FI94648B - Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI94648B FI94648B FI893842A FI893842A FI94648B FI 94648 B FI94648 B FI 94648B FI 893842 A FI893842 A FI 893842A FI 893842 A FI893842 A FI 893842A FI 94648 B FI94648 B FI 94648B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mersacidin
- compound
- aureus
- process according
- staph
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 14
- 108010067215 mersacidin Proteins 0.000 title abstract description 47
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title abstract description 13
- JSWKNDSDVHJUKY-CYGWNLPQSA-N mersacidin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]1[C@H](C)SC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@H](CC(C)C)NC1=O)C(=O)N[C@@H]1[C@H](C)SC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(N/C=C/S[C@@H](C)C(NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC1=O)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)[C@H](C)CC)NC(=O)[C@H]1[C@@H](SC[C@H](N)C(=O)N1)C)C1=CC=CC=C1 JSWKNDSDVHJUKY-CYGWNLPQSA-N 0.000 title abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000186394 Eubacterium Species 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 4
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 4
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 abstract description 3
- JSWKNDSDVHJUKY-MNVIWFPGSA-N CC[C@@H](C)[C@@H]1NC(=O)[C@@H]2CS[C@@H](C)[C@@H](NC(=O)[C@@H]3CS[C@@H](C)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@@H]4NC(=O)[C@@H]([NH3+])CS[C@H]4C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N4CCC[C@H]4C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC([C@H](C)S\C=C/NC1=O)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)N2 Chemical compound CC[C@@H](C)[C@@H]1NC(=O)[C@@H]2CS[C@@H](C)[C@@H](NC(=O)[C@@H]3CS[C@@H](C)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@@H]4NC(=O)[C@@H]([NH3+])CS[C@H]4C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N4CCC[C@H]4C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC([C@H](C)S\C=C/NC1=O)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)N2 JSWKNDSDVHJUKY-MNVIWFPGSA-N 0.000 description 44
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 6
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 5
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 5
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 5
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DMEYJYUCUFDMEV-VKHMYHEASA-N (2s)-2-(chloroamino)pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@H](NCl)C(O)=O DMEYJYUCUFDMEV-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588813 Alcaligenes faecalis Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- -1 acrylic ester Chemical class 0.000 description 3
- 229940005347 alcaligenes faecalis Drugs 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003820 Medium-pressure liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004187 Spiramycin Substances 0.000 description 2
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 239000004181 Flavomycin Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241001312524 Streptococcus viridans Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 1
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N chembl3301825 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)C(O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000013530 defoamer Substances 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N ethenamine Chemical group NC=C UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012473 microbial detection method Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- SBOJXQVPLKSXOG-UHFFFAOYSA-N o-amino-hydroxylamine Chemical compound NON SBOJXQVPLKSXOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 150000003109 potassium Chemical class 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 102200086358 rs104894622 Human genes 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- PYJJCSYBSYXGQQ-UHFFFAOYSA-N trichloro(octadecyl)silane Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCC[Si](Cl)(Cl)Cl PYJJCSYBSYXGQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/19—Antibiotic
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
Description
! - 54648
Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmististami-seksi Tämä keksintö koskee menetelmää uuden antibiootin, 5 jota nimitetään mersasidiiniksi, valmistamiseksi Eubacte-rium Bacillus-lajista Y-85 54728 (talletettu 6.5.1988 Budapestin sopimuksen mukaisesti kokoelmaan Deutsche Samm-lung fiir Mikroorganismen numerolla DSM 4584). Mersasidiini on käyttökelpoinen lääkeaineena.
10 Keksinnön mukaisesti saatava mersasidiini on kaavan I mukainen syklinen polypeptidi.
.s. A i ch(Ch3)2 15 ch2 iH2 iH2 h2n-ch-co-nh-ch-co-nh-chtco-nh-ch-co-nh-ch-co-n-ch-co S NCII, 20 __„__"" ·> • I * .
C0-CH-NH-C0-CH-NH-C0-CH2-NH-C0-CH2-NH-C0-CH2-HH-C0-CH2-NH
CH(CH3)2 CH------S -----CH2 111 IH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO 1 lii CH, CH CH, CH, | 1 / \ 1 I ί 30 I CH CH2 CH(CHj)2 Sv ^ ^ CH*CH-NH-CO-CH-NH CH-CHj 35 · l c2h5 2 - 54648
Kiraali-C-atomien konfiguraatio on selvitetty kaavassa II.
/S\S/CHjP CH(CHj)2 5 ch2 '"ch ch2 s ch2 ^ H2N-CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH-C0-N-CH-C0
R 5 S S I
.-—"S S \llj 10 fH2 s co-ch-nh-co-ch-nh-co-ch2-wh-co-ch2-nh-co-ch2-nh-co-ch2-nh R CH(CH3)2 JH3___s·—___ (II> 15 iH s S s ' iH2
NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO
s CH2 sIh !h2 R
I CH \ CH, 20 CH(CH^2 S\ io2H s ^ CH-CH-NH-CO-CH-NH s CH-CHj C2H5 25 Tämä keksintö ei koske ainoastaan mersasidiinin vaan myös sen fysiologisesti hyväksyttävien suolojen ja ilmeisten kemiallisten vastineiden valmistusta.
Syklisiä peptidiantibiootteja kuvataan teoksessa CRC Handbook of antibiotics (antibioottikäsikirja), osa 30 IV, s. 263 - 424, luvussa "Syklisiä peptidejä". Suvusta . Bacillus eristettyjä antibiootteja kuvataan myös teokses- sa "Antibiotics, origin, nature and properties [antibiootit, alkuperä, luonne ja ominaisuuksia]", jonka ovat julkaisseet Korzybski, T. et ai., 1978, osa III, s. 1529 - 35 2078. Samassa kirjallisuusviitteessä, osa I, s. 311 - 491
II
3 - 94648 kuvataan muista mikrobilähteistä peräisin olevia polypep-tidiantibioottej a.
Kaikkien käytettävissä olevien tietojen mukaan mer-sasidiini eroaa kuitenkin selvästi kaikista yllä olevissa 5 kirjallisuusviitteissä kuvatuista syklisistä polypeptidi-antibiooteista. Chemical Abstractsissa ei ole rekisteröitynä yhdistettä, jolla esiintyy sellainen molekyylipaino ja aminohappokoostumus kuin mersasidiinilla.
