FI102684B - Menetelmä luontaisen HIV-gp160:n tuottamiseksi - Google Patents
Menetelmä luontaisen HIV-gp160:n tuottamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI102684B FI102684B FI901879A FI901879A FI102684B FI 102684 B FI102684 B FI 102684B FI 901879 A FI901879 A FI 901879A FI 901879 A FI901879 A FI 901879A FI 102684 B FI102684 B FI 102684B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cells
- hiv
- serum
- medium
- htlv
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims abstract description 24
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 61
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010038826 HIV Envelope Protein gp160 Proteins 0.000 claims 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract description 26
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 101710090322 Truncated surface protein Proteins 0.000 description 20
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 11
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 10
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 9
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 7
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 6
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 4
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 4
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 108010039334 HIV Envelope Protein gp120 Proteins 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- OUSKVHOYPHDTIA-DBRKOABJSA-N (3s,4s,5r,6r)-3,4,5,6,7-pentahydroxyheptan-2-one Chemical compound CC(=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO OUSKVHOYPHDTIA-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108010089171 HIV Envelope Protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 101710155913 Major envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- -1 concanavalin A Chemical compound 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000004692 intercellular junction Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012913 medium supplement Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N phenobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- RYVMUASDIZQXAA-UHFFFAOYSA-N pyranoside Natural products O1C2(OCC(C)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)CC5O)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC(C(C1O)O)OC(CO)C1OC(C1OC2C(C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(O)C(CO)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OCC(O)C(O)C1O RYVMUASDIZQXAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
- C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Element Separation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Physical Vapour Deposition (AREA)
Description
102684
Menetelmä luontaisen HIV-gpl60:n tuottamiseksi Tässä kuvattava menetelmä on tehty työn kuluessa, . joka tehtiin National Cancer Institute, Department of 5 Health and Human Servicesin sopimuksen nro NOl-CP-67694 alaisena.
Keksinnön tausta Tämä keksintö koskee ihmisen immuunikatoviruksen (HIV:n), immuunikadon (AIDSin) aiheuttajan, luontaisen 10 gpl60:n tuottamista.
Ihmisen immuunikatovirus (HIV) on nyt varmuudella todettu immuunikadon (AIDSin) aiheuttajaksi. Tämä virus hakeutuu soluihin, joissa on CD4-antigeeni, ja on voimakkaasti sytopaattinen auttaja-indusoijasoluille (T4-soluil-15 le). HIV:n vaippageenituote syntetisoituu gpl60-esiaste-molekyylinä, joka tulee myöhemmin käsitellyksi ulkoiseksi vaippaproteiiniksi gpl20 ja transmembraaniseksi proteiiniksi gp41. gpl60:n ja pienempien proteiinien, gpl20:n ja gp41:n, esiaste-tuotesuhde on nyt hyvin dokumentoitu sa-20 moin kuin kaikkien kolmen aminohapposekvenssit /Ällän et ai., Science 228 (1985) 1091 - 1094 ja Veronese et ai., Science 229 (1985) 1402 - 14057. Ulkopuolinen glykopro-teiini gpl20 sitoutuu alttiiden solujen CD4-molekyyliin virussolun fuusion ja viruksen indusoiman jättisolun muo-X 25 dostumisen alkuvaiheessa /Balgleish et ai., Nature 312, 763 - 7667.
Sen lisäksi että HIV:n gpl20 ja gp41 osallistuvat solun pintareseptorien tunnistukseen ja solufuusioon, ne ovat immuunitunnistuksen pääkohteita HIV:n infektoimissa 30 yksilöissä. Siksi nämä proteiinit ovat saaneet osakseen . erityistä huomiota viruksen tuhoamista koskevissa tutki muksissa ja rokotteen kehittämisessä. On havaittu, että yhdistelmä-DNA-menetelmillä tuotetut suuret gpl20-segmen-tit tai HIV:n infektoimista soluista eristetty luontainen 35 gpl20 saavat aikaan pääasiassa tyyppispesifisten tuhoavien vasta-aineiden syntymisen eläimissä. Lisäksi HIV:n vaipan 102684 esiasteproteiini gpl60, jota tuotettiin bakulovirusvekto-reita sisältävissä hyönteissoluissa, aiheutti voimakkaan tyyppispesifisen immuunivasteen vuohissa /Rusche et ai., PNAS, USA 84 (1987) 6924 - 6928/.
