FI95274B - HIV-1:een liittyvät polypeptidit, diagnostiset systeemit ja analyysimenetelmät - Google Patents
HIV-1:een liittyvät polypeptidit, diagnostiset systeemit ja analyysimenetelmät Download PDFInfo
- Publication number
- FI95274B FI95274B FI891898A FI891898A FI95274B FI 95274 B FI95274 B FI 95274B FI 891898 A FI891898 A FI 891898A FI 891898 A FI891898 A FI 891898A FI 95274 B FI95274 B FI 95274B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- polypeptide
- hiv
- amino acid
- polypeptides
- immunoreaction
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 224
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 216
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 209
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 35
- 238000003556 assay Methods 0.000 title description 10
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 title description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 57
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 claims description 51
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 48
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 42
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 29
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 28
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 28
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 27
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 25
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 20
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 19
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 claims description 16
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 14
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 12
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 claims description 12
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 12
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 10
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 8
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 6
- -1 amino acid ester Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 2
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 claims 7
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims 6
- 239000000834 fixative Substances 0.000 claims 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 claims 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 claims 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 43
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 17
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 10
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 101710112672 Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 8
- 101710204224 Tape measure protein Proteins 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 6
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 3
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 3
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 3
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 2
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000535712 Mindium Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241001529934 Simian T-lymphotropic virus 3 Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 description 1
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- FCZCIXQGZOUIDN-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-diethoxyphosphinothioyloxyacetate Chemical compound CCOC(=O)COP(=S)(OCC)OCC FCZCIXQGZOUIDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- BRHPBVXVOVMTIQ-ZLELNMGESA-N l-leucine l-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@H](N)C(O)=O BRHPBVXVOVMTIQ-ZLELNMGESA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 230000001459 mortal effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000379 polypropylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 238000001814 protein method Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical compound ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
95274 HIV-1 reen liittyvät polypeptidit, diagnostiset systeemit ja analyysimenetelmät 5 Esillä oleva keksintö tarkastelee uusia polypeptidiantigee-nejä, jotka liittyvät ihmisen immuunikatovirustyyppi lreen (HIV-1) ja niiden käyttöön diagnostisissa systeemeissä ja analyysimenetelmissä.
10 Hankittu immuunikato-oireyhtymä (AIDS) on nyt levinnyt maailmanlaajuiseksi ja näyttää olevan akuutti yleinen terveysongelma erityisesti Afrikassa. Retroviruksen, joka on nimitetty ihmisen immuunikatovirustyyppi lrksi (HIV-l), mutta joka aikaisemmin tunnettiin LAVrna, HTLV-liima tai ARVma, 15 osoitettiin olevan AIDS:in aiheuttaja epidemioiden vaivaamilla eri alueilla, kuten Pohjois-Amerikassa, Länsi-Euroo-passa ja Keski-Afrikassa.
HIV-l:n molekyylitason tutkimukset ovat paljastaneet joi-20 tain eroja Pohjois-Amerikan ja Keski-Afrikan isolaattien välillä. Kuitenkin pohjoisamerikkalaisilla, länsieurooppalaisilla ja keskiafrikkalaisilla isolaateilla näyttää olevan samanlaiset biologiset ominaisuudet ja antigeenisesti ristiinreagoivat proteiinit, joiden suhteelliset molekyy-25 limassat ovat samat.
HIV-l:llä infektoituneet yksilöt kehittävät vasta-aineita gag-geenin koodaamia viruksen ytimen proteiineja, jotka on nimitetty pl9:ksi ja p24:ksi ja niiden prekursoriproteiine-30 ja, jotka on nimitetty p55:ksi, vastaan. Lisäksi on havaittu vasta-aineita env-geenin koodaamia vaipan glykoprote-iineja gpl20 (solun ulkopuolinen glykoproteiini tai EGP), gp41 (transmembraaninen proteiini tai TMP) ja niiden pre-kursoriglykoproteiineja, jotka on nimitetty gpl60:ksi, vas-35 taan.
Monilta AIDS-potilailta katoavat HIV-l:n ydinproteiinien vasta-aineet sairauden edettyä pitkälle, mutta heillä säi- 95274 2 lyvät vaippa-antigeeneine immunoreaktiiviset vasta-aineet. Vaippatuotteita havaitaan säännöllisesti HIV-infektion eri vaiheissa olevien potilaitten seerumin vasta-aineina. Vaikka saatavilla on vain muutamia raportteja koskien HIV-l:een 5 liittyvää seerumimuutosta, vaippaproteiinien vasta-aineet näyttävät ilmaantuvan hiukan ennen ydinproteiinien vasta-aineiden ilmaantumista. Katso Carlson ym., Lancet, i:361-362, (1987). Näistä syistä env-geenin tuotteita edustavien antigeenien käytöllä on suuri merkitys AIDS:iin liittyvien 10 retrovirusaltistusten diagnosoinnissa.
Koska AIDS voi levitä verivalmisteiden välityksellä, taudin tunnistuksen alkuajoista asti on voimakkaasti yritetty kehittää diagnostisia testejä, joilla voitaisiin seuloa ve-15 restä infektoivalle virukselle tyypillisiä vasta-aineita ja antigeenejä. Yritykset tällä alueella ovat kantaneet hedelmää ja vuoden 1985 loppuun mennessä viidelle yritykselle on myönnetty lupa markkinoida HIV-l-viruksen vasta-aineiden havaitsemiseen perustuvia testejä. Kaikki nämä testit pe-20 rustuvat näiden vasta-aineiden havaitsemiseen käyttämällä virusproteiineja, jotka on saatu viljellyistä HIV:11a in-fektoiduista T-lymfosyyteistä. Viljellyistä soluista saatu virus rikotaan (esim. detergentillä) ja tuloksena on neste (jota kutsutaan "viruslysaatiksi"). Tätä lysaattia (joka 25 sisältää joukon virus- ja soluproteiinien fragmentteja) käytetään sitten tyypillisesti immunoanalyysin kiinteän faasin komponenttina.
Vaikka olemassa olevat testit näyttävät huomattavasti vä-30 hentäneen verituotteiden välityksellä tapahtuvaa HIV-l:n leviämistä, viruslysaattiin perustuvilla testeillä näyttää olevan joitakin merkittäviä haittapuolia, kuten suuri väärien positiivisten tulosten määrä. Väärien positiivisten tulosten arvellaan osaksi johtuvan nykyisten analyysien 35 kiinteässä faasikomponentissa käytetyissä viruslysaattival-misteissa olevista ei-viraalisista proteiineista.
95274 3
Yritettäessä vähentää väärien positiivisten tulosten määrää on alettu käyttää kohdesuunnattuja serologisia analyysejä, joissa käytetään synteettisiä polypeptidejä, jotka muistuttavat virusproteiineissa esiintyviä luonnollisia antigeeni-5 determinantteja. Esimerkiksi Cosandille myönnetty US-pa-tentti 4 629 783, Wang ym., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 83:6159-6163 (1986) ja Kennedy ym., Science, 231:1556-1559 (1986), kuvaa useita polypeptidejä, joiden sanotaan voivan jäljitellä eri HIV-l-proteiinien, myös TMP:n (gp41), muo-10 dostamia antigeenideterminantteja.
Tarkemmin sanottuna Cosandille myönnetyssä patentissa kuvataan 26 aminohapon polypeptiditähde, joka on nimitetty po-lypeptidi 39:ksi, jonka sekvenssi oli saatu Wain-Hobsonin 15 ym., Cell, 40:9-15 (1985), kuvaamaan HIV-l-isolaatin TMP- sekvenssistä. Cosandin patentti sisältää havaintoja, joiden mukaan polypeptidi 39 voisi tunnistaa vasta-aineita, jotka HIV-1-TMP on indusoinut tuntematonta maantieteellistä alkuperää olevissa seerumeissa.
20
Wangin ym., supra, raportoima peptidi numero 8 sisältää 21 aminohapon tähteet, jotka vastaavat sekvenssiltään Ratnerin ym., Nature, 313:277-284 (1985), raportoimia HIV-1-sekvenssiin TMP-tähteitä 586-606. Wangin ym. mukaan polypeptidi 8 25 voi tunnistaa anti-HIV-l-TMP-vasta-aineita, jotka on kerät-; ty yhdysvaltalaisten seerumeista. Lisäksi Wang ym. rapor toivat, että polypeptidi 8:n analogit, joissa väliini on pysyvästi korvautunut isoleusiinilla kohdassa 587 ja ar-giniini lysiinillä kohdassa 596, niin kuin tietyissä vi-30 rusisolaateissa on todettu, eivät paljon vaikuttaneet ihmisen vasta-aineiden sitoutumiseen näihin analogeihin.
Myöhemmin Gnann ym., J. Infect. Dis., 156-267 (1987), raportoivat, että Wileyn ym., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 35 83:5038 (1986), TMP-aminohappotähteen sekvenssistä johdettu polypeptidi voi tunnistaa anti-HIV-l-TMP-vasta-aineita käytännöllisesti katsoen 100 %:sta amerikkalaisten AIDS-poti- 95274 4 laiden seerumeita, mutta voi tunnistaa samoja vasta-aineita vain noin 84 %:sta zairelaisia AIDS-potilaita.
FI-hakemuksessa 865313 esitetyt peptidit eroavat esillä 5 olevan keksinnön mukaisista peptideistä oleellisesti, ja lisäksi ne immunoreagoivat HIV-2-viruksen indusoimien vasta-aineiden kanssa, kun taas esillä olevan keksinnön mukaiset peptidit immunoreagoivat HIV-1-viruksen indusoimien vasta-aineiden kanssa.
10
On keksitty kaksi spesifistä polypeptidiä, joilla on parannettu kyky tunnistaa anti-HIV-1-vasta-aineita keskiafrikkalaisten kudosnäytteistä. Näin ollen esillä olevassa keksinnössä tarkastellaan polypeptidiä, jonka keskeisenä osana 15 ovat 12 aminohappotähdettä, joiden sekvenssi voidaan esittää seuraavan kaavan muodossa: LGZWGCSGKHIC, 20 jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini.
Tarkastelun kohteena on myös yhdiste, joka käsittää ainakin kahden polypeptidin seoksen, jossa ensimmäisellä polypep-tidillä on seuraavan kaavan mukainen aminohappotähdesek-25 venssi: LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini, ja toinen poly-peptidi kykenee reagoimaan immunologisesti ihmisen immuuni-30 katoviruksen (HIV) indusoimien vasta-aineiden kanssa.
Tarkastelun kohteena on lisäksi menetelmä anti-HIV-1-vasta-aineiden läsnäolon analysoimiseksi kudosnestenäytteestä. Immunoreaktiivinen seos muodostuu, kun sekoitetaan kudos-35 nestenäyte seuraavan kaavan mukaisen polypeptidin kanssa: LGZWGCSGKHIC, 5 95274 jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini.
Immunoreaktiivista seosta pidetään biologisissa analyysi -olosuhteissa riittävän pitkä aika, jotta mitkä tahansa 5 liuoksessa olevat anti-HIV-1-vasta-aineet ehtivät reagoida polypeptidin kanssa ja muodostaa polypeptidiä sisältävän immunoreaktiotuotteen.
Sen jälkeen kaikki muodostuneet polypeptidiä sisältävät 10 immunoreaktiotuotteet määritetään ja siten myös kaikki mai nitussa näytteessä olevat anti-HIV-l-vasta-aineet.