Mersasidiinin valmistukseen käytetty Eubacterium, 10 viljelmänumero Hoechst India Limited Y-85 54728, josta jäljempänä käytetään nimitystä Y-85 54728, on eristetty paikasta Mulund (suolajärvi), Maharashtra, Intia, otetusta maanäytteestä ja identifioitu Bacillus-lajiksi.
Mersasidiinin fysiologisesti sopivia suoloja voi-15 daan muodostaa yleisesti tunnetulla tavalla mitä erilaisimpien yhdisteiden kanssa, esim. orgaanisten amiinien, kuten esim. trietyyliamiinin tai tri(2-hydroksietyyli)-amiinin, alkali- ja maa-alkalimetallien, kuten metallien Na, K, Mg ja Ca, epäorgaanisten happojen, kuten esim.
20 suolahapon, rikkihapon tai fosforihapon, ja orgaanisten happojen, kuten esim. etikkahapon, sitruunahapon, bentsoe-hapon, maleiinihapon, fumaarihapon, viinihapon tai p-tolu-eenisulfonihapon kanssa.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle uuden antibiootin • 25 mersasidiini ja sen fysiologisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi on tunnusomaista, että viljellään Eubacterium Bacillus-lajia Y-85 54728 (DSM 4584) aerobisissa olosuhteissa hiilen- ja typenlähteitä, epäorgaanisia ravinto-suoloja ja hivenaineita sisältävässä elatusaineessa, yh-30 diste eristetään ja puhdistetaan yleisellä tavalla kasvu-liuoksesta, ja haluttaessa yhdiste muutetaan suolamuotoon.
Hiilenlähteinä voivat tulla kysymykseen esimerkiksi galaktoosi, glyseroli, sakkaroosi tai glukoosi. Erityisen hyvänä hiilenlähteenä pidetään galaktoosia. Erityisen hy-35 vinä typenlähteinä pidetään hiivauutetta, naudanuutetta, * 94648 maissinliotusvettä, kasaminohappoja -tai sellaisia epäorgaanisia aineita kuin esimerkiksi ammoniumsuoloja. Aivan erityisen hyvänä typenlähteenä pidetään maissinliotusvettä. Epäorgaanisina ravintosuoloina voivat tulla kysymyk-5 seen esim. natriumvetyfosfaatti, kaliumvetyfosfaatti, kal-siumkloridi tai magnesiumsulfaatti. Hivenaineet voivat olla esim. rauta-, mangaani-, kupari- tai sinkkisuoloja tai muita metallisuoloja.
Bakteerin Y-85 54728:n viljely suoritetaan edulli-10 sesti lämpötiloissa 26 - 29 °C ja pH-arvojen ollessa noin 6,5 - 7,2. Erityisen edullisesti viljely suoritetaan 28 °C:ssa (± 1 °C) ja pH:ssa 7,2.
Viljelyä suoritetaan edullisesti noin 60 - 72 tunnin ajan, jolloin uutta antibioottia muodostuu optimaali-15 sena saantona. Erityisen edullisesti viljelyä jatketaan 66 tunnin ajan uposolosuhteissa ravistuskolveissa sekä labo-ratoriofermentoreissa. Tarvittaessa voidaan fermentoreissa käyttää vaahdonestoainetta (esim. Desmophen®, polyoleja toiminimeltä Fa. Bayer AG, Leverkusen). Kasvatuksen kulku 20 ja mersasidiinin muodostuminen voidaan määrittää mittaamalla kasvuliuoksen bioaktiivisuus lajeja Staphylococcus aureus R 85 ja Alcaligenes faecalis kohtaan käyttäen tunnettuja agarlevydiffuusio-osoitusmenetelmiä (vrt. esim. Oxoid-Handbuch 1972, 2. painos, julkaisija Oxoid Limited, 25 Lontoo, Englanti).
Tulokseksi saatavassa kasvuliuoksessa esiintyy mer-sasidiinia vain viljelmän suodoksessa, joka erotetaan so-lumassasta sentrifugoimalla. Mersasidiini voidaan eristää viljelmän suodoksesta käyttäen yhtä tai useampaa tunnettua 30 menetelmää, kuten esimerkiksi hydrofobiseen vuorovaikutuk-♦ . seen perustuvaa kromatografiaa esim. käyttäen sellaisia polymeerisiä adsorbentteja kuin ®biaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries, Japani) tai ^kmberlite XaD-2(R), XAD-7(R) (polymeerinen adsorbentti, joka on po-35 lystyreeni-, akryyliesteri- tai amino-oksidimatriisia ja 5 - 54648 jossa keskimääräinen huokosen läpimitta on (40 - 225) . 10‘10m, Rohm & Haas Co., USA), tai uuttamalla veteen sekoittumattomien liuottimien, kuten etyyliasetaatin tai butanolin avulla. Edullinen menetelmä on adsorptio 5 Diaion HP-20:een, jota seuraa yhdisteen desorptio sopivien orgaanisten liuottimien, kuten esim. metanolin, asetoni-triilin tai näiden liuottimien vesiseosten avulla. Erityisen hyvänä liuottimena mersasidiinin eluoimiseksi pidetään metanoiia.
10 Poistamalla liuotin aktiivisista eluaateista saa daan raaka mersasidiini. Lisäpuhdistusta voidaan aikaansaada kromatografian avulla käyttäen sellaisia aineita kuinsilikageeliä, muunnettua silikageeliä, selluloosaa tai *%ephadex LH-20:tä (lipofiilinen geelisuodatusmateriaali, 15 valmistaja Pharmacia Fine Chemicals AB, Ruotsi). Edullista menetelmää edustaa raa'an mersasidiinin kromatografia käyttäen silikageeliä ja eluutioon asetonitriili-vesiseok-sia suurentaen portaittain vesikonsentraatiota kulloinkin 5 - 10 %:n verran. Aktiiviset eluaatit (jotka on saatu 20 selville bio-osoitusmenetelmän avulla) konsentroidaan puo-lipuhtaaksi yhdisteeksi. Näin saatua puolipuhdasta antibioottia voidaan puhdistaa edelleen esim. kromatografian avulla käyttäen lipofiilistä geelisuodatusmateriaalia, kuten esim. Sephadex® LH-20:tä, ja sellaisia liuottimia . 25 kuin esim. vesi, MeOH, CHC13, heksaani tai niiden vastaavia yhdistelmiä, ja mahdollisesti käsittelemällä sen jälkeen aktiivihiilijauheella, tai preparatiivisen korkeapainenes-tekromatografian avulla käyttäen silikageelipylvästä ja sellaisia liuottimia kuin esim. MeOH, CH3CN, vesi tai nii-30 den vastaavia yhdistelmiä. Erityisen hyvänä menetelmänä *. pidetään korkeapainenestekromatografiaa käyttäen oktade- kyylitrikloorisilaaniryhmiä sisältävää HPLC-materiaalia olevaa pylvästä (kuten esim. toiminimen Fa. Shandon, USA, tuote Hypersil®) ja seosta, jossa on CH3CN:a ja vettä 35 (70:30). Sen jälkeen kun orgaaninen liuotin on poistettu 6 t - S4648 aktiivisista eluaateista esim. tislaamalla tyhjössä ja sitä on seurannut lyofilisointi veden poistamiseksi, saadaan mersasidiini valkeana jauheena.