5 Kykyä infektoida tiettyjä solulinjoja HIV:11a ja tehdä infektoiduista soluista koko viruksen jatkuvia tuottajia on kuvattu US-patenttijulkaisussa 4 652 599. Myös kykyä infektoida solulinja ja tämän keksinnön mukaista HIV-varianttia on kuvattu jokin aika sitten /Getchell 10 et ai., J. Clin. Microbiol. 23 (1986) 737 - 742?·
Kumpikaan näistä tapauksista ei ole kuitenkaan yksinään antanut mahdollisuutta saada aikaan menetelmä, jolla pystytään tuottamaan HIV:n glykoproteiinia gpl60 luontaisessa muodossaan. Luontainen gpl60 pilkkoutuu nor-15 maalisti gpl20:ksi ja gp41:ksi. Niinpä solujen kasvualustasta tai hajotetusta viruksesta saatava vaippaproteiini on gpl20:ä ja gp41:ä. Siksi on mitä yllättävintä, että gpl60:ä voidaan valmistaa luontaisessa muodossaan.
Glykoproteiinia gpl60 on tuotettu vain yhdistelmä-20 menetelmin. Yhdistelmä-gpl60 on kuitenkin erilainen kuin luontainen gpl60, erityisesti glykosylaation suhteen. Näistä eroista tulee ratkaisevia pyrittäessä HIV-rokotteeseen, erityisesti siitä syystä, että HIV:n vaippaglykoproteiinit määräävät viruksen hakeutumistaipumuksen ja sisältävät 25 epitooppeja, jotka voat olennaisia viruksen vastaisten tuhoavien vasta-aineiden kehittämisen kannalta.
Yhteenveto keksinnöstä Tämän keksinnön eräänä päämääränä on tarjota käyttöön ainutlaatuinen HUT78-soluklooni, joka infektoituna 30 kroonisesti HTLV-III^,.^ : llä vapauttaa toiminnallisesti .. alkuperäistä virusglykoproteiinia gpl60 solun ulkopuoli seen alustaan.
Tämän keksinnön eräänä toisena päämääränä on tarjota käyttöön kuolemattomaksi tehty solulinja, jota kasva-35 tetaan seerumittomassa alustassa sellaisissa olosuhteissa, että solulinja vapauttaa luontaisessa muodossaan olevaa gpl60:ä alustaan.
3 102684 Tämän keksinnön eräänä päämääränä on vielä tarjota käyttöön luontaisessa muodossaan oleva koskematon HIV-gpl60.
Keksinnön nämä ja muut tavoitteet ja edut toteutetaan kasvattamalla infektoitua solulinjaa 6D5451~seeru-5 mittomassa alustassa ja eristämällä luontainen gpl60, jota solut vapauttavat alustaan.
Kuvien kuvaus
Kuvio 1 (kaista 1) esittää linssilektiini-Sepharo-sesta eluoidun glykoproteiinin SDS-PAGE-kuviota. Kaista 2 10 esittää Coomassie-sinisellä värjättyä puhdistettua gpl60:ä.
Kuvio 2 esittää HIV-spesifisten proteiinien vapautumista 6D54^^-soluista. Osakuva A: alusta, joka on peräisin FCSrssä kasvatetuista soluista; osakuva B: HBl01:ssä kasvatetuista soluista peräisin oleva alusta. Kaista: 15 HIV-positiivinen ihmisseerumi; kaista 2: kaniinin anti-HTLV-IIIB-gp41; kaista 3: kaniinin anti-121-peptidi (Centocore); kaista 4: vuohen anti-HTLV-III -gpl20; kaista
D
5 normaali ihmisseerumi; kaista 6: normaali kaniinin seerumi; kaista 7: normaali vuohen seerumi.
20 Kuvio 3 esittää HIV:n indusoiman solusitkoksen (syncytiumin) muodostumisen inhiboitumista HTLV-III^^-glykoproteiinien vaikutuksesta. CEM-soluja viljeltiin yhdessä Molt-3/HTLV-IIIg-solujen kanssa jäljempänä kuvattavalla tavalla. Solut valokuvattiin 48 tunnin kuluttua.
' 25 Virusglykoproteiinien vaikutusten tutkimiseksi CEM-soluja esi-inkuboitiin 1 tunti proteiinien kanssa ennen rinnak-kaisviljelyä. Osakuva A. käsittelemättömät CEM-solut; osakuva B: CEM-solut ynnä Molt-3/HTLV-III -solut; osakuva
D
C: infektoimattomasta 6D5-soluviljelmästä saaduilla glyko- 4 102684 jälkeen 0,45 ^um:n suodattimen läpi. Puoli millilitraa alustaa inkuboitiin yhdessä CEM5Q-solujen kanssa kokonaistilavuudessa 2 ml jäljempänä kuvattavalla tavalla. Sitoutuneet proteiinit immuunisaostettiin OKT4-vasta-aineella.