Toisen toteutustavan mukaisessa menetelmässä anti-HIV-1-vasta-aineiden analysoimiseksi kudosnestenäytteestä valmis-15 tetaan immunoreaktioseos sekoittamalla kudosnestenäyte yhdisteeseen, joka käsittää ainakin kahden polypeptidin seoksen, jossa ensimmäisellä polypeptidillä on seuraavassa esitetyn kaavan mukainen aminohappotähdesekvenssi: 20 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini, ja toinen poly-peptidi on joko: 25 LGLWGCSGKLIC, LGIWGCSGKIIC tai NSWGCAFRQVC.
Tällä tavalla muodostettua immunoreaktioseosta pidetään 30 biologisissa analyysiolosuhteissa riittävän pitkä aika, jotta mitkä tahansa näytteessä olevat anti-HIV-l-vasta-ai-neet ehtivät reagoida immunologisesti yhdisteen sisältämän polypeptidin kanssa ja muodostaa polypeptidiä sisältävän immunoreaktiotuotteen.
Sen jälkeen kaikki polypeptidiä sisältävät immunoreaktiotuotteet määritetään ja siten myös kaikki näytteessä olevat anti-HIV-l-vasta-aineet.
35 6 95274
Tarkastelun kohteena on myös diagnostinen systeemi pakkausmuodossa kudosnestenäytteessä olevien anti-HIV-1-vasta-ai-neiden analysoimiseksi käsittäen paketin, joka sisältää seuraavan kaavan mukaisen polypeptidin: 5 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini.
10 Toisessa toteutustavassa pakkausmuodossa oleva diagnostinen systeemi kudosnestenäytteessä esiintyvien anti-HIV-1-vasta-aineiden analysoimiseksi käsittää paketin, joka sisältää ainakin kaksi polypeptidiä, jossa ensimmäinen polypeptidi on seuraavan kaavan mukainen: 15 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini; ja toinen poly-peptideistä on joko 20 LGLWGCSGKLIC, LGIWGCSGKLIC tai NSWGCAFRQVC.
25 A. Määritelmät I Aminohappo: Kaikki tässä identifioidut aminohappotähteet ovat luonnollisessa L-muodossa. Polypeptidien vakionimistön mukaisesti, J. Biol. Chem., 243:3557-59, (1969), aminohap potähteiden lyhennykset noudattavat seuraavaa vastaavuus-30 taulukkoa: ♦ 11 - 95274 7
Vastaavuustaulukko
Symboli Aminohappo l-kiriaiminen_3 -kiriaiminen_ 5 Y Tyr L-tyrosiini G Gly glysiini F Phe L-fenyylialaniini M Met L-metioniini A Ala L-alaniini 10 S Ser L-seriini I Ile L-isoleusiini L Leu L-leusiini T Thr L-treoniini V Vai L-valiini 15 P Pro L-proliini K Lys L-lysiini H His L-histidiini Q Gin L-glutamiini E Glu L-glutamiinihappo 20 W Trp L-tryptofaani R Arg L-arginiini D Asp L-aspartiinihappo N Asn L-asparagiini C Cys L-kysteiini 25 .. On tarpeellista huomauttaa, että kaikki aminohappotähdesek- venssit esitetään tässä kaavoina, joiden suunta vasemmalta oikealle vastaa tavanomaista suuntaa aminopäästä karboksi-päähän. Lisäksi on huomattava, että viiva aminohappotähde-30 sekvenssin alussa tai lopussa merkitsee sidosta toiseen sekvenssiin, joka voi käsittää yhden tai useamman aminohappotähteen kaiken kaikkiaan noin viiteenkymmeneen tähteeseen saakka polypeptidiketjussa.
35 Polypeptidi ja Peptidi: polypeptidi ja peptidi ovat termejä, joita tässä käytetään vaihtelevasti nimeämään lineaarista sarjaa korkeintaan noin 50 aminohappotähteestä, jotka 8 95274 on liitetty toisiinsa peptidisidoksin vierekkäisten tähteiden alfa-amino- ja karboksiryhmien välistä.
Proteiini: Proteiini on termi, jota tässä käytetään nimeä-5 mään lineaarista sarjaa yli 50 aminohappotähteestä, jotka on liitetty toisiinsa samalla tavalla kuin polypeptidissä-kin.
B. Polypeptidit 10 Tämän keksinnön mukainen polypeptidi käsittää keskeisenä osana 12 aminohappotähdettä, joiden sekvenssi on seuraavan kaavan mukainen LGZWGCSGKHIC, 15 jossa Z on joko isoleusiini (I) tai metioniini (M) .
Keksinnön peptidit sisältävät ainakin kaksi kysteiinitäh-dettä. Siitä seuraa, että kyseessä olevat peptidit voivat 20 esiintyä eri hapetusmuodoissa. Monomeerisen muodon lisäksi, jossa kysteiinitähteiden sulfhydryyliryhmä on pelkistynyt, voi olla olemassa myös dimeerisiä tai polymeerisiä muotoja, joissa kahden tai useamman peptidimolekyylin sulfhydryyli-ryhmät hapettuvat ja muodostavat peptidien välisiä ja si-25 säisiä disulfidisidoksia. Koska tämän keksinnön polypepti-- dit omaavat kaksi kysteiinitähdettä, ne voivat muodostaa syklisiä monomeereja tai lineaarisia tai syklisiä dimeerejä ja eri pituisia lineaarisia polymeerejä. Nämä eri hapetus-muodot sisältyvät osaksi esillä olevaa keksintöä ja luetaan 30 kuuluviksi termeihin "polypeptidit" ja "peptidit".
Tämän keksinnön mukainen polypeptidi voidaan syntetoida millä tahansa tekniikalla, jonka polypeptiditekniikkaan perehtynyt asiantuntija tuntee, käsittäen myös yhdistelmä-35 DNA-tekniikat. Synteettisen kemian tekniikat, kuten kiinte än faasin Merrifield-tyyppinen synteesi, ovat suositeltavia sellaisista syistä kuten puhtaus, antigeeninen spesifisyys, epätoivottujen sivutuotteiden puuttuminen, valmistamisen 11 ζΓ 07 £ '· dL. ί , 9 helppous ja muista vastaavista syistä. Erinomainen tiivistelmä monista käytettävissä olevista tekniikoista on kuvattu J. M. Stewardin ja J. D. Youngin teoksessa "Solid Phase Peptide Synthesis", W. H. Freeman Co., San Francisco, 1969; 5 M. Bodanszkyn ym. teoksessa "Peptide Synthesis", John Wiley & Sons, toinen painos, 1976 ja J. Meienhoferin teoksessa "Hormonal Proteins and Peptides", vol. 2, s. 46, Academic Press (New York), 1983, joissa kuvataan kiinteän faasin synteesiä, ja E. Schroderin ja K. Kubken teoksessa "The 10 Peptides", voi. 1, Academic Press (New York), 1965, jossa on kuvattu klassista liuossynteesiä, jotka kaikki edellä mainitut teokset on sisällytetty tähän viitteinä. Sopivia suojaavia ryhmiä, jotka ovat käyttökelpoisia sellaisissa synteeseissä, on kuvattu yllä mainituissa teksteissä ja 15 J. F. W. McOmien teoksessa "Protective Groups in Organic
Chemistry", Plenum Press, New York, 1973, joka on liitetty tähän viitteenä.
Yleisesti ottaen nämä menetelmät käsittävät yhden tai 20 useamman aminohappotähteen tai sopivalla tavalla suojattujen aminohappotähteiden peräkkäisen lisäämisen kasvavaan ketjuun. Normaalisti joko ensimmäisen aminohappotähteen amino- tai karboksyyliryhmä on suojattu sopivalla valikoivasti poistettavalla suojaavalla ryhmällä. Erilaista, vali-25 koivasti poistettavaa suojaavaa ryhmää käytetään aminoha- poille, jotka sisältävät reaktiivisen sivuryhmän, kuten ly-siinille.
Esimerkiksi kiinteän faasin synteesissä suojattu tai joh-30 dettu aminohappo on liitetty reagoimattomaan kiinteään alustaan suojaamattoman karboksyyli- tai aminoryhmän kautta. Amino-tai karboksyyliryhmää suojaava ryhmä poistetaan sen jälkeen valikoivasti ja sekvenssin seuraava aminohappo, jolla on komplementaarinen (amino- tai karboksyyli-) ryhmä, 35 joka on sopivalla tavalla suojattu, sekoitetaan ja sen annetaan reagoida olosuhteissa, jotka suosivat amidisidoksen syntyä, jo aikaisemmin kiinteään alustaan kiinnittyneen tähteen kanssa. Amino- tai karboksyyliryhmää suojaava ryhmä 10 95274 poistetaan sen jälkeen tästä juuri lisätystä aminohappotähteestä ja seuraava aminohappo (sopivasti suojattu) liitetään sen jälkeen jne. Kun kaikki halutut aminohapot on liitetty oikeassa järjestyksessä, kaikki jäljelle jäävät pää-5 te- tai sivuryhmiä suojaavat ryhmät (ja kiinteä alusta) poistetaan järjestyksessä tai samanaikaisesti lopullisen polypeptidin muodostamiseksi.
Tämän keksinnön mukaiset polypeptidit sisältävät noin 12 10 aminohappotähdettä lukuunottamatta tapauksia, joissa näiden lisäksi on liitetty tähteitä jompaankumpaan päähän, jotta aikaansaataisiin "liittäjä”, jonka avulla tämän keksinnön mukaiset polypeptidit voidaan helposti liittää leimaan tai kiinteään matriisiin tai kantajaan. Leimat, kiinteät mat-15 riisit ja kantajat, joita voidaan käyttää tämän keksinnön mukaisissa polypeptidideissä, on kuvattu jäljempänä.
Aminohappotähteen liittäjät käsittävät tavallisesti ainakin yhden tähteen ja voivat käsittää yli 40 tähdettä, useimmi-20 ten l:stä l0:een tähdettä eivätkä käsitä sekvenssejä, jotka muistuttavat AIDS:a indusoivia epitooppeja. Tyypillisiä liittämiseen käytettyjä aminohappotähteitä ovat tyrosiini, kysteiini, lysiini, glutamiini- ja aspartiinihappo tai muut niiden kaltaiset. Lisäksi tämän keksinnön mukainen polypep-25 tidisekvenssi voi erota luonnollisesta sekvenssistä sekvenssillä, joka on muokattu terminaalinen NH2-asylaatiolla, esim. asetyloinnilla tai tioglykolihappoaminaatiolla, terminaalisella karboksiaminaatiolla esim. ammoniumilla, me-tyyliamiinilla ja muilla sen kaltaisilla.
30
Kun tämän keksinnön mukainen polypeptidi on liitetty kan-• tajaan liittäjän avulla niin, että muodostuu tällä teknii kan alueella tunnettu kantaja-hapteenikonjugaatti, polypeptidi pystyy indusoimaan sellaisten vasta-aineiden syntyä, 35 jotka reagoivat immunologisesti HIV-l:n kanssa ja neutraloivat sitä.