Mersasidiini soveltuu bakteerinvastaisen vaikutuk-5 sensa johdosta (vrt. aktiivisuustesti) käytettäväksi lääkeaineena. Mersasidiini voidaan viimeistellä lääkkeiksi, jotka sisältävät mersasidiinia tavanomaisten, yleisesti tunnettujen apu- ja/tai kantaja-aineiden ohella. Mersasidiini on käyttökelpoinen antibioottisen ja/tai immuno-10 suppressiivisen vaikutuksen omaavien lääkkeiden valmistukseen sinänsä tunnetulla tavalla.
Seuraavien esimerkkien tarkoituksena on selventää tätä keksintöä.
Esimerkki 1 15 Viljelmän Y-85 54728 eristäminen maasta.
a) Eristämiselatusaineen koostumus proteoosipeptoni 20,0 g K2S04 1,5 g
MgS04.7H20 1,5 g 20 glyseroli 10,0 g agarjauhe 15,0 g vesi, josta on poistettu mineraalit 1 litra pH-arvo 6,8 b) Maanäyte ja eristäminen 25 10 g:n joukkoon suolajärvestä Mulundista saatua maanäytettä lisättiin 90 ml sterilisoitua vettä, josta oli poistettu mineraalit, 250 ml:n erlenmeyerkolvissa ja kolvia ravistettiin 2 tuntia pyöröravistuskoneessa käyttäen 220 kierrosta. Yllä olevasta maanäytesuspensiosta tehtiin 30 sitten asteittainen 10-kertaisten laimennusten sarja . 10"5:een asti. Yksi ml viimeisen laimennoksen suspensiota lisättiin steriilin petrilasimaljan (halkaisija 15 cm) keskelle, minkä jälkeen lisättiin noin 50 ml yllä olevaa, 45 °C:seen jäähdytettyä eristämiselatusainetta ja maljaa 35 ravistettiin voimakkaasti. Maanäytesuspension ja elatus- 7 · 94648 aineen seoksen annettiin jähmettyä ja sitä inkuboitiin 3 päivän ajan 28 °C:ssa (± 1 °C). Petrimalja tarkastettiin säännöllisin väliajoin ja kasvavista mikro-organismeista eristettiin bakteeri Y-85 547 728.
5 Esimerkki 2
Viljelmän Y-85 547 728 ylläpito Ylläpitokasvualustan koostumus Y-85 547 728:a ylläpidettiin seuraavan koostumuksen omaavalla ravintoagarkasvualustalla.
10 peptoni 10 g naudanuute 3 g hiivauute 3 g agarjauhe 15 g vesi, josta on poistet- .15 tu mineraalit 1 litra pH-arvo 7,2
Sen jälkeen kun aineosat oli perusteellisesti liuotettu kuumentamalla, liuos jaettiin koeputkiin ja sterilisoitiin 121 °C:ssa kahdenkymmenen minuutin ajan. Koeputket 20 jäähdytettiin ja annettiin jähmettyä vinossa asennossa. Agarvinopinnoille istutettiin silmukan avulla Y-85 547 28:a ja inkuboitiin 28 °C:ssa (± 1 °C) kunnes näkyi hyvää kasvua. Hyvin kasvaneita viljelmiä säilytettiin +8 °C:ssa jääkaapissa.
25 Esimerkki 3
Viljelmän Y-85 547 28 fermentaatio ravistuskolveis- sa.
Siirrostusviljelmäelatusaineen koostumus kasaminohappoj a 5 g 30 maissinliotusvesi 5 g ·. glyseroli 20 g « galaktoosi 10 g vesi, josta on poistettu mineraalit 1 litra 35 pH-arvo 7,2 8 · 9 4 G 4 8
Jaettiin kulloinkin 25 ml yllä olevaa siirrostus-viljelmäelatusainetta 250 ml:n erlenmeyerkolveihin ja kuumennettiin 20 minuutin ajan autoklaavissa 121 °C:ssa. Kolvit jäähdytettiin ja niihin istutettiin kuhunkin silmukal-5 la yllä mainittua hyvin kasvanutta viljelmää esimerkistä 2 ja ravistettiin 28 °C:ssa (± 1 °C) 24 tunnin ajan käyttäen 220 kierrosta minuutissa. Saatua viljelmäliuosta käytettiin siirrostuksena valmistuskolveihin siirrostamiseen kuten seuraavassa on kuvattu.
10 Antibiootin mersasidiini valmistus ravistuskolveis- sa
Valmistuselatusaine vastasi esimerkissä 3 kuvattua siirrostusviljelmäelatusainetta. Jaettiin kulloinkin 100 ml elatusainetta 500 ml:n erlenmeyerkolveihin ja kuu-15 mennettiin 20 minuutin ajan 121 °C:ssa autoklaavissa. Kolvit jäähdytettiin ja niihin siirrostettiin sitten yllä mainittua siirrostusta (1 % tilavuus/tilavuus). Fermentaa-tiota suoritettiin pyöröravistuskoneessa käyttäen 220 kierrosta minuutissa lämpötilassa 28 °C (± 1 °C) 66 tunnin 20 ajan.
Antibiootin tuottamista valvottiin tutkimalla tunnetulla tavalla bioaktiivisuusprofiilia lajeja Staphylococcus aureus 209 P, Staphylococcus aureus R 85 ja Alcali-genes faecalis vastaan käyttäen levydiffuusiomenetelmää. 25 Talteenoton jälkeen viljelyliuos sentrifugoitiin ja mersa- sidiini eristettiin viljelmän suodoksesta ja puhdistettiin seuraavassa kuvatulla tavalla.