Kaista 1: 0,5 x 10^ solua; kaista 2: 1 x 10^ solua; kais-6 6 5 ta 3: 2 x 10 solua, kaista 4: 5 x 10 solua; kaista 5: 10 x 106 solua; kaista 6: 20 x 10^ solua.
Edullisten suoritusmuotojen kuvaus
Yksi HUT78-soluklooni infektoitiin ihmisen immuunikatovirus, tyyppi l:llä (HIV-l:llä), jolloin infektoidusta 10 solulinjasta tuli jatkuva viruksentuottaja. Klooni 6D5 on herkkä krooniselle HIV-l-infektiolle, kuten Getschell et ai. kuvaavat /J. Clin, Microbiol. 23 (1986) 737 - 7427. Klooni 6D5 infektoidaan eräällä spesifisellä HIV-1-kannal-la, HTLV-III^j.^; llä, jolloin saadaan infektoitu solulinja 15 6D5^(.^. Infektoitua solulinjaa kasvatetaan sitten seerumit- tomassa alustassa pelletoimalla 6D5^^^-solut ja suspendoi-malla ne uudelleen seerumittomaan alustaan (kuten HBl01:ään, jota myy Du Pont). Myös seerumitonta alustaa HB104, jota myös myy Du Pont, voidaan käyttää tämän keksinnön käytän-20 nön toteutuksen yhteydessä.
Glykoproteiini gpl60 voidaan erottaa alustassa olevista muista proteiineista vain käytettäessä seerumitonta alustaa. gpl60:ä ei pystytä erottamaan alustan muista 1 komponenteista, kun käytetään seerumia sisältävää alustaa.
25 Edullisessa suoritusmuodossa HBlOl-alusta sisältää myös kasvua edistäviä täydennysaineita, kuten transferrii-nia, insuliinia ja naudan seerumialbumiinia. Solujen kasvun edistämiseksi niistä valmistettiin uusi alaviljelmä joka neljäs päivä. 6D5^^^-soluja kasvatettiin 2-3 suku-.. 30 polven ajan. Alustaan vapautuneiden HIV-proteiinien määrä 011 solunulkoisella käänteistranskriptaasiaktiivisuudella mitattuna seerumittomassa alustassa lähes viisinkertainen seerumipitoiseen alustaan nähden. Infektoitujen solujen kasvualustassa oleva käänteistranskriptaasi (RT) analysoi- 35 tiin käyttämällä (dT)15 (A)n:ä aluketemplaattina Poieszin et ai. kuvaamalla tavalla /PNAS, USA 77 (1980) 7 415 -7 4197- 102684
Soluja sisältämätöntä alustaa käytettiin glykoprote- . 3 linilähteenä. Alustaan lisättiin pitoisuudeksi 20 mmol/dm natriumfosfaattia, pH 7,5, 0,5 % Triton X-100:a, 3 0,1 mmol/dm fenyylimetyylisulfonyylifluoridia ja 400 mmol/ 3 5 dm natnumkloridia. Kun alustaa oli mkuboitu huoneen lämpötilassa 1 tunti, se väkevöitiin 30-kertaiseen väkevyyteen Pellicon-kasettijärjestelmällä, jota myy Millipore. Alustan täydennysaineista peräisin olevat ulkopuoliset proteiinit poistettiin konsentraatista immuuniaffiniteetti-10 absorptiolla (yön yli) käyttämällä Sepharoseen sidottua vuohen vasta-aientta, jota oli muodostettu seerumittoman alustan kasvua edistävien täydennysaineiden sisältämiä proteiineja vastaan. Vuohen vasta-aineeseen sitoutuneet proteiinit poistettiin ja sitoutumaton materiaali johdet-15 tiin sitten lektiiniaffiniteettikolonnin, edullisesti lek-tiini-Sepharose-kolonnin (Pharmcia), läpi. Vaikka on edullista käyttää linssilektiinikolonnia, muitakin lektiinejä, jotka tunnistavat mannoosia, kuten konkanavaliini A:ta, voidaan käyttää. Kun kolonni oli pesty fosfaattipuskuroi-20 dulla fysiologisella suolaliuoksella (PBSillä), se elu- 3 oitiin 400 mmol/dm alfa-metyyliraannosidia sisältävällä liuoksella virusglykoproteiinin ottamiseksi talteen. Vaikka kolonnin eluointiin on edullista käyttää metyylimanno-, sidia, voidaan käyttää mitä tahansa mannoosia, pyranosi- 25 dia tai sakkaridia, joka kilpailee lektiinin kanssa affi-niteettikolonnissa. Kuvio 1 (kaista 1) esittää linssi-lektiini-Sepharosesta eluoidun glykoproteiinin SDS-PAGE-kuviota. Vallitsevat glykoproteiinit näytteissä olivat 120 ja 160 kilodaltonin (kD) proteiinit. Nämä proteiinit 30 reagoivat voimakkaasti myös immuunitäpläkokeissa HIV-1- vasta-ainepositiivisen ihmisseerumin kanssa. HTLV-III4,-^-glykoproteiinin immuunitäpläanalyysi tehdään tunnetulla menettelyllä, kuten Sarngadharanin et ai. kuvaamalla tavalla /Science 224 (1984) 506 - 508?· Lyhyesti kuvattuna 35 proteiinit ajetaan 7-%:isillä SDS:polyakryyliamidigeeleil-lä ja siirrettiin nitroselluloosaliuskoihin (kaupallisesti 6 102684 saatavissa). Nitroselluloosaliuskat käsitellään sitten asianmukaisilla vasta-aineilla ja täplät kehitetään perok-sidaasiin kytketyillä sekundaarisilla vasta-aineilla; vyöhykkeet visualisoidaan saattamalla liuskat reagoimaan di-5 aminobentsidiinin kanssa.