Il - 95274 11 C. Polypeptidiseokset
Esillä olevan keksinnön tarkastelun kohteena on myös seos, joka käsittää ainakin kahden polypeptidin seoksen, jossa toisen polypeptidin aminohappotähdesekvenssi on seuraavan 5 kaavan mukainen: LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini (esim. valittu 10 p3:n ja p4:n ryhmästä, joita vastaavat aminohappotähdesek-venssit on kuvattu taulukossa 1). Toisella seoksessa esiintyvällä polypeptidillä on tyypillisesti aminohappotähdesekvenssi, joka vastaa osaa proteiinista viruksessa, joka ai-heutta AIDS:a tai liittyy siihen, kuten HIV-1, HIV-2 ja sen 15 kaltaiset, ja joka voi reagoida immunologisesti vasta-aineiden kanssa, joita mainittu proteiini indusoi. Mieluiten seos sisältää vielä lisäksi seoksena ainakin yhden polypep-tideistä pl, p2 ja/tai p5, joiden aminohappotähdesekvenssi on myös kuvattu taulukossa 1. Tyypillisesti eri polypepti-20 dit esiintyvät seoksessa ekvimolaarisinä määrinä.
Taulukko 1
Nimitys_Aminohappotähdesekvenssi_Virus pl LGLWGCSGKLIC HIV-1 25 p2 LGIWGCSGKLIC HIV-1 ·; p3 LGIWGCSGKHIC HIV-1 p4 LGMWGCSGKHIC HIV-1 p5 NSWGCAFRQVC HIV-2 30 D. Vasta-aineet ja vasta-aineseokset
Termiä "vasta-aine" käytetään tässä sen eri kielioppimuo-doissa viittaamaan immunoglobuliinimolekyyleihin ja niiden immunologisesti aktiivisiin osiin, ts. molekyyleihin, jotka sisältävät vasta-ainetta sitovan kohdan tai paratoopin.
35 Esimerkkejä vasta-ainemolekyyleistä ovat käsittelemättömät immunoglobuliinimolekyylit, keskeisiltä osiltaan käsittelemättömät immunoglobuliinimolekyylit ja ne osat immunoglobu-liinimolekyyliä, jotka sisältävät paratoopin, käsittäen - 95274 12 osat, jotka alalla tunnetaan Fab:nä, Fab':na, F(ab')2:na ja F(v):nä.
Tämän keksinnön mukaiselle vasta-aineseokselle on ominais -5 ta, että se sisältää HIV-l:tä neutraloivia vasta-ainemole-kyylejä, jotka reagoivat immunologisesti seuraavan kaavan mukaisen polypeptidin kanssa: LGBWGCSGKJIC, 10 jossa B on joko isoleusiini, leusiini tai metioniini ja J on joko histidiini tai leusiini. Suositeltavaa on, että polypeptidi on p3 tai p4. Lisäksi vasta-aineseokselle on tyypillistä, että siinä ei ole käytännöllisesti katsoen 15 lainkaan vasta-aineita, jotka reagoivat immunologisesti seuraavan kaavan mukaisten HIV-1-TMP-sukuisten polypeptidi-en kanssa:
RlLAVERYLKDQQLL ja CTTAVPWNASWS.
20
Tyypillisesti tämän keksinnön mukainen vasta-aineseos tuotetaan immunoimalla nisäkäs tämän keksinnön mukaisella ym-pillä ja siten indusoimalla nisäkkäässä vasta-ainemolekyy-lejä, joilla on sopiva polypeptidi-immunospesifisyys. Vas-25 ta-ainemolekyylit kerätään sen jälkeen nisäkkäästä ja eris-; tetään halutussa määrin hyvin tunnetuilla tekniikoilla, kuten esimerkiksi immunoaffiniteettikromatografisesti. Siten tuotettua vasta-aineseosta voidaan käyttää mm. tämän keksinnön mukaisissa diagnostisissa menetelmissä ja systee-30 meissä HIV-l:n tunnistamiseen kudosnäytteestä.
Tämän keksinnön mukaisia vasta-aineseoksia voidaan kuvata oligoklonaalisiksi verrattuna luonnossa esiintyviin poly-klonaalisiin vasta-aineisiin, koska ne sisältävät paratoop-35 peja, jotka on kohdistettu verrattain harvoihin epitooppei-hin verrattuna epitooppeihin, joita käsittelemättömät HIV- 1-TMP-molekyylit sisältävät. Siitä seuraa, että tämän keksinnön mukaiset vasta-aineet sitoutuvat verrattain harvoi-
II
13 952 74 hin polypeptidin jäijuttelemiin epitooppeihin, kun taas kokonaista TMP-molekyyliä vastaan tuotetut luonnonmukaiset vasta-aineet sitoutuvat epitooppeihin koko TMP-molekyylissä, joten niitä voidaan pitää polyklonaalisinä.
5
Monoklonaaliset vasta-aineseokset ovat myös tämän keksinnön tarkastelun kohteena. Monoklonaalinen vasta-aineseos sisältää havaittavissa määrin vain yhden lajin vasta-aineen sitoutumiskohdan, joka kykenee tehokkaasti sitomaan HIV-Ι-ΙΟ TMP:tä. Näin ollen tämän keksinnön mukainen monoklonaalinen vasta-aineseos tyypillisesti sitoutuu ainoastaan Hiv-i-TMP:hen, vaikka se voi sisältää vasta-aineita, jotka voivat sitoutua muihinkin proteiineihin kuin HIV-l-TMP:hen.
15 Sopivia monoklonaalisessa muodossa olevia vasta-aineita, tyypillisesti kokonaisia vasta-aineita, voidaan valmistaa käyttämällä hybridoomatekniikkaa, jota Niman ym., Proc.
Natl. Sei., USA., 80:4949-4953 (1983), ovat kuvanneet, joka kuvaus on liitetty tähän viitteenä. Lyhyesti sanottuna hyb-20 ridooman, josta monoklonaalinen vasta-aineseos on muodostettu, valmistamiseksi myelooma- tai jokin muu itsenäisesti elossa pysyvä solulinja yhdistetään lymfosyyttien kanssa, jotka on saatu tämän keksinnön mukaisella polypeptidillä hyperimmunoidun nisäkkään pernasta.
25
On suositeltavaa, että myeloomasolulinja on peräisin samasta lajista kuin lymfosyytitkin. Tyypillisesti hiirikanta 129 G1X+ on suositeltava nisäkäs. Tässä keksinnössä käytettäviksi sopivia hiiren myeloomasoluja käsittävät hypoksan-30 tiini-aminopteriini-tymidiini-sensitiiviset (HAT) solulin-jat p3X63-Ag8.653 ja Sp2/0-Agl4, jotka ovat saatavissa Ame-• rican Type Culture Collectionista, Rockville, MD, nimik keillä CRL 1580 ja CRL 1581 mainitussa järjestyksessä.
35 Tyypillisesti splenosyytit yhdistetään myeloomasoluihin käyttämällä polyetyleeniglykolia (PEG) 1500. Yhdistyneet hybridit seulotaan niiden HAT-herkkyyden perusteella. Tämän keksinnön mukaisia vasta-ainemolekyylejä erittävät hybri- 14 95274 doomat identifioidaan käyttämällä entsyymisidonnaista im-munosorbentti-menetelmää (ELISA), joka on kuvattu esimerkissä 2.
5 Esillä olevan keksinnön mukainen vasta-aineseos voidaan tuottaa synnyttämällä monoklonaalinen hybridoomaviljelmä, joka käsittää ravinnealustan, joka sisältää sopivalle poly-peptidille spesifisiä polypeptidejä erittävän hybridooman. Viljelmää pidetään sellaisissa olosuhteissa ja niin pitkän 10 aikaa, että hybridooma alkaa erittää vasta-ainemolekyylejä alustaan. Vasta-ainetta sisältävä alusta kerätään sen jälkeen talteen. Vasta-ainemolekyylit voidaan sitten eristää hyvin tunnetuilla tekniikoilla.
15 Näiden seosten valmistamiseen käyttökelpoiset alustat ovat sekä alalla hyvin tunnettuja että kaupallisesti saatavilla ja käsittävät synteettiset viljelyalustat, sisäsiittoiset hiiret ja muut sen kaltaiset. Esimerkkinä synteettisestä alustasta on Dulbeccon minimiperusravinnealusta (DMEM; Dul-20 becco ym., Virol. 8:396 (1959), johon on lisätty 4,5 g/1 glukoosia, 20 mm glutamiinia ja 20 % vasikan sikiön seerumia. Esimerkkinä sisäsiittoisesta hiirikannasta on Balb/c.
Edellä kuvatulla tavalla valmistettuja vasta-aineseoksia 25 voidaan käyttää esimerkiksi diagnostisissa menetelmissä, : joissa HIV-l-TMP:tä sisältävän immunoreaktiotuotteen muo dostaminen on toivottavaa.
E. Diagnostiset systeemit 30 Tämän keksinnön mukainen diagnostinen systeemi pakkausmuodossa käsittää ainakin yhtä analyysiä varten riittävän määrän tämän keksinnön mukaista polypeptidiä, polypeptidiseok-sen, vasta-aineseoksen tai monoklonaalisen vasta-aineseok-sen reagenssipakkauksena. Tyypillisesti myös reagenssipak-35 kauksen käyttöohjeet sisältyvät siihen.
Tässä käytettynä "paketti"-termi tarkoittaa kiinteää matriisia tai materiaalia, kuten lasia, muovia, paperia, fo- il 95274 15 liota ja sen kaltaisia, jotka pystyvät sovituissa rajoissa kantamaan tämän keksinnön mukaisen polypeptidin, vasta-ai-neseoksen tai monoklonaalisen vasta-aineseoksen. Näin ollen paketti voi esimerkiksi olla lasiastia, joka sisältää mil-5 ligrammoina laskettavia määriä tarkastelun kohteena olevaa polypeptidiä tai se voi olla mikrotiitterilevyn kuoppa, johon tarkastelun kohteena olevan polypeptidin mikrogrammoina laskettavissa olevia määriä on toimivasti kiinnitetty, ts. kiinnitetty sillä tavalla, että se kykenee immuno-10 logisesti sitoutumaan vasta-aineeseen.
"Käyttöohjeet" tyypillisesti käsittävät selkeän kuvauksen reagenssipitoisuuksista tai ainakin yhden analyysimenetelmän parametrin, kuten sekoitettavan reagenssin ja näytteen 15 suhteelliset määrät, reagenssi/näyteseosten säilytysajat, lämpötilan, puskuriolosuhteet ja sen kaltaiset.
Suositeltavissa toteutusmuodoissa tämän keksinnön diagnostinen systeemi sisältää polypeptidi p3:n ja/tai p4:n, mie-20 luiten p3:n ja p4:n seoksena.
Suositeltava on myös diagnostinen systeemi, joka sisältää ainakin kaksi polypeptidiä, jossa ensimmäisellä polypepti-deistä on seuraavan kaavan mukainen aminohappotähdesekvens-25 si: " LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini. Toinen polypeptidi kykenee reagoimaan immunologisesti HIV:n, kuten HIV-30 l:n, HIV-2:n ja muiden sen kaltaisten, indusoimien vasta-aineiden kanssa ja on mieluiten joko pl, p2 tai p5. Jokainen polypeptidi voidaan erikseen pakata pakkaukseen, esim. osana erillisistä kiinteistä alustoista. Mieluiten ensimmäinen ja toinen polypeptidi saavat olla seoksena ekvimo-35 laarisina määrinä.
