FI88546B - Nytt foerfarande foer bestaemning av stabilt glukohemoglobin - Google Patents

Claims (14)

1. Förfarande för bestämning av mängden av stabilt glukohe-moglobin i ett glukohemoglobin-innehällande prov, k ä n -netecknat av att det innefattar stegen: (a) blandning av nämnda prov i ett vattenhaltigt medium med ftalsyra eller biftalsyra uppvisande ett pH-värde av 3-6, i ett förhällande av ätminstone cirka 1,5 millimol av nämnda syra per milligram hemoglobin för bildning av en syrlig reak-t ionsblandning; (b) upprätthällande av nämnda syrliga reaktionsblandning under en i förväg bestämd tidsperiod vid en temperatur över-stigande 0°C upp tili 37°C som är tillräcklig för avlägsnande av närvarande labilt glukohemoglobin under bibehällande av det stabila glukohemoglobinet närvarande i det ursprungliga provet; (c) blandning av nämnda reaktionsblandning med en med vatten kombinerbar borohydridreduktant i ett förhällande av ätminstone cirka 0,015 millimol borohydrid per milligram hemoglobin för bildning av en reduktionsreaktionsblandning; (d) upprätthällande av nämnda reduktionsreaktionsblandning under en i förväg bestämd tidsperiod vid en temperatur över- 49 88546 stigande 0°C upp till 37°C som är tillräcklig för bildning av glucitollysin-hemoglobin; (e) separation av nämrfda glucitollysin-hemoglobin frän eventuellt oreagerad borohydrid for bildning avä isolerat 5 glucitollysin-hemoglobin; (f) blandning av nämnda isolerade glucitollysin-hemoglobin med glucitollysin-specifikä receptormolekyler för bildning av en immunoreaktionsblandning; (g) upprätthällande av nämnda immunoreaktionsblandning under 10 biologiska bestämningsbetingelser under en tidsperiod som är tillräcklig för att receptormolekylerna skall bindas immuno-logiskt vid nämnda glucitollysin-hemoglobin under bildning av en immunoreaktant; och (h) bestämning av mängden av immunoreaktant som bildas i den 15 upprätthällna immunoreaktionsblandningen.

2. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck- n a t av att nämnda blandningssteg (a) genomföres i ett för-hällande av ätminstone cirka 15,0 millimol syra per milligram 20 hemoglobin.

3. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-n a t av att nämnda syrliga lösning i steg (a) uppvisar ett . ···. pH-värde av 4-5. 25

4. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-n a t av att nämnda blandning i steg (c) genomföres i ett förhällande av ätmistone cirka 0,15 millimol borohydrid per milligram hemoglobin. 30

5. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck- n a t av att receptorerna i steg (f) föreligger i form av en monoklonal antikropp. 35 6. Förfarande enligt patentkravet 5, känneteck- n a t av att nämnda monoklonala antikropp utsöndras genom :: hybridomen uppvisande ATCC-tillgänglighetsnumret HB 8356 el- ·; ler HB 8358. so 38546

7. Förfarande for bestämning av mängden av stabilt glukohe-moglobin i ett glukohemoglobin-innehällande prov, k ä n -netecknat av att det innefattar stegen: (a) tillhandahällande av en i förväg bestämd volym av en packad röd-blodcell-pellett; (b) blandning av nämnda i förväg bestämda volym av pelletten med vattenhaltig 0,05 M ftalsyravid ett pH-värde av 4-5 i ett förhällande av cirka 1 volym pellett tili cirka 62,5 volymer vattenhaltig syra under bildning av en syrlig reaktionsbland-ning; (c) upprätthällande av nämnda syrliga reaktionsblandning under en tidsperiod av 15 minuter till 30 minuter vid en tem-peratur av 20°C till 37°C under bildning av ett hemolysat; (d) blandning i brunnar pd en mikrotiterplatta av en i förväg bestämd volym av nämnda hemolysat med en lika stor volym av en vattenhaltig lösning uppvisande en natriumborohydrid-eller kaliumborohydridkoncentration av cirka 400 mM under bildning av en reduktionsreaktionsblandning innehällande ett förhällande av ätminstone cirka 0,15 minimoi borohydrid per milligram hemoglobin; (e) upprätthällande av nämnda reduktionsreaktionsblandning under en tidsperiod av 15 minuter till 30 minuter vid en tem-peratur av 20°C till 37°C under bildning av vid mikrotiter-plattans brunnar bundet glucitollysin-hemoglobin; (f) separation av nämnda vid brunnarna bundet glucitollysin-hemoglobin frän nämnda borohydrid för bildning av isolerat vid brunnarna bundet glucitollysin-hemoglobin; (g) blandning av nämnda isolerade vid brunnarna bundet glucitollysin-hemoglobin med en i förväg bestämd mängd av enzym-märkta receptorer som utsöndrats av hybridom uppvisande ATCC-tillgänglighetsnumret HB 8356 eller HB 8358 för bildning av en immunoreaktionsblandning; (h) upprätthällande av nämnda immunoreaktionsblandning under en tidsperiod av 15 minuter till 30 minuter vid en temperatur av 20°C tili 37°C, vilken tidsperiod är tillräcklig för att nämnda receptorer skall binda immunologiskt nämnda glucitollysin-hemoglobin och bilda en vid mikrotiterplattans brunnar bunden immunoreaktant; och (i) bestämning av mängden av vid mikrotiterplattans brunnar bunden immunoreaktant som bildats i steg (h). si 88546

8. Förfarande för överföring av stabilt glukohemoglobin tili glucitollysin-hemoglobin frän ett glukohemoglobinprov innehällande säväl labilt som stabilt glukohemoglobin, kännetecknat av att det innefattar stegen; (a) blandning av nämnda prov i ett vattenhaltigt medium med ftalsyra eller biftalsyra uppvisande ett pH-värde av 3-6 i ett förhällande av ätminstone cirka 1,5 millimol av nämnda syra per milligram hemoglobin under bildning av en syrlig reaktionsblandning; (b) upprätthällande av nämnda syrliga reaktionsblandning under en i förväg bestämd tidsperiod vid en temperatur översti-gande 0°C tili 37°C som är tillräcklig för avlägsnande av närvarande labilt glukohemoglobin under upprätthällande av det stabila glukohemoglobinet närvarande i det ursprungliga provet; (c) blandning av nämnda reaktionsblandning med en med vatten kombinerbar borohydridreduktant i ett förhällande av ätmins-tone cirka 0,015 millimol borohydrid per milligram hemoglobin under bildning av en reduktionsreaktionsblandning; (d) upprätthällande av nämnda reduktionsreaktionsblandning under en i förväg bestämd tidsperiod vid en temperatur frän överstigande 0°C tili 37°C som är tillräcklig för bildning av glucitollysin-hemoglobin; och (e) separation ev nämnda glucitollysin-hemoglobin frän • eventuellt oreagerad borohydrid under bildning av isolerat glucitollysin-hemoglobin.

9. Förfarande enligt patentkravet 8, kännetecknat av att nämnda blandning i steg (a) genomföres vid ett förhällande av ätminstone cirka 15 millimol syra per milligram hemoglobin.

10. Förfarande enligt patentkravet 8, kännetecknat av att nämnda syrliga lösning i steg (a) uppvisar ett pH-värde av 4-5. 1 Förfarande enligt patentkravet 8, känneteck-n a t av att nämnda blandning i steg (c) genomföres i ett förhällande av ätminstone cirka 0,15 millimol borohydrid per milligram hemoglobin. 52 88546

12. Förfarande enligt patentkravet 8, känneteck-n a t av att nämnda prov föreligger i form av röda blodcel-ler.

13. Diagnostiskt system lämpat for genomförande av en fast-fas-bestämning av mängden av stabilt glukohemoglobin närva-rande i ett glukohemoglobinprov enligt förfarandet enligt nägot av patentkraven ovan, kännetecknat av att det innefattar: (a) en första förpackning innehällande en fast-fas-matris pä vars yta nämnda bestämning skall genomföras; (b) en andra förpackning innehällande en i förväg bestämd mängd av en med vatten kombinerbar borohydridreduktant; (c) en tredje förpackning innehällande en känd mängd av glu-citollysin-specifikä receptormolekyler; och (d) en fjärde förpackning innehällande en i förväg bestämd mängd av ftalsyra eller biftalsyra; varvid förpackningarnas innehäll föreligger i respektive mängder som är tillräckliga för genomförande av bestämningen.

14. Diagnostiskt system enligt patentkravet 13, kännetecknat av att nämnda glucitollysin-specifikä receptormolekyler utsöndras genom hybridomen uppvisande ATCC-tillgänglighetsnumret HB 8356 eller HB 8358.

15. Diagnostiskt system enligt patentkravet 14, kännetecknat av att nämnda receptormolekyler är bundna vid en markör.