gpl60 puhdistettiin linssilektiini-Sepharose-kolon-nista eluoidusta glykoproteiiniseoksesta immuuniaffini-teettikromatografisesti käyttämällä monoklonaalista vasta-ainetta HIV-l-gp41-proteiinille. Monoklonaalinen vasta-10 aine kehitettiin käyttämällä osittain puhdistettuja HTLV-III^j.^-glykoproteiineja tavanomaisin menetelmin. Vasta-aineen immunoglobuliinifraktio liitettiin Sepharoseen valmistajan (Pharmacia) kuvaamalla menetelmällä. Linssilek-tiini-Sepharose-kolonnista tuleva eluaatti tasapainotet-15 tiin lämpötilassa 4°C anti-HIV-l-gp41-Sepharosella liuok- 3 sessa, joka sisälsi 20 mmol/dm Tris-HCl:a, pH 8,5, 0,5 % 3 3
Triton X-100:a, 1 mol/dm kaliumkloridia ja 0,1 mmol/dm PMSF:ä. Sitten Sepharose pakattiin pylvääseen, pestiin PBS:llä ja eluoitiin sitoutunut proteiini liuoksella, joka 3 20 sisälsi 100 nunol/dm natriumvetykarbonaattia. HTLV-III^^^-gpl60 eluoitui pylväästä lähes homogeenisessa tilassa.
Kuvio 1 (kaista 2) esittää SDS-PAGE:lla erotettua ja Coomassie-sinisellä värjättyä puhdistettua gpl60:ä.
Glykoproteiinia gpl60 ja sen johdannaisia, jotka « 25 on valmistettu tämän keksinnön mukaisesti, voidaan käyttää tavanomaisesti immuuniterapeuttisissa ja/tai immuunidiag-nostisissa menetelmissä ja koostumuksissa. Tällaiset hoitomenetelmät ja käytettävät määrät ovat alalla hyvin tunnettuja, ja ammattimiehet voivat valita ne käytettävissä 30 olevien menetelmien ja tekniikoiden joukosta. Tämän kek-• sinnön mukaisesti valmistettua gpl60:ä voidaan esimerkik si yhdistää farmaseuttisesti hyväksyttävään apuaineeseen sellainen määrä, että saadaan aikaan diagnostinen käyttökelpoisuus ELISA-määrityksessä.
35 Vaikka edellä olevassa keksinnön kuvauksessa viita taan edullisiin suoritusmuotoihin, sillä ei ole tarkoitus rajoittaa keksintöä.
7 102684
Jotta tässä kuvattu keksintö olisi täydellisemmin ymmärrettävissä, annetaan seuraavat esimerkit. Tulisi ymmärtää, että nämä esimerkit on tarkoitettu ainoastaan valaisemaan keksintöä eikä niitä tulisi pitää sitä millään 5 tavoin rajoittavina.
Esimerkit Esimerkki 1 6D54gi-soluja (2 000 000 kpl) leimattiin 15 tuntia seerumittomassa BHlOl-alustassa (10 ml), joka sisälsi 35 10 5 % normaalista metioniinimäärästä, 1 mCi S-metioniinia ja 5 % dialysoitua HB101:n täydennysainetta. Soluton su-pernatantti suodatettiin 0,45 yum:n suodattimen läpi, vä- kevöitiin ja käsiteltiin liuoksella, joka sisälsi 0,5 % 3 3
Triton X-100:a, 500 mmol/dm natriumkloridia ja 1 mmol/dm 15 fenyylimetyylisulfonyylifluoridia. Kun liukenevaan muotoon saatettua alustaa oli pidetty 1 tunti huoneen lämpötilassa, se sekoitettiin yhtä suuren tilavuuden kanssa PBS:ää, joka sisälsi 0,5 % Triton X-100:a, 1 % deoksikolaattia ja 0,1 % natriumdodekyylisulfaattia (PBS-TDS). Seosta 20 (1 ml) inkuboitiin yön yli yhdessä anti-HIV-seerumin (10 ^ul) ja 10 % proteiini-A:ta sisältävän Sepharosen (150 yUl) kanssa. Sepharose pelletoitiin, pestiin neljästi PBS-TDS:llä ja keitettiin 2 min liuoksen kanssa, joka si- 3 sälsi 1 % beeta-merkaptoetanolia ja 125 mmol/dm Tris-25 HCl:a (pH 6,8). Liukenevaan muotoon saatetut leimatut proteiinit erotettiin 7,5-%:isella SDS-polyakryyliamidi-geelillä ja tehtiin autoradiografia Veronesen et ai. kuvaamalla tavalla /Science 229 (1985) 1 402 - 1 4057· Kuviossa 2 gpl60 näkyy erillisenä immuunireagoivana pro-' I 30 te iinituotteena kasvualustassa.
Esimerkki 2
Seerumittomassa alustassa kasvatettujen solujen ulkopuolisen alustan sisältämät virusproteiinit analysoitiin leimaamalla ne edellä kuvatulla tavalla 35 · 35 metabolisesti S-metioniinilla. Vapautuneet radioaktiivi set proteiinit immuunisaostettiin joko seropositiivisella 102684 ihxnisseerumilla tai HTLV-III_:n gpl20:lle tai gp41:lle
D
spesifisillä vasta-aineilla. HIV-l-positiivinen ihmissee-rumi saosti pääasiallisen vaippaproteiinin (p24) lisäksi kaksi proteiinia, joiden koot olivat noin 120 kD ja 160 kD. 5 Vuohen vasta-aine HTLV-III -gpl20:lle saosti sekä 120 kD:n
D
että 160 kD:n proteiinin, mikä viittaa siihen, että ne sisältävät gpl20:n immuunireaktiiviset alueet. Toisaalta kaniinin anti-gp41 immuunisaosti vain 160 kD:n proteiinin. Nämä tulokset osoittavat, että 160 kD:n proteiini sisältää 10 sekä HlV:n gpl20- että gp41-alueen, kun taas 120 kD:n proteiinissa on vain HIV:n gpl20-epitoopit.
Esimerkki 3 Tämän keksinnön mukaisesti tuotetut luontaiset 120 ja 160 kD:n glykoproteiinit karakterisoitiin tarkemmin mää-15 rittämällä niiden reaktiivisuus HTLV-III^in gpl20:lle ja
D
gp41:lle spesifisten vasta-aineiden kanssa. Tätä varten proteiinit erotettiin SDS-PAGE:11a, siirrettiin nitrosel-luloosaliuskoihin ja käsiteltiin HTLV-III„:n gpl20:lle ja
D
gp41:lle spesifisillä vasta-aineilla. Sekä 120 että 20 160 kD:n proteiinit reagoivat HIV-l-positiivisen seerumin ja vuohen anti-gpl20:n kanssa. Vain 160 kD:n proteiini reagoi HTLV-ΙΙΙοίη gp41:lle spesifisten vasta-aineiden
D
kanssa. Käytetyistä kahdesta monoklonaalisista gpl20:n vastaisista vasta-aineista vain toinen reagoi molempien 25 kanssa, mikä osoittaa monoklonaalisten vasta-aineiden tyyp-pispesifisen reaktiivisuuden erilaisten eristettyjen HIV-kantojen kanssa.
Esimerkki 4
Vaikka HIV-l-infektion pääkohde on T-lymfosyyttien 30 auttaja-/-indusoijaryhmä, joka sisältää CD4-solunpinta-J markkereita, aletaan vasta ymmärtää todellista mekanismia, jolla virus infektoi sille herkät kohdesolut. CD4-antigee-nien tiettyjen epitooppien vastaisten monoklonaalisten vasta-aineiden on havaittu estävän virusinfektion, ja ne 35 voisivat immuunisaostaa CD4:n ja gpl20:n komplekseja. Tämä 9 102684 näyttäisi viittaavan siihen, että avainasemassa oleva gpl20:n ja CD4:n välinen vuorovaikutus aloittaa HIV-1-infektioprosessin. Virusinfektion eräänä seurauksena on solufuusiotapahtumien aiheuttama monitumaisten jättiso-5 lujen muodostuminen. Erään CEM-solukloonin on osoitettu muodostavan nopeasti ja kvantitatiivisesti solusitkosta (syncytium) sekoitettuna HIV-l-infektoitujen solulinjojen kanssa /Mathews et ai., PNAS, USA 84 (1987) 5424 - 54287 (kuvio 3B). Tämän tyyppinen solusitkoksen muodostus toi-10 mii usein gpl20:n ja CD4:n välisen vuorovaikutuksen mittana virusinfektion aikana. HTLV-III^^-glykoproteiinin kykyä häiritä HTLV-III :n indusoimaan CEM-solujen fuusiota
D
tutkittiin inkuboimalla kohde-CEM-soluja osittain puhdistetun glykoproteiinivalmisteen kanssa ennen sekoittamista 15 Molt-3/HTLV-III -solujen kanssa 36 tunnin ajan. CEM-solu- £5 jen esi-inkuboinnilla infektoitumattomista 6D5-soluista saatujen glykoproteiinivalmisteiden kanssa ei ole mitään vaikutusta solusitkoksen muodostumiseen (kuvio 3C). Sitä vastoin CEM-solujen esikäsittely HTLV-III^g^-glykoproteii- 20 nivalmisteiden kanssa esti täydellisesti HTLV-III^-/-
Molt-3-solujen indusoimman solusitkoksen muodostuksen (kuvio 3D). Tämä viittaa siihen, että virusglykoproteiini pystyisi selektiivisesti sitoutumaan kohdesoluilla oleviin CD4-antigeeneihin ja estämään siten HIV-l-infektoitujen 25 solujen aiheuttaman infektion.
Tekemällä immuunisaostus ihmisseerumilla havaittiin, että yli 90 % virusglykoproteiineista oli liukenevassa muodossa säädetyn alustan suurinopeuksisen sentrifugoin- nin jälkeen. HTLV-III451-glykoproteiinin vuorovaikutusta 30 CD4-molekyylin kanssa tutkittiin tarkemmin leimatun : gpl20:n ja gpl60:n spesifisellä sitoutumisella CEM-solui- 35 hm. Tätä varten S-metioniinilla leimatusta eDS.-.rstä 451 saatua solutonta supernatanttia inkuboitiin kasvavien CEM-solumäärien kanssa. Kun solut oli pesty PBS:llä, so-35 luilla oleva sitoutuneen HIV-glykoproteiinin ja CD4:n kompleksi tehtiin liukenevaksi pinta-aktiivisilla aineilla 10 102684 edellä kuvatulla tavalla. Liukenevaan muotoon saatettu uute immuunisaostettiin kahdella CD4-molekyylin vastaisella monoklonaalisella vasta-aineella. OKT4 saosti molemmat HIV-glykoproteiinit. On kuitenkin kiinnostavaa, että 5 reseptoritiheyden ollessa rajoittavana tekijänä gpl20 oli vallitseva soluihin sitoutuva spesies. Suuremmalla solu-tiheydellä, kun sitoutumsikohtia oli runsaammin, oli sekä gpl60 että gpl20 selvästi havaittavissa CD4-kompleksissa. CD4-glykoproteiinikompleksia ei pystytty saostamaan mono-10 klonaalisella 0KT4A:lla. Tämä sopii yhteen aiempien havaintojen kanssa, joiden mukaan HIV-gpl20:n kiinnittymiskohta CD4-molekyylillä on OKT4A-epitooppi. Reseptorikohdan suhteellinen affiniteetti näyttää suosivan gpl20:ä gpl60:een verrattuna sen havainnon perusteella, ettei gpl20:n ja 15 gpl60:n seoksesta sitoutunut käytännöllisesti katsoen ol lenkaan gpl60:ä CD4-pitoisuuksien ollessa rajoittavia. Se, missä määrin tämän sitoutumisvaikeuden sanelevat suurempaan gpl60:een kohdistuvat topologiset esteet lähestyttäessä solupinnan CD4:ää, on vielä määrittämättä.
20 Vaikka tässä on kuvattu keksinnön erityisiä suori tusmuotoja, ymmärrettäneen luonnollisesti, ettei keksintö rajoitu niihin ja että on tehtävissä sen monia ilmeisiä muunnoksia ja variaatioita ja että tällaiset muunnokset on tarkoitettu kuuluviksi liitteenä olevien patenttivaati-25 musten suoja-alan piiriin.