Edelleen suositeltava on diagnostinen systeemi, jossa on ainakin kaksi kiinteää alustaa, mieluiten erikseen pakattu 95274 16 na pakkaukseen. Ensimmäinen kiinteä alusta käsittää kiinteän matriisin, johon on toimivasti kiinnitetty ainakin kahden polypeptidin seos. Ensimmäisen polypeptidin aminohappotähde sekvenssi on seuraavan kaavan mukainen: 5 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini ja toinen poly-peptidi on joko pl tai p2. Toinen kiinteä alusta käsittää 10 kiinteän matriisin, johon on toimivasti liitetty polypep-tidi p5.
Suositeltavissa toteutusmuodoissa tämän keksinnön mukainen diagnostinen systeemi sisältää lisäksi leiman tai indikaat-15 torin, jonka avulla voidaan havaita tämän keksinnön mukaisen polypeptidin tai vasta-ainemolekyylin sisältävän kompleksin muodostuminen.
Tässä käytetty sana "kompleksi" tarkoittaa tietyn sitoutu-20 misreaktion tuloksena syntynyttä tuotetta, kuten vasta-aine -antigeeni- tai reseptori-ligandi-reaktion. Esimerkkeinä komplekseista ovat immunoreaktiotuotteet.
Tässä käytettyinä termit "leima" ja "indikaattori" niiden 25 erilaisissa kieliopillisissa muodoissa tarkoittavat yksittäisiä atomeja ja molekyylejä, jotka ovat joko suoraan tai epäsuorasti vaikuttamassa havaittavan signaalin muodostumiseen indikoiden kompleksin olemassa oloa. Mikä tahansa leima tai indikaattori voidaan liittää tai sisällyttää ilmen-30 nettyyn proteiiniin, polypeptidiin tai vasta-ainemolekyy-liin, joka on osa tämän keksinnön mukaista vasta-ainetta tai monoklonaalista vasta-aineseosta, tai käyttää erikseen, ja näitä atomeja tai molekyylejä voidaan käyttää yksin tai liitettyinä muihin reagensseihin. Sellaiset leimat ovat 35 hyvin tunnettuja kliinisessä diagnostisessa kemiassa ja ovat osa keksintöä vain siinä määrin kuin niitä käytetään muuten uusissa proteiinimenetelmissä ja/tai -systeemeissä.
Il 95274 1 7
Leima voi olla fluoresoiva leimausaine, joka sitoutuu kemiallisesti vasta-aineisiin tai antigeeneihin denaturoimatta niitä niin, että muodostuu fluorokromi (väri), joka on käyttökelpoinen immunofluoresoiva merkkiaine. Käyttökelpoi-5 siä fluoresoivia leimausaineita ovat fluorokromit, kuten fluoreseiini-isosyanaatti (FIC), fluoreseiini-isotiosya-naatti (FITC), 5-dimetylamiini-1-naftaleenisulfonyyliklo-ridi (DANSC), tetrametyylirodamiini-isotiosyanaatti (TRITC), lissamiini, rodamiini-8200-sulfonyyli-kloridi (RB 10 200 SC) ja muut sen kaltaiset. DeLuca on kuvannut immuno- fluoresenssianalyysitekniikoita artikkelissa "Immunofluorescence Analysis", teoksessa Antibody As a Tool, Marchalonis ym., toim. John Wiley & Sons, Ltd., s. 189-231 (1982), joka on lisätty tähän viitteeksi.
15
Suositelluissa toteutusmuodoissa indikoiva ryhmä on entsyymi, kuten piparjuuriperoksidaasi (HRP), glukoosioksidaasi tai muu sen kaltainen. Niissä tapauksissa, joissa pääasiallinen indikaattoriryhmä on entsyymi, kuten HRP tai glukoo-20 sioksidaasi, tarvitaan lisäksi muita reagensseja visualisoimaan sitä, että reseptori-ligandi-kompleksi (immunologinen reaktiotuote) on muodostunut. Sellaisia muita HRP:lie sopivia reagensseja ovat vetyperoksidi ja hapetusvärin pre-kursori, kuten diaminobentsidiini. Glukoosioksidaasin kans-25 sa käyttökelpoinen reagenssi on lisäksi 2,2'-atsino-di-(3-etyyli-bentstiatsoliini-G-sulfonihappo) (ABTS).
Radioaktiiviset aineet ovat myös käyttökelpoisia leimaus-aineita, joita tässä on käytetty kuvaannollisesti. Esimerk-30 kinä radioaktiivisesta aineesta on radioaktiivinen aine, joka tuottaa gammasäteilyä. Aineet, jotka itsessään tuottavat gammasäteitä, kuten 124I, 125I, 128I, 132I, ja 51Cr, edustavat yhtä luokkaa säteilyä tuottavista radioaktiivisista indikaattoreista. Erityisen suositeltava on l25I. Toinen ryh-35 mä käyttökelpoisia leimausaineita ovat sellaiset kuin nC, I8CF, 150 ja 13N, jotka itsessään säteilevät positroneja. Sillä tavalla säteilleet positronit tuottavat gammasäteitä - 95274 18 kohdatessaan eläinkudoksen elektronit. Käyttökelpoinen on myös beeta-säteilijä, kuten 3H:n mindium.
Leimojen kiinnittäminen, ts. polypeptidien ja proteiinien 5 leimaaminen, tunnetaan alalla hyvin. Esimerkiksi hybridoo-man tuottamat vasta-ainemolekyylit voidaan leimata aineenvaihdunnan kautta sisällyttämällä radioisotooppeja sisältävät aminohapot viljelyalustaan. Ks. esimerkiksi Galfre ym., Meth. Enzymol., 73:3-46 (1981). Tekniikat proteiinien kon-10 jugoimiseksi ja yhdistämiseksi aktivoitujen toimivien ryhmien kautta ovat erityisen käyttökelpoisia. Ks. esimerkiksi Aurameas ym., Scand. J. Immunol, voi. 8 suppl. 7:7-23 (19-78), Rodwell ym., Biotech., 3:889-894 (1984) ja US-patentti 4 493 795.
15
Diagnostiset systeemit voivat myös sisältää, mieluiten erillisenä pakettina, spesifisen sitojan. "Spesifinen si-toja" on molekulaarinen kokonaisuus, joka kykenee valikoivasti sitomaan tämän keksinnön mukaisen reagenssilajin tai 20 sellaisen lajin sisältävän kompleksin, mutta ei itse ole tämän keksinnön mukainen polypeptidi tai vasta-ainemolekyy-liseos. Esimerkkejä spesifisistä sitojista ovat toiset vas-ta-ainemolekyylit, komplementtiproteiinit tai niiden fragmentit, S. aureus-proteiini A ja muut sen kaltaiset. Mie-25 luiten spesifinen sitoja sitoo reagenssilajin, kun kyseinen laji esiintyy kompleksin osana.
Suositelluissa toteutustavoissa spesifinen sitoja on leimattu. Kuitenkin kun diagnostinen systeemi sisältää spesi-30 fisen sitojan, joka ei ole leimattu, sitojaa käytetään tyypillisesti laajentavana tekijänä tai reagenssina. Näissä toteutusmuodoissa leimattu spesifinen sitoja pystyy spesifisesti sitomaan laajentavan tekijän, kun laajentava tekijä on sidottu reagenssilajin sisältävään kompleksiin.
Tämän keksinnön diagnostisia pakkauksia voidaan käyttää "ELISA"-menetelmässä tunnistamaan ainakin anti-HIV-l-vasta-aineiden esiintyminen tai määrä kudosnestenäytteissä, kuten 35 - 95274 19 seerumissa, plasmassa tai virtsassa. "ELISA" tarkoittaa entsyymisidonnaista immunosorbenttianalyysiä, jossa vasta-aine tai antigeeni sidotaan kiinteään faasiin ja jossa käytetään entsyymi-antigeeni- tai entsyymi-vasta-aine-konju-5 gaattia näytteessä esiintyvän antigeenin tai vasta-aineen tunnistamiseen ja määrän määrittämiseen. ELISA-tekniikka on kuvattu D. P. Sitesin ym. teoksen Basic and Clinical Immunology 4. painoksen kappaleessa 22, jonka teoksen on julkaissut Lange Medical Publications of Los Altos, CA 10 vuonna 1982 ja US-patenteissa 3 654 090; 3 850 752 ja 4 016 043, jotka kaikki on liitetty tähän viitteiksi.
Näin ollen suositeltavissa toteutusmenetelmissä tämän keksinnön mukainen polypeptidi, vasta-ainemolekyyliseos tai 15 monoklonaalinen vasta-aineseos voidaan kiinnittää kiinteään matriisiin kiinteän alustan luomiseksi, joka alusta käsittää paketin kysymyksessä olevassa diagnostisessa systeemissä .
20 Tyypillisesti reagenssi on kiinnitetty kiinteään materiaaliin adsorboimalla nestemäisestä alustasta, vaikka muitakin kiinnitysmenetelmiä, jotka alan asiantuntijat hyvin tuntevat, voidaan käyttää.
25 Käyttökelpoiset kiinteät materiaalit tunnetaan myös hyvin alalla. Sellaiset materiaalit ovat veteen liukenemattomia ja sisältävät ristisidoksisen dekstraanin, jota on saatavissa tuotemerkillä SEPHADEX Pharmaciä Fine Chemicalsilta (Piscataway, NJ); agaroosin; polystyreenihelmet, jotka ovat 30 noin 1 mikronista 5 millimetriin halkaisijaltaan ja joita on saatavissa Abbott Laboratories of North Chicagolta, IL; polyvinyylikloridin, polystyreenin, ristisidoksisen polyak-ryyliamidin, nitroselluloosa- tai nailonpohjäiset kudokset, kuten levyt, nauhat ja liuskat; tai putket, maljat tai mik-35 rotiitterilevyn kuopat, kuten sellaiset, jotka on tehty polystyreenistä tai polyvinyylikloridista.
20 95274
Minkä tahansa tässä kuvatun diagnostisen systeemin reagens-silaji, leimattu spesifinen sitoja tai laajentava reagenssi voidaan hankkia liuoksena, liukoisena hajotustuotteena tai käytännöllisesti katsoen kuivana pulverina, esim. lyofili-5 soidussa muodossa. Kun indikaattori on entsyymi, entsyymin substraatti voidaan myös hankkia systeemin erillisenä pakettina. Kiinteä alusta, kuten edellä kuvattu mikrotiitte-rilevy ja yksi tai useampi puskuri voidaan myös sisällyttää erikseen pakattuna osana tähän diagnostiseen systeemiin.
10 Tässä diagnostisten systeemien yhteydessä kuvatut paketoin-timateriaalit ovat sellaisia, joita on tavallisesti käytetty diagnostisissa systeemeissä. Sellaisiin materiaaleihin kuuluvat lasi- ja muovi(esim. polyetyleeni, polypropyleeni 15 ja polykarbonaatti)-pullot, -astiat, muoviset ja muovikalvolla päällystetyt kotelot ja muut sen kaltaiset.
F. Analyysimenetelmät
Esillä olevassa keksinnössä tarkastellaan menetelmää, jonka 20 avulla voidaan tunnistaa HIV-l:n vasta-aineet ja mieluiten myös havaita niiden määrä kudosnestenäytteessä tuottamalla kompleksi, joka sisältää tämän keksinnön mukaisen polypep-tidin ja sellaiset vasta-aineet. Alan asiantuntijat ymmärtävät, että on olemassa lukuisia hyvin tunnettuja kliinisiä 25 diagnostisen kemian menetelmiä, joita voidaan käyttää näi-: den kompleksien muodostamiseen. Näin ollen keksintöä ei voi rajata tässä kuvattuihin esimerkkeihin.