Esimerkki 4 Y-85 547 28:n viljely fermentoreissa 30 Vaihe 1 ·. Siirrostusviljelmän valmistaminen ravistuskolveissa
Esimerkin 3 siirrostusviljelmäelatusainetta (100 ml) pantiin 500 ml:n erlenmeyerkolveihin, jolloin pH-arvo oli ennen sterilisaatiota säädetty 6,8:ksi. Kolveja 35 sterilisoitiin sitten 121 °C:ssa autoklaavissa 20 minuutin 9 £4£48 ajan, ne jäähdytettiin ja niihin siirrostettiin silmukalla hyvin kasvanutta viljelmää esimerkistä 2. Kolveja inkuboi-tiin 28 °C:ssa (± 1 °C) 24 tunnin ajan pyöröravi st uskoneessa käyttäen 220 kierrosta minuutissa. Näitä kasvaneita 5 viljelmiä käytettiin pieniin fermentoreihin siirrostami-seen kuten jäljempänä on kuvattu.
Vaihe 2
Siirrostusviljelmän valmistaminen pienissä fermen-toreissa 10 10 litraa siirrostusviljelmäelatusainetta (joka on kuvattu esimerkissä 3), jonka pH-arvo oli säädetty ennen sterilisaatiota 6,8:ksi, ja 0,04 % (tilavuus/tilavuus) vaahdonestoainetta Desmophen pantiin 15 litran jaloteräs-fermentoriin, sterilisoitiin autoklaavissa 121 °C:ssa 36 15 minuutin ajan, jäähdytettiin ja siirrostettiin 4 % (tilavuus/tilavuus) siirrostusta yllä olevasta esimerkin 4 vaiheesta 1 aseptisissa olosuhteissa. Sen jälkeen viljeltiin 24 tunnin ajan seuraavissa olosuhteissa: lämpötila 28 °C (± 1 °C) 20 sekoitusnopeus 150 kierrosta minuutissa ilmastus 6 litraa minuutissa 24 tunnin ajan kasvanut viljelmä käytettiin vaiheen 3 valmistuselatusaineeseen siirrostamiseen.
Vaihe 3 25 Fermentaatio tuotantomittakaavassa 100 litraa valmistuselatusainetta (joka vastasi esimerkissä 3 mainittua siirrostusviljelmäelatusainetta), jonka pH-arvo oli ennen sterilisaatiota säädetty 6,8:ksi ja johon oli lisätty 0,06 % Desmohenia ja joka oli 150 30 litran fermentorissa, tai 250 litraa elatusainetta ja . 0,06 % Desmophenia, jotka olivat 390 litran fermentorissa, sterilisoitiin 28 minuutin ajan 121 °C:ssa in situ ja siihen siirrostettiin 4 % siirrostusviljelmää vaiheesta 2.
10 - 94648
Kasvatettiin seuraavissa olosuhteissa: lämpötila: 28 °C (± 1 °C) sekoitusnopeus: 80 - 100 kierrosta minuutissa ilmastus: 50 litraa minuutissa 5 (100 litran fermentorin ta pauksessa ) 125 litraa minuutissa (390 litran fermentorin tapauksessa ) 10 talteenottoaika: 66 tunnin jälkeen
Antibiootin tuottamista valvottiin tutkimalla aktiivisuusprofiilia lajeja Staphylococcus aureus 209 P, Staphylococcus aureus R 85 ja Alcaligenes faecalis vastaan. Kasvatusliemi sentrifugoitiin talteenoton jälkeen ja 15 antibiootti eristettiin viljelmän suodoksesta ja puhdistettiin kuten seuraavassa on kuvattu.
Esimerkki 5
Mersasidiinin eristäminen ja puhdistaminen Noin 100 litraa talteen otettua kasvuliuosta ero-20 tettiin sentrifugoimalla soluista. Saatu suodos (pH 6,8 -7,0) johdettiin 5 litran Diaion HP-20 -pylvään lävitse. Pylvästä pestiin seuraavaksi 50 litralla vettä, josta oli poistettu mineraalit. Sen jälkeen sitä pestiin peräkkäin liuoksilla, joissa oli 70 % H20:tä MeOH:ssa, (40 litraa), 25 50 % H20:tä Me0H:ssa (50 litraa) ja 30 % H20:tä Me0H:ssa * (50 litraa) ja pesuvesi heitettiin kulloinkin pois. Lo puksi pylvästä eluoitiin 10 litralla Me0H:a. Aktiiviset eluaatit konsentroitiin alennetussa paineessa ruskeaksi öljymäiseksi aineeksi. Tätä hierrettiin litran kanssa pet-30 rolieetteriä (kiehumispiste 40 - 60 °C), suodatettiin ja suodos heitettiin pois. Tätä menettelyä toistettiin, kun-nes suodatusjäännökseksi jäi jauhe. Siten saatiin raaka mersasidiinia ruskehtavan keltaisena jauheena (12 g).
Raa'alle mersasidiinille suoritettiin sitten kes-35 kipainenestekromatografia käyttäen 300 g silikageeliä w - 94648 (200 - 300 mesh) kooltaan 5,5 x 53 cm olevassa lasipyl-väässa. Pylvästä pestiin 1,5 litralla CH3CN:a ja sen jälkeen eluoitiin 10 % CH3CN:n vesiliuoksella (3 litraa) ja 15 % CH3CN:n vesiliuoksella (3 litraa) käyttäen virtaus-5 nopeutta 16 ml minuutissa. Koottiin 250 ml:n fraktioita ja ne tutkittiin aallonpituudella 210 nm suoritetun UV-ana-lyysin ja mikrobien avulla suoritettujen osoitusmenetel-mien avulla. 6 fraktiota (1,5 litraa) 15 % CH3CN:n vesi-liuos -eluaateista oli aktiivisia ja ne konsentroitiin 10 tyhjössä 35 °C:ssa CH3CN:n poistamiseksi ja jäädytyskuivat-tiin sen jälkeen, jolloin saatiin 2 g puolipuhdasta ainetta kellertävänä jauheena.
Näin saadulle puolipuhtaalle materiaalille suoritettiin jälleen keskipainenestekromatografia käyttäen si-15 likageeliä (200 - 300 mesh) kooltaan 4 x 54 cm olevassa lasipylväässä. Pylvästä eluoitiin peräkkäin CH3CN:lla (1 litra), 5 % CH3CN:n vesiliuoksella (1 litra) ja 10 % CH3CN:n vesiliuoksella (4,5 litraa) käyttäen virtausnopeutta 30 ml minuutissa. Koottiin 250 ml:n fraktioita ja tun-20 nistaminen suoritettiin UV-analyysin avulla aallonpituudella 210 nm ja mikrobeja hyödyntävän osoittamisen avulla. Mersasidiini saatiin eluoimalla 10 % CH3CN:n vesiliuoksella (750 ml), joka sitten konsentroitiin alennetussa paineessa 35 °C:ssa, mitä seurasi jäädytyskuivaus, jolloin saatiin 25 593 mg mersasidiinia väriltään valkeasta vaikeahkoon ole- « vana jauheena.
