FI94759B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-1,3a,8-trimetyylipyrrolo/2,3b/indolijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

X - 94759

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-1,3a, 8-trimetyylipyrrolo[2,3b] indoli johdannaisten valmistamiseksi 5 Esillä oleva keksintö koskee menetelmää yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava

Rl-(X)tn I ch3 10 \ /V A i c -L-13 (i),

Il L A

o Τ| fN* CH3H CHj 15 jossa X on 0, NH tai N-alempi-Cj^-alkyyli;

Rx on alempi-Ci.g-alkyyli, halogeenilla tai alempi-C1.6-alkoksilla substituoitu fenyyli tai bentsyyli? R2 on vety tai alempi-C1.6-alkyyli; ja 20 m on 0 tai 1, edellyttäen, että kun m on 0 voi Rx olla myös vety, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditiosuolan valmistamiseksi, jolloin menetelmälle on tunnusomaista, että a) yhdiste, jolla on kaava 25 ch3 h2n \ "Orin (ΧΠΙ).

30 I H I

.

» saatetaan reagoimaan kaavan R1NC0 mukaisen isosyanaatin kanssa, jossa Rx on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Rx on 35 edellä määritelty, X on NH ja R2 on vety, tai • « 2 94759 b) kaavan XIII mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan R1-X'-C0C1 (XVIa) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa Rx on edellä määritelty ja X' on O, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Rx on edellä määritelty, X' on 5 O ja Rj on vety, sillä edellytyksellä, että jos edellä mainitussa reaktiossa Rx on tertiäärinen butyyli, käytetään yhdisteen XVIa sijasta di-tert-butyylidikarbonaattia, tai c) alkyloidaan edellä kohdassa (b) saatu kaavan I mukainen yhdiste kaavan R2Hal mukaisella halogenidilla, 10 kaavan R20S020R2 mukaisella disulfaatilla tai kaavan R20S02CH3 mukaisella mesylaatilla, joissa R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä ja Hai on Cl, Br tai J, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Rx ja R2 ovat edellä määriteltyjä, paitsi että R2 ei ole vety ja X' on O, 15 tai d) mahdollisesti kaavan XIII mukainen yhdiste saa tetaan reagoimaan kaavan RXC0C1 mukaisen happokloridin kanssa, jossa Rx on edellä määritelty, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa m on 0, R2 on vety ja Rx on 20 edellä määritelty, tai e) muunnetaan edellä kohdassa (c) saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa Rx on tertiäärinen butyyli ja R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä, lämpötilassa noin 150 - 200 °C amiiniksi, jolla on kaava 25 R*. f 3

| n I

30 CH3 CH3 jossa R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä, ja joka toisena reaktiovaiheena saatetaan reagoimaan kaavan RxNC0 mukaisen isosyanaatin kanssa, jossa Rx on edellä mää- 35 ritelty lukuunottamatta vetyä, kaavan 1 mukaisen yhdisteen • 4 • 94759 3 saamiseksi, jossa X on NH, Rj on edellä määritelty ja R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä.

Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat käyttökelpoisia lieventämään lukuisia muistin 5 häiriötoimintoja, joille on tunnusomaista kolinerginen va jaus, kuten Alzheimerin tautia.

Ellei toisin mainita tai osoiteta ovat seuraavat määritelmät voimassa läpi hakemuksen ja siihen liittyvissä patenttivaatimuksissa.

10 Termi alempialkyyli tarkoittaa suoraa tai haarau tunutta alkyyliryhmää, jossa on 1 - 6 hiiliatomia. Esimerkkejä mainitusta alempialkyylistä ovat metyyli, etyyli, n-propyyli, iso-propyyli, n-butyyli, iso-butyyli, sek-bu-tyyli, t-butyyli ja suoraketjuinen ja haarautunut pentyy-15 li ja heksyyli.

Termi halogeeni tarkoittaa fluoria, klooria, bromia tai jodia.

Esillä olevan keksinnön mukaista menetelmää valaistaan yksityiskohtaisesti käyttäen jäljempänä kuvattua syn-20 teesikaaviota.

Esillä olevaan keksintöön liittyviä yhdisteitä kuvaavissa rakennekaavioissa paksut linjat (^M), jotka lähtevät 1,2,3,3a,8,8a-heksahydropyrrolo[2,3-b]indolirengas-systeemin 3a- ja 8a-hiilistä, tarkoittavat, että nämä kak-.. 25 si substituenttia ovat kolmirengassysteemin keskitason yläpuolella, kun taas katkoviivat (muHill) tarkoittavat, että kaksi substituenttia ovat kolmirengassysteemin keskitason alapuolella, ja aaltoviivat (^✓w) tarkoittavat, että nämä kaksi substituenttia ovat mainitun keskitason joko ylä-30 tai alapuolella. Konformationaalisuuden vuoksi täytyy molempien 3a- ja 8a-asemassa olevien substituenttien olla joko mainitun keskitason yläpuolella tai alapuolella. Siten kaavoissa (I), (II) ja (III) 3a- ja 8a-hiilissä olevat substituentit ovat cis, koska ne ovat samalla puolella • · 94759 4 kolmirengassysteemiä. Kun mainitut substituentit ovat kummatkin kolmirengassysteemin keskitason yläpuolella, on konfiguraatio 3aS-cis, ja kun kummatkin substituentit ovat keskitason alapuolella, on konfiguraatio 3aR-cis.

5 r2

Rj Rj 10 j Y | H Γ R3 *4 15 3aS-cis

20 R2 R,-«)» I

.. 25 ! '^Φ^ζ?2 Y H R3 3aR - cis 30

Keksijöiden halutessa kuvata hakemuksessa ja pa-tenttivaatimuksissa yhdellä kaavalla (tilan säästämiseksi), että yhdiste on joko 3aS-cis tai 3aR-cis, tai niiden raseeminen tai muu seos, sisältää yhdisteen kaava silloin 35 aaltoviivoja, kuten kaavassa (I).

» · » «

II

5 94759

Esillä olevan keksinnön vaatimuksiin kuuluu kunkin yhdisteen tai rakennekaavan kummatkin mainitut isomeerit (3aS-cis ja 3aR-cis), vaikka toisinaan tilan säästämiseksi esitetään hakemuksessa vain yksi isomeeri. Keksinnön vaa-5 timusten piiriin kuuluvat myös kaikki 3aS-cis ja 3aR-cis isomeerien seokset mukaan lukien raseeminen 1:1 seos.

Synteesikaavio Jäljempänä esitetyssä synteesivaiheiden kuvauksessa ovat X, m ja Rx ja R2 ovat edellä määriteltyjä, R3, R4 ja R5 10 ovat metyylejä ja R6 on vety tau alempi alkyyli, tai muutoin on osoitettu.

Vaihe A

Lähtien yhdisteestä II, jossa Y* on vety, fluori, kloori, bromi, alempialkyyli, alempialkoksi tai trialem-15 pialkyylisilyyli ja käyttäen Julian'in ja Pikl'in kuvaamaa synteesikaaviota [J. Amer. Chem. Soc., 57 (1935) 563), voidaan valmistaa kaavan III mukainen yhdiste, kuten jäljempänä esitetyssä diagrammissa on pääpiirtein esitetty. Synteesikaavion yksityiskohdista viitataan alkuperäisar-20 tikkeliin.