Erilaisia heterogeenisiä ja homogeenisiä analyysimenetelmiä 30 voidaan käyttää, joko kilpailevia tai ei-kilpailevia, tunnistamaan HIV-l-TMP:n vasta-aineet kudosnestenäytteessä ja . myös mieluiten havaitsemaan niiden määrät käyttämällä tämän keksinnön mukaista polypeptidiä. Esimerkiksi esillä oleva keksintö tarkastelee menetelmää, jossa analysoidaan kudos-35 näyte anti-HIV-1-vasta-aineiden esiintymisen suhteen käsittäen seuraavat vaiheet:
II
95274 21 a) muodostetaan immunoreaktioseos sekoittamalla kudosneste-näyte polypeptidin kanssa, jonka polypeptidin aminohappo-tähdesekvenssi on esitetty seuraavassa kaavassa: 5 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini. Mieluiten ku-dosnestenäyte on tunnettu määrä verta tai muu verituotetta, kuten seerumia tai plasmaa, vaikka virtsa, sylki, siemen-10 neste, emätinerite tai selkäydinneste (CSF) ovat myös käyttökelpoisia. Mieluiten polypeptidi esiintyy osana kiinteätä alustaa, esim. tämän keksinnön mukainen polypeptidi kiinnitettynä mikrotiitterilevykuopan sisäseiniin niin, että muodostuneella immunoreaktioseoksella on sekä kiinteä, että 15 nestemäinen faasi.
b) seos pidetään biologisissa analyysiolosuhteissa ennalta määrätty aika esimerkiksi noin 10 minuutista noin 16-20 tuntiin lämpötilassa, joka voi olla noin 4 C-asteesta noin 20 45 C-asteeseen, joka on tarpeeksi pitkä aika minkä tahansa näytteessä olevan anti-HIV-1-vasta-aineen reagoida immuno-logisesti (sitoutua immunologisesti) polypeptidin kanssa niin, että muodostuu polypeptidin sisältävä immunoreaktio-tuote.
25 ·" Biologiset analyysiolosuhteet ovat sellaiset, joissa tämän keksinnön mukaiset polypeptidimolekyylit säilyttävät biologisen aktiivisuutensa ja myös analysointia varten etsityt HIV-1-vasta-aineet ja käsittävät lämpötila-alueen noin 4 C-30 asteesta noin 45 C-asteeseen, pH-alueen noin 5:stä noin 9:ään ja ionivahvuuden, joka vaihtelee tislatun veden vah-. vuudesta noin yksimolaariseen natriumkloridiin. Menetelmät sellaisten olosuhteiden optimoimiseksi tunnetaan alalla hyvin.
35 c) analysoidaan kaikki muodostuneet polypeptidiä sisältävät immunoreaktiotuotteet ja sillä tavoin myös kaikki immuno-reaktiotuotteen sisältämät anti-HIV-l-vasta- aineet tulevat - 95274 22 määritellyiksi. Mieluiten määritetään kaikkien polypeptidiä sisältävien immunoreaktiotuotteiden määrät ja siten myös näytteen sisältämien anti-HIV-1-vasta-aineiden määrät.
5 Minkä tahansa polypeptidiä sisältävän (anti-HIV-1-vasta-ainetta sisältävän) immunoreaktiotuotteen analysoiminen, joko suoraan tai epäsuorasti, voidaan täydentää alalla hyvin tunnetuilla analyysitekniikoilla. Esimerkiksi suositeltavissa toteutusmuodoissa polypeptidiä sisältävä vaiheen 10 (b) immunoreaktiotuote käsitellään edelleen analysoitavaksi vaiheessa (c) seuraavien vaiheiden mukaisesti: (i) Sekoitetaan biologisesti aktiivinen leimattu spesifinen sitoja polypeptidiä sisältävän immunoreaktiotuotteen kanssa 15 leimausreaktioseoksen aikaansaamiseksi. Leimattu spesifinen sitoja kykenee sitoutumaan mihin tahansa polypeptidiä sisältävässä immunoreaktiotuotteessa esiintyvään immunoglobu-liiniin niin, että muodostuu leimattu kompleksi. Mieluiten leimattu spesifinen sitoja käsittää toiset vasta-ainemole-20 kyylit, kuten ksenogeeniset anti-ihmis-Fc-vasta-aineet.
Erityisen suositeltavaa on, että leimattu spesifinen sito-jareagenssi on spesifinen immunoglobuliiniluokalle.
(ii) Näin muodostunut leimausreaktioseos pidetään biologi -25 sissa analyysiolosuhteissa ennalta määrätty aika, joka on riittävän pitkä leimatun spesifisen sitojan sitoutua mihin tahansa polypeptidiä sisältävinä immunoreaktiotuotteina esiintyviin anti-HIV-1-vasta-aineisiin niin, että muodostuu leimattu kompleksi.
30
Leimatun kompleksin analysoiminen on samalla näytteen anti-HIV-l-vasta-aineiden analyysi. Suositelluissa toteutusmuodoissa osaksi kompleksia sitoutuneen leimatun spesifisen sitojan määrä määritetään ja tällä tavoin voidaan samalla 35 tunnistaa näytteessä olevat anti-HIV-1-vasta-aineet ja määrittää niiden määrä. Määrä voi olla 0 indikoiden, että näytteessä ei ole mittausrajoissa havaittavia määriä anti-HIV- l- vasta -aineita. Menetelmät leimatun spesifisen sitojan 11 23 95274 esiintymisen ja sen määrien analysoimiseksi riippuvat käytetystä leimasta; sellaiset leimat ja analyysimenetelmät ovat alalla hyvin tunnettuja.
5 Vaihtoehtoisesti sellaisia homogeenisia analyysimenetelmiä, jotka on kuvattu US-patenteissa 4 536 479; 4 233 401; 4 233 402 ja 3 996 345, jotka on lisätty tähän viitteinä, voidaan käyttää vaiheen (c) polypeptidiä sisältävän immuno-reaktiotuotteen tunnistamiseen.
10
Esimerkit l. Polypeptidisynteesit
Polypeptidit pl, p2, p3, p4 ja p5 syntetoitiin käyttämällä klassista kiinteän faasin tekniikkaa, jonka Merrifield, 15 Adv. Enzymol., 32:221-96 (1969) on kuvannut ja joka on muokattu käytettäväksi Model 430A:n automatisoidussa pepti-disyntetisaattorissa (Applied Biosystems, Foster City, CA). Polypeptidihartsit poistettiin vetyfluoridilla, uutettiin ja niiden puhtaus analysoitiin korkean erotuskyvyn neste-20 kromatografiällä, jossa käytettiin käänteisfaasi-C18-kolon nia. (Waters Associates, Milford, MA).
Polypeptidi p5:n aminohappotähdesekvenssi, joka on johdettu HIV-2-isolaatin sekvenssistä, on esitetty C-kappaleen tau-25 lukossa 1. Vertailun helpottamiseksi polypeptidien pl, p2, p3 ja p4 aminohappotähdesekvenssit, jotka on johdettu 4:stä eri HIV-1-isolaatista, on esitetty taulukossa 2.
Taulukko 2 30
Peptidin Aminohappotähdesekvenssi* '· nimitys_123456789 10 11 12
p2 LGIWGCSGKLIC
pl -b - L.........
35 p3 --------- H
p4 M ------ H
« 24 95274 * Jokaisen polypeptidin aminohappotähdesekvenssi vastaa osaa tunnetusta HIV-l-gp4l-aminohappotähdesekvenssistä.
b Viiva tarkoittaa sitä, että aminohappotähde on sama kuin 5 polypeptidi p2:n sekvenssin samalla kohtaa oleva aminohappotähde, kun taas p2-sekvenssistä poikkeavaa aminohappoa on nimitetty kirjaimella, joka vastaa erilaista tai "korvattua" tähdettä. Näin ollen pl:n aminohappotähdesekvenssi on samanlainen kuin p2:nkin paitsi, että leusiini on korvattu 10 isoleusiinilla tähdekohdassa numero 3.
2. ELISA-systeemi ja -menetelmä
Sata mikrolitraa (μΐ) fosfaatilla puskuroitua saliinia (PBS), joka sisälsi 1 mikrogramman (^g) polypeptidiä pl, 15 p2, p3, p4 tai p5, lisättiin polyvinyylisten 96-kuoppaisten mikrotiitterilevyjen kuoppiin (Microtest III, Falcon). Levyjä pidettiin sen jälkeen noin 16 tuntia 37 C-asteessa, jotta PBS haihtuisi ja polypeptidit adsorboituisivat kuoppien seinämiin (pinnoittivat seinämät liittymällä toimivas-20 ti niihin). Sataviisikymmentä μΐ ELISA-laimennosta (PBS, joka sisältää 0,2 % polyoksietyleeni-(20)- sorbitaani-mono-lauraattia (Tween 20), 10 % lämpöinaktivoitua vasikan sikiön seerumia (FCS) ja 0,5 millimolaarista (mM) timerosaa-lia) sekoitettiin sen jälkeen jokaiseen kuoppaan täyttämään 25 ylimääräiset proteiinin sitoutumiskohdat.
Kun laimennosta sisältäviä kuoppia oli pidetty 1 tunti noin 23 C-asteessa, laimennos poistettiin ravistamalla tai puhaltamalla, jolloin tuloksena oli tämän keksinnön mukainen 30 diagnostinen systeemi, ts. mikrotiitterilevyn kuoppa, jossa oli tämän keksinnön mukainen polypeptidi toimivasti kiinnittyneenä sen sisäseiniin (polypeptidipinnoitteinen kuoppa) .
35 Sata μΐ jokaista seerumia laimennettuna suhteessa 1:64 ELISA- laimennokseen sekoitettiin polypeptidipinnoitteiseen kuoppaan. Tuloksena ollutta kiinteä-neste-faasi-immunoreak-tioseosta pidettiin noin 23 C-asteessa 90 minuuttia, jotta
II
95274 25 muodostuisi polypeptidiä sisältäviä immunoreaktiotuotteita. Laimennetut seerumit poistettiin sen jälkeen kuopista puhaltamalla käyttämällä ELISA-pesintä (Immuno Wash 12,
Nunc). Jokainen kuoppa pestiin sen jälkeen 4 kertaa ELISA-5 huuhtelulla (PBS, joka sisältää 0,2 % Tween 20:tä) ja puhallettiin kuivaksi.
Sata μΐ piparjuuriperoksidaasilla leimattua vuohen anti-ihmis-IgG:tä, affiniteettipuhdistettua (Boehringer Mannheim 10 Biochemicals), joka oli laimennettu 1 : 30 000 PBSriin, joka sisälsi 10 % lämpöinaktivoitua FCS:a ja 0,5 mM timer-solia, sekoitettiin sen jälkeen jokaiseen kuoppaan. Tuloksena ollutta leimaus-reaktioseosta pidettiin 90 minuuttia noin 23 C-asteessa polypeptidiä sisältävien leimattujen 15 kompleksien muodostumiseksi. Reagoimaton leimattu vasta- aine poistettiin ravistamalla ja jokainen kuoppa pestiin ja puhallettiin kuivaksi niin kuin edellä on kuvattu.