Claims (4)
1. Menetelmä ihmisen immuunikatoviruksen luontaisen gpl60:n tuottamiseksi, tunnettu siitä, että 5 infektoidaan HUT78-T-solulinjan soluja HTLV-III451: llä; valikoidaan ne infektoidut HUT78-solut, jotka tuottavat luontaista gpl60:tä; inkuboidaan mainittua gpl60:tä tuottavaa solulinjaa 10 seerumittomassa kasvualustassa solujen kasvua edistävissä olosuhteissa; ja eristetään luontainen gpl60 mainitusta kasvualustasta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä ihmisen 15 immuunikatoviruksen luontaisen gpl60:n tuottamiseksi, tunnettu siitä, että inkuboidaan luontaista gpl60:tä tuottavan infektoidun 6D5451-T-solulinjan soluja seerumittomassa kasvualustassa ja 20 eristetään mainitusta kasvualustasta luontaista HIV-vaippaglykoproteiinia gpl60 vastaava 160 kD:n proteiini.
3. HTLV-III451: llä infektoidun HUT78-solui in jän käyttö luontaisen gpl60:n tuottamiseksi viljeltäessä sitä see- 25 rumittomassa kasvualustassa.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että solulinja on solulinja 6D5451. 12 102684
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US23285988A | 1988-08-16 | 1988-08-16 | |
| US23285988 | 1988-08-16 | ||
| US36254889 | 1989-06-07 | ||
| US07/362,548 US5116740A (en) | 1988-08-16 | 1989-06-07 | Method for producing native hiv gp160 |
| US8903428 | 1989-08-10 | ||
| PCT/US1989/003428 WO1990002196A1 (en) | 1988-08-16 | 1989-08-10 | Method for producing native hiv gp160 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI901879A0 FI901879A0 (fi) | 1990-04-12 |
| FI102684B1 FI102684B1 (fi) | 1999-01-29 |
| FI102684B true FI102684B (fi) | 1999-01-29 |
Family
ID=26926401
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI901879A FI102684B (fi) | 1988-08-16 | 1990-04-12 | Menetelmä luontaisen HIV-gp160:n tuottamiseksi |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5116740A (fi) |
| EP (1) | EP0394386B1 (fi) |
| KR (1) | KR900702045A (fi) |
| AT (1) | ATE127526T1 (fi) |
| AU (1) | AU638214B2 (fi) |
| DE (1) | DE68924155T2 (fi) |
| DK (1) | DK175733B1 (fi) |
| FI (1) | FI102684B (fi) |
| HK (1) | HK1000969A1 (fi) |
| WO (1) | WO1990002196A1 (fi) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5254457A (en) * | 1989-01-11 | 1993-10-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Monoclonal antibodies and method for identifying different aids-related viruses |
| US7041293B1 (en) | 1990-04-03 | 2006-05-09 | Genentech, Inc. | HIV env antibodies |
| EP0527760B1 (en) * | 1990-04-03 | 1995-07-19 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for vaccination against hiv |
| WO1992006220A1 (en) * | 1990-10-05 | 1992-04-16 | President And Fellows Of Harvard College | Detection and isolation of ligands |
| WO1994028929A1 (en) * | 1993-06-07 | 1994-12-22 | Genentech, Inc. | Hiv envelope polypeptides |
| US5736317A (en) * | 1995-03-07 | 1998-04-07 | Akzo Nobel N.V. | Human T-cell line infected with HIV-2 which secretes a protein corresponding to native HIV-2 gp160 in an extracellular medium |
| ZA975889B (en) * | 1996-07-08 | 1998-02-23 | Genentech Inc | HIV envelope polypeptides and vaccine. |
| US6585979B1 (en) | 1996-07-08 | 2003-07-01 | Genentech, Inc. | HIV envelope polypeptides and immunogenic composition |
| US20020155120A1 (en) * | 1996-07-10 | 2002-10-24 | Lowell George H. | Protein and peptide vaccines for inducing mucosal immunity |
| CN1500806B (zh) * | 2002-11-14 | 2010-05-05 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 一种HIV－1ɡp160膜蛋白及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4699785A (en) * | 1984-09-18 | 1987-10-13 | The Regents Of The University Of California | Cell line producing feline leukemia virus |
| AU4310689A (en) * | 1988-09-02 | 1990-04-02 | Ohio State University Research Foundation, The | Virus-derived antigenic composition and its preparation and use |
-
1989
- 1989-06-07 US US07/362,548 patent/US5116740A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-10 WO PCT/US1989/003428 patent/WO1990002196A1/en active IP Right Grant
