FI94648B - Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI94648B FI94648B FI893842A FI893842A FI94648B FI 94648 B FI94648 B FI 94648B FI 893842 A FI893842 A FI 893842A FI 893842 A FI893842 A FI 893842A FI 94648 B FI94648 B FI 94648B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mersacidin
- compound
- aureus
- process according
- staph
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/19—Antibiotic
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
Description
! - 54648
Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmististami-seksi Tämä keksintö koskee menetelmää uuden antibiootin, 5 jota nimitetään mersasidiiniksi, valmistamiseksi Eubacte-rium Bacillus-lajista Y-85 54728 (talletettu 6.5.1988 Budapestin sopimuksen mukaisesti kokoelmaan Deutsche Samm-lung fiir Mikroorganismen numerolla DSM 4584). Mersasidiini on käyttökelpoinen lääkeaineena.
10 Keksinnön mukaisesti saatava mersasidiini on kaavan I mukainen syklinen polypeptidi.
.s. A i ch(Ch3)2 15 ch2 iH2 iH2 h2n-ch-co-nh-ch-co-nh-chtco-nh-ch-co-nh-ch-co-n-ch-co S NCII, 20 __„__"" ·> • I * .
C0-CH-NH-C0-CH-NH-C0-CH2-NH-C0-CH2-NH-C0-CH2-HH-C0-CH2-NH
CH(CH3)2 CH------S -----CH2 111 IH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO 1 lii CH, CH CH, CH, | 1 / \ 1 I ί 30 I CH CH2 CH(CHj)2 Sv ^ ^ CH*CH-NH-CO-CH-NH CH-CHj 35 · l c2h5 2 - 54648
Kiraali-C-atomien konfiguraatio on selvitetty kaavassa II.
/S\S/CHjP CH(CHj)2 5 ch2 '"ch ch2 s ch2 ^ H2N-CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH-C0-N-CH-C0
R 5 S S I
.-—"S S \llj 10 fH2 s co-ch-nh-co-ch-nh-co-ch2-wh-co-ch2-nh-co-ch2-nh-co-ch2-nh R CH(CH3)2 JH3___s·—___ (II> 15 iH s S s ' iH2
NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO
s CH2 sIh !h2 R
I CH \ CH, 20 CH(CH^2 S\ io2H s ^ CH-CH-NH-CO-CH-NH s CH-CHj C2H5 25 Tämä keksintö ei koske ainoastaan mersasidiinin vaan myös sen fysiologisesti hyväksyttävien suolojen ja ilmeisten kemiallisten vastineiden valmistusta.
Syklisiä peptidiantibiootteja kuvataan teoksessa CRC Handbook of antibiotics (antibioottikäsikirja), osa 30 IV, s. 263 - 424, luvussa "Syklisiä peptidejä". Suvusta . Bacillus eristettyjä antibiootteja kuvataan myös teokses- sa "Antibiotics, origin, nature and properties [antibiootit, alkuperä, luonne ja ominaisuuksia]", jonka ovat julkaisseet Korzybski, T. et ai., 1978, osa III, s. 1529 - 35 2078. Samassa kirjallisuusviitteessä, osa I, s. 311 - 491
II
3 - 94648 kuvataan muista mikrobilähteistä peräisin olevia polypep-tidiantibioottej a.
Kaikkien käytettävissä olevien tietojen mukaan mer-sasidiini eroaa kuitenkin selvästi kaikista yllä olevissa 5 kirjallisuusviitteissä kuvatuista syklisistä polypeptidi-antibiooteista. Chemical Abstractsissa ei ole rekisteröitynä yhdistettä, jolla esiintyy sellainen molekyylipaino ja aminohappokoostumus kuin mersasidiinilla.
Mersasidiinin valmistukseen käytetty Eubacterium, 10 viljelmänumero Hoechst India Limited Y-85 54728, josta jäljempänä käytetään nimitystä Y-85 54728, on eristetty paikasta Mulund (suolajärvi), Maharashtra, Intia, otetusta maanäytteestä ja identifioitu Bacillus-lajiksi.
Mersasidiinin fysiologisesti sopivia suoloja voi-15 daan muodostaa yleisesti tunnetulla tavalla mitä erilaisimpien yhdisteiden kanssa, esim. orgaanisten amiinien, kuten esim. trietyyliamiinin tai tri(2-hydroksietyyli)-amiinin, alkali- ja maa-alkalimetallien, kuten metallien Na, K, Mg ja Ca, epäorgaanisten happojen, kuten esim.
20 suolahapon, rikkihapon tai fosforihapon, ja orgaanisten happojen, kuten esim. etikkahapon, sitruunahapon, bentsoe-hapon, maleiinihapon, fumaarihapon, viinihapon tai p-tolu-eenisulfonihapon kanssa.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle uuden antibiootin • 25 mersasidiini ja sen fysiologisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi on tunnusomaista, että viljellään Eubacterium Bacillus-lajia Y-85 54728 (DSM 4584) aerobisissa olosuhteissa hiilen- ja typenlähteitä, epäorgaanisia ravinto-suoloja ja hivenaineita sisältävässä elatusaineessa, yh-30 diste eristetään ja puhdistetaan yleisellä tavalla kasvu-liuoksesta, ja haluttaessa yhdiste muutetaan suolamuotoon.
Hiilenlähteinä voivat tulla kysymykseen esimerkiksi galaktoosi, glyseroli, sakkaroosi tai glukoosi. Erityisen hyvänä hiilenlähteenä pidetään galaktoosia. Erityisen hy-35 vinä typenlähteinä pidetään hiivauutetta, naudanuutetta, * 94648 maissinliotusvettä, kasaminohappoja -tai sellaisia epäorgaanisia aineita kuin esimerkiksi ammoniumsuoloja. Aivan erityisen hyvänä typenlähteenä pidetään maissinliotusvettä. Epäorgaanisina ravintosuoloina voivat tulla kysymyk-5 seen esim. natriumvetyfosfaatti, kaliumvetyfosfaatti, kal-siumkloridi tai magnesiumsulfaatti. Hivenaineet voivat olla esim. rauta-, mangaani-, kupari- tai sinkkisuoloja tai muita metallisuoloja.