Sata μΐ kromogeenista substraattiliuosta [sitraattipuskuri 20 (500 ml deionoitua vettä, joka sisältää 5,0 g vedetöntä sitruunahappoa ja 7,0 g Na2HP04, pH 5), joka sisältää 0,4 mg/ml o-fenyleenidiamiinia (OPD) ja 0,01 % H202] sekoitettiin jokaiseen kuoppaan kehitysreaktioseoksen muodostamiseksi. Kun kehitysreaktioseosta oli pidetty 30 minuuttia 25 noin 23 C-asteessa, 100 μΐ 1 M HCl:a sekoitettiin jokaiseen kuoppaan kehitysreaktion pysäyttämiseksi. Tuloksena olleiden liuosten absorbanssit analysoitiin 492 nanometrissä (OD492) käyttämällä ELISA-luki jaa (Titertek Multiscan, Flow Laboratories, Inglewood, CA). Seropositiivisuudeksi (HIV-30 infektioksi) määritettiin kaikki OD492-arvot, jotka olivat suurempia kuin OD492:n keskiarvo plus 24 normaalin kontrolli-(ei infektoituneen) seerumin 3 keskihajontaa. Kaikki seerumit analysoitiin ainakin 3 kertaa.
35 HIV-1-infektoituneiden yhdysvaltalaisten potilaiden seerumit kerättiin San Diegossa, CA (n = 84) ja Centers for Disease Control -keskusten kautta kaikkialta Yhdysvalloista (n = 79). 40 HIV-l-positiivisen seerumin sarja käsitti 26 95274 näytteet 12 oireettomasta seropositiivisesta potilaasta (CDC-ryhmä II), 13 potilaasta, joilla oli yleinen lymfode-mopatia (CDC-ryhmä III) tai AIDS:iin liittyvä kompleksi ARC; (CDC-ryhmä IV-A) ja 15 potilaasta, joilla oli puhjen-5 nut AIDS (CDC-ryhmä IV-C tai IV-D). Ks. Centers for Disease Control, Morbid. Mortal Weekly Rep., 35,-334 (1976).
Seerumit zairelaisista HIV-1-infektoituneista potilaista ja terveistä normaaleista zairelaisista kontrolleista kerät-10 tiin Kinshasassa vuonna 1983 ja ne karakterisoi Brun-Vezinet ym., Science, 226:453 (1984).
HIV-2-positiiviset seerumit kerättiin Guinea Bissaussa vuonna 1980 ja ne karakterisoitiin immunoblottauksella ja 15 immunofluoresenssilla HIV-1-, HIV-2- ja STLV-antigeenejä vastaan. Fultz ym., Kolmas kansainvälinen AIDS-konferenssi, tiivistelmä MP.72 (1987).
Kaikki seerumit koodattiin, jaoteltiin näyte-eriksi ja va-20 rastoitiin -20 C-asteessa.
Edellä kuvattujen seerumien analyysitulokset anti-HIV-vasta-aineiden esiintymisen suhteen käyttäen polypeptidejä pl, p2, p3, p4 ja p5 on esitetty taulukossa 3.
25
Taulukosta 3 voidaan nähdä, että polypeptidi p2, jonka ami-nohappotähdesekvenssi on homologinen Cosandin patentissa kuvatun peptidin 39 karboksipään 12 tähteen kanssa, reagoi immunologisesti 100-%:isesti yhdysvaltalaisilta potilailta 30 saatujen HIV-1-infektoituneiden seerumien kanssa, mutta zairelaisista HIV-1-infektoituneista seerumeista vastaava tulos oli vain 88,2 %.
Il 95274 27
Taulukko 3
Zairelaisten AIDS-potilaitten seerumien karakterisointi 5 HIV- Western Koko ELISA-antigeenit
Seerumi viljelmä Blot_virus pl p2 p3 p4 p5 z-9 + p24+,p41+/- + -*+++- z-23 + p24+,p41+/- + + + z - 24 + p25+ + + + + + - 10 z-29 + NDb + + + --- z- 31 + p24+ ,p41+ + + + + + - z-34 + p24+,p41- + + + z-47 + p24+,p41- + - - + +
z-50 - p24+,p41+ + - - + + ND
15 z - 51 - p41+ + + + + + z-52 + p25+,p41+ + + + + + - p60 + z-68 + ND ++ + -+ - z-72 + p25+ + + + + + - 20 z-75 + pl8+,p25+ + + + + + p41+,p60+ z-81 + pl8+,p25+ + + + + + - p41+,p60+ 25 4 + = positiivinen; - = negatiivinen (ELISA-peptidin positiivisuuden raja määritettiin 24 negatiivisen kontrollisee-rumisarjan OD492:n keskiarvona plus 3 keskihajontaa. Näytteet määriteltiin positiivisiksi tai negatiivisiksi seerumilai-30 mennoksella 1:64).
b ND = ei ole tehty, riittämätön näytteen määrä.
Samalla tavalla polypeptidi pl, jonka aminohappotähdesek-35 venssi sisältää leusiinin korvaten isoleusiinin, verrannol lisesti polypeptidi p2:een, reagoi immunologisesti 99,4-%:isesti HIV-1-infektoituneiden yhdysvaltalaisten seerumien 95274 28 kanssa, mutta vain 86,8-% risesti HIV-1-infektoituneiden zairelaisten seerumien kanssa.
Verrattuna polypeptideihin pl ja p2 taulukon 3 tuloksista 5 näkyy, että tämän keksinnön mukaiset polypeptidit, ts. po-lypeptidit p3 ja p4 tunnistivat anti-HIV-l-vasta-aineita 94,1 ja 97,1 %:ssa, mainitussa järjestyksessä, testatuista zairelaisista AIDS-seerumeista. Tämän keksinnön polypepti-dien pl ja p2 herkkyysasteen ero oli odottamaton, koska l) 10 polypeptideillä pl ja p2 näyttää olevan samanlainen herkkyys HIV-l-TMP-vasta-aineille sekä yhdysvaltalaisissa että zairelaisissa seerumeissa ja 2) polypeptidien pl, p3 ja p4 ja aminohappotähdesekvenssit on kaikki johdettu zairelaisista HIV-1-isolaateista, mutta niiden herkkyydessä anti-15 HIV-l-TMP:n vasta-aineille on odottamattomia eroja.
Syy(t) edellä kuvattuihin herkkyyseroihin ovat tuntemattomat. Kuitenkin noiden erojen perusteella voidaan arvella, että polypeptidejä p3 ja/tai p4 voidaan käyttää sellaisten 20 polypeptidien kuten pl ja p2 kanssa, jotta saavutettaisiin suurempi herkkyystaso HIV-l:n tunnistamiseksi. Lisäksi taulukon 3 paljastamat erot osoittavat, että tämän keksinnön mukaista polypeptidiä voidaan käyttää yhdessä HIV-2:lie spesifisen polypeptidin kanssa, kuten p5:n, jotta saavutet-25 täisiin suurempi herkkyystaso HIV-l:n tai HIV-2:n tunnista miseksi kuin mitä saavutettaisiin käytettäessä HIV-2:sta johdettua polypeptidiä yksinään.
Viisi zairelaista AIDS-seerumia, jotka eivät reagoineet 30 polypeptidi pl:n kanssa, 1, joka ei reagoinut polypeptidi p3:n eikä polypeptidi p4:n kanssa ja 8, jotka reagoivat ·' pl:n ja p4:n kanssa, analysoitiin infektiivisen HIV-l:n esiintymisen suhteen McCormickin ym., Am. J. Trop. Med.
Hyg., 36:102 (1987), viljelymenetelmän mukaan. Lisäksi nuo 35 seerumit analysoitiin anti-HIV-l-vasta-aineiden esiintymi sen suhteen kaupallisella ELISA-diagnoosisysteemillä, jossa käytetään koko viruksen (viruslysaatin) antigeenejä (Litton Bionetics, Kensington, MD) ja spesifisten HIV-1-proteiinien
II
95274 29 vasta-aineiden suhteen Western-immunoblottausmenetelmällä, jossa käytettiin CDC-HIV-l-kantaa 451 antigeenilähteenä.
Noiden analyysien tulokset, jotka on esitetty taulukossa 4, 5 osoittavat, että polypeptidit p3 ja p4 reagoivat kaikkien 5 zairelaisseerumin kanssa, jotka eivät reagoineet polypepti-di pl:n kanssa. Lisäksi, koska kaikkien 5 polypeptidi pl:lle negatiivisen seerumin huomattiin sisältävän infek-tiivista HIV-l:tä, mutta olivat negatiivisia tai samanar-10 voisia Western blot -analyysissä, tämän keksinnön mukaiset diagnostiset systeemit edustavat immunoanalyysisysteemejä, joissa on parannettu herkkyys anti-HIV-l-TMP-vasta-aineil-le.
15 3. Vasta-ainetuotantoanalyysi
Polypeptidi pl liitettiin avaimenreikäkotilon hemosyaniini-(KLH)-kantajaproteiiniin karboksipään kysteiinitähteen kautta käyttämällä ristiliittäjä-m-maleimidobentsoyyli-N-hydroksisukkinimidi-esteriä, Linin ym., Biochem. 18:690-697 20 (1979), menetelmän mukaan. Sen jälkeen kun esi-immunoidut seeruminäytteet oli saatu, kaksi kania injektoitiin 0-päi-vänä kuuteen ihonalaiseen kohtaan 250 μg:lla liitettyä po-lypeptidiä, joka oli emulgoitu 1 ml:aan täydellistä Freun-din adjuvanttia. 14. päivänä kanit injektoitiin ihonalai-25 sesti 250 μg:lla liitettyä polypeptidiä epätäydellisessä
Freundin adjuvantissa. 21. päivänä ne injektoitiin intrape-ritoneaalisesti 250 μg:lla liitettyä polypeptidiä 1 mlrssa alunasuspensiota. Kaniseerumit kerättiin 7. ja 14. päivänä kolmannen injisoinnin jälkeen ja ne säilytettiin -20 C-as-30 teessä. Vasta-ainepitoisuudet määritettiin esimerkki 2:ssa kuvatulla ELISA-menetelmällä.
30 95274
Taulukko 4
Kanin anti-polypeptidi RT-aktiivisuuden
Seerumin numero_CPM*X103_estyminen %b_ 5 V3343 12 246 95 V3344 55 202 77 kontrolli0 218 210 kontrolli 264 122 10 * CPM = [3H] TTP-lukema minuutissa b RT-aktiivisuuden estyminen % (neutraloitumis-%) = anti-polypeptidi-antiseerumin CPM-RT-analyysi 15 l - - X 100 % kontrolliseerumien CPM-RT-analyysin keskiarvo e kontrolli = esi-immunoitu kanin seerumi 20 Edellä oleva selitysosa, joka sisältää erityiset toteutusmenetelmät ja esimerkit, on tarkoitettu kuvaamaan esillä olevaa keksintöä eikä sitä saa pitää keksintöä rajoittavana. Lukuisia muita variaatioita ja muunnelmia voidaan toteuttaa ilman, että poiketaan tämän keksinnön todellisesta 25 luonteesta ja piiristä.
li
Claims (17)
1. Polypeptid, kännetecknad av att den väsentligen inne- fattar 12 aminosyrarester med en aminosyrarestsekvens som representeras av formeln: LGZWGCSGKHIC, 30 väri Z är antingen isoleucin eller metionin.
1. Polypeptidi, tunnettu siitä, että sen keskeinen osa on 12 aminohappotähdettä, joiden aminohappotähdesekvenssi on seuraavan kaavan mukainen: 5 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini.
2. NSWGCAFRQVC.
2. Komposition som innefattar en blandning av ätminstone tvä polypeptider, kännetecknad av att den första av dessa 35 polypeptider väsentligen innefattar 12 aminosyrarester med en sekvens som representeras av formeln: LGZWGCSGKHIC, II 95274 väri Z är antingen isoleucin eller metionin, och en andra av dessa polypeptider är verksam att immunreagera med anti-kroppar som inducerats av human immunbristvirus.
2. Yhdiste, joka käsittää ainakin kahden polypeptidin seoksen, tunnettu siitä, että ensimmäisen mainitun polypeptidin keskeinen osa on 12 aminohappotähdettä, joiden sekvenssi on seuraavan kaavan mukainen:
3. Komposition enligt patentkrav 2, kannetecknad av att en andra av dessa polypeptider har en aminosyrarestsekvens som representeras av en formel vald bland: LGLWGCSGKLIC,
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että toisen mainitun polypeptidin aminohappotähdesekvenssi on jokin seuraavista:
25 LGLWGCSGKLIC, LGIWGCSGKLIC ja NSWGCAFRQVC.
4. Förfarande för bestämning av närvaron av anti-HIV-1-antikroppar i ett prov pä kroppsvätska, kännetecknat av att 15 det innefattar följande steg: a) en immunreaktionsblandning beredes genom att ett prov pä kroppsvätska blandas med en polypeptid som väsentligen bestär av 12 aminosyrarester med en sekvens som represente- 20 ras av en formel: LGZWGCSGKHIC, väri Z är antingen isoleucin eller metionin; 25 b) denna immunreaktionsblandning hälles vid biologiska analysbetingelser under en tid tillräcklig för eventuella anti-HIV-1-antikroppar som förekommer i provet att immunreagera med polypeptiden och bilda en polypeptidhaltig im- 30 munreaktionsprodukt; och c) förekomsten av eventuella polypeptidhaltiga immunreak-tionsprodukter som bildats, och därmed förekomsten av eventuella anti-HIV-l-antikroppar i provet bestämmes. 35
4. Menetelmä anti-HIV-1-vasta-aineiden esiintymisen analy- 30 soimiseksi kudosnestenäytteestä, tunnettu siitä, että se käsittää seuraavat vaiheet: « ' a) valmistetaan immunoreaktioseos sekoittamalla kudosnes-te-näyte polypeptidiin, jonka keskeinen osa käsittää 12 35 aminohappotähdettä, joiden sekvenssi on seuraavan kaavan mukainen: LGZWGCSGKHIC, ----—- I 95274 jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini; b) mainittua immunoreaktioseosta pidetään biologisissa analyysiolosuhteissa riittävän kauan, jotta mikä tahansa 5 näytteessä esiintyvä anti-HIV-1-vasta-aine ehtii reagoida immunologisesti mainitun polypeptidin kanssa muodostaen polypeptidiä sisältävän immunoreaktiotuotteen; ja c) analysoidaan kaikki polypeptidiä sisältävät immuno-10 reaktiotuotteet ja siten myös kaikki mainitussa näytteessä esiintyvät anti-HIV-l-vasta-aineet.
5. Förfarande enligt patentkrav 4, kännetecknat av att den polypeptidhaltiga immunreaktionsprodukten vidare be-handlas för analys enligt steg (c) genom att: 33 95274 (i) en märkningsreaktionsblandning beredes genom att den polypeptidhaltiga immunreaktionsprodukten blandas med märk-ta antikroppmolekyler, verksamma att binda tili varje hu-mant immunoglobulin som förekommer i immunreaktionsproduk- 5 ten, och (ii) märkningsreaktionsblandningen som beretts pä detta sätt, hälles vid biologiska analysbetingelser under en tidsperiod tillräcklig för dessa märkta antikroppar att 10 immunreagera med eventuella anti-HIV-1-antikroppar som fö-religger som polypeptidhaltiga immunreaktionsprodukter för att därmed bilda ett märkt komplex.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polypeptidiä sisältävä immunoreaktiotuote käsi-15 tellään edelleen vaiheessa (c) analysoitavaksi seuraavasti: (i) valmistetaan leimausreaktioseos sekoittamalla mainittuun polypeptidiä sisältävään immunoreaktiotuotteeseen leimattuja vasta-ainemolekyylejä, jotka voivat sitoutua mihin 20 tahansa mainitussa immunoreaktiotuotteessä esiintyvään im-munoglobuliiniin, ja (ii) mainittua tällä tavoin valmistettua leimausreaktio-seosta pidetään biologisissa analyysiolosuhteissa riittävän 25 kauan, jotta mainitut leimatut vasta-aineet ehtivät reagoida immunologisesti minkä tahansa polypeptidiä sisältävänä immunoreaktioseoksena esiintyvän anti-HIV-1-vasta-aineen kanssa muodostaen leimatun kompleksin.
6. Förfarande enligt patentkrav 5, kannetecknat av att 15 polypeptiden fixeras vid en mikrotiterskiva före tillbland-ningen i steg (a).
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ennen mainittua vaiheen (a) seoksen valmistamista mainittu polypeptidi kiinnitetään mikrotiitterile-vyyn.
7. Förfarande för bestämning av förekomsten av anti-HIV-antikroppar i ett prov pä kroppsvätska, kannetecknat av 20 följande steg: a) en immunreaktionsblandning beredes genom att ett prov pä kroppsvätska blandas med en komposition innefattande en blandning av dtminstone tvä polypeptider, varvid den första 25 av dessa polypeptider innefattar väsentligen 12 aminosyra-.. rester och har en sekvens som representeras av formeln: LGZWGCSGKHIC, 30 väri Z är antingen isoleucin eller metionin, och en andra polypeptid som representeras av en formel vald bland: LGLWGCSGKLIC, LGIWGCSGKLIC och
35 NSWGCAFRQVC; b) immunreaktionsblandningen hälles vid biologiska analysbetingelser under en tidsperiod tillräcklig för varje li 95274 anti-HIV-antikropp som förekommer i provet att iinmunreagera med polypeptiden och bilda en polypeptidhaltig immunreak-tionsprodukt; och 5 c) förekomsten av eventuella polypeptidhaltiga immunreak-tionsprodukter som bildats, och därmed förekomsten av eventuella anti-HIV-antikroppar i provet bestämmes.
7. Menetelmä kudosnestenäytteessä esiintyvien anti-HIV- vasta-aineiden analysoimiseksi, tunnettu seuraavista vaiheista : 95274 a) valmistetaan immunoreaJctioseos sekoittamalla kudosnes-te-näyte yhdisteeseen, joka käsittää ainakin kahden poly-peptidin seoksen, jossa mainittu ensimmäinen mainituista polypeptideistä käsittää keskeisenä osana 12 aminohappotäh- 5 dettä ja jonka sekvenssi on seuraavan kaavan mukainen: LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini ja toinen maini-10 tuista polypeptideistä on seuraavasta kaavaryhmästä valitun kaavan mukainen: LGLWGCSGKLIC, LGIWGCSGKLIC ja NSWGCAFRQVC; 15 b) mainittua immunoreaktioseosta pidetään biologisissa analyysiolosuhteissa tarpeeksi pitkä aika jotta mikä tahansa näytteessä esiintyvä anti-HIV-vasta-;.i ne ehtii reagoida immunologisesti mainitun polypeptidin kanssa ja muo- 20 dostaa polypeptidiä sisältävän immunoreaktiotuotteen; ja c) analysoidaan kaikkien muodostuneiden polypeptidiä sisältävien immunoreaktiotuotteiden esiintyminen ja siten myös kaikkien anti-HIV-vasta-aineiden esiintyminen maini- 25 tussa näytteessä.
8. Förfarande enligt patentkrav 7, kännetecknat av att 10 den polypeptidhaltiga immunreaktionsprodukten beredes vida-re för bestämning enligt steg (c) genom att: (i) en märkningsreaktionsblandning beredes genom att tili den polypeptidhaltiga immunreaktionsprodukten blandas märk- 15 ta antikroppmolekyler, verksamma att binda till varje human im-munoglobulin som förekommer som immunreaktionsprodukt, och (ii) denna märkningsreaktionsblandning som sälunda beretts, 20 hälles vid biologiska analysbetingelser under en tidsperiod tillräcklig för de märkta antikropparna att immunreagera med eventuella anti-HIV-antikroppar som föreligger som po-lypeptidhaltiga immunreaktionsprodukter för att bilda ett märkt komplex. 25 : 9. Förfarande enligt patentkrav 7, kännetecknat av att polypeptiden, före tillblandningen enligt steg (a), fixeras vid en fast matris.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu polypeptidiä sisältävä immunoreak-tiotuote käsitellään edelleen analysoitavaksi vaiheen (c) 30 mukaisesti seuraavasti: (i) valmistetaan leimausreaktioseos sekoittamalla mainittuun polypeptidiä sisältävään immunoreaktiotuotteeseen leimattuja vasta-ainemolekyylejä, jotka voivat sitoutua mihin 35 tahansa mainitussa immunoreaktiotuotteessa esiintyvään im-munoglobuliiniin, ja 95274 (ii) mainittua tällä tavoin valmistettua leimausreaktio-seosta pidetään biologisissa analyysiolosuhteissa riittävän kauan, jotta mainitut leimatut vasta-aineet ehtivät reagoida immunologisesti minkä tahansa polypeptidiä sisäl-5 tävänä immunoreaktioseoksena esiintyvän anti-HIV-vasta-aineen kanssa muodostaen leimatun kompleksin.
9. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ennen mainitun vaiheen (a) seoksen valmistamista 10 mainittu polypeptidi kiinnitetään mikrotiitterilevyyn.
10 LGIWGCSGKLIC och NSWGCAFRQVC.
10. Diagnostiskt system i form av en sats för bestämning av förekomsten av anti-HIV-l-antikroppar i ett prov pä kroppsvätska, varvid systemet innefattar en förpackning som innehäller en polypeptid med en aminosyrarestsekvens som representeras av formeln: 35 LGZWGCSGKHIC, väri Z är antingen isoleucin eller metionin. 40 9 5 2 7 4
10 LGIWGCSGKLIC OCh NSWGCAFRQVC.
10. Diagnostinen systeemi pakkausmuodossa kudosnestenäyt-teessä esiintyvien anti-HIV-1-vasta-aineiden analysoimiseksi, tunnettu siitä, että systeemi käsittää paketin, 15 joka sisältää polypeptidin, jonka aminohappotähdesekvenssi on seuraavan kaavan mukainen LGZWGCSGKHIC 20 jossa Z on isoleusiini tai metioniini.
11. Diagnostiskt system i form av en sats för bestämning av förekomsten av anti-HIV-1-antikroppar i ett prov pä kroppsvätska, varvid systemet innefattar en förpackning som innehäller atminstone tvä polypeptider, kannetecknat av att 5 den första av dessa polypeptider har en aminosyrarestsek-vens som representeras av formeln: LGZWGCSGKHIC, 10 väri Z är antingen isoleucin eller metionin, och en andra polypeptid verksam att immunreagera med antikroppar som in-ducerats av human immunbristvirus.
11. Diagnostinen systeemi pakkausmuodossa kudosnestenäyt-teessä esiintyvien anti-HIV-l-vasta-aineiden analysoimiseksi käsittäen paketin, joka sisältää ainakin kaksi poly- 25 peptidiä, tunnettu siitä, että mainituista polypeptideistä ensimmäisen aminohappotähdesekvenssi on seuraavan kaavan mukainen: LGZWGCSGKHIC, 30 jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini, ja toinen mai-• nituista polypeptideistä voi reagoida immunologisesti ih misen immuunikatoviruksen indusoimien vasta-aineiden kanssa. 35
12. Diagnostiskt system enligt patentkrav 11, kännetecknat 15 av att den andra polypeptiden har en aminosyrarestsekvens som representeras av en formel vald bland: LGLWGCSGKLIC, LGIWGCSGKLIC och
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen diagnostinen systeemi, tunnettu siitä, että mainitun toisen mainituista polypeptideistä aminohappotähdesekvenssi on jokin seuraavista: 95274 LGLWGCSGKLIC, LGIWGCSGKLIC ja NSWGCAFRQVC.
13. Diagnostiskt system enligt patentkrav 11, kännetecknat av att den första och andra polypeptiden är blandade.
13. Patenttivaatimuksen 11 mukainen diagnostinen systee mi, tunnettu siitä, että mainitut ensimmäinen ja toinen polypeptidi on sekoitettu keskenään.
14. Diagnostiskt system enligt patentkrav 11, kännetecknat av att det ytterligare innefattar, i separata förpacknin-gar, ett märkt specifikt bindemedel för att pavisa förekomsten av polypeptidhaltiga immunreaktionsprodukter.
14. Patenttivaatimuksen 11 mukainen diagnostinen systee-10 mi, tunnettu siitä, että se lisäksi sisältää, erillisessä paketissa, leimatun spesifisen sitojan osoittamaan poly-peptidiä sisältävän immunoreaktiotuotteen esiintymisen.
15. Diagnostiskt system enligt patentkrav 11, känneteck nat av att polypeptiden är fixerad vid en mikrotiterskiva.
15 LGLWGCSGKLIC ja LGIWGCSGKLIC, ja (b) toisen kiinteän alustan, joka käsittää kiinteän matriisin, johon on toimivasti liitetty polypeptidi, jonka 20 aminohappotähdesekvenssi on seuraavan kaavan mukainen: NSWGCAFRQVC.
15. Patenttivaatimuksen 11 mukainen diagnostinen systee- 15 mi, tunnettu siitä, että mainittu polypeptidi on kiinni tetty mikrotiitterilevyyn.
15 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on isoleusiini tai metioniini ja toinen mainituista polypeptideistä voi reagoida immunologisesti ihmisen immuunikatoviruksen indusoimien vasta-aineiden kanssa. 20
16. Diagnostiskt system i form av en sats, kännetecknat av att det innefattar: (a) en första fast bärare, innefattande en fast matris med verksamt fixerade polypeptid med en aminosyrarestsekvens som representeras av formel: 35 ti «1 95274 LGZWGCSGKHIC, väri Z är antingen isoleucin eller metionin; och 5 (b) en andra fast bärare, innefattande en fast matris med verksamt fixerade polypeptid med en aminosyrarestsekvens som representeras av en formel vald bland: LGLWGCSGKLIC,
16. Diagnostinen systeemi pakkausmuodossa, tunnettu siitä, että se käsittää: 20 (a) ensimmäisen kiinteän alustan, joka koostuu kiinteästä matriisista, johon on toimivasti kiinnitetty polypeptidi, jonka aminohappotähdesekvenssi on seuraavan kaavan mukainen: 25 LGZWGCSGKHIC, jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini; ja 30 (b) toisen kiinteän alustan, joka koostuu kiinteästä mat riisista, johon on toimivasti kiinnitetty polypeptidi, jonka aminohappotähdesekvenssi on jokin seuraavista: LGLWGCSGKLIC,
35 LGIWGCSGKLIC ja NSWGCAFRQVC. 95274
17. Diagnostinen systeemi pakkausmuodossa, tunnettu siitä, että se käsittää: (a) ensimmäisen kiinteän alustan, joka käsittää kiinteän 5 matriisin, johon on toimivasti liitetty ainakin kahden po- lypeptidin seos, jossa ensimmäisellä mainituista polypepti-deistä on seuraavan kaavan mukainen aminohappotähdesekvens-si: LGZWGCSGKHIC, 10 jossa Z on joko isoleusiini tai metioniini ja toisella mainituista polypeptideistä on seuraavasta kaavaryhmästä valittu aminohappotähdesekvenssi:
17. Diagnostiskt system i form av en sats, kännetecknat av att systemet innefattar: 15 (a) en första fast bärare, vilken innefattar en fast matris med en blandning av ätminstone tvä polypeptider verksamt fixerade därvid, varvid den första av dessa polypeptider har en aminosyrarestsekvens som representeras av for-2 0 mein: LGZWGCSGKHIC, väri Z är antingen isoleuxin eller metionin, och en andra av dessa polypeptider har en aminosyrarestsekvens som rep-25 resenteras av en formel vald bland: LGLWGCSGKLIC och LGIWGCSGKLIC; och 30 (b) en andra fast bärare, vilken innefattar en fast matris med en därvid verksamt fixerad polypeptid med en aminosyrarestsekvens som representeras av formeln: NSWGCAFRQVC.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US8806787A | 1987-08-21 | 1987-08-21 | |
US8806787 | 1987-08-21 | ||
PCT/US1988/002870 WO1989001494A1 (en) | 1987-08-21 | 1988-08-19 | Hiv-1-related polypeptides, diagnostic systems and assay methods |
US8802870 | 1988-08-19 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI891898A FI891898A (fi) | 1989-04-20 |
FI891898A0 FI891898A0 (fi) | 1989-04-20 |
FI95274B true FI95274B (fi) | 1995-09-29 |
FI95274C FI95274C (fi) | 1996-01-10 |
Family
ID=22209204
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI891898A FI95274C (fi) | 1987-08-21 | 1989-04-20 | HIV-1:een liittyvät polypeptidit, diagnostiset systeemit ja analyysimenetelmät |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0329761B1 (fi) |
JP (1) | JP2902658B2 (fi) |
AU (1) | AU614543B2 (fi) |
DE (1) | DE3886032T2 (fi) |
DK (1) | DK173905B1 (fi) |
FI (1) | FI95274C (fi) |
NO (1) | NO177536C (fi) |
WO (1) | WO1989001494A1 (fi) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8828098D0 (en) * | 1988-12-01 | 1989-01-05 | Wellcome Found | Peptides |
US6248574B1 (en) | 1989-12-13 | 2001-06-19 | Avigdor Shaffermann | Polypeptides selectively reactive with antibodies against human immunodeficiency virus and vaccines comprising the polypeptides |
FR2732346B1 (fr) * | 1995-03-27 | 1997-05-30 | Centre Nat Rech Scient | Proteines mutees, codees par un gene env mute de lentivirus, fragments peptidiques inclus dans lesdites proteines, vecteurs d'expression exprimant lesdites proteines mutees et leurs applications |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
DE3887053T4 (de) * | 1987-04-16 | 1994-09-08 | Johnson & Johnson | Stlv-iii-verwandte polypeptide, diagnosesysteme und testmethoden. |
-
1988
- 1988-08-19 EP EP19880907953 patent/EP0329761B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-19 WO PCT/US1988/002870 patent/WO1989001494A1/en active IP Right Grant
- 1988-08-19 AU AU23021/88A patent/AU614543B2/en not_active Expired
- 1988-08-19 DE DE3886032T patent/DE3886032T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-08-19 JP JP63507309A patent/JP2902658B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-04-20 NO NO891635A patent/NO177536C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-04-20 DK DK198901931A patent/DK173905B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-04-20 FI FI891898A patent/FI95274C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK193189D0 (da) | 1989-04-20 |
AU2302188A (en) | 1989-03-09 |
NO177536C (no) | 1995-10-04 |
JPH02500597A (ja) | 1990-03-01 |
DE3886032T2 (de) | 1994-06-16 |
AU614543B2 (en) | 1991-09-05 |
DK193189A (da) | 1989-04-20 |
EP0329761B1 (en) | 1993-12-01 |
JP2902658B2 (ja) | 1999-06-07 |
NO177536B (no) | 1995-06-26 |
NO891635L (no) | 1989-06-20 |
EP0329761A1 (en) | 1989-08-30 |
NO891635D0 (no) | 1989-04-20 |
WO1989001494A1 (en) | 1989-02-23 |
FI891898A (fi) | 1989-04-20 |
EP0329761A4 (en) | 1990-09-26 |
DK173905B1 (da) | 2002-02-11 |
FI95274C (fi) | 1996-01-10 |
DE3886032D1 (de) | 1994-01-13 |
FI891898A0 (fi) | 1989-04-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4812556A (en) | Synthetic peptide antigen for the detection of HIV-2 infection | |
Papsidero et al. | Human immunodeficiency virus type 1-neutralizing monoclonal antibodies which react with p17 core protein: characterization and epitope mapping | |
JP2777115B2 (ja) | 生物学的流体中の抗lavウイルス抗体の検出法 | |
US5017687A (en) | Peptides for the detection of HTLV-1 infection | |
AU606928B2 (en) | Synthetic peptide antigens for the detection of hiv-1 infection | |
JPH03500648A (ja) | 新ペプチド、人工抗原およびイムノアッセイキット | |
JPS62500027A (ja) | エプスタイン、バールウィルス核抗原と免疫反応する抗体を産生する化学的に合成されたポリペプチド | |
US5374518A (en) | Monoclonal antibody for differentiating HIV-2 from HIM-1 seropositive individuals | |
US6440657B1 (en) | Nucleic acids and peptides of human immunodeficiency virus type (HIV-1) | |
US5670309A (en) | Methods and diagnostic kits for the detections of HIV-2-specific antibodies employing polypeptides obtained from the simian immunodeficiency virus | |
JP2777160B2 (ja) | Stlv‐3関連ポリペプチド、診断系および検定法 | |
FI102684B (fi) | Menetelmä luontaisen HIV-gp160:n tuottamiseksi | |
FI95274B (fi) | HIV-1:een liittyvät polypeptidit, diagnostiset systeemit ja analyysimenetelmät | |
Pinter et al. | A sensitive radioimmunoprecipitation assay for human immunodeficiency virus (HIV) | |
CA2105664C (en) | Polypeptides derived from the human immunodeficiency virus endonuclease protein | |
ES2302236T3 (es) | Peptidos del vhi-1 modificados y su uso en la deteccion de anticuerpos anti-vih. | |
AU646460B2 (en) | Monoclonal antibody for differentiating HIV-2 from HIV-1 seropositive individuals | |
CA1338001C (en) | Synthetic peptide antigens for the detection of htlv-1 infection | |
RU1825424C (ru) | Способ обнаружени антител к ВИЧ-2 | |
EP1231271A2 (en) | DNA fragments of the GAG gene of Lav. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
BB | Publication of examined application | ||
FG | Patent granted |
Owner name: SCRIPPS CLINIC AND RESEARCH FOUNDATION |
|
MA | Patent expired |