NO177640B - Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktive 4-substituerte alkylkarbapenemforbindelser - Google Patents

Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktive 4-substituerte alkylkarbapenemforbindelser Download PDF

Info

Publication number
NO177640B
NO177640B NO905215A NO905215A NO177640B NO 177640 B NO177640 B NO 177640B NO 905215 A NO905215 A NO 905215A NO 905215 A NO905215 A NO 905215A NO 177640 B NO177640 B NO 177640B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
tert
alkyl
solution
pyridine
Prior art date
Application number
NO905215A
Other languages
English (en)
Other versions
NO905215D0 (no
NO177640C (no
NO905215L (no
Inventor
Alain Martel
Carol Bachand
Marcel Menard
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of NO905215D0 publication Critical patent/NO905215D0/no
Publication of NO905215L publication Critical patent/NO905215L/no
Publication of NO177640B publication Critical patent/NO177640B/no
Publication of NO177640C publication Critical patent/NO177640C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D477/00—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D477/00—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring
    • C07D477/10—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
    • C07D477/12—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached in position 6
    • C07D477/16—Heterocyclic compounds containing 1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. carbapenicillins, thienamycins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulphur-containing hetero ring with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 4, and with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 with hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached in position 6 with hetero atoms or carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 3
    • C07D477/20—Sulfur atoms
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte til fremstilling av en terapeutisk aktiv 4-substituert alkylkarbapenemforbindelse med formel (I)
hvor Br er
A er en usubstituert eller hydroksysubstituert, uforgrenet eller forgrenet C^.^Q-alkylengruppe eller en uforgrenet eller forgrenet C1_1Q-alkylengruppe, hvori det inngår et mellomliggende heteroatom valgt blant oksygen, svovel og nitrogen,
R^ er hydroksy, halogen, nitril, azido,
en kvaternær ammoniumgruppe, -NR^R^,
eller
azetidinyl
B er en uforgrenet eller forgrenet C^_g-alkylengruppe eller en direkte binding, når R<3> er bundet til svovelatomet via et karbonatom deri,
R<3> er hydroksy, nitril, <C>^.g-alkyl, halogen, fenyl,
nr<5>'r<6>',
eller en heterocyklisk gruppe, hvor
bindingen går til et karbonatom deri, valgt blant pyridin, 1,2,3-triazol, imidazol, piperidin, 1-tia-2,3-diazol eller azetidin, og de heterocykliske grupper kan eventuelt være substituert med C^_4-alkyl, eller R<3> er pyrrolidin som eventuelt er substituert med C(=0)N(CH3) 2>
C / Cl
RJ og R° er hver uavhengig hydrogen, eller C^g-alkyl, eller Rr og R° sammen med nitrogenatomet som de bundet til, danner en pyrrolidinring,
R<4> er hydrogen, Na eller K,
R^ og R^ er hver uavhengig hydrogen eller C-^.g-alkyl, og når R<5> er hydrogen eller <C>1_4-alkyl, er R6 substituert C1-4<->alkyl hvor alkylsubstituenten er valgt blant nitril og fenyl, eller p-klor-L-alanyl-p-klor-L-alanyl, L-alanyl eller L-alanyl-L-alanyl, eller R^ og R^ utgjør sammen med det nitrogenatom hvortil de er bundet, en usubstituert eller substituert heterocyclisk ring valgt blant pyrrolidin, piperazin, pyridin, imidazol, 2,5-pyrrolidindion eller morfolin, hvilken substituent er valgt blant C1_4-alkyl,
W er en direkte binding, oksygen, eller NR^,
Y er oksygen eller NR^,
Z er hydrogen, hydroksy, C1_4<->alkyl, -NR<7>R<8>,
amino(<C>^_4)alkyl, eller azido(C1-4)alkyl,
R7 ' og R° fl er hver uavhengig hydrogen, C^_4-alkyl, og
R1<0> er hydrogen, <C>1_4-alkyl, eller di(<C>1_4)alkylamino,
eller et ikke-toksisk farmasøytisk akseptabelt salt derav,
under forutsetning av at AR<2> ikke kan være hydrok-
symetyl, metoksymetyl, metyltiometyl, fluormetyl eller klor-metyl, når B er en direkte binding, og R<3> er en heterocyklisk gruppe
Således vedrører oppfinnelsen fremstilling av hittil ukjente antibiotiske karbapenemforbindelser med en substituert alkylgruppe i 4-stillingen samt ikke-toksiske, farmasøytisk akseptable salter derav med antimikrobiell aktivitet. De omhandlede karbapenemantibiotika og farmasøytiske preparater derav er derfor nyttige ved behandling av antibakterielle infeksjoner hos mennesker og dyr, enten alene eller i kombinasjon med andre antibiotika (klasse 514, underklasse 210).
Terminologien for forbindelser av denne klasse kan enten være basert på grunnstammen "karbapenem", hvorved det anvendes et momenklaturmessig trivialnavnsystem, eller på det systema-tiske navn i overensstemmelse med Chemical Abstracts. I den foreliggende oppfinnelse er stillingene nummerert i overensstemmelse med Chemical Abstractssystemet, f.eks. 3-R<3->4-R<2->6-R1-7-okso-l-azabicyclo[3,2, 0]hept-2-en-karboksylsyre som vist i følgende formel
Det er hensikten at uttrykket "karbapenem", som i det foreliggende anvendes for en klasse av forbindelser, skal benyttes synonymt med navnet 7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre. Det anvendte nummereringssystem vil imidlertid i alle tilfelle være nummereringssystemet ifølge Chemical Abstracts som illustrert ovenfor.
Det er kjent et stort antall karbapenemantibiotika. Denne klasse antibiotika er som type eksemplifisert ved tienamycin (US 3.930.357), som først ble fremstilt ved fermentering, og som viser et bredt spektrum av antibiotisk aktivitet. Imipenem (US 4.194.047), et etterfølgende kjemisk mere stabilt derivat av tienamycin, utvikles. Klinisk anvendbarhet er imidlertid begrenset som følge av at den hurtig nedbrytes i mennesker av renaldehydropeptidase (DHP). Derfor administreres imipenem klinisk i kombinasjon med en DHP-inhibitor.
Til tross for det brede spektrum av antibiotisk aktivitet hos imipenem, er det stadig behov for mere effektive karbapenemantibiotika, som er både kjemisk og biologisk mer stabi-le enn imipenem ved behandling av infektiøse sykdommer. Forsk-ning med henblikk på å forbedre karbapenemantibiotika fort-setter, hvilket understrekes av det store antall patenter, som er blitt utstedt og offentliggjort på dette område. Den nærmestliggende kjente karbapenemteknikk er beskrevet i føl-gende publikasjoner og patenter.
I EP-patentskrift nr. 30.032, beskrives et stort antall karbapenemer med formelen
hvor R1, R<2>, R**, r<7> og R<8> uavhengig er valgt fra gruppen bestående av bl.a. hydrogen (R<1> og R<2> er ikke hydrogen), substituert og usubstituert alkyl, alkenyl eller alkynyl med 1-10 karbonatomer. Generisk skjelnes ikke mellom de forskjellige substituentbetydninger for R<1>, R<2>, R6, R<7> og R<8> bortsett fra, at R<1> og R<2> ikke er hydrogen. I EP-patentskrift nr. 45.198 beskrives en rekke karbapenemer med formelen
hvor R^- er alkyl, aryl, alkyltio, aryltio eller acylamino-
alkyl<ti>o, R2 0g R<3> er uavhengig en alkoksykarbonyl eller cyano eller en gruppe med formelen COR<*>, og R<3> videre kan være alkyl eller aryl. Det forutsettes at 4-stillingen har to substituenter, hvorav minst én er forskjellig fra alkyl.
I EP-patentskrift nr. 71.908 beskrives en rekke karbapenemer med formelen
hvor R** og R<7> samt R^ og R-^ er en gruppe substituenter, som ikke skiller seg fra hverandre, men er lik for begge grupper. Selv om det er angitt en liste over foretrukne substituenter på side 57 for R^ og R<1>^, er kun metyl angitt i eksemplene. I EP-patentskrift nr. 160.391 beskrives en rekke karbapenemer med formelen
hvor R<1> og R<2> er lik eller forskjellige og betegner hydrogen (forutsatt at Rx 1 og R^ 9 ikke begge er hydrogen), halogen, 02-7-alkoksykarbonyl, eller substituert eller usubstituert C^_^q_ alkyl, <C>2_g-alkenyl, <C>2_g-alkynyl, C^_g-alkoksy, C]__g-alkyltio, <C>3_3~cycloalkyl, karbocyclisk Cg.^Q-aryl, aralkyl, aral-kenyl eller aralkynyl, som bl.a. kan være substituert med forskjellige substituenter, eller R<1> og R<2>, sammen med det
karbonatom, hvortil de er bundet, danner en C3_g-alicyclisk ring. De eneste substituenter, som er angitt i eksemplene for R<1> og R<2> er slike, hvor R<1> og R<2> er metyl, metoksy, fluor og 1,1-dimetyl.
I EP-patentskrift nr. 160.876 beskrives en rekke karbapenemer med formelen
hvor R^ er halogen, OR, OS02R, SH, SR, S02R, NH2/ NHR, e N(R)2, N(R)3,
hvor R er hydrogen, C^g-alkyl,
C2_g-alkenyl, C2_g-alkynyl, fenyl, fenylalkyl med 7-12 karbonatomer, cycloalkyl med 3-6 karbonatomer, cycloalkyl med 3-6 karbonatomer i ringdelen og 1-6 karbonatomer i alkyldelen, heterocycliske grupper, herunder heterocyclyl, heterocyclyl-alkyl, heteroaryl og heteroarylalkyl, hvilke heterocycliske grupper har en lang rekke substituenter. På side 29 tilveie-bringes det en liste over representative substituenter for R<9>, hvorav det fremgår at bindingen av R<9> til karbapenem-ringen skjer via halogen, svovel, oksygen, nitrogen og fosfor.
I EP-patentskrift nr. 170.019 beskrives en rekke karbapenemer, som er substituert i 4-stillingen med en etergruppe og som har formelen hvor R<1> er lavere alkyl, aryl eller aryllavere alkyl, og R<3> og R<4> er konvensjonelle substituenter for karbapenemer. De i eksemplene angitte substituenter er slike, hvor R<1> er metyl, etyl, isopentyl og fenyl. I Abstract 759 fra the Twenty-Seventh Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy avholdt 4.-7. oktober 1987 beskriver E. Goetschi, en av oppfinnerne som nevnt i EP-patentskrift nr. 170.019, imidlertid noen lfi-alkoksykarbapenemer, blant hvilke Ro 19-8928, hvori R<1> er hydroksyetyl, spesielt er eksemplifisert.
Det er således formålet med den foreliggende oppfinnelse å frembringe en hittil ukjent klasse antibiotika, som har antimikrobiel aktivitet og som er nyttig ved behandling av infektiøse sykdommer hos mennesker og dyr. Et ytterligere formål med den foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en analogifremgangsmåte til fremstilling av slike antibiotika og deres ikke-toksiske, farmasøytisk akseptable salter og derivater .
Analogifremgangsmåte ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved at man (a) omsetter en forbindelse med formel (Xla)
hvor Ru er eller
A har den ovenfor angitte betydning,
P<1> er en karboksybeskyttende gruppe, valgt blant
CH-CH=CH2 og p-nitrobenzyl,
R<12> er hydroksy, azido, O-P<3> eller N-P<4>,
<p2>0g p<3> er nver uavhengig en hydroksybeskyttende gruppe,
valgt blant tert.-butyldimetylsilyl eller trimetylsilyl
P<4> er -C(=0)-0-CH2-CH=CH2, og
L<1> er oksygen eller 0-P(=0)(0Ph)2
med en forbindelse med formelen
hvor B og R<3> hver har den ovenfor anførte betydning, hvorved • det oppnås en forbindelse med formel (Xllla)
hvor R-*-1, R^2, R<3>, A, B og P^ hver har den ovenfor anførte betydning, eller
(b) omsetter en forbindelse med formel (XVI)
hvor R3, R1<1>, A, B og P<1> hver har den ovenfor anførte betydning, og L<2> er trifluormetansulfonyl, med et passende nucleofil, hvorved det oppnås en forbindelse med formel (XVTIa) hvor R3, R1<1>, A, B og P<1> hver har den ovenfor anførte betydning, og R<13> er azido, -NR<5>R<6>,
eller nitril, hvor R<5>, R<6>, Y og Z hver har den ovenfor
anførte betydning,
eller
(c) omsetter en forbindelse med formel (XVIIIa), som eventuelt inneholder en konvensjonell hydroksy-, amino- eller karboksybeskyttende gruppe
hvor R3, R11 og P<1> hver har den ovenfor anførte betydning, og R<16> er hydrogen eller <C>1_4-alkyl, eller et salt derav, med et passende imidoylerings-, acylerings- eller alkyleringsmiddel, hvorved det oppnås en forbindelse med formel (XVIIIb)
hvor
R<3>, R<11>, P<1> og R<1>^ hver har den ovenfor anførte betydning,
og R17 er C^^-alkyl, eller
hvor Y og Z hver har den
ovenfor anførte betydning,
og
eventuelt fjerner man en beskyttende gruppe, eller at det av produktet fra trinn (a), (b) eller (c) dannes en kvaternær forbindelse eller at produktet forestres, eller produktet omdannes til et salt til fremstilling av en forbindelse med formel (I).
Ifølge en foretrukket utførelse er R^ nitril, azido, en kvaternær ammoniumgruppe,
-<NR5>R<6> eller
Fortrinnsvis fremstilles forbindelsene (4R, 5S, 6S)-3-[ (2-cyanoetyl)tiol]-4-(2"-guanidinoetyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyklo[3.2.0]hept-2-en-2-karboksylsyre og (4R,5S,6S)-4-(2"-guanidionetyl)-3-[(2-guanidionetyl)tiol]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyklo[3.2.0]hept-2-en-2-karboksylsyre, ved at man omsetter de tilsvarende utgangsforbindelser.
De nye fremstilte 4-substituerte alkyl-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyreforbindelser, er antimikrobielle midler som er nyttige ved behandling av infektiøse sykdommer hos mennesker og dyr.
Uttrykkene "C1_4-alkyl" og "C^g-alkyl", betyr i det foreliggende (med mindre annet er angitt) uforgrenede eller forgrenede alkyl- eller alkoksy-grupper, såsom metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, iso-butyl, t-butyl, amyl, heksyl og liknende. Disse grupper inneholder fortrinnsvis 1-4 karbonatomer, og mere foretrukket 1 eller 2 karbonatomer. Uttrykket "lavere" betegner 1-6 karbonatomer, med mindre annet er anført. Uttrykkene "uforgrenet eller forgrenet C^_^Q-alkylengruppe" og "uforgrenet eller forgrenet C^.g-alkylengruppe" i forbindelse med definisjonen av "A" og "B" betyr i det foreliggende hhv. uforgrenede eller forgrenede alkylengrupper, såsom metylen, etylen, propylen, metyletylen, butylen, metyl-propylen, etyletylen, dimetyletylen, pentylen, metylbutylen, etylpropylen, heksylen, metylpentylen, heptylen eller lignende. Uttrykket "hydroksysubstituert uforgrenet eller forgrenet C^^Q-alkylengruppe" i forbindelse med definisjonen av "A" betegner uforgrenede eller forgrenede alkylengrupper substituert med hydroksy, såsom 2-hydroksyetylen, 2- eller 3-hydroksypropylen, 2-, 3- eller 4-hydroksybutylen, 2- eller 3-hydroksymetyl-butylen, 2-, 3-, 4- eller 5-hydroksypentylen eller lignende. Uttrykket "uforgrenet eller forgrenet C^-^q-alkylengruppe, hvori det inngår et mellomliggende heteroatom valgt blant oksygen, svovel eller nitrogen" i forbindelse med definisjonen av "A" betegner en uforgrenet eller forgrenet alkylengruppe, som inneholder et oksygen-, svovel- eller nitrogenheteroatom, såsom - (CH2) i-6~°" (CH2) 2-6"' ~ ^CH2^ l-6""s~
(<CH>2)2.6, -(<CH>2)1_6-N<H->(<CH>2)2_6, <->(<CH>2)1.6<->NCH3-(CH2)2_6<->eller lignende. Med mindre annet er angitt omfatter uttrykket "halogen" i det foreliggende brom, klor, jod og fluor, mens uttrykket "halogenid" omfatter bromid-, klorid- og jodidan-ionen. Uttrykket "kvaternær ammoniumgruppe" betegner i det foreliggende en kvaternær ammoniumgruppe, som kan være acyk-lisk, cyklisk eller en kombinasjon derav, og kan inneholde et eller flere ytterligere heteroatomer valgt blant nitrogen, svovel og oksygen. Egnede acykliske, cykliske og kombinerte acykliske/cykliske kvaternære ammoniumgrupper er de
i det foreliggende beskrevne og de ved
i US patentskrift nr. 4.486.586 definerte, og som det herved refereres til. Et eksempel på en acyclisk kvaternær ammoniumgruppe er en gruppe med formelen
hvor R', R" og R"' kan være
like eller forskjellige og f.eks. være (lavere)alkyl, (lavere) alkenyl eller substituert (lavere)alkyl. Eksempler på cycliske kvaternære ammoniumgrupper er fullt umettede mono-cycliske, heterocycliske ringsystemer, og bicycliske hetero-cycliske ringsystemer, hvor minst én N-holdig ring er fullt mettet.
Egnede cycliske ringsystemer er f.eks. pyridinium, pyrimidi-nium, pyrazinium, tiazolium, tiadiazolium, quinolinium, isoquinolinium, tiazolo [4,5-c] pyridinium eller liknende. Eksempler på kombinerte acycliske/cycliske kvaternære ammoniumgrupper omfatter f.eks. 1-metylpyrrolidinium, 1-metylpiperidinium, 1-metylmorholinium, 1-metylpiperazinium, 1-metylimidazolidinium og 1-metylisoindolinium.
Det vil være åpenbart for fagmannen, at karbapenemer med formel (I), hvor R2 inneholder en acylrest fra en naturlig forekommende aminosyre eller et peptid kan være aktive in vivo som et pro-legemiddel, dvs. aminosyreresten kan hydrolyseres av peptidaseenzymer i verten til dannelse av en mere aktiv form av de ønskede karbapenemantibiotika. Forbindelsene, som fremstilles ved analogifremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse, og som inneholder en acylrest av en aminosyre eller et peptid, er mere aktive in vivo enn in vitro. Uttrykket "ikke-toksisk farmasøytisk akseptabelt salt" betegner i det foreliggende ikke-toksiske syre- og basesalter, og salter av zwitterionisk art. Salter med en base omfatter uorganiske metalsalter, såsom natrium-, kalium-, kalsium- og magnesiumsalter, ammoniumsaltet, og salter med ikke-toksiske aminer, såsom trialkylaminer, pyridin, picolin, dibenzylamin, etanolamin, N-metylmorfolin og andre aminer, som er blitt anvendt for å danne salter av karboksylsyrer. Salter med en syre omfatter uorganiske syresalter, såsom hydroklorid, hydrobromid, hydrojodid, sulfat, fosfat eller liknende, og organiske syresalter, såsom formiat, acetat, maleat, eitrat, succinat, ascorbat, lactat, fumarat og tartrat, som er blitt anvendt for å danne salter med basiske aminer. Da forbindelsene med formel (I) også skal ha en sur eller basisk gruppe i substituentene R<*>, R<2> og R<3> kan "ikke-toksisk farmasøytisk akseptabelt salt" omfatte egnede syre- eller baseaddisjons-salter av disse funksjonelle grupper, såsom hydroklorid, fosfat, natrium, kalium, ammoniumklorid, acetat og andre salter av en sur gruppe eller en basisk gruppe som beskrevet ovenfor.
Karboksybeskyttende grupper, som kan anvendes ved analogifremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse til blokkering eller beskyttelse av karboksylsyrefunksjonen er velkjente for fagmannen, og om ønsket kan disse grupper fjernes ved metoder, som fortrinnsvis ikke resulterer i noen merkbar ødeleggelse av den resterende del av molekylet, f.eks. ved kjemisk eller enzymatisk hydrolyse, behandling med kjemiske reduksjonsmidler under milde betingelser, bestråling med ultrafiolett lys eller katalytisk hydrogenering. Eksempler på slike lett fraspaltbare karboksybeskyttende grupper omfatter grupper, såsom C-^g-alkyl, 2,2,2-trikloretyl, silyl, såsom trimetylsilyl og t-butyldimetylsilyl, fenyl, ringsubstituert fenyl, f.eks. 4-klorfenyl, tolyl og t-butylfenyl, fenyl-(lavere)alkyl, ringsubstituert fenyl(lavere)alkyl, f.eks. benzyl, 4-metoksybenzyl, 4-nitrobenzyl, benzhydryl, og trityl, metoksymetyl, 2,2,2-trikloretoksykarbony1, benzyloksymetyl, (lavere)alkanoyloksy(lavere)alkyl, såsom acetoksymetyl, pro-pionyloksymetyl, (lavere)alkenyl, såsom vinyl og allyl, usubstituert eller substituert fenyl(C1-4)alkoksykarbonyl, såsom benzyloksykarbonyl og 4-nitrobenzyloksykarbonyl, og (02-4)-alkenyloksykarbonyl, såsom allyloksykarbonyl. Særlig fordel-aktige karboksybeskyttende grupper er benzyl, 4-nitrobenzyl, 2-nitrobenzyl, 2,4-dimetoksybenzyl, 4-metoksybenzyl eller liknende, fortrinnsvis allyl eller substituert allyl. Andre egnede beskyttelsesgrupper for karboksy er beskrevet i "Protective Groups in Organic Synthesis", Theodora W. Greene (John Wiley & Sons, 1981), kapitel 5, som inkorporeres ved referanse.
Aminobeskyttende grupper, som kan anvendes ved analogifremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse, til blokkering eller beskyttelse av aminogruppen er velkjente for fagmannen. Eksempler på konvensjonelle aminobeskyttende grupper er beskrevet av J.W. Barton i Protective Grou<p>s in Organic Chemistrv, J.F.W. McOmie, Ed., Plenum Press, New York, N.Y., 1973, kapitel 2, og av R.A. Boissonnas i Advances in Organic Chemistrv, 3., 159-190 (1963) . Det vil være åpenbart for fagmannen, at den særlige aminobeskyttende gruppe, som anvendes, ikke er kritisk og at man bare skal velge en gruppe, som er stabil ved de etterfølgende reaksjonstrinn, og som kan fjernes under betingelser, som bevarer den følsomme fi-lactam-kjerne.
Egnede aminobeskyttende grupper omfatter f.eks. acylgrupper, såsom formyl, acetyl og substituert acetyl (f.eks. halogenert acetyl), benzoyl og substituert benzoyl, alkoksykarbonyl, halogenert alkoksykarbonyl, alkenyloksykarbonyl, aralkoksykarbonyl, halogenert aralkoksykarbonyl, benzyl og benzylderivater, trityl og tritylderivater, sulfenylderivater, sulfonylderivater, diacylderivater, såsom fthalimido eller succinimido eller derivater derav og Schiffbaser dannet med aldehyder eller ketoner. Spesifikke eksempler på egnede aminobeskyttende grupper omfatter formyl, acetyl, trifluoracetyl, trikloracetyl, benzoyl, toluoyl, 2,2,2- trikloretoksykarbonyl, isopropoksykarbonyl, t-butoksykarbonyl, cyclopentyloksy-karbonyl, cycloheksyloksykarbonyl, benzyloksykarbonyl, 2-nitrobenzyloksykarbonyl, 4-nitrobenzyloksykarbonyl, 4-metoksy-benzyloksykarbonyl, 4- klorbenzyloksykarbonyl, allyloksykarbonyl, 2-furfuryloksykarbonyl, trimetylsilyletoksykarbonyl, N-fenylkarbamoyl, benzyl, 4-nitrobenzyl, trityl, benzen-sulfonyl, p-toluensulfonyl, 2-nitrofenylsulfenyl, fenyl-tiokarbonyl, trimetylsilyl, trietylsilyl, trifenylsilyl, t-butyldimetylsilyl, metyldifenylsilyl, og diacylaminobeskyt-tende grupper, såsom fthalimido, succinimido og derivater derav.
Forbindelsene, som fremstilles ved analogifremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse, har flere asymmetriske karbonatomer og kan således forekomme i flere stereokjemiske former. Oppfinnelsen omfatter blandingen av isomerer og de enkelte stereoisomerer. Foretrukne forbindelser med formel (I) er forbindelser med 4R,5S,6S-konfigurasjonen i 1-azabicyclo-[3,2,0]heptanringstrukturen, som er den samme stereokjemiske konfigurasjon som i det antibiotiske tienamycin. I tillegg kan substituentene R<*> og A selv inneholde asymmetriske karbonatomer. Hvor det er hensikts-messig, kan R^-substituenten forekomme i enten R- eller S-konfigurasjon. Både R-og S-konfigurasjonen av RI faller inn under den foreliggende oppfinnelse, f.eks. R- og S-isomerene av 1-hydroksyetyl-, 1-fluoretyl- og 1-aminoetylsubstituenter. R-^-substituenten har fortrinnsvis R-konfigurasjon, såsom lR-hydroksyetyl og 1R-aminoetyl. I det tilfelle, hvor alkylen-gruppen i substituenten A har en forgrenet alkylsubstituent eller en hydroksy-substituent, vil forbindelsene med formel (I) inneholde et ytterligere asymmetrisk karbonatom. Den foreliggende oppfinnelse omfatter begge isomerer av forbindelsene med formel (I), f.eks. forbindelsene i eksempel 57, 58 og 152.
Når R<3> er C^_g-alkyl kan denne være metyl.
De ovenfor angitte RJ-grupper er forøvrig kjente i karbapenemteknikken. Egnede kvaterniserte nitrogenholdige heterocycliske grupper er beskrevet i US patentskrift 4.642.341 og 4.644.061. Andre egnede grupper er beskrevet i US patentskrift nr. 4.745.188, især når det gjelder definisjonen av R<8>. Det skal også vises til US patentskrift 4.822.787, 4.840.946, 4.863.916, 4.888.344 og 4.962.103.
Forbindelser med formel (I), hvor R<4> er hydrogen, eller en anionisk ladning eller samt ikke-toksiske farmasøytisk akseptable salter derav, er nyttige som antimikrobielle midler.
Karbapenemforbindelsene med formel (I) kan fremstilles ved forskjellige metoder. I én utførelsesform av den foreliggende oppfinnelse fremstilles forbindelsene med formel (I) fortrinnsvis ut fra hittil ukjente forbindelser med formel
(II)
hvor R<11> er eller A har den foran angitte betydning, Pl er en konvensjonell, lett fraspaltbar karboksybeskyttende gruppe, R^<2> er hydroksy, azido, 0-P<3> eller N-P<4>, P<2> og P<3> hver er uavhengig en konvensjonell hydroksybeskyttende gruppe, og P<4> er en konvensjonell aminobeskyttende gruppe. Forbindelsene med formel (II) kan fremstilles ut fra hittil ukjente mellomprodukter med formel (III) hvor R-^, A, R^<2> og P^- har den ovenfor anførte betydning, og R<18> er hydrogen eller P<4>, hvor P<4> er en konvensjonell aminobeskyttende gruppe. Videre kan forbindelsene med formel (III) fremstilles ut fra hittil ukjente mellomprodukter med formel (IV)
hvor R<1*>, A, R<12> og R<18> har den ovenfor anførte betydning.
Forbindelsene med formel (IV) kan fremstilles ved forskjellige metoder, og som eksempel kan fremgangsmåten til fremstilling av en av de mere foretrukne utførelsesformer av forbindelser med formel (IV) belyses ved reaksjonssekvensen skissert i reaksjonsskjerna 1 i forbindelse med fremstillingen av mellomproduktforbindelser med formel (IVa).
I denne sekvens omdannes tioesteren (VI), som fremstilles i trinn (A) fra tiolen (V) til silylenoleteren (VII) i trinn
(B) og kobles i trinn C uten separasjon til azetidinonen (VIII) ved nucleofil fortrengning av den fraspaltbare gruppe
"L" i 4-stillingen. Det resulterende mellomprodukt (IX)
(illustrert i fi-isomerformen) kan deretter forsepes i trinn
(D) , hvorved det ble oppnådd den tilsvarende karboksylsyre (IVa). De i reaksjonsskjerna 1 anførte generelle metoder og
reaksjoner er beskrevet i US patentskrift nr. 4.772.683.
Reaksionsskiema 1
Under henvisning til reaksjonsskjerna 1 illustrerer trinn (A) esterifiseringen av en tiol (V) til en tidester (VI). Omsetningen i trinn (A) er kjent og kan utføres med 2-picolyl-merkaptan, hvor R er hydrogen eller metyl, og en hensikts-messig aktivert karboksygruppe, som beskrevet heri, hvor A og R<12> har den ovenfor anførte betydning.
Trinn (B) illustrerer omsetningen mellom tioester (VI) og et triorganosilyltriflatsilyleringsmiddel til dannelse av silylenoleteren (VII). Omsetningen i trinn (B) utføres i et inert organisk løsningsmiddel og i nærvær av en organisk base. Egnede inerte organiske løsningsmidler, som kan anvendes, omfatter metylenklorid, tetrahydrofuran, karbontetraklorid, cycloheksan, dioksan, dimetoksyetan, dietyleter og kloroform. Reaksjonstemperaturer kan ligge i intervallet fra ca. -40°C til +30°C. Mest hensiktsmessig utføres omsetningen ved å blande reaktantene under avkjøling, fortrinnsvis ved mellom ca. -15°C og 0°C, og deretter tillate gradvis oppvarming til værelsestemperatur.
Triorganosilyl-triflatsilyleringsmidler er velkjente og omfatter trimetylsilyl-trifluormetansulfonat, triisopropylsilyl-trifluormetansulfonat, trietylsilyl-trifluormetansulfonat, t-butyldimetylsilyl-trifluormetansulfonat, t-butyldifenylsilyl-trifluormetansulfonat eller 2,4,6-tri(t-butyl-fenoksy)dimetylsilyl-trifluormetansulfonat. Gunstige resultater er blitt oppnådd under anvendelse av t-butyldimetylsilyl-trifluormetansulfonat. P vil således være triorganosilylresten av det særlige triorganosilyl-triflatsilyleringsmiddel, som anvendes.
Egnede organiske aminbaser omfatter diisopropyletylamin, DBU (1,8-diazabicyclo[5,4,0]undec-7-en), DBN (1,5-diaza-bicyclo[4,3,0]non-5-en), men spesielt foretrekkes tri(Cl-4)-alkylaminer, såsom trimetylamin, trietylamin, tributylamin og tripropylamin. Det har imidlertid vist seg, at en sterkere base i noen tilfeller kan være nødvendig for å utføre omsetningen i trinn (A).
Den organiske base og triorganosilyl-riflatsilylerings-midlet er vanligvis tilstede i et ca. 2-folds molart overskudd i forhold til tioesteren (VI), idet basen er tilstede i et lite overskudd i forhold triorganosilyl-triflatsilylerings-midlet. Reaksjonstider varierer vanligvis fra ca. 1 time til ca. 5 timer, men vanligvis oppnåes et maksimalt utbytte i løpet av ca. 3 timer. Omsetningen utføres fortrinnsvis under en inert atmosfære.
I trinn (B) omsettes silylenoleteren (VII) med en azetidinon (VIII) substituert i 4-stillingen, hvorved det ble oppnådd mellomprodukt (IX). Omsetningen utføres i nærvær av en Lewissyrekatalysator og et løsningsmiddel, som er inert i nærvær av Lewissyrekatalysatoren, og fortrinnsvis under en inert atmosfære.
Egnede inerte løsningsmidler, som nevnt ovenfor, er fortrinnsvis tørre, og utgjør vanligvis ca. 10% av det samlete volum av reaksjonsblandingen. Det har vist seg, at diklormetan gir tilfredsstillende resultater.
Egnede Lewissyrekatalysatorer omfatter sinkhalogenider, zirconiumhalogenider og bortrifluorid. Det har vist seg at sinkklorid gir tilfredsstillende resultater.
Silylenoleteren (VII) er substituert med en gruppe "-A-R12", hvor A er en usubstituert eller hydroksysubstituert, uforgrenet eller forgrenet C1_1Q-alkylengruppe eller en uforgrenet eller forgrenet C^-^g-alkylengruppe, hvori det inngår et mellomliggende heteroatom valgt blant oksygen, svovel og nitrogen, og R<12> er hydroksy, halogen, C1_4-alkoksy, azido, O-P<3> eller N-P<4>, hvor P<3> er en konvensjonell hydroksybeskyttende gruppe, og P<4> er en konvensjonell aminobeskyttende gruppe.
De 3,4-disubstituerede azetidinon-mellomprodukter, f.eks. slike med formel (VIII) , hvor P<2> er en konvensjonell hydroksybeskyttende gruppe, og L er en konvensjonell fraspaltbar gruppe, er i seg selv kjente, og er nøkkel-mellomprodukter ved fremstillingen av karbapenem- og penem-antibiotika med en (R)-hydroksyetylsubstituent i karbapenem- eller penemkjernens 6-stilling.
Substituenten i 4-stillingen i forbindelsen med formel (VIII) er benevnt "L", og er en fraspaltbar gruppe, som kan erstattes ved nucleofil substituering med silylenoleteren (VII). Slike fraspaltbare grupper omfatter acyloksy (f.eks. acetoksy, propionyloksy eller t-butyryloksy), halogen (f.eks. klor), arylsulfonyl (f.eks. fenylsulfonyl), mesyl og tosyl. "L" er fortrinnsvis acetoksy, idet 4-acetoksyazetidinon er et lett tilgjengelig utgangsmateriale.
Den hydroksybeskyttende gruppe "<p2>" i azetidinon (VIII) og den hydroksybeskyttende gruppe "<p3>" på substituenten "R<12>" i silylenoleteren med formel (VII) kan være like eller forskjellige. "<p2>" og "<p3>" er fortrinnsvis identiske, og mere foretrukket er "P", "P2" og "P3" identiske.
Hydroksybeskyttende grupper, som er kjente i teknikken, er ønskelige, idet de forhindrer bireaksjoner og gir økte ut-bytter i de siste trinn i reaksjonssekvensen. Egnede hydroksybeskyttende grupper kan f.eks. være acylgrupper, såsom benzyloksykarbonyl, benzhydryloksykarbonyl, trityloksykarbonyl, p-nitro-benzyloksykarbonyl og 2,2, 2-trikloretoksykarbonyl, aralkylgrupper, såsom benzyl, benzhydryl, trityl eller p-nitrobenzyl, eller triorganosilylgrupper, såsom tri(C1-g)-alkylsilyl (f.eks. trimetylsilyl, trietylsilyl, triisopropylsilyl, isopropyldimetylsilyl, t-butyldimetylsilyl, metyldiiso-propylsilyl eller metyldi-t-butylsilyl), triarylsilyl (f.eks. trifenylsilyl, tri-p-xylsilyl) eller triaralkylsilyl (f.eks. tribenzylsilyl). Eksempler på disse og andre egnede hydroksybeskyttende grupper og metoder for å danne og fjerne disse er kjente i teknikken, se f.eks. Protective Groups in Organic Svnthesis. T.W. Greene, John Wiley & Sons, New York, 1981, kapitel 2.
Den hydroksybeskyttende gruppe valgt for "P2" og "P<3>" er fortrinnsvis en gruppe, som er fraspaltbar i et senere trinn i reaksjonsprosessen. Voluminøse triorganosilylgrupper, såsom triisopropylsilyl, t-butyldifenylsilyl eller t-butyldimetylsilyl, anvendes fortrinnsvis, idet de gir et vesentlig stereo-kontrollert reduksjonstrinn. Slike grupper er lett fraspaltbare under milde betingelser, f.eks. ved behandling med metanolisk HC1 eller med fluoridioner (f.eks. tetra-n-butylammoniumfluorid/tetrahydrofuran) , som bevarer den sensitive £>-
lactamkjerne.
Omsetningen i trinn (C) utføres fortrinnsvis i en inert atmosfære og ved en temperatur fra ca. -30 °C til værelsestemperatur. Reaktantene tilsettes fortrinnsvis under avkjø-ling, ca. -15°C til ca. +5°C, og de omsettes ved ca. 0-5°C, og oppvarmes deretter, om ønsket, gradvis til værelsestemperatur. Reaksjonsblandingen kan om ønsket omrøres i inntil 30 timer, hvorved det ble oppnådd maksimalt utbytte.
B-Isomeren av det resulterende mellomprodukt (IX) kan separeres fra den tilsvarende a-isomer ved konvensjonell kromatografi eller HPLC, eller fortrinnsvis ved krystallisasjon. Alternativt kan JJ-isomeren separeres fra a-isomeren ved forsepning av mellomprodukt (IX), som beskrevet nedenfor i trinn (D), hvilket gir den tilsvarende karboksylsyre (IVa), idet ii-isomeren fortrinnsvis utkrystalliserer, når fi/cc-forholdet er ca. 2/1 eller mer.
I trinn (D) forsåpes forbindelsen med formel (IX), hvorved det ble oppnådd den tilsvarende karboksylsyre (IVa). Forsåpning er kjent i teknikken og kan utføres på følgende måte. Forbindelsen med formel (IX) kan først løses i et løsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran eller vandig tetra-hydrofuran, og deretter tilsettes under avkjøling en overskytende mengde av en uorganisk base, såsom natriumhydroksid. Hydrogenperoksid kan likeledes tilsettes. Det foretrekkes at hydrogenperoksid tilsettes forsåpningsreaksjonsblandingen, og mere foretrukket kan det tilsettes før tilsetning av den uorganiske base. Omsetningen er vanligvis avsluttet i løpet av 1-2 timer ved ca. 0°C til værelsestemperatur, og karboksyl-syren (IVa) fremstilles ved etterfølgende forsuring med en uorganisk syre, såsom saltsyre.
Fremgangsmåten til fremstilling av diazo-mellomprodukter med formel (Illa) kan hensiktsmessig oppsummeres i reaksjonsskjerna 2. I korthet aktiveres karboksylsyredelen i azetidinon (IVa) i denne reaksjonssekvens og fortrenges med et monokar-boksybeskyttet magnesiummalonat i trinn (E), hvorved det ble oppnådd Ji-esteren (X), som derpå diazoteres i trinn (F), hvor-ved det ble oppnådd det tilsvarende diazo-mellomprodukt Illa.
Reaksionsskierna 2
Idet det henvises til reaksjonsskjerna 2 utføres omsetningen av syren (IVa) til ketoesteren (X) i trinn (E) hensiktsmessig i en totrinnsprosess. Karboksylsyregruppen aktiveres først med en konvensjonell, i teknikken kjent karboksyaktiverende gruppe, fortrinnsvis med karbonyIdiimid-azol i et inert løsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran, dimetoksyetan, acetonitril, benzen og toluen, og fortrinnsvis i benzen eller toluen eller en blanding av acetonitrilbenzen. Reaksjonstemperaturen kan ligge i intervallet fra ca. -15°C til ca. 70°C, fortrinnsvis ca. 0-20°C. Det aktiverte karboksy-mellomprodukt kan isoleres, men det foretrekkes, at mellompro-duktet i annet trinn omsettes in situ under en inert atmosfære med magnesiummalonat, som er blitt tørket før anvendelse, såsom ved azeotrop fjerning av eventuelt resterende vann med en Dean-Stark-felle. Magnesiummalonatet er fortrinnsvis et monoalkyl- eller monoarylmalonat, såsom monoallyl- eller substituert allylmalonat, monobenzyl-, 2-nitrobenzyl-, 4-nitro-benzyl-, 4-metoksybenzyl- eller 2,4-dimetoksybenzylmalonat.
Omsetningen av et magnesiummalonat med den aktiverende karboksygruppe utføres i et inert organisk løsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran, dioksan, diklormetan, acetonitril, benzen eller toluen, fortrinnsvis benzen eller acetonitril, ved en temperatur fra ca. 0-80°C. Omsetningen forløper fortrinnsvis ved ca. 60°C, inntil omsetningen er gjennomført, noe
som vanligvis er tilfellet etter ca. 18 timer. Magnesiummalonatet er fortrinnsvis til stede i et overskudd på ca. 1,1 til ca. 3,0 mol ekvivalent pr. ekvivalent syre (IVa). Overskuddet av magnesiummalonat kan tilsettes reaksjonsblandingen på én
gang, eller om ønsket tilsettes trinnvis, inntil omsetningen er gjennomført og maksimalt utbytte er blitt oppnådd.
I trinn (F) diazoteres ketoesteren (X), hvorved det ble oppnådd det tilsvarende diazomellomprodukt (Illa) . Diazotering er kjent i teknikken og kan utføres i et inert løsningsmiddel, såsom acetonitril, diklormetan, toluen, benzen eller liknende. Omsetningen utføres fortrinnsvis i acetonitril med et azid, såsom 4-karboksybenzensulfonylazid, p-toluensulfonylazid, metansulfonylazid eller liknende. Omsetningen utføres i nærvær av en base, såsom trietylamin, dietylamin, pyridin, lutidin eller liknende, i ca. 1-30 timer ved en temperatur på ca. 0-50°C.
I reaksjonsskjema 3 har R<12>, A, P^ og P<2> den ovenfor anførte betydning. Diazoforbindelsen med formel (Illa) ring-sluttes vanligvis direkte i trinn (G) til den bicycliske keton med formel (Ila). Alternativt avbeskyttes diazoforbindelsen med formel (Illa) om ønsket i 6-stillingen i trinn (H) for ringslutning til den bicycliske keton med formel (Ilb).
Reaks ionssk- iema 3
Ringslutning av diazoforbindelsen med formel (Illa) til den bicycliske forbindelse med formel (Ila) i trinn (G) kan utføres i et inert organisk løsningsmiddel, såsom tetrahydro-furan, etylacetat, benzen, toluen, heksan, cycloheksan eller liknende, ved en temperatur fra værelsestemperatur til ca. 110°C i løpet av 15 minutter til ca. 5 timer i nærvær av en katalysator, såsom bis(acetylacetonat)-Cu(II), kobbersulfat, kobberpulver, rhodiumacetat [Rh2(0Ac)4], rhodium(II)oetanoat,
(Pd(OAc)2)/ Pb(OAc)4 eller liknende, fortrinnsvis rhodium (II)-acetat eller -octanoat. Alternativt kan ringslutningen utføres ved bestråling av forbindelsen med formel (Illa) med en lys-kilde gjennom et Pyrex,-filter (bølgelengde større enn 300 nm) i et løsningsmiddel, såsom benzen, dietyleter eller liknende, ved en temperatur fra ca. 0°C til værelsestemperatur i 30 minutter til ca. 2 timer.
I en alternativ reaksjonsvei fjernes P<2> i diazo-forbindelsen med formel (Illa), hvor P2 fortrinnsvis er en trior-ganosilylbeskyttende gruppe, og særlig en t-butyldimetyl-silylgruppe, i trinn (H) ved å underkaste forbindelsen med formel (Illa) syrehydrolyse i et løsningsmiddel, såsom aceto-nitril, metanol, etanol, tetrahydrofuran, dioksan eller liknende, i nærvær av en syre, såsom saltsyre, svovelsyre eller eddiksyre, og fortrinnsvis med ca. 3 ekvivalenter IN vandig saltsyre ved ca. -10°C til ca. 30°C. Omsetningen utføres fortrinnsvis ved ca. 0°C til værelsestemperatur i ca. 6-18 timer, fortrinnsvis ved værelsestemperatur i 18 timer. Der-etter underkastes diazoforbindelsen med formel (Illb) ring-slutningsbetingelser i trinn (I), som er identiske med ovennevnte betingelser i trinn (G), hvorved det ble oppnådd den bicycliske keton med formel (Ilb).
Forbindelsene med formel (Ia), hvor A, B, R<3>, R<4> og R<12 >har de ovenfor anførte betydninger, kan fremstilles ut fra de bicycliske ketoner med formel (Ila) eller (Ilb) via reaksjons-sekvensene vist i reaksjonsskjerna 4. Det vil være åpenbart for fagmannen, at begge reaksjonsveier er egnede til fremstilling av forbindelser med formel (Ia). Ikke desto mindre vil valget av reaksjonsvei avhenge av det anvendte utgangsmateriale, såsom forbindelser med formel (Ila) eller (Ilb), og definisjonen av substituentene A, B, R<3> og R^<2>. Således utføres trinn (J) og trinn (K) i nærvær av og trinn (J') og trinn (K') i fravær av en hydroksybeskyttende gruppe på substituenten i karbapenemkjernens 6-stilling.
Reaksionsskiema 4
Til utdypning av fremgangsmåtene i reaksjonsskjerna 4 illustrerer trinn (J) og (J') acyleringen eller aktiveringen av ketoesterne (Ila) og (Ilb). Omsetningen i trinn (J) og (J') er velkjente i teknikken og kan utføres med passende acyleringsmidler for å tilveiebringe en fraspaltbar gruppe L<1>, som er egnet for fortrengningsreaksjonen i trinn (K) og (K').
Passende acyleringsmidler for å frembringe L<1> kan omfatte syreanhydrider, såsom eddiksyreanhydrid, metansulfonsyreanhydrid, p-toluensulfonsyreanhydrid, p-nitrofenylsulfon-syreanhydrid, 2,4,6-triisopropylfenylsulfonsyreanhydrid, trifluormetan-sulf onsyreanhydrid eller liknende, eller syrehalogenider, såsom acetylklorid, propionylklorid, dietylklorfosfat, difenylklorfosfat, toluensulfonylklorid, p-bromfenylsulfonyl-klorid eller liknende, eller andre midler, som tilveiebringer en fraspaltbar gruppe L<1> ved konvensjonelle metoder og som er kjente i teknikken. Acyleringen utføres fordelaktig med difenylklorfosfat, hvorved det ble oppnådd den fraspaltbare difenylfosphonyloksygruppe i 2-stillingen i mellomproduktene (XI) og (XII).
Acyleringsreaksjonen i trinn (J) eller (J') utføres typisk i et inert organisk løsningsmiddel, såsom metylenklorid, acetonitril, dimetylformamid, tetrahydrofuran eller liknende, i nærvær av en base, såsom diisopropyletylamin, trietylamin, 4-dimetylaminopyridin, imidazol, lutidin, N-metylmorpholin, N-metylpiperidin, 1,8-diazobicyclo[5,4,0]-undec-7-en, 1,5-diazabicyclo[4,3,0]non-5-en eller liknende, ved en temperatur fra ca. -20°C til 40°C i løpet av ca. 0,5-18 timer og fortrinnsvis 1-3 timer, ved 0°C til værelsestemperatur. Mellomproduktene (XI) og (XII) kan om ønsket isoleres, men anvendes med fordel i neste trinn uten isolering eller opprenskning.
Mellomproduktene med formel (XI) og (XII) omdannes der-etter i trinn (K) og (K') til mellomproduktene (XIII) henholdsvis (XIV) ved en konvensjonell fortrengningsreaksjon.
Ved analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan mellomproduktene med formel (XI) eller (XII) omsettes med minst én ekvimolær mengde av et merkaptanreagens med formelen
hvor B og R<3> har den ovenfor anførte betydning, i et inert organisk løsningsmiddel, såsom metylenklorid, dioksan, tetrahydrofuran, acetonitril, dimetylformamid, dimetylsul-foksid, heksametylenfosforamid eller liknende og fortrinnsvis i nærvær av en base, såsom diisopropyletylamin, trietylamin, 4-dimetylaminopyridin, natriumhydrogenkarbonat, kaliumkarbonat eller liknende. Temperaturen er ikke kritisk for fortrengningen, men omsetningen utføres fordelaktig ved en temperatur fra ca. -40°C til 30°C i fra 30 minutter til 24 timer. Mest hensiktsmessig utføres omsetningen ved ca. 0-5°C i 2-4 timer. Ved fortrengningsreaksjonen i trinn (K') kan en ca. ekvimolær mengde trimetylsilylklorid eventuelt tilsettes reaksjonsblandingen for tilsetning av merkaptanreagenset til midlertidig beskyttelse av l<R->hydroksyetylgruppen. Etter at fortrengningen er gjennomført, kan trimetylsilylbeskyttelses-gruppen lett fjernes som beskrevet i det foreliggende i forbindelse med fjernelse av P<2->beskyttelses-gruppen, fortrinnsvis ved behandling med eddiksyre i tetra-hydrofuran, tetrahydro-furanvann eller liknende ved ca. 0°C til værelsestemperatur i ca. 1-4 timer.
I trinn (L) avbeskyttes forbindelsen med formel (XIII) til fremstilling av forbindelsen med formel (XIV). Avbeskyttelsen utføres på konvensjonell måte og, når den hydroksybeskyttende gruppe er en triorganosilylgruppe, såsom t-butyldimetylsilyl, utføres avbeskyttelsen fortrinnsvis i nærvær av et tetra(lavere)alkylammoniumfluorid, såsom tetrabutylammoniumfluorid. Selv om reaksjonsbetingelsene ikke er kritiske, utføres omsetningen fordelaktig med ca. tre ekvivalenter av et ammoniumfluoridderivat og eventuelt i nærvær av ca. seks ekvivalenter iseddiksyre, i et inert organisk løsningsmiddel, såsom metanol, etanol, dioksan, acetonitril, diklormetan, tetrahydrofuran eller liknende eller en blanding derav. Avbeskyttelsen utføres vanligvis ved en temperatur fra ca. -40°C til 30°C, fortrinnsvis ved -15°C til 0°C i ca. 4 timer til 1 uke, fortrinnsvis ca. 3 dager.
Det vil være åpenbart for fagmannen at det avsluttende deblokeringstrinn, trinn (M), naturligvis vil variere i avhengighet av de beskyttende grupper, som er til stede som P<1>, og på substituentene R12 og R<3>. Deblokeringstrinnet (M) for å fjerne den karboksybeskyttende gruppe P<1> i mellomproduktet med formel (XIV) til fremstilling av forbindelser med formel (Ia), hvor R<4> er hydrogen eller en ikke-toksisk, farma-søytisk akseptabel kation, såsom natrium eller kalium, utføres ved konvensjonelle metoder, såsom hydrolyse, kjemisk reduksjon eller hydrogenering. Når det anvendes en beskyttende gruppe, såsom p-nitrobenzyl, som kan fjernes ved katalytisk hydrogenering, kan mellompro-duktet med formel (XIV) i et egnet løsningsmiddel, såsom vann, dioksan, tetrahydro-furan, etanol, isopropanol, n-butanol eller blandinger derav, inneholdende en bufferløsning, såsom fosfatbuffer, dikalium-hydrogenfosfat, natriumbikarbonat, acetatbuffer eller liknende, behandles under et hydrogentrykk på 1 til ca. 4 atmosfærer i nærvær av en hydrogeneringskata-lysator, såsom palladium-på-karbon, palladiumhydroksid-på-karbon, platinoksid, palladium-på-bariumsulfat, Raney-nikkel og liknende, ved en temperatur fra 0-50°C i ca. 15 minutter til 4 timer.
Når den karboksybeskyttende gruppe P^ er en allylgruppe kan den fjernes med en katalysator omfattende en palladium-forbindelse og fortrinnsvis et palladium-ligandkompleks, såsom tetrakis(trifenylfosfin)palladium[0],bis(dibenzylidenaceton)-palladium[0], di[1,2-bis(difenylfosfino)etan]palladium[0], tetrakis(trifenylfosphit)palladium[0] eller lignende. Reduksjonen utføres fortrinnsvis i nærvær av et allyl-syrefjernende middel, f.eks. en amin, såsom N-metylanilin eller morfolin, en aktivert metylenforbindelse, såsom benzoylacetat eller 2-metyl-3-oksovaleriansyre, en alkansyre eller et salt derav, såsom natriumacetat, natrium-2-etylheksanoat eller liknende.
Omsetningen utføres vanligvis i et ikke-reduserende løsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran, vann, etanol, dioksan, acetonitril, diklormetan, etylacetat eller blandinger derav ved en temperatur fra 0-50°C i ca. 15 minutter til 4 timer. Den katalytiske reduksjon utføres fordelaktig i etylacetat eller diklormetan ved ca. 0°C i nærvær avtetrakis(trifenylfosfin)palladium[0] inneholdende ca. 1,1 molekvivalent kaliumetyl-2-heksanoat. På liknende måte kan andre konvensjonelle karboksybeskyttende grupper fjernes ved i teknikken kjente metoder.
Som nevnt ovenfor kan forbindelsene med formel (XIV) eventuelt inneholde ytterligere hydroksybeskyttende grupper 0-P<3> og/eller aminobeskyttende grupper N-P<4>, hvor P<3> og P<4> har den ovenfor anførte betydning. Reaksjonstrinn (M) kan således, om ønsket, omfatte en ytterligere deblokkeringsprosedyre for å fjerne de beskyttende grupper. Ved reaksjonen kan anvendes konvensjonelle metoder, som i og for seg er kjente for å fjerne en beskyttende gruppe, såsom hydrolyse, reduksjon eller liknende, og reaksjonen omfatter de belyste metoder for å fjerne den karboksybeskyttende gruppe P^ og den hydroksybeskyttende gruppe P<2>.
I det spesielle tilfellet, hvor R<12> er azido i forbindelsen med formel (XIV), kan det være ønskelig å redusere azido til en amin under deblokkeringsprosedyren i trinn (M). Reduksjonen kan utføres i en vandig eller bufferinnstilt vandig løsning ved ca. pH 6-9 og fortrinnsvis i en vandig løsning ved ca. -10°C til 30°C, fortrinnsvis ved ca. 0-5°C under et hydrogentrykk på 1-4 atmosfærer i nærvær av en hydrogeneringskatalysator, såsom 30% palladium-på-Celite, 10% palladium-på-karbon, palladiumhydroksid-på-karbon, platinoksid, 5% palladium-på-bariumsulfat, 5% palladium-på-aluminiumoksid eller liknende, fortrinnsvis på 5% palladium-på-bariumsulfat og 5% palladium-på-aluminiumoksid, i ca. 30 minutter til 3 timer, inntil reduksjonen er avsluttet.
Det vil være åpenbart for fagmannen at deblokkeringen av de karboksy- og/eller hydroksy- og/eller aminobeskyttende grupper i trinn (M) kan utføres samtidig under omsetningen. Alternativt eller om ønsket kan de beskyttende grupper selektivt fjernes trinnvis. Ikke desto mindre vil det være åpenbart for fagmannen, at rekkefølgen for å fjerne de beskyttende grupper vil være avhengig av arten og valget av de beskyttende grupper, og om det er ønskelig å fremstille et mellomprodukt med formel (XIV) eller formel (Ia) inneholdende noen av de beskyttende grupper, såsom P<1>, P<2>, 0-P<3> og N-P<4>, til fremstilling av ytterligere forbindelser med formel (I).
Ved en annen utførelsesform av analogifremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse kan forbindelser med formel (I) fremstilles ut fra hittil ukjente mellomprodukter med formel (XVI)
hvor A, B, R3 og R<11> har den ovenfor anførte betydning, P<1> er en konvensjonell, lett fraspaltbar karboksybeskyttende gruppe valgt blant CH-CH=CH2 eller p-nitrobenzyl og L<2> er trifluormetansulfonyl.
Forbindelsene med formel (XVI) anvendes til fremstilling av forbindelser med formel (I) og som eksempel er fremgangs-måten til fremstilling av én av de mere foretrukne utførelses-former av formel (I) belyst i reaksjonsskjerna 5 i forbindelse med fremstillingen av forbindelser med formel (Ib). I korthet avbeskyttes det beskyttede mellomprodukt med formel (XIII), hvor R<12> er 0-P<3>, selektivt i trinn (N) til alkoholen med formel (XV). Alkoholgruppen i 4-stillingen i karbapenem (XV) omdannes i trinn (0) til forbindelser med. formel (XVIa) med en konvensjonell fraspaltbar gruppe "L^", som lar seg underkaste nucleofil fortrengning i trinn (P) for å fremstille forbindelsene med formel (XVIII). Deblokkering av de beskyttede grupper i trinn (L+M) vil gi forbindelsene med formel (Ib), hvor A, B, R<3> og R<4> har den ovenfor anførte betydning, og R<13 >er en nucleofil rest, hvor R-LJ kan være
azido, -NR<5>R<6>,
eller nitril, hvor R^, R^, Y og Z har
den ovenfor anførte betydning.
Reaksionsskiema 5
I reaksjonsskjerna 5 illustrerer trinn (N) fjerningen av en hydroksybeskyttende gruppe fra mellomproduktet med formel (XIII), hvor R<12> er 0-P<3>, hvor P<3> er en konvensjonell hydroksybeskyttende gruppe valgt blant tert-butyldimetylsilyl eller trimetylsilyl. Den beskyttende gruppe P<3> er fortrinnsvis t-butyldimetylsilyl. Omsetningen i trinn (N) utføres i et inert organisk løsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran, dioksan, etyl-acetat, dimetoksyetan, metylenklorid, karbontetraklorid, toluen, cycloheksan eller liknende, med ca. 1-10 molekvi-valenter tetra(lavere)alkylfluorid, bortrifluorid eller kaliumfluorid og eventuelt inneholdende ca. 1-20 ekvimolære mengder av en organisk lavere alkylsyre, aromatisk syre eller heteroaromatisk syre ved en temperatur fra ca. -40°C til 40°C i ca. 1-60 timer. Omsetningen utføres fordelaktig i tetra-hydrofuran med ca. 3 ekvivalenter tetrabutylammoniumfluorid i nærvær av ca. 6 ekvivalenter eddiksyre ved en temperatur fra ca. -15°C til 0°C i ca. 18-24 timer.
Trinn (0) illustrerer omsetningen mellom en alkohol (XV) og et egnet acyleringsmiddel eller aktiveringsmiddel for å danne mellomproduktet med formel (XVIa) med en fraspaltbar gruppe "L^", som tilsvarer trifluormetylsulfonyl, som lar seg underkaste nucleofil fortrengning. Egnede acyleringsmidler for trinn (0) kan være de samme midler, som anvendes til fremstilling av den fraspaltbare gruppe "L " i trinn (K) i reaksjonsskjerna 4 eller andre midler, som tilveiebringer en fraspaltbar gruppe ved konven-sjonelle prosedyrer og som er velkjente i teknikken.
Reaksjonen i trinn (0) kan utføres i et inert organisk løsningsmiddel, såsom tetrahydrofuran, dimetoksyetan, dioksan, etylacetat, metylenklorid, kloroform, karbontetraklorid, toluen, benzen, cycloheksan eller liknende, med et acylerings-eller aktiveringsmiddel i nærvær av en ikke-nucleofil base, såsom trietylamin, diisopropyletylamin, 2,6-lutidin, 1,8-diazobicyclo[5,4,0]undec-7-en, 1, 5-diazobicyclo[4,3,0]non-5-en eller liknende, ved en temperatur fra ca. -78°C til værelsestemperatur. Reaksjonen utføres fordelaktig i metylenklorid med ca. 1,2 ekvivalenter trifluormetansulfonsyreanhydrid i nærvær av ca. 1,5-2 ekvivalenter diisopropyletylamin ved ca. -78°C eller i tetrahydrofuran med en blanding av trifenylfosfin og dietylazodikarboksylat ved ca. -40°C.
Fremstillingen av de ønskede forbindelser med formel (XVII) utføres i trinn (P) ved nucleofil fortrenging av den fraspaltbare L<2->gruppe i mellomproduktet (XVIa) med den ønskede nitrogen-, karbon-, oksygen- eller svovelholdige nucleofil R1<3>, hvor R*<3> har den ovenfor anførte betydning. Mellomproduktet med formel (XVIa) omsettes med minst én ekvivalent, og fortrinnsvis en overskytende mengde, av det ønskede nucleofile reagens i et inert organisk løsningsmiddel, såsom metylenklorid, tetrahydrofuran, kloroform, karbontetraklorid, dioksan, etylacetat, diglyme, dimetoksyetan, cycloheksan, toluen eller liknende, ved en temperatur fra -78°C til ca. 30°C, fortrinnsvis fra ca. -15°C til 5°C, inntil omsetningen er ferdig, noe som overvåkes ved konvensjonelle påvis-ningsmetoder, såsom tyntlagskromatografi og høytrykksvæske-kromatografi.
Fremstillingen av den ønskede karbapenem med formel (Ib) utføres ved deblokkering av de beskyttede grupper i mellomproduktet (XVII) på konvensjonell måte. Passende deblokkeringsmetoder for hydroksy-, karboksy- og aminobeskyttende grupper er som tidligere beskrevet ovenfor under trinn (L) og
(M) .
I en annen reaksjonsvei kan forbindelsene med formel (Ic) fremstilles ut fra forbindelsene med formel (XVIII) i trinn (Q) som illustrert i reaks jonssk jerna 6, hvor A, B, R<3>, R<4> og P<2> har den ovenfor anførte betydning, R^ er hydrogen eller
<C>1_4-alkyl, og R17 er C1_4~alkyl eller Reaksionsskiema 6
Derivatiseringen av aminogruppen med formel (XVIII) eller salter derav utføres vanligvis i trinn (Q) med passende imidoyleringsmidler, acyleringsmidler eller alkyleringsmidler. Omsetningen utføres eventuelt med forbindelser med formel (XVIII), hvor P<2> er en konvensjonell hydroksybeskyttende gruppe, og R<4> er en konvensjonell karboksybeskyttende gruppe. Omsetningen utføres fordelaktig uten en hydroksybeskyttende gruppe (dvs. P<2> er hydrogen), og R<4> er hydrogen eller et salt derav.
Egnede imidoyleringsmidler omfatter formimidater og lavere alkylimidater, såsom metylformimidat, etylformimidat, benzylformimidat, metylacetimidat, etylpropionimidat, etyl-butyrimidat, etylpentanimidat, og lavere alkanimidoyl-halogenider, såsom formimidoylklorid, acetimidoylklorid, propionimidoylklorid, butyrimidoylklorid eller liknende. Omsetningen utføres vanligvis i et konvensjonelt løsnings-middel, såsom tetrahydrofuran, dioksan, metanol, etanol, vann, bufferløsning eller en blanding derav ved en temperatur fra -20°C til 40°C i ca. 10 minutter til 18 timer. Omsetningen utføres fordelaktig i en vandig f osf atbuf ferløsning ved svak basisk pH i ca. 10-30 minutter ved ca. 5°C.
Egnede acyleringsmidler til fremstilling av forbindelser med formel (Ic) omfatter syrehalogenider, syreanhydrider, blandete anhydrider, aktiverte estere, tiolestere og liknende, såsom acetylklorid, azidoacetylklorid, eddiksyreanhydrid, metylisocyanat, etylisocyanat, N,N- dimetylkarbamoylklorid, aktiverte estere av N-beskyttede aminosyrer, aminoiminometan-sulfonsyre, metylaminoiminometansulfonsyre og liknende. Acyleringsreaksjonen kan utføres i forskellige løsningsmiddelsyste-mer, herunder løsningsmidler, såsom tetrahydrofuran, dioksan, acetonitril, etanol, metanol, dimetylformamid, vann og liknende og blandinger derav. Det vil være åpenbart for fagmannen at omsetningen, om nødvendig, kan utføres i nærvær av en base eller en syreakseptor, såsom magnesiumoksid, kaliurakarbo-nat, kaliumbikarbonat, pyridin, lutidin, 2,6-lutidin, 4-dimetylaminopyridin, trietylamin, N,N-diisopropyletylamin og liknende. Omsetningen utføres fordelaktig i en vandig organisk blanding eller vandig bufferløsning ved en temperatur fra
-20°C til 50°C i 15 minutter til 18 timer.
Egnede alkyleringsmidler er kjente i teknikken og omfatter lavere alkyl- eller substituerede(lavere)alkyl-halogeni-der, lavere alkyl- eller trifluormetansulfonater, formaldehyd, lavere alkyl- eller substituerede(lavere)alkyl-aldehyder, aromatiske eller heteroaromatiske aldehyder, heterocycloalkyl-eller substituerede heterocycloalkyl-aldehyder, hvilke aldehyder kan omsettes i nærvær av reduksjonsmidler, såsom natriumcyanoborhydrid, natriumborhydrid og liknende. Omsetningen kan utføres i en rekke forskjellige løsningsmiddelsystemer, herunder tetrahydrofuran, dioksan, acetonitril, etanol, metanol, dimetylformamid, vann og liknende og blandinger derav ved en temperatur fra ca. -20°C til 50°C i 15 minutter til 20 timer. Når alkyleringsmidlet er formaldehyd utføres omsetningen fortrinnsvis med 37% formaldehyd i nærvær av natriumcyanobor-hydrid i vandig acetonitril eller en vandig bufferløsning under svakt sure betingelser ved ca. 0-5°C i 15 minutter til 10 timer.
Som nevnt ovenfor kan forbindelsene med formel (XVIII) eventuelt inneholde en hydroksybeskyttende gruppe og/eller en karboksybeskyttende gruppe. Reaksjonsskjerna 6 kan således omfatte ytterligere deblokkeringer for å fjerne de beskyttende grupper. Egnede deblokkeringsmetoder kan utføres på i og for seg kjent måte eller på de i trinn (L) og (M) beskrevne måter for å fjerne beskyttende grupper.
Fremstillingen av forbindelser med formel (I) ved fremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse er basert på flere tilgjengelige J3-lactam-mellomprodukter til fremstillingen av karbapenemforbindelser i rekken av tienamyciner. Ovennevnte reaksjonsskjemaer illustrerer eksempelvis fremstillingen av forbindelser med formel (I), hvor R<1> er en 1-hydroksyetylgruppe i fi-lactam-ringstrukturens 6-stilling.
Til belysning av den kraftige antibakterielle aktivitet og den overlegne kjemiske og biologiske stabilitet av karba-penemerne, som fremstilles ved analogifremgangsmåten ifølge den foreliggende oppfinnelse, anføres i tabell I et represen-tativt antall eksempler på forbindelser fremstilt ifølge den foreliggende oppfinnelse med in vitro aktiviteter (MIC), kjemisk stabilitet (T 1/2) og biologisk stabilitet (DHPI).
In vitro antibakteriell aktivitet ble bestemt ved dobbeltseriefortynninger av forbindelsen i Mueller-Hinton-agar og inokulasjon av agaroverflaten eller næringsmediet med en hensiktsmessig fortynnet 18-24 timer gammel næringsmedium-kultur. Agarplater og glass inkuberedes ved 37°C i 17 timer, og den laveste konsentrasjon, som forårsaket inhibering av synlig vekst betraktes som den minimale inhibitoriske konsentrasjon (MIC).
Kjemisk stabilitet i vandig løsning ved pH 7,4 og 37°C noteres som halveringstid (T 1/2) i timer. Disse verdier ble bestemt ved metoden ifølge Woodward et al., J. Am. Chem. Soc., 102, 2042 (1980) .
Biologisk stabilitet overfor nedbrytning med renal dehydropeptidase I [renal dipeptidase (EC 3.4.13.11)] ble bestemt og de anførte verdier er angitt i relasjon til verdi-ene iakttatt med imipenem. Ren renal svinedipeptidase ble fremstilt som beskrevet av Hitchcock et al., J. Anal. Biochem.. 163, 219 (1987), mens renal humandipeptidase ble fremstilt som beskrevet av Campbell e_t al., J. Biol. Chem., 259, 14586-14590 (1984).
Løsninger av 0,10 mM karbapenem i 50 mM buffer 4-morpholinpropansulfonsyre, pH 7,1, ble fersk fremstilt. UV/vis spekteret for en 2,5 ml aliquot ble målt, og deretter ble 0,025 ml IM NHzOH tilsatt til nedbrydning av fi-lactambin-dingen. Spekteret ble målt igjen etter 30 minutter ved 25°C for svine-dipeptidase og ved 37°C for human-dipeptidase og igjen med intervaller på 5-10 minutter, inntil ytterligere fall i absorbans ikke kunne iakttas. Forskjellen i spektrum mellom intakt og nedbrutt fi-lactam ble anvendt til beregning av Xmaks og e. En lignende aliquot karbapenemløsning ble inkuberedet ved 25°C for svine-dipeptidase og ved 37°C for human-dipeptidase, og endringshastigheten i absorbans ved Åmaks ble bestemt. Deretter ble enzym tilsatt, hvorved det ble oppnådd en hastighet på minst IO""4 absorbansenheter pr. sekund. Hastigheten av enzymatisk hydrolyse ble korrigert for spontan hydrolyse og konvertert deretter med E til nmol min~^
(ml enzym)Alle hastigheter er angitt i forhold til den iakttatte for imipenem.
Som i tilfellet med andre B-lactam-antibiotika kan forbindelser med den generelle formel (I) omdannes ved kjente metoder til farmasøytisk akseptable salter, som virknings-messig praktisk talt er ekvivalente med forbindelser, som ikke er på saltform. Således kan man f.eks. løse en forbindelse med formel (I), hvor R<4> er en anionisk ladning, i et egnet inert løsningsmiddel og deretter tilsette en ekvivalent av en farma-søytisk akseptabel syre. Det ønskede syreaddisjonssalt kan utvinnes ved konvensjonelle metoder, f.eks. løsningsmiddel-presipitering, lyofilisering, etc. Når andre basiske eller syrefunksjonelle grupper er til stede i forbindelsen med formel (I) kan farmasøytisk akseptable baseaddisjonssalt og syreaddisjonssalt tilsvarende fremstilles ved hjelp av kjente metoder.
En forbindelse med formel (I) , hvor R<4> er hydrogen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, kan også omdannes ved konvensjonelle metoder til en tilsvarende forbindelse. En forbindelse med formel (I), hvor R<4> er en vanlig karboksybeskyttende gruppe, kan ved konvensjonelle metoder omdannes til den tilsvarende forbindelse, hvor R<4> er hydrogen, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
De hittil ukjente karbapenemderivater med den allmenne formel (I), hvor R<4> er hydrogen, eller farmasøytisk akseptabel salt derav, er kraftige antibiotika, som er aktive overfor
forskellige gram-positive og gram-negative bakterier og de kan f.eks. anvendes som additiver i dyrefor til fremming av vekst, som konserveringsmidler i næringsmidler, som baktericider ved industriell anvendelse, f.eks. i vannbasert maling og i spill-vann fra papirmøller til inhibering av veksten av skadelige
bakterier, og som desinfeksjonsmidler til ødeleggelse eller inhibering av veksten av skadelige bakterier på medisinsk og dentalt utstyr. De er imidlertid særlig nyttige ved behandl-ingen av infektiøse sykdommer i mennesker og dyr forårsaket av gram-positive eller gram-negative bakterier.
De farmasøytisk aktive forbindelser, som fremstilles ved analogifremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, kan anvendes alene eller formuleres som farmasøytiske preparater, som utover den aktive karbapenemingrediens, inneholder en farmasøytisk akseptabel bærer eller diluent. Forbindelsene kan administreres på forskjellig måte, hovedsaklig oralt, topisk eller parenteralt (intravenøs eller intramuskulær injeksjon). De farma-søytiske preparater kan være på fast form, såsom kapsler, tabletter, pulver, etc, eller på flytende form, såsom løs-ninger, suspensjoner eller emulsjoner. Preparater til injeksjon, som er den foretrukne administreringsvei, kan være fremstilt i enhetsdoseform i ampuller eller i multidosebehold-ere og kan inneholde formuleringsmidler, såsom suspenderings-, stabiliserings- og dispergeringsmidler. Preparatene kan være på bruksferdig form eller i pulverform til rekonstituering på administreringstidspunktet med et egnet vehikel, såsom sterilt vann.
Den dose som skal administreres, avhenger i stor utstrek-ning av den spesielle forbindelse, som anvendes, det spesielle preparat, som formuleres, administreringsmåten, arten av og tilstanden hos verten og det spesielle sted og den spesielle organisme, som skal behandles. Utvelgelse av den spesielt foretrukne dose og administreringsmåte overlates til den be-handlende leges skjønn. Vanligvis kan forbindelsene imidlertid administreres parenteralt eller oralt til pattedyrsverter i en mengde fra ca. 5 til 200 mg/kg/dag. Administrering skjer vanligvis i oppdelte doser, f.eks. 3-4 ganger daglig.
Oppfinnelsen belyses i det følgende med eksempler. De foreliggende anvendte forkortelser er konvensjonelle forkortelser, som er kjent av fagmannen. Noen er beskrevet nedenfor.
Forkortelser
TBDMS : tert-butyldimetylsilyl
TBDMS-OTf : tert-butyldimetylsilyl trifluormetansulfonat pet-eter : petroluemseter (kokepunkt 20-60°C) TsN3(TosNo) : p-toluensulfonylazid
DPCP : ClPO(OPh)2 eller difenylklorfosfat
DIPEA : N,N-diisopropyletylamin
TMSC1 : trimetylsilylklorid (klortrimetylsilan)
DMAP : 4-N,N-dimetylaminopyridin
TsNH2 : p-toluensulfonamid
TBAF : tetrabutylammoniumfluorid
DEAD : dietylazodikarboksylat
HOBT : 1-hydroksybenzotriazol,hydrat
DCC : 1,3-dicycloheksylkarbodiimid
HN3 : hydrazoesyre
I de følgende eksempler er alle temperaturer angitt i °C. Smeltepunkter ble bestemt på et Gallenkamp kapillar smelte-punktsapparat og kokepunkter ble målt ved spesifikke trykk (mm Hg) og begge temperaturangivelser er ukorrigerte. Proton-kjernemagnetisk resonanspektrum(<1>H-NMR) ble opptatt på et Bruker AC-200. Alle spekter ble bestemt i de anførte løs-ningsmidler og kjemiske skift er angitt i 8 enheter nedstrøms for den interne standard tetrametylsilan (TMS) og interproton koblingskonstanter er angitt i Hertz (Hz). Oppsplittings-mønstre er som følger: s, singlet, d, doublet, t, triplet, q, kvartet, m, multiplet, br, bred top, dd, dobbel doublet, bd, bred duplet, dt, dobbel triplet, bs, bred singlet og dq, dobbel kvartet. Infrarøde spektre (IR) ble bestemt på et Perkin Eimer 781 spektrometer fra 4000 cm"<1> til 400 cm"<1>, kalibrert til 1601 cm<-1> absorpsjon med en polystyrenfilm og angitt i resiprokke centimeter (cm<-1>). Relative intensiteter er angitt som følger: s (sterk), m (medium) og w (svak). Optiske rotasjoner [a]25D ble bestemt på et Perkin Eimer 41 polarimeter i de anførte løsningsmidler. Ultrafiolette spektre ble bestemt på et Hewlett Packard 8451A diode-array-spektro-fotometer i det angitte løsningsmiddel og den angitte konsentrasjon.
Analytisk tyntsjiktskromatografi (TLC) ble utført på pre-coatete silicagelplater (60F-254, 0,25 mm) og ble visualisert under anvendelse av UV-lys, joddamp og/eller farging med ett av følgende reagenser: (a) metanolisk fosformolybdensyre (2%) og oppvarming, (b) reagens (a) etterfulgt av 2% coboltsulfat i 5 M H2SO4 og oppvarming. Søylekromatografi, også benevnt hurtigsøylekromatografi, ble utført i en glasskolonne under anvendelse av findelt silicagel (40-63 m på silicagel-H) og ved trykk noe over atmosfærisk trykk med de anførte løsnings-midler. Preparativ tyntlagskromatografi ble utført på pre-coatede silicagelplater (60F- 254,2 mm) og ble visualisert under anvendelse av UV-lys.
Reversfase analytisk tyntsjiktskromatografi ble utført på Analtech pre-coatede reversfase F (250 microns) plater og visualisert under anvendelse av UV-lys eller joddamp.
Reversfase søylekromatografi ble utført på en glasskolonne under anvendelse av "jiBondapak C18" (55-100 m) prep. 500. Høytrykksvæskekromatografi ble utført under anvendelse av en Waters 501 HPLC pumpe, en Varian 2550 UV-detektor og en Varian 4290 integrator. Kolonnespesifikasjonene er som følger: "JiBondapak C^g" pakning, 30 cm lengde, 3,9 mm I.D., partikkel-størrelse 10\ if og den mobile fase er CH3CN/vandig 0,01M K2HP04 ved pH 7,4.
Alle løsningsmiddelavdampninger ble utført under redusert trykk. I det foreliggende betegner uttrykket heksaner en blan-ding av isomere Cg-hydrokarboner, som spesifisert av The American Chemical Society, petroleumseter betegner 30-60°C fraksjoner, og uttrykket "inert" atmosfære er en argon- eller nitrogenatmosfære, med mindre annet er anført.
Eksempel 1
Natrium-( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- fluoretvl)- 6-\ ( l' R) - 1'-hvdroksvetvll- 3- r( pvridin- 2- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo\ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. 4- fluor- r( pvridin- 2- yl) metvltiolbutvrat
Til en kald (isbad) løsning av 5,26 g (4,2 mmol) 2-mercaptometylpyridin og 4,1 ml (50 mmol) pyridin i (50 ml) CH2CI2 ble dråpevis tilsatt 5,23 g (4,2 mmol) 4-fluorbutyrylklorid fremstilt ved fremgangsmåten ifølge F.L. Pattison et al. i J. Org. Chem, 21, 887 (1956). Blandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time, fortynnet med 100 ml etylacetat, vasket med 3 x 100 ml kaldt vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). 9 g rå blanding ble ledet gjennom en 250 g silicagelpute, hvorved det ble oppnådd 7,6 g (85%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2CI2) Umaks: 1690 cm"l (C=0).
lH-NMR (CDCI3) 8: 8,55-8,51 (1H, m, pyridin-H), 7,67-7,58 (1H, m, pyridin-H), 7,35-7,31 (1H, bd, J=7,8 Hz, pyridin-H), 7,2-7,12 (1H, m, pyridin-H), 4,61, 4,58, 4,55, 4,37, 4,34, 4,3 (2H, dt, J=5,8 Hz, J=47,l Hz, CH2-F), 4,27 (2H, s, CH2~S), 2,74 (2H, t, J=7,2 Hz, CH2C=0) og 2,2- 1,92 ppm (2H, m, CH2).
B. Enolsilyleter av 4- fluor- r( pvridin- 2-vl) metvltiolbutvrat
En kald (isbad) løsning av 427 mg (2,00 mmol) 4-fluor—
[(pyridin-2-yl)metyltio]butyrat og 0,6 ml (4 mmol) trietylamin i 10 ml CH2CI2 ble behandlet dråpevis med 0,7 ml (3 mmol) tert-butyldimetylsilyltrifluormetansulfonat. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 5 timer, fortynnet med 50 ml petroleumseter, vasket med 3 x 25 ml iskaldt vann, 25 ml saltvann og tørket (MgS04). Løsningen ble behandlet med nøytralt aktivt kull, hvorved det ble oppnådd 0,68 g (100%) av tittelforbindelsen som en rød olje.
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,56-8,52 (1H, m, aromatisk
H), 7,67- 7,58 (1H, m, aromatisk-H), 7,28-7,23 (1H, m,
aromatisk H), 7,18-7,11 (1H, m, aromatisk-H), 5,02 (0,4 H, t,
J=7,5 Hz, vinylisk H), 4,85 (0,6 H, t, J=7,2 Hz, vinylisk H), 4,40 og 4,16 (d, 2H, dt, J=6,7 Hz, J=47,2 Hz, CH2F), 4,28,
4,05 (0,8 H, dt, J=6,4 Hz, J=47,2 Hz, CH2F), 4,05 (0,8 H, s, CH2-pyridin), 3,98 (1,2 H, s, CH2~pyridin), 2,5-2,2 (2H, m,
CH2), 0,98 og 0,97 (9H, 2s, t-butyl), 0,25 og 0,21 ppm (6H,
2s, dimetyl).
C. ( 3S. 4S)-3-r il ' R )- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-r( 1" R)- 1"-( pvridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 3n-fluorpropyllazetidin- 2- on
Til kald (isbad) 5,45 g (40 mmol) under argon fersk dannet ZnCl2 ble tilsatt 5,75 g (20 mmol) (3S,4R)-4-acetoksy-3-[(1'R)-1'tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on i 60 ml CH2CI2 etterfulgt av en dråpevis tilsetning av 14 g (40 mmol) silylenoleteren fremstilt i trinn B i 20 ml CH2CI2. Blandingen ble omrørt i 20 timer ved 5°C (kaldt rom), deretter holdt over en kald, mettet, vandig NaHC03-løsning og ekstrahert med 2 x 100 ml etylacetat. Etylacetatekstraktene ble vasket med mettet NH4CI, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ved løsningsmiddel-avdampning triturert med petroleumseter og filtrert og det ble oppnådd 4,0 g (45%) av produktet. Omkrystallisasjon fra etylacetat ga tittelforbindelsen, smp. 114-115°C.
IR (CH2CI2) "Umaks: 3410 (NH) , 1770 og 1680 cm-1 (C=0) .
lH-NMR (CDCI3) 8: 8,55-8,52 (1H, m, aromatisk-H), 7,68, 7,59 (1H, m, aromatisk-H), 7,33-7,29 (1H, bd, J=7,8 Hz, aromatisk-H), 7,21-7,14 (1H, m, aromatisk-H), 5,86 (1H, bs, NH), 5,71-4,29 (2H, 2 par av m, CH2F), 4,277 (2H, s, CH2S), 4,22-4,11 (1H, m, H-l'), 3,88 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=6,7 Hz, H-4), 3, 075-2, 97 (2H, m, H=3 og H-l"), 2,3-1,8 (2H, 2 par av m, CH2-2"), 1,01 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) , 0, 855 (9H, s, tert-butyl) og 0,048 ppm (6H, s, dimetyl).
Analyse for C2lH33N203SSiF:
Beregnet: C, 57,24%; H, 7,55%; N, 6,36%; S, 7,28%.
Funnet: C, 57,01%; H, 7,74%; N, 6,17%; S, 7,24%.
D. ( 3S, 4S)- 3- r( 1' R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 4-[( 1" R)- l"- karboksv- 3"- fluorpropyllazetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 110 mg (0,25 mmol) (3S,4S)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-
(pyridin-2-yl)metyltiokarbonyl-3"- fluor-propyl]azetidin-2-on i 5 ml THF ble behandlet med 45 ul (0,5 mmol) 30% H2O2 og 0,5 ml (0,5 mmol) 1,0N vandig NaOH. Isbadet ble fjernet og blandingen ble omrørt i 1 time, og deretter fortynnet med 20 ml etylacetat. Blandingen ble vasket med 1 x 40 ml IN vandig HC1, 3 x 20 ml vann, 1 x 20 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsnings-midlet ga 82 mg (100%) av tittelforbindelsen som et faststoff, smp. 104-105°C (EtOAc).
IR (CH2CI2) Umaks: 3410 (NH), 1770, 1750 og 1715 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,34 (1H, bs, NH), 4,8-4,6 og 4,6-4,35 (2H, 2 par av m, CH2F), 4,35-4,1 (1H, m, H-l'), 3,95 (1H, dd, J=l,9 Hz, J=6,0 Hz, H-4), 3,15-3,12 (1H, m, H-3), 2,95-2,8 (1H, m, H=l") , 2,3-1,8 (2H, m, CH2), 1,18 (3H, d, J=6,3 Hz, CH2), 0,87 (9H, s, tert-butvi), 0,072 og 0,063 ppm (6H, 2s, dimetyl).
Analyse for CisH28N04SiF:
Beregnet: C, 54,03%; H, 8,46%; N, 4,20%.
Funnet: C, 53,75%; H, 8,55%; N, 4,05%.
E. ( 3S, 4R)- 3- r( l' R)- l'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 4-r( 1" R) 1"-( 2- fluoretvl)- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"-oksopropyllazetidin- 2- on
En suspensjon av 0,75 g (2,3 mmol) (3S., 4SJ-3-[ (1'R)-1'-tert-but<y>ldimet<y>lsil<y>loks<y->et<y>l]-4-[(1"R)-l"-karboksy-3"-fluorpropyl]azetidin-2-on i 15 ml CH3CN ble behandlet med 0,39 g (2,4 mmol) karbonyldiimidazol og omrørt i 1 time ved 22°C. Det resulterende acylimidazol ble behandlet med 0,73 g (2,4 mmol) vannfritt magnesiummonoallylmalonat og omrørt i 50 timer ved 22°C. Blandingen ble fortynnet med 60 ml EtOAc, vasket med 1 x 60 ml kaldt IN vandig HC1, 2 x 60 ml vann, mettet vandig 1 x 60 ml NaHC03, 2 x 60 ml vann , 60 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 1,7 g rest, som ble ledet gjennom en 100 g silicagelpute, hvorved det ble oppnådd 96 mg (10%) av tittelforbindelsen (heksan -> 20% EtOAc/heksan) som en olje.
IR (CH2C12) "Umaks: 3410 (NH) , 1770, 1715, 1655 og 1630 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,01, 6,00 (1H, 2 bs, NH), 6,0-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,4-5,15 (2H, m, vinylisk H) , 5,14 (0,5H, s, vinyl H av enol), 4,7-4,6 (2H, m, CH2~vinyl), 4,7-4,2 (2H, 2 par av m, CH2F), 4,21- 4,13 (1H, m, H-l'), 3,91 (0,5 H, dd, J=2,l Hz, J = 4,4 Hz, H4), 3,88 (0,5 H, dd, J=2,l Hz, J=6,9 Hz, H-4), 3,60 (1H, s, CH2CO) , 3,26-3,17 (0,5 H, m, H-l"), 2,99 (0,5 H, dd, J=2,2 Hz, J=4,4 Hz, H-3), 2,95-2,92 (0,5 H, m, H-3), 2,55-2, 35 (0,5 H, m, H-l"), 2,3-1,7 (2H, m, CH2), 1,175 og 1,12 (3H, 2d, J=6,28 Hz og J=6,34 Hz, CH3), 0,86 (9H, s, tert- butyl), 0,067 og 0,055 (6H, 2s, dimetyl).
F. ( 3S, 4R) - 3- f ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvl- oksvetvn- 4-f( 1" R)- 1"- ( 2- fluoretvl)- 3"- diazo- 3"- allvloksvkarbonvl-2"- oksopropvl1azetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 0,20 g (0,48 mmol) (3S., 4R)-3-[ (1'R) -1' -tejrt-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- [ (1"R) -1"- (2-fluoretyl)-3"allyloksykarbonyl-2"- oksopro-pyl]azetidin-2-on i CH3CN ble behandlet med 64 ml (0,48 mmol) trietylamin og 95 mg (0,48 mmol) p-toluensulfonyl-azid. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 1 time. Avdampning av CH3CN ga en halvfast rest, som ble triturert med 10 ml petroleumseter. Faststoffet ble fjer-net ved filtrering, og løsningen ble overført til en 6 g (10% EtOAc-heksan) silicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 190 mg (90%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2CI2) Umaks: 3410 (NH), 2150. (N2), 1777, 1715 og 1650 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,03-5,83 (1H, m, vinylisk
H) , 5,90 (1H, bs, NH) , 5,40-5,28 (2H, m, vinylisk H) , 4,"73-4,7 (2H, m, CH2 vinylisk) 4,7-4,4, 4,4-4,2 (2H, 2 par av m, CH2-F) , 4,3-4,1 (2H, m, H-l' og H-l"), 3,90 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=5,2 Hz, H-4), 3,06-3,03 (1H, dd, J=2,l Hz, J=3,5 Hz, H-3), 2,2-2,0, 2,0-1,8 (2H, 2 par av m, CH2) , 1,18 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,86 (9H, s, tert-butyl), 0,061 og 0,051 ppm (6H, 2s, dimetyl). G. ( 3S, 4R) - 3- r ( l' R) - l'- hvdroksvetvn- 4- r ( 1" R) - l"-( 2-fluoretvl)- 3"- diazo- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"-oksopropyllazetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 170 mg (0, 390 mmol) (3S., 4R)-3-[(l'R)-1'-tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R) -1"-(2-fluoretyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 2 ml CH3CN ble behandlet med 0,78 ml (0,78 mmol) IN vandig HC1 løsning. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 4 timer. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum, og resten ble fortynnet med 15 ml EtOAc. Den organiske fase ble vasket med 10 ml 0,IM vandig NaHC03 , 10 ml vann, 10 ml saltvann og tørket (MgSC-4) • Løsningsmidlet ble avdampet, og resten ble ledet gjennom 5 g silicagelpute (1:1 etylacetat:heksan) hvorved det ble oppnådd 130 mg (100%) av tittel-forbindelsen.
IR (CH2C12) Umaks: 3680, 3600 (OH), 3400 (NH); 2150
(N2),1765, 1715 og 1650 cm~l (C=0).
lH-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,04 (1H, bs, NH), j6,0-5,8 (1H, m, vinylisk-H), 5,4-5,29 (2H, m, vinylisk-H),!4,75-4,71 (2H, m, CH2- vinylisk), 4,7-4,5, 4,5-4,3 (2H, 2 pair av m,
CH2F), 2,2-2,0 (2H, m H-l' og H-l"), 3,88 (1H, dd,\J=2,0 Hz, J=6,5 Hz, H-4), 2,98 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=7,2 Hz, H-3), 2,34 (1H, d, J=3,6 Hz, OH), 2,4-1,8 (2H, 2 par av m, Cgj) og 1,31 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3). j
I
H. Allvl-( 2R, 4R, 5R, 6S)- 4-( 2"- fluoretvl)- 6-\( l' R)+ 1'-hvdroksvetvll- 3, 7- diokso- l- azabicvclo f3, 2, 01heptan- 2-karboksvlat |
En løsning av 150 mg (0,46 mmol) (3S., 4R)-3-[ (1<R)-1'-hydroksyetyl]-4-[(1"R)-1"(2-fluoretyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 5 ml 25% heksanetylacetat ble tilbakekjølet i 2,5 timer under anvendelse av Rh(OAc)2 som katalysator. Løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd 140 mg (100%) av den bicykliske tittelketon.
IR (CH2C12) Umaks: 3680, 3600 (OH), 1770, 1745 og
1735 cm-1(C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,0-5,80 (1H, m, vinylisk-H), 5,4-5,26 (2H, m, vinylisk H), 4,79-4,68 (1H, m, HCH-F), 4,69-4,65 (2H, m, CH2~ vinyl) , 4,68 (1H, s, H-2) , 4,57-4, 44 (1H, m, HCHF), 4,37 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=8,6 Hz, H-5), 4,38-4,24 (1H, m, H-l'), 3,29 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=7,2 Hz, H-6), 3,02-2,9 (1H, m, H-4), 2,3-1,7 (3H, 2 par av m og bs, CH2 og OH) og 1,39 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
I. Allvl-( 4R. 5S. 6S)- 4-( 2"- fluoretvl)- 6- \ ( l ' R )- 1-hvdroksvetvll- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3. 2, 0} hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 0,14 g (0,55 mmol) allyl-(2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (2"-f luoretyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3, 7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 2 ml CH3CN ble behandlet med 0,11 ml (0,50 mmol) ClP0(0Ph)2 og 0,098 ml (0,55 mmol)N,N-diisopropyletylamin og omrørt i 2 timer. Det resulterende enolfosfat ble deretter behandlet med 0,065 ml (0,5 mmol) TMSC1 og 0,098 ml (0,55 mmol) N,N-diisopropyletylamin, omrørt i 15 minutter og til slutt behandlet med 63 mg (0,55 mmol) 2-picolylmercaptan og 0,098 ml (0,55 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 3 timer, fortynnet med 20 ml etylacetat, vasket med 3 x 10 ml H2O og tørket (MgS04). Resten oppnådd ved løsningsmiddelavdampning ble ledet gjennom en 10 g silicagelsøyle (1/1: etylacetat/heksan). 170 mg av det oppnådde trimetylsilyleter-mellomprodukt ble fortynnet med 2 ml THF, 1 ml H2O, behandlet med 30 ul (0,46 mmol) AcOH og omrørt i 1 time. Blandingen ble fortynnet med 20 ml etylacetat, vasket med 10 ml IM vandig NaHC03, 10 ml vann, 10 ml saltvann og tørket (MgS04), hvorved det ble oppnådd 0,125 g (69%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2CI2) "Umaks: 3600 (OH) , 1775 og 1715 cm"l
(C=0) .
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 5: 8,53-8,51 (1H, bd, aromatisk H), 7,71- 7,62 (1H, m, aromatisk H), 7, 38, 7,34 (1H, bd, J=7,8 Hz, aromatisk-H), 7,23-7,16 (1H, m, aromatisk-H), 6,0-5,85 (1H, m, vinylisk-H), 5,47-5,21 (2H, m, vinylisk H), 4,86-4,6
I
(3H, m, CH2~vinylisk og HCHF), 4,52-4,44 (1H, m, HCHF), 4,26-4, 19, 4, 06, 3, 99 (2H, ABq, J=13,9 Hz, CH2-pyridin) ,' 4,28-4,18 (2H, m, H-l' og H-5), 3,85-3,73 (1H, m, H-4), 3,23|(1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,3 Hz, H-6), 2,4-1,6 (3H, m og bs, CH2 og OH) og 1,36 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) . !
j 1
J. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- fluoretvl)- 6- f( 1' R)- 1' -
hvdroksvetvll - 3- f ( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- oltso- l-
1
azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
1
i
En kald (isbad) løsning av 125 mg (0, 320 mmol)! allyl (4R, 5S., 6S.) -4- (2"-f luoretyl) -6-[ (l'R) -1' -hydroksyetyl]-3-[ (pyridin-2-yl) metyltio] -7-okso-l-azabicyclo [3,2, 03jhept-2-en-2-karboksylat i 3 ml THF ble behandlet med 10 mg Pd(PPh3)4 og 60 \ il (0,55 mmol) N-metylanilin. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 1,5 time. Blandingen ble fdrtynnet med
20 ml EtOAc og ekstrahert med 1 x 10 ml og 1 x 5 ml vandig 0,05M pH 7,0 fosfat buffer. De vandige faser ble kojmbinert, vasket med 10 ml etylacetat og ledet gjennom en 20 |g (H2O, 2%, 5%, 7%, 10%, CH3CN/H2O) "u-Bon-dapak Cl8"-søyle, hvorved det ble oppnådd 50 mg (40%) av tittelforbindelsen. j
Renhet ved HPLC: 99,23%, retensjonstid 15,90 minutter (10% CH3CN/KH2PO4, 0,01 M, pH 7,4).
UV (H20) Xmax: 266 (6300), 304 (8700). j
IR (Nujol) Umaks: 1750 og 1600 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,47-8,45 (1H, m, aromatisk-H), 7,89- 7,81 (1H, m, aromatisk -H), 7,53-7,49 (1H, bd, J=7,9 Hz, aromatisk H) , 7,39-7,32 (1H, m, aromatisk -H), |4,8-4,6, 4,55-4,35 (2H, 2 par av m, CH-F) , 4,24, 4,17, 4,10,| 4,03 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH2"Pyridin), 4,3- 4,17 (1H, m, H-l'), 4,10
(1H, dd, J=9,5 Hz, J=2,6 Hz, H-5), 3,43 (1H, dd, J=6,l Hz, J=2,6 Hz, H-6), 3,41-3,29 (1H, m, H-4) og 1,27 ppm (1H, d, J=6, 4 Hz, CH3) .
Eksempel 2
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r( l' R) - 1'-hydroksvetvll- 3- F( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. 4- azido- f( pyridin- 2- yl) metvltiolbutvrat
En kald (isbad) løsning av 46,5 g (0,372 mol) 2-mercaptometylpyridin i CH2CI2 ble behandlet med 37,5 ml (0,465 mol) pyridin, etterfulgt av en dråpevis tilsetning av 54,9 g (0,372 mol) 4-azidobutyrylklorid i 100 ml CH2CI2. Blandingen ble omrørt ved 5°C i 1 time, fortynnet med 2 1 EtOAc, vasket med 500 ml kaldt vann, 500 ml vandig IM NaHS03, 500 ml vann, deretter med 500 ml vandig IM NaHC03, 500 ml vann og saltvann. Resten ble ledet gjennom en 900 g silicagelpute, hvorved det ble oppnådd 88,9 g (91%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2CI2) Umaks: 2100 (N3), og 1690 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,55-8,52 (1H, m, aromatisk H), 7,66- 7,58 (1H, m, aromatisk H), 7,34-7,31 (1H, bd, aromatisk H), 7,19-7,12 (1H, m, aromatisk H), 4,26 (2H, s,
CH2-pyridin), 3,335 (2H, t, J=6,6 Hz, CH2N3), 2,688 (2H, t, J=7,2 Hz, CH2C0) og 2,03-1,87 ppm (2H, m, CH2). |
i
B. tert- butvldimetvlsilvlenoleter av 4- azido-\ ( pvridin- 2-vl) metvltiolbutvrat
i
En kald (isbad) løsning av 191 g (0,809 mol) 4-azido-[(pyridin-2-yl)metyltio]-butyrat ill CH2CI2 ble béhand-let med 141 ml (1,01 mol) trietyl-amin etterfulgt av drjå-pevis tilsetning av 223 ml (0,970 mol) tert-butyl-dimetyl-silyl-trifluormethansulfonat og omrørt i 45 minutter ved ijca. 22°C.
1 Blandingen ble nedkjølt (isbad), behandlet på samme måte med trietylamin og tert-butyldimetylsilyl-trifluormetanjsulfonat og omrørt i 45 min. Denne frem-gangsmåte ble gjentatt jen gang til, og blandingen ble omrørt i 1 time. Blandingen ble nedkjølt (isbad), for-tynnet med 2 1 kald petroleum1seter<,> og vasket med 4x11 kald vann, 5 x 1 1 IM vandig NaHC03, 1 1 vann , saltvann og tørket (MgS04) . Den organiske fajse ble behandlet med kull og filtrert, hvorved det ble oppjnådd 327 g (100%) av tittelforbindelsen. |
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,56-8,53 (1H, m, aromatisk H) , 7, 67 7,59 (1H, m, aromatisk H) , 7,28-7,25 (1H, Jbd, aromatisk H), 7,18-7,12 (1H, m, aromatisk H), 3, 989| (0,45 H, t, J=7,6 Hz, vinylisk H), 4,828 (0,55 H, t, J=7,2 Hz, vinylisk H) , 4, 048 (0, 9 H, s, CH2~pyridin) , 3, 978 (1, 1 H, s, CH2~ pyridin), 3,128 (1,1 H, t, J=7,2 Hz, CH2N3), 3,004 1(0,9 H, t, J=6,9 Hz, CH2N3), 2,35-2,22 (2H, m, CH2), 0,985, 0r969 (9H,
I
2s, tert-butyl), 0,251 og 0,215 ppm (6H, 2s, dimetyl).
C. ( 3S, 4S) - 3- r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-r ( 1" R) - l"-.( Pvridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 3"-azidopropyllazetidin- 2- on
Til 38,6 g (0,284 mol) ferskt dannet ZnCl2 ble ved 0°C
(isbad) under argonatmosfære først tilsatt 40,75 g (0,142 mol)
(3S_, 4R) -4-acetoksy-3- [ (l'R) -1 > - tert-butvl-dimetvlsilvloksv-etyl]azetidin-2-on i 500 ml CH2CI2 og deretter dråpevis tilsatt en løsning av tert-butyldimetyl-silylenoleter av 100 g (0,284 mol) 4-azido-[(pyridin-2-yl)metyltio]butyrat fremstilt i trinn B i 140 ml CH2CI2. Blandingen ble omrørt (isbad) i 1
time, fikk deretter stå i 15 timer ved 5°C (kaldt rom).
Blandingen ble omrørt igjen i 4 timer ved ca. 22°C, deretter fortynnet med 700 ml vandig mettet NH4CI og ekstrahert to ganger med
2x11 EtOAc. De organiske faser ble kombinert, vasket med 3
x 500 ml vann, 500 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en rest, som ble fortynnet med 200 ml petroleumseter, podet med tittelforbindelsen og fikk utkrystallisere i 18 timer ved 5°C (kaldt rom). Krystallene
ble oppsamlet og morluten ble opprenset på 500 g hurtigsilicagelpute [8/2:CH2Cl2/heksan-» 50% EtOAc/CH2Cl2], hvorved det ble oppnådd ialt 50,5 g (74%) av tittelforbindelsen, smp. 95-96°C (petroleumseter).
IR (CH2CI2) Umaks: 3400 (NH), 2100 (N3), 1770 og 1680 cnr
1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,55-8,52 (1H, m, aromatisk
H) , 7, 67- 7,59 (1H, m, aromatisk H) , 7, 34-7, 30 (1H, bd,
aromatisk H), 7,21-7,14 (1H, m, aromatisk H), 5,93 (1H, bs,
NH), 4,278 (2H, s, CH2~pyridin), 4,2-4,09 (1H, m, H-l') 3,839 (1H, dd, J=2,l Hz, J=6,7 Hz, H-4), 3,47- 3,22 (2H, jm, CH2-N3), 3,053 (1H, dd, J=2,3 Hz, J=3,3 Hz, H-3), 2,99-2,89j(1H, m, H-1"), 2, 09-1, 97 (1H, m, HCH), 1,79-1, 65 (1H, m, HCH), 1,009 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,852 (9H, s, tert-butyl) og 0,044 (6H, s, dimetyl).
D. ( 3S. 4S) - 3- r( l' R)- l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl1- 4-r <1" R)- l"- karboksv- 3"- azidopropyn azetidin- 2- bn
En kald (isbad) løsning av 4,79 g (10 mmol) (3S, 4S.)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(pyridin-2-yl)metyltiokarbonyl-3"-azidopropyl]azetidin-2-on i 50 ml THF ble behandlet med 2,58 ml (30,0 mmol) H202 30%, etterfulgt av en dråpevis tilsetning av 30 ml,(30 mmol) IN vandig NaOH løsning. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 1 time, deretter avkjølt igjen (isbad). Réak-sjonsblandingen ble sur-gjort med 60 ml (60 mmol) IN vandig HC1 og ekstrahert med 3 x 50 ml EtOAc. De organiske ekstrakter ble kombinert, vasket med 50 ml vann, IM vandig NaHS03, 50 ml vann, 50 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning;av løsningsmidlet ga 3,64 g (98%) av tittelforbindelsen som et hvitt faststoff, smp. 138-139°C (dietyleter, petroleumseter).
IR (CH2CI2) Umaks:3410 (NH) , 2100 (N3) ,' 1770, 11740 og 1710 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,57 (1H, bs, NH), j4,23-4,18 (1H, m, H- 1'), 3,932 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=5,8 Hz, Jh-4), 3,52-3,36 (2H, m, CH2N3) , 3,146 (1H, dd, J=l,8 Hz, J=3,7 Hz, H-3), 2,85-2,74 (1H, m, H-l"), 2,1- 1,94 (1H, m, HCH), 1^ 9-1,7 (1H, m, HCH), 1,1830 (3H, t, J=6,3 Hz, CH3), 0,868 (9H, s, tert-butyl), 0,072 og 0,059 ppm (6H, 2s, dimetyl).
E. ( 3S, 4R)- 3- f ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-f( 1" R)- 1"-( 2- azidoetvl)- 3"- diazo- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"-oksopropvllazetidin- 2- on
En suspensjon av 3,56 g(10 mmol) (3S., 4S.) -3- [ (1' R) -1' - tert-butyldimethylsilyloksy-ethyl]-4-[(1"R)-1"-karboksy-3"-azidopropyl]azetidin-2-on i vannfri CH3CN under nitrogenatmosfære, ble først behandlet med 1,94 g (12 mmol) karbonyldiimidazol og omrørt i 30 minutter. Til den klare løsning ble tilsatt 3,73 g (12 mmol) monoallyl-magnesium-malonat, og blandingen ble omrørt i 18 timer ved 60°C. Deretter ble ytterligere 932 mg (3 mmol) malonat tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 60°C i ytterligere 4 timer. Denne fremgangsmåte ble gjentatt to ganger med en oppvarmningsperiode på henholdsvis 18 og 4 timer. Acetoni-tril ble deretter avdampet, og resten ble opptatt i 200 ml EtOAc. Denne løsning ble vasket med kaldt 100 ml vann, 100 ml IN vandig HC1, 100 ml 10% vandig Na2C03, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 4,2 g (100%) rå (3S., 4R) -3-[ (l'R) -1' tert-butvldimetvl-silvloksvetvl) -4-[(1"R)-1"-(2-azidoetyl)-3"-allyloksy-karbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on. 1,85 g (4,22 mmol) av dette råmateriale i 19 ml CH3CN ble nedkjølt (isbad), behandlet suksessivt med 0,6 ml (4,3 mmol) trietylamin og 847 mg (3,2 mmol) p-toluensulfonylazid og omrørt ved ca. 22°C i 3,5 timer. Løsningsmidlet ble avdampet, og resten ble ledet gjennom en 20 g, (CH2CI2, 10% EtOAc/CH2Cl2) silicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 1,21 g (62%) av tittelforbindelsen kontaminert med en liten mengde p-toluensulfonamid.