- 1989-08-10 DE DE68924155T patent/DE68924155T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-10 KR KR1019900700768A patent/KR900702045A/ko not_active Application Discontinuation
- 1989-08-10 AU AU40687/89A patent/AU638214B2/en not_active Expired
- 1989-08-10 EP EP89909487A patent/EP0394386B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-10 AT AT89909487T patent/ATE127526T1/de not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-04-10 DK DK199000900A patent/DK175733B1/da not_active IP Right Cessation
- 1990-04-12 FI FI901879A patent/FI102684B/fi active IP Right Grant
-
1997
- 1997-12-29 HK HK97102646A patent/HK1000969A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0394386B1 (en) | 1995-09-06 |
| AU4068789A (en) | 1990-03-23 |
| DE68924155D1 (de) | 1995-10-12 |
| HK1000969A1 (en) | 1998-05-15 |
| DK90090D0 (da) | 1990-04-10 |
| FI901879A0 (fi) | 1990-04-12 |
| EP0394386A1 (en) | 1990-10-31 |
| EP0394386A4 (en) | 1991-03-13 |
| DE68924155T2 (de) | 1996-04-18 |
| FI102684B1 (fi) | 1999-01-29 |
| WO1990002196A1 (en) | 1990-03-08 |
| DK90090A (da) | 1990-04-10 |
| AU638214B2 (en) | 1993-06-24 |
| DK175733B1 (da) | 2005-02-07 |
| US5116740A (en) | 1992-05-26 |
| KR900702045A (ko) | 1990-12-05 |
| ATE127526T1 (de) | 1995-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0699077B1 (en) | Hiv immunogenic complexes | |
| US6608179B1 (en) | Antibodies, that bind to HIV-2 transmembrane glycoprotein homodimer (gp 80) | |
| EP0339504A2 (en) | Human immunodeficiency virus (HIV) env-coded peptide capable of eliciting HIV-inhibiting antibodies in mammals | |
| Ikuta et al. | Expression of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) gag antigens on the surface of a cell line persistently infected with HIV-1 that highly expresses HIV-1 antigens | |
| CA2066607A1 (en) | Peptides associated with the cd4 binding region of gp120 and their methods of use | |
| US5459060A (en) | Human monoclonal antibodies directed against the transmembrane glycoprotein (gp41) of human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) | |
| FI102684B (fi) | Menetelmä luontaisen HIV-gp160:n tuottamiseksi | |
| CA1270756A (en) | T-lymphotrophic virus | |
| CA2007567A1 (en) | Monoclonal antibodies and method for identifying different aids-relating viruses | |
| Meshcheryakova et al. | CD4-derived peptide and sulfated polysaccharides have similar mechanisms of anti-HIV activity based on electrostatic interactions with positively charged gp120 fragments | |
| US6083504A (en) | Human monoclonal antibodies directed against the transmembrane glycoprotein (GP41) of human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) | |
| US5122468A (en) | Hut-78 cell lines infected with HTLV-III which secrete gp160 | |
| JP4423374B2 (ja) | Ｈｉｖ−２型ヒトレトロウイルスのトランスメンブランエンベロープ糖タンパク質の抗原、及び、該抗原に免疫類似性を有する抗原 | |
| Pinter et al. | A sensitive radioimmunoprecipitation assay for human immunodeficiency virus (HIV) | |
| JP2810179B2 (ja) | 天然型ｈｉｖ ｇｐ１６０の製造方法 | |
| US5562905A (en) | Human immunodeficiency virus (hiv) env-coded peptide capable of eliciting hiv-inhibiting antibodies in mammals | |
| EP0329761B1 (en) | Hiv-1-related polypeptides, diagnostic systems and assay methods | |
| EP0400245B1 (en) | Proteins and glycoproteins of the HIV-2 EHO retrovirus antibodies directed against them - application for the diagnosis | |
| Cogniaux et al. | Characterization of monoclonal antibodies against the p17 core protein of the human immunodeficiency virus 1 | |
| Tripathy et al. | Design and synthesis of a self-assembling peptide derived from the envelope proteins of HIV type 1. An approach to heterovalent immunogens. | |
| Clerget-Raslain et al. | Specificity of anti-peptide antibodies elicited against synthetic peptides mimicking conserved regions of HIV1 envelope glycoprotein | |
| CA2201419C (en) | Human t-cell lymphotropic virus type i envelope protein and human monoclonal antibodies specific therefor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Owner name: AKZO N.V. |