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (10 ml), vedellä (10 ml), 1 M NaHC03:n vesi-liuoksella (10 ml), vedellä (10 ml), suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen poistamisen jälkeen jäännös otettiin talteen kylmään (jäähaude) THF:iin 10 (10 ml), käsiteltiin 2 N CH3C02H:n vesiliuoksella (3 ml, 6 mmol), ja sekoitettiin 1 tunti kylmässä ja 1,5 tuntia noin 22 eC:ssa. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml), pestiin kylmällä vedellä (10 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (10 ml), vedellä (10 ml), suolaliuoksella 15 ja kuivattiin (MgS04). Jäännös eluoitiin silikageeli-(15 g) pylvään läpi (CH2C12 -» 60 % EtOAc/CH2Cl2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (175 mg, 38 %).
IR 3600, 3500 - 3400 (OH), 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm-1 (C=0); 20 XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,54 - 8,51 (1H, m, aromaattinen H), 7,7- 7,6 (1H, m, aromaattinen H), 7,38, 7,34 (1H, m, aromaattinen H), 7,25 - 7,15 (1H, m, aromaattinen H), 6,1 - 5,8 (1H, m, allyylin H), 5,5 (2H, m, al-lyylin H), 4,8 - 4,55 (2H, m, CH2-allyyli), 4,294, 4,225, 25 4,072, 4,002 (2H, ABq, J = 14,0 Hz, CH2-pyridyyli), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l'), 4,166 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,8 - 3,65 (1H, m, H-4), 3,6 - 3,3 (2H, m, CH2-N3), 3,162 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,7 Hz, H-6), 2,2 - 2 (1H, m, HCH), 1,95 (1H, leveä s, OH), 1,9 - 1,6 (1H, m, HCH) ja 30 1,382 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
96311 71 I. (4R/5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-6-[(1'R)-1'-hyd-roksietyyli] -3- [ (pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 5*3 NHj 5 OH y OH ^ /IV-O -·
1o2H
10 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidoetyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyy-li] -3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (43 mg, 0,1 mmol) CH2-Cl2:ssa, käsiteltiin (PPh3 )4Pd: 11a (21 mg, 0,018 mmol) ja 15 N-metyylianiliinilla (0,03 ml, 0,26 mmol). Seosta sekoitettiin 1 tunti noin 22 °C:ssa, laimennettiin dietyylieet-terillä (10 ml), sen jälkeen uutettiin 0,1 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (2 x 1,5 ml, 0,15 mmol), vedellä (2 x 1,5 ml). Vesifaasit pestiin di-20 etyylieetterillä (5 ml) ja pH säädettiin arvoon 5,9 - 6,0 1 M pH-arvon 4,2 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella. Sen jälkeen vesipitoista kerrosta hydrogenolysoitiin 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) paineessa 5-15 °C:ssa (lämpötila reaktion lopussa) 1 tunti käyttäen 10-prosent-w 25 tista Pd/C:a (75 mg) katalyyttinä. Katalyytti suodatettiin, huuhdottiin pH-arvon 6 omaavalla fosfaattipuskurilla ja puhdistettiin C18-p-Bondapak- (12 g) käänteisfaasipyl-väällä (2 % CH3CN/H20), sitten puhdistettiin uudelleen samalla tavalla, jolloin saatiin otsikon yhdiste (6 mg, 30 16 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98,11 %, viipymäaika = 6,08 minuuttia (302 mm, 10 % CH3CN, 0,01 M pH 7,4 fosfaattipuskuri ); UV (H20) *„ax: 266 (4600), 302 (5300); 35 IR (CH2C12) ^max: 1755 ja 1590 cm’1 (C=0); 96311 72 *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,48 - 8,45 (1H, m, aromaattinen), 7,9 - 7,8 (1H, m, aromaattinen H), 7,51, 7,47 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,4 - 7,33 (1H, m, aromaattinen H), 4,22, 4,15, 4,09, 4,02 (2H, ABq, J = 14,5 Hz, 5 CH2-pikolyyli), 4,3 - 4,14 (1H, m, H-l’), 4,097 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 3,374 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), 3,3 - 3,16 (1H, m, H-4), 3,03 (1H, t,' J = 7,8 Hz, CH2N), 2,2 - 2,05 (1H, ra, HCH), 1,82 - 1,6 (1H, m, HCH) ja 1,299 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
10 Esimerkki 3 (4R, 5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli )-6-[(l'R)-l' -hydrok-sietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 15 1H CH2CH2NH2
/-f N
C02H
20 A. (3S,4R)-3-[(l'R)-l’-hydroksietyyli]-4-[(l"R)-1"-(2-atsidoetyyli)-3"-diatso-3"-p-nitrobentsyylioksikar-bonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni N- N3 25 1 . J -
y X J XX
" /"Λ 0 30 °
Suspensiota, jonka muodosti 3S,4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)-4-[(l"R)-l"-karboksi-3"-atsidopropyyli]atsetidin-2-oni (100 mg, 0,27 mraol) CH3CN:ssa (4 ml), käsiteltiin karbonyylidi-imi- 35 datsolilla (52 mg, 0,32 mmol) ja sekoitettiin 0,5 tuntia 73 96311 noin 22 °C:ssa. Lisättiin magnesiummono-p-nitrobentsyy-limalonaattia (200 mg, 0,400 mmol), ja seosta kuumennettiin 60 °C:ssa (haudelämpötila) 18 h. Seos laimennettiin EtOAc:lla (20 ml), pestiin 1 N HCl:n vesiliuoksella 5 (10 ml), vedellä (10 ml), 10-prosenttisella K2C03:n vesi- liuoksella (10 ml), suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04), jolloin saatiin raakatuotteena (3S,4R)-3-[(l'R)-1-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(2-atsidoe tyyli )-3"-p-nitrobentsyylioksikarbonyyli-2"-okso-10 propyyli]atsetidin-2-onia (1,37 g, 92 %). Osa tästä raaka-tuotteesta (109 mg, 0,198 mmol) liuotettiin CH3CN:iin (2 ml) ja käsiteltiin peräkkäin trietyyliamiinilla (0,030 ml, 0,22 mmol) ja p-tolueenisulfonyyliatsidilla (43 mg, 0,22 mmol), ja sekoitettiin noin 22 °C:ssa 1,3 15 tuntia. Liuotin haihdutettiin ja jäännös laitettiin prepa-ratiiviselle TLC-levylle (dietyylieetteri ), jolloin saatiin uuttamisen jälkeen (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-tert-butyyli-dimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(2-atsidoetyyli)-3"-diatso-3"-p-nitrobentsyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyy-20 li]atsetidin-2-onia (Rf 0,71, 84 mg), jossa oli mukana epäpuhtautena p-tolueenisulfonyyliatsidia (65 mg, 57 % korjattu saanto). Samanlainen seos (toisesta reaktiosta) (2,7 g, 4,7 mmol) liuotettiin kylmään (jäähaude) etanoliin (40 ml) ja siihen lisättiin tipoittain 2 N HCl:n vesi---- 25 liuosta (4,7 ml, 9,4 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seos ta sekoitettiin 23 tuntia, minkä jälkeen se neutraloitiin (jäähaude) 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (noin 10 ml) ja väkevöitiin tyhjössä. Jäännös laimennettiin EtOAcrlla (100 ml), pestiin kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella 30 (200 ml), vedellä (20 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageelikerroksen (30 g) läpi (CH2C12 -* 80 % Et0Ac/CH2Cl2 -> EtOAc), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,45 g, 67 %) keltaisena kiinteänä aineena.
‘H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,3 - 8,23 (2H, m, aro-35 maattinen H), 7,56, 7,52 (2H, leveä d, J = 8,7 Hz, aro- 96311 74 maattinen H), 6,02 (1H, leveä s, NH), 5,44, 5,37, 5,35, 5,29 (2H, Abq, J = 13,1 Hz, CH2), 4,16 - 4,01 (2H, m, H- 1' ja H-l"), 3,849 (1H, dd, J = 2,2 Hz, J 6,0 Hz, H-4), 3,43 - 3,25 (2H, m, CH2N3), 3,041 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 5 6,9 Hz, H-3), 2,3 - 2,0 (1H, m, HCH), 2,130 (1H, d, J = 4,1 Hz, OH), 1,9 - 1,7 (1H, m, HCH) ja 1,30 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
B.p-nitrobentsyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)- 6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyyli-10 tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti
0 COjPNB
Liuosta, jonka muodostivat (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-hyd-20 roksietyyli] -4- [(l"R)-l"-[( 2-atsidoetyyli ) -3" -diatso-3" - p-nitrobentsyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin- 2-oni (856 mg, 1,86 mmol) 3:1-suhteisessa EtOActn ja hek-saanin seoksessa (40 ml) ja Rh(0Ac)2 (20 mg), kuumennettiin 80 - 85 °C:ssa (haudelämpötila) 1,5 tuntia. Liuotin pois-25 tettiin, jolloin jäljelle jäi raakatuotteena bisyklinen ^ ketoni: p-nitrobentsyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(2"-atsidoetyy- li)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo- [3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (860 mg, 100 %); :H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,2 (2H, d, aromaattinen 30 H), 7,5 (2H, d, aromaattinen H), 5,4 (1H, s, H-2), 5,3 (2H, ABq:n keskus, CH2-aromaattinen), 4,3 (1H, dd, H-5), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l'), 3,5 (2H, t, CH2N3), 3,3 (1H, dd, H-6), 3,0 - 2,8 (1H, m, H-4), 2,1 - 1,9 (1H, m, HCH), 1,9 - 1,7 (1H, m, HCH), 1,43 (3H, d, CH3).
11 : tilit 1411 I I 4 st . , i 96311 75
Kylmää (jää-CH3OH-haude) liuosta, jonka muodosti raakatuotteena oleva ketoni (860 mg, 1,86 mmol) CH3CN:ssa (20 ml), käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (0,43 ml, 2,05 mmol), minkä jälkeen lisättiin hitaasti N,N-di-iso-5 propyylietyyliamiinia (0,35 ml, 2,05 mmol) ja hiukan 4-dimetyyliaminopyridiiniä. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, minkä jälkeen lisättiin peräkkäin trimetyylisilyyli-kloridia (0,26 ml, 2,05 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyli-amiinia (0,35 ml, 2,05 mmol), ja sekoittamista jatkettiin 10 vielä 30 minuuttia. Saatua O-trimetyylisilyylienolifos-faattia käsiteltiin 2-pikolyylimerkaptaanilla (517 mg, 4,10 mmol) CH3CN:ssa (1 ml), minkä jälkeen lisättiin tipoittain N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,70 ml, 0,41 mmol) ja sekoitettiin 1 tunti. Seos laimennettiin 15 EtOAc:lla (40 ml), pestiin kylmällä vedellä (20 ml), pH-arvon 7,4 omaavalla fosfaattipuskurilla (20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatu jäännös otettiin talteen THF:iin (100 ml), jäähdytettiin 5 °C:seen (jäähaude), käsiteltiin 20 2 N CH3C02H:n vesiliuoksella (5 ml) ja sekoitettiin 2 tun tia. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (25 ml), pestiin vedellä, pH-arvon 7,5 omaavalla fosfaattipuskurilla (20 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös puhdistettiin silikageeli-flash (20 g) -kromatografiapyl-^ 25 väällä (CH2C12 -♦ EtOAc), jolloin saatiin otsikon yhdiste (500 mg, 49 %).
IR (CH2C12) vmax: 3600, 3509, 3400 (OH), 2100 (N3), 1775, 1710 (C=0) ja 1525 cm’1 (N02); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,54, 8,52 (1H, leveä d, 30 aromaattinen H), 8,198 (2H, d, J = 8,7 Hz, p-NB-esteri), 7,7 - 7,5 (3H, m ja d, J = 8,7 Hz, aromaattinen H, p-NB-esteri), 7,36 - 7,32 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,24 -7,17 (1H, m, aromaattinen H), 5,517, 5,448, 5,230, 5,161 (2H, ABq, J = 14,8 Hz, CH2-pNB), 4,305, 4,236, 4,087, 4,018 35 (2H, ABq, J = 13,9 Hz, CH2-pyridyyli), 4,3 - 4,2 (1H, m, 96311 76 H-l'), 4,190, 4,177 (osa dd:a, J = 2,6 Hz, osa H-5:a), 3,85 - 3,72 (1H, m, H-4), 3,7 - 3,3 (2H, m, CH2N3), 3,198 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J * 7,6 Hz, H-6), 2,2 - 1,95 (1H, m, H-CH), 1,9 - 1,6 (1H, m, HCH), 1,64 (1H, leveä s, OH) ja 5 1,399 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-6-[(1'R)-1'-hyd-roksietyyli] -3-[ (pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo io jj r* OH s' OH s'
COgPNB COgH
15
Liuosta, jonka muodosti p-nitrobentsyyli-(4R,5S, 6S )-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (55 mg, 0,1 mmol) dietyyli-20 eetterin ja THF:n (1:1, 20 ml) ja 0,05 M veden ja pH-arvon 7,0 omaavan fosfaattipuskurin (7 ml + 3 ml) kaksifaasisys-teemissä, hydrogenolysoitiin käyttäen 10-prosenttista Pd/ C:a (84 mg) 345 kPa:n (50 psi:n) paineessa 5 tuntia kylmässä (jäähaude). Katalyytti suodatettiin pois ja orgaani-25 nen kerros pestiin vedellä. Vesikerrokset yhdistettiin ja vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi, jolloin saatiin otsikon yhdiste (6 mg), jonka spektritiedot olivat identtiset esimerkin 2 vaiheessa I valmistetun yhdisteen spektritietojen kanssa.
77 96311
Esimerkki 4 (4R,5S,6S)-4-[3-(N-formimidoyyli)aminoetyyli]-6- C (11R) — 1 * -hydroksietyyli] -3- [ (pyridin-2-yyli)metyylitkö] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-5 karboksyylihappo n3 nhchnh
OH s' OH
„
C02Na COeH
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti natrium-(4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidoetyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyy-15 li]-3-[ (pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (100 mg, 0,24 mmol) vedessä (12 ml) ja 0,1 M pH-arvon 6,0 omaavassa fosfaatti-puskurissa (7 ml), hydrogenolysoitiin 2 tuntia käyttäen 10-prosenttista Pd/C:a katalyyttinä. Katalyytti suodatet-20 tiin pois, ja vesipitoisen liuoksen (jäähaude) pH säädettiin arvoon 8,5 1 N ja 0,1 N Na0H:n vesiliuoksella. Seokseen lisättiin annoksittain bentsyyliformimidaattivetyklo-ridia (410 mg, 2,4 mmol), ja pH pidettiin välillä 8-8,3 0,1 N NaOHrlla. Reaktioseosta sekoitettiin 15 min ja vie-'w 25 tiin p-Bondapak-Cie-pylvään läpi (10 g, H20 -» 1, 2 ja 3 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (30 mg). Tuote puhdistettiin uudelleen samalla aineella (C18, 6 g), jolloin saatiin puhdasta otsikon yhdistettä (13 mg, 13 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 92,6 % (p-Bondapak-C18, 8 % 30 CH3CN/KH2P04 0,01 M pH 7,4, viipymäaika = 7,095 minuuttia); UV (H20) >max: 304 (6445), 266 (5592); IR (Nujol) vmax: 1755, 1595 (C=0) ja 1715 cm'1 (C=N); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,47, 8,45 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,9 - 7,8 (1H, m, aromaattinen H), 7,805 35 (1H, s, C=NH), 7,5 - 7,2 (2H, m, aromaattinen H), 4,3 - - 96311 78 4,1 (1H, m, H-l'), 4,217, 4,141, 4,078, 4,008 (2H, ABq, 3 = 15,2 Hz, CH2-pyridiini), 4,14 - 4,07 (1H, peittynyt H-5), 3,5 - 3,1 (4H, m, H-6, CH2N, H-4), 2,1 - 1,1 (1H, m, HCH), 1,75 - 1,5 (1H, m, HCH) ja 1,296 ppm (3H, d, J = 5 6,3 Hz, CH3).
Esimerkki 5
Natrium-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-4- (2" -hydroksietyyli) -3- [ (pyridin-2-yy 1 i)metyy 1 itio] - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-10 laatti
£H CHpCHpOH
AJ. ^ C02Na A. 4-tert-butyylidimetyylisilyylioksi[(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatti + Si0<CH,>jC0,H + Q^sh —* Q^.C<CT,»,.).+ 0
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodostivat 4-25 tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyrihappo (2,7 g, — 13 mmol) ja 2-pikolyylimerkaptaani (1,67 g, 13 mmol) CH2-Cl2:ssa (40 ml), käsiteltiin 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidillä (2,8 g, 13 mmol) ja 1-hydroksibentsotriatsolihyd-raatilla (1,81 g, 13 mmol), ja sekoitettiin noin 22 °C:ssa 30 20 tuntia. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin ; vedellä, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin jäännös, joka vietiin sili-kageelikerroksen läpi (EtOAccheksaani, 1:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (3,08 g, 71 %).
35 IR (puhdas) 1690 cm'1 C=0; - 96311 79 *H NMR (CDC13, 200 MHz) δ: 8,54, 8,52 (1H, leveä d, aromaattinen), 7,68, 7,66, 1,63, 7,62, 7,59, 7,58 (1H, dt, aromaattinen), 7,36, 7,32 (1H, d, aromaattinen), 7,26, 7,19, 7,166, 7,16, 7,15, 7,13 (1H, m, aromaattinen), 4,25 5 (2H, s, CH2), 3,62 (2H, t, J = 6,1 Hz, CH2), 2,68 (2H, t, J = 7,5 Hz, CH2), 1,90 (2H, 5 viivan keskus; CH2), 0,87 (9H, s, t-butyyli) ja 0,019 ppm (6H, s, dimetyyli).
B. 4-tert-butyylidimetyylisilyylioksi[(pyridin-2-yyli)metyylitio]butyraatin tert-butyylidimetyylisilyyli-10 enolieetteri
^ 0 ( I
^ li^^i^^SCCCHgJgOS i+ -* +Si-0<CHg)p /°^1 +
1 rvjO
15
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti S-(2-pikolyylitio)-4-tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyraatti (1,3 g, 4,0 mmol) CH2Cl2:ssa (15 ml), lisättiin tipoittain tert-butyylidimetyylisilyylitrif luorimetaanisulfonaattia 20 (1,1 ml, 6,0 mmol), trietyyliamiinia (1,14, 8,00 mmol) ja sekoitettiin 3 tuntia huoneenlämpötilassa (noin 22 °C). Seos laimennettiin petrolieetterillä (60 ml), pestiin kylmällä vedellä (3 x 50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuosta käsiteltiin puuhiilellä, suodatet-w 25 tiin ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,8 g, 100 %) öljynä.
IR (puhdas) vmax: 1630 cm-1 olefiini; lH NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,54, 8,53, 8,52, 8,51 (1H, d, aromaattinen H), 7,30 - 7,24 (1H, m, aromaattinen 30 H), 7,16 - 7,10 (1H, m, aromaattinen H), 6,00 (0,6 H, t, J = 7,5 Hz, olefiinin H), 4,89 (0,4 H, t, J = 7,1 Hz, ole-fiinin H), 4,04 (1,2 H, s, CH2), 3,97 (0,8 H, s, CH2), 3,47 (0,8 H, t, J = 7,1 Hz, CH2), 3,38 (0,8 H, t, J = 6,8 Hz, CH2), 2,28 - 2,15 (2H, m, CH2), 0,98, 0,96 (2s, 9H, t-bu-35 tyyli), 0,864, 0,861 (9H, 2s, t-butyyli), 0,237, 0,196 96311 80 (6H, 2s, dimetyyli), 0,014 ja 0,003 ppm (6H, 2s, dimetyy-11).
C. (3S,4S)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4-[(1"R)-1"- (pyridin-2-yyli)metyylitiokar-5 bonyyli-3"-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyyli]atse-tidin-2-oni | 0Si + osi+ i i 1' *"»< h s IJ ir+ I-1
10 y& ♦ Hu ^ 'Vrv.oQ
tr + sίocHjCHj , T h 11 ^
Kylmään (jäähaude) juuri fuusioituun ZnCl2:iin (545 mg, 4 mmol) lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna 15 (3S,4R)-4-asetoksi-3-[(l 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy- lioksietyyli] atsetidin-2-onia ( 575 mg, 2 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), minkä jälkeen lisättiin tipoittain silyylienoli-eetteriä (1,8 g, 4 mmol), joka oli valmistettu vaiheessa B, CH2Cl2:ssa (5 ml). Seosta sekoitettiin 5 °C:ssa 18 tun-20 tia, laimennettiin etyyliasetaatilla (60 ml), pestiin kylläisellä NaHC03:n vesiliuoksella (50 ml), kylläisellä NH<Cl:n vesiliuoksella (50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväällä (80 g, 1:5 etyyliase-25 taatti/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste kiin- —' teänä aineena (500 mg, 45 %), s.p. 103 - 105 °C (heksaa-ni).
IR (puhdas) vBax: 3410 (NH), 1765 ja 1680 cm*1 (C=0); NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,54 - 8,51 (1H, m, aro-30 maattinen H), 7,66 - 7,57 (1H, m, aromaattinen H), 7,34 (1H, d, J = 7,8 Hz, aromaattinen H), 7,20-7,12 (1H, m, aromaattinen H), 5,99 (1H, leveä s, NH), 4,24 (2H, s, CH2), 4,2 - 4,09 (1H, m, H-l'), 3,83 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 6,9 Hz, H-4), 3,73 - 3,49 (2H, m, CH20), 3,04 - 2,94 (2H, 35 m, H-l" ja H-3), 2,01 - 1,89 (1H, m, H-2"), 1,80 - 1,64 : ' *» t mk m-* m i ei 96311 (1H, m. H-2" ), 1,00 (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3), 0, 861, 0,850 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,040 ja 0,004 ppm (12H, 2s, dime tyyli );
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C27H47N204SSi2: 5 C 58,76; H 8,58; N 5,08; S 5,81.
Todettu: C 58,57; H 9,00; N 4,97; S 5,89.
D. (3S,4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-' lioksietyyli] -4-[ (1"R) -l"-karboksi-3"-tert-butyylidi.metyy-lisilyylioksipropyyli]atsetidin-2-oni 10 , , OS 14* OS i 4- i I I f I i
OSi 4- ^ OSi 4- J
VvoO — Λαγ- 15 (K H 0 H °
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-3 - [ (1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[ (1"R)-1"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-3"-tert-20 butyylidimetyylisilyylioksipropyyli]atsetidin-2-oni (480 mg, 0,87 mmol) THF:ssa (5 ml), käsiteltiin 30-pro-senttisella H202:lla (0,15 ml, 1,7 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 1 N NaOH:n vesiliuosta (1,7 ml, l, 7 mmol). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin w 25 90 minuuttia, minkä jälkeen se laimennettiin etyyliasetaa tilla (30 ml), pestiin 1 N HCl:n vesiliuoksella (25 ml), 1 N NaHS03:n vesiliuoksella (25 ml), vedellä ja suolaliuoksella ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,37 g, 96 %) valkoisena kiinteänä 30 aineena; s.p. 125 - 127 °C (etyyliasetaatti).
IR (CH2C12) νΒ„: 3410 (NH), 1765 (β-laktaami) ja 1710 cm-1 (happo); XH NMR (CDC13) 6: 6,23 (1H, leveä s, NH), 4,204 (1H, m, H-l' ), 2,94 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 5,9 Hz, H-4), 3,72 35 (2H, leveä t, J = 5,7 Hz, CH2), 3,07 (1H, dd, J = 1,7 Hz, 96311 82 J - 4,1 Hz, H-3), 2,84 - 2,74 (1H, m, H-l"), 2,02 - 1,81 (1H, m, HCH), 1,78 - 1,69 (1H, m, HCH), 1,18 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,889, 0,866 (18H, 2s, tert-butyyli) ja 0,065 ppm (12H, s, dimetyyli); 5 Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C21H42N05Si2: C 56,71; H 9,52; N 3,15.
Todettu: C 56,55; H 9,67; N 3,13.
E. (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4-[ (1"R) -l"-(2-tert-butyylidimetyylisilyyli-10 oksietyyli) -3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]at- setidin-2-oni
I I
OS i + 0Si +
IM I I
OS i + I OS i + I
“ '''[TV--- λ—N y A—N l 5 0A H 0 // H 0
Suspensiota, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(1'R)-1'-20 tert-butyylidimetyylisilyylioksimetyyli]-4-[(1"R)-1"-kar-boksi-3"-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyyli]atseti-din-2-oni (7,5 g, 17 mmol) CH3CN:ssa (75 ml), käsiteltiin karbonyylidi-imidatsolilla (2,92 g, 18,0 mmol) ja sekoitettiin 1 tunti 22 °C:ssa. Sen jälkeen seosta käsiteltiin 25 vedettömällä monoalkyylimagnesiununalonaatilla (5,3 g, w 17 mmol) ja kuumennettiin 80 eC:ssa (haudelämpötila) 18 tuntia. Liuotin haihdutettiin osittain. Väkevöity liuos laimennettiin EtOAc:lla (250 ml), pestiin 1 N HCl:n vesi-liuoksella (100 ml), vedellä (100 ml) ja kylläisellä 30 NaHC03:n vesiliuoksella (100 ml), vedellä ja suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS0„). Jäännös (15 g) vietiin flash-silikageeli (300 g) -pylvään läpi (1:3 EtOAc/heksaa-ni), jolloin saatiin otsikon yhdiste (5,15 g, 57 %) ketoni- ja enolimuodon seoksena.
ii iii.t n» l i i ai 96311 83 IR (Nujol) λ>βμ: 3150 - 3100 (OH), 1760, 1710, 1650 ja 1620 era'1 (C=0 ja enoli); 2H NMR (CDCI3, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,80 (2H, 2 leveää s ja m, NH ja allyyli), 5,38 - 5,23 (2H, m, allyyli), 5,07 5 (0,5 H, s, enolin vinyyli-H), 4,67 - 4,60 (2H, m, CH2), 4,24 - 4,12 (1H, m, H-l'), 3,90 (0,47 H, dd, J = 2,2 Hz, J = 5,6 Hz, H-4), 3,83 (0,53 H, dd, J = 2,1 Hz, J =' 7.1 Hz, H-4), 3,75 - 3,48 (32 H, m, CH20Si ja COCH2CO), 3,10 (0,47 H, m, H-l"), 2,94 (1H, m, H-3), 2,55 - 2,40 10 (0,45 H, m, H-l"), 1,97 - 1,6 (2H, 2 m, CH2), 1,17 (1,3 H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 1,11 (1,4 H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,882, 0,878, 0,865 (18 H, 3s, tert-butyyli), 0,064, 0,056, 0,049 ja 0,031 ppm (12H, 4s, dimetyyli);
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C26H49N06Si2: 15 C 59,16; H 9,36; N 2,65.
Todettu: C 59,11; H 9,36; N 2,60.
F. (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R) -1"-(2-tert-butyylidimetyylisilyyli-oksietyyli) -3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2,,-oksopro-20 pyyli]atsetidin-2-oni 1 j l 0Si+ OS i +
OS i 4- _J OS i + I
V J r rs« [ V^co,^^ Γ V^co-^Ni'' - « β Λ" Η β
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l’’R)-l"-(2-tert-butyylidimetyylisilyylioksimetyyli ) -3"-allyylioksikarbo-30 nyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (0,60 g, 1,1 mmol) CH3CN:ssa (10 ml), käsiteltiin p-tolueenisulfonyyliatsi-dilla (240 mg, 1,2 mmol) ja trietyyliamiinilla (160 μΐ, 1.1 mmol), ja sekoitettiin 2 tuntia noin 22 °C:ssa. Liuotin poistettiin, ja jäännöstä trituroitiin petrolieetterin 35 (20 ml) kanssa p-tolueenisulfonamidin saostamiseksi. Kel- 96311 84 täinen öljy (0,61 g) vietiin silikageelin läpi (25 g, 10 -20 % EtOAc/heksaani), jolloin saatiin puhdas otsikon yhdiste (420 mg); s.p. = 53 - 55 eC.
IR (CH2C12) V„ax: 3400 (NH), 3140 (N2), 1765, 1715 ja 5 1050 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,02 - 5,8 (2H, leveä s ja m, NH, allyyli), 5,4 - 5,27 (2H, m, allyyli), 4,72 - 4,68 (2H, m, CH2), 4,23 - 4,13 (2H, m, H-l' ja H-l" ), 3,87 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 5,5 Hz, H-4), 3,67 - 3,52 (2H, m, 10 CH20), 3,04 (1H, leveä t, J = 4,0 Hz, H-3), 2,10 - 2,01 (1H, m, HCH), 1,66 - 1,57 (1H, m, HCH), 1,165 (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3), 0,862 ja 0,849 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,058, 0,053, 0,0005 ja 0,0061 ppm (12H, 4s, dimetyyli);
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C26H47N306Si2: 15 C 56,39; H 8,55; N 7,59.
Todettu: C 56,44; H 8,80; N 7,50.
G. Allyyli-(4R,5R,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli] -4- (2"-tert-butyylidimetyylisi-lyylioksietyyli)-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-20 2-karboksylaatti n 1.1 osi + , n 1. J' OS i 4- S^‘ + f
xT
25 jXf* d 0 1oä^
Liuosta, jonka muodostivat (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[l"R)-l"-(2-30 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (1,0 g, 1,8 mmol) ja rodium(II)oktanoaatti (3 mg) 75-pro-senttisessa heksaani-EtOAc:ssa (10 ml), kuumennettiin palautus jäähdyttäen 3 tuntia ja haihdutettiin kuiviin, joi- : »tt-j *m 85 9631Ί loin saatiin otsikon yhdiste öljynä, kvantitatiivisella saannolla 1 g, 100 %).
IR (puhdas) 1765 (C=0), 1745 (olkapää, C=0) ja 1735 cm'1 (olkapää, C=0); 5 XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 5,99 - 8,79 (1H, m, al- lyyli), 5,39 (2H, m, allyyli), 4,7 - 4,6 (2H, m, CH2), 4,63 (1H, s, H-2), 4,35 - 4,2 (1H, m, H-l’), 4,25 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 8,4 Hz, H-5), 3,8 - 3,6 (2H, m, CH2-0), 3,21 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 5,8 Hz, H-6), 2,99 - 2,87 (1H, m, 10 H-4), 2,0 - 1,58 (2H, m, CH2), 1,28 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 0,886, 0,879 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,094, 0,087, w 0,054 ja 0,045 ppm (12H, 4s, dimetyyli).
H. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyylidi-metyyllsilyylioksietyyli] -4- (2"-tert-butyylidimetyylisi-15 lyylioksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaa11 i
I I
OS i + OS i + 1 Ji 1 1'
OS i+ S OS i 4- S
- 25 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R, 5R, 6S )-6 - [ (1' R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli] -4-( 2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli )-3,7-diokso-1-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (0,92 g, 1,8 mmol) CH3CN:ssa (10 ml), käsiteltiin difenyy-30 likloorifosfaatilla (0,4 ml, 2 mmol), N,N-di-isopropyyli-etyyliamiinilla (0,36 ml, 2 mmol), dimetyyliaminopyridii-nillä (1 mg), ja sekoitettiin 1 tunti 22 °C:ssa. Seos jäähdytettiin jälleen (jäähaude), käsiteltiin 2-pikolyyli-merkaptaanilla (0,38 g, 3 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyy-35 liamiinilla (0,6 μΐ, 3,2 mmol), ja sekoitettiin 20 tuntia 96311 86 5 °C:ssa. Reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (60 ml), pestiin kylmällä NaHC03:lla, vedellä (3 x 50 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös vietiin silikageelipylvään läpi (16 g, 1:9 -» 5 1,3 EtOAc:heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,63 g, 56 %).
IR (CH2C12) voax: 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,52 - 8,49 (1H, m, aromaattinen), 7,68 - 7,59 (1H, m, aromaattinen), 7,34 - 7,30 10 (1H, d, aromaattinen), 7,20 - 7,13 (1H, m, aromaattinen), 6,03 - 5,84 (1H, m, allyylin H), 5,47 - 5,18 (1H, m, al-lyylin H), 3,82 - 4,6 (2H, m, CH2), 4,354, 4,287 (1H, osa w ABq:a, J = 13,5 Hz, CH2-pyridyyli), 4,28 - 4,14 (1H, m, H-1'), 4,143, 4,075 (1H, osa ABq:a, J = 13,5 Hz, CH2-pyridyy-15 li), 4,08 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 9,2 Hz, H-5), 3,84 - 3,70 (2H, m, CH20), 3, 65 - 3,51 ( 1H, m, H-4), 3,100 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 6,9 Hz, H-6), 2,12 - 1,69 (1H, m, HCH), 1,56 - 1,56 (1H, m, HCH), 1,284 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,888, 0,850 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,081 (6H, s, 20 dimetyyli), 0,051 ja 0,045 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
I. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1·-hydroksietyyli]-4 - ( 2"-hydroksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti oc 0Si+ OH _
' ' . J1 J
0Si+ ¢/ tH f —0 - co2/‘N<:i' 30
Kylmää (jää-MeOH-haude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-6-[(1 ’R)-l ’ -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-4-(2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-li )-3- [ (pyridin-2-yyli ) metyyli tio] -7-okso-l-atsabisyklo-35 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (230 mg, 0,36 mmol) 96311 87 THFrssa (juuri tislattu) (5 ml), käsiteltiin ensin etik-kahapolla (250 μΐ, 4,2 mmol) ja lisättiin tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin THF-liuosta (2,2 ml, 2.2 mmol). Seosta sekoitettiin 120 tuntia 22 °C:ssa, lai-5 mennettiin EtOAc:lla (20 ml), pestiin kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (15 ml), vedellä (15 ml), suolaliuoksella (15 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella* saatu jäännös puhdistettiin silikageeli (10 g) -pylväässä (10 % CH3CN/CH2C12, CH3CN, asetoni), jolloin saatiin otsikon 10 yhdiste (60 mg, 41 %).
IR (CH2C12) Vmax: 3690, 3610, 3530 (OH), 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,5 - 8,47 (1H, m, aromaattinen H), 7,75 - 7,66 (1H, m, aromaattinen H), 7,42, 15 7,38 (1H, d, aromaattinen H), 7,23 - 7,19 (1H, aromaatti nen H), 6,05 - 5,86 (1H, m, allyylin H), 5,48 - 5,21 (2H, m, allyylin H), 4,87 - 4,60 (2H, m, CH2), 4,343, 4,273 (1H, osa ABq:a, J = 14,1 Hz, CH2-pyridyyli), 4,204 (1H, dd, J = 2.7 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 4,142, 4,072 (1H, osa ABq:a, J = 20 14,1 Hz, CH2-pyridyyli), 4,27 - 4,14 (1H, m, H-l'), 3,89 - 3,70 (3H, m, CH2-0 ja H-4), 3,261 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7.8 Hz, H-6), 2,17 - 2,02 (1H, m, HCH), 1,89 - 1,67 (1H, m, HCH), 1,66 (2H, leveä s, OH) ja 1,364 ppm (3H, d, J = 6.3 Hz, CH3).
“ 25 J. Natrium-(4R,5S,6S)-6-[(1*R)-11-hydroksietyyli]- 4-(2"-hydroksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
OH OH
OH s' OH
” \q—0 - to**·.
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-35 (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] - 4- ( 2 " -hydroksietyy- • 96311 88 li )-3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (60 mg, 0,15 mmol) juuri tislatussa THF:ssa (2 ml), käsiteltiin PPh3:lla (5 mg), (PPh3 )4Pd: 11a ( 5 mg) ja N-metyylianiliinilla 5 (33 μΐ, 0,3 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seosta se koitettiin 1 tunti, sen jälkeen laimennettiin EtOAcrlla (8 ml) ja uutettiin kaksi kertaa 0,1 M pH-arvon 7 omaavan puskurin vesiliuoksella (4 ml + 2 ml). Vesifaasit yhdistettiin, pestiin EtOAc:lla (5 ml), pidettiin pumppauksella 10 aikaansaadussa tyhjössä ja vietiin käänteisfaasisilikagee- li-C18-pylvään läpi (10 g, H20 - 10 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste lyofilisoituna jauheena (25 mg, 43 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,5 % (10 % CH3CN/KH2P04 15 0,01 M, pH 7,4, Cie-p-Bondapak, viipymäaika 4,49 minuut tia ).
IR (Nujol) VBax: 1750 ja 1600 cm'1 (C=0); UV: (H20) λπιβχ: 266 (5100), 306 (6800); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,48 - 8,45 (1H, m, aro-20 maattinen H), 7,89 - 7,81 (1H, m, aromaattinen H), 7,53 -7,49 (1H, d, J = 7,9 Hz, aromaattinen H), 7,39 - 7,33 (1H, m, aromaattinen H), 4,25 - 4,186, 4,103, 4,033 (2H, ABq, J = 13,8 Hz, CH2-pyridyyli), 4,25 - 4,18 (1H, m, H-l'), 4,0587, 4,0457 (osa dd:a, J = 2,6 Hz, H-5), 3,74 - 3,61 25 (1H, m, H-CH-0), 3,57 - 3,44 (1H, m, HCH-0), 3,383 (1H, — • dd, J = 2,6 Hz, J * 5,9 Hz, H-6), 3,31 - 3,19 (1H, m, H-4), 2,1 - 1,9 (1H, m, HCH), 1,69 - 1,5 (1H, m, HCH) ja 1,285 ppm (3H, d, J * 6,4 Hz, CH3).
89 -.56311
Esimerkki 6
Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)- 1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-5 laatti OH (CH2)2N3 10 I //—s CT \ ·— C02Na A.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidime-15 tyylisilyylioksietyyli]-4-(2,,-hydroksietyyli)-3-[ (pyridin- 2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
OS i + OH
on 0Si+ S 2Si+ r o/ ° 25 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l' - tert-butyy lidime tyylisi lyylioksi-etyyli] -4-( 2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli ) - 3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (630 mg, 1,00 mmol) joka oli 30 valmistettu kuten esimerkin 5 vaiheessa H, juuri tislatussa THF:ssa (10 ml), käsiteltiin ensin AcOHrlla (0,35 ml, 6 mmol), ja sen jälkeen lisättiin tipoittain 1 M tetra-butyyliammoniumfluoridin THF-liuosta (3,0 ml, 3 mmol). Seosta sekoitettiin 20 tuntia 5 °C:ssa, neutraloitiin pH-35 arvoon 7,0 IM NaHC03:n vesiliuoksella, ja uutettiin 96311 90
EtOAc:lla (2 x 15 ml). Orgaaninen liuos pestiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (1 x 20 ml), vedellä (3 x 20 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (0,6 g) vietiin flash-silikageeli (20 g) -pylvään läpi, jolloin saa-5 tiin otsikon yhdiste (1:1 heksaani, EtOAc) öljynä (0,39 g, 75 %).
IR (CH2C12) vmax: 3680, 3610 (OH), 1770 ja 1710 cm'1' (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,479 (1H, leveä d, J = 10 4,1 Hz, aromaattinen H), 7,710 (1H, dt, J = 7,7 Hz, J = l, 78 Hz, aromaattinen H), 7,40 (1H, d, J = 8,8 Hz, aro maattinen H), 7,26 - 7,19 (1H, m, aromaattinen H), 6,04 -5,85 (1H, m, allyylin H), 5,48 - 5,20 (2H, m, allyylin H), 4,83 - 4,61 (2H, m, CH2), 4,387, 4,317, 4,178, 4,109 (2H, 15 ABq, J = 14,0 Hz, CH2-pyridiini), 4,27 - 4,12 (1H, m, H-l' ), 4,122, 4,075, 4,063 (1H, dd, J =2,4 Hz, J = 9,4 Hz, H-5), 3,93 - 3,82 (2H, m, H-4 ja HCH-0), 3,65 - 3,55 (2H, m, H-CH-0 ja OH), 3,130 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 7,0 Hz, H-6), 2,2 - 2,0 (1H, m, HCH), 1,9 - 1,6 (1H, m, HCH), 20 1,279 (3H, t, J = 7,1 Hz, CH3), 0,889 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,076 ppm (6H, s, dimetyyli).
B.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-25 2-karboksylaatti ^ OH N3 0Si+ J °ji + > 0 — 'VV·-*? lo2/X*
Kylmää (-20 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-35 etyyli]-4-(2"-hydroksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyyli- :| ; HUI ΙΊ11 lii*»' 96311 91 tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti (0,39 g, 0,75 mmol) THF:ssa (80 ml), käsiteltiin trifenyylifosfiinilla (315 mg, 1,2 mmol), 0,43 M hydratso-iinihapon tolueeniliuoksella (0,21 ml, 1,3 mmol) ja di-5 etyyliatsodikarboksylaatilla (0,21 ml, 1,3 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia -20 °C:ssa, laimennettiin EtOAc:lla (30 ml), pestiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (1 x 20 ml), vedellä (2 x 20 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (noin 1 g) vietiin silikageeli-10 (50 g) pylvään läpi (1/3 AcOEt/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,30 g, 74 %).
IR (CH2C12) -0max: 2105 (N3), 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); ~ *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,53 - 8,50 (1H, m, aro maattinen H), 7,71 - 7,62 (1H, m, aromaattinen H), 7,38, 15 7,34 (1H, d, aromaattinen H), 7,22 - 7,16 (1H, m, aromaat tinen H), 6,03 - 5,84 (1H, m, allyylin H), 5,46 - 5,20 (2H, m, allyylin H), 4,83 - 4,59 (2H, m, CH2), 4,306, 4,237, 4,096, 4,628 (2H, ABq, J = 13,7 Hz, CH2-pyridyyli), 4,23 - 4,1 (1H, m, H-l'), 4,076, 4,063, 4,016 (1H, dd, J = 20 2,6 Hz, J = 9,4 Hz, H-5), 3,75 - 3,6 (1H, m, H-4), 3,6 - 3,45 (1H, m, HCH-0), 3,45 - 3,25 (1H, m, HCH-0), 3,071 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 7,8 Hz, H-6), 2,13 - 1,95 (1H, m, HCH), 1,8 - 1,5 (1H, m, HCH), 1,302 (3H, d, J = 6,0 Hz, CH3), 0,892 (9H, s, tert-butyyli), 0,086 ja 0,081 ppm (6H, 25 2s, dimetyyli).
C.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-1' -hydroksietyyli] -3- [pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti K3 N3
30 ' J J
OS i + OH s' - 'W·-o 0 !o2^ 0 92 9 6 311
Kylmää (-20 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 53, 6S ) -4-( 2"-atsidoetyyli )-6-[(l'R)-l' -tert-butyyli-dimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-5 laatti (0,30 g, 0,55 mmol) juuri tislatussa THF:ssa (10 ml), käsiteltiin Ac0H:lla (0,2 ml, 3,3 mmol), ja lisättiin tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin THF-liuosta (1,7 ml, 1,7 mmol). Sen jälkeen seosta sekoitettiin 5 eC:ssa 90 tuntia, laimennettiin Et0Ac:lla (40 ml), 10 pestiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (1 x 30 ml), vedellä (2 x 30 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös, 0,3 g, vietiin silikageeli (10 g) -pylvään läpi (1:1 heksaani:EtOAc), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,21 g, 89 %).
15 IR (CH2C12) vmax: 3680 - 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,54 - 8,51 (1H, m, aromaattinen H), 7,7 - 7,6 (1H, m, aromaattinen H), 7,38, 7,34 (1H, m, aromaattinen H), 7,25 - 7,15 (1H, m, aromaat-20 tinen H), 6,1 - 5,8 (1H, m, allyylin H), 5,5 (2H, m, al-lyylin H), 4,8 - 4,55 (2H, m, CH2-allyyli), 4,294, 4,225, 4,072, 4,002 (2H, ABq, J = 14,0 Hz, CH2-pyridyyli), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l'), 4,166 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,8 - 3,65 (1H, m, H-4), 3,6 - 3,3 (2H, m, CH2-N3), ; 25 3,162 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,7 Hz, H-6), 2,2 - 2 (1H, ~ m, HCH), 1,95 (1H, leveä s, OH), 1,9 - 1,6 (1H, m, HCH), 1,382 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
D.Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-30 l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti N3 N3 OH l OH ! - co2 C02Na i| rh 1 liiti liiti < 96311 93
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-4-(2-atsidoetyyli )-6-[ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -3-[(pyridin-2-yyli)]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (74 mg, 0,17 mmol) CH2Cl2:ssa (3 ml), 5 käsiteltiin Pd( PPh3 )4:11a (35 mg), minkä jälkeen lisättiin N-metyylianiliinia (0,5 ml, 0,45 mmol). Saatua seosta sekoitettiin noin 22 °C:ssa 1 tunti, sen jälkeen laimennettiin 0,1 M pH-arvon 7,1 omaavalla fosfaattipuskurin vesi-liuoksella (0,35 ml) ja dietyylieetterillä (10 ml). Faasit 10 erotettiin, ja vesifaasi pestiin dietyylieetterillä (2 x 10 ml), pidettiin pumppauksella aikaansaadussa suurtyhjös-sä, ja vietiin C18-mikroBondapak-käänteisfaasipylvään läpi (35 g, 4 % -» 10 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (55 mg, 41 %) lyofilisoinnin jälkeen.
15 UV: (H20) λ„βχ: 266 (7800), 304 (10500);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,5 % (304 nm, 10 % CH3CN/KH2P04 0,01 M pH 7,4).
IR (Nujol) vnax: 2100 (N3), 1750 ja 1600 cm'1 (C=0); lH NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,5 - 8,4 (1H, m, aromaat-20 tinen H), 7,9 - 7,8 (1H, m, aromaattinen H), 7,54, 7,50 (1H, dd, aromaattinen H), 7,4 - 7,3 (1H, m, aromaattinen H), 4,27, 4,20, 4,11, 4,04 (2H, ABq, J = 14,2 Hz, CH2-pyri-diini), 4,25 - 4,15 (1H, m, H-l'), 4,067, 4,054 (osa dd:a, J = 2,6 Hz, osa H-5:a), 3,52 - 3,17 (4H, m, CH2N3, H-4 ja r 25 H-6), 3,389 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 2,1 - 1,9 (1H, m, HCH), 1,75 - 1,5 (1H, m, HCH) ja 1,297 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 7 (4R, 5S,6S) -4- (3"-aminopropyyli)-6- [(l'R)-l' -hydrok-30 sietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 0H (CH2)3NH2 cr co2h 35 96311 94 A. 5-atsido[(pyridin-2-yyli)metyylitio]valeraatti + N3<CH2)„C0C1 ► C^^v^S\^<CH2)4N3
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti 2-piko-lyylimerkaptaani (20,2 g, 162 mmol) CH2Cl2:ssa (200 ml), käsiteltiin pyridiinillä (16,3 ml, 203 mmol), minkä jäl-10 keen lisättiin tipoittain 5-atsidovaleryylikloridia (27,0 g, 167 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, laimennettiin dietyylieetterillä (1 1), pestiin kylmällä vedellä (500 ml), 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (2 x 500 ml), vedellä (500 ml), 1 M NaHC03:n vesiliuoksella 15 (500 ml), vedellä (500 ml), suolaliuoksella (500 ml), ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (40,8 g, 100 %).
*H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,54, 8,52 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,6 - 7,5 (1H, m, aromaattinen H), 7,35 -20 7,31 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,19 - 7,12 (1H, m, aromaattinen H), 4,25 (2H, s, CH2), 3,27 (2H, t, J = 6,6 Hz, CH2N3), 2,62 (2H, t, J = 6,9 Hz, CH2C0) ja 1,8 - 1,5 ppm (4H, m, CH2CH2).
B. 5-atsido[(pyridin-2-yyli)metyylitio]valeraatin 25 tert-butyylidimetyylisilyylienolieetteri w fl| „ N,<CH?). 0Si +
Y KjQ
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti 5-atsido[(pyridin-2-yyli)metyylitio]valeraatti (44,0 g, 162 mmol) CH2Cl2:ssa (400 ml), lisättiin peräkkäin trietyy-35 liamiinia (50 ml, 356 mmol) ja tipoittain tert-butyyli- I IM I iili I U M : : ! 95 5631 1 diraetyylisilyylitrifluoriraetaanisulfonaattia (76,6 ml, 333 mmol). Kylmä haude poistettiin, ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin petroli-eetterillä (1,5 1), pestiin kylmällä vedellä (2 x 500 ml), 5 IM NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 500 ml), vedellä (2 x 500 ml), suolaliuoksella (500 ml) ja kuivattiin (MgS04). Sen jälkeen orgaanista faasia käsiteltiin neutraalilla* aktivoidulla puuhiilellä, jolloin saatiin suodattamisen ja liuottimen haihduttamisen jälkeen otsikon yhdiste (48,9 g, 10 83 %).
*H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,56 - 8,53 ( 1H, m, aromaattinen H), 7,67 - 7,57 (1H, m, aromaattinen H), 7,28 -7,23 (1H, m, aromaattinen H), 7,18 - 7,11 (1H, m, aromaattinen H), 4,96 (0,5 H, t, J = 7,6 Hz, vinyylin H), 4,80 15 (0,5 H, t, J = 7,3 Hz, vinyylin H), 4,030 ja 3,955 (2H, 2s, CH2-pyridyyli), 3,097 ja 3,040 (2H, 2t, J = 7,0 Hz, J = 7,3 Hz, CH2), 2,06 (2H, 4 viivan keskus, J = 7,1 Hz, CH2-vinyyli), 1,57 - 1,38 (2H, m, CH2), 0,989, 0,970 (9H, 2s, tert-butyyli) ja 0,243, 0,205 ppm (6H, 2s, dimetyyli). 20 C. (3S,4S)-3-[(1’R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy- lioksietyyli] -4- [ (1"R) -1"- (pyridin-2-yyli Jmetyylitiokar-bonyyli-4"-atsidobutyyli]atsetidin-2-oni
OSit I
_ ]' J»c h3<ch2>, osi+ ”1+ <c,h*’3n3
Ti * KjO - 'SAoO
0 ^ jy h o
Kylmään (jäähaude) juuri fuusioituun ZnCl2:iin 30 (18,0 g, 133 mmol) lisättiin peräkkäin (3S,4R)-4-asetoksi- 3- [ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] atse-tidin-2-onia (19,0 g, 67,0 mmol) CH2Cl2:ssa (200 ml) ja tipoittain liuos, jonka muodosti vaiheessa B valmistetun 5-atsido[(pyridin-2-yyli)metyylitio]valeraatintert-butyy-35 lidimetyylisilyylienolieetterin (48,5 g, 133 mmol) liuos 96311 96 CH2Cl2:ssa (100 ml). Seosta sekoitettiin 1 tunti ja se jätettiin yön yli (18 h) 5 °C:seen (kylmä huone). Reaktio-seos laimennettiin petrolieetterillä (1,2 1) ja jääkylmällä vedellä (500 ml). Orgaaninen faasi pestiin kylmällä 5 vedellä (2 x 500 ml), IM NH4Cl:n vesiliuoksella (1 x 500 ml), vedellä (500 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 500 ml), vedellä (2 x 500 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageelikerroksen läpi (400 g, heksaani, CH2C12, EtOAc), jolloin saatiin ot-10 sikon yhdiste (14,2 g, 44 %) öljynä.
IR (CH2C12) Vmax: 3400 (NH), 2100 (N3), 1770 ja 1680 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,55 - 8,51 (1H, m, aromaattinen H), 7,68 - 7,59 (1H, m, aromaattinen H), 7,35 -15 7,30 (1H, m, aromaattinen H), 7,21 - 7,14 (1H, m, aromaattinen H), 5,89 (1H, leveä s, NH), 4,27 (2H, s, CH2-pyri- dyyli), 4,20 - 4,10 (1H, m, H-l’), 3,81 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 7,0 Hz, H-4), 3,279 (2H, leveä t, J = 6,3 Hz, CH2N3), 3,048 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 3,2 Hz, H-3), 2,9 -20 1,7 (1H, m, H-l"), 1,9 - 1,7 (1H, m, HCH), 1,7 - 1,5 (3H, m, HCH ja CH2), 0,987 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,851 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,042 ppm (6H, s, dimetyyli).
D. (3S,4S)-3-[(l’R)-l’-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-4-[(l"R)-1"-karboksi-4"-atsidobutyyli]atse-25 tidin-2-oni ^
| I
OSi+ (CU ) M 0Si+ (CHO3N3
Jr I ^ H 2 3N 3 f 1 f 2
γΑ-θΟ —► A'[rvco2H
30 y nh
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4S)- 3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-35 [(l"R)-l"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-4"-atsido- il iti , nti 1 < 4 at · 1 97 9631Ί butyyli]atsetidin-2-oni (14,0 g, 28,4 mmol) THFrssa (140 ml), käsiteltiin ensin 30-prosenttisella H202:lla (9,8 ml, 714 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 1 M NaOH:n vesiliuosta (85,2 ml, 85,2 mmol). Jäähaude poistet-5 tiin, ja seosta sekoitettiin 0,5 tuntia, minkä jälkeen se tehtiin happamaksi 1 N HCl:n vesiliuoksella (170 ml, 170 mmol) ja uutettiin EtOAcrlla (3 x 125 ml). Etyyliase-taattiuutteet yhdistettiin, pestiin vedellä (1 x 125 ml), 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (1 x 125 ml), vedellä (2 x 10 125 ml), suolaliuoksella (1 x 125 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin ja kiinteää ainetta tritu-roitiin (heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (8,3 g, 76 %) valkoisena kiinteänä aineena; s.p. 147 -148 °C (dietyylieetteri).
15 IR (CH2C12) Vmx: 3410 (NH), 2100 (N3), 1765, 1740 ja 1710 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,43 (1H, leveä s, NH), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l'), 3,89 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 6,1 Hz, H-4), 3,337 (2H, leveä t, J = 6,1 Hz, CH2N3), 3,148 20 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 3,7 Hz, H-3), 2,75 - 2,6 (1H, m, H-l"), 1,9 - 1,5 (4H, m, CH2CH2), 1,176 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,868 (9H, s, tert-butyyli), 0,071 ja 0,060 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
E. (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy--1- 25 lioksietyyli] -4-[(l"R)-l"- (3-atsidopropyyli) -3"-diatSO
S'' -allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli] atsetidin-2-oni OS i + (CHpKN-, OS i -h <CH2)3N3
- JU,,. JUU
„A - — A
Suspensiota, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-35 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4-[ (l"R)-l"-kar- 96311 98 boksi-4"-atsidobutyyli]atsetidin-2-oni (5,0 g, 13 mmol) CH3CN:ssa (50 ml), käsiteltiin karbonyylidi-imidatsolilla (2,5 g, 15,6 mmol) ja sekoitettiin 30 minuuttia. Saatuun kirkkaaseen liuokseen (asyyli-imidatsoli) lisättiin magne-5 siummonoallyylimalonaattia (5,0 g, 16 mmol). Seosta kuumennettiin 70 °C:ssa (haudelämpötila) 18 tuntia. Lisättiin vielä malonaattia (1,25 g, 4 mmol), ja seosta kuumennettiin vielä 5 tuntia. Sen jälkeen lisättiin jälleen magne-siununonoallyylimalonaattia (1,25 g, 4 mmol), ja kuumenta-10 mistä jatkettiin 18 tuntia. Liuotin haihdutettiin osittain. Jäännös otettiin talteen etyyliasetaattiin (100 ml), pestiin vedellä (100 ml), IN HCl:n vesiliuoksella (100 ml), vedellä (2 x 100 ml), 10-prosenttisella K2C03:n vesiliuoksella (100 ml), vedellä (100 ml), suolaliuoksella 15 (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, min kä jälkeen jäännös otettiin talteen CH3CN:iin (50 ml), jäähdytettiin 5 °C:seen (jäähaude) käyttäen typpeä suoja-kaasuna, lisättiin peräkkäin trietyyliamiinia (1,82 ml, 13,0 mmol) ja tipoittain p-tolueenisulfonyyliatsidia 20 (2,56 ml, 13,0 mmol) CH3CN:ssa (5 ml), ja sekoitettiin 3 tuntia huoneenlämpötilassa (22 °C). Liuotin haihdutettiin ja saatu jäännös vietiin silikageelikerroksen läpi (100 g, heksaani -> 40 % eette-ri/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,6 g, 25 %) keltaisena öljynä.
25 IR (CH2C12) 3400 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), ^ 1765, 1715 ja 1650 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,1 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,85 (1H, leveä s, NH), 5,41 - 5,29 (2H, m, vinyylin H), 4,74 - 4,70 (2H, m, allyylin CH2), 4,3 - 4,0 (2H, 30 m, H-l' ja H-l" ), 3,85 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 5,3 Hz, H- 4), 3,267 (2H, m, CH2N3), 3,044 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = ' 3,6 Hz, H-3), 2,0 - 1,8 (1H, m, HCH), 1,7 - 1,4 (3H, m, CH2HCH), 1,172 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,863 (9H, s, tert-butyyli), 0,063 ja 0,052 (6H, 2s, dimetyyli).
,| 1 |«i MO I M M
96311 99 F. Allyyli-(4R,5R,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli]-4-(3"-atsidopropyyli)-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti 5 OS i -f* <CH2)3N3 °Si+ <CH2>3N3 10
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)-4-[(1"R)-1"-(3-atsido-propyyli ) -3" -diatso-3" -allyylioksikarbonyyli-2 " -oksopro-pyyli]atsetidin-2-oni (1,45 g, 303 mmol) bentseenissä 15 (50 ml) ja joka oli etukäteen puhdistettu argonilla (10 minuuttia), kuumennettiin palautus jäähdyttäen 40 minuuttia käyttäen Rh(0Ac)2:a (40 mg) katalyyttinä. Sen jälkeen liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,45 g, 100 %) öljynä.
20 IR (CH2C12) vmax: 2100 (N3), 1770 ja 1745 cm*1 (C=0); lH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,0 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,4 - 5,25 (2H, m, vinyylin H), 4,67 (1H, s, H-2), 4,64 (2H, m, CH2), 4,4 - 4,2 (1H, m, H-l'), 4,255 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 8,3 Hz, H-5), 3,5 - 3,2 (2H, m, CH2N3), 25 3,24 (1H, dd, J = 2,4Hz, J = 6,2 Hz, H-6), 2,8 - 2,6 (1H, m, H-4), 1,85 - 1,55 (4H, m, CH2CH2C0), 1,304 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 0,886 (9H, s, tert-butyyli), 0,102 ja 0,090 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
G. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- 30 [ (1 ’R)-1’-(tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)]-3- [(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti 05i+ <CHj)3N3 <CHS)3H3 C02\/tsN C02\/^> 100 - 96311
Kylmää (jää-MeOH-haude) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R, 5R, 6S)-4-( 3"-atsidopropyyli )-6-[ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (1,45 g, 3,03 mmol) 5 CH3CN:ssa (25 ml), käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (0,67 ml, 3,3 mmol) ja lisättiin tipoittain N,N-di-isopro-pyylietyyliamiinia (0,55 ml, 3,3 mmol), ja sekoitettiin 45 minuuttia. Sen jälkeen saatua enolifosfaattia käsiteltiin 2-pikolyylimerkaptaanilla (2,90 g, 23,2 mmol) ja li-10 sättiin tipoittain N, N-di-isopropyylietyyliamiinia (3,86 ml, 23,2 mmol). Jää-MeOH-haude korvattiin jäähau-teella ja seosta sekoitettiin 2 tuntia, minkä jälkeen se laimennettiin EtOAcrlla (100 ml), pestiin kylmällä vedellä (50 ml), kylmällä 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (3 x 50 ml), 15 vedellä (2 x 50 ml), kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 50 ml), vedellä (1 x 50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageelipylvään läpi (30 g, heksaani -> 40 % EtOAc/heksaani), jolloin saatiin otsikon tuote, jossa oli epäpuhtautena lähtöaineena 20 käytettyä tiolia. Tämä aine laimennettiin dietyylieette-rillä (50 ml) ja pestiin jälleen kylmällä vedellä (20 ml), 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (3 x 20 ml), H20:lla (2 x 20 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 20 ml), vedellä (20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04), . 25 jolloin saatiin puhdas otsikon yhdiste (1,45 g, 86 %). ^ IR (CH2C12) 2105 (N3), 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,5 - 8,4 (1H, m, aromaattinen H), 7,8 - 7,6 (1H, m, aromaattinen H), 7,4 - 7,39 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,3 - 7,18 (1H, m, 30 aromaattinen H), 6,05 - 5,80 (1H, m, vinyylin H, H-l'), 4,01 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,6 - 3,4 (1H, m), 5,5 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, CH2), 4,287, 4,217, 4,083, 4,013 (2H, ABq, J = 14,0 Hz, CH2-pyri-dyyli), 4,21 - 4,08 (1H, m, H-4), 3,4 - 3,2 (2H, m, CH2N3), 35 3,145 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 7,5 Hz, H-6), 2,0 - 1,4
Il IMI 11« I HS ! 96311 101 (4H, m, CH2CH2), 1,288 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,874 (9H, s, tert-butyyli), 0,073 ja 0,059 (6H, 2s, dimetyyli).
H. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-5 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti JSi+ <CH,),»3 .0H tCHa>,Ha . VM5 -
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-(3"-atsidopropyyli )-6-[(l'R)-l’ -tert-15 butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)me-tyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (1,5 g, 2,6 mmol) THF:ssa (30 ml), lisättiin ti-poittain CH3C02H:a (0,9 ml, 15,6 mmol) ja 1 M tetrabutyy-liammoniumfluoridin liuosta THF:ssa (7,8 ml, 7,8 mmol). 20 Seosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 1 tunti, annettiin seistä 56 tuntia 5 °C:ssa ja sen jälkeen sekoitettiin huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Seos jäähdytettiin 0 °C:seen, neutraloitiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (16 ml), ja vesi-faasia uutettiin EtOAc:n ja dietyylieetterin seoksella ^. 25 (1:1) (2 x 100 ml). Orgaaniset uutteet yhdistettiin, pes tiin kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella, vedellä (2 x 50 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageelipylvään läpi (30 g, heksaani/CH2Cl2 CH2-Cl2/EtOAc -* EtOAc), jolloin saatiin otsikon yhdistettä 30 (679 mg, 64 %) ja lähtöainetta (160 mg, 11 %).
IR (CH2C12) vnax: 3600, 3500 (OH), 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm*1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,51 - 8,49 (1H, m, aromaattinen H), 7,7 - 7,6 (1H, m, aromaattinen H), 7,41, 35 7,37 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,23 - 7,16 (1H, m, 96311 102 aromaattinen H), 6,05 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,5 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,86 - 4,6 (2H, m, vinyylin CH2), 4,256, 4,185, 4,056, 3,985 (2H, ABq, J = 14,2 Hz, CH2-pyri-dyyli), 4,25 - 4,15 (1H, m, H-l'), 1,121 (1H, dd, J = 5 2,7 Hz, J 9,5 Hz, H-5), 3,6 - 3,45 (1H, peittynyt, H- 4), 3,45 - 3,24 (2H, m, CH2N3), 3,214 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,5 Hz, H-6), 1,87 (1H, leveä d, J = 6,5 Hz, OH), 2,0 - 1,5 (4H, m, CH2CH2) ja 1,37 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
10 I.(4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1 * R)-1'-hyd- roksietyyli]-3-tpyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo °H (CHg)gN3 °H (CH2)3NH2 " xf6—0 —
C02N^s> C02H
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-20 (4R, 5S, 6S )-4-( 3"-atsidopropyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyy- li] -3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (133 mg, 0,3 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), käsiteltiin (Ph3P )4Pd: 11a (63 mg) ja N-metyylianiliinilla (0,1 ml, 0,6 mmol). Jäähaude poistet-. 25 tiin, ja seosta sekoitettiin 1 tunti, minkä jälkeen se — jäähdytettiin jälleen (jäähaude). Reaktioseos laimennettiin dietyylieetterillä (40 ml) ja uutettiin 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla (2 x 6 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetteril-30 lä (2 x 20 ml) ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 5,8 - 5,9 : 0,05 M pH-arvon 4,2 omaavalla fosfaattipuskurilla. Vesipi toista kerrosta hydrogenolysoitiin 345 kPa:n (50 psi:n) paineessa 1 tunti 5 °C:ssa -» 15 °C:ssa käyttäen 10-pro-senttista Pd/C:a (225 mg) katalyyttinä. Hydrogenolyysin 35 lopussa katalyytti poistettiin, vietiin C18-p-Bondapak- '1 IM I l.lll M l ii . .
96311 103 pylvään läpi (35 g, H20 -* 4 % CH3CN/H20) ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste, joka puhdistettiin uudelleen Cie-p-Bondapak-pylväällä (15 g) ja lyofilisoitiin (17 mg, 11 %).
5 Puhtaus: 97,5 % määritettynä HPLC:llä (10 % CH3CN/ KH2P04 0,01 M, pH 7,4, viipymäaika 5,66 min, μ-Bondapak-^18 10 μ ) r UV (H20) λΒβχ: 304 (9383), 266 (6895); IR (Nujol) \>ΜΧ: 1755 ja 1590 cm'1 (C=0); 10 XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,48 - 8,45 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,9 - 7,8 (1H, m, aromaattinen H), 7,54, 7,49 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,4 - 7,3 (1H, m, aromaattinen H), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l’), 4,225, 4,157, 4,106, 4,043 (2H, ABq, J = 13,2 Hz, CH2-pyridiini), 4,056, 15 4,043 (osa dd:a, J = 2,6 Hz, H-5), 3,31 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,197 (1H, leveä t, J = 9,4 Hz, H-4), 3,0 - 2,85 (2H, m, CH2N3), 1,9 - 1,55 (3H, m, HCH ja CH2), 1,55 - 1,2 (1H, m, HCH) ja 1,295 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
20 Esimerkki 8 (4R, 5S, 6S) -4- [3"- (N-formimidoyyli)aminopropyyli] - 6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)me-tyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
W 25 OH <ch,),nh8 SH <CH8>3NHCHNH
C02H c °2 H
30 . Hydrogenolysoidun raakatuotteen, (4R,5S,6S)-4-(3"- aminopropyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon, joka saatiin poistamalla suojaus al-35 lyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli) — 6 —[(1’R)-l-hydrok- - 96311 104 sietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatista (150 mg, 0,338 mmol), kuten esimerkin 7 vaiheessa I on kuvattu, pH säädettiin arvoon 8,5 IM NaOHrn vesiliuoksella 5 °C:ssa 5 (jäähaude). Vesipitoiseen seokseen lisättiin annoksittain bentsyyliformimidaattivetykloridia (583 mg, 3,41 mmol) niin, että pH pidettiin välillä 8,3 - 8,4 1 M NaOH:n vesi-liuoksella. Lisäyksen lopussa seosta sekoitettiin 6 minuuttia, ja sen jälkeen vietiin p-Bondapak-C18-käänteis£aa- 10 sipylvääseen (40 g, H20 -* 1, 2, 3, 4 ja 6 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon tuote, joka puhdistettiin uudelleen p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylväällä (H20 -» 2, 3, 4 ja 6 I ^ CH3CN/H20). Puhdas otsikon yhdiste (19 mg, 11 %) saatiin valkoisena höytäleisenä kiinteänä aineena.
15 Puhtaus: 98,9 % määritettynä HPLCtllä (10 % CH3CN/ K2P04, 0,01 M, pH 7,4, viipymäaika 6,77 min, μ-Bondapak- C18 10 μ); UV (H20) 'Amax: 304 (7791), 266 (5941); IR (Nujol) Vmax: 1755, 1690 (C=0) ja 1715 cm'1 20 (C=NH); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,45 - 8,42 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,87 - 7,75 (1H, m, aromaattinen H), 7,77 (1H, leveä s, C=NH), 7,51, 7,47 (1H, leveä d, aromaattinen H), 7,37, 7,3 (1H, m, aromaattinen H), 4,3 - 4,1 (1H, m, . 25 H-l'), 4,198, 4,134, 4,072, 4,001 (2H, ABq, J = 13,5 Hz, — CH2-pyridiini), 4,045 - 4,07 (1H, peittynyt H-5), 3,4 - 3,05 (4H, m, CH2N, H-4, H-6), 1,8 - 1,4 (3H, m, HCH ja CH2), 1,4 - 1,15 (1H, m, HCH) ja 1,259 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
j| Sttil 14 U l i 4 *4 ' * 96311 105
Esimerkki 9
Natrium-(4R, 5S,6S)-6-[(11R)-1' -hydroksietyyli]-4_ (3"-hydroksipropyyli ) -3- [ (pyridin-2-yyli)metyyli- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-5 boksylaatti
(CH2)30H
Λα-jo 10 ✓ ,—N //
CT
C02Na A. Natrium-5-hydroksivaleraatti 15 ^ H0Ny«VAv/0Na "^0 0 20 Kylmään (jäähaude) suspensioon, jonka muodosti va- lerolaktoni (20 g, 0,20 mol) vedessä (100 ml), lisättiin tipoittain NaOHrn (8,0 g, 0,20 mol) liuosta vedessä (100 ml). Seosta sekoitettiin 15 minuuttia, minkä jälkeen kylmä haude poistettiin, ja sekoitusta jatkettiin vielä w 25 15 minuuttia. Sen jälkeen seos suodatettiin kiinteän ai neen poistamiseksi, ja suodos lyofilisoitiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (26,2 g, 94 %) valkoisena kiinteänä aineena.
IR (Nujol) 3600 - 3100 (OH) ja 1560 cm*1 (C = 0); 30 *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 3,61 (2H, t, J = 6,1 Hz, CH2OH), 2,20 (2H, t, J = 7,0 Hz, CH2C02) ja 1,58, 1,57, 1,55 ppm (4H, m, CH2CH2).
96311 106 B.t-butyylidimetyylisilyyli-5-(t-butyylidimetyyli-silyylioksi ) valeraatti
I I
-* +S10 0Si + 5 π 1 1 0 0
Kylmään (jäähaude) suspensioon, jonka muodosti nat-rium-5-hydroksivaleraatti (25,0 g, 179 mmol) DMFrssa 10 (250 ml), lisättiin annoksittain t-butyylidimetyylisilyy- likloridia (80,8 g, 536 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain trietyyliamiinia (32 ml, 232 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seosta sekoitettiin 2,5 vuorokautta noin 22 °C:ssa. Reaktioseos laimennettiin jääkylmällä vedellä 15 (700 ml) ja uutettiin dietyylieetterillä (2 x 800 ml).
Orgaaniset uutteet yhdistettiin, pestiin kylmällä vedellä (5 x 500 ml), suolaliuoksella (500 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (70 g, >100 %) öljynä.
20 IR (puhdas) vmax: 1720 cm'1 (C=0); lH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 3,61 (2H, t, J = 6,0 Hz, CH20), 2,33 (2H, t, J = 7,0 Hz, CH2C02), 2,8 - 2,5 (4H, m, (CH2)2), 0,92, 0,88 ( 18H, 2s, t-butyyli), 0,25, 0,09 ja 0,04 ppm (12H, 3s, CH3).
25 C.5-(t-butyylidimetyylisilyylioksi)valeriaanahappo w
1 I. I
o 0 30
Liuosta, jonka muodosti t-butyylidimetyylisilyy-li-5-(t-butyylidimetyylisilyylioksi)valeraatti (70 g, 178,6 mmol:sta natriumhydroksivaleraattia) Me0H:ssa (550 ml), käsiteltiin 5 N AcOH:n vesiliuoksella (50 ml, 35 250 mmol) ja sen jälkeen sekoitettiin 1,5 - 2,0 tuntia.
:l : «Ui «111 I 1 I UI
96311 107
Liuotin poistettiin ja jäännös otettiin talteen CH2Cl2:iin (1 1) ja pestiin jääkylmällä vedellä (4 x 500 ml), suolaliuoksella (500 ml) ja kuivattiin (MgS0<). Liuottimen haihdutuksen jälkeen saatu jäännös (58 g) otettiin talteen di-5 etyylieetteriin (600 ml) ja uutettiin 1 M NaHC03:n vesi-liuoksella (3 x 200 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (3 x 200 ml), tehtiin happamaksi 5 M AcOH:n vesiliuoksella pH-arvoon 5,0, ja sen jälkeen uutettiin dietyylieetterillä (4 x 200 ml). Orgaa-10 niset uutteet yhdistettiin, pestiin kylmällä vedellä (4 x 200 ml), suolaliuoksella (200 ml) ja kuivattiin (MgS04), jolloin saatiin otsikon yhdiste (25 g, 60 %) öljynä.
IR (CH2C12) \>b„: 3660 - 2500 (OH), 1750 - 1710 cm'1 (C=0); 15 *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 3,63 (2H, t, J = 6,0 Hz, CH20), 2,39 (2H, t, J = 7,2 Hz, CH2C02), 1,78 - 1,49 (4H, m, (CH2)2), 0,89 (9H, s, t-butyyli) ja 0847 ppm (6H, s, CH3).
D. 5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-1-[(pyri-20 din-2-yyli)metyylitio]valeraatti 1 1 fi^ +SiCL . A OH _* +S i Cl S\ λ .·>
1 1 N
Y 25 ° °
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti 5-(t-butyylidimetyylisilyylioksi)valeriaanahappo (25,0 g, 108 mmol) CH2Cl2:ssa (350 ml), lisättiin 2-pikolyylimerkap-taania (13,5 g, 108 mmol), 1,3-disykloheksyylikarbodi-imi-30 diä (22,2 g, 108 mmol) ja 1-hydroksibentsotriatsolihyd- raattia (14,6 g, 108 mmol). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 20 tuntia, sitten laimennettiin etyyliasetaatilla (1 1), pestiin jääkylmällä vedellä (1 1), jääkylmällä 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (1 1), jääkylmällä vedellä 35 (1 1), 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (1 1), jääkylmällä ve- 96311 108 dellä (2 x 1 1), suolaliuoksella (1 1) ja kuivattiin (MgSO<). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös puhdistettiin silikageeli-flash-pylväällä (250 g, heksaani, 5 %, 10 %, 15 % EtOAc/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdis-5 te (30,2 g, 83 %) öljynä.
IR (CH2C12) VBax: 1690 cm*1 (C=0); :H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,55 - 8,52 (1H, m, py-ridiini-H), 7,68 - 7,59 (1H, m, pyridiini-H), 7,37 - 7,33 (1H, leveä d, J = 7,7 Hz, pyridiini-H), 7,20 - 7,14 (1H, 10 m, pyridiini-H), 4,26 (2H, s, CH2S), 3,60 (2H, t, J = 6,1 Hz, CH20), 2,61 (2H, t, J = 7,1 Hz, CH2C02), 1,85 - 1,6 (2H, m, CH2), 1,6 - 1,4 (2H, m, CH2), 0,88 (9H, s, t-butyy- ^ li) ja 0,03 (6H, s, CH3).
E. 5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-1-[(pyri-15 din-2-yyli)metyylitio]valeraatin t-butyylidimetyylisilyy- lienolieetteri rT^i 1 1 ^ °^i+ •i JL S ^ OSi+ -► +SiO^\X\ / 1
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti 5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-1-[(pyridin-2-yyli)-25 metyylitio]valeraatti (30,2 g, 89,0 mmol) CH2Cl2:ssa — (300 ml), lisättiin trietyyliamiinia (27 ml, 196 mmol) ja sen jälkeen lisättiin tipoittain tert-butyylidimetyylisi-lyylitrifluorimetaanisulfaattia (41 ml, 178 mmol). Kylmä haude poistettiin, ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Seos 30 laimennettiin kylmällä petrolieetterillä (2,7 1), pestiin jääkylmällä vedellä (2 x 500 ml), jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (1 x 500 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 500 ml), suolaliuoksella (500 ml) ja kuivattiin. Orgaaninen liuos käsiteltiin neutraalilla aktivoidulla puuhiilel-35 lä ja suodatettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (33 g, 96311 109 83 %) punaisena öljynä geometristen isomeerien suhteessa 45:55.
XH NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,54 - 8,51 (1H, m, py-ridiini-H), 7,65 - 7,56 (1H, m, pyridiini-H), 7,31 - 7,23 5 (1H, m, pyridiini-H), 7,16 - 7,09 (1H, m, pyridiinin H), 5,02 (0,55 H, t, J = 7,6 Hz, vinyylin H), 4,87 (0,45 H, t, J = 7,2 Hz, vinyylin H), 4,03 (1,1 H, s, CH2S), 3,96 (0,9' H, s, CH2S), 3,55, 3,52, 3,49, 3,46 (2H, 4 viivaa, J = 6,4 Hz, CH20), 2,1 - 1,96 (2H, m, CH2-vinyyli), 1,52 - 1,29 10 (2H, m, CH2), 0,985, 0,977 (9H, 2s, t-butyyli), 0,879, 0,873 (9H, 2s, t-butyyli), 0,236 g, 0,194 g, 0,02 g ja 0,013 ppm (12H, 4s, CH3 ).
F. (3S,4S)-3-[(l’R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R)-1"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokar-15 bonyyli-4"-tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli]atse-tidin-2-oni
°»S|+ S /‘nAP
20 A/nt , Mi + +SiO<CHe,3 - 25 i
; I I
OS i + <CH,)30Si+ 0 ox 30
Kylmään (jäähaude) juuri sulatettuun ZnCl2:iin (10,0 g, 73,5 mmol) lisättiin käyttäen typpeä suojakaasuna (3S, 4R)-4-asetoksi-3- [ (1'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]atsetidin-2-onia (10,5 g, 36,7 mmol) CH2-35 Cl2:ssa (100 ml), minkä jälkeen lisättiin hitaasti enolisi- 96311 110 lyylieetteriä (33,2 g, 73,3 mmol), joka oli valmistettu vaiheessa E, CH2Cl2:ssa (50 ml). Seosta sekoitettiin 18,5 tuntia 5 eC:ssa, minkä jälkeen se laimennettiin petroli-eetterillä (11) ja kaadettiin jään ja veden seokseen 5 (500 ml). Orgaaninen faasi pestiin kylmällä vedellä (2 x 500 ml), IM NH4Cl:n vesiliuoksella (500 ml), vedellä (500 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (500 ml), vedellä (2 x 500 ml), suolaliuoksella (500 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageelikerroksen läpi (100 g, 10 CH2C12, 3 %, 5 %, 8 %, 10 %, 20 % EtOAc/CH2Cl2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (9,2 g, 44 %) kiinteänä aineena; s.p. = 110 - 111 °C (dietyylieetteri-petrolieetteri, 1/4). .
IR (CH2C12) vmax: 3400 (NH), 1770 ja 1680 cm'1 (C=0); :H NMR (CDClj, 200 MHz) δ: 8,54 - 8,50 (1H, m, py-15 ridiini-H), 7,66 - 7,58 (1H, m, pyridiini-H), 7,34, 7,30 (1H, leveä d, J =7,5 Hz, pyridiini-H), 7,2 - 7,13 (1H, m, pyridiini-H), 5,85 (1H, leveä s, NH), 4,25 (2H, s, CH2S), 4,20 - 4,09 (1H, m, H-l'), 3,82 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 7,1 Hz, H-4), 3,61 - 3,55 (2H, m, CH20), 3,05 - 3,02 (1H, 20 m, H-3), 2,84 - 2,75 ( 1H, m, H-l"), 1,9 - 1,4 (4H, m, (CH2)2), 0,98 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,87, 0,85 (18H, 2s, t-butyyli), 0,04 ja 0,023 ppm (12H, 2s, CH3).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C28H50N204SSi: C 59,32; H 8,89; N 4,94.
25 Todettu: C 59,35; H 9,03; N 4,95. w G. (3S,4S)-3-[(1’R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4-[ (1"R) -l"-karboksi-4"-tert-butyylidimetyy-lisilyylioksibutyyli]atsetidin-2-oni
1 , 1 I
30 OS i + <CH2)30Si+^^ 0Si+ <CH2)30Si + J~NH 0 * 0
0 0' H
96311 111
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4S)- 3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[ (l"R)-l"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-4"-tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli]atsetidin-2-oni 5 (7,30 g, 12,9 mmol) THFrssa (70 ml), käsiteltiin 30-pro- senttisella (tilavuus/tilavuus) H202:lla (4,45 ml, 51,0 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 1 M NaOH:n vesiliuosta (38,7 ml, 38,7 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia, minkä jälkeen se jäähdy-10 tettiin jälleen .(jäähaude). Sen jälkeen lisättiin 1 N HCl:n vesiliuosta (77 ml), ja seosta uutettiin EtOAcrlla (3 x 50 ml). Orgaaniset uutteet pestiin kylmällä vedellä (2 x 50 ml), 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (2 x 50 ml), jääkylmällä vedellä (3 x 50 ml), suolaliuoksella ja kuivat-15 tiin (MgS04), jolloin saatiin otsikon yhdiste (5,5 g, 92 %) valkoisena kiinteänä aineena; s.p. = 127 - 128 °C (petro-lieetteri/dietyylieetteri, 1/2).
IR (CH2C12) v'„,ax: 3410 (NH), 1755, 1740 ja 1710 cm'1 (C=0); 20 *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,28 (1H, leveä s, NH),.
4,23 - 4,18 (1H, m, H-l’), 3,89 (1H, dd, J = 2,0 Hz, J = 6,3 Hz, H-4), 3,7 - 3,55 (2H, m, CH20), 3,15 - 3,05 (1H, m, H-3), 2,8 - 2,6 (1H, m, H-l"), 1,8 - 1,5 (4H, m, (CH2)2), 1,17 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,89, 0,86 (18H, w 25 2s, t-butyyli), 0,064, 0,057 ja 0,051 (12H, 3s, CH3).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C2BH45N05Si2: C 57,47; H 9,86; N 3,05.
Todettu: C 57,41; H 10,04; N 3,07.
H. (3S,4R)-3-[(l'R)-l’-tert-butyylidimetyylisilyy-30 lioksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(3"-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksipropyyli) -3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli] -atsetidin-2-oni
I 1 1 I
OSi-r (CHo) 30S i-r 0Si+ (CH?).GSi + - 11 1 1 11 I 1 ^—Λc 0 £ H ^c 0 2 y** κ ° 112 5 6 ό 11
Liuosta, jonka muodosti magnesium-bis-allyylimalo-naatti (5,7 g, 18,1 mmol) bentseenissä (80 ml), kuumennettiin palautusjäähdyttäen käyttäen Dean-Stark-jäähdytintä. Ensimmäiset 20 ml bentseeniä poistettiin, ja Dean-Stark 5 korvattiin tiputussuppilolla, joka oli täytetty 3A-mole-kyyliseulalla. Refluksointiaikaa jatkettiin vielä 3 tuntia, ja tämän liuoksen annettiin jäähtyä.
Erillisessä astiassa käsiteltiin liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-10 lioksietyyli] -4- [ (. 1 "R )-l "-karboksi-4" -tert-butyylidimetyy-lisilyylioksibutyyli]atsetidin-2-oni (5,50 g, 12,1 mmol) tolueenissa (100 ml), karbonyylidi-imidatsolilla (2,15 g, 13,3 mmol). Seosta sekoitettiin 2 tuntia ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, jota pidettiin pumppauk-15 sella aikaansaadussa suurtyhjössä 2 tuntia. Sen jälkeen asyyli-imidatsoli laimennettiin bentseenillä (20 ml) ja lisättiin magnesium-bis-allyylimalonaatin bentseeniliuok-seen. Seosta kuumennettiin 67 - 70 °C:ssa 18 tuntia, jäähdytettiin, laimennettiin kylmällä EtOAc:lla, pestiin jää-20 kylmällä vedellä (2 x 100 ml), HClrlla (100 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 100 ml), 10-prosenttisella Na2C03:n vesiliuoksella (1 x 100 ml), jääkylmällä vedellä (1 x 100 ml), suolaliuoksella (100 ml), kuivattiin (MgS04) ja käsiteltiin aktivoidulla puuhiilellä. Liuotin haihdutet-25 tiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (6,2 g, 95 %) öl-jynä.
IR (CH2C12) 3410 (NH), 1765 ja 1715 cm*1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 12,03, 12,02 (0,5 H, 2s, enolyylin H), 6,0 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,87 (1H, le-30 veä s, NH), 5,38 - 5,24 (2H, m, vinyylin H), 5,07 (0,52 H, s, enolimuodon vinyyli-H), 4,65 - 4,61 (2H, m, CH2-vinyy-li), 4,19 - 4,1 (1H, m, H-l'), 3,89 (0,5H, dd, J = 2,0 Hz, J = 6,2 Hz, H-4), 3,82 (0,5H, dd, J = 2,0 Hz, J = 7,4 Hz, H-4), 3,64 - 3,4 (2,5 H, m, CH20 ja H-l"), 2,97 - 2,91 (1H, 35 m, H-3), 2,3 - 2,1 (0,5H, m, H-l"), 1,8 - 1,4 (4H, m, - 96311 113 (CH2)2), 1,17 (1,5H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 1,11 (1,5 H, d, J = 6,4 Hz, CH3), 0,88, 0,86 ( 18H, 2s, tert-butyyli), 0,06 ja 0,054 ppm (12H, 2s, CH3).
I. (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-5 lioksietyyli] -4- [ (1"R) -1"-(3-tert-butyylidimetyylisilyyli- oksipropyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-okso-propyyli]atsetidin-2-oni
I I I I
OS i+ (CH2)30Si+ OS i + <CH2)30Si+ ° " /^-ΝΗ °
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-15 3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4- [ ( 1"R)-1"-(3-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyyli)-3"-allyylioksikarbonyyli-2" -oksopropyyli] at set idin-2-oni (6,20 g, 11,5 mmol) vedettömässä CH3CN:ssa (50 ml), käsiteltiin trietyyliamiinilla (1,16 ml, 11,5 mmol), minkä 20 jälkeen lisättiin tipoittain p-tolueenisulfonyyliatsidia (2,27 g, 11,5 mmol) CH3CN:ssa (10 ml). Seosta sekoitettiin 3 tuntia noin 22 °C:ssa ja liuotin poistettiin tyhjössä. Öljymäistä jäännöstä trituroitiin heksaanin kanssa, ja kiinteä aine poistettiin suodattamalla. Heksaanin haihdu-^ 25 tuksella saatu jäännös vietiin silikageelikerroksen läpi (100 g, heksaani, 20 %, 30 %, 40 % eetteri/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste keltaisena öljynä (4,88 g, 75,0 %).
IR (CH2C12) vroax: 3410 (NH), 2150 (N2) , 1765, 1715 ja 30 1650 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) δ: 6,03 - 5,80 (1H, m, vinyylin H), 5,84 (1H, leveä s, NH), 5,4 - 5,28 (2H, m, vinyylin H), 4,73 - 4,68 (2H, m, vinyylin -CH2), 4,23 - 4,12 (1H, m, H-1'), 4,07 - 4,0 (1H, m, H-l"), 3,88 (1H, dd, J = 35 2,0 Hz, J = 5,5 Hz, H-4), 3,59, 3,56, 3,54 (2H, 3 viivaa, 96311 114 CH20), 3,04 (1H, t, J = 2,5 Hz, H-3), 1,9 - 1,7 (1H, m, H-C-H), 1,6 - 1,4 (3H, m, HCH ja CH2), 1,16 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,87, 0,86 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,056, 0,050 ja 0,027 ppm (12H, 3s, CH3).
5 J. Allyyli-(2R,4R,5R,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyyli- dimetyylisilyylioksietyyli] - 4- (3"-tert-butyylidimetyyli-silyylioksipropyyli) -3,7-diokso-l-atsabisyklo [3.2.0] hep-taani-2-karboksylaatti
I I I I
10 0Si + <CH2)30Si+ 0Si + <CH2)3QSi-f — ^'ΐλ=" 0//Νη 0 15
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1’R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(3-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyyli ) -3" -diatso-3" -allyyli-oksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (3,8 g, 20 6,7 mmol) bentseenissä (300 ml), puhdistettiin argonilla 10 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin Rh(0Ac)2:a (100 mg), ja seosta kuumennettiin palautusjäähdvttäen 70 minuuttia. Liuotin poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (3,9 g, >100 %) öljynä.
25 IR (CH2C12) Vmax: 1765 ja 1745 cm'1 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 5,99 - 5,79 (1H, m, vinyylin H), 5,39 - 5,20 (2H, m, vinyylin H), 4,66 - 4,60 (2H, m, CH2-vinyyli ), 4,63 (1H, s, H-2), 4,36, 4,33, 4,30, 4,27 (1H, 4 viivaa 5:stä, H-l'), 4,24 (1H, dd, J = 2,4 Hz, 30 J = 8,1 Hz, H-5), 2,7 - 2,5 (2H, m, CH,0) , 3,31 (1H, dd, J = 2,3 Hz, J = 5,8 Hz, H-6), 2,8 - 2,6 (1H, m, H-4), 1,8 - 1,5 (4H, m, (CH2)2), 1,29 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3) , 0,881, 0,878 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,093, 0,085 ja 0,033 ppm (12H, 3s, CH3) .
i| I' SMJ! I'Hfl : - i 96311 115 K. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l’R)-l'-tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli] -4- ( 3"-tert-butyylidimetyylisi-lyylioksipropyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
5 !. , I I I
OS i + ( CH^ 5 ^ 0S i-f OS i + <CH?)^0Si -(- xA 1 ja 1 n 10 cosn^>
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti allyyli-( 2R, 4R, 5R, 6S)-6-[(l 'R)-l' - tert-butyy lidime tyylisi-lyylioksietyyli] -4- (3" - tert-butyylidimetyylisilyylioksi-15 propyyli )-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-kar- boksylaatti (3,8 g:sta, 6,7 mmol:sta vastaavaa diatsoa) CH3CN:ssa (40 ml), lisättiin tipoittain difenyylikloorifos-faattia (1,52 ml, 7,37 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyli-amiinia (1,03 ml, 7,37 mmol). Seosta sekoitettiin 1 tunti 20 -15 °C:ssa - -10 °C:ssa. Sen jälkeen saatua enolifosfaat- tia käsiteltiin kylmässä (-15 °C) 2-pikolyylimerkaptaanil-la (1,68 g, 13,4 mmol) CH3CN:ssa (10 ml), minkä jälkeen lisättiin tipoittain N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,36 ml, 13,4 mmol). Seosta sekoitettiin 1 h ^ 25 -10 °C:ssa - 0 °C:ssa, ja sen jälkeen 1,5 tuntia 5 °C:ssa (jaähaude). Reaktioseos laimennettiin kylmällä EtOAc:lla (300 ml), pestiin kylmällä vedellä (2 x 100 ml), jääkylmällä 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (3 x 100 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 100 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 30 100 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikagee-li-flash-pylvään läpi (60 g, heksaani, 5 %, 10 %, 15 %, 20 % EtOAc/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (3,2 g, 74 %) öljynä.
35 IR (CH2C12) -vmax: 1770 ja 1715 cm’1 (C=0); 116 96311 *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,50 - 8,48 (1H, m, py-ridiini-H), 7,7 - 7,6 (1H, pyridiini-H), 7,41 - 7,36 (1H, leveä d, J = 7,9 Hz, pyridiini-H), 7,21 - 7,15 (1H, m, pyridiini-H), 6,05 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,47 - 5,19 5 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,28, 4,21, 4,09, 4,02 (2H, ABq, J = 13,8 Hz, CH2-pikolyyli ), 4,21 - 4,08 (1H, m, H-l'), 4,01 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J =' 9,3 Hz, H-5), 3,7 - 3,5 (2H, ra, CH2-0), 3,5 - 3,4 (1H, m, H-4), 3,27 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 7,3 Hz, H-6), 1,9 - 10 1,4 [4H, m, (CH2).*], 1,28 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,877, 0,871 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,066, 0,057, 0,036 ja 0,029 ppm (12H, 4s, CH3).
L. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]- 4-(3"-hydroksipropyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-15 okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
0Si+ <CH2 5 3OSli+ OH <CHj)30H
coB\^ co2\^ +
OS i4- CCH,)30H
Kylmää (jää-MeOH-haude) liuosta, jonka muodosti al-30 lyyli-( 4R, 5S,6S)-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyyli- oksietyyli]-4-(3"-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyy-li )-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (3,20 g, 4,95 mmol) kuivassa THF:ssa (60 ml), käsiteltiin CH3C02H:lla (1,72 ml, 35 30 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 1 M tetrabu- : : m i iiiu i>im . . i.
96311 117 tyyliammoniumfluoridin THF-liuosta (15 ml, 15 mmol). Seosta pidettiin kylmässä huoneessa (5 °C) 30 tuntia, sen jälkeen neutraloitiin (jäähaude) 1 M NaHC03:lla (30 ml, 30 mmol). Seos laimennettiin EtOAcrlla (200 ml) ja vesi-5 faasia uutettiin kaksi kertaa EtOAc:lla (2 x 200 ml). Orgaaniset uutteet pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesi-liuoksella (4 x 100 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 100 ml)/ suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (75 g, CH2C12, 5 %, 10 10 %, 20 %, 30 %,..40 %, 60 % EtOAc/CH2Cl2), jolloin saatiin allyyli- (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4-( 3"-hydroksipropyyli ) -3- [ (pyridin-2-yyli )-metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaattia (1,5 g, 57 %) valkoisena kiinteänä aineena. 15 IR (CH2C12) Dmx: 3600 - 3300 (OH), 1770 ja 1720 cm'1 (C=0); *Ή NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,48 - 8,45 (1H, m, py-ridiini-H), 7,77 - 7,67 (1H, m, pyridiini-H), 7,50 - 7,46 (1H, d, J = 7,9 Hz, pyridiini-H), 7,26 - 7,19 (1H, m, py- 20 ridiini-H), 6,05 - 5,85 (1H, m, vinyylin H), 5,47 - 5,20 (2H, m, vinyylin H), 4,84-4,61 (2H, m, vinyylin CH2), 4,46, 4,39, 4,05, 3,98 (2H, ABq, J - 14,4 Hz, CH2-pyridii-ni), 4,20, 4,16, 4,13 (1H, 3 viivaa 5:stä, H-l' ), 3,96 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,8 - 3,6 (2H, m, ^ 25 CHjO), 3,5 - 3,3 (1H, m, H-4), 3,22 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 7,3 Hz, H-6), 1,9 - 1,6 (4H, m, (CH2)2), 1,64 (1H, leveä S, OH), 1,27 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,857 (9H, s, tert-butyyli), 0,059 ja 0,039 (6H, 2s, CH3).
Edellä mainittua pylvästä eluoitiin asetonilla, 30 jolloin saatiin otsikon yhdiste (411 mg, 20 %).
IR (CH2C12) v„ax: 3700 - 3200 (OH), 1770 ja 1710 cm*1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) δ: 8,49 - 8,46 (1H, m, pyridiini-H), 7,75 - 7,66 (1H, m, pyridiini-H), 7,48 - 7,45 35 (1H, leveä d, J = 8,9 Hz, pyridiini-H), 7,23 - 7,19 (1H, 96311 118 m, pyridiini-H), 6,06 - 5,86 ( 1H, m, vinyylin H), 5,48 - 5,21 (1H, ra, vinyylin H), 4,88 - 4,60 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,41, 4,33, 4,06, 3,98 (2H, ABq, J = 14,5 Hz, CH2-pyridii-ni), 4,22 - 4,13 (1H, m, H-l’), 4,11, 4,09 (osa dd:a, J = 5 2,6 Hz, osa H-5:a), 3,8 - 3,6 (2H, m, CH20), 3,6 - 3,45 (1H, m, H-4), 3,30 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 7,6 Hz, H-6), 1,9 - 1,5 (5H, m, (CH2)2) ja OH) ja 1,35 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
M. Natrium-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-10 4-(3"-hydroksipropyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7- okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CH2)30H OH (CH2)30H w Α-Λ_ίΝΧ5 , COg C 0 2 N ä
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti al-lyyli- (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -4 - ( 3" -hydrok-20 sipropyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (166 mg, 0,400 mraol) CH2Cl2:ssa (10 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a, minkä jälkeen lisättiin tipoittain kalium-2-etyyliheksanoaattia (0,5 M EtOAc:ssa, 1 ml, 0,5 mmol). Seosta sekoitettiin 25 15 minuuttia, laimennettiin dietyylieetterillä (25 ml) ja " uutettiin jääkylmällä 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavalla puskurin vesiliuoksella (3 x 5 ml). Vesipitoiset uutteet pestiin dietyylieetterillä (2 x 25 ml) ja vietiin C18-p-Bon-dapak-käänteisfaasipylvään läpi (40 g, H20, 1 %, 2 %, 3 %, 30 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (120 mg, 75 %) lyofilisoituna jauheena.
Puhtaus 99,6 % määritettynä HPLC:llä; UV (H20) /.„ax: 306 (11900), 266 (8000); IR (Nujol) ‘V max * 1745 ja 1590 cm*1 (C = 0); 96311 119 *Η NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,47, 8,45 (1H, leveä d, J = 4,8 Hz, pyridiini-H), 7,85 (1H, leveä t, J = 7,8 Hz, pyridiini-H), 7,52 (1H, leveä d, J = 7,8 Hz, pyridiini-H), 7,39 - 7,33 (1H, m, pyridiini-H), 4,22, 4,17, 4,11, 5 4,06 (2H, ABq, J = 10,5 Hz, CH2-pyridiini), 4,3 - 4,0 (2H, m, peittynyt H-l' ja H-5), 3,57, 3,54, 3,51 (2H, m, peittynyt H-l' ja H-5), 3,57, 3,54, 3,51 (2H, m, CH20), 3,35 (1H, dd, J = 2,3 Hz, J = 6,0 Hz, H-6), 3,21, 3,17, 3,12 (1H, m, H-4), 2,8 - 2,2 (4H, m, (CH2)2) ja 1,28 ppm (3H, d, 10 J = 6,3 Hz, CH3)..7,
Esimerkki 10 w (4R, 5S, 6S)-4-(2"-aminoetyyli)-6-[(l’R)-l’-hydrok- sietyyli]-3-[(l-metyylipyridin-2-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabi syklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy-15 lihapon yksiemäksinen fosfaattisuola OH CH2CHjN3 OH CHjCHjNHj
ArWO i: '"ί:.·-, 3, P.,e 0^-KY l 9n COjK C0ZH 3
HjP0<
Suspensio, jonka muodosti kalium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksie tyyli ] - 3- [ ( pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-Ύ 25 karboksylaatti (valmistettu kuten esimerkissä 6) (0,300 g, 0,70 mmol) kuivassa asetonitriilissä (3 ml), jäähdytettiin -20 °C:seen ja käsiteltiin 98-prosenttisella muurahaishapolla (0,030 ml, 0,79 mmol). 15 minuutin kuluttua kirkasta liuosta käsiteltiin metyylitrifluorimetaanisulfonaatilla 30 (0,12 ml, 1,06 mmol) ja sekoitettiin 1,5 tuntia. Sen jäl keen reaktio pysäytettiin lisäämällä 20 ml 0,1 M pH-arvon 7,4 omaavaa fosfaattipuskuria, ja asetonitriili haihdutettiin tyhjössä. Vesifaasi laimennettiin 40 ml :11a 0,1 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja hydrattiin 35 0 °C:ssa käyttäen 30-prosenttista palladiumia celitellä 120 9631 1 (0,40 g) 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1,5 tuntia. Katalyytti suodatettiin celite-kerroksella, ja suodos kro-matografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 3 x 15 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 -5 5 %) vedessä, jolloin saatiin 0,062 g (19 %) otsikon yh distettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena pakastus-kuivauksen jälkeen. Tuotteen puhtaus arvioitiin 1H-NMR:n avulla 80 %:ksi.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97 % (p-Bondapak-C16, 10 3,9 mm x 30 cm), -Teluointi 10 % CH3CN-H20 pH 7,4 fosfaat tipuskuri, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 10,0 minuuttia. ^ UV (H20, pH 7,4, fosfaattipuskuri) ·Λοβχ: 270 nm (6630) ja 300 nm (olkapää, 3480); 15 ' IR (KBr) v roax: 1765 (β-laktaamin C=0), 1635, 1610 ja 1585 cm'1; XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,39 Hz, CH5-CHO), 1,7 - 2,3 (m, 2H, CH2-4), 3,1 - 3,3 (m, 2H, CH2NH2), 3,37 (dt, JH4 CH2 = 10,1 Hz, JH4 H5 = 3,86 Hz, 1H, H-4), 3,53 20 (dd, JH6 H5 = 3,20 Hz, JH6 H1. = 6,42 Hz, 1H, H-6), 4,2 - 4,4 (m, H-5 ja H-l1 päällekkäin), 4,40 (s, 3H, pyridiniumin CH3), 7,79 (=d, J = 7,3 Hz, 1H, pyridiniumin H-3), 7,92 (m, 1H, H-5), 8,44 (m, 1H, pyridiniumin H-4) ja 8,78 ppm (d, J = 5,5 Hz, 1H, pyridiniumin H-6).
. ‘ 25 Esimerkki 11 (4R,5S,6S)-4-(2"-N,N-dimetyy1iaminoetyy1i)-6-[ (1 Ή) -1’-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitkö]^- ok so-l-ats ab is yklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30
rnn CH-:HjNh'e OH CK,CK,N
JLji r*i . Λ_α ‘ “ I ^ //~~~ S C H -CnO ’[ )l ^j
^ ί C-" ' I
35 C0?H c:2h il ; iBil HB li · i i 96311 121
Liuos, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyy-li)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyy-litio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy-lihappo (esimerkki 2) (0,187 g, 0,51 mmol) kylmässä vedes-5 sä (3 ml), laimennettiin CH3CN:lla (2 ml) ja sen jälkeen käsiteltiin 0-5 °C:ssa 37-prosenttisella formaldehydin vesiliuoksella (0,21 ml). Liuoksen pH (pH-mittari) oli 7,2. Sen jälkeen lisättiin natriumsyaaniboorihydridiä (0,058 g, 0,93 mmol) kerralla (pH 8,5 - 9,0), minkä jäl-10 keen 2 minuutin kuluttua lisättiin jääetikkaa (3 tippaa, pH 5,2 - 5,5). Saatua homogeenistä seosta sekoitettiin 0 -5 °C:ssa 30 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin 20 ml 0,1 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja asetonitriili poistettiin tyhjössä (<15 °C). Jäljelle jäänyt vesifaasi 15 kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 2,5 x 10 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 -10 %) vedessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot otettiin talteen, pakastuskuivattiin ja kromatografoitiin toisen kerran käyttäen samaa menettelyä. Otsikon yhdiste saatiin 20 valkoisena amorfisena jauheena: 0,117 g (58 %); [a]22 - 4,0° (c 1,0, H20).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 88 % p-Bondapak-Cie:11a,
3,9 mm x 30 cm, virtausnopeus 2 ml/min, 5 % CH3CN-H20, pH
7.4 fosfaattipuskuri, UV-detektori 300 nm, viipymäaika '-y 25 9,02 minuuttia.
UV (H20, pH 7,4, fosfaattipuskuri) λ„,3χ: 266 (7039) ja 302 nm (7707); IR (KBr) 1762 (β-laktaamin C=0) ja 1595 cm'1 (karboksyylihapon C=0); 30 JH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,30 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,6 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,86 (s, 6H, N(CH3)2), 3,15 (m, 3H, H-4 ja CH2N), 3,32 (dd, JH6 H5 = 2,91 Hz, jh6.hi· = 6,75 Hz, 1H' H-6), 4,10 (ABq, JAB = 14,06 Hz, Δ = 25.4 Hz, SCH2), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0, päällek-35 käin), 7,38 (m, 1H, pyridiinin H-3), 7,47 (d, J = 7,87 Hz, 96311 122 1H, pyridiinin H-5), 7,86 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H, pyridiinin H-2).
Esimerkki 12 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok-5 sietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitioj-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy 'lihappo OH (CH2)4N'H2 10 I /)-SCH--s.
1—N// c
£T
co2h ^ A. tert-butyylidimetyylisilyyli-6-(tert-butyylidi-15 metyylisilyylioksi)heksanoaatti
I I
/ \ Na0H_^ H0<CHg)5C0eNa -- +Si0<CHg)5C0gS; - 20 ζ-kaprolaktonin (20,6 g, 0,18 mol) saippuoinnilla, kuten julkaisussa P.A. Aristoff et al., J. Org. Chem. 48 (1983) 5341 on kuvattu, saatiin 30,0 g natriumsuolaa valkoisena kiinteänä aineena: :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,2 -: 25 1,7 (m, 6H), 2,19 (t, J = 7,32 Hz, 2H, CH2C02Na) ja ^ 3,61 ppm (t, J = 6,51 Hz, 2H, CH20H).
Raakatuotteena saatu suola suspendoitiin N,N-di-metyyliformamidiin (250 ml), joka oli jäähdytetty 0 -5 °C:seen, ja käsiteltiin tert-butyylidimetyylisilyyliklo-30 ridilla (81,6 g, 0,54 mol), minkä jälkeen lisättiin tipoittaan trietyyliamiinia (32,6 ml, 0,23 mol). 26 tunnin jälkeen 22 °C:ssa muodostunut kiinteä aine suodatettiin ja pestiin petrolieetterillä (k.p. 20 - 60 °C). Laimennet tiin vielä petrolieetterillä (500 ml), minkä jälkeen suo-35 dos pestiin kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kui- I i 1:1« 1:1 i u .
96311 123 vattiin (MgSO«). Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen jäännös tislattiin tyhjössä, jolloin saatiin 60,8 g (93 %) otsikon esteriä kirkkaana öljynä: k.p. = 106 - 107 °C/ 2,00 Pa (0,015 torria).
5 IR (NaCl, kalvo) vBex: 1722 cm"1 (esterin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04 ja 0,26 (2s, 2 x 6H, SiCH3), 0,88 ja 0,92 (2s, 2 x 9H, tert-butyyli), 1,2 -' 1,7 ppm (m, 6H, CH2-3, -4 ja -5).
B. 6-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)heksaani- 10 happo
I I ΗρΟ I
w + Si0(CHO5C0pSi+ -^ + SiO(CHp)cCOPH
I Ί H * I 2 5 2 15 Liuosta, jonka muodosti vaiheessa A valmistettu si- lyyliesteri (82,0 g, 0,227 mol) tetrahydrofuraanin (800 ml) ja veden (800 ml) seoksessa, käsiteltiin 22 °C:ssa oksaalihapolla (8,2 g, 0,09 mol) ja sekoitettiin 2 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin EtOAcrlla (1 1), 20 pestiin vedellä ja suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS0<).
Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 72 g öljyä, joka oli otsikon hapon ja disiloksaanin seos. Tämä tuote käytettiin ilman puhdistusta seuraavassa vaiheessa: IR (NaCl, kalvo) vm4X: 1715 cm'1 (karboksyylihapon T 25 C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,41 (s, SiCH3) , 0,88 (s, Si-tert-butyyli), 1,3 - 1,8 (m, CH2-3, -4 ja -5), 2,3 - 2,4 (m, CH2C02H) ja 3,6 - 3,7 ppm (m, CH20Si).
C. 6-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-(pyridin- 30 2-yyli)metyylitioheksanoaatti t 3 □ n s o<ch2)5co2h-r tboms o< >5cosch2 124 96311
Liuokseen, jonka muodosti vaiheesta B raakatuottee-na saatu 6-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)heksaanihappo (= 0,227 mol) kuivassa CH2Cl2:ssa (500 ml) lisättiin 0 -5 °C:ssa 2-pikolyylimerkaptaania (28,4 g, 0,227 mol), 1-5 hydroksibentsotriatsolihydraattia (34,8 g, 0,227 mol) ja 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä (46,9 g, 0,227 mol). 16 tunnin jälkeen 22 °C:ssa muodostunut kiinteä aine suodatettiin ja pestiin EtOAcilla. Suodokset pestiin vedellä, suolaliuoksella ja sen jälkeen kuivattiin (MgSO,). Liuotin 10 haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoi-tiin silikageelillä (9 x 10 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAcrn seoksella (95:5), jolloin saatiin 40,0 g (50 %) otsikon tioesteriä kirkkaana öljynä: IR (NaCl, kalvo) vnax- 1695 cm'1 (tioesterin C=0); 15 ΧΗ NMR (200 MHz, CDC13) δ: 0,28 (s, 6H, SiCH3), 0,88 (s, 9H, t-Bu), 1,3 - 1,8 (m, 6H, CH2-3, -4 ja -5), 2,58 (t, J = 7,5 Hz, 2H, CH2-2), 3,57 (t, J = 6,2 Hz, 2H, CH2-6), 4,24 (s, 2H, pikolyylin CH2), 7,15 (m, 1H, pyri- diinin H-5), 7,33 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 20 7,62 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,52 ppm (d, J = 8,5 Hz, 1H, pyridiinin H-6).
D.6-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)-1-(pyridin-2-yyli)metyylitioheksanoaatin O-tert-butyylidimetyylisi-lyylienolieetteri : 25 H OTBDMS ' ~ AP - w ^
TBDMSO(CHp)cCOpSCH? N / \ I
d TBDMS0(CH2)< SCHg-^^ 30 Liuosta, jonka muodosti 6-(tert-butyylidimetyyli- si lyylioksi)-1-(pyridin-2-yyli)metyylitioheksanoaatti (40,0 g, 0,113 mol) kuivassa CH2Cl2:ssa (400 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa trietyyliamiinilla (32 ml, 0,23 mol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain tert-butyylidimetyyli-35 silyylitrifluorimetaanisulfonaattia (40 ml, 0,174 mol).
j| : gt*-1 S ISJ n i ti - 96311 125
Sen jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 22 eC:ssa 3 tuntia. Laimennettiin petrolieetterillä (k.p. 30 - 60 °C, 1 1), minkä jälkeen orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin alipaineessa. Jäljelle jäänyt kova 5 öljy (53,0 g) käytettiin välittömästi sellaisenaan seuraa-van vaiheen kytkentäreaktiossa.