IR (CH2CI2) Umaks: 3410 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), 1765, 1715 og 1645 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 5: 6,1-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,87 (1H, bs, NH), 5,41-5,29 (2H, m, vinylisk H), 4,75-4,7 (2H m, CH2), 4,23-4,1 (2H, m, H-l' og H-l"), 3,873 (1H,| dd, J=2,l Hz, J=5,2 Hz, H-4), 3, 39- 3,24 (2H, m, CH2N3) , 3, 049 (1H, dd, J=2,l Hz, J=3,7 Hz, H-3), 2,21-2,05 (1H. m, HCH), 1,75-1,60 (1H, m, HCH), 1,179 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,864 (9H, s, tert-butyl), 0,064 og 0,052 ppm (6H, 2s, dimetyl). |
I
F. ( 3S. 4R) - 3- f ( l' R)- l/- hvdroksvetvn- 4- r ( 1" R) - 1"-( 2-azidoetvl)- 3"- diazo- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"- oksopropyl1-azetidin- 2- on
1
Til en kald (isbad) løsning av 1,21 g (2,61 mmol)
1 (3S., 4R) -3- [1'R) -1' - tertbutvl-dimetvlsilvloksvetvll 44- [ (1"R) - 1"-(2-azidoetyl)-3"-diazo-3"-allyloksy-karbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 20 ml EtOH ble langsomtJtilsatt 2,61 ml (5,22 mmol) 2N vandig HC1. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 22 timer, deretter nøytralisert til pH 7 med IM vandig NaHC03. Blandingen ble konsentrert<j>under vakuum, og resten ble opptatt i 50 ml EtOAc, vasket med 20 ml vann, 20 ml IM vandig NaHC03, 20 ml saltvann og tørket (MgSC-4) . Resten ble ledet gjennom en 20 g sili-cagelsøyle (CH2CI2 -* 8/2:EtOAc/CH2Cl2), hvorved det ble oppnådd 760 mg (83%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2CI2) Umaks: 3600, 3500 (OH), 2150 (N2)j 2100 (N3),1765, 1715 og 1645 cm~l (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,25 (1H, bs, NH), j6,04-5,8 (1H m, vinylisk H), 5,4-5,2 (2H, m, vinylisk H), 4;9-4,8 (2H, m, CH2), 4,17- 4,01 (2H, m, H-l' og H-l"), 3,844 (1H, dd,
J=2,l Hz, J=6,l Hz, H-4), 3,42-3,2 (2H, m, CH2N3), 3,017 (1H, dd, J=2,l Hz, J=6,7 Hz, H-3), 2,5 (1H, bs, OH), 2,2-2,0 (1H, m, HCH), 1,85-1,7 (1H, m, HCH) og 1,286 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
G. Allvl-( 2R, 4R, 5R, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- f( l' R) -1' -
hvdroksvetvll- 3, 7- diokso- l- azabicvclo T3, 2, 01heptan- 2-karboksvlat
En løsning av 350 mg (1 mmol) (3S., 4R) -3-[ (l'R) -1' - hydroksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(2-azidoetyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on og 6 mg Rh(OAc)2 i 15 ml EtOAc og 5 ml heksan ble oppvarmet ved 80-85°C (badtemperatur) i 2 timer. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum, hvorved det ble oppnådd 340 mg (100%) av tittelforbindelsen som en olje.
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 5: 6,05-5,9 (1H, m, vinylisk H), 5,5 5,2 (2H, m, vinylisk H) , 4,77 (1H, s, H-2) , 4,48-4,6 (2H, m, CH2), 4,329 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=8,7 Hz, H-5), 4,3-4,1 (1H, m, H-l')» 3,568 (2H, t, J=6,5 Hz, CH2N3), 3,234 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=8,0 Hz, H-6), 2,95-2,75 (1H, m, H-4), 2,1-1,9 (1H, m, HCH), 1,8-1,6 (1H, m, HCH) og 1,412 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3) .
H. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r ( l' R)- l'~
i hvdroksvetvll- 3-\( pvridin- 2- vl) metvltiol-7-okso-l-azabicvclo\ 3 . 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-CH30H bad) løsning av 338 mg ( 1 mmol) allyl-(2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (l'R) -1'-hydrok-éyetyl]-3, 7-diokso-l-azabicyclo[3, 2, 0]-heptan-2-karboksy-lat i•8 ml CH3CN ble behandlet suksessivt med 0,23 ml (1,1 mmol) ClP0(0Ph)2 og 0,19 ml (1,1 mmol) N,N-diisopropyl-etyl-amin og omrørt i 45 minutter. Det resulterende enol-fosfat ble deretter behandlet 0,14 ml (1,1 mmol) med trimetylsilylklorid og 0,19iml (1,1 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin og ble omrørt i ytterligere 45 minut-ter. Det resulterende beskyttede enolfosfat ble deretter behandlet med 250 mg (2,0 mmol) 2-picolylmercaptan\ i 1 ml CH3CN og 0,34 ml (2,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin og ble der-etter omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen blé fortynnet med 30 ml EtOAc, vasket med 10 ml kaldt vann, 10 ml IM vandig NaHS03, 10 ml vann , 10 ml IM vandig NaHC03, 10 ml vann, 10 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble etter fjernming av løsningsmiddel, opptatt i kald (isbad) 10 ml THF, behandlet med 3 ml (6 mmol) 2N vandig CH3CO2H og omrørt i 1 time kaldt og 1,5 time ved ca. 22°C. Blandingen ble fortynnetjmed 20 ml etylacetat, vasket med 10 ml kaldt vann, 10 ml IM vandig NaHC03, 10 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble eluert gjennom en 15 g silicagelsøyle (CH2CI2 -> 60% EtOAc/CH2Cl2)/ hvorved det ble oppnådd 175 mg ( 38%) av tittelforbindelsen.
IR 3600, 3500-3400 (OH), 2100 (N3), 1775 og 1710
cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz), 8: 8,54-8,51 (1H, m,:aromatisk H), 7,7-7,6 (1H, m, aromatisk H), 7,38, 7,34 (1H, m, aromatisk i 1
H) , 7,25-7,15 (1H, m, aromatisk H), 6,1-5,8 (1H, m, allyl H), 5,5 (2H, m, allyl H), 4,8-4,55 (2H, m, CH2-allyl), 4,294, 4,225, 4,072, 4,002 (2H, ABq, J=14,0 Hz, CH2~ pyridyl), 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 4,166 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H- 5), 3,8-3,65 (1H, m, H-4), 3,6-3,3 (2H, m, CH2-N3) , 3,162 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,7 Hz, H-6), 2,2-2 (1H, m, HCH), 1,95 (1H, bs, OH), 1,9-1,6 (1H, m, HCH) og 1,382 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3). I. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- f( l' R)- l'- hvdroksyetvl]- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 43 mg (0,1 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (1'R) -1' -hydroksyetyl] -3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabi-cyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i CH2CI2 ble behandlet med 21 mg (0,018 mmol)
(PPh3)4Pd og med 0,03 ml (0,26 mmol) N-metylanilin. Blandingen ble omrørt i 1 time ved ca. 22°C, fortynnet med 10 ml dietyleter, deretter ekstrahert med 2 x 1,5 ml (0,15 mmol)
0,1M vandig pH 7,0 fosfatbufferløsning, 2 x 1,5 ml vann. De vandige faser ble vasket med 5 ml dietyleter og pH innstilt til pH 5,9-6,0 med en IM vandig pH 4,2 fosfat-buffer. Den vandige fase ble deretter hydrogenolysert ved 45-50 psi og ved 5-15°C (temperatur ved avslutning av reaksjonen) i 1 time, under anvendelse av 75 mg 10% Pd/C som katalysator. Katalysatoren ble filtrert, skyllet med en pH 6 fosfatbuffer og opprenset på
en "Ci8JiBondapak" 12 g reversfasesøyle (2% CH3CN/H2O),
deretter opprenset på samme måte, hvorved det ble oppnådd 6 mg (16%) av tittel-forbindelsen.
Renhet ved HPLC: 98,11%, retensjonstid = 6,08 minutter
(302 mm, 10% CH3CN, 0,01M pH 7,4 fosfatbuffer).
UV (H20) Xmax: 266 (4600), 302 (5300).
1
IR (Nujol) Umaks:1755 og 1590 cm-1 (C=0). j
lH-NMR (D2O, 200 MHz) 8: 8,48-8,45 (1H, m, aromatisk), 7,9-7,8 (1H, m, aromatisk H), 7,51, 7,47 (1H, bd, aromatisk
i
H), 7,4-7,33 (1H, m, aromatisk H), 4,22, 4,15, 4,09, 4,02 (2H, ABq, J=14,5 Hz, CH2-picolyl) , 4,3-4,14 (1H, m, H-1M , 4,097 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 3,374 (1H, dd, j=2,8 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 3,3-3,16 (1H, m, H-4), 3,03 (1H, tj J=7,8 Hz, CH2N), 2,2-2,05 (1H, m, HCH), 1,82-1,6 (1H, m, HCH) og 1,299 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) . Eksempel 3 ( 4R, 5S, 6S) - 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r( lf R)- 1' hvdroksvetvll- 3-f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo- f 3, 2, Olhept-1 2- en- 2- karboksvlsvre A. ( 3S, 4R) - 3- f ( 1' R)- V - hvdroksvetvll - 4- f ( 1" R) - 1"! ( 2-1 azidoetvl)- 3"- diazo- 3"- p- nitrobenzvloksvkarbonvl- 2"-oksopropyllazetidin- 2- on | En suspensjon av 100 mg (0,27 mmol) (3S., 4S) -3-[ (1' R) -1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-4-[(1"R)-l"-karboksy-3"-azidopropyl]azetidin2-on i 4 ml CH3CN ble behandlet med 52 mg (0,32 mmol) karbonyldiimidazol og omrørt i 0,5 time ved ca. 22°C200 mg (0,400 mmol) magnesiummono-p-nitro-benzyl-malonat ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 60°C (badtemperatur) i 18 timer. Blandingen ble for-tynnet med 20 ml EtOAc, vasket med 10 ml IN vandig HC1, 10 ml vann, 10 ml 10% vandig K2CO3, 10 ml saltvann og tørket (MgS04), hvorved det ble oppnådd 1,37 g (92%) av rå (3S., 4R)-3-[ (l'R)-1-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(2-azidoetyl)-3"-p-nitrobenzyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on. 109 mg (0,198 mmol) av dette råmateriale ble oppløst i 2 ml CH3CN og behandlet sukses-sivt med 0,030 ml (0,22 mmol) trietylamin og 43 mg (0,22 mmol) p-toluensulfonylazid og omrørt ved ca. 22°C i 1,3 timer. Løsningsmidlet ble avdampet og resten overført til en preparativ TLC-plate (dietyleter), hvorved det etter ekstraksjon ble oppnådd Rf 0,71 (84 mg) (3S., 4R) -3- [ (1'R) -1' - tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(2- azido-etyl)-3"-diazo-3"-p-nitrobenzyloksykarbonyl-2"-okso-propyl]azetidin-2-on kontaminert med 65 mg (57% justert utbytte) p-toluen-sulf onylazid. En liknende blanding 2,7 g (4,7 mmol) (fra en annen omsetning) ble oppløst i 40 ml kald (isbad) etanol og dråpevis behandlet med 4,7 ml (9,4 mmol) 2N vandig HC1. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 23 timer, hvoretter den ble nøytralisert (isbad) med ca. 10 ml IM vandig NaHC03 og konsentrert under vakuum. Resten ble fortynnet med 100 ml EtOAc, vasket med 200 ml kald IM vandig NaHCC-3, 20 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom 30 g sili-cagelpute (CH2CI2 80% EtOAc/CH2Cl2 -» EtOAc), hvorved det ble oppnådd 1,45 g (67%) av tittelforbindelsen som et gult faststoff.
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,3-8,23 (2H, m, aromatisk H), 7,56, 7,52 (2H, bd, J=8,7 Hz, aromatisk H), 6,02 (1H, bs, NH), 5,44, 5,37, 5,35, 5,29 (2H, Abq, J=13,1 Hz, CH2), 4,16-4,01 (2H, m, H-l' og H-l"), 3,849 (1H, dd, J=2,2 Hz, J=6,0 Hz, H-4), 3,43-3,25 (2H, m, CH2N3), 3,041 (1H, dd, J=2,l Hz, J=6,9
Hz, H-3), 2,3-2,0 (1H, m, HCH), 2,130 (1H, d, J=4,l Hz, OH), 1,9-1,7 (1H, m, HCH) og 1,30 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
B. p- nitrobenzvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)-1' - hvdroksvetvll- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, Olhept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 856 mg (1,86 mmol) (3S., 4R)-3-[ (1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[(1"R)-l"-[(2-azidoetyl)-3"-diazo-3"-p-nitrobenzyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 40 ml 3/1:EtOAc/heksan og 20 mg Rh(OAc)2 ble oppvarmet ved 80-85°C (badtemperatur) i 1,5 time. Løsningsmidlet ble fjernet og etterlot 860 mg (100%) rå bicyklisk keton: p-nitrobenzyl-(2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (1'R) -1' -hydroksyetyl] -3, 7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat.
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 5: 8,2 (2H, d, aromatisk H), 7,5 (2H, d, aromatisk H), 5,4 (1H, s, H-2), 5,3 (2H, sentrum av ABq, CH2 aromatisk), 4,3 (1H, dd, H-5), 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 3,5 (2H, t, CH2N3), 3,3 (1H, dd, H-6) , 3,0-2,8 (1H, m, H-4), 2,1-1,9 (1H, m, HCH), 1,9-1,7 (1H, m, HCH), 1,43 (3H, d, CH3) .
En kald (is-CH30H bad) løsning av 860 mg (1,86 mmol) rå keton i 20 ml CH3CN ble behandlet med 0,43 ml (2,05 mmol) difenylklorfosfat, etterfulgt av langsom tilsetning av 0,35 ml (2,05 mmol) N,N-diisopropyletylamin og et spor av 4-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, hvoretter 0,26 ml (2,05 mmol) trimetyl-silyl-klorid og 0,35 ml (2,05 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt suksessivt, og omrøring ble fortsatt i ytterligere 30 minutter. Det resulterende O-trimetylsilylenolfosfat ble behandlet med 517 mg (4,10 mmol) 2-picolylmercaptan i 1 ml CH3CN etterfulgt av dråpevis tilsetning av 0,70 ml (0,41 mmol) N,N-diisopropyletylamin og omrørt i 1 time. Blandingen ble fortynnet med 40 ml EtOAc, vasket med 20 ml kald vann, 20 ml pH 7,4 fosfatbuffer, 20 ml saltløsning og tørket (MgS04). Den oppnådde rest ble etter avdampning av løsningsmidlet opptatt i 100 ml THF, avkjølt til 5°C (isbad), behandlet med 5 ml 2N vandig CH3CO2H og omrørt i 2 timer. Blandingen ble fortynnet med 25 ml etylacetat, vasket med vann, 20 ml pH 7,5 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble opprenset på en 20 g silicagel-hurtigkromatografisøyle (CH2CI2 -> EtOAc), hvorved det ble oppnådd 500 mg (49%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2CI2) Umaks: 3600, 3509, 3400 (OH), 2100 (N3), 1775, 1710 (C=0) og 1525 cm-1 (NO2).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,54, 8,52 (1H, bd, aromatisk H), 8,198 (2H, d, J=8,7 Hz, p-NB ester), 7,7-7,5 (3H, m, og d, J=8,7, aromatisk H, p-NB ester), 7,36-7,32 (1H, bd, aromatisk H), 7,24-7,17 (1H, m, aromatisk H), 5,517, 5,448, 5,230, 5,161 (2H, ABq, J=14,8 Hz, CH2~p-NB), 4,305, 4,236, 4,087, 4,018 (2H, ABq, J=13,9 Hz, CH2-pyridyl), 4,3-4,2 (1H, m, H-l'), 4,190, 4,177 (del av dd, J=2,6 Hz, del av H-5), 3,85-3,72 (1H, m, H-4), 3,7-3,3 (2H, m, CH2N3), 3,198 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=7,6 Hz, H-6) , 2,2-1,95 (1H, m, H-CH) , 1,9-1,6 (1H, m, HCH), 1,64 (1H, bs, OH) og 1, 399 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
C. ( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r ( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo \ 3 , 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 55 mg (0,1 mmol) p-nitrobenzyl-(4R, 5S., 6S.) - 4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1' -hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabi-cyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i et tofasesystem av 1:1 (20 ml) dietyleter:THF og 7 ml + 3 ml vann 0,05M, pH 7,0 fosfatbuffer ble hydrogenolysert over 84 mg 10% Pd/C ved 50 psi i 5 timer kaldt (isbad). Katalysatoren ble frafiltrert og den organiske fase ble vasket med vann. De vandige faser ble kombinert og ledet gjennom en "uBondapak Ci8" revers-fasesøyle, hvorved det ble oppnådd 6 mg av tittelforbindelsen, hvis spektraldata var identisk med forbindelsen fremstilt i eksempel 2 trinn I.
Eksempel 4
( 4R, 5S, 6S)- 4- f 3-( N- formimidovl)- aminoetvll- 6- t ( l' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- r( Pvridin- 2- vl) metvltiol-7-okso-l-azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 100 mg (0,24 mmol) natrium-(4R, 5S, 6S) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (l'R) -1'-hydroksy-etyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 12 ml vann og 7 ml 0,IM pH 6,0 fosfatbuffer ble hydrogenolysert i 2 timer under anvendelse av 10% Pd/C som katalysator. Katalysatoren ble frafiltrert og pH av den vandige løsning (isbad) ble innstilt til 8,5 med IN og 0,1N vandig NaOH. Blandingen ble behandlet porsjonsvis med 410 mg (2,4 mmol) benzyl-formimidathydroklorid og pH ble holdt ved 8-8,3 med 0,IN NaOH. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 minutter og ledet gjennom en 10 g (H2O -» 1,2 dg 3% CH3CN/H2O) "uBonda-pak Ci8"-søyle, hvorved det ble oppnådd 30 mg av tittel-forbindelsen. Produktet ble på nytt renset med C18
(6 g) av samme materiale, hvorved det ble oppnådd 13 mg (13%)
av ren tittelforbindelse.
Renhet ved HPLC: 92,6% ("JiBondapak Ci8", 8% CH3CN/KH2PO4 0,01M pH 7,4, r.t. = 7,095 minutter).
UV (H20) Xmax: 304 (6445), 266 (5592).
IR (Nujol) Umaks: 1755, 1595 (C=0) og 1715 cm-1
(ON) .
lH-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,47, 8,45 (1H, bd, aromatisk H), 7,9-7,8 (1H, m, aromatisk H), 7,805 (1H, s, C=NH), 7,5-7,2 (2H, m, aromatisk H) ,' 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 4,217, 4,141, 4,078, 4,008 (2H, ABq, J=15,2 Hz, CH2"Pyridin), 4,14-4,07 (1H, Skjult H-5), 3,5-3,1 (4H, m, H-6, CH2N, H- 4), 2,1-1,1 (1H, m, HCH), 1,75-1,5 (1H, m, HCH) og 1,296 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) •
Eksempel 5
Natrium-( 4R. 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4- ( 2"-hydroksvetvl)- 3- r( Pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. 4- tert- butvldimetvlsilvloksv- r( pyridin- 2-vl) metvltiolbutvrat
En kald (isbad) løsning av 2,7 g (13 mmol) 4- tert-butyldimetylsilyloksysmørsyre og 1,67 g (13 mmol) 2-picolylmercaptan i 40 ml CH2CI2 ble behandlet med 2,8 g (13 mmol) 1,3-dicyclohexylkarbodiimid og 1,81 g (13 mmol) 1-hydroksybenzotriazolhydrat og omrørt ved ca. 22°C i 20 timer.
70
Blandingen ble fortynnet med etylacetat, vasket med vann, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsnings-midlet ga en rest, som ble ledet gjennom en EtOAc:heksan, 1:3 silicagelpute, hvorved det ble oppnådd 3,08 g (71%) av tittelforbindelsen.
IR (ren) "Umaks*. 1690 cm~l C=0.
lH-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,54, 8,52 (1H, bd, aromatisk), 7, 68, 7, 66, 7, 63, 7, 62, 7,59, 7,58 (1H, dt, aromatisk), 7,36, 7,32 (1H, d, aromatisk), 7,26, 7,19, 7,166, 7,16, 7,15, 7,13 (1H, m, aromatisk), 4,25 (2H, s, CH2), 3,62 (2H, t, J=6,l Hz, CH2), 2,68 (2H, t, J=7,5 Hz, CH2), 1,90 (2H, sentrum av 5 linjer, CH2), 0,87 (9H, s, t-butyl) og 0,019 ppm (6H, s, dimetyl).
B. tert- butvldimetvlsilvlenoleter av 4- tert-butvldimetylsilyloksy-\( pvridin- 2- yl) metyltioIbutvrat
En kald (isbad) løsning av 1,3 g (4,0 mmol) S-(2-picolyltio)-4-tertbutyldimetylsilyloksybutyrat i 15 ml CH2CI2 ble behandlet dråpevis med 1,1 ml (6,0 mmol) tert-butyldimetylsilyltrifluormetansulfonat, 1,14 ml (8,00 mmol) trietylamin og omrørt i 3 timer ved værelsetempera-tur (ca. 22°C). Blandingen ble fortynnet med 60 ml petro-leumseter, vasket med 3 x 50 ml kaldt vann, 50 ml saltvann og tørket (MgS04). Løsningen ble behandlet med aktivt kull, filtrert, og løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd 1,8 g (100%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) "Umaks: 1630 crrrl olefin.
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,54, 8,53, 8,52, 8,51 (1H, d, aromatisk-H), 7,30-7,24 (1H, m, aromatisk-H), 7,16-7,10 (1H, m, aromatisk-H), 6,00 (0,6 H, t, J=7,5 Hz, olefinisk H), 4,89
(0,4 H, t, J=7,l Hz, olefinisk H), 4,04 (1,2 H, s, CH2), 3,97 (0,8 H, s, CH2), 3,47 (0,8 H, t, J=7,l Hz, CH2) , 3,38 (0,8 H, t, J=6,8 Hz, CH2), 2,28-2,15 (2H, m, CH2), 0,98, 0,96 (2s, 9H, t-butyl), 0,864, 0,861 (9H, 2s, t-butyl), 0,237, 0,196 (6H, 2s, dimetyl), 0,014 og 0,003 ppm (6H, 2s, dimetyl).
C. ( 3S, 4S) - 3- f ( l' R) - l,- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-T( 1" R)- 1"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 3"- tert-butvldimetvlsilvloksv- propvllazetidin- 2- on
Til 545 mg (4 mmol) kald (isbad) fersk dannet ZnCl2 under argon ble tilsatt 575 mg (2 mmol) (3J3,4R) -4-acet-oksy-3-[d'R)-1'-tert-butyl-dimetylsilyloksyetyl]-azeti-din-2-on i 10 ml CH2CI2 etterfulgt av dråpevis tilsetning av 1,8 g (4 mmol) silylenoleteren dannet i trinn B i 5 ml CH2CI2. Blandingen ble omrørt ved 5°C i 18 timer, fortyn-net med 60 ml etylacetat, vasket med 50 ml mettet vandig NaHC03, 50 ml mettet vandig NH4C1,50 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble etter avdampning av løsningsmidlet renset på en 80 g (1:5 etylacetat/heksan) silicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 500 mg (45%) smp. = 103-105°C (heksan) av tittelforbindelsen som et faststoff.
IR (CH2CI2) Umaks: 3410 (NH), 1765 og 1680 cm-1
(C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,54-8,51 (1H, m, aromatisk H), 7,66- 7,57 (1H, m, aromatisk H), 7,34 (1H, d, J=7,8 Hz, aromatisk H), 7,20- 7,12 (1H, m, aromatisk H), 5,99 (1H, bs, NH), 4,24 (2H, s, CH2) , 4,2- 4,09 (1H, m, H-l'), 3,83 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=6,9 Hz, H-4), 3,73-3,49 (2H, m, CH2O), 3,04-2,94 (2H, m, H-l" og H-3), 2,01-1,89 (1H, m, H-2"), 1,80-1,64 (1H,
m, H-2"), 1,00 (3H, d, J=6,4 Hz, CH3), 0,861, 0,850 (18H, 2s, tert-butyl), 0,040 og 0,004 ppm (12H, 2s, dimetyl).
Analyse for C27H47N204SSi2:
Beregnet: C 58,76%, H 8,58%, N 5,08%, S 5,81%.
Funnet: C 58,57%, H 9,00%, N 4,97%, S 5,89%.
D. ( 3S, 4S)- 3- f( l' R)- l'- tert- Butvldimetvlsilvloksyetvl1- 4-r ( 1" R)- 1"- karboksv- 3"- tertbutvldimetvl-silvloksvpropvllazetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 480 mg (0,87 mmol)
(3S., 4S.) -3-[ (l'R) -1' -tertbutyldimetylsilyloksyetyl] -4- [ (1"R) - 1"-(pyridin-2-yl)metyltiokarbonyl-3"-tert-butyl-dimetylsilyloksypropyl]azetidin-2-on i 5 ml THF ble behandlet med 0,15 ml (1,7 mmol) 30% H2O2, etterfulgt av en dråpevis tilsetning av en 1,7 ml (1,7 mmol) IN vandig NaOH løsning. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 90 minutter, hvoretter den ble fortynnet med 30 ml etylacetat, vasket med 25 ml IN vandig HC1, 25 ml IN vandig NaHS03, vann og saltvann, og tørket. Etter avdamp-ning av løsningsmidlet ble det oppnådd 0,37 g (96%) av tittelforbindelsen som et hvitt faststoff, smp. 125-127°C (etylacetat).
IR (CH2CI2) Umaks' 3410 (NH), 1765 (fi-lactam) og 1710 cm" 1 (syre) .
lH-NMR (CDCI3) 8: 6,23 (1H, bs, NH) , 4,204 (1H, m, H-l'), 2,94 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=5,9 Hz, H-4), 3,72 (2H, bt, J=5,7 Hz, CH2), 3,07 (1H, dd, J=l,7 Hz, J=4,l Hz, H-3), 2,84-2,74 (1H, m, H-l"), 2,02-1,81 (1H, m, HCH), 1,78-1,69 (1H, m, HCH), 1,18 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) , 0, 889, 0, 866 (18H, 2s, tert-
butyl), og 0,065 ppm (12H, s, dimetyl).
Analyse for C2lH42NOsSi2:
Beregnet: C 56,71%, H 9,52%, N 3,15%.
Funnet: C 56,55%, H 9,67%, N 3,13%.
E. ( 3S. 4R) - 3- r ( l' R) - l'- tert- Butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-f( 1" R)- 1"- ( 2- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl)-3"-allvloksvkarbonvl- 2"- oksopropvn azetidin- 2- on
En suspensjon av 7,5 g (17 mmol) (3S., 4S.) -3- [ (l'R) -1' - tert-butyldimetylsilyloksymetyl]-4-[(1"R)-ln-karboksy-3"-tert-butyldimetylsilyloksypropyl]-azetidin-2-on i 75 ml CH3CN ble behandlet med 2,92 g (18,0 mmol) karbonyldi-imidazol og omrørt i 1 time ved 22°C. Blandingen ble deretter behandlet med 5,3 g (17 mmol) vannfri monoalkyl-magnesium-malonat og oppvarmet ved 80°C (badtemperatur) i 18 timer. Løsningsmidlet ble delvist avdampet. Den konsen-trerte løsning ble fortynnet med 250 ml EtOAc, vasket med 100 ml IN vandig HC1, 100 ml vann, 100 ml mettet vandig NaHC03, 100 ml vann og saltvann og tørket (MgS04). Resten (15 g) ble ledet gjennom en 300 g hurtigsilicagelsøyle (1:3 EtOAc/heksan), hvorved det ble oppnådd 5,15 g (57%) av tittelforbindelsen som en blanding av keton- og enolform.
IR (Nujol) Umaks: 3150-3100 (OH), 1760, 1710, 1650 og 1620 cm-1 (C=0 og enol).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,03-5,80 (2H, 2 bs og m, NH og allyl), 5,38-5,23 (2H, m, allyl), 5,07 (0,5 H, s, vinylisk H av enol), 4,67-4,60 (2H, m, CH2), 4,24-4,12 (1H, m, H-l')/ 3,90 (0,47 H, dd, J=2,2 Hz, J=5,6 Hz, H-4), 3,83 (0,53 H, dd, J=2,l Hz, J=7,l Hz, H-4), 3,75-3,48 (32 H, m, CH20Si og
C0CH7C0), 3,10 (0,47 H, m, H-l"), 2,94 (1H, m, H-3), 2,55-2,40 (0,45 H, m, H-l"), 1,97-1,6 (2H, 2 m, CH2), 1,17 (1,3 H, d, J=6,3 Hz, CH3), 1,11 (1,4 H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,882, 0, 878, 0, 865 (18 H, 3s, tert-butyl), 0, 064, 0, 056, 0, 049 og 0,031 ppm (12H, 4s, dimetyl).
Analyse for C26H49N06Si2:
Beregnet: C 59,16%, H 9,36%, N 2,65%.
Funnet: C 59,11%, H 9,36%, N 2,60%.
F. ( 3S, 4R)- 3- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvil- 4-r( 1" R)- 1"- ( 2- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl)- 3"- diazo-3"- allvloksvkarbonvl- 2"- oksopropyll azetidin- 2- on
En løsning av 0,60 g (1,1 mmol) (3S., 4R)-3-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4-[ (1"R)-1"-(2-tert-butyldimetylsilyloksymetyl)-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 10 ml CH3CN ble behandlet med 240 mg (1,2 mmol) p-toluensulfonylazid og 160 ul (1,1 mmol) trietylamin og omrørt i 2 timer ved ca. 22°C. Løsningsmidlet ble fjernet og resten titurert med 20 ml petroleumseter til presipitering av p-toluensulfonamid. Den 0,61 g gule olje ble ledet gjennom 25 g (10%-20% EtOAc/heksan) silicagel, hvorved det ble oppnådd 420 mg av ren tittelforbindelse, smp. 53-55°C.
IR (CH2CI2) Umaks: 3400 (NH), 3140 (N2), 1765, 1715 og 1050 cm-1 (C=0).
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,02-5,8 (2H, bs og m, NH, allyl), 5,4- 5,27 (2H, m, allyl), 4,72-4,68 (2H, m, CH2),
4,23-4,13 (2H, m, H-l' og H-l"), 3,87 (1H, dd, J=2,l Hz, J-5,5 Hz, H-4), 3,67-3,52 (2H, m, CH2O), 3,04 (1H, bt, J=4,0 Hz, H-3), 2,10-2,01 (1H, m, HCH), 1, 66-1,57 (1H, m, HCH), 1,165 (3H, d, J=6,4 Hz, CH3), 0,862 og 0,849 (18H, 2s, tert- butyl),
0,058, 0,053, 0,05 og 0,0061 ppm (12H, 4s, dimetyl).
Analyse for C26H47N306Si2'•
Beregnet: C 56,39%, H 8,55%, N 7,59%.
Funnet: C 56,44%, H 8,80%, N 7,50%.
G. Allvl-( 4R, 5R, 6S)- 6- f( 1' R) - 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 4- ( 2"- tert- butvldimetvlsilyl-oksvetvl)- 3, 7- diokso- l- azabicvclo T3, 2, Olheptan- 2-karboksvlat
En løsning av 1,0 g (1,8 mmol) (3S., 4R)-3-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksy-etyl]-4-[(1"R)-1"-(2-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbqnyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on, 3 mg rhodium(II)oetanoat i 10 ml 75% heksan-EtOAc ble oppvarmet under tilbakekjøling i 3 timer og inndampet, hvorved det ble oppnådd 1 g (100%) av
tittelforbindelsen som en olje i kvantitativt utbytte.
IR (ren) <Um>aks'. 1765 (C=0), 1745 (skulder C=0) og 1735
cm-1 (skulder, C=0) .
lH-NMR (CDCI3, 200 MHz) 5: 5,99-5,79 (1H, m, allyl), 5,39
(2H, m, allyl), 4,7-4,6 (2H, m, CH2), 4,63 (1H, s, H-2), 4,35-
4,2 (1H, m, H-l'), 4,25 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=8,4 Hz, H-5),
3,8-3,6 (2H, m, CH2-O), 3,21 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=5,8 Hz, H-
6), 2, 99-2, 87 (1H, m, H-4), 2,0-1,58 (2H, m, CH2) , 1,28 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3) , 0, 886, 0, 879 (18H, 2s, tert-butyl), 0, 094, 0,087, 0,054 og 0,045 ppm (12H, 4s, dimetyl). H. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 6- f 11 ' R )- 1'-( tert butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-( 2"- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl)- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 0,92 g (1,8 mmol) allyl-(4R-5R-6S.) -6- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- (2"- tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-3,7-diokso-l-azabicyclo [3,2,0]-heptan-2-karboksylat i 10 ml CH3CN ble behandlet med 0,4 ml (2 mmol) difenylklorfosfat, 0,36 ml (2 mmol) N,N-diisopropyletylamin, 1 mg dimetylaminopyridin og omrørt i 1 time ved 22°C. Blandingen ble avkjølt igjen (isbad), behandlet med 0,38 g (3 mmol) 2-picolylmerkaptan og 0,6<A>@ul (3,2 mmol) N,N-diiso-propyletylamin og omrørt i 20 timer ved 5°C. Reaksjonsblan-dingen ble fortynnet med 60 ml EtOAc, vasket med kald NaHCX^, 3 x 50 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Den oppnådde rest ved løsningsmiddelavdampning ble ledet gjennom en 16 g silica-gelsøyle (1:9 —»1,3 EtOAc:heksan), hvorved det ble oppnådd 0,63 g (56%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) Vmaks: 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,52-8,49 (1H, m aromatisk), 7,68-7,59 (1H, m, aromatisk), 7,34-7,30 (1H, d, aromatisk), 7,20-7,13 (1H, m, aromatisk), 6,03-5,84 (1H, m, allylisk H), 5,47-5,18 (1H, m, allylisk H), 3,82-4,6 (2H, m, CH2), 4,354, 4,287 (1H, del av ABq, J=13,5 Hz, CH2-pyridyl), 4,28-4,14 (1H, m, H-l')/ 4,143, 4,075 (1H, del av ABq, J=13,5 Hz, CH2-pyridyl)/ 4,08 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3,84-3,70 (2H, m, CH20), 3,65-3,51 (1H, m, H-4), 3,100 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,9 Hz, H- 6), 2,12-1,69 (1H, m, HCH), 1,56-1,56 (1H, m,
HCH), 1,284 (3H, d, J=6,l, CH3), 0,888, 0,850 (18H, 2s, tert-butyl), 0,081 (6H, s, dimetyl), 0,051 og 0,045 ppm (6H, 2s, dimetyl).
I. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 6-' ( l' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 4-( 2"-hvdroksvetvl)- 3- r( pvridin- 2- vl)- metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo T 3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 230 mg (0,36 mmol) allyl- (4R, 51, 6S.) -6- [ A@ (1'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] - 4-(2"-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml THF (fersk destillert) ble først behandlet med 250A@ul (4,2 mmol) eddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i 2,2 ml (2,2 mmol) THF. Blandingen ble omrørt i 120 timer ved 22°C, fortynnet med 20 ml EtOAc, vasket med 15 ml kald IM vandig NaHC03# 15 ml vann, 15 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ved løsningsmiddelavdampning ble renset på en 10 g silicagelsøyle (10% CH3CN/CH2C12, CH3CN, aceton), hvorved det ble oppnådd 60 mg (41%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C1) Vmaks: 3690, 3610, 3530 (OH), 1775 og 1710 cm" <1> (C=0) .
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,5-8,47 (1H, m, aromatisk H), 7,75-7,66 (1H, m, aromatisk H), 7,42, 7,38 (1H, d, aromatisk H), 7,23-7,19 (1H, aromatisk H), 6,05-5,86 (1H, m, allylisk H), 5,48-5,21 (2H, m, allylisk H), 4,87-4,60 (2H, m, CH2), 4,343, 4,273 (1H del av ABq, J=14,l Hz, CH2-pyridyl), 4,204 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 4,142, 4,072 (1H, del av ABq, J=14,l Hz, CH2-pyridyl), 4,27-4,14 (1H, m, H-l'), 3,89-
3,70 (3H, m, CH2-0 og H-4), 3,261 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,8 Hz, H-6), 2,17-2,02 (1H, m, HCH), 1, 89-1, 67 (1H, m, HCH), 1,66 (2H, bs, OH) og 1,364 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
J. Natrium- ( 4R, 5S, 6S)- 6- f( l' R)- l' - hvdroksvetvl 1 - 4- ( 2"-hvdroksvetvl)- 3-\( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo\ 3 , 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 60 mg (0,15 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S.) -6-[ (l'R) -1 ' -hydroksyetyl] -4- (2"-hydroksyetyl) -3-(pyridin-2-yl)metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 2 ml fersk destillert THF ble behandlet med 5 mg PPh3, 5 mg (PPh3)4Pd og 33 ul (0,3 mmol) N-metylanilin. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 1 time, deretter fortynnet med 8 ml EtOAc og ekstrahert to ganger med en 0,IM, pH 7 vandig bufferløsning (4 ml + 2 ml). De vandige faser ble kombinert, vasket med 5 ml EtOAc, pumpet under vakuum og ledet gjennom en 10 g reversfasesilicagel-C18-søyle (H2O-10% CH3CN/- H20), hvorved det ble oppnådd 25 mg (43%) av tittelforbindel-sen som et lyofilisert pulver.
Renhet ved HPLC: 99,5% (10% CH3CN/KH2P04 0,01 M, pH 7,4, "C18-UBondapak", r.t. 4,49 minutter).
IR (Nujol) Vmaks: 1750 og 1600 cm"<1> (C=0).
UV: (H2<0>) <>.>maks 266 (5100), 306 (6800).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 8,48-8,45 (1H, m, aromatisk H), 7,89-7,81 (1H m, aromatisk H), 7,53-7,49 (1H, d, J=7,9 Hz, aromatisk H), 7,39-7,33 (1H, m, aromatisk H), 4,25-4,186, 4,103, 4,033 (2H, ABq, J=13,8, CH2-pyridyl) , 4,25-4,18 (1H, m, H-l'), 4,0587, 4,0457 (del av dd, J=2,6, H-5), 3,74-3,61 (1H, m, H-CH-O), 3,57-3,44 (1H, m, HCH-O), 3,383 (1H, dd, J=2,6 Hz,
J=5,9 Hz, H-6), 3,31-3,19 (1H, m, H-4), 2,1-1,9 (1H, m, HCH), 1,69-1,5 (1H m, HCH), og 1,285 ppm (3H, d, J-6,4 Hz, CH3).
Eksempel 6
Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 4-( 2"- hvdroksvetvl)- 3-A@( pyridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksylat
En kald (isbad) løsning av 630 mg (1,00 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S.) -6- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- (2"-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat fremstilt som beskrevet i eksempel 5 trinn H i 10 ml fersk destillert THF
ble først behandlet med 0,35 ml (6 mmol) AcOH og deretter dråpevis med en IM THF-løsning av 3,0 ml (3 mmol) tetrabutyl-
ammoniumfluorid. Blandingen ble omrørt i 20 timer ved 5°C, nøytralisert til pH 7,0 med en IM vandig NaHCC^-løsning og ekstrahert med 2 x 15 ml EtOAc. Den organiske løsning ble vasket med 1 x 20 ml IM vandig NaHC03, 3 x 20 ml vann, salt-vann og tørket (MgS04). 0,6 g ble ledet gjennom en 20 g hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 0,39 g (75%) av tittelforbindelsen (1:1 heksan:EtOAc) som en olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3680, 3610 (OH), 1770 og 1710 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) <A>@5: 8,479 (1H, bd, J=4,l Hz, aromatisk H), 7,710 (1H, dt, J=7,7 Hz, J=l,78 Hz, aromatisk H), 7,40 (1H, d, J=8,8 Hz, aromatisk H), 7,26-7,19 (1H, m, aromatisk H), 6,04-5,85 (1H, m, allylisk-H), 5,48-5,20 (2H, m, allylisk H), 4,83-4,61 (2H, m, CH2), 4,387, 4,317, 4,178, 4,109 (2H, ABq, J=14,0 Hz, CH2~pyridin), 4,27-4,12 (1H, m, H-1'), 4,122, 4,075, 4,063 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 3,93-3,82 (2H, m, H-4 og HCH-O), 3,65-3,55 (2H, m, H-CH-0 og OH), 3,130 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=7,0 Hz, H-6), 2,2-2,0 (1H, m, HCH), 1,9-1,6 (1H, m, HCH), 1,279 (3H, t, J=7,l Hz, CH3) , 0,889 (9H, s, tert-butvi) og 0,076 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R. 5S. 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- Tl' R)- l'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 3- f( pyridin- 2- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (-20°C) løsning av 0,39 g (0,75 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -6- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- (2n-hydroksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 80 ml THF ble behandlet med 315 mg (1,2 mmol) trifenylfosfin, en 0,43M løsning av hydrazoesyre i 0,21 ml (1,3 mmol) toluen og 0,21 ml (1,3 mmol) dietylazodikarboksylat. Blandingen ble omrørt i 30 minutter ved -20°C, fortynnet med 30 ml EtOAc, vasket med 1 x 20 ml IM vandig NaHC03, 2 x 20 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten (ca. 1 g) ble ledet gjennom en 50 g silicagelsøyle (l/3:AcOEt/heksan), hvorved det ble oppnådd 0,30 g (74%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) Vmaks: 2105 (N3), 1775 og 1710 cm'<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,53-8,50 (1H, m, aromatisk H), 7,71- 7,62 (1H, m, aromatisk H), 7,38, 7,34 (1H, d, aromatisk H), 7,22-7,16 (1H, m, aromatisk H), 6,03-5,84 (1H, m, allylisk H), 5,46-5,20 (2H, m, allylisk H), 4,83-4,59 (2H, m, CH2), 4,306, 4,237, 4,096, 4,628 (2H, ABq, J=13,7 Hz, CH2 pyridyl), 4,23-4,1 (1H, m, H-l')/ 4,076, 4,063/ 4,016 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,4 Hz, H-5) , 3,75-3,6 (1H, m, H-4), 3,6-3,45 (1H, m, HCH-O), 3,45-3,25 (1H, m, HCH-O), 3,071 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=7,8 Hz, H-6), 2,13-1,95 (1H, m, HCH), 1,8-1,5 (1H, m, HCH), 1,302 (3H, d, J=6,0 Hz, CH3), 0,892 (9H, s, tert-butyl), 0,086 og 0,081 ppm (6H, 2s, dimetyl).
C. Allyl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- F( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 3- rpvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo' 3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (-20°C) løsning av 0,30 g (0,55 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"azidoetyl) -6- [ (1'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3-[(pyridin-2-yl)metyltio-7]-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml fersk destillert THF ble behandlet med 0,2 ml (3,3 mmol) AcOH og dråpevis med en IM THF-løsning av 1,7 ml (1,7 mmol) tetrabutylammonium-fluorid. Blandingen ble deretter omrørt ved 5°C i 90 timer, fortynnet med 40 ml EtOAc, vasket med 1 x 30 ml IM vandig NaHC03, 2 x 30 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten 0,3 g ble ledet gjennom en 10 g silicagelsøyle (1:1 heksan:EtOAc), hvorved det ble oppnådd 0,21 g (89%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) <V>maks:3680-3600 (OH), 2100 (N3) 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,54-8,51 (1H, m, aromatisk H), 7,7-7,6 (1H, m, aromatisk H), 7,38, 7,34 (1H, m, aromatisk H), 7,25-7,15 (1H, m, aromatisk H), 6,1-5,8 (1H, m, allyl H), 5,5 (2H, m, allyl H), 4,8-4,55 (2H, m, CH2-allyl), 4,294, 4,225, 4,072, 4,002 (2H, ABq, J=14,0 Hz, CH2~pyridyl), 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 4,166 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H- 5), 3,8-3,65 (1H, m, H-4), 3,6-3,3 (2H, m, CH2~<N>3), 3,162 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,7 Hz, H-6), 2,2-2 (1H, m, HCH), 1,95 (1H, bs, OH) , 1,9-1,6 (1H, m, HCH), 1, 382 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3) .
D. Natrium- ( 4R, 5S, 6S) - 4- ( 2"- azidoetvl) - 6- r ( l' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- r( Pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo\ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 74 mg (0,17 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2-azidoetyl) -6-[ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3-[(pyridin-2-yl)]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat i 3 ml CH2C12 ble behandlet med 35 mg Pd(PPh3)4 etterfulgt av tilsetningen av 0,5 ml (0,45 mmol) N-metyl-anilin. Den resulterende blanding ble omrørt ved ca. 22°C i 1 time, deretter fortynnet med 0,35 mmol O,IM pH 7,1 vandig fosfatbufferløsning og 10 ml dietyleter. Fasene ble adskilt og den vandige fase ble vasket med 2 x 10 ml dietyleter, pumpet under høyvakuum, og ledet gjennom en 35 g "C^ UBondapak"-reversfasesøyle (4% -» 10% CH3CN/H20), hvorved det ble oppnådd 55 mg (41%) av tittelforbindelsen etter lyofilisering.
UV: (H20) Xmak.s: 266 (7800), 304 (10500).
Renhet ved HPLC: 99,5% (304 nm, 10% CH3CN/KH2P04 0,01M pH 7,4) .
IR (Nujol) vmaks: 2100 (N3), 1750 og 1600 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz)<A>@8: 8,5-8,4 (1H, m, aromatisk H), 7,9-7,8 (1H, m, aromatisk H), 7,54, 7,50 (1H, dd, aromatisk H) , 7,4-7,3 (1H, m, aromatisk H), 4,27, 4,20, 4, 11, 4, 04 (2H, ABq, J=14,2 Hz, CH2~pyridin), 4,25-4,15 (1H, m, H-l')/ 4,067, 4,054 (del av dd, J=2,6 Hz, del av H-5), 3,52-3,17 (4H, m, CH2N3, H-4 og H-6), 3,389 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 2,1-1,9 (1H, m, HCH), 1,75-1,5 (1H, m, HCH) og 1,297 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 7
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll-3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. 5- azido-\( pyridin- 2- yl) metvltiol- valerat
En kald (isbad) løsning av 20,2 g (162 mmol) 2-picolyl-merkaptan i 200 ml CH2C12 ble behandlet med 16,3 ml (203 mmol) pyridin etterfulgt av dråpevis tilsetning av 27,0 g (167 mmol) 5-azidovalerylklorid i 50 ml CH2C12. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, fortynnet med dietyleter (1 1), vasket med 500 ml kaldt vann, 2 x 500 ml IM vandig NaHS03, 500 ml vann, 500 ml IM vandig NaHC03, 500 ml vann, 500 ml saltvannog tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 40,8 g (100%) av tittelforbindelsen.
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,54, 8,52 (1H, bd, aromatisk H), 7,6- 7,5 (1H, m, aromatisk H), 7,35-7,31 (1H, bd, aromatisk H), 7,19-7,12 (1H, m, aromatisk H), 4,25 (2H, s, C<H>2), 3,27 (2H, t, J=6,6 Hz, CH2N3), 2,62 (2H, t, J=6,9 Hz, C<H>2CO), og 1,8-1,5 ppm (4H, m, CH2CH2).
B. tert- butvldimetvlsilvlenoleter av 5- azidor( pvridin- 2-vl) metvltiolvalerat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 44,0 g (162 mmol) 5-azido-[(pyridin-2-yl)metyltio]valerat i 400 ml CH2C12 ble suksessivt behandlet med 50 ml (356 mmol) trietylamin og dråpevis med 76,6 ml (333 mmol) tert-butyldimetylsilyl-trifluormetansulfonat. Det kalde bad ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 1,5 1 petroleumseter, vasket med 2 x 500 ml kaldt vann, 2 x 500 ml IM vandig NaHC03, 2 x 500 ml vann, 500 ml saltvann og tørket (MgS04). Den organiske fase ble deretter behandlet med nøytralt, aktivt kull, hvorved det ble oppnådd, etter filtrering og avdampning av løsningsmidlet, 48,9 g (83%) av tittelforbindelsen.
^H-NMR <CDC13, 200 MHz) 6: 8,56-8,53 (1H, m, aromatisk H), 7,67- 7,57 (1H, m, aromatisk H), 7,28-7,23 (1H, m, aromatisk H), 7,18-7,11 (1H, m, aromatisk H), 4,96 (0,5 H, t, J=7,6 Hz, vinylisk H), 4,80 (0,5 H, t, J=7,3 Hz, vinylisk H), 4,030 og 3,955 (2H, 2s, CH2-pyridyl), 3,097 og 3,040 (2H, 2t, J=7,0 Hz, J=7,3 Hz, CH2), 2,06 (2H, sentrum av 4 linjer, J=7,l Hz, CH2-vinyl), 1,57-1,38 (2H, m, CH2), 0,989, 0,970 (9H, 2s, tert-butvl) og 0,243, 0,205 ppm (6H, 2s, dimetyl).
C. ( 3S. 4S)- 3- r( lfR)-1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-r( 1" R)- 1"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 4"-azidobutvllazetidin- 2- on
En kald (isbad) fersk dannet 18,0 g (133 mmol) ZnCl2 ble suksessivt tilsatt 19,0 g (67,0 mmol) (3S., 4R) -4-acetoksy-3-[(l'R)- l'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on i 200 ml CH2C12 og dråpevis en løsning av 48,5 g (133 mmol) tert-butyldimetylsilylenoleter av 5-azido-[(pyridin-2-yl)metyl-tio] valerat (fremstilt i trinn B i 100 ml CH2C12). Blandingen ble omrørt i 1 time og sto natten over (18 timer) ved 5°C (kaldt rom). Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 1,2 1 petroleumseter og 500 ml iskaldt vann. Den organiske fase ble vasket med 2 x 500 ml kaldt vann, 1 x 500 ml IM vandig NH4C1, 500 ml vann, 2 x 500 ml IM vandig NaHC03, 2 x 500 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 400 g silicagelpute (heksan, CH2C12, EtOAc), hvorved det ble oppnådd 14,2 g (44%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3400 (NH), 2100 (<N>3), 1770 og 1680 cm" <1> (C=0) .
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,55-8,51 (1H, m, aromatisk
H), 7,68- 7,59 (1H, m, aromatisk H), 7,35-7,30 (1H, m, aromatisk H), 7,21-7,14 (1H, m, aromatisk H), 5,89 (1H, bs, NH), 4,27 (2H, s, CH2-pyridyl), 4,20-4,10 (1H, m, H-l'), 3,81 (1H, dd, J=2,l Hz, J=7,0 Hz, H-4), 3,279 (2H, bt, J=6,3 Hz, CH2N3), 3,048 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=3,2 Hz, H-3), 2,9- 1,7 (1H, 'm, H-l"), 1,9-1,7 (1H, m, HCH), 1,7-1,5 (3H, m, HCH og CH2), 0, 987 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) , 0,851 (9H, s, tert-but vi) og 0,042 ppm (6H, s, dimetyl). D. ( 3S, 4S)- 3- r( 1' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-r( 1" R)- 1"- karboksv- 4"- azidobutvl1azetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 14,0 g (28,4 mmol) (3S., 4S.)-3-[(l'R)-1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[ (1"R) -1"-(pyridin-2-yl)metyltiokarbonyl-4"-azidobutyl]azetidin-2-on i 140 ml THF ble først behandlet med 9,8 ml (714 mmol) 30% H202 etterfulgt av dråpevis tilsetning av 85,2 ml (85,2 mmol) IM vandig NaOH. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 0,5 time, hvoretter den ble gjort sur med 170 ml (170 mmol) IN vandig HC1 og ekstrahert med 3 x 125 ml EtOAc. Etylacetatekstraktene ble kombinert, vasket med 1 x 125 ml vann, 1 x 125 ml IM vandig NaHS03, 2 x 125 ml vann, 1 x 125 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet og triturering av faststoffet (heksan) ga 8,3 g (76%) av tittelforbindelsen som et hvitt faststoff, smp. 147-148°C (dietyleter).
IR (CH2C12) <V>maks: 3410 (NH), 2100 (N3), 1765, 1740 og
1710 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,43 (1H, bs, NH), 4,3-4,1
(1H, m, H- 1'), 3,89 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=6,l Hz, H-4), 3,337 (2H, bt, J=6,l Hz, CH2<N>3), 3,148 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=3,7 Hz, H-3), 2,75-2,6 (1H, m, H-l"), 1,9-1,5 (4H, m, CH2CH2), 1,176 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,868 (9H, s, tert-butyl), 0,071 og 0,060 ppm (6H, 2s, dimetyl).
E. ( 3S. 4R)- 3- r( l' R)- l/- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl1- 4-f( 1" R)- 1"-( 3- azidopropvl)- 3"- diazo- 3"- allvloksvkarbonvl-2"- oksopropyl) azetidin- 2- on
En suspensjon av 5,0 g (13 mmol) (3S., 4R)-3-[ (1'R)-1'-tert-but<y>ldimet<y>lsil<y>loks<y>et<y>l]-4-[(1"R)-l"-karboksy-4"-azidobutyl]azetidin-2-on i 50 ml CH3CN ble behandlet med 2,5 g
(15,6 mmol) karbonyldiimidazol og omrørt i 30 minutter. Den resulterende klare løsning (acylimidazol) ble tilsatt 5,0 g (16 mmol) magnesium-monoallylmalonat. Blandingen ble oppvarmet ved 70°C (badtemperatur) i 18 timer. Ytterligere 1,25 g (4 mmol) malonat ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet i ytterligere 5 timer. Deretter ble 1,25 g (4 mmol) magnesium-monoallylmalonat igjen tilsatt og oppvarmning ble fortsatt i 18 timer. Løsningsmidlet ble delvist avdampet. Resten ble tatt opp i 100 ml etylacetat, vasket med 100 ml, 100 ml IN vandig HC1, 2 x 100 ml vann, 100 ml 10% vandig K2C03, 100 ml vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble etter løsnings-middelsavdampning tatt opp i 50 ml CH3CN, avkjølt til 5°C (isbad) under nitrogen, behandlet suksessivt med 1,82 ml (13,0 mmol) trietylamin og dråpevis med 2,56 ml (13,0 mmol) p-toluensulfonylazid i 5 ml CH3CN og omrørt i 3 timer ved værelsestemperatur (22°C). Løsningsmidlet ble avdampet og den
oppnådde rest ble ledet gjennom en 100 g silicagelpute (heksan -> 40% eter/heksan), hvorved det ble oppnådd 1,6 g (25%) av tittelforbindelsen som en gul olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3400 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), 1765, 1715 og 1650 cm"<1> (C=0) .
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,1-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,85 (1H, bs, NH), 5,41-5,29 (2H, m, vinylisk H), 4,74-4,70 (2H, m, allylisk CH2), 4,3-4,0 (2H, m, H-l', og H-l"), 3,85 (1H, dd, J=2,l Hz, J=5,3 Hz, H-4), 3,267 (2H, m, CH2N3) , 3,044 (1H, dd, J=2,l Hz, J=3,6 Hz, H-3), 2,0-1,8 (1H, m, HCH), 1,7-1,4 (3H, m, CH2HCH), 1,172 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3). 0,863 (9H, s, tert-butyl) 0,063 og 0,052 ppm (6H, 2s, dimetyl),
F. Allvl-( 4R, 5R. 6S)- 6- r ( l' R) - 1 ' - tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 4-( 3"- azidopropyl)- 3, 7- diokso-1- azabicvclo T3, 2, 01- heptan- 2- karboksvlat
En løsning av 1,45 g (303 mmol) (3S_, 4R)-3-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl) -4-[(1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 50 ml benzen, tidligere renset med argon (10 min), ble oppvarmet under tilbakekjøling i 40 minutter under anvendelse av 40 mg Rh(0Ac)2 som katalysator. Løsningsmidlet ble deretter avdam-pet, hvorved det ble oppnådd 1,45 g (100%) av tittelforbindel-sen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 2100 (N3), 1770 og 1745 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,0-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,4-5,25 (2H, m, vinylisk H), 4,67 (1H, s, H-2), 4,64 (2H, m,
CH2)/ 4,4-4,2 (1H, m, H-l'), 4,255, (1H, dd, J=2,4 Hz, J=8,3 Hz, H-5), 3,5-3,2 (2H, m, CH2N3), 3,24 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,2 Hz, H-6), 2,8-2,6 (1H, m, H-4), 1, 85-1,55 (4H, m, C<H>2C<H>2CO), 1,304 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,886 (9H, s, tert-butyl), 0,102 og 0,090 ppm (6H, 2s, dimetyl).
G. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- r( l' R) - 1'-( tert-butvl- dimetvlsilvloksvetvl) 1- 3- r( Pvridin- 2- vl) metvltio1-7- okso- l- azabicvclo\ 3 , 2 , 01 hept- 2- en- 2- karbo) c5vlat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 1,45 g (3,03 mmol) allyl- (4R, 5R, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3, 7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]-heptan-2-karboksylat i 25 ml CH3CN ble behandlet med 0,67 ml (3,3 mmol) difenylklorfosfat og dråpevis med 0,55 ml (3,3 mmol) N,N-diisopropyletylamin og omrørt i 45 minutter. Det resulterende enolfosfat ble deretter behandlet med 2,90 g (23,2 mmol) 2-picolylmerkaptan og dråpevis med 3,86 ml (23,2 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Is-MeOH-badet ble erstattet med et isbad, og blandingen ble omrørt i 2 timer, hvoretter den ble fortynnet med 100 ml EtOAc, vasket med 50 ml kald vann, 3 x 50 ml kald IM vandig NaHS03, 2 x 50 ml vann, 2 x 50 ml kald IM vandig NaHC03, 1 x 50 ml vann, 50 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 30 g silicagelsøyle (heksan -> 40% EtOAc/heksan), hvorved det ble oppnådd tittelproduktet kontaminert med utgangstiolen. Dette materiale ble fortynnet med 50 ml dietyleter og ble igjen vasket med 20 ml kaldt vann, 3 x 20 ml IM vandig NaHS03, 2 x 20 ml H20, 2 x 20 ml IM vandig NaHC03, 20 ml vann, 20 ml saltvann og tørket (MgS04) hvorved det ble oppnådd 1,45 g (86%) som en ren tittelforbindelse.
IR (CH2C12) Vmaks: 2105 (N3), 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 8,5-8,4 (1H, m, aromatisk H), 7,8-7,6 (1H, m, aromatisk H), 7,4-7,39 (1H, bd, aromatisk H), 7,3-7,18 (1H, m, aromatisk H), 6,05-5,80 (1H, m, vinylisk H, H-l'), 4,01 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,5 Hz, H-5) , 3,6-3,4 (1H, m) , 5,5-5,2 (2H, m, vinylisk H) , 4,9- 4,6 (2H, m, CH2) , 4,287, 4,217, 4,083, 4,013 (2H, ABq, J=14,0 Hz, CH2-pyridyl), 4,21-4,08 (1H, m, H-4), 3,4-3,2 (2H, m, CH2N3), 3,145 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=7,5 Hz, H-6), 2,0-1,4 (4H, m, CH2CH2), 1,288 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,874 <9H, s, tert-butyl), 0,073 og 0,059 ppm (6H, 2s, dimetyl).
H. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 6-\( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3-\( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (is-MeOH-bad) 30 ml THF-løsning av 1,5 g (2,6 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -4-(3"-azidopropyl)-6-[ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-1-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat ble behandlet dråpevis med 0,9 ml, (15,6 mmol) CH3C02H og med en IM THF-løsning av 7,8 ml (7,8 mmol) tetrabutylammoniumfluorid. Blandingen ble omrørt ved denne temperatur i 1 time, fikk lov å stå i 56 timer ved 5°C og ble deretter omrørt ved værelsestemperatur i 24 timer. Blandingen ble avkjølet til 0°C, nøy-tralisert med 16 ml IM vandig NaHC03 og den vandige fase ble ekstrahert med 2 x 100 ml EtOAc/dietyleter (1:1). De organiske ekstrakter ble kombinert, vasket med 50 ml kald IM vandig NaHC03, 2 x 50 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 30 g silicagelsøyle (heksan/CH2Cl2 -» CH2C12/- EtOAc —» EtOAc), hvorved det ble oppnådd 679 mg (64%) av tittelforbindelsen og 160 mg (11%) av utgangsmateriale.
IR (CH2C12) <V>maks: 3600, 3500 (OH), 2100 (N3), 1775 og 1710 cm'<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,51-8,49 (1H, m, aromatisk H), 7,7-7,6 (1H, m, aromatisk H), 7,41, 7,37 (1H, bd, aromatisk H), 7,23-7,16 (1H, m, aromatisk H), 6,05-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,5-5,2 (2H, m, vinylisk H), 4,86-4,6 (2H, m, vinylisk CH2), 4,256, 4,185, 4,056, 3,985 (2H, ABq, J=14,2 Hz, CH2-pyridyl), 4,25-4,15 (1H, m, H-l'), 1,121 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,6-3,45 (1H, skjult, H-4), 3,45-3,24 (2 H, m, CH2N3), 3,214 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,5 Hz, H-6), 1,87 (1H, bd, J=6,5, OH) , 2,0-1,5 (4H, m, CH2CH2) og 1,37 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
I. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll-3- rpvridin- 2- vi) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo r3. 2, 01hept-2- en- 2- karboksylsyre
En kald (isbad) løsning av 133 mg (0,3 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2C12 ble behandlet med 63 mg (Ph3P)4Pd og 0,1 ml (0,6 mmol) N-metylanilin. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 1 time, hvoretter den igjen ble avkjølt (isbad). Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 40 ml dietyleter og ekstrahert med 2 x 6 ml 0,0511 pH 7,0 fosfat-buffer. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 20 ml dietyleter og gjort sur til pH 5,8-5,9 med en 0,05M, pH 4,2 fosfatbuffer. Den vandige fase ble hydrogenolysert ved 50 psi i 1 time ved 5 -» 15°C under anvendelse av 225 mg 10% Pd/C som katalysator. Ved avslutning av hydrogenolyse ble katalysa-toren fjernet, ledet gjennom 35 g "C^g uBondapak"-søyle (H2O -» 4% CH3CN/H20) og lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 17 mg (11%) av tittelforbindelsen, som ble gjennrenset på 15 g "C^g (lBondapak"-søyle og lyofilisert.
Renhet: 97,5% bestemt ved HPLC (10% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4, r.t. 5,66 minutter, "uBondapak-C18" 10fi) .
UV (<H>2<0>) ^maks: 304 (9383), 266 (6895).
IR (Nujol) Vmaks: 1755 og 1590 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,48-8,45'(1H, bd, aromatisk H), 7,9-7,8 (1H, m, aromatisk H) , 7,54, 7, 49 (1H, bd, aromatisk H) , 7,4-7,3 (1H, m, aromatisk H), 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 4,225, 4, 157, 4, 106, 4, 043 (2H, ABq, J=13,2 Hz, CH2-pyridin), 4,056, 4,043 (del av dd, J=2,6 Hz, H-5), 3,31 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,197 (1H, bt, J=9,4 Hz, H-4), 3,0-2,85 (2H, m, C<H>2N3), 1,9-1,55 (3H, m, HCH og CH2), 1,55-1,2 (1H, m, HCH) og 1,295 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 8
( 4R. 5S. 6S)- 4- r 3"-( N- formimidovl) aminopropvl1- 6- 1" ( 1' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- r( pyridin- 2- vl) metvltio1- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
pH av det rå, hydrogenolyserte produkt (4R, 5S., 6S.) -4-(3"-aminopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre oppnådd ved avbeskyttelse av 150 mg (0,338 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.)-4-(3"-azidopropyl)-6-[ (1'R)-1-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat som beskrevet i eksempel 7 trinn I ble innstilt til pH 8,5 med IM vandig NaOH ved 5°C (isbad). Den vandige blanding ble porsjonsvis tilsatt 583 mg (3,41 mmol) benzyl-formimidat,hydroklorid under bibeholdelse av pH ved 8,3-8,4 med IM vandig NaOH. Ved tilsetningens avslutning ble blandin-gen omrørt i 6 minutter og deretter overført til en 40 g "uBondapak-C18"-reversfasesøyle (H2<0> -» 1,2,3,4 og 6% CH3CN/- H20), hvorved det ble oppnådd tittelproduktet, som ble gjenrenset på en "aBondapak-C18"-reversfasesøyle (H20 -> 2, 3, 4 og 6% CH3CN/H20). 19 mg (11%) ren tittelforbindelse ble oppnådd som et hvitt, fnugget faststoff.
Renhet: 98,9% som bestemt ved HPLC (10% CH3CN/K2P04 0,01M, pH 7,4, r.t. 6,77 minutter, "uBondapak-C18" 10u) .
UV (H20) Xmaks<:> 304 (7791), 266 (5941).
IR (Nujol) <v>maks: 1755, 1690 (C=0), og 1715 cm"<1> (C=NH).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,45-8,42 (1H, bd, aromatisk H), 7,87-7,75 (1H, m, aromatisk H), 7,77 (1H, bs, C=NH), 7,51, 7,47 (1H, bd, aromatisk H), 7,37, 7,3 (1H, m, aromatisk H), 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 4,198, 4,134, 4,072, 4,001 (2H, ABq, J=13,5 Hz, CH2-pyridin), 4,045-4,07 (1H, skjult H-5), 3,4-3,05 (4H, m, CH2N, H-4, H-6), 1,8-1,4 (3H, m, HCH og CH2), 1,4-1,15 (1H, m, HCH) og 1,259 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 9
Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 6- f ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 3"-hvdroksvpropyl)- 3-\( pvridin- 2- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. Natrium- 5- hvdrokswalerat
En kald (isbad) suspensjon av 20 g (0,20 mol) valerol-acton i 100 ml vann ble behandlet dråpevis med en løsning av 8,0 g (0,20 mol) NaOH i 100 ml vann. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, hvoretter det kalde bad ble fjernet og omrøring ble fortsatt i ytterligere 15 minutter. Blandingen ble deret-ter filtrert for å fjerne faststoffet, og lyofilisering av filtratet ga 26,2 g (94%) av tittelforbindelsen som et hvitt faststoff.
IR (Nujol) vmaks: 3600-3100 (OH), og 1560 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (<D>20, 200 MHz) 8: 3,61 (2H, t, J=6,l Hz, CH20H), 2,20 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2C02) og 1,58, 1,57, 1,55 ppm (4H, m, CH2CH2).
B. t- butvldimetvlsilvl- 5-( t- butvldimetvlsilvloksv) valerat
En kald (isbad) suspensjon av 25,0 g (179 mmol) natrium-5-hydroksyvalerat i 250 ml DMF ble porsjonsvis tilsatt 80,8 g (536 mmol) t-butyldimetylsilylklorid, etterfulgt av dråpevis tilsetning av 32 ml (232 mmol) trietylamin. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 2,5 dager ved ca. 22°C. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 700 ml iskaldt vann og ekstrahert med 2 x 800 ml dietyleter. De organiske ekstrakter ble kombinert, vasket med 5 x 500 ml kaldt vann, 500 ml salt-vann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 70 g (>100%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) vmaks: 1720 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 3,61 (2H, t, J=6,0 Hz, CH20), 2,33 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2C02) , 2,8-2,5 (4H, m, (CH2)2), 0,92, 0,88 (18 H, 2s, t-butyl), 0,25, 0, 09, og 0,04 ppm (12H, 3s, CH3) .
C. 5-( t- butvldimetvlsilvloksv) valerianesvre
En løsning av 70 g (fra 178,6 mmol natriumhydroksy-valerat) t-butyldimetylsilyl-5-(t-butyldimetylsilyloksy)-valerat i 550 ml MeOH ble behandlet med en 5N løsning av 50 ml
(250 mmol) AcOH i vann og deretter omrørt i 1,5-2,0 timer. Løsningsmidlet ble fjernet, og resten ble tatt opp ill CH2CI2 og vasket med 4 x 500 ml iskaldt vann, 500 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten (58 g) ved løsningsmiddelavdampning ble tatt opp i 600 ml dietyleter og ekstrahert med 3 x 200 ml IM vandig NaHC03. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 3 x 200 ml dietyleter, gjort sur med 5M vandig AcOH til pH 5,0 og deretter ekstrahert med 4 x 200 ml dietyleter. De organiske ekstrakter ble kombinert, vasket med 4 x 200 ml kaldt vann, 200 ml saltvann og tørket (MgS04), hvorved det ble oppnådd 25 g (60%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3660-2500 (OH), 1750-1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 6: 3,63 (2H, t, J=6,0 Hz, CH20), 2,39 (2H, t, J=7,2 Hz, CH2C02), 1,78-1,49 (4H, m, (CH2)2)/ 0,89 (9H, s, t-butyl) og 0847 ppm (6H, s, CH3).
D. 5-( tert- butvldimetvlsilvloksy)- 1- f( pyridin- 2- yl)-metvltiolvalerat
En kald (isbad) løsning av 25,0 g (108 mmol) 5-(t-butyldimetylsilyloksy)-valerianesyre i 350 ml CH2Cl2 ble tilsatt 13,5 g (108 mmol) 2-picolyl-merkaptan, 22,2 g (108 mmol) 1,3-dicycloheksylkarbodiimid og 14,6 g (108 mmol) 1-hydroksybenzotriazol,hydrat. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 20 timer, deretter fortynnet med 1 1 etylacetat, vasket med 1 1 iskaldt vann, 1 1 iskald IM vandig NaHS03, 1 1 iskaldt vann, 1 1 IM vandig NaHC03, 2x11 iskaldt vann, 1 1 saltvann og tørket (MgS04). Resten ved løsningsmiddelavdampning ble renset på 250 g hurtigsilica-gelsøyle (heksan, 5%, 10%, 15% EtOAc/heksan), hvorved det ble oppnådd 30,2 g (83%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) vmaks<:> 1690 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 8,55-8,52 (1H, m, pyridin-H), 7,68-7,59 (1H, m, pyridin-H), 7,37-7,33 (1H, bd, J=7,7 Hz, pyridin-H), 7,20-7,14 (1H, m, pyridin-H), 4,26 (2H, s, CH2S), 3,60 (2H, t, J=6,l Hz, CH20), 2,61 (2H, t, J=7,l Hz, CH2C02) , 1,85-1,6 (2H, m, CH2), 1,6-1,4 (2H, m, CH2), 0,88 (9H, s, t-butyl) og 0,03 ppm (6H, s, CH3).
E. t- butvldimetvlsilvlenoleter av 5-( tert- butyldimetvl-silvloksv)- 1- r( pvridin- 2- vl) metvltiolvalerat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 30,2 g (89,0 mmol) 5-(tert-butyldimetylsilyloksy)-1-[(pyridin-2-yl)metyltio]valerat i 300 ml CH2C12 ble tilsatt 27 ml (196 mmol) trietylamin etterfulgt av dråpevis tilsetning av 41 ml (178 mmol) tert-butyldimetylsilyl-trifluormetansulfat. Det kalde bad ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 2 timer. Blandingen ble fortynnet med 2,7 1 kald petroleumseter, vasket med 2 x 500 ml iskaldt vann, 1 x 500 ml iskald vandig IM NaHC03, 2 x 500 ml iskaldt vann, 500 ml saltvann og tørket. Behandling av den organiske løsning med nøytralt aktivt kull og filtrering ga 33 g (83%) av tittelforbindelsen som en rød olje i et 45:55 forhold av geometriske isomerer.
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,54-8,51 (1H, m, pyridin-H), 7,65-7,56 (1H, m, pyridin-H), 7,31-7,23 (1H, m, pyridin-H), 7,16-7,09 (1H, m, pyridin H), 5,02 (0,55 H, t, J=7,6 Hz, vinylisk H), 4,87 (0,45 H, t, J=7,2 Hz, vinylisk H), 4,03 (1,1
H, s, CH2S) , 3,96 (0,9 H, s, CH2S) , 3,55, 3,52, 3,49, 3,46 (2H, 4 linjer, J=6,4 Hz, CH20), 2,1-1,96 (2H, m, CH2-vinyl), I, 52-1,29 (2H, m, CH2) , 0, 985, 0, 977 (9H, 2s, t-butyl), 0, 879, 0,873 (9H, 2s, t-butyl), 0,236 g, 0,194 g, 0,02 g og 0,013 ppm (12H, 4s, CH3).
F. ( 3S. 4S)- 3-' ( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll - 4-r( 1" R)- 1"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 4"- tert-butvldimetvlsilvloksvbutvl1azetidin- 2- on
Kald (isbad) fersk dannet 10,0 g (73,5 mmol) ZnCl2 under nitrogen ble tilsatt 10,5 g (36,7 mmol) (3S., 4R)-4-acetoksy-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on i 100 ml CH2C12 etterfulgt av langsom tilsetning av 33,2 g (73,3 mmol) enolsilyleterenfremstilt i trinn E i 50 ml CH2C12. Blandingen ble omrørt i 18,5 timer ved 5°C, hvoretter den ble fortynnet med 1 1 petroleumseter og holdt på is og 500 ml vann. Den organiske fase ble vasket med 2 x 500 ml kaldt vann, 500 ml IM vandig NH4C1, 500 ml vann), 500 ml IM vandig NaHC03, 2 x 500 ml vann, 500 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 100 g silicagelpute (CH2Cl2, 3%, 5%, 8%, 10%, 20% EtOAc/CH2Cl2)/ hvorved det ble oppnådd 9,2 g (44%) av tittelforbindelsen som et faststoff, smp. 110-111°C (dietyl-eter-petroleumseter:1/4).
IR (CH2C12) <V>maks: 3400 (NH), 1770 og 1680 cm"<1> (C=0). <1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,54-8,50 (1H, m, pyridin-H), 7, 66-7,58 (1H, m, pyridin-H), 7, 34, 7, 30 (1H, bd, J=7,5 Hz, pyridin-H), 7,2-7,13 (1H, m, pyridin-H), 5,85 (1H, bs, NH), 4,25 (2H, s, CH2S), 4,20-4,09 (1H, m, H- l'), 3,82 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=7,l Hz, H-4), 3,61-3,55 (2H, m, CH20), 3,05-3,02 (1H, m, H-3), 2,84-2,75 (1H, m, H-l"), 1,9-1,4 (4H, m, (C<H>2)2), 0,98 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0, 87, 0, 85 (18H, 2s, t-butyl), 0,04 og 0,023 ppm (12H, 2s, CH3).
• Analyse for C2gH5øN204SSi:
Beregnet: C, 59,32%; H, 8,89%; N, 4,94%.
Funnet: C, 59,35%; H, 9,03%; N, 4,95%.
G. ( 3S. 4S)- 3- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsidlvloksvetvll- 4-f( 1" R)- l"- karboksv- 4"- tert- butvldimetvlsilvloksvbutvl1-azetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 7,30 g (12,9 mmol) (3S., 4S.)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(pyridin-2-yl)metyltiokarbonyl-4"- tert-butvldimetvlsilvloksv butyl]azetidin-2-on i 70 ml THF ble behandlet med 4,45 ml (51,0 mmol) 30% på volumbasis H202^ etterfulgt av dråpevis tilsetning av 38,7 ml (38,7 mmol) IM vandig NaOH. Isbadet ble fjernet og blandingen ble omrørt i 30 minutter, hvoretter den igjen ble avkjølt (isbad). Deretter ble 77 ml IN vandig HC1 tilsatt, og blandingen ble ekstrahert med 3 x 50 ml EtOAc. De organiske ekstrakter ble vasket med 2 x 50 ml iskalt vann, 2 x 50 ml IM vandig NaHS03, 3 x 50 ml iskalt vann, saltvann og tørket (MgS04), hvorved det ble oppnådd 5,5 g (92%) av tittel-forbindelsen, som et hvitt faststoff, smp. 127-128°C (petro-leumseter/dietyleter: 1/2).
IR (CH2C12) Vmaks:3410 (NH), 1755, 1740 og 1710 cm"<1 >(C=0).
<X>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,28 (^-H, bs, NH) , 4,23-4,18 (1H, m, H- 1'), 3,89 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=6,3 Hz, H-4), 3,7-3,55 (2H, m, CH20) , 3, 15-3, 05 (1H, m, H3) , 2,8-2,6 (1H, m, H-1"), 1,8-1,5 (4H, m, (CH2)2), 1,17 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) , 0, 89, 0, 86 (18H, 2s, t-butyl), 0, 064, 0, 057 og 0,051 ppm (12H, 3s, CH3).
Analyse for C^g^^NO^S^:
Beregnet: C, 57,47%, H, 9,86%, N, 3,05%.
Funnet: C, 57,41%, H, 10,04%, N, 3,07%.
H. ( 3S, 4R) - 3- r ( l' R) - l/- tert- butvldimetvlsilvloksv- etvn- 4-f( 1" R)- l"-( 3"- tert- butvldimetvlsilvloksvpropyl)- 3"-allvloksvkarbonyl- 2"- oksopropvn azetidin- 2- on
En løsning av 5,7 g (18,1 mmol) magnesium-bis-allylmalonat i 80 ml benzen ble oppvarmet under tilbakekjøling under anvendelse av en Dean Stark-kondensator. De første 20 ml benzen ble fjernet og Dean Stark ble erstattet med en skille-trakt fyllt med 3Å molekylsikter. Tilbakekjølingen ble fort-satt i ytterligere 3 timer og løsningen ble avkjølt.
I en separat kolbe ble en løsning av 5,50 g (12,1 mmol)
(3S., 4S) -3- [' (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- [ (1"R) - l"-karboksv-4"- tert-butvldimetvlsilvloksvbutvilazetidin-2-on i 100 ml toluen behandlet med 2,15 g (13,3 mmol) karbonyldiimidazol. Blandingen ble omrørt i 2 timer, og løsningsmidlet ble
avdampet, hvorved det ble oppnådd en olje som ble pumpet under høyvakuum i 2 timer. Acylimidazolen ble deretter fortynnet med 20 ml benzen og tilsatt benzenløsningen av magnesium-bis-allylmalonat. Blandingen ble oppvarmet ved 67-70°C i 18 timer, avkjølet, fortynnet med kald EtOAc, vasket med 2 x 100 ml iskalt vann, 100 ml HC1, 2 x 100 ml, 1 x 100 ml (10%) vandig Na2C03, 1 x 100 ml iskalt vann, 100 ml saltvann, tørket (MgSO^) og behandlet med aktivt kull. Avdampning av løsnings-midlet ga 6,2 g (95%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3410 (NH), 1765 og 1715 cm"<1> (C=0).
^■H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 12,03, 12,02 (0,5 H, 2s, enolylisk-H), 6,0-5,8 (1H, m, vinylisk-H), 5,87 (1H, bs, NH), 5,38-5,24 (2H, m, vinylisk-H), 5,07 (0,52 H, s, vinylisk-H av enolform), 4,65-4,61 (2H, m, CH2-vinyl), 4,19-4,1 (1H, m, H-1')/ 3,89 (0,5H, dd, J=2,0 Hz, J=6,2 Hz, H-4), 3,82 (0,5H, dd, J=2,0 Hz, J=7,4 Hz, H-4), 3,64-3,4 (2,5 H, m, CH20 og H-l"), 2,97-2,91 (1H, m, H-3), 2,3-2,1 (0,5H, m, H-l"), 1,8-1,4 (4H, m, (C<H>2)2), 1,17 (1,5H, d, J=6,2 Hz, CH3) , 1,11 (1,5 H, d, J=6,4 Hz, CH3), 0,88, 0,86 (18H, 2s, tert-butyl), 0,06 og 0. 054 ppm (12H, 2s, CH3).
1. ( 3S, 4R)- 3- r( l' R)- l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-r( 1" R)- 1"-( 3- tert- butvldimetvlsilvloksvpropvl)- 3"- diazo-3"- allvloksvkarbonvl- 2"- oksopropvl1azetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 6,20 g (11,5 mmol) (3S,4R)-3-[(l'R)-1'-tert-but<y>ldimet<y>lsil<y>loks<y>et<y>l]-4-[(1"<R>)-1"-(3- tert-butyldimetylsilyloksypropyl)-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]-azetidin-2-on i 50 ml vannfri CH3CN ble behandlet med 1,16 ml (11,5 mmol) trietylamin, etterfulgt av dråpevis til-setning av 2,27 g (11,5 mmol) p-toluensulfonylazid i 10 ml CH3CN. Blandingen ble omrørt i 3 timer ved ca. 22°C, og løs-ningsmidlet ble fjernet under vakuum. Den oljeaktige rest ble triturert med heksan og faststoffet ble fjernet ved filtre-ring. Resten, ved avdampning av heksan, ble ledet gjennom en 100 g (heksan, 20%, 30%, 40% eter/heksan) silicagelpute, hvorved det ble oppnådd 4,88 g (75%) av tittelforbindelsen som en gul olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3410 (NH), 2150 (N2), 1765, 1715 og 1650 cm<-1> (C=0).
<X>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,03-5,80 (1H, m, vinylisk-H), 5,84 (1H, bs, NH), 5,4-5,28 (2H, m, vinylisk-H), 4,73-4,68 (2H, m, vinylisk-CH2), 4,23-4,12 (1H, m, H-l'), 4,07-4,0 (1H, m, H-l"), 3,88 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=5,5 Hz, H-4), 3,59, 3,56, 3,54 (2H, 3 linjer, CH20), 3,04 (1H, t, J=2,5 Hz, H-3), 1,9-1,7 (1H, m, H-C-H), 1,6-1,4 (3H, m, HCH og CH2), 1,16 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) , 0, 87, 0, 86 (18H, 2s, tert-butyl), 0, 056, 0, 050 og 0,027 ppm (12H, 3s, CH3).
J. Allvl-( 2R, 4R, 5R, 6S)- 6- f( l' R)- 1'- tert- butvldimetvl- silvl-oksvetvll- 4-( 3"- tert- butvldimetylsilvloksvpropvl)- 3, 7-diokso- l- azabicvclo f3, 2, 01heptan- 2- karboksvlat
En løsning av 3,8 g (6.7 mmol) (3S., 4R) -3-[ (l'R) -1' -tert-butyldimetyl-silyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(3-tert-butyldimetyl-silyloksypropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl] azetidin-2-on i 300 ml benzen ble renset med Argon i 10 minut-ter. Deretter ble 100 mg Rh(OAc)2 tilsatt, og blandingen ble oppvarmet under tilbakekjøling i 70 minutter. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum, hvorved det ble oppnådd 3,9 g (>100%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) vmaks: 1765 og 1745 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 5,99-5,79 (1H, m, vinylisk H), 5,39-5,20 (2H, m, vinylisk H), 4,66-4,60 (2H, m, CH2-vinyl), 4,63 (1H, s, H2), 4,36, 4,33, 4,30, 4,27 (1H, 4 linjer av 5, H-l'), 4,24 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=8,l Hz, H-5), 2,7-2,5 (2H, m, CH20), 3,31 (1H, dd, J=2,3 Hz, J=5,8 Hz, H-6), 2,8-2,6 (1H, m, H-4), 1,8-1,5 (4H, m, (CH2)2)# 1/29 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,881, 0,878 (18H, 2s, tert-butyl), 0,093, 0,085 og 0,033 ppm (12H, 3s, CH3) .
K. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-( 3"- tert- butvldimetvlsilvloksvpropyl)- 3-T( pyridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, 01-hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 3,8 g (6,7 mmol av det tilsvarende diazo) allyl- (2R, 4R, 5R, 6S.)-6- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- (3"- te. rt-butvldimetvlsilvloksvpropvl) - 3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]-heptan-2-karboksylat i 40 ml <CH>3CN ble behandlet dråpevis med 1,52 ml (7,37 mmol) difenyl-klorfosfat og 1,03 ml (7,37 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 1 time ved -15°C til -10°C. Det resul-terende enolfosfat ble deretter behandlet kaldt (-15°C) med 1,68 g (13,4 mmol) 2-picolylmerkaptan i 10 ml CH3CN, etter-fulgt av dråpevis tilsetning av 2,36 ml (13,4 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 1 time ved -10°C til 0°C og deretter i 1,5 time ved 5°C (isbad). Reaksjons-blandingen ble fortynnet med 300 ml kald EtOAc, vasket med 2 x 100 ml kaldt vann, 3 x 100 ml IM iskald vandig NaHS03, 2 x 100 ml iskalt vann, 2 x 100 ml IM vandig NaHC03, 2 x 100 ml iskalt vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 60 g (heksan, 5%, 10%, 15%, 20% EtOAc/heksan) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 3,2 g (74%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) vmaks: 1770 og 1715 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,50-8,48 (1H, m, pyridin-H), 7,7-7,6 (1H, pyridin-H), 7,41-7,36 (1H, bd, J=7,9, pyridin-H), 7,21-7,15 (1H, m, pyridin-H), 6,05-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,47-5,19 (2H, m, vinylisk-H), 4,9-4,6 (2H, m, CH2-vinyl), 4,28, 4,21, 4,09, 4,02 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH2-picolyl), 4,21-4,08 (1H, m, H-l'), 4,01 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,7-3,5 (2H, m, CH2-0) , 3,5-3,4 (1H, m, H-4), 3,27 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=7,3 Hz, H-6), 1,9-1,4 (4H, m, (CH2)2), 1,28 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,877, 0,871 (18H, 2s, tert-butyl), 0, 066, 0, 057, 0, 036 og 0, 029 ppm (12H, 4s, CH3) .
L. Allyl-( 4R. 5S, 6S)- 6- f ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 3"-hydroksvpropyl)- 3-[( pyridin- 2- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicyclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 3,20 g (4,95 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6- [ (1'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] - 4-(3"- tert-butyldimetylsilyloksypropyl)-3-[(pyridin-2-yl) - metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 60 ml tørr THF ble behandlet med 1,72 ml (30 mmol) CH3C02H, etterfulgt av dråpevis tilsetning av en løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i 15 ml (15 mmol) THF. Blandingen ble holdt i et kaldt rom (5°C) i 30 timer, deretter nøytralisert (isbad) med 30ml (30 mmol) IM NaHC03. Blandingen ble fortynnet med 200 ml EtOAc og den vandige fase ble ekstrahert to ganger med 2 x 200 ml EtOAc. De organiske ekstrakter ble vasket med 4 x 100 ml IM iskald vandig NaHC03, 2 x 100 ml iskalt vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 75 g (C<H>2C12, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 60% EtOAc/CH2Cl2) hurtig-silicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 1,5 g (57%) av allyl-(4R, 5 S., 6S.) -6- [ (1' R) -1' -tert-buty ldimety ls i ly loksyety 1 ] -4- (3 " - hydroksypropyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat som et hvitt faststoff.
IR (CH2C12) Vmaks: 3600-3300 (OH), 1770 og 1720 cm"<1>
(C=0).
^H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 5: 8,48-8,45 (1H, m, pyridin-H), 7,77- 7,67 (1H, m, pyridin-H), 7,50-7,46 (1H, d, J=7,9 Hz, pyridin-H), 7,26- 7,19 (1H, m, pyridin-H), 6,05-5,85 (1H, m, vinylisk-H), 5,47-5,20 (2H, m, vinylisk-H), 4,84-4,61 (2H, m, vinylisk-CH2), 4,46, 4,39, 4,05, 3,98 (2H, ABq, J=14,4 Hz,
CH2-pyridin), 4,20, 4,16, 4,13 (1H, 3 linjer av 5, H-l'), 3,96 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,8-3,6 (2H, m, CH20), 3,5-3,3 (1H, m, H-4), 3,22 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=7,3 Hz, H-6), 1,9-1,6 (4H, m, (CH2)2), 1,64 (1H, bs, OH) , 1,27 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,857 (9H, s, tert-butyl), 0,059 og 0,039 (6H, 2s, CH3).
Eluering av ovenstående søyle med aceton ga 411 mg,
(20%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) <v>maks: 3700-3200 (OH), 1770 og 1710 cm"<1 >(C=0).
^•H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 5: 8, 49-8, 46 (1H, m, pyridin-H), 7,75-7,66 (1H, m, pyridin-H), 7,48-7,45 (1H, bd, J=8,9 Hz, pyridin-H), 7,23-7,19 (1H, m, pyridin-H), 6,06-5,86 (1H, m, vinylisk-H), 5,48-5,21 (1H, m vinylisk-H), 4,88-4,60 (2H, m, CH2-vinylisk), 4,41, 4,33, 4,06, 3,98 (2H, ABq, J=14,5Hz, CH2-pyridin), 4,22-4,13 (1H, m, H-l'), 4,11, 4,09 (del av dd, J=2,6 Hz, del av H-5), 3,8-3,6 (2H, m, CH20), 3,6-3,45 (1H, m, H-4), 3,30 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=7,6 Hz, H-6), 1,9-1,5 (5H, m, (CH2)2 og OH) og 1,35 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
M. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 4-( 3"-hvdroksvpropyl)- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
Til en kald (isbad) løsning av 166 mg (0,400 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -4- (3"-hydroksypropyl)-3-[(pyridin-2-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2, 0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2C12 ble tilsatt Pd(PPh3)^ etterfulgt av dråpevis tilsetning av 0,5 M kalium-2-etylheksanoat i 1 ml (0,5 mmol) EtOAc. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, fortynnet med 25 ml dietyleter og ekstrahert med en 3 x 5 ml 0,04 M iskald vandig (pH 7) buffer. De vandige ekstrakter ble vasket med 2 x 25 ml dietyleter og ledet gjen-nom en 40 g (H20, 1%, 2%, 3%, 5% CH3CN/H20) C18-<uB>ondapak reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 120 g (75%) av tittelf orbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet 99,6% som bestemt ved HPLC.
UV (H20) A.maJcs<:> 306 (11900), 266 (8000).
IR (Nujol) vmaks: 1745 og 1590 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,47, 8,45 (1H, bd, J=4,8 Hz, pyridin-H), 7,85 (1H, bt, J=7,8 Hz, pyridin-H), 7,52 (1H, bd, J=7,8 Hz, pyridin-H), 7,39-7,33 (1H, m, pyridin-H), 4,22, 4,17, 4,11, 4,06 (2H, ABq, J=10,5 Hz, CH2-pyridin), 4,3-4,0 (2H, m, skjult H-l' og H-5), 3,57, 3,54, 3,51 (2H, m, skjult H-l' og H-5), 3,57, 3,54, 3,51 (2H, m, CH20), 3,35 (1H, dd, J=2,3 Hz, J=6,0 Hz, H-6), 3,21, 3,17, 3,12 (1H, m, H-4), 2,8-2,2 (4H, m, (CH2)2) og 1,28 ppm (3H, d, J=6 , 3 Hz, CH3).
Eksempel 10
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3-r ( l- metvlpvridiniurn- 2- vl) metvltiol - 7- okso- l-azabicvclo[ 3, 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, fosfat-monobasisk salt
En suspensjon av 0,300 g (0.7 mmol) kalium-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3, 2,0]hept-2-en-2-karboksylat (fremstilt som i eksempel 6) i 3 ml tørr acetonitril ble av-kjølt til -20°C og behandlet med 0,030 ml (0.79 mmol) 98% maursyre. Etter 15 minutter ble den klare løsning behandlet med 0,12 ml (1,06 mmol) metyltrifluormetansulfonat og omrørt i 1,5 time. Reaksjonsblandingen ble deretter stoppet ved tilset-ning av 20 ml 0,IM pH 7,4 fosfatbuffer og acetonitril ble av-dampet under vakuum. Den vandige fase ble fortynnet med 40 ml (0,IM) pH 6,0 fosfatbuffer og hydrogenert ved 0°C over 0,40 g (30%) palladium-på-Celite ved 45 psi hydrogen i 1,5 time. Katalysatoren ble filtrert på en Celite-pute, og filtratet ble kromatografert på 3 x 15 cm "u-Bondapak C18i. reversfasesilica-gel. Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga
0,062 g (19%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft fast-stoff etter frysetørking. Renheten av produktet ved ^H-NMR ble vurdert til 80%.
Renhet ved HPLC: 97% 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18", eluering 10% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshas-tighet 1,5 ml/min., uv-detektor 300 nm, retensjonstid 10,0 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 270 nm (6,630) og 300 nm (sh, 3480).
IR (KBr) vmaks: 1765 (C=0 av p-lactam), 1635, 1610 og 1585 cm"1.
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,39 Hz, CH3CHO), 1,7-2,3 (m, 2H, CH2~4), 3,1-3,3 (m, 2H, CH2NH2), 3,37 (dt, <J>H4, CH2=10'1 Hz' JH4,H5=3'86Hz' 1H' H"4)' 3'53 (dd' JH6/H5=3,20 Hz, Jh6,H1'=6'42 Hz' 1H' h"6)' 4,2-4,4 (m, H-5 og H-l', overlapping), 4,40 (s, 3H, CH3 av pyridinium), 7,79 (~d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridinium), 7,92 (m, 1H, H-5), 8,44 (m, 1H, H-4 av pyridinium) og 8,78 ppm (d, J=5,5 Hz, 1H, H-6 av pyridinium).
Eksempel 11
( 4R. 5S. 6S)- 4-( 2"- N, N- dimetvlaminoetvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvl]- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvcld r3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,187 g (0,51 mmol) (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyl)-6-[(1'R)-1'hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre
(eksempel 2) i 3 ml kaldt vann ble fortynnet med 2 ml CH3CN og deretter behandlet ved 0-5°C med 0,21 ml (37%) vandig formaldehyd. Løsningens pH (pH-meter) var 7,2. Deretter ble 0,058 g (0,93 mmol) natriumcyanoborhydrid tilsatt på én gang (pH 8,5-9,0), etterfulgt etter 2 minutter av 3 dråper iseddiksyre (pH 5,2-5,5). Den resulterende homogene blanding ble omrørt ved 0-
5°C i 30 minutter. Deretter ble 20 ml (0,IM) pH 6,0 fosfat-
buffer tilsatt og acetonitril ble fjernet under vakuum
(<15°C). Den resterende vandige fase ble kromatografert på 2,5
x 10 cm "u-Bondapak C^g" reversfasesilicagel under eluering med en gradient av 0-10% acetonitril i vann. De UV-aktive fraksjoner ble oppsamlet, frysetørket og kromatografert annen gang under anvendelse av samme system. Tittelforbindelsen ble oppnådd som et hvitt, amorft pulver: 0,117 g (58%); [a]"-4,0°
(c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 88% på 3,9 mm x 30 cm, "n-Bondapak
C1g", strømningshastighet 2 ml/min, 5% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 9,02 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) ^maks: 266 (7,039) og 302
nm (7,707).
IR (KBr) vmaks: 1762 (C=0 av p-lactam) og 1595 cm-1 (C=Q
av karboksylsyre).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,30 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,2 (m, 2H, CH2~4), 2,86 (s, 6H, N(CH3)2), 3,15 (m, 3H, H-4 og CH2N) , 3,32 (dd, JH6,H5=2'91 Hz' JH6, Hl'=6'75 Hz, 1H, H-6), 4,10 (ABq, 0^=14,06 Hz, Av=25,4 Hz, SCH2) , 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping), 7,38 (m, 1H, H-3 av pyridin), 7,47 (d, J=7,87 Hz, 1H, H-5 av pyridin), 7,86 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,47 ppm (d, J=5,0 Hz, 1H, H-2 av pyridin).
Eksempel 12
( 4R. 5S, 6S) - 4-( 4"- aminobutvl)- 6-\( l' R)- 1'- hvdroksvetvll-3- f( pyridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
A. tert- butvldimetvlsilvl- 6-( tert- butvldimetvlsilvloksv)-heksanoat
Forsepning av 20,6 g (0,18 mol) E-caprolacton som beskrevet av P.A. Aristofff et al. i J^ Org. Chem., 48, 5341
(1983) ga 30,0 g av natriumsaltet som et hvitt faststoff: <1>H-NMR (200 MHz, D20) 6: 1,2-1,7 (m, 6H), 2,19 (t, J=7,32 Hz, 2H, CH2C02Na) og 3,61 ppm (t, J=6,51 Hz, 2H, CH20H). Det rå saltet ble suspendert i 250 ml N,N-dimetylformamid, avkjølt til 0-5°C og behandlet med 81,6 g (0,54 mol) tert-butyldimetylsilylklorid, etterfulgt av 32,6 ml (0,28 mol) trietylamin tilsatt dråpevis. Etter 26 timer ved 22°C, ble det dannede faststoff filtrert og vasket med petroleumseter (kp
20-60°C). Etter fortynning med ytterligere 500 ml petroleumseter ble filtratet vasket med mettet NaHCC^, saltvann og tør-ket (MgS04). Etter avdampning av løsningsmidlet ble resten destillert under vakuum, hvorved det ble oppnådd 60,8 g (93%) av tittel-esteren som en klar olje: kp. 106-107°C/0,015 tørr.
IR (NaCl, film) vmaks: 1722 cm-<1> (C=0 av ester) .
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,04 og 0,26 (2s, 2 x 6H, SiCH3), 0,88 og 0,92 (2s, 2 x 9H, tert-butyl), 1,2-1,7 ppm (m, 6H, CH2-3,4 og 5).
B. 6-( tert- butvldimetvlsilvloksv) heksansvre
En løsning av 82,0 g (0,227 mol) silylesteren fremstilt som beskrevet i trinn A i en blanding av 800 ml tetrahydro-furan og 800 ml vann ble behandlet ved 22°C med 8,2 g (0,09) oksalsyre og omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble der-etter fortynnet med 1 1 EtOAc, vasket med vann og saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 72 g av en olje, som var en blanding av tittelsyren og disiloksan. Dette produktet ble anvendt uten rensning i det neste trinn: IR (NaCl, film) vmaks: 1715 cm-<1> (C=0 av karboksylsyre). <1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,41 (s, SiCH3), 0,88 (s, Sitert-butyl), 1,3-1,8 (m, CH2-3, 4 og 5), 2,3-2,4 (m, CH2C02H) og 3,6-3,7 ppm (m, CHoOSi) . C. 6-( tert- butvldimetvlsilvloksv)-( Pvridin- 2- yl) metvltio- heksanoat
En løsning av den rå 6-(tert-butyldimetylsilyloksy)-heksansyre fra trinn B (-0,227 mol) i 500 ml tørr CH2C12 ble behandlet ved 0-5°C med 28,4 g (0,227 mol) 2-picolylmerkaptan, 1-hydroksybenzotriazol, 34,8 g (0,227 mol) hydrat og 46,9 g (0,227 mol) 3-dicycloheksylkarbodiimid. Etter 16 timer ved 22°C, ble det dannede faststoff filtrert og vasket med EtOAc. Filtratene ble vasket med vann, saltvann og deretter tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 9 x 10 cm silicagel. Eluering med en blan-ding av toluen og EtOAc (95:5) ga 40,0 g (50%) av tittel-tioesteren som en klar olje: IR (NaCl, film) vmaks<:> 1695 cm-<1> (C=0 av tioester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,28 (s, 6H, SiCH3), 0,88
(s, 9H, t-Bu), 1,3-1,8 (m, 6H, CH2-3,4 og 5), 2,58 (t, J=7,5 Hz, 2H, CH2-2), 3,57 (t, J=6,2 Hz, 2H, CH2~6), 4,24 (s, 2H, CH2 av picolyl), 7,15 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,33 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,62 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,52 ppm (d, J=8,5 Hz, 1H, H-6 av pyridin).
D. O- tert- butvldimetvlsilylenol- eter av 6-( tert- butvldimetvlsilvloksv) - 1-( pyridin- 2- vl) metvltioheksanoat
En løsning av 40,0 g (0,113 mol) 6-(tert-butyldimetylsilyloksy)-1-(pyridin-2-yl)metyltioheksanoat i 400 ml tørr CH2C12 ble behandlet ved 0-5°C med 32 ml (0,23 mol) trietyl-amin, etterfulgt av 40 ml (0,174 mol) tert-butyldimetylsilyl-trifluormetansulfonat tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved 22°C i 3 timer. Etter fortynning med 11 (kp 30-60°C) petroleumseter, ble den organiske fase vasket med vann, tørket (MgS04) og inndampet under redusert trykk. Den resterende harde olje (53,0 g) ble omgående anvendt som vist til kobling i det neste trinn.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) indikerte en 1:1 blanding av fl-og Z-isomerer, 5: 3,95 og 4,03 (2 x s, SCH2), 4,85 (t, J=7,25 Hz, C=CH) og 5,0 ppm (t, J=7,54 Hz, OCH) .
E. ( 3S, 4S) - 3- f ( l' R) - l/- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-r( IR")- 1"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 5"- tert-butvldimetvlsilvloksypentvllazetidin- 2- on
Til en suspensjon av 15,4 g (0,113 mol) fersk dannet zinkklorid i 200 ml tørr CH2C12 ved 0-5°C ble tilsatt 16,25 g (0, 056 mol) (3S., 4R)-4-acetoksy-3-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl ] azetidin-2-on. Deretter ble en løsning av den rå silylenoleter (0,113 mol) fremstilt i trinn D i 200 ml tørr CH2C12 tilsatt dråpevis (-15 minutter), og den resulterende blanding ble omrørt ved 0-5°C i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med mettet vandig ammoniumklorid, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en mørk rest, som ble kroma-tografert på 15 x 11 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (1:1) ga 23 g (70%) av tittelforbindelsen som en gummi, som ble anvendt som sådan i det neste trinn. Ijj-nmr indikerte et 9:1 P til a forhold av isomerer. Krystallisasjon av en aliquot fra heksan ga den rene P-isomer av tittelfor-22
bindelsen som hvite plater, smp. 82-83°C, [a] jJ-9,0° (c 1,0, CHC13).
UV (EtOH) </\.>maks: 238 (5, 080) og 264 nm (4, 600).
IR (KBr) vmaks: 1770 (C=0) av p-lactam og 1682 cm"<1> (C=0 av tioester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,02 og 0,04 (2 x s, 2 x 6H,
SiCH3), 0,84 og 0,87 (2 x s, 2 x 9H, Si tert-butyl), 0,97 (d, J=6,31 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-2,0 (m, 6H, CH2-2,3,4 av pentyl), 2,8 (m, 1H, H-l av pentyl), 3,03 (m, 1H, H-6), 3,56 (t, J=5,9 Hz, 2H, CH2-5 av pentyl), 3,80 (dd, Jh4,H3=2'05 Hz' jH4 H<=>
7,08 Hz, 1H, H-4), 4,14 (m, 1H, CH3CHO) , 4,26 (AB<q>, JM= 14,0 Hz, AV=7,3 Hz, 2H, SCH2), 5,88 (bred s, 1H, NH), 7,18 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,33 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,64 (m, 1H, H-4 av pyridin), og 8,52 ppm (d, J=4,8 Hz, 1H, H-6 av pyridin).
Analyse for C2gH51N2<0>4SSi2:
Beregnet: C, 60,06%; H, 8,86%; N, 4,83%; S, 5,53%.
Funnet: C, 60,30%; H, 8,82%; N, 4,72%; S, 5,67%.
F. ( 3S. 4S) - 3- r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn - 4-f( 1" R)- l"- karboksv- 5"- tert- butvldimetvlsilvl-oksvpentvllazetidin- 2- on
En løsning av 23,0 g (39,7 mmol, blanding av p- og a-isomer i et ~9:1 forhold) (3S,4R)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl]-4-[(1"R)-l"-(pyridin-2-yl)metyltio-karbonyl-5"-tert-butyldimetylsilyloksypentyl]-azetidin-2-on, i 200 ml tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C med 7,0 ml (81,2 mmol) 30% hydrogenperoksid, etterfulgt av dråpevis tilsetning av 80 ml (80,0 mmol) IM natriumhydroksid. Etter 2
timer ved 22°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med 500 ml EtOAc og surgjort med 100 ml IN HC1. Den organiske fase ble vasket med 100 ml IN natriumhydrogensulfit, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga et faststoff, som ble omkrystallisert fra AcOEt-heksan, hvorved det ble oppnådd 12,4
g (66%) av tittelforbindelsen som et hvitt faststoff: smp.
136-138°C; [a]2^ _3/6o (c CHCl3).
IR (KBr) vmaks: 1760 (sh), 1715 (C=0 av syre) og 1690
cm"1.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,04, 0,05 og 0,06 (3 x s,
6H, 3H og 3H, SiCH3), 0,86 og 0,88 (2 x s, 2 x 9H, sit-Bu),
1,16 (d, J=6,28 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2-2,3 og 4
av pentyl), 2,6 (m, 1H, H-l av pentyl), 3,13 (m, 1H, H-3),
3,60 (t, J=5,82 Hz, 2H, CH2-5 av pentyl), 3,86 (dd, <J>H4^
H3=l,92 Hz, JH4,H=6'46 Hz' 1H' H~4>' 4'20 <dc*/ <J>H1',CH3<=> 6'28
Hz, Jh1,H3=3'86 Hz' 1H' CH3CHO), og 6,32 ppm (bred s, 1H, NH).
Analyse for C23H47N05Si2<:>
Beregnet: C, 58,31%; H, 10,00%; N, 2,96%; Funnet: C, 58,18%; H, 10,18%; N, 2,91%. G. ( 3S, 4R)- 3- r( l' R)- l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl1- 4-f( 1" R)- 1"-( 4- tert- butvldimetvlsilvloksvbutvl)-3"-allvloksvkarbonvl- 2"- oksopropvn azetidin- 2- on
En suspensjon av 4,70 g (9,92 mmol) (3S, 4S)-3-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksy-etyl]-4-[(1"R)-l"-karboksy-5"-tert-butyldimetylsilyloksypentyl]-azetidin-2-on i 125 ml tørr toluen ble behandlet ved 22°C med 1,80 g (11,1 mmol) 1,1-karbonyldiimidazol. Etter 5 timer ble løsningsmidlet avdampet under redusert trykk, og resten ble oppløst i 15 ml tørr benzen. Denne løsning ble tilsatt en løsning av 4,7 g, (15,3 mmol) magnesiummonoallylmalonat i 100 ml tørr benzen og den resulterende blanding ble omrørt ved 80°C i 18 timer. Reak-sjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med kald IN HC1, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en rest, som ble kromatografert på 6,5 x 11 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (8:2) ga 3,48 g (63%) av tittelforbindelsen som et hvitt faststoff. <1>H-NMR av dette produkt indikerte en 1:1 blanding av keto- og enolform av acetoacetatet. Omkrystal-lisasjon av faststoffet fra petroleumseter (30-60°C) ved -20°C ga noe ren enolform av produktet som hvite nåleformete krystaller, smp 72-73°C, [a]<2>D<2>0<o> (c 1/0/ CHC1;3) .
UV (EtOH) Xmaks: 248 nm (11,090).
IR (KBr) vmaks: 1761 (C=0 av p-lactam), 1718, 1650 og 1625 cm"<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,03 og 0,05 (2 x s, 2 x 6H, SiCH3), 0,86 og 0,88 (2 x s, 2 x 9H, Sit-Bu) , 1,10 (d, J=6,29 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,19 (m, 1H, H-l av oksopropyl), 2,90 (m, 1H, H-3), 3,59 (t, J=5,96 Hz, CH2-4 av butyl), 3,81 (dd, <J>h4,H3=2'03 Hz'<j>H4,H1=7'41 Hz' 1H, H-4), 4,18 (d<q,><J>h,CH3=6'29 Hz'JH,H3<=>3'67 Hz' CH 3CHO), 4,63 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,06 (s, 1H, H-3 av oksopropyl-enolform), 5,2-5,4 (m, 2H, CH av allyl) og 5,8-6,1 ppm (m, 2H, CH av allyl og NH).
Analyse for C2g<H>53N0gSi2:
Beregnet: C, 60,50%; H, 9,61%; N, 2,52%;
Funnet: C, 60,62%; H, 9,64%; N, 2,45%.
H. ( 3S. 4R) - 3- r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl) -4-r( 1" R)- 1"-( 4- tert- butvldimetvlsilvloksvbutvl)- 3"- diazo-3"- allvloksvkarbonvl- 2"- oksopropvllazetidin- 2- on
En løsning av 3,4 g (6,12 mmol) (3S, 4R)-3-[ (l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(4-tert-butyl-dimetylsilyloksybutyl)-3n<->allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]-azetidin-2-on i 50 ml acetonitril ble behandlet ved 22°C med 2,3 ml (6,9 mmol, av en 3M løsning i CH3CN) p-toluensulfonyl-azid og 0,85 ml (6,1 mmol) trietylamin. Etter 1,5 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 200 ml EtOAc, vasket med vann, mettet vandig NaHCX^, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en rest, som ble triturert med en blanding av toluen og ~30 ml EtOAc (9:1) . Det krystalliske p-toluensulfonamid ble filtrert, og filtratet ble kromato-grafert på 5 x 11 cm silicagel. Eluering'med en blanding av toluen og EtOAc (9:1) ga 3,56 g (100%) av tittelforbindelsen som en klar olje: IR (NaCl, film) vmaks: 2140 (N2), 1760 (C=0 av p-lactam), 1720 (C=0 av ester) og 1650 cm<-1>. <1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 6: 0,03 og 0,05 (2 x s, 2 x 6H, SiCH3), 0,9 (s, 18H, Si t-Bu), 1,16 (d, J=6,29 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,9 (m, 6H, CH2- 1, 2 og 3 av butyl), 3,04 (m, 1H, H-3), 3,57 (t, J=6,2 Hz, 1H, CH2~4 av butyl), 3,85 (dd, JH4,H3=2'n Hz' JH4 H=5'48 Hz' 1H' H"4) ' 4'05 (m' 1H' 11-1 av oksopropyl), 4,17 (<dq,><J>h,CH3=6'29 Hz' jH2 H3=3'68 Hz' 1H' CH3CHO), 4,7 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,3-5,5 (m, 2H, CH av allyl) og 5,8- 6,1 ppm (m, 2H, NH og CH av allyl). I. Allvl- ( 4R, 5R, 6S)- 6- r ( IVR) - 1' - tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-( 4"- tert- butvldimetvlsilvloksvbutvl)- 3, 7-diokso- 1- azabicvclo-[ 3, 2, OT heptan- 2- karboksvlat
En løsning av 3,50 g (6,0 mmol) (3S, 4R)-3-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(4-tert-butyldimetyl-silyl-oksybutyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 350 ml tørr benzen ble behandlet under nitrogen med 0,14 g rhodium(II)oetanoat og oppvarmet under tilbakekjøling i 45 minutter. Avdampning av løsnings-midlet ga den rå bicykliske keton som en olje, som ble anvendt i det neste trinn.
IR (NaCl, film) vmaks<:> 1770 (C=0 av p-lactam) og 1745 cm-<1> (C=0 av ketoester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,03, 0,08 og 0,09 (3 x s, 6H, 3H og 3H, SiCH3), 0,86 (s, 18H, SitBu), 1,1-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 1,28 (d, J=6,16 Hz, 3H, CH3CHO), 2,64 (m, 1H, H-4), 3,22 (dd, <J>H6,H5=2'36 Hz' JH6,H1'=5'54 Hz' 1H' H-6), 3,6 (m, 2H, CH20Si), 4,24 (dd, <J>H5,H6=2'36 Hz' JH5, H4=8,03 Hz, 1H, H-5), 4,30 (m, 1H, CH3CHO) , 4,61 (s, 1H, H-2) , 4,64 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,4 og 5,8-6,0 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
J. Allvi- ( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl)- 4-( 4"- tert- butvldimetvlsilvloksvbutvl)- 3-\( pyridin- 2- yl) metvl- tiol- 7- okso- l- azabicvclo ' 3, 2, 01-hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av (6,0 mmol) allyl-(4R,5R,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-4-(4"-tert-butyldimetylsilyl-oksybutyl)-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0Jheptan-2-karboksylat i 35 ml tørr CH3CN ved 0-5°C ble behandlet under nitrogen, med 1,4 ml (6,8 mmol) difenylklorfosfat og 1,2 ml (6,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. 4-N,N-dimetylaminopyridin (~3 mg) ble deretter tilsatt, og den resulterende blanding ble omrørt ved samme temperatur i 1 time. Etter tilsetningen av 1,5 g (12,0 mmol) 2-picolylmerkaptan og N,N-diisopropyletylamin ble blandingen omrørt ved 0-5°C i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatogra-fert på 5 x 10 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (9:1) ga 2,95 g (74%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 1775 (C=0 av (3-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,04, 0,05 og 0,06 (3 x s, 6H, 3H og 3H, SiCH3), 0,87 og 0,88 (2 x s, 2 x 9H, Si t-Bu), 1,2-2,0 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 1,26 (d, J=6,13 Hz, 3H, CH3CHO), 3,12 (dd, <J>H6,H5= 2'48 Hz' JH6,H1'=6'68 Hz' 1H' H-6), 3,40 (m, 1H, H-4), 3,59 (m, 2H, CH2~4 av butyl) , 4,03
(dd, <J>H5,H6=2'48 Hz' JH5,H4=9'17 Hz' 1H' H"5> ' 4'13 ^«J/
JAB=14'3 Hz' Av=30,4 Hz, 2H, SCH2), 4,20 (m, 1H, CH3CHO), 4,72 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,8-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,20 (m, 1H, H-5 av pyridyl), 7,4 (d, J=7,9 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,67 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,5 (m, 1H,
H-6 av pyridin).
K. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 6- f( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-( 4"- hvdroksvbutvl)- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol - 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 2,95 g (4,46 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-6-[ (l'R)-1'-tert-butyl-dimetylsilyloksyetyl]-4-(4"-tert-butyldimetylsilyl-oksybutyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 70 ml tørr tetra-hydrofuran ble behandlet ved -10°C og under nitrogen med 1,6 ml (28,0 mmol) iseddiksyre, etterfulgt av 13,4 ml 1,0M tetra-butylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Den resulterende blan-ding ble deretter omrørt ved 0°C i 17 timer. Reaksjonsblan-dingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med kaldt mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løs-ningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 6 x 8 cm silicagel. Eluering med en gradient av 50 -» 100% EtOAc i toluen ga 1,64 g (67%) av tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 1775 (C=0 av p-lactam) og 1710 cm-<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,06 og 0,07 (2s, 2 x 3H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, Si t-Bu), 1,28 (d, J=6,08 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2- 1,2 og 3 av butyl), 3,14 (dd,
2,54 Hz, JH6,Hl'=7'19 Hz' 1H' H-6> ' 3'37 <m' 1H' H_4> ' 3,65 (m, 2H, CH2-4 av butyl) , 4,02 (dd, <J>H5,H6= 2'54 Hz' JH5,H4=9'37 Hz' 1H' H"5) ' 4'14 (ABc*' JAB~13'8 Hz' Av=33,2 Hz, 2H, SCH2), 4,2 (m, 1H, CH3CHO), 4,72 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9- 6,1 (2xm, 2H og 1H, CH av allyl), 7,2 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,4 (d, J=7,9 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,68 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,50 ppm (1H, H-6 av pyridin).
L. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6-'( l' R)- 1'- tert-butvldi- metvlsilvloksvetyll- 3- r( pvridin- 2- yl) metvltiol-7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,64 g (3,0 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-6-[(l'R)-l'-tert-butyldi-metylsilyloksy]-4-(4"-hydroksybutyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 250 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved -20°C og under nitrogen med 1,26 g 4,8 mmol) trifenylfosfin og 8,5 ml (5,1 mmol) av en 0,6M løsning av hydrazoesyre i toluen. Deretter ble 0,80 ml (5,08 mmol) dietylazodikarboksylat tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter. Etter 30 minut-ter ved -20°C ble reaksjonsblandingen stoppet ved tilsetning av EtOAc og mettet vandig NaHC03. Den organiske fase ble vasket med saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsnings-midlet under redusert trykk ga en olje, som ble triturert med ~25 ml toluen. Det krystalliske dietylhydrazindikarboksylat ble filtrert, og filtratet ble behandlet på samme måte med dietyleter til utkrystallisering av trifenylfosfinoksidet. Resten ble til slutt kromatografert på 5 x 9 cm silicagel under eluering med en blanding av toluen og EtOAc (8:2). Inndampning av de UV-aktive fraksjoner ga 1,60 g (93%) av tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl,.film) vmaks: 2100 (N3), 1775 (C=0 av p<->lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,06 og 0,07 (2 x S, 2 x 3H, SiCH3), 0,88 (s, 9H, Si t-Bu), 1,29 (d, J=6,07 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2-1,9 (m, 6H, CH2"1, 2 og 3 av butyl), 3,10 (dd, <J>H6/H5=2,55 Hz, <J>H6,Hl/= 7'20 Hz' 1H' H-6>/ 3'29 (t/ J=6,2 Hz, 2H, CH2N3) 3,42 (m, 1H, H-4), 4,02 (dd, <J>H5,H6= 2'55 Hz' JH5/H4=9,36 Hz, 1H, H-5), 4,13 (ABq, ^=14,0 Hz, Av=31,9 Hz, 2H, SCH2), 4,19 (m, 1H, overlapning med SCH2, CH 3CHO), 4,72 (m, 2H, SCH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,21 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,41 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,69 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,50 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
M. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutyl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll - 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclof 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,60 g (2,80 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 40 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 5°C med 1,0 ml (17,5 mmol) eddiksyre og deretter med 8,4 ml (8,4 mmol) av en 1,0M løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Etter 112 timer ved 5°C ble reaksjonsblan-dingen fortynnet med EtOAc, vasket med mettet NaHC03 og salt-vann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatograferet på 4 x 11 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (1:1) ga 0,57 g (36%) av utvunnet utgangsmateriale. Deretter oppnådde man, ved eluering med EtOAc, 0,76 g (59%, 92% basert på utvunnet utgangsmateriale av tittelforbindelsen i form av en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 (N2) , 1772 (C=0 av (3-lactam)
og 1708 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,38 (d, J=6,28 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 1,84 (d, J=5,2 Hz, 1H, OH), 3,15 (dd, <J>h6,H5=2'64 Hz JH6 Hl' = 7'28 Hz' 1H, H-6), 3,31 (t, J=6,2 Hz, 2H, CH2N3) , 3,48 (m, 1H, H-4), 4,13 (dd, JH5,H6=2' 64 Hz' JH5,H4=9'43 Hz' 1H' H"5> ' 4'1:L <AB(3' JAB=14,16 Hz, Av=33,3 Hz, 2H, SCH2), 4,2 (m, 1H, CH3CHO), 4,74
(m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (m, 2H, CH av allyl), 7,2 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,40 (d, J=7,9 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,67 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,50 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
N. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll -
3- f ( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo' 3, 2, 01 - hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,76 g (1,66 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo[3, 2, 0]hept-2-en-2-karboksylat i tørr CH2C12 ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 0,14 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 3,6 ml (1,8 mmol) av en 0,5M løsning av kaliurn-2-etylheksanoat i EtOAc. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med 150 ml dietyl-eter og ekstrahert tre ganger med 75 ml 0,05M pH 7,0 fosfat-buffer. De kombinerte vandige ekstrakter ble fortynnet med 75 ml IM NaH2P04 (resulterende pH 5,8) og deretter hydrogenert over 0,8 g 30% palladium-på-"Celite" under 45 psi ved 0-5°C i 1,5 time. Katalysatoren ble deretter frafiltrert, og filtratet ble konsentrert til ~50 ml under vakuum (<15°C). Kromatografi av resten på 5 x 9 cm "u-Bondapak C18„ reversfasesilicagel under anvendelse av en gradient av 0-10% acetonitril i vann ga først 0,125 g (17%) kalium-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl] -4-(4"-hydroksybutyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat som et hvitt pulver etter lyofilisering.
Sluttfraksjonene ga deretter 0,273 g (42%) av tittel-forbindelsen som et hvitt pulver etter frysetørking. Av ^H-NMR og HPLC ble dette produkt kontaminert med 7% av det ovenstående hydroksybutyl-biprodukt. En porsjon av produktet, dvs. 0,175 g, ble renset ytterligere én gang ved kromatografi, hvorved det ble oppnådd 0,152 g (87% utvinning) av den rene tittelforbindelse: [a]D 0° (c 1,0, H20)
Renhet ved HPLC: 94% på 3,9 mm x 30 cm, "Ji-Bondapak C18", eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1,5 ml/min, uv-detektor 306 nm, retensjonstid 8,92 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) ^maks: 266 (6.490) og 306 nm (9.377) .
IR (KBr) vmaks: 1758 (C=0 av fj-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,29 (d, J=6,36 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,97 (t, J=7,6 Hz, 2H, CHqNHq), 3,16 (m, 1H, H-4), 3,29 (dd, <J>H6,H5=2'52 H<z>'<J>H6,Hl/=6'35 Hz' 1H' h~6>' 4,0-4,3 (m, 4H, H-5, CH3CHN og SCH2 overlapping), 7,37 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,52 (d, J=7,9 Hz, 1H, H-3 av pyridin) , 7,86 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,47 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
Eksempel 13
Kalium-( 4R. 5S, 6S)- 6- r ( l' R)- 1' - hvdroksvetvll- 4-( 4"-hvdroksvbutvl)- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo\ 3 , 2 . 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- f ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 4"-hvdroksvbutvl)- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 0,67 g (1,01 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-(4"-tert-butyl-dimetylsilyloksybutyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat (fremstilt i eksempel 12, trinn J) i 15 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved
-10°C og under nitrogen med 0,7 ml (12,2 mmol) eddiksyre etterfulgt av 6,0 ml (6,0 mmol) av en 1,0M løsning av tetra-butylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Etter 140 timer ved 0-5°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med EtOAc, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 3 x 7 cm silicagel. Eluering med en gradient av CH3CN i EtOAc ga først 0,17 g (30%) av det monoavbeskyttede allyl-(4R,5S,6S)-6-
[ d/R)-l'-tert-butyldimetyl-silyloksyetyl]-4-(4"-hydroksybutyl)-3-[(pyridin-2-1)metyltio]-7-okso-l-aza-bicyclo[3,2, 0]-hept-2-en-2-karboksylat som en olje, som var identisk med forbindelsen i eksempel 12, trinn K.
Eluering med acetonitril ga 0,20 g (45%) av tittel-forbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 3400 (OH), 1770 (C=0 av P-lactam) og 1705 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
^H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,37 (d, J=6,26 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 3,21 (dd, JH6,H5=2'65 Hz' JH6,H1'=8'09 Hz' 1H' H-6> / 3'44 <m/ 1H' H-4> 3,68 (~t, J=5,0, 2H, CH20H), 4,1-4,2 (m, overlapping med SCH2, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,14 (ABq, ^=14,08 Hz, Av=35,7 Hz, 2H, SCH2), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,21 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,42 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,69 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,5 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
B. Kalium-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 4"-hvdroksvbutvl)- 3- f( pyridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicyclo T3, 2. 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 0,20 g (0,46 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-hydroksyetyl]-4-(4"-hydroksybutyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,020 g trifenylfosfin, 0,020 g tetrakis-(trifenylfosfin)palladium [0] og 1,0 ml (0,5 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 20 minutter ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 3 x 10 ml vann og de kombinerte vandige ekstrakter ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Kromatografi på 3,5
x <6,>5 cm "u-B<ondap>ak C18„ (eluering 0-5% CH3CN i vann) revers-fasesilicagel ga 0,151 g (75%) av tittelforbindelsen som et
22
hvitt, amorft faststoff etter frysetørking: [a] ^ -4,1° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 99% 3,9 mm x 30 cm, "ji-Bondapak C18", eluering 5% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 2 ml/min, uv-detektor 304 nm, retensjonstid 10,0 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) A.maks: 266 (7.243) og 306 nm (10.819).
IR (KBr) vmaks: 1750 (C=0 av fJ-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,28 (d, J=6,33 Hz, 3H, C<H>3CHO), 1,1-1,7 (m, 6H, CH2CH2CH2CH20H) 3,13 (m, 1H, H-4) 3,32 (dd, <J>h6,H5=2'50 Hz' jH6,H1'=5'93 Hz' 1H' h_6) ' 3'56 (t' J=6,3 Hz, CH20H), 4,14 (ABq, ^=14,5 Hz, Av=24,6 Hz, 2H, SCH2), 4,0-4,3 (m overlapping med SCH2, 2H, H-5 og CH3CHO), 7,37 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,52 (d, J=7,9 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,86 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,47 ppm (d, J=4,9 Hz, 1H, H-6 av pyridin).
Eksempel 14
( 4R, 5S, 6S)-4-f 4"-( N- formimidovl) aminobutvll- 6- F( 1' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- r( Pvridin- 2- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo\ 3 , 2 , 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,098 g (0,25 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)~6-[(l'R)-1'hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 25 ml 0,04M pH 7,0 fosfatbuffer ved 0°C ble innstilt til pH 8,5 med 0,1M natriumhydroksid. 0,43 g (2,5 mmol) benzylform-imidat,hydroklorid ble deretter tilsatt i små porsjoner (~10 minutter), mens pH ble holdt ved ca. 8,3 med 0,1M NaOH. Etter 15 minutter ved 0-5°C ble løsningens pH innstilt til 7,0 med 0,1M HC1, og den vandige fase ble vasket med EtOAc. Den vandige fase ble deretter holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel og deretter kromatografert på 3,5 x 6,5 cm "ji-Bondapak C^g", (eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann) revers-fasesilicagel. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,076 g (72%) av tittelforbindelsen som et hvitt amorft pulver: [a] 2q + 2,4° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 97,9% på 3, 9 mm x 30 cm, "u,-Bondapak <C>18", eluering 10% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, uv-detektor 306 nm, retensjonstid 8,68 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) X.maks: 266 (6.680) og 306 nm (8.980).
IR (KBr) vmaJcs: 1758 (C=0 av p-lactam), 1715 og 1590 (C=0 av karboksylat) .
^H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,28 (d, J=6,31 Hz, CH3CHO), 1,2-1,7 (m, 6H, CH2CH2CH2CH2NH), 3,16 (~t, 1H, H-4), 3,3 (m, 3H, H-6 og CH2NHCH=NH overlapping), 4,0-4,3 (m, 4H, H-5, CH3CHO og SCH2 overlapping), 7,37 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,53 (d, J=7,9 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,79 (s, 1H, NH-CH=NH), 7,86 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,47 ppm (d, J=4,4 Hz, 1H, H-6 av pyridin).
Eksempel 15
( 4R. 5S, 6S)-4-f2"-( N- auanidinvl) aminopropvll- 6- r( l' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- r( pvridin- 2- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 120 mg (0,28 mmol) natrium-(4R,5S,6S)-4-(3"-azidopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat (oppnådd ved behandling av forbindelsen i eksempel 7, trinn H ved den vanlige fremgangsmåte som beskrevet i eksempel 6, trinn D) i en 8,4 ml- (0,84 mmol) 0,1M vandig pH 5,9 fosfat-buffer og 8 ml vann ble omrystet i en Parr-hydrogenator ved 40-50 psi hydrogen i 90 minutter ved 5-15°C (temperatur ved avslutning av omsetningen) under anvendelse av 60 mg 30% Pd på "Celite" som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og pH av den vandige løsning ble innstilt til 8,5 med 0,1N vandig NaOH-løsning. Denne løsningen ble ved 5°C (isbad) tilsatt 360 mg (3,0 mmol) aminoiminometansulfonsyre og pH ble holdt ved 8-8,5 under tilsetning av den 0,1N vandige NaOH-løsning. Denne blanding ble omrørt i 30 minutter og deretter nøytraliseret til pH 7,0 med en 0,1N vandig HC1-løsning. Den ble to ganger ledet gjennom en "liBondapak C^g" (6 g og 3 g) søyle (H20 -» 15% CH3CN/H2O), hvorved det ble oppnådd 15 mg (13%) av tittelforbindelsen.
Renhet ved HPLC: 100% (304 nm, 10% CH3CN/KH2P04 0,0IM, pH 7,4). Retensjonstid 7,3 minutter.
UV (H20) <X>maks: 266 (5830), 306 (8.250).
IR (Nujol) Vmaks: 3500-3000 (OH og NH2), 1755, 1590
(0=0), og 1660, 1630 cm-1 (c=N).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,47-8,45 (1H, m, aromatisk - H), 7,9-7,81 (1H, m, aromatisk -H), 7,54-7,50 (1H, bd, J=7,9 Hz, aromatisk -H), 7,40- 7,34 (1H, m, aromatisk -H), 4,25-4,16 (1H, m, H-l'), 4,22, 4,17, 4,10, 4,03 (2H, ABq, J=14,4 Hz, CH2 pyridin), 4,06 ( 0,5 H, d, J=2,3 Hz, del av H-5), 3,24 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 3,2-3,1 (2H, m, CH2-N), 3,27-3,1 (1H, m, skjult H-4), 1,7-1,1 (4H, m, CH2CH2) og 1,28 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 16
Natrium-( 4R, 5S, 6S) - 6- f ti ' R ) - 1'- hvdroksvetvll- 4- 12 "-metvl- karbamovloksvetvl)- 3- T( pvridin- 2- yl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. Allvl-( 4R. 5S. 6S)- 6- T ti ' R )- 1'-( tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-( 2"- etvlkarbamovloksvetvl)- 3- f( pyridin- 2-vl)- metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2 . 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
Til en kald (0°C) løsning av 0,27 g (0,52 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-[(1'R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-4-(2"-hydroksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-
[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat fremstilt i eksempel 6, trinn A i 5 ml CH2Cl2 under argon ble tilsatt 0,31 ml (5,23 mmol) metylisocyanat. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0-5°C i 48 timer, hvoretter -10% av utgangsmaterialet forble uomsatt. Løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd et skumstoff, som ble kromatograferet på 2,5 x 9 cm silicagel pakket i CH2CI2 og elueret med en blanding av CH2<C>I2 og EtOAc (1:1, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,26 g (87%) av tittelforbindelsen.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 8: 0,02 (s, 3H, SiCH3), 0,04 (s, 3H, SiCH3), 0,82 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,24 (d, CH3, JCH3,l/= 6'14 Hz)' i/69" i'85 (m* 1H' CH2), 2,05-2,18 (m, 1H, CH2), 2,79 (d, NHCH3, J=4,81 Hz), 3,16 (dd, H-6, J5^g=2,33 Hz, J6 lf= 6,74 Hz), 3,47 (t, H-4, J=9, 69 Hz), 3, 84-4, 39 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 4,57-4,83 (m, OCH2, allyl), 5,18-5,46 (m, =CH2, allyl), 5,8-6,02 (m, CH=, allyl), 7,19 (m, H-5, py, <J>4f5=7,72 Hz, J5fg=4,77 Hz), 7,48 (d, H-3, py, <J>3f4<=>7,82 Hz), 7,69 (dt, H-4, py, J4/g=l, 64. Hz) og 8,45 ppm (dd, H-6, py).
B. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 2"- metvl-karbamovloksvetvl)- 3-\( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,25 g (0,43 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-4-(2"-metylkarbamoyloksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0]hept-2-en-2-karboksy lat i 5 ml tørr THF ble behandlet med 0,15 ml (2,6 mmol) eddiksyre, etterfulgt av en 1,3 ml (1,3 mmol) IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i THF. Blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 120 timer, hvoretter ca. halvdelen av utgangsmaterialet forble uomsatt. Blandingen ble nøytraliseret ved 0°C med en 2,6 ml (2,6 mmol) IM NaHCC^-løsning og ekstraheret med 3 x 50 ml EtOAc. Den kombinerte organiske ekstrakt ble vasket suksessivt med en kald IM NaHC03~løsning, vann og saltvann, tørket (MgS04), og løsnings-midlet ble avdampet til et faststoff pluss sirup, som ble kromatografert på 2,5 x 9 cm silicagel pakket i CH2C12 og elueret først med en blanding av CH2C12 og EtOAc (gradienteluering), deretter med EtOAc og til slutt med en blanding av CH3CN og CH2C12 (1:1, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,1 g (50%) av tittelforbindelsen som et hvitt pulver.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 5: 1,37 (d, CH3, JCH3/1/=
6,25 Hz), 1, 66-1, 84 (m, 1H, CH2) , 2,11-2,27 (m, 1H, CH2) , 2,78 (d, NHCH3, <J=>4,95 Hz), 3,32 (dd, H-6, J5^6=2,52 Hz, Jg/1,=8,47 Hz), 3,45 (t, H-4, J= 10,26 Hz), 3,93-4,31 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 4,59-4,87 (m, 0CH2, allyl), 5,19-5,48 (m, =CH2,
allyl), 5,84-6,04 (m, CH=, allyl), 7,19 (m, H-5, py, J4^5=7,71 Hz, <J>5^6=5,31 Hz), 7,41 (d, H-3, py, <J>3/4<=7,>85 Hz), 7,66 (dt, H-4, py, J4f6=1'77 Hz)' 8'45 PPm (m' H~6'P¥' J3,6<=0>'96 Hz) •
C. Natrium-( 4R. 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 4-( 2"-metvlkarbamovloksvetvl)- 3- r( pvridin- 2- vl)- metvltiol-7-okso- l- azabicvclo f 3, 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,094 g, 0,204 mmol) av allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-metylkarbamoyloksy-etyl)-3-[(pyridin-2-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2C12 ble behandlet med 0,03 g (0,026 mmol) Pd[Ph3P]4 etterfulgt av en 0,45 ml (0,224 mmol) 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i EtOAc. Blan-dingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ekstraheret med 3 x 15 ml vann. Den kombinerte vandige fase ble ledet gjennom en søyle av 2,5 x 9 cm "ji-Bondapak C-^g" reversfase-silicagel. Tittelforbindelsen ble elueret med en blanding av vann og CH3CN (95:5, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,062 g (69%) som et hvitt fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 99,7%, UV-deteksjon ved 304 nm på 4 mm x 30 cm, "ji-Bondapak C18" , 8% CH3CN i pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, retensjonstid 9,04 minutter.
UV (pH 7,4) /\.ma]cs: 304 (8778).
IR (Nujol) <v>maks: 1750 cm"<1> (C=0, p-lactam), 1710 cm"<1>
(NHCO) .
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,305 (d, CH3, JcH3,l'=6'38 Hz), 1,6-1,73 (m, 1H, CH2) , 2, 00-2, 07 (m, 1H, CH2) , 2,71 (s, NCH3), 3,23 (t, H-4, J=9,7 Hz), 3,48 (dd, H-6, J5/6<=2,>61 Hz, <J>6/1,=5,84 Hz), 3,93-4,31 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,39 (dd, H-5, py, J5^6=4,84 Hz, <J>4^5<=>7,74 Hz), 7,52 (d, H-3, py, <J>3f4=7,84 Hz), 7,89 (dt, H-4, py, J4^6=l,72 Hz), 8,48 ppm (d, H-6, py).
Eksempel 17
( 4R. 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl- ( 4R. 5S, 6S) - 6- r ( l ' R ) - 1' - tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-( 4"- tert- butvldimetvlsilvloksvbutvl)- 3- r( 2-cvanoetvl) tiol- 7- okso- l- azabicyclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En løsning av 6,87 mmol (fremstilt ut fra 4,0 g, 6,87 mmol av diazo-forstadiet ved fremgangsmåten i eksempel 12, trinn I) allyl-(4R,5R,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4-(4"-tert-butyldimetylsilyloksybutyl)-3,7-diokso-l-aza-bicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 40 ml tørr CH3CN ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,56 ml (7,52 mmol) difenylklorfosfat og 1,31 ml (7,52 mmol) N,N-diisopropyletylamin, tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Løsningen ble deretter avkjølt til -20°C og behandlet med 1,23 g (14,1 mmol) P-merkaptopropionitril [L. Bauer og T.L. Welsh, Org. Chem., 26, 1443 (1961)] i 5 ml acetonitril etterfulgt av 1,31 ml (7,52 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Temperaturen for løsnin-gen fikk deretter lov til å nå 0-5°C, og blandingen ble omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med mettet vandig NafKX^, saltvann og tørket (MgSO^). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatograferet på 5 x 9 cm silicagel. Eluering med en gradient av 0-5% EtOAc i toluen ga 3,42 g (80%) av tittelfor-bindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2260 (CN), 1778 (C=0 av p-lactam) og 1715 cm-<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,04 og 0,08 (2 x s, 2 x 6H, SiCH3), 0,88 og 0,89 (2 x s, 2 x 9H, Si tert'-Bu) 1,27 (d, J=6,14 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,3-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,5-3,2 (m, 6H, SCH2CH2CN, H-4 og H-6 overlapping), 3,61 (m, 2H, CH20Si), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlap-ping), 4,7 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. Allvl-( 4R. 5S, 6S)-6-f( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 4"- hvdroksvbutvl)- 7- okso-1- azabicvclo ' 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 3,42 g (5,49 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-(4"-tert-butyl-dimetylsilyloksybutyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0 ] hept-2-en-2-karboksylat i 75 ml tørr tetrahydro-furan ble behandlet ved 0-5°C med 1,9 ml (33,2 mmol) eddik-syre, etterfulgt av 16,5 ml (16,5 mmol) av en 1,0M løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Etter 24 timer ved 4°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med EtOAc, vasket med mettet vandig NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdamp-ning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatograferet på 5 x 11 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (1:1 til AcOEt) ga 1,67 g (68%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 3500 (OH), 2250 (CN), 1775 (C=0 av P-lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,08 (s, 6H, SiCH3), 0,88 (S, 9H, Sit- Bu), 1,29 (d, J=6,12 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,9 (m, 6H,
CH2-l/2 og 3 av butyl), 2,68 (m, 2H, CH2CN) , 2,7-3,2 (m, 3H, H-4 og SCH2), 3,21 (dd, <J>h6,H5=2'62 Hz' jH6,H1=6'78 Hz' 1H' h" 6), 3,66 (m, 2H, CH20H), 4,2 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapning), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
C. Allvl- ( 4R, 5S, 6S) - 4- ( 4 "- azidobutvl) - 6- f (!' R)- 1' - tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 7- okso-1- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,67 g (3,28 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)-tio]-4-(4"-hydroksybutyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 250 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved -20°C med 1,38 g (5,26 mmol) trifenylfosfin og 7,6 ml (5,7 mmol) av en 0,75M løsning av hydrazoesyre i toluen. Deretter ble 0,90 ml (5,7 mmol) dietylazodikarboksylat dråpevis tilsatt i løpet av 5 minutter, og den resulterende blanding ble omrørt ved samme temperatur i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble stoppet ved tilsetning av EtOAc og mettet vandig natrium-hydrogenkarbonat. Den organiske fase ble vasket med saltvann, tørket (MgS04) og konsentrert under redusert trykk. Den resterende olje ble triturert med 25 ml toluen og filtrert for å fjerne det krystalliske dietylhydrazin-dikarboksylat. Etter en lignende behandling med dietyleter, for å fjerne trifenyl-fosfinoksidet, ble filtratet kromatografert på 4,5 x 11 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (8:2) ga 1,40 g (80%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2250 (CN), 2100 (N3), 1765 (C=0
av p-lactam) og 1710 cm-1 (c=0 av ester).
^H-NMR (200 MHz, CDCl^ g. Q/Q8 (s# fiH# siCH3, # 0,89 (s, 9H, t-Bu), 1,30 (d, J=6,12 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,9 (m, 6H, CH2-l/2 og 3 av butyl), 2,68 (m, 2H, CH2CN), 2,9-3,2 (m, 3H, H-4 og SCH2), 3,17 (dd, <J>h6,H5=2'58 Hz'<j>H6,H1=6'9 Hz' h_6>' 3,32 (bred t, J=6,0 Hz, 2H, C<H>0N3), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapning), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
D. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol-6- Hl' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclor3. 2, 01 - hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,40 g (2,62 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 40 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C med 1,0 ml (17,5 mmol) eddiksyre, etterfulgt av 8,4 ml (8,4 mmol) av en 1,0M løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydro-furan. Løsningen ble oppbevart ved 5°C i 10 dager. Reaksjons-blandingen ble deretter fortynnet med kald EtOAc, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løs-ningsmidlet ga en olje, som ble kromatograferet på 4,5 x 11 cm silicagel under eluering med en gradient av EtOAc i toluen (1:1 til EtOAc).
De tidlige fraksjoner ga 0,23 g (16%) utvunnet utgangsmateriale. Etterfølgende fraksjoner ga deretter 0,78 g (71%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 3500 (OH) , 2250 (CN) , 2100 (N3) , 1770 (C=0 av p-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,40 (d, J=6,26 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 1,83 (d, J=5,l Hz, 1H, OH), 2,9-3,3 (m, 3H, H-4 og SCH2), 3,22 (dd, JH6,H5=2'75 Hz' JH6,Hl/=7'37 Hz' 1H' H~6)/ 3/34 (bredt, J=6,0 Hz, 2H, C<H>2N3), 4,25 (m overlapping med H-5, 1H, CH3CHO), 4,28 (dd, <J>H5,H6=2'75 Hz' JH5,H4=9'58 Hz' 1H' H~5> ' 4'77 <m' 2H' CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl) .
E. ( 4R. 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- T( 2- cvanoetvl) tiol- 6-F( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclor3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,78 g (1,86 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidoetyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml tørr CH2C12 ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 0,1 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 4,1 ml (2,05 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i EtOAc. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med 150 ml dietyl-eter og ekstrahert med 0,05M pH 7,0 vandig 3 x 75 ml fosfat-buffer. Den kombinerte vandige fase ble innstilt til pH 5,8 med IM NaH2P04 og spor av organisk løsningsmiddel ble fjernet under vakuum. Den vandige løsning ble hydrogeneret ved 0-5°C over 30% palladium på "Celite" under 45 psi i 2 timer. Kata-lysatoren ble deretter filtreret på en "Celite"-pute og vasket med vann. "(i-Bondapak C18u HPLC (elue-ring 5% CH3CN-H20 pH 6,8 fosfatbuffer) indikerte en 70:30 blanding av 4"-aminobutyl-forbindelsen (eluert først) og 4-hydroksybutylforbindelsen.
Løsningen ble deretter hurtig kromatograferet på 4 x 7 cm reversfasesilicagel, ("H-Bondapak C^" eluering H2OCH3CN 5%) for å fjerne de uorganiske salter. De UV-aktive fraksjoner ble lyofilisert og kromatografert på samme søyle under elue-ring med 5% CH3CN-H20, 0,01M pH 6,8 fosfatbuffer. To hoved-fraksjoner ble oppnådd, som igjen ble avsaltet på reversfase-silicagel. Lyofilisering av den første fraksjon ga 0,33 g (50%) av 4"-aminobutyl tittelforbindelsen som et hvitt amorft pulver. Ifølge HPLC og <1>H-NMR hadde denne fraksjon en renhet på ~90% og var kontaminert med noe 4"-hydroksybutylforbindelse og andre urenheter.
Den andre fraksjon ga 0,102 g (14%) av 4-hydroksybutylforbindelsen som et hvitt, amorft pulver, 90% ren ved HPLC og
■^H-NMR, som anvendt i eksempel 18.
Forsiktig kromatografi av ovennevnte 4'-aminobutylfor-bindelse på reversfase ("Ji-Bondapak C^g", samme betingelser som ovenfor) ga rene fraksjoner av tittelforbindelsen: [a] 2 £2 +60,4° (c 1,0, H20).
Renhet ved HPLC: 98,5% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <C>18", eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, UV-detektor 306 nm, retensjonstid 5,25 minutter.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 300 nm (10.267).
IR (KBr) vmaks: 2250 (CN), 1760 (C=0 av p-lactam) og 1690 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,38 Hz, 1H,
CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,86 (m, 2H, CH2CN), 2,9-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,02 (t, J=7,6 Hz, 2H, CH2N<H>2), 3,4 (m, Jh6,H5=2'^ Hz' 2H/ H-6 °9 H-4 overlapping) og 4,3 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping).
Eksempel 18
Kalium-( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 4"- hvdroksv-butvl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclof 3, 2, 0 1hept - 2- en- 2- karboksvlat
Den rå fraksjon inneholdende 0,102 g (90% renhet) 4"-hydroksybutylforbindelsen oppnådd ved hydrogenering av azido-forstadiet i eksempel 17, trinn E, ble renset ved preparativ HPLC ("Zorbax ODS", Dupont, 21,2 mm x 25 cm, eluering 5% CH3CN-H20 pH 6,8 kaliumfosfatbuffer, UV-detektor) etterfulgt av avsalting på "u.-Bondapak C-^g". Lyofilisering ga 0, 045 g (45% utvinning) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 99% på 3, 9 mm x 30 cm, "|x-Bondapak <C>18", eluering 10% CH3<C>N-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 0,6 ml/min, uv-detektor 306 nm, retensjonstid 6,93 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) kmaks: 302 nm (7.364).
IR (KBr) vmaks<:> 2250 (CN), 1750 (C=0 av p-lactam) og 1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,41 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,86 (m, 2H, CH2CN), 2,8-3,3 (m, 2H, SCH2) , 3,35 (m, 1H, H-4), 3,43 (dd, JH6/H5=2,59 Hz, Jh6,H1=6'° Hz' 1H'h~6)/ 3/62 ( fc' J=6, 3 Hz, 2H, CH2OH), og 4,3 ppm (m, 2H, H-5 og CH 3CHO overlapping).
Eksempel 19
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4- f4"-( N- formimidovl)-aminobutvll- 6- r(!' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo- f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (0-5°C) løsning av 0,113 g (0,32 mmol) (4R,5S,-6S)-4-(4"-aminobutyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0] hept-2-en-2-karboksylsyre i 30 ml 0,04M pH 7,0 fosfatbuffer ble innstilt til pH 8,5 med 0,1M NaOH. Deretter ble 0,54 g (3,17 mmol) benzylformimidat,hydroklorid tilsatt i små porsjoner, mens pH ble opprettholdt ved 8,0-8,5 med 0,1N NaOH (-10 minutter). Etter 10 minutter ble pH innstilt til 7,0 med 0,1N HC1, og reaksjonsblandingen ble vasket med EtOAc. Den vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsnings-middel og deretter kromatograferet på 3,5 x 7 cm "ji-Bondapak C]_g" reversfasesilicagel. Eluering med en gradient av 0-10% acetonitril i vann ga 0,106 g (86%) av tittelforbindelsen som
22
et hvitt, amorft pulver etter frysetørking: [CX] ^ +53,50 (C
1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 93% på 3,9 mm x 30 cm, "ji-Bondapak C18", eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 7,74 minutter.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) ^maks: 300 nm (10.481).
IR (KBr) vmaks<:> 2250 (CN), 1760 (C=0 av p-lactam) og 1715 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,34 (d, J=6,34 Hz, 3H,
CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2~1,2 og 3 av butyl), 2,8-2,9 (m, 2H, CH2CN), 2,9-3,3 (m, 2H, SCH2), 3,3-3,5 (m, 4H, H-4, H-6 og CH2N), 4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping) og 7,81 ppm (s, 1H, CH=N).
Eksempel 20
( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 4"- N, N- dimetvlamino-butvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvl]- 7- okso- l- azabicvclor 3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,054 g (0,15 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(1'R)-1' -hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 1 ml vann ved 0-5°C, ble fortynnet med 1 ml acetonitril og deretter behandlet med 0,075 ml (0,81 mmol) 37% vandig formaldehyd, etterfulgt av 0,024 g (0,38 mmol) natriumcyanoborhydrid og én dråpe eddiksyre. Etter 15 minutter ble reaksjonsblandingen stoppet ved tilsetningen av 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og det organiske løsningsmiddel ble fjernet i vakuum. Den vandige fase ble deretter kromatografert på 3,5 x 6,5 cm "|i-Bondapak C23" reversfasesilicagel. Eluering med en gradient av 0-10% acetonitril i vann ga 0,016 g (27%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 96% på 3, 9 mm x 30 cm, "ji-Bondapak <C>18", eluering 5% C<H>3CN-H20 pH 7,0 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 10,9 minutter.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) kmaks: 300 nm (9.907). IR (KBr) vmaks: 2250 (svak CN), 1759 (C=0 av p<->lactam)
og 159<0> cm<-1> (C=Q av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3- 1,9 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,87 (s, 6H, N(C<H>3)2), 2,87 (m overlapning med NCH3, 2H, CH2CN), 2,9-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,15 (~t overlapping med SCH2, 2H CH2N(CH3)2), 3,38 (dd, JH6,H5=2'6 <Hz>'<J>H6,H1<=> 6'25 Hz' 1H' H" 6), 3,38 (m overlapping med H-6, 1H, H-4) og 4,27 ppm (m, 2H,
. H-5 og CH3CHO).
Eksempel 21
Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl) - 6- f( l' R) - 1 ' - hvdroksv- etvll- 3- r( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo f3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. ( 3S, 4R)- 3- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4- r( 1WR)- 1"-( 3- azido-propyl) - 3*,- diazo- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"- oksopropvn - azetidin- 2- on
Til en kald (isbad) løsning av 2,4 g (5,0 mmol) (3S., 4R) - 3-[ (l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]-azetidin-2-on fra eksempel 7, trinn E, i 50 ml EtOH ble til-satt en 7 ml 2N vandig HCl-løsning. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 20 timer. Løsningens pH ble innstilt til 7 med en 15 ml IM vandig NaHC03~løsning og etanol ble fjernet under vakuum. Den oppnådde rest ble fortynnet med EtOAc, vasket med en 18 ml IM vandig NaHC03-løsning, 10 ml vann, 10 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 40 g (5, 10, 20, 40, 60, 80% EtOAc/CH2Cl2) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 1,7 g (93%) av tittelforbindelsen som en olje, som utkrystalliserte.
IR (CH2C12) <V>maks: 3600, 3500 (OH), 3400 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), 1765, 1715 og 1650 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,04-5,84 (1H, m, vinylisk-H), 6,01 (1H, bs, NH), 5,42-5,29 (2H, m, vinylisk-H), 4,75-4,63 (2H, m, CH2vinyl), 4,19-4,01 (1H, m, H-l'), 4,02-3,89 (1H, m, H-l"), 3,83 (1H, dd, J=6,5 Hz, J=2,l Hz, H-4), 3,31-3,25 (2H, m, CH2N3) , 3,01 (1H, dd, J=l, 9 Hz, J=6,9 Hz, H-3), 2,23 (1H, d, J= 3,9 Hz, OH) , 1, 98-1, 75 (1H, m, HCH), 1,73-1,48 (3H, m, CH2-HCH) og 1,29 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
B. Allvl-( 2R. 4R. 5R. 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- r( 1' R)- 1' -
hvdroksvetvl]- 3, 7- diokso- l- azabicvclo\ 3 . 2 , 01heptan- 2-karboksvlat
En løsning av 1,46 g (4,00 mmol) (3S., 4R) -3-[ (1'R) -1' -
hydroksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyl-
. oksy-karbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on og 56 mg Rh(OAc)2 i 14 0 ml benzen ble oppvarmet under tilbakekjøling i 40 minut-ter. Benzen ble fjernet under vakuum, hvorved det ble oppnådd 1,5 g (100%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3610 (OH), 2100 (N3), 1770 og 1745
cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 5,96-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,39-5,25 (2H, m, vinylisk H), 4,75-4,64 (2H, m, CH2-vinylisk), 4,66 (1H, s, H-2), 4,35-4,26 (1H, m, H-l'), 4,29 (1H, dd, J=2,2 Hz, J=8,l Hz, H-5), 3,45- 3,25 (2H, m, CH2N3), 3,29 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=7,7 Hz, H-6), 2,8-2,6 (1H, m, H-4), 1,9-1,5 (4H, m, OH, CH2-CH2) og 1,42 ppm (3H, t, J=6,2 Hz, CH3).
C. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- r( 2- hvdroksyetyl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo [ 3. 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 1,5 g (4,00 mmol) allyl- (2R, 4R, 5R, 6S.) -4 - (3"-azidopropyl) -6- [ (1'R) -1' - hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]-heptan-2-karboksylat i 30 ml CH3CN ble behandlet dråpevis med 0,88 ml (4,4 mmol) difenylklorfosfat og 0,76 ml (4,4 mmol) N,N-diiso-propyletylamin . Blandingen ble omrørt i 45 minutter og det resulterende enolfosfat ble silylert ved suksessiv tilsetning av 0,57 ml (4,4 mmol) trimetylsilylklorid og 0,76 ml (4,4 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 35 minutter og det beskyttete enolfosfat ble deretter behandlet med 624 mg (8,00 mmol) 2-merkaptoetanol og 1,39 ml (8,00 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt, fikk lov å stå ved 5°C i 24 timer og ble deretter fortynnet med 100 ml kald EtOAc. Den ble vasket med 1 x 50 ml kald IN vandig HC1, 2 x 50 ml iskaldt vann, en 1 x 50 ml kald IM NaHC03 løsning, 2 x 50 ml iskaldt vann, 50 ml saltvann og tørket (MgS04). Den oppnådde rest ved avdampning av løsningsmidlet ble fortynnet med 30 ml (destillert over Na/benzofenon) THF og behandlet først med 1,3 ml (24 mmol) AcOH og deretter dråpevis med en 12,0 ml (12 mmol) IM tetrabutylammoniumfluorid løsning i THF ved -25°C (CH3CN/-tørris-bad). Blandingen ble omrørt i 20 minutter, deretter fortynnet med 150 ml kald EtOAc. Den ble vasket med en 3 x 50 ml iskald IM vandig NaHC03-løsning, 3 x 50 ml iskaldt vann, 50 ml saltvann og tørket (MgSO^). Den oppnådde rest, ved avdampning av løsningsmidlet, ble ledet gjennom en 100 g (EtOAc-CH2Cl2; 10% -» 100%) hurtigsilicagel-søyle, hvorved det ble oppnådd 795 mg (50%) av tittelforbin-delsen som en halv-krystallisk olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,04-5,90 (1H, m, vinylisk H), 5,50-5,23 (2H, m, vinylisk-H), 4,82-4,63 (2H, m, CH2-vinylisk), 4,27-4,19 (1H, m, H-l'), 4,22 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,9-3,75 (2H, m, CH20) , 3, 42-3,26 (2H, m, CH2~ N3 og H-4), 3,24 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,3 Hz, H- 6), 3,08-2,8 (2H, m, SCH2), 2,3-1,9 (1H, bs, OH), 1, 95-1,54 (4H, m, CH2-CH2) og 1,37 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3) .
D. Natrium ( 4R, 5S. 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvl1- 3- f( 2- hvdroksvetvltiol- 7- okso- l- azabicvclo \ 3 . 2. 01- hept- 2- ene- 2- carboksvlat
En kald (isbad) løsning av 63 mg (0,16 mmol) allyl-(4R,5S,6S.)-4-(3"-azidopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 7 ml CH2C12 ble behandlet med 12 mg (0,012 mmol) Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i 0,32 ml (0,16 mmol) etylacetat. Blandingen ble omrørt ved 5°C i 40 minutter, deretter fortynnet med 30 ml dietyleter og ekstra-hert med en 3 x 3,5 ml kald pH 7,0 bufferløsning og 1 x 3 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 10 ml dietyleter, ledet gjennom en 15 g (H20, 1,2,3,4% CH3CN/H20) "ji-Bondapak C^g" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 30 mg (50%) av tittelforbindelsen etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 98,6% (5% CH3CN/buffer pH 7,4 0,014M), retensjonstid 8,87 minutter.
UV (H20) Xmaks<:> 304 (10.770).
IR (Nujol) Vmaks<:> 3600-3100 (OH), 2100 (N3), 1750 og 1600 cm"1 (C=0).
<X>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,35-4,20 (1H, m, H-l'), 4,22 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,8-3,7 (2H, m, CH20), 3,45-3,3 (4H, CH2N3, H-6 og H-l'), 3,11-2,8 (2H, m, SCH2), 1,95-1,45 (4H, m, CH2CH2) og 1,33 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 22
Natrium-( 4R. 5S. 6S)- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 2"-azidoacetoksvetvl)- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol-7-okso-l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat A. Allvl- ( 4R, SS , 6S) - 6- ni' R) - 1' - ( tert- butvldimetvlsilvloksvetvl) 1- 4-( 2"- azidoacetoksvetvl)- 3-( pvridin- 2- vl)-metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
Til en løsning av 0,5 g (0,96 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-4-(2"-hydroksyetyl) -3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat (fremstilt i eksempel 6, trinn A) i 10 ml CH2CI2 ved 0°C under argon ble tilsatt 0,1 ml (1,2 mmol) pyridin, etterfulgt av en løsning av 0,14 g (1,2 mmol) azidoacetylklorid i 2 ml CH2Cl2- Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 30 minutter og ble deretter fortynnet med 40 ml EtOAc og vasket suksessivt med en kald pH 7 fosfatbufferoppløsning og saltvann. Etter tørking (MgS04) ble løsningsmidlet avdampet til en sirup, som ble kromatografert på 2,3 x 11 cm silicagel pakket i CH2CI2 og eluert med en blanding av CH2CI2 og EtOAc (8:2, gradient eluering), hvorved det ble oppnådd 0,423 g (73%) av tittelforbindelsen som en sirup.
<X>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,04 (s, 3H, SiCH3), 0,05 (s, 3H, SiCH3), 0,84 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,28 (d, CH3, JH,CH3' = 6,12 Hz), 1,70- 1,87 (m, 1H, CH2), 2,16-2,33 (m, 1H, CH2), 3,16 (dd, H-6, <J>5/6<=>2,64 Hz, Jg ^=7,04 Hz), 3,67 (m, H-4, J=2,l, 8, 03, 10, 63 Hz), 3,98 (s, CH2N3) 3, 83-4, 43 (overlap-ping, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2) <4,>57-4,82 (m, OCH2 allyl), 5,18-5,45 (m, =CH2, allyl), 5,82-6,01 (m, CH=, allyl), 7,17 (m, H-5, py, J4^5=7,68 Hz, J5^6=4,9 Hz), 7,38 (d, H-3, py, <J>3>4=7,83 Hz), 7,66 (dt, H-4, py, J46=1,8 Hz), 8,45 ppm (m,
H-6, py, J3/g=0,8 Hz).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6-\(!' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 4-( 2"-azidoacetoksvetvl)- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol-7-okso-l-azabicvclo F3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,423 g (0,7 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-4-(2"-azidoacetoksy-etyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-aza-bicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml tørr THF ble behandlet med 0,24 ml (4,22 mmol) eddiksyre, etterfulgt av en IM løsning av tetrabutylammonium-fluorid i 2,11 ml (2,11 mmol) THF. Blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 120 timer, hvoretter ~25% av utgangsmaterialet forble uomsatt. Blandingen ble nøy-tralisert ved 0°C med en 4,3 ml (4,22 mmol) IM NaHC03-løsning og ekstrahert med 3 x 50 ml EtOAc. Den kombinerte organiske fase ble vasket suksessivt med en kald IM NaHC03~løsning, vann og saltvann, tørr (MgS04), og løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd en klebrig gummi, som ble kromatogra-fert på 2,5 x 12 cm silicagel pakket i CH2CI2 og eluert med en blanding av CH2CI2 og EtOAc (3:7, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,23 g (68%) av tittelforbindelsen.
^H-NMR (200 MHz, CDC13 7,24) 8: 1,38 (d, CH3, JH/CH3/=6,24 Hz), 1,71-1,87 (m, 1H, CH2) , 2,26-2,38 (m, 1H, CH2), 3,24 (dd, H-6, J5/6=2,82 Hz, J5/1,=8,08 Hz), 3,7 (m, H-4, J=2,16, 9,79 Hz), 3,86-4,53 (m, 8H, CH20, CH2N3, CHOH, H-5, SCH2), 4,57-4,85 (m, OCH2, allyl), 5,19-5,45 (m, =CH2, allyl), 5,83-6,02 (m, CH=, allyl), 7,14-7,21 (m, H-5, py, <J>3>5<=>1,03
Hz, J4>5=7,71 Hz, <J>5^6<=>4,82 Hz), 7,38 (d, H-3, py, <J>3/g<=>0,98 Hz, J3^4=7,86 Hz), 7,65 (dt, H-4, py, J3^4<=7,>86 Hz, J4 6<=>1,81 Hz), 8,46 ppm (m, H-6, py).
C. Natrium- ( 4R. 5S, 6S)- 6- r ( l' R)- V - hvdroksvetvll - 4-( 2"-azidoacetoksvetvl)- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo \ 3 . 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,22 g (0,46 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-azidoacetoksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2CI2 under argon ble tilsatt 0,08 g (0,07 mmol) Pd[Ph3P]4 etterfulgt av en 0,5M løsning av natrium-2-etyl-heksanoat i 1,01 ml (0,5 mmol) EtOAc .Blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deretter ekstrahert med 3 x 15 ml vann. Den kombinerte vandige fase ble ledet gjennom en 2,5 x 10 cm søyle av "u-Bondapak C^g" reversfasesilicagel. 0,1 g (48%) av tittelforbindelsen ble eluert med en blanding av vann og CH3CN (9:1, gradienteluering) og ble oppnådd som et hvitt, fnugget faststoff etter lyofilisering.
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,31 (d, CH3, JCH3 x,= 6,4 Hz), 1,65-1,84 (m, 1H, CH2), 2,03-2,2 (m, 1H, CH2), 3,28 (dt, H-4, J=2,72, 11,33 Hz), 3,48 (dd, H-6, J5^6=2,64 Hz, Jg x»» 6'03 Hz), 4,13 (s, 2H, CH2N3), 4,05- 4,35 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,39 (m, H-5, py, J4/5=7,73 Hz, J5/6=4,92 Hz), 7,51 (d, H-3, py, J3/4=7,83 Hz), 7,87 (dt, H-4, py, <J>4/6<=>l,75 Hz), 8,48 ppm (d, H-6, py).
Eksempel 23
( 4R. 5S. 6S)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 2"- amino-acetoksvetvl)- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,08 g (0,17 mmol) natrium-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-azidoacetoksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i en 20 ml 0,05 M løsning av pH 7 natrium-fosfatbuffer ble hydrogenert ved 0°C over 0,04 g (5%) palladium-på-BaS04 ved 40 psi i 30 minutter. Katalysatoren ble filtrert og vasket med vann. Den kombinerte vandige løsning ble ledet gjennom en 2,5 x 10 cm "u<-Bo>ndapak <C>18« søyle av reversfasesilicagel. Forbindelsen ble eluert med en blanding av vann og CH3CN (9:1, gradienteluering). Den første oppnådde forbindelse viste seg å være natrium-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-hydroksyetyl)-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat som et resultat av ester-spaltning. Deretter ble 0,035 g (49%) av tittelforbindelsen eluert og oppnådd som et hvitt fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 93,1% (faktisk >98%) UV-deteksjon ved 304 nm, 4 mm x 30 cm (|l-Bondapack C18) , 10% CH3CN i pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, retensjonstid: 5,37 minutter.
UV (pH 7,4) Xmaks: 304 (8260).
IR (Nujol) <v>maks: 1750 cm"<1> (C=0 p<->lactam),
■^H-NMR (20<0> MHz, D^ 5. 1/29 (d/ ^ JCH3/1=6,4 Hz),
1, 69-1, 87 (m, 1H, CH2), 2,06-2,21 (m, 1H, CH2) / 3,27 (dt, H-4, J=2, 79, 10, 83 Hz), 3,46 (dd, H-6, <J>5^<g=>2,7 Hz, Jg^,=6,33 Hz), 3,89 (S, 2H, CH2NH2), 4,04- 4,38 (m, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,36 (m,.H-5, py, J4/5=7,73 Hz, J5/g=5,08 Hz), 7,5 (d, H-3, py, J3f4=7,93 Hz), 7,85 (dt, H-4, py, <J>4/6<=>l/77 Hz, 8,45 ppm (d, H-6 py).
Eksempel 24
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 3-r( pvridin- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- l'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( Pvridin- 3- vl) metvl- tiol-7- okso- l- azabicvclo" 3, 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 6,46 mmol (fremstilt fra 3,0 g, 6,46 mmol av diazo-forstadiet i eksempel 2, trinn E) allyl-(4R,5R,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3, 7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]-heptan-2-karboksylat i 50 ml tørr CH3CN ble behandlet ved -15°C med 1,4 ml (6,75 mmol) difenyl-klorfosfat og 1,2 ml (6,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble langsomt oppvarmet til 0-5°C i løpet av 30 minutter. Deretter ble 1,4 ml (8,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 1,54 g (12,3 mmol) 3-merkaptometylpyridin i 5 ml CH3CN tilsatt dråpevis. Etter 1,5 time ved 0-5°C ble reak-sjonsblandingen stoppet ved tilsetning av EtOAc og kaldt vann. Den organiske fase ble vasket med IM NaHS03, mettet NaHC03, saltvann og tørr (MgS04). Avdampning av løsnings-midlet ga en olje, som ble kromatogravert på 5 x 11 cm silicagel. Eluering med en gradient av 0-20% EtOAc i toluen ga 2,13 g (60%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 (N3), 1775 (C=0 av p<->lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
^H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,07 og 0,08 (2 x s, 2 x 3H, SiCH3), 0,88 (s, 9H, Sit-Bu), 1,29 (d, J=6,12 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,2 (m, 2H, CH2-4), 3,06 (dd, <J>H6,H5=2'70 H<z>'<J>H6,H1=7'74 Hz, 1H, H-6), 3,2-3,7 (m, H, CH2<N>3 og H-4), 4,05 (dd overlapning med SC<H>2, <j>h5,H6=2'7^ Hz' jH5,H4= 9'54 Hz, 1H, H-5), 4,07 (ABq, ^=15,6 Hz, Av=15,2 Hz, 1H, SCH2) , 4,17 (m, 1H, CH3CHO), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,8-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,29 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,79 (m, 1H, H-4 av pyridin), 8,54 (dd, J=15,0 Hz og J=4,8 Hz, 1H, H-6 av pyridin) og 8,62 ppm (d, J=2,0 Hz, 1H, H-2 av pyridin).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll - 3- f( pyridin- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclof3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 2,13 g (3,92 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(pyridin-3-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 60 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,35 ml (23,6 mmol) eddiksyre og 12,0 ml (12,0 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammonium-fluorid i tetrahydrofuran. Etter fem dager ved 5°C ble reak-sjonsblandingen fortynnet med EtOAc, vasket med kald mettet NaHC03, saltvann og tørr (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 4 x 12 cm silicagel under eluering med en gradient av 50-100% EtOAc i toluen. De første fraksjoner ga 0,33 g (15%) av utvunnet utgangsmateriale. De etterfølgende fraksjoner ga 0,90 g (54%) av tittelfor-bindelsen som en klar olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 (N3), 1775 (C=0 av p<->lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<X>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,38 (d, J=6,23 Hz, 3H, C<H>3CHO), 1,6-2,2 (m, 2H, CH2-4), 3,12 (dd, JH6,H5=2'77 Hz' JH6/H1=7,89 Hz, 1H, H-6), 3,3-3,7 (m, 3H, CH2<N>3 og H-4), 4,05 (ABq, ^=13,4 Hz, Av= 23,0 Hz, 2H, SCH2) , 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,3-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,3 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,72 (m, 1H, H-4 av pyridin), 8,53 (dd, J=l,58 Hz og J=4,8 Hz, 1H, H-6 av pyridin) og 8,6 ppm (d, J=2,0 Hz, 1H, H-2 av pyridin).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r 11 ' R )- 1'- hvdroksvetvll- 3-f( pyridin- 3- yl) metyltio!- 7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksylsyre
En løsning av 0,90 g (2,09 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2M<->azidoetyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-3-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml tørr CH2CI2 ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 0,13 g og 4,6 ml (2,3 mmol) tetrakis(trifenylfosfin)palladium
[0] av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i EtOAc. Etter 15 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med 150 ml dietyleter og ekstrahert med 3 x 75 ml 0,05M pH 7 fosfatbuffer. Den kombinerte vandige fase ble innstilt til pH 5,8 med IM NaH2P04 og spor av organisk løsningsmiddel ble fjernet i vakuum. Den vandige løsning ble deretter hydrogenert over 0,9 g (30%) palladium-på-"Celite" ved 0-5°C og under 45 psi i 1,2 timer. Katalysatoren ble deretter frafiltrert, og filtra-tet ble kromatografert på en 3,5 x 6,5 cm "[i-Bondapak C^qm reversfasesilicagel. Eluering med en gradient av 0-5% CH3CN i vann ga tittelmaterialet som et hvitt amorft pulver etter frysetørking. Krystallisasjon i 30 ml vann ga 0,137 g av tittelforbindelsen som et meget fint faststoff. En ytterligere kromatografi av morlutporsjonene ga 0,27 g (total utbytte 0,397 g, 52%) av tittelforbindelsen som et hvitt amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 94,5% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <c>18"), eluering 8% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 5,35 minutter.
UV (H20, fosfatbuffer, pH 7,4 ) ^mak:s: 268 (6, 010) og 302 nm (7.740) .
IR (KBr) Vjjj^g.- 1770 (C=0 av p-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat). <1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,30 (d, J=6,29 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,2 (m, 2H, CH2~4), 3,04 (bredt, J=8,3 Hz, 2H, C<H>2N<H>2), 3,20 (m, 1H, H-4), 3,38 (dd, <J>h6,H5=2'72 Hz' jH6, H1=6,45 Hz, 1H, H-6), 4,06 (AB<q>, JAB<=> 13,6 Hz, Av=24,3, 2H, SCH2), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 7,4 4 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,85 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-4 av pyridin), 8,44. (d, J=4,9 Hz, 1H, H-6 av pyridin) og 8,50 ppm (bred s, 1H, H-2 av pyridin).
Eksempel 25
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- N, N- dimetvlaminoetvl)- 6-\( 1' R)- 1' - hvdroksvetvll- 3- r( Pvridin- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo ' 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En suspensjon av 0,150 g (0,41 mmol) (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyl)-6-[ (l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-3-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre fra eksempel 24 i en blanding av 3 ml vann og 3 ml acetonitril ble behandlet ved 0-5°C med 0,23 ml (2,4 mmol) 37% vandig formaldehyd, 0,048 g (0,72 mmol) natriumcyano-borhydrid og to dråper eddiksyre. Etter 20 minutter ble reaksjonsblandingen fortynnet med 30 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer, og spor av organisk løs-ningsmiddel ble fjernet i vakuum. Den vandige fase ble kroma-tografert to ganger på 4 x 9 cm "u-Bondapak C^" reversfase-silicagel under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril 0-5% i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,080 g (~50%) av et hvitt, amorft pulver. Ifølge HPLC er dette produkt en blanding av dimetylamino-tittelforbindelsen og N-metyl-N-cyanometylforbindelsen (eksempel 26) i et 3:1 forhold. Rensning ved 10 mm x 30 cm, "(l-Bondapak C^gn, eluering 5%, CH3CN-H2O) preparativ HPLC ga 0,047 g (29%) ren dimetylamino-tittelf orbindelse.
Renhet ved HPLC: 97% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <c>18", eluering 8% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, retensjonstid 5,42 minutter.
UV (H20, PH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks. 268 nm (6592) og 302 nm (7.793).
IR (KBr) vmaks: 1765 (C=0 av |3-lactam) og 1605 cm-1 (C=Q
av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,30 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,5-2,2 (m, 2H, CH2-<4>), 2,87 (s, 6H, N(CH3)2), 3,15 (m, 3H, CH2N og H-4), 3,32 (dd, Jh6,H5=2'90 Hz' jH6,H1<=>6'80 Hz, 1H, H-6), 4,05 (AB<q,> 0^=14,1 Hz, Av=29,7 Hz, 2H, SCH2) , 4,12 (dd, delvis overlapping med SCH2, JH5 h6<=>2'90 Hz' 1H' h" 5), 4,22 (m, 1H, CH3CHO), 7,44 (dd, J=5,0 Hz og J=7,9 Hz, 1H, H-5 av pyridin), 7,84 (m, 1H, H-4 av pyridin), 8,44 (dd, J=l,5 Hz, og J=5,0 Hz, 1H, H-6 av pyridin) og 8,50 ppm (d, J=l,8 Hz, 1H, H-2 av pyridin).
Eksempel 26
( 4R, 5S, 6S- 4- f2"-( N- cvanometvl- N- metvlamino) etvll - 6-r( l ' R )- 1/- hvdroksvetvll- 3- r( pvridin- 3- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
Blandingen av produkter oppnådd ved den reduktive alky-lering av (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl] -3-[(pyridin-3-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylsyre, som beskrevet i eksempel 25, ble renset ved "u-Bondapak C]_g" preparativ HPLC. Den minste kompo-nent i blandingen ga med lengre reaksjonstid 0,011 g av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter lyofili-sering.
Renhet ved HPLC: 92% på 3,9 mm x 30 cm, "ji-Bondapak <c>18", eluering 8% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 23,5 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 268 og 304 nm.
IR (KBr) vmaks: 1752 (C=0 av p-lactam) og 1605 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,31 (d, J=6,36 Hz, 1H, CH3CHO) , 1,4 og 1,9 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4) , 2,35 (s, 3H, N-CH3), 2,3-2,6 (m, 2H, CH2CH2N), 3,12 (m, 1H, H-4), 3,33 (dd, <J>H6,H5=2'68 Hz' JH6,H1=5'95 Hz' 1H' H"6> > 3'70 <s' 2H' NCH2CN) , 4,09 (ABq, ^=14,14 Hz, Av=29,5 Hz, 2H, SCH2) , 4,12 (dd overlapping med SCH2, Jh5,H6=2'68 Hz' 1h' h~5*' 4'24 (m/ 1H, CH3CHO), 7,49 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,92 (d, J=8,0 Hz, 1H, H-4 av pyridin), 8,46 (bred d, J=4,3 Hz, 1H, H-6 av pyridin) og 8,54 ppm (bred s, 1H, H-2 av pyridin).
Eksempel 27
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 6- r( 1/ R)- 1'- hvdroksvetvll-3- f( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l- azabicvclo[ 3 , 2 , 01hept-2- en- 2- karboksvlsvre
En 50 ml (2,0 mmol) 0,04M pH 7,0 fosfatbufferløsning av natrium- (4R, 5S., 6j>) -4- (3"-azidopropyl)-6-[ (1'R) -1'-hydroksyetyl] -3- [(2-hydroksyetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat oppnådd fra den tilsvarende 404 mg (1,02 mmol) allylester, som beskrevet i eksempel 21, ble innstilt ved 5°C til pH 5,8-5,9 med en 1,0M pH 4,2 NaH2P04 buffer-oppløsning. Denne blanding ble tilsatt 400 mg 30% Pd/"Celite" og den ble omrystet på en Parr-hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1,5 time ved en innledningstemperatur på 5°C (is-bad) og sluttemperatur på 15°C. Katalysatoren ble frafiltrert, og oppløsningen ble ledet gjennom en 60 g (H2O) "fiBondapak (^■^"-reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd urent tittel-materiale kontaminert med natrium-(4R, 5S., 6S.)-4-(3"-hydroksypropyl) -6-[(l'R)-l' -hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksy-etyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat (eksempel 28). Dette kontaminerte materiale oppløst i en 0,01M pH 6,0 fosfat-buffer ble igjen holdt over en "JiBondapak C1g"-søyle (forhold 500/1). De første to volumener av søylen ble eluert med pH 6,0 buffer og etterfølgende eluering med vann ga 95 mg (28%) ren 3-aminopropyl-tittelforbindelse og 3-hydroksy-propylderivatet (fra 340 mg, 0,85 mmol allylester, 45 mg (17%) som beskrevet i eksempel 28).
Renhet av tittelforbindelse ved HPLC: 88% (KH2P04 0,01M, pH 7,4) retensjonstid 5,54 minutter.
UV (H20) Xmaks: 302 (9000).
IR (Nujol) Vmaks: 3600-3100 (OH), 1750 og 1585 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,33-4,2 (1H, m, H-l')/ 4,23 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3, 82-3, 67 (2H, m, CH20) , 3,43-3,34 (1H, m H-4), 3,36 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,6 Hz, H6), 3,09-3,02 (2H, m, CH2N), 3,06-2,79 (2H, 2 sett av m, SCH2), 1,95-1,5 (4H, m, CH2CH2) og 1,33 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 28
Natrium-( 4R. 5S. 6S)- 4-( 3"- hvdroksvpropyl)- 6- r( 1' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- f( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En 50 ml (2,0 mmol) 0,04M pH 7,0 fosfatbufferløsning av natrium- (4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3-[(2-hydroksyetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat oppnådd fra den tilsvarende 404 mg (1,02 mmol) allyl-ester, som beskrevet i eksempel 21, ble innstilt ved 5°C til pH 5,8-5,9 med en 1,0M pH 4,2 NaH2P04-bufferløs-ning. Denne blanding ble tilsatt 400 mg 30% Pd/"Celite" og den ble omrystet på en Parr-hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1,5 time ved en innledningstemperatur på 5°C (isbad) og sluttemperatur på 15°C. Katalysatoren ble frafiltrert, og løsnin-gen ble ledet gjennom en 60 g (H20) "uBondapak C18"-revers-fasesøyle, hvorved det ble oppnådd urent tittelmateriale kontaminert med (4R, 5S., 6S.) -4- (3"-aminopropyl) -6- [ (1' R)-1' - hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat (eksempel 27). Dette kontaminerte materiale oppløst i en 0,01M Ph 6,0 fosfat-buffer ble igjen holdt over en "JiBondapak C18"-søyle (forhold 500/1) . De første to volumer av søylen ble eluert med pH 6,0 buffer og etterfølgende eluering med vann ga 95 mg (28%) av 3-aminopropylforbindelsen ifølge eksempel 27 og 3-hydroksypropyl-tittelforbindelsen (fra 340 mg, 0,85 mmol av allylester, 45 mg, 17%).
Renhet av tittelforbindelse ved HPLC: 95,2% (KH2P04, 0,01M pH 7,4), retensjonstid 7,9 minutter.
UV (H20) <X>maks: 302 (10.300).
IR (Nujol) Vmaks: 3600-3100 (OH), 1740 og 1690 cm-<1 >(C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,35-4,2 (1H, m, H-l')/ 4,23 (1H, dd, J=9,2 Hz, J=2,5 Hz, H-5), 3,77 (2H, m, SCH2CH20), 3,65 (2H, m, CH20), 3,41 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,l Hz, H-6), 3,42-3,36 (1H, m, H-4), 3,1-2,8 (2H, 2 sett av m, SCH2) , 2,0-1,4 (4H, m, CH2CH2) og 1,33 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 2 9
Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- r(!' R )- 1 '-hvdroksvetvll- 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclo F3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksvlat
A. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- r( 1 ' R )-1'-tert- .
butvl- dimetvlsilvloksvetvll- 3- metvltio- 7- okso- l-azabicyclo- T3, 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 2,0 g (4,2 mmol) (3S., 4R) -3- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetyl-silyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksypropyl]azetidin-2-on frem-stilt i eksempel 7, trinn E, og Rh(OAc)2 i 80 ml benzen ble oppvarmet under tilbakekjøling i 20 minutter. Benzen ble fjer-net under vakuum og den resulterende bicykliske keton ble for-tynnet med 80 ml CH3CN. Den ble avkjølt til -10°C (is-MeOH-bad) og behandlet dråpevis med 1,0 ml (4,6 mmol) difenylklor-fosfat og 0,84 ml (4,6 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 2,3 mg 4-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 2 timer, der-etter ble 1,7 ml (9,2 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av tilsetningen av en strøm av CH3SH-gass (10 minutter). Blandingen ble holdt ved 5°C (kaldt rom) i 18 timer, deretter fortynnet med 400 ml kald EtOAc, vasket med 400 ml kald IN vandig HC1, 200 ml iskaldt vann, 2 x 400 ml IM vandig NaHC03, 3 x 400 ml iskaldt vann, saltvann og tørrt (MgS04). Den oppnådde rest (2 g) etter avdampning av løsnings-midlet ble ledet gjennom en 100 g (heksan -» 20% EtOAc/-heksan) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 1,0 g (50%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 2100 (N3), 1775 og 1710 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 5,97-5,89 (1H, m, vinylisk H), 5,48-5,21 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,6 (2H, m, CH2-vinyl), 4,3-4,15 (1H, m, H-l')/ 4,12 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 3,5-3,3 (2H, m, CH2N3), 3,3-3,1 (1H, m, H-4), 3,16 (1H, dd, J=7,4 Hz, J-2,7 Hz, H-6), 2,38 (3H, s, CH3) , 1,9-1,5 (4H, m, C<H>2CH2), 1,31 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,88 (9H, s, tert-butyl), 0,086 og 0,078 ppm (6H, 2s, CH3).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4- ( 3"- azidopropyl)- 6 -\( l' R) - 1'-hvdroksvetvll- 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclo' 3, 2, 01-hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (-20°C) løsning av 1,0 g (2,1 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (1' R) -1' - tert-butvl-dimetvl-silyloksyetyl]-3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3, 2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 60 ml THF ble behandlet med 1,5 ml (25,2 mmol) iseddik-AcOH og deretter med en 12,7 ml (12,6 mmol) IM THF-løsning av tetrabutylammoniumfluorid. Reaksjonen ble holdt ved 5°C i 100 timer, deretter nøytralisert med en IM vandig NaHC03~oppløsning, fortynnet med 200 ml EtOAc, vasket med 1 x 50 ml kald IM vandig NaHC^-oppløsning, 2 x 150 ml vann, 1 x 150 ml saltvann og tørr (MgS04). Den oppnådde rest (1,2 g) ved avdampning av løsningsmiddel ble ledet gjennom en (1/1, heksan/EtOAc -» EtOAc) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 0,30 g av tittelforbindelsen og 0,42 g av utgangs-eteren, som igjen ble behandlet med tetrabutylammoniumfluorid under de samme betingelser, hvorved det ble oppnådd 0,13 g av tittelforbindelsen, samlet utbytte 0,43 g (56%).
IR (CH2C12) vmaks:360° (0H)' 2100 (N3*' 1775 oa 1710 cm~ <1> (C=0) .
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,07-5,87 (1H, m, vinylisk H), 5,5-5,21 (2H, m, vinylisk-H), 4,87-4,62 (2H, m, CH2-vinylisk), 4,3-4,18 (1H, m, H-l'), 4,22 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,5-3,3 (2H, m, CH2N3), 3,3-3,2 (1H, m, H-4), 3,23 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=7,6 Hz, H-6), 2,37 (3H, s, SCH3), 1,9-1,55 (4H, m, CH2CH2) , 1,77 (1H, d, J=4,8 Hz, OH) og 1,39 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
C. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01 - hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) 50 mg (0,14 mmol) løsning av allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3-metyl-tio-7-okso-l-azabicyclo[3,2, 0]hept-2-en-2-karboksylat i 2 ml CH2C12 ble behandlet med 5 mg Pd(PPh3)4 og en 0,3 ml (0,15 mmol) 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i EtOAc. Blandingen ble fortynnet med 10 ml EtOAc og ekstrahert med en 1 x 10 ml, 1 x 5 ml 0,05M fosfatbufferløsning. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet gjennom en 20 g (H20 -> 2% CH3CN/H20) "JiBondapak C18" revers-fasesøyle, hvorved det ble oppnådd 30 mg (60%) av tittelfor-bindelsen .
Renhet ved HPLC: 97,2% (10% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4), retensjonstid 7,56 minutter.
UV (H20) Xmaks<:> 304 (8070).
IR (Nujol) vmaks: 3600-3100 (OH), 2100 (N3), 1745 og 1595 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,34-4,2 (1H, m, H-l'), 4,22 (1H, dd, J=2,3 Hz, J=9,0 Hz, H-5), 3,47-3,37 (4H, m, H-6, H-4 og CH2N3), 3,375 (d, J=2,3 Hz, del av dd av H-6), 2,37 (3H, s, CH3), 1,95-1,4 (4H, m, CH2CH2) og 1,35 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 30
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll - 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlsvre
pH av en 25 ml kald (is-bad) 0,05M pH 7,0 natriumfosfat-buf fer av natrium-(4R, 5S., 6S.)-4-(3"-azidopropyl)-6-[ d'R)-l'-hydroksyetyl]-3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat fremstilt ut fra den tilsvarende 0,12 g (0,33 mmol) allylester, som beskrevet i eksempel 29, ble innstilt
til 5,8 med en 1,0M pH 4,2 Na^PO^ bufferløsning. Blandingen ble deretter omrystet på en Parr-hydrogenator ved et hydrogentrykk på 45-50 psi i 90 minutter ved ~10°C (innledningstemperatur: 5°C) under anvendelse av 120 mg, 30% Pd/"Celite" som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering, og løsningen ble ledet gjennom en 50 g (H20 -* 2% CH3CN/H2O) "jiBondapak C^ q" reversfase-søyle, hvorved det ble oppnådd 0,3 g av en blanding av to forbindelser. Dette lyofiliserte pulver ble igjen ledet gjennom 45 g (150 ml 0,05M pH 6,0 fosfatbuffer, H20 -» 2% CH3CN/H2O) reversfasesøylen, hvorved det ble oppnådd 125 mg av urent 3-aminopropylderivat og 20 mg (20%) 3-hydroksypropyl-derivatet fra eksempel 31. 3-aminopropylderi-vatet ble på nytt renset på reversfasesøylen, hvorved det ble oppnådd 25 mg (25%) av den rene 3-aminopropyl-tittelforbin-delse .
Renhet ved HPLC: 96,5% (KH2P04 buffer 0,01M, pH 7,4), retensjonstid: 7,50 minutter.
UV (H20) kmaks: 304 (8580).
IR (Nujol) vmaks<:> 3600-3100 (OH, NH2), 1750 og 1580 cm"<1 >(C=0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,3-4,2 (1H, m, H-l')/ 4,21 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=9,l Hz, H-5), 3,48-3,39 (1H, m, H-4), 3,33 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,15-3,0 (2H, m, CH2N), 2,34 (3H, s, SCH3), 1,9-1,5 (4H, m, CH2CH2) og 1,33 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 31
Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 3"-hvdroksvpropyl)- 3- metvltio- 7- okso- l-azabicvclo f 3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
pH av en 25 ml kald (isbad) 0,05M pH 7,0 natriumfosfat-buffer av natrium-(4R, 5S_, 6S.)-4-(3"-azidopropyl)-6-[ (1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat fremstilt ut fra den tilsvarende 0,12 g (0,33 mmol) allylester, som beskrevet i eksempel 29, ble innstilt til pH 5,8 med en 1,0M pH 4,2 NaH2P04 bufferløsning. Blandin-gen ble deretter omrystet på en Parr-hydrogenator ved et hydrogentrykk på 45-50 psi i 90 minutter ved ~10°C (innledningstemperatur: 5°C) under anvendelse av 120 mg 30% Pd/"Celite" som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering, og løsningen ble ledet gjennom en 50 g (H2O -» 2% CH3CN/H2O) "iiBondapak C18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 0,3 g av blandingen av begge tittelmaterialer. Dette lyofiliserte pulver ble igjen ledet gjennom 45 g (150 ml) 0,05M pH 6,0 fosfatbuffer, H20 -» 2% CH3CN/H20) reversfase-søyle, hvorved det ble oppnådd 125 mg av den urene 3-amino-propylforbindelse ifølge eksempel 30 og 20 mg (20%) av den rene 3-hydroksypropyl-tittelforbindelse.
Renhet ved HPLC: 97,5% (2% CH3CN/pH 7,4 0,01M fosfatbuffer), retensjonstid: 7,79 minutter.
UV (H20) Xmaks<:> 306 (9700).
IR (Nujol) vmaks: 3500-3100 (OH), 1740 og 1590 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,34-4,18 (1H, m, H-l'), 4,21 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,69-3,63 (2H, m, CH20), 3,46-3,36 (1H, m, H- 4), 3,38 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 2,36 (3H, s, SCH3), 1,95-1,4 (4H, m, CH2CH2) og 1,34 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 32
( 4R, 5S, 6S)- 4- r3"-( N- formimidovl) aminopropvll- 6- r( l' R)-1'- hvdroksvetvll-3-f( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo- f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
Til en kald (isbad) løsning av 50 mg (0,15 mmol)
(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-aminopropyl) -6- [ (l'R)-1' -hydroksyetyl] -3- [ (2-hydroksyetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, som fremstilt i eksempel 27, i en 10 ml (0,4 mmol) 0,04M pH 7,0 fosfatbufferløsning ble tilsatt en 0,1N vandig NaOH-løsning for å bringe pH på 8,2-8,4. Denne løsning ble porsjonsvis tilsatt 257 mg (1,5 mmol) benzylformimidat, hydro-klorid, mens pH ble holdt ved 8,0-8,5 med den 0,1N vandige NaOH-løsning. Blandingen ble omrørt i 10 minutter og deretter ble pH innstilt til 7,0 med 0,1N vandig HC1. Løsningen ble ledet gjennom en 25 g (H20 -> 2%, 4% CH3CN/H20) "u-Bondapak C18"-søyle, hvorved det ble oppnådd 33 mg (62%) av den rene tittelforbindelse som et lyofilisert pulver.
Renhet ved HPLC: 93,8% (2% CH3CN/KH2HP04 0,01M, pH 7,4), retensjonstid: 5,73 minutter.
UV (<H>20) >-maks: 302 (7651).
IR (Nujol) Vmaks: 3600-3100 (NH,OH), 1755, 1585 (C=0) og 1710 cm<-1> (C=NH).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 7,83, 7,80 (1H, 2s, NCHN), 4,35-4,2 (1,5 H, m, H-l'), 4,21 (0,5 H, d, J=2,2 Hz, del av H-5), 3,8-3,7 (2H, m, CH20), 3,55-3,25 (4H, m, CH2N, H-6, H-4), 3,1-2,8 (2H, 2 sett av m, SCH2), 1,95-1,4 (4H, m, CH2CH2) og 1,32 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
Eksempel 33
( 4R, 5S, 6S)- 4- f3"-( N- formimidovl) aminopropvll- 6- f( l' R) - 1'- hvdroksvetvll- 3- metvltio- 7- okso- 1-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
pH av en kald (isbad) løsning av 31 mg (0,10 mmol)
(4R,51,61) -4-(3"-aminopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-metyl-tio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, som fremstilt i eksempel 30, i en 0,05M pH 7,0 fosfatbuffer ble inn-stilt til 8,5 med en 0,1N vandig NaOH-løsning. Blan-dingen ble porsjonsvis tilsatt 172 mg (1 mmol) benzylformi-midat,hydroklorid, idet pH ble holdt ved 8-8,3 med den 0,1N vandige NaOH-løsning, og den ble omrørt i 15 minutter. pH av blandingen ble deretter innstilt til 7,0 og den vandige løs-ning ble ledet gjennom en 15 g (H20) "JiBondapak C18"-søyle, hvorved det ble oppnådd 22 mg (60%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet ved HPLC: 97,8% (304 nm, 2% CH3CN/KH2P4 0,01M pH 7,4) retensjonstid 8,33 minutter.
UV (H20) <X>maks: 306 (12.200).
IR (Nujol) Vmaks: 3600-3100 (OH, NH2), 1750, 1590 (C=0) og 1710 cm"<1> (C=N).
<1>H-NMR (D20; 200 MHz) 8: 7,83, 7,80 (1H, 2s, CH), 4,35-4,18 (2H, m, H-l' og H-5), 3,45-3,35 (3H, m, CH2N, H-4), 3,30 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,2 Hz, H-6), 2,34 (3H, s, SCH3), 1,9-1,45 (4H, m, CH2CH2) og 1,32 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 34
( 4R. 5S. 6S)- 4- r 3"-( N- guanidinvl) aminopropvl1- 6- f( 1' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
pH av en kald (isbad) løsning av 50 mg (0/17 mmol)
(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-aminopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre fremstilt i eksempel 30 i en 0,05M pH 7,0 fosfatbuffer ble innstilt til pH 8 med en 0,1N vandig NaOH-løsning. Til denne blandingen ble 211 mg (1,70 mmol) aminoiminometansulfonsyre porsjonsvis tilsatt, idet pH av reaksjonsblandingen ble holdt ved 7,8-8,0 med den 0,1N vandige NaOH-løsning. Den ble der-etter omrørt i 1 time og blandingens pH ble innstilt til 7,0 med en 0,1N vandig HCl-løsning. Den ble ledet gjennom en 25 g (H20) "jiBondapak C18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 17 mg (40%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet ved HPLC: 99,4% (304 nm, 2% CH3CN/KH2P04 0,0IM pH 7,4), retensjonstid 9,19 minutter.
UV (H20) Xmaks<:> 306 (10.700).
IR (Nujol) Vmaks<:> 3600-3100 (NH2, OH), 1750, 1680 (C=0) og 1660 cm"<1> (C=N).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,3-4,17 (1H, m, H-l')/ 4,20 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=9,l Hz, H-5), 3,46-3,30 (1H, m, H-4), 3,26 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 3,3-3,2 (2H, m, CH2N) , 2,34 (3H, s, SCH3), 1,9-1,4 (4H, m, CH2CH2) og 1,32 ppm (3H,
d, J=6/3 Hz, CH3) .
Eksempel 35
( 4R, 5S, 6S) -4-f 3"- ( N- cruanidinvl) aminopropvl 1 - 6- T ( l' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- r( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3. 2. 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 50 mg (0,15 mmol) (4R, 5S., 6S.) - 4-(3"-aminopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl) tio] -7-okso-l-azabicyclo- [3, 2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre fremstilt i eksempel 27 i en 10 ml (0,4 mmol) 0,04M pH 7,0 vandig fosfatbuffer ble tilsatt en 0,1N vandig NaOH-løsning for å bringe pH 7 til 7,8-8,0. Denne løsningen ble porsjonsvis tilsatt 186 mg (1,5 mmol) aminoiminometansulfonsyre som beskrevet av H.S. Mosher et al. Tet. Lett. 29 (26) 3183-86
(1988) og pH ble holdt ved 7,6-7,8. Blandingen ble omrørt i 1 time, mens pH (7,6-7,8) ble holdt konstant med en 0,1N vandig NaOH-løsning. pH av reaksjonsblandingen ble innstilt til 7,08 med en 0,1N vandig HCl-løsning og deretter ledet gjennom en 25 g (H20, 2%, 4% -CH3CN/H20) "ji-Bondapak C18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 35 mg (63%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet ved HPLC: 99,1% (2% CH3CN/buffer pH 7,4, 0,01M), retensjonstid 7,5 minutter.
UV (H20) /Vmaks: 304 (7800).
IR (Nujol) Vmaks: 3320, 3180 (NH, OH), 1750, 1580 (C=0) og 1665 cm-<1> (C=N).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,3-4,2 (2H, m, H-l' og H-5),
3,77 (2H, t, J=6,2 Hz, CH20) , 3,28 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,2 Hz, H-6), 3,45-3,15 (3H, m, H-4 og CH2N), 3,15-2,8 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,0-1,45 (4H, m, CH2CH2) og 1,32 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 36
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6-r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 , Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. All vi- ( 4R, 5R, 6S) - 4-( 2"- azidoetvl) - 6- r ( l' R) - l'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 7- okso-l- azabicvclo \ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 6,46 mmol (fremstilt ved ringsluttning av diazo-forstadiet (3,0 g, 6,46 mmol), fremstilt i eksempel 2, trinn E) allyl-(4R,5R,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]-heptan-2-karboksylat i 50 ml tørr acetonitril ble behandlet ved -15°C og under nitrogen med 1,4 ml (6,75 mmol) difenyl-klorfosfat og 1,2 ml (6,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin til-satt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt og temperaturen av blandingen ble langsomt oppvarmet til 0-5°C i løpet av 30 minutter. Deretter ble 1,2 ml (6,9 mmol) N,N-diisopropyletyl-amin og 1,13 g (13,0 mmol) {5-merkaptopropionitril som beskrevet av L. Bauer og T.L. Welsh, J. Org. Chem., 26, 1443 (1961) tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 2 timer. Reak-sjonsblandingen ble deretter fortynnet med 300 ml EAtOAc, vasket med vann, IM NaHS03, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 11 cm silicagel. Eluering med en gradient av 0-10% EtOAc i toluen ga 3,3 g (-100%) av tittelfor-bindelsen som en brun olje kontaminert med noe polymert materiale. Dette materiale ble anvendt som vist i det neste trinn.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2250 (CN), 2100 (N3), 1775 (C=0 av P-lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDC13) 5: 0,19 (S, 6H, SiCH3), 0,99 (S, 9H, Sit- Bu) 1,41 (d, J=6,ll Hz, 3H, CH3CH0), 1,7-2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,7-3,4 (m, 5H, SCH2CH2CN og H-6), 3,4-3,8 (m, 3H, C<H>2N3 og H-4), 4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CH0), 4,85 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,3-5,6 og 5,9-6,2 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( 2- cvanoetvl)-tiol- 6- f(!' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo-T3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 3,3 g (6,4 mmol) rå allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat fra trinn A i 100 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 2,2 ml (38,4 mmol) eddiksyre etterfulgt av 20 ml (20,0 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Løsningen ble oppbevart ved 5°C i 8 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 11 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (1:1) ga 0,92 g (36%, utbytte fra diazoazetidinonen) av tittelforbindelsen som en klar olje. -IR (NaCl, film) Vmaks: 3500 (OH) , 2250 (CN), 2105 (N3), 1775 (C=0 av (5-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av karboksylat) . <1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,40 (d, J=6,23 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,1 (m, 2H, CH2-4), 2,7 (m, 2H, CH2CN), 2,9-3,3 (m, 3H, H-6 og SCH2), 3,4- 3,7 (m, 3H, H-4 og CH2N3), 4,25 (m. overlapning med H-5, 1H, CH3CHO), 4,29 (dd, Jh5,H6=2'80 Hz' JH5,H4=9'69 Hz' 1H' H"5>' 4'77 <m' 2H' CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl) . C. ( 4R, 5S, 6S) - 4-( 2"- aminoetvl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6-T( l' R)- 1' - hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,92 g (2,35 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-1-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml tørr CH2C12 ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 0,13 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium[0] og 5,2 ml (2,6 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i EtOAc. Deretter ble 200 ml 0,1M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og det organiske løsningsmiddel ble avdampet under redusert trykk. Den resterende vandige fase ble hydrogenert ved 0-5°C over 2,0 g 5% palladium-på-bariumsulfat og under 45 psi hydrogen i 30 minutter. Katalysatoren ble frafiltrert, og filtratet ble konsentrert til halvparten under vakuum. Etter to kromato-grafier på 7,5 x 10,5 "Ji-Bondapak C^g" reversfasesilicagel, under eluering med vann, ga lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner 0,15 g (20%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 99% på 3, 9 mm x 30 cm, "ji-Bondapak c18"' eluerin9 H2° PH 7/4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 304 nm, retensjonstid 4,67 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 298 nm (7.709).
IR (KBr) vmaks<:> 2250 (CN), 1760 (C=0 av p-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CH0), 1,8-2,4 (m, 2H, CH2-4), 2,85 (m, 2H, CH2CN), 2,9-3,3 (m, 4H, SCH2 og CH2NH2), 3,45 (m, overlapping med H-6, 1H, H-4), 3,47 (dd, <J>h6,H5=2'90 Hz' JH6Hl=6'47 Hz' 1H' H~6)' oq 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO).
Eksempel 37
Natrium ( 4R, 5S, 6S)- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-\ 2 "-( 2 . 5-diokso- l- pvrrolidinvloksv) etvll- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol - 7- okso- l- azabicvclo r 3, 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( 1' R )- 1'-( tert- butvldimetvlsilvloksvetvl) 1- 4- f2"-( 2, 5- diokso- l- pvrrolidinvloksv) etvll- 3-T( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 , Olhept-2- en- 2- karboksvlat
En blanding av 0,29 g (0,56 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1* R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-4-(2"-hydroksyetyl) -3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat fremstilt i eksempel 6, trinn A, 0,07 g (0,62 mmol) N-hydroksysuccinimid og 0,176 g (0,67 mmol) trifenylfosfin i 8 ml tørr THF ved 0°C under argon ble tilsatt 0,117 g (0,67 mmol) dietylazodikarboksylat. Reaksjonsblandin-gen ble omrørt ved 0°C i 1 time og ved værelsestemperatur i ytterligere 1 time. Løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk, og resten ble kromatografert på 3 x 9 cm silicagel pakket i CH2CI2 og eluert med en blanding av CH2C12 og EtOAc (4:6, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd tittelforbin-delsen blandet med ca. én ekvivalent av Ph3P=0 (0,465 g).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 5: 0,04 (s, 6H, Si(CH3)2), 0, 84 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,23 (d, CH3, JCH3,1'=6'07 Hz> ' i/73" 1,95 (m, 1H, CH2), 2,19-2,33 (m, 1H, CH2), 2,67 (s, 4H, 0=C(CH2)2C=0) , 3,14 (dd, H-6, J5^6=2,56 Hz, ^^,=6,4 Hz), 3,81 (m, H-4), 3,96-4,33 (overlapping, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 4,59-4,81 (m, OCH2, allyl), 5,17-5,44 (m, =CH2, allyl), 5,82-5,98 (m, CH=, allyl), 7,16 (m, H-5, py, J4 5=7,47 Hz, <J>5^6=4,91 Hz), 8,49 (d, H-6, py).
B. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 4- r2"-( 2. 5-diokso- l- pvrrolidinvloksv) etvll- 3- f( pyridin- 2- yl) metvltiol - 7- okso- l- azabicvclor 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,46 g (0,75 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-4-[2"-(2,5-diokso-l-pyrrolidinyloksy)etyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat fra trinn A i 8 ml tørr THF ble behandlet under argon med 0,26 ml (4,48 mmol) eddiksyre etterfulgt av en IM løsning av tetra-butylammoniumfluorid i 2,24 ml (2,24 mmol) THF. Blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 120 timer og deretter nøytralisert ved 0°C med en 4,52 ml (4,48 mmol) IM NaHC03-løsning. Blandingen ble ekstrahert med 3 x 50 ml EtOAc og den kombinerte organiske fase ble vasket suksessivt med en kald IM NaHC^-løsning, vann og saltvann, tørket (MgS04) og løsningsmiddel avdampet, hvor-ved det ble oppnådd en klebrig gummi, som ble kromatografert på 3,5 x 9 cm silicagel pakket i CH2C12 og eluert først med en blanding av CH2C12 og EtOAc (50 til 100% EtOAc) og deretter med en blanding av CH3CN og EtOAc (1:1 gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,18 g (64,3%) av tittelforbindelsen som et skumstoff.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 5: 1,37 (d, CH3, JCH3 X/= 6,25 Hz), 1,71-1,9 (m, 1H, CH2), 2,31~2'44 (m'1H' C<H>2}'<2>'<7 >(s, 4H, 0=C(CH2)2C=0), 3,25 (dd, H-6, <J>5/g<=2,>73 Hz, Jg/1,<=>8,77 Hz), 3,91 (m, H- 4), 3,85-4,30 (overlapping, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 4,58-4,86 (m, OCH2, allyl), 5,19-5,46 (m, =CH2, allyl), 5,84-6,03 (m, CH»,'allyl), 7,16 (m, H-5, py, <J>3^5<=>0,93 Hz, J4/5=7,67 Hz, J5^6=4,04 Hz), 7,34 (m, H- 3, py, <J>3f4<=>7,8 Hz), 7,64 (m, H-4, py, J4^g=l,82 Hz), 8,48 (m, H-6, py).
C. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( IR')- 1'- hvdroksvetvll- 4-' 2"-( 2, 5- diokso- l- pyrrolidinyloksv) etvll- 3-[( pyridin- 2-yl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclor 3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,16 g (0,32 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[ (l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[2"-(2,5-diokso-l-pyrrolidinyloksy)etyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2C12 under argon ble tilsatt 0,055 g (0,048 mmol) Pd[Ph3P]4 etterfulgt av en 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i 0,64 ml (0,32 mmol) EtOAc. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer og deret-ter ekstrahert med 3 x 15 ml vann. Den kombinerte vandige fase ble ledet gjennom en søyle av 3 x 11 cm "ji-Bondapak C18" reversfasesilicagel. Tittelforbindelsen ble eluert med en blanding av vann og CH3CN (9:1, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,1 g (64,9%) som et hvitt fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 97,6%, UV-deteksjon ved 304 nm på 4 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18", 8% CH3CN i pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, retensjonstid 9,7 minutter.
IR (Nujol) /*<v>maks: 1750 cm"<1> (C=0, p<->lactam), 1720 cm"<1 >(amid C=0).
UV (pH 7,4) Vmaks:304 (7756).
<1>H—NNR (200 MHz, D20) 8: 1,25 (d, CH3, JcH3,l'=6'39 Hz)' 1,75-1,91 (m, 1H, CH2), 2,11-2,25 (m, 1H, CH2), 2,82 (s, 4H,0= C(CH2)2C=0), 3,41 - 3,52 (overlapping, 2H, H-4, H-6), 3,98-4,30 (overlapning, 6H, CH20, CHOH, H-5, SCH2), 7,41 (dd, H-5, py, <J>3,4=7,9 Hz), 7,91 (dt, H-4, py, J4^6=l,68 Hz), 8,48 (d, H-6, py) .
Eksempel 38
( 4R. 5S, 6S) - 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r (!' R) - 1' - hvdroksvetvll - 3-F( 1, 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclor 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl- ( 4R. 5S, 6S) - 4- ( 2"- azidoetvl) - 6- * (!' R) -l'-tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( 1, 2, 3- tiadiazol- 4- vl)-metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2. 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En løsning av 3,7 g (8,0 mmol fremstilt som i eksempel 2, trinn E) (3S., 4R) -3- [ (1'R)-1' -tert-butyldimetylsilyloksy-etyl] -4-[(1"R)-1"-(2-azidoetyl)-3"-diazo-3"allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on og 150 mg Rh(OAc)2 i 300 ml varm benzen ble oppvarmet under tilbakekjøling i 1 time. Filtrering og avdampning av benzen ga det rå allyl-(4R, 5S_, 6S.)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat, som ble løst i 75 ml CH3CN, avkjølt til -15°C (is-MeOH-bad) og behandlet dråpevis med 1,76 ml (8,80 mmol) difenylklorfosfat og 1,54 ml (8,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 1 time og det resulterende enolfosfat ble behandlet dråpevis med 1,16 g (8,8 mmol) 1,2,3-tiadiazol-4-metylmercaptan i 1,5 ml CH3CN og 1,54 ml (8,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Reak-sjonsblandingen ble omrørt i 1 time og ytterligere 160 mg (1,2 mmol) merkaptan og 0,20 ml (1,2 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 1 time, fortynnet med 200 ml kaldt EtOAc, vasket med 25 ml kaldt vann, 3 x 25 ml IM vandig NaHS03, 25 ml H20, 25 ml IN vandig HC1, 25 ml IM vandig NaHC03, 25 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 125 g (heksan -» 5% ->25% EtOAc/-heksan) hurtigsilicagelpute, hvorved det ble oppnådd 2,38 g (61,5%) av tittelforbindelsen og 640 mg (0,96 mmol) enolfosfat.
IR (CH2C12) Vmaks: 2100 (N3), 1775 og 1710 cm-1 (c=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 8,44 (1H, s, aromatisk-H), 6,00-5,83 (1H, m, vinylisk-H), 5,46-5,20 (2H, m, vinylisk-H), 4, 82-4, 60 (2H, allylisk CH2) , 4,774, 4,70,1, 3,397, 4,324 (2H, ABq, J=14,6 Hz, CH2), 4,25-4,13 (1H, m, H-l'), 4,113 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 3,69- 3,55 (2H, m, CH2-N3), 3,46-3,32 (1H, m, H-4), 3,094 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,4 Hz, H-6), 2,16-1,98, 1,78-1,65 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,291 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,882 (9H, s, tert-butvi) og 0,080 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- 1' - hvdroksvetvl 1- 3- r( 1. 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01 nept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 2,38 g (4,30 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6-[ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3- [ (1,2,3-tiadiazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i vannfri 40 ml THF ble behandlet med 1,49 ml (25,8 mmol) eddiksyre og dråpevis med en 12,9 ml (12,9 mmol) IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i THF. Blandingen ble deretter omrørt i 48 timer ved 5°C. Den ble fortynnet med 150 ml EtOAc og vasket med 2 x 25 ml vann, 2 x 25 ml IM vandig NaHC03, 1 x 25 ml vann, 25 ml saltvann og tørr (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 50 g (CH2Cl2/heksan: 1/1 -> EtOAc/CH2Cl2: 5 -» 60%) hurtig-silicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 814 mg (43%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 3600 (OH), 2100 (N3) , 1780 og 1710 cm"1 (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,46 (1H, s, aromatisk-H), 6,04-5,84 (1H, m, vinylisk-H), 5,47-5,21 (2H, m, vinylisk-H), 4,87-4,59 (2H, m, allylisk H), 4,799, 4,725, 4,353, 4,278 (2H, ABq, J=15,0 Hz, CH2-aromatisk), 4,216 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=6,7 Hz, H-5), 4,72-4,18 (1H, m, H-l'), 3,79-3,67 (1H, m, H-4), 3,66-2,56, 3,52-3,38 (2H, 2 sett av m, CH2-N3), 3,176 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=7,9 Hz, H6), 2,20-2,03, 1,88-1,67 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,874 (1H, d, J=4,3 Hz, OH) og 1,495 ppm (3H, d, J=6,5 Hz, CH3).
C. ( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3-f( 1, 2. 3- tiadiazol- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l- azabivclo-f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 465 mg (1,07 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6-[ (l'R) -1'-hydroksyetyl]-3-[(1,2,3-tiadiazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3, 2, 0]-hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml CH2C12 ble behandlet med 22 mg Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av 2,14 ml (1,07 mmol) natrium-etyl-2-heksanoat i EtOAc. Blandingen ble omrørt i 1 time, for-tynnet med 20 ml dietyleter og ekstrahert med en 4 x 5 ml 0,04M vandig pH 7,0 fosfatbuffer. De vandige ekstrakter ble vasket med 2 x 20 ml dietyleter og pH ble innstilt til 5,9. Den vandige løsning ble deretter omrystet i en Parr-hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time ved 5°-15°C (ved avslutning av reaksjonen) under anvendelse av 465 mg 30% Pd/"Celite" som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og vasket med 2 x 5 ml vann. Den vandige fase ble ledet gjennom en 100 g (H20 -> 1% -> 3% CH3CN/H20), "p.-Bondapak c18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 163 mg (41%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 97,9% ved HPLC (300 nm).
UV (<H>2<0>) <k>maks: 300 (8 11 9240).
IR (Nujol) 8: 1770 og 1580 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,87 (1H, s, aromatisk H), 4,73, 4,67, 4,43, 4,35 (2H, ABq, J=14,0 Hz, CH2~aromatisk), 4,31-4,18 (1H, m, H-l'), 4,157 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 3,417 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,38-3,26 (1H, m, H-4), 3,17-3,02 (2H, m, CH2-N) , 2,25-2, 07, 1,86-1, 65 (2H, 2 sett av m, CH2-4), og 1,306 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 39
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3-metvltio- 7- okso- l- azabicvclo 13 , 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksvlsvre
A. Allvl- ( 4R, 5S. 6S) - 4- ( 2"- azidoetvl) - 6- r ( l' R) - 1' - hvdroksvetvll - 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclof3. 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH-bad) 2,55 g (7,00 mmol) av allyl- (4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] - 3,7-diokso-l-azabicyclo[3, 2,0]heptan-2-karboksylat [fra (3S., 4R) -3- [ <1'R) -1' -hydroksyetyl] -4- [ (1"R) -1"- (2-azidoetyl) - 3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on som beskrevet i eksempel 38, trinn A] i 100 ml CH3CN ble behandlet med 1,63 ml (7,70 mmol) difenylklorfosfat, 1,40 ml (7,7 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 26 mg 4-dimetylaminopyridin. Blan-dingen ble omrørt i 1 time og det resulterende enolfosfat ble behandlet med 1,0 ml (7,7 mmol) trimetylsilylklorid og 1,4 ml (7,7 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 15 minutter og 2,8 ml (15 mmol) N,N-iisopropyletylamin ble til-satt, etterfulgt av tilsetningen av en strøm av CH3SH gass i 10 minutter. Blandingen fikk lov å omsettes ved 5°C i 44 timer, deretter fortynnet med 300 ml EtOAc, vasket med en iskald 3 x 50 ml IM vandig NaHC03-løsning, 3 x 50 ml iskaldt vann, 50 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten (3 g) ble for-tynnet med 100 ml THF, behandlet med 17,5 ml (35 mmol) 2N vandig AcOH og omrørt i 1 time ved 22°C. Blandingen ble for-tynnet med 300 ml EtOAc, vasket med 2 x 100 ml IM vandig NaHC03, 3 x 100 ml H20, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten (1,5 g) ble ledet gjennom en 75 g (heksan/EtOAc: 1/1 -» EtOAc) silicagelpute, hvorved det ble oppnådd 530 mg (21%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) Vmaks: 3600-3200 (OH), 2100 (N3), 1770 og 1705 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 6: 6,07-5,87 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,22 (2H, m, vinylisk-H), 4,88-4,63 (2H, m, allylisk CH2), 4,30-4,19 (1H, m, H-l'), 4,227 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 3,66-3,54 (1H, m, H-4), 3,49-3,34 (2H, m, CH2N), 3,142 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=7,9 Hz, H-6), 2, 394 (3H, s, SCH3), 2,17-1,68 (3H, m og bs, OH og CH2-4) og 1,391 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
B. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksv- etvl1- 3- metvltio- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 0,53 g (1,5 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6-[ (1'R) -1'-hydroksyetyl]-3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml C<H>2C12 ble behandlet med 50 mg Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i 3,2 ml (1,6 mmol) EtOAc. Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 30 minutter. Den ble fortynnet med 20 ml etylacetat og ekstrahert med 2 x 10 ml vann. De vandige faser ble kombinert, vasket med 20 ml dietyl-eter og ledet gjennom en reversfase 50 g (H20 —» 5% CH3CN/H20), "^i-Bondapak C^ q" søyle, hvorved det ble oppnådd 0,32 g (64%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
<X>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,33-4,19 (1H, m, H-l'), 4,221 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 3,63-3,33 (3H, m, H-4, CH2-
N), 3,401 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,4 Hz, H-6), 2,365 (3H, S, SCH3), 2,13-1,95, 1,89-1,70 (2H, 2 sett av m, CH2-4) og 1,334 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 6- r ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3-metvltio- 7- okso- l- azabicvclo f 3. 2, 01 hept- 2- en- 2-karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 320 mg (0,960 mmol) natrium-(4R, 5S_, 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (l'R) -1'-hydroksyetyl]-3-metyl-tio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml vann ble omrystet på en Parr-hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 90 minutter under anvendelse av 320 mg 30% Pd/"Celite" som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og den vandige fase ble tre ganger ledet gjennom (50 g, 800 g og 80 g, H20) "u-Bondapak (^"-søyle, hvorved det ble oppnådd 82 mg (30%) av tittelf orbindelsen som et lyofilisert pulver-.
Renhet: 91,8% (HPLC, 304 nm).
UV (H20) <X>maks: 304 (8 11 8110).
IR (Nujol) 8: 3600-3200 (OH), 1750 og 1600 cm"<1> (C=0). <1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,34-4,21 (1H, m, H-l'), 4,231 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,6 Hz, H-5), 3,53-3,40 (1H, m, H-4), 3,385 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 3,14-3,05 (2H, m, CH2N), 2,34 (3H, s, SCH3), 2,23- 2,80 (2H, 2 sett av m, CH2-4) og 1,335 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 4 0
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- guanidinoetvl)- 6- T( l' R)- 1' - hvdroksvetvll- 3-[( 1, 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol - 7- okso-l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
En kald løsning (isbad) av 160 mg (0/432 mmol)
(4R, 5S., 6S.) -4- (2"-aminoetyl) -6- [ (1'R)-1' -hydroksyetyl] -3-[(1,2,3-tiadiazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3, 2,0]-hept-2-en-2-karboksylsyre fra eksempel 38 i en 25 ml 0,04M vandig pH 7,4 fosfatbufferløsning ble behandlet med en 0,1N vandig NaOH-løsning (til innstilling og opprettholdelse av pH på 7,6-7,8) og porsjonsvis med 533 mg (4,30 mmol) aminoiminometansulfonsyre. Blandingen ble omrørt i 45 minutter og pH ble innstilt til 6,9 med en 0,1N vandig HCl-løsning. Den vandige blanding ble ledet gjennom en 50 g (H20 l%-5% CH3CN/H20) "ji-Bondapak C^g" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 93 mg (52%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 99,7% (HPLC, 300 nm).
UV (H20) kmaks: 302 <8 11 8300).
IR (Nujol) Vmaks: 3400-3100 (OH), 1755 (C=0) , 1665 (C=N) og 1585 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,886 (1H, s, aromatisk-H), 4,651, 4,577, 4,421, 4,347 (2H, ABq, J=14,9 Hz, CH2-aromatisk), 4,3-4,17 (1H, m, H- 1'), 4,143 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 3,405 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 3,38-3,1 (3H, m, H-4 og.CH2-N), 2,15-1,95, 1,8-1,55 (2H, 2 sett av m, CH2-4) og 1,315 (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 41
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3- T( 2- cvanoetvl) tiol- 6-r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclof 3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 3- f( 2- cvanoetvl)-tiol- 6- r(!' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo-T3. 2 . 01hePt- 2- en- 2- karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH-bad) av 2,16 g (5,90 mmol) allyl- (2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat fremstilt ut fra (3S,4R)-3-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2n<->oksopropyl]azetidin-2-on, som fremstilt i eksempel 21, trinn B i 40 ml CH3CN ble behandlet dråpevis med 1,3 ml (6,5 mmol) difenylklorfosfat og 1,12 ml (6,5 mmol) N,N-diisopropyletyl-amin og et spor av 4-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 45 minutter og det resulterende enolfosfat ble silylert ved suksessiv tilsetning av 0,84 ml (6,5 mmol) trimetylsilylklorid og 1,12 ml (6,50 mmol) N,N-diisopropyl-
etylamin.
Blandingen ble omrørt i 30 minutter og den resulterende enolfosfatsilyleter ble behandlet med 640 mg (7,37 mmol) cyanoetantiol og 1,27 ml (7,37 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, hvoretter is-MeOH-badet ble erstattet med et isbad og omrøring ble fortsatt i ytterligere 30 minutter. Deretter ble 160 mg (1,84 mmol) cyanoetantiol og 0,317 ml (1,84 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av en omrøringsperiode på 1 time. Ytter-ligere 160 mg (1,84 mmol) cyanoetantiol og 0,317 ml (1,84 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt og etter 30 minutters omrøring ble blandingen fortynnet med 100 ml EtOAc, vasket med 3 x 40 ml iskaldt vann, 3 x 40 ml IM vandig NaHS03, 40 ml vann, 40 ml IM vandig NaHC03, 40 ml vann, 40 ml saltvann og tørket (MgS04). Den oppnådde rest ved løsningsmiddelavdamp-ning ble oppløst i 40 ml THF, avkjølt til -15°C (is-MeOH-bad) og behandlet suksessivt med 2 ml (35,4 mmol) eddiksyre og dråpevist med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 17,7 ml (17,7 mmol) THF. Blandingen ble omrørt i 40 minutter, fortynnet med 100 ml EtOAc, vasket med 20 ml kald IN vandig HC1, 2 x 20 ml vann, 20 ml IM vandig NaHC03, 2 x 20 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 50 g (C<H>2C12 -» 10, 20, 40, 60% Et0Ac/CH2Cl2) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 1,41 g (59,0%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) VmaJcs: 3600, 3500 (OH) , 2100 (N3) , 1780 og 1710 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8:.6,07-5,87 (1H, m, vinylisk H), 5,50-5,24 (2H, m, vinylisk H), 4,89-4,63 (2H, m, allylisk-CH2), 4,279 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 4,3-4,17 (1H, m, H-l'), 3,52-3,36 (2H, m, CH2N3), 3,30-3,2 (1H, m, H-4), 3,277 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=7,6 Hz, H-6), 3,22-2,93 (2H, m, SCH2), 2,82-2,56 (2H, m, CH2CN), 2,0-1,7 (5H, m, OH, CH2CH2) og 1, 395 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3) .
B. ( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tio]- 6-f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclof 3, 2. Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 661 mg (1,63 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3- [ (2-cyanoetyl) tio] -6- [ (1'R) - 1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 66 ml CH2C12 ble behandlet med 132 mg (0,110 mmol) Pd(PPh3)4 og dråpevis med en 3,3 ml (1,7 mmol) 0,5M løsning av natriumetyl-2-heksanoat. Blandingen ble omrørt i 50 minutter, fortynnet med 250 ml dietyleter og ekstrahert med en 3 x 10 ml 0,04M pH 7 fosfatløsning. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 50 ml dietyleter og pH ble senket til 5,9 med en IM vandig NaH2P04-bufferløsning. Denne blanding (rått natriumsalt av (4R, 5jS, 6S.) -4- (3n-azidopropyl)-3- (2-cyanoetyltio)- 6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-lazabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat) ble tilsatt 660 mg 30% Pd/"Celite" og den ble rystet på en Parr-hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time ved 5°C (isbad innledningstemperatur, 15°C sluttemperatur). Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og vasket med 2 x 10 ml vann. Den vandige løsning ble ledet gjennom en 165 g (H20 1% CH3CN) "jx-Bondapak C18" reversfase-søyle, hvorved det ble oppnådd 363 mg av 3-aminopropyl-tittel-forbindelsen og 3-hydroksypropylderivatet beskrevet i eksempel 42 som 74:26 blanding. Blandingen ble igjen ledet gjennom 180 g (pH 6,0, 0,01M fosfatbuffer) reversfasesøylen, hvorved det ble oppnådd derivater med fosfatsalt av begge.
Saltet av 3-aminopropylforbindelsen ble fjernet ved reversfasekromatografi, hvorved det ble oppnådd 182 mg (33%) av ren tittelforbindelse.
Renhet: 98,3% (HPLC 300 nm).
UV (H20) kmalcs: 300 (7900).
IR (nujol) vmaks: 1755 og 1585 cm"<1> (C=0),
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,34-4,21 (1H, m, H-l'), 4,268 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,8 Hz, H-5), 3,408 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3, 47- 3, 38 (1H, m, H-4), 3,23-2,91 (4H, m, CH2NH2, CH2S), 2,89-2,80 (2H, m, C<H>2CN), 1,92-1,50 (4H, m, CH2CH2) og 1,334 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 42
Natrium-( 4R, 5S. 6S)- 3- T( 2- cvanoetvl) tiol- 6- F( l' R)- l'~ hvdroksvetvll- 4-( 3"- hvdroksvpropyl)- 7- okso- l- azabicyclo-r 3, 2, 01hePt- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 661 mg (1,63 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3- [ (2-cyanoetyl) tio] -6-[ (1'R) - 1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat fra eksempel 41, trinn A i 66 ml CH2CI2 ble behandlet med 132 mg (0,110 mmol) Pd(PPh3)4 og dråpevis med en 3,3 ml (1,7 mmol) 0,5M løsning av natriumetyl-2-heksanoat. Blandingen ble omrørt i 50 minutter, fortynnet med 250 ml dietyleter og ekstrahert med en 3 x 10 ml 0,04M pH 7 fosfat-løsning. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 50 ml dietyleter og pH ble senket til 5,9 med en IM vandig NaH2P04-bufferløsning. Denne blandingen (rått natriumsalt av (4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azido-propyl) -3- (2-cyanoetyltio) -6- [ (l'R) -1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat) ble tilsatt 660 mg 30% Pd/"Celite" og den ble omrystet på en Parr-hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time ved 5°C (isbad innledningstemperatur, 15°C sluttemperatur). Kata-lysatoren ble fjernet ved filtrering og vasket med 2 x 10 ml vann. Den vandige løsning ble ledet gjennom en 165 g (H2O —> 1% CH3CN) "|i-Bondapak C^"- reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 363 mg av 3-aminopropylforbindelsen ifølge eksempel 41 og 3-hydroksypropyl-tittelforbindelsen som 74:26 blanding. Blandingen ble igjen ledet gjennom 180 g (pH 6,0, 0,01M fosfatbuffer) reversfasesøylen, hvorved det ble oppnådd derivater med fosfatsalt av begge.
Saltet av 3-hydroksypropylforbindelsen ble fjernet ved reversfasekromatografi (H20), hvorved det ble oppnådd 85 mg (14%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 92,5% (HPLC 300 nm).
IR (Nujol) vmaks: 1745 og 1695 cm<-1> (C=0).
UV (<H>20) >maks: 302 (9600).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,34-4,21 (1H, m, H-l'), 4,270 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=12,0 Hz, H-5), 3,65 (2H, bt, J=6,0 Hz, CH20), 3,450 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,0 Hz, H-6), 3,45-3,35 (1H, m, H-4), 3,25-3,06, 3,03-2,9 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,88-2,80 (2H, m, CH2CN), 1,94-1,41 (4H, m, CH2CH2) og 1,331 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 43
( 4R, 5S, 6S)- 4- r3"-( N- forminidovl) aminopropyll- 3- r(2-cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclb- f3. 2. 01hept- 2- en- 2- karboksvlicsvre
En kald (isbad) løsning av 135 mg (0,400 mmol)
(4R, 5S., 6S.)-4-(3"-aminopropyl)-3-[ (2-cyanoetyl) tio]-6-[ (l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre fra eksempel 41 i en 25 ml 0,04M pH 7,0 vandig fosfatbufferløsning ble tilsatt en 0,1N vandig NaOH-løsning for å bringe pH på 8,2-8,4, og 685 mg (4,00 mmol) benzylformi-midat hydroklorid porsjonsvis, idet pH av den vandige blanding ble holdt ved 8,0-8,4. Blandingen ble omrørt i 10 minutter og deretter ble pH senket til 7,0 med en 0,1N vandig HCl-løsning. Løsningen ble to ganger ledet gjennom en 30 g (H20 A@-» 1%, 2% CH3CN/H20) "ji.-Bondapak C18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 99 mg (69%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 97,8% (HPLC 300 nm).
UV (<H>20) kmaks: 300 (9350).
IR (Nujol) Vmaks: 1760 (C=0), 1710 (C=N) og 1590 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 7,83, 7,81 (1H, 2s, CH), 4,725 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,l Hz, H-5), 4,31-4,20 (1H, m, H-l'), 3,50-3,35 (4H, m, H-4, H-6 og CH2N), 3,22-3,08 og 3,02-2,91 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,89- 2,80 (2H, m, CH2CN), 1,92-1,50 (4H, m, CH2CH2) og 1,323 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 44
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)-6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll - 3- r( pvridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 6- f( 1' R)- 1' - hvdroksvetvl1- 3- r( pyridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH-bad) løsning av 4,0 g (11 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -6'-[ (l'R) -1'-hydroksyetyl]-4- (3"-azidopropyl) -3, 7-diokso-l-azabicyclo [3,2, 0]hept-2-en-2-karboksylat [fra (3S_, 4R)-3-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[(1<n>R)-1"-(3-azidopropy1)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2n<->oksopropyl]azetidin-2-on som fremstilt i eksempel 21, trinn B oppvarmet under tilbake-kjøling i 300 ml benzen med 100 mg Rh(OAc)2 i 45 minutter i 100 ml CH3CN ble behandlet dråpevis med 2,6 ml (12 mmol) difenylklorfosfat, 2,2 ml (12 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 20 mg 4-N,N-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 1 time, deretter behandlet med 2,07 g (16,5 mmol) 4-picolylmercaptan og 3,1 ml (17 mmol) N,N-diisopropyletylamin og holdt i 18 timer ved 5°C. Blandingen ble fortynnet med 300 ml etyl-acetat, vasket med 1 x 100 ml kald IM vandig NaHCC^, 2 x 100 ml H20, 1 x 100 ml IM vandig NaHS03, 2 x 100 ml vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten (5 g) ble ledet gjennom en 150 g (heksan/EtOAc -» CH3CN) hurtigsilicagelpute, hvorved det ble oppnådd 3,0 g (62%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) vmaks: 3680-3600 (OH), 2100 (N3), 1780 og 1710 cm"1 (C=0).
<X>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,58-8,55 (2H, m, aromatisk-H), 7,29- 7,20 (2H, m aromatisk H), 6,06-5,86 (1H, m, vinylisk-H), 5,49-5,22 (2H, m, vinylisk-H), 4,89-4,63 (2H, m, allylisk-CH2), 4,27-4,14 (1H, m, H- 1'), 4,109 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 4, 10, 4, 03, 3, 98, 3, 91 (2H, ABq, J=14,2 Hz, CH2-aromatisk), 3,43-3,22 (2H, m, CH2-N), 3,200 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,6 Hz, H-6), 3,10-2,98 (1H, m, H-4), 2,19 (1H, bs, OH), 1,91-1,43 (4H, m, CH2CH2~4) og 1,360 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
B. Natrium-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3-\( pvridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 3,0 g (6,8 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.)-4-(3"-azidopropyl)-6-[ (l'R) -1'-hydroksyetyl]-3-[ (pyridin-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml CH2C12 ble behandlet med 150 mg Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av 14 ml (7 mmol) natriumetyl-2-heksanoat i etylacetat. Blandingen ble omrørt i 60 minutter, deretter for-tynnet med heksan/dietyleter (1/1) og ekstrahert med en 1 x 100 ml og 2 x 25 ml 0,05M vandig fosfatbuffer. De vandige faser ble kombinert, vasket med 100 ml dietyleter og ledet gjennom en 300 g (H20A@-> 5% CH3CN/H20) "|i-Bondapak C18"-søyle, hvorved det ble oppnådd 0,8 g (30%) av tittelforbindelsen.
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 8,50-8,46 (2H, m aromatisk-H), 7,50-7,20 (2H, m, aromatisk-H), 4,28-4,15 (1H, m, H-l'), 4,19, 4,11, 4,03, 3,95 (2H, ABq, J=14,6 Hz, CH2-aromatisk), 4,073 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,37-3,29 (3H, m, H-6 og CH2N), 3,16-3,06 (1H, m, H-4), 1,8-1,38 (4H, 2 sett av m, CH2CH2-4) og 1,288 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll-3- r( pyridin- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo \ 3 . 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald løsning av 270 mg (0,60 mmol) natrium-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (1'R) -1' -hydroksyetyl] -3- [ (pyridin-4-yl)-metyl-tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 55 ml vann ble omrystet i en Parr-hydrogenator ved 5°C (isbad) i 2,5 timer ved 45-50 psi hydrogen under anvendelse av 540 mg 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og den vandige løsning ble ledet gjen-nom en 50 g (H20A@-> 7% CH3CN/H20) "[i-Bondapak C18"-reversfase-søyle, hvorved det ble oppnådd 127 mg (53%) av tittelforbin-delsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 97,2% (HPLC, 300 nm).
UV (<H>20) kmakS: 262 (e 5210), 304 (E 7950).
IR (nujol) vmaks: 3600-3100 (OH), 1760 og 1600 cm"<1 >(C=0).
^■H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8, 49-8, 46 (2H, m, aromatisk-H), 7,52-7,24 (2H, m, aromatisk-H), 4,28-4,16 (1H, mH-1'), 4,16, 4,08, 4, 02, 3,94 (2H, ABg, J=14,6 Hz, CH2-aromatisk), 4,076 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,20-3,10 (1H, m, H-4), 3,00-2, 93 (2H, m, CH2N) , 1, 80-1, 38 (4H, m, CH2CH2-4) og 1,292 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 45
( 4R, 5S, 6S)- 4- ( 4"- aminobutvl)- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll-3- r( pvridin- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. 6- azidoheksanovlklorid
En løsning av 151 g (0,96 mol) 6-azidoheksansyre [M. Rothe og K. Gehrke, Makromol. Chem. 83, 1 (1965), CA. 64: 4934d.] i 500 ml tørr CH2C12 ble behandlet ved 22°C med 88,0 ml (1,0 mmol) oksalylklorid tilsatt dråpevis i løpet av 30 minutter. Etter 2 timer ble to dråper N,N-dimetylformamid tilsatt, og løsningen ble omrørt ved 22°C under nitrogen i 18 timer. Løsningsmidlet ble deretter avdampet under vakuum, hvorved det rå syreklorid ble oppnådd som en klar olje, som ble anvendt som vist på det neste trinn.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2100 (N3) og 1800 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,3-1,9 (m, 6H, CH2~3,4 og 5), 2,9 (t, J=7 Hz, 2H, CH2~2) og 3,3 ppm (t, J=6,5 Hz, 2H, CH2-6).
B. 2- picolvl- 6-( azido) tiolheksanoat
En løsning av 130,6 g (1,04 mol) 2-picolylmerkaptan i 1,3 1 tørr CH2C12 ble avkjølt til 0-5°C, behandlet med 85 ml (1,05 mol) pyridin og en løsning av 179 g (1,02 mol) 6-azido-heksanoylklorid i 200 ml CH2C12 tilsatt dråpevis i løpet av 1 time. Etter ytterligere 1 time ved 0-5°C ble den organiske fase vasket med vann, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 244 g (90%) av tioesteren som en klar olje, som ble anvendt som vist i det neste trinn.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 <N3) og 1680 cm"<1> (C=0 av tioester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDC13) 8: 1,3-1,8 (m, 6H, CH2-3,4 og
5) , 2,6 (t, J=7,34 Hz, 2H, CH2-2), 3,25 (t, J=6,7 Hz, 2H, CH2~ 6) , 4,25 (s, 2H, SCH2), 7,16 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,33 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,62 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,53 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin). C. O- tert- butvldimetvlsilvleter av 2- picolvl- 6-( azido)- tiolheksanoat
En løsning av 244 g (0,92 mol) 2-picolyl-6-(azido)tiolheksanoat ill tørr CH2C12 ble avkjølt til -10°C, behandlet med 260 ml (1,86 mol) trietylamin, etterfulgt av 318 ml (1,38 mol) tert-butyldimetylsilyltrifluormetansulfonat tilsatt dråpevis i løpet av 40 minutter. Temperaturen av blandingen fikk lov til å nå 22°C, og løsningen ble omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 1,5 1 heksan, vasket med 2x11 kaldt vann, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Løsningen ble deretter behandlet med aktivt karbon (nøytral), filtrert og konsentrert under vakuum. Det resterende sorte, tjæreaktige materiale ble ekstrahert med 1,5 1 heksan og ekstrakten ble inndampet, hvorved det ble oppnådd 315 g (90%) av den rå silylenoleter som en sort olje, som ble anvendt som vist på koblingstrinnet. Ved ■'•H-NMR var dette produkt en 1:1 blanding av E-og Z-isomer.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2090 (N3), 1625 og 1590 cm"1.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,2 og 0,24 (2 x s, 6H, SiCH3), 0,97 og 0,98 (2 x s, 9H, Si t-Bu) , 1,2-1,8 (m, 4H,
CH2-4 og 5), 2,0 (m, 2H, CH2~ CH=C) , 3,17 (m, 2H, CH2N3) , 3,95 og 4,03 (2 x s, 2H, SCH2), 4,82 og 4,97 (2 x t, 1H, J=7,26 Hz, og J=7,58 Hz, 2 x 1H, CH2-CH=C), 7,14 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,26 (m, 1H, H-3 av pyridin), 7,6 (m, 1H, H-4 av pyridin) og
8,55 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
D. ( 3S. 4S) - 3- r ( l ' R ) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl1- 4-r( 1" R)- 1"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 5"- azido-pentvllazetidin- 2- on
En kald (0-5°C) suspension av 151 g (1,1 mol) fersk dannet zinkklorid i 2,6 1 tørr diklormetan ble tilsatt 238 g (0,83 mol) (3S,4R)-4-acetoksy-3-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] azetidin-2-on, etterfulgt av en løsning av den rå 0-tert-butyldimetylsilyleter av 315 g (0,83 mol) 2-picolyl-6-(azido)tiolheksanoat i tørr diklormetan. Temperaturen på løsningen fikk langsomt lov til å nå 22°C (~3 timer) og den resulterende homogene blanding ble omrørt i 18 timer. Reak-sjonsblandingen ble deretter vasket sukessivt med vann, mettet NH4C1, mettet NaHC03, vann og saltvann. Etter tørking (MgS04) ga avdampning av løsningsmidlet 4 94 g av en mørk olje, som ble anvendt som vist i det neste trinn. Ved ^-H-NMR-analyse viste dette råprodukt seg å være en blanding av l'R- og l'S-pentyl i et 8:2 forhold. Opprensning av en lite aliquot på silicagel (eluering toluen-EtOAc, 1:1) ga rene isomer av tittelforbin-delsen som et hvitt krystallisk produkt, smp. 81-83°C (heksan).
UV (EtOH) Xmaks: 236 (5576) og 264 nm (4.989).
IR (KBr) vmaks: 2100 (N3), 1758 (C=0 av p<->lacta), 1718 (C=0 av ester) og 1680 cm<-1> (C=0 av tioester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,04 (s, 6H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, Sit- Bu), 0,99 (d, J=6,32 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-2,0 (m, 6H, CH2-2,3 og 4 av pentyl) 2,79 (m, 1H, H-l av pentyl), 3,04 (bred s, 1H, H-3 av azetidinon), 3,23 (t, J=6,56 Hz, 2H, CH2<N>3), 3,80 (dd, <J>h3,H4=2'08 Hz'<J>H3,H1=6'97 Hz' 1H' H"3 av azetidinon), 4,14 (m, 1H, CH3CH0) 4,26 (s, 2H, SCH2), 5,85
(bred s, 1H, NH), 7,18 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,32 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,62 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,5 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
Analyse for C23H37<N>5<0>3SSi:
Beregnet: C, 56,18%; H, 7,58%; N, 14,24%.
Funnet: C, 56,25%; H, 7,59%; N, 14,10%.
E. ( 3S, 4S)- 3- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-f( 1" R)- l"- karboksv- 5"- azidopentvl1azetidin- 2- on
En løsning av det rå -400 g (0,83 mol) (3S,4S)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(pyridin-2-yl)-metyltiokarbonyl-5"-azidopentyl]azetidin-2-on i 3 1 tetra-hydrofuran ble avkjølt til 0°C og behandlet med 1 1 (11,6 mol) 30% hydrogenperoksid, forsiktig tilsatt porsjonsvis, etter-fulgt av 2,8 1 IM NaOH tilsatt dråpevis i løpet av 2 timer. Løsningen ble omrørt i ytterligere 2 timer ved 0-5°C og forsuret til pH 2,0 med -1 1 3N HC1. Reaksjonsblandingen ble der-etter ekstrahert med 2 1 og 3 x 1 1 EtOAc og den kombinerte organiske ekstrakt ble vasket med vann, IM NaHS03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en mørk olje, som ble løst i 2 1 heksan og ekstrahert med 4x11 mettet NaHC03. Den kombinerte vandige fase ble avkjølt til 0-5°C og forsuret til pH 2 med 3N HC1. Det dannede, hvite precipitat ble oppsamlet og vasket med vann. Den fuktige filterkake ble løst i CH2Cl2, tørket (MgS04) og inndampet, hvorved det ble oppnådd 114 g av det rå produkt. Krystallisasjon fra en blan-ding av etylacetat og heksan ga 67,4 g (21%) av den rene tit-
telsyre som hvite plater, smp. 132-133°C.
IR (KBr) Vmaks: 3280 (NH), 2500 (COOH), 2110 (N3) , 1760 (sh), 1715 og 1690 cm"<1> (C=0 av syre og p-lactam).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,06 og 0,07 (2 x s, 2 x 3H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, Si t-Bu) , 1,17 (d, J=6,29 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-1,8 (m, 6H, CH2-2,3 og 4 av pentyl) , 2,64 (m, 1H, H-l av pentyl), 3,14 (m, 1H, H-3), 3,29 (t, J=6,5 Hz, 2H, CH2N3), 3,87 (dd, Jh4,H3=1'90 Hz' JH4,H1=6'22 Hz' 1H' H~4)' 4,20 (dq, Jh,CH3=6'29 Hz' JH,H3=4'04 Hz' 1H' CH3CHO), og 6,46 ppm (s, 1H, NH).
Analyse for C17<H>32<N>404S:
Beregnet: C, 53,10%; H, 8,39%; N, 14,57%.
Funnet: C, 53,08%; H, 8,12%; N, 14,56%.
F. ( 3S. 4R) - 4- r ( 1" R) - 1"- ( 4- azidobutvl) - 3"- allvloksvkarbonvl-2"- oksopropvl1- 3- r( l ' R )- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksyetvll- azetidin- 2- on
En suspensjon av 67,0 g (0,174 mol) (3S,4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-l"-karboksy-5"-azidopentyl]azetidin-2-on i tørr 1,5 1 CH3CN ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 31,1 g (0,192 mol) 1,1-karbonyldiimidazol og den resulterende blanding ble omrørt i 2 timer. Løs-ningen ble deretter konsentrert under vakuum, hvorved det ble oppnådd det rå imidazolid som en olje.
IR (NaCl, film) 2100 (N3), 1755 (C=0 av p-lactam) og 1730 cm"<1> (C=0 av imidazolid).
Det rå imidazolid i 200 ml tørr CH3CN ble deretter tilsatt en løsning av 87,0 g (0,28 mol) tørket magnesiummonoallylmalonat i 1,4 1 benzen, og den resulterende blanding ble omrørt ved 60-65°C i 16 timer. Den avkjølte reaksjonsblanding ble deretter fortynnet med 1 1 etylacetat, vasket suksessivt med kaldt vann, 0,1N HC1, mettet NaHCC^, vann og saltvann. Etter tørking (MgS04) ga avdampning av løsningsmidlet 80,3 g av den rå ketoester som en olje, som ble anvendt som vist i neste trinn. Opprensning av en liten aliquot på silicagel ga den rene tittelforbindelse som en klar olje. Ved <1>H-NMR var dette produkt en 1:1 blanding av keto- og enolform.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 (N3), 1760 (C=0 av 0-lactam) og 1715 cm"<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,05 og 0,06 (2 x s, 6H, SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si t-Bu), 1,10 og 1,17 (2d, J=6,33 Hz, og J=6,28 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2"1,2 og 3 av butyl), 2,1-2,3 (m, 1H, H-l av butyl), 1,2-2,3 (m, 6H, CH2~1,2 og 3 av butyl), 2,9 og 2,97 (2 x m, 1H, H-3 av azetidinon), 3,27 (bred t, 2H, CH2N3), 3,54 (s, CH2-3 av oksopropyl, ketoform), 3,83 (to overlappende dd, 1H, H-4 av azetidinon), 4,17 (m, 1H, CH3CHO), 4,64 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,07 (s, CH3 av oksopropyl, enolform), 5,2-5,4 og 5,8-6,0 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl) og 6,0 ppm (bred s, 1H, NH).
G. ( 3S, 4R)- 4- r( 1" R)- 1"-( 4- azidobutvl)- 3"- allvloksvkarbonvl-3"- diazo- 2"- oksopropyl1- 3- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvl-silyloksvetyl] azetidin- 2- on
En løsning av 79 g (0,169 mol) rå (3S,4R)-4-[(1"R)-1"-(4-azidobutyl)-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]-3-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on i 400 ml acetonitril ble avkjølt til 0-5°C og behandlet med en løsning av 40 g (0,20 mol) p-toluensulfonylazid i 500 ml acetonitril. Deretter ble 28,3 ml (0,20 mmol) trietylamin tilsatt dråpevis i 5 minutter, og den resulterende blanding ble omrørt i 2 timer. Løsningsmidlet ble deretter konsentrert under vakuum, og resten ble triturert med en blanding av dietyleter og heksan (1:1). Det krystalliske p-toluensulfonamid ble oppsamlet ved filtrering, og filtratet ble inndampet, hvorved det ble oppnådd 86 g av diazo-tittelforbindelsen som en olje. Dette materiale kan anvendes som sådan til spaltning av silyleteren.
Opprensning av 30 g av det rå produkt på 9 x 13 cm (eluering heksan-EtOAc, 9:1 til 7:3) silicagel ga 17,5 g (tilsvarende et 59% utbytte fra syren, to trinn) av diazoazetidinon-tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl, film) Vmaks:. 2140 (N2), 2100 (N3), 1760 (C=0 av |$- lactam) , 1720 (C=0 av ester) og 1650 cm"<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,05 og 0,06 (2 x s, 2 x 3H, Si CH3), 0,86 (s, 9H, t-Bu), 1,17 (d, J=6,31 Hz, 3H, CH3CHO), 3,04 (m, 1H, H-3 av azetidinon), 3,25 (m, 2H, CH2N3), 3,84 (dd, <J>h4,H3=2'^9 Hz' jH4,H1= 5,33 Hz, 1H, H-4 av azetidinon), 4,07 (m, 1H, H-l av oksopropyl), 4,17 (dq, Jh,CH3=6'31 Hz' JH/H3=3,94 Hz, 1H, CH3CHO), 4,72 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,3-5,4 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), og 5,84 ppm (s, 1H, NH).
H. ( 3S, 4R) - 4- f ( 1" R)- 1"-( 4- azidobutvl)- 3"- allvloksvkarbonvl-3"- diazo- 2"- oksopropvl1- 3- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvllazetidin- 2- on
En løsning av 17,5 g (35,5 mmol) (3S,4R)-4-[(1"R)-1"-(4-azidobutyl) -3"allyloksykarbonyl-3"-diazo-2,,-oksopropyl] -3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on i 300 ml etanol ble behandlet ved 24°C med 100 ml IN HC1 og omrørt i mørket i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert med Na2C03 og konsentrert i vakuum. Den resterende vandige løsning ble ekstrahert med 50Q ml og 250 ml etylacetat og den kombi-nerte organiske fase ble vasket med vann, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga et faststoff, som etter krystallisasjon fra dietyleter-heksan og opprensning av moderlutporsjonene på silicagel (etylacetat) ga 11,8 g (88%) av tittelforbindelsen som hvite nåleformede krystaller, smp. 73-74°C.
UV (EtOH) ^aks* 260 nm (8.365).
IR (KBr) Vmaks<:> 3350 (OH), 2160 (N2), 2080 (N3), 1738 (C=0 av p- lactam), 1716 (C=0 av ester) og 1650 cm"<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,30 (d, J=6,33 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,28 (d, J=3, 8 Hz, 1H, OH), 3,0 (dd, Jh3,H4<=2>'° Hz' JH3,H1<=>6'97 Hz'1H' H~3 av azetidinon), 3,27 (t, J=6,58 Hz, 2H, CH2<N>3), 3,8 (dd, JR4 H3=2,0 Hz, Jh4,H1=6'55 Hz' 1h' H-4), 3,95 (m, 1H, H-l av oksopropyl), 4,15 (m, 1H, CH3CHO), 4,73 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,3-5,4 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl) og 6,0 ppm (bred s, 1H, NH).
Analyse for C1g<H>22<N>6<0>5'
Beregnet: C, 50,79%; H, 5,86%, N, 22,21%.
Funnet: C, 50,87%; H, 5,87%; N, 22,31%.
I. Allvl-( 2R, 4R, 5R, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3, 7- diokso- l- azabicyclo[ 3, 2, 01heptan- 2-karboksvlat
En løsning av 1,88 g (4,97 mmol) (3S, 4R) -4-[ (1"R) -1"-(4-azidobutyl) -3"allyloksykarbonyl-3,,-diazo-2"-oksopropyl] -3-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]azetidin-2-on i 60 ml tørr benzen ble behandlet under nitrogen med 0,050 g rhodium(II)octanoat-dimer og oppvarmet under tilbakekjøling (badtemperatur 90°C) i 20 minutter. Løsningsmidlet ble deretter avdampet under vakuum, hvorved det ble oppnådd den bicykliske tittelketon som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2100 (N3), 1762 (C = 0 av p-lactam) og 1745 cm'<1>.
^H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,41 (d, J=6,26 Hz, 3H, CH2CHO), 1,4-2,0 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,7 (m, 1H, H-4), 3,2-3,4 (m, 3H, H-6 og CH2N3 overlapping), 4,28 (dd, <J>H5^Hg=2,37 Hz, Jh5,H4=8,15 Hz' 1H' h~5) i 4,3 (m, overlapping med H-5, 1H, CH3CHO), 4,65 (s, 1H, H-2), 4,66 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,4 og 5,8-6,0 ppm (2 x m, 2 og 1H, CH av allyl).
J. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- f( l' R)- l-hvdroksvetvl1- 3- f( pyridvl- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 4,97 mmol allyl-(2R,4R,5R, 6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo-[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 30 ml tørr CH3CN ble avkjølt til 0-5°C og behandlet med 1,40 g (5,21 mmol) difenylklorfosfat og 0,91 ml (5,21 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 10 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt og blandingen ble omrørt i 1 time. Deretter ble ytterligere 1,3 ml (7,4 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av 0,93 g (7,4 mmol) 3-icolyl-tiol. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved 0-5°C i 4 timer og deretter stoppet ved tilsetningen av 300 ml etyl-acetat og kaldt vann. Den organiske fase ble vasket med pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løs-ningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 3,5 x 10 cm silicagel. Eluering med etylacetat ga 1,41 g (62%) av tittel-forbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 (N3), 1770 (C = 0 av 0-lactam) og 1705 cm<-1> (C = 0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,38 (d, J=6,26 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 3,1 (m, 1H, H-4), 3,16 (dd, <J>H6,H5=2'72 H<z>'<J>H6,H1=7'33 Hz' 1H' H~6)' 3'32 (t, J=6,0 Hz, 2H, CH2<N>3), 4,02 (ABq, 2H, SCH2), 4,14 (dd, JH5 H6=2,72 Hz, JH5,H4=9'56 Hz' 1H' H~5>' 4'22 (m' 1H' CH3CHO), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,3 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,7 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,5 ppm (m, 2H, H-2 og H-6 av pyridin).
K. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- 1' - hvdroksvetvll -
3- rpvridin- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
En løsning av 1,12 g (2,45 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-3-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 40 ml etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,050 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 5,4 ml (2,7
mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etyl-
acetat. Etter 20 minutter ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 3 x 20 ml kaldt vann og den kombinerte vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsnings-
middel. Den vandige fase ble deretter hydrogenert over 1,2 g 25% palladium-på-aluminium-oksid ved 0-5°C og under 45 psi hydrogen i 1,5 time (innledningsvis pH 6,8, slutt-pH 9,6).
Etter tilsetningen av 20 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer ble katalysatoren frafiltrert, og filtratet ble kromatografert på 3 x 14 cm "(i-Bondapak C18" reversf asesilicagel. Eluering med en gradient av 0-10% acetonitril i vann ga 0,489 g (51%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter fryse-tørking: [a]2<I2->3,5<0> (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 98,7% på 3,9 mm x 30 cm, "fi-Bondapak
C18", eluering 5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 9,6 minutter.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 268 (5740) og 306
nm (8810).
IR (KBr) vmaks: 1755 (C = 0 av p-lactam) og 1585 cm-<1>
(C= 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,29 (d, J=6,33 Hz, 3H,
CH3CHO), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,96 (t,
J=7,6 Hz, 2H, CH2<N>3), 3,15 (m, 1H, H-4), 3,29 (dd, JR6 R5=2,54
Hz, JH6,H1=6'36 Hz' 1H' H-6)/ 4,07 (ABS/ JaB=14'2 Hz' Av=24,3
Hz, 2H, SCH2), 4,07 (overlapning med SCH2, 1H, H- 5), 4,22 (m,
1H, C<H>3CH0), 7,44 (dd, <J>H5,H6=4'95 Hz' JH5,H4=7'9 Hz' 1H' H"5
av pyridin), 7,88 (m, 1H, H-4 av pyridin), 8,43 (dd, <J>h6,H5=
4,95 Hz, Jh6,H4=1'52 Hz' 1H' h~6 av Pyridin) og 8,52 ppm (d, <J>H2fH4=l,75 ppm, 1H, H-2 av pyridin).
Eksempel 4 6
( 4R. 5S. 6S)- 4-( 4"- N- formimidovlaminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- f( pyridin- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,175 g (0,45 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-amino-butyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-3-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre fra eksempel 45 i 15 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,5 med IM NaOH. Deretter ble 0,38 g (2,2 mmol) benzylformi-midat,hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minut-ter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH. Etter ytter-ligere 20 minutter ved 0-5°C ble 20 ml 0,2M pH 6,0 fosfat-buffer tilsatt, og blandingen ble vasket med 20 ml EtOAc. Den vandige fase ble deretter holdt under vakuum for ål fjerne spor av organisk løsningsmiddel og kromatografert to ganger på 2 x 14 cm "u-Bondapak C^g" reversfasesilicagel under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,120 g (64%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff: [a]<2>D<4->3,20 (c 0,5, H20) .
Renhet ved HPLC: 99% på 3,9 mm x 30 cm, "(X-Bondapak <C>18", eluering 10% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 2 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 6,44 min.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) kmaks: 266 (6,300) og 304 nm (9, 600) .
IR (KBr) vmaks: 1755 (C=0 av |3-lactam) , 1715 og 1590 cm" <1> (C=0 av karboksylat).
<1>H NMR (200 MHz, D20) 6: 1,28 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 3,2 (m, 3H, H-6 og CH2NH2), 4,07 (overlapning med SCH2, 1H, H-5), 4,07 (ABq, 3^ =14, 3 Hz, Av=23,5 Hz, 2H, SCH2) , 4,22 (m, 1H, CH3CHO), 7,44 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,79 (s, 1H, CH=NH), 7,89 (m, 1H, H-4 av pyridin), 8,43 (m, 1H, H-6 av pyridin) og 8,52 ppm (m, 1H, H-2 av pyridin).
Eksempel 47
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3- r( 3- cvanopropvl) tiol- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclof3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l ' R )- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 3-( 3- cvanopropvl) tiol- 7- okso-l- azabicvclo r 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 6,46 mmol (fremstilt ved ringslutning av 3,0 g, 6,46 mmol av diazo-forstadiet fremstilt i eksempel 2, trinn E) allyl-(4R,5R,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyl-dimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]-heptan-2-karboksylat i 50 ml tørt acetonitril ble behandlet ved -15°C og under argon med 1,4 ml (6,75 mmol) difenylklor-fosfat og 1,2 ml (6,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt og temperaturen av blandingen ble langsomt hevet til 0-5°C i løpet av 30 minut-ter. 1,2 ml (6,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 1,31 g (13,0 mmol) 4-merkapto-butyronitril [oppnådd fra basisk hydrolyse av en vandig tetrahydrofuranløsning av 4-acetylmercaptobutyro-nitril (U.S. 3,223,585)] ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 4 timer og natten over ved -15°C. Reaksjonsblan-dingen ble deretter fortynnet med 300 ml EtOAc, vasket med vann, IM NaHS03, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromato-grafert på 5 x 15 cm silicagel. Eluering med en blanding av EtOAc og toluen (1:9) ga 2,62 g (78%) av tittelforbindelsen som en brun olje.
IR (NaCl, film) Vmaks= 2250 (CN), 2100 (N3), 1775 (C=0 av P-lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
^H-NMR (200 MHz, CDC13) 6: 0,10 (s, 6H, SiCH3), 0,90 (s, 9H, Si-t- Bu) 1,31 (d, 3H, J=6,ll Hz, CH3CH0), 1,7-2,12 (m, 4H, CH2-4 og CH2CH2-CN), 2,4-3,12 (m, SH, CH2~<S,> CH2CN og H-6), 3,32-3,7 (m, 3H, CH2N3 og H-4), 4,16 (dd, <J>4_5<=>9,6 Hz, J5_ 6=2,70 Hz, 1H, H-4), 4,21 (dd, J6_8=7,47 Hz, J8_g=6,2 Hz, CH3CH0), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,20-6,50 og 5,96 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( 3- cvanopropvl)-tiol- 6- r( l ' R )- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclor 3. 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 2,48 g (4,77 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(3-cyanopropyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 75 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 1,64 ml (28,6 mmol) eddiksyre, etterfulgt av 14,9 ml (14,8 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammonium-fluorid i tetrahydrofuran. Løsningen ble oppbevart ved 5°C i 4 1/2 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromato-grafert på 5 x 15 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og EtOAc (9:11) ga 0,91 g (37%, utbytte fra diazoazetidinonen) av tittelforbindelsen som en gul olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 3500 (OH), 2250 (CN), 2100 (N3) , 1775 (C=0 av p-lactam) og 1705 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,40 (d, 3H, J=6,21 Hz, CH3CHO), 1,6- 2,15 (m, 4H, CH2<C>H2<C>N og CH2-4), 2,55 (m, 2H, CH2CN), 2, 85-3, 09 (m, 2H, SCH2), 3,18 (dd, 1H, Jg_8<=7,>84 Hz, J5_g=2,66 Hz, H-6), 3, 37-3, 67 (m, 3H, H-4 og CH2N3) , 4,26 (m, overlapning med H-5, 1H, CH3CHO), 4,26 (dd, J4 5=9,70 Hz, <J>5_g=2,61 Hz, 1H, H-5), 4,78 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,24- 5,30 og 5,96 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
C. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( 3- cvanopropvl)-tiol- 6- f( l ' R )- 1 '- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclor 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 900 mg (2,22 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-3[(cyanopropyl)tio]-6-[(1' R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 47 ml tørt CH2Cl2 ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 123 mg tetrakis-(trifenylfosfin)palladium [0] og 4,9 ml (2,44 mmol) av en 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i EtOAc. Deret-ter ble 190 ml 0,1M fosfatbuffer tilsatt og den organiske fase ble adskilt. Den organiske fase ble gjenekstrahert to ganger med 50 ml vann og de kombinerte vandige faser ble pumpet for å fjerne organisk løsningsmiddel. Kromatografi på 7 x 10,5 cm "u.-Bondapak C^g" reversfasesilicagel under anvendelse av en gradient av acetonitril i 0-7% vann, etterfulgt av lyofilise-ring av de UV-aktive fraksjoner ga 580 mg (66%) av tittelfor-bindelsen lett kontaminert med natrium-2-etylheksanoat. Dette materiale ble anvendt som vist i neste trinn.
IR (NaCl, film) vmaJcs: 2250 (CN) , 2105 (N3) , <1>750 (C=0 av p-lactam) og 1600 (C=0 av karboksylat).
^H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,31 (d, J=6,40 Hz, 3H, CH3CHO), 1,71-2,01 (m, 4H, CH2CH2<C>N og CH2-4), 2,73 og 2,74 (2t, J=6,94 og J=7,04, 2H, CH2CN), 2,80-3,19 (m, 2H, SCH2), 3,35-3,67 (m, 4H, CH2N3, H-4 og H-6), 4,29-4,42 (m, 2H, H-5 og CH3CHO).
D. ( 4R. 5S. 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3- f( 3- cvanopropvl) tiol- 6-r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo r3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksylsvre
En løsning av 250 mg (0,64 mmol) natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-3-[(3-cyanopropyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl] -7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i vann ble hydrogenert ved 0-5°C over 250 mg 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 1 time. Katalysatoren ble frafiltrert, og filtratet ble kromatografert på 7 x 10,5 cm "(i-Bondapak C^ q" reversfasesilicagel under eluering med vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 18 mg (8%) av tittelforbindelsen lett kontaminert med natrium-2-etylhek-sanoat som et lysegult, amorft pulver og 129 mg (59%) av den rene tittelforbindelsen som et off-white, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 97% 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18", eluering 2% CH3CN/H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 5,24 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (5982).
IR (KBr) Vmaks: 2250 (CN), 1760 (C=0 av p-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,75-2,30 (m, 4H, CH2CH2CN og CH2-4), 2,63 (t, J=7,07 Hz, 2H, CH2CN), 2,69-3,19 (m, 4H, SCH2 og CH2NH2), 3,41 (m, overlapning med H-6, 1H, H-4), 3,44 (dd, J1»_g=6,6 Hz, J^_ 6=2,85 Hz, H-6), 4,21-4,33 (m, 2H, H-5 og CH3CHO).
Eksempel 48
( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1' - hvdroksvetvll - 4-( 2"- aminoetvl) - 3-f( pyridin- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 , Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( pvridin- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 4,7 g (10,76 mmol) allyl-(4R, 5R, 6S) -6- [ (l'R)-1' - (tert-butyldimetylsilyloksyetyl) ] -4- (2"-azidoetyl)-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat fremstilt som i eksempel 2 i 50 ml CH3CN ble behandlet med 2,45 ml (11,84 mmol) difenylklorfosfat, etterfulgt av 2,06 ml (11,84 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 10 mg 4-N,N-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer under argon, hvoretter argon ble boblet gjennom løsningen i 10 minutter. Enolfosfaten ble deretter behandlet med 2,02 g (16,15 mmol) 4-picolylmerkaptan i 10 ml CH3CN etterfulgt av 2,81 ml (16,15 mmol) N,N-diisopropyletylamin og omrørt ved 0°C i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 350 ml EtOAc og vasket suksessivt med kald IM NaHS03, IM NaHC03 og salt-vann. Den organiske fase ble tørket (MgSO^) og løsningsmidlet avdampet til en sirup, som ble kromatografert på 7,5 x 11 cm silicagel pakket i CH2Cl2 og eluert med en blanding av CH2CI2 og EtOAc (8:2 gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 2,28 g (39%) av tittelforbindelsen som en sirup.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 6: 0,04 (s, 3H, SiCH3), 0,06 (s, 3H, SiCH3), <0,>86 (s, 9H, SiC(CH3)3), 1,27 (d, CH3, JCH3/1/=6,12 Hz), 1,63- 1,76 (m, 1H, CH2), 1,93-2,05 (m, 1H, CH2), 3,02 (dd, H-6, J5^6=2,68 Hz, J6^1,=7,91 Hz), 3,18-3,67 (overlapning, 3H, H-4, CH2N3), 3,9-4,17 (overlapning, 4H, CHOH, H-5, SCH2), 4,6-4,85 (m, OCH2, allyl), 5,2-5,47 (m, <=>CH2, allyl), 5,84-6,03 (m, CH=, allyl), 7,29 (A av A2B2, H-
3,5 py, J2/3=5,98 Hz), 8,56 (B av A2<B>2, H<->2,6 py).
B. Allvl- ( 4R, 5S, 6S) - 6- f ( l/ R) - 1' - hvdroksvetvl 1 - 4- ( 2"- azidoetyl)- 3- r( Pvridin- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclor 3. 2. 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 2,26 g (4,16 mmol) allyl-(4R, 5S,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-(2"-azidoetyl)-3-[(pyridin-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 35 ml tørr THF ble behandlet under Argon med 1,43 ml (24,94 mmol) eddiksyre, etterfulgt av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 12,47 ml (12,47 mmol) THF. Blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 120 timer og deretter nøytralisert ved 0°C med en 25 ml (25 mmol) IM NaHC03-løsning. Blandingen ble ekstrahert med 3 x 75 ml EtOAc og den kombinerte organiske fase ble vasket suksessivt med en kald IM NaHC03~løsning, H20 og saltvann, tørket (MgS04) og avdampet løsningsmiddel, hvorved det ble oppnådd et klebrig skumstoff, som ble kromatografert på 4,5 x 11 silicagel pakket i CH2C12 og eluert først med en blanding av CH2C12 og EtOAc (50 til 100% EtOAc) og deretter med en blanding av CH3CN og EtOAc (1:1 gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 1,23 g (69%) av tittelforbindelsen som et skumstoff.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 8: 1,36 (d, CH3, <J>CH3^1/=6,23 Hz), 1,64-1,79 (m, 1H, CH2), 1,94-2,09 (m, 1H, C<H>2), 3,09 (dd, H-6, J5^6=2,78 Hz, ^^,=8,08 Hz), 3,19-3,65 (overlapping, 3H, H-4, CH2N3), 3,88-4,23 (overlapping, 4H,
CHOH, H-5, SCH2), 4,61-4,88 (m, OCH2, allyl), 5,21- 5,47 (m, =CH2, allyl), 5,85-6,04 (m, CHO, allyl), 7,28 (A av A2B2, 2H, H-3,5, py, J2^3=6,01 Hz), 8,56 (B av A2<B>2, 2H, H-2,6, py).
C. Natrium ( 4R, 5S, 6S)- 6- r(!' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 2"-azido- etvl)- 3- f( pyridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo- T3. 2. 0] hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 1,23 g (2,86 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-azidoetyl)-3-[(pyridin-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 25 ml CH2C12 under argon ble tilsatt 0,3 g (0,26 mmol) Pd[Ph3P]4, etterfulgt av en 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i 5,73 ml (2,86 mmol) EtOAc. Blan-dingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og deretter ekstrahert med 3 x 25 ml vann. Den kombinerte vandige fase ble ledet gjennom en søyle av 4,5 x 11 cm "|i-Bondapak C^g" reversfasesilicagel. Tittelforbindelsen ble elueret med en blanding av vann og CH3CN (9:1, gradienteluering), hvorved det ble opppnådd 0,69 g (58,5%) som et fnugget faststoff etter lyofilisering.
^■H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,29 (d, CH3, JCH3 1/=6,37 Hz), 1,6-1,78 (m, 1H, CH2), 1, 93-2, 09 (m, 1H, CH2) , 3,14-3,58 (overlapping, 3H, H-4, CH2<N>3), 3,4 (dd, H-6, J5>6<=2,>64 Hz, J6/1/=6,22 Hz), 3,96-4,28 (overlappning, 4H, CHOH, H-5, SCH2), 7,5 (A av A2B2, H-3,5, py, J2^3=5,35 Hz), 8,49 (br s, B av A2B2, H-2,6, py).
D. ( 4R, 5S. 6S)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 2"- aminoetvl)- 3-r( pvridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 , 2 . 01hept-2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,16 g (0,39 mmol) natrium-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-azidoetyl)-3-[(pyridin-4-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 40 ml av en 0,05M pH 7 fosfatbuffer ble hydrogeneret ved 45 psi over 0,32 g 5% Pd-på-aluminiumoksid ved 0°C i 1 time. Etter fjerning av katalysatoren ble filtratet ledet gjennom en søyle av 4,5 x 11 cm 11 |i.-Bondapak C^g" reversf asesilicagel. Tittelforbindelsen ble elueret med en blanding av vann og CH3CN (95:5, gradienteluering), hvorved det ble opppnådd 0,044 g (31,4%) som et fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 95,9%; UV-deteksjon ved 302 nm på 4 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18", 10% CH3CN i pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, retensjonstid 7,24 minutter.
IR (nujol) Vjfla^g: 1750 cm-<1> (C=0, Ø-lactam).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 1,31 <d, CH3, JcH3,l'=6'35 Hz)' 1,65-1,85 (m, 1H, CH2), 2,04-2,22 (m, 1H, CH2), 3,04 (t, 2H, C<H>2NH2), 3,19 (dt, H-4, J4/5=10,05, J=3,44 Hz), 3,4 (dd, H-6, <J>5/6=2,8 Hz, <J>6^1,=6,52 Hz), 3,99, 4,13 (AB, SCH2, Jgem=14,39 Hz), 4,11 (dd, H-5), 4,24 (m, H-l'), 7,46 (A av A2B2, H-3,5, py, J2f 3=6,1 Hz), 8,49 (B av A2<B>2, H-2-6, py).
Eksempel 4 9
( 4R. 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll-4- r2"-( N- morfolino) etvl1- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 . Olhept-2- en- 2- karboksylsyre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl)-6- r( l' R)- l^- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 3- T 12 - cvanoetvl)- tiol- 7- okso- l- azabicvclo f3f 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksylat
En kald (is-metanol bad) løsning av 15,0 g (27,0 mmol) allyl- (2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (2"- tert-butvldimetvlsilvloksvetvl) -6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 160 ml CH3CN, opppnådd fra den tilsvarende (3S,4R)-3-[(l'R)- 1'- tert-butvldimetvlsilvloksy-etyl]-4-[(1"R)-1"-(2-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on ble behandlet suksessivt med 6,2 ml (30 mmol) difenylklorfosfat og dråpevis med 5,2 ml (30 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 20 mg 4-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 1 time og det resulterende enolfosfat ble behandlet med 2,9 g (33,8 mmol) 2-cyanoetantiol og 5,8 ml (33,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og behandlet to ganger med 30 minutters intervall med 600 mg (6,7 mmol x 2) 2-cyanoetantiol og 1,16 ml (6,76 mmol x 2) N,N-diisopropyletylamin. Blan-dingen ble fortynnet med 400 ml etylacetat, vasket med 3 x 100 ml iskaldt vann, 100 ml iskaldt IM vandig NaHS03, 100 ml iskaldt IN vandig HC1, 100 ml vann, 100 ml kaldt IM vandig NaHC03, 100 ml x 2 iskaldt vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Blandingen ble ledet gjennom en 250 g (heksan -> 15% etylacetat/heksan) hurtigsilicagelpute, hvorved det ble opp-nådd 11,5 g (71,6%) av tittelforbindelsen som et faststoff.
IR (ren) Vmaks: 2250 (ON) , 1775 og 1710 cm'<1> (OO),
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,05-5,85 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,21 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,55 (2H, m, allylisk CH2), 4,27-4,18 (2H, m, H-l' og H-5), 4,195 (del av H-5, d, J=2,6 Hz), 3,89-3,75 (1H, m, HCH-OSi), 3,60-3,45 (2H, m, H-4 ogHCH-OSi), 3,35-3,22, 3,12-2,93 (2H, 2 sett av m, SCH2), 3,102 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 2,70-2, 60 (2H, m, CH2-CN), 2,04-1,90, 1,80-1,60 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,267 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,907 og 0,887 (18H, 2s, tert-butyl), 0,084 og 0,074 ppm (12H, 2s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R. 5S. 6S)- 6- r ( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 2"- hvdroksvetvl)- 7-okso- azabicvclo ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-metanol bad) løsning av 2,0 g (3,36 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -4- (2"-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -6-[ (l'R) -1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[ (2-cyanoetyl) - tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml vannfri tetra-hydrofuran ble behandlet suksessivt med 2,2 ml
(40 mmol) iseddikksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i 20 ml (20 mmol) tetrahydrofuran. Blan-dingen ble omrørt i 1 time og fikk deretter lov til å omsettes ved 5°C (kaldt rom) i 18 timer. Blandingen ble holdt i 50 ml
iskaldt, mettet NaHCC>3 og ekstraheret med 4 x 25 ml etylace-tat. De organiske faser ble kombinert, vasket med 25 ml iskaldt vann, 2 x 25 ml iskaldt IM vandig NaHC03, 2 x 25 ml vann, 25 ml saltvann og tørket (MgS04). Blandingen ble ledet gjennom en <50> g (<CH>2<C1>2 _» 10f 20/ 30, 40% EtOAc/CH2Cl2) hurtigsilicagelpute, hvorved det ble oppnådd 1,0 g (62%) av tittelforbindelsen som et halvfast stoff.
IR (rent) <v>maks: 3600-3200 (OH), 2250 (C=N), 1770 og 1710 cm"1 (C=0).
^•H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6, 03-5, 86 (1H, m, vinylisk-H), 5,50-5,22 (2H, m, vinylisk H) , 4, 80-4, 66 (2H, m, allylisk CH2), 4,222 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,8 Hz, H-5), 4,25-4,19 (1H, m, H-l'), 3, 95-3, 82, 3,75-3, 65 (2H, 2 sett av m, CH20) , 3,59-3,48 (1H, m, H-4), 3,31-3, 16, 3, 09-2, 94 (2H, 2 sett av m, S-CH2), 3,184 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,9 Hz, H-6), 2,74- 2,66 (2H, m, CH2-CN), 2,15-1,95, 1,90-1,70 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,56 (1H, s, OH), 1,290 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,891 (9H, s, tert-butyl) og 0,090 ppm (6H, s, dimetyl).
C. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4-[ 2"-( N- morfolino)-etvll- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald løsning (tørris-aceton) av 312 mg (0,650 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] - 3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml CH2C12 ble behandlet med 200 |i.l (1,72 mmol) N,N-diisopropyletylamin og dråpevis med 130 |il (0, 773 mmol) trif luormetansulf onsyreanhydrid. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, og deretter ble 350 |ll (4,01 mmol) morfolin tilsatt. Tørris-badet ble fjernet og erstattet med et isbad. Blandingen ble omrørt i 3 timer, hvoretter den ble overført direkte på en 15 g (heksan -» heksan/EtOAc -» CH3CN) silicagel-søyle hvorved det ble opppnådd 420 mg (100%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) vmaks: 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8 6,04-5,84 (1H, m, vinylisk-H), 4,85-4,62 (2H, m, allylisk-CH2), 4,192 (1H, dd, J=2,2 Hz, J=ll,8 Hz, H-5), 4,29, 4,26, 4,20 (1H, m, del av H-l'), 3,70 (4H, bs, CH2OCH2), 3,35-3,16 (3H, m, H-4, H-6, HCHS), 3,03-2,89 (1H, m, HCHS), 2,72-2,55 (2H, m, CH2CN), 2,52-2,22 (6H, m, (CH2)3N), 1, 98-1, 86 (1H, m, CH-4), 1, 69-1, 48 (l'H, m, CH-4), 1,279 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,877 (9H, s, tert-butyl) og 0,076 (6H, s, dimetyl).
D. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- l'~ hvdroksvetvll- 4- T2"-( N- morfolino) etvll- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 420 mg (764 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6-[ (l'R) -1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-[2"-(N-morfolino)etyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml THF ble først behandlet med 560 Jil (9,78 mmol) eddikksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 4,55 ml (4,55 mmol) THF. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og is-MeOH-badet ble erstattet med et isbad. Blandingen fikk deretter lov til å størkne i et kaldt rom (5°C) i 210 timer. Deretter ble 600 mg fast NaHC03 tilsatt og blandingen ble omrørt i 30 minutter og deretter overført til 4 preparative (2 mm CH3CN) TLC plater, hvorved det ble oppnådd 325 mg (97%, Rf=0,2) av ren tittelforbindelse, men kontaminert med noe tetrabutylammoniumsalt.
IR (nujol) vmaks<:> 3600-3200 (OH), 1770 og 1710 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR(CDC13, 200 MHz) 8: 6,04-5,87 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,24 <2H, m, vinylisk H), 4,88-4,64 (2H, m, allylisk CH2), 4,276 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,8 Hz, H-5), 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 3,76-3,7 (4H, bm, CH2OCH2), 3,45-3,31 (1H, m, H-4), 3, 269 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=8,0 Hz, H- 6), 3,25-3, 16, 3, 03-2, 90 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,72-2,35 (8H, CH2CN, (CH2)3N), 2,1-1,9 og 1,8-1,6 (2H, 2 sett av m, CH2) og 1, 388 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
E. ( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6-\ 11 ' R)- 1'- hvdroksvetvll - 4- T2"-( N- morfolino) etvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 321 mg (0,737 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.)-3-t (2-cyanoetyl) tio]-6-[ (1 'R) -1' -hydroksyetyl] -4-[2"-(N-morfolino)etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 6 ml CH2C12 ble tilsatt 14 mg Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av 1,5 ml (0,75 mmol) kaliumetyl-2-heksanoat.
Isbadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt i 1 time. Ytter-ligere Pd(PPh3)4 ble tilsatt og omrøring ble fortsatt i 1
time. Blandingen ble fortynnet med dietyleter og ekstraheret med en 0,05M vandig pH 7,0 buffer og en pH 7,4 buffer. Den vandige, ekstraherte blanding ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet gjennom en H20 (2% -» 4% CH3CN/H20) "Ji-Bondapak C^g" reversfasesøyle, hvorved det ble opppnådd 17 9 mg (61,4%) av tittelforbindelsen som et lyofiliseret pulver.
Renhet ved HPLC: 99,7% (300 nm).
UV (<H>2<0>) <k>maks: 300 (7900) .
IR (Nujol) Vmaks: 1750 og 1600 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,271 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,8
Hz, H-5), 4,4-4,22 (1H, m, H-l'), 3,84-3,80 (4H, m, CH2OCH2),
3,424 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 3,43-3,33 (1H, m, H-4), 3,21-3,08, 3,01-2,90 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,90-2,6
(8H, m, CH2CN, (CH2)3N), 2,2-2,0, 1,90-1,70 (2H, 2 sett av m,
CH2) og 1,336 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 50
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3- r( 3- cvanopropvl) tiol- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvcloT3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 3- r( 3- cvanopropvl)-tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclof3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 2,00 g (5,49 mmol) allyl- (2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3, 7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat frem-stilt fra (3S., 4R)-3-[ (1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[ (1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]-azetidin-2-on, som fremstilt i eksempel 21, i 40 ml CH3CN ble behandlet dråpevis med 1,2 ml (6,0 mmol) difenylklorfosfat og 1,03 ml (6,00 mmol) N,N-diisopropyletylamin og et spor av 4-N,N-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og det resulterende enolfosfat ble behandlet dråpevis med 693 mg (6,86 mmol) cyanopropylmerkaptan og 1,19 ml (6,90 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin. Blandingen ble omrørt i 1 time, deretter ble is-MeOH-badet erstattet med et isbad og omrøring ble fortsatt i ytterligere 2 timer. Deretter ble ytterligere 280 mg (2,74 mmol) cyanopropylmerkaptan og 0,480 ml (2,74 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av en omrø-ringsperiode på 18 timer ved 5°C (kaldt rom). Ytterligere 280 mg (2,74 mmol) tiol og 0,480 ml (2,74 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt og omrøring ble fortsatt i 3 timer, hvoretter blandingen ble fortynnet med 100 ml etylacetat, vasket med 2 x 40 ml kaldt IM vandig NaHS03, 40 ml vann, 40 ml IN vandig HC1, 40 ml vann, 40 ml IM vandig NaHC03, 40 ml vann, 40 ml saltvann og tørket (MgSO^). Resten ble ledet gjennom en 75 g (EtOAc/Heksan:1/3 —» EtOAc) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 1,33 g (59%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) VmaJcs: 3600-3500 (OH) , 2250 (CN) , 2100 (N3) , 1780 og 1710 cm"<1> (C=0).
^■H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6, 04-5, 87 (1H, m, vinylisk-H) , 5,50-5,23 (2H, m, vinylisk-H), 4, 89-4, 63 (2H, m, allylisk CH2), 4,29-4,20 (1H, m, H-l')/ 4,248 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,50-3,35 (2H, m, CH2~<N>3), 3,267 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,6 Hz, H-6), 3, 30-3, 20 (1H, m, H-4), 3, 05-2, 85 (2H, m, SCH2), 2,59-2,51 (2H, m, CH2<C>N), 2,06-1,93 (2H, CH2CH2CH2CN), 1,93-1,57 (4H, CH2-CH2-CH2N3), <1,>76 (1H, d, J=3,7 Hz, OH) og 1,393 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3- r( 3- cvanopropvl) tiol- 6-r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo ' 3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksylsyre
En kald (isbad) løsning av 100 mg (0,240 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.)-4-(3"-azidopropyl)-3-[ (3-cyanopropyl) tio]-6- [ (l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2C12 ble behandlet med 220 mg (0,018 mmol) Pd(PPh3)4, etterfulgt av dråpevis tilsetning av en 0,48 ml (0,24 mmol) 0,5M løsning av natriumetyl-2-heksanoat i EtOAc. Blandingen ble omrørt i 1,5 timer, deretter fortynnet med 20 ml dietyleter og ekstrahert med 3 x 3 ml vann og en 3 x 3 ml 0,05M løsning av en pH 8,0 fosfatbuffer. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 5 ml dietyleter og deretter behandlet ved 5°C (isbad) ved 45-50 psi hydrogen i 1,25 timer under anvendelse av 100 mg 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering, vasket med 2 x 2 ml vann og den vandige løsning ble ledet gjennom en 25 g (H20 -» 1%, 2% CH3CN/H20) "u-Bondapak <C>18"<->søyle, hvorved det ble oppnådd 65 mg (77%) som et hvitt lyofilisert pulver.
Renhet ved HPLC: 99,9% (300 nm).
UV (<H>2<0>) ^maks: 302 (e 8000) .
IR (Nujol) vmaks<:> 2250 (CN), 1760 og 1595 cm"<1> (C=0).
^■H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4, 34-4, 32 (2H, m, H-l' og H-5), 4,239, 4,226 (d, J=2,6 Hz, del av H-5), 3,42-3,33 (1H, m, H-4), 3, 383 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,2 Hz, H-6), 3, 09-2, 94 (3H, m, CH2N og S-HCH), 2,85-2,74 (1H, m, SHCH), 2,70-2,61 (2H, m, CH2CN), 2,10-1,49 (6H, m, CH2CH2C<H>2CN, CH2CH2) og 1,334 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 51
( 4R, 5S. 65)- 4- r 3"-( N- formimidovl) aminopropvll- 3- f( 3-cvanopropyl) tio]- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
En kald løsning (isbad) av 150 mg (0, 420 mmol) (4R,5S_, 6S.) -4- (3"-aminopropyl) -3- [ (3-cyanopropyl) tio] -6- [ (1' R) -1' - hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 25 ml 0,04M pH 7,0 fosfatbuffer ble først behandlet med en 0,1M vandig NaOH-løsning (for å øke og bibeholde pH ved 8-8,4) og porsjonsvis med 720 mg (4,2 mmol) benzylformimidat, hydroklorid. Blandingen ble omrørt i 10 minutter og løsningens pH senket til 7,0 med en 0,1N vandig HCl-oppløsning. Blandingen ble deretter ledet to ganger gjennom en 30 g og 60 g (H20 -> 1%, 2%, 3%, 4% CH3CN/H20) Bondapak C18"-søyle, hvorved det ble oppnådd 117 mg (73%) av tittelforbindelsen som et lyofiliseret pulver.
Renhet ved HPLC: 94,4% (300 nm).
UV (<H>2<0>) </\.>maks: 302 (e 9100).
IR (Nujol) <V>maks: 2250 (CN), 1755 (C=0), 1715 (C=N) og 1590 cm"<1> (C=0).
^■H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 7,83, 7,81 (1H, 2s, CH) , 4,34-4,22 (2H, m, H-l' og H-4), 4,231 (d, J=2,9 Hz, del av H-4), 3,49-3,32 (4H, m, H-4, H-6 og CH2N), 3,06-2,92, 2,84-2,74 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,70-2,61 (2H, m, CH2CN), 2,10-1,47 (6H, CH2CH2CH2CN, CH2-CH2) og 1,323 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 52
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- r( 3- cvanopropvl) tiol- 6-'( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 . Olhept-2- en- 2- karboksvlsyre
A. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 3- f( 3- cvanopropvl)-tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclof3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 6,71 mmol (fremstilt ved ringsluttning av 1,54 g, 6,71 mmol av diazo-forstadiet som beskrevet i eksempel 45) allyl-(4R,5R, 6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl] -3, 7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 40 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,53 ml (7,4 mmol) difenylklorfosfat og 1,3 ml (7,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minut-ter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deret-ter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Deretter ble 1,75 ml (10,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etter-fulgt av 1,01 g (10,0 mmol) 4-merkaptobutyronitril [fra basisk hydrolyse av 4-acetyl-merkaptobutyronitril (U.S. 3.223.585)], og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 18 timer. Reaksjonsblan-dingen ble deretter fortynnet med 300 ml EtOAc vasket med vann, mettet NaHC03, pH 7,0 fosfatbuffer og saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatograferet på 4,5 x 11 cm silicagel under anvendelse av en gradient av EtOAc i toluen (8:2 til 1:1), hvorved det ble oppnådd 2,14 g (73%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2250 (CN), 2100 (N3), 1772 (C=0 av p-lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 6: 1,39 (d, J=6,25 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,1 (m, 8H, CH2-1,2 og 3 av butyl og CH2-2 av cyanopropyltio), 2,55 (m, 2H, CH2CN), 2,8-3,1 (m, 2H, SCH2),
3,2 (dd, Jh6,H5=2'70 Hz' JH6,H1=7'22 Hz' 1H' H"6)' 3'2 (m' overlapning med H-6, 1H, H-4), 3,33 (t, J=6,l Hz, 2H, CH2N3), 4,25 (dd, JH5,H6=2'70 H<z>'<J>H5,H4=9'49 Hz' 1H' H"5)' 4'75 <m' 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- r( 3- cvanopropvl) tiol- 6-' ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo r3, 2 . Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 1,86 g (4,3 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-3-[(3-cyanopropyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 80 ml tørr EtOAc ble behandlet ved 24°C og under nitrogen med 0,10 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 9,5 ml (4,75 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i EtOAc. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen ekstraheret med 2 x 75 ml vann og den kombinerte vandige fase ble hydrogeneret over 2,4 g 5% palladium-på-aluminiumoxid ved 0-5°C under 45 psi hydrogen i 1 time. Deretter ble 40 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt omgående (innledningsvis pH 10,5, tilsluttt pH 6,9). Katalysatoren ble frafiltreret, og filtratet ble kromatograferet to ganger på 3,5 x 11 cm "u-Bondapak C-^<g>" reversfase-silicagel under eluering med en blanding av acetonitril og vann (5:95). Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,839 g (53%) av tittelforbindelsen som et hvitt amorft faststoff.
Renhet ved HPLC: 99% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak c18"' ^% CH3CN- H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 7,89 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (9.528).
IR (KBr) Vmaks: 2250 (CN), 1755 (C=0 av p-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,32 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,1 (m, 8H, CH2-1,2 og 3 av butyl og CH2-<2> av cyanopropyltio), 2,64 (t, J=7,0 Hz, 2H, CH2CN), 2,6-3,1 (m, 2H, SCH2), 3,0 (t, J=7,6 Hz, 2H, C<H>2N<H>2), 3,3 (m, overlapping med H-6, 1H, H-4), 3,35 (dd, <J>fi6,H5=2'46 Hz' JH6,H1=6'39 Hz' 1H, H-6), 4,22 (dd, <J>h5,H6=2'46 Hz' JH5,H4=6'83 Hz' 1H' H~5) og 4,26 ppm (m, 1H, CH3CHO).
Eksempel 53
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll - 3- r( Pvridin- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- f( l' R)- l'-hvdroksvetvl- 3- f( pyridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo F3, 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 5,28 mmol (fremstilt ved ringsluttning av 2,0 g av diazo-forstadiet som beskrevet i eksempel 45) allyl-(4R,5R,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(1'R)-1-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 35 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,49 g (5,5 mmol) difenylklorfosfat og 0,97 ml (5,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter til-satt, og løsningen ble omrørt i 1 time. Deretter ble ytterligere 1,4 ml (7,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etter-fulgt av 1,0 g (7,9 mmol) 4-picolylmerkaptan, og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble stoppet ved tilsetning av 300 ml EtOAc og 0,2M pH 7,0 fosfat-buffer. Den organiske fase ble vasket med saltvann, tørket (MgS04) og konsentrert. Resten ble kromatograferet på 3,5 x 13 cm silicagel under eluering med EtOAc, hvorved det ble oppnådd 1,89 g (78%) av tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2100 (N3), 1770 (C=0 av p<->lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,37 (d, J=6,27 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 3,02 (m, 1H, H-4), 3,14 (dd, <J>h6,H5=2'65 H<z>'<J>H6,H1=7'41 Hz' 1H' H-6)' 3'31 (t, J=6,l Hz,CH2<N>3), 3,98 (ABq, JAB=14,22 Hz, A@Av=15,7 Hz, 2H, SCH2), 4,21 (m, 1H, CH3CHO), 4,76 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,27 (~d, 2H, H-3 av pyridyl) og 8,57 ppm (~d, 2H, H-2 av pyridyl).
B. ( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll-3- f( pyridin- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo " 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 1,80 g (3,9 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S)-4-(4M-azidobutyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-4-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml EtOAc ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,1 g tetrakis-(trifenylfosfin)palladium [0] og 8 ml (4,0 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i EtOAc. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen ekstraheret med 3 x 50 ml vann og den kombinerte vandige ekstrakt ble hydrogeneret over 2,3 g 5% palladium-på-aluminiumoksid ved 0-5°C og under 45 psi hydrogen i 1 time. Deretter ble 50 ml kald 0,2M pH 6,0 fosfat-buffer tilsatt (innledningsvis pH 10,5, tilsluttt pH 6,7) og katalysatoren ble frafiltrert. Filtratet ble deretter kromato-grafert på 3 x 14 cm ")i-Bondapak C^g" revers-fasesilicagel under eluering med en gradient av acetonitril (0-5%) i vann.
De første fraksjoner ga, etter lyofilisering, 0,050 g (4%) (4R,5S,6S)-4-(4"-hydroksybutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl] -3-[(pyridin-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat (blanding av Na- og K-salt) som et hvitt faststoff.
De følgende fraksjoner ga 0,830 g (54%) av tittel-
22 forbindelsen som et hvitt amorft faststoff: [a] ^ -9,5° (c 1,0, H20) ;
Renhet ved HPLC: 97,8% på 3,9 mm x 30 cm, "p.-Bondapak C18", 5% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 2 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 7,42 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) ^maks: 262 (5.195) og 304 nm (8.370).
IR (KBr) vmaks: 1755 (C=0 av p-lactam) og 1600 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,29 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,94 (t, J=7,5 Hz, CH2NH2), 3,10 (m, 1H, H-4), 3,28 (dd, <J>h6,5=2'53Hz' JH6fH1=6,30 Hz, 1H, H-6), 4,05 (m, 3H, H-5 og SCH2 overlap-ping), 4,21 (m, 1H, CH3CHO), 7,48 (~d, 2H, H-3 av pyridin), og 8,49 ppm (~d, 2H, H-2 av pyridin).
Eksempel 54
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- N- formimidovlaminobutvl)- 6-\( l' R)- 1'-hvdroksv- etvl1- 3- f( pvridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo 13 , 2 , 0]- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,318 g (0,81 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1'hydroksyetyl]-3-[(pyridin-4-yl)metyl-tio] -7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 25 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,5 med IN NaOH. Deretter ble 0,70 g (4,06 mmol) benzylformimidat,hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter, mens pH ble holdt ved 8,5 med IN NaOH. Etter ytterligere 20 minutter ved 0-5°C ble reaksjonsblandingen stoppet ved tilsetning av 20 ml 0,2M pH 6,0 fosfat. Den vandige løsning ble deretter vasket med 20 ml EtOAc og deretter kromatograferet på 3 x 15 cm n\ i-Bondapak Cl8" under eluering med 0-10% 0,01M pH 7,0 fosfat-buffer og acetonitril. De UV-aktive fraksjoner ble avsaltet på samme søyle under anvendelse av vann og 10% acetonitril og lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 0,153 g (53%) av tittel-forbindelsen som et hvitt amorft faststoff: [a] 2D 4-3,6° (c 0,55, H20) ;
Renhet ved HPLC: 97,5% på 3, 9mm/30 cm, "Jl-Bondapak C18", 15% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 5,8 minutter.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) \nakS: 262 (5.476) og 304 nm (8.790).
IR (KBr) vmaks<:> 1750 (C=0 av p-lactam), 1715 og 1600 (C=0 av karboksylat).
^H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,27 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,1-1,7 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 3,11 (m, 1H,
H-4), 3,2-3,4 (m, 3H, H-6 og CH2NH), 4,08 (m overlapping med SCH2, 1H, H-5), 4,08 (ABq, ^=14,75 Hz, A@Av=23,2 Hz, SCH2) , 4,21 (m, 1H, CH3CHOH), 7,47 (m, 2H, H-3 av pyridin), 7,78 (s, 1H, CH=NH) og 8,47 ppm (m, 2H, H-2 av pyridin).
Eksempel 55
( 4R, 5S, 65)- 4- r 3"-( N- formimidovl) aminopropyll- 6- f( l' R)-1'- hvdroksvetvll- 3- f( pvridin- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 0,16 g (0,42 mmol) (4R,5S,-6S)-4-(3"-aminopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre som beskrevet i eksempel 44 i en 30 ml 0,05M pH 7,0 vandig fosfatbuffer ble behandlet med en 0,1N vandig NaOH-oppløsning (for å øke og bibeholde pH ved ca. 8,0) og porsjonsvis med 720 mg (4,2 mmol) benzylformimidat,hydroklorid. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, nøytraliseret til pH 7,0 med IM vandig NaH2P04 og ledet to ganger gjennom en (H20 —>5% CH3CN/H20) "|i- Bondapak <C>13"-søyle, hvorved det ble oppnådd 7 6 mg (47%) av tittelforbindelsen som et lyofiliseret pulver.
Renhet: 96,7% (HPLC 304 nm).
UV (H20) kmaks<:> 262 (e 7120), 304 (e 10700).
IR (Nujol) Vmaks: 3600-3100 (OH, NH2), 1755 (C=0), 1710 (C=N) og 1600 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20,. 200 MHz) 8: 8, 48-8, 44 (2H, m, aromatisk-H), 7,78-7,44 (2H, m, aromatisk H), 4,27-4,15 (1H, m, H-l'),
4,14, 4,07, 4,00, 3,93 (2H, ABq, J=Hz, CH2-aromatisk), 4,075 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,34-3,23 (3H, m, H-5 og
CH2-N), 3,303, 3,291 (del av H-6, d, J=2,5 Hz), 3,17-3,07 (1H, m, H-4), 1,70-1,36 (4H, m, CH2CH2-4), og 1,268 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 56
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- aminoetvl) tiol- 4-( 2"- hvdroksvetvl)- 6-f ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl)-6- f( 1' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( 2- p-nitro- benzvloksvkarbonylaminoetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo- f 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 5,41 mmol (fremstilt ved ringslutning av 3,0 g, 5,41 mmol av diazo-forstadiet beskrevet i eksempel 5) allyl-(4R,5R,6S)-4-(2"-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo-[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 25 ml tørr acetonitril
(25 ml) ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,18 ml (5,65 mmol) difenylklorfosfat og 1,0 ml (5,65 mmol) N,N-diiso-propyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Deret-ter ble et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin tilsatt og løsningen ble omrørt i 90 minutter. Ytterligere 1,42 ml (8,1 mmol) N,N-diisopropyletylamin etterfulgt av 2,10 g (8,19 mmol) p-nitrobenzyl-2-merkaptoetylkarbamat (I. Shinkai et al., Svntesis, 924 (1980)) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 16 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen fortynnet med 400 ml EtOAc, vasket med vann, saltvann og tørket (MgS04). Etter avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ble resten kromatografert på 3,5 x 10 cm silicagel. Eluering med en gradient av 5-10% etylacetat i toluen ga 1,75 g (42%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 1772 (C = 0 av p-lactam) og 1720 cm-<1> (C = 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,04, 0,05 og 0,08 (3 x s, 3H, 3H og 6H, SiCH3), 0,88 (s, 18H, Si t-Bu), 1,27 (d, J=6,14Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,1 (m, 2H, CH2CH2, OTBDMS), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,10 (dd, <J>h6,H5=2'49 Hz' JH6,H1 = 6'34 Hz' 1H, H-6), 3,2-3,9 (m, 5H, H-4, CH2OTBDMS og CH2NH), 4,16 (dd, JH5/H6=2,49 Hz, JH5,H4=9'37 Hz' 1H' H"5)' 4'23 (m' 1H' CH3CHO), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,18 (s, 2H, CH2 av p-nitrobenzyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,5 (d, J=8,7 Hz, 2H, H orto av p-nitrobenzyl) og 8,22 ppm (d, J=8,7 Hz, 2H, H meta av p- nitrobenzyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- hvdroksvetvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- r( 2- p- nitrobenzvloksvkarbonvlaminoetvl)-tiol- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,75 g (2,29 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-6-[(l'R)-1'-tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-p-nitro-benzyloksykarbonylaminoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml tørr tetrahydrofuran ble avkjølt til 0-5°C og behandlet under nitrogen med 1,6 ml (27,5 mmol) eddikksyre, etterfulgt av 13 ml (13,0 mmol) av en 1,0M løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetra-hydrofuran. Etter 120 timer ved 5°C ble reaksjonsblan-dingen fortynnet med 200 ml etylacetat, vasket med vann, mettet NaHC03, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04). Den oppnådde rest, etter avdampning av løsningsmid-let, ble kromatograferet på 3 x 11 cm silicagel under eluering med etylacetat og deretter en blanding av etylacetat, aceton og acetonitril (18:1:1).
De første fraksjoner ga 0,78 g (50%) av et mono-avbeskyttet produkt, allyl-(5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksy-etyl]-4-(2"-hydroksyetyl)-3-[(2-p-nitrobenzyloksy-karbonylamino-etyl)-tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat som en olje.
De følgende fraksjoner ga 0,23 g (19%) av tittel-forbindelsen som et skumstoff.
IR (NaCl, film) vmaks: 1770 (C = 0 av Ø-lactam), 1725 og 1705 cm<-1> (C = 0 av ester).
^H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,37 (d, J=6,23 Hz, 3H, CH3CHO), 1,7-2,1 (m, 2H, CH2CH20H), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,26 (dd, <J>H6,H5=2'55 Hz' JH6,H1=7'77 Hz' 1H' H"6)' 3,3-3,9 (m, 5H, H-4, CH20H og CH2NH), 4,1-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,19 (s, 2H, CH2 av p-nitrobenzyl) , 5,2-5,5 og 5,9-6,1 .(2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,5 (d, J=8,7 Hz, 2H, H orto av p-nitrobenzyl) og 8,22 ppm (d, J=8,7 Hz, H meta av p-nitrobenzyl).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- aminoetvl) tiol- 4-( 2"- hvdroksvetvl)- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo r3. 2, 01- hept-2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,99 g (1,85 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-hydroksyethy1)-6-[(1'R)-1'-hydroksyethy1]-3-[(2-p-nitrobenzyloksykarbonylaminoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 40 ml tørt etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,050 g tetrakis-(trifenylfosfin)palladium [0] og 4 ml (2,0 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 30 minutter ble et precipitat dannet og reaksjonsblandin-gen ble avkjølt til 0-5°C i 2 timer. Faststoffet ble de-retter filtrert og tørket under vakuum, hvorved det ble oppnådd 1,0 g av kaliumsalt-mellomproduktet som et lyse-brunt faststoff. Faststoffet ble deretter tilsatt en blanding av 40 ml kald 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, 20 ml tetrahydrofuran og 20 ml dietyleter og hydrogenert ved 0-5°C over 1,2 g 10% palladium-på-aktivt-karbon og under 45 psi hydrogen i 1 time. Katalysatoren ble filtrert, og filtratet ble kromatografert to ganger på reversfasesilicagel ("ji-Bondapak C^g", 3 x 14 cm) under eluering med en gradient av acetonitril (0-10%) i vann. Lyofilisering av de første fraksjoner ga 0,150 g (26%) av tittelfor-bindelsen som et hvitt, amorft faststoff. Sluttfraksjonene ga også 0,450 g delvis redusert materiale. Utkrystallisasjon av de første fraksjoner i 1 ml vann ga 0,096 g av tittelforbindelsen som små terninger.
Renhet ved HPLC: 99,8% på "jx-Bondapak C18", 3, 9 mm x 30 cm, eluering 2% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 6,24 minutter.
UV (vann, pH 7,4, fosfatbuffer) Xmaks* 298 nm (8.510).
IR (KBr) vmaks: 1758 (C = 0 av Jl-lactam), 1638, 1618 og 1580 cm"<1> (C = 0 av karboksylat).
1H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,42 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,2 (m, 2H, CH2-1 av hydroksyetyl), 2,9-3,8 (m, 7H, H-4, SCH2CH2NH2 og CH20H), 3,49 (dd, JH6 H5= 2,72 Hz, <J>H6,H1<=>5'37 Hz, 1H, H-6), og 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping).
Eksempel 57
( 4R, 5S, 6S)- 4- f( 2" R eller S) - aminopropyll- 6- f ( l' R)- 1' - hvrdoksvetvll- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l
- zabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- karboksvlsvre, isomer A
A. 4- azido-( pyridin- 2- yl) metvltiovalerat
En kald (5°C) løsning av 59,0 g (412,2 mmol) 4-azido-valeriansyre og 33,84 g (412,2 mmol) N-metylimidazol i 1200 ml CH2C12 ble behandlet dråpevis med S0C12 (15 min-utter). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 5°C i 1 time og ved 20°C i 2,5 timer. Reaksjonsblandingen ble atter avkjø-let i et is-bad og ble denne gang behandlet dråpevis (15 minutter) med en løsning av 51,6 g (412,2 mmol) 2-mercapto-metylpyridin og 37,2 g (453,4 mmol) N-metyl-imidazol i 50 ml CH2C12. Etter omrøring i 15 minutter ved 5°C ble løsningsmidlet avdampet og erstattet med 500 ml etylacetat. Løsningen ble vasket med 250 ml vann. De orga-niske lag ble kombinert og vasket med NaHCC^. Til slutt etter vask med saltvann ble den organiske løsning tørket (MgS04) og inndampet, hvorved det ble oppnådd 97,23 g (94,2%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) <u>maks: 2110 cm~<2> <""N3>' 1690 cm<-1> (tioester) .
<1>H-NMR (CDC13) 8: 8,55-8,52 (1H, m, pyridin -H), 7,67-7,58 (1H, m, pyridin-H), 7,35-7,31 (1H, m, pyridin-H), 7,20-7,13 (1H, m, pyridin-H), 4,36 (2H, s, CH2~S), 3,55-3,45 (1H, m, CH-N3), 2,74-2,65 (2H, m, CH2C0S), 1,89-1,62 (2H, m, CH2C-N3), 1,28 (3H, d, J=6,53 Hz, CH3-).
B. Enolsilvleter av 4- azido-( pyridin- 2- yl) metvlvalerat
En kald (5°C) løsning av 97,2 g (388,4 mmol) 4-azido-(pyridin-2-yl)metyltiovalerat og 86,5 g (854,5 mmol) trietylamin i 1000 ml CH2C12 ble behandlet dråpevis (25 minutter) med 205,3 g (776,8 mmol) tert-butyldimetylsilyltrifluormetansulfonat. Isbadet fikk lov til at bli brukt og løsningen ble omrørt ved 20°C i 15 timer. Deretter ble løsningsmidlet avdampet og erstattet med 1000 ml petroleumseter. Løsningen ble omrystet med 500 ml kaldt vann og de to faser filtrert gjennom en pute av "Celite". Den vandige fase ble kassert og den organiske fase vasket suksessivt med kaldt vann, vandlig NaHCC^, med kaldt vann igjen og til slutt med saltvann. Den organiske løsning ble tørket (MgS04) og behandlet med karbon. Etter filtrering gjennom en pute av "Celite", ble det mørke filtrat underkastet ytterligere to kull-behandlinger, hvorved det til slutt ble oppnådd en rød løsning. Etter avdampning av løsningsmidlet ble oppnådd 99,4 g (70,2%) av tittelforbindelsen som en rød olje.
IR (CH2C12) "Umaks: 2110 cm-<1> (-N3) .
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,57-8,53 (1H, m, pyridin-H), 7,67-7,58 (1H, m, pyridin-H), 7,30-7,25 (1H, m, pyridin-H), 7,18-7,11 (1H, m, pyridin-H), 5,00 (0,32 H, t, J=7,65 Hz, vinylisk H), 4,85 (0,68 H, t, J= 7,29 Hz, vinylisk-H), 4,05 (0,64 H, s, -SCH2), 3, 98 (1, 36 H, s, -SCH2) , 3,34 (0, 68 H, m, CH-N3), 3,22 (0,32 H, m, CH-<N>3), 2,25-2,15 (2H, m, -CH2~), 1,10 (2,04.H, d, J=6,54 Hz, H3C-), 1,08 (0,96 H, d, J=6,53 Hz, H3C-), 0,99 (9H, 2s, t-butyl), 0,25 og 0,22 ppm (6H, 2s, dimetyl).
C. ( 3S. 4S)- 3- r( l' R)- l/- tertbutvldimetvlsilvloksvetvl1- 4-r( 1" R)- l"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 3"-azidobutvllazetidin- 2- on
Til en kald (5°C) suspensjon av 33,4 g (245 mmol) dannet ZnCl2 i 500 ml CH2C12 ble suksessivt tilsatt 70,42 g (245 mmol) (3S,4R)-4-acetoksy-3-[(1'R)-1'-tert- butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on og tert-butyldimetyl-silylenoleteren av 99,4 g (272,6 mmol) 4-azido-(pyridinyl) metyltiovalerat fra trinn B. Isbadet fikk lov til å bli brukt under mekanisk omrøring av blandingen natten over (18 timer). Deretter ble løsningsmidlet avdampet og den viskøse rest ble fordelt mellom 500 ml dietyleter og 100 ml vann. Den vandige fase ble kassert og den organiske løsning vasket suksessivt med vann, NaHCC^, med vann igjen og til slutt med saltvann. Den organiske fase ble tørket (MgS04), behandlet med karbon, filtrert og inndampet. Den dertved oppnådde 142,5 g røde, viskøse olje ble renset ved kromatografi (Si02, CH2C12, 5% CH3CN i CH2C12 og etyl-acetat), hvorved det ble oppnådd 38,0 g
(32,5%) av tittelforbindelsen som en 1:1 blanding av isomere forbindelser ved C-3".
IR (CH2C12) %aks 5: 3405 (NH)' 2115 (~N3^' 1765 < fi~ lactam), 1680 cm"<1> (CO-S) .
Mindre poler isomer A:
■'-H-NMR (CDC13) 8: 8,56-8,52 (1H, m, pyridin -H) , 7,68-7,60 (1H, m, pyridin -H), 7,33-7,26 (1H, m, pyridin), 7,21-7,15 (1H, m, pyridin -H), 5,83 (1H, s, NH), 4,29 (2H, s SCH2~ ), 4,15 (1H, m, CH'), 3,80 (1H, dd, J=6,20, 2,14 Hz, H-4), 3,48 (1H, m, CH-N3), 3,16-3,05 (2H, m, H-3, H- 1"), 1,96 og 1,44 (2H, 2m, -CH2"), 1,29 (3H, d, J=6,41, H3C-C-N3), 1,03 (3H, d, J=6,29, -CH3), 0,854 (9H, s, t-butyl), 0,05 (6H, s, Si(CH3)2) .
Mere poler isomer B:
<1>H-NMR (CDC13) 8: 8,54-8,52 (1H, m, pyridin -H), 7,68-7,59 (1H, m, pyridin -H), 7, 36-7,26 (1H, m, pyridin -H), 7,21-7,15 (1H, m, pyridin -H) , 5,85 (1H, s, NH), 4,28 (2H, d, J=5,25 Hz, S-CH2), 4,17 (1H, m, CH'), 3,89 (1H, dd, J=2,05, 6,87 Hz, H-4), 3,49 (1H, m, CH-N3) , 3,05 (1H, m, H-3), 2,85^" (1H, m, H-l"), 2,05 og 1,57 (2H, 2m, CH2"), 1,28 (3H, d, ^ J=6,47, H3CC-N3), 1,01 (3H, d, J=6,32, H3C), 0,85 (9H, s, t-butyl), 0,05 (6H, s, Si(CH3)2). D. ( 3S, 4S)- 3- r( l' R)- l'- tert- butvldimetvl- silvloksvetvl1- 4-f( 1" R)- l"- karboksv- 3"- azidobutvllazetidin- 2- on 27 ml (314 mmol) 30% hydrogenperoksid ble tilsatt en kald (5°C) løsning av 37,5 g (78,5 mmol) (3S, 4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4-[(1"R)-1"-(pyridin-2-yl)metyltio-karbonyl-3"-azidobutyl]azetidin-2-on etter-fulgt av dråpevis tilsetning av 235,5 ml (235,5 mmol) IN NaOH. Tilsetningen ble foretatt i løpet av 40 minutter, idet T<10°C. Blandingen ble omrørt i ytterligere 30 minutter og deretter gjort sur til pH -1,0 med 30 ml konsentrert HC1. Løsningen ble ekstrahert med etylacetat. Ekstraktene ble vasket to ganger med saltvann, tørket (MgS04) og inndampet. Det sådan oppnådde faststoff ble triturert i petroleumseter og oppsamlet ved filtrering, hvorved det ble oppnådd 24,0 g (82,6%) av tittelforbin-delsen, smp. 123-125°C (dek).
IR (CH2C<1>2) <V>maks: 2110 (-N3), 1765 (fi-lactam), 1740 og 1710 cm"<1> (-C02H).
Mindre poler isomer A:
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 6,35 (1H, s, NH), 4,20 (1H, m, CH'),
3,89 (1H, dd, J=2, 05, 5,50 Hz, H-4), 3,58 (1H, m, CH-N3) , 3,13 (1H, m, H-3), 2,95 (1H, m, H-l"), 1,88 og 1,48 (2H, 2m, -CH2), 1,34 (3H, d, J=6,45 Hz, CH3- C-N3) , 1,19 (3H, d, J=6,26 -CH3) , 0,87 (9H, s, t-butyl), 0,07 (6H, 2s, Si(CH3)2).
Mere poler isomer B:
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 6,42 (1H, s, NH), 4,20 (1H, m, CH'), 3,88 (1H, dd, J=l,94, 6,42 Hz, H-4), 3,55 (1H, m, CH-N3), 3,15 (1H, m, H-3), 2,74 (1H, m, H-l"), 1,98 og 1,59 (2H, 2m, -CH2), 1,33 (3H, d, J=6,50 Hz, H3CC-N3) , 1,18 (3H, d, J=6,28, -CH3) , 0,87 (9H, s, t-butyl), 0,068 (6H, 2s, Si(CH3)2). E. ( 3S, 4R)- 3- r( l7R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 4-r( 1" R)- 1"-( 2- azidopropvl- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"-oksopropyllazetidin- 2- on
En blanding av 3,48 g (9,39 mmol) (3S, 4S)-3-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-l"-karboksy-3"-azidobutyl]azetidin-2-on og 1,70 g (10,33 mmol) karbonyldiimidazol i CH3CN ble omrørt ved 20°C i 30 minutter og deretter inndampet til tørr tilstand, hvorved det ble opp-nådd et skumaktig materiale.
I en separat kolbe ble en suspensjon av 4,37 g (14 mmol) magnesium-monoallylmalonat i 75 ml benzen tilbake-kjølet, idet det resterende vann ble oppsamlet i en Dean Stark-felle. Etter 1,5 timer med tilbakekjøling ble denne løsning avkjølt til 20°C og tilsatt ovennevnte imidazolid. Denne blanding ble anbrakt i et oljebad forhåndsoppvarmet til 70°C og oppvarmet i 18 timer. Deretter ble blandingen fortynnet med en lik mengde etylacetat og vasket med vann, fortynnet HC1, vann igjen, fortynnet NaHC03 og til slutt vann og saltvann. Den organiske fase ble tørket (MgS04) og inndampet. Det rå produkt ble renset ved kromatografi (Si02, CH2C12/ deretter 5-10% CH3CN i CH2C12), hvorved det ble oppnådd 3,37 g (79,3%) av tittelforbindelsen som en olje, som størknet.
IR (CH2C12) t^aks* 2115 (-N3) , 1765, 1715 cm"<1> (C=0) .
Mindre poler isomer A:
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,6-6,0 (5H, allylmønster) 4,18 (1H, m, H-l'), 3,80-3,85 (1H, m, H-4), 3,62 (1H, d, -CHC=0), 3,46 (1H, m, CH-N3), 3,27 (0,6H, m, H-l"), 2,99 og 2,93 (1H, m, H-3), 2,55 (0,4H, m, H-l"), 1,93 og 1,41 (2H, 2m, -CH2C-N3) 1,32 og 1,31 (3H, 2d, J=6, 45, 6, 40 Hz, CH3CN3) , 1,19 og 1,12 (3H, 2d, J=6,27, 6,29 Hz, -CH3), 0,87 (9H, s, t- butyl), 0,07 og 0,06 (6H, 2s, Si(CH3)2)•
Mere poler isomer B:
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,6-6,0 (5H, allylmønster), 4,17 (1H, m, H-l'), 3,84 (1H, dd, J=2,l, 5,35 Hz, H-4), 3,63 (1H, d, CH2CO) , 3,48 (1H, m, CHN3) , 3,07 (0,6 H, m, H-l"), 2,93 (1H, m, H-3), 2,0 og 1,6 (2H, 2m, CH2CN3), 1,27 og 1,32 (3H, 2d, J=6,5 Hz, C<H>3CN3) 1,09 og 1,18 (3H, 2d, J=6,25 Hz, CH3) , 0,87 (9H, s, t-butyl), 0,06 (6H, 2s, Si(CH3)2). F. ( 3S. 4R) - 3- f ( l' R) - l/- tert- butvldimetvl- silvloksvetvn- 4-f ( 1" R)- 1"-( 2- azidopropvl)- 3"- diazo- 3"- allyloksvkarbonvl-2"- oksopropvn azetidin- 2- on
En blanding av 442 mg (2,32 mmol) p-toluensulfonylklorid, 154 mg (2,37 mmol) natriumazid og 12 mg tetra-butyl-ammoniumklorid i 15 ml CH3CN ble omrørt ved 20°C i 4 timer. Deretter ble denne blanding avkjølt til 5°C og 953 mg (2,11 mmol) (3S,4R)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetyl-silyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(2-azidopropyl)-3"-allyloksy-karbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i en minimal mengde CH3CN ble tilsatt, etterfulgt dråpevis av 235 mg (2,32 mmol) trietylamin. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 5°C i 1,5 timer og deretter inndampet. Resten ble opptatt i dietyleter og vasket med vann og saltvann. Den organiske fase ble tørket (MgS04) og inndampet, hvorved det ble oppnådd et bløtt faststoff. Dette materiale ble triturert i petroleumseter og det uløselige tosylamid (74,3%) ble frafiltrert. Filtratet ble inndampet, hvorved det ble oppnådd en gul viskøs olje, som ble opprenset ved kromatografi (Si02, CH2C12/ deretter 5% CH3CN i CH2C12), hvorved det ble oppnådd 825 mg (81,7%) av tittelfor-bindelsen som en viskøs olje.
IR (CH2C12) Dmaks: 2125 (=N2), 2118 (-N3), 1765 (fi-lactam) , 1713 cm""1 (-C02~) .
Mindre poler isomer A:
<1>H NMR (CDCI3) 8: 4,7-6,0 (5H, allylmønster) 4,31 (1H, m, H-l"), 4,16 (1H, m, H-l'), 3,81 (1H, dd, J=2,08, 4,90 Hz, H-4), 3,38 (1H, m, CH-N3) , 3,05 (1H, m, H-3), 2,69 og 1,39 (2H, 2m, C<H>2<->CN3), 1,28 (3H, d, J=6,42 Hz, H3CCN3), 1,18 (3H, d, J=6,29 Hz, -CH3), 0,86 (9H, s, t-butyl), 0,064 og 0,052 (6H, 2s, Si (CH3)2) .
Mere poler isomer B:
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,7-6,0 (5H, allylmønster), 4,15 (2H, m, H-l', H- 1"), 3,84 (1H, m, H-4), 3,45 (1H, m, CH-N3), 3,05 (1H, m, H-3), 2,10 og 1,5 (2H, 2m, CH2C-N3), 1,27 (3H, d, J=6,43 Hz, C<H>3<->CN3), 1,17 (3H, d, J= 6,27 Hz, -CH3), 0,87 (9H, s, t-butyl), 0, 064 og 0,053 (6H, 2S, Si(CH3)2).
G. ( 3S, 4R)- 3- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 4- r( 1" R)- 1"-( 2-azidopropyl)- 3"- diazo- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"-oksopropyllazetidin- 2- on
En kald (5°C) løsning av 825 mg (1,72 mmol) (3S,4R)-3-[(l'R)-l</->tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-l"-(2-azidopropyl) -3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2*1-oksopropyl]azetidin-2-on i 10 ml CH3CN ble behandlet med 0,52
ml (2,06 mmol) 4N HC1. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 5°C
i 3,5 timer og 20°C i 1 time. Reaksjonen ble der-etter stanset ved tilsetning av 3 ml mettet NaHCC^. Etter fortynning med etylacetat ble blandingen vasket med vann og saltvann (to ganger). Den organiske fase ble tørket (MgS04) og inndampet.
Det rå produkt ble renset ved kromatografi på silicagel under eluering med CH2CI2 og deretter etylacetat, hvorved det ble oppnådd 554 mg (88,4%) av tittelforbindelsen som en gul olje.
De to isomere forbindelser ble ikke atskilt.
IR (CH2C12) umaks: 3600 (~0H)' 3400 (NH)' 2145 <=N2''
2115 (-N3), 1763 (fi-lactam), 1713 (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,7-6,0 (5H, allylmønster), 4,12 (2H,
m, H-l' og H-l"), 3,81 (1H, m, H-4), 3,45 (1H, m CH-N3), 3,05
(1H, m, H-3), 2,05 og 1,55 (2H, 2m, CH2CN3), 1,30 (6H, flere spisser, 2-CH3).
H. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidopropyl)- 6-\(!' R)- 1' -
hydroksvetvll- 3- f( pyridin- 2- vl) metvltiol - 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En suspensjon av 55 mg rhodium-octanoat-dimer i 110 ml CgHg ble anbrakt i et oljebad forhåndsoppvarmet til 130°C og tilbakekjølet i 30 minutter. Deretter ble 2,0 g (5,49 mmol)
(3S,4R)-3-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(2-azidopropyl)-3lf-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopro-pyl] azetidin-2-on tilsatt. Ringslutning ble avsluttet etter 25 minutter under kraftig tilbakekjøling. Løsnings-midlet ble avdampet og erstattet med 55 ml CH3CN. Denne løsning ble behandlet med 1,6 g (6 mmol) difenylklor-fosfat, 0,78 g (6 mmol) N,N-diisopropyletylamin og en katalytisk mengde 4-N,N-dimetylaminopyridin. Etter 15 minutter ved 5°C var reaksjonen brakt tilende. Deretter ble reaksjonsblandingen fortynnet med etylacetat og vasket med vann og saltvann. Etter tørring (MgS04) ble den organiske fase inndampet og det rå produkt renset ved kromatografi (Si02/Et20)xhvorved det ble oppnådd 1,63 g (52,0%) enolfosfat.
Den rensede enol ble løst i 16 ml kaldt (5°C) DMF og behandlet med 465 mg (3,72 mmol) 2-picolyltiol og 481 mg (3,72 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 5°C i 17 timer og ved 20°C i 24 timer. Løsningen ble deretter fortynnet med 100 ml etylacetat og vasket med 3 x 50 ml kaldt saltvann, 2 x 25 ml 10% NaHS03, vann og til slutt saltvann. Den organiske fase ble tørket (MgS04) og inndampet, hvorved det ble oppnådd en brun viskøs olje. Kromatografi resulterte i rensing og separasjon av de to isomerer av tittelforbindelsen (Si02/kald Et20) 470 mg (37%) av den mindre polere isomer A og 325 mg (25,6%) av den mere polere isomer B.
Mindre poler isomer A
IR (CH2C12) Dmaks<:> 3600 (-OH), 2115 (-N3) , 1775 (Ji-lactam), 1710 cm"<1> (-C02-).
<1>H-NMR (CDCI3) 5: 8,55 (1H, m, Ar-H), 7,66 (1H, m, Ar-H), 7,34 (1H, m, Ar-H), 7,19 (1H, m, Ar-H), 4,6-6,0 (5H, allylmønster), 4,19 (2H, ABq, J=13,8 Hz, S-CH2), 4,16-4,24 (2H, m, H-l', H-5), 3,87 (1H, m, CH-N3), 3,65 (1H, m, H-4), 3,05 (1H, dd, J=2, 70, 7, 92 Hz, H-6), 1,6-2,0 (2H, 2m, CH2CN3) , 1,39 (6H, d, J=6,15 Hz, 2-CH3).
Mere poler isomer B
IR (CH2C12) Umaks: 3600 <-0H)» 2115 (-N3), 1772 (A-lactam), 1710 cm<-1> (-C02-).
<1>H-NMR (CDCI3) 5: 8,51 (1H, m, Ar-H), 7,64 (1H, m, Ar-H), 7,37 (1H, m, Ar-H), 7,21 (1H, m, Ar-H), 4,6-6,10 (5H, allylmønster), 4,22 (1H, m, H-l'), 4,14 (1H, dd, J=2,66, 9,60 Hz, H-5), 4,11 (2H, ABq, J=14,18 Hz, -SCH2), 3,75 (1H, m, CH-N3), 3,62 (1H, m, H-4)' 3,32 (1H, dd, J=2,70, 7,32, H-6), 1,6-2,0 (2H, 2m, -CH2C-N3), 1,39 (3H, d, J=6,42 Hz, -CH3), 1,38 (3H, d, J=6,25 Hz, -CH3) .
I. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4- f( 2" R eller S)- azidopropyl1- 6-f( IR*)-!'- hvdroksvetvll- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo- f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat, isomer
A
En kald (5°C) løsning av 500 mg (1,13 mmol, den mindre polere isomer A i trinn H) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azido-propyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml CH2C12 ble behandlet med 2,5 ml (1,24 mmol) 0,5M natriumetylheksanoat og 131 mg (0,113 mmol) (PPh3)4Pd. Etter omrøring i 30 minutter ble løsningen fortynnet med 100 ml dietyleter og ekstrahert med pH 7,0, 3 x 15 ml 0,04M buffer. De vandige ekstrakter ble vasket med dietyleter og kromato-grafert på reversfase-Si02 (partisil), eluering med vann og deretter 5-15% CH3CN i vann. De relevante fraksjoner ble 250
kombinert og lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 180 mg (38,9%) av tittelfor-bindelsen.
<1>H-NMR (D20) 8: 8,50 (1H, m, Ar-H), 7,89 (1H, m, Ar-H),7,4-7,6 (2H, 2m, 2 Ar-H), 4,26-4,06 (2H, m, H-l', H-5), 4,18 (2H, ABq, J=14,09, S-CH2), 3,6 (1H, m, CH-N3), 3,35 (2H, m, H-6, H-4), 1,8 og 1,56 (2H, 2m, CH2C-N3) , 1,35 (3H, d, J=6,71 Hz, -CH3), 1,32 (3H, d, J=6,65 Hz, -CH3).
J. ( 4R. 5S. 6S)- 4- r( 2" R eller S)- aminopropvl1- 6- T( 1' R) - 1' -
hvdroksvetvll- 3- r( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, isomer A
En løsning av 175 mg (0,425 mmol, den mindre polere isomer A i trinn I) natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i pH 6,0, 60 ml 0,05M fosfatbuffer ble hydrogenert ved 5°C i nærvær av 350 mg 30% Pd/"Celite" ved et trykk på 45 psi hydrogen. Etter 75 minutter ble ytterligere 100 mg katalysator tilsatt og reduksjonen fortsatt i ytterligere 30 minutter. Katalysatoren ble frafiltrert og filtratet kromatografert på reversfase-Si02 (partisil) under eluering med vann og deretter 5% CH3CN i vann. De relevante fraksjoner ble lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 50 mg (31,2%) av tittelforbindelsen, isomer A.
UV (H20) Xmaks: 266 (4093), 300 (3945).
IR (Nu jol) Dmaks: 1755 (Ji-lactam), 1595 cm<-1> (-C02~) . <1>H-NMR (D20) 8: 8,46 (1H, m, Ar-H), 7,84 (1H, m, Ar-H), 7,46-7,29 (2H, m, 2 Ar-H), 4,24-4,01 <4H, m, H-l', H-5, - SCH2), 3,17-3,46 (3H, m, H-4, H-6, CH-N-) , 1,4-2,0 (2H, 2m, CH2C-N), 1,31 (3H, d, J=6,53 Hz, - CH3) , 1,29 (3H, d, J=6,31 Hz, -CH3).
Eksempel 58
( 4R. 5S. 6S)- 4- f ( 2" S eller R) - aminopropyll - 6- f ( 1' R) - 1' - hvdroksvetvll- 3- f( pyridin- 2- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- karboksvlsvre, isomer B
A. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4- f( 2" S eller R)- azidopropyl1- 6-f ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- f( pvridin- 2- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo- f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat, isomer B
En kald (5°C) løsning av 340 mg (0,767 mmol, den mere polere isomer B fra eksempel 57, trinn H) allyl-(4R, 5S,6S)-4-(2"-azidopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyltio]-7-okso-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 35 ml CH2C12 ble behandlet med 1,7 ml (0,85 mmol) 0,5M natriumetylheksanoat og 88 mg (0,08 mmol) (PPh3)4Pd. Etter omrøring i 30 minutter ble løsningen fortynnet med 70 ml dietyleter og ekstrahert med pH 7,0, 3 x 10 ml 0,04M buffer. De vannige ekstrakter ble vasket med dietyleter og kromato-grafert på reversfase Si02 (partisil) under eluering med vann og deretter 5-15% CH3CN i vann. De relevante fraksjoner ble kombinert og lyofilisert hvorved det ble oppnådd 14 0 mg (44,4%) av tittelforbindelsen.
<1>H-NMR (D20) 8: 8,4 8 (1H, m, Ar-H), 7,88 (1H, m, Ar-H), 7,49 (1H, m, Ar-H), 7,40 (1H, m, Ar-H), 4,02-4,27 (4H, m, H-1', H-5, SCH2), 3,67 (1H, m, CH-N3), 3,43 (1H, dd, J=2,5, 5,84, H-6), 3,15 (1H, m, H-4), 1, 50-1, 90 (2H, 2m, CH2C-N3) , 1,28 (6H, d, J=6,35 Hz, 2-CH3).
B. ( 4R, 5S, 6S) - 4- r ( 2" S eller R) - Aminopropvl 1- 6- T ( 1' R) - 1' -
hvdroksvetvll- 3- f( pvridin- 2- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, isomer B
En løsning av 135 mg (0,328 mmol, den mere polere isomer B fra trinn A) natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-azido-propyl)-6-[(1'R)-1'- hydroksyetyl]-3-[(pyridin-2-yl)metyl-tio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i pH 6,0, 45 ml 0,05M fosfatbuffer ble hydrogenert ved 5°C i nærvær av 270 mg 30% Pd/"Celite" ved et trykk på 40 psi hydrogen. Etter 65 minutter ble katalysatoren frafiltrert og filtratet kromatografert på reversfase Si02 (partisil) under eluering med vann og deretter 5% CH3CN i vann. De relevante fraksjoner ble kombinert og lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 60 mg (48,5%) av tittelforbindelsen.
UV (H20) Xmaks: 268 (8362), 302 (9583).
IR (Nujo<l>) Dmaks: 1760 (fJ-lactam), 1595 cm"<1> (-C02-) .
<1>H-NMR (D20) 8: 8,4 6 (1H, m, Ar-H), 7,83 (1H, m, Ar-H), 7,47 (1H, m, Ar-H), 7,36 (1H, m, Ar-H), 4,01-4,25 (4H, m, H-1', H-5, SCH2), 3,40 (2H, m, -CH-N, dd, J=2,95, 6,66, H-6), 3,14 (1H, m, H-4), 1,98 og 1,75 (2H, 2m, CH2-CN), 1,35 (3H, d, J=6,44 Hz, -CH3), 1,29 (3H, d, J=6,37,
-CH3).
Eksempel 59
( 4R, 5S, 6S)- 3- f( cvanopropyl) tiol- 4-( 3"- guanidinopropyl)- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f 3. 2, 01hept- 2-en- 2- karboksvlsvre
En kald løsning (isbad) av 150 mg (0,420 mmol)
(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-aminopropyl) -3- [ (3-cyanopropyl) tio] -6- [ (l'R) - 1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, som beskrevet i eksempel 50, i en 25 ml 0,04M pH 7,0 vandig fosfatbufferløsning ble først behandlet med en 0,IM vandig NaOH-løsning (til forøkelse og bibeholdelse av pH ved 7,6 til 7,8) og med 520 mg (4,20 mmol)
aminoiminometansulfonsyre. Blandingen ble omrørt i 2 timer og pH ble innstillet til 7,1 med en 0,1N vandig HCl-løsning. Blandingen ble ledet gjennom en 45 g (H20 -» 1% -> 8% CH3CN/H20) "ji-Bondapak C^g" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd av 125 mg (75%) tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet 98,4% (HPLC 300 nm).
UV (H20) Xmaks<:> 302 (e = 8230).
IR (Nujol) Dmaks: 2250 (C=N), 1750 (C=0), 1700 (C=N) og 1585 cm—1 ( c=0)
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,33-4,21 (1H, m, H-l'), 4,243 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,4 Hz, H-4), 3,41-3,23 (3H, m, H-4 og CH2-N), 3,330 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 3, 06-2, 92, 2,85-2,73 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,71-2,60 (2H, m, CH2CN), 2, 06-1, 4 9 (6H, m, CHoC^C<H>oCN og CH2CH2) og 1,321 ppm (3H, d, 6, 4 Hz, CH3) .
Eksempel 60
( 4R, 5S, 6S) - 4- ( 3"- guanidinopropvl) - 6- r ( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 3- r( pvridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 0,16 g (0,42 mmol) (4R, 5S., 6S.) - 4-(3"-aminopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre [eksempel 44] i en 30 ml 0,05M pH 7,0 vandig fosfatbuffer ble behandlet med en 0,1N vandig NaOH-løsning (til forøkelse og bibeholdelse av pH ved ca. 7,7-8,1) og 525 mg (4,2 mmol) aminoiminometansulfonsyre. Blandingen ble omrørt i 90 minutter, nøytralisert til pH 7,0 med en 1,0M vandig Na<H>2P04-løsning og ledet gjennom en 30 g (H20 -» 8% CH3CN/H20) "(i-Bondapak C18" reversfase-søyle, hvorved det ble oppnådd av 85 mg (57%) tittelfor-bindelsen som et lyofilisert pulver. Renhet: 95,2% (HPLC, 304 nm).
UV (H20) ^maks" 304 (e 8,000), 262 (e 5200).
IR (Nujol) <U>maks: 3500-3100 (OH, NH), 1755 (C=0), 1660 (C=N) og 1600 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 8,49-8,46 (2H, m, aromatisk H), 7,49-7,46 (2H, m, aromatisk -H), 4,25-4,16 (1H, m, H-l'), 4,16, 4,09, 4,01, 3,94 (2H, ABq, J=14,4 Hz, CH2-aromatisk), 4,058 (del av H-5, d, J=2,4 Hz), 3,261 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,02 Hz, H-6), 3,20-3,07 (3H, m, CH2N, H-4), 1,8-1,5, 1,5-1,26 (4H, 2 sett av m, CH2CH2-4) og 1,280 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 61
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tioT- 4-( 3"- guanidinopropyl)- 6-f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 7- okso- l- azabicvclo\ 3, 2. 01hept- 2-en- 2- karboksvlsvre
Til en kald (isbad) løsning av 125 mg (0,37 mmol)
(4R, 5S., 6jS)-4-(3"-aminopropyl)-3-[ (2-cyanoetyl) tio]-6-[ (l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre [fremstillet i eksempel 41] i en 25 ml 0,04M pH 7,0 vandig fosfatbuffer ble tilsatt 0,1N vandig NaOH og porsjonsvis 458 mg (3,70 mmol) aminoiminometan-sulfonsyre, mens pH ble holdt ved 7,6-7,8. Blandingen ble omrørt i 2,5 timer ved 5°C og pH ble innstillet til 7,05 med en 0,1N vandig HCl-løsning. Løsningen ble ledet gjennom en 38 g (H20, 1,2,3,4,5% CH3CN/H20) "u-Bondapak C18''-søyle, hvorved det ble oppnådd 98 mg (70%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet 98,8% (HPLC, 300 nm).
UV (H20) ^maks' 300 (e 8990).
IR (Nujol) Umaks: 1755 (C==0) ' 1665 (C=N) og 1585 0111-1 (C=0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,34-4,21 (1H, m, H-l'), 4,259
(1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3,45-3,33 (1H, m, H-4), 3,351 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,29-3,22 (2H, m, CH2-N), 3,18-3,08, 3,02-2,92 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,91-2,80 (2H, m, CH2CN), 1,92-1,44 (4H, m, CH2CH2) og 1,321 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 62
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- f(!' R)- 1'- hvdroksv- etvll-3- f( 1- metvl- l, 2, 3- triazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- f( 1' R)-1'-hvdroksvetvll- 3- r( 1- metvl- l, 2, 3- triazol- 4- vl) metvltiol - 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av (5,28 mmol, fremstillet ved ringslut-ning av 2,0 g, 5,28 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,5R,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 40 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,2 ml (5,8 mmol) difenylklorfosfat og 1,0 ml (5,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt og den klare blanding ble omrørt ved samme temperatur i 1 time. Deretter ble ytterligere 1,8 ml (10,6 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt etterfulgt av 1,36 g (10,5 mmol) l-metyl-4-mercaptometyl-l,2,3-triazol, og blandingen ble. omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter stanset ved tilsetning av 200 ml EtOAc og kaldt vann. Den organiske fase ble vasket med IM NaHS03, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 10 cm silicagel under anvendelse av en gradient av EtOAc i toluen (1:1 til EtOAc) . Inndampning av de UV-aktive fraksjoner ga 1,51 g (62%) av tittelforbindelsen som et skumstoff.
IR (NaCl, film) Dmaks: 3400 (bred, OH) 2100 (N3), 1770 (C=0 av fi-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDC13) 5: 1,37 (d, J=6,26 Hz, 3H, CH3CH0), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 1,92 (d, J=l,9 Hz, 1H, OH), 3,17 (dd, Jh6,H5=2'66 <Hz>' JH6 Hl=7'09 Hz' 1H, H-6), 3,33 (bred t, J=6,2 Hz, 2H, CH2N3), 3,52 (bred t, J=9,0 Hz, 1H, H-4), 4,07 (ABq, ^=14,75 Hz, A\ >= 54,4 Hz, 2H, SCH2), 4,08 (s, 3H, CH3-1 av triazol), 4,2 (m, 2H, H-5 og CH 3CHO overlapping), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl) og 7,48 ppm (s, 1H, H-5 av triazol).
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3-r( 1- metvl- l, 2. 3- triazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo [ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksylsyre
En løsning av 1,51 g (3,27 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(1' R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(1-metyl-l, 2, 3-triazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0] hept-2-en-2-karboksylat i 75 ml tørr EtOAc ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,075 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 7,2 ml (3,6 mmol) av en 0,5M løs-ning av kalium-2-etylheksanoat i EtOAc. Etter 45 minutter ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 2 x 75 ml vann. Den kombinerte vannige fase ble holdt under vakuum til fjer-nelse av spor av organisk løsningsmiddel og deretter hydrogenert ved 0-5°C over 1,7 g 5% Pd over aluminiumoksid ved 45 psi hydrogen i 1 time (til slutt pH 10,5). Deretter ble 25 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og katalysa-toren ble frafiltrert på en "Celite"-pute. Filtratet ble konsentrert til halvdelen under vakuum og deretter kromatografert på en 3,5x 12 cm reversfasesilicagel "ji-Bondapak C^g". Eluering med en gradient av acetonitril (0-5%) i vann ga 1,0 g (76%) av tittelforbindelsen som et hvitt amorft pulver etter frysetørring.
Renhet ved HPLC: 97% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighed 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 6,07 minutter.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) XmaJcs: 302 nm (9.098).
IR (KBr) Umaks: 1755 (C=0 av fi-lactam) og 1690 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,30 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 3,0 (t, J=7,6 Hz, 2H, C<H>oN<H>o). 3,23 (bred t, 1H, H-4), 3,33 (dd, ^H6,H5=2'52 Hz' JH6,H1=6'33 Hz' 1H' H"6/ ' 4/08 (s' 3H' ^ Z' 1 av triazol), 4,09 (ABq, JAB=14,93 Hz, A\)=33,7 Hz, 2H, SCH2), 4,1 (overlapping med SCH2, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3CHO) og 7,87 ppm (s, 1H, H-5 av triazol).
Eksempel 63
( 4R. 5S, 6S)- 3- f ( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r ( 1' R)-!'-hvdroksvetvll- 4- f2"-( 1- pyrrolidinyl) etvll- 7- okso- l-azabicvclo 13 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- f(!' R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4- T2"-( 1-pyrrolidinvl) etvll- 7- okso- l- azabicvclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald løsning (tørris-aceton-bad) av 418 mg (0,870 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.)-6-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3-[(2-cyanoetyl)-tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2CI2 ble behandlet med 410 ul (3,59 mmol) N,N-diiso-propyletylamin og dråpevis med 209 fil (1,24 mmol) trif luormetansulf onsyreanhydrid. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og 530 ul (6,35 mmol) pyrrolidin ble tilsatt dråpevis. Tørris-aceton-badet ble erstattet med et is-MeOH-bad, og blandingen ble omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble overført på fire preparativ 2 mm (EtOAc, Rf=0,2) TLC plater, hvorved det ble oppnådd 355 mg (75,5%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) Vmaks: 1780 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,05-5,85 (1H, m, vinylisk-H), 5,49-5,72 (2H, m, vinylisk-H), 4,85-4,63 (2H, m, allylisk-CH2), 4,3-4,13 (1H, m, H-l'), 4,193 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 3,224 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H-6), 3,37-3,19 (2H, m, H-4 og HCHS), 3,07-2,93 (1H, m, HCHS), 2,72-2,5 (8H, m, CH2CN og (CH2)3N), 2,1-1,8 (6H, m, CH2~<4> og CH2~CH2), 1,587 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,892 (9H, s, tert-butyl) og 0,088 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3- r( cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- 1-hvdroksvetvll- 4-\ 2 "-( 1- pvrrolidinyl) etvll- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 355 mg (0,665 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6- [ (1'R) -1' -tertbutyldimetyl-silyloksy-etyl] - 3-[(2-cyanoetyl)-tio]-4-[2"-(1-pyrrolidinyl)etyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml THF ble først behandlet med 500 ul (8,73 mmol) eddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 4,5 ml (4,5 mmol) THF. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og fikk deretter lov til å størkne i et kaldt rom (5°C) i 114 timer. Deretter ble 1 g fast NaHC03 tilsatt, og blan-dingen ble omrørt i 30 minutter. Den ble overført på tre 2 mm (eluering to ganger med aceton) preparativ TLC plater, hvorved det ble oppnådd 220 gm (78,8%, Rf 0,2) av tittel-forbindelsen kontaminert med noen tetrabutylammoniumsalt.
IR (re<n>) Umaks: 3600-3200 (OH), 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,07-5,87 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,24 (2H, m, vinylisk H), 4,88-4,6 (2H, m, allylisk-CH2), 4,293 (1H, dd, J=3,2 Hz, J=10,4 Hz, H-5),
4,17-4,02 (1H, m, H-l'), 3,366 (1H, dd, J=3,2 Hz, J=9,2 Hz, H-6), 3,2- 2,8 (9H, CH2S, (CH2)3<N,> H-4), 2,7-2,62 (2H, m, CH2CN), 2,4-2,2 (1H, m, HCH-4), 2,1-1,8 (5H, m, CH2CH2, HCH-4) og 1, 404 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
C. ( 4R. 5S. 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) thiol- 6- r( l' R)- l'-hydroksvetvll- 4-' 2"-( 1- pyrrolidinyl) etvll - 7- okso- l-azabicvclo- ' 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
Til en kald (isbad) løsning av 220 mg (0,524 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -3- [ (2-cyanoetyl) tio] -6- [ (1'R) -1'-hydroksyetyl]-4-[2"-(1-pyrrolidinyl)etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml CH2C12 ble tilsatt 20 mg Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av 1,1 ml (0,55 mmol) natriumetyl-2-heksanoat i EtOAc. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, hvoretter den ble fortynnet med dietyleter og en 0,05M vandig pH 7,0 bufferløsning. Den organiske fase ble atter ekstrahert med en 3 x 3 ml 0,05M pH 7,4 bufferløsning. De vandige faser ble kombinert, vasket med 25 ml dietyleter og ledet gjennom en 25 g (H20, 2 -» 4% CH3CN/H20) "u-Bondapak <C>18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 145 mg (73%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet ved HPLC: 97,2% (300 nm).
UV (<H>20) kmaks: 300 (E=7500).
IR (Nujol) *0nia]cs: 1760 og 1600 cm-<1> (C=0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,33-4,24 (1H, m, H-l')» 4,298 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,43 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 3,50- 2,4 (7H, m, (CH2) 3N, H-4), 3,21-3,07, 3,01-2,90 (2H, 2 sett av m, CH2~S), 2,88-2,78 (2H, m, CH2CN), 2,24-1,93 (5H, m, CH2CH2 og CH2~4) og 1,336 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 64
( 4R. 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- f( 2- karbamovletvl)-tiol- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclor 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R. 5S. 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 3- r( 2- karbamovletvl) tiol - 6- r ( l' R)- 1'- hydroksvetvlT- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 5,28 mmol (fremstilt ved ringslutning av 2,0 g, 5,28 mmol av diazo-forstadiet, som beskrevet i eksempel 45) allyl-(4R,5R, 6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[ (l'R)-l#-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 40 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,20 ml (5,8 mmol) difenylklor-fosfat og 1,0 ml (5,74 mmol) N,N-diisopropyletylamin til-satt samtidig i løpet av 10 minutter. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Ytterligere 0,92 ml (5,3 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt, etterfulgt av 0,67 ml (5,3 mmol) klortrimetylsilan, og blandingen ble omrørt i 10 minutter. Deretter ble 1,21 ml (6,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av 0,73 g (6,9 mmol) 3-mercaptopropionamid [fremstilt som beskrevet av T. Endo et al, Chemistry Letters. 443 (1974) og C. M. Buess, J. Am. Chem. Soc, 77, 6613 (1955)] i 2 ml N,N-dimetylformamid, og løsningen ble deretter omrørt ved 0-5°C i 18 timer. Reak-sjonsblandingen ble stanset ved tilsettning av 300 ml EtOAc og kaldt vann. Den organiske fase ble vasket med mettet NaHC03, 0,2M pH 7,0 fosfat-buffer, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løs-ningsmidlet ga en olje, som ble fortynnet med 20 ml tetrahydrofuran og 5 ml vann og behandlet med 2 ml eddikesyre. Etter 1 time ved 22°C og 18 timer ved 5°C ble løsningen fortynnet med 300 ml EtOAc og vasket som ovenfor. Etter tørring (MgS04) og avdampning av løsnings-midlet ble resten kromatografert på 5 x 10 cm silicagel under eluering med en gradient av etanol (0-10%) i EtOAc. Inndampning av de UV-aktive fraksjoner ga 1,06 g (46%) av tittelesteren som en olje.
IR (NaCl, film) umaks:2100 (N3), 1770 (C=0 av fi-lactam), 1710 (sh C=0 av ester) og 1680 cm<-1> (C=0 av amid).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,38 (d, J=6,27 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2,3 av azidobutyl), 2,05 (d, J=2,0 Hz, 1H, OH), 2,53 (~t, J=7 Hz, 2H, SCH2CH2CONH2), 3,0-3,3 (m, 4H, SCH2, H-6 og H-4 overlapning), 3,33 (t, J=6,l Hz, 2H, CH2N3), 4,26 (dd, JH5,H6=2'61 Hz' JH5,H4=9'37 Hz' 1H'H"
5), 4,26 (overlapning med H-5, 1H, CH3CHO), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 5,5 og 5,6 ppm (2 bred s, 2 x 1H, CONH2). B. ( 4R, 55. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- f( 2- karbamovletvl) - tiol- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 1,06 g (2,42 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-3-[(2-karbamoyletyl)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml EtOAc ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,074 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 5,3 ml (2,65 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etyl-heksanoat i EtOAc. Etter 30 minutter ble reaksjonsblan-dingen ekstrahert med 2 x 50 ml vann og den kombinerte vandige fase ble holdt under våkum til fjernelse av spor av organisk løsningsmiddel. Den vandige fase ble deretter hydrogenert over 1,25 g 5% palladium-på-aluminiumoksid ved 0-5°C og under 45 psi hydrogen i 1 time. Etter tilsetning av 20 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer ble katalysatoren fra-filtrert, og filtratet ble kromatografert to ganger på en 3,5 x 15 cm reversfasesilicagel "u-Bondapak C^". Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 0,36 g (40%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver (93% ren ved HPLC) etter frysetørring. Renheten kan forøkes til 99% ved ytterligere kromatografi på samme søyle under anven-delse av 0,01M pH 7,0 fosfatbuffer i stedet
for vann etterfulgt av avsaltning av produktet.
Renhet ved HPLC: 99,5% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 0,7 ml/min, UV-detektor 304 nm, retensjonstid 6,96 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) ^ma}cs: 302 nm (8.865).
IR (KBr) *omakS* 1750 (C=0 av fi-lactam), 1670 (C=0 av amid) og 1590 cm"<1>(C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,60 (~t, J=6,4 Hz, 2H, CH2CONH2), 2,9- 3,2 (m, 4H, SCH2 og CH2NH2 overlapning), 3,4 (m, 2H, H-4 og H-6), 4,23 (dd, <J>h5,H6<=>2'6 Hz' JH5,H4<=>9'15 Hz, 1H, H-5) og 4,27 ppm (m, 1H, CH3CHO) .
Eksempel 65
( 4R. 5S, 6S) - 3- F ( 2"- cvanoetvl) tiol- 4-( 2- N-formimidovlaminoetyl)- 6- f( 1' R)- 1' - hvdroksvetvll - 7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,290 g (0,89 mmol) (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylsyre i 35 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,5 med IM NaOH og behandlet med benzylformimidat, 0,76 g (4,4 mmol) hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 (IN NaOH). Etter 20 minutter ble reaksjonsblandingen stanset ved tilsettning av 25 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og vasket med EtOAc. Den vandige fase ble holdt under våkum til fjernelse av spor av organisk løsningsmiddel og deretter kromatografert på en 3,5 x 12 cm reversfasesilicagel ")A-Bondapak C^g". Søylen ble først eluert med 0,01M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, lyofilisert og avsaltet på samme søyle under eluering med vann. Etter frysetørring ble 0,120 g (838%) av tittelforbindelsen oppnådd som et hvitt, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 1,5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 4,91 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 300 nm (7.429).
IR (KBr) Dmaks: 2250 (svak CN), 1755 (C=0 av ii-lactam), 1610 (C=N av formimidoyl) og 1580 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<X>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,34 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,8-2,3 (m, 2H, CH2-1 av aminoetyl), 2,8-3,2 (m, 4H, SCH2CH2CN), 3,45 (overlapning med H-6, 1H, H-4), 3,47 (dd, <J>H6/H5=2,92 Hz, <J>H6,H1=6'87 Hz' 1H' H" 6>' 4'28 <m' 1H' CH3CHO), 4,32 (dd, Jh5,H6=2'92 H<z>'<J>H5,H4=6'68 Hz' 1H' H~5), og 7,85 ppm (s, 1H, CH=NH).
Eksempel 66
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)-3-f( 2-karbamovloksvetvl) tiol- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvl]- 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3-'(2-karbamovloksvetvl) tiol- 6- f( 1' R)- 1' - hvdroksvetvll -7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat En kald (is-MeOH bad) løsning av 2,0 g (5,49 mmol) allyl-(4R, 5R, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3- [ (2-karbamoyl-oksy-etyl) tio] - 6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3, 7-diokso-l-azabicyclo [3, 2, 0]heptan-2-karboksylat fremstilt fra (3S_, 4R) -3-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on, i 40 ml CH3CN ble behandlet med 1,3 ml (6,0 mmol) difenyl-klorfosfat, 0,98 ml (6,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin og et spor av 4-dimetyl-aminopyridin. Blandingen ble omrørt i 40 minutter, deretter ble det resulterende enolfosfat behandlet med 1,33 g (11,0 mmol) 2-karbamoyloksyetylmercaptan og 1,7 ml (11,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 24 timer ved 5°C, deretter atter behandlet med ytterligere 0,65 ml (5,5 mmol) 2-karbamoyloksy-etylmercaptan og 0,88 ml (5,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Etter en omrøringsperiode på ytter-ligere 35 timer ble blandingen fortynnet med 200 ml etylacetat, vasket med 2 x 50 ml kaldt vann, 2 x 50 ml kaldt IM vandig NaHS03, 50 ml vann, 50 ml IN vandig HC1, 50 ml vann, 50 ml IM vandig NaHC03, 50 ml vann, 50 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 25 g (heksan -» etylacetat) silicagelpute, hvorved det ble oppnådd 1,29 g (53%) av tittelforbindelsen som en gul halvkrystallinsk forbindelse.
IR (CH2C12) <U>maks: 3680, 3600, 3540, 3420 (OH, NH2), <2>100
(N3), 1775, 1740 og 1710 cm-1 (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,04-5,87 (1H, m, vinylisk-H), 5,50-5,22 (2H, m, vinylisk-H), 4,88-4,63 (4H, m, NH2 og allylisk-CH2), 4,37-4,10 (4H, m, H-l<7>, CH20 og H-4), 4,276 (del av H-4, d, J=2,7 Hz), 3,49-3,35 (3H, m, CH2N3 og H-4), 3,247 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,5 Hz, H-6), 3,8- 3,09, 2,97-2,63 (2H, 2 sett av m, SCH2), 1,96-1,55 (3H, m, OH og CH2CH2) og 1, 388 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- r( 2- karbamovloksvetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald løsning (isbad) av 520 mg (1,18 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3- [ (2-karbamoksyl-oksyetyl) - tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml CH2C12 ble behand-let med 110 mg (0,09 mmol) (PPh3)4Pd og dråpevis med en 0,5M løsning av 2,36 ml (1,18 mmol) natriumetyl-2-heksanoat i etyl-acetat. Blandingen ble omrørt i 20 minutter, fortynnet med 150 ml dietyleter og ekstrahert med 2 x 20 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 30 ml dietyleter og omrystet i en Parr hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 2 timer ved 0°C under anvendelse av 500 mg 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. pH av løsningen ble innstilt til 6,9 med en IM vandig KH2P04-løsning. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og den vandige løsning ble ledet to ganger gjennom en 120 g (H20 -» 1% -* 3% CH3CN/H20) "u-Bondapak <C>18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 155 mg (35%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 99,0% (HPLC, 300 nm).
UV (H20) Xmaks: 302 (e 10600).
IR (Nujol) *Omaks: 1755, 1710 og 1585 cm"<1> (C = 0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,34-4,21 (4H, m, H-l', H-5 og CH20), 3,47-3,35 (1H, m, H-4), 3,356 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,21- 2,88 (4H, m, CH2N, SCH2), 2,0-1,4 (4H, m, CH2CH2) og 1,334 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 67
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3- f( 1- metvl- l, 2, 3-triazol- 4- vl) metvltiol- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo- f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allyl-( 4R, 5S, 6S)-( 2"- azidoetvl)- 6- f( 1' R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3- f( 1- metvl- l. 2. 3- triazol- 4-vl)- metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En løsning av 4,69 mmol (fremstilt ved ringslutning av 2,18 g, 4,69 mmol av diazo-forstadiet, som beskrevet i eksempel 2) allyl-(4R,5R,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo-[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 36 ml tørr acetonitril ble behandlet ved -15°C og under argon med 1,02 ml (4,9 mmol) difenylklorfosfat og 0,87 ml (5,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved -15°C i 30 minutter. 0,87 ml (5,0 mmol) N,N-Diisopropyletylamin og 1,22 g (9,4 mmol) l-metyl-4-tiometyl-l,2,3-triazol ble tilsatt, og blandingen ble omrørt natten over ved -15°C. Reaksjons-blandingen ble fortynnet med 250 ml EtOAc og blandet med en blanding fra et liknende forsøk ut fra 0,54 mmol av diazo-forstadiet. Den resulterende løsning ble vasket med vann, IM NaHS03, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 15 cm silicagel. Eluering med en blanding av EtOAc og toluen (7:13) ga 1,99 g (69%) av tittelforbindelsen som en brun olje.
IR (Nujol) Dmaks: 2105 (N3), 1775 (C=0 av G-lactam) og 1710 (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,89 (s, 9H, Si-t- bu), 1,29 (d, J=6,14 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,72 og 2,04 (2 x m, 2 x 1H, C<H>2<-> 4), 3,10 (dd, <J>1</>6=7,19 Hz, J5_6=2,73 Hz, 1H, H-6), 3, 30-3, 64 (m, 2H, CH2N3) , 3,65 (ddd, J4_5=J=10,06 Hz, J=2,73 Hz, l.H, H-4), 4,01 (d, Jgem=14,62 Hz, 1H, CH2-S) , 4,02-4,35 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,08 (s, 3H, CH3-N), 4,26 (d, Jgem=14,58 Hz, 1H, CH2-S), 4,72 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,21-5,47 og 5,95 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,48 (s, 1H, CH av triazol).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)-3-f( 1- metvl- l. 2. 3-triazol- 4- vl) metvltiol- 6- r ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- karboksvlat
En løsning av 1,99 g (3,63 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyl-oksy-etyl]-3-[(1-metyl-l,2,3-triazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 57 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 1,25 ml (21,8 mmol) eddikesyre etterfulgt av 11,3 ml (11,3 mmol) av IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetra-hydrofuran. Løsningen ble oppbevart ved 5°C i 10 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket
med mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 15 cm silicagel. Eluering med en blanding av acetonitril og EtOAc
(3:97) ga 1,0 9 g (48%, utbytte fra diazoazetidinon) av tittelforbindelsen som et skumaktig, lysegult faststoff.
IR (NaCl, film) Umaks: 3490 (OH), 2105 (N3), 1780 (C=0 av 15-lactam) , og 1710 (C=0 av ester) .
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,38 (d, J=6,26 Hz, 3H,
CH3CHO), 1,78 og 2,02-2,18 (2 x ra, 2 x 1H, CH2~4), 2,07 (d,
J=4,42 Hz, 1H, OH), 3,17 (dd, J1/_5=7,71 Hz, J5_6=2,76 Hz, H-6), 3,39-3,65 (m, 2H, CH2N3), 3,74 (ddd, J4_5=10,40 Hz,
J=10,40 Hz, J=2,42 Hz, H-4), 3,95 (d, Jgem=14,89 Hz,-1H, CH2~
S), 4,08 (s, 3H, CH3-N), 4,14-4,27 (m, 1H, CH3CHO), 4,21 (dd, <J>4_5=9,54 Hz, J5_6=2,69 Hz, H-5), 4,28 (d, <J>gem<=>15,05 Hz, 1H, CH2-S), 4,73 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,22-5,48 og 5,94 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 7,48 (s, 1H, CH av triazol).
C. ( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3- r( 1- metvl- l, 2, 3-triazol- 4- vl) metvltiol- 6- r il ' R )- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo 13 , 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 495 mg (1,14 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-3-[(1-metyl-l,2,3-triazol-4-yl)metyltio]-6-[(1'R)-1' -hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 25 ml tørr CH2CH2 ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 83 mg tetrakis(trifenylfosfin)-palladium [0] og 2,5 ml (1,25 mmol) av en 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i EtOAc. Deretter ble 50 ml vann tilsatt og den organiske fase ble adskilt. Den organiske fase ble gjenekstrahert med 3 x 15 ml vann og de kombi-nerte vandige faser ble avpumpet til fjernelse av organisk løsningsmiddel. Den resterende vandige fase ble hydroge-nert over 419 mg 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 1 time. Katalysatoren ble frafiltrert, og filtratet ble nøytralisert med en løsning av NaH2P04 IM (noen få dråper). Blandingen ble kromatografert på 7 x 11 cm reversfasesilicagel"u-Bondapak C^g" under anvendelse av en gradient av acetonitril i 0-1% vann, etterfulgt av lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner, hvilket ga 290 mg (69%) av tittelforbindelsen som et lysegult, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 97,3% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 1,5% acetonitril i vann pH 7,4 fosfat-buffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 302 nm,
retensjonstid 5,82 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) X^j^: 302 nm (6091).
IR (KBr) t^aks' 1760 (C=0 av A-lactam) og 1600 (C=0 av karboksylat).
^H-NMR (200 Hz, D20) 5: 1,31 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,80 og 2,17 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 3,09 (t, J=8,33 Hz, C<H>2N3), 3,32 (ddd, J4_5=J=10,06 Hz, J=3,06 Hz, 1H, H-4), 3,41 (dd, <J>7,_6<=>6,56 Hz, J5_6=2,79 Hz, H-6), 3,95-4,28 (m, 4H, CH2-S, CH3CHO, H-5), 4,08 (s, 3H, CH3-N), 7,85 (S, 1H, CH av triazol).
Eksempel 68
( 4R. 5S, 6S)- 3- f( 3- cvanopropvl) tiol- 4-( 4"- N-formimidovlaminobutvl)- 6- r( l' R)-1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2. 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,411 g (1,12 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-3-[(3-cyanopropyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 50 ml vann ble innstilt til pH 8,5 med IM NaOH. Deretter ble 0,94 g (5,4 mmol) benzylformimidat, hydroklorid til-satt i små porsjoner i løpet av 5 minutter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH. Etter 20 minutter ble 40 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt, og løsningen ble vasket med etylacetat og den vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Den vandige løsning ble kromatografert ved 0-5°C på 3,5 x 15 cm reversfasesilicagel "u-Bondapak C^g" under anvendelse av en gradient av 0-10% acetonitril i 0,0IM pH 7,0 fosfat-buffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, konsentrert under våkum (t <10°C) og avsaltet på samme søyle under eluering med vann og 0-10% acetonitril. 0,224 g (50%) av tittelforbindelsen ble oppnådd som et hvitt, amorft pulver etter frysetørring.
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 8% CH3CN-H2O, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 304 nm, retensjonstid 6,85 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) <X>maks: 304 nm (9.324).
IR (KBr) Dmaks: 2250 (CN), 1755 (C=0 av fl-lactam), 1715 (C=N av formimidoyl) og 1590 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,31 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,1 (m, 8H, CH2-1,2 og 3 av butyl og CH2-2 av cyanopropyl) , 2,64 (t, J=6,9 Hz, 2H, CH2CN) , 2,7-3,1 (m, 2H, SCH2), 3,35 (m, 4H, CH2NH, H-4 og H-6 overlapping), 4,2-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping) og 7,79 ppm (s, 1H, CH=NH).
Eksempel 69
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- N, N- dimetvlaminobutvl)- 6- T( l' R)- 1'-hvdroksvetvl1 - 3- T( pvridin- 3- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,221 g (0,56 mmol) (4R,5S,6S)-4-<4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(pyridin-3-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylsyre i 5 ml kaldt vann (0-5°C) ble behandlet med 0,23 ml (2,8 mmol) 37 vekt% formaldehyd og 0,2 ml (3,5 mmol) eddikesyre. Den resulterende pH var 4,0. Deretter ble 0,071 g (1,1 mmol) natriumborhydrid tilsatt på én gang etterfulgt av ytterligere 0,130 g (2,1 mmol) tilsatt i små porsjoner i løpet av 2 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter stanset ved tilsettning av 20 ml 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer og deretter kromatografert på 2 x 15 cm reversfasesilicagel "(i-Bondapak C^ q" . Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 0,161 g (68%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff etter frysetørring.
Renhet ved HPLC: 94% på "u-Bondapak Cl8", 3,9 mm/30 cm, eluering 10% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1,5 ml/min, uv-detektor 300 nm, reten-sjonstid 8,19 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 266 (4.980) og 304 nm (7.540).
IR (KBr) t>maks: 1758 (C=0 av ii-lactam) og 1582 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 6: 1,29 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO),
1,2-1,8 (m, 6H, CH2_1/2 og 3 av butyl), 2,86 (s, 6H, NCH3), 3,1 (m, 3H, CH2N og H-4), 3,29 (dd, <J>h6,H5=2'54 Hz' Jh6/H1=6,35 Hz, 1H, H-6), 4,08 (ABq, ^==14,9 Hz, A\)= 24,2 Hz, 2H, SCH2), 4,08 (overlapping med SCH2, 1H, H- 5), 4,22 (m, 1H, CH3CHO), 7,45 (dd, J=4,9 Hz og J=7,9 Hz, 1H, H-5 av pyridin), 7,9 (m, 1H, H-4 av pyridin), 8,44 (dd, J=l,5 Hz, og J=4,9 Hz, 1H, H-6 av pyridin) og 8,53 ppm (d, J=l,8 Hz, 1H, H-2 av pyridin).
Eksempel 70
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- N- formimidovlaminobutvl)- 6- r(!' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- r( 1- metvl- l, 2. 3- triazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo T3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,296 g (0,75 mmol) (4R, 5S, 6S)-4-(4*1-aminobuty1)-6-[(1' R) -1'hydroksyetyl]-3-[(1-mety1-1,2,3-triazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre [fremstilt i eksempel 62] i 30 ml vann ble behandlet ved 0-5°C med 0,65 g (3,8 mmol) benzylformi-midat, hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH. Etter 30 minutter ble 25 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt, og den resulterende blanding ble vasket med 20 ml EtOAc. Den vandige fase ble holdt under vakuum til fjernelse av spor av organisk løsnings-middel og deretter kromatografert på 3,5 x 14 cm reversfasesilicagel "u-Bondapak C^g". Søylen ble først eluert med en gradient av 0-8% CH3CN i 0,01M pH 7 fosfatbuffer. De UV- aktive fraksjoner ble konsentrert i våkum (T <15°C) og kromatografert igjen på samme søyle under anvendelse av vann i stedet for buffer. Lyofili-sering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,21 g (66%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 98% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 8% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 304 nm, retensjonstid 6,34 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks<:> 302 nm (8.586).
IR (KBr) Uma]cs: 1755 (C=0 av Ii-lactam), 1715 (C=N av formimidoyl) og 1590 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,30 (d, J=6,36 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 3,1-3,5 (m, 4H, H-4, H-6 og CH2-4 av butyl overlapping), 4,08 (s, 3H, CH3-I av triazol), 4,09 (ABq, ^=14,85 Hz, Au=31,9 Hz, 2H, SCH2) , 4,15 (overlapping SCH2 og CH3, 1H, H-5), 4,27 (m, 1H, CH3CHO), 7,8 (bred S, 1H, CH=NH) og 7,87 ppm (s, 1H, H-5 av triazol).
Eksempel 71
( 4R, 5S, 6S) - 4-( 4"- aminobutvl) - 6- f ( l' R)-!'-hvdroksvetvll- 3- r( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsyre
A. Allvl-( 4R, 55, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvl1- 3- f( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 11,8 mmol (fremstilt ved ringslutning av 4,47 g, 11,8 mmol av diazo-forstadiet, som i eksempel 45) allyl-(4R,5R,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydrok-syetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 50 ml tørr acetonitril ble avkjølt til 0-5°C og behand-let med 2,57 ml (12,4 mmol) difenylklorf osf at og 2,16 ml (12,4 mmol) N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Etter 1 time ble 2,16 ml (12,4 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt etterfulgt av 1,57 ml (12,4 mmol) klortrimetylsilan dråpevis i løpet av 5 minutter. Deretter ble ytterligere 2,16 ml (12,4 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 1,84 g (23,5 mmol) 2-mercapto-etanol tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket med kaldt vann, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som deretter ble fortynnet med 100 ml tetrahydrofuran og 20 ml vann og behandlet med 2 ml eddikesyre ved 20°C i 2 timer. Løsningen ble atter fortynnet med etylacetat, vasket med mettet NaHC03, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer og saltvann. Etter tørring over vannfri MgS04 ga avdampning av løsningsmidlet en olje, som ble kromatografert på 4,5 x 10 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og etylacetat (1:1) ga 2,56 g (52%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Umaks: 2100 (N3) , 1765 (C = 0 av 15-lactam) og 1705 cm<-1> (C = 0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDC13) 8: 1,38 (d, J=6,29 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2"1, 2 og 3 av butyl), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2CH2OH), 3,18 (dd, <J>h6,H5=2'60 Hz'<J>H6,H1=7'18 Hz'1H' H-6), 3,3 (m, 3H, CH2N3 og H'-4 overlapping), 3,82 (t, J=6,0 Hz, 2H, SC<H>oCHoOH), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3<C>HO overlapping), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. ( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- f( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 2,56 g (6,2 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4n<->az idobuty1)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl) tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 60 ml tørt etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,15 g tetrakis(trifenylfosfin)palla-dium [0] og 1,25 g (6,9 mmol) kalium-2-etylheksanoat. Etter 2 timer ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 3 x 50 ml kaldt vann og den kombinerte vandige fase ble kromatografert på 3 x 13 cm (eluering 5% CH3CN-H2O) reversf asesilicagel "(i-Bondapak C^ q" . 1,4 g kaliumsalt-mellomproduktet ble deretter hydrogenert ved 0-5°C i 200 ml vann over 2,0 g 5% palladium- på-aluminiumoksid under 45 psi hydrogen i 45 minutter. Etter tilsetning av 60 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer ble katalysatoren frafil-trert, og filtratet ble kromatografert på 3 x 13 cm reversfasesilicagel "ji-Bondapak C^g". Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i' vann ga 0, 689 g (32%) av tittelf orbindelsen som et hvitt, amorft faststoff etter frysetørring: [a]<2>)<4> + 74,0° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering med pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, retensjonstid 9,68 min.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 304 nm (7.616).
IR (KBr) Dmaks: 1750(C = 0 av Ji-lactam) og 1585 cm"<1> (C = 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20): 1,33 (d, J=6,38 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,8-3,1 (m, 2H, SC<H>2CH20H), 3,02 (t, J=7,6 Hz, 2H, CH2<N>H2), 3,36 (m, 2H, H-4 og H-6 overlapping), 3,77 (t, J=6,2 Hz, 2H, SCH2CH2OH), 4,22 (dd, JH5,H6=2'43 Hz' 1H/ H~5) og 4,26 ppm (m, overlapping med H-5, 1H, CH3CHO).
Eksempel 72
( 4R. 5S, 6S) - 3- f ( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 4"- guanidinobutvl) -6-r ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f3. 2, 01hept- 2-en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0, 300 g (0,85 mmol) (4R, 5S, 6S)-4-(4"-aminobutyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre [fremstilt i eksempel 17] i 20 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,0 med IM NaOH og deretter behandlet med 0,35 g (2,8 mmol) aminoiminometansulfonsyre [K. Kim et al., Tetrahedron Lett., 29, 3183 (1988)] tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter. pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH under tilsett-ningen og i 2 timer. Deretter ble 10 ml pH 6,0 0,2M fosfatbuffer tilsatt, og løsningen ble kromatografert på 2,5 x 14 cm reversf asesilicagel "fi-Bondapak C^g". Eluering med en. gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 0,257 (77%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter frysetørring: [a]<22> + 45,5° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 99% på "(i-Bondapak C18", 3, 9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 11,1 min.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (8.676).
IR (KBr) Dmaks: 2250 (svak CN), 1755 (C=0 av B-lactam), 1665 (C=N av guanidyl) og 1685 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,32 (d, J=6,39 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,8-3,3 (m, 4H, SCH2CH2CN), 3,22 (t, J=6,5 Hz, CH2NH), 3,36 (dd, JR6 R5=2,34 Hz, <J>h6,H1=6'22 Hz' 1H' h-6>' 3'4 (overlapping med H-6, 1H, H-
4) og 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapning). Eksempel 73 ( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 2"- guanidinoetvl)- 6-r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- a2abicvclor3, 2, 01hept- 2-en- 2- karboksylsvre
En løsning av 0,185 g (0,57 mmol) (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2- karboksylsyre [fremstilt i eksempel 36] i 20 ml kaldt (0-5°C) vann ble behandlet med 0,35 g (2,8 mmol) aminoiminometansulfonsyre [K. Kim et al, Tetrahedron Lett, 29, 3183 (1988)] tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter, mens pH ble holdt på 8-8,5 med IM NaOH. pH ble holdt mellom 8 og 8,5 i 1 time og reaksjonen ble der-etter stanset ved tilsettning av 5 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer. Løsningen ble kromatogra-fert på 2,5 x 14 cm reversf asesilicagel "u-Bondapak C-^g" under eluering med en gradient av 0-2% acetonitril i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,035 g (17%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter frysetørring.
Renhet ved HPLC: 99% på "|i-Bondapak C18", 3,9 mm/30 cm, eluering 2% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 5,98 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 300 nm (7.483).
IR (KBr) Vmaks: 2255 (svak CN) , 1755 (C=0 av Ji-lactam), 1660 (C=N av guanidin) og 1590 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,34 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO),
1,7-2,3 (m, 2H, CH2~1 av guanidinoetyl), 2,7-3,4 (m, 7H, SCH2CH2CN, CH2-2 av guanidinoetyl og H-4), 3,45 (dd, JH6/H5=2,69 Hz, Jh6,H1 = 6'8 Hz' 1H'h" 6> °9 4'3 PPm <m' 2H/ H" 5 og CH3CHO overlapping).
Eksempel 7 4
( 4R, 5S, 6S)- 4-( N- formimidovl- 4"- aminobutvl)- 6- r( 1' R) - 1'- hvdroksvetvll- 3- f( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo \ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,205 g (0,59 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(l'R)-1'hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksy-etyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylsyre i 20 ml vann ved 0-5°C ble innstilt til pH 8,5 med IM NaOH. Deretter ble 0,39 g (2,27 mmol) benzylformimidat, hydroklorid tilsatt i små porsjoner (10 minutter), mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH. Etter 15 minutter ble reaksjonsblandingen stanset ved tilsettning av 10 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og vasket med 20 ml etylacetat. Den vandige fase ble deretter kromatografert på 2 x 14 cm reversfasesilicagel "u-Bondapak C18" under eluering med en gradient av 0-2% acetonitril i 0,02M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, konsentrert til 50 ml og avsaltet på samme søyle under anvendelse av vann i stedet for buffer. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjo-ner ga 0,154 g (69%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff: [a]<24> + 67,0° (c 1,0, H20). Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 2% Cf^CN-I^O/ pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 10,2 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 304 nm (10.105).
IR (KBr) Vmaks: 1750 (C = 0 av IJ-lactam), 1715 (C = N av formimidoyl) og 1590 cm<-1> (C = 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,8-3,1 (m, 2H, SCHoCHoOH), 3,3-3,5 (m, 4H, H-4, H-6 og CH2NH overlapping), 3,77 (t, J=6,21 Hz, 2H, SCH2CH2OH), 4,21 (dd, Jh5,H6=2'25 Hz' 1H, H-5), 4,26 (m overlapping med H-5, 1H, CH3CHO), og 7,78 ppm (bred s, 1H, CH=NH).
Eksempel 75
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- 1' hvdroksvetvll- 3-f( l- N- metvlimidazol- 5- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- f( V R)- 1' - hvdroksvetvll - 3- f( l- N- metylimidazoI- 5- yl) metvltiol - 7-okso- l- azabicvclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 5,28 mmol (fremstilt ved ringslutning av 2,0 g, 5,28 mmol av diazo-forstadiet som i eksempel 45) allyl-(4R, 5R, 6S) -4- (4"-azidobutyl) -6- [ (1' R) -1' -hydroksyetyl] -3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan2-karboksylat i 40 ml tørr CH3CN ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,2 ml (5,8 mmol) difenylklorfosfat og 1,0 ml (5,8 mmol) N,N-diiso-propyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal, av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 40 minutter. Ytterligere 1,84 ml (10,6 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt, etterfulgt av 1,35 g (10,5 mmol) 5-mercaptometyl-l-N-metylimidazol i 3 ml tørr CH3CN. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med etylacetat, vasket med vann, mettet NaHCC^, saltvann og tørket (MgS04). Etter avdampning av løsningsmidlet ble resten kromatografert på 4,5 x 10 cm silicagel under eluering med en blanding av etylacetat, CH3CN og aceton (8:1:1 til 4:3:3). Inndampning av de UV-aktive fraksjoner ga 1,86 g (76%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Umaks: 2100 (N3) , 1770 (C=0 av Ii-lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,38 (d, J=6,25 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,4-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 3,17 (dd, <J>H5,H6=2'72 Hz'<J>H3,H4=7'36 Hz' 1H' H_6>' 3'2 <m' 1H' H_4> ' 3,32 (t, J=6,0 Hz, 2H, CH2<N>3), 3,68 (s, 3H, CH3-I av imidazol), 4,02 (ABq, JAfi=14,3 Hz, A\>=33,0 Hz, 2H, SCH2) , 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 6,93 (s, 1H, H-4 av imidazol), og 7,42 ppm (s, 1H, H-2 av imidazol).
B. ( 4R. 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- l'-hvdroksvetvll - 3- f( l- N- metvlimidazol- 5- vl) metvltiol-7-okso- l- azabicvclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
En løsning av 1,86 g (4,04 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-4-(4M-azidobuty1)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(1-N-metyl-imidazol-5-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-
karboksylat i 75 ml etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,075 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 8,9 ml (4,45 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-
etylheksanoat i etylacetat. Etter 45 minutter ble
reaksjonsblandingen ekstrahert med 2 x 75 ml vann og den kombinerte vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Den vandige løsning ble deretter hydrogenert ved 0-5°C over 2,1 g 5% 999palladium-på-aluminiumoksid under 45 psi hydrogen i 1 time. Deretter ble 30 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og katalysatoren ble frafiltrert. Filtratet ble kromato-grafert to ganger på 3,5 x
11 cm reversfasesilicagel "u-Bondapak C^g" under eluering med en gradient av aceto-nitril (0-8%) i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,528 g (33%) av tittelforbindelsen
som et hvitt, amorft pulver: [0C]D<22> -22,4° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 97,3% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30
cm, eluering 8% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 5,88 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks:'302 nm (7.569).
IR (KBr) Dmaks: 1755 (C=0 av ii-lactam) og 1585 cm"<1> (C=0
av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,31 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,8 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,99 (t, J=7,6 Hz, 2H, C<H>2N<H>2), 3,22 (bred t, 1H, H-4), 3,33 (dd, JH6,H5=2'56 Hz' JH6/H1=6,34 Hz, 1H, H-6), 3,71 (s, 3H, CH3-I av imidazol), 4,07 (ABq, ^=14,8 Hz, Al>=38, 45 Hz, 2H, SCH2) , 4,13 (dd overlapping med SCH2, Jh5,h6=2'56 Hz' 1H' h"5)' 4'24 (m' 1H' CH3CHO), 6,94 (s, 1H, H-4 av imidazol) og 7,66 ppm (s, 1H, H-2 av imidazol).
Eksempel 76
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3- r( 2- karbamovletvl) tiol- 6-r( l ' R )- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo[ 3 . 2 . Olhept- 2-en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- r( 2-karbamovletvl) tiol- 6- r( l7 R)- 1 '- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH bad) løsning av 2,00 g (5,49 mmol) allyl (2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] - 3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2- karboksylat fersk fremstilt fra (31, 4R)-3-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 50 ml CH3CN ble behandlet dråpevis med 1,3 ml (6,0 mmol) difenylklorfosfat, 1,1 ml (6,0 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin og et spor av 10 mg 4-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 1 time og behandlet med en løsning av 1,16 g (11,0 mmol) 2-karb-amoyletantiol i 5 ml DMF og 2,0 ml (11 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 20 timer (kaldt rom). Blandingen ble behandlet en gang til med 580 mg (5,5 mmol) tiol og N,N-diisopropyl-etylamin og ble omrørt i 72 timer. Den ble fortynnet med 200 ml etylacetat, vasket med 2 x 100 ml vann, 1 x 100 ml IM vandig NaHC03, 3 x 100 ml vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten (2,6 g) ble ledet gjennom en 75 g (etylacetat -» aceton) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 0,84 g (36%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) <U>maks: 3680' 3600, 3520, 3410 (OH og NH2), 2100 (N3), 1775, 1710, 1690 og 1675 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,03-5,89 (1H, m vinylisk H), 5,7, 5,6 (2H, bd, NH2) , 5,22 (2H, m, vinylisk-H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk-CH2), 4,266 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=7,5 Hz, H-5), 3,6-3,27 (3H, m, CH2N3 og H-4), 3,251 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,2 Hz, H-6), 3,23-2,95 (2H, m, SCH2), 2,6- 2,45 (2H, m, CH2C0N), 2,25 (1H, bs, OH) , 1,95-1,5 (4H, m, CH2-CH2~4) og 1,373 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
B. ( 4R, 5S,6S)-4-( 3"- aminopropvl)- 3-\( 2- karbamovletvl) tiol- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2-en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 0,84 g (2,0 mmol) allyl-(4R, 5S_, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3- [ (2-karbamoyletyl) tio] -6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml CH2C12 ble behandlet med Pd(PPh3)4 og dråpevis med en 0,5M løsning av natrium-etyl-2-heksanoat i 4,2 ml (2,1 mmol) etylacetat. Blandingen ble omrørt i 45 minutter, deretter fortynnet med 75 ml etyl-acetat og ekstrahert med iskaldt 1 x 50 ml og 2 x 25 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og rystet ved 5°C (isbad) ved 45-50 psi hydrogen i 90 minutter i en Parr hydrogenator under anvendelse av 800 g 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. pH av løsningen ble innstilt til 6,9 med en IM vandig KH2P04-løsning. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og den vandige fase ble ledet gjennom en 160 g (H20 —» 4% CH3CN/H20) "|i-Bondapak Cig" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 340 mg (48%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 94,7% (304 nm, HPLC).
UV (H20) Xmaks: 302 (e 9260).
IR (Nujol) Vmaks<:> 3600-3100 (OH, NH2), 1750-1665 og 1600 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,35-4,21 (1H, m, H-l'), 4,239 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=5,3 Hz, H-5), 3,45-3,36 (1H, m, H-4), 3,385 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 3,2-2,8 (4H, m, CH2N og SCH2), 2,63-2,55 (2H, m, CH2C0), 2,0-1,45 (4H, m, (CH2)2-4) og 1,331 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 77
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- N- formimidovlaminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3-[( l- N- metvlimidazol- 5- vl) metyltio]- 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
En løsning av 0,269 g (0,68 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[ (1'R)-1'hydroksyetyl]-3-[(l-N-metylimid-azol-5-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 30 ml vann ved 0-5°C ble innstilt til pH 8,5 med IM NaOH. Deretter ble benzylform-imidat, 0,60 g (3,49 mmol) hydroklorid tilsatt i små porsjoner, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH. Etter 30 minutter ble reaksjonen stanset ved tilsetning av 25 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og vasket med etylacetat. Den vandige fase ble deretter kromatografert på 3,5 x 12 cm reversfase-silicagel under eluering med en gradient av 0-8% acetonitril i 0,01M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, konsentrert og avsaltet på samme søyle under eluering med vann og acetonitril. Lyofilise-ring av de UV-aktive fraksjoner ga 0,180 g (63%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver: [a]22-23,l° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 97,6% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 8% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 9,45 min.
IR (KBr) Dmaks: 1750 (C=0 av 15-lactam) , 1715 (C=N av formimidoyl) og 1590 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,30 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,8 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 3,2-3,5 (m, 4H, H-4,
H-6 og CH2N), 3,71 (s, 3H, CH3-I av imidazol), 4,08 (ABq, JAB=14,68 Hz, A\)=37,4 Hz, 2H, SCH2), 4,14 (dd overlapping med SCH2, Jh5,6=2'43 Hz' JH5,H4=9'38 Hz' 1H' H~5)' 4'24 (m' 1H' CH3CHO), 6,93 (s, 1H, H-4 av imidazol), 7,62 (s, 1H, H-2 av imidazol) og 7,79 ppm (s, 1H, CH=NH).
Eksempel 78
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- auanidinobutvl)- 6- r ( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 3-\( pyridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksylsvre
En løsning av 0,134 g (0,34 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1'hydroksyetyl]-3-[(pyridin-4-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylsyre i 15 ml kaldt vann (pH 6,4) ble innstilt til pH 8,0 med IM NaOH. Deretter ble 0,170 g (1,36 mmol)
aminoiminometansulfonsyre [K. Kim et al., Tet. Lett., 29, 3183
(1988) ] tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter, mens pH ble holdt ved 8 med IM NaOH. Ytterligere tre porsjoner 3 x
0,050 g aminoiminometansulfonsyre ble tilsatt med 30 minutters interval og den resulterende blanding (noe uløselig materiale) ble omrørt i ialt 3 timer ved 0-5°C. pH ble holdt ved 8 med IM NaOH. Deretter ble 15 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og den resul-terende homogene løsning ble kromatografert på reversfase-silicagel 2,5 x 14 cm "|i-Bondapak C^g". Eluering med en gradient av 0-10% acetonitril i vann ga 0,103 g (69%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter frysetørking. Dette lyofiliserté materiale var bare noe løselig i vann.
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18<n>, 3,9 mm x 30 cm, eluering 10% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1,5 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjons-tid 7,47 min.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) Umaks: 262 (5.360) og 304 nm (8.765).
IR (KBr) umaks: 1752 (C=0 av fl-lactam), 1665 (C=N av guanidin), 1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,27 (d, J=6,33 Hz, 3H, CH3CHO), 1,1-1,7 (m, 6H, CH2-1,2,3 av butyl), 3,1 (m, 1H, H-4), 3,15 (t, J=6,4 Hz, 2H, CH2N), 3,26 (dd, JH6,H5=2'45 Hz' JH6,H1<=>6'06 Hz, 1H, H-6), 4,05 (ABq, ^=14,76 Hz, A\)=22, 9 Hz, 2H, SCH2) , 4,05 (overlapping med SCH2, 1H, H- 5), 4,21 (m, 1H, CH3CHO), 7,47 (d, J=6,2 Hz, 2H, H-3 av pyridin) og 8,47 ppm (d, J=6,2 Hz, 2H, H-2 av pyridin).
Eksempel 7 9
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 6- r( l' R)- l'-hydroksvetvll- 3- f( l- N- metvlimidazol- 5- vl)- metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 65)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- r ( l' R) - 1'-hydroksvetvll- 3- T( l- N- metvlimidazol- 5- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 5 mmol (fremstilt ved ringslutning av 1,82 g, 5 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,6S)-4-(3"-azidopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3, 7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i tørt 75 ml CH3CN ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,14 ml (5,5 mmol) difenylklorfosfat og 0,96 ml (5,5 mmol) N,N-diiso-propyletylamin. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylamino-pyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. En løsning av 1 g (7,5 mmol) 5-mercaptometyl-lN-metylimidazol i tørt 1 ml CH3CN ble tilsatt, etterfulgt av 1,3 ml (7,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen fortynnet med 150 ml EtOAc, vasket med vann, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Etter avdampning av løsningsmidlet ble resten kromatografert på 3,5 x 6,5 cm silicagel under eluering med en gradient av CH3CN i EtOAc (25:75 —» 100:0), deretter aceton. Fraksjon-er, som indeholdt den ønskede forbindelse, ble kombinert og konsentrert under vakuum, hvorved det ble oppnådd 1,29 g (58%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) "umaks: 2100 (N3) , 1775 (C=0 av 15-lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,38 (d, J=6,24 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 3,23 (dd, <J>H5/H6=2,69 Hz, <J>h3,H4=7'73 Hz' 1H' h~6)' 3»3-3,4 (m, 3H, H-4 og C<H>2-N3 overlapping), 3,70 (s, 3H, CH3-I av imidazol), 4,05 (ABq, 2H, SCH2), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 6,94 (s, 1H, H-4 av imidazol), og 7,45 ppm (s, 1H, H-2 av imidazol).
B. ( 4R. 5S. 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 6- r ( l' R)-!'-hydroksvetvll- 3- T( l- N- metvlimidazol- 5- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 1,25 g (2,8 mmol) allyl- (4R, 5S, 6S) -4-(311-azidopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(1-N-metyl-imidazol-5-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 35 ml etylacetat ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 0,275 g tetrakis(trifenyl-fosfin)palladium
[0] og 0,450 g natrium-2-etylheksanoat. Det kalde bad ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 22°C i 1 time. Deretter ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 3 x 60 ml vann og den kombinerte vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Den vandige løsning ble deretter hydroge-nert ved 0-5°C over 1,25 g 5% palladium-på-aluminiumoksid under 50 psi hydrogen i 3 timer. Katalysatoren ble frafil-trert, pH innstilt til 6,2 med 2N HC1. Det resulterende filtrat ble konsentrert til ca. 50 ml og kromatografert to ganger på 3,5 x 14 cm reversfasesilicagel "u-Bondapak C^g" under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann. Lyofilisering av rene fraksjoner (utprøvet ved reversfase-TLC) ga 0,39 g (38%) av tittelforbindelsen som et off-white, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 97,8% på "u,-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering med 8% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, reten-sjonstid 5,00 min.
UV (H20) Xmaks: 300 nm (7396).
IR (KBr) Dmaks: 1755 (C=0 av J5-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0
av karboksylat).
■'■H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,31 (d, J=6,36 Hz, 3H, CHqCHO) , 1,3-1,9 (m, 3H, CH2-1,2 av propyl) , 2,99 (t, J=7,15, 2H, CH2NH2), 3,25 (bredt, 1H, H-4), 3,37 (dd, <J>h6,H5=2'66' JH6,H1<=> 6'46 Hz' 1H' H-6>/ 3'72 (S/ 3H' CH3_1 av imidazol), 4,08 (ABq, 2H, SCH2), 4,15-4,3 (m overlapping med SCH2, 2H, H-5 og CH3CHO), 6,96 (s, 1H, H-4 av imidazol) og 7,67 ppm (s, 1H, H-2 av imidazol).
Eksempel 80
( 4R, 5S, 6S)- 4- f3"-( N- formimidovl) aminopropvll- 6- f( l' R)-1'-hvdroksvetvll- 3- f( l- N- metvlimidazol- 5- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 300 mg (0,789 mmol) (4R,5S, 6S)-4-(<3>"-aminopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(1-N-metylimid-azol-5-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 40 ml vann ble avkjølt i et isbad og løsningens pH ble innstilt til 8 med IN vandig NaOH-løs-ning. Til blandingen ble porsjonsvis tilsatt benzylform-imidat, 5 ekv. (3,94 mmol, 0,68 g) hydroklorid, idet pH ble holdt ved 8-8,5 med IN vandig NaOH-løsning. Reaksjons-blandingen ble omrørt i 15 minutter etter avslutning av tilsetning, deretter ble pH innstilt til 6,5 med IN vandig HCl-løsning og vasket med 2 x 30 ml etylacetat. Den vandige fase ble konsentrert under vakuum uten oppvarming og renset på 3 x 5 x 13 cm reversf asesilicagel ("u-Bonda-pak C^", eluering med 0,01M pH 6,0 fosfatbuffer og en gradient av 0-3% CH3CN). De rene fraksjoner ble lyofili-sert, gjenrenset på reversfasesøylen for å fjerne salt (vann -» 5% CH3CN/H2O), hvorved det ble oppnådd av 0,115 g (36%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 99,2% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, strømningshastighet 1 ml/min, eluering 8% CH3CN-KH2PO4 0,01M pH 7,4, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 6,30 min.
UV (<H>20) Xinaks: 300 nm (6=7853) .
IR (KBr) Dmaks: 1755 (C=0 av li-lactam), 1715 (C=N) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat). •'■H-NMR (200 MHz, D20) 6: 1,30 (d, J=6,37 Hz, CH3) , 1,3-1,72 (4H, m, CH2CH2), 3,19-3,40 (3H, m, CH2N og H-6 overlapping), 3,71 (3H, s, N-CH3), 4,08 (ABq, J=14,87 Hz, Au=45,5 Hz, 2H, SCH2), 4,2 (m, 1H, CH3CHO), 6,95 (s, 1H, H-4 av imidazol), 7,65 (s, 1H, H-2 av imidazol og 7,81 (s, 1H,
CH=NH).
Eksempel 81
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 4"- N, N- dimetvlaminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- f( pvridin- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,176 g (0,45 mmol) (4R,5S, 6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1* hydroksyetyl]-3-[(pyridin-4-yl) - metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylsyre i 8 ml vann ble behandlet ved 0-5°C med 0,2 ml (-2,5 mmol) 37% formaldehyd, 0,052 ml (0,9 mmol) eddik-syre og 0,056 g (0,9 mmol) natriumcyanoborhydrid. Slutt-blandingen har pH 4,2. Avslutning av reaksjonen ble overvåket ved HPLC. I løpet av 5 timer ble 6 x 0,050 g natriumcyanoborhydrid og 2 x 0,1 ml formaldehyd tilsatt, mens pH ble holdt ved ved 4,5-5 med eddiksyre. Reaksjonen ble deretter stanset ved tilsetning av 15 ml 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer og løsningens pH ble innstilt til 6,5 med IM NaOH. Ved HPLC var produktet en 74:20 blanding av dimetyl- og N-metyl-N-cyanometylderivater. Løsningen ble kromato-grafert to ganger på 2,5 x 18 cm reversfasesilicagel "u-Bondapak C " under anvendelse av en gradient av 0-10%
18
acetonitril i vann.
Lyofilisering av de første fraksjoner ga 0,021 g av N-metyl-N-cyanometylforbindelsen.
De følgende fraksjoner ga 0,104 g (55%) av tittel-forbindelsen som et hvitt, amorft pulver, [a]<2>)<2> +4,0° (c 0,5, vann) .
Renhet ved HPLC: 95% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 10% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, retensjonstid 12,0 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 262 (6.032) og 304 nm (9.937).
IR (KBr) Umaks: 1758 (C=0 av 15-lactam) og 1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,1-1,8 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 1,28 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 2,85 (s, 6H, NCH3), 2,9-3,2 (m, 3H, H-4 og CH2N), 3,27 (dd, Jh6,H5=2'54 Hz' JH6/H1 = 6,34 Hz, 1H, H-6), 4,06 (ABq, ^=14,9 Hz, Au=23,4 Hz, 2H, SCH2), 4,08 (overlapping med SCH2, 1H, H- 5), 4,21 (m, 1H, CH3CH0), 7,49 (~d, 2H, H-3 av pyridin) og 8,49 ppm (~d, 2H, H-2 av pyridin).
Eksempel 82
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 6- r(!' R)- 1' hvdroksv- etvll-3- f( 1- metvl- l, 2, 3- triazol- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo T3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 6- f(!' R)- 1' - hvdroksvetvll- 3- f( 1- metvl- l, 2. 3- triazol- 4- vl)-metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo- r 3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 1,7 g (4,7 mmol) allyl-(2R, 4R, 5R, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6-[ (l'R) -1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2- karboksylat fersk fremstilt fra (3S,4R)—3—[(1'R)—1'—hydroksyetyl]—4—[(1"R)—1"—
(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 50 ml CH3CN ble behandlet med 1,1 ml (5 mmol) difenylklorfosfat, 0,92 ml (5,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin og et spor av 5 mg 4-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 1 time og enolfosfatet ble behandlet dråpevis med 1,21 g (9,40 mmol) 4-mercaptometyl-l-metyl-l,2,3-
triazol og 1,84 ml (10,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Etter en omrørings-periode på 20 timer ved 5°C (kaldt rom) ble blandingen fortynnet med 200 ml etylacetat, vasket med 2 x 100 ml kaldt IM vandig NaHC03, 2 x 100 ml vann, 1 x 100 ml IM vandig NaHS03, 2 x 100 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten (3 g) ble ledet gjennom en 150 g (1/1 heksan/etylacetat ->etylacetat) hurtigsilicagelpute, hvorved det ble oppnådd 1,0 g (47%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 3680, 3600, 3400 (OH), 2100 (N3), 1775 og 1710 cm-<1> (C=0).
<X>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 7,489 (1H, s, aromatisk-H), 6,02-5,87 (1H, m, vinylisk-H), 5,47-5,20 (2H, m, vinylisk-H), 4,85-4,59 (2H, m, allylisk CH2), 4,274, 4,199, 3,961, 3,886 (2H, ABq, J=15,1 Hz, CH2-aromatisk), 4,25-4,12 (1H, m, H-l'), 4,159 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,6 Hz, H- 5), 4,071 (3H, s, N-Me), 3,64-3,53 (1H, m, H-4), 3,49-3,36 (2H, m, CH2-N3), 3,228 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,3 Hz, H-6), 2,3 (1H, bs, OH) , 2,03-1,5 (4H, m, (C<H>2)2-4) og 1,357 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
B. ( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksv- etvll-3- r( 1- metvl- l, 2, 3- triazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo- r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 1,0 g (2,2 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3-[ (1-metyl-1,2,3-triazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0] hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml CH2C12 ble behandlet med 100 mg Pd(PPh3)4 og dråpevis med en 0,5M løsning av natriumetyl-2-heksanoat i 4,6 ml (2,3 mmol) etylacetat. Blandingen ble omrørt i 1,5 timer, fortynnet med 150 ml etylacetat og ekstrahert med 1 x 75 ml, 2 x 30 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og omrystet ved 5°C (isbad) i en Parr hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time under anvendelse av 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. Ytterligere 1 g katalysator ble deretter tilsatt, og blandingen ble atter omrystet i ytterligere 1,5 time, hvoretter katalysatoren ble fjernet ved filtrering. Den vandige porsjon ble ledet gjennom en 200 g (vann -> 5% CH3CN/H20) "u-Bondapak c18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 500 mg (59%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 97,2% (304 nm, HPLC).
UV (H20) Xmaks<:> 302 (e 8250).
IR (Nujol) Umaks: 3600-3100 (OH), 1755 og 1585 cm<-1 >(C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 7,866 (1H, s, aromatisk H), 4,30-4,18 (1H, m, H-l'), 4,216, 4, 143, 4, 034, 3, 959 (2H, ABq, J=14,7 Hz, CH2-aromatisk), 4,085 (3H, s, N-CH3), 4,10-4,08 (1H, m, skjult H-5), 3,356 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,33-3,20 (1H, m, H-4), 3, 07-3, 00 (2H, m, CH2N3) , 1,95-1,40 (4H, m, (C<H>2)2-4) og 1,312 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 83
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- acetamidoetvl) tio1- 4-( 3"-aminopropyl)- 6- r( 1* R)- 1'- hvdroksvetvl1- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
Tittelforbindelsen ble oppnådd fra den resterende kontaminering av 2-karbamoyletylmercaptan med N-acetyl-cysteamin i reaksjonen utført i eksempel 77 og ble isolert på vanlig måte. Tittelforbindelsen ble oppnådd som et lyofilisert pulver.
Renhet: 95% (304 nm, HPLC).
UV (H20) XmaJcs<:> 302 (e = 7810) .
IR (Nujol) Dmak.s: 3600-3100 (OH, NH) , 1755, 1650 og 1600 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,30-4,20 (1H, m, H-l'), 4,230 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,5-3,3 (4H, m, H-6, H-4 og CH2-NAc), 3,1-2,95 (3H, SHCH og CH2N) , 1,9-1,7 (1H, m, SHCH), 1, 999 (3H, s, NAc) , 1,9-1,5 (4H, m, (CH2)2-4) og 1,332 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 84
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- karbamovletvl) tiol- 4- r3"-( N-formimidovl)- aminopropyl1- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 7-okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald løsning (isbad) av 180 mg (0,500 mmol)
(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-aminopropyl) -3- [ (2-karbamoyletyl) tio] -6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i en 50 ml 0,05M vandig pH 7,0 vandig fosfatbuffer ble først behandlet med en 0,1N vandig NaOH-løsning (for å øke og bibeholde pH ~8,2) og deretter porsjonsvis med benzylformimidat, 0,87 g (5,0 mmol) hydro-klorid. Blandingen ble omrørt i 20 minutter og pH ble senket til 7,0 med en IM vandig NaH2P04-løsning. Blandin-gen ble ledet gjennom en 3,6 g (H20 -» 4% CH3CN/H20) "ji- Bondapak C18"
søyle, hvorved det ble oppnådd 110 mg (57%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 93,1% (HPLC, 302 nm).
UV (H20) Xjnaks: 302 (e 7550).
IR (Nujol) Umaks<:> 3600-3100 (NH2, OH), 1750, 1665 og 1590 cm"1 (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,34-4,22 (2H, m, H-l' og H-5), 4,225 (del av H-5, d, J=2,6 Hz), 3,49-3,34 (4H, m, CH2N3, H-5 og H-4), 3,351 (del av H6, d, J=2,4 Hz), 3,15-2,85 (1H, 2 sett av m, SCH2), 2,71-2,51 (2H, m, CH2CON), 2,0-1,46 (4H, m, (CH2)2-4) og 1,322 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 85
( 4R. 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvll - 3- r( 1, 2. 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allyl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- f( 1, 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- zabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 5,28 mmol (fremstilt ved ringslutning av 2,0 g, 5,28 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,5R,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat, i tørr 40 ml aceto-nitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,2 ml (5,8 mmol) dif enylklorf osf at og 1,0 ml (5,7 mmol) N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Løsningen ble deretter avkjølt til - 20°C og behandlet med 1,84 ml (10,56 mmol) N,N-diisopropyletylamin, etterfulgt av 1,45 g (10,96 mmol) 4-mercaptometyl-l,2,3-tiadiazol i 5 ml acetonitril. Temperaturen ble langsomt øket til 0°C i løpet av 1 time, og blandingen ble fordelt mellom vann og 400 ml etylacetat. Den organiske fase ble vasket med IM NaHS03, mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdamp-ning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 11 cm silicagel. Eluering med en gradient av etyl-acetat i toluen (8:2 til 1:1) ga 1,95 g (79%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) umaks: 2100 (N3) , 1770 (C=0 av ii-lactam) og 1708 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDC13) 8: 1,38 (d, J=6,28 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2"1,2 og 3 av butyl), 3,18 (dd, JH6 H5=2'70 Rz> JH6,H1=7'21 Hz' 1H' H~6)' 3'34 (t' J=6'1 Hz' 2H, CH2N3), 3,46 (bred t, 1H, H-4), 4,17 (dd, <J>H5,H6=2'70 Hz' JH5 H4=9,7 Hz, 1H, H-5), 4,22 (m, 1H, CH-jCHO) , 4,50 (ABq, JAB=14,95 Hz, A"U=73,5 Hz, 2H, SCH2) , 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), og 8,47 ppm (s, 1H, H-5 av tiadiazol).
B. ( 4R, 5S, 6S) - 4-( 4"- aminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- r( 1, 2. 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo 13 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En opløsning av 1,95 g (4,2 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(1,2, 3-tiadi-azol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabi-cyclo[3,2,0]hept-2-en-2-
karboksylat i 75 ml etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,075 g tetrakis(trifenylfosfin)palla-dium [0] og 9,2 ml (4,6 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 45 minutter ble reaksjonsblandingen
ekstrahert med 2 x 75 ml vann og den kombinerte vandige ekstrakt ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Den vandige fase ble deretter hydrogenert ved 0-5°C over 2,1 g 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45
psi hydrogen i 2 timer. Deretter ble 30 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og katalysatoren ble frafiltrert.
Filtratet ble kromato-grafert på 3,5 x 15 cm
reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^g" under eluering med en gradient av 0-8% acetonitril i vann.
De første oppsamlede fraksjoner ga 0,17 g (4R,5S,6S)-4-(4"-hydroksybutyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-(1, 2, 3-tiadiazol-4-yl)metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat (Na-, K-salt) som et hvitt faststoff etter frysetørking. De etterfølgende fraksjoner ga 0,576 g (34%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft fast-stoff.
Renhet ved HPLC: 97,7% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30
cm, eluering 8% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 0,8 ml/min, retensjonstid 6,75 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 260 (5.470) og 302
nm (9.209).
IR (KBr) UmaJcs: 1755 (C=0 av fl-lactam) og 1585 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,29 (d, J=6,36 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 3,0 (t, J=7,6 Hz, 2H, C<H>2N<H>2), 3,21 (bredt, 1H, H-4), 3,32 (dd, JH6^5=2,45 Hz, JH6,H1 = 6'25 Hz' 1H' H"6)' 4'10 <dd' JH5,H6=2'45 Hz' JH5>H4=9,42 Hz, 1H, H-5), 4,23 (m, 1H, CH3<C>HO), 4,51 (ABq, <J>AB=14,94 Hz, Au=40,2 Hz, 2H, SCH2), og 8,89 ppm (s, 1H, H-5 av tiadiazol).
Eksempel 86
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- N- formimidovlaminobutvl)- 6- Tl' R)- 1' - hvdroksvetvll- 3- r( 1. 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,250 g (0,63 mmol) (4R, 5S, 6S) -4-(411-aminobutyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(1,2,3-tiadiazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 30 ml vann ble behandlet ved 0-5°C med benzylformimidat,0,60 g (3,5 mmol) hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH. Etter 20 minutter ble 25 ml 0,2M pH 6 buffer tilsatt, og blandingen ble vasket med 20 ml etyl-acetat. Den vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel og kromatografert på 3,5 x 15 cm reversf asesilicagel "u-Bondapak C^g". Søylen ble først eluert med en gradient av 0-8% aceto-nitril i en 0,01M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, lyofilisert og igjen kromato-grafert på samme søyle under anvendelse av vann i stedet for buffer. Frysetørking av de UV-aktive fraksjoner ga 0,21 g (78%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff: [a]<22><-><28,>4° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 98% på "u-Bondapak C18, 3,9 mm x 30 cm, eluering 8% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 7,8 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 258 (5.318) og 302 nm (8 .795) .
IR (KBr) Umaks: 1755 (C = 0 av J5-lactam) , 1710 (C = N av formimidoyl) og 1590 cm<-1> (C = 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,29 (d, J=6,39 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 3,2-3,5 (m, 4H, H-6 og CH2-4 av butyl overlapping), 4,10 (dd, <j>h5,H6=2'47Hz' JH5/H4=9,43 Hz, 1H, H-5), 4,23 (m, 1H, CH3CHO), 4,51 (ABq, <J>AB=15'° Hz' Al)=39,4 Hz, 2H, SCH2) , 7,8 (bred S, 1H, CH=NH) , og 8,9 ppm (s, 1H, H-5 av tiadiazol).
Eksempel 87
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 4"- guanidinobutvl)- 6- r( l' R)- l'-hvdroksvetvl]- 3- r( 2- hvdroksvetvl1tiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2 # 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,150 g (0,44 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl)-tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 10 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8 med IM NaOH og deretter behandlet med 0,216 g (1,74 mmol) aminoimino-metan-sulfonsyre tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter. pH ble holdt ved 8-8,5 under tilsetningen og i ytterligere tre timer med IM NaOH. Den kalde reaksjon ble deretter stanset ved tilsetningen av 10 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og deretter kromatografert på 2,5 x 16 cm reversf asesilicagel "ji-Bondapak C^g". Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 0,115 g (68%) av tittelforbindelsen etter lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner.
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 7,19 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) <X>maks: 304 nm (9.530).
IR (KBr) Dmaks: 1750 (C=0 av Ji-lactam) , 1665 (C=N av guanidyl) og 1580 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl) , 2,8-3,1 (m, 2H, SCH2) , 3,22 (t, J=6,5 Hz, 2H, CH2N<H>2), 3,32 (dd, JH6,H5=2'45 Hz' JH6,H1=6'19 Hz' 1H' H"6>' 3'35 (overlapping med H-6, 1H, H-4), 3,77 (t, J=6,3 Hz, 2H, C<H>20H), 4,21 (dd, <J>H5,H6=2'45 Hz' JH5,H4=9'34 Hz' 1H' H~5>'°9 4'27 PPm (m' 1H/ CH3CHO).
Eksempel 88
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- karbamovloksvetvl) tiol- 4- T3"-( N-formidovl) aminopropyll- 6- r 11 ' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo f3, 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald løsning (isbad) av 150 mg (0,40 mmol) (4R, 5S., 6S.)-4-(3"-aminopropyl)-3-[(2-karbamoyloksyetyl)-tio]-6-[(l'R)-1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i en 0,04M pH 7,0 vandig fosfatbuffer ble behandlet med en 0,1N vandig NaOH-løsning (for å innstille og bibeholde pH ved 8,0-8,3) og porsjonsvis med benzylformimidat, 342 mg (2,0 mmol) hydroklorid. Blandingen ble omrørt i 15 minutter og pH ble innstilt til 7,05 med en 0,1N vandig HC1-løsning. Blandingen ble ledet gjennom en 37,5 g (0,02M vandig pH 7,0 fosfatbuffer -» 1% - > 2% -» 3% -» 4% CH3CN/fosfatbuffer) "u-Bondapak C18" revers-fasesøyle. Det lyofiliserte pulver ble atter ledet gjennom samme reversfasesøyle (H2O —> 1% -> 4% CH3CN/H20), hvorved det ble oppnådd 95 mg (59%) av ren tittelforbindelse som et lyofilisert pulver.
Renhet: 98,7% (300 nm, HPLC).
UV (H20) Xjaafcg: 302 (7520).
IR (Nujol) Umaks: 3600-3100 (OH, NH2), 1750, 1710 og 1585 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 7,830, 7,807 (1H, 2s, CH=N), 4,83-4,20 (4H, m, H-l', H4 og CH20); 3,45-3,33 (4H, m, CH2N, H-6, H-4), 3,19-3,05, 2,98-2,85 (2H, 2 sett av m, S-CH2), 1,95-1,51 (4H, 4-CH2CH2) og 1,320 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 89
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminopropvl)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol - 6-r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2-en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidopropvl)- 3- r( 2-cvanoetyl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat, isomer B
En kald (5°C) løsning av 1,48 g (2,6 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4- (2"-azidopropyl)-3-(difenylfosfono)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat [fremstilt som i eksempel 57, trinn H] i 15 ml DMF ble behandlet med 300 mg (3,44 mmol) 3-mercaptopropio-nitril og 445 mg (3,44 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Isbadet fikk lov å brukes opp og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 20°C i ialt 18 timer. Løsningen ble fortynnet med 100 ml etylacetat og vasket tre ganger med kaldt saltvann. Den organiske fase ble tørket (MgS04) og inndam-pet, hvorved det ble oppnådd en blanding, som ble kromatografert på SiC>2 under eluering med dietyleter. Av de to fremstilte isomere produkter A og B ble den mere polere isomer B renset, hvorved det ble oppnådd 212 mg (20,1%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) Umaks: 3600 (-OH), 2115 (-N3), 1778 (fi-lactam), 1710 (-C02~).
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,6-6,10 (5H, allylmønster), 4,21-4,32 (2H, m, H- 1'), 4, 28 (dd, J=2,79, 9, 60 Hz, H-5), 3,51-3,69 (2H, m, CH-N3, H-4), 3,23 og 3,0 (2H, 2m, S-CH2), 3,06 (1H, dd, J=2,72, 8,14 Hz, H-6), 2,72 (2H, m, CH2CN), 1,6-1,9 (2H, m, CH2C-N3), 1,39 (3H, d, J=6,2 Hz, -CH3), 1,38 (3H, d, J=6,38 Hz, -CH3).
B. Natrium- ( 4R, 5S, 6S) - 4- ( 2"- azidopropyl) - 3- r ( 2- cvanoetvl) -
tiol- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll -7-okso-l-azabicvclo f 3, 2,01hept-2-en-2-karboksvlat, isomer B
En kald (5°C) løsning av 210 mg (0,52 mmol, den mere
polere isomer B fra trinn A) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azido-propyl)-3- [(2-cyanoetyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml CH2C12 ble behandlet med 1,14 ml (0,57 mmol) 0,5M natriumetylheksanoat og 60 mg (0,052 mmol) (PPh3)4Pd. Etter omrøring i 30 minutter ved 5°C ble løsningen fortynnet med 40 ml dietyleter og ekstrahert med 3 x 8 ml 0,04M buffer (pH 7,0).
De vandige ekstrakter ble kombinert og kromato-grafert på reversfase Si02 (partisil) under eluering med vann og deretter 5% CH3CN i vann. De relevante fraksjoner ble kombinert og lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 63 mg (31,3%) av tittelforbindelsen.
<1>H-NMR (D20) 8: 4,25-4,35 (2H, m, H-l', H-5), 3,54-3,69
(2H, m, CH- N3, H-4), 3,42 (1H, dd, J=2,72, 6,38 Hz, H-6),
3,19 og 2,99 (2H, 2m, SCH2) , 2, 84-2, 94 (2H, m, CH2CN) , 1,82
(2H, m, C<H>2<->CN3), 1,38 (3H, d, J= 6,52 Hz, -CH3) , 1,34 (3H, d, J=6,47 Hz, -CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminopropvl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6-r ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo- r3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksvlsvre, isomer B
En løsning av 63 mg (0,163 mmol) natrium-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidopropyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat fra trinn B i 20 ml 0,05M fosfatbuffer (pH 7,0) ble hydrogenert ved 5°C i nærvær av 70 mg 30% Pd/"Celite" ved et trykk på 45 psi hydrogen. Etter 60 minutter ble katalysatoren frafiltrert og filtratet kromatografert på reversfase SiC>2 (partisil) under elu-ering med vann og deretter 5% CH3CN i vann. De relevante fraksjoner ble kombinert og lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 12 mg (21,7%) av tittelforbindelsen.
UV (H20) Xmaks: -296 (6200).
IR (Nujol) <D>maks: 1755 (fi-lactam), 1585 cm"<1> (-C02-).
<1>H-NMR (D20) 8: 4,26-4,40 (2H, m, H-5, H-l')/ 3,43-3,69 (3H, m, H- 4, CH-N3, H-6), 2,8-3,16 (4H, m, SCH2CH2CN), 1,8-2,2 (2H, m, C<H>2CN3), 1,43 (3H, d, J=6,62 Hz, -CH3), 1,35 (3H, d, J=6,37 Hz, -CH3).
Eksempel 90
( 4R. 5S, 6S)- 3- r ( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r ( l' R)-!'-hvdroksvetvll- 4- f2"-( imidazol- l- vl) etvll- 7- okso- l-azabicvclo ( 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 6- f(!' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 4- f2"-( imidazol- l-vl) etvll - 7- okso- l- azabicvclo\ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald løsning (tørris-aceton bad) av 370 mg
(0, 770 mmol) allyl- (4R, 5S_, 6S.)-6- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3-[(2-cyanoetyl)tio]-4- (2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2C12 ble behandlet med 462 ul (2,65 mmol) N,N-diisopropyletylamin og dråpevis med 231 ul (1,37 mmol) trifluormetansulfonsyreanhydrid. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og 200 mg (2,94 mmol) imidazol ble tilsatt. Tørrisbadet ble erstattet med et is-MeOH bad, og blandingen ble omrørt i 3,5 timer. Blandingen ble deretter fortynnet med kaldt etylacetat, vasket med 3 x 20 ml vann, 20 ml NaHC03, 2 x 20 ml vann, saltvann og tørket, hvorved det ble oppnådd 350 mg (85%) av tittelforbindelsen som et faststoff.
IR (ren) Umaks: 1775 og 1710 cm"<1>(C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 7,53 (1H, s, aromatisk -H), 7,14 (1H, s, aromatisk H) , 6,99 (1H, s, aromatisk H) , 5,97-5,88 (1H, m, vinylisk-H), 5,48-5,23 (2H, m vinylisk-H), 4,80-4,69 (2H, m, allylisk-CH2), 4,255 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 4,35-4,2 (2H, m, H-l' og HCH- imidazol), 4,0-3,9 (1H, m, HCH-imidazol), 3,173 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,0 Hz, H-6), 3,2-3,1 (1H, m, H-4), 3,7-3,5 (4H, SCH2CH2CN), 2,3-2,15, 2,1- 1,9 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,369 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,912 (9H, s, tert-butyl), 0,133 og 0,127 ppm (6H, 2s, CH3).
B. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 4- f2"-( imidazol- l- vl) etvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 425 mg (0,802 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksy-etyl] - 3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-[2"-(imidazol-l-yl)etyl]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml tetrahydrofuran ble først behandlet med 600 ul (10,5 mmol) eddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i 4,5 ml (4,5 mmol) tetrahydrofuran. Blan-dingen ble omrørt i 30 minutter og ble deretter omsatt ved 5°C (kaldt rom) i 114 timer. Etter denne perioden ble 1 g fast NaHC03 tilsatt, og blandingen ble omrørt i 30 minut-ter (isbad). Den ble overført til tre preparative 2 mm (aceton, Rf = 0,2) TLC plater, hvorved det ble oppnådd 120 mg (36%) av tittelforbindelsen, kontaminert med noe tetrabutylammoniumfluoridsalt.
IR (ren) Vmaks: 3600-3100 (OH), 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 7,70 (1H, s, aromatisk-H), 7,17 (1H, s, aromatisk-H), 7,05 (1H, s, aromatisk H), 6,05-5,99 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,24 (2H, m, vinylisk-H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk-CH2), 4,4-4,2 (4H, m, H-5, H-l' og CH2-imidazol), 3,217 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=9,3 Hz, H-6), 3,05-2,90 (1H, m, H-4), 2,75-2,55 (4H, m, SCH2CH2CN), 2,50-2,25, 2,05-•1,85 (2H, 2 set av m, CH2-4), 1,6 (1H, bs, OH) og 1,447 ppm (3H, d, J=6,1 Hz, CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 3- f ( 2- cvanoetvl) tio)- 6- r ( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 4- f 2"-( imidazol- l- vl) etvll- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
Til en kald (isbad) løsning av 120 mg (0,288 mmol) allyl-(4R,5S., 6S) -3-[ (2-cyanoetyl) tioj-6-[ U'R)-l'-hydroksyetyl]-4-[-2"-(imidazol-l-yl)etyl]-7- okso-1-aza-bicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml CH2C12 ble tilsatt 20 mg Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av 1,0 ml (0,50 mmol) natriumetyl-2-heksanoat i etylacetat. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og isbadet ble fjernet. Etter 30 minutter ble blandingen atter avkjølt og omrøring ble fortsatt i ytterligere 30 minutter. Blandingen ble fortyn-net med 30 ml dietyleter og 5 ml vann. Fasene ble adskilt og den organiske fase ble atter ekstrahert med 2x5 ml vann og 3 x 5 ml 0, 05M vandig pH 7,4 fosfatbuffer. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet gjennom en 20 g (H20 -» 2% CH3CN/H20) reversfase "\L-Bondapak C^g" søyle, hvorved det ble oppnådd et materiale kontaminert med natriumsaltet av etyl-2-heksanoat. Pulve-ret ble ledet gjennom samme søyle, men ble eluert med 0,025M pH 6,0 fosfatbuffer, hvorved det ble oppnådd ren tittelforbindelse og fosfatsaltet. Saltet ble fjernet gjennom samme reversfasesøyle (H20), hvorved det ble opp-nådd 43 mg (39,6%) av ren tittelforbindelse.
Renhet: 99,8% (HPLC 300 nm).
UV (H20) Xmaks: 300 (7800).
IR Umaks: 1750 og 1600 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,00 (1H, s, aromatisk H), 7,36 (1H, s, aromatisk-H), 7,19 (1H, s, aromatisk H), 3,41-3,26 (3H, m, H-5, H-l' og HCH-imidazol), 4,25-4,05 (1H, m, HCH-imidazol), 3,528 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,8 Hz, H6) , 3,25-3,10 (1H, m, H-4), 2,74-2,66 (4H, m, SCH2CH2CN), 2,4-2,25, 2,25-2,0 (2H, 2 sett av m, CH2-4), og 1,383 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 91
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- N, N- dimetvlaminobutvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- f( 2- hvdroksvetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,175 g (0,51 mmol) (4R, 5S, 6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl) tio] -7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylsyre i 8 ml kaldt (0-5°C) vann ble behandlet med 0,2 ml 37% vandig formaldehyd og 52 ul (0,9 mmol) eddiksyre. Deretter ble 5 x 0,050 g (total 4,0 mmol) natriumcyanobor-hydrid tilsatt i små porsjoner i løpet av 1 time (pH ~5). Reaksjonen ble deretter stanset ved tilsetning av 10 ml 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer. HPLC av den rå reaksjonsblanding antydet en blanding av tittelforbindelse og 4-(4"-N-metyl-N-cyanometylaminobutyl)-forbindelse i et 7:3 forhold. Løs-ningen ble deretter kromatografert på 2,5 x 15 cm revers-fasesilicagel ("u-Bondapak C^g") under eluering med en gradient av 0-5% aceto-nitril i 0,01M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombineret, konsentrert og avsaltet på samme søyle under eluering med vann i stedet for buffer. Lyofilisering av de relevante fraksjoner ga 0,077 g (40%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver: [a]<24> + 78,5° (c 1,0, H20).
Renhet ved HPLC: 98% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 6,68 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 304 nm (8.500).
IR (KBr) Uma]cs: 1750 (C=0 av B-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,84 (s, 6H, NCH3), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2) , 3,11 (t, J=8,0 Hz, 2H, CH2N), 3,34 (dd, <J>H<g>^H5=2,40 Hz, Jh6,H1=^'41 Hz' 1H' H-6), 3,35 (overlapping med H-6, 1H, H-4), 3,77 (t, J=6,16 Hz, CH20H), 4,22 (dd, <J>H5,H6=2'40 Hz' JH5,H4=10'1 Hz' 1H' H~5) 0<? 4'26 PPm (m' 1H' CH3CHO).
Eksempel 92
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3-metvltio- 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2-
karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 6- F( l' R) - 1' - hydroksvetvlT- 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclof3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 5,28 mmol (fremstilt fra 2,0 g, 5,28 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,5R,6S)-4-(4"-azido-butyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo-[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 40 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,2 ml (5,79 mmol) difenylklorfosfat og 1,0 ml (5,74 mmol) N,N-diiso-propyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble tilsatt, og blandingen ble omrørt i 40 minutter. Deretter ble 0,92 ml (5,28 mmol) N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av 0,67 ml (5,28 mmol) klortrimetylsilan og blandingen ble omrørt i 5 minutter. Løsningen ble deretter behandlet med 1,84 ml (10,56 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin, og over-skudd av 0,7 g (15 mmol) metant-iol ble kondensert i løs-ningen. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved 0-5°C i 48 timer. Etter tilsetning av 400 ml etylacetat ble den organiske fase vasket suksessivt med vann, IM NaHS03, 1M NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Løsningen ble deretter konsentrert under redusert trykk, og resten ble fortynnet med 20 ml tetrahydrofuran og 5 ml vann og behandlet ved 0-5°C med 2 ml eddiksyre. Den resulterende blanding ble opp-bevart ved 0-5°C i 16 timer. Etter fortynning med etylace-tat og opparbeiding som ovenfor (mettet NaHC03, saltvann, MgS04) ble det oppnådde produkt kromatografert på 5 x 10 cm silicagel. Eluering med en gradient av etylacetat i toluen (2:8 til 3:7) ga 1,38 g (69%) av tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl, film) Umaks: 2100 (N3) , 1770 (C=0 av il-lactam) og 1705 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDC13) 8: 1,39 (d, J=6,26 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4-1,8 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 1,90 (d, J=5,14 Hz, 1H, 0H), 2,36 (s, 3H, SCH3), 3,16 (dd, Jh6,H5=2'58 Hz, <J>h6,H1=7'38 Hz' 1H' h~6)' 3'20 (overlapping med H-6, 1H, H-4), 3,33 (t, J=6,2 Hz, 2H, CH2N3), 4,21 (dd, JH5,H6=2'58 Hz' JH5,H4=9'29 Hz' 1H/ H~5>' 4'25 (overlapping med H-5, 1H, CH3CH0), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3-metvltio- 7- okso- l- azabicvclor 3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlsvre
En løsning av 1,38 g (3,63 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 75 ml tørr
etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,12 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 8 ml (4,0 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 1,5 timer ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 2 x 75 ml kaldt
vann og den kombinerte vandige ekstrakt ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Den vandige fase ble deretter hydrogenert ved 0-5°C over 2 g 5% palladium-på-aluminium-oksid og under 45 psi hydrogen i 1,2 timer. Deretter ble 25 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og katalysatoren ble frafiltrert. Filtratet ble kromatografert på 3,5 x 15 cm reversfasesilicagel ("u- Bondapak Cjg") under eluering med en gradient av 0-4% acetonitril i vann. Lyofilisering av de uv-aktive fraksjoner ga 0,57 g (50%) av tittelfor-bindelsen som et hvitt, amorft pulver: [a]<22> +97,2° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 98,9% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H2O, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 0,8 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjons-tid 6,05 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 306 nm (9.475).
IR (KBr) Vmaks: 1750 (C=0 av fi-lactam) og 1580 cm"<1> (CO av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,34 (s, 3H, SCH3), 3,01 (t, J=7,6 Hz, 2H, CH2NH2), 3,31 (dd, <J>H6,H5=2'36 Hz' JH6,H1=6'47 Hz' 1H' H"6>' 3'39 (bredt, J=9 Hz, 1H, H-4), 4,19 (dd, <J>h5,H6=2'36 HZ/<J>H5,H4=9'06 Hz' 1H' h~5) °9 4'26 PPm (m' 1H, CH3CHO).
Eksempel 93
( 4R, 5S. 65)- 4-( 3"- aminopropyl)- 6- f( 1* R)- 1' - hvdroksvetvll- 3- r( 1. 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo f3, 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksylsyre
A. Allyl-( 4R, 55, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 6-[ ( l' R)- 1' — hvdroksvetvll- 3- r( 1, 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicyclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald løsning (is-MeOH bad) av allyl- (2R, 4R, 5R, 6S.) -4-(3"-azidopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3, 2, 0]heptan-2-karboksylat, fersk fremstilt fra 1,7 g (4,7 mmol) (3S., 4R) -3-[ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -4-[ (1 "R) -1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"-allyloksykarbony1-2"-oksopropyl ] azetidin-2-on i 50 ml CH3CN ble behandlet dråpevis med 1,1 ml (5,0 mmol) diphenylklorfosfat og 0,92 ml (5,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin og med et spor av 5 mg 4-N,N-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 1 time og enolfosfatet ble behandlet med 925 mg (7,0 mmol) 4-mercaptometyl-l,2,3-tiadiazol og 1,84 ml (10,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 2 timer ved 5°C (isbad) og ytterligere 0,46 g (3,5 mmol) tiol og 0,92 ml (5 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt. Reaksjonsblandingen hensto i 18 timer ved 5°C (kaldt rom), ble fortynnet med 200 ml etylacetat, vasket med 100 ml IM vandig NaHC03, 100 ml vann, 100 ml IM vandig NaHS03, 100 ml vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten (4,0 g) ble ledet gjennom en 200 g (Heksan/EtOAc 1/1) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 0,90 g (43%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Umaks: 3680, 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 og 1710 cm'1 (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 8,477 (1H, s, aromatisk-H), 6,02-5,85 (1H, m, vinylisk-H), 5,48-5,22 (2H, m, vinylisk-H), 4,87-4,61 (2H, m, allylisk -CH2), 4,771, 4,696, 4,337, 4,260 (2H, ABq, J=15,2 Hz, CH2~aromatisk), 4,28-4,14 (1H, m, H-l'), 4,162 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,6 Hz, H- 5), 3, 60-3,27 (3H, m, C<H>2N3 og H-4), 3,245 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,5 Hz, H-6), 2,04-1,50 (4H, m, (CH2)2-4), 1,597 (1H, bs, OH) og 1,377 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 6- T(!' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3-\( 1, 2, 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 0,9 g (2 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (1'R)-1' -hydroksyetyl] -3-[(1,2,3-tiadiazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml CH2C12 ble behand-let med 90 mg Pd(PPh3)4 etterfulgt av dråpevis tilsetning av en 0,5M løsning av 4,1 ml (2,05 mmol) natriumetyl-2-heksanoat i. etylacetat. Blandingen ble omrørt i 30 minut-ter, deretter fortynnet med en 1/1 blanding av etylace-tat/dietyleter og ble ekstrahert med en 1 x 50 ml og 2 x 25 ml 0,05M pH 7,0 vandig fosfatbufferløsning. De vandige ekstrakter ble kombinert,
vasket med dietyleter og ledet gjennom en 180 g (H20 -* 5% CH3CN/H20) "u-Bondapak C18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 0,50 g (61%) av natriumkarboksylatet som et lyofilisert pulver.
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 8,897 (1H, s, aromatisk -H),
4,679, 4,605, 4,447, 4,372 (2H, ABq, J=15 Hz, CH2~aromatisk), 4,299-4,173 (1H, 5 linjer, H-l'), 4,124 (1H, dd, J=2,5 Hz,
J=9,5 Hz, H-5), 3,412, 3,401 (del av H-6, d, J=2,5 Hz), 3,41-
3,34 (3H, m, H-6 og CH2-N3), 3,31-3,20 (1H, m, H-4), 1,9-1,32
(4H, m, (C<H>2)2-4) og 1,300 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
500 mg (1,22 mmol) natriumkarboksylat i 75 ml vann ble
rystet ved 0°C (isbad) i en Parr hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time under anvendelse av 500 mg 5%
Pd/aluminiumoksid som katalysator. Ytterligere 500 mg
katalysator ble tilsatt og hydrogeneringen ble fortsatt i ytterligere 1 time ved 0°C. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og pH (10-11) ble innstilt til 7,0 med en IM vandig NaH2P04 løsning. Blandingen ble ledet gjennom en 100 g (H20 ->
5% CH3CN/H20) "fi-Bondapak C18" reversfase-søyle, hvorved det ble oppnådd 250 mg (53%) av slutt-forbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 99,93% (304 nm, HPLC).
UV (H20) Xmaks<:> 302 (e 8050).
IR (Nujol) umaks<:> 3600-3100 (OH, NH2), 1755 og 1685 cm"<1 >(C=0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8,894 (1H, s, aromatisk H), 4,660, 4,586, 4,440, 4,365 (2H, ABq, J=14,9 Hz, CH2~
aromatisk), 4,302-4,174 (1H, 5 linjer, H-l'), 4,125 (1H, dd,
J=2,6 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,359 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,5 Hz,
H-6), 3,32-3,22 (1H, m, H-4), 3,06-2,97 (2H, m, CH2- N), 1,83-1,32 (4H, m, (C<H>2)2-4) og 1,304 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 94
( 4R. 5S. 6S)-4-f 3"-( N- formimidovl) aminopropyll- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- T( 1- metvl- l. 2. 3- triazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald løsning (isbad) av 175 mg (0,460 mmol)
(4R, 51, 61) -4- (3"-aminopropyl) -6- [ (1'R) -1' -hydroksyetyl] -3- [ (1-metyl-1,2,3-triazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i en 50 ml 0,02M vandig pH 7,0 fosfatbuffer ble behandlet med en 0,10N vandig NaOH-løsning (for å øke og bibeholde pH ved ca. 8,0 ± 0,2) og med 200 mg (1,15 mmol) benzylformimidat, hydro-klorid. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og deretter ble løsningens pH senket til 7,0 med en IM vandig NaH2P04-løsning. Blandingen ble ledet gjennom en 20 g (vann -» 5% CH3CN/<H>20) "|i-Bondapak C18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 110 mg (59%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 97,2% (302 nm, HPLC).
UV (H20) Xmaks<:> 302 (e 9260).
IR (Nujol) Umaks: 3600-3700 (OH), 1750 (C=0), 1710 (C=N) og 1585 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 7,867 (1H, s, aromatisk -H), 7,834, 7,812 (1H, 2s, CH), 4,30-4,18 (1H, m, H-l'), 4,212, 4,137, 4,031, 3,957 (2H, ABq, J=14,9 Hz, CH2-aromatisk), 4,159, 4,112, 4,099 (1H, ls og ld, J=2,6 Hz, del av H-5), 4,083 (3H, s, N-CH3), 3,330 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,l Hz, H-6), 3, 45-3,20 (3H, m, H-4 og CH2N) , 1,9-1,32 (4H, m, (CH2)2-4) og 1, 300 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 95
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- guanidinopropvl)- 6- T( l' R)- 1'-hvdroksvetvn- 3- r ( 1- metvl- l, 2. 3- triazol- 4-vl) metvltiol- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 . 2 . 01hept- 2- en- 2-karboksylsvre
En kald (isbad) løsning av 170 mg (0,460 mmol)
(4R, 5S., 6S.)-4-(3"-aminopropyl) -6-[ (l'R) -1'-hydroksyetyl]-3-[ (1-metyl-1,2,3-triazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i en 50 ml 0,02M pH 7,0 vandig fosfatbuffer ble først behandlet med en 0,1N vandig NaOH-løsning (for å øke og bibeholde pH ved 8,0 ± 0,2) og 570 mg (4,60 mmol) aminoiminometansulfonsyre. Blandingen ble omrørt i 90 minutter og deretter ble pH senket til 7,0 med en IM vandig løsning av NaH2P04. Blan-dingen ble ledet gjennom en 20 g (vann -» 5% CH3CN/H2O) "|i-Bondapak <C>18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 130 mg (74%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 99,85% (302 nm, HPLC).
UV (H20) <X>maks: 302 (£ 9150).
IR (Nujol) <U>maks: 3600-3100 (NH, OH), 1755 (C=0), 1670-1630 (C=N) og 1590 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 7,871 (1H, s, aromatisk H), 4,31-4,16 (1H, 5 linjer, H-l'), 4,211, 4,135, 4,037, 3,962 (2H, ABq, J=15 Hz, CH2~aromatisk), 4,063 (3H, s, CH3~triazol), 4,155-4,06 (1H, m, skjult H-5), 3,318, 3,306, 3,267 (del av H-6, d + s), 3,32-3,22 (3H, m, CH2-N og H- 4), 1,9-1,30 (4H, m, (C<H>2)2-4) og 1,29 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 96
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- T(2-karbamovloksv) etvltiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo \ 3 . 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidobutvl)- 3- r(2-karbamovloksv) etvltiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvl) 1- 7-okso- l- azabicvclo f3, 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 7,6 mmol (fremstilt fra 2,88 g, 7,6 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,5R,6S)-4-(4"-azido-butyl)-6-[(1' R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 35 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,65 ml (8,0 mmol) difenylklorfosfat og 1,38 ml (8,0 mmol) N,N-diiso-propyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 30 minutter. Deretter ble 1,38 ml (8,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av 1,0 ml (8,0 mmol) klortrimetylsilan, og blandingen ble omrørt i.10 minutter. Ytterligere 1,38 ml (8,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin ble tilsatt, etterfulgt av 1,8 g (15,2 mmol) 2-karbamoyloksy-etantiol i acetonit-ril, og den resulterende blanding ble omrørt ved 0-5°C i 18 timer. Reaksjonen ble deretter stanset ved tilsetning av 100 ml kald 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer og 500 ml etylacetat. Den organiske fase ble vasket med vann, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble oppløst i 50 ml tetrahydrofuran og 50 ml vann og behandlet ved 0-5°C med 1,5 ml eddiksyre. Temperaturen ble deretter langsomt hevet til 22°C i løpet av 1 time. Reak-sjonsblandingen ble deretter fortynnet med 400 ml etyl-acetat og opparbeidingen ble foretatt som ovenfor. Den oppnådde rest ble etter avdampning av løsningsmidlet kromatografert to ganger på 4 x 12 cm silicagel under eluering, først med en blanding åv toluen og etylacetat (1:1) og deretter en blanding av diklormetan og aceto-nitril (7:3) . Inndampning av de UV-aktive fraksjoner ga 1,71 g (49%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) "Dmaks: 2100 (N3) , 1770 (C=0 av B-lactam) og 1720 (bred C = 0 av ester og karbamat).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,39 (d, J=6,25 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-1,8 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,8-3,2 (m, 5H, SCH2, C<H>2N3 og H-4), 3,18 (dd, <J>h6,H5=2'62 Hz'jH6,H1<=7>'17 Hz, 1H, H-6), 4,1-4,4 (m, 4H, H-5, CH3CHO og CHoOCONHo overlapping), 4,6-4,9 (m, 4H, CH2 av allyl og OCONH2), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. ( 4R. 5S, 6S)- 4-( 4"- aminobutvl)- 3- r ( 2-karbamovloksv) etvltiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo T3, 2. 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 1,71 g (3,77 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(4"-azidobutyl)-3-[(2karbamoyloksy)etyltio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml tørr etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,100 g tetrakis(trifenylfosfin)-palladium
[0] etterfulgt av 8 ml (4,0 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Reaksjons-blandingen ble deretter ekstrahert med 3 x 50 ml vann og den kombinerte vandige ekstrakt ble kromatografert på 3 x 13 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^g") . Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 1,0 g (59%) av kaliumsalt-mellomproduktet som et hvitt faststoff etter frysetørring.
Kaliumsaltet ble deretter oppløst i 150 ml kaldt vann og hydrogenert ved 0-5°C over 1,5 g 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 1 time. Deretter ble 20 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt, katalysatoren ble frafiltrert, og filtratet ble kromatografert på 3 x 15 cm reversfasesilicagel ("|i-Bondapak C^g") . Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 0,722 g (83%, 49% kombinert) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter lyof ilisering: [cc]<22> +74,6° (c l,0,H2O).
Renhet ved HPLC: 96,4% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 0,8 ml/min, uv-detektor 300 nm, reten-sjonstid 5,56 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (9.219).
IR (KBr) Umaks: 1750 (C = 0 av IS-lactam) , 1720 (C = 0 av karbamat) og 1585 cm<-1> (C = 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (df J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,9-3,2 (m, 4H, SCH2 og CH2NH2), 3,36 (dd, <J>h6,H5=2'51 H<z>'<J>H6,H1=6'27 Hz' 1H'H" 6), 3,4 (m, overlapping med H-6, 1H, H-4) og 4,2-4,4 ppm (m, 4H, H-5, CH3CHO og CH2OCONH2).
Eksempel 97
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- guanidinopropyl)- 6- r ( l' R)- l'-hvdroksvetvn- 3- f ( 1, 2 . 3- tiadiazol- 4- vl) metvltiol- 7-okso- l- azabicvclo [ 3. 2 . 0] hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald løsning (isbad) av 120 mg (0,31 mmol) (4R, 5S_, 6S.) - 4-(3"-aminopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(1,2,3-tiadiazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylsyre i en 30 ml 0,025M pH 7,0 vandig
fosfatbuffer ble først behandlet med en 0,1M vandig NaOH-
løsning (for å øke og bibeholde pH ved 8,1 ± 0,2) og porsjonsvis med 390 mg (3,10 mmol) aminoiminometansulfon-syre. Blandingen ble omrørt i 1,5 time og pH ble senket til 7,0 med
en IM vandig Na^PO^løsning. Blandingen ble ledet gjennom en 20 g (vann -> 3% CH3CN/H2O) "a-Bondapak <C>18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 90 mg (68%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 98,5% (302 nm, HPLC).
UV (H20) Xmaks: 302 (£ 8400).
IR (Nujol) Dmaks: 3600-3100 (OH, NH3), 1750 (C=0), 1770-
1730 (C=N) og 1680 cm"<1> (C=0).
^■H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 8, 896 (1H, s, aromatisk H),
4,654, 4,580, 4,446, 4,371 (2H, ABq, J=15 Hz, CH2-aromatisk), 4,29-4,17 (1H, 5 linjer, H-l'), 4,124 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,5
Hz, H-5), 3,298 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,5 Hz, H-6), 3,30-3,10
(3H, m, CH2-N og H-4), 1, 90-1, 30 (4H, m, (CH2)2-4) og 1,291
ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 98
( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- karbamovloksvetvl) tiol- 4-( 4"- N-formimidovlaminobutyl)- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvl1-7-okso- l- azabicvclo 13 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,196 g (0,506 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-3-[(2-karbamoyloksyetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl] -7-okso-l-azabicyclo[3, 2,0]hept-2-en-2-karboksyl-syre i 15 ml kaldt vann ble innstilt til pH 8,0 med IM NaOH og behandlet ved 0-5°C med 0,26 g (1,5 mmol) benzyl-formimidat, hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter. pH ble holdt ved 8-8,5 med IM NaOH under til-setningen. Etter 20 minutter ble 10 ml 0,2M pH 6,0 fosfat-buffer tilsatt og reaksjonsblandingen ble vasket med etyl-acetat. Den vandige fase ble deretter først kromatografert på 2,5 x 15 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^") under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i 0,02M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombi-nert, koncentrert (T < 5°C) og avsaltet på samme søyle under eluering med vann i stedet for buffer. Lyofilisering av de relevante fraksjoner ga 0,136 g (65%) av tittel-forbindelsen som et hvitt, amorft faststof: [a]<22> + 72,0° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 98,8% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H2O, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 6,12 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (9.228).
IR (KBr) Vmaks: 1750 (C = 0 av fi-lactam), 1715 cm"<1> (C = 0 av karbamat og formimidoyl) og 1590 cm-1 (C = 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,31 (d, J=6,32 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,3-3,5 (m, 4H, H-4, H-6 og CHoNH), 4,2-4,4 (m, 3H, CH2OCONH2, H-5 og CH3CHO) og 7,79 ppm (bred s, 1H, CHNH).
Eksempel 99
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3-\( 1- metvl- l. 3- imidazol- 5-vl)- metvltiol- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 3- r( 1- metvl- l, 3- imidazol- 5-yl) metvltiol - 7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En løsning av 5,10 mmol (fremstilt ved ringslutning av 2,37 g, 5,10 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,5R,6S) -4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksy-etyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 39 ml tørr acetonitril ble behandlet ved -15°C og under argon med 1,10 ml (5,3 mmol) difenylklorfosfat og 0,95 ml (5,3 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved - 15°C i 30 minutter.0,95 ml (5,4 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 1,31 g (10,2 mmol) l-metyl-5-tiometyl-l,3-imidazol ble tilsatt, og blandingen ble omrørt i 3 timer ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble for-tynnet med 272 ml EtOAc og vasket med vann, IM NaHS03, mettet NaHC03, saltvann °9 tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på silicagel. Eluering med en blanding av EtOAc:CH3CN:aceton (12:87:1) ga 1,5 g (54%) av tittelforbindelsen som en gul olje.
IR (CH2C<1>2) umalcs: 2100 (N3) , 1775 (C=0 av 15-lactam) og 1710 (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 6: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,90 (S, 9H, Si-t- bu), 1,31 (d, J=6,l Hz, 3H, CH3CHO), 1,7 og 2,0 (2 x m, 2 x 1H, CH2-4), 3,08 (dd, J1,g=7,17 Hz,
<J>5_6=2,76 Hz, 1H, H-6), 3,3-3,6 (m, 2H, CH2N3) , 3,69 (s, 3H, CH3-N), 3,9-4,2 (m, 4H), 4,7 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 6,0 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl), 6,99 og 7,46 (2xs, 2H, imidazoyl) .
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( 1- metvl- l, 3-imidazo- 5- yl) metvltiol- 6- f( l' R)- 1' - hvdroksvetvll - 7-okso- l- azabicvclo\ 3 , 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,50 g (2,74 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl ]-3-[(1-metyl-1,3-imidazol-5-yl)-metyltio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 43 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 0,94 ml (16,4 mmol) eddiksyre etterfulgt av 8,5 ml (8,5 mmol) IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Løsningen ble oppbevart ved 5°C i 8,5 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med EtOAc, vasket med mettet NaHC03, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 4,5 x 15 cm silicagel. Eluering med aceton ga 1,87 g (73%) av tittelforbindelsen som et skumaktig lysegult faststoff.
IR (NaCl, film) Umaks: 3200 (bred, OH), 2105 (N3), 1780 (C=0 av Ji- lactam) , og 1710 (C=0 av ester) .
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3- r( 1- metvl- l, 3- imidazo- 5-vl)- metvltiol- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 558 mg (1,29 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-3-[(1-metyl-l,3-imidazol-5-yl)-metyltio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i tørt 29 ml CH2C12 ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 112 mg tetrakis(trifenylfosfin)-palladium [0] og 2,84 ml (1,42 mmol) av en 0,5M løsning av natrium-2-etylheksanoat i EtOAc. Deretter ble 39 ml vann tilsatt og den organiske fase ble adskilt. Den organiske fase ble reekstrahe-rt med 2 x 22 ml vann og de kombinerte vandige faser ble inndampet til fjernelse av organisk løsningsmiddel. Den resterende vandige fase ble hydroge-nert over 396 mg 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 1 time. Katalysatoren ble frafiltrert, og filtratet ble nøytralisert med en IM løsning av NaH2P04 (noen få dråper). Blandingen ble kromatografert på 7 x 11 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C18") under anvendelse av en gradient av acetonitril i 0-1% vann etterfulgt av lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner, hvorved det ble oppnådd 130 mg av tittelforbindelsen som et lysegult, amorft pulver.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks<:> 302 nm (6000).
IR (KBr) umaks: 1765 (C=0 av fi-lactam) og 1625 (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 Hz, D20) 6: 1,32 (d, J=6,3 Hz, 3H, CH3CHO), 1,7 og 2,1 (2 x m, 2 x 1H, CH2~4), 3,05 (t, J=9,0 Hz, CH2N<H>2), 3,23 (m, 1H, H-4), 3,41 (dd, <J>7</_>6<=>6,5 Hz, J5_6=2,7 Hz, H-6), 3,7 (s, 3H, CH3-N) , 3,9-4,3 (m, 4H, CH2-S, CH3CHO, H-5), 6,93 og 7,63 (2 x s, 2H, imidazoyl).
Eksempel 100
( 4R, 5S, 6S)- 3- r ( 2- karbamovloksvetvl) tiol- 4-( 4"-quanidinobutvl)- 6- f( 1' R) - 1'- hvdroksvetvll - 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
En løsning av 0,172 g (0,44 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4'-aminobutyl)-3-[(2-karbamoyloksyetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyety1]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 13 ml kald vann (0-5°C) ble innstilt til pH 8,5 med IM NaOH. Deretter ble 0,275 g (2,21 mmol) aminoiminometansulfonsyre tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter, mens pH ble holdt mellom 8 og 8,5. Etter 45
minutter ved 0-5°C ble reaksjonen stanset ved tilset-ning av
15 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og kromatografert på 2,5 x 15
cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^"). Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 0,149 g (78%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff etter frysetørring.
Renhet ved HPLC: 99% på "ji-Bondapak C18", 3, 9 mm x 30 cm, eluering 10% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-
ningshastighet 0,8 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjons-tid 6,0 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (9.371).
IR (KBr) Vmaks: 1750 (sh, C = 0 av A-lactam), 1730 (bred
C = 0 av karbamat), 1670 (C=0 av guanidin) og 1590 cm<-1> (C=0
av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,32 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2),
3,22 (t, J = 6,5 Hz, CH2N), 3,34 (dd, JH6,H5=2'55 Hz'
JHg^H1=6,10 Hz, 1H, H-6), 3,36 (m, overlapping med H-6, 1H, H-
4) og 4,2-4,4 ppm (m, 4H, CH20, H-5 og CH3CHO).
Eksempel 101
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 2"-dimetvlaminoetvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- f( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 2"- dimetvlaminoetvl)- 7- okso- l- azabicyclo\ 3 , 2 . 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald løsning (tørris-aceton bad) av 384 mg (0,801 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -6-[ (l'R) -1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml CH2C12 ble behandlet med 480 ul (4,20 mmol) N,N-diisopropyletyl-amin og dråpevis med 208 ul (1,24 mmol) trifluormetan-sulf onsyreanhydrid. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og en strøm av HN(CH3)2 ble ledet'gjennom blandingen i 20 sekunder. Tørris-acetonbadet ble erstattet med et is-MeOH bad. Blandingen ble omrørt i 3 timer (omsetning etterfulgt med TLC), deretter fortynnet med 100 ml iskald etylacetat, vasket med 4 x 50 ml iskaldt vann, saltvann og tørket (MgS04), hvorved det ble oppnådd 390 mg (96%) av tittel-forbindelsen som en olje.
IR (ren) l)maks: 2250 (C=N), 1775 og 1710 cm"<1> (C=0) .
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,03-4,85 (1H, m, vinylisk-H), 5, 49-5,22 (2H, m, vinylisk H) , 4,9-4,6 (2H, m, allylisk -CH2), 4,30-4,17 (1H, m, H-l'), 4,205 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 3,40-3,20 (2H, m H-4 og HCH-N) , 3,254 (1H, dd, J=2,8 Hz,
J=7,0 Hz, H-6), 3,15-2,95 (2H, m, SCH2) , 2,72-2, 63 (2H, m, CH2CN), 2,5-2,30 (1H, m, HCH-N), 2,254 (6H, s, N(CH3)2), 2,05-1,80 (1H, m, HCH-4), 1,7-1,4 (1H, m, HCH-4), 1,290 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,890 (9H, s, tert-butyl) og 0,086 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4- ( 2"-dimetylaminoetyl)— 6— r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 390 mg (0,768 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6-[ (l'R) -1' - tert-butvldimetvlsilvl-oksv-etyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-dimetylaminoetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml tetra-hydrofuran ble behandlet med 600 |il (10,5 mmol) eddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluo-rid i 6,0 ml (6,0 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt i 1 time og fikk deretter lov til å størkne i et kaldt rom i 144 timer. Blandingen ble fortynnet med 100 ml etylacetat og vasket med 2 x 100 ml iskaldt IM vandig NaHC03, 2 x 100 ml kaldt saltvann og tørket. (MgS04), hvor-ved det ble oppnådd 270 mg (89%) av tittelforbindelsen som en rå olje.
IR (ren) <U>maks: 3600-3200 (OH), 1775 og 1710 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,05-1,90 (1H, m, vinylisk H), 5,50-5,24 (2H, m, vinylisk-H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk-H), 4,294, 4,279 (del av H-5, d, J=2,9 Hz), 4,29-4,15 (1H, m, H-1')/ 3,45-3,9 (3H, m, H-4 og SCH2), 3,302 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=7,9 Hz, H-6), 2,8-2,6 (4H, m, CH2"N og CH2CN) , 2,264 (6H, S, N(C<H>3)2), 2,0-1,6 (3H, m, CH2-4 og OH) og 1,377 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
C. ( 4R, SS . 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4-( 2"- dimetvlaminoetvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01 hept- 2- en- 2- karbo) csvlsvre
En kald løsning (isbad) av 270 mg (0,69 mmol) rå allyl-(4R, 5S., 6S.)-3-[ (2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-dimetylamino-etyl)-6-[(l'R)-1' -hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml CH2C12 ble behandlet med 30 mg Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av natriumetyl-2-heksanoat i 1,44 ml (0,720 mmol) etylacetat. Blandingen ble omrørt i 45 minutter, deretter fortynnet med en 20 ml 1/1 etylacetat/dietyl-eterblanding og ekstrahert med en 1 x 20 ml, 2 x 10 ml 0,02M pH 7,0 fosfatbuffer. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet to ganger gjennom en 40 g (0,02M vandig pH 7,0 fosfat-buffer -> 3% CH3CN/H20) "u-Bondapak C^g" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 70 mg (30%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 99,5% (298 nm, HPLC).
UV (<H>2<0>) <X>jj^g: 298 (e 6960).
IR (Nujol) Vmaks<:> 3600-3120 (OH), 2250 (C=-N) , 1750 og 1590 cm"<1> (C=0). 1 H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,33-4,21 (1H, ru, H-l') , 4,289 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,429 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 3, 48- 3, 35 (H, m, H-4), 3,21-2,76 (6H, SCH2, CH2-N, C<H>2CN) 2,758 (6H, S, N(CH3)2), 2,27-2,14 og 1,98-1,80 (2H, 2 set av m, CH2-4) og 1,339 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3). Eksempel 102 ( 4R, 5S. 6S)- 4-( 4"- guanidinobutvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- metvltio- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept-2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,226 g (0,72 mmol) (4R, 5S, 6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 20 ml kaldt vann (0-5°C) ble innstilt til pH 8,5 med IM NaOH og deret-ter behandlet med 0,40 g (3,22 mmol) aminoiminometansul-fonsyre tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter. pH ble holdt ved 8-8,5 under tilsetningen og i ytterligere to timer med IM NaOH. Reaksjonen ble deretter stanset ved tilsetning av 20 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og kromato-grafert på 3,5 x 15 cm reversfasesilicagel ("|i- Bondapak C^g") . Eluering med en gradient av acetonitril (0- 5%) i vann ga 0,169 g (66%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 99,8% på "|i-Bondapak C1Q", 3,9 mm x 30 cm, 5% CH3CN-H2O, pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1,5 ml/min, UV-detektor 304 nm, retensjonstid 5,77 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 306 nm (9.411).
IR (KBr) umaks: 1750 (C=0 av fi-lactam), 1665 (C=N av guanidin) og 1580 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl) , 2,34 (s, 3H, SCH3) , 3,22 (t, J=6,5 Hz, 2H, C<H>2N), 3,28 (dd, <J>H6/H5=2,39 Hz,
JH6/H1=6,26 Hz, 1H, H-6), 3,38 (bredt, 1H, H-4), 4,19 (dd, JH5/H6=2,39 Hz, Jh5,H4=9'04 Hz' 1H' H5) °9 4'27 PPm (m' 1H' CH3CHO).
Eksempel 103
( 4R, 5S. 5S)- 4-( 4"- N- formimidovlaminobutvl)- 6- r ti ' R )-1'- hvdroksvetyl- 3- metvltio- 7- okso- l-azabicvclo \ 3 . 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
En løsning av 0,210 g (0,67 mmol) (4R, 5S, 6S)-4-(4"-aminobutyl)-6-[(1'R)-1'hydroksyetyl]-3-metyltio-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 30 ml vann ved 0-5°C ble innstilt til pH 8,5 med IN NaOH. Deretter ble 0,60 g (3,5 mmol) benzylformimidat, hydroklorid til-satt i små porsjoner i løpet av 10 minutter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IN NaOH. Etter ytterligere 20 minutter ved 0-5°C ble reaksjonen stanset ved tilsetning av 25 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer og vasket med 20 ml etylacetat. Den vandige fase ble deretter holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel og deretter kroma-tografert på 3,5 x 14 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C18") under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i 0,01M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, konsentrert i vakuum (T
<5°C) og atter kromato-grafert under eluering med vann i stedet for buffer. Lyo-filisering av de relevante fraksjoner ga 0,123 g (54%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver: [a]<22> 110,3° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 3% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1,5 ml/min, uv-detektor 304 nm, retensjons-tid 6,48 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 306 nm (10.187).
IR (KBr) Umaks: 1750 (C=0 av Ii-lactam), 1715 (C=N av formimidoyl) og 1580 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,32 (d, J=6,27 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 6H, CH2-1,2 og 3 av butyl), 2,34 (s, 3H, SCH3), 3,3-3,5 (m, 4H, H-6, H-4 og CH2NH), 4,18 (dd, Jh5,H6=1'92 Hz' jH5,H4=9'° Hz' 1H' H~5)' 4'26 <m' 1H' CH3CHO) og 7,8 ppm (bred
S, 1H, CH=NH).
Eksempel 104
( 4R, 5S. 6S)- 3- r( 2- karbamovloksvetvl) tiol- 4-( 4"- N. N-dimetvlaminobutvl)- 6- r(!' R) - 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,230 g (0,59 mmol) (4R,5S,6S)-4-(4"-aminobutyl)-3-(2-karbamoyloksyetyltio)-6-[ (l'R) -1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 10 ml vann ble behandlet ved 0-5°C med 0,25 ml (3,0 mmol) 37% vandig formaldehyd og 2 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer. Deretter ble 0,074 g (1,18 mmol) natriumcyanoborhydrid tilsatt på én gang, og den resulte-rende blanding ble omrørt ved 0-5°C i 1 time. Ved HPLC ("ji-Bondapak C18") var produktet en 51:45 blanding av tittel-dimetylderivatet og N-metyl-N-cyanometylderivatet. Den rå reaksjonsblanding ble først kromatografert på 2 x 15 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C18") under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i 0,02M pH 7,0 fosfatbuffer. De første fraksjoner ble kombinert og avsaltet på samme søyle under eluering med vann i stedet for buffer, hvorved det ble oppnådd 0,081 g (33%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 99% på "|i.-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv.-detektor 300 nm, retensjonstid 6,11 min.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 (9.036).
IR (KBr) umaks: 1750 (C = 0 av A-lactam), 1725 (C = 0 av karbamat) og 1595 cm<-1> (C = 0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-2,0 (m, 6H, CH2-1, 2 og 3 av butyl), 2,84 (s, 6H, NCH3), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,10 (t overlapping med SCH2, J=7,9 Hz, 2H, CH2N) , 3,36 (dd, JH6,H5=2'30 Hz' 1H' H~6) ' 3'37 (m' overlapping med H-6, 1H, H-4) og 4,2- 4,4 ppm (m, 4H, H-5, C<H>3CHO og CH2OCONH2 overlapping).
Eksempel 105
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- acetaldehvddimetvlhvdrazon)- 3- f( 2-cvanoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'- hydroksyetvll- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, OThept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- acetaldehvd)- 6- r( l' R)- 1' - tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol - 7-okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (tørris-acetone bad) løsning av 150 [ Li (1,65 mmol) oksalylklorid i 5 ml CH2CI2 ble behandlet dråpevis med en løsning av 250 |il (3,19 mmol) DMSO i 1 ml CH2C12. Blandingen ble omrørt i 5 minutter og deretter ble en løs-ning av 420 mg (0, 875 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.)-6- [ (1' R) - 1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl ]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 4 ml CH2CI2 tilsatt dråpevis. Blandingen ble omrørt i 15-20 minutter og 1,5 ml (10,8 mmol) trietylamin ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i ytterligere 10 minut-ter og ble deretter oppvarmet til værelsestemperatur (~10 minutter). Den ble fortynnet med 25 ml vann og 40 ml CH2CI2 og den vandige fase ble ekstrahert med 4 x 20 ml CH2CI2. De organiske faser ble kombinert, vasket med 2 x 20 ml iskaldt 5% vandig HC1, 2 x 20 ml iskaldt vann, 2 x 20 ml iskaldt 5% NaHC03, 2 x 20 ml iskaldt vann, 20 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 402 mg (96%) tittelforbindelse som en olje.
IR (ren) Uma}cs: 2250 (CsN) , 1775, 1720 og 1710 cm"<1 >(C=0) .
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 9,849 (1H, s, CHO), 6,01-5,87 (1H, m, vinylisk-H), 5,49-5,22 (2H, m, vinylisk-H), 4,80-4,60 (2H, m, allylisk-CH2), 4,371 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,8 Hz, H-5), 4,28-4,18 (1H, 6 linjer, H-l'), 3,763 (1H, dt, J=3,5 Hz,
J=10,2 Hz, H-4), 3,2-2,77 (5H, m, H-6, SCH2 og CH2CHO), 2,70-2,63 (2H, m, CH2CN), 1,161 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,883 (9H, s, tert-butyl) og 0,068 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- acetaldehvddimetvlhvdrazon)- 6-r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 3- r ( 2-cvanoetvl) tiol- 7- okso- l- azabicvclo r3, 2 . 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 402 mg (0,840 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"-acetaldehyd) -6- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3- [(2-cyanoethyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml vannfri etanol ble behandlet med 150 ul (1,97 mmol) dimetyl-hydrazin. Blandingen ble omsatt ved 5°C (kaldt rom) i 24 timer, hvoretter løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd 463 mg (100%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) <\>)maks: 2250 (C=N), 1775, 1710 (C=0) og 1550 cm"<1>
(C=N).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,474 (1H, bt, J=4,2 Hz, CH=N), 6,04- 5,85 (1H, m, vinylisk H), 5,48-5,21 (2H, m, vinylisk H), 4,85-4,70 (2H, m, allylisk -H), 4,298 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 4,28-4,22 (1H, m, H-l'), 3,64-3,55 (1H, m, H-4), 3,319 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=3,9 Hz, H- 6), 3,25-2,92 (2H, m, SCH2) , 2, 754 (6H, s, N(C<H>3)2), 2,73-2, 60 (3H, m, CH2CN og HCH-4), 2,55-2,3 (1H, m, HCH-4) 1,148 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,0878 (9H, s, tert-butyl) og 0,066, 0,060 ppm (6H, 2s, dimetyl).
C. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- acetaldehvddimetvlhvdrazon)- 3- r( 2-cvanoetvl) tiol- 6- f( I' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 460 mg (0,883 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -4- (2"-acetaldehyddimetylhydrazon) -6-[ (l'R) - 1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyano-etyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 15 ml tetrahydrofuran ble behandlet med 700 ul (12,2 mmol) eddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 6,0 ml (6,0 mmol) tetrahydro-furan. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og ble deretter omsatt ved 5°C (kaldt rom) i 430 timer. Den ble fortynnet med 100 ml iskald etylacetat, vasket med iskaldt 5% vandig 4 x 20 ml NaHC03, 2 x 20 ml vann, 20 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 335 mg (93%) tittelforbindelse som en rå olje.
IR (ren) Umaks<:> 3600-3200 (OH) , 2250 (CsN), 1775, 1710 (C=0) og 1550 cm"<1> (C=N).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,602 (1H, bt, J=4,8 Hz, CH-N), 6,05- 5,90 (1H, m, vinylisk H), 5,51-5,24 (1H, m, vinylisk H), 4,90-4,64 (2H, m, allylisk CH2), 4,311 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=9,8 Hz, H-5), 4,20-4,00 (1H, m, H-l'), 3,73-3,60 (1H, m, H-4), 3, 307 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=8,0 Hz, H-6), 3,18-2,90 (2H, m, SCH2), 2,773 (6H, S, N(C<H>3)2), 2,87-2,63 (3H, m, CH2CN og HCH-4), 2,56-2,40 (1H, m, HCH-4), 1,59 (1H, bs, OH) og 1,310 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
D. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- acetaldehvddimetvlhvdrazon)- 3- r(2-cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
En kald løsning (isbad) av 335 mg (0,820 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"acetaldehyddimetylhydrazon) -3- [ (2-cyanoetyl) tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml CH2C12 ble behandlet med 35 mg Pd(PPh3)4 og dråpevis med en 0,5M løsning av 1,72 ml (0,860 mmol) natriumetyl-2-heksanoat i etylacetat. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, deretter fortynnet med en 1/1 løsning av etylacetat/dietyleter og ekstrahert med en 0,02M pH 7,0 vandig 1 x 30 ml, 2 x 10 ml fosfat-buffer. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet to ganger gjennom en 40 g (0,02M vandig fosfatbuffer-» 5% CH3CN/buffer og 40 g, H20 -» 5% CH3CN/H20) "ji-Bondapak C18" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 100 mg (33%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
.Renhet: 97,9% (302 nm, HPLC).
UV (H20) <X>maks: 240 (e 7440), 302 (6 8150).
IR (Nujol) Dmaks: 3600-3100 (OH), 2250 (CsN), 1750 og 1590 (C=0) og 1560 cm"<1> (C=N).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,425 (1H, dt, J=5,4 Hz, CH=N), 4,288 (1H, dd, J=2,62 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 4,30-4,17 (1H, m, H-1'), 3,79-3,67 (1H, H-4), 3,518 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=5,8 Hz, H-6), 3,30-3,13, 3,05-2,90 (2H, 2 set av m, SCH2), 2,90-2,80 (2H, m, CH2CN), 2,90-2,50 (2H, m, CH2-4), 2,691 (6H, s, N(C<H>3)2) og 1,274 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 106
Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- acetaldehvd)- 3- F ( 2-cvanoetvl) tiol- 6- r(!' R )- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo \ 2 . 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- acetaldehvd)- 3- r( 2-cvanoetvl) tiol- 6- r ( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald løsning (is-MeOH bad) av 200 mg (0,418 mmol) allyl-(4R,51, 61)-4-(2"-acetaldehyd)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3- [(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0]hept-2-en-2-karboksy lat i 8 ml tetrahydrofuran ble behandlet med 350 ml (6,1 mmol) iseddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 3,0 ml (3,0 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og deretter omsatt ved 5°C (kaldt rom) i 500 timer. Den ble fortynnet med 50 ml iskaldt etylacetat og iskaldt, mettet, 4 x 20 ml vandigt NaHC03, 20 ml saltvann og tørket (MgS04) . Avdampning av løsningsmidlet ga en olje, som bl€; overført til en preparativ silicagelplate (EtOAc, Rf=0,5), hvorved det ble oppnådd 4 0 mg (2 6%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) Umaks: 3600-3300 (OH), 2250 (CN), 1775 og 1720 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 9,869 (1H, s, CHO), 6,04-5,87 og 5, 49- 5,25 (3H, m, vinyl H), 4, 89-4, 65 (2H, m, CH2-vinyl), 3,416 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,9 Hz, H-5), 4,24-4,13 (1H, 5 linjer, H-l'), 3,84-3,71 (1H, 6 linjer, H-4), 3,19-2,81 (3H, m, H-6, CH2S og CH20), 2,75-2,63 (2H, m, CH2~CN), 1,57 (1H, bs, OH) og 1,298 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
B. Natrium-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- acetaldehvd)- 3- r( 2-cvanoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (isbad) løsning av 40 mg (0,11 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"-acetaldehydo) -6-[ (1'R) -1'-hydroksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 2 ml diklormetan ble behandlet med 10 mg Pd(PPh3)4 og med 20 |il (overskudd) N-metylanilin. Blandin-gen ble omrørt i 30 minutter, deretter fortynnet med 20 ml dietyleter og ekstrahert med en 4 x 5 ml 0,05M pH 7,4 vandig fosfatbuffer. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet gjennom en 9 g (H20) reversfasesøyle n\i-Bondpak C18", hvorved det ble oppnådd 10 mg (26%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
IR (Nujol) Dmaks: 3600-3100 (OH), 2250 (CN) , 1755, 1720 og 1600 (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 9,789 (0,5H, s, CHO), 5,244, 5,226, 5,208, 5, 189 (0,5H, 4 linjer, CH<OH) 2), 4, 409 (0,5 H, dd, J=2,7 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 4,36-4,20 (1H, m, H-l'), 3,92-3,84 (0,5 H, 6 linjer, J=3,7 Hz, 10,2 Hz, H-4), 3,556 (0,5 H, dd, J=2,6 Hz, J=5,8 Hz, H-6), 3,56-3,46 (0,5H, m, H-4), 3,27-2,80 (5,5 H, m, 0,5 H-6, SCH2, CH2CN og 1H for CH2CHO), 2,15-1,90 (1H, m, CH2CH(OH)2), 1,336 (1,5H, d, J=6,4 Hz, CH3) og
1,248 ppm (1,5 H, d, J=6,5 Hz, CH3) .
Eksempel 107
Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- l'-hvdroksvetvl1- 4-( natriumoksvkarbonvlmetvl)- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat A. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 4-( allvloksvkarbonvlmetyl)- 3- f( 2-cvanoetvl) tiol-6-\( l' R)-1'- tert- butvldimetylsilvl-oksvetyll- 7- okso- l- azabicvclo r3, 2, 01hept-2-en-2-karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 300 mg (0,627 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4-(2"-acetaldehyd) -6-[ (1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml dimetylforma-mid ble behandlet med 2,0 g (5,7 mmol) pyridiniumdikromat og omrørt i 24 timer ved 5°C (kaldt rom). Blandingen ble for-tynnet med 100 ml vann og den vandige fraksjon ble ekstrahert med 5 x 20 ml etylacetat. Etylacetatekstraktene ble kombinert, vasket med 2 x 50 ml vann, 50 ml 1% iskaldt HC1, 3 x 50 ml vann, saltvann og tørket (MgSO^). Avdamp-ning av løsningsmidlet ga en 200 mg rest, som ble løst i en 10 ml 1:1 blanding av diklormetan og DMF. Løsningen ble behandlet suksessivt med 1 ml allylalkohol, 135 mg (1,00 mmol) 1-hydroksybenzotriazol og 206 mg (1,00 mmol) 1,3-dicycloheksylkarbodiimid og ble omrørt i 72 timer ved ca.
22 °C. Etylacetatekstraktene ble kombinert, vasket med 3 x
20 ml vann, iskaldt IN vandig 20 ml HC1, 2 x 20 ml vann, 20 ml IM vandig NaHC03, 3 x 20 ml vann, 20 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble etter løsningsmiddelavdamping overført til to preparative 2 mm (EtOAc, Rf=0,9) silica-gelplater, hvorved det ble oppnådd 100 mg (29,8%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (ren) Umaks: 2250 (CsN), 1780, 1735 og 1710 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,03-5,81, 5,48-5,22 (6H, m, vinylisk H), 4, 82-4,58 (4H, 2 set av m, CH2-vinyl),' 3,370 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 4,30-4,19 (1H, 6 linjer, H-l'), 3,7 (1H, X del av ABX, J=3,4 Hz, H-4), 3,24-3,11, 3,04-2,90 (2H, 2 set av m, SCH2) , 3,128 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=4,2 Hz, H-6), 2,877, 2,860, 2,792, 2,774 (1H, AB del av ABx, J=3,4 Hz, J=17,l Hz), 2,601, 2,545, 2,516, 2,460 (1H, AB del av ABX, J=17,l Hz, J=ll,3 Hz, CH2-4), 2, 72-2, 63 (2H, m, CH2CN) , 1,147 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,879 (9H, s, tert-butyl), 0,068 og 0,063 ppm (6H, 2 s, dimetyl).
B. Allyl-( 4R, 5S. 6S)- 4-( allvloksvkarbonvlmetvl)- 3- f( 2-cvanoetvl) tiol- 6-[( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (is-metanol bad) løsning av 100 mg (0,187 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -4- (allyloksykarbonylmetyl) -3- [ (2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 3 ml TF ble 350
behandlet med 120 |il (2,09 mmol) iseddiksyre og dråpevis med
en 1,3 ml (1,3 mmol) IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i TF. Blandingen ble omrørt i 30 minutter og ble deretter omsatt ved 5°C (kaldt rom) i 430 timer. Blandingen ble fortynnet med 40 ml iskaldt etyl-acetat, vasket med 4 x 20 ml iskaldt, mettet, vandig NaHCC>3, 2 x 20 ml vann, 20 ml saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga en rest, som ble overført til en 2 mm (EtOAc, Rf = 0,75) preparativ silicagelplate, hvorved det ble oppnådd 23 mg (29%) av tittelforbindelsen som en olje, som størknet ved henstand.
IR (ren) Umaks<:> 3600-3300 (OH), 2250 (CsN), 1775, 1730 og 1710 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04-5,83, 5,50-5,24 (6H, 2 set av m, vinylisk-H), 4,89-4,61 (4H, 2 set av m, CH2-vinyl), 4, 395 (1H, dd, J=3,0 Hz, J=9,8 Hz, H-5), 4,30-4,10 (1H, m, H-1')/ 3,803-3,678 (1H, X del av ABX, J=3,4 Hz, H-4), 3,173 (1H, dd, J=3,l Hz, J=6,9 Hz, H-6), 3,20- 3,133, 3,09-2,9 (2,5 H, 2 set av m, SCH2 og skjult d av ABq), 2,884, 2,867 (1 del av AB, J=3,4 Hz, CH2-4), 2,688 (2H, t, J=7,2 Hz, CH2CN), 2,649, 2, 589, 2,56.2, 2, 503 (1H, AB del av ABX, J=ll,9 Hz, J=17,5 Hz, CH2-4), 1, 974 (1H, d, J=4,6 Hz, OH) og 1, 300 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
C. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- 1' - hvdroksvetvll- 4-( natriumoksvkarbonylmetyl)- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 23 mg (0,055 mmol) allyl-(4R, 5S_, 6S.) -4- (allyloksykarbonylmetyl) -3- [ (2-cyanoetyl) -tio] -6-[(l'R)-1'hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2, 0]-hept-2-en-2-karboksylat i 3 ml CH2Cl2 ble behandlet suk-sessivt med 11 mg Pd(PPh3)4, og 30 ul (0,22 mmol) N-metyl-anilin. Blandingen ble omrørt i 20 minutter, deretter for-tynnet med 10 ml dietyleter og ekstrahert med en 5 x 2 ml 0,1 M pH 7,0 vandig fosfatbuffer. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet gjennom en 5 g (H20 -» 1% CH3CN) reversfasesøyle "u-Bondapak C^", hvor-ved det ble oppnådd 10 mg (50%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
IR (Nujol) Vmaks<:> 3600-3200 (OH), 2250 (ChN), 1755 og 1600 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,328 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 4,297-4,22 (1H, m, H-l'), 3,778-3,653 (1H, x del av ABX, J=3,7 Hz, H-4), 3,419 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=4,2 Hz, H-6), 3, 30-3, 15, 3, 01-2, 90 (2H, 2 set av m, SCH2) , 2,90-2,81 (<=S>2,5H, m, SCH2CN og 1 d av B delen av ABX), 2,760-2,742 (0,77H, d, J=3,7 Hz, B del av ABX, CH2C02), 2,346, 2,286, 2,262 og 2,203 (1H, A del av ABX, J=ll,8 Hz, J=16,7 Hz, C<H>2<C>02) og 1,241 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 108
( 4R. 5S. 6S)- 3-(( 4S)- 4- r( 2S)- 2- dimetvlamino- karbonvll pyrrolidinvltio)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 2"-hydroksvetvl)- 7- okso- l- azabicvclo r 3, 2, 0] hept- 2- en-karboksvlsvre
A. Allvl- ( 4R. 5R, 6S) - 3- difenvlf osforvloksv- 6- \ Cl/ R) - l'- tert-butyldimetvlsilvloksyetvll- 4-( 2"- tert- butyl-dimetvlsilvloksvetvl)- 7- okso- l- azabicyclo f 3, 2, OThept- 2-en- 2- karboksylat
En løsning av 6,93 g (12,5 mmol) (3S,4R)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(IR)-1-(2-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-3-allyloksykarbonyl-3-diazo-2-oksopropyl]azetidin-2-on i 150 ml tørr benzen ble behandlet med 0,2 g rhodium(II)octanoat-dimer og oppvarmet under tilbakekjøling (badtemperatur 90-95°C) i 1 time. Løsnings-midlet ble. avdampet under redusert trykk, og resten ble løst i 80 ml acetonitril og avkjølt til 0-5°C. Deretter ble 2,40 ml (13,78 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 2,85 ml (13,75 mmol) difenylklorfosfat tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal av 4-N,N- dimetylaminopyri-din ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 500 ml etylacetat og vasket suksessivt med kaldt vann, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under vakuum ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 12 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og etylacetat (95:5) ga 5,77 g (61%) av tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl, film) uma]cs: 1788 (C=0 av fi-lactam) og 1730 cm" <1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,01, 0,06 og 0,07 (3 x s, 6H, 3H og 3H, SiCH3), 0,83 og 0,87 (2 x s, 2 x 9H, Sitert -Bu) 1,27 (d, J=6,14 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-1,8 og 1,9-2,1 (m, 2H,
CH2-4), 3,25 (dd, <J>h6,H5=2'77 <Hz>' jH6,H1 = 6'92 Hz' 1H' H~6) ' 3,3-3,7 (m, 3H, H-4 og CH2CH2OSi) , 4,12 (dd, <J>^HG^2'77 Hz' JH5/H4=10,35 Hz, 1H, H-5), 4,20 (m, 1H, CH3CHO), 4,64 (bredd, J=5,l Hz, 2H, CH2 av allyl), 5,1-5,4 og 5,7-6,0 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl) og 7,1-7,4 ppm (m, 10H, aromatiske).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3-(( 4S)- 4- r1- N- allvloksvkarbonvl- ( 2S)- 2-dimetvlaminokarbonvllpyrrolidinvltio)- 6- r( 1' R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvn- 4-( 2"- tert-butvldimetvlsilvloksvetvl)- 7- okso- l- azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,24 g (1,63 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-3-difenylfosforyloksy-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4-(2"-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i tørr 20 ml acetonitril ble avkjølet til 0-5°C og behandlet suksessivt med 0,57 ml (3,27 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 0,84 g (3,27 mmol) (2S,4S)-l-N-allyloksykarbonyl-2-dimetylamino-karbonyl-4-mercaptopyrrolidin [fremstilt ved de vanlige fremgangsmåter som beskrevet i EP patentansøknad EP-126.587] i 3 ml acetonitril. Reaksjonsblandingen ble der-etter omrørt ved 0-5°C i 16 timer. Løsningen ble deretter fortynnet med 200 ml etylacetat, vasket med vann, 0,2M fosfatbuffer pH 7,0, saltvann og tørket (MgS04). Avdamp-ning av løsningsmidlet i vakuum ga en olje, som ble kromatografert på 2,5 x 20 cm silicagel. Eluering med en blanding av 1:1 toluen og etyl-acetat ga 0,80 g (64%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Dmaks: 1775 <c=0 av fi-lactam), 1710 (C=0 av ester) og 1660 cm<-1> (C=0 av amid).
allyl (4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl-(2S)-2-dimetylaminokarbonyl] pyrrolidinyltio)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetyl-silyl-oksyetyl]- 4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat (se eksempel 109, fremgangsmåte B, trinn A).
Eluering med en blanding av etylacetat, aceton og acetonitril (6:2:2) ga deretter 0,179 g (36%) av tittel-karbapenem, som en olje kontaminert med noe tetrabutylammoniumsalt. Dette produkt ble anvendt som sådan i neste trinn.
IR (NaCl, film) Vmaks: 3400 (OH), 1775 (C=0 av JS-lactam), 1710 (C=0 av ester) og 1650 cm<-1> (C=0 av amid).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,33 (d, J=6,33 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,0 (m, 3H, CH2-4 og H-3 av pyrrolidin), 2,9 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2,95, 2,97, 3,03 og 3,09 (4 x s, total 6H, NCH3), 3,4 ~ 5,0 (bred, 16H) , 5,2-5,5 og 6,8-6,1 ppm (4H og 2H, CH av allyl).
D. ( 4R, 5S, 6S)- 3-(( 4S)- 4- r( 2S)- 2- dimetvlaminokarbonvl1 - pyrrolidinyltio)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 4-( 2"-hvdroksvetvl)- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvls<y>re
En løsning av 0,33 g (0,613 mmol) allyl-(4R,5S,6S) 3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl-(2S)-2-dimetylamino-karbon-yl]pyrrolidinyltio)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,030 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 0,26 ml (2,45 mmol) N-metylanilin. Etter 1 time ble
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,03, 0,05 og 0,09 (3 x s, 3H, 3H og 6H, SiCH3), 0,87 og 0,89 (2 x s, 2 x 9H, Sit-But), 1,26 (d, J=6,25 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,1 (m, 3H, CH2-4 og H-3 av pyrrolidin), 2,6 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2,95, 1,97, 3,03 og 3,08 (4s, total 6H, CON(CH3)2)/ 3,05 (overlapping med NCH3, 1H, H-6), 3,4-3,6 og 3,7-3,9 (2 x m, 3H og 2H, H- 4, CH2OSi og H-5 av pyrrolidin), 4,0-4,2 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,2-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,5-4,9 (m, 5H, CH2 av allyl og H-2 av pyrrolidin), 5,1-5,5 og 5,8-6,1 ppm (2 x m, 4H og 2H, CH av allyl).
C. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 3-(( 4S)- 4- f1- N- allvloksvkarbonvl-( 2S)- 2-dimetylaminokarbonyl1pyrrolidinyltio)- 6- f( 1' R) - 1' - hydroksvétvll- 4-( 2"- hydroksyetvl)- 7- okso- l-azabicyclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En løsning av 0,70 g (0,91 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl-(2S)-2-dimetylamino-karbo-nyl]pyrrolidinyltio)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- (2"-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml tørr tetra-hydrofuran ble behandlet dråpevis ved 0-5°C med 0,62 ml (11,0 mmol) eddiksyre etterfulgt av 5,5 ml (5,5 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetra-hydrofuran. Reaksjonsblandingen ble deretter oppbevart ved 10°C i 144 timer. Løsningen ble deretter fortynnet med 200 ml etylacetat, vasket med kald, mettet natrium-hydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet i vakuum ga en olje, som ble kromato-grafert på 2,5 x 12 cm silicagel. Eluering med etylacetat ga først 0,30 g (50%) mono-avbeskyttet det dannede faststoff oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum, hvorved det ble oppnådd 0,164 g (65%) av den rå tittelforbindelse som et pulver. Dette faststoff ble kromatografert på 2,5 x 14 cm reversfasesilicagel ("Ji-Bondapak Ciq") under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,122 g (44%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver: [a]22= -58,5° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 94,7% på 3,9 mm x 30 cm "u-Bondapak <C>18", eluering 5% C<H>3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 5,9 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) <X>maks: 302 nm (8.680).
IR (KBr) Umaks: 1750 (CO av B-lactam), 1650, 1660 (C=0 av amid) og 1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
1H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,7-2,2 (m, 3H, CH2~1 av hydroksyetyl og H-3 av pyrrolidin), 3,0 (m overlapping med NCH3, 1H, H-3 av pyrrolidin), 3,0 og 3,07 (2 x s, 2 x 3H, NCH3), 3,3 -3,9 (m, 5H, H-4, CHoCHoOH og CH2-5 av pyrrolidin), 3,48 (dd, JH6 H5= 2,73 Hz, JH6 H1=5,91 Hz, 1H, H-6), 3,95 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,2- 4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping), og 4,83 ppm (t, J=5,8 Hz, 1H, H- 2 av pyrrolidin).
Eksempel 109
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3-(( 4S)- 4- f( 2S)- 2-dimetvlaminokarbonvnpyrrolidinvltio) -6-f ( l' R) - 1' - hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo\ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksvlsyre
Fremgangsmåte A
A. Allvl-( 4R. 5R, 6S) - 4- ( 2"- azidoetvl) - 3- difenvlfosforvl-oksy- 6- [( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll- 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 4,0 g (8,6 mmol) (3S,4S)-4-[(IR)-1-(2-azidoetyl)-3-allyloksykarbonyl-3-diazo-2-oksopropyl]-3-[<1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on i 125 ml tørr benzen ble behandlet under nitrogen med 0,075 g rhodium(II)octanoat dimer og deretter oppvarmet under tilbakekjøling (badtemperatur 90°C) i 30 minutter. Løsningsmidlet ble deretter avdampet under redusert trykk og det bisykliske keton-mellomprodukt ble løst i 60 ml tørr acetonitril og avkjølt til 0-5°C. Løsningen ble deretter behand-let med 2,0 ml (9,65 mmol) difenylklor-fosfat og 1,68 ml (9,64 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Deretter ble et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 45 minutter. Reaksjons-blandingen ble deretter fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket med kaldt vann, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04). Etter avdampning av løsningsmidlet under reduksert trykk ble resten kromatografert på 5 x 10 cm silicagel. Eluering med en gradient av 0-5% etylacetat i toluen ga 3,84 g (66%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) t)maks: 2100 (N3), 1788 (C=0 av fl-lactam) og 1730 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,07 og 0,08 (2s, 6H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, Si-tBu) , 1,28 (d, J=6,18 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,6-2,2
(m, 2H, CH2-4), 3,18 (dd, <J>R6^H5=2,95 Hz, JH6,H1=7'38 Hz' 1H' H-6), 3,1-3,5 (m, 3H, CH2OH og H-4), 4,12 (dd, JH5,H6=2'95Hz' JH5fH4=10,54 Hz, 1H, H-5), 4,19 (m, 1H, CH3<C>HO), 4,65 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,1-5,5 og 5,8-6,0 (2rn, 2H og 1H, CH av allyl), og 7,2-7,5 (m, 10H, aromatiske).
B. Allyl-( 4R. 5S, 6S)- 3-(( 4S)- 4- f1- N- allvloksvkarbonvl-( 2S)- 2- dimetvlaminokarbonvllpyrrolidinyltio)- 4-( 2"-azidoetvl)- 6- r( l' R)- lr- tert- butvldimetvlsilvloksyetvll - 7- okso- l- azabicyclo f 3. 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En løsning av 3,84 g (5,74 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-3-difenylfosforyloksy-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 40 ml tørr acetonitril ble avkjølt til 0-5°C <q>g behandlet under nitrogen med 2,0 ml (11,6 mmol) N,N-diisopropyletylamin etterfulgt av 3,0 g (11,6 mmol) (2S,4S)-1-N-allyloksykarbonyl-2-dimetylamino-karbonyl-4-mercaptopyrrolidin [fremstilt ved de alminne-lige fremgangsmåter ifølge EP-126.587] i 7 ml acetonitril. Etter 17 timer ved 0-5°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket med kaldt vann, mettet natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Resten oppnådd etter avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ble kromatografert på 5 x 10 cm silicagel under eluering med en blanding av toluen og etylacetat (1:1) og ga 2,47 g (64%) av tittelforbindelsen som et hvitt skum.
IR (NaCl, film) umaks: 2100 (N3), 1780 (C=0 av ii-lactam), 1710 (C=0 av ester) og 1660 cm<-1> (C=0 av amid).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,1 (s, 6H, SiCH3), 0,9 (s,
9H, Si-tBu) , 1,31 (d, J=6,03 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,6-2,1 (m, 3H, H-3 av pyrrolidin og CH2-4), 2,6-2,8 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2,96, 2,98, 3,05 og 3,11 <4s, total 6H, NCH3), 3,1 (overlapping med NCH3, 1H, H-6), 3,3-3,8 (m, 5H, CH2-5 av pyrrolidin, CH2N3 og H-4), 4,1 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,5-4,9 (m, 5H, CH2 av allyl og H-2 av pyrrolidin), 5,1-5,5 og 5,8-6,1 ppm (2 x m, 4H og 2H, CH av allyl).
Fremgangsmåte B
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3-(( 4S)- 4- \ 1- N- allvloksvkarbonvl-( 2S)- 2-dimetvlaminokarbonyllpyrrolidinyltio)- 6- f( l' R)- l'- tert-butvldimetylsilvloksvetvll- 4-( 2"- hydroksyetyl)- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En løsning av 2,64 g (3,44 mmol) allyl (4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl-(2S)-2-dimetylamino-karbo-nyl]pyrrolidinyltio)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4- (2"-tert-butyldimetylsilyloksy-etyl)-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat [fremstilt i eksempel 108, trinn B] i 50 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,2 ml (21,0 mmol) eddiksyre, etterfulgt av 10,3 ml (10,3 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Etter 16 timer ved 10°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med 400 ml etylacetat, vasket med kald mettet natrium-hydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga en olje, som ble kromatografert på 4 x 8 cm silicagel. Eluering med etyl-acetat ga 1,82 g (81%) av tittelkarbapenemen som en olje.
IR (NaCl, film) Dmaks: 3450 (OH), 1755 (C=0 av J3-lactam), 1705 (C=0 av ester) og 1650 cm"<1> (C=0 av amid).
^■H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,09 (s, 6H, SiCH3) , 0,89 (s, 9H, Si-tBu) , 1,29 (d, J=6,l Hz, 3H, CH3CHO) , 1,6-2,1 (m, 3H, CH2CH2OH og H-3 av pyrrolidin), 2,6-2,8 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2,96, 2,98, 3,05 og 3,09 (4s, total 6H, CON(CH3)2), 3,17 (bred dd, <J>h6,H5=2'5 <H>z' jH6 Hl=6'1 Hz' 1H' H-6), 3,46 (~t, 2H, H-5 av pyrrolidin og H-4 overlapping), 3,6- 3,9 (m, 3H, CHoCHoOH og H-5 av pyrrolidin), 4,1 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,15-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,5-4,9 (m, 5H, CH2 av allyl og H-2 av pyrrolidin), 5,1-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 4H og 2H, CH av allyl).
B. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 3-(( 4S)-\ 1- N- allvloksvkarbonvl-( 2S)- 2-dimetylaminokarbonvl1pyrrolidinyltio)- 4-( 2"- azido- etvl)-6- f( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilyloksvetvn- 7- okso- l-azabicvclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En løsning av 1,82 g (2,79 mmol) allyl (4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl-(2S)-2-dimetylamino-karbo-nyl]pyrrolidinyltio)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetyl-silyloksyetyl]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 200 ml tørr tetrahydrofuran ved -20°C og under nitrogen ble behandlet med 1,17 g (4,46 mmol) trifenylfosfin og 6,5 ml (4,81 mmol) av en 0,74M løsning av hydrazoesyre i toluen. 0,75 ml (4,76 mmol)
dietylazodikarboksylat ble deretter tilsatt dråpevis, og den
resulterende blanding ble omrørt i 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 500 ml etyl-acetat, vasket med kald, mettet natriumhydrogen-karbonat, saltvann og tørket (MgS04). Løsningsmidlet ble deretter konsentrert i vakuum, hvorved det ble oppnådd en pasta, som ble triturert ved 0-5°C med 25 ml toluen og filtrert for å fjerne det krystallinske dietylhydrazin-dikarboksylat. Filtratet ble konsentrert og behandlet på samme måte med 25 ml dietyleter for å fjerne trifenyl-fosfinoksidet. Filtratet ble deretter kromatografert på 4 x 11 cm silicagel under eluering med en blanding av toluen og etylacetat (1:1), hvorved det ble oppnådd 2,3 g av tittelforbindelsen som en olje, som ble kontaminert med trifenylfosfinoksid. Infrarød- og 1H-NMR-spektre av produktet var identiske med spektre av produktet oppnådd ved fremgangsmåte A.
C. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 3-(( 4S)- 4- r1- N- allvloksvkarbonvl-( 2S)- 2- dimetvlaminokarbonvn pyrrolidinyltio)- 4-( 2"-azidoetvl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicyclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 2,47 g (3,65 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl-(2S)-2-dimetylamino-karbo-nyl]pyrrolidinyltio) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml tørr tetrahydro-furan ble avkjølt til 0-5°C og behandlet under nitrogen med 1,25 ml (21,8 mmol) eddiksyre, etterfulgt av 11,0 ml (11,0 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetra-hydrofuran. Løsningen ble oppbevart ved 10°C i 7 dager. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket med kald, mettet natriumhydrogen-karbonat, saltvann og tørket (MgSO^). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga en olje, som ble kromatografert på 4 x 11 cm silicagel. Eluering med en gradient av etylacetat i toluen (50 -» 100%) ga 1,43 g (70%) av tittelforbindelsen som et hvitt skum.
IR (NaCl, film) umaks: 2105 (N3), 1780 (C=0 av fi-lactam) 1710 (C=0 av ester) og 1650 cm<-1> (C=0 av amid).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,39 (d, J=6,17 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,7-2,2 (m, 3H, H-3 av pyrrolidin og CH2~4), 2,6-2,8 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2, 96, 2, 98, 3, 06 og 3,10 (4 x s, total 6H, NCH3), 3,15 (overlapping med NCH3, 1H, H-6), 3,3-3,7 (m, 5H, CH2-5 pyrrolidin, H-4 og C<H>2N3), 4-4,2 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,2-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO) , 4,5-4,9 (m, 5H, CH2 av allyl og H-2 av pyrrolidin), 5,1-5,5 og 5,7-6,1 ppm (2 x m, 4H, og 2H, CH av allyl).
D. ( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3-( ( 4S)- 4- r ( 2S)- 2-dimetvlaminokarbonvllpyrrolidinyltio)- 6- r(!' R)- 1'-hydroksyetyl]- 7- okso- l- azabicvclo \ 3 , 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlsvre
En løsning av 1,18 g (2,1 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl-(2S)-2-dimetylamino-karbo-nyl]pyrrolidinyltio)-4-(2"-azidoetyl)-6- [(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,01hept-2-en-2-karboksylat i 40 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,1 g tetrakis(trifenylfosfin)-palladium
[0] etterfulgt av 0,91 ml (8,4 mmol) N-metyl-anilin. Etter 1 time ble den organiske fase ekstrahert med 3 x 40 ml kaldt vann og den kombinerte vandige ekstrakt ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løs-ningsmiddel. Den vandige fase ble deretter kromatografert på 3,5 x 15 cm reversfasesilicagel ("|i.-Bondapak C18") under eluering med en gradient av 0-15% acetonitril i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,50 g (54%) av titte1-karbapenemen som et hvitt, amorft pulver: ta]<22> = -56,2° (c 1, H20).
Renhet ved HPLC: 96% på "u-Bondapak Clg", 3,9 mm x 30 cm, 15% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfat buffer, strømningshastig-het 1 ml/min, uv-detector 302 nm, retensjonstid 7,6 min.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks<:> 302 nm (8.420).
IR (KBr) Umaks: 2100 (N3) , 1760 (C=0 av ii-lactam), 1655 (C=0 av amid) og 1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,36 Hz, 3H, CH3CH0), 1,7-2,3 (m, 3H, H-3 av pyrrolidin og CH2-4), 3,0 og 3,07 (2 x s, 2 x 3H, NCH3), 3,1 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 3,3-3,7 (m, 5H, H-5 pyrrolidin, H-4, H-6 og CH2N3), 3,77 (dd, Jgem=12, 15
Hz, <J>h5,H4=6'32 Hz' h~5 av Pyrrolidin), 4,0 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,27 (m, 1H, CH3CHO) 4,30 (dd overlapping med CH3CHO, JH5,H6=2'7 HZ/ H~5) °9 4,9 ppm (overlapping med HOD, H-2 av pyrrolidin).
Eksempel 110
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3-! ( 4S)- 4- r( 2S)- 2- dimetvl-aminokarbonyl1pyrrolidinyltio- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll - 7- okso- l- azabicvclo r3, 2. 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre, eddiksvresalt
En løsning av 0,70 g (1,60 mmol) (4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-3-[(4S)-4-[(2S)-2-dimetylaminokarbonyl]-pyrro-lidinyltio] -6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-karboksylsyre i 140 ml kaldt vann ble hydrogenert ved 0-5°C over 1,9 g 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 1 time. Deretter ble 0,18 ml (3,2 mmol) eddiksyre tilsatt (pH ble endret fra 8,1 til 4,2) og katalysatoren ble frafiltrert på en "Celite"-pute. Filtratet ble kromatografert på en 2,5 x 13 cm reversfasesilicagelsøyle ("u-Bondapak C18") under eluering med vann. De UV-aktive fraksjoner ble samlet, lyofilisert og kromatografert ytterligere en gang på samme søyle. Lyofilisering av de relevante fraksjoner ga 0,35 g (47%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft pulver: [Ol]22 -47,8° (c 1,0, H20).
Renhet ved HPLC: 98,8% på "u-Bondapak C18", 3,4 mm x 30 cm, 5% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastig-het 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 11,3 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 300 nm (8.130).
IR (KBr) Umaks: 1760 (C=0 av J5-lactam), 1660 (C=0 av amid) og 1600 cm<-1> (bred, C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,35 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,8-2,4 (m, 3H, H-3 av pyrrolidin og CH2-4), 1,94 (s, CH3C02H) , 3,02 og 3,09 (2s, 2 x 3H, CON(CH3)2), 2,9-3,2 (m overlapping med NCH3, 3H, H-3 av pyrrolidin og CH2NH2), 3,25-3,5 (m, 2H, H-5 av pyrrolidin og H-4), 3,51 (dd, <J>h6,H5=2'89 Hz, JH6,H1 = 6'44 Hz' 1H' H-6) , '3,6-3,75 (m, 1H, H-5 av pyrrolidin), 3,98 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,3 (m, 1H, CH 3CHO). 4,34 (dd overlapping med CH3CHO, JH5H6=2'89 Hz' <J>H5/H4=9,70 Hz, 1H, H-5) og 4,74 ppm <t, J=8,6 Hz, 1H, H-2 av pyrrolidin).
Eksempel 111
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3-{ ( 45)- 4- f( 2S)- 2-dimetylaminokarbonyl1pyrrolidinyltio}- 6- f( 1' R)- 1'-hydroksyetyl]- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksylsyre
A. Allyl-( 4R, 5S, 6S)- 3-(( 4S)- 4- f1- N- allvloksvkarbonvl)-( 2S)- 2- dimetvlaminokarbonvllpvrrolidinvltio)- 4-( 3"-azidopropyl)- 6- f(!' R )- 1'- hydroksyetyl]- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En løsning av 8,23 mmol allyl-(2R,4R,5R, 6S)-4-(3"-azidopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat (fremstilt ved ringslutning av 3,0 g, 8,23 mmol av diazo-forstadiet) i 60 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,9 ml (9,18 mmol) difenylklorfosfat og 1,6 ml (9,18 mmol) N,N-diisopropyl etylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal av 4-N,N-dimetyl-aminopyridin ble deretter tilsatt, og løsningen ble omrørt i 1 time. Deretter ble ytterligere 2,0 ml (11,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av en løsning av 3,0 g (11,65 mmol)
(2S,4S)-l-N-allyloksykarbonyl-2-dimetylaminokarbonyl-4—
mercaptopyrrolidin i 7 ml aceto-nitril, og den resulterende blanding ble omrørt ved 0-5°C i 18 timer. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 500 ml etylacetat og vasket med kaldt vann, mettet natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga en olje, som ble kromatografert på 6,5 x 12 cm silicagel. Eluering med en gradient av etylacetat i toluen (1:1 til EtOAc) ga 1,59 g (33%) av tittelforbindelsen som et hvitt skum.
IR (NaCl, film) umaks: 2100 (N3), 1775 (C=0 av fi-lactam)f 1705 (C=0 av ester) og 1650 cm<-1> (C=0 av amid).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,37 og 1,39 (2d, J=6,l Hz og J=6,18 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 5H, H-3 av pyrrolidin, CH2-1 og 2 av propyl), 2,6-2,8 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2, 96, 2, 97, 3, 05 og 3,1 (4S, total 6H, CON(CH3)2)/ 3,1-3,7 (m, 6H, CH2~5 av Pyrrolidin, CH2<N>3# H-4 og H-6), 4,0 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,5-4,9 (m, 5H, H-2 av pyrrolidin og CH2 av allyl), 5,1-5,5 og 5,8-6,1 ppm (2m, 4H og 2H, CH av allyl) .
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 3- r( 4S)- 4- f( 2S)- 2-dimetylaminokarbonvllpyrrolidinvltiol- 6- r( 1' R)- 1'-hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksvlsyre
En løsning av 1,59 g (2,76 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-3-((4S)-4-[1-N-allyloksykarbonyl)-(2S)-2-dimetylamino-karbo-nyl]pyrrolidinyltio)-4-(3"-azidopropyl)-6- [(l'R) -1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,12 g tetrakis(trifenyl-fosfin)palladium
[0] etterfulgt av 1,2 ml (11,1 mmol) N-metylanilin. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen ekstra-hert med 3 x 50 ml vann, og den kombinerte vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løs-ningsmiddel. Kromatografi av den vandige fase på 3,5 x 15 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C]_g") under anvendelse av en gradient av 0-15% acetonitril i vann ga 0,60 g (48%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft pulver etter frysetørring: [cx]<22> -47,7° (c 1,0,H20)
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C^", 3,9 mm/30 cm, eluering 15% CH3CN~H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1,5 ml/min, UV-detektor 302 nm, retensjons-tid 9, 0 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (9.737).
IR (KBr) "Omaks: 2100 (N3) , 1755 (C=0 av Jl-lactam), 1655 (C=0 av amid) og 1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,32 (d, J=6,39 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 5H, CH2-1 og 2 av propyl og H-3 av pyrrolidin), 2,99 og 3,07 (2s, 2 x 3H, C0N(CH3)2), 2,9-3,1 (overlapping med C0N(C<H>3)2, 1H, H-3 av pyrrolidin), 3,2-3,5 (m, 5H, H-5 av pyrrolidin, H-4, H-6 og CH2N3), 3,63 (dd, Jgem<=1>2,25 Hz, JH5 H4=6'16 Hz' 1H/ H~5 av Pyrrolidin), 3,93 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,2-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping) og 4,65 ppm (t, J=8,5 Hz, 1H, H-2 av pyrrolidin).
Eksempel 112
( 4R. 5S. 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3-( ( 4S)- 4- r ( 2S)- 2-dimetvlaminokarbonyllpyrrolidinyltio)- 6- T( l' R)- 1'-hydroksvetvll- 7- okso- l- azabicyclo\ 3 . 2 , 01hept- 2- en- 2-karboksvlsyre, dibasisk fosfatsalt
En løsning av 0,51 g (1,13 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-azidopropyl)-3-((4S)-4-[(2S)-2-dimetylaminokarbonyl]-pyrrolidinyltio)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 100 ml kaldt vann ble hydrogenert over 0,5 g 5% palladium-på-aluminium-oksid ved 45 psi hydrogen og 0-5°C i 1 time. Deretter ble 50 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og katalysatoren ble frafiltrert på en "Celite"-pute. Filtratet ble kroma-tografert på 3,5 x 14 cm reversfase-silicagel ("|i-Bondapak C^") under eluering med en gradient av 0-10% acetonitril i 0,02M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert og avsaltet på en liknende søyle (2,5 x 14 cm) under eluering med vann i stedet for buffer. Lyofilisering av de uv-aktive fraksjoner ga 0,25 g (46%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft pulver: [CC]<22> -67,6° (c 1,0, H20).
Renhet ved HPLC: 99% på "|i-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 8% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 0,8 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 5,68 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (10.400).
IR (KBr) <t>)maks: 1760 (C=0 av ii-lactam), 1645 (C=0 av amid) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (d, J=6,33 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 5H, H-3 av pyrrolidin og CH2-1 og 2 av propyl), 2,73 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2,97 og 3,07 (2s, 2 x 3H, CON(C<H>3)2), 3-3,2 (overlapping med NCH3, <4>H, CH2-5 av pyrrolidin og CH2NH2), 3,34 (bred t, 1H, H-4), 3,38 (dd, <J>H6/H5=2,59 Hz, <J>h6,H1=6'27 Hz' 1H' H~6)' 3'73 (m' 1H' H"4 av pyrrolidin), 4,10 (dd kollapset til en t, J=8,0 Hz, 1H, H-2 av pyrrolidin) og 4,2-4,4 ppm (m, 2H, CH3CHO og H-5 overlapping).
Eksempel 113
( 4R, 5S, 6S) - 3- ( MS) - 4- f ( 2S) - 2- dimetvlamino-karbonvllpyrrolidinyltio)- 4-( 3"- quanidinopropyl)- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2-en- 2- karboksvlsvre, dibasisk fosfatsalt
kj LJ
En løsning av 0,14 g (0,33 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyl)-3-{(4S)-4-[(2S)-2-dimetylaminokarbonyl]-pyrrolidinyltio}-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, dibasisk fosfatsalt i 15 ml vann ved 0-5°C ble innstilt til pH 8- 8,5 med IN natriumhydroksid og deretter behandlet med 0,22 g (1,77 mmol) aminoiminometansulfonsyre tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter. pH av reaksjonsblandingen ble holdt ved 8-8,5 under tilsetningen og i ytterligere 2 timer. Deretter ble 15 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og den resulterende løsning ble kromatografert på 2,5 x 14 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^g")• Eluering med en gradient av 0-15% acetonitril i vann ga 0,068 g (45%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver etter frysetørring.
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 8% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 302 nm, retensjonstid 7,2 min.
UV (<H>20, pH 7,4 fosfatbuffer) <X>maks: 302 nm (10.800).
IR (KBr) "Omaks: 1755 (C=0 av Ji-lactam) , 1640 (C=0 av amid) og 1590 cm<-1> (sh, C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,38 Hz, 3H, CH3CHO),
1,4-2,0 (m, 5H, H-3 av pyrrolidin og CH2-1 og 2 av propyl), 2,75 (m, 1H, H-3 av pyrrolidin), 2,97 og 3,08 (2s, 2 x 3H, NCH3), 3,1-3,4 (m, 5H, CH2-5 av pyrrolidin, CH2N-3 av propyl og H-4), 3,33 (dd, <J>H6,H5=2'55 Hz' JH6,H1=6'21 Hz' 1H' H"6) ' 3,75 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,16 (X del av AMX system, JAX=8,8 Hz, JMX=7'4 Hz' 1H' H~2 av Pyrrolidin), 4,25 (dd overlapping med CH3CHO, Jh5,H6=2'55 Hz' 1H' h~5^ °9 4/27 PPm (m, 1H, CH3CHO).
Eksempel 114
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( 2- aminoetvl) tiol- 6-r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo r3. 2. 01hePt- 2-en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- allvloksvkarbonvlamino-etvl) tiol- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- 1 ' - tert-butvldimetvlsilvloksyetvll- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 10,0 mmol allyl-(2R,4R,5R,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat (frem-stilt ved ringslutning av 4,64 g, 10,0 mmol av diazo-forstadiet) i 75 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 2,3 ml (11,1 mmol) difenylklor-fosfat og 1,9 ml (10,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin til-satt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal av 4-N,N-dimetylaminopyridin bl€$ deretter tilsatt, og den resulterende blanding ble omrørt ved ,0-5°C i 30 minutter. Løsningen ble deretter behandlet med ytterligere 6,0 ml (34,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin, etterfulgt av 5,1 g (33,4 mmol) allyl-2-mercaptoetylkarbamat [se eksempel 116, trinn A] i 5 ml acetonitril, og den resulterende blanding ble omrørt ved 0-5°C i 20 timer. Løsnin-gen ble deretter fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket med vann, mettet natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04) . Resten oppnådd etter avdampning av løsningsmidlet, under vakuum ble kromatografert på 5 x 10 cm silicagel under eluering med en gradient av 0-10% etylacetat i toluen. Inddampning av de relevante fraksjoner ga 4,37 g (75%) av tittelforbindelsen som en lysegul olje. Ifølge TLC og ^H- NMR var dette materiale kontaminert med noen urenheter (disulfid), men ble anvendt som sådan i neste trinn.
IR (NaCl, film) umaks: 2100 (N3), 1775 (C=0 av fi-lactam) og 1720 cm"<1> (bred, C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,89 (S, 9H, Si- tBu), 1,30 (d, J=6,05 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 2H, CH2-4), 2,8-3,6 (m, 8H, SCH2C<H>2N, <CH>2N3, H-4 og H-6), 4,1-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO), 4,5-4,9 (m, 4H, CH2 av allyl), 5,1-5,5 og 5,8-6,1 ppm (2m, 6H, og 2H, CH av allyl og NH).
B. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 3- f( 2- allvloksvkarbonvlaminoetvl)-tiol- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- l- azabicyclo-[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En løsning av 4,37 g (7,54 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-3-[ (1-allyloksykarbonylaminoetyl)tio]-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 120 ml tørr tetra-hydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 2,7
ml (47,5 mmol) eddiksyre etterfulgt av 24 ml (24,0 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran
tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter. Løsningen ble deretter oppbevart ved 10°C i 7 dager. Reak-sjonsblandingen ble deretter fortynnet med 500 ml etyl-acetat, vasket med mettet natriumhydrogenkarbonat (2x), saltvann og tørket (MgSO^). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga en olje,
som ble kromatografert på 6,5 x 11 cm silicagel under eluering med en gradient av etylacetat i toluen (7:3 til 1:1).
Inndampning av de UV-aktive fraksjoner ga 1,17 g (33%) av tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl) Umaks: 3480 (OH) , 2100 (N3) , 1770 (C=0 av £>-
lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,39 (d, J=6,24 Hz, 3H,
CH3CHO) , 1,7-2,1 (m, 2H, CH2-4), 2,7-3,15 (m, 2H, SCH2) , 3,18
(dd, <J>H6,H5=2'66 H<z>'<J>H6,H1=7'97 Hz' 1H' H"6)' 3,2-3,7 (m, 5H, CH2NH, CH2N3 og H-4), 4,23 (m, overlapping med H-5, 1H,
CH3CHO), 4,25 (dd, <J>h5,H6=2'66 H<z>'<j>H5,H4=9'57 Hz' 1H' H*5)'
4,57 og 4,75 (2m, 2 x 2H, CH2 av allyl), 5,1-5,5 og 5,8- 6,1
ppm (2m, 6H og 2H, CH av allyl og NH).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- f( 2- aminoetvl) tiol- 6-f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2. 01 - hept- 2- en- 2- karboksylsyre
En løsning av 1,17 g (2,5 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-3-[(2-allyloksykarbonylaminoetyl)tio]-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 30 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,072 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium
[0] etterfulgt av 1,6 ml (14,8 mmol) N-metylanilin. Løsningen ble omrørt i 3 timer under tilsyne-komst av et presipitat. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med 3 x 35 ml kaldt vann og den kombinerte vandig fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsnings-middel. Løsningen ble deretter kromatografert på 2,5 x 14 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak Cis") under eluering med en gradient av acetonitril i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,37 g (43%) av tittelkarbapenemen som et hvitt, amorft f ast st of: tot]p<2> + 21,5° (c 1,0, H20).
Renhet ved HPLC: 99,2% på "u-Bondapak C18" 3,9 mm x 30 cm, 10% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshas-tighet 1 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 7,68 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 298 nm (7401).
IR (KBr) Umaks: 2100 (N3) , 1760 (C=0 av Ji-lactam) og 1590 cm"<1> (bred, C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,38 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,7-2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,9-3,7 (bred m, 7H, SCH2CH2NH2, CH2N3 og H-4), 3,50 (dd, Jh6,H5=2'67 Hz' JH6,H1=6'24 Hz' 1H' h"6) °9 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping).
Eksempel 115
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 2"- aminoetvl)- 3- f( 2- aminoetvl) tiol- 6-eddiksvresalt
En løsning av 0,30 g (0,88 mmol) (4R, 5S, 6S)-3-[ (2-aminoetyl)tio]-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 90 ml kaldt vann ble hydrogenert ved 0-5°C over 1,2 g 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 50 minutter. Deretter ble 0,1 ml (1,6 mmol) eddiksyre tilsatt (pH ble endret fra 9,3 til 4,3) og katalysatoren ble fra-filtrert på en "Celite"-pute. Filtratet ble kromatografert på 2,5 x 14 cm reversfasesilicagel under eluering med 0,005M vandig eddiksyre. Produktet ble eluert meget hurtig fra søylen med løsningsmiddelfronten. De UV-aktive frak-sjoner ble kombineret, lyofilisert og kromatografert ytterligere en gang i samme søyle. Lyofilisering ga 0,22 g (66%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft pulver. Ifølge UV og ^H-NMR hadde dette produkt en renhet på 60% og inneholdt noen uorganiske salter av eddiksyre (basert på en UV-absorpsjon på 7400 for azido-forstadiet).
Renhet ved HPLC: 99% på "|i-Bondapak C18'*, 3, 9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 0,9 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 5,7 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 296 nm (4.446).
IR (KBr) "Umaks: 1760 (C=0 av Ji-lactam) og 1570 cm"<1 >(bred, C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,36 Hz, 3H, CH3CHO), 1,9 (s, CH3C02H) , 1,8-2,4 (m, 2H, CH2~4) , 2,8-3,45 (m, 7H, SCH2CH2NH2, H-4 og CH2NH2>' 3'49 (dd'<J>H6,H5=2'84 Hz' JH6/H4=6,42 Hz, 1H, H-6), 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3<C>HO).
Eksempel 116
( 4R, 5S,6S)-3- f( 2- aminoetvl) tiol- 4-( 3"- azidopropvl)- 6-r(!' R)- 1' - hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f3, 2. 01-hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allyl- 2- mercaptoetvlkarbamat
HSCH2CH2NH2.HC1 + CH2=CH-CH2OCOCl -* HSCH2CH2NHC02CH2-CH=CH2
En suspension av 4,4 g (38,7 mmol) 2-aminoetantiol, hydroklorid i 30 ml tørr acetonitril ble avkjølt til 0-5°C og behandlet under nitrogen med 16,0 ml (91,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Etter 5 minutter ble 6,56 ml (51,7 mmol) trimetylsilylklorid tilsatt på én gang, og blandin-gen ble omrørt i 1"5 minutter. Deretter ble 4,24 ml (40,0 mmol) allylklorformiat dråpevis tilsatt, etterfulgt av 6,9 ml (29,6 mmol) N,N-diisopropyletylamin (10 minutter), og den resulterende blanding ble omrørt i 30 minutter ved 0-5°C og i 2 timer ved 22°C. 100 ml vann ble deretter til-satt og reaksjonsblandingen ble ekstrahert med 2 x 100 ml diklormetan. Den kombinerte organiske fase ble vasket med 20 ml IN saltsyre, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (Na2S04). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga 6,5 g av den rå tiol som en klar olje, som ble anvendt umiddelbart til koblingstrinnet. Frem-stillingen av tittelforbindelsen ble basert på fremgangs-måten som beskrevet av I. Shinkai et al, Svntesis, 924, (1980).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 6: 1,36 (t, J=8,53 Hz, 1H, SH), 2,66 (m, 2H, SCH2), 3,37 (m, 2H, CH2N), 4,57 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2 (bred, 1H, NH), 5,2-5,4 og 5,8-6,1 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- allvloksvkarbonvlaminoetvl)-t io1- 4-( 3"- az idopropyl)- 6- l ( 1' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 7-okso- l- azabicvclo[ 3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 11,0 mmol allyl-(4R,5R,6S)-4-(3"-azidopropyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat (fremstilt ved ringslutning av 4,0 g, 11,0 mmol av diazo-forstadiet) i 50 ml tørr acetonitril ble avkjølt til 0-5°C og behandlet dråpevis med 2,3 ml (11,5 mmol) difenylklorfosfat og 2,3 ml (11,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystal av 4-N,N-dimetyl-aminopyridin ble deretter tilsatt, og løsningen ble omrørt i 1 time. Hydroksylgruppen ble deretter silylert ved dråpevis tilsetning av 2,3 ml (11,5 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin, etterfulgt av 1,46 ml (11,5 mmol) klortrimetyl-silan, og den resulterende blanding ble omrørt i 15 minut-ter. Deretter ble ytterligere 3,8 ml (21,9 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 3,53 g (21,9 mmol) allyl-2-mercaptoetylkarbamat tilsatt, og blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 16 timer. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 400 ml etylacetat og vann. Den organiske fase ble vasket med 2% kald vandig sitronsyre, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04). Løsningsmidlet ble avdampet under redusert trykk og resten ble løst i en blanding av 100 ml tetrahydrofuran og 50 ml vann og behandlet ved 0-5°C med 5 ml eddiksyre. Etter 1 time ved 0-5°C og 2 timer ved 22°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med 400 ml etylacetat, vasket suksessivt med kald, mettet natrium-hydrogenkarbonat, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04) . Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga en olje, som ble kromatografert på 4 x 12 cm silicagel. Eluering med en gradient av etylacetat i toluen (8:7 til 1:1) ga 3,19 g (61%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) l>maks: 3400 (OH) , 2100 (N3) , 1755 (C=0 av fi-lactam) og 1705 cm<-1> (bred, C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,39 (d, J=6,25 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 2,7-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,24 (dd, <J>H6,H5=2'63 Hz'<J>H6,H1=7'46 Hz' 1H' H_6)' 3,2-3,6 (m, 5H, CH2N3, CH2N og H-4), 4,24 (dd, <J>h5,H6=2'63 Hz' JH5,H4=9,43 Hz' 1H/ H~5)' 4,24 (overlapping med H-5, 1H, CH3CHO), 4,56 og 4,75 ppm (2m, 2 x 2H, CH2 av allyl), 5,1-5,5 (m, 5H, CH av allyl og NH) og 5,8-6,1 ppm (m, 2H, CH av allyl) .
C. ( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- aminoetvl) tiol- 4-( 3"- azidopropyl)- 6-r(!' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01 - hept- 2- en- 2- karboksylsyre
En løsning av 3,19 g (6,65 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-3-[(2-allyloksykarbonylaminoetyl)tio]-4-(3"-azidopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 80 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,19 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium
[0] og 4,3 ml (40,0 mmol) N-metylanilin. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen, som inneholdt et gele-liknende presipitat fortynnet med 200 ml kaldt vann og innstilt til pH 3,8 med 2N saltsyre for å løse amino-syren. Den kalde, vandige fase ble oppsamlet, vasket med diklormetan, innstilt til pH 6,5 med IN natrium-hydroksid og holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løs-ningsmiddel. Løsningen ble deretter kromatografert på 3 x 15 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^s") under elue-ring med en gradient av 0-10% acetonitril i vann. Lyofi-lisering av de UV-aktive fraksjoner ga 1,28 g (54%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver: [CX]<22>
+ 32, 6° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 99% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 10% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-
ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 13,3 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 298 nm (8.425).
IR (KBr) Uma]cs: 2100 (N3) , 1760 (C=0 av ii-lactam) og 1590
cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 4Hr CH2-1 og 2 av propyl), 2,8-3,5 (m, 5H, SCH2C<H>2NH2 og H-4), 3,42 (t, J=6,2 Hz, 3H, CH2N3), 3,47 (dd, <J>H6,H5=2'70 <Hz>'<J>H6,H1=5'98 Hz' 1H' H~6>' 4'26 <dd'
<J>H5,H6=2'70 Hz' JH5,H4=9'35 Hz' 1H' H-5) °9 4/28 PPm (m
overlapping med H-5, 1H, CH3CHO).
Eksempel 117
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3-[( 2- aminoetvl) tiol- 6-r ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01 - hept- 2- en- 2- karboksylsvre, eddiksvresalt
En løsning av 0,292 g (0,82 mmol) (4R,5S,6S)-3-[(2-aminoetyl)tio]-4-(3"-azidoetyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 90 ml vann ble hydrogenert ved 0-5°C over 1,2 g 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 1 time. Der-etter ble 0,1 ml (1,64 mmol) eddiksyre tilsatt og katalysatoren ble frafiltrert på en "Celite"-pute. Filtratet ble deretter kromatografert på 3 x 12 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C18") under eluering med 0,005M vandig eddik-syre. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert og lyofili-sert, hvorved det ble oppnådd 0,264 g (82%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff: Wq2 + 37,0° (c 1,0, H20).
Renhet ved HPLC: 98% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 0,8 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 4,9 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 298 nm (7.517).
IR (KBr) "Ojj^g: 1755 (C=0 av fi-lactam) og 1570 cm"<1 >(bred, C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 1,92 (s, CH3C02H), 2,8-3,4 (m, 7H, SCH2C<H>2NH2, CH2NH2-3 av propyl og H-4), 3,43 (dd, <J>H6,H5=2'73 Hz' JH6,H1 = 6'37 Hz' 1H' H-6) ' 4'2_4/3 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping).
Eksempel 118
( 4R, 5S. 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- r( 2- N- formimidovl-aminoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1 ' - hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsyre
En suspension av 0,460 g (1,29 mmol) (4R,5S,6S)-3-[(2-aminoetyl)tio]-4(3"-azidopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 25 ml kaldt vann ble innstilt til pH 8,5 med IM natrium-hydroksid og behandlet ved 0-5°C med 0,78 g (4,52 mmol) benzylform-imidat,hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 10 minutter. pH ble holdt ved 8-8,5 med IM natriumhydroksid under tilsetningen og i ytterligere 25 minutter. Deretter ble 20 ml 0,2M pH 6 fosfatbuffer til-satt og reaksjonsblandingen ble vasket med 20 ml etyl-acetat. Den vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel og deretter kromatografert på 2,5 x 11 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C18"). Søylen ble eluert med en gradient av 0-15% acetonitril i 0,01M fosfatbuffer. De UV-aktive fraksjoner ble kombineret, konsentrert i vakuum (T <20°C) og avsaltet i samme søyle under eluering med vann istedenfor buffer. Lyofilisering av de relevante fraksjoner ga 0,240 g (48%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft pulver: [oc]^<2> +16,0°
(c 1, 0, H20) .
Renhet ved HPLC: 99,4% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 20% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 0,8 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjons-tid 6,06 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (9.768).
IR (KBr) \)maks: 2100 (N3) , 1955 (C=0 av B-lactam) , 1715 (CN av formimidoyl) og 1590 cm<-1> (C=0 av karbok-sylat).
^•H-NMR (.200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,4-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av butyl), 2,8-3,3 (m, 2H, SCH2), 3,3-3,8 (m, 6H, H- 6, H-4, CH2N3 og CHoNH), 4,2-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping), 7,76 og 7,83 ppm (2S, 1H, NHCH=NH).
Eksempel 119
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- f( 2- N- formimidovl-aminoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll - 7- okso- l-azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksvresalt
En løsning av 0,180 g (0,47 mmol) (4R,5S, 6S)-4-(3"-azidopropyl)-3-[(2-N-formimidoylaminoetyl)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 70 ml kaldt vann ble hydrogenert ved 0-5°C over 1,2 g 5% palladium-på-aluminiumoksid og under 45 psi hydrogen i 1 time. Deretter ble 0,045 ml (0,79 mmol) eddiksyre tilsatt og katalysatoren ble frafiltrert på en "Celite"-pute. Filtratet ble deretter kromatografert på 3x10 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C-^g") under eluering med 0,005M eddiksyre. Lyofilisering av de UV- aktive fraksjoner ga 0,136 g (69%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff: [a]2<2> + 17,5° (c 1,0 H2<0>).
Renhet ved HPLC: 94% på "u-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm eluering 5% CH3CN-H2O pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 7,57 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 300 nm (6.900).
IR (KBr) Umaks: 1755 (C=0 av JJ-lactam), 1720 (CN av formimidoyl) og 1570 cm<-1> (bred, C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 6: 1,33 (d, J=6,36 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 4H, CH2~1 og 2 av propyl), 1,92 (s, 3H, CH3C02<H>), 3,04 (t, J=7,0 Hz, 2H, CH2N<H>2), 3,42 (dd, <J>H6,H5=2'64 Hz'
JH6,H1=6'31 Hz' 1H' H~6>' 2,8-3,7 (m, 5H, SCH2, CH2<N>HCH= NH og H-4), 4,26 (dd, overlapping med CH3CHO, Jh5,H6=2'64 Hz' 1H' h~ 5), 4,28 (m, 1H, CH3CHO), 7,74 og 7,83 ppm (2S, 1H, NHCH=NH).
Eksempel 120
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 6- r ( l' R)- l'~ hvdroksvetvll- 3- f 2-( 1- pyrrolidinyl) etvltiol- 7- okso- l-azabicvcloT3. 2. 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksvresalt
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- f 12 - hvdroksvetvl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- trietvlsilvloksvetvl1- 7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2, Qlhept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (is-metanol bad) løsning av allyl-(2R, 4R, 5R, 6S.)-4-(3"-azidopropyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]- heptan-2karboksylat [fremstilt fra 1,0 g (2,75 mmol) (3S., 4R)-3-[ (1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[ (1"R)-1"-(3-azidopropyl)-3"-diazo-3"allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]-azetidin-2-on] ble langsomt behandlet med 0,6 ml (3,0 mmol) difenyl-klorfosfat etterfulgt av dråpevis tilsetning av 0,52 ml (3,0 mmol) diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 1 time, deretter ble 0,5 ml (3 mmol) trietylsilylklorid og 0,52 ml (3,0 mmol) diiso-propyletylamin tilsatt. Blandin-gen ble omrørt i 30 minutter ved -15°C. Det resulterende silylerte enolfosfat ble behandlet med 430 mg (5,5 mmol) 2-merkaptoetanol i 0,5 ml CH3CN og 0,95 ml (5,5 mmol) diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 19 timer ved 5-8°C (kaldt rom), deretter fortynnet med 50 ml etyl-acetat, vasket med 2 x 20 ml iskaldt vann, 3 x 20 ml IM vandig NaHSC^, 20 ml vann, 20 ml IN vandig HC1, 2 x 20 ml vann, 20 ml IM vandig NaHCC^, 20 ml vann, 20 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 50 g (0-50% etylacetat/heksan) hurtigsilicagelsøyle, hvorved det ble oppnådd 883 mg (63%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) %aks: 3600 (0H> ' 2100 (N3>' 1775 (C=0 B-lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 ester).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,05-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,2 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk CH2), 4,30-4,16 (1H, m, H- 1'), 4,145 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 3,803 (2H, t, J=5,9 Hz, CH20), 3,40-3,28 (2H, m, CH2N3), 3,24-3,28 (1H, m, H-l'), 3,192 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=7,5 Hz, H-6), 3,15-2,87 (2H, m, SCH2), 1,89-1,75 (1H, m, del avCH2-4), 1,7-1,45 (3H, m, CH2~CH2 ved 4), 1,552 (1H, bs, OH), 1,316 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,998, 0,957 og 0,920 (9H, 3 linjer, CH3), 0, 662, 0, 659, 0, 623, 0, 584, 0, 546 og 0,539 ppm (Hu, 6 linjer, CH2).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- f2-( l-pyrrolidinvl) etvltiol- 6- r( l' R)- 1'- trietvlsilvl-oksvetvll - 7- okso- l- azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald (tørr is-aceton) løsning av 883 mg (1/73 mmol) allyl- (4R, 5S, 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3- [ (2-hydroksyetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-trietylsilyloksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml diklormetan ble først behandlet med 0,80 ml (4,5 mmol) diisopropyletylamin og dråpevis med 0,35 ml (2,1 mmol)
trifluormetansulfonsyreanhydrid. Blandingen ble omrørt i 20
minutter og 0,90 ml (10,4 mmol) pyrrolidin i 1 ml diklormetan ble tilsatt. Omrøring ble fortsatt i 30 minutter ved -78°C (tørris-aceton) og i 30 minutter ved
-15°C (is-metanol bad). Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 100 ml etylacetat og 20 ml petroleumseter, vasket med 10 x 25 ml iskaldt vann, 25 ml saltvann, tørket (MgS04), og resten oppnådd ved løsningsmiddelavdampning ble ledet gjennom en 45 g
(33 -» 100% etylacetat/heksan, 10% -» 40% aceton/etylacetat)
hurtigsilicagelpute, hvorved det ble oppnådd 510 mg (52%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) umaks: 2100 (N3), 1775 (C=0 Ji-lactam) og 1710
cm-<1> (C=0 ester).
<1>H-NMR (CDC13 200 MHz) 8: 6,03-5,9 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,21 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk CH2), 4,30-4,14 (1H, m, H- 1'), 4,121 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,6 Hz,
H-5), 3,4-3,30 (2H, m, CH2N3), 3,23-3,14 (1H, m, H-4), 3,169
(1H, dd, J= 2,6 Hz, J=7,6 Hz, H-6), 2,98- 2,88, 2,75-2,63 (2H,
2 sett av m, SCH2), 2,63-2,45 (6H, m, CH2N), 1,9-1,5 (8H, m, CH2CH2-4 og CH2CH2 pyrrolidin), 1,317 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0, 0993, 0, 952, 0, 916 (9H, 3 linjer, CH3) , 0, 697, 0, 658, 0, 655, 0,619, 0,579, 0,542 og 0,535 ppm (6H, 7 linjer, SiCH2). C. Allyl- T4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 6- r( l7R)- 1' - hvdroksvetvll- 3- f2-( 1- pyrrolidinvl) etvltio)- 7- okso- l-azabicyclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat En kald (is-metanol) løsning av 500 mg (0,77 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3- [2- (1-pyrrolidinyl) -etyltio] - 6-[(l'R)-1'-trietylsilyloksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml vannfri tetrahydrofuran ble først behandlet med 0,290 ml (5,28 mmol) iseddiksyre etterfulgt av dråpevis tilsetning av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 2,64 ml (2,64 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen fikk lov til å stå ved -20°C i 20 timer, den ble deretter fortynnet med 25 ml etylacetat, vasket med 3 x 10 ml iskaldt IM vandig NaHCC>3, 10 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten, 370 mg (94%) oppnådd ved løsningsmiddelavdampning, ble anvendt som sådan i neste trinn.
IR (CH2C12) Umaks: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 (C=0 fi-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 ester).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6, 04-5, 90 (1H, m, vinylisk H) , 5, 49-5,22 (2H, m, vinylisk H), 4, 82-4, 62 (2H, m, allylisk H), 4,27-4,18 (1H, m, H- 1'), 4,217 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 3,45-3,25 (3H, m, CH2N3 og H-4), 3,233 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,6 Hz, H-6), 2,99-2,82, 2,76-2,65 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,65-2,4 (6H, m, CH2N), 1,95-1,50 (9H, m, CH2<C>H2~4, OH og CH2CH2 pyrrolidin) og 1,388 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
D. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 6- f ( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 3- f2-( 1- pyrrolidinyl) etvltio]- 7- okso- l-azabicvclo [ 3 . 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 360 mg (0,80 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3- [2-(1-pyrrolidinyl)etyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml diklormetan ble først behandlet med Pd(PPh3)4 etterfulgt av dråpevis tilsetning av 0,17 ml (1,6 mmol) N-metylanilin. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, deretter ble en 50 ml (5 mmol) 0,1M pH 7,0 vandig fosfatbuffer og 50 ml dietyleter tilsatt. Den organiske fase ble atter ekstrahert med 2 x 15 ml 0,1M pH 7,0 buffer og 15 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombi-nert, vasket med 2 x 25 ml dietyleter og ledet gjennom en 50g (0 -» 30% CH3CN/H20) "ji-Bondapak C-Lg" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 200 mg (58%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 99,9% som bestemt ved HPLC (r.t. = 7,751, "ji-Bondapak C18", lOjI, 15% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (vann) Xmaks: 296 (7170).
IR (Nujol) Dmaks: 3500-3100 (OH) , 2100 <N3) , 1755 (C=0 J5-lactam) og 1600 cm<-1> (C=0 karboksylat).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,35-4,20 (1H, m, H-l'), 4,263 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 3,475 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,l Hz, H-6), 3,46- 3,39 (2H, m, CH2N), 3,10-2,9 (1H, m, 1H av SCH2), 2,10-1,85 (5H, m, C<H>2CH2 pyrrolidin og 1H av CH2~4), 1,80-1,45 (3H, m, CH2CH2-4) og 1,331 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
E. ( 4R, 5S, 6S) - 4-( 3"- aminopropvl)- 6- [ ( l' R) - 1' -
hvdroksvetvll-3-[2-( 1- pvrrolidinvl) etvltiol- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksvresalt
En kald (isbad) løsning av 150 mg (0,34 mmol) (4R, 5S., 6S.) - 4- (3"-azidopropyl) -6- [ (l'R)-1' -hydroksyetyl] -3-[2- (1-pyrrolidinyl)etyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylsyre i 30 ml vann ble omrystet i en Parr hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time under anvendelse av 750 mg 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. Katalysatoren ble fjernet, vasket med 2 x 5 ml vann, og pH av løsningen (9,5) ble innstilt til 4,6 med en IM vandig eddiksyreløsning. Den vandige løsning ble ledet to ganger gjennom en 45 g og 35 g (0,005M vandig eddiksyre, 1% -» 2% CH3CN/0,005M vandig eddiksyre) "u-Bondapak C^g" reversfasesøyle, hvorved det ble oppnådd 138 mg (67%) av tittelforbindelsen som et blekgult lyofilisert pulver.
Renhet: 99,5% som bestemt ved HPLC (r.t. = 7.338, "ji-Bondapak C18" 10U, 10% CH3CN/KH2P04, 0,01M, pH 7,4).
UV (H20) Xmaks: 296 (8426).
IR (Nujol) "Umaks: 3500-3100 (OH, NH2) , 1755 (C=0 Ji-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 karboksylat).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 6: 4,33-4,20 (2H, m, H-l' og H-5), 3,412 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,4 Hz, H-6), 3,5-3,1 (1H, m, CH2N, H-4, 1H av SCH2), 3,09, 3,051, 3,016 (2H, 3 linjer, CH2N), 3,10-2,95 (1H, m, 1H av SCH2), 2,09 (4H, bs, CH2CH2 pyrrolidin), 1,92 (2H, s, CH3C02), 2,0-1,45 (4H, m, CH2C<H>2~4) og 1,331 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 121
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- aminopentvl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6-f ( l' R)- 1' - hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo T3. 2, 01hept- 2-en- 2- karboksvlsyre
A. 7- azidoheptansvre
50,0 g (0,24 mol) 7-bromheptansyre ble tilsatt en løsning av 9,6 g (0,24 mol) natriumhydroksid i 75 ml vann. Deretter ble 20,9 g (0,32 mol) natriumazid tilsatt, og* den resulterende blanding ble oppvarmet under tilbakekjøling i 17 timer. Løsningen ble deretter avkjølt til 0-5°C, forsu-ret til pH 2,0 med 2N svovelsyre og ekstrahert med 3 x 200 ml dietyleter. Den kombinerte organiske ekstrakt ble vasket med saltvann, tørket (MgS04) og inndampet under vakuum, hvorved det ble oppnådd 40,9 g (100%) av tittel-syren som en olje. Ifølge <1>H-NMR inneholdt det rå produkt 6% (mol) av utgangs-bromsyren og ble anvendt som sådan til syrekloriddannelse.
IR (NaCl, film) umaks: 2100 (N3) og 1710 cm"<1> (C=0 av syre) .
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,3-1,8 (m, 8H, CH2-3,4,5 og 6), 2,36 (t, J=7,35 Hz, 2H, CH2~2) og 3,26 ppm (t, J=6,77 Hz, 2H, CH2-7) .
B. 7- azidoheptanovlklorid
En løsning av 40,9 g (0,24 mol) 7-azidoheptansyre fra trinn A i 200 ml tørr diklormetan ble behandlet dråpevis ved 22°C med 22,0 ml (0,25 mol) oksalylklorid i løpet av 10 minutter. Etter 1 time ble to dråper N,N-dimetylformamid tilsatt, og blandingen ble omrørt i ytterligere 1 time. Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga det rå syreklorid som en olje, som ble anvendt som sådan på neste trinn.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2100 (N3) og 1800 cm"<1> (C=0 av syreklorid).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,3-1,9 (m, 8H, CH2-3,4,5 og 6), 2,9 (t, J=7,18 Hz, 2H, CH2"2) og 3,27 ppm (t, J=6,7 Hz, 2H, CH2-7).
C. 2- picolyl- 7- azidotiolheptanoat
En løsning av 30,0 g (0,24 mol) 2-picolylmercaptan i
400 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 21,0 ml (0,26 mol) pyridin, etterfulgt av en løsning av 45,5 g (0,24 mol) 7-azidheptanoylklorid i 100 ml diklormetan dråpevis i løpet av 10 minutter. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen vasket med kaldt mettet
natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga den rå tioester som en klar olje. Filtrering på en 9 x 11 cm silicagelpute under eluering med en blanding av toluen og etylacetat (8:2) ga 60,3 g (90%) av tittel- tioesteren som en
klar olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 (N3) og 1690 cm'<1> (C=0 av tioester).
<1>H-NMR (200 -MHz, CDCI3) 8: 1,2-1,8 (m, 8H, CH2-3,4,5 og 6), 2,59 (t, J=7,4 Hz, 2H, CH2"2) , 3,24 (t, J=6,79 Hz, 2H, CH2-7), 4,25 (s, 2H, SCH2), 7,15 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,33 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,62 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,53 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
D. o- tert- Butvldimetvlsilvlenoleter av 2- picolvl- 7-azidotiolheptanoat
En løsning av 60,0 g (0,215 mol) 2-picolyl-7-azidotiolheptanoat i 250 ml tørr diklormetan ble avkjølet til
-10°C og behandlet med 60,0 ml (0,43 mmol) trietylamin.
Deretter ble 74 ml (0,32 mmol) tert-butyldimetylsilyl-trifluormetansulfonat tilsatt dråpevis i løpet av 40 minutter. Temperaturen av blandingen ble hevet til 20°C, og løsningen ble omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter for-
tynnet med 600 ml heksan og vasket med kaldt vann (3x), mettet NaHCC>3, saltvann og tørket (MgS04) . Avdampning av
løsningsmidlet ga den rå silylenoleter som en mørk olje, som ble anvendt som sådan i neste trinn. Ifølge <1>H-NMR var det en 1:1 blanding av E- og Z-isomer.
IR (NaCl, film) Umaks: 2100 cm-<1> (N3) .
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,2 og 0,23 (2 x s, 6H,
SiCH3), 0,96 og 0,98 (2 x s, 9H, Sit-Bu), 1,2-2,1 (m, CH2-4,5
og 6), 3,2 (m, 4H, CH2-3 og 7), 3,95 og 4,03 (2 x s, 2H,
SCH2), 4,84 og 4,99 (2 x t, J=7,22 Hz og J=7,6 Hz, 1H, CH-2),
7,14 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,28 (m, 1H, H-3 av pyridin),
7,61 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,53 ppm (m, 1H, H-6 av pyri-
din) .
E. ( 3S, 4S) - 3- r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-r( 1" R)- 1"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 6"-( pvridin- 2-vl) metvltiokarbonvl- 6"- azidoheksyl1azetidin- 2- on
Til en 0-5°C kald suspensjon av 38 g (0,28 mol) fersklaget zinkklorid i 600 ml tørr diklormetan ble tilsatt 60,0 g (0,208 mmol) (3S,4R)-4-acetoksy-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] azetidin- 2-on, etter-fulgt av en løsning av den rå o-tert-butyldimetylsilylen-oleter av 0,215 mol 2-picolyl-7-azidotiolheptanoat i 125 ml diklormetan. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved 22°C i 18 timer. Blandingen ble deretter vasket suksessivt med vann, mettet ammoniumklorid, mettet natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under vakuum ga 131 g av den rå tioester som en mørk olje, som ble anvendt som sådan i neste trinn. <1>H- NMR- og HPLC-analyse av denne blanding antydet en 85:15 blanding av epimerer i heksyls 1-stilling (isomerforhold ii:cc 85:15). Kromatografi av en 4 g porsjon på 4 x 20 cm (eluering toluen-etylacetat, 1:1) silicagel ga 1,0 g av det rene tittelmateriale som en olje, etterfulgt av 0,25 g blandede fraksjoner av li og a epimerer. Ren Ji-epimer hadde følgende karakteristika: IR (NaCl, film) umaks: 2100 (N3) , 1761 (C=0 av Ii-lactam) og 1685 cm"<1> (C=0 av tioester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,04 (s, 6H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, Si t-Bu), 0,99 (d, J=6,32 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,9 (m, 8H, CH2-2,3,4 og 5 av heksyl), 2,9 (m, 1H, H-l av heksyl), 3,03 (m, 1H, H-3), 3,22 (t, J=6,73 Hz, 2H, CH2<N>3), 3,79 (dd, <J>H4,H3=2'07 Hz' JH4,H1=7'01 Hz' 1H' H_4> ' 4'14 «*d' <J>H,CH3=6'32 Hz' JH,H3=3'60 Hz' 1H' CH3CHO) , 5,86 (bred s, 1H,
NH), 7,18 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,32 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,63 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,54 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
F. ( 3S, 4S)- 3- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl1- 4-f( 1" R)- l"- karboksv- 6"- azidoheksvn azetidin- 2- on
En løsning av den rå tioester (~0,2 mmol) fra trinn E i 700 ml tetrahydrofuran ble avkjølt til 0-5°C og behand-let dråpevis med 150 ml (1,74 mol) 30% hydrogenperoksid (tilsetningstid 15 minutter). Deretter ble 700 ml (2,7 mol) IN natriumhydroksid tilsatt dråpevis i løpet av 1 time. Blandingen ble omsatt ved 18°C, og løsningen ble omrørt i ytterligere 1 time. Blandingen ble deretter fortynnet med 700 ml heksan og den vandige fase ble opp-samlet, avkjølet til 0-5°C og forsuret til pH 2,0 med konsentrert saltsyre. Den vandige løsning ble deretter ekstrahert med 500 ml og 200 ml etylacetat. Den kombinerte organiske fase ble vasket suksessivt med vann, IM natrium-bisulfit, saltvann og tørket (MgS04). Løsningsmidlet ble deretter avdampet til en pasta, som ble triturert med 200 ml heksan. Filtrering av faststoffet ga 16,1 g (19% utbytte fra acetoksyazetidinon) av tittelsyren som et hvitt faststoff. <1>H-NMR viste ikke tilstedeværelse av a-isomer. Omkrystallisasjon fra en blanding av etylacetat og heksan ga hvite plater: smp. 145- 147°C (dek.). [Ct]^<4> -7,1°
(c 1,0, CHC13).
IR (KBr) Dma]cs: 2100 (N3) og 1715 og 1690 (bred C=0) .
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 6: 0,06 og 0,07 (2 x s, 2 x 3H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, Si t-Bu) , 1,17 (d, J=6,31 Hz, 3H, CH3CHO) 1,2-1,8 (m, 8H, CH2-2,3,4 og 5 av heksyl), 2,65 (m, 1H, H-l av
heksyl), 3,13 (bred dd, 1H, H-3), 3,26 (t, J=6,7 Hz, 2H, CH2N3), 3,86 (dd, <J>H4,H3=1'98 Hz' JH4,H1 = 6'92 Hz' 1H' H"4)' 4,20 (d<q,> Jh,CH3=6'31 Hz'JH,H3<=4>'° Hz' 1H' CH3CHO), og 6,34 ppm (s, 1H, NH).
Analyse for C18<H>34<N>4<0>4Si:
Beregnet: C 54,24%, H 8,60%, N 14,06%.
Funnet: C 54,18%, H 8,54%, N 13,91%.
G. ( 3S, 4R)- 4- r( 1" R)- 1"-( 5- azidopentvl)- 3"-allvloksvkarbonyl- 2"- oksopropvn- 3- f( 1' R)-1'-tert-butvldimetvlsilvloksvetvl1azetidin- 2- on
En suspension av 15,0 g (37,6 mmol) (3S, 4S)-3-[ (l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-l"-karboksy-6"-azido-heksyl]azetidin-2-on i 350 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 6,7 g (41,3 mmol) 1,1-karbonyldiimidazol. Den resulterende blanding ble om-rørt i 2 timer, og løsningsmidlet ble avdampet under vaku-um, hvorved det ble oppnådd det rå imidazolid, som en olje.
IR (NaCl, film) V^^g: 2100 (N3), 1760 (C=0 av fi-lactam) og 1735 cm<-1> (C=0 av imidazolid).
Det rå imidazolid i 50 ml tørr acetonitril ble deretter tilsatt en løsning av 19,0 g (61,2 mmol) magnesium-monoallylmalonat i 300 ml benzen, og den resulterende blanding ble oppvarmet ved 65°C i 28 timer. Den avkjølte reaksjonsblanding ble fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket suksessivt med vann, kald IN saltsyre, mettet natrium-hydrogenkarbonat og saltvann. Etter tørring (MgS04) ga avdampning av løsningsmidlet det rå tittel-materiale som en ~20 g olje, som ble anvendt som sådan i neste trinn. Kromatografi av en liten porsjon på silicagel (eluering
toluen-etylacetat 8:2) ga tittelmaterialet som en olje.
IR (NaCl, film) Vmalcs: 2100 (N3), 1760 (C=0 av lactam), 1715, 1650 og 1630 cm~l.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) blanding av keto- og enolform i et 1:1 forhold; 8: 0,05 og 0,07 (2s, 6H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, Si t-Bu), 1,1 og 1,17 (2d, J=6,31 Hz, og J=6,33 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2-1,8 (m, 8H, CH2- 1,2,3 og 4 av pentyl), 2,2 (m, H-l av oksopropyl, enolform), 2,9-3,0 (m, H-3 og H-l av oksopropyl, ketoform), 3,26 (t, J=6,7 Hz, CH2N3), 3,54 (s, CH2-3 av oksopropyl, ketoform), 3,8 (m, 1H, H-4), 4,2 (m, 1H, CH3CH0), 4,8 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,07 (s, 1H, H-3 av oksopropyl, enolform), 5,2-5,4 og 5,9-6,1 (2m, 2H og 1H, CH av allyl) og 5,9 ppm (bred s, 1H, NH).
H. ( 3S, 4R)- 4- r( 1" R)- 1"-( 5- azidopentvl)- 3"-allvloksvkarbonyl- 3"- diazo- 2"- oksopropvl1- 3- r( lf R)-1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvllazetidin- 2- on
En løsning av den rå 37,6 mmol (3S,4R)-4-[(1"R)-1"-(5-azidopentyl)-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azetidin-2-on i 100 ml acetonitril ble behandlet ved 0-5°C med en løsning av 9,1 g (46,1 mmol) p-toluensulfonylazid i 115 ml aceto-nitril, etterfulgt av 6,5 ml (46,0 mmol) trietylamin. Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved 22°C i 30 minutter. Løsningsmidlet ble deretter avdampet under vakuum, og resten ble triturert med en blanding av dietyl-eter og heksan (1:1). Det krystallinske p-toluensulfonamid ble oppsamlet ved filtrering. Filtratet ble konsentrert under vakuum, hvorved det ble oppnådd tittelforbindelsen som en olje. Dette produkt ble anvendt som sådant i neste trinn. Kromatografi av en porsjon på silicagel med en blanding av toluen og etylacetat (9:1) ga det rene tittelmateriale som en olje.
IR (NaCl, film) t>ma]cs: 2140 (N2) , 2100 (N3) , 1760 <C=0 av fi-lactam), 1720 og 1650 cm"<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,05 og 0,06 (2 x s, 6H,
SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si t-Bu), 1,17 (d, J=6,3 Hz, 3H, CH3CH0), 1,2-2,0 (m, 8H, CH2- 1,2,3 og 4 av pentyl), 3,03 (bred dd, 1H, H-3), 3,24 (t, J=6,7 Hz, 2H, C<H>2N3), 3,84 (dd, <J>H4,H3=2'07 Hz' JH4,H-1=5'37 Hz' 1H' H~4)' 4'1 <m' 1H' H_1 av oksopropyl), 4,17 (d<q,><J>H,CH3<=>6'3 Hz'JH,H3=3'86 Hz' 1H' CH3CH0), 4,72 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,3-5,4 og 5,9-6,1 (2m, 2H og 1H, CH av allyl) og 5,84 ppm (bred s, 1H, NH) .
I. ( 3S, 4R)- 4- r( 1" R)- l"-( 5- azidopentvl)- 3" allvloksvkarbonvl- 3"- diazo- 2"- oksopropvn - 3- f ( l' R)- 1' - hvdroksvetvllazetidin- 2- on
En løsning av den rå 37,6 mmol (3S,4R)-4-[(1"R)-1"-(5-azidopentyl)-3"-allyloksykarbonyl-3"-diazo-2"-okso-propyl]-3-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-azetidin-2-on i 250 ml etanol ble behandlet ved 5°C med 100 ml IN vandig saltsyre. Etter 65 timer ble pH av reaksjonsblandingen innstilt til 6 med natriumhydrogen-karbonat og etanolen ble fjernet under redusert trykk. Resten ble fortynnet med 500 ml etylacetat og den orga-niske fase ble vasket med vann, 0,2M pH 7 fosfatbuffer og saltvann. Etter tørring (MgS04) ble løs-ningsmidlet avdam-pet under vakuum, og resten ble kromatografert på 9 x 12 cm silicagel (eluering med en gradient av etylacetat i toluen (1:1) til ren etylacetat). Inndampning av de rele-vante fraksjoner ga 8,95 g (61% for 3 trinn fra karboksyl-syren) av tittelazetidinon som et faststoff. Omkrystal-lisasjon av en blanding av dietyleter og heksan ga hvite prismer: smp. 65-66°C; [d]^<2> -31,2° (c 1,0, CHC13).
UV (EtOH) Xmaks<:> 260 nm (8.440).
IR (KBr) Umaks: 2158 (N2), 2100 (N3), 1730 og 1712 (C=0 Ii-lactam og ester) og 1650 cm<-1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,29 (d, J=6,3 Hz, 3H, CH3CHO), 1,2-1,9 (m, 8H, CH2-1,2,3 og 4 av pentyl), 2,31 (d, J=3,75 Hz, 1H, OH), 2,99 (dd, <J>H3,H4=2'° Hz' JH3,H1=6'93 Hz' 1H, H-3), 3,25 (t, J=6,7 Hz, 2H, CH2N3), 3,82 (dd, JH4 H3=2,0 Hz, JH4,H1<=>6'63 Hz' 1H' H~4)' 3'95 (m, 1H, H-l av azidopentyl), 4,11 (m, 1H, CH3CHO), 4,73 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,3-5,4 og 5,9-6,1 (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl) og 6,0 ppm (bred s, 1H, NH) .
Analyse for C^H^NgO^:
Beregnet: C 52,09%, H 6,16%, N 21,42%.
Funnet: C 51,85%, H 6,04%, N 21,33%.
J. Allvi-( 2R, 4R, 5R, 6S)- 4-( 4"- azidopentvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvl]- 3, 7- diokso- l- azabicvclo f3, 2, 01heptan- 2-karboksylat
En løsning av 2,50 g (6,37 mmol) (3S,4R)-4-[(1"R)-1"-(5-azidopentyl)-3"-allyloksykarbonyl-3"-diazo-2"-okso-propyl]-3-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]azetidin-2-on i 80 ml tørr benzen ble behandlet under argon med 0,050 g rhodium(II)oetanoat-dimer og oppvarmet under tilbakekjø-ling (badtemperatur 95°C) i 20 minutter. Løsningsmidlet ble deretter avdampet under vakuum, hvorved det ble opp-nådd den rå, bisykliske tittelforbindelse som en olje, som ble anvendt umiddelbart i neste trinn.
IR (NaCl, film) Dmaks: 2100 (N3)', 1760 (C=0 av ii-lactam) og 1745 cm"<1> (sh C=0 av ketoester).
1H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,4 (d, J=6,30 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 8H, CH2-1, 2, 3 og 4 av pentyl), 2,7 (m, 1H, H-4), 3,2-3,4 (m, 3H, H-6 og CH2N3) , 4,26 (dd, Jh5,H6==2'32 Hz, JH5,H4=8'06 Hz' 1H' h~5>' 4'28 <m' 1H/ CH3CHO), 4,64 (s, 1H, H-2), 4,66 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,4 og 5,8-6,0 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
K. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 4"- azidoetvl)- 3- r( 2- cvanoetvl)-tiol- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo 13 , 2 , 0] hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 6,37 mmol allyl-(2R,4R,5R,6S)-4-(4"-azidopentyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 40 ml tørr aceto-nitril ble behandlet ved 0-5°C og under argon med 1,45 ml (7,0 mmol) difenylklorfosfat og 1,22 ml (7,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 10 minut-ter. Deretter ble et lite krystall av 4-N,N-dimetylamino-pyridin tilsatt, og blandingen ble omrørt i 45 minutter. Deretter ble 2,22 ml (12,7 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av 1,11 g (12,7 mmol) ft-mercapto-propionitril i 3 ml acetonitril, og blandingen ble omrørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med etylacetat, vasket med vann, mettet natriumhydrogen-karbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løs-ningsmidlet ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 10 cm silicagel. Eluering med en gradient av etylacetat i toluen (8:2 til 7:3) ga 2,52 g (91%) av tittelforbindelsen som en klar olje.
IR (NaCl, film) Dmaks: 2258 (CN) , 2100 (N3), 1770 (C=0 av Ii-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester) .
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,38 (d, J=6,28 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 8H, CH2-1,2,3 og 4 av pentyl), 1,89 (d, J=4, 6 Hz, 1H, OH) , 2, 7
(-dt, 2H, CH2CN), 2,9-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,19 (dd, <J>H6,H5=2'65 Hz, <J>h6,H1=7'34 Hz' 1H' h~6)' 3/2 (overlapping med H-6, 1H, H-4) , 3,30 (t, J=6,5 Hz, 1H, CH2N3), 4,24 (overlapping med H-5, 1H, CH3CHO), 4,26 (dd, JH5,H6=2'65 Hz' JH5,H4=9'52 Hz' 1H' H"
5) , 4,76 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl). L. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 5"- aminooentvl)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6-f( l' R)- 1' - hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo-\ 3, 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 2,52 g (5,8 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(5"-azidopentyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 125 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 22°C og under argon med 0,13 g tetrakis(trifenylfosfin)-palladium [0] etterfulgt av 12,8 ml (6,4 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 45 minutter ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 125 ml vann og den vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Den vandige løsning ble deretter hydrogenert ved 0-5°C over 4,0 g 5% palladium-på-aluminiumoksid under 45 psi hydrogen i 1 time
(innledningsvis pH 7, til slutt pH 11). Deretter ble 50 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer tilsatt og katalysatoren ble frafiltrert. Filtratet ble konsentrert til halvdelen under vakuum (T <10°C) og deretter kromatografert på 3,5 x 14 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^g") under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 1,06 g (49%) av tittelkarba-penemen som et hvitt, amorft faststoff etter frysetørring: [a]<22> +52,1° (c 1,0, H20).
Renhet ved HPLC: 99% på "|i-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H2O, pH 7,4 fosfatbuffer, strømings-hastighet 1 ml/min, uv-detektor 306 nm, retensjonstid.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (9.055) ..
IR (KBr) <D>maks: 2255 (CN) , 1755 (C=0 av 15-lactam) , og 1590 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,3-1,9 (m, 8H, CH2-1,2,3 og 4 av pentyl), 2,8-3,2 (m, 4H, SC<H>2CH2CN), 3,0 (t, J=7,4 Hz, 2H, CHoNHo), 3,36 (overlapping med H-6, 1H, H-4), 3,38 (dd, <J>H6,H5=2'53 Hz' JH6,H1=6'30 Hz' 1H, H-6), 4,25 (dd overlapping med CH3CHO, Jh5,H6=2'53 Hz' 1H' H-5) og 4,27 ppm (m, 1H, CH3CHO).
Eksempel 122
( 4R. 5S, 6S)- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 3- f( 2-hvdroksvetvl) tiol- 4-( 2"- aminoetvl)- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( 1' R)- 1'-( tert- butvldimetvl-silvloksvetvl) 1- 3- f( 2- hvdroksvetvl) tiol - 4-( 2"-azidoetvl)- 7- okso- l- azabicvclo- T3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,47 g (1,08 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'(tert- butyldimetylsilyloksyetyl)]-4-(2"-azidoetyl)-3,7-diokso-l-azabi-cyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 10 ml CH3CN ble behandlet med 0,25 ml (1,18 mmol) difenylklorfosfat etterfulgt av 0,21 ml (1,18 mmol) N,N-diisopropyletylamin og 2 mg 4-N,N-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 2 timer under argon, hvoretter argon ble boblet gjennom løsningen i 15 minutter. Enolfosfatet ble deretter behandlet med 0,15 ml (2,15 mmol) 2-mercaptoetanol i 2 ml CH3CN, etterfulgt av 0,38 ml (2,15 mmol) N,N-diisopropyletylamin og omrørt ved 0°C i 1 time og fikk deretter lov å stå kaldt (5°C) i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml EtOAc og vasket suksessivt med kaldt vann, IM NaHS03, vann, IN HC1, vann, IM NaHC03 og saltvann. Den organiske fase ble tørket (MgS04) og løsningsmidlet ble avdampet til en sirup, som ble kromatografert på 3,5 x 11 cm silicagel pakket i CH2Cl2 og eluert med en blanding av CH2CI2 og EtOAc (8:2, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,35 g (65,5%) av tittelforbindelsen som en sirup.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 5: 0,06 (s, 6H, Si<CH3)2<># >0,87 (S, 9H, SiC(CH3)3), 1,35 (d, 3H, CH3, J<=>6,3 Hz,), 2,85-3,9 (overlapp, 8H, CH2OH, CH2N3, H-4, H-6, SCH2), 4,22 (sentrum m, 2H, H-5, H-l'), 4,6-4,9 (m, 2H, OCH2, allyl), 5,2-5,5 (m, 2H, =CH2, allyl), 5,86-6,05 (m, 1H, CH= allyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- f( 2-hvdroksvetyl) tiol- 4-( 2"- azidoetvl)- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2 # 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,33 g (0,66 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl) ]-3-[(2-hydroksyetyl)tio]-4-(2"-azidoetyl) -7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml tørr tetra-hydrofuran ble behandlet under argon med 0,23 ml (4 mmol) eddiksyre etterfulgt av en IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i 1,99 ml (1,99 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 168 timer og deretter nøytralisert ved 0°C med en 4 ml (4 mmol) IM NaHCC^-løsning. Blandingen ble ekstrahert med 3 x 50 ml EtOAc og den kombinerte organiske fase ble vasket suksessivt med kaldt NaHC03, vann °9 saltvann, tørket (MgS04) og løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd et klebrig skum, som ble kromatografert på 3,5 x 8 cm silicagel pakket i CH2CI2 og eluert med en blanding av CH^C^ og EtOAc (0:100, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,09 g (35,4%) av tittelforbindelsen som et skum.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,37 (d, 3H, CH3, J=6,26 Hz), 2,82-3,17 (m, 2H, SCH2) , 3,15 (m, 1H, H-6), 3,34-3,64 (overlapp, 3H, CH2N3, H-4), 3,82 (t, 2H, CH20H, J=5,43 Hz), 4,22 (m, 1H, H-l'), 4,22 (dd, 1H, H-5, J4/5<=9,>64 Hz, <J>5/6<==>2,78 Hz), 4,62-4,87 (m, 2H, OCH2, allyl), 5,21-5,49 (m, 2H, =CH2, allyl), 5,86-6,05 (m, 1H, CH=, allyl).
C. ( 4R. 5S. 6S)- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- T( 2-hvdroksvetvl) tiol- 4-( 2"- aminoetvl)- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
Til en kald (0°C) løsning av 0,09 g (0,24 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl)tio]-4-(2"-azidoetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml CH2C12 under argon, ble det tilsatt 0,04 g (0,035 mmol) Pd[Ph3P]4/ etterfulgt av en 0,5M løsning av 2-etylheksanoat i 0,52 ml (0,26 mmol) EtOAc. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time, 50 ml dietyleter ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med 3 x 25 ml vann. Til den kombinerte vandige ekstrakt ble tilsatt en 0,05M løsning av 10 ml pH 7,0 fosfatbuffer og den ble hydrogenert ved 0°C over
0,3 g 5% palladium-på-aluminiumoksid ved 40 psi i 2 timer. Katalysatoren ble frafiltrert, vasket med vann og det
kombinerte filtrat ble ledet gjennom en søyle av 3,5 x 9 cm "u- Bondapak C18" reversfasesilicagel. Egnete fraksjoner tilsvarende til produktet ble lyofilisert til et faststoff,
som ble rekromatografert på 3,5 x 9 cm "u-Bondapak C^g" revers-fasesilicagel. Forbindelsen ble eluert med vann og 0,021 g (28,2%) ble oppnådd som et blekgult, fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet ved HPLC: 93,9% med UV-deteksjon ved 302 nm på "u-Bondapak C18" (4 mm x 30 cm); pH 6,8 fosfatbuffer;
strømningshastighet 1 ml/min; retensjonstid 3,89 min.
W *-maks: 302 nm-
IR (Nujol)<:><D>maks: 1750 cm-<1> (C=0, il-lactam) .
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (d, 3H, CH3, J=6,37 Hz), 1,82-1,98, 2,1-2,27 (m, 2H, CH2), 2,79-3,23 (overlapp, 4H, CH2NH2, SCH2), 3,44 (sentrum m, 2H, H-4, H-6), 3,76 (m, 2.H, CH2OH, J=6,24 Hz), 4,26 (dd, 1H, H- 5, <J>4/5<=>9,14 Hz, J5^6=2,56 Hz), 4,28 (m, 1H, H-l').
Eksempel 123
( 4R, 5S, 6S)- 3-[( 2- cvanoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksyetvll- 4-[ 2"-( 1- N- metvlpvrrolidinium) etvll- 7-okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 0,150 g (0,39 mmol) (4R, 5S, 6S)-3-[ (2-cyanoetyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[2"-(1-pyrrolidinyl) -etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre [fremstilt i eksempel 63] i en blanding av 8 ml vann, 4 ml acetonitril og 5 ml dioksan ved 0-5°C ble innstilt til pH 9,5 med IM natriumhydroksid. Deretter ble 0,22 ml dimetylsulfat tilsatt på én gang og pH ble holdt ved 9- 9,5 i 35 minutter. Deretter ble 20 ml 0,2M pH 6,0 fosfatbuffer til-satt, og løsningen ble holdt under vakuum for å fjerne det organiske løsningsmiddel. Den vandige løsning ble kromatografert to ganger på 2,5 x 13 cm reversfasesilicagel ("u-Bondapak C^g") under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,056 g (36%) av pyrrolidinium-tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff: [a]22 +57,0° (c 1,0, H2<0>).
Renhet ved HPLC: 99% på "|i-Bondapak C18", 3,9 mm x 30 cm, eluering 5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid
6,24 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 298 nm (6.660).
IR (KBr) Uma}cs: 2250 (CN), 1760 (C=0 av fi-lactam) og 1600 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
^■H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,34 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO) , 2,0-2,4 (m, 6H, CH2-1 av etyl og CH2-3,3' av pyrrolidin), 2,8-3,2 (m, 4H, SCH2CH2CN), 3,11 (s, 3H, NCH3), 3,4-3,7 (m, 8H, H-4, H-6, CH2-2 av etyl og CH2-2,2' av pyrrolidin), 4,28 (m, 1H, CH3CHO) og 4,31 ppm (dd, <J>H5 Hg=3,01 Hz, JH5 H4=9,0 Hz, 1H, H-5) .
Eksempel 124
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- Cvanoetvl) tio1- 4- r2"- rN, N-( 2-cvanoetvl) metvlaminoletvll- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll-7-okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- karboksylsyre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( l' R)-1' -tert-butyldimetylsilyl oksyet yl 1- 3-[( 2- cvanoetyl) tiol- 4-[ 2"-[ N, N-( 2- cvanoetvl) metvlaminoletvll- 7- okso- l-azabicyclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (tørris-aceton) løsning av 400 mg (0,830 allyl-(4R, 5S., 6S.) -6- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3- [ (2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2, 0]-hept-2-en-2-karboksylat i 10 ml diklormetan ble først behandlet med 0,380 ml (2,16 mmol) diisopropyletylamin og deretter dråpevis med 0,17 ml (1,0 mmol) trifluormetan-sulf onsyreanhydrid. Blandin-gen ble omrørt i 25 minutter, behandlet med 0,23 ml (2,5 mmol) N-metyl-(3-laninnitril i 0,5 ml diklormetan og deretter omrørt i 3 timer ved -15°C (tørrisbad erstattet med is-metanol bad). Blan-dingen sto i kaldt rom (5°C) i 18 timer, ble deretter fortynnet med 20 ml etylacetat, vasket med 5 ml iskaldt IM vandig NaHC03, 5 ml iskaldt vann, 5 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 15 g hurtigsilicagelpute (30 —» 80% etylacetat/-heksan), hvorved det ble oppnådd 315 mg (69%) av tittelforbin-delsen som en blekgul olje.
IR (CH2C12) vmaks<:> 2250 (CN), 1775 (C=0 p-lactam) og 1715 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6, 03-5, 86 (1H, m, vinylisk H), 5,486- 5,224 (2H, m, vinylisk H), 4,851-4,666 (2H, m, allylisk CH2), 4,29-4,18 (1H, m, H-l'), 4,197, 4,184 (d, J=2,6 Hz, del av H-5), 3,541-3,450 (1H, m, H-4), 3,380-3,242, 3,069-2,929 (2H, 2 sett av m, SCH2), 3,110 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=7,0 Hz, H-6), 2,807-2,315 (8H, m, CH2N og CH2CN), 2,315 (3H, s, NCH3), 2,04-1,87, 1,70-1,55 (2H, 2 sett av m, CH2~4), 1,30 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,895 (9H, s, tert-butyl) og 0,096 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 3- \ ( 2- cvanoetvl) tiol- 4- f2"- TN, N-( 2-cvanoetyl) metvlaminoletvll- 6- r(!' R)- 1'- hvdroksvetvll - 7-okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01heot- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-metanol bad) løsning av 305 mg (0,560 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] - 3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-[2"-[N,N-(2-cyanoetyl)metylamino]etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 5 ml tetra-hydrofuran ble behandlet med 0,18 ml (3,4 mmol) iseddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 1,68 ml (1,68 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen sto i et kaldt rom i 8 dager, ble deretter fortynnet med 25 ml etylacetat, vasket med 3 x 5 ml iskaldt IM vandig NaHC03, 2 x 5 ml vann, 5 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 6 g hurtigsilicagel-pute (40% -> 100% etylacetat/heksan, 1/1 etylacetat/aceton), hvor-ved det ble oppnådd 195 mg (80%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vma]cs: 3600, 3500 (OH) , 2250 (CN) , 1775 (C=0 av p-lactam) og 1710 cm<-1> (CO) .
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,04-5,85 (1H, m, vinylisk H), 5,494- 5,238 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,70 (2H, m, allylisk H), 4,282 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,6 Hz, H-5), 4,29-4,13 (1H, m, H-l'), 3,80-3,70 (1H, m, H- 4), 3,35-3,20, 3,05-2,90 (2H, 2 sett av m, SCH2), 3,152 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=8,8 Hz, H-6), 2,8-2,6 (4H, m, CH2CN) , 2,6-2,45 (2H, m, CH2N) , 2,1-1,9, 1,7-1,5 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,60 (1H, bs, OH) og 1,404 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 4- T2"- TN, N-( 2- cvanoetvl)-metvlaminoletyl1- 6- f( 1' R)- 1' - hvdroksvetvl]- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksylsvre
En kald (isbad) løsning av 195 mg (0,45 mmol) allyl-(4R,-5S., 6SJ-3-C (2-cyanoetyl) tio] -4-[2"-[N,N- (2-cyanoetyl) - metylamino]etyl]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 12 ml diklormetan ble behandlet med 42 mg (0,034 mmol) Pd(Ph3)4 og dråpevis med en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i 0,90 ml (0,45 mmol) etylacetat. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, deretter fortynnet med dietyleter og ekstrahert med 3 x 15 ml 0,04M vandig fosfatbuffer og 2 x 15 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 10 ml dietyleter og ledet gjennom 150 g "u-Bondapak C-^g" reversfase-søyle (0 -» 3% CH3CN/H20), hvorved det ble oppnådd 127 mg (72%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 99,2% som bestemt ved HPLC (r.t.= 7,89 min, "Ji-Bondapak C18", 10 U, 5% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (H20) Xmaks: 300 (7887).
IR (Nujol) Vmaks: 3600-3100 (OH) , 2250 (CN) , 1745 (C==0 j3-lactam) og 1595 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,35-3,25 (2H, m, H-l' og H-5), 3, 404 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,3 Hz, H-6), 3, 42-3, 30 (1H, m, H-4), 3,25-3,1, 3,03-2,9 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,87-2,81 (4H, m, CH2N), 2,75-2,65, 2,62-2,54 (4H, 2 sett av 3 linjer, CH2CN), 2,328 (3H, s, N-CH3), 2,15-1,95, 1,8-1,6 (2H, 2 sett av m, CH2-4) og 1,341 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 125
( 4R. 5S. 6S)- 4- r2"-( l- N- azetidino) etvll- 3- f( 2-cvanoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- f( l' R)- l'- tert-butvldimetvlsilyloksvetvll-4-(2"-tert-butvldimetylsilyloksvetyl)- 3- r( 2- cvanoetyl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 27,2 mmol (fremstilt ved ringslutning av
15,08 g, 27,2 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(2R,4R,5R,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-(2"-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl)-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 200 ml tørr aceto-
nitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 6,3 ml (30,4 mmol) difenylklorfosfat og 5,0 ml (28,7 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter til-
satt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Ytterligere 9,5 ml (54,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin, etterfulgt av 4,6 g (53,8 mmol) P-merkaptopropionitril i 10 ml acetonitril ble tilsatt dråpevis, og den resulterende blanding ble omrørt i 30
minutter.
Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 1'1 etyl-acetat, vasket med kaldt vann, mettet natriumhydrogenkarbonat, 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer, saltvann og tørket (MgS04). Løsnings-midlet ble avdampet under redusert trykk, og resten
ble kromato-grafert over 7,5 x 11 cm silicagel under eluering med en gradient av 0-5% etylacetat i toluen. Inndampning av de UV-aktive fraksjo-ner ga 11,19 g (69%) av tittelmaterialet som
en olje, som størk-net ved henstand. Omkrystallisasjon fra heksan ga tittelforbin-delsen som lange nåleformede
krystaller, smp. 95°C, [a] 22
D + 48,9° (c 1,0, CHC13).
UV (EtOH) Xmaks: 318 nm (11.930).
IR (KBr) vmaks<:> 1770 (C=0 av p-lactam) og 1700 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,08 og 0,09 (2s, 3H og 9H, SiCH3), 0,89 og 0,91 (2s, 2 x 9H, Si-tBu), 1,27 (d, J- 6,15 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,1 (m, 2H, CH2~4), 2,67 (~t, 2H, CH2CN), 2,9-3,1 og 3,2-3,4 (2m, 2H, SCH2), 3,10 (dd, JH6,H5=2'52 Hz' JH6, Hl=6'26 Hz' 1H' H~6) ' 3,45-3, 65 og 3,75- 3,9 (2m, 2H og 1H, H-4 og CH20Si), 4,21 (dd overlapping med CH3CHO, JH5/H6=2,52 Hz, 1H, H-5), 4,24 (m, 1H, CH3<C>HO), 4,74 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
Analyse for C29<H>5o<N>2^5ss^2:
Beregnet: C 58,55%, H 8,47%, N 4,71%, S 5,39%.
Funnet: C 58,45%, H 8,37%, N 4,73%, S 5,24%.
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r( 1' R)- 1'- tert-butvldimetylsilvloksvetvl 1 - 3- ( 2- cvanoetvl) tio r- 4- ( 2"--hvdroksvetyl)- 7- okso- l- azabicvclo-, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En løsning av 11,19 g (18,8 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-(2"-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 250 ml tetrahydrofuran ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 6,5 ml (0,113 mol) eddiksyre, etterfulgt av 56 ml (56,0 mmol) av en 1,0M løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetra-hydrofuran. Løsningen ble deretter oppbevart ved 10°C i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 1 1 etyl-acetat, vasket med kaldt, mettet natriumhydrogenkarbonat, salt-vann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under redu-sert trykk ga en olje, som ble kromatografert på 7,5 x 12 cm silicagel. Eluering med en gradient av etylacetat i toluen (3:7 til 1:1) ga 6,80 g (75%) av tittelforbindelsen som et tykt glass.
IR (NaCl, film) vmaks: 3500 (OH), 2260 (CN), 1775 (C=0 av P-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 6: 0,09 (s, 6H, SiCH3), 0,89 (S, 9H, Si-tBu) , 1,29 (d, J=6,13 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,6-2,1 (m, 2H, CH2-4), 2,70 (~t, 2H, CH2CN) , 2,95-3,1 og 3,2-3,4 (2m, 2H, SCH2), 3,18 (dd, <J>h6,H5=2'63 Hz' JH6,H1=7'02 Hz' 1H' H~6>' 3,54 (bredt, 1H, H-4), 3,6-4,0 (m, 2H, CH20H), 4,15-4,3 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping), 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
C. Allvl- ( 4R, 5S, 6S) - 4- f 2"- ( 1- N- azetidino) etvll - 6- r ( 1' R)- 1' - tert- butyldimetylsilvloksyetvn- 3- F( 2- cvanoetvl) tiol- 7-okso- l- azabicvclo F3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,07 g (2,22 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 18 ml tørr diklormetan ble avkjølt til -78°C og behandlet under nitrogen med 0,57 ml (3,27 mmol) N,N-diisopropyletylamin etter-fulgt av 0,39 ml (2,31 mmol) trifluormetansulfonsyreanhydrid dråpevis i løpet av 5 minutter. Etter 30 minutter ved -78°C ble ytterligere 0,57 ml (3,27 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av 0,18 ml
(2,67 mmol) azetidin dråpevis i løpet av 5 minutter. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -78°C i 30 minutter, langsomt oppvarmet til -20°C i løpet av 30 minutter og omrørt ved denne temperatur i 1 time. Reaksjonen ble deretter stoppet ved tilsetning til en kald blanding av 200 ml etylacetat og 20 ml vann. Den organiske fase ble vasket med 2 x 20 ml saltvann, tørket (MgS04) og inndampet under redusert trykk. Resten ble
kromatografert på 3,5 x 12 cm silicagel under eluering med aceton. Inndampning av de UV-aktive fraksjoner ga 0,639 g (55%) av tittelforbindelsen som en olje. Ifølge TLC og <1>H-NMR inneholdt dette materiale 25% av et produkt resulterende fra åpningen av P-lactam med azetidin.
IR (NaCl, film) vmaks: 2255 (CN), 1775 (C=0 av p<->lactam), 1712 (C=0 av ester) og 1645 (amid av det åpne produkt).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,08 (s, 6H, SiCH3), 0,88 (s, 9H, Si-tBu), 1,29 (d, J=6,13Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-1,8 (m, 2H, CH2-4), 2,07 (m, 2H, CH2-3 av azetidin), 2,69 (~t, 2H, CH2CN), 2,9-3,5 (bred m, 10H, CH2~2 og 4 av azetidin, CH2-2 av etyl, H-4 og H-6 og SCH2), 4,15 (dd, Jh5,H6=2'55 Hz' JH5,H4<=>9'45 Hz' 1H, H-5), 4,17 (m, 1H, CH3CHO), 4,73 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
D. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4- r2"-( l- N- azetidino) etvl1- 3- r( 2-cvanoetvl)- tiol- 6- f(!' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 0, 639 g (1,23 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S)-4-[2"-(1-N-azetidino)etyl]-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclos3,2, 0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 8 ml tørr tetrahydrofuran ble avkjølt til -15°C og behandlet under nitrogen med 0,42 ml (3,7 mmol) eddiksyre etter-fulgt av 3,7 ml (3,7 mmol) av en IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Løsningen ble deretter omrørt ved 0°C i 140 timer. Deretter ble 1,2 g fast pulverisert natrium-hydrogenkarbonat tilsatt, og blandingen ble omrørt i 10 minutter. Den organiske fase ble deretter kromatografert på 3,5 x 3,5 cm silicagel under eluering med en blanding av aceton og N,N-dimetylformamid (9:1). Inndampning av de relevante fraksjoner ga 0,39 g (78%) av tittelmaterialet som en olje. Ifølge ^-NMR var dette materiale ca. 50% rent og inneholdt noe N,N-dimetylformamid og noe tetrabutylammoniumsalt. Dette produkt ble anvendt som vist i neste trinn.
IR (NaCl, film) vmaks: 2250 (CN), 1775 (C=0 av lactam) og 1710 cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,39 (d, J=6,31 Hz, 3H, CH3CHO), 1,7 (m, 2H, CH2-4), 2,27 (m, 2H, CH2-3 av azetidin), 2,67 (~t, 2H, CH2CN) , 2,9-3,2 (m, 2H, SCH2) , 3,2-3,4 (m, 4H, H-4, H-6 og CH2-2 av etyl), 3,58 (t, J=7,6 Hz, CH2-2 og 4 av azetidin), 4,10 (d<q,><j>h,CH3<=>^'31 Hz' JH,H6=8,8^ Hz' 1H' CH3CHO), 4,28 (dd, JH5/R6=3,12 Hz, Jh5,H4=10'26 Hz' 1H' H"5) ' 4,75 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
E. ( 4R. 5S, 6S)- 3- r2"-( l- N- azetidino) etvl1- 3- r (2-cvanoetvl) tiol- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvl1- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
En løsning av 0,39 g (0,96 mmol) rå allyl-(4R,5S,6S)-4-[2"-(1-N-azetidino)etyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 15 ml etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,050 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 3 ml (1,5 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen ekstrahert med vann (30 ml og 20 ml) og den kombinerte ekstrakt ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Deretter ble 8 ml 0,2M pH 6 fosfatbuffer tilsatt, og løsningen ble kromatografert på 3 x 13 cm "Ji-Bondapak C^g" reversfasesilicagel under eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, lyofilisert og kromatografert en gang til på samme søyle. Sluttlyofilisering ga 0,065 g (19%) tittelkarbapenem som et hvitt, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 99,4% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <C>18", eluering 5% C<H>3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 6,41 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 298 nm (8.422).
IR (KBr) <V>maks: 2250 (CN), 1760 (C=0 av p-lactam) og 1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,38 Hz, 3H, C<H>3CHO), 1,7-2,2 (m, 2H, CH2-4), 2,52 (m, 2H, CH2-3 av azetidin), 2,85 (m, 2H, CH2CN), 2,85-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,2-3,5 (m, 3H, CH2-2 av etyl og H-4), 3,41 (dd overlapping med CH2-2 av etyl, <J>h6,H5=2'70 H<z>'<j>H6,H1=6'86 Hz' 1H' h"6)' 4'17 (m, 4H, CH2-2 og 4 av azetidin), og 4,2-4,35 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO).
Eksempel 126
( 4R. 5S, 6S)- 3- r ( 2- cvanoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'-hydroksvetvll- 4-[ 2"-( 4- metvlpiperazin- l- yl) etvll - 7- okso-l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R, 5S. 6S)- 6- r( l' R)-1'-tert-butyldimetylsilyl ok syetyll - 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 4- r2"-( 4-metylpiperazin- l- yl) ethvl- 7- okso- l- azabicyclo 13 , 2, Olhept-2- en- 2- karboksylat
En løsning av 1,0 g (2,08 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-6-[(l'R)-1'-tertbutyldimetyl-silyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-[2"-(4-metylpiperazin-l-yl)etyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml tørr diklormetan ble avkjølt til -78°C og behandlet under nitrogen med 0,54 ml (3,1 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin etterfulgt av 0,40 ml (2,38 mmol) trifluormetan-sulfonsyreanhydrid dråpevis i løpet av 5 minutter. Etter 20 minutter ved -78°C, ble 1,0 ml (9,01 mmol) 1-metylpiperazin tilsatt dråpevis og den resulterende løsning ble langsomt opp-varmet til -20°C og omrørt ved denne temperatur i 1,5 time. Reaksjonen ble deretter stoppet ved tilsetning av 200 ml kald etylacetat og vann. Den organiske fase ble vasket med vann, saltvann og tørket (MgSO^). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga 1,4 g av en klar olje, som ble anvendt som sådan på neste trinn. Ifølge <1>H-NMR var dette produkt kontaminert med noe 1-metylpiperazin.
IR (NaCl, film) vmaks: 2260 (CN), 1775 (C=0 av lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 6: 0,08 (s, 6H, SiCH3), 0,88 (2, 9H, Si-tBut), 1,28 (d, J=6,05 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 2H> CH2-4), 2,3 (s, 3H, NCH3), 2,3-2,6 (m, 10H, CH2-2 av etyl og CH2 av piperazin) , 2,6-2,8 (m, 2H, CH2CN), 2,9-3,1 og 3,2-3,4 (m, 2H, SCH2), 3,19 (dd, <J>h6,H5=2'37 Hz' jH6,H1=6'6 Hz' 1H' h~ 6), 3,3 (m, 1H, H-4), 4,19 (dd overlapning med CH3CHO, JH5,H6=2'37 Hz' 1H' H~5>' 4'22 <m/ 1H' CH3<C>HO), 4,73 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r ( l' R)- l'~
hydroksvetvll- 4- f2"-( 4- metvlpiperazin- l- yl) etvll- 7- okso-l- azabicvclo r 3, 2, 01- hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,17 g (2,08 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4- [211- (4-metylpiperazin-l-yl) etyl] -7-okso-l-azabicyclo-s3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml tørr tetrahydrofuran ble avkjølt til -20°C, og behandlet dråpevis under nitrogen med 1,55 ml (27,1 mmol) eddiksyre etterfulgt av 14,6 ml (14,6 mmol) av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Løsningen ble deret-ter oppbevart ved 10°C i 7 dager. Reaksjonsblandingen ble deret-ter fortynnet med 300 ml etylacetat, vasket med kaldt, mettet natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga 1,45 g av det rå karbapenem. Kromatografi på 3,5 x 6 cm silicagel under anvendelse av en blanding av aceton og N,N-dimetylformamid (9:1) ga 0,57 g (61%, i 2 trinn) av tittelkarbapenemen som en olje. Ifølge <1>H-NMR inneholdt dette materiale én ekvivalent av N,N-dimetylformamid.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2250 (CN), 1770 (C=0 av lactam) og 1710 cm"<1> (C=0 av ester).
^•H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,38 (d, J=6,24 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,6-2,0 (m, 2H, CH2-4), 2,29 (s, 3H, NCH3) , 2,3-2,8 (m, 12H, CH2 av piperazin, CH2-2 av etyl og CH2CN), 2,9-3,1 og 3,2-3,4 (m, 2H, SCH2), 3,24 (dd overlapping med SCH2, <J>H6,H5=2'7 <Hz>'<J>H6,H1=6'9 Hz' 1H' H"6>' 3'42 <m' 1H' H"4>' 4,23 (m, 1H, CH3CHO), 4,28 (dd, JH5,H6=2'7 Hz' jH5,H4<=>9'5 Hz' 1H, H-5), 4,76 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 ppm (2 x m, 2H og 1H, CH av allyl).
C. ( 4R. 5S, 6S)- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r( l' R)- l'~ hvdroksvetvl]- 4-[ 2"-( 4- metvlpjperazin- l- vl) etvll- 7- okso-l- azabicvclo \ 3 , 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,57 g (1,27 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-[2"-(4-metylpiperazin-l-yl)etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 25 ml tørr etylacetat ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 0,075 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] etterfulgt av 2,8 ml (1,4 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 45 minutter ble reaksjonsblandingen ekstrahert suksessivt med 50 ml av en 0,1M pH 6,0 fosfatbuffer og 25 ml vann. Den kombinerte vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel og ble deretter kromato-grafert to ganger på 2,5 x 14 cm "u-Bondapak C^g" reversfase-silicagel. Eluering med en gradient av 0-5% acetonitril i vann ga 0,28 g (54%) av tittelkarbapenemen som et hvitt, amorft pulver etter frysetørking: [cc]<22>D = +35,3° (c 1,0, H20) .
Renhet ved HPLC: 97% på 3,9 mm x 30 cm , "u-Bondapak C18" eluering 10% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer,
strømningshastighet 1 ml/min., uv-detektor 302 nm, retensjonstid 6,6 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 300 nm (8.390).
IR (KBr) vmaks: 2250 (CN), 1755 (C=0 av p-lactam) og 1595 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,39 Hz, 3H, CH3CHO), 1,6-2,2 (m, 2H, CH2~<4>), 2,75 (s, 3H, NCH3), 2,6-3,3 (m, 12H, CH2 av piperazin, SC<H>2 og CH2-2 av 4-etyl), 3,3-3,5 (m, 2H, H-4 og H-6 overlapping) og 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO).
Eksempel 127
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- guanidinopropvl)- 6- f( l' R)- 1'-hydroksvetvl]- 3-( f2-( 1- pyrrolidinyl) etvlltio)- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksvresalt
En kald (isbad) løsning av (4R, 5S., 6S.)-4-(3"-aminopropyl)-6- [(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-([2-(1-pyrrolidinyl)etyl]tio)-7-okso-l-azabicyclo[3,2, 01hept-2-en-2-karboksylsyre (fra hydrogenolyse av det tilsvarende azidoderivat 115 mg-, 0,270 mmol) i 15 ml 0,05M vandig fosfatbuffer ble behandlet med 0,1N vandig NaOH for å øke og bibeholde pH ved 8,0-8,2 under den porsjonsvise tilsetning av 170 mg (1,30 mmol) amino-iminometansulfonsyre. Blandingen ble omrørt i 3 timer (pH holdt ved 8-8,2), deretter ble den nøytrali-sert med 0,1 M vandig NaH2P04. Den ble ledet gjennom 20 g "|i-Bondapak C-^g" søyle (0,005M vandig eddiksyre, 1 -» 2% CH3CN/0,005M vandig eddiksyre), hvorved det ble oppnådd 75 mg (57%) tittelfor-bindelsen som et hvitt, lyofilisert pulver.
Renhet: 98, 07% som bestemt ved HPLC (r.t.= 8,86 min, "ji-Bondapak C18", 10M, 20% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (vann) Xmaks: 296 (6723).
IR (Nujol) Vmaks: 3400-3100 (OH, NH2) , 1760 (C=0 av J3-lactam), 1670, 1635 (C=N), og 1485 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,35-4,23 (1H, m, H-l'), 4,264 (1H, dd, J=3,l Hz, J=9,8 Hz, H-5), 3,399, 3,384 (d, J=3,l Hz, del av H-6), 3,40- 3,138 (11H, m, H-4, CH2-NH, S-CH2CH2N, CH2-N-C<H>2 og del av H-6), 2,12- 2,05 (4H, (CH2)2 pyrrolidin), 1,919 (1,5 H, s, CH3C02), 1,95-1,4 (2 sett av m, CH2CH2 ved posisjon 4) og 1,320 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 128
( 4R. 5S. 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- r( 2- N. N-dimetylaminoetyl) tiol- 6- T( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo r3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksvresalt
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- r( 2- N. N-dimetvlaminoetvl)- tio)- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso-l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (tørris-aceton bad) løsning av 3,29 g (6,45 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (3"-azidopropyl) -3-[ (2-N,N-dimetylaminoetyl)-tio]-6-[(l'R)-1'-trietylsilyloksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 60 ml CH2CI2 ble tilsatt 2,90 ml (16,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin etterfulgt av dråpevis til-setning av 1,29 ml (7,7 mmol) trifluormetansulfonsyreanhydrid. Etter en 20 minutters omrøringsperiode ble en strøm av gassformet dimetylamin ledet gjennom reaksjonsblandingen i 1,5 minutter. Blandingen ble omrørt i 15 minutter ved -78°C og i 30 minutter ved -15°C (is-metanol), deretter fortynnet med 250 ml iskald etylacetat og 50 ml dietyleter, vasket med 10 x 50 ml iskaldt vann, 50 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ved løsnings-middelavdampning løst i 30 ml vannfri tetrahydrofuran, avkjølt til -15°C (is-metanol), deretter behandlet med 2,1 ml (38,7 mmol) iseddiksyre og en IM tetrahydrofuranløsning av 19,4 ml (19,4 mmol) tetrabutylammoniumfluorid og sto ved -20°C i 18 timer. Blandingen ble fortynnet med 150 ml iskald etylacetat, vasket med 3 x 75 ml kaldt IM vandig NaHCC^, 75 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom 75 g hurtigsilicagelsøyle (50-100% etylacetat/heksan, 10% -» 100% aceton/etylacetat, 15% metanol/aceton), hvorved det ble oppnådd 605 mg (22%) av tittel-forbindelsen som en gul olje.
IR (CH2C12) vmaks: 3600, 3300 (OH), 2100 (N3), 1775 og 1610 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) S: 6,1-5,9 (1H, m, vinylisk H),
5,5-5,2 (2H, m, vinylisk H), 4,88-4,62 (2H, m, allylisk CH2), 4,247 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz), 4,3-4,2 (1H, m, H-l'), 3,43-3,2 (3H, m, H-l', CH2N3), 3,244 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,4 Hz, H-6), 3,1-2,8 (2H, m, SCH3) , 2, 65-2,56 (2H, m, CH2N) , 2, 335 (6H, s, N(CH3)2), 2,0-1,56 (5H, m, CH2CH2~4, OH) og 1,391 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) .
B. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- f( 2- N. N-dimetvlaminoetvl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
En kald (isbad) løsning av 588 mg (1,39 mmol) allyl-
(4R, 5S., 6S.) -4-(3"-azidopropyl) -3-[ (2-N,N-dimetylaminoetyl)tios-6-t(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 35 ml CH2C12 ble først behandlet med 123 mg (0,1 mmol) Pd(PPh3)4^ etterfulgt av dråpevis tilsetning av 0,3 ml (2,78 mmol) N-metylanilin.
Blandingen ble omrørt i 25 minutter. Der-etter ble en 80 ml
0,1M vandig pH 7,0 fosfatbufferløsning og 150 ml dietyleter tilsatt. Fasene ble adskilt og den organiske fase ble ekstrahert med 2 x 30 ml 0,01M vandig pH 7,0 fosfatbuffer-
løsning. De vandige faser ble kombinert, vasket med 2 x 50 ml dietyleter og ledet gjennom 75 g "u-Bondapak C^g"
reversfasesøyle (vann, 2% —» 30% CH3CN/H20), hvorved det ble oppnådd 399 mg (75%) tittelforbindelsen som et blekgult, lyofilisert pulver.
IR (Nujol) vmaks<:> 3500-3100 (OH), 2100 (N3), <1>750 og 1590
cm"<1> (C=0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,264 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,3
Hz, H-5), 4,34-4,2 (1H, m, H-l'), 3,475 (1H, dd, J=2,7 Hz,
J=6,0 Hz, H-6), 3,5-3,2 (3H, m, CH2N3 og H-l'), 3,2-2,95 (4H, m, SCH2 og CH2N), 2,0-1,8, 1,8- 1,47 (4H, 2 sett av m, H-CH-4 og HCHCH2-4) og 1,33 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- r( 2- N. N-dimetvlaminoetvl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksvresalt
En kald (isbad) løsning av 250 mg (0,65 mmol) (4R, 5S_, 6S_)-4-(2"-azidopropyl)-3-[(2-N,N-dimetylaminoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 50 ml vann ble omrystet på en Parr hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time under anvendelse av 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. Ytterligere 600 mg katalysator ble deretter tilsatt og hydrogeneringsperioden ble forlenget med ytterligere 1 time. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og vasket med 3 x 5 ml vann. pH av den vandige blanding ble innstilt til 4,5 med en IM vandig eddiksyreløsning, hvoretter den ble ledet gjennom en 75 g "|l-Bondapak C^g" reversfasesøyle (0,005 M iskald vandig eddik-syre, 1% CH3CN/0,005 M vandig eddiksyre), hvorved det ble oppnådd 215 mg (79%) av tittelforbindelsen som et blekgult, lyofilisert faststoff.
Renhet: 96,1% som bestemt ved HPLC (r.t.= 5,83 min, "u-Bondapak C18", 10 Ji, 10% CH3CN/KH2P04 0, 01M, pH 7,4).
UV (vann) Xmaks: 296 (8142).
IR (Nujol) vmaks: 3400-3100 (OH, NH2), 1755 og 1600 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,273 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,9 Hz, H-5), 4,4-4,2 (1H, m, H-l'), 3,458 (1H, dd, J=2,8 Hz,
J=6,2 Hz, H-6), 3,4-3,2 (3H, m, CH2N og H-4), 3,2-3,0 (4H, m, SCH2 og CH2N) , 2,91 (6H, s, (N(CH3)2), 1,92 (2,5 H, s, C<H>3C02H), 2,0-1,4 (4H, m, CH2CH2-4) og 1,330 (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 129
( 4R, 5S. 6S)- 3- U( 4S)- 4- r ( 2S)-dimetvlaminokarbonvllpvrrolidinvltioP- 4-( 2"-quanidinoetvl)- 6- F( l' R)- V - hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksyresalt
En løsning av 0,24 g (0,51 mmol) (4R,5S,6S)-4-(2"-aminoetyl)-3-U(4S)-4-[(2S)-2-dimetylaminokarbonyl]pyrrolidinyltiop-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, eddiksyresalt i 25 ml kaldt (0-5°C) vann ble inn-stilt til pH 8-8,5 med IM natriumhydroksid. Deretter ble 0,38 g (3,06 mmol) aminoiminometansulfonsyre tilsatt i små porsjoner (5 min), mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM natriumhydroksid under tilsetningen og i ytterligere 2 timer. pH ble deretter innstilt til 5 med eddiksyre og den resulterende løsning ble kromatogra-fert på 2,5 x 15 cm "ji-Bondapak C^g" reversfasesilicagel. Elue-ring med en gradient av 0-20% acetonitril i 0,005M vandig eddik-syre ga 0,063 g (24%) tittelkarbapenem som et hvitt, amorft faststoff etter frysetørking.
Renhet ved HPLC: 94% på 3, 9 mm x 30 cm, "|i-Bondapak C18", eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, uv-detektor 302 nm, retensjonstid 15,6 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfat buffer) Xmaks: 300 nm (8.011).
IR (KBr) Vmaks: 1760 (C=0 av p-lactam), 1660 (C=0 av amid) og 1600 (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,33 (d, J=6,32 Hz, 3H, CH;(CH0) 1,7-2,2 (m, 3H, H-3 av pyrrolidin og CH2-4), 1,92 (s, C<H>3C02H), 3,0 og 3,07 (2S, 2 x 3H, CON(CH3)2), 3-3,1 (m overlapning med NCH3, 1H, H-3 av pyrrolidin), 3,2-3,6 (m, 5H, H-5 av pyrrolidin, H-4, H-6 og CH2NH av etyl), 3,65 (dd, Jgem=12,2 Hz, Jh5,H4=5'85 Hz' 1h' h~5 av pyrrolidin), 3,9 (m, 1H, H-4 av pyrrolidin), 4,28 (m overlapping med H-5, 1H, CH3CHO), 4,31 (dd, <J>h5,H6=2'75 Hz' JH5,H4=9'8 Hz' 1H' h~5> °9 4,70 ppm (t, J=8,5 Hz, 1H, H-2 av pyrrolidin).
Eksempel 130
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- r( N. N-dimetvlamidinometvl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7-okso- 1- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksyresalt
En løsning av 0,270 g (0,68 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-azido-propyl)-3-[(N,N-dimetylaminometyl)tio]-6-[(l'R)-1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylsyre i 80 ml kaldt vann ble hydrogenert ved 0-5°C over 1,2 g 5% palladium-på-aluminiumoksid under 45 psi hydrogen i 1 time. Deretter ble 0,08 ml (1,4 mmol) eddiksyre tilsatt (pH ændring fra 9 til 4) og kata-lysatoren ble fra-filtrert. Filtratet ble kromatografert på 3 x 12 cm "ji-Bondapak C18" reversfasesilicagel under anvendelse av en gradient av 0-20% acetonitril i 0,01M vandig eddiksyre. Lyofili-sering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,200 g av et hvitt, amorft pulver, som ifølge 1H-NMr var en ekvimoler blanding av tittel-materiale og acetamidinacetat. Denne blanding ble løst i 1 ml etanol og precipitert med 3 ml dietyleter (3 ml). Det oppnådde faststoff (-0,088 g) ble kromatografert på samme søyle som ovenfor, hvorved det ble oppnådd 0,080 g (27%) av den rene tittelforbindelse som et hvitt, amorft pulver.
Renhet ved HPLC: 96% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18" eluering 3% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer,
strømningshastighet 2 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 9,3 min.
UV (H20, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 292 nm (5.872).
IR (KBr) vmaks:1760 (C=0 av p-lactam), 1645 (sh) og 1575 cm-<1> (C=0 av karboksylat). 1 H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,38 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 4H, CH2~1 og 2 av propyl), 1,91 (s, 3H, C<H>3C02H), 3-3,4 (m, 3H, H-4 og CH2NH2), 3,12 og 3,29 (2s, 2 x 3H, N(C<H>3)2), 3,50 (dd, <J>h6,H5=2'92 Hz' JH6,H1 = 6'32 Hz' 1H' H~ 6), 3,84 (s, delvis utskiftet, SCH2), og 4,2- 4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping).
Eksempel 131
( 4R, 5S. 6S)- 4- r2"-( 2- aminoetvltio) etvl1- 3- r( 2-cvanoetvltiol- 6- f( l' R)-1'- hvdroksvetvl]- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4- f 2 "-( 2-allvloksvkarbonylaminoetvltio) etvll- 6- r( l' R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll - 3- f ( 2- cvanoetvl) tiol - 7- okiSo- l-azabicvclo 13 , 2 . 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (tørris-aceton) løsning av 350 mg (0,73 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -6- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] - 3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo-[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat i 7 ml diklormetan ble først behandlet med 0,34 ml (1,9 mmol) diisopropyletylaminog deretter dråpevis med 0,14 ml (0,88 mmol) trifluormetansulfon-syreanhydrid. Blan-dingen ble omrørt i 25 minutter, behandlet dråpevis med 354 mg (2,2 mmol) N-allyloksykarbonylcysteamin i 1 ml diklormetan og deretter omrørt i 1/2 time ved -15°C (tørrisbad ble erstattet med et is-metanolbad). Blandingen ble behandlet med ytterligere 177 mg (1,1 mmol) tiol i 0,5 ml diklormetan og 0,13 ml (0,73 mmol) diisopropyletylamin, deretter omrørt i ytterligere 30 minutter. Den ble fortynnet med 30 ml etylacetat, vasket med 2 x 10 ml iskaldt IM vandig NaHS03, 10 ml vann, 2 x 10 ml IM vandig NaHC03, 10 ml vann, 10 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 35 g hurtigsilicagelsøyle (10% -» 50% etylacetat/heksan), hvorved det ble oppnådd 321 mg (70%) av tittelforbin-delsen.
IR (CH2C12) vmaks<:> 3450 (NH) , 2250 (CN) , 1775 (C=0 av {J-lactam) og 1720 cm"<1> (C=0 ester og karbamoyl).
<X>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6, 03-5,82 (2H, m, vinylisk H), 5,48-5,19 (4H, m, vinylisk H) , 5,1 (1H, bs, NH) , 4,9-4,63 (2H, m, allylisk CH2), 4,583-4,55 (2H, m, allylisk CH2), 4,3-4,13 (1H, m, H-l'), 4,158 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,55-3, 33 (3H, m, CH2N og H-4), 3,33-3, 19, 3, 05-2, 9 (2H, 2 sett av m, SCH2 ved posisjon 3), 3,11 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,9 Hz, H-6), 2,9-2,63 (6H, 2 sett av m, CH2CN og CH2S), 2,1-1,96, 1,96-1,75 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,300 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,884 (9H, s, tert-butyl) og 0,090 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4- f2"-( 2-allyloksykarbonylaminoetyltio) etvll- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol-6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclor 3, 2, 0) hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-metanolbad) løsning av 310 mg (0,500 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -4- [2"- (2-allyloksykarbonylaminoetyltio) etyl]-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 7 ml tetra-hydrofuran ble behandlet med 0,16 ml (3,0 mmol) iseddiksyre og dråpevis med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 1,5 ml (1,5 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen sto i et kaldt rom (5°C) i 15 dager, ble deretter fortynnet med 30 ml etylacetat, vasket med 3 x 15 ml iskaldt IM vandig NaHC03, 2 x 15 ml vann, 15 ml salt-vann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 15 g hurtig-silicagelsøyle (40 -> 100% etylacetat/heksan), hvorved det ble oppnådd 155 mg (60%) av tittelforbindelsen som en gul olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3600 (OH), 3450 (NH), 2250 (CN), 1775 (C=0 av (3-lactam) og 1715 cm"<1> (C=0, ester og karbamoyl) .
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,05-5,8 (2H, m, vinylisk H) , 5,50-5,20 (4H, m, vinylisk H), 5,05 (1H, bt, NH), 4,82-4,65
(2H, m, allylisk CH2), 4,586, 4,559 (2H, d, J=5,5 Hz, allylisk CH2), 4,206 (d, J=2,7 Hz, del av H-5), 4,22-4,05 (1H, m, H-1'), 3,7-3,5 (1H, mH-4), 3,5-3,3, 3,3-3,1, 3,1-2,8, 2,8-2,6 (11H, H-6, CH2N, SCH2, CH2CN), 2,1-1,6 (3H, m, CH2~4 og OH) og 1,427 ppm (3H, d, J=6,l Hz, CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4- f2"-( 2- aminoetvltio) etvll- 3- r( 2-cvanoetvl) tiol- 6- r( 1' R)-1'- hydroksyetyl]- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsyre
En kald (isbad) løsning av 150 mg (0,29 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- [2"- (2-allyloksykarbonylaminoetyltio) etyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml diklormetan ble først behandlet med 53 mg (0,040 mmol) Pd(Pd3)4 etterfulgt av dråpevis tilsetning av 0,15 ml (1,2 mmol) N-metylanilin. Blandingen ble omrørt i 20 minutter, deretter fortynnet med 30 ml dietyleter og en 15 ml 0, IM pH 7,0 vandig fosfatbuffer., Den organiske fase ble igjen ekstrahert med 2 x 7 ml 0,IM bufferløsning og 7 ml vann.
De vandige ekstrakter ble vasket med 2 x 20 ml dietyleter og ledet gjennom en 45 g "u-Bondapak C^g" reversfasesøyle (vann, 1 -» 6% CH3CN/vann), hvorved det ble oppnådd 31 mg (28%) av tittelfor-bindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 98,0% som bestemt ved HPLC (r.t. = 6,26 min, "u-Bondapak C18", 10 u, 5% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (vann) Xmaks: 300 (10.964).
IR (Nujol) Vmaks<:> 3500-3100 (OH, NH2), 2250 (CN), 1755 (C=0 av p-lactam) og 1590 cm-<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,32-4,20 (1H, m, H-l'), 4,244
(d, J=2,7 Hz, del av H-5), 3,608-3,494 (1H, m, H-4), 3,407 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 3,278-3,04 (3H, m, CH2N og deler av SCH2 ved posisjon 3), 3,03-2,71 (6H, m, SCH2 ved 3, SCH2 og CH2CN), 3,70-2,49 (1H, m, del av SCH2), 2,10-1,95, 1,95-1,75 (2H, 2 sett av m, CH2-4) og 1,322 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 132
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- cruanidinoetvl)- 6- r ( l' R)- l'-hvdroksvetvll- 3- f 2-( 1- pyrrolidinyl) etvltiol- 7- okso- l-azabicyclo 13 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre, eddiksyresalt
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- 1'- tert-butyldimetylsilyloksyetyl 1 - 3- T2- ( 1- pyrrolidinvl) etvltiol-7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (tørris-aceton) løsning av 1,0 g (2,0 mmol) allyl- (4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (l'R) -l'- tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl]-3-[(2-hydroksyetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml tørt CH2Cl2 ble først behandlet med 0,92 ml (5,2 mmol) diisopropyletylamin og dråpevis med 0,40 ml (2,4 mmol) trifluormetansulfonsyreanhydrid. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, 1,0 ml (12 mmol) pyrrolidin ble tilsatt dråpevis og blandingen ble omrørt i 1 time ved -15°C (is-MeOH). Blandingen ble fortynnet med 100 ml 1:1 EtOAc/petroleumseter-blanding og vasket med 10 x 25 ml iskaldt vann. Den organiske fraksjon ble tørket (MgSC^) og ledet gjennom 60 g hurtigsilica-gelpute (20% -* 100% EtOAc/Heksan, 20% aceton/EtOAc), hvorved det ble oppnådd 640 mg (58%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks<:> 2100 (N3), 1775 og 1720 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,1-5,8 (1H, m, vinylisk H) , 5,5-5,2 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,55 (2H, m, allylisk CH2), 4,3-4,1 (1H, m, H-l'), 4,12 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,7-3,5 (1H, m, H-4), 3,4-3,2 (2H, m, CH2N3) , 3,07 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=7,9 Hz, H-6), 3, 04-2,76 (2H, 2 sett av m, SCH2) , 2,76-2,5 (6H, m, CH2N), 2,15-1,95 (1H, m, HCH), 1,9-1,6 (5H, m, (C<H>2)2 og H-CH), 1,313 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,895 (9H, s, tert-butyl) og 0,094 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- f2-( 1- pyrrolidinyl) etvltiol - 7- okso- l-azabicyclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-MeOH bad) løsning av 620 mg (1,1 mmol) allyl-(4R, 5S, 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6-[ (l'R) -1'-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl]-3-[2-(1-pyrrolidinyl)etyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml vannfri tetrahydrofuran ble først behandlet med 0,36 ml (6,6 mmol) eddiksyre, etterfulgt av dråpevis tilsetning av en IM tetrahydrofuranløsning av 3,3 ml (3,3 mmol) tetrabutylammoniumfluorid. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, deretter ved 5°C (isbad) i 1 time og blandingen sto i 12 dager i kjølerom (5-8°C).
Blandingen ble fortynnet med 30 ml etylacetat, vasket med 4 x 5 ml IM vandig NaHC03, 5 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 5 g hurtigsilicagelpute (etylacetat/heksan 50 -» 100%, aceton/etylacetat 20% -» 100%), hvorved det ble oppnådd 200 mg (42%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 3600 (OH), 2100 (N3), 1775 og 1620 cm" <1> (C=0) .
■'"H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6, 05-5, 95 (1H, m, vinylisk H), 5,5-5,2 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk CH2), 4,3-4,2 (1,5 H, m, H-l' og skjult del av H-5), 4,208 (d, J=2,7 Hz, del av H-5), 3,63-3,53 (1H, m, H-4), 3,49-3,35 (2H, m, CH2N3), 3,155 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,9 Hz, H-6), 3,09-2,6 (4H, SC<H>2CH2-pyrrolidin), 2,56 (4H, bs, CH2NCH2), 2,2-1,7 (6H, m, CH2-4 og CH2CH2 for pyrrolidin) og 1,395 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
C. ( 4R, 55, 6S)- 4-( 2"- guanidinoetyl)- 6- r( 1' R)- 1'-hvdroksvetvll- 3- f 2-( 1- pvrrolidinvl) etvltiol - 7- okso- l-azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksyresalt
En kald (isbad) løsning av 160 mg (0, 370 mmol) allyl-- (4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -6- [ (l'R) -1' -hydroksyetyl] -3-[2- (1--pyrrolidinyl) etyltio] -7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en--2-karboksylat i 12 ml CH2C12 ble behandlet med 30 mg (0,02 mmol) Pd[PPh3]4, etterfulgt av dråpevis tilsetning av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i 0,74 ml (0,37 mmol) etylacetat. Blan-dingen ble omrørt i 15 minutter, deretter fortynnet med 70 ml dietyleter og ekstrahert med en 3 x 15 ml 0,04M pH 7,0 vandig fosfatbuffer og 1 x 15 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombi-nert, vasket med 2 x 30 ml dietyleter og pH ble innstilt (isbad) til 5,9 med en IM vandig NaH2P04 bufferløsning. Den vandige blan-ding ble omrystet på en Parr hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen ved 5°C (isbad) i 1 time under anvendelse av 160 mg 30% Pd/- "Celite" som katalysator. Deretter ble ytterligere 100 mg kataly-sator tilsatt og hydrogeneringen ble utført i ytterligere 30 minutter. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og vasket med 2 x 5 ml vann. pH av den vandige løsning (isbad) ble innstilt til 8,0 med en 0,5M vandig NaOH-løsning, og 360 mg (2,96 mmol, 8 ekv.) aminoiminometansulfonsyre ble tilsatt porsjonsvis, mens pH ble holdt ved 7,8-8,0 med NaOH-løsningen. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 timer (isbad), hvoretter pH ble innstilt til 7,0 med en IM vandig eddiksyreløsning. Den vandige blanding ble ledet gjennom en 60 g "u-Bondapak C18" reversfasesøyle, stabilisert og eluert med 0,005M vandig eddiksyreløsning (1% -» 2% CH3CN), hvor- ved det ble oppnådd 45 mg (26%) av tittelforbindelsen som et lyofilisert pulver.
Renhet: 97,5% bestemt ved HPLC (r.t.= 7,17 min, 10 u, "ji-Bondapak C18", 10% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (vann) Xmaks: 294 (5427).
IR (Nujol) Vmaks: 3400-3100 (NH), 1765, 1000 (C=0) og 1675-1630 cm"<1> (C=N).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,35-4,2 (1H, m, H-l'), 4,292 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,502 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 3,8- 3,0 (9H, m, H-4, SCH<q>CH<q>N, CH2NCH2 av pyrrolidin), 2,2-1,95 (5H, CH2CH2 pyrrolidin, H-CH ved posisjon -4), 1,95-1,7 (1H, m, HC-H ved posisjon -4), 1,91
(1,5 H, s, CH3CO) og 1,328 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH3).
Eksempel 133
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- r( 3S)- 3- Pvrrolidinvltiol-6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvl)- 7- okso- l- azabicvclo 13 . 2, Olhept-2- en- 2- karboksvlsvre
A. ( 3S)- N- allyloksvkarbonvl- 3- merkaptopvrrolidin
En kald løsning (5°C) av 1,0 g (5,84 mmol) (3R)-N-allyloksy-karbonyl-3-hydroksypyrrolidin i CH2Cl2 ble behandlet med 0,532 g (6,72* mmol) pyridin etterfulgt av 1,90 g (6,72 mmol) trifluor-metansulfonsyreanhydrid. Etter omrøring i 15 minutter ble løs-ningsmidlet avdampet, resten triturert i dietyleter og filtrert. Det rå triflate ble gjenoppløst i kaldt (5°C) CH3CN og 0,71 g (7 mmol) trietylamin ble tilsatt dråpevis, mens H2S ble boblet gjen-nom løsningen. Dannelse av tiol var avsluttet i løpet av 15 minutter. Løsningsmidlet ble således avdampet og det rå produkt ble renset ved kromatografi. (Si02/5% CH3CN i CH2C12), hvorved det ble oppnådd av 0,787 g (71,9%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) Vmaks: 1700 (-C02~), 1650 cm"1 (>=<).
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,50-6,10 (5H, allylmønster), 3,70-3,90 (1H, m, CH-S-) 3,20-3, 70 (4H, m, - (CH2-) 2N) / 2,20-2,40 og 1,70-2,00 (2H, 2m, 2 H-4), 1,70 (1H, d, J=6,57, -SH).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- f( 3S)- N-( allvloksvkarbonyl)- 3- pvrrolidinyltiol- 6- F( 1' R)- 1'-hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo- f 3. 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald (5°C) løsning av allyl-(4R,5S,6S)-4-(3"-azido-propyl)-3-(difenylfosfono)-6-[(1'R)-1' -hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat (fra 1,09 g, 3 mmol diazoketon) i CH3CN ble behandlet med 0,79 g (4,2 mmol) (3S)-N-allyloksykarbonyl-3-merkaptopyrrolidin, etterfulgt av 0,54 g (4,2 mmol) diisopropyletylamin. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 5°C i 18 timer, deretter fortynnet med EtOAc og vasket suksessivt med saltvann, fortynnet saltsyre, fortynnet hydrogenkarbonat og til slutt igjen med saltvann. Den organiske fase ble tørket (MgS04) og inndampet. Det rå produkt ble renset ved kromatografi (Si02/-15% CH3CN i CH2C12), hvorved det ble oppnådd 441 mg (29,1%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) Vmaks<:> 3610 (-0H) , 2105 (-N3) , 1775 (|5— lactam), 1700 (-C02~), 1650 cm"<1> (>=<).
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,50-6,10 (10H, 2 allylmønstre), 4,15-4,25 (2H, m, H-5, H-l'), 3,70-3,90 (2H, m, H-4, -CHS), 3,0-3,90 (7H, m CH2-<N>3, H-6, >CH2)2)N-), 1,50-2, 40 (6H, m, 2H-1", 2H-2", 2H-4 av pyrrolidin), 1,40 (3H, d, J=6,23, -CH2').
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- r( 3S)- 3-pyrrolidinvlvtiol- 6- r( 1' R)- 1' hvdroksvetvll - 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
En løsning av 0,15 g (0,3 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(3"-azidopropyl)-3-[(3S)-N-(allyloksykarbonyl)-3-pyrrolidinyltio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat, 0,30 g trifenylfosfin og 0,127 g (1,19 mmol) N-metylanilin i 10 ml EtOAc ble avkjølt i is og behandlet med
0,03 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0]. Isbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen omrørt ved 20°C i 30 min. Tilsetning av ytterligere 0,025 g
tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] gjorde omsettningen fullstendig i løpet av 45 minutter. Reaksjonsblan-dingen ble deretter ekstrahert med kaldt vann og de vandige ekstrakter ble kromatografert på reversfasesilicagel (Partisil). Eluering ble foretatt med 0-20% CH3CN i vann. De relevante frak-sjoner ble lyofilisert, hvorved det ble oppnådd 0,028 g (24,5%) av tittelforbindelsen som et hvitt skum.
IR (Nujol) vmaks<:> 2100 (-N3), 1765 (p<->lactam), 1595 cm"<1 >(-C02-).
<1>H-NMR (D20) 8: 4,15-4,35 (2H, m, H-5, H-l'), 3,97 (1H, m, -CH-S-), 3,20-3,70 (8H, m, H-4, H-6, CH2~<N>3, -CH2)2<N>), 2,40-2,60 og 1,25-2,20 (6H, m, 2H-1", 2H-2", 2H-4 av pyrrolidin), 1,31 (3H, d, J=6,35, -CH3').
D. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropyl)- 3- r ( 3S)- 3-pyrrolidinyltio]- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (5°C) løsning av 0, 042 g (0,11 mmol) (4R, 5S. 6S)-4- (3"-azidopropyl) -3- [ (3S) -3-pyrrolidinyltio] -6-[ (1' R) -1' -hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 15 ml vann ble hydrogenert i 1 time ved 43 psi i nærvær av 0,04 g 5% Pd/Al203. Deretter ble katalysatoren frafiltrert og pH av filtra-tet ble senket til 6,3 ved tilsetning av IM NaH2P04. Den vandige løsning ble kromatografert på reversfasesilicagel (Partisil) under eluering med kaldt vann. Lyofilisering av de relevante fraksjoner ga et urent hvitt faststoff. En ytterligere kromato-grafering, denne gang under eluering med 0,6 ml eddiksyre/1 1 vann ga 0,025 g (54,7%) av den rene tittelforbindelse som eddiksyresaltet.
IR (Nujol) VmaJcs: 1755 cm"<1> (JJ-lactam) .
1 H-NMR (D20) 5: 4,20-4,40 (2H, m, H-5, H-l'), 3,99 (1H, m, -CH-S), 3,15-3,70 (6H, m, H-6, H-4, -CH2)2N), 3,05 (2H, m, CH2-N), 2,30-2,60 og 1,50-2,15 (6H, m, 2H-1", 2H-2", 2H-4 av pyrrolidin), 1,33 (3H, d, J=6,33, CH3') , 1,92 (3H, s, eddiksyre). Eksempel 134 ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- r( 2- quanidinoetvl) tiol-6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvref eddiks<y>resalt
En suspensjon av 0,300 g (0,76 mmol) (4R, 5S, 6S)-4-(3"-azidoetyl)-3-[(2-guanidinoetyl)tio]-6-[(l'R)-1' -hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 150 ml kaldt vann ble hydrogenert ved 0-5°C over 1,0 g 5% palladium-på-alumi-niumoksid under 45 psi hydrogen i 1 time. Etter tilsetningn av 0,1 ml (1,6 mmol) eddiksyre ble katalysatoren frafiltrert, og filtratet ble kromatografert to ganger på 2,5 x 15 cm "u-Bondapak C1g" reversfasesilicagel under eluering med 0,005M eddiksyre. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,23 g (70%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft faststoff: [a]<22>D +32,2° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 99% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18", eluering vann pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 0,8 ml/min, UV-detektor 302 nm, retensjonstid 8,27 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (6.390).
IR (KBr) Vmaks: 1750 (C=0 av (3-lactam) , 1680, 1630 og 1580 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,34 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 1,92 (s, CH3C02H) , 2,8-3,4 (m, 4H, SCH2 og CH2NH2), 3,37 (m, overlapping med H-6, 1H, H-4), 3,40 (dd, <j>h6,H5=2'*>Hz' JH6/H1=6,4 Hz, 1H, H-6), 3,48 (t, J=5, 8 Hz, 2H, CH2NH-C(NH)NH2), 4,25 (dd, overlapping med CH3CHO, Jh5,h6=2'6 Hz' 1H, H-5) og 4,28 ppm (m, 1H, CH3CHO).
Eksempel 135
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- guanidinoetyl)- 3- f( 2-guanidinoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre, eddiks<y>resalt
En løsning av 0,270 g (0,73 mmol) (4R,5S,6S)-4-(2"-amino-etyl)-3-[(2-aminoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, eddiksyresalt [frem-stilt i eksempel 115] i 50 ml kaldt vann ble innstilt til pH 8,5 med IM vandig natriumhydroksid og behandlet ved 0-5°C med 0,80 g (6,44 mmol) aminoiminometansulfonsyre tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med basen. Etter 2,5 time ble pH innstilt til 4,5 med eddiksyre, og løsningen ble kromatografert to ganger på 2,5 x 15 cm "u-Bondapak C^g" revers-fasesilicagel under eluering med vann. Lyofilisering av de UV- aktive fraksjoner ga 0,080 g (23%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft faststoff.
Renhet ved HPLC: 99% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18" eluering 0,01M fosfatbuffer, strømningshastighet 2 ml/min, uv-detektor 300 nm, retensjonstid 6,75 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 302 nm (7.250).
IR (KBr) vmaks: 1755 (C=0 av [5-lactam), 1670, 1640 og 1570 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,34 Hz, 3H, C<H>3CHO), 1,7-2,2 (m, 2H, CH2~1 av etyl), 1,92 (s, CH3C02H), 2,7-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,2-3,7 (m, 6H, H-4, H-6, CH2~2 av etyl og SC<Ho>CHoN) og 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO).
Eksempel 136
( 4R, 5R, 6S)- 3- f ( 2- cvanoetvl) tiol- 6- r ( l' R)-!'-hvdroksvetvll- 4- f2"-( 1- pvridinium) etvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2 f 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 0,481 g (1 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-l'-tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-hydroksyetyl)-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat [fremstillet i eksempel 125] i 10 ml tørr diklormetan ble avkjølt til -78°C og behandlet under argon med 0,2 62 ml (1,5 mmol) N,N-diisopropyletylaminetterfulgt av 0,194 ml (1,15 mmol) trifluor-metansulfonsyreanhydrid dråpevis i løpet av 3 minutter. Etter 20 minutter ved -78°C, ble 0,324 ml (4 mmol) pyridin tilsatt. Reak-sjonsblandingen sto ved -20°C i 18 timer, ble deretter konsen-trert under vakuum uten oppvarming. Resten ble oppløst i 20 ml tørr tetrahydrofuran, avkjølt til -15°C og behandlet under argon med 0,76 ml eddiksyre, etterfulgt av 6 ml (6 mmol) av en IM løs-ning av tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran.
Løsningen sto ved 0°C i 96 timer, deretter ble 0,090 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] tilsatt, etterfulgt av 0,350 ml (2 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Den resulterende reaksjonsblanding ble omrørt under argon ved 0°C. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 30 ml kaldt vann. pH av den vandige fase ble innstilt til 6,5 med IN NaOH, deretter ble den vandige ekstrakt vasket med dietyleter og' holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel. Løsningen ble fil-trert, deretter kromatografert på 3,5 x 14 cm "|i-Bondapak C^g" reversfasesilicagel under eluering med vann. De UV-aktive fraksjoner ble kombinert, lyofilisert og kromatografert ytterligere en gang på samme søyle under eluering med en gradient av 0-1% acetonitril i vann. Sluttlyofilisering ga 0,310 g av et hvitt, amorft pulver, som ble krystallisert i 20 ml kald metanol, hvor-ved det ble oppnådd 0,262 g (68%) av den rene, krystalliske tittel-karbapenem.
Renhet ved HPLC: 99,96% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <c>18"' eluerin9 2% CH3CN-vann pH 7,4 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 0,8 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 9,97 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 298 nm (8101), 260
nm (7531).
IR (KBr) vmaks: 2250 (CN), 1755 (C=0 av p-lactam) og
1600 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,37 (d, J=6,35, 3H, CH3CHO), 2,2-2,6 (m, 2H, CH2"4), 2,8 (m, 2H, CH2CN) , 2,9-3,1 (m, 2H,
SCH2), 3,45 (m, 1H, H-4), 3,56 (dd, Jh6,H5=2'97 Hz' <J>H6,H1=7'04 Hz' 1H' H-6>' 4,20-4,40 (m, 2H, H-5 og CH3<C>HO), 4,81 (m, overlapping med HOD signal, 2H, N<+->CH2), 8,11 (m, 2H, H-3 og H-5 på pyridinium), 8,59 (m, 1H, H-4 på pyridinium), 8,91 (m, H-2 og H-6 på pyridinium).
Eksempel 137
( 4R. 5S, 6S)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- f 12-cvanoetvl) tiol-4-f 2"-( B- klor- L- alanvl- B- klor- L-alanvl) aminoetvll- 7- okso- l- azabicvclof 3, 2, 01- hept- 2- en-2- karboksylsyre
En løsning av 0, 475 g (1,46 mmol) (4R,5S, 6S)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-aminoetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 15 ml 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer ble avkjølt til 0°C, mens argon ble boblet gjennom løsningen. pH ble innstilt til 10,2 med IN NaOH, og N-karboksy-anhydrid av 0,22 g (1,46 mmol) 6-klor-,L-alanin i 1,5 ml dioksan ble tilsatt på én gang under kraftig omrøring. Da pH falt til 7,2, ble den gjenninnstilt til 10,2 og forble der i 1 time. Reak-sjonen ble stoppet ved innstilling av pH til 6,0 med IN HC1. Argon ble boblet gjennom løsningen i 30 minutter ved 0°C, mens pH ble gjenninnstilt til 6,0, hver gang den steg til over 6,0. Den rå reaksjonsblanding ble ledet gjennom en søyle av 4,5 x 10,5 cm "(i-Bondapak C^ q" inneholdende produktet ble kombinert og lyofi-lisert til et faststoff, som ble rekromatografert på 4,5 x 10,5 cm Bondapak C18" reversfasesilicagel. Den litt mindre polaere tittelforbindelse, adskilt meget tett på monopeptidderivatet, ble eluert med en blanding av vann og CH3CN (94:6, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,049g (6,8%) som et gullaktig, fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet 92,2% ved HPLC: UV-deteksjon ved 300 nm på 4 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18" , 10% CH3CN i pH 6,8 fosfatbuffer, strøm-ningshastighet 1 ml/min, retensjonstid 8,31 min.
UV Ws: 300 nm-
IR (Nujol) <v>maks: 1750 cm<-1> (C=0, p<->lactam).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,37 (d, 3H, CH3, J<=>6,4 Hz), 1, 66-1, 77, 2, 06-2, 16 (m, 2H, CH2) , 2, 83-2, 89 (m, 2H, CH2CN) , 2,91-3,04, 3,08-3,21 (m, 2H, SCH2), 3,32-3,41 (m, 3H, CH2NH, H-4), 3,58 (dd, 1H, H-6, J6/1,=5,88 Hz), 3, 78-4, 08 (m, 4H, C<p>H2), 4,17 (t, 1H, CCXH, Ja<p>=4,61 Hz), 4,27 (dd, 1H, H-5, J4^5=7,92 Hz, J5/6=2,48 Hz), 4,31 (m, 1H, H-l'), 4,76 (t, 1H, CCCH, Jap=5, 37 Hz) .
Eksempel 138
Natrium-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- f( 2-fluoretyl) tio]- 6- f( l' R)- 1"- hydroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo [ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat A. Allvl- ( 4R, 5S. 6S) - 4- ( 2"- azidoetvl) - 6- Ul ' R ) - 1' - tert-butyldimetvlsilvloksvetvll- 3- f( 2- fluoretyl) tiol- 7- okso-1- azabicvclo[ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (isbad) og godt omrørt løsning av 1,05 ml (DAST, 8,06 mmol) dietylammoniumsvovltrifluorid i 20 ml CH2CI2 ble dråpevis i løpet av 10 minutter tilsatt allyl-(4R, 5S., 6S.)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(1'R)-1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-[(2hydroksyetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 80 ml CH2CI2. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, deretter ble reaksjonen stoppet med 100 ml iskaldt vann og til slutt fortynnet med en 1/1 blanding av etylacetat/dietyleter og 400 ml vann. Den vandige fase ble ekstrahert med 300 ml etylacetat/dietyleter (1/1) de orga-niske ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 250 ml iskaldt vann, iskaldt IN vandig HC1, vann, IM vandig NaHCC^, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 180 g hurtigsilicagelpute (heksan, 5 —» 25 % etylacetat/heksan), hvorved det ble oppnådd 1,54 g (38%) av tittelforbindelsen som en gul olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 2100 (N3), 1775 og 1710 cm"<1> (C=0).
^■H-NMR (CDCI3, 200 MHz) s: 6, 05-5, 85 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,22 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,4 (4H, m, allylisk CH2 og CH2F), 4,3-4,13 (1H, m, H-l'), 4,145 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,7-3,55 (1H, m, H-4), 3,46-3,3 (2H, m, CH2N3), 3,4-3,15, 3,05-2,8 (2H, 2 sett av m, SCH2), 3,088 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,7 Hz, H-6), 2,13-1,95, 1,85-1,65 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,309 (3H, d, J=6,1 Hz, CH3), 0,897 (9H, S, tert-butyl) og 0,095 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl- ( 4R, 5S, 6S) - 4- ( 2"- azidoetvl) - 3- r ( 2- f luoretvl) tiol -
6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvcvlo F3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
0T3DH5 0H
<C0>2<N>^ J CC2N^>
En kald (is-MeOH) løsning av 457 mg (0,92 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl)-6- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3- [(2-fluoretyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] -hept-2-en-2-karboksy lat i 8 ml tetrahydrofuran ble først behand-let med 0,3 ml (5,5 mmol) iseddiksyre og deretter dråpevis med en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 2,75 ml (2,75 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt i 10 minutter og sto der-etter i kjølerom (5-8°C) i 9 dager. Den ble deretter fortynnet med 50 ml etylacetat, vasket med 4 x 25 ml iskaldt IM vandig NaHCC>3, 2 x 25 ml vann, 25 ml saltvann og tørket (MgS04). Den ble ledet gjennom en 15 g hurtigsilicagelsøyle (heksan, etylacetat/-heksan 10% -» 50%), hvorved det ble oppnådd 240 mg (68%) av tittel-forbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) vmaks<:> 3400 (OH), 3100 (N3), 1778 og 1612 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,03-5,9 (1H, m, vinylisk H), 5,5-5,2 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,35 (4H, m, allylisk CH2 og CH2-F), 4,3-4,15 (1H, m, H-l'), 4,248 (1H, dd, J=2,7 Hz, J==9,5 Hz, H-5), 3,7-3,5 (1H, m, H-4), 3,5-3,3 (2H, m, CH2N3), 3,3-2,8 (2H, 2 sett av m, SCH2), 3,160 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=8,0 Hz, H-6), 2, 15-1, 95, 1, 84-1, 65 (2H, 2 sett av m, CH2-4) , 1,834 (1H, d, J=5,l Hz, OH) og 1,395 ppm (3H, d, J= Hz, CH3).
C. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- f(2-fluoretyl) tiol- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (isbad) løsning av 585 mg (1,52 mmol) allyl-(4R, 5S., 6S.) -4- (2"-azidoetyl) -3- [ (2-f luoretyl) tio] -6- [ (1'R) -1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml CH2C12 ble tilsatt 142 mg (0,114 mmol) Pd(PPh3)4 og dråpevis en 0,5M løsning av kaliumetyl-2-heksanoat i 3,0 ml (1,50 mmol) etylacetat. Blandingen ble omrørt i 20 minutter, fortynnet med 80 ml dietyleter og ekstrahert med 4 x 15 ml vann. De vandige ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 20 ml vann og ledet gjennom en 200 g "u-Bondapak C^g" reversfasesøyle (1% -» CH3CN/-vann), hvorved det ble oppnådd 40,2 mg (72%) av tittelforbindel-sen som et off-white, lyofilisert faststoff.
Renhet: 97,8% bestemt ved HPLC (r.t.= 14,85 min, "Ji-Bondapak C18", 10 U, 5% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (H20) Xmak.s: 302 (9184).
IR (Nujol) Vmaks: 3350 (OH), 2100 (N3), 1750 og 1600 cm" <1> (C=0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,83-4,75, 4,6-4,5 (2H, 2 sett av m, CH2F), 4,35-4,2 (1H, m, H-l'), 4,210 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,0 Hz, H-5), 3,65- 2,9 (6H, m, H-4, SCH2, CH2N3, H-6), 2,17-2,0, 1,9-1,7 (2H, 2 sett av m, CH2-4) og 1,331 ppm (3H, d, J= Hz, CH3).
Eksempel 139
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- T( 4- piperidinvl) tiol- 6-r ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo r 3, 2, Olhept-2- en- 2- kar- boksvlsvre
En kald (5°C) løsning av 0,08 g (0,20 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-azidopropyl)-3-[(4-piperidinyl)tio]-6-[ (1' R)-1' - hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 40 ml vann ble hydrogenert ved 45 psi i 1 time i nærvær av 0,08 g 5% Pd/Al203. Katalysatoren ble deretter frafiltrert og pH av filtra-tet ble senket til 5,0 ved tilsetning av eddiksyre. Denne forsu-rete vandige løsning ble kromatografert på reversfasesilicagel (Partisil) under eluering med 15% CH3CN i vann. Lyofilisering av de relevante fraksjoner ga 0,066 g (76,8%) av tittelforbindelsen som eddiksyresaltet.
IR (Nujol) vmaks: 1760 (p<->lactam), 1580 cm"<1> (-C02-).
<1>H-NMR (D20) 8: 4,20-4,40 (2H, m, H-5, H-l'), 3,25-3,60 (5H, m, H-6, (2 H-2, 2 H-6 av piperidin)), 2,95-3,15 (4H, m, CH2-N, H-4, H-4 av piperidin), 1,50-2,40 (8H, m, 2H-1", 2H-2", (2H-3, 2H-5 av piperidin)), 1,93 (3H, s, eddiksyre), 1,34 (3H, d, J=6,30, -CH3').
Eksempel 140
( 4R, 5S, 6S)- 3- r( N, N- dimetvlamidinometvl) tiol- 4-( 3"-quanidinopropyl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsvre,
eddiks<y>resalt
En løsning av 0,203 g (0,47 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-amino-propyl)-3-[(N,N-dimetylamidinometyl)tio]-6-[(l'R)-1' - hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 30 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,5 med IM vandig natrium-hydroksid og deretter behandlet med 0,230 g (1,85 mmol) amino-iminometansulfonsyre tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minut-ter, mens pH ble holdt ved 8-8,5. Etter 2 timer ble pH innstilt til 4,8 med iseddiksyre, og løsningen ble kromatografert på 2,5 x 13,5 cm "u-Bondapak C^g" reversfasesilicagel under eluering med 0,01M vandig eddiksyre. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,090 g (40%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft faststoff.
Renhet ved HPLC: 98% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <C>18", eluering 5% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 292 nm, retensjonstid 7,52 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 292 nm (6.340).
IR (KBr) vmaks: 1760 (C=0 av B-lactam), 1680, 1650 og 1580 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,32 (d, J=6,36 Hz, 3H, CH3CH0) , 1,4-1,9 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl) -, 1,92 (s, CH3C02H), 3,12 og 3,29 (2s, 2 x 3H, NCH3), 3,1-3,4 (m, 3H, H-4
og CH2-3 av propyl), 3,44 (dd, <J>h6,H5= 2'83 Hz' JH6, Hl=5'!)7 Hz, 1H, H-6), 3,86 (s, 2H, SCH2) og 4,2-4,4 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping).
Eksempel 141
( 4R. 5S. 6S)- 3- r( 2- N. N- dimetvlaminoetvl) tiol- 4-( 2"-guanidinoetyl)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo \ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiks<y>resalt
A. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- r( l' R)- l'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3- r( 2- N, N-dimetvlaminoetyl) tiol- 7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2-en- 2- karboksylat
En kald (is-MeOH bad) løsning av 4,64 g (10 mmol) enol-fosfat fremstilt fra (3J3, 4R) -3- [ (1' R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -4-[(1"R)-1"-(2-azidoetyl)-3n-diazo-3n-allyloksy-karbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 45 ml acetonitril ble behandlet langsomt med 1,05 g (10,0 mmol) N,N-dimetylaminoetantiol i 2 ml CH3CN og dråpevis med 1,92 ml
(11,0 mmol) diisopropyletyl-amin. Blandingen ble omrnrt i 1,5 time ved -10°C -> 0°C, behandlet med 520 mg (5 mmol) merkaptan i 1 ml CH3CN og 0,96 ml (5,5 mmol) diisopropyletylamin. Blandingen ble omrørt i 1/2 time ved -15°C og sto i kjøleskap (-20°C) i 18 timer. Den ble fortynnet med en 1:1 blanding av 500 ml etylacetat/dietyleter, vasket med 5 x 100 ml iskaldt vann, 100 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 100 g hurtigsilicagelsøyle (50 —> aceton/- etylacetat), hvorved det ble oppnådd 4,0 g (76%) av tittelforbin-delsen kontaminert med det åpnede B-lactam-biprodukt.
IR (CH2C12) Vmaks: 2100 N3, 1775 og 1715 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,1-5,8 (1H, m, vinylisk H), 5,5-5,1 (2H, m, vinylisk 3H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk-CH2), 4,3-4,1 (1H, m, H- 1'), 4,2-4,15 (1H, dd, H-5), 3,7-3,5 (1H, m, H-4), 3,5-3,3 (2H, m, CH2-N3) , 3,071 (1H, dd, J=3,0 Hz, J=7,l Hz, H-6), 3,1-2,85 (2H, m, SCH2), 2,7-2,4 (2H, m CH2~N), 2,28 (6H, S, N(CH3)2), 2,1-1,6 (2H, m, CH2~4), 1,314 (3H, d, J=6,l Hz, CH3), 0,897 (9H, s, tert-butyl) og 0,069 ppm (6H, s, dimetyl).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( 2- N. N-dimetvlaminoetyl) tiol- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso-l- azabicvclo f 3, 2, 0hept- 2- en- 2- karboksylat
En kald (is-metanol bad) løsning av 4,0 g (7,6 mmol, 37% ren) allyl- (4R, 5S., 6J3) -4- (2"-azidoetyl) -6-[ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3- [(2-N,N-dimetylaminoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i tetrahydrofuran ble først behandlet med 2,5 ml (45,6 mmol) iseddiksyre og dråpevis med en IM tetrahydrofuranløsning av 22/8 ml (22/8 mmol) tetra-butylammoniumfluorid. Blandingen sto ved 5°C i 11 dager, ble deretter fortynnet med 400 ml etylacetat, vasket med 2 x 25 ml iskaldt IM vandig NaHCC>3 3 x 25 ml iskaldt vann, 25 ml saltvann og tørket. Resten ble ledet gjennom en 60 g hurtigsilicagelsøyle (10 — > 100% aceton/etylacetat), hvorved det ble oppnådd 473 mg (41%) av tittelforbindelsen som en gul olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 3610, 3450 (OH), 2110 (N3), 1780 og 1610 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,1-5,9 (1H, m, vinylisk H), 5,49-5,22 (2H, m, vinylisk H), 4,9-4,6 (2H, m, allylisk CH2), 4,235 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 4,33-4,2 (1H, m H-1')/ 3/7-3,5 (1H, m, H-4), 3,47- 3,3 (2H, m, CH2N3) , 3,150 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=7,9 Hz, H-6), 3,1-2,9 (2H, m, SCH2) , 2,7-2,4 (2H, m, CH2N) , 2, 284 (6H, s, N(C<H>3)2), 1,95-1,7 (3H, m,, OH, CH2-4) og 1,400 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
C. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 3- r( 2- N. N-dimetvlaminoetvl) tiol- 6- r( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso-l- azabicvclo F 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 470 mg (1,14 mmol) allyl-(4R, 5JL, 6S.) -4-(2"-azidoetyl) -3- [ (2-N,N-dimetylaminoetyl) tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 17 ml CH2C12 ble tilsatt 105 mg (0,086 mmol) Pd(PPh3)4 og en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i 2,28 ml (1,14 mmol) etylacetat. Blandingen ble omrørt i 15 minutter, fortynnet med 100 ml dietyleter og ekstrahert med 4 x 20 ml iskaldt vann. De organiske ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 40 ml dietyl-eter og ledet gjennom en 67,5 g "u-Bondapak <C>1Q" reversfasesøyle (vann, 1% -» 10% CH3CN/H2O), hvorved det ble oppnådd 200 mg (46%) av tittelforbindelsensom et gult lyofilisert pulver.
IR (Nujol) vmaks: 3400-3100 (OH), 2100 (N3), 1755 og 1600 cm"1 (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,280 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,8 Hz, H-5), 4,32-4,2 (1H, m, H-l'), 3,67-3,54 (1H, m, H-4), 3,481 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,l Hz, H-6), 3,5-3,34 (2H, m, CH2N3), 3,2-2,92 (4H, m, SCH2 og CH2<N>), 2,60 (6H, s, N(CH3)2), 2,18-2,02, 1,91-1,75 (2H, 2 sett av m, CH2-4) og 1,329 ppm (3H, d, J=6,1 Hz, CH3).
D. ( 4R, 5S, 65)- 3- r( 2- N, N- dimetvlaminoetvl) tio]- 4- ( 2"-guanidinoetvl)- 6- f( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo ( 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiks<y>resalt
pH av en kald (isbad) 67 ml 0,04M pH 7,0 vandig fosfat-bufferløsning av 190 mg (0,514 mmol) (4R, 5S_, 6S.)-4-(2"-azidoetyl)-3-[(2-N,N-dimetylaminoetyl)tio]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre ble innstilt til 5,9 med en IM vandig NaH2P04-løsning. Blandingen (isbad) ble omrystet på en Parr hydrogenator ved 45-50 psi hydrogen i 1 time under anvendelse av 270 mg 30% Pd/"Celite" som katalysator. Ytterligere 270 mg Pd/"Celite" ble tilsatt og hydrogeneringen ble fortsatt i ytterligere 1 time. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering
og vasket med 2 x 10 ml vann. pH av den vandige løsning (isbad) ble innstilt til 7,8-8,0 med en IN vandig NaOH-løsning. Deretter ble 354 mg (2,87 mmol) aminoiminometan-sulfonsyre tilsatt porsjonsvis og pH ble holdt ved 7,8-8,0 med den IN vandige NaOH-løsning. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1,5 time, hvoretter ytterligere 124 mg (1 mmol) aminoiminometansulfonsyre ble tilsatt. pH ble holdt ved 7,8-8,0 og omrøringen ble fortsatt i ytterligere 1 time. Ved avslutning av reaksjonen ble pH innstilt til 7,0 med en 1,0M vandig eddiksyreløsning, og blandingen ble ledet gjennom en 130 g "u-Bondapak C18" reversfasesøyle (iskald 0,005M vandig AcOH, 1% CH3CN/0,005M AcOH), hvorved det ble oppnådd 60 mg (26%) av tittelforbindelsen som et off-white, lyofilisert pulver.
Renhet: 96,9% som bestemt ved HPLC (r.t.= 6,02 min, "ji-Bondapak Clg", 10 U, 3% CH3CN/KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (H20) Xmaks: 296 (6089).
IR (Nujol) Vmaks: 3400-3100 (NH, OH), 1760, 1600-1540 (C=0), 1680- 1620 cm"<1> (C=N).
<1>H-NMR (D20, 200 NH2) 6: 4,33, 4,32 (d, J=2,9 Hz, del av H-5), 4,33-4,2 (m, H-l' og del av H-5), 3,51 (1H, dd, J=2,9 Hz, J=6,6 Hz, H- 6), 3,41-3,21 (5H, m, CH2-guanidin, CH2N, H-4), 3,20-2, 96 (2H, m, SCH2) , 2,91 (6H, s, NCH3) , 2,24-2,03,, 1,9-1,55 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,925 (2, 2H, s, CH3C02) og 1,33 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) .
Eksempel 142
( 4R. 5S, 6S)- 3- f( N, N- dimetvlamidinometyl) tiol- 4-( 3"- N-formimidoylaminopropyl)- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll - 7-okso- l- azabicvclo13, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiks<y>resalt
En løsning av 0,204 g (0,474 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-aminopropyl)-3-[(N,N-dimetylamidinometyl)tio]-6-[(1' R) -1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, eddiksyresalt i 30 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,5 med IM vandig natriumhydroksid og deretter behandlet med 0,40 g (2,3 mmol) benzylformimidat, hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter, mens pH ble holdt ved 8-8,5 med IM natriumhydroksid. Etter 15 minutter ble pH innstilt til'5 med konsentrert eddiksyre og reaksjons-blandingen ble vasket med 25 ml etylacetat. Den vandige fase ble holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsnings-middel og deretter kromatografert to ganger ved 4°C på 2,5 x 14 cm "u-Bondapak C^g" reversf asesilica-gel. Eluering med 0,01M vandig eddiksyre ga 0,088 g (41%) av tittelforbindelsen som et hvitt amorft pulver etter lyofilise-ring.
Renhet ved HPLC: 97% på 3,9 mm/30 cm, "u-Bondapak C18", eluering 3% C^CN-vann, pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshas-tighet 0,8 ml/min, UV-detektor 292 nm, retensjonstid 5,8 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 292 nm (7.200).
IR (KBr) vmaks: 1750 (C=0 av (3-lactam) , 1715, 1645 og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,32 (d, J=6,32 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-1,9 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 1,92 (s, C<H>3C02H), 3,12 og 3,28 (2 x s, 2 x 3H, NCH3) , 3,0-3,6 (m, 4H, H-4, H-6 og CH2-3 av propyl), 3,84 (s, 2H, SCH2), 4,2-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CH0 overlapping) og 7,81 ppm (s, 1H, CH=NH).
Eksempel 143
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- N- formimidovlaminopropyl)- 3- r( 2- quanidinoetvl) tiol- 6- f ( l' R)- 1'- hydroksyetyl]- 7- okso- l- azabicvclo [ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksyresalt
En løsning av 0,300 g (0,695 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-amino-propyl)-3-[(2-guanidinoetyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, eddiksyresalt i 30 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,5 med IM vandig natriumhydroksid og deretter behandlet med 0,60 g (3,5 mmol) benzylformimidat,hydroklorid tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter. pH ble holdt ved 8-8,5 med IM natriumhydroksid under tilsetningen og i ytterligere 15 min. pH ble deretter innstilt til 5 med konsentrert eddiksyre og reaksjonsblandingen ble vasket med 20 ml etylacetat. Den vandige fase ble deretter holdt under vakuum for å fjerne spor av organisk løsningsmiddel og deretter kromatografert ved 4°C på 2,5 x 15 cm "u-Bondapak c18" r^vers-fasesilicagel. Eluering med 0,01M vandig eddiksyre ga 0,190 g (59%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft
22
faststoff etter lyofilisering: [a] D +26,6° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 97% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <C>18", eluering 2% CH3CN-vann, pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 6,1 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) X.maks: 302 nm (8.677).
IR (KBr) Vmaks: 1755 (C=0 av B-lactam), 1710, 1670, 1620 og 1580 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1, 32 (d, J=6,33 Hz, 3H, CH3CH0), 1,4-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 1,93 (s, CH3C02H) , 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2) , 3,3-3,5 (m, 6H, H-4, H-6, CH2-3 av propyl og SC<H>2CH2N), 4,2-4,4 (m, 2H, H-5 og CH 3CHO) og 7,8 ppm (s, 1H, CH=NH).
Eksempel 144
( 4R. 5S. 6S)- 3- f( 2- guanidinoetvl) tiol- 4-( 3"- guan-idinopropyl)- 6- T( 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicyclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre, eddiksyresalt
En løsning av 0,300 g (0,695 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-amino-propyl)-3-[(2-guanidinoetyl)tio]-6-[(l'R)-l'~ hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre, eddiksyresalt i 30 ml kaldt (0-5°C) vann ble innstilt til pH 8,5 med IN vandig natriumhydroksid og deretter behandlet med 0,43 g (3,46 mmol) aminoiminometansulfonsyre tilsatt i små porsjoner i løpet av 5 minutter. pH ble holdt ved 8,0-8,5 under tilsetningen og i ytter-ligere 2 timer med IM natriumhydroksid. pH ble deretter innstilt til 5 med iseddiksyre, og løsningen ble kromatografert på 2,5 x 15 cm "u-Bondapak C18" med 0,01M vandig eddiksyre ga 0,213 g (64%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft faststoff etter lyofilisering: [a]<22>D + 11,3° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 99% på 3,9 nm x 30 cm, "u-Bondapak <C>18", eluering 2% CH3CN-H20, pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 10,4 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) 5^^: 302 nm (10.260).
IR (KBr) vmaks: 1755 (C=0 av B-lactam), 1670, 1630 og 1580 cm<-1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,32 (d, J=6,38 Hz, 3H, CH3CH3CHO), 1,4-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 1,92 (s, CH3C02H), 2,8-3,2 (m, 2H, SCH2), 3,2-3,6 (m, 6H, H-4, H-6, CH2-3 av propyl og SCH2CH2N), 4,23 (dd, JR5 H6=2,49 Hz, JH5,H4=9'2 Hz' 1H' H-5) og 4,27 ppm (m overlapping med H-5, 1H, CH3CHO).
Eksempel 145
( 4R. 5S, 6S)- 6- f( 1* R)- 1>- hvdroksvetvll- 3-\( 2-cvanoetvl) tiol-4- 12"-( L- alanyl) aminoetyl]- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,512 g (1,57 mmol) (4R, 5S, 6S)-6-[ (1'R) - 1'-hydroksyetyl)-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-aminoetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylsyre i 15 ml 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer ble avkjølt til 0°C, mens argon ble boblet gjennom løsningen. pH ble innstilt til 10,2 med IN NaOH, og N-karboksy-anhydrid av 0,181 g (1,57 mmol) L-alanin i 1,5 ml dioksan ble tilsatt på én gang under kraftig omrøring. Da pH falt til 7,2, ble den gjenninnstilt til 10,2 og forble der i 1 time. Reaksjonen ble stoppet ved innstilling av pH til 6,0 med IN HC1. Argon ble boblet gjennom løsningen i 30 minutter ved
0°C, mens pH ble gjen-innstilt til 6,0, hver gang den steg til over 6,0. Den rå reak-sjonsblanding ble ledet gjennom en søyle av 4,5 x 11,5 cm Bondapak C18" reversfasesilicagel. Egnede fraksjoner inneholdende produktet ble kombinert og lyofilisert til et faststoff, som ble rekromatografert på 4,5 x 11 cm "ji-Bondapak C-]_g" reversfase-silicagel. Den litt mer polære tittelforbindelse, adskilt meget tett på dipeptidderivatet, ble eluert med en blanding av vann og CH3CN (97:3, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,099 g (15,9%) som et gult, fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet 96,5% ved HPLC: UV-deteksjon ved 300 nm på 4 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18", 5% CH3CN i pH 6,8 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 0,6 ml/min, retensjonstid 7,25 min.
W *maks : 30°-
IR (Nujol) <v>maks: 1750 cm 1 (C=0, B-lactam).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,38 (d, 3H, CH3, J=6,4 Hz), 1,47 (d, 3H, CH3, J=7,0 Hz), 1,52-1,77, 1,97-2,11 (m, 2H, CH2), 2,82-2,89 (overlapping, 2H, CH2CN), 2,91-3,17
(overlapping, 2H, SCH2), 3,27-3,43 (overlapping, 3H, CH2N, H-4), 3,59 (dd, 1H, H-6, J5f 6=2, 66 Hz, ^^,<=>6,06 Hz), 3,91 (q, 1H, <C>a<H,><J>a/CH3=7'02 Hz)' 4/74-4,96 (overlaping, 2H, H-5, H-<!>')•
Eksempel 14 6
( 4R, 5S, 6S)- 6- r( 1' R) - 1'- hvdroksvetvl1- 3- T( 2-cvanoetvl) tiol- 4- f2"-( L- alanvl- L- alanvl) aminoetvll- 7-okso- l- azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsyre
En løsning av 0,512 g (1,57 mmol) (4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-4-(2"-aminoetyl)-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 15 ml 0,2M pH 7,0 fosfatbuffer ble avkjølt til 0°C, mens argon ble boblet gjennom løsningen. pH ble innstilt til 10,2 med IN NaOH, og N-karboksy-anhydrid av 0,181 g (1,57 mmol) L-alanin i 1,5 ml dioksan ble tilsatt på én gang under kraftig omrøring. Da pH falt til 7,2, ble den gjeninnstilt til 10,2 og forble der i 1 time. Reaksjonen ble stoppet ved innstilling av pH til 6,0 med IN HC1. Argon ble boblet gjennom løsningen i 30 minutter ved 0°C, mens pH ble gjeninnstilt til 6,0, hver gang den steg til over 6,0. Den rå reaksjonsblanding ble ledet gjennom en søyle av 4,5 x 11,5 cm "ji- Bondapak C^g" reversfasesilicagel. Egnede fraksjoner inneholdende til produktet ble kombinert og lyofilisert til et faststoff, som ble rekromatografert på 4,5 x 11 cm "u-Bondapak C18" reversfase-silicagel. Den litt mindre polære tittelforbindelse, adskilt meget tett på monopeptidderivatet, ble eluert med en blanding av vann og CH3CN (96:4, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,069g (9,4%) som et gullaktig, fnugget faststoff etter lyofilisering.
Renhet 96,6% ved HPLC: UV-deteksjon ved 300 nm på 4 mm x 30 cm, "u-Bondapak <C>18", 5% CH3CN i pH 6,8 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 0,6 ml/min, retensjonstid 9,1 min.
UV Ws: 300 nm«
IR (Nujol) <v>maks: 1750 cm-<1> (C=0, p-lactam).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,37 (d, 3H, CH3, J<=>6,45 Hz), 1,42 (d, 3H, CH3, J=7,39 Hz), 1,46 (d, 3H, CH3, J=8,85 Hz)., 1,59-1,75, 1,99-2,14 (m, 2H, CH2), 2,84-2,89 (overlapping, 2H, CH2CN), 2,92-3,22 (overlapping, 2H, SCH2), 3,3-3,42 (overlapping, 3H, CH2N, H-4), 3,59 (dd, 1H, H-6, J5^6<=2,>56 Hz, <J>6 1,=5,88 Hz), 3,9 (br, 1H, CaH) , 4,25-4, 34 (overlapping, 3H, H-5, H-l', CaH).
Eksempel 147
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- f( 3- azetidinvl) tiol- 6-r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l- azabicvclo 13 , 2 , Olhept-2- en- 2- karboksylsyre
En kald (5°C) løsning av 0,235 g (0,64 mmol) (4R, 5S,6S)-4-(3"-azidopropyl)-3-[(3-azetidinyl)tio]-6-[(l'R)-l'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 75 ml vann ble hydrogenert over 0,235 g 5% Pd/Al203 under et trykk på 45 psi. Etter 1 time ble den anvendte katalysator erstattet med 0,235 g frisk katalysator og hydrogeneringen ble fortsatt i ytterligere 1 time. Deretter ble reaksjonsblandingen filtrert, forsuret til pH 5,7 med AcOH og til slutt kromatografert på reversfasesilicagel (Partisil) under éluering med vann. Mate-rialet oppnådd etter lyofilisering krevde ytterligere to kromatografiske opprensninger, hvorved det ble oppnådd 0,045 g (17,5%) av tittelforbindelsen med god renhet.
IR (Nujol) vmaks: 1750 cm<-1> (B-lactam).
<1>H-NMR (D20) 6: 4,00-4,15 og 4,50-4,70 (4H, 2m, 2H-2, 2H-4 av azetidin), 4,15-4,20 (3H, m, H-5, H-l', CH-S), 3,47 (1H, dd, J=2,72, J=6,33, H-6), 3,00-3,25 (3H, m, CH2~N, H-4), 1,50-1,95 (4H, m, 2H-1", 2H-2"), 1,38 (3H, d, J=6,34, -CH3').
Eksempel 148
Kalium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- hvdroksvetvl)- 6- r(!' R)- 1'-hydroksvetvl]- 3- r( imidazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo [ 3 , 2 , 01hept- 2- en- 2- karboksylat A. Allvl-( 4R, 5S, 6S) - 6- f ( l' R) - l'- tert-butvldimetylsilyloksvetvll - 4- ( 2"- tert-butvldimetvlsilvloksyetvl)- 3- F( imidazol- 4- vl)- metvltiol - 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 9,03 mmol (fremstilt ved ringsluttning av 5,00 g, 9,03 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,5R,6S)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-(2"-tert-butyldimetylsilyloksyetyl) -3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 60 ml tørr acetonitril ble avkjølt til 0-5°C og behandlet under nitrogen med 2,1 ml (10,1 mmol) difenylklorfosfat og 1,7 ml (9,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter.. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble deretter tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Løsningen ble deretter avkjølt til -20°C og derpå behandlet med ytterligere 2,3 ml (13,2 mmol) N,N-diisopropyletylamin, etterfulgt av 1,22 g (10,7 mmol) av 4(5)(merkaptometyl)imidazol i 10 ml acetonitril. Etter 3 timer ved -20°C og 1 time ved 0°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket med mettet natriumhydro-genkarbonat, saltvann, tørket (MgS04) og inndampet under redusert trykk. Resten ble kromatografert på 5 x 10 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og etylacetat (8:2) ga først 5,0 g (73%) oppnådd enolfosfat. Deretter ga eluering med etylacetat 1,35 g (24%) av tittelforbindelsen som en olje. Ifølge <1>H-NMR inneholdt dette materiale 25% av det åpne produkt resulterende fra spaltning av B-lactam med tiolen.
IR (NaCl, film) vmaks: 1772 (C=0 av B-lactam) og 1708 cm-<1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,5 (SiCH3), 0,9 (Si-t-Bu), 1,27 (d, J=6,13H, CH3CHO), 1,6-2,2 (m, CH2CH2OSi), 3,09 (dd, JH8,H6)= 2'45 Hz' JH6,H1=6'63 Hz' H~6)' 3,5-4,3 (m, H-4, H-5, SC<H>2, CH3CHO, CH2CH2OSi), 4,7 (m, CH2 av allyl), 5,1-5,5 og 5,8-6,1 (2m, CH av allyl), 6,9 (s, H-5 av imidazol) og 7,6 ppm (s, H-2 av imidazol).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- f( 1/ R)- 1'- hvdroksvetvll- 4-( 2"-hvdroksvetvl)- 3- r( imidazol- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo C3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 2,65 g (4,26 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(l'R)-1'-tertbutyldimetylsilyloksyetyl]-4-(2"-tert-butyldimetylsilyl-oksyetyl)-3-[(imidazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat i 60 ml tetrahydrofuran ble avkjølt til 0-5°C og behandlet med 3,0 ml (52,4 mmol) iseddiksyre, etterfulgt av 26 ml (26,0 mmol) av en 1,0M løsning av tetrabutylammonium-fluorid i tetrahydrofuran. Løsningen ble deretter oppbevaret ved 5°C i 12 dager. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 300 ml etylacetat, vasket med mettet natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket. Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga en olje, som ble kromatografert på en 5 x 5 cm silica-gelpute under eluering med en gradient av 0-20% metanol i etyl-acetat. Det oppnådde produkt 0,37 g (20%) innholdt noe tetra-butylammoniumsalt og ble anvendt som vist på avbeskyttelses-trinnet.
IR (NaCl, film) vmaks: 1765 (C=0 av B-lactam) og 1700 cm<-1> (C=0 av ester).
C. Kalium- ( 4R. 5S. SS ) - 4-( 2"- hydroksyetyl) - 6- r ( r PO - 1'-hydroksyetvl]- 3- r( imidazol- 4- vl) metvltiol-7-okso-l-azabicvclo f3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylat
En løsning av 0,37 g (0,94 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-4-(2"-hydroksyetyl)-3-[(imidazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]-hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med tetra-kis(trifenylfosfin)palladium [0] og 2,1 ml (1,25 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 1,2 timer ble reaksjons-blandingen ekstrahert med 2 x 50 ml vann og de kom-binerte vandige ekstrakter ble kromatografert to ganger på 3 x 15 cm "u-Bondapak C^g" reversfasesilicagel under eluering med vann. Lyofilisering av de UV-aktive fraksjoner ga 0,081 g (22%) av tittel-karbapenemen som et hvitt, amorft faststoff.
Renhet ved HPLC: 100% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak C18", eluering pH 7,0 fosfatbuffer, strømningshastighet 1,!5 ml/min, UV-detektor 300 nm, retensjonstid 9,04 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) Xmaks: 304 nm (10.153)
IR (KBr) vmaks: 1750 (C=0 av B-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,30 (d, J=6,37 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,1 (2M, 2H, CH2CH20H), 3,3-3,5 (m, 2H, H-6 og H-4 overlap-ping), 3,5-3,8 (m, 2H, CHoCHoOH), 4,03 (ABq, <J>AB=14'6 Hz' Av=37/0 Hz, 2H, SCH2), 4,13 (dd overlapping med SCH2, JH5,H6=2'53 Hz' JH5,H4=9'60 Hz' 1H' H~5), 4,24 (m, 1H, CH3CHO), 7,10 (s, 1H, H-5 av imidazol) og 7,79 ppm (s, 1H, H-2 av imidazol).
Eksempel 149
( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 3-\( 3R)- 3-pyrrolidinvltiol- 6- f( 1' R )- l '- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. ( 3R)- N- Allvloksvkarbonyl- 3- hvdroksvpyrrolidin
8,0 g (64,7 mmol) 3(R)-hydroksypyrrolidin,HCl-salt ble oppløst i 130 ml (130 mmol) kald (5°C) IN NaOH og behandlet dråpevis med en løsning av 9,4 g (77,7 mmol) allylklorformiat i 80 ml aceton. Blandingen ble omrørt i 15 minutter etter avslut-ning av tilsetningen og deretter ble det meste aceton avdampet. Den vandige løsning ble deretter ekstrahert med etylacetat. De organiske ekstrakter ble vasket med saltvann, tørket (MgS04) og inndampet. Det rå karbamat ble renset ved kromatografi (Si02/-Et20, deretter EtOAc og CH3CN), hvorved det ble oppnådd 6,28 g (56,7%) av tittelforbindelsen som en mobil olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3603, 3440 (-OH), 1697 (-C02), 1650 (<>=<>)<.>
<1>H-NMR (CDC13) 8: 4,8-6,1 (5H, allylmønster), 4,48 (1H, bred s, H-3), 3,40-3,60 (4H, m, 2H-2, 2H-5), 1,80-2,10 (3H, m, 2H-4, -OH).
B. ( 3S) - N- allyloksvkarbonvl- 3- hvdroksvpyrrolidin
En kald løsning (5°C) av 2,16 g (12,62 mmol) (3R)-N-allyl-oksykarbonyl-3-hydroksypyrrolidin i CH2C12 ble behandlet med 1,15 g (14,5 mmol) pyridin og 4,09 g (14,5 mmol) trifluormetansulfon-syreanhydrid. Etter omrøring i 15 minutter ble løsningsmidlet av-dampet, resten triturert i dietyleter og filtrert. Filtratet ble deretter inndampet, det rå triflat oppløst i kaldt (5°C) CH2C12 og behandlet med en forut-fremstilt løsning av 0,87 g (18,93 mmol) maursyre og 1,9 g (18,93 mmol) trietylamini CH2C12. Isbadet ble fjernet og løsningen omrørt ved værelsestemperatur i 45 minutter. Deretter ble reaksjonsblandingen vasket med kaldt vann og saltvann. Etter tørking (MgS04) ble løsningsmidlet avdampet og det rå formiat renset ved kromatografi (Si02, 10% CH3CN i CH2C12) hvorved det ble oppnådd 2,13 g (84,7%). Dette opprensete materi-ale ble oppløst i kald (5°C) tetrahydrofuran, og 11 ml (11 mmol) IN NaOH ble tilsatt dråpevis. Etter omrøring i 10 minutter ble reaksjonsblandingen nøytralisert med HC1, fortynnet med EtOAc og vasket med kaldt vann og saltvann. Etter avdampning av løsnings-midlet ble produktet kromatografert (Si02/EtOAc), hvorved det ble oppnådd
1,51 g (82,5%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) Vmaks: 3605, 3440 (-0H), 1695 (-C02~), 1650 cm-1 (>=<).
<1>H-NMR (CDC13) 5: 4,40-6,10 (5H, allylmønster), 4,50 (1H, m, H-3), 3,40-3,70 (4H, m, 2H-2, 2H-5), 1,90-2,10 (2H, m, 2H-4) . [CX]20D : +26, 90 (130 mg/100 ml, MeOH) .
C. ( 3R)- N- allvloksykarbonyl- 3- merkaptopyrrolidin
En kald løsning (5°C) av 1,51 g (8,82 mmol) (3S)-N-allyl-oksykarbonyl-3-hydroksypyrrolidin i CH2C12 ble behandlet med 0,80 g (10,14 mmol) pyridin, etterfulgt av 2,86 g (10,14 mmol) trifluormetansulfonsyreanhydrid. Etter omrøring i 15 minutter ble løsningsmidlet avdampet, resten triturert i dietyleter og fil-trert, etter inndampning av filtratet ble det rå triflat gjenopp-løst i kaldt (5°C) CH3CN, og 1,07 g (10,58 mmol) trietylamin ble tilsatt dråpevis, mens H2S ble boblet gjennom i løsningen. Utgangsmaterialet forsvant i løpet av 30 minutter. Løsningsmidlet ble deretter avdampet og det rå tiol renset ved kromatografi (Si02/CH2C12), hvorved det ble oppnådd 1,25 g (75,7%) av tittel-forbindelsen. <1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,60-6,10 (5H, allylmønster), 3,20-3,90 (5H, m, H-3, 2H-2, 2H-5), 2,20-2,40 (1H, m, H-5), 1,80-2,00 (1H, m, H-5), 1,71 (1H, d, J=6,65, SH) . D . Allvl-( 4R. 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropyl)- 3- r ( 3R)- N-( allvloksvkarbonvl)- 3- pvrrolidinvltiol-6-f( l' R)-1'-hvdroksvetvl1- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 0 ]hept-2-en-2-karboksylat
En kald (5°C) løsning av 1,85 g (3,25 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-4-(3"-azidopropyl)-3-(difenylfosfono)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 35 ml DMF ble behandlet med 1,25 g (6,68 mmol)
(3R)-N-allyloksy-karbonyl-3-merkaptopyrrolidin, etterfulgt av 0,863 g (6,68 mmol) diisopropyletylamin. Isbadet ble fjernet og etter omrøring ved værelsestemperatur i 15 timer ble løsningen fortynnet med 90 ml dietyleter og vasket tre ganger med kaldt saltvann. Etter tørking (MgS04) ble den organiske løsning inndampet og den rå karbapenem renset ved kromatografi (Si02, 30% CH3CN i CH2C12), hvorved det ble oppnådd 1,27 g (77,1%) av tittelforbindelsen.
IR (CH2C12) vmaks: 3610 (-OH) , 2105 (-N3) , 1778 (S— lactam), 1700 (-C02), 1650 cm<-1> (>=<).
<1>H-NMR (CDCI3) 8: 4,5-6,10 (10H, 2 allylmønstre), 4,15-4,30 (2H, m, H-5, H-l'), 3,70-3,90 (2H, m, H-4, CH-S-), 3,10-3,70 (7H, m, H-6, -CH2<N>3, <->(CH2)2N-), 1,40-2,40 (6H, m, 2H-1", 2H-2", 2H-4 av pyrrolidin), 1,40 (3H, d, J=6,23, -CH3').
E. ( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- azidopropvl)- 3- r( 3R)-3-pyrrolidinvltio]- 6-\( IR')- 1'- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksylsyre
En kald (5°C) løsning av 0,932 g (1,84 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-4-(3"-azidopropyl)-3-[(3R)-N-(allyloksykarbonyl)-3-pyrro-lidinyltio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo- [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 50 ml EtOAc ble behandlet med 11,04 ml (5,52 mmol) 0,5M natriumetylheksanoat og 0,90 g (PPt^J^Pd. Løsningen ble omrørt i 20 timer ved 5°C, deretter fortynnet med EtOAc og ekstrahert med kaldt vann. De vandige ekstrakter ble forsuret til pH ~7,0 med AcOH og kroma-tografert på reversfasesilicagel (Partisil). Eluering ble foretatt med 0-25% CH3CN i vann hvorved det ble oppnådd 15 mg (2,1%) av tittel-forbindelsen. (Det isolerede hovedprodukt var den tilsvarende monoavbeskyttede ester, (31%)) .
<1>H-NMR (D20) 8: 4,20-4,40 (2H, m, H-5, H-l')/ 3,95 (1H, m, -CH-S) , 2/ 96-3, 42 (1H, m, H-4), 3,1-3,42 (7H, m, H-6, - CH2<N>3, <->(CH2)2N-), 1,50- 2,50 (6H, m, 2H-1", 2H-2", 2H-4 av pyrrolidin), 1,33 (3H, d, J=6,37, -CH3').
Eksempel 150
( 4R, 5S, 6S)- 4-( 3"- aminopropvl)- 3- r( 3R)- 3-pyrrolidinyltio]- 6- [( l ' R )- 1 '- hvdroksvetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0,54 g (0,142 mmol) (4R,5S,6S)-4-(3"-azido-propyl)-3-[(3R)-3-pyrrolidinyltio]-6-[ (1' R) -1' - hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylsyre i 15 ml kaldt vann ble hydrogenert ved 5°C i 1 time ved 60 psi hydrogen i nærvær av 60 mg 5% Pd/Al203. Deretter ble katalysatoren frafil-trert og filtratet ble forsuret til pH 5,5 med eddiksyre. Kroma-tografi på reversfasesilicagel (Partisil) av den forsurete løs-ning ga 30 mg (50,9%) av tittelforbindelsen som dens eddiksyre-salt.
IR (Nujol) <V>maks: 1750 cm"1 (B-lactam), 1590 (-C02-).
<1>H-NMR (D20) 8: 4,20-4,40 (2H, m, H-5, H-l'), 3,90-4,10 (1H, m, -CH-S) , 3, 60-3, 70 (1H, m, H-4), 3,20-3,50 (5H, m, H-6, (-C<H>2)-2N-), 3,05 (2H, m, CH2~N-), 1,50-2,60 (6H, m, 2H-1", 2H-2", 2H-4 av pyrrolidin), 1,33 (3H, s, J=6,40, -CH3<1>), 1,92 (3H, s, eddik-syre).
Eksempel 151
Kalium- ( 4R, 5S. 6S) - 4-( 2"- azidoetvl) - 6- f ( l' R) - 1'-hvdroksvetvll- 3- r( imidazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
A. Allvl- ( 4R, 5S, 6S) - 4- ( 2"- azidoetvl) - 6- f ( l' R) - V - tert-butvldimetvlsilvloksyetvll- 3- f( imidazol- 4- yl) metvltiol-7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 10,7 mmol (fremstilt ved ringslutning av 5,0 g, 10,7 mmol av diazo-forstadiet) allyl-(4R,5R, 6S)-4-(2"-azido-etyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 75 ml tørr acetonitril ble avkjølt til 0-5°C og ble behandlet med 2,45 ml (11,8 mmol) difenylklorfosfat og 2,06 ml (11,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 5 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble tilsatt, og blandingen ble omrørt i 1 time. Blandingen ble deretter avkjølt til -20°C og behandlet med ytterligere 2,06 ml (11,8 mmol) N,N-diisopropyletylamin etter-fulgt av en løsning av 1,50 g (13,1 mmol) 4(5)-(merkaptometyl)imidazol i 10 ml acetonitril. Løsningen ble langsomt oppvarmet til 0-5°C og omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 300 ml etylacetat, vasket med mettet natrium-hydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Løsningsmidlet ble avdampet under redusert trykk, og resten ble kromatografert på 5 x 10 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og etyl-acetat (8:2) ga først 3,38 g (' 11%) av enolfosfat-mellomproduktet. Ytterligere eluering med etylacetat ga 1,45 g (25%) av tittelfor-bindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 2100 (N3) og 1765 cm"<1> (C=0 av B-lactam).
B. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- f( l' R)- l'-hydroksvetvl1- 3- f( imidazol- 4- yl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 1,45 g (2,72 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl)-3-[(imidazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 40 ml tetrahydrofuran ble avkjølt til 0-5°C og behandlet med 1,0 ml (17,5 mmol) eddiksyre, etterfulgt av 8,2 ml (8,2 mmol) 1,0M tetrabutylammoniumfluorid i tetrahydrofuran. Etter 14 dager ved 0-5°C ble reaksjonsblandingen fortynnet med 400 ml etylacetat, vasket med mettet natriumhydrogenkarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Løsningsmidlet ble avdampet under redusert trykk, og resten ble kromatografert på 4 x 6 cm silicagel. Eluering med en gradient av 0-20% metanol i etylacetat ga 0,34 g (30%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2100 (N3), 1765 (C=0 av B-lactam)
og 170<0> cm<-1> (C=0 av ester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,38 (d, J=6,25 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,1 (m, CH2C<H>2N3), 3,15 (dd, Jh6,H5=2'63 Hz' <J>H6,H1=7'72 Hz' 1H' H~6)' 3'3~ 3'7 (m' 3H' H~4 °9 C<H>2CH2<N>3 overlapping), 4,06 (AB<q>, ^=14,6 Hz, Av= 45,2 Hz, 2H, SCH2), 4,1-4,4 (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping), 4,6-4,9 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,9-6,1 (2m, 2H, og 1H, CH av allyl), 6,98 (s, 1H, H-5 av imidazol) og 7,59 ppm (s, 1H, H-2 av imidazol).
C. Kalium-( 4R, 5S, 6S)- 4-( 2"- azidoetvl)- 6- f( l' R)- 1'-hvdroksvetvl1 — 3— f( imidazol- 4- vl) metvltiol- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En løsning av 0,304 g (0,81 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-4-(2"-azidoetyl)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(imidazol-4-yl)metyltio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml diklor-metan ble behandlet ved 25°C og under nitrogen med 0,040 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0] og 1,8 ml (0,9 mmol) av en 0,5M løsning av kalium-2-etylheksanoat i etylacetat. Etter 1,2 timer ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 2 x 50 ml vann og den kombinerte ekstrakt ble kromatografert på 2,5 x 15 cm "ji-Bondapak C^<g>" reversfasesilicagel. Søylen ble eluert med en gradient av 0-5% acetonitril i 0,01M pH 7,0 fosfatbuffer. De UV- aktive fraksjoner ble oppsamlet, konsentrert og avsaltet på samme søyle under eluering med vann i stedet for buffer. Lyofilisering av de relevante fraksjoner ga 0,047 g (14%) av tittel-karba-penemen som et hvitt, amorft faststoff.
Renhet ved HPLC: 99% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak <C>18", eluering 10% CH3CN-vann pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 1 ml/min, UV-detektor 302 nm, retensjonstid 6,83 min.
UV (vann, pH 7,4 fosfatbuffer) <X>maks: 304 nm (8.380).
IR (KBr) vmaks: 2100 (N3), 1745 (C=0 av B-lactam) og 1600 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,31 (d, J=6,40 Hz, 3H, CH3CHO) , 1,6-2,1 (m, 2H, CH2CH2N3), 3,2-3,6 (m, 4H, H-6, H-4 og CH2CH2N3 overlapping), 4,03 (ABq, JAB=14,52 Hz, Av=33,6 Hz, 2H, SCH2), 4,14 (dd, Jh5,H6=2'42 H<z>'<J>H5,H4=9'48 Hz' 1H' H~5>/ 4,24 (m, 1H, CH3CHO), 7,09 (s, 1H, H-5 av imidazol) og 7,72 ppm (s, 1H, H-2 av imidazol).
Eksempel 152
( 4R, 5S, 6S)- 4- r3"- amino-( 2" R eller S)- 2"- hvdroksvpropvll-3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 6- 1 (!' R)- 1'- hvdroksvetvll - 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. ( Pyridin- 2- vl) metvltio- 5- azido- 4-( tert-butvldimetvlsilvloksv) pentanoat
En kald (isbad) løsning av 38 g (0,14 mmol) 5-azido-4-(tert-butyldimetylsilyloksy)pentansyre fra iodlactonisering beskrevet av P.A. Bartlett, et al. i J. Am. Chem. Soc. 100, 3950 (1978) i 250 ml dimetylformamid ble tilsatt 17,5 g (0,140 mol).2-picolylmerkaptan, 30 g (0,15 mol) 1,3-dicycloheksyllkarbodiimid og 10 g (0,074 mol) 1— hydroksybenzotriazol. Blandingen ble omrørt i 60 timer i kjølerom (5-8°C), fortynnet med 1 1 vann og ekstra-hert med 5 x 250 ml dietyleter. Dietyleterekstraktene ble kombi-nert, vasket med 5 x 250 ml vann, 200 ml saltvann, tørket og ledet gjennom en 500 g hurtigsilicagelpute (heksan, 5 —» 30% etylacetat/heksan), hvorved det ble oppnådd 30 g ( %) av tittel-forbindelsen som en olje.
IR (film) Vmaks: 2100 (N3) og 1690 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 8,558-8,525 (1H, m, pyridin H-6), 7,672- 7,586 (1H, m, pyridin H-4), 7,336 (1H, d, J=7,9 Hz, pyridin H-3), 7,199- 7,131 (1H, m, pyridin H-5), 4,257 (2H, s, CH2S), 3,834 (1H, sentrum av 5 linjer, J=5,41 Hz, CHO), 3,197 (2H, sentrum av ABX, J=4,5 Hz, J=5,4 Hz, J=12,5 Hz, C<H>2N3), 2, 659 (2H, t, J=7, 6 Hz, CH2CO), 2, 01-1, 786 (2H, m, CH2), 0,893 (9H, s, tert-butyl), 0,094 og 0,061 ppm (6H, 2s, dimetyl).
B. ( 3S, 4S) - 3- r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn - 4-r( 1" R)- 1"-( pyridin- 2- vl) metvltiokarbonvl- 4"- azido-( 3" R og S)- 3"-( tert- butvldimetvlsilvloksy) butyl] azetidin- 2- on
En kald (is-metanol bad) løsning av 30 g (78,9 mmol)
(pyridin-2-yl)metyltio-5-azido-4-(tert-butyldimetylsilyloksy)-pentanoat i 500 ml diklormetan ble behandlet med 35 ml (0,25 mol) trietylamin og dråpevis med 46 ml (0,20 mmol) tert-butyldimetyl-silyltrifluormetansulfonat. Ved avslutning av tilsetningen sto blandingen i 18 timer ved 5-8°C, den ble deretter fortynnet med 1 1 heksan, vasket med 5 x 500 ml vann, 500 ml saltvann, tørket (MgS04) og behandlet med aktivt kull. Resten (20 g, 51%, 0,040 mmol), en rød olje, ble tilsatt en kald (isbad) blanding av 13 g (0,096 mol) fersk fremstilt zinkklorid og 20 g (0, 069 mol) (3S., 4R)-4-acetoksy-3-[ (l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]azet-idin-2-on i 250 ml diklormetan. Blandingen sto i kjølerom i 18 timer, ble fortynnet med 1 1 dietyleter, vasket med 3 x 250 ml mettet vandig NH4C1, 3 x 250 ml vann, iskaldt, mettet, vandig NaHCC^, 250 ml vann, 250 ml saltvann og tørket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 500 g hurtigsilicagelpute (heksan —> 50% etylacetat/heksan), hvorved det ble oppnådd
tittelforbindelsene som adskilte diastereomerer (30 g av hver diastereomer, 24% samlet utbytte).
Isomer 1
Rf= 0,33 (heksan/etylacetat:1/1).
IR (film) Vmaks: 3300-3200 (NH), 2700 (N3), 1765 og 1680
cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 8,54-8,51 (1H, m, pyridin-H6), 7,64-7,58 (1H, m, pyridin H-4), 7,314 (1H, d, J=7,8 Hz, pyridin H-3), 7,21-7,14 (1H, m, pyridin H-5), 5,845 (1H, bs, NH), 4,280, 4,269 (2H, 2 linjer, del av ABq, CH2S), 4,2-4,05 (1H, m, CHO) , 3, 832 (1H, dd, J=2,05 Hz, J=6,0 Hz, H-4), 3,83-3,70 (1H, m, CHO), 3,227 (2H, ABX, J=4,6 Hz, J=5,1 Hz, J=12,5 Hz, CH2N3), 3,08-2,95 (2H, m, H-3 og H-l"), 2,15-1,98, 1,67-1,55 (2H, m, CH2-1"), 1, 025 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3) , 0, 883, 0,868 (18H, 2s, tert-butyl), 0,070 og 0,047 ppm (3H og 5H, 2s, dimetyl).
Isomer 2
Rf= 0,42 (heksan/etylacetat: 1/1).
IR (film) vmaks: 3250 (NH), 2100 (N3), 1765 og 1685 cm"<1 >(C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 8,55-8,52 (1H, m, pyridin H-6), 7,67- 7,58 (1H, m, pyridin H-4), 7,32 (1H, d, J=7,8 Hz, pyridin H-3), 7,21- 7,14 (1H, m, pyridin H-5), 5,90 (1H, bs, NH), 4,336, 4,267, 4,245, 4,174 (2H, ABq, J=14,0 Hz, CH2S), 4,20-4,13 (1H, m, CHO), 3,794 (1H, dd, J=2,l Hz, J=6,9 Hz, H-4), 3,82-3,75 (1H, m, CHO), 3,207 (2H, ABX, J=3,8 Hz, J=5,2 Hz, J=12,8 Hz, CH2S), 3,048 (1H, bt, J=2,5 Hz, H-3), 2,86-2,75 (1H, m, H-l"), 2,10-1,96, 1,85-1,70 (2H, 2 sett av m, CH2-4), 1,050 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,883, 0,857 (18H, 2s, tert-butyl) og 0,047 ppm (12H, s, dimetyl).
C. ( 3S. 4S) - 3- r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-r( 1" R)- l"- karboksv- 4"- azido-( 3" R eller S)- 3"-( tert-butyldimetvlsilvloksv) butvllazetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 2,38 g (3,9 mmol) (3S_, 4S.)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(pyridin-2-yl)metyltiokarbonyl-4"-azido-(3"R eller SJ-3"-(tertbutyldimetyl-silyloksy)butyl]azetidin-2-on i 25 ml tetrahydrofuran ble behand-let med 1,3 ml (15,6 mmol) 30% vandig hydrogenperoksid etter-fulgt av langsom tilsetning av 11,7 ml (11,7 mmol) IM vandig NaOH. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, deretter forsuret med 14 ml IN vandig HC1 og ekstrahert med 3 x 30 ml etylacetat. De organiske ekstrakter ble kombinert, vasket med 2 x 20 ml vann, 2 x 20 ml IM vandig NaHS03, 30 ml vann, saltvann og tørket (MgS04) hvorved det ble oppnådd 1,8 g (92%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C1) vmaks: 3400 (NH), 2100 (N3), 1765, 1740 og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,329 (1H, bs, NH), 4,23-4,14 (1H, m, CHO), 3,867 (1H, dd, J=2,2 Hz, J=6,4 Hz, H4), 3,26 (2H, sentrum av ABX, J=4,2 Hz, J=4,7 Hz, J=12,7 Hz, CH2N3), 3,13 (1H, sentrum av m, H-3), 2,70-2,60 (1H, m, H-l"), 2,04-1,7 (2H, m, CH2-1"), 1,171 (3H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,898, 0, 869 (18H, 2s, tert-butyl), 0, 109, 0, 099, 0, 070 og 0, 062 ppm (12H, 4s, CH3).
D. ( 3S, 4R) - 3- r ( l' R) - l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-r( l" R)- l"-( 4- azido-( 3R eller S)- 3- tert-butvldimetvlsilvloksvpropyl)- 3"- allvloksvkarbonvl- 2"-oksopropyl1azetidin- 2- on
En løsning av 1,8 g (3,6 mmol) (3S, 4S) -3- [ (l'R) -1' -tert-butyldimetylsilyloksyetyl ]-4- [(1"R)-l"-karboksy-4"-azido-(3"R eller S)3"- tert-butvldimetvlsilvloksvbutvl]azetidin-2-on i 25 ml toluen ble behandlet med 642 mg (3,96 mmol) karbonyldiimidazol og deretter omrørt i 1,5 time. Løsningsmidlet ble fjernet og resten ble igjen oppløst i toluen. Løsningsmidlet ble igjen fjernet, og resten ble tørket under høyvakuum. Denne resulterende acylimid-azol ble tilsatt en foruttørket løsning (oppvarmet i 2,5 timer i 3Å og 4Å molsikter) av 4,5 g (14,4 mmol) magnesiummonoallyl-malonat i 40 ml benzen. Blandingen ble oppvarmet i 1,6 timer (badtemp.
75°C), fortynnet med en 1/1 blanding av dietyleter og etylacetat, vasket med 2 x 40 ml iskaldt vann, 40 ml iskaldt IN vandig HC1, 2 x 40 ml vann, 40 ml saltvann og tørket (MgS04), hvorved det ble oppnådd 2,29 g (>100%) av den rå tittelforbin-delse, som ble anvendt som vist i neste trinn.
IR (CH2C12) Vmaks: 3420 (NH) , 2120 (N3) , 1770 (OO B-lactam), 1720, 1660 og 1630 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 12,113 (0,5H, bs, OH enol), 6,03-5,80 (1H, m, vinylisk H) 5,927 (1H, bs, NH), 5,387-5,253 (2H, m, vinylisk H), 5,058 (2,6H, s, olefinisk H av enol), 4,665-4,616 (2H, m, allylisk H), 4,24-4,12, 3,883-3,764 (2H, m, H-4 og H-l'), 3,775, 3,764 (d, J=2,l Hz, del av H-4), 3, 680, 3, 600, 3,592, 3,513 (2H, ABq, J=15,9 Hz, CH2 av acetoacetat), 3,357-3,269 (1H, m, del av CH2N3), 3,187-3,01 (2H, m, H-l" og del av CH2N3), 2,955 (0,5 H, dd, J=2,l Hz, J=4,l Hz, H-3), 2,905 (0,5 H, dt, J=2,6 Hz, del av H-3), 2,256-2,146, 2,065-1,91, 1,836-1,6 (2H, 3 serier av m, CH2-4), 1,180 (1,4 H, d, J=6,2 Hz, CH3) , 1, 086 (1, 6 H, d, J=6,3 Hz, CH3), 0,896 og 0,866 (18H, 2s, tert-butyl), 0,108, 0,091, 0,087, 0,069 og 0,056 ppm (12H, 5s, dimetyl).
E. ( 3S, 4R)- 3- r( l' R)- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvll - 4-f( 1" R)- 1"-( 4- azido-( 3R eller S)- 3- tert-butvldimetylsilyloksvpropvl)- 3"- diazo- 3"-allvloksvkarbonyl- 2"- oksopropyl) azetidin- 2- on
En kald (isbad) løsning av 2,2 g (3,6 mmol) (3S_, 4R)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-(4-azido-(3R eller S)-3- tert-butvldimetvlsilvloksvpropyl)-<3>"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 22 ml CH3CN ble først behandlet med 0,51 ml (3,6 mmol) trietylamin og dråpevis med 709 mg (3,6 mmol) tosylazid i 3 ml CH3CN. Blandingen ble omrørt i 1,5 time, og løsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Resten ble tri-turert med heksan og det faste tosylamid ble fjernet ved filtre-ring og vasket med heksan. Resten opppnådd ved inndampning av heksanfraksjonene ble ledet gjennom en 60 g hurtigsilicagelsøyle (heksan, 10 40% eter/heksan), hvorved det ble oppnådd 650 mg (30%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 3410 (NH), 2150 (N2), 2100 (N3), 1765 (OO av B-lactam), 1715 og 1650 cm"<1> (C=0) .
<1>H-NMR (CDCI3, 200 MHz) 8: 6,03-5,832 (1H, m, vinylisk
H), 5,862 (1H, bs, NH), 5,40-5,29 (2H, m, vinylisk H), 4,72-4,689 (2H, m, CH2 allylisk), 4,215-4,07 (2H, m, CHO og H-l'), 3,805-3,71 (1H, m, H-l"), 3,189 (2H, ABX, J=3,9 Hz, J=5,5 Hz, J=12,7 Hz, CH2N3), 3,023 (1H, bt, J=2,5 Hz, H-3), 2,175-2,03, 1,73-1,57 (2H, 2 sett av m, CH2-1"), 1,162 (3H, d, J=6,4 Hz, CH3), 0,891, 0,865 (18H, 2s, tert-butyl), 0,094, 0,062 og 0,053 ppm (12H, 3s, dimetyl). F. Allvl-( 4R, 5R, 6S)- 4- r3"- azido-( 2" R eller S)- 2"- tert-butvldimetvlsilvloksvpropvll- 6- r( lf R)- 1'- tertbutvldimetvlsilvloksvetvll- 3, 7- diokso- l-azabicvclo f 3, 2, 01heptan- 2- karboksvlat
En løsning av 690 mg (1,1 mmol) (3S, 4R) -3-[ (l'R) -1' - tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(1"R)-1"-[4-azido-(3R eller
S)-3- tert-butvldimetylsilvloksvpropyl]-3"-diazo-3"-allyloksykarbonyl-2"-oksopropyl]azetidin-2-on i 20 ml benzen ble oppvarmet under tilbakekjøling i nærvær av 17 mg Rh(0Ac)2 i 45 minutter. Ytter-ligere 17 mg katalysator ble tilsatt og oppvarmningen ble fort-satt i ytterligere 30 minutter. Kata-lysatoren ble fjernet ved filtrering og benzen ble fjernet under vakuum, hvorved det ble oppnådd 700 mg (100%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) vmaks: 2110 (N3), 1770 og 1745 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 5: 6,0-5,79 (1H, m, vinylisk H), 5,38-5,24 (2H, m, vinylisk H), 4,72-4,88 (2H, m, allylisk CH2)/ 4,633 (1H, s, CH-2), 4,58-4,28 (1H, m, Hl'), 4,325 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=8,4 Hz, H-5), 3,91-3,82 (1H, m, CHO) 3,40-3,2 (2H, m, CH2N3), 3,246 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=4,3 Hz, H-6), 2,839 (1H, bq, J=7,9 Hz, H-4), 1,84-1,72 (2H, m, CH2~4), 1,270 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,897 (18H, s, tert-butyl), 0,112, 0,099, 0, 092 og 0, 083 ppm (12H, 4s, dimetyl).
G. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4- r3"- azido-(" 2R eller S)- 2"- tert-butvldimetvlsilyloksvpropvll- 6- f(!' R)- 1'- tert-butvldimetvlsilyloksvetvl1- 3- f( 2- cvanoetvl) tiol- 7- okso-l- azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (is-metanol bad) løsning av allyl-(4R, 5S., 6jS) -4-[3"-azido-(2"R eller S.)-2-tert-butyldimetylsilyloksypropyl]-6-t d'R) -1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo-[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat (fra 690 mg, 1,1 mmol av diazo) i 8 ml CH3CN ble behandlet dråpevis med 0,26 ml
(1,32 mmol) difenylklorfosfat og 0,23 ml (1,32 mmol) diisopropyletylamin og en spormengde av 20 mg 4-N,N-dimetylaminopyridin. Blandingen ble omrørt i 1 time og deretter ble to porsjoner cyanoetylmerkaptan (130 mg, 1,5 mmol og 52 mg, 0,60 mmol) og diisopropyletylamin (0,26 ml, 1,50 mmol og 0,10 ml, 0,60 mmol) tilsatt suksessivt i løpet av 1 time. Blandingen ble omrørt i 1,5 time, fortynnet med 25 ml etylacetat, vasket med 3 x 10 ml iskaldt vann, 3 x 10 ml IM vandig NaHS03, 2 x 10 ml vann, 10 ml IN vandig HC1, 2 x 10 ml vann, 10 ml IM vandig NaHC03, 10 ml vann, 10 ml saltvann og tør-ket (MgS04). Resten ble ledet gjennom en 25 g hurtigsilicagelsøyle (petroleumseter, 10 m -4 40% dietyleter/petroleumseter), hvorved det ble oppnådd 442 mg (62%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) Vmaks: 2250 (CN), 2110 (N3), 1775 (C=OB-lactam), 1710 cm<-1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 8: 6,03-5,84 (1H, m, vinylisk H), 5,48-5,20 (2H, m vinylisk H), 4,85-4,6 (2H, m, allylisk CH2), 4,38-4,3 (1H, m, H- 1'), 4,284 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,5 Hz, H-5), 3,65-3,50 (1H, m, CHO), 3,47-2,93 (5H, m, H-4, CH2N3, SCH2), 3,205 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,4 Hz, H-6), 2,699, 2,664, 2,632 (2H, m, CH2CN), 1,90-1,75 (2H, m, CH2~4), 1,245 (3H, d, J=6,2 Hz, CH3), 0,935 og 0,898 (18H, 2s, tert-butyl), 0,143 og 0,091 (12H, 2s, dimetyl).
H. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4- r3"- azido-( 2" R eller S)- 2"-hvdroksypropyll- 6- f( l' R)- 1' - hvdroksvetvll- 3-\ ( 2-cyanoetyl) tiol- 7- okso- l- azabicvclo r3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksylat
En kald (is-metanol bad) løsning av 440 mg (0,68 mmol) allyl-(4R,5S_, 6S)-4-[3"-azido-(2"R eller S.) -2"-tert-butyldimetylsilyloksypropyl]-6-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] -3- [ (2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 6 ml tetrahydrofuran ble behandlet med 0,94 ml (17 mmol) iseddiksyre og dråpevis med en IM tetrabutylammonium-fluoridløsning i 6,8 ml (6,8 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt i 15 dager ved 8°C, deretter fortynnet med 40 ml etyl-acetat, vasket med 4 x 10 ml iskaldt vann, 2 x 10 ml IM vandig NaHC03, 10 ml vann, saltvann og tørket (MgS04). Resten ble over-ført til en preparativ silicagelplate (etylacetat/heksan:4/1), hvorved det ble oppnådd 185 mg (65%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (CH2C12) <V>maks: 3600, 3450 (OH), 2250 (CN), 2110 (N3), 1775 (C=0 B-lactam) og 1710 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (CDC13, 200 MHz) 6: 6,04-5,87 (1H, m, vinylisk H), 5,493- 4,24 (2H, m, vinylisk H), 4,88-4,64 (2H, m, allylisk H), 4,294 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 4,3-4,17 (1H, m, H-l'), 3,9-3,67 (2H, m, CHO og H-4) , 3,382, 3,353 (2H, 2 linjer, CH2N3), 3,35-3,23 (1H, m, 1 proton av SCH2), 3,159 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=8,0 Hz, H-6), 3,05-2,91 (1H, m, 1 proton av SCH2), 3,91 (1H, bs, OH), 2,81-2,63 (2H, m, CH2CN), 2,377 (1H, bs, OH), 1, 94-1, 64 (2H, m, CH2-4) og 1, 388 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).
I. Natrium-( 4R, 5S, 6S)- 4- f3"- azido-( 2" R eller S)- 2"-hvdroksvpropyll- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- f( 2-cvanoetvl) tiol- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, 0] hept- 2- en- 2-karboksylat
En kald (isbad) løsning av 180 mg (0,43 mmol) allyl-(4R, 5J3, 6S.)-4-[3"-azido-(2"R eller S.) -2"-hydroksypropyl]-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo [3,2, 0]hept-2-en-2-karboksylat i 7 ml CH2C12 ble behandlet med Pd(PPh3)4 og dråpevis med 0,11 ml (0,86 mmol) N-metylanilin. Blandingen ble omrørt i 30 minutter, deretter fortynnet med en 10 ml 0,IM pH 7,0 vandig fosfatbuffer og 20 ml dietyleter. Den organiske fase ble ekstrahert med ytterligere 2 x 5 ml pH 7,0 buffer og 5 ml vann. De vandige faser ble kombinert, vasket med dietyleter og ledet gjennom en 50 g "u-Bondapak <C>l8" reversfasesøyle (vann -» 2% CH3CN/vann), hvorved det ble oppnådd 105 mg (61%) av tittelfor-bindelsen som et lyofilisert pulver.
IR (Nujol) Vmaks: 3500-3100 (OH), 2100 (N3), 1745 (C=0 B-lactam) og 1595 cm"<1> (C=0).
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 8: 4,343, 4,33 (d, J=2,5 Hz, del av H-5), 4,35-4,21 (2H, m, H-l' og H-5), 3,9-3,8 (1H, m, CHO), 3,679-3,583 (1H, m, H-4), 3,435, 3,422 (del av H-6, d, J=2,5 Hz), 3,48-3,31 (3H, rn-, H-6 og CH2N3), 3,257-3, 134, 3,087-2, 91 (2H, 2 sett av m, SCH2), 2,91-2,83 (2H, m, CH2CN), 1,99-1,876, 1,783-1,655 (2H, 2 sett av m, CH2~4) og 1,321 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
J. ( 4R. 5S, 6S)- 4- r3"- amino-( 2" R eller S)- 2"- hvdroksvpropvn-6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 7- okso- l-azabicvclo r 3. 2. 0] hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (isbad) løsning av 105 mg (0,26 mmol) natrium-(4R, 5S., 6S.)-4-[3"-azido-(2"R eller S.)-2"-hydroksypropyl]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 20 ml vann ble omrystet på en Parr hydrogenator i 1 time ved 45-50 psi hydrogen under anvendelse av 5% Pd/aluminiumoksid som katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og vasket med 2 x 2 ml vann. pH av den vandige reaksjonsblanding ble innstilt til 7,05 med en 0,1M vandig NaH2P04~løsning. Den nøytraliserte løsning ble ledet gjennom en 50 g "u-Bondapak C^g" reversfasesøyle (vann), hvorved det ble oppnådd 65 mg, (43%) av tittelforbindelsen som et hvitt lyofi-lisert pulver.
Renhet: 98,2% som bestemt ved HPLC (r.t.=5,92 min, 10 u, "u-Bondapak <C>18", KH2P04 0,01M, pH 7,4).
UV (vann) <*.>maKS: 300 (8008).
IR (Nujol) Vmaks<:> 3600-3100 (OH, NH2), 2250 (CN), 1750 (C=0 B-lactam) og 1590 cm-<1> (C=0) .
<1>H-NMR (D20, 200 MHz) 5: 4,312 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=9,7 Hz, H-5), 4, 32-4,207 (1H, m, H-l'), 3, 948-3, 849 (1H, m CHO) , 3,68-3,575 (1H, m, H-4), 3,380 (1H, dd, J=2,8 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 3,235, 3,219, 3,169, 3,154 (1H, del av ABX, J=3,l Hz, J=13,2 Hz, CH2N3), 3,23-3,11 (1H, m, 1 proton av SCH2), 3,008-2,95 (2H, m, del av CH2CN og del av SCH2), 2,88-2,82 (2H, m, CH2CN), 2,002-1,699 (2H, m, CH2-4) og 1,328 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3).
Eksempel 153
( 4R, 5S, 6S)- 6- f 1' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- benzvltio- 4- f2"-( N- benzvl- N- metvl) aminoetvll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
A. Allvl-( 4R. 5S. 6S)- 6- f( l7 R)- 1'-( tert-butyl dimetyl silyloksvet yl) - 3- benzvltio- 4- f2"- tert-butvldimetylsilvloksyetyll- 7- okso- l-azabicvclo f 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 4,75 g (9,03 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-4»
[2"-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3,7-diokso-l-azabicyclo[3,2,0]heptan-2-karboksylat i 50 ml CH3CN ble behandlet med 2,06 ml (9,93 mmol) ClP0(0Ph)2/ etterfulgt av 1,73 ml (9,93 mmol) N,N-diisopropyl-etylamin og 10 mg 4-N,N-dimetylaminopyridin. Blandingen ble om-rørt ved 0°C i 2,5 timer under argon, hvoretter argon ble boblet gjennom løsningen i 10 minutter. Enolfosfatet ble deretter behandlet med 2,54 ml (21,58 mmol) benzylmerkaptan, etterfulgt av 3,8 ml (21,68 mmol) N,N-diisopropyletylamin og omrørt ved 0°C i 20 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 300 ml EtOAc og vasket suksessivt med kald IM NaHS03, vann og saltvann, tørket (MgS04) og løsningsmidlet ble avdampet til en sirup, som ble kromatografert på 9 x 10 cm silicagel pakket i heksan og eluert med en blanding av heksan og EtOAc (85:15, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 4,35 g (76,2%) av tittelforbindelsen som et skum.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 5: 0,05 (S, 12H, Si(CH3)2), 0, 857, 0, 86 (2s, 18H, SiC(CH3)2)</> 1,26 (d, 3H, CH3) , 1,62-1, 78, 1, 98-2, 12 (m, 2H, CH2) , 3,05 (dd, 1H, H-6, <J>6/1,<=>6,93 Hz), 3,45-3,6 (m, 1H, H-4), 3,53-3,8 (sentrum av m, 2H, CH20), 4,03 (dd, 1H, H-5, J5/6=2,38 Hz, J4^5=9,21 Hz), 4,1 (tett AB, 2H, SCH2), 4,18 (m, 1H, H-l'), 4,59-4,82 (m, 2H, OCH2, allyl),
5,17-5,46 (m, 2H, =CH2, allyl), 5,83-6,02 (m, 1H, CH=, allyl), 7,16-7,34 (m, 5H, fenyl).
B. Allvl- HR, 5S, 6S)- 6- r ( 1' R) - 1' - ( tert-butvldimetvlsilvloksv) etvll- 3- benzvltio- 4-( 2"-hvdroksvetyl)- 7- okso- l- azabicvclo T3, 2, 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 4,35 g (6,88 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-6-[(1'R)-1'-(tert-butyldimetylsilyloksyetyl)]-3-benzyltio-4-[2"-tert-butyldimetyl-silyloksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] -hept-2-en-2-karboksylat i 65 ml tørr tetrahydrofuran ble behand-let under argon med 2,36 ml (41,26 mmol) eddiksyre, etterfulgt av en IM løsning av tetrabutylammoniumfluorid i 20,63 ml (20,63 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 5 timer og sto ved -20°C i 18 timer, hvoretter den ble nøytralisert ved 0°C med 42 ml (42 mmol) IM NaHC03-løsning. Blandingen ble ekstrahert med 3 x 75 ml EtOAc og den kombinerte organiske fase ble vasket suksessivt med kaldt IM NaHC.03, vann og saltvann, tørket (MgS04) og løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd et skum, som ble kromatografert på 7,5 x 8 cm silicagel pakket i CH2CI2 og eluert med en blanding av CH2Cl2 og CH3CN (8:2, gradientelue-ring), hvorved det ble oppnådd 2,49 g (69,9%) av tittelforbindelsen som et skum.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3, 7,24) 8: 0,04, 0,05 (2 s, 6H, Si(CH3)2), 0,86 (s, 9H, SiC(CH3)2), 1,26 (d, 3H, CH3) , 1,63-1,8, 1,98-2,14 (m, 2H, CH2) , 3,12 (dd, 1H, H-6, Jg j/=7,46 Hz), 3,45 (m, 1H, H-4, J=2,19, 9,45, 11,5 Hz), 3,63, 3,82 (sentrum av m, 2H, CH2<0>), 4,01 (dd, 1H, H-5, <J>5/6<=>2,59 Hz,
J4,5=9'45 Hz)' 4,03-4,13 (AB, 2H, SC<H>2, <J=>13,26 Hz), 4,155 (m, 1H, H-l'), 4,59-4,84 (m, 2H, OCH2, allyl), 5,18-5,46 (m, 2H, =CH2, allyl), 5,83-6,03 (m, 1H, CH=, allyl), 7,19-7,38 (m, 5H, fenyl) .
C. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- f( 1' R)- 1'-( tert-butvldimetvlsilvloksv) etvll- 3- benzvltio- 4-\ 2 "~( N- benzvl-N- metvl) aminoetvl)- 7- okso- l- azabicvclo f 3, 2, Olhept- 2- en-2- karboksvlat
En løsning av 0,5 g (0,97 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1' R)-1'-(tertbutyldimetylsilyloksy)etyl]-3-benzyltio-4-[2"-hydroksy-etyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karboksylat i 15 ml tørt CH2C12 ble avkjølt til -78°C under argon og behandlet med 0,185 ml (1,06 mmol) diiso-propyletylamin, etterfulgt av 0,18 ml (1,06 mmol) (CF3S02)20. Etter 1 time ved -78°C ble N-0,75 ml (5,8 mmol) benzyl-N-metylamin tilsatt, og blandingen ble omrOrt ved -78°C i 1 time og ved 0°C i 5 timer og hensatt ved 5°C i 16 timer. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 200 ml EtOAc og vasket med kaldt vann og saltvann, tørket (MgS04) og løsnings-midlet ble avdampet til en sirup, som ble kromatografert på 4,5 x 13 cm silicagel pakket i CH2C12. Tittelforbindelsen ble eluert med en blanding av CH2C12 og EtOAc (7:3, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,4 g (66,7%) av en sirup.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 5: 0,036, 0,045 (2 s, 6H, Si(C<H>3)2), 0,86 (s, 9H, SiC (CH3) 3) , 1,07 (d, 3H, CH3, J=6,16 Hz), 2,26 (s, 3H, NCH3), 3,18 (m, 1H, H-4, J=l,94, 9, 27, 11, 37 Hz), 3,44-3,56 (AB, 2H, NCH2, ^=13,15 Hz), 3,94 (dd, 1H, H-5, J5^6=2,47 Hz, J^5=9,32 Hz), 4,0-4,1 (AB, 2H, SCH2, ^=13,21 Hz), 4,14 (m, 1H, H-l'), 4,7-4,8 (m, 2H, OCH2,
allyl), 5,19-5,48 (m, 2H, *=CH2, allyl), 5,85-6,04 (m, 1H, CH=, allyl), 7,19-7,78 (m, 10H, fenyl).
D. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 6- r ( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- benzvltio-4- f 2"-( N- benzyl- N- metvl) aminoetvll- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 0] hept- 2- en- 2- karboksvlat
En kald (0°C) løsning av 0,4 g (0,65 mmol) allyl-(4R,5S,6S)-6-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-3-benzyltio-4-[2"-(N-benzyl-N-metyl)-aminoetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 8 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet under argon med 0,22 ml (3,89 mmol) HOAc etterfulgt av en IM løsning av tetrabutyl-ammoniumfluorid i 1,95 ml (1,95 mmol) tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt ved 0-5°C i 168 timer og deretter nøytra-lisert ved 0°C med 3,9 ml (3,9 mmol) IM NaHCC^-løsning. Blandin-gen ble ekstrahert med 3 x 80 ml EtOAc og den kombinerte organis-ke ekstrakt ble vasket suksessivt med kaldt IM NaHC03, vann og saltvann, tørket (MgS04) og løsningsmidlet ble avdampet, hvorved det ble oppnådd en gummi, som ble kroma-tografert på 3,2 x 12 cm silicagel pakket i CH2Cl2. Søylen ble først eluert med en blan-ding av CH2C12 og EtOAc (100:0 -» 0:100, gradienteluering) og til slutt ble tittelforbindelsen eluert med en blanding av EtOAc og aceton (8:2, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,093 g (28,3%) av et skum.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3 7,24) 8: 1,13 (d, 3H, CH3, J=6,28 Hz), 1,94-2, 39 (m, 2H, CH2N) , 2,34 (s, 3H, NCH3) , 2,9 (dd, 1H, H-6, J6,l/=7'77 Hz)' 3'23 (m' 1H' H-4>' 3/44, 3/52 (AB, 2H, NC<H>2, ^=13,1 Hz), 3,77 (dd, 1H, H-5, J4^5=9,56 Hz, J5/6<=>2,57
Hz), 3,88 (m, 1H, H-l'), 3, 98-4, 09 (AB, 2H, SCH2, ^=13,59 Hz), 4,59-4,86 (m, 2H, OCH2, allyl), 5,19-5,45 (m, 2H, =CH2, allyl), 5,84-6,03 (m, 1H, CH=, allyl), 7,24-7,32 (m, 10H, fenyl).
E. ( 4R, 5S, 6S)- 6- f( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3- benzvltio- 4- f2"-( N- benzvl- N- metvl) aminoetvll- 7- okso- l-azabicvclo \ 3 . 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En kald (0°C) løsning av 0,093 g (0,18 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-6-[(l'R)-1'-hydroksyetyl]-3-benzyltio-4-[2"-(N-benzyl-N-metyl)aminoetyl]-7-okso-l-azabicyclo[3,2,0]hept-2-en-2-karbok-sylat i 5 ml CH2C12 under argon ble tilsatt 0,026 g (0,023 mmol) Pd[Ph3P]4^ etterfulgt av en 0,5M løsning av 2-etylheksanoat i 0,37 ml (0,18 mmol) EtOAc. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 50 minutter, fortynnet med 50 ml dietyleter og ekstrahert med 3 x 10 ml 0,1M pH 7,0 fosfatbuffer. Den kombinerte vandige ekstrakt ble ledet gjennom en 3,2 x 7 cm søyle av "u-Bondapak C18" revers-fasesilicagel. Tittelforbindelsen ble eluert med en blanding av vann og CH3CN (7:3, gradienteluering), hvorved det ble oppnådd 0,067 g (78,2%) som et fnugget faststoff.
Renhet 99,9% ved HPLC, UV-deteksjon ved ^makS: 304 nm' på 4 mm x 30 cm "u-Bondapak C18", pH 6,8 fosfatbuffer, strømnings-hastighet 1 ml/min, retentionstid: 7,22 min.
UV *maks: 304 nm-
IR (Nujol) vmaks: 1750 cm-<1> (C=0, B-lactam).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 5: 1,12 (d, 3H, CH3, J=6,35 Hz),
1,38, 1,94 (sentrum av m, 2H, CH2), 2,38 (s, 3H, NCH3), 2,47 (sentrum m, 2H, CH2CN), 3,04 (m, overlapping, 1H, H-6), 3,05 (m, overlap-ping, 1H, H-4), 3,72 (tett AB, 2H, NCH2), 4,05 (dd, 1H, H-5), 3, 96, 4,09 (AB, 2H, SCH2, ^=13,8 Hz), 4,11 (m, 1H, H-l'), 7,35-7,54 (m, 10H, fenyl).
Eksempel 154
( 4R, 5S, 6S)- 3- f ( 2- cvanoetvl) tiol- 6- f ( l' R)- l'~ hvdroksvetyl1- 4-( 3- N- metvlaminopropyl)-7-okso-l-azabicvclo r 3. 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsyre
A. 5- N- Allyloksykarbonvl- N- metvlaminovalerinanesvre
En blanding av 13,0 g (0,115 mmol) l-metyl-2-piperidon og 100 ml 6N saltsyre ble oppvarmet under tilbakesvaling i 8 timer. Løsningsmidlet ble avdampet til tørrhet og den resterende amino-syre ble som beskrevet av M. Maeda, et. Al, Chem. Pharm. Bull. 32, 4157 (1984) fortynnet med 100 ml kaldt vann (0-5°C). pH ble innstilt til 8,5 med fast natriumkarbonat, og 12,2 ml (0,115 mmol) allylklorformiat ble dråpevis tilsatt, mens pH ble holdt ved 8-8,5. Etter 30 minutter ved 0°C og ytterligere 30 minutter ved 22°C ble reaksjonsblandingen vasket med dietyleter og den vandige fase ble innstilt til pH 3 med konsentrert saltsyre. Den vandige løsning ble ekstrahert med 3 x 200 ml dietyleter og den kombinerte organiske ekstrakt ble vasket med saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet ga 22,9 g (93%) av tittel-syren som en olje.
IR (NaCl, film) Vmaks: 1740, 1710 og 1680 cm<-1> (sh). 1 H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,5-1,7 (m, 4H, CH^ Qg 4) f 2,35-2,45 (m, 2H, CH2~2), 2,90 (s, 3H, NCH3), 3,25-3,35 (m, 2H, CH2N), 4,55-4,6 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,15-5,35 og 5,85-6,05 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
B. 5- N- Allyloksvkarbonvl- N- metvlaminovalerylklorid
En løsning av 35,26 g (0,164 mol) 5-N-allyloksykarbonyl-N-metylaminovalerinanesyre i 175 ml tørr diklormetan ble behandlet dråpevis ved 22°C med 15,7 ml (0,180 mol) oksalylklorid. Etter 10 minutter ble 4 dråper N,N-dimetylformamid tilsatt og reaksjons-blandingen ble omrørt i 2,0 timer, mens uttømning av gass lang-somt opphørte. Løsningsmidlet og overskydende reagens ble avdam-pet under redusert trykk og det resterende syreklorid ble anvendt som vist i neste trinn.
IR (NaCl, film) Vmaks: 1800 (C=0 av syreklorid), 1740 (sh), 1705 og 1670 cm<-1> (sh).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,5-1,8 (m, 4H, CH2~3 og 4), 2,90 (s, 3H, NCH3), 2,9-3,0 (m, 2H, CH2~2) , 3,29 (t, 2H, CH2N), 4,55-4,6 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,15-5,35 og 5,8-6,0 ppm (2m, 2H og 1H, CH av allyl).
C. 2- Picolvl- 5-( N- allvloksvkarbonvl- N-metvlamino) tiolvalerat
En løsning av 20,5 g (0,164 mol) 2-picolylmerkaptan i 350 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 0°C og under nitrogen med 16,0 ml (0,197 mol) pyridin, etterfulgt av en løsning av 46,0 g (0,164 mol) 5-N-allyloksykarbonyl-N-metylaminovalerylklorid i 75 ml diklormetan tilsatt dråpevis i løpet av 10 minutter. Etter 1,5 time ved 0-5°C ble reaksjonsblandingen vasket med mettet natrium-bikarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsnings-midlet under redusert trykk ga en olje, som ble filtrert gjennom en 7,5 x 12 cm silicagelpute under eluering med en blanding av toluen og etylacetat (1:1). Inndampning av de UV-aktive frak-sjoner ga 48,4 g (92%) av tittelmaterialet som en klar olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 1700 og 1690 (sh) cm<-1>.
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 6: 1,5-1,7 (m, 4H, CH2~3 og 4), 2,61 (t, J=7,0 Hz, 2H, CH2-2) , 2,87 (s, 3H, NCH3) , 3,26 (t, J=6,6 Hz, 2H, CH2-5), 4,24 (s, 2H, CHoPvr), 4,55-4,6 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,15-5,3 og 5,9- 6,05 (2 m, 2H og 1H, H av allyl), 7,1-7,2 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,33 (d, J=7,8 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,62 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,5- 8,55 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
D. tert- butvldimetylsilylenoleter av 2- picolvl- 5-( N-allvloksvkarbonyl- N- metvlamino) tiolvalerat
En løsning av 51,3 g (0,159 mol) 2-picolyl-5-(N-allyloksykarbonyl-N-metylamino)tiolvalerat i 225 ml tørr diklor-metan ble avkjølt til -10°C og behandlet med 44 ml (0,315 mol) trietylamin etterfulgt av 56 ml (0,243 mol) tert-butyldimetyl-silyltri-fluormetansulfonat dråpevis i løpet av 40 minutter. Etter oppvarmning til 22°C ble løsningen omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 11 heksan og vasket med 3 x 300 ml kaldt vann. De kombinerte vandige vaske-væsker ble ekstrahert.med 300 ml heksan og de kombinerte orga-niske ekstrakter ble vasket med saltvann og tørket (MgS04). Etter behandling med aktivt kull ble løsnings-midlet avdampet under vakuum, hvorved det ble oppnådd rå silylenoleter som en mørk olje, som ble anvendt som vist i neste trinn Ifølge <1>H-NMR var produktet en 1:1 blan-ding av E- og Z-isomerer.
IR (NaCl, film) vmaks: 1705 cm-<1> (C=0 av karbamat).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 2,83 og 2,85 (2s, NCH3), 3,96 og 4,03 (2s, CH2Pyr), 4,85 (t, J=5 Hz, CH=CS0) og 5,0 ppm (bred t, CH=CSO).
E. ( 3S. 4S)- 3- r( l ' R )- 1'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvil- 4-f( 1R)- 1-( 2- pyridvl) metvltiokarbonvl- 4-( N-allyloksvkarbonyl- N- metvlamino) butyl! azetidin- 2- on
En 35,0 g (0,256 mol) suspensjon av fersk fremstilt zink-klorid i 400 ml tørr diklormetan ble ved 22°C tilsatt 36,5 g (0,127 mol) fast 4R-acetoksy-3S-[(1'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl] azetidin-2-on, etterfulgt av en løsning av 0,159 mol rå silylenoleter i 50 ml tørr diklormetan. Reaksjonsblandin-gen ble deretter omrørt ved 22°C i 18 timer. Blandingen ble der-etter vasket med vann, mettet ammoniumklorid, mettet natrium-bikarbonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsnings-midlet under redusert trykk ga en olje, som ble kromatografert på 15 x 12 cm silicagel. Eluering med en gradient av 50-100% etyl-acetat i toluen ga 34,16 g (49%) av tittelmaterialet som en olje. Ifølge <1>H-NMR var dette produkt en 84:16 blanding av B- og s-isomerer.
IR (NaCl, film) vmaks: 1765 (C=0 av B-lactam), 1705 (sh) og 1685 cm"<1> (C=0 av karbamat og tioester).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3, hovedisomer, B) 8: 0,04 (s, 6H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, Si-t-Bu), 0,97 (d, J=6,33Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,8 (m, 4H, CH2-2 og 3 av butyl), 2,83 (s, 3H, NCH3), 2,83 (m overlapping med NCH3, 1H, H-l av butyl), 3,03 (bredt, 1H, H-3), 3,1-3,4 (m, 2H, CH2N), 3,79 (dd, <J>H4,H3=1'96 Hz' JH4,H1=7'16 Hz' 1H' H-4>/ 4,1-4,25 (m, 1H, CH3CHO), 4,26 (s, 2H, CH2P<y>r), 4,55-4,6 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,15-5,35 (m, 2H, CH av allyl), 5,85-6,1 (m, 2H, NH og CH av allyl), 7,15-7,20 (m, 1H, H-5 av pyridin), 7,32 (d, J=7,78 Hz, 1H, H-3 av pyridin), 7,55-7,65 (m, 1H, H-4 av pyridin) og 8,5-8,55 ppm (m, 1H, H-6 av pyridin).
F. Imidazolid av ( 3S, 4S)- 3- r(!' R)- 1'- tert- butvldimetvl-silvloksvetyll- 4- r( IR)- l- karboksv- 4-( N-allvloksvkarbonvl- N- metylamino) butyl] azetidin- 2- on
En løsning av 13,56 g (31,6 mmol) (3S,4S)-3-[ (l'R)-l'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-[(IR)-l-karboksy-4-(N-allyloksy-karbonyl-N-metylamino)butyl]azetidin-2-on i 300 ml tørr aceto-nitril ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 5,64 g (34,8 mmol) 1,1-karbonyldiimidazol. Etter 3 timer ble løsningsmidlet avdampet under redusert trykk og det rå imidazolid ble anvendt som vist i neste trinn.
IR (NaCl, film) Vmaks: 1760, 1740 og 1700 cm"<1>.
G. ( 3S. 4S)- 3- r( l' R)- l'- tert- butvldimetvlsilvloksvetvn- 4-f( IR)- l- karboksv- 4-( N- allvloksvkarbonvl- N-metvlamino) butvllazetidin- 2- on
En løsning av 32,16 g (58,5 mmol) (3S,4S)-3-[(l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyethyl]-4-[(IR)-1-(2-pyridyl)metyltiokarbonyl-4-(N-allyloksykarbonyl-N-metylamino)butyl]azetidin-2-on i 250 ml tørr tetrahydrofuran ble behandlet dråpevis ved 0-5°C med 20 ml (0,23 mol) 30% hydrogenperoksid (tilsetningstid 5 minutter), etterfulgt av 64 ml (64,0 mmol) IN vandig natrium-hydroksid (tilsetningstid 20 minutter). Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved 22°C 1 time. Deretter ble 500 ml heksan tilsatt, og blandingen ble omrørt i ytterligere 10 minutter. Den vandige fase, som ble dannet, ble oppsamlet og den organiske fase ble ekstrahert med 100 ml 0,1N natriumhydroksid. De kombinerte vandige ekstrakter ble avkjølt til 0-5°C, forsuret til pH 2 med konsentrert saltsyre og ekstrahert med 2 x 350 ml etylacetat. De kom-binerte organiske ekstrakter ble vasket med IM natrium-bisulfit, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmid-let under redusert trykk ga 13,56 g (52%) av den rå tittelsyre som et skum. <1>H-NMR indikerte en 8:2 blanding av B- og s-isomerer.
IR (NaCl, film) vmaks: 1740 (C=0 av B-lactam) og 1700 (bred, C=0 av karbamat og syre).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 0,05 og 0,06 (2s, 6H, SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si-t-Bu), 1,15 (d, J=6,30 Hz, 3H, CH3CHO), 1,4-1,8 (m, 4H, CH2-2 og 3 av propyl), 2,6-2,7 (m, 1H, H-l av butyl), 2,89 (s, 3H, NCH3), 3,12 (bred t, 1H, H-3), 3,2-3,5 (m, 2H, CH2N), 3,86 (dd, <J>H4,H3=1'84 H<z>'<J>H4,H1=6'38 Hz' 1H' H-4), 4,19 (dq, JH,CH3=6,30, JH,H3=3'8 Hz' 1H' CH3CHO), 4,55-4,6 (m, 2H, CH2 av allyl), 5,15-5,35 og 5,8-6,05 (2m, 2H og 1H, CH av allyl) og 6,53 ppm (bred s, 1H, NH).
H. ( 3S, 4R)- 3- r( l' R)- l/- tert- butvldimetvlsilvloksvetvl1- 4-U ( IR)- 1- r( 3- N- allvloksvkarbonvl- N- metvlamino) propyll- 3-allvloksvkarbonvl- 2- oksopropvlBazetidin- 2- on
En løsning av 31,6 mmol rå imidazol i 50 ml tørr acetonitril ble tilsatt en blanding av 16,0 g (51,5 mmol) magnesiummonoallyl-malonat i 300 ml tørr benzen, og den resulterende blanding ble holdt ved 65°C i 16 timer. Den avkjølte reaksjonsblanding ble deretter fortynnet med 500 ml etylacetat, vasket med kald IN vandig saltsyre, mettet natriumbikarbonat og saltvann. Etter tørking (MgS04) ble den organiske fase inndampet under redusert trykk og den resterende olje ble anvendt som vist på neste trinn. Kromatografi av en liten porsjon på silicagel (eluering toluen-etylacetat 9:1 til 1:1) ga tittelforbindelsen som en olje. <1>H-NMR indikerte en 1:1 blanding av keto- og enolform.
IR (NaCl, film) vmaks: 1760 (C=0 av B-lactam) og 1705 cm""1.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,05 og 0,06 (2s, SiCH3), 0. 86 (s, Si-t-Bu), 1,09 og 1,16 (2d, J=6,31 Hz, J=6,29 Hz, CH3CHO), 1,3-1,8 (m, CH2-1 og 2 av butyl), 2,1 (m, H-l av oksopropyl, ketoform), 2,88 (s, NCH3), 2,8-3,1 (m, H-3), 3,2-3.3 (m, CH2N), 3,55 (s, CH2-3 av oksopropylketoform), 3,82 (2 dd overlapping, H-4), 4,1 (m, 1H, CH3CHO), 4,57 og 4,63 (2m, CH2 av allyl), 5,08 (s, CH-3 av oksopropyl, enolform), 5,15-5.4 (m, CH av allyl) og 5,8-6,1 ppm (m, CH av allyl og NH).
1. ( 3S, 4R) - 3- f ( 1' R) - 1' - tert- butvldimetvlsilvloksvetvl] - 4-U( IR)- 1-[( 3- N- allvloksvkarbonvl- N- metvlamino) propyl]- 3-allvloksvkarbonyl- 3- diazo- 2- oksopropvlBazetidin- 2- on
En løsning av 31,6 mol (rått fra det foregående trinn)
(3S, 4R)-3-[ (l'R)-1'-tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-{ (1R)-1-[(3-N-allyloksykarbonyl-N-metylamino)propyl]-3-allyloksykarbonyl-2-oksopropyl}azetidin-2-on i 100 ml acetonitril ble avkjølt til 0-5°C og behandlet med en løsning av 6,45 g (32,7 mmol) p-toluen-sulfonylazid i 35 ml acetonitril. Deretter ble 4,6 ml (33,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter, og den resulterende blanding ble omrørt i 45 minutter ved 22°C. Løsningsmidlet ble deretter avdampet under redusert trykk, og resten ble triturert med en blanding av dietyleter og heksan (1:1, 100 ml). Det krystalliske p-toluensulfonamid ble oppsamlet ved filtrering og vasket med en
blanding av dietyleter og heksan (1:1). Filtratet og vaskevæsken ble inndampet under redusert trykk, hvorved det ble oppnådd det rå diazoazetidinon, som ble anvendt som vist på neste trinn. Rensning av en liten porsjon på silicagel (eluering toluen: etylacetat 1:1) ga tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 2140 (N2), 1760 (C=0 av p— lactam), 1710 og 1650 cm"<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 0,05 og 0,06 (2s, 6H, SiCH3), 0,86 (s, 9H, Si-t-Bu) , 1,15 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,3-1,9 (m, 4, CH2-1 og 2 av propyl), 2,87 (s, 3H, NCH3), 3,03 (m, 1H, H-3), 3,23 (bredt, J=6,7 Hz, CH2N), 3,84 (dd, <J>h4,H3=2'09 Hz, JH4,H1=5'51 Hz' 1H' H"4>/ 4,0-4,15 (m, 1H, H-l av oksopropyl), 4,15-4,25 (m, 1H, CH3CHO), 4,5-4,6 og 4,7-4,8 (2m, 2 x 2H, CH2 av allyl), 5,1-5,3 (m, 4H, CH av allyl) og 5,8-6,1 ppm (m, 3H, CH av allyl og NH) .
J. ( 3S, 4R)- 4-{ ( IR)- 1- r( 3- N- allvloksvkarbonyl- N-metvlamino) propyll- 3- allvloksykarbonvl- 3- diazo- 2-oksopropyl)- 3- r( l ' R )- 1'- hydroksyetyl] azetidin- 2- on
En løsning av 31,6 mmol (rått fra det foregående trinn)
(3S, 4R)-3-[<1'R)-1'tert-butyldimetylsilyloksyetyl]-4-{(1R)-1-[(3-N-allyloksykarbonyl-N-metylamino)propyl]-3-allyloksykarbonyl-3-diazo-2-oksopropyl}-azetidin-2-on i 175 ml etanol ble avkjølt til 0-5°C og behandlet med 100 ml IN vandig saltsyre. Etter 18 timer ved 5°C ble pH innstilt til 6 med fast natriumbikarbonat og etanolen ble avdampet under redusert
trykk. Resten ble fortynnet med 300 ml etylacetat og den organiske fase ble vasket med 0,2 M pH 7,0 fosfatbuffer og saltvann. Etter tørking (MgS04) ble løs-ningsmidlet avdampet under redusert trykk og resten ble kromato-grafert på 9 x 11 cm silicagel. Eluering med en blanding av toluen og etylacetat (1:1) ga 5,92 g (43%, utbytte for 5 trinn fra syren) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) Vj^g: 3450 og 3280 (bred OH og NH), 2140 (N2), 1755 (C=0 av B-lactam), 1700 (bred) og 1645 cm"<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,29 (d, J=6,33 Hz, 1H, CH3CHO), 1,4-1,8 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 2,88 (s, 3H, NCH3), 2,9 (bred, 1H, H-3), 3,1-3,4 (m, 2H, CH2N), 3,80 (dd, <J>H4/H3=1,98 Hz, Jh4,H1=6'95 Hz' 1H' h~4)' 3,9-4,0 (m, 1H, H-l av oksopropyl), 4,1 (m, 1H, CH3CHO), 4,55-4,6 og 4,7-4,75 (2m, 2 x 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,45 og 5,9-6,1 (2m, 4H og 2H, CH av allyl) og 6,6 ppm (bred s, NH).
K. Allvl-( 2R. 4R. 5R. 6S)- 4-\( 3"- N- allvloksvkarbonvl- N-metylamino) propyl1- 6- r( l' R)- 1'- hvdroksvetvll- 3, 7- diokso-1- azabicvclo r 3, 2, 01heptan- 2- karboksylat
En løsning av 2,00 g (4,58 mmol) (3S,4R)-4-{(IR)-1-[(3-N-allyloksykarbonyl-N-metylamino)propyl]-3-allyloksykarbonyl-3-diazo-2-oksopropyl}-3-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]azetidin-2-on i 80 ml tørr benzen ble oppvarmet under tilbakekjøling i nærvær av 0,050 g rhodiumoctanoatdimer i 30 minutter. Løsningsmidlet ble avdampet under redusert trykk og det bicykliske tittelprodukt ble anvendt som vist i neste trinn.
IR (NaCl, film) Vmaks: 3450 (OH), 1762 (C=0 av B-lactam), 1645 (sh) og 1690 cm-<1>.
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 5: 1,43 (bred d, J=6,l Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 4H, CH2~1 og 2 av propyl), 2,9 (m, 1H, H-4 av propyl), 2,92 (s, 3H, NCH3), 3,1-3,4 (m, 3H, H-6 og CH2N), 4,1-4,3 (m, 1H, CH3CHO), 4,3 (bred dd, 1H, H-5), 4,56 og 4,66 (2m, 2 x 2H, CH2 av allyl), 5,15-5,4 og 5,8-6,15 ppm (2m, 4H og 2H, CH av allyl).
L. Allvl-( 4R, 5S, 6S)- 4- f( 3"- N- allvloksvkarbonvl- N-metvlamino) propyl1- 3- r( 2- cvanoetvl) tiol- 6- f( l' R)- 1'-hydroksvetyl1- 7- okso- l- azabicvclo[ 3, 2. 01hept- 2- en- 2-karboksvlat
En 4,58 mmol løsning av den rå bicykliske keton fremstilt i trinn K i 40 ml tørr acetonitril ble behandlet ved 0-5°C og under nitrogen med 1,04 ml (5,02 mmol) difenylklorfosfat og 0,88 ml (5,06 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt samtidig i løpet av 2 minutter. Et lite krystall av 4-N,N-dimetylaminopyridin ble tilsatt, og blandin-gen ble omrørt i 45 minutter. Deretter ble ytterligere 0,80 ml (4,60 mmol) N,N-diisopropyletylamin tilsatt, etterfulgt av en løsning av 0,40 g (4,60 mmol) B-merkaptopropio-nitril i 2 ml acetonitril, og den resulterende blanding ble omrørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble deretter fortynnet med 300 ml etylacetat, vasket med kaldt vann, mettet natriumbikar-bonat, saltvann og tørket (MgS04). Avdampning av løsningsmidlet under redusert trykk ga en olje, som ble kromatografert på 5 x 10 cm silicagel. Eluering med en gradient av etylacetat i toluen (1:1 til EtOAc) ga 1,45 g (67%) av tittelforbindelsen som en olje.
IR (NaCl, film) vmaks: 3450 (OH), 2250 (CN), 1775 (C=0 av B-lactam) og 1700 cm<-1> (C=0 av ester og karbamat).
<1>H-NMR (200 MHz, CDCI3) 8: 1,44 (bred d, J=6,0 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 4H, CH2"1 og 2 av propyl), 2,67 (bred t, 2H, SCH0CH0CN), 2,94 (s, 3H, NCH3), 2,9-3,5 (m, 4H, H-6, H-4 og CH2N), 4,06 (m, 1H, CH3CHO), 4,28 (dd, Jh5,H6=2'78 Hz' JH5, H4=9,79 Hz, 1H, H-5), 4,57 og 4,76 (2m, 2 x 2H, CH2 av allyl), 5,2-5,5 og 5,8-6,1 ppm (2m, 4H og 2H, CH av allyl).
M. ( 4R. 55. 6S)- 3- r ( 2- cvanoetvl) tiol- 6- T ( l ' R )- l '-hvdroksvetvll- 4-( 3"- N- metvlaminopropvl)- 7- okso- l-azabicvclo r 3, 2, 01hept- 2- en- 2- karboksvlsvre
En løsning av 0, 760 g (1,59 mmol) allyl-(4R,5S, 6S)-4-t(3"-N-allyloksykarbonyl-N-metylamino)propyl]-3-[(2-cyanoetyl)tio]-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyclo [3, 2, 0] hept-2-en-2-karboksylat i 25 ml tørr diklormetan ble behandlet ved 22°C og under nitrogen med 1,0 ml (9,23 mmol) N-metylanilin, etterfulgt av 0,060 g tetrakis(trifenylfosfin)palladium [0]. Etter 3 timer ble reaksjonsblandingen ekstrahert med 2 x 25 ml vann og 35 ml 0,05M pH 6,0 fosfatbuffer. Den kombinerte vandige ekstrakt ble kromatografert på 3 x 13 cm reversfasesilicagel under eluering med en gradient av 0-10% acetonitril i vann. Lyofilisering av de første fraksjoner ga 0,156 g (27%) av tittelforbindelsen som et hvitt, amorft faststoff: [a] 22D + 57,9° (c 1,0, vann).
Renhet ved HPLC: 99,7% på 3,9 mm x 30 cm, "u-Bondapak Cl8", eluering 5% CH3CN-H20 pH 7,4 fosfatbuffer, strømningshastighet 0,7 ml/min, UV-detektor 302 nm, retensjonstid 6,37 min.
UV (vann pH 7,4 fosfatbuffer) ^maKS: 300 nm (9.050).
IR (KBr) vmaks: 2250 (CN), 1755 (C=0 av B-lactam) og 1590 cm"<1> (C=0 av karboksylat).
<1>H-NMR (200 MHz, D20) 8: 1,33 (d, J=6,35 Hz, 3H, CH3CHO), 1,5-2,0 (m, 4H, CH2-1 og 2 av propyl), 2,72 (s, 3H, CH3N), 2,75-2,9 (m, 2H, SCHoCHoCN), 2,9-3,25 (m, 2H, CH2N), 3,40 (dd, JH6/H5=2'61 Hz' JH6,H1=6'53 Hz' 1H' H~6) ' 3'42 (m overlapping med H-6, 1H, H-4) og 4,2- 4,35 ppm (m, 2H, H-5 og CH3CHO overlapping).

Claims (1)

1. Analogifremgangsmåte til fremstilling av en terapeutisk aktiv 4-substituert alkylkarbapenemforbindelse med formel (I)
hvor R<1> er
A er en usubstituert eller hydroksysubstituert, ufor
grenet eller forgrenet C-^-^ø-alkylengruppe ©Her ©n uforgrenet eller forgrenet C^_^Q-alkylengruppe,
hvori det inngår et mellomliggende heteroatom valgt blant oksygen, svovel og nitrogen,
R<2> er hydroksy, halogen, nitril, azido,
r c en kvaternær ammoniumgruppe, -NRaR ,
azetidinyl
eller
B er en uforgrenet eller forgrenet C-^.g-alkylengruppe
eller en direkte binding, når R<3> er bundet til svovelatomet via et karbonatom deri,
R<3> er hydroksy, nitril, C1_g-alkyl, halogen, fenyl,
NR<5>'R<6>',
eller en heterocyklisk gruppe, hvor bindingen går til et karbonatom deri, valgt blant pyridin, 1,2,3-triazol, imidazol, piperidin, 1-tia-2,3-diazol eller azetidin, og de heterocykliske grupper kan eventuelt være substituert med C]__4-alkyl, eller R<3> er pyrrolidin som eventuelt er substituert med C(=0)N(CH3)2,
C / Cl
R og R° er hver uavhengig hydrogen, eller C-^g-alkyl, eller
Cf Cl
Br og R° sammen med nitrogenatomet som de bundet til, danner en pyrrolidinring,
R<4> er hydrogen, Na eller K,
R<5> og R^ er hver uavhengig hydrogen eller C^g-alkyl, og når R<5> er hydrogen eller C1_4-alkyl/ er R<6> substituert Cj^-alkyl hvor alkylsubstituenten er valgt blant nitril og fenyl, eller P-klor-L-alanyl-8-klor-L-alanyl, L-alanyl eller L-alanyl-L-alanyl, eller R^ og R^ utgjør sammen med det nitrogenatom hvortil de er bundet, en usubstituert eller substituert heterocyclisk ring valgt blant pyrrolidin, piperazin, pyridin, imidazol, 2,5-pyrrolidindion eller morfolin, hvilken substituent er valgt blant C1_4-alkyl,
W er en direkte binding, oksygen, eller NR^,
Y er oksygen eller NR1^,
Z er hydrogen, hydroksy, C1_4-alkyl, -NR<7>R8,
amino(C1_4)alkyl, eller azido(C1_4) alkyl,
R<7> og R<8> er hver uavhengig hydrogen, C1_4-alkyl, og
R1<0> er hydrogen, <C>1_4-alkyl, eller di( Ci-^)alkylamino,
eller et ikke-toksisk farma-søytisk akseptabelt salt derav,
under forutsetning av at AR<2> ikke kan være hydrok-symetyl, metoksymetyl, metyltiometyl, fluormetyl eller klor-metyl, når B er en direkte binding, og R<3> er en heterocyklisk gruppe,
karakterisert ved
at man (a) omsetter en forbindelse med formel (Xla)
hvor R<11> er
eller A har den ovenfor angitte betydning,
P<1> er en karboksybe-skyttende gruppe, valgt blant
CH-CH=CH2 og p-nitrobenzyl,
R1<2> er hydroksy, azido, 0-P<3> eller N-P<4>,
P<2> og P<3> er hver uavhengig en hydroksybeskyttende gruppe,
valgt blant tert.-butyldimetylsilyl eller trimetylsilyl
P<4> er -C(=0)-0-CH2-CH=CH2, og
L<1> er oksygen eller 0-P(=0)(0Ph)2
med en forbindelse med formelen
hvor B og R<3> hver har den ovenfor anførte betydning, hvorved det oppnås en forbindelse med formel (Xllla)
hvor R<11>, R<1>2, R<3>, A, B og P<1> hver har den ovenfor anførte betydning, eller (b) omsetter en forbindelse med formel (XVI) hvor R<3>, R<11>, A, B og P<1> hver har den ovenfor anførte betydning, og L<2> er trifluormetansulfonyl,
med et passende nucleofil, hvorved det oppnås en
forbindelse med formel (XVIIa)
hvor R<3>, R<11>, A, B og P<1> hver har den ovenfor anførte betydning, og R<13> er azido, -NR<5>R^,
eller nitril, hvor R<5>, R^, Y og Z hver har den ovenfor anførte betydning,
eller (c) omsetter en forbindelse med formel (XVIIIa), som eventuelt inneholder en konvensjonell hydroksy-, amino- eller
karboksybeskyttende gruppe
hvor R<3>, R<11> og P<1> hver har den ovenfor anførte betydning, og R1* er hydrogen eller C1_4-alkyl, eller et salt derav, med et passende imidoylerings-, acylerings- eller alkyleringsmiddel, hvorved det oppnås en forbindelse med formel (XVIIIb)
hvor
R<3>, R<11>, P<1> og R<1>^ hver har den ovenfor anførte betydning,
og R17 er <C>1_4<->alkyl, eller
hvor Y og Z hver har den ovenfor anførte betydning,
og
eventuelt fjerner man en beskyttende gruppe, eller at det av produktet fra trinn (a), (b) eller (c) dannes en kvaternær forbindelse eller at produktet forestres, eller produktet omdannes til et salt til fremstilling av en forbindelse med formel (I).;2. Fremgangsmåte ifølge krav 1 for fremstilling av forbindelser der R<2> er nitril, azido, en kvaternær ammoniumgruppe, -NR<5>R<6> eller
karakterisert ved at man omsetter de tilsvarende utgangsmaterialer.;3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2 til fremstilling av (4R,5S,6S)-3-[(2-cyanoetyl)tiol]-4-(2"-guanidinoetyl)-6-[(1'R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyklo[3.2.0]hept-2-en-2-karboksylsyre, karakterisert ved
at man omsetter de tilsvarende utgangsforbindelser.;4. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2 til fremstilling av (4R, 5S, 6S)-4-(2"-guanidionetyl)-3-[(2-guanidionetyl)tiol]-6-[(1' R)-1'-hydroksyetyl]-7-okso-l-azabicyklo[3.2.0]hept-2-en-2-karboksylsyre, karakterisert ved
at man omsetter de tilsvarende utgangsforbindelser.*
NO905215A 1989-12-04 1990-12-03 Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktive 4-substituerte alkylkarbapenemforbindelser NO177640C (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US44601789A 1989-12-04 1989-12-04
US61392190A 1990-11-20 1990-11-20

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO905215D0 NO905215D0 (no) 1990-12-03
NO905215L NO905215L (no) 1991-06-05
NO177640B true NO177640B (no) 1995-07-17
NO177640C NO177640C (no) 1995-10-25

Family

ID=27034476

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO905215A NO177640C (no) 1989-12-04 1990-12-03 Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktive 4-substituerte alkylkarbapenemforbindelser

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0433759A1 (no)
KR (1) KR910011856A (no)
AU (2) AU643735B2 (no)
CA (1) CA2031487A1 (no)
FI (1) FI96311C (no)
HU (1) HU213265B (no)
IE (1) IE904348A1 (no)
IL (1) IL96528A (no)
NO (1) NO177640C (no)
NZ (1) NZ236319A (no)
OA (1) OA09333A (no)
PT (1) PT96080B (no)
YU (1) YU229290A (no)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5672701A (en) * 1990-01-16 1997-09-30 Bristol-Myers Squibb Company 4-substituted alkyl carbapenem antibiotics
US5317016A (en) * 1991-08-20 1994-05-31 Shionogi Seiyaku Kabushiki Kaisha Pyrrolidylthiocarbapenem derivative
NO20015844L (no) 2001-11-30 2003-06-02 Arne Kristiansen Anordning for å produsere et trykkpotensial over et legeme
US9580427B2 (en) 2011-05-17 2017-02-28 The Regents Of The University Of California Kinase inhibitors

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4312871A (en) * 1979-12-03 1982-01-26 Merck & Co., Inc. 6-, 1- And 2-substituted-1-carbadethiapen-2-em-3-carboxylic acids
JPS60202886A (ja) * 1984-03-27 1985-10-14 Sankyo Co Ltd １―置換カルバペネム―３―カルボン酸誘導体
CA1272719A (en) * 1986-03-06 1990-08-14 Pierre Dextraze Carbapenem antibiotics
US4960879A (en) * 1988-03-23 1990-10-02 Shionogi & Co., Ltd. Process for carbapenem intermediates
US5189158A (en) * 1991-03-20 1993-02-23 American Cyanamid Company 4-substituted azetidinones as precursors to 2-substituted-3-carboxy carbapenem antibiotics and a method of producing them

Also Published As

Publication number Publication date
AU6768890A (en) 1991-06-06
KR910011856A (ko) 1991-08-07
FI96311B (fi) 1996-02-29
HUT56371A (en) 1991-08-28
HU213265B (en) 1997-04-28
NZ236319A (en) 1994-02-25
FI905912A0 (fi) 1990-11-30
AU4611793A (en) 1993-12-02
HU908046D0 (en) 1991-06-28
AU661192B2 (en) 1995-07-13
YU229290A (sh) 1993-05-28
AU643735B2 (en) 1993-11-25
IE904348A1 (en) 1991-06-05
EP0433759A1 (en) 1991-06-26
PT96080B (pt) 1998-02-27
CA2031487A1 (en) 1991-06-05
PT96080A (pt) 1991-09-30
NO905215D0 (no) 1990-12-03
FI96311C (fi) 1996-06-10
NO177640C (no) 1995-10-25
FI905912A (fi) 1991-06-05
NO905215L (no) 1991-06-05
OA09333A (fr) 1992-09-15
IL96528A (en) 1996-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4925838A (en) 3-pyrrolidinylthio-1-azabicyclo[3.2.0]-hept-2-ene-2-carboxylic acid compounds
US4963544A (en) 3-pyrrolidinylthio-1-azabicyclo[3.2.0]-hept-2-ene-2-carboxylic acid compounds
US5081237A (en) 3-alkenyl-1-azabicyclo[3.2.0]hept-2-ene-2-carboxylic acid compounds
EP0337637A1 (en) 2-(Heterocyclylthio)carbapenem derivatives their preparation and their use as antibiotics
US5608056A (en) Substituted 3-pyrrolidinylthio-carbapenems as antimicrobial agents
HU201762B (en) Process for producing 3-pyrrolidinylthio-1-azobicyclo(3.2.0)hept-2-en-2-carboxylic acid derivatives
US5589473A (en) Mono- and bicyclic DNA gyrase inhibitors
RU2247725C2 (ru) Производные 1-метилкарбапенема
RU2097383C1 (ru) Производные карбапенема и способ их получения
US5194624A (en) Intermediates for the preparation of compounds of antimicrobial activity
NO177640B (no) Analogifremgangsmåte til fremstilling av terapeutisk aktive 4-substituerte alkylkarbapenemforbindelser
EP1340756B1 (en) Novel beta-lactam compounds and process for producing the same
NZ247420A (en) Azetidine derivatives as intermediates in the preparation of carbapenams,
US5202437A (en) 3-pyrrolidinylthio-1-azabicyclo(3.2.0)-hept-2-ene-2-carboxylic acid compounds
JP2004043438A (ja) １−メチルカルバペネム誘導体を含有する医薬
EP0722447A1 (en) 3-pyrrolidinylthio-carbapenem derivatives and their antimicrobal activity