Bakteerin Y-85 54728:n viljely suoritetaan edulli-10 sesti lämpötiloissa 26 - 29 °C ja pH-arvojen ollessa noin 6,5 - 7,2. Erityisen edullisesti viljely suoritetaan 28 °C:ssa (± 1 °C) ja pH:ssa 7,2.
Viljelyä suoritetaan edullisesti noin 60 - 72 tunnin ajan, jolloin uutta antibioottia muodostuu optimaali-15 sena saantona. Erityisen edullisesti viljelyä jatketaan 66 tunnin ajan uposolosuhteissa ravistuskolveissa sekä labo-ratoriofermentoreissa. Tarvittaessa voidaan fermentoreissa käyttää vaahdonestoainetta (esim. Desmophen®, polyoleja toiminimeltä Fa. Bayer AG, Leverkusen). Kasvatuksen kulku 20 ja mersasidiinin muodostuminen voidaan määrittää mittaamalla kasvuliuoksen bioaktiivisuus lajeja Staphylococcus aureus R 85 ja Alcaligenes faecalis kohtaan käyttäen tunnettuja agarlevydiffuusio-osoitusmenetelmiä (vrt. esim. Oxoid-Handbuch 1972, 2. painos, julkaisija Oxoid Limited, 25 Lontoo, Englanti).
Tulokseksi saatavassa kasvuliuoksessa esiintyy mer-sasidiinia vain viljelmän suodoksessa, joka erotetaan so-lumassasta sentrifugoimalla. Mersasidiini voidaan eristää viljelmän suodoksesta käyttäen yhtä tai useampaa tunnettua 30 menetelmää, kuten esimerkiksi hydrofobiseen vuorovaikutuk-♦ . seen perustuvaa kromatografiaa esim. käyttäen sellaisia polymeerisiä adsorbentteja kuin ®biaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries, Japani) tai ^kmberlite XaD-2(R), XAD-7(R) (polymeerinen adsorbentti, joka on po-35 lystyreeni-, akryyliesteri- tai amino-oksidimatriisia ja 5 - 54648 jossa keskimääräinen huokosen läpimitta on (40 - 225) . 10‘10m, Rohm & Haas Co., USA), tai uuttamalla veteen sekoittumattomien liuottimien, kuten etyyliasetaatin tai butanolin avulla. Edullinen menetelmä on adsorptio 5 Diaion HP-20:een, jota seuraa yhdisteen desorptio sopivien orgaanisten liuottimien, kuten esim. metanolin, asetoni-triilin tai näiden liuottimien vesiseosten avulla. Erityisen hyvänä liuottimena mersasidiinin eluoimiseksi pidetään metanoiia.
10 Poistamalla liuotin aktiivisista eluaateista saa daan raaka mersasidiini. Lisäpuhdistusta voidaan aikaansaada kromatografian avulla käyttäen sellaisia aineita kuinsilikageeliä, muunnettua silikageeliä, selluloosaa tai *%ephadex LH-20:tä (lipofiilinen geelisuodatusmateriaali, 15 valmistaja Pharmacia Fine Chemicals AB, Ruotsi). Edullista menetelmää edustaa raa'an mersasidiinin kromatografia käyttäen silikageeliä ja eluutioon asetonitriili-vesiseok-sia suurentaen portaittain vesikonsentraatiota kulloinkin 5 - 10 %:n verran. Aktiiviset eluaatit (jotka on saatu 20 selville bio-osoitusmenetelmän avulla) konsentroidaan puo-lipuhtaaksi yhdisteeksi. Näin saatua puolipuhdasta antibioottia voidaan puhdistaa edelleen esim. kromatografian avulla käyttäen lipofiilistä geelisuodatusmateriaalia, kuten esim. Sephadex® LH-20:tä, ja sellaisia liuottimia . 25 kuin esim. vesi, MeOH, CHC13, heksaani tai niiden vastaavia yhdistelmiä, ja mahdollisesti käsittelemällä sen jälkeen aktiivihiilijauheella, tai preparatiivisen korkeapainenes-tekromatografian avulla käyttäen silikageelipylvästä ja sellaisia liuottimia kuin esim. MeOH, CH3CN, vesi tai nii-30 den vastaavia yhdistelmiä. Erityisen hyvänä menetelmänä *. pidetään korkeapainenestekromatografiaa käyttäen oktade- kyylitrikloorisilaaniryhmiä sisältävää HPLC-materiaalia olevaa pylvästä (kuten esim. toiminimen Fa. Shandon, USA, tuote Hypersil®) ja seosta, jossa on CH3CN:a ja vettä 35 (70:30). Sen jälkeen kun orgaaninen liuotin on poistettu 6 t - S4648 aktiivisista eluaateista esim. tislaamalla tyhjössä ja sitä on seurannut lyofilisointi veden poistamiseksi, saadaan mersasidiini valkeana jauheena.
Mersasidiini soveltuu bakteerinvastaisen vaikutuk-5 sensa johdosta (vrt. aktiivisuustesti) käytettäväksi lääkeaineena. Mersasidiini voidaan viimeistellä lääkkeiksi, jotka sisältävät mersasidiinia tavanomaisten, yleisesti tunnettujen apu- ja/tai kantaja-aineiden ohella. Mersasidiini on käyttökelpoinen antibioottisen ja/tai immuno-10 suppressiivisen vaikutuksen omaavien lääkkeiden valmistukseen sinänsä tunnetulla tavalla.
Seuraavien esimerkkien tarkoituksena on selventää tätä keksintöä.