• · · j t 1 m 6 94759 ___ Br t1 Rj /Br

Pv1 pci Y R5 γ ιο ^3 (II) R5 R5 15 --H --ch2cn /^1\ - ><Λν\

1 y’ U

20 13 R3 *5 _ ”2 » ril--ch2ch2nh2

25 Pd 1/ I

γ· O

r3 30 (ΠΙ)

II

• · 7 94759

Vaihe B

Yhdisteen III annetaan reagoida natriummetallin ja etanolin kanssa pääosin samalla tavoin kuin edellä mainitussa Julian'in ja Piki'in artikkelissa on kuvattu kaavan 5 IV mukaisen yhdisteen saamiseksi. Jälleen reaktion yksityiskohdista viitataan alkuperäisartikkeliin.

R5 10 (III) + Na + C2H5OH -► | || | 1

Y' H

R3 H

15 (IV)

Vaihe C

Yhdisteen III annetaan reagoida etyylikloorifor-miaatin kanssa, ja sen jälkeen tuotteen annetaan reagoida 20 LiAlH4: n kanssa pääkohdin kuten ovat kuvanneet Yu ja Bros- si, Heterocycles, 27 (1988) 1709 kaavan V mukaisen yhdisteen saamiseksi.

' · 1 • · « 94759 8 -;-CH2CH,NH OEt (HI) + a-C-OCjH,-► \/ 5 >^ν\ oy' 0

Rj O

10 ^ρφ

Y’ H I

15 r3 CH3 (V)

20 Vaihe D

Yhdisteen IV annetaan reagoida halogenidiyhdisteen kanssa, jolla on kaava R4'-Hal, jossa R4' on alempialkyyli, alempialkenyyli, alempialkynyyli tai aryylialempialkyyli ja Hai on kloori tai bromi, tunnetulla tavanomaisella ta- ... 25 valla kaavan VI mukaisen yhdisteen saamiseksi.

• ·

II

9 94759 r5

(IV) + R/.Ha] -► I , |) I I

5

Y* I H

R,’ (VI) 10

Valhe E

Yhdisteen IV annetaan reagoida muurahaishappo-etik-kahappo-seka-anhydrldln tai muurahaishapon anhydrldin kanssa tunnetulla tavanomaisella tavalla kaavan VII mukal-15 sen yhdisteen saamiseksi.

f (IV) + H - C - 0 - C - CH3 ^

20 0 0 / I h I

R3 ^C\

(j H

(VII)

. 25 Vaihe F

Yhdisteen IV annetaan reagoida yhdisteen kanssa, jolla on kaava R,-C-C1 30 fi jossa R7 on alemplalkyyll, aryyllalemplalkenyyli tai alemplalkoksl, tunnetulla tavanomaisella tavalla kaavan VIII mukaisen yhdisteen saamiseksi.

« 10 . 94759 f’

° r H I

R3 ^C\ CT r7 (VIII)

10 Vaihe G

Yhdisteen IX, joka on saatu vaiheessa B, C, D, E tai F, annetaan reagoida nitroniumtetrafluoriboraatin (N02BF4) kanssa kaavan X mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Tämä reaktio suoritetaan tyypillisesti sopivassa liuotti-15 messa, kuten asetonitriilissä, lämpötilassa noin - 50 -82 eC. On edullista että yhdisteen IX ja N02BF4:n moolisuh-de on noin 1,0 - 1,1.

γ I H r h *· *3 R< 25 ·; (ix) (X)

Vaihe H

Yhdisteen IXa, joka on saatu vaiheessa B, C, D, E tai F, annetaan reagoida N02BF4:n kanssa pääkohdin kuten 30 vaihessa G, paitsi että yhdisteen IXa ja N02BF4:n moolisuh-de on noin 2,0 - 2,2, kaavan XI mukaisen yhdisteen saa-* miseksi.

II

« - 94759 *5 11 s R« I no2 |5 . ·*- γψ r3 r4 no2 R3 R4 UXa) (XI) 10 Valhe 1

Kaavan XII mukainen yhdiste, joka on saatu valheessa G tai H, hydrataan platina- tai palladiumkatalyy-tin, kuten platinaoksidin tai palladiumin hiilellä, avulla, kaavan XIII mukaisen yhdisteen saamiseksi. Koska yh-15 diste XIII on suhteellisen epästabiili, käytetään sitä jäljempänä kuvattuihin seuraaviin reaktioihin ilman liuoksesta eristämistä.

20 R5 f R< \ N0\ Λ 1 nh2 s5

Y H I Y I H

25 R4 R3 R4 (XII) ^ (XUI) /

30 Vaihe J

ΐ. Yhdisteen XIII annetaan reagoida kaavan R1NC0 (Rx # H) mukaisen isosyanaatin kanssa kaavan XIV mukaisen yhdisteen saamiseksi. Tämä reaktio suoritetaan tyypillisesti sopivassa liuottimessa, kuten etyyliasetaatissa, 35 lämpötilassa -78 - 78 eC.

12 94759

H H

I ! f (XIII) + R,NCO-► Κ» O Υ I Η R3 R* 10 (XIV)

Valhe K

Yhdisteen XI11 annetaan reagoida kaavan XVI mukai-15 sen yhdisteen kanssa emäksen, kuten trietyyliaminin ja/tai 4-dimetyyliaminopyridiinin, läsnä ollessa, kaavan XVIII mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa X' on O. Tyypillisesti reaktio suoritetaan sopivassa liuottimessa, kuten etyyliasetaatissa, lämpötilassa -78 - 78 °C.

20

(XIII) + Rj-O-C-Cl 1 II O

(XVI)

” 25 H

·« ** . — λΦΨ

O Y I H

x’ = o R3 R* (XVIII) 4 • · „ 94759 13

Kun edellä olevassa reaktiossa Rx on tertläärlnen butyyli, käytetään yhdisteen XVI sijasta di-tert-butyyli-dlkarbonaattla.

Vaihe L

5 Yhdisteen XVIII annetaan reagoida vahvan emäksen, kuten sek-BuLl:n, kanssa, ja syntyvän anionin annetaan reagoida halogenidiyhdisteen kanssa, jolla on kaava R2 - Hai, jossa R2 ei ole vety ja Hai on kloori tai bromi, tunnetulla tavanomaisella tavalla kaavan XIX mukaisen yh-10 disteen saamiseksi.

(XVIII) + sek. BuLi + R2 - Hai (R2 φ H) r2 — /

OY I H I

20 *3 r4 (XIX)

Sama tulos voidaan myös aikaansaada antamalla yhdisteen XVIII reagoida litiumbis( trimetyylisilyyli)amidin, 25 ____ Si(CH3 )3

Li - N

" Si(CH3 )3' 30 kanssa sopivassa liuottimessa, kuten THF:ssä, ja sen jäl-. keen antamalla syntyvän anionin reagoida kaavan R2-0-S02-0-R2 mukaisen disulfaattiyhdisteen, kaavan R2-0-S02-CH3 mukaisen mesylaatin tai kaavan R2C1 tai R2Br mukaisen kloridin tai bromidin kanssa sopivassa liuotti-35 messa, kuten THF:ssa.

14 - 94759

Vaihe M

Yhdisteen XIII annetaan reagoida kaavan Rj-CO-Cl mukaisen happokloridin kanssa tunnetulla tavanomaisella tavalla kaavan XXII mukaisen yhdisteen saamiseksi.

5 H

(XIII) + Rj C1 --► c L/ 1 1 J

10 \ / C O Y | H | D R3 ^ (XXII)

15 Vaihe N

Vaiheessa L saatu kaavan XlXa mukainen yhdiste muutetaan kaavan XXIII mukaiseksi yhdisteeksi. Tämä muunnos suoritetaan tavanomaisesti kuumentamalla yhdistettä XlXa lämpötilassa noin 150 - 250 eC. Sen jälkeen yhdisteen 20 XXIII annetaan reagoida kaavan RjNCO mukaisen isosyanaatin kanssa, kuten vaiheessa J kaavan XXIV mukaisen yhdisteen saamiseksi.

« · . . · li » « . 94759 15 r2 ch3 r5 • «Λ/γγχγ

o Y IHI

ch3 r3 «4 10 (XlXa ) R2 r5

15 -i!-1 RiNCO

" kXp—'

H I

R3 ^ 20 (XXIII) 1 '

O H I

30 R3 R4 (XXIV) 1 ' •

Jfi . 94759 ίο

Esillä olevat kaavan I mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa useita muistihäiriöitä, joille on tunnusomaista alentunut kolinerginen toiminta, kuten Alzheimerin taudissa.

5 Tämän käyttökelpoisuuden osoittavat näiden yhdis teiden kyky estää asetyylikolinesteraasientsyymiä ja siten lisätä asetyylikoliinin pitoisuutta aivossa.

Kolinesteraasin estokoe

Kolinesteraaseja on kaikkialla kehossa, sekä ai-10 voissa että seerumissa. Kuitenkin vain aivojen asetyyliko-linesteraasin (AChE) jakauma korreloi keskuskolinergisen hermotuksen kanssa. Tämän saman hermotuksen uskotaan heikentyneen Alzheimer-potilailla. Siten aivojen AChE:n (vastakohtana seerumin AChE:lie) spesifiset estäjät aiheutta-15 vat vähemmän sivuvaikutuksia ja siten vähemmän toksisuutta kuin fysostigimiini (epäspesifinen AChE-estäjä). Olemme määritelleet in vitro asetyylikolinesteraasin vaikutuksen eston rotan aivojuoviossa.

Asetyylikolinesteraasin vaikutuksen esto in vitro 20 rotan aivojuoviossa

Asetyylikolinesteraasia (AChE), jota joskus kutsutaan aidoksi tai spesifiksi kolinesteraasiksi, esiintyy hermosoluissa, luustoon liittyvissä lihaksissa, sileissä lihaksissa, lukuisista rauhasissa ja punaisissa veriso- ·· 25 luissa. AChE voidaan erottaa muista kolinesteraaseista • · substraatti- ja inhibiittorispesifisyydellä ja alueellisella jakaantumisella. Sen jakauma aivoissa korreloi ko-linergisen hermotuksen kanssa, ja alifraktiointi osoittaa suurinta pitoisuutta hermojen päissä.

30 Yleisesti on hyväksytty, että AChE:n fysiologinen .1 tehtävä on nopea asetyylikoliinin hydrolyysi ja inakti- vointi. AChE-inhibiittorit osoittavat merkittäviä kolino-mineettisiä vaikutuksia kolinergisesti hermotetuissa vai-kutuselimissä, ja niitä on terapeuttisesti käytetty vi-35 herkaihin, voimakkaan lihasheikkouden ja suolistolamaan- • 94759 17 nuksen hoidossa. Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat kuitenkin, että AChE-inhibiittorit voivat olla myös hyödyllisiä hoidettaessa Alzheimer-tylsistymistä.

Jäljempänä kuvattua menetelmää käytettiin esillä 5 olevassa keksinnössä kolinesteraasivaikutuksen mittaamiseksi. Tämä on muunnelma menetelmästä, jonka ovat kuvanneet Ellman et ai. [Biochem. Pharmacol. 7 (1961) 98].

Menettely: A. Reagenssit 10 1. 0,05 M fosfaattipuskuri pH 7,2 a) 6,85 g NaH2P04' H20/100 ml tislattua H20:ta b) 13,40 g Na2HP04 7H20/100 ml tislattua H20:ta c) lisätään a) b):hen, kunnes pH on 7,2 d) laimennetaan 1:10 15 2. Kromogeenisubstraattipuskuri a) 9,9 mg 5,5-ditiobisnitrobentsoehappo (DTNB) (0,25 mM) b) 99 mg s-asetyylitiokoliinikloridi (5 mM) c) laimennetaan 100 ml:aan 0,05 M fosfaattipusku-20 rilla, pH 7,2 (reagenssi 1) 3. Useimpiin kokeisiin 2 mM varastoliuos testilää-kettä tehdään sopivassa liuottimessa ja laimennetaan portaittain niin, että lopullinen konsentraatio esi-inkuboin-tivaiheessa vaihtelee 10'3 - 10-6M. Erilaisia konsentraa- ·; 25 tioita voidaan käyttää riippuen lääkeaineen voimakkuudes- • · ta.

B. Kudospreparaatti

Wistar-urosrotilta katkaistaan kaulat, aivot poistetaan nopeasti, aivojuohio leikataan irti, punnitaan ja 30 homogenisoidaan 19 osaan (noin 7 mg proteiinia/ml) 0,05 M .' fosfaattipuskuria (pH 7,2) käyttäen Potter-Elvehjem-homo genisoi jaa. Lisätään 50 mikrolitran yksiköihin kantoainet-ta, joissa on useita lääkeaineväkevyyksiä, 50 mikrolitran tasaosia homogenaattia, ja esi-inkuboidaan 10 minuutin 35 ajan huoneenlämpötilassa.

• ie 94759 C. Koe 1. IC50-rutiinimäärityksiin käytetään Abbott Bichro-matic Analyzer ΑΒΑ-100 -analysaattoria asetyylikolineste-raasln vaikutuksen selvittämiseksi.

5 Instrumenttiasetukset

Suodatin: 450-415 Inkubolntllämpötila: 30 °C Desimaalipiste: 0000,

Analyyslaika: 5 minuuttia 10 Karuselliklerros: 3

Reaktlosuunta : alas : päätepiste

Ruiskulevy: 1:101 laimennus

Sen jälkeen kun kudosta (entsyymiä) on esl-lnkubol-15 tu 10 minuutin ajan Inhibiittorin kanssa, sekoitetaan näytteet kromogeenlsubstraattlpuskurln kanssa ABA-100:lla. Käyttäen Ilmoitettuja Instrumenttlasetuksia ABA-100 automaattisesti havannoi värireaktion ja tulostaa tulokset entsyymiyksiköissä 15 minuutin jälkeen.

20 2. Entsyymiaktiivisuus voidaan mitata myös Gilford 250 -spektrofotometrillä. Tätä mittausta käytetään tarkempiin kineettisiin mittauksiin.

Instrumenttiasetukset:

Lamppu: näkyvä .. 25 Suodatin: ei suodatinta

Aallonpituus: 412 nm Raon leveys: 0,2 mm Valinta: pieni aukko

Kalibroitu absorbanssi: 1,0 yksikköä täysi skaala 30 Liuskan nopeus: 0,5 cm/min.

Reagenssit lisätään moniosakyvetin referenssi- ja näytepuolelle seuraavasti:

II

19 94759

Referenssi Näyte 0,8 ml 0,05 M fos- 0,8 ml 0,05 M fosfaattipuskuria faattipuskuria 0,8 ml kromogeeni- 0,8 ml kromogeenisubstraattipuskuria 5 substraattipuskuria 10 mikrolitraa entsyymiä (kudoshomogenaattia

Ensin määritetään entsyymin (kudoshomogenaatin) ei-inhiboitu aktiivisuus. Lääkeaineet lisätään sopivassa 10 liuottimessa sopivissa vahvuuksissa puskurikantoaineeseen.

Reaktionopeus määritetään tallennetun absorbanssimuutoksen kulmakertoimesta. Nopeus (moolia/litraa/minuuttia) voidaan laskea kuten seuraavassa kaavassa on kuvattu: 15 nopeus (moolia/litraa/minuuttia)»kulmakerroin/(1,36 x 104) Tämän kokeen tulokset joillekin esillä olevan keksinnön mukaisille yhdisteille ja fysostigmiinille (refe-renssiyhdiste) on esitetty taulukossa 1.

• · « • · « • 4 • 94759 20

Taulukko 1

Yhdiste Estävä väkevyys (μΜ), Aivo-AChE

1,2,3,3a,8,8a-heksa- 14,0 5 hydro-5-(fenoksikar- bonyyliamino)-l,3a, 8-trimetyylipyrrolo-[2,3-b]indolioksalaatti 10 5-(4-kloorifenoksikarbo- 1,1 nyyliaminio)-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-1,3a,8-trimetyy-lipyrrolo-[2,3-b]indolioksalaatti 15 (referenssi yhdiste)

Fysostigmiini 0,034 Tätä käyttökelpoisuutta osoittaa lisäksi näiden 20 yhdisteiden kyky palauttaa kolinergisiä muistihäiriötä jäljempänä kuvatussa pimeän välttämiskokeessa (Dark Avoidance Assay)

Pimeän välttökoe Tässä kokeessa testataan hiirien kykyä muistaa epä-25 mielyttävä ärsyke 24 tunnin ajan. Hiiri asetetaan kam-mioon, jossa on pimeä osasto; voimakas hehkuvalo ajaa sen pimeään osastoon, jossa metallilevyt lattiassa antavat sille sähköiskun. Eläin otetaan pois koelaitteesta ja 24 tunnin jälkeen testataan uudelleen sen kyky muistaa 30 sähköisku.

. Jos annetaan skopolamiinia, koliini vaikutuksen vas tavaikutuksen aiheuttavaa ainetta, joka heikentää muistia, ennen eläimen ensimmäistä koekammiokertaa, niin eläin palaa pimeään osastoon piakkoin sen jälkeen kun se asetetaan 35 koekammioon 24 tuntia myöhemmin. Tämä skopolamiinin vaiku- *· > « 21 - 94759 tus estetään aktiivisella koeyhdisteellä, jolloin aikaväli pimeään osastoon sisäänmenolle on pidempi.

Aktiivisen yhdisteen tulokset ilmoittavat kuinka monella %:lla eläinryhmästä skopolamiinin vaikutus on es-5 tetty, jota osoittaa se, että koekammioon asettamisen ja pimeään osastoon sisäänmenon väliaika pidentynyt.

Tämän kokeen tulokset joillekin keksinnön mukaisille yhdisteille ja takriinille sekä pilokarpiinille (refe-renssiyhdiste) on esitetty taulukossa 2.

« · • .

> « 94759 22

Taulukko 2

Yhdiste Annos (mg/ruumiin Skopolamiinin ai- painokilo, s.c.) kaasaaman muisti-5 häiriön kumoutumi nen %:na eläimistä 5-(t-butoksikarbo- 0,31 33 nyyliamino)- 1,25 20 10 1,2,3,3a,8,8a- 5,0 27 heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo-[2,3-b]indoliok-salaatti 15 5-(bentsoksikarbo- 0,3 28 nyyliamino)- 1,0 21 1,2,3,3a,8,8a- 3,0 21 heksahydro-1,3a,8-20 trimetyy- lipyrrolo-[2,3-b]-indoli 1,2,3,3a,8,8a- 0,16 53 25 heksahydro-5- 0,31 40 (fenoksikarbonyyli- 5,0 21 amino)-l,3a,8-tri-metyylipyrrolo-[2,3-b]-indoli-30 oksalaatti « (Referenssi yhdiste)

Takriini 0,63 13

Pilokarpiini 5,0 13 • < t 23 94759

Esillä olevia kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan antaa potilaalle tehokkaita määriä jollain lukuisista menetelmistä, esimerkiksi suun kautta kapseleina tai tabletteina, ruuansulatuskanavan ulkopuolisesti steriileinä 5 liuoksina tai suspensioina ja joissain tapauksissa suonen sisäisesti steriileinä liuoksina. Vapaa emäs lopputuotteet, vaikkakin tehokkaita sinänsä, voidaan formuloida ja antaa niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditio-suolojen muodossa stabiilisuuden, kiteyttämisen helppou-10 den, lisääntyneen liukoisuuden ja vastaavien syiden vuoksi.

Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistettujen happoadditiosuolojen valmistuksessa käyttökelpoisia happoja ovat epäorgaaniset hapot, kuten suola-, bromivety-, 15 rikki-, typpi-, fosfori- ja perkloorihapot, sekä orgaaniset hapot, kuten viini-, sitruuna-, etikka-, meripihka-, maleiini-, fumaari- ja oksaalihapot.

Esillä olevat kaavan I mukaiset aktiiviset yhdisteet voidaan antaen suun kautta esimerkiksi inertin lai-20 mennusaineen tai syötävän kantoaineen kanssa, tai ne voidaan sulkea gelatiinikapseleihin, tai ne voidaan puristaa tableteiksi. Yhdisteisiin voidaan terapeuttisesti suun kautta annettaessa lisätä täyteaineita, ja niitä voidaan käyttää tabletteina, nappeina, eliksiireinä, suspensioina, j 25 siirappeina, vohveleina, purukumeina ja niiden kaltaisissa muodoissa. Näiden valmisteiden tulisi sisältää vähintään 0,5 % aktiivista yhdistettä, vaihdellen riippuen erityisestä annostelumuodosta, ja edullisesti ne sisältävät 4 -noin 70 % yhdistettä yksikön painosta. Tälläisissä koostu-30 muksissa aktiivisen yhdisteen määrä on sellainen, että so-. piva annostus saavutetaan edullisesti niin, että suun kautta annettava annosyksikkömuoto sisältää 1,0 - 300 milligrammaa aktiivista yhdistettä.

Tabletit, pillerit, kapselit, napit ja niiden kal-35 täiset voivat myös sisältää seuraavia ainesosia: sideai- 24 · 94759 neen, kuten mikrokiteisen selluloosan, traganttikumin tai gelatiinin; täyteaineen, kuten tärkkelyksen tai laktoosin, hajotusaineen, kuten algiinihapon, Primogeelin, maissi-tärkkelyksen ja niiden kaltaisen; voiteluaineen, kuten 5 magnesiumstearaatin tai Sterotexin: liukastusaineen, kuten kolloidisen silikonidioksidin; ja makeutusaineen, kuten sakkaroosin tai sakkariinin, tai makuaineen, kuten piparmintun, metyylisalisylaatin tai appelsiinimaun. Kun annos-yksikkömuoto on kapseli voi se sisältää edellä mainitun 10 tyyppisten aineiden lisäksi nestemäisen kantoaineen, kuten rasvaöljyn. Muut yksikköannosmuodot voivat sisältää useita muita aineita, jotka muuttavat annosyksikön fysikaalista muotoa, esimerkiksi päällysteaineita. Siten tabletit tai pillerit voidaan päällystää sokerilla, shella-15 kalla tai muilla suolessa hajoavilla päällysteaineilla.

Siirappi voi aktiivisten yhdisteiden lisäksi sisältää sakkaroosia makeutusaineena ja tiettyjä säilöntä-, väri- ja makuaineita. Näiden lukuisten koostumuksien valmistuksessa käytettävien aineiden tulisi olla farmaseuttisesti puhtai-20 ta ja käytetyissä määrissä ei-toksisia.

Ruuansulatuskanavan ulkopuolista terapeuttista annostelua varten esillä olevat kaavan I mukaiset aktiiviset yhdisteet voidaan liittää liuoksiin tai suspensioihin.

Näiden valmisteiden tulisi sisältää vähintään 0,1 % aktii-... 25 vista yhdistettä, mutta määrä voi vaihdella 0,5 - 30 % sen t · painosta. Aktiivisen yhdisteen määrä näissä koostumuksissa on sellainen, että sopiva annostus saavutetaan edullisesti siten, että ruuansulatuskanavan ulkopuolinen annosyksikkö sisältää 0,5 - 100 milligrammaa aktiivista yhdistettä.

30 Liuokset tai suspensiot voivat sisältää myös muita ainesosia: steriilin laimentimen, kuten veden ruisketta varten, suolaliuoksen, rasvaöljyn, polyetyleeniglykoleja, glyseriinin, propyleeniglykolin tai muun synteettisen liuottimen; bakteerin vastaisia aineita, kuten bentsyyli-35 alkoholin tai metyyliparabeeneja; hapettumisen vastaisia _ Λ · 94759 25 aineita, kuten askorbiinihapon tai natriumbisulfaatin; hyytelöintiaineita kuten etyleenidiamiinitetraetikkahapon; puskureita, kuten asetaatteja, sitraatteja tai fosfaatteja sekä toonisuuden säätöaineita, kuten natriumkloridia tai 5 dekstroosia. Ruuansulatuskanavan ulkopuolisesti annettava valmiste voidaan laittaa kertakäyttöruiskuihin tai monian-noslääkepulloihin, jotka ovat lasisia tai muovisia.

Seuraavat esimerkit esitetään tämän keksinnön havainnollistamiseksi .

10 Esimerkki 1 1,2,3,3a, 8,8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyyli-pyrrolo[2,3-b]indoli

Sekoitettuun liuokseen, jossa on l,2,3,3a,8,8a-hek-sahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia (25,0 g) 15 asetonitriilissä (500 ml) 0 °C:ssa, lisättiin nitronium- tetrafluoriboraattia (18,65 g) liuotettuna asetonitriiliin (500 ml) tipoittain yli 0,5 tunnin ajan. Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa yhden tunnin ajan ja annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan vielä tunnin ajan. Lisättiin jäätä 20 ja laimeaa NaHC03-liuosta ja sen jälkeen metyleenikloridia (800 ml). Kerrokset erotettiin, ja vesipitoinen faasi uutettiin metyleenikloridilla (2 x 200 ml). Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, kuivattiin (Na2S04) ja väkevöitiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin kahdesti si-25 likageelillä, ensin eluoiden 2,5 % metanoli/etyyliasetaa- «« tiliä ja sen jälkeen 2 % metanoli/metyleenikloridilla 1,2,3,3a, 8,8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyylipyrro-lo[2,3-b]indolin saamiseksi (7,7 g).

Analyysi:

30 Laskettu C13H16N302:lie 63,14 % C 6,94 % H 16,99 % N

Löydetty: 62,86 % 6,90 % H 16,82 % N

• 26 - 94759

Esimerkki 2 5,7-dinitro-l,2,3,38,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trime-tyylipyrrolo[2,3-b]indoli

Sekoitettuun liuokseen, jossa on l,2,3,3a,8,8a-hek-5 sahydro-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia (3,7 g) asetonitriilissä (100 ml) 0 °C:ssa, lisättiin nitronium-tetrafluoriboraattia (5,1 g) liuotettuna asetonitriiliin (100 ml) tipoittain yli 0,5 tunnin ajan. Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa yhden tunnin ajan ja annettiin läm-10 metä huoneenlämpötilaan vielä tunnin ajan. Lisättiin jäätä ja laimeaa NaHC03-liuosta ja sen jälkeen metyleeniklori-dia (200 ml). Kerrokset erotettiin, ja vesipitoinen faasi uutettiin metyleenikloridilla (2 x 50 ml). Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, kuivattiin (Na2S04) ja väkevöitiin, 15 jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin silikagee-lillä (eluoimalla 2:1 heksaani/asetonilla) 5,7-dinitro-1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]-indolin saamiseksi (1,8 g).

Analyysi:

20 Laskettu C13H16N404:lle 53,40 % C 5,53 % H 19,17 % N

Löydetty: 53,11 % C 5,44 % H 19,14 % N

Esimerkki 3 1,2,3,3a, 8,8a -heksahydro-5- (metyyliaminokarbonyyli-amino)-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolimesotartraat-• 25 tihemihydraatti

Etyyliasetaattiin (100 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia (2,6 g) ja hydrattiin Parr-laitteella 310 kPa (45 psi:ssa) (naulaa per neliötuuma) käyttäen PtOz:ta (250 mg) katalyyt-30 tinä. Pelkistys päättyi 3 tunnissa. Pelkistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon. Seos jäähdytettiin 0 °C:seen, lisättiin metyyli-isosyanaatin (0,6 g) liuosta etyyliasetaatissa (100 ml) kahden tunnin ajan ja seosta sekoitettiin vielä 2 tuntia huoneenlämpötilassa.

35 Seos pestiin vedellä (2 x 100 ml), kuivattiin (Na2S04), > I · 27 S4759 väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kromatografialla (eluoimalla 15 % MeOH/EtOAc:11a). Puhtaat fraktiot väkevöitiin l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-5-(metyyliaminokarbonyy-liamino) -1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolinsaamiseksi 5 (1,05 g). Mesotartaraatti valmistettiin liuottamalla vapaa emäs eetteriin (200 ml) ja MeOH:iin (10 ml) ja lisäämällä mesotartariinihapon liuos eetterissä.

Analyysi:

Laskettu C15H22N407'C4H606'%H20: lie:

10 52,64 % C 6,75 % H 12,92 % N

Löydetty: 52,66 % C 6,47 % H 12,90 % N

Esimerkki 4 1,2,3,3a, 8,8a-heksahydro-5- (metoksikarbonyyliami-no)-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolioksalaatti 15 Etyyliasetaattiin (100 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyylipyrrolo [ 2,3-b] indo-lia (1,0 g) ja hydrattiin Parr-laitteella 310 kPa (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (100 mg) katalyyttinä. Pelkistys päättyi 2 tunnissa. Pelkistysseos suodatettiin suo-20 raan typpi huuhdeltuun pulloon. Lisättiin 4-dimetyyliami-nopyridiiniä (50 mg), seos jäähdytettiin 0 eC:seen, lisättiin dimetyylipyrokarbonaatin (0,54 g) liuosta etyyliasetaatissa (50 ml) yhden tunnin ajan. Seos väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä 25 (eluoimalla 15 % MeOH/EtOAc:11a). Puhtaat fraktiot väkevöitiin 1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-5-(metyylioksi-karbonyy-liamino) -1,3a, 8-trimetyylipyrrolo[ 2,3-b] indolinsaamiseksi (0,4 g) ja oksalaattisuola valmistettiin liuottamalla vapaa emäs eetteriin (200 ml) ja minimaaliseen määrään me-30 tanolia ja lisäämällä oksaalihapon liuos eetterissä.

Analyysi:

Laskettu C15H21N302 · C2H204:

55,87 % C 6,08 % H 11,50 % N Löydetty: 55,66 % 6,28 % H 11,42 % N

• · 2β 94759

Esimerkki 5 5-( etoksikarbonyyliamino )-1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolioksalaatti

Etyyliasetaattiin (100 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 5 8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyylipyrrolo [ 2,3-b] indo- lia (1,0 g) ja hydrattiin Parr laitteella 310 kPa (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (100 mg) katalyyttinä. Pelkistys päättyi 2 tunnissa. Pelkistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon. Lisättiin 4-dimetyyliami-10 nopyridiiniä (50 mg) ja trietyyliaminia (0,14 g), seos jäähdytettiin 0 °C:seen, lisättiin etyyliklooriformiaatin (0,44 g) liuosta etyyliasetaatissa (70 ml) 1,5 tunnin ajan. Seos pestiin vedellä (2 x 100 ml), kuivattiin (Na2S04), väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kromatogra-15 fialla silikageelillä (eluoimalla 15 % MeOH/EtOAc:11a). Puhtaat fraktiot väkevöitiin 5-etoksikarbonyyliamino-1,2,3,3a, 8, 8a-heksahydro- 1,3a, 8-trimetyylipyrrolo [2,3b]-lndolin saamiseksi (0,6 g). Oksalaattisuola valmistettiin liuottamalla vapaa emäs eetteriin (200 ml) ja minimimää-20 rään Me0H:ia (20 ml) ja lisäämällä oksaalihapon liuos eetterissä .

Analyysi:

Laskettu C16H23N302'C2H204:

56,97 % C 6,65 % H 11,07 % N 25 Löydetty: 56,93 % C 6,58 % H 11,03 % N

Esimerkki 6 1,2,3,3a, 8,8a-heksahydro-5- (trikloorietoksikarbo-nyyliamino)-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indoli

Etyyliasetaattiin (100 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 30 8a-heksahydro-5-nitro-1,3a, 8-trimetyylipyrrolo [ 2,3-b] indo- lia (2,2 g) ja hydrattiin Parr-laitteessa 310 kPa (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (160 mg) katalyyttinä. Pelkistys päättyi 3 tunnissa. Pelkistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon. Lisättiin 4-dimetyyliami-35 nopyridiiniä (0,109 g) ja trietyyliaminia (0,89 g), seos

• · I

II

94759 29 jäähdytettiin O eC:seen, lisättiin trikloorietyylikloori-formiaatin (1,88 g) liuosta etyyliasetaatissa (100 ml) 2 tunnin aikana. Seos pestiin vedellä (2 x 100 ml), kuivattiin (Na2S04), väkevöitiin ja puhdistettiin flash-liek-5 kikromatografiällä silikageelillä (eluoimalla 15 % MeOH/-

EtOAcrlla). Puhtaat fraktiot väkevöitiin 1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-5-(trikloorietoksikarbonyyliamino)-1,3a,8-tri-metyylipyrrolo[2,3-b]indolin saamiseksi (0,8 g).

Analyysi: 10 Laskettu C16H20N3O2.C2H2O4:

48,90 % C 5,14 % H 10,70 % N Löydetty: 49,08 % C 5,06 % H 10,77 % N

Esimerkki 7 5-(propoksikarbonyyliamino)-cis-l,2,3,3a,8,8a-hek-15 sahydro-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b)indolioksalaatti

Parr-pulloon 500 ml laitettiin 0,370 g platinaoksi-dikatalyyttiä ja 1,51 g 5-nitro-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia 250 ml:ssa HPLC-laatuista etyyliasetaattia. Pullo asettiin Parr-laittee-20 seen, puhdistettiin vetykaasulla ja ravistettiin huoneen lämpötilassa keskimääräisessä paineessa 379 kPa (55 psi) vetyä. Liuos suodatettiin suoraan 24 tunnin jälkeen typel-lä huuhdeltuun astiaan katalyytin poistamiseksi. Mekaanisesti sekoitettuun astiaan lisättiin 0,66 g trietyyliamii-25 nia, 0,19 g 4-dimetyyliaminopyridiinia ja lisäksi 50 ml HPLC-laatuista etyyliasetaattia. Liuos jäähdytettiin 0 °C:seen käyttäen jää/vesihaudetta ja käsiteltiin tipoit-tain liuoksella, jossa oli 0,72 g propyyliklooriformiaat-tia 150 ml:ssa HPLC-laatuista etyyliasetaattia. Reaktiota 30 valvottiin ohutkerrosanalyysillä silikageelillä. Reaktio tukahdutettiin 150 ml:11a vettä ja saatua seosta sekoitettiin voimakkaasti 5 minuutin ajan ja siirrettiin erotus-suppiloon. Vesipitoinen faasi poistettiin. Kuivattu (Na2S04) orgaaninen faasi suodatettiin ja väkevöitiin tum-35 maksi öljyksi tyhjiössä, öljy osoittautui olevan monen 30 94759 ainesosan seos, joka erotettiin preparatiivisella HPLC:lla silikageelillä. Puhdas öljy liuotettiin 150 ml:aan vedetöntä dietyylieetteriä ja käsiteltiin tipoittain pienellä ylimäärällä vedetöntä oksaalihappoa vedettömässä dietyyli-5 eetterissä samalla sekoittaen. Syntyneet kiinteät aineet otettiin talteen suodattamalla inertissä ilmakehässä ja pestiin suppilossa pienillä erillä vedetöntä dietyylieetteriä, jolloin saatiin 1,07 g oksalaattituotetta jauhemaisena kiinteänä aineena, s.p. 153-155 °C (hajoaa).

10 Analyysi:

Laskettu C17H25N302 * C2H204:

58,00 % C 6,92 % H 10,68 % N Löydetty: 58,66 % C 6,88 % H 10,95 % N

Esimerkki 8 15 5-( t-butoksikarbonyyliamino )-l, 2,3,3a, 8,8a-heksa- hydrol,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolioksalaatti

Etyyliasetaattiin liuotettiin 1,2,3,3a,8,8a-heksa-hydro-5-nitro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia (1,9 g) ja hydrattiin Parr-laitteessa 310 kPa (45 psi:ssa) 20 käyttäen Pt02:ta katalyyttinä. Pelkistys päättyi 2 tunnissa. Pelkistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon, jossa oli di-tert-butyylidikarbonaattiaa (1,8 g). Lisättiin 4-dimetyyliaminopyridiiniä (85 mg) ja reaktio-seosta sekoitettiin 3 tunnin ajan huoneenlämpötilassa.

. 25 Lisättiin vettä (50 ml) ja kerrokset erotettiin. Etyyli- •« asetaattiliuos kuivattiin Na2S04:lla, suodatettiin ja väke-vöitiin öljyn saamiseksi, joka puhdistettiin kromatogra-fialla silikageelillä (eluoiden 15 % MeOH/EtOAc:lla). Puhtaat fraktiot otettiin talteen ja väkevöitiin vapaan emäk-30 sen saamiseksi (800 mg), joka muutettiin sen oksalaatti-suolaksi liuottamalla eetteriin (100 ml) ja lisättiin ok- » saalihapon (300 mg) liuokseen eetterissä (25 ml).

Analyysi:

Laskettu C18H27N306 C2H404:

35 58,95 % C 7,17 % H 10,31 % N

Löydetty: 58,81 % C 7,10 % H 10,21 % N

• · 31 94759

Esimerkki 9 1,2,3,3a, 8,8a-heksahydro-5-( fenoksikarbonyyliami-no)-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolioksalaatti

Etyyliasetaattiin (100 ml) liuotettiin 1,2,3,33,8, 5 8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyylipyrrolo[2,3-b) indo- lia (2,2 g) ja hydrattiin Parr-laitteessa 310 kPa (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (220 mg) katalyyttinä. Pelkistys päättyi 2 tunnissa. Pelkistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon. Lisättiin 4-dimetyyliami-10 nopyridiiniä (0,100 g) ja trietyyliamiinia (0,9 g), seos jäähdytettiin 0 °C:seen ja lisättiin yli 1,5 tunnin ajan liuosta, jossa oli fenyyliklooriformiaattia (1,4 g) etyyliasetaatissa (100 ml). Seos pestiin vedellä (2 x 100 ml), kuivattiin Na2S04:lla, väkevöitiin ja puhdistettiin flash-15 kromatografialla (eluoiden 15 % MeOH/EtOAc:lla). Puhtaat fraktiot väkevöitiin l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-5-(fenoksi-karbonyyliamino)-l, 3a, 8-trimetyylipyrrolo[2,3-b] -indolin saamiseksi (0,66 g), joka muutettiin sen oksalaattisuolak-si liuottamalla eetteriin (200 ml) ja metanoliin (20 ml) 20 sekä lisäämällä oksaalihapon (0,16 g) liuosta eetterissä. Analyysi:

Laskettu C22H23N302 C2H204:

61,82 % C 5,90 % H 9,83 % N Löydetty: 61,75 % C 5,93 % H 10,04 % N

25 Esimerkki 10 • · 5-(4-metoksifenoksikarbonyyliamino)-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-1,3a, 8-trimetyylipyrrolo[ 2,3-b] indolioksalaatti

Etyyliasetaattiin (200 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyylipyrrolo [ 2,3-b] indo-30 lia (3,8 g) ja hydrattiin Parr-laitteessa 310 kPa (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (380 mg) katalyyttinä. Pel-kistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon. Lisättiin 4-dimetyyliaminopyridiiniä (183 mg) ja trietyyliamiinia (3,0 g), seos jäähdytettiin 0 *C:seen ennen kuin 35 lisättiin yli 1,5 tunnin ajan liuosta, jossa oli 4-metok-sifenyyliklooriformiaattia (2,8 g) etyyliasetaatissa •.

32 · 94759 (60 ml). Seos pestiin vedellä (2 x 100 ml), kuivattiin Na2S04:lla, väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kromatogra-fiällä. Puhtaat fraktiot väkevöitiin 5-(4-metoksifenoksi-karbonyyliamino)-l, 2,3,3a, 8,8a-heksahydro-l, 3a, 8-trimetyy-5 lipyrrolo[2,3-b]-indolin saamiseksi (1,0 g). Oksalaatti- suola valmistettiin liuottamalla vapaa emäs Et20:iin (200 ml) ja lisäämällä oksaalihapon (240 mg) liuosta Et20: ssa (40 ml).

Analyysi: 10 Laskettu C21H25N303'C2H204:

60,39 % C 5,95 % H 9,18 % N Löydetty: 59,97 % C 5,88 % H 9,35 % N

Esimerkki 11 5- (4-kloorifenoksikarbonyyliamino )-1,2,3,3a,8,8a-15 heksahydro-1,3a, 8-trimetyylipyrrolo[ 2,3-b) indolioksalaatti

Parr-pulloon 500 ml laitettiin 0,450 g platinaoksi-dikatalyyttiä ja 7,23 g 5-nitro-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia 250 ml:ssa HPLC-laatuista etyyliasetaattia. Pullo asettiin Parr-laittee-20 seen, puhdistettiin vetykaasulla ja ravistettiin huoneen lämpötilassa keskimääräisessä paineessa 379 kPa (55 psi) vetyä. Liuos suodatettiin suoraan 24 tunnin jälkeen typel-lä huuhdeltuun astiaan hydrauskatalyytin poistamiseksi. Mekaanisesti sekoitettuun liuokseen lisättiin 2,94 g tri-25 etyyliaminia, 0,37 g 4-dimetyyliaminopyridiinia ja lisäksi »< 40 ml HPLC-laatuista etyyliasetaattia. Liuos jäähdytettiin 0 eC:seen käyttäen jää/vesihaudetta ja käsiteltiin tipoit-tain liuoksella, jossa oli 5,54 g 4-kloorifenyylikloori-formiaattia 250 ml:ssa HPLC-laatuista etyyliasetaattia.

30 Reaktiota valvottiin ohutkerrosanalyysillä silikageelillä. Reaktio tukahdutettiin 150 ml:11a vettä ja saatua seosta sekoitettiin voimakkaasti 10 minuutin ajan ja siirrettiin erotussuppiloon. Vesipitoinen faasi poistettiin. Kuivattu (Na2S04) orgaaninen faasi suodatettiin ja väkevöitiin tum-35 maksi vaahdoksi tyhjiössä. Vaahto osoittautui olevan monen ainesosan seos, jotka erotettiin preparatiivisella • · 33 94759 HPLC:lla silikageelillä, jolloin saatiin 1,51 g puhdasta öljyä. Puhdas öljy liuotettiin 250 ml:aan vedetöntä di-etyylieetteriä ja suodatettiin, ja suodosta käsiteltiin tipoittain pienellä ylimäärällä vedetöntä oksaalihappoa 5 vedettömässä dietyylieetterissä samalla sekoittaen. Syntynyt saostuma otettiin talteen suodattamalla inertissä ilmakehässä ja pestiin suppilossa pienillä erillä vedetöntä dietyylieetteriä, jolloin saatiin jauhemainen kiinteä aine, s.p. 110 °C (hajoaa).

10 Analyysi:

Laskettu C20H22ClN3O2.C2H2O4:

57,21 % C 5,24 % H 9,10 % N Löydetty: 57,23 % C 5,35 % H 9,36 % N

Esimerkki 12 15 5-(2,6-dimetyylifenoksikarbonyyliamino)-1,2,3,3a, 8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indoli

Etyyliasetaattiin (200 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 8a-heksahydro-5-ni tro-1,3a, 8-trimetyylipyrrolo [ 2,3-b] indo-lia (3,0 g) ja hydrattiin Parr-laitteessa 310 kPa 20 (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (300 mg) katalyyttinä. Pel- kistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon. Lisättiin 4-dimetyyliaminopyridiiniä (145 mg) ja trietyy-liamiinia (2,4 g), seos jäähdytettiin 0 ®C:seen. Lisättiin yli 1,5 tunnin ajan liuosta, jossa oli 2,6-dimetyylifenyy- • 25 liklooriformiaattia (2,2 g) etyyliasetaatissa (60 ml).

Seos pestiin vedellä (2 x 100 ml), kuivattiin Na2S04:lla, väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä. Puhtaat fraktiot väkevöitiin 5-(2,6-dimetyyli-fenoksikarbonyyliamino)-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-30 trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolin saamiseksi (2,04 g).

Analyysi:

Laskettu C22H27N302 : 72,30 % C 7,45 % H 11,50% N

Löydetty: 71,86 % C 7,43 % H 11,56 % N 1 34 94759

Esimerkki 13 5-( bentsoksikarbonyyliamino )-1,2,3,3a,8,8a-heksa-hydro-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b)indoli

Etyyliasetaattiin (100 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 5 8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyylipyrrolo[ 2,3-b] indo- lia (2,2 g) ja hydrattiin Parr-laitteessa 310 kPa (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (220 mg) katalyyttinä. Reaktio päättyi 2 tunnissa. Pelkistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon. Lisättiin 4-dimetyyliaminopyri-10 diiniä (0,100 g) ja trietyyliamiinia (0,9 g), seos Jäähdytettiin 0 1C:seen ja lisättiin yli 1,5 tunnin ajan liuosta, jossa oli bentsyyliklooriformiaattia (1,5 g) etyyliasetaatissa (100 ml). Seos pestiin vedellä (2 x 100 ml), kuivattiin Na2S04:lla, väkevöitiin ja puhdistettiin flash-15 kromatografiällä silikageelillä (eluoiden 15 % Me0H/Et0-

Ac:lla). Puhtaat fraktiot väkevöitiin 5-(bentsoksikarbo-nyyliamino)-l, 2,3,3a, 8,8a-heksahydro-l, 3a, 8-trimetyylipyr-rolo[2,3-b]indolin saamiseksi (1,2 g).

Analyysi:

20 Laskettu C21H25N302: 71,75 % C 7,18 % H 11,96 % N

Löydetty: 71,70 % C 7,16 % H 11,98 % N

Esimerkki 14 5-(4-klooribentsoyyliamino)-l,2,3,3a,8,8a-heksa-hydro-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indoli • 25 Etyyliasetaattiin (300 ml) liuotettiin 1,2,3,3a,8, 8a-heksahydro-5-nitro-l, 3a, 8-trimetyylipyrrolo [ 2,3-b] indo-lia (6,8 g) ja hydrattiin Parr-laitteessa 310 kPa (45 psi:ssa) käyttäen Pt02:ta (680 mg) katalyyttinä. Pelkistysseos suodatettiin suoraan typpi huuhdeltuun pulloon, 30 lisättiin 4-dimetyyliaminopyridiiniä (330 mg) ja trietyyliamiinia (5,5 g) ja seos jäähdytettiin 0 °C:seen. Lisättiin yli 1,5 tunnin ajan liuosta, jossa oli 4-klooribent-soyylikloridia (4,4 g) etyyliasetaatissa (100 ml). Seos pestiin vedellä (2 x 150 ml), kuivattiin Na2S04:lla, väke-35 vöitiin ja puhdistettiin flash-kromatografialla. Puhtaat fraktiot väkevöitiin 5-(4-klooribentsoyyliamino) 1,2,3, > ·* 35 94759 3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolin saamiseksi kiinteänä aineena (2,5 g).

Analyysi:

Laskettu C20H22C1N30: 67,50 % C 6,23 % H 11,81 % N

5 Löydetty: 67,20 % C 6,30 % H 11,91 % N

Esimerkki 15 5-(t-butoksikarbonyyli-N-metyyliamino) 1,2,3,3a,8, 8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indoli

Kuivaan THFriin (15 ml) typessä liuotettiin 5-(t-10 butyylioksikarbonyyliamino)-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro- 1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia (1,7 g) ja jäähdytettiin -78 °C:seen kuivassa jää/asetonihauteessa. Pipetillä lisättiin litiumbis(trimetyylisilyyli)amidin (7,2 ml) liuosta THF:ssa. Liuosta sekoitettiin -78 eC:ssa 15 15 minuutin ajan, kuumennettiin huoneenlämpötilaan ja jäähdytettiin uudelleen -78 °C:een ennen kuin lisättiin dimetyylisulfaattia (0,74 g) THF:ssa (5 ml) ruiskulla. Seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan ja annettiin lämmmetä huoneenlämpötilaan sekä lisättiin vettä reaktion lopetta-20 miseksi. Lisättiin etyyliasetaattia (100 ml) ja seos pestiin suolaliuoksella (20 ml), kuivattiin Na2S04:lla, väke-vöitiin ja puhdistettiin flash-kromatografialla (eluoiden 15 % MeOH/EtOAc:lla). Puhtaat fraktiot väkevöitiin 5-(t-butoksikarbonyyli-N-metyyliamino)-l,2,3,3a,8,8a-heksa- • 25 hydro-1,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolin saamiseksi (0,42 g).

Esimerkki 16 5-(N-metyyliaminokarbonyyli-N-metyyliamino)-1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]-30 indoli 5-(t-butoksikarbonyyli-N-metyyliamino)-1,2,3,3a,8, 8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrrolo[2,3-b]indolia (100 mg) kuumennettiin typessä ilman liuotinta öljyhau-teella 200 - 210 eC:seen. Tunnin jälkeen TLC (ohutkerros-35 kromatografia) osoitti uuden yhdisteen syntymisen. Pullon annettiin jäähtyä ympäristön lämpötilaan ja lisättiin di- • · l 36 94759 kloorimetaania (5 ml) ja sen jälkeen hitaasti metyyli-isosyanaatin (18 mg) liuosta dikloorimetaanissa (3 ml) yli 45 minuutin ajan. Seos pestiin vedellä (2 ml), kuivattiin Na2S04:lla, väkevöitiin ja puhdistettiin flashkromatogra-5 fiällä (eluoiden 15 % MeOH/EtOAc:lla). Puhtaat fraktiot väkevöitiin 5-(metyyliaminokarbonyyli-N-metyyliamino)-1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyyllpyrrolo[2,3-b]-indolin saamiseksi (0,05 g). 1 — · «· «

Claims (6)

37 94759

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen 1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a, 8-trimetyylipyrrolo[2,3b] -5 indolijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava *2 (X)m CH3 10 -li—I1 (,)· O 7 I I 1 ch3H ch3 15 jossa X on 0, NH tai N-alempi-C^-alkyyli; Rx on alempi-C^-alkyyli, halogeenilla tai alempi-C^-alkoksilla substituoitu fenyyli tai bentsyyli; R2 on vety tai alempi-C^-alkyyli; ja 20 m on 0 tai 1, edellyttäen, että kun m on 0 voi Rx olla myös vety, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditiosuolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jolla on kaava

25 CH, i (XIII),

30. H I CH3 CH3 saatetaan reagoimaan kaavan RjNCO mukaisen isosyanaatin kanssa, jossa Rx on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R2 on 35 edellä määritelty, X on NH ja R2 on vety, tai • · 94759 38 b) kaavan XIII mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan R^X’-COCl (XVIa) mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R: on edellä määritelty ja X' on 0, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa R2 on edellä määritelty, X' on 5. ja R2 on vety, sillä edellytyksellä, että jos edellä mai nitussa reaktiossa Rx on tertiäärinen butyyli, käytetään yhdisteen XVIa sijasta di-tert-butyylidikarbonaattia, tai c) alkyloidaan edellä kohdassa (b) saatu kaavan I mukainen yhdiste kaavan R2Hal mukaisella halogenidilla, 10 kaavan R20S020R2 mukaisella disulfaatilla tai kaavan R20S02CH3 mukaisella mesylaatilla, joissa R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä ja Hai on Cl, Br tai I, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa Rj^ ja R2 ovat edellä määriteltyjä, paitsi että R2 ei ole vety ja X' on 0, 15 tai d) mahdollisesti kaavan XIII mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan R1C0C1 mukaisen happokloridin kanssa, jossa R2 on edellä määritelty, kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseksi, jossa m on 0, R2 on vety ja Rx on 20 edellä määritelty, tai e) muunnetaan edellä kohdassa (c) saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 on tertiäärinen butyyli ja R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä, lämpötilassa noin 150 - 200 °C amiiniksi, jolla on kaava , 25 CH3 / OÖOII)· I h i

30 CH3 CH3 jossa R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä, ja joka toisena reaktiovaiheena saatetaan reagoimaan kaavan RtNC0 mukaisen isosyanaatin kanssa, jossa Rx on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä, kaavan I mukaisen yhdisteen 35 saamiseksi, jossa X on NH, Rx on edellä määritelty ja R2 on edellä määritelty lukuunottamatta vetyä. • * 1 · 39 94759

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että X on O tai NH.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan l,2,3,3a,8,8a-heksa- 5 hydro-5-( fenoksikarbonyyliamino) -1,3a, 8-trimetyylipyrrolo-[2,3-b]indoli.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5-(4-kloorifenoksikar-bonyyliamino)-1,2,3,3a,8,8a-heksahydro-1,3a,8-trimetyyli- 10 pyrrolo[2,3-b]indoli.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5-(t-butoksikarbonyy-liamino)-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrro-lo[2,3-b]indoli.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan 5-(bentsoksikarbonyy-liamino)-l,2,3,3a,8,8a-heksahydro-l,3a,8-trimetyylipyrro-lo[2,3-b]indoli. · «. I · 40 94759