XH NMR (200 MHz, CDC13) osoitti E- ja Z-isomeerien 1:1-suhteisen seoksen; 6; 3,95 ja 4,03 (2 x s, SCH2), 4,85 (t, J = 7,25 Hz, C=CH) ja 5,0 ppm (t, J * 7,54 Hz, C=CH). 10 E. (3S, 4S).ir3-[ (1 Ή)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy- lioksietyyli] -4- [ (1"R) -1”- (pyridin-2-yyli )metyylitiokar-bonyyli-5"-tert-butyylidimetyylisilyylioksipentyyli]atse-tidin-2-oni
OTBOttS OTBOttS <CH }40TB0r.S
15 f .Ofic OIBOOS J Jf ίΓ^Ί — HsC^ iVcosch* A—N. IBOttSOCCH.). SCH,X,—\
CT XH o H
Suspensioon, jonka muodosti juuri fuusioitu sinkki-20 kloridi (15,4 g, 0,113 mmol) kuivassa CH:Cl2:ssa (200 ml) 0-5 °C:ssa, lisättiin (3S,4R)-4-asetoksi-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]atsetidin-2-onia (16,25 g, 0,056 mol). Sen jälkeen lisättiin tipoittain (* 15 min) liuos, jonka muodosti raakatuotteena oleva vai-r 25 heessa D valmistettu silyylienolieetteri (0,113 mol) kuivassa CH2Cl2:ssa (200 ml), ja saatua seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 18 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin Et0Ac:lla, pestiin kylläisellä ammoniumkloridin vesi-liuoksella, kylläisellä NaHC03:11a, suolaliuoksella ja kui-30 vattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin tumma jäännös, joka kromatografoitiin silikageelillä (15 x 11 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAc:n seoksella (1:1), jolloin saatiin 23 g (70 %) otsikon yhdistettä kumimaisena aineena, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaihees-35 sa. :H-NMR osoitti β-isomeerin suhteen α-isomeeriin olevan 126 .. 9631Ί 9:1. Erä kiteytettiin heksaaneista, jolloin saatiin otsikon yhdisteen puhdasta β-isomeeriä valkoisina levyinä; s.p. =82-83 °C; [a]“ - 9,0° (c 1,0, CHC13).
UV (EtOH) 238 (5080) ja 264 nm (4600); 5 IR (KBr) v„ax: 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1682 cm*1 (tioesterin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,02 ja 0,04 (2 x s, 2 x 6H, SiCH3), 0,84 ja 0,87 (2 x s, 2 x 9H, Si-tert-butyyli), 0,97 (d, J = 6,31 Hz, 3H, CH,CH0), 1,2 - 2,0 (m, 6H, pen-10 tyylin CH2-2, -3 j.a -4), 2,8 (m, 1H, pentyylin H-l), 3,03 (m, 1H, H-6), 3,56 (t, J = 5,9 Hz, 2H, pentyylin CH2-5), 3,80 (dd, JH4 H3 = 2,05 Hz, JH4 H = 7,08 Hz, 1H, H-4), 4,14 (m, 1H, CHjCHO), 4,26 (ABq, JAB = 14,0 Hz, Δ*> = 7,3 Hz, 2H, SCH2), 5,88 (leveä s, 1H, NH), 7,18 (m, 1H, pyridiinin 15 H-5), 7,33 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,64 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,52 ppm (d, J = 4,8 Hz, 1H, pyri diinin H-6).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C29H51N204SSi2: C 60,06; H 8,86; N 4,83; S 5,53; 20 Todettu: C 60,30; H 8,82; N 4,72; S 5,67.
F. (3S,4S)-3-[(11R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R) -l"-karboksi-5"-tert-butyylidimetyy-lisilyylioksipentyyli]atsetidin-2-oni 7I- OTBDnS <CH ) 0TBDnS OTBOnS (CH , QTgons ^ .A-A=...,-Q_·ΑΛ·.·
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1’R)-l'-tert-30 butyylidimetyylisilyylioksietyyli] - 4- [(l"R)-l"-( pyridin-2-yyli )metyylitiokarbonyyli-5" -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksipentyyli]atsetidin-2-oni (23,0 g, 39,7 mmol, β- ja a-isomeerin noin 9:1-suhteinen seos) tetrahydrofuraanissa (200 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa 30-prosenttisella vety-35 peroksidilla (7,0 ml, 81,2 mmol), minkä jälkeen lisättiin ; · »U,i |:»ΐί Iita·' 96311 127 tipoittain 80 ml (80,0 mmol) 1 M natriumhydroksidia. 2 tunnin jälkeen 22 °C:ssa reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (500 ml) ja tehtiin happamaksi 1 N HCl:lla (100 ml). Orgaaninen faasi pestiin 1 N natriumbisulfiitil-5 la (100 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgSO*). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin kiinteä aine, joka uudel-leenkiteytettiin AcOEt:n ja heksaanien seoksesta, jolloin saatiin 12,4 g (66 %) otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena; s.p. 136 - 138 °C; [a]” -3,6° (c 1,0, 10 CHC13). ^ IR (KBr) vmax: 1760 (olkapää), 1715 (hapon C=0) ja ^ 1690 cm'1; NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04, 0,05 ja 0,06 (3 x s, 6H, 3H ja 3H, SiCH3), 0,86 ja 0,88 (2 x s, 2 x 9H, Si-15 t-Bu), 1,16 (d, J = 6,28 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,8 (m, 6H, pentyylin CH2-2, -3 ja -4), 2,6 (m, 1H, pentyylin H-l), 3,13 (m, 1H, H-3), 3,60 (t, J = 5,82 Hz, 2H, pentyylin CH2-5), 3,86 (dd, JH„,H3 = 1,92 Hz, JH4 H = 6,46 Hz, 1H, H-4), 4,20 (dq, JH1.>CH3 = 6,28 Hz, JK1 H3 = 3,86 Hz, 1H, CH3CHO) ja 20 6,32 ppm (leveä s, 1H, NH).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C23H47N05Si2: C 58,31; H 10,00; N 2,96;
Todettu: C 58,18; H 10,18; N 2,91.
G. (3S,4R)-3-[(1’R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-T 25 lioksietyyli] -4- [ (1"R) -1"-(4-tert-butyylidimetyylisilyyli-oksibutyyli)-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]at-setidin-2-oni
0 T B D “ S (CM2)<)073Df1S 0 T 8 D M S ( CHg } ^ 0 7 30nS
30 K,r """»f—j^^co.H _.
/h\ °
0y H G H
Suspensiota, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(1’R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4- [ (1 "R ) -1" -kar-35 boksi-5"-tert-butyylidimetyylisilyylioksipentyyli]atseti- 96311 128 din-2-oni (4,70 g, 9,92 mmol) kuivassa tolueenissa (125 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa 1,1-karbonyylidi-imidatso-lilla (1,80 g, 11,1 mmol). 5 tunnin kuluttua liuotin haihdutettiin alipaineessa ja jäännös liuotettiin kuivaan 5 bentseeniin (15 ml). Tämä liuos lisättiin magnesiummonoal-lyylimalonaatin (4,7 g, 15,3 mmol) liuokseen kuivassa bentseenissä (100 ml), ja saatua seosta sekoitettiin 80 eC:ssa 18 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin EtOAcrlla, pestiin kylmällä 1 N HClilla, kylläisellä 10 NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin jäännös, joka kromatogra-foitiin silikageelillä (6,5 x 11 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAcrn seoksella (8:2), jolloin saatiin 3,48 g (63 %) otsikon yhdistettä valkoisena kiinteänä aineena. Tämän 15 tuotteen 1H-NMR osoitti asetoasetaatin keto- ja enolimuodon 1:1-suhteisen seoksen. Kiinteä aine uudelleenkiteytettiin petrolieetterissä (30 - 60 °C) -20 °C:ssa, jolloin saatiin jonkin verran tuotteen puhdasta enolimuotoa valkoisina neuloina: s.p. 72 - 73 °C; [a]j;2 0° (c 1,0, CHC13).
20 UV (EtOH) χαΛΧ: 248 nm (11090); IR (KBr) vmax: 1761 (β-laktaamin C=0), 1718, 1650 ja 1625 cm*1; NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,03 ja 0,05 (2 x s, 2 x 6H, SiCH3), 0,86 ja 0,88 (2 x s, 2 x 9H, Si-t-Bu), 1,10 25 (d, J = 6,29 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,19 (m, 1H, oksopropyylin H-l), 2,90 (m, 1H, H-3), 3,59 (t, J = 5,96 Hz, butyylin CH2-4), 3,81 (dd, JH4 H3 = 2,03 Hz, JH4 H1 = 7,41 Hz, 1H, H-4), 4,18 (dq, jh.ch3 = 6,29 Hz, jh.h3 = 3/ 67 Hz, CH3CH0), 4,63 (m, 2H, al-30 lyylin CH2), 5,06 (s, 1H, oksopropyylienolimuodon H-3), 5,2 - 5,4 (m, 2H, allyylin CH) ja 5,8 - 6,1 ppm (m, 2H, allyylin CH ja NH).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C28H53N06Si2: C 60,50; H 9,61; N 2,52; 35 Todettu: C 60,62; H 9,64; N 2,45.
m su i din i i i at: : : 96311 129 H. (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli)-4-[ (1"R)-1"- (4-tert-butyylidimetyylisilyyli-oksibutyyli) -3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-okso-propyyli)atsetidin-2-oni
5 OTBDttS . nTRnre OTBDflS < ) < OTBDfiS
I UjHgJ<0IΒ0Π5 > w N—^ ' X—N. ^ /,—N 0 e xh \ 10 Liuosta, j-pnka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-tert- butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(4-tert-w butyylidimetyylisilyylioksibutyyli) -3 " -allyylioksikarbo- nyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (3,4 g, 6,12 mmol) asetonitriilissä (50 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa p-toluee-15 nisulfonyyliatsidilla (6,9 mmol, 2,3 ml 3 M liuosta CH3-CNrssa) ja trietyyliamiinilla (0,85 ml, 6,1 mmol). 1,5 tunnin kuluttua reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (200 ml), pestiin vedellä, kylläisellä NaHC03:n vesiliuoksella, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haih-20 dutettiin, jolloin saatiin jäännös, jota trituroitiin to-lueenin ja Et0Ac:n seoksen (9:1, =30 ml) kanssa. Kiteinen p-tolueenisulfonamidi suodatettiin, ja suodos kromatogra-foitiin silikageelillä (5 x 11 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAc:n seoksella (9:1), jolloin saatiin 3,56 g (100 %) ^ 25 otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä: IR (NaCl, kalvo) yaax: 2140 (N2), 1760 (B-laktaamin C=0), 1720 (esterin C=0) ja 1650 cm'1; :H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,03 ja 0,05 (2 x s, 2 x 6H, SiCH3), 0,9 (s, 18H, Si-t-Bu), 1,16 (d, J = 6,29 Hz, 30 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3.04 (m, 1H, H-3), 3,57 (t, J = 6,2 Hz, 1H, butyylin CH2- 4), 3,85 (dd, JH4.H3 = 2,11 Hz, JH4 H = 5,48 Hz, 1H, H-4), 4.05 (m, 1H, oksopropyylin H-l), 4,17 (dq, JHCH3 = 6,29 Hz, jh2.h3 = 3,68 Hz' 1H' CH3CH0), 4,7 (m, 2H, allyylin CH2),
35 5,3 - 5,5 (m, 2H, allyylin CH) ja 5,8 - 6,1 ppm (m, 2H, NH
ja allyylin CH).
96311 130 I. Allyyli-(4R,5R,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidi-xnetyylisilyylioksietyyli] -4-(4"-tert-butyylidimetyylisi-lyylioksibutyyli) -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti 5 OTBOMS <CHe)40TB0MS 0Tgons < CH_) otbdms ] H H I fr J H H f η3γ H.r """I— // \ 0 * 0 H 0 \ CO, 10 ^
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[ (1"R)-1"-(4-tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli)-3"-diatso-3"-allyyli-oksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (3,50 g, 15 6,0 mmol) kuivassa bentseenissS (350 ml), käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna rodium(II)oktanoaatilla (0,14 g) ja kuumennettiin palautusjäähdyttäen 45 minuuttia. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuotteena bisyklinen ketoni öljynä, joka käytettiin seuraavassa vai-20 heessa.
IR (NaCl, kalvo) VBax: 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1745 cm*1 (ketoesterin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,03, 0,08 ja 0,09 (3 x s, 6H, 3H ja 3H, SiCH3), 0,86 (s, 18H, Si-t-Bu), 1,1 - 1,8 25 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 1,28 (d, J = 6,16 Hz, ^ 3H, CH3CH0), 2,64 (m, 1H, H-4), 3,22 (dd, JH6 H5 = 2,36 Hz, JH6.H1· = 5,54 Hz' 1H' H~6)' 3/6 (m, 2H, CH20Si), 4,24 (dd, jh5.h6 = 2,36 Hz, JH5 H4 = 8,03 Hz, 1H, H-5), 4,30 (m, 1H, CH3CHO), 4,61 (s, 1H, H-2), 4,64 (m, 2H, allyylin CH2), 30 5,2 - 5,4 ja 5,8 - 6,0 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH2) .
m 1 «iit 1 1 1 m 96311 131 J. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli ) -4- (4"-tert-butyylidiinetyylisi-lyylioksibutyyli) -3- [ (pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5
ΟΤΒΟΠΞ (CH2)40TB0HS OTBDnS <CH2>40TB0f1S
Λ—n3c^'\— J I )=:0 -- J I /)-SCH2—i:
^L_n / N
0 COp-^^ ° 10 2 2 'I.
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-6-[ (1 ’ R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli ) - 4-(4" -tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli)-3,7-diokso-l-at-sabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (6,0 mmol) kui-15 vassa CH3CN:ssa (35 ml) 0 - 5 °C:ssa, käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,4 ml, 6.8 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,2 ml, 6.9 mmol), jotka lisättiin samanaikaisesti 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin 4-N,N-dimetyyliaminopyridiiniä 20 (* 3 mg), ja saatua seosta sekoitettiin samassa lämpöti lassa 1 tunti. Lisättiin 2-pikolyylimerkaptaania (1,5 g, 12,0 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 16 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla, pestiin kylläi- w 25 sellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04).
«
Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromato-grafoitiin silikageelillä (5 x 10 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAcrn seoksella (9:1), jolloin saatiin 2,95 g (74 %) otsikon yhdistettä öljynä.
30 IR (NaCl, kalvo) vBax: 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04, 0,05 ja 0,06 (3 x s, 6H, 3H ja 3H, SiCH3), 0,87 ja 0,88 (2 x s, 2 x 9H, Si-t-Bu), 1,2 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 1,26 35 (d, J = 6,13 Hz, 3H, CH3CHO), 3,12 (dd, JH6 H5 = 2,48 Hz, 96311 132 JH6.H1· = 6,68 Hz, 1«, H-6), 3,40 (m, 1H, H-4), 3,59 (m, 2H, butyylin CH2-4), 4,03 (dd, JH5 H6 = 2,48 Hz, JH5 M = 9,17 Hz, 1H, H-5), 4,13 (ABq, JAB = 14,3 Hz, Δ 30,4 Hz, 2H, SCH2), 4,20 (m, 1H, CH3CHO), 4,72 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 5 ja 5,8 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,20 (m, 1H, pyridyylin H-5), 7,4 (d, J = 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,67 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,5 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6 ).
K. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidi-10 metyylisilyylioksi^Btyyli] -4- (4"-hydroksibutyyli ) -3- [ (pyri-din-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
OTBDHS (CH2)40Te0nS 0TB0MS < CHj)^ OH
15 "3^,%rr^scH3_0 ϋίΔ ".Λ^Ϊ-,οη,-Ο ° 0
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-20 [ (1' R) — 1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-(4"- tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli)-3-[(pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (2,95 g, 4,46 mmol) kuivassa tetrahydro-furaanissa (70 ml), käsiteltiin -10 °C:ssa ja käyttäen 25 typpeä suojakaasuna jääetikalla (1,6 ml, 28,0 mmol), ja ^ sen jälkeen 13,4 ml:11a 1,0 M tetrabutyyliammoniumfluori-dia tetrahydrofuraanissa. Sen jälkeen saatua seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 17 tuntia. Sitten reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla, pestiin kylmällä kylläisellä NaHC03:lla, 30 suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silika-geelillä (6x8 cm). Eluoitiin EtOAc:n gradientilla (50 -* 100 %) tolueenissa, jolloin saatiin 1,64 g (67 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä.
J tili lii! IMiIImi 96311 133 IR (NaCl, kalvo) Vmax: 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,06 ja 0,07 (2s, 2 x 3H, SiCHj), 0,87 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,28 (d, J = 6,08 Hz, 3H, 5 CHjCHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,14 (dd, JH6.„5 = 2,54 Hz, JH6H1. = 7,19 Hz, 1H, H-6), 3,37 (m, 1H, H-4), 3,65 (m, 2H, butyylin CH2-4), 4,02 (dd, JH5 H6 =' 2,54 Hz, JH5 H4 = 9,37 Hz, 1H, H-5), 4,14 (ABq, JAB = 13,8 Hz, δλ> = 33,2 Hz, 2H, SCH2), 4,2 (m, 1H, CH3CHO), 4,72 10 (m, 2H, allyylin GH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,2 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,4 (d, J = w 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,68 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,50 ppm (1H, pyridiinin H-6).
L. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6-15 [(1*R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(py- ridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
OTBOr.S < CHj) 2 OH OTBOnS
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-. 25 [(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksi]-4-(4"-hydrok- sibutyyli ) —3 — [ ( pyridin-2-yyli )metyylitio] - 7-okso-l-atsa-bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,64 g, 3,0 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa ( 250 ml), käsiteltiin -20 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna trifenyy-30 lifosfiinilla (1,26 g, 4,8 mmol) ja 8,5 ml:lla (5,1 mmol) 0,6 M hydratsoiinihapon tolueeniliuosta. Sen jälkeen lisättiin tipoittain 5 minuutin aikana dietyyliatsodikar-boksylaattia (0,80 ml, 5,08 mmol). 30 minuutin jälkeen -20 °C:ssa reaktio pysäytettiin lisäämällä EtOAcia ja kyl-35 Iäistä NaHC03:n vesiliuosta. Orgaaninen faasi pestiin suo- 134 S6511 laliuoksella ja kuivattiin (MgSO«). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, jota trituroitiin to-lueenin kanssa (=25 ml). Kiteinen dietyylihydratsoiinidi-karboksylaatti suodatettiin, ja suodosta käsiteltiin sa-5 maila tavalla dietyylieetterin kanssa trifenyylifosfiini- oksidin kiteyttämiseksi. Lopuksi jäännös kromatografoitiin silikageelillä (5 x 9 cm) käyttäen tolueenin ja EtOAc:n seosta (8:2) eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 1,60 g (93 %) otsikon yhdistettä 10 kirkkaana öljynä.··* IR (NaCl, kalvo) Vmax: 2100 (N3), 1775 (B-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); w XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,06 ja 0,07 (2 x s, 2 x 3H, SiCHj), 0,88 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,29 (d, J = 6,07 Hz, 15 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,10 (dd, JH6 H5 = 2,55 Hz, JH6 H1. = 7,20 Hz, 1H, H-6), 3,29 (t, J = 6,2 Hz, 2H, CH2N3), 3,42 (m, 1H, H-4), 4,02 (dd, JH5.H6 - 2,55 Hz, JH5H4 = 9,36 Hz, 1H, H-5), 4,13 (ABq, JAB = 14,0 Hz, Δν 31,9 Hz, 2H, SCH2), 4,19 (m, 1H, päällekkäin 20 SCH2:n kanssa, CH3CH0), 4,72 (m, 2H, allyylin SCH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,21 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,41 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,69 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,50 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
25 M. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti CTBDnS (CH2),n3 Oh <Ch8>,n3 30 »3r\—r^\ Π n I i χ)—sch,—\ -* * I I /)—sen-—\
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-35 atsidobutyyli )-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyyliok-
Il ; I I#·» ! 135 96ο 11 sietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,60 g, 2,80 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (40 ml), käsiteltiin 5 °C:ssa etikkahapolla (1,0 ml, 17,5 mmol) ja sen 5 jälkeen 8,4 ml:11a (8,4 mmol) 1,0 M tetrabutyyliammonium-fluoridin tetrahydrofuraaniliuosta. 112 tunnin jälkeen 5 °C:ssa reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla, pestiin kylläisellä NaHC03:lla ja suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka 10 kromatografoitiin^, silikageelillä (4 x 11 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAcrn seoksella (1:1), jolloin saatiin w 0,57 g (36 %) lähtöainetta. Sen jälkeen eluoitiin
Et0Ac:lla, jolloin saatiin 0,76 g (59 %, 92 % perustuu talteenotettuun lähtöaineeseen) otsikon yhdistettä öljynä. 15 IR (NaCl, kalvo) vB„: 2100 (N2), 1772 (3-laktaamin C=0) ja 1708 cm"1 (esterin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,28 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 1,84 (d, J = 5,2 Hz, 1H, OH), 3,15 (dd, JH6.„5 » 2,64 Hz, JH6 H1. = 20 7,28 Hz, 1H, H-6), 3,31 (t, J = 6,2 Hz, 2H, CH2N3), 3,48 (m, 1H, H-4), 4,13 (dd, JHS.H6 = 2,64 Hz, JK5 H4 = 9,43 Hz, 1H, H-5), 4,11 (ABq, JAB = 14,16 Hz, Δν = 33,3 Hz, 2H, SCH2), 4,2 (m, 1H, CH3CH0), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (m, 2H, allyylin CH), 7,2 (m, 1H, Τ' 25 pyridiinin H-5), 7,40 (d, J = 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,67 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,50 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
N. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hyd-roksietyyli] -3- [ (pyridin-2-yyli) me tyyli tio] -7-okso-l-at-30 sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
°-H <ΟΗ?)4ν3 OH
·.- — -Tnd-"--0
35 0 Λ«,^ "· \cäH
96311 136
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,76 g, 1,66 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa, 5 käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [0] (0,14 g) ja 3,6 ml:11a (1,18 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksaanoaatin liuosta EtOAc:ssa. 30 min kuluttua reaktioseos laimennettiin dietyylieetterillä (150 ml) ja uutettiin kolme kertaa 10 75 ml :11a 0,05 M.^pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskuria, yhdistetyt vesipitoiset uutteet laimennettiin 75 ml :11a 1 M NaH2P0<:a (saatiin pH-arvo 5,8) ja sen jälkeen hyd-rattiin käyttäen 30-prosenttista palladiumia celitellä (0,8 g) 310 kPa:n (45 psi:n) paineessa 0-5 °C:ssa 1,5 15 tuntia. Sen jälkeen katalyytti suodatettiin ja suodos vä-kevöitiin * 50 ml:ksi tyhjössä (<15 °C). Jäännös kromato-grafoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 5 x 9 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 10 %) vedessä, jolloin saatiin ensin 0,125 g (17 %) kalium-20 (4R, 5S, 6S )-6-[ (1'R)-l' -hydroksietyyli] -4-( 4" -hydroksibu- tyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaattia valkoisena jauheena lyofilisoinnin jälkeen.
Loppufraktioista saatiin sitten 0,273 g (42 %) ot-25 sikon yhdistettä valkoisena jauheena pakastuskuivauksen --jälkeen. 1H-NMR:n ja HPLC:n mukaan tässä tuotteessa oli epäpuhtautena 7 % edellä mainittua hydroksibutyylisivutuo-tetta. Erä tätä tuotetta, 0,175 g, puhdistettiin toisen kerran kromatografiällä, jolloin saatiin 0,152 g (87 % 30 saanto) puhdasta otsikon tuotetta: [a]D 0° (c 1,0, H20).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 94 % p-Bondapak-Cie:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20 pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 306 nm, vii-pymäaika 8,92 minuuttia.
96311 137 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) xmax: 266 (6490) ja 306 nm (9377); IR (KBr) v,„: 1758 (β-laktaamin C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); 5 NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,29 (d, J = 6,36 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,97 (t, J = 7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,16 (m, 1H, H-4), 3,29 (dd,‘ ^Ηδ.ΗΕ = 2,52 Hz, 0h6,hi' = 6,35 Hz, 1H, H—6), 4,0 - 4,3 (m, 4H, H-5, CH3CHO ja SCH2 päällekkäin), 7,37 (m, 1H, pyridii-10 nin H-5), 7,52 (dy J = 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,86 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,47 ppm (m, 1H, pyridiinin w H-6).
Esimerkki 13
Kalium-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-4-15 (4"-hydroksibutyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyyli- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar- boksylaatti
OH <CH2)40H
20 h A""r-r\ o^
COgK
^ 25 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]- 4- (4"-hydroksibutyyli) -3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
OTBOMS (CHs)4OTS0r!S OH (CH?)<0H
30 h r—-A n h n 3 Li ;ί0Γ 3 ΓΓ ^ y,—N--L/ N Pc OH y—Ν·~-γ
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S )-6-35 [ (1'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] - 4- ( 4" - 138 9631Ί tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli)-3-[(pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti (valmistettu esimerkin 12 vaiheessa J) (0,67 g, 1,01 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (15 ml), 5 käsiteltiin -10 °C:ssa käyttäen typpeä suojakaasuna etik-kahapolla (0,7 ml, 12,2 mmol), ja sen jälkeen 6,0 ml:11a (6,0 mmol) 1,0 M tetrabutyyliammoniumfluoridin tetrahydro-furaaniliuosta. 140 tunnin jälkeen 0-5 eC:ssa reaktio-seos laimennettiin Et0Ac:lla, pestiin kylläisellä NaH-10 C03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoi-tiin silikageelillä (3x7 cm). Eluoitiin CH3CN:n gradien-tilla Et0Ac:ssa, jolloin saatiin ensin 0,17 g (30 %) al-lyyli-(4R, 5S,6S)-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyyli-15 oksietyyli]-4-(4"-hydroksibutyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)me- tyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-sylaattia, josta oli poistettu yksi suojaryhmä, öljynä, joka oli identtistä esimerkin 12 vaiheen K yhdisteen kanssa. Eluoitiin asetonitriilillä, jolloin saatiin sitten 20 0,20 g (45 %) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) vmax: 3400 (OH), 1770 (S-laktaamin C=0) ja 1705 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,37 (d, J = 6,26 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,21 25 (dd, JH6.H5 = 2,65 Hz, JH6H1. = 8,09 Hz, 1H, H-6), 3,44 (m, 1H, H-4), 3,68 (* t, J = 5,0 Hz, 2H, O^OH), 4,1 - 4,2 (m, päällekkäin SCH2:n kanssa, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,14 (ABq, JAB = 14,08 Hz, Δv = 35,7 Hz, 2H, SCH2), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, 30 allyylin CH), 7,21 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,42 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,69 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,5 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
96311 139 B. Kalium-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]- 4- (4"-hydroksibutyyli) -3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH (CH2)40H oh (0Η2)40Η —pj. n H —Λ ρί
3C Γ Λ-SCH,-L! sO PdC 0 ] H3C \ \—SCH.-LL
// 2 N^// 2 - cr I cr |
C02y^> C02K
10 Liuosta, ...jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -4-(4"-hydroksibutyyli )-3- [ (pyri-din-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,20 g, 0,46 mmol) kuivassa dikloo-rimetaanissa (10 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen 15 typpeä suojakaasuna trifenyylifosfiinilla (0,020 g), tet-rakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,020 g) ja 1,0 ml:11a (0,5 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin etyyliasetaattiliuosta. 20 minuuttia kuluttua reaktioseos-ta uutettiin vedellä (3 x 10 ml), ja yhdistettyjä vesipi-20 toisia uutteita pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Kromatografoitiin käänteisfaasisi-likageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 6,5 cm, eluointi 0 -5 % CH3CN vedessä), jolloin saatiin 0,151 g (75 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena pakas-25 tuskuivauksen jälkeen: [a]” -4,1“ (c 1,0, H20).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % (p-Bondapak-C1B, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 2 ml/min, UV-detektori 304 nm, vii-pymäaika 10,0 minuuttia.
30 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 7^nax: 266 (7243) ja 306 nm (10819); IR (KBr) V'lax: 1750 (B-laktaamin C = 0) ja 1590 cm-1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) δ: 1,28 (d, J = 6,33 Hz, 3H, 35 CH,CHO), 1,1 - 1,7 (m, 6H, CH2CH2CH2CH2OH), 3,13 (m, 1H, 140 96311 H-4), 3,32 (dd, JH6 H5 = 2,50 Hz, JH6 H1. = 5,93 Hz, 1H, H-6), 3,56 (t, J - 6,3 Hz, CH2OH), 4,14 (ABq, JAB = 14,5 Hz, Δ\> 24,6 Hz, 2H, SCH2), 4,0 - 4,3 (m päällekkäin SCH2:n kanssa, 2H, H-5 ja CH3CHO), 7,37 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,52 (d, 5 J = 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,86 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,47 ppm (d, J = 4,9 Hz, 1H, pyridiinin H-6).
Esimerkki 14 (4R,5S,6S)-4-[4"-(N-formimidoyyli)aminobutyyli]-6-[ (1 ’ R) -1' -hydroksietyyli] -3- [ (pyridin-2-yyli)metyy-10 litio]-7-i^kso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2- karboksyy1ihappo N-H _.-
JJ
OH <CHg)4NHg 0H (CH2)4N^ h
IS - ^0—^0 — JQ
C°*“ 0 COjH
(4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok-20 sietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsa- bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,098 g, 0,25 mmol) fosfaattipuskuriliuoksen (25 ml, 0,04 M pH 7,0) pH säädettiin 0 °C:ssa arvoon 8,5 0,1 M natriumhydroksi-dilla. Sen jälkeen lisättiin bentsyyliformimidaattivety-25 kloridia (0,43 g, 2,5 mmol) pieninä annoksina (¾ 10 min) ^ niin, että pH pidettiin samalla noin arvossa 8,3 0,1 M NaOH:lla. 15 minuutin jälkeen 0-5 °C:ssa liuoksen pH säädettiin arvoon 7,0 0,1 M HCl:lla, ja vesifaasi pestiin EtOAcrlla. Sen jälkeen vesifaasia pidettiin tyhjössä or-30 gaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi, ja sitten kro-matografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C1£, 3,5 x 6,5 cm, eluointi asetonitriilin gradientilla 0 -5 % vedessä). UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,076 g (72 %) otsikon yhdistettä valkoisena 35 amorfisena jauheena: [a]B2 + 2,4° (c 1,0, H20) .
il : li i lilli i i im . 1 96311 141
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,9 % p-Bondapak-CI8:11a, 3.9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 306 nm, viipymäaika 8,68 minuuttia.
5 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) xmax: 266 (6680) ja 306 nm (8980); IR (KBr) vmax: 1758 (B-laktaamin C=0), 1715 ja 1590' (karboksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,28 (d, J = 6,31 Hz, CH,-10 CHO), 1,2 - 1,7 ,*(m, 6H, CH2CH2CH2CH2NH), 3,16 ( t, 1H, H-4), 3,3 (m, 3H, H-6 ja CH2NHCH = NH, päällekkäin), 4,0 -__ 4,3 (m, 4H, H-5, CH3CH0 ja SCH2 päällekkäin), 7,37 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,53 (d, J = 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,79 (s, 1H, NH-CH=NH), 7,86 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 15 8,47 ppm (d, J = 4,4 Hz, 1H, pyridiinin H-6).
Esimerkki 15 (4R,5S,6S)-4-[2"-(N-guanidinyyli)aminopropyyli]-6-[ (1' R) -1' -hydroksietyyli] -3- [ (pyridin-2-yyli)metyyli tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-20 karboksyylihappo
NH
OH <CH2)3N'. qh (Ch2)3NH-C
i-j0 — COcK'a co2h
Liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli )-6- [ (1' R ) -1' -hydroksietyyli] -3- [ ( pyridin-30 2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni- 2-karboksylaatti (120 mg, 0,28 mmol) [saatu käsittelemällä esimerkin 7 vaiheen H yhdistettä yleisellä menettelyllä, joka on kuvattu esimerkin 6 vaiheessa D] 0,1 M pH-arvon 5.9 omaavan fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (8,4 ml, 35 0,84 mmol) ja vedessä (8 ml), ravistettiin Parrin hydraus- 96311 142 laitteessa 276 - 345 kPa:n (40 - 50 psi:n) vetypaineessa 90 minuuttia 5-15 °C:ssa (lämpötila reaktion lopussa) käyttäen 30-prosenttista Pd:a celitellä (60 mg) katalyyttinä. Katalyytti poistettiin suodatettiin, ja vesipitoisen 5 liuoksen pH säädettiin arvoon 8,5 0,1 N NaOH:n vesiliuoksella. Tähän liuokseen lisättiin 5 °C:ssa (jäähaude) ami-noiminometaanisulfonihappoa (360 mg, 3,0 mmol), ja pH pidettiin välillä 8 - 8,5 lisäämällä 0,10 N NaOH:n vesi-liuosta. Tätä seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja sen jäl-10 keen neutraloituiin pH-arvoon 7,0 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Se vietiin kaksi kertaa Cie-p-Bondapak-pylvään (6 g ja 3 g) läpi (H20 -* 15 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon v yhdiste (15 mg, 13 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 100 % (304 nm, 10 % CH3CN/ 15 KH2P04 0,01 M, pH 7,4), viipymäaika 7,3 minuuttia; UV (H20) ^max: 266 (5830), 306 (8250); IR (Nujol) ^Bax: 3500 - 3000 (OH ja NH2), 1755, 1590 (C=0) ja 1660, 1630 cm'1 (C=N); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,47 - 8,45 (1H, m, aro-20 maattinen H), 7,9 - 7,81 (1H, m, aromaattinen H), 7,54 - 7,50 (1H, leveä d, J = 7,9 Hz, aromaattinen H), 7,40 -7,34 (1H, m, aromaattinen H), 4,25 - 4,16 (1H, m, H-l'), 4,22, 4,17, 4,10, 4,03 (2H, ABq, J = 14,4 Hz, CH2-pyridii-ni), 4,06 (= 0,5 H, d, J = 2,3 Hz, osa H-5:a), 3,24 (1H, r 25 dd, J = 2,7 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 3,2 - 3,1 (2H, m, CH2-N), 3,27 - 3,1 (1H, m, peittynyt H-4), 1,7 - 1,1 (4H, m, CH2-CH2) ja 1,28 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3) .
Esimerkki 16
Natrium-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-4-30 ( 2"-metyylikarbamoyylioksietyyli)-3-[(pyridin-2- yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept- 2-eeni-2-karboksylaatti OH CH2CHP0CGNHCH3 35 [(^1 —f \_scK2-k-; // COONa 96311 143 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l,-(tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli]-4-(2"-metyylikarbamoyylioksi-etyyli) -3- [ (pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5
I I
OS i + CHjCHjOH OSl♦ CH2CH2OCONHCH3 —rK Π ch3n=c=o 10 COO^'V^' w Kylmään (O °C) liuokseen, jonka muodosti esimerkin 6 vaiheessa A valmistettu allyyli-(4R,5S,6S)-[(1'R)-l'-(tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)]-4-(2"-hydroksi-15 etyyli)-3-[ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,27 g, 0,52 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna metyyli-isosyanaattia (0,31 ml, 5,23 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin välillä 0-5 eC:ssa 48 tuntia, jona aikana 20 n. 10 % lähtöaineesta jäi reagoimatta. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin vaahto, joka kromatografoitiin sili-kalla (2,5 x 9 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin ja eluoi-tiin CH2Cl2:n ja Et0Ac:n seoksella (1:1, gradienttieluoin-ti), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,25 g, 87 %).
"f 25 1H NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 0,02 (s, 3H,
SiCH3), 0,04 (s, 3H, SiCH3), 0,82 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,24 (d, CH3, J Ch3 . i * = 6/14 Hz), 1,69 - 1,85 (m, 1H, CH2), 2,05 -2,18 (m, 1H, CH2), 2,79 (d, NHCH3, J = 4,81 Hz), 3,16 (dd, H-6, J56 = 2,33 Hz, J61. = 6,74 Hz), 3,47 (t, H-4, J = 30 9,69 Hz), 3,84 - 4,39 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2) , 4,57 - 4,83 (m, 0CH2, allyyli), 5,18 - 5,46 (m, =CH2, al-lyyli), 5,8 - 6,02 (m, CH=, allyyli), 7,19 (m, H-5, py, J4.5 = 7,72 Hz, J5 6 = 4,77 Hz), 7,48 (d, H-3, py, J3.4 = 7,82 Hz), 7,69 (dt, H-4, py, J4 6 = 1,64 Hz), 8,45 (dd, H-35 6, py).
96311 144 B. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]- 4- (2"-metyylikarbamoyylioksietyyli ) -3- [ (pyridin-2-yyli) -metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti
5 I
OS i * CH2CH20C0NHCH3 oh CHgCHgOCONHCHj cHf°H.
^—Ν'/ f* Bu4N Γ /THF ^—Ν'/ N
cooXX'' cooXX^ 10 -*
Kylmää (O °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi- ___ etyyli )]-4-(2"-metyylikarbamoyylioksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-15 2-karboksylaatti (0,25 g, 0,43 mmol) kuivassa THF:ssa (5 ml), käsiteltiin etikkahapolla (0,15 ml, 2,6 mmol), ja sen jälkeen 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin THF-liuok-sella (1,3 ml, 1,3 mmol). Seosta sekoitettiin välillä 0 -5 °C 120 tuntia, jona aikana noin puolet lähtöaineesta jäi 20 reagoimatta. Seos neutraloitiin 0 °C:ssa 1 M NaHC03-liuok-sella (2,6 ml, 2,6 mmol) ja uutettiin EtOAc:lla (3 x 50 ml). Yhdistetty orgaaninen uute pestiin peräkkäin kylmällä 1 M NaHC03-liuoksella, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saa-‘ 25 tiin kiinteää ainetta sekä siirappimaista ainetta, joka kromatografoitiin silikalla (2,5 x 9 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, ja eluoitiin ensin CH2Cl2:n ja EtOAcrn seoksella (gradienttieluointi), sitten EtOAcrlla ja lopuksi CH3CN:n ja CH2Cl2:n seoksella (1:1, gradienttieluointi), jolloin 30 saatiin otsikon yhdiste valkoisena jauheena (0,1 g, 50 %).
:H NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 1,37 (d, CH3, JCK3.1· = 6,25 Hz), 1,66 - 1,84 (m, 1H, CH2), 2,11 - 2,27 (m, 1H, CH2), 2,78 (d, NHCH3, J = 4,95 Hz), 3,32 (dd, H-6, J5.6 = 2,52 Hz, J6 = 8,47 Hz), 3,45 (t, H-4, J = 35 10,26 Hz), 3,93 - 4,31 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 96311 145 4,59 - 4,87 (m, OCH2, allyyli), 5,19 - 5,48 (m, =CH2, al-lyyli), 5,84 - 6,04 (m, CH=, allyyli), 7,19 (m, H-5, py, J4,5 = 7,71 Hz, J5 6 = 5,31 Hz), 7,41 (d, H-3, py, J3 4 = 7,85 Hz), 7,66 (dt, H-4, py, J< 6 = 1,77 Hz), 8,45 (m, H-6, 5 PYr J3.6 = °'96 Hz)· C. Natrium-(4R,5S,6S)-6-[(1 · R) -1'-hydroksietyyli]- 4- (2"-metyylikarbamoyylioksietyyli ) -3- [ (pyridin-2-yyli) -metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti 10 ..Λ OH CHgCH20C0NHCH3 ch2ch2oconhch3 w ^V-rA (f*| Pd[Ph3P)4 XXr_r-\ cru 0 C00/N<^ ^ COONa 15
Kylmää (0 eC) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R, 5S, 6S )-6- [ (1'R)-l ’ -hydroksietyyli] -4- ( 2" -metyylikar-bamoyylioksietyyli )-3-[ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti(0,094 g, 20 0,204 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), käsiteltiin Pd [Ph3P] 4:11a (0,03 g, 0,026 mmol), ja sen jälkeen 0,5 M natrium-2-etyy-liheksanoaatin EtOAc-liuoksella (0,45 ml, 0,224 mmol). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 2 tuntia ja sen jälkeen uutettiin vedellä (3 x 15 ml). Yhdistetty vesifaasi vietiin 25 y-Bondapak-C18-käänteisfaasisilikapylvään läpi (2,5 x 9 cm). Otsikon yhdiste eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (95:5, gradienttieluointi ) ja saatiin valkoisena höytälei-senä kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen (0,062 g, 69 %).
30 Puhtaus HPLCrn mukaan: 99,7 %, UV-toteaminen <· 304 nm:ssa y-Bondapak-C18: 11a (4 mm x 30 cm), 8 % CH3CN pH- arvon 7,4 omaavassa fosfaattipuskurissa, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 9,04 minuuttia.
UV (pH 7,4) ?.max: 304 (8778).
35 IR (nujol) v max: 1750 cm-1 (C=0, B-laktaami), 1710 cm'1 (NHC0).
146 .9631Ί lH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,305 (d, CH3, JCH3 r = 6,38 Hz), 1,6 - 1,73 (m, 1H, CH2), 2,00 - 2,07 (m, 1H, CH2), 2,71 (s, NCH3), 3,23 (t, H-4, J = 9,7 Hz), 3,48 (dd, H-6, J5,6 = 2,61 Hz, J6>1. = 5,84 Hz), 3,93 - 4,31 (m, 6H, 5 CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,39 (dd, H-5, py, J56 = 4,84 Hz, J4 5 = 7,74 Hz), 7,52 (d, H-3, py, J3>4 = 7,84 Hz), 7,89 (dt, H-4, py, J4 6 = 1,72 Hz), 8,48 (d, H-6, py).
Esimerkki 17 (4R, 5S, 6S) -4- (4" - am inobu tyyli) -3-[ (2-syaanietyyli) -10 tio]-6-[ (l^R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabi- syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH <CH2)„NH2 w
HZc^"”"'r~rK
15 J_/y— S CHgCHgCN
co2h A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidi-20 metyylisilyylioksietyyli] -4- (4"-tert-butyylidimetyylisi-lyylioksibutyyli) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
0T8DHS <εμ2)4οΤΒΟη5 O'SDnS ( CH2 ) <0T = Qf*.S
-- H3tr^%rf^SCH,CHiCN
30 Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6- [(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-(4 " -tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli)-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (6,87 mmol, valmistettu 4,0 g:sta, 6,87 mmol:sta diatsoprekursoria 35 esimerkin 12 vaiheen I menettelyn mukaisesti) kuivassa 96311 147 CH3CN:ssa (40 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,56 ml, 7.52 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N, N-di-isopropyy-lietyyliamiinia (1,31 ml, 7,52 mmol) 5 minuutin aikana.
5 Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiini-kide, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Sitten liuos jäähdytettiin -20 °C:seen ja käsiteltiin B-merkaptopropionitrii-' Iillä [L. Bauer ja T.L. Welsh, J. Org. Chem., 26^ (1961) 1443] (1,23 g, 14,1 mmol) asetonitriilissä (5 ml) ja sen 10 jälkeen N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,31 ml, 7.52 mmol). Sitten liuoksen lämpötilan annettiin nousta ^ 0-5 °C:seen, ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Sen jäl keen reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla, pestiin kylläisellä NaHC03:n vesiliuoksella, suolaliuoksella ja kuivat- 15 tiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (5x9 cm). Eluoi-tiin EtOAcrn gradientilla (0 - 5 %) tolueenissa, jolloin saatiin 3,42 g (80 %) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) vmax: 2260 (CN), 1778 (B-laktaamin 20 C=0) ja 1715 cm'1 (esterin C=0); ΧΗ NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04 ja 0,08 (2 x s, 2 x 6H, SiCH3), 0,88 ja 0,89 (2 x s, 2 x 9H, Si-tert-Bu), 1,27 (d, J = 6,14 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,5 - 3,2 (m, 6H, SCH2CH2CN, H-4 ja H-6 ^ 25 päällekkäin), 3,61 (m, 2H, CH20Si), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H- 5 ja CH3CHO päällekkäin), 4,7 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
B.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli) -3- [ (2- syaani etyyli) tio] -4 - (4" -hyd-30 roksibutyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2- karboksylaatti
OTBOnS <CHg)40TBDnS 0T50“S ()40H
35 H=C Yt>-scH2cHfcN ^ ΧΓ-Λ sc o Λ / ox 96311 148
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-(A" -tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli ) -3- [ ( 2-syaanietyy-li )tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-5 laatti (3,42 g, 5,49 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (75 ml), käsiteltiin 0-5 eC:ssa etikkahapolla (1,9 ml,
33.2 mmol) ja sen jälkeen 16,5 miellä (16,5 mmol) 1,0 M
tetrabutyyliammoniumfluoridin tetrahydrofuraaniliuosta.
24 tunnin jälkeen 4 °C:ssa reaktioseos laimennettiin 10 EtOAcilla, pestiini kylläisellä NaHC03:n vesiliuoksella, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silika-geelillä (5 x 11 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAcrn seoksella (1:1 -* AcOEt), jolloin saatiin 1,67 g (68 %) otsikon 15 yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) 3500 (OH), 2250 (CN), 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) δ: 0,08 (s, 6H, SiCH3), 0,88 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,29 (d, J = 6,12 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 20 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,68 (m, 2H, CH2CN), 2,7 - 3,2 (m, 3H, H-4 ja SCH2), 3,21 (dd, JH6H5 = 2,62 Hz, jh6.hi = 6,78 Hz, 1H, H- 6), 3,66 (m, 2H, CH20H), 4,2 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5.2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
25 C. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6- ^ [ (1 'R) -1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30 QiBDflS 0 T B □ h S (ch2)4N3 h3c^%p^^_SCH£CH2CN, —^3-. Hsc ^[jA-sch2ch2cn o/ 0 co2/^ 149 P6311
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-syaanietyyli ) tio]-4-(4"-hydroksibutyyli) -7-okso-l-atsa-bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,67 g, 5 3,28 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (250 ml), käsiteltiin -20 °C:ssa trifenyylifosfiinilla (1,38 g, 5,26 mmol) ja 7,6 ml:11a (5,7 mmol) 0,75 M hydratsoiiniha-' pon tolueeniliuosta. Sen jälkeen lisättiin tipoittain 5 minuutin aikana dietyyliatsodikarboksylaattia (0,90 ml, 10 5,7 mmol), ja saastua seosta sekoitettiin samassa lämpöti lassa 30 minuuttia. Reaktio pysäytettiin lisäämällä EtOAc:a ja kylläistä natriumbikarbonaatin vesiliuosta. Orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin alipaineessa. Jäljelle jäänyttä öl-15 jyä trituroitiin tolueenin (25 ml) kanssa ja suodatettiin kiteisen dietyylihydratsoiinidikarboksylaatin poistamiseksi. Suoritettiin samanlainen käsittely dietyylieetterillä trifenyylifosfiinioksidin poistamiseksi, minkä jälkeen suodos kromatografoitiin silikageelillä (4,5 x 11 cm). 20 Eluoitiin tolueenin ja EtOAcrn seoksella (8:2), jolloin saatiin 1,40 g (80 %) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) v.„: 2250 (CN), 2100 (N3), 1765 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,08 (s, 6H, SiCH3), 0,89 X 25 (s, 9H, t-Bu), 1,30 (d, J = 6,12 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2 - 1.9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,68 (m, 2H, CH2CN), 2.9 - 3,2 (m, 3H, H-4 ja SCH2), 3,17 (dd, JH6 H5 = 2,58 Hz, jh6.hi = 6,9 Hz, H-6), 3,32 (leveä t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2N3), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO päällekkäin), 4,74 (m, 2H, 30 allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
150 96311 D. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OTBDns <CH , N 0H <ch2)4n3 5 J j ! Ί H3CArA_SCH CH CN TBPT^COH^ H3C VfV.SCH2CH£CN .
/^ cOg/^ co2^^ 10 Liuosta, muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"- atsidobutyyli )-6- [ (1' R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyyliok-sietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,40 g, 2,62 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (40 ml), käsiteltiin 0 -15 5 eC:ssa etikkahapolla (1,0 ml, 17,5 mmol) ja sen jälkeen 8,4 ml :11a (8,4 mmol) 1,0 M tetrabutyyliammoniumfluoridin tetrahydrofuraaniliuosta. Liuosta pidettiin 5 °C:ssa 10 vuorokautta. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin kylmällä EtOAc:lla, pestiin kylläisellä NaHC03:lla, suola-20 liuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelil-lä (4,5 x 11 cm) käyttäen EtOAc:n gradienttia tolueenissa (1:1 -* EtOAc) eluenttina.
Ensiksi saaduista fraktioista saatiin talteen 25 0,23 g (16 %) lähtöainetta. Seuraavista fraktioista saa- ~ tiin sitten 0,78 g (71 %) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) vmax: 3500 (OH), 2250 (CN), 2100 (N3), 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,40 (d, J = 6,26 Hz, 3H, 30 CH3CH0), 1,4 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 1,83 ' (d, J = 5,1 Hz, 1H, OH), 2,9 - 3,3 (m, 3H, H-4 ja SCH2), 3,22 (dd, JH6.H5 = 2,75 Hz, JK6 H1. = 7,37 Hz, 1H, H-6), 3,34 (leveä t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2N3), 4,25 (m päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH,CH0), 4,28 (dd, JH5.h6 = 2,75 Hz, Jhs.h< = 96311 151 9,58 Hz, 1H, H-5), 4,77 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
E.(4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-3-[(2-syaanietyy-li)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo-5 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo °.H °H <CHe)4NHj
H3^rO^SCH*CH*CN —1—-— H3^1rr>-SCHZCH2CN
10 cOg^^^. C0jH
'Λ w Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"- atsidoetyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-15 sylaatti (0,78 g, 1,86 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa käyttäen typpeä suojakaasuna tet-rakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,1 g) ja 4,1 ml:lla (2,05 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin EtOAc-liuosta. 30 minuutin kuluttua reaktioseos laimennet-20 tiin dietyylieetterillä (150 ml) ja uutettiin 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (3 x 75 ml). Yhdistetyn vesifaasin pH säädettiin arvoon 5,8 1 M NaH2P04:lla, ja orgaanisen liuottimen jäljet poistettiin tyhjössä. Vesipitoista liuosta hydrattiin 0-5 °C:ssa V 25 käyttäen 30-prosenttista palladiumia celitellä 310 kPa:n (45 psi:n) paineessa 2 tuntia. Sen jälkeen katalyytti suodatettiin celite-kerroksella ja pestiin vedellä. HPLC (μ-Bondapak-C18, eluointi 5 % CH3CN-H20 pH 6,8 fosfaattipuskuri) osoitti 4"-aminobutyyliyhdisteen (eluoitui ensin) ja 30 4-hydroksibutyyliyhdisteen 70:30-suhteisen seoksen.
Sen jälkeen liuos kromatografoitiin nopeasti kään-teisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C16, 4x7 cm, eluointi H20-CH3CN, 5 %) epäorgaanisten suolojen poistamiseksi. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin ja kromatografoitiin 35 samalla pylväällä käyttäen 5 % CH3CN-H20, 0,01 M pH-arvon 152 >ού 11 6.8 omaavaa fosfaattipuskuria eluenttina. Saatiin kaksi pääfraktiota, joista poistettiin jälleen suolat käänteis-faasisilikageelillä. Ensimmäinen fraktio lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,33 g (50 %) otsikon 4"-aminobutyyliyh- 5 distettä valkoisena amorfisena jauheena. HPLC:n ja 1H-NMR:n mukaan tämä fraktio oli noin 90-prosenttisen puhdas ja siinä oli jonkin verran 4"-hydroksibutyyliyhdistettä ja muita epäpuhtauksia.
Toisesta fraktiosta saatiin 0,102 g (14 %) 4-hyd-10 roksibutyyliyhdis^että valkoisena amorfisena jauheena, joka oli 90-prosenttisen puhdas HPLC:n ja 1H-NMR:n mukaan ja joka käytettiin esimerkissä 18. _
Edellä mainittu 4’-aminobutyyliyhdiste kromatogra-foitiin varovasti käänteisfaasilla (p-Bondapak-C18, samat 15 olosuhteet kuin edellä), jolloin saatiin puhtaat fraktiot otsikon yhdistettä: [a]^2 + 60,4“ (c 1,0, H20).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98,5 % p-Bondapak-C18:11a, 3.9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 306 nm, vii- 20 pymäaika 5,25 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) xmax: 300 nm (10267); IR (KBr) Vr,»*: 2250 (CN), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 1690 cm'1 (karboksylaatin C=0); 25 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,38 Hz, 1H, ~ CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,86 (m, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,02 (t, J = 7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,4 (m, JH6 H5 = 2,66 Hz, 2H, H-6 ja H-4 päällekkäin) ja 4,3 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin).
;i ; an i in» 1.1.44U . . .
«311
Esimerkki 18
Kalium-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-(4"- hydroksibutyyli)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-7-ok- so-l-atsabisyklo[3.2,0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 OH <CHj)4H3 oh (CH.) oh 1 Jf J j
n s) Hj * butyyli * J j^/) SCHzCH2CN
COjK
10 . Raakatuott^ena saatu fraktio, joka sisälsi 4"-hyd- roksibutyyliyhdistettä (0,102 g, 90 % puhdas) ja joka saa-w tiin hydraamalla atsidoprekursoria esimerkin 17 vaiheessa E, puhdistettiin preparatiivisella HPLC:llä (Zorbax ODS, Dupont, 21,2 mm x 25 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 6,8 15 kaliumfosfaattipuskuri, UV-detektori), minkä jälkeen poistettiin suolat p-Bondapak-C16:11a. Lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,045 g (45 %:n saanto) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena.
Puhtaus HPLC:n mukaan (99 % p-Bondapak-C18:11a, 20 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4, fosfaat tipuskuri, virtausnopeus 0,6 ml/min, UV-detektori 306 nm, viipymäaika 6,93 minuuttia; UV (H20, pH 7,4, fosfaattipuskuri) ?.nax: 302 nm (7364); . 25 IR (KBr) vmax: 2250 (CN), 1750 (B-laktaamin C=0) ja 1600 cm'1 (karboksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,41 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,86 (m, 2H, CH2CN), 2,8 - 3,3 (m, 2H, SCH2) , 3,35 (m, 1H, H-4), 30 3,43 (dd, JH6.H5 = 2,59 Hz, JH6H1 = 6,0 Hz, 1H, H-6), 3,62 (t, J = 6,3 Hz, 2H, CH20H) ja 4,3 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin).
154 s i I
Esimerkki 19 (4R, 5S, 6S)-3-[(2-syaanietyyli )tio]-4-[4"-(N-form-imidoyyli)aminobutyyli] - 6- [ (1' R) -1' -hydroksietyy-li] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-5 boksyylihappo
N-H
II
JH oh <CHi,4^S
h —f\ __ H \ 'H
10 /) 3 ΓΗ)—SCHgCHgCN
C0?H COjH w ( 4R, 5S, 6S )-4-(4"-aminobutyyli )-3 -[ ( 2-syaanietyyli )-15 tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-1-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,113 g, 0,32 mmol) kylmän (0 - 5 °C) fosfaattipuskuriliuoksen (30 ml, 0,04 M, pH 7,0) pH säädettiin arvoon 8,5 0,1 M NaOHrlla. Sen jälkeen lisättiin bentsyyliformimidaattivetykloridia (0,54 g, 20 3,17 mmol) pieninä annoksina niin, että pH pidettiin välillä 8,0 - 8,5 0,1 N NaOHrlla (n. 10 min). 10 minuutin kuluttua pH säädettiin arvoon 7,0 0,1 N HClrlla, ja reak-tioseos pestiin EtOAcrlla. Vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi, ja sen jäl-·. 25 keen kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-
Bondapak-C18, 3,5 x 7 cm). Eluoitiin asetonitriilin gra-dientilla (0 - 10 %) vedessä, jolloin saatiin 0,106 g (86 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen: [a]p2 + 53,5° (c 1,0, H20).
30 Puhtaus HPLCrn mukaan: 93 % p-Bondapak-Cls:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH,CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 7,74 minuuttia.
UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) >.rax: 300 nm 35 (10481); 96311 155 IR (KBr) v max * 2250 (CN), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 1715 cm*1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,34 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 -5 2,9 (m, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,3 (m, 2H, SCH2), 3,3 - 3,5 (m, 4H, H-4, H-6 ja CH2N), 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin) ja 7,81 ppm (s, 1H, CH=N).
Esimerkki 20 (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio)-4-(4"-N,N-dime-10 tyyli amino,lj>utyyli)-6-[ (1'R)-1' -hydroksietyyli]-7- okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-happo OH (CHj)^NHg OH (CH?),n/CH:3
f ! HCH0 ! I VCH
15 ;H NaBH3CN , H
3 I /)-SCHjCHjCN RcOH-H-0 3 | ,)-SCH,CH,CN
η
COjH COjH
Liuos, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyy-20 li )-3- [ ( 2-syaanietyyli ) tio] - 6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,054 g, 0,15 mmol) vedessä (1 ml) 0 - 5 °C:ssa, laimennettiin asetonitriilillä (1 ml), ja sen jälkeen käsiteltiin 37-prosenttisella formaldehydin vesiliuoksella ^ 25 (0,075 ml, 0,81 mmol), ja sen jälkeen natriumsyaaniboori- hydridillä (0,024 g, 0,38 mmol) ja yhdellä tipalla etikka-happoa. 15 minuutin kuluttua reaktio pysäytettiin lisäämällä 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja orgaaninen liuotin poistettiin tyhjössä. Sen jälkeen vesi-30 faasi kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-1 Bondapak-C16, 3,5 x 6,5 cm). Eluoitiin asetonitriilin gra- dientilla (0 - 10 %) vedessä, jolloin saatiin 0,016 g (27 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena lyofilisoinnin jälkeen.
156 96ό 11
Puhtaus HPLC:n mukaan: 96 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,0, fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 10,9 minuuttia.
5 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) xoax: 300 nm (9907); IR (KBr) umax: 2250 (heikko CN), 1759 (B-laktaamin C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,37 Hz, 3H, 10 CH3CH0), 1,3 - 1_^ (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,87 (s, 6H, N(CH3)2), 2,87 (m päällekkäin NCH3:n kanssa, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,15 (=t päällekkäin SCH2:n kanssa, 2H, CH2N(CH3)2), 3,38 (dd, JH6 H5 = 2,6 Hz, JH6 H1 = 6,25 Hz, 1H, H-6), 3,38 (m päällekkäin H-6:n kans- 15 sa, 1H, H-4) ja 4,27 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0).
Esimerkki 21
Natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1’ R)- 1 *-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-ok- so-1-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 nu
.°H
μ _Λ
3 M
.—N // Χ/Χ0Η °χ I _ 25 COpNa A. (3S,4R)-3-[(1’R)-1’-hydroksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(3-atsidopropyyli)-3"-diatso-3”-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni 30 CS i * <CH2)-N3 OH < C H g)3 N 3 iXi ΛΧ(! 35 0 96311 157
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti esimerkin 7 vaiheen E (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(3-atsidopropyyli)-3" -diatso-3" -allyylioksikarbonyyli-2" -oksopropyyli ] atse-5 tidin-2-oni (2,4 g, 5,0 mmol) EtOH:ssa (50 ml), lisättiin 2 N HCl:n vesiliuosta (7 ml). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 20 tuntia. Liuoksen pH säädettiin arvoon 7 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (15 ml) ja etanoli poistettiin tyhjössä. Saatu jäännös laimennettiin EtOAc:lla, 10 pestiin 1 M NaH£03:n vesiliuoksella (18 ml), vedellä (10 ml), suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS0<). w Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään (40 g) läpi (5, 10, 20, 40, 60, 80 % EtOAc/CH2Cl2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,7 g, 93 %) öljynä, joka kiteytyi.
15 IR (CH2C12) vb„: 3600, 3500 (OH), 3400 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), 1765, 1715 ja 1650 cm*1 (OO); XH NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,84 (1H, m, vinyylin H), 6,01 (1H, leveä s, NH), 5,42 - 5,29 (2H, m, vinyylin H), 4,75 - 4,63 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,19 - 4,01 20 (1H, m, H-l' ), 4,02 - 3,89 (1H, m, H-l"), 3,83 (1H, dd, J = 6,5 Hz, J = 2,1 Hz, H-4), 3,31 - 3,25 (2H, m, CH2N3), 3,01 (1H, dd, J = 1,9 Hz, J = 6,9 Hz, H-3), 2,23 (1H, d, J = 3,9 Hz, OH), 1,98 - 1,75 (1H, m, HCH), 1,73 - 1,48 (3H, m, CH2-HCH) ja 1,29 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3) .
25 B. Allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- [ (1' R) -1' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-at sabi syklo [3.2.0] — heptaani-2-karboksylaatti OH <CHg>3N3 OH (CH?),N'
30 J 1 ,·> J J
1 II C02n^s -► Γ )=0 - 96311 158
Liuosta, jonka muodostivat (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-hyd-roksietyyli]-4-[(1"R)-l"-(3-atsidopropyyli)-3"-diatso-3"-allyy1ioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (1,46 g, 4,00 mmol) ja Rh(0Ac)2 (56 mg) bentseenissä 5 (140 ml), kuumennettiin palautusjäähdyttäen 40 minuuttia.
Bentseeni poistettiin tyhjössä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,5 g, 100 %) öljynä; IR (CH2C12) 3610 (OH), 2100 (N3), 1770 ja 1745 cm'1 ( C = 0 ); 10 XH NMR (CD.Jlj, 200 MHz) 6: 5,96 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,39 - 5,25 (2H, m, vinyylin H), 4,75 - 4,64 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,66 (1H, s, H-2), 4,35 - 4,26 (1H, v m, H-1 ' ) / 4,29 (1H, dd, J = 2,2 Hz, J = 8,1 Hz, H-5), 3,45 - 3,25 (2H, m, CH2N3), 3,29 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 15 7,7 Hz, H-6), 2,8 - 2,6 (1H, m, H-4), 1,9 - 1,5 (4H, m, OH, CH2-CH2) ja 1,42 ppm (3H, t, J = 6,2 Hz, CH3) .
C. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- [ (1 ’ R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 2H <ch2>3n3 oh <ch?),n,
Xj X-A
Ar ' _ 25 C02\^ C0e\^
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4 - ( 3"-atsidopropyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroks ietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani- 30 2-karboksylaatti (1,5 g, 4,00 mmol) CH,CN:ssa (30 ml), lisättiin tipoittain difenyylikloorifosfaattia (0,88 ml, 4.4 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,76 ml, 4.4 mmol). Seosta sekoitettiin 45 minuuttia, ja saatu eno-lifosfaatti silyloitiin lisäämällä peräkkäin trimetyylisi- 35 lyylikloridia (0,57 ml, 4,4 mmol) ja N, N-di-isopropyyli- 96311 159 etyyliamiinia (0,76 ml, 4,4 mmol). Seosta sekoitettiin 35 minuuttia, ja sen jälkeen suojattua enolifosfaattia käsiteltiin 2-merkaptoetanolilla (624 mg, 8,00 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,39 ml, 8,00 mmol).
5 Seosta sekoitettiin, annettiin seistä 5 °C:ssa 24 tuntia, ja sen jälkeen laimennettiin kylmällä EtOActlla (100 ml).
Se pestiin kylmällä 1 N HCl:n vesiliuoksella (1 x 50 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 50 ml), kylmällä 1 M NaHC03-liuok-sella (1 x 50 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 50 ml), suola- 10 liuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös laimennettiin THF:11a (30 ml, tislattu käyttäen Na/bentsofenonia) ja käsiteltiin ensin AcOHrlla (1,3 ml, 24 mmol) ja sen jälkeen tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuoksella THF:ssa (12,0 ml, 15 12 mmol) -25 °C:ssa (CH3CN/hiilihappojäähaude). Seosta se koitettiin 20 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin kylmällä EtOAc:lla (150 ml). Se pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (3 x 50 ml), jääkylmällä vedellä (3 x 50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). 20 Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös vietiin silikagee-li-flash-pylvään (100 g) läpi (EtOAc-CH2Cl2; 10 % -► 100 %), jolloin saatiin otsikon yhdiste (795 mg, 50 %) puolikitei-senä öljynä; IR (CH2C12) Vmax: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 ja w 25 1710 cm'1 (C=0); *Η NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,90 (1H, m, vinyylin H), 5,50 - 5,23 (2H, m, vinyylin H), 4,82 - 4,63 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,27 - 4,19 (lh, m, H-l’), 4,22 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,9 - 3,75 (2H, m, CH20), 30 3,42 - 3,26 (2H, m, CH2-N3 ja H-4), 3,24 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,3 Hz, H-6), 3,08 - 2,8 (2H, m, SCHZ), 2,3 - 1,9 (1H, leveä s, OH), 1,95 - 1,54 (4H, m, CH2-CH2) ja 1,37 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
160 96ό 11 D. Natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 oh <ch2)3n3 OH (Ch2)3n3 C02Na 10
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-( 3"-atsidopropyyli )-6- [(1'R)-1' -hydroksietyy- w li] -3- [ (2-hydroksietyyli )tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (63 mg, 0,16 mmol) CH2Cl2:ssa 15 (7 ml), käsiteltiin Pd( PPh3 )4:11a (12 mg, 0,012 mmol) ja 0,5 M natrium-2-etyyliheksanoaatin liuoksella etyyliasetaatissa (0,32 ml, 0,16 mmol). Seosta sekoitettiin 5 °C:ssa 40 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin dietyyli-eetterillä (30 ml) ja uutettiin kylmällä pH-arvon 7,0 20 omaavalla puskuriliuoksella (3 x 3,5 ml) ja vedellä (1 x 3 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyy-lieetterillä (2 x 10 ml), vietiin p-Bondapak-C18-käänteis-faasipylvään (15 g) läpi (H20, 1, 2, 3, 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (30 mg, 50 %) lyofilisoinnin 25 jälkeen. ^
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98,6 % (5 % CH3CN/puskuri pH 7,4, 0,014 M), viipymäaika 8,87 minuuttia; UV (H20) *„ax: 304 (10770); IR (Nujol) 3600 - 3100 (OH), 2100 (N3), 1750 30 ja 1600 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,35 - 4,20 (1H, m, H-l'), 4,22 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 3,8 - 3,7 (2H, m, CH20), 3,45 - 3,3 (4H, CH2N3, H-6 ja H-l'), 3,11 - 2,8 (2H, m, SCH2), 1,95 - 1,45 (4H, m, CH2CH2) ja 1,33 ppm (3H, 35 d, J = 6,4 Hz, CH3).
au i i l tl 96311 161
Esimerkki 22
Natrium-(4R,5S,6S)-6-[ (1 Ή) -1' -hydroksietyyli] -4- (2"-atsidoasetoksietyyli) -3- [ (pyridin-2-yyli)metyylitkö] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-5 karboksylaatti OH CH?CH?0C0CHpN, M-*® COONa A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1TR)-1'-(tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli) ] -4-(2"-atsidoasetoksietyyli)-3-15 [(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]- hept-2-eeni-2-karboksylaatti
I I
0Si+ CH2CH20H - CH2CH2OCOCH2N3 ^*""TrLsCHäjD K3CH;C°-CI.> X—Ν'/ ** pyridiini λ— ° loo^ 0
Liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-w 25 [ (1' R)-l' -(tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli) ] -4- ( 2"- hydroksietyyli )-3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,5 g, 0,96 mmol) [valmistettu esimerkin 6 vaiheessa A] CH2Cl2:ssa (10 ml) 0 °C:ssa, lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna 30 pyridiiniä (0,1 ml, 1,2 mmol) ja sen jälkeen atsidoasetyy-likloridin (0,14 g, 1,2 mmol) liuosta CH2Cl2:ssa (2 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 30 minuuttia ja sen jälkeen laimennettiin EtOAcilla (40 ml) ja pestiin peräkkäin kylmällä pH-arvon 7 omaavalla fosfaattipuskuriliuok-35 sella ja suolaliuoksella. Kuivaamisen jälkeen (MgS04) haih- 96311 162 dutettiin liuotin, jolloin saatiin siirappimainen aine, joka kromatografoitiin silikalla (2,3 x 11 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, ja eluoitiin CH2Cl2:n ja EtOAcrn seoksella (8:2, gradienttieluointi), jolloin saatiin otsikon 5 yhdiste siirappimaisena aineena (0,423 g, 73 %).
*H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04 (s, 3H, SiCH3), 0,05 (s, 3H, SiCH3), 0,8 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,28 (d, CH3, jch3.i· - 6/ 12 Hz), 1,70 - 1,87 (m, 1H, CH2), 2,16 - 2,33 (m, 1H, CHj), 3,16 (dd, H-6, J5 6 = 2,64 Hz, J6 r = 7,04 Hz), 10 3,67 (m, H-4, J = 2,1, 8,03, 10,63 Hz), 3,98 (s, CH2N3), 3,83 - 4,43 (päällekkäin, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 4,57 - 4,82 (m, OCH2-allyyli), 5,18 - 5,45 (m, =CH2, allyy- ^ li), 5,82 - 6,01 (m, CH=, allyyli), 7,17 (m, H-5, py, J4 5 = 7,68 Hz, J5>6 = 4,9 Hz), 7,38 (d, H-3, py, J3>4 = 7,83 Hz), 15 7,66 (dt, H-4, py, J4>6 = 1,8 Hz), 8,45 (m, H-6, py, J3 6 = 0,8 Hz).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]- 4-(2"-atsidoasetoksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-20 laatti OS i + CHgCH2OCOCHgN3 SH CHgCHgOCOCHgNj ^VA-.ch.-O) cbj,cooh^ // Bu4N*F-/THF //^ * 25 0 0
Kylmää (0 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli)]-4-(2"-atsidoasetoksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)-30 metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar- boksylaatti (0,423 g, 0,7 mmol) kuivassa THF:ssa (8 ml), käsiteltiin etikkahapolla (0,24 ml, 4,22 mmol) ja sen jälkeen 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuoksella THF:ssa (2,11 ml, 2,11 mmol). Seosta sekoitettiin välillä 0 - 5 °C 35 120 tuntia, jona aikana noin 25 % lähtöaineesta jäi rea- :l «tl i «iili i i t #i > 163 963 n goimatta. Seos neutraloitiin 0 °C:ssa 1 M NaHC03-liuoksella (4,3 ml, 4,22 mmol) ja uutettiin EtOAc:lla (3 x 50 ml). Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin peräkkäin kylmällä 1 M NaHC03-liuoksella, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin 5 (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin tahmeaa kumimaista ainetta, joka kromatografoitiin silikalla (2,5 x 12 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin ja eluoitiin CH2Cl2:n ja EtOAcin seoksella (3:7, gradienttieluointi), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,23 g, 68 %).
10 ‘H NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 1,38 (d, CH3,
JcHs.r = 6,24 Hz), 1,71 - 1,87 (m, 1H, CH2), 2,26 - 2,38 (m, w 1H, CH2), 3,24 (dd, H-6, J5 6 = 2,82 Hz, J6 r = 8,08 Hz), 3,7 (m, H-4, J = 2,16, 9,79 Hz), 3,86 - 4,53 (m, 8H, CH20, CH2N3, CHOH, H-5, SCH2), 4,57 - 4,85 (m, 0CH2, allyyli), 15 5,19 - 5,45 (m, =CH2, allyyli), 5,83 - 6,02 (m, CH=, allyy li), 7,14 - 7,21 (m, H-5, py, J3.5 = 1,03 Hz, J4 5 « 7,71 Hz, J5.6 = 4,82 Hz), 7,38 (d, H-3, py, J3 6 = 0,98 Hz, J3>4 = 7,86 Hz), 7,65 (dt, H-4, py, J3 4 = 7,86 Hz, J4 6 = 1,81 Hz), 8,46 (m, H-6, py).
20 C. Natrium-(4R,5S,6S)-6-((1'R)-11-hydroksietyyli]- 4-(2"-atsidoasetoksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti _ 25 OH CH2CH20C0CH2N3 M CHjCHjOCOCHjNj _Λ PdlPhjPU -r-Λ n ^ COONa 30 Kylmään (0 °C) liuokseen, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S )-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -4-( 2"-atsidoasetok-sietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-4-(2"-atsidoase-toksietyyli )-3-[ (pyridin-2-yyli Jmetyylitio] -7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,22 g, 35 0,46 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), lisättiin käyttäen argonia 96311 164 suojakaasuna Pd[Ph3P]4:a (0,08 g, 0,07 mmol) ja sen jälkeen 0,5 M natrium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAcrssa (1,01 ml, 0,5 mmol). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 2 tuntia ja sen jälkeen uutettiin vedellä (3 x 15 ml). Yhdistetty 5 vesipitoinen faasi vietiin p-Bondapak-Cie-käänteisfaasisi-likapylvään läpi (2,5 x 10 cm). Otsikon yhdiste eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (9:1, gradienttieluointi) ja saatiin valkoisena höytäleisenä kiinteänä aineena lyofili-soinnin jälkeen (0,1 g, 48 %).
10 *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,31 (d, CH3, JCH3 r = 6,4 Hz), 1,65 - 1,84 (m, 1H, CH2), 2,03 - 2,2 (m, 1H, CH2), 3,28 (dt, H-4, J = 2,72, 11,33 Hz), 3,48 (dd, H-6, J56 = w 2,64 Hz, J6 r = 6,03 Hz), 4,13 (s, 2H, CH2N3), 4,05 - 4,35 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,39 (m, H-5, py, J4 5 = 15 7,73 Hz, J5 6 = 4,92 Hz), 7,51 (d, H-3, py, J3.4 = 7,83 Hz), 7,87 (dt, H-4, py, J4.6 = 1,75 Hz), 8,48 (d, H-6, py).
Esimerkki 23 (4R,5S,6S)-6-[ (l'R)-l'-hydroksietyyli]-4-(2"-amino-asetoksietyyli) -3- [ (pyridin-2-yyli) metyylitio] - 7-20 okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyyli- happo OH CH8CHg0C0CH8N3 OH CHgCHgOCOCHgNHg fi^l 276 kPa 25 5 % Pd BaS04:11a -
i:00Na COOH
Liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -4-( 2"-atsidoasetoksietyyli )-3-30 [(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]- hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,08 g, 0,17 mmol) 0,05 M pH-arvon 7 omaavassa natriumfosfaattipuskuriliuoksessa (20 ml), hydrattiin 0 °C:ssa käyttäen 5 % palladiumia BaS04:lla (0,04 g) 276 kPa:n (40 psi:n) paineessa 30 mi-35 nuuttia. Katalyytti suodatettiin ja pestiin vedellä. Yh- 1 «H i 41 ii Iita*': 165 96ό 11 distetty vesipitoinen liuos vietiin p-Bondapak-Cie-kään-teisfaasisilikapylvään läpi (2,5 x 10 cm). Yhdiste eluoi-tiin veden ja CH3CN:n seoksella (9:1, gradienttieluointi). Ensimmäinen saatu yhdiste osoittautui natrium-(4R,5S,6S)-5 6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-4-(2"-hydroksietyyli)-3-[(py- ridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatiksi esterilohkaisun tuloksena. Otsikon yhdiste eluoitui seuraavaksi ja se saatiin valkoisena höytäleisenä kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen 10 (0,035 g, 49 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 93,1 % (todellinen >98 %) UV-toteaminen 304 nm:ssa, p-Bondapak-Cie (4 mm x 30 cm); 10 % CH3CN pH-arvon 7,4 omaavassa fosfaattipuskurissa; virtausnopeus 1 ml/min; viipymäaika: 5,37 minuuttia.
15 UV (pH 7,4) *MX: 304 (8260); IR (Nujol) vraax: 1750 cm'1 (β-laktaamin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, CH3, JCH3 = 6,4 Hz), 1,69 - 1,87 (m, 1H, CH2), 2,06 - 2,21 (m, 1H, CH2), 3,27 (dt, H-4, J = 2,79, 10,83 Hz), 3,46 (dd, H-6, 20 J5 6 = 2,7 Hz, J6 r = 6,33 Hz), 3,89 (s, 2H, CH2NH2), 4,04 -4,38 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,36 (m, H-5, py, J4 5 = 7,73 Hz, J5 6 = 5,08 Hz), 7,5 (d, H-3, py, J3.4 = 7,93 Hz), 7,85 (dt, H-4, py, J46 = 1,77 Hz), 8,45 (d, H-6, PY)· 25 Esimerkki 24 (4R, 5S, 6S) -4 - (2"-aminoetyyli) -6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3- [(pyridin-3-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo [3 . 2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 °H CH2CH£NH? 3 nC)>-sc^—
COoH
35 8 96311 166 A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1' R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 OTBDrs CHgCH£N3 oTBons ch2ch2n3 h^"tx\=° —' h,c^JX^-sch,-Ö 10 tOs^'
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(2"-atsidoetyyli )-6- [ (1' R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyyli-oksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (6,46 mmol, valmistettu 3,0 g:sta, 15 6,46 mmol:sta esimerkin 2 vaiheen E diatsoprekursoria) kuivassa CH3CN:ssa (50 ml), käsiteltiin -15 °C:ssa difenyy-likloorifosfaatilla (1,4 ml, 6,75 mmol), ja lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,2 ml, 6,9 mmol) samanaikaisesti 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-20 N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seos lämmitettiin hitaasti 0-5 °C:seen 30 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin tipoittain N, N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,4 ml, 8,0 mmol) ja 3-merkaptometyylipyridiiniä (1,54 g, 12,3 mmol) CH3CN:ssa (5 ml). 1,5 tunnin jälkeen 0 -25 5 °C:ssa reaktio pysäytettiin lisäämällä Et0Ac:a ja kylmää ^ vettä. Orgaaninen faasi pestiin 1 M NaHS03:lla, kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoi-tiin silikageelillä (5 x 11 cm). Eluoitiin EtOAcrn gra-30 dientilla (0 - 20 %) tolueenissa, jolloin saatiin 2,13 g (60 %) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) vmax: 2100 (N3), 1775 (B-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); :H NMR (200 MHz, CDC13) δ: 0,07 ja 0,08 (2 x s, 2 x 35 3H, SiCH3), 0,88 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,29 (d, J = 6,12 Hz, 96311 167 3H, CH3CHO), 1,6 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 3,06 (dd, JH6 H5 = 2.70 Hz, JH6 H1 = 7,74 Hz, 1H, H-6), 3,2 - 3,7 (m, H, CH2N3 ja H-4), 4,05 (dd päällekkäin SCH2:n kanssa, JH5 H6 ~ 2.70 Hz, JH5 H4 = 9,54 Hz, 1H, H-5), 4,07 (ABq, JAB = 5 15,6 Hz, Δν = 15,2 Hz, 1H, SCH2), 4,17 (m, 1H, CH3CH0), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,8 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,29 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,79 (m, 1H, pyridiinin H-4), 8,54 (dd, J = 15,0 Hz ja J = 4,8 Hz, 1H, pyridiinin H-6) ja 8,62 ppm (d, J = 2,0 Hz, 10 1H, pyridiinin H-2).
B.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-w 1 *-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli)metyylitio]-7-okso- 1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 15 |TBOflS jH2CH2N3 °-H CHjCHgNj ,.,-0 -=- AtV».-0 0 to, ° 20 Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"- atsidoetyyli )-6-[(l’R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyyli-oksietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli)metyylitio]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (2,13 g, 3,92 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (60 ml), käsitel-“ 25 tiin 0-5 eC:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna etikka- hapolla (1,35 ml, 23,6 mmol) ja 12,0 ml:11a (12,0 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraa-nissa. Viiden vuorokauden jälkeen 5 °C:ssa reaktioseos laimennettiin Et0Ac:lla, pestiin kylmällä kylläisellä NaH-30 C03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoi-tiin silikageelillä (4 x 12 cm) käyttäen EtOAc:n gradient-tia (50 - 100 %) tolueenissa eluenttina. Ensimmäisistä fraktioista saatiin 0,33 g (15 %) lähtöainetta. Seuraavis- 96311 168 ta fraktioista saatiin 0,90 g (54 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä.
IR (NaCl, kalvo) vmax: 2100 (N3), 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm"1 (esterin C=0); 5 XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,23 Hz, 3H, CHjCHO), 1,6 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 3,12 (dd, JH6.H5 = 2,77 Hz, JH6 H1 = 7,89 Hz, 1H, H-6), 3,3 - 3,7 (m, 3H, CH2N3 ja H-4), 4,05 (ABq, JAB = 13,4 Hz, Δν 23,0 Hz, 2H, SCH2), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO päällekkäin), 4,75 (m, 2H, 10 allyylin CH2), 5,3 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,3 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,72 (m, 1H, pyridiinin H-4), 8,53 (dd, J = 1,58 Hz ja J =4,8 Hz, 1H, ^ pyridiinin H-6) ja 8,6 ppm (d, J = 2,0 Hz, 1H, pyridiinin H-2).
15 C. (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-6-[ (1 Ή) -1'-hyd- roksietyyli] -3- [ (pyridin-3-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH CHgCHjNj OH CHjCHgNHg 20 Η,ΑρΛ SCH;_Q, » S) Ha A-
0 0 lo,H
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-25 atsidoetyyli )-6-[ (1' R)-l'-hydroksietyyli]-3-[ (pyridin-3- ^ yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,90 g, 2,09 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suo-jakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [0] 30 (0,13 g) ja 4,6 ml:11a (2,3 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyli- heksanoaatin liuosta EtOAcrssa. 15 minuutin kuluttua reak-tioseos laimennettiin dietyylieetterillä (150 ml) ja uutettiin 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla (3 x 75 ml). Yhdistetyn vesipitoisen faasin pH säädettiin 35 arvoon 5,8 1 M NaH2P04:lla ja orgaanisen liuottimen jäljet 96311 169 poistettiin tyhjössä. Sen jälkeen vesipitoista liuosta hydrattiin käyttäen 0,9 g 30-prosenttista palladiumia ce-litellä 0-5 °C:ssa ja 310 kPa:n (45 psi:n) paineessa 1,2 tuntia. Sitten katalyytti suodatettiin ja suodos kromato-5 grafoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 6,5 cm). Eluoitiin CH3CN:n gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin otsikon aine valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen. Kiteytettiin vedessä (30 ml), jolloin saatiin 0,137 g otsikon yhdistettä 10 hyvin hienona kiinteänä aineena. Emäliuos kromatografoi-tiin toisen kerran, jolloin saatiin 0,27 g (kokonaissaanto 0,397 g, 52 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena j auheena.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 94,5 % p-Bondapak-C18:11a, 15 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20 pH 7,4 fosfaattipus kuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipy-mäaika 5,35 minuuttia; UV (HjO, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 268 (6010) ja 302 nm (7740); 20 IR (KBr) 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,30 (d, J = 6,29 Hz, 3H, CH3CH0), 1,6 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 3,04 (leveä t, J = 8,3 Hz, 2H, CH2NH2), 3,20 (m, 1H, H-4), 3,38 (dd, JH6 H5 = w 25 2,72 Hz, JH6 (I1 = 6,45 Hz, 1H, H-6), 4,06 (ABq, JM = 13,6 Hz, ΔΌ 24,3, 2H, SCH2), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3-CHO), 7,44 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-4), 8,44 (d, J = 4,9 Hz, 1H, pyridiinin H-6) ja 8,50 ppm (leveä s, 1H, pyridiinin H-2).
170 96c 11
Esimerkki 25 (4R,5S,6S)-4-(2"-N,N-dimetyyliaminoetyyli)-6- [ (l’R)-l'-hydroksietyyli]-3-[ (pyridin-3-yyli)metyylitkö] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-5 karboksyylihappo /CH3 JH ch2ch2nh2 oh ^fNcHa -r\-_ Na0H3CN H3r \..
Suspensiota, jonka muodosti esimerkin 24 (4R,5S, 6S) -4- (2" -aminoetyyli )-6- [ (1' R) -1' -hydroksietyyli ] -3- [ (py-15 ridin-3-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept- 2-eeni-2-karboksyylihappo (0,150 g, 0,41 mmol) veden (3 ml) ja asetonitriilin (3 ml) seoksessa, käsiteltiin 0 -5 °C:ssa 37-prosenttisella formaldehydin vesiliuoksella (0,23 ml, 2,4 mmol), natriumsyaaniboorihydridillä 20 (0,048 g, 0,72 mmol) ja kahdella tipalla etikkahappoa* 20 min kuluttua reaktioseos laimennettiin 30 ml:11a 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja orgaanisen liuottimen jäljet poistettiin tyhjössä. Vesifaasi kromato-grafoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (μ-25 Bondapak-C18, 4 x 9 cm) käyttäen asetonitriilin gradient- ' tia (0 - 5 %) vedessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,080 g (*50 %) valkoista amorfista jauhetta. HPLC:n mukaan tämä tuote on otsikon dimetyyliaminoyhdisteen ja N-metyyli-N-syaanimetyyliyhdis-30 teen (esimerkki 26) seos suhteessa 3:1. Puhdistettiin pre-paratiivisella HPLC:llä (p-Bondapak-C18, 10 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20), jolloin saatiin 0,047 g (29 %) puhdasta otsikon dimetyyliaminoyhdistettä.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97 % p-Bondapak-C18:11a, 35 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4, fosfaat- il i S-»·* d ii! I i i ftt - t 171 96 311 tipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 5,42 minuuttia; UV (HjO, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λΜ*: 268 nm (6592) ja 302 nm (7793); 5 IR (KBr) vmax: 1765 (β-laktaamin C=0) ja 1605 cm'1 (karboksylaatin C=0); NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,30 (d, J = 6,37 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,87 (s, 6H, N(CH3)2), 3,15 (m, 3H, CH2N ja H-4), 3,32 (dd, JH6-H5 = 2,90 Hz, JH6 H1 = 10 6,80 Hz, 1H, H-6), 4,05 (ABq, JAB = 14,1 Hz, Δν = 29,7 Hz, 2H, SCH2), 4,12 (dd, osittain päällekkäin SCH2:n kanssa, w jh5.h6 = 2,90 Hz, 1H, H-5), 4,22 (m, 1H, CH3CH0), 7,44 (dd, J = 5,0 Hz ja J = 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-5), 7,84 (m, 1H, pyridiinin H-4), 8,44 (dd, J = 1,5 Hz ja J = 5,0 Hz, 15 1H, pyridiinin H-6) ja 8,50 ppm (d, J = 1,8 Hz, 1H, pyri diinin H-2).
Esimerkki 26 (4R,5S,6S)-4-[2"-(N-syaanimetyyli-N-metyyliamino)- etyyli]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-3-20 yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept- 2-eeni-2-karboksyylihappo
CHgCN
°H CHgCHgNHj OH CHgCHjN^ -r\ [f^l NaBH3°CN M -r\ ^ 25 ^ ^[X^SCH^N -^ ^
C02H 0 COgH
Seos, jonka muodostivat (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyy-li)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli)metyy-30 litio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy- lihapon pelkistävän alkyloinnin tuotteet, kuten esimerkissä 25 on kuvattu, puhdistettiin preparatiivisella HPLCillä (p-Bondapak-C10). Seoksen vähäisemmästä komponentista, jolla oli pidempi reaktioaika, saatiin 0,011 g otsikon yhdis- 172 56311 tettä valkoisena amorfisena jauheena lyofilisoinnin jälkeen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 92 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-5 puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, vii-pymäaika 23,5 minuuttia; UV (HjO, pH 7,4 fosfaattipuskuri) xBax: 268 ja 304 nm; IR (KBr) vBax: 1752 (B-laktaamin C=0) ja 1605 cm'1 10 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,31 (d, J = 6,36 Hz, 1H, CH3CH0), 1,4 ja 1,9 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 2,35 (s, 3H, ^ N-CH3), 2,3 - 2,6 (m, 2H, CH2CH2N), 3,12 (m, 1H, H-4), 3,33 (dd, JH6>H5 = 2,68 Hz, JH6H1 = 5,95 Hz, 1H, H-6), 3,70 (s, 15 2H, NCH2CN), 4,09 (ABq, JM = 14,14 Hz, Δν = 29,5 Hz, 2H, SCH2), 4,12 (dd päällekkäin SCH2:n kanssa, JH5 H6 = 2,68 Hz, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3CH0), 7,49 (m, 1H, pyridiinin H- 5), 7,92 (d, J = 8,0 Hz, 1H, pyridiinin H-4), 8,46 (leveä d, J = 4,3 Hz, 1H, pyridiinin H-6) ja 8,54 ppm (leveä s, 20 1H, pyridiinin H-2).
Esimerkki 27 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-aminopropyyli) -6- [ (1 Ή) -1 ’ -hydrok- sietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsa- bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 25
OH (CHj)3N3 OH (CHj)3NHj OH (CHj>30H
—► Π^5ν^οΗ + i_l>-s^oh o [ (T 1 cOjN* to2H COjNa 30 0,04 M liuoksen, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)- 4-(3"-atsidopropyyli)-6-[ (1 ’ R)-l' -hydroksietyyli]—3—[(2 — hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti, joka oli saatu vastaavasta allyyli-esteristä (404 mg, 1,02 mmol), kuten esimerkissä 21 on ku-35 vattu, pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa (50 ml, 96311 173 2,0 mmol) pH säädettiin 5 °C:ssa arvoon 5,8- 5,9 1,0 M pH-arvon 4,2 omaavalla NaH2P04-puskuriliuoksella. Tähän seokseen lisättiin 30-prosenttista Pd/celiteä (400 mg), ja sitä ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n 5 (45-50 psi:n) vetypaineessa 1,5 tuntia, jolloin alku- lämpötila oli 5 °C (jäähaude) ja loppulämpötila oli 15 °C. Katalyytti suodatettiin ja liuos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (60 g, HzO), jolloin saatiin epäpuhdasta otsikon ainetta, jossa oli epäpuhtautena natrium-10 ( 4R, 5S, 6S )-4-( 3"-hydroksipropyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksi- etyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaattia (esimerkki 28). Tämä epäpuhdas aine liuotettiin 0,01 M pH-arvon 6,0 omaavaan fosfaattipuskuriin ja kaadettiin jälleen p-Bondapak-Cie-15 pylvääseen (suhde 500/1). Kaksi ensimmäistä pylvästila-vuutta eluoitiin pH-arvon 6,0 omaavalla puskurilla ja sen jälkeen eluoitiin vedellä, jolloin saatiin 3-aminopropyy-liä, puhdasta otsikon yhdistettä (95 mg, 28 %) ja 3-hyd-roksipropyylijohdannaista (340 mg:sta, 0,85 mmol:sta al-20 lyyliesteriä, 45 mg, 17 %, kuten esimerkissä 28 on kuvattu ).
Otsikon yhdisteen puhtaus HPLC:n mukaan: 88 % (KH2P04, 0,01 M, pH 7,4), viipymäaika 5,54 min; UV (H20) l\max: 302 (9000); 25 IR (Nujol) vBax: 3600 - 3100 (OH), 1750 ja 1585 cm-1 (C=0); 'H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33 - 4,2 (1H, m, H-l'), 4,23 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,2 Hz, H-5), 3,82 - 3,67 (2H, m, CH20), 3,43 - 3,34 (1H, m, H-4), 3,36 (1H, dd, J = 30 2,5 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), 3,09 - 3,02 (2H, m, CH2N), 3,06 - 2,79 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 1,95 - 1,5 (4H, m, CH2CH2) ja 1,33 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
♦ 174 Q 5 >:ι 1 1
^ I I
Esimerkki 28
Natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-hydroksipropyyli)-6-[ (1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli) -tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-5 boksylaatti OH <CH2)3N3 OH <CHs)3NH2 oh <ch?)30h
^vnoh p—oh ρ°H
10 0 tOgN. iOjH tOjN.
0,04 M liuoksen, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)- 4-(3"-atsidopropyyli)-6-[ (1 * R) — 1 *-hydroksietyyli]-3- [(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti, joka oli saatu vastaavasta allyy-15 liisteristä, kuten esimerkissä 21 on kuvattu (404 mg, 1,02 mmol), pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa (50 ml, 2,0 mmol) pH säädettiin 5 °C:ssa arvoon 5,8 - 5,9 1,0 M pH-arvon 4,2 omaavalla NaH2P04-puskuriliuoksella.
Tähän seokseen lisättiin 30-prosenttista Pd/celiteä 20 (400 mg), ja sitä ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1,5 tuntia, jolloin alkulämpötila oli 5 °C (jäähaude) ja loppulämpöti-la oli 15 °C. Katalyytti suodatettiin ja liuos vietiin μ-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (60 g, H20), jolloin 25 saatiin epäpuhdasta otsikon ainetta, jossa oli epäpuhtau- ~ tena (4R,5S,6S)-4-(3"-hydroksipropyyli)—6—[(1*R) —1 *-hydroksietyyli] -3- [ (2-hydroksietyyli) tio] -7-okso-l-atsabisyk- lo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaattia (esimerkki 27).
Tämä epäpuhdas aine liuotettiin 0,01 M pH-arvon 6,0 omaa-30 vaan fosfaattipuskuriin ja kaadettiin jälleen μ-Bondapak-C18-pylvääseen (suhde 500/1). Kaksi ensimmäistä pylvästila-vuutta eluoitiin pH-arvon 6,0 omaavalla puskurilla ja sen jälkeen eluoitiin vedellä, jolloin saatiin esimerkin 27 3-aminopropyyliyhdistettä (95 mg, 28 %) ja otsikon 3-hyd-35 roksipropyyliyhdistettä (340 mg:sta, 0,85 mmol:sta allyy- 96311 175 liesteriä, 45 mg, 17 %). Otsikon yhdisteen puhtaus HPLC:n mukaan: 95,2 % (KH2P04, 0,01 M, pH 7,4), viipymäaika 7,9 minuuttia; UV (H2°) λ**χ: 302 (10300); 5 IR (Nujol) vMX: 3600 - 3100 (OH), 1740 ja 1690 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,35 - 4,2 (1H, m, H-l'), 4,23 (1H, dd, J = 9,2 Hz, J = 2,5 Hz, H-5), 3,77 (2H, m, SCH2CH20), 3,65 (2H, m, CH20), 3,41 (1H, dd, J = 2,5 Hz, 10 J = 6,1 Hz, H-6), 3,42 - 3,36 (1H, m, H-4), 3,1 - 2,8 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,0 - 1,4 (4H, m, CH2CH2) ja 1,33 ppm ^ (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 29
Natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1'R)-15 1 ’ -hydroksietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyk- lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CHg)3N3 20 I //—SCH3 ln jr~ C OgNa A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- "7, 25 [ (1 'R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3-metyy- litio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti OS i + <CH253N3 OS i + (£H2>3N3 30 χτ£λ _ q/ 0 96311 176
Liuosta, jonka muodostivat (3S,4R)-3-[(l'R)-l’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[ (l"R)-l"-(3-atsidopropyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksipropyyli]atsetidin-2-oni, joka oli valmistettu esimer-5 kin 7 vaiheessa E (2,0 g, 4,2 mmol), ja Rh(0Ac)2 bentsee-nissä (80 ml), kuumennettiin palautusjäähdyttäen 20 minuuttia. Bentseeni poistettiin tyhjössä, ja saatu bisykli-nen ketoni laimennettiin CH3CN:lla (80 ml). Se jäähdytettiin -10 eC:seen (jää-MeOH-haude) ja siihen lisättiin ti-10 poittain difenyylikloorifosfaattia (1,0 ml, 4,6 mmol) ja N, N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,84 ml, 4,6 mmol) ja 4-dimetyyliaminopyridiiniä (2,3 g). Seosta sekoitettiin 2 tuntia, sitten siihen lisättiin N,N-di-isopropyylietyyli-amiinia (1,7 ml, 9,2 mmol) ja sen jälkeen siihen johdet- 15 tiin CH3SH-kaasuvirta (10 min). Seosta pidettiin 5 °C:ssa (kylmä huone) 18 tuntia, sen jälkeen laimennettiin kylmällä EtOAcrlla (400 ml), pestiin kylmällä 1 N HCl:n vesi-liuoksella (400 ml), jääkylmällä vedellä (200 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 400 ml), jääkylmällä vedellä 20 (3 x 400 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuot timen haihdutuksella saatu jäännös (2 g) vietiin silika-geeli-flash-pylvään läpi (100 g, heksaani -* 20 % EtOAc/ heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,0 g, 50 %) öljynä.
25 IR (CH2C12) vmax: 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm’1 (C=0); — *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 5,97 - 5,89 (1H, m, vinyylin H), 5,48 - 5,21 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,3 - 4,15 (1H, m, H-l'), 4,12 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,4 Hz, H-5), 3,5 - 3,3 (2H, m, CH2N3), 30 3,3 - 3,1 (1H, m, H-4), 3,16 (1H, dd, J = 7,4 Hz, J = 2,7 Hz, H-6), 2,38 (3H, s, CH3), 1,9 - 1,5 (4H, m, CH2CH2), 1,31 (3H, d, J * 6,1 Hz, CH3), 0,88 (9H, s, tert-butyyli), O, 086 ja 0,078 ppm (6H, 2s, CH3).
177 56311 B. Allyyli-(4R,5S-6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- [(1'R)-1’ -hydroksietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2-0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 I. (CHo)3N3 OH (CH2)3N3
0 OS 1+ - ά J J V I
m^scH3 _ /O-8"· CT 0 io co2\^x ___ Kylmää (-20 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S)-4-(3"-atsidopropyyli )-6- [ (1' R)-l' -tert-butyyli-dimetyylisilyylioksietyyli]-3-metyylitio-7-okso-l-atsabi-15 syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,0 g, 2,1 mmol) THF:ssa (60 ml), käsiteltiin jääetikalla (1,5 ml, 25,2 mmol) ja sen jälkeen 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin THF-liuoksella (12,7 ml, 12,6 mmol). Reaktioseosta pidettiin 5 °C:ssa 100 tuntia, sen jälkeen neutraloitiin 1 M 20 NaHC03:n vesiliuoksella, laimennettiin EtOAc:lla (200 ml), pestiin kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (1 x 50 ml), vedellä (2 x 150 ml), suolaliuoksella (1 x 150 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös (1,2 g), vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (1/1, hek-25 saani/EtOAc -* EtOAc), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (0,30 g) ja lähtöaineena käytettyä eetteriä (0,42 g), joka käsiteltiin uudelleen tetrabutyyliammoniumfluoridilla samoissa olosuhteissa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,13 g); yhdistetty saanto 0,43 g, 56 %.
30 IR (CH2C12) vnM: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm"1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,07 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,5- 5,21 (2H, m, vinyylin H), 4,87 - 4,62 (2H, m, CH2-vinyyli), 4,3 - 4,18 (1H, m, H-l'), 4,22 (1H, 35 dd, J = 2,6 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 3,5 - 3,3 (2H, m, CH2N3), 178 96ο 11 3.3 - 3,2 (1Η, m, H-4), 3,23 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 7,6 Hz, H-6), 2,37 (3H, s, SCH3), 1,9 - 1,55 (4H, m, CH2-CH2), 1,77 (1H, d, J = 4,8 Hz, OH) ja 1,39 ppm (3H, d, J = 6.3 Hz, CH3).
5 C. Natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- [ (1 'R) -1' -hydroksietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2,0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CH2)3N3 OH (CH2)3N3 10 —r^\ n ))—sch3 _» n, /)—sch3
/""T
C02^<s, C02Na 15
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-(3"-atsidopropyyli )-6- [(1'R)-l' -hydroksietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti (50 mg, 0,14 mmol) CH2Cl2:ssa (2 ml), kä-20 siteltiin Pd(PPh3)4:11a (5 mg) ja 0,5 M natrium-2-etyyli-heksanoaatin EtOAc-liuoksella (0,3 ml, 0,15 mmol). Seos laimennettiin EtOAc:lla (10 ml) ja uutettiin 0,05 M fos-faattipuskuriliuoksella (1 x 10 ml, 1 x 5 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä ja 25 vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (20 g, H20 -* 2 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (30 mg, 60 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,2 % (10 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, pH 7,4), viipymäaika 7,56 minuuttia; 30 UV (H20) ?.max: 304 (8070); : IR (Nujol) V Bax: 3600 - 3100 (OH), 2100 (N3), 1745 ja 1595 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,34 - 4,2 (1H, m, H-l’), 4,22 (1H, dd, J = 2,3 Hz, J = 9,0 Hz, H-5), 3,47 - 3,37 35 (4H, m, H-6, H-4 ja CH2N3), 3,375 (d, J = 2,3 Hz, osa H-6:n 96311 179 dd:a), 2,37 (3H, s, CH3), 1,95 - 1,4 (4H, m, CH2CH2) ja 1,35 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 30 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-aminopropyyli) -6-[ (1 Ή) -1' -hydrok-5 sietyyli] -3-raetyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]- hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
OH < CHg)3N3 OH (CH2)3NH2 oh <CHg)30H
io scH3 + 0/^fscHs C02Na C02H C02Na
Kylmän (jäähaude) liuoksen, jonka muodosti natrium-(4R, 5S, 6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(l'R)-l’-hydroksietyy-15 li] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti, joka oli valmistettu vastaavasta allyy-liesteristä (0,12 g, 0,33 mmol), kuten esimerkissä 29 on kuvattu, 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavassa natriumfosfaatti-puskurissa (25 ml), pH säädettiin arvoon 5,8 1,0 M pH-20 arvon 4,2 omaavalla NaH2P04-puskuriliuoksella. Sen jälkeen seosta ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 -345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 90 minuuttia noin 10 eC:ssa (alkulämpötila: 5 °C) käyttäen 30-prosenttista
Pd/celiteä (120 mg) katalyyttinä. Katalyytti poistettiin 25 suodattamalla, ja liuos vietiin p-Bondapak-Cie-käänteisfaa-sipylvään läpi (50 g, H20 -» 2 % CH3CN/H20), jolloin saatiin kahden yhdisteen seos (0,3 g). Tämä lyofilisoitu jauhe vietiin jälleen käänteisfaasipylvääseen (45 g, 150 ml 0,05 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, H20 -» 2 % 30 CH3CN/H20), jolloin saatiin epäpuhdasta 3-aminopropyylijoh dannaista (125 mg) ja esimerkin 31 3-hydroksipropyylijohdannaista (20 mg, 20 %). 3-aminopropyylijohdannainen puhdistettiin uudelleen käänteisfaasipylväällä (45 g, H20 -* 2 % CH3CN/H20), jolloin saatiin puhdasta otsikon 3-amino-35 propyyliyhdistettä (25 mg, 25 %).
96311 180
Puhtaus HPLC:n mukaan: 96,5 % (KH2P04-puskuri, 0,01 M, pH 7,4), viipymäaika: 7,50 minuuttia; UV (H20) *„ax: 304 (8580); IR (Nujol) vBax: 3600 - 3100 (OH, NH2), 1750 ja 5 1580 cm*1 (C=0); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,3 - 4,2 (1H, m, H-l'), 4,21 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 9,1 Hz, H-5), 3,48 - 3,39 (1H, m, H-4), 3,33 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,15 - 3,0 (2H, m, CH2N), 2,34 (3H, s, SCH3), 1,9 - 1,5 10 (4H, m, CH2CH2) ja 1,33 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 31
Natrium-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-4- ^ (3 " -hydroks ipropyy 1 i) -3 -metyyl i t io- 7 -okso-1 -a t sabi - syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 15
OH (CHg)jNj OH <CH2)3NH2 OH <CH2>30H
JX^SCH3 — jiG>_sch3 + ^u>-scH3 C0,Na L0,H COgNa 20 2 2
Kylmän (jäähaude) liuoksen, jonka muodosti natrium-(4R, 5S, 6S)-4-(3"-atsidopropyyli )-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -3-me tyylitio-7-okso-l-at sabi syklo [3. 2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti, joka oli valmistettu vastaavasta allyy-25 liesteristä (0,12 g, 0,33 mmol), kuten esimerkissä 29 on ^ kuvattu, 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavassa natriumfosfaatti-puskurissa (25 ml), pH säädettiin arvoon 5,8 1,0 M pH-arvon 4,2 omaavalla NaH2P04-puskuriliuoksella. Sen jälkeen seosta ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 -30 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 90 minuuttia noin 10 °C:ssa (alkulämpötila: 5 °C) käyttäen 30-prosenttista
Pd/celiteä (120 mg) katalyyttinä. Katalyytti poistettiin suodattamalla, ja liuos vietiin y-Bondapak-Cie-käänteisfaa-sipylvään läpi (50 g, H20 -» 2 % CH3CN/H20), jolloin saatiin 35 molempien otsikon aineiden seos (0,3 g). Tämä lyofilisoitu il ! * lilU i l i m ‘ i 96311 181 jauhe vietiin jälleen käänteisfaasipylvääseen (45 g, 150 ml 0,05 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, H20 -* 2 % CH3CN/H20), jolloin saatiin epäpuhdasta esimerkin 30 3-aminopropyyliyhdistettä (125 mg) ja puhdasta otsikon 3-5 hydroksipropyyliyhdistettä (20 mg, 20 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,5 % (2 % CH3CN/pH 7,4, 0,01 M fosfaattipuskuri), viipymäaika: 7,79 minuuttia; UV (H,0) XBax: 306 (9700); IR (Nujol) v Bax: 3500 - 3100 (OH), 1740 ja 10 1590 cm'1 (C=0); :H NMR (D20, 200 MHz) δ: 4,34 - 4,18 (1H, m, H-l'), w 4,21 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 3,69 - 3,63 (2H, m, CH20), 3,46 - 3,36 (1H, m, H-4), 3,38 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 2,36 (3H, s, SCH3), 1,95 - 1,4 15 (4H, m, CH2CH2) ja 1,34 ppm (3H, d, J - 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 32 (4R, 5S, 6S) -4- [3"- (N-formimidoyyli )aminopropyyli] - 6-[(1fR)-1’-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-20 boksyylihappo
OH <CH2)3NH2 oh (CH2)3NHCH=NH
25 0^ N 1 0H 0H
co2h co2h
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyy-30 li] -3-[ (2-hydroksietyyli )tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (50 mg, 0,15 mmol), joka oli valmistettu esimerkissä 27, 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskuriliuoksessa (10 ml, 0,4 mmol), lisättiin 0,1 N NaOH:n vesiliuosta pH:n säätämiseksi välille 35 8,2-8,4. Tähän liuokseen lisättiin annoksittain bentsyy- 182 5 G ό 11 liformimidaattivetykloridia (257 mg, 1,5 mmol) niin, että pH pidettiin välillä 8,0 - 8,5 0,1 N NaOH:n vesiliuoksella. Seosta sekoitettiin 10 minuuttia ja sen jälkeen pH säädettiin arvoon 7,0 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Liuos 5 vietiin p-Bondapak-C18-pylvään läpi (25 g, H20 -> 2 %, 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin puhdasta otsikon yhdistettä (33 mg, 62 %) lyofilisoituna jauheena.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 93,8 % (2 % CH3CN/KH2HP04, 0,01 M, pH 7,4), viipymäaika: 5,73 minuuttia; !0 UV (H20) Xm„: 302 (7651); IR (Nujol) v Bax: 3600 - 3100 (NH, OH), 1755, 1585 (C = 0) ja 1710 cm*1 (C=NH); ^ XH NMR (D20, 200 MHz) δ: 7,83, 7,80 (1H, 2s, NCHN), 4,35 - 4,2 (1,5 H, m, H-l'), 4,21 (0,5 H, d, J = 2,2 Hz, 15 osa H-5:a), 3,8 - 3,7 (2H, m, CH20), 3,55 - 3,25 (4H, m, CH2N, H-6, H-4), 3,1 - 2,8 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 1,95 - 1,4 (4H, m, CH2CH2) ja 1,32 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3). Esimerkki 33 (4R, 5S, 6S) -4- [3"- (N-formimidoyyli )aminopropyyli] -20 6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-metyylitio-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
OH (CH2)3NH2 oh (CH2)3NHCH=NH
(n^V-scH3 - / cC^scH3 co2h co2h
Kylmän (jäähaude) liuoksen, jonka muodosti 30 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1’R)-l'-hydroksietyy li] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (31 mg, 0,10 mmol), joka oli valmistettu esimerkissä 30, 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa, pH säädettiin arvoon 8,5 0,1 N NaOHrn vesi-35 liuoksella. Seokseen lisättiin annoksittain bentsyyliform- : SU i Slli lit·· . .