Esimerkki 1 15 Viljelmän Y-85 54728 eristäminen maasta.
a) Eristämiselatusaineen koostumus proteoosipeptoni 20,0 g K2S04 1,5 g
MgS04.7H20 1,5 g 20 glyseroli 10,0 g agarjauhe 15,0 g vesi, josta on poistettu mineraalit 1 litra pH-arvo 6,8 b) Maanäyte ja eristäminen 25 10 g:n joukkoon suolajärvestä Mulundista saatua maanäytettä lisättiin 90 ml sterilisoitua vettä, josta oli poistettu mineraalit, 250 ml:n erlenmeyerkolvissa ja kolvia ravistettiin 2 tuntia pyöröravistuskoneessa käyttäen 220 kierrosta. Yllä olevasta maanäytesuspensiosta tehtiin 30 sitten asteittainen 10-kertaisten laimennusten sarja . 10"5:een asti. Yksi ml viimeisen laimennoksen suspensiota lisättiin steriilin petrilasimaljan (halkaisija 15 cm) keskelle, minkä jälkeen lisättiin noin 50 ml yllä olevaa, 45 °C:seen jäähdytettyä eristämiselatusainetta ja maljaa 35 ravistettiin voimakkaasti. Maanäytesuspension ja elatus- 7 · 94648 aineen seoksen annettiin jähmettyä ja sitä inkuboitiin 3 päivän ajan 28 °C:ssa (± 1 °C). Petrimalja tarkastettiin säännöllisin väliajoin ja kasvavista mikro-organismeista eristettiin bakteeri Y-85 547 728.
5 Esimerkki 2
Viljelmän Y-85 547 728 ylläpito Ylläpitokasvualustan koostumus Y-85 547 728:a ylläpidettiin seuraavan koostumuksen omaavalla ravintoagarkasvualustalla.
10 peptoni 10 g naudanuute 3 g hiivauute 3 g agarjauhe 15 g vesi, josta on poistet- .15 tu mineraalit 1 litra pH-arvo 7,2
Sen jälkeen kun aineosat oli perusteellisesti liuotettu kuumentamalla, liuos jaettiin koeputkiin ja sterilisoitiin 121 °C:ssa kahdenkymmenen minuutin ajan. Koeputket 20 jäähdytettiin ja annettiin jähmettyä vinossa asennossa. Agarvinopinnoille istutettiin silmukan avulla Y-85 547 28:a ja inkuboitiin 28 °C:ssa (± 1 °C) kunnes näkyi hyvää kasvua. Hyvin kasvaneita viljelmiä säilytettiin +8 °C:ssa jääkaapissa.
25 Esimerkki 3
Viljelmän Y-85 547 28 fermentaatio ravistuskolveis- sa.
Siirrostusviljelmäelatusaineen koostumus kasaminohappoj a 5 g 30 maissinliotusvesi 5 g ·. glyseroli 20 g « galaktoosi 10 g vesi, josta on poistettu mineraalit 1 litra 35 pH-arvo 7,2 8 · 9 4 G 4 8
Jaettiin kulloinkin 25 ml yllä olevaa siirrostus-viljelmäelatusainetta 250 ml:n erlenmeyerkolveihin ja kuumennettiin 20 minuutin ajan autoklaavissa 121 °C:ssa. Kolvit jäähdytettiin ja niihin istutettiin kuhunkin silmukal-5 la yllä mainittua hyvin kasvanutta viljelmää esimerkistä 2 ja ravistettiin 28 °C:ssa (± 1 °C) 24 tunnin ajan käyttäen 220 kierrosta minuutissa. Saatua viljelmäliuosta käytettiin siirrostuksena valmistuskolveihin siirrostamiseen kuten seuraavassa on kuvattu.
10 Antibiootin mersasidiini valmistus ravistuskolveis- sa
Valmistuselatusaine vastasi esimerkissä 3 kuvattua siirrostusviljelmäelatusainetta. Jaettiin kulloinkin 100 ml elatusainetta 500 ml:n erlenmeyerkolveihin ja kuu-15 mennettiin 20 minuutin ajan 121 °C:ssa autoklaavissa. Kolvit jäähdytettiin ja niihin siirrostettiin sitten yllä mainittua siirrostusta (1 % tilavuus/tilavuus). Fermentaa-tiota suoritettiin pyöröravistuskoneessa käyttäen 220 kierrosta minuutissa lämpötilassa 28 °C (± 1 °C) 66 tunnin 20 ajan.
Antibiootin tuottamista valvottiin tutkimalla tunnetulla tavalla bioaktiivisuusprofiilia lajeja Staphylococcus aureus 209 P, Staphylococcus aureus R 85 ja Alcali-genes faecalis vastaan käyttäen levydiffuusiomenetelmää. 25 Talteenoton jälkeen viljelyliuos sentrifugoitiin ja mersa- sidiini eristettiin viljelmän suodoksesta ja puhdistettiin seuraavassa kuvatulla tavalla.
Esimerkki 4 Y-85 547 28:n viljely fermentoreissa 30 Vaihe 1 ·. Siirrostusviljelmän valmistaminen ravistuskolveissa
Esimerkin 3 siirrostusviljelmäelatusainetta (100 ml) pantiin 500 ml:n erlenmeyerkolveihin, jolloin pH-arvo oli ennen sterilisaatiota säädetty 6,8:ksi. Kolveja 35 sterilisoitiin sitten 121 °C:ssa autoklaavissa 20 minuutin 9 £4£48 ajan, ne jäähdytettiin ja niihin siirrostettiin silmukalla hyvin kasvanutta viljelmää esimerkistä 2. Kolveja inkuboi-tiin 28 °C:ssa (± 1 °C) 24 tunnin ajan pyöröravi st uskoneessa käyttäen 220 kierrosta minuutissa. Näitä kasvaneita 5 viljelmiä käytettiin pieniin fermentoreihin siirrostami-seen kuten jäljempänä on kuvattu.
Vaihe 2
Siirrostusviljelmän valmistaminen pienissä fermen-toreissa 10 10 litraa siirrostusviljelmäelatusainetta (joka on kuvattu esimerkissä 3), jonka pH-arvo oli säädetty ennen sterilisaatiota 6,8:ksi, ja 0,04 % (tilavuus/tilavuus) vaahdonestoainetta Desmophen pantiin 15 litran jaloteräs-fermentoriin, sterilisoitiin autoklaavissa 121 °C:ssa 36 15 minuutin ajan, jäähdytettiin ja siirrostettiin 4 % (tilavuus/tilavuus) siirrostusta yllä olevasta esimerkin 4 vaiheesta 1 aseptisissa olosuhteissa. Sen jälkeen viljeltiin 24 tunnin ajan seuraavissa olosuhteissa: lämpötila 28 °C (± 1 °C) 20 sekoitusnopeus 150 kierrosta minuutissa ilmastus 6 litraa minuutissa 24 tunnin ajan kasvanut viljelmä käytettiin vaiheen 3 valmistuselatusaineeseen siirrostamiseen.
Vaihe 3 25 Fermentaatio tuotantomittakaavassa 100 litraa valmistuselatusainetta (joka vastasi esimerkissä 3 mainittua siirrostusviljelmäelatusainetta), jonka pH-arvo oli ennen sterilisaatiota säädetty 6,8:ksi ja johon oli lisätty 0,06 % Desmohenia ja joka oli 150 30 litran fermentorissa, tai 250 litraa elatusainetta ja . 0,06 % Desmophenia, jotka olivat 390 litran fermentorissa, sterilisoitiin 28 minuutin ajan 121 °C:ssa in situ ja siihen siirrostettiin 4 % siirrostusviljelmää vaiheesta 2.
10 - 94648
Kasvatettiin seuraavissa olosuhteissa: lämpötila: 28 °C (± 1 °C) sekoitusnopeus: 80 - 100 kierrosta minuutissa ilmastus: 50 litraa minuutissa 5 (100 litran fermentorin ta pauksessa ) 125 litraa minuutissa (390 litran fermentorin tapauksessa ) 10 talteenottoaika: 66 tunnin jälkeen
Antibiootin tuottamista valvottiin tutkimalla aktiivisuusprofiilia lajeja Staphylococcus aureus 209 P, Staphylococcus aureus R 85 ja Alcaligenes faecalis vastaan. Kasvatusliemi sentrifugoitiin talteenoton jälkeen ja 15 antibiootti eristettiin viljelmän suodoksesta ja puhdistettiin kuten seuraavassa on kuvattu.
Esimerkki 5
Mersasidiinin eristäminen ja puhdistaminen Noin 100 litraa talteen otettua kasvuliuosta ero-20 tettiin sentrifugoimalla soluista. Saatu suodos (pH 6,8 -7,0) johdettiin 5 litran Diaion HP-20 -pylvään lävitse. Pylvästä pestiin seuraavaksi 50 litralla vettä, josta oli poistettu mineraalit. Sen jälkeen sitä pestiin peräkkäin liuoksilla, joissa oli 70 % H20:tä MeOH:ssa, (40 litraa), 25 50 % H20:tä Me0H:ssa (50 litraa) ja 30 % H20:tä Me0H:ssa * (50 litraa) ja pesuvesi heitettiin kulloinkin pois. Lo puksi pylvästä eluoitiin 10 litralla Me0H:a. Aktiiviset eluaatit konsentroitiin alennetussa paineessa ruskeaksi öljymäiseksi aineeksi. Tätä hierrettiin litran kanssa pet-30 rolieetteriä (kiehumispiste 40 - 60 °C), suodatettiin ja suodos heitettiin pois. Tätä menettelyä toistettiin, kun-nes suodatusjäännökseksi jäi jauhe. Siten saatiin raaka mersasidiinia ruskehtavan keltaisena jauheena (12 g).
Raa'alle mersasidiinille suoritettiin sitten kes-35 kipainenestekromatografia käyttäen 300 g silikageeliä w - 94648 (200 - 300 mesh) kooltaan 5,5 x 53 cm olevassa lasipyl-väässa. Pylvästä pestiin 1,5 litralla CH3CN:a ja sen jälkeen eluoitiin 10 % CH3CN:n vesiliuoksella (3 litraa) ja 15 % CH3CN:n vesiliuoksella (3 litraa) käyttäen virtaus-5 nopeutta 16 ml minuutissa. Koottiin 250 ml:n fraktioita ja ne tutkittiin aallonpituudella 210 nm suoritetun UV-ana-lyysin ja mikrobien avulla suoritettujen osoitusmenetel-mien avulla. 6 fraktiota (1,5 litraa) 15 % CH3CN:n vesi-liuos -eluaateista oli aktiivisia ja ne konsentroitiin 10 tyhjössä 35 °C:ssa CH3CN:n poistamiseksi ja jäädytyskuivat-tiin sen jälkeen, jolloin saatiin 2 g puolipuhdasta ainetta kellertävänä jauheena.
Näin saadulle puolipuhtaalle materiaalille suoritettiin jälleen keskipainenestekromatografia käyttäen si-15 likageeliä (200 - 300 mesh) kooltaan 4 x 54 cm olevassa lasipylväässä. Pylvästä eluoitiin peräkkäin CH3CN:lla (1 litra), 5 % CH3CN:n vesiliuoksella (1 litra) ja 10 % CH3CN:n vesiliuoksella (4,5 litraa) käyttäen virtausnopeutta 30 ml minuutissa. Koottiin 250 ml:n fraktioita ja tun-20 nistaminen suoritettiin UV-analyysin avulla aallonpituudella 210 nm ja mikrobeja hyödyntävän osoittamisen avulla. Mersasidiini saatiin eluoimalla 10 % CH3CN:n vesiliuoksella (750 ml), joka sitten konsentroitiin alennetussa paineessa 35 °C:ssa, mitä seurasi jäädytyskuivaus, jolloin saatiin 25 593 mg mersasidiinia väriltään valkeasta vaikeahkoon ole- « vana jauheena.
Mersasidiinin loppupuhdistus tapahtui korkeapaine-nestekromatografiän avulla käyttäen kooltaan 4 x 250 mm olevaa Hypersil (10 μΐ) -pylvästä, eluenttina 30 % CH3CN:n 30 vesiliuosta ja virtausnopeutena 1,0 ml minuutissa. Frak-. tiot tunnistettiin suorittamalla UV-analyysi aallonpituu- della 210 nm. Näissä olosuhteissa mersasidiinin retentio-aika oli noin 3,5 minuuttia. Koottiin asianmukaiset fraktiot, ne konsentroitiin tyhjössä 35 °C:ssa ja lyofilisoi-35 tiin lopuksi, jolloin saatiin 275 mg antibioottia valkeana 12 - 94648 jauheena. Mersasidiinin puhtaus tutkittiin käyttäen kooltaan 4 x 120 nun olevaa APS-Hypersil (5 μ) -pylvästä; eluenttina CH3CN:n ja H20:n seosta (70:30); virtausnopeutta 1 ml minuutissa; paperinsyöttönopeutta 10 mm minuutissa; 5 osoittamista aallonpituudella 210 nm. Korkeapainenestekro-matogrammi on esitetty kuviossa 1.
Mersasidiinin fysikaaliskemialliset ominaisuudet.
Mersasidiini on uusi yhdiste, jonka rakenteelle on tunnusomaista nonadekapeptidi, jossa on C-terminaalinen 10 vinyyliamidijäännös ja neljä molekyylinsisäistä sulfidi- siltaa. Taulukkoon 1 on koottu mersasidiinin fysikaalis-kemiallisia ominaisuuksia.
Taulukko 1
Mersasidiinin fysikaaliskemialliset ominaisuudet: 15 Ulkonäkö: valkea amorfinen jauhe
Luonne: syklinen polypeptidi
Sulamispiste: noin 240 °C (hajoaa) [a]“° -9,4° (c - 0,3, MeOH)
Summakaava: Cg0 H12Q N2(J 021 S4 20 - vahvistettu suuren erotuskyvyn massaspektromet rian avulla (FAB-ionointi, matriisi 3-nitrobentsyylialko-holi) - M + H* -ionin mitattu m/z 1825,785 - koostumukselle 12_ 1„ 14.. 16_ 32e C80 H121 N20 °21 S4
ZO
laskettu m/z 1825,790
Massaspektri (FAB, matriisi 3-nitrobentsyylialko-holi): kuvio 2 1H-NMR-spektri (270 MHz, CD30D): kuvio 3 30 13C-NMR-spektri (100 MHz, CD30H): taulukko 2 n t is - 94648
Taulukko 2
Mersasidiinin 13C-NMR-tulokset (7 % liuos CD3OH: ssa, 310 K)
Kemiallinen siirtymä Kerrannaisuus Rakenteen kohta 5 (miljoonasosia)_ 10.42 q C-5 Ile (19) 15,97 q C-4' Ile (19) 18,51 q C-4 3-tio-Abu (2) 18.68 q C-4’ Vai (11) 10 19,77 q C-4 Vai (11) 20.13 q C-4 3-tio-Abu (4+15) 21,28 q C-4 3-tio-Abu (13) 22.43 t C-3 Cys (1) 15 22,43 q C-5’ Leu (5) 23.17 q C-5' Leu (14) 23,53 q C-5 Leu (5) 23.58 q C-5 Leu (14) 25,47 d C-4 Leu (5) 20 25,78 d C-4 Leu (14) 26,00 t C-4 Pro (6) 26.68 t C-4 lie (19) 28.17 t C-3 Glu (18) 30,85 t C-3 Pro (6) 25 32,54 d C-3 Vai (11) : 33,58 t C-3 Cys (12) 35,21 d C-3 Ile (19) 35.59 t C-4 Glu (17) 37.14 t C-3 Cys (18) 30 37,34 t C-3 Phe (3) 39,39 d C-3 3-tio-Abu (2) 40,93 t C-3 Leu (14) 42,02 t C-3 Leu (5) 42,81 t C-2 Gly (10) 35 43,38 t C-2 Gly (9) 43.59 d C-3 3-tio-Abu (4) 44,10 t C-2 Gly (7) 44,62 t C-2 Gly (8) 14 - 94648
Kemiallinen siirtymä Kerrannaisuu Rakenteen kohta (miljoonasosia)_ 45,50 d C-3 3-tio-Abu (13) 48,67 t C-5 Pro (6) 5 49,46 d C-3 3-tio-Abu (15) 50.42 d C-2 Leu (14) 52.71 d C-2 Leu (5) 55,25 d C-2 Cys (18) 55.72 d C-2 Cys (12) 10 56,72 d C-2 Glu (17) 57.42 d C-2 3-tio-Abu (15) 57,81 d C-2 Phe (3) 58,12 d C-2 Cys (1) 59,07 d C-2 3-tio-Abu (2) 15 59,08 d C-2 3-tio-Abu (4) 59,19 d C-2 3-tio-Abu (13) 61,60 d C-2 Pro (6) 62,64 d C-2 Ile (19) 63,14 d C-2 Vai (11) 20 103,84 d C-2 Tiovinyyli- amidi (20) 112,41 t C-2 dehydro-Ala (16) 127,97 d C-7 Phe (3) 25 129,56 d C-l Tiovinyyli- amidi (20) 129,71 d C-6 Phe (3) 130,22 d C-5 Phe (3) 136,96 s C-4 Phe (3) 30 138,15 s C-2 dehydro-Ala (16) 166,56 s C-l dehydro-Ala (16) 171,16 s C-l Ile (19) 35 171,38 s C-l Gly (10) 171,44 s C-l Cys (18) 171,62 s C-l 3-tio-Abu (4) 171,76 s C-l 3-tio-Abu (15) is . - 94648
Kemiallinen siirtymä Kerrannaisuus Rakenteen kohta (miljoonasosia)_ 171,82 s C-l Gly (9) 171,84 s C-l Leu (5) 5 171,86 s C-l 3-tio-Abu (13) 171,87 s C-l 3-tio-Abu (2) 172,59 s C-l Gly (8) 172,74 s C-l Leu (14) 173,06 s C-l Gly (7) 10 173,76 s C-l Cys (12) 174,00 s C-l Vai (11) 174,25 s C-l Glu (17)
Aktiivisuustestej ä: a) Mersasidiinin aktiivisuus in vitro 15 Taulukossa 3 on esitetty mersasidiinin biologiset ominaisuudet erilaisten mikro-organismien kasvun estämiseen tarvittavina MHK-arvoina (pienin estävä konsentraa-tio)
Taulukko 3 20 Numero_Koeorganismi_MHK-arvot (pg/ml) 1. Staph, aureus 209P 0,78 - 1,56 2. Staph, aureus E 88 6,25-12,50 3. Staph, aureus 3066 12,50 - 25,00 4. Staph, aureus 20240 3,12 - 6,25 25 5. Staph, aureus 20424 1,56 - 3,12 6. Staph, aureus 503 0,78 - 1,56 7. Staph, aureus 789 0,78 - 1,56 8. Staph, aureus 722 3,12 - 6,25 9. Staph, aureus SG 511 0,39 - 0,78 30 10. Staph, aureus 20666 3,12 - 6,25 11. Staph, aureus E 712 3,12 - 6,25 12. Staph, aureus 285 0,78 - 1,56 13. Staph, aureus R 85 0,39 - 0,78 14. Staph, aureus 710 0,39 - 0,78 35 15. Micrococcus luteus 0,0975-0,195 16 · 94648
Numero Koeorqanismi MHK-arvot (,ug/ml) 16. Bacillus subtilis 0,39 - 0,78 17. Streptococcus faecalis 0,0975-0,195 18. Str. D 21777 1,56 - 3,12 5 19. S. epidermidis MRSE 0,5 - 16,0 20. S. epidermidis MSSE 0,5 - 16,0 21. Gruppe. A Streptococci 0,5 - 8,0 22. Gruppe B Streptococci 1,0 - 8,0 23. Gruppe C Streptococci 2,0 - 64 10 24. Gruppe G Streptococci 2,0 - 8,0 25. Streptococci bovis 4,0 - 32,0 26. Streptococcus viridans 0,5 - 32,0 27. Streptococcus faecalis 64,0 28. Streptococcus pneumoniae 1,0 - 4,0 15 29. Corynebacterium JK 2,0-4,0 30. Listeria monocyctogenes 16,0 - 64,0 31. Clostridium species 0,5 - 16,0 32. Peptostreptococci species 0,5 - 8,0 33. Propionobacterium genes 1,0 - 16,0 20 b) Mersacidiinin aktiivisuus in vivo Laboratoriohiirten in vivo -systeemissä mersasi-• diini osoitti hyvää aktiivisuutta. Annettaessa ihon alle annoksina 9,37 ja 25,00 mg/kg laboratoriohiirille, jotka oli kokeellisesti infektoitu Staphylococcus aureus SG 511:llä ja S. aureus 710:llä (metisilliinille resistentti) saavutettiin 100 % parantumisaste. Sen lisäksi tutkit- . tiin antibiootin akuuttia myrkyllisyyttä laboratoriohii- • · rillä. Edes annoksella 500 mg/kg (ihon alle), joka annos on tähän mennessä suurin tutkittu konsentraatio, ei ha-30 vaittu eläinten kuolleisuutta. Tulokset on esitetty taulukossa 4.
17 - 94648
Taulukko 4
Mersasidiinin in vivo -aktiivisuus S. aureus SG 511 -infektiota vastaan hiirillä verrattuna vankomysiiniin. Käytetty siirrostus; 1,75 x 109 cfu/niiri 5 Yhdiste Annos/käyttö Parantuneiden/käsitel- Likimääräinen EDS(), mg/kg x 3, tyjen hiirien lukumäärä ed9q mg/kg * 3 g>c> (parannusaste prosenteissa)
Mersasi- ~ 53/53 (100) 6.25 36/40 ( 95) 2,59 10 3,12 18/27 ( 67) 5,38 1,60 3/24 ( 12) 0,80 0/27 ( 0)
Vanko- mysiini 18,75 71/71 (100) 15 12,5 59/61 ( 97) 7,20 9.37 48/53 ( 85) 9,37 6.25 13/44 ( 29) 3,12 2/41 ( 5) 20
Mersasidiinin in vivo-aktiivisuus S. aureus E 710:tä (MRSA).vastaan hiirissä verrattuna vankomysiiniin Käytetty rokotusaine! 5 x 10® KBE/hiiri (1 MLD) 25 Yhdiste Annos/käyttB Parantuneiden/käsi- Likimääräinen ED * mg/kg x 3, se teltyjen hiirien ED_Q x 3 lukumäärä (parannusaste prosenteissa)_
Mersasi- diini 25,00 12/12 (100) 10,81 3o 12,50 10/16 ( 63) 19,59 9.37 4/10 ( 40) 6.25 1/10 ( 10)
Vanko- mysiini 37,00 6/6 (100) 18,94 35 25,00 14/21 ( 67) 32,01 12,50 3/11 (27) 6.25 0/11 ( 0) 18 - 94648
Mersasidiinin in vivo -aktiivisuus S. aureus SG 511-infektiota vastaan rotissa verrattuna vankomysiiniin Käytetty siirrostus: 2 x 109 cfu 5-%:isessa musiinissa injektoituna ihon alle.
5 Käsittely: 50 mg/kg x 7 vuorokautta
Tulokset: Mersasidiini vähentää bakteerien muodostumista määrällä 1,4 log^Qcfu/ml (cfu - pesäkkeitä muodostavia yksiköitä), vankomysiini vähentää bakteerien mudoos-tumista määrällä 0,79 log^cfu/ml.
10 Esimerkki 6
Mersasidiinin vesiliukoisten suolojen valmistus Mersasidiini on alkalisuoloinaan vesiliukoinen.
Näitä voidaan valmistaa esim. saattamalla mersasidiini reagoimaan ekvivalenttisen määrän Kanssa vastaavaa alkaiimetaiii- 15 hydroksidia pyridiinin läsnäollessa. Esimerkiksi 50 mg mersasidiinia liuotettiin 1 mi:aan pyriaiiniä, liuos jäähdytettiin 0°C:seen ja siihen lisättiin samalla sekoittaen 1,683 mg KOH:ia liuotettuna 3 ml:aan tislattua vettä. Seosta sekoitettiin 0°C:ssa tunnin ajan, minkä jälkeen lyofi- 20 lisoitiin. Saatiin 49 mg kalium-mersasidiinia valkoisena jauheena. Tämän kalium-mersasidiinin liukoisuus veteen on 160 mg/ml. Kalium-mersasidiiniin antibakteeriset ominaisuudet in .vitro ja in vivo ovat verrattavissa mersasidiinin vastaaviin ominaisuuksiin. Koetulokset on esitetty taulu- 25 koissa 5 ja 6.
- 94648
Taulukko 5
Kalium-mersasidiinin MHK-arvot 1. Staph, aureus 209P 2 5 2. Staph, aureus R 85 2 3. Staph, aureus 710 1 4. Staph, aureus 3066 10 5. Staph, aureus 25923 Θ 6. Staph, epidermldle 32965 6 10 7. Staph, epldermidis 823 50 8. Staph, haemolyticus 712 10 9.. Staph, haemolyticus 809 4 10. Strepto. hominis ML 22 10 11. Strepto. faecalls 29212 15 12. Strepto. faecalls 21777 15
Taulukko 6
Kalium-mersasidiinin in vivo -aktiivisuus S. aureus-ja Strept. pyogenes A 77 - infektioita vastaan hiirissä 2q Koeorganismi Käytetty 50 X vaikuttava annos siirrostus (ED^q) ^8 x B.c.
Staph, aureus SG 511 1,75 x 109 2,85 (Methicillin sensitive) 25 Staph, aureus E 710 1 x 1010 6,72 (Methicillin resistant)
Staph, aureus C 31153 2 x 109 15,35 (Methicillin & Cephalexin 30 resistent)
Strept. pyogenes A 77 3,8 x 103 0,46
Claims (6)
1. Menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen /S. .AY1 i"tCH3>2 ch2 "'ch ch2 ch2 ^ HoN-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-N-CH-CO 2 i i 10 S CH3 ch9—' I 1 C0-CH-NH-C0-CH-NH-C0-CH2-NH-C0-CH2-NH-C0'-CH2-NH-C0-CH2-NH 15 CH(CH3)2 iH3 __________ --- -£H2. NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-HH-C-H-CO 50 I I I I 20 ch2 ch ch, ch, I /v i i I CH, \ CH2 CH(CHj)23 s
25. CH<H-NH-CO-CH-NH CH-CHt I 5 C2H5 tai sen fysiologisesti hyväksyttävän suolan valmistamisek-30 si, tunnettu siitä, että viljellään Eubacterium ; Bacillus-lajia Y-85 54728 (DSM 4584) aerobisissa olosuh teissa hiilen- ja typenlähteitä, epäorgaanisia ravinto-suoloja ja hivenaineita sisältävässä elatusaineessa, yhdiste eristetään ja puhdistetaan yleisellä tavalla kasvu-35 liuoksesta, ja haluttaessa yhdiste muutetaan suolamuotoon. 1 « - 94648
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan II mukainen yhdiste tai sen fysiologisesti hyväksyttävä suola 1 .S. s CHj CH CH2 s CH2 ^ H,N-CH-CO-NH-CH-CD-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-N-CH-CO R S S ______CH S S I * CH3 CHn^ * I 2 s co-ch-nh-co-ch-nh-co-ch2-sh-co-ck2-nh-co-ch2-nh-cd-ch2-nh
15. CH(CHj)2 (ii, ______— ------"5 ~---CH2 IH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO S I _ I f I o
20. CH9 S CH tH9 CH9 I 2 / \ 2 ‘ 2 I CH \ H2 CH(CHj)2 sv ^ ^ CH-CH-NH-CO-CH-NH 25 | s CH-CHt I J c2h5 valmistetaan viljelemällä Eubacterium Bacillus-lajia 30 Y-85 54728 (DSM 4584) aerobisissa olosuhteissa hiilen- ja typenlähteitä, epäorgaanisia ravintosuoloja ja hivenaineita sisältävässä elatusaineessa, eristämällä ja puhdistamalla yleisellä tavalla kasvuliuoksesta, ja haluttaessa muuttamalla yhdiste suolamuotoon. 22 - 94648
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että viljely suoritetaan lämpötiloissa noin 26 - 29 °C ja pH:ssa noin 6,5 - 7,2.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen me-5 netelmä, tunnettu siitä, että viljely suoritetaan 28 °C:ssa (± 1 °C) ja pH:ssa noin 7,2.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fermentaatiota suoritetaan kauemmin kuin 60 tuntia.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen me netelmä, tunnettu siitä, että kaavan I ja II mukaiset yhdisteet puhdistetaan kromatografisten menetelmien avulla. « II 23 -94648
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3827868A DE3827868A1 (de) | 1988-08-17 | 1988-08-17 | Ein neues antibiotikum, mersacidin, ein verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung als arzneimittel |
| DE3827868 | 1988-08-17 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI893842A0 FI893842A0 (fi) | 1989-08-15 |
| FI893842A FI893842A (fi) | 1990-02-18 |
| FI94648B true FI94648B (fi) | 1995-06-30 |
| FI94648C FI94648C (fi) | 1995-10-10 |
Family
ID=6361001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI893842A FI94648C (fi) | 1988-08-17 | 1989-08-15 | Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5112806A (fi) |
| EP (1) | EP0362520B1 (fi) |
| JP (1) | JP2892699B2 (fi) |
| KR (1) | KR0139628B1 (fi) |
| AT (1) | ATE113296T1 (fi) |
| AU (1) | AU613228B2 (fi) |
| CA (1) | CA1338171C (fi) |
| DE (2) | DE3827868A1 (fi) |
| DK (1) | DK175121B1 (fi) |
| ES (1) | ES2064398T3 (fi) |
| FI (1) | FI94648C (fi) |
| HU (1) | HU203906B (fi) |
| IE (1) | IE64706B1 (fi) |
| IL (1) | IL91317A0 (fi) |
| IN (1) | IN167138B (fi) |
| NO (1) | NO174517B (fi) |
| NZ (1) | NZ230303A (fi) |
| PH (1) | PH27179A (fi) |
| PT (1) | PT91468B (fi) |
| ZA (1) | ZA896245B (fi) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE255165T1 (de) * | 1994-09-12 | 2003-12-15 | Aventis Pharma Gmbh | Rekombinantes mersacidin und verfahren zu seiner herstellung |
| US5910479A (en) * | 1996-10-18 | 1999-06-08 | Ambi Inc. | Method for the treatment of Streptococcus pneumoniae infection |
| US6861236B2 (en) * | 2002-05-24 | 2005-03-01 | Applied Nanosystems B.V. | Export and modification of (poly)peptides in the lantibiotic way |
| GB0406870D0 (en) | 2004-03-26 | 2004-04-28 | Novacta Biosystems Ltd | Improvements relating to the production of lantibiotics |
| WO2007036706A1 (en) * | 2005-09-27 | 2007-04-05 | Novacta Biosystems Limited | Variants of the lantibiotic mersacidin and their use |
| GB0600928D0 (en) | 2006-01-17 | 2006-02-22 | Novacta Biosystems Ltd | Improvements relating to lantibiotics |
| GB0714030D0 (en) * | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | The use of type-B lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
| GB0714029D0 (en) * | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | Lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
| JP5719312B2 (ja) | 2009-01-14 | 2015-05-13 | ノヴァクタ バイオシステムズ リミティッド | デオキシアクタガルジン誘導体 |
| AU2010212183B2 (en) | 2009-02-04 | 2014-07-10 | Novacta Biosystems Limited | Actagardine derivatives |
| GB201001688D0 (en) | 2010-02-02 | 2010-03-17 | Novacta Biosystems Ltd | Compounds |
| GB201013513D0 (en) | 2010-08-11 | 2010-09-22 | Novacta Biosystems Ltd | Formulations |
| KR102582570B1 (ko) * | 2021-03-19 | 2023-09-22 | 한국생명공학연구원 | 유박테리움 칼란데리, 이의 배양액 또는 이의 배양액 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물 |
| WO2023049300A1 (en) * | 2021-09-22 | 2023-03-30 | Biomedit, Llc | Methods of inhibiting diseases caused by respiratory viruses |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4493796A (en) * | 1980-09-12 | 1985-01-15 | Board Of Trustees, Univ. Of Ill. | Didemnins A, B, C, and derivatives thereof, as antiviral agents |
| JPS61134398A (ja) * | 1984-12-06 | 1986-06-21 | Microbial Chem Res Found | 新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法 |
-
1988
- 1988-07-04 IN IN193/BOM/88A patent/IN167138B/en unknown
- 1988-08-17 DE DE3827868A patent/DE3827868A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-08-14 ES ES89114990T patent/ES2064398T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-14 EP EP89114990A patent/EP0362520B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-14 AT AT89114990T patent/ATE113296T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-08-14 DE DE58908558T patent/DE58908558D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-15 PH PH39098A patent/PH27179A/en unknown
- 1989-08-15 IL IL91317A patent/IL91317A0/xx unknown
- 1989-08-15 FI FI893842A patent/FI94648C/fi active IP Right Grant
- 1989-08-15 NZ NZ230303A patent/NZ230303A/en unknown
- 1989-08-15 US US07/393,953 patent/US5112806A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-16 NO NO893288A patent/NO174517B/no not_active IP Right Cessation
- 1989-08-16 JP JP1210228A patent/JP2892699B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-16 DK DK198904037A patent/DK175121B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-08-16 IE IE263889A patent/IE64706B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-08-16 HU HU894215A patent/HU203906B/hu unknown
- 1989-08-16 CA CA000608500A patent/CA1338171C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-16 ZA ZA896245A patent/ZA896245B/xx unknown
- 1989-08-16 AU AU39966/89A patent/AU613228B2/en not_active Expired
- 1989-08-17 KR KR1019890011679A patent/KR0139628B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-08-17 PT PT91468A patent/PT91468B/pt not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI94648B (fi) | Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi | |
| TANAKA et al. | Brasilinolide A, a new macrolide antibiotic produced by Nocardia brasiliensis: producing strain, isolation and biological activity | |
| AU2005300815B2 (en) | Acylated nonadepsipeptides used as lysobactin derivatives | |
| CN101522705B (zh) | 来自actinomadura namibiensis的抗菌和抗病毒肽 | |
| US4180564A (en) | A-38533 Antibiotics and process for production thereof | |
| FI100112B (fi) | Menetelmä bakteerien vastaisen tiomarinolin valmistamiseksi | |
| FI101402B (fi) | Menetelmä uuden antibiootin, balhimysiinin valmistamiseksi | |
| KR20090036544A (ko) | 신규한 항균성 화합물 | |
| RU2228337C2 (ru) | Ванкорезмицин (варианты), его использование, штамм amycolatopsis вида hil-006734 для его получения | |
| Gastaldo et al. | Isolation, structure determination and biological activity of A-16686 factors A′ 1, A′ 2 and A′ 3 glycolipodepsipeptide antibiotics | |
| EP0318680B1 (en) | Novel antibiotic compounds named A/16686 Factors A'1, A'2 and A'3 | |
| RU2795449C1 (ru) | Новые депсипептидные соединения, обладающие антибактериальной активностью | |
| US5571701A (en) | Antibiotic, balhimycin, a process for its production and its use as pharmaceutical | |
| JP4452505B2 (ja) | 抗生物質ｇｅ８１１１２ファクターａ、ｂ、ｂ１、その製薬学的に許容され得る塩および組成物および使用 | |
| US5171836A (en) | Antibiotics plusbacin | |
| EP0818464B1 (en) | Methylsulfomycin l, a process for its production and its use | |
| JP5823733B2 (ja) | 抗生物質産生微生物及びそれが産生した抗生物質 | |
| KR810000327B1 (ko) | 항생물질 a-35512 구성요소 b 비당체의 제조방법 | |
| KR860002194B1 (ko) | A-21978c 사이클릭 펩타이드 유도체의 제조방법 | |
| HRP20020497A2 (en) | Amycomycin, a process for its production and its use a pharmaceutical |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH Free format text: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH |