FI86192C - Stereoselektiv foerfarande foer framstaellning av omaettad laktoner. - Google Patents

Stereoselektiv foerfarande foer framstaellning av omaettad laktoner. Download PDF

Info

Publication number
FI86192C
FI86192C FI863250A FI863250A FI86192C FI 86192 C FI86192 C FI 86192C FI 863250 A FI863250 A FI 863250A FI 863250 A FI863250 A FI 863250A FI 86192 C FI86192 C FI 86192C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
product
alkyl
cyclohexyl
formula
title product
Prior art date
Application number
FI863250A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI863250A (fi
FI86192B (fi
FI863250A0 (fi
Inventor
Robert Louis Rosati
Edward Fox Kleinman
Jasjit Singh Bindra
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of FI863250A0 publication Critical patent/FI863250A0/fi
Publication of FI863250A publication Critical patent/FI863250A/fi
Publication of FI86192B publication Critical patent/FI86192B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI86192C publication Critical patent/FI86192C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/14—Angiotensins: Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D307/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/32—Oxygen atoms
    • C07D307/33—Oxygen atoms in position 2, the oxygen atom being in its keto or unsubstituted enol form
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/02—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines
    • C07D217/06—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines with the ring nitrogen atom acylated by carboxylic or carbonic acids, or with sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0227—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the (partial) peptide sequence -Phe-His-NH-(X)2-C(=0)-, e.g. Renin-inhibitors with n = 2 - 6; for n > 6 see C07K5/06 - C07K5/10
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/86—Renin inhibitors

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Polyamides (AREA)

Description

1 86192
Stereoselektiivinen menetelmä tyydyttyneiden laktonien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee stereoselektiivistä menetel-5 mää tyydyttyneiden laktonien valmistamiseksi, joilla on kaava H R16 ^r,17 (V) in —!— O-C-NH-^V^; 10 I il HJ' / Ή 0 0-i jossa R16 on (Cj-C^ alkyyli, (Cl~C6) alkenyyli, fenyyli, naftyyli, (C4-C?)sykloalkyyli, (C4-C?)sykloalkenyyli, 15 (C7-C9)fenyylialkyyli, (C11-C13) naftyylialkyyli, (C5-C10)-(sykloalkyyli)alkyyli tai jokin mainituista ryhmistä mono- tai disubstituoituna aromaattisessa renkaassa samoilla tai erilaisilla ryhmillä, joita ovat (Cj-C^)alkyyli, (C1-C3)alkoksi, fluori ja kloori; ja R17 on (Cj-Cg) (2-al-20 kenyyli), (C4-C?)(syklo-2-alkenyyli), bentsyyli tai naf- tyylimetyyli tai jokin mainituista ryhmistä mono- tai disubstituoituna aromaattisessa renkaassa samoilla tai erilaisilla ryhmillä, joita ovat (C^-C^)alkyyli, (Cj-CgJal-.···. koksi, fluori ja kloori.
25 Keksinnön mukaisella stereoselektiivisellä mene- * telmällä saadaan reniini-inhibiittorien valmistuksessa / käytettävää statiinirungon omaavaa laktonia, johon voi daan, edelleen stereoselektiivisesti, liittää haluttu aminohappo. Esitetynkaltaisten laktonien valmistusta on 30 kuvattu julkaisuissa J. Org. Chem. 47 (1982) 1221 - 1228 sekä Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 23 (1984) 143 - 145.
Statiinirungon omaavia dipeptideitä, joita voidaan ;**: käyttää välituotteina reniini-inhibiittorien valmistuk- sessa tai inhibiittoreina, on aiemmin valmistettu mene- • « · *.// 35 telmillä, jotka tunnetaan EP-hakemusjulkaisusta 45665 se-« * 2 86192 kä julkaisuista J. Org. Chem. 50 (1985) 4615 - 4625 ja J. Med. Chem. 26 (1983) 1457 - 1462.
Edellä mainittuihin tunnettuihin menetelmiin nähden keksinnön mukaisella menetelmällä on se etu, että sen 5 avulla saadaan stereoselektiivisesti tyydyttyneitä lakto-neita, joilla on täysin kontrolloitu stereokemia.
Julkaisuissa J. Org. Chem. 47 (1982) 1221 - 1228 ja Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 23 (1984) 143 - 145 kuvataan vain tyydyttämättömien laktonien valmistus, joiden 10 hydraus jälkimmäisen viitteen mukaan on vaikeaa.
Julkaisussa J. Org. Chem. 50 (1985) 4615 - 4625 ei . 17 ole esitetty ryhmän R stereokemiallista kontrollointia. Lisäksi ko. julkaisussa ryhmän R16 paikalla olevalla ryhmällä on vastakkainen konfiguraatio kuin esillä olevassa 15 keksinnössä ryhmällä R16.
Julkaisussa J. Org. Chem. 47 (1982) 1221 - 1228 kuvataan laktonin esiasteen valmistus, jolla on vastakkainen stereokemia happiatomin kohdalla. Tämä käy ilmi verrattaessa ko. julkaisun yhdisteitä 10 ja 11 esillä 20 olevan keksinnön yhdisteeseen C.
\ 4 o
-^-CC-CO,* \—C*C-C0,R
··; 25
‘ ' j Yhdisteet 10 ja 11 Yhdiste C
: EP-hakemusjulkaisussa 45665 ei tehdä eroa stereo- kemiallisten isomeerien välillä.
30 Julkaisu J. Med. Chem. 26 (1983) 1457 - 1462 kos kee 5-amino-3-hydroksi-7-metyylioktaanihapon (AHMOA) val-mistusta. Ko. julkaisussa ei kuitenkaan esitetä tai ehdo-. teta minkäänlaisia laktoneita. Jos AHMOA:sta muodostuisi laktoni, se olisi 4-jäseninen laktoni, kun taas esillä • ·' 35 olevan keksinnön laktonit ovat 5-jäsenistä.
3 p C Ί ο 2
Keksinnön mukaisella stereoselektiivisellä menetelmällä saatavia laktoneita voidaan käyttää valmistettaessa polypeptidijohdannaisia, joissa on 5-amino-2,5-di-substituoitu-4-hydroksivaleriaanahappotähteitä ja jotka 5 ovat käyttökelpoisia ehkäisemään reniinientsyymin angio-tensinogeenia lohkaisevaa vaikutusta; ja niiden välituotteita, erityisesti N-a-[N-(t-butoksikarbonyyli)fenyyli-alanyyli]-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyyli)histidii-niä.
10 Proteolyyttistä reniinientsyymiä, jonka molekyyli- paino on noin 40 000, muodostuu munuaisessa ja erittyy siitä vereen. Sen tiedetään olevan aktiivinen in vivo lohkaisten luonnossa esiintyvän plasman glykoproteiini-angiotensinogeenia. Kun kyseessä on ihmisen angiotensino-15 geeni, lohkeaminen tapahtuu leusiini (10.) ja valiini-(11.) aminohappotähteiden välisen sidoksen kohdalla an-giotensinogeenin N-päätepäässä:
Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-Val-20 123456789 10 11
Ile-His-Ser-Glu-12 13 14 15
Kiertävä N-päätteinen dekapeptidi (angiotensiini I), jota 25 on muodostunut reniinin edellä mainitun lohkaisuvaikutuk-: sen seurauksena, lohkeaa sen jälkeen kehon vaikutuksesta oktapeptidiksi, joka tunnetaan nimellä angiotensiini II.
: ' : Angiotensiini II:n tiedetään olevan voimakas painetta ai heuttava aine, so. aine, joka pystyy aiheuttamaan merkit-30 tävää verenpaineen lisääntymistä ja sen uskotaan toimivan aiheuttamalla verisuonten kuristumista ja natriumia pidättävän aldosteronihormonin vapautumista lisämunuaises-ta. Täten reniini-angiotensinogeenisysteemin on katsottu olevan kausaalisena tekijänä tietyissä veren liikapainei-: 35 suusmuodoissa.
4 861S2
Eräs keino lievittää reniini-angiotensinogeenisys-teemin toiminnan haitallisia vaikutuksia on antaa ainetta, joka pystyy ehkäisemään reniinin angiotensinogeenia lohkaisevaa vaikutusta. Tiedossa on muutamia sellaisia 5 aineita, mukaan luettuina antireniini-vasta-aineet, pep-statiini ja luonnossa esiintyvät fosfolipidiyhdisteet. EP-patenttihakemuksessa nro 77 028 esitetään sarja re-niiniä inhibioivia polypeptidiyhdisteitä, joissa on ei-pääte-statiini (Sta; 4-amino-3-hydroksi-6-metyylienan-10 tyylihappo) tai statiinijohdannainen. Sta mukaan lukien, valtaosassa esimerkkeinä esitetyistä yhdisteistä on kuusi tai useampia aminohappotähteitä. Esimerkkinä muutamista lyhyimmistä siinä esitetyistä ketjusta ovat: asetyyli-Phe-His-Sta-Leu-Phe-NHj, ja 15 t-butyylioksikarbonyyli-Phe-His-Sta-Leu-Phe-NH2.
Niissä on poikkeuksetta statiinin kummallakin puolella ainakin kaksi aminohappotähdettä. Di- tai polypeptidyy-listatyyliryhmä on poikkeuksetta sitoutuneena lipofiili-seen aminohappoon, useimmiten leusiiniin. (Ks. myös US-20 patenttijulkaisut 4 470 971 ja 4 478 826).
EP-patenttihakemuksessa nro 45 665 ja US-patentti-julkaisussa 4 424 207 esitetään sarja reniiniä inhibioivia polypeptidijohdannaisia, joiden kaava on 25 a
Ra 0 A-B-Pro-Phe-His-N <X''1S^X'‘VS^^\D-E-Ya OH Rb : : : 30 jossa A on esimerkiksi t-butoksikarbonyyli, B on His tai muu emäksinen aminoasyyliryhmä, D on Vai, Ile tai muu li-·'. : pofiilinen aminoasyylitähde, E on Tyr, Phe, His tai muu .1·. aromaattinen aminoasyylitähde, Ra ja Rb ovat kumpikin iso-propyyli, isobutyyli, bentsyyli tai muu lipofiilinen : ·' 35 aminohappotyyppinen sivuketju ja Ya on päätehappo, esteri · • · · • · • · 5 C s 1 n r\ • · j tai amidityyppinen ryhmä. Pääte-5-aminovaleriaanahap-potähteet mukaan lukien, nämä yhdisteet ovat poikkeuksetta heptapeptidejä, so. N-tetrapeptidyyli-5-aminopen-tanoyyli-lipofiilinen-aminoasyyli-aromaattinen-aminohap-5 pojohdannainen.
Hakija on havainnut, että poikkeuksellista arvoa reniiniä inhibioivina aineina omaavat polypeptidijohdannaiset, joilla on kaava I
10 V/1 | R-W- (W1) -N^ ^^VN,(W2)Tn-N-R4 (I) n H ~ OH f V m k
RJ
15 ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat, jossa kaavassa n ja m ovat kumpikin 1 tai 0, n:n ja m:n summan ollessa ainakin 1; W on H aCH,R5 -N C- i n
H O
jossa R5 on fenyyli, 1-naftyyli, 4-hydroksifenyyli, 4-me-toksifenyyli, 4-imidatsolyyli, propyyli tai isopropyyli; 25 W1 on 5 Ji 7 ", /H21 £12^?
Λ .....S
τη "N C~ “N C-
*.·.1 30 I II I II
H 0 CH3 O
*!./ W2 υη H',, yCHjIjS6
L? - X
-N C- *:· i il :·.·. H 0 6 86192 jossa R6 on -NH2, -NH-jp-NH2 tai -CH2NH2;
O
kun n on 1, R on vety, aminoa suojaava asyyliryhmä, jonka molekyylipaino on pienempi kuin 500, prolyyli, pyrogluta-5 myyli tai prolyyli tai pyroglutamyyli, jonka typessä on mainittu aminoa suojaava asyyliryhmä; ja kun n on 0, R on fenoksiasetyyli tai 2-bentsyyli-3-fenyylipropionyyli (di-bentsyyliasetyyli); R1 ja R2 ovat kumpikin itsenäisesti vety, (C^Cg)alkyyli, 10 (Cj^-Cg)alkenyyli, fenyyli, naftyyli, (C4~C7)sykloalkyyli, (C4-C?) sykloalkenyyli, (C?-C9) fenyylialkyyli, (cn_cx3)“ naftyylialkyyli, (C5-C1Q) (sykloalkyyli)alkyyli, (C5-C10)-(sykloalkenyyli)alkyyli tai jokin mainituista ryhmistä, jonka aromaattisessa renkaassa on mono- tai disubsti-15 tuenttina samoja tai erilaisia ryhmiä, joita ovat (Cj-C3)alkyyli, (C1~C3)alkoksi, fluori tai kloori; ja (a) R3 ja R4 ovat erillisinä ja ovat kumpikin itsenäisesti vety, (Cj-Cg)alkyyli, fenyyli, naftyyli, (C4-C7)sykloalkyyli, adamantyyli, (C7-C9)fenyylialkyyli, 20 (C11-C13) naftyylialkyyli, (C5-C1Q) (sykloalkyyli) alkyyli tai adamantyyli; tai R3 on vety ja R4 on R7 R8
-iH(CH2)p(Q)riH(CH2)qY
: 25 p ja q ovat kumpikin itsenäisesti nolla tai kokonaisluku 3. - ö; r on 0 tai 1; Q on -CH2-, -CH=CH-, -0-, -NH-, -CHOH- tai -CO-; 30 Y on metyyli, fenyyli, -COOR9, -CONR9R10 -CONHCOOCH2CgH5, ... ; nh2, -nhcoch2c6h5, • · · 1
Ji · 7 86192 1 ΙΓ°"9 YT-»9"10’ ja
H O tai HO
5 R7, R®, R9 ja R10 ovat kukin itsenäisesti vety, (Cj-CgJal-kyyli, fenyyli, (C4-C7)sykloalkyyli, (C7~C9)fenyylialkyy-li, (C5~C10)-(sykloalkyyli)alkyyli tai adamantyyli; tai 10 (b) R3 ja R4 yhdessä typen kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, muodostavat pyrroli-, indoliini-, isoindo-liini-, piperidiini-, 1,2,3,4-tetrahydrokinoliini-, 1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini-, perhydroatsepiini- tai morfoliinirengassysteemin.
15 Ilmaisu "aminoa suojaavat asyyliryhmät" viittaavat asyyliryhmiin, jotka pystyvät pääasiallisesti ehkäisemään reaktion W:n (tai W3:n kun n = 0) α-typen kohdalla in vivo R:n molekyylipaino on pienempi kuin 500, jotta saataisiin estetyksi liian haitallinen vaikutus liukoisuus-20 ominaisuuksiin. Esimerkkejä sopivista aminoa suojaavista asyyliryhmistä ovat alan asiantuntijain hyvin tuntemia, esim. ryhmät t-butyylioksikarbonyyli, t-butyyliasetyyli, bentsyylioksikarbonyyli, t-butyyliureido, (tris-hydrok-si)-(t-butyyliureido) ja fenoksiasetyyli.
25 Kun n on 1, ensisijainen R:n merkitys on t-butok- sikarbonyyli ja ensisijaisia W:n ja W*:n merkityksiä ovat fenyylialanyyli ja vastaavasti histidyyli. Kun m on 1, ' * ensisijainen W2:n merkitys on lysyyli. Kaikissa tapauk- ; ; sissa ensisijainen R3:n merkitys on sykloheksyylimetyyli • 30 ja ensisijaisia R2:n merkityksiä ovat 2-metyylipropyyli, bentsyyli, 2-metyylipropenyyli, 4-klooribentsyyli, 4-me-tyylibentsyyli, 4-metoksibentsyyli, 3,4-diklooribentsyy-li, 2-klooribentsyyli, 3-klooribentsyyli ja sykloheksyy-limetyyli, erityisesti 2-metyylipropyyli. Kun m on 0 ja n 35 on 1, ensisijaisia NR3R4:n merkityksiä ovat NH2, NHCH3, 8 86192 N(CH3)2/ NHCH2C6Hs, NH(CH2)3COOH, NH(CH2)4NH2, NH(CH2) 4NHCOCH2CgH5 ja tetrahydroisokinoliini. Kun in ja n ovat kumpikin 1, ensisijaisia NR3R4:n merkityksiä ovat fenyylialaniini ja statiini-etyyliesteri.
5 Ilmaisu farmaseuttisesti hyväksyttävä suola viit taa happoadditiosuoloihin, joita mikä tahansa kaavan (I) mukainen yhdiste, joka sisältää emäksisen toiminnallisen ryhmän, muodostaa hapon, kuten esimerkiksi happojen HC1, hno3, h2so4, h3po4, ch3so3h, p-CH3C6H4S03H, ch3cooh tai 10 HOOCCH2CH2COOH kanssa. Kun yhdisteessä (I) on useampia kuin yksi emäksinen toiminnallinen ryhmä, suolassa on valinnaisesti useampia kuin yksi ekvivalentti happoa. Vaihtoehtoisesti kun kaavan (I) mukaisessa yhdisteessä on hapan toiminnallinen ryhmä, ilmaisu viittaa myös kationi- 15 siin suoloihin, kuten esimerkiksi, alkalimetallisuolaan (esim. Na, K), maa-alkalimetallisuolaan (esim. Ca, Mg) tai amiinisuolaan (esim. dietanoliamiini, meglumiini). Tällaisten suolojen valmistamiseen käytetään tavanomaisia menetelmiä.
20 Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistuksessa
voidaan käyttää välituotteita, joilla on kaava II
h^r1 q —(II) R11-N (W3) -N-R13
25 I J Λ **. I
I 2 '12
H H OH H R R
' jossa R1 ja R2 ovat edellä määriteltyjä; 30 W3 on \>,CH2,3r14 -N C- V l n . . 35 Ho • · * » · i • · 9 86192 jossa R11 on -NHC0,CH2CH2C.H5, -NHCNHCOjCHjC.H- tai
ί I
NH
-CH2NHC02C6H5; R11 on vety tai t-butoksikarbonyyli; ja 5 (a) R12 ja R13 ovat erillisinä ja ovat kumpikin itsenäisesti vety, (C^-Cg)alkyyli, fenyyli, naftyyli, (C4-C7)sykloalkyyli, adamantyyli, (C7-C9)fenyylialkyyli, (Cii-Ci3) naftyylialkyyli tai (C5-C10) (sykloalkyyli) alkyyli tai R12 on vety ja R13 on 10 R7 R8
-CH(CH2)p(Q)rCH(CH2)qY
p, q, r ja Q ovat edellä määriteltyjä; 15 Y1 on metyyli, fenyyli, -COOR18, -CONR9R10, -conhcooch2c6h5 , -nhcoch2c6h5 , 20 -N-^SrOP18 tai ;
H 'o HO
* * * 7 8 9· 10 '1' 25 R,R,R ja R ovat kukin itsenäisesti edellä määri- ! teltyjä; ja R18 vastaa itsenäisesti R7:n merkitystä, vetyä lukuun ottamatta; tai (b) R12 ja R13 yhdessä typen kanssa, johon ne ovat 30 sitoutuneet, muodostavat pyrroli-, indoliini-, isoindo-liini-, piperidiini-, 1,2,3,4-tetrahydrokinoliini-, : : : 1,2,3,4tetrahydroisokinoliini-, perhydroatsepiini- tai ;·[·. morfoliinirengassysteemin; ja • · ’..I välituotetta, jonka kaava on 35 10 861 92 ψ CH(CH3>2 H .CH, H *pH_ H, JTH- CH, V> 2 'vA 2 '*,> 2. * 2 5 (CH.J-,C-0-C—liinH ? 33 II I I I Π I » ΐ / OH O H O H 0-
Keksinnön mukaiselle stereoselektiiviselle mene-10 telmälle kaavan (V) mukaisten laktonien valmistamiseksi on tunnusomaista, että
(1) aldehydi, jolla on kaava B
15 H -R16 --O-C-NH ^ ^ CHO (B)
O
20 jossa R16 on (C^-Cg)alkyyli, (Cj-Cg)alkenyyli, fenyyli, naftyyli, (C4-C?)sykloalkyyli, (C4-C?) sykloalkenyyli, (C?-C9) fenyylialkyyli, (Cn "C13^ naftyylialkyyli, (C5-C10)-(sykloalkyyli)alkyyli tai jokin mainituista ryhmistä mo-
• M
no- tai disubstituoituna aromaattisessa renkaassa samoi-:: 25 11a tai erilaisilla ryhmillä, joita ovat (0χ-03)alkyyli, : (C1-C3) alkoksi, fluori ja kloori, saatetaan regoimaan yh- • : disteen kanssa, jolla on kaava
LiC=CCOOR15 30 ,·. ; jossa R15 on (Cx—C3)alkyyli, reaktion suhteen intertissä
liuottimessa -50°.. .-80°C:ssa pääasiallisesti yhdisteen muodostamiseksi, jolla on kaava C
35 li 11 86192 H R16 y --0-C-NH-^^_-C=C-C0oR15 <C> c II /¾ 2
5 o H OH
(2) kaavan C mukainen yhdiste hydrataan yhdisteen muodostamiseksi, jolla on kaava D
10 \ >r16 -W5 (D)
15 0 K'bH
(3) kaavan D mukainen yhdiste syklisoidaan yhdisteen muodostamiseksi, jolla on kaava E
20 H r16 (E) --0-C-NH ^ y- / ° ja 25 (4) kaavan E mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan suunnilleen mooliekvivalentin kanssa orgaanista halogeni-dia, jolla on kaava V:; r17x 30 jossa X on kloori, bromi tai jodi; siten, että läsnä on '· ” oleellinen ylimäärä alhaisen nukleofiilisyyden omaavaa : vahvaa emästä.
Ensisijainen X:n merkitys on bromi.
!··. 35 i2 861 92
Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä valmistetaan yleensä alan asiantuntijain tuntemin menetelmin. Ensisijaisen kemiallisen synteesin lähtöesivaihe on aminohappotähteen suojaamattoman α-aminoryhmän asylointi aminohapolla, jos-5 sa on aktivoitu (asylointitarkoituksiin) karboksyylifunk-tio ja sopiva suojaava ryhmä, joka on sitoutunut omaan α-typpeensä muodostaen peptidisidoksen kahden aminohappotähteen välille, minkä jälkeen seuraa mainitun suojaavan ryhmän poistaminen. Tämä synteesin esivaihe, kytkentä -10 kytkennän purku, suoritetaan toistuvasti polypeptidin kokoamiseksi, lähtemällä molekyylirakenteen C-päätepäästä ja jatkamalla edelleen N-päätepäähän. Tyypillisiä a-ami-nohappoja, joita käytetään tämän keksinnön yhdisteiden synteesissä, on saatavissa kaupallisesti (vapaina happoi-15 na, suoloina tai estereinä jne) sekä a-aminosuojatuissa että a-aminosuojaamattomissa muodoissa. Statiinia on saatavissa kaupallisesti N-(t-butyylioksikarbonyyliJstatii-nina; lisäksi statiinia voidaan valmistaa (vapaana happona tai esterinä) sekä y-aminosuojatuissa että -aminosuo-20 jaamattomissa muodoissa menetelmin, joita on esitetty kirjallisuudessa (ks. esim. US-patenttia 4 397 786 ja Rich, D.H., ym., J. Org. Chem., voi. 43, s. 3624 ja seu-raavat (1978)). Haluttaessa ensimmäisessä kytkentävai-heessa reagenssina käytetään sopivaa N-suojaamatonta ami-. .·. 25 nohappoanalogia (vapaata happoa, suolaa tai esteriä jne.), kuten 4-aminovoihappoa, 4-aminovaleriaanahappoa, .! 5-(bentsyylioksioksikarbonyyliamino)pentyyliamiinia tai etyyli-3-(2-aminoetoksi)propionaattia. Ellei sellaisia • · ;-·* yhdisteitä ole kaupan tai ne eivät ole aikaisemmin tun- 30 nettuja, niitä valmistetaan helposti orgaanisen kemian alalla hyvin tunnetuin menetelmin. Kun halutussa tuot-V*: teessä on emäksinen aminohappotähde W2 (so. m = 1), tar- vittavaa välituotetta H-(w’)-NR12Rn (jossa w\ R12 ja Rn ovat edellä määriteltyjä) valmistaan lysiinistä, or-35 nitiinista tai arginiinista, a-NH2-ryhmän ollessa suojat- i3 861 92 tu hydrolysoituvalla ryhmällä, kuten t-butoksikarbonyy-lillä (t-Boc), joka on lohkaistavissa vedettömissä hap-pamissa olosuhteissa (esim. noin 3-5-norm. HCl:n diok-saaniliuoksella tai vedettömällä trifluorietikkahapolla) 5 ja omegatyppi hydrogenolysoituvalla ryhmällä, kuten bent-syylioksikarbonyylillä (cbz), suorittamalla kytkentä amiinin HNR12R13 kanssa. Ensisijaisissa kytkentäolosuh-teissa käytetään ekvimoolimääriä suurempia tai pienempiä määriä kytkettäviä reagensseja, disykloheksyylikarbodi-10 imidiä (tai samanlaista dehydratoivaa kytkentäainetta) ekvimoolimäärin ja 1-hydroksibentsotriatsolia 1-2-molaa-risin määrin, reaktion suhteen inertissä liuottimessa, kuten CH2Cl2:ssa 0-50 °C:ssa (tarkoituksenmukaisesti ympäristön lämpötilassa). Reagenssin ollessa happosuolan 15 muodossa, tertiääristä amiinia (esim. trietyyliamiinia, N-metyylimorfoliinia) käytetään mainitun hapon neutralointiin riittävin määrin. Ennen seuraavaa kytkentävai-hetta emäksisen aminohappotähteen W2 α-aminoryhmän suojaus poistetaan, esim. α-t-Boc-ryhmä on helposti poistet-20 tavissa 3,5 - 4,5 -norm. HCl:n dioksaaniliuoksen vaikutuksen alaisena -10 - 40 °C:ssa, tarkoituksenmukaisesti ympäristön lämpötilassa; tai vedettömän trifluorietikka-hapon vaikutuksen alaisena -20 - +20 °C:ssa, tarkoituksenmukaisesti noin 0-5 °C:ssa.
: 25 Tarvittavia 2,5-disubstituoitu-4-hydroksivaleriaa- nahappotähteitä on yleensä valmistettava synteettisesti.
: : Keksinnön mukaista stereoselektiivistä menetelmää sovel lettaessa lähdetään sopivan kiraalisuuden omaavasta esiasteesta, tarkoituksenmukaisesti L-aminohaposta, esim.
30 alkuvaiheissa: • · <* * · • * • · · • ♦ · «» · i4 861 92 H, R1 n o1
v —- V
t-Boc-NH^^\ C02CH3 t-Boc-NH^^CHO
5 (A) (B) H. R1 t-Boc-NH — 5-CO.R15 ► H = 1
10 (C) OH
\/ \ /1
/\^^^C02r15 X
15 t-Boc-ΝίΓ t-Boc-NH
H 0=H H l ]
°~A
(D) (E) Lähtöaineena Käytettävää suojattua L-aminohappoa saadaan 20 kaupallisesti tai alalla hyvin tunnetuin normaalein menetelmin, joihin sisältyy, haluttaessa, aromaattisen renkaan pelkistys, esim. alla esimerkkinä esitetyn N-(t-bu-toksikarbonyyli)fenyylialaniini-metyyliesterin aromaattisen renkaan pelkistys. Alempialkyyliesteri, ensisijaises-25 ti esitetty metyyliesteri, pelkistyy helposti aldehydik-si, esimerkiksi di-isobutyylialuminiumhydridin kanssa to-lueenissa -50 - -80 °C:ssa. Aldehydin annetaan vuorostaan reagoida yhdisteen LiCsCCOOR15 (R15 on tavallisesti etyyli, joka on muodostettu in situ etyylipropiolaatista) 30 kanssa, jälleen -50 - -80 °C:ssa, reaktion suhteen iner-tissä liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa. Tässä ;vaiheessa muodostuu tavallisesti diastereoisomeeriparia, ' » ♦ '·* ' halutun diastereoisomeerin (C) ollessa suureksi osaksi vallitseva. Vähäisempi, ei-toivottu isomeeri poistetaan *·*. 35 ensisijaisesti kolmoissidoksen hydrauksen jälkeen, joka suoritetaan normaaleissa hydrausolosuhteissa, esim. pal-: ·’ ladiumkatalyytillä, ensisijaisesti BaS04:lla olevalla
II
is 86192 palladiumilla, suhteellisen lievissä olosuhteissa; ja muodostetaan laktonia (esim. reaktion tapahtuessa tolu-eenissa etikkahapon läsnäollessa).
Haluttu laktoniepimeeri, jonka 4S-stereokemia on 5 esitetty kaavoissa (E) ja (F), kondensoidaan sitten halo-genidin R2X kanssa (X = Cl, Br tai I; ensisijaisesti X = Br), jolloin läsnä on oleellinen ylimäärä, esim. 2 - 2,5 mooliekvivalenttia vahvaa emästä, jonka nukleofiilisyys on vähäinen, kuten esim. yhdistettä LiN[CH(CH3)]2 tai en-10 sisijaisesti litiumheksametyylidisilatsidia. Ensisijaisesti halogenidi on allyyli- tai bentsyylityyppinen halo-genidi (esim. 2-metyyli-2-propenyylibromidi, bentsyyli-bromidi).
Tämän jälkeen kaksoissidos tai aromaattinen rengas 15 hydrataan, jos tyydyttyneen R2-ryhmän saaminen kaavan (I) mukaiseen yhdisteeseen on toivottavaa, esim.
H R1 ^ R1 2Q t-Boc-NH'^^^ / -► t-Boc-NH^^S^
HO-H I
No N0 (F) (G)
:/: 25 S
t-Boc-ΜΓ yC I
(H) 30 Jälleen kerran haluttu diastereoisomeeri, joka on esite-. . tyn trans-(2R)-stereokemiallisen rakenteen mukainen, on vallitsevana. Se erotetaan kromatografoimalla (ennen tar-* peellisen hydrauksen suorittamista halutun R2-ryhmän muo- : * : dostamiseksi tai sen jälkeen). Vaihtoehtoisesti hydrausta 35 voidaan lykätä, erityisesti kun R2 on kondensointivai- heessa bentsyyliryhmä, myöhempään halutun yhdisteen koko- ie 86192 nais-synteesin vaiheeseen. Yksinkertaisen olefiinin en-s i si ja i r. i a hydrauskat.al yyt.to jä ovat IM tai Kh, kun taan fenyyiin pelkistämiseksi sykloheksyyliksi, Rh on ensisijainen.
5 Tietyissä ensisijaisissa kaavan (I) mukaisten yh disteiden valmistuksissa, erityisesti NR12R13:n ollessa yksinkertainen amiini, kuten NH2, NHCH3, N(CH3)2 tai NHCH2C6H5, laktonin annetaan reagoida suoraan sopivan amiinin kanssa, esim. seuraavasti: 10 1
Xa>r2 t-boc-ΝΉ T TO R ^
H
(j) 15 H -R1 conr12r13 20 t-Boc-NH 0 FT OH W R^ (K) (II, m-0, R11=t-Boc) 25
Laktonit reagoivat tasaisesti ylimäärin käytettyjen alhaisemman molekyylipainon omaavien, emäksisempien amiinien, kuten NH3:n, NH2CH3:n ja NH(CH3)2 kanssa alemmissa lämpötiloissa (esim. 0-40 °C:ssa) reaktion suh- 30 teen inertissä liuottimessa. Esteellisempien tai vähemmän . . emäksisten amiinien yhteydessä käytetään korkeampia läm pötiloja, esim. välillä 80 - 100 °C olevia lämpötiloja, valinnaisesti etikkahappokatalyytin läsnäollessa.
‘ : Kompleksisempien NR12R13-ryhmien yhteydessä pide- • 35 tään suotavana muuttaa laktoni, saippuoimalla suojattu laktoni (J) hapoksi laimealla NaOH:lla vesipitoisessa i7 8 61 92 liuottimessa, muuttamalla happo bentsyyliesteriksi käyttämällä bentsyylibromidia K2C03:n läsnäollessa reaktion suhteen inertissä liuottimessa, kuten dimetyyliformami-dissa, muodostamalla tetrahydropyranyylieetteri 3,4-di-5 hydro-2H-pyraanin vaikutuksen alaisena reaktion suhteen inertissä liuottimessa katalyytin, kuten pyridinium-p-tosylaatin läsnäollessa ja suorittamalla lopuksi hydroge-nolyysi hapoksi: 10 H/ Ar1 ,cooh t-boc-NH ^ 6 15 Jälkimmäinen kytketään sitten aminoyhdisteen H-(W3)m-NR12R13 20 kanssa käyttämällä dehydratoivaa kytkentämenetelmää (esim. disykloheksyylikarbodi-imidillä), jota on selostettu edellä tai ns. seka-anhydridimenetelmää, joka myöskin on alalla hyvin tunnettu ja esitetty esimerkkinä seu-raavassa; minkä jälkeen seuraa tetrahydropyranyylieette- 25 rin selektiivinen hydrolyysi lämmittämällä vesipitoisessa • i etikkahapossa kaavan (II) mukaisen väliyhdisteen muodos tamiseksi, jossa R11 on t-butoksikarbonyyli.
Kaavan (II) mukainen yhdiste, jossa R11 on t-Boc, lähteestään riippumatta, lohkaistaan sitten selektiivi- 30 sesti (edellä selostetuin menetelmin), jolloin saadaan vapaata aminoyhdistettä (II), jossa R11 on vety.
Ensisijaisen menetelmän loppuvaiheissa väliyhdiste kytketään yhdisteen
: 35 R-W4-(W5) -OH
n .*··. kanssa, jossa R ja n ovat edellä määriteltyjä; ja W4 ja 18 8 61 S 2 W5 vastaavat edellä mainittua W:tä ja vastaavasti W1:tä/ mutta kunkin histidiinitähteen imidatsolityppi on suojat-j tuna t-butoksikarbonyylillä. Ensisijaisessa kytkentämene- telmässä, käytettäessä disykloheksyylikarbodi-imidiä, 5 käytetään edellä selostettuja olosuhteita. Ensisijainen menetelmä osoittautuu erityisen edulliseksi, kun n on 1, paremmaksi kuin tavallinen menetelmä, jossa kukin aminohappo liitetään yksinään peräkkäisissä vaiheissa. Lopuksi kukin imidatsoli-t-Boc-suojaryhmä poistetaan selektiivi-10 sesti hydrolysoimalla vesipitoisessa etikkahapossa (esim.
80-%:isessa etikkahapossa) 10 - 40 °:ssa ja kukin N-bent-syylioksikarbonyyli- tai bentsyyliesterisuojaryhmä pois-j tetaan selektiivisesti normaalein edellä selostetuin hyd- rausmenetelmin, tavallisesti toivottavan N-päätesuojaryh-15 män jäädessä koskemattomaksi.
Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden aktiivisuus re-niinin angiotensinogeenia lohkaisevan vaikutuksen inhibiittoreina määritetään tutkimalla niiden kykyä ehkäistä reniinin angiotensinogeenia lohkaisevaa vaikutusta in 20 vitro. Tällöin reniini-inhibiitoreita lisätään eri määriä erilaisiin vesiplasmaeriin ja saatuja seoksia inkuboi-daan, minkä jälkeen niistä määritetään angiotensiini I käyttämällä angiotensiini I -vasta-ainetta. Angiotensiini ...” I:n muodostumista reniini-inhibiittorin läsnäollessa ver- 25 rataan määrään, joka on muodostunut inhibiittorin puut-tuessa ja lasketaan inhiboitumis-%. Angiotensiini I mää-*·'. ritetään radio-immuunikokeen avulla, joka perustui kokee seen, jonka ovat kehittäneet Haber ym., J. Clin. Endocrinol., 29, S. 1349 - 1355 (1969).
30 Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää ve- . . renpainetta alentavina aineina.
I”· Kaikki esitetyt stereokemialliset rakennenimityk-·] ’ set vastaavat absoluuttista stereokemiallista rakennetta.
*·*: Keksintöä kuvataan seuraavin esimerkin. Kaikki lämpötilat 35 ovat Celsius-asteita ja ovat ympäristön lämpötiloja ellei toisin ole erikseen mainittu. Kaikki liuottimen haihdutu- • · ^ tukset tapahtuivat vakuumissa. Kaikki normaalit liuokset ovat « «»k 19 861 92 vesiliuoksia ellei toisin ole erikseen mainittu. THF merkitsee tetrahydrofuraania; DMF merkitsee dimetyyliformami-dia; DME merkitsee 1,2-dimetoksietaania; ja DMSO merkitsee dimetyylisulfoksidia. Kaikki normaalit «-aminohapot tai 5 niiden johdannaiset ovat L-muodossa. Statiini on 3S,4S-4-amino-3-hydroksi-6-metyylienantyylihappo.
Esimerkki 1 S-3-sykloheksyyli-2-(t-butoksikarbonyyliamino)-propionialdehydi 10 Metyyli-S-3-sykloheksyyli-2-(t-butoksikarbonyyli amino) propionaatti (51,2 g, 0,179 mol) liuotettiin 728 ml:aan kuivaa tolueenia ja jäähdytettiin -78°:seen. Tunnin aikana lisättiin tiputtamalla di-isobutyylialuminiumhydridiä (449 ml 1-mol. tolueeniliuosta, 0,449 mol) pitämällä läm-15 pötila välillä -70 - -78°. -70°:ssa lisättiin metanolia (13 ml), sen jälkeen 608 ml puoliksi kyllästettyä natrium-kaliumtartraattiliuosta ja seos lämmitettiin ympäristön lämpötilaan. Lisättiin eetteriä (300 ml) ja orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin litralla kyllästettyä natrium-20 kaiiumtartraattiliuosta. Alkuperäinen vesikerros uutettiin 600 ml;11a tuoretta eetteriä ja pestiin takaisin 600 ml:11a tuoretta kyllästettyä natriumkaliumtartraattiliuosta. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotetta • : 25 hartsina, jossa oli epäpuhtautena tolueenia, H~nmr:n pe- : : rusteella 45,6 g; tie Rf 0,45 (etyyliasetaatti-heksaani 1:3); ^H-nmr (CDCl·^) delta: 0,9 - 2,3 (m), jossa on t-bu-tyyli-singletti kohdalla 1,4, 3,0 - 4,8 (m), 4,9 - 5,2 ! (d) , 9,6 (s) .
• · 30 Esimerkki 2
Etyyli-4RS,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliamino) -4 -hydroksi-2-heksynoaatti
Kuivaa vastatislattua THF (117 mol) ja di-isopropyy-v · liamiinia (22,0 ml, 15,8 g, 0,156 ml) pantiin liekillä 35 kuivattiin reaktioastiaan ^:n suojaamana ja muodostunut . ··. liuos jäähdytettiin -30°:seen ja viiden minuutin kuluessa 20 861 S2 lisättiin butyylilitiumia (76,9 ml 1,6-mol. heksaaniliuos-ta, 0,123 mol). Sitten liuos jäähdytettiin -78°:seen ja 20 minuutin aikana lisättiin tiputtamalla etyylipropio-laattia (12,5 ml, 12,1 g, 0,123 mol), pitämällä lämpötila 5 välillä -65 - -78°. Seoksen oltua 30 minuuttia -78°:ssa, 20 minuutin aikana lisättiin edellisen esimerkin otsikon tuotetta (19,52 g, 0,0866 mol) 35 ml:ssa THF, pitämällä lämpötila jälleen välillä -65 - -78°. Kahden tunnin kuluttua reaktioseokseen lisättiin 200 ml THF-etikkahapposeosta 10 5:1 ja sen annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan ja lai mennettiin puolella tilavuusmäärällä eetteriä ja samalla tilavuusmäärällä 10-%:ista sitruunahappoa.
Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin peräkkäin 2 x 200 ml:11a tuoretta 10-%:ista sitruunahappoa, 200 ml:11a 15 suolaliuosta ja 2 x 200 ml:11a kyllästettyä NaHCO^-liuosta, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin tummanpunaiseksi öljyksi, 38,2 g. Jälkimmäinen kromatografoitiin si-likageelikolonnissa 10 x 42 cm tarkkailemalla tlc:n avulla, eluoimalla 5 litralla etyyliasetaatti-heksaaniseosta 20 1:9, 1 500 ml:11a suoritetun kolonnin kehittämisen jälkeen koottiin 500 ml fraktioita. Fraktiot 29-37 yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotetta öljynä, 15,3 g; tie Rf 0,44 (etyyliasetaatti-heksaani 3:7); 1H-nmr (CDC13) delta: 1,0 - 2,0 (m, 25H), jossa on t-butyy- _ : 25 liryhmän singletti kohdalla 1,5, 3,8 - 5 (m, 6H).
' : r Esimerkki 3 j 4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butyylioksikarbonyyli- · ·. amino)-y-heksanolaktöni
Edellisen esimerkin otsikon tuote (18,28 g) ja 5 % 30 Pd/BaSO^ (10,97 g) yhdistettiin 150 ml:n kanssa etyyliasetaattia ja hydratiin kaksi tuntia neljän atmosfäärin vety-paineessa. Katalyytti otettiin talteen suodattamalla ja '· suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin välituo- * tetta etyyli-4RS,5S-6-sykloheksyyli-4-hydroksi-5-(t-butyy- 35 lioksiamino)heksanoaattia, 19 g. Jälkimmäinen liuotettiin .1··. 250 ml:aan 2,5-%:ista etikkahapon tolueeniliuosta, li 21 86192 kiehutettiin 2,5-3 tuntia, haihdutettiin kuiviin ja jäännös kromatografoitiin silikageelikolonnissa 10 x 30 cm, tarkkailemalla tie:n avulla, eluoimalla 4 litralla eetteri-heksaaniseosta 9:11, 8 litralla eetteri-heksaaniseosta 1:1, 5 2 litralla eetteri-heksaaniseosta 11:9 ja lopuksi 3 litral la eetteri-heksaaniseosta 3:2, keräämällä 28 x 400 ml:n fraktioita, 6 x 150 ml:n fraktioita ja lopuksi 11 x 400 ml:n fraktioita. Fraktiot 17-24 yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin eetterin kanssa, jolloin saatiin pääosana ja toi-10 vottuna, polaarittomampaa, 4S,5S-otsikon tuotetta öljynä, 9,13 g; tie Rf 0,5 (eetteri-heksaani 7:3). Polaarisempi otsikon tuotteen 4R,5S-epimeeri eristettiin haihduttamalla kuiviin yhdistetyt fraktiot 28-45 ja kiteytettiin tritu-roimalla heksaanin kanssa, 1,77 g; sp. 101,5 - 103,5°.
15 Esimerkki 4 2R,4S,5S- ja 2S,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksi-karbonyyliamino)-2-(2-metyyli-2-propenyyli)-V-hek-sanolaktoni
Kuivaa vastatislattua THF 830 ml) ja di-isopropyy-20 liamiinia (3,51 ml, 2,52 g, 0,0249 mol) pantiin liekillä kuivattuun reaktioastiaan n suojaamana, muodostunut liuos jäähdytettiin -50°:seen, lisättiin butyylilitiumia (13,9 ml 1,6-mol. heksaaniliuosta, 0,0222 mol) ja seos jäähdytettiin edelleen -78°:seen. Edellisen esimerkin otsi-25 kon tuotetta (2,77 q, 0,0089 mol), joka oli 15 ml:ssa THF, ·.: · lisättiin tiputtamalla 10 minuutin aikana ja enolaatin an- ·/·; nettiin muodostua vielä 20 minuutin aikana -78°:ssa, minkä : ajan jälkeen 10 minuutin kuluessa lisättiin 3-bromi-2-me- tyyli-1-propeenia 5 ml:ssa THF ja seosta sekoitettiin vielä 30 tunnin ajan -78°:ssa, sammutettiin 5 ml:11a kyllästettyä NH^Cl-liuosta, lämmitettiin huoneen lämpötilaan, laimennettiin puolella tilavuusmäärällä eetteriä, pestiin 2 x 50 ml:11a 10-%:ista sitruunahappoa, 2 x 50 ml:11a kyllästettyä NaHCO^-liuosta ja 1 x 25 ml: 11a suolaliuosta, kuivat-: 35 tiin MgS0^:lla ja haihdutettiin kuiviin öljyksi, 3,06 g, otsikon epimeerien seosta. Jälkimmäinen erotettiin « t 22 861 92 kromatografoimalla silikageelikolonnissa 7 x 20 cm; tarkkailemalla tlc;n avulla; eluoimalla peräkkäin 2 litralla eetteri-heksaaniseosta 1;9, 4 litralla eetteri-heksaani-seosta 3:17, 2 litralla eetteri-heksaaniseosta 1:4, 2 lit-5 ralla eetteri-heksaaniseosta 1:3, 2 litralla eetteri-heksaaniseosta 1:1; ja keräämällä 125 ml:n fraktioita. Polaa-rittomampi otsikon tuote, trans-(2R)-stereokemiallista muotoa vastaava, kerättiin fraktioina 30-48, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin sitä saatiin öljynä, 1,17 g; 10 tie Rf 0,45 (eetteri-heksaani 2:3); ^H-nmr (CDCl^) delta 1,4 (s, 9H), 1,8 (s, 3H), 0,3 - 3,0 (m, 18H), 3,6 - 4,0 (m, 1 H), 4,69 (s, 1 H) , 4,75 (s, 1H) , 4,1 - 4,8 (m, 2H) . Fraktioista 55-76 saatiin polaarisempaa otsikon tuotetta, myöskin öljynä, 0,358 g, ollen cis-(2S)-stereokemiallista i 15 muotoa vastaava; tie Rf 0,36 (eetteri-heksaani 2:3); H-nmr identtinen polaarittomamman epimeerin kanssa.
Esimerkki 5 2R,4S,5S- ja 2S,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksi- karbonyyliamino)-2-(2-metyylipropyyli)-y-heksano-20 laktoni
Edellisen esimerkin polaarittomampaa tuotetta (1,17 g) ja 10-%:ista Pd/C;tä (0,351 g) yhdistettiin 20 ml:ssa etyyliasetaattia ja hydrattiin neljän ilmakehän paineessa 2,5 tuntia, katalyytti otettiin talteen suodatta-25 maila ja suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin polaarittomampaa otsikon tuotetta (ollen samoin trans-, so.
: 2R-stereokemiallista muotoa vastaava) öljynä, joka kitey tyi paikoillaan ollessaan, 1,20 g; sp. 88-93°; tie Rf 0,65 . (eetteri-heksaani 1:1), Rf 0,73 (etyyliasetaatti-heksaani 30 2:1). Toista isomeeriä, joka oli cis-(2S)-stereokemiallis ta muotoa vastaava, saatiin samalla tavalla; tie Rf 0,59 . . (eetteri-heksaani 1:1). Seuraavissa esimerkeissä, joissa käytetään tätä polaarittomampaa epimeeriä, jonka Rf on ' 0,65 (eetteri-heksaani 1:1), 2R-stereokemiallinen muoto on 35 spesifioitu.
23 8 6 1 92
Esimerkki 6 — - " * " ψ*
Bentsyyli-2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikar-bonyyliamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)hek-sanoaatti 5 Edellisen esimerkin polaarittomampaa 2R-otsikon tuo tetta (1,0 g, 2,72 mmol) DME:tä (14 ml) ja NaOH (4,4 ml, 5-norm., 0,022 mol) yhdistettiin, sekoitettiin 12 tuntia ja sitten orgaaninen liuotin haihdutettiin pois. Vesipitoinen jäännös laimennettiin vedellä (5 ml), päälle kaadettiin 10 kerrokseksi sama tilavuusmäärä eetteriä, jäähdytettiin 0°;seen ja tehtiin happameksi 22 ml:11a 1-norm. HC1, jonka aikana vesikerros sameni, Eetterikerros erotettiin ja vesi-kerros (pH 2,0) pestiin samalla tilavuusmäärällä tuoretta eetteriä. Eetterikerrokset yhdistettiin, kuivattiin 15 MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin välituotetta 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyy-liamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)kapronihappoa valkeana vaahtona, 0,909 g (2,36 mmol). Jälkimmäinen pantiin 20 ml:aan DMF yhdessä K2C03:n (0,330 g, 2,36 mmol) kanssa 20 ja jäähdytettiin 0°:seen. Lisättiin bentsyylibromidia (0,308 ml, 0,443 g, 2,59 mmol) ja sekoitetun seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Neljän tunnin kuluttua reaktioseos laimennettiin samalla tilavuusmäärällä eetteriä, pestiin 1 x 75 ml:11a 10-%;ista sitruunahappoa, 1 x • _ 25 75 ml: 11a kyllästettyä NaHCO-j, kuivattiin MgSO^:lla ja • haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin öljyä, 1,35 g. Jäl-kimmäinen kromatografoitiin silikageelillä (4 x 20 cm) ; tarkkailtiin tie:n avulla; eluoitiin litralla eetteri-hek-saaniseosta 1:9, litralla eetteri-heksaaniseosta 3:17, 30 litralla eetteri-heksaaniseosta 1:4 ja lopuksi litralla eetteri-heksaaniseosta 3:7 ja koottiin 23 ml:n fraktioita. Fraktiot 46-75 yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, joi-'* loin saatiin kiteistä lähtöainetta, 0,583 g, joka soveltui ‘ uudelleen kierrätettäväksi. Fraktiot 85-119 yhdistettiin ja 35 haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin tämän otsikon tuo-.**·. tetta öljynä, 0,275 g; tie Rf 0,47 (eetteri-heksaani 1:1).
Λ · 24 861 92 1H-nmr (CDCl-j) : 0,3 - 2,0 (m, 24H) , 1,4 {s, 9H) , 2 - 2,4 (m, 1H) , 2,6 - 3,0 (m, 1H) , 3,2 - 3,7 (in, 2H) , 4,65 (d, 1H) , 5,1 (s, 2H) , 7,3 (s, 5H) .
Esimerkki 7 5 Bentsyyli-2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikar- bonyyliamino)-2-(2-metyylipropyyli)-4-(2-tetrahyd-ropyranyylioksi)heksanoaatti
Edellisen esimerkin tuotetta (0,442 g, 0,929 mmol), 3.4- dihydro-2H-pyraania (97 %, 0,255 ml, 0,235 g, 2,79 10 mmol) ja pyridinium-p-tosylaattia (23 mg, 0,093 mmol) yhdistettiin 6,5 ml:ssa CI^C^ ja sekoitettiin suljetussa astiassa 18 tuntia, sitten liuotin haihdutettiin pois ja jäännös liuotettiin 100 ml:aan eetteriä, pestiin 2 x 100 ml :11a puoliksi kyllästettyä suolaliuosta, kuivattiin 15 MgSO^:lla, haihdutettiin kuiviin yhdessä kanssa ja kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin tämän otsikon tuotetta öljynä, 0,565 g; tie Rf 0,59 (eetteri-heksaani-seos 2:3).
Esimerkki 8 20 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami- no)-2-(2-metyylipropyyli)-4-(2-tetrahydropyranyyIloksi )kapronihappo
Edellisen esimerkin tuotetta (0,565 g) ja 10-%:ista Pd/C:tä (0,170 g) yhdistettiin 10 ml:ssa etyyliasetaattia ' 25 ja hydrattiin neljän ilmakehän paineessa 2,5 tuntia. Kata- : : lyytti otettiin talteen suodattamalla ja suodos haihdutet tiin kuiviin yhdessä Cl^C^jn kanssa, jolloin saatiin otsi-kon tuotetta öljynä, 0,55 g, joka sisälsi teoreettisin . .·. saannoin (0,474 g) tuotetta; tie Rf 0,0 (eetteri-heksaani 30 2:3), 0,35 (etyyliasetaatti-heksaani 1:1); ^H-nmr (CDCl^): 9.5- 10,1 (bs, 1H, COOH) eikä bentsyyliryhmästä johtuvia piikkejä. Tämä esimerkki toistettiin 300 mg:n mittakaavas- * ’· sa kuivaamalla tuote suurtyhjössä, jolloin saatiin 250,5 mg tuotetta (kvantatiivinen saanto otsikon tuotetta valkeana *·’: 35 vaahtona) .
25 861 92
Esimerkki 9 N-/N-OC- (t-butoksikarbonyyli) -N- £- (bentsyylioksikar-bonyyli)lysyyli/fenyylialaniini-bentsyyliesteri N-hydroksibentsotriatsolia (162 mg, 1,2 mmol), N-me-5 tyylimorfoliinia (101,2 mg, 1 mmol), L-fenyylialaniini-bentsyyliesteri-p-tolueenisulfonaattia (428 mg, 1 mmol), N-ofr- (t-butyylioksikarbonyyli)-N-£-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysiiniä (456 mg, 1,2 mmol) ja 1-sykloheksyyli-3-(2-mor-foliinoetyyli)karbodi-imidi-meto-p-tolueenisulfonaattia 10 (635 mg, puhtaus 80 %, 1,2 mmol) liuotettiin peräkkäin me- tyleenikloridiin (50 ml) 0°C:ssa ja saatua liuosta sekoitettiin 19 tuntia 20°C:ssa. Reaktioseos pestiin sitten peräkkäin 75 ml:11a 5,5-%:ista HCl:n vesiliuosta, 75 ml:11a kyllästettyä NaHCO^n vesiliuosta ja 75 ml:11a suolaliuos- 15 ta, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin 4 1 saatiin otsikon tuotetta kuivana vaahtona, 0,669 g; H-nmr (CDCl^) delta 1,5 (s, 9H, t-butyyli). Tuotetta käytettiin suoraan seuraavassa esimerkissä enempää puhdistamatta.
Esimerkki 10 20 N-/N-£-(bentsyylioksikarbonyyli)lysyyli7fenyylial- niini-bentsyyliesteri-hydrokloridi Edellisen vaiheen tuotetta (0,650 g) liuotettiin 7 ml;aan 3,7-norm, HCl:n dioksaaniliuosta, annettiin olla paikoillaan tunnin ajan ja haihdutettiin kuiviin, jolloin 25 saatiin otsikon tuotetta, 0,583 g; ^H-nmr (CD-jOD) delta 5,2 (s, 2H, -CH2C6H5).
Esimerkki 11 N-( (N-0C-/2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbo-nyyliamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksa-30 noyyli/-N-£-(bentsyylioksikarbonyyli)lysyyli))fenyy- lialaniini-bentsyyliesteri-hydrokloridi .·. : Edellisen esimerkin tuotetta (0,560 g, 1,01 mmol) sekoitettiin 5 ml:n kanssa CI^C^ ja jäähdytettiin 0°:seen typen suojaamana, Lisättiin trietyyliamiinia (0,211 ml, : 35 1,51 mmol) ja sitten esimerkin 8 tuotetta (0,474 g, 1,01 mmol) 5 ml:ssa CI^C^. Lopuksi lisättiin 1-hydroksibentso- 26 861 92 triatsolia (0,204 g, 1,51 mmol) ja sitten disykloheksyyli-karbodi-imidiä (0,208 g, 1,01 mmol) 5 mlsssa Ci^C^. Reak-tioseoksen annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan ja sekoitettiin 18 tuntia. Muodostunut suspensio suodatettiin 5 ja CH2CI2 haihdutettiin pois suodoksesta, laimennettiin 15 ml:11a etyyliasetaattia ja suodatettiin uudelleen. Toinen suodos pestiin 2 x 10 ml:11a 10-%:ista sitruunahappoa, 2x10 ml:11a kyllästettyä NaHCO-^-liuosta ja 1 x 10 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin MgSO^rlla ja haihdutettiin kuiviin 10 yhdessä Cl^C^in kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotteen tetrahydro-2-pyranyyli-eetteri-väliyhdistettä, 0,97 q. Jälkimmäistä sekoitettiin 20 tuntia 35 ml:n kanssa 70-%:ista etikkahappoa. Seos haihdutettiin pienitilavuiseksi ja jäännös haihdutettiin kuiviin yhdessä tolueenin kanssa, jolloin 15 saatiin kiinteää, valkeaa jäännöstä. Jälkimmäinen liuotettiin 20 ml:aan CH2C12, pestiin 1 x 10 ml :11a suolaliuosta ja 2 x 10 ml:11a kyllästettyä NaHCO^-liuosta, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin valkeaa kiinteää ainetta, 1,02 g, joka kromatografoitiin sili-20 kageelillä 7 x 15 cm, eluoimalla 2 litralla 0,5 % metano-lia sisältävällä CHCl^lla, tarkkailemalla tlc:n avulla ja keräämällä 125 ml:n fraktioita. Otsikon tuote saatiin talteen valkeana kiinteänä aineena haihduttamalla yhdistetyt fraktiot 29-40 kuiviin ja trituroimalla jäännöstä eette-25 rin kanssa, 0,497 g; sp. 157-159°; tie Rf 0,39 (etyyliase-taatti-heksaani 1:1); ^H-nmr (CDCl^) 1,4 (s, 9H, t-butyy-li) ja 6,5 - 7,4 (m, 15H, aromaattinen).
Esimerkki 12 N-ofc- ((2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-S-^iN-t-butoksikarbo-30 nyylifenyylialanyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2- (2-metyylipropyyli)heksanoyyli))-N-£- ((bentsyyli-oksikarbonyyli))lysyyli-fenyylialaniini-bentsyyli-" esteri
Edellisen esimerkin tuotetta (250 mg, 0,282 mmol) v.‘: 35 sekoitettiin 3 ml: n kanssa tr if luorietikkahappoa, kosteu delta CaC^-kuivausputkella suojaten ja jäähdytettiin 27 861 92 0°:seen. 35 minuutin kuluttua reaktioseos haihdutettiin kuiviin eetterin kanssa, jolloin saatiin välituotetta N- ((N-ot-/2R,4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2 -metyy 1 ipropyy 1 i) heksanoyy 1 i_7-N- £- (bentsyy 1ioksikarbo-5 nyyli)lysyyli))fenyylialaniini-bentsyyliesteri-trifluori-asetaattisuolaa valkeana vaahtona, 0,291 g. Jälkimmäinen liuotettiin N2:n suojaamana 2 ml:aan CHjC^, jäähdytettiin 0°:seen ja lisättiin peräkkäin trietyyliamiinia (0,0471 ml, 0,0342 g, 0,338 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolia (0,0571 g, 10 0,423 mmol), N-oi-/Tj-(t-butoksikarbonyyli)fenyylialanyyli_7- N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyyli)histidiiniä (149,7 mg, 0,296 mmol) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (61,1 mg, 0,296 mmol) 5 ml:ssa CI^C^. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, sekoitettiin 18 tuntia, liuotin 15 haihdutettiin pois muodostuneesta suspensiosta, jäännös suspendoitiin 5 ml:aan etyyliasetaattia, suodatettiin di-sykloheksyyli-urean poistamiseksi, jolloin saatiin 373 mg kiinteää ainetta, jonka määritettiin tlc;n avulla sisältävän myöskin huomattavin määrin haluttua välituotetta, jos-20 sa oli histidiini-imidatsoli-(t-butoksikarbonyyli)suoja-ryhmä y-histidiinitypessä; tie Rf 0,51 (metanoli-CHCl^ 1:19). Suodos haihdutettiin 140 mg:ksi jäännöstä, jossa oli lisää väliyhdistettä tlc:n avulla todeten ja ^H-nmr:ssä (CDCl-j) näkyi kahden t-butyyliryhmän kaksi singlettiä koh-25 dilla 1,3 ja 1,6 ja bentsyyliryhmän metyleenin singletti ‘ ; kohdalla 5,1. Molemmat välituotetta sisältävät aineet yhdistettiin ja niitä käsiteltiin, typen suojaamana sekoit-f'·': taen, 70 ml:n kanssa kyllästettyä dimetyyliamiinin CHCl^- liuosta kolmen tunnin ajan. Sitten reaktioseos haihdutet-• · 30 tiin kiinteäksi aineeksi, jossa ei ollut amiinin tuoksua ja kromatografoitiin silikageelillä, 7 x 15 cm, eluoimalla . . enenevin määrin (2 —> 5 %) metanolia sisältävällä CHCl^rlla ja tarkkailemalla tlc;n avulla. Tuotefraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin ja trituroitiin heksaani/eetteriseok-Γ : 35 sen kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana kiinteänä aineena, 0,182 g; tie Rf 0,85 (etyyliasetaatti- 28 861 92 butanoli-etikkahappo-H.,0 1:1:1:1), Rf 0,24 (metanoli-CHCl., 1 * J 1:19); H-nmr (CDCl-j, jossa vähäinen osa CH-jOD:tä) 1,3 (s, 9H, t-butyyli), 6,8 (s, 1H) ja 7,5 (s, 1H)-imidatsoli-pro- tonit ja 5,0 (s, 2H, CH^Hj) .
5 Esimerkki 13 N-OC- ((2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-(t-butoksikar-bonyylifenyylialanyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi- 2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli))lysyyli-fenyyli-alaniini-diasetaatti 10 Edellisen esimerkin tuotetta (70 mg) ja 10-%:ista
Pd/C:tä (70 mg) yhdistettiin 10 ml:n kanssa metanoli-etik-kahapposeosta 4:1 ja hydrattiin neljän ilmakehän paineessa kaksi tuntia. Katalyytti otettiin talteen suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuiviin tolueenin kanssa, jolloin 15 saatiin otsikon tuotetta valkeana jauheena, 73 mg; tie Rf 0,63 (etyyliasetaatti-butanoli-etikkahappo-HoO 1:1:1:1), i z
Rf 0,0 (metanoli-CHCl-j 1:19); H-nmr (DMSO-dg) 1,3 (s, 9H, t-butyyli), ei bentsyyli-CH2-protoneja eikä aromaattisia protoneja kohdilla 6,8 - 7,8; sp., hajoaa 200°:n ylä-20 puolella.
Esimerkki 14 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-N-metyylihek-saaniamidi (Menetelmä A) 25 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami- ‘ no)-2-(2-metyylipropyyli)-y-heksanolaktonia (197 mg, : 0,536 mmol, esimerkki 5) liuotettiin 1 ml:aan vettä ja jääh- dytettiin jää-vesihauteessa. Kylmää liuosta huiskuteltiin CH^NH2:n kanssa kolme minuuttia, korkattiin ja annettiin 30 olla paikoillaan huoneen lämpötilassa kaksi tuntia, jonka ajan kuluttua tie osoitti reaktion päättyneen. Liuotin . . haihdutettiin pois seoksesta ja kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana, kiinteänä vaahtona, 204 mg; tie Rf 0,31 (etyyliasetaatti-heksaani 3:1).
29 861 92
Esimerkki 15 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydroklo-ridi 5 Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (199 mg, 0,499 mmol) liuotettiin 4-norm. HCl:n dioksaaniliuokseen (1 ml) ja sekoitettiin 25 minuuttia n suojaamana, jonka ajan kuluttua tie osoitti lähtöaineen kuluneen loppuun. Liuotin haihdutettiin sitten pois reaktioseoksesta ja kuivattiin 10 suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta epätäydelli-sesti kuivuneena, vaaleankeltaisena jauheena, 185 mg; tie Rf 0,20 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1; tlc-levyä käsiteltiin NH^-höyryn kanssa ennen eluointia HCl-suolan muuttamiseksi vapaaksi emäkseksi).
15 Esimerkki 16 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/to-(N-(t-butoksikarbo-nyyli)fenyylialanyyli)norleusyyli/amino-4-hydroksi- 2-(2-metyylipropyyli)-N-metyyliheksaaniamidi Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (61,8 mg, 20 0,185 mmol), CHC12 (0,5 ml), trietyyliamiinia (0,033 ml, 0,240 mmol), /N-(t.-butoksikarbonyyli) fenyylialanyyli7nor-leusiinia (70 mg, 0,185 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolia (43 mg, 0,278 mmol) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (38 mg, 0,185 mmol) lisättiin peräkkäin 2 ml:n astiaan, seosta se-25 koitettiin 18 tuntia 0°;ssa ja seos suodatettiin. Suodos : laimennettiin 2,5 ml:11a CH2C12, pestiin 2x3 ml:11a .·. : 1-norm. NaOH, 1x3 ml:lla suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^) - - ja haihdutettiin kuiviin harmahtavan valkeaksi jauheeksi.
Jälkimmäinen kromatografoitiin 2 g :11a silikageeliä ja 30 eluoitiin käyttämällä enenevin määrin, 0,5 %, 1 %, 2 %, 4 % ja 6 % etanolia sisältäviä CH2Cl2-liuoksia, kussakin tapauksessa 50 ml, jolloin saatiin 21,1 mg valkeaa jauhet-ta, jossa oli epäpuhtautena disykloheksyyli-ureaa (DCU) .
: ’ Jälkimmäinen yhdistettiin tuotteen ja DCU-pitoisen kiin- 35 teän aineen kanssa, jota oli aluksi eristetty reaktioseok-sesta ja kromatografoitiin 15 g:11a silikageeliä käyttämällä * · · 30 8 6 1 92 enenevin määrin, 1 %, 2 %, 3% ja 4% etanolia sisältäviä
Ci^Cl^-liuoksia, kussakin tapauksessa 500 ml. DCU-vapaat tuotefraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jol- loin saatiin otsikon tuotetta, 60,4 mg; H-nmr (DMSO-dg) 5 300 MHz (pprn) 0,9 - 0,95 (m, 9H, C(CH3)2 ja C-CH3); 1,33 (s, 9H, boc); 2,56 (d, 3H, NCH3, J = noin 5 Hz); 3,8, 4,18 ja 4,32 (m, 1H, kukin); 4,62 (d, 1H, J = noin 4 Hz); 7,06, 7,46 ja 7,95 (d, 1H kukin, J = noin 8 Hz); 7,68 (q, 1H, J = noin 0,5 Hz); 7,2 - 7,4 (m, aromaattinen).
10 Esimerkki 17 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-metyylipro-pyyli)-N-metyyliheksaaniamidi
Esimerkin 8 otsikon tuotetta (211 mg, 0,449 mmol) 15 liuotettiin 1 ml:aan kuivaa THF ja jäähdytettiin -50°: seen N2:n suojaamana. Lisättiin sekoittaen N-metyyli-morfoliinia (0,0545 ml, 0,494 mmol) ja, 2-3 minuutin kuluttua, lisättiin tiputtamalla isobutyyliklooriformiaattia (0,0641 ml, 0,494 mmol). Seoksen oltua edelleen 10 minuut-20 tia -50°:ssa, lämpötilaa nostettiin -30°:seen ja 20 minuutin aikana lisättiin tiputtamalla metyyliamiinia (37,6 mg, 1,21 mmol) 0,068 mlrssa THF. 10 minuutin kuluttua seos lämmitettiin ympäristön lämpötilaan, laimennettiin 5 ml:11a etyyliasetaattia, pestiin 3x5 ml:lla kyllästettyä NaHC03 25 ja sitten 1 x 5 ml :11a H20, kuivattiin (MgSO^) ja haihdu-tettiin öljyksi, 245 mg. Jälkimmäinen kromatografoitiin : 5 g: 11a silikageeliä eluoimalla eetteri-heksaaniseoksella 1:1 ja tarkkailemalla tlc:n avulla, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana kiinteänä vaahtona, 102,2 mg; tie Rf 30 0,2 ja 0,25 (eetteri-heksaani 3:1), heijastaen 1:1-epimee- rejä tetrahydropyranyylieetterisivuketjussa.
si 86192
Esimerkki 18 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-N-metyylihek-saaniamidi (Menetelmä B) 5 Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (98,6 mg, 0,203 mmol) liuotettiin 1,5 ml:aan etikkahappo-H20-liuosta 2:1 ja sekoitettiin kuusi tuntia, sitten haihdutettiin kuiviin ja käsiteltiin 2 x CH^CgH^rn kanssa, jolloin saatiin öljyä, 99,2 mg. Jälkimmäinen kromatografoitiin 5 g:11a si-10 likageeliä eluoimalla 200 ml:lla suhteessa 1:1, sitten 100 ml:11a suhteessa 3:1 käytetyillä etyyliasetaatti-hek-saaniseoksilla, tarkkailemalla tie:n avulla. Puhtaat tuote-fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana kiinteänä vaahtona, 15 61,5 mg; tie Rf 0,22 (etyyliasetaatti-heksaani 2:1), 1H-nmr (CDC13) 300 MHz (ppm) 0,9 (d, 6H); 1,46 (s, 9H); 2,82 (d, 3H); identtinen esimerkin 14 otsikon tuotteen kanssa.
Tämä tuote (59,2 mg) muutettiin esimerkin 15 mene-20 telmällä 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydrokloridiksi, 50,0 mg, joka oli identtinen tuon esimerkin tuotteen kanssa.
Esimerkki 19 25 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/fa-oc- (N-t-butoksikarbo- : : nyylifenyylialanyyli) -N- (imidatsoli) - (t-butoksikar bonyyli )histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(2-metyyli-propyyli) -N-metyyliheksaaniamidi
Esimerkin 16 menetelmällä esimerkin 15 otsikon tuo-• _ 30 te (47,3 mg, 0,141 mmol; valmistettu juuri edellä olevien esimerkkien mukaisesti) ja N-Of-/N- (t-butoksikarbonyyli) f e-nyylialanyyli_7-N- (imidatsoli) - (t-butoksikarbonyyli) histi-' ”· diini (74,4 mg, 0,148 mmol) muutettiin 1 ml:ssa CH2CI2 tä män otsikon tuotteeksi. Reaktioseoksen suodattamisen jäl-35 keen suodoksesta haihdutettiin pois CH2CI2 ja laimennettiin 1 ml:11a etyyliasetaattia, pestiin 2x1 ml:lla 1-norm.
32 861 92
NaOH, 1 x 1 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin vaahdoksi, 123,6 mg, joka kromato-grafoitiin 4 g:11a silikageeliä, eluoimalla 100 ml:n erillä 0,5 %, 1 %, 2 %, 4 % ja 6 % etanolia CH2Cl2:ssa sisäl-5 täviä liuoksia ja tarkkailemalla tlc;n avulla. Puhtaat tuotefraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana kiinteänä vaahtona, 84.4 mg, tie Rf 0,58 (CHCl3-etanoli-etikkahappo 18:2:1).
Esimerkki 20 10 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/tJ-oc- (N-t-butoksikarbo- nyylifenyylialanyyli) histidyylij7amino-4-hydroksi-2-(2-metyy1ipropyy1i)-N-metyy1iheksaaniamidi Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (81,1 mg, 0,104 mmol) liuotettiin 1 ml:aan metanolia ja sekoitet-15 tiin N2:n suojaamana noin 5 mg:n kanssa K2C03 tunnin ajan. K2CO3 neutraloitiin etikkahapolla ja seos haihdutettiin lähes kuiviin, laimennettiin vedellä ja tehtiin suolattomaksi ioninvaihtajahartsilla (5 g RP C-18) eluoimalla 2 x kolonnin tilavuudella metanoli-H20-seosta 2:3 ja sitten 20 4 x kolonnin tilavuudella metanolia. Vedettömät fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin ja kuivattiin suurtyh-jössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana jauheena,
63.5 mg; tie Rf 0,03 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1); ^H-nmr (DMSO-dg) 300 MHz (ppm): 0,90 ja 0,95 (dubletit, 6H
·*·. 25 kokonainen, J = 7 Hz, C(CH3)2); 1,30 (s, 9H, C(CH3)3); 2,56 (d, 3H, J = noin 5 Hz, NCH3) ; 3,72 (m, 1H) ; 4,14 (m, " 1H); 4,47 (m, 1H), 7,53 (s, 1H, yksi imidatsolyyli CH); I! 6,86, 7,12, 7,76 ja 8,22 (m, 1H kukin, NH); 7,16 - 7,40 (m, aromaattinen).
:· 30 Esimerkki 21 2-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyli-amino)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-metyyli-:propyyli)heksanoyyli7~1,2,3,4-tetrahydroisokinoliini : Esimerkin 8 otsikon tuotetta (0,243 g, 0,517 mmol), 35 tetrahydroisokinoliinia (0,044 ml, 0,069 g, 0,517 mmol) ja 1-hydroksibentsotriatsolia (70 mg, 0,517 mmol) yhdistettiin
< I
33 861 92 5 ml:n kanssa CI^C^ ja jäähdytettiin 0°:seen. Lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (107 mg, 0,517 mmol) ja seosta sekoitettiin 18 tuntia huoneen lämpötilassa, suodatettiin, suodos haihdutettiin kuiviin ja jäännöstä trituroi-5 tiin 5 ml:n kanssa etyyliasetaattia ja suodatettiin uudelleen. Toinen suodos pestiin 1x5 ml :11a 5-%:ista HC1, 1x5 ml:11a kyllästettyä NaHCOg ja 1 x 5 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^), haihdutettiin kuiviin ja toinen jäännös kromatografoitiin 36 g:11a silikageeliä käyttämäl-10 lä eluenttina 1 % metanolia sisältävää CHCl^, 229 mg; ^H-nmr (CDC13) delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3).
Esimerkki 22 2-/"2R,4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli) heksanoyyli_7-1,2,3,4-tetrahydro-15 isokinoliini-hydrokloridi
Edellisen esimerkin tuote (176 mg, 0,301 mmol) muu tettiin esimerkin 15 menetelmällä epätäydellisen kuivaksi otsikon tuotteeksi, 153 mg; 1H-nmr (CD3OD) delta 1,2 ppm (6H, J = 7, -CH(CH3)2).
20 Esimerkki 23 2-/2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5- (N-Ct- (N-t-butoksikar-bonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksi-karbonyyli)histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(2-metyy-lipropyyli)heksanoyyliJ-1,2,3,4-tetrahydro-isokino-• 25 liini : Esimerkin 16 menetelmällä käyttämällä trietyyli- amiinin asemesta N-metyylimorfoliinia, edellisen esimerkin : märkä tuote (153 mg, 0,301 mmol, oletettu) ja N-OC-(N-t- . . . butoksikarbonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butok- 30 sikarbonyyli)histidiini (186 mg, 0,367 mmol) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi. Reaktioseos suodatettiin ja suodos kromatografoitiin silikageelillä käyttämällä eluentti- : na 2,5 % metanolia CHCl-^ssa, jolloin saatiin tämän otsi-
.f. 1 J
’ kon tuotetta, 286 mg; H-nmr (CDC13) delta 1,4 ppm (s, 9H, 35 C(CH3)3).
34 861 92
Esimerkki 24 2-[2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(N-(N-t-butoksikar-bonyylifenyylialanyyli)histidyyli)amino-4-hydroksi- 2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli/-1,2,3,4-tetrahyd-5 roisokinoliini
Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (286 mg) sekoitettiin kuusi päivää 10 ml:n kanssa etikkahappo-I^O-seosta 4:1, sitten haihdutettiin kuiviin tolueenilaimenti-men kanssa ja jäännös kromatografoitiin 20 g:11a silika-10 geeliä käyttämällä eluenttina 10 % metanolia CHCl^sssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta, kahdesta tuotteesta po- laarittomampaa, 110 mg; H-nmr (CDCl^) 1,4 ppm (s, 9H, c(ch3)3) .
Esimerkki 25 15 N-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyli- amino)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-metyyli-propyyli)heksanoyy1i7proliini-metyyliesteri Käyttämällä kahden tunnin reaktioaikaa 0°:ssa ja 16 tunnin reaktioaikaa huoneen lämpötilassa, käyttämällä 20 N-metyylimorfoliinia trietyyliamiinin asemesta ja käyttämällä kromatografoitaessa eluenttina 1 % metanolia sisältävää CHC13, esimerkin 8 tuotteen (300 mg, 0,639 mmol) ja proliini-metyyliesteri-hydrokloridin (106 mg, 0,639 mmol) muuttamiseen otsikon tuotteeksi, 215 mg, käytettiin esi-25 merkin 19 menetelmää; ^H-nmr (CDC13) delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3); tie Rf 0,7 (2,5 % CH3OH CHCl3:ssa).
: Esimerkki 26 N-/"2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5- (t-butoksikarbonyyli-amino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyylij-30 proliini-metyyliesteri
Edellisen esimerkin tuotetta (165 mg) sekoitettiin 10 ml:ssa etikkahappo-I^O-seosta 4:1 18 tunnin ajan, haih- dutettiin kuiviin ja käsiteltiin 2 x 5 ml:n kanssa toluee-' : : nia ja 1 x 5 ml:n kanssa CHC13, jolloin saatiin hiukan kos- 35 teaa otsikon tuotetta öljynä, 166 mg; tie Rf 0,6 (2,5 % CH3OH CHC13 : ssa) .
il 35 8 6 1 92
Esimerkki 27 N-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli7proliini-metyylies-teri 5 Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (166 mg, kos teaa) yhdistettiin 3,7-norm. HCl:n dioksaaniliuoksen kanssa (1 ml). Kahden tunnin kuluttua seos haihdutettiin kuiviin, liuotettiin 5 ml saan etyyliasetaattia, pestiin 1x5 ml:11a kyllästettyä NaHCO^ ja sitten 1x5 ml:11a suolaliuosta, 10 kuivattiin (MgSO.) ja haihdutettiin uudelleen kuiviin, 4 1 jolloin saatiin otsikon tuotetta; H-nmr (CD^OD) delta 3,8 ppm (s, 3H, CC^CH^) .
Esimerkki 28 N-/2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5- (N-ot- (N-t-butoksikar-15 bonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksi- karbonyyli)histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(2-metyyli-propyy1i)heksanoyy1i7proliini-metyy1ie steri Edellisen esimerkin tuotetta (132 mg, 0,334 mmol), N-ot- (N-t-butoksikarbonyylifenyylialanyyli) -N- (imidatsoli)-20 (t-butoksikarbonyyli)histidiidiä (168 mg, 0,334 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolia (45 mg, 0,334 mmol) ja disyklo-heksyylikarbodi-imidiä (69 mg, 0,334 mmol) yhdistettiin 5 mlrssa CH2CI2 0°;ssa, CaCl2-kuivausputken suojaamana, ja sekoitettiin tuossa lämpötilassa 18 tuntia, sitten liuo-·"*: 25 tin haihdutettiin pois, jäännöstä trituroitiin 5 ml:n kans- \ : sa eetteriä ja suodatettiin. Eetterisuodos haihdutettiin kuiviin jäännökseksi (230 mg) , joka kromatografoitiin si-likageelillä käyttämällä eluenttina 1 % CH^OH sisältävää • CHCl^, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta, ; 30 110 mg; ^H-nmr (CDCl^) , delta, 1,4 ppm (s, 9H, C(CH^)^).
• ' Esimerkki 29 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-GC- (N-t-butoksikarbo-nyylifenyylialanyyli)histidyyli/amino-2-(2-metyyli-: propyyli)-y-heksanolaktoni 35 Edellisen esimerkin otsikon tuote muutettiin esimer- .··*. kin 26 menetelmällä N-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(Ν-<Χ- 36 861 92 (N-t-butoksikarbonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)(t-bu- toksikarbonyyli)histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(2-metyyli- propyyli)heksanoyyli7proliini-metyyliesteriksi, 110 mg; H-nmr osoitti histidiini-t-butoksikarbonyylisuojaryhmän 5 hävinneen. Tästä välituotteesta, kromatografoitaessa sili- kageelillä CH^OH-CHCl^-seoksella 1:24, muodostui otsikon tuotetta, josta proliini-metyyliesteri puuttui, 51 mg; H-nmr (CDCl^) delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3, mutta ei mitään metyyliesteripiikkiä; ir (CDCl^) laktonikarbonyyli 10 kohdalla 1 785 cm-1.
Esimerkki 30 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/lJ-CC- (N-t-butoksikarbo-fenyylialanyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksaaniamidi 15 Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (32,7 mg) huiskutettiin 0,5 ml:ssa metanolia ylimäärin käytetyn kuivan NH^:n kanssa 0°;ssa. Noin 10 minuutin kuluttua reaktio-seos haihdutettiin kuiviin, jäännöstä trituroitiin eetterin kanssa ja otsikon tuote otettiin talteen suodattamalla 20 valkeana kiinteänä aineena, 23 mg; ^H-nmr (CDCl^) delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3),
Esimerkki 31 N-/N-0C- (t-butoksikarbonyyli) -N-£- (bentsyylioksikar-bonyyli)lysyyli7statiini-etyyliesteri : 25 Esimerkin 19 menetelmällä, kromatografisen puhdis tuksen ollessa tarpeeton, statiini-etyyliesteri-hydroklori-di (0,467 g, 0,00195 mol), N-OC- (t-butoksikarbonyyli) -N-1-(bentsyylioksikarbonyyli)lysiini (0,198 g, 0,00195 mol), N-metyylimorfoliini (0,215 ml, 198 mg, 0,00195 mol), 30 1-hydroksibentsotriatsoli (264 mg, 0,00195 mol) ja disyk- loheksyylikarbodi-imidi (403 mg, 0,00195 mol) muutettiin 25 ml:ssa CH2C12 otsikon tuotteeksi, kiinteäksi vaahdoksi, :·’· 0,704 g; tie Rf 0,65 (CHC13-CH30H 9:1); 1H-nmr (CDC13) delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3).
37 86192
Esimerkki 32 N-/fa-£- (bentsyylioksikarbonyyli) lysyyli_7statiini-etyyliesteri-hydrokloridi
Edellisen esimerkin tuotetta (0,805 g, 0,00142 mol) 5 sekoitettiin 10 ml:ssa 3,7-norm. HCl:n dioksaaniliuosta kaksi tuntia, haihdutettiin kuiviin, jäännöstä trituroi- tiin eetterin kanssa ja suodatettiin, jolloin saatiin ot- sikon tuotetta, 0,650 g; H-nmr (CD^OD) delta 5,2 ppm (s, 2H, bentsyyli-CI^) .
10 Esimerkki 33 N-/N-Ofr- (2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbo-nyyliamino)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-me-tyylipropyyli)heksanoyyli)-N-g-(bentsyylioksikarbonyyli) lysyylijf statiini-etyyliesteri 15 Esimerkin 28 menetelmällä käyttämällä eluenttina 0,5 % metanolia sisältävää CHCl-j, edellisen esimerkin tuote (332 mg, 0,662 mmol) ja esimerkin 8 tuote (311 mg, 0,662 mmol) muutettiin kromatografoiduksi otsikon tuotteeksi, 300 mg; ^H-nmr (CDC13) delta 1,4 (s, 9H, CiCH^)^).
20 Esimerkki 34 N-/N-<X- (2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5- (t-butoksikarbo-nyyliamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli) -N-g-(bentsyylioksikarbonyyli)lysyyli7statiini-etyyliesteri 25 Edellisen esimerkin tuote (300 mg) muutettiin esi- ; ; merkin 26 menetelmällä otsikon tuotteeksi, käsiteltiin : 2x10 ml:n kanssa tolueenia ja kuivattiin suurtyhjössä, ·'- 200 mg; ^H-nmr (CDCl^) delta 1,4 ppm (s, 9H, CiC^)^).
Esimerkki 35 30 N-/N-oc-(2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydrok- si-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli)-N-£-(bentsyylioksikarbonyyli) lysyyli/statiini-etyyliesteri Edellisen esimerkin tuotetta (200 mg) ja 10 ml 3,7-norm. HCl:n dioksaaniliuosta sekoitettiin kaksi tun-• 35 tia, haihdutettiin kuiviin, jäännöstä trituroitiin eette- . rin kanssa ja valkea kiinteä aine otettiin talteen 38 8 6 1 92 suodattamalla. Kromatografoimalla tämä kiinteä aine 35 g:11a silikageeliä, käyttämällä CH^OH-CHCl^-seosta 1:19, saatiin HClrstä vapaata otsikon tuotetta, 52 mg; ^H-nmr (CD^OD) delta 5,2 (s, 2H, bentsyyli-Cl^).
5 Esimerkki 36 N-//N-oC-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-( (N-oL-(N-t-bu-toksikarbonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyyli)histidyyli))amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli7-N-£-/bentsyyli-10 oksikarbonyyli7lysyyli7_7statiini-etyyliesteri Käyttämällä kaksi ekvivalenttia 1-hydroksibentso-triatsolia ja käyttämällä 2,5 % CH^OH sisältävää CHCl^ eluenttina, edellisen esimerkin tuote (52 mg, 0,0709 mmol) ja N-ot- (N-t-butoksikarbonyylifenyylialanyyli) -N- (imidatso-15 li)-(t-butoksikarbonyyli)histidiini (36 mg, 0,0709 mol) muutettiin kromatografoiduksi otsikon tuotteeksi, 28 mg; ^H-nmr (CDCl^) delta 1,4 ppm (s, 9H, CiCH^)^); hplc-reten-tioaika 10,28 minuuttia (käänteisfaasi C18-kolonni, elu-oimalla asetonitriili-pH 2,1-fosfaattipuskuriseoksella 20 1:1 nopeudella 3 ml/min).
Esimerkki 37 N-/'/N-°t-2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5- (N-butoksikarbo-nyylifenyylialanyylihistidyyli)amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli/-N-C-(bentsyylioksi-*: 25 karbonyyli)lysyyli/7statiini-etyyliesteri
Edellisen esimerkin tuote (28 mg) muutettiin esimerkin 26 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, 22 mg; H-nmr (CDCl^) osoitti imidatsoli-t-butoksikarbonyyli-suojaryhmän kadonneen, mutta siinä on delta 1,4 ppm (s, 30 9H) johtuen säilyneestä t-butoksikarbonyyliryhmästä.
39 8 6 1 92
Esimerkki 38 N4S, 5S-6-sykloheksyyli-5- (N-t-butoksikar-bonyylifenyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi- 2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli7lysyyli//statiini-5 etyyliesteri
Edellisen esimerkin tuotetta (22 mg) hydrattiin ilmakehän paineessa 2 ml:ssa etanolia 22 mg:11a 10-%:ista Pd/C:tä kolme tuntia. Katalyytti otettiin talteen suodattamalla piimään läpi, pesemällä 2 x 1 ml:11a etanolia. Yh-10 distetty suodos ja pesuneste haihdutettiin kuiviin lasi-maiseksi aineeksi, muutettiin valkeaksi, suodatettavaksi jauheeksi trituroimalla minimaalisella eetterimäärällä, 13 mg; "*H-nmr (CDCl^) delta 1,5 ppm (s, 9H, CiCH^ij). Esimerkki 39 15 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami- no)-2-bentsyyli-y-heksanolaktoni
Kuiva di(isopropyyli)amiini (2,48 ml, 0,0177 mol; tislattu Cal^n päältä) jäähdytettiin kuivassa THF:ssa (7,4 ml, tislattu K;n päältä) ^tn suojaamana 0°:seen. Vii-20 den minuutin aikana lisättiin tiputtamalla butyylilitiumia (11,0 ml 1,62-molaarista heksaaniliuosta, 0,0177 mol). 15 minuuttia 0°:ssa sekoittamisen jälkeen seos jäähdytettiin -78°:seen ja viiden minuutin kuluessa lisättiin esimerkin 3 polaarittomampaa 4S,5S-otsikon tuotetta (2,30 g, 0,0074 25 mol) 3,7 ml:ssa kuivaa THF. Sen jälkeen kun oli sekoitettu vielä 30 minuuttia -78°:ssa, viiden minuutin aikana lisät-: tiin tiputtamalla bentsyylibromidia (0,923 ml, 0,0078 mol) 3,7 ml:ssa kuivaa THF. Seoksen oltua tunnin -78°:ssa, reaktio sammutettiin lisäämällä 10 ml kyllästettyä NH^Cl, läm-30 niitettiin huoneen lämpötilaan, laimennettiin 25 ml :11a eetteriä ja kerrokset erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 2x15 ml:11a kyllästettyä NaHC03, kuivattiin (MgSO^) ·.*·: ja haihdutettiin kuiviin öljyksi (3,29 g) . öljy kromato- grafoitiin 150 g:lla silikageeliä eluoimalla 2,5 litralla 35 etyyliasetaatti-heksaaniseosta 1:9 ja tarkkailemalla tlc:n *···, avulla. Puhtaat tuotefraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin « · · 40 861 92 kuiviin, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta valkeana öljyisenä kiinteänä aineena, 1,46 g; tie Rf 0,60 (etyyliasetaatti-heksaani 1:1). Kolonnista otettiin talteen myös polaarisempaa lähtöainetta (0,92 g keltaista öl-5 jyä, puhtaus noin 70 %, tie Rf 0,4 samassa seoksessa). Esimerkki 40 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-hydroks i-2-bentsyy1i-N-metyy1ihek saaniamidi Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (157 mg) liuo-10 tettiin 2 ml saan CH^OH, jäähdytettiin 0°:seen ja huiskuteltiin CH^NI^n kanssa kolme minuuttia. Astia korkattiin, annettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia, haihdutettiin kuiviin 2 x 2 ml:n eetterilaimennuksen kanssa ja kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotet-15 ta valkeana kiinteänä vaahtona, 164 mg; tie Rf 0,17 (etyy- liasetaatti-heksaaniseos 1:1), Rf 0,29 (etyyliasetaatti- heksaaniseos 3;1); H-nmr (CDCl^) 300 MHz osoitti odotettujen piikkien (s, 9H) ; N-CH^ (d, 3H) ; aromaat tisten resonanssien ja t-butoksikarbonyyli-NH:n (d, 1H) 20 läsnäolon.
Esimerkki 41 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-bent-syyli-N-metyyliheksaaniamidi-hydrokloridi Edellisen esimerkin tuote (150 mg) liuotettiin 25 2 ml:aan 4-norm. HCl;n dioksaaniliuosta, sekoitettiin N2:n suojaamana 0,5 tuntia, haihdutettiin kuiviin, laimennettiin 3 x 2 ml:n eetterierien kanssa ja jäännös kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta vaaleankeltaisena jauheena, 135 mg; tie 0,20 (CHCl^-etanoli-etikka-30 happoseos 18:2:1; täplitettyä levyä oli käsitelty NH^:n kanssa HCl-suolan neutraloimiseksi ennen eluointia).
«» · . » · il 41 86192
Esimerkki 42 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-0C- (N-t-butoksikarbo-nyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikar-bonyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-bentsyyli-N-5 metyyliheksaaniamidi
Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (123 mg, 0,333 mol), CH2CI2 (1 ml), trietyyliamiinia (0,060 ml, 0,433 mmol) , N-oC-(N-t-butoksikarbonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli) - (t-butoksikarbonyyli) histidiiniä (176 mg, 0,350 10 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolia (84 mg, 0,550 mmol) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (72 mg, 0,350 mmol) yhdistettiin peräkkäin 0°:ssa ja sekoitettiin n suojaamana 16 tuntia tuossa lämpötilassa. Sivutuote DCU otettiin talteen suodattamalla ja pesemällä 3 ml:11a Cl^C^illa. Yhdis-15 tetty suodos ja pesuneste pestiin 2x3 ml:11a 1-norm.
NaOH ja sitten 1x3 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^), haihdutettiin kuiviin 342 mg:ksi vaaleankeltaista kiinteää einettä ja kromatografoitiin 20 g:lla silikageeliä, eluoimalla asteittain 250 ml:n seoksin, joissa oli 0,5 %, 20 1%, 2%, 4% ja 6% etanolia Cl^C^jssa ja tarkkailemalla tie:n avulla, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta, 154 mg; tie Rf 0,55 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1).
Esimerkki 43 ... 25 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylife- nyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi-2-bentsyy-""; li-N-metyyliheksaaniamidi
Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (147 mg) sekoitettiin N2:n suojaamana 1,5 ml:n kanssa etikkahappo-30 l^O-seosta 4:1 seitsemän tuntia, sitten haihdutettiin kui-• : : viin 3 x 3 ml:n kanssa eetterilaimennusta ja kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana f·.· jauheena, 135 mg; tie Rf 0,05 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1); ^H-nmr (DMSO-dg), 250 MHz delta (ppm) : 1,32 (s, \ 35 9H, t-butyyli); 3,72 4,15 ja 4,48 (3m 1H, kukin); 6,87 ja • « 42 8 6 1 92 7,52 (s, 1H, kumpikin, imidatsolyyli CH); 7,0 - 7,35 (m, aromaattinen), 7,40, 7,62 ja 8,17 (3d, 1H, kukin).
Esimerkki 44 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-5 no-4-hydroksi-2-(sykloheksyylimetyyli)-N-metyyli- heksaaniamidi
Esimerkin 40 otsikon tuotetta (83,1 mg) hydrattiin 45 mg:11a 10-%:ista Rh/C-katalyyttiä 10 mlrssa metanolia neljän ilmakehän H2-paineessa 1,5 tuntia. Katalyytti otet-10 tiin talteen suodattamalla piimään läpi metanolilla pesten. Yhdistetty suodos ja pesuneste haihdutettiin kuiviin, laimennettiin 2x5 ml:11a eetteriä ja kuivattiin suurtyhjös-sä, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana, kiinteänä vaahtona, 76,9 mg; ^H-nmr (CDCl-j, 30 MHz); C (CH^) ^-sing-15 letti, ei fenyyli-protoneja ja N-CH^-dubletti; tie Rf 0,32 (etyyliasetaatti-heksaani 3;1).
Esimerkki 45 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(sykloheksyylimetyyli) -N-metyyliheksaaniamidi-hydroklo-20 ridi
Edellisen esimerkin otsikon tuote (75 mg) muutettiin esimerkin 41 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, 64,1 mg, tie Rf 0,18 (CHCl3-etanoli-etikkahappo 18:2:1); täplitetty levy neutraloitiin NH^-höyryllä ennen eluointia).
25 Esimerkki 46 2R,4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-oC- (N-t-butoksikarbonyyli-fenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyyli)-histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(sykloheksyylimetyyli) -N-metyyliheksaaniamidi 30 Edellisen esimerkin tuote (59,1 mg, 0,158 mmol) muu tettiin esimerkin 42 menetelmällä kromatografoiduksi otsikon tuotteeksi, valkeaa, kiinteää vaahtoa, 76,4 mg; tie Rf 0,60 (CHCl-j-etanoli-etikkahappo 18:2:1); ^H-nmr (DMSO-d^, 250 MHz) kaksi C(CH^)^-singlettiä keskuksena 1,6 ppm.
43 861 92
Esimerkki 47 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylife-nyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(syklo-heksyylimetyyli)-N-metyyliheksaaniamidi 5 Edellisen esimerkin tuote (71,5 mg) muutettiin esi merkin 43 menetelmällä otsikon tuotteeksi, valkeaa jauhetta, 59,1 mg; tie Rf 0,05 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1); ^H-nmr (DMSO-dg, 250 MHz) C(CH^)3-singletti kohdalla 1,32 ppm, N-CH^-dubletti kohdalla 2,58 ppm ja imidatsoli C-H-10 singletit kohdilla 6,86 ja 7,52 ppm.
Esimerkki 48 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-N-bentsyyli-heksaaniamidi 15 Esimerkin 5 otsikon tuotetta (150 mg, 0,408 mol), kuivaa tolueenia (2 ml), bentsyyliamiinia (0,29 ml, 5 ekv.), etikkahappoa (0,023 ml, 1 ekv.) sekoitettiin N2:n suojaamana, lämmitettiin vähitellen 90°:seen ja pidettiin tuossa lämpötilassa kuusi tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin, lai-20 mennettiin 3 ml:11a etyyliasetaattia, pestiin 2x3 ml:11a 1-norm. HC1 ja 1 x 3 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana, öljyisenä vaahtona, 187 mg; tie Rf 0,58 (etyyliasetaatti-heksaani 2:1).
25 Esimerkki 49 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-" metyylipropyyli)-N-bentsyyliheksaaniamidi-hydroklo- ridi
Edellisen esimerkin tuote (172 mg) muutettiin esi-30 merkin 41 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, valkeaa ·/_· jauhetta 146 mg; tie Rf 0,30 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1; täplitetty levy käsitelty NH^-höyryllä ennen eluoin-tia) .
• ♦ · • · ♦ ·· · 44 861 92
Esimerkki 50 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/ij-ofr- (N-t-butoksikarbo-nyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikar-bonyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(2-metyyli-5 propyyli)-N-bentsyyliheksaaniamidi
Edellisen esimerkin tuote (136 mg, 0,331 mol) muutettiin esimerkin 42 menetelmällä kromatografoiduksi otsikon tuotteeksi, valkeaa, kiinteää vaahtoa, 167 mg; tie Rf 0,60 (CHCl-j-etanoli-etikkahappo 18:2;1).
10 Esimerkki 51 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylife-nyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(2-me-tyylipropyyli)-N-bentsyyliheksaaniamidi Edellisen esimerkin tuote muutettiin esimerkin 43 15 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, valkeaa kiinteää vaahtoa, 146 mg; tie Rf 0,18 (CHC^-etanoli-etikkahappo 18:2:1); 1H-nmr (DMSO-dg), 250 MHz delta (ppm): 0,83 ja 0,90 (d, 3H, kumpikin, J = 6 Hz, CiCH-j^); 1,32 (s, 9H, CtCHjl-j); 3,72, 4,16 ja 4,50 (m, 1H, kukin); 4,28 (m, 2H; 20 NCH2); 6,86 (br, 1H); 7,52 (s, 1H); 7,1 - 7,4 (M, 11-13H, aromaattinen ja NH); 8,25 (d, 1H, NH); 8,36 (t, 1H). Esimerkki 52 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-N,N-dimetyyli-25 heksaaniamidi
Esimerkin 5 otsikon tuote (595 mg) liuotettiin 5 ml:aan metanolia, jäähdytettiin 10°:seen, kuljetettiin kolme minuuttia dimetyyliamiinin kanssa, korkattiin ja annettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia.
30 Tie osoitti konversion olevan 80 %. Liuosta huljuteltiin sitten huoneen lämpötilassa kaksi minuuttia dimetyyliamiinin kanssa, korkattiin uudelleen ja annettiin olla paikoil-laan 18 tuntia, jonka ajan kuluttua tie osoitti konversion tapahtuneen täydellisesti. Liuos haihdutettiin kuiviin ja 35 jäännös kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana, kiinteänä vaahtona, 112 mg; tie Rf 0,31 i! «s 86192 (etyyliasetaatti-heksaani 3:1); ms piikit kohdilla 281,0, 230,9, 212,0, 186,1, 131,0, 100,0, 80,9, 68,9 ja 57,0. Esimerkki 53 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-me-5 tyylipropyyli)-N,N-dimetyyliheksaaniamidi-hydroklo- ridi
Edellisen esimerkin tuote (107 mg) muutettiin esimerkin 41 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, harmahtavan valkeaa, kiinteää vaahtoa, 94,7 mg; tie Rf 0,16 (CHCl^-10 etanoli-etikkahappo 18:2:1; täplitetty levy käsitelty NH^-höyryllä ennen eluointia) ms piikit kohdilla 313,3, 256,1, 215,2, 186,1, 156,0, 143,1, 126,1, 111,1, 100,1, 83,0 ja 69,1 .
Esimerkki 54 15 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/iJ-ot- (N-t-butoksikarbo- nyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikar-bonyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(2-metyyli-propyy1i)-N,N-dimetyyliheksaaniamidi Esimerkin 42 menetelmällä käyttämällä lisäksi kroma-20 tografoinnissa eluointiin 250 ml:n seoksia, joissa oli 8 %, 12 %, 20 % ja 50 % etanolia Cl^C^JSsa, edellisen esimerkin tuote (87 mg, 0,249 mmol) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, valkeaa, kiinteää vaahtoa, 107 mg; tie Rf 0,52 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2;1); ^H-nmr (DMSO-dg, .**·. 25 250 MHz) kaksi C (CH^) 3-singlettiä, aromaattisia piikkejä ; ja imidatsolipiikkejä; ms 511 ,4, 357,3, 329,1 , 301 ,2, 257.0, 21 1 ,1 , 165,1 , 136,0, 120,1 , 110,0, 91 ,0, 57,1 ja 41.0.
Esimerkki 55 30 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylife- nyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(2-me-tyylipropyyli)-N,N-dimetyyliheksaaniamidi :/··; Edellisen esimerkin tuote muutettiin esimerkin 43 menetelmällä raa'aksi otsikon tuotteeksi, 78,2 mg, jossa 35 oli hplc:n perusteella oleellinen määrä mp-epäpuhtautta. Raakatuotetta käsiteltiin preparatiivista hplc:tä käyttäen *·! 46 861 92 5 g:n käänteisfaasi C-18-kolonnissa, eluoitiin nelinkertaisilla kolonnin tilavuusmäärillä seoksia, joissa oli metanolia ja H20:ta suhteissa 1:1, 3:1, 17:3 ja 100:0. Epäpuhtaudet eluoituivat eluentilla 3:1, puhtaan otsikon 5 tuotteen eluoituessa eluentilla 17:3, joka eristettiin haihduttamalla kuiviin, valkeana jauheena, 46,0 mg; tie Rf 0,02 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1); hplc-retentio-aika 5,87 minuuttia C-8 4,6 mm x 25 cm:n kolonni, eluoitiin seoksella, jossa oli suhteessa 3:2 CH3CN ja pH 2,1-10 fosfaattipuskuria, nopeudella 1,5 ml/min); ms 322,4, 311,1, 283,1, 218,9, 165,1, 131,0, 110,1, 97,0, 91,0, 69,1, 59,1, 43,0; 1H-nmr (DMSO-dg, 250 MHz) delta 1,32 (s, 9H, C(CH3)3); 2,85 ja 3,07 (2s, 6H, N(CH3)2); 6,92 ja 7,52 (2s, 2H, imid-atsoli C-H).
15 Esimerkki 56 5-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyli-amino)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-metyyli-propyyli)heksanoyyli/amino-1-(bentsyylioksikarbonyy-liamino)pentaani 20 Esimerkin 31 menetelmällä, paitsi käyttämällä eette riä, etyyliasetaatin asemesta, eristämiseen, esimerkin 8 otsikon tuote (160 mg, 0,341 mmol) ja valmistuksen 3 tuote (80,5 mg, 0,341 mmol) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, 222 mg; ^H-nmr (CDCl-j) delta 1,44 ppm (s, 9H, C(CH3)3).
25 Esimerkki 57 5-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksiamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli/amino-1-(bentsyylikarbonyyliamino)pentaani Edellisen esimerkin tuote (221 mg) muutettiin esi-30 merkin 26 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, 193 mg; 1H-nmr (CDC13) delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3).
86192
Esimerkki 58 5-/'2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2- (2-metyylipropyyli) heksanoyyl iJ7 amino-1 - (bentsyylioksi-karbonyyliamino)pentaani 5 Edellisen esimerkin tuotetta (193 mg) sekoitettiin 10 ml:n kanssa 3,7-norm. HCl:n dioksaaniliuosta kaksi tuntia, haihdutettiin kuiviin ja jäännöstä trituroitiin eetterin kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 144 mg; 1H-nmr (CD3OD) delta 5,2 ppm (s, 2H, bentsyyli CHj).
10 Esimerkki 59 5-//2R,4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-0C- (N-t-butoksi-karbonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butok-s ikarbonyy1i)hi stidyy1 xjamino-4-hydroks i-2-(2-me-tyylipropyyli) heksanoyyli^amino-1 - (bentsyylikarbo-15 nyyliamino)pentaani Käyttämällä eluenttina CHCl-j esimerkin 28 menetel mää käytettiin edellisen esimerkin tuotteen muuttamiseen tämän otsikon kromatografoiduksi tuotteeksi, 25 mg; H-nmr (CDC13) delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3).
20 Esimerkki 60 5-/2r,4s,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyli-fenyylialanyyli-histidyyli) amino-4-hydroksi-2- (2-metyylipropyyli) heksanoyyli7amino-1 - (bentsyylioksi-karbonyyliamino)pentaani 25 Edellisen esimerkin otsikon tuote (25 mg) muutet- : tiin esimerkin 43 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, ’* · kuiviin haihduttamisen jälkeen jäännöstä käsiteltiin kah- desti tolueenin kanssa ja jäännöstä trituroitiin eetterin kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana kiinteänä '··_" 30 aineena, 11 mg; ^H-nmr (CDCl^) delta 1,4 ppm (s, 9H, c(ch3)3).
Tämän tuotteen muuttamiseksi 5-/2R,4S,5S-6-syklo-:/*: heksyyli-5- (t-butoksikarbonyylifenyylialanyyli-histidyyli) - amino-4-hydroksi-2- (2-metyylipropyyli) heksanoyyli7amino-35 pentyyliamiiniksi on käytetty esimerkin 13 mukaista hyd-rausta Pd/C-katalyytillä.
48 861 92
Esimerkki 61
Bentsyyli-4-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksi-karbonyyliamino)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-me tyy1ipropyy1i)heksanoyy1i]aminobutyraatti 5 Esimerkin 8 otsikon tuote (160 mg, 0,341 mmol) ja bentsyyli-4-aminobutyraatti-hydrokloridi (66 mg, 0,341 mmol) kytkettiin toisiinsa esimerkin 23 menetelmällä. Reak-tioajan päätyttyä seos haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin 5 ml:aan eetteriä, pestiin 1 x 3 ml :11a kyl-10 lästettyä NaHCO^/ 1 x 3 ml :11a 5-%:ista HCl ja 1 x 3 ml:11a suolaliuosta ja haihdutettiin uudelleen kuiviin raa'aksi tuotteeksi, 172 mg, joka kromatografoitiin 20 g:11a silika-geeliä CHCl^:n ollessa eluenttina, jolloin saatiin puhdis-tettua otsikon tuotetta, 107 mg; H-nmr (CDCl^) delta 1,4 15 ppm (s, 9H, C(CH3)3).
Esimerkki 62
Bentsyyli-4-/"2R, 4S , 5S-6-sykloheksyyli-5- (t-butoksi-karbonyyliamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-heksanoyy li_7aminobutyraatti 20 Edellisen esimerkin tuote (380 mg) muutettiin esi merkin 43 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, 330 mg; ^H-nmr delta 1,4 ppm (s, 9H, C(CH3)3).
Esimerkki 63
Bentsyyli-4-£2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-: 25 hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli7aminobuty- . raatti : Edellisen esimerkin tuotteen (330 mg), joka oli 10 ml:ssa 3,7-norm. HCl:n dioksaaniliuosta, annettiin olla paikoillaan kaksi tuntia. Seos haihdutettiin kuiviin, jään-30 nös liuotettiin 5 ml:aan etyyliasetaattia, pestiin 5 ml:n erillä kyllästettyä NaHCC>3 ja sitten suolaliuoksella, kuivattiin (MgSO.) ja haihdutettiin uudelleen kuiviin, jolloin 4 1 ·; saatiin otsikon tuotetta öljynä, 220 mg; H-nmr (CD3OD) : delta 5,2 ppm (s, 2H, Cj^CgH^) .
49 861 92
Esimerkki 64
Bentsyyli-4-/7"2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/N-ot- (N-(t-butoksikarbonyyli)fenyylialanyyli)-N-(imidatso-li)-(t-butoksikarbonyyli)histidyyli7amino-4-hydrok-5 si-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyliaminq7butyraatti
Otsikon tuotteen muodostamiseksi edellisen esimerkin tuote (270 mg, 0,586 mmol) kytkettiin esimerkin 42 menetelmällä. DCU;n talteen ottamisen jälkeen suodos haihdutettiin kuiviin, liuotettiin eetteriin, suodatettiin uudel-10 leen ja suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 480 mg raakatuotetta, Jälkimmäinen kromatografoitiin 50 g:11a si-likageeliä käyttämällä eluenttina 2,5 % metanolia sisältävää CHCl^, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta, 132 mg; ^H-nmr (CDCl^) delta 1,4 ppm (s, 9H, CtCH^)^).
15 Esimerkki 65 4-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(N-(t-butoksikarbonyyli) fenyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyliamino/voihappo Edellisen esimerkin tuotetta (93 mg) hydrattiin 20 2,5 ml:ssa etyyliasetaatti-metanoliseosta 1:1 23 mg:lla 10-%:ista Pd/C-katalyyttiä kaksi tuntia neljän ilmakehän paineessa. Katalyytti otettiin talteen suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuiviin öljyksi, joka liuotettiin eetteriin, suodatettiin ja haihdutettiin uudelleen kuiviin, ·'**: 25 jolloin saatiin otsikon tuotetta, 62 mg; ^H-nmr (CD3OD) ; delta 1,4 ppm (s, 9H, 0(0112)3).
. - ‘ Esimerkki 66 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5- (t-butyylioksikarbonyyli-amino)-2-[(2-naftyy1i)metyy1 ij-y-heksano1aktoni Γ! 30 Esimerkin 3 otsikon tuote (0,295 g, 0,95 mmol) ja 2-(bromimetyyli)naftaleeni (220 mg, 0,99 mmol) muutettiin esimerkin 39 menetelmällä raa'aksi otsikon tuotteeksi (0,43 g keltaista öljyä), joka kromatografoitiin 20 g:lla V : silikageeliä, eluoimalla 700 ml:11a etyyliasetaatti-heksaa- 35 niseosta 1:9 ja sitten 300 ml:11a etyyliasetaatti-heksaani-,·*·. seosta 1:1, tarkkailemalla tlc:n avulla. Puhdas otsikon ψ · · so 86192 tuote eristettiin keskijakeista, 139 mg; Rf 0,62 (etyyli-asetaatti-heksaani 1;1).
Esimerkki 67 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-5 no) -4-hydroksi-2-/’(2-naftyyli) metyyliy-N-metyylihek- saaniamidi
Edellisen esimerkin otsikon tuote (113 mg) jäähdytettiin 2 ml:ssa metanolia 0-5°:seen ja kylmää liuosta huljuteltiin CH3NH2:n kanssa kaksi minuuttia, korkattiin, an-10 nettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa kaksi tuntia, haihdutettiin kuiviin, laimennettiin 2 x 2 ml:n kanssa eetteriä ja kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana vaahtona, 114 mg; tie Rf 0,15 (etyyliase-taatti-heksaani 1:1), Rf 0,48 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 15 18:2:1).
Esimerkki 68 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-^'(2-naf tyyli) metyyliy-N-metyyliheksaanicimidi-hydroklo-ridi 20 Esimerkin 15 menetelmällä, haihduttamalla kuiviin yhdessä eetterin kanssa, edellisen esimerkin tuote 107,4 mg muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, liuottimen kostuttamaksi keltaiseksi jauheeksi, 102,5 mg; Rf 0,2 (CHCl^-etano- li-etikkahappo 18;2:1; kuormitettu levy esineutraloitu NH^-. 25 höyryllä).
Esimerkki 69 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-£li- (N-od-( N-t-butoksikarbo-nyyli)fenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikar-bonyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-/(2-naftyyli)-30 metyyliy-N-metyyliheksaaniamidi
Esimerkin 16 menetelmällä edellisen esimerkin otsikon tuote (96 mg, 0,229 mmol) ja valmistuksen 1 otsikon tuote (121 mg, 0,240 mmol) muutettiin raa'aksi otsikon tuotteeksi, öljyistä vaahtoa, 235 mg, joka kromatografoi-. 35 tiin 5 g:lla silikageeliä, eluoimalla 200 ml:n erillä 0,5 %, 1%, 2%, 4% ja 6% etanolia sisältäviä Cl^C^-seoksia ja 4 si 86192 tarkkailemalla tie:n avulla. Puhtaat tuotefraktiot haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta, valkeaa vaahtoa, 124 mg; tie Rf 0,6 (CHCl3-etanoli-etikkahappo 18:2:1).
5 Esimerkki 70 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(N-t-butoksikarbonyyli-fenyylialanyyli-histidyyli) amino-4-hydroksi-2-/'(2-naf ty y 1 i) me tyy 1 i7-N-me tyy 1 iheksaanicimidi Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (116 mg) sekoi-10 tettiin 1,5 ml:ssa metanolia K2C03:n kanssa (1 mg) tunnin ajan, sitten neutraloitiin kahdella tipalla etikkahappoa. Seos haihdutettiin kuiviin eetterin kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana jauheena, 101,4 mg; tie Rf 0,08 (CHCl^-etanoli-etikkahappo 18:2:1); ms ei m+, mutta 15 massapiikit 311,1, 283,0, 257,0, 213,0, 192,1, 179,1, 141,0, 111,0, 97,1 ja 57,1; 1H-nmr (DMSO-dg) delta (300 MHz), 1,30 (s, 9H, C(CH3)3); 2,46 (d, 3H, NCH3); 3,70, 4,14, 4,47 (3m, 1H kukin); 6,86, 7,62 (2s, 1H kumpikin), 7,10, 8,22 (2d, 1H kumpikin), 7,15 - 7,41 (m, aromaattinen), 7,48, 20 7,84 (2m, aromaattinen).
Esimerkki 71 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/'/li-/N-0C-metyyli-N-af-(N-t-butoksikarbonyylifenyylialanyyli)-N-(imidatso-li)-(t-butoksikarbonyyli)7histidyyli77amino-4-hydr-·’**: 25 oksi-2-(2-metyylipropyyli)-N,N-dimetyyliheksaani- ; amidi .·, ; Esimerkkien 16 ja 69 menetelmillä esimerkin 52 tuo- te (0,534 g, 0,00153 mol) ja N-ot-metyyli-N-of-(N-t-butoksi-karbonyylif enyylialanyyli)-N-(imidatsoli) - (t-butoksikarbo-30 nyyli)histidiini (0,790 g, 0,00153 mol) muutettiin täksi • ·’ kromatografoiduksi tuotteeksi, harmahtavan-valkeaa vaahtoa, 0,394 g; tie Rf 0,52 (CHCl3~etanoli-etikkahappo 18:2:1).
• · · • · * · ·. * • · 52 861 92
Esimerkki 72 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-0fc-metyyli-N-Ct- (N- (t-butoksikarbonyyli)fenyylialanyyli)histidyyli7amino- 4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-N,N-dimetyylihek-5 saaniamidi
Edellisen esimerkin tuote (195 mg) muutettiin esimerkin 70 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, puhdistettiin preparatiivista hplcrtä käyttäen RP C-18-kolonnissa, eluoi-malla 4-kertaisella kolonnitilavuudella seosta CH30H-H20 10 1:1 ja 6-kertaisella kolonnitilavuudella seosta CH3OH-H2= 3:1. Puhtaita tuotefraktioita todettiin jälkimmäisessä eluaatissa, ne otettiin talteen valkeana jauheena haihduttamalla kuiviin, 153,6 mg; tie Rf 0,09 (CHCl^-etanoli-etik-kahappo 18:2:1); ms ei m , mutta 575,3, 525,3, 511,3, 15 442,2, 416,2, 399,2, 288,1, 371,2, 343,1, 291,0, 247,1, 186,1, 165,1, 123,9, 109,0 95,0, 69,1, 59,0 ja 43,0; 1H-nmr (DMSO-d6) delta (300 MHz) 0,78 (2d, 6H, (CH3)2 rotameerit), 3,0 (3s, 3H)? 3,10, 3,76, 4,50, 4,60, 4,95, 5,10, 6,92, 7,48, 7,60 (multipletit), 7,10 - 7,35 (leveät multipletit, 20 aromaattinen).
Esimerkki 73 N-CK-/2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyy-li)amino-4-(2 -tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-metyylipropyyli) heksanoyyli7~N-£-(bentsyylioksikarbonyyli)-25 lysiini-raetyyliesteri
Esimerkin 8 otsikon tuote (0,318 g, 0,00068 mol) kyt-kettiin N-£- (bentsyylioksikarbonyyli) lysiini-metyyliesteri-*.1·: hydrokloridin (0,223 g, 0,00068 mol) kanssa yhteen esimer- : kin 9 menetelmän mukaisesti. Raaka tuote (0,261 g) puhdisti.- tettiin kromatografoimalla 30 g:11a silikageeliä käyttämäl- :Y: lä eluenttina CHCl3-CH3OH-seosta 99:1, jolloin saatiin puh distettua otsikon tuotetta, 0,147 g; ^H-nmr (CDCl3) delta : 3,8 (s, 3H, 0CH3) .
« · • 1 • at 53 86192
Esimerkki 74 N-Ct-£2R, 4S,5S-6-sykloheksyyli-5- (t-butoksikarbonyy-li)amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyy-li/-N-£- (bentsyylioksikarbonyyli)lysiini-metyylies-5 teri
Edellisen esimerkin otsikon tuotetta (0,131 g, 0,00018 mol) sekoitettiin 5 ml:n kanssa etikkahappo-I^O-seosta 4:1 16 tuntia, sitten haihdutettiin kuiviin toluee- nilaimentimen kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta valio keana kiinteänä aineena, 95 mg; 1H-nmr (CDCl-j) delta 3,8 (s, 3H, OCH3).
Esimerkki 75 N-OC-/2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli^-N-t-(bentsyylioksi-15 karbonyyli)lysiini-metyyliesteri
Edellisen esimerkin otsikon tuote (95 mg) liuotettiin 2 ml;aan trifluorietikkahappoa 0°C:ssa, pidettiin siinä tunnin ajan, haihdutettiin kuiviin tolueenilaimentimen kanssa, jäännös hajotettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia ja 20 10 ml:aan kyllästettyä vetykarbonaattiliuosta, vesikerros uutettiin 2x10 ml:11a tuoretta etyyliasetaattia ja orgaaniset kerrokset yhdistettiin ja pestiin suolaliuoksella, kuivattiin MgSO^lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saa- tiin otsikon tuotetta öljynä, 80 mg; H-nmr (CDCl^) delta .·*·. 25 3,8 (s, 3H, OCH3) .
: .*. Esimerkki 76 *·’ | N-0tf-/7“2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/N-c(r(2-bentsyyli- 3-fenyylipropionyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikar-; bonyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipro- 30 pyyli)heksanoyyli7/-N-£-/Ybentsyylioksikarbonyyli7./- * lysiini-metyyliesteri
Esimerkkien 16 ja 69 menetelmällä käyttämällä kui- • · tenkin kromatografioitaessa eluenttina CHCl3-CH3OH-seosta 99:1, edellisen esimerkin tuote (80 mg, 0,142 mmol) ja 35 valmistuksen 9 tuote (70 mg, 0,142 mol) kytkettiin yhteen, jolloin muodostui tämän otsikon tuotetta, 113 mg raakana, « · « <. « 54 861 92 kromatografoituna 80 mg; 1H-nmr (CDC13) delta 1,6 (s, 9H, C(CH3)3) .
Esimerkki 77 N-Ού-Τ'Z"2R,4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-c£- (2-bentsyyli-5 3-fenyylipropionyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2- (2-metyylipropyyli)heksanoyyliZ7-N-r-//bentsyyliok-sikarbonyyli//lysiini-metyyliesteri Edellisen esimerkin tuote (80 mg) liuotettiin 3 ml;aan etikkahappo-HjO-seosta 4:1, pidettiin siinä 24 tun-10 tia, haihdutettiin kuiviin tolueenilaimentimen kanssa, tri-turoitiin 3 ml:n kanssa eetteri-heksaaniseosta 1:1 ja suodatettiin, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana jau-1 heena, 40 mg; H-nmr (CDC13) ei näy C(CH3)3~piikkejä ja delta 3,8 (s, 3H, 0CH3).
15 Esimerkki 78 N-0i-fY"2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-QC- (2-bentsyyli- 3-fenyylipropionyyli)histidyyli/amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyli77lysiini-metyyliesteri Edellisen esimerkin tuotetta (40 mg), joka oli 20 1 ml:ssa metanolia ja 1 ml:ssa etikkahappoa, hydrattiin 40 mg:lla 10-%:ista Pd/C-katalyyttiä 1,5 tuntia. Katalyytti otettiin talteen suodattamalla ja suodos haihdutettiin öljyksi, haihdutettiin kahdesti kuiviin tolueenin kanssa, jolloin saatiin valkeaa jauhetta, jota trituroitiin eette-25 rin kanssa ja suodatettiin, jolloin saatiin tämän otsikon tuotetta, 18 mg; ^H-nmr (CD30D) delta 3,8 ppm (s, 3H).
.·. : Tämä tuote muutetaan esimerkin 30 menetelmällä vas- ..." taavaksi lysiini-amidijohdannaiseksi.
; Esimerkki 79 30 S-4-metyyli-2-(t-butoksikarbonyyliamino)pentanaali
Esimerkin 1 menetelmällä N-(t-butoksikarbonyyli)-leusiini-metyyliesteri (28,0 g, 0,114 mol) muutettiin tä-män otsikon tuotteeksi, 21,7 g (88 %) , vaalean keltaista ::: öljyä; tie Rf 0,36 (etyyliasetaatti-heksaani 2:3); 1H-nmr 35 (CDC13) delta (90 MHz) 0,97 (d, J = 6, 6H) , 1 ,1 - 1 ,8 (m, 3H) , 1,4 (s, 9H) , 3,3 - 5,0 (m, 2H) , 9,53 (s, 1H) .
II
55 8 6 1 92
Esimerkki 80
Etyyli-4RS-5S-7-metyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami- no)-4-hydroksi-2-oktynoaatti
Esimerkin 2 menetelmällä, kromatografoimalla kuiten-5 kin eluoimalla asteittain etyyliasetaatti-heksaaniseoksin 3:17 —> 1:4, edellisen esimerkin tuote (0,4 g, 0,048 mol) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, 5,45 g; tie Rf 0,40 (etyyliasetaatti-heksaani 3:7); ir (CHC13) 3438, 3340, 2233, 1711 cm"1; 1H-nmr (CDC13) delta (300 MHz) 0,97 (t, J = 10 7, 6H), 1,34 (t, J = 6, 3H), 1,48 (s, 9H), 1,48 (m, 2H), 1,70 (m, 1H), 3,3 - 3,4 (m, 1H), 3,81 - 3,96 (m, 1 H), 4,28 (q, J = 7, 2H), 4,45 - 4,58 (m, 1H), 4,68 - 4,78 (m, 1H).
Analyysi yhdisteelle C16H27N05:
Laskettu: C 61,32 H 8,68 N 4,47 15 Saatu: C 61,38 H 8,58 N 4,42.
Esimerkki 81 4S,5S-7-metyyli-5-(t-butoksikarbonyyliamino)-y-ok- tanolaktoni
Esimerkin 3 menetelmin käyttämällä kuitenkin kroma-20 tografoitaessa asteittain eluentteina etyyliasetaatti-hek-saaniseoksia 2:3 —> 1:0, edellisen esimerkin tuote muutettiin halutuksi polaarittomammaksi (4S,5S)-laktonituotteek-si, joka kiteytyi trituroitaessa heksaanin kanssa, 3,10 g (78 %); sp. 76-77°; ir (CHCl3) 3439, 1775, 1711 cm"1; 25 1H-nmr (CDC13) delta (300 MHz) 0,92 (d, J = 6, 6H) , 1,44 (s, 9H), 1,28 - 1,81 (m, 3H), 2,06 - 2,32 (m, 2H), 2,48 - 2,58 (m, 2H), 3,79 - 3,92 (leveä s, 1H), 4,42 - 4,58 (m, 2H).
Analyysi yhdisteelle C-)4H25N^4:
Laskettu: C 61,97 H 9,29 N 5,16 30 Saatu: C 62,15 H 9,26 N 5,12.
Myöskin polaarisempi (4R,5S) -laktoni eristettiin kromatografoimalla saannon ollessa paljon alhaisempi ja • · kiteytettiin trituroimalla heksaanin kanssa, 0,68 g, sp.
:T: 113,5 - 116°C.
i» » • · 56 8 6 1 92
Esimerkki 82
2 R, 4 S, 5 £> -7-metyyli-5- (t-butoksikarbonyy 1 iamino) - 2 -(2-metyy1i-2-propenyy1i) -V-oktanolaktoni Menetelmä A
5 Esimerkin 4 menetelmällä edellisen esimerkin otsi kon tuote (polaarittomampi 4S,5S-epimeeri; 0,51 g, 0,0019 mol) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi pääosana yhdessä polaarisemman 2s,4S,5S-epimeerinsä kanssa. Raa'at tuotteet (0,60 g) erotettiin kromatografoimalla silikageelikolonnis-10 sa 4,5 x 20 cm, eluoimalla litran erillä eetteri-heksaani-seoksia 1:9, 3:17, 1:5, 1:4, 3:7 ja 1:1, keräämällä 23 ml:n fraktioita. Fraktioista 51-85 saatiin puhdistettua otsikon tuotetta, 0,21 g; sp. 128-132°; Γ 730 L°y -23,7° (c = 0,529, CH^OH)
15 D J
Polaarisempaa 2S,4S,5S-epimeeriä eristettiin fraktioista 89-120, 105 mg; 1H-nmr (CDCl-j) delta 4,8 (2s, 2H, vinyyli-protonit) ja 1,75 (s, 3H, vinyyli-metyyli); osa tästä epimeeristä kiteytettiin haihduttamalla hitaasti 20
Cl^C^-heksaaniseoksesta, jolloin saatiin neulamaisia kiteitä, sp. 99-101°.
Menetelmä B
Suspensioon, jossa oli litiumheksametyylidisilatsi- dia -78°C:ssa, valmistettu lisäämällä tiputtamalla 5,1 ml 25 (8,11 mmol) 1,6-mol. n-butyylilitiumin heksaaniliuosta : 1,79 ml:aan (1,39 g, 8,49 mmol) heksametyylidisilatsaania : 3,5 ml:ssa THF 0°C:ssa, lisättiin tiputtamalla liuos, jossa - oli 1,00 g (3,69 mmol) edellisen esimerkin 4S,5S-laktonia ' 3 ml;ssa THF. Lisäyksen päättyessä seos tuli kirkkaaksi ja ^ sitä sekoitettiin vielä 15 minuuttia -78°C:ssa. Sitten li-- sättiin tiputtamalla viiden minuutin aikana liuos, jossa oli 0,548 g (4,06 mmol) vastatislattua metallyylibromidia 2 ml:ssa THF ja seoksen annettiin lämmetä hitaasti : · ·1 -40°C:seen kahden tunnin aikana ennen kuin reaktio sammu- ;·]·, tettiin 2 ml:11a kyllästettyä NH^Cl. Huoneen lämpötilaan lämmittämisen jälkeen reaktioseos jaettiin 30 ml:aan • · · * · · • · « * · • · · · « 57 8 6 1 92 10-%:ista sitruunahappoa liukeneviin osiin. Orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin 10-%:isella sitruunahapolla (3 x 30 ml) ja kyllästetyllä NaHCO^lla, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin 1,11 g:ksi raakaa cis(2S):n ja 5 trans(2R):n seosta. Nämä laktonit erotettiin 88 g:lla si-likageeliä käyttämällä eluenttina eetteri-heksaaniseoksia 1:9 —> 3:7). Polaarittomampaa trans(2S)laktonia sisältävät fraktiot /tie Rf 0,55 (eetteri-heksaani 1:1).7 yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin 0,613 g:ksi (51 %) valkeaa kiin-10 teää ainetta, sp. 132-135°C. Vähäisemmät epäpuhtaudet (tlc:n osoittamat) poistettiin trituroimalla heksaanissa, jolloin saatiin 0,562 g (47 %) analyyttisesti puhdasta otsikon 2R,4S,5S-laktonia, sp. 133-135°C. Röntgensädeanalyy- siin soveltuvia kiteitä valmistettiin haihduttamalla hi- 15 taasti heksaani-metyleenikloridiseoksesta. H-nmr (CDClg) delta (250 MHz) 0,90 (J, J = 6, 3H), 0,92 (d, J = 6, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,70 (s, 3H), 1,92 - 2,15 (m, 2H), 2,26 - 2,39 (m, 1H), 2,57 (dd, J = 15 ja 3, 1H), 2,72 - 2,88 (m, 1H), 3,77 - 3,90 (m, 1H), 4,34 (d, J = 9, 1H), 4,33 - 4,51 20 (m, 1H), 4,70 (s, 1H) , 4,81 (s, 1H); l3C-nmr (75 MHz) delta 21,8, 23,0, 24,7, 28,3, 30,0, 37,9, 39,5, 41,8, 51,7, 79,8, 80,7, 112,8, 141,9, 156,0, 179,3; IR (CHCI3) 3439, 1768, 1712, 1654 cm”1; -25,0° (c = 0,5, CH3OH) .
Analyysi yhdisteelle C^gH^NO^: 25 Laskettu: C 66,43 H 9,60 N 4,30
Saatu: C 66,47 H 9,59 N 4,27.
Yksityisen kiteen röntgensädeanalyysi osoitti, että näiden yhdisteiden rakenne ja stereokemiallinen tulkinta oli oikea.
30 Polaarisempaa cis(2S)laktonia sisältävät fraktiot (tie Rf 0,44, eetteri-heksaani 1:11) yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin 39 mg:ksi (3 %) valkeaa kiinteää ainetta, : sp. 96-98°C; 1H-nmr (CDClg) delta (250 MHz) 0,92 (d, J = 6, 6H), 1,43 (s, 9H), 1,72 (s, 3H), 2,02 - 2,14 (m, 1H), 35 2,23 - 2,36 (m, 1H), 2,60 - 2,87 (m, 2H), 3,74 - 3,89 (m, : 1H), 4,35 - 4,47 (m, 2H), 4,69 (s, 1H), 4,78 (s, 1H); 58 861 92 13nmr (75 MHz) delta 21,9, 22,0, 23,0, 24,8, 28,3, 30,7, 38,8, 38,9, 42,3, 50,1, 79,6, 80,4, 112,6, 142,0, 155,9, 178,7; IR (CHC13) 3443, 1774, 1714, 1656 cm"1; -0,6° (C = 0,5, CH3OH).
5 Analyysi yhdisteelle C^gH^NO^:
Laskettu: C 66,43 H 9,60 N 4,30 Saatu: C 66,94 H 9,45 N 4,27
Esimerkki 83 2R,4S,5S-7-metyyli-5-(t-butoksikarbonyyliamino)-2-10 (2-metyylipropyyli)-Y-oktanolaktoni
Etyyliasetaattiliuosta (10 ml), jossa oli 438 mg (1,35 mmol) edellisen esimerkin otsikon laktonia ja 44 mg 10-%:ista Pd/C-katalyyttiä, hydrattiin Parr Shaker -laitteessa 50 psi:n paineessa kaksi tuntia. Sen jälkeen kun ka-15 talyytti oli suodatettu pois ja liuotin haihdutettu, saatiin 437 mg (99 %) tämän otsikon tuotetta valkeana kiinteänä aineena, sp. 130-131°C. 1H-nmr (CDCl^) delta (300 MHz) 0,84 - 0,97 (m, 12H), 1,41 (s, 9H), 1,86 - 1,96 (m, 1H), 2,30 - 2,42 (m, 1H), 2,56 - 2,68 (m, 1H), 3,76 - 3,89 (m, 20 1 H) , 4,35 (d, J = 8, 1H) , 4,45 (leveä t, 1H) ? 13C-runr (75 Hz) delta 21,3, 21,8, 22,9, 23,0, 24,8, 26,1, 28,3, 31,0, 37,7, 40,5, 41,9, 51,7, 79,8, 80,5, 156,0, 180,3; IR (CDCL3) 3439, 1769, 1713 cm"1; [ojD -32,1° (c = 1,0, ch3oh).
25 Analyysi yhdisteelle ciqH33N®4: . Laskettu: C 66,02 H 10,16 N 4,28 ; Saatu: C 66,07 H 10,03 N 4,05.
Edellisten esimerkkien erilaisin menetelmin tämä tuote muutetaan analogisiksi reniiniä inhiboiviksi tuot-30 teiksi, joissa R on 2-metyylipropyyli mieluummin kuin ·'· sykloheksyylimetyyli.
* * m 59 86192
Esimerkki 84
Bentsyyli-3-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksi-karbonyyliamino)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyliaminq7propionaatti 5 Esimerkin 8 tuotetta (0,30 g, 0,64 mmol) ja bentsyy- li-/3~alaniinihydrokloridia (0,15 g, 0,70 mmol) yhdistettiin 5 ml:ssa Cl^Clg 0°C:ssa. Sekoittaen lisättiin N-metyy-limorfoliinia (0,154 ml, 1,41 mmol), sen jälkeen dietyyli-syaanifosfonaattia (0,109 ml, 0,70 mmol). Sen jälkeen kun 10 oli sekoitettu 16 tuntia 0°C:ssa ja tunnin ajan huoneen lämpötilassa, seos haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (20 ml), uutettiin 2 x 20 ml:lla kyllästettyä NaHC03, 1 x 20 ml:lla IVOtta ja 1 x 20 ml:lla suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin 15 0,394 g:ksi raakaa tuotetta, kromatografoitiin 45 g:11a silikageeliä seoksen CHCl^-CH^OH (99:1) ollessa eluentti-na, jolloin saatiin puhdistettua tämän otsikon tuotetta, 0,30 g; tie Rf 0,8 (CHCl3-CH3OH 19:1).
Esimerkki 85 20 Bentsyyli- 3-/2R, 4S, 5S-6-rsykloheksyyli-5- (t-butoksi- karbonyyliamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)-heksanoyy1iamino^propionaatti
Edellisen esimerkin tuotetta (300 mg) sekoitettiin 10 ml:n kanssa etikkahappo-H-O-seosta 4:1 16 tuntia, haih- • · · ^ 25 dutettiin kuiviin suurtyhjössä ja tolueenilaimentimen kans-:_· | sa, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 273 mg
Esimerkki 86 : Bentsyyli-3-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4- hydroksi-2-(2-metyy1ipropyy1i)heksanoyy1iamino7pro-30 pionaatti-hydrokloridi
Edellisen esimerkin tuotetta (273 mg) liuotettiin . . 3 ml:aan eetteriä ja käsiteltiin 3 ml:n kanssa 3,7-norm.
HCl:n dioksaaniliuosta 0°C:ssa. Seoksen oltua neljä tuntia ’·' ' 0°:ssa, reaktioseos haihdutettiin kuiviin ja trituroitiin 35 eetteri-heksaaniseoksen kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana kiinteänä aineena, 248 mg.
60 861 92
Esimerkki 87
Bentsyyli-3 -/"2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-OC- (N-(t-butoksikarbonyyli)fenyylialanyyli)-N-(imidatso-li)-(t-butoksikarbonyyli)histidyyli^amino-4-hydrok-5 si-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyliaminq7propionaatti Käyttämällä kromatografoinnissa eluenttina CHClj-CH^OH-seosta 39:1, esimerkin 84 menetelmää käytettiin kytkemällä toisiinsa edellisen esimerkin tuote (248 mg, 0,589 mmol) ja valmistuksen 1 tuote (357 mg, 0,707 mmol) N-metyy-10 limorfoliinin (0,155 ml, 1,413 mmol) ja dietyyli-syaanifos-fonaatin (0,11 ml, 0,707 mmol) läsnä ollessa, jolloin näin saatiin valmistetuksi puhdistettua otsikon tuotetta, 0,225 g; tie 0,5 (CHCl-j-CH-jOH 9:1).
Esimerkki 88 15 Bentsyyli-3-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/N-(t-butok sikarbonyyli) fenyylialanyylihistidyyli7amino-4-hydr-oksi-2-(2-metyy1ipropyy1i)heksanoyy1iaminq7propio-naatti
Edellisen esimerkin tuote (342 mg) muutettiin esi-20 merkin 85 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi, 305 mg; tie Rf 0,2 (CHC13-CH30H 9:1).
Esimerkki 89 3-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/K-(t-butoksikarbo-nyy1i)fenyy1ialanyy1ihi stidyy1i/amino-4-hydrok s i-2-25 (2-metyylipropyyli) heksanoyyliamino_7propionihappo Käyttämällä liuottimena 10 ml puhdasta metanolia edellisen esimerkin tuote (0,305 g) hydrattiin esimerkin 13 mukaisesti. Katalyytin talteenoton jälkeen suodos haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin tämän otsikon tuotetta, 30 0,234 g; ^H-nmr (CDC13) delta 1,5 ppm (s, 9H).
Esimerkki 90 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-- no)-4-hydroksi-2-(2-metyyli-2-propenyyli)-N-metyy- ’*. * liheksaaniamidi 35 Esimerkin 4 trans (2R) otsikon tuote (0,20 g, 0,55 .*··. mmol) liuotettiin 10 ml:aan CH3OH, jäähdytettiin 0°C:seen « · · li ei 86192 ja liuos kyllästettiin CH^NI^lla. Sen jälkeen kun seosta oli pidetty 0°:ssa 60 tuntia, se haihdutettiin kuiviin ja kiinteää jäännöstä trituroitiin heksaanin kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 0,220 g.
5 Esimerkki 91 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(2-me tyy1i-2-propenyy1i)-N-me tyy1ihek saan iamidi Edellisen esimerkin tuotetta (0,220 g) sekoitettiin 2 ml:n kanssa trifluorietikkahappoa -11°C:ssa 0,5 tuntia.
10 Reaktioseos haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin 5 ml:aan etyyliasetaattia, pestiin 5 ml:11a kyllästettyä NaHCOg ja 5 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 0,169 g.
15 Esimerkki 92 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-Of- (N- (t-butoksikarbo-nyylifenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)-(t-butoksikar-bonyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(2-metyyli-2-propenyyli)propenyyli-N-metyyliheksaaniamidi 20 Edellisen esimerkin tuote (169 mg, 0,57 mmol) ja valmistuksen 1 tuote (288 mg, 0,57 mmol) yhdistettiin 15 ml:ssa CI^Clj 1-hydroksibentsotriatsolin (77 mg, 0,57 mmol) ja disykloheksyylikarbodi-imidin (118 mg, 0,57 mmol) kanssa 0°:ssa. 18 tuntia ympäristön lämpötilassa sekoitta-* / 25 misen jälkeen disykloheksyyliurea otettiin talteen suodat- : : : tamalla, suodos haihdutettiin kuiviin ja muodostunut jään- nös liuotettiin 10 mlsaan etyyliasetaattia, pestiin 1 x 5 ml:11a kyllästettyä NaHCO^, 1x5 ml:11a 5-%:ista HCl ja 1x5 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin (MgSO^), haihdutet-• 30 tiin kuiviin (0,329 g) ja kromatografoitiin 35 g:lla sili- kageeliä käyttämällä eluenttina seosta CHCl^-CH-jOH 40:1, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta 0,129 g.
• · 62 861 92
Esimerkki 93 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/N-(t-butoksikarbonyyli)-fenyylialanyylihistidyyli/amino-4-hydroksi-2-(2-ine-tyyli-2-propenyyli)-N-metyyliheksaaniamidi 5 Esimerkin 85 menetelmällä trituroimalla lopuksi kiin teää tuotetta eetterin kanssa, edellisen esimerkin tuote (0,129 g) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, 75 mg; ^H-nmr (CDCl-j) delta 1,5 ppm (s, 9H) .
Esimerkki 94 10 Etyyli-4-£2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikar- bonyyliamino)-4-(2-tetrahydropyranyylioksi)-2-(2-metyylipropyyliheksanoyyliamino/butyraatti Esimerkin 84 menetelmää käytettiin kromatografoi-matta esimerkin 8 tuotteen (300 mg, 0,64 mmol) kytkemiseen 15 etyyli-4-aminobutyraattihydrokloridin (118 mg, 0,70 mmol) kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 385 mg.
Esimerkki 95 E t y y 1 i - 4 - /2 R, 4 S, 5 S - 6 - sy k lohek syy 1 i - 5 - (t -bu tok s ikar -bonyyliamino)-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)hek-20 sanoyyliamino/butyraatti
Edellisen esimerkin tuotetta (0,385 g) käsiteltiin esimerkin 85 mukaisesti seoksen etikkahappo-I^O 4:1 kanssa, raaka, laktonipitoinen tuote (330 mg) eristettiin kylmä-kuivaamalla ja otsikon tuote eristettiin kromatografoimal-25 la silikageelillä, eluoimalla laktoni eetteri-heksaaniseok-: : sella 1:1 ja otsikon tuote seoksella CHCl^-CH^OH 19:1, 161 mg; tie Rf 0,6 (CHC13-CH30H 9:1).
Esimerkki 96 .·. Etyyli-4-/2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydr- 30 oksi-2-(2-metyylipropyyli) heksanoyyliamino7butyraat- ti-hydrokloridi . . Edellisen esimerkin tuote (0,161 g) liuotettiin 5 ml:aan eetteriä ja jäähdytettiin 0°C:seen. Lisättiin 7,4-norm. HCl:n dioksaaniliuosta (3 ml) ja seosta sekoi-35 tettiin 0°C:ssa 3,5 tuntia, minkä jälkeen haihdutettiin i! 63 861 92 kuiviin ja kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 0,141 g; tie Rf 0,1 (CHC13-CH30H 9:1). Esimerkki 97
Etyyli-4-/i2R,4S ,5S-6-sykloheksyyli-5-/N-«- (N- (t-5 butoksikarbonyyli)fenyylialanyyli)-N-(imidatsoli)- (t-butoksikarbonyyli)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(2-metyylipropyyli)heksanoyyliamino/butyraatti Esimerkin 87 menetelmällä edellisen esimerkin tuote (140 mg, 0,323 mmol) ja valmistuksen 1 tuote (179 mg, 0,355 10 mmol) kytkettiin yhteen, eristettiin ja puhdistettiin, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 136 mg. Tämä tuote muutettiin esimerkin 88 menetelmällä etyyli-4-/2R,4S,5S-6-syklo-heksyyli-5-/to-(t-butoksikarbonyyli)fenyylialanyylihistidyy-1i7amino-4-hydroksi-2-(2-metyy1ipropyy1i)heksanoyy1iaminq7 -15 butyraatiksi.
Esimerkki 98 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-2-(p-klooribentsyyli) -y-heksanolaktoni Esimerkin 39 menetelmällä polaarittomampi esimerkin 20 3 4S,5S-tuote (2,5 g, 0,008 mol) ja 4-klooribentsyylibro- midi (1,81 g, 0,0088 mol) muutettiin tämän otsikon kroma-tografoiduksi tuotteeksi, väritöntä hartsia, 1,91 g; tie Rf 0,6 (heksaani-etyyliasetaatti 3:1) 0,7 (heksaani-etyy-liasetaattiseos 2:1, jossa 1 % etikkahappoa).
... 25 Esimerkki 99 ·.: 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami- no) -2- (p-metyylibentsyyli) -y-heksanolaktoni Käyttämällä kromatografoinnissa eluenttina seosta ; heksaani-etyyliasetaatti 5:1, esimerkin 39 menetelmää käy- 30 tettiin esimerkin 3 4S,5S-tuotteen (1,5 g, 0,0048 mol) ja QC-bromi-p-ksyleenin (0,98 g, 0,0053 mol) muuttamiseen tämän . . otsikon tuotteeksi, valkeaa hartsia, 0,985 g; tie Rf 0,55 *..1 (heksaani-etyyliasetaatti 2:1), 0,75 (heksaani-etyyliase taatti 1:1).
• · · * 1 · « · 64 86192
Esimerkki 100 2R, 4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-2-(p-metoksibentsyyli)-y-heksanolaktoni Esimerkin 3 4S,5S-tuote (3,79 g, 0,0118 mol) ja 5 p-metoksibentsyylibromidi (2,61 g, 0,130 mol) muutettiin esimerkin 99 menetelmällä kromatografoiduksi otsikon tuotteeksi, valkeaa hartsia, 1,06 g; tie Rf 0,4 (heksaani-etyy-liasetaatti 3:1).
Esimerkki 101 10 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami- no)-2-(3,4-diklooribentsyyli)-y-heksanolaktoni Esimerkin 39 menetelmällä käyttämällä kromatografoin-nissa eluenttina seosta heksaani-etyyliasetaatti 3:1, esimerkin 3 4S,5S-tuote (2,0 g, 0,0064 mol) ja 3,5-di- 15 klooribentsyylibromidi (1,68 g, 0,007 mol) muutettiin otsikon tuotteeksi, kirkasta hartsia, 1,36 g; tie Rf 0,22 (heksaani-etyyliasetaatti 3:1), 0,9 (heksaani-etyyliasetaatti 1:2, jossa 1 % etikkahappoa).
Esimerkki 102 20 2R,4S,5S-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliamino)- 2-(o-klooribentsyyli)-y-heksanolaktoni Esimerkin 39 menetelmällä käyttämällä kromatogra-foinnissa eluenttina seosta heksaani-etyyliasetaatti 6:1, esimerkin 3 4S,5S-tuote (2,0 g, 0,0064 mol) ja o-kloori- 25 bentsyylikloridi (1,44 g, 0,007 mol) muutettiin otsikon ·· tuotteeksi, kirkasta hartsia, 1,51 g; tie Rf 0,75 (heksaa- ·.: ni-etyyliasetaatti 3:1), 0,65 (heksaani-etyyliasetaatti 2:1, jossa 1 % etikkahappoa).
Esimerkki 103 30 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami no) -2-(m-klooribentsyyli)-Y-heksanolaktoni . . Edellisen esimerkin menetelmällä esimerkin 3 4S,5S- tuote (2,0 g, 0,0064 mol) ja m-klooribentsyylikloridi (0,92 ml, 1,44 g, 0,007 mol) muutettiin kromatografoiduksi V' : 35 otsikon tuotteeksi, väritöntä hartsia, 2,11 g, tie Rf 0,4 • * · « · « «M • * • * * * · 65 861 92 (heksaani-etyyliasetaatti 3:1), 0,75 (heksaani-etyyliasetaatti 2:1, jossa 1 % etikkahappoa).
Esimerkki 104 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-5 no)-4-hydroksi-2-(p-klooribentsyyli)-N-metyylihek- saaniamidi Käyttämällä kahden tunnin reaktioaikaa ympäristön lämpötilassa, trituroimatta heksaanin kanssa, esimerkin 90 menetelmää käytettiin esimerkin 98 tuotteen (1,0 g) muut-10 tamiseksi tämän otsikon tuotteeksi, valkeaa kiinteää ainetta, 1,07 g; tie Rf 0,75 (heksaani-etyyliasetaatti 2:1, jossa 1 % etikkahappoa) 0,6 (CI^Clj :C2H^OH-etikkahappo 18:2:1).
Esimerkki 105 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyli)-15 4-hydroksi-2-(p-metyylibentsyyli)-N-metyyliheksaani- amidi Käyttämällä edellisen esimerkin menetelmää kroma-tografoimalla tuote silikageelillä seoksen heksaani-etyyliasetaatti 1:1 ollessa eluenttina, esimerkin 99 tuote 20 (0,885 g) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, 0,518 g; tie Rf 0,1 (etyyliasetaatti-heksaani 1:1), 0,55 (CHCl^-C2H^OH-etikkahappo 18:2:1).
Esimerkki 106 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-25 no)-4-hydroksi-2-(p-metoksibentsyyli)-N-metyylihek- : : saaniamidi
Esimerkin 4 menetelmällä esimerkin 100 tuote (1,06 g) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, harmahtavan valkeaa . .·. kiinteää ainetta, 1,07 g; tie Rf 0,2 (etyyliasetaatti-hek- 30 saani 2:1, jossa 1 % etikkahappoa), 0,8 (CH2CI2-C2HJJOH 9:1, jossa 1 % väkevää NH^OH).
66 861 92
Esimerkki 107 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-4-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-hydroksi-2-(3,4-diklooribentsyyli)-N-metyyli-heksaaniamidi 5 Esimerkin 104 menetelmällä esimerkin 101 tuote (1,36 g) muutettiin täksi tuotteeksi, valkeaa hartsia, 1,39 g; tie Rf 0,25 (heksaani-etyyliasetaatti 1:1, jossa 1 % etikkahappoa), 0,55 (CH2C12-C2H50H 9:1, jossa 1 % väkevää NH^OH).
10 Esimerkki 108 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyliami-no)-4-hydroksi-2-(o-klooribentsyyli)-N-metyylihek- saaniamidi Käyttämällä 16 tunnin reaktioaikaa ympäristön läm-15 pötilassa esimerkin 104 menetelmää käytettiin esimerkin 102 tuotteen (1,51 g) muuttamiseksi täksi tuotteeksi, valkeaksi hartsiksi, 1,56 g; tie Rf 0,09 (heksaani-etyyliasetaatti 2:1, jossa 1 % etikkahappoa).
Esimerkki 109 20 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-- (t-butoksikarbonyyliarai- no)-4-hydroksi-2-(m-klooribentsyyli)-N-metyylihek-saaniamidi
Esimerkin 104 menetelmällä esimerkin 103 tuote (2,11 g) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, valkeaa hart-25 siä, 1,68 g; tie Rf 0,25 (heksaani-etyyliasetaatti 2:1, jossa 1 % etikkahappoa), 0,5 (CH2Cl2-C2H,-OH 9:1, jossa 1 % etikkahappoa).
Esimerkki 110 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli~5-amino-4-hydroksi-2-(jazz. 30 klooribentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydroklo- ridi . Esimerkin 104 tuotetta (1,07 g) sekoitettiin N2:n suojaamana 10 ml:ssa 3,78-norm. HCl:n dioksaaniliuosta 10 minuutin ajan, haihdutettiin kuiviin. Jäännös yhdistet- m » » :‘ * 35 tiin kolme kertaa 10 ml:n kanssa eetteriä ja haihdutettiin uudelleen kuiviin, jolloin saatiin otsikon tuotetta 67 861 92 kiinteänä aineena, 1,11 g; tie Rf 0,18 (CH2Cl2-C2H5OH-etikkahappo 18:2:1).
Esimerkki 111 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(p-5 metyylibentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydroklo- ridi
Edellisen esimerkin menetelmällä esimerkin 105 tuote (0,454 g) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, 0,4 g; tie Rf 0,1 (CHCl3-C2H5OH-etikkahappo 18:2:1).
10 Esimerkki 112 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(£-metoksibentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydroklo-ridi
Esimerkin 106 tuote (1,07 g) muutettiin esimerkin 15 110 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi kvantitatiivisin saannoin (saannon paino 1,14 g, 0,22 g suurempi kuin teoreettisesti); tie Rf 0,2 (CH2C12-C2H50H 9:1, jossa 1 % väkevää HN40H).
Esimerkki 113 20 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(3,4- diklooribentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydroklo-ridi
Esimerkin 107 tuote (1,38 g) muutettiin esimerkin 110 menetelmällä tämän otsikon tuotteeksi kvantitatiivisin • · · ../· 25 saannoin (paino 1,52 g, 0,30 g suurempi kuin teoreettises- ti); tie Rf 0,25 (CH2C12-C2H50H 9:1, jossa 1 % väkevää NH4OH) .
: · : Esimerkki 114 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(o- • ·. 30 klooribentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydrokloridi
Esimerkin 110 menetelmällä esimerkin 108 tuote . . (1,56 g) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, 1,4 g; tie Rf ; ’ 0,1 (CH2Cl2-C2H3OH 9:1, jossa 1 % etikkahappoa).
• · · « « • · • · 68 861 92
Esimerkki 115 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-amino-4-hydroksi-2-(m-klooribentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi-hydrokloridi Esimerkin 110 menetelmällä esimerkin 109 tuote 5 (1,67 g) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi kvantitatiivi sin saannoin (0,23 g teoreettista enemmän); tie Rf 0,1 (CH2CI2-C2H5OH 9:1, jossa 1 % etikkahappoa).
Esimerkki 116 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/N-(t-butoksikarbonyyli)-10 fenyylialanyyli-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyy li) histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(p-klooribentsyyli)-N-metyy1ihek saan iamidi
Esimerkin 110 tuotetta (1,11 g, 0,0023 mol) sekoitettiin typen suojaamana 8 ml:n kanssa CI^C^. Lisättiin peräk-15 käin trietyyliamiinia (0,42 ml, 0,0030 mol), valmistuksen 1 tuotetta (1,20 g, 0,0024 mol), 1-hydroksibentsotriatsolia (0,583 g, 0,0038 mol) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,495 g, 0,0024 mol) ja seosta sekoitettiin 24 tuntia. Reaktioseos laimennettiin 25 ml:11a CI^Clj, pestiin 2 x 20 12 ml:11a 1-norm. NaOH ja 1 x 12 ml:11a kyllästettyä
NaCl, kuivattiin (Na2S0^) ja haihdutettiin kuiviin vaahdoksi, 1,31 g. Jälkimmäinen kromatografoitiin silikageelil-lä eluoimalla seoksella CH2Cl2“C2H^OH 19:1, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta, 0,70 g; tie Rf 0,65 25 (CH2Cl2-C2H^OH-etikkahappo 18:2:1).
: : Esimerkki 117 2R, 4S, 5S-6-sykloheksyyli-5-/N-(t-butoksikarbonyyli) -fenyylialanyyli-N-imidatsoli) - (t-butoksikarbonyyli) --·. histidyyli7amino-4-hydroksi-2- (£-metyylibentsyyli) - 30 N-metyyliheksaaniamidi
Yhdistämällä reagenssit 0°C:ssa, antamalla sitten . . reaktioseoksen lämmetä ja käyttämällä kromatografointiin *; 1 eluenttina seosta CH2Cl2~C2HgOH 5:1, edellisen esimerkin menetelmää käytettiin muuttamaan esimerkin 111 tuote (0,4 g) 35 tämän otsikon tuotteeksi, 0,60 g; tie Rf 0,9 (CI^C^” C2HgOH-etikkahappo 18:2:1).
» · • 1 • · i: · · 69 861 92
Esimerkki 118 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/N- (t-butoksikarbonyyli) -fenyylialanyyli-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyy-li)histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(£-metoksibentsyy-5 li)-N-metyyliheksaaniamidi
Edellisen esimerkin menetelmällä käyttämällä kroma-tografOltaessa eluenttina seosta CI^Cl2-02^011 20:1, esimerkin 112 tuote (0,92 g, korjattu puhtaaksi) muutettiin tämän otsikon tuotteeksi, valkeaa kiinteää ainetta, 0,73 g; 10 tie Rf 0,7 (CH2C12-C2H50H 9:1), 0,85 (d^C^-CH-jOH 9:1, jossa 1 % väkevää NH^OH).
Esimerkki 119 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/N-(t-butoksikarbonyyli)-fenyylialanyyli-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyy-15 li)histidyyliyamino-4-hydroksi-2-(3,4-diklooribent- syyli)-N-metyyliheksaaniamidi
Esimerkin 117 menetelmällä käyttämällä kromatogra-foitaessa eluenttina CH2Cl2-C2H^OH-seosta 24:1, esimerkin 113 tuote (1,22 g, korjattu puhtaaksi) muutettiin täksi 20 tuotteeksi, 1,08 g; tie Rf 0,75 (CHCI2-C2H5OH 9:1).
Esimerkki 120 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/fr-(t-butoksikarbonyyli)-fenyylialanyyli-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyyli) histidyyli/amino-4-hydroksi-2-(o-klooribentsyyli)-·'**: 25 N-metyyliheksaaniamidi : Esimerkin 119 menetelmällä esimerkin 114 tuote (1,33 g, korjattu puhtaaksi) muutettiin kromatografoiduksi otsikon tuotteeksi, valkeaksi kiinteäksi aineeksi, 1,02 g; tie Rf 0,55 (Cl^C^-etyyliasetaattiseos 9:1, jossa 1 % - - 30 etikkahappoa).
70 8 6 1 92
Esimerkki 121 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-/fr-(t-butoksikarbonyyli)-fenyylialanyyli-N-(imidatsolyyli)-(t-butoksikarbonyyli) histidyyli7amino-4-hydroksi-2-(m-klooribent-5 syyli)-N-metyyliheksaaniamidi
Esimerkin 119 menetelmällä esimerkin 115 tuote (1,45 g, korjattu puhtaaksi), muutettiin kromatografoiduk-si otsikon tuotteeksi, valkeaksi hartsiksi, 1,68 g; tie Rf 0,62 (CH2Cl2-C2Hj-OH 9:1, jossa 1 % etikkahappoa) .
10 Esimerkki 122 2R,4s,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylife-nyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(£-klooribentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi Esimerkin 116 tuote (0,25 g) yhdistettiin 2 ml:n 15 kanssa jääetikkahappoa ja 0,5 ml:n kanssa H20:ta ja sekoitettiin N2:n suojaamana kahdeksan tuntia, sitten haihdutettiin kuiviin ja jäännöstä trituroitiin 3 x 0,5 ml:n kanssa tolueenia, sitten lietettiin 3x5 ml:aan eetteriä, haihduttaen kullakin kerralla uudelleen kuiviin, jolloin 20 saatiin 83 mg raakaa tuotetta. Jälkimmäinen puhdistettiin 5 g:11a sidottu faasi-oktadekyylisilaani (C^g)-käänteis-faasitäytettä 10 mm:n i.d.-flash-kolonnissa seoksen CH^OH-I^O 1:1 ollessa alussa liikkuva faasi. Raaka tuote liuotettiin 2 ml:aan CH.jOH-H20-seosta 1:1, suodatettiin ja 25 pantiin kolonniin. Kolonni eluoitiin neljällä kolonni- - · tilavuudella seosta CH^OH-I^O 1:1, kahdella kolonnitila- : vuudella seosta CH-j0H-H20 6:4, kahdella kolonnitilavuudel- ' la seosta CH^OH-I^O 7:3, kahdella kolonnitilavuudella seos- ta CH^OH-I^O 8:2 polaarisempien epäpuhtauksien poistamisek-30 si. Otsikon tuote eluoitui kahdella kolonnitilavuudella seosta CH^OH-^O 9:1, otettiin talteen valkeana kiinteänä . . aineena, 30 mg; ^H-nmr (300 MHz, DMSO-dg) delta (ppm) 1,28 (s, 9H, t-butyyli) ja 6,99 (d, J = 7 Hz, 1H, imidatsoli- - ’ vety) .
• · · • * >« « 71 86192
Esimerkki 123 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylife-nyylialanyyli-histidyyli)amino-4-hydroksi-2-(g-metyyli-bentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi 5 Edellisen esimerkin menetelmällä, tuotteen eluoi- tuessa kuitenkin hiukan myöhemmin, 2-kolonnitilavuudessa 100-%:ista CH^OHrta, esimerkin 117 tuote (100 mg) muutettiin puhdistetuksi otsikon tuotteeksi, valkeaa kiinteää ainetta, 41 mg; ^H-nmr (300 MHz, DMSO-dg) delta (ppm) 1,25 10 (s, 9H, t-butyyli), 6,83 (d, J = 12 Hz, 1H, imidatsoli- vety).
Esimerkki 124 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylifenyy-lialanyylihistidyyli)amino-4-hydroksi-2-(g-metoksi-15 bentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi
Edellisen esimerkin menetelmällä esimerkin 118 tuote (0,362 g) muutettiin tämän otsikon puhdistetuksi tuotteeksi, valkeaa kiinteää ainetta, 0,126 g; tie Rf 0,55 (CH2C12-CH30H 9:1, jossa 1 % väkevää NH^OH) ; 1H-nmr (300 20 MHz, DMSO-dg) delta (ppm) 1,27 (s, 9H, t-butyyli), 2,42 (d, J = 4 Hz, 3H, NCH3) ja 3,66 (s, 3H, OCH3).
Esimerkki 125 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyli-fenyylialanyylihistidyyli)amino-4-hydroksi-2-(3,4-25 diklooribentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi : Esimerkin 122 menetelmällä kromatografoimatta esi merkin 119 tuote (1,08 g) muutettiin tämän otsikon tuot- teeksi, valkeaa kiinteää ainetta, 0,90 g; H-nmr (300 MHz, DMSO-dg) delta (ppm) 1,29 (s, 9H, t-butyyli), 2,47 (d, J = 30 5 Hz, 3H, NCH3).
•. Esimerkki 126 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyyli-fenyylialanyylihistidyyli)amino-4-hydroksi-2-(o-' '· klooribentsyyli)-N-metyyliheksaaniamidi .1 1 35 Edellisen esimerkin menetelmällä esimerkin 120 tuo- te (1,01 g) muutettiin raa'aksi otsikon tuotteeksi · * 1 · • · 72 861 92 (0,48 g), puhdistettiin kromatografoimalla silikageelillä käyttämällä eluenttina seosta CI^C^-CH^OH 9:1, 0,22 g; tie Rf 0,5 (C^C^-CH-^OH 9:1, jossa 1 % väkevää NH^OH) ; ^H-nmr (300 MHz, DMSO-dg) delta (ppm) 1,27 (s, 9H, t-butyy-5 li), 2,45 (d, J = 4 Hz, 3H, NCH3).
Esimerkki 127 2R,4S,5S-6-sykloheksyyli-5-(t-butoksikarbonyylifenyy-lialanyylihistidyyli)amino-4-hydroksi-2-(m-kloori-bentsyyliheksaaniamidi 10 Edellisen esimerkin menetelmällä esimerkin 121 tuote (0,94 g) muutettiin kromatografoiduksi otsikon tuotteeksi, valkeaa kiinteää ainetta, 0,58 g; tie Rf 0,15 (CHjC^-C2H5OH 9:1, jossa 1 % etikkahappoa); ^H-nmr (300 MHz, DMSO-dg) delta (ppm) 1,27 (s, 9H, t-butyyli), 2,45 (d, 15 J = 5 Hz, 3H, NCH3).
Valmistus 1 N-0f-/N-t-butoksikarbonyylifenyylialanyyli7-N-(imidatsoli) - (t--butoksikarbonyyli) histidiini Liete, jossa oli 36,4 g L-histidiini--metyyliesteri-20 dihydrokloridia dikloorimetaanissa (1 000 ml), jäähdytettiin 5°:seen ja sitä käsiteltiin 52 ml:n kanssa trietyyli-amiinia. 10 minuutin kuluttua lisättiin 40 g t-butoksikar-bonyyli-fenyylialaniinia ja sen jälkeen 1-hydroksibentso-triatsolia (30,6 g) ja edelleen viiden minuutin kuluttua, 25 disykloheksyylikarbodi-imidiä (30,8 g). Sitten seos suodatettiin ja pestiin dikloorimetaanilla. Yhdistetyt suodos ja pesuneste haihdutettiin kuiviin ja jäännös liuotettiin 1 000 ml:aan etyyliasetaattia. 10 minuutin sekoittamisen jälkeen seos suodatettiin ja suodos pestiin 1-norm. NaOHtlla 30 (3 x 150 ml) ja suolaliuoksella, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 45,9 g välituotetta t-butoksikarbonyyli-fenyylialanyyli-histidiini-metyylies-teriä värittömänä kiinteänä aineena. Enempää puhdistamatta 40 g tätä kiinteää välituotetta liuotettiin 600 ml:aan 35 metanolia ja lisättiin 200 ml vettä. Seos jäähdytettiin 0°:seen ja sitä käsiteltiin 40 g:n kanssa kuivaa kalium- 73 861 92 karbonaattia, sekoitettiin 15-20°:ssa 2,5 tuntia, sitten 28°:ssa 1,5 tuntia, jäähdytettiin 10°:seen ja pH säädettiin 12-norm. HCl:llä arvoon 4,2. Saatu liuos konsentroitiin noin 250 mlrksi ja lisättiin 70 ml vettä, sen jälkeen 5 660 ml dioksaania. 0°:ssa pH säädettiin arvoon 13,5 ja li sättiin 29 ml di-(t-butyyli)dikarbonaattia. 30 minuutin kuluttua (jona aikana lämpötila nostettiin 20°:seen) pH oli pudonnut arvoon 9,5 ja lisättiin 10 ml di-(t-butyyli)-dikarbonaattia. Edelleen tunnin kuluttua pH oli 8,0 ja 10 reaktio oli päättynyt. Seos konsentroitiin dioksaanin poistamiseksi, lisättiin 300 ml vettä ja seos pestiin kahdesti eetterillä. Lisättiin etyyliasetaattia (500 ml) ja 10°:ssa pH säädettiin arvoon 1,2 väkevällä HCl:llä. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros pestiin kahdesti etyyliase-15 taatilla. Etyyliasetaattikerrokset yhdistettiin, pestiin vedellä, suolaliuoksella, kuivattiin Na2SO^:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin usean eetterin kanssa suoritetun yhteishaihdutuksen ja 25°C;ssa vakiopainoon kuivaamisen jälkeen saatiin väritöntä vaahtoa, paino 44 g. HPLC 60/40 20 MeCN/Ph 2,1 0,1-mol. fosfaattia Zorbax'lla 25 cm x 4,6 mm 214 nm, 1,5 ml/min, retentioaika 3,23 minuuttia (94 % ko-konaisabsorbanssista 10 minuuttiin); ^H-nmr (CDCl^) ppm: 1,40 (s, 9H, C(CH3)3), 1,60 (s, 9H, C(CH3)3), 3,0 - 3,4 (m, 4H, CH2), 4,40 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 5,32 (m, 1H), 25 6,89 (br, 1H), 8,13 (s, 1H), 7,1 - 7,4 (m, 7H).
Valmistus 2 : : : 1,5-di(bentsyylioksikarbonyyliamino)pentaani N2;n suo3aamana 1 > 5-diaminopentaani (2,86 ml, 2,5 g, 0,0245 mol) liuotettiin 50 ml:aan CH2C12 ja jäähdytettiin . 30 0°:seen. Sekoittaen lisättiin tiputtamalla bent syy lioksi- • karbonyylikloridia (3,67 ml, 4,17 g, 0,0245 mol), pitämäl lä lämpötila lähellä 0°. Seos lämmitettiin huoneen lämpötilaan, pestiin 2 x 50 ml:11a 5-%:ista HC1, 1 x 50 ml:lla · kyllästettyä NaHC03 ja 1 x 50 ml:11a suolaliuosta, kuivat- 35 tiin (MgSO.) ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin ot- ..*· 4 1 : · : sikon tuotetta valkeana kiinteänä aineena, 4 g; H-nmr 74 861 92 (CDCl^) delta 5f2 ppm (s, 4H, kaksi bentsyyli-CI^-ryh-mää). Saanto lisääntyy suuresti käytettäessä kaksi moole-ekvivalenttia happokloridia.
Valmistus 3 5 5-(bentsyylioksikarbonyyliamino)pentyyliamiini- hydrobromidi
Typen suojaamana edellisen valmistuksen tuote (4,0 g, 0,0108 mol) lietettiin Ct^Clj^en (11 ml) ja eetteriin (5,4 ml). Sekoittaen lisättiin 30-%:ista HBr:n etik-10 kahappoliuosta (2,7 ml). Muodostuneesta liuoksesta alkoi kahden minuutin aikana saostua kiinteää ainetta. 20 minuutin kuluttua lisättiin 5 ml eetteriä ja otsikon tuote otettiin talteen suodattamalla eetterillä pesten, 2,7 g; "*H-nmr (CD^OD) delta 5,2 ppm (s, 2H, bentsyyli-Cl^)-15 Valmistus 4 N-o(-metyylihistidiini-metyyliesteri-dihydrokloridi N-0(-metyylihistidiini (Reinhold ym. , J-Med. Chem.
11, s. 258, 1968, 4,0 g, 0,0195 mol) lietettiin 40 ml:aan metanolia 0°:ssa, suihkutettiin kuivaa HCl kahdeksan mi-20 nuutin ajan (liukeneminen tapahtui kolmen minuutin kuluttua) , lämmitettiin kiehuttaen neljä tuntia ja haihdutettiin kuiviin yhdessä eetterin kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta valkeana jauheena, 4,94 g.
Valmistus 5 25 N-Qt-metyyli-N-Qi-/N- (t-butoksikarbonyyli) fenyyliala- nyvli7histidiini-metyyliesteri
Edellisen valmistuksen tuote (1,6 g, 0,0087 mol), N-(t-butoksikarbonyyli)fenyylialaniini (2,55 g, 0,096 mol), 1-hydroksibentsotriatsoli (2,44 g, 0,016 mol) ja disyklo-30 heksyylikarbodi-imidi (1,98 g, 0,0096 mol) yhdistettiin 10 ml:ssa CI^C^ 0°:ssa neljän tunnin ajaksi. Reaktioseos laimennettiin 10 ml:11a tuoretta CHjC^# suodatettiin, jolloin saatiin ensimmäinen erä kiinteää ainetta, suodos haihdutettiin kuiviin, jäännös liuotettiin 15 ml:aan etyyli-35 asetaattia, suodatettiin jälleen, jolloin saatiin toinen : erä kiinteää ainetta, toinen suodos pestiin 2 x 7,5 ml :11a 75 86192 H20:ta, kolmas erä kiinteää ainetta poistettiin suodattamalla 0°;seen jäähdyttämisen jälkeen ja kolmas suodos haihdutettiin kuiviin ja jäännöstä trituroitiin etyyliasetaatin kanssa neljännen kiinteän aineen erän muodostamiseksi.
5 Kiinteiden aineiden ensimmäinen ja toinen erä (DCU) hävitettiin. Kiinteiden aineiden kolmas ja neljäs erä, jotka sisälsivät hyvin vähän DCU:ta, yhdistettiin, jolloin saatiin 2,47 g otsikon tuotetta.
Valmistus 6 1 0 N-OC-metyyli-N-Oc-/lii-t-butoksikarbonyyli) f enyyliala- nyyli_7histidiini
Edellisen valmistuksen tuotetta (2,32 g, 0,054 mol) hydrolysoitiin 70 ml:ssa asetonia ja 20 mltssa IVOtta 3,5 tuntia 1,1-norm. NaOH:lla (5,4 ml, 1,1 ekviv.). Asetoni 15 haihdutettiin pois ja vesipitoisen jäännöksen pH säädettiin arvoon 5,8 laimealla HCl:llä. Muodostunutta otsikon tuotteen liuosta käytettiin eristämättä seuraavassa vaiheessa.
Valmistus 7 20 N-ot-metyyli-N-aC- (N-t-butoksikarbonyyli) fenyyliala- nyyli-N-(imidatsoli)-(t-butoksikarbonyyli)histidiini Koko edellisen valmistuksen tuotteen liuos laimennettiin 30 ml:ksi H20:lla ja laimennettiin edelleen 30 ml:11a dioksaania ja jäähdytettiin 0°:seen. pH säädet-25 tiin arvoon 11,0 laimealla NaOH:lla ja lisättiin di(t-bu-‘ _ toksikarbonyyli) anhydridiä /"(t-boc) 20; 1,61 ml, 0,007 mol, • noin 1,3 ekvivalenttia^ ja lämpötila pidettiin 0°:ssa tun- nin ajan pidettäessä pH välillä 8,5 - 11,0 lisäämällä lai-meaa NaOH. Haude poistettiin, lisättiin vielä 0,5 ml an-30 hydridiä ja pH stabiloitui nopeasti arvoon 10,5. Dioksaani haihdutettiin pois ja vesipitoinen jäännös pestiin 2 x 30 ml:11a etyyliasetaattia. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin takaisin 1 x 30 ml:11a H20:ta ja pesuneste - : yhdistettiin alkuperäisen vesikerroksen kanssa, päälle 35 kaadettiin 50 ml tuoretta etyyliasetaattia ja pH säädet-- tiin arvoon 1,4 laimealla HCl:llä. Hapan etyyliasetaatti- 76 861 92 kerros erotettiin, yhdistettiin happamien vesikerrosten toisen 30 ml:n etyyliasetaatti-pesuneste-erän kanssa, pestiin takaisin 30 ml:11a tuoretta H20:ta, kuivattiin Na2SO^:lla ja haihdutettiin kuiviin yhdessä eetterin kans-5 sa, jolloin saatiin otsikon tuotetta 1,9 g.
Valmistus 8 N-s(- (2-bentsyyli-3-fenyylipropionyyli) histidiini-metyyliesteri
Typen suojaamana 2-bentsyyli-3-fenyylipropionihappo 10 (dibentsyylietikkahappo, 5,0 g, 0,0208 mol) ja histidiini-metyyliesteri-dihydrokloridi (4,72 g, 0,0208 mol) yhdistettiin 100 ml:ssa CH2C12 ja jäähdytettiin 0°:seen. Lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (4,29 g, 0,0208 mol) ja sitten N-metyylimorfoliinia (4,58 ml, 0,0416 mol) ja seosta 15 sekoitettiin, annettiin lämmetä ympäristön lämpötilaan ja sekoitettiin 16 tuntia. Liukenematon aines poistettiin suodattamalla, suodos pestiin 2 x 100 ml:lla K^C^ta, 2 x 100 ml:11a kyllästettyä NaHCO^ ja 1 x 100 ml:11a suolaliuosta, kuivattiin MgSO^:lla, haihdutettiin kuiviin jäännök-20 seksi, joka painoi 6,8 g ja jäännös kromatografoitiin 600 g:11a silikageeliä käyttämällä eluenttina seosta CHCl^-CH-jOH 99:1, jolloin saatiin puhdistettua otsikon tuotetta 4,5 g; ^H-nmr (CDCl^) delta 3,8 (s, 3H, OCH^). Valmistus 9 25 N-ot- (2-bentsyyli-3-fenyylipropionyyli) -N- (imidatso- li)-(t-butoksikarbonyyli)histidiini Edellisen valmistuksen otsikon tuote (4,5 g, 0,0108 mol) ja (4,66 g, 0,0378 mol) yhdistettiin 25 ml:ssa CH^OH ja 8 ml:ssa i^Ozta ja sekoitettiin 16 tun-30 tia. Metanoli haihdutettiin pois ja vesipitoinen jäännös laimennettiin 25 ml:lla dioksaania ja 15 ml:lla I^C^ta.
Di(t-butyyli)dikarbonaattia (2,8 g, 0,013 mol) ja seosta sekoitettiin 16 tuntia. Dioksaani haihdutettiin pois ja emäksinen vesipitoinen jäännös uutettiin 20 ml:11a eette-35 riä, pH säädettiin 5-%:isella HCl:llä arvoon 2,5 ja uutettiin 30 ml :11a tuoretta eetteriä. Jälkimmäinen orgaaninen
II
,7 861 92 kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin MgSO^rlla, haihdutettiin kuiviin, jäännöstä trituroitiin 15 ml:n kanssa eetteri-heksaaniseosta 1;1 ja suodatettiin, jolloin saatiin otsikon tuotetta, 1,6 g; H-nmr (CDC13) delta 1,6 5 (s, 9H, C(CH3)3).

Claims (9)

  1. 78 8 6 1 92 Patenttivaatimus Stereoselektiivinen menetelmä tyydyttyneen lak-toniyhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava V 5 H R16 ''Jt s17 (V) --0-C—XH 10 0 -o-40 jossa R16 on (C^-Cgjalkyyli, (Ca-C6)alkenyyli, fenyyli, naf-tyyli, (C4-C7 )sykloalkyyli, (C4-C7 )sykloalkenyyli, (C7-C9)fe-15 nyylialkyyli, (Cu-C13)naftyylialkyyli, (C5-C10) ( sykloalkyy-li)alkyyli tai jokin mainituista ryhmistä mono- tai di-substituoituna aromaattisessa renkaassa samoilla tai erilaisilla ryhmillä, joita ovat (C1-C3)alkyyli, (C^-Cj )alkok-si, fluori ja kloori; ja R17 on (Cj-C^) (2-alkenyyli), (C4-20 C7)(syklo-2-alkenyyli), bentsyyli tai naftyylimetyyli tai jokin mainituista ryhmistä mono- tai disubstituoituna aromaattisessa renkaassa samoilla tai erilaisilla ryhmillä, joita ovat (C1-C3)alkyyli, (Cj-C^Jalkoksi, fluori ja kloori, tunnettu siitä, että 25 (1) aldehydi, jolla on kaava B H ^R16 / --O-C-NH ^ ^ CHO (B)
  2. 30 O jossa R16 on (C^-C^alkyyli, (C^-Cgjalkenyyli, fenyyli, naf-tyyli, (C4-C7)sykloalkyyli, (C4-C7)sykloalkenyyli, (C7-C9)fe-nyylialkyyli, (Cn-C13 )naftyylialkyyli, (C5-C10) (sykloalkyy-35 li)alkyyli tai jokin mainituista ryhmistä mono- tai di- li 79 861 92 substltuoituna aromaattiesssa renkaassa samoilla tai erilaisilla ryhmillä, joita ovat (C1-C3)alkyyli, (C1-C3)alkok-si, fluori ja kloori, saatetaan regoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 5 LiC=CCOOR15 jossa R15 on (C^-Cj)alkyyli, reaktion suhteen intertissä liuottimessa -50°...-80°C:ssa pääasiallisesti yhdisteen 10 muodostamiseksi, jolla on kaava C H R16 I V —I—0-C-NH^N^-.C=C-C02R15 (C)
  3. 15. H (2) kaavan C mukainen yhdiste hydrataan yhdisteen muodostamiseksi, jolla on kaava D
  4. 20. R16 H_01r™''>r^'''-^o2Rl5 (D)
  5. 0 H %H ...* 25 (3) kaavan D mukainen yhdiste syklisoidaan yhdis- ·.: ; teen muodostamiseksi, jolla on kaava E \ r16 30 --0-C-NH (E) o 0-^0 ja : V 35 80 861 92 (4) kaavan G mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan suunnilleen mooliekvivalentin kanssa orgaanista halogeni-dia, jolla on kaava
  6. 5 R17X jossa X on kloori, bromi tai jodi; siten, että läsnä on oleellinen ylimäärä alhaisen nukleofiilisyyden omaavaa vahvaa emästä. il ei 86192 Stereoselektivt förfarande för framställning av en omättad laktonförening med formeln V 5 HR16 (V) --O-C-NiT ji p-. Il H''. / Ή 10 ° ° väri R16 är (Cx-C6)alkyl, (C1-C6)alkenyl, fenyl, naftyl, (C4-C7)cykloalkyl, (C4-C7 )cykloalkenyl, (C7-C9)fenylalkyl, 15 (Cn-C13 )naftylalkyl, (C5-C10)(cykloalkyl)alkyl eller nägon av nämnda grupper i en sädan form, i vilken den aromatiska ringen är mono- eller disubstituerad med grupper, vilka är lika eller olika och valts bland (Ct-C3)alkyl, (C^-CjJalko-xi, fluor och klor; och R17 är (Cj-C^) (2-alkenyl), (C4-C7)-20 (cyklo-2-alkenyl), bensyl eller naftylmetyl eller nägon av nämnda grupper i en sädan form, i vilken den aromatiska ringen är mono- eller disubstituerad med grupper, vilka är lika eller olika och valts bland (C^-Cj )alkyl, (Cj-Cjialko-xi, fluor och klor, kännetecknat därav, att '...· 25 man ·.· : (1) omsätter en aldehyd med formeln B H R16 ''yS (B) 30 --0-C-NHCHO 0 väri R16 är (C1-C6)alkyl, (C1-C6)alkenyl, fenyl, naftyl, (C4-C7)cykloalkyl, (C4-C7)cykloalkenyl, (C7-C9)fenylalkyl, '/· 35 (C11-C13)naftylalkyl, (C5-C10) (cykloalkyl)alkyl eller nägon 82 '86192 av nämnda grupper i en sädan form, i vilken den aromatiska ringen är mono- eller disubstituerad med grupper, vilka är lika eller olika och valts bland (Cj-CjJalkyl, (C^-CjJalko-xi, fluor och klor, med en förening med formeln 5 LiC=CCOOR15 väri R15 är (C1-C3)alkyl, i ett reaktionsinert lösningsmedel vid -50°...-80°C för att i allra högsta grad bilda en fö-10 rening med formeln C H R16 i y -j-O-C-Nn^X^c.c.c^R15 (C)
  7. 15. H t)H (2) hydrerar föreningen med formeln C för att bilda en förening med formeln D
  8. 20. R16 . Xf —f— 0-C-NH^<s_^\^C0oR15 I W 2
  9. 0 H ÖH 25 (3) cykliserar föreningen med formeln D för att bilda en förening med formeln E (E) 30 --0-C-NH och (4) omsätter föreningen med formeln E med ungefär 35 en molekvivalent av en organisk halogenid med formeln il 83 8 6 1 92 R17X väri X är klor, brom eller jod, i närvaro av ett väsent-5 ligt överskott av en stark bas med läg nukleofil förmäga.
FI863250A 1985-08-09 1986-08-08 Stereoselektiv foerfarande foer framstaellning av omaettad laktoner. FI86192C (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US76416885A 1985-08-09 1985-08-09
US76416885 1985-08-09
US06/858,324 US4729985A (en) 1985-08-09 1986-04-30 Renin inhibitors containing 5-amino-2,5-disubstituted-4-hydroxypentanoic acid residues
US85832486 1986-04-30

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI863250A0 FI863250A0 (fi) 1986-08-08
FI863250A FI863250A (fi) 1987-02-10
FI86192B FI86192B (fi) 1992-04-15
FI86192C true FI86192C (fi) 1992-07-27

Family

ID=27117410

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI863250A FI86192C (fi) 1985-08-09 1986-08-08 Stereoselektiv foerfarande foer framstaellning av omaettad laktoner.

Country Status (22)

Country Link
US (1) US4729985A (fi)
EP (1) EP0212903B1 (fi)
JP (1) JPS6253952A (fi)
KR (1) KR890003603B1 (fi)
CN (1) CN86105870A (fi)
AT (1) ATE84046T1 (fi)
AU (1) AU576970B2 (fi)
CA (1) CA1294736C (fi)
DE (1) DE3687380T2 (fi)
DK (1) DK379186A (fi)
EG (1) EG17971A (fi)
ES (1) ES2000852A6 (fi)
FI (1) FI86192C (fi)
GR (1) GR862078B (fi)
HU (1) HU207101B (fi)
IE (1) IE58524B1 (fi)
IL (1) IL79626A0 (fi)
NO (1) NO170725C (fi)
NZ (1) NZ217127A (fi)
PH (1) PH24494A (fi)
PT (1) PT83172B (fi)
YU (1) YU45355B (fi)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4727060A (en) * 1984-11-13 1988-02-23 Ciba-Geigy Corporation Novel 5-amino-4-hydroxyvaleryl derivatives
DE3538749A1 (de) * 1985-10-31 1987-05-07 Merck Patent Gmbh Peptide
FI870474A (fi) * 1986-02-07 1987-08-08 Ciba Geigy Ag Med svavelhaltiga grupper substituerade 5-amino-4-hydroxivalerylderivat.
DE3626130A1 (de) * 1986-08-01 1988-02-11 Merck Patent Gmbh Aminosaeurederivate
US4681972A (en) * 1986-09-16 1987-07-21 Warner-Lambert Company Separation of diastereomers
US4851387A (en) * 1986-10-14 1989-07-25 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. 5-substituted amino-4-hydroxy-pentanoic acid derivatives and their use
US4927565A (en) * 1986-12-19 1990-05-22 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. 5-substituted amino-4-hydroxy-pentenoic acid derivatives and their use
US4758584A (en) * 1987-02-05 1988-07-19 Ciba-Geigy Corporation Antihypertensive 5-amino-4-hydroxyvaleryl derivatives substituted by sulphur-containing groups
US4859654A (en) * 1987-07-01 1989-08-22 Pfizer Inc. Homocyclostatine and cyclostatine containing polypeptides as antihypertensive agents
ES2061652T3 (es) * 1987-07-01 1994-12-16 Pfizer Polipeptidos que contienen homocicloestatina y cicloestatina como agentes antihipertensivos.
EP0312158A3 (en) * 1987-10-13 1990-07-25 Merck & Co. Inc. Tetrapeptide renin inhibitors having novel c-terminal amino acid amide
GB8728560D0 (en) * 1987-12-07 1988-01-13 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB8728561D0 (en) * 1987-12-07 1988-01-13 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
DE68916271T2 (de) * 1988-01-26 1995-02-23 Sankyo Co Renin inhibierende Polypeptide, ihre Herstellung und Anwendung.
EP0329295A1 (en) * 1988-02-01 1989-08-23 The Upjohn Company Renin inhibiting peptides with polar end groups
JPS6486550A (en) * 1988-08-19 1989-03-31 Seiko Epson Corp Complementary mos integrated circuit
US5436339A (en) * 1991-03-06 1995-07-25 Abbott Laboratories Process for the preparation of a substituted diaminoalcohol
US5238935A (en) * 1991-05-20 1993-08-24 Schering Corporation N-acyl-tetrahydroisoquinolines as inhibitors of acyl-coenzyme A: cholesterol acyl transferase
US5124337A (en) * 1991-05-20 1992-06-23 Schering Corporation N-acyl-tetrahydroisoquinolines as inhibitors of acyl-coenzyme a:cholesterol acyl transferase
TW217410B (fi) * 1992-04-01 1993-12-11 Ciba Geigy
MY119161A (en) * 1994-04-18 2005-04-30 Novartis Ag Delta-amino-gamma-hydroxy-omega-aryl-alkanoic acid amides with enzyme especially renin inhibiting activities
EP0702004A2 (de) * 1994-09-15 1996-03-20 Ciba-Geigy Ag 2,9-Diamino- und 2-amino-8-carbamoyl-4-hydroxy-alkansäureamid-derivative
EP0716077A1 (de) * 1994-12-08 1996-06-12 Ciba-Geigy Ag Aromatisch substituierte Omega-Aminoalkansäureamide und Alkansäurediamide und ihre Verwendung als Renininhibitoren
CA2191924A1 (en) * 1995-12-05 1997-06-06 Kevin Felsenstein 5-amino-6-cyclohexyl-4-hydroxy-hexanamide derivatives as inhibitors of .beta.-amyloid protein production
US5703129A (en) * 1996-09-30 1997-12-30 Bristol-Myers Squibb Company 5-amino-6-cyclohexyl-4-hydroxy-hexanamide derivatives as inhibitors of β-amyloid protein production
CA2401749A1 (en) 2000-03-23 2001-09-27 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods to treat alzheimer's disease
ATE314343T1 (de) 2000-06-30 2006-01-15 Elan Pharm Inc Verbindungen zur behandlung der alzheimerischen krankheit
RU2550691C2 (ru) * 2009-08-11 2015-05-10 Новартис Аг Раскрытие циклов лактонов и лактамов
CN105195868B (zh) * 2015-11-12 2018-05-15 上海电气核电设备有限公司 一种机器人焊接系统及其焊接方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4163676A (en) * 1978-04-03 1979-08-07 Blue Cross Laboratories Ethanol-modified lecithin cookware spray composition
NO812612L (no) * 1980-08-06 1982-02-08 Ferring Pharma Ltd Enzym-inhibitorer.
US4478826A (en) * 1981-10-08 1984-10-23 Merck & Co., Inc. Renin inhibitory peptides
CA1258748A (en) * 1981-10-08 1989-08-22 Daniel F. Veber Renin inhibitory peptides
US4470971A (en) 1981-10-19 1984-09-11 Merck & Co., Inc. Renin inhibitory peptides having His13
US4397786A (en) 1981-11-23 1983-08-09 Merck & Co., Inc. Method of preparing statine and derivatives
CA1245217A (en) * 1981-12-10 1988-11-22 Joshua S. Boger Renin inhibitory peptides having phe su13 xx deletion
WO1984003044A1 (en) * 1983-02-07 1984-08-16 Ferring Ab Enzyme inhibitors
US4613676A (en) * 1983-11-23 1986-09-23 Ciba-Geigy Corporation Substituted 5-amino-4-hydroxyvaleryl derivatives
FI850948L (fi) * 1984-03-12 1985-09-13 Pfizer Renin inhibitorer som innehaoller statin eller dess derivat.
US4661473A (en) * 1984-03-27 1987-04-28 Merck & Co., Inc. Renin inhibitors containing peptide isosteres
EP0486478A3 (en) * 1984-08-06 1992-08-12 The Upjohn Company Renin-inhibiting peptides
DE3512128A1 (de) * 1985-04-03 1986-10-09 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Peptide

Also Published As

Publication number Publication date
FI863250A (fi) 1987-02-10
CA1294736C (en) 1992-01-21
PT83172B (pt) 1989-03-30
YU45355B (en) 1992-05-28
NO170725C (no) 1992-11-25
AU6102186A (en) 1987-02-12
EP0212903A3 (en) 1989-11-15
FI86192B (fi) 1992-04-15
PT83172A (en) 1986-09-01
DK379186D0 (da) 1986-08-08
US4729985A (en) 1988-03-08
KR870002164A (ko) 1987-03-30
IE862143L (en) 1987-02-09
NO863202L (no) 1987-02-10
JPS6253952A (ja) 1987-03-09
ES2000852A6 (es) 1988-03-16
FI863250A0 (fi) 1986-08-08
DE3687380T2 (de) 1993-04-29
EP0212903A2 (en) 1987-03-04
YU142286A (en) 1988-10-31
HUT41419A (en) 1987-04-28
PH24494A (en) 1990-07-18
ATE84046T1 (de) 1993-01-15
DE3687380D1 (de) 1993-02-11
EG17971A (en) 1991-11-30
IL79626A0 (en) 1986-11-30
GR862078B (en) 1986-12-24
DK379186A (da) 1987-04-01
AU576970B2 (en) 1988-09-08
NO170725B (no) 1992-08-17
JPH0543697B2 (fi) 1993-07-02
IE58524B1 (en) 1993-10-06
HU207101B (en) 1993-03-01
KR890003603B1 (ko) 1989-09-27
CN86105870A (zh) 1987-03-11
NO863202D0 (no) 1986-08-08
NZ217127A (en) 1989-11-28
EP0212903B1 (en) 1992-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI86192C (fi) Stereoselektiv foerfarande foer framstaellning av omaettad laktoner.
US5114918A (en) Endothelin antagonistic cyclic pentapeptides
EP0517589B1 (fr) Dérivés de tachykinines, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US4548926A (en) Hypotensive peptides and their use
JP3912798B2 (ja) 新規アミノ酸誘導体、それらの調製方法及びこれらの化合物を含む医薬組成物
EP0184550A2 (de) 5-Amino-4-hydroxyvalerylamid-Derivate
WO1995030687A1 (de) Neurokinin (tachykinin)-antagonisten
US4665055A (en) Peptide renin inhibitors
AU627156B2 (en) Amino acid derivatives
KR930007431B1 (ko) 경구용 활성 레닌 억제제
AU603093B2 (en) Renin inhibitors having a lactam pseudo dipeptide
CA1293839C (en) Process for obtention of peptide amino-alcohol derivatives containing a tetrasubstituted carbon as inhibiting agents of renin and acid proteases
KR900009022B1 (ko) 비 펩타이드성 레닌 억제제
TW202235429A (zh) 含ｎ－置換－胺基酸殘基之胜肽化合物的製備方法
EP4118094A1 (en) Efficient preparation of dolastatin and auristatin analogs through a common intermediate
US5225528A (en) Cyclic hexapeptide oxytocin antagonists
US4609641A (en) Renin-inhibitory peptide analogs
US4943561A (en) Gastrin releasing peptide antagonist
AU592122B2 (en) Difluorocyclostatine containing polypeptides
US4948913A (en) Renin inhibitors containing 5-amino-2,5-disubstituted-4-hydroxypentanoic acid residues
WO1989003841A1 (en) Renin inhibitors, processes for preparing them, methods for using them, and compositions containing them
EP0391180A2 (de) Peptidartige Aminosäurederivate mit reninhemmender Wirkung
EP0297816B1 (en) Homocyclostatine and cyclostatine containing polypeptides as antihypertensive agents
US4992562A (en) Renin inhibitors containing 5-amino-2,5-disubstituted-4-hydroxypentanoic acid residues
US4859654A (en) Homocyclostatine and cyclostatine containing polypeptides as antihypertensive agents

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: PFIZER INC.