96311 183 imidaattivetykloridia (172 mg, 1 mmol) niin, että pH pidettiin välillä 8 - 8,3 0,1 N NaOH:n vesiliuoksella, ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia. Sen jälkeen seoksen pH säädettiin arvoon 7,0, ja vesipitoinen liuos vietiin μ-5 Bondapak-Cie-pylvään läpi (15 g, H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (22 mg, 60 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,8 % (304 nm, 2 % CH3CN/ KH2P4, 0,01 M pH 7,4) viipymäaika 8,33 minuuttia; UV (H20) >.b„: 306 (12200); 10 IR (Nujol) \>Bax: 3600 - 3100 (OH, NH2), 1750, 1590 (C=0) ja 1710 cm'1 (ON); w XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 7,83, 7,80 (1H, 2s, CH), 4,35 - 4,18 (2H, m, H-l’ ja H-5), 3,45 - 3,35 (3H, m, CH2N, H-4), 3,30 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 6,2 Hz, H-6), 2,34 15 (3H, s, SCH3), 1,9 - 1,45 (4H, m, CH2CH2) ja 1,32 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 34 (4R,5S,6S)-4-[3"-(N-guanidinyyli)aminopropyyli]-6- [ (1' R)-1'-hydroksietyyli]-3-metyylitio-7-okso-l-20 atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH <CH2)3NHe OH (CH2)3NH(C=NH)NH2 25 0ApH3 " 0</^Q^scH3
COgH C02H
Esimerkissä 30 valmistetun (4R,5S,6S)-4-(3"-amino-propyyli )-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -3-metyylitio-7-okso-30 l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon(50 mg, 0,17 mmol) kylmän (jäähaude) fosfaattipuskuriliuoksen (0,05 M, pH 7,0) pH säädettiin arvoon 8 0,1 N NaOHrn vesi-liuoksella. Tähän seokseen lisättiin annoksittain amino-iminometaanisulfonihappoa (211 mg, 1,70 mmol); reaktio-35 seoksen pH pidettiin välillä 7,8 - 8,0 0,1 N NaOH:n vesi- 96311 184 liuoksella. Sen jälkeen sitä sekoitettiin 1 tunti, ja seoksen pH säädettiin arvoon 7,0 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Se vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (25 g, HzO), jolloin saatiin otsikon yhdiste (17 mg, 40 %) 5 lyofilisoituna jauheena.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,4 % (304 nm, 2 % CH3CN/ KH2P04, 0,01 M, pH 7,4), viipymäaika 9,19 minuuttia; UV (H20) λΒβχ: 306 (10700); IR (Nujol) \>Bax: 3600 - 3100 (NH2, OH), 1750, 1680 10 (C=0) ja 1660 cm'1 (C=N); :H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,3 - 4,17 (1H, m, H-l'), 4,20 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 9,1 Hz, H-5), 3,46 - 3,30 (1H, m, H-4), 3,26 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 3,3 - 3,2 (2H, m, CH2N), 2,34 (3H, s, SCH3), 1,9 - 1,4 (4H, 15 m," CH2CH2) ja 1,32 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
Esimerkki 35 (4R, 5S,6S)-4-[3"-(N-guanidinyyli)aminopropyyli]-6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-20 boksyylihappo OH <CH2)3NH2 OH < CH2),NHC< =NH)NH, A-j,
; 25 0X
C02H co2h
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti esimerkissä 27 valmistettu (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-30 6 - [ (1' R) -1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7- okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (50 mg, 0,15 mmol) 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (10 ml, 0,4 mmol), lisättiin 0,1 N NaOH:n vesiliuosta pH-arvon 7 muuttamiseksi välille 35 7,8 - 8,0. Tähän liuokseen lisättiin annoksittain amino- :| ia i »lii I : I a» ; 96311 185 iminometaanisulfonihappoa (186 mg, 1,5 mmol), kuten julkaisussa H.S. Mosher et ai., Tet. Lett. 29 (26) (1988) 3183 - 3186 on kuvattu, ja pH pidettiin välillä 7,6 - 7,8. Seosta sekoitettiin 1 tunti niin, että pH pidettiin samal-5 la vakiona (7,6 - 7,8) 0,1 N NaOH:n vesiliuoksella. Reak-tioseoksen pH säädettiin arvoon 7,08 0,1 N HCl:n vesi-liuoksella ja sen jälkeen vietiin p-Bondapak-C18-käänteis-faasipylvään läpi (25 g, H20, 2 %, 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (35 mg, 63 %) lyofilisoituna jau-10 heena;
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,1 % (2 % CH3CN/puskuri pH 7,4, 0,01 M), viipymäaika 7,5 minuuttia; UV (H20) 304 (7800); IR (Nujol) vBax: 3320, 3180 (NH, OH), 1750, 1580 15 (C'=0) ja 1665 cm’1 (C-N); :H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,3 - 4,2 (2H, m, H-l' ja H-5), 3,77 (2H, t, J = 6,2 Hz, CH20), 3,28 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 6,2 Hz, H-6), 3,45 - 3,15 (3H, m, H-4 ja CH2N), 3,15 - 2,8 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,0 - 1,45 (4H, m, CH2-20 CH2) ja 1,32 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
Esimerkki 36 (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-[(2-syaanietyyli)-tio]-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo T 25 OH CH2CH2NH2
^ Vr^-SCHgCH8CN
30 (K
co2h 96311 186 A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1’R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-syaani-etyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti 5 OTBDMS CH2CH-N3 OTBDttS CH2CH2N3
Cr . CT
10 C02/%v<^'
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(2"- w-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyyliok-sietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo [3.2.0]heptaani-2-kar-15 boksylaatti (6,46 mmol, valmistettu saattamalla esimerkin 2 vaiheessa E valmistettu diatsoprekursori (3,0 g, 6,46 mmol) rengasmuotoon) kuivassa asetonitriilissä (50 ml), käsiteltiin -15 °C:ssa ja käyttäen typpeä suoja-kaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,4 ml, 6,75 mmol), 20 ja lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,2 ml, 6,9 mmol) samanaikaisesti 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seoksen lämpötila nostettiin hitaasti 0-5 °C:seen 30 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin N,N-di-isopropyyli-25 etyyliamiinia (1,2 ml, 6,9 mmol) ja β-merkaptopropionit- — riiliä (1,13 g, 13,0 mmol), kuten julkaisussa L. Bauer ja T.L. Welsh, J. Org. Chem. 26 (1961 ) 1443 on kuvattu, ja seosta sekoitettiin 0-5 eC:ssa 2 tuntia. Sitten reak-tioseos laimennettiin EtOAc:lla (300 ml), pestiin vedellä, 30 IM NaHS03:lla, kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (5 x 11 cm). Eluoitiin EtOAcin gradientilla (0 - 10 %) tolueenissa, jolloin saatiin 3,3 g (*100 %) otsikon yhdistettä ruskeana 35 öljynä, jossa oli epäpuhtautena hiukan polymeeristä ainet- ;l : au.: nu i . i il . .
96311 187 ta. Tämä aine käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
IR (NaCl, kalvo) vmax: 2250 (CN), 2100 (N3), 1775 (B-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); 5 XH NMR (200 MHz, CDC13) δ: 0,19 (s, 6H, SiCH3), 0,99 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,41 (d, J = 6,11 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 -2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,7 - 3,4 (m, 5H, SCH2CH2CN ja H-6), 3,4 - 3,8 (m, 3H, CH2N3 ja H-4), 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO), 4,85 (m, 2H, allyylin CH2), 5,3- 5,6 ja 5,9- 6,2 ppm 10 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[ (2- w syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OTBDfIS CHgCHgNj OH CHgCHgN3
H JcOH H A_rA
3 JZX^“SCH*CHeCN - — > 3° rO-SCH3CHgCN
tOg/^' 0 tog/^' 20 Liuosta, jonka muodosti vaiheesta A raakatuotteena saatu allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l’R)-l'-tert-butyylidimetyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (3,3 g, 6,4 mmol) kuivassa tetrahydrofu-^ 25 raanissa (100 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna etikkahapolla (2,2 ml, 38,4 mmol) ja sen jälkeen 20 ml:11a (20 mmol) 1 M tetrabutyyliammonium-fluoridin liuoksella tetrahydrofuraanissa. Liuosta pidettiin 5 °C:ssa 8 vuorokautta. Sen jälkeen reaktioseos lai-30 mennettiin Et0Ac:lla, pestiin kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelil-lä (5 x 11 cm). Eluoitiin tolueenin ja Et0Ac:n seoksella (1:1), jolloin saatiin 0,92 g (36 %, saanto diatsoatseti-35 dinonista) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä.
96311 188 IR (NaCl, kalvo) vBax: 3500 (OH), 2250 (CN), 2105 (N3), 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,40 (d, J = 6,23 Hz, 3H, 5 CH3CH0), 1,6 - 2,1 (m, 2H, CH2-4), 2,7 (m, 2H, CH2CN), 2,9 -3,3 (m, 3H, H-6 ja SCH2), 3,4 - 3,7 (m, 3H, H-4 ja CH2N3), 4,25 (m päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CHO), 4,29 (dd, J„5.h6 = 2,80 Hz, JHSM = 9,69 Hz, 1H, H-5), 4,77 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 10 1H, allyylin CH).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-arainoetyyli)-3-[(2-syaanietyy-li)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH CH?CHeN3 OH ch,ch,nh,
X Λ 1» P-m X J
-- HsC %ΓΤ"λ>—SCHeCH2CN
0 o/ x, 20 Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"- atsidoetyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (0,92 g, 2,35 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml), käsiteltiin 0-5 eC:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna ·: 25 tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,13 g) ja ~ 5,2 ml:11a (2,6 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAc:ssa. Sen jälkeen lisättiin 200 ml 0,1 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja orgaaninen liuotin haihdutettiin alipaineessa. Jäljelle jäänyttä vesifaa-30 siä hydrattiin 0-5 °C:ssa käyttäen 2,0 g:a 5-prosenttis-ta palladiumia bariumsulfaatilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin ja suodos väkevöitiin puoleen tyhjössä. Kromatografoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 35 7,5 x 10,5 cm) käyttäen vettä eluenttina ja lyofilisoitiin 96311 189 UV-aktiiviset fraktiot, minkä jälkeen saatiin 0,15 g (20 -%) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena;
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3.9 mm x 30 cm, eluointi H20 pH 7,4 fosfaattipuskuri, vir-5 tausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 304 nm, viipymäaika 4,67 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) \max: 298 nm (7709); IR (KBr) vnax: 2250 (CN), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 10 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,33 (d, J = 6,35 Hz, 3H, w CH3CH0), 1,8 - 2,4 (m, 2H, CH2-4), 2,85 (m, 2H, CH2CN), 2.9 - 3,3 (m, 4H, SCH2 ja CH2NH2), 3,45 (m, päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,47 (dd, JH6 H5 * 2,90 Hz, JH6 H1 = 15 6,47 Hz, 1H, H-6) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0).
Esimerkki 37
Natrium- (4R,5S,6S)-6-[(l’R)-l'-hydroksietyyli]-4-[2"-(2,5-diokso-l-pyrrolidinyylioksi)etyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo-20 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 0.5 25 Γ s
Hsc sch2_0 30 0 : C02Na 96311 190 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1 Ή)-1'-(tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli)]-4-[2"-(2,5-diokso-l-pyrrolidi-nyylioksi)etyyli] -3- [ (pyridin-2-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 0
/ o / r<J
iSl+ CH.CH.OH OS i + -CH tfJ
Is- I «0-0 f n S"! 0 ",c^'XC>-sc"!-0 —-—- “‘liO—kk«-0 10 // N~^/ Ph,pt OEBO /)—" °
Seokseen, jonka muodostivat esimerkin 6 vaiheessa A valmistettu allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-(tert-butyy-15 lidimetyylisilyylioksietyyli)]-4-(2"-hydroksietyyli)-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,29 g, 0,56 mmol), N-hyd-roksisukkinimidi (0,07 g, 0,62 mmol) ja trifenyylifosfiini (0,176 g, 0,67 mmol) kuivassa THF:ssa (8 ml) 0 °C:ssa, 20 lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna dietyyliatsodikar-boksylaattia (0,117 g, 0,67 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 1 tunti ja huoneenlämpötilassa vielä tunti. Liuotin poistettiin alipaineessa, ja jäännös kromatogra-foitiin silikalla (3 x 9 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, • 25 ja eluoitiin CH2Cl2:n ja EtOAcrn seoksella (4:6, gradient- tieluointi), jolloin saatiin otsikon yhdiste, joka oli seoksena noin yhden ekvivalentin kanssa Ph3P=0:a (0,465 g).
XH NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) δ: 0,04 (s, 6H,
Si (CH3) 2), 0,84 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,23 (d, CH3, JCH3 v = 30 6,07 Hz), 1,73 - 1,95 (m, 1H, CH2), 2,19 - 2,33 (m, 1H, CH2), 2,67 (s, 4H, 0=C(CH2)2C=0), 3,14 (dd, H-6, J5 6 = 2,56 Hz, J6 r = 6,4 Hz), 3,81 (m, H-4), 3,96 - 4,33 (päällekkäinen, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 4,59 - 4,81 (m, 0CH2, allyyli), 5,17 - 5,44 (m, =CH2, allyyli), 5,82 - 5,98 (m, 35 CH=, allyyli), 7,16 (m, H-5, py, J4 5 = 7,47 Hz, J5,6 = 4,91 Hz), 8,49 (d, H-6, py).
il i · li ! lltl 1119; 96311 191 B. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]- 4-[2"-(2,5-diokso-l-pyrrolidinyylioksi)etyyli] -3- [ (pyri-din-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 -i Jr ·· Jr „ -i3=b- o
Kylmää (O °C) liuosta, jonka muodosti vaiheen A allyyli-(4R, 5S,6S)-6-[(l'R)-l'-( tert-butyylidimetyylisi-15 lyylioksietyyli)] -4-[2"-(2,5-dioksi-l-pyrrolidinyylioksi)-etyyli] -3-[ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,46 g, 0,75 mmol) kuivassa THF:ssa (8 ml), käsiteltiin käyttäen argonia suo-jakaasuna etikkahapolla (0,26 ml, 4,48 mmol) ja sen jäl-20 keen 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuoksella THFrssa (2,24 ml, 2,24 mmol). Seosta sekoitettiin välillä 0 - 5 °C 120 tuntia, ja sen jälkeen neutraloitiin 0 eC:ssa 1 M NaHC03-liuoksella (4,52 ml, 4,48 mmol). Seosta uutettiin EtOAc:lla (3 x 50 ml) ja yhdistetty orgaaninen faasi pes-25 tiin peräkkäin kylmällä 1 M NaHC03-liuoksella, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin tahmeaa kumimaista ainetta, joka kromatografoitiin silikalla (3,5 x 9 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, ja eluoitiin ensin CH2Cl2:n ja EtOAcrn seoksel-30 la (50 - 100 % EtOAc) ja sen jälkeen CH3CN:n ja EtOAc:n seoksella (1:1, gradienttieluointi), jolloin saatiin otsikon yhdiste vaahtona (0,18 g, 64,3 %); "H NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 1,37 (d, CH3,
Jch3.i· = 6'25 Hz>' 1'71 " 1'9 (m' 1H' CH2) f 2,31 - 2,44 (m, 35 1H, CH2), 2,7 (s, 4H, 0*C(CH2 )2C=0), 3,25 (dd, H-6, J5 6 = 96311 192 2,73 Hz, J61. = 8,77 Hz), 3,91 (m, H-4), 3,85 - 4,30 (päällekkäinen, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 4,58 - 4,86 (m, OCH2, allyyli), 5,19 - 5,46 (m, =CH2, allyyli), 5,84 - 6,03 (m, CH=, allyyli), 7,16 (ra, H-5, py, J3 5 = 0,93 Hz, J4 5 = 5 7,67 Hz, J5 6 * 4,04 Hz), 7,34 (m, H-3, py, J3 4 = 7,8 Hz), 7,64 (m, H-4, py, J46 = 1,82 Hz), 8,48 (m, H-6, py).
C. Natrium-(4R,5S,6S)-6-t(1'R)-l’-hydroksietyyli]- 4-[2"-(2,5-diokso-l-pyrrolidinyylioksi)etyyli] -3-[ (pyri-din-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-10 eeni-2-karboksylaatti
j" Ä x A
is ·Λι>··νθ k.
Kylmään (0 °C) liuokseen, jonka muodosti allyyli-20 (4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-4-[2"-(2,5-dioksi- 1-pyrrolidinyylioksi Jetyyli]-3-[ (pyridin-2-yyli)metyy-litio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (0,16 g, 0,32 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna Pd[Ph3P]4:a (0,055 g, 25 0,048 mmol) ja sen jälkeen 0,5 M natrium-2-etyyliheksano- ^ aatin liuosta EtOAcrssa (0,64 ml, 0,32 mmol). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 2 tuntia ja sen jälkeen uutettiin vedellä (3 x 15 ml). Yhdistetty vesifaasi vietiin μ-Bonda-pak-C18-käänteissilikapylvään läpi (3 x 11 cm). Otsikon 30 yhdiste eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (9:1, gra-dienttieluointi) ja se saatiin valkoisena höytäleisenä kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen (0,1 g, 64,9 %);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,6 %; UV-toteaminen 304 nm:ssa y-Bondapak-C18:11a (4 mm x 30 cm), 8 % CH3CN pH-35 arvon 7,4 omaavassa fosfaattipuskurissa, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 9,7 minuuttia; il : au i am ι ι i » ? 96311 193 IR (Nujol) Vmex: 1750 cm'1 (C=0, B-laktaami), 1720 cm"1 (amidin C=0).
UV (pH 7,4) λη„: 304 (7756).
XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,25 (d, CH3, JCH3 r = 5 6,39 Hz), 1,75 - 1,91 (m, 1H, CH2), 2,11 - 2,25 (m, 1H, CH2), 2,82 (s, 4H, 0=C(CH2)200), 3,41 - 3,52 (päällekkäin, 2H, H-4, H-6), 3,98 - 4,30 (päällekkäin, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,41 (dd, H-5, py, J3>4 = 7,9 Hz), 7,91 (dt, H-4, py, J46 = 1,68 Hz), 8,48 (d, H-6, py).
10 Esimerkki 38 (4R, 5S, 6S) -4- (2"-aminoetyyli )-6-((1^)-11 -hydrok-w sietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy- lihappo 15 OH <CH2)2NH2 2o cr co2h A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(1,2,3-tia- 25 diatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]- hept-2-eeni-2-karboksylaatti
I I
OS i + (CH2)sN3 . OS l + (CH£)2N3 11 ! il2 \ \ 30 __* ^ s : Η )s zy h 0 * //
ox o I
Liuosta, jonka muodostivat (3S,4R)-3-[(1'R)-1'- 35 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(2- 194 S6311 atsidoetyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-okso-propyyli]atsetidin-2-oni (3,7 g, 8,0 mmol, valmistettu esimerkin 2 vaiheessa E) ja Rh(0Ac)2 (150 mg) kuumassa bentseenissä (300 ml), kuumennettiin palautusjäähdyttäen 5 1 tunti. Bentseeni suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuotteena allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsido-etyyli)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-li]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksy-laattia, joka liuotettiin CH3CN:iin (75 ml), jäähdytettiin 10 -15 °C:seen (jää-MeOH-haude) ja siihen lisättiin tipoit- tain difenyylikloorifosfaattia (1,76 ml, 8,80 mmol) ja Ν,Ν-di-isopropyylietyyliamiinia (1,54 ml, 8,8 mmol). Seos- ^ ta sekoitettiin 1 tunti, ja saatuun enolifosfaattiin lisättiin tipoittain 1,2,3-tiadiatsoli-4-metyylimerkaptaania 15 (1,16 g, 8,8 mmol) CH3CN:ssa (1,5 ml) ja N,N-di-isopropyy- lietyyliamiinissa (1,54 ml, 8,8 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti ja lisättiin vielä merkaptaania (160 mg, 1,2 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,20 ml, 1,2 mmol). Seosta sekoitettiin 1 tunti, laimen-20 nettiin kylmällä EtOAc:lla (200 ml), pestiin kylmällä vedellä (25 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (3 x 25 ml), H20:lla (25 ml), IN HCl:n vesiliuoksella (25 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (25 ml), suolaliuoksella (25 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-ker-25 roksen läpi (125 g, heksaani -* 5 % -> 25 % EtOAc/heksaani), ^ jolloin saatiin otsikon yhdistettä (2,38 g, 61,5 %) ja jonkin verran enolifosfaattia (640 mg, 0,96 mmol); IR (CH2C12) νπ„: 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm-1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,44 (1H, s, aromaattinen 30 H), 6,00 - 5,83 (1H, m, vinyylin H), 5,46 - 5,20 (2H, m, vinyylin H), 4,82 - 4,60 (2H, allyylin CH2), 4,774, 4,701, 3,397, 4,324 (2H, ABq, J = 14,6 Hz, CH2), 4,25 - 4,13 (1H, m, H-l' ), 4,113 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 3,69 - 3,55 (2H, m, CH2-N3), 3,46 - 3,32 (1H, m, H-4), 35 3,094 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,4 Hz, H-6), 2,16 - 1,98, >1 tttt «itu tue 195 PCS 11 1,78 - 1,65 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,291 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,882 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,080 ppm (6H, s, dimetyyli).
B.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-5 1' -hydroksietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyyli- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti OS i + OH (CH,)pN3 10 j=\ _T"
-SCH2—^S-* SCH2”^/S
15 Kylmää (jää-MeOH-haude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-4-( 2" -atsidoetyyli )-6-[(1Ή)-Γ -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (1,2,3-tiadiatsol- 4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (2,38 g, 4,30 mmol) vedettömässä THFrssa 20 (40 ml), käsiteltiin etikkahapolla (1,49 ml, 25,8 mmol) ja lisättiin tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta THFrssa (12,9 ml, 12,9 mmol). Sen jälkeen seosta sekoitettiin 48 tuntia 5 °C:ssa. Se laimennettiin EtOAcrlla (150 ml) ja pestiin vedellä (2 x 25 ml), IM w 25 NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 25 ml), vedellä (1 x 25 ml), suolaliuoksella (25 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (50 g, CH2Cl2/heksaani r 1/1 -> EtOAc/CH2C12: 5 -* 60 %), jolloin saatiin otsikon yhdiste (814 mg, 43 %) öljynä; 30 IR (CH2C12) v»„: 3600 (OH), 2100 (N3), 1780 ja 1710 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,46 (1H, s, aromaattinen H), 6,04 - 5,84 (1H, m, vinyylin H), 5,47 - 5,21 (2H, m, vinyylin H), 4,87 - 4,59 (2H, m, allyylin H), 4,799, 35 4,725, 4,353, 4,278 (2H, ABq, J = 15,0 Hz, CH2-aromaatti- 96311 196 nen), 4,216 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 6,7 Hz, H-5), 4,72 -4,18 (1H, m, H-l' ), 3,79 - 3,67 (1H, m, H-4), 3,66 - 2,56, 3,52 - 3,38 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-N3), 3,176 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 7,9 Hz, H6), 2,20 - 2,03, 1,88 - 1,67 (2H, 2 m-5 kohtaa, CH2-4), 1,874 (1H, d, J = 4,3 Hz, OH) ja 1,495 ppm (3H, d, J = 6,5 Hz, CH3).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-6-[(1’R)-1'-hyd-roksietyyli] -3- [ (1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio) ] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 10 °H <ch2)2n3 oh (CH2)2NH2 —Λ N\
15 CO^H
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidoetyyli )-6- [ (1 'R)-l' -hydroksietyy-li]-3-[(l, 2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (465 mg, 20 1,07 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml), käsiteltiin Pd(PPh3)4:lla (22 mg) ja 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuoksella (2,14 ml, 1,07 mmol) EtOAc:ssa. Seosta sekoitettiin 1 tunti, laimennettiin dietyylieetterillä (20 ml) ja uutettiin 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuok-25 sella (4 x 5 ml). Vesipitoiset uutteet pestiin dietyylieetterillä (2 x 20 ml) ja pH säädettiin arvoon 5,9. Sen jälkeen vesipitoista liuosta ravistettiin Parrin hydraus-laitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1 tunti 5 °C:sta 15 °C:seen (reaktion lopussa) käyttäen 30 30-prosenttista Pd/celiteä (465 mg) katalyyttinä. Kata lyytti poistettiin suodattamalla ja pestiin vedellä (2 x 5 ml). Vesipitoinen kerros vietiin p-Bondapak-C18-käänteis-faasipylvään läpi (100 g, H20 -+ 1 % -* 3 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (163 mg, 41 %) lyofilisoituna 35 jauheena;
Il ' *:> «4« l.l X:sa : 197 96011
Puhtaus: 97,9 % HPLC:n mukaan (300 nm); UV (H20) 7.Bax: 300 (S 9240); IR (Nujol) 6: 1770 ja 1580 cm'1 (C=0); 1H NMR (Dz0, 200 MHz) 6: 8,87 (1H, s, aromaattinen 5 H), 4,73, 4,67, 4,43, 4,35 (2H, ABq, J = 14,0 Hz, CH2-aro- maattinen), 4,31 - 4,18 (1H, m, H-l'), 4,157 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,7 Hz, H-5), 3,417 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,38 - 3,26 (1H, m, H-4), 3,17 - 3,02 (2H, m, CH2-N), 2,25 - 2,07, 1,86 - 1,65 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-10 4) ja 1,306 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 39 (4R, 5S, 6S) -4- (2"-aminoetyyli )-6-[ (1' R) -1' -hydrok-sietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 15 OH <CH2)2NH2 -λ I a)-s C H 3 // 20 '/ co2h A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1*R)-1?-hydroksietyyli]-3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo-w 25 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CH2)2N3 OH <CH2)pN3 30 i-NH 0 £
Kylmää (jää-MeOH-haude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidoetyyli )-6 - [ (1' R) -1' -hydrok-35 sietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0] heptaani-2-kar- • 96311 198 boksylaatti[(3S,4R9-3-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-4-[(1"R)-1"- ( 2-atsidoetyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-onista (2,55 g, 7,00 nunol), kuten esimerkin 38 vaiheessa A on kuvattu] CH3CN:ssa 5 (100 ml), käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (1,63 ml, 7,70 mmol), N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,40 mmol, 7,7 mmol) ja 4-dimetyyliaminopyridiinillä (26 mg). Seosta sekoitettiin 1 tunti, ja saatua enolifosfaattia käsiteltiin trimetyylisilyylikloridilla (1,0 ml, 7,7 mmol) ja 10 N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,4 ml, 7,7 mmol). Seosta sekoitettiin (15 min) ja lisättiin N,N-di-isopro-pyylietyyliamiinia (2,8 ml, 15 mmol) ja sen jälkeen johdettiin CH3SH-kaasuvirta 10 minuutin ajan. Seoksen annettiin reagoida 5 eC:ssa 44 tuntia, sen jälkeen laimennet-15 tiin EtOAc:11a (300 ml), pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (3 x 50 ml), jääkylmällä vedellä (3 x 50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (3 g) laimennettiin THF:11a (100 ml), käsiteltiin 2 N AcOH:n vesiliuoksella (17,5 ml, 35 mmol) ja sekoitet-20 tiin 1 tunti 22 °C:ssa. Seos laimennettiin EtOAc:11a (300 ml), pestiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 100 ml), H20 ( 3 x 100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (1,5 g) vietiin silikageelikerroksen läpi (75 g, heksaani/EtOAc: 1/1 -> EtOAc), jolloin saatiin otsi-25 kon yhdiste (530 mg, 21 %) öljynä; — IR (puhdas) v„ax: 3600 - 3200 (OH), 2100 (N3), 1770 ja 1705 cm*1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,07 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,88 - 4,63 30 (2H, m, allyylin CH2), 4,30 - 4,19 (1H, m, H-l'), 4,227 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,4 Hz, H-5), 3,66 - 3,54 (1H, m, H-4), 3,49 - 3,34 (2H, m, CH2N), 3,142 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 7,9 Hz, H-6), 2,394 (3H, s, SCH3), 2,17 - 1,68 (3H, m ja leveä s, OH ja CH2-4) ja 1,391 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, 35 CH3).
96311 199 B. Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)- 1 ’ -hydroksietyyli]-3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CH2)2N3 OH (CHP)pN.
Π /)-SCH3 -* ΓΤ /)—SCH3 10 C02Na
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-w (4R, 5S, 6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyy li] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3. 2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,53 g, 1,5 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), kä-15 siteltiin Pd( PPh3 )4:11a (50 mg) ja 0,5 M natrium-2-etyyli-heksanoaatin liuoksella EtOAcrssa (3,2 ml, 1,6 mmol). Jäähaude poistettiin ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Se laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml) ja uutettiin vedellä (2 x 10 ml). Vesifaasit yhdistettiin, pestiin di-20 etyylieetterillä (20 ml) ja vietiin käänteisfaasi-p-Bonda-pak-C18-pylvään läpi (50 g, H20 -* 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,32 g, 64 %) lyofilisoituna jauheena ; *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33 - 4,19 (1H, m, H-l'), ^ 25 4,221 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 3,63 - 3,33 (3H, m, H-4, CH2-N), 3,401 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,4 Hz, H-6), 2,365 (3H, S, SCH3), 2,13 - 1,95, 1,89 - 1,70 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,334 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
C. (4R, 5S, 6S) -4- (2"-aminoetyyli) -6-1(1^)-11 -hyd- 30 roksietyyli ] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept- 2-eeni-2-karboksyy1ihappo OH <CH2)2N3 OH (CH2)2NH2 ”
COgNa C02H
200 96ό11
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti natrium-(4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidoetyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyy-li] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (320 mg, 0,960 mmol) vedessä (20 ml), 5 ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 90 minuuttia käyttäen 30-prosenttista Pd/celiteä (320 mg) katalyyttinä. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja vesifaasi vietiin kolme kertaa p-Bondapak-Cie-pylvääseen (50 g, 800 g ja 80 g, H20), 10 jolloin saatiin otsikon yhdiste (82 mg, 30 %) lyofilisoi-tuna jauheena;
Puhtaus: 91,8 % (HPLC, 304 nm); „ UV (H20) 304 (£ 8110); IR (Nujol) 6: 3600 - 3200 (OH), 1750 ja 1600 cm'1 15 (C=0); NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,34 - 4,21 (1H, m, H-l'), 4,231 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,6 Hz, H-5), 3,53 - 3,40 (1H, m, H-4), 3,385 (1H, dd, J = 2,6 Hz, 3 = 6,6 Hz, H-6), 3,14 - 3,05 (2H, m, CH2N), 2,34 (3H, s, SCH3), 2,23 - 2,80 20 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,335 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
Esimerkki 40 (4R,5S,6S)-4-(2"-guanidinoetyyli)-6-[(1'R)-11-hyd- roksietyyli] -3- [ (1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyyli-25 tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2,0]hept-2-eeni-2-kar- boksyy1ihappo OH (CHg)gNHg OH (CH2)2NHC(=NH)NHe so JIX/-SCH*-VS —„
C02H COjH
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti esimerkin 38(4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyy-35 li]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-at- 96311 201 sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (160 mg, 0,432 mmol) 0,04 M pH-arvon 7,4 omaavan fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (25 ml), käsiteltiin 0,1 N NaOH:n vesi-liuoksella (pH säätämiseksi välille 7,6 - 7,8 ja sen pitä-5 miseksi siinä), ja lisättiin annoksittain aminoiminometaa-nisulfonihappoa (533 mg, 4,30 mmol). Seosta sekoitettiin 45 minuuttia, ja pH säädettiin arvoon 6,9 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Vesipitoinen seos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (50 g, H20 -* 1 % - 5 % CH3CN/H20), 10 jolloin saatiin otsikon yhdiste (93 mg, 52 %) lyofilisoi-tuna jauheena; _ Puhtaus: 99,7 % (HPLC, 300 nm); UV (H20) 302 (£ 8300); IR (Nujol) 3400 - 3100 (OH), 1755 (C=0), 1665 15 (C=N) ja 1585 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,886 (1H, s, aromaattinen H), 4,651, 4,577, 4,421, 4,347 (2H, ABq, J = 14,9 Hz, CH2-aromaattinen), 4,3 - 4,17 (1H, m, H-l'), 4,143 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,7 Hz, H-5), 3,405 (1H, dd, J = 2,7 Hz, 20 J = 6,8 Hz, H-6), 3,38 - 3,1 (3H, m, H-4 ja CH2-N), 2,15 -1,95, 1,8 - 1,55 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,315 (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 41 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-aminopropyyli) -3- [ (2-syaanietyy-25 li)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH (CH?)^NH? “ co2h 202 96511 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1*R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 °H <CH2)3N3 OH <CHe)3N3
HicTl>Oi _> h3c /VA_s 10
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti esimerkin 21 vaiheessa B valmistetusta (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(3-atsidopropyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atseti-15 dih-2-onista (2,16 g, 5,90 mmol) valmistettu allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karbok-sylaatti CH3CN:ssa (40 ml), lisättiin tipoittain difenyy-likloorifosfaattia (1,3 ml, 6,5 mmol) ja N,N-di-isopropyy-20 lietyyliamiinia (1,12 ml, 6,5 mmol) ja hiukan 4-dimetyyli-aminopyridiiniä. Seosta sekoitettiin 45 minuuttia, ja saatu enolifosfaatti silyloitiin lisäämällä peräkkäin trime-tyylisilyylikloridia (0,84 ml, 6,5 mmol) ja N,N-di-isopro-pyylietyyliamiinia (1,12 ml, 6,50 mmol).
25 Seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja saatua enoli- ~ fosfaattisilyylieetteriä käsiteltiin syaanietaanitiolilla (640 mg, 7,37 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,27 ml, 7,37 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, minkä jälkeen jää-MeOH-haude korvattiin jäähauteella ja 30 sekoittamista jatkettiin vielä 30 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin syaanietaanitiolia (160 mg, 1,84 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,317 ml, 1,84 mmol), minkä jälkeen sekoitettiin 1 tunnin ajan. Lisättiin vielä syaanietaanitiolia (160 mg, 1,84 mmol) ja N,N-di-isopropyyli-35 etyyliamiinia (0,317 ml, 1,84 mmol), ja kun seosta oli 96311 203 sekoitettu 30 minuuttia, se laimennettiin EtOAc:lla (100 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (3 x 40 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (3 x 40 ml), vedellä (40 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (40 ml), vedellä (40 ml), suola-5 liuoksella (40 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös liuotettiin THF:iin (40 ml), jäähdytettiin -15 °C:seen (jää-MeOH-haude) ja käsiteltiin peräkkäin etikkahapolla (2 ml, 35,4 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuoksella THFrssa 10 (17,7 ml, 17,7 mmol). Seosta sekoitettiin 40 minuuttia, laimennettiin EtOAc:lla (100 ml), pestiin kylmällä 1 N HC1: n vesiliuoksella (20 ml), vedellä (2 x 20 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (20 ml), vedellä (2 x 20 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin sili-15 kageeli-flash-pylvään läpi (50 g, CH2C12 -» 10, 20, 40, 60 % EtOAc/CH2Cl2), jolloin saatiin otsikon yhdiste öljynä (1,41 g, 59,0 %); IR (CH2C12) 3600, 3500 (OH), 2100 (N3), 1780 ja 1710 cm'1 (C=0); 20 XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,07 - 5,87 (1H, m, vi nyylin H), 5,50 - 5,24 (2H, m, vinyylin H), 4,89 - 4,63 (2H, m, allyylin CH2), 4,279 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,7 Hz, H-5), 4,3 - 4,17 (1H, m, H-l’), 3,52 - 3,36 (2H, m, CH2N3), 3,30 - 3,2 (1H, m, H-4), 3,277 (1H, dd, J * 25 2,8 Hz, J = 7,6 Hz, H-6), 3,22 - 2,93 (2H, m, SCH2), 2,82 - 2,56 (2H, m, CH2CN), 2,0 - 1,7 (5H, m, OH, CH2CH2) ja 1,395 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
96311 204 B. (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-syaani-etyyli) tio] -6- [ (1 ' R) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H 2H (CH.KNK,
C0!H
+ 10
2H (CH,),0H
COjN* 15 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]- 6-[(l 'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (561 mg, 1,63 mmol) CH2Cl2:ssa (66 ml), käsiteltiin Pd(PPh3)4:11a (132 mg, 0,110 mmol) ja 20 lisättiin tipoittain 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaattili-uosta (3,3 ml, 1,7 mmol). Seosta sekoitettiin 50 minuuttia, laimennettiin dietyylieetterillä (250 ml) ja uutettiin 0,04 M pH-arvon 7 omaavalla fosfaattiliuoksella (3 x 10 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin 25 dietyylieetterillä (2 x 50 ml) ja pH säädettiin arvoon 5,9 ^ 1 M NaH2P04-puskurin vesiliuoksella. Tähän seokseen (raa-katuotteena oleva (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-(2-syaanietyylitio)-6-[(1'R)-l’-hydroksietyyli]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatinnatriumsuola) 30 lisättiin 30-prosenttista Pd/celiteä (660 mg) ja ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1 tunti 5 °C:ssa (jäähaude, alku-lämpötila, 15 °C loppulämpötila). Katalyytti poistettiin suodattamalla ja pestiin vedellä (2 x 10 ml). Vesipitoinen 35 liuos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi 96311 205 (155 g, H20 -♦ 1 % CH3CN), jolloin saatiin otsikon yhdistettä, 3-aminopropyyliä, ja 3-hydroksipropyylijohdannaista (363 mg), joka on kuvattu esimerkissä 42, 74:26-suhteisena seoksena. Seos vietiin jälleen käänteisfaasipylvääseen 5 (180 g, pH 6,0, 0,01 M fosfaattipuskuri), jolloin saatiin molemmat johdannaiset fosfaattisuolojen kanssa.
3-aminopropyyliyhdisteen suola poistettiin kään-teisfaasikromatografialla, jolloin saatiin puhdas otsikon yhdiste (182 mg, 33 %); 10 Puhtaus: 98,3 % (HPLC 300 nm); UV (HjO) XBax: 300 (7900); w IR (Nujol) vBax: 1755 ja 1585 cm’1 (OO); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,34 - 4,21 (1H, m, H-l’), 4,268 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,8 Hz, H-5), 3,408 (1H, 15 dd, J = 2,5 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,47 - 3,38 (1H, m, H-4), 3,23 - 2,91 (4H, m, CH2NH2, CH2S), 2,89 - 2,80 (2H, m, CH2CN), 1,92 - 1,50 (4H, m, CH2CH2) ja 1,334 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
Esimerkki 42 20 Natrium-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6- [ (1 Ή) -1'-hydroksietyyli]-4-(3"-hydroksipropyyli)- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti OH (CH,),*, 2H (CHt),NHe
COj^S;. C0,H
J.
30 SH Wtw COjNi
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti esimerkin 35 41 vaiheen A allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3- 96311 206 [(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (661 mg, 1,63 mmol) CH2Cl2:ssa (66 ml), käsiteltiin Pd(PPh3)4:11a (132 mg, 0,110 mmol) ja lisättiin tipoittain 0,5 M nat-5 riumetyyli-2-heksanoaattiliuosta (3,3 ml, 1,7 mmol). Seosta sekoitettiin 50 minuuttia, laimennettiin dietyylieet-terillä (250 ml) ja uutettiin 0,04 M pH-arvon 7 omaavalla fosfaattiliuoksella (3 x 10 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (2 x 50 ml) ja pH 10 säädettiin arvoon 5,9 IM NaH2P04-puskurin vesiliuoksella.
Tähän seokseen (raakatuotteena oleva (4R,5S,6S)-4-(3"-at-sidopropyyli)-3-(2-syaanietyylitio)-6-[(1'R)-l'-hydroksi- ^ etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatin natriumsuola) lisättiin 30-prosenttista Pd/celiteä 15 (660 mg), ja sitä ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1 tunti 5 °C:ssa (jäähaude, alkulämpötila, 15 °C loppulämpötila). Katalyytti poistettiin suodattamalla ja pestiin vedellä (2 x 10 ml). Vesipitoinen liuos vietiin p-Bondapak-Cie-20 käänteisfaasipylvään läpi (165 g, H20 -» 1 % CH3CN), jolloin saatiin esimerkin 41 3-aminopropyyliyhdistettä ja otsikon 3-hydroksipropyyliyhdistettä (363 mg) 74:26-suhteisena seoksena. Seos vietiin jälleen käänteisfaasipylvääseen (180 g, pH 6,0, 0,01 M fosfaattipuskuri), jolloin saatiin 25 molemmat johdannaiset fosfaattisuolojen kanssa. — 3-hydroksipropyyliyhdisteen suola poistettiin kään-teisfaasikromatografiällä (H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (85 mg, 14 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 92,5 % (HPLC 300 nm); 30 IR (Nujol) vBM: 1745 ja 1695 cm'1 (C=0); UV (H20) *Bax: 302 (9600); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,34 - 4,21 (1H, m, H-l'), 4,270 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 12,0 Hz, H-5), 3,65, 2H, leveä t, J = 6,0 Hz, CH20), 3,450 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 35 6,0 Hz, H-6), 3,45 - 3,35 (1H, m, H-4), 3,25 - 3,06, 207 96 311 3.03 - 2,9 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,88 - 2,80 (2H, m, CH2-CN), 1,94 - 1,41 (4H, m, CH2CH2) ja 1,331 ppm (3H, d, J = 6.4 Hz, CH3).
Esimerkki 43 5 (4R, 5S, 6S)-4- [3*'“ (N-formimidoyyli )aminopropyyli] - 3-[ (2-syaanietyyli) tio] -6- t (1 ' R) -1' -hydroksietyy-li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-kar-boksyy1ihappo
SH <CH2)3NH2 OH (CH,)3HHCH=NH
“ .AJL .rKA
3 ΓΓ >^S(CH2)2CN -, H3C rT>-S(CH2)2CN
/ Λ
C02H C02H
15 Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti esimerkin 41 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-syaani etyyli )tio] -6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (135 mg, 0,400 mmol) 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipus-20 kurin vesiliuoksessa (25 ml), lisättiin 0,1 N NaOH:n vesi-liuosta pH:n säätämiseksi välille 8,2 - 8,4 ja bentsyyli-formimidaattivetykloridia (685 mg, 4,00 mmol) annoksittain; vesipitoisen seoksen pH pidettiin välillä 8,0 - 8,4. Seosta sekoitettiin 10 minuuttia ja sen jälkeen pH säädet- ^ 25 tiin arvoon 7,0 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Liuos vietiin kaksi kertaa p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (30 g, H20 -» 1 %, 2 % -CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (99 mg, 69 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 97,8 % (HPLC 300 nm); 30 UV (H20) 300 (9350); IR (Nujol) vmax: 1760 (C=0), 1710 (C=N) ja 1590 cm'1 (C=0); NMR (D20 , 200 MHz) 6: 7,83, 7,81 (1H, 2s, CH), 4,725 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,1 Hz, H-5), 4,31 - 4,20 35 (1H, m, H-l' ), 3,50 - 3,35 (4H, m, H-4, H-6 ja CH2N), 208
Q/C Τζ ' η > Ο vj I I
3,22 - 3,08 ja 3,02 - 2,91 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,89 -2,80 (2H, m, CH2CN), 1,92 - 1,50 (4H, m, CH2CH2) ja 1,323 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 44 5 (4R, 5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[ (1'R)-1 *-hydrok- sietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo |H <CH2)3NH2 ”'c co2h 15 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3,,-atsidopropyyli)-6- [(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CH2)3N3 OH (CH2)3N3 C02 25 Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti ^ allyyli-(4R,5S,6S)-6'-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-4-(3"-at-sidopropyyli)-3,7-diokso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti [valmistettu kuten esimerkin 21 vaiheessa B (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(3-at-30 sidopropyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-okso-propyyli]atsetidin-2-onista (4,0 g, 11 mmol), kuumentamalla palautusjäähdyttäen bentseenissä (300 ml) Rh(0Ac)2:n (100 mg) kanssa 45 min] CH3CN:ssa (100 ml), lisättiin ti-poittain difenyylikloorifosfaattia (2,6 ml, 12 mmol), N,N-35 di-isopropyylietyyliamiinia (2,2 ml, 12 mmol) ja 4-N,N- 209 56311 dimetyyliaminopyridiiniä (20 mg). Seosta sekoitettiin 1 tunti, sen jälkeen käsiteltiin 4-pikolyylimerkaptaanilla (2,07 g, 16,5 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (3,1 ml, 17 mmol) ja pidettiin 18 tuntia 5 °C:ssa. Seos 5 laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), pestiin kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (1 x 100 ml), H20:lla (2 x 100 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (1 x 100 ml), vedellä (2 x 100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (5 g) vietiin silikageeli-flash-kerroksen 10 läpi (150 g, heksaani/EtOAc -* CH3CN), jolloin saatiin otsikon yhdiste (3,0 g, 62 %) öljynä.
w IR (CH2C12) 3680 - 3600 (OH), 2100 (N3), 1780 ja 1710 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,58 - 8,55 (2H, m, aro-15 maattinen H), 7,29 - 7,20 (2H, m, aromaattinen H), 6,06 -5,86 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,89 - 4,63 (2H, m, allyylin CH2), 4,27 - 4,14 (1H, m, H-l' ), 4,109 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 4,10, 4,03, 3,98, 3,91 (2H, ABq, J = 14,2 Hz, CH2-aromaattinen), 20 3,43 - 3,22 (2H, m, CH2-N), 3,200 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,6 Hz, H-6), 3,10 - 2,98 (1H, m, H-4), 2,19 (1H, leveä s, OH), 1,91 - 1,43 (4H, m, CH2CH2-4) ja 1,360 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
B. Natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-- 25 [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CH2)3N3 JH (CH2)3N3
30 H3C H’C
00g C02Na
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-( 3"-atsidopropyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyy-35 li] -3- [ (pyridin-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- 96311 210 [3.2.O]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (3,0 g, 6,8 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml), käsiteltiin Pd(PPh3)4:11a (150 mg) ja 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuoksella (14 ml, 7 mmol) etyyliasetaatissa. Seosta sekoitettiin 60 minuut-5 tia, sen jälkeen laimennettiin heksaanin ja dietyylieet-terin seoksella (1/1) ja uutettiin 0,05 M fosfaattipuskurin vesiliuoksella (1 x 100 ml ja 2 x 25 ml). Vesipitoiset kerrokset yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (100 ml) ja vietiin p-Bondapak-C18-pylvään läpi (300 g, 10 H20 -> 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,8 g, 30 %); XH NMR (D20 , 200 MHz) 6: 8,50 - 8,46 (2H, m, aro- ^ maattinen H), 7,50-7,20 (2H, m, aromaattinen H), 4,28 - 4,15 (1H, m, H-l'), 4,19, 4,11, 4,03, 3,95 (2H, ABq, J = 15 14,6 Hz, CH2-aromaattinen), 4,073 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,37 - 3,29 (3H, m, H-6 ja CH2N), 3,16 - 3,06 (1H, m, H-4), 1,8 - 1,38 (4H, 2 m-kohtaa, CH2CH2-4) ja 1,288 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
C.(4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-l'-hyd-20 roksietyyli] -3-[ (pyridin-4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-at- sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H (CH2)3N3 OH (CHjJjNHj
C02Na C Dj H
Kylmää liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)- 4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(py-30 ridin-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept- 2-eeni-2-karboksylaatti (270 mg, 0,60 mmol) vedessä (55 ml), ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 5 °C:ssa (jäähaude) 2,5 h 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypai-neessa käyttäen 5-prosenttista Pd/alumiinioksidia (540 mg) 35 katalyyttinä. Katalyytti poistettiin suodattamalla, ja
m Mil«4 M 4 Ml I
211 563 n vesipitoinen liuos vietiin p-Bondapak-Cie-käänteisfaasi-pylvään läpi (50 g, H20 -* 7 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (127 mg, 53 %) lyofilisoituna jauheena; Puhtaus: 97,2 % (HPLC, 300 nm); 5 UV (H20) Xnax: 262 (£ 5210), 304 (£ 7950); IR (Nujol) vBax: 3600 - 3100 (OH), 1760 ja 1600 cm'1 (C=0); NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,49 - 8,46 (2H, m, aromaattinen H), 7,52 - 7,24 (2H, m, aromaattinen H), 4,28 -10 4,16 (1H, m, H-l'), 4,16, 4,08, 4,02, 3,94 (2H, ABq, J = 14,6 Hz, CH2-aromaattinen), 4,076 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = w 6,5 Hz, H-6), 3,20 - 3,10 (1H, m, H-4), 3,00 - 2,93 (2H, m, CH2N), 1,80 - 1,38 (4H, m, CH2CH2-4) ja 1,292 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
15 Esimerkki 45 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-t(1'R)-1’-hydrok-sietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH (CH ) MH.
20 I 2^2
25 C02H
A. 6-atsidoheksanoyylikloridi (C0C1)2 N3(CH2)5C02H -> N3(CH2)5C0C1 30 ; Liuokseen, jonka muodosti 6-atsidoheksaanihappo (151 g, 0,96 mol) [M. Rothe ja K. Gehrke, Makromol. Chem. 83, 1 (1965); C.A. 64:4934d.] kuivassa CH2Cl2:ssa (500 ml), lisättiin 22 eC:ssa oksalyylikloridia (88,0 ml, 1,0 mmol) 35 tipoittain 30 minuutin aikana. 2 tunnin kuluttua lisättiin 96311 212 kaksi tippaa N,N-dimetyyliformamidia, ja liuosta sekoitettiin 22 °C:ssa käyttäen typpeä suojakaasuna 18 tuntia. Sen jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin raakatuotteena happokloridia kirkkaana öljynä, joka käy-5 tettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa: IR (NaCl, kalvo) vMX: 2100 (N3) ja 1800 cm’1 (C=0); lH NMR (200 MHz, CDC13) δ: 1,3 - 1,9 (m, 6H, CH2-3, -4 ja -5), 2,9 (t, J = 7 Hz, 2H, CH2-2) ja 3,3 ppm (t, J = 6.5 Hz, 2H, CH2-6).
10 B. 2-pikolyyli-6-(atsido)tioliheksanoaatti N3(CH2)5C0C1 + I -> N3<CH2)5C0SCH2—J ~ 15 Liuos, jonka muodosti 2-pikolyylimerkaptaani (130,6 g, 1,04 mol) kuivassa CH2Cl2:ssa (1,3 1), jäähdytettiin 0 - 5 °C:seen, käsiteltiin pyridiinillä (85 ml, 1.05 mol), ja lisättiin tipoittain 1 tunnin aikana 6-atsi-doheksanoyylikloridin (179 g, 1,02 mmol) liuos CH2Cl2:ssa 20 (200 ml). Vielä yhden tunnin jälkeen 0-5 °C:ssa orgaa ninen faasi pestiin vedellä, kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 244 g (90 %) tioesteriä kirkkaana öljynä, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa: , 25 IR (NaCl, kalvo) vBax: 2100 (N3) ja 1680 cm'1 (tio- esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,3 - 1,8 (m, 6H, CH2-3, -4 ja -5), 2,6 (t, J = 7,34 Hz, 2H, CH2-2), 3,25 (t, J = 6,7 Hz, 2H, CH2-6), 4,25 (s, 2H, SCH2), 7,16 (m, 1H, pyri-30 diinin H-5), 7,33 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,62 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,53 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
il ii t ιίη I I i a : .
96311 213 C. 2-pikolyyli-6-(atsido)tioliheksanoaatin O-tert-butyylidimetyylisilyylieetteri OTBons 5 N3(CH2)5C0SCH5J^^ - r^> N N3(CHs)4 SCHj—
Liuos, jonka muodosti 2-pikolyyli-6-(atsido)tioli-heksanoaatti (244 g, 0,92 mol) 1 l:ssa kuivaa CH2Cl2:a, 10 jäähdytettiin -10 eC:seen, käsiteltiin trietyyliamiinilla (260 ml, 1,86 mol), ja sen jälkeen lisättiin tert-butyyli-^ dimetyylisilyylitrifluorimetaanisulfonaattia (318 ml, 1,38 mol) tipoittain 40 minuutin aikana. Seoksen lämpötilan annettiin saavuttaa 22 °C, ja liuosta sekoitettiin 15 3 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin heksaa- neilla (1,5 1), pestiin kylmällä vedellä (2 x 1 1), kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS0«). Sitten liuosta käsiteltiin aktivoidulla hiilellä (neutraali), suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä. Jäljelle jää-20 nyttä mustaa tervamaista ainetta uutettiin heksaaneilla (1,5 1) ja uute haihdutettiin, jolloin saatiin 315 g (90 %) raakatuotteena silyylienolieetteriä mustana öljynä, joka käytettiin sellaisenaan kytkentävaiheessa. 1H-NMR:n mukaan tämä tuote on 1:1-suhteinen E- ja z-isomeerin seos. ^ 25 IR (NaCl, kalvo) \5Bax: 2090 (N3), 1625 ja 1590 cm'1; NMR (200 MHz, CDC13) 6; 0,2 ja 0,24 (2 x s, 6H, SiCH3), 0,97 ja 0,98 (2 x s, 9H, Si-t-Bu), 1,2 - 1,8 (m, 4H, CH2-4 ja -5), 2,0 (m, 2H, CH2-CH=C), 3,17 (m, 2H, CH2-N3), 3,95 ja 4,03 (2 x s, 2H, SCH2), 4,82 ja 4,97 (2 x t, 30 1H, J = 7,26 Hz ja 7,58 Hz, 2 x 1H, CH2-CH=C), 7,14 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,26 (m, 1H, pyridiinin H-3), 7,6 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,55 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
™ »6311 D. (3S,4S)-3-[(1’R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R) -l”-(pyridin-2-yyli)metyylitiokar-bonyyli-5"-atsidopentyyli]atsetidin-2-oni OTBOHS OT0OflS i u 5 J _ oisons . <'»*>*"* *3^'", I / \ H3r\-fVC0SCH2-l!^
\ N,<CH*)4 SCHS-^P N
Kylmään (0 - 5 °C) suspensioon, jonka muodosti 10 juuri fuusioitu sinkkikloridi (151 g, 1,1 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (2,6 1), lisättiin 238 g (0,83 mol) (3S, 4R)-4-asetoksi-3-[ (1 Ή)-1 ’ -tert-butyylidimetyylisilyy- _ lioksietyyli]atsetidin-2-onia ja sen jälkeen liuosta, jonka muodosti raakatuotteena oleva 2-pikolyyli-6-(atsido)-15 tioliheksanoaatin O-tert-butyylidimetyylisilyylieetteri (315 g, 0,83 mol) kuivassa dikloorimetaanissa. Liuoksen lämpötilan annettiin hitaasti saavuttaa 22 °C (* 3 h), ja saatua homogeenista seosta sekoitettiin 18 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos pestiin peräkkäin vedellä, kylläisellä 20 NH4Cl:lla, kylläisellä NaHC03:lla, vedellä ja suolaliuok sella. Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen haihdutettiin liuotin, jolloin saatiin 494 g tummaa öljyä, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. 1H-NMR-analyysin avulla tämä raakatuote todettiin l’R- ja 1’S-pentyylin 25 8:2-suhteiseksi seokseksi. Pieni erä puhdistettiin silika- ^ geelillä (eluointi tolueeni-EtOAc, 1:1), jolloin saatiin puhdasta otsikon yhdisteen isomeeriä valkoisena kiteisenä tuotteena: s.p. = 81 - 83 °C (heksaanit); UV (EtOH) ληΜ: 236 (5576) ja 264 nm (4 989); 30 IR (KBr) vBax: 2100 (N3), 1758 (β-laktaamin C=0), 1718 (esterin C=0) ja 1680 cm'1 (tioesterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04 (s, 6H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, Si-t-Bu), 0,99 (d, J = 6,32 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 -2,0 (m, 6H, pentyylin CH2-2, -3 ja -4), 2,79 (m, 1H, pen-35 tyylin H-l), 3,04 (leveä s, 1H, atsetidinonin H-3), 3,23 l· Uit UI) I I -I e , - 96311 215 (t, J = 6,56 Hz, 2H, CH2N3), 3,80 (dd, JH3 H4 = 2,08 Hz, JH3 H1 = 6,97 Hz, 1H, atsetidinonin H-3), 4,14 (m, 1H, CH3CH0), 4,26 (s, 2H, SCHj), 5,85 (leveä s, 1H, NH), 7,18 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridii-5 nin H-3), 7,62 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,5 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C23H37N503SSi: C 56,18; H 7,58; N 14,24.
Todettu; C 56,25; H 7,59; N 14,10.
10 E. (3S,4S)-3-[(1*R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyy- lioksietyyli] -4- [ (1"R)-l"-karboksi-5"-atsidopentyyli]at-setidin-2-oni
0TBDI1S OTBDnS
9 <CH2>4N3 . <CH?).N3
li ...» XX
h3^ '1—[ cosch2-1^^ h2o2 h3c^ "'I—|XXC02H
λ—N * X—N
Liuos, jonka muodosti raakatuotteena oleva (3S,4S)-20 3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-
[(1"R)-1"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-5"-atsido-pentyyli]atsetidin-2-oni (n. 400 g, 0,83 mol) 3 l:ssa tet-rahydrofuraania, jäähdytettiin 0 °C:seen ja siihen lisättiin 30-prosenttista vetyperoksidia (1 1, 11,6 mol) varo-~ 25 vasti annoksittain, ja sen jälkeen lisättiin 2,8 1 1 M
NaOH:a tipoittain 2 tunnin aikana. Liuosta sekoitettiin vielä kaksi tuntia 0-5 ®C:ssa ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 2,0 3 N HCl:lla (n. 1 1). Sen jälkeen reaktioseosta uutettiin EtOAc:lla (2 1 ja 3 x 1 1), ja yhdistetty orgaa-30 ninen uute pestiin vedellä, 1 M NaHS03:lla, sekoitettiin ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin tumma öljy, joka liuotettiin heksaaneihin (2 1) ja uutettiin kylläisellä NaHC03:lla (4 x 1 1). Yhdistetty vesifaasi jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja tehtiin happamaksi pH-ar-35 voon 2 3 N HCl:lla. Muodostunut valkoinen sakka otettiin 216 9631Ί talteen ja pestiin vedellä. Kostea kakku liuotettiin CH2Cl2:iin, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin saatiin 114 g raakatuotetta. Kiteytettiin etyyliasetaatin ja heksaanien seoksesta, jolloin saatiin 67,4 g (21 %) 5 puhdasta otsikon happoa valkoisina levyinä; s.p. 132 - 133 eC.
IR (KBr) vB„: 3280 (NH), 2500 (C00H), 2110 (N3), 1760 (olkapää), 1715 ja 1690 cm'1 (hapon ja B-laktaamin C=0); 10 NMR (200 MHz, CDC13) 6; 0,06 ja 0,07 (2 x s, 2 x 3H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,17 (d, J = 6,29 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 1,8 (m, 6H, pentyylin CH2-2, -3 ja -4), ^ 2,64 (m, 1H, pentyylin H-l), 3,14 (m, 1H, H-3), 3,29 (t, J = 6,5 Hz, 2H, CH2N3), 3,87 (dd, JH4 H3 = 1,90 Hz, JH4 H1 = 15 6,22 Hz, 1H, H-4), 4,20 (dq, JH CH3 = 6,29 Hz, JH H3 = 4,04 Hz, 1H, CH,CHO) ja 6,46 ppm (s, 1H, NH).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C17H32N404S: C 53,10; H 8,39; N 14,57.
Todettu: C 53,08; H 8,12; N 14,56.
20 F. (3S,4R)-4-[(l"R)-l"-(4-atsidobutyyli)-3"-allyy- lioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]-3-[(1TR)-1'-tert-butyy-lidimetyylisilyylioksietyyli]atsetidin-2-oni
OTBDMS OTBOMS
<ch2)4n3 <ch8>«n3 H 3 c"\ Ac 0 g H H 3 0 8 //\ “ #—\ °
0' H 0X H
Suspensiota, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(1'R)-l'-30 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-karboksi-5"-atsidopentyyli]atsetidin-2-oni (67,0 g, 0,174 mol) kuivassa CH3CN:ssa (1,5 1), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna 1,1-karbonyyli-di-imidatsolilla (31,1 g, 0,192 mol), ja saatua seosta 35 sekoitettiin 2 tuntia. Sen jälkeen liuos väkevöitiin tyh- 96311 217 jössä, jolloin saatiin raakatuote, imidatsolidi, öljynä: IR (NaCl, kalvo) 2100 (N3), 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1730 cm-1 (imidatsolidin C=0).
Raakatuotteena oleva imidatsolidi, joka oli kuivas-5 sa CH3CN:ssa (200 ml), lisättiin sitten liuokseen, jonka muodosti kuivattu magnesiummonoallyylimalonaatti (87,0 g, 0,28 mol) bentseenissä (1,4 1), ja saatua seosta sekoitettiin 60 - 65 °C:ssa 16 tuntia. Sen jälkeen jäähdytetty reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (1 1), pestiin 10 peräkkäin kylmällä vedellä, 0,1 N HClrlla, kylläisellä NaHC03:lla, vedellä ja suolaliuoksella. Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen haihdutettiin liuotin, jolloin saatiin 80,3 g raakatuotetta, ketoesteriä, öljynä, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Pieni erä puhdistet-15 tiin silikageelillä, jolloin saatiin puhdasta otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä. 1H-NMR:n mukaan tämä tuote oli keto- ja enolimuodon 1:1-suhteinen seos: IR (NaCl, kalvo) vB„: 2100 (N3), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 1715 cm’1; 20 XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,05 ja 0,06 (2 x s, 6H,
SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,10 ja 1,17 (2d, J = 6,33 Hz ja J = 6,28 Hz, 3H, CH,CH0), 1,2 - 1,8 (m, 6H, bu-tyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,1 - 2,3 (m, 1H, butyylin H-l), 1,2 - 2,3 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,9 ja 2,97 ' 25 (2 x m, 1H, atsetidinonin H-3), 3,27 (leveä t, 2H, CH2N3), 3,54 (s, oksopropyylin CH2-3, ketomuoto), 3,83 (kaksi päällekkäistä dd:a, 1H, atsetidinonin H-4), 4,17 (m, 1H, CH3-CHO), 4,64 (m, 2H, allyylin CH2), 5,07 (s, oksopropyylin CH-3, enolimuoto), 5,2- 5,4 ja 5,8- 6,0 (2xm, 2H ja 30 1H, allyylin CH) ja 6,0 ppm (leveä s, 1H, NH).
96311 218 G. (3S,4R)-4-[(1"R)-1”-(4-atsidobutyyli)-3"-allyy-lioksikarbonyyli-3"-diatso-2"-oksopropyyli] -3- [(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]atsetidin-2-oni _ OTBDMS OTBOnS (pu \ u 5 ‘S".’.". , H3r "*"\—p-tsn3 H3(r\—AAco^ //\ ° sy~\ °
(Γ Ή 0 H
10 Liuos, jonka muodosti raakatuotteena oleva (3S,4R)- 4- [ (1 "R) -1" - (4-atsidobutyyli) -3 " -allyylioksikarbonyyli-2" -oksopropyyli]-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyyliok-sietyyli]atsetidin-2-oni (79 g, 0,169 mol) asetonitriilis-sä (400 ml), jäähdytettiin 0-5 ®C:seen ja käsiteltiin p-15 tolueenisulfonyyliatsidin (40 g, 0,20 mol) liuoksella ase-tonitriilissä (500 ml). Sen jälkeen lisättiin tipoittain (5 min aikana) trietyyliamiinia (28,3 ml, 0,20 mmol), ja saatua seosta sekoitettiin 2 tuntia. Sen jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä, ja jäännöstä trituroitiin dietyy-20 lieetterin ja heksaanien seoksen (1:1) kanssa. Kiteinen p-tolueenisulfonamidi otettiin talteen suodattamalla ja suo-dos haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon diatsoyhdiste öljynä (86 g). Tämä aine voidaan käyttää sellaisenaan si-lyylieetterin lohkaisuun.
25 Osa raakatuotteesta (30 g) puhdistettiin silikagee- ^
Iillä (9 x 13 cm, eluointi heksaanit-EtOAc, 9:1 -» 7:3), jolloin saatiin 17,5 g (vastaa 59 %:n saantoa haposta, kaksi vaihetta) otsikon diatsoatsetidinonia kirkkaana öljynä: 30 IR (NaCl, kalvo) vn„: 2140 (N2), 2100 (N3), 1760 (β-laktaamin C=0), 1720 (esterin C=0) ja 1650 cm'1; XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,05 ja 0,06 (2 x s, 2 x 3H, SiCH3), 0,86 (s, 9H, t-Bu), 1,17 (d, J = 6,31 Hz, 3H, CH3CH0), 3,04 (m, 1H, atsetidinonin H-3), 3,25 (m, 2H, CH2-35 N3), 3,84 (dd, JH4-H3 « 2,09 Hz, JH4 H1 = 5,33 Hz, 1H, atseti- <U - 1-11:1 t ili I. 1 i iil . .
96311 219 dinonin H-4), 4,07 (m, 1H, oksopropyylin H-l), 4,17 (dq, jh.ch3 = 6,31 Hz, Jh.h3 * 3/94 Hz' 1H, CH3CHO), 4,72 (m, 2H, allyylin CH2), 5,3 - 5,4 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 5,84 ppm (s, 1H, NH).
5 H. (3S,4R)-4-[(1"R)-1"-(4-atsidobutyyli)-3"-allyy- lioksikarbonyyli-3"-diatso-2"-oksopropyyli] -3- [(1’R)-11 -hydroksietyyli]atsetidin-2-oni OTBDNS(CHg)4N3 OH <CH2)<N3 10 HCl-EtOH CO, w <r '« \
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-4-[(l"R)-l"-(4-at-15 sidobutyyli) -3 " -allyylioksikarbonyyli-3 " -diatso-2 " -okso- propyyli]-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli]atsetidin-2-oni (17,5 g, 35,5 mmol) etanolissa (300 ml), käsiteltiin 24 eC:ssa 1 N HClrlla (100 ml) ja sekoitettiin pimeässä 16 tuntia. Reaktioseos neutraloitiin 20 Na2C03:lla ja väkevöitiin tyhjössä. Jäljelle jäänyttä vesipitoista liuosta uutettiin etyyliasetaatilla (500 ml ja 250 ml) ja yhdistetty orgaaninen faasi pestiin vedellä, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin kiinteä aine, joka kiteytettiin di-25 etyylieetterin ja heksaanien seoksesta ja emäliuos puhdistettiin silikageelillä (etyyliasetaatti), minkä jälkeen saatiin 11,8 g (88 %) otsikon yhdistettä valkoisina neuloina: s.p. =73-74 °C; UV (EtOH) 260 nm (8365); 30 IR (KBr) VBax: 3350 (OH), 2160 (N2), 2080 (N3), 1738 (β-laktaamin C=0), 1716 (esterin C=0) ja 1650 cm'1; JH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,30 (d, J = 6,33 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,28 (d, J = 3,8 Hz, 1H, OH), 3,0 (dd, JH3 H< = 2,0 Hz, JH3 H1 = 35 6,97 Hz, 1H, atsetidinonin H-3), 3,27 (t, J = 6,58 Hz, 2H, 96311 220 CH2N3), 3,8 (dd, JH4,H3 = 2,0 Hz, JH4Hl = 6,55 Hz, 1H, H-4), 3,95 (m, 1H, oksopropyylin H-l), 4,15 (m, 1H, CH3CHO), 4,73 (m, 2H, allyylin CH2), 5,3 - 5,4 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 6,0 ppm (leveä s, 1H, NH).
5 Analyyttisesti laskettu yhdisteelle ^16^22^6^5 · C 50,79; H 5,86; N 22,21.
Todettu: C 50,87; H 5,87; N 22,31.
I. Allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6- [(1'R)-1’ -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]-10 heptaani-2-karboksylaatti OH <CH2J4N3 OH <CH2)4N3
"3^Vl0IVCO!/^' __ H3C Yfi-J
15 cr XH (K \ .
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-4-[(l"R)-l"-(4-at-sidobutyyli ) -3" -allyylioksikarbonyyli-3 " -diatso-2" -okso-propyyli]-3-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]atsetidin-2-oni 20 (1,88 g, mmol) kuivassa bentseenissä (60 ml), käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna rodium(II)oktanoaattidimee-rillä (0,050 g) ja kuumennettiin palautusjäähdyttäen (hau-delämpötila 90 °C) 20 minuuttia. Sen jälkeen liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin otsikon bisyklistä 25 ketonia öljynä: ~~ IR (NaCl, kalvo) ·νη„χ: 2100 (N3), 1762 (β-laktaamin C=0) ja 1745 cm'1; ΧΗ NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,41 (d, J = 6,26 Hz, 3H, CH2CHO), 1,4 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,7 30 (m, 1H, H-4), 3,2 - 3,4 (m, 3H, H-6 ja CH2N3 päällekkäin), 4,28 (dd, Jh5 h6 = 2,37 Hz, JH5M = 8,15 Hz, 1H, H-5), 4,3 (m päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CHO), 4,65 (s, 1H, H-2), 4,66 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,4 ja 5,8 - 6,0 ppm (2 x m, 2 ja 1H, allyylin CH).
- 96311 221 J. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4”-atsidobutyyli)-6- [(1rR)-1' -hydroksietyyli] -3- [pyridyl-3-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti _ 2H <ch2>4n3 OH <ch2)4n3 “X- — Ή-ο * \o2/^ 0 λο2/^ 10 Liuos, jonka muodosti allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(4"- atsidobutyyli )-6- [(1’R)-1' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-w atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (4,97 mmol) kuivassa CH3CN:ssa (30 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (1,40 g, 15 5,21 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin 10 minuutin aika na N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,91 ml, 5,21 mmol). Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiini-kide, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Sitten lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,3 ml, 7,4 mmol) 20 ja sen jälkeen 3-pikolyylitiolia (0,93 g, 7,4 mmol). Sitten reaktioseosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 4 tuntia, ja sen jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä etyyliasetaattia (300 ml) ja kylmää vettä. Orgaaninen faasi pestiin pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, suolaliuoksella 25 ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (3,5 x 10 cm). Eluoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 1,41 g (62 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) ynax: 2100 (N3), 1770 (S-laktaamin 30 C=0) ja 1705 m'1 (esterin C=0); *Η NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,26 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,1 (m, 1H, H-4), 3,16 (dd, JH6H5 = 2,72 Hz, JH6-H1 = 7,33 Hz, 1H, H-6), 3,32 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2N3), 4,02 (ABq, 2H, 35 SCH2), 4,14 (dd, JH5.H6 = 2,72 Hz, JH5>H4 = 9,56 Hz, 1H, H-5), 96311 222 4,22 (m, 1H, CH3CHO), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,3 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,7 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,5 ppm (m, 2H, pyridiinin H-2 ja H-6).
5 K. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1'R)-1'-hyd- roksietyyli]-3-[pyridin-3-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H <CHe)4N3 OH <CHe)4NH2
” - -*y0—Q
' \o.H
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-15 atsidobutyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,12 g, 2,45 mmol) etyyliasetaatissa (40 ml), käsiteltiin 22 eC:ssa ja käyttäen typpeä suoja-kaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] 20 (0,050 g) ja 5,4 ml:11a (2,7 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyli- heksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 20 minuutin kuluttua reaktioseosta uutettiin kylmällä vedellä (3 x 20 ml), ja yhdistettyä vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesifaasia 25 hydrattiin käyttäen 5-prosenttista palladiumia alumiiniok-sidilla (1,2 g) 0 - 5 °C:ssa ja 310 kPa:n (45 psi:n) vety-paineessa 1,5 h (pH-arvo alussa 6,8, pH-arvo lopussa 9,6). Lisättiin 20 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, minkä jälkeen katalyytti suodatettiin, ja suodos kro-30 matografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 14 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 -10 %) vedessä, jolloin saatiin 0,489 g (51 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen: [a]22 -3,5° (c 1,0, H20); 96311 223
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98,7 % p-Bondapak-Cie: 11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 9,6 minuuttia; 5 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λ*,,*: 268 (5740) ja 306 nm (8810); IR (KBr) 0Ba3(: 1755 (B-laktaamin C=0) ja 1585 cm*1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, J = 6,33 Hz, 3H, 10 CHjCHO), 1,2 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,96 (t, J = 7,6 Hz, 2H, CH2N3), 3,15 (m, 1H, H-4), 3,29 (dd, ^ Jh6,h5 = 2,54 Ha, JH6H1 = 6,36 Hz, 1H, H-6), 4,07 (ABq, JM = 14,2 Hz, AV 24,3 Hz, 2H, SCH2), 4,07 (päällekkäin SCH2:n kanssa, 1H, H-5), 4,22 (m, 1H, CH3CH0), 7,44 (dd, JH5 H6 = 15 4,'95 Hz, JH5 H4 = 2,9 Hz, 1H, pyridiinin H-5), 7,88 (m, 1H, pyridiinin H-4), 8,43 (dd, JH6H5 = 4,95 Hz, JH6 H4 = 1,52 Hz, 1H, pyridiinin H-6) ja 8,52 ppm (d, JH2 H4 = 1,75 ppm, 1H, pyridiinin H-2).
Esimerkki 46 20 (4R,5S,6S)-4-(4"-N-formimidoyyliaminobutyyli)-6- [ (1 'R) -11 -hydroksietyyli] -3-[ (pyridin-3-yyli)metyy-litio]-7-okso-l-atsabxsyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 25 TH <ch2)4nh2 oh <chs)4Nh-c-h -
coeH C0gH
30 : Esimerkin 45 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6- [(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,175 g, 0,45 mmol) kylmän (0 - 5 eC) vesiliuoksen 35 (15 ml) pH säädettiin arvoon 8,5 1 M NaOHrlla. Sen jälkeen 96311 224 lisättiin bentsyyliformimidaattivetykloridia (0,38 g, 2,2 nunol) pieninä annoksina 10 minuutin aikana niin, että pH pidettiin samalla välillä 8 - 8,5 IM NaOHrlla. Vielä 20 minuutin jälkeen 0-5 °C:ssa lisättiin 20 ml 0,2 M pH-5 arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja seos pestiin Et0Ac:lla (20 ml). Sen jälkeen vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi ja kro-matografoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gra-10 dienttia (0 - 5 %) vedessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,120 g (64 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: ^ [a]84 -3,2° (c 0,5, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 15 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20 pH 7,4 fosfaatti- puskuri, virtausnopeus 2 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 6,44 minuuttia.
UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 266 (6300) ja 304 nm (9600); 20 IR (KBr) V max: 1755 (β-laktaamin C=0), 1715 ja 1590 cm*1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,28 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,2 (m, 3H, H-6 ja CH2NH2), 4,07 (päällekkäin SCH2:n kanssa, 25 1H, H-5), 4,07 (ABq, JAB = 14,3 Hz, AV- 23,5 Hz, 2H, SCH2), ~ 4,22 (m, 1H, CH3CHO), 7,44 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,79 (s, 1H, CH=NH), 7,89 (m, 1H, pyridiinin H-4), 8,43 (m, 1H, pyridiinin H-6) ja 8,52 ppm (m, 1H, pyridiinin H-2).
( il IM » nil I I I ti , ; 96311 225
Esimerkki 47 (4R, 5S, 6S) -4- (2"-aminoetyyli) -3- [ (3-syaanipropyy-li)tio]-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 5 2H CHpCHpNH? »
3 I /)-SCHpCHpCHpCN
COgH
A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3-(3-syaanipro-15 pyyli) tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti 0TB0MS CH?CH?N3 OTBDMS CHpCH?N3 .Λ-Λ. -ΛγΑ
3C Γ -► 3 Γ /)-SCHsCHgCHgCN
2° /“"-f
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyyliok-'T* 25 sietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-kar- boksylaatti [6,46 mmol, valmistettu esimerkin 2 vaiheessa E valmistetusta diatsoprekursorista (3,0 g, 6,46 mmol) renkaan muodostuksella] kuivassa asetonitriilissä (50 ml), käsiteltiin -15 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna 30 difenyylikloorifosfaatilla (1,4 ml, 6,75 mmol) ja lisättiin samanaikaisesti N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,2 ml, 6,9 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seoksen lämpötila nostettiin hitaasti 0-5 °C:seen 30 minuutin 35 aikana. Lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,2 ml, 96311 226 6,9 mmol) ja 4-merkaptobutyronitriiliä (1,31 g, 13,0 mmol) [saatu 4-asetyylimerkaptobutyronitriilin vesipitoisen tet-rahydrofuraaniliuoksen emäksisestä hydrolyysistä (US-pa-tenttijulkaisu 3 223 585)], ja seosta sekoitettiin 0 -5 5 °C:ssa 4 tuntia ja yön yli -15 °C:ssa. Sen jälkeen reak- tioseos laimennettiin EtOAc:lla (300 ml), pestiin vedellä, 1 M NaHS03:11a, kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (5 x 15 cm).
10 Eluoitiin EtOAcrn ja tolueenin seoksella (1:9), jolloin saatiin 2,62 g (78 %) otsikon yhdistettä ruskeana öljynä: IR (NaCl, kalvo) 2250 (CN), 2100 (N3), 1775 (B- laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); *Η NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,10 (s, 6H, SiCH3), 0,90 15 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,31 (d, 3H, J = 6,11 Hz, CH3CH0), 1,7 - 2,12 (m, 4H, CH2-4 ja CH2CH2-CN), 2,4 - 3,12 (m, SH, CH2-S, CH2CN ja H-6), 3,32 - 3,7 (m, 3H, CH2N3 ja H-4), 4,16 (dd, J4.5 = 9,6 Hz, J5_6 * 2,70 Hz, 1H, H-4), 4,21 (dd, J6_8 = 7,47 Hz, Je_9 = 6,2 Hz, CH3CHO), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 20 5,20 - 6,50 ja 5,96 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(3- syaanipropyyli)tio]-6-[(1'R)-11-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OTBOnS CH?CH?N, CH2CH2N3 ” „Α-Λ. - ,,ΛγΑ.
3 H3C rr^SCH2CH2CH2CN
30 Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"- atsidoetyyli)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyyli-oksietyyli]-3-[(3-syaanipropyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyk- lo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (2,48 g, 4,77 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (75 ml), käsiteltiin 0 -35 5 eC:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna etikkahapolla 227 .96311 (1,64 ml, 28,6 mmol) ja sen jälkeen 14,9 ml:11a (14,8 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin tetrahydrofuraani-liuosta. Liuosta pidettiin 5 °C:ssa 4 ½ vuorokautta. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin EtOAcrlla, pestiin kyl-5 Iäisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04).
Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromato-grafoitiin silikageelillä (5 x 15 cm). Eluoitiin tolueenin ja EtOAc:n seoksella (9:11), jolloin saatiin 0,91 g (37 %, saanto diatsoatsetidinonista) otsikon yhdistettä keltaise-10 na öljynä: IR (NaCl, kalvo) MBax: 3500 (OH), 2250 (CN), 2100 ^ (N3), 1775 (8-laktaamin C=0) ja 1705 cm'1 (karboksylaatin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,40 (d, 3H, J = 6,21 Hz, 15 CH3CH0), 1,6 - 2,15 (m, 4H, CH2CH2CN ja CH2-4), 2,55 (m, 2H, CH2CN), 2,85 - 3,09 (m, 2H, SCH2), 3,18 (dd, 1H, J6_8 = 7,84 Hz, J5_6 - 2,66 Hz, H-6), 3,37 - 3,67 (m, 3H, H-4 ja CH2N3), 4,26 (m, päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CHO), 4,26 (dd, J4 5 = 9,70 Hz, J5_6 = 2,61 Hz, 1H, H-5), 4,78 (m, 2H, 20 allyylin CH2), 5,24 - 5,30 ja 5,96 (2 x m, 2H ja 1H, allyy- lin CH).
C. Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(3-syaanipropyyli)tio]-6-[(1T R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti T 25 2H ch2ch2n3 oh ch2ch2n3
Hac '"""\—T \ . Pdtoi h c"""\—r\
| jj^// SCH2CH2CH2CN ► 3 [ |^^^SCH2CH2CH2CN
30 ^ ^
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(syaanipropyyli)tio]-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (900 mg, 2,22 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (47 ml), 35 käsiteltiin 0-5 eC:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna 96311 228 tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [0] (123 mg) ja 4,9 ml:lla (2,44 mmol) 0,5 M natrium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAc:ssa. Sen jälkeen lisättiin 190 ml 0,1 M fosfaattipuskuria, ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaanis-5 ta faasia uutettiin uudelleen kaksi kertaa 50 ml:11a vettä, ja yhdistettyjä vesipitoisia kerroksia pidettiin pumppauksella aikaansaadussa tyhjössä orgaanisen liuottimen poistamiseksi. Kromatografoitiin käänteisfaasisilikagee-lillä (Bondapak-Cie, 7 x 10,5 cm) käyttäen asetonitriilin 10 gradienttia vedessä (0 - 7 %), minkä jälkeen lyofilisoi-tiin UV-aktiiviset fraktiot, jolloin saatiin 580 mg (66 %) otsikon yhdistettä, jossa oli epäpuhtautena hiukan nat-rium-2-etyyliheksanoaattia. Tämä aine käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa; 15 IR (NaCl, kalvo) 2250 (CN), 2105 (N3), 1750 β-laktaamin C=0) ja 1600 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,31 (d, J = 6,40 Hz, 3H, CH3CH0), 1,71 - 2,01 (m, 4H, CH2CH2CN ja CH2-4), 2,73 ja 2,74 (2t, J = 6,94 Hz ja J = 7,04 Hz, 2H, CH2CN), 2,80 -20 3,19 (m, 2H, SCH2), 3,35 - 3,67 (m, 4H, CH2N3, H-4 ja H-6), 4,29 - 4,42 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0).
D. (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-[(3-syaanipro-pyyli) tio] -6-[ (l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 25 OH CH?CH?N-, OH CH?CH?NH, ,Λτ-τΛ- · .ΛγΛ.
COpNa COpH
30
Liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli )-3 - [ ( 3-syaanipropyyli )tio]-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (250 mg, 0,64 mmol) vedessä, hydrattiin 0 -35 5 “C:ssa käyttäen 250 mg 5-prosenttista palladiumia alu- 229 .96311 miinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psl:n) vetypaineessa 1 tunti. Katalyytti suodatettiin ja suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (Bondapak-C18, 7 x 10,5 cm) käyttäen vettä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofili-5 soitiin, jolloin saatiin 18 mg (8 %) otsikon yhdistettä, jossa oli epäpuhtautena hiukan natrium-2-etyyliheksanoaat-tia vaaleankeltaisena amorfisena jauheena ja 129 mg (59 %) puhdasta otsikon yhdistettä luonnonvalkoisena amorfisena j auheena: 10 Puhtaus HPLC:n mukaan: 97 % p-Bondapak-Cie, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 2 % CH3CN/H20 pH 7,4 fosfaattipuskuri, vir-w tausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 5,24 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Λ*»*1 302 nm 15 (5982); IR (KBr) vBIIX: 2250 (CN), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,75 - 2,30 (m, 4H, CH2CH2CN ja CH2-4), 2,63 (t, 20 J = 7,07 Hz, 2H, CH2CN), 2,69 - 3,19 (m, 4H, SCH2 ja CH2-NH2), 3,41 (m, päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,44 (dd, Jr_6 = 6,6 Hz, J5_6 = 2,85 Hz, H-6), 4,21 - 4,33 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO).
Esimerkki 48 w· 25 (4R, 5S, 6S)-6- [ (1 'R)-1' -hydroksietyyli] -4-(2"-amino- etyyli)-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo nh2 -50 0H / H3c '/%/r~r^C /T~\ 35 co2h 230 96311 A.Allyyli-(4Rf 5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli] -4- (2"-atsidoetyyli) -3- [ (pyridin-4 -yy 1 i) metyyl it io ] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 / N / /N3
OS i + / OS i + J
r y r
HjArfVo clP0<-°—->g_. h3c ,%rx\_SCH
DIPER, ^ // \=/ CY \ ^ y HS-CH,—(f 'N cr \ .. ., 10 cozy^>
Kylmää (O °C) liuosta, jonka muodosti esimerkissä v 2 valmistettu allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1Ή)-1’-(tert-butyy-lidimetyylisilyylioksietyyli)]-4-(2"-atsidoetyyli)-3,7-15 dibkso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (4,7 g, mmol) CH3CN:ssa (50 ml), käsiteltiin di f enyylikloo-rifosfaatilla (2,45 ml, 11,84 mmol), ja sen jälkeen N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (2,06 ml, 11,84 mmol) ja 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinillä (10 mg). Seosta sekoitet-20 tiin 0 °C:ssa 2 tuntia käyttäen argonia suojakaasuna, minkä jälkeen liuoksen läpi kuplitettiin argonia 10 minuuttia. Sitten enolifosfaattia käsiteltiin 4-pikolyylimerkap-taanilla (2,02 g, 16,15 mmol) CH3CN:ssa (10 ml) ja sen jälkeen N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (2,81 ml, 25 16,15 mmol) ja sekoitettiin 0 °C:ssa 3 tuntia. Reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (350 ml) ja pestiin peräkkäin kylmällä 1 M NaHC03:lla ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin siirappimainen aine, joka kromatografoitiin silikalla 30 (7,5 x 11 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, ja eluoitiin CH2Cl2:n ja EtOAcrn seoksella (8:2, gradienttieluointi), jolloin saatiin otsikon yhdiste siirappimaisena aineena (2,28 g, 39 %).
*H NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 0,04 (s, 3H, Si-35 CH3), 0,06 (s, 3H, SiCH3), 0,86 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,27 (d, ; ia.1 a,iu ι,υ,α* , 96311 231 CH3, Jch3.i· = 6,12 Hz), 1,63 - 1,76 (m, 1H, CH2), 1,93 - 2,05 (m, 1H, CH2), 3,02 (dd, H-6, J5 6 = 2,68 Hz, J6 r = 7,91 Hz), 3,18 - 3,67 (päällekkäin, 3H, H-4, CH2N3), 3,9 - 4,17 (päällekkäin, 4H, CHOH, H-5, SCH2), 4,6 - 4,85 (m, OCH2, 5 allyyli), 5,2 - 5,47 (m, =CH2, allyyli), 5,84 - 6,03 (m, CH=, allyyli), 7,29 (A2B2:n A, H-3,5 py, J2 3 = 5, 98 Hz), 8,56 (A2B2:n B, H-2,6 py).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]- 4- (2"-atsidoetyyli) -3- [ (pyridin-4-yyli )metyylitio] -7-okso-10 l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti / ,N3 ,N3
_ 0Si+ l OH J
15 * λα,^ * \o8^
Kylmää (0 eC) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-6-[ (1'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli]-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(pyridin-4-yyli)metyyli-20 tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy- laatti (2,26 g, 4,16 mmol) kuivassa THF:ssa (35 ml), käsiteltiin käyttäen argonia suojakaasuna etikkahapolla (1,43 ml, 24,94 mmol) ja sen jälkeen 1 M tetrabutyyliammo-niumfluoridin THF-liuoksella (12,47 ml, 12,47 mmol). Seos-25 ta sekoitettiin välillä 0 - 5 °C 120 tuntia ja sen jälkeen neutraloitiin 0 °C:ssa 1 M NaHC03-liuoksella (25 ml, 25 mmol). Seosta uutettiin EtOAcrlla (3 x 75 ml), ja yhdistetty orgaaninen faasi pestiin peräkkäin kylmällä 1 M NaHC03-liuoksella, H20:lla ja suolaliuoksella, kuivattiin 30 (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin tahmeaa vaahtoa, joka kromatografoitiin silikalla (4,5 x 11), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, ja eluoitiin ensin CH2Cl2:n ja EtOAc:n seoksella (50 - 100 % EtOAc) ja sitten CH3CN:n ja EtOAc:n seoksella (1:1, gradienttieluointi), jolloin saa-35 tiin otsikon yhdiste vaahtona (1,23 g, 69 %).
232 9 C 31Ί XH NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) δ: 1,36 (d, CH3,
Jchs.i· = 6,23 Hz), 1,64 - 1,79 (m, 1H, CH2), 1,94 - 2,09 (m, 1H, CH2), 3,09 (dd, H-6, Js 6 * 2,78 Hz, J6 r = 8,08 Hz), 3,19 - 3,65 (päällekkäin, 3H, H-4, CH2N3), 3,88 - 4,23 5 (päällekkäin, 4H, CHOH, H-5, SCH2), 4,61 - 4,88 (m, OCH2, allyyli), 5,21 - 5,47 (m, =CH2, allyyli), 5,85 - 6,04 (m, CHO, allyyli), 7,28 (A2B2:n A, 2H, H-3,5, py, J2 3 = 6,01 Hz), 8,56 (A2B2:n B, 2H, H-2,6, py).
C. Natrium- (4R, 5S, 6S) -6- [ (1 ' R) -1' -hydroksietyyli] -10 4- (2"-atsidoetyyli) -3- [ (pyridin-4-yyli)metyylitio] -7-okso- l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
Ng N 2
OH / OH J
* \o2^ ^ ' 'cOjNa
Kylmään (0 eC) liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -4-( 2" -atsidoetyy-20 li )-3- [ (pyridin-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,23 g, 2,86 mmol) CH2Cl2:ssa (25 ml) ja jossa käytettiin argonia suojakaasu-na, lisättiin Pd[Ph3P]<:a (0,3 g, 0,26 mmol) ja sen jälkeen 0,5 M natrium-2-etyyliheksanoaatin liuosta Et0Ac:ssa 25 (5,73 ml, 2,86 mmol). Seosta sekoitettiin 0 eC:ssa 1 tun- ^ ti, ja sen jälkeen uutettiin vedellä (3 x 25 ml). Yhdistetty vesifaasi vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasisili-kapylvään läpi (4,5 x 11 cm). Otsikon yhdiste eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (9:1, gradienttieluointi) ja 30 saatiin höytäleisenä kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen (0,69 g, 58,5 %).
XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, CH3, JCH3 r = 6,37 Hz), 1,6 - 1,78 (m, 1H, CH2), 1,93 - 2,09 (m, 1H, CH2), 3,14 - 3,58 (päällekkäin, 3H, H-4, CH2N3), 3,4 (dd, 35 H-6, J5 6 = 2,64 Hz, J6>1. = 6,22 Hz), 3,96 - 4,28 (päällek- 233 - 96511 käin, 4H, CHOH, H-5, SCH2), 7,5 (A2B2:n A, H-3,5, py, J2>3 » 5,35 Hz), 8,49 (leveä s, A2B2:n B, H-2,6, py).
D. (4R,5S,6S)-6-[(1»R)-1'-hydroksietyyli]-4-(2"- aminoetyyli)-3- [ (pyridin-4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-at-5 sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo .N3 KHa 1 r1 Tr1 “3\)X^SCH’-0 raH’c coeNa co2h
Liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli]-4-( 2"-atsidoetyyli )-3- [ (pyridin- 4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-15 2-karboksylaatti (0,16 g, 0,39 mmol) 40 ml:ssa 0,05 M pH-arvon 7 omaavaa fosfaattipuskuria, hydrattiin 310 kPa:n (45 psi:n) paineessa käyttäen 5-prosenttista Pd:a alumiinioksidilla (0,32 g) 0 °C:ssa 1 tunti. Katalyytti poistettiin, minkä jälkeen suodos vietiin p-Bondapak-Cie-käänteis-20 faasisilikapylvään läpi (4,5 x 11 cm). Otsikon yhdiste eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (95:5, gradientti-eluointi) ja se saatiin höytäleisenä kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen (0,044 g, 31,4 %).
Puhtaus HPLCrn mukaan: 95,9 %; UV-toteaminen
w. 25 302 nm:ssa p-Bondapak-Cle: 11a (4 mm x 30 cm), 10 % CH3CN
pH-arvon 7,4 omaavassa fosfaattipuskurissa, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 7,24 minuuttia.
IR (Nujol) VBax: 1750 cm'1 (C=0, B-laktaami).
2H NMR (D20, 200 MHz) 6: 1,31 (d, CH3, J^.!· = 30 6,35 Hz), 1,65 - 1,85 (m, 1H, CH2), 2,04 - 2,22 (m, 1H, CH2), 3,04 (t, 2H, CH2NH2), 3,19 (dt, H-4, J45 = 10,05 Hz, J = 3,44 Hz), 3,4 (dd, H-6, J5-6 = 2,8 Hz, J6 r = 6,52 Hz), 3,99, 4,13 (AB, SCH2, Jgen = 14,39 Hz), 4,11 (dd, H-5), 4,24 (m, H-l1 ), 7,46 (A2B2:n A, H-3,5, py, J2 3 = 6,1 Hz), 8,49 35 (A2B2:n B, H-2,6, py).
234 96311
Esimerkki 49 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6-[(1’R)-1' -hyd-roksietyyli] -4- [2"- (N-morfolino)etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H <CHg)V \
10 CN
co2h A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-tert-butyylidimetyyli-silyylioksietyyli) -6- [(1’R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-15 lioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyk- lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
ne*· I * I
V+ < CH2) gOS i + OSi* <CH2)20Si + , ,,,λΧ'. .AA, 1
Li /Γ\ -- I />—S<CHg)gCN
/-% (/
C0E
Kylmää (jää-metanolihaude) liuosta, jonka muodosti • 25 vastaavasta (SSARj-S-Cil'Ri-l'-tert-butyylidimetyylisi- ^ lyylioksietyyli] —4— [(1"R)-l"-( 2-tert-butyylidimetyylisi-lyylioksietyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-onista (15,0 g, 27,0 mmol) saatu allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(2"-tert-butyylidimetyylisilyyli-30 oksietyyli)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karbok-sylaatti CH3CN:ssa (160 ml), käsiteltiin peräkkäin dife-nyylikloorifosfaatilla (6,2 ml, 30 mmol) ja tipoittain N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (5,2 ml, 30 mmol) ja 4-35 dimetyyliaminopyridiinillä (20 mg). Seosta sekoitettiin 235 96ό'Π 1 tunti, ja saatua enolifosfaattia käsiteltiin 2-syaani-etaanitiolilla (2,9 g, 33,8 nunol) ja N,N-di-isopropyyli-etyyliamiinilla (5,8 ml, 33,8 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, ja sitä käsiteltiin kaksi kertaa 30 minuutin 5 välein 2-syaanietaanitiolilla (600 mg, 6,7 mmol x 2) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,16 ml, 6,76 mmol x 2). Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (400 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (3 x 100 ml), jääkylmällä 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (100 ml), jääkylmällä 1 N HCl:n vesiliuok-10 sella (100 ml), vedellä (100 ml), kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (100 ml), jääkylmällä vedellä (100 ml x 2), w suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgSO,,). Seos vie tiin silikageeli-flash-kerroksen läpi (250 g, heksaani -* 15 % etyyliasetaatti/heksaani), jolloin saatiin otsikon 15 yhdiste (11,5 g, 71,6 %) kiinteänä aineena; IR (puhdas) VBax: 2250 (C=N), 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); "H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,05 - 5,85 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,21 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,55 20 (2H, m, allyylin CH2), 4,27 - 4,18 (2H, m, H-l* ja H-5), 4,195 (osa H-5:a, d, J = 2,6 Hz), 3,89 - 3,75 (1H, m, HCH-OSi), 3,60 - 3,45 (2H, m, H-4 ja HCH-OSi), 3,35 - 3,22, 3,12 - 2,93 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 3,102 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 2,70 - 2,60 (2H, m, CH2-CN), w 25 2,04 - 1,90, 1,80 - 1,60 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,267 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,907 ja 0,887 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,084 ja 0,074 ppm (12H, 2s, dimetyyli).
96311 236 B.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -4- (2"-hyd-roksietyyli) -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti
5 I | I
JOS i + (CH?)aOS i + 2s,1+ <CH?)pOH
1 J ' J j
Π3° f /)-S<CHg)gCN -* 3 1 /)-S < CH?) ?CN
10
Kylmää (jää-metanolihaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S) -4- (2" -tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli]-6-[(1’R)-l’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-15 li] -3-[ (2-syaanietyyli) tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]- hept-2-eeni-2-karboksylaatti (2,0 g, 3,36 mmol) vedettömässä tetrahydrofuraanissa (20 ml), käsiteltiin peräkkäin jääetikalla (2,2 ml, 40 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabu-tyyliammoniumfluoridin liuoksella tetrahydrofuraanissa 20 (20 ml, 20 mmol). Seosta sekoitettiin 1 tunti ja sen jäl keen sen annettiin reagoida 5 °C:ssa (kylmä huone) 18 tuntia. Seos kaadettiin jääkylmään kylläiseen NaHC03:iin (50 ml), ja uutettiin etyyliasetaatilla (4 x 25 ml). Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, pestiin jääkylmällä ve-25 dellä (25 ml), jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella — (2 x 25 ml), vedellä (2 x 25 ml), suolaliuoksella (25 ml) ja kuivattiin (MgS04). Seos vietiin silikageeli-flash-ker-roksen läpi (50 g, CH2C12 -♦ 10, 20, 30, 40 % EtOAc/CH2Cl2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,0 g, 62 %) puolikiin-30 teänä aineena; IR (puhdas) ym»,· 3600 - 3200 (OH), 2250 (ON), 1770 ja 1710 cm'1 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,86 (1H, m, vinyylin H), 5,50 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,80 - 4,66 35 (2H, m, allyylin CH2), 4,222 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 237 ✓ 6 ό I 1 9,8 Hz, H-5), 4,25 - 4,19 (1H, m, H-l’), 3,95 - 3,82, 3,75 - 3,65 (2H, 2 m-kohtaa, CH20), 3, 59 - 3,48 (1H, m, H-4), 3,31 - 3,16, 3,09 - 2,94 (2H, 2 m-kohtaa, S-CH2), 3,184 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,9 Hz, H-6), 2,74 - 2,66 5 (2H, m, CH2-CN), 2,15 - 1,95, 1,90 - 1,70 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,56 (1H, s, OH), 1,290 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 0,891 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,090 ppm (6H, s, dimetyy-li).
C.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[ (1 Ή) -1'-tert-butyylidime-10 tyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-(N- morfolino)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (CHOOH 2?i+ <CHg), ---·Λ^ 20 Kylmään liuokseen (hiilihappojää-asetoni), jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -4- (2" -hyd-roksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti (312 mg, 0,650 mmol) CH2Cl2:ssa (8 ml), lisät-w: 25 tiin N, N-di-isopropyylietyyliamiinia (200 μΐ, 1,72 mmol) ja tipoittain trifluorimetaanisulfonihappoanhydridiä (130 μΐ, 0,773 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuuut-tia, ja sen jälkeen siihen lisättiin morfoliinia (350 μΐ, 4,01 mmol). Hiilihappojäähaude poistettiin ja korvattiin 30 jäähauteella. Seosta sekoitettiin 3 tuntia, minkä jälkeen se vietiin suoraan silikageelipylvääseen (15 g, heksaani -* heksaani/EtOAc -» CH3CN), jolloin saatiin otsikon yhdiste (420 mg, 100 %) öljynä; IR (puhdas) Vaax' 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); 238 56311 *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,84 (1H, m, vinyylin H), 4,85 - 4,62 (2H, m, allyylin CH2), 4,192 (1H, dd, J = 2,2 Hz, J = 11,8 Hz, H-5), 4,29, 4,26, 4,20 (1H, m, osa H-l' : a), 3,70 (4H, leveä s, CH2OCH2), 3,35 - 3,16 5 (3H, m, H-4, H-6, HCHS), 3,03 - 2,89 (1H, m, HCHS), 2,72 - 2,55 (2H, m, CH2CN), 2,52 - 2,22 (6H, m, (CH2)3N), 1,98 -1,86 (1H, m, CH-4), 1,69 - 1,48 (1H, m, CH-4), 1,279 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,877 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,076 (6H, s, dimetyyli).
10 D. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6- [ (1'R)-1’-hydroksietyyli]-4-[2"-(N-morfolino)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti w OS i + <CHg)- /“\ OH ,ru , ^ is 1' y w i } **w° "3C —> H=c CN ™ C02\/^ 20 Kylmää liuosta (jää-MeOH-haude), jonka muodosti allyyli-( 4R, 5S, 6S )-6-[ (1' R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -3- [ (2-syaanietyyli)tio] -4- [2" -(N-morfolino) -etyyli ] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (420 mg, 764 mmol) THFissa (8 ml), käsiteltiin 25 ensin etikkahapolla (560 μΐ, 9,78 mmol) ja lisättiin ti- ~ poittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta THF:ssa (4,55 ml, 4,55 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, ja jää-MeOH-haude korvattiin jäähauteella. Sen jälkeen seoksen annettiin olla kylmässä huoneessa 5 °C 210 tuntia. Sen 30 jälkeen lisättiin kiinteää NaHC03:a (600 mg), ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja sitten vietiin 4 preparatii-viselle TLC-levylle (2 mm, CH3CN), jolloin saatiin puhdasta otsikon yhdistettä (325 mg, 97 %, Rf =0,2), jossa oli kuitenkin epäpuhtautena jonkin verran tetrabutyyliammonium-35 suolaa; 239 U.0i1 IR (Nujoi) vBas: 3600 - 3200 (OH), 1770 ja 1710 cm*1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,24 (2H, m, vinyylin H), 4,88 - 4,64 5 (2H, m, allyylin CH2), 4,276 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,8 Hz, H-5), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l'), 3,76 - 3,7 (4H, leveä m, CH2OCH2), 3,45 - 3,31 (1H, m, H-4), 3,269 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 8,0 Hz, H-6), 3,25 - 3,16, 3,03 - 2,90 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,72 - 2,35 (8H, CH2CN, (CH2)3N), 10 2,1 - 1,9 ja 1,8 - 1,6 (2H, 2 m-kohtaa, CH2) ja 1,388 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
E. (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1 'R)-l1-hydroksietyyli]-4-[2"-(N-morfolino)etyyli]-7-okso-l-atsa-bi syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 15 J \ OH <CH2)jl·/ 0 OH <CH o J > W I i * * \_/
HsC —► H=c '’"rtysvN
20 COgH
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti allyy- li-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]—6—[(1'R)—1'-hydroksietyyli] -4-[2" -(N-morfolino) etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo-Ύ 25 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (321 mg, 0,737 mmol) CH2Cl2:ssa (6 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a (14 mg) ja 0,5 M kaliumetyyli-2-heksanoaattiliuosta (1,5 ml, 0,75 mmol). Jäähaude poistettiin, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Lisättiin vielä Pd(PPh3)4:a, ja sekoitusta jatkettiin 1 tun-30 ti. Laimennettiin dietyylieetterillä ja uutettiin 0,05 M vesipitoisella pH-arvon 7,0 omaavalla puskurilla ja pH-arvon 7,4 omaavalla puskurilla. Uutettu vesipitoinen seos yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä ja vietiin kään-teisfaasi-p-Bondapak-C18-pylvään läpi (H20, 2 % -* 4 % CH3CN/ 96311 240 H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (179 mg, 61,4 %) lyo-filisoituna jauheena;
Puhtaus HPLC:n mukaan; 99,7 % (300 nm); UV (H20) λ.»: 300 (7900); 5 IR (Nujol) vB„: 1750 ja 1600 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4271 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,8 Hz, H-5), 4,4 - 4,22 (1H, m, H-l'), 3,84 - 3,80 (4H, m, CH2OCH2), 3,424 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 3,43 - 3,33 (1H, m, H-4), 3,21 - 3,08, 3,01 - 2,90 10 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,90 - 2,6 (8H, m, CH2CN, (CH2)3N), 2,2 - 2,0, 1,90 - 1,70 (2H, 2 m-kohtaa, CH2) ja 1,336 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3). _
Esimerkki 50 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-aminopropyyli)-3-[ (3-syaanipropyy-15 li)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH (CH2)3NH2 20 H3C^1-T\
I /)—S(CH?),CN
co2h 25 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(3- ^ syaanipropyyli)tio]-6-1(11R)-lf-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 2H <CH5>3N3 OH (CH2)3N3
HsC ""'"Ό^)rK —> HjC x[T-^s<ch2)3cn // « (Γ /-'f C02 • 96311 241
Kylmään liuokseen (jää-MeOH-haude), jonka muodosti (3S, 4R) -3- [ (1' R) -1 · -hydroksietyyli] -4- [(1"R)-1"-(3-atsido-propyyli )-3”-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopro-pyyli]atsetidin-2-onista (2,00 g, 5,49 mmol) esimerkissä 5 21 valmistettu allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(3"-atsidopropyy- li)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo- [3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti CH3CN:ssa (40 ml), lisättiin tipoittain difenyylikloorifosfaattia (1,2 ml, 6,0 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,03 ml, 10 6,00 mmol) ja hiukan 4-N,N-dimetyyliaminopyridiiniä. Seos ta sekoitettiin 30 minuuttia, ja saatuun enolifosfaattiin lisättiin tipoittain syaanipropyylimerkaptaania (693 mg, 6,86 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,19 ml, 6,90 mmol). Seosta sekoitettiin 1 tunti, sen jälkeen jää-15 MeOH-haude korvattiin jäähauteella, ja sekoitusta jatkettiin vielä 2 tuntia. Sitten lisättiin vielä syaanipropyylimerkaptaania (280 mg, 2,74 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,480 ml, 2,74 mmol), minkä jälkeen sekoitettiin 18 tuntia 5 °C:ssa (kylmä huone). Lisättiin vielä 20 tiolia (280 mg, 2,74 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,480 ml, 2,74 mmol), ja sekoitusta jatkettiin 3 tuntia, minkä jälkeen seos laimennettiin etyyliasetaatilla (100 ml), pestiin kylmällä 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (2 x 40 ml), vedellä (40 ml), IN HCl:n vesiliuoksella 25 (40 ml), vedellä (40 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (40 ml), vedellä (40 ml), suolaliuoksella (40 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (75 g, EtOAc/heksaani: 1/3 -» EtOAc), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,33 g, 59 %) öljynä; 30 IR (CH2C12) vBax: 3600 - 3500 (OH), 2250 (CN), 2100 (N3), 1780 ja 1710 cm'1 (C=0); NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,50 - 5,23 (2H, m, vinyylin H), 4,89 - 4,63 (2H, m, allyylin CH2), 4,29 - 4,20 (1H, m, H-l’), 4,248 35 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,50 - 3,35 (2H, m, ,λ, 96311 242 CH2N3), 3,267 (1Η, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,6 Hz, H-6), 3,30 -3,20 (1H, m, H-4), 3,05 - 2,85 (2H, m, SCH2), 2,59 - 2,51 (2H, m, CH2CN), 2,06 - 1,93 (2H, CH2CH2CH2CN), 1,93 - 1,57 (4H, CH2-CH2-CH2N3), 1,76 (1H, d, J = 3,7 Hz, OH) ja 5 1,393 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
B. (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(syaanipro-pyyli)tio] -6-[ (l’RJ-l'-hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 10 |H <„CH2>3N3 SH <CH2)3NHg .,AJL ,
C02 COgH
15
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R, 5S,6S ) -4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(3-syaanipropyyli)-tio] -6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (100 mg, 0,240 mmol) 20 CH2Cl2:ssa (10 ml), käsiteltiin Pd(PPh3)4:lla (220 mg, 0,018 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 0,5 M nat-riumetyyli-2-heksanoaatin liuosta (0,48 ml, 0,24 mmol) EtOAc:ssa. Seosta sekoitettiin 1,5 tuntia, sen jälkeen laimennettiin dietyylieetterillä (20 ml) ja uutettiin ve-25 dellä (3 x 3 ml) ja 0,05 M pH-arvon 8,0 omaavalla fosfaat- ^ tipuskuriliuoksella (3 x 3 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (2 x 5 ml) ja sen jälkeen käsiteltiin 5 °C:ssa (jäähaude) 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1,25 tuntia käyttäen 5-pro-30 senttistä Pd/alumiinioksidia (100 mg) katalyyttinä. Katalyytti poistettiin suodattamalla, pestiin vedellä (2 x 2 ml), vesipitoinen liuos vietiin p-Bondapak-C18-pylvään läpi (25 g, H20 -* 1 %, 2 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (65 mg, 77 %) valkoisena lyofilisoituna jau-35 heena; 96311 243
Puhtaus HPLCrn mukaan: 99,9 % (300 nm); UV (H20) Λβ„: 302 (fc 8000); IR (Nujol) vn„: 2250 (CN), 1760 ja 1595 cm'1 (C=0); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,34 - 4,32 (2H, m, H-l' 5 ja H-5), 4,239, 4,226 (d, J = 2,6 Hz, osa H-5:a), 3,42 -3,33 (1H, m, H-4), 3,383 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,2 Hz, H-6), 3,09 - 2,94 (3H, m, CH2N ja S-HCH), 2,85 - 2,74 (1H, m, SHCH), 2,70 - 2,61 (2H, m, CH2CN), 2,10 - 1,49 (6H, m, CH2CH2CH2CN, CH2CH2) ja 1,334 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3). 10 Es imerkkl 51 (4R, 5S, 6S) -4- [3"- (N-formimidoyyli)aminopropyyli] -w 3- [ (3-syaanipropyyli) tio] -6- [ (1 *R) -1' -hydroksietyy- li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksyy1ihappo 15
OH <CH2)3NH2 oh (CH2)3NHCH=NH
3 ^P^>”S<CH*>3CN * 3 ^Q^-S(CH^3CN
20 C02H ° tOgH
Kylmää liuosta (jäähaude), jonka muodosti (4R,5S, 6 S )-4 - ( 3"-aminopropyyli)-3-[(3-syaanipropyyli)tio]-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-~ 25 2-eeni-2-karboksyylihappo (150 mg, 0,420 mmol) 0,04 M pH- arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa (25 ml), käsiteltiin ensin 0,1 M NaOHrn vesiliuoksella (pH:n nostamiseksi ja sen pitämiseksi välillä 8 - 8,4) ja lisättiin annoksittain bentsyyliformimidaattivetykloridia (720 mg, 30 4,2 mmol). Seosta sekoitettiin 10 minuuttia, ja liuoksen pH laskettiin arvoon 7,0 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Sen jälkeen seos vietiin p-Bondapak-C18-pylvään läpi (kaksi kertaa, 30 g ja 60 g, H20 -* 1 %, 2 %, 3 %, 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (117 mg, 73 %) lyofilisoi-' 35 tuna jauheena; 96311 244
Puhtaus HPLC:n mukaan: 94,4 % (300 nm); UV (H20) λ„„: 302 (£ 9100); IR (Nujol) vnax: 2250 (CN), 1755 (C=0), 1715 (C=N) ja 1590 cm'1 (C=0); 5 XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 7,83, 7,81 (1H, 2s, CH), 4,34 - 4,22 (2H, m, H-l' ja H-4), 4,231 (d, J = 2,9 Hz, osa H-4:a), 3,49 - 3,32 (4H, m, H-4, H-6 ja CH2N), 3,06 -2,92, 2,84 - 2,74 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,70 - 2,61 (2H, m, CH2CN), 2,10 - 1,47 (6H, CH2CH2CH2CN, CH2-CH2) ja 10 1,323 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 52 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-3-[(3-syaanipropyy- w li)tio]-6-[(11R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 15 2H <cHj)4nh2
I //-SCHpCHpCHpCN
co2h A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-3-[(3-syaanipropyyli)tio]-6-[(1' R)-1’-hydroksietyyli]-7-okso-l-. 25 atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti ^ 0H <ch2)4n3 oh (CH2)4N3 \/t 1) (Ph0)2P0Cl,
H3t |\—0 -Hunigin emäs „ h3c "'i [\__ SCH CH CH CN
λ—2) HSCH2CH2CHeCN
30
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-6-[ (1'R)-l' -hydroksietyyli] - 3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti [6,71 mmol, 35 valmistettu diatsoprekursorin (1,54 g, 6,71 mmol) renkaan 96311 245 muodostuksella, kuten esimerkissä 45 on kuvattu] kuivassa asetonitriilissä (40 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,53 ml, 7,4 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-5 isopropyylietyyliamiinia (1,3 ml, 7,5 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliami-nopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Sitten lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,75 ml, 10,0 mmol) ja sen jälkeen 4-merkaptobutyronitriiliä 10 (1,01 g, 10,0 mmol) [4-asetyylimerkaptobutyronitriilin emäksisestä hydrolyysistä (US 3 223 585)], ja seosta se-w koitettiin 0-5 °C:ssa 18 tuntia. Sitten reaktioseos lai mennettiin EtOAcrlla (300 ml), pestiin vedellä, kylläisellä NaHC03:lla, pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla 15 ja suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin si-likageelillä (4,5 x 11 cm) käyttäen EtOAcrn gradienttia tolueenissa (8:2 - 1:1), jolloin saatiin 2,14 g (73 %) otsikon yhdistettä öljynä; 20 IR (NaCl, kalvo) vB„: 2250 (CN), 2100 (N3), 1772 (B- laktaamin C=0) ja 1710 cm"1 (esterin C=0); :H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,39 (d, J = 6,25 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 2,1 (m, 8H, butyylin CH2-1, -2 ja -3 ja syaanipropyylition CH2-2), 2,55 (m, 2H, CH2CN), 2,8 - 3,1 - 25 (m, 2H, SCH2), 3,2 (dd, JH6H5 = 2,70 Hz, JH6H1 = 7,22 Hz, 1H, H-6), 3,2 (m, päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,33 (t, J = 6,1 Hz, 2H, CH2N3), 4,25 (dd, JH5.H6 = 2,70 Hz, JH5 H4 = 9,49 Hz, 1H, H-5), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
30 B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-3-[(3-syaanipro- pyyli) tio] -6- [ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H <CH2>„N3 OH (Ch2)4nh2 35 H3C ^P^-sch2ch2ch2cn ” ^I0] > h3c ^T^-sch2ch2ch2cn
C02H
• 96311 246
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-3-[(3-syaanipropyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hyd-roksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti (1,86 g, 4,3 mmol) kuivassa EtOAc:ssa (80 ml), 5 käsiteltiin 24 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tet-rakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,10 g) ja 9.5 ml:11a (4,75 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAc:ssa. 30 minuutin kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (2 x 75 ml), ja yhdistettyä vesifaasia 10 hydrattiin käyttäen 2,4 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla 0-5 °C:ssa 310 kPa:n (45 psi:n) vety-paineessa 1 tunti. Välittömästi sen jälkeen lisättiin _ 40 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria (alku-pH 10,5, loppu-pH 6,9). Katalyytti suodatettiin, ja suodos 15 kromatografoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 11 cm) käyttäen asetonitriilin ja veden seosta (5:95) eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,839 g (53 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena; 20 Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 7,89 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λΜΧ: 302 nm 25 (9528); » IR (KBr) vB„: 2250 (CN), 1755 (β-laktaamin C*0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,32 (d, J = 6,37 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 2,1 (m, 8H, butyylin CH2-1, -2 ja -3 ja 30 syaanipropyylition CH2-2), 2,64 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2CN), 2.6 - 3,1 (m, 2H, SCH2), 3,0 (t, J = 7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,3 (m, päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,35 (dd,
Jh6.h5 = 2,46 Hz, JH6.H1 = 6,39 Hz, 1H, H-6), 4,22 (dd, JH5.„6 = 2,46 Hz, JH5 H4 = 6,83 Hz, 1H, H-5) ja 4,26 ppm (m, 1H, CH3- 35 CHO).