Mersasidiinin loppupuhdistus tapahtui korkeapaine-nestekromatografiän avulla käyttäen kooltaan 4 x 250 mm olevaa Hypersil (10 μΐ) -pylvästä, eluenttina 30 % CH3CN:n 30 vesiliuosta ja virtausnopeutena 1,0 ml minuutissa. Frak-. tiot tunnistettiin suorittamalla UV-analyysi aallonpituu- della 210 nm. Näissä olosuhteissa mersasidiinin retentio-aika oli noin 3,5 minuuttia. Koottiin asianmukaiset fraktiot, ne konsentroitiin tyhjössä 35 °C:ssa ja lyofilisoi-35 tiin lopuksi, jolloin saatiin 275 mg antibioottia valkeana 12 - 94648 jauheena. Mersasidiinin puhtaus tutkittiin käyttäen kooltaan 4 x 120 nun olevaa APS-Hypersil (5 μ) -pylvästä; eluenttina CH3CN:n ja H20:n seosta (70:30); virtausnopeutta 1 ml minuutissa; paperinsyöttönopeutta 10 mm minuutissa; 5 osoittamista aallonpituudella 210 nm. Korkeapainenestekro-matogrammi on esitetty kuviossa 1.
Mersasidiinin fysikaaliskemialliset ominaisuudet.
Mersasidiini on uusi yhdiste, jonka rakenteelle on tunnusomaista nonadekapeptidi, jossa on C-terminaalinen 10 vinyyliamidijäännös ja neljä molekyylinsisäistä sulfidi- siltaa. Taulukkoon 1 on koottu mersasidiinin fysikaalis-kemiallisia ominaisuuksia.
Taulukko 1
Mersasidiinin fysikaaliskemialliset ominaisuudet: 15 Ulkonäkö: valkea amorfinen jauhe
Luonne: syklinen polypeptidi
Sulamispiste: noin 240 °C (hajoaa) [a]“° -9,4° (c - 0,3, MeOH)
Summakaava: Cg0 H12Q N2(J 021 S4 20 - vahvistettu suuren erotuskyvyn massaspektromet rian avulla (FAB-ionointi, matriisi 3-nitrobentsyylialko-holi) - M + H* -ionin mitattu m/z 1825,785 - koostumukselle 12_ 1„ 14.. 16_ 32e C80 H121 N20 °21 S4
ZO
laskettu m/z 1825,790
Massaspektri (FAB, matriisi 3-nitrobentsyylialko-holi): kuvio 2 1H-NMR-spektri (270 MHz, CD30D): kuvio 3 30 13C-NMR-spektri (100 MHz, CD30H): taulukko 2 n t is - 94648
Taulukko 2
Mersasidiinin 13C-NMR-tulokset (7 % liuos CD3OH: ssa, 310 K)
Kemiallinen siirtymä Kerrannaisuus Rakenteen kohta 5 (miljoonasosia)_ 10.42 q C-5 Ile (19) 15,97 q C-4' Ile (19) 18,51 q C-4 3-tio-Abu (2) 18.68 q C-4’ Vai (11) 10 19,77 q C-4 Vai (11) 20.13 q C-4 3-tio-Abu (4+15) 21,28 q C-4 3-tio-Abu (13) 22.43 t C-3 Cys (1) 15 22,43 q C-5’ Leu (5) 23.17 q C-5' Leu (14) 23,53 q C-5 Leu (5) 23.58 q C-5 Leu (14) 25,47 d C-4 Leu (5) 20 25,78 d C-4 Leu (14) 26,00 t C-4 Pro (6) 26.68 t C-4 lie (19) 28.17 t C-3 Glu (18) 30,85 t C-3 Pro (6) 25 32,54 d C-3 Vai (11) : 33,58 t C-3 Cys (12) 35,21 d C-3 Ile (19) 35.59 t C-4 Glu (17) 37.14 t C-3 Cys (18) 30 37,34 t C-3 Phe (3) 39,39 d C-3 3-tio-Abu (2) 40,93 t C-3 Leu (14) 42,02 t C-3 Leu (5) 42,81 t C-2 Gly (10) 35 43,38 t C-2 Gly (9) 43.59 d C-3 3-tio-Abu (4) 44,10 t C-2 Gly (7) 44,62 t C-2 Gly (8) 14 - 94648
Kemiallinen siirtymä Kerrannaisuu Rakenteen kohta (miljoonasosia)_ 45,50 d C-3 3-tio-Abu (13) 48,67 t C-5 Pro (6) 5 49,46 d C-3 3-tio-Abu (15) 50.42 d C-2 Leu (14) 52.71 d C-2 Leu (5) 55,25 d C-2 Cys (18) 55.72 d C-2 Cys (12) 10 56,72 d C-2 Glu (17) 57.42 d C-2 3-tio-Abu (15) 57,81 d C-2 Phe (3) 58,12 d C-2 Cys (1) 59,07 d C-2 3-tio-Abu (2) 15 59,08 d C-2 3-tio-Abu (4) 59,19 d C-2 3-tio-Abu (13) 61,60 d C-2 Pro (6) 62,64 d C-2 Ile (19) 63,14 d C-2 Vai (11) 20 103,84 d C-2 Tiovinyyli- amidi (20) 112,41 t C-2 dehydro-Ala (16) 127,97 d C-7 Phe (3) 25 129,56 d C-l Tiovinyyli- amidi (20) 129,71 d C-6 Phe (3) 130,22 d C-5 Phe (3) 136,96 s C-4 Phe (3) 30 138,15 s C-2 dehydro-Ala (16) 166,56 s C-l dehydro-Ala (16) 171,16 s C-l Ile (19) 35 171,38 s C-l Gly (10) 171,44 s C-l Cys (18) 171,62 s C-l 3-tio-Abu (4) 171,76 s C-l 3-tio-Abu (15) is . - 94648
Kemiallinen siirtymä Kerrannaisuus Rakenteen kohta (miljoonasosia)_ 171,82 s C-l Gly (9) 171,84 s C-l Leu (5) 5 171,86 s C-l 3-tio-Abu (13) 171,87 s C-l 3-tio-Abu (2) 172,59 s C-l Gly (8) 172,74 s C-l Leu (14) 173,06 s C-l Gly (7) 10 173,76 s C-l Cys (12) 174,00 s C-l Vai (11) 174,25 s C-l Glu (17)
Aktiivisuustestej ä: a) Mersasidiinin aktiivisuus in vitro 15 Taulukossa 3 on esitetty mersasidiinin biologiset ominaisuudet erilaisten mikro-organismien kasvun estämiseen tarvittavina MHK-arvoina (pienin estävä konsentraa-tio)
Taulukko 3 20 Numero_Koeorganismi_MHK-arvot (pg/ml) 1. Staph, aureus 209P 0,78 - 1,56 2. Staph, aureus E 88 6,25-12,50 3. Staph, aureus 3066 12,50 - 25,00 4. Staph, aureus 20240 3,12 - 6,25 25 5. Staph, aureus 20424 1,56 - 3,12 6. Staph, aureus 503 0,78 - 1,56 7. Staph, aureus 789 0,78 - 1,56 8. Staph, aureus 722 3,12 - 6,25 9. Staph, aureus SG 511 0,39 - 0,78 30 10. Staph, aureus 20666 3,12 - 6,25 11. Staph, aureus E 712 3,12 - 6,25 12. Staph, aureus 285 0,78 - 1,56 13. Staph, aureus R 85 0,39 - 0,78 14. Staph, aureus 710 0,39 - 0,78 35 15. Micrococcus luteus 0,0975-0,195 16 · 94648
Numero Koeorqanismi MHK-arvot (,ug/ml) 16. Bacillus subtilis 0,39 - 0,78 17. Streptococcus faecalis 0,0975-0,195 18. Str. D 21777 1,56 - 3,12 5 19. S. epidermidis MRSE 0,5 - 16,0 20. S. epidermidis MSSE 0,5 - 16,0 21. Gruppe. A Streptococci 0,5 - 8,0 22. Gruppe B Streptococci 1,0 - 8,0 23. Gruppe C Streptococci 2,0 - 64 10 24. Gruppe G Streptococci 2,0 - 8,0 25. Streptococci bovis 4,0 - 32,0 26. Streptococcus viridans 0,5 - 32,0 27. Streptococcus faecalis 64,0 28. Streptococcus pneumoniae 1,0 - 4,0 15 29. Corynebacterium JK 2,0-4,0 30. Listeria monocyctogenes 16,0 - 64,0 31. Clostridium species 0,5 - 16,0 32. Peptostreptococci species 0,5 - 8,0 33. Propionobacterium genes 1,0 - 16,0 20 b) Mersacidiinin aktiivisuus in vivo Laboratoriohiirten in vivo -systeemissä mersasi-• diini osoitti hyvää aktiivisuutta. Annettaessa ihon alle annoksina 9,37 ja 25,00 mg/kg laboratoriohiirille, jotka oli kokeellisesti infektoitu Staphylococcus aureus SG 511:llä ja S. aureus 710:llä (metisilliinille resistentti) saavutettiin 100 % parantumisaste. Sen lisäksi tutkit- . tiin antibiootin akuuttia myrkyllisyyttä laboratoriohii- • · rillä. Edes annoksella 500 mg/kg (ihon alle), joka annos on tähän mennessä suurin tutkittu konsentraatio, ei ha-30 vaittu eläinten kuolleisuutta. Tulokset on esitetty taulukossa 4.
17 - 94648
Taulukko 4
Mersasidiinin in vivo -aktiivisuus S. aureus SG 511 -infektiota vastaan hiirillä verrattuna vankomysiiniin. Käytetty siirrostus; 1,75 x 109 cfu/niiri 5 Yhdiste Annos/käyttö Parantuneiden/käsitel- Likimääräinen EDS(), mg/kg x 3, tyjen hiirien lukumäärä ed9q mg/kg * 3 g>c> (parannusaste prosenteissa)
Mersasi- ~ 53/53 (100) 6.25 36/40 ( 95) 2,59 10 3,12 18/27 ( 67) 5,38 1,60 3/24 ( 12) 0,80 0/27 ( 0)
Vanko- mysiini 18,75 71/71 (100) 15 12,5 59/61 ( 97) 7,20 9.37 48/53 ( 85) 9,37 6.25 13/44 ( 29) 3,12 2/41 ( 5) 20
Mersasidiinin in vivo-aktiivisuus S. aureus E 710:tä (MRSA).vastaan hiirissä verrattuna vankomysiiniin Käytetty rokotusaine! 5 x 10® KBE/hiiri (1 MLD) 25 Yhdiste Annos/käyttB Parantuneiden/käsi- Likimääräinen ED * mg/kg x 3, se teltyjen hiirien ED_Q x 3 lukumäärä (parannusaste prosenteissa)_
Mersasi- diini 25,00 12/12 (100) 10,81 3o 12,50 10/16 ( 63) 19,59 9.37 4/10 ( 40) 6.25 1/10 ( 10)
Vanko- mysiini 37,00 6/6 (100) 18,94 35 25,00 14/21 ( 67) 32,01 12,50 3/11 (27) 6.25 0/11 ( 0) 18 - 94648
Mersasidiinin in vivo -aktiivisuus S. aureus SG 511-infektiota vastaan rotissa verrattuna vankomysiiniin Käytetty siirrostus: 2 x 109 cfu 5-%:isessa musiinissa injektoituna ihon alle.
5 Käsittely: 50 mg/kg x 7 vuorokautta
Tulokset: Mersasidiini vähentää bakteerien muodostumista määrällä 1,4 log^Qcfu/ml (cfu - pesäkkeitä muodostavia yksiköitä), vankomysiini vähentää bakteerien mudoos-tumista määrällä 0,79 log^cfu/ml.
10 Esimerkki 6
Mersasidiinin vesiliukoisten suolojen valmistus Mersasidiini on alkalisuoloinaan vesiliukoinen.
Näitä voidaan valmistaa esim. saattamalla mersasidiini reagoimaan ekvivalenttisen määrän Kanssa vastaavaa alkaiimetaiii- 15 hydroksidia pyridiinin läsnäollessa. Esimerkiksi 50 mg mersasidiinia liuotettiin 1 mi:aan pyriaiiniä, liuos jäähdytettiin 0°C:seen ja siihen lisättiin samalla sekoittaen 1,683 mg KOH:ia liuotettuna 3 ml:aan tislattua vettä. Seosta sekoitettiin 0°C:ssa tunnin ajan, minkä jälkeen lyofi- 20 lisoitiin. Saatiin 49 mg kalium-mersasidiinia valkoisena jauheena. Tämän kalium-mersasidiinin liukoisuus veteen on 160 mg/ml. Kalium-mersasidiiniin antibakteeriset ominaisuudet in .vitro ja in vivo ovat verrattavissa mersasidiinin vastaaviin ominaisuuksiin. Koetulokset on esitetty taulu- 25 koissa 5 ja 6.
- 94648
Taulukko 5
Kalium-mersasidiinin MHK-arvot 1. Staph, aureus 209P 2 5 2. Staph, aureus R 85 2 3. Staph, aureus 710 1 4. Staph, aureus 3066 10 5. Staph, aureus 25923 Θ 6. Staph, epidermldle 32965 6 10 7. Staph, epldermidis 823 50 8. Staph, haemolyticus 712 10 9.. Staph, haemolyticus 809 4 10. Strepto. hominis ML 22 10 11. Strepto. faecalls 29212 15 12. Strepto. faecalls 21777 15
Taulukko 6
Kalium-mersasidiinin in vivo -aktiivisuus S. aureus-ja Strept. pyogenes A 77 - infektioita vastaan hiirissä 2q Koeorganismi Käytetty 50 X vaikuttava annos siirrostus (ED^q) ^8 x B.c.
Staph, aureus SG 511 1,75 x 109 2,85 (Methicillin sensitive) 25 Staph, aureus E 710 1 x 1010 6,72 (Methicillin resistant)
Staph, aureus C 31153 2 x 109 15,35 (Methicillin & Cephalexin 30 resistent)
Strept. pyogenes A 77 3,8 x 103 0,46
Claims (6)
1. Menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen /S. .AY1 i"tCH3>2 ch2 "'ch ch2 ch2 ^ HoN-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-N-CH-CO 2 i i 10 S CH3 ch9—' I 1 C0-CH-NH-C0-CH-NH-C0-CH2-NH-C0-CH2-NH-C0'-CH2-NH-C0-CH2-NH 15 CH(CH3)2 iH3 __________ --- -£H2. NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-HH-C-H-CO 50 I I I I 20 ch2 ch ch, ch, I /v i i I CH, \ CH2 CH(CHj)23 s
25. CH<H-NH-CO-CH-NH CH-CHt I 5 C2H5 tai sen fysiologisesti hyväksyttävän suolan valmistamisek-30 si, tunnettu siitä, että viljellään Eubacterium ; Bacillus-lajia Y-85 54728 (DSM 4584) aerobisissa olosuh teissa hiilen- ja typenlähteitä, epäorgaanisia ravinto-suoloja ja hivenaineita sisältävässä elatusaineessa, yhdiste eristetään ja puhdistetaan yleisellä tavalla kasvu-35 liuoksesta, ja haluttaessa yhdiste muutetaan suolamuotoon. 1 « - 94648
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan II mukainen yhdiste tai sen fysiologisesti hyväksyttävä suola 1 .S. s CHj CH CH2 s CH2 ^ H,N-CH-CO-NH-CH-CD-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-N-CH-CO R S S ______CH S S I * CH3 CHn^ * I 2 s co-ch-nh-co-ch-nh-co-ch2-sh-co-ck2-nh-co-ch2-nh-cd-ch2-nh
15. CH(CHj)2 (ii, ______— ------"5 ~---CH2 IH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-C-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO S I _ I f I o
20. CH9 S CH tH9 CH9 I 2 / \ 2 ‘ 2 I CH \ H2 CH(CHj)2 sv ^ ^ CH-CH-NH-CO-CH-NH 25 | s CH-CHt I J c2h5 valmistetaan viljelemällä Eubacterium Bacillus-lajia 30 Y-85 54728 (DSM 4584) aerobisissa olosuhteissa hiilen- ja typenlähteitä, epäorgaanisia ravintosuoloja ja hivenaineita sisältävässä elatusaineessa, eristämällä ja puhdistamalla yleisellä tavalla kasvuliuoksesta, ja haluttaessa muuttamalla yhdiste suolamuotoon. 22 - 94648
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että viljely suoritetaan lämpötiloissa noin 26 - 29 °C ja pH:ssa noin 6,5 - 7,2.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen me-5 netelmä, tunnettu siitä, että viljely suoritetaan 28 °C:ssa (± 1 °C) ja pH:ssa noin 7,2.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fermentaatiota suoritetaan kauemmin kuin 60 tuntia.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen me netelmä, tunnettu siitä, että kaavan I ja II mukaiset yhdisteet puhdistetaan kromatografisten menetelmien avulla. « II 23 -94648
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3827868 | 1988-08-17 | ||
| DE3827868A DE3827868A1 (de) | 1988-08-17 | 1988-08-17 | Ein neues antibiotikum, mersacidin, ein verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung als arzneimittel |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI893842A0 FI893842A0 (fi) | 1989-08-15 |
| FI893842A7 FI893842A7 (fi) | 1990-02-18 |
| FI94648B true FI94648B (fi) | 1995-06-30 |
| FI94648C FI94648C (fi) | 1995-10-10 |
Family
ID=6361001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI893842A FI94648C (fi) | 1988-08-17 | 1989-08-15 | Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5112806A (fi) |
| EP (1) | EP0362520B1 (fi) |
| JP (1) | JP2892699B2 (fi) |
| KR (1) | KR0139628B1 (fi) |
| AT (1) | ATE113296T1 (fi) |
| AU (1) | AU613228B2 (fi) |
| CA (1) | CA1338171C (fi) |
| DE (2) | DE3827868A1 (fi) |
| DK (1) | DK175121B1 (fi) |
| ES (1) | ES2064398T3 (fi) |
| FI (1) | FI94648C (fi) |
| HU (1) | HU203906B (fi) |
| IE (1) | IE64706B1 (fi) |
| IL (1) | IL91317A0 (fi) |
| IN (1) | IN167138B (fi) |
| NO (1) | NO174517B (fi) |
| NZ (1) | NZ230303A (fi) |
| PH (1) | PH27179A (fi) |
| PT (1) | PT91468B (fi) |
| ZA (1) | ZA896245B (fi) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0700998B1 (en) * | 1994-09-12 | 2003-11-26 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Recombinant mersacidin and a method for production |
| US5910479A (en) * | 1996-10-18 | 1999-06-08 | Ambi Inc. | Method for the treatment of Streptococcus pneumoniae infection |
| US6861236B2 (en) * | 2002-05-24 | 2005-03-01 | Applied Nanosystems B.V. | Export and modification of (poly)peptides in the lantibiotic way |
| GB0406870D0 (en) | 2004-03-26 | 2004-04-28 | Novacta Biosystems Ltd | Improvements relating to the production of lantibiotics |
| JP2009509519A (ja) * | 2005-09-27 | 2009-03-12 | ノヴァクタ バイオシステムズ リミティッド | ランチビオティックメルサシジンの変種およびそれらの使用 |
| GB0600928D0 (en) | 2006-01-17 | 2006-02-22 | Novacta Biosystems Ltd | Improvements relating to lantibiotics |
| GB0714030D0 (en) * | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | The use of type-B lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
| GB0714029D0 (en) * | 2007-07-18 | 2007-08-29 | Novacta Biosystems Ltd | Lantibiotic-based compounds having antimicrobial activity |
| ES2520165T3 (es) * | 2009-01-14 | 2014-11-11 | Novacta Biosystems Limited | Derivados de desoxiactagardina |
| CN102388060B (zh) | 2009-02-04 | 2014-09-10 | 诺瓦克塔生物系统有限公司 | 阿肽加定衍生物 |
| GB201001688D0 (en) | 2010-02-02 | 2010-03-17 | Novacta Biosystems Ltd | Compounds |
| GB201013513D0 (en) | 2010-08-11 | 2010-09-22 | Novacta Biosystems Ltd | Formulations |
| KR102582570B1 (ko) * | 2021-03-19 | 2023-09-22 | 한국생명공학연구원 | 유박테리움 칼란데리, 이의 배양액 또는 이의 배양액 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물 |
| EP4404946A4 (en) * | 2021-09-22 | 2026-01-07 | Biomedit Inc | METHOD FOR INHIBITING DISEASES SURRIDATED BY RESPIRATORY VIRUSES |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4493796A (en) * | 1980-09-12 | 1985-01-15 | Board Of Trustees, Univ. Of Ill. | Didemnins A, B, C, and derivatives thereof, as antiviral agents |
| JPS61134398A (ja) * | 1984-12-06 | 1986-06-21 | Microbial Chem Res Found | 新生理活性物質プリパスタチン及びその製造法 |
-
1988
- 1988-07-04 IN IN193/BOM/88A patent/IN167138B/en unknown
- 1988-08-17 DE DE3827868A patent/DE3827868A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-08-14 DE DE58908558T patent/DE58908558D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-14 EP EP89114990A patent/EP0362520B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-14 ES ES89114990T patent/ES2064398T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-14 AT AT89114990T patent/ATE113296T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-08-15 US US07/393,953 patent/US5112806A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-15 PH PH39098A patent/PH27179A/en unknown
- 1989-08-15 NZ NZ230303A patent/NZ230303A/en unknown
- 1989-08-15 FI FI893842A patent/FI94648C/fi active IP Right Grant
- 1989-08-15 IL IL91317A patent/IL91317A0/xx unknown
- 1989-08-16 DK DK198904037A patent/DK175121B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-08-16 IE IE263889A patent/IE64706B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-08-16 CA CA000608500A patent/CA1338171C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-16 HU HU894215A patent/HU203906B/hu unknown
- 1989-08-16 ZA ZA896245A patent/ZA896245B/xx unknown
- 1989-08-16 JP JP1210228A patent/JP2892699B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-16 NO NO893288A patent/NO174517B/no not_active IP Right Cessation
- 1989-08-16 AU AU39966/89A patent/AU613228B2/en not_active Expired
- 1989-08-17 KR KR1019890011679A patent/KR0139628B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1989-08-17 PT PT91468A patent/PT91468B/pt not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI94648B (fi) | Menetelmä uuden antibiootin, mersasidiinin, valmistamiseksi | |
| TANAKA et al. | Brasilinolide A, a new macrolide antibiotic produced by Nocardia brasiliensis: producing strain, isolation and biological activity | |
| HUP0102903A2 (hu) | Nokatiacin antibiotikumok, eljárás az előállításukra és a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények | |
| CN101522705B (zh) | 来自actinomadura namibiensis的抗菌和抗病毒肽 | |
| AU2005300815B2 (en) | Acylated nonadepsipeptides used as lysobactin derivatives | |
| US4180564A (en) | A-38533 Antibiotics and process for production thereof | |
| FI100112B (fi) | Menetelmä bakteerien vastaisen tiomarinolin valmistamiseksi | |
| FI101402B (fi) | Menetelmä uuden antibiootin, balhimysiinin valmistamiseksi | |
| RU2228337C2 (ru) | Ванкорезмицин (варианты), его использование, штамм amycolatopsis вида hil-006734 для его получения | |
| KR20090036544A (ko) | 신규한 항균성 화합물 | |
| Gastaldo et al. | Isolation, structure determination and biological activity of A-16686 factors A′ 1, A′ 2 and A′ 3 glycolipodepsipeptide antibiotics | |
| JP5823733B2 (ja) | 抗生物質産生微生物及びそれが産生した抗生物質 | |
| RU2795449C1 (ru) | Новые депсипептидные соединения, обладающие антибактериальной активностью | |
| US5571701A (en) | Antibiotic, balhimycin, a process for its production and its use as pharmaceutical | |
| EP0318680A2 (en) | Novel antibiotic compounds named A/16686 Factors A'1, A'2 and A'3 | |
| JP4452505B2 (ja) | 抗生物質ｇｅ８１１１２ファクターａ、ｂ、ｂ１、その製薬学的に許容され得る塩および組成物および使用 | |
| KR810000327B1 (ko) | 항생물질 a-35512 구성요소 b 비당체의 제조방법 | |
| KR860002194B1 (ko) | A-21978c 사이클릭 펩타이드 유도체의 제조방법 | |
| HRP20020497A2 (en) | Amycomycin, a process for its production and its use a pharmaceutical | |
| HK1012009A1 (en) | Lipopeptides from actinoplanes sp. endowed with pharmacological activity, process for their preparation and their use | |
| HK1012009B (en) | Lipopeptides from actinoplanes sp. endowed with pharmacological activity, process for their preparation and their use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH Free format text: SANOFI-AVENTIS DEUTSCHLAND GMBH |