96311 247
Esimerkki 53 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok-sietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 5 2H <CHg)4NH2
"iC
C02H
A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]-15 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti SH <CHj)4N3 OH < CHg)4N3
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti [5,28 mmol, "~r 25 valmistettu diatsoprekursorin (2,0 g) renkaan muodostuk sella, kuten esimerkissä 45 on kuvattu] kuivassa asetonit-riilissä (35 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,49 g, 5,5 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyy-30 lietyyliamiinia (0,97 ml, 5,5 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja liuosta sekoitettiin 1 tunti. Sitten lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,4 ml, 7,9 mmol) ja sen jälkeen 4-pikolyylimerkaptaania (1,0 g, 7,9 mmol), ja 35 seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 3 tuntia. Reaktio pysäy- 96311 248 tettiin lisäämällä EtOAc:a (300 ml) ja 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskuria. Orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja väkevöitiin. Jäännös kro-matografoitiin silikageelillä (3,5 x 13 cm) käyttäen 5 EtOAcra eluenttina, jolloin saatiin 1,89 g (78 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä: IR (NaCl, kalvo) vBax: 2100 (N3), 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C-0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,37 (d, J = 6,27 Hz, 3H, 10 CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,02 (m, 1H, H-4), 3,14 (dd, JH6 H5 = 2,65 Hz, JH6 H1 = 7,41 Hz, 1H, H-6), 3,31 (t, J = 6,1 Hz, CH2N3), 3,98 (ABq, JAB = w 14,22 Hz, AV = 15,7 Hz, 2H, SCH2), 4,21 (m, 1H, CH3CHO), 4,76 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 15 2H ja 1H, allyylin CH), 7,27 (s d, 2H, pyridyylin H-3) ja 8,57 ppm (= d, 2H, pyridyylin H-2).
B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1'R)-1·-hyd-roksietyyli] -3- [ (pyridin-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 20 SH <CH2)4N3 OH <CHa>«NH2 77=-0 -=74-=-0
COgH
.25
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,80 g, 3,9 mmol) EtOAc:ssa (50 ml), 30 käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tet-rakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [0] (0,1 g) ja 8 ml:11a (4 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta Et0Ac:ssa. 30 minuutin kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (3 x 50 ml), ja yhdistettyä vesipitoista uutetta 35 hydrattiin käyttäen 2,3 g:a 5-prosenttista palladiumia 249 9 6 311
alumiinioksidilla 0-5 eC:ssa ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 h. Sen jälkeen lisättiin 50 ml kylmää 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria (alku-pH
10,5, loppu-pH 6,7), ja katalyytti suodatettiin. Sen jäl-5 keen suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gra-dienttia (0 - 5 %) vedessä eluenttina.
Ensimmäisistä fraktioista saatiin lyofilisoinnin jälkeen 0,050 g (4 %) (4R,5S,6S)-4-(4"-hydroksibutyyli)-10 6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyyli- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-w laattia (Na- ja K-suolan seos) valkoisena kiinteänä ai neena .
Seuraavista fraktioista saatiin 0,830 g (54 %) ot-15 sikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]” -9,5° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,8 % p-Bondapak-Cie:11a, 3,9 mm x 30 cm, 5 % CH3CN-H20 pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 2 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 20 7,42 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) χΜΧ: 262 (5195) ja 304 nm (8370); IR (KBr) ymax: 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1600 cm'1 (karboksylaatin C=0); ^ 25 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, J = 6,37 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,94 (t, J = 7,5 Hz, CH2NH2), 3,10 (m, 1H, H-4), 3,28 (dd, jh6.5 - 2,53 Hz, JH6 H1 = 6,30 Hz, 1H, H-6), 4,05 (m, 3H, H-5 ja SCH2 päällekkäin), 4,21 (m, 1H, CH3CH0) 7,48 (* d, 2H, 30 pyridiinin H-3) ja 8,49 ppm (* d, 2H, pyridiinin H-2).
250 S6311
Esimerkki 54 (4R,5S,6S)-4-(4"-N-formimidoyyliaminobutyyli)-6- [ (1' R) -1 ’ -hydroksietyyli] -3- [ (pyridin-4-yyli)metyyli tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-5 karboksyylihappo
2H <CHj)4NH2 °H <CHg)<NHCH=NH
H=c — kjc 10 COjH COgH
(4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok- .w sietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (318 g, 15 0,81 mmol) kylmän (0 - 5 °C) vesiliuoksen (25 ml) pH sää dettiin arvoon 8,5 IN NaOHrlla. Sen jälkeen lisättiin bentsyyliformimidaattivetykloridia (0,70 g, 4,06 mmol) pieninä annoksina 10 minuutin aikana niin, että pH pidettiin arvossa 8,5 1 N NaOHrlla. Pidettiin vielä 20 min 0 -20 5 °C:ssa, minkä jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä 20 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattia. Sen jälkeen vesipitoinen liuos pestiin EtOAcrlla (20 ml) ja sitten kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18:lla, 3 x 15 cm) käyttäen 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavaa 25 fosfaattipuskuria ja asetonitriiliä (0 - 10 %) eluenttina. UV-aktiivisille fraktioille suoritettiin suolanpoisto samassa pylväässä käyttäen vettä ja asetonitriiliä (10 %) ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,153 g (53 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]£2 30 -3,6° (c 0,55, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,5 % p-Bondapak-Cie: 11a, 3,9 mm/30 cm, 15 % CH3CN-H20 pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 5,8 minuuttia; il «H i liiat l.t i-M : .
251 £6311 UV (HjO, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λβ·χ: 262 (5476) ja 304 (8790); IR (KBr) τ>Ββχ: 1750 (β-laktaamin C=0), 1715 ja 1600 (karboksylaatin C=0); 5 *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,27 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,1 - 1,7 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,11 (m, 1H, H-4), 3,2 - 3,4 (m, 3H, H-6 ja CH2NH), 4,08 (m päällekkäin SCH2:n kanssa, 1H, H-5), 4,08 (ABq, JAB = 14,75 Hz, AV = 23,2 Hz, SCH2), 4,21 (m, 1H, CH3CH0H), 7,47 10 (m, 2H, pyridiinin H-3), 7,78 (s, 1H, CH=NH) ja 8,47 ppm (m, 2H, pyridiinin H-2). w Esimerkki 55 (4R, 5S, 6S) -4- [3"- (N-formimidoyyli)aminopropyyli] - 6-[(1' R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)me-15 tyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2- karboksyy1ihappo
OH (CH2)3NH2 Jh <CH2)3NHCH=NH
- "Λά-νΟ - -O
co2h C02H
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti esimerkissä 44 kuvattu (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-': 25 1 ’ -hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]-7-ok- so-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,16 g, 0,42 mmol) 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (30 ml), käsiteltiin 0,1 N Na0H:n vesiliuoksella (pH:n nostamiseksi arvoon noin 8,0 30 ja sen pitämiseksi siinä) ja lisättiin annoksittain bent-syyliformimidaattivetykloridia (720 mg, 4,2 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, neutraloitiin pH-arvoon 7,0 1 M NaH2P04:n vesiliuoksella ja vietiin kaksi kertaa μ-Bonda-pak-C18-pylvään läpi (H20 -* 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin 35 otsikon yhdiste (76 mg, 47 %) lyofilisoituna jauheena; 96311 252
Puhtaus: 96,7 % (HPLC 304 nm); UV (H20) 262 (S 7120), 304 (£ 10700); IR (Nujol) 3600 - 3100 (OH, NH2), 1755 (C=0), 1710 (C=N) ja 1600 cm*1 (OO); 5 *H NMR (D20 , 200 MHz) 6: 8,48 - 8,44 (2H, m, aro maattinen H), 7,78 - 7,44 (2H, m, aromaattinen H), 4,27 - 4,15 (1H, m, H-l'), 4,14, 4,07, 4,00, 3,93 (2H, ABq, J =
Hz, CH2-aromaattinen), 4,075 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 3,34 - 3,23 (3H, m, H-5 ja CH2-N), 3,303, 10 3,291 (osa H-6:a, d, J = 2,5 Hz), 3,17 - 3,07 (1H, m, H-4), 1,70 - 1,36 (4H, m, CH2CH2-4) ja 1,268 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3). „
Esimerkki 56 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-aminoetyyli) tio] - 4- (2"-hydroksi-15 etyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H ch2ch2oh 20 H3C N-r^\ I //— SCHpCHpNHp /-"-f co2h 25 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-tert-butyylidimetyyli- ~ silyylioksietyyli) -6- [ (1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -3- [ (2-p-nitrobentsyylioksikarbonyyliamino-etyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti 30 : OTBDflS OTBDns
1 CH2CH20TBDnS f CHgCHjOTBDnS
u M
H3C \ \-n -► -» 3L I Λ-SCHgCHgNHCOgPNS
96311 253
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabi-syklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti [5,41 mmol, valmis-5 tettu saattamalla esimerkin 5 diatsoprekursori (3,0 g, 5,41 mmol) rengasmuotoon] kuivassa asetonitriilissä (25 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suo-jakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,18 ml, 5,65 mmol) ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamii-10 nia (1,0 ml, 5,65 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja ^ liuosta sekoitettiin 90 minuuttia. Lisättiin vielä N,N- di-isopropyylietyyliamiinia (1,42 ml, 8,1 mmol) ja sen j älkeen p-nitrobentsyyli-2-merkaptoetyylikarbamaattia 15 (2,10 g, 8,19 mmol) [I. Shinkai et ai., Synthesis, 924 (1980)], ja seosta sekoitettiin 16 tuntia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (400 ml), pestiin vedellä, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS0«). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, minkä jälkeen jäännös kromatogra-20 foitiin silikageelillä (3,5 x 10 cm). Eluoitiin etyyliase taatin gradientilla (5 - 10 %) tolueenissa, jolloin saatiin 1,75 g (42 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) vBax: 1772 (β-laktaamin C=0) ja 1720 cm"1 (karboksylaatin C=0); 25 *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04, 0,05 ja 0,08 (3 x s, 3H, 3H ja 6H, SiCH3), 0,88 (2, 18H, Si-t-Bu), 1,27 (d, J = 6,14 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - 2,1 (m, 2H, CH,CH, OTBDMS), 2,8 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,10 (dd, Jh6h5 = 2,49 Hz, JH6 H1 = 6,34 Hz, 1H, H-6), 3,2 - 3,9 (m, 5H, H-4, CH,OTBDMS ja 30 CH2NH), 4,16 (dd, JH5H6 = 2,49 Hz, JH5 H4 = Hz, 1H, H-5), 4,23 (m, 1H, CH3CHO), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5,18 (s, 2H, p-nitrobentsyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,5 (d, J * 8,7 Hz, 2H, p-nitrobentsyylin orto-H) ja 8,22 ppm (d, J = 8,7 Hz, 2H, p-nit-35 robentsyylin meta-H).
96311 254 B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-hydroksietyyli)-6- [ (1 ' R) -1' -hydroksietyyli]-3- [ (2-p-nitrobentsyylioksikar-bonyyliaminoetyyli) tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
5 OTBDfIS 2H
J! CHgCHgOTBOMS I CHgCHgOH
H . z"""\-
π3υ I /)—SCH?CHpNHC02PNB -► 3 | Λ—SCH?CH,NHCO,PNB
10
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-( 2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)-6-[(1'R)-l'-tert- w butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-p-nitrobentsyyli-oksikarbonyyliaminoetyyli)tio]-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-15 hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,75 g, 2,29 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (20 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna etikkahapolla (1,6 ml, 27,5 mmol) ja sen jälkeen 13 ml:11a (13,0 mmol) 1,0 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofu-20 raanissa. 120 tunnin jälkeen 5 eC:ssa reaktioseos laimene nettiin etyyliasetaatilla (200 ml), pestiin vedellä, kylläisellä NaHC03:lla, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatu jäännös kromatografoi-25 tiin silikageelillä (3 x 11 cm) käyttäen etyyliasetaattia ^ ja sen jälkeen etyyliasetaatin, asetonin ja asetonitriilin seosta (18:1:1) eluenttina.
Ensimmäisistä fraktioista saatiin 0,78 g (50 %) tuotetta, josta oli poistettu yksi suojaryhmä, allyyli-30 ( 5S, 6S)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy- li]-4-(2"-hydroksietyyli )-3-[ ( 2-p-nitrobentsyylioksikar-bonyyliaminoetyyli )tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaattia öljynä.
Seuraavista fraktioista saatiin 0,23 g (19 %) ot-35 sikon yhdistettä vaahtona: 255
Of 7" η L o ] f IR (NaCl, kalvo) ·νΒβι: 1770 (β-laktaamin C=0), 1725 ja 1705 cm'1 (esterin C=0); 1H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,37 (d, J = 6,23 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 - 2,1 (m, 2H, CH2CH2OH), 2,8 - 3,2 (m, 2H, 5 SCH2), 3,26 (dd, JH6 H5 = 2,55 Hz, JH6 H1 = 7,77 Hz, 1H, H-6), 3,3 - 3,9 (m, 5H, H-4, CH20H ja CH2NH), 4,1 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO päällekkäin), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,19 (s, 2H, p-nitrobentsyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,5 (d, J = 8,7 Hz, 2H, 10 p-nitrobentsyylin orto-H) ja 8,22 ppm (d, J = 8,7 Hz, p-nitrobentsyylin meta-H).
w c. (4R,5S,6S)-3-[(2-aminoetyyli)tio]-4-(2"-hydrok- sietyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 15
OH OH
Jf CHpCHpOH 1 CH?CH?0H
L-Λ „ c\-A
COgH
20 2 e
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-hydroksietyyli ) -6- [ (1' R ) -1' -hydroksietyyli] -3- [ ( 2-p-nit-robentsyylioksikarbonyyliaminoetyyli)tio]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,99 g, 25 1,85 mmol) kuivassa etyyliasetaatissa (40 ml), käsiteltiin 22 eC:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trife-nyylifosfiini)palladiumilla [0] (0,050 g) ja 4 ml:11a (2,0 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 30 minuutin kuluttua oli muodostunut sakka, 30 ja reaktioseos jäähdytettiin 0-5 °C:seen 2 tunniksi. Sen jälkeen suodatettiin kiinteä aine ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin välituotteena 1,0 g kaliumsuolaa vaaleanruskeana kiinteänä aineena. Sen jälkeen kiinteä aine lisättiin seokseen, jonka muodostivat kylmä 0,2 M pH-arvon 35 7,0 omaava fosfaattipuskuri (40 ml), tetrahydrofuraani 256 9(5311 (20 ml) ja dietyylieetteri (20 ml), ja hydrattiin 0 -5 eC:ssa käyttäen 1,2 g:a 10-prosenttista palladiumia aktivoidulla hiilellä ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunti. Katalyytti suodatettiin ja suodos kromatografoi-5 tiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 3 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 10 %) vedessä eluenttina. Ensimmäiset fraktiot lyofilisoi-tiin, jolloin saatiin 0,150 g (26 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena. Häntäfraktioista 10 saatiin myös 0,450 g osittain pelkistettyä ainetta. Ensimmäiset fraktiot kiteytettiin vedestä (1 ml), jolloin saatiin 0,096 g otsikon yhdistettä pieninä kuutioina:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,8 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 2 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-15 puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 6,24 minuuttia; UV (vesi, pH 7,4, fosfaattipuskuri) ;vBax: 298 nm (8510); IR (KBr) vmaJt: 1758 (β-laktaamin C=0), 1638, 1618 ja 20 1580 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,42 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 2,2 (m, 2H, hydroksietyylin CH2-1), 2,9 - 3,8 (m, 7H, H-4, SCH2CH2NH2 ja CH20H), 3,49 (dd, JH6 H5 = 2,72 Hz, JH6 H1 = 5,37 Hz, 1H, H-6) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, 25 H-5 ja CHjCHO päällekkäin). ~
Esimerkki 57 (4R,5S,6S)-4-[(2"R tai S)-aminopropyyli]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-
7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy-30 lihappo; isomeeri A
2H nh2 -.oVLJo 35 ^ cc2h 96311 257 A. 4-atsido(pyridin-2-yyli)metyylitiovaleraatti Ϊ" OH — 5
Kylmään (5 °C) liuokseen, jonka muodostivat 4-at-sidovaleriaanahappo (59,0 g, 412,2 mmol) ja N-metyyli-imi-datsoli (33,84 g, 412,2 mmol) CH2Cl2:ssa (1 200 ml), lisättiin tipoittain S0Cl2:a (15 min). Reaktioseosta sekoitet-10 tiin 5 °C:ssa 1 tunti ja 20 °C:ssa 2,5 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin jälleen jäähauteessa ja lisättiin tipoittain w tänä aikana (15 min) liuos, jonka muodostivat 2-merkapto- metyylipyiridiini (51,6 g, 412,2 mmol) ja N-metyyli-imidat-soli (37,2 g, 453,4 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml). Sekoitettiin 15 15 minuuttia 5 eC:ssa, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin ja korvattiin etyyliasetaatilla (500 ml). Liuos pestiin vedellä (250 ml). Orgaaniset kerrokset yhdistettiin ja pestiin NaHC03:lla. Lopuksi pestiin suolaliuoksella, minkä jälkeen orgaaninen liuos kuivattiin (MgS04) ja haihdutet-20 tiin, jolloin saatiin 97,23 g (94,2 %) otsikon yhdistettä.
IR (CH2C12) vmax: 2110 cm’2 (-N3), 1690 cm'1 (tioeste- ri); NMR (CDC13) 6: 8,55 - 8,52 (1H, m, pyridiini-H), 7,67 - 7,58 (1H, m, pyridiini-H), 7,35 - 7,31 (1H, m, py-25 ridiini-H), 7,20 -7,13 (1H, m, pyridiini-H), 4,36 (2H, s, CH2-S), 3, 55 - 3,45 (1H, m, CH-N3), 2,74 - 2,65 (2H, m, CH2C0S), 1,89 - 1,62 (2H, m, CH2C-N3), 1,28 (3H, d, J = 6,53 Hz, CH3-).
B. 4-atsido(pyridin-2-yyli )metyylivaleraatin enoli- 30 silyylieetteri
Kylmään (5 eC) liuokseen, jonka muodostivat 4-atsi-do(pyridin-2-yyli)metyylitiovaleraatti (97,2 g, 388,4 mmol) ja trietyyliamiini (86,5 g, 854,5 mmol) CH2Cl2:ssa (1000 ml), lisättiin tipoittain (25 min) tert-butyylidi-35 metyylisilyylitrifluorimetaanisulfonaattia (205,3 g, 258
Sf 311 775,8 mmol). Jäähauteen jään annettiin sulaa, ja liuosta sekoitettiin 20 °C:ssa 15 tuntia. Sen jälkeen liuotin haihdutettiin ja korvattiin petrolieetterillä (1 000 ml). Liuosta ravistettiin kylmän veden (500 ml) kanssa ja kaksi 5 faasia suodatettiin celite-kerroksen läpi. Vesipitoinen kerros heitettiin pois, ja orgaaninen faasi pestiin peräkkäin kylmällä vedellä, NaHC03:n vesiliuoksella, kylmällä vedellä jälleen ja lopuksi suolaliuoksella. Orgaaninen liuos kuivattiin (MgS04) ja käsiteltiin puuhiilellä. Suo-10 datettiin celite-kerroksen läpi, minkä jälkeen tummalle suodokselle suoritettiin vielä kaksi puuhiilikäsittelyä, jolloin saatiin lopuksi punainen liuos. Liuotin haihdutet- setiin, jolloin saatiin 99,4 g (70,2 %) otsikon yhdistettä punaisena öljynä.
15 IR (CH2C12) vBex: 2110 cm'1 (-N3); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,57 - 8,53 (1H, m, py-ridiini-H), 7,67 - 7,58 (1H, m, pyridiini-H), 7,30 - 7,25 (1H, m, pyridiini-H), 7,18 - 7,11 (1H, m, pyridiini-H), 5,00 (0,32 H, t, J = 7,65 Hz, vinyylin H), 4,85 (0,68 H, 20 t, J = 7,29 Hz, vinyylin H), 4,05 (0,64 H, s, -SCH2), 3,98 (1,36 H, s, -SCH2-), 3,34 (0,68 H, m, CH-N3), 3,22 (0,32 H, m, CH-N3), 2,25 - 2,15 (2H, m, -CH2-), 1,10 (2,04 H, d, J = 6,54 Hz, H3C-), 1,08 (0,96 H, d, J = 6,53 H, H3C-), 0,99 (9H, 2s, t-butyyli), 0,25 ja 0,22 ppm (6H, 2s, dime-25 tyyli). ~ C. (3S,4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4-[(1"R)-1"- (pyridin-2-yyli)metyylitiokar-bonyyli-3"-atsidobutyyli]atsetidin-2-oni I I \ 30 os i ♦ .I I os i + >—w VI ,3 OS i * 1 f 3 ^ A-r, ΛνΛ 96311 259
Kylmään (5 eC) liuokseen, jonka muodosti fuusioitu ZnCl2 (33,4 g, 245 mmol) CH2Cl2:ssa (500 ml), lisättiin peräkkäin (3S,4R)-4-asetoksi-3-[(1'R)-l'-tert-butyyli- dimetyylisilyylioksietyyli]atsetidin-2-onia (70,42 g, 5 245 mmol) ja vaiheen B 4-atsido(pyridin-2-yyli)metyylitio- valeraatin tert-butyylidimetyylisilyylienolieetteriä (99,4 g, 272,6 mmol). Jäähauteen jään annettiin sulaa ja samalla seosta sekoitettiin mekaanisesti yön yli (18 tuntia). Sen jälkeen liuotin haihdutettiin, ja viskoosia 10 jäännöstä jakouutettiin dietyylieetterillä (500 m) ja vedellä (100 ml). Vesifaasi heitettiin pois, ja orgaaninen w liuos pestiin peräkkäin vedellä, NaHC03:lla, jälleen vedel lä ja lopuksi suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04), käsiteltiin puuhiilellä, suodatettiin ja haihdu-15 tettiin. Näin saatu punainen viskoosi öljy (142,5 g) puhdistettiin kromatografiällä (Si02, CH2C12, 5 % CH3CN CH2-
Cl2:ssa ja etyyliasetaatissa), jolloin saatiin 38,0 g (32,5 %) otsikon yhdistettä C-3":ssa isomeeristen yhdisteiden 1:1-suhteisena seoksena.
20 IR (CH2C12) vb„: 3405 (NH), 2115 (-N3), 1765 (8-lak- taami), 1680 cm'1 (C0-S); Vähemmän polaarinen isomeeri A: ‘H NMR (CDC13) 6: 8,56 - 8,52 (1H, m, pyridiini-H), 7.68 - 7,60 (1H, m, pyridiini-H), 7,33 - 7,26 (1H, m, py-25 ridiini), 7,21 - 7,15 (1H, m, pyridiini-H), 5,83 (1H, s, NH), 4,29 (2H, s, SCH2-), 4,15 (1H, m, CH'), 3,80 (1H, dd, J = 6,20 Hz, 2,14 Hz, H-4), 3,48 (1H, m, CH-N3), 3,16 - 3,05 (2H, m, H-3, H-l"), 1,96 ja 1,44 (2H, 2m, -CH2"), 1,29 (3H, d, J = 6,41, H3C-C-N3), 1,03 (3H, d, J = 6,29 Hz, 30 -CH3), 0,854 (9H, s, t-butyyli), 0,05 (6H, s, Si(CH3)2).
Polaarisempi isomeeri B: 1H NMR (CDC13) 6: 8,54 - 8,52 (1H, m, pyridiini-H), 7.68 - 7,59 (1H, m, pyridiini-H), 7,36 - 7,26 (1H, m, py-ridiini), 7,21 - 7,15 (1H, m, pyridiini-H), 5,85 (1H, s, 35 NH), 4,28 (2H, d, J = 5,25 Hz, S-CH2), 4,17 (1H, m, CH’), 96311 260 3,89 (1H, dd, J = 2,05 Hz, 6,87 Hz, H-4), 3,49 (1H, m, CH-N3), 3,05 (1H, m, H-3), 2,85 (1H, m, H-l"), 2,05 ja 1,57 (2H, 2m, CH2"), 1,28 (3H, d, J = 6,47, H3CC-N3), 1,01 (3H, d, J = 6,32 Hz, H3C), 0,85 (9H, s, t-butyyli), 0,05 (6H, s, 5 Si(CH3)2).
D. (3S,4S)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-4-[(1"R)-l"-karboksi-3”-atsidobutyyli]atse-tidin-2-oni 10 S?i+ OS i + l / r^i I1 ! N3 h3c %i—_,. H3r xi—p^co2H — '4 15
Vetyperoksidia (30 %, 27 ml, 314 mmol) lisättiin kylmään (5 °C) liuokseen, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(l'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-3"-atsidobutyyli]at-20 setidin-2-oni (37,5 g, 78,5 mmol), ja sen jälkeen lisättiin tipoittain 1 N Na0H:a (235,5 ml, 235,5 mmol). Lisäys suoritettiin 40 min:ssa niin, että T <10 eC. Seosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia ja sen jälkeen tehtiin happamaksi pH-arvoon noin 1,0 väk. HClrlla (30 ml). Liuosta 25 uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet pestiin kaksi kertaa "" suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin. Näin saatua kiinteää ainetta trituroitiin petrolieetterissä ja otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 24,0 g (82,6 %) otsikon yhdistettä; s.p. = 123 - 125 °C (haj.).
30 IR (CH2C12) vmax: 2110 ( -N3), 1765 (β-laktaami ), 1740 ja 1710 cm'1 (-C02H ).
Vähemmän polaarinen isomeeri A: NMR (CDC13) 6: 6,35 (1H, s, NH), 4,20 (1H, m, CH'), 3,89 (1H, dd, J = 2,05, 5,50 Hz, H-4), 3,58 (1H, m, 35 CH-N3), 3,13 (1H, m, H-3), 2,95 (1H, m, H-l"), 1,88 ja 1,48 96311 261 (2H, 2m, -CH2), 1,34 (3H, d, J = 6,45 Hz, CH3-C-N3), 1,19 (3H, d, J = 6,26, -CH3), 0,87 (9H, s, t-butyyli), 0,07 (6H, 2s, Si(CH3)2).
Polaarisempi isomeeri B: 5 NMR (CDClj) 6: 6,42 (1H, s, NH), 4,20 (1H, m, CH'), 3,88 (1H, dd, J = 1,94, 6,42 Hz, H-4), 3,55 (1H, m, CH-N3), 3,15 (1H, m, H-3), 2,74 (1H, m, H-l"), 1,98 ja 1,59 (2H, 2m, -CH2), 1,33 (3H, d, J = 6,50 Hz, H3CC-N3), 1,18 (3H, d, J = 6,28, -CH3), 0,87 (9H, s, t-butyyli), 0,068 10 (6H, 2s, Si(CH3)2).
E. (3S,4R)-3-[(l'R)-l’-tert-butyylidimetyylisilyy-w lioksietyyli] -4- [ (1"R) -l"-(2-atsidopropyyli)-3"-allyyliok- sikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni
15 I I
OS i + 0Si+ ! I 3 1' 1 3 H3r "'"l—f'coaH -. "jf J-N X-N. ^
H <y H
20
Seosta, jonka muodostivat (3S,4S)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4- [ (1 "R) -1 "-karboksi-3M-atsidobutyyli]atsetidin-2-oni (3,48 g, 9,39 mmol) ja karbonyylidi-imidatsoli (1,70 g, 10,33 mmol) CH3CN:ssa, ^_· 25 sekoitettiin 20 °C:ssa 30 minuuttia ja sen jälkeen haihdu tettiin kuiviin, jolloin jäi jäljelle vaahtomainen aine.
Erillisessä astiassa refluksoitiin suspensiota, jonka muodosti magnesiummonoallyylimalonaatti (4,37 g, 14 mmol) bentseenissä (75 ml) niin, että jäljelle jäävä 30 vesi kerättiin Dean-Stark-loukkuun. 1,5 tunnin refluksoin-nin jälkeen tämä liuos jäähdytettiin 20 °C:seen ja lisättiin edellä mainittuun imidatsolidiin. Tämä seos laitettiin öljyhauteeseen, joka oli etukäteen kuumennettu 70 °C:seen, ja kuumennettiin 18 tuntia. Sen jälkeen seos 35 laimennettiin yhtä suurella määrällä etyyliasetaattia, ja 96311 262 pestiin vedellä, laimealla HClilla, jälleen vedellä, laimealla NaHC03:lla ja lopuksi vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin. Raa-katuote puhdistettiin kromatografialla (Si02, CH2C12, sitten 5 5 - 10 % CH3CN CH2Cl2:ssa), jolloin saatiin 3,37 g (79,3 %) otsikon yhdistettä öljynä, joka muuttui kiinteäksi; IR (CH2C12) Vaax: 2115 (-N3), 1765, 1715 cm*1 (C=0) Vähemmän polaarinen isomeeri A: XH NMR (CDC13) 6: 4,6 - 6,0 (5H, allyylityyppi), 10 4,18 (1H, m, H-l'), 3,80 - 3,85 (1H, m, H-4), 3,62 (1H, d, -CHC=0), 3,46 (1H, m, CH-N3), 3,27 (0,6H, m, H-l"), 2,99 ja 2,93 (1H, m, H-3), 2,55 (0,4H, m, H-l"), 1,93 ja 1,41 ^ (2H, 2m, -CH2C-N3), 1,32 ja 1,31 (3H, 2d, J = 6,45, 6,40 Hz, CH3CN3), 1,19 ja 1,12 (3H, 2d, J = 6,27, 6,29 Hz, 15 -CH3), 0,87 (9H, s, t-butyyli), 0,07 ja 0,06 (6H, 2s,
Si(CH3)2).
Polaarisempi isomeeri B: *H NMR (CDC13) 6: 4,6- 6,0 (5H, allyylityyppi), 4,17 (1H, m, H-l’), 3,84 (1H, dd, J =2,1, 5,35 Hz, H-4), 20 3,63 (1H, d, CH2CO), 3,48 (1H, m, CHN3), 3,07 (0,6H, m, H- 1"), 2,93 (1H, m, H-3), 2,0 ja 1,6 (2H, 2m, CH2CN3), 1,27 ja 1,32 (3H, 2d, J = 6,5 Hz, CH3CN3), 1,09 ja 1,18 (3H, 2d, J = 6,25 Hz, -CH3), 0,87 (9H, s, t-butyyli), 0,06 (6H, 2s,
Si( CH3 )2) .
25 F. (3S,4R)-3-[(1 Ή)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy- w lioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(2-atsidopropyyli)-3"-diatSOS'' -allyylioksikarbonyyli-2 "-oksopropyyli] atsetidin-2-oni 1 i 1 \—n 0Si+ OS i * 30 II f n3 II 1 N2 h3C --- H3c^Vj- yp N. Λ,—N. ®
cr H tr H
263 96ά 11
Seosta, jonka muodostivat p-tolueenisulfonyyli-kloridi (422 mg, 2,32 mmol), natriumatsidi (154 mg, 2,37 mmol) ja tetrabutyyliammoniumkloridi (12 mg), CH3-CN:ssa (15 ml), sekoitettiin 20 °C:ssa 4 tuntia. Sen jäl-5 keen tämä seos jäähdytettiin 5 °C:seen ja lisättiin ( 3S,4R)-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-li] -4- [ (l"R)-l"-( 2-atsidopropyyli )-3"-allyylioksikarbonyy- li-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-onia (953 mg, 2,11 mmol) pienessä määrässä CH3CN:a ja sen jälkeen tipoittain tri-10 etyyliamiinia (235 mg, 2,32 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 5 °C:ssa 1,5 tuntia ja sen jälkeen haihdutettiin. w Jäännös otettiin talteen dietyylieetteriin ja pestiin ve dellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin jäljelle jäi pehmeä kiin-15 teä aine. Tätä ainetta trituroitiin petrolieetterissä, ja liukenematon tosyyliamidi (74,3 %) suodatettiin pois. Suo-dos haihdutettiin, jolloin saatiin viskoosi öljy, joka puhdistettiin kromatografiällä (Si02, CH2C12, sitten 5 % CH3CN CH2Cl2:ssa), jolloin saatiin 825 mg (81,7 %) otsikon 20 yhdistettä viskoosina öljynä; IR (CH2C12) Vb„: 2125 (=N2), 2118 (-N3), 1765 (8- laktaami), 1713 cm'1 (-C02-); Vähemmän polaarinen isomeeri A: *H NMR (CDC13) 6: 4,7 - 6,0 (5H, allyylityyppi), 25 4,31 (1H, m, H-l"), 4,16 (1H, m, H-l’), 3,81 (1H, dd, J = 2,08, 4,90 Hz, H-4), 3,38 (1H, m, CH-N3), 3,05 (1H, m, H-3), 2,69 ja 1,39 (2H, 2m, CH2-CN3), 1,28 (3H, d, J = 6,42 Hz, H3CCN3), 1,18 (3H, d, J = 6,29 Hz, -CH3), 0,86 (9H, s, t-butyyli), 0,064 ja 0,052 (6H, 2s, Si(CH3)2).
30 Polaarisempi isomeeri B: XH NMR (CDC13) 6: 4,7- 6,0 (5H, allyylityyppi), 4,15 (2H, m, H-l’, H-l"), 3,84 (1H, m, H-4), 3,45 (1H, m, CH-N3), 3,05 (1H, m, H-3), 2,10 ja 1,5 (2H, 2m, CH2-C-N3), 1,27 (3H, d, J = 6,43 Hz, CH3CN3), 1,17 (3H, d, J = 96311 264 6,27 Hz, -CH3), 0,87 (9H, s, t-butyyli), 0,064 ja 0,053 ( 6H, 2S, Si( CH3 )2).
G. (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(2-atsidopropyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-5 2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni OS i + s' N;3 0H ^—N3 Γ 1 S2 ii k 10 x?—N. J—N ®
iU '"H
Kylmää (5 ®C) liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-3- w [(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(2-atsidopropyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksi-15 karbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (825 mg, l, 72 mmol) CH3CN:ssa (10 ml), käsiteltiin 4 N HCl:lla (0,52 ml, 2,06 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 5 °C:ssa 3,5 tuntia ja 20 °C:ssa 1 tunti. Sen jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä kylläistä NaHC03:a (3 ml). Laimennet- 20 tiin etyyliasetaatilla, minkä jälkeen seos pestiin vedellä ja suolaliuoksella (kaksi kertaa). Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin kromatografiällä silikageelillä eluoiden CH2Cl2:lla ja sen jälkeen etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 554 mg (88,4 %) : 25 otsikon yhdistettä keltaisena öljynä. Kahta isomeeristä w yhdistettä ei erotettu; IR (CH2C12) vnax: 3600 (-0H), 3400 (NH), 2145 (=N2), 2115 (-N3), 1763 (β-laktaami), 1713 (C=0).
XH NMR (CDC13) 6: 4,7 - 6,0 (5H, allyylityyppi), 30 4,12 (2H, m, H-l' ja H-l"), 3,81 (1H, m, H-4), 3,45 (1H, m, CH-N3), 3,05 (1H, m, H-3), 2,05 ja 1,55 (2H, 2m, CH2CN3), 1,30 (6H, useita piikkejä, 2-CH3).
265
9 6 61 I
H. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidopropyyli)-6-[(1'R)-l’-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2,0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH ^ n3 OH S N3 j X u2 ilo
10 J
W OH N3 OH N3 Η)Λπ^γ0Ρ,0,,0ΡΒ,! 15
Suspensio, jonka muodosti rodiumoktanoaattidimeeri (55 mg) C6H6:ssa (110 ml), laitettiin öljyhauteeseen, joka oli kuumennettu etukäteen 130 °C:seen, ja refluksoitiin 30 20 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-hyd-roksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(2-atsidopropyyli)-3"-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-onia (2,0 g, 5,49 mmol). Renkaan muodostus suoritettiin loppuun 25 minuutin aikana refluksoiden voimakkaasti. Liuotin w 25 haihdutettiin ja korvattiin CH3CN:lla (55 ml). Tätä liuosta käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (1,6 g, 6 mmol), N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,78 g, 6 mmol) ja katalyyttisellä määrällä 4-N,N-dimetyyliaminopyridiiniä. 15 minuutin jälkeen 5 °C:ssa reaktio oli mennyt loppuun.
30 Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla ja pestiin vedellä ja suolaliuoksella. Kuivattiin (MgS0<), minkä jälkeen orgaaninen faasi haihdutettiin ja raakatuote puhdistettiin kromatografiällä (Si02/Et20), jolloin saatiin 1,63 g (52,0 %) enolifosfaattia.
- 96311 266
Puhdistettu enoli liuotettiin kylmään (5 °C) DMF:iin (16 ml) ja käsiteltiin 2-pikolyylitiolilla (465 mg, 3,72 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (481 mg, 3,72 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 5 eC:ssa 5 17 tuntia ja 20 °C:ssa 24 tuntia. Sen jälkeen liuos lai mennettiin etyyliasetaatilla (100 ml) ja pestiin kylmällä suolaliuoksella (3 x 50 ml), 10 % NaHS03:lla (2 x 25 ml), vedellä ja lopuksi suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin, jolloin jäi jäljelle rus-10 kea viskoosi öljy. Kromatografoitiin, jolloin kaksi otsikon yhdisteen isomeeriä puhdistui ja erottui (Si02/kylmä Et20); 470 mg (37 %) vähemmän polaarista isomeeriä A ja ^ 325 mg (25,6 %) polaarisempaa isomeeriä B: Vähemmän polaarinen isomeeri A: 15 IR (CH2C12) 3600 (-0H), 2115 (-N3), 1775 (β- laktaami), 1710 cm'1 (-C02-); XH NMR (CDC13) 6: 8,55 (1H, m, Ar-H), 7,66 (1H, m,
Ar-H), 7,34 (1H, m, Ar-H), 7,19 (1H, m, Ar-H), 4,6 - 6,0 (5H, allyylityyppi), 4,19 (2H, ABq, J = 13,8 Hz, S-CH2), 20 4,16 - 4,24 (2H, m, H-l ’, H-5), 3,87 (1H, m, CH-N3), 3,65 (1H, m, H-4), 3,05 (1H, dd, J - 2,70, 7,92 Hz, H-6), 1,6 -2,0 (2H, 2m, CH2CN3), 1,39 (6H, d, J = 6,15 Hz, 2-CH3).
Polaarisempi isomeeri B: IR (CH2C12) vnax: 3600 (-0H), 2115 (-N3), 1772 (β-25 laktaami), 1710 cm"1 (-C02-); ^ :H NMR (CDC13) 6: 8,51 (1H, m, Ar-H), 7,64 (1H, m,
Ar-H), 7,37 (1H, m, Ar-H), 7,21 (1H, m, Ar-H), 4,6 - 6,10 (5H, allyylityyppi), 4,22 (1H, m, H-l'), 4,14 (1H, dd, J = 2,66, 9,60 Hz, H-5), 4,11 (2H, ABq, J = 14,18 Hz, -SCH2), 30 3,75 (1H, m, CH-N3), 3,62 (1H, m, H-4), 3,32 (1H, dd, J = 2,70, 7,32 Hz, H-6), 1,6 - 2,0 (2H, 2m, -CH2C-N3), 1,39 (3H, d, J - 6,42 Hz, -CH3), 1,38 (3H, d, J = 6,25 Hz, -CH3).
96311 267
I. Natrium-(4R,5S,6S)-4-[(2"R tai S)-atsidopropyy-li]-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyy-litio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti; isomeeri A
5
0Π OH
10 J~N \o2^ \o8n.
w Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S)-4-( 2"-atsidopropyyli )-6- [ (1 'R)-l' -hydroksietyy-li] -3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo-15 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (500 mg, 1,13 mmol, vaiheen H vähemmän polaarinen isomeeri A) CH2Cl2:ssa (50 ml), käsiteltiin 0,5 M natriumetyyliheksanoaatilla (2,5 ml, 1,24 mmol) ja (PPh3)4Pd:11a (131 mg, 0,113 mmol). Sekoitettiin 30 minuuttia, minkä jälkeen liuos laimennet-20 tiin dietyylieetterillä (100 ml) ja uutettiin 0,04 M puskurilla (pH 7,0, 3 x 15 ml). Vesipitoiset uutteet pestiin dietyylieetterillä ja kromatografoitiin käänteisfaasi-Si02:lla (partisil); eluoitiin vedellä ja sen jälkeen 5 -15 % CH3CN:lla vedessä. Oleelliset fraktiot yhdistettiin ja • 25 lyofilisoitiin, jolloin saatiin 180 mg (38,9 %) otsikon yhdistettä; *H NMR (D20 ) 6 : 8 , 50 (1H, m, Ar-H), 7,89 (1H, m, Ar-H), 7,4 - 7,6 (2H, 2m, 2 Ar-H), 4,26 - 4,06 (2H, m, H-l', H-5), 4,18 (2H, ABq, J = 14,09 Hz, S-CH2), 3,6 (1H, m, CH-30 N3), 3,35 (2H, m, H-6, H-4), 1,8 ja 1,56 (2H, 2m, CH2C-N3), 1,35 (3H, d, J = 6,71 Hz, -CH3), 1,32 (3H, d, J = 6,65 Hz, -CH3).
96311 268 J. (4R,5S,6S)-4-[(2"R tai S)-aminopropyyli]-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-
7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo; isomeeri A
5
OH OH
"^*rnTSv^ „3cA,, J-n—n ” J-n—\
10 cr COgNa (K COgH
Liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidopropyyli )-6-[(1'R)-l ’-hydroksietyyli]-3-[ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-15 2-karboksylaatti (175 mg, 0,425 mmol, vaiheen I vähemmän polaarinen isomeeri A) 0,05 M fosfaattipuskurissa (pH 6,0, 60 ml), hydrattiin 5 °C:ssa 30-prosenttisen Pd/celiten (350 mg) läsnä ollessa 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa. 75 minuutin kuluttua lisättiin vielä katalyyttiä (100 mg), 20 ja pelkistystä jatkettiin vielä 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin pois, ja suodos kromatografoitiin käänteis-faasi-Si02:11a (partisil) eluoiden vedellä ja sen jälkeen 5-prosenttisella CH3CN:lla vedessä. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 50 mg (31,2 %) otsikon 25 yhdistettä; isomeeriä A; UV (H20) λ„„: 266 (4093), 300 (3945); IR (Nujol) 1755 (β-laktaami), 1595 cm'1 (-C02-); JH NMR (D20) 6: 8,46 (1H, m, Ar-H), 7,84 (1H, m, Ar-30 H), 7,46 - 7,29 (2H, m, 2 Ar-H), 4,24 - 4,01 (4H, m, H-l', H-5, -SCH2), 3,17 - 3,46 (3H, m, H-4, H-6, CH-N-), 1,4 -2,0 (2H, 2m, CH2C-N), 1,31 (3H, d, J = 6,53 Hz, -CH3), 1,29 (3H, d, J = 6,31 Hz, -CH3).
269 96511
Esimerkki 58 (4R,5S,6S)-4-[(2"S tai R)-aminopropyyli]-6-[(1?R)- 1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-
7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy-5 lihappo, isomeeri B
2H ^ nh2 \
COgH
A. Natrium-(4R,5S,6S)-4-[(2"S tai R)-atsidopropyy-15 li]-6-[(1*R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyy-litio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti; isomeeri B
0Π OH J~"3 ^ (y ^ ^C02Na 25 Kylmää (5 eC) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidopropyyli )-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -3- [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (340 mg, 0,767 mmol, esimerkin 57 vaiheen H polaarisempi isomeeri B) CH2Cl2:ssa 30 (35 ml), käsiteltiin 0,5 M natriumetyyliheksanoaatilla (1,7 ml, 0,85 mmol) ja (PPh3 )4Pd: 11a (88 mg, 0,08 mmol). Sekoitettiin 30 minuuttia, minkä jälkeen liuos laimennettiin dietyylieetterillä (70 ml) ja uutettiin 0,04 M puskurilla (pH 7,0, 3 x 10 ml). Vesipitoiset uutteet pestiin 35 dietyylieetterillä ja kromatografoitiin käänteisfaasi- 96311 270
Si02:lla (partisil): eluoitiin vedellä ja sen jälkeen 5 - 10-prosenttisella CH3CN:lla vedessä. Oleelliset fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 140 mg (44,4 %) otsikon yhdistettä; 5 *H NMR (D20) 6: 8,48 (1H, m, Ar-H), 7,88 (1H, m, Ar- H), 7,49 (1H, m, Ar-H), 7,40 (1H, m, Ar-H), 4,02 - 4,27 (4H, m, H-l', H-5, SCH2), 3,67 (1H, m, CH-N3), 3,43 (1H, dd, J = 2,5, 5,84, H-6), 3,15 (1H, m, H-4), 1,50 - 1,90 (2H, 2m, CH2C-N3), 1,28 (6H, d, J = 6,35 Hz, 2-CH3).
10 B. (4R,5S,6S)-4-[(2"S tai R)-aminopropyyli]-6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-2-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo; ^
isomeeri B
15 OH OH J—I^H2 ,,ΛρΛ/'νΟ /-""Λο,ν. <y~H \o5h 20
Liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidopropyyli )-6-[ (1 'R)-l ’ -hydroksietyyli] -3 - [ (pyridin-2-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (135 mg, 0,328 mmol, vaiheen A polaari-25 sempi isomeeri B) 0,05 M fosfaattipuskurissa (pH 6,0, 45 ml), hydrattiin 5 °C:ssa 30-prosenttisen Pd/celiten (270 mg) läsnä ollessa 276 kPa:n (40 psi:n) vetypaineessa.
65 minuutin kuluttua katalyytti suodatettiin pois, ja suo-dos kromatografoitiin käänteisfaasi-Si02:lla (partisil) 30 eluoiden vedellä ja sen jälkeen 5-prosenttisella CH3CN:lla vedessä. Oleelliset fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 60 mg (48,5 %) otsikon yhdistettä; UV (H20) 268 (8362), 302 (9583); IR (Nujol) Vmax: 1760 (β-laktaami), 1595 cm-1 35 ( -C02- ); 96311 271 "H NMR (D20) 6: 8,46 (1H, m, Ar-H), 7,83 (1H, m, ΑΓΗ), 7,47 (1H, m, Ar-H), 7,36 (1H, m, Ar-H), 4,01 - 4,25 (4H, m, H-l' , H-5, SCH2), 3,40 (2H, m, -CH-N, dd, J = 2,95, 6,66, H-6), 3,14 (1H, m, H-4), 1,98 ja 1,75 (2H, 2m, CH2-5 CN), 1,35 (3H, d, J = 6,44 Hz, -CH3), 1,29 (3H, d, J = 6,37, -CH3).
Esimerkki 59 (4R, 5S, 6S) -3- [ (syaanipropyyli)tio]-4- (3"-guanidino- propyyli)-6-[(1'R)-1·-hydroksietyyli]-7-okso-l-10 atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H (CHg)3NHe OH (CH-)3NHC(=NH)NH? .A-J, .Λ-Λ 3 -* 3 ^ElVs<CHa>3-
15 C02H COgH
Kylmää liuosta (jäähaude), jonka muodosti esimerkissä 50 kuvattu (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(3-syaanipropyyli)tio]-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-20 atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (150 mg, 0,420 mmol) 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (25 ml), käsiteltiin ensin 0,1 M NaOHrn vesiliuoksella (pH-arvon nostamiseksi välille 7,6 - 7,8 ja sen pitämiseksi siinä) ja aminoiminometaanisulfonihapolla '-', 25 (520 mg, 4,20 mmol). Seosta sekoitettiin 2 tuntia, ja pH
säädettiin arvoon 7,1 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Seos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (45 g, H20 -+ 1 % -» 8 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (125 mg, 75 %) lyofilisoituna jauheena; 30 Puhtaus 98,4 % (HPLC 300 nm); UV (H20) xmax: 302 (f 8230); IR (Nujol) VMX: 2250 (C=N), 1750 (C=0), 1700 (C=N) ja 1585 cm*1 (C=0); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33 - 4,21 (1H, m, H-l'), 35 4,243 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,4 Hz, H-4), 3,41 - 3,23 272 9 6 £ 11 (3H, m, H-4 ja CH2-N), 3,330 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 3,06 - 2,92, 2,85 - 2,73 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,71 - 2,60 (2H, m, CH2CN), 2,06 - 1,49 (6H, m, CH2-CH2CH2CN ja CH2CH2) ja 1,321 ppm (3H, d, 6,4 Hz, CH3).
5 Esimerkki 60 (4R,5S,6S)-4-(3"- guanidinopr opyy 1 i)-6-[(l’R)-l -hyd-roksietyyli] -3- [ (pyridin-4-yyli)metyylitio] -7-okso-1-atsabi syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H (CH,>,NH, 2H (CH?),NHC(=NH)NH, 10 1 t Ϊ f 5
HjC ^ld>-SCH=-C/N —* "3C
C02H COgH
15 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (4R,5S, 6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[ (pyridin-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,16 g, 0,42 mmol) [esimerkki 44] 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin 20 vesiliuoksessa (30 ml), käsiteltiin 0,1 N NaOHrn vesi-liuoksella (pH-arvon nostamiseksi välille noin 7,7 - 8,1 ja sen pitämiseksi siinä) ja aminoiminometaanisulfoniha-polla (525 mg, 4,2 mmol). Seosta sekoitettiin 90 minuuttia, neutraloitiin pH-arvoon 7,0 1,0 M NaH2P04:n vesiliuok-25 sella ja vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi ~ (30 g, H20 -» 8 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (85 mg, 57 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 95,2 % (HPLC, 304 nm); UV (H20) \max: 304 (g 8000), 262 (fc 5200); 30 IR (Nujol) vm»: 3500 - 3100 (OH, NH), 1755 (C=0), 1660 (C=N) ja 1600 cm'1 (C=0); :H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,49 - 8,46 (2H, m, aromaattinen H), 7,49 - 7,46 (2H, m, aromaattinen H), 4,25 - 4,16 (1H, m, H-1'), 4,16, 4,09, 4,01, 3,94 (2H, ABq, J = 35 14,4 Hz, CH2-aromaattinen), 4,058 (osa H-5:a, d, J = I· ' ·*-» M» I 14 4( 96311 273 2,4 Hz), 3,261 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,02 Hz, H-6), 3,20 - 3,07 (3H, m, CH2N, H-4), 1,8 - 1,5, 1,5 - 1,26 (4H, 2 m-kohtaa, CH2CH2-4) ja 1,280 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 61 5 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -4 - (3"-guanidino- propyyli)-[(1*R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- bisyklo-[3,2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H <CH2)3NH, 2H <CH-)-NHC<=NH)NHp „ .A-r-L ,Α-Α
w COgH COgH
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti 15 (4R, 5S, 6S )-4-( 3"-aminopropyyli ) -3- [ ( 2-syaanietyyli ) tio] - 6-[(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso- 1-atsabisyklo [3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (125 mg, 0,37 mmol) [valmistettu esimerkissä 41] 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (25 ml), lisättiin 0,1 N 20 NaOH:n vesiliuosta ja annoksittain aminoiminometaanisulfo-nihappoa (458 mg, 3,70 mmol) niin, että pH pidettiin välillä 7,6 - 7,8. Seosta sekoitettiin 2,5 tuntia 5 eC:ssa, ja pH säädettiin arvoon 7,05 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Liuos vietiin p-Bondapak-C18-pylvään läpi (38 g, H20, 1, 2, 25 3, 4, 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (98 mg, 70 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus 98,8 % (HPLC, 300 nm); UV (H20) λBtx: 300 (£ 8990); IR (Nujol) v„ax: 1755 (C=0), 1665 (C=N) ja 1585 cm'1 30 (C=0); αΗ NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,34 - 4,21 (1H, m, H-l'), 4,259 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,2 Hz, H-5), 3,45 - 3,33 (1H, m, H-4), 3,351 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,29 - 3,22 (2H, m, CH2-N), 3,18 - 3,08, 3,02 - 2,92 (2H, 274 S6311 2 m-kohtaa, SCH2), 2,91 - 2,80 (2H, m, CH2CN), 1,92 - 1,44 (4H, m, CH2CH2) ja 1,321 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
Esimerkki 62 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok-5 sietyyli] -3- [ (1-metyyli-l, 2,3 -tr iät soi- 4-yyl i) me tyyli tioj -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni- 2-karboksyy1ihappo SH (CH2)4nh2 ch3 10 J, f I-N ^ H c'%/\-[f^ \ 3 />-SCH?—Ll o \ co2h 15 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 <CHS),NS 8K <CH;>,N3
»jC "'*'rT^>=0 "lC
; 25
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-6-[ (1 ’R) -1 ’ -hydroksietyyli] - 3, 7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (5,28 mmol, valmistettu saattamalla 2,0 g, 5,28 mmol diatsoprekursoria 30 rengasmuotoon) kuivassa asetonitriilissä (40 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyy-likloorifosfaatilla (1,2 ml, 5,8 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin 5 minuutin aikana N,N-di-isopropyylietyyliamii-nia (1,0 ml, 5,8 mmol). Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-35 dimetyyliaminopyridiinikide, ja kirkasta seosta sekoitet- 96311 275 tiin samassa lämpötilassa 1 tunti. Sen jälkeen lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,8 ml, 10,6 mmol) ja sen jälkeen l-metyyli-4-merkaptometyyli-l,2,3-triatso-lia (1,36 g, 10,5 mmol), ja seosta sekoitettiin 3 tuntia.
5 Sitten reaktio pysäytettiin lisäämällä EtOAc:a (200 ml) ja kylmää vettä. Orgaaninen faasi pestiin 1 M NaHS03:lla, kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromato-grafoitiin silikageelillä (5 x 10 cm) käyttäen EtOAc:n 10 gradienttia tolueenissa (1:1 EtOAc:iin). UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 1,51 g (62 %) ot-w sikon yhdistettä vaahtona: IR (NaCl, kalvo) vBax: 3400 (leveä, OH), 2100 (N3), 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); 15 NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,37 (d, J = 6,26 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 1,92 (d, J = 1,9 Hz, 1H, OH), 3,17 (dd, JH6 H5 = 2,66 Hz, JH6 H1 = 7,09 Hz, 1H, H-6), 3,33 (leveä t, J = 6,2 Hz, 2H, CH2N3), 3,52 (leveä t, J = 9,0 Hz, 1H, H-4), 4,07 (ABq, JAB = 20 14,75 Hz, Δν 54,4 Hz, 2H, SCH2), 4,08 (s, 3H, triatsolin CH3-1), 4,2 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 7,48 ppm (s, 1H, triatsolin H-5).
B. (4R, 5S, 6S) -4- (4"-aminobutyyli) -6-[(1'R)-1' -hyd-: 25 roksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)metyyli- tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-happo fH (CH2)4N3 ^ch3 OH <ch2)4nh2 ^Ch3 30 h zr"'ΓΓ"\ 1>PdC03 h ΛγπΛ 3 π>·.-ν 3
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-( 4"-35 atsidobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(1-metyyli- 96311 276 1,2,3-triatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo-
[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,51 g, 3,27 mmol) kuivassa EtOAc:ssa (75 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)pal-5 ladiumilla [0] (0,075 g) ja 7,2 ml:lla (3,6 mmol) 0,5 M
kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAc:ssa. 45 minuutin kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (2 x 75 ml). Yhdistettyä vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi ja sen jälkeen hydrattiin 0 -10 5 eC:ssa käyttäen 5-prosenttista Pd:a alumiinioksidilla 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunti (loppu-pH 10,5). Sen jälkeen lisättiin 25 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja katalyytti suodatettiin ce-lite-kerroksella. Suodos väkevöitiin puoleen tyhjössä ja 15 sen jälkeen kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 12 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 1,0 g (76 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen: 20 Puhtaus HPLC:n mukaan: 97 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 6,07 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) x„ax: 302 nm 25 (9098); w IR (KBr) vBax: 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1690 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,30 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,0 30 (t, J - 7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,23 (leveä t, 1H, H-4), 3,33 (dd, JH6.„5 = 2,52 Hz, JH6H1 = 6,33 Hz, 1H, H-6), 4,08 (s, 3H, triatsolin CH3-1), 4,09 (ABq, JAB = 14,93 Hz, AV = 33,7 Hz, 2H, SCH2), 4,1 (päällekkäin SCH2:n kanssa, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3CH0) ja 7,87 ppm (s, 1H, triatsolin 35 H-5).
96311 277
Esimerkki 63 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1'R) -1' -hyd- roksietyyli]-4-[2"-(1-pyrrolidinyyli)etyyli]-7-ok- so-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-5 happo on <ch2>5n{^3 ίο I /)— cn
w COgH
A.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidime-15 tyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-(1- pyrrolidinyyli)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti / /
0 S i + (CHp)?0H OS i + <CH2)2N
βCN —N~^/' CN
^ 25
Kylmään liuokseen (hiilihappojää-asetonihaude), jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l*R)-1'-tert-butyy-lidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-syaanietyyli )tio] -4-(2" -hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-30 eeni-2-karboksylaatti (418 mg, 0,870 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (410 μΐ, 3,59 mmol) ja tipoittain trifluorimetaanisulfo-nihappoanhydridiä (209 μΐ, 1,24 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, ja lisättiin pyrrolidiiniä (530 μΐ, 35 6,35 mmol) tipoittain. Hiilihappojää-asetonihaude korvat- 96311 278 tiin jää-MeOH-hauteella, ja seosta sekoitettiin 2 tuntia. Reaktioseos vietiin neljälle preparatiiviselle TLC:lle (2 mm, EtOAc, Rf = 0,2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (355 mg, 75,5 %) öljynä; 5 IR (puhdas) vBax: 1780 ja 1710 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6; 6,05 - 5,85 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,72 (2H, m, vinyylin H), 4,85 - 4,63 (2H, m, allyylin CH2), 4,3 - 4,13 (1H, m, H-l'), 4,193 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,4 Hz, H-5), 3,224 (1H, dd, J = 10 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-6), 3,37 - 3,19 (2H, m, H-4 ja HCHS), 3,07 - 2,93 (1H, m, HCHS), 2,72 - 2,5 (8H, m, CH2CN ja (CH2)3N), 2,1 - 1,8 (6H, m, CH2-4 ja CH2-CH2), 1,587 (3H, ^ d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,892 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,088 ppm (6H, s, dimetyyli).
15 B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(syaanietyyli)tio]-6- [ (l'R)-l’-hydroksietyyli]-4-[2"-(l-pyrrolidinyy 1 i)etyy 1 i ] - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OS i + < CH?)p OH <CH?)pN// 1
β—^CN ^XCN
C02\^S C02\y^s ; 25 w
Kylmään liuokseen (jää-MeOH-haude), jonka muodosti allyyli-(4R, 5S,6S)-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-(1-pyrrolidi-nyyli)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-30 karboksylaatti (355 mg, 0,665 mmol) THF:ssa (8 ml), lisättiin ensin etikkahappoa (500 μΐ, 8,73 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta THF:ssa (4,5 ml, 4,5 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja sen jälkeen annettiin olla kylmässä huoneessa (5 °C) 114 tuntia. Sit-35 ten lisättiin kiinteää NaHC03:a (1 g), ja seosta sekoitet- 96311 279 tiin 30 minuuttia. Se vietiin kolmelle preparatiiviselle TLC-levylle (2 mm, eluointi kaksi kertaa asetonilla), jolloin saatiin otsikon yhdiste (220 g, 78,8 %, Rf 0,2), jossa oli epäpuhtautena jonkin verran tetrabutyyliammoniumsuolo-5 ja; IR (puhdas) VMX: 3600 - 3200 (OH), 1775 ja 1710 cm-1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,07 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,24 (2H, m, vinyylin H), 4,88 - 4,6 10 (2H, m, allyylin CH2), 4,293 (1H, dd, J = 3,2 Hz, J = 10,4 Hz, H-5), 4,17 - 4,02 (1H, m, H-l'), 3,366 (1H, dd, -w J = 3,2 Hz, J = 9,2 Hz, H-6), 3,2 - 2,8 (9H, CH2S, (CH2)3N, H-4), 2,7 - 2,62 (2H, m, CH2CN), 2,4 - 2,2 (1H, m, HCH-4), 2,1 - 1,8 (5H, m, CH2CH2, HCH-4) ja 1,404 ppm (3H, d, J = 15 6,3 Hz, CH3).
C. (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-4-[2"-(1-pyrrolidinyyli)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 20 OH OH <CH?)?N|
ArLT - cn cn
V 25 C02N^^ C02H
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti allyy- li-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli] -4-[2"-(1-pyrrolidinyyli)etyyli]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (220 mg, 30 0,524 mmol) CH2Cl2:ssa (8 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a (20 mg) ja 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuosta (1,1 ml, 0,55 mmol) EtOAcrssa. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, minkä jälkeen se laimennettiin dietyylieetterillä ja 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavalla puskurin vesiliuoksella. 35 Orgaanista kerrosta uutettiin jälleen 0,05 M pH-arvon 7,4 96311 280 omaavalla puskuriliuoksella (3 x 3 ml). Vesipitoiset kerrokset yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (25 ml) ja vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (25 g, H20, 2 -+ 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste 5 (145 mg, 73 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,2 % (300 nm); UV (H20) 300 (ζ 7500); IR (Nujol) vBax: 1760 ja 1600 cm*1 (C=0); NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33 - 4,24 (1H, m, H-l’), 10 4,298 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 3,43 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 6,8 Hz, H-6), 3,50 - 2,4 (7H, m, (CH2)3N, H-4), 3,21 - 3,07, 3,01 - 2,90 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-S), ~ 2,88 - 2,78 (2H, m, CH2CN), 2,24 - 1,93 (5H, m, CH2CH2 ja CH2-4) ja 1,336 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
15 Esimerkki 64 (4R, 5S, 6S)-4-(4,,-aminobutyyli)-3-[ (2-karbamoyyli-etyyli) tio] -6- [ (1 ’R) -1 ’ -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH <CHp)4NH2 - ΑΛ \-sch2ch2conh2
25 C02H
A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-3-[(2-karbamoyylietyyli) tio] -6- [(1'R)-1' -hydroksietyyli)-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30 <CH2)<N3 oh <CH2)4N3 H3C o —. — ^ Xp^>-SCH2CH2C0NH2 - 96311 281
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (5,28 mmol, valmistettu saattamalla 2,0 g, 5,28 mmol diatsoprekursoria 5 rengasmuotoon, kuten esimerkissä 45 on kuvattu) kuivassa asetonitriilissä (40 ml), käsiteltiin 0 - 5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,20 ml, 5,8 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,0 ml, 5,74 mmol) 10 minuutin 10 aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliamino-pyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Lisättiin w vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,92 ml, 5,3 mmol) ja sen jälkeen klooritrimetyylisilaania (0,67 ml, 5,3 mmol), ja seosta sekoitettiin 10 minuuttia. Sen jälkeen 15 lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,21 ml, 6.9 mmol) ja sen jälkeen 3-merkaptopropionamidia (0,73 g, 6.9 mmol) [valmistettu kuten julkaisuissa T. Endo et ai., Chemistry Letters. 443 (1974) ja C.M. Buess, J. Am. Chem. Soc., 77 (1955) 6613 on kuvattu] N,N-dimetyyliformamidissa 20 (2 ml), ja sitten liuosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 18 tuntia. Reaktio pysäytettiin lisäämällä Et0Ac:a (300 ml) ja kylmää vettä. Orgaaninen faasi pestiin kylläisellä NaH-C03:lla, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutet-25 tiin, jolloin saatiin öljy, joka laimennettiin tetrahydro-furaanilla (20 ml) ja vedellä (5 ml) ja käsiteltiin etik-kahapolla (2 ml). 1 tunnin jälkeen 22 °C:ssa ja 18 tunnin jälkeen 5 °C:ssa liuos laimennettiin EtOAc:lla (300 ml) ja pestiin kuten edellä. Kuivattiin (MgS04) ja liuotin haihdu-30 tettiin, minkä jälkeen jäännös kromatografoitiin silika-geelillä (5 x 10 cm) käyttäen etanolin gradienttia (0 -10 %) EtOAcrssa eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 1,06 g (46 %) otsikon esteriä öljynä: 96311 282 IR (NaCl, kalvo) vMX: 2100 (N3), 1770 (3-laktaamin C=0), 1710 (olkapää, esterin C*0) ja 1680 cm'1 (amidin C=0); 1H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,27 Hz, 3H, 5 CH3CH0), 1,3 - 1,9 (m, 6H, atsidobutyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,05 (d, J = 2,0 Hz, 1H, OH), 2,53 («t, J = 7 Hz, 2H, SCH2-CH2CONH2), 3,0 - 3,3 (m, 4H, SCH2, H-6 ja H-4 päällekkäin), 3,33 (t, J = 6,1 Hz, 2H, CH2N3), 4,26 (dd, JH5>H6 = 2,61 Hz, JH5,H4 = 9,37 Hz, 1H, H-5), 4,26 (päällekkäin H-5:n kanssa, 10 1H, CH3CH0), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 5,5 ja 5,6 ppm (2 leveää S, 2 x 1H, C0NH2).
B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-3-[(2-karbamoyy-lietyyli) tio] -6- [ (1 'R) -1' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabi-15 syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo jH <CH2><N3 OH (CH2)4NHg
h3ctN—r\ DPdto] H
3 rT\-SCHeCHgC0NH2 20 Λο,/N^ ^ Vn
C02H
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-3- [ ( 2-karbamoyylietyyli)tio] -6- [ (1' R )-l' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-25 karboksylaatti (1,06 g, 2,42 mmol) EtOAcrssa (50 ml), kä- ^ siteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetra-kis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,074 g) ja 5,3 ml:11a (2,65 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAc:ssa. 30 minuutin kuluttua reaktioseosta uu-30 tettiin vedellä (2 x 50 ml), ja yhdistettyä vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesifaasia hydrattiin käyttäen 1,25 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla 0-5 °C:ssa ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunti. Lisättiin 35 20 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, minkä o f,", i
283 ^ f I
jälkeen katalyytti suodatettiin, ja suodos kromatografoi-tiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 3,5 x 15 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 0,36 g (40 %) otsikon 5 yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena (93-prosenttisen puhdasta HPLC:n mukaan) pakastuskuivauksen jälkeen. Puhtautta voidaan lisätä 99 %:iin toisella kromatografoinnil-la samassa pylväässä käyttäen 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskuria veden sijasta, minkä jälkeen tuotteelle 10 suoritetaan suolanpoisto:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,5 % p-Bondapak-C18:11a, w 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti- puskuri, virtausnopeus 0,7 ml/min, UV-detektori 304 nm, viipymäaika 6,96 minuuttia; 15 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λΒβχ: 302 nm (8865); IR (KBr) v,„: 1750 (β-laktaamin C=0), 1670 (amidin C=0) ja 1590 cm*1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) δ: 1,33 (d, J = 6,37 Hz, 3H, 20 CH3CH0), 1,3 - 2,0 (m, 5H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,60 (=t, J = 6,4 Hz, 2H, CH2CONH2), 2,9 - 3,2 (m, 4H, SCH2 ja CH2NH2 päällekkäin), 3,4 (m, 2H, H-4 ja H-6), 4,23 (dd, JH5.H6 = 2'6 HZ, JH5.H4 = 9/15 Hz ' 1H' H“5) 3¾ 4'27 PPm (m/ 1H, CHjCHO) .
25 Esimerkki 65 (4R, 5S,6S) -3- [ (2”-syaanietyyli)tio]-4-(2-N-formimi-doyyliaminoetyyli) - 6- [ (1 * R) -1' -hydroksietyyli] - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-happo 30
: 2H CH?CH?NH? £H CH,CH,NH-CH=NH
.X-rC .A-X' 35 co2h co2h 284 - ^11 (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-[(2-syaanietyyli)-tio] -6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,290 g, 0,89 mmol) kylmän (0 - 5 °C) vesiliuoksen (35 ml) pH säädettiin ar-5 voon 8,5 1 M NaOH:lla, ja käsiteltiin bentsyyliformimi-daattivetykloridilla (0,76 g, 4,4 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 10 min aikana niin, että pH pidettiin välillä 8 - 8,5 (IN NaOH). 20 minuutin kuluttua reaktio pysäytettiin lisäämällä 25 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa 10 fosfaattipuskuria ja pestiin EtOAc:lla. Vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi, ja sitten kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä w· (p-Bondapak-C18, 3,5 x 12 cm). Pylvästä eluoitiin ensin 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla. UV-ak-15 tiiviset fraktiot yhdistettiin, lyofilisoitiin ja suoritettiin suolanpoisto samassa pylväässä käyttäen vettä eluenttina. Pakastuskuivauksen jälkeen saatiin otsikon yhdiste valkoisena amorfisena jauheena (0,120 g, 38 %):
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 20 3,9 mm x 30 cm, eluointi 1,5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaat tipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 4,91 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ληβχ: 300 nm (7429); 25 IR (KBr) vBax: 2250 (heikko CN), 1755 (β-laktaamin v C=0), 1610 (formimidoyylin C=N) ja 1580 cm'1 (karboksylaa-tin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,34 (d, J = 6,37 Hz, 3H, CH3CH0), 1,8 - 2,3 (m, 2H, aminoetyylin CH2-1), 2,8 - 3,2 30 (m, 4H, SCH,CH,CN), 3,45 (päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,47 (dd, JH6 H5 = 2,92 Hz, JH6 H1 = 6,87 Hz, 1H, H-6), 4,28 (m, 1H, CH3CHO), 4,32 (dd, JH5 H6 = 2,92 Hz, JH5 H4 = 6,68 Hz, 1H, H-5) ja 7,85 ppm (s, 1H, CH=NH).
' aamun j st. .
96311 285
Esimerkki 66 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-karbamoyyli- oksietyyli)tio]-6-[ (1 *R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso- 1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 5 <ch2)3nh2 3 I ,)-S(CH2)jOCONHj io s? ox \
C02H
A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[ (2-karbamoyylioksietyyli)tio]-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-7-15 okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH (C H j) g N! -j <CH2)3N3 # -► H3C " —S<CHs)sOCQNHj 20 /-H Γ\θ^ C02\^>
Kylmää (jää-MeOH-haude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S )-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(l'R)-l'-w 25 hydroksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaa- ni2-karboksylaatti, joka oli valmistettu (3S,4R)-3-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -4-[ (l"R)-l"-(3-atsidopropyy-li) -3 " -diatso-3" -allyylioksikarbonyyli-2 " -oksopropyyli ] -atsetidin2-onista (2,0 g, 5,49 mmol), CH3CN:ssa (40 ml), 30 käsiteltiindifenyylikloorifosfaatilla (1,3 ml, 6,0 mmol), N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,98 ml, • 6,0 mmol) ja pienellä määrällä 4-dimetyyliaminopyridii- niä. Seosta sekoitettiin 40 minuuttia, sitten saatua enolifosfaattiakäsiteltiin 2-karbamoyylioksietyylimer-35 kaptaanilla (1,33 g, 11,0 mmol) ja N,N-di-isopropyyli- 96311 286 etyyliamiinilla (1,7 ml, 11,0 mmol). Seosta sekoitettiin 24 tuntia 5 eC:ssa, sitten sitä käsiteltiin jälleen 2-kar-bamoyylioksietyylimerkaptaanilla (0,65 ml, 5,5 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,88 ml, 5,5 mmol).
5 Sekoitettiin vielä 35 h, minkä jälkeen seos laimennettiin etyyliasetaatilla ml), pestiin kylmällä vedellä (2 x 50 ml), kylmällä 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (2 x 50 ml), vedellä (50 ml), 1 N HCl:n vesiliuoksella (50 ml), vedellä (50 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (50 ml), vedellä 10 (50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04).
Jäännös vietiin silikageelikerroksen läpi (25 g, heksaa-ni -* etyyliasetaatti), jolloin saatiin otsikon yhdiste w (1,29 g, 53 %) keltaisena puolikiteisenä yhdisteenä; IR (CH2C1j) vBax: 3680, 3600, 3540, 3420 (OH, NH2), 15 21Ö0 (N3), 1775, 1740 ja 1710 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,50 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,88 - 4,63 (4H, m, NH2 ja allyylin CH2), 4,37 - 4,10 (4H, m, H-l', CHjO ja H-4), 4,276 (osa H-4:a, d, J = 2,7 Hz), 3,49 - 3,35 20 (3H, m, CH2N3 ja H-4), 3,247 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,5 Hz, H-6), 3,8 - 3,09, 2,97 - 2,63 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 1,96 - 1,55 (3H, m, OH ja CH2CH2) ja 1,388 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
B.(4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-karbamoyy-25 lioksietyyli)tio]-6-[(1’R)-1’-hydroksietyyli]-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo oh <ch2)3n3 oh <ch2>3nh2
u , H
H3C Γ \ S<CH?),0C0NHp -* H3L f />—S(CH2)30C0NH2 30 J’ C02\^ co2h
Kylmää liuosta (jäähaude), jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(2-karbamoyylioksi-35 etyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- 287 C {Ύ -» η -Ό o I j bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (520 mg, 1,18 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml), käsiteltiin (PPh3 )4Pd: 11a (110 mg, 0,09 mmol) ja lisättiin tipoittain 0,5 M natrium-etyyli-2-heksanoaatin liuosta (2,36 ml, 1,18 mmol) etyyli-5 asetaatissa. Seosta sekoitettiin 20 minuuttia, laimennettiin dietyylieetterillä (150 ml) ja uutettiin vedellä (2 x 20 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (2 x 30 ml) ja ravistettiin Parrin hyd-rauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypai-10 neessa 2 tuntia 0 °C:ssa käyttäen 5-prosenttista Pd/alu-miinioksidia (500 mg) katalyyttinä. Liuoksen pH säädettiin w arvoon 6,9 1 M KH2P04:n vesiliuoksella. Katalyytti poistet tiin suodattamalla, ja vesipitoinen liuos vietiin kaksi kertaa p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (120 g, 15 H20 -* 1 % -♦ 3 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (155 mg, 35 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 99,0 % (HPLC, 300 nm); UV (H20) χββχ: 302 (g 10600); IR (Nujol) 1755, 1710 ja 1585 cm*1 (C=0); 20 NMR (D20 , 200 MHz) 6: 4,34 - 4,21 (4H, m, H-l', H-5 ja CH20), 3,47 - 3,35 (1H, m, H-4), 3,356 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,21 - 2,88 (4H, m, CH2N, SCH2), 2,0 - 1,4 (4H, m, CH2CH2) ja 1,334 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
25 Esimerkki 67 (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli) metyyli tio] -6-[ (1' R) -1' -hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 OH CH2CH2NH2 ^H3 o \ co2h 35 96311 288 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(1-metyyli- 1,2,3-triatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 OT0DMS CHgCHgN3 0ΤΒ0Π5 CH2CH?N- fH3
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(2"- w atsidoetyyli)-6-[(1'R)-l’-tert-butyylidimetyylisilyyliok-sietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-kar-15 boksylaatti (4,69 mmol, valmistettu saattamalla 2,18 g, 4,69 mmol diatsoprekursoria rengasmuotoon, kuten esimerkissä 2 on kuvattu) kuivassa asetonitriilissä (36 ml), käsiteltiin -15 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,02 ml, 4,9 mmol) ja N,N-di-20 isopropyylietyyliamiinilla (0,87 ml, 5,0 mmol). Lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin -15 eC:ssa 30 minuuttia. Lisättiin N,N-di-isopro-pyylietyyliamiinia (0,87 ml, 5,0 mmol) ja l-metyyli-4-tio-metyyli-1,2,3-triatsolia (1,22 g, 9,4 mmol), ja seosta 25 sekoitettiin yön yli -15 °C:ssa. Reaktioseos laimennettiin Et0Ac:lla (250 ml) ja sekoitettiin seoksen kanssa, joka saatiin samanlaisesta kokeesta ja jossa käytettiin lähtöaineena 0,54 mmol diatsoprekursoria. Saatu liuos pestiin vedellä, 1 M NaHS03:lla, kylläisellä NaHC03:lla, suola-30 liuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelil-lä (5 x 15 cm). Eluoitiin EtOAcrn ja tolueenin seoksella (7:13), jolloin saatiin 1,99 g (69 %) otsikon yhdistettä ruskeana öljynä: 96311 289 IR (Nujol) vBax: 2105 (N3), 1775 (B-laktaamin C=0) ja 1710 (esterin C=0).
*H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,89 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,29 (d, J = 6,14 Hz, 3H, CH3CH0), 1,72 5 ja 2,04 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 3,10 (dd, Jr6 = 7,19 Hz, J5_6 = 2,73 Hz, 1H, H-6), 3,30 - 3,64 (m, 2H, CH2N3), 3,65 (ddd, J4_5 = J = 10,06 Hz, J = 2,73 Hz, 1H, H-4), 4,01 (d, Jgem = 14,62 Hz, 1H, CH2-S ), 4,02 - 4,35 (m, 2H, H-5 ja CH3-CHO), 4,08 (s, 3H, CH3-N), 4,26 (d, Jgea = 14,58 Hz, 1H, 10 CH2-S), 4,72 (m, 2H, allyylin CH2), 5,21 - 5,47 ja 5,95 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,48 (s, 1H, triatsolin w CH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(1-metyyli-1,2,3-triatsol-4-yyli)metyylitio] -6- [ (1 ’R) -1' -hyd-15 roksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar- boksylaatti OTBDHS CHeCH2N3 OH CHgCHgN3 H3C^rA_K H3jf"> 20 X_N OcON // ° * Λο^
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1*R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyyliok-: 25 sietyyli]-3-[ (1-metyyli-l, 2,3-triatsol-4-yyli )metyylitio] - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,99 g, 3,63 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (57 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaa-suna etikkahapolla (1,25 ml, 21,8 mmol) ja sen jälkeen 30 11,3 ml:11a (11,3 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa. Liuosta pidettiin 5 °C:ssa 10 vuorokautta. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin EtOAcrlla, pestiin kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saa-35 tiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (5 x 96311 290 15 cm). Eluoitiin asetonitriilin ja EtOAcrn seoksella (3:97), jolloin saatiin 1,09 g (48 %, saanto diatsoatse-tidinonista) otsikon yhdistettä vaahtomaisena vaaleankeltaisena kiinteänä aineena: 5 IR (NaCl, kalvo) vB.x: 3490 (OH), 2105 (N,), 1780 (B- laktaamin C=0) ja 1710 (esterin C=0).
XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,25 Hz, 3H, CH3CH0), 1,78 ja 2,02 - 2,18 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 2,07 (d, J = 4,42 Hz, 1H, OH), 3,17 (dd, Jr_6 = 7,71 Hz, J5_6 = 10 2,76 Hz, H-6), 3,39 - 3,65 (m, 2H, CH2N3), 3,74 (ddd, J4.5: 10,40 Hz, J = 10,40 Hz, J = 2,42 Hz, H-4), 3,95 (d, JgeB = 14,89 Hz, 1H, CH2-S), 4,08 (s, 3H, CH3-N), 4,14 - 4,27 (m, ~ 1H, CH3CH0), 4,21 (dd, J4_5 = 9,54 Hz, J5.6 = 2,69 Hz, H-5), 4,28 (d, Jgem = 15,05 Hz, 1H, CH2-S), 4,73 (m, 2H, allyylin 15 CH2), 5,22 - 5,48 ja 5,94 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 7,48 (s, 1H, triatsolin CH).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-[(1-metyyli- 1,2,3-triatsol-4-yyli)metyylitio]-6-[ (1 Ή) -1'-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-20 syylihappo
Ng —m NHp pii oh / p 0H j j3 «a^VrCs Jf'> 11Ρι1101- «,Αι-rV, |T"> J-Ly~SN-^ ^ 25 (K \ (K \ co2h
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli )-3- [ (1-metyyli-l, 2,3-triatsol-4-yyli )metyyli-tio]-6-[(l'R)-l’-hydroksietyyli]-7-okso-1-atsabisyklo-30 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (495 mg, 1,14 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (25 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfii-ni )palladiumilla [0] (83 mg) ja 2,5 ml:lla (1,25 mmol) 0,5 M natrium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAc:ssa. Sen 35 jälkeen lisätiin 50 ml vettä, ja orgaaninen kerros erotet- 1 « t μ» i iia : .
- 96311 291 tiin. Orgaanista faasia uutettiin uudelleen 3 x 15 ml vedellä, ja yhdistettyjä vesipitoisia kerroksia pidettiin pumppauksella aikaansaadussa tyhjössä orgaanisen liuottimen poistamiseksi. Jäljelle jäänyttä vesifaasia hydrattiin 5 käyttäen 419 mg 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunti. Katalyytti suodatettiin, ja suodos neutraloitiin 1 M NaH2P04-liuoksella (muutama tippa). Seos kromatografoitiin kään-teisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 7 x 11 cm) käyt-10 täen asetonitriilin gradienttia vedessä (0 - 1 %), ja sen jälkeen UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin w saatiin 290 mg (69 %) otsikon yhdistettä vaaleankeltaisena amorfisena jauheena:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,3 % p-Bondapak-C18:11a,
15 3,9 mm x 30 cm, eluointi 1,5 % asetonitriili vedessä, pH
7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 5,82 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) >.Bax: 302 nm (6091); 20 IR (KBr)vmax: 1760 (β-laktaamin C=0) ja 1600 (kar- boksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,31 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CHjCHO), 1,80 ja 2,17 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 3,09 (t, J = 8,33 Hz, CH2N3), 3,32 (ddd, J4_5 = J = 10,06 Hz, J = "Ϊ 25 3,06 Hz, 1H, H-4), 3,41 (dd, J7._6 = 6,56 Hz, J5_6 = 2,79 Hz, H-6), 3,95 - 4,28 (m, 4H, CH2-S, CH3CH0, H-5), 4,08 (s, 3H, CH3-N), 7,85 (s, 1H, triatsolin CH).
Esimerkki 68 (4R,5S,6S)-3-[(3-syaanipropyyli)tio]-4-(4"-N-form-30 imidoyyliaminobutyyli) -6- [ (1 *R) -1 ’ -hydroksietyyli] - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyy- lihappo
JO» (CH.J.NH, OH <CH,)4NH-CH=NH
1 a ,HC1 I J
_<-\ M CU, Ph u
n3u I )-SCH.CH.CH.CN -► 3 | ,)-SCH,CH,CH,CN
/-"-f
COjH COjH
292 963 11 (4R, 5S, 6S)-4-(4"-aminobutyyli)-3-[(3-syaanipro-pyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabi-syklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,411 g, 1,12 mmol) vesiliuoksen (50 ml) pH säädettiin arvoon 8,5 5 1M NaOH:lla. Sen jälkeen lisättiin pieninä annoksina 5 minuutin aikana bentsyyliformimidaattivetykloridia (0,94 g, 5,4 mmol) niin, että pH pidettiin välillä 8-8,5 1 M NaOH:lla. 20 min kuluttua lisättiin 40 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja liuos pestiin 10 etyyliasetaatilla, ja vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Vesipitoinen liuos kromatografoitiin 0-5 °C:ssa käänteisfaasisilikageelillä _ (3,5 x 15 cm, μ-Bondapak) käyttäen asetonitriilin gra-dienttia (0 - 10 %) 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaat-15 tipuskurissa. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, väke-vöitiin tyhjössä (t <10 °C) ja suoritettiin suolanpoisto samassa pylväässä käyttäen vettä ja asetonitriiliä (0 -10 %) eluenttina. Otsikon yhdiste saatiin valkoisena amorfisena jauheena (0,224 g, 50 %) pakastuskuivauksen jäl-20 keen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 nun x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 304 nm, vii-pymäaika 6,85 minuuttia; 25 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) a.max: 304 nm ^ (9324); IR (KBr) vBax: 2250 (CN), 1755 (B-laktaamin C=0), 1715 (formimidoyylin C=N) ja 1590 cm’1 (karboksylaatin C=0); 30 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J - 6,31 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 2,1 (m, 8H, butyylin CH2-1, -2 ja -3 ja syaanipropyylin CH2-2), 2,64 (t, J = 6,9 Hz, 2H, CH2CN), 2,7 - 3,1 (m, 2H, SCH2), 3,35 (m, 4H, CH2NH, H-4 ja H-6 päällekkäin), 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin) 35 ja 7,79 ppm (s, 1H, CH=NH).
C f? * ·ι 293 v; ' «
Esimerkki 69 (4R,5S,6S)-4-(4"-N,N-dimetyyliaminobutyyli )-6- [ (1 'R)-l' -hydroksietyyli]-3-[ (pyridin-3-yyli)metyy- litio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-5 karboksyylihappo 2H (CHjJ.NHj OH (CHe),N<CH3)£
10 COgH COgH
w Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobu- tyyli)-6-[(l'R)-l’-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-3-yyli)me-tyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-15 syylihappo (0,221 g, 0,56 mmol) 5 ml:ssa kylmää vettä (0 -5 °C), käsiteltiin 37-prosenttisella (paino/paino) formaldehydillä (0,23 ml, 2,8 mmol) ja etikkahapolla (0,2 ml, 3,5 mmol). Saatu pH oli 4,0. Sen jälkeen lisättiin kerralla 0,071 g (1,1 mmol) natriumboorihydridiä ja sen jälkeen 20 vielä 0,130 g (2,1 mmol) pieninä annoksina 2 tunnin aikana. Sen jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä 20 ml 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja sitten kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 2 x 15 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 -25 5 ®C) vedessä, jolloin saatiin 0,161 g (68 %) otsikon yh distettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena pakastus-kuivauksen jälkeen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 94 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm/30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipus-30 kuri, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 8,19 minuuttia; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ληβχ: 266 (4980) ja 304 nm (7540); IR (KBr) vBax: 1758 (B-laktaamin C=0) ja 1582 cm'1 35 (karboksylaatin C=0); 96311 294 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,86 (s, 6H, NCH3), 3,1 (m, 3H, CH2N ja H-4), 3,29 (dd, JH6 H5 = 2,54 Hz, JH6 H1 = 6,35 Hz, 1H, H-6), 4,08 (ABq, JAB = 5 14,9 Hz, Δ-D = 24,2 Hz, 2H, SCH2), 4,08 (päällekkäin SCH2:n kanssa, 1H, H-5), 4,22 (m, 1H, CH3CHO), 7,45 (dd, J = 4,9 Hz ja J = 7,9 Hz, 1H, pyridiinin H-5), 7,9 (m, 1H, pyridiinin H-4), 8,44 (dd, J * 1,5 Hz ja J » 4,9 Hz, 1H, pyridiinin H-6) ja 8,53 ppm (d, J * 1,8 Hz, 1H, pyridiinin 10 H-2).
Esimerkki 70 (4R, 5S,6S)-4-(4"-N-formimidoyyliaminobutyyli)-6- [ (1 *R) -1'-hydroksietyyli)-3-[(1-metyyli-l,2,3- triatsol-4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo-15 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo SH <CHg)4NHg /CH3 fH <CHg)4NH-CH = NH CH3 "'ttvsch JF\ v'Y-r'v^ P~*'
20 COgH COgH
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobu-tyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] -25 hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,296 g, 0,75 mmol) [valmistettu esimerkissä 62] vedessä (30 ml), käsiteltiin 0 -5 °C:ssa bentsyyliformimidaattivetykloridilla (0,65 g,
3,8 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 10 minuutin aikana niin, että pH pidettiin välillä 8 - 8,5 IM
30 NaOH:lla. 30 min kuluttua lisättiin 25 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja saatu seos pestiin EtOAcrlla (20 ml). Vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi ja sen jälkeen kroma-tografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 35 3,5 x 14 cm). Pylvästä eluoitiin ensin CH3CN:n gradientilla 96311 295 (O - 8 %) 0,01 M pH-arvon 7 omaavassa fosfaattipuskurissa. UV-aktiiviset fraktiot väkevöitiin tyhjössä (T<15 °C) ja kromatografoitiin jälleen samalla pylväällä käyttäen vettä puskurin sijasta. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, 5 jolloin saatiin 0,21 g (66 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98 % p-Bondapak-C18:11a, 3.9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 304 nm, vii- 10 pymäaika 6,34 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λΒ„: 302 nm _ (8586); IR (KBr) vB„: 1755 (8-laktaamin C=0), 1715 (form-imidoyylin C=N) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); 15 XH NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,30 (d, J * 6,36 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,1 - 3,5 (m, 4H, H-4, H-6 ja butyylin CH2-4 päällekkäin), 4,08 (s, 3H, triatsolin CH3-1), 4,09 (ABq, JM = 14,85 Hz, Δν = 31.9 Hz, 2H, SCH2), 4,15 (päällekkäiset SCH2 ja CH3, 1H, 20 H-5), 4,27 (m, 1H, CH3CHO), 7,8 (leveä s, 1H; CH=NH) ja 7,87 ppm (s, 1H, triatsolin H-5).
Esimerkki 71 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1’R)-1’-hydrok-sietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsa-w 25 bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH <CH2)4NH2
3 I />-SCHjCHgOH
//^ CT \
C02H
96311 296 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6- [ (1' R) -1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 °H <CHg)4N3 OH <CH2)4N3 u h cr'\—r\
H3C I Y^o -* -► HsC Γ /)-SCH2CH20H
s "'W
10
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-at-sidobutyyli)-6-[(l'R)-l?-hydroksietyyli]-3,7-diokso-l-at-sabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (11,8 mmol, valmistettu saattamalla 4,47 g, 11,8 mmol diatsoprekursoria 15 rengasmuotoon kuten esimerkissä 45) kuivassa asetonitrii-lissä (50 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (2,57 ml, 12,4 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,16 ml, 12,4 mmol) 5 minuutin aikana. 1 tunnin kulut-20 tua lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,16 ml, 12.4 mmol) ja sen jälkeen klooritrimetyylisilaania (1,57 ml, 12,4 mmol) tipoittain 5 minuutin aikana. Sitten lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,16 ml, 12.4 mmol) ja 2-merkaptoetanolia (1,84 g, 23,5 mmol), ja 25 seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 16 tuntia. Sen jälkeen ~ reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin kylmällä vedellä, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka sitten laimennettiin tetrahydrofuraanilla (100 ml) ja 30 vedellä (20 ml) ja käsiteltiin etikkahapolla (2 ml) 20 °C:ssa 2 tunnin ajan. Liuos laimennettiin jälleen etyyliasetaatilla, pestiin kylläisellä NaHC03:lla, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla ja suolaliuoksella. Kuivattiin vedettömällä MgS04:lla, minkä jälkeen haih-35 dutettiin liuotin, jolloin saatiin öljy, joka kromatogra- 96311 297 foitiin silikageelillä (4,5 x 10 cm). Eluoitiin tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella (1:1), jolloin saatiin 2,56 g (52 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) vBajt: 2100 (N3), 1765 (β-laktaamin 5 C=0) ja 1705 cm'1 (esterin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,29 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 - 3,2 (m, 2H, SCH,CH,0H), 3,18 (dd, JH6,H5 = 2,60 Hz, JH6>H1 = 7,18 Hz, 1H, H-6), 3,3 (m, 3H, CH2N3 ja H'-4 päällekkäin), 10 3,82 (t, J = 6,0 Hz, 2H, SCH,CH,0H), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 -w 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1 Ή)-1'-hyd-roksietyyli] -3-[ (2-hydroksietyyli) tio] -7-okso-l-atsabisyk-15 lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH <CH,>4N, SH <CHs)4NH2 XJ ,xi
H3C I \ \-SCH-CHpOH -* -»- 3 I /)-SCH2CH20H
/-'f S'—( 20 0 C03h
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] - 3- [ ( 2-hydroksietyyli )tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-"T 25 karboksylaatti (2,56 g, 6,2 mmol) kuivassa etyyliasetaa tissa (60 ml), käsiteltiin 22 eC:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis( trifenyylifosfiini )palladiumilla [0] (0,15 g) ja 1,25 g:lla (6,9 mmol) kalium-2-etyyliheksano-aattia. 2 tunnin kuluttua reaktioseosta uutettiin kylmällä 30 vedellä (3 x 50 ml), ja yhdistetty vesifaasi kromatogra-foitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 13 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20). Sen jälkeen välituoteka-liumsuolaa (1,4 g) hydrattiin 0 - 5 °C:ssa vedessä (200 ml) käyttäen 2,0 g:a 5-prosenttista palladiumia alu-35 miinioksidilla 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 45 mi- 29s 9^11 nuuttia. Lisättiin 60 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, minkä jälkeen katalyytti suodatettiin ja suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-Cie, 3 x 13 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradien-5 tiliä (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 0,689 g (32 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena pakastuskuivauksen jälkeen: [a]” +74,0° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi pH-arvon 7,4 omaavalla fosfaat-10 tipuskurilla, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 9,68 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Bax: 304 nm w (7616); IR (KBr) vmax: 1750 (β-laktaamin OO) ja 1585 cm"1 15 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,38 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 - 3,1 (m, 2H, SCH2CH2OH), 3,02 (t, J = 7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,36 (m, 2H, H-4 ja H-6 päällekkäin), 3,77 (t, J = 6,2 Hz, 20 2H, SCH2CH2OH), 4,22 (dd, JH5 H6 = 2,43 Hz, 1H, H-5) ja 4,26 ppm (m, päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CH0).
Esimerkki 72 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -4- (4"-guanidino-butyyli) -6- [(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsa-25 bisyklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo ^
N-H
OH (CH2)4NH2 n_h OH < CH2)4NH-C-NH2 30 //~νλ co2h co2h (4R, 5S, 6S) -4- (4" -aminobutyyli) -3- [ (2-syaanietyyli)-tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-1-atsabisyklo-35 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,300 g, 0,85 mmol) 96311 299 [valmistettu esimerkissä 17] kylmän (O - 5 eC) vesiliuoksen (20 ml) pH säädettiin arvoon 8,0 1 M NaOH:lla, ja sen jälkeen käsiteltiin aminoiminometaanisulfonihapolla (0,35 g, 2,8 mmol) [K. Kim et ai., Tetrahedron Lett., 29 5 (1988) 3183], joka lisättiin pieninä annoksina 5 minuutin aikana. pH pidettiin välillä 8 - 8,5 1 M NaOHrlla lisäyksen aikana ja kahden tunnin ajan. Sen jälkeen lisättiin 10 ml pH-arvon 6,0 omaavaa 0,2 M fosfaattipuskuria, ja liuos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-10 Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm). Eluoitiin asetonitriilin gra-dientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 0,257 (77 %) w otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena pakas- tuskuivauksen jälkeen: [α]82 +45,5° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLCrn mukaan: 99 % p-Bondapak-Cie: 11a, 15 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti- puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 11,1 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 302 nm (8676); 20 IR (KBr) vnax: 2250 (heikko CN), 1755 (β-laktaamin C=0), 1665 (guanidyylin C=N) ja 1685 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,39 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 -^ 25 3,3 (m, 4H, SCH,CH,CN), 3,22 (t, J = 6,5 Hz, CH,NH), 3,36 (dd, Jh6.h5 2,34 Hz, JH6H1 = 6,22 Hz, 1H, H-6), 3,4 (päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CHO päällekkäin).
300 963Ί1
Esimerkki 73 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -4-(2"-guanidino-etyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa-bi syklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
5 N-H
nu II
OH CHgCHgNH2 CH2CH2NH-C-NH2
Η3^ *1 Λ—SCHgCHgCN ---C-S°3H >H3C ' —SCHgCH2CN
COgH COgH
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyy-li )-3- [ (2-syaanietyyli)tio] -6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli]-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 15 (0,185 g, 0,57 mmol) [valmistettu esimerkissä 36] kylmässä (0 - 5 °C) vedessä (20 ml), käsiteltiin aminoiminometaani-sulfonihapolla (0,35 g, 2,8 mmol) [K. Kim et al., Tetrahedron Lett., 29 (1988) 3183], joka lisättiin pieninä annoksina 5 minuutin aikana niin, että pH pidettiin välillä 20 8 - 8,5 1 M NaOH:lla. pH-arvoa pidettiin välillä 8-8,5 1 tunti, ja reaktio pysäytettiin lisäämällä 5 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria. Liuos kromatografoltiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 2 %) ve-25 dessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, ~ jolloin saatiin 0,035 g (17 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm/30 cm, eluointi 2 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipus-30 kuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipy-mäaika 5,98 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Xmax: 300 nm (7483); IR (KBr) vnax: 2255 (heikko CN), 1755 (B-laktaamin 35 C=0), 1660 (guanidiinin C=N) ja 1590 cm"1 (karboksylaatin C=0); 96311 301 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,34 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,7 - 2,3 (m, 2H, guanidinoetyylin CH2-1), 2,7 -3,4 (m, 7H, SCH2CH2CN, guanidinoetyylin CH2-2 ja H-4), 3,45 (dd, J„6.h5 = 2-69 Hz-· jh6.hi = 6'8 Hz* 1H^ H-6) ja 4,3 ppm 5 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO päällekkäin).
Esimerkki 74 (4R, 5S, 6S) -4- (N-formimidoyyli-4"-aminobutyyli) -6- [(1'R)-1’-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-10 boksyylihappo
OH (CH2)4NH2 ^'H OH (CHj )<NH-CH = NH
"3<: SCHjCH,0« ^ °C ;-. “’C 'rri—SCHjCHjOH
15 COjH co2h (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli] -3- [(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0, 205 g, 0,59 mmol) 20 0-5 °C:ssa olevan vesiliuoksen (20 ml) pH säädettiin ar voon 8,5 1M NaOH:lla. Sen jälkeen lisättiin bentsyyli-formimidaattivetykloridia (0,39 g, 2,27 mmol) pieninä annoksina (10 min) niin, että pH pidettiin välillä 8 - 8,5 1 M NaOH:lla. 15 minuutin kuluttua reaktio pysäytettiin "f 25 lisäämällä 10 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja pestiin etyyliasetaatilla (20 ml). Sen jälkeen vesifaasi kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gra-dienttia (0 - 2 %) 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaat-30 tipuskurissa eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, väkevöitiin 50 ml:ksi ja suoritettiin suolanpoisto samassa pylväässä käyttäen vettä puskurin sijasta. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,154 g (69 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä 35 aineena: [a]£2 +67,0° (c 1,0, H20); 96311 302
Puhtaus HPLCrn mukaan: 99 % p-Bondapak-Cie: 11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 2 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 10,2 minuuttia; 5 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ?.nax: 304 nm (10105); IR (KBr) v„ax: 1750 (β-laktaamin C=0), 1715 (form- imidoyylin C=N) ja 1590 cm"1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,37 Hz, 3H, 10 CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 - 3,1 (m, 2H, SCH2CH2OH), 3,3 - 3,5 (m, 4H, H-4, H-6 ja CH2NH päällekkäin), 3,77 (t, J = 6,21 Hz, 2H, SCH,CH,0H), 4,21 w (dd, JH5 H6 = 2,25 Hz, 1H, H-5), 4,26 (m päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CH0) ja 7,78 ppm (leveä s, 1H, CH=NH).
15 Esimerkki 75 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1’R)-1'-hydrok-sietyyli] -3- [ (l-N-metyyli-imidatsol-5-yyli)metyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksyylihappo 20 OH (CH2)4NH2 S Λ l C02H LH3 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli) - 6- [(l'R)-l1-hydroksietyyli]-3-[(l-N-metyyli-imidatsol-5-30 yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni- 2-karboksylaatti OH (CH2)4N3 OH <CH2)4N3 ' -U k ‘9 Mirt drift I li aft .
303 9631 1
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-6- [ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (5,28 mmol, valmistettu saattamalla 2,0 g, 5,28 mmol diatsoprekursoria 5 rengasmuotoon kuten esimerkissä 45) kuivassa CH3CN:ssa (40 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suo-jakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,2 ml, 5,8 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamii-nia (1,0 ml, 5,8 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen li-10 sättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 40 minuuttia. Lisättiin vielä N,N-di-iso-propyylietyyliamiinia (1,84 ml, 10,6 mmol) ja sen jälkeen 5-merkaptometyyli-l-N-metyyli-imidatsolia (1,35 g, 10,5 mmol) kuivassa CH3CN:ssa (3 ml). 3 tunnin kuluttua 15 reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä, kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen jäännös kromatografoitiin silikageelillä (4,5 x 10 cm) käyttäen etyyliasetaatin, CH3CN:n ja asetonin seosta (8:1:1 -4:3:3) 20 eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 1,86 g (76 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) v„,ajt: 2100 (N3), 1770 (B-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,25 Hz, 3H, 25 CH3CH0), 1,4 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,17 (dd, J„5.„6 = 2,72 Hz, JH3 H4 = 7,36 Hz, 1H, H-6), 3,2 (m, 1H, H-4), 3,32 (t, J = 6,0 Hz, 2H, CH2N3), 3,68 (s, 3H, imidat-solin CH3-1), 4,02 (ABq, JAB = 14,3 Hz, Δν = 33,0 Hz, 2H, SCH2), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,74 (m, 2H, al-30 lyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, al-lyylin CH), 6,93 (s, 1H, imidatsolin H-4) ja 7,42 ppm (s, 1H, imidatsolin H-2).
96311 304 B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1' R)-l'-hyd-roksietyyli] -3-[ (l-N-metyyli-imidatsol-5-yyli)metyylitio] -7-okso-1-atsabi syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 5 2H <CH2)4N3 OH <CH2)4NH2 ··· - -·· CH3 COgH CH3 10
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6-[(1’R)-l1-hydroksietyyli]-3-[(1-N-metyy-li-imidatsol-5-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,86 g, 4,04 mmol) 15 etyyliasetaatissa (75 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)pal-ladiumilla [0] (0,075 g) ja 8,9 ml:lla (4,45 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa.
45 minuutin kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (2 x 20 75 ml), ja yhdistettyä vesifaasia pidettiin tyhjössä or gaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesipitoista liuosta hydrattiin 0 - 5 °C:ssa käyttäen 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla (2,1 g) 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunnin ajan. Sen jäl-25 keen lisättiin 30 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaatti- v puskuria ja katalyytti suodatettiin. Suodos kromatografoi-tiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 3,5 x 11 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 -8 %) vedessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofili-30 soitiin, jolloin saatiin 0,528 g (33 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [a]*2 -22,4° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,3 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, vii-35 pymäaika 5,88 minuuttia; u · m t am in-a - (7569); 96311 305 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) \Bax: 302 nm IR (KBr) Vmax: 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1585 cm'1 (karboksylaatin C=0); 5 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,31 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,99 (t, J = 7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,22 (leveä t, 1H, H-4), 3,33 (dd, JH6H5 = 2,56 Hz, JH6H1 = 6,34 Hz, 1H, H-6), 3,71 (s, 3H, imidatsolin CH3-1), 4,07 (ABq, JM = 14,8 Hz, Δ,ν = 10 38,45 Hz, 2H, SCH2), 4,13 (dd päällekkäin SCH2:n kanssa, jh5.h6 = 2,56 Hz, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3CH0), 6,94 (s, —, 1H, imidatsolin H-4) ja 7,66 ppm (s, 1H, imidatsolin H-2).
Esimerkki 76 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-karbamoyyli-15 etyyli)tio] -6-[(l'R)-l’ -hydroksietyyli]-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (CH2)3NH2 20 H3r \—r^\ I //-S(CHp)pCONH?
C02H
• 25 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3”-atsidopropyyli)-3-[(2- karbamoyylietyyli) tio] -6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH (CH2)3N3 2H <0Η2)3Ν3 30 . M3C \\-StCH?),C0NH.
Peo,/^ / ’
Kylmään (jää-MeOH-haude) seokseen, jonka muodosti 35 allyyli-( 2R, 4R, 5R, 6S )-4- (3"-atsidopropyyli ) — 6—[(l’R) — 1' — 306 96311 hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti, joka oli juuri valmistettu (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(3-atsidopropyyli)-3 " -diatso-3 " -allyylioksikarbonyyli-2 " -oksopropyyli ] atse-5 tidin-2-onista (2,00 g, 5,49 mmol), CH3CN:ssa (50 ml), lisättiin tipoittain difenyylikloorifosfaattia (1,3 ml, 6.0 mmol), N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,1 ml, 6.0 mmol) ja hiukan 4-dimetyyliaminopyridiiniä (10 mg). Seosta sekoitettiin 1 tunti ja käsiteltiin 2-karbamoyyli- 10 etaanitiolin (1,16 g, 11,0 mmol) liuoksella DMF:ssa (5 ml) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (2,0 ml, 11 mmol). Seosta sekoitettiin 20 tuntia (kylmä huone). Seosta käsiteltiin jälleen tiolilla (580 mg, 5,5 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla ja sekoitettiin 72 tuntia. Se 15 laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml), pestiin vedellä (2 x 100 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (1 x 100 ml), vedellä (3 x 100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (2,6 g) vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (75 g, etyyliasetaatti -» asetoni), jolloin 20 saatiin otsikon yhdiste (0,84 g, 36 %) öljynä; IR (CH2C12) veex: 3680, 3600, 3520, 3410 (OH ja NH2), 2100 (N3), 1775, 1710, 1690 ja 1675 cm-1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,89 (1H, m, vinyylin H), 5,7, 5,6 (2H, leveä d, NH2), 5,22 (2H, m, vi-25 nyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, allyylin CH2), 4,266 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 7,5 Hz, H-5), 3,6 - 3,27 (3H, m, CH2N3 ja H-4), 3,251 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,2 Hz, H-6), 3,23 -2,95 (2H, m, SCH2), 2,6 - 2,45 (2H, m, CH2CON), 2,25 (1H, leveä s, OH), 1,95 - 1,5 (4H, m, CH2-CH2-4) ja 1,373 ppm 30 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
H IIU Hill l i t UI
O. f 7: ' 1
307 Αλί I I
B.(4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-karbamoyy-lietyyli) tio] -6- [(1'R)-1' -hy dr oksi etyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH ^ CHj)3N3 OH (CH2)3NHe k —r\ n r'""% r^\ 3 I /) S < CHg ) gCONHj -y 3 | \ S ( CHO-C0NH-,
C02\^s COgH
10 Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti allyy- li-( 4R, 5S, 6S)-4-(3"-atsidopropyyli ) —3— [ ( 2-karbamoyylietyy-w li)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,84 g, 2,0 mmol) CH2Cl2:ssa (20 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a ja tipoittain 15 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuosta etyyliasetaa tissa (4,2 ml, 2,1 mmol). Seosta sekoitettiin 45 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin etyyliasetaatilla (75 ml) ja uutettiin jääkylmällä vedellä (1 x 50 ml ja 2 x 25 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieette-20 rillä ja ravistettiin 5 °C:ssa (jäähaude) 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 90 minuuttia Parrin hydraus-laitteessa käyttäen 5-prosenttista Pd/alumiinioksidia (800 g) katalyyttinä. Liuoksen pH säädettiin arvoon 6,9 1 M KH2P04:n vesiliuoksella. Katalyytti poistettiin suodat-^ 25 tamalla ja vesipitoinen kerros vietiin p-Bondapak-C18-kään- teisfaasipylvään läpi (160 g, H20 -* 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (340 mg, 48 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 94,7 % (304 nm, HPLC); 30 UV (H20) xmax: 302 (6 9260); : IR (Nujol) 3600 - 3100 (OH, NH2); 1750 - 1665 ja 1600 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) δ: 4,35 - 4,21 (1H, m, H-l'), 4,239 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 5,3 Hz, H-5), 3,45 - 3,36 35 (1H, m, H-4), 3,385 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), -6311 308 3,2 - 2,8 (4H, m, CH2N ja SCH2), 2,63 - 5,55 (2H, m, CH2CO), 2,0 - 1,45 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,331 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 77 5 (4R,5S,6S)-4-(4"-N-formimidoyyliaminobutyyli)-6- [(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3- [ (1-N-metyyli-imidat-sol-5-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] -hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 10 8H <ch2)4nh2 m‘H .HC1 tH <ch2)4nh-ch=nh C02H CH3 co2h CH3 15 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1'R)-l’-hydrok sietyyli] -3- [(l-N-metyyli-imidatsol-5-yyli)metyylitio]-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,269 g, 0,68 mmol) 0-5 °C:ssa olevan vesiliuoksen (30 ml) pH säädettiin arvoon 8,5 1 M NaOH:lla. Sen jälkeen 20 lisättiin bentsyyliformimidaattivetykloridia (0,60 g, 3,49 mmol) pieninä annoksina niin, että pH pidettiin samalla välillä 8 - 8,5 IM NaOH:lla. 30 minuutin kuluttua reaktio pysäytettiin lisäämällä 25 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja pestiin etyyliasetaatilla. r 25 Sitten vesifaasi kromatografoitiin käänteisfaasisilikagee- w
Iillä (3,5 x 12 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 8 %) 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, väke-vöitiin ja suoritettiin suolanpoisto samalla pylväällä 30 eluoiden vedellä ja asetonitriilillä. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,180 g (63 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [a]“ -23,1° (c 1,0, vesi);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,6 % p-Bondapak-Cie: 11a, 35 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti- 309 Π < 7 Ί Ί ί ι puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, vii-pymäaika 9,45 minuuttia; IR (KBr) vBax: 1750 (β-laktaamin C=0), 1715 ( for- mimidoyylin C=N) ja 1590 cm-1 (karboksylaatin C=0); 5 *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,30 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,2 - 3,5 (m, 4H, H-4, H-6 ja CH,N), 3,71 (s, 3H, imidatsolin CH3-1), 4,08 (ABq, JM - 14,68 Hz, av = 37,4 Hz, 2H, SCH2), 4,14 (dd päällekkäin SCH2:n kanssa, J„5-6 = 2,43 Hz, JH5 H4 = 10 9,38 Hz, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3CH0), 6,93 (s, 1H, imi datsolin H-4), 7,62 (s, 1H, imidatsolin H-2) ja 7,79 ppm w (s, 1H, CH=NH).
Esimerkki 78 (4R, 5S, 6S) -4- (4"-guanidinobutyyli) -6- [(l'R)-l' -hyd-15 roksietyyli]-3-[ (pyridin-4-yyli)metyylitio] -7-okso- 1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
N-H
2H <CH2)4NH2 n_h OH (CHg)4NH-C-NHg
-r\ f=\ HjN-C-SO-H
20 H’c J—- H=c
COjH
(4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok-sietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsa-'f 25 bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,134 g, 0,34 mmol) kylmän vesiliuoksen (15 ml, pH 6,4), pH säädettiin arvoon 8,0 IM NaOHrlla. Sen jälkeen lisättiin 0,170 g (1,36 mmol) aminoiminometaanisulfonihappoa [K. Kim et ai., Tet. Lett., 29 (1988) 3183] pieninä annoksina
30 5 minuutin aikana niin, että pH pidettiin arvossa 8 1 M
NaOHrlla. Lisättiin vielä kolme erää aminoiminometaanisulfonihappoa (3 x 0,050 g) 30 min välein, ja saatua seosta (jonkin verran liukenematonta ainetta) sekoitettiin yhteensä 3 tuntia 0-5 °C:ssa. pH pidettiin koko ajan ar-35 vossa 8 1 M NaOHrlla. Sen jälkeen lisättiin 15 ml 0,2 M
96311 310 pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja saatu homogeeninen liuos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 - 10 %) vedessä, jolloin saatiin 0,103 g 5 (69 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen. Tämä lyofilisoitu aine liukenee vain heikosti veteen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-10 puskuri, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 7,47 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Amax: 262 (5 360) ja 304 nm (8765); IR (KBr) vaax- 1752 (β-laktaamin C=0), 1665 (gua- 15 nidiinin C=N) ja 1600 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) δ: 1,27 (d, J = 6,33 Hz, 3H, CH3CHO), 1,1 - 1,7 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,1 (m, 1H, H-4), 3,15 (t, J = 6,4 Hz, 2H, CH2N), 3,26 (dd, J„6.„5 = 2,45 Hz, JH6 H1 = 6,06 Hz, 1H, H-6), 4,05 (ABq, JAB = 20 14,76 Hz, AV = 22,9 Hz, 2H, SCH2), 4,05 (päällekkäin SCH2:n kanssa, 1H, H-5), 4,21 (m, 1H, CH3CH0), 7,47 (d, J = 6,2 Hz, 2H, pyridiinin H-3) ja 8,47 ppm (d, J = 6,2 Hz, 2H, pyridiinin H-2).
Esimerkki 79 25 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(l,R)-l’-hydrok- ~' sietyyli] -3- [ (l-N-metyyli-imidatsol-5-yyli)metyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksyy1ihappo 30 2H <CHS)3NH2
Hsc l 35 C02H 3 311 96311 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(l-N-metyyli-imidatsol-5-yy-li)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 2H <CH2)3N3 oh (CH?)3N3 --„^5 ^ Λ ^ λ ' COg/V/' COg''^^ CH3 10
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,6S)-4-(3"-atsi-w dopropyyli)-6-[(1’R)-1' -hydroksietyyli ] -3,7-diokso-l-atsa- bisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (5 mmol, valmistettu saattamalla 1,82 g, 5 mmol diatsoprekursoria ren-15 gasmuotoon) kuivassa CH3CN:ssa (75 ml), käsiteltiin 0 -5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloori-fosfaatilla (1,14 ml, 5,5 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyy-liamiinilla (0,96 ml, 5,5 mmol). Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoi-20 tettiin 1 tunti. Lisättiin 5-merkaptometyyli-l-N-metyyli- imidatsolin (1 g, 7,5 mmol) liuosta kuivassa CH3CN:ssa (1 ml) ja sen jälkeen N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,3 ml, 7,5 mmol). 3 tunnin kuluttua reaktioseos laimennettiin Et0Ac:lla (150 ml), pestiin vedellä, kylläisellä 25 NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen jäännös kromatografoitiin si-likageelillä (3,5 x 6,5 cm) käyttäen CH3CN:n gradienttia EtOAcrssa (25:75 -* 100:0) eluenttina, sitten asetonia. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja väke-30 voitiin tyhjössä, jolloin saatiin 1,29 g (58 %) otsikon ! yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) vB„: 2100 (N3), 1775 (8-laktaamin C = 0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,24 Hz, 3H, 35 CH3CH0), 1,4 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 3,23 312 9CZ' 1 (dd, JH5.H6 = 2,69 Hz, JH3H4 = 7,73 Hz, 1H, H-6), 3,3 - 3,4 (m, 3H, H-4 ja CH2-N3 päällekkäin), 3,70 (s, 3H, imidatsolin CH3-1), 4,05 (ABq, 2H, SCH2), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CHjCHO), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 5 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH), 6,94 (s, 1H, imidatsolin H-4) ja 7,45 ppm (s, 1H, imidatsolin H-2).
B.(4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-1'-hyd-roksietyyli] -3- [ (1-N-metyyli-imidatsol-5-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 10 OH (CH2)3N3 <CH2)3NH2 ·· —-Vi--0 - CH3 C02H CH3 15 · 2
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli )-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -3- [ (1-N-metyy-li-imidatsol-5-yyli )metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,25 g, 2,8 mmol) 20 etyyliasetaatissa (35 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)-palladiumilla [0] (0,275 g) ja natrium-2-etyyliheksanoaa-tilla (0,450 g). Kylmä haude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin 22 °C:ssa 1 tunti. Sen jälkeen reaktioseosta • 25 uutettiin vedellä (3 x 60 ml), ja yhdistettyä vesifaasia ^ pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesipitoista liuosta hydrattiin 0 -5 °C:ssa käyttäen 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla (1,25 g) 345 kPa:n (50 psi:n) vetypaineessa 3 tun-30 tia. Katalyytti suodatettiin, pH säädettiin arvoon 6,2 2 N HClrlla. Saatu suodos väkevöitiin noin 50 ml:ksi ja kroma-tografoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 3,5 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gra-dienttia (0 - 5 %) vedessä eluenttina. Puhtaat fraktiot 35 (tarkistettiin käänteisfaasi-TLC:llä) lyofilisoitiin, joi- 313 96311 loin saatiin 0,39 g (38 %) otsikon yhdistettä luonnonvalkoisena amorfisena jauheena.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97,8 % y-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8-prosenttisella CH3CN-H20:11a, 5 pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detek-tori 300 nm, viipymäaika 5,00 minuuttia; UV (H20) *max: 300 nm (7396); IR (KBr) v„ax: 1755 (B-laktaamin C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); 10 NMR (200 MHz, D20) δ: 1,31 (d, J = 6,36 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 3H, propyylin CH2-1, -2), 2,99 (t, J * 7,15 Hz, 2H, CH2NH2), 3,25 (leveä t, 1H, H-4), 3,37 (dd, J„6.„5 = 2,66, JH6H1 = 6,46 Hz, 1H, H-6), 3,72 (s, 3H, imidatsolin CH3-1), 4,08 (ABq, 2H, SCH2), 4,15 - 4,3 (m 15 päällekkäin SCH2:n kanssa, 2H, H-5 ja CH3CH0), 6,96 (s, 1H, imidatsolin H-4) ja 7,67 ppm (s, 1H, imidatsolin H-2).
Esimerkki 80 (4R, 5S, 6S) -4- [3"- (N-f ormimidoyyli) aminopropyyli] - 6- [ (1' R) -1' -hydroksietyyli] -3- [ (1-N-metyyli-imidat-20 soi-5-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]- hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
JH (CH2)3NHe °H (CH2)3NH-Cn = K'H
.. fj~\\ „ _Λ :Γ\\ — 25 Jr—K // 2 J-K^y 2 : CK \ 1 (y \ 1 C02H CH3 C02H CH3
Liuos, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-[3"-aminopropyy-li)-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3- [ (1-N-metyyli-imidatsol-30 5-yyli )metyylitio] -7-o-.so-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-: 2-karboksyylihappo (300 mg, 0,789 mmol) vedessä (40 ml), jäähdytettiin jäähauteessa, ja liuoksen pH säädettiin arvoon 8 1 N NaOH:n vesiliuoksella. Seokseen lisättiin annoksittain bentsyyliformimidaattivetykloridia (5 ekv., 35 3,94 mmol, 0,68 g) niin, että pH pidettiin välillä 8-8,5 314 P6311 1 N NaOH:n vesiliuoksella. Reaktioseosta sekoitettiin 15 minuutin lisäyksen jälkeen, ja sitten pH säädettiin arvoon 6,5 1 N HCl:n vesiliuoksella ja pestiin etyyliasetaatilla (2 x 30 ml). Vesifaasi väkevöitiin tyhjössä ilman kuumen-5 nusta ja puhdistettiin käänteisfaasisilikageelillä [μ-Βοη-dapak-C18, 3,5 x 13 cm, eluointi 0,01 M pH-arvon 6,0 omaavalla fosfaattipuskurilla ja CH3CN:n gradientilla (0 -3 %)]. Puhtaat fraktiot lyofilisoitiin, puhdistettiin uudelleen käänteisfaasipylväällä suolojen poistamiseksi (ve-10 si -* 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin 0,115 g (36 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena lyofi-lisoinnin jälkeen.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,2 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, virtausnopeus 1 ml/min, eluointi 8 % CH3CN-15 KH2P04, 0,01 M, pH 7,4, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 6,30 minuuttia; UV (H20) %aax: 300 nm (£ 7853); IR (KBr) veax: 1755 (β-laktaamin C=0), 1715 (C=N) ja 1590 cm-1 (karboksylaatin C=0); 20 *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,30 (d, J = 6,37 Hz, CH3), 1,3 - 1,72 (4H, m, CH2CH2), 3,19 - 3,40 (3H, m, CH2N ja H-6 päällekkäin), 3,71 (3H, s, N-CH3), 4,08 (ABq, J = 14,87 Hz, AV = 45,5 Hz, 2H, SCH2), 4,2 (m, 1H, CH3CH0), 6,95 (s, 1H, imidatsolin H-4), 7,65 (s, 1H, imidatsolin H-2) ja 7,81 25 (s, 1H, CH=NH). ~
Esimerkki 81 (4R,5S,6S)-4-(4"-N,N-dimetyyliaminobutyyli)-6-[ (1'R) -1'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)metyy-litio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-30 karboksyylihappo CH,
2H <CH2)„NHe OH
J hcho J I CH3
C02H C CjH
; ; u > hik i i t *» 315 96311
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobu-tyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[(pyridin-4-yyli)me-tyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-syylihappo (0,176 g, 0,45 mmol) vedessä (8 ml), käsitel-5 tiin 0 - 5 °C:ssa 37-prosenttisella formaldehydillä (0,2 ml, *2,5 mmol), etikkahapolla (0,052 ml, 0,9 mmol) ja natriumsyaaniboorihydridillä (0,056 g, 0,9 mmol). Lopullisen seoksen pH oli 4,2. Reaktion edistymistä tarkkailtiin HPLC:llä. 5 tunnin aikana lisättiin natriumsyaaniboorihyd-10 ridiä (6 x 0,050 g) ja formaldehydiä (2 x 0,1 ml) niin, että pH pidettiin välillä 4,5 - 5 etikkahapolla. Sen jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä 15 ml 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja liuoksen pH säädettiin arvoon 6,5 1 M NaOHrlla. HPLCrn mukaan tuote on 74:20-suh-15 teinen dimetyyli- ja N-metyyli-N-syaanimetyylijohdannais- ten seos. Liuos kromatografoitiin kaksi kertaa käänteis-faasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 18 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 10 %) vedessä.
Ensimmäisten fraktioiden lyofilisoinnilla saatiin 20 0,021 g N-metyyli-N-syaanimetyyliyhdistettä.
Seuraavista fraktioista saatiin 0,104 g (55 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [α]β2 +4,0® (c 0,5, vesi);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 95 % p-Bondapak-C18:11a, _ 25 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaat tipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 12,0 minuuttia; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 262 (6032) ja 304 nm (9937); 30 IR (KBr)vmaX: 1758 (β-laktaamin C=0) ja 1600 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,1 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 1,28 (d, J = 6,37 Hz, 3H, CH3CH0), 2,85 (s, 6H, NCH3), 2,9 - 3,2 (m, 3H, H-4 ja CH2N), 3,27 (dd, 35 Jh6,h5 = 2,54 Hz, JH8 H1 = 6,34 Hz, 1H, H-6), 4,06 (ABg, JM - 56311 14,9 Hz, Δ = 23,4 Hz, 2H, SCH2), 4,08 (päällekkäin SCH2:n kanssa, 1H, H-5), 4,21 (m, 1H, CH3CH0), 7,49 (*d, 2H, pyri-diinin H-3) ja 8,49 ppm (*d, 2H, pyridiinin H-2).
Esimerkki 82 5 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-aminopropyyli) -6- [ (1 *R) -1' -hydrok- sietyyli]-3-[(1'-metyyli-1,2,3-triatsol-4-yyli)me-tyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 2H <CH2)3NH?
COpH
15 * A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 OH CCH2>3N3 OH <CH2)3N3
H3C I -► "3^ f \ S(CH2)—(S I
(f *** 25 C0»N^· _
Kylmää liuosta (jää-MeOH-haude), jonka muodosti allyyli-(2R, 4R, 5R, 6S)-4-( 3" -atsidopropyyli )-6- [(l'R)-l'-hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptan-2-karboksylaatti, joka oli juuri valmistettu (3S,4R)-3- 30 [(1*R)-1'-hydroksietyyli]-4-[(l"R)-l"-(3-atsidopropyyli)- 3 " -diatso-3 " -allyylioksikarbonyyli-2 " -oksopropyyli ] atse-tidin-2-onista (1,7 g, 4,7 mmol) CH3CN:ssa (50 ml), käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (1,1 ml, 5 mmol), N, N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,92 ml, 5,0 mmol) ja pie- 35 neliä määrällä 4-dimetyyliaminopyridiiniä (5 mg). Seosta 317 sekoitettiin 1 tunti, ja enolifosfaattiin lisättiin tipoittaan 4-merkaptometyyli-l-metyyli-l,2,3-triatsolia (1,21 g, 9,40 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,84 ml, 10,0 mmol). Sekoitettiin 20 tuntia 5 °C:ssa 5 (kylmä huone), minkä jälkeen seos laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml), pestiin kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 100 ml), vedellä (2 x 100 ml), 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (1 x 100 ml), vedellä (2 x 100 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (3 g) vietiin 10 silikageeli-flash-kerroksen läpi (150 g, 1/1 heksaani/ etyyliasetaatti -* etyyliasetaatti), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,0 g, 47 %) öljynä; IR (CH2C12) vnax: 3680, 3600, 3400 (OH), 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm-1 (C=0); 15 XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 7,489 (1H, s, aromaat tinen H), 6,02 - 5,87 (1H, vinyylin H), 5,47 - 5,20 (2H, m, vinyylin H), 4,85 - 4,59 (2H, m, allyylin CH2), 4,274, 4,199, 3,961, 3,886 (2H, ABq, J = 15,1 Hz, CH2-aromaatti-nen), 4,25 - 4,12 (1H, m, H-l’), 4,159 (1H, dd, J = 20 2,6 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 4,071 (3H, s, N-Me), 3,64 - 3,53 (1H, m, H-4), 3,49 - 3,36 (2H, m, CH2-N3), 3,228 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,3 Hz, H-6), 2,3 (1H, leveä s, OH), 2.03 - 1,5 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,357 ppm (3H, d, J = 6.3 Hz, CH3).
'!i 25 B.(4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-1'-hyd- roksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)metyyli-tio] -7-okso-l-atsabisyklo(3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyyli- happo 30 2H c C H 5) 3 N- 3 JH (CK^-.NH, ^ "( - ^ \
COc\^<N
96311 318
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti al-lyyli-(4R,5S,6S )-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(l'R)-l'-hyd-roksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)metyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-5 laatti (1,0 g, 2,2 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:lla (100 mg) ja tipoittain 0,5 M natriumetyy-li-2-heksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa (4,6 ml, 2,3 mmol). Seosta sekoitettiin 1,5 tuntia, laimennettiin etyyliasetaatilla (150 ml) ja uutettiin vedellä (1 x 10 75 ml, 2 x 30 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pes tiin dietyylieetterillä, ja ravistettiin 5 eC:ssa (jäähaude) Parrin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1 h käyttäen 5-prosenttista Pd/ alumiinioksidia katalyyttinä. Sen jälkeen lisättiin vielä 15 katalyyttiä (1 g), ja seosta ravistettiin jälleen vielä 1,5 tuntia, minkä jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla. Vesipitoinen erä vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaa-sipylvään läpi (200 g, vesi -* 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (500 mg, 59 %) lyofilisoituna jauhee-20 na;
Puhtaus: 97,2 % (304 nm, HPLC); UV (H20) λοβχ: 302 (S 8250); IR (Nujol) 3600 - 3100 (OH), 1755 ja 1585 cm'1 (C-0); . 25 1H NMR (D20, 200 MHz) 6: 7,866 (1H, s, aromaattinen ^ H), 4,30 - 4,18 (1H, m, H-l'), 4,216, 4,143, 4,034, 3,959 (2H, ABq, J = 14,7 Hz, CH2-aromaattinen), 4,085 (3H, s, N-CH3), 4,10 - 4,08 (1H, m, peittynyt H-5), 3,356 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,33 - 3,20 (1H, m, H-4), 30 3,07 - 3,00 (2H, m, CH2N3), 1,95 - 1,40 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,312 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
- 96311 319
Esimerkki 83 (4R,5S,6S)-3-[(2-asetamidoetyyli)tio]-4-(3"-amino-propyyli)-6-[(1 * R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabi syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 5 OH <CHp),NH?
- AvC
h3l 1 \-S(CHg)gNHflc 10 CT \
COgH
Otsikon yhdiste saatiin 2-karbamoyylietyylimerkap-taanista ja N-asetyylikysteamiinista jäljelle jääneestä epäpuhtaudesta reaktiossa, joka toteutettiin esimerkissä 15 76, ja yhdiste erotettiin tavalliseen tapaan. Otsikon yh diste saatiin lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 95 % (304 nm, HPLC); UV (H20) Λ max: 302 ( 7810); IR (Nujol)^ 3600 - 3100 (OH, NH), 1755, 1650 ja 20 1600 cm'1 (C=0); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,30 - 4,20 (1H, m, H-l'), 4,230 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 3,5 - 3,3 (4H, m, H-6, H-4 ja CH2-NAc), 3,1 - 2,95 (3H, SHCH ja CH2N), 1,9 - 1,7 (1H, m, SHCH), 1,999 (3H, s, NAc), 1,9 -w 25 1,5 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,332 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 84 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-karbamoyylietyyli) tio] -4-[3"-(N-formimidoyyli)aminopropyyli]-6-[(1 ' R)-1'-hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-30 karboksyy1ihappo
OH <CH2)3NHg oh <CH2)3NHCHNH
H H
35 3 Γ_ΤΛ— S(CH2)2C0NHg -- H3C [T \_S(CH2)2C0NH2
C02H COgH
96311 320
Kylmään liuokseen (jäähaude), jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-karbamoyylietyyli)-tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (180 mg, 0,500 mmol) 5 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuok sessa (50 ml), lisättiin ensin 0,1 N NaOH:n vesiliuosta (pH:n nostamiseksi arvoon *8,2 ja sen pitämiseksi siinä), ja sen jälkeen annoksittain bentsyyliformimidaattivetyk-loridia (0,87 g, 5,0 mmol). Seosta sekoitettiin 20 minuut-10 tia ja pH säädettiin arvoon 7,0 1 M NaH2P0<:n vesiliuoksella. Seos vietiin p-Bondapak-Cie-pylvään läpi (3,5 g, H20 -> 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (110 mg, _ 57 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 93,1 % (HPLC, 302 nm); 15 UV (H20) λΒβχ: 302 (S 7550); IR (Nujol) V „ax: 3600 - 3100 (NH2, OH), 1750, 1665 ja 1590 cm'1 (C-0); XH NMR (DjO, 200 MHz) 6: 4,34 - 4,22 (2H, m, H-l' ja H-5), 4,225 (osa H-5:a, d, J = 2,6 Hz), 3,49 - 3,34 20 (4H, m, CH2N3, H-5 ja H-4), 3,351 (osa H6:a, d, J = 2,4 Hz), 3,15 - 2,85 (1H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,71 - 2,51 (2H, m, CH2CON), 2,0 - 1,46 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,332 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3) .
Esimerkki 85 , 25 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1'R)-1'-hydrok- “ sietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy-lihappo
OH (CHp)ÄNHP
30 f f 2 2 h zr""""—τΛ fTS\
h3L | \-S C H p —(/ /,N
//—‘ NT
ο/χ \
35 COpH
; > 9H < i'll! l!l i.M : . i r f 7 λ i
321 -'UU i I
A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6-[(1R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti 5 °H <ch2)4n3 OH cch2>4n3 = ---··· 0 \o2^ 0 Λο2^ 10
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-^ atsidobutyyli)-6- [ (1 Ή)-1' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l- atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (5,28 mmol, valmistettu saattamalla 2,0 g, 5,28 mmol diatsoprekursoria 15 rengasmuotoon) kuivassa asetonitriilissä (40 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna dife-nyylikloorifosfaatilla (1,2 ml, 5,8 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,0 ml, 5,7 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 20 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 1 h. Sitten liuos jäähdytettiin -20 °C:seen ja käsiteltiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (1,84 ml, 10,56 mmol) ja sen jälkeen 4-merkaptometyyli-l, 2,3-tiadiatsolilla (1,45 g, 10,96 mmol) 5 ml:ssa asetonitriiliä. Lämpötila ^ 25 nostettiin hitaasti 0 eC:seen 1 tunnin aikana, ja seosta jakouutettiin vedellä ja etyyliasetaatilla (400 ml). Orgaaninen faasi pestiin 1 H NaHS03:lla, kylläisellä NaH-C03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoi-30 tiin silikageelillä (5 x 11 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gradientilla tolueenissa (8:2 - 1:1), jolloin saatiin 1,95 g (79 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) vBax: 2100 (N3), 1770 (B-laktaamin C = 0) ja 1708 cm'1 (esterin C=0); 96311 322 *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,28 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,18 (dd, JH6.H5 = 2,70 Hz, JH6H1 = 7,21 Hz, 1H, H-6), 3,34 (t, J = 6,1 Hz, 2H, CH2N3), 3,46 (leveä t, 1H, H-4), 4,17 (dd, 5 J„5.h6 = 2,70 Hz, = 9,7 Hz, 1H, H-5), 4,22 (m, 1H, CH3- CHO), 4,50 (ABq, JAB = 14,95 Hz, AV = 73,5 Hz, 2H, SCH2), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 8,47 ppm (s, 1H, tiadiatsolin H-5).
10 B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1'R)-1'-hyd- roksietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H <CH2)<N3 oh <CH2)4NH2
15 Hsi — — ”3C
^ Λ ^ * co2 x co2h
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-20 atsidobutyyli)-6-[(1’R)—1'-hydroksietyyli]-3-[(1,2,3-tia- diatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,95 g, 4,2 mmol) etyyliasetaatissa (75 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis( trifenyylifosfiini palladiumilla [0] 25 (0,075 g) ja 9,2 ml:lia (4,6 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyli- ~ heksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 45 minuutin kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (2 x 75 ml), ja yhdistettyä vesipitoista uutetta pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesifaasia 30 hydrattiin 0-5 °C:ssa käyttäen 2,1 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) ve-typaineessa 2 tuntia. Sen jälkeen Lisättiin 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja katalyytti suodatettiin.
Suodos kromatografoitiin käänteis:aasisilikageelillä (μ- 323 9(:511
Bondapak-C18, 3,5 x 15 cm) käyttäen asetonitriilin gra-dienttia (0 - 8 %) vedessä eluenttina.
Ensimmäisistä talteenotetuista fraktioista saatiin 0,17 g (4R,5S,6S)-4-(4"-hydroksibutyyli)-6-[(1'R)-l'-hyd-5 roksietyyli] -3-(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli )metyylitio-7-okso- l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaattia (Na-, K-suola) valkoisena kiinteänä aineena pakastuskuivauksen jälkeen. Seuraavista fraktioista saatiin 0,576 g (34 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä ainee-10 na:
Puhtaus HPLCrn mukaan: 97,7 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH,CN-H,0, pH 7,4 fosfaatti- * puskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, viipymäaika 6,75 minuuttia; 15 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ληΜ: 260 (5470) ja 302 nm (9209); IR (KBr) VBax: 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1585 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, J = 6,36 Hz, 3H, 20 CH3CH0), 1,3 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,0 (t, J = 7,6 Hz, 2H, g^jNHj), 3,21 (leveä t, 1H, H-4), 3,32 (dd, JH6.5 = 2,45 Hz, JH6.H1 = 6,25 Hz, 1H, H-6), 4,10 (dd, JH5.H6 = 2,45 Hz, JH5H4 = 9,42 Hz, 1H, H-5), 4,23 (m, 1H, CHjCHO), 4,51 (ABq, JAB = 14,94 Hz, AV = 40,2 Hz, 2H, SCH2) 25 ja 8,89 ppm (s, 1H, tiadiatsolin H-5).
Esimerkki 86 (4R,5S,6S)-4-(4"-N-formimidoyyliaminobutyyli)-6-[ (1' R) -1' -hydroksietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-30 2-eeni-2-karboksyylihappo
°H <CH2)4NiH2 OH <CHg )4NH-CH = K'H
35 tr \ cr \
C02h C02H
96311 324
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobu-tyyli )-6- [(1’R)-l' -hydroksietyyli] -3 - [ (1,2,3-tiadiatsol- 4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,250 g, 0,63 mmol) vedessä (30 ml), 5 käsiteltiin 0-5 eC:ssa bentsyyliformimidaattivetyklori-dilla (0,60 g, 3,5 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 10 minuutin aikana niin, että pH pidettiin välillä 8-8,5 1 M NaOH:lla. 20 minuutin kuluttua lisättiin 25 ml 0,2 M pH-arvon 6 omaavaa puskuria, ja seos pestiin etyyliasetaa-10 tiliä (20 ml). Vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi ja kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-Cie, 3,5 x 15 cm). Pylvästä eluoitiin ensin asetonitriilin gradientilla (0 -8 %) 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa.
15 UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, lyofilisoitiin ja kromatografoitiin jälleen samalla pylväällä käyttäen vettä puskurin sijasta. UV-aktiiviset fraktiot pakastuskuivat-tiin, jolloin saatiin 0,21 g (78 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]22 -28,4° (c 20 1,0, vesi);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, vii-pymäaika 7,8 minuuttia; 25 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λΜΧ: 258 (5318) w ja 302 nm (8975); IR (KBr) vnax· 1755 (β-laktaamin C=0), 1710 (form-imidoyylin C=N) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, J = 6,39 Hz, 3H, 30 CHjCHO), 1,2 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 3,2 - 3,5 (m, 4H, H-6 ja butyylin CH2-4 päällekkäin), 4,10 (dd, = 2,47 Hz, JH5>H4 = 9,43 Hz, 1H, H-5), 4,23 (m, 1H, CH3CHO), 4,51 (ABq, JAB = 15,0 Hz, AV = 39,4 Hz, 2H, SCH2), 7,8 (leveä s, 1H, CH=NH) ja 8,9 ppm (s, 1H, tiadiatsolin 35 H-5).
; »H l· 1114 I i 4 #1 : S
325 96311
Esimerkki 87 (4R, 5S, 6S) -4- (4"-guanidinobutyyli) -6-[ (1'R)-1' -hyd-roksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
5 N - H
<ch2)4nh? oh <CH2)4NH-C-NH2 H’C — H3cA,//QQ^sch2ch2oh 10 co2h co2h (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(1'R)-l'-hydrok-sietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,150 g, 0,44 mmol) 15 kylmän (0 - 5 °C) vesiliuoksen (10 ml) pH säädettiin arvoon 8 1 M NaOH:lla, ja sen jälkeen käsiteltiin aminoimi-nometaanisulfonihapolla (0,216 g, 1,74 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 minuutin aikana. pH pidettiin välillä 8-8,5 koko lisäyksen ajan ja vielä 3 tuntia 1 M 20 Na0H:lla. Sen jälkeen kylmän reaktioseoksen reaktio pysäytettiin lisäämällä 10 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja sen jälkeen kromatografoitiin käänteis-faasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 16 cm). Eluoi-tiin asetonitriilin gradientissa (0 - 5 %) vedessä, jol-25 loin saatiin 0,115 g (68 %) otsikon yhdistettä UV-aktii-visten fraktioiden lyofilisoinnin jälkeen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-30 pymäaika 7,19 minuuttia; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri ) λ max: 304 nm (9530); IR (KBr) Vmax: 1750 (B-laktaamin C=0), 1665 (gua- nidyylin C = N) ja 1580 cm'1 (karboksylaatin C=0); 96311 326 *H NMR (200 MHz, D20) δ: 1,32 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 -3,1 (m, 2H, SCH2), 3,22 (t, J = 6,5 Hz, 2H, CH,NH,), 3,32 (dd, JH6 H5 = 2,45 Hz, JH6.H1 = 6,19 Hz, 1H, H-6), 3,35 (pääl-5 lekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,77 (t, J = 6,3 Hz, 2H, CH20H), 4,21 (dd, JH5>H6 = 2,45 Hz, JH5.H< = 9,34 Hz, 1H, H-5) ja 4,27 ppm (m, 1H, CH3CHO ).
Esimerkki 88 (4R,5S,6S)-3-[(2-karbamoyylioksietyyli)tio]—4-[3"-10 (N-f ormimidoyyli) aminopropyyli] -6-[(l’R)-l' -hydrok- sietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [ 3.2.0]hept-2-eeni- 2-karboksyylihappo
OH (CH?),NH, OH (CH?),NHCH=NH
„ ,Λ-Λ- .Λτ-(
COgH COgH
Kylmää liuosta (jäähaude), jonka muodosti (4R,5S, 20 6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-karbamoyylioksietyyli)tio]- 6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo-[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (150 mg, 0,40 mmol) 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa, käsiteltiin 0,1 N NaOH:n vesiliuoksella (pH:n säätämiseksi 25 välille 8,0 - 8,3 ja sen pitämiseksi siinä), ja lisättiin ^ annoksittain bentsyyliformimidaattivetykloridia (342 mg, 2,0 mmol). Seosta sekoitettiin 15 minuuttia, ja pH säädettiin arvoon 7,05 0,1 N HCl:n vesiliuoksella. Seos vietiin p-Bondapak-C16-käänteisfaasipylvään läpi (37,5 g, 0,02 M 30 pH-arvon 7,0 omaava fosfaattipuskurin vesiliuos -♦ 1 % -* 2 %-*3 %-4 % CHjCN/fosf aattipuskuri ) . Lyofilisoitu jauhe vietiin jälleen saman käänteisf aasipylvään läpi (H20 1 % -* 4 % CH3CN/H20), jolloin saatiin puhdasta otsikon yhdistettä (95 mg, 59 %) lyofilisoituna jauheena; _____ 35 Puhtaus: 98,7 % (300 nm, HPLC); 96311 327 UV (K20' 302 (7520); IR (Nu-ol) vBax: 3600 - 3100 (OH, NH2), 1750, 1710 ja 1585 era'* (C=0); KMR (D20, 200 MHz) 6: 7,830, 7,807 (1H, 2s, 5 CH-N), 4,83 - 4,20 (4H, m, H-l’, H< ja CH20), 3,45 - 3,33 (4H, m, CH_N, H-6, H-4), 3,19 - 2,85 (2H, 2 m-kohtaa, S-CH2), 1,95 - 1,51 (4H, 4-CH2CH2) ja 1,320 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CHj).
Es-merkki 89 10 ( R, 5S, 6S)-4-(2"-aminopropyyli)-3-( (2-syaanietyy- 'i)tio]-6-[(1’R)-11-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa-w jisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
15 OH
H3CX|—fV^CN
N xo2h 20
A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidopropyyli)-3-[(2--yaanietyyli)tio]-6-[(11R)-1 *-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti;isomeeri B
25 )—«3
OH / OH I
cn
o'/ N \ol'^ 0* N
: j
Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S ) -4-(2"-atsidopropyyli)-3-(difenyylifosfono )-6-[ (11R) -1 ’ -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-__2-eeni-2-karboksylaatti (1,48 g, 2,6 mmol) [valmistettu 35 kuten esimerkin 57 vaiheessa H] DMF:ssa (15 ml), käsitel- 96311 328 tiin 3-merkaptopropionitriilillä (300 rg, 3,44 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (445 mg, 3,44 mmol). Jäähauteen jään annettiin sulaa, ja rea> tioseosta sekoitettiin 20 eC:ssa yhteensä 18 tuntia. Liuos laimennettiin 5 etyyliasetaatilla (100 ml) ja pestiin kolua kertaa kylmällä suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS0<) ja haihdutettiin, jolloin saatiin seos, joka kromatografoi-tiin Si02:lla eluoiden dietyylieetterillä. Kahdesta isomee-risestä tuotteesta A ja B, jotka saatiin, molaarisempi 10 isomeeri B puhdistettiin, jolloin saatiin 2.2 mg (20,1 %) otsikon yhdistettä; IR (CH2C12) vmax: 3600 (-0H), 2115 (-1 ), 1778 (B- ^ laktaami), 1710 (-C02-); XH NMR (CDC13) 6: 4,6 - 6,10 (5H, alli 'lityyppi), 15 4,21 - 4,32 (2H, m, H-l\ 4,28, dd, J; 2,79 9,60 Hz, H-5), 3,51 - 3,69 (2H, m, CH-N3, H-4), 3,23 ja 3, ' (2H, 2m, S-CH2), 3,06 (1H, dd, J = 2,72, 8,14 Hz, H-6), 2, 2 (2H, m, CH2CN), 1,6 - 1,9 (2H, m, CH2C-N3), 1,39 (3H, d, J 6,2 Hz, -CH3), 1,38 (3H, d, J = 6,38 Hz, -CH3).
20 B. Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidopropyyli) -3-[(2-
syaanietyyli)tio]-6-[(l'R)-lf-hydroksietyyli]-7-c<so-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti;isom eri B
^ N3 -n3 25 OH . OH / H,C-\- 0^ N N c02Na 30 Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti allyyii- ( 4R,5S,6S)-4-(2"-atsidopropyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6 - [ (1' R) -1'-hydroksietyyli)-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (210 mg, 0,52 mmol, vaiheen A polaarisempi isomeeri B) CH2Cl2:ssa (20 ml), käsiteltiin 35 0,5 M natriumetyyliheksanoaatilla (1,14 ml, 0,57 mmol) ja 96311 329 (PPh3 )«Pd:11a (60 mg, 0,052 mmol). Sekoitettiin 30 minuuttia 5 °C:ssa, minkä jälkeen liuos laimennettiin dietyyli-eetterillä (40 ml) ja uutettiin 0,04 M puskurilla (pH 7,0, 3 x 8 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin ja kromato-5 grafoitiin käänteisfaasi-Si02:11a (partisil) eluoiden vedellä ja sen jälkeen 5-prosenttisella CH3CN:lla vedessä. Oleelliset fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 63 mg (31,3 %) otsikon yhdistettä; NMR (D20 ) 6 : 4,25 - 4,35 ( 2H, m, H-l\ H-5), 10 3,54 - 3,69 (2H, m, CH-N3, H-4), 3,42 (1H, dd, J = 2,72, 6,38 Hz, H-6), 3,19 ja 2,99 (2H, 2m, SCH2), 2,84 - 2,94 w (2H, m, CH2CN), 1,82 (2H, m, CH2-CN3), 1,38 (3H, d, J = 6,52 Hz, -CH3), 1,34 (3H, d, J = 6,47 Hz, -CH3).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-aminopropyyli)-3-[(2-syaani-15 etyyli) tio] -6-[(l’R)-l' -hydroksietyyli] - 7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo; isomeeri B
)-n3 )-NH2 OH / OH / H3(rN—[il ^ CN _
CK C02Na {/ \ogH
Liuosta, jonka muodosti vaiheen B natrium-(4R, w 25 5S,6S)-4-(2"-atsidopropyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6- [(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti (63 mg, 0,163 mmol) 0,05 M fos faattipuskurissa (pH 7,0, 20 ml), hydrattiin 5 °C:ssa 30-prosenttisen Pd/celiten (270 mg) läsnä ollessa 310 kPa:n 30 (45 psirn) vetypaineessa. 60 minuutin kuluttua katalyytti suodatettiin pois ja suodos kromatografoitiin käänteisfaa-si-Si02:lla (partisil) eluoiden vedellä ja sitten 5-pro-senttisella CH3CN:lla vedessä. Oleelliset fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin_-saatiin 12 mg (21,7 %) 35 otsikon yhdistettä; 96311 330 UV (H20) \αΛΧ: 296 (6200); IR (Nujol) 1755 (β-laktaami), 1585 cm'1 (-C02-); JH NMR (D20) δ: 4,26 - 4,40 (2H, m, H-5, H-l'), 5 3,43 - 3,69 (3H, m, H-4, CH-N3, H-6), 2,8 - 3,16 (4H, m, SCH2CH2CN), 1,8 - 2,2 (2H, m, CH2CN3), 1,43 (3H, d, J = 6,62 Hz, -CH3), 1,35 (3H, d, J = 6,37 Hz, -CH3).
Esimerkki 90 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1'R) -1' -hyd-10 roksietyyli]-4-[2"-(imidatsol-l-yyli)etyyli]-7-ok- so-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyyli- happo
2H (CHpK-sT^N
...VL." cn co2h 20 A.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidime- tyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-(imidatsol-l-yyli)etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
: 25 OS i + (CHp)pOH £s.i+ (CHp)p-N x N
XrL· 30 0 C p
Kylmään liuokseen (hiilihappojää-asetonihaude), jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyy-lidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-syaanietyyli )tio] -4-35 (2"-hydroksietyyli)-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2- ! ! «B = l KIIJ I I -I ΜΛ 96311 331 eeni-2-karboksylaatti (370 mg, 0,770 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (462 μΐ, 2,65 mmol) ja tipoittain trifluorimetaanisulfoni-happoanhydridiä (231 μΐ, 1,37 mmol). Seosta sekoitettiin 5 30 minuuttia ja lisättiin imidatsolia (200 mg, 2,94 mmol).
Hiilihappojäähaude korvattiin jää-MeOH-hauteella, ja seosta sekoitettiin 3,5 tuntia. Sen jälkeen seos laimennettiin kylmällä etyyliasetaatilla, pestiin vedellä (3 x 20 ml), NaHC03:lla (20 ml), vedellä (2 x 20 ml), suolaliuoksella ja 10 kuivattiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste kiinteänä aineena (350 mg, 85 %); IR (puhdas) v_ax: 1775 ja 1710 cm*1 (C=0); 'V-'r NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 7,53 (1H, s, aromaattinen H), 7,14 (1H, s, aromaattinen H), 6,99 (1H, s, aromaatti-15 nen H), 5,97 - 5,88 (1H, m, vinyylin H), 5,48 - 5,23 (2H, m, vinyylin H), 4,80 - 4-,69 (2H, m, allyylin CH2), 4,255 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 4,35 - 4,2 (2H, m, H-11 ja HCH-imidatsoli), 4,0 - 3,9 (1H, m, HCH-imidatso- li), 3,173 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,0 Hz, H-6), 3,2 - 20 3,1 (1H, m, K-4), 3,7 - 3,5 (4H, SCH2CH2CN), 2,3 - 2,15, 2.1 - 1,9 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,369 (3H, d, J = 6.1 Hz, CH3), 0,912 (9H, s, tert-butyyli), 0,133 ja 0,127 ppm (6H, 2s, CH3).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-w. 25 [ (1 ’ R)-1'-hydroksietyyli]-4-[2"-(imidatsol-l-yyli)etyyli] - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
JOS i ·. (CH?>,OH
1 / W f w 30 r._ """»—H.r N -^\
Kylmään liuokseen (jää-MeOH-haude), jonka muodosti 35 allyyli - (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy- 332 5 C 311 lioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-(imidatsol-1-yyli )etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti (425 mg, 0,802 mmol) tetrahydrofuraanissa (20 ml), lisättiin ensin etikkahappoa (600 μΐ, 10,5 mmol) 5 ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa (4,5 ml, 4,5 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja sen jälkeen sen annettiin reagoida 5 °C:ssa (kylmä huone) 114 tuntia. Sen jälkeen lisättiin kiinteää NaHC03:a (1 g), ja seosta sekoitettiin 30 minuut-10 tia (jäähaude). Se vietiin kolmelle preparatiiviselle TLC:lle (2 mm, asetoni, Rf = 0,2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (120 mg, 36 %), jossa oli epäpuhtautena jonkin w verran tetrabutyyliammoniumfluoridisuolaa; IR (puhdas) Vnax: 3600 - 3100 (OH), 1775 ja 1710 cm'1 15 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 7,70 (1H, s, aromaattinen H), 7,17 (1H, s, aromaattinen H), 7,05 (1H, s, aromaattinen H), 6,05 - 5,99 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,24 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, allyylin CH2), 4,4 - 4,2 20 (4H, m, H- 5, H-l’ ja CH2-imidatsoli), 3,217 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 9,3 Hz, H-6), 3,05 - 2,90 ( 1H, m, H-4), 2,75 -2,55 (4H, m, SCH2CH2CN), 2,50 - 2,25, 2,05 - 1,85 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,6 (1H, leveä s, OH) ja 1,447 ppm (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3).
25 C. (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1'- hydroksietyyli]-4-[2"-(imidatsol-l-yyli)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo [3 .2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
OH (CHpK-rr^N OH (CHgJg-N^'N
1 J ^ Λ J w h3c ""λ rVSx/x —. h3c *"
)---\ CN CN
CC2H
il i rit't iiu iii.i ti - g 96311 333
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti al-lyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hyd-roksietyyli]-4-[2"-(imidatsol-l-yyli)etyyli]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (120 mg, 5 0,288 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a (20 mg) ja 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuosta (1,0 ml, 0,50 mmol) etyyliasetaatissa. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja jäähaude poistettiin. 30 minuutin kuluttua seos jäähdytettiin jälleen ja sekoitusta jatkettiin vielä 30 10 minuuttia. Seos laimennettiin dietyylieetterillä (30 ml) ja vedellä (5 ml). Faasit erotettiin ja orgaanista kerrosta uutettiin jälleen vedellä (2 x 5 ml) ja 0,05 M pH-arvon 7,4 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (3 x 5 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieette-15 rillä ja vietiin käänteisfaasi-p-Bondapak-C18-pylvään läpi (20 g, H20 -* 2 % CH3CN/H20), jolloin saatiin ainetta, jossa oli epäpuhtautena etyyli-2-heksanpaatin natriumsuolaa. Jauhe vietiin saman pylvään läpi, mutta eluoitiin 0,025 M pH-arvon 6,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, jolloin saa-20 tiin puhdasta otsikon yhdistettä ja fosfaattisuolaa. Suolat poistettiin samalla käänteisfaasipylväällä (H20), jolloin saatiin puhdasta otsikon yhdistettä (43 mg, 39,6 %);
Puhtaus: 99,8 % (HPLC 300 nm); UV (H20) λΒ„: 300 (7800); ^ 25 IR VMX: 1750 ja 1600 cm-1 (C=0); 1H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,00 (1H, s, aromaattinen H), 7,36 (1H, s, aromaattinen H), 7,19 (1H, s, aromaattinen H), 3,41 - 3,26 (3H, m, H-5, H-l' ja HCH-imidatsoli), 4,25 - 4,05 (1H, m, HCH-imidatsoli), 3,528 (1H, dd, J = 30 2,7 Hz, J = 6,8 Hz, H6), 3,25 - 3,10 (1H, m, H-4), 2,74 - 2,66 (4H, m, SCH2CH2CN), 2,4 - 2,25, 2,25 - 2,0 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,383 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
96311 334
Esimerkki 91 (4R,5S,6S)-4-(4"-N,N-dimetyyliarainobutyyli)-6- [ (1' R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-5 boksyylihappo
8“ OH
L· J HCHO J f H*^ T~n>-SCHiCH,OH r
ίο JXf5CH=CH‘-0H
C0?H ^ COgH
Liuokseen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobu-tyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-hydroksietyyli)-15 tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli- happo (0,175 g, 0,51 mmol) kylmässä (0-5 °C) vedessä (8 ml), lisättiin 0,2 ml 37-prosenttista formaldehydin vesiliuosta ja etikkahappoa (52 μΐ, 0,9 mmol). Sen jälkeen lisättiin natriumsyaaniboorihydridiä pieninä annoksina 20 (5 x 0,050 g, yhteensä 4 mmol) 1 tunnin aikana (pH *5).
Sitten reaktio pysäytettiin lisäämällä 10 ml 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskuria. Raakatuotteena olevan reaktioseoksen HPLC osoitti otsikon yhdisteen ja 4-(4"-N-metyyli-N-syaanimetyyliaminobutyyli)yhdisteen 7:3-suhtei-25 sen seoksen. Sen jälkeen liuos kromatografoitiin käänteis- faasisilikageelillä (p-Bondapak-Cie, 2,5 x 15 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 5 %) 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, väkevöitiin ja niille suoritettiin 30 suolanpoisto samalla pylväällä käyttäen eluenttina puskurin sijasta vettä. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,077 g (40 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [a]” +78,5° (c 1,0, H2Q);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98 % μ-Bondapak-C-fg: 11a, 35 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CK3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti- il IHt Iitti Iina» ; ; 96311 335 puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 6,68 minuuttia; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 304 nm (8500); 5 IR (KBr) vBex: 1750 (β-laktaamin C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,37 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,84 (s, 6H, NCH3), 2,8 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,11 (t, J = 10 8,0 Hz, 2H, CH2N), 3,34 (dd, JH6 H5 = 2,40 Hz, JH6 H1 = 6,41 Hz, 1H, H-6), 3,35 (päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, _ H-4), 3,77 (t, J = 6,16 Hz, CH20H), 4,22 (dd, JH5H6 = 2,40 Hz, JH5 H4 = 10,1 Hz, 1H, H-5) ja 4,26 ppm (m, 1H, CH3-CHO).
15 Esimerkki 92 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok-sietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] -hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 20 2H <CH2),NH2 “iC W"”*
25 CObH
A. Ällyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-6- [ (1 ’R) -1' -hydroksietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyk-lo(3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30 OH (CH2)4N3 °H <CH2)4N3 —---K,c 963'.'; 336
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"-atsidobutyyli )-6-[(1 ’R)-l ’ -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (5,28 mmol, valmistettu 2,0 g:sta, 5,28 mmolrsta diatsoprekursoria) 5 kuivassa asetonitriilissä (40 ml), käsiteltiin 0 -5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloori-fosfaatilla (1,2 ml, 5,79 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,0 ml, 5,74 mmol) 5 min aikana. Lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyri-10 diinikide, ja seosta sekoitettiin 40 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,92 ml, 5,28 mmol) ja sen jälkeen klooritrimetyylisilaania (0,67 ml, 5,28 mmol), ja seosta sekoitettiin 5 minuuttia. Sitten liuosta käsiteltiin N,N-di-isopropyylietyyliamii-15 nilla (1,84 ml, 10,56 mmol), ja ylimääräinen metaanitioli (0,7 g, 15 mmol) kondensoitui liuoksessa. Sen jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 48 tuntia. Lisättiin etyyliasetaattia (400 ml), minkä jälkeen orgaaninen faasi pestiin peräkkäin vedellä, 1 M NaHS03:lla, 1 M NaH-20 C03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Sitten liuos väkevöitiin alipaineessa, ja jäännös laimennettiin tetrahydrofuraanilla (20 ml) ja vedellä (5 ml) ja käsiteltiin 0-5 eC:ssa etikkahapolla (2 ml). Saatua seosta pidettiin 0-5 eC:ssa 16 tuntia. Laimennettiin etyyliase-25 taatilla ja käsiteltiin kuten edellä (kyll. NaHC03, suola-liuos, MgS04), minkä jälkeen saatu tuote kromatografoitiin silikageelillä (5 x 10 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gra-dientilla tolueenissa (2:8 - 3:7), jolloin saatiin 1,38 g (69 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä: 30 IR (NaCl, kalvo) ymax: 2100 (N3), 1770 (B-laktaamin C=0) ja 1705 cm'1 (esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) δ: 1,39 (d, J = 6,26 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 1,90 (d, J = 5,14 Hz, 1H, OH), 2,36 (s, 3H, SCH3), 3,16 (dd, 35 jh6.h5 = 2/58 Hz, JH6 H1 = 7,38 Hz, 1H, H-6), 3,20 (päällek- 96311 337 käin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,33 (t, J = 6,2 Hz, 2H, CH2-Ns), 4,21 (dd, JH5H6 = 2,58 Hz, JH5>H4 = 9,29 Hz, 1H, H-5), 4,25 (päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CHO), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, 5 allyylin CH).
B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli J-e-Cil'R)-!'-hyd-roksietyyli] -3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 10 2H <ch2)4n3 OH (Ch2),nh2 co2h 15
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-( 4"-atsidobutyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3-metyylitio- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2,0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,38 g, 3,63 mmol) kuivassa etyyliasetaatissa (75 ml), 20 käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tet-rakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,12 g) ja 8 ml:lla (4 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 1,5 tunnin kuluttua reaktioseosta uutettiin kylmällä vedellä (2 x 75 ml), ja yhdistettyä 25 vesipitoista uutetta pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesifaasia hyd-rattiin 0-5 eC:ssa käyttäen 2 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypai-neessa 1,2 tuntia. Sen jälkeen lisättiin 25 ml 0,2 M pH-30 arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja katalyytti suodatettiin. Suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikagee-lillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 15 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 4 %) vedessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,57 g (50 %) 96311 338 otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [a]” +97,2° (c 1,0, vesi);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98,9 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-5 puskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 6,05 minuuttia; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λΒ„: 306 nm (9475); IR (KBr) \>nax: 1750 (β-laktaamin C=0) ja 1580 cm'1 10 (karboksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,34 — (s, 3H, SCH3), 3,01 (t, J = 7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,31 (dd, JH6.H5 = 2,36 Hz, JH6.H1 = 6,47 Hz, 1H, H-6), 3,39 (leveä t, 15 J = 9 Hz, 1H, H-4), 4,19 (dd, JH5 H6 = 2,36 Hz, JH5>H, = 9,06 Hz, 1H, H-5) ja 4,26 ppm (m, 1H, CH3CH0).
Esimerkki 93 (4R,5S,6S)-4 - (3"-aminopropyyli )-6-[(l'R)-l’ -hydrok-sietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio]-20 7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy- lihappo (C H p)3 N H2 25 u /7^ s ~ co2h 96311 339 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)me-tyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti 5 <ch2)3n3 oh <ch2)3n3 — «»'\rLscH, .si
Jr~\ (f \oeV/Cs ''T'" 10 C02\^ w Kylmään liuokseen (jää-MeOH-haude), jonka muodosti allyyli-( 2R, 4R, 5R, 6S )-4-(3"-atsidopropyyli ) -6- [(l'R)-l'-hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-15 2-karboksylaatti, joka oli juuri valmistettu (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(3-atsidopropyyli)-3" -diatso-3" -allyylioksikarbonyyli-2" -oksopropyyli] atse-tidin-2-onista (1,7 g, 4,7 mmol) ja joka oli CH3CN:ssa (50 ml), lisättiin tipoittain difenyylikloorifosfaattia 20 (1,1 ml, 5,0 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,92 ml, 5,0 mmol) ja hiukan 4-N,N-dimetyyliaminopyridii-niä (5 mg). Seosta sekoitettiin 1 tunti, ja enolifosfaat-tia käsiteltiin 4-merkaptometyyli-l,2,3-tiadiatsolilla (925 mg, 7,0 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla : 25 (1,84 ml, 10,0 mmol). Seosta sekoitettiin 2 tuntia 5 °C:ssa (jäähaude) ja lisättiin vielä tiolia (0,46 g, 3,5 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,92 ml, 5 mmol). Reaktioseoksen annettiin olla 18 tuntia 5 °C:ssa (kylmä huone), laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml), 30 pestiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (100 ml), vedellä (100 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (100 ml), vedellä (100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös (4,0 g) vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (200 g, heksaani/EtOAc 1/1), jolloin saatiin otsikon yh-35 diste (0,90 g, 43 %) öljynä; 340 9Γο'1 IR (CH2C12) vb„: 3680, 3600 (OH), 2100 (Ns), 1775 ja 1710 cm'1 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 8,477 (1H, s, aromaattinen H), 6,02 - 5,85 (1H, m, vinyylin H), 5,48 - 5,22 5 (2H, m, vinyylin H), 4,87 - 4,61 (2H, m, allyylin -CH2), 4,771, 4,696, 4,337, 4,260 (2H, ABq, J = 15,2 Hz, CH2-aro-maattinen), 4,28 - 4,14 (1H, m, H-l'), 4,162 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 3,60 - 3,27 (3H, m, CH2N3 ja H- 4), 3,245 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,5 Hz, H-6), 2,04 -10 1,50 (4H, m, (CH2)2-4), 1,597 (1H, leveä s, OH) ja 1,377 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
B. (4R, 5S, 6S)-4- (3"-aminopropyyli) -6- [(1’R)-1' -hyd- ^ roksietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 15 °H (CH2)3N3 OH <ch2>3nh2
^^riV-SCH _- H3C Yfy_SrH
JA^SCH2 V»
20 COjH
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R, 5S, 6S )-4- (3"-atsidopropyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyy-li] -3 - [ (1,2,3-tiadiatsol-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,9 g, 2 mmol) 25 CH2Cl2:ssa (20 ml), käsiteltiin Pd( PPh3 )4:11a (90 mg), ja sen jälkeen lisättiin tipoittain 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuosta (4,1 ml, 2,05 mmol) etyyliasetaatissa. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin 1/1-suhteisella etyyliasetaatin ja dietyylieette-30 rin seoksella ja uutettiin 0,05 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (1 x 50 ml ja 2 x 25 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieette-rillä ja vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (180 g, "TijO -> 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin natriumkar-35 boksylaattia (0,50 g, 61 %) lyofilisoituna jauheena; H IH:I (illi l;|J tt i : » 96311 341 *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,897 (1H, s, aromaattinen H), 4,679, 4,605, 4,447, 4,372 (2H, ABq, J = 15 Hz, CH2-aromaattinen), 4,299 - 4,173 (1H, 5 viivaa, H-l'), 4,124 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,412, 3,401 (osa 5 H-6: a, d, J = 2,5 Hz), 3,41 - 3,34 (3H, m, H-6 ja CH2-N3), 3,31 - 3,20 (1H, m, H-4), 1,9 - 1,32 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,300 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Natriumkarboksylaattia (500 mg, 1,22 mmol), joka oli vedessä (75 ml), ravistettiin 0 °C:ssa (jäähaude) Par-10 rin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) ve-typaineessa 1 tunti käyttäen 5-prosenttista Pd/alumiini-oksidia katalyyttinä (500 mg). Lisättiin vielä katalyyttiä (500 mg), ja hydrausta jatkettiin vielä yksi tunti 0 °C:ssa. Katalyytti poistettiin suodattamalla, ja pH 15 (10-11) säädettiin arvoon 7,0 1 M NaH2P04:n vesiliuoksel la. Seos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (100 g, H20 -» 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin lopullinen yhdiste (250 mg, 53 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 99,93 % (304 nm, HPLC); 20 UV (H20) λ max: 302 (£ 8050); IR (Nujol) v Bax: 3600 - 3100 (OH, NH2), 1755 ja 1685 cm"1 (C=0); :H NMR (D20, 200 MHz) 6: 8,894 (1H, s, aromaattinen H), 4,660, 4,586, 4,440, 4,365 (2H, ABq, J = 14,9 Hz, CH2-25 aromaattinen), 4,302 - 4,174 (1H, 5 viivaa, H-l’), 4,125 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,359 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,5 Hz, H-6), 3,32 - 3,22 (1H, m, H-4), 3,06 -2,97 (2H, m, CH2-N), 1,83 - 1,32 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,304 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
CRi i 342 ' '
Esimerkki 94 (4R,5S,6S)-4-[3"- (N-formimidoyyli)aminopropyyli] - 6- [ (1'R)-11-hydroksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3- triatsol-4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo-5 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H <CH2)3NH2 oh <ch2)3nhchnh
iQ VN
cosH co2h
Kylmää liuosta (jäähaude), jonka muodosti _ (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli] -3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)metyylitio]-7-15 okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (175 mg, 0,460 mmol) 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (50 ml), käsiteltiin 0,10 N NaOH:n vesiliuoksella (pH:n nostamiseksi arvoon noin 8,0 ± 0,2 ja sen pitämiseksi siinä) ja bentsyyliformimidaattive-20 tykloridilla (200 mg, 1,15 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, ja sen jälkeen liuoksen pH laskettiin arvoon 7,0 1 M NaH2P04:n vesiliuoksella. Seos vietiin μ-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (20 g, vesi -* 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (110 mg, 59 %) lyofilisoi- ' 25 tuna jauheena;
Puhtaus: 97,2 % (302 nm, HPLC); UV (H20) 302 (£ 9260); IR (Nujol) vBax: 3600 - 3700 (OH), 1750 (C=0), 1710 (C = N) ja 1585 cm*1 (C=0); 30 NMR (DjO, 200 MHz) 6: 7,867 (1H, s, aromaattinen H), 7,834, 7,812 (1H, 2s, CH), 4,30 - 4,18 (1H, m, H-l'), 4,212, 4,137, 4,031, 3,957 (2H, ABq, J = 14,9 Hz, CH2-aro-maattinen), 4,159, 4,112, 4,099 (1H, Is ja Id, J = 2,6 Hz, osa H-5: a), 4,083 (3H, s, N-CH3), 3,330 tl'H, dd, J = 35 2,6 Hz, J = 6,1 Hz, H-6), 3,45 - 3,20 (3H, m, H-4 ja CH2N) , 96311 343 1,9 - 1,32 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,300 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 95 (4R,5S,6S)-4-(3M-guanidinopropyyli)-6-[(l'R)-l'-5 hydroksietyyli]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yy- li)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo [ 3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo JH (CH2)3NH2 OH <CHg)3NHC<=NH)NHe 10 „ArA ' ^N/C"3
3 I )>—SCH2—1--*3C ΓΤ \_sch2^/ I
/~nA n λ=·ν
COgH COgH
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti 15 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli )-6-[(l'R)-l'-hydroksietyy- li]-3-[(1-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (170 mg, 0,460 mmol) 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (50 ml), käsiteltiin ensin 20 0,1 N NaOHrn vesiliuoksella (pH:n nostamiseksi arvoon noin 8,0 ± 0,2 ja sen pitämiseksi siinä) ja aminoiminometaani-sulfonihapolla (570 mg, 4,60 mmol). Seosta sekoitettiin 90 minuuttia, ja sen jälkeen pH laskettiin arvoon 7,0 IM NaH2P04:n vesiliuoksella. Seos vietiin p-Bondapak-C18-kään-' 25 teisf aasipylvään läpi (20 g, vesi -* 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (130 mg, 74 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 99,85 % (302 nm, HPLC); UV (H20) imax: 302 (c 9150); 30 IR (Nujol) vmax: 3600 - 3100 (NH, OH), 1755 (C=0), 1670 - 1630 (C=N) ja 1590 cm'1 (C=0); "H NMR (D20, 200 MHz) δ: 7,871 (1H, s, aromaattinen H), 4,31 - 4,16 (1H, 5 viivaa, H-l'), 4,211, 4,135, 4,037, 3,962 (2H, ABq, J = 15 Hz, CH2-aromaattinen), 4,063 (3H, 35 s, CH3-triatsoli), 4,155 - 4,06 (1H, m, peittynyt H-5), 344 9 6^1 3,318, 3,306, 3,267 (osa H-6:a, d + s), 3,32 - 3,22 (3H, m, CH2-N ja H-4), 1,9 - 1,30 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,29 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 96 5 (4R, 5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-3-[ (2-karbamoyyliok- si)etyylitio] -6- [ (1' R) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (CH2)4NH2 10 1 f
u X
3 /)-SCHpCHpOCONHp // cr \
COgH
15 Ä. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidobutyyli)-3-[(2-karbamoyylioksi)etyylitio]-6-[(1' R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OH <CH2)4N3 OH <CH,).N3 ” „Λ-Α_ 25 Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(4"- atsidobutyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (7,6 mmol, valmistettu 2,88 g:sta, 7,6 mmol:sta diatsoprekursoria) kuivassa asetonitriilissä (35 ml), käsiteltiin 0 -30 5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloori- \ fosfaatilla (1,65 ml, 8,0 mmol), ja samanaikaisesti lisät tiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,38 ml, 8,0 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dime-tyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 30 minuut-35 tia. Sen jälkeen lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia
345 96ο 1 I
(1,38 ml, 8,0 mmol) ja sitten klooritrimetyylisilaania (1,0 ml, 8,0 mmol), ja seosta sekoitettiin 10 minuuttia. Lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,38 ml, 8,0 mmol) ja sen jälkeen 2-karbamoyylioksietaanitiolia 5 (1,8 g, 15,2 mmol) asetonitriilissä, ja saatua seosta se koitettiin 0-5 °C:ssa 18 tuntia. Sitten reaktio pysäytettiin lisäämällä kylmää 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskuria (100 ml) ja etyyliasetaattia (500 ml). Orgaaninen faasi pestiin vedellä, suolaliuoksella ja kuivat-10 tiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka liuotettiin tetrahydrofuraaniin (50 ml) ja veteen (50 ml) ja käsiteltiin 0 - 5 °C:ssa etikkahapolla (1,5 ml). Sen jälkeen lämpötilan annettiin hitaasti saavuttaa 22 eC 1 tunnin aikana. Sitten reaktioseos laimen-15 nettiin etyyliasetaatilla (400 ml) ja käsiteltiin kuten edellä. Liuottimen haihdutuksen jälkeen saatu jäännös kro-matografoitiin kaksi kertaa silikageelillä (4 x 12 cm) käyttäen ensin tolueenin ja etyyliasetaatin seosta (1:1) ja sitten dikloorimetaanin ja asetonitriilin seosta (7:3) 20 eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 1,71 g (49 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) VBax: 2 100 (N3), 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1720 (esterin ja karbamaatin leveä C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,39 (d, J = 6,25 Hz, 3H, ^ 25 CH3CHO), 1,4 - 1,8 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 - 3,2 (m, 5H, SCH2, CH2N3 ja H-4), 3,18 (dd, JH6 H5 = 2,62 Hz, jh6.hi = 7/17 Hz, 1H, H-6), 4,1 - 4,4 (m, 4H, H-5, CH3CH0 ja CH2OCONH2 päällekkäin), 4,6 - 4,9 (m, 4H, allyylin CH2 ja 0C0NH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin 30 CH).
96311 346 B. (4R,5S,6S)-4-(4"-aininobutyyli)-3-[ (2-karbamoyy-lioksi)etyylitio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH <CHg)4N3 OH <CHs)4NH2 μ m ^ 3 Pj. /)-SCH2CH2OCONH2 -► 3 I \-sch2ch2oconh? co2^^ co2h 10 Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"~ atsidobutyyli)-3-[(2-karbamoyylioksi)etyylitio]-6-[(1'R)-1' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,71 g, 3,77 mmol) kuivassa etyyliasetaatissa (50 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä 15 suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini Jpalladiumilla [0] (0,100 g) ja sen jälkeen 8 ml:11a (4 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. Sitten reaktioseosta uutettiin vedellä (3 x 50 ml), ja yhdistetty vesipitoinen uute kromatografoitiin käänteisfaasisilika-20 geelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 13 cm). Eluoitiin asetonit-riilin gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 1,0 g (59 %) välituotekaliumsuolaa valkoisena kiinteänä aineena pakastuskuivauksen jälkeen.
Sitten kaliumsuola liuotettiin kylmään veteen • 25 (150 ml) ja hydrattiin 0 - 5 cC:ssa käyttäen 1,5 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunti. Sen jälkeen lisättiin 20 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, katalyytti suodatettiin, ja suodos kromatografoitiin käänteis-30 faasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 15 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 0,722 g (83 %, 49 % yhdistetty) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena lyofilisoinnin jälkeen: [a] 202 +74,6° (c 1,0, H20); 347 9631 1
Puhtaus HPLC:n mukaan: 96,4 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 5,56 minuuttia; 5 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Ληβχ: 302 nm (9219); IR (KBr) vmax: 1750 (3-laktaamin C=0), 1720 (kar- bamaatin C=0) ja 1585 cm*1 (karboksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J - 6,34 Hz, 3H, 10 CH3CH0), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,9 - 3,2 (m, 4H, SCH2 ja CH2NH2), 3,36 (dd, JH6 H5 = 2,51 Hz, ' jh6.hi = 6,27 Hz, 1H, H-6), 3,4 (m, päällekkäin H-6:n kans sa, 1H, H-4) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 4H, H-5, CH3CH0 ja CH,0-C0NH2) .
15 Esimerkki 97 (4R,5S,6S)-4-(3"-guanidinopropyyli)-6-[(1' R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(1,2,3-tiadiatsol-4-yyli)metyy-litio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 20 OH <CH2)3NH2 oh <CH2)3NHC<=NH)NH2 «3^ sch— HsC XrT^—schs -^1
. 25 C02H C02H
Kylmään liuokseen (jäähaude), jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli] -3 - [(1,2,3-tiadiatso 1-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (120 mg, , 30 0,31 mmol) 0,025 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipusku- ‘ rin vesiliuoksessa (30 ml), lisättiin ensin 0,1 M NaOH:n vesiliuosta (pH:n nostamiseksi arvoon noin 8,1 ± 0,2 ja sen pitämiseksi siinä) ja annoksittain aminoiminometaani-sulfonihappoa (390 mg, 3,10 mmol). Seosta sekoitettiin 35 1,5 h, ja pH laskettiin arvoon 7,0 1 M NaH2P04:n vesiliuok- 96311 348 sella. Seos vietiin p-Bondapak-Cie-käänteisfaasipylvään läpi (20 g, vesi -* 3 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (90 mg, 68 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 98,5 % (302 nm, HPLC); 5 UV (HjO) λΒβχ: 302 (ξ 8400); IR (Nujol) veax: 3600 - 3100 (OH, NH3), 1750 (C=0), 1770 - 1730 (C=N) ja 1680 cm'1 (C=0); *H NMR (DjO, 200 MHz) 6: 8,896 (1H, s, aromaattinen H), 4,654, 4,580, 4,446, 4,371 (2H, ABq, J = 15 Hz, CH2-10 aromaattinen), 4,29 - 4,17 (1H, 5 viivaa, H-l'), 4,124 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,298 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J « 6,5 Hz, H-6), 3,30 - 3,10 (3H, m, CH2-N ja ^ H-4), 1,90 - 1,30 (4H, m, (CH2)2-4) ja 1,291 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
15 Esimerkki 98 (4R,5S,6S)-3-[(2-karbamoyylioksietyyli)tio]-4-(4"-N-formimidoyyliaminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 20
OH (CHe)^NH2 N-H OH (CHg)4NH-CH=NH
h A—r^\ H^ocHoPh μ Λ— 3 ΓΠ λ—scHgCHgOCONHj -—* 3 I |_ Λ SCH2CH20C0NH5 COgH C02H _ : 25 (4R, 5S, 6S ) -4- (4" -aminobutyyli) -3- [ (2-karbamoyyliok-sietyyli )tio] - 6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] - 7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,196 g, 0,506 mmol) kylmän vesiliuoksen (15 ml) pH säädettiin ar-30 voon 8,0 1 M NaOH:lla, ja käsiteltiin 0-5 °C:ssa bent-syyliformimidaattivetykloridilla (0,26 g, 1,5 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 10 minuutin aikana. pH pidettiin välillä 8 - 8,5 IM NaOH:lla koko lisäyksen ajan. 20 ffiTnuutin kuluttua lisättiin 10 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaa-35 vaa fosfaattipuskuria, ja reaktioseos pestiin etyyliase- ?6311 349 taatilla. Sen jälkeen vesifaasi kromatografoitiin ensin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-Cie, 2,5 x 15 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 5 %) 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa eluenttina. UV-5 aktiiviset fraktiot yhdistettiin, väkevöitiin (T <5 °C) ja suoritettiin suolanpoisto samalla pylväällä käyttäen eluenttina puskurin sijasta vettä. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,136 g (65 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]22 10 +72,0° (c 1,0, vesi);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98,8 % p-Bondapak-C18:11a, w 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti- puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 6,12 minuuttia; 15 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 302 nm (9228); IR (KBr) v max' 1750 (β-laktaamin C=0), 1715 cm'1 (karbamaatin ja formimidoyylin C=0) ja 1590 cm'1 (karbok-sylaatin C=0); 20 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,31 (d, J = 6,32 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 - 3.2 (m, 2H, SCH2), 3,3 - 3,5 (m, 4H, H-4, H-6 ja CH,NH), 4.2 - 4,4 (m, 3H, CH2OCONH2, H-5 ja CH3CH0) ja 7,79 ppm (leveä s, 1H, CHNH).
: 25 Esimerkki 99 (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-[(1-metyyli-1,3-imidatsol-5-yyli)metyylitio]-6-[(l'R)-l’-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 nu CH-CH.NHp -'Vs-.I5· 25 O7" \ q u COpH L"3
350 i’uO :ί I
A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(1-metyyli- 1,3-imidatsol-5-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 OTBDflS CH2CH2N3 OTBOnS CH?CH?N^ -.¼. - ΛιΗ> 10 CH =
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(2"- ^ atsidoetyyli)-6-[(1'R) — 1'-tert-butyylidimetyylisilyyliok-sietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-kar-15 boksylaatti (5,10 mmol, valmistettu saattamalla 2,37 g, 5,10 mmol diatsoprekursoria rengasmuotoon) kuivassa aseto-nitriilissä (39 ml), käsiteltiin -15 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,10 ml, 5.3 mmol) ja N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,95 ml, 20 5,3 mmol). Lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridii- nikide, ja seosta sekoitettiin -15 °C:ssa 30 minuuttia. Lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,95 ml, 5.4 mmol) ja l-metyyli-5-tiometyyli-l,3-imidatsolia (1,31 g, 10,2 mmol), ja seosta sekoitettiin 3 tuntia : 25 0 °C:ssa. Reaktioseos laimennettiin EtOActlla (272 ml) ja pestiin vedellä, 1 M NaHS03:lla, kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silika-geelillä. Eluoitiin EtOAc:n, CH3CN:n ja asetonin seoksella 30 (12:87:1), jolloin saatiin 1,5 g (54 %) otsikon yhdistettä keltaisena öljynä: IR (CH2C12) v max: 2100 (N3), 1775 (β-laktaamin C = 0) ja 1710 (esterin C=0).
:H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0’,“09 (s, 6H, SiCH3), 0,90 35 (s, 9H, Si-t-bu), 1,31 (d, J = 6,1 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 ja 96311 351 2,0 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 3,08 (dd, Jj.6 = 7,17 Hz, J5_6 = 2,76 Hz, 1H, H-6), 3,3 - 3,6 (m, 2H, CH2N3), 3,69 (s, 3H, CHj-N), 3,9 - 4,2 (m, 4H), 4,7 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5.5 ja 6,0 (2xm, 2H ja 1H, allyylin CH), 6,99 ja 7,46 5 (2 x S, 2H, imidatsoyyli).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(1-metyyli-1,3-imidatso-5-yyli) metyyli tio] - 6- [ (l'R)-l' -hyd-roksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 10 OTBDMS CH2CH2N3 gH CH2CH2N, I r ^ I / ® n - Η3^Λ,"πΛ c J|x) TBRr 1 Η3Απ\_ς |j X) * \oa/^ CH3 * \0g^ CH3 15
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyyliok-sietyyli] -3- [ (1-metyyli-l, 3-imidatsol-5-yyli )metyylitio- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 (1,50 g, 2,74 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (43 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasu-na etikkahapolla (0,94 ml, 16,4 mmol) ja sen jälkeen 8.5 ml:11a (8,5 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa. Liuosta pidettiin 5 °C:ssa 25 8,5 vuorokautta. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin
EtOAcrlla, pestiin kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS0<). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (4,5 x 15 cm). Eluoitiin asetonilla, jolloin saatiin 1,87 g 30 (73 %) otsikon yhdistettä vaahtomaisena vaaleankeltaisena kiinteänä aineena: IR (NaCl, kalvo) vmax: 3200 (leveä, OH), 2105 (N3), 1780 (β-laktaamin C=0) ja 1710 (esterin C=0).
96311 352 C.(4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-[(1-metyyli-1,3-iraidatsol-5-yyli)metyylitio]-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 OH OH J** "s'^rrCs JT> 1>Pdm· h3o'"""I—[f"> I ^ t„, CQz' J C02H L 3 10
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(1-metyyli-l,3-imidatsol-5-yyli)metyyli- — tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (558 mg, 1,29 mmol) 15 kuivassa CH2Cl2:ssa (29 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfii-ni )palladiumilla [0] (112 mg) ja 2,84 ml:lla (1,42 mmol) 0,5 M natrium-2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAcissa. Sen jälkeen lisättiin 39 ml vettä ja orgaaninen kerros erotet-20 tiin. Orgaanista faasia uutettiin uudelleen 2 x 22 ml:11a vettä, ja yhdistetyt vesipitoiset kerrokset haihdutettiin orgaanisen liuottimen poistamiseksi. Jäljelle jäänyttä vesifaasia hydrattiin käyttäen 396 mg:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) ve-; 25 typaineessa 1 tunti. Katalyytti suodatettiin ja suodos neutraloitiin 1 M NaH2P04-liuoksella (muutama tippa). Seos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (Bondapak-C1B, 7 x 11 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia vedessä (0 - 1 %), minkä jälkeen lyofilisoitiin UV-aktiiviset 30 fraktiot, jolloin saatiin 130 mg otsikon yhdistettä vaa- \ leankeltaisena amorfisena jauheena: UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Xmax: 302 nm (6000); 1R (KBr) vmax: 1765 (β-laktaamin C=0) ja 1625 (kar-35 boksylaatin C=0); 96311 353 *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,3 Hz, 3H, CHjCHO), 1,7 ja 2,1 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 3,05 (t, J = 9,0 Hz, CH2NH2), 3,23 (m, 1H, H-4), 3,41 (dd, Jr_6 = 6,5 Hz, J5.6 = 2,7 Hz, H-6), 3,7 (s, 3H, CH3-N), 3,9 - 4,3 (m, 4H, 5 CH2-S, CHjCHO, H-5), 6,93 ja 7,63 (2 x s, 2H, imidatsoyy-li).
Esimerkki 100 (4R,5S,6S)-3-[(2-karbamoyylioksietyyli)tio]-4-(4"-guanidinobutyyli )-6-[(l’R)-l’-hydroksietyyli]-7-10 okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli- happo
w N-H
OH (CHj^KHj OH <CHe)4NH-C-NHj H.N^SOjH H.C —f\ . c 3 I h— SCHgCHgOCONHg -½-2 „ m3l \ SCH.CH.OCONH.
15
COjH COjH
( 4R, 5S, 6S )-4-( 4 ' -aminobutyyli ) -3 - [ (2-karbamoyylioksietyyli) tio] -6- [ (1'R)—1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa-20 bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,172 g, 0,44 mmol) kylmän vesiliuoksen (0 - 5 eC, 13 ml) pH säädettiin arvoon 8,5 1M NaOHrlla. Sen jälkeen lisättiin aminoiminometaanisulfonihappoa (0,275 g, 2,21 mmol) pieninä annoksina 10 minuutin aikana niin, että pH pidettiin 25 välillä 8 - 8,5. 45 minuutin jälkeen 0-5 eC:ssa reaktio pysäytettiin lisäämällä 15 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja kromatografoitiin käänteisfaasisili-kageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 15 cm). Eluoitiin aseto-nitriilin gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 30 0,149 g (78 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena • kiinteänä aineena pakastuskuivauksen jälkeen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-Cie:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, -virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 300 nm, 35 viipymäaika 6,0 minuuttia; (9371); 96311 354 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) χαΛΧ: 302 nm IR (KBr) v„x: 1750 (olkapää, B-laktaamin C=0), 1730 (karbamaatin leveä OO), 1670 (guanidiinin C=0) ja 5 1590 cm"1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,32 Hz, 3H, CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,8 -3,2 (m, 2H, SCH2), 3,22 (t, J = 6,5 Hz, CH2N), 3,34 (dd, JH6.H5 = 2,55 Hz, JH6 H1 = 6,10 Hz, 1H, H-6), 3,36 (m, pääl-10 lekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 4H, CH20, H-5 ja CH3CH0).
Esimerkki 101 »— (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -4- (2"-dimetyyli-aminoetyyli)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-15 atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H <CHO?-N(CHO? u XrU,
20 3 LJi S<CH2>SCN
C Op H
Ä.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidime-: 25 tyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-(2"-di- metyyliaminoetyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2. 0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
I I
OS i + <CHE)pOH 0Si+ (CH2)--N<CH3)2 30 I f \ ]
n3C I I >^_S(CH,)ECN — ^ I_il —S(CH2)2CN
Il «tl t il Hi l t i ϋ : ; 355 96511
Kylmään liuokseen (hiilihappoj ää-asetonihaude), jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-tert-butyy-lidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-syaanietyyli )tio] -4-(2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-5 eeni-2-karboksylaatti (384 mg, 0,801 mmol) CH2Cl2:ssa (20 ml), lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (480 μΐ, 4,20 mmol) ja tipoittain trifluorimetaanisulfoni-happoanhydridiä (208 μΐ, 1,24 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja seoksen läpi johdettiin 20 s:n ajan ΗΝΙΟ (CH3 )2-virta. Hiilihappojää-asetonihaude korvattiin jää-MeOH-hauteella. Seosta sekoitettiin 3 tuntia (reaktiota seurattiin TLC:llä), sen jälkeen laimennettiin jääkylmällä etyyliasetaatilla (100 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (4 x 50 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgSO«), jolloin 15 saatiin otsikon yhdiste (390 mg, 96 %) öljynä; IR (puhdas) vmax: 2250 (C=N), 1775 ja 1710 cm’1 (c=0); :H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 4,85 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, 20 m, allyylin -CH2), 4,30 - 4,17 (1H, m, H-l'), 4,205 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,7 Hz, H-5), 3,40 - 3,20 (2H, m, H-4 ja HCH-N), 3,254 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 7,0 Hz, H-6), 3,15 - 2,95 (2H, m, SCH2), 2,72 - 2,63 (2H, m, CH2CN), 2,5 - 2,30 (1H, m, HCH-N), 2,254 (6H, s, N(CH3)2), 2,05 -^ 25 1,80 (1H, m, HCH-4), 1,7 - 1,4 (1H, m, HCH-4), 1,290 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,890 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,086 ppm (6H, s, dimetyyli).
96311 356 B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4- ( 2"-dimetyyliaminoetyyli) -6- [(1'R)-1T -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti C OS i + <CHp)?N<CH,)? 2H <CH2)2-N<CH3)g 5 , j 2 2 3 2 V Ϊ h3c 1 \ S(Ch2)2cn —- h3c *1 \b— s<ch2)2cn v^· C02\^.
10
Kylmään liuokseen (jää-MeOH-haude), jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-6- [ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy- ---- lioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-(2"-dimetyyliami-noetyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-15 boksylaatti (390 mg, 0,768 mmol) tetrahydrofuraanissa (10 ml), lisättiin etikkahappoa (600 μΐ, 10,5 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa (6,0 ml, 6,0 mmol). Seosta sekoitettiin 1 tunti ja sen jälkeen sen annettiin olla kylmässä huo-20 neessa 144 tuntia. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (100 ml) ja pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 100 ml), kylmällä suolaliuoksella (2 x 100 ml) ja kuivattiin (MgS04), jolloin saatiin otsikon yhdiste (270 mg, 89 %) raakatuoteöljynä; 25 IR (puhdas) v»„: 3600 - 3200 (OH), 1775 ja ~ 1710 cm"1 ( C=0); :H NMR (CDC13, 200 MHz) δ: 6,05 - 1,90 (1H, m, vinyylin H), 5,50 - 5,24 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, allyylin H), 4,294, 4,279 (osa H-5:a, d, J = 2,9 Hz), 30 4,29 - 4,15 ( 1H, m, H-l'), 3,45 - 3,9 (3H, m, H-4 ja SCH2), 3,302 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 7,9 Hz, H-6), 2,8 - 2,6 (4H, m, CH2-N ja CH2CN), 2,264 (6H, s, N(CH3)2), 2,0 - 1,6 (3H, m, CH2-4 ja OH) ja 1,377 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
il III I Mil 1; 4 4» : . ..
96311 357 C. (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-(2"-dime-tyyliaminoetyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH (CHp)?N<CH,)p OH (CH?)?-N<CH,5 - ! ,ΛτΛ_
COa'x/'sN C02H
10 Kylmää liuosta (jäähaude), jonka muodosti raaka- tuotteena oleva allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)-w tio] -4-(2"-dimetyyliaminoetyyli )-6- [ (1' R)-1' -hydroksietyy li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaat-ti (270 mg, 0,69 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), käsiteltiin 15 Pd(PPh3)4:11a (30 mg) ja 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuoksella etyyliasetaatissa (1,44 ml, 0,720 mmol). Seosta sekoitettiin 45 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin 1/1-suhteisella etyyliasetaatin ja dietyylieetterin seoksella (20 ml) ja uutettiin 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavalla fos-20 faattipuskurilla (1 x 20 ml, 2 x 10 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä ja vietiin kaksi kertaa p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (40 g, 0,02 M pH-arvon 7,0 omaava fosfaattipuskurin vesi-liuos -* 3 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste 25 (70 mg, 30 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 99,5 % (298 nm, HPLC); UV (H20) άβ„: 298 (£ 6960); IR (Nujol) v roax: 3600 - 31200 (OH), 2250 (ChN), 1750 ja 1590 cm'1 (C=0); 30 :H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33 - 4,21 (1H, m, H-l'), 4,289 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 3,429 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), 3,48 - 3,35 (H, m, H-4), 3,21 - 2,76 (6H, SCH2, CH2-N, CH2CN), 2,758 (6H, s, N(CH3)2), 2,27 - 2,14 ja 1,98 - 1,80 (2H, 2 m-kohtaa, 35 CH2-4) ja 1,339 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3) .
358 96311
Esimerkki 102 (4R, 5S, 6S) -4- (4"-guanidinobutyyli) -6- [ (1 'R) -1' -hyd- roksietyyli]-3-metyylitio-7-okso-1-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
5 N-H
OH <CH,,>,NHf N-H OH <CHg)«NH-C-NHj hjc uVsch>
10 <r"\ /-NT
0 0 g H COgH
(4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok- w sietyyli]-3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,226 g, 0,72 mmol) kylmän vesi- 15 liuoksen (0 - 5 eC, 20 ml) pH säädettiin arvoon 8,5 IM NaOHrlla, ja sen jälkeen käsiteltiin aminoiminometaanisul-fonihapolla (0,40 g, 3,22 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 minuutin aikana- pH pidettiin välillä 8-8,5 koko lisäyksen ajan ja vielä kaksi tuntia 1 M NaOH:lla.
20 Sen jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä 20 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja kromatografoi-tiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 15 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 0,169 g (66 %) otsikon yhdistettä • 25 valkoisena amorfisena jauheena lyofilisoinnin jälkeen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,8 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 304 nm, viipymäaika 5,77 minuuttia; 30 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 'K αΛΧ: 306 nm • (9411); IR (KBr) vmax: 1750 (β-laktaamin C = 0), 1665 (gua- nidiinin C=N) ja 1580 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,35 Hz, 3H, 35 CH3CH0), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,34 f lK:t dll» lii·»- · 96311 359 (s, 3H, SCH3), 3,22 (t, J = 6,5 Hz, 2H, CH2N), 3,28 (dd, J„6.„5 = 2,39 Hz, JH6K1 = 6,26 Hz, 1H, H-6), 3,38 (leveä t, 1H, H-4), 4,19 (dd, JH5.„6 = 2,39 Hz, JH5>H4 = 9,04 Hz, 1H, H5) ja 4,27 ppm (m, 1H, CH3CHO).
5 Esimerkki 103 (4R,5S,5S)-4-(4"-N-formimidoyyliaminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli-3-metyylitio-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
2H <CHg>4NHg OH <CH2)<NH-CH = NH
h3c —*Hsc y0^iz->
C02H 'cOgH
15 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyyli)-6-[(l'R)-l'-hydrok- sietyyli]-3-metyylitio-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,210 g, 0,67 mmol) 0-5 eC:ssa olevan vesiliuoksen (30 ml) pH säädettiin arvoon 8,5 IN NaOHrlla. Sen jälkeen lisättiin bentsyyliformimidaattive-20 tykloridia (0,60 g, 3,5 mmol) pieninä annoksina 10 minuutin aikana niin, että pH pidettiin välillä 8 - 8,5 IN NaH0:lla. Vielä 20 minuutin jälkeen 0-5 °C:ssa reaktio pysäytettiin lisäämällä 25 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria ja pestiin etyyliasetaatilla (20 ml). 25 Sen jälkeen vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi ja sitten kromatografoltiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 5 %) 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa eluent-30 tina. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, väkevöitiin tyhjössä (T <5 °C) ja kromatografoitiin toisen kerran käyttäen puskurin sijasta vettä eluenttina. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,123 g (54 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [αΐβ2 35 +110,3° (c 1,0, vesi); 96311 360
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-Cie: 11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 3 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 304 nm, viipymäaika 6,48 minuuttia; 5 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 306 nm (10187); IR (KBr) vnax: 1750 (β-laktaamin C=0), 1715 (form-imidoyylin C=N) ja 1580 cm'1 (karboksylaatin C=0); lH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,27 Hz, 3H, 10 CHjCHO), 1,3 - 1,9 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,34 (s, 3H, SCH3), 3,3 - 3,5 (m, 4H, H-6, H-4 ja CH,NH), 4,18 (dd, J„5,H6 = 1,92 Hz, JH5.„4 = 9,0 Hz, 1H, H-5), 4,26 (m, 1H, v-CH3CHO) ja 7,8 ppm (leveä s, 1H, CH=NH).
Esimerkki 104 15 (4R,5S,6S)-3-[(2-karbamoyylioksietyyli)tio]-4-(4"- N,N-dimetyyliaminobutyyli)-6-[(1' R)-1'-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 20 2H <ch2)4nh2 OH <ch2)4n<ch3)2
/L, 1 HCH0 JL J
"3t nQ>-«c««c».ocom| ντ^5:„!ϋΗ!θ[01)Η! co£h \o-h 25 Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobu- tyyli)-3-(2-karbamoyylioksietyylitio)-6-[(1'R)-1'-hydrok-sietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-syylihappo (0,230 g, 0,59 mmol) vedessä (10 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa 0,25 ml:11a (3,0 mmol) 37-prosenttista 30 formaldehydin vesiliuosta ja 2 ml:11a 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria. Sen jälkeen lisättiin kerralla 0,074 g (1,18 mmol) natriumsyaaniboorihydridiä, ja saatua seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 1 tunti. HPLC:n mukaan (p-Bondapak-C18) tuote oli otsikon dimetyylijohdannaisen ja — 35 N-metyyli-N-syaanimetyylijohdannaisen 51:45-suhteinen .n uh uni f m «t - · 96311 361 seos. Raakatuotteena saatu reaktioseos kromatografoitiin ensin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2 x 15 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 5 %) 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa eluent-5 tina. Ensimmäiset fraktiot yhdistettiin ja suoritettiin suolanpoisto samalla pylväällä käyttäen puskurin sijasta vettä eluenttina, jolloin saatiin 0,081 g (33 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena lyofi-lisoinnin jälkeen: 10 Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-w puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii- pymäaika 6,11 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) \max: 302 (9036); 15 IR (KBr) v Bax: 1750 (β-laktaamin C=0), 1725 (kar- bamaatin C=0) ja 1595 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3 - 2,0 (m, 6H, butyylin CH2-1, -2 ja -3), 2,84 (s, 6H, NCH3), 2,8 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,10 (t päällekkäin 20 SCH2:n kanssa, J = 7,9 Hz, 2H, CH2N), 3,36 (dd, JH6 H5 = 2,30 Hz, 1H, H-6), 3,37 (m, päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 4H, H-5, CH3CH0 ja CH,OCONH, päällekkäin) .
Esimerkki 105 (El keksinnön mukainen) 25 (4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydodimetyylihydratsoni)- 3-[ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1' R) -11 -hydroksietyy-li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksyy1ihappo 30 2H CH?CH=NN(CH-,)3 Α-Λ 3 [ a>-S<CH2) cn 35 co2h 362 • 9(5311 A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydo)-6-[(1’R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-syaani-etyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti 5 I '
OS i + (CHp)pOH 2Sl + CHgCHO
XJ „ X.J, H3c ''[—f\_S(CH,),CN —» h3c ΓΤ /)—S<CH2)2CN 10 COgs^^ COgX^X^
Kylmään (hiilihappojää-asetonihaude) liuokseen, ^ jonka muodosti oksalyylikloridi (150 μΐ, 1,65 mmol) CH2-Cl2:ssa (5 ml), lisättiin tipoittain liuosta, jonka muodos-15 ti DMSO (250 μΐ, 3,19 mmol) CH2Cl2:ssa (1 ml). Seosta sekoitettiin 5 minuuttia ja sen jälkeen lisättiin tipoittain liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)-tio]-4-(2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-20 hept-2-eeni-2-karboksylaatti (420 mg, 0,875 mmol) CH2-Cl2:ssa (4 ml). Seosta sekoitettiin 15 - 20 minuuttia, ja lisättiin trietyyliamiinia (1,5 ml, 10,8 mmol). Liuosta sekoitettiin vielä 10 minuuttia, ja sen jälkeen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan (*10 min). Se laimennettiin 25 vedellä (25 ml) ja CH2Cl2:lla (40 ml), ja vesipitoista kerrosta uutettiin CH2Cl2:lla (4 x 20 ml). Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, pestiin jääkylmällä 5-prosenttisella HC1:n vesiliuoksella (2 x 20 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 20 ml), jääkylmällä 5-prosenttisella NaHC03:lla (2 x 30 20 ml), jääkylmällä vedellä (2 x 20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (402 mg, 96 %) öljynä; IR (puhdas) i>max: 2250 (C=N), 1775, 1720 ja 1710 cm'1 (C=0); ΐ m t im i mu * 96311 363 *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 9,849 (1H, s, CHO), 6.01 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,80 - 4,60 (2H, m, allyylin -CH2), 4,371 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,8 Hz, H-5), 4,28 - 4,18 (1H, 6 vii- 5 vaa, H-l’), 3,763 (1H, dt, J = 3,5 Hz, J = 10,2 Hz, H-4), 3.2 - 2,77 (5H, m, H-6, SCH2 ja CH,CHO), 2,70 - 2,63 (2H, m, CH2CN), 1,161 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 0,883 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,068 ppm (6H, s, dimetyyli).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydidimetyyli-10 hydratsoni)-6-[(l'R)-l1-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-etyyli] -3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo-w [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
I I
2s,1+ CHpCHO 2s.1+ CH?CH = NN<CHt>p “ , XrJ-,_ . Α-Λ_ 3 Li /)—s<ch2)2cn — ^ ry N—scm^cn 20 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S)-4-( 2"-asetaldehydo)-6 - [ (1' R)-l' -tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (402 mg, 0,840 mmol) vedettömässä etanolissa (8 ml), käsiteltiin 25 dimetyylihydratsiinilla (150 μΐ, 1,97 mmol). Seoksen an nettiin reagoida 5 °C:ssa (kylmä huone) 24 tuntia, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin, jolloin jäi jäljelle otsikon yhdiste (463 mg, 100 %) öljynä; IR (puhdas) vmax: 2250 (CsN), 1775, 1710 (C=0) ja 30 1550 cm'1 (CeN); aH NMR (CDCI3, 200 MHz) 6: 6,474 (1H, leveä t, J = 4.2 Hz, CH=N), 6,04 - 5,85 (1H, m, vinyylin H), 5,48 -5,21 (2H, m, vinyylin H), 4,85 - 4,70 (2H, m, allyylin H), 4,298 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,4 Hz, H-5), 4,28 - 4,22 35 (1H, m, H-l’), 3,64 - 3,55 (1H, m, H-4), 3,319 (1H, dd, 96311 364 J = 2,7 Hz, J = 3,9 Hz, H-6), 3,25 - 2,92 (2H, m, SCH2), 2,754 (6H, s, N(CH3)2), 2,73 - 2,60 (3H, m, CH2CN ja HCH-4), 2,55 - 2,3 (1H, m, HCH-4), 1,148 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 0,0878 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,066, 0,060 ppm (6H, 5 2s, dimetyyli).
C. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydidimetyyli-hydratsoni)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1’-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti
10 I
OS i + CH2CH = NN(CH3)2 jH CH2CH = NN(CH3)2
H3lT 'V-f^_s<CH , CN — H3C
/-N"T
is \:°2\/<\ co2n^
Kylmään liuokseen (jää-MeOH-haude), jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S)-4-(2" -asetaldehydidimetyylihydratsoni) - 6- [ (1' R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-20 syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni- 2-karboksylaatti (460 mg, 0,883 mmol) tetrahydrofuraanissa (15 ml), lisättiin etikkahappoa (700 μΐ, 12,2 mmol) ja ti-poittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa (6,0 ml, 6,0 mmol). Seosta sekoitettiin 25 30 minuuttia ja sen jälkeen annettiin reagoida 5 *C:ssa (kylmä huone) 430 tuntia. Se laimennettiin jääkylmällä etyyliasetaatilla (100 ml), pestiin jääkylmällä 5-prosent-tisella NaHC03:n vesiliuoksella (4 x 20 ml), vedellä (2 x 20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). 30 Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (335 mg, 93 %) raakatuoteöljynä; IR (puhdas) vBax: 3600 - 3200 (OH), 2250 (ChN), 1775, 1710 (C=0) ja 1550 cm·1 (C=N); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,602 (1H, leveä t, J = 35 4,8 Hz, CH-N), 6,05 - 5,90 (1H, m, vinyylin H), 5,51 - - 96311 365 5,24 (1H, m, vinyylin H), 4,90 - 4,64 (2H, m, allyylin CH2), 4,311 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J * 9,8 Hz, H-5), 4,20 -4,00 (1H, m, H-l'), 3,73 - 3,60 (1H, m, H-4), 3,307 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 8,0 Hz, H-6), 3,18 - 2,90 (2H, m, 5 SCH2), 2,773 (6H, s, N(CH3)2), 2,87 - 2,63 (3H, m, CH2CN ja HCH-4), 2,56 - 2,40 (1H, m, HCH-4), 1,59 (1H, leveä s, OH) ja 1,310 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
D. (4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydidimetyylihydratso-ni) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1 Ή) -1' -hydroksietyyli] -10 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH CH2CH=NN(CH3)2 OH CH2CH=NN(CH,)? . Λ-Λ
C02\^ COgH
Kylmään liuokseen (jäähaude), jonka muodosti allyy-li-(4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydidimetyylihydratsoni)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[ (1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-20 l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (335 mg, 0,820 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a (35 mg) ja tipoittain 0,5 M natriumetyyli-2-heksanoaatin liuosta (1,72 ml, 0,860 mmol) etyyliasetaatissa. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin 1/1-suhtei-w 25 sella etyyliasetaatin ja dietyylieetterin liuoksella ja uutettiin 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (1 x 30 ml, 2 x 10 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä ja vietiin kaksi kertaa p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvääseen (40 g, 30 0,02 M fosfaattipuskurin vesiliuos -» 5 % CH3CN/puskuri ja 40 g, H20 -» 5 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (100 mg, 33 %) lyofilisoituna jauheena;
Puhtaus: 97,9 % (302 nm, HPLC); UV (H20) Α1βχ: 240 (£ 7440), 302 (fc. 8150); 96311 366 IR (Nujol) vB„: 3600 - 3100 (OH), 2250 (C=N), 1750 ja 1590 (OO) ja 1560 cm'1 (C=N); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,425 (1H, dt, J = 5,4 Hz, CH=N), 4,288 (1H, dd, J = 2,62 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 5 4,30 - 4,17 (1H, m, H-l’), 3,79 - 3,67 (1H, H-4), 3,518 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 5,8 Hz, H-6), 3,30 - 3,13, 3,05 - 2.90 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,90 - 2,80 (2H, m, CH2CN), 2.90 - 2,50 (2H, m, CH2-4), 2,691 [6H, s, N(CH3)2] ja 1,274 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
10 Esimerkki 106 (Ei keksinnön mukainen)
Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydo)-3-[(2-syaa-nietyyli) tio] -6- [ (1' R) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-1-atsabisyklo [3.2.0 ]hept-2-eeni-2-karboksylaatti-happo
15 °H CHjCHO
3 ' FO>—S(CH2)2CN 20 ° COeNa A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydo)-3-[(2-syaanietyyli)tio]—6—[(l’R)—1*-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
25 I
OS i + CH2CH0 2h ch2cho
r^__S(CH2)2CN -- ^^-5(ch2)2CN
30 ° C02n^ co2N^
Kylmään liuokseen (jää-MeOH-haude), jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-4-( 2" -asetaldehydo )-6-[(1'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)-35 tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy- 96311 367 laatti (200 mg, 0,418 mmol) tetrahydrofuraanissa (8 ml), lisättiin jääetikkaa (350 ml, 6,1 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa (3,0 ml, 3,0 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia ja 5 sen jälkeen annettiin reagoida 5 eC:ssa (kylmä huone) 500 tuntia. Se laimennettiin jääkylmällä etyyliasetaatilla (50 ml) ja jääkylmällä kylläisellä NaHC03:n vesiliuoksella (4 x 20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin jäi jäljelle öljy, joka 10 vietiin preparatiiviselle silikageelilevylle (EtOAc, Rf = 0,5), ja saatiin otsikon yhdiste (40 mg, 26 %) öljynä; _ IR (puhdas) vMX: 3600 - 330 (OH), 2250 (CN), 1775 ja 1720 cm-1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 9,869 (1H, s, CHO), 15 6,04 - 5,87 ja 5,49 - 5,25 (3H, m, vinyylin H), 4,89 - 4,65 (2H, m, CH2-vinyyli), 3,416 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,9 Hz, H-5), 4,24 - 4,13 (1H, 5 viivaa, H-l'), 3,84 - 3,71 (1H, 6 viivaa, H-4), 3,19 - 2,81 (3H, m, H-6, CH2S ja CH20), 2,75 - 2,63 (2H, m, CH2-CN), 1,57 (1H, leveä s, OH) 20 ja 1,298 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
B. Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-asetaldehydo)-3-[(2- syaanietyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaattihappo
25 2H CH*CH0 °H CHgCHO
HiC "Ρό-S<CH«>«CN — H3C vX-SCCH.i.CN
0 rn v CT \ C02Na 30 Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S )-4-( 2"-asetaldehydo )-6 - [ (1' R) -1 ’ -hydroksietyyli] -3- [ ( 2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (40 mg, 0,11 mmol) dikloori-metaanissa (2 ml), käsiteltiin Pd(PPh3)4:11a (10 mg) ja N-35 metyylianiliinilla (20 μΐ, ylimäärä). Seosta sekoitettiin 368 96311 30 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin dietyylieetterillä (20 ml) ja uutettiin 0,05 M pH-arvon 7,4 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (4 x 5 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä ja vie-5 tiin käänteisfaasi-p-Bondapak-Cie-pylvään läpi (9 g, H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (10 mg, 26 %) lyofilisoi-tuna jauheena; IR (Nujol) 3600 - 3100 (OH), 2250 (CN), 1755, 1720 ja 1600 (OO); 10 *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 9,789 (0,5H, s, CH0), 5,244, 5,226, 5,208, 5,189 (0,5H, 4 viivaa, CH(0H)2), 4,409 (0,5H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,7 Hz, H-5), 4,36 - 4,20 (1H, m, H-l' ), 3,92 - 3,84 (0,5 H, 6 viivaa, J = 3,7 Hz, 10,2 Hz, H-4), 3,556 (0,5 H, dd, J = 2,6 Hz, J = 5,8 Hz, 15 H-6), 3,56 - 3,46 (0,5H, m, H-4), 3,27 - 2,80 (5,5 H, m, 0,5 H-6, SCH2, CH2CN ja CH,CH0:n 1H), 2,15 - 1,90 (1H, m, CH2CH(0H)2), 1,336 (1,5H, d, J = 6,4 Hz, CH3) ja 1,248 ppm (1,5 H, d, J = 6,5 Hz, CH3).
Esimerkki 107 (Ei keksinnön mukainen) 20 Natrium-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6- [ (1 ’R) -11 -hydroksietyyli] -4-(natriumoksokarbonyyli-metyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 25 OH CHjCOjNa
HjC *^cd>-S(CH^CN
30 ° COjNa ia Utit I MI I S 4 st .
96311 369 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(allyylioksikarbonyylime-tyyli) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6-[ (1 * R) -1' - tert-butyylidi-metyylisxlyylioksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.OJhept-2-eeni-2-karboksylaatti
5 I
OS i + CHgCHO C H g C 0 gH
h,c^ji5-s<ch')'cn —'HsC ;o^-s(ch=,scn 10 0 C0g\^ C02\^s 15 2^i+ :hsco2-^.
h3c "*"r—T^ws<ch2)2cn C02\^ 20
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-4-(2”-asetaldehydo)-6- [ (1' R)-l' -tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (300 mg, “ 25 0,627 mmol) dimetyyliformamidissa (10 ml), käsiteltiin pyridiniumdikromaatilla (2,0 g, 5,7 mmol) ja sekoitettiin 24 tuntia 5 eC:ssa (kylmä huone). Seos laimennettiin vedellä (100 ml), ja vesipitoista fraktiota uutettiin etyyliasetaatilla (5 x 20 ml). Etyyliasetaattiuutteet yhdis- 30 tettiin, pestiin vedellä (2 x 50 ml), 1-prosenttisella jääkylmällä HCl:lla (50 ml), vedellä (3 x 50 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin jäljelle jäi jäännös (200 mg), joka liuotettiin 1:1-suhteiseen dikloorimetaanin ja DMF:n seokseen (10 ml).
35 Liuosta käsiteltiin peräkkäin allyylialkoholilla (1 ml), 96311 370 1-hydroksibentsotriatsolilla (135 mg, 1,00 mmol) ja 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidillä (206 mg, 1,00 mmol) ja sekoitettiin 72 tuntia noin 22 eC:ssa. Etyyliasetaattiuut-teet yhdistettiin, pestiin vedellä (3 x 20 ml), jääkylmäl-5 lä 1 N HCl:n vesiliuoksella (20 ml), vedellä (2 x 20 ml), 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (20 ml), vedellä (3 x 20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös vietiin kahdelle preparatii-viselle silikageelilevylle (2 mm, EtOAc, Rf = 0,9), jolloin 10 saatiin otsikon yhdiste (100 mg, 29,8 %) öljynä; IR (puhdas) vna1: 2250 (CsN), 1780, 1735 ja 1710 cm-1 (C=0); __ *H NMR (CDClj, 200 MHz) 6; 6,03 - 5,81, 5,48 - 5,22 (6H, m, vinyylin H), 4,82 - 4,58 (4H, 2 m-kohtaa, CH2-vi- 15 nyyli), 3,370 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 4,30 - 4,19 (1H, 6 viivaa, H-l'), 3,7 (1H, ABX:n X-osa, J = 3,4 Hz, H-4), 3,24 - 3,11, 3,04 - 2,90 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 3,128 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 4,2 Hz, H-6), 2,877, 2,860, 2,792, 2,774 (1H, ABX;n AB-osa, J = 3,4 Hz, 20 J = 17,1 Hz), 2,601, 2,545, 2,516, 2,460 (1H, ABX;n AB-osa, J = 17,1 Hz, J = 11,3 Hz, CH2-4), 2,72 - 2,63 (2H, m, CH2CN), 1,147 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,879 (9H, s, tert- butyyli), 0,068 ja 0,063 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(allyylioksikarbonyylime-25 tyyli)-3-[ (2-syaanietyyli) tio]-6-[ (1'R)-11-hydroksietyy- ~ li]-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1i-happo 0Si+ CHjCOj-s^ OH CHjCOjs^.
u I—u
H3C I \—S C CHp ) sCN -- h3l ΓΤ />—S < CH. ) pCN
C02n^ - 96311 371
Kylmään (jää-metanolihaude) liuokseen, jonka muo-dostiallyyli-(4R,5S,6S)-4-(allyylioksikarbonyylimetyyli)- 3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyyli-si lyylioksietyyli ] -7-okso-1 -atsabisyklo [3.2.0] hept- 2 -eeni -5 2-karboksylaatti (100 mg, 0,187 mmol) THFrssa (3 ml), lisättiin jääetikkaa (120 μΐ, 2,09 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta THF:ssa (1,3 ml, 1,3 mmol). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia, ja sen jälkeen sen annettiin reagoida 5 °C:ssa (kylmä huone) 430 10 tuntia. Seos laimennettiin jääkylmällä etyyliasetaatilla (40 ml), pestiin jääkylmällä kylläisellä NaHC03:n vesi-liuoksella (4 x 20 ml), vedellä (2 x 20 ml), suolaliuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin jäljelle jäi jäännös, joka vietiin preparatiivi-15 selle silikageelilevylle (2 mm, EtOAc, Rf = 0,75), jolloin saatiin otsikon yhdiste (23 mg, 29 %) öljynä, joka muuttui kiinteäksi, kun sen annettiin seistä; IR (puhdas) νΜχ: 3600 - 3300 (OH), 2250 (C=N), 1775, 1730 ja 1710 cm'1 (C=0); 20 XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,83, 5,50 - 5,24 (6H, 2 m-kohtaa, vinyylin H), 4,89 - 4,61 (4H, 2 m-kohtaa, CH2-vinyyli), 4,395 (1H, dd, J = 3,0 Hz, J = 9,8 Hz, H-5), 4,30 - 4,10 (1H, m, H-l’), 3,803 - 3,678 (1H, ABX:n X-osa, J = 3,4 Hz, H-4), 3,173 (1H, dd, J = 3,1 Hz, J = 6,9 Hz, w 25 H-6), 3,20 - 3,133, 3,09 - 2,9 (2,5 H, 2 m-kohtaa, SCH2 ja peittynyt ABqtn d), 2,884, 2,867 (1 osa AB:a, J = 3,4 Hz, CH2-4), 2,688 (2H, t, J = 7,2 Hz, CH2CN), 2,649, 2,589, 2,562, 2,503 (1H, ABX:n AB-osa, J = 11,9 Hz, J - 17,5 Hz, CH2-4), 1,974 (1H, d, J = 4,6 Hz, OH) ja 1,300 ppm (3H, d, 30 J = 6,3 Hz, CH3). 1 96311 372 C. Natrium-(4R,5S,65)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6- [(l'R)-l' -hydroksietyyli] -4- (natriumoksokarbonyylimetyy-li) -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaat-ti 5 OSi+ CH2C02n^ °H CH2C02Na
H3C^Xf——S(CH2)2CN -- H3C
0 C02n^ C02Na 10
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyy-li(4R,5S,6S)-4-(allyylioksikarbonyylimetyyli)-3-[(2-syaa-nietyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (23 mg, 15 0,055 mmol) CH2Cl2:ssa (3 ml), käsiteltiin peräkkäin
Pd(PPh3)4:lla (11 mg) ja N-metyylianiliinilla (30 μΐ, 0,22 mmol). Seosta sekoitettiin 20 minuuttia, sen jälkeen laimennettiin dietyylieetterillä (10 ml) ja uutettiin 0,1 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuok-20 sella (5 x 2 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä ja vietiin käänteisfaasi-p-Bonda-pak-C18-pylvään läpi (5 g, H20 -* 1 % CH3CN), jolloin saatiin otsikon yhdiste (10 mg, 50 %) lyofilisoituna jauheena; IR (Nujol) Vnax: 3600 - 3200 (OH), 2250 (CsN), 1755 25 ja 1600 cm"1 (C=0); — XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,328 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 4,297 - 4,22 (1H, m, H-l'), 3,778 -3,653 (1H, ABX:n X-osa, J = 3,7 Hz, H-4), 3,419 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 4,2 Hz, H-6), 3,30 - 3,15, 3,01 - 2,90 30 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,90 - 2,81 (=2,5H, m, SCH2CN ja ABX:n B-osan 1 d), 2,760 - 2,742 (0,77H, d, J = 3,7 Hz, ABX: n B-osa, CH2C02), 2,346, 2,286, 2,262 ja 2,203 (1H, ABX;n A-osa, J = 11,8 Hz, J = 16,7 Hz, CH2C02) ja 1,241 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
373 96311
Esimerkki 108 (4R, 5S, 6S) -3-{(4S)-4-[(2S)-2-dimetyyliaminokarbo-nyyli]pyrrolidinyylitio}-6-[(1’R)-1'-hydroksietyy-li]-4-(2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo-5 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo jH ch,ch2oh CHs
JL J . CON
io ^ CH3 10 ^Ν“Η w co2h A. Allyyli-(4R,5R,6S)-3-difenyylifosforyylioksi-6-15 [(1’R)-11 -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4-(2”- tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli) -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
OTBDnS CHgCHgOTBDflS OTBDflS CHgCHgOTBDMS
20 I I 5* 1 / 0 H3c ^° 2 ^ -► H3C ^[~Q)—0 - P < 0 P h) g j/ cr \ ^ ° 'cOg//'N^i’ ^ 25 Liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(1'R)-l’-tert- butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4- [ (lR)-l-( 2-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksietyyli)-3-allyylioksikarbonyy-li-3-diatso-2-oksopropyyli]atsetidin-2-oni (6,93 g, 12,5 mmol) kuivassa bentseenissä (150 ml), käsiteltiin 30 rodium(II)oktanoaattidimeerillä (0,2 g) ja kuumennettiin palautusjäähdyttäen (haudelämpötila 90 - 95 °C) 1 tunti. Liuotin haihdutettiin alipaineessa ja jäännös liuotettiin asetonitriiliin (80 ml) ja jäähdytettiin 0-5 °C:seen. Sen jälkeen lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia 35 (2,40 ml, 13,78 mmol) ja difenyylikloorifosfaattia 374 - 963Π (2,85 ml, 13,75 mmol) samanaikaisesti 5 minuutin aikana.
Sitten lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml) ja pestiin peräk-5 käin kylmällä vedellä, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla puskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy, joka kromatogra-foitiin silikageelillä (5 x 12 cm). Eluoitiin tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella (95:5), jolloin saatiin 5,77 g 10 (61 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä: IR (NaCl, kalvo) vBax: 1788 (β-laktaamin C=0) ja 1730 cm*1 (esterin C=0); w XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: -0,01, 0,06 ja 0,07 (3 x s, 6H, 3H ja 3H, SiCH3), 0,83 ja 0,87 (2 x s, 2 x 9H, Si-15 tert-Bu), 1,27 (d, J - 6,14 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - 1,8 ja 1,9 - 2,1 (m, 2H, CH2-4), 3,25 (dd, JH6 H5 = 2,77 Hz, JH6 H1 = 6,92 Hz, 1H, H-6), 3,3 - 3,7 (m, 3H, H-4 ja CH,CH,0Si), 4,12 (dd, JH5,H6 = 2,77 Hz, JH5>H4 = 10,35 Hz, 1H, H-5), 4,20 (m, 1H, CH3CH0), 4,64 (leveä d, J = 5,1 Hz, 2H, allyylin 20 CH2), 5,1 - 5,4 ja 5,7 - 6,0 (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 7,1 - 7,4 ppm (m, 10H, aromaattiset).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyylioksi-karbonyyli- (2S) -2-dimetyyliaminokarbonyyli ] pyrrolidinyyli-tio)-6-[(1’R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-25 4-(2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OTBDMS CHpCHpOTBDMS OTBOHS CH,CH20TBDMS ru , JtAj™. -
^ ^ Y
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-dife-nyylifosforyylioksi-6-[ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisi-35 lyylioksietyyli] -4-( 2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksi- • 96311 375 etyyli )-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (1,24 g, 1,63 nunol) kuivassa asetonitriilissä (20 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin peräkkäin N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,57 ml, 5 3,27 mmol) ja (2S,4S)-l-N-allyylioksikarbonyyli-2-dimetyy- liaminokarbonyyli-4-merkaptopyrrolidiniinilla (0,84 g, 3,27 mmol) [valmistettu yleisillä menetelmillä, jotka on kuvattu EP-patenttihakemuksessa EP-126 587] asetonitrii-lissä (3 ml). Sen jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 0 -10 5 °C:ssa 16 tuntia. Sitten liuos laimennettiin etyyliase taatilla (200 ml), pestiin vedellä, 0,2 M fosfaattipuskurilla (pH 7,0), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (2,5 x 20 cm). Eluoitiin 15 tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella (1:1), jolloin saatiin 0,80 g (64 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) 1775 (B-laktaamin C=0), 1710 (esterin C=0) ja 1660 cm'1 (amidin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,03, 0,05 ja 0,09 (3 x 20 s, 3H, 3H ja 6H, SiCH3), 0,87 ja 0,89 (2 x s, 2 x 9H, Si-t-But), 1,26 (d, J = 6,25 Hz, 3H, CH3CH0), 1,6 - 2,1 (m, 3H, CH2-4 ja pyrrolidiinin H-3), 2,6 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,95, 1,97, 3,03 ja 3,08 (4s, yhteensä 6H, CON- (CH3)2), 3,05 (päällekkäin NCH3:n kanssa, 1H, H-6), 3,4 -— 25 3,6 ja 3,7 - 3,9 (2 x m, 3H, ja 2H, H-4, CH20Si ja pyrroli diinin H-5), 4,0 - 4,2 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,5 - 4,9 (m, 5H, allyylin CH2 ja pyrrolidiinin H-2), 5,1 - 5,5 ja 5,8 - 6,1 ppm (2 x m, 4H ja 2H, allyylin CH).
96311 376 C. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyylioksi-karbonyyli- (2S) -2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyyli-tio)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-4-(2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
5 OTBDHS CHjCHjOTBDnS 2H CHeCHt0H
1 1 C0N<CH3)? 1 f con<ch3>2
‘ Λο?^ T * λο8^ T
10 Liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3- ((4S)-4-[l-N-allyylioksikarbonyyli-(2S)-2-dimetyyliamino-karbonyyli]pyrrolidinyylitio)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidi- ^ metyylisilyylioksietyyli] -4- ( 2" -tert-butyylidimetyylisi-lyylioksietyyli )-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-15 2-karboksylaatti (0,70 g, 0,91 mmol) kuivassa tetrahydro-furaanissa (10 ml), lisättiin tipoittain 0 - 5 °C:ssa etikkahappoa (0,62 ml, 11,0 mmol) ja sen jälkeen 5,5 ml (5,5 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tet-rahydrofuraanissa. Sen jälkeen reaktioseosta pidettiin 20 10 eC:ssa 144 tuntia. Sitten liuos laimennettiin etyyli asetaatilla (200 ml), pestiin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (2,5 x 12 cm). Eluoitiin 25 ensin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 0,30 g (50 %) w allyyli- (4R, 5S, 6S )-3-( (4S )-4- [1-N-allyylioksikarbonyyli-( 2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyylitio)-6-[ (1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4- (2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-30 karboksylaattia, josta oli poistettu yksi suojaryhmä [katso esimerkki 109, menetelmä B, vaihe A].
Sitten eluoitiin etyyliasetaatin, asetonin ja ase-tonitriilin seoksella (6:2:2), jolloin saatiin 0,179 g (36 %) otsikon karbapeneemiä öljynä, jossa oli epäpuhtau- 96311 377 tena jonkin verran tetrabutyyliammoniumsuolaa. Tämä tuote käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa: IR (NaCl, kalvo) vBax: 3400 (OH), 1775 (3-laktaamin C=0), 1710 (esterin C=0) ja 1650 cm-1 (amidin C=0); 5 XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,33 (d, J = 6,33 Hz, 3H, CH3CH0), 1,6 - 2,0 (m, 3H, CH2-4 ja pyrrolidiinin H-3), 2,9 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,95, 2,97, 3,03 ja 3,09 (4 x s, yhteensä 6H, NCH3), 3,4 - 5,0 (leveä, 16H), 5,2 - 5,5 ja 6,8 - 6,1 ppm (4H ja 2H, allyylin CH).
10 D. (4R,5S,5S)-3-((4S)-4-[(2S)-2-dimetyyliaminokar- bonyyli]pyrrolidinyylitio)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-4-w (2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2- eeni-2-karboksyy1ihappo S" CHjCH.OH j" CH g 15 JL / ,C0< JL. J .«< AV Xco^ ^ v
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-20 4- [l-N-allyylioksikarbonyyli-( 2S)-2-dimetyyliaminokarbo- nyyli]pyrrolidinyylitio)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-4-(2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,33 g, 0,613 mmol) dikloorimetaa-nissa (10 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä X 25 suojakaasuna tetrakis( trifenyylifosfiini )palladiumilla [O] (0,030 g) ja N-metyylianiliinilla (0,26 ml, 2,45 mmol). 1 tunnin kuluttua muodostunut kiinteä aine otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 0,164 g (65 %) otsikon yhdistettä raakatuotejauheena. Tämä 30 kiinteä aine kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gra-dienttia (0 - 5 %) vedessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,122 g (44 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [a]” = 35 -58,5° (c 1,0, H20); 96311 378
Puhtaus HPLC:n mukaan: 94,7 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-HjO, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 5,9 minuuttia; 5 UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 7.„ax: 302 nm (8680); IR (KBr) VBax: 1750 (β-laktaamin CO), 1650, 1660 (amidin C=0) ja 1600 cm-1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,37 Hz, 3H, 10 CH3CH0), 1,7 - 2,2 (m, 3H, hydroksietyylin CH2-1 ja pyrro-lidiinin H-3), 3,0 (m päällekkäin NCH3:n kanssa, 1H, pyrro-lidiinin H-3), 3,0 ja 3,07 (2 x s, 2 x 3H, NCH3), 3,3 - 3,9 (m, 5H, H-4, CH2CH2OH ja pyrrolidiinin CH2-5), 3,48 (dd, JH6.H5 - 2,73 Hz, JH6H1 = 5,91 Hz, 1H, H-6), 3,95 (m, 1H, 15 pyrrolidiinin H-4), 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin) ja 4,83 ppm (t, J = 5,8 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-2).
Esimerkki 109 (4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-((4S)-4-[(2S)-2-20 dimetyyliaminokarbonyyli ] pyrrolidinyylitio) -6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 2H ch2ch2n3 _ 30 2 963 7 7 379
Menetelmä A
A. Allyyli-(4R,5R,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-dife-nyylifosforyylioksi-6- [ (1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisi-lyylioksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-5 2-karboksylaatti OTBDnS CH8CHgN3 OTBOMS CHgCHgNj f I a? J, / o 1H=c ‘Vf>-o-lp<oPh)e A0 ^ w Liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-4-[(lR)-l-(2-atsi- doe tyyli )-3-allyylioksikarbonyyli-3-diatso-2-oksopropyy-li] -3- [ (1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] at-15 setidin-2-oni (4,0 g, 8,6 mmol) kuivassa bentseenissä (125 ml), käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna rodium-(II)oktanoaattidimeerillä (0,075 g) ja sen jälkeen kuumennettiin palautusjäähdyttäen (haudelämpötila 90 °C) 30 minuuttia. Sitten liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja 20 välituotteena saatu bisyklinen ketoni liuotettiin kuivaan asetonitriiliin (60 ml) ja jäähdytettiin 0-5 °C:seen. Sen jälkeen liuosta käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (2,0 ml, 9,65 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia ml, 9,64 mmol) 5 minuutin aikana. 25 Sitten lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 45 minuuttia. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin kylmällä vedellä, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgSO*). 30 Liuotin haihdutettiin alipaineessa, minkä jälkeen jäännös [ kromatografoitiin silikageelillä (5 x 10 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gradientilla (0 - 5 %) tolueenissa, jolloin saatiin 3,84 g (66 %) otsikon yhdistettä öljynä: IR (NaCl, kalvo) ynax: 2100 (N3), 1788 (β-laktaamin 35 C=0) ja 1730 cm’1 (esterin C=0); 96311 380 XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,07 ja 0,08 (2s, 6H, SiCH3), 0,87 (S, 9H, Si-t-Bu), 1,28 (d, J = 6,18 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 3,18 (dd, JH6 H5 = 2,95 Hz, JH6H1 = 7,38 Hz, 1H, H-6), 3,1 - 3,5 (m, 3H, CH2OH 5 ja H-4), 4,12 (dd, JH5H6 = 2,95 Hz, JH5.H4 = 10,54 Hz, 1H, H-5), 4,19 (m, 1H, CH3CHO), 4,65 (m, 2H, allyylin CH2), 5.1 - 5,5 ja 5,8 - 6,0 (2m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 7.2 - 7,5 (m, 10H, aromaattiset).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyylioksi-10 karbonyyli- (2S) -2-dimetyyliaminokarbonyyli ] pyrrolidinyyli- tio}-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1’R)-1'-tert-butyylidimetyy-lisilyylioksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 15 OTBDUS CHgCHjN3 OTBDMS CHgCHgNj ,aJ s ηΛ<( /vc,n<ch·’· N Y0 ^ COg·^^ COg'^^ o 20 Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-at- sidoetyyli)-3-difenyylifosforyyliokso-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] - 7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (3,84 g, 5,74 mmol) kuivassa asetonitriilissä (40 ml), jäähdytettiin 0 -25 5 °C:seen ja käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna Ν,Ν- di-isopropyylietyyliamiinilla (2,0 ml, 11,6 mmol) ja sen jälkeen (2S,4S)-l-N-allyylioksikarbonyyli-2-dimetyyli-aminokarbonyyli-4-merkaptopyrrolidiinilla [valmistettu EP-126 587:n yleisten menetelmien mukaisesti] (3,0 g, 30 11,6 mmol) asetonitriilissä (7 ml). 17 tunnin jälkeen 0 - 5 °C:ssa reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin kylmällä vedellä, kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös, joka oli saatu haihduttamalla liuotin alipainees-35 sa, kromatografoitiin silikageelillä (5 x 10 cm) käyttäen il i »Mlk lii II lii Λ ΛΛ ; 381 5£ό I 1 tolueenin ja etyyliasetaatin seosta (1:1) eluenttina, jolloin saatiin 2,47 g (64 %) otsikon yhdistettä valkoisena vaahtona: IR (NaCl, kalvo) vBax: 2100 (N3), 1780 (β-laktaamin 5 C=0), 1710 (esterin C=0) ja 1660 cm*1 (amidin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,1 (s, 6H, SiCH3), 0,9 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,31 (d, J = 6,03 Hz, 3H, CH3CH0), 1,6 -2,1 (m, 3H, pyrrolidiinin H-3 ja CH2-4), 2,6 - 2,8 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,96, 2,98, 3,05 ja 3,11 (4s, yhteensä 10 6H, NCH3), 3,1 (päällekkäin NCH3:n kanssa, 1H, H-6), 3,3 - 3.8 (m, 5H, pyrrolidiinin CH2-5, CH2N3 ja H-4), 4,1 (m, 1H, w pyrrolidiinin H-4), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,5 - 4.9 (m, 5H, allyylin CH2 ja pyrrolidiinin H-2), 5,1 - 5,5 ja 5,8 - 6,1 ppm (2 x m, 4H ja 2H, allyylin CH).
15 Menetelmä B
A. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyylioksi-karbonyyli- (2S) -2-dimetyyliaminokarbonyyli ] pyrrolidinyyli-tio)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]- 4- (2"-hydroksietyyli) -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-20 eeni-2-karboksylaatti
OTBDfIS CHjCHjOTBOMS OTBDHS CH2CH20H
H H CAJ coN<ch3,2 ^ 25 Ϊ Xco2^ 8
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-((4S)- 4- [ 1-N-allyylioksikarbonyyli- ( 2S) -2-dimetyyliaminokarbonyyli] pyrrolidinyylitio)-6- [(1'R)-l'-tert-butyylidimetyy-' lisilyylioksietyyli] -4-( 2"-tert-butyylidimetyylisilyyliok- 30 sietyyli) -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok- sylaatti (2,64 g, 3,44 mmol) [valmistettu esimerkin 108 vaiheessa B] kuivassa tetrahydrofuraanissa (50 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna etik-kahapolla (1,2 ml, 21,0 mmol) ja sen jälkeen 10,3 ml:11a 35 (10,3 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tet- 96311 382 rahydrofuraanissa. 16 tunnin jälkeen 10 °C:ssa reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (400 ml), pestiin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, 5 jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelil-lä (4x8 cm). Eluoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 1,82 g (81 %) otsikon karbapeneemiä öljynä: IR (NaCl, kalvo) VBaJt: 3450 (OH), 1755 (B-laktaamin C=0), 1705 (esterin C=0) ja 1650 cm'1 (amidin C=0); 10 *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,89 (S, 9H, Si-t-Bu), 1,29 (d, J = 6,1 Hz, 3H, CH3CH0), 1,6 -2,1 (m, 3H, CH2CH2OH ja pyrrolidiinin H-3), 2,6 - 2,8 (m, ^ 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,96, 2,98, 3,05 ja 3,09 (4s, yhteensä 6H, CON(CH3)2), 3,17 (leveä dd, JH6 H5 = 2,5 Hz, 15 JH6 H1 = 6,1 Hz, 1H, H-6), 3,46 (*=t, 2H, pyrrolidiinin H-5 ja H-4 päällekkäin), 3,6 - 3,9 (m, 3H, CH2CH2OH ja pyrrolidiinin H-5), 4,1 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,15 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,5 - 4,9 (m, 5H, allyylin CH2 ja pyrrolidiinin H-2), 5,1 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 4H 20 ja 2H, allyylin CH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-[1-N-allyylioksikar-bonyyli-(2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyyli-tio)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyyli silyylioksietyyli]-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-25 eeni-2-karboksylaatti w ΛΟΤΒΟΠε CHjCHjOH OTSOnS CH2CH2N3 ! .C0N(CH3>2 1 / CON(CH3 >,
Yf\-+-c£ —¥ ΕΤ>Κί ^ γθΝ^ v0 30 ? 2
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)- • i 4- [ 1-N-allyylioksikarbonyyli- ( 2S ) -2-dimetyyliaminokarbonyyli] pyrrolidinyylitio)-6- [(1'R)-1'-tert-butyylidimetyy-lisilyylioksietyyli]-4-(2"-hydroksietyyli)-7-okso-l-at-35 sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,82 g, ii »tt=t at» i.(4 at . : 96311 383 2,79 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (200 ml) -20 °C:ssa ja jossa käytettiin typpeä suojakaasuna, käsiteltiin trifenyylifosfiinilla (1,17 g, 4,46 mmol) ja 6,5 ml:11a (4,81 mmol) 0,74 M hydratsoiinihapon liuoksella 5 tolueenissa. Sen jälkeen lisättiin tipoittain dietyyliat-sodikarboksylaattia (0,75 ml, 4,76 mmol), ja saatua seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Sitten reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivat-10 tiin (MgS04). Sen jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin tahna, jota trituroitiin 0-5 °C:ssa to-w lueenin (25 ml) kanssa ja suodatettiin kiteisen dietyyli- hydratsiinidikarboksylaatin poistamiseksi. Suodos väkevöi-tiin ja käsiteltiin samalla tavalla dietyylieetterillä 15 (25 ml) trifenyylifosfiinioksidin poistamiseksi. Sen jäl keen suodos kromatografoitiin silikageelillä (4 x 11 cm) käyttäen tolueenin ja etyyliasetaatin seosta (1:1) eluent-tina, jolloin saatiin 2,3 g otsikon yhdistettä öljynä, jossa oli epäpuhtautena trifenyylifosfiinioksidia. Tuot-20 teen infrapuna- ja 1H-NMR-spektrit ovat identtisiä menetelmässä A saadun tuotteen spektrien kanssa.
C. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[l-N-allyylioksi-karbonyyli- (2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyyli-tio)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-'"“T 25 okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti otbous pu fu k* f)u ch2ch2n3 c^ch3>^ H3Arr(_s^YcoN<cH^ Y7; γ0^ v0 ^
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)- 4- [ 1-N-allyylioksikarbonyyli- ( 2S )-2-dimetyyliaminokarbo-nyyli]pyrrolidinyylitio)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-7-okso-l-atsa-35 bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (2,47 g, 96311 384 3,65 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (50 ml), jäähdytettiin 0-5 eC:seen ja käsiteltiin käyttäen typpeä suo-jakaasuna etikkahapolla (1,25 ml, 21,8 mmol) ja sen jälkeen 11,0 ml:11a (11,0 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluo-5 ridin liuosta tetrahydrofuraanissa. Liuosta pidettiin 10 eC:ssa 7 vuorokautta. Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, 10 joka kromatografoitiin silikageelillä (4 x 11 cm). Eluoi-tiin etyyliasetaatin gradientilla tolueenissa (50 -♦ 100 %), jolloin saatiin 1,43 g (70 %) otsikon yhdistettä ^ valkoisena vaahtona: IR (NaCl, kalvo) vBax: 2105 (N3), 1780 (8-laktaamin 15 C=0), 1710 (esterin C=0) ja 1650 cm'1 (amidin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,39 (d, J = 6,17 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 - 2,2 (m, 3H, pyrrolidiinin H-3 ja CH2-4), 2,6 - 2,8 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,96, 2,98, 3,06 ja 3,10 (4 x s, yhteensä 6H, NCH3), 3,15 (päällekkäin NCH3:n 20 kanssa, 1H, H-6), 3,3 - 3,7 (m, 5H, pyrrolidiinin CH2-5, H-4 ja CH2N3), 4 - 4,2 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,5 - 4,9 (m, 5H, allyylin CH2 ja pyrrolidiinin H-2), 5,1 - 5,5 ja 5,7 - 6,1 ppm (2 x m, 4H ja 2H, allyylin CH).
25 D- (4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-((4S)-4-[(2S)- ~ 2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyylitio)-6-[(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 SH CH2CHEN3 °H CHgCH jNj «.ΛργΛ wVC0N1CK’’! «Arr^-s-^C0N,c",,ä
9 C0?H
• 96311 385
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)- 4- [ 1-N-allyylioksikarbonyyli- ( 2S) -2-dimetyyliaminokarbo-nyyli]pyrrolidinyylitio)-4-(2"-atsidoetyyli)—6—[(1*R)—lf— hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-5 karboksylaatti (1,18 g, 2,1 mmol) kuivassa dikloorimetaa-nissa (40 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis( trifenyylifosfiini )palladiumilla [0] (0,1 g) ja sen jälkeen 0,91 ml:11a (8,4 mmol) N-metyyli-aniliinia. 1 tunnin kuluttua orgaanista faasia uutettiin 10 kylmällä vedellä (3 x 40 ml), ja yhdistettyä vesipitoista uutetta pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesifaasi kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 15 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 15 %) vedessä 15 eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,50 g (54 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena jauheena: [a]12 -56,2° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 96 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, 15 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, 20 virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 7.6 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Amax: 302 nm (8420); IR (KBr) yaax: 2100 (N3), 1760 (β-laktaamin C=0), w 25 1655 (amidin C=0) ja 1600 cm'1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,36 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 - 2,3 (m, 3H, pyrrolidiinin H-3 ja CH2-4), 3,0 ja 3,07 (2xs, 2x 3H, NCH3), 3,1 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 3,3 - 3,7 (m, 5H, pyrrolidiinin H-5, H-4, H-6 ja 30 CH2N3), 3,77 (dd, Jgen = 12,15 Hz, JH5 H4 = 6,32 Hz, pyrroli diinin H-5), 4,0 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,27 (m, 1H, CH3CH0), 4,30 (dd päällekkäin CH3CH0:n kanssa, JH5 H6 = 2.7 Hz, H-5) ja 4,9 ppm (päällekkäin H0D:n kanssa, pyrrolidiinin H-2).
386 - 9 6 31 1
Esimerkki 110 (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyyli)-3-{(4S)-4-[(2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyylitio} - 6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo-5 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etikkahappo- suola OH CHgCHjNj OH CHjCKgNHj 'νψ-αΓ'"^· τψ-αΓ"·
COjH COjH
.CHjCOjH
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(2”-atsido-etyyli)-3-{(4S)-4-[(2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrro-15 lidinyylitio}-6-[(11 R)-l ’ -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- bisyklo[3.2.0]hept-2-karboksyylihappo (0,70 g, 1,60 mmol) kylmässä vedessä (140 ml), hydrattiin 0-5 eC:ssa käyttäen 1,9 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunti. Sen jälkeen 20 lisättiin 0,18 ml (3,2 mmol) etikkahappoa (pH muuttui 8,l:stä 4,2reen), ja katalyytti suodatettiin celite-ker-roksella. Suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikagee-lipylväällä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 13 cm) käyttäen vettä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, lyofili-; 25 soitiin ja kromatografoitiin toisen kerran samalla pyi- ^ väällä. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,35 g (47 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena jauheena: [a]” -47,8° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLCrn mukaan: 98,8 % p-Bondapak-C18:11a, 30 3,4 mm x 30 cm, 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 11,3 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) % max: 300 nm, (8130); 387 -96311 IR (KBr) vBax: 1760 (β-laktaamin C=0), 1660 (amidin C=0) ja 1600 cm-1 (leveä, karboksylaatin C=0).
*H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,35 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,8 - 2,4 (m, 3H, pyrrolidiinin H-3 ja CH2-4), 5 1,94 (s, CH,C0,H), 3,02 ja 3,09 (2s, 2 x 3H, CON(CH3)2), 2,9 - 3,2 (m päällekkäin NCH3:n kanssa, 3H, pyrrolidiinin H-3 ja CH2NH2), 3,25 - 3,5 (m, 2H, pyrrolidiinin H-5 ja H-4), 3,51 (dd, JH6H5 = 2,89 Hz, JH6>H1 = 6,44 Hz, 1H, H-6), 3,6 - 3,75 (m, 1H, pyrrolidiinin H-5), 3,98 (m, 1H, pyrro-10 lidiinin H-4), 4,3 (m, 1H, CH3CH0), 4,34 (dd päällekkäin CH3CH0:n kanssa, JH5 H6 = 2,89 Hz, JH5 H4 = 9,70 Hz, 1H, H-5) w ja 4,74 ppm (t, J = 8,6 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-2).
Esimerkki 111 (4R, 5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-{(4S)-4-[(2S)-15 2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyylitio}-6- [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo |H (CH2)3N3 co2h ^ 25 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyylioksi-karbonyyli)-(2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyy-litio)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30 OH <CH2)3N3 OH <CH2)3N3 J / 1 J CON < CH3) j -ίο- - 96311 388
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-( 3" -atsidopropyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3,7-di-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (8,23 mmol, valmistettu saattamalla 3,0 g, 8,23 mmol diat-5 soprekursoria rengasmuotoon) kuivassa asetonitriilissä (60 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suo-jakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (1,9 ml, 9,18 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamii-nia (1,6 ml, 9,18 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen 10 lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja liuosta sekoitettiin 1 tunti. Sitten lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,0 ml, 11,5 mmol) ja sen jälkeen(2S,4S-l-N-allyylioksikarbonyyli-2-dimetyyliamino-karbonyyli-4-merkaptopyrrolidiinin (3,0 g, 11,65 mmol) 15 liuosta asetonitriilissä (7 ml), ja saatua seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 18 tuntia. Reaktio pysäytettiin lisäämällä etyyliasetaattia (500 ml), ja pestiin kylmällä vedellä, kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipai-20 neessa, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin sili-kageelillä (6,5 x 12 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gra-dientilla tolueenissa (1:1 -> EtOAc), jolloin saatiin 1,59 g (33 %) otsikon yhdistettä valkoisena vaahtona: IR (NaCl, kalvo) Vmax: 2100 (N3), 1775 (β-laktaamin .. 25 C=0), 1705 (esterin C=0) ja 1650 cm'1 (amidin C=0); ΧΗ NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,37 ja 1,39 (2d, J = 6,1 Hz ja J = 6,18 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - 2,0 (m, 5H, pyr-rolidiinin H-3), propyylin CH2-1 ja -2), 2,6 - 2,8 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,96, 2,97, 3,05 ja 3,1 (4S, yhteensä 30 6H, CON(CH3)2), 3,1 - 3,7 (m, 6H, pyrrolidiinin CH2-5, CH2- N3, H-4 ja H-6), 4,0 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,5 - 4,9 (m, 5H, pyrrolidiinin H-2 ja allyylin CH2), 5,1 - 5,5 ja 5,8 - 6,1 ppm (2m, 4H ja 2H, allyylin CH).
• 96311 389 B. (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-((4S)-4-[(2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyylitio}-6- [(1?R)-1' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 5 OH <CHj)jN3 2H <CHg>3N3
9 COgH
10
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-((4S)- 4-[1-N-allyylioksikarbonyyli)-(2S)-2-dimetyyliaminokarbo-nyyli]pyrrolidinyylitio)-4-(3"-atsidopropyyli )-6-[(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-15 2-karboksylaatti (1,59 g, 2,76 mmol) kuivassa dikloorime-taanissa (50 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis( trifenyylifosfiini )palladiumilla [0] (0,12 g) ja sen jälkeen 1,2 ml:11a (11,1 mmol) N-metyyli-aniliinia. 3 tunnin kuluttua reaktioseosta uutettiin ve-20 dellä (3 x 50 ml), ja yhdistettyä vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Vesif aasi kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 3,5 x 15 cm) käyttäen asetonitriilin gra-dienttia (0 - 15 %) vedessä, jolloin saatiin 0,60 g (48 %) ^ 25 otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena jauheena pa- kastuskuivauksen jälkeen: [a]£2 -47,7° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-Cie:11a, 3,9 mm/30 cm, 15 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 30 9,0 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Xoax: 302 nm (9737); IR (KBr) Vnax: 2100 (N3), 1755 (β-laktaamin C=0), 1655 (amidin C=0) ja 1600 cm*1 (karboksylaatin C=0); - 96311 390 *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,39 Hz, 3H, CHjCHO), 1,4 - 2,0 (m, 5H, propyylin CH2-1 ja -2 ja pyrro-lidiinin H-3), 2,99 ja 3,07 (2s, 2 x 3H, C0N(CH3)2), 2,9 -3,1 (päällekkäin CON(CH3)2:n kanssa, 1H, pyrrolidiinin 5 H-3), 3,2 - 3,5 (m, 5H, pyrrolidiinin H-5, H-4, H-6 ja CH2N3), 3,63 (dd, Jgen = 12,25 Hz, JH5>H4 = 6,16 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-5), 3,93 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO) ja 4,65 ppm (t, J = 8,5 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-2).
10 Esimerkki 112 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-((4S)-4-[(2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli ] pyrrolidinyylitio )-6-[(1'R)-1?-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon kaksiemäksi-15 nen fosfaattisuola + OH <CHj)3N3 OH (CHjJjNHj JL J .C0N<CH3>. JL J C0N<CH3)2
20 C0,H tOjH
.0.5 HP04'z
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopro-pyyli )-3-( (4S)-4-[(2S ) -2-dimetyyliaminokarbonyyli] pyrrolidinyylitio )-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa-25 bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,51 g, ^ 1,13 mmol) kylmässä vedessä (100 ml), hydrattiin käyttäen 0,5 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa ja 0 - 5 °C:ssa 1 tunti. Sen jälkeen lisättiin 50 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa 30 fosfaattipuskuria, ja katalyytti suodatettiin celite-ker- roksella. Suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikagee-lillä (p-Bondapak-C16, 3,5 x 14 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 10 %) 0,02 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot yhdis-35 tettiin ja suoritettiin suolanpoisto samanlaisella pyi- ’B ' IK I Hill I I 1 *1 . .
391 963Π väällä (2,5 χ 14 cm) käyttäen eluenttina puskurin sijasta vettä. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,25 g (45 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena jauheena: [a]“ -67,6° (c 1,0, H20); 5 Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 5,86 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ληβχ: 302 nm 10 (10400); IR (KBr) Vmax: 1760 (β-laktaamin C=0), 1645 (amidin w C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,33 Hz, 3H, CHjCHO), 1,4 - 2,0 (m, 5H, pyrrolidiinin H-3 ja propyylin 15 CH2-1 ja -2), 2,73 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,97 ja 3,07 (2s, 2 χ 3H, CON(CH3)2), 3-3,2 (päällekkäin NCH3, 4H, pyrrolidiinin CH2-5 ja CH2NH2), 3,34 (leveä t, 1H, H-4), 3,38 (dd, Jh6.h5 = 2,59 Hz, JH6H1 = 6,27 Hz, 1H, H-6), 3,73 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,10 (dd luhistunut yhteen at:n 20 kanssa, J = 8,0 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-2) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, CH3CH0 ja H-5 päällekkäin).
Esimerkki 113 (4R, 5S,6S)-3-((4S)-4-[(2S)-2-dimetyyliaminokarbo-nyyli]pyrrolidinyylitio)-4-(3"-guanidinopropyyli)-^ 25 6-[ (1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihapon kaksiemäksi-nen fosfaattisuola NH? 2H <che)3nh3* OH (CH?)3NH-C-NHe
C0JH COjH
.0.5 HP04‘e .0,5 HP04‘j • 96311 392 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-{(4S)-4-[(2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrrolidinyylitio}-6-[ (1?R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon kaksiemäksisen fosfaattisuolan (0,14 g,
5 0,33 mmol) 0-5 °C:ssa olevan vesiliuoksen (15 ml) pH
säädettiin välille 8 - 8,5 IN natriumhydroksidilla, ja sen jälkeen käsiteltiin aminoiminometaanisulfonihapolla (0,22 g, 1,77 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 minuutin aikana. Reaktioseoksen pH pidettiin välillä 8 -10 8,5 lisäyksen aikana ja vielä 2 tunnin ajan. Sen jälkeen lisättiin 15 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja saatu liuos kromatografoitiin käänteisfaasisili-kageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm). Eluoitiin aseto-nitriilin gradientilla (0 - 15 %) vedessä, jolloin saatiin 15 0,068 g (45 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen:
Puhtaus HPLCrn mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:lla, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 8 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, vii-20 pymäaika 7,2 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) XBax: 302 nm (10800); IR (KBr) v___: 1755 (β-laktaamin C=0), 1640 (amidin C=0) ja 1590 cm"1 (olkapää, karboksylaatin C=0); 25 *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,38 Hz, 3H, — CH3CHO), 1,4 - 2,0 (m, 5H, pyrrolidiinin H-3 ja propyylin CH2-1 ja -2), 2,75 (m, 1H, pyrrolidiinin H-3), 2,97 ja 3,08 (2s, 2 x 3H, NCH3), 3,1 - 3,4 (m, 5H, pyrrolidiinin CH2-5, propyylin CH2N-3 ja H-4), 3,33 (dd, JH6 H5 = 2,55 Hz, 30 jh6.hi = 6,21 Hz, 1H, H-6), 3,75 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,16 (AMX-systeemin X-osa, JM =8,8 Hz, Jffl = 7,4 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-2), 4,25 (dd päällekkäin CH3CH0:n kanssa, jh5,h6 = 2'55 Hz, 1H, H-5) Ja 4'27 PPm 1H, CH3CH0).
96311 393
Esimerkki 114 (4R, 5S,6S)-4-(2”-atsidoetyyli)-3- [ (2-aminoetyyli) -tio] -6- [(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo 5 2H CH?CHpNq
..IJ
3 .Li // SCH2CHiNH2 10 <F \
C02H
A. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-allyylioksikarbonyyli-aminoetyyli)tio]-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1f R)-1'-tert-bu-15 tyylidimetyylisilyylioksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 0 T B o n s ch,ch,n, otbdhs ch2ch,n, .Λ-Λ. „A-r-( ' 3 I y=0 -* -► -► 3 1 /)-SCH2CH2NHC0pCH2CH = CH.
20 /-'L
\o2^ 6 \o^
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-^ 25 lioksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2- karboksylaatti (10,0 mmol, valmistettu saattamalla 4,64 g, 10,0 mmol diatsoprekursoria rengasmuotoon) kuivassa aseto-nitriilissä (75 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloorifosfaatilla (2,3 ml, 30 11,1 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyy- lietyyliamiinia (1,9 ml, 10,9 mmol) 5 minuutin aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja saatua seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 30 minuuttia. Sitten liuosta käsiteltiin vielä N,N-di-isopropyylietyyli-35 amiinilla (6,0 ml, 34,5 mmol) ja sen jälkeen allyyli-2- 96311 394 merkaptoetyylikarbamaatilla [katso esimerkki 116, vaihe A] (5,1 g, 33,4 nunol) asetonitriilissä (5 ml), ja saatua seosta sekoitettiin 0-5 eC:ssa 20 tuntia. Sen jälkeen liuos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin 5 vedellä, kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin jäännös, joka kromatografoitiin sili-kageelillä (5 x 10 cm) käyttäen etyyliasetaatin gradient-tia (0 - 10 %) tolueenissa eluenttina. Oleelliset fraktiot 10 haihdutettiin, jolloin saatiin 4,37 g (75 %) otsikon yhdistettä vaaleankeltaisena öljynä. TLC:n ja ’n-NMRrn mukaan tässä aineessa oli jonkin verran epäpuhtauksia (disulfi-dia), mutta se käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa: 15 IR (NaCl, kalvo) Veax: 2100 (N3), 1775 (B-laktaamin C=0) ja 1720 cm'1 (leveä, esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,89 (S, 9H, Si-t-Bu), 1,30 (d, J = 6,05 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - 2,0 (m, 2H, CH2-4), 2,8 - 3,6 (m, 8H, SCH,CH,N, CH2N3, H-4 20 ja H-6), 4,1 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0), 4,5 - 4,9 (m, 4H, allyylin CH2), 5,1 - 5,5 ja 5,8 - 6,1 ppm (2m, 6H ja 2H, allyylin CH ja NH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-allyylioksikarbonyyli-aminoetyyli) tio] -4- (2"-atsidoetyyli) -6- [ (1 ’ R) -1 ’ -hydrok-25 sietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok- sylaatti OTBDnS CHjCHjNj OH CHeCHgN3 u u 3 /9-SCHjCHjNHCO,'^' -► 3 ,)-SCHjCHjNHCOp^X^ 30 //Λ COg/'Vi''
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(l-allyylioksikarbonyyliaminoetyyli )tio] -4-( 2"-atsidoetyyli )-35 6-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-7- .1 lii i 1:111 I I i ui . : 395 96511 okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (4,37 g, 7,54 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (120 ml), käsiteltiin 0-5 eC:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna etikkahapolla (2,7 ml, 47,5 mmol), ja sen 5 jälkeen lisättiin tipoittain 5 minuutin aikana 24 ml (24,0 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin tetrahydro-furaaniliuosta. Sitten liuosta pidettiin 10 °C:ssa 7 vuorokautta. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin kylläisellä natriumbikarbonaa-10 tiliä (2 x), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (6,5 x 11 cm) käyttäen etyyliasetaatin gradienttia tolueenissa (7:3 -* 1:1) eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin 15 saatiin 1,17 g (33 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä: IR (NaCl) vna*: 3480 (OH), 2100 (N3), 1770 (3-lak- taamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,39 (d, J = 6,24 Hz, 3H, CHjCHO), 1,7 - 2,1 (m, 2H, CH2-4), 2,7 - 3,15 (m, 2H, SCH2), 20 3,18 (dd, JH6H5 - 2,66 Hz, JH6H1 = 7,97 Hz, 1H, H-6), 3,2 - 3,7 (m, 5H, CH2NH, CH2N3 ja H-4), 4,23 (m, päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CH0), 4,25 (dd, JH5H6 = 2,66 Hz, JH5 H4 = 9,57 Hz, 1H, H-5), 4,57 ja 4,75 (2m, 2 x 2H, allyylin CH2), 5,1 - 5,5 ja 5,8 - 6,1 ppm (2m, 6H ja 2H, allyylin CH ja 25 NH).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(2-aminoetyy-li) tio] -6- [(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [ -3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 IH ch2ch2n3 oh ch2ch2n3
^ ^ \o,H
- 96311 396
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-[ ( 2-allyylioksikarbonyyliaminoetyyli )tio] -4-(2"-atsidoetyyli)- 6-[(1'R)-l' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,17 g, 2,5 mmol) kuivassa 5 dikloorimetaanissa (30 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)pal-ladiumilla [O] (0,072 g) ja sen jälkeen N-metyylianilii-nilla (1,6 ml, 14,8 mmol). Liuosta sekoitettiin 3 tuntia, jona aikana muodostui sakkaa. Reaktioseosta uutettiin kyl-10 mällä vedellä (3 x 35 ml), ja yhdistettyä vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen liuos kromatografoitiin käänteisfaasi-silikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm) käyttäen ase-tonitriilin gradienttia vedessä eluenttina. UV-aktiiviset 15 fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,37 g (43 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]*2 +21,5° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,2 % p-Bondapak-Cie:11a, 3,9 mm x 30 cm, 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, 20 virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 7,68 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λΒβχ: 298 nm (7401 nm); IR (KBr)Vmax: 2100 (N3), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 25 1590 cm'1 (leveä, karboksylaatin C=0); —' XH NMR (200 MHz, D20) ö: 1,33 (d, J = 6,38 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,9 - 3,7 (leveä m, 7H, SCH2CH2NH2, CH2N3 ja H-4), 3,50 (dd, JH6,H5 = 2,67 Hz, JH6>H1 = 6,24 Hz, 1H, H-6) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 30 päällekkäin).
397 rcc'i
Esimerkki 115 (4R,5S,6S)-4- (2"-aminoetyyli) -3- [ (2-aminoetyyli) -tio] -6-[(l'R)-l’ -hydroksietyyli ] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etikka-5 happosuola OH CH£CH2N3 OH CHjCHgNHg
H,r /%l-r^\ 1) Hj , Pd μ Λ,_fX
^ I yV—SCHgCHaNH, -► 3 I \ SCH^CH NH
L-h// 8 2 8 2) Ac OH // 5LM2LH8NH2 10 / Λ \
C02H COgH
.ch3co2h
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-3-[(2-aminoetyyli ) tio] -4-( 2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-15 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,30 g, 0,88 mmol) kylmässä vedessä (90 ml), hydrattiin 0-5 °C:ssa käyttäen 1,2 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 50 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin 0,1 ml (1,6 mmol) 20 etikkahappoa (pH muuttui 9,3:sta 4,3:een), ja katalyytti suodatettiin celite-kerroksella. Suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (2,5 x 14 cm) käyttäen 0,005 M etikkahapon vesiliuosta eluenttina. Tuote eluoitui pylväästä hyvin nopeasti liuotinrintaman kanssa. UV-aktiivi-w 25 set fraktiot yhdistettiin, lyofilisoitiin ja kromatogra foitiin samalla pylväällä toisen kerran. Lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,22 g (66 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena jauheena. UV:n ja ^-NMRin mukaan tämä tuote oli 60-prosenttisen puhdasta ja siinä oli epäpuhtau-30 tena jonkin verran etikkahapon epäorgaanisia suoloja (perustuu UV-absorptioon, joka oli 7400, atsidoprekursoril-le);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti- 96311 398 puskuri, virtausnopeus 0,9 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 5,7 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 296 nm (4446); 5 IR (KBr) 1760 (B-laktaamin C=0) ja 1570 cm'1 (leveä, karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) δ: 1,33 (d, J = 6,36 Hz, 3H, CHjCHO), 1,9 (s, CH,C0,H), 1,8 - 2,4 (m, 2H, CH2-4), 2,8 -3,45 (m, 7H, SCH2CH2NH2, H-4 ja CH,NH,), 3,49 (dd, JH6 H5 = 10 2,84 Hz, JH6 H4 = 6,42 Hz, 1H, H-6), 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0).
Esimerkki 116 (4R,5S,6S)-3-t(2-aminoetyyli)tio]-4-(3"-atsidopro-pyyli) -6- [(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-15 syklo-[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo OH <CH2>3N3 H3C -T\ 20 _j^// 2CH2CHgNH2
C02H
A. Allyyli-2-merkaptoetyy1ikarbamaatti 25 ^ HSCH2CH2NH2 HC1 + CH2=CH-CH2OCOCl - hsch2ch2nhco2ch2-ch=ch2
Suspensio, jonka muodosti 2-aminoetaanitiolivety-kloridi (4,4 g, 38,7 mmol) kuivassa asetonitriilissä 30 (30 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin käyt täen typpeä suojakaasuna N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (16,0 ml, 91,8 mmol). 5 minuutin kuluttua lisättiin kerralla trimetyylisilyylikloridia (6,56 ml, 51,7 mmol), ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia. Sitten lisättiin tipoit-35 tain (10 min) allyyliklooriformaattia (4,24 ml, 40,0 mmol) : : «H i *.%U t i+ . . .
96311 399 ja sen jälkeen N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (6,9 ml, 29,6 mmol), ja saatua seosta sekoitettiin 30 min 0 -5 °C:ssa ja 2 tuntia 22 eC:ssa. Sen jälkeen lisättiin vettä (100 ml), ja reaktioseosta uutettiin dikloorimetaanilla 5 (2 x 100 ml). Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin 1 N ve- tykloridihapolla (20 ml), 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 6,5 g raakatuotetiolia kirkkaana öljynä, joka käytettiin välit-10 tömästi kytkentävaiheessa. Otsikon yhdisteen valmistus perustuu julkaisun I. Shinkai et ai., Synthesis, 924 w (1980) menettelyyn.
XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,36 (t, J = 8,53 Hz, 1H, SH), 2,66 (m, 2H, SCH2), 3,37 (m, 2H, CH2N), 4,57 (m, 2H, 15 allyylin CH2), 5,2 (leveä, 1H, NH), 5,2 - 5,4 ja 5,8 - 6,1 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin CH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-allyylioksikarbonyyli-aminoetyyli) tio] -4-(3"-atsidopropyyli) -6- [ (1' R) -11 -hydrok-sietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-20 sylaatti S" <CHe>,M3 OH (CH2)3N3 "3C ' ”3C ' TT^SCHjCHjNHCO,/^
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-at-sidopropyyli )-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (11,0 mmol, 30 valmistettu saattamalla 4,0 g, 11,0 mmol diatsoprekursoria rengasmuotoon) kuivassa asetonitriilissä (50 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin tipoittain difenyyli-kloorifosfaatilla (2,3 ml, 11,5 mmol), ja lisättiin samanaikaisesti 5 minuutin aikana N, N-di-isopropyylietyyliamii-35 nia. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyliaminopyri- 400 96311 diinikide, ja liuosta sekoitettiin 1 tunti. Sitten hydrok-syyliryhmä silyloitiin lisäämällä tipoittain N,N-di-iso-propyylietyyliamiinia (2,3 ml, 11,5 mmol) ja sen jälkeen klooritrimetyylisilaania (1,46 ml, 11,5 mmol), ja saatua 5 seosta sekoitettiin 15 minuuttia. Sitten lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (3,8 ml, 21,9 mmol) ja allyyli-2-merkaptoetyylikarbamaattia (3,53 g, 21,9 mmol), ja seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 16 tuntia. Reaktio pysäytettiin lisäämällä etyyliasetaattia (400 ml) ja vet-10 tä. Orgaaninen faasi pestiin 2-prosenttisella kylmällä sitruunahapon vesiliuoksella, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja jäännös liuotettiin seokseen, jonka muodostivat tetrahydrofuraani (100 ml) ja 15 vesi (50 ml), ja käsiteltiin 0-5 °C:ssa etikkahapolla (5 ml). 1 tunnin jälkeen 0-5 °C:ssa ja 2 tunnin jälkeen 22 °C:ssa reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (400 ml), pestiin peräkkäin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaatti-20 puskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (4 x 12 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gradientilla tolueenissa (8:7 -> 1:1), jolloin saatiin 3,19 g (61 %) otsikon yhdistettä öljynä: ,.25 IR (NaCl, kalvo) vB„: 3400 (OH), 2100 (N3), 1755 (β- — laktaamin C=0) ja 1705 cm'1 (leveä, esterin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,39 (d, J = 6,25 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 2,7 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,24 (dd, Jh6.hs = 2,63 Hz, Jh6.hi = 30 7,46 Hz, 1H, H-6), 3,2 - 3,6 (m, 5H, CH2N3, CH2N ja H-4), 4,24 (dd, JH5 H6 = 2,63 Hz, JH5 H4 = 9,43 Hz, 1H, H-5), 4,24 (päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CH0), 4,56 ja 4,75 ppm
(2m, 2 x 2H, allyylin CH2), 5,1 - 5,5 (m, 5H, allyylin CH
ja NH) ja 5,8 - 6,1 ppm (m, 2H, allyylin CH).
i*t iiih i»-*·#* 401 * C. (4R,5S,6S)-3-[(2-aminoetyyli)tio]-4-(3"-atsido-propyyli)-6-[(1’ R)-1’-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyk-lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 5 2H <ch2)3n3 oh <ch2)3n3 H S'S—fX , h 3t I /)-SCHgCHgNHCOj/'X^ -- 3 f Λ-SCH?CH,NH2
/^T
COg^N/^ COgH
10 Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2- allyylioksikarbonyyliaminoetyyii)tio)-4-(3"-atsidopropyy- i_ li )-6-[(1*R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (3,19 g, 6,65 mmol) kuivassa dikloorimetaanissa (80 ml), käsiteltiin 22 eC:ssa 15 ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakistrifenyylifosfii-ni)palladiumilla [0] (0,19 g) ja N-metyylianiliinilla (4,3 ml, 40,0 mmol). 3 tunnin kuluttua reaktioseos, joka sisälsi geelimäistä sakkaa, laimennettiin kylmällä vedellä (200 ml), ja sen pH säädettiin arvoon 3,8 2 N vetykloridi- 20 hapolla aminohapon liuottamiseksi. Kylmä vesifaasi otettiin talteen, pestiin dikloorimetaanilla, sen pH säädettiin arvoon 6,5 1 N natriumhydroksidilla, ja sitä pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen liuos kromatografoitiin käänteisfaasisilika-'X 25 geelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 15 cm) käyttäen asetonitrii- lin gradienttia (0 - 10 %) vedessä eluenttina. UV-aktiivi-set fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 1,28 g (54 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [a]82 +32,6° (c 1,0, H20); 30 Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 13,3 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Amax: 298 nm 35 (8425); 96311 402 IR (KBr) VBax: 2100 (N3), 1760 (B-laktaamin C=0) ja 1590 cm"1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,33 (d, J = 6,37 Hz, 3H, CHjCHO), 1,5 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 2,8 -5 3,5 (m, 5H, SCH2CH2NH2 ja H-4), 3,42 (t, J = 6,2 Hz, 3H, CH2N3), 3,47 (dd, J,:6.H5 = 2,70 Hz, JH6 H1 = 5,98 Hz, 1H, H-6), 4,26 (dd, JH5 H6 = 2,70 Hz, JH5.„4 = 9,35 Hz, 1H, H-5) ja 4,28 ppm (m päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CHO).
Esimerkki 117 10 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-aminopropyyli) -3- [ (2-aminoetyyli)- tio] -6-[ (1 *R) -1 ’ -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etikka-happosuola 1C OH <CH2)3N3 2H (CH2>3NHj
1 J X.,J
^ \θ;Η C0,H
20 Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-3-[(2-amino- etyyli)tio]-4-(3"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-happo (0,292 g, 0,82 mmol) vedessä (90 ml), hydrattiin 0 -5 eC:ssa käyttäen 1,2 g:a 5-prosenttista palladiumia alu-25 miinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 w tunti. Sen jälkeen lisättiin 0,1 ml (1,64 mmol) etikkahap-poa, ja katalyytti suodatettiin celite-kerroksella. Sitten suodos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 3 x 12 cm) käyttäen 0,005 M etikkahapon vesi-30 liuosta eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,264 g (82 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]£2 +37,0° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLCrn mukaan: 98 % p-Bondapak-Cie: 11a, 35 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti- 0 7 Ί 1 403 ^ Οθ ä 1 puskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 4,9 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λ aax: 298 nm (7517); 5 IR (KBr) VBax: 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1570 cm'1 (leveä, karboksylaatin C=0); :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,92 (s, CH3C02H), 2,8 - 3,4 (m, 7H, SCH2CH2NH2, propyylin CH,NH,-3 ja 10 H-4), 3,43 (dd, JH6 H5 = 2,73 Hz, JH6 H1 = 6,37 Hz, 1H, H-6), 4,2 - 4,3 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CHO päällekkäin).
Esimerkki 118 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-atsidopropyyli) -3- [ (2-N-formimido-yyliaminoetyyli) tio] -6- [ (1 1R) -1' -hydroksietyyli] -15 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy- lihappo OH CHpCHpCHpN^ OH CH2CH?CH?N,
ΑτΛ. Λ A
3 J__l Λ—SCHgCHsNHg -* h3^ π λ—SCH2CH2NHCH = NH
20 ' A \
COgH COjH
(4R,5S,6S)-3-[(2-aminoetyyli)tio]-4-(3"-atsidopro-pyyli )-6- [ (1'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo-25 [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon (0,460 g, 1,29 mmol) kylmän vesisuspension (25 ml) pH säädettiin arvoon 8,5 1 M natriumhydroksidilla ja käsiteltiin 0-5 °C:ssa bentsyy-liformimidaattivetykloridilla (0,78 g, 4,52 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 10 minuutin aikana. pH pidet-30 tiin välillä 8 - 8,5 IM natriumhydroksidilla koko lisäyksen ajan ja vielä 25 minuuttia. Sen jälkeen lisättiin 20 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja reaktioseos pestiin etyyliasetaatilla (20 ml). Vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistami-35 seksi, ja sen jälkeen kromatografoitiin käänteisfaasisili- • 96311 404 kageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 11 cm). Pylvästä eluoi-tiin asetonitriilin gradientilla (0 - 15 %) 0,01 M fosfaattipuskurissa. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, väkevöitiin tyhjössä (T <20 °C), ja suoritettiin suolan-5 poisto samalla pylväällä käyttäen eluenttina puskurin sijasta vettä. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,240 g (48 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena: [a]“ +16,0° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,4 % p-Bondapak-C18:11a, 10 3,9 mm x 30 cm, eluointi 20 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaat tipuskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 6,06 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) aBax: 302 nm (9768); 15 IR (KBr) VB„: 2100 (N3), 1955 (β-laktaamin C=0), 1715 (formimidoyylin CN) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,33 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 2,0 (m, 4H, butyylin CH2-1 ja -2), 2,8 - 3,3 (m, 2H, SCH2), 3,3 - 3,8 (m, 6H, H-6, H-4, CH2N3 ja CH7NH), 20 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin), 7,76 ja 7,83 ppm (2S, 1H, NHCH=NH).
Esimerkki 119 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-N-f onniini do -yyliaminoetyyli) tio] -6-((1^)-11 -hydroksietyyli] -25 7-okso-l-atsabisyklo[3.2,0]hept-2-eeni-2-karboksyy- lihapon etikkahapposuola OH (CH2)3N3 OH <CH2)3NHg u r^'S rA 1 >H- ,Pd H r^4"",
3^ .)-SCHpCHjNHCH^NH -* 3 Λ-SCH?CH.NHCH = NH
30 2>flC0H V
; C0,H C0,H
.CH3C0jH
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopro-pyyli)-3-[(2-N-formimidoyyliaminoetyyli)tio]-6-[(l’R)-l'-35 hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2- 405 - 9631Ί karboksyylihappo (0,180 g, 0,47 mmol) kylmässä vedessä (70 ml), hydrattiin 0-5 °C:ssa käyttäen 1,2 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 tunti. Sen jälkeen lisättiin 5 etikkahappoa (0,045 ml, 0,79 mmol), ja katalyytti suodatettiin celite-kerroksella. Sitten suodos kromatografoi-tiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 10 cm) käyttäen 0,005 M etikkahappoa eluenttina. UV-aktii-viset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,136 g 10 (69 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]” +17,5° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLC:n mukaan: 94 % μ-Bondapak- C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-15 pymäaika 7,57 minuuttia; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ^ roax: 300 nm (6900); IR (KBr) ^max: 1755 (β-laktaamin C=0), 1720 (for- mimidoyylin CN) ja 1570 cm'1 (leveä, karboksylaatin C=0); 20 *H NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,33 (d, J = 6,36 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,92 (s, 3H, CH,C0,H), 3,04 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2NH2), 3,42 (dd, JH6.H5 = 2,64 Hz, JH6H1 = 6,31 Hz, 1H, H-6), 2,8 - 3,7 (m, 5H, SCH2, CH,NHCH=NH ja H-4), 4,26 (dd, päällekkäin CH3CHO:n — 25 kanssa, JH5 H6 = 2,64 Hz, 1H, H-5), 4,28 (m, 1H, CH,CH0), 7,74 ja 7,83 ppm (2S, 1H, NHCH=NH).
0Γ7 ' η
406 ·" t ο ! I
Esimerkki 120 (4R, 5S, 6S) - 4- (3"-aminopropyyli) -6- [ (1' R) -1' -hydrok-sietyyli] -3- [2- (1-pyrrolidinyyli)etyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon 5 etikkahapposuola p ;c:-::)3kk: haac /—l 10 n>-s(CH-^
c C02H
A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-6-[(1’R)-1 ’-trietyylisilyylioksietyy-15 li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaat-ti p (CK-),K, p3 (CH.J:K3 c- v-pLo —c 'öi)-!r·- '"
c ^ CO
Kylmään (jää-metanolihaude) liuokseen, jonka muo-25 dosti allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6- — [(1'R)-l' -hydroksietyyli] -3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]-heptaani-2-karboksylaatti [valmistettu (3R,4R)-3-[(1'R)-1' -hydroksietyyli] -4- [ (1 "R)-1"-( 3-atsidopropyyli ) -3" -diat-so-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli] atsetidinonis-30 ta (1,0 g, 2,75 mmol)], lisättiin hitaasti difenyylikloo-rifosfaattia (0,6 ml, 3,0 mmol), ja sen jälkeen lisättiin tipoittain di-isopropyylietyyliamiinia (0,52 ml, 3,0 mmol). Seosta sekoitettiin 1 h, sen jälkeen lisättiin trietyylisilyylikloridia (0,5 ml, 3 mmol) ja di-isopropyy-35 lietyyliamiinia (0,52 ml, 3,0 mmol). Seosta sekoitettiin M311 30 min -15 °C:ssa. Saatua silyloitua enolifosfaattia käsiteltiin 2-merkaptoetanolilla (430 mg, 5,5 mmol) CH3CN:ssa (0,5 ml) ja di-isopropyylietyyliamiinilla (0,95 ml, 5,5 mmol). Seosta sekoitettiin 19 h 5 - 8 °C:ssa (kylmä 5 huone), sen jälkeen laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (2 x 20 ml), IM NaHSC3:n vesiliuoksella (3 x 20 ml), vedellä (20 ml), IN HCl::i vesiliuoksella (20 ml), vedellä (2 x 20 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (20 ml), vedellä (20 ml), suola-10 liuoksella (20 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin siiikageeli-flash-pylvään läpi (50 g, 0 - 50 % etyyliase-t'.atti/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (883 mg, 63 %) öljynä.
IR (CH2C12) V nax: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 (C=0, β-15 laktaami) ja 1710 cm'1 (C=0, esteri); aH NMR (CDC13, 200 MHz) 6; 6,05 - 5,8 (1H, m, vi nyylin H), 5,49 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, allyylin CH2), 4,30 -4,16 (1H, m, H-l’), 4,145 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 3,803 (2H, t, J = 5,9 Hz, 20 CH20), 3,40 - 3,28 (2H, m, CH2N3), 3,24 - 3,28 (1H, m, H-l’), 3,192 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 7,5 Hz, H-6), 3,15 -2,87 (2H, m, SCH2), 1,89 - 1,75 (1H, m, osa CH2-4:a), 1,7 -1,45 (3H, m, CH2-CH2 4:ssa), 1,552 (1H, leveä s, OH), 1,316 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,998, 0,957 ja 0,920 (9H, 3 vii-w 25 vaa, CH3), 0,662, 0,659, 0,623, 0,584, 0,546 ja 0,539 ppm (6H, 6 viivaa, CH2).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[2-(l-pyrrolidinyyli)etyylitio] - 6-[(l’R)-l' -trietyylisilyyli-oksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-30 boksylaatti OTE5 OTES , v ^ ^^-2)3^3 ^ yOn2 )3113
Cds tO“S(CE*,*0H—* Cr‘3 tQ^3ic;uuN0 ^ C02n^s 408 Γ~. s' ~r si 9oö 11
Kylmään (hiilihappojää-asetoni) liuokseen, ^ onka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-6-[(1'R)-l'-trietyylisilyylioksievyy-li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaat-5 ti (883 mg, 1,73 mmol) dikloorimetaanissa (20 ml), lisättiin ensin di-isopropyylietyyliamiinia (0,80 ml, 4,5 mmc1) ja tipoittain trifluorimetaanisulfonihappoanhydrid ä (0,35 ml, 2,1 mmol). Seosta sekoitettiin 20 min, ja lisättiin pyrrolidiiniä (0,90 ml, 10,4 mmol) dikloorimetaanissa 10 (1 ml). Sekoittamista jatkettiin 30 min -78 °C:ssa (hiili- happo jää-asetoni) ja 30 min -15 eC:ssa (jää-metanolihau-de). Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (100 ml) __ ja petrolieetterillä (20 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (10 x 25 ml), suolaliuoksella (25 ml), kuivattiin (MgS04), 15 ja liuottimen haihdutuksen jälkeen saatu jäännös vietiin silikageeli-flash-kerroksen läpi (45 g, 33 -> 100 % etyyli-asetaatti/heksaani, 10 % - 40 % asetoni/etyyliasetaatti), jolloin saatiin otsikon yhdiste (510 mg, 52 %) öljynä.
IR (CH2C12) max: 2100 (N3), 1775 (C=0, S-laktaami) 20 ja 1710 cm'1 (C=0, esteri); JH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,9 ( 1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,21 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, allyylin CH2), 4,30 -4,14 (1H, m, H-l'), 4,121 (1H, di, J = 2,6 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 3,4 - 3,30 (2H, m, CH2N3), 25 3,23 - 3,14 (1H, m, H-4), 3,169 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = ^ 7,6 Hz, H-6), 2,98 - 2,88, 2,75 - 2,63 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2, 63 - 2,45 (6H, m, CH2N), 1,9 - 1,5 (8H, m, CH2CH2-4 ja pyrrolidiinin CH2CH2), 1,317 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,0993, 0,952, 0,916 (9H, 3 viivaa, CH3), 0,697, 0,658, 30 0,619, 0,579, 0,542 ja 0,535 ppm (6H, 7 viivaa, SiCH2).
96311 409 C. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[ (1 *R) -1' -hydroksietyyli] -3- [2- (1-pyrrolidinyyli) etyyli-tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti 5
Jp5 (CH2)3N3 Jp (CH2) 3N3
Cn'Jp0-s (εκ2)20 — CH3^G>-S(ch^20 CC^v<\ 10 “ c
Kylmää (jää-metanoli) liuosta, jonka muodosti allyyli- (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[2—(1-pyrrolidinyyli )etyylitio]-6-[(1'R)-l'-trietyylisilyylietyylisilyy-15 lioksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2- karboksylaatti (500 mg, 0,77 mmol) vedettömässä tetrahyd-rofuraanissa (5 ml), käsiteltiin ensin jääetikalla (0,290 ml, 5,28 mmol) ja sen jälkeen lisättiin tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraa-20 nissa (2,64 ml, 2,64 mmol). Seoksen annettiin seistä -20 °C:ssa 20 h, sen jälkeen se laimennettiin etyyliasetaatilla (25 ml), pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesi-liuoksella (3 x 10 ml), suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksen jälkeen saatu jäännös ^ 25 (370 mg, 94 %) käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaihe essa .
IR (CH2C12) ^ max: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 (C = 0, β-laktaami) ja 1710 cm'1 (C=0, esteri); ΧΗ NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,90 (1H, m, vi-30 nyylin H), 5,49 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,82 - 4,62 (2H, m, allyylin H), 4,27 - 4,18 (1H, m, H-l'), 4,217 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,7 Hz, H-5), 3,45 - 3,25 (3H, m, CH2N3 ja H-4), 3,233 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,6 Hz, H-6), 2,99 - 2,82, 2,76 - 2,65 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,65 - 2,4 410 96 311 (6H, m, CH2N), 1,95 - 1,50 (9H, m, CH2CH2-4, OH ja pyrroli-diinin CH2CH2) ja 1,388 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
D. (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-6-[(1'R)-1'- hydroksietyyli]-3-[2-(l-pyrrolidinyyli)etyylitio]-7-okso-5 1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo ^|H (CK2)-J3 ^ c C02\^s 0 C02-“
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-( 3"-atsidopropyyli )-6 - [ (1' R) -1' -hydroksietyy-15 li]-3-[2-(1-pyrrolidinyyli)etyylitio]-7-okso-l-atsabisyk- lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (360 mg, 0,80 mmol) dikloorimetaanissa (20 ml), käsiteltiin ensin Pd( PPh3 )4:11a, ja sen jälkeen lisättiin tipoittain N-me-tyylianiliinia (0,17 ml, 1,6 mmol). Seosta sekoitettiin 20 15 min, sen jälkeen lisättiin 0,1 M pH-arvon 7,0 omaavaa fosfaattipuskurin vesiliuosta (50 ml, 5 mmol) ja dietyyli-eetteriä (50 ml). Orgaanista faasia uutettiin jälleen 0,1 M pH-arvon 7,0 omaavalla puskurilla (2 x 15 ml) ja vedellä (15 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pes-25 tiin dietyylieetterillä (2 x 25 ml) ja vietiin μ-Bondapak- w" C18-käänteisfaasipylvään läpi (50 g, 0 -» 30 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (200 mg, 58 %) lyofilisoi-tuna jauheena.
Puhtaus: 99,9 % määritettynä HPLC:llä (viipymäai- 30 ka = 7,751, p-Bondapak-C18, 10 μ, 15 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, pH 7,4); UV (vesi) λ max: 296 (7170); IR (Nujol) v> max: 3500 - 3100 (OH), 2100 (N3), 1755 (C=0, β-laktaami) ja 1600 cm'1 (C=0, karboksylaatti); 411 9Co 11 *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,35 - 4,20 (1H, m, H-l'), 4,263 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,4 Hz, H-5), 3,475 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,1 Hz, H-6), 3,46 - 3,39 (2H, m, CH2N), 3,10 - 2,9 (1H, m, SCH2:n 1H), 2,10 - 1,85 (5H, m, 5 pyrrolidiinin CH2CH2 ja CH2-4:n 1H), 1,80 - 1,45 (3H, m, CH2CH2-4) ja 1,331 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
E.(4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-6-[(1'R)-1'-hyd-roksietyyli] -3- [2- (1-pyrrolidinyyli) etyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etikka-10 happosuola w (CH2)2N3 J (CH2)2Nn2. HO Ac 15 — cH3i^s'cH^'0 0 CC2H 0 cc:'r:
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S )-4-(3"atsidopropyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyy-20 li]-3-[2 — (1-pyrrolidinyyli)etyylitio]-7-okso-l-atsabisyk- lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (150 mg, 0,34 mmol) vedessä (30 ml), ravistettiin Parrin hydraus-laitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1 h käyttäen 5-prosenttista Pd:a alumiinioksidilla 25 (750 mg) katalyyttinä. Katalyytti poistettiin, pestiin vedellä (2 x 5 ml), ja liuoksen pH (9,5) säädettiin arvoon 4,6 IM etikkahapon vesiliuoksella. Vesipitoinen liuos vietiin kaksi kertaa p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (45 g ja 35 g, 0,005 M etikkahapon vesiliuos, 1 % -» 30 2 % CH3CN/0,005 M etikkahapon vesiliuos), jolloin saatiin otsikon yhdiste (138 mg, 67 %) vaaleankeltaisena lyofili-soituna jauheena.
Puhtaus: 99,5 % määritettynä HPLC:llä (viipymäai- ka = 7,338, p-Bondapak-C18, 10 μ, 10 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, 35 pH 7,4); 96311 412 ' 1 UV (H20) λ Μχ: 296 (8426); IR (Nujol) 0 Bax: 3500 - 3100 (OH, NH2), 1755 (C=0, β-laktaami) ja 1590 cm*1 (C=0, karboksylaatti); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33 - 4,20 (2H, m, H-l' ja 5 H-5), 3,412 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,4 Hz, H-6), 3,5 - 3,1 (1H, m, CH2N, H-4, SCH2:n 1H), 3,09, 3,051, 3,016 (2H, 3 viivaa, CH2N), 3,10 - 2,95 (1H, m, SCH2:n 1H), 2,09 (4H, leveä s, pyrrolidiinin CH2CH2), 1,92 (2H, s, CH3C02), 2,0 -1,45 (4H, m, CH2CH2-4) ja 1,331 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, 10 CH3) .
Esimerkki 121 (4R,5S,6S)-4-(4"-aminopentyyli)-3-[ (2-syaanietyy-li)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 15 2H (CH2)=NK2 h,c "'""i—
I /)—5CH-CK~.CN
// ^
20 0 V
co2h A. 7-atsidoheptaanihappo N a N - 5r(CH2)6C02H -N2(Ch2)6CC2ii 25 — 7-bromiheptaanihappoa (50,0 g, 0,24 mol) lisättiin natriumhydroksidin (9,6 g, 0,24 mol) liuokseen 75 mltssa vettä. Sen jälkeen lisättiin natriumatsidia (20,9 g, 0,32 mol), ja saatua seosta kuumennettiin palautusjäähdyt-30 täen 17 h. Sitten liuos jäähdytettiin 0-5 °C:seen, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2,0 2 N rikkihapolla, ja uutettiin dietyylieetterillä (3 x 200 ml). Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS0<) ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 40,9 g (100 %) 35 otsikon yhdistettä öljynä. 1H-NMR;n mukaan raakatuote si- - 96311 413 sälsi 6 % (mooli-%) lähtöaineena käytettyä bromihappoa, ja se käytettiin sellaisenaan happokloridin valmistuksessa.
IR (NaCl, kalvo) $ na]C: 2100 (N3) ja 1710 cm'1 (hapon C=0); 5 aH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,3 - 1,8 (m, 8H, CH2-3, -4, -5 ja -6), 2,36 (t, J = 7,35 Hz, 2H, CH2-2) ja 3,26 ppm (t, J = 6,77 Hz, 2H, CH2-7).
B. 7-atsidoheptanoyylikloridi 10 K3(CH2)6C02K -► S2(Cn2)6C0Cl
Liuosta, jonka muodosti vaiheen A 7-atsidoheptaani-happo (40,9 g, 0,24 mol) kuivassa dikloorimetaanissa 15 (200 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa oksalyylikloridilla (22,0 ml, 0,25 mol) tipoittain 10 min aikana. 1 h:n kuluttua lisättiin 2 tippaa Ν,Ν-dimetyyliformamidia, ja seosta sekoitettiin vielä tunnin ajan. Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin raakatuotehappokloridia öljynä, 20 joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa: IR (NaCl, kalvo) V1 nax: 2100 (N3) ja 1800 cm'1 (happokloridin C=0); JH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,3 - 1,9 (m, 8H, CH2-3, -4, -5 ja -6), 2,9 (t, J = 7,18 Hz, 2H, CH2-2) ja 3,27 ppm ^ 25 (t, J = 6,7 Hz, 2H, CH2-7).
C. 2-pikolyyli-7-atsidotioliheptanoaatti
n,(CH,)6coci+ I -► I
“ ‘ S^S:h25h M=h2)6cosck2-^.<>J
30 : Liuosta, jonka muodosti 2-pikolyylimerkaptaani (30,0 g, 0,24 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (400 ml), käsiteltiin 0-5 eC:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna pyridiinillä (21,0 ml, 0,26 mol), ja sen jälkeen 7-atsido-35 heptanoyylikloridilla (45,5 g, 0,24 mol) dikloorimetaanis- 96311 414 sa (100 ml) tipoittain 10 min aikana. 30 min kuluttua reaktioseos pestiin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin raakatuotetio-5 esteri kirkkaana öljynä. Suodatettiin silikageelikerrok- sella (9 x 11 cm) käyttäen tolueenin ja etyyliasetaatin seosta (8:2) eluenttina, jolloin saatiin 60,3 g (90 %) otsikon tioesteriä kirkkaana öljynä: IR (NaCl, kalvo) J nax: 2100 (N3) ja 1690 cm'1 (tio-10 esterin C=0); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,2 - 1,8 (m, 8H, CH2-3, -4, -5 ja -6), 2,59 (t, J = 7,4 Hz, 2H, CH2-2), 3,24 (t, _ J = 6,79 Hz, 2H, CH2-7), 4,25 (s, 2H, SCH2), 7,15 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,33 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H- 15 3), 7,62 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,53 ppm (m, 1H, pyri diinin H-6).
D. 2-pikolyyli-7-atsidotioliheptanoaatin 0-tert-butyylidimetyylisilyylienolieetteri 20 _/0T3D“s k3(cr2)5coschAP “Ci.;3<7\s-H2i5
Liuos, jonka muodosti 2-pikolyyli-7-atsidotiolihep-25 tanoaatti (60,0 g, 0,215 mol) kuivassa dikloorimetaanissa w (250 ml), jäähdytettiin -10 °C:seen ja käsiteltiin tri-etyyliamiinilla (60,0 ml, 0,43 mmol). Sen jälkeen lisättiin 74 ml (0,32 mmol) tert-butyylidimetyylisilyylitri-fluorimetaanisulfonaattia tipoittain 40 min aikana. Seok-30 sen lämpötilan annettiin saavuttaa 20 °C, ja liuosta sekoitettiin 3 h. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin hek-saaneilla (600 ml) ja pestiin kylmällä vedellä (3 x), kylläisellä NaHC03:lla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin raakatuotesilyyli-35 enolieetteriä tummana öljynä, joka käytettiin sellaisenaan 96311 415 seuraavassa vaiheessa. 1H-NMR:n mukaan se oli 1:1-suhteinen E- ja Z-isomeerin seos; IR (NaCl, kalvo) VBax: 2100 cm'1 (Na); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,2 ja 0,23 (2 x s, 6H, 5 SiCH3), 0,96 ja 0,98 (2 x s, 9H, Sit-Bu), 1,2 - 2,1 (m, CH2-4, -5 ja -6), 3,2 (m, 4H, CH2-3 ja -7), 3,95 ja 4,03 (2 x s, 2H, SCH2), 4,84 ja 4,99 (2 x t, J = 7,22 Hz, ja J = 7,6 Hz, 1H, CH-2), 7,14 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,28 (m, 1H, pyridiinin H-3), 7,61 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 10 8,53 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
E. (3S,4S)-3-[(1'R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4 - [ (1"R) -1" - (pyridin-2-yyli)metyylitiokar-bonyyli-6"- (pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-6"-atsido-heksyyli]atsetidin-2-oni 15
CTED“S 0T=D“S
J ,0Ac CT3DKE 1 'T
I I X j 2 Ti Cl- | j w0Sl..<5 /—K ‘ f \ il Ί-^ Λ-ν 20 Kylmään (0 - 5 °C) suspensioon, jonka muodosti juu ri fuusioitu sinkkikloridi (38 g, 0,28 mol) kuivassa di-kloorimetaanissa (600 ml), lisättiin 60,0 g (0,208 mmol) ( 3S, 4R)-4-asetoksi-3- [ (1' R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]atsetidin-2-onia ja sen jälkeen raakatuot-·— 25 teenä olevan 2-pikolyyli-7-atsidotioliheptanoaatin O-tert- butyylidimetyylisilyylienolieetterin (0,215 mol) liuosta dikloorimetaanissa (125 ml). Sen jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 22 °C:ssa 18 h. Sitten seos pestiin peräkkäin vedellä, kylläisellä ammoniumkloridilla, kylläisellä nat-30 riumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04).
Liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 131 g raa-katuotetioesteriä tummana öljynä, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Tämän seoksen 1H-NMR- ja HPLC-analyysi osoittivat 85:15-suhteisen heksyylin 1-ase-35 man epimeerien seoksen (isomeerisuhde B:a, 85:15). Kroma- 416 - 96311 tografoitiin erä (4 g) silikageelillä (4 x 20 cm, eluointi tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella, 1:1), jolloin saatiin 1,0 g puhdasta otsikon ainetta öljynä ja sen jälkeen β- ja α-epimeerien sekafraktioita (0,25 g). Puhtaalla β-5 epimeerillä oli seuraavat ominaisuudet: IR (NaCl, kalvo) max: 2100 (N3), 1761 (β-laktaamin C=0) ja 1685 cm*1 (tioesterin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,04 (s, 6H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, Si-t-Bu), 0,99 (d, J = 6,32 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 -10 1,9 (m, 8H, heksyylin CH2-2, -3, -4 ja -5), 2,9 (m, 1H, heksyylin H-l), 3,03 (m, 1H, H-3), 3,22 (t, J = 6,73 Hz, 2H, CH2N3), 3,79 (dd, JH4 H3 = 2,07 Hz, JH4 H1 = 7,01 Hz, 1H, H-4), 4,14 (qd, J„.CH3 = 6,32 Hz, JH H3 = 3,60 Hz, 1H, ~ CH3CH0), 5,86 (leveä s, 1H, NH), 7,18 (m, 1H, pyridiinin H-15 5), 7,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,63 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,54 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
F. (3S,4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R) -l"-karboksi-6"-atsidoheksyyli]at-setidin-2-oni 20 2TBDnS (CH,)5N3 (CH2)cS3 J\/r_/LcrF «
| ” ~ ~ » ’ I
ox o 25 -
Liuos, jonka muodosti vaiheen E raakatuotetioesteri (=0,2 mmol) tetrahydrofuraanissa (700 ml), jäähdytettiin 0 - 5 °C:seen ja käsiteltiin tipoittain 150 ml:11a (1,74 mol) 30-prosenttista vetyperoksidia (lisäysaika 30 15 min). Sen jälkeen lisättiin tipoittain 1 h:n aikana 700 ml 1 N natriumhydroksidia (2,7 mol). Seoksen annettiin reagoida 18 °C:ssa, ja liuosta sekoitettiin vielä tunnin ajan. Sen jälkeen seos laimennettiin heksaaneilla (700 ml), ja vesipitoinen faasi otettiin talteen, jäähdy-35 tettiin 0-5 °C:seen ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 2,0
· : iJtl I I J H . . I
- 96311 417 tettiln 0-5 ®C:seen ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 2,0 väkevällä vetykloridihapolla. Sen jälkeen vesipitoista liuosta uutettiin etyyliasetaatilla (500 ml ja 200 ml). Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin peräkkäin vedellä, 1 M 5 natriumbisulfiitilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Sen jälkeen liuotin haihdutettiin tahnaksi, jota trituroitiin heksaanien (200 ml) kanssa. Kiinteä aine suodatettiin, jolloin saatiin 16,1 g (19 % saanto asetoksiat-setidinonista) otsikon happoa valkoisena kiinteänä ainee-10 na. ^-NMR ei osoittanut, että läsnä olisi ollut yhtään a-isomeeriä. Uudelleenkiteytettiin etyyliasetaatin ja hek-w saanien seoksesta, jolloin saatiin valkoisia levyjä: s.p. = 145 - 147 °C (haj.); [oft = -7,1° (c 1,0, CHC13).
IR (KBr) >/ 2100 (N3) ja 1715 ja 1690 (leveä 15 C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,06 ja 0,07 (2 x s, 2 x 3H, SiCHj), 0,87 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,17 (d, J = 6.31 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2 - 1,8 (m, 8H, heksyylin CH2-2, -3, -4 ja -5), 2,65 (m, 1H, heksyylin H-l), 3,13 (leveä 20 dd, 1H, H-3), 3,26 (t, J = 6,7 Hz, 2H, CH2N3), 3,86 (dd, JH4.H3 - 1,98 Hz, JH4.H1 - 6,92 Hz, 1H, H-4), 4,20 (dq, J„.CH3 = 6.31 Hz, JHH3 = 4,0 Hz, 1H, CH3CHO) ja 6,34 ppm (s, 1H, NH).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C18H34N404Si: ^ 25 C 54,24; H 8,60; N 14,06;
Todettu: C 54,18; H 8,54; N 13,91.
G.(3S,4R)-4-[(1"R)-1"-(5-atsidopentyyli)-3"-allyy-lioksikarbonyyli-2"-oksopropyyli]-3-[(1'R)-l'-tert-butyy-lidimetyylisilyylioksietyyli]atsetidin-2-oni 30
0TBDMS 0TBDMS
I (CH2)5N3 (CH2)5N3 h3c^w^co2h __ __ e3A^a.0j/v 35 0 " 0^ ä - 96311 418
Suspensiota, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(1' R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4- [ (1 "R)-1"-kar-boksi-6"-atsidoheksyyli]atsetidin-2-oni (15,0 g, 37,6 mmol) kuivassa asetonitriilissä (350 ml), käsiteltiin 5 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna 1,1-karbonyyli- di-imidatsolilla (6,7 g, 41,3 mmol). Saatua seosta sekoitettiin 2 h, ja liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin raakatuoteimidatsolidi öljynä: IR (NaCl, kalvo) ^ Bax: 2100 (N3), 1760 (B-laktaamin 10 C=0) ja 1735 cm-1 (imidatsolidin C=0).
Asetonitriilissä (50 ml) oleva raakatuoteimidatso-lidi lisättiin magnesiummonoallyylimalonaatin (19,0 g, 61,2 mmol) liuokseen bentseenissä (300 ml), ja saatua seosta kuumennettiin 65 °C:ssa 28 h. Jäähdytetty reaktio-15 seos laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin peräkkäin vedellä, kylmällä 1 N vetykloridihapolla, kylläisellä natriumbikarbonaatilla ja suolaliuoksella. Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen haihdutettiin liuotin, jolloin saatiin raakatuotteena otsikon ainetta öljynä 20 («20 g), joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaihees sa. Pieni erä kromatografoitiin silikageelillä (eluointi tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella, 8:2), jolloin saatiin otsikon aine öljynä: IR (NaCl, kalvo) VBax: 2100 (N3), 1760 (B-laktaamin 25 C=0), 1715, 1650 ja 1630 cm-1; — 1H NMR (200 MHz, CDC13) keto- ja enolimuodon 1:1-suhteinen seos; 6: 0,05 ja 0,07 (2s, 6H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,1 ja 1,17 (2d, J = 6,31 Hz ja J = 6,33 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,8 (m, 8H, pentyylin CH2-1, -2, -3 ja 30 -4), 2,2 (m, oksopropyylin enolimuodon H-l), 2,9 - 3,0 (m, oksopropyylin ketomuodon H-3 ja H-l), 3,26 (t, J = 6,7 Hz, CH2N3), 3,54 (s, oksopropyylin ketomuodon CH2-3), 3,8 (m, 1H, H-4), 4,2 (m, 1H, CH3CH0), 4,8 (m, 2H, allyylin CH2), 5,07 (s, 1H, oksopropyylin enolimuodon H-3), 5,2 - 5,4 ja 96311 419 5,9 - 6,1 (2m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 5,9 ppm (leveä s, 1H, NH).
H.(3S,4R)-4-[(l"R)-l"-(5-atsidopentyyli)-3"-allyy-lioksikarbonyyli-3"-diatso-2"-oksopropyyli] -3- [ (1' R) -1' -5 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]atsetidin-2-oni 2TBDKS cc:-:2)5n3 otbd-s cc:-::)5k3 H, C 0 , H , C 0, ! J I,1 -" ' I I m 10 C 0 C c Λ
Liuosta, jonka muodosti raakatuotteena oleva (3S, 4R)-4-[(1"R)-l"-(5-atsidopentyyli)-3"-allyylioksikar-15 bonyyli-2"-oksopropyyli]-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyy- lisilyylioksietyyli]atsetidin-2-oni (37,6 mmol) asetonit-riilissä (100 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa p-tolueenisul-fonyyliatsidin (9,1 g, 46,1 mmol) liuoksella asetonitrii-lissä (115 ml) ja sen jälkeen trietyyliamiinilla (6,5 ml, 20 46,0 mmol). Sen jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 22 eC:ssa 30 min. Sitten liuotin haihdutettiin tyhjössä, ja jäännöstä trituroitiin dietyylieetterin ja heksaanien seoksen (1:1) kanssa. Kiteinen p-tolueenisulfonamidi otettiin talteen suodattamalla. Suodos väkevöitiin tyhjössä, w 25 jolloin saatiin otsikon yhdiste öljynä. Tämä tuote käytet tiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Kromatografoitiin erä silikageelillä tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella (9:1), jolloin saatiin puhdas otsikon aine öljynä: IR (NaCl, kalvo) \) max: 2140 (Na), 2100 (N3), 1760 30 (β-laktaamin C=0), 1720 ja 1650 cm"1; ; *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,05 ja 0,06 (2 x s, 6H,
SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,17 (d, J = 6,3 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2 - 2,0 (m, 8H, pentyylin CH2-1, -2, -3 ja -4), 3,03 (leveä dd, 1H, H-3), 3,24 (t, J = 6,7 Hz, 2H, CH,N3), 35 3,84 (dd, JH4 H3 = 2,07 Hz, ^ = 5,37 Hz, 1H, H-4), 4,1 420 96311 (m, 1H, oksopropyylin H-l), 4,17 (dq, JH CH3 = 6,3 Hz, JH H3 = 3,86 Hz, 1H, CH3CH0), 4,72 (m, 2H, allyylin CH2), 5,3 - 5,4 ja 5,9 - 6,1 (2m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 5,84 ppm (leveä s, 1H, NH).
5 I. (3S, 4R) -4- [ (1"R) -1"- (5-atsidopentyyli) -3"-allyy- lioksikarbonyyli-3"-diatso-2"-oksopropyyli] -3- [ (1 ’R) -1' -hydroksietyyli]atsetidin-2-oni CTEDilS (CH2)cK3 CCK,)cN, 10 I X Jlr f T “ ^
Vfr>·^ ^ ΛΝ 0 = 15 Liuosta, jonka muodosti raakatuotteena oleva (3S,4R)-4-[(l"R)-l"-(5-atsidopentyyli)-3"-allyylioksikar-bonyyli-3"-diatso-2"-oksopropyyli] -3- [ (1' R)-l' -tert-butyy-lidimetyylisilyylioksietyyli]atsetidin-2-oni (37,6 mmol) etanolissa (250 ml), käsiteltiin 5 °C:ssa 100 ml:11a 1 N 20 vetykloridin vesiliuosta. 65 h:n kuluttua reaktioseoksen pH säädettiin arvoon 6 natriumbikarbonaatilla, ja etanoli poistettiin alipaineessa. Jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), ja orgaaninen faasi pestiin vedellä, 0,2 M pH-arvon 7 omaavalla fosfaattipuskurilla ja suola-25 liuoksella. Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen liuotin haih- ~ dutettiin tyhjössä, ja jäännös kromatografoitiin silika-geelillä (9 x 12 cm, eluointi etyyliasetaatin gradientilla tolueenissa (1:1) -♦ puhtaalla etyyliasetaatilla). Oleelliset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 8,95 (61 % 30 kolmelle vaiheelle karboksyylihaposta) otsikon atsetidi-nonia kiinteänä aineena. Uudelleenkiteytettiin dietyyli-eetterin ja heksaanien seoksesta, jolloin saatiin valkoisia prismoja: s.p. = 65 - 66 °C; [a]D22 -31,2° (c 1,0, CHC13).
35 UV (EtOH) ^BM: 260 nm (8 440);
Il ' IH I Min I I » ill .
421 96311 IR (KBr) „ax: 2158 (N2), 2100 (N3), 1730 ja 1712 (β-laktaamin ja esterin C=0) ja 1650 cm*1; NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,29 (d, J = 6,3 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2 - 1,9 (m, 8H, pentyylin CH2-1, -2, -3 ja -4), 5 2,31 (d, J = 3,75 Hz, 1H, OH), 2,99 (dd, JH3 H4 = 2,0 Hz, jh3.hi = 6>93 Hz, 1H/ H-3), 3,25 (t, J = 6,7 Hz, 2H, CH2N3), 3,82 (dd, JH4 H3 = 2,0 Hz, JH4<H1 = 6,63 Hz, 1H, H-4), 3,95 (m, 1H, atsidopentyylin H-l), 4,11 (m, 1H, CH3CHO), 4,73 (m, 2H, allyylin CH2), 5,3 - 5,4 ja 5,9 - 6,1 (2 x m, 2H ja 10 1H, allyylin CH) ja 6,0 ppm (leveä s, 1H, NH).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C17H2<N605: ^ C 52,09; H 6,16; N 21,42;
Todettu: C 51,85; H 6,04; N 21,33.
J. Allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(4"-atsidopentyyli)-6-15 [(l'R)-l' -hydroksietyyli] -3, 7-diokso-l-atsabisyklo[3.2. 0] - heptaani-2-karboksylaatti OB {?2hll °," <Ca2>S»i H jC^0 2 -C\ .
20 Λ ° <T H Λ
Liuosta, jonka muodosti (38,4R)-4-[(1"R)-1"-(5-at" sidopentyyli)-3"-allyylioksikarbonyyli-3"-diatso-2"-okso-25 propyyli]-3-[(1’R)-1’-hydroksietyyli]atsetidin-2-oni (2,50 g, 6,37 mmol) kuivassa bentseenissä (80 ml), käsiteltiin käyttäen argonia suojakaasuna rodium(II)oktanoaat-tidimeerillä (0,050 g) ja kuumennettiin palautusjäähdyt-täen (haudelämpötila 95 °C) 20 min. Sen jälkeen haihdutet-30 tiin liuotin tyhjössä, jolloin saatiin raakatuotteena otsikon bisyklistä yhdistettä öljynä, joka käytettiin välittömästi seuraavassa vaiheessa: IR (NaCl, kalvo) N? -ax: 2100 (N3), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 1745 cm*1 (ketoesterin olkapää, C=0); . 9«·Π *Η NMR (200 MHz, CDC13) δ: 1,4 (d, J = 6,30 Hz, 3H, CHjCHO), 1,4 - 2,0 (m, 8H, pentyylin CH2-1, -2, -3 ja -4), 2,7 (m, 1H, H-4), 3,2 - 3,4 (m, 3H, H-6 ja CH2N3), 4,26 (dd, JH5H6 = 2,32 Hz, JH5H4 = 8,06 Hz, 1H, H-5), 4,28 (m, 5 1H, CH3CHO), 4,64 (s, 1H, H-2), 4,66 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,4 ja 5,8 - 6,0 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
K. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(4"-atsidoetyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 10 OH (CH2)cN* (CH2)5M3
A' - A-A
K3c Π >=o —* — r-3c I I /)—5ch2c:-:2cn /-»a
15 ° C02^ C02^A
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-(4"-atsidopentyyli)-6-[(1’R)-l'-hydroksietyyli]-3,7-diok-so-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti 20 (6,37 mmol) kuivassa asetonitriilissä (40 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna difenyyli-kloorifosfaatilla (1,45 ml, 7,0 mmol) ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,22 ml, 7,0 mmol) 10 min aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-25 N,N-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 45 min. Sitten lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,22 ml, 12,7 mmol) ja sen jälkeen β-merkaptopropionit-riiliä (1,11 g, 12,7 mmol) asetonitriilissä (3 ml), ja seosta sekoitettiin 1 h. Sitten reaktioseos laimennettiin 30 etyyliasetaatilla, pestiin vedellä, kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatogra-foitiin silikageelillä (5 x 10 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gradientilla tolueenissa (8:2 -> 7:3), jolloin saa-35 tiin 2,52 g (91 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä.
< i im i anu i.uM .i 96311 423 IR (NaCl, kalvo) B„: 2258 (CN), 2100 (N3), 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,28 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3 - 1,9 (m, 8H, pentyylin CH2-1, -2, -3 ja -4), 5 1,89 (d, J = 4,6 Hz, 1H, OH), 2,7 (=dt, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,19 (dd, J„6.„5 = 2,65 Hz, JH6 H1 = 7,34 Hz, 1H, H-6), 3,2 (päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,30 (t, J = 6,5 Hz, 1H, CH2N3), 4,24 (päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH3CH0), 4,26 (dd, JH5 H6 = 2,65 Hz, JH5 H4 = 10 9,52 Hz, 1H, H-5), 4,76 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
L. (4R,5S,6S)-4-(5"-aminopentyyli)-3-[(2-syaani-etyyli) tio] -6- [(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 15 (CHz)cK3 OH (CH,)cKH2 ,A-r< '
-31- ^JL-l //-SCH2CK2CN -* 3 _I //-SCH2CH2CS
20 C 0 2 H
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(5"-atsidopentyyli ) -3- [ ( 2-syaanietyyli ) tio] - 6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[ 3 .2.0]hept-2-eeni-2-kar-w 25 boksylaatti (2,52 g, 5,8 mmol) kuivassa asetonitriilissä (125 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen argonia suoja-kaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [0] (0,13 g) ja sen jälkeen 12,8 ml:lla (6,4 mmol) 0,5 M ka-lium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 30 45 min kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (125 ml), ja vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen vesipitoista liuosta hydrattiin 0-5 °C:ssa käyttäen 4,0 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) ve-35 typaineessa 1 h (alku-pH 7, loppu-pH 11). Sen jälkeen li- 424 9 6 ύ 1 1 sättiin 50 ml 0,2 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja katalyytti suodatettiin. Suodos väkevöitiin puoleen tyhjössä (T<10 °C), ja sen jälkeen kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3,5 x 14 cm) 5 käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 5 %) vedessä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 1,06 g (49 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena pakastuskuivauksen jälkeen: [afl = +52,1° (c 1,0, H20).
10 Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 306 nm, vii-pymäaika.
UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) 302 nm 15 (9. 055); IR (KBr) 2255 (CN), 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1590 cm"1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,9 (m, 8H, pentyylin CH2-1, -2, -3 ja -4), 20 2,8 - 3,2 (m, 4H, SCH,CH,CN), 3,0 (t, J= 7,4 Hz, 2H, CH2NH2), 3,36 (päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,38 (<3d, J„6.„5 = 2,53 Hz, JH6 H1 = 6,30 Hz, 1H, H-6), 4,25 (dd päällekkäin CH3CH0:n kanssa, JH5 H6 = 2,53 Hz, 1H, H-5) ja 4,27 ppm (m, 1H, CH3CH0).
25 Esimerkki 122 (4R, 5S, 6S) -6-[ (1 ’R) -1' -hydroksietyyli] -3- [ (2-hyd-roksietyyli)tio]-4-(2"-aminoetyyli)-7-okso-l-atsa-bi syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 OH 2 Λ r7
Lli3 ν-τΛ s^oh
° COOH
- 96311 425 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli)]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-4-(2"-atsidoetyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 OTBDMS I2 CTBDKS /3 c:C'-rC· ciFO(OPh), .A_JC ny DIΞ A qjj 10 0 co/"^ HS^ 0 'co,^-
Kylmää (O °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi-15 etyyli )]-4-( 2" - atsidoetyyli)-3,7-diokso-l-atsabisyklo-t3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (0,47 g, 1,08 mmol) CH3CN:ssa (10 ml), käsiteltiin difenyylikloorifosfaatilla (0,25 ml, 1,18 mmol) ja sen jälkeen N,N-di-isopropyyli-etyyliamiinilla (0,21 ml, 1,18 mmol) ja 4-N,N-dimetyyli-20 aminopyridiinillä (2 mg). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa ja käyttäen argonia suojakaasuna 2 h, minkä jälkeen argonia kuplitettiin liuoksen läpi 15 min. Sitten enolifosfaattia käsiteltiin 2-merkaptoetanolilla (0,15 ml, 2,15 mmol) CH3CN:ssa (2 ml) ja sen jälkeen N,N-di-isopropyylietyyli-25 amiinilla (0,38 ml, 2,15 mmol) ja sekoitettiin 0 °C:ssa 1 h ja annettiin olla kylmässä (5 °C) 16 h. Reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (50 ml) ja pestiin peräkkäin kylmällä vedellä, 1 M NaHS03:lla, vedellä, 1 N HCl:lla, vedellä, 1 M NaHC03:lla ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi 30 kuivattiin (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin siirappimainen aine, joka kromatografoitiin silika-geelillä (3,5 x 11 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, ja eluoitiin CH2Cl2:n ja EtOAcrn seoksella (8:2, gradientti-eluointi), jolloin saatiin otsikon yhdiste siirappimaisena 35 aineena (0,35 g, 65,5 %).
426 - 96311 XH NMR (200 MHz, CDC13 7,24) 6: 0,06 (s, 6H,
Si( CH3 )2), 0,87 (S, 9H, SiC(CH3)3), 1,35 (d, 3H, CH3, J = 6,3 Hz), 2,85 - 3,9 (päällekkäin, 8H, CH2OH, CH2N3, H-4, H-6, SCH2), 4,22 (keskus-m, 2H, H-5, H-l'), 4,6 - 4,9 (m, 2H, 5 OCH2, allyyli), 5,2 - 5,5 (m, 2H, =CH2, allyyli), 5,86 - 6,05 (m, 1H, allyylin CH= ) · B. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3 - t(2-hydroksietyyli)tio]-4-(2"-atsidoetyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 10 otedhsj 3 oh / 3
CiCVr'Cc'·'·^'015 15 ° C02^ 0 C02^
Kylmää (0 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi-20 etyyli )]-3-[(2-hydroksietyyli)tio]-4-(2"-atsidoetyyli)-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,33 g, 0,66 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (5 ml), käsiteltiin käyttäen argonia suojakaasuna etikkahapolla (0,23 ml, 4 mmol) ja sen jälkeen 1 M tetrabutyyliammonium-25 fluoridin liuoksella tetrahydrofuraanissa (1,99 ml, — 1,99 mmol). Seosta sekoitettiin lämpötilavälillä 0 - 5 °C 168 h, ja sen jälkeen neutraloitiin 0 °C:ssa 1 M NaHC03-liuoksella (4 ml, 4 mmol). Seosta uutettiin EtOAc:lla (3 x 50 ml), ja yhdistetty orgaaninen faasi pestiin peräk-30 käin kylmällä NaHC03:lla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin tahmea vaahto, joka kromatografoitiin silikalla (3,5 x 8 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin, ja eluoitiin CH2Cl2:n ja EtOAc:n seoksella (0:100, gradienttieluointi), jolloin 35 saatiin otsikon yhdiste vaahtona (0,09 g, 35,4 %).
96311 *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,37 (d, 3H, CH3, J = 6,26 Hz), 2,82 - 3,17 (m, 2H, SCH2), 3,15 (m, 1H, H-6), 3,34 - 3,64 (päällekkäin, 3H, CH2N3, H-4), 3,82 (t, 2H, CH2OH, J = 5,43 Hz), 4,22 (m, 1H, H-l'), 4,22 (dd, 1H, H-5, 5 J4>5 = 9,64 Hz, J5 6 = 2,78 Hz), 4,62 - 4,87 (m, 2H, 0CH2, allyyli), 5,21 - 5,49 (m, 2H, =CH2, allyyli), 5,86 - 6,05 (m, 1H, CH=, allyyli).
C. (4R,5S,6S )-6-((1^)-11 -hydroksietyyli] - 3- [ (2-hydroksietyyli)tio] -4- (2"-aminoetyyli) -7-okso-l-atsabisyk-10 lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo w 0” N"
is CH3 vpr^_s^^0K
/^/02Ka Π J>-3 0 co2^ k 0 \ H2/5« Pd/Al ‘ 20 Kylmään (0 °C) liuokseen, jonka muodosti allyyli- (4R, 5S, 6S)-6-[ (1 Ή)-1' -hydroksietyyli] -3- [ ( 2-hydroksietyy-li )tio] -4-( 2"-atsidoetyyli ) -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,09 g, 0,24 mmol) CH2Cl2:ssa, lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna w 25 Pd[Ph3P]4:a (0,04 g, 0,035 mmol) ja sen jälkeen 0,5 M 2- etyyliheksanoaatin liuosta EtOAcrssa (0,52 ml, 0,26 mmol). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 1 h, lisättiin dietyylieet-teriä (50 ml) ja uutettiin vedellä (3 x 25 ml). Yhdistettyyn vesipitoiseen uutteeseen lisättiin 0,05 M pH-arvon 30 7,0 omaavaa fosfaattipuskuriliuosta (10 ml), ja hydrattiin 0 °C:ssa käyttäen 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla (0,3 g) 276 kPatn (40 psi:n) paineessa 2 h. Katalyytti suodatettiin, pestiin vedellä, ja yhdistetty suodos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasisilikapylvään läpi 35 (3,5 x 9 cm). Sopivat tuotetta vastaavat fraktiot lyofili- 96311 428 soitiin, jolloin saatiin kiinteä aine, joka kromatografoi-tiin uudelleen p-Bondapak-Cie-käänteisfaasisilikalla (3,5 x 9 cm). Yhdiste eluoitiin vedellä ja se saatiin vaaleankeltaisena höytäleisenä kiinteänä aineena lyofilisoin-5 nin jälkeen (0,021 g, 28,2 %).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 93,9 %, UV-toteaminen 302 nm:ssa p-Bondapak-C18:11a (4 mm x 30 cm); pH 6,8 fosfaattipuskuri; virtausnopeus 1 ml/min; viipymäaika: 3,89 min.
10 UV λ bm: 302 nm; IR (Nujol): ^nax: 1750 cm'1 (C=0, β-laktaami); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 1,33 (d, 3H, CH3, J = 6,37 Hz), 1,82 - 1,98; 2,1 - 2,27 (m, 2H, CH2), 2,79 - 3,23 ~ (päällekkäin, 4H, CH2NH2, SCH2), 3,44 (keskus-m, 2H, H-4, H-15 6), 3,76 (m, 2H, CH20H, J = 6,24 Hz), 4,26 (dd, 1H, H-5, J4-5 = 9,14 Hz, J56 = 2,56 Hz), 4,28 (m, 1H, H-l’).
Esimerkki 123 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1' R) -1' -hyd- roksietyyli]-4-[2"-(l-N-metyylipyrrolidinium)etyy-20 li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-kar- boksylaatti n -j w *. s 'l" j-r.-Cr.-.-l. J CH ,-i.· r-μ (.''"""l ^ FT^>— 5CH2CH:CK -- K3C^ *‘\ i \—£Cr ^ .. ' ‘ co2- 30
Liuoksen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli )tio] -6-[(1'R)-l’-hydroksietyyli]-4-[2"-(1-pyrroli-dinyyli)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,150 g, 0,39 mmol) [valmistettu esimer-35 kissä 63] veden (8 ml), asetonitriilin (4 ml) ja dioksaa- 429 96311 nin (5 ml) seoksessa 0-5 °C:ssa, pH säädettiin arvoon 9,5 1 M natriumhydroksidilla. Sen jälkeen lisättiin dime-tyylisulfaattia (0,22 ml) kerralla, ja pH pidettiin välillä 9 - 9,5 35 min. Sitten lisättiin 20 ml 0,2 M pH-arvon 5 6,0 omaavaa fosfaattipuskuria, ja liuosta pidettiin tyh jössä orgaanisen liuottimen poistamiseksi. Vesipitoista liuosta kromatografoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisili-kageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 13 cm) käyttäen asetonit-riilin gradienttia (0 - 5 %) vedessä eluenttina. UV-aktii-10 viset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,056 g (36 %) pyrrolidiniumia, otsikon yhdistettä, valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [afl = +57,0° (c 1,0, H20);
Puhtaus HPLCrn mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-15 puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 6,24 min.
UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ^Bax: 298 nm (6 660); IR (KBr) ^ max: 2250 (CN), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 20 1600 cm"1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,34 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 2,0 - 2,4 (m, 6H, etyylin CH2-1 ja pyrrolidiinin CH2-3,3' ), 2,8 - 3,2 (m, 4H, SCH2CH2CN), 3,11 (s, 3H, NCH3), 3,4 - 3,7 (m, 8H, H-4, H-6, etyylin CH2-2 ja pyrrolidiinin ^ 25 CHj-2,2'), 4,28 (m, 1H, CH3CH0) ja 4,31 ppm (dd, JH5,H6 = 3,01 Hz, JH5 H4 = 9,0 Hz, 1H, H-5).
430 96311
Esimerkki 124 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -4-[2"-[N,N-(2-syaanietyyli)metyyliamino]etyyli]-6-[(1'R)-1'-hyd-roksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-ee-5 ni-2-karboksyylihappo ce3
2H (CH2)2S(CH2)2CH
10 Ch3 ΪΐΧ3>-SCch2)2CN
0 C02H
15 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1*R)-1 *-tert-butyylidi- metyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-syaanietyyli ) tio] -4-[2"-[N,N- (2-syaanietyyli)metyyliamino]etyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 CH-; OTEDiiS 0T3Qil5 ,r ' ; _ (CH2)20K ^-^2)2^-^2)2-^
CH3 ,/]3r^"s^CH:)2CN -* s^ch2)2CN
25 C 0 2 w 0 2 ^
Kylmää (hiilihappojää-asetoni) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidiraetyy- 30 lisilyylioksietyyli] -3-[ (2-syaanietyyli )tio] -4-(2"-hydrok-sietyyli )-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (400 mg, 0,830 mmol) dikloorimetaanissa (10 ml), käsiteltiin ensin di-isopropyylietyyliamiinilla (0,380 ml, 2,16 mmol) ja sen jälkeen tipoittain trifluorimetaanisul- 35 fonihappoanhydridillä (0,17 ml, 1,0 mmol). Seosta sekoi- 431 - 96311 tettiin 25 min, käsiteltiin N-metyyli-B-alaniininitriilil-lä (0,23 ml, 2,5 mmol) dikloorimetaanissa (0,5 ml) ja sen jälkeen sekoitettiin 3 h -15 eC:ssa (hiilihappojäähaude korvattiin jää-metanolihauteella). Seoksen annettiin seis-5 tä kylmässä huoneessa (5 eC) 18 h, sen jälkeen laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml), pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (5 ml), jääkylmällä vedellä (5 ml), suolaliuoksella (5 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-kerroksen läpi (15 g, 30 -» 80 % 10 etyyliasetaatti/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (315 mg, 69 %) vaaleankeltaisena öljynä.
IH (CH2C12) o aax: 2250 (CN), 1775 (C=0, β-laktaami) ja 1715 cm"1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,86 (1H, m, vi-15 nyylin H), 5,486 - 5,224 (2H, m, vinyylin H), 4,851 - 4,666 (2H, m, allyylin CH2), 4,29 - 4,18 (1H, m, H-l'), 4,197, 4,184 (d, J = 2,6 Hz, osa H-5:a), 3,541 - 3,450 (1H, m, H-4), 3,380 - 3,242, 3,069 - 2,929 (2H, 2 m-koh-taa, SCH2), 3,110 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J = 7,0 Hz, H-6), 20 2,807 - 2,315 (8H, m, CH2N ja CH2CN), 2,315 (3H, s, NCH3), 2,04 - 1,87, 1,70 - 1,55 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,30 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,895 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,096 ppm (6H, s, dimetyyli).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-; 25 [ 2”-[N,N-(2-syaanietyyli)metyyliamino]etyyli]-6-[(1'R)- 1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
on CH3 CPU
30 CTEDK5 I OH 1 '
j (CE2)2N(CK2)2CN j (CH2)2N(CH2)2CN
Cri3^G^“sCch2)2cn —* C"3 JZT^-S(CK2)2CK
° C02S^ C C02S^> 35 - 96311 432
Kylmää (jää-metanolihaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-6-[ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-[N,N-(2-syaa-nietyyli )metyyliamino]etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-5 hept-2-eeni-2-karboksylaatti (305 mg, 0,560 mmol) tetra-hydrofuraanissa (5 ml), käsiteltiin jääetikalla (0,18 ml, 3.4 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuoksella tetrahydrofuraanissa (1,68 ml, 1,68 mmol). Seoksen annettiin seistä kylmässä huoneessa 8 vuorokautta, 10 sen jälkeen se laimennettiin etyyliasetaatilla (25 ml), pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (3 x 5 ml), vedellä (2 x 5 ml), suolaliuoksella (5 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-kerroksen läpi (6 g, 40 % -* 100 % etyyliasetaatti/heksaani, 1/1 etyyli-15 asetaatti/asetoni), jolloin saatiin otsikon yhdiste (195 mg, 80 %) öljynä.
IR (CH2C12) \?Bex: 3600, 3500 (OH), 2250 (CN), 1775 (C=0, β-laktaami) ja 1710 cm'1 (C»0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04 - 5,85 (1H, m, vi-20 nyylin H), 5,494 - 5,238 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,70 (2H, m, allyylin H), 4,282 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,6 Hz, H-5), 4,29 - 4,13 (1H, m, H-l’), 3,80 - 3,70 (1H, m, H-4), 3,35 - 3,20, 3,05 - 2,90 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 3,152 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 8,8 Hz, H-6), 2,8 - 2,6 25 (4H, m, CH2CN), 2,6 - 2,45 (2H, m, CH2N), 2,1 - 1,9, 1,7 - _ 1.5 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,60 (1H, leveä s, OH) ja 1,404 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
C. (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-[N,N-(2-syaanietyyli)metyyliamino]etyyli] -6- [ (1 ' R) -1' -hydrok-30 sietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-syylihappo CH-s CH; OF 1 ” OH 1
(CK2)2N (CK2)?CN (C H 2) 2^ C
C02s^x^ C02H
96311 433
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-3- [ (2-syaanietyyli )tio] -4- [2 " - [N, N- ( 2-syaani-etyyli )metyyliamino]etyyli]-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 (195 mg, 0,45 mmol) dikloorimetaanissa (12 ml), käsitel tiin Pd(Ph3)4:lla (42 mg, 0,034 mmol) ja tipoittain 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuoksella etyyliasetaatissa (0,90 ml, 0,45 mmol). Seosta sekoitettiin 30 min, laimennettiin dietyylieetterillä ja uutettiin 0,04 M fosfaatti-10 puskurin vesiliuoksella (3 x 15 ml) ja vedellä (2 x 15 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (2 x 10 ml) ja vietiin p-Bondapak-C18-kään-teisfaasipylvään läpi (150 g, 0 -» 3 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (127 mg, 72 %) lyofilisoituna jau-15 heena.
Puhtaus: 99,2 % määritettynä HPLC:llä (viipymäai-ka = 7,89 min, p-Bondapak-C18, 10 μ, 5 % CH3CN/KH2P04 0,01 M, pH 7,4); UV (H20) 300 (7887); 20 IR (Nujol) J aax: 3600 - 3100 (OH), 2250 (CN), 1745 (C=0, β-laktaami) ja 1595 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,35 - 3,25 (2H, m, H-l' ja H-5), 3,404 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 6,3 Hz, H-6), 3,42 -3,30 (1H, m, H-4), 3,25 - 3,1, 3,03 - 2,9 (2H, 2 m-kohtaa, w 25 SCH2), 2,87 - 2,81 (4H, m, CH2N), 2,75 - 2,65, 2,62 - 2,54 (4H, 2 kolmen viivan kohtaa, CH2CN), 2,328 (3H, s, N-CH3), 2,15 - 1,95, 1,8 - 1,6 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,341 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
434 9 6 311
Esimerkki 125 (4R,5S,6S)-4“[2"-(1-N-atsetidino)etyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso -1 - a t sabi syklo [3.2.0] hept - 2 -eeni - 2 -karboksyyl i -5 happo OH CK.CHnN^^ J Γ ^
10 H3C Γ /)—SCH-CH-CN
COoK
ύ 15 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli] -4- (2"-tert-butyylidimetyylisi-lyylioksietyyli)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20
073DilS CH«CK«0m3DilS C TS D il £ CH-CK-CTEDKS
J L L· m L· L· JJr-' "3' 25 -
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(2R,4R,5R,6S)-6-[ (1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4-(2"-30 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli )-3,7-diokso-l-at-sabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (27,2 mmol, valmistettu syklisoimalla 15,08 g, 27,2 mmol diatsoprekurso-ria) kuivassa asetonitriilissä (200 ml), käsiteltiin 0 -5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloori-35 fosfaatilla (6,3 ml, 30,4 mmol), ja samanaikaisesti lisät- 96311 435 tiin 5 min aikana N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (5,0 ml, 28.7 mmol). Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyli-aminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 1 h. Lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (9,5 ml, 54,5 mmol) 5 ja sen jälkeen β-merkaptopropionitriiliä (4,6 g, 53.8 mmol) asetonitriilissä (10 ml) tipoittain, ja saatua seosta sekoitettiin 30 min.
Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliaseta atilla 1), pestiin kylmällä vedellä, kylläisellä natrium-10 bikarbonaatilla, 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaatti-puskurilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä (7,5 x 11 cm) käyttäen etyyliasetaatin gra-dienttia (0 - 5 %) tolueenissa eluenttina. UV-aktiiviset 15 fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 11,19 g (69 %) otsikon ainetta öljynä, joka muuttui kiinteäksi, kun sen annettiin seistä. Uudelleenkiteytettiin heksaaneista, jolloin saatiin otsikon yhdiste pitkinä neuloina: s.p. = 95 °C; [a]22 = +48,9° (c 1,0, CHC13).
20 UV (EtOH) λ max: 318 nm (11 930); IR (KBr) \) max: 1770 (β-laktaamin C=0) ja 1700 cm*1 (esterin C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,08 ja 0,09 (2s, 3H ja 9H, SiCH3), 0,89 ja 0,91 (2s, 2 x 9H, Si-t-Bu), 1,27 (d, 25 J = 6,15 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6 - 2,1 (m, 2H, CH2-4), 2,67 (=t, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,1 ja 3,2 - 3,4 (2m, 2H, SCH2), 3,10 (dd, JH6 H5 = 2,52 Hz, JH6 H1 = 6,26 Hz, 1H, H-6), 3,45 -3,65 ja 3,75 - 3,9 (2m, 2H ja 1H, H-4 ja CH20Si), 4,21 (dd päällekkäin CH3CH0:n kanssa, JH5 H6 = 2,52 Hz, 1H, H-5), 4,24 30 (m, 1H, CH3CHO), 4,74 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin CH).
Analyyttisesti laskettu yhdisteelle C2gH50N205SSi2: C 58,55; H 8,47; N 4,71; S 5,39;
Todettu: C 58,45; H 8,37; N 4,73; S 5,24.
96311 436 B.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli]-3-[ (2-syaanietyyli) tio] -4-(2"-hyd-roksietyyli) -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti 5
OTEDuS CE7CHoOTEDk5 OTEDKS CK2CH:CH
\r I j H:C n^-SC^Cä^CS AcoT* 2“ I ,^-SCh2Cr,2Cl, io 0 co2'^> ° co2^^
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[ (1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4-( 2" -15 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)-3-[(2-syaanietyyli )tio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti (11,19 g, 18,8 mmol) tetrahydrofuraanissa (250 ml), käsiteltiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna etikkahapolla (6,5 ml, 0,113 mol) ja sen jälkeen 56 ml:11a 20 (56,0 mmol) 1,0 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa. Liuosta pidettiin sen jälkeen 10 °C:ssa 18 h. Sitten reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (1 1), pestiin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuo-25 tin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, joka --kromatografoitiin silikageelillä (7,5 x 12 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gradientilla tolueenissa (3:7 -» 1:1), jolloin saatiin 6,80 g (75 %) otsikon yhdistettä paksuna la-simaisena aineena: 30 IR (NaCl, kalvo) ^ ΒΛΧ: 3500 (OH), 2260 (CN), 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); ^ NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,89 (S, 9H, Si-t-Bu), 1,29 (d, J = 6,13 Hz, 3H, CH3CH0), 1,6 - 2,1 (m, 2H, CH2-4), 2,70 (=t, 2H, CH2CN), 2,95 - 3,1 ja 35 3,2 - 3,4 (2m, 2H, SCH2), 3,18 (dd, JH6 H5 = 2,63 Hz, JH6 H1 = 437 Γ/ττΜ
' κ.! > I
7,02 Hz, 1Η, Η-6), 3,54 (leveä t, 1Η, H-4), 3,6 - 4,0 (m, 2H, CH2OH), 4,15 - 4,3 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO päällekkäin), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin CH).
5 C. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-(l-N-atsetidino)etyy- li] -6- [(1'R)-1' -tert-butyylidiraetyylisilyylioksietyyli] - 3- [ (2-syaanietyyli) tio] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
10 CTEDK5 CE,CH20H °^DliS
J / ‘ } f ~ S;: I λ—SCSjCHjCS -- h5c I i ,)-scb2cb2ck 0 ° co2^· 15
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1' R) -1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-syaani-20 etyyli )tio] -4-( 2"-hydroksietyyli )-7-okso-l-atsabisyklo[-3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,07 g, 2,22 mmol) kuivassa dikloorimetaanissa (18 ml), jäähdytettiin -78 °C:seen ja käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,57 ml, 3,27 mmol), ja w 25 sen jälkeen lisättiin tipoittain trifluorimetaanisulfoni- happoanhydridiä (0,39 ml, 2,31 mmol) tipoittain 5 min aikana. 30 min jälkeen -78 cC:ssa lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,57 ml, 3,27 mmol) ja sen jälkeen tipoittain atsetidiiniä (0,18 ml, 2,67 mmol) 5 min 30 aikana. Reaktioseosta sekoitettiin -78 °C:ssa 30 min, läm-; mitettiin hitaasti -20 °C:seen 30 min aikana ja sekoitet- * tiin tässä lämpötilassa 1 h. Sen jälkeen reaktio pysäytet tiin lisäämällä se kylmään etyyliasetaatin (200 ml) ja veden (20 ml) seokseen. Orgaaninen faasi pestiin suolaliu-35 oksella (2 x 20 ml), kuivattiin (MgSO<) ja haihdutettiin 438 resu alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä (3,5 x 12 cm) käyttäen asetonia eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 0,639 g (55 %) otsikon yhdistettä öljynä. TLC:n ja 1H-NMR:n mukaan tämä 5 aine sisälsi 25 % tuotetta, joka oli saatu B-laktaamin avaamisesta atsetidiinilla.
IR (NaCl, kalvo) 2255 (CN), 1775 (B-laktaamin C=0), 1712 (esterin C=0) ja 1645 (avatun tuotteen amidi); XH NMR (200 MHz, CDC13) δ: 0,08 (s, 6H, SiCH3), 0,88 10 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,29 (d, J = 6,13 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 1,8 (m, 2H, CH2-4), 2,07 (m, 2H, atsetidiinin CH2-3), 2,69 (=t, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,5 (leveä m, 10H, atsetidiinin CH2-2 ja -4, etyylin CH2-2, H-4 ja H-6 ja SCH2), 4,15 (dd, Jh5.h6 = 2,55 Hz, JH5H4 = 9,45 Hz, 1H, H-5), 4,17 (m, 1H, 15 CH3CH0), 4,73 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin CH).
D. Ällyyli-(4R,5S,6S)-4-[2"-(1-N-atsetidino)etyyli ] -3- [ (2-syaanietyyli) tio] - 6-[(l'R)-l’ -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 CT3Dr.5 ch7ch,n//n^> OH. οη,οη.ν^ I r “v \ f ^ "s lu-*****· w’ 3 25 0 °'
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-[2"-(1-N-atsetidino)etyyli]-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisi-30 lyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,639 g, 1,23 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (8 ml), jäähdytettiin -15 °C:seen ja käsiteltiin käyttäen typpeä suoja-kaasuna etikkahapolla (0,42 ml, 3,7 mmol) ja sen jälkeen 35 3,7 ml:11a (3,7 mmol) 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin 96311 439 liuosta tetrahydrofuraanissa. Sen jälkeen liuosta sekoitettiin 0 °C:ssa 140 h. Sitten lisättiin 1,2 g kiinteää jauhemaista natriumbikarbonaattia, ja seosta sekoitettiin 10 min. Sen jälkeen orgaaninen faasi kromatografoitiin 5 silikageelillä (3,5 x 3,5 cm) käyttäen asetonin ja N,N-dimetyyliformamidin seosta (9:1) eluenttina. Oleelliset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 0,39 g (78 %) otsikon ainetta öljynä. XH-NMR:n mukaan tämä aine oli noin 50-prosenttisen puhdasta ja se sisälsi jonkin verran N,N-10 dimetyyliformamidia ja jonkin verran tetrabutyyliammonium-suolaa. Tämä tuote käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
IR (NaCl, kalvo) V max: 2250 (CN), 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); 15 XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,39 (d, J = 6,31 Hz, 3H, CH3CHO), 1,7 (m, 2H, CH2-4), 2,27 (m, 2H, atsetidiinin CH2-3), 2,67 (=t, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,2 - 3,4 (m, 4H, H-4, H-6 ja etyylin CH2-2), 3,58 (t, J = 7,6 Hz, atsetidiinin CH2-2 ja -4), 4,10 (dq, Jh.Ch3 = 20 6,31 Hz, JH H6 = 8,86 Hz, 1H, CH3CH0), 4,28 (dd, JH5 H6 = 3.12 Hz, JH5 H4 = 8,86 Hz, 1H, CH3CH0), 4,28 (dd, JH5 H6 = 3.12 Hz, JH5H4 = 10,26 Hz, 1H, H-5), 4,75 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin CH).
25 E. (4R,5S,6S)-3-[2"-(1-N-atsetidino)etyyli]-3-[ (2- syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1·-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
CH CH^CrUN^ On CH-CK-N^N
so ] r ^ f r ‘ ·_· .-"'V-r-Λ H _Λ I I />—sch2ch2cn -- i se:-:,::-:.::;; ,r~^( ‘ *
C02^ '·' CO^H
06? 11 440 ' 1
Liuosta, jonka muodosti raakatuotteena oleva allyy-li-(4R,5S,6S)-4-[2"-(1-N-atsetidino)etyyli]-3-[(2-syaani-etyyli )tio] - 6- [ (1'R)-l' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,39 g, 5 0,96 mmol) etyyliasetaatissa (15 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trife-nyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,050 g) ja 3 ml:lla (1,5 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 30 min kuluttua reaktioseosta uutettiin 10 vedellä (30 ml ja 20 ml), ja yhdistettyä uutetta pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi. Sen jälkeen lisättiin 8 ml 0,2 M pH-arvon 6 omaavaa fosfaatti-puskuria, ja liuos kromatografoitiin käänteisfaasisilika-geelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 13 cm) käyttäen asetonitrii-15 Iin gradienttia (0 - 5 %) vedessä eluenttina. UV-aktiivi-set fraktiot yhdistettiin, lyofilisoitiin ja kromatografoitiin toisen kerran samalla pylväällä. Lopuksi lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,065 g (19 %) otsikon karbape-neemiä valkoisena amorfisena jauheena: 20 Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,4 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 6,41 min; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ti nax: 298 nm 25 (8 422); ~ IR (KBr) ^ aax: 2250 (CN), 1760 (β-laktaamin C=0) ja 1600 cm'1 (karboksylaatin 00); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,33 (d, J = 6,38 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,52 (m, 2H, atsetidii-30 nin CH2-3), 2,85 (m, 2H, CH2CN), 2,85 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,2 - 3,5 (m, 3H, etyylin CH2-2 ja H-4), 3,41 (dd päällekkäin etyylin CH2-2:n kanssa, Jh6.h5 = 2,70 Hz, Jh6.hi = 6,86 Hz, 1H, H-6), 4,17 (m, 4H, atsetidiinin CH2-2 ja -4) ja 4,2 - 4,35 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0).
96311 441
Esimerkki 126 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli)tio] -6- [ (1 'R) -1' -hyd-roksietyyli]-4-[2"-(4-metyylipiperatsin-l-yyli)-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-5 karboksyylihappo nu / \ OH CH2CK,-N K-CH3 i r · \_y
H
3 1 />—SCK^CH-jCN
10 co2h A.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1?R)-1'-tert-butyylidime-15 tyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-[2"-(4- metyylipiperatsin-l-yyli)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OTEDuS CH,CH,0H 0T3DKS CH,CH-/ \-CH- 20 ] 1 - I f 2 - \_/ Y r'"""·:·--A ..
3" |l Λ—SCH,CH?CK -► -3C i 5CHAH.CN
N^y y)—N -</ ' 4 W 25
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l Ή)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-syaani-etyyli )tio] -4- [2"-( 4-metyylipiperatsin-l-yyli )etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30 (1,0 g, 2,08 mmol) kuivassa dikloorimetaanissa (20 ml), jäähdytettiin -78 °C:seen ja käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,54 ml, 3,1 mmol), ja sen jälkeen lisättiin trifluorimetaanisul-fonihappoanhydridiä (0,40 ml, 2,38 mmol) tipoittain 5 min 35 aikana. 20 min jälkeen -78 °C:ssa lisättiin tipoittain 1- 442 9CZ' 1 metyylipiperatsiinia (1,0 ml, 9,01 mmol), ja saatu liuos lämmitettiin hitaasti -20 eC:seen ja sekoitettiin tässä lämpötilassa 1,5 h. Sen jälkeen reaktio pysäytettiin lisäämällä kylmää etyyliasetaattia (200 ml) ja vettä. Orgaa-5 ninen faasi pestiin vedellä, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 1,4 g kirkasta öljyä, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. 1H-NMR:n mukaan tässä tuotteessa oli epäpuhtautena jonkin verran 1-metyylipiperatsiinia.
10 IR (NaCl, kalvo) 0 max: 2260 (CN), 1775 (3-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); aH NMR (200 MHz, CDC13) δ: 0,08 (s, 6H, SiCH3), 0,88 (2, 9H, Si-t-But), 1,28 (d, J = 6,05 Hz, 3H, CH3CH0), 1,5 - ^ 2,0 (m, 2H, CH2-4), 2,3 (s, 3H, NCH3), 2,3 - 2,6 (m, 10H, 15 etyylin CH2-2 ja piperatsiinin CH2), 2,6 - 2,8 (m, 2H, CH2CN), 2,9 - 3,1 ja 3,2 - 3,4 (m, 2H, SCH2), 3,19 (dd, jh6.h5 = 2,37 Hz, JH6H1 = 6,6 Hz, 1H, H-6), 3,3 (m, 1H, H-4), 4,19 (dd päällekkäin CH3CH0:n kanssa, JH5 H6 = 2,37 Hz, 1H, H-5), 4,22 (m, 1H, CH3CHO), 4,73 (m, 2H, allyylin CH2), 20 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1’R)-1’-hydroksietyyli]-4-[2"-(4-metyylipiperatsin-l-yyli) etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti 25 — 0TED“S CH,CK»-/ VcK, OH C K ,C K/ \-CH, j w j r ‘ w ' ... r>x Λ
| i /)—SCK-CHyCN -► j ! ,)—SCH-CH-CN
' ‘ 30 C02y/^> CC,
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-syaani-35 etyyli )tio] -4-[2"-(4-metyylipiperatsin-l-yyli )etyyli] -7- 96311 443 okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,17 g, 2,08 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (50 ml), jäähdytettiin -20 eC:seen, ja lisättiin tipoittain ja käyttäen typpeä suojakaasuna etikkahappoa (1,55 ml, 5 27,1 mmol) ja sen jälkeen 14,6 ml, (14,6 mmol) 1 M tetra- butyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa. Sen jälkeen liuosta pidettiin 10 °C:ssa 7 vuorokautta. Sitten reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), pestiin kylmällä kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suola-10 liuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 1,45 g raakatuotekarbapenee-miä. Kromatografoitiin silikageelillä (3,5 x 6 cm) käyttäen asetonin ja N,N-dimetyyliformamidin seosta (9:1), jolloin saatiin 0,57 g (61 %, kahdelle vaiheelle) otsikon 15 karbapeneemiä öljynä. 1H-NMR:n mukaan tämä aine sisälsi yhden ekvivalentin N,N-dimetyyliformamidia.
IR (NaCl, kalvo) \) B1M: 2250 (CN), 1770 (S-laktaamin C=0) ja 1710 cm'1 (esterin C=0); XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,24 Hz, 3H, 20 CH3CH0), 1,6 - 2,0 (m, 2H, CH2-4), 2,29 (s, 3H, NCH3), 2,3 - 2.8 (m, 12H, piperatsiinin CH2, etyylin CH2-2 ja CH2CN), 2.9 - 3,1 ja 3,2 - 3,4 (m, 2H, SCH2), 3,24 (dd päällekkäin SCH2:n kanssa, JH6 H5 =2,7 Hz, JH6 H1 = 6,9 Hz, 1H, H-6), 3,42 (m, 1H, H-4), 4,23 (m, 1H, CH3CHO), 4,28 (dd, JH5 H6 = ^ 25 2,7 Hz, JH5 H4 = 9,5 Hz, 1H, H-5), 4,76 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 ppm (2 x m, 2H ja 1H, allyylin CH).
C. (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli] -4- [2"-(4-metyylipiperatsin-l-yyli)etyyli] -30 7-okso-l-atsabisyklo[3.2,0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo V'; C H - C H - -}/ \'-CK3 CH f- -j .v7 \-rv
j - w ] y™ \AC"S
i I —5c:-:,c:-:,cn -► -3- 1 ; \_ri.
A/ - 1 ; /y- «- w.. 2^ li 2^ A'
C:/ C 0 2 H
96311 444
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(l’R)-l'-hydroksietyyli]-4-[2"-(4-metyylipiperatsin-l-yyli)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,57 g, 1,27 mmol) 5 kuivassa etyyliasetaatissa (25 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfii-ni )palladiumilla [0] (0,075 g) ja sen jälkeen 2,8 ml:lla (1,4 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 45 min kuluttua reaktioseosta uutettiin 10 peräkkäin 50 ml:11a 0,1 M pH-arvon 6,0 omaavaa fosfaatti-puskuria ja 25 ml:11a vettä. Yhdistettyä vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi ja sen jälkeen kromatografoitiin kaksi kertaa käänteisfaa-sisilikageelillä (y-Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm). Eluoitiin 15 asetonitriilin gradientilla (0 - 5 %) vedessä, jolloin saatiin 0,28 g (54 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena jauheena pakastuskuivauksen jälkeen: [a]2D2 = +35,3° (c 1,0, H20).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97 % p-Bondapak-Cie: 11a, 20 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaat tipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 6,6 min; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ^ : 300 nm (8 390); 25 IR (KBr) ^ aax: 2250 (CN), 1755 (β-laktaamin C=0) ja _ 1595 cm*1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,33 (d, J = 6,39 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6 - 2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,75 (s, 3H, NCH3), 2,6 - 3,3 (m, 12H, piperatsiinin CH2, SCH2 ja 4-etyylin CH2-2), 30 3,3 - 3,5 (m, 2H, H-4 ja H-6 päällekkäin) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0).
/1 /1 K ^ t- \J I
445
Esimerkki 127 (4R, 5S, 6S)-4-(3"-guanidinopropyyli)-6-[(l'R)-l'- hydroksietyyli]-3-([2-(1-pyrrolidinyyli)etyyli]- tio)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-5 boksyylihapon etikkahapposuola “Oac jjf'·1 (ch2)2nhcc=kh)i;h-. hcac
CS: fe>-5tcss).0 -C5j 'tQ-SCCHOiO
10 ^ \
C0:K L C 0 2 H
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6-S )-4-( 3"-aminopropyyli )-6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli] -3- ( [2-15 (1-pyrrolidinyyli )etyyli] tio)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]- hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (vastaavan atsidojohdannaisen hydrogenolyysistä, 115 mg, 0,270 mmol) 0,05 M fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (15 ml), käsiteltiin 0,1 N vesipitoisella Na0H:lla pH:n nostamiseksi välille 8,0 - 8,2 ja 20 sen pitämiseksi siinä aminoiminometaanisulfonihapon (170 mg, 1,30 mmol) asteittaisen lisäyksen aikana. Seosta sekoitettiin 3 h (pH pidettiin välillä 8 - 8,2), sen jälkeen neutraloitiin 0,1 M vesipitoisella NaH2P04:lla. Vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (20 g, w 25 0,005 M etikkahapon vesiliuos, 1 -* 2 % CH3CN/0,005 M etik- kahapon vesiliuos), jolloin saatiin otsikon yhdiste (75 mg, 75 %) valkoisena lyofilisoituna jauheena.
Puhtaus: 98,07 % määritettynä HPLC:llä (viipymäai-ka = 8,86 min, p-Bondapak-C18, 10 M, 20 % CH3CN/KH2P04, 30 0,01 M pH 7,4); UV (vesi) λ aax: 296 (6723); IR (Nujol) 3400 - 3100 (OH, NH2), 1760 (B- laktaamin C=0), 1670, 1635 (C=N) ja 1485 cm'1 (karboksy- laatin C=0); 446 963 n XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,35 - 4,23 (1H, m, H-l’), 4,264 (1H, dd, J = 3,1 Hz, J = 9,8 Hz, H-5), 3,399, 3,384 (d, J = 3,1 Hz, osa H-6:a), 3,40 - 3,138 (UH, m, H-4, CH2-NH, S-CH2CH2N, CH2-N-CH2 ja osa H-6:a), 2,12 - 2,05 (4H, 5 (CH2)2, pyrrolidiini), 1,919 (1,5H, s, CH3C02), 1,95 - 1,4 (2 m-kohtaa, CH2CH2 4-asemassa) ja 1,320 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 128 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-N,N-dimetyy- 10 liaminoetyyli) tio]-6-[ (1 ’R) -1 ’ -hydroksietyyli] -7- okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-hapon etikkahapposuola OH (CH2)3NK2.H0Ac 15 ,X f c&2 JOO—S(CH2)2H(CH3)2 0 co2a 20 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(2- N,N-dimetyyliaminoetyyli)tio] -6- [ (1 ?R) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti OTES/ρμ-νντ Oh 25 F m (^2)3^3 _ J ' f
Ch3 —5(CH,)20H — - nQ>-S(Ca:)2R(Cfi3): C02N^^^» C02X^ 30 Kylmään (hiilihappojää-asetonihaude) liuokseen, : jonka muodosti allyyli-( 4R, 5S, 6S )-4-( 3'*-atsidopropyyli)- 3 - [ ( 2-hydroksietyyli )tio] —6—[(1 *R) — 1 * -trietyylisilyy-lioksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (3,29 g, 6,45 mmol) CH2Cl2:ssa (60 ml), 35 lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,90 ml, :l Id i 1,111 I i i M . i - 96311 447 16,8 mmol) ja sen jälkeen lisättiin tipoittain trifluori-metaanisulfonihappoanhydridiä (1,29 ml, 7,7 mmol). 20 min pituisen sekoitusajan jälkeen reaktioseoksen läpi vietiin 1,5 min ajan dimetyyliamiinikaasuvirta. Seosta sekoitet-5 tiin 15 min -78 °C:ssa ja 30 min -15 °C (jää-metanoli), sen jälkeen laimennettiin jääkylmällä etyyliasetaatilla (250 ml) ja dietyylieetterillä (50 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (10 x 50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja kuivattiin (MgS04). Liuottimen haihdutuksella saatu jäännös 10 liuotettiin vedettömään tetrahydrofuraaniin (30 ml), jäähdytettiin -15 °C:seen (jää-metanoli), sen jälkeen käsiteltiin jääetikalla (2,1 ml, 38,7 mmol) ja 1 M tetrabutyyli-ammoniumfluoridin tetrahydrofuraaniliuoksella (19,4 ml, 19,4 mmol), ja annettiin seistä -20 °C:ssa 18 h. Seos lai-15 mennettiin jääkylmällä etyyliasetaatilla (150 ml), pestiin kylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (3 x 75 ml), suolaliuoksella (75 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (75 g, 50 - 100 % etyyli-asetaatti/heksaani, 10 % -> 100 % asetoni/etyyliasetaatti, 20 15 % metanoli/asetoni), jolloin saatiin otsikon yhdiste (605 mg, 22 %) keltaisena öljynä.
IR (CH2C12) \J b„: 3600, 330 (OH), 2100 (N3), 1775 ja 1610 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,1 - 5,9 (1H, m, vinyy-^ 25 Iin H), 5,5 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,88 - 4,62 (2H, m, allyylin CH2), 4,247 (1H, dd, J - 2,7 Hz, J = 9,5 Hz), 4,3 - 4,2 (1H, m, H-l'), 3,43 - 3,2 (3H, m, H-l', CH2N3), 3,244 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,4 Hz, H-6), 3,1 - 2,8 (2H, m, SCH3), 2,65 - 2,56 (2H, m, CH2N), 2,335 (6H, s, 30 N(CH3)2), 2,0 - 1,56 (5H, m, CH2CH2-4, OH) ja 1,391 ppm (3H, : d, J = 6,3 Hz, CH3).
448 963'1 B. (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(2-N,N-di- metyyliaminoetyyli)tio]-6-[(l’R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo ^ OH ffu i w OH γγη^χ1 ^ 1^2--3^3 ___^ y-n2J3;'3 3 5 ( c*“ 2 ) ( CH3 ) 2 *" 2 ( cn2 ) 2^T ( ^-"-3 ) 2
0 C02n^ 0 C02K
10
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-(3”-atsidopropyyli )-3- [ (2-N, N-dimetyyliamino- ^ etyyli )tio] -6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-15 syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (588 mg, 1,39 mmol) CH2Cl2:ssa (35 ml), käsiteltiin ensin Pd(PPh3)4:lla (123 mg, 0,1 mmol), ja sen jälkeen lisättiin tipoittain N-metyylianiliinia (0,3 ml, 2,78 mmol). Seosta sekoitettiin 25 min. Sen jälkeen lisättiin 0,1 M pH-arvon 20 7,0 omaavaa fosfaattipuskurin vesiliuosta (80 ml) ja di- etyylieetteriä (150 ml). Faasit erotettiin, ja orgaanista faasia uutettiin 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaatti-puskurin vesiliuoksella (2 x 30 ml). Vesifaasit yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (2 x 50 ml) ja vietiin μ-25 Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (75 g, vesi, 2 % -* w 30 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (399 mg, 75 %) vaaleankeltaisena lyofilisoituna jauheena.
IR (Nujol) \>„ax: 3500 - 3100 (OH), 2100 (N3), 1750 ja 1590 cm'1 (C=0); 30 NMR (Da0, 200 MHz) 6: 4,264 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,3 Hz, H-5), 4,34 - 4,2 (1H, m, H-l'), 3,475 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,0 Hz, H-6), 3,5 - 3,2 (3H, m, CH2N3 ja H-1'), 3,2 - 2,95 (4H, m, SCH2 ja CH2N), 2,0 - 1,8, 1,8 -1,47 (4H, 2 m-kohtaa, H-CH-4 ja HCHCH2-4) ja 1,33 ppm (3H, 35 d, J = 6,3 Hz, CH3).
449 96511 C. (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2-N,N-dime-tyyliaminoetyyli)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etik-kahapposuola 5 (°H2hh 2H C C H 2) 3 N H 9. HO A c
CH3 W-\ n rvj\ J
J-N^“S(CH2^N(CH3)2 — ‘ 3 -S ( C H 2 ) 2 K ( C H 2 ) 2
10 CC2h 0 C02K
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidopropyyli )-3- [ ( 2-N, N-dimetyyliamino-15 etyyli )tio] - 6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (250 mg, 0,65 mmol) vedessä (50 ml), ravistettiin Parrin hydraus-laitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1 h:n ajan käyttäen 5-prosenttista Pd:a alumiinioksidilla 20 katalyyttinä. Sen jälkeen lisättiin vielä katalyyttiä (600 mg), ja hydrausaikaa jatkettiin vielä yksi tunti. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja pestiin vedellä (3 x 5 ml). Vesipitoisen seoksen pH säädettiin arvoon 4,5 1 M etikkahapon vesiliuoksella, minkä jälkeen se vietiin 25 p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (75 g, 0,005 M * jääkylmä etikkahapon vesiliuos, 1 % CH3CN/0,005 M etikkaha pon vesiliuos), jolloin saatiin otsikon yhdiste (215 mg, 79 %) vaaleankeltaisena lyofilisoituna kiinteänä aineena.
Puhtaus: 96,1 % määritettynä HPLC:llä (viipymäaika 30 = 5,83 min, p-Bondapak-Clg, 10 μ, 10 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, pH 7,4); UV (vesi) λ max: 296 (8142); IR (Nujol) V max: 3400 - 3100 (OH, NH2), 1755 ja 1600 cm’1 (C=0 ); os’*' 11 450 " ‘ V * lH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,273 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,9 Hz, H-5), 4,4 - 4,2 (1H, m, H-l'), 3,458 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 6,2 Hz, H-6), 3,4 - 3,2 (3H, m, CH2N ja H-4), 3,2 - 3,0 (4H, m, SCH2 ja CH2N), 2,91 (6H, s, 5 (N(CH3)2), 1,92 (2,5H, s, CH3C02H), 2,0 - 1,4 (4H, m, CH2CH2-4) ja 1,330 (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
Esimerkki 129 (4R, 5S, 6S) -3-{ (4S) - 4- [ (2S) -2-dimetyyliaminokarbo-nyyli]pyrrolidinyylitio}-4-(2"-guanidinoetyyli)-6-10 [(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etikkahappo-suola
X - H
- CHoCHoNH, OH CH-CK-.N'K-C-KH-
15 fX_A
—K ^// V-K-H J.—t; \—N-n
“°2K c-2h . CH;.C0:H
20
Liuoksen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(2"-amino-etyyli ) -3-{(4S ) - 4-[(2S)-2-dimetyyliaminokarbonyyli]pyrro-lidinyylitio}-6- [ (11 R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihaponetikkahapposuo-25 la (0,24 g, 0,51 mmol) 25 ml:ssa kylmää (0 - 5 eC) vettä, w ' pH säädettiin välille 8 - 8,5 IM natriumhydroksidilla.
Sen jälkeen lisättiin aminoiminometaanisulfonihappoa (0,38 g, 3,06 mmol) pieninä annoksina (5 min) niin, että pH pidettiin välillä 8 - 8,5 1 M natriumhydroksidilla li-30 säyksen aikana ja vielä 2 h:n ajan. Sen jälkeen pH säädettiin arvoon 5 etikkahapolla, ja saatu liuos kromatografoi-tiin käänteisfaasisilikageelillä (y-Bondapak-C18, 2,5 x 15 cm). Eluoitiin asetonitriilin gradientilla (0 - 20 %) 0,005 M etikkahapon vesiliuoksessa, jolloin saatiin :l Ht>l liiti lii I iti r-Γ?."1 451 · '* v' 1 0,063 g (24 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena pakastuskuivauksen jälkeen:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 94 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-5 puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, vii-pymäaika 15,6 min; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ^ n„: 300 nm (8011); IR (KBr) V 1760 (β-laktaamin C=0), 1660 (amidin 10 C=0) ja 1600 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,32 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7 - 2,2 (m, 3H, pyrrolidiinin H-3 ja CH2-4), 1,92 (s, CH,C0,H), 3,0 ja 3,07 (2s, 2 x 3H, CON(CH3)2), 3 -3,1 (m päällekkäin NCH3:n kanssa, 1H, pyrrolidiinin H-3), 15 3,2-3,6 (m, 5H, pyrrolidiinin H-5, H-4, H-6 ja etyylin CH2NH), 3,65 (dd, Jgem = 12,2 Hz, JHS H4 = 5,85 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-5), 3,9 (m, 1H, pyrrolidiinin H-4), 4,28 (m päällekkäin H-5:n kanssa, 1H, CH,CH0), 4,31 (dd, JH5 H6 = 2,75 Hz, JH5 H4 9,8 Hz, 1H, H-5) ja 4,70 ppm (t, J = 20 8,5 Hz, 1H, pyrrolidiinin H-2).
Esimerkki 130 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(N,N-dimetyyli-amidinometyyli)tio]-6-[(1’R)-1’-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-^ 25 hapon etikkahapposuola ch c:-:2ch;ce;k3 y· c:-:2ch:c:-:;kh; >Kh A:CE Κ3^Χ^Τ"\_ξ:κ^^ΚΓ' />—S^·'· “w " ^KiCHa'.z 30 \ ' "'·· :v \
C0,H CC;K
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopro-pyyli )-3- [ (N, N-dimetyyliaminometyyli )tio] -6- [ (1 ’ R) -1 ’ -hyd-35 roksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar- 0,<71 η
452 ** - ^ 5 I
boksyylihappo (0,270 g, 0,68 mmol) kylmässä vedessä (80 ml), hydrattiin 0-5 eC:ssa käyttäen 1,2 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) vetypaineessa 1 h:n ajan. Sen jälkeen lisättiin 5 etikkahappoa (0,08 ml, 1,4 mmol) (pH muuttui arvosta 9 arvoon 4), ja katalyytti suodatettiin. Suodos kromatogra-foitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 12 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 20 %) 0,01 M etikkahapon vesiliuoksessa. UV-aktiiviset fraktiot 10 lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,200 g valkoista amorfis ta jauhetta, joka oli 1H-NMR:n mukaan otsikon aineen ja asetamidiiniasetaatin ekvimolaarinen seos. Tämä seos liuotettiin etanoliin (1 ml) ja saostettiin dietyylieetterillä (3 ml). Saatu kiinteä aine (= 0,088 g) kromatografoitiin 15 samalla pylväällä kuin edellä, jolloin saatiin 0,080 g (27 %) puhdasta otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 96 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 3 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-20 puskuri, virtausnopeus 2 ml/min, UV-detektori 300 nm, vii-pymäaika 9,3 min; UV (H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri) max: 292 nm (5872); IR (KBr) Ό B(UC: 1760 (B-laktaamin C=0), 1645 (olka-25 pää) ja 1575 cm'1 (karboksylaatin C=0); — XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,38 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,91 (s, 3H, CH3C02H), 3-3,4 (m, 3H, H-4 ja CH,NH,), 3,12 ja 3,29 (2s, 2 x 3H, N(CH3)2), 3,50 (dd, JH6H5 = 2,92 Hz, JH6 H1 = 30 6,32 Hz, 1H, H-6), 3,84 (s, osittain vaihtunut, SCH2) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin).
453 96311
Esimerkki 131 (4R, 5S, 6S) -4- [2" - (2-aminoetyylitio) etyyli] -3- [ (2-syaanietyylitio]-6-[(1’R)-1’-hydroksietyyli]-7-ok-so-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyyli-5 happo SK (CK2)2S(CE2)2KK2
^X
10 3 n>5(CH!)i»
0 W
A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-[2"-(2-allyylioksikarbonyy-15 liaminoetyylitio)etyyli]-6-[(1’R)-1'-tert-butyylidimetyy-lisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti CT3D“S 0T3DK^c , 20 Λ (CHz)2°H y-2^s-vCH:i:i.*.co2's^ CKj ^0-sciH,)iCS —- cs> ° CC2\^S c co:^.
""I 25 Kylmään (hiilihappojää-asetoni) liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli]-3-[ (2-syaanietyyli)tio] -4-(2"-hyd-roksietyyli) -7 -okso-1 -atsabi syklo [3.2.0] hept- 2 -eeni - 2 -kar-boksylaatti (350 mg, 0,73 mmol) dikloorimetaanissa (7 ml), 30 lisättiin ensin di-isopropyylietyyliamiinia (0,34 ml, 1,9 mmol) ja sen jälkeen tipoittain trifluorimetaanisul-fonihappoanhydridiä (0,14 ml, 0,88 mmol). Seosta sekoitettiin 25 min, siihen lisättiin tipoittain N-allyylioksikar-bonyylikysteamiinia (354 mg, 2,2 mmol) dikloorimetaanissa 35 (1 ml), ja sen jälkeen sekoitettiin 0,5 h -15 °C:ssa (hii- «♦ S6311 lihappojäähaude korvattiin jää-metanolihauteella). Seokseen lisättiin jälleen vielä tiolia (177 mg, 1,1 mmol) dikloorimetaanissa (0,5 ml) ja di-isopropyylietyyliamiinia (0,13 ml, 0,73 mmol), sen jälkeen sekoitettiin vielä 5 30 min. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (30 ml), pes tiin jääkylmällä 1 M NaHS03:n vesiliuoksella (2 x 10 ml), vedellä (10 ml), IM NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 10 ml), vedellä (10 ml), suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi 10 (35 g, 10 % -* 50 % etyyliasetaatti/heksaani), jolloin saa tiin otsikon yhdiste (321 mg, 70 %).
IR (CH2C12) J 3450 (NH), 2250 (CN), 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1720 cm'1 (C=0, esteri ja karbamoyyli); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,82 (2H, m, vi-15 nyylin H), 5,48 - 5,19 (4H, m, vinyylin H), 5,1 (1H, leveä s, NH), 4,9 - 4,63 (2H, m, allyylin CH2), 4,583 - 4,55 (2H, m, allyylin CH2), 4,3 - 4,13 (1H, m, H-l'), 4,158 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,55 - 3,33 (3H, m, CH2N ja H-4), 3,33 - 3,19, 3,05 - 2,9 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2 3-ase-20 massa), 3,11 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,9 Hz, H-6), 2,9 -2,63 (6H, 2 m-kohtaa, CH2CN ja CH2S), 2,1 - 1,96, 1,96 -1,75 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,300 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,884 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,090 ppm (6H, s, di-metyyli).
25 B.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-[2"-(2-allyylioksikarbonyy- liaminoetyylitio)etyyli] -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1 Ή) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30 CTBDT.S OH . ,,r„ .
, vvrn ^ VV. f (οΓ.ο)25^υηη)Ξ1>η002\^> : f (Cn2)2S(Cn2J2^i,*C02sv^« J x CI"‘3 - Cr‘3 3(CH,)2Cn ° CC2N^. “ CO:^.
35 96311 455
Kylmää (jää-metanolihaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-[2"-(2-allyylioksikarbonyyliamino-etyylitio)etyyli]-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyk-5 lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (310 mg, 0,500 mmol) tetrahydrofuraanissa (7 ml), käsiteltiin jääetikalla (0,16 ml, 3,0 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabutyyliammo-niumfluoridin tetrahydrofuraaniliuoksella (1,5 ml, 1,5 mmol). Seoksen annettiin seistä kylmässä huoneessa 10 (5 °C) 15 vuorokautta, sen jälkeen laimennettiin etyyli asetaatilla (30 ml), pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesi-liuoksella (3 x 15 ml), vedellä (2 x 15 ml), suolaliuoksella (15 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin sili-kageeli-flash-pylvään läpi (15 g, 40 -* 100 % etyyliase-15 taatti/heksaani), jolloin saatiin otsikon yhdiste (155 mg, 60 %) keltaisena öljynä.
IR (CH2C12) 0 max: 3600 (OH), 3450 (NH), 2250 (CN), 1775 (C=0, β-laktaami) ja 1715 cm'1 (C=0, esteri ja kar-bamoyyli); 20 ΧΗ NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 6,05 - 5,8 (2H, m, vi- nyylin H), 5,50 - 5,20 (4H, m, vinyylin H), 5,05 (1H, leveä t, NH), 4,82 - 4,65 (2H, m, allyylin CH2), 4,586, 4,559 (2H, d, J = 5,5 Hz, allyylin CH2), 4,206 (d, J = 2,7 Hz, osa H-5:a), 4,22 - 4,05 (1H, m, H-l'), 3,7 - 3,5 (1H, m, ^ 25 H-4), 3,5 - 3,3, 3,3 - 3,1, 3,1 - 2,8, 2,8 - 2,6 (UH, H-6, CH2N, SCH2, CH2CN), 2,1 - 1,6 (3H, m, CH2-4 ja OH) ja 1,427 ppm (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3).
C. (4R, 5S, 6S) -4- [2*'- (2-aminoetyylitio)etyyli] -3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1»-hydroksietyyli]-7-okso-30 1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
Λ U 0 V
O -- r n u % c r u > W
(CH2)2S(CH2)2NHC02n^ i^2)2bi ^..2J2.<~2
Cr‘3 J1^S(ck2)2cn —- CK; s(c:-:2)2cn
C02\x^ w C02K
96311 456
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti allyy-li-(4R, 5S, 6S)-4- [2"-(2-allyylioksikarbonyyliaminoetyyli-tio)etyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-l'-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-5 sylaatti (150 mg, 0,29 mmol) dikloorimetaanissa ( ml), lisättiin ensin Pd(Pd3)4:a (53 mg, 0,040 mmol) ja sen jälkeen tipoittain N-metyylianiliinia (0,15 ml, 1,2 mmol). Seosta sekoitettiin 20 min, sen jälkeen laimennettiin di-etyylieetterillä (30 ml) ja 0,1 M pH-arvon 7,0 omaavalla 10 fosfaattipuskurin vesiliuoksella (15 ml). Orgaanista kerrosta uutettiin jälleen 0,1 M puskuriliuoksella (2 x 7 ml) ja vedellä (7 ml). ^
Vesipitoiset uutteet pestiin dietyylieetterillä (2 x 20 ml) ja vietiin p-Bondapak-Cie-käänteisfaasipylvään 15 läpi (45 g, vesi, 1 -» 6 % CH3CN/vesi), jolloin saatiin otsikon yhdiste lyofilisoituna jauheena (31 mg, 28 %).
Puhtaus: 98,0 % määritettynä HPLC:llä (viipymäaika = 6,26 min, p-Bondapak-C18, 10 μ, 5 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, pH 7,4); 20 UV (vesi) ft 300 (10 964); IR (Nujol) S Bax: 3500 - 3100 (OH, NH2), 2250 (CN), 1755 (C=0, β-laktaami) ja 1590 cm'1 (C=0); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,32 - 4,20 (1H, m, H-l'), 4,244 (d, J = 2,7 Hz, osa H-5:a), 3,608 - 3,494 (1H, m, 25 H-4), 3,407 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), 3,278 - ~ * 3,04 (3H, m, CH2N ja osia SCH2:sta 3-asemassa), 3,03 - 2,71 (6H, m, SCH2 3:ssa, SCH2 ja CH2CN), 3,70 - 2,49 (1H, m, osa SCH2:a), 2,10 - 1,95, 1,95 - 1,75 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,322 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
I : lli-fc lii» l i t *1 : > 457 963 ί 1
Esimerkki 132 (4R,5S,6S)-4-(2"-guanidinoetyyli)-6-[(1' R)-1'-hyd-roksietyyli] -3- [2- (l-pyrrolidinyyli)etyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-5 hapon etikkahapposuola
! (CH2)2KKC( = NH)NH2.H0AC
c;-3'oQ>-s(Ch2)20 10 0 co2h ~ A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1’R)- 1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[2-(1-pyrro-15 lidinyyli)etyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2- eeni-2-karboksylaatti
OTBDilS OTBDKS
f (CH2)2N3 r (CH2)2K3 20 Cch\ /—> “3 IX>-S(CH2)20H -* J 3 —5(°Η2)2Νν^\ C02x^ —. 25
Kylmään (hiilihappojää-asetoni) liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2-hydrok-sietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-30 karboksylaatti (1,0 g, 2,0 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (20 ml), lisättiin ensin di-isopropyylietyyliamiinia (0,92 ml, 5,2 mmol) ja tipoittain trifluorimetaanisulfoni-happoanhydridiä (0,40 ml, 2,4 mmol). Seosta sekoitettiin 30 min, lisättiin tipoittain pyrrolidiiniä (1,0 ml, 35 12 mmol) ja sekoitettiin 1 h -15 °C:ssa (jää-MeOH). Seos 96311 458 laimennettiin 1:1-suhteisella EtOAc:n ja petrolieetterin seoksella (100 ml), ja pestiin jääkylmällä vedellä (10 x 25 ml). Orgaaninen fraktio kuivattiin (MgS04) ja vietiin silikageeli-flash-kerroksen läpi (60 g, 20 % -» 100 % 5 EtOAc/heksaani, 20 % asetoni/EtOAc), jolloin saatiin otsikon yhdiste (640 mg, 58 %) öljynä.
IR (CH2C12) n) Bax: 2100 (N3), 1775 ja 1720 cm'1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,1 - 5,8 (1H, m, vinyylin H), 5,5 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,55 (2H, m, 10 allyylin CH2), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l · ), 4,12 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,7 - 3,5 (1H, m, H-4), 3,4 -3,2 (2H, m, CH2N3), 3,07 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 7,9 Hz, H-6), 3,04 - 2,76 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,76 - 2,5 (6H, ~ m, CH2N), 2,15 - 1,95 (1H, m, HCH), 1,9 - 1,6 (5H, m, (CH3)2 15 ja H-CH), 1,313 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 0,895 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,094 ppm (6H, s, dimetyyli).
B.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-[2-(l-pyrrolidinyyli)etyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 jBDi1S(CH2)2N3 JH LCH2)2K3 —cE3 25 0 C02S^. ° ' C02\^ c
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti 30 allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-( 2"-atsidoetyyli )-6-[(l'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [2-(1-pyrrolidinyy-li)etyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (620 mg, 1,1 mmol) vedettömässä tetrahydro-furaanissa (8 ml), lisättiin ensin etikkahappoa (0,36 ml, 35 6,6 mmol) ja sen jälkeen tipoittain 1 M tetrabutyyliammo- 96311 459 niumfluoridin tetrahydrofuraaniliuosta (3,3 ml, 3,3 mmol). Seosta sekoitettiin 15 min, sen jälkeen 5 °C:ssa (jäähau-de) 1 h, ja sen annettiin seistä 12 vuorokautta kylmässä huoneessa (5 - 8 °C).
5 Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (30 ml), pes tiin 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (4 x 5 ml), suolaliuoksella (5 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silika-geeli-flash-kerroksen läpi (5 g, etyyliasetaatti/heksaani, 50 -♦ 100 %; asetoni/etyyliasetaatti 20 % -* 100 %), jolloin 10 saatiin otsikon yhdiste (200 mg, 42 %) öljynä.
IR (CH2C12) n} Bax: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 ja 1620 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,05 - 5,95 (1H, m, vinyylin H), 5,5 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, 15 m,· allyylin CH2), 4,3 - 4,2 (1,5H, m, H-l' ja peittynyt osa H-5:sta), 4,208 (d, J = 2,7 Hz, osa H-5:a), 3,63 - 3,53 (1H, m, H-4), 3,49 - 3,35 (2H, m, CH2N3), 3,155 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,9 Hz, H-6), 3,09 - 2,6 (4H, SCH2CH2-pyr-rolidiini), 2,56 (4H, leveä s, CH2NCH2), 2,2 - 1,7 (6H, m, 20 CH2-4 ja CH2CH2 pyrrolidiinille) ja 1,395 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-guanidinoetyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-3-[2-(l-pyrrolidinyyli)etyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etik-25 kahapposuola
^|H (CH2)2N3 JfH (C H o ; j N K C (= S H) N E 2. H 0 A C
Ca3 tO-S(CH2)2lQ -* C"3 Jl£>-S(CH2)2lQ
30 0 C02v^. 0 C32E
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4- ( 2"-atsidoetyyli )-6-[(l'R)-l' -hydroksietyy-35 li]-3-[2-(1-pyrrolidinyyli)etyylitio]-7-okso-l-atsabisyk- 96311 460 lo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (160 mg, 0,370 mmol) CH2Cl2:ssa (12 ml), käsiteltiin Pd[PPh3]4:lla (30 mg, 0,02 mmol), minkä jälkeen lisättiin tipoittain 0,5 M ka-lium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa 5 (0,74 ml, 0,37 mmol). Seosta sekoitettiin 15 min, sen jäl keen laimennettiin dietyylieetterillä (70 ml) ja uutettiin 0,04 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (3 x 15 ml) ja vedellä (1 x 15 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (2 x 10 30 ml), ja pH säädettiin (jäähaude) arvoon 5,9 1 M vesipi toisella NaH2P04-puskuriliuoksella. Vesipitoista seosta ravistettiin Parriin hydrauslaitteessa 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 5 °C:ssa (jäähaude) 1 h käyttäen 30-prosenttista Pd/celiteä (160 mg) katalyyttinä.
15 Sen jälkeen lisättiin vielä katalyyttiä (100 mg), ja hyd-raus toteutettiin 30 min aikana. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja pestiin vedellä (2 x 5 ml). Vesipitoisen liuoksen (jäähaude) pH säädettiin arvoon 8,0 0,5 M NaOH:n vesiliuoksella, ja lisättiin aminoiminometaanisulfonihap-20 poa (360 mg, 2,96 mmol, 8 ekv.) annoksittain niin, että pH pidettiin samalla välillä 7,8 - 8,0 NaOH-liuoksella. Reak-tioseosta sekoitettiin 3 h (jäähaude), minkä jälkeen pH säädettiin arvoon 7,0 IM etikkahapon vesiliuoksella. Vesipitoinen seos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään , 25 läpi (60 g), joka pylväs oli stabiloitu ja jota eluoitiin w 0,005 M etikkahapon vesiliuoksella (1 % -* 2 % CH3CN), jolloin saatiin otsikon yhdiste (45 mg, 26 %) lyofilisoituna j auheena.
Puhtaus: 97,5 % määritettynä HPLC:llä (viipymäaika 30 = 7,17 min, p-Bondapak-C18, 10 μ, 10 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, pH 7,4); UV (vesi) A oax: 294 (5427); IR (Nujol) s) B„: 3400 - 3100 (NH), 1765, 1000 (C=0) ja 1675 - 1630 cm*1 (C=N); 96311 461 *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,35 - 4,2 (1H, m, H-l'), 4,292 (1H, dd, J - 2,9 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,502 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), 3,8 - 3,0 (9H, m, H-4, SCH,CH,N, pyrrolidiinin CH2NCH2), 2,2 - 1,95 (5H, CH2CH2, 5 pyrrolidiini, H-CH 4-asemassa), 1,95 - 1,7 (1H, m, HC-H 4-asemassa), 1,91 (1,5H, s, CH3C0) ja 1,328 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3).
Esimerkki 133 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(3S)-3-pyrroli- 10 dinyylitio] -6-[ (1 'R) -1 ’ -hydroksietyyli] -7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo w nh2 15 OK \
J
λ—N-U If 0 C02H n 20 A. (3S)-N-allyylioksikarbonyyli-3-merkaptopyrroli- diinl
HO KS
— 25 ^ \ 0-9 30
Kylmää liuosta (5 °C), jonka muodosti (3R)-N-allyy-lioksikarbonyyli-3-hydroksipyrrolidiini (1,0 g, 5,84 mmol) CH2Cl2:ssa, käsiteltiin pyridiinillä (0,532 g, 6,72 mmol) ja sen jälkeen trifluorimetaanisulfonihappoanhydridillä 35 (1,90 g, 6,72 mmol). Sekoitettiin 15 min, minkä jälkeen 96311 462 liuotin haihdutettiin, jäännöstä trituroitiin dietyylieet-terissä ja suodatettiin. Raakatuotetriflaatti liuotettiin uudelleen kylmään (5 °C) CH3CN:iin ja samalla kun liuosta kuplitettiin H2S:lla, lisättiin trietyyliamiinia (0,71 g, 5 7 mmol) tipoittain. Tiolin muodostus oli täydellinen 15 min kuluttua. Liuotin haihdutettiin ja raakatuote puhdistettiin kromatografiällä (Si02/5 % CH3CN CH2Cl2:ssa), jolloin saatiin 0,787 g (71,9 %) otsikon yhdistettä.
IR (CH2C12) J 1700 (-C02-), 1650 cm'1 (> = <).
10 XH NMR (CDC13) 6: 4,50 - 6,10 (5H, allyylityyppi), 3,70 - 3,90 (1H, m, CH-S-), 3,20 - 3,70 [4H, m, -(CH2-)2N], 2,20 - 2,40 ja 1,70 - 2,00 (2H, 2m, 2 H-4), 1,70 (1H, d, J = 6,57 Hz, -SH).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-15 [ (3S)-4-(allyylioksikarbonyyli)-3-pyrrolidinyylitio]-6- [ (1 Ή) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept- 2- eeni-2-karboksylaatti N 3 N5 2° 5 3
°K f 0 CH
—--ttl Ό ? (0 Φ) o s v. /S ►—v
CH3 . Cn3 nOf ^Y
Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R, 5S, 6S )-4-(3"-atsidopropyyli )-3-( difenyylifosfono)-6-30 [(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept- . 2-eeni-2-karboksylaatti (1,09 g:sta, 3 mmolrsta diatsoke- tonia) CH3CN:ssa, käsiteltiin (3S)-N-allyylioksikarbonyyli- 3- merkaptopyrrolidiinillä (0,79 g, 4,2 mmol) ja sen jälkeen di-isopropyylietyyliamiinilla (0,54 g, 4,2 mmol).
35 Reaktioseosta sekoitettiin 5 °C:ssa 18 h, sen jälkeen lai- 463 9 6 31 1 mennettiin EtOAc:lla ja pestiin peräkkäin suolaliuoksella, laimealla vetykloridihapolla, laimealla bikarbonaatilla ja lopuksi jälleen suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin 5 kromatografiällä (Si02/15 % CH3CN CH2Cl2:ssa), jolloin saatiin 441 mg (29,1 %) otsikon yhdistettä.
IR (CH2C12) \J n„: 3610 (-0H), 2105 (-N3), 1775 (S-laktaami), 1700 (-C02-), 1650 cm'1 (> = <).
:H NMR (CDC13) 6: 4,50 - 6,10 (10H, 2 allyylityyp-10 piä), 4,15 - 4,25 (2H, m, H-5, H-l’), 3,70 - 3,90 (2H, m, H-4, -CHS-), 3,0 - 3,90 (7H, m, CH2-N3, H-6, >CH2)2)N-), 1,50-2,40 (6H, m, 2H-1", 2H-2", pyrrolidiinin 2H-4), 1,40 (3H, d, J = 6,23 Hz, -CH2' ).
C. (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(3S)-3-pyr-15 rolidinyylitio] -6-[ (1 'R) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-at- sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo n 2 h 20 0H }E f Λ jL JS ►n—y γ-j. \—\
ch5 ''-rfVT) —- Π I LJ
i-N-\ * cV -\ .. H
0 ί-°2%^02/Λ<^ — 25
Liuos, jonka muodostivat allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[ (3S)-N-( allyylioksikarbonyyli )-3-pyr-rolidinyylitio]-6-[(l 'R)-l' -hydroksietyyli]-7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,15 g, 30 0,3 mmol), trifenyylifosfiini (0,03 g) ja N-metyylianilii- ni) (0,127 g, 1,19 mmol) EtOAc:ssa (10 ml), jäähdytettiin jäässä ja käsiteltiin tetrakis(trifenyylifosfiini)palla-diumilla [O] (0,03 g). Jäähaude poistettiin, ja reaktio-seosta sekoitettiin 20 °C:ssa 30 min. Lisättiin vielä tet-35 rakis(trifenyylifosfiini)palladiumia [O] (0,025 g), joi- 96311 464 loin reaktio meni loppuun 45 min:ssa. Sen jälkeen reaktio-seosta uutettiin kylmällä vedellä, ja vesipitoiset uutteet kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (Partisil). Eluointi suoritettiin 0 - 20-prosenttisella CH3CN:lla ve-5 dessä. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,028 g (24,5 %) otsikon yhdistettä valkoisena vaahtona.
IR (Nujol) V Bax: 2100 (-N3), 1765 (β-laktaami), 1595 cm*1 (-C02-).
*H NMR (D20) 6: 4,15 - 4,35 (2H, m, H-5, H-l'), 3,97 10 (1H, m, -CH-S-), 3,20 - 3,70 (8H, m, H-4, H-6, CH2-N3, -CH2)2N), 2,40 - 2,60 ja 1,25 - 2,20 (6H, m, 2 H-l", 2H-2”, pyrrolidiinin 2H-4), 1,31 (3H, d, J = 6,35 Hz, -CH3').
D. (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(3S)-3-pyr-rolidinyylitio] -6- [ (1 Ή) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-at-15 sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo K 3 y OH | 1 20 f te - ---% JL ^ \ cf-nrVV — ^-'pXV1 25 ~
Kylmää (5 eC) liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4 - ( 3"-atsidopropyyli ) - 3-[(3S)-3-pyrrolidinyylitio]-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,042 g, 0,11 mmol) vedessä 30 (15 ml), hydrattiin 1 h 296 kPa:n (43 psi:n) paineessa niin, että läsnä oli 5-prosenttista Pd/Al203:a (0,04 g).
Sen jälkeen katalyytti suodatettiin ja suodoksen pH laskettiin arvoon 6,3 lisäämällä 1 M NaH2P04:a. Vesipitoista liuosta kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä 35 (Partisi) eluoiden kylmällä vedellä. Oleelliset fraktiot 96311 465 lyofilisoitiin, jolloin saatiin epäpuhdasta valkoista kiinteää ainetta. Kromatografoitiin toisen kerran tällä kertaa eluoiden 0,6 ml:11a etikkahappoa/1 1 vettä, jolloin saatiin 0,025 g (54,7 %) puhdasta otsikon yhdistettä etik-5 kahapposuolana.
IR (Nujol) Ί Bex: 1755 cm'1 (β-laktaami); XH NMR (D20) 6: 4,20 - 4,40 (2H, m, H-5, H-l’), 3,99 (1H, m, -CH-S), 3,15 - 3,70 (6H, m, H-6, H-4, -CH2)2N), 3,05 (2H, m, CH2-N), 2,30 - 2,60 ja 1,50 - 2,15 (6H, m, 10 2H-1", 2H-2", pyrrolidiinin 2H-4), 1,33 (3H, d, J = 6,33 Hz, -CH3’), 1,92 (3H, s, etikkahappo).
Esimerkki 134 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(2 -guanidinoetyyli) tio] -6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] -15 7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy- lihapon etikkahapposuola CH ch2ck2ch2n3 2h ck2ch2ch2nh2
ΪΓ h2 NH
2Q J J j 3CH,CH2NH-C-NH2 -* ' 1_^/)—sCH2CH2NH-v-N.'2
c co2h C02H
Suspensiota, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-atsi-V 25 doetyyli )-3-[(2-guanidinoetyyli ) tio]-6-[(1' R)-1'-hydrok sietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3. 2.0]hept-2-eeni-2-karbok-syylihappo (0,300 g, 0,76 mmol) kylmässä vedessä (150 ml), hydrattiin 0-5 °C:ssa käyttäen 1,0 g:a 5-prosenttista palladiumia alumiinioksidilla ja 310 kPa:n (45 psi:n) ve-30 typaineessa 1 h. Lisättiin 0,1 ml (1,6 mmol) etikkahappoa, minkä jälkeen katalyytti suodatettiin ja suodos kromatografoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (μ-Bondapak-C18, 2,5 x 15 cm) käyttäen 0,005 M etikkahappoa eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin 466 96ό 11 saatiin 0,23 g (70 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]D22 +32,2° (c 1,0, vesi).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi vedellä ja pH-arvon 7,4 omaavalla 5 fosfaattipuskurilla, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detekto-ri 302 nm, viipymäaika 8,27 min; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λ aax: 302 nm (6 390); IR (KBr) s) nax: 1750 (β-laktaamin C=0), 1680, 1630 10 ja 1580 cm"1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) δ: 1,33 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,92 (s, CHjCOjH), 2,8 - 3,4 (m, 4H, SCH2 ja CH2NH2), 3,37 (m, pääl- ~ lekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4), 3,40 (dd, JH6 H5 = 2,6 Hz, 15 jhä.hi = 6,4 Hz, 1H, H-6), 3,48 (t, J = 5,8 Hz, 2H, CH,NHC( NH )NH,), 4,25 (dd, päällekkäin CH,CHO: n kanssa, jh5.h6 = 2,6 Hz, 1H, H-5) ja 4,28 ppm (m, 1H, CH3CH0).
Esimerkki 135 (4R,5S,6S)-4-(2"-guanidinoetyyli)-3-[(2-guanidino-20 etyyli) tio] -6- [ (1 Ή) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etikkahapposuola
NH
Γ" 11 25 1 f J / NH ~
— H = C
0 C0’H CH,C0SH " CCjH
30
Liuoksen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(2"-amino-etyyli )-3-[ (2-aminoetyyli )tio] -6- [ (1' R )-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-35 hapon etikkahapposuola (0,270 g, 0,73 mmol) [valmistettu 467 96311 esimerkissä 115] kylmässä vedessä (50 ml), pH säädettiin arvoon 8,5 1 M natriumhydroksidin vesiliuoksella, ja käsiteltiin 0 - 5 °C:ssa aminoiminometaanisulfonihapolla (0,80 g, 6,44 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 5 min aikana niin, että pH pidettiin välillä 8-8,5 emäk sellä. 2,5 h:n kuluttua pH säädettiin arvoon 4,5 etikka-hapolla, ja liuos kromatografoitiin kaksi kertaa käänteis-faasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 15 cm) käyttäen vettä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, 10 jolloin saatiin 0,080 g (23 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena.
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-Cie: 11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 0,01 M fosfaattipuskurilla, virtausnopeus 2 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 15 6,75 min; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ^ aax: 302 nm (7 250); IR (KBr) ^ Bax: 1755 (β-laktaamin C=0), 1670, 1640 ja 1570 cm'1 (karboksylaatin OO); 20 XH NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,33 (d, J = 6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,7 - 2,2 (m, 2H, etyylin CH2-1), 1,92 (s, CH3C02H), 2,7 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,2 - 3,7 (m, 6H, H-4, H-6, etyylin CH2-2 ja SCH2CH2N) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CHO).
25 Esimerkki 136 (4R, 5R, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1 ’R) -1' -hyd-roksietyyli]-4-[2”-(1-pyridinium)etyyli]-7-okso-l-atsabisyklo(3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30 _ _Tr_ C T r Γ a 5 ^ π Γ u r- ·_· m / \\
J CK2CH:0K J
'1 q/ * cn,- 35 LJ2 2 96311 468
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-syaani-etyyli )tio] -4-( 2"-hydroksietyyli )-7-okso-l-atsabisyklo[-3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,481 g, 1 mmol) [val-5 mistettu esimerkissä 125] kuivassa dikloorimetaanissa (10 ml), jäähdytettiin -78 °C:seen ja käsiteltiin käyttäen argonia suojakaasuna N,N-di-isopropyylietyyliamiinilla (0,262 ml, 1,5 mmol) ja sen jälkeen trifluorimetaanisul-fonihappoanhydridillä (0,194 ml, 1,15 mmol) tipoittain 10 3 min aikana. 20 min jälkeen -78 °C:ssa lisättiin pyridii- niä (0,324 ml, 4 mmol). Reaktioseoksen annettiin seistä -20 eC:ssa 18 h, sen jälkeen väkevöitiin tyhjössä ilman kuumennusta. Jäännös liuotettiin kuivaan tetrahydrofuraa-niin (20 ml), jäähdytettiin -15 °C:seen ja käsiteltiin 15 käyttäen argonia suojakaasuna etikkahapolla (0,76 ml) ja sen jälkeen 6 ml:11a (6 mmol) 1 M tetrabutyyliammonium- fluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa. Liuoksen annettiin seistä 0 °C:ssa 96 h, sen jälkeen lisättiin tetrakis(tri-fenyylifosfiiniJpalladiumia [0] (0,090 g) ja sitten N,N-20 di-isopropyylietyyliamiinia (0,350 ml, 2 mmol). Saatua reaktioseosta sekoitettiin käyttäen argonia suojakaasuna 0 °C:ssa. 3 h:n kuluttua reaktioseosta uutettiin kylmällä vedellä (30 ml). Vesifaasin pH säädettiin arvoon 6,5 IN NaOH:lla, sitten vesipitoinen uute pestiin dietyylieette-25 rillä ja pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien ^ poistamiseksi. Liuos suodatettiin, sitten kromatografoltiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-Cie, 3,5 x 14 cm) käyttäen vettä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot yhdistettiin, lyofilisoitiin ja kromatografoitiin toisen 30 kerran samalla pylväällä käyttäen asetonitriilin gradient-tia (0 - 1 %) vedessä eluenttina. Lopuksi lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,310 g valkoista amorfista jauhetta, joka kiteytettiin kylmästä metanolista (20 ml), jolloin saatiin puhdasta kiteistä otsikon karbapeneemiä (0,262 g, 68 %).
96311 469
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,96 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 2 % CH3CN-vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 9,97 min; 5 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λ Bax: 298 nm (8101), 260 nm (7531); IR (KBr) 2250 (CN), 1755 (β-laktaamin C=0) ja 1600 cm"1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,37 (d, J = 6,35 Hz, 3H, 10 CH3CH0), 2,2 - 2,6 (m, 2H, CH2-4), 2,8 (m, 2H, CH2CN), 2,9 -3,1 (m, 2H, SCH2), 3,45 (m, 1H, H-4), 3,56 (dd, JH6 H5 = 2,97 Hz, JH6 H1 = 7,04 Hz, 1H, H-6), 4,20 - 4,40 (m, 2H, H-5 ja CH3CHO), 4,81 (m, päällekkäin HOD-signaalin kanssa, 2H, N*-CH2), 8,11 (m, 2H, H-3 ja H-5 pyridiniumilla), 8,59 15 (m; 1H, H-4 pyridiniumilla), 8,91 (m, H-2 ja H-6 pyridi niumilla ).
Esimerkki 137 (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-r-hydroksietyyli]-3-[(2-syaa- nietyyli)tio]-4-[2"-(B-kloori-L-alanyyli-B-kloori-20 L-alanyyli)aminoetyyli]-7-okso-l-atsabisyklo- [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyy1ihappo p CH2CH2NH2 s h 25 ^n3 ί—+ X - :
° COCK
< * Π 30 0 ^ ‘ ψ α,0Η2κ:-Λ^ηγ*^Η2 C ”--^ VJ 1 ^ 35 \ ^ η ρ ρ - 96311 470
Liuos, jonka muodosti (4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-hyd-roksietyyli] -3 - [ ( 2-syaanietyyli ) tio] -4-( 2"-aminoetyyli ) -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,475 g, 1,46 mmol) 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaat-5 tipuskurissa (15 ml), jäähdytettiin 0 eC:seen niin, että liuoksen läpi kuplitettiin samalla argonia. pH säädettiin arvoon 10,2 1 N NaOHrlla, ja lisättiin β-kloori-L-alanii-nin N-karboksianhydridiä (0,22 g, 1,46 mmol) dioksaanissa (1,5 ml) yhtenä annoksena ja sekoittaen voimakkaasti. Kun 10 pH laski arvoon 7,2, se säädettiin uudelleen arvoon 10,2 ja annettiin sen olla siinä 1 h. Reaktio pysäytettiin säätämällä pH arvoon 6,0 1 N HCl:lla. Liuoksen läpi kuplitettiin argonia 30 min 0 °C:ssa, ja samlla pH säädettiin uudelleen arvoon 6,0 aina, kun se nousi yli arvon 6,0. Raa-15 katuotteena oleva reaktioseos vietiin p-Bondapak-C18-kään-teisfaasisilikapylvään läpi (4,5 x 10,5 cm). Sopivat tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin kiinteäksi aineeksi, joka kromatografoitiin uudelleen μ-Bondapak-C18-käänteisfaasisilikalla (4,5 x 10,5 cm). Hiukan 20 vähemmän polaarista otsikon yhdistettä, joka erottui tarkasti monopeptidijohdannaisesta, eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (94:6, gradienttieluointi), ja se saatiin kellertävänä höytäleisenä kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen (0,049 g, 6,8 %).
25 Puhtaus 92,2 % HPLC:n mukaan: UV-toteaminen ^ 300 nm:ssa p-Bondapak-C18:11a (4 mm x 30 cm), 10 % CH3CN pH-arvon 6,8 omaavassa fosfaattipuskurissa, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 8,31 min.
UV A 300 nm; 30 IR (Nujol) ^ aex: 1750 cm'1 (C=0, β-laktaami).
XH NMR (200 MHz, D20) ö: 1,37 (d, 3H, CH3, J = 6,4 Hz), 1,66 - 1,77; 2,06 - 2,16 (m, 2H, CH2), 2,83 - 2,89 (m, 2H, CH2CN), 2,91 - 3,04; 3,08 - 3,21 (m, 2H, SCH2), 3,32 - 3,41 (m, 3H, CH2NH, H-4), 3,58 (dd, 1H, H-6, J6r = 35 5,88 Hz), 3,78 - 4,08 (m, 4H, CBH2), 4,17 (t, 1H, CaH, JQ β = 96311 471 4,61 Hz), 4,27 (dd, 1H, H-5, J4 5 *= 7,92 Hz, J5 6 = 2,48 Hz), 4,31 (m, 1H, H-l1 ), 4,76 (t, 1H, C0H, Ja.B = 5,37 Hz). Esimerkki 138
Natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(2-fluo-5 rietyyli) tio] -6-[ (1 'R) -l"-hydroksietyyli] -7-okso- l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (CH2)2K3 10 Γ u· ^ 0 C02Na 15 A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1’R)-11 -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-fluori-etyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-20 boksylaatti OTBD-15 0T5DK5 J (CH2)2N3 jT CCH2)2n3 25 CH:· VtA-5(CH,)20H — Cr-3^n^SiCH2),? 0 C02s~-^ ° 30
Kylmään (jäähaude) ja hyvin sekoitettuun liuokseen, jonka muodosti dietyyliammoniumrikkitrifluoridi (DAST, 1,05 ml, 8,06 mmol) CH2Cl2:ssa (20 ml), lisättiin tipoittaan 10 min aikana allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-35 6- [ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ ( 2- 96311 472 hydroksietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaattia CH2Cl2:ssa (80 ml). Seosta sekoitettiin 15 min, sen jälkeen reaktio pysäytettiin jääkylmällä vedellä (100 ml) ja lopuksi laimennettiin 1/1-suhteisella 5 etyyliasetaatin ja dietyylieetterin seoksella ja vedellä (400 ml). Vesifaasia uutettiin etyyliasetaatilla/dietyy-lieetterillä (1/1, 300 ml), ja orgaaniset uutteet yhdistettiin, pestiin jääkylmällä vedellä (2 x 250 ml), jääkylmällä 1 N HCl:n vesiliuoksella, vedellä, 1 M NaHC03:n vesi-10 liuoksella, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-kerroksen läpi (180 g, heksaani, 5 -» 25 % etyyliasetaatti/heksaani), jolloin saatiin otsi- w kon yhdiste (1,54 g, 38 %) keltaisena öljynä: IR (CH2C12) ') nax: 2100 (N3), 1775 ja 1710 cm-1 (C=0); 15 XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,05 - 5,85 (1H, m, vi nyylin H), 5,49 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,4 (4H, m, allyylin CH2 ja CH2F), 4,3 - 4,13 (1H, m, H-l'), 4,145 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,7 - 3,55 (1H, m, H-l), 3,46 - 3,3 (2H, m, CH2N3), 3,4 - 3,15, 3,05 - 2,8 20 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 3,088 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,7 Hz, H-6), 2,13 - 1,95, 1,85 - 1,65 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,309 (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3), 0,897 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,095 ppm (6H, s, dimetyyli).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[ (2-25 fluorietyyli)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 0T3D.Mi5 qh r (CHjJjHj f (CH2)2N3 30 CkT\—^ '\'Y- 3 C02-v-^ 0 CC2N^.
96311 473
Kylmää (jää-MeOH) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-4-(2"-atsidoetyyli )-6-[( 1'R)-l' -tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-fluorietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (457 mg, 5 0,92 mmol) tetrahydrofuraanissa (8 ml), käsiteltiin ensin jääetikalla (0,3 ml, 5,5 mmol) ja sen jälkeen tipoittain 1 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuoksella tetrahydrofuraanissa (2,75 ml, 2,75 mmol). Seosta sekoitettiin 10 min, ja sen jälkeen sen annettiin seistä kylmässä huo-10 neessa (5-8 eC) yhdeksän vuorokautta. Sitten se laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml), pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (4 x 25 ml), vedellä (2 x 25 ml), suolaliuoksella (25 ml) ja kuivattiin (MgS04). Se vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (15 g, heksaani, etyyliase-15 taatti/heksaani 10 % -> 50 %), jolloin saatiin otsikon yhdiste (240 mg, 68 %) öljynä.
IR (CH2C12) o aax: 3400 (OH), 3100 (N3), 1778 ja 1612 cm'1 (C=0); :H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,9 (1H, m, vi-20 nyylin H), 5,5 - 5,2 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,35 (4H, m, allyylin CH2 ja CH2-F), 4,3 - 4,15 (1H, m, H-l'), 4,248 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,7 - 3,5 (1H, m, H-4), 3,5 - 3,3 (2H, m, CH2N3), 3,3 - 2,8 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 3,160 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 8,0 Hz, H-6), 2,15 -'“f" 25 1,95, 1,84 - 1,65 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,834 ( 1H, d, J = 5,1 Hz, OH) ja 1,395 ppm (3H, d, J = Hz, CH3).
C. Natrium-(4R,5S;6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(2-fluorietyyli)tio]-6-((1’R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 30
: C H OH
r (CH2)2n3 r (CH2)2N3 35 ° 0 CC2Ka 474 96311
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti allyy-li-(4R, 5S, 6S)-4-(2"-atsidoetyyli )-3- [ (2-fluorietyyli )tio] - 6- [ (1' R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-hept-2-eeni-2-karboksylaatti (585 mg, 1,52 mmol) CH2Cl2:ssa 5 (20 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a (142 mg, 0,114 mmol) ja ti poittaan 0,5 M kaliumetyyli-2-heksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa (3,0 ml, 1,50 mmol). Seosta sekoitettiin 20 min, laimennettiin dietyylieetterillä (80 ml) ja uutettiin vedellä (4 x 15 ml). Vesipitoiset uutteet yhdistet- 10 tiin, pestiin vedellä (2 x 20 ml) ja vietiin μ-Bondapak-C18-käänteisfaasipylvään läpi (200 g, 1 % -* 10 % CH3CN/ve-si), jolloin saatiin otsikon yhdiste (40,2 mg, 72 %) luonnonvalkoisena lyofilisoituna kiinteänä aineena.
Puhtaus: 97,8 % määritettynä HPLC:llä (viipymäaika 15 = 14,85 min, p-Bondapak-Cie, 10 μ, 5 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M, pH 7,4); UV (H20) Λ b„: 302 (9184); IR (Nujol) 3350 (OH), 2100 (N3), 1750 ja 1600 cm'1 (C=0); 20 XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,83 - 4,75, 4,6 - 4,5 (2H, 2 m-kohtaa, CH2F), 4,35 - 4,2 (1H, m, H-l’), 4,210 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,0 Hz, H-5), 3,65 - 2,9 (6H, m, H-4, SCH2, CH2N3, H-6), 2,17 - 2,0, 1,9-1,7 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,331 ppm (3H, d, J = Hz, CH3).
25 Esimerkki 139 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(4-piperidinyy-li)tio]-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo
V' ’T
o o Λ -i ? 30 -'3 cXL-0·
35 0^N \o2H CT C02H
96311 475
Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)- 4-( 3"-atsidopropyyli )-3- [ (4-piperidinyyli ) tio] -6-[(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,08 g, 0,20 mmol) vedessä (40 ml), 5 hydrattiin 310 kPa:n (45 psi:n) paineessa 1 h niin, että läsnä oli 5-prosenttista Pd/Al203:a (0,08 g). Sen jälkeen katalyytti suodatettiin ja suodoksen pH laskettiin arvoon 5,0 lisäämällä etikkahappoa. Tämä happamaksi tehty vesipitoinen liuos kromatografoitiin käänteisfaasisilikagee-10 Iillä (Partisil) eluoiden 15-prosenttisella CH3CN:lla ve dessä. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,066 g (76,8 %) otsikon yhdistettä etikkahapposuolana.
IR (Nujol) V max: 1760 (β-laktaami), 1580 cm'1 (-C02-); 15 XH NMR (D20 ) 6 : 4,20 - 4,40 ( 2H, m, H-5, H-l'), 3,25 - 3,60 [5H, m, H-6, (2 H-2, piperidiinin 2 H-6)], 2,95 - 3,15 (4H, m, CH2-N, H-4, piperidiinin H-4), 1,50 -2,40 [8H, m, 2H-1", 2H-2", (2H-3, piperidiinin 2H-5)], 1,93 (3H, s, etikkahappo), 1,34 (3H, d, J = 6,30 Hz, -20 CH3' ).
Esimerkki 140 (4R,5S,6S)-3-[(Ν,Ν-diraetyyliamidinometyyli)tio]-4- (3 " -guanidinopropyyl i)-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli ] - 7-okso-1-atsabisyklo [3.2.0 ] hept-2-eeni-2-karboksyy-’'-r' 25 lihapon etikkahapposuola
OH . NH
f Ch2ch2ch2nh2 OH ch2ch2ch2nh-c-nh2 Η3-%/ΓΎ\_ /»H h r N., J 1 /)—SCH2C^ --- 3~ I \ 5-.. r^Nn 30 >c^
CCtH CH3^2H - 'cO.H =H3C02H
476 9 6 311
Liuoksen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopro-pyyli )-3-[ (N, N-dimetyyliamidinometyyli )tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,203 g, 0,47 mmol) kylmässä vedessä 5 (0-5 °C, 30 ml), pH säädettiin arvoon 8,5 1 M natrium- hydroksidin vesiliuoksella, ja sen jälkeen käsiteltiin aminoiminometaanisulfonihapolla (0,230 g, 1,85 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 min aikana niin, että pH pidettiin samalla välillä 8 - 8,5. 2 h:n kuluttua pH sää-10 dettiin arvoon 4,8 jääetikalla, ja liuos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 13,5 cm) käyttäen 0,01 M etikkahapon vesiliuosta eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin ^ 0,090 g (40 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena 15 kiinteänä aineena:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 98 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-puskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 292 nm, vii-pymäaika 7,52 min; 20 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) Λ nax: 292 nm (6 340); IR (KBr) \> nax: 1760 (β-laktaamin C=0), 1680, 1650 ja 1580 cm"1 (karboksylaatin C=0); XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,36 Hz, 3H, . 25 CH3CH0), 1,4 - 1,9 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,92 (s, _ ! CH3C02H), 3,12 ja 3,29 (2s, 2 x 3H, NCH3), 3,1 - 3,4 (m, 3H, H-4 ja propyylin CH2-3), 3,44 (dd, JH6 H5 = 2,83 Hz, JH6 H1 = 5,97 Hz, 1H, H-6), 3,86 (s, 2H, SCH2) ja 4,2 - 4,4 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin).
!l ttt-l rilli! I i 1 «I r . 96311 477
Esimerkki 141 (4R, 5S, 6S) -3-[(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)tio]-4- (2"-guanidinoetyyli) -6- [(1'R)-1' -hydroksietyyli] - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2,0]hept-2-eeni-2-karboksyy-5 lihapon etikkahapposuola
( C r. 2) 2 h "f- >- i- A ) i< H 2 0 A C
10 3 /J—^“2 ) 2-U «H3 J 2 L 0 n 2.
15 A.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1’R)- 1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3- [ (2-N,N-dime-tyyliaminoetyyli) tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 20 CTBD^S OTBDu5 ^ ^ iCn2)2K2 ^ 25
Kylmään (jää-MeOH-haude) liuokseen, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1’R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-li] -4-[ (l"R)-l"-(2-atsidoetyyli )-3"-diatso-3"-allyyliok- 30 sikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-onistavalmistet- tu enolifosfaatti (4,64 g, 10 mmol) asetonitriilissä (45 ml), lisättiin hitaasti N, N-dimetyyliaminoetaanitiolia (1,05 g, 10,0 mmol) CH3CN:ssa (2 ml) ja tipoittain di-iso-propyylietyyliamiinia (1,92 ml, 11,0 mmol). Seosta sekoi- 35 tettiin 1,5 h -10 eC:ssa -» 0 °C:ssa, sen jälkeen jäähdy- 478 96311 tettiin jälleen (jää-metanoli) ja käsiteltiin taas merkap-taanilla (520 mg, 5 mmol) CH3CN:ssa (1 ml) ja di-isopropyy-lietyyliamiinilla (0,96 ml, 5,5 mmol). Seosta sekoitettiin h h -15 eC:ssa ja sen annettiin asettua jääkaapissa 5 (-20 °C) 18 h. Se laimennettiin 1:1-suhteisella etyyliase taatin ja dietyylieetterin seoksella (500 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (5 x 100 ml), suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (100 g, 50 -* 100 % etyyliasetaati/heksaani, 10 10 % asetoni/etyyliasetaatti), jolloin saatiin otsikon yhdiste (4,0 g, 76 %), jossa oli epäpuhtautena avattua B-laktaamisivutuotetta.
IR (CH2C12) "Ϊ max: 2100 (N3), 1775 ja 1715 cm'1 (C=0); ~ :H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,1 - 5,8 (1H, m, vinyy-15 Iin H), 5,5 - 5,1 (2H, m, vinyylin 3H), 4,9 - 4,6 (2H, m, allyylin CH2), 4,3 - 4,1 (1H, m, H-l'), 4,2 - 4,15 (1H, dd, H-5), 3,7 - 3,5 (1H, m, H-4), 3,5 - 3,3 (2H, m, CH2-N3), 3,071 (1H, dd, J = 3,0 Hz, J = 7,1 Hz, H-6), 3,1 - 2,85 (2H, m, SCH2), 2,7 - 2,4 (2H, m, CH2-N), 2,28 (6H, s, 20 N(CH3)2), 2,1 - 1,6 (2H, m, CH2-4), 1,314 (3H, d, J = 6,1
Hz, CH3), 0,897 (9H, s, tert-butyyli) ja 0,069 ppm (6H, s, dimetyyli).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)tio] -6- [ (1 ’R) -1' -hydroksietyyli] -25 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti -
OTBDr.S CH (CV Λ V
j f*** Λ Ϊ C:l3 'Εθ-5ί«ί)ί»(«,)ί — Cr'3 CQ>-St = s:)2S(CH;.:2 30 ' 0 C02n^ CC2s^ 479 96311 -
Kylmään (jää-metanolihaude) liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2”-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli ] -3- [ (2-N, N-dimetyy-liaminoetyyli )tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-5 2-karboksylaatti (4,0 g, 7,6 mmol, 37 % puhdas) tetrahyd-rofuraanissa, lisättiin ensin jääetikkaa (2,5 ml, 45,6 mmol) ja tipoittain 1 N tetrabutyyliammoniumfluoridin tetrahydrofuraaniliuosta (22,8 ml, 22,8 mmol). Seoksen annettiin seistä 5 eC:ssa 11 vuorokautta, sen jälkeen lai-10 mennettiin etyyliasetaatilla (400 ml), pestiin jääkylmällä 1 M NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 25 ml), jääkylmällä vedellä (3 x 25 ml), suolaliuoksella (25 ml) ja kuivattiin. Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (60 g, 10 -» 100 % asetoni/etyyliasetaatti), jolloin saatiin otsikon 15 yhdiste (473 mg, 41 %) keltaisena öljynä.
IR (CH2C12) \) aax: 3610, 3450 (OH), 2110 (N3), 1780 ja 1610 cm*1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,1 - 5,9 (1H, m, vinyylin H), 5,49 - 5,22 (2H, m, vinyylin H), 4,9 - 4,6 (2H, m, 20 allyylin CH2), 4,235 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 9,3 Hz, H- 5), 4,33 - 4,2 (1H, m, H-l’), 3,7 - 3,5 (1H, m, H-l), 3,47 - 3,3 (2H, m, CH2N3), 3,150 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 7,9 Hz, H-6), 3,1 - 2,9 (2H, m, SCH2), 2,7 - 2,4 (2H, m, CH2N), 2,284 (6H, S, N(CH3)2), 1,95 - 1,7 (3H, m, OH, CH2-4) 25 ja 1,400 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
C. (4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(2-N,N-dime- tyyliaminoetyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 JH (CH2)2N2 Jd (CH2)2N3 ° r~3 (C H 2):K (C H 3) 2 C H 3 (C H 2) 2N (C H 3) 2 35 96311 480
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti allyy-li-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(2-N,N-dimetyyliami-noetyyli )tio]-6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (470 mg, 5 1,14 mmol) CH2Cl2:ssa (17 ml), lisättiin Pd(PPh3)4:a (105 mg, 0,086 mmol) ja 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa (2,28 ml, 1,14 mmol). Seosta sekoitettiin 15 min, laimennettiin dietyylieetterillä (100 ml) ja uutettiin jääkylmällä vedellä (4 x 20 ml).
10 Orgaaniset uutteet yhdistettiin, pestiin dietyylieetterillä (2 x 40 ml) ja vietiin p-Bondapak-Cie-käänteisfaasi-pylvään läpi (67,5 g, vesi, 1 % -* 10 % CH3CN/H20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (200 mg, 46 %) keltaisena lyofili-soituna jauheena.
15 IR (Nujol) 9 Bax: 3400 - 3100 (OH), 2100 (N3), 1755 ja 1600 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,280 (1H, dd, J = 2,4 Hz, J - 6,8 Hz, H-5), 4,32 - 4,2 (1H, m, H-l'), 3,67 - 3,54 (1H, m, H-4), 3,481 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,1 Hz, H-20 6), 3,5 - 3,34 (2H, m, CH2N3), 3,2 - 2,92 (4H, m, SCH2 ja CH2N), 2,60 (6H, s, N(CH3)2), 2,18 - 2,02, 1,91 - 1,75 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,329 ppm (3H, d, J = 6,1 Hz, CH3).
D. (4R,5S,6S)-3-[(2-N,N-dimetyyliaminoetyyli)tio]- 4-(2"-guanidinoetyyli)-6-[(1 Ή) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-25 l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etik- ~ kahapposuola
J" (CK2);N3 j-' (C H=) 2I-HC (= NH ) KH, KOAC
C " ^ Λ, 1,* ' " ^ p Λ 0 n .. vw'i* ...
Kylmän (jäähaude) (4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-3-[(2-N,N-dimetyyliamlnoetyyli)tio]-6-[(1'R)-l'-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-syylihapon (190 mg, 0,514 mmol) liuoksen 0,04 M pH-arvon 5 7,0 omaavassa fosfaattipuskurin vesiliuoksessa (67 ml) pH
säädettiin arvoon 5,9 IM NaH2P04:n vesiliuoksella. Seosta (jäähaude) ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 310 -345 kPa:n (45 - 50 psi:n) vetypaineessa 1 h käyttäen 30-prosenttista Pd/celiteä (270 mg) katalyyttinä. Lisättiin 10 vielä Pd/celiteä (270 mg), ja hydrausta jatkettiin vielä yksi tunti. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja pestiin vedellä (2 x 10 ml). Vesipitoisen liuoksen (jäähaude) pH säädettiin välille 7,8 - 8,0 1 N NaOH:n vesiliuoksella. Sen jälkeen lisättiin aminoiminometaanisulfonihappoa 15 (354 mg, 2,87 mmol) annoksittain, ja pH pidettiin välillä 7.8 - 8,0 1 N NaOHrn vesiliuoksella. Reaktioseosta sekoitettiin 1,5 h, minkä jälkeen lisättiin vielä aminoiminometaanisulfonihappoa (124 mg, 1 mmol). pH pidettiin välillä 7.8 - 8,0, ja sekoitusta jatkettiin vielä yksi tunti.
20 Reaktion lopussa pH säädettiin arvoon 7,0 1,0 M etikkaha- pon vesiliuoksella, ja seos vietiin p-Bondapak-C18-kään-teisfaasipylvään läpi (130 g, jääkylmä 0,005 M vesipitoinen AcOH, 1 % CH3CN/0,005 M AcOH), jolloin saatiin otsikon yhdiste (60 mg, 26 %) luonnonvalkoisena lyofilisoituna '-r 25 jauheena.
Puhtaus: 96,9 % määritettynä HPLC:llä (viipymäaika = 6,02 min, p-Bondapak-C18-10 μ, 3 % CH3CN/KH2P04, 0,01 M pH 7,4); UV (H20) λ Bax: 296 (6089); 30 IR (Nujol) V max: 3400 - 3100 (NH, OH), 1760, 1600 - 1540 (C=0), 1680 - 1620 cm-1 (C=N); *H NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33, 4,32 (d, J = 2,9 Hz, osa H-5:a), 4,33 - 4,2 (m, H-l' ja osa H-5:a), 3,51 (1H, dd, J = 2,9 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), 3,41 - 3,21 (5H, m, CH2-35 guanidiini, CH2N, H-4), 3,20 - 2,96 (2H, m, SCH2), 2,91
·>· %^ w f I
482 (6H, s, NCH3), 2,24 - 2,03, 1,9 - 1,55 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,925 (2, 2H, s, CH3C02) ja 1,33 ppm (3H, d, J = 6.4 Hz, CH3).
Esimerkki 142 5 (4R,5S,6S)-3-[(Ν,Ν-dimetyyliamidinometyyli)tio]-4- (3,,-N-formimidoyyliaminopropyyli)-6-[ (1 'R)-l1 -hyd-roksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-ee-ni-2-karboksyylihapon etikkahapposuola
^•0 Cn2Cn2CH2NK2 CH2CH2CH2NH-C^=NH
u >NH ,r NH
VCHg^ 0' \ o' \
CCpK CC,H
d C:-i,C02H d CH-CC2H
15
Liuoksen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopro-pyyli )-3- [ (N, N-dimetyyliamidinometyyli )tio] -6- [ (1' R)-l' -hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-20 karboksyylihapon etikkahapposuola (0,204 g, 0,474 mmol) kylmässä vedessä (30 ml, 0 - 5 eC), pH säädettiin arvoon 8.5 1 M natriumhydroksidin vesiliuoksella, ja sen jälkeen käsiteltiin bentsyyliformimidaattivetykloridilla (0,40 g, 2,3 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 min aikana 25 niin, että pH pidettiin samalla välillä 8 - 8,5 1 M nat- "" riumhydroksidilla. 15 min kuluttua pH säädettiin arvoon 5 väkevällä etikkahapolla, ja reaktioseos pestiin etyyliasetaatilla (25 ml). Vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi, ja sen jälkeen kromato-30 grafoitiin kaksi kertaa 4 eC:ssa käänteisfaasisilikagee-lillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 14 cm). Eluoitiin 0,01 M etik-kahapon vesiliuoksella, jolloin saatiin 0,088 g (41 %) otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena jauheena lyofili-soinnin jälkeen.
96311 483
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm/30 cm, eluointi 3 % CH3CN-vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 0,8 ml/min, UV-detektori 292 nm, vii-pymäaika 5,8 min; 5 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λ Ββχ: 292 nm (7200); IR (KBr) v? Bax: 1750 (β-laktaamin C=0), 1715, 1645 ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); lH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,32 Hz, 3H, 10 CH3CH0), 1,4 - 1,9 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,92 (s, CH,C0,H), 3,12 ja 3,28 (2 x s, 2 x 3H, NCH3), 3,0 - 3,6 (m, w 4H, H-4, H-6 ja propyylin CH2-3), 3,84 (s, 2H, SCH2), 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin) ja 7,81 ppm (s, 1H, CH=NH).
15 Esimerkki 143 (4R, 5S, 6S) -4- (3"-N-formimidoyyliaminopropyyli) - 3-[ (2-guanidinoetyyli) tio] -6- [(l'R)-l' -hydroksietyy-li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksyylihapon etikkahapposuola 20 ch2ch2cw2nh, -"· :h2cm,:h2nh-ch=mh H, Cj —1—\ Π -r^\ )l J M /)-SCH2CH-NH-C-I/H? -► - J 1 /)-5CH-CHjNH-C-MH, 25 : 25 CC2- --3CC2h CC2H Ch,CC2h
Liuoksen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopro-30 pyy li)-3-[(2-guanidinoetyyli)tio]-6-[(l'R)-l’-hydroksi- etyyli] - 7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-syylihapon etikkahapposuola (0,300 g, 0,695 mmol) kylmässä vedessä (30 ml, 0 - 5 °C), pH säädettiin arvoon 8,5 IM natriumhydroksidin vesiliuoksella, ja sen jälkeen käsitel-35 tiin bentsyyliformimidaattivetykloridilla (0,60 g, 484 96311 3,5 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 min aikana. pH pidettiin välillä 8 - 8,5 1 M natriumhydroksidilla koko lisäyksen ajan ja vielä 15 min. Sen jälkeen pH säädettiin arvoon 5 väkevällä etikkahapolla, ja reaktioseos pestiin 5 etyyliasetaatilla (20 ml). Sitten vesifaasia pidettiin tyhjössä orgaanisen liuottimen jälkien poistamiseksi, ja sen jälkeen kromatografoitiin 4 °C:ssa käänteisfaasisili-kageelillä (p-Bondapak-Cie, 2,5 x 15 cm). Eluoitiin 0,01 M etikkahapon vesiliuoksella, jolloin saatiin 0,190 g (59 %) 10 otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiinteänä ai neena lyofilisoinnin jälkeen: [a]2,,2 = +26,6° (c 1,0, vesi).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 97 % p-Bondapak-C18:11a, _ 3,9 mm x 30 cm, eluointi 2 % CH3CN-vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, 15 viipymäaika 6,1 min; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λ Bax: 302 nm (8 677); IR (KBr) ·\) nax: 1755 (β-laktaamin C=0), 1710, 1670, 1620 ja 1580 cm'1 (karboksylaatin C=0); 20 NMR (200 MHz, D20 ) 6: 1,32 (d, J = 6,33 Hz, 3H, CHjCHO), 1,4 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,93 (s, CH3C02H), 2,8 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,3 - 3,5 (m, 6H, H-4, H- 6, propyylin CH2-3 ja SCH2CH2N), 4,2 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0) ja 7,8 ppm (s, 1H, CH=NH).
25 Esimerkki 144 w (4R,5S,6S)-3-[(2-guanidinoetyyli)tio]-4-(3"-guani-dinopropyyli) -6- [ (1' R) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihapon etikkahapposuola 30
** N H
f ^H2CH2CHzNr:, CH2Cr---CH,NH-C-NH2 I 1 //—— äi-HpCHpMH- C-NH, - » ί'” I I \---- ... . u -^"2t.-,2,grr-u-NH2 35 C°rJ -Ch,C02h C ^ w c w< 485 fl /"T li /\
rCO M
Liuoksen, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopro-pyyli)-3-[(2-guanidinoetyyli)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-syylihapon etikkahapposuola (0,300 g, 0,695 mmol) kylmässä 5 vedessä (30 ml, 0 - 5 °C), pH säädettiin arvoon 8,5 IN natriumhydroksidin vesiliuoksella, ja sen jälkeen käsiteltiin aminoiminometaanisulfonihapolla (0,43 g, 3,46 mmol), joka lisättiin pieninä annoksina 5 min aikana. pH pidettiin välillä 8,0 - 8,5 koko lisäyksen ajan ja vielä 2 h 10 IM natriumhydroksidilla. Sen jälkeen pH säädettiin arvoon 5 jääetikalla, ja liuos kromatografoitiin käänteisfaasisi-likageelillä (p-Bondapak-C18, 2,5 x 15 cm). Eluoitiin 0,01 M etikkahapon vesiliuoksella, jolloin saatiin 0,213 g (64 %) otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiin-15 teänä aineena lyofilisoinnin jälkeen: [afn = +11,3° (c 1,0, vesi).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-Cie: 11a, 3,9-mm x 30 cm, eluointi 2 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymä-20 aika 10,4 min; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) n Bax: 302 nm (10 260); IR (KBr) 1755 (β-laktaamin O0), 1670, 1630 ja 1580 cm"1 (karboksylaatin C=0); ^ 25 :H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,32 (d, J = 6,38 Hz, 3H, CH3CH3CHO), 1,4 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 1,92 (S, CH3C02H), 2,8 - 3,2 (m, 2H, SCH2), 3,2 - 3,6 (m, 6H, H-4, H-6, propyylin CH2-3 ja SCH,CH,N), 4,23 (dd, JH5 H6 * 2,49 Hz, JH5 H4 = 9,2 Hz, 1H, H-5) ja 4,27 ppm (m päällek-30 käin H-5:n kanssa, 1H, CH3CH0).
486 9 6311
Esimerkki 145 (4R,5S,6S)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-syaa-nietyyli)tio]-4-[2"-(L-alanyyli)aminoetyyli]-7-ok-so-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-5 happo n il, ’:h- v .. — -.. v,.. m n ~ v ^ u' V i; / ^ / J H r | ' Γ~Γ\ Λν· ^Γ-3Ν.Χ^λ g--\ ,, r>' L"'3 10 ^ -3 -- L ^ C V,,..
— LUU- *:
•J
Liuos, jonka muodosti (4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli] -3-[(2-syaanietyyli)tio]-4-(2"-aminoetyyli)-15 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,512 g, 1,57 mmol) 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaattipuskurissa (15 ml), jäähdytettiin 0 °C:seen niin, että liuoksen läpi kuplitettiin samalla argonia. pH säädettiin arvoon 10,2 1 N Na0H:lla, ja lisättiin L-alaniinin N-kar-20 boksianhydridiä (0,181 g, 1,57 mmol) dioksaanissa (1,5 ml) yhtenä eränä sekoittaen voimakkaasti. Kun pH laski arvoon 7,2, se säädettiin uudelleen arvoon 10,2 ja annettiin olla siinä 1 h. Reaktio pysäytettiin säätämällä pH arvoon 6,0 1 N HCl:lla. Liuoksen läpi kuplitettiin argonia 30 min . 25 0 °C:ssa ja samalla pH säädettiin uudelleen arvoon 6,0 — i aina, kun sen nousi yli arvon 6,0. Raakatuotteena oleva reaktioseos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasisilikapyl-vään läpi (4,5 x 11,5 cm). Sopivat tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 30 kiinteä aine, joka kromatografoitiin uudelleen μ-Bondapak-C18-käänteisfaasisilikalla (4,5 x 11 cm). Hiukan polaari-sempi otsikon yhdiste, joka erottui tarkasti dipeptidijohdannaisesta, eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (97:3, gradienttieluointi), ja se saatiin keltaisena höytäleisenä 31 ! «1 HU I I t ili . . .
«7 96311 kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen (0,099 g, 15,9 %).
Puhtaus 96,5 % HPLC:n mukaan: UV-toteaminen 300 nm:ssa p-Bondapak-Cie: 11a (4 mm x 30 cm), 5 % CH3CN pH-5 arvon 6,8 omaavassa fosfaattipuskurissa, virtausnopeus 0,6 ml/min, viipymäaika 7,25 min.
UV 300; IR (Nujol) \^oax: 1750 cm'1 (OO, B-laktaami).
XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,38 (d, 3H, CH3, J = 10 6,4 Hz), 1,47 (d, 3H, CH3, J = 7,0 Hz), 1,52 - 1,77; 1,97 - 2,11 (m, 2H, CH2), 2,82 - 2,89 (päällekkäin, 2H, CH2CN), w 2,91-3,17 (päällekkäin, 2H, SCH2), 3,27 - 3,43 (päällekkäin, 3H, CH2N, H-4), 3,59 (dd, 1H, H-6, J5 6 = 2, 66 Hz, J61. = 6,06 Hz), 3,91 (q, 1H, CaH, Ja CH3 = 7,02 Hz), 4,74 -15 4,96 (päällekkäin, 2H, H-5, H-l').
Esimerkki 146 (4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-syaa-nietyyli) tio] -4- [2"- (L-alanyyli-L-alanyyli)amino-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-20 karboksyylihappo ^ ^ f U r -a m Tr ..
to- L Π 7 'w i] ί m\ Π *> n u -1 _ .--4 ^ 1 v_ w s 25 +
c COOK
0 CH, 11* N H 1 30 f ch2ch:nk^Y yNh2 ί CH ^' p\_ CN CH; 0
COOK
-J
- 96311 488
Liuos, jonka muodosti (4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-hyd-roksietyyli] -3- [ (2-syaanietyyli )tio] -4-( 2"-aminoetyyli ) - 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo (0,512 g, 1,57 mmol) 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavassa fosfaat-5 tipuskurissa (15 ml), jäähdytettiin 0 °C:seen ja samalla liuoksen läpi kuplitettiin argonia. pH säädettiin arvoon 10,2 1 N NaOHrlla, ja lisättiin L-alaniinin N-karboksian-hydridiä (0,181 g, 1,57 mmol) dioksaanissa (1,5 ml) yhtenä eränä sekoittaen voimakkaasti. Kun pH laski arvoon 7,2, se 10 säädettiin uudelleen arvoon 10,2 ja annettiin olla siinä 1 h. Reaktio pysäytettiin säätämällä pH arvoon 6,0 IN HCl:lla. Liuoksen läpi kuplitettiin argonia 30 min 0 eC:ssa, niin, että pH säädettiin uudelleen arvoon 6,0 aina, kun nousi yli arvon 6,0. Raakatuotereaktioseos vie-15 tiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasisilikapylvään läpi (4,5 x 11,5 cm). Sopivat tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin kiinteä aine, joka kromatografoitiin uudelleen p-Bondapak-C18-kään-teisfaasisilikalla (4,5 x 11 cm). Hiukan vähemmän polaari-20 nen otsikon yhdiste, joka erottui tarkasti monopeptidijohdannaisesta, eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (96:4, gradienttieluointi), ja se saatiin kellertävänä höytälei-senä kiinteänä aineena lyofilisoinnin jälkeen (0,069 g, 9,4 %).
25 Puhtaus 96,6 % HPLC:n mukaan: UV-toteaminen — 300 nm:ssa p-Bondapak-C18:11a (4 mm x 30 cm), 5 % CH3CN pH-arvon 6,8 omaavassa fosfaattipuskurissa, virtausnopeus 0,6 ml/min, viipymäaika 9,1 min.
UV d 300 nm.
30 IR (Nujol) ^max: 1750 cm'1 (C=0, fi-laktaami); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,37 (d, 3H, CH3, J = 6,45 Hz), 1,42 (d, 3H, CH3, J = 7,39 Hz), 1,46 (d, 3H, CH3, J = 8,85 Hz), 1,59 - 1,75; 1,99 - 2,14 (m, 2H, CH2), 2,84 -2,89 (päällekkäin, 2H, CH2CN), 2,92 - 3,22 (päällekkäin, 35 2H, SCH2), 3,3 - 3,42 (päällekkäin, 3H, CH2N, H-4), 3,59 489 9631 1 (dd, 1H, H-6, J5>6 = 2,56 Hz, J6 r = 5,88 Hz), 3,9 (leveä, 1H, CaH), 4,25 - 4,34 (päällekkäin, 3H, H-5, H-l', CaH).
Esimerkki 147 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(3-atsetidinyy-5 li)tio]-6-[(1*R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsa- bisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo v] ^ N H ? 10 OK S Sa \ __ ci 0 ν' X02H it 15
Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)- 4-(3"-atsidopropyyli)-3-[ (3-atsetidinyyli)tio]-6-[(1'R)-1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-20 2-karboksyylihappo (0,235 g, 0,64 mmol) vedessä (75 ml), hydrattiin käyttäen 5-prosenttista Pd/Al203:a (0,235 g) ja 310 kPa:n (45 psi:n) paineessa. 1 tunnin kuluttua käytetty katalyytti korvattiin uudella katalyytillä (0,235 g), ja hydrausta jatkettiin vielä yhden tunnin ajan. Siinä vai--- 25 heessa reaktioseos suodatettiin, tehtiin happamaksi pH- arvoon 5,7 AcOHrlla ja lopuksi kromatografoitiin käänteis-faasisilikageelillä (Partisil) eluoiden vedellä. Lyofili-soinnin jälkeen saatu aine tarvitsi vielä kaksi kromato-grafiapuhdistusta, joiden jälkeen saatiin 0,045 g (17,5 %) 30 otsikon yhdistettä, joka oli hyvin puhdasta.
IR (Nujol) eax: 1750 cm'1 (β-laktaami); XH NMR (D20 ) 6 : 4,00 - 4,15 ja 4,50 - 4,70 (4H, 2m, 2H-2, atsetidiinin 2H-4), 4,15 - 4,20 (3H, m, H-5, H-l', CH-S), 3,47 (1H, dd, J = 2,72 Hz, J = 6,33 Hz, H-6), 490 963 n 3,00 - 3,25 (3H, m, CH2-N, H-4), 1,50 - 1,95 (4H, m, 2H-1", 2H-2"), 1,38 (3H, d, J = 6,34 Hz, -CH3 · ).
Esimerkki 148
Kalium-(4R,5S,6S)-4-(2"-hydroksietyyli)-6- [(1'R)-5 1'-hydroksietyyli]-3-[(imidatsol-4-yyli)metyyli- tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-kar-boksylaatti
CH-CH,0H
10 riAl' ' l—S
rr>^-0 co2:< ^ 15 A.Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1?-tert-butyylidime-tyylisilyylioksietyyli]-4-(2"-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli)-3- [ (imidatsoi-4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-20 atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti Λ-’ίηνί 0r'BDw5 , ~ “J CH->CHoOTBD-lS “ CK,CHOT3Dr.5
J f J T
-K3 \—rA Cr-3 'i—r\ FTw : 25 ΠΧ)0 —^ ° ° -ο2φ “
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-6-[(1Ή)-30 1’-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-(2"-tert-bu- tyylidimetyylisilyylioksietyyli )-3,7-diokso-l-atsabisyklo- [3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti (9,03 mmol, valmistettu syklisoimalla 5,00 g, 9,03 mmol diatsoprekursoria) kuivassa asetonitriilissä (60 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen 35 ja käsiteltiin käyttäen typpeä suojakaasuna difenyylikloo- I| Stt I dll! 96311 491 rifosfaatilla (2,1 ml, 10,1 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (1,7 ml, 9,8 mmol) 5 min aikana. Sen jälkeen lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyli-aminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 1 h. Sitten 5 liuos jäähdytettiin -20 °C:seen ja sen jälkeen käsiteltiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiini11a (2,3 ml, 13,2 mmol) ja sitten 1,22 g:11a (10,7 mmol) 4(5)-(merkap-tometyyliJimidatsolia asetonitriilissä (10 ml). 3 h:n jälkeen -20 °C:ssa ja 1 h:n jälkeen 0 °C:ssa reaktioseos lai-10 mennettiin etyyliasetaatilla (500 ml), pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin silikageelillä (5 x 10 cm). Eluoitiin tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella (8:2), jolloin saatiin talteenotetuksi 15 ensin 5,0 g (73 %) enolifosfaattia. Sen jälkeen eluoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 1,35 g (24 %) otsikon yhdistettä öljynä. xH-NMR:n mukaan tämä aine sisälsi 25 % avointa tuotetta, joka oli saatu β-laktaamin lohkaisusta tiolilla.
20 IR (NaCl, kalvo) ') Bax: 1772 (β-laktaamin C=0) ja 1708 cm*1 (esterin C=0); :H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,5 (SiCH3), 0,9 (Si-t-Bu), 1,27 (d, J = 6,13 Hz, CT3CH0), 1,6 - 2,2 (m, CH2CH2OSi), 3,09 (dd, JH8 H6 = 2,45 Hz, JH6 H1 = 6,63 Hz, H-25 6), 3,5 - 4,3 (m, H-4, H-5, SCH2, CH3CH0, CH2CH2OSi), 4,7 (m, allyylin CH2), 5,1 - 5,5 ja 5,8 - 6,1 (2m, allyylin CH), 6,9 (s, imidatsolin H-5) aj 7,6 ppm (s, imidatsolin H-2).
B. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-30 4-(2"-hydroksietyyli)-3-[(imidatsol-4-yyli)metyylitio]-7- okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
Λπη t\wp Λ-J
Ϋ CH2CH20TBD11S ψ CH:CH:OH
96311 492
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-(2"-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksietyyli)-3-[(imidatsol-4-yyli)me-tyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-5 sylaatti (2,65 g, 4,26 mmol) tetrahydrofuraanissa (60 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin jääetikalla (3,0 ml, 52,4 mmol) ja sen jälkeen 26 ml :11a (26,0 mmol) 1,0 M tetrabutyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa. Sitten liuosta pidettiin 5 °C:ssa 12 vuorokaut-10 ta. Sen jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelikerroksella (5 x 5 cm) käyttäen metanolin gra-15 dienttia (0 - 20 %) etyyliasetaatissa eluenttina. Saatu tuote (0,37 g, 20 %) sisälsi hiukan tetrabutyyliammonium-suolaa, ja sen käytettiin sellaisenaan suojauksen poisto-vaiheessa.
IR (NaCl, kalvo) V max: 1765 (β-laktaamin C=0) ja 20 1700 cm'1 (esterin C=0).
C. Kalium-(4R,5S,6S)-4-(2"-hydroksietyyli)-6-[(1'-R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(imidatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 25 OH OH rr r,· Λυ
; L CH2CH20K jr Ch2Ch,0H
C ' N r H \^} ° " :o2y; 30
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[ (1'R)-l' -hydroksietyyli] -4-( 2"-hydroksietyyli )- 3- [ ( imi-datsol-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-35 2-eeni-2-karboksylaatti (0,37 g, 0,94 mmol) kuivassa di- 96311 493 kloorimetaanissa (20 ml), käsiteltiin 22 *C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)pal-ladiumilla [0] ja 2,1 ml:11a (1,25 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyliheksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 1,2 h:n ku-5 luttua reaktioseosta uutettiin vedellä (2 x 50 ml), ja yhdistetty vesipitoinen uute kromatografoitiin kaksi kertaa käänteisfaasisilikageelillä (p-Bondapak-C18, 3 x 15 cm) käyttäen vettä eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot lyofili-soitiin, jolloin saatiin 0,081 g (22 %) otsikon karbape- 10 neemiä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 100 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla, virtausnopeus 1,5 ml/min, UV-detektori 300 nm, viipymäaika 9,04 min; 15 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) ^ Bex: 304 nm (10 153); IR (KBr) max: 1750 (β-laktaamin C=0) ja 1590 cm'1 (karboksylaatin C=0); NMR (200 MHz, D20) 6: 1,30 (d, J = 6,37 Hz, 3H, 20 CH3CH0), 1,5 - 2,1 (2m, 2H, CH2CH2OH), 3,3 - 3,5 (m, 2H, H-6 ja H-4 päällekkäin), 3,5 - 3,8 (m, 2H, CH2CH2OH), 4,03 (ABq, JAB = 14,6 Hz, a = 37,0 Hz, 2H, SCH2), 4,13 (dd päällekkäin SCH2:n kanssa, JH5 H6 = 2,53 Hz, JH5 H4 = 9,60 Hz, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3CH0), 7,10 (s, 1H, imidatsolin H-5) ^ 25 ja 7,79 ppm (s, 1H, imidatsolin H-2).
Esimerkki 149 (4R, 5S,6S)-4- (3"-atsidopropyyli) - 3- [ (3R) -3-pyrro-lidinyylitio] -6- [ (1TR) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 V- OH ( 35 L-\[.// 4}
° C02nCO
u 11 494 9 6 31 1 A. (3R)-N-allyylioksikarbonyyli-3-hydroksipyrroli- diini
HO HO
5 O-b π .HC1 CO,'^' 10 3(R)-hydroksipyrrolidiini HCl-suola (8,0 g, 64,7 mmol) liuotettiin kylmään (5 °C) IN NaOH:iin (130 ml, 130 mmol) ja käsiteltiin tipoittain allyylikloo-riformaatin (9,4 g, 77,7 mmol) liuoksella asetonissa (80 ml). Seosta sekoitettiin 15 min sen jälkeen, kun li-15 säys oli suoritettu, ja sitten suurin osa asetonista haihdutettiin. Sen jälkeen vesipitoista liuosta uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaniset uutteet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin. Raakatuotekar-bamaatti puhdistettiin kromatografiällä (Si02/Et20, sitten 20 EtOAc ja CH3CN), jolloin saatiin 6,28 g (56,7 %) otsikon yhdistettä liikkuvana öljynä.
IR (CH2C12) 3603, 3440 (-OH), 1697 (-C02), 1650 (> = <) - XH NMR (CDC13) 6: 4,8 - 6,1 (5H, ai lyy li tyyppi), 25 4,48 (1H, leveä s, H-3), 3,40 - 3,60 (4H, m, 2H-2, 2H-5), — 1,80 - 2,10 (3H, m, 2H-4, -OH).
B. (3S)-N-allyylioksikarbonyyli-3-hydroksipyrroli- diini
30 HO HO
v - v 35 495 56311
Kylmää liuosta (5 °C), jonka muodosti (3R)-N-allyy-lioksikarbonyyli-3-hydroksipyrrolidiini (2,16 g, 12,62 mmol) CH2Cl2:ssa, käsiteltiin pyridiinillä (1,15 g, 14,5 mmol) ja trifluorimetaanisulfonihappoanhydridillä 5 (4,09 g, 14,5 mmol). Sekoitettiin 15 min, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin, jäännöstä trituroitiin dietyylieet-terissä ja suodatettiin. Sen jälkeen suodos haihdutettiin, raakatuotetriflaatti liuotettiin kylmään (5 °C) CH2Cl2:iin ja käsiteltiin etukäteen valmistetulla liuoksella, jonka 10 muodostivat muurahaishappo (0,87 g, 18,93 mmol) ja tri-etyyliamiini (1,9 g, 18,93 mmol) CH2Cl2:ssa. Jäähaude poistettiin, ja liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 45 min. Sen jälkeen reaktioseos pestiin kylmällä vedellä ja suolaliuoksella. Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen 15 liuotin haihdutettiin ja raakatuoteformaatti puhdistettiin kromatografiällä (Si02; 10 % CH3CN CH2Cl2:ssa), jolloin saatiin 2,13 g (84,7 %). Tämä puhdistettu aine liuotettiin kylmään (5 °C) tetrahydrofuraaniin, ja lisättiin 1 N NaOH:a (11 ml, 11 mmol) tipoittain. Sekoitettiin 10 min, 20 minkä jälkeen reaktioseos neutraloitiin HCl:lla, laimennettiin EtOAcrlla ja pestiin kylmällä vedellä ja suolaliuoksella. Liuotin haihdutettiin, minkä jälkeen tuote kromatografoitiin (Si02/Et0Ac), jolloin saatiin 1,51 g (82,5 %) otsikon yhdistettä.
w 25 IR (CH2C12) Vmax: 3605, 3440 (-0H), 1695 (-C02-), 1650 cm'1 (>=<).
NMR (CDC13) 6: 4,40 - 6,10 (5H, allyylityyppi), 4,50 (1H, m, H-3), 3,40 - 3,70 (4H, m, 2H-2, 2H-5), 1,90 - 2,10 (2H, m, 2H-4). [a]D20: +26,9 (130 mg/100 ml, MeOH).
30 C. (3R)-N-allyylioksikarbonyyli-3-merkaptopyrroli- diini b — ’o CC— r Λ „ ^ v 2 96311 496
Kylmää liuosta (5 °C), jonka muodosti (3S)-N-allyy-lioksikarbonyyli-3-hydroksipyrrolidiini (1,51 g, 8,82 mmol) CH2Cl2:ssa, käsiteltiin pyridiinillä (0,80 g, 10,14 mmol) ja sen jälkeen trifluorimetaanisulfonihappoan-5 hydridillä (2,86 g, 10,14 mmol). Sekoitettiin 15 min, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin, jäännöstä trituroitiin dietyylieetterissä, suodos haihdutettiin ja sen jälkeen suodatettiin, raakatuotetriflaatti liuotettiin uudelleen kylmään (5 eC) CH3CN:iin ja samalla liuokseen kuplitettiin 10 H2S:a, ja lisättiin trietyyliamiinia (1,07 g, 10,58 mmol) tipoittain. Lähtöaine katosi 30 min:ssa. Sen jälkeen haihdutettiin liuotin, ja raakatuotetioli puhdistettiin kroma-tografiällä (Si02/CH2C12), jolloin saatiin 1,25 (75,7 %) otsikon yhdistettä.
15 *H NMR (CDC13) 6: 4,60 - 6,10 (5H, allyylityyppi), 3,20 - 3,90 (5H, m, H-3, 2H-2, 2H-5), 2,20 - 2,40 (1H, m, H-5), 1,80 - 2,00 (1H, m, H-5), 1,71 (1H, d, J = 6,65, SH) .
D. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3- 20 [ (3R)-N-(allyylioksikarbonyyli)-3-pyrrolidinyylitio]-6- [ (1' R) -1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti VT >* -’3 25 \ \
.A_J ,XS
L'13 HO—::Pc0 Φ)2 —- ""3 30 c co,"'^ 1 co2^ ,1 . iH.i «Iti I U(t > 497 96311
Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S )-4-( 3"-atsidopropyyli )-3-(difenyylifosfono ) - 6-[ (1 'R)-l' -hydroksietyyli )-7-okso-l-atsabisyklo[3.2. 0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,85 g, 3,25 mmol) DMF:ssa 5 (35 ml), käsiteltiin (3R)-N-allyylioksikarbonyyli-3-mer- kaptopyrrolidiinillä (1,25 g, 6,68 mmol) ja sen jälkeen di-isopropyylietyyliamiinilla (0,863 g, 6,68 mmol). Jää-haude poistettiin, ja sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 h, minkä jälkeen liuos laimennettiin dietyylieetterillä 10 (90 ml) ja pestiin kolme kertaa kylmällä suolaliuoksella.
Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen orgaaninen liuos haihdutettiin, ja raakatuotekarbapeneemi puhdistettiin kroma-tografiällä (Si02, 30 % CH3CN CH2Cl2:ssa), jolloin saatiin 1,27 g (77,1 %) otsikon yhdistettä.
15 IR (CH2C12) ') aax: 3610 (-0H), 2105 (-N3), 1778 (6- laktaami), 1700 (-C02-), 1650 cm*1 (> = <).
*H NMR (CDC13) 6: 4,5 - 6,10 (10H, 2 allyylityyp-piä), 4,15 - 4,30 (2H, m, H-5, H-l'), 3,70 - 3,90 (2H, m, H-4, CH-S-), 3,10 - 3,70 (7H, m, H-6, -CH2N3, -(CH2)2N-), 20 1,40 - 2,40 (6H, m, 2H-1", 2H-2", pyrrolidiinin 2H-4), 1,40 (3H, d, J = 6,23 Hz, -CH3' ).
E. (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopropyyli)-3-[(3R)-3-pyr-rolidinyylitio] -6- [ (1 ’R) -1 * -hydroksietyyli] -7-okso-l-at-sabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo w 25 n3 n3 30 f ____
Li-3 '1-p \ r- w 11 3 I I \ Γ J ΛΤ // ‘-'t/. * J_M // --¾._
Q
C02'/^ :ri 35 498 56311
Kylmää (5 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R, 5S, 6S)-4-(3"-atsidopropyyli )-3- [ (3R)-N-(allyylioksi-karbonyyli] -3-pyrrolidinyylitio] -6- [ (1' R) -1' -hydroksietyy-li] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaat-5 ti (0,932 g, 1,84 mmol) EtOAc:ssa (50 ml), käsiteltiin 0,5 M natriumetyyliheksanoaatilla (11,04 ml, 5,52 mmol) ja (PPh3)4Pd:11a (0,90 g). Liuosta sekoitettiin 20 h 5 eC:ssa, sitten laimennettiin Et0Ac:lla ja uutettiin kylmällä vedellä. Vesipitoiset uutteet tehtiin happamiksi pH-arvoon 10 *7,0 Ac0H:lla ja kromatografoitiin käänteisfaasisilikagee- lillä (Partisil). Eluointi suoritettiin 0 - 25-prosentti-sella CH3CN:lla vedessä, jolloin saatiin 15 mg (2,1 %) otsikon yhdistettä. [Pääosa erotetusta tuotteesta oli vastaavaa esteriä, josta oli poistettu yksi suojaryhmä 15 (31 %)].
lH NMR (D20 ) 6 : 4,20 - 4,40 ( 2H, m, H-5, H-l’), 3,95 (1H, m, -CH-S), 2,96 - 3,42 (1H, m, H-4), 3,1 - 3,42 (7H, m, H-6, -CH2N3, -(CH2)2N-), 1,50 - 2,50 (6H, m, 2H-1", 2H-2", pyrrolidiinin 2H-4), 1,33 (3H, d, J = 6,37 Hz, 20 -CH3').
Esimerkki 150 (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyyli)-3-[(3R)-3-pyrrolidinyylitio] -6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-7-okso-l- atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 25 • n3 nk2
Jn > J > r iT\ Λ - -s"', Λ 30 Lr.3 "ι—)—f\_-
^ I, - O x - O
L03r. uC;n // ... S6311
Liuosta, jonka muodosti (4R,5S,6S)-4-(3"-atsidopro-pyyli)-3-[(3R)-3-pyrrolidinyylitio]-6-[(1'R)-l'-hydroksi-etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-syylihappo (0,54 g, 0,142 mmol) kylmässä vedessä (15 ml), 5 hydrattiin 5 °C:ssa 1 h 414 kPa:n (60 psi:n) vetypaineessa niin, että läsnä oli 5-prosenttista Pd/Al203:a (60 mg). Sen jälkeen katalyytti suodatettiin ja suodos tehtiin happamaksi pH-arvoon 5,5 etikkahapolla. Tämä happamaksi tehty liuos kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (Par-10 tisil), jolloin saatiin 30 mg (50,9 %) otsikon yhdistettä son etikkahapposuolana.
IR (Nujol) Bax; 1750 cm*1 (β-laktaami), 1590 W ( -CO,’1).
ΧΗ NMR (D20 ) 6 : 4,20 - 4,40 ( 2H, m, H-5, H-l'), 15 3,90 - 4,10 (1H, m, -CH-S), 3,60 - 3,70 (1H, m, H-4), 3,20 - 3,50 (5H, m, H-6, (-CH2)2N-), 3,05 (2H, m, CH2-N-), 1,50 - 2,60 (6H, m, 2H-1", 2H-2", pyrrolidiinin 2H-4), 1,33 (3H, s, J = 6,40 Hz, -CHj1), 1,92 (3H, s, etikkahap-po).
20 Esimerkki 151
Kalium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(l'R)-l'-hydroksietyyli] -3-[ (imidatsol-4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-laatti _ 25 2H CHoCH-,N3 J' 1 * n-f 3 I I /V——3CH9^^\vt^ 30 /y\ "
C02K
500 96311 A.Ällyyli-(4R,5S,6S)-4-(2”-atsidoetyyli)-6-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(imidatsol- 4-yyli)metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 pws ce2ch2h3 pDHS ch2ck2n3 [ _^ch3 10 0 C02 CC2/1^'
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5R,6S)-4-(2"-at-sidoetyyli)-6-[(1’R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-15 etyyli]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karbok-sylaatti (10,7 mmol, valmistettu syklisoimalla 5,0 g, 10,7 mmol diatsoprekursoria) kuivassa asetonitriilissä (75 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin dife-nyylikloorifosfaatilla (2,45 ml, 11,8 mmol), ja samanai-20 kaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (2,06 ml, 11,8 mmol) 5 min aikana. Lisättiin pieni 4-Ν,Ν-dimetyyliaminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 1 h.
Sen jälkeen seos jäähdytettiin -20 °C:seen ja käsiteltiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiini11a (2,06 ml, , 25 11,8 mmol) ja sen jälkeen 4(5)(merkaptometyyli)imidatsolin —' (1,50 g, 13,1 mmol) liuoksella asetonitriilissä (10 ml).
Liuos lämmitettiin hitaasti 0-5 °C:seen ja sekoitettiin 3 h. Sitten reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suo-30 laliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä (5 x 10 cm). Eluoitiin tolueenin ja etyyliasetaatin seoksella (8:2), jolloin saatiin ensin 3,38 g, (47 %) välituo-te-enolifosfaattia. Eluoitiin edelleen etyyliasetaatilla, 35 jolloin saatiin 1,45 g (25 %) otsikon yhdistettä öljynä.
«u 96311 IR (NaCl, kalvo) ') max: 2100 (N3) ja 1765 cm'1 (β- laktaamin C=0).
B.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1’R)-11 -hydroksietyyli]-3-[(imidatsol-4-yyli)metyylitio]-7-5 okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 0TnDΪ1S pu r.f v, Or. -v -μ « JT\ Jf\ io \ " oJ~^~~SC}iz i C°2^ CO,^
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-at-sidoetyyli)-6-[(1’R)-l1-tert-butyylidimetyylisilyylioksi-15 etyyli)-3-[(imidatsol-4-yyli)metyylitio]-7-okso-l-atsabi- syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (1,45 g, 2,72 mmol) tetrahydrofuraanissa (40 ml), jäähdytettiin 0 -5 °C:seen ja käsiteltiin etikkahapolla (1,0 ml,
17,5 mmol), ja sen jälkeen 8,2 ml:11a (8,2 mmol) 1,0 M
20 tetrabutyyliammoniumfluoridia tetrahydrofuraanissa. 14 vuorokauden jälkeen 0-5 °C:ssa reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (400 ml), pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa ja jäännös kromatografoi- ''-f 25 tiin silikageelillä (4x6 cm). Eluoitiin metanolin gradi- ♦ entilla (0 - 20 %) etyyliasetaatissa, jolloin saatiin 0,34 g (30 %) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) ^ max: 2100 (N3), 1765 (β-laktaamin C=0) ja 1700 cm'1 (esterin C=0); 30 aH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,38 (d, J = 6,25 Hz, 3H,
CH3CH0), 1,5 - 2,1 (m, CH2CH2N3), 3,15 (dd, JH6 H5 = 2,63 Hz, jh6.hi = 7,72 Hz, 1H, H-6), 3,3 - 3,7 (m, 3H, H-4 ja CH2CH2N3 päällekkäin) 4,06 (ABq, JAB = 14,6 Hz, ύ = 45,2 Hz, 2H, SCH2), 4,1 - 4,4 (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin), 4,6 -35 4,9 (m, 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,9 - 6,1 (2m, 2H
96311 502 ja 1H, allyylin CH), 6,98 (s, 1H, imidatsolin H-5) ja 7,59 ppm (s, 1H, imidatsolin H-2).
C. Kalium-(4R,5S,6S)-4-(2"-atsidoetyyli)-6-[(1 *R) — 1' -hydroksietyyli)-3-[(imidatsol-4-yyli)metyylitio]-7-5 okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti £H CH-CH-N, ' ch,ch2s,
\ f ,—n J f " ' [— N
ειίΤΛ-τΛ Jf\\ ζφ··._Λ JT\\ -- jX>"SCK:^f
C02K
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-(2"-15 atsidoetyyli)-6- [ (1'R)-l' -hydroksietyyli] -3- [ (imidatsol- 4-yyli )metyylitio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,304 g, 0,91 mmol) dikloorimetaanissa (20 ml), käsiteltiin 25 °C:ssa ja käyttäen typpeä suoja-kaasuna tetrakis(trifenyylifosfiini)palladiumilla [0] 20 (0,040 g) ja 1,8 ml:11a (0,9 mmol) 0,5 M kalium-2-etyyli- heksanoaatin liuosta etyyliasetaatissa. 1,2 h:n kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (2 x 50 ml) ja yhdistetty uute kromatografoitiin käänteisfaasisilikageelillä (μ-Βοη-dapak-C18, 2,5 x 15 cm). Pylvästä eluoitiin asetonitriilin 25 gradientilla (0 - 5 %) 0,01 M pH-arvon 7,0 omaavassa fos- — faattipuskurissa. UV-aktiiviset fraktiot otettiin talteen, väkevöitiin ja suoritettiin suolanpoisto samalla pylväällä käyttäen vettä puskurin sijasta eluenttina. Oleelliset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,047 g (14 %) 30 otsikon karbapeneemiä valkoisena amorfisena kiinteänä ai- . neena:
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 10 % CH3CN-vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, UV-detektori 302 nm, 35 viipymäaika 6,83 min; 96311 503 UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) fr Bax: 304 nm (8 380); IR (KBr) Ό Bax: 2100 (N3), 1745 (β-laktaamin C=0) ja 1600 cm'1 (karboksylaatin C=0); 5 XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,31 (d, J = 6,40 Hz, 3H,C> H3CH0), 1,6 - 2,1 (m, 2H, CH2CH2N3), 3,2 - 3,6 (m, 4H, H-6, H-4 ja CH2CH2N3 päällekkäin), 4,03 (ABq, JfiB = 14,52 Hz, Δ = 33,6 Hz, 2H, SCH2), 4,14 (dd, JH5.H6 = 2,42 Hz, JH5H4 = 9,48 Hz, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3CH0), 7,09 (s, 1H, 10 imidatsolin H-5) ja 7,72 ppm (s, 1H, imidatsolin H-l).
Esimerkki 152 w (4R,5S,6S)-4-[3"-amino-(2"R tai S)-2"-hydroksipro- pyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(1'R)-1'-hydrok- sietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-15 2-karboksyylihappo 2n CH2CK(0H)CH2NH2
r TfA
C?‘3 20 A— 0 co2h A. (Pyridin-2-yyli)metyylitio-5-atsido-4-(tert-bu-''-f 25 tyylidimetyylisilyylioksi)pentanoaatti 0TB DuS 0TB D M 5 >I3CH2CH (CE,) 2C0,K-► N3CH2CH (CK2) 2C0SCK2-A^ 30
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti 5-at-sido-4-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)pentaanihappo (38 g, 0,14 mmol), joka oli saatu jodilaktonisaatiosta, 35 joka on kuvattu julkaisussa P.A. Bartlett et ai., J. Am.
96311 504
Chem. Soc. 100 (1978) 3950, dimetyyliformamidissa (250 ml), lisättiin 2-pikolyylimerkaptaania (17,5 g, 0,140 mol), 1,3-disykloheksyylikarbodi-imidiä (30 g, 0,15 mol) ja 1-hydroksibentsotriatsolia (10 g, 0,074 mol).
5 Seosta sekoitettiin 60 h kylmässä huoneessa (5 - 8 °C), laimennettiin vedellä (11) ja uutettiin dietyylieette-rillä (5 x 250 ml). Dietyylieetteriuutteet yhdistettiin, pestiin vedellä (5 x 250 ml), suolaliuoksella (200 ml), kuivattiin ja vietiin silikageeli-flash-kerroksen läpi 10 (500 g, heksaani, 5 -» 30 % etyyliasetaatti/heksaani), jol loin saatiin otsikon yhdiste (30 g, %) öljynä.
IR (kalvo) ') max: 2100 (N3) ja 1690 cm'1 (C=0).
NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,558 - 8,525 (1H, m, pyridiinin H-6), 7,672 - 7,586 (1H, m, pyridiinin H-4), 15 7,336 (1H, d, J = 7,9 Hz, pyridiinin H-3), 7,199 - 7,131 (1H, m, pyridiinin H-5), 4,257 (2H, s, CH2S), 3,834 (1H, 5 viivan keskus, J 5,41-2, CHO), 3,197 (2H, ABX:n keskus, J = 4,5 Hz, J = 5,4 Hz, J = 1,25 Hz, CH2N3), 2,659 (2H, t, J = 7,6 Hz, CH2C0), 2,01 - 1,786 (2H, m, CH2), 0,893 (9H, 20 s, tert-butyyli), 0,094 ja 0,061 ppm (6H, 2s, dimetyyli).
B. (3S,4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1"R) -1"- (pyridin-2-yyli)metyylitiokar-bonyyli-4"-atsido-(3"R ja S)-3"-tert-butyylidimetyylisi-lyylioksi Jbutyyli]atsetidin-2-oni 25 — CT3D.M5 Λ rr D Τ' v c 1
^ i - 'J i. Ϊ I
f %- ."Ϊ ? C Γ. L Γ. ί 3 0 T 5 D “5 f, η η,.^\ J, “ N-C H-C n ( C H-7} 5C —* ' J C05CH?—1(f ' “ “ r^~n “ N =-/
30 L
Kylmään (jää-metanolihaude) liuokseen, jonka muodosti (pyridin-2-yyli)metyylitio-5-atsido-4-( tert-butyyli-35 dimetyylisilyylioksi)pentanoaatti (30 g, 78,9 mmol) di- 96311 505 kloorimetaanissa (500 ml), lisättiin trietyyliamiinia (35 ml, 0,25 mmol) ja tipoittain tert-butyylidimetyylisi-lyylitrifluorimetaanisulfonaattia (46 ml, 0,20 mmol). Lisäyksen lopussa seoksen annettiin seistä 18 h 5 -5 8 °C:ssa, sen jälkeen laimennettiin heksaanilla (1 1), pestiin vedellä (5 x 500 ml), suolaliuoksella (500 ml), kuivattiin (MgS04) ja käsiteltiin aktivoidulla puuhiilellä. Jäännös (20 g, 51 %, 0,040 mmol), punainen öljy, lisättiin kylmään (jäähaude) seokseen, jonka muodosti juuri fuusioi-10 tu sinkkikloridi (13 g, 0,096 mmol) ja (3R,4R)-4-asetoksi-3-[ (1 'R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]atseti-din-2-oni (20 g, 0,069 mmol) dikloorimetaanissa (250 ml). Annettiin seistä kylmässä huoneessa 18 h, laimennettiin dietyylieetterillä (1 1), pestiin kylläisellä NH4C1:n vesi-15 liuoksella (3 x 250 ml), vedellä (3 x 250 ml), jääkylmällä kylläisellä NaHC03:n vesiliuoksella, vedellä (250 ml), suolaliuoksella (250 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (500 g, heksaani -* 50 % etyyliasetaatti/heksaani), jolloin saatiin otsikon 20 yhdisteet erillisinä diastereomeereinä (30 g kumpaakin diastereomeeriä, 24 % yhdistetty saanto).
Isomeeri 1
Rf = 0,33 (heksaani/etyyliasetaatti, 1/1); IR (kalvo) ') max: 3300 - 3200 (NH), 2700 (N3), 1765 ^ 25 ja 1680 cm'1 (C=0); NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,54 - 8,51 (1H, m, py-ridiinin H-6), 7,64 - 7,58 (1H, m, pyridiinin H-4), 7,314 (1H, d, J = 7,8 Hz, pyridiinin H-3), 7,21 - 7,14 (1H, m, pyridiinin H-5), 5,845 (1H, leveä s, NH), 4,280, 4,269 30 (2H, 2 viivaa, osa ABqra, CH2S), 4,2 - 4,05 (1H, m, CHO), 3,832 (1H, dd, J = 2,05 Hz, J = 6,0 Hz, H-4), 3,83 - 3,70 (1H, m, CHO), 3,227 (2H, ABX, J = 4,6 Hz, J = 5,1 Hz, J = 12,5 Hz, CH2N3), 3,08 - 2,95 (2H, m, H-3 ja H-l" ), 2,15 -1,98, 1,67 - 1,55 (2H, m, CH2-1"), 1,025 (3H, d, J = 96311 506 6,3 Hz, CH3), 0,883, 0,868 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,070 ja 0,047 ppm (3H ja 5H, 2s, dimetyyli).
Isomeeri 2
Rf = 0,42 (heksaani/etyyliasetaatti, 1/1); 5 IR (kalvo) V fflax: 3250 (NH), 2100 (N3), 1765 ja 1685 cm'1 (C=0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 8,55 - 8,52 (1H, m, py-ridiinin H-6), 7,67 - 7,58 (1H, m, pyridiinin H-4), 7,32 (1H, d, J = 7,8 Hz, pyridiinin H-3), 7,21 - 7,14 (1H, m, 10 pyridiinin H-5), 5,90 (1H, leveä s, NH), 4,336, 4,267, 4,245, 4,174 (2H, ABq, J = 14,0 Hz, CH2S), 4,20 - 4,13 (1H, m, CHO), 3,794 (1H, dd, J = 2,1 Hz, J = 6,9 Hz, H-4), 3,82 - 3,75 (1H, m, CHO), 3,207 (2H, ABX, J = 3,8 Hz, J = 5,2 Hz, J = 12,8 Hz, CH2S), 3,048 (1H, leveä t, J = 2,5 Hz, 15 H-3), 2,86 - 2,75 (1H, m, H-l"), 2,10 - 1,96, 1,85 - 1,70 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4), 1,050 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,883, 0,857 (18H, 2s, tert-butyyli) ja 0,047 ppm (12H, s, dimetyyli).
C. (3S,4S)-3-[(1 ’ R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-20 lioksietyyli]-4-[(1"R)-l"-karboksi-4"-atsido-(3"R tai S)-3"-tert-butyylidimetyylisilyylioksibutyyli]atsetidin-2-oni
073 DK S OTBDtlS
25 073D.75 i 073 Dii 5 i - CK2CHCH2N3 CH2CHCH2N3 2'cJ~h^ ' "Q 2Q^~h 30
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-3 - [ (1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(pyridin-2-yyli)metyylitiokarbonyyli-4"-atsido-(3"R tai S)-3"-tert-butyylidimetyylisilyylioksi)butyyli]-35 atsetidin-2-oni (2,38 g, 3,9 mmol) tetrahydrofuraanissa • IKU *1« 1.1 i M . . , 96311 507 (25 ml), käsiteltiin 30-prosenttisella vetyperoksidin vesiliuoksella (1,3 ml, 15,6 mmol), ja sen jälkeen lisättiin hitaasti 1 M NaOHrn vesiliuosta (11,7 ml, 11,7 mmol). Seosta sekoitettiin 30 min, sen jälkeen tehtiin happamaksi 5 IN HCl:n vesiliuoksella (14 ml) ja uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 30 ml). Orgaaniset uutteet yhdistettiin, pestiin vedellä (2 x 20 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (2 x 20 ml), vedellä (30 ml), suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,8 g, 92 %) 10 öljynä.
IR (CH2C12) Ό max: 3400 (NH), 2100 (N3), 1765, 1740 ja 1710 cm’1 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) δ: 6,329 (1H, leveä s, NH), 4,23 - 4,14 (1H, m, CHO), 3,867 (1H, dd, J = 2,2 Hz, J = 15 6,4 Hz, H-4), 3,26 (2H, ABX:n keskus, J * 4,2 Hz, J = 4,7 Hz, J * 12,7 Hz, CH2N3), 3,13 (1H, m:n keskus, H-3), 2,70 - 2,60 (1H, m, H-l"), 2,04 - 1,7 (2H, m, CH2-1"), 1,171 (3H, d, J * 6,3 Hz, CH3), 0,898, 0,869 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,109, 0,099, 0,070 ja 0,062 ppm (12H, 4s, 20 CH3).
D. (3S,4R)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(4-atsido-(3R tai S)-3-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksipropyyli) -3"-allyylioksikarbonyy-li-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni ^ 25
CTBDnS 0J M S
OTBDuS I CTBDJ15 I
CH2CHCH2N3 ck2chck2k3
30 ‘ V*V
Liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] - 4-[(l"R)-l" -karboksi-35 4"-atsido-(3"R tai S)-3"-tert-butyylidimetyylisilyyliok- 96311 508 sibutyyli]atsetidin-2-oni (1,8 g, 3,6 mmol) tolueenissa (25 ml), käsiteltiin karbonyylidi-imidatsolilla (642 mg, 3,96 mmol) ja sen jälkeen sekoitettiin 1,5 h. Liuotin poistettiin, ja jäännös liuotettiin jälleen tolueeniin.
5 Liuotin poistettiin jälleen, ja jäännös kuivattiin suur-tyhjössä. Tähän saatuun asyyli-imidatsoliin lisättiin etukäteen kuivattua (kuumennettu 2,5 h käyttäen 3A:n ja 4A:n molekyyliseuloja) magnesiummonoallyylimalonaatin (4,5 g, 14,4 mmol) liuosta bentseenissä (40 ml). Seosta kuumennet-10 tiin 1,6 h (haudelämpötila 75 °C), laimennettiin 1/1-suh-teisella dietyylieetterin ja etyyliasetaatin seoksella, pestiin jääkylmällä vedellä (2 x 40 ml), jääkylmällä 1 N HCl:n vesiliuoksella (40 ml), vedellä (2 x 40 ml), suolaliuoksella (40 ml) ja kuivattiin (MgS04), jolloin saatiin 15 raakatuotteena otsikon yhdiste (2,29 g, >100 %), joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
IR (CH2C12) 3420 (NH), 2120 (N3), 1770 (C=0, B- laktaami), 1720, 1660 ja 1630 cm'1 (C=0); *H NMR (CDClj, 200 MHz) ö: 12,113 (0,5H, leveä s, 20 OH-enoli), 6,03 - 5,80 (1H, m, vinyylin H), 5,927 (1H, leveä s, NH), 5,387 - 5,253 (2H, m, vinyylin H), 5,058 (2,6H, s, enolin olefiini-H), 4,665 - 4,616 (2H, m, allyy-lin H), 4,24 - 4,12, 3,883 - 3,764 (2H, m, H-4 ja H-l'), 3,775, 3,764 (d, J = 2,1 Hz, osa H-4:a), 3,680, 3,600, 25 3,592, 3,513 (2H, ABq, J = 15,9 Hz, asetoasetaatin CH2), ^ 3,357 - 3,269 (1H, m, osa CH2N3:a), 3,187 - 3,01 (2H, m, H- 1" ja osa CH2N3: a), 2,955 (0,5H, dd, J = 2,1 Hz, J = 4,1 Hz, H-3), 2,905 (0,5H, dt, J = 2,6 Hz, osa H-3:a), 2,256 - 2,146, 2,065 - 1,91, 1,836 - 1,6 (2H, 3 m-sarjaa, 30 CH2-4), 1,180 (1,4 H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 1,086 (1,6 H, d, J = 6,3 Hz, CH3), 0,896 ja 0,866 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,108, 0,091, 0,087, 0,069 ja 0,056 ppm (12H, 5s, dimetyy-li).
96311 509 E. (3S,4R)-3-[(l'Rj-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-4-[(1"R)-1"-(4-atsido-(3R tai S)-3-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksipropyyli) -3" -diatso-3" -allyyliok- sikarbonyyli-2"-oksopropyyli]atsetidin-2-oni 5 0ΤΒΓΧ5 οτβπμ, V"'5 t CH^CHCKoN3 f CH2CHCH2N3
Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyy-15 li]-4-[(1"R)-l"-(4-atsido-(3R tai S)-3-tert-butyylidime-tyylisilyylioksipropyyli)-3"-allyylioksikarbonyyli-2"-ok-sopropyyli]atsetidin-2-oni (2,2 g, 3,6 mmol) CH3CN:ssa (22 ml), lisättiin ensin trietyyliamiinia (0,51 ml, 3.6 mmol) ja tipoittain tosyyliatsidia (709 mg, 3,6 ml) 20 CH3CN:ssa (3 ml). Seosta sekoitettiin 1,5 h ja liuotin poistettiin tyhjössä. Jäännöstä trituroitiin heksaanin kanssa, ja kiinteä tosyyliamidi poistettiin suodattamalla ja pestiin heksaanilla. Heksaanifraktioiden haihdutuksella saatu jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi — 25 (60 g, heksaani, 10 -+ 40 % eetteri/heksaani), jolloin saa tiin otsikon yhdiste (650 mg, 30 %) öljynä.
IR (CH2C12) V m4X: 3410 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), 1765 (C=0, B-laktaami), 1715 ja 1650 cm*1 (C=0); *H NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,832 (1H, m, vi-30 nyylin H), 5,862 (1H, leveä s, NH), 5,40 - 5,29 (2H, m, vinyylin H), 4,72 - 4,689 (2H, m, allyylin CH2), 4,215 - 4.07 (2H, m, CHO ja H-l'), 3,805 - 3,71 (1H, m, H-l"), 3,189 (2H, ABX, J = 3,9 Hz, J = 5,5 Hz, J = 12,7 Hz, CH2N3), 3,023 (1H, leveä t, J = 2,5 Hz, H-3), 2,175 - 2,03, 35 1,73 - 1,57 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-1"), 1,162 (3H, d, J = ,10 96311 6,4 Hz, CH3), 0,891, 0,865 (18H, 2s, tert-butyyli), 0,094, 0,062 ja 0,053 ppm (12H, 3s, dimetyyli).
F. Allyyli-(4R,5R,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tai S)-2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyyli)-6-[(1'R)-1'-5 tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3,7-diokso-l-atsa-bisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksylaatti
0T5DNS
0T3DM5 i. CTBDiiS , ίο f CK-LhCr.o^- f CHoCHCH-K- 0^n cr-C 0^"K^( C02\v^S> 15
Liuosta, jonka muodosti ( 3S,4R)-3-[(1'R)-l’-terttu tyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-[(l"R)-l"-[4-atsido-(3R tai S)-3-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyyli]-3 "-diatso-3"-allyylioksikarbonyyli-2 " -oksopropyyli]atseti-20 din-2-oni (690 mg, 1,1 mmol) bentseenissä (20 ml), kuumennettiin palautus jäähdyttäen Rh(0Ac)2:n (17 mg) läsnä ollessa 45 min. Lisättiin vielä katalyyttiä (17 mg), ja kuumentamista jatkettiin vielä 30 min. Katalyytti poistettiin suodattamalla, ja bentseeni poistettiin tyhjössä, jolloin 25 saatiin otsikon yhdiste (700 mg, 100 %) öljynä. ^ IR (CH2C12) \>max: 2110 (N3), 1770 ja 1745 cm*1 (C=0); lH NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 6,0 - 5,79 (1H, m, vinyylin H), 5,38 - 5,24 (2H, m, vinyylin H), 4,72 - 4,88 (2H, m, allyylin CH2), 4,633 ( 1H, s, CH-2), 4,58 - 4,28 (1H, m, 30 H-l'), 4,325 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 8,4 Hz, H-5), 3,91 -3,82 (1H, m, CHO), 3,40 - 3,2 (2H, m, CH2N3), 3,246 ( 1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 4,3 Hz, H-6 ), 2,839 ( 1H, bq, J = 7,9 Hz, H-4), 1,84 - 1,72 (2H, m, CH2-4 ), 1,270 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3), 0,897 (18H, s, tert-butyyli), 0,112, 0,099, 35 0,092 ja 0,083 ppm (12H, 4s, dimetyyli).
•I ' li»'» un i i4 aa : : s 96311 511 G. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tai S)-2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksipropyyli] -6- [ (1'R)-1' -tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyy-li) tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksy-5 laatti CTEBFS C T B D Π 5
qt^dHS i OTBDKS I
f CH9CHCH,N3 f CH2CHCHzN3 . A__r -Λ__(
10 Π0=Ο -► 3 n_J>-S(CH2)2CN
^ 0 CCjXXs. 0 CO-N^.
Kylmään (jää-metanolihaude) liuokseen, jonka muo-15 dosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tai S)-2-tert- butyylidimetyylisilyylioksipropyyli]-6-[(1'R)-1'-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksietyyli] -3, 7-diokso-l-atsabisyklo-[ 3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (690 mg:sta, 1,1 mmol:sta diatsoa) CH3CN:ssa (8 ml), lisättiin tipoit-20 tain difenyylikloorifosfaattia (0,26 ml, 1,32 mmol) ja di-isopropyylietyyliamiinia (0,23 ml, 1,32 mmol) ja pieni määrä 4-N,N-dimetyyliaminopyridiiniä (20 mg). Seosta sekoitettiin 1 h, ja sen jälkeen lisättiin peräkkäin 1 h:n aikana kaksi erää syaanietyylimerkaptaania (130 mg, 25 1,5 mmol ja 52 mg, 0,60 mmol) ja di-isopropyylietyyliamii- nia (0,26 ml, 1,50 mmol ja 0,10 ml, 0,60 mmol). Seosta sekoitettiin 1,5 h, laimennettiin etyyliasetaatilla (25 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (3 x 10 ml), IM NaHS03:n vesiliuoksella (3 x 10 ml), vedellä (2 x 10 ml), 30 IN HCl:n vesiliuoksella (10 ml), vedellä (2 x 10 ml), 1 M ' NaHC03:n vesiliuoksella (10 ml), vedellä (10 ml), suola liuoksella (10 ml) ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin silikageeli-flash-pylvään läpi (25 g, petrolieetteri, 10 -* 40 % dietyylieetteri/petrolieetteri), jolloin saatiin ot-35 sikon yhdiste (442 mg, 62 %) öljynä.
96311 512 IR (CH2C12) ^ nax: 2250 (CN), 2110 (N3), 1775 (C=0, β-laktaami), 1710 cm*1 (C=0); 'H NMR (CDClj, 200 MHz) 6: 6,03 - 5,84 (1H, m, vinyylin H), 5,48 - 5,20 (2H, m, vinyylin H), 4,85 - 4,6 5 (2H, m, allyylin CH2), 4,38 - 4,3 (1H, m, H-l'), 4,284 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 9,5 Hz, H-5), 3,65 - 3,50 (1H, m, CHO), 3,47 - 2,93 (5H, m, H-4, CH2N3, SCH2), 3,205 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,4 Hz, H-6), 2,699, 2,664, 2,632 (2H, m, CH2CN), 1,90 - 1,75 (2H, m, CH2-4), 1,245 (3H, d, J = 10 6,2 Hz, CH3), 0, 935 ja 0,898 (18H, 2s, tert-butyyli ), 0,143 ja 0,091 (12H, 2s, dimetyyli).
H. Allyyli-(4R,5S,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tax S)-2"-hydroksipropyyli]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-syaa-nietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-15 karboksylaatti
CTEDKS i730"5 OH
jT chzckch2n3 j·' ch2c:-:ch2n3 20 ' ^D^>~5iCH2)2CN -► CH2)2C-7 0 C02\^
Kylmään (jää-metanolihaude) liuokseen, jonka muo-, 25 dosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tai S)-2"-tert- ~ butyylidimetyylisilyylioksipropyyli]-6-[(1'R)-l'-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksietyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (440 mg, 0,68 mmol) tetrahydrofuraanissa (6 ml), lisättiin 30 jääetikkaa (0,94 ml, 17 mmol) ja tipoittain 1 M tetrabu-tyyliammoniumfluoridin liuosta tetrahydrofuraanissa (6,8 ml, 6,8 mmol). Seosta sekoitettiin 15 vuorokautta 8 °C:ssa, sen jälkeen laimennettiin etyyliasetaatilla (40 ml), pestiin jääkylmällä vedellä (4 x 10 ml), IM 35 NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 10 ml), vedellä (10 ml), suo- :l IIM MU l'M « · : 513 96311 laliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Jäännös vietiin prepa-ratiiviselle silikageelilevylle (etyyliasetaatti/heksaani, 4/1), jolloin saatiin otsikon yhdiste (185 mg, 65 %) öljynä.
5 IR (CH2C12) 3600, 3450 (OH), 2250 (CN), 2110 (N3), 1775 (OO, β-laktaami) ja 1710 cm'1 (C*0); XH NMR (CDC13, 200 MHz) δ: 6,04 - 5,87 (1H, m, vinyylin H), 5,493 - 4,24 (2H, m, vinyylin H), 4,88 - 4,64 (2H, m, allyylin H), 4,294 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 10 9,7 Hz, H-5), 4,3 - 4,17 (1H, m, H-l'), 3,9 - 3,67 (2H, m, CH0 ja H-4), 3,382, 3,353 (2H, 2 viivaa, CH2N3), 3,35 - 3,23 (1H, m, 1 SCH2:n protoni), 3,159 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J 8,0 Hz, H-6), 3,05 - 2,91 (1H, m, 1 SCH2:n protoni), 3,91 (1H, leveä s, OH), 2,81 - 2,63 (2H, m, CH2CN), 2,377 15 (1H, leveä s, OH), 1,94 - 1,64 (2H, m, CH2-4) ja 1,388 ppm (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3).
I. Natrium-(4R,5S,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tai S)-2"-hydroksipropyyli]-6-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]-3-[(2-syaa-nietyyli)tio]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-20 karboksylaatti 0H v ψ J'A C>:-CnCH,N, J?‘ CHjOECHjHj 'r 25 CE} VO-3(CH2hCH—- CH3 rT^V_3(CK2;2c:·! °X 0 C0;Na 30 Kylmään (jäähaude) liuokseen, jonka muodosti allyy- li-(4R,5S,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tai S)-2"-hydroksipropyy- li]-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] - 3- [ ( 2-syaani etyyli ) tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (180 mg, 0,43 mmol) CH2Cl2:ssa (7 ml), lisättiin Pd( PPh3 )4: a 35 ja tipoittain N-metyylianiliinia (0,11 ml, 0,86 mmol).
96311 514
Seosta sekoitettiin 30 min, sen jälkeen laimennettiin 0,1 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurin vesiliuoksella (10 ml) ja dietyylieetterillä (20 ml). Orgaanista kerrosta uutettiin vielä pH-arvon 7,0 omaavalla puskurilla 5 (2x5 ml) ja vedellä (5 ml). Vesipitoiset kerrokset yh distettiin, pestiin dietyylieetterillä ja vietiin μ-Bonda-pak-Cie-käänteisfaasipylvään läpi (50 g, vesi -* 2 % CH3CN/ vesi), jolloin saatiin otsikon yhdiste (105 mg, 61 %) lyo-filisoituna jauheena.
10 IR (Nujol) \) mmx: 3500 - 3100 (OH), 2100 (N3), 1745 (C=0, β-laktaami) ja 1595 cm'1 (C=0); XH NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,343, 4,33 (d, J = 2,5 Hz, osa H-5:a), 4,35 - 4,21 (2H, m, H-l’ ja H-5), 3,9 - 3,8 ~ (1H, m, CH0), 3,679 - 3,583 (1H, m, H-4), 3,435, 3,422 15 (osa H-6:a, d, J = 2,5 Hz), 3,48 - 3,31 (3H, m, H-6 ja CH2N3), 3,257 - 3,134, 3,087 - 2,91 (2H, 2 m-kohtaa, SCH2), 2,91 - 2,83 (2H, m, CH2CN), 1,99 - 1,876, 1,783 - 1,655 (2H, 2 m-kohtaa, CH2-4) ja 1,321 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
20 J. (4R,5S,6S)-4-[3"-amino-(2"R tai S)-2"-hydroksi- propyyli] -6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli] - 3- [ (2-syaanietyyli) -tio] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksyyli-happo
OK . OH
^ C ^ p v pppy v 9^ rw pupu >T u f t::2^ HL ϋ?1' 3 f ^ :J 2*'Jl2 ^^-S(Ch2)2c» -- Cr‘3 JP3^-5(CB2)iC3
C CO-,Να 0 CO,H
30
Kylmää (jäähaude) liuosta, jonka muodosti natrium-(4R,5S,6S)-4-[3"-atsido-(2"R tai S)-2"-hydroksipropyyli]- 6-[(1’R)-1’-hydroksietyyli]-3-[ ( 2-syaanietyyli)tio]-7- 35 ok so-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti 96311 515 (105 mg, 0,26 mmol) vedessä (20 ml), ravistettiin Parrin hydrauslaitteessa 1 h 310 - 345 kPa:n (45 - 50 psi:n) ve-typaineessa käyttäen 5-prosenttista Pd/alumiinioksidia katalyyttinä. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja pes-5 tiin vedellä (2 x 2 ml). Vesipitoisen reaktioseoksen pH säädettiin arvoon 7,05 0,1 M NaH2P04:n vesiliuoksella.
Neutraloitu liuos vietiin p-Bondapak-C18-käänteisfaasipyl-vään läpi (50 g, vesi), jolloin saatiin otsikon yhdiste (65 mg, 43 %) valkoisena lyofilisoituna jauheena.
10 Puhtaus: 98,2 % määritettynä HPLC:llä (viipymäai-
ka = 5,92 min, p-Bondapak-C18, 10 μ, KH2P04, 0,01 M, pH
w 7'4); UV (vesi) r max: 300 (8008); IR (Nujol) V max: 3600 - 3100 (OH, NH2), 2250 (CN), 15 1750 (C=0, 3-laktaami) ja 1590 cm'1 (C=0); ΧΗ NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,312 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 9,7 Hz, H-5), 4,32 - 4,207 (1H, m, H-l'), 3,948 - 3,849 (1H, m, CH0), 3,68 - 3,575 (1H, m, H-4), 3,380 (1H, dd, J = 2,8 Hz, J = 6,6 Hz, H-6), 3,235, 3,219, 3,169, 20 3,154 (1H, osa ABX:a, J = 3,1 Hz, J = 13,2 Hz, CH2N3), 3,23 - 3,11 (1H, m, 1 SCH2:n protoni), 3,008 - 2,95 (2H, m, osa CH2CN:a ja osa SCH2:a), 2,88 - 2,82 (2H, m, CH2CN), 2,002 - 1,699 (2H, m, CH2-4) ja 1,328 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, CH3).
· 25 Esimerkki 153 (4R, 5S, 6S) -6-[ (1 *R) -1' -hydroksietyyli] -3-bentsyyli-tio-4-[2"-(N-bentsyyli-N-metyyli)aminoetyyli]-7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyyli-happo 30 p i:
VT
; ^ \ ψη CH2Pn r Λ,, 35 - j 1 ^ n 21 --
VoOH
516 96311 A. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'- (tert-butyylidi-metyylisilyylioksietyyli) ] -3-bentsyylitio-4- [ 2"-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksietyyli) ] -7-okso-l-atsabisyklo [ -3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti vs,'ec|k ^Άα ''jX^~SCz2?z 10 νΛ ^ :-:5-CK,-?h C \2 ^
Kylmää (0 eC) liuosta, jonka muodosti allyyli-15 (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l’-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi- etyyli)]-4-[2"-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli]- 3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0] heptaani-2-karboksylaatti (4, 75 g, mmol) CH3CN:ssa (50 ml), käsiteltiin
ClP0(0Ph)2:11a (2,06 ml, 9,93 mmol) ja sen jälkeen N,N-di-20 isopropyylietyyliamiinilla (1,73 ml, 9,93 mmol) ja 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinillä (10 mg). Seosta sekoitettiin 0 eC:ssa 2,5 h käyttäen argonia suojakaasuna, minkä jälkeen liuoksen läpi kuplitettiin argonia 10 min. Sen jälkeen enolifosfaattia käsiteltiin bentsyylimerkaptaanilla . 25 (2,54 ml, 21,58 mmol) ja sen jälkeen N,N-di-isopropyyli- ^ etyyliamiinilla (3,8 ml, 21,68 mmol) ja sekoitettiin 0 °C:ssa 20 h. Reaktioseos laimennettiin EtOAc:lla (300 ml) ja pestiin peräkkäin kylmällä 1 M NaHS03:lla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (KgS04) ja liuotin haihdu-30 tettiin, jolloin saatiin siirappimainen aine, joka kroma-tografoitiin silikalla (9 x 10), joka oli pakattu heksaa-niin, ja eluoitiin heksaanin ja EtOAc:n seoksella (85:15, gradienttieluointi ), jolloin saatiin otsikon yhdiste vaahtona (4,35 g, 76,2 %).
:| · »*·* M» 1-4·* 96311 517 :H NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 0,05 (s, 12H, Si (CH3 )2), 0,857, 0,86 (2s, 18H, SiC(CH3)2), 1,26 (d, 3H, CH3), 1,62 - 1,78; 1,98 - 2,12 (m, 2H, CH2), 3,05 (dd, 1H, H-6, J61. = 6,93 Hz), 3,45 - 3,6 (m, 1H, H-4), 3,53 - 3,8 5 (m-keskukset, 2H, CH20), 4,03 (dd, 1H, H-5, J5 6 * 2,38 Hz, J4 5 = 9,21 Hz), 4,1 (tiivis AB, 2H, SCH2), 4,18 (m, 1H, H-1'), 4,59 - 4,82 (m, 2H, 0CH2, allyyli), 5,17 - 5,46 (m, 2H, =CH2, allyyli), 5,83 - 6,02 (m, 1H, CH=, allyyli), 7,16 - 7,34 (m, 5H, fenyyli).
10 B. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l·-(tert-butyylidi- metyylisilyylioksietyyli)]-3-bentsyylitio-4-(2"-hydroksi-etyyli) -7-okso-l-atsabisyklo [3.2.0]hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti
15 c^yS CT3DM5 ,CH
Λ Ύ . ...A f l--3 'rT>-3Cn.?h ---ΓΐΛ-SCSj?’ J^-ΙιΑζ ί· 5u4N*F'/TH7 CO- " CO- 20
Kylmää (0 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R,5S,6S)-6-[(1'R)-l'-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi-^ 25 etyyli )]-3-bentsyylitio-4-[2"-tert-butyylidimetyylisilyy-
lioksietyyli)-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (4,35 g, 6,88 mmol) kuivassa tetrahydrofu-raanissa (65 ml), käsiteltiin käyttäen argonia suojakaasu-na etikkahapolla (2,36 ml, 41,26 mmol) ja sen jälkeen 1 M
30 tetrabutyyliammoniumfluoridin liuoksella tetrahydrofuraa-nissa (20,63 ml, 20,63 mmol). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 5 h ja annettiin olla -20 °C:ssa 18 h, minkä jälkeen se neutraloitiin 0 °C:ssa 1 M NaHC03-liuoksella (42 ml, 42 mmol). Seosta uutettiin Et0Ac:lla (3 x 75 ml), ja yh-
35 distetty orgaaninen faasi pestiin peräkkäin kylmällä 1 M
96311 518
NaHC03:lla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin vaahto, joka kromatografoitiin silikalla (7,5 x 8 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin ja eluoitiin CH2Cl2:n ja CH3CN:n seoksella (8:2, 5 gradienttieluointi), jolloin saatiin otsikon yhdiste vaahtona (2,49 g, 69,9 %).
XH NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 0,04, 0,05 (2s, 6H, Si(CH3)2), 0,86 (s, 9H, SiC(CH3)2), 1,26 (d, 3H, CH3), I, 63 - 1,8; 1,98 - 2,14 (m, 2H, CH2), 3,12 (dd, 1H, H-6, 10 J6.r = 7,46 Hz), 3,45 (m, 1H, H-4, J = 2,19, 9,45, II, 5 Hz), 3,63, 3,82 (m:n keskukset, 2H, CH20), 4,01 (dd, 1H, H-5, J5 6 = 2, 59 Hz, J4 5 = 9,45 Hz), 4,03 - 4,13 (AB, 2H, SCHZ, J = 13,26 Hz), 4,155 (m, 1H, H-l'), 4,59 - 4,84 (m, 2H, 0CH2, allyyli), 5,18 - 5,46 (m, 2H, =CH2, allyyli), 15 5,83 - 6,03 (m, 1H, CH=, allyyli), 7,19 - 7,38 (m, 5H, fenyyli).
C. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyylidi-metyylisilyylioks ie tyyli) ] -3-bentsyylitio-4- [ 2"-(N-bent-syyli-N-metyyli)aminoetyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]-20 hept-2-eeni-2-karboksylaatti /CK3 0TBDI1S ?K c 7Ξ D M S J _ 0Η"Γγ-Τγ.ςΓ= _ -,j;/CK3 (Cr;5C;)20 CHfV-r^ 25 ”"""2 " “1,VCK2?h Ε = ΞΑ tm W V «,
Liuos, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-30 1'-(tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli)]-3-bentsyyli- tio-4- [2"-hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,5 g, 0,97 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (15 ml), jäähdytettiin -78 °C:seen käyttäen argonia suojakaasuna ja käsiteltiin di-isopropyylietyyli- 35 amiinilla (0,185 ml, 1,06 mmol) ja sen jälkeen 519 96311 (CF3S02)20:11a (0,18 ml, 1,06 mmol). 1 h:n jälkeen -78 °C:ssa lisättiin N-bentsyyli-N-metyyliamiinia (0,75 ml, 5,8 mmol), ja seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 1 h ja 0 °C:ssa 5 h ja annettiin olla 5 °C:ssa 16 h. Reaktio-5 seos laimennettiin EtOAc:lla (200 ml) ja pestiin kylmällä vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin siirappimainen aine, joka kromatografoitiin silikalla (4,5 x 13 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin. Otsikon yhdiste eluoitiin CH2Cl2:n ja Et0Ac:n 10 seoksella (7:3, gradienttieluointi), jolloin saatiin siirappimainen aine (0,4 g, 66,7 %).
XH NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 0,036, 0,045 (2s, W 6H, Si (CH3 )2), 0,86 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,07 (d, 3H, CH3, J = 6,16 Hz), 2,26 (s, 3H, NCH3), 3,18 (m, 1H, H-4, J = 15 1,94, 9,27, 11,37 Hz), 3,44 - 3,56 (AB, 2H, NCH2, JAB = 13,15 Hz), 3,94 (dd, 1H, H-5, J5 6 = 2,47 Hz, J4 5 = 9,32 Hz), 4,0 - 4,1 (AB, 2H, SCH2, JAB = 13,21 Hz), 4,14 (m, 1H, H-l'), 4,7 - 4,8 (m, 2H, 0CH2, allyyli), 5,19 - 5,48 (m, 2H, =CH2, allyyli), 5,85 - 6,04 (m, 1H, CH=, allyyli), 20 7,19 - 7,78 (m, 10H, fenyyli).
D. Allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-bentsyylitio-4-[2"-(N-bentsyyli-N-metyyli)aminoetyyli]- 7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti
'*-< 25 /·. * > Γ ‘J
J·· CH3Ph - ΠΓ 5 Chop li “λτ__ n 30 ^ c r\ ^ η Λ
Kylmää (0 °C) liuosta, jonka muodosti allyyli-( 4R, 5S, 6S ) -6- [ (1 ’ R)-l' -tert-butyylidimetyylisilyylioksi-35 etyyli] -3-bentsyylitio-4- [2" - ( N-bentsyyli-N-metyyli ) amino- 520 9 6 311 etyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0] hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti (0,4 g, 0,65 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (8 ml), käsiteltiin käyttäen argonia suojakaasuna HOAczlla (0,22 ml, 3,89 mmol) ja sen jälkeen 1 M tetrabutyyliammo-5 niumfluoridin liuoksella tetrahydrofuraanissa (1,95 ml, 1,95 mmol). Seosta sekoitettiin välillä 0 - 5 °C 168 h, ja sen jälkeen neutraloitiin 0 °C:ssa 1 M NaHC03-liuoksella (3,9 ml, 3,9 mmol). Seosta uutettiin EtOAc:lla (3 x 80 ml), ja yhdistetty orgaaninen uute pestiin peräkkäin 10 kylmällä 1 M NaHC03:lla, vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin kumimainen aine, joka kromatografoitiin silikalla (3,2 x 12 cm), joka oli pakattu CH2Cl2:iin. Pylvästä eluoitiin ensin CH2Cl2:n ja EtOAcrn seoksella (100:0 -> 0:100, gra-15 dienttieluointi), ja lopuksi otsikon yhdiste eluoitiin
EtOAc:n ja asetonin seoksella (8:2, gradienttieluointi), jolloin saatiin vaahto (0,093 g, 28,3 %).
XH NMR (200 MHz, CDC13, 7,24) 6: 1,13 (d, 3H, CH3, J = 6,28 Hz), 1,94 - 2,39 (m, 2H, CH2N), 2,34 (s, 3H, 20 NCH3), 2,9 (dd, 1H, H-6, J6-1. = 7,77 Hz), 3,23 (m, 1H, H-4), 3,44, 3,52 (AB, 2H, NCH2, JAB » 13,1 Hz), 3,77 (dd, 1H, H-5, J4 5 = 9,56 Hz, J5 6 = 2,57 Hz), 3,88 (m, 1H, H-l'), 3,98 - 4,09 (AB, 2H, SCH2, JAB = 13,59 Hz), 4,59 - 4,86 (m, 2H, 0CH2, allyyli), 5,19 - 5,45 (m, 2H, =CH2, allyyli), 25 5,84 - 6,03 (m, 1H, CH=, allyyli), 7,24 - 7,32 (m, 10H, — fenyyli).
E. (4R,5S,6S)-6-[(1’R)-1'-hydroksietyyli]-3-bent- syylitio-4- [2"- (N-bentsyyli-N-metyyli) aminoetyyli] -7-okso-1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 30 .;/Ch'3 /CK3
Ck J -T
L· ^ ·ν· o 521 9 6 31 Ί
Kylmään (O °C) liuokseen, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l' -hydroksietyyli]-3-bentsyylitio-4-[2"-( N-bentsyyli-N-metyyli )aminoetyyli] -7-okso-l-atsabi-syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,093 g, 5 0,18 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), lisättiin käyttäen argonia suojakaasuna Pd[Ph3P]4:a (0,026 g, 0,023 mmol) ja sen jälkeen 0,5 M 2-etyyliheksanoaatin liuosta EtOAcrssa (0,37 ml, 0,18 mmol). Seosta sekoitettiin 0 °C:ssa 50 min, laimennettiin dietyylieetterillä (50 ml) ja uutettiin 10 0,1 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla (3 x 10 ml). Yhdistetty vesipitoinen uute vietiin μ-Bondapak-C18-käänteisfaasisilikapylvään läpi (3,2 x 7 cm). Otsikon yhdiste eluoitiin veden ja CH3CN:n seoksella (7:3, gra-dienttieluointi) ja se saatiin höytäleisenä kiinteänä ai-15 neena (0,067 g, 78,2 %).
Puhtaus: 99,9 % HPLC:n mukaan, UV-toteaminen ^ max · s s a 304 nm, p-Bondapak-Cls (4 mm x 30 cm), pH 6,8 fosfaattipuskuri, virtausnopeus 1 ml/min, viipymäaika 7,22 min.
20 UV /) max: 304 nm.
IR (Nujol) Vmax: 1750 cm'1 (C=0, 6-laktaami).
*H NMR (200 MHz, D20) δ: 1,12 (d, 3H, CH3, J = 6,35 Hz), 1,38, 1,94 (m-keskukset, 2H, CH2), 2,38 (s, 3H, NCH3), 2,47 (keskus-m, 2H, CH2CN), 3,04 (m, päällekkäin, 25 1H, H-6), 3,05 (m, päällekkäin, 1H, H-4), 3,72 (tiivis AB, 2H, NCH2), 4,05 (dd, 1H, H-5), 3,96, 4,09 (AB, 2H, SCH2, JAB = 13,8 Hz), 4,11 (m, 1H, H-l’), 7,35 - 7,54 (m, 10H, fenyyli).
522 96311
Esimerkki 154 (4R, 5S, 6S) -3- [ (2-syaanietyyli) tio] -6- [ (1'R) -11 -hyd- roksietyyli] -4- (3-N-metyyliaminopropyyli) -7-okso- 1-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 5 £K ch2ck2ck2i:hch3
tn= nT>-SCK:CK2CN
10 0 C02H
A. 5-N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliaminovaleri-aanahappo ^ ^^COCl ^ ! Cn, ch3 20
Seosta, jonka muodostivat l-metyyli-2-piperidoni (13,0 g, 0,115 mmol) ja 100 ml 6 N vetykloridihappoa, kuumennettiin palautusjäähdyttäen 8 h. Liuotin haihdutettiin kuiviin ja jäljelle jäänyt aminohappo, kuten julkaisussa 25 M. Maeda, et ai., Chem. Pharm. Bull. 32 (1984) 4157 on —- kuvattu, laimennettiin kylmällä vedellä (0 - 5 °C, 100 ml). pH säädettiin arvoon 8,5 kiinteällä natriumkarbonaatilla, ja lisättiin allyyliklooriformaattia (12,2 ml, 0,115 mmol) tipoittain niin, että pH pidettiin samalla 30 välillä 8 - 8,5. 30 min jälkeen 0 °C:ssa ja vielä 30 min jälkeen 22 °C:ssa reaktioseos pestiin dietyylieetterillä ja vesifaasin pH säädettiin arvoon 3 väkevällä vetyklori-dihapolla. Vesipitoista liuosta uutettiin dietyylieetterillä (3 x 200 ml), ja yhdistetty orgaaninen uute pestiin 523 96311 suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 22,9 g (93 %) otsikon happoa öljynä.
IR (NaCl, kalvo) 1740, 1710 ja 1680 cm'1 (ol kapää ); 5 *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,5 - 1,7 (m, 4H, CH2-3 ja -4), 2,35 - 2,45 (m, 2H, CH2-2), 2,90 (s, 3H, NCH3), 3,25 - 3,35 (m, 2H, CH2N), 4,55 - 4,6 (m, 2H, allyylin CH2), 5,15 - 5,35 ja 5,85 - 6,05 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin CH).
10 B.5-N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliaminovaleryy- likloridi w 0 o (CH2),C02H-«· (CK,) 4CCC1 15 C=3 CH,
Liuokseen, jonka muodosti 5-N-allyylioksikarbonyy-li-N-metyyliaminovaleriaanahappo (35,26 g, 0,164 mol) kui-20 vassa dikloorimetaanissa (175 ml), lisättiin tipoittain 22 °C:ssa oksalyylikloridia (15,7 ml, 0,180 mol). 10 min kuluttua lisättiin 4 tippaa N,N-dimetyyliformamidia, ja reaktioseosta sekoitettiin 2,0 h, jona aikana kaasun poistuminen hitaasti lakkasi. Liuotin ja ylimääräinen reagens-'-i 25 si haihdutettiin alipaineessa, ja jäljelle jäänyt happo- kloridi käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa: IR (NaCl, kalvo) V max: 1800 (happokloridin C=0), 1740 (olkapää), 1705 ja 1670 cm'1 (olkapää); NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,5 - 1,8 (m, 4H, CH2-3 30 ja -4), 2,90 (s, 3H, NCH3) , 2,9 - 3,0 (m, 2H, CH2-2), 3,29 (t, 2H, CH2N), 4,55 - 4,6 (m, 2H, allyylin CH2), 5,15 - 5,35 ja 5,8 - 6,0 ppm (2m, 2H ja 1H, allyylin CH).
4 524 9631 1 C. 2-pikolyyli-5-(N-allyylioksikarbonyyli-N-metyy-liamino)tiolivaleraatti 5 ':^\-(CHO4C0CI-- / / “ * c:-:3 ch3
Liuosta, jonka muodosti 2-pikolyylimerkaptaani 10 (20,5 g, 0,164 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (350 ml), käsiteltiin 0 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna pyri-diinillä (16,0 ml, 0,197 mol), ja sen jälkeen lisättiin 5-N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliaminovaleryylikloridin (46,0 g, 0,164 mol) liuosta dikloorimetaanissa (75 ml) 15 tipoittain 10 min aikana. 1,5 h:n jälkeen 0-5 °C:ssa reaktioseos pestiin kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, joka suodatettiin silikageelikerroksen läpi (7,5 x 12 cm) käyttäen tolueenin 20 ja etyyliasetaatin seosta (1:1) eluenttina. UV-aktiiviset fraktiot haihdutettiin, jolloin saatiin 48,4 g (92 %) otsikon ainetta kirkkaana öljynä: IR (NaCl, kalvo) ^ nax: 1700 ja 1690 (olkapää) cm'1; XH NMR (200 MHz, D20) 6: 1,5 - 1,7 (m, 4H, CH2-3 ja 25 -4), 2,61 (t, J = 7,0 Hz, 2H, CH2-2), 2,87 (s, 3H, NCH3), - 3,26 (t, J = 6,6 Hz, 2H, CH2-5), 4,24 (s, 2H, CH,Pyr), 4,55 - 4,6 (m, 2H, allyylin CH2), 5,15 - 5,3 ja 5,9 - 6,05 (2m, 2H ja 1H, allyylin H), 7,1 - 7,2 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,33 (d, J = 7,8 Hz, 1H, pyridiinin H-3), 7,62 (m, 30 1H, pyridiinin H-4) ja 8,5 - 8,55 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
96311 525 D. 2-pikolyyli-5-(N-allyylioksikarbonyyli-N-metyy-liamino)tiolivaleraatintert-butyylidimetyylisilyylienoli-eetteri 5 : H J0 .s JÖ v-Vn / " '. 0T3D“5 n '2 L Γ. “ ^ ·* 3 10
Liuos, jonka muodosti 2-pikolyyli-5-(N-allyyliok-sikarbonyyli-N-metyyliamino)tiolivaleraatti (51,3 g, 0,159 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (225 ml), jäähdytettiin -10 °C:seen ja käsiteltiin trietyyliamiinilla 15 (44 ml, 0,315 mol) ja sen jälkeen tipoittain tert-butyyli- dimetyylisilyylitrifluorimetaanisulfonaatilla (56 ml, 0,243 mol) 40 min aikana. Lämmitettiin 22 °C:seen, minkä jälkeen liuosta sekoitettiin 3 h. Sitten reaktioseos laimennettiin heksaanilla (1 1) ja pestiin kylmällä vedellä 20 (3 x 300 ml). Yhdistettyjä vesipitoisia pesuliuoksia uutettiin heksaaneilla (300 ml), ja yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Käsiteltiin aktivoidulla puuhiilellä, minkä jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin raakatuotesilyyli-w 25 enolieetteri tummana öljynä, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. ^-NMRrn mukaan tuote oli E- ja Z-isomeerien 1:1-suhteinen seos.
IR (NaCl, kalvo) \) max: 1705 cm'1 (karbamaatin C=0); ΧΗ NMR (200 MHz, CDC13) 6: 2,83 ja 2,85 (2s, NCH3), 30 3,96 ja 4,03 (2s, Oi2Pyr), 4,85 (t, J = 5 Hz, CH=CS0) ja ; 5,0 ppm (leveä t, CH=CS0).
96311 526 E. (3S,4S)-3-[(l'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (1R) -1- (2-pyridyyli )metyylitiokarbonyyli- 4-(N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliamino)butyyli]atseti-din-2-oni 5 0TBDK5 csrV/1; ' /r—\' v nC r^prvc p" v_- CHi v ^ -13 10 u t 0
0TEDM5 II
15 t (£Η2)3κΛ)^Ν^ _ --% y t - -j CH3 fl\
X-N C05CH2—IL-J
(T 'n 20
Suspensioon, jonka muodosti juuri fuusioitu sinkki-kloridi (35,0 g, 0,256 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (400 ml), lisättiin 22 °C:ssa kiinteää 4R-asetoksi-3S-25 [ (1' R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] atseti- ~ din-2-onia (36,5 g, 0,127 mol) ja sen jälkeen liuos, jonka muodosti raakatuotesilyylienolieetteri (0,159 mol) kuivassa dikloorimetaanissa (50 ml). Sen jälkeen reaktioseosta sekoitettiin 22 °C:ssa 18 h. Sitten seos pestiin vedellä, 30 kylläisellä ammoniumkloridilla, kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikageelillä (15 x 12 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gradientilla (50 - 100 %) tolueenissa, 35 jolloin saatiin 34,16 g (49 %) otsikon ainetta öljynä.
96311 527 :H-NMR:n mukaan tämä tuote oli 6- ja a-isomeerien 84:16-suhteinen seos.
IR (NaCl, kalvo) ^ Baa: 1765 (8-laktaamin C=0), 1705 (olkapää) ja 1685 cm'1 (karbamaatin C=0 ja tioesteri); 5 :H NMR (200 MHz, CDC13, pääisomeeri, 8) 6: 0,04 (s, 6H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, Si-t-Bu), 0,97 (d, J = 6,33 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3 - 1,8 (m, 4H, butyylin CH2-2 ja -3), 2,83 (s, 3H, NCH3), 2,83 (m päällekkäin NCH3:n kanssa, 1H, butyylin H-l), 3,03 (leveä t, 1H, H-3), 3,1 - 3,4 (m, 2H, 10 CH2N), 3,79 (dd, JH4H3 = 1,96 Hz, JH4H1 = 7,16 Hz, 1H, H-4), 4,1 - 4,25 (m, 1H, CH3CH0), 4,26 (s, 2H, CH2Pyr), 4,55 - 4,6 (m, 2H, allyylin CH2), 5,15 - 5,35 (m, 2H, allyylin CH), 5,85 - 6,1 (m, 2H, NH ja allyylin CH), 7,15 - 7,20 (m, 1H, pyridiinin H-5), 7,32 (d, J = 7,78 Hz, 1H, pyri-15 diinin H-3), 7,55 - 7,65 (m, 1H, pyridiinin H-4) ja 8,5 -8,55 ppm (m, 1H, pyridiinin H-6).
F. (3S,4S)-3-[(1'R)-l1-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli] -4- [ (lR)-l-karboksi-4- (N-allyylioksikarbonyy-li-N-metyyliamino)butyyli]atsetidin-2-oni 20 o o
OT3DH5 Π G75DMS II
f (CH2)3N^0^<^ f (0Η2),νΛ)-^ η^\ J. 'CK 3 J ' 'CH, - 25 :osch,~0 *CH3 Xk C02h
Liuokseen, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(l,R)-l,-tert-30 butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4- [ (1R )-1-( 2-pyridyy-li )metyylitiokarbonyyli-4-(N-allyylioksikarbonyyli-N-me-* tyyliamino)butyyli]atsetidin-2-oni (32,16 g, 58,5 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (250 ml), lisättiin tipoit-tain 0-5 °C:ssa 30-prosenttista vetyperoksidia (20 ml, 35 0,23 mol) (lisäysaika 5 min) ja sen jälkeen 64 ml (64,0 96311 528 mmol) 1 N natriumhydroksidin vesiliuosta (lisäysaika 20 min). Sen jälkeen reaktloseosta sekoitettiin 1 h. Sitten lisättiin heksaania (500 ml), ja seosta sekoitettiin vielä 10 min. Muodostunut vesifaasi otettiin talteen, ja orgaa-5 nista faasia uutettiin 100 ml:11a 0,1 N natriumhydroksi-dia. Yhdistetyt vesipitoiset uutteet jäähdytettiin 0 -5 °C:seen, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 väkevällä vety-kloridihapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 350 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin 1 M natriumbi-10 sulfiitilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 13,56 g (52 %) raakatuotehappoa vaahtona. ^-NMR osoitti β-ja o-isomeerien 8:2-suhteisen seoksen.
IR (NaCl, kalvo) ψ max: 1740 (β-laktaamin C=0) ja 15 1700 (leveä, karbamaatin ja hapon C=0); *H NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,05 ja 0,06 (2s, 6H,
SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,15 (d, J = 6,30 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4 - 1,8 (m, 4H, propyylin CH2-2 ja -3), 2,6 - 2,7 (m, 1H, butyylin H-l), 2,89 (s, 3H, NCH3), 3,12 (leveä 20 t, 1H, H-3), 3,2 - 3,5 (m, 2H, CH,N), 3,86 (dd, JH4 H3 = 1,84 Hz, JH4 H1 = 6,38 Hz, 1H, H-4), 4,19 (dq, JH CH3 = 6,30 Hz, JH H3 =3,8 Hz, 1H, CH3CH0), 4,55 - 4,6 (m, 2H, allyylin CH2), 5,15 - 5,35 ja 5,8 - 6,05 (2m, 2H ja 1H, allyylin CH) ja 6,53 ppm (leveä s, 1H, NH).
25 G. (3S,4S)-3-[(1 Ή)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy- — lioksietyyli] -4- [ (1R) -l-karboksi-4- (N-allyylioksikarbonyy-li-N-metyyliamino)butyyli]atsetidin-2-onin imidatsolidi C 0
30 C TED K S Π OTBD^E
f (CH2)3 r (CK2)3N^_0 * —-%. f CH3 —J ,_^H3
CK3 ~ CH3 I—r n rz-N
G c°2e — — G co:s^ cr "h cr "h 35 96311 529
Liuosta, jonka muodosti (3S,4S)-3-[(1'R)-l'-tert-butyylidimetyylisilyylioksietyyli] -4- [ (lR)-l-karboksi-4-(N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliamino )butyyli ] atsetidin-2-oni (13,56 g, 31,6 mmol) kuivassa asetonitriilissä 5 (300 ml), käsiteltiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suoja- kaasuna 1,1-karbonyylidi-imidatsolilla (5,64 g, 34,8 mmol). 3 h:n kuluttua liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja raakatuoteimidatsolidi käytettiin sellaisenaan seuraa-vassa vaiheessa.
10 IR (NaCl, kalvo) ^ 1760, 1740 ja 1700 cm'1.
H. (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-butyylidimetyylisilyy-lioksietyyli]-4-{(lR)-l-[(3-N-allyylioksikarbonyyli-N-me-tyyliamino)propyyli]-3-allyylioksikarbonyyli-2-oksopro-pyyli}atsetidin-2-oni 15
0 0 CTBDilS OTBDttS
f (CH2)3N^^ f (CH2)3N^^ -A j xh3 ^ uE, CK3 '"ri^rn xr^i * CH3 COo^ 20 X—N LU2iNs^ X-HVTT 0
Cx 'r: ox
Liuos, jonka muodosti raakatuoteimidatsoli V 25 (31,6 mmol) kuivassa asetonitriilissä (50 ml), lisättiin seokseen, jonka muodosti magnesiummonoallyylimalonaatti (16,0 g, 51,5 mmol) kuivassa bentseenissä (300 ml), ja saatua seosta pidettiin 65 °C:ssa 16 h. Sen jälkeen jäähdytetty reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla 30 (500 ml), pestiin kylmällä 1 N vetykloridihapon vesiliuok sella, kylläisellä natriumbikarbonaatilla ja suolaliuok-: sella. Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen orgaaninen faasi haihdutettiin alipaineessa ja jäljelle jäänyt öljy käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Pieni erä kroma-35 tografoitiin silikageelillä (eluoitiin tolueenin ja etyy- 96311 530 liasetaatin seoksella, 9:1 -* 1:1), jolloin saatiin otsikon yhdiste öljynä. ^-NMR osoitti keto- ja enolimuodon 1:1-suhteisen seoksen.
IR (NaCl, kalvo) v^MX: 1760 (β-laktaamin C=0) ja 5 1705 cm’1; NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,05 ja 0,06 (2s, SiCH3), 0,86 (s, Si-t-Bu), 1,09 ja 1,16 (2d, J = 6,31 Hz, J = 6,29 Hz, CH3CH0), 1,3 - 1,8 (m, butyylin CH2-1 ja -2), 2,1 (m, oksopropyylin ketomuodon H-l), 2,88 (s, NCH3), 2,8 - 10 3,1 (m, H-3), 3,2 - 3,3 (m, CH2N), 3,55 (s, oksopropyylin ketomuodon CH2-3), 3,82 (2 dd päällekkäin, H-4), 4,1 (m, 1H, CHjCHO), 4,57 ja 4,63 (2m, allyylin CH2), 5,08 (s, oksopropyylin enolimuodon CH-3), 5,15 - 5,4 (m, allyylin CH) ja 5,8 - 6,1 ppm (m, allyylin CH ja NH).
15 I. (3S,4R)-3-[(1'R)-1’-tert-butyylidimetyylisilyy- lioksietyyli]-4-{(1R)-1-[(3-N-allyylioksikarbonyyli-N-me-tyyliamino) propyyli] -3-allyylioksikarbonyyli-3-diatso-2-oksopropyyli}atsetidin-2-oni
20 0 0 CTEDK5 3T33CS
J, J j CH- iXj} 002'** - Ctx- 25 ~
Liuos, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-{(1R)—1—[(3-N-allyyli-oksikarbonyyli-N-metyyliamino)propyyli]-3-allyylioksikar-30 bonyyli-2-oksopropyyli}atsetidin-2-oni (raakatuote edellisestä vaiheesta, 31,6 mmol) asetonitriilissä (100 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin p-tolueenisul-fonyyliatsidin (6,45 g, 32,7 mmol) liuoksella asetonitriilissä (35 ml). Sen jälkeen lisättiin N, N-di-isopropyyli-35 etyyliamiinia (4,6 ml, 33,0 mmol) tipoittain 5 min aikana, 96311 531 ja saatua seosta sekoitettiin 45 min 22 °C:ssa. Sitten liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja jäännöstä trituroi-tiin dietyylieetterin ja heksaanien seoksella (1:1, 100 ml). Kiteinen p-tolueenisulfonamidi otettiin talteen 5 suodattamalla ja pestiin dietyylieetterin ja heksaanien seoksella (1:1). Suodos ja pesuliuos haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin raakatuotediatsoatsetidinoni, joka käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa. Pieni erä puhdistettiin silikageelillä (eluoitiin tolueenin ja etyy-10 liasetaatin seoksella, 1:1), jolloin saatin otsikon yhdiste öljynä.
IR (NaCl, kalvo) l^max: 2140 (N2), 1760 (B-laktaamin C=0), 1710 ja 1650 cm*1; XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,05 ja 0,06 (2s, 6H, 15 SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,15 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CH,CHO), 1,3 - 1,9 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 2,87 (s, 3H, NCH3), 3,03 (m, 1H, H-3), 3,23 (leveä t, J = 6,7 Hz, CH2N), 3,84 (dd, JH4.H3 = 2,09 Hz, JH4 H1 = 5,51 Hz, 1H, H-4), 4.0 - 4,15 (m, 1H, oksopropyylin H-l), 4,15 - 4,25 (m, 1H, 20 CH3CH0), 4,5 - 4,6 ja 4,7 - 4,8 (2m, 2 x 2H, allyylin CH2), 5.1 - 5,3 (m, 4H, allyylin CH) ja 5,8 - 6,1 ppm (m, 3H, allyylin CH ja NH).
J. (3S,4R)-4-{(1R)-1-[(3-N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliamino)propyyli] -3-allyylioksikarbonyyli-3-diatso-— 25 2-oksopropyyli}-3-[(1'R)-1'-hydroksietyyli]atsetidin-2- oni 0 0 30 ~ c'^rr^r'Sc^
C H
96311 532
Liuos, jonka muodosti (3S,4R)-3-[(1'R)-l'-tert-bu-tyylidimetyylisilyylioksietyyli]-4-{(1R)-1-[(3-N-allyyli-oksikarbonyyli-N-metyyliamino)propyyli]-3-allyylioksikar-bonyyli-3-di atso-2-oksopropyy1i}atsetidin-2-oni 5 (31,6 mmol, raakatuote edellisestä vaiheesta) etanolissa (175 ml), jäähdytettiin 0-5 °C:seen ja käsiteltiin 1 N vetykloridihapon vesiliuoksella (100 ml). 18 h:n jälkeen 5 °C:ssa pH säädettiin arvoon 6 kiinteällä natriumbikarbonaatilla, ja etanoli haihdutettiin alipaineessa. Jäännös 10 laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), ja orgaaninen faasi pestiin 0,2 M pH-arvon 7,0 omaavalla fosfaattipuskurilla ja suolaliuoksella. Kuivattiin (MgS04), minkä jälkeen liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja jäännös kromatogra-foitiin silikageelillä (9 x 11 cm). Eluoitiin tolueenin ja 15 etyyliasetaatin seoksella (1:1), jolloin saatiin 5,92 g (43 %, saanto 5 vaiheelle haposta) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) ^roax: 3450 ja 3280 (leveä OH ja NH), 2140 (N2), 1755 (β-laktaamin C=0), 1700 (leveä) ja 20 1645 cm·1; XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,29 (d, J = 6,33 Hz, 1H, CHjHO), 1,4 - 1,8 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 2,88 (s, 3H, NCH3), 2,9 (leveä, 1H, H-3), 3,1 - 3,4 (m, 2H, CH2N), 3,80 (dd, JH4 H3 = 1,98 Hz, JH4 H1 = 6,95 Hz, 1H, H-4), 3,9 -25 4,0 (m, 1H, oksopropyylin H-l), 4,1 (m, 1H, CH3CH0), 4,55 - w 4,6 ja 4,7 - 4,75 (2m, 2 x 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,45 ja 5,9 - 6,1 (2m, 4H ja 2H, allyylin CH) ja 6,6 ppm (leveä s, NH).
533 96311 K. Allyyli-(2R,4R,5R,6S)-4-[(3"-N-allyylioksikar-bonyyli-N-metyyliamino)propyyli]-6- [(1'R)-1' -hydroksietyy-li]-3,7-diokso-l-atsabisyklo[3.2.0]heptaani-2-karboksy-laatti 5 0 0 r ;a OH (Cn,)3N^ J CH (CH2),N “ J, 7 Ά C»3 J, J CH3 CHi "|—ΑΛΓ,ι./ν' -* CH3 '1—f\ .
ίο JRj - ° C02y^'
Liuosta, jonka muodosti (3S,4R)-4-{(1R)-l-[ (3-N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliamino)propyyli]-3-allyyli-15 oksikarbonyyli-3-diatso-2-oksopropyyli}-3-[ (1' R)-1' -hyd-roksietyyli]atsetidin-2-oni (2,00 g, 4,58 mmol) kuivassa bentseenissä (80 ml), kuumennettiin palautusjäähdyttäen rodiumoktanoaattidimeerin (0,050 g) läsnä ollessa 30 min. Liuotin haihdutettiin alipaineessa, ja otsikon bisyklinen 20 tuote käytettiin sellaisenaan seuraavassa vaiheessa.
IR (NaCl, kalvo) max: 3450 (OH), 1762 (S-laktaamin C=0), 1645 (olkapää) ja 1690 cm'1;
Hl NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,43 (leveä d, J = 6,1 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja ^ 25 -2), 2,9 (m, 1H, propyylin H-4), 2,92 (s, 3H, NCH3), 3,1 - 3,4 (m, 3H, H-6 ja CH2N), 4,1 - 4,3 (m, 1H, CH3CH0), 4,3 (leveä dd, 1H, H-5), 4,56 ja 4,66 (2m, 2 x 2H, allyylin CH2), 5,15 - 5,4 ja 5,8 - 6,15 ppm (2m, 4H ja 2H, allyylin CH) .
534 9 6 31 1 L.Allyyli-(4R,5S,6S)-4-[(S^N-allyylioksikarbonyy-li-N-metyyliamino )propyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[ (1 ’ R) -11 -hydroksietyyli ] -7-okso-1 -atsabisyklo [3.2.0] hept-2-eeni-2-karboksylaatti 5 ll 0
CH rc-_- , 0F
f > : r (c:-;2)3n - 7
10 3 " IIJ^AoCc:Cr::CN
CO- 0 '
Liuosta, jonka muodosti raakatuotteena oleva bisyk-linen ketoni, joka oli valmistettu vaiheessa K 15 (4,58 mmol), kuivassa asetonitriilissä (40 ml), käsitel tiin 0-5 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna difenyy-likloorifosfaatilla (1,04 ml, 5,02 mmol), ja samanaikaisesti lisättiin N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,88 ml, 5,06 mmol) 2 min aikana. Lisättiin pieni 4-N,N-dimetyyli-20 aminopyridiinikide, ja seosta sekoitettiin 45 min. Sen jälkeen lisättiin vielä N,N-di-isopropyylietyyliamiinia (0,80 ml, 4,60 mmol) ja sitten β-merkaptopropionitriilin (0,40 g, 4,60 mmol) liuosta asetonitriilissä (2 ml), ja saatua seosta sekoitettiin 1 h. Sen jälkeen reaktioseos 25 laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), pestiin kylmällä ^ vedellä, kylläisellä natriumbikarbonaatilla, suolaliuoksella ja kuivattiin (MgS04). Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin sili-kageelillä (5 x 10 cm). Eluoitiin etyyliasetaatin gradien-30 tiliä tolueenissa (1:1 -* EtOAc), jolloin saatiin 1,45 g (67 %) otsikon yhdistettä öljynä.
IR (NaCl, kalvo) v^max: 3450 (OH), 2250 (CN), 1775 (β-laktaamin C=0) ja 1700 cm'1 (esterin ja karbamaatin C=0); il 1 ia i imi umi .
535 96311 XH NMR (200 MHz, CDC13) 6: 1,44 (leveä d, J = 6.0 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 2,67 (leveä t, 2H, SCH2CH2CN), 2,94 (s, 3H, NCH3), 2,9 - 3,5 (m, 4H, H-6, H-4 ja CH2N), 4,06 (m, 1H, CH3CH0), 5 4,28 (dd, JH5H6 = 2,78 Hz, JH5 H4 = 9,79 Hz, 1H, H-5), 4,57 ja 4,76 (2m, 2 x 2H, allyylin CH2), 5,2 - 5,5 ja 5,8 - 6.1 ppm (2m, 4H ja 2H, allyylin CH).
M. (4R,5S,6S)-3-[(2-syaanietyyli)tio]-6-[(l’R)-l'-hydroksietyyli]-4-(3"-N-metyyliaminopropyyli)-7-okso-l-10 atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappo 0
Jf" f^h^C¥ ir‘ (CH2)3NKCH3 is ck, \—J r --- -. Λ 3 ^XAsck2ch2cn — ^\-sch2ch2cn ° CO. 0 rn £* w w L· 20
Liuosta, jonka muodosti allyyli-(4R,5S,6S)-4-[(3"-N-allyylioksikarbonyyli-N-metyyliamino)propyyli]-3-[(2-syaanietyyli)tio]—6—[(l'R) — 1'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksylaatti (0,760 g, w 25 1,59 mmol) kuivassa dikloorimetaanissa (25 ml), käsitel tiin 22 °C:ssa ja käyttäen typpeä suojakaasuna N-metyyli-aniliinilla (1,0 ml, 9,23 mmol) ja sen jälkeen tetrakis-(trifenyylifosfiini)palladiumilla [O] (0,060 g). 3 h:n kuluttua reaktioseosta uutettiin vedellä (2 x 25 ml) ja 30 0,05 M pH-arvon 6,0 omaavalla fosfaattipuskurilla (35 ml).
Yhdistetty vesipitoinen uute kromatografoitiin käänteis-faasisilikageelillä (3 x 13 cm) käyttäen asetonitriilin gradienttia (0 - 10 %) vedessä eluenttina. Ensimmäiset fraktiot lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,156 g (27 %) \ 96311 536 otsikon yhdistettä valkoisena amorfisena kiinteänä aineena: [a]2! = +57,9° (c 1,0, vesi).
Puhtaus HPLC:n mukaan: 99,7 % p-Bondapak-C18:11a, 3,9 mm x 30 cm, eluointi 5 % CH3CN-H20, pH 7,4 fosfaatti-5 puskuri, virtausnopeus 0,7 ml/min, UV-detektori 302 nm, viipymäaika 6,37 min; UV (vesi, pH 7,4 fosfaattipuskuri) λ max: 300 nm (9050); IR (KBr) v?max: 2250 (CN), 1755 (β-laktaamin OO) ja 10 1590 cnf1 (karboksylaatin C=0); *H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J = 6,35 Hz, 3H, CHjCHO), 1,5 - 2,0 (m, 4H, propyylin CH2-1 ja -2), 2,72 (s, _ 3H, CH3N), 2,75 - 2,9 (m, 2H, SCH2CH2CN), 2,9 - 3,25 (m, 2H, CH2N), 3,40 (dd, JH6>H5 = 2,61 Hz, JH6 H1 = 6,53 Hz, 1H, H-6), 15 3,42 (m päällekkäin H-6:n kanssa, 1H, H-4) ja 4,2 - 4,35 ppm (m, 2H, H-5 ja CH3CH0 päällekkäin).
» « li |*4 M» I l i-m

Claims (3)

96311 537
1. Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitu tio)-7-okso-l-atsabi-5 syklo[3.2.0]hept-2-eeni-2-karboksyylihappojohdannaisen valmistamiseksi, jolla johdannaisella on kaava I OH 2 i A-R2 CHj-CH f 10 o)H/-s-s-83 w co2r1 tai sen myrkyttömän farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan 15 valmistamiseksi, jossa kaavassa A on substituoimaton tai hydroksisubstituoitu haa- rautumaton tai haarautunut C2_5-alkyleeniryhmä, R2 on hydroksi, halogeeni, fenyyli, syaani, atsido, aminoetyylitio, kvaternäärinen ammonioryhmä, jolla 20 on kaava ch3 + -D *“ -Ό· 'Ύ 25 ryhmä -NR5R6, sukkinimido-oksi, (N-formimidoyyli)-amino, guanidino, metyylikarbamoyylioksi, atsido-asetoksi, aminoasetoksi tai atsetidinyyli; B on haarautumaton tai haarautunut C1.4-alkyleeniryh- 30 mä tai suora sidos, kun R3 on kiinnittynyt rikki- atomiin hiiliatominsa kautta; R3 on vety, hydroksi, syaani, C^-alkyyli, halogeeni, fenyyli, -NR5 R6', (N-formimidoyyli)amino, guanidino, karbamoyylioksi, karbamoyyli, N,N-dimetyyli-35 formimidoyyli tai heterosyklinen ryhmä, joka on 538 9 6 3 11 kiinnittynyt C-atominsa kautta ja on atsetidinyy-li, pyridiini, 1,2,3-triatsoli, imidatsoli, pipe-ridiini tai l-tia-2,3-diatsoli ja on mahdollisesti substituoitu C1.4-alkyylillä, tai R3 on pyrrolidii-5 ni, joka on mahdollisesti substituoitu ryhmällä -C( =0)N(CH3)2, ja R5 ja R6 ovat toisistaan riippumatta vety tai C^j-alkyyli tai R5 ja R6 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, muodostavat pyrrolidiinirenkaan;
10 R4 on vety tai poistettavissa oleva karboksin suoja- ryhmä, kuten allyyli tai p-nitrobentsyyli; R5 ja R6 ovat toisistaan riippumatta vety, C^-alkyyli, ja kun R5 on vety tai C1.4-alkyyli, R6 on substituoitu C1.4-alkyyli, jonka substituentti on syaani tai fe-15 nyyli, tai aminohapon tai peptidin happotähde, jo ka on B-kloori-L-alanyyli-B-kloori-L-alanyyli, L-alanyyli tai L-alanyyli-L-alanyyli, tai R5 ja R6 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, muodostavat substituoimattoman tai G^-al-20 kyylillä substituoidun heterosyklisen renkaan, jo ka on pyrrolidiini, piperatsiini, pyridiini, imidatsoli tai morfOliini; tunnettu siitä, että a) yhdiste, jolla on kaava Xla 25 A-R12 ""w-C ED-*·
30. C02-P1 jossa R11 on OH O-P2 I I
35 -CHCH3 tai -CHCH3 •I IM t Alt) I l i 539 96311 A on edellä määritelty; P1 on tavanomainen helposti poistettavissa oleva karboksin suojaryhmä, joka on -CH2-CH=CH2 tai p-nitrobentsyyli; R12 on hydroksi, halogeeni, amino, atsido, 0-P3 tai N-P4; P2 ja P3 merkitsevät toisistaan riip-5 pumatta tavanomaisia hydroksin suojaryhmiä, kuten tertbu-tyylidimetyylisilyyli, trietyylisilyyli ja trimetyylisi-lyyli; P4 on tavanomainen aminon suojaryhmä ja L1 on -0-P( =0)(0Ph)2, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 10 HS-B-R3 jossa B ja R3 ovat edellä määritellyt, kaavan XHIa
15 A-R12 Rm J jT^\-S-B-R3 XHIa
20. COjP1 mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa kaavassa Ru, R12, R3, A, B ja P1 ovat edellä määritellyt, ja poistetaan hydroksin suojaryhmä ja aminon suojaryhmä, mikäli kaavan w 25 XHIa mukaisessa yhdisteessä niitä on; tai b) yhdiste, jolla on kaava XV o-P2 A-OH CHj-CH f ; 30
0 C02-P‘ 35 jossa R3, A, B, P1 ja P2 ovat edellä määritellyt, saatetaan 96311 540 reagoimaan sopivan asylointi- tai aktivointiaineen kanssa ja sen jälkeen sopivan nukleofiilin kanssa kaavan XVIIa <?-p2 A-»‘>
5 CHj-CH f Γ /)-S-B-R3 XVIIa 0 i co2-p‘ 10 mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa kaavassa R3, A, B, P1 ja P2 ovat edellä määritellyt ja R13 on atsido, metyylikar-bamoyylioksi, atsidoasetoksi, sukkinimido-oksi, aminoetyy-litio tai -NR5R6, jossa R5 ja R6 ovat edellä määritellyt, ja poistetaan hydroksin suojaryhmä P2; 15 ja haluttaessa suoritetaan ennen hydroksin suoja- ryhmän P2 poistamista, samanaikaisesti sen kanssa tai sen jälkeen yksi tai useampi seuraavista reaktioista: (i) pelkistetään atsidoryhmä substituenteissa R2 ja/tai R3 aminoryhmäksi; 20 (ii) imidoyloidaan aminoryhmä R2 ja/tai R3 (N- formimidoyyli)aminoryhmäksi; (iii) asyloidaan aminoryhmä R2 ja/tai R3, edullisesti aminoiminometaanisulfonihapolla, guanidinoryhmäksi; (iv) asyloidaan aminoryhmä R2 ryhmäksi -NR5R6, jossa
25 R5 on vety ja R6 on B-kloori-L-alanyyli-B-kloori-L-alanyy- li, L-alanyyli-L-alanyyli tai L-alanyyli; (v) alkyloidaan aminoryhmä R2 ryhmäksi -NR5R6, jossa R5 on C^-alkyyli ja R6 on C^-alkyyli tai substituoitu CX_A-alkyyli, jossa substituentti on syaani tai fenyyli; 30 (vi) poistetaan suojaryhmä P1, niin että saadaan yhdiste, jossa R4 on vety; * (vii) esteröidään yhdiste, jossa R4 on vety; (viii) kvaternisoidaan saatu kaavan I mukainen yhdiste; 35 (ix) muutetaan saatu kaavan I mukainen yhdiste myrkyttömäksi farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolak-seen. 11. t*:f MH lilJJB l .i i 96311 541
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (4R,5S,6S)-3-[ (2-syaanietyyli)tio]-4-(2"-guanidinoetyyli)-6-[(1'R)-l'-hydroksietyyli]-7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni-2- 5 karboksyylihappo tai sen myrkytön farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (4R,5S,6S)-4-(2"-guanidinoetyyli)-3-[(2-guanidinoetyyli)tio]-6-[(1'R)- 10 1' -hydroksietyyli] -7-okso-l-atsabisyklo[3.2.0]hept-2-eeni- 2-karboksyylihappo tai sen myrkytön farmaseuttisesti hy-^ väksyttävä suola. 96311 542
FI905912A 1989-12-04 1990-11-30 Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitu tio)-7-okso-1-atsabisyklo/3.2.0/hept-2-eeni-2-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi FI96311C (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US44601789A 1989-12-04 1989-12-04
US44601789 1989-12-04
US61392190A 1990-11-20 1990-11-20
US61392190 1990-11-20

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI905912A0 FI905912A0 (fi) 1990-11-30
FI905912A FI905912A (fi) 1991-06-05
FI96311B true FI96311B (fi) 1996-02-29
FI96311C FI96311C (fi) 1996-06-10

Family

ID=27034476

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI905912A FI96311C (fi) 1989-12-04 1990-11-30 Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitu tio)-7-okso-1-atsabisyklo/3.2.0/hept-2-eeni-2-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0433759A1 (fi)
KR (1) KR910011856A (fi)
AU (2) AU643735B2 (fi)
CA (1) CA2031487A1 (fi)
FI (1) FI96311C (fi)
HU (1) HU213265B (fi)
IE (1) IE904348A1 (fi)
IL (1) IL96528A (fi)
NO (1) NO177640C (fi)
NZ (1) NZ236319A (fi)
OA (1) OA09333A (fi)
PT (1) PT96080B (fi)
YU (1) YU229290A (fi)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5672701A (en) * 1990-01-16 1997-09-30 Bristol-Myers Squibb Company 4-substituted alkyl carbapenem antibiotics
US5317016A (en) * 1991-08-20 1994-05-31 Shionogi Seiyaku Kabushiki Kaisha Pyrrolidylthiocarbapenem derivative
NO20015844L (no) 2001-11-30 2003-06-02 Arne Kristiansen Anordning for å produsere et trykkpotensial over et legeme
AU2012255759B2 (en) 2011-05-17 2017-08-10 Principia Biopharma, Inc. Kinase inhibitors

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4312871A (en) * 1979-12-03 1982-01-26 Merck & Co., Inc. 6-, 1- And 2-substituted-1-carbadethiapen-2-em-3-carboxylic acids
JPS60202886A (ja) * 1984-03-27 1985-10-14 Sankyo Co Ltd １―置換カルバペネム―３―カルボン酸誘導体
CA1272719A (en) * 1986-03-06 1990-08-14 Pierre Dextraze Carbapenem antibiotics
US4960879A (en) * 1988-03-23 1990-10-02 Shionogi & Co., Ltd. Process for carbapenem intermediates
US5189158A (en) * 1991-03-20 1993-02-23 American Cyanamid Company 4-substituted azetidinones as precursors to 2-substituted-3-carboxy carbapenem antibiotics and a method of producing them

Also Published As

Publication number Publication date
EP0433759A1 (en) 1991-06-26
HUT56371A (en) 1991-08-28
FI905912A (fi) 1991-06-05
HU908046D0 (en) 1991-06-28
IL96528A (en) 1996-06-18
YU229290A (sh) 1993-05-28
FI96311C (fi) 1996-06-10
KR910011856A (ko) 1991-08-07
NO177640C (no) 1995-10-25
HU213265B (en) 1997-04-28
PT96080A (pt) 1991-09-30
NZ236319A (en) 1994-02-25
NO905215L (no) 1991-06-05
AU643735B2 (en) 1993-11-25
AU661192B2 (en) 1995-07-13
NO905215D0 (no) 1990-12-03
CA2031487A1 (en) 1991-06-05
AU4611793A (en) 1993-12-02
OA09333A (fr) 1992-09-15
NO177640B (no) 1995-07-17
IE904348A1 (en) 1991-06-05
AU6768890A (en) 1991-06-06
FI905912A0 (fi) 1990-11-30
PT96080B (pt) 1998-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4925838A (en) 3-pyrrolidinylthio-1-azabicyclo[3.2.0]-hept-2-ene-2-carboxylic acid compounds
JP2542773B2 (ja) ピロリジルチオカルバペネム誘導体
JPH0215080A (ja) ３―ピロリジニルチオ―１―アザビシクロ［３．２．０］ヘプト―２―エン―２―カルボン酸化合物
FI103046B (fi) Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten pyrrolidinyylitiokarbapeneemij ohdannaisten valmistamiseksi
FI96311B (fi) Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten 6-(1-hydroksietyyli)-3-(substituoitu tio)-7-okso-1-atsabisyklo/3.2.0/hept-2-eeni-2-karboksyylihappojohdannaisten valmistamiseksi
HU193895B (en) Process for preparing carbapenem derivatives
CZ20031325A3 (cs) 1-methylkarbapenemové deriváty
HU191066B (en) Process for preparing carbapenem derivatives
RU2162088C2 (ru) 1-метилкарбапенем или его фармакологически приемлемые соли, композиция, способ предупреждения или лечения бактериальных инфекций
JPH04368386A (ja) １−メチルカルバペネム−３−カルボン酸の製造法
AU651505B2 (en) Aminoalkylpyrrolidinylthiocarbapenem derivatives
JPH06503803A (ja) １―アザビシクロ［３．２．０］ヘプト―２―エン―２―カルボン酸化合物
JP3242677B2 (ja) 新規なβ−ラクタム化合物及びその製造法
CA1297110C (en) 2-aza-substituted 1-carbadethiapen-2-em-3-carboxylic acids
JPH08134075A (ja) 新規なカルバペネム誘導体
EP0372582A2 (en) 6-Aminoalkyl carbapenems
EP0658162A1 (en) Carbapenem derivatives and processes for preparing the same
NZ247420A (en) Azetidine derivatives as intermediates in the preparation of carbapenams,
JPH11315021A (ja) １―メチルカルバペネム誘導体を含有する医薬
JPH04234886A (ja) １−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸化合物
CS247195B2 (cs) Způsob výroby karbapenemderivátů

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY