FI84171B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva peptidderivat. - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva peptidderivat. Download PDF

Info

Publication number
FI84171B
FI84171B FI860281A FI860281A FI84171B FI 84171 B FI84171 B FI 84171B FI 860281 A FI860281 A FI 860281A FI 860281 A FI860281 A FI 860281A FI 84171 B FI84171 B FI 84171B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
formula
product
trifluoro
give
mmol
Prior art date
Application number
FI860281A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI84171C (fi
FI860281A (fi
FI860281A0 (fi
Inventor
Andrew Shaw
Donald John Wolanin
Scott Haven Bergeson
Philip Duke Edwards
John Anthony Schwartz
Mark Morris Stein
Diane Amy Trainor
Richard Alan Wildonger
Original Assignee
Ici America Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB858501522A external-priority patent/GB8501522D0/en
Priority claimed from GB858501523A external-priority patent/GB8501523D0/en
Priority claimed from GB858501524A external-priority patent/GB8501524D0/en
Application filed by Ici America Inc filed Critical Ici America Inc
Publication of FI860281A0 publication Critical patent/FI860281A0/fi
Publication of FI860281A publication Critical patent/FI860281A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI84171B publication Critical patent/FI84171B/fi
Publication of FI84171C publication Critical patent/FI84171C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/13—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by hydroxy groups
    • C07C205/26—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by hydroxy groups and being further substituted by halogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/01—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton having nitro groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C205/02—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton having nitro groups bound to acyclic carbon atoms of a saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C205/00—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton
    • C07C205/39—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by esterified hydroxy groups
    • C07C205/42—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by esterified hydroxy groups having nitro groups or esterified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C07C205/43—Compounds containing nitro groups bound to a carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by esterified hydroxy groups having nitro groups or esterified hydroxy groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton to carbon atoms of the same non-condensed six-membered aromatic ring or to carbon atoms of six-membered aromatic rings being part of the same condensed ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

1 84171
Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten peptidijohdannaisten valmistamiseksi
Esillä olevan keksinnön kohteena on menetelmä tiet-5 tyjen trifluorimetyyliketonisubstituoitujen peptidijoh dannaisten valmistamiseksi, jotka ovat ihmisen leukosyyt-tielastaasin (HLE) reversiibeleitä inhibiittoreita, mikä tekee ne käyttökelpoisiksi, kun tällainen inhibitio on toivottu, kuten tutkimusvälineinä farmakologisissa, diag- 10 nostisissa ja muissa senkaltaisissa tutkimuksissa sekä kudosdegeneraatiotautien käsittelyssä, joita tauteja ovat esimerkiksi lämminveristen eläinten keuhkolaajentuma, valtimon haurauskovetustauti, nivelreuma ja luu-niveltulehdus. Keksinnön kohteena ovat myös tässä menetelmässä käy- 15 tettävät välituotteet.
Haiman elastaasin irreversiibeleitä inhibiittoreita on kuvattu US-patenttijulkaisussa 4 277 395.
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää substituoi-tujen peptidien valmistamiseksi, joilla on kaava 20 R1 R~A\ XO.NH.CH.CO.CF-, (la) r\ 25 (CH 2)n 3 RW° f R_A\ / \ C0.NH.CH.C0.CF_ XN N—( 3 I / \ <Ib) 30 14 4 > R >CH,)n 2 n tai 35 2 84171 3 f O R2 o f R -A-M 11 y-^ CO.NH-CH-CO-CF3 R NcH2)n jolloin 10 n on 1; R1 on C^-alkyyli; A on ryhmä -NH-CO-, -0-C0- tai -C0-; R2 on fenyyli, bentsyyli tai C^-alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu bentsyylioksikarbonyyli-, bentsyyliok-15 sikarbonyyliamino-, fenyylisulfonyyliamino- tai (fenyyli- sulfonyy1iamino)karbonyy1iryhmäl1ä; R* ja R6 ovat vetyjä; R5 on C^-alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu bentsyylioksikarbonyyli- tai bentsyylioksikarbonyyliaminoryh-20 mällä; ja R3 on jokin seuraavista ryhmistä: (1) Cj.g-alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu C1.4-alkoksikarbonyyli-, C1_4-alkoksikarbonyyliamino-, karb-oksi-, 2-(C1_4-alkoksi)etoksi-, adamantyyli-, morfolinyyli-, 25 pyridyyli-, tienyyli-, oksopyrrolidinyyli-, fenyyli-, C1.4- alkoksikarbonyylifenyyli-, karboksifenyyli-, fenoksi-, C1.4-alkoksikarbonyylifenoksi-, karbamoyylifenoksi-, karba-moyylimetyylifenoksi-, bentseenisulfonyyliamino-, metaani-sulfonyyliaminokarbonyyli-,bentseenisulfonyyliaminokarbo-30 nyyli-, naftaleenisulfonyyliaminokarbonyyli-, adaman- taanisulfonyyliaminokarbonyyli-, tai klooribentseenisul-f onyy1iaminokarbonyy1i fenyy1iryhmäl1ä; (2) naftyyli, aminokloorifenyyli, fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu hydroksi-, C1_4-alkoksi-, C^-alkok- 35 sikarbonyyli-, karboksi-, halogeeni-, dihalogeeni-, metaa- 3 84171 nisulfonyyliaminokarbonyyli-, naftaleenisulfonyyliami.no-karbonyyli- tai [N-bentsyyli-(4-bromibentseenisulfonyyli)-amino]karbonyyliryhmällä; (3) ryhmä, jolla on kaava W-S02-NH-C0-fenyyli, jossa W 5 on fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu halogeeni- tai nitroryhmällä; (4) ryhmä, jolla on kaava Y-CO-NH-(CH2)m, jossa m on 2 -5, ja Y on fenyyli, bentsyyli, difenyylimetyyli, fenoksi-metyyli, bentsyylioksi, C1.4-alkoksi, (C^-alkoksikarbonyy- 10 li)fenyyliamino, (2-pyridyyli)etoksi tai karboksifenyyli-amino; (5) syklopentyyli tai undekyyli, jotka on mahdollisesti substituoitu C1.4-alkoksikarbonyyli- tai karboksiryhmällä; (6) 2-fenyylivinyyli, jonka fenyylirengas on mahdolli-15 sesti substituoitu C^-alkoksikarbonyyli-, karboksi- tai klooribentseenisulfonyyliaminokarbonyyliryhmällä; ja (7) 2-ureidokarbonyylivinyyli, di(bentsyylioksimetyy-li)metyyli tai di(2-fenoksietyyli)metyyli; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan val-20 mistamiseksi, jossa menetelmässä hapetetaan alkoholi, jolla on kaava
R1 OH
3 1 ‘ R -A CO.NH.CH.CH.CF3 25 S (Vila) ( > CH0) 2 n
R2 n r1 0H
30 r3 _A0 I | V /\ CO.NH.CH.CH.CF^
n—r J
H / \ (Vllb) X(CH2>n 35 4 841 71 tai
O Rx O R1 OH
R -A"N^JL ^ ^ /CO.NH.CH.CH.CF
X h ;X
5 R \ ) (VIIc) (CH ) * n jolloin n, R1, R2, R3, R4, R5, R6 ja A merkitsevät samaa kuin edellä, ja haluttaessa ryhmässä R3 karboksiryhmän sisältä-10 vän kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen yhdisteen saamiseksi lisäksi hydrolysoidaan kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste, jossa ryhmässä R3 on karboksyylihappoesteri, saattamalla mainitun esterin sisältävä yhdiste reagoimaan alkali-metallihydroksidin kanssa sopivassa vesipitoisessa liuot-15 timessa noin 15 - 30 °C:een lämpötilassa, ja ryhmässä R3 sulfonyyliaminokarbonyyliryhmän sisältävän kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen yhdisteen saamiseksi lisäksi kondensoidaan kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste, jossa ryhmässä R3 on karboksyylihapporyhmä, sulfonamidin aminoryhmään karbodi-20 imidin läsnäollessa sopivassa liuottimessa noin 15 - 30 °C:een lämpötilassa, ja haluttaessa muutetaan saatu kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi tavanomaisen suolanmuodostusvaiheen avulla.
25 Kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisia yhdisteitä nimite tään tässä vastaavasti dipeptideiksi, tripeptideiksi ja tetrapeptideiksi.
Kaavojen la, Ib ja Ie mukaisten yhdisteiden suoloja ovat farmaseuttisesti hyväksyttävät emäs- tai happoaddi-30 tiosuolat, joita ovat esimerkiksi mineraalihappojen, kuten kloorivedyn, tai orgaanisten happojen, kuten sitruuna-, maleiini-, fumaari- tai etikkahapon suolat. Emäsadditio-suoloja ovat esimerkiksi alkalimetallihydroksidien, kuten natriumhydroksidin, alkalimetallikarbonaattien ja -bikar-35 bonaattien, maa-alkalimetallihydroksidien ja orgaanisten 5 84171 amiinien kanssa muodostetut suolat. Tällaisia suoloja voidaan valmistaa liuottamalla peptidijohdannainen veden kanssa sekoittuvaan orgaaniseen liuottimeen, lisäämällä emäksen vesiliuosta ja ottamalla suola talteen vesiliuok-5 sesta.
Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetuilla edullisilla yhdisteillä on S-konfiguraatio (so. luonnossa esiintyvien aminohappojen konfiguraatio) alla esitetyissä kaavoissa Ha, Hb ja Ile asteriskilla (*) esitetyn kiraa-10 likeskuksen suhteen. Jäljempänä kuvattujen yksityiskoh taisten menetelmien A ja B synteesillä saadaan diastereo-meerinen seos tuloksena R- ja S-konfiguraation omaavien tuotteiden läsnäolosta symbolilla Δ merkityn kiraalikes-kuksen suhteen. Menetelmissä C ja D kuvatuilla erotus- ja 15 synteesimenetelmillä saadaan yhdisteitä, jotka ovat olen naisesti enantiomeerisesti ja diastereomeerisesti puhtaita. Edullisia yhdisteitä ovat sellaiset, joilla symbolilla Δ merkityn keskuksen suhteen on S-konfiguraatio.
20 r1
R3-A I
V -CO . NH . CH . CO. CF
N-<* A (IIa) c > (CH2»„ 25
_ O
. /* \ CO .NH.CH. CO. CF ,
RJ-A-N N-<* Λ J
i / \ <iib>
30 R
f 0 r2 o R1 R "Ä"N\V^\ y* K CO .NH—CH—CO—CF , 35 | N N-(* A 6 r5 i4 7 \ (iic) R N(CHJn 2 n 6 84171
Kuten alan asiantuntija hyvin tietää, yksittäisten isomeerien aktiivisuus ei ole sama, joten on edullisinta käyttää aktiivisinta isomeeriä. Keksinnön suojapiiriin sekä keksinnön mukaisesti saatujen yhdisteiden diastereo-5 meerinen seos että aktiiviset S- ja R-isomeerit.
Kuten alan asiantuntija tietää, trifluorimetyylike-tonit voivat esiintyä solvaatteina, varsinkin hydraattei-na, joita esittävät kaavat lila, Illb ja IIIc, ja myös tällaiset keksinnön mukaisesti saadut yhdisteet kuuluvat 10 keksinnön suojapiiriin.
R1
R3-A I
\ ^.CO.NH.CH.C (OH) 2.CF, N—\ / \ (Ula) 15 L > (CH2>n R2 0
CO *NH,CH . C (OH) o.CFn R -A-N N ( J
20 I / \ (Illb) R4 ™2>η 25 3 f ? ^O Ϋ R -A-N^^^ll / \ CO.NH. CH. C(OH) ? . CFo ] N-/ Λ R5 '4 / \ <IIIC» R NcH2)n 30
Keksinnön mukaisessa menetelmässä peptidijohdannaisten valmistamiseksi käytetään edullisesti kaupallisesti saatavia α-aminohappoja (so. sellaisia, joissa NH^-ryh-mä on liittynyt -COOH ryhmän viereiseen hiiliatomiin). 35 Tästä johtuen edellä olevissa tri- ja tetrapeptidijohdan- naisten kaavoissa edullisia substituentteja R2 ^5 ova^.
7 84171 sellaiset, jotka on saatu seuraavista aminohapoista: ala-niini, väliini, norvaliini, leusiini, isoleusiini, norleu-siini, fenyylialaniini, tryptofaani, tyrosiini, asparagii-5 ni, glutamiini, asparagiinihappo, glutamiinihappo, lysii-ni, treoniini, seriini, α-aminovoihappo ja fenyyliglysii-ni.
Edullisia keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä ovat esimerkkien 6, 11, 15 - 18, 20 - 28, 51 - 56, 10 58, 59, 62, 63, 65, 68, 71, 72, 74, 75, 77 - 79, 82, 84 - 91, 93 - 111, 114, 115, 117, 119 ja 121 - 126 pääotsikoissa mainitut yhdisteet. Näistä ovat edullisempia esimerkkien 16, 24, 27, 52, 58, 71, 74, 77 - 79, 85, 89, 93 - 96, 98, 100, 104 - 107, 110, 114, 115, 119 ja 123 - 125 yhdis-15 teet ja kaikkein edullisimpia esimerkkien 77, 95, 104, 114 ja 115 yhdisteet.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettäviä lähtöaineita ja välituotteita sekä kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa seuraavasti.
20 Menetelmä A
Vaihe 1 käsittää kaavan V mukaisen aminoalkoholin valmistuksen
R1 OH I I
25 H2N.CH.CH.CF3 (V) 3 2 1 (eristetään sopivasti hydrokloridisuolana). Kaavan R1CH2N02 mukaisen sopivan nitroalkaanin (valmistettu stan-30 dardimenetelmällä, jollei muuten saatavissa) Henry-konden-saatiossa [McBee, E.T. et ai., J. Amer. Chem. Soc. 78 (1956) 4053] trifluoriasetaldehydietyylihemiasetaalin kanssa, jonka kaava on [CF3CH(OH)OCH2CH3], saadaan kaavan VI mukainen nitroalkoholi 35 8 84171
R1 OH I I
o2n.ch.ch.cf3 (VI) 3 2 1 5 joka saadaan kahden raseemisen diastereomeerin ( [2(RS),3(RS)] ja [2(RS,3(SR)]) seoksena (katso esim. esimerkki Ib). Pelkistämällä yhdisteen VI nitroryhmä sopivalla pelkistimellä saadaan yhdiste V kahden raseemisen 10 diastereomeerin ([2(RS),3(RS)] ja [2(RS),3(SR)]) seoksena (katso esim. esimerkki le). Tätä amiinisuolaa käytetään suoraan synteesin jatkovaiheissa.
Vaiheessa 2 yhdiste V muutetaan myös keksinnön kohteena olevaksi kaavan IVa, IVb tai IVc mukaiseksi 15 avainvälituotteeksi
R1 OH
I I
CO.NH.CH.CH.CF-,
HN S 3 2 1 J
/ \ (IVa) 20 \ > (CH2>n
oe- R2 O R1 OH
N-f I ) HN' \_ CO. NH. CH . CH . CF^ (IVb) R4 ( ) (0Η2)η 30 tai
R6 2 R1 OH
I o \ -?° I ! HN 11 /—\ C0.NH.CH.CH.CF3 V^N N—/ 3 2 1 35 5 1 / \ (IVc) R R4 Sch,) 2 n 9 84171 alalla hyvin tunnetuin menetelmin, kuten esim. teoksissa Bodanszky, M., Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin (1948), ja The Peptides. Analysis, Synthesis and Biology Gross, E., Meienhofer, J. (toim.), 5 osat 1-5, Academic Press, New York, 1979 - 1983. Käyttämällä sopivaa N-suojattua syklistä aminohappoa (kuten CBZ-proliinia), suorittamalla sen jälkeen peptidikytkentöjä ja poistamalla sopivat aminoryhmien suojaryhmät saadaan kaavan IVa mukaisia yhdisteitä. Suorittamalla samanlaisia 10 sopivien N-suojattujen dipeptidihappojen ja tripeptidihap-pojen kytkentöjä ja poistamalla suojaryhmät saadaan vastaavasti kaavojen IVb ja IVc mukaisia yhdisteitä. Lisäksi kaavan IVa mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa kaavojen IVb tai IVc mukaisiksi yhdisteiksi käyttäen samaa peptidien 15 valmistusmenetelmää. Tässä kuvatulla tavalla saadut tuotteet ovat [2(RS),3(RS)]~ ja [2(RS),3(SR)]-yhdisteiden seoksia, jollei erotusta ole suoritettu.
Vaiheessa 3 välituotteet IVa, IVb tai IVc muutetaan välituotteiksi Vila, Vllb ja VIIc: 20 i
R OH
3 1 I
R -A CO.NH.CH.CH.CF, y 3 2 1 3 ^^ (Vila) 25 (CH2>n
R2 n r1 0H
R3-A \ S 1 I
\ f\ .CO.NH.CH.CH.CF, N N-C 3 2 1 * 30 H / \ (Vllb) (CH ) z n
O RV O R1 OH
35 R3 A N li ^-€ * * R - A-N / \ .CO.NH.CH.CH.CF, Y W N-S 3 2 1 3 R5 \ > (VIIc) (CH 7)n i n 10 841 71 reaktiossa sopivan reagenssin kanssa amidien, ureoiden, uretaanien tai sulfonamidien muodostamiseksi, jollaisia reagensseja ovat happokloridit, -anhydridit ja -seka-an-hydridit, isosyanaatit, karbonaatit, kuten 4-nitrofenyyli-5 karbonaatit (valmistettu Kunzin et ai.in, Angew. Chem. Int. Ed. (Eng) 22 (1983) 783 - 784, kuvaamalla tavalla), klooriformiaatit, sulfonyylikloridit ja sulfinyyliklori-dit, ja sen jälkeen hapettamalla kirjallisuudesta tunnetuin menetelmin. Saadut tuotteet ovat ([2(RS),3(SR)]- ja 10 [2(RS),3(RS)]~) yhdisteiden seoksia, jollei erotusta ole suoritettu.
Kuten alan asiantuntija selvästi huomaa, vaiheen 2 ja vaiheen 3 järjestys voidaan muuttaa, jos otetaan riittävästi huomioon kytkentämenetelmät, rasemisointi-, suoja-15 ryhmien poistomenetelmät jne. Siten sopivissa olosuhteissa kaavan Vila mukaisia välituotteita voidaan valmistaa myös suoraan kaavan V mukaisista yhdisteistä; myös kaavan Vllb mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa suoraan kaavan V tai IVa mukaisista yhdisteistä, ja kaavan VIIc mukaisia yhdis-20 teitä voidaan myös valmistaa suoraan yhdisteistä V, IVa tai IVb.
Vaiheessa 4 kaavojen Vila, Vllb tai VIIc mukaiset välituotteet hapetetaan vastaaviksi lopputuotteiksi Ia, Ib tai Ie. Sopivia menetelmiä ovat esim. sellaiset, joissa 25 käytetään oksalyylikloridia, DMS0:ta ja tertiääristä amiinia [katso Marx, M. et ai., J. Org. Chem. 49 (1984) 788 -793], jolloin parhaat tulokset saadaan käyttämällä 10 - 20 ekvivalenttia hapetusainetta, tai käytetään etikkahappo-anhydridiä ja DMS0:ta, kromitrioksidi-pyridiinikompleksia 30 metyleenikloridissa tai käytetään Dess-Martin-perjodinaa-nia [1,1,l-triasetoksi-2,l-bentsoksojodol-3(3H)-oni, menetelmä: Dess, D.B. et ai., J. Org. Chem. 48 (1983) 4155 -56]. Edullisimmin käytetään Dess-Martin perjodinaania. Jollei erotusta ole suoritettu, kaavojen Ia, Ib ja Ie mu-35 kaiset tuotteet saadaan tällä menetelmällä seoksena 11 84171 [3(RS)], joka sisältää olennaisesti kahta diastereomeeria, jos kaavoissa Ha, Ilb ja Ile asteriskillä (*) merkitys keskukset ovat olennaisesti enantiomeerisesti puhtaita.
Vaiheessa 5 kaavojen Ia, Ib tai Ie mukaiset yhdis-5 teet muutetaan muiksi kaavojen Ia, Ib tai Ie mukaisiksi yhdisteiksi saippuointi-, kytkentä- ja suojaryhmänpoisto-reaktiolla. Tuoteseoksen stereokemia on sama kuin vaiheessa 4.
Menetelmä B on menetelmään A verrattuna edullisem- 10 pi.
Vaiheessa 1 menetelmän A vaiheessa 1 saatu kaavan VI mukainen raseeminen diastereomeeriseos erotetaan frak-tiotislaamalla ja kiteyttämällä, jolloin saadaan nitroal-koholi VI olennaisesti puhtaana raseemisena diastereomee-15 rina [2(RS),3(SR)], joka ei olennaisesti lainkaan sisällä toista raseemista diastereomeeria [2(RS),3(RS)]. Pelkistämällä nitroryhmä, edullisesti hydraamalla käyttäen l0-%:sta Pd/C-katalyyttiä, saadaan yhdiste V yhtenä raseemisena diastereomeerina [2(RS),3(SR)], joka ei olennaises-20 ti lainkaan sisällä toista raseemista diastereomeeria (alan asiantuntijalle on selvää, että vaihtoehtoisesti voidaan myös diastereomeeria [2(RS),3(RS)] käyttää vastaavien yhdisteiden valmistukseen).
Vaihe 2 on sama kuin menetelmässä A, jolloin kui-25 tenkin käytetään menetelmän B vaiheessa 1 valmistettua amiinia V. Tällä menetelmällä saadut tuotteet ovat olennaisen puhtaita [2(RS),3(SR)]-seoksia.
Vaihe 3 on sama kuin menetelmässä A, mutta siinä käytetään menetelmän B vaiheessa 2 valmistettua tuotetta. 30 Tällä menetelmällä saadut tuotteet ovat olennaisen puhtaita [2(RS),3(SR)]-seoksia.
Samoin kuin menetelmässä A vaiheiden 2 ja 3 järjestystä voidaan sopivissa olosuhteissa muuttaa.
Vaihe 4 on sama kuin vaihe 4 menetelmässä A. Saatu 35 tuoteseos on sama kuin menetelmän A vaiheessa 4 saatu tuo-teseos.
i2 841 71
Vaihe 5 on sama kuin menetelmän A vaihe 5.
Menetelmä C on suora synteesimenetelmä kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisten erillisten ("resolvoitujen") isomeerien valmistamiseksi, jotka isomeerit eivät olennaisesti lain-5 kaan sisällä muita diastereomeereja, esimerkiksi sellaisten kaavojen Ha, Hb ja Ile mukaisten tuotteiden valmistamiseksi, joissa merkeillä * ja Δ esitetyt keskukset ovat kaikki S.
Vaihe 1 käsittää menetelmän B vaiheessa 1 valmis-10 tetun rasemaatin V resoluution. Kun yhdistettä V vastaava vapaa emäs on vapautettu, resolvointi suoritetaan muodostamalla D-viinihapon kanssa diastereomeeriset suolat, jotka erotetaan toisistaan fraktiokiteyttämällä. Haluttu amiini saadaan sitten erotetuista suoloista vapauttamalla 15 emäs, esimerkiksi 2(R),3(S):n sisältävä kaavaa V vastaava vapaa emäs. Näin saatu tuote on olennaisesti enantiomeeri-sesti ja diastereomeerisesti puhdas.
Vaiheet 2 ja 3 ovat olennaisesti samat kuin menetelmissä A ja B, jolloin ne kuitenkin rajoittuvat menetel-20 miin, joissa vältetään kaavoissa Ha, Hb ja Ile asteriskillä (*) merkityn keskuksen rasemoituminen. Näin saadut tuotteet ovat olennaisesti enantiomeerisesti ja diastereomeerisesti puhtaita.
Vaihe 4 rajoittuu menetelmiin, joissa vältetään 25 kaavoissa Ha, Hb ja Ile merkeillä * ja Δ esitettyjen keskusten rasemoituminen. Edullisesti käytetään Dess-Mar-tinin perjodinaani-menetelmää. Näin saadut tuotteet Ia, Ib ja Ie ovat olennaisesti enantiomeerisesti ja diastereomeerisesti puhtaita.
30 Vaihe 5 rajoittuu menetelmiin, joissa vältetään rasemoituminen kaavojen Ha, Hb ja Ile merkeillä * ja Δ esitetyissä keskuksissa.
Menetelmä D
Vaihe 1 käsittää menetelmällä A tai B valmistettu-35 jen kaavojen Ia, Ib tai Ie mukaisten yhdisteiden (jotka ovat 3(RS)-keskuksen johdosta diastereomeerisia seoksia) 13 841 71 erottamisen erillisiksi isomeereiksi, jotka ovat diaste-reomeerisesti ja enantiomeerisesti olennaisesti puhtaita. Tämä erottaminen suoritetaan edullisesti käyttäen prepara-tiivista kromatografiaa, esim. MPLC ja HPLC.
5 Vaihe 2 on sama kuin menetelmän C vaihe 5.
Inhlbitiomittaukset
Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden teho elastaasi-inhibiittoreina määritettiin aluksi tutkimalla keksinnön mukaisesti valmistetun yhdisteen kykyä 10 inhiboida ihmisen leukosyyttielastaasin (HLE) vaikutus pienimolekyylipainoisella peptidisubstraatilla. Inhibiittorin teho arvioidaan kineettisesti määrittämällä inhibiittorin ja HLE:n vuorovaikutuksesta syntyneen kompleksin dissosiaatiovakio K^. Substraattina käytettiin anilidia, 15 metoksisukkinyylialanyylialanyyliprolyylivaliini-p-nitro- anilidia, jonka ovat kuvanneet Nakajima, K. et ai., J. Biol. Chem. 254 (1979) 4027 - 4032, ja Teshima, T. et ai., J. Biol. Chem., 257(9) (1982) 5085 - 5091. Näissä tutkimuksissa käytettyä HLE-entsyymiä voidaan saada firmasta 20 Elastin Products, St. Louis, Missouri, tai puhdistamalla menetelmällä, jonka ovat esittäneet Viscarello, B.R. et ai., Preparative Biochemistry 13 (1983) 57 - 67, seuraavasti (kaikki toimenpiteet suoritettiin kylmähuoneessa 4 °C:ssa).
25 Suolauutto-DNaasikäsittely: lähtömateriaali, mär käinen yskös (193 g), homogenoitiin kylmän tislatun veden (200 ml) kanssa ja sentrifugoitiin 30 000 G:ssä 20 minuuttia 4 °C:ssa. Supernatantti hylättiin ja pelletti uutettiin korkealla suolapitoisuudella, ja sitä käsiteltiin 30 DNaasilla menetelmällä, jonka ovat kuvanneet Twumasi, D.Y. et ai., J. Biol. Chem. 252 (1977) 1917 - 1926 (1977). Kro-matografia elastiiniagaroosilla: DNaasi-käsittelystä saatu sakka jaettiin kahteen 40 ml:n annokseen liuosta, joka sisälsi 50 mM Tris:iä ja 1,0 M NaCl:a, pH 8, suspensio 35 sentrifugoitiin ja supernatantti vietiin suoraan kolon-
A
niin, joka sisälsi liukoista elastiini-Sepharosew 4B:tä 14 841 71 (2,5 x 20 can). Kolonni pestiin tasapainotetulla puskurilla (50 mM Tris, 50 mM NaCl, pH 8,0), kunnes eluaatin optinen tiheys aallonpituudella 280 nm (OD280 ) oli palannut peruslinjalle. Lisää epäpuhtautena olevaa proteiinia eluoitiin 5 kahdella kolonnitilavuudella liuosta, joka sisälsi 50 mM asetaattia ja 1,0 M NaCl:a, pH 5,0. Elastaasi ja katep-siini G (HLC-G) eluoitiin lopuksi liuoksella, joka sisälsi 50 mM asetaattia, 1,0 M NaClza ja 20 % DMSOrta, pH 5,0. Kolonni kehitettiin nopeudella 6 ml/min, koottiin 10 ml:n 10 fraktioita. Aktiiviset fraktiot yhdistettiin, dialysoitiin kahta 6 litran erää vastaan liuosta, joka sisälsi 50 mM asetaattia ja 0,1 M NaCl:a, pH 5,5, ja konsentroitiin 40 ml:ksi Amicon®-ultrasuodatusyksikössä (YM-10-membraani). CM-kromatografia: konsentroitu aktiivinen fraktio vietiin 15 CM-Sephadex® c-50 -kolonniin (2,2 x 10 cm), joka oli etukäteen tasapainotettu liuoksella, joka sisälsi 50 mM asetaattia ja 0,1 M NaCl:a, pH 5,5, ja kolonni pestiin tällä puskurilla epäpuhtautena oleva proteiinin poistamiseksi. Eluointia jatkettiin liuoksella, joka sisälsi 50 mM ase-20 taattia ja 0,2 M NaCl:a, pH 5,5, ja tulokseksi saatiin kokeessa Bz-Phe-Val-Arg-pNA: ta vastaan piikkiaktiivisuuden korvautuminen. HLE eluoitiin sitten asetaattipuskurilla, joka sisälsi 0,45 M NaClza, kun sen sijaan HLC-G:n eluutio vaati käyttämään 1,0 M NaClza puskurissa, kuten Martodam, 25 R. et ai., Preparative Biochemistry 9 (1979) 15 - 31, ovat kuvanneet. Tämä kolonni kehitettiin nopeudella 30 ml/h, koottiin 5,5 ml:n fraktioita. Näin puhdistettua HLE:tä käytettiin mittaamaan p-nitroaniliinin standardi tuotta-misnopeus; mittaus suoritettiin 25 °C:ssa spektrofotomet-30 rillä näkyvän spektrin alueella (410 nm) käyttäen automaattista tulostusta (käytetty laite: Cary 210 -spektrofo-tometri, Varian Associates). Reaktiot pantiin alulle injektoimalla 10 μΐ HLE-liuosta 3 ml:n kyvettiin, joka sisälsi 2,89 ml puskuria (10 mM natriumfostaatti, 100 mM 35 NaCl, pH 7,6), 50 μΐ substraattiliuosta DMS0:ssa ja 50 μΐ DMS0:ta. Aluksi saadut, vakaana pysyvät p-nitroaniliinin is 84171 tuottonopeudet laskettiin sovittamalla koetulokset lineaariseen riippuvuuteen ajasta käyttäen lineaarista pienimmän neliösumman menetelmää. Ilman inhibiittoria määritettyä nopeutta käytettiin standardina laskettaessa inhibiittorin 5 Kt-arvoja.
Poikkeuksetta kaikkien keksinnön mukaisesti saatujen peptidien todettiin olevan HLE:n "hitaasti-sitovia” inhibiittoreita, ja siten ne vaativat erityisiä analyysimenetelmiä HLE-inhibition Kj-arvoJen määrittämiseen [katso 10 Williams, J.W. ja Morrison, J.F., Meth. Enz. 63 (1979) 437, jossa on kuvattu näitä menetelmiä]. Tyypillisessä kokeessa 3 ml:n kyvettiin lisättiin 2,89 ml puskuria (10 mM natriumfosfaatti, 500 mM NaCl-liuos, pH 7,6), 50 μΐ inhibiittoriliuosta DMS0:ssa ja 50 μΐ substraattiliuosta 15 DMS0:ssa. Kyvetti suljettiin tulpalla ja sitä käänneltiin useita kertoja sisällyksen sekoittamiseksi, sitten kyvetti sai seistä spektrofotometrissä (25 °C). Viiden minuutin kuluttua, jona aikana reaktioliuoksen lämpötila oli tasoittunut, kyvettiin lisättiin 10 μΐ entsyymiperusliuosta 20 reaktion aikaansaamiseksi. Inhibiittorikonsentraation 0- kokeita suoritettiin 2 tai 3 ja inhibiittorin eri konsent-raatiolla suoritettiin jokaisella vähintään kolme koetta. K^-arvot laskettiin käyttäen menetelmiä, joihin edellä viitattiin (Williams ja Morrison).
25 Taulukoissa 1, 2 ja 3 esitetään koetuloksia, jotka on suoritettu edellä kuvattua menetelmää käyttäen ja joista käyvät ilmi edustavan joukon kaavan la, Ib ja Ie mukaisia yhdisteitä ihmisen valkosolujen elastaasientsyymiä inhiboivat ominaisuudet (molaariset K^-arvot).
84171 16
Taulukko 1
Kaavan la mukaisten yhdisteiden ihmisen valkosolujen elastaasientsyymiä inhiboivat ominaisuudet (R·1 = isopropyyli; n = 1) 5 3
Esim. R A K.-arvo
nro (RxlO
B m 10 _ 7 2-(1-adamantyyli)etyyli 0.C0 6 7 8 Ph( CH2 )4 CO 8,1 8 9 PhCH2- O.CO 1,8 6 15 29 CH3OC. (CH2 )n- O.CO 9 8 30 H02C. (0Η2)η- O.CO 3,2 7 31 Z.NH(CH2)4- CO 1,0 7 32 PhO( CH2 )3- CO 5,7 7 33 2-morfolinoetyyli O.CO 4,6 6 20 34 2-(2-pyridyyli)etyyli O.CO 2,3 7 35 (PhCH2OCH2)2CH- O.CO 1,4 7 36 PhOCH2CO. NH (CH2) 3- CO 4,4 7 37 CH3OCO. (CH2)2- CO 1,5 6 38 t-BuO.CO.NH(CH2)2- CO 8,5 7 25 39 PhCO.NH( CH2 )2- CO 6,0 7 40 Ph2CH. CO. NH( CH2 )3- CO 1,7 7 41 CH30. (CH2)2.0. (CH2)2- O.CO 4,1 6 42 PhCH2NHCO(CH2)2- CO 2,2 6 43 Z.NH(CH2)2- CO 2,1 7 30 44 Z.NH(CH2)3 CO 2,1 7 45 (PhOCH2CH2)2CH- (a) CO 7,6 7 46 (PhOCH2CH2)2CH- (b) CO 2,6 8 47 (p-etoksikarbonyylife- nyyli) ,NHCO.NH(CH2)5- CO 5,7 8 35 48 Z.NH(CH2)5- CO 1,9 7 49 (p-karboksifenyy- li ). NHCONH( CH2 )5- CO 3,2 7 50 Ph. S02. NH (CH2) 5- CO 4,7 7
Taulukko 2 17 841 71
Kaavan Ib mukaisten yhdisteiden ihmisen valkosolu-5 jen elastaasientsyymiä inhiboivat ominaisuudet (R1 = isopropyyli; R4 = H; n = 1)
Esim. R2 R3 A K.-arvo
nro (ikxlO
10 B m 11 i-Pr PhCH2- 0.C0 1,6 9 15 12 i-Pr 2-(2-oksopyrroli- dinyyli)etyyli- O.CO 1,0 8 13 i-Pr Me02C. (CH2)2- CO 1,3 8 14 i-Pr H02C.(CH2)- CO 1,5 7 15 i-Pr 4-Et02C-Ph- NH.CO 5,0 9 20 16 i-Pr 4-H02C-Ph- NH.CO 1,4 8 17 i-Pr Ph. (CH2 )3- CO 1,2 9 18 i-Pr 2-(1-adamantyyli)- etyyli- O.CO 2,0 10 19 i-Pr MeO. (CH2)2.0(CH2)2- O.CO 2,0 8 25 20 i-Pr 4-MeO-Ph- CO 3,5 9 21 Z.NH(CH2)4 PhCH2- O.CO 9,0 10 22 PhCH2 PhCH2- O. CO 3,1 9 51 i-Pr 1-naftyyli- CO 4,7 9 52 i-Pr 4 - (MeS02NHC0) - 30 fenyyli- NH.CO 4,2 9 53 i-Pr 2-morfolinoetyyli- O.CO 2,3 9 54 i-Pr 2,4-Cl~-Ph- CO 3,2 9 55 i-Pr Ph- O.CO 1,5 9 56 i-Pr 2-(2-pyridyyli- 35 etyyli)- O.CO 1,1 8 57 i-Pr 4-F-Ph- NH.CO 1,1 8 58 i-Pr 4 -(PhS02NHC0)Ph- NH.CO 3,7 9 59 i-Pr 2-(3-tienyyli)- etyyli- O.CO 3,4 9 40 60 Et t-butyyli- O.CO 1,5 8 61 Et 2-tienyylimetyyli CO 1,1 8 62 Et PhCH2- O. CO 5,2 9 63 Et Ph- O. CO 5,9 9 64 i-Pr 4-asetamido-Ph- SO? 5,5 8 45 65 Z.NH(CH2)4 t-butyyli- O.CO 5,8 9 66 i-Pr 2-CH2N-5-Cl-Ph- CO 3,6 8 67 Et 4-MeO-Ph- CO 1,8 8 68 Et 2-(1-adamantyyli)- etyyli- O.CO 9,0 10 50 69 PhS02NH- (CH2)4 t-butyyli- O. CO 9,5 9 70 Et 4-Et02C-Ph- NH.CO 7,7 9 71 Et 4-H02C-Ph- NH.CO 1,6 8 72 Z.NH(CH2)4 Ph- S02 1,7 9
Eslm· R2 R3 A K. -arvo nro (&χ10 18 841 71 B m 5 73 Et MeO( CH2 )20( CH2 )2- 0.C0 4,1 8
74 i-Pr (Z)-H2N.CO.NH.CO
CH=CH- CO 1,6 8 75 1-Pr Ph- NH.CO 2,6 9 10 76 PhCH2 4-Et02C-Ph NH.CO 7,6 9 77 i-Pr 4-(1-naftyyli- S02NHC0)Ph- NH.CO 1,0 9 78 Z.NH(CH2)4 4-H02C-Ph- NH.CO 6,9 9 79 i-Pr 4-H02C-Ph- CO 6,5 9 15 80 Et Ph- S02 1,0 8 81 Et l-Et02C-syklo- pentyyli- CO 8,4 8 82 Et 1-adamantyyli- S02 1,4 9 83 Et l-H02C-syklo- 20 pentyyli- CO 7,6 8 84 i-Pr 4-Me02C-Ph- CO 2,2 9 85 PhCH2 4-H02C-Ph- NH.CO 1,4 8 86 i-Pr 4-Me02C-PhCH2- 0.C0 1,8 9 87 i-Pr (E)-4-(Et02C) - 25 PhCH=CH- CO 8 10 88 i-Pr 2-Et02C-Ph- NH.CO 3,8 9 89 i-Pr 4-( 4-N02-PhS02- NHCO)-Ph- CO 1,1 9 90 Z.(CH2)2 PhCH2- O.CO 3,0 10 30 91 i-Pr 1-adamantyyli- S02 1,2 9 92 Ph 2-EtOzC-Ph- NH.CO 1,7 8
93 PhS02NH
(CH2)4 PhCH2- O.CO 1,1 9 94 i-Pr 4-(PhS02-NHC0)-Ph- CO 1,4 9 35 95 i-Pr 4-(4-Br-PhS02- NHCO)-Ph- CO 6,0 10 96 i-Pr 1-naftyyli- S02NHC0NHC0(CH2)2- CO 6,1 9 97 i-Pr 4-asetamido- 40 Ph.OCH2- CO 4,4 9 98 i-Pr 4-H02C-PhCH2- O.CO 5,2 9 99 i-Pr 4-(H2NCOCH2)-
PhO. (CH2)3- CO 4,0 9 100 i-Pr (E)-4-H02C-Ph- 45 CH=CH- CO 2,0 9 101 i-Pr 4-Et02C-Ph.0CH2- CO 4,7 9 102 i-Pr 4-Et02C-Ph. (CH2)2- CO 1,1 9 103 i-Pr 4-HO-Ph CO 5,5 9 104,121i-Pr 4-(4-ClPhS02- 50 NHCO). Ph- CO 5,0 10 105 i-Pr 4-H02C-Ph. (CH2)2- CO 2,1 9 106 i-Pr 4-(4-ClPhS02- NHCO).Ph(CH2) 2- CO 8,0 10 19 841 71
Esim- R2 R3 A K. -arvo nro (RxlO m B m 5 _______ 107 i-Pr (E)-4-(4-ClPhS02- NHCO)-Ph-CH=CH- CO 5,0 10 108 i-Pr 4-(4-Br-PhS02- NCH2)Ph.CO)Ph- CO 2,0 10 10 109a i-Pr 1-adamantyyli- S02 2,7 9 110b i-Pr 4-(PhS02NHC0).Ph- NH.CO 2,6 9 lllc Ph PhCH2- 0.C0 2,4 9 112d Ph PhCH2- O.CO 0,28 8 113e i-Pr 4-(4-Br-PhS02- 15 NHCO).Ph- CO 7,0 8 114f i-Pr 4-(4-Br-PhS02- NHCO).Ph- CO 3,3 10 115g i-Pr 4-(4-Cl-PhS02- NHCO).Ph- CO 4,0 10 20 116h i-Pr 4-(4-Cl-PhS02- NHCO).Ph- CO 1,0 7 117,6i i-Pr PhCH2- O.CO 6,0 10 118 j PhCH2- PhCH2- O.CO 1,2 7 119k i-Pr 4-H02C.Ph- NH.CO 3,6 9 25 1201 i-Pr 4-HOzC.Ph- NH.CO 1,0 6
Huomautuksia: Z = pHCH2O.CO; pH = fenyyli; i-Pr = isopropyyli; Me = metyyli; Et = etyyli 30 (a) vaihtoehtoinen isomeeri esimerkin 91 yhdisteelle (b) ainoa seoksesta saatu isomeeri esimerkissä 58 (c) ensimmäinen esimerkistä 92 saatu isomeeri (d) toinen esimerkistä 92 saatu isomeeri (e) ensimmäinen esimerkistä 95 saatu isomeeri 35 (f) toinen esimerkistä 95 saatu isomeeri (g) ensimmäinen esimerkistä 104 saatu isomeeri (h) toinen esimerkistä 104 saatu isomeeri (i) ensimmäinen esimerkistä 11 saatu isomeeri (j) toinen esimerkistä 11 saatu isomeeri 40 (k) ensimmäinen esimerkistä 16 saatu isomeeri (1) toinen esimerkistä 16 saatu isomeeri
Taulukko 3 20 8 4 1 71
Kaavan le mukaisten yhdisteiden ihmisen valkosolu-5 jen elastaasientsyymiä inhiboivat ominaisuudet (R1 = R2 = isopropyyli; R4 = R6 = H; n = 1)
Esim. R3 A R5 K.-arvo nro (RxlO”m 10 B m 23 CH302C. (CH2)2- CO butyyli 1,1 10 15 24 H02C.(CH2)2- CO butyyli 1,1 8 25 PhCH2- 0.C0 Z.(CH2)4 1,0 10 26 CH302C. (CH2)2- CO Z.NH(CH2)4 3,0 10 27 H02C.(CH2)2- CO Z.NH(CH2)4 1,0 10 28 PhCH2- CO Z.NH(CH2)4 1,0 10 20 122 PhCH2- 0.C0 Z.NH(CH2)4 2,0 10 123 PhS02NHC0. (CH2)2- CO butyyli 4,8 9 124 CH3S02NHC0. (CH2)2-CO butyyli 3,5 8 125 PhS02NHC0. (CH2)2- CO Z.NH(CH2)4 1,0 9 126 1-adamantyyli- 25 S02NHC0(CH2)2- CO butyyli 1,1 9
Huomautuksia: Ph = fenyyli; Z = PhCH2O.CO-:
Kj-arvot annetaan mooleina 30
Eläinkokeet
Emfyseemaeläinkokeissa eläimille annetaan intra-trakeaalisesti (i.t.) elastolyyttistä proteaasia, joka aiheuttaa hitaasti eteneviä keuhkoja hajottavia vaurioita.
: : 35 Nämä vauriot arvioidaan normaalisti joidenkin viikkojen tai kuukausien kuluttua alkuperäisestä käsittelystä. Nämä proteaasit aiheuttavat kuitenkin myös vaurioita, jotka voidaan havaita ensimmäisinä tunteina. Aikaisissa vaurioissa esiintyy ensin verenvuotoa, joka kehittyy ensim-40 mäisen vuorokauden kuluessa tulehdukselliseksi vaurioksi, joka häviää ensimmäisen viikon jälkeen. Tämän aikaisen vaurion toteamiseksi suoritettiin seuraava koe.
Hamstereille annettiin kevyt nukutus Brevitalilla. Sitten annostettiin suoraan henkitorveen fosfaattipusku-45 roitua suolaliuosta (PBS), pH 7,4, joko yksin tai sisäl- 2i 84171 tää 400 pg ihmisen leukosyyttielastaasia (HLE). 24 tunnin kuluttua eläimet tapettiin, keuhkot poistettiin ja keuhkoista erotettiin varovasti ylimääräinen kudos. Märän keuhkon paino määritettiin, keuhkot huuhdottiin PBStllä ja 5 huuhtoutunut puna- ja valkosolujen kokonaismäärä määritettiin. Märän keuhkon paino, huuhtoutuneiden punasolujen kokonaismäärä ja huuhtoutuneiden valkosolujen kokonaismäärä ovat HLE-annon jälkeen kohonneita annoksista riippuvalla tavalla. Yhdisteet, jotka ovat tehokkaita elastaasi-10 inhibiittoreita, pystyvät estämään tai vähentämään entsyymi-indusoitua vaurioitumista alentamalla märän keuhkon painoa ja pienentämällä huuhtoutuneiden puna- ja valkosolujen kokonaismäärää, kun näitä arvoja verrataan arvoihin, jotka on saatu annettaessa pelkästään HLE:tä. Yhdis-15 teiden teho niiden käyttökelpoisuuden määrittämiseksi HLE-vaurioiden estäjinä voidaan arvioida antamalla niitä yhdessä HLE:n kanssa tai erilaisina ajankohtina ennen HLE-antoa. Keksinnön mukaisesti saaduilla yhdisteillä saatiin tilastollisesti merkitseviä arvoja keuhkojen märkäpainon 20 alenemisessa ja huuhtoutuneiden solujen kokonaismäärässä, kun vertailuun käytettiin pelkällä HLE-annostuksella saatuja arvoja.
Kaavojen Ia, Ib ja Ie mukaisilla yhdisteillä oli aktiivisuutta ainakin yhdessä edellä kohdissa "Inhibitio-25 mittaukset" tai "Eläinkokeet" kuvatussa kokeessa. On huomattava, ettei aina saatu suoraa korrelaatiota yhdisteiden aktiivisuuden (inhibitiomittauksella saatu K^arvo) ja eläinkokeissa saatujen huuhtoutuneiden solujen kokonaismäärän ja märän keuhkon painon alenemisen (verrattuna ar-30 voihin, jotka on saatu annettaessa pelkästään HLE:tä) välille. Uskotaan, että eläinkokeella saadaan paremmin tällaisen yhdisteen aktiivisuutta emfyseeman käsittelyssä ennustava tulos.
Farmakokinetlikka: 35 Urospuolisille Syyrian hamstereille (80 - 120 g) annetaan suonensisäisesti injektiona koeyhdistettä. Ennen 22 84171 injektiota ja erilaisina ajankohtina sen jälkeen eläimistä otetaan kevyessä eetterinukutuksessa sydänpunktuurilla noin 0,2 ml:n verinäytteitä. Veri pannaan 2 ml:n sentrifu-giputkiin, joissa veri saa hyytyä tunnin ajan. Näyte sent-5 rifugoidaan ja seerumi poistetaan.
Lääketasot määritetään inaktivoimalla ensin endo-geeniset elastaasi-inhibiittorit inkuboimalla seerumia (50 μΐ) 5 minuuttia puskurin (sama määrä) kanssa, joka sisältää 5 mg/ml naudan haimatrypsiiniä. Trypsiini-inaktivoitu 10 seerumi (10 μΐ) lisätään sitten 0,52 ml:n kyvettiin, joka sisältää puskuria, jonka HLE-pitoisuus on 20 nM. 30 minuutin inkuboinnin jälkeen reaktio käynnistetään lisäämällä substraattia (350 μΐ) (MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA, 1,6 mM), ja reaktiota seurataan spektrofotometrisesti aallon-15 pituudella 410 nm. Vertailutarkoituksissa koeyhdisteiden seerumipysyvyys määritetään seuraavalla tavalla:
Seeruminäytteiden prosentuaalinen inhibitio laskettiin seuraavasti: 20 Vo - Vi
Inhibitio-% = - x 100, jossa
Vo
Vo on kontrolliseerumin läsnäollessa saatu nopeus ja Vi 25 inhiboidun reaktion nopeus. Tulokset ilmoitetaan inhibitio-%: n logaritmina ajan suhteen laskettuna inhibiittorin antamisesta. Tuloksena olevasta käyrästä lasketaan arvioitu seerumin puoliintumisaika (t05).
Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voi-30 daan antaa lämminverisille eläimille, varsinkin ihmiselle, keuhkoemfyseeman, ateroskleroosin, nivelreuman ja osteo-artriitin käsittelyyn, varsinkin keuhkoemfyseeman käsittelemiseksi. Antotapa voi olla oraalinen tai parenteraali-nen, johon sisältyy ihonalainen anto osmoottisella pumpul-35 la tai jauhe- tai nesteaerosolia käyttäen. Yhdisteet voidaan muodostaa tavanomaisella tavalla oraalisiksi tai pa- 23 841 71 renteraalisiksi annosmuodoiksi liittämällä yhteen 10 - 250 mg annosyksikköä kohti yhdistettä ja tavanomaista väliainetta, täyteainetta, sideainetta, säilöntäainetta, stabilointiainetta, makuainetta ym., joita käytetään tavanomai-5 sessa farmaseuttisessa lääkevalmistuksessa, esim. siten kuin US-patenttijulkaisussa 3 755 340 on kuvattu. Parente-raalisessa lääkeannossa potilaalle voidaan antaa yhdistettä 3 - 4 kertaa vrkrssa 1 - 10 ml suonensisäisesti, lihaksensisäisesti tai ihonalaisesti injektiona 0,02 - 10 10 mg/kehonpaino-kg. Injektiovalmiste voi sisältää yhdistettä vesipitoisessa isotonisessa, steriilissä liuoksessa tai suspensiossa, joka mahdollisesti sisältää säilöntäainetta, kuten fenolia, tai liukenemista auttavaa ainetta, kuten etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA). Jauheaerosolina 15 yhdisteitä voidaan annostaa samalla tavalla kuin cromolyn- <β\ natriumia käyttäen Spinhaler -turboinhalaatiolaitetta (tuottaja: Fisons Corp of Bedford, Massachusetts) ja kapseleita, jotka sisältävät noin 0,1 - 50 mg/kapseli; keskimääräinen aikuisen ihmisen annos on 1 - 8 kapselia/vrk. 20 Jokainen Spinhaler®-iaitteessa käytetty kapseli sisältää tarvittavan määrän yhdistettä, jolloin loppuosa 20 mg:n kapselin sisällöstä on farmaseuttisesti hyväksyttävää kantaja-ainetta, kuten laktoosia. Nesteaerosolina yhdisteitä annostetaan noin 100 - 1 000 pg painallusta kohti, jossa 25 vapautuu standarditilavuus ponnekaasua. Nesteaerosolia voidaan antaa 1-8 annosta vrk:ssa, jolloin annosten vaihtelut riippuvat käsiteltävän kohteen sairauden vakavuudesta, kehon painosta ja aerosolihiukkasten hiukkas-kokojakautumasta, sillä pienemmät hiukkaset tunkeutuvat 30 syvemmälle keuhkoihin. Nesteaerosolien ponneaineita, esim.
fluorattuja hiilivetyjä tai isobutaania, aerosolipulloja, -venttiilejä ja -painonappeja ovat Lachman, L. et ai. kuvanneet teoksessa "The Theory and Practice of Industrial Pharmacy", Lea and Febiger, Philadelphia (1976).
35 Seuraavissa esimerkeissä ja koko selityksessä käy tetään seuraavia lyhenteitä ja merkintöjä: atm (ilmake- 24 841 71 hä); kp., (kiehumispiste); °C (celsiusaste); kaikki lämpötilat ovat celsiusasteina, jollei muuta ilmoiteta; g (gramma); h (tunti); mg (milligramma); min (minuutti); ml (millilitra); 1 (litra); mol (mooli); mmol (millimooli); 5 sp. (sulamispiste); N (normaalinen); nm (nanometri); nM (nanomolaarinen); x (kertaa); huoneen lämpötila (20 -23 °C); DCC (1,3-disykloheksyylikarbodi-imidi); DMF (dime-tyyliformamidi); DMSO (dimetyylisulfoksidi); Et20 (dietyy-lieetteri); EtOAc (etyyliasetaatti); HOAc (etikkahappo); 10 HOBT (hydroksibentsotriatsoli); MeOH (metyylialkoholi); EtOH (etyylialkoholi); Pd/C (palladium/hiili-katalyytti); pNA (p-nitroanilidi); THF (tetrahydrofuraani); CBZ (bent-syylioksikarbonyyli); t-BOC (tert-butyylioksikarbonyyli); DMF (dimetyyliformamidi); TEA (trietyyliamiini); AcOH 15 (etikkahappo); NMM (N-metyylimorfoliini); < (pienempi tai yhtä suuri kuin); TFA (trifluorietikkahappo); Ac20 (eti-kkahappoanhydridi); CDI (karbonyylidi-imidatsoli); WSCDI (vesiliukoinen karbodiimidi: l-etyyli-3-(3-dimetyyliamino-propyyliJkarbodi-imidihydrokloridi); DMPA (4-dimetyyliami-20 nopyridiini); Dess-Martin-perjodinaan!(1,1,1-triasetoksi- 2,l-bentsoksojodol-3(3H)-oni); HCl-kaasu (kaasumainen HC1) - muuten HC1 on aina vesiliuoksena; Rh/C (rodium/hiili-katalyytti); 0 (fenyyliryhmä); TLC (ohutkerroskromatogra-fia silikageelillä, jollei muuta mainita); Rf (suhteellinen 25 liikkuvuus TLC:ssä); MPLC (keskipainenestekromatografia); HPLC (korkeapainenestekromatografia); t„(HPLC-retentioaika minuutteina); FR (HPLC virtausnopeus, ml/min); Col A (Zo-rbax ODS -analyyttinen kolonni, 4,6 x 25 cm); Col B (Phenomenex® Zorbax® C-8 -analyyttinen kolonni, 4,6 x 35 et 30 cm); Col C (Altex Ultrasphere oktyyli 10 mm (sisäläpi-mitta) x 25 cm, 5 pm analyyttinen ja preparatiivinen kolonni); flash-kromatografia (flash-kolonnikromatografia silikageelillä, jollei muuta mainita); imukromatoqrafia (imukolonnikromatografia silikageelillä). Lisäksi käyte-35 tään tavanomaisia alkuaineiden symboleja C, H, N jne; 133,3 Pa = 1 torr; 1H-NMR (ydinmagneettinen resonanssi)- 25 841 71 spektrit saatiin käyttäen 80 MHz:n tai 250 MHz:n laitetta ja sisäisenä standardina tetrametyylisilaania (TMS) (esimerkissä käytetty liuotin on mainittu esimerkissä); 6 (miljoonasosia alakenttään TMS:stä); s (singletti); d 5 (dupletti), dd (kaksi duplettia); m (multipletti)- Nimikkeistö: yhdenmukaisuuden ja selvyyden vuoksi käytetään, milloin se on mahdollista, "aminohapposekvenssityypin" nimiä. Lisäksi kaavan V mukaiset amiinit ja kaavojen I, II, III, IV ja VII mukaisten C-terminaaliamidien N-sub-10 stituentit, jotka ovat muodollisesti johdettuja kaavasta V, numeroidaan seuraavasti: R1 CH R1 OH R1
1 I f I ! (I
H2N.CH.CH.CF3 W^NH.CH.CH.CFg j^NH.CH.CO.CFg 15 321 321 3 2 1 V IV, VII (osakaava) I, II (osakaa- va)
Kun tarvittiin lisämateriaalia tai milloin näin 20 mainitaan, useat esimerkit toistettiin.
Esimerkki 1 2( RS), 3(SR)-3-amino-4-metyyli-1,1,1-trifluori-2-pentanolln hydrokloridisuola a. 2-metyyli-l-nitropropaani 25 l-jodi-2-metyylipropaania (94,0 g, 0,51 mol) li sättiin tipoittain etukäteen jäähdytettyyn (O °C) AgN02:n / ί nn n n cc 0:ssa (180 ml). Reaktio- (100,0 g, 0,65 mol) suspensioon Et2 seos suojeltiin valolta ja sitä sekoitettiin yön yli, jolloin se sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos suo-
A
30 datettiin Celitellä . Suodos konsentroitiin vakuumissa, ja jäännös vakuumitislattiin (varoitus: mahdollisesti räjähtävä), jolloin saatiin 37,7 g (0,366 mol) tuotetta, kp.
61 - 65 0C/6913,6 Pa (52 mm Hg).
35 26 841 71 b. 2(RS),3(SR)-4-metyyli-3-nitro-l,1,1-trifluori- 2-pentanoli 1- nitro-2-metyylipropaania (37,7 g, 0,366 mol) esimerkistä la, trifluoriasetaldehydietyylihemiasetaalia 5 (58,5 g 0,366 mol, 90 %:n puhtausaste) ja K2C03:a (3,4 g, 0,025 mol) sekoitettiin yhdessä 60 °C:ssa 3 h ja sitten huoneen lämpötilassa 3 vrk. Suolaliuosta ja 1 N vesipitoista HCl:a (50 ml) lisättiin ja orgaaninen kerros erotettiin. Vesikerros uutettiin Et20:lla (2 x 250 ml), yhdis-10 tetyt orgaaniset kerrokset pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumis-sa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla silika-geelillä gradienttieluoimalla CH2Cl2:heksaaniseoksella (50:50), CH2Cl2:heksaaniseoksella (75:25), CH2Cl2:lla (100 15 %) ja MeOH:CH2Cl2-seoksella (5:95), jolloin saatiin tuote (44,9 g); TLC, Rf = 0,65, silikageeli, EtOAc:CHCl3 (5:95).
c. 2(RS),3(SR)-3-amino-4-metyyli-l,1,1-trifluori- 2- pentanolin hydrokloridisuola
Esimerkin Ib tuotteen (37,0 g, 0,184 mol) liuos 20 Et20:ssa (200 ml) lisättiin tipoittain litiumaluminiumhyd-ridin (22,0 g, 0,58 mol) suspensioon Et20:ssa (800 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 45 minuuttia, ja siihen lisättiin varovasti kyllästettyä Na2S04:n vesiliuosta (110 ml). Muodostunut suspensio suodatettiin; suodosta käsiteltiin 25 HCl-eetteriliuoksella ja seos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin 37,6 g tuotetta, jota käytettiin ilman enempää puhdistamista. 1H-NMR (CD3COCD3) (250 MHz): 1,2 6, m, 6H; 2,3 6, m, 1H; 3,586, m, 1H; 4,986, m, 2H; 7,786, m, (NH2).
30 27 841 71
Esimerkki 2 2(RS), 3(SR) -N- [3- (4-metyyli-1,1,1-trlfluori-2-hydr- okslpentyyll)]-L-prollnamidl a. 2(RS),3(SR)-l-[(fenyyllmetoksi)karbonyyli]-N- 5 [3-(4-metyyli-l,1,l-trifluori-2-hydroksipentyyli)]- L-prolinamidi
Isobutyyliklooriformiaatin (11,01 g, 0,08 mol) liuos vedettömässä THFrssä (30 ml) lisättiin tipoittain viiden minuutin kuluessa typpikehässä etukäteen jäähdytet-10 tyyn (-15 °C) CBZ-L-proliinin (19,21 g, 0,077 mol) ja N-metyylimorfoliinin (8,18 g, 0,081 mol) liuokseen THFrssä (300 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 15 min -15 °C:ssa. Seoksen lämpötila alennettiin sitten -40 °C:seen, ja siihen lisättiin tipoittain esimerkin le tuotteen (16,00 g, 0,077 15 mol) ja N-metyylimorfoliinin (8,18 g, 0,081 mol) liuos THF:ssä (200 ml). Reaktioseosta sekoitettiin -40 °C:ssa 1 h, sitten seos sai vähitellen lämmetä huoneen lämpötilaan, ja sitä sekoitettiin edelleen tunnin ajan. Reaktioseos suodatettiin ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Saatu 20 siirappi liuotettiin CHCl3:een, liuos pestiin 20-%:11a sitruunahapon vesiliuoksella (2 x 75 ml). Orgaaninen kerros konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote valkeana sameana siirappina. Raakatuotetta trituroitiin eetteri :heksaani seoksessa (1:2), jolloin saatiin kolme erää 25 tuotetta valkeana jauheena (17,11 g); TLC, Rf = 0,47, sili-kageeli, MeOH:CHCl3 (3:97);.sp. 152 - 154 °C; HPLC, tR = 14,06, 16,63, 18,23, 19,00, Zorbax® 0DS -analyyttinen ko-lonni, H20:CH3CN (70:30), virtausnopeus * 3 ml/min.
b. 2(RS),3(SR)-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trifluori-2- 30 hydroksipentyyli)]-L-prollnamidi
Esimerkin 2a tuote (2,00, 4,97 mmol) liuotettiin vedettömään etanoliin (50 ml), liuokseen lisättiin 10-%:sta Pd/C-katalyyttiä (0,5 g) ja reaktioseosta hydrattiin (310 126,53 Pa vedyn paine) 3 h huoneen lämpötilassa.
35 Reaktioseos suodatettiin Celitellä® ja liuotin haihdutet- 28 841 71 tiin vakuumissa, jolloin saatiin 1,36 g tuotetta, jota käytettiin ilman enempää puhdistamista.
Esimerkki 3 2(RS), 3(SR)-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-tri-5 fluori-2-hydroksipentyyll)]-L-prolinamidi a. N-[(fenyylimetoksi)karbonyyll]-L-valyyli-L-pro- liini-metyyliesteri 1-hydroksibentsotriatsolia (163,3 g, 1,2 mol) lisättiin etukäteen jäähdytettyyn (0 °C) N-bentsyylioksikar-10 bonyyli-L-valiinin (151,8 g, 0,6 mol) liuokseen DMF:ssä (1,3 1), ja seosta sekoitettiin 15 min. L-proliinimetyyli-esterihydrokloridin (100,0 g, 0,6 mol) ja TEA:n (64,2 g, 0,63 mol) suspensio DMF:ssä (0,7 1) lisättiin, sitten lisättiin DCC:tä (137,1 g, 0,66 mol). Reaktioseosta sekoi-15 tettiin 3 h 0 °C:ssa ja sitten 3 vrk huoneen lämpötilassa. Reaktioseos suodatettiin ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Jäännös sekoitettiin EtOAc:hen (0,75 1) ja suodatettiin. Suodos pestiin peräkkäin 20-%:11a sitruunahapon vesiliuoksella (0,75 1), kyllästetyllä NaHC03-vesiliuoksel-20 la ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (271,3 g). Tuote puhdistettiin flash-kro-matografiällä silikageelillä käyttäen gradienttieluointia aloittaen CH2Cl2:lla ja lopettaen Me0H:CH2Cl2:11a (4:96), 25 jolloin saatiin 218,1 g tuotetta; TLC, Rf = 0,48, silika-geeli, MeOH:CHCl3 (5:95).
b. N-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyli-L-pro- liini
Esimerkin 3a tuotteen (158,8 g, 0,438 mol) liuok-30 seen Me0H:ssa (1,6 1) lisättiin 1 N NaOH-vesiliuosta (500 ml), ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 17 tuntia. Sitten lisättiin 1 N NaOH-vesiliuosta (100 ml) ja sekoittamista jatkettiin 5 tuntia. Vielä 50 ml 1 N NaOH-vesiliuosta lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin yön 35 yli· Reaktioseos konsentroitiin vakuumissa MeOH:n pois- 29 8 4 1 71 tamiseksi. Lisättiin vettä (1,0 1) ja vesiliuos uutettiin Et20:lla. Vesiliuos tehtiin happameksi 1 N HC1-vesiliuoksella (700 ml) ja uutettiin EtOAc:llä. EtOAc-uutteet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja 5 konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin 159,2 g tuotetta; TLC, Rf = 0,34, silikageeli, MeOH;CHCl3:AcOH (5:94:1).
c. 2(RS),3(SR)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-va-lyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1,-trifluori-2-hydroksi-pentyyli)]-L-prolinamidi 10 Isobutyyliklooriformiaattia (77,3 g, 0,566 mol) li sättiin etukäteen jäähdytettyyn (-15 °C) N-metyylimorfolii-nin (59,25 g, 0,566 mol) ja esimerkin 3b tuotteen (197,2 g, 0,566 mol) liuokseen vedettömässä THF:ssä (2,5 1), ja reaktioseosta sekoitettiin 10 min. Lämpötila alennettiin 15 -40 °C:seen, ja seokseen lisättiin N-metyylimorfoliinia (59,25 g, 0,566 mol) ja sitten tipoittain esimerkin le t-uotteen (117,5 g, 0,566 mol) liuos THF:ssä (2,5 1). Reak-tioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin 3 vrk. Reaktioseos suodatettiin ja suodos 20 konsentroitiin vakuumissa. Jäännös liuotettiin EtOAc:hen ja pestiin peräkkäin vedellä, 1 N HCl-vesiliuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin raakatuote (267,8 g). Tuote puhdistettiin flash-kromatografialla si-25 likageelillä käyttäen gradienttieluointia: THF:tolueeni (5:95) - THF:tolueeni (25:75), jolloin saatiin 183,8 g tuotetta; TLC, Rf*0,4, silikageeli, THF:tolueeni (20:80).
d. _2 (RS),3(SR)-L-valyyll-N-[3-(4-metyyll-l,1,1- tri-fluorl-2-hydroksipentyyli)]-L-prollnamidi 30 Esimerkin 3c tuotteen (36,7 g, 0,073 mol) ja 10- %:sen Pd/C-katalyytin (10 %, sisälsi 50 % vettä) seos hyd-rattiin Parr-ravistimessa (303 924 Pa H2-paine). Tunnin kuluttua reaktioastiasta poistettiin kaasu ja astia saatettiin jälleen H2-paineeseen, 0,5 tunnin kuluttua reak-35 tioseos suodatettiin Celitelläw ja suodos konsentroitiin 30 84171 vakuumissa, jolloin saatiin 26,0 g tuotetta; TLC, Rf=0,16, silikageeli, MeOH:CHCl3 (5:95).
Esimerkki 4 2(RS), 3(SR)-3-amino-4-metyyli-l,1,1-trifluori-2-5 pentanolin hydrokloridisuola a. 2-metyyli-l-nitropropaani
Esimerkin la yhdiste valmistettiin vaihtoehtoisesti seuraavasti: 5 litran 3-kaulapyöröpohjakolvi varustettiin mekaanisella sekoittajalla, lämpömittarilla, tiputussup-10 pilolla ja N2-johdolla. Kolviin pantiin AgNOz:ta (1 006,8 g, 6,54 mol) Et20:ssa (2,5 1), ja tiputussuppiloon lisättiin isobutyylijodidia (927,2 g, 5,03 mol). Sekä kolvi että tiputussuppilo käärittiin alumiinipaperiin reaktion suojaamiseksi valolta. Suspensio jäähdytettiin 5 °C:seen 15 (jäähaude) ja siihen tiputettiin sekoittaen 2 tunnin aikana jodidi. Koko lisäyksen ajan reaktioseoksen lämpötila pidettiin 5 °C:ssa tai sen alapuolella. Lisäyksen päätyttyä reaktioseos pantiin jäihin, jossa sen annettiin hitaasti yön yli lämmetä huoneen lämpötilaan. 48 tunnin sekoittani! -20 sen jälkeen otetun näytteen NMR-analyysi osoitti, että kaikki isobutyylijodidi oli kulunut. Reaktioseos suodatet-tiin Celitelläw hopeasuolojen poistamiseksi, ja suodatin-kakku pestiin Et20:lla (3 x 500 ml). Yhdistetyt suodokset kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin kier-25 tohaihduttimessa (hauteen lämpötila noin 35 °C) noin 600 ml:ksi. Fraktiotislaamalla (normaalipaine) (varoitus: mahdollisesti räjähtävä) saatiin puhdas nitroyhdiste (350,4 g, 68 %:n saanto); kp. 135 - 142 °C.
b. 2(RS),3(SR)-4-metyyli-3-nitro-l,1,1-trifluori- 30 2-pentanoli
Mekaanisella sekoittajalla ja N2-johdolla varustettuun 3 litran 3-kaulapyöröpohjakolviin vietiin K2C03:a (470,0 g, 3,4 mol), esimerkin 4a tuotetta (350 g, 3,4 mol) ja lopuksi trifluoriasetaldehydietyylihemiasetaalia (708,0 35 g, 4,4 mol). Seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneen läm- 3i 84171 pötilassa 78 h, jonka ajan kuluttua ^-NMR osoitti nitro-alkaanin kuluneen lähes täydellisesti loppuun. Reaktioseos laimennettiin CH2Cl2:lla ja suodatettiin. Suodosta käsiteltiin HCl-vesiliuoksella pH: n säätämiseksi arvoon 3.
5 Kerrokset erotettiin, ja vesikerros pestiin CH2Cl2:lla (500 ml). Yhdistetyt CH2Cl2-liuokset pestiin vedellä (1 litra) ja suolaliuoksella (1 litra), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin, jolloin saatiin 854,6 g raakatuotetta keltaisena öljynä. 1H-NMR osoitti tuotteen sisältävän nitroal-10 koholin molempia diastereomeereja (suhteessa noin 3:1, kuten alkoholiprotönien integroinnilla määritettiin), kuten alueella 6,0 - 6,5 olevista lukemista nähdään, kun ajo suoritettiin asetoni-d6:ssa, ja epäpuhtauksina oli liuottimia ja vähäisiä määriä lähtöaineita.
15 Tislaamalla alennetussa paineessa saatiin seuraa- vat fraktiot: _Paino_Kp. (°C)_ A 191,7 g 44-50 °C/normaalipaine lähtöaineita ja liuottimia 20 B 34,8 g 35 °C/1 torr - 45 °C/0,5 torr C 213,6 g 45 °C/0,5 torr - 95 °C/1,5 torr D 337,8 g 95 °C/1,5 torr - 105 °C/2 torr E 114,0 g loukun haihtuvat aineet 25 Myöhempien synteesivaiheiden pyhdistustoimenpitei den yksinkertaistamiseksi tässä vaiheessa pyrittiin saamaan pääasiallinen diastereomeeripari olennaisesti puhtaana ja jatkamaan synteesisarjaa käyttäen ainoastaan tätä materiaalia. Pääasiallinen diastereomeeripari kiteytyy 30 diastereomeerien seoksesta sekä myös kylmästä pentaanista värittöminä neulasina. Edellä olevan tislauksen fraktion C annettiin siten kiteytyä jääkaapissa yön yli. Tuote koottiin, pestiin kylmällä pentaanilla ja kuivattiin useiden tuntien ajan vakuumiuunissa (varoitus: tämä materiaali on 35 jonkin verran haihtuvaa, ja merkittäviä määriä voi pitkän 32 841 71 vakuumikäsittelyn aikana hävitä), jolloin saatiin 52,0 g olennaisesti puhdasta materiaalia. Fraktioita, joiden tiedettiin (NMR) sisältävän merkittäviä määriä haluttua isomeeriä, käsiteltiin toistuvasti tällä tavalla (suorite-5 ttiin uudelleentislaus, jotta saataisiin uusia fraktioita, joissa haluttu diastereomeeri on rikastuneena), jolloin lopuksi saatiin kaikkiaan 197,7 g olennaisesti puhdasta nitroalkoholia. Tämä määrä edustaa tämäntyyppisellä menetelmällä saatua määrää, joka ei vastaa saannon ylärajaa. 10 c. 2(RS),3(SR)-3-amino-4-metyyli-l,1,1-trifluorl- 2-pentanolin hydrokloridisuola Vedetöntä EtOH:ta (232 ml) lisättiin 10-%:seen Pd/C-katalyyttiin (2,30 g) N2-kehässä*. Lisättiin esimerkin 4b tuote (22,93 g, 0,144 mol) ja seos pantiin Parr-hyd-15 rauslaitteeseen (noin 480 000 Pa H2-paine) yöksi. Katalyytti poistettiin suodattamalla Celitellä®. Suodatuskakku pestiin EtOH:lla. Yhdistettyjen suodosten lävitse johdettiin HCl-kaasua, kunnes noin 8 g (noin 0,22 mol) oli absorboitunut. Liuos konsentroitiin kiertohaihduttimessa ja 20 saatuun jäännökseen lisättiin Et20:ta, joka haihdutettiin (tämä toistettiin useita kertoja). Saatiin valkea kiinteä aine, joka pestiin Et20:lla ja kuivattiin yön yli vakuumi-uunissa, jolloin saatiin 20,79 g (88 %) amiinihydroklori-dia. Hitaasti kuumennettaessa tuote pehmeni 90 °C:ssa ja 25 suli 118 - 120 °C:ssa. Kun näyte pantiin etukäteen 110 °C:seen kuumennettuun hauteeseen, se suli välittömästi.
* Vähemmän aktiivisella katalyyttinä (esim. 10-%:nen Pd/BaS04, märkä 10-%:nen Pd/C) tai reaktioajan ollessa riittämätön voidaan saada yhtä tai useampaa sivutuotetta.
30 Esimerkki 5 2( RS ), 3( SR)-L-valyyli-N-[3—(4-metyyli-l,1,1-tri-fluorl-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi a.N-[(fenyylimetoksi)karbonyyll]-L-valyyli-L-prol-iinimetyyliesteri 35 Mekaanisella sekoittajalla, N2-johdolla ja lämpö mittarilla varustettuun 3 litran 3-kaulapyöröpohjakolviin 33 841 71 lisättiin CBZ-L-valiinin (100,0 g, 0,40 mol) liuos DMF:ssä (1 litra, kuivattu seuloilla). Reaktioseos jäähdytettiin 0 °C:seen ja siihen lisättiin HOBT-hydraattia (108,1 g, 0,80 mol). Noin 15 min sekoittamisen jälkeen lisättiin yhtenä 5 annoksena L-proliinimetyyliesteri-hydrokloridin (66,2 g, 0,40 mol) ja TEA:n (41,8 g, 0,42 mol) suspensio DMF:ssä (500 ml). Suspension alashuuhtomiseksi lisättiin vielä 500 ml DMF:ää. Reaktioseokseen lisättiin sitten DCC:tä (90,8 g, 0,44 mol), loppuosa siitä huuhdottiin reaktioastiaan 10 DMF:llä (100 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 3 h 0 °C:ssa, sitten seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan, jossa sitä sekoitettiin edelleen 3 vrk. Reaktioseos suodatettiin ja suodos konsentroitiin alennetussa paineessa. Suodatuskakku pestiin EtOAc:llä (3x1 000 ml), suodos konsentroitiin ja 15 jäännös yhdistettiin DMF-liuoksen konsentroinnista saatuun jäännökseen. Yhdistetty tuoteseos (noin 2,5 1) laimennettiin Et20:lla (2 1) ja pantiin jääkaappiin yöksi. Sakka poistettiin suodattamalla. Kun suodos pestiin 1 N HCl:llä (1 litra), muodostui lisää sakkaa, joka poistettiin suo-20 dattamalla. Suodos pestiin sitten 1 N HCl:llä (1 litra), vedellä (0,5 1), kyllästetyllä NaHC03-liuoksella (2x1 litra) ja suolaliuoksella (0,5 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin, jolloin saatiin 587,2 g raakatuotetta. Se flash-kromatografoitiin silikageelillä (3,5 kg) käyttäen 25 gradienttieluointia [CH2C12 - 5-%:inen Me0H:CH2Cl2 (5:95)]. Sekafraktiot kromatografoitiin uudelleen epäpuhtauksien poistamiseksi. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin, jolloin saatiin 500,7 g (87 %) tuotetta, joka sisälsi vähäisen määrän alhaisen Rf-arvon omaavaa epäpuh-30 tautta; TLC, Rf=0,37, silikageeli, Et20:heksaani (3:1);
Rf - 0,53, silikageeli, MeOH:CHCl3 (5:95).
b. N-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyli-L-pro-liini 12 litran 3-kaulapyöröpohjakolviin, joka oli varus-35 tettu mekaanisella sekoittajalla ja N2-johdolla, lisättiin esimerkin 5a tuotteen (500,7 g, 1,38 mol) metanoliliuos 34 841 71 (4 1). Liuosta sekoitettiin, ja siihen lisättiin 1 N NaOH-liuosta (1,4 1), jolloin pH kohosi noin arvoon 13. Kolmen tunnin sekoittamisen jälkeen reaktioseoksen pH-arvo oli 11. Lisättiin vielä 1 N NaOH-liuosta (0,1 1) pH-arvon sää-5 tämiseksi 12:ksi, ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, MeOH poistettiin reaktioseoksesta konsentroimalla kiertohaihduttimessa. Samalla kun liuotin poistettiin, reaktioseokseen lisättiin kaikkiaan 1 litra vettä emäksen konsentraation alentamiseksi. Vesiliuos pes-10 tiin Et20:lla ja tehtiin sitten happameksi (pH noin 3,5) 1 N HCl-liuoksella (1,5 1). Kerrokset erotettiin ja vesi-kerros uutettiin EtOAc:llä (3x1 litra). Yhdistetyt orgaaniset liuokset pestiin suolaliuoksella (1 litra), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin, jolloin saatiin 493,0 g 15 (100 %) valkeata kiinteätä tuotetta; TLC, Rf=0,51, silika- geeli, MeOH:CHCl3 (5:95) (AcOH-lisäys).
c. 2(RS),3(SR)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-va-lyyli-N- [ 3—(4-metyyll-l, 1,1-trif luori-2-hydroksi-pentyyli)]-L-prollnamidi 20 Esimerkin 5b tuote (105,3 g, 0,302 mol) liuotet tiin N2-kehässä vedettömään THFiään (1,5 1) 3 litran 3-kaulapyöröpohjakolvissa, joka oli varustettu mekaanisella sekoittajalla, lämpömittarilla, N2-johdolla ja tiputussup-pilolla. Liuos jäähdytettiin -35 °C:seen, ja sitä käsitel-25 tiin 1 ekvivalentilla (34 ml, 0,309 mol) NMM:ää. Seokseen, jonka lämpötila pidettiin korkeintaan -35 °C:ssa, lisättiin tipoittain 20 minuutin kuluessa isobutyylikloorifor-miaattia (39 ml, 0,307 mol). Lisäyksen päätyttyä reaktio-seosta sekoitettiin tunnin ajan -35°C:ssa. Lisättiin vielä 30 1 ekv. (34 ml) NMM:ää. Sitten lisättiin esimerkin 4c tuote (62,8 g, 0,302 mol) THFtssä (300 ml) sellaisella nopeudella, että lämpötila pysyi S -35 °C. Lisäyksen päätyttyä lämpötila pidettiin s -35 °C:ssa tunnin ajan, sitten seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan samalla, kun sitä sekoitettiin 35 yön yli. Reaktioseos suodatettiin ja suodatuskakku pestiin THF:llä (1 litra). Yhdistetyt suodokset konsentroitiin, 35 84 1 71 jolloin saatiin 189 g raakatuotetta. Raakatuote flash-kromatografoitiin silikageelillä (5 000 ml) ja eluoitiin THF:tolueeniseoksella (1:9). Kun tuote alkoi eluoitua, liuottimen polaarisuutta muutettiin asteittain: THF:tolu-5 eeni (15:85); THF:tolueeni (20:80) ja lopuksi Me0H:THF:to-lueeni (2,5:30:70) (Me0H:ta käytettiin mahdollisimman vähän, jotta vältettäisiin alhaisen Rf-arvon omaavien epäpuhtauksien eluoituminen). Kolonnista saadut, tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin ja kuivattiin vakuumissa yön 10 yli, jolloin saatiin 12,0 g (8 %) lievästi epäpuhdasta tuotetta ja 131,6 g (87 %) olennaisesti puhdasta materiaalia (huom: kun tämän materiaalin liuos haihdutettiin täysin kuiviin, saatiin vaahto, joka jatketulla vakuumikäsit-telyllä muuttui kiinteäksi. Tämä työvaihe oli suoritetta-15 va riittävän suuressa kolvissa vaahdon paisumisen vuoksi). TLC, Rf=0,25, silikageeli, MeOH:CHCl3 (5:95), Rf=0,37, si-likageeli, THF:tolueeni (20:80). Kun materiaali täplitet-tiin kevyesti, molemmat isomeerit erosivat, ja saatiin täplät Rf=0,37 ja Rf=0,46, silikageeli, THF:tolueeni 20 (20:80).
(Huom: tässä menetelmässä ilmoitetun sisäisen lämpötilan ylläpitäminen näyttää olevan ehtona olennaisesti puhtaan tuotteen saamiselle).
d. 2(RS),3(SR)-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-25 trifluori-2-hydroksipentyyli)]-L-prollnamidi
Esimerkin 5c tuote (131,6 g, 0,262 mol) liuotettiin EtOH:hon (750 ml) ja liuosta sekoitettiin N2-kehässä suuressa Parr-hydrauspullossa olevan 10-%:sen Pd/C-kata-lyytin (50 % H20, 13,0 g) kanssa. Reaktioseosta ravistel-30 tiin Parr-laitteessa 480 000 Pa vedyn paineessa. Paineen aleneminen estettiin lisäämällä vetyä, kunnes vedyn kulutus lakkasi. Tutkittaessa reaktioseos TLC:llä todettiin kaiken lähtöaineen kuluneen. Reaktioseos suodatettiin Ce-litellä ja konsentroitiin vaahdoksi. Vaahtoa trituroi-35 tiin Et20:ssa, tuote suodatettiin ja kuivattiin, jolloin 36 84171 saatiin 81,4 g (84 %) vaaleanharmaata kiinteätä ainetta; TLC, R(»0,41, silikageeli, CHCl3:MeOH (10:1).
Esimerkki 6 3S(tai R)-fenyylimetoksikarbonyyli-L-valyyli-N-Γ3-5 (1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro- linamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 - CH(CH3)CH3, R3 = CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) a. 2R,3S,-3-amino-l,1,l-trifluori-4-metyyli-2-pen-ta-noli, D-viinihapon suola 10 Esimerkin 4e mukaisesti valmistettu amiinihydrok- loridi (20 g) liuotettiin veteen, ja liuos neutraloitiin kiinteällä NaHC03:lla. Vesiliuos uutettiin useita kertoja CH2Cl2:lla. Yhdistetyt uutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin, jolloin saatiin vapaa amiiniemäs (14,04 g) 15 valkeana kiinteänä aineena. Se lisättiin yhdessä D-viinihapon (12,31 g) kanssa kiehuvaan vedettömään etanoliin (100 ml) ja muodostunut samea liuos suodatettiin kuumana suodatinpaperilla. Liuos jäähdytettiin ensin hitaasti yön yli huoneen lämpötilaan ja pantiin sitten jääkaappiin 20 useiksi tunneiksi. Sakka suodatettiin lasisintterisuodat-timella, pestiin kylmällä Et0H:lla ja kuivattiin yön yli vakuumissa 40 °C:ssa. Kuivatusta valkeasta kiinteästä aineesta (4,56 g) otettu näyte suli 127 - 130 °C:ssa. Suurin osa saadusta materiaalista (4,05 g) liuotettiin kiehuvaan 25 etanoliin (20 ml), ja liuoksen annettiin hitaasti jäähtyä huoneen lämpötilaan. Saostunut valkea geelimäinen kiinteä aine suodatettiin lasisintterisuodattimelle ja pestiin useita kertoja etanolilla. Kuivaamalla vakuumiuunissa 40 °C:ssa useiden tuntien ajan saatiin valkea kiinteä aine, 30 sp. 132 - 134 °C.
b. 2S,3S-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trif luorl-2-hydroksi-4-metyylipentyyli) ] -L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R1 -CH(CH3)CH3, R3 = CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 35 Esimerkissä 5b valmistettu happo (1,00 g, 2,87 mmol) liuotettiin N2-kehässä vedettömään THF:ään (16 ml) 50 37 841 71 ml:n 3-kaulapyöröpohjakolvissa, joka oli varustettu lämpömittarilla, N2-johdolla, septumilla ja magneettisauvalla. Lisättiin NMMtää (0,34 ml, 3,09 mmol) ja saatua liuosta sekoitettiin ja jäähdytettiin -35°C:seen. Lisättiin isobu-5 tyyliklooriformiaattia (0,37 ml, 2,85 mmol) 2 minuutin kuluessa siten, ettei lämpötila kohonnut yli -35 °C:een. Reaktioseosta sekoitettiin 1 h -45 - -35°C:ssa. Esimerkissä 6a valmistettua D-tatraattisuolaa (0,92 g, 2,86 mmol) THF:n (5 ml) ja DMSOtn (2 ml) seoksessa käsiteltiin 10 NMMrllä (0,68 ml), ja samea liuos lisättiin reaktioseok-seen sellaisella nopeudella, että lämpötila pysyi alle -40 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin -45- -15 °C:ssa 1 h, sitten seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan yön aikana. Seos laimennettiin CHCl3:lla ja pestiin sitten vedellä ja 15 kyllästetyllä NaHC03-liuoksella, kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,15 g, 80 %) valkeana kiinteänä aineena. Yhdisteen ^-NMR-spektrissä (DMS0-d6) oli dupletti kohdassa 66,43, joka on alkoholipro-tonin ominainen kemiallinen siirtymä ilmoitetun suhteel-20 lisen konfiguraation omaavassa materiaalissa.
c. 3S(tai R)-fenyylimetokslkarbonyyli-L-valyyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 25 Esimerkin 6b alkoholia (0,25 g, 0,5 mmol) liuotet tuna CH2Cl2:een käsiteltiin yhtenä annoksena lisätyllä Dess-Martin perjodinaanilla (0,42 g, 0,99 mmol). Lisättiin TFA:ta (0,08 ml, 1,04 mmol), ja hieman sameata seosta sekoitettiin yön yli. Reaktioseokseen muodostui valkea sus-30 pensio. TLC osoitti, ettei lähtöainetta ollut olennaisesti läsnä. Seokseen lisättiin sekoittaen vettä, joka sisälsi Na2S203:a (0,78 g) ja NaHC03:a (0,42 g). Kun valkea kiinteä suspensio oli erottunut orgaanisesta kerroksesta, orgaaninen kerros erotettiin vesifaasista. Orgaaninen kerros pes-35 tiin (kyllästetty NaHC03-vesiliuos), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin öljyksi, öljy liuotettiin Et20-heksaaniseok- 38 841 71 seen, liuos konsentroitiin, jolloin saatiin valkea kiinteä aine (0,21 g, 84 %:n saanto). Uudelleenkiteyttämällä kuumasta EtjO-heksaaniseoksesta saatiin otsikon yhdiste olennaisesti puhtaana isomeerinä, jonka HPLC:ssä oli yksi ai-5 noa piikki, jonka retentioaika oli sama kuin autenttisella näytteellä, joka oli valmistettu esimerkin 117 mukaisesti; HPLC, t„=5,65, Col A, H20:CH30H (55:45), FR=2,0.
Esimerkki 7 1- [ 2 - (tri syklo [3.3.1.13,71 dek-l-yyll )etokslkarbo-10 nyyli]-N-[3(RS )-3-(4-metyyli-l,1,1-trifluori-2- oksopentyyli)]-L-prolinamidi a. 4-nitrofenyyll-2-[trisyklo(3.3.1.13,7)dek-l-yyll] -etyyllkarbonaatti p-nitrofenyyliklooriformiaatin (1,17 g, 5,82 mmol) 15 liuokseen Et20:ssa (25 ml) lisättiin 0 °C:ssa pyridiiniä (5 ml) ja sitten tunnin aikana tipoittain 2-(1-adamantyy-li)etanolia (1,00 g, 5,54 mmol) Et20:ssa (20 ml). Saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 h, sitten seos jaettiin veteen ja Et20:hon liukeneviin osiin. Eetteriker-20 ros pestiin 5-%:sella HCl-vesiliuoksella, fosfaattipuskurilla (pH 7,0), kuivattiin (MgS04), ja liuotin poistettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromato-grafisesti silikageelillä käyttäen eluointiin EtOAcrhek-saaniseosta (5:95), jolloin saatiin valkea jauhemainen 25 tuote (1,10 g); TLC, Rf = 0,29, silikageeli, EtOAc:heksaani (5:95).
b. 1-[2-(trisyklo [3.3.1.13,71 dek-l-yyll )etoksi-kar-bonyyli) ] -N-2 (RS), 3 (SR) -3-(4-metyyli-l, 1,1-trif luo-ri-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi 30 Esimerkin 7a tuotteen (731,0 mg, 2,98 mmol), esi merkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen (500 mg, 1,80 mmol) ja K2C03:n (2,57 g, 18,6 mmol) liuosta DMF:ssä (50 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 h, liuos suodatettiin ja liuotin poistettiin vakuumissa. Jäännökseen 35 lisättiin EtOAc:tä, liuos pestiin 3 annoksella 10-%:sta NaOH-vesiliuosta, kuivattiin (kiinteä K2C03:Na2S04, 10:90), 39 8 4171 suodatettiin, ja liuotin poistettiin alennetussa paineessa. Raakatuote kromatografoitiin silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (1:99). Saatu kiinteä aine pestiin heksaanilla, jolloin saatiin valkea kiinteä tuote 5 (340 mg); HPLC, t„=5,86, 6,38, Zorbax® ODS -analyyttinen
kolonni, virtausnopeus = 2 ml/min, CH3CN: H20: TFA
(70:30:0,1).
c. l-[2-(trisycklo[3.3.1.13,71dek-l-yyli)etoksikar-bonyyli]-N-3(RS)-[3-(4-metyyli-l, 1,1-trif luori-2-10 oksopentyyli)]-L-prolinamidi -43 °C:seen jäähdytettyyn oksalyylikloridin (1,09 g, 8,60 mmol) liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (15 ml) lisättiin tipoittain 15 minuutin kuluessa DMS0:ta (1,37 g, 17,3 mmol) vedettömässä CH2Cl2:ssa (10 ml). Liuosta sekoi-15 tettiin 10 min, ja esimerkin 7b tuote (340 mg, 0,72 mmol) lisättiin samalla tavalla 30 minuutin kuluessa. Liuosta sekoitettiin -43 °C:ssa vielä 1 h, sitten lisättiin hitaasti TEA:ta (4,80 ml, 34,5 mmol) ja liuoksen annettiin hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan, jossa sitä edelleen 20 sekoitettiin 2 h. Liuos laimennettiin CH2Cl2:lla, pestiin 10-%:sella HCl-vesiliuoksella, 5-%:sella NaOCl-vesiliuok-sella, kuivattiin (kiinteä K2C03: Na2S04, 10 : 90), suodatettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin 2 peräkkäisellä flash-kromatografialla silika-25 geelillä käyttäen eluointiin ensin MeOH:CHCl3-seosta (0,1:99,9) ja sitten EtOAc:heksaaniseosta (1:5), jolloin saatiin valkea kiinteä tuote (130 mg); TLC, Rf=0,50, sili-kageeli, MeOH:CHCl3 (5:95); HPLC, tR= 5,31, Zorbax® ODS -analyyttinen kolonni, virtausnopeus = 2 ml/min, 30 CH3CN:H20:TFA (70:30:0,1).
Analyysi, laskettu kaavalle C24H35N2F304.0, 25H20: C 60,43, H 7,50, N 5,87 %
Saatu: C 60,50, H 7,45, N 5,74 % 40 841 71
Esimerkki 8 3( RS) - l-( 4-fenyylibutyylikarbonyyli )-N- [3-( 4-metyy- li-1,1,l-trifluori-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi a. 2(RS ),3( SR)-!-(4-fenyylibutyylikarbonyyli)-N- 5 [3-(4-metyyli-l, 1, l-trifluori-2-hydroksipentyyli)]- L-prolinamidl 5-fenyylivaleriaanahapon (0,330 g, 1,86 mmol) ja N-metyylimorfoliinin (0,280 g, 2,79 mmol) liuos THF:ssä (100 ml) jäähdytettiin -15 °C:seen. Liuokseen lisättiin tipoit-10 tain isobutyyliklooriformiaatin (0,280 g, 2,05 mmol) liuos THF:ssä (5 ml) ja seosta sekoitettiin -15 °C:ssa 10 min, jonka ajan kuluttua lämpötila laskettiin -40 °C:seen, ja seokseen lisättiin tipoittain esimerkin 2b mukaisesti valmistetun yhdisteen (0,500 g, 1,86 mmol) liuos THF:ssä (25 15 ml). Seosta sekoitettiin 1 h -40 °C:ssa ja sitten yön yli huoneen lämpötilassa. Seos suodatettiin ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kroraa-tografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (3:97), jolloin saatiin valkea kiinteä tuote (0,60 20 g); TLC, Rf = 0,40 - 0,51, silikageeli, MeOH:CHCl3 (3:97).
b. 3(RS)-!-(4-fenyylibutyylikarbonyyli)-N-[3-(4- metyyll-1,1,l-trlfluori-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi DMS0:n (4,22 g, 54,0 mmol) liuos vedettömässä 25 CH2Cl2:ssa (80 ml) lisättiin tipoittain typpikehässä etukäteen jäähdytettyyn (-60 °C) sekoitettuun oksalyyliklori-din (3,43 g, 27,0 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (10 ml). Lämpötila ei lisäyksen aikana saanut kohota yli -55 °C:een. Seosta sekoitettiin -60 °C:ssa 15 min ja sitten lisättiin 30 tipoittain 10 min kuluessa -60°C:ssa esimerkin 8a tuotteen (0,580 g, 1,35 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (100 ml). Reaktio-seosta sekoitettiin 1 h -60 °C:ssa. Seokseen lisättiin tipoittain 10 min kuluessa -60 °C:ssa di-isopropyylietyyli-amiinia (6,98 g, 54,0 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin ja 35 se sai lämmetä tunnin kuluessa huoneen lämpötilaan. Reak- 41 84171 tioseos pestiin peräkkäin 2 annoksella 1 N HCl-vesiliuosta ja suolaliuoksella, seos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (0,85 g) oranssinvärisenä siirappina. Raakatuote puhdistettiin kolmella peräkkäisellä 5 flash-kromatografoinnilla silikageelillä käyttäen seuraa-via eluentteja: 1) MeOH:CHCl3 (3:97), 2) MeOH:CHCl3 (3:97) ja 3) Et20:heksaani (90:10), jolloin saatiin tuote (319 mg) valkeana vaahtona; TLC, Rf = 0,33 - 0,40, silikageeli, Et20:heksaani (90:10); HPLC, tR = 17,93, 18,55, Zorbax® ODS 10 -analyyttinen kolonni, H20:CH3CN (55:45), virtausnopeus = 2 ml/min.
Analyysi, laskettu kaavalle C22H29N203F3.1,25H20: C 58,85, H 7,07, N 6,24 %
Saatu: C 58,91, H 6,83, N 6,13 % 15 Esimerkki 9 3( RS )-l- [ ( fenyylimetoksi )karbonyyll] -N- [3-( 4-metyy- li-1,1,1-trifluori-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi Dimetyylisulfoksidin (0,890 g, 11,4 mmol) liuos vedettömässä metyleenikloridissa (5 ml) lisättiin tipoit-20 tain typpikehässä -60 °C:ssa sekoittaen oksalyylikloridin (0,75 g, 5,9 mmol) liuokseen vedettömässä metyleenikloridissa (5 ml). Reaktioseos sai lämmetä -25 °C:seen ja siihen lisättiin esimerkin 2a mukaisesti valmistetun tuotteen (0,200 g, 0,497 mmol) liuos vedettömässä metyleeniklori-25 dissa (5 ml). Seosta sekoitettiin -25 °C:ssa 0,5 h, sitten lisättiin trietyyliamiinia (1,94 g, 19,2 mmol), ja reaktioseos sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos suodatettiin. Suodos haihdutettiin. Jäännös liuotettiin kloroformiin. Kloroformiliuos pestiin peräkkäin 1 N HCl-vesi-30 liuoksella, suolaliuoksella ja kuivattiin (Na2S04). Liuos suodatettiin, liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (0,147 g). Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluenttina CHCl3:MeOH-seosta (97:3), jolloin saatiin tuote (0,11 g); 35 TLC, Rf = 0,25, CHCl3:EtOAc (90:10).
42 84 1 71
Analyysi, laskettu kaavalle: C19H23F3N204.1,5H20: C 53,39, H 6,13, N 6,55 %
Saatu: C 53,55, H 5,78, N 6,56 %
Esimerkki 10 5 2( RS), 3(SR)-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-tri- fluori-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi a. N-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyli-L-pro-liinimetyyliesteri
Toistettiin esimerkin 3a menetelmä.
10 b. N-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyll-L-pro- liini
Toistettiin esimerkin 3b menetelmä käyttäen esimerkin 10a materiaalia.
c. 2-metyyli-l-nitropropaanl 15 Toistettiin esimerkin la menetelmä.
d. 2(RS),3(SR)-4-metyyll-3-nitro-l,1,1-trifluori- 2-pentanoi1
Toistettiin esimerkin Ib menetelmä käyttäen esimerkin 10c materiaalia.
20 e. 2(RS),3(SR)-3-amino-4-metyyll-l,1,1-trifluori- 2-pentanolin hydrokloridisuola.
Toistettiin esimerkin le menetelmä käyttäen esimerkin lOd materiaalia.
f. 2(RS),3(SR)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-va- 25 lyyli-N- [3-( 4-metyyli-l, 1,1-trif luori-2-hydroksi- pentyyli)]-L-prolinamidi
Toistettiin esimerkin 3c menetelmä käyttäen esimerkkien 10b ja lOe yhdisteitä.
g. _2(RS),3(SR)-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1- 30 trifluori-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi
Toistettiin esimerkin 3d menetelmä käyttäen esimerkin lOf yhdistettä.
43 8 4 1 71
Esimerkki 11 3(RS)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyll-N-[3-(4-metyyli-l,1,l-trifluori-2-oksopentyyli)]-L-pro-linamidi 5 a.-f. Vaiheet a-f toistettiin siten kuin esimer keissä lOa-f selvitettiin.
g. 3(RS)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1,1-trif luori-2-oksopentyyli ) ] -L-prolinamidi 10 DMSO:n (12,46 g, 159,50 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (12 ml) lisättiin tipoittain typpikehässä 10 minuutin kuluessa etukäteen jäähdytettyyn (-60 °C) sekoitettuun oksalyylikloridin (10,12 g, 79,75 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (160 ml). Lisäyksen aikana lämpötila ei saanut 15 kohota yli -50 °C:een. Seokseen lisättiin tipoittain 10 minuutin aikana -60 °C:ssa esimerkin llf alkoholin (2,00 g, 3,99 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (160 ml). Reaktioseosta sekoitettiin -60 °C:ssa 1 h. Seokseen lisättiin tipoittain -60 °C:ssa 10 min kuluessa di-isopropyylietyyliamiinia (20,62 20 g, 159,50 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 1 h, jona aikana se sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos pestiin 1 N HC1-vesiliuoksella, sitten suolaliuoksella ja seos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote oranssinvärisenä siirappina (2,76 g). Raakatuote puhdis-25 tettiin 3 kertaa peräkkäin flash-kromatografiällä silika-geelillä käyttäen seuraavia eluentteja: 1) eetteri:heksaa-ni (80:20), 2) Me0H:CHCl3 (2,5:97,5), 3) MeOH:CHCl3 (2,5:97,5), jolloin saatiin tuote valkeana vaahtona (0,88 g); TLC, Rf = 0,45, silikageeli, MeOH:CHCl3 (3:97); HPLC, 30 tR = 6,45, 11,10, Zorbax® ODS -analyyttinen kolonni, H20:CH3CN (55:45), jossa 0,1 % trifluorietikkahappoa, virtausnopeus - 2 ml/min.
Analyysi, laskettu kaavalle C24H32N305F3.0,5H20: C 56,68, H 6,54, N 8,26 % 35 Saatu: C 56,58, H 6,52, N 8,21 % 44 841 71
Esimerkki 12 3(RS)-[2-(2-oksopyrrolidinyyli )etokslkarbonyyli]-Lvalyyll-N- [3-( 4-metyyli-l, 1,1-trlfluori-2-oksipen-tyyli)]-L-prolinamldi 5 a. 4-nitrofenyyli-2-(2-oksopyrrolidinyyli)etyyli- karbonaatti N-(2-hydroksietyyli)pyrrolidoni (3,00 g, 23,2 mmol) liuotettiin typpikehässä dietyylieetteriin (20 ml), ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa. Liuokseen li-10 sättiin tipoittain 2 h kuluessa p-nitrofenyylikloorifor-miaatin (4,68 g, 23,2 mmol) liuos dietyylieetterissä (25 ml). Seosta sekoitettiin vielä 2 h huoneen lämpötilassa. Seos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (7,90 g). Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä 15 silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (5:95), jolloin saatiin valkea jauhemainen tuote (4,62 g); TLC, Rf = 0,51, silikageeli, MeOH:CHCl3 (3:97).
b. 2(RS),3(SR)-[2-(2-oksopyrrolidinyyli)etoksikar-bonyyli ] -L-valyyll-N- [3-(4-metyyli-l, 1,1-trif luori-20 2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi
Etyyli-2-pyrrolidoni-p-nitrofenyylikarbonaatin (1,20 g, 4,08 mmol) ja esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (1,50 g, 4,08 mmol) liuokseen DMF:ssä (100 ml) lisättiin huoneen lämpötilassa typpikehässä kaliumkarbo-25 naattia (2,820 g, 40,80 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli, sitten seos laimennettiin EtOAc:llä ja ylimääräinen K2C03 suodatettiin. Suodos konsentroitiin vakuumissa, jäännös liuotettiin EtOAc:hen ja liuos pestiin peräkkäin 10-%:11a NaHC03-vesiliuoksella, vedellä, 5-%:sella sitruu-30 nahapon vesiliuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin epäpuhdas alkoholi. Se puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (5:95), jolloin saatiin tuote 35 (0,72 g); TLC, Rf = 0,46, silikageeli, MeOH:CHCl3 (7:93).
45 84171 c. 3(RS)-[2-(2-oksopyrrolldinyyli)etoksikarbonyy-li]-L-valyyli-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trlfluorl-2-okslpentyyli]-L-prolinamidi DMSO:n (4,310 g, 55,20 mmol) liuos vedettömässä 5 CH2Cl2:ssa (6 ml) lisättiin tipoittain typpikehässä 10 min kuluessa etukäteen jäähdytettyyn (-60 °C) sekoitettuun ok-salyylikloridin (3,500 g, 27,60 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (80 ml). Lisäyksen aikana lämpötila ei saanut kohota yli -50 °C:een. Esimerkin 12b alkoholin (0,720 g, 1,38 mmol) 10 liuos CH2Cl2:ssa (80 ml) lisättiin tipoittain 10 min kuluessa -60 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin -60 °C:ssa 1 h. Seokseen lisättiin tipoittain 10 min kuluessa -60 °C:ssa di-isopropyylietyyliamiinin (7,13 g, 55,2 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (50 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 1 h, jona 15 aikana seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos pestiin 1 N HC1-vesiliuoksella ja suolaliuoksella ja konsentroitiin sitten vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote oranssinvärisenä siirappina. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin 20 MeOH:CHCl3-seosta (5:95), jolloin saatiin tuote valkeana vaahtona (0,43g); TLC, Rf = 0,33, silikageeli, MeOH:CHCl3 (5:95); HPLC, tR = 3,50, 4,63, Zorbax® ODS -analyyttinen kolonni, H20:CH3CN (55:45), virtausnopeus - 1 ml/min. Analyysi, laskettu kaavalle C23H35N406F3.H20: 25 C 51,29, H 6,92, N 10,40 %
Saatu: C 51,20, H 6,86, N 10,03 %
Esimerkki 13 3( RS)-[2-(metoksikarbonyyli)etyylikarbonyyli]-L-valyyll-N-[3-(4-metyyli-l, 1, l-trifluorlmetyyli-2-30 oksopentyyll)]-L-prolinamidi a. N-bentsyyllokslkarbonyyli-L-valyyli-L-proliini-tert.-butyyliesteri N-bentsyylioksikarbonyyli-L-valiinin (56,25 g, 0,244 mol) ja HOBTin (60,67 g, 0,45 mol) liuos DMF:ssä 35 (565 ml) jäähdytettiin 5 °C:seen. Liuokseen lisättiin yhte- 46 841 71 nä annoksena DCC:ta (50,89 g, 0,247 mol). Seosta sekoitettiin vielä 15 min 5 °C:ssa ja sitten siihen lisättiin L-proliini-tert.-butyyliesteriä (38,36 g, 0,224 mol). Seosta sekoitettiin vielä 2 h 5 °C:ssa ja sitten 48 h huoneen läm-5 pötliassa. Seos suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa.
öljymäinen jäännös liuotettiin EtOAcrhen (1 litra), ja liuos pestiin peräkkäin 20-%:11a sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä NaHC03-vesiliuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04), suodatettiin 10 ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tuote (92,0 g) valkeana vaahtona; TLC, Rf = 0,9, silikageeli, CHC13: EtOAc (85:15).
b♦ L-valyyli-L-proliini-tert.-butyyliesteri Esimerkin 13a tuotteen (92,0 g, 0,277 mol) ja 15 10-%:sen Pd/C-katalyytin (10 g) seos EtOH:ssa (1 litra) hydrattiin Parr-ravistimessa huoneen lämpötilassa 413 790 Pa:n vedyn paineessa 6 h. Seos suodatettiin Celiteliä® konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tuote (62 g) viskoosisena keltaisena öljynä: TLC, Rf = 0,3, silikageeli, 20 MeOH:CHCI3 (10:90).
c._N-[2-(metokslkarbonyyll)etyylikarbonyyli]-L- valyyli-L-proliini-1,1-dimetyylietyyllesteri 1 N NaOH-vesiliuos (8,0 ml) lisättiin esimerkin 13b tuotteen (2,1 g, 7,8 mmol) etukäteen jäähdytettyyn (0 25 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (60 ml). Seosta sekoitettiin ja siihen lisättiin 3-karbometoksipropionyylikloridia (0,96 ml, 7,8 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin voimakkaasti 0 °C:ssa 15 min. Liuos poistettiin jäähauteesta, laimennettiin vedellä (30 ml) ja tehtiin happameksi 1 N HCl-vesi-30 liuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin, ja vesikerros uutettiin CH2Cl2:lla. Orgaaniset liuokset yhdistettiin, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Saatu jäännös puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin ensin Et20:ta ja sitten 35 EtOAc:tä, jolloin saatiin tuote (2,68 g); TLC, Rf = 0,28, silikageeli, Et20.
47 84171 d. _N-[2-(metoksikarbonyyli)etyylikarbonyyli]-L- valyyli-L-prollini
Esimerkin 13c tuotteen (2,68 g, 6,98 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (11 ml) lisättiin trifluorietikkahappoa 5 (11,0 ml, 143 mmol). Seosta sekoitettiin 4 h, sitten seos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tuote (2,13 g), jota käytettiin ilman enempää puhdistamista.
e. 2(RS),3(SR)-[2-(metoksikarbonyyli)etyylikarbo- nyyli]-L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1,1-trifluori- 10 2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamldi
Isobutyyliklooriformiaattia (0,85 ml, 6,5 mmol) lisättiin N-metyylimorfoliinin (0,71 ml, 6,5 mmol) ja esimerkin 13d tuotteen (2,13 g, 6,5 mmol) etukäteen jäähdytettyyn (-15 °C) liuokseen THF:ssä (50 ml). Seosta sekoi-15 tettiin 10 min ja seoksen lämpötila alennettiin -50 °C:seen. Reaktioseokseen lisättiin yhtenä annoksena N-metyylimorfoliinin (0,71 ml, 6,5 mmol) ja esimerkin le mukaisesti valmistetun tuotteen (1,39 g, 6,5 mmol) suspensio THF:ssä (50 ml) ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli, 20 jona aikana se sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktio-seos suodatettiin, ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Jäännös liuotettiin EtOAc:hen ja liuos pestiin peräkkäin 1 N HCl-vesiliuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuu-25 missä. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla sili-kageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (5:95), jolloin saatiin tuote (1,92 g); TLC, R, = 0,24, silikagee-li, MeOH:CHC13 (5:95).
f. 3(RS)-[2-(metoksikarbonyyli)etyylikarbonyyli]- 30 L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l, 1,1-trif luori-2-okso- pentyyli)]-L-prolinamidi DMS0:n (11,2 ml, 0,158 mol) liuos CH2Cl2:ssa (12 ml) lisättiin hitaasti etukäteen jäähdytettyyn (-60 °C) oksa-lyylikloridin (6,9 ml, 0,079 mol) liuokseen CH2Cl2:ssa (160 35 ml). Reaktioseokseen lisättiin esimerkin 13e tuotteen (1,90 g, 3,95 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (160 ml) ja reaktio- 48 841 71 seosta sekoitettiin -60 °C:ssa 1 h. Sitten lisättiin hitaasti di-isopropyylietyyliamiinia (28,0 ml, 0,158 mol) ja reaktioseos sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuos pestiin 1 N HCl-vesiliuoksella (2 x 80 ml) ja suolaliuoksella.
5 Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin raakatuote (3,5 g). Tuote puhdistettiin suodattamalla silikageelikerroksen lävitse EtOAc:n kanssa ja sitten flash-kromatografialla silikagee-lillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (5:95), jolloin 10 saatiin tuote (1,49 g); TLC, Rf = 0,31, silikageeli,
MeOH:CHCl3 (5:95); diagnostinen 1H-NMR, siirtymät (CD3SOCD3, 250 MHz); 0,9 m 12H; 3,54, s, 3H; 3,54 - 3,68, m, 2H; 4,34, m, 1H; 4,40, m, 1H; 4,48, dd, 0,5H; 4,58, dd, 0,5H; 8,1, d, 1H; 8,58, dd, 1H.
15 Esimerkki 14 3(RS)- [2-(karboksietyyli )karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1,1-trif luori-2-oksopentyyli ) ] -L-prollnamldi 1 N NaOH-vesiliuosta (0,92 ml) lisättiin esimerkin 20 13f tuotteen (0,20 g, 0,42 mmol) liuokseen MeOH:ssa (10 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Lisättiin 1 N HCl-vesiliuosta (1 ml), ja reaktio-seoksesta haihdutettiin MeOH vakuumissa. Jäljelle jäänyt vesiliuos uutettiin Et0Ac:llä, ja orgaaninen uute pestiin 25 suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja kon sentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tuote (0,18 g); TLC, Rf = 0,2, silikageeli, Me0H:CHCl3:TFA (5:94:1); HPLC, tR = 2,9, 5,86, Applied Science Absorbosphere® C8, 4,6 mm x 10 cm, CH3CN:H20:TFA (20:80:0,1), virtausnopeus 1,6 30 ml/min.
84171 49
Esimerkki 15 3 ( RS )-[(4-etoksikarbonyyllfenyyli)aminokarbonyy-li] -L-valyyli-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trifluori-2-oksopentyyll]-L-prolinamidi 5 a. 2(RS),3(SR)-[(4-etoksikarbonyylifenyyli)amlno- karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-tri-fluori-2-hydroksipentyyli)]-L-prollnamidi Etyyli-4-isosyanaattobentsoaatin (0,86 g, 4,5 mmol) liuos CHCl3:ssa (2 ml) lisättiin tipoittain esimerkin 3d 10 mukaisesti valmistetun tuotteen (1,65 g, 4,5 mmol) liuokseen CHCl3:ssa (20 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Reaktioseos konsentroitiin va-kuumissa, jolloin saatiin raakatuote. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen 15 eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (2,5:97,5) ja MeOH:CHCla-seos-ta (5:95), jolloin saatiin tuote (1,76 g); TLC, Rf = 0,34, silikageeli, MeOH:CHCl3 (5:95).
b. 3(RS)-[(4-etoksikarbonyylifenyyli)aminokarbo-nyyli] - L-valyyli-N- [3-( 4-metyyli-l, 1,1-trif luori-20 2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi DMS0:n (4,5 ml, 63 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (5 ml) lisättiin hitaasti oksalyylikloridin (2,75 ml, 31,5 mmol) etukäteen jäähdytettyyn (-60 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (60 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 15 min -60 °C:ssa. Reaktio-25 seokseen lisättiin esimerkin 15a tuotteen (1,76 g, 3,15 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (60 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin 1 h -60 °C:ssa. Seokseen lisättiin hitaasti di-isopro-pyylietyyliamiinia (11 ml, 63 mmol), ja reaktioseos sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuos pestiin 1 N HCl-vesi-30 liuoksella (2 x 60 ml) ja suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (2,3 g). Tuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen gradienttieluointia: CHC13, MeOH:CHCl3 (2,5:97,5) ja 35 MeOH:CHCl3 (5:95), jolloin saatiin tuote (0,91 g); TLC, 50 841 71
Rf * 0,42, silikageeli, MeOH:CHCl3 (5:95); HPLC, tR= 6,77, 11,27, Zorbax® ODS -analyyttinen kolonni, CH3CN:H20 (45:55), virtausnopeus * 2 ml/min.
Esimerkki 16 5 3(RS)- [ (4-karboksifenyyli )amlnokarbonyyll] -L-valyy- li-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trifluori-2-oksopentyy-11)]-L-prolinamidi
Esimerkin 15b tuotteen (0,48 g, 0,86 mmol) liuokseen MeOH:n (8 ml) ja veden (7 ml) seoksessa lisättiin 1 N 10 NaOH-vesiliuosta (1 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 3 h, sitten lisättiin vielä 1 N NaOH-vesiliuosta (1 ml) ja reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Seokseen lisättiin 1 N HCl-liuosta (2,5 ml) ja metanoli haihdutettiin vakuumissa. Jäännökseen lisättiin vettä (10 15 ml) ja sitten uutettiin EtOAc:llä (2 x 50 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tuote (0,42 g); TLC, Rf= 0,17, silikageeli, MeOH:CHClj:AcOH (5:94:1); HPLC, tR= 2,38, 2,78, Zorbax® ODS 20 -analyyttinen kolonni, CH3CN:H20 (30:70), virtausnopeus = 1 ml/min.
Esimerkki 17 3( RS ) - [ ( 4-fenyylibutyyli )karbonyyli] -L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1, l-trifluori-2-oksopentyyli ) ] -L-25 prolinamidi a. 2(RS),3(SR)-[(4-fenyylibutyyli)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1,1-trif luori-2-hydrok-sipentyyli)]-L-prolinamidi 5-fenyylivaleriaanahapon (0,728 g, 4,08 mmol), esi-30 merkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (1,5 g, 4,08 mmol) ja HOBT:n (1,19 g, 8,8 mmol) liuokseen THF:ssä (75 ml) lisättiin 0 °C:ssa DCC:tä (0,906 g, 4,4 mmol). Seosta sekoitettiin yön yli, jona aikana se sai lämmetä huoneen lämpötilaan. Seos konsentroitiin vakuumissa, ja saatu 35 jäännös liuotettiin CHCl3:een (60 ml), liuos pestiin pe- 51 84171 räkkäin 20-%:11a sitruunahapon vesiliuoksella (30 ml), vedellä (30 ml),-5 %:lla NaHC03-vesiliuoksella (30 ml) ja suolaliuoksella (30 ml). Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumis-5 sa, jolloin saatiin raakatuote (2,0 g). Se puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (5:95), jolloin saatiin tuote (1,0 g) valkoisena vaahtona; TLC, Rf = (0,5 - 0,55), silikageeli, MeOH:CHC13 (5:95).
10 b. 3(RS)-[(4-fenyyllbutyyll)karbonyyli]-L-valyyli- N- [3-(4-metyyli-l, 1,1-trifluori-2-oksopentyyli ) ]-L-prolinamidi DMS0:n (3,4 ml, 48 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (4 ml) tiputettiin typpikehässä sekoittaen oksa-15 lyylikloridin (2,10 ml, 24 mmol) jäähdytettyyn (-60 °C) liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (50 ml). Liuosta sekoitettiin -60 °C:ssa 15 min. Liuokseen lisättiin hitaasti esimerkin 17a mukaisen tuotteen (1,00 g, 1,89 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (30 ml), jolloin lisäyksen aikana 20 lämpötila pidettiin -50 °C:n alapuolella. Seosta sekoitet tiin 50 °C:ssa 1 h. Seokseen lisättiin tipoittain di-iso-propyylietyyliamiinia (8,48 ml, 48 mmol), ja reaktioseok-sen annettiin hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan. Reak-tioseos pestiin peräkkäin 1 N HCl-vesiliuoksella ja suola-25 liuoksella. Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin epäpuhdas ketoni. Se puhdistettiin kolmella peräkkäisellä flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (5:95), CHC13 (100 %) -30 MeOH:CHC13 (3:97) ja Et20 (100 %) - MeOH:Et20 (10:90), jolloin saatiin lopputuote (0,2 g) valkeana vahamaisena aineena; HPLC, tR= 6,80, 8,90, Zorbax® ODS -kolonni; H20:CHjCN:TFA (40:60:0,1), virtausnopeus» 0,75 ml/min. Analyysi, laskettu kaavalle C27N304F3H38.0,5H20: 35 C 60,65, H 7,35, N 7,85 %
Saatu: C 60,68, H 7,30, N 7,67 % 52 84 1 71
Esimerkki 18 3(RS )-2- [2-( trisyklo[3.3.1« 13,71 dek-l-yyli )etoksi-karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-tri-fluori-2-oksopentyyli3-L-prolinamidi 5 a. 4-nitrofenyyli-2-(trisyklo[3.3.1.l3-7ldek-l- yyli)etyylikarbonaatti
Tuote valmistettiin noudattamalla esimerkin 7a menetelmää .
b. 2(RS),3(SR)-[2-(trisyklo[3.3.1.I3'7] dek-l-yyli)-10 etoksikarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1- trifluori-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi Esimerkin 18a tuotteen (0,758 g, 2,19 mmol), esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (0,768 g, 2,09 mmol) ja K2C03:n (2,89 g, 20,9 mmol) liuosta DMF:ssä (75 15 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 g, liuos suodatettiin ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla, liuos pestiin kolmella annoksella 10-%:sta NaOH-vesiliuosta ja suolaliuoksella, kuivattiin (kiinteä K2C03: Na2S04, 10:90), suodatettiin, ja 20 liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (2:98), jolloin saatiin tuote valkeana vaahtona; TLC, Rf = 0,14 ja 0,18, silika-geeli, MeOH:CHCl3 (2:98).
25 c. 3(RS)-[2-(trisyklo[3.3.1.13,71dek-l-yyli)etoksi- karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-tri-fluori-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi Oksalyylikloridin (2,14 g, 16,8 mmol) -43 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (30 ml) 30 lisättiin tipoittain 1 tunnin aikana DMSOrta (2,66 g, 33,6 mmol) CH2Cl2:ssa (20 ml) ja sitten esimerkin 18b tuotetta (0,965 g, 1,68 mmol) samalla tavalla 30 min aikana. Liuosta sekoitettiin -43 °C:ssa vielä 1 h, sitten lisättiin tri-etyyliamiinia (8,50 g, 84,0 mmol) ja liuoksen annettiin 35 lämmetä hitaasti huoneen lämpötilaan. Liuos laimennettiin CH2Cl2:lla, pestiin 5-%:sella HCl-vesiliuoksella, 5-%:sella 53 84171
NaOCl-vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04), suodatettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin CHCl3:a (silikageeliä oli ensin käsitelty MeOH:CHCl3-seok-5 sella, 1:99), jolloin saatiin tuote (410 mg) valkeana vaahtona; TLC, Rf = 0,39, silikageeli, MeOH:CHCl3 (2:98); HPLC, tR = 8,12 ja 10,75, Zorbax® ODS -kolonni, virtausnopeus = 1,5 ml/min, CH3CN:H20:TFA (70:30:0,1).
Analyysi, laskettu kaavalle C29H44N3F305.0, 75H20: 10 C 59,52, H 7,83, N 7,18 %
Saatu: C 59,48, H 7,70, N 7,17 %
Esimerkki 19 3(RS)-[(2-metoksietoksi)etoksikarbonyyli]-L-valyy-li-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trifluori-2-oksopentyy-15 li)]-Lprolinamidl a. 2-(2-metoksietoksi)etyyli-4-nitrofenyylikarbo-naatti p-nitrofenyyliklooriformiaatin (2,00 g, 9,92 mmol) liuokseen Et20:ssa (50 ml) lisättiin 0 °C:ssa pyridiiniä (8 20 ml) ja sitten tipoittain 1 h:n aikana 2-(2-metoksietoksi)-etanolin (1,14 g, 9,45 mmol) liuos Et20:ssa (25 ml). Saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 h, sitten seos jaettiin veteen ja eetteriin liukeneviin osiin. Eet-terikerros pestiin 5- %:sella HCl-vesiliuoksella, fosfaat-25 tipuskurilla (pH 7,0), kuivattiin (MgS04), suodatettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin EtOAc:heksaaniseosta (30:70), jolloin saatiin tuote (1,30 g) kirkkaana värittömänä öljynä, TLC, Rf = 0,11, silikagee-30 li, EtOAc:heksaani (30:70).
b. 2(RS),3(SR)-[(2-metoksietoksietoksi)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1, l-trifluori-2-hydrok-sipentyyli)]-L-prolinamidi
Esimerkin 19a tuotteen (1,11 g, 3,90 mmol), esi-35 merkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (1,37 g, 3,72 mmol) ja K2C03:n (5,14 g, 37,2 mmol) liuosta DMF:ssä (100 5« 84171 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 h, liuos suodatettiin ja liuotin poistettiin vakuumissa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, liuos pestiin 3 annoksella 10-%:sta NaOH-vesiliuosta ja suolaliuoksella, kuivattiin 5 (kiinteä K2C03:Na2S04, 10:90), suodatettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin
EtOAc:tä (silikageeli esikäsiteltiin TEA:heksaaniseoksel-la, 1:9), jolloin saatiin kirkas väritön lasimainen tuote 10 (1,13 g); TLC, Rf = 0,43 ja 0,48, silikageeli, Me0H:CHCl3 (1:9).
Analyysi, laskettu kaavalle C22H38N307F3: C 51,45, H 7,45, N 8,18 %
Saatu: C 51,48, H 7,35, N 8,01 % 15 c. 3(RS) — [(2-metoksietoksi)etoksikarbonyyli]-L- valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-trifluori-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi
Oksalyylikloridin (3,26 g, 2,57 mmol) -43 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (70 ml) 20 lisättiin tipoittain 1 h aikana DMSO:ta (4,07 g, 51,4 mmol) CH2Cl2:ssa (20 ml) ja sen jälkeen esimerkin 19b tuotetta (1,10 g, 2,14 mmol) CH2Cl2:ssa (25 ml) samalla tavalla 30 minuutin kuluessa. Liuosta sekoitettiin vielä 1 h -43 °C:ssa, sitten lisättiin TEA:ta (10,80 g, 107,0 mmol), 25 ja liuos sai lämmetä hitaasti huoneen lämpötilaan. Liuos laimennettiin CH2Cl2:lla, pestiin 5-%:lla HCl-vesiliuoksel-la, 5-%:sella NaOCl-vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04), suodatettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä 30 käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (2:98), jolloin saatiin tuote (420 mg) kirkkaana, vaaleankeltaisena siirappina; TLC, Rf = 0,32 ja 0,37, silikageeli, MeOH:CHCl3 (5:95); HPLC, tR = 7,38 ja 9,55, Zorbax® 0DS -analyyttinen kolonni, virtausnopeus = 0,5 ml/min, CH3CN:H20:TFA (50:50:0,1).
35 Analyysi, laskettu kaavalle C22H36N307F,.0,75H20: 55 841 71 C 50,33, H 7,20, N 8,00 %
Saatu: C 50,34, H 7,21, N 7,58 %
Esimerkki 20 3( RS) - [ (4-metoksifenyyli )karbonyyli] -L-valyyli-N-5 [3-(4-metyyll-l,1 1-trlfluori-2-oksopentyyli)]-L- prollnamidi a. 2(RS),3(SR)-[(4-metoksifenyyli)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l, 1,1-trifluori-2-hydrok-sipentyyll)J-L-prollnamidi 10 Esimerkin 3d mukaisesti valmistetun yhdisteen (1,50 g, 4,08 mmol) ja TEA:n (2,06 g, 20,4 mmol) 0 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen CHCl3:ssa (50 ml) lisättiin tipoittain 1 h kuluessa 4-metoksibentsoyylikloridia (0,766 g, 4,49 mmol) CHCl3:ssa (40 ml), ja seosta sekoitettiin huoneen 15 lämpötilassa yön yli. Liuotin haihdutettiin vakuumissa, ja jäännös liuotettiin Et0Ac:hen, liuos pestiin 5-%:sella HCl-vesiliuoksella, 20-%:sella NaOH-vesiliuoksella, kuivattiin (kiinteä K2C03:Na2S04, 10:90), suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistet-20 tiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin MeOH:CHCl3-seosta (5:95), jolloin saatiin tuote (1,84 g) valkeana vaahtona; TLC, Rf = 0,33, silikageeli, MeOH:CHC13 (5:95).
Analyysi, laskettu kaavalle ^24^34^5^3^3*0» 3H20 : 25 C 56,86, H 6,88, N 8,29 %
Saatu: C 56,80, H 6,88, N 8,07 % b. 3(RS)-[(4-metoksifenyyli)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l, 1,1-trif luori-2-oksopentyyli ) ] -L-prolinamidi 30 Oksalyylikloridin (3,79 g, 29,9 mmol) -43 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (50 ml) lisättiin tipoittain 40 min kuluessa DMS0:ta (4,73 g, 59,8 mmol) CH2Cl2:ssa (20 ml) ja sitten esimerkin 20a tuotetta (1,50 g, 2,99 mmol) CH2Cl2:ssa (20 ml) samalla tavalla 30 35 min kuluessa. Liuosta sekoitettiin -43 °C:ssa 1 h, sitten „ 84171 56 lisättiin TEA:ta (15,10 g, 149,5 mmol) ja liuoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Liuos laimennettiin CH2Cl2:lla, pestiin 5-%:sella HCl-vesiliuoksella, 5-%:lla NaOCl-vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04), suodatettiin, ja 5 liuotin haihdutettiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin EtOAc:heksaaniseosta (1:1) (silikageeli käsiteltiin ensin TEA:heksaaniseoksella, 10:90), jolloin saatiin tuote (489 mg) valkeana vaahtona; TLC. Rf = 0,15 ja 0,19, silikageeli, 10 MeOH:CHCl3 (2:98): HPLC tR = 6,62 ja 9,72, Zorbax® ODS -
kolonni, virtausnopeus = 1 ml/min, CH3CN: H20: TFA
(50:50:0,1).
Analyysi, laskettu kaavalle C24H3205N3F3: C 57,71, H 6,46, N 8,41 % 15 Saatu: C 57,39, H 6,67, N 8,18 %
Esimerkki 21 3(RS )-N2, N*-di[(fenyyllmetoksi)karbonyyli]-L-lysyy-li-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trifluori-2-oksopentyy-li)]-L-prolinamidl 20 a. 2(RS),3(SR)-N-[3-(4-metyyli-1,1,1-trifluori-2- hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi
Tuote valmistettiin noudattamalla esimerkin 2b menetelmää .
b. 2(RS),3(SR)-N2, N6-di[(fenyyllmetoksi)karbonyy- 25 li] -L-lysyyli-N-[3-(4-metyyli-1,1,1-trifluori-2- hydroksipentyyli)]-L-prolinamidl (N2, N6-dibentsyylioksikarbonyyli)-L-lysiinin (1,54 g, 3,72 mmol), esimerkin 21a tuotteen (1,0 g, 3,72 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolin (1,01 g, 7,44 mmol) ja 30 vedettömän THF:n (70 ml) seokseen lisättiin sekoittaen 0 °C:ssa typpikehässä DCC:tä (0,84 g, 4,09 mmol). Reak-tioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 1 h, sitten seos sai lämmetä hitaasti yön yli huoneen lämpötilaan. Reaktioseos suodatettiin, liuotin poistettiin vakuumissa ja jäännös liuo-35 tettiin CHCL3:een. CHCl3-liuos pestiin 20-%:sella sitruuna- 57 841 71 hapon vesiliuoksella, orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04) ja suodatettiin. Liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (3,14 g). Tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin 5 CHCl3:MeOH-seosta (97:3), jolloin saatiin 1,50 g lopputuotetta, Rf = 0,33-0,45, CHCl3:MeOH (95:5), silikageeli.
c._3 (RS)-N*, N*-di[ ( fenyylimetoksi )karbonyyli] -L- lysyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-trifluorl-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi 10 Oksalyylikloridin (3,04 g, 24 mmol) liuokseen ve dettömässä CH2Cl2:ssa (50 ml) lisättiin sekoittaen -60 °C:s-sa typpikehässä DMS0:n (3,59 g, 46 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (30 ml). Reaktioseosta sekoitettiin -60 °C:ssa 5 min, sitten seos sai lämmetä -30 °C:seen. Siihen 15 lisättiin tipoittain esimerkin 21b tuotteen (1,32 g, 2,0 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (30 ml). Reaktioseosta sekoitettiin -25 °C:ssa 1 h. Reaktioseokseen lisättiin sitten TEA:ta (7,8 g, 77,4 mmol), ja seoksen annettiin hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos pestiin 1 20 N HCl-vesiliuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin tuote (2,6 g). Se puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin CHCl3:Me0H-seosta (97:3), jolloin saatiin 25 0,99 g tuotetta, TLC, Rf = 0,4-0,52, CHCl3:Me0H (95:5), silikageeli.
Esimerkki 22 3 (RS)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-fenyyliala-nyyll-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-trifluori-2-oksopen-30 tyyli)]-L-prolinamidi a. 2(RS),3(SR)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-fe-nyylialanyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-trifluori-2-hydroksipentyyll)]-L-prollnamldl Esimerkki 21a tuotteen (1,41 g, 4,47 mmol), N-35 (bentsyylioksikarbonyyli)-L-fenyylialaniinin (1,20 g, 4,47 58 841 71 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolin (1,21 g, 8,94 mmol) ja vedettömän THF:n (75 ml) seokseen lisättiin sekoittaen 0 °C:ssa typpikehässä DCC:tä (1,01 g, 4,92 mmol). Reaktio-seosta sekoitettiin O °C:ssa 1 h, sitten seos sai lämmetä 5 huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin yön yli. Reak-tioseos suodatettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin jäännös, joka liuotettiin CHCl3:een. CHC13-liuos pestiin 20- %:sella sitruunahapon vesiliuoksella ja suolaliuoksella ja kuivattiin (Na2S04), CHCl3-liuos suoda-10 tettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (3,57 g). Tuote puhdistettiin flash-kroma-tografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin CHCl3:MeOH-seosta (97:3), jolloin saatiin tuote (1,45 g) valkeana vaahtona; TLC, Rf = 0,39 - 0,60, CHCl3:MeOH (95:5), silika-15 geeli, HPLC: Zorbax® ODS -analyyttinen kolonni, CH3CN:H20 (50:50), virtanopeus = 2,5 ml/min, tR = 6,47 ja 7,63.
b. 3(RS)-[(fenyyllmetoksi)karbonyyli]-L-fenyyli-alanyyli-N-[3-(4-metyyli-l, 1, l-trifluori-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi 20 Oksalyylikloridin (1,89 g, 14,9 mmol) liuokseen ve dettömässä CH2Cl2:ssa (40 ml) lisättiin tipoittain sekoittaen typpikehässä -60 °C:ssa DMS0:n (2,33 g, 29,9 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (40 ml). Reaktioseosta sekoitettiin +60 °C:ssa 0,5 h. Sitten lisättiin esimerkin 22a 25 tuotteen (1,43 g, 2,49 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (40 ml) -50 °C:ssa, ja saatua seosta sekoitettiin -60 °C:s-sa 1 h. Seokseen lisättiin di-isopropyylietyyliamiinia (7,70 g, 59,7 mmol), ja seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Seos pestiin 2 kertaa 1 N HCl-vesiliuoksella 30 ja sitten suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin (Na2S04), suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (1,87 g). Tuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin CHCl3:MeOH-seosta (98:2), jolloin saatiin tuote 35 (0,771 g) valkeana vaahtona; TLC, Rf - 0,62 - 0,69, 59 84171 CHCl3:MeOH (95:5), silikageell; HPLC, Zorbax© ODS -analyyttinen kolonni, CH3CN:H20 (50:50), virtausnopeus = 2,5 ml/min, tR = 6,11 ja 6,21.
Analyysi, laskettu kaavalle C28H32F3N305: 5 C 61,41, H 5,84, N 7,67 %
Saatu: C 61,53, H 5,82, N 7,67 %
Esimerkki 23 3(RS)-[2-(metoksikarbonyyli)etyylikarbonyyli]-L-norleusyyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1, 1-tri-10 fluorl-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi a._N-[2-(metoksikarbonyyli)etyyllkarbonyyli]-L- norleusiini L-norleusiinin (6,55 g, 50 mmol) ja metyleeniklo-ridin (250 ml) seokseen lisättiin tipoittain O °C:ssa typ-15 pikehässä voimakkaasti sekoittaen 1 N NaOH-liuos (100 ml, 100 mmol). Sitten lisättiin tipoittain 3-karbometoksipro-pionyylikloridia (7,52 g, 50 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 15 min. Jäähdytyshaude poistettiin, ja seokseen lisättiin vettä (100 ml). pH säädettiin 3 N HC1-20 vesiliuoksella arvoon 1. Lisättiin etyyliasetaattia (200 ml), ja orgaaninen kerros erotettiin. Vesikerros uutettiin etyyliasetaatilla, ja orgaaniset uutteet yhdistettiin, pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin (Na2S04). Liuos suodatettiin. Liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin 25 raakatuote (10,73 g). Osa raakatuotteesta (6,47 g, 26,4 mmol) puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin CHCl3:MeOH-seosta (97:3), jolloin saatiin tuote (5,31 g); TLC, Rf = 0,45, silikageeli, CHC13:MeOH:AcOH (95:4,75:0,25).
30 b. 2(RS),3(SR)-[2-(metoksikarbonyyli)etyylikarbo- nyyll]-L-norleusyyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli- 1,1,l-trifluori-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi Esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (5,60 g, 15,3 mmol), esimerkin 23a tuotteen (3,75 g, 15,3 35 mmol) ja 1-hydroksibentsotriatsolin (4,13 g, 30,6 mmol) 84171 ου etukäteen jäähdytettyyn (O °C) liuokseen THF:ssä (70 ml) lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (3,46 g, 16,8 mmol). Liuos sai lämmetä hitaasti huoneen lämpötilaan, ja sitä sekoitettiin yön yli. Reaktioseos suodatettiin ja 5 konsentroitiin vakuumissa. Jäännös laimennettiin EtOAc:llä, ja saatu liuos pestiin kyllästetyllä NaHC03-ve-siliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografial-10 la silikageelikolonnissa käyttäen gradienttieluointia: Et20 (100 %), Et20:EtOAc (90:10), Et20:Et0Ac (75:25), Et20:Et0Ac (50:50), jolloin saatiin tuote (5,6 g); TLC, Rf = 0,45, silikageeli, MeOH:CHCl3 (1:9).
c. 3(RS)-[2-(metokslkarbonyyli)etoksikarbonyyli]-15 L-norleusyyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-tri- fluori-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi Oksalyylikloridin (16,5 ml, 0,189 mol) etukäteen jäähdytettyyn (-65°C) liuokseen CH2Cl2:ssa (350 ml) lisättiin hitaasti DMS0:n (27,0 ml, 0,378 mol) liuos CH2Cl2:ssa 20 (27 ml). Liuosta sekoitettiin 15 min ja siihen lisättiin sitten esimerkin 23b tuotteen (5,60 g, 0,00943 mol) liuos CH2Cl2:ssa (250 ml). Seosta sekoitettiin -65 °C:ssa 1 h, sitten lisättiin tipoittain di-isopropyylietyyliamiinia (67,0 ml, 0,378 mol). Seos sai lämmetä huoneen lämpöti-25 laan ja pestiin sitten 1 N HCl-vesiliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla silikageelikolonnissa käyttäen gradienttieluointia, joka sisälsi seuraa-30 vat vaiheet: Et20 (100 %), Et20: EtOAc (50:50), EtOAc (100%), jolloin saatiin osittain puhdistettu tuote, joka edelleen puhdistettiin flash-kromatografialla gradientti-eluoimalla vaiheittain: CHC13 (100 %), MeOH:CHCl3 (2,5:97,5) ja MeOH:CHCl3 (5:95), jolloin saatiin lopputuote 35 (3,24 g); HPLC, tR = 6,80 ja 12,98, Zorbax® ODS -analyyt tinen kolonni, H20:CH3CN (65:35), virtausnopeus = 2 ml/min.
84171 61
Esimerkki 24 3(RS)-[(2-karboksietyyli )karbonyyll]-L-norleusyy-li-L-valyyll-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-trifluori-2-oksopentyyli)3-L-prolinamidi 5 Esimerkin 23c tuotteen (2,60 g, 4,39 mmol) liuok seen MeOH:ssa (95 ml) lisättiin 1 N NaOH-vesiliuosta (9,5 ml). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, ja siihen lisättiin 1 N HC1-vesiliuosta (10,5 ml). Reaktioseos konsentroitiin vakuumissa, ja jäännökseen li-10 sättiin vettä (35 ml). Suspensio uutettiin EtOAcrllä, orgaaninen liuos pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tuote (2,1 g); HPCL, tR = 12,63 ja 19,05, Zor-bax® ODS -analyyttinen kolonni, H20:CH3CN (65:35), virtaus-15 nopeus 0,5 ml/min.
Esimerkki 25 3(RS)-C(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-g-glutamyyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l, 1,1-trifluori-2-okso-pentyyll)]-L-prolinamidifenyylimetyyliesteri 20 a. 2(RS),3(SR)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-a- glutamyyli-L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1,1-trif luo-rl-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidifenyylimetyy-liesteri N-bentsyylioksikarbonyyli-L-glutamiinihappo-a-bent-25 syyliesterin (1,52 g, 4,1 mmol) ja N-metyylimorfoliinin (0,45 ml, 4,1 mmol) etukäteen jäähdytettyyn (-15 °C) liuokseen THF:ssä (30 ml) lisättiin isobutyyliklooriformiaattia (0,53 ml, 4,1 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 10 min, sitten seos jäähdytettiin -40 °C:seen. Siihen lisättiin ti-30 poittain esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (1,5 g, 4,1 mmol) liuos THF:ssä (30 ml), ja seosta sekoitettiin yli yön, jolloin se sai hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös liuotettiin EtOAc:hen, liuos pestiin 1 N HC1-35 vesiliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin raakatuo- 62 841 71 te. Se puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageeliko-lonnissa käyttäen gradienttieluointia: CHC13 (100 %),
MeOH:CHC13 (2,3:97,5) ja MeOH:CHCl3 (5:95), jolloin saatiin tuote (2,13 g); TLC, Rf - 0,43, silikageeli, MeOH:CHCl3 5 (5,95).
b. 3(RS)-[(fenyylimetoksi)karbonyyli]-L-a-gluta- myyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyll-l,1,l-trifluori-2-oksopentyyli) ]-L-prolinamidifenyylimetyyllesteri Oksalyylikloridin (5,2 ml, 0,059 mol) etukäteen 10 jäähdytettyyn (-65 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (100 ml) lisät tiin varovasti DMS0:n (8,40 ml, 0,118 mol) liuos CH2Cl2:ssa (8 ml). Liuosta sekoitettiin 15 min, sitten lisättiin ti-poittain esimerkin 25a tuotteen (2,13 g, 2,96 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (100 ml). Seosta sekoitettiin 1 h -60 °C:ssa, 15 sitten lisättiin tipoittain N,N-di-isopropyylietyyliamii- nia (20,9 ml, 0,118 mol). Reaktioseos sai lämmetä huoneen lämpötilaan, pestiin 1 N HCl-vesiliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin raakatuote. Tuote puhdistettiin osittain 20 flash-kromatografialla silikageelikolonnissa käyttäen vai heittaista gradienttieluointia: Et20 (100 %), Et20:Et0Ac (50:50) ja EtOAc (100 %). Loppupuhdistus suoritettiin flash-kromatografialla silikageelikolonnissa käyttäen vaiheittaista gradienttieluointia: CHC13 (100 %), MeOH:CHCl3 25 (1:99), MeOH:CHCl3 (2:98) ja MeOH:CHCl3 (5:95), jolloin saatiin tuote (1,35 g); HPLC, tR = 7,2 ja 11,5, Zorbax® ODS -analyyttinen kolonni, H20:CH3CN (50:50), virtausnopeus = 2 ml/min.
Esimerkki 26 30 3(RS)-N*-[2-(metoksikarbonyyli )etyylikarbonyyll] - N6-[ ( fenyylimetoksi)karbonyyll]-L-lysyyli-L-valyy-li-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trifluori-2-oksopentyy-li)]-L-prollnamidi 63 84 1 71 a. N2-[(2-metoksikarbonyyli)etyylikarbonyyli]-N6- fenyylimetoksikarbonyyli-L-lysiini N-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysiinin (6,06 g, 0,0216 mol) etukäteen jäähdytettyyn (O °C) liuokseen 5 CH2Cl2:ssa (160 ml) lisättiin 1 N NaOH-vesiliuosta (43 ml). Reaktioseosta sekoitettiin voimakkaasti, ja siihen lisättiin 3-karbometoksipropionyylikloridia (2,66 ml, 0,0216 mol). Reaktioseosta sekoitettiin voimakkaasti 15 min 0 °C:ssa. Seokseen lisättiin peräkkäin vettä (100 ml), IN 10 HCl-vesiliuosta (25 ml) ja EtOAc:tä (500 ml), ja kerrokset erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin tuote (6,78 g). Sitä käytettiin ilman enempää puhdistamista.
15 b. 2( RS), 3( SR)-N^~ [2-(metoksikarbonyyli )etyylikar- bonyyli] -N*-fenyylimetoksikarbonyyli-L-lysyyli-L-valyyli-N-[3-( 4-metyyli-l, 1, l-trifluori-2-hydroksi-pentyyli)]-L-prolinamidi
Esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (4,63 20 g, 12,6 mmol), esimerkin 26a tuotteen (5,00 g, 12,6 mmol) ja H0BT:n (3,76 g, 27,8 mmol) etukäteen jäähdytettyyn (O °C) seokseen THF:ssä (65 ml) lisättiin DCC:tä (2,85 g, 13,9 mmol). Seosta sekoitettiin 1 h 0 °C:ssa, seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin yön yli. Liuotin 25 poistettiin vakuumissa, jäännös laimennettiin EtOAc:llä ja pestiin peräkkäin kyllästetyllä NaHC03-liuoksella ja suolaliuoksella. Orgaaninen faasi kuivattiin (kiinteä K2C03:Na2S04, (10 : 90), suodatettiin, ja liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote. Se puhdistettiin 30 flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen eluointiin
MeOH:CHCl3-seosta (1:99), jolloin saatiin tuote (6,22 g) valkeana vaahtona: TLC, Rf = 0,40, silikageeli, Me0H:CHCl3 (5:95).
64 841 71 c. 3(RS )-N2-[2-(metokslkarbonyyli)etyylikarbonyy-11] -N6- C ( fenyylimetoksi )karbonyyli] -L-lysyyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-trifluori-2-oksopen-tyyll)]-L-prolinamldi 5 Oksalyylikloridin (8,8 ml, 200 mmol) -43 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (150 ml) lisättiin tipoittain typpikehässä sekoittaen DMS0:n (15,9 g, 100 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (50 ml). Esimerkin 26b tuotteen (6,22 g, 8,37 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (60 10 ml) lisättiin samalla tavalla. Reaktioseosta sekoitettiin -20 °C:ssa 1 h, ja siihen lisättiin tipoittain TEA:ta (70 ml, 400 mmol). Seos sai hitaasti lämmetä huoneen lämpötilaan, sitä sekoitettiin vielä 1 h, sitten se laimennettiin CH2Cl2:lla, pestiin 5-%:lla NaOCl-vesiliuoksella, kuivat-15 tiin (kiinteä K2C03: Na2S04, 10:90), suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote. Se puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluenttina MeOH:CHCl3-seosta (1:99), jolloin saatiin tuote (4,5 g) vaaleankeltaisena vaahtona; TLC, Rf = 0,51, 20 silikageeli, MeOH:CHCl3 (1:9); HPLC,tR = 6,99 ja 12,01, virtausnopeus - 1 ml/min, Zorbax® -analyyttinen kolonni, H20:CH3CN:TFA (50:50:0,1).
Esimerkki 27 3( RS )-N2- [ (2-karboksletyyli )karbonyyli] -N6- [ ( fenyy-25 limetoksi)karbonyyli]-L-lysyyli-L-valyyll-N-[3-(4- metyyli-1,1,l-trifluorl-2-oksopentyyli)]-L-prolin-amidi
Esimerkin 26c tuotteen (2,0 g, 2,7 mmol) liuosta MeOH:n (60 ml) ja 1 N NaOH:n (5,4 ml, 5,4 mmol) seoksessa 30 sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 h, sitten pH säädettiin 1 N HC1-vesiliuoksella (6,0 ml, 6,0 mmol) 7:ksi. MeOH poistettiin vakuumissa, jäännös liuotettiin EtOAc:hen, liuos pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), suodatettiin, ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saa-35 tiin raakatuote. Se puhdistettiin flash-kromatografiällä 65 841 71 silikageelillä (pH 5,5, Baker®) käyttäen eluointiin kloroformia, jolloin saatiin tuote (1,7 g) valkeana vaahtona; HPLC, tR * 4,06 ja 5,56, virtausnopeus * 1 ml/min, Zorbax® 5 ODS -analyyttinen kolonni, H20: CH3CN:TFA (50:50:0,1).
Analyysi laskettu kaavalle C34H4eN509F3.1,75H20 C 53,78, H 6,83, N 9,22 %
Saatu: C 53,46, H 6,39, N 9,03 %
Esimerkki 28 10 3S(tai R)-N2,N^-dl[(fenyylimetoksi)karbonyyli3-L- lysyyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-trifluori- 2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi a. 2(RS),3(SR)-N2,N*-dl[(fenyylimetoksi)karbonyy-li]-L-lysyyli-L-valyyll-N-[3-(4-metyyli-l,1,1-tri-15 fluori-2-hydroksipentyyli)]-L-prolinamidi N2N6-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysiinin (1,69 g, 4,08 mmol), esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (1,50 g, 4,08 mmol), 1-hydroksibentsotriatsolin (1,10 g, 8,16 mmol) O °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä 20 THF:ssä (75 ml) lisättiin typpikehässä sekoittaen DCC:tä (0,93 g, 4,49 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 1 h, sitten seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin yön yli. Reaktioseos suodatettiin, suodos haihdutettiin vakuumissa. Jäännös liuotettiin CHCl3:een, ja 25 liuos pestiin 1 N HCl-vesiliuoksella ja suolaliuoksella ja kuivattiin (Na2S04). Na2S04 suodatettiin pois, ja suodos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (3,94 g), joka puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluointiin CHCl3:MeOH-seosta (95:5), 30 jolloin saatiin 2,48 g tuotetta; TLC, Rf = 0,36 - 0,56, CHCl3:MeOH (95:5), silikageeli; HPLC, Zorbax®ODS -analyyttinen kolonni, virtausnopeus = 1,5 ml/min, CH3CN:H20 (50:50); tR = 18,33, 14,99.
Analyysi, laskettu kaavalle C33H41F3N407: 35 C 59,01, H 6,24, N 8,45 %
Saatu: C 58,89, H 6,33, N 7,89 % 66 841 71 b. 3S(tai R)-N*,N6-di[(fenyylimetoksi)karbonyyll]-L-lysyyli-L-valyyli-N-[3-(4-metyyll-l,1,1-trifluo-rl-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi
Oksalyylikloridin -60 °C:seen jäähdytettyyn liuok-5 seen vedettömässä CH2Cl2:ssa (40 ml) lisättiin sekoittaen typpikehässä DMS0:n (2,8 g, 36,13 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (40 ml). Sitten reaktioseokseen lisättiin -50 °C:ssa esimerkin 28a tuotteen (2,30 g, 3,01 mmol) liuos vedettömässä CH2Cl2:ssa (40 ml) ja reaktioseosta sekoitet-10 tiin -60 °C:ssa 1 h. Seokseen lisättiin trietyyliamiinia (7,290 g, 72,26 mmol), ja seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Seos pestiin 2 kertaa 1 N HCl-vesiliuok-sella, sitten suolaliuoksella ja kuivattiin (Na2S04). Na2S04 suodatettiin pois, ja suodos konsentroitiin vakuumissa, 15 jolloin saatiin raakatuote (2,67 g). Se puhdistettiin flash-kromatografiällä silikageelillä käyttäen eluenttina CHCl3:MeOH-seosta (97:3), jolloin saatiin 64 mg tuotetta; TLC, Rf = 0,6, CHCl3:MeOH (95:5); HPLC, Zorbax® ODS -analyyttinen kolonni, CH3CN:H20 (60:40), virtausnopeus = 1,5 20 ml/min, tR - 5,29.
Analyysi, laskettu kaavalle C38H 550F3Ns08.H20: C 58,53, H 6,72, N 8,98 %
Saatu: C 58,95, H 6,59, N 8,74 %
Esimerkki 29 25 3(RS)-l-(12-metoksi-12-oksododekyylioksi)karbonyy- li-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-li)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = CH3OCO(CH2)n, A = OCO, n = 1) a♦ Metyyli-12-hydroksidodekanoaatti 30 1-hydroksidodekaanihapon (4,0 g, 18,5 mmol), MeOH:n (450 ml), väkevän rikkihapon (2,5 ml) ja 3A-molekyyliseulojen (3 ml) seosta sekoitettiin palautusjäähdytyslämpötilassa 16 h. Seos neutraloitiin kyllästetyllä NaHC03-vesi-liuoksella ja konsentroitiin vakuumissa, jäännös jaettiin 35 etyylieetteriin ja veteen liukeneviin osiin. Eetterikerros pestiin vedellä, kyllästetyllä NaHC03-vesiliuoksella ja 67 8 41 71 suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin valkea kiinteä tuote (3,94 g); NMR (DMSO-d6) δ 83,65 (3H,s); 1,7 - 1,9 (22H,m).
5 b. ll-metokslkarbonyyliundekyyli-4-nitrofenyyli- karbonaatti
Esimerkin 29a tuote muutettiin esimerkissä 7a kuvatulla menetelmällä otsikon yhdisteeksi, joka puhdistettiin flash-kromatografialla (EtOAc:heksaani, 1:9), jolloin saa-10 tiin otsikon yhdiste 59 %:n saannolla; TLC, R* = 0,20, EtOAc:heksaani (1:9).
c. 2(RS),3(SR)-l-(12-metoksi-12-oksododekyyliok-si)-karbonyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = 15 CH(CH3)CH3, R3 = CHjOCOfCHj)^, A = 0C0, n = 1)
Esimerkin 29b yhdiste saatettiin reagoimaan esimerkin 7b menetelmällä esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa, ja saatu raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (asetoni:heksaani, 3:7), jolloin 20 saatiin otsikon tuote (45 %); HPLC, tR = 4,43, Col A, CH3CN:H20 (35:65), FR = 2,0.
d. 3(RS)-!-(12-metoksi-12-oksododekyylioksi)karbo-nyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 25 = CH30C0(CH2)X1, A = 0C0, n = 1)
Esimerkin 29c tuotteeseen (1,1 mmol) lisättiin DMS0:ta (65 ml) ja Ac20:ta (50 mmol). Saatua liuosta sekoitettiin 18 h huoneen lämpötilassa, sitten liuos laimennettiin Et20:lla. Orgaaninen liuos pestiin kyllästetyllä 30 NaHC03-vesiliuoksella (3 x), vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla (Et20:heksaani, 1:1), jolloin saatiin otsikon yhdiste (100 %),* HPLC, tR = 12,73, Col A, CH3CN:H20 (60:40), FR = 2,0.
35 Analyysi, laskettu kaavalle C22H28F3N305.0,4H20: 84171 68 C 55,91, H 8,00, N 5,21 %
Saatu: C 56,05, H 8,00, N 5,19 %
Esimerkki 30 3( RS)-1-(12-hydroksi-12-oksododekyylioksi)karbo-5 nyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen- tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 * CH(CH3)CH3, R3 = HOCO(CH2)u, A-OCO, n = 1)
Esimerkin 14 menetelmällä esimerkin 29d tuote muutettiin otsikon yhdisteeksi, joka puhdistettiin flashkro-10 matografiällä (EtOAc:heksaani, 1:1), saanto 10 %; HPLC, tR = 4,55, Col A, CH3CN:H20 ( 60:40), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C24H39F3N206.0,1H20: C 56,48, H 7,74, N 5,49 %
Saatu: C 56,48, H 7,96, N 5,23 % 15 Esimerkki 31 3(RS)-l-[l-okso-5-(fenyylimetoksikarbonyyliamino)-pentyyli] -N- [3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-okso-pentyyli)]-L-prolinamidl (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = CH2OCONH(CH2)4, A = CO, n = 1) 20 a-5-(fenyylimetoksikarbonyyliamino)valeriaanahappo 5-aminovaleriaanahapon (5,00 g, 42,68 mmol) ja 2 N NaOH-liuoksen (32,0 ml, 32,0 mmol) jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen lisättiin sekoittaen samanaikaisesti bentsyyli-klooriformiaattia (7,65 g, 6,40 ml, 44,81 mmol) ja 2 N 25 NaOH-liuosta (32,0 ml, 32,0 mmol). 0,5 tunnin sekoittamisen jälkeen 0 °C:ssa liuos pestiin Et20:lla. Et20-liuos tehtiin happameksi (pH 2,0) 6 N HCl-liuoksella, jolloin tuote saostui. Otsikon yhdiste suodatettiin, pestiin vedellä ja kuivattiin (vakuumiuuni), jolloin saatiin puhdas 30 valkea kiinteä tuote (8,55 g, 80,0 %), sp. 104 - 105 °C; TLC, Rf= 0,48, MeOH:CHC13:AcOH (3:97:0,1).
b. 2(RS),3(SR)-l-[l-okso-5-(fenyyllmetoksikarbo-nyyliamlno)pentyyli]-N-[3-(1,1,l-trifluori-2-hydr-oksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, 35 R1 = CH(CH3)CH3, R3 = CH2OCONH(CH2)4, A = CO, n = 1) 69 841 71
Esimerkin 31a tuotteen (0,47, 1,86 nunol), H0BT:n (0,50 g, 3,72 nunol) ja DCC:n (0,40 g, 1,95 mmol) jäähdytettyyn (0 °C) liuokseen CHCl3:ssa (50 ml) lisättiin sekoittaen esimerkin 2b mukaisesti valmistettua tuotetta 5 (0,50 g, 1,86 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, seos konsentroitiin, ja saatu siirappi liuotettiin osittain EtOAcrhen. Liukenematon materiaali suodatettiin EtOAc-liuoksesta, ja suodos pestiin kyllästetyllä NaHC03-vesiliuoksella, 5-%:sella sitruuna-10 happoliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatogra-fiällä Me0H:CHCl3, 4:96), jolloin saatiin otsikon yhdiste valkeana vaahtona (0,78 g, 84 %); TLC, Rf = 0,4, MeOH:CHCl3 (4:96).
15 c. 3(RS)-l-[l-okso-5-(fenyylimetoksikarbonyyliami no )-pentyyli]-N-[3-(l,l,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 CH(CH3)CH3, R3 = CH2OCONH(CH2)4, A = CO, n = 1) Esimerkin 31b tuotteeseen (1 mmol) lisättiin 20 DMSO:ta (85 mmol) ja Ac20:ta (64 mmol). Saatua liuosta sekoitettiin 18 h huoneen lämpötilassa, liuos kaadettiin jääveteen (50 ml) ja sitä sekoitettiin 1 - 4 h. Raakatuote uutettiin EtOAc:hen, uute pestiin kyllästetyllä NaHC03-vesiliuoksella ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), 25 suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla (CHCl3:MeOH, 97:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (58 %); HPLC, t„ = 6,56 ja 7,79, Col A, H20:CH3CN (60:40), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C24H32F3N305.1,5H20: 30 C 54,74, H 6,69, N 7,98 %
Saatu: C 54,87, H 6,20, N 8,02 %
Esimerkki 32 3(RS)-!-(l-okso-4-fenoksibutyyli)-N-[3-(1,1,1-tri-fluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi 35 (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0(CH2)3, A = CO, n = 1) 70 841 71 a. 2(RS),3(SR)-l-(l-okso-4-fenoksibutyyll)-N-[3-(1,1,1-txi.f luori-2-hydroksi-4-metyyllpentyyli ) ] -L-prolinamidi (kaava Vila, R1 » CH(CH3)CH3, R3 =00(CH2 )3, A = CO, n - 1) 5 4-fenoksivoihapon 0,25 M THF-liuokseen lisättiin yhtenä annoksena mooliekvivalenttimäärä CDI:tä. Reaktio-seosta sekoitettiin 1 h huoneen lämpötilassa, sitten lisättiin yhtenä annoksena mooliekvivalenttimäärä esimerkin 2b mukaisesti valmistettua tuotetta. Reaktioseosta sekoi-10 tettiin yön yli, seokseen lisättiin ylimäärin kyllästettyä
NaHC03-vesiliuosta, ja seos uutettiin EtOAc:llä. EtOAc-uutteet pestiin (1 N HC1, suolaliuos), kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (88 %); TLC, Rf * 0,53 ja 0,61, MeOH:CH2Cl2 15 (1:9).
b. 3(RS)-l-(l-okso-4-fenoksibutyyli)-N-[3-(1,1,1- trif luori-4-iwetyyli-2-oksopentyyli ) ] -L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0(CH2)3, A = CO, n - 1) 20 Esimerkin 32a tuote muutettiin esimerkin 31c mene telmällä otsikon yhdisteeksi, joka kiteytettiin vedestä, saanto 39 %; TLC, R = 0,68 ja 0,64, CH2Cl2:MeOH (9:1).
Analyysi, laskettu kaavalle C21H27F3N204.1,25H20: C 55,93, H 6,59, N 6,21 % 25 Saatu: C 55,88, H 6,67, N 6,15 %
Esimerkki 33 3(RS)-1-[2-(4-morfolinyyli)etoksikarbonyyli]-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 4-morfoli-30 nyyli-(CH2)2, A = 0C0, n = 1) a. 2-(4-morfolinyyli)etyyli-4-nitrofenyylikarbo- naattihydrokloridi
Noudattaen esimerkin 7a menetelmää, jättäen kuitenkin pyridiini pois (ja happopesu pois), 2-(4-morfoli-35 nyyli )etanolia käsiteltiin 4-nitrofenyyliklooriformiaatil-la. Raakatuote suodatettiin, pestiin Et20:lla ja kuivattiin 71 84171 vakuumissa. Tuote saatiin 91 %:n saannolla ja sitä käytettiin seuraavaan reaktioon lähemmin karakterisoimatta.
b. 2(RS),3(SR)-l-[2-(4-morfolinyyli)etoksikarbo-nyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksl-4-metyyli- 5 pentyyll)]-L-prolinamidl (kaavan Vila, R1 - CH(CH3)CH3, R3 = 4-morfolinyyli-(CH2)2, A = 0C0, n = 1)
Noudattaen esimerkin 7b menetelmää esimerkin 33a tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valio mistetun tuotteen kanssa, jolloin puhdistamalla flash-kromatografialla (MeOH:CHCl3, 1:99) saatiin otsikon yhdiste (68 %); TLC, Rf = 0,34, MeOH:CHCl3 (5:95), FR 2,0.
c. 3(RS)-l-[2-(4-morfolinyyli)etoksikarbonyyli]-N-[3-( 1,1, l-trlfluori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ]-L- 15 prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 4-mor- folinyyli-(CH2)2, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 33b tuotteeseen (1,1 mmol) lisättiin DMS0:ta (65 mmol) ja Ac20:ta (50 mmol). Muodostunutta liuosta sekoitettiin 18 h huoneen lämpötilassa, sitten 20 laimennettiin CH2Cl2:lla. Orgaaninen liuos pestiin kyllästetyllä NaHC03-vesiliuoksella (3 x), vedellä ja suolaliuoksella, kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla (MeOH:CHCl3, 2,98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (37 %); 25 HPLC, tR = 8,44 ja 9,88, Col A, CH3CN:H20 ( 60:40), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C1BH28F3N305.1,0H2O: C 48,97, H 6,85, N 9,51 %
Saatu: C 48,97, H 6,61, N 9,73 %
Esimerkki 34 30 3(RS)-l-[l-okso-6-[2-(2-pyridyyli)etoksijkarbonyy- liaminoheksyylij-N-[3-( 1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = (2-pyridyyli )- (CH2)2OCONH-(CH2)5, A = CO, n = 1) 35 a. 4-nitrofenyyli-2-(2-pyridyyli)etyylikarbonaatti 2-pyridiinietanolin (1,38 g, 11 mmol) liuos Et20:ssa (20 ml) lisättiin 0 °C:ssa 1 tunnin kuluessa se- 72 841 71 koittaen typpikehässä p-nitrofenyyliklooriformiaatin (2,26 g, 11 mmol) liuokseen. Seosta sekoitettiin 1 h O °C:ssa, muodostunut sakka koottiin typpisuojakaasussa ja kiteytettiin uudelleen vedettömästä etanolista, jolloin saatiin 5 1,53 g (58 %) otsikon yhdistettä lähes valkeina kiteinä, sp. 125 - 127 °C.
b. 2(RS),3(SR)-l-[l-okso-6-[2-(2-pyridyyli)etok- si] -karbonyyliaminoheksyyll] -N- [3- (1,1,1-trlfluo-rl-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi 10 (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = (2-pyridyyli)- (CH2)2OCONH(CH2)5, A = CO, n = 1)
Esimerkin 50b amiinituotteen (0,75 g, 1,8 mmol), esimerkin 34a tuotteen (0,675 g, 1,8 mmol), TEA:n (0,52 ml, 3,6 mmol), CH3CN:n (25 ml) ja veden (25 ml) seosta se-15 koitettiin huoneen lämpötilassa 2 vrk, sitten liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote. Se puhdistettiin flash-kromatografiällä (CH30H:CHC13, 2,5:97,5), jolloin saatiin vaaleankeltainen kiinteä tuote (1,13 mmol, 60 %); TLC, Rf = 0,5, CH30H:CHC13 (5:95).
20 c. 3(RS)-l-[l-okso-6-[2-(2-pyridyyli)etoksi]karbo- nyyliamlnoheksyyli]-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyy-li-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = ( 2-pyridyyli)-(CH2)2OCONH(CH2 )5, A = CO, n = 1) 25 Noudattamalla esimerkin 31c menetelmää esimerkin 34c tuote muutettiin otsikon yhdisteeksi. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (MeOH:CH2Cl2, 3:97), jolloin otsikon yhdiste saatiin 10 %:n saannolla; HPLC, tR = 1,84, Col A, H20:CH3CN (60:40), FR = 2,0.
30 Analyysi, laskettu kaavalle C25H35F3N4O5.0, 5H20: C 55,85, H 6,75, N 10,40 %
Saatu: C 56,08, H 6,82, N 10,43 %
Esimerkki 35 3(RS)-l-[2-fenyylimetoksi-l-( fenyylimetoksimetyy-35 li)etoksikarbonyyli]-N-[3-(1,1,1-trlfluori-4-me- tyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = ( CH2OCH2)2CH, A = 0C0, n = 1) 73 84171 a. 4-nitrofenyyli-2-fenyylimetoksi-l-(fenyylimeto-ksimetyyli)etyylikarbonaatti TEA:ta (0,74 g, 7,34 mmol) lisättiin tipoittain 0 - 5 °C:ssa sekoittaen p-nitrofenyyliklooriformiaatin (1,48 5 g, 7,34 mmol) liuokseen Et20:ssa (30 ml). Tähän reaktio-seokseen lisättiin 0-5°C:ssa 1,3-dibentsyyliglyserolin (2,0 g, 7,34 mmol) liuos Et20:ssa (20 ml), ja seosta sekoitettiin 2 h 0 - 5 °C:ssa, seos sai sitten lämmetä huoneen lämpötilaan, ja sitä sekoitettiin yön yli. Reaktioseos suoda-10 tettiin ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Jäännöksenä saatu keltainen öljy (3,6 g) puhdistettiin flash-kromato-grafiällä (heksaani:Et20, 8:2), jolloin saatiin 2,19 g (68 %) otsikon yhdistettä kirkkaana öljynä; TLC, Rf = 0,33, heksaani:eetteri (7:3).
15 b. 2(RS),3(SR)-1-[2-fenyylimetoksi-l-(fenyylimeto- ksimetyyli )etoksikarbonyyli] -N- [3-(1,1,1-trif luori- 2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi,(kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 =( CH20CH2)2CH, A = 0C0, n = 1) 20 Noudattaen esimerkin 7b menetelmää esimerkin 35a tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (CHCl3:Et0Ac, 95:5), jolloin saatiin otsikon yhdiste 62 %:n saannolla; HPLC, tR = 5,81 ja 6,29, Col 25 A, H20:CH3CN (40:60), FR = 2,0.
c. 3(RS)-l-[2-fenyylimetoksi-l-(fenyylimetoksime-tyyli)etoksikarbonyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = ( CH20CH2)2CH, A = 0C0, n = 1) 30 Noudattaen esimerkin 31c menetelmää esimerkin 35b tuote hapetettiin, ja saatu raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (CHCl3:Et0Ac, 98:2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (13 %); HPLC, tR = 5,62, Col A, H20:CH3CN (40:60), FR = 2,0.
35 Analyysi, laskettu kaavalle C29H35F3N206.0,25H20: C 61,20, H 6,28, N 4,92 %
Saatu: C 61,28, H 6,34, N 5,15 % 74 841 71
Esimerkki 36 3(RS)-!-[!-okso-4-(1-okso-2-fenoksietyy1iamino)bu-tyyli ] -N- [3-(1,1,1-trif luori-4-metyyll-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidl (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 5 = OCH2CONH(CH2)3, A - CO, n - 1) a. Etyyli-4-(l-okso-2-fenoksietyyllamlno)butano-aattl
Etyyli-4-aminobutanoaatti-hydrokloridin (3,4 g), fenoksiasetyylikloridin (2,76 ml), Et20:n (50 ml) ja ve-10 den (50 ml) seokseen lisättiin sekoittaen yhtenä annoksena 4,2 g NaHC03:a. 2 h:n kuluttua kerrokset erotettiin, ja orgaaninen faasi pestiin 1 N HCl-liuoksella, suolaliuoksella, kuivattiin MgS04) ja suodatettiin. Liuotin haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon yhdiste 15 (3,1 g, 53 %) öljynä.
b. 4-(l-okso-2-fenoksietyyliamlno)voihappo Esimerkin 36a tuotteen (3,1 g) ja 1 N NaOH-liuok- sen (15 ml) seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 6 h. Muodostunut liuos tehtiin happameksi 2 N HCl-liuoksella. 20 Saostunut sakka koottiin, pestiin vedellä ja kuivattiin suurvakuumissa. Saatiin 2,5 g (95 %) otsikon yhdistettä valkeana kiinteänä aineena, sp. 91 - 94 °C.
c. 2(RS),3(SR)-l[l-okso-4-(l-okso-2-fenoksietyyli-amino)butyyli]-N-[3-( 1,1,1-trif luori-2-hydroksi4- 25 metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = OCH2CONH(CH2)3, A = CO, n = 1) Noudattaen esimerkin 32a menetelmää esimerkin 36b tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa. Raakatuote puhdistettiin happo-30 ja emäspesuilla, jolloin saatiin otsikon yhdiste (92 %); TLC, Rf = 0,43 ja 0,48, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
d. 3(RS)-l-[l-okso-4-(l-okso-2-fenoksletyyllami-no)butyyli]-N-[3-( 1,1,1-trif luorl-4-metyyli-2-okso-pentyyli)]- L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, 35 R3 - OCH2CONH(CH2)3, A - CO, n - 1)
Esimerkin 36d tuote hapetettiin esimerkissä 61c käytetyllä hapetusmenetelmällä. Raakatuote puhdistettiin 75 84171 flash-kromatografialla (MeOH:CH2Cl2, 3:97), jolloin saatiin otsikon yhdiste (75 %); HPLC, tR « 4,62 ja 6,02, Col A, CH3CN:H20 ( 65:35), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C23H30F3N3O5: 5 C 56,26, H 6,28, N 8,56 %
Saatu: C 56,28, H 6,40, N 8,30 %
Esimerkki 37 3(RS)-l-(4-metoksi-l,4-dioksobutyyli)-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi 10 (kaava Ia, R, = CH(CH3)CH3, R3 = CH3OCO(CH2)2, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-l-(4-metoksi-l,4-dioksobutyyli)-N-[3-( 1,1, l-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli ) ] -L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 15 CH30C0(CH2)2, A = CO, n = 1) Jäävesihauteessa jäähdytettyyn esimerkin 2b mukaisesti valmistetun yhdisteen (1,34 g), CH2Cl2:n (50 ml) ja 1 N NaOH-liuoksen (6 ml) seokseen lisättiin tipoittain ja sekoittaen 3-karbometoksipropionyylikloridia (0,75 g).
20 Tunnin kuluttua kerrokset erotettiin, orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 1,1 g (58 %) valkoista jauhemaista otsikon yhdistettä; TLC, Rf = 0,57, MeOH:CH2C12 (1:9).
b. 3(RS)-1-(4-metoksl-l,4-dioksobutyyll)-N-[3- 25 (1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro linamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 CH30C0(CH2)2, A = CO, n = 1)
Esimerkin 37a tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla 30 MeOH:CH2Cl2 (2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (71 %); TLC, Rf = 0,58, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
Analyysi, laskettu kaavalle Cl6H23F3N205.0,75H20: C 48,79, H 6,27, N 7,11 %
Saatu: C 49,04, H 6,12, N 6,83 % 76 84171
Esimerkki 38 3(RS )-1-[3-(1,1-dimetyylietoksikarbonyyli)amino-l-oksopropyyli]-N- [3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 5 CH(CH3)CH3, R3 = (CH3)3COCONH(CH2)2, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-l-[3-(l,1-dimetyylietoksikarbonyy-li )amino-l-oksopropyyli]-N-[3-( 1,1,1-trif luori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = (CH3) 3COCONH (CH2) 2, A = 10 CO, n = 1)
Noudattaen esimerkin 32a menetelmää 3-(B0C-amino)-propionihappo saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (80 %); TLC, Rf = 0,35, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
15 b. 3(RS)-l-[3-(l,1-dimetyylietoksikarbonyyli)ami no- 1-oksopropyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyy-11-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = (CH3)3COCONH(CH2)2, A = CO, n = 1) Esimerkin 38a tuote hapetettiin esimerkin 61c mu-20 kaisella menetelmällä, ja raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CH2Cl2, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (61 %); TLC, Rf = 0,46, MeOH:CH2Cl2 (1:9). Analyysi, laskettu kaavalle C19H30F3N3O5.0,75H20: C 50,83, H 6,62, N 9,39 % 25 Saatu: C 51,18, H 7,00, N 9,28 %
Esimerkki 39 3(RS)-l-(3-bentsoyyliamino-l-oksopropyyli)-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-pro-linamldl (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = CONH(CH2)2, 30 A - CO, n - 1) a. 2(RS),3(SR)-l-(3-bentsoyyliamino-l-oksopropyy-li)-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksl-4-metyylipen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0CONH(CH2)2, A = CO, n = 1) 77 841 71 3-(bentsoyyliamino)propionihappo saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (83 %); TLC, Rf = 0,39 ja 0,42, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
5 b. 3(RS)-l-(3-bentsoyyliamino-l-oksopropyyli)-N- [3-( 1,1, l-trifluorl-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ] -L-prollnamldl (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0CONH-(CH2)2, A = CO, n = 1)
Esimerkin 39a tuote hapetettiin esimerkin 61c mene-10 telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CH2Cl2, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (48 %); TLC, Rf = 0,54, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
Analyysi, laskettu kaavalle C21H26F3N304: C 57,14, H 5,94, N 9,52 % 15 Saatu: C 57,12, H 6,59, N 9,45 %
Esimerkki 40 3(RS)-l-[3-(l-okso-2,2-difenyylietyyli)amino]-1-oksobutyyll-N- [3-(1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-okso-pentyyll) ] -L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, 20 R3 = 02CHCONH(CH2)3, A = CO, n = 1) a. Etyyli-3-(l-okso-2,2-difenyylietyyli)aminobuta-noaatti
Etyyli-4-aminobutyraattihydrokloridin (2,51 g) ja difenyyliasetyylikloridin (3,46 g) liuokseen CH2Cl2:ssa (50 25 ml) lisättiin sekoittaen yhtenä annoksena 3,4 g NaHC03:a. 2 tunnin kuluttua kerrokset erotettiin, ja orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin. Saatiin 3,5 g (72 %) valkeata kiinteätä otsikon yhdistettä; TLC, R - 0,71, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
30 b. 3-(l-okso-2,2-difenyylletyyli)amlnovoihappo
Esimerkin 40a tuotteen (3,5 g), 1 N NaOH-liuoksen (30 ml) ja EtOH:n (10 ml) seosta sekoitettiin 10 h. Liuos uutettiin sitten Et20:lla. Vesifaasi tehtiin happameksi 2 N HCl-liuoksella, muodostunut sakka koottiin, pestiin ve-35 dellä ja kuivattiin suurvakuumissa. Saatiin 2,9 g (93 %) otsikon yhdistettä valkeana jauheena.
78 84 1 71 c. 2(RS),3(SR)-l-[3-(l-okso-2,2-difenyylietyyli)-amino-l-oksobutyyli]-N-[3-(1,1,l-trifluorl-2-hydr-oksl-4-metyylipentyyli))-L-prolinamidl (kaava Vila, R1 - CH(CH3)CH3, R3 = 2CHCONH(CH2)3, A = CO, n = 1) 5 Esimerkin 40b tuote saatettiin reagoimaan esimer kin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 32a mukaisella menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (81 %); TLC, Rf = 0,13, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
d. 3(RS)-l-[3-(l-okso-2,2-dlfenyylletyyli)amino-1- 10 oksobutyyli]-N-[3-(1,1,1-trlfluori-4-metyyli-2- oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 CH(CH3)CH3, R3 = 2CHCONH(CH2)3, A = CO, n = 1) Esimerkin 40c tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä 15 (MeOH:CH2Cl2, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (27%); TLC, Rf - 0,24, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
Analyysi, laskettu kaavalle C29H34F3N304.1,0H20: C 61,31, H 6,48, N 7,39 %
Saatu: C 61,58, H 6,77, N 7,43 % 20 Esimerkki 41 3( RS )-l-[2-(2-metoksietoksl)etoksikarbonyyli]-N-[3-( 1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 CH30(CH2)20(CH2)2, A = 0C0, n = 1) 25 a. 2(RS) 3(SR)-l-[2-(2-metoksietoksi)etoksikarbo- nyyli]-N-[3-(1,1,1-trlfluori-2-hydroksi-4-metyy-lipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, Rl = CH(CH3)CH3, R3 = CH30(CH2)20(CH2)2, A = 0C0, n=l) Esimerkin 19a tuote saatettiin reagoimaan esimer-30 kin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 7b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin kuivapylväs-flash-kromatografialla silikageelillä käyttäen gradienttieluoin-tia: asetoni:heksaani (10:90) - (50:50), jolloin saatiin otsikon yhdiste (75 %); TLC, Rf = 0,30 ja 0,35, 35 asetoni:heksaani (40:60).
79 8 4 1 71 c. 3(RS)-l-[2-(2-metoksletoksi)etoksikarbonyyli]-N— [3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ] -L-prol inamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = CH30(CH2)20(CH2)2, A * 0C0, n = 1) 5 Esimerkin 41a tuote hapetettiin esimerkin 61c mene telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (asetoni:CHC13, 1:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (42 %); HPLC, tR=5,69, Col A, H20:CH3CN (75:25), FR = 2,0. Analyysi, laskettu kaavalle C17H27F3N206: 10 C 49,39, H 6,83, N 6,78 %
Saatu: C 49,27, H 6,80, N 6,48 %
Esimerkki 42 3( RS ) — 1 — [ 1,4-diokso-4- ( f enyy lime tyyli amino) bu tyyli] -N- [3 - (1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-15 li)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = CH2NHCO(CH2)2, A = CO, n = 1) a. 4-okso-4-(fenyylimetyyliamlno)voihappo Bentsyyliamiinin (10,7 g) ja meripihkahappoanhydri- din (10 g) seosta sekoitettiin THF:ssä (1 litra) 2 vrk. 20 Kiinteä aine suodatettiin ja liuotettiin 1 N NaOH-liuok-seen (110 ml). Vesifaasi pestiin Et20:lla ja tehtiin sitten happameksi väkevällä HCl:llä samalla jäähdyttäen jäävesi-hauteessa. Kiinteä aine koottiin, pestiin vedellä ja kuivattiin suurvakuumissa. Saatiin 10,9 g (53%) otsikon yh-25 distettä valkeana jauheena, sp. 137,5 - 138 °C.
b. 2(RS),3(SR)-!-[!,4-diokso-4-(fenyylimetyyliami-no)butyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyyllpentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0CH2NHCO(CH2)2, A = CO, n = 1) 30 Esimerkin 42a tuote saatettiin reagoimaan esimer kin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (74 %); TLC, Rf = 0,48, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
35 80 841 71 c. 3(RS)-l-[l,4-diokso-4-(fenyylimetyyliamino)bu-tyyli] -N-[3-(1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 * 0CH2NHCO(CH2)2, A = CO, n = 1) 5 Esimerkin 42b tuote hapetettiin esimerkin 61c mene telmällä. Saatu raakatuote puhdistettiin flash-kromato-grafialla (MeOH:CH2Cl2, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (40 %); TLC, Rf = 0,56, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
Analyysi, laskettu kaavalle C22H28F3N304: 10 C 58,10, H 6,20, N 9,23 %
Saatu: C 57,90, H 6,36, N 9,27 %
Esimerkki 43 3(RS)-l-[l-okso-3-(fenyylimetoksikarbonyyliamino)-propyyll]-N-[3-( 1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-okso-15 pentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 =0CH2OCONH(CH2)2, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-l-[l-okso-3-(fenyylimetoksikarbo-nyyliamino)propyyli] -N- [3-(1,1,1-trifluori-2-hyd-roksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava 20 Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0CH2OCONH (CH2) 2, A = CO, n = 1) CBZ-6-alaniini saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (82 %); TLC, 25 Rf = 0,59, MeOH:CH2C12 (1:9).
b. 3(RS)-l-[l-okso-3-(fenyylimetoksikarbonyyliami-no)propyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluorl-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 CH(CH3)CH3, R3 = CH2OCONH(CH2)2, A = CO, n = 1) 30 Esimerkin 43a tuote hapetettiin esimerkin 61c mene telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CH2Cl2, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (35 %); TLC, Rf = 0,23, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
Analyysi, laskettu kaavalle C22H2eF3N304.0,4H20: 35 C 55,20, H 6,06, N 8,77 %
Saatu: C 55,28, H 6,25, N 8,55 % 84171 81
Esimerkki 44 3(RS)-l-[l-okso-4-( fenyylimetoksikarbonyyliamino)-butyyli]-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, 5 R3 =0CH2OCONH(CH2)3, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-l-[l-okso-4-(fenyylimetoksikarbo-nyyliamino)butyyll]-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hyd-roksi-4-metyyllpentyyli) ] -L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0CH2OCONH(CH2)3, A = CO, 10 n = 1) CBZ-4-aminovoihappo saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (72 %); TLC, Rf = 0,47, Et20:EtOAc (1:1).
15 b. 3(RS)-l-[l-okso-4-(fenyylimetoksikarbonyyliami- no)butyyli]-N-(3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-okso-pentyyli)j-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0CH2OCONH(CH2)3, A = CO, n = 1)
Esimerkin 44a tuote hapetettiin esimerkin 61c mene-20 telmällä. Raakatuote puhdistettiin preparatiivisella TLC:llä (MeOH:CHCl3, 2,5:97,5), jolloin saatiin otsikon yhdiste (32 %); TLC, Rf = 0,65 ja 0,68, MeOH:CHCl3 (1:9). Esimerkki 45 3R(tai S)-l-[l-okso-4-fenoksi-2-(2-fenoksietyyli)-25 butyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-okso- pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = [0O(CH2)2]2CH, A = CO, n = 1)
Natriumin (2,3 g) liuokseen vedettömässä etanolissa (50 ml) lisättiin sekoittaen dietyylimalonaattia (15,2 ml) 30 ja sitten 2-fenoksietyylikloridia (15,7 g). Reaktioseosta keitettiin sitten palautusjäähdyttäen 12 h. EtOH haihdutettiin vakuumissa, ja seos laimennettiin vedellä (40 ml). Vesifaasi uutettiin Et20:lla. Yhdistetyt Et20-uutteet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja 35 haihdutettiin. Tislaamalla saatiin 12,2 g (27 %) otsikon 82 841 71 diesteriä kirkkaana nesteenä, kp. 155 - 175 °C (106 Pa, 0,8 torr); TLC, Rf = 0,34, CH2C12.
b. 4-fenoksi-2-(2-fenoksietyyli)voihappo Esimerkin 45a tuotteen (10,0 g), kaliumhydroksidin 5 (17,7 g) ja veden (22 ml) seosta keitettiin palautusjääh dyttäen 4 h. Reaktioseos jäähdytettiin ja tehtiin happa-meksi väkevällä kloorivetyhapolla. Saostunut kiinteä aine koottiin, pestiin vedellä ja ilmakuivattiin. Saatua kiinteätä ainetta (8,44 g) kuumennettiin 170 °C:ssa 2 h, sitten 10 se jäähdytettiin. Kiteyttämällä sykloheksaanista saatiin 4,1 g (93 %) otsikon yhdistettä hienoina valkeina neulasina, sp. 85 - 86°C.
Analyysi, laskettu kaavalle C18H20O4: C 71,98, H 6,71 % 15 Saatu: C 71,92, H 6,71 % c. 4-fenoksl-2-(2-fenoksietyyli)butanoyyllkloridi Esimerkin 45b tuotteen (1,5 g) ja tionyylikloridin (0,73 ml) seosta kuumennettiin höyryhauteella 1 h. Reaktioseos haihdutettiin. Happokloridi (otsikon yhdiste) saa-20 tiin kirkkaana öljynä kvantitatiivisella saannolla, ja se käytettiin jatkoreaktioihin välittömästi.
d. 2(RS),3(SR)-1-[l-okso-4-fenoksi-2-(2-fenoksi-etyyli)butyyli]-N-[3-(1,1,l-trifluori-2-hydroksi4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = 25 CH(CH3)CH3, R3 = [0O(CH2)2]2CH, A = CO, n = 1)
Esimerkin 45c mukainen yhdiste saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun yhdisteen kanssa esimerkin 37a mukaisella menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (95 %); TLC, Rf = 0,47 ja 0,54, Et20.
30 e. 3R(tai S)-[l-okso-4-fenoksi-2-(2-fenoksietyy li )butyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyll-2-okso-pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = [0O(CH2)2]2CH, A = OC , n = 1)
Esimerkin 45d tuote hapetettiin esimerkin 61c mene-35 telmällä, jolloin saatiin raakatuote diastereomeerien 83 8 4 1 71 seoksena. Diastereomeerit erotettiin flash-kromatografial-la (Et20:heksaani, gradienttieluointi: 60:40 - 75:25). Nopeammin eluoituva dlastereomeeri oli otsikon yhdiste, jota saatiin 27,7 %:n saannolla; HPLC, tR = 6,94, Col A, 5 CH3CN:H20 (65:35), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C29H35F3N205: C 63,49, H 6,43, N 5,11 %
Saatu: C 63,39, H 6,47, N 5,07 %
Esimerkki 46 10 3S(tai R)-[l-okso-4-fenoksi-2-(2-fenoksietyyli)- butyyli] -N- [3-(1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = [0O(CH2)2]2CH, A = CO, n = 1)
Esimerkissä 45e kuvatun raakatuotteen diastereo-15 meerien erotuksesta saatu hitaammin eluoituva diastereo-meeri on otsikon yhdiste, saanto 28,3 %; HPLC, t„=5,04, Col A, CH3CN:H20 (65:35), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C29H35F3N205: C 63,49, H 6,43, N 5,11 % 20 Saatu: C 63,50, H 6,45, N 5,26 %
Esimerkki 47 3(RS)-l-[6-[(4-etoksikarbonyylifenyyll)amlnokarbo-nyyli)amlno]-1-okso]-heksyyli-N-[3-(1,1,1-trifluo-rl-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava 25 Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 - 4-(CH3CH2OCO) NHC0NH(CH2 )5, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-!-[6-[(4-etoksikarbonyylifenyyli)-aminokarbonyyliamlnoj-l-okso]heksyyli-N-[3—(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyyllpentyyll)]-L-prolin-30 amidi (kaava Vila, R1 - CH(CH3)CH3, R3 = 4 -(CH3CH2OCO) NHCONH(CH2)5, A = CO, n = 1)
Esimerkin 50b tuotteen (0,6 g, 1,5 mmol), TEA:n (0,15 g, 1,5 mmol) ja DMF:n (20 ml) seokseen lisättiin typpikehässä sekoittaen huoneen lämpötilassa etyyli-piso-35 syanaattobentsoaattia (0,288 g, 1,5 nunol). Seosta sekoi- 84 841 71 tettiin huoneen lämpötilassa yön yli, sitten seos konsentroitiin vakuumissa, ja saatu meripihkanvärinen jäännös liuotettiin EtOAcrhen. EtOAc-liuos pestiin (IN HC1), kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, 5 jolloin saatiin 1,15 g öljymäistä jäännöstä. Se puhdistettiin flash-kromatografialla (CHC13:CH30H, 97:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,62 g, 70 %) valkeana kiinteänä aineena; TLC, Rf = 0,28, 0,35, CHC13:CH30H (95:5).
b. 3(RS)-l-[6-[(4-etoksikarbonyylifenyyli)amino-10 karbonyyliamino]-l-okso]heksyyli-N-[3-( 1,1,1-tri- fluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 4-(CH3CH2OCO)0NHCONH(CH2)5, A = CO, n = 1)
Esimerkin 47a tuote hapetettiin esimerkin 61c mene-15 telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (CHCl3:MeOH, 97:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (43 %); HPLC, tR=12,39, 15,79, Col A, H20:CH3CN (65:35), FR = 2,0. Analyysi, laskettu kaavalle C27H37F3N406.1,0H2O: C 55,09, H 6,68, N 9,51 % 20 Saatu: C 54,75, H 6,63, N 9,29 %
Esimerkki 48 3(RS)-l-[6-(fenyylimetoksikarbonyyliamino)-l-ok-soheksyyli] -N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-okso-pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, 25 R3 * 0CH2OCONH(CH2)5, A = CO, n = 1)
Esimerkin 50a tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (CHCl3:MeOH, 97:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (31%); HPLC, tR * 4,06, Col A, CH3CN:H20 (1:1), FR = 2,0.
30 Analyysi, laskettu kaavalle C25H34F3N305.0,5H20: C 57,46, H 6,75, N 8,04 %
Saatu: C 57,87, H 6,24, N 7,86 %.
35 85 841 71
Esimerkki 49 3(RS )-1-[6-[(4-hydroksikarbonyylifenyyli)aminokar-bonyyliamino]-l-okso]heksyyli-N-[3-(1,1,1-trifluo-ri-4-metyyli-2-oksopentyyli)1-L-prolinamidi (kaava 5 Ia, R1 * CH(CH3)CH3, R3 = 4-(HOCO) NHCONH( CH2 )5, A = CO, n = 1)
Esimerkin 47b yhdiste muutettiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi (saanto 38 %); HPLC, tR = 6,24, 8,0, Col A, H20:CH3CN (75:25), FR = 2,0.
10 Analyysi, laskettu kaavalle C25H33F3N406.2,5H20: C 51,1, H 6,50, N 9,50 %
Saatu: C 51,34, H 5,93, N 8,95 %
Esimerkki 50 3(RS)-l-(6-fenyyllsulfonyyllamino-l-oksoheksyyli)-15 N- [3-( 1,1,1-trlf luorl-4-metyyll-2-oksopentyyli ) ] - L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 0S(O2)NH(CH2)5, A = CO, n = 1) a» 2(RS),3(SR)-l-[6-(fenyylimetoksikarbonyyliami-no)-1-oksoheksyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hyd-20 roksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava
Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = CH2OCONH(CH2)5, A = CO, n = 1) N-CBZ-aminokapronihapon (6,84 g, 25,7 mmol), esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen (6,89 g, 25,7 25 mmol), H0BT:n (6,94 g, 51,4 mmol) ja vedettömän THF:n (250 ml) 0 °C:seen jäähdytettyyn seokseen lisättiin sekoittaen typpikehässä DCC:tä (6,35 g, 30,8 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 1 h 0 °C:ssa, sen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, sitä sekoitettiin yön yli ja sitten seos suo-30 datettiin. Suodos konsentroitiin vakuumissa, ruskea jäännös liuotettiin CHCl3:een, liuos pestiin (20-%:nen sitruu-nahappoliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kroma-tografialla (CHCl3:MeOH, 97:3), jolloin saatiin 8,0 g (61 35 %) otsikon yhdistettä vahamaisena aineena; TLC, Rf = 0,35, CHC13:MeOH (95:5).
86 841 71 b. _2( RS),3( SR )-1-(6-amino-l-oksoheksyyli)-N-[3- (1,1,1-trifluorl-2-hydroksi-4-metyylipentyyli ) ] -L-prollnamldi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = H2N(CH2)5, A - CO, n - 1) 5 Esimerkin 50a tuotteen (2,0 g, 3,99 mmol), EtOH:n (100 ml) ja 10 %:sen Pd/C-katalyytin (0,3 g) seos pantiin Parr-sekoittimeen ja käsiteltiin 310 320 Pa vedyn paineessa 3 h. Seos suodatettiin Celitellä®, ja suodatuskakku pestiin EtOH:lla. Suodos ja pesunesteet yhdistettiin ja 10 konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin 1,36 g (86 %) otsikon yhdistettä vaaleanvihreänä vahamaisena öljynä: TLC, Rf = 0,2, CHCl3:MeOH (85:15).
c. 2(RS),3(SR)-l-(6-fenyylisulfonyyliamino-l-ok-soheksyyli)-N-[3-(l,l,1-trifluori-2-hydroksi-4- 15 metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 =0S(O2)NH(CH2)5, A = CO, n = 1) Esimerkin 50b tuotteen (0,26 g, 1,5 mmol), TEA:n (0,3 g, 3,0 mmol) ja vedettömän DMF:n (20 ml) seokseen lisättiin sekoittaen typpikehässä huoneen lämpötilassa bent-20 seenisulfonyylikloridia (0,6 g, 1,5 mmol), ja saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. DMF poistettiin vakuumissa, saatu ruskeahko jäännös liuotettiin EtOAc:hen. EtOAc-liuos pestiin (1 N HC1), kuivattiin (MgS04) ja suodatettiin. Suodos konsentroitiin vakuumissa 25 ja jäännös puhdistettiin flash-kromatografiällä (CHCl3:MeOH, 97:3), jolloin saatiin 0,48 g (60 %) otsikon yhdistettä valkeana jauheena; TLC, Rf = 0,30, 0,40, CHC13:MeOH (95:5).
d. 3(RS)-!-(6-fenyylisulfonyyliamlno-l-oksoheksyy- 30 li )-N-[3-( 1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy- 11)]-L-prolinamidi (kaava Ia, R1 = CH(CH3)CH3, R3 * 0S(O2)NH(CH2)5, A = CO, n = 1)
Esimerkin 50c tuote hapetettiin esimerkin 8b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä 35 (Et20:heksaani, 3:1, ja sen jälkeen toisella kolonnilla käyttäen CHCl3:MeOH-seosta, 97:3), jolloin saatiin otsikon 87 841 71 yhdiste (36 %); HPLC, tR = 8,48, 10,33, CH3CN:H20 (35:65), FR = 2,0.
Esimerkki 51 3(RS)-(1-naftyylikarbonyyli)-L-valyyli-N-[3-5 (1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-pro- linamidi(kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 1-naftyyli, R4 = H, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-(l-naftyylikarbonyyli)-L-valyyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]- 10 L-prolinamldl (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 1-naftyyli, R4 = H, A = CO, n = 1) Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan 1-naftaleenikarbonyylikloridin kanssa esimerkin 20a menetelmällä, jolloin puhdistamalla raakatuote 15 preparatiivisella TLC:llä (heksaani:Et20, 4:6) saatiin otsikon yhdiste 38 %:n saannolla, TLC, Rf = 0,46, 0,41,
MeOH:CHC13 (5:95).
Analyysi, laskettu kaavalle C27H32F3N304: C 60,32, H 6,37, N 7,82 % 20 Saatu: C 60,89, H 6,21, N 7,68 % b. _3(RS)-( 1-naftyylikarbonyyli)-L-valyyli-N- [3- (1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamldl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 1-naf tyyli, R4 = H, A = CO, n = 1) 25 Oksalyylikloridin (24,0 g, 190 mmol) etukäteen jäähdytettyyn (-43 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (350 ml) lisättiin hitaasti DMS0:n (29,7 g, 380 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (81 ml), saatua liuosta sekoitettiin 15 min ja sitten siihen lisättiin esimerkin 51b tuotteen (9,4 mmol) 30 liuos CH2Cl2:ssa (83 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 1 h -30 °C:ssa, sitten lisättiin tipoittain di-isopropyylietyy-liamiinia (48,9 g, 380 mmol), reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, se pestiin (1 N HC1, 5-%:nen NaCl-vesiliuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatet-35 tiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin preparatiivisella TLC:llä (heksaani:Et20, 40:60), jolloin 88 84 1 71 saatiin otsikon yhdiste (38 %), HPLC, tR = 5,21, 7,31, Col A, CH3CN:H20:TFA (50:50:0,1), FR = 1,5.
Analyysi, laskettu kaavalle C27H32F3N304.0, 75H20: C 60,32, H 6,37, N 7,82 % 5 Saatu: C 60,69, H 6,21, N 7,68 %
Esimerkki 52 3(RS)-[4-(metyyllsulfonyyliaminokarbonyyli )fenyy-liaminokarbonyyli3-L-valyyll-N-[3-( 1,1,1-trifluo-ri-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidl (kaava 10 Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 4-[CH3S(02)NHC0] , R4 = H, A = NHCO, n = 1) Esimerkin 16 mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan metaanisulfonamidin kanssa esimerkin 89 menetelmällä, ja saatu tuote puhdistettiin flash-kromato-15 grafiällä [Baker pH 5,0 -silikageeli, gradienttieluointi CHCl3:Me0H (97:3) - (90:10)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (59 %), HPLC, t„=2,60, 3,33, Voi C, H20:CH3CN (60:40), FR = 6,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C25H34F3N507S.0, 5H20: 20 C 48,85, H 5,74, N 11,39 %
Saatu: C 49,03, H 5,74, N 10,86 %
Esimerkki 53 3( RS) - [ 2- (4-morfolinyyli )etoksikarbonyyli] -L-valyy-li-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-25 li)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 4-morfolinyyli-CH2CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[2-(4-morfolinyyli)etoksikarbonyy-li] -L-valyyll-N- [3-(1,1,1-trif luori-2-hydroksi-4-30 metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 * CH(CH3)2, R3 = 4-morfolinyyli-CH2CH2, R4 = H, A - 0C0, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 33a mukaisesti valmistetun tuot-35 teen kanssa esimerkin 7b menetelmällä. Raakatuote puhdis- 89 84 1 71 tettiin flash-kromatografialla (MeOH:CHCl3, 2,5:97,5), jolloin saatiin otsikon yhdiste 55 %:n saannolla, HPLC, tR = 4,62, 5,85, Col A, CH3CN:H20 (1:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C23H39F3N406.H20: 5 C 50,91, H 7,61, N 10,32 %
Saatu: C 50,95, H 7,20, N 10,02 % b. 3(RS)-[2-(4-morfollnyyli)etoksikarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, 10 R2 = CH(CH3)2, R3 = 4-morfolinyyli-CH2CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1)
Oksalyylikloridin (24,0 g, 190 nunol) etukäteen jäähdytettyyn (-43 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (350 ml) lisättiin DMS0:n (29,7 g, 380 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (135 ml), 15 liuosta sekoitettiin 15 min, sitten siihen lisättiin esimerkin 53a tuotteen (9,4 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (125 ml). Reaktioseos sai lämmetä -43 °C:sta -20 °C:seen samalla kun sitä sekoitettiin 1 h, sitten lisättiin tipoittain di-isopropyylietyyliamiinia (48,9 g, 380 mmol) ja reaktio-20 seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Seos laimennettiin CH2Cl2:lla, pestiin (NaOH-vesiliuos, pH 10), kuivattiin (K2C03/Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla (MeOH:CHCl3, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (18 %) HPLC, tR = 25 2,00, 2,60, Col A, H20:CH3CN (1:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C23H37F3N406.1,5H20: C 50,26, H 7,34, N 10,19 %
Saatu: C 50,49, H 6,96, N 9,96 %
Esimerkki 54 30 3(RS)-([2,4-dikloorifenyyli)karbonyyli]-L-valyyli- N- [3-(1,1, l-trifluori-4-metyyll-2-oksopentyyli ) ] -Lprolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 CH(CH3)2, R3 = 2,4-dikloori0, R4 = H, A = CO, n = 1) 90 84 1 71 a. 2(RS),3(SR)-[(2,4-dikloorifenyyli)karbonyyll]-L-valyyll-N- [3-( 1,1, l-trifluorl-2-hydroksi-4-metyy-llpentyyll)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 2,4-dikloori , R4 = 5 H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan 2,4-diklooribentsoyylikloridin kanssa esimerkin 20a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste 98 %:n saannolla; TLC, Rf = 0,54, MeOH:CHCl3 (5:95).
10 b.3(RS)-[(2,4-dikloorifenyyli)karbonyyli]-L-valyy- li-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-li) ] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 2,4-dikloori , R4 = H, A = CO, n = 1) Oksalyylikloridin (24,0, 190 mmol) etukäteen jääh-15 dytettyyn (-65 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (350 ml) lisättiin hitaasti DMS0:n (29,7 g, 380 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (27 ml), ja saatua liuosta sekoitettiin 15 min, sitten lisättiin esimerkin 54a mukaisesti valmistetun tuotteen (9,4 nm:oi) liuos CH2Cl2:ssa (250 ml). Reaktioseosta sekoitet-20 tiin 1 h -65 °C:ssa, siihen lisättiin tipoittain di-isopro-pyylietyyliamiinia (48,9 g, 380 mmol), reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, ja seos pestiin (IN HC1, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kroma-25 tografialla (MeOH:CHCl3, 3:97), jolloin saatiin otsikon yhdiste (15 %), HPLC, tR = 17,93, 18,55, Col A, H20:CH3CN (55:45), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle ^-23^28^^-2^3^3^4 · HjO : C 49,65, H 5,43, N 7,55 % 30 Saatu: C 49,95, H 5,31, N 7,35 %
Esimerkki 55 3(RS)-fenokslkarbonyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-tri-fluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 0, 35 R4 = H, A = 0C0, n = 1) 91 84171 a. 2(RS),3(SR)-fenoksikarbonyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trlfluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L- prolinamidi (kaava Vllb, R1 * CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 - 0, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 5 Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatet tiin reagoimaan fenyyliklooriformiaatin kanssa esimerkin 20a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromato-grafiällä (MeOH:CHCl3, 5:95), jolloin saatiin otsikon yhdiste 61 %:n saannolla, TLC, Rf = 0,31, 0,36, MeOH:CHCl3 10 (3:97).
b. 3(RS)-fenoksikarbonyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trlfluorl-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 0, R4 - H, A = 0C0, n = 1) 15 Esimerkin 55a tuote hapetettiin esimerkin 54b mene telmällä. Saatu raakatuote puhdistettiin flash-kromato-grafiällä (heksaani:Et20, 15:85), jolloin saatiin otsikon yhdiste (37 %), HPLC, tR = 2,72, 3,55, Col A, H20:CH3CN (1:1), FR = 2,0.
20 Analyysi, laskettu kaavalle C23H30F3N3O5.0, 5H20: C 55,86, H 6,32, N 8,50 %
Saatu: C 56,07, H 6,30, N 8,48 %
Esimerkki 56 3(RS)-[2-(2-pyridyyli)etoksikarbonyyli]-L-valyyli-25 N- [3-(1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli )]- L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 2-pyridyyli-CH2CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[2-(2-pyridyyli)etoksikarbonyyli]-30 L-valyyll-N- [3-(1,1, l-trifluori-2-hydroksi-4-roetyy- lipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 2-pyridyyli-CH2CH2, R4 = H, A - 0, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatet-35 tiin reagoimaan esimerkin 34a mukaisesti valmistetun tuot- 92 841 71 teen kanssa esimerkin 34b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (MeOH:CHCl3, 4:96), jolloin saatiin otsikon yhdiste 50 %:n saannolla, TLC, Rf = 0,30, 0,34, CHCl3:MeOH (95:5).
5 b.3(RS)-[2-(2-pyridyyli)etoksikarbonyyli]-L-valyy- 11-N-[3-(1,1,1-trlfluori-4-metyyll-2-oksopentyy-li)]-L-prolinamldl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, r2 = CH(CH3)2, R3 = 2-pyridyyli-CH2CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 10 Esimerkin 56a tuote hapetettiin esimerkin 54b mene telmällä, jolloin kuitenkin happopesu jäi pois. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla 2 kertaa (heksaa-ni:Et20, 1:1, sitten Me0H:CHCl3, 5:95), jolloin saatiin Otsikon yhdiste (19 %), HPLC, tR = 9,52, 14,58, Col A, 15 H20:CH3CN (60:40), FR = 1,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C24H33F3N405.0, 75H20: C 54,59, H 6,58, N 10,61 %
Saatu: C 54,63, H 6,47, N 10,55 %
Esimerkki 57 20 3(RS)-[ (4-fluorlfenyyli )aminokarbonyyli] -L-valyy- li-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-li) ] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = F0, R4 = H, A = NHCO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[(4-fluorifenyyll)aminokarbonyyli]-25 L-valyyli-N-[3-( 1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyy- llpentyyli)]-prolinamldi (kaava VIIb, R1 CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = F0, R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu yhdiste saatet-30 tiin reagoimaan 4-fluorifenyyli-isosyanaatin kanssa esimerkin 15a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla [gradientti Me0H:CHCl3 (2,5:97,5)-(5:95)], jolloin saatiin otsikon yhdiste 84 %:n saannolla; TLC,
Rf « 0,37, Me0H:CHCl3 (5:95).
93 8 4 1 71 b. 3(RS)-[(4-fluorifenyyli)aminokarbonyyli]-L-va-lyyli-N- [3-( 1,1, 1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-li)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = F , R4 = H, A = NHCO, n = 1) 5 Esimerkin 57a tuote hapetettiin esimerkin 54b mene telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CHCl3, 3:97), jolloin saatiin otsikon yhdiste (42 %), HPLC, tR = 8,87, 12,10, Col A, H20:CH3CN (60:40), FR = 1,0. Analyysi, laskettu kaavalle C23H30F4N404: 10 C 54,97, H 6,02, N 11,15 %
Saatu: C 55,18, H 6,15, N 11,08 %
Esimerkki 58 3( RS )-[4-( fenyylisulfonyyliaminokarbonyyli ) fenyy-liaminokarbonyyli )-L-valyyli-N- [3- (1,1,1-trif luo-15 ri-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava
Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 4-[0S(02)NHC0] , R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 16 mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan bentseenisulfonamidin kanssa esimerkin 89 20 menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatogra-fiällä (Baker pH 5,0 silikageeli, CHCl3:Me0H, 97:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (42 %), HPLC, tR 4,05, 5,93, Col C, H20:CH3CN (60:40), FR = 6,0.
Analyysi, laskettu kaavalle ^30^36^13N5O7S. 0,5H20: 25 C 53,25, H 5,51, N 10,34 %
Saatu: C 53,38, H 5,61, N 10,02 %
Esimerkki 59 3(RS) - [2- (3-tiofenyyli )etoksikarbonyyli ] -L-valyy-li-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-30 li)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 3-tiofenyyli-CH2)CH2, R4 = H, A = OCO, n = 1) a.4-nitrofenyyli-2-(3-tiofenyyli)etyylikarbonaatti 3-tiofeenietanolia käsiteltiin esimerkin 7a mene-35 telmän mukaisesti 4-nitrofenyyliklooriformiaatilla. Raaka-tuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (EtOAc:heksaa- 94 841 71 ni, 1:9), jolloin saatiin otsikon yhdiste (56 %), TLC,
Rf * 0,25, EtOAc:heksaani (1:9).
b. 2(RS),3(SR)-[2-(3-tiofenyyli)etoksikarbonyyll]-L-valyyll-N-[3-(1,1,1-trifluorl-2-hydroksl-4-me- 5 tyyllpentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 3-tiofenyyli-CH2 )CH2, R4 - H, A - 0, n - 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 59a tuotteen kanssa esimerkin 7b 10 menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatogra-fiällä (asetonirheksaani, 3:7), jolloin saatiin otsikon yhdiste (58 %): TLC, Rf = 0,23, 0,27, MeOH:CHCl3 (5:95). Analyysi, laskettu kaavalle C24h34f3n305S: C 52,96, H 6,57, N 8,06 % 15 Saatu: C 53,28, H 6,46, N 7,77 % c. 3(RS)-[2-(3-tiofenyyll)etoksikarbonyyli]-L-va-lyyll-N- [3-(1,1, l-trlfluorl-4-metyyli-2-oksopentyy-11)]-L-prolinamldi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 3-tiofenyyli-CH2)CH2, R4 = H, A = 0C0, 20 n - 1)
Oksalyylikloridin (24,0 g, 190 mmol) etukäteen jäähdytettyyn (-43 °C) liuokseen CH2Cl2:ssa (350 ml) lisättiin hitaasti DMS0:n (29,7 g, 380 mmol) liuos CH2Cl2:ssa (135 ml). Saatua liuosta sekoitettiin 15 min, sitten sii-25 hen lisättiin esimerkin 59b mukaisesti valmistettu tuote (9,4 mmol) CH2Cl2:ssa (125 ml), ja reaktioseosta sekoitettiin vielä 1 h -43 °C:ssa. Reaktioseokseen lisättiin ti-poittain di-isopropyylietyyliamiinia (48,9 g, 380 mmol), reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, ja 30 seos pestiin (1 N HCl-vesiliuos, 5-%:nen NaOCl-vesiliuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromato-grafiällä (asetoni: heksaani, 1:4), jolloin saatiin otsikon yhdiste (23 %), HPLC, tR = 5,09, 7,61, Col A, 35 H20:CH3CN (1:1), FR = 2,0.
95 84171
Analyysi, laskettu kaavalle C24H32F3N305S: C 53,17, H 6,21, N 8,09 %
Saatu: C 52,92, H 6,26, N 8,09 %
Esimerkki 60 5 3( RS)-(1,1-dlmetyylietoksikarbonyyli)-L-g-amino- butyryyli-N-[3-(l, 1,1-trifluorl-4-metyyll-2-okso-pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = CH3C(CH3)2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-(1,1-dimetyylietoksikarbonyyli)-L- 10 g-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi- 4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = CH3C(CH3)2, R4 = H, A = OCO, n = 1) HOBT:n (7,76 g, 57,4 mmol), BOC-a-aminovoihapon 15 (5,60 g, 27,4 mmol) ja esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen (7,00 g, 26,1 mmol) 0 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä THF:ssä (130 ml) lisättiin sekoittaen typpikehässä DCC:tä (5,90 g, 28,7 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 1 h, sitten seos sai lämmetä huoneen 20 lämpötilaan ja sitä sekoitettiin yön yli. Reaktioseos suodatettiin, suodos konsentroitiin vakuumissa, ja jäännös liuotettiin EtOAc:hen. Saatu liuos pestiin (kyllästetty NaHC03-liuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-25 kromatogravialla (EtOAc:CH2C12, 1:3), jolloin saatiin otsi kon yhdiste (95 %), TLC, Rf = 0,29, EtOAc:CH2Cl2 (3:7).
b. 3(RS)-(1,1-dimetyylietoksikarbonyyli)-L-g-amino-butyryyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-okso-pentyyli ) ] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, 30 R2 = CH2CH3, R3 = CH3C(CH3)2, R4 = H, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 60a tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (Me0H:CHCl3, 1,5:98,5), jolloin saatiin otsikon yhdiste (47 %), HPLC, tR = 10,21, 14,54, Col A, H20:CH3CN (65:35), FR = 35 2,0.
96 841 71
Analyysi, laskettu kaavalle C2oH32F3N305: C 53,21, H 7,14, N 9,31 %
Saatu: C 53,65, H 7,21, N 9,51 %
Esimerkki 61 5 3(RS)-[1-okso-(2-tiofenyyli)etyyli]-L-g-aminobuty- ryyll-N-[3 —(1,1,1-trifluorl-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 - CH2CH3, R3 = (tiofenyyli )CH2, R4 = H, A = CO, n = 1) 10 a, 2(RS),3(SR)-L-a-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-tri- fluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi, trifluorietikkahapon suola (kaava IVb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R4 = H, n = 1)
Esimerkin 60a mukaisesti valmistetun tuotteen 15 (4,0 g, 8,84 mmol) ja TFA:n (32 ml, 415 mmol) liuosta CH2Cl2:ssa (32 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa 22 h, sitten liuotin haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raakatuote (5 g, 100 %) värittömänä lasina, jota käytettiin ilman enempää puhdistamista tai karakteri-20 sointia.
b. 2(RS),3(SR)-[l-okso-2-(2-tiofenyyli)etyyli]-L-g-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamldi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = (tiofenyyli )CH2, R4 = H, 25 A = CO, n = 1) H0BT:n (0,413 g, 3,06 mmol), 2-tiofeenietikkahapon (0,222 g, 1,53 mmol), NMM:n (0,154 g, 1,53 mmol) ja esimerkin 61a mukaisesti valmistetun tuotteen (0,650 g 1,39 mmol) O °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä 30 THFrssä (20 ml) lisättiin sekoittaen typpikehässä DCC:tä (0,315 g, 1,53 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 1 h O °C:ssa, sitten seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin yön yli. Reaktioseos suodatettiin ja suodos konsentroitiin vakuumissa, jäännös liuotettiin EtOAc:hen. 35 Saatu liuos pestiin (suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suo- 97 84171 (Jätettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla (asetoni:heksaani, 1:1), jolloin saatiin otsikon yhdiste (33 %); TLC, Rf = 0,40, 0,44, MeOH:CHC13 (1:9).
5 Analyysi, laskettu kaavalle C21H30F3N3O4S: C 52,82, H 6,33, N 8,80 %
Saatu: C 52,43, H 6,53, N 8,08 % c.3(RS)-[l-okso-2-(2-tlofenyyli)etyyli]-L-a-amino-butyryyli-N-[3-( 1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-okso-10 pen tyyli ) ] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = (tiofenyyli )CH2, R4 = H, A = CO, n = 1)
Cr03:n (0,84 g, 8,4 mmol) suspensioon vedettömässä CH2Cl2:ssa (50 ml) lisättiin vedetöntä pyridiiniä (1,36 ml, 15 17 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 min. Saatuun viininpunaiseen suspensioon lisättiin 1 g Celiteä® ja sitten esimerkin 61b tuotetta (0,20 g, 42 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml). Seosta sekoitettiin, kunnes TLC osoitti kaiken alkoholin tulleen käytetyksi. Seos suoda-20 tettiin sitten silikageelikerroksen läpi käyttäen liuottimena metanoli:kloroformiseosta (1:9). Liuottimet haihdutettiin suodoksesta vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin preparatiivisella TLC:llä (MeOH:CHCl3, 5:95), jolloin saatiin valkea kiinteä tuote (150 mg); HPLC, tR * 4,18, 5,65, 25 Col A, H20:CH3CN (60:40), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C21H28F3N304S.0,5H20: C 52,06, H 6,03, N 8,67 %
Saatu: C 52,03, H 6,19, N 8,38 %
Esimerkki 62 30 3(RS)-(fenyyllmetoksikarbonyyli)-L-g-aminobutyryy- li-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-li)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 * CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 - CH2, R4 = H, A - OCO, n = 1) 98 841 71 a. 2(RS),3(SR)-(fenyylimetokslkarbonyyli)-L-g-ami-nobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trlfluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = CH2, R4 = H, A = OCO, 5 n = 1)
Esimerkin 61a mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan bentsyyliklooriformiaatin (1,5 ekv) kanssa CHCl3:ssa (käytettiin 1/4 esimerkissä 20a käytetystä määrästä) esimerkin 20a menetelmällä. Saatu raaka tuote 10 puhdistettiin flash-kromatografialla (asetoni:heksaani, 1:4), jolloin saatiin otsikon yhdiste (51 %); TLC, Rf = 0,38, 0,43, asetoni:heksaani (40:60).
b. 3(RS)-(fenyylimetoksikarbonyyli)-L-a-aminobuty-ryyli-N-[3-(1,1,1-trlfluorl-4-metyyll-2-oksopen- 15 tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 * CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = CH2, R4 = H, A = OCO, n = 1) Esimerkin 62a tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Saatu raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (asetoni:heksaani, 30:70), jolloin saatiin otsikon 20 yhdiste (64 %), HPLC, tR = 5,69, 7,75, Col A, H20:CH3CN (55:45), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C23H30F3N3O5.0,80H20: C 55,26, H 6,37, N 8,40 %
Saatu: C 55,10, H 6,19, N 8,77 % 25 Esimerkki 63 3(RS)-(fenoksikarbonyyli)-L-g-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-pro-linamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 * CH2CH3, R3 - 0, R4 = H, A - OCO, n = 1) 30 a. 2(RS),3(SR)-(fenoksikarbonyyli)-L-g-aminobyty- ryyli-N- [3-( 1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyyli-pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = , R4 = H, A = OCO, n = 1) 35 Noudattamalla esimerkin 20a menetelmää, mutta käyt tämällä TEA:n sijasta NMM:ää esimerkin 61a mukaisesti vai- 99 84 1 71 luistettu tuote saatettiin reagoimaan fenyyliklooriformi-aatin (1,5 ekv) kanssa. Raakatuote puhdistettiin prepara-tiivisella TLCrllä (asetoni:heksaani, 3:7), jolloin saatiin otsikon yhdiste (18 %), TLC, Rf = 0,32, 0,37, aseto-5 ni:heksaani (3:7).
b. StRSi^fenoksikarbonyylii-L-g-aminobutyryyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, r3 = 0, r4 = h, A = 0C0, n = 1) 10 Esimerkin 63a tuote hapetettiin esimerkin 61c mene telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (EtOAc:heksaani, 1:9), jolloin saatiin otsikon yhdiste (60 %), HPLC, tR = 4,75, 6,51, Col A, H20:CH3CN (55:45). Analyysi, laskettu kaavalle C22H28F3N305: 15 C 56,04, H 5,98, N 8,90 %
Saatu: C 56,04, H 6,18, N 8,85 %
Esimerkki 64 3( RS)- [4-( 1-oksoetyyliamino)fenyylisulfonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-20 tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 * CH(CH3)CH3, R3 = 4-(CH3C0NH) , R4 = H, A - S(02), n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[4-(1-oksoetyyliamino)fenyylisulfo-nyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-2-hydroksi-25 4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 * CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 * 4 -(CH3C0NH) , R4 = H, A = S(02), n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (1,00 g, 2,72 mmol) ja NMM:n (0,28 g, 0,30 ml, 2,80 mmol) liuok-30 seen CH2Cl2:ssa (50 ml) lisättiin sekoittaen typpikehässä 4-asetamidobentseenisulfonyylikloridia (0,64 g, 2,72 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, sitten liuos pestiin (5-%:nen sitruunahappo, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroi-35 tiin. Jäännöksenä saatu oranssinvärinen siirappi flash-kromatografoitiin silikageelillä (350 g) (MeOH:CHCl3, 10° 84171 7:93), jolloin saatiin otsikon yhdiste (810 mg, 52,6 %); TLC, Rf - 0,34, 0,45, MeOH:CHCl3(7:93).
b. 3(RS)-[4-(1-oksoetyyliamino)fenyylisulfonyyli]-L-valyyli-N- [3- (1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-okso-5 pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = 4 -(CH3C0NH) , R4 = H, A = S(02), n = 1)
Esimerkin 64a tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla 10 (Me0H:CHCl3, 5:95), jolloin saatiin otsikon yhdiste (84 %), HPLC, tR = 3,22, 4,58, Col A, CH3CN:H20 (40:60), FR = 2,0. Analyysi, laskettu kaavalle C24H33 F3N406S.H20: C 49,65, H 6,08, N 9,65 %
Saatu: C 49,73, H 5,86, N 9,53 % 15 Esimerkki 65 3(RS)-N2-( 1,1-dimetyylietoksikarbonyyli )-N6-fenyy-limetoksikarbonyyli-L-lysyyli-N-[3-(1,1,1-trifluo-rl-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2OCONH(CH2)4, r3 = 20 (CH3)3C, R4 = H, A = 0C0, n = 1) a. 2(RS), 3( SR)-N2-( 1,1-dimetyylietoksikarbonyyli)-N^-fenyylimetoksikarbonyyli-L-lysyyli-N-[3-(1,1,1-trifluorl-2-hydroksi-4-metyylipentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 25 0CH2OCONH(CH2)4, R3 = (CH3)3C, R4 = H, A = 0C0, n = 1) N2-B0C-N6-CBZ-L-lysiini saatettiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 84b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla [gradienttieluointi:MeOH:CHCl3 (2,5:97,5) -30 (5:95)), jolloin saatiin otsikon yhdiste (73 %), TLC, Rf = 0,57, MeOH:CHCl3 (5:95).
b. 3(RS)-N2-( 1,1-dimetyylietoksikarbonyyli ) -N6-fe-nyylimetoksikarbonyyli-L-lysyyll-N-[3-( 1,1,1-tri-fluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi 35 (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2OCONH(CH2)4, R3 = (CH3 )3C, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 101 84171
Esimerkin 65a tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (gradienttieluointi:MeOH:CHCl3 (2,5:97,5) - (5:95)), jolloin saatiin otsikon yhdiste (65 %), HPLC, tR = 4,15, 5,14, 5 Col A, H20:CH3CN (45:55), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C30H43F3N4O7.0,5H20: C 56,51, H 6,95, N 8,79 %
Saatu: C 56,45, H 6,58, N 8,42 %
Esimerkki 66 10 3(RS)~ C(2-amino-5-kloorlfenyyli )karbonyyli j -L-va- lyyll-N- [3-(1,1, 1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-li)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 2-NH2-5-Cl- , R4 = H, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[(2-amino-5-kloorifenyyli)karbonyy- 15 11] -L-valyyli-N- [3-(1,1,1-trifluorl-2-hydroksi-4- metyylipentyyll)]-L-prolinamidi (kaava (VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 2-NH2-5-Cl- , R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistetun tuotteen (1 g, 20 2,7 mmol) liuosta CH2Cl2:ssa (50 ml) käsiteltiin huoneen lämpötilassa 5-kloori-isatiinihappoanhydridillä (0,54 g, 2,7 mmol) ja seosta sekoitettiin yön yli, sitten seos pestiin (5-%:nen NaHC03-vesiliuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), konsentroitiin vakuumissa, ja jäännös puhdistet-25 tiin flash-kromatografiällä (MeOH:CHCl3, 3:97), jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,4 g, 78 %) valkeana vaahtona, TLC, Rf = 0,30, 0,25, MeOH:CHCl3 (5:95).
b. 3(RS)-[(2-amino-5-kloorifenyyli)karbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen- 30 tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 2-NH2-5-Cl- , R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 66a tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä 35 (MeOH:CHCl3, 3:97), jolloin saatiin otsikon yhdiste (76 %), HPLC, tR = 3,41, 4,62, Col A, H20:CH3CN (50:50), FR = 2,0.
102 841 71
Analyysi, laskettu kaavalle C23H30F4N4O.H2O: C 51,45, H 6,01, N 10,43 %
Saatu: C 51,65, H 5,74, N 9,68 %
Esimerkki 67 5 3(RS)-(4-metoksifenyylikarbonyyll)-L-a-aminobuty- ryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3), R3 = 4-(CH30)- , R4 = H, A = CO, n « 1) a. 2(RS),3(SR)-(4-metoksifenyylikarbonyyll)-L-g- 10 aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4- metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = 4- (CH3 )0- , R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 61a mukaisesti valmistettu yhdiste saa-15 tettiin reagoimaan 4-metoksibentsoyylikloridin kanssa esimerkin 20a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (EtOAcrheksaani, 6:40), jolloin saatiin otsikon yhdiste (34 %), TLC, Rf = 0,71, 0,73, MeOH:CHCl3 (1:9).
20 Analyysi, laskettu kaavalle C23H32F3N305.0,3H20: C 56,05, H 6,67, N 8,52 %
Saatu: C 56,06, H 6,60, N 8,14 % b. 3(RS)-(4-metoksifenyylikarbonyyli)-L-g-amino-butyryyll-N- [3-( 1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-okso- 25 pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = 4-(CH3)O-0, R4 = H, A = CO, n = 1) Esimerkin 67a tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä, jolloin kuitenkin alkoholin liuottamiseen käytettiin 5-kertainen määrä liuotinta. Raakatuote puhdis-30 tettiin preparatiivisella TLC:llä (MeOH:CHCl3, 1:9), jolloin saatiin otsikon yhdiste (40 %), HPLC, tR = 8,89, 11,75, Col A, H20:CH3CN (70:30), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C23H30F3N3O5.H20: C 54,86, H 6,41, N 8,35 % 35 Saatu: C 54,89, H 6,38, N 7,48 % 84171 103
Esimerkki 68 3(RS)-[2-(trisyklo[3.3.1.13'7!-dek-l-yyli)etoksi-karbonyyli]-L-g-aminobutyryyli-N-[3-(l, 1,1-trifluo-ri-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava 5 Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = (1-adamantyy li )-CH2CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[2-(trisyklo[3.3-l.l3!]-dek-l-yyli)-etoksikarbonyyli]-L-q-aminobutyryyli-N-[3-( 1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)) ]-L-pro- 10 linamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = (l-adamantyyli)-CH2CH2, R4 = H, A = OCO, n = 1) Esimerkin 61a mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 7a mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 34b menetelmällä. Raakatuote puh-15 distettiin flash-kromatografialla [EtOAcrheksaani (20:80) sitten (50:50)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (42 %), TLC, Rf = 0,33, 0,44, MeOH:CHCl3 (5:95).
b. 3(RS)-[2-(trisyklo[3.3.1.1^]-dek-l-yyli)etok-sikarbonyyli] - L-g-aminobutyryyli-N- [3 - (1,1,1-tri- 20 fluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2CH3, R3 = (1-ada-mantyyli )-CH2CH2, R4 = H, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 68a tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla 25 [Et20:heksaani (50:50) sitten (90:10)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (66 %), HPLC, tR = 4,64, 5,63, Col A, H20:CH3CN (25:75), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C2eH42F3N305.0,15H20: C 60,01, H 7,60 % 30 Saatu: C 59,76, H 7,65 %
Esimerkki 69 3(RS)-N2-( 1,1-dimetyylietoksikarbonyyli )-N*-fenyy-lisulfonyyli-L-lysyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-me-tyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, 35 R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0S(O2)CH2)4, R3 = (CH3)3C, R4 = H, A = OCO, n = 1) 104 841 71 a. 2(RS), 3( SR)-N2-( 1,1-dimetyylietoksikarbonyyli)-L-lysyyli-N- [3-( 1,1, l-trifluori-2-hydroksi-4-metyy-lipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 CH(CH3)CH3, R2 = NH2(CH2)4, R3 = (CH3)3C, R4 = H, A = 5 OCO, n = 1)
Esimerkin 65a mukaisesti valmistetun yhdisteen (3,0 g, 4,8 mmol) liuokseen vedettömässä etanolissa (60 ml) lisättiin 10-%:sta Pd/C-katalyyttia (0,6 g). Suspensiota sekoitettiin yön yli Pa vedyn paineessa. Sitten lisättiin 10 vielä 0,3 g 10-%:sta Pd/C-katalyyttia ja sekoittamista jatkettiin useiden tuntien ajan. Reaktioseos suodatettiin Celitellä ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (2,48 g), jota käytettiin suoraan seuraa-vassa vaiheessa.
15 b. 2( RS), 3( SR)-N2-( 1,1-dimetyylietoksikarbonyyli) - N6-fenyylisulfonyyli-L-lysyyli-N-[3-( 1,1,1-trifluo-rl-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamldi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = S(02)CH2)4, R3 = (CH3)3C, R4 = H, A = OCO, n = 1) 20 Esimerkin 72b menetelmällä, jossa kuitenkin TEA:n sijasta käytettiin NMM:ää, esimerkin 69a tuote saatettiin reagoimaan bentseenisulfonyylikloridin kanssa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (CHCl3:Me0H, 95:5), jolloin otsikon yhdiste saatiin 69 %:n saannolla, TLC, 25 Rf*0,29, MeOH:CHCl3 (95:5).
c. 3( RS )-N2- (1,1-dimetyylletoksikarbonyyli )-N6-fe-nyyllsulfonyyli-L-lysyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = S(02)CH2)4, R3 = (CH3)3C, R4 = H, 30 A * 0C0, n = 1)
Esimerkin 69b tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä [gradienttieluointi: MeOH:CHCl3 (0,100) - (2,5:97,5)), jolloin saatiin otsikon yhdiste (57 %), HPLC, tR = 7,48, 9,11, 35 Col A, CH3CN:H20 (1:1), FR * 1,0.
105 84171
Analyysi, laskettu kaavalle C28H16F3N407S. H20: C 51,52, H 6,64, N 8,58 %
Saatu: C 51,47, H 6,46, N 7,80 %
Esimerkki 70 5 3(RS)-( 4-etoksikarbonyylifenyyli )aminokarbonyyli- L-g-aminobutyryyll-N-[3-( 1,1, 1-trlfluori-4-metyy-11-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2, R3 = 4- (CH3CH2OC(0) ] , R4 = H, A = NHCO, n = 1) 10 a. 2(RS) 3(SR)-(4-etoksikarbonyylifenyyli)amino- karbonyyli-L-g-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluo-ri-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2, R3 = 4-(CH3CH20C(0)] , R4 = H, A = NHCO, n = 1) 15 Esimerkin 61a mukaisesti valmistettu tuote saatet tiin reagoimaan 4-isosyanaattobentsoaatin kanssa esimerkin 15a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (46 %), TLC, Rf=0,53, MeOH:CHC13 (5:95).
b. 3(RS)-(4-etoksikarbonyylifenyyli)aminokarbonyy-20 li-L-g-aminobutyryyli-N-[3-( 1,1, l-trifluorl-4metyy- li-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2, R3 = 4 - (CH3CH2OC (O) ] , R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 70a tuote hapetettiin esimerkin 61c mene-25 telmällä. Raakatuote ouhdistettiin flash-kromatografiällä (CHCl3:MeOH, 97:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (68 %), HPLC, tR = 6,35, 8,70, Col A, H20:CH3CN, (60:40), FR = 2,0. Analyysi, laskettu kaavalle C25H33F3N406.0, 5H20: C 54,44, H 6,21, N 10,15 % 30 Saatu: C 54,76, H 6,13, N 10,27 %
Esimerkki 71 3(RS)-(4-hydrokslkarbonyylifenyyll )aminokarbonyy- ll-L-g-amlnobutyryyll-N-[3-( 1,1,1-trif luori-4-me-tyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 35 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2, R3 = 4-(HoC(O)]0, R4 = H, A = NHCO, n = 1) 106 841 71
Esimerkin 70b mukaisesti valmistettu tuote muutettiin otsikon yhdisteeksi esimerkin 14 menetelmällä. Raaka-tuote puhdistettiin flash-kromatografialla (Baker pH 5,0, silikageeli, CHCl3:MeOH, 97:3), jolloin otsikon yhdiste 5 saatiin 61 %:n saannolla, HPLC, tR = 3,68, 4,69, Col A, H20:CH3CN (3:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C23H29F3N406.H20: C 51,88, H 5,86, N 10,52 %
Saatu: C 51,98, H 5,69, N 10,19 % 10 Esimerkki 72
3(RS)-N^-fenyyllmetoksikarbonyyli-N^-fenyylisulfo-nyyli-L-lysyyli-N-(3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH2)4NHCOONHCH2 , R3 = , R4 - H, A
15 = S(02), n = 1) a. 2(RS), 3( SR)-N6-fenyylimetoksikarbonyyli-L-lysyy- 11-N-(3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-11)3-L-prolinamidin trifluorietikkahapon suola (kaava IVb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH20C0NH(CH2)4-, 20 R4 = H, n = 1)
Esimerkin 65a mukaisesti valmistetun tuotteen (2,75 g, 4,4 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (7 ml) lisättiin TFA:ta (10,4 g, 90 mmol), ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1 h. Liuokseen lisättiin tolueenia (10 ml), ja 25 reaktioseos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (3,4 g), jota käytettiin ilman enempää puhdistamista.
b. 2(RS), 3( SR)-N6-f enyylimetoksikarbonyyli-N2-f enyy-lisulfonyyli-L-lysyyli-N-(3-(1,1,1-trifluori-2- 30 hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava
Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH2)4NHC(O)ONHCH20, R3 = 0, R4 = H, A = S(02), n = 1)
Esimerkin 72a tuotteen (0,83 g, 1,3 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (6,5 ml) lisättiin TEA:ta (0,39 g, 3,9 mmol) ja 35 bentseenisulfonyylikloridia (0,25 g, 1,4 mmol), ja reak-tioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reak- 107 841 71 tioseos konsentroitiin vakuumissa, ja jäännös liuotettiin EtOAc:hen. EtOAc-liuos suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, saatu jäännös puhdistettiin flash-kromatogra-fiällä [gradienttieluointi: MeOH:CHCl3 (2,5:97,5) 5 (5:95)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (81 %), TLC,
Rf = 0,52, MeOH:CHC13 (5:95).
c. 3( RS )-N6-fenyylimetokslkarbonyyli-N2-fenyylisul-fonyyli-L-lysyyll-N-[3-(1,1,l-trifluorl-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = 10 CH(CH3)CH3, R2 = (CH2)4NHC(O)ONHCH20, R3 = 0, R4 = H, A * S (02), n = 1)
Esimerkin 72b tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä [gradienttieluointi:CHC13:MeOH (100:0) - (97,5:2,5)], jol-15 loin saatiin otsikon yhdiste (63 %), HPLC, tR = 5,0, 6,3, Col A, CH3CN:H20 (3:2), FR = 1,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C31H39F3N407S.H20: C 54,22, H 6,02, N 8,16 %
Saatu: C 54,17, H 5,80, N 7,86 % 20 Esimerkki 73 3 (RS)-[2-(2-metoksietoksi)etoksikarbonyyli]-L-a-aminobutyryyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 * CH3CH2-, R3 = CH30(CH2)20(CH2)2, R4 = 25 H, A = 0C0, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[2-(2-metoksietoksi)etoksikarbonyy-li]-L-g-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VI Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 30 CH30(CH2)20(CH2)2, R4 = H, A = 0C0, n = 1)
Esimerkin 61a mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 19a mukaisesti valmistetun tuotteen kanssa esimerkin 34b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä [gradienttieluointi: 35 asetoni:heksaani (1:9) - (7:3)], jolloin saatiin otsikon 84171 108 yhdiste (75 %), TLC, Rf = 0,30, 0,35, asetoni:heksaani (40:60).
Analyysi, laskettu kaavalle C17H29F3N206.0, 5H20: C 48,22, H 7,14, N 6,61 % 5 Saatu: C 48,13, H 6,90, N 6,07 % b. 3(RS)-[2-(2-metoksietoksi)etoksikarbonyyli]-L-g-aminobutyryyll-N-[3-( 1,1, 1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2, R3 = CH30(CH2)20(CH2)2, R4 = 10 H, A = 0C0, n = 1)
Esimerkin 73a tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä [gradienttieluointi: EtOAc:heksaani (1:1) - EtOAc (100 %) - asetoni:EtOAc (1:9)], jolloin saatiin otsikon yhdiste 15 (40 %); HPLC, tR = 5,70, 8,95 Col A, H20:CH3CN (75:25), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C21H34F3N307: C 48,77, H 7,14, N 6,61 %
Saatu: C 48,13, H 6,90, N 6,09 % 20 Esimerkki 74 3( RS) - [ Z- (4-aminokarbonyyliamino-l,4-diokso-2-bute-nyyll)]-L-valyyli-N-(3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 25 Z-H2NC(0)NHC(0)CH=CH-, R4 = H, A = CO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-[Z-(4-aminokarbonyyliamino-l,4-di-okso-2-butenyyli) ] -L-valyyli-N- [3-( 1,1,1-trifluori- 2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi(kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, r3 * 30 Z-H2NC(0)NHC(0)CH»CH-, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan Z-4-aminokarbonyyliamino-4-okso-2-butee-nihapon kanssa esimerkin 21b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CHCl3, 5:95), jol-35 loin saatiin otsikon yhdiste (26 %), TLC, Rf = 0,17, 0,25, Me0H:CHCl3 (5:95).
109 84171 b. 3(RS)-[Z-(4-aminokarbonyyliamino-l,4-diokso-2-butenyyli) ] -L-valyyli-N- [3 - (1,1,1-trif luori-4-me-tyyli-2-oksopentyyli)]-L-prollnamidi (kaava lb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 5 Z-H2NC(0)NHC(0)CH=CH-, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 74a tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (MeOH:CHCl3, 4:96), jolloin saatiin otsikon yhdiste (29 %), HPLC, tR = 1,78, 2,45, Col A, H20:CH3CN (65:35), FR = 2,0.
10 Analyysi, laskettu kaavalle C21H30F3N5O6.1,5H20: C 47,37, H 6,25, N 13,15 %
Saatu: C 47,29, H 5,77, N 13,02 %
Esimerkki 75 3(RS)-fenyyliaminokarbonyyli-L-valyyli-N-(3- 15 (1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ]-L- prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 (CH3)2CH-, R3 = , R4 = H, A = NHCO, n = 1) a. 2(RS),3(SR)-fenyyliaminokarbonyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1, l-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]- 20 L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = , R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu yhdiste saatettiin reagoimaan fenyyli-isosyanaatin kanssa esimerkin 15a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromato- 25 grafialla (MeOH:CHCl3, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (62 %), TLC, Rf = 0,24, 0,32, MeOH:CHCl3 (2:98).
b. _3(RS)-fenyyliaminokarbonyyli-L-valyyli-N-[3- (1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro-linamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 30 (CH3 )2CH-, R3 = 0, R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 75a tuote hapetettiin esimerkin 31c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (MeOH:CHCl3, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (75 %), HPLC, tR = 5,70, 8,77, Col A, H20:CH3CN (60:40), FR = 2,0.
35 Analyysi, laskettu kaavalle C23H31F3N404.0,75H20: C 55,47, H 6,58, N 11,25 %
Saatu: C 55,46, H 6,50, N 10,72 % no 84Ί71
Esimerkki 76 3(RS)-(4-etoksikarbonyylifenyyli )aminokarbonyyli-L-fenyylialanyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidl (kaava Ib, R1 5 CH(CH3)CH3, R2 = CH2-, R3 = 4- [CH3CH2OC(O) ] , R4 = H, A « NHCO, n = 1) a._2(RS),3(SR)-l-fenyylimetoksikarbonyyli-N-(3- (1,1,l-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vila, R1 = CH(CH3)CH3, R3 = 10 0CH2-, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 4 mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan CBZ-L-proliinin kanssa esimerkin 2a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (100 %), TLC,
Rf = 0,37, 0,45, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
15 b. 2(RS),3(SR)-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4- metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava IVa, R1 = CH(CH3)CH3, n = 1)
Esimerkin 76a tuote muutettiin otsikon yhdisteeksi (100 %) esimerkin 2b menetelmällä, TLC, Rf = 0,73, 0,81, 20 MeOH:CH2Cl2 (15:85), kyllästetty NH40H:lla.
c. 2(RS),3(SR)-fenyylimetoksikarbonyyli-L-fenyyli-alanyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksl-4-metyy-lipentyyll)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 * CH(CH3)CH3, R2 = CH2 , R3 « CH2-, A = 0C0, n = 1) 25 CBZ-L-fenyylialaniinin (2,29 g, 10,0 mmol), H0BT:n (2,70 g, 17,6 mmol) ja esimerkin 76b mukaisesti valmistetun tuotteen (2,68 g, 10,0 mmol) -17° C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä THF:ssä (45 ml) lisättiin sekoittaen DCC:tä (2,27 g, 11,0 mmol), seos jätettiin huoneen 30 lämpötilaan yöksi, suodatettiin ja THF haihdutettiin.
Jäännös liuotettiin Et20:n ja Et0Ac:n seokseen, liuos pestiin (kyllästetty NaHC03 (2 x), IN HC1, suolaliuos), kuivattiin (MgS04), suodatettiin, konsentroitiin, ja jäännös liuotettiin mahdollisimman pieneen määrään 35 CH2Cl2:ta. N,N'-disykloheksyyliurea suodatettiin, ja suodos konsentroitiin vakuumissa, jäännös kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon yhdiste kvantitatiivisella saan- ill 84171 nolla valkeana vaahtona; TLC, Rf = 0,37, 0,45, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
d. 2(RS),3(SR)-L-fenyylialanyyll-N-(3-(1,1,1-tri-f luorl-2-hydroksi-4-metyyllpentyyll) ] -L-prolinamidi 5 (kaava IVb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2 , R4 = H, n = 1)
Esimerkin 76c tuotteen (501,3 mg, 0,898 mmol) ja 50 %:lla vettä kostutetun l0-%:sen Pd/C-katalyytin (50 mg) seosta vedettömässä Et0H:ssa (17 ml) sekoitettiin vedyn paineessa 101 325 Pa yön yli, seos suodarettiin, konsent-10 roitiin ja jäännös kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin kvantitatiivisella saannolla otsikon yhdiste; TLC, Rf = 0,14, MeOH:CH2C12 (5:95), Rf=0,43, 0,48, Me0H:NH40H-kylläs-tetty CH2C12 (5:95).
e. 2(RS),3(SR)-(4-etoksikarbonyylifenyyli)amino- 15 karbonyyli-L-fenyylialanyyli-N- [3-( 1,1,1-trifluori- 2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi(kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2-, R3 = 4- [CH3CH20C(0) ]0, R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 76d mukaisesti valmistettu yhdiste saa-20 tettiin reagoimaan etyyli-4-isosyanaattobentsoaatin kans sa esimerkin 15a menetelmällä, jolloin otsikon yhdiste saatiin 95 %:n saannolla, TLC, Rf = 0,21, 0,26, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
f. 3(RS)-(4-etoksikarbonyylifenyyli)aminokarbonyy- 25 li-L-fenyylialanyyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyy- li-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH2-, R3 = 4- [CH3CH20C(0) ] , R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 76e tuote hapetettiin esimerkin 61c mene-30 telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla [gradienttieluointi: Et20:pentaani (11:1) - Et20], jolloin saatiin otsikon yhdiste (94 %), HPLC, tR = 10,26, 13,52, Col A, CH3CN:H20 (45:55), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C3oH35F3N406.l,2H20: 35 C 57,47, H 6,03, N 8,94 %
Saatu: C 57,43, H 6,02, N 8,97 % 112 84171
Esimerkki 77 3(RS)-[[4-[(1-naftyyllsulfonyyli)aminokarbonyyli]-fenyylijaminokarbonyyli] -L-valyyli-N-[3-(1,1,1-tri-fluorl-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamldi 5 (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [ 1-naf tyyli-S (02 )NHC(0) ] , R4 = H, A = NHCO, n = 1) a, 1-naftaleenisulfonamidi 1-naftaleenisulfonyyliklorldin (5,0 g, 22 mmol) -78 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä Et20:ssa 10 (400 ml) johdettiin sekoittaen ammoniakkia 5 min ajan.
Seosta sekoitettiin -78 °C:ssa 1 h, sitten seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan, ja sitä sekoitettiin yön yli. Et20 poistettiin vakuumissa, ja jäännöksenä saatu valkea jauhe pestiin vedellä ja kuivattiin vakuumissa, jolloin 15 saatiin 3,2 g (70 %) otsikon yhdistettä valkeana jauheena, sp. 152 - 153 °C.
b. 3(RS)-[[4-[(1-naftyylisulfonyyli)aminokarbonyy-lijfenyyll]aminokarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi 20 (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [ 1-naf tyyli-S( 02 )NHC( 0) ] , R4 = H, A = NHCO, n = 1) Esimerkin 16 mukaisesti valmistetun tuotteen (1,5 g, 2,84 mmol), DMPA:n (0,38 g, 3,1 mmol) ja WSCDI:n (0,59 g, 3,08 mmol) liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (40 25 ml) lisättiin huoneen lämpötilassa typpikehässä sekoittaen esimerkissä 77a valmistettua 1-naftaleenisulfonamidia (0,64 g, 3,09 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli, sitten seos pestiin (1 N HC1), kuivattiin (MgS04) ja suodatettiin. Suodos konsentroitiin va-30 kuumissa kumimaiseksi jäännökseksi, joka puhdistettiin flash-kromatografialla [CH2C12, sitten CH2C12: MeOH: AcOH (98:1,9:0,1)], jolloin saatiin 0,76 g (36 %) otsikon yhdistettä valkeana jauheena, HPLC, tR = 10,08, 16,38, Col A, CH3CN:H20 ( 30:70), FR = 2,5.
35 Analyysi, laskettu kaavalle HjO: 113 841 71 C 54,25, H 5,49, N 9,30 %
Saatu: C 54,56, H 5,68, N 8,85 %
Esimerkki 78 3(RS)-N2-(4-hydroksikarbonyylifenyyli)aminokarbo-5 nyyli-Ne-fenyylimetoksikarbonyyli-L-lysyyli-N-[3- (1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro-linamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 (CH2)4NHC(O)OCH20, R3 = 4-[HOC(O)]0, R4 = H, A = NHCO, n = 1) 10 a. 2(RS),3(SR)-N2-(4-etoksikarbonyylifenyyli)ami- nokarbonyyli-N6-fenyylimetokslkarbonyyli-L-lysyyli-N- [3-(1,1, l-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyy-li)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH2)4NHC(O)OCH20, R3 = 4-[EtOC(O)]0, R4 = H, A = 15 NHCO, n = 1)
Esimerkin 72a mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan etyyli-4-isosyanaattobentsoaatin kanssa esimerkin 15a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (gradienttieluointi: CHC13 20 MeOH:CHCl3 (2:98) ja sitten (5:95)), jolloin saatiin otsikon yhdiste (95 %), TLC, Rf = 0,41, Me0H:CHCl3 (2,5:97,5).
b. 3(RS )-N2-( 4-etoksikarbonyylifenyyli )aminokarbo-nyyll-N6-fenyylimetoksikarbonyyli-L-lysyyli-N-[3-25 (1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-pro- linamidl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 (CH2)4NHC(O)OCH20, R3 = 4- [EtOC( 0) ] , R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 78a tuote hapetettiin esimerkin 31c mene-30 telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla [gradienttieluointi: CHC13 - MeOH:CHCl3 (2,5:97,5) -(5:95)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (77 %), TLC Rf = 0,48, MeOH:CHC13 (2,5:97,5).
35 114 84171 c. 3(RS)-2-(4-hydroksikarbonyylifenyyli)aminokar-bonyyli-N6-fenyylimetoksikarbonyyli-L-lysyyli-N-[3-( 1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-oksopentyyll) ] -L-prollnamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 5 (CH2)4NHC(O)OCH20, R3 = 4- [HOC(0) ] 0, R4 = H, A = NHCO, n - 1)
Esimerkin 78b tuote muutettiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi (85 %:n saanto), HPLC, tR = 4,71, 6,76, Col A, CH3CN:H20 ( 40:60), FR = 2,5.
10 Analyysi, laskettu kaavalle C33H40F3N5O8.1,5H20: C 55,15, H 6,03, N 9,74 %
Saatu: C 54,90, H 5,92, N 9,29 %
Esimerkki 79 3( RS)- ( 4-hydroksikarbonyylifenyyli)karbonyyli-L-15 valyyll-N-[3-(1,1,l-trlfluori-4-metyyli-2-oksopen- tyyll)]-L-prolinamidl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [H0C( 0) ] , R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 84c mukaisesti valmistettu tuote muutet-20 tiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi, joka saatiin 72 %:n saannolla, HPLC, tR = 3,48, 5,31, Col A, H20:CH3CN (3:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C24H30F3N3O6.1,0H20: C 54,23, H 6,07, N 7,91 % 25 Saatu: C 54,46, H 6,05, N 7,69 %
Esimerkki 80 3 (RS)-fenyylisulfonyyli-L-g-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro-linamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, 30 R3 = 0, R4 = H, A = S(02), n = 1) a. 2(RS),3(SR)-fenyylisulfonyyll-L-g-aminobutyryy-11-N- [3-( 1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyyllpen-tyyll)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = , R4 = H, A = S(02), n = 1) 35 Esimerkin 61a mukaisesti valmistetun tuotteen (0,5 g, 1,1 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (5 ml) lisättiin NMM:ää 84171 115 (0,24 g, 2,4 mmol) ja bentseenisulfonyylikloridia (0,21 g, I, 2 mmol), ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Reaktioseos konsentroitiin vakuumissa, jäännös liuotettiin EtOAc:hen, liuos suodatettiin ja suo- 5 dos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuo-te. Se puhdistettiin osittain flash-kromatografiällä [gra-dienttieluointi: MeOH:CHCl3 (2,5:97,5) - (5:95)] ja lopullisesti flash-kromatografiällä [gradientti: EtzO:heksaani (80:20) - Et20-heksaani (90:10) - Et20], jolloin saatiin 10 otsikon yhdiste (0,118 g); TLC, Rf = 0,33, Et20.
b. 3(RS)-fenyylisulfonyyli-L-g-aminobutyryyli-N-[3-( 1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-oksopentyyli) ] -L-prolinamidl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = 0, R4 = H, A = S(02), n = 1) 15 Esimerkin 80a tuote hapetettiin esimerkin 31c mene telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä [gradienttieluointi: MeOH:CHCl3 (0:100) - (2:98) - (5:95)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (42 %); HPLC, tR = 4,97, 6,17, Col A, H20:CH3CN (1:1), FR = 1,0.
20 Analyysi, laskettu kaavalle C21H28F3N305S.H20: C 49,50, H 5,93, N 8,25 %
Saatu: C 49,70, H 6,24, N 7,67 %
Esimerkki 81 3(RS)-[1-(etoksikarbonyy1i)syklopent-1-yyli]karbo-25 nyyli-L-g-aminobutyryyli-N- [3-(1,1,1-trifluori-4- metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 * CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = 1-[CH3CH20C(0)]-syklopent-l-yyli-, R4 = H, A = CO, n = 1) a. l-(etoksikarbonyyll)syklopentaanikarboksyyli-30 happo
Dietyyli-1,1-syklopentaanidikarboksylaatin (2,5 g, II, 68 mmol) liuokseen EtOH:ssa (10 ml) lisättiin tipoit-tain 0,5 tunnin kuluessa K0H:n (654 mg, 11,68 mmol) liuos EtOH:ssa (10 ml). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilas- 35 sa 96 h, sitten seos konsentroitiin vakuumissa ja jäännös jaettiin veteen ja etyyliasetaattiin liukeneviin osiin.
116 84171
Vesikerros tehtiin happameksi väkevällä HClrllä ja uutettiin EtOAc:llä. EtOAc-uutteet pestiin (suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumis-sa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (1,73 g) kirkkaana 5 öljynä.
b. 2(RS),3(SR)-[l-(etoksikarbonyyll)syklopent-l-yyll3karbonyyli-L-a-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolin-amidl (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, 10 R3 = 1- [CH3CH2OC(O) ] -syklopent-l-yyli, R4 = H, A = CO, n = 1)
Yhtä esimerkin 81a mukaisesti valmistetun yhdisteen ekvivalenttia kohti käytettiin seuraavia reagensseja: HOBT (3,3 ekv), DCC (1,65 ekv), TEA (1,5 ekv) ja esimer-15 kin 61a mukaisesti valmistettu yhdiste (1,0 ekv), joista esimerkin 50a menetelmällä (sitruunahappopesu jäi pois) saatiin raakatuote. Se puhdistettiin imukromatografiällä [gradienttieluointi: Et20:heksaani (1:1) - Et20), jolloin saatiin otsikon yhdiste (46 %), TLC, Rf = 0,47, MeOH:CHCl3 20 (5:95).
Analyysi, laskettu kaavalle C24H38F3N306: C 55,27, H 7,34, N 8,06 %
Saatu: C 54,74, H 5,93, N 7,88 % c. 3(RS)-[l-(etoksikarbonyyli)syklopent-l-yyli]- 25 karbonyyll-L-g-aminobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluo- ri-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = l-[CH3CH2OC( O)]-syklopent-l-yyli-, R4 = H, A = CO, n = 1) 30 Esimerkin 81b tuote hapetettiin esimerkin 33c mene telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (asetoni:heksaani, 1:4), jolloin saatiin otsikon yhdiste (37 %), HPLC, t„ = 6,68, 8,31, Col A, H20:CH3CN (70:30), FR = 2,0.
35 Analyysi, laskettu kaavalle C24H36F3N306.1,1H20: 84171 117 C 53,44, H 7,13, N 7,80 %
Saatu: C 53,48, H 6,97, N 7,60 %
Esimerkki 82 3(RS)-( trisyklo[3.3.1. l3'71dek-l-yyli )sulfonyyli-L-5 g-aminobutyryyli-N- [3 — (1,1, 1-trifluori-4-metyyli- 2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = 1-adamantyyli, R4 = H, A = S (02), n = 1) a. 1-adamantaanisulfinyylikloridi 10 Aluminiumtrikloridia (40 g, 3 mol) lisättiin hi taasti tionyylikloridiin (200 ml, 2,7 mol), ja seos jäähdytettiin -20 °C:seen. Seokseen lisättiin annoksittain 2,5 h kuluessa adamantaania, ja seosta sekoitettiin 1 h, sitten sen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan. Tionyyli-15 kloridi poistettiin vakuumissa, jäännös laimennettiin CCl4:llä ja aluminiumtrikloridi hajotettiin jäävedellä. Kerrokset erotettiin, orgaaninen kerros pestiin (suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös vakuumitislattiin (1 torr, 133,3 20 Pa) vigreaux-kolonnia käyttäen, jolloin saatiin vahamainen kiinteä tuote (28,8 g, kp. 118 - 128 °C), TLC, Rf = 0,6 -0,4, EtOAc:heksaani (15:85).
b. 2(RS),3(SR)-( trisyklo[3.3.1.13,7] dek-l-yyli )sul-fonyyli-L-g-aminobutyryyli-N- [3-( 1,1,1-trif luori- 25 2-hydroksl-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi(kaava
Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = 1-adamantyy-li, R4 = H, A = S(O), n = 1)
Esimerkin 61a mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 82a mukaisesti valmistetun tuot-30 teen kanssa esimerkin 20a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin imukromatograf iällä [gradienttieluointi: Et20:EtOAc (1:1) - EtOAc], jolloin saatiin otsikon yhdiste (61 %), TLC, Rf = 0,53, MeOH:CHCl3 (5:95).
Analyysi, laskettu kaavalle C25H40F3N304S.0,45.H20: 35 C 55,22, H 7,58 %
Saatu: C 55,05, H 7,57 % ue 84171 c. 2(RS), 3(SR)-( trisyklo[3.3.1. l3'7]dek-l-yyli )sul-fonyyli-L-g-amlnobutyryyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyll)]-L-prolinamidi(kaava Vllb, R1 - CH(CH3)CH3, R2 * CH3CH2-, R3 = 1 -adamantyy- 5 li, R4 “ H, A = S(Oz), n 1)
Esimerkin 82b tuotteen (277 mg, 0,515 mmol) liuokseen asetonissa (25 ml) lisättiin tipoittain 1 h aikana palautusjäähdytyslämpötilassa KMn04:n kyllästetty aseto-niliuos (60 ml). Seosta sekoitettiin palautusjäähdytys-10 lämpötilassa 15 min, sitten seos jäähdytettiin, suodatet-tiin Celitelläw ja konsentroitiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (Et0Ac:Et20, 4:6), jolloin saatiin kiinteä otsikon yhdiste (180 mg); TLC, Rf = 0,67, 0,70, Me0H:CHCl3 (1:9).
15 Analyysi, laskettu kaavalle C25H40F3N3O5S: C 54,43, H 7,31, N 7,62 %
Saatu: C 54,49, H 7,33, N 7,39 % d. 3(RS)-(trisyklo[3.3.1.1371dek-l-yyll)sulfonyy-li-L-g-aminobutyryyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-me- 20 tyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = 1-adamantyyli, R4 = H, A = S(02), n = 1)
Esimerkin 82c tuote hapetettiin esimerkin 33c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla 25 (asetoni:heksaani, 15:85), jolloin saatiin otsikon yhdis te (40 %), HPLC, tR * 6,27, 8,29, Col A, H20:CH3CN (1:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C25H38F3N305S.0,5H20: C 53,75, H 7,04, N 7,32 % 30 Saatu: C 53,91, H 7,11, N 6,97 %
Esimerkki 83 3(RS)-[l-(hydrokslkarbonyyli)syklopent-l-yyll]kar-bonyyli-L-g-aminobutyryyli-N- [3- (1,1,1-trif luori- 4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, 35 R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH3CH2-, R3 = 1-[HOC( 0) ] syklo- pent-l-yyli, R4 = H, A = CO, n = 1) 119 84171
Esimerkin 81c mukaisesti valmistettu yhdiste muutettiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi, joka eristettiin 79 %:n saannolla, HPLC, tR = 3,74, 4,92, Col A, H20:CH3CN (3:1), FR = 2,0.
5 Analyysi, laskettu kaavalle C22H32F3N306.0,35H20: C 53,08, H 6,62, N 8,44 %
Saatu: C 53,04, H 6,58, N 8,16 %
Esimerkki 84 3(RS)-(4-metoksikarbonyylifenyyli)karbonyyli-L-10 valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen- tyyli)] -L-prollnamldi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [CH30C( 0) ] , R4 = H, A = CO, n = 1) a. 4-metokslkarbonyylibentseenikarboksyylihappo 15 Väkevää rikkihappoa (277,5 ml, 5,2 mol) tiputet tiin 0,5 h aikana sekoittaen 0 °C:ssa kromi(VI)oksidin (299,25 g, 2,99 mol) ja veden (925 ml) seokseen. Saatu liuos lisättiin tipoittain 0 °C:ssa 1 h aikana sekoittaen metyyli-4-(hydroksimetyyli)bentsoaatin (92,5 g, 0,564 mol) 20 liuokseen asetonissa (4,6 1). Reaktioseos sai lämmetä huoneen lämpötilaan, ja sitä sekoitettiin yön yli. Päällä oleva neste dekantoitiin, sitten pohjalle jäänyt musta tervamainen aines uutettiin asetonilla. Dekantoitu neste ja asetoniuute yhdistettiin ja konsentroitiin vakuumissa, 25 ja saatua tummanruskeata jäännöstä trituroitiin kylmässä vedessä (4 1). Muodostunut sakka koottiin, pestiin 3 kertaa vedellä (1 litra) ja kuivattiin, jolloin saatiin 94,6 g (94 %) otsikon yhdistettä valkeina kiteinä, sp.
218 - 221 °C.
30 b. 2(RS),3(SR)-(4-metoksikarbonyylifenyyli)karbo- nyyli-L-valyyli-N- [3- (1,1, 1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[CH3OC(O)]0, R4 = H, A = CO, n = 1) 35 Esimerkin 3d mukaisesti valmistetun yhdisteen (17,54 g, 47,8 mmol), esimerkin 84a tuotteen (8,6 g, 47,8 »0 84171 mmol) ja HOBT:n (12,86 g, 95,3 mmol) 0 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen vedettömässä THF:ssä (400 ml) lisättiin sekoittaen typpikehässä WSCDl:tä (10,27 g, 53,6 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 1 h, sitten seos sai 5 lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin yön yli. THF poistettiin vakuumissa, ja öljymäinen jäännös liuotettiin EtOAc:hen. EtOAc-liuos pestiin (1 N HC1, kyllästetty NaHC3:n vesiliuos ja suolaliuos), kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin 10 24,45 g raakatuotetta kuivana valkeana vaahtona. Se puh distettiin flash-kromatografialla (CHCl3:Me0H, 97:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (79 %), HPLC, t„ = 4,62, 5,80, Col A, H20:CH3CN (55:45), FR = 3,0.
c. 3(RS)-(4-metoksikarbonyylifenyyli)karbonyyli-L- 15 valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen- tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- (CH30C(O) ]0, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 84b tuote hapetettiin esimerkin 31c mene-20 telmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (CHCl3:Me0H, 98:2), jolloin saatiin otsikon yhdiste (69 %), HPLC, tR - 4,51, 6,82, Col A, H20:CH3CN (55:45), FR = 2,0. Analyysi, laskettu kaavalle ^25^32^3^3^6 · 0 t 5H20 : C 55,96, H 6,19, N 7,83 % 25 Saatu: C 55,90, H 6,30, N 7,93 % d. 3(RS)-(4-metoksikarbonyylifenyyli)karbonyyli-L-valyyll-N-[3-(l,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)] -L-prollnamidl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [CH3OC(O) ] 0, R4 = H, A = CO, 30 n = 1)
Dessin, D.B. ja Martinin, J.C., J. Org. Chem. 48 (1983) 4155 - 4156, kuvaama edullinen hapetusmenetelmä otsikon yhdisteen valmistamiseksi suoritettiin seuraavasti: Dess-Martin-perjodinaanin (6,76 g, 15,96 mmol) ja esi-35 merkin 84b mukaisesti valmistetun tuotteen (6,49 g, 12,25 mmol) liuokseen vedettömässä CH2Cl2:ssa (80 ml) lisättiin 121 84171 sekoittaen typpikehässä TFA:ta (1,82 g, 1,23 ml, 15,96 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli, sitten lisättiin Et20:ta (30 ml), ja seos kaadettiin kyllästettyyn NaHC03-vesi liuokseen, joka sisälsi Na2S203:a 5 (17,63 g, 111,51 mmol). 15 min sekoittamisen jälkeen or gaaninen kerros erotettiin, pestiin (kyllästetty NaHC03-liuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste valkeana vaahtona (6,42 g, 99,4 %), TLC, Rf = 0,67, 0,76, MeOH:CHCl3 10 (3:97), HPLC, tR = 4,64, 6,84, Col A, H20:CH3CN (60:40), FR = 2,0.
Esimerkki 85 3(RS)-(4-hydroksikarbonyylifenyyli )aminokarbonyy-li-L-fenyylialanyyli-N- [3-( 1,1, l-trifluori-4-metyy-15 li-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0CH2, R3 = 4-[H0C(0)] , R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 76f mukaisesti valmistettu tuote muutettiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi. Se 20 puhdistettiin flash-kromatografiällä [gradienttieluointi: MeOH:CH2Cl2 (4:96) - (10:90)], saanto: 48 %, HPLC, tR = 5,5-2, 8,12, Col A, CH3CN:H20 (35:65), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C28H31F3N406.H20: C 56,56, H 5,59, N 9,42 % 25 Saatu: C 56,58, H 5,59, N 9,22 %
Esimerkki 86 3(RS)-(4-metoksikarbonyylifenyyli)metoksikarbonyy-li-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluorl-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 30 CH( CH3 )CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [CH30C( O ) ]0CH2-, R4 = H, A = 0C0, n = 1) a. (4-metoksikarbonyylifenyyll)metyyll-4-nitrofe-nyylikarbonaattl
Esimerkin 7a menetelmällä, jolloin kuitenkin pH 7,0 35 -pesu jätettiin pois, metyyli-4-hydroksimetyylibentsoaatti muutettiin otsikon yhdisteeksi. Se eristettiin trituroi- 122 84171 maila heksaanelssa, pestiin heksaani: EtOAc-seoksella (1:1) ja kuivattiin vakuumissa. Saanto 50 %, TLC, Rf = 0,75, EtOAc:heksaani (1:1).
b. 2(RS),3(SR)-(4-metokslkarbonyyllfenyyll)metok- 5 sikarbonyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2- hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[CH3OC(O)]0CH2-, R4 = H, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatet-10 tiin reagoimaan esimerkin 86a tuotteen kanssa esimerkin 7b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatogra-fiällä (asetoni:heksaani, 2:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste (48 %), TLC, Rf = 0,63, 0,68, MeOH:CHCl3 (1:9). Analyysi, laskettu kaavalle C26H36F3N307: 15 C 55,81, H 6,48, N 7,51 %
Saatu: C 55,54, H 6,39, N 7,29 % c. 3(RS)-(4-metoksikarbonyylifenyyli)metoksikarbo-nyyll-L-valyyll-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 20 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[CH3OC(0)]0CH2-, R4 = H, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 86b tuote hapetettiin esimerkin 33c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin preparatiivisella TLC:llä (EtOAc:Et20, 3:2), jolloin saatiin otsikon yhdis-25 te (10 %), HPLC, tR = 4,32, 6,44, H20:CH3CN (1:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C26H34F3N3O7.0,65H20: C 54,86, H 6,25, N 7,38 %
Saatu: C 54,87, H 6,25, N 7,05 %
Esimerkki 87 30 3(RS)-[E-3-(4-etoksikarbonyylifenyyli)-l-oksoprop- 2-enyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli -2-oksopentyy li )]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = E- [4-CH3CH2OC( 0) ]0CH=CH, R4 = H, A = CO, n = 1) 123 84171 a. Etyyli-4-formyylibentsoaatti 4-formyylibentsoehapon (25 g), väkevän rikkihapon (2 ml) ja EtOH:n (19,5 ml) seosta keitettiin hiljaa palautus jäähdyttäen 5 vrk 100 ml:ssa 1,2-dikloorietaania.
5 Liuotin haihdutettiin, ja jäännökseen lisättiin Et20:ta. Et20-liuos pestiin (kyllästetty NaHC03-vesiliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin. Vakuumitis-laamalla jäännös saatiin 20,1 g (68 %) otsikon esteriä kirkkaana nesteenä, kp. 145 - 150 °C (2900 Pa, 22 torr).
10 b. E-(4-etoksikarbonyyli)bentseenipropeenihappo
Esimerkin 87a tuotteen (8,9 g), malonihapon (10,4 g), piperidiinin (1 ml) ja pyridiinin (25 ml) seosta kuumennettiin höyryhauteella 3 h. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös lietettiin 200 ml:aan vettä, pH säädettiin etik-15 kahapolla arvoon 6. Sakka koottiin ja ilmakuivattiin. Kiteyttämällä EtOHrsta saatiin 10,1 g (92 %) otsikon happoa kirkkaanvalkeina kiteinä, sp. 220,5 - 221 °C.
c. 2(RS),3(SR)-[E-3-(4-etoksikarbonyylifenyyli)-l-oksoprop-2-enyyli3-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-tri-fluo- 20 ri-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = E- [4-CH3CH2OC( 0) ] 0CH=CH, R4 = H, A = CO, n = 1) Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 87b tuotteen kanssa esimerkin 25 32a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (88 %), TLC, Rf = 0,14, 0,18, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
d. 3(RS)-[E-3-(4-etoksikarbonyylifenyyli)-l-okso-prop-2-enyyli]-L-valyyli-N- [ 3 — (1,1,1-trlf luori-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, 30 R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = E-[4-CH3CH2OC(0))0CH=CH, R4 * H, A = CO, n = 1) Esimerkin 87c tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CH2Cl2, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (65%), 35 TLC, Rf = 0,23, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
124 84171
Analyysi, laskettu kaavalle C28H36F3N306: C 59,25, H 6,39, N 7,40 %
Saatu: C 59,14, H 6,75, N 7,21 %
Esimerkki 88 5 3(RS)-(2-etoksikarbonyylifenyyli )aminokarbonyyli- L-valyyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-okso-pentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 2- [CH3CH2OC( O) ] 0, R4 - H, A = NHCO, n = 1) 10 a. 2(RS),3(SR)-(2-etoksikarbonyylifenyyli)amino- karbonyyll-L-valyyli-N- [3-( 1,1,1-trifluori-2-hyd-roksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH, R3 = 2- [CH3CH2OC )(0)] , R4 = H, A = NHCO, n = 1) 15 Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatet tiin reagoimaan etyyli-2-isosyanaattobentsoaatin kanssa esimerkin 15a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (EtOAc:heksaani, 60:40), jolloin saatiin otsikon yhdiste (66 %), TLC, Rf 0,48, 0,57, 20 MeOH:CHC13 (5:95).
b. 3(RS)-(2-etoksikarbonyylifenyyli)aminokarbonyy-li-L-valyyli-N-[3 — (1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 2-(CH3CH2OCO)0, R4 = 25 H, A = NHCO, n - 1)
Esimerkin 54b menetelmän muunnoksessa käytettiin -45 °C: seen jäähdytetyssä reaktioseoksessa reaktantteja seuraavissa suhteissa: esimerkin 88a tuote (1 ekv), oksa-lyylikloridi (2 ekv), DMSO (4 ekv). Reaktioseos sai läm-30 metä -20 °C:seen ennen TEA-lisäystä (TEA:ta lisättiin di-isopropyylietyyliamiinin sijasta). Reaktioseos pestiin (1 N HC1, kyllästetty NaHC03-vesiliuos, 10-%:nen NaOCl-vesi-liuos, suolaliuos). Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (Et20:heksaani, 4:1), jolloin saatiin otsikon 35 yhdiste (74 %), HPLC, t„ = 6,95, 10,46, Col A, CH3CN:H20 (35:65), FR = 2,0.
125 84171
Analyysi, laskettu kaavalle ^26^35^3^4®6 *0/7 5H20 ί C 54,78, H 6,45, N 9,83 %
Saatu: C 54,73, H 6,34, N 9,51 %
Esimerkki 89 5 3(RS)-4-[(4-nitrofenyyli )sulfonyyliamlnokarbonyy- li] fenyylikarbonyyli-L-valyyli-N- [3— (1,1,1-trifluo-ri-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamldi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4[(4-NO20)S(O2)NHCO]0, R4 = H, A = CO, n = 1) 10 Esimerkin 79 tuotteen (0,5 g, 0,97 mmol), DMPA:n (0,12 g, 0,97 mmol), DCC:n (0,22 g, 0,97 mmol) ja vedettömän CH2Cl2:n (30 ml) seokseen lisättiin sekoittaen typpike-hässä huoneen lämpötilassa 4-nitrobentseenisulfonamidia (0,196 g, 0,97 mmol). Seosta sekoitettiin yön yli huoneen 15 lämpötilassa, sitten seos suodatettiin. Suodos pestiin (1 N HC1), kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Saatu keltainen jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla (CHC13:MeOH:AcOH, 90:9,8:0,2), jolloin saatiin 0,29 g (43 %) otsikon yhdistettä valkeana jauhee-20 na, HPLC, tR = 4,26, 8,42, Col A, H20:CH3CN (4:1), FR = 2,0. Analyysi, laskettu kaavalle C30H34F3N5O9.H2O: C 50,34, H 5,06, N 9,78 %
Saatu: C 50,03, H 4,92, N 9,43 %
Esimerkki 90 25 3( RS )-fenyylimetoksikarbonyyli-L-glutamyyli-N- [3- (1,1,l-trlfluori-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-pro-linamidifenyylimetyyliesteri (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH2)2C(O)OCH20, R3 = 0CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 30 a. 2(RS),3(SR )-fenyylimetoksikarbonyyll-L-gluta- myyli-N-[3-( 1,1,1-trif luori-2-hydroksi-4-metyyli-pentyyll)]-L-prolinamldi (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH2)2C(O)OCH20, R3 = 0CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 35 CBZ-glutamiinihappo-gamma-bentsyyliesteri saatet tiin reagoimaan esimerkin 2b mukaisesti valmistetun tuot- 84171 126 teen kanssa esimerkin 84b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla [gradienttieluointi:heksaa-ni:Et20 (1:3) - Et20], jolloin saatiin otsikon yhdiste (64 %), TLC, Rf = 0,61, Et20.
5 b. 3(RS)-fenyyllmetoksikarbonyyli-L-glutamyyli-N- [3-( 1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ] -L-prolinamidifenyylimetyyliesteri (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH2)2C(O)OCH20, R3 = CH2-, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 10 Esimerkin 90a tuote hapetettiin esimerkin 54b me netelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla [gradienttieluointirheksaani:Et20 (2:8) - (1:9)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (30 %), HPLC, t„ = 6,12, 8,84, Col A, CH3CN:H20 (1:1), FR = 3,0.
15 Analyysi, laskettu kaavalle C31H36F3N307.2H20: C 56,78, H 6,15, N 6,41 %
Saatu: C 56,98, H 5,74, N 6,12 %
Esimerkki 91 3S(tai R)-(trisyklo[3.3.1.l37]dek-l-yyli)sulfonyy-20 li-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2- oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 1-adamantyyli, R4 = H, A = S(02), n = 1) a. 2(RS),3(SR)-(trisyklo[3.3.1.l3-7]dek-l-yyli )sul-25 f inyyll-L-valyyli-N- [3-(1,1,1-trif luori-2-hydrok- si-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 1-adamantyyli, R4 = H, A = S(0), n = 1)
Esimerkin 3d mukaisesti valmistettu tuote saatet-30 tiin reagoimaan esimerkin 82a tuotteen kanssa esimerkin 20a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla (Et0Ac:Et20, 2:3), jolloin saatiin otsikon yhdiste, TLC, Rf = 0,75, MeOH:CHC13 (1:9).
127 84171 b. 2(RS),3(SR)-( trisyklo[3.3.1.13,7] dek-1-yyli )-sulfonyyll-L-valyyll-N-[3, (1,1,1-trifluori-2-hyd-roksl-4-metyylipentyyli)]-L-prollnamldl (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 1-adaman-5 tyyli, R4 = H, A = S(02), n = 1)
Esimerkin 91a tuote muutettiin esimerkin 82a menetelmällä otsikon yhdisteeksi, joka puhdistettiin flash-kromatografiällä (EtOAc:heksaani, 2:3), saanto 60 %, TLC, Rf = 0,29, 0,35, EtOAc:heksaani (1:1).
10 Analyysi, laskettu kaavalle C26H42F3N305S. 2,5H20: C 51,13, H 7,75, N 6,88 %
Saatu: C 51,12, H 7,03, N 6,40 % c. 3S(tai R)-(trisyklo[3.3.1♦l37]dek-l-yyli)sulfo-nyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2- 15 oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 1 -adamantyy 1 i, R4 = H, A = S(02), n = 1)
Esimerkin 91b tuote hapetettiin esimerkin 33c menetelmällä otsikon yhdisteeksi, josta puhdistamalla flash-20 kromatografiällä (EtOAc:heksaani, 1:1) saatiin 57 %:n saannolla yksi olennaisen puhdas isomeeri: HPLC, tR = 3,01, Col A, H20:CH3CN (45:55), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C26H40F3N3O5S.0,4H2O: C 54,70, H 7,20 % 25 Saatu: C 54,89, H 7,17 %
Esimerkki 92 3(RS)-(4-etoksikarbonyylifenyyli )aminokarbonyyli-L-fenyyliqlysyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 30 CH(CH3)CH3, R2 = 0, R3 = 4- [CH3CH2OC( 0) ] 0, R4 = H, A = NHCO, n - 1) a. 2(RS),3(SR)-fenyyllmetoksikarbonyylj-L-fenyyli-glysyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-2-hydroksi-4-metyy-lipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 35 CH(CH3)CH3, R2 = 0, R3 = 0CH2-, R4 = H, A = 0C0, n = 1) 128 841 71
Esimerkin 76b mukaisesti valmistettu yhdiste saatettiin reagoimaan CBZ-L-fenyyliglysiinin kanssa esimerkin 50a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kro-matografialla (MeOH:CH2Cl2, 5:95), jolloin saatiin otsikon 5 yhdiste (95 %), TLC, Rf = 0,13, 0,19, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
b. 2(RS).3(SR)-L-fenyyliglysyyli-N-[3-(1,1,1-tri-f luori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli) ] -L-prolinamidi (kaava IVb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0, R4 = H, n = 1) Esimerkin 92a tuote muutettiin esimerkin 2b mene- 10 telmällä 100 g:n saannolla otsikon yhdisteeksi.
c. 2(RS),3(SR)-(4-etoksikarbonyylifenyyli)amino-karbonyyli-L-fenyyliglysyyli-N- [3-( 1,1,1-trifluo-ri-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0, R3 = 15 4- [CH3CH20C( 0) ] 0, R4 = H, A = NHC0, n = 1)
Esimerkin 92b tuote saatettiin reagoimaan etyyli-4-isosyanaattobentsoaatin kanssa esimerkin 15a menetelmällä, jolloin saatiin otsiion yhdiste (86 %), TLC, Rf = 0,24, 0,27, MeOH:Et20 (1:99).
20 d. 3(RS)-(4-etoksikarbonyyllfenyyli)aminokarbonyy- ll-L-fenyyliglysyyli-N-[3-( 1,1,1-trifluori-4-metyy-11-2-oksopentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0, R3 = 4- [CH3CH2OC( 0) ]0, R4 = H, A * NHC0, n = 1) 25 Esimerkin 92c tuote hapetettiin esimerkin 31c me netelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä [gradienttieluointi: Et20 - CH3CN:Et20 (1:99)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (82 %), HPLC, tR = 8,88, 10,82, Col A, CHjCN:H20 ( 45 : 55), FR = 2,0.
30 Analyysi, laskettu kaavalle C29H33F3N406.0,64H20: C 56,77, H 5,80, N 8,75 %
Saatu: C 56,62, H 5,78, N 8,78 % 129 84171
Esimerkki 93 3(RS)-fenyyllmetokslkarbonyyli-L-[5-(fenyylisulfo-nyyliamino)glutamyyli]-N-(3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-prolinamldl (kaava Ib, 5 R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0S(O2)NHC(O)(CH2)2, R3 = 0CH2, R4 « H, A = 0C0, n = 1) a. 3(RS)-fenyylimetoksikarbonyyli-L-glutamyyli-N-[3-(1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ] -L-prollnamldl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 10 HOCO(CH2)2, R3 = 0CH2, R4 = h, A = 0C0, n = 1)
Esimerkin 90b tuote muutettiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi, TLC, Rf = 0,27,
MeOH:CHC13:AcOH (2,5:95:0,1).
b. 3(RS)-fenyylimetoksikarbonyyli-L-[5-(fenyyli- 15 sulfonyyllamino)glutamyyli]-N-[3-(1,1,1-trifluori- 4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamldi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0S(O2)NHC(O)(CH2)2, R3 = 0CH2, R4 = H, A = 0C0, n = 1)
Esimerkin 93a tuote saatettiin reagoimaan bentsee-20 nisulfonamidin kanssa esimerkin 77b menetelmällä. Raaka-tuote puhdistettiin flash-kromatografialla [gradientti-eluointi: MeOH:Et20 (2,5:97,5) - (5:95)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (40 %), HPLC, tR = 7,38, 10,35, Col A, H20:CH3CN (65:35), FR = 2,5.
25 Analyysi, laskettu kaavalle C30H35F3N408S. 1,5H20: C 51,79, H 5,51, N 8,19 %
Saatu: C 51,70, H 5,24, N 7,89 %
Esimerkki 94 3(RS)-[4-fenyylisulfonyyliaminokarbonyyli)fenyyli-30 karbonyyli] -L-valyyli-N- [3-( 1,1,1-trif luori-4-me- tyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[0S(O2)NHC(0)]0, R4 - H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 79 mukaisesti valmistettu tuote saatet-35 tiin reagoimaan bentseenisulfonamidin kanssa esimerkin 89 menetelmällä, ja saatu raakatuote puhdistettiin flash- 130 841 71 kromatografiällä (EtOAc: E120: AcOH, 25:74,9:0,1), jolloin saatiin otsikon yhdiste (33 %), HPLC, tR = 3,71, 5,65, Col A, H20:CH3CN (3:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C30H35F3N407S. 1,25H20: 5 C 53,36, H 5,59, N 8,29 %
Saatu: C 53,75, H 5,64, N 7,72 %
Esimerkki 95 2(RS)-[4-[(4-bromifenyyli)sulfonyyliamlnokarbonyy-li]fenyyllkarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-( 1,1,1-tri-10 fluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4 - [ ( 4-Br0 )S( 02 )NHC( O) ] 0, R4 = H, A = CO, n = 1) a. 4-bromibentseenisulfonamidi 4-bromibentseenisulfonyylikloridi (10,0 g, 39,6 15 mmol) muutettiin esimerkin 77a menetelmällä otsikon yhdisteeksi, joka saatiin valkeina kiteinä (8,45 g, 92 %), sp. 163 - 165 °C.
b. 3(RS)-[4-C(4-bromifenyyli)sulfonyyliaminokarbo-nyyli] fenyyllkarbonyyli] -L-valyyli-N-[3-(1,1,1-tri- 20 fluorl-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [ ( 4Br0 )S( 02 )NHC( 0) ]0, R4 = H, A = CO, n = 1) Esimerkin 79 mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 95a tuotteen kanssa esimerkin 89 25 menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin kiteyttämällä hek-saani: Et20-seoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdiste (50 %), HPLC, tR = 5,25, 7,84, Col A, H20:CH3CN (77,5:22,5), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C3oH34BrF3N4O7S.0,75H20: 30 C 48,36, H 4,80, N 7,52 %
Saatu: C 48,61, H 4,89, N 7,18 %
Esimerkki 96 3(RS )-4-( l-naftyyllsulfonyyliamino)-l, 4-dioksobu-tyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-35 oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3 )2CH-, R3 = 1-naftyyli- S(02)NHC(0)(CH2)2, R4 = H, A = CO, n * 1) 131 84171
Esimerkin 14 mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan 1-naftaleenisulfonamidin kanssa esimerkin 89 menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromato-grafiällä (MeOH:CHCl3, 5:95), jolloin saatiin otsikon yh-5 diste (46 %), HPLC, tR - 4,09, 6,57, Col A, H20:CH3CN
(60:40), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C30H37F3N407S. 0,5H20: C 54,29, H 5,77, N 8,44 %
Saatu: C 54,33, H 6,01, N 8,09 % 10 Esimerkki 97 3(RS)-[2-(4-aminokarbonyylifenoksi)-l-oksoetyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-okso-pentyyli)] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [H2NC( O) ]0OCH2, R4 = H, A = CO, 15 n = 1) a. 4-aminokarbonyylifenoksietikkahapon metyylies-teri p-hydroksibentsamidin (3,43 g), metyylibromiase-taatin (2,37 ml) ja K2C03:n (3,45 g) seosta 25 ml:ssa 20 DMF:ää sekoitettiin 12 h. Reaktioseos laimennettiin vedellä (150 ml), kiinteä aine suodatettiin, pestiin vedellä ja ilmakuivattiin. Kiteyttämällä etanolista saatiin 3,3 g (63 %) otsikon yhdistettä valkeina kiteinä.
b. 4-aminokarbonyylifenoksietikkahappo 25 Esimerkin 97a tuotteen (3,3 g) ja 0,5 N NaOH:n (30 ml) seosta sekoitettiin 3 h. Liuos suodatettiin, ja suodos tehtiin happameksi (pH 1) 1 N HCl:llä. Kiinteä aine suodatettiin ja ilmakuivattiin, jolloin saatiin otsikon happo valkeana jauheena, sp. 255 - 256 °C.
30 c._2(RS),3(SR)-[2-(4-aminokarbonyylifenoksi)-l- oksoetyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluorl-2-hyd-roksl-4-metyyllpentyyli)]-L-prolinamidi (kaava VIIb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[H2NC(0)]0OCH2, R4 = H, A = CO, n = 1) 35 Esimerkin 5d mukaisesti valmistettu tuote saatet tiin reagoimaan esimerkin 97b mukaisesti valmistetun yhdisteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä, jolloin saa- 132 8 4171 tiin otsikon yhdiste 33 %:n saannolla, TLC, Rf = 0,27, 0,31, MeOH:CH2C12 (1:9).
d. 3(RS)-[2-(4-aminokarbonyylifenoksl)-l-oksoetyy-11]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluorl-4-metyyli-2-5 oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 * CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4 - [ H2NC (0) ] 0OCH2, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 97c tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografial-10 la (MeOH:CH2Cl2, 4:96), jolloin saatiin otsikon yhdiste (35 %), TLC, Rf - 0,37, MeOH:CHCl3 (1:9).
Analyysi, laskettu kaavalle C25H33F3N406.1,5H20: C 52,72, H 6,37, N 9,83 %
Saatu: C 52,78, H 6,03, N 9,65 % 15 Esimerkki 98 3 ( RS)-(4-hydroksikarbonyylifenyyli)metoksikarbo-nyyll-L-valyyll-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH( CH3 )CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[H0C( 0) ]0CH2, R4 = 20 H, A = 0C0, n - 1)
Esimerkin 86c mukaisesti valmistettu tuote muutettiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi, joka eristettiin preparatiivisella TLC:llä (MeOH:CHCl3, 15:85) 45 %:n saannolla, HPLC, tR = 2,27, 3,02, Col A, H20:CH3CN 25 (60:40), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C25H32F3N307.2HZ0: C 51,81, H 6,26, N 7,25 %
Saatu: C 51,75, H 5,63, N 7,15 %
Esimerkki 99 30 3(RS)-[4-[4-(2-amino-2-oksoetyyli)fenoksi]-1-okso- butyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trif luori-4-metyy-li-2-oksopentyyli)1-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 « CH( CH3 )CH3, R2 = (CH3)2CH, R3 = 4- [H2NC(O )CH2300(CH2 )3, R4 = H, A = CO, n = 1) 133 841 71 a. 4-(4-aminokarbonyylifenoksi)voihapon etyylies-teri p-hydroksifenyyliasetamidin (3,8 g), etyyli-4-bro-mibutyraatin (3,6 ml) ja K2C03:n (3,45 g) seosta DMFrssä 5 (30 ml) sekoitettiin 12 h. Seos laimennettiin vedellä (100 ml), kiinteä aine suodatettiin ja ilmakuivattiin. Kiteyttämällä se etanolista saatiin 4 g (60 g) otsikon yhdistettä valkeina kiteinä, sp. 144,5 - 145,5 °C.
b. 4-(4-aminokarbonyylifenoksi)voihappo 10 Esimerkin 99a tuotteen (3,97 g) ja 1 N NaOH:n (20 ml) seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Liuos suodatettiin ja tehtiin happameksi 1 N HCl:llä. Kiinteä aine suodatettiin ja kuivattiin suurvakuumissa, jolloin saatiin 3 g (82 %) otsikon yhdistettä valkeana 15 jauheena, sp. 162,5 - 164 °C.
c. 2(RS),3(SR)-[4-[4-(2-amino-2-oksoetyyli)fenoksi] -1-oksobutyyli] -L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori- 2-hydroksi-4-metyyllpentyyli)]-L-prolinamidi(kaava Vllb, R1 « CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, r3 = 20 4- [H2NC(O )CH2]00( CH2 )3, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 5d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 99b tuotteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste 71 %:n saannolla, TLC, Rf = 0,28, 0,31, Me0H:CHCl3 (1:9).
25 d. 3(RS)-[4-[4-(2-amino-2-oksoetyyli)fenoksi3-l- oksobutyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyll)j-L-prolinamidl (kaava R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [H2NC( 0 )CH2] 00( CH2 )3, R4 = H, A = CO, n = 1) 30 Esimerkin 99c tuote hapetettiin esimerkin 61c mene telmällä ja saatu raakatuote puhdistettiin flash-kromato-grafialla (MeOH:CH2Cl2, 4:96), jolloin saatiin otsikon yhdiste (32 %), HPLC, tR = 2,11, 3,01, Col B, H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1), FR = 2,0.
134 84171
Analyysi, laskettu kaavalle C28H39F3N406.5H20: C 56,65, H 6,79, N 9,43 %
Saatu: C 56,83, H 6,98, N 9,24 %
Esimerkki 100 5 3( RS-E- [3- (4-hydroksikarbonyylifenyyli )-l-oksoprop- 2-enyyli]-L-valyyll-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyy-li-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 » E-4-[HOC(O)]0OCH=CH-, R4 = H, A = CO, n = 1) 10 Esimerkin 87d mukaisesti valmistettu tuote muutet tiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi (88 %), HPLC, tR = 2,6, 3,4, Col B, H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1), FR = 1,5.
Analyysi, laskettu kaavalle C26H32F3N306.0,35H20: 15 C 57,21, H 6,03, N 7,96 %
Saatu: C 57,40, H 6,40, N 7,38 %
Esimerkki 101 3(RS ) -[2-(4-etoksikarbonyylifenoksi)-1-okso-etyyli]-L-valyyll-N-[3-(l,1,1-trlfluori-4-metyyli-20 2-oksopentyyll)]-L-prollnamidl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-(CH3CH20C(0) ]0OCH2, R4 = H, A = CO, n = 1 a. Etyyli-4-[2-okso-2-(fenyylimetoksi)etoksi]bent-soaattl 25 Etyyli-p-hydroksibentsoaatin (4,98 g), bentsyyli- bromiasetaatin (4,75 ml) ja K2C03:n (4,14 g) seosta 30 ml:ssa DMF:ää sekoitettiin 15 h. Reaktioseos laimennettiin vedellä (200 ml) ja uutettiin eetteri:heksaaniseoksella (1:1). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin (vesi, suola-30 liuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 9,3 g (99 %) otsikon yhdistettä raskaana öljynä; TLC, Rf = 0,71, Et20:heksaani (1:1).
b. Etyyli-4-(2-hydroksl-2-oksoetoksi)bentsoaatti Esimerkin 101a tuotteen (2,0 g) liuos EtOH:ssa (50 35 ml) hydrattiin 170 000 Pa:n vedyn paineessa käyttäen 10 %:sta Pd/C-katalyyttia (200 mg). 20 min kuluttua reaktio 135 84171
oli täydellinen, reaktioseos suodatettiin CelitelläQ
ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Jäännös kiteytettiin metyyli-tert-butyylieetteri:heksaaniseoksesta, jolloin saatiin 900 mg (63 %) otsikon yhdistettä hienoina valkeina 5 neulasina, sp. 129 - 130 °C.
c. 2(RS),3(SR)-[2-(4-etokslkarbonyylifenoksi)-l-oksoetyyli]-L-valyyli-N[3-l,1,1-trifluori-2-hyd-roksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 10 4- [CH3CH20C(0) ] 0OCH2, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 5d mukaisesti valmistettu tuote saatettiin reagoimaan esimerkin 101b tuotteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste 92 %:n saannolla, TLC, Rf = 0,47, 0,53, MeOH:CH2Cl2 (1:9).
15 dj_3(RS)-[2-(4-etoksikarbonyylifenoksi)-l-okso- etyyli]-L-valyyli-N-[3—(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH, R3 = 4-[CH3CH2OC(O)]0OCH2, R4 = H, A = CO, n = 1) 20 Esimerkin 101c tuote hapetettiin esimerkin 61c me netelmällä ja saatu raakatuote puhdistettiin flash-kroma-tografialla (MeOH:CH2Cl2, 2:98), jolloin saatiin otsikon yhdiste (41 %), TLC, Rf = 0,37, MeOH:CHCl3 (1:9).
Analyysi, laskettu kaavalle C27H36F3N307: 25 C 56,74, H 6,35, N 7,35 %
Saatu: C 56,40, H 6,50, N 7,12 %
Esimerkki 102 3(RS)-[3-(4-etoksikarbonyylifenyyli)-l-oksopropyy-li] -L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-30 oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH, R3 = 4- [CH3CH2OC(O) ]0(CH2 )2-, R4 = H, A = CO, n = 1) a. 4-etoksikarbonyylibentseenipropionihappo 4-karbetoksikaneelihapon (4,9 g) liuos EtOH:ssa 35 (120 ml) hydrattiin normaalipaineessa 5-%:sen Rh/C-kata- 136 841 71 lyytin (485 mg) läsnäollessa 21 h. Liuos suodatettiin ja suodos haihdutettiin. Jäännös kiteytettiin sykloheksaa-nista, jolloin saatiin 2,23 g (46 %) otsikon yhdistettä valkeina kiteinä, sp. 108,5 - 110,5 °C.
5 b. 2(RS),3(SR)-[3 — (4-etokslkarbonyylifenyyli)-l- oksopropyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 » (CH3 )2CH, R3 = 4-[CH3CH2OC(O)]0(CH2)2-, R4 = H, A = CO, n = 1) 10 Esimerkin 5d mukaisesti valmistettu tuote saatet tiin reagoimaan esimerkin 102a tuotteen kanssa esimerkin 32a menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromato-grafialla (MeOH:CH2Cl2, 4:96), jolloin saatiin otsikon yhdiste (83 %), TLC, Rf = 0,33, 0,38, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
15 c._3 (RS)- [3-( 4-etoksikarbonyylifenyyli ) -1-okso- propyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyy-li-2-oksopentyyll)]-L-prolinamldl (kaava R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[CH3CH2OC(O)]0(CH2)2-, R4 = H, A = CO, n = 1) 20 Esimerkin 102b tuote hapetettiin esimerkin 84d me netelmällä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (97 %).
Analyysi, laskettu kaavalle C28H38F3N306.0, 65H20: C 57,85, H 6,81, N 7,23 %
Saatu: C 57,89, H 6,83, N 6,98 % 25 Esimerkki 103 3(RS)-4-hydroksibentsoyyli-L-valyyli-N-[3-( 1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-(HO)0, R4 = H, A = CO, n = 1) 30 a. 2(RS),3(SR)-4-hydroksibentsoyyli-L-valyyli-N- [3-( 1,1, l-trifluori-2-hydroksl-4-metyylipentyyll)3-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-(HO)0, A = CO, n = 1)
Esimerkin 5d mukaisesti valmistettu tuote saatet-35 tiin reagoimaan 4-hydroksibentsoehapon kanssa esimerkin 84b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromato- 137 84171 grafiällä (Et0Ac:Et20, 15:85), jolloin saatiin otsikon yhdiste (65 %), TLC, Rf = 0,43, Et0Ac:Et20 (15:85).
Analyysi, laskettu kaavalle C23H32F3N305.0, 6H20: C 55,43, H 6,71, N 8,43 % 5 Saatu: C 55,76, H 6,62, N 8,03 % b. 3(RS)-4-hydroksibentsoyyll-L-valyyli-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro-linamldi (kaava Ib, R1 - CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- (HO )0, R4 = H, A = CO, n = 1) 10 Esimerkin 103a tuote hapetettiin esimerkin 33c me netelmällä, jota oli kuitenkin muunnettu seuraavasti: raa-katuote liuotettiin MeOH:hon, ja liuosta sekoitettiin K2C03:n vesiliuoksen (5 ml) kanssa huoneen lämpötilassa 16 h. Seos konsentroitiin vakuumissa osittain, tehtiin hap-15 pameksi väkevällä HCl:llä ja uutettiin EtOAc:llä. EtOAc-liuos pestiin (suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jäännös puhdistettiin flash-kroma-tografiällä (Et0Ac:Et20, 1:9), jolloin saatiin otsikon yhdiste 38 %:n saannolla, HPLC, tR = 3,54, 4,92, Col A, 20 CHjCN:H20 (35:65), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C23H30F3N305.1,2H20: C 54,47, H 6,44, N 6,29 %
Saatu: C 54,83, H 6,49, N 7,89 %
Esimerkki 104 25 3 ( RS)-[4-[(4-kloorifenyyli)sulfonyyliaminokarbo- nyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trinyylifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro-linamldi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH, r3 = 4- [ (4-C10)S(02 )NHC( 0) ] , R4 = H, A = CO, n = 1) 30 Esimerkin 79 mukaisesti valmistettu tuote saatet tiin reagoimaan 4-klooribentseenisulfonamidin kanssa esimerkin 77b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CH2Cl2, 3:97), jolloin saatiin otsikon yhdiste (66 %), HPLC, tR = 4,26, 6,07, Col A, 35 H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1).
Analyysi, laskettu kaavalle C30H34C1F3N407S.O, 9HzO: 138 841 71 C 51,23, H 5,13, N 7,60 %
Saatu: C 51,23, H 5,11, N 7,96 %
Esimerkki 105 3(RS)-[3-(4-hydroksikarbonyylifenyyli)-1-oksoprop-5 yyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2- oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[HOC(O)]0(CH2)2, R* - H, A - CO, n = 1)
Esimerkin 102c mukaisesti valmistettu tuote muu-10 tettiin esimerkin 14 menetelmällä otsikon yhdisteeksi 81 % saannolla, HPLC, tR = 2,6, 3,4, Col B, H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1).
Analyysi, laskettu kaavalle C26H34F3N306: C 57,66, H 6,33, N 7,76 % 15 Saatu: C 56,98, H 6,49, N 7,35 %
Esimerkki 106 3(RS)- [3- [4- [ (4-kloorlfenyyli)sulfonyyliaminokarbo-nyyli]fenyyli]-1-oksopropyyli]-L-valyyli-N-Γ3-(1,1,l-trlfluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-pro-20 llnamldi (kaava Ib, R1 =CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 * 4- [ ( 4-C10 )S(02 )NHC(0 ) ]0(CH2 )2, R* = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 105 mukaisesti saatu tuote saatettiin reagoimaan 4-klooribentseenisulfonamidin kanssa esimerkin 25 77b menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromato- grafiällä (MeOH:CH2C12, 5:95), jolloin saatiin otsikon yhdiste (90 %), HPLC, tR = 3,96, 5,73, Col B, H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1), FR = 3,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C32H38C1F3N407S. 1,7H20: 30 C 51,53, H 5,59, N 7,51 %
Saatu: C 51,72, H 5,40, N 7,24 % 84171 139
Esimerkki 107 3 (RS)-E-[3-[4-[(4-kloorifenyyli)sulfonyyliamino-karbonyyli )fenyyli] -l-oksoprop-2-enyyli] -L-valyy-11-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-5 li)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = E- [4- [ ( 4-C10)S( 02 )NHC( O ) ] 0CH=CH-, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 100 tuote saatettiin reagoimaan 4-kloo-ribentseenisulfonamidin kanssa esimerkin 77b menetelmällä. 10 Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä
(MeOH:CH2Cl2, 5:95), jolloin saatiin otsikon yhdiste (97 %), HPLC, tR = 4,73, 6,68, Col B, H20:CH3CN:THF:TFA
(55:35:15:01), FR = 3,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C32H36C1F3N407S. 1,7H20: 15 C 51,67, H 5,33, N 7,53 %
Saatu: C 51,72, H 5,40, N 7,24 %
Esimerkki 108 3(RS)-[l-[4-[[(4-bromifenyyli)sulfonyyli][fenyy-limetyylijaminokarbonyyli]fenyyli]-1-oksometyyli]-20 L-valyyll-N- [3- (1,1,1-trlf luori-4-metyyli-2-okso- pentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4-[ (4-Br0)S(02)N(CH20)C(0)]0-, R4 = H, A = CO, n = 1) a. 4-broml-N-(fenyylimetyyli)bentseenlsulfonamidi 25 Bentsyyliamiinin (5,36 g, 50 mmol) ja pyridiinin (400 ml) seokseen lisättiin sekoittaen typpikehässä huoneen lämpötilassa 4-bromibentseenisulfonyylikloridia (14,05 g, 55 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 1 h, sitten seos kaadettiin jääveteen (800 ml), muodostunut kel-30 täinen sakka suodatettiin ja kiteytettiin uudelleen EtOH:vesiseoksesta, jolloin saatiin 9,44 g (53 %) otsikon yhdistettä lähes valkeina neulasina, sp. 116 - 117 °C. Analyysi, laskettu kaavalle Ci3Hj2BrN02S: C 47,87, H 3,71, N 4,29 % 35 Saatu: C 48,02, H 3,78, N 4,25 % uo 84171 b. 1,l-dimetyylietyyli-4-[[(4-bromifenyyli)sulfo-nyyli] [fenyylimetyyli]aminokarbonyyli]bentsoaatti Esimerkin 108a tuotteen (4,4 g, 13,49 mmol) liuokseen CH2Cl2:ssa (150 ml) lisättiin huoneen lämpötilassa 5 sekoittaen DMPA:ta (1,81 g, 14,84 mmol). Saatuun liuokseen lisättiin peräkkäin WSCDI:tä (2,84 g, 14,84 mmol) ja tereftaalihappo-mono-tert-butyyliesteriä (3,0 g, 13,49 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli, sitten se konsentroitiin vakuumissa, ja jäännös liuo-10 tettiin EtOAcrhen. EtOAc-liuos pestiin (20-%:nen sitruuna-hapon vesiliuos, suolaliuos, vesi), kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Saatu öljymäi-nen jäännös liuotettiin lämpimään EtOH:hon, liuoksen annettiin sitten jäähtyä. Muodostuneet valkeat kiteet suoda-15 tettiin, pestiin kylmällä EtOH:lla ja kuivattiin suurva-kuumissa, jolloin saatiin 5,72 g (80 %) otsikon yhdistettä valkeina kiteinä, sp. 120 - 122 °C.
Analyysi, laskettu kaavalle C25H24BrN05S: C 56,61, H 4,56, N 2,64 % 20 Saatu: C 56,84, H 4,68, N 2,60 % c. 4-[[(4-bromifenyyli)sulfonyyli][fenyylimetyy-li]aminokarbonyy1i]bentseohappo
Esimerkin 108b tuote (5,30 g, 10 mmol) lisättiin 0 °C:ssa TFA:han (50 ml), johon se liukeni välittömästi. Noin 25 10 min kuluttua muodostui valkea sakka. Sekoittamista jat kettiin 0,5 h, sitten seos suodatettiin. Suodatettu kiinteä aine pestiin vedellä ja kiteytettiin uudelleen kuumasta vedettömästä EtOH:sta, jolloin saatiin 4,0 g (84 %) otsikon yhdistettä valkeana jauheena, sp. 193 - 194 °C.
30 d.2(RS),3(SR)-[l-[4-[[(4-bromifenyyli)sulfonyyll]- [fenyylimetyyli]amlnokarbonyyli]fenyyli]-1-oksome-tyyli]-L-valyyli-N-[3-( 1,1, 1-trifluori2-hydroksi-4-metyylipentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)2, R3 = 35 4-[ [ (4-Br0)S(02)] [0CH2]NCO]0, R4 = H, A = CO, n = 1) 141 84171
Esimerkin 108c tuotteen (1,0 g, 2,1 mmol), esimerkin 5d mukaisesti valmistetun tuotteen (0,85 g, 2,3 mmol), HOBT:n (0,28 g, 2,1 mmol) ja vedettömän THF:n seokseen lisättiin 0 °C:ssa sekoittaen typpikehässä WSCDI:tä (0,44 5 g, 2,3 mmol), Reaktioseosta sekoitettiin 0 °C:ssa 15 min, sitten seos sai lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä sekoitettiin 4 h. THF poistettiin vakuumissa, ruskeahko jäännös liuotettiin EtOAcrhen. EtOAc-liuos pestiin (1 N HC1, kyllästetty NaHC03-liuos, suolaliuos), kuivattiin 10 (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jol loin saatiin jäännös (1,6 g). Osa siitä (1,27 g) kiteytettiin metyyli-tert-butyylieetteri:heksaaniseoksesta, jolloin saatiin 0,64 g (kokonaissaanto 49 %) otsikon yhdistettä valkeana jauheena, TLC, Rf = 0,59, 0,64 15 (CHC13:CH30H, 95:5) HPLC, tR = 14,34, 15,26, Col B, H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1), FR = 3,0.
e. 3(RS)-[1-[4- [ [(4-bromifenyyli)sulfonyyli][fe- nyylimetyyli]aminokarbonyyli]fenyyli]-1-oksometyy-li]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-20 oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [ [ ( 4-Br0 )S( 02) ] N( CH20 )C( 0) ] 0, R4 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 108d tuotteen (300 mg, 0,364 mmol) liuos 25 CH2Cl2:ssa (2 ml) lisättiin sekoittaen typpikehässä huoneen lämpötilassa Dess-Martin-perjodinaanin (1,54 g, 3,63 mmol) ja vedettömän CH2Cl2:n (10 ml) seokseen. Saatuun seokseen lisättiin TFA:ta (0,41 g, 3,63 mmol), jolloin saatiin välittömästi kirkas liuos, joka 10 min kuluttua 30 sameni. Sekoittamista jatkettiin yön yli, sitten lisättiin EtOAc:tä (50 ml) ja saatu seos kaadettiin kyllästettyyn NaHC03-vesiliuokseen (100 ml), joka sisälsi 4 g Na2S203:a. Kaksifaasiseosta sekoitettiin voimakkaasti 10 min. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin [kyllästetty 35 NaHC03-liuos (100 ml), suolaliuos (100 ml)], kuivattiin 142 841 71 (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jäännös kuivattiin suurvakuumissa, jolloin saatiin 0,24 g (80 %) otsikon yhdistettä valkeana jauheena, TLC, Rf = 0,62, 0,75, CHC13: MeOH (95:5), HPLC, tR = 14,88, 21,56, Col B, 5 H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1), FR = 3,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C34H40BrF3N407S. 0,25H20: C 53,78, H 4,94, N 6,78 %
Saatu: C 53,84, H 4,98, N 6,45 %
Esimerkki 109 10 3R(tai S)-(trisyklo[3.3.1,l37ldek-l-yyli)sulfonyy- li-L-valyyli-N- [3-1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-okso-pentyyli)]-L-prolinamidl (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 1-adamantyyli, R4 = H, A = S(02), n = 1 15 Esimerkissä 91c kuvatusta flash-kromatografiästä saatiin toisena olennaisesti puhtaana isomeerinä otsikon yhdiste (84 %), HPLC, tR = 3,89, Col A, H20:CH3CN, (45:55), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C26H40F3N305S.0,5H20: 20 C 54,57, H 7,22, N 7,34 %
Saatu: C 54,52, H 7,15, N 7,33 %
Esimerkki 110 3S(tai R)-[4-(fenyylisulfonyyliaminokarbonyyli)-fenyyliaminokarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-tri-25 fluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [0S(02 )NHC(0) ]0, R4 = H, A = NHCO, n = 1) Esimerkin 58 molemmat diastereomeerit erotettiin MPLC:llä LiChroprep® rp-8 kolonnilla (Merck, koko B 40 -30 63 pm) käyttäen eluenttina Me0H:H20-seosta (50:50). Kootut
fraktiot tutkittiin HPLC:llä, ja sopivat fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste, HPLC, tR = 4,5, Col B, H20: CH3CN: THF: TFA
(55:35:15:0,1), FR = 2,0.
84171 143
Esimerkki ill 3S(tai R)-fenyylimetoksikarbonyyli-L-fenyyliqly-syyll-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, 5 R2 = 0, R3 = 0CH2-, R4 = H, A = 0C0, n = 1)
Esimerkin 92a tuote hapetettiin esimerkin 61c menetelmällä. Raakatuote puhdistettiin flash-kromatografiällä (MeOH:CH2Cl2, 1,5:98,5), jolloin saatiin otsikon yhdiste (80 %) yhtenä olennaisesti puhtaana isomeerinä, TLC, Rf = 10 0,26, pentaani:MeOH:Et20 (25:1:99).
Analyysi, laskettu kaavalle C27H30F3N3O5: C 60,78, H 5,67, N 7,88 %
Saatu: C 60,64, H 5,85, N 7,96 %
Esimerkki 112 15 3R(tai S)-fenyylimetoksikarbonyyli-L-fenyyliqly- syyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = 0, R3 = 0CH2-, R4 = H, A = 0C0, n = 1) Esimerkissä 111 kuvatusta flash-kromatografiästä 20 saatiin otsikon yhdiste (83 %) toisena olennaisen puhtaana isomeerinä, TLC, Rf = 0,30, pentaani:MeOH:Et20 (25:1:99). Analyysi, laskettu kaavalle C27H30F3N3O5: C 60,78, H 5,67, N 7,88 %
Saatu: C 59,43, H 5,65, N 7,48 % 25 Esimerkki 113 3R(tai S)-[4-[(4-bromifenyyli)sulfonyyliaminokar-bonyyli] fenyylikarbonyyli] -L-valyyli-N- [3-( 1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 30 4-[ (4-Br0)S(02 )NHC(0) ]0, R4 * H A = CO, n = 1)
Esimerkin 95b tuote (0,5 g, 0,7 mmol) kromatogra-foitiin MPLC:llä LiChroprep® rp-8 -kolonnilla (Merck, koko B 40 - 63 pm) käyttäen eluointiin Me0H:H20-seosta (60:40). Kootut fraktiot tutkittiin HPLC:llä, sopivat fraktiot yh- !44 841 71
distettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 2 tuotetta. Otsikon tuote (0,147 g) saatiin olennaisen puhtaana isomeerinä; HPLC, tR = 12,38, Col B, H20:CH3CN: THF: TFA
(55:35:15:0,1), FR = 3,0.
5 Esimerkki 114 3S(taiR)-[4-[(4-bromifenyyli)sulfonyyliaminokarbo-nyyll)fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 - CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 10 4 - [ ( 4-Br0 )S( 02 )NHC( 0 ) ]0, R = H, A = CO, n = 1 )
Esimerkissä 113 kuvatussa erotuksessa saatu toinen tuote oli otsikon yhdiste (0,065 g), joka saatiin olennaisen puhtaana isomeerinä, HPLC, tR = 8,44, Col B, H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1), FR = 3,0.
15 Esimerkki 115 3S(tai R)-[4-[(4-kloorlfenyyli)sulfonyyliaminokar-bonyyli] fenyylikarbonyyli] -L-valyyli-N- [3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R*= CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 20 4- [ (4-C10 )S( 02 )NHC(0) ]0, R4 = H, A = CO, n = 1) 544,8 mg esimerkissä 104 valmistettua materiaalia liuotettiin H20:CH3CN:THF-seokseen (2,2 ml: 3,3 ml: 0,5ml) ja erotettiin MPLC:llä Lobar® koko B LiChroprep® RP-8 -kolonnilla käyttäen eluenttina H20:CH3CN:THF:TFA-seosta 25 (55,32,5:12,5:0,1). HPLC-alanyysin perusteella yhdistet
tiin sopivat fraktiot, ne konsentroitiin vakuumissa ja jäännös kuivattiin suurvakuumissa 43 °C:ssa, jolloin otsikon yhdiste (255 mg) saatiin valkeana amorfisena kiinteänä aineena; HPLC, tR = 5,76, Col B, H20:CH3CN: THF: TFA
30 (55:32,5:12,5:0,1), FR = 3,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C30H34ClF3N4O7S. 1,3H20: C 50,71, H 5,19, N 7,89 %
Saatu: C 50,88, H 4,87, N 7,70 % 145 84 1 71
Esimerkki 116 3R(tai S)-[4-[(4-kloorifenyyli)sulfonyyliaminokar-bonyyli] fenyyli]karbonyyli-L-valyyli-N- [3- (1,1,1-trlfluori-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi 5 (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = (CH3)2CH-, R3 = 4- [ ( 4-C10 )S( 02 )NHC( 0) ] 0, R4 - H, A = CO, n = 1 573,8 mg esimerkin 104 mukaisesti valmistettua tuotetta liuotettiin H20:THF-seokseen (2 ml: 3 ml) ja erotettiin MPLC:llä Lobar® koko B LiChroprep® RP-8 -kolonnil-10 la käyttäen eluenttina THF:H20:TFA-seosta (41:59:0,1).
HPLC-analyysin perusteella sopivat fraktiot yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (51,8 mg) olennaisen puhtaana isomeerinä (99:1, HPLC:n mukaan); HPLC, tR = 8,8, Col B, H20:CH3CN: THF: TFA (55:32,5:12,5:0,1), 15 FR = 3,0.
Esimerkki 117 3S(tai R)-fenyylimetoksikarbonyyli-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, 20 R3 = 0CH2, R4 = H, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 11 mukaisesti valmistettu tuote (10 g, 0,02 mol) erotettiin erillisiksi, olennaisen puhtaiksi optisiksi isomeereiksi flash-kromatografialla (1 kg sili-kageeliä, Et20:heksaani, (80:20). Yhdistämällä sopivat 25 fraktiot saatiin otsikon yhdiste (3,17 g) olennaisen puhtaana isomeerinä, HPLC, tR =5,65, Col A, H20:CH3CN (55:45), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C24H32F3N3O5. H20: C 55,47, H 6,46, N 8,08 % 30 Saatu: C 55,50, H 6,77, N 7,99 %
Esimerkki 118 3R(tai S)-fenyylimetokslkarbonyyli-L-valyyl i-N-[3-(1,1,l-trifluori-4-metyyll-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, 35 R3 = CH2, R4 = H, A = OCO, n = 1)
Yhdistämällä esimerkissä 117 kuvatun erotuksen so- 146 841 71 pivat fraktiot saatiin otsikon yhdiste (3,67 g) toisena olennaisen puhtaana isomeerinä.
Analyysi, laskettu kaavalle C24H32f3n305: C 57,71, H 6,46, N 8,41 % 5 Saatu: C 57,61, H 6,34, N 7,96 %
Esimerkki 119 3S(tai R) -[(4-karboksifenyyli)aminokarbonyyli]-L-valyyli-N-[3—(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen-tyyli) ] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, 10 R2 = CH(CH3)CH3, R3 = 4-(HOOC)0, R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Esimerkin 16 mukaisesti valmistettu tuote (500 mg) erotettiin MPLCrllä Lobar® koko LiChroprep® RP-8 -kolonnilla käyttäen eluenttina Me0H:H20-seosta (1:1). HPLC-ana-15 lyysin perusteella sopivat fraktiot yhdistettiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste olennaisen puhtaana isomeerinä; HPLC, tR = 6,58, Col A, CH3CN:H20 (25:75), FR = 2,0. Esimerkki 120 3R(tai S)-[(4-karboksifenyyll)aminokarbonyyli)-L-20 valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopen- tyyli)] -L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = 4 - (HOOC )0, R4 = H, A = NHCO, n = 1)
Yhdistämällä esimerkissä 119 kuvatun erotuksen so-25 pivat fraktiot saatiin otsikon yhdiste vahvasti rikastettuna isomeerinä (220 mg): sen ja esimerkin 119 isomeerin suhde oli 90,4:9,5. HPLC, tR = 11,09, Col A, CH3CN:H20 (25:75), FR = 2,0.
Esimerkki 121 30 3( RS)-[4-[(4-kloorifenyyli)sulfonyyliaminokarbo- nyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyli-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = 4- [ (4-C10 )S( 02 )NHCO]0, R4 = H, A = CO, n = 1) 35 Edullinen menetelmä esimerkin 5d mukaisesti val mistetun tuotteen muuttamiseksi otsikon yhdisteeksi on seuraava: 147 841 71 a. 1,l-dimetyylletyyli-4-[(4-kloorifenyyll)sulfo-nyyllaminokarbonyyll]bentsoaatti 5 litran 3-kaulapyöröpohjakolvi varustettiin mekaanisella sekoittajalla ja typen sisäänjohtoputkella. Reak-5 tioastiaan pantiin CH2Cl2:ta (2 1) ja tereftaalihapon mono-tert-butyyliesteriä (127 g, 0,574 mol), sitten lisättiin peräkkäin DMPA:ta (70,06 g, 0,574 mol) ja 4-klooribent-seenisulfonamidia (110,04 g, 0,574 mol), jolloin kiinteiden aineiden alashuuhtomiseen käytettiin 400 ml CH2Cl2:ta. 10 WSCDI:tä (110,10 g, 0,574 mol) lisättiin annoksittain 10 min kuluessa käyttäen alashuuhtomiseen 100 ml CH2Cl2:ta. Reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, seos konsentroitiin vakuumissa kuiviin. Jäännös jaettiin EtOAc:hen ja veteen liukeneviin osiin. EtOAc-liuos pestiin 15 (20-%:nen sitruunahapon vesiliuos, kyllästetty NaHC03-vesi- liuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännöksenä saatu valkea kiinteä aine kuivattiin vakuumiuunissa 50 °C:ssa, jolloin saatiin otsikon yhdiste (227 g, 100 %) riittävän puhtaana käytettäväksi suo-20 raan seuraavassa vaiheessa; TLC, Rf = 0,43, MeOH:CHCl3 (15:85). (Lisäpuhdistus voitiin suorittaa kiteyttämällä
EtOH:vesiseoksesta, sp. yli 300 °C).
b. 4-[(4-kloorifenyyli)sulfonyyliaminokarbonyyli]-bentseenikarboksyylihappo 25 3 litran 3-kaulapyöröpohjakolvi varustettiin mekaa nisella sekoittajalla ja CaCl2-kuivausputkella. Siihen vietiin TFA:ta (1300 g), seos jäähdytettiin 0 °C:seen, sitten lisättiin esimerkin 121a tuotetta (79,5 g, 0,20 mol). Aluksi kiinteä aine liukeni kirkkaaksi liuokseksi. 10 - 15 30 min kuluttua tuote saostui raskaana sakkana, joka vaikeutti reaktioseoksen sekoittamista. Reaktion saamiseksi täydelliseksi oli tärkeätä, että sekoitettiin voimakkaasti mekaanisella sekoittajalla. Reaktioseosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 1 h, sitten seos kaadettiin 1 500 ml:aan jää-35 vettä, ja seosta sekoitettiin 2 h. Muodostunut sakka suodatettiin ja kuivattiin. Saatu valkea kiinteä aine (61,5 84171 148 g, 91 %) kiteytettiin uudelleen vedettömän etanolin (1 600 ml) ja veden (1 600 ml) seoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdiste (54 g, 80 %) valkeina neulasina; sp. 286 - 288 °C; TLC, Rf = 0,7, MeOH:CHC13:AcOH (10:90:1).
5 c. 2(RS),3(SR)-[4-[(4-kloorlfenyyli)sulfonyyliami- nokarbonyyli]fenyylikarbonyyli]-L-valyyll-N-[3-(1,1,1-trifluori-2-hydroksi-4-metyylipentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Vllb, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = 4- [ ( 4-C10 )S( 02 )NHC0] 0, R* = H, A = 10 CO, n = 1) 250 ml:n 3-kaulapyöröpohjakolvi varustettiin mag-neettisekoittajalla ja typen sisäänjohtoputkella. Reaktio-astiaan pantiin CH2Cl2:ta (125 ml), ja sitten lisättiin esimerkin 121b tuote (5,45 g, 16,07 mmol), DMPA:tä (1,96 15 g, 16,07 mmol) ja esimerkin 5d mukaisesti valmistettua tuotetta (6,20 g, 16,87 mmol) käyttäen kiinteiden aineiden alashuuhtomiseen CH2Cl2:ta (20 ml), sitten lisättiin WSCDI:tä (3,24 g, 16,87 mmol) käyttäen alashuuhtomiseen CH2Cl2:ta (5 ml). Reaktioseosta sekoitettiin 5 h, sitten 20 seos pestiin (IN HC1, kyllästetty NaHC03-vesiliuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote (11,0 g, 100 %) valkeana kiinteänä aineena. Osa siitä (3,39 g) liuotettiin MeOH:hon (40 ml) ja liuos laimennettiin vedellä (9 ml). Saatu liuos 25 kyllästettiin K2C03:lla, ja liuosta sekoitettiin yön yli huoneenlämpötilassa. Suurin osa MeOH:sta haihdutettiin vakuumissa, jäännös jaettiin etyyliasetaattiin ja veteen liukeneviin osiin. EtOAc-liuos pestiin (kyllästetty NaHC03-vesiliuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroi-30 tiin, jolloin saatiin olennaisen puhdas otsikon yhdiste (3,13 g, 92 %); TLC, Rf = 0,38, 0,46, MeOH:CHC13:AcOH (5:95:1); HPLC, tR = 6,20, 6,25, Col A, H20:CH3CN:THF:TFA (55:35:15:0,1), FR = 3,0.
149 841 71 d. 3(RS)-[4-[(4-kloorifenyyli)sulfonyyliaminokar-bonyyli]fenyylikarbonyyli3 -L-valyyli-N- [3-( 1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ib, R1 = CH(CH3)CH3, R2 * CH(CH3)CH3, R3 = 5 4-[(4-C10)S(02)NHCO]0, R4 = H, A = CO, n = 1)
Dess-Martin-perjodinaanin (636 g, 1,50 mol) liuokseen CH2Cl2:ssa (5 1) lisättiin esimerkin 121c mukaisesti valmistettua tuotetta (351 g, 0,50 mol) THF:ssä (500 ml), ja saatu suspensio laimennettiin CH2Cl2:lla (2 1), sitten 10 lisättiin TFA:ta (171 g, 150 mol). Reaktioseosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa, CH2C12 haihdutettiin vakuumissa, jäännös laimennettiin EtOAcrllä, ja liuosta käsiteltiin kyllästetyn NaHC03-vesiliuoksen ja kyllästetyn Na2S203-vesiliuoksen seoksella 1:1). Kun kaikki kiinteä aine 15 oli liuennut, vesikerros erotettiin ja EtOAc-kerros pestiin (kyllästetty NaHC03-vesi liuos: kyllästetty Na2S03-vesi-liuos (1:1), kyllästetty NaHC03-vesiliuos, suolaliuos), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös liuotettiin MeOH:hon (1,5 1), ja liuosta käsiteltiin 1 N 20 HCl:llä (1,5 1), sitten MeOH haihdutettiin vakuumissa.
Jäljelle jäänyt vesipitoinen suspensio uutettiin CH2C12:1-la, yhdistetyt CH2Cl2-uutteet pestiin (suolaliuos), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin flash-kromatografialla [gradienttieluointi: Et20 -25 Et20:Me0H (95:5)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (37 %);
HPLC, t„ = 6,68, 9,27, Col B, H20: CH3CN: THF: TFA
(55:35:15:0,1), FR = 2,0.
Esimerkki 122 3(RS)-N2,N*-di(fenyylimetokslkarbonyyli)-L-lysyyli-30 L-valyyli-N-[ 3-(1,1,1-trif luori-4-metyyll-2-okso- pentyyll)] -L-prollnamidi (kaava Ie, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = 0CH2, R4 = H, R5 = 0 CH2OCONH(CH2)4, R6 = H, A = OCO, n = 1)
Esimerkin 28a tuote hapetettiin esimerkin 54b me-35 netelmällä, ja saatu raakatuote puhdistettiin flash-kromatografialla [heksaani:EtzO (1:1), sitten Et20, lopuksi 150 84171
Et20:Et0Ac (3:1)], jolloin saatiin otsikon yhdiste (56 %); HPLC, tR * 4,19, 6,02, Col A, CH3CN:H20 ( 60:40), FR = 1,5. Analyysi, laskettu kaavalle C38H50F3n5O8.0,5H20: C 59,21, H 6,67, N 9,03 % 5 Saatu: C 58,93, H 6,62, N 8,75 %
Esimerkki 123 3(RS)-[1,4-diokso-4-(fenyylisulfonyyliamino)butyy-li]-L-leusyyli-L-valyyli-N-[3-( 1,1,1-trif luori-4-metyyli-2-oksopentyyli)]-L-prolinamidi (kaava Ie, R1 10 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = S(02)NHC0(CH2)2, R4 = H, R5 = (CH2)3CH3, R6 = H, A = CO, n = 1) Esimerkin 24 tuotteen (0,5 g, 0,87 mmol), bentsee-nisulfonamidin (0,14 g, 0,87 mmol), DMPA:n (0,11 g, 0,87 mmol) ja DCC:n (0,18 g, 0,87 mmol) liuosta CH2Cl2:ssa (20 15 ml) sekoitettiin 4 vrk huoneen lämpötilassa. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakatuote. Se puhdistettiin flash-kromatografialla Baker pH 5,0 -silikageelillä [(gradienttieluointi: CHC13 -MeOH:CHCl3 (2:98) - MeOH:CHCl3 (5:95)], jolloin saatiin ot-20 sikon yhdiste (0,37 g), HPLC, t„ = 3,84, 5,03, Col A, H20:CH3CN (65:35), FR = 1,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C32H46F3N508S: C 52,23, H 6,57, N 9,52 %
Saatu: C 51,94, H 6,29, N 9,37 % 25 Esimerkki 124 3(RS)-[4-(metyylisulfonyyliamino)-1,4-dioksobutyy-li] -L-leusyyli-L-valyyll-N- [3-(1,1,1-trlf luori-4-metyyli-2-oksopentyyll)]-L-prolinamidi (kaava Ie, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 30 CH3S (02) NHCO (CH2) 2, R4 = H, R5 = (CH2)3CH3, R6 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 24 tuotteen (0,5 g, 0,87 mmol), metaani-sulfonamidin (0,082 g, 0,87 mmol), DMPA:n (0,11 g 0,87 mmol) ja DCC:n (0,18 g, 0,87 mmol) liuosta CH2Cl2:ssa (20 35 ml) sekoitettiin 4 vrk huoneen lämpötilassa. Reaktioseos suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin 151 84171 raakatuote. Se puhdistettiin osittain flash-kromatogra-fiällä Baker pH 5,5 -silikageelillä [gradienttieluointi: CHClj, MeOH:CHC13 (1:99) - (2, 5:97,5)]. Osittain puhdistettu tuote jaettiin etyyliasetaattiin ja 1 N HCl:suola-5 liuosseokseen liukeneviin osiin. Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,28 g); HPLC, tR = 5,99, 8,95, Col A, H20:CH3CN (65:35); FR = 1,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C27H44F3N508S: 10 C 49,46, H 6,76, N 10,68 %
Saatu: C 49,07, H 6,79, N 10,43 %
Esimerkki 125 3(RS) -N2-[1,4-diokso-4-(fenyyllsulfonyyllamlno)bu-tyyli]-N6-fenyylimetoksikarbonyyll-L-lysyyli-L-va-15 lyyli-N-[3-( 1,1, l-trlfluori-4-metyyli-2-oksopentyy- li)]-L-prolinamidi (kaava Ie, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = 0S(O2)NHCO(CH2)2, R4 = H, R5 = 0CH2OCONH(CH2)4, R6 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 27 tuotteen (493 mg, 0,670 mmol), bent-20 seenisulfonamidin (117 mg, 0,745 mmol), DMPA:n (91 mg, 0,745 mmol) ja DCC:n (153 mg, 0,745 mmol) liuosta CH2Cl2:ssa (20 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa 24 h. Liuos laimennettiin EtOAc:llä, pestiin (vesi), kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Raaka-25 tuote puhdistettiin flash-kromatografisesti Baker pH 5,5 -silikageelillä (CH30H:CHC13, 2,5:97,5), jolloin saatiin otsikon yhdiste (243 mg) valkeana jauheena; TLC, Rf = 0,50, CH30H:CHC13:AcOH (5:94:1).
Analyysi, laskettu kaavalle C40H53F3N6010.0,75H20: 30 C 54,56, H 6,24, N 9,54 %
Saatu: C 54,52, H 6,23, N 9,48 % 152 841 71
Esimerkki 126 3(RS ) -[1,4-diokso-4-[(trisyklo[3.3.1.I37] dek-1-yyli )sulfonyyliamino] butyyli] -L-leusyyli-L-valyy-11-N-[3-(1,1,1-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyy-5 11)]-L-prolinamldl (kaava Ie, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = (l-adamantyyli)S(02)NHC0(CH2)2, R4 = H, R5 = (CH2)3CH3, R6 = H, A = CO, n = 1) a. 1-adamantaanisulfinamidi
Esimerkin 82a tuotteeseen (10,0 g, 45,7 mmol) li-10 sättiin hitaasti väkevää ammoniumhydroksidia (300 ml) ja seosta keitettiin palautusjäähdyttäen 3 h. Ammoniumhydrok-sidi tislattiin pois, jäännös liuotettiin veteen ja uutettiin Et20:lla. Et20-uute pestiin (suolaliuos), kuivattiin (Na2S04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Raaka-15 tuote puhdistettiin imukromatografiällä silikageelillä (Et20-Et0Ac), jolloin saatiin 4,2 g puhtaan valkoista kiinteätä tuotetta, sp. 139 - 141 °C (kirjallisuus: 141 - 142 °C).
b. 1-adamantaanisulfonamidi 20 Esimerkin 126a tuotteen (4,0 g, 20,0 mmol) liuok seen asetonissa (150 ml) lisättiin palautusjäähdytyslämpö-tilassa KMn04:n kyllästettyä asetoniliuosta, kunnes violetti väri säilyi. Liuos jäähdytettiin, suodatettiin Celi-tellä® ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin kiin-25 teä tuote (3,2 g), sp. 191 - 193 °C (kirjallisuus: 197 -198 °C); TLC, Rf = 0,80, EtOAc.
c. 3(RS)-[l,4-diokso-4-[(trisyklo[3.3.1.13,71dek-l-yyli )sulfonyyliamlno] butyyli] -L-leusyyli-L-valyyli-N-[3-( 1,1, l-trifluori-4-metyyli-2-oksopentyyli ) ] - 30 L-prolinamidi (kaava Ie, R1 = CH(CH3)CH3, R2 = CH(CH3)CH3, R3 = (1-adamantyyli )S(02)NHC0(CH2)2, R4 = H, R5 = (CH2)3CH3, R6 = H, A = CO, n = 1)
Esimerkin 24 tuotteen (300 mg, 0,51 mmol), DMPA:n (62 mg, 0,51 mmol), WSCDI:n (99 mg, 0,51 mmol) ja esimer-35 kin 126b tuotteen (110 mg, 0,51 mmol) liuosta CH2Cl2:ssa (30 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 h. CH2C12 153 84171
liuos pestiin (1 N HC1, suolaliuos), kuivattiin (MgS04), suodatettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Raakatuote puhdistettiin preparatiivisella TLCrllä (MeOH:CHCl3/ 1:9), jolloin saatiin kiinteä otsikon yhdiste; TLC, Rf = 0,56, 5 MeOH:CHC13 (5:95), HPLC, tR = 4,23, 7,05, Col A, H20:CH3CN
(1:1), FR = 2,0.
Analyysi, laskettu kaavalle C36H56F3N508S. 1,2H20: C 54,22, H 7,38, N 7,78 %
Saatu: C 54,28, H 7,84, N 7,71 %

Claims (5)

154 84171
1· Menetelmä terapeuttisesti aktiivisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava 5
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hapetus suoritetaan käyttäen 5 hapettimena a) oksalyylikloridin, dimetyylisulfoksidin ja ter-tiäärisen amiinin seosta sopivassa liuottimessa noin -20 --70 °C:een lämpötilassa; b) etikkahappoanhydridin ja dimetyylisulfoksidin 10 seosta noin 15 - 30 °C:een lämpötilassa; c) kromitrioksidi-pyridiinikompleksia sopivassa liuottimessa noin 15 - 30 °C:een lämpötilassa; tai d) Dess-Martin perjodinaania sopivassa liuottimessa noin 15-30 °C:een lämpötilassa.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöaineina käytetyssä kaavan Vila, Vllb tai VIIc mukaisessa alkoholissa R1 ja R2 ovat kumpikin isopropyyliryhmiä; A on karbonyyliryhmä ja ryhmä R3 on 4-kloorifenyyli-S02-NH-C0-fenyyli-, 4-bromife-20 nyyli-SOj-NH-CO-fenyyli- tai l-naftyyli-S02-NH-CO-fenyyli- NH- .
3 H ° y_Y I I R .A-N. Ji / \ CO.NH.CH.CH.CF^ n' n——r I* H ( )> <viic) 20 (CH2* n jolloin n, R1, R2, R3, R4, R5, R6 ja A merkitsevät samaa kuin edellä, ja haluttaessa ryhmässä R3 karboksiryhmän sisältävän kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen yhdisteen saamiseksi li-25 säksi hydrolysoidaan kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste, jossa ryhmässä R3 on karboksyylihappoesteri, saattamalla mainitun esterin sisältävä yhdiste reagoimaan alkali-metallihydroksidin kanssa sopivassa vesipitoisessa liuot-timessa noin 15-30 °C:een lämpötilassa, ja ryhmässä R3 30 sulfonyyliaminokarbonyyliryhmän sisältävän kaavan Ia, Ib tai Ie mukaisen yhdisteen saamiseksi lisäksi kondensoidaan kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste, jossa ryhmässä R3 on karboksyylihapporyhmä, sulfonamidin aminoryhmään karbodi-imidin läsnäollessa sopivassa liuottimessa noin 15 - 30 35 °C:een lämpötilassa, ja haluttaessa muutetaan saatu kaavan Ia, Ib tai Ie mukainen yhdiste farmaseuttisesti hyväksyt- 157 84171 täväksi suolaksi tavanomaisen suolanmuodostusvaiheen avulla.
3 I R -Av ,CO.NH.CH.CO.CF, <Ia) C\ (CH2]n 10. n R2 0 r1 R .A y ^ CO.NH.CH.CO.CF, N N-< J
15 I4 Π 2 n tai r>6 1 3 | 0 R2 0 R
20 R3 .A-NJL ^ ^ CO.NH-CH-CO-CF3 1^ N —/ , T . ;> o R ^(CH,) 2 n 25 jolloin n on 1; R1 on C1.4-alkyyli; A on ryhmä -NH-C0-, -0-C0- tai -C0-; R2 on fenyyli, bentsyyli tai C1.4-alkyyli, joka on mahdolli-30 sesti substituoitu bentsyylioksikarbonyyli-, bentsyyliok- sikarbonyyliamino-, fenyylisulfonyyliamino- tai (fenyyli-su1fonyy1iamino)karbonyy1iryhmä11ä; R4 ja R6 ovat vetyjä; R5 on C1.4-alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu bent-35 syylioksikarbonyyli- tai bentsyylioksikarbonyyliaminoryh- mällä; ja 155 841 71 R3 on jokin seuraavista ryhmistä: (1) C1.6-alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu C1.4-alkoksikarbonyyli-/ C1.4-alkoksikarbonyyliamino-, karboksi-, 2-(C1_4-alkoksi)etoksi-, adamantyyli-, morfolinyyli-, 5 pyridyyli-, tienyyli-, oksopyrrolidinyyli-, fenyyli-, ΰ1-4-alkoksikarbonyylifenyyli-, karboksifenyyli-, fenoksi-, C1.4-alkoksikarbonyylifenoksi-, karbamoyylifenoksi-, karba-moyylimetyylifenoksi-, bentseenisulfonyyliamino-, metaani-sulfonyyliaminokarbonyyli-,bentseenisulfonyyliaminokarbo-10 nyyli-, naftaleenisulfonyyliaminokarbonyyli-, adaman- taanisulfonyyliaminokarbonyyli-, tai klooribentseenisul-fonyyliaminokarbonyylifenyyliryhmällä; (2) naftyyli, aminokloorifenyyli, fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu hydroksi-, C1.4-alkoksi-, C1.4-alkok- 15 sikarbonyyli-, karboksi-, halogeeni-, dihalogeeni-, metaa-nisulfonyyliaminokarbonyyli-, naftaleenisulfonyyliamino-karbonyyli- tai [N-bentsyyli-(4-bromibentseenisulfonyyli)-amino]karbonyyliryhmällä; (3) ryhmä, jolla on kaava W-S02-NH-C0-fenyyli, jossa W 20 on fenyyli, joka on mahdollisesti substituoitu halogeeni- tai nitroryhmällä; (4) ryhmä, jolla on kaava Y-C0-NH-(CH2)m, jossa m on 2 -5, ja Y on fenyyli, bentsyyli, difenyylimetyyli, fenoksi-metyyli, bentsyylioksi, C1.4-alkoksi, (C1.4-alkoksikarbonyy- 25 liJfenyyliamino, (2-pyridyyli)etoksi tai karboksifenyyli-amino; (5) syklopentyyli tai undekyyli, jotka on mahdollisesti substituoitu C1.4-alkoksikarbonyyli- tai karboksiryhmällä; (6) 2-fenyylivinyyli, jonka fenyylirengas on mahdolli-30 sesti substituoitu C1.4-alkoksikarbonyyli-, karboksi- tai klooribentseenisulfonyyliaminokarbonyyliryhmällä; ja (7) 2-ureidokarbonyylivinyyli, di(bentsyylioksimetyy-li)metyyli tai di(2-fenoksietyyli)metyyli; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan val-35 mistamiseksi, tunnettu siitä, että hapetetaan alkoholi, jolla on kaava 156 84 1 71 R1 OH 3 ^ * R .A CO.NH.CH.CH.CF3 Xn—(Vila) 5 < > (CH2>„ R2 o Rl 0H r3 a X_I !
10 V Γ\ .CO.NH.CH.CH.CF., H / \ (Vllb) \ ' (CH2)n i5 . ? 1 tai n Rx OH
4. Yhdiste, jolla on kaava R1 OH 25 f 1 CO. NH . CH . CH . CF HN-S i / \ (iva) X(CH2>n 30 R2 0 R1 OH >—€ t I hn/ \ c0.NH.cH.cH.cF3 (Ivb) 35 i4 ( ) <CH2>n 158 841 71 tai R6 d2 r1 OH
FI860281A 1985-01-22 1986-01-21 Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva peptidderivat. FI84171C (fi)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB858501522A GB8501522D0 (en) 1985-01-22 1985-01-22 Dipeptide derivatives
GB858501523A GB8501523D0 (en) 1985-01-22 1985-01-22 Tripeptide derivatives
GB8501522 1985-01-22
GB8501523 1985-01-22
GB858501524A GB8501524D0 (en) 1985-01-22 1985-01-22 Tetrapeptide derivatives
GB8501524 1985-01-22

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI860281A0 FI860281A0 (fi) 1986-01-21
FI860281A FI860281A (fi) 1986-07-23
FI84171B true FI84171B (fi) 1991-07-15
FI84171C FI84171C (fi) 1991-10-25

Family

ID=27262565

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI860281A FI84171C (fi) 1985-01-22 1986-01-21 Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva peptidderivat.

Country Status (25)

Country Link
US (2) US4910190A (fi)
EP (1) EP0189305B1 (fi)
JP (2) JPH0759591B2 (fi)
KR (1) KR910002689B1 (fi)
CN (1) CN1027640C (fi)
AU (1) AU594658B2 (fi)
CA (1) CA1341023C (fi)
CZ (1) CZ278063B6 (fi)
DE (1) DE3686172T2 (fi)
DK (1) DK172736B1 (fi)
ES (3) ES8706169A1 (fi)
FI (1) FI84171C (fi)
GB (1) GB8600263D0 (fi)
GR (1) GR860169B (fi)
HK (1) HK18097A (fi)
HU (1) HU206370B (fi)
IE (1) IE58957B1 (fi)
IL (1) IL77680A (fi)
NO (1) NO169493C (fi)
PH (1) PH26575A (fi)
PL (1) PL150268B1 (fi)
PT (1) PT81887B (fi)
SK (1) SK278095B6 (fi)
UA (1) UA39093C2 (fi)
ZW (1) ZW1486A1 (fi)

Families Citing this family (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8600263D0 (en) * 1985-01-22 1986-02-12 Ici America Inc Peptide derivatives
US5055450A (en) * 1985-01-22 1991-10-08 Ici Americas Inc. Peptide derivatives
US5496927A (en) * 1985-02-04 1996-03-05 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
ZA86746B (en) * 1985-02-04 1986-09-24 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
ATE71934T1 (de) * 1985-06-07 1992-02-15 Ici America Inc Selektionierte difluorverbindungen.
EP0276101A3 (en) * 1987-01-19 1989-11-23 Ici Americas Inc. Substituted peptide derivatives
GB8809316D0 (en) * 1987-05-11 1988-05-25 Ici America Inc Heterocyclic ketones
US5296608A (en) * 1988-04-25 1994-03-22 Hoffman-La Roche Inc. Intermediates for analogs of tyrosine sulfate or tyrosine phosphate containing peptides
US5182263A (en) * 1988-04-25 1993-01-26 Hoffmann-La Roche Inc. Analogs of tyrosine sulfate or tyrosine phosphate containing peptides
IL90872A0 (en) * 1988-07-08 1990-02-09 Smithkline Beckman Corp Retroviral protease binding peptides
EP0369391A3 (en) * 1988-11-15 1991-09-25 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. N-substituted amides
GB8910547D0 (en) * 1989-05-08 1989-06-21 Ici America Inc Substituted ketones
GB8910550D0 (en) * 1989-05-08 1989-06-21 Ici America Inc Substituted amides
US5221665A (en) * 1989-10-27 1993-06-22 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. N-substituted amides
DK0458536T3 (da) * 1990-05-24 1998-10-19 Zeneca Ltd Terapeutisk middel til behandling og forebyggelse af åndedrætsbesværsyndrom hos voksne
US5162348A (en) * 1990-05-24 1992-11-10 Imperial Chemical Industries Plc Treatment of cystic fibrosis
DK0458537T3 (da) * 1990-05-24 1999-10-18 Zeneca Ltd Anvendelse af en terapeutisk forbindelse til behandling af bronkitis
GB9014132D0 (en) * 1990-06-25 1990-08-15 Ici Plc Agent for therapy
US5296591A (en) * 1990-12-31 1994-03-22 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Trifluoromethylketone derivatives, processes for preparation thereof and use thereof
US5521179A (en) * 1991-04-18 1996-05-28 Zeneca Limited Heterocyclic amides
GB9207145D0 (en) * 1991-04-18 1992-05-13 Ici Plc Heterocyclic amides
US5340801A (en) * 1991-05-08 1994-08-23 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Compounds having cholecystokinin and gastrin antagonistic properties
EP0587799B1 (en) * 1991-05-23 1999-07-07 Merrell Pharmaceuticals Inc. Inhibitors of cathepsin g and elastase for preventing connective tissue degradation
GB9113164D0 (en) * 1991-06-18 1991-08-07 Ici Plc Pharmaceutical agent
WO1993003011A1 (en) * 1991-08-08 1993-02-18 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Urea derivative
AU658426B2 (en) * 1991-08-15 1995-04-13 Zeneca Limited Substituted heterocycles
GB9216272D0 (en) * 1991-08-15 1992-09-09 Ici Plc Substituted heterocycles
US5714470A (en) 1991-08-22 1998-02-03 Merrell Pharmaceuticals, Inc. Orally-active elastase inhibitors
US5478811A (en) * 1991-08-22 1995-12-26 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Orally-active elastase inhibitors
US5486529A (en) * 1992-04-16 1996-01-23 Zeneca Limited Certain pyridyl ketones for treating diseases involving leukocyte elastase
EP0636143B1 (en) * 1992-04-16 1997-09-24 Zeneca Limited Alpha-aminoboronic acid peptides and their use as elastase inhibitors
GB9211783D0 (en) * 1992-06-04 1992-07-15 Ici Plc Amide derivatives
GB9214053D0 (en) * 1992-07-02 1992-08-12 Ici Plc Heterocyclic amides
FR2694295B1 (fr) * 1992-07-28 1994-09-02 Adir Nouveaux peptides dérivés de trifluoromethylcetones, leur procéde de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
US5780590A (en) * 1993-10-15 1998-07-14 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides
GB9402680D0 (en) * 1994-02-11 1994-04-06 Zeneca Ltd Pyrrolidine derivatives
FR2719589B1 (fr) * 1994-05-05 1996-06-14 Adir Nouveaux peptides dérivés de trifluorométhylcétones, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
CN1152048C (zh) * 1994-06-02 2004-06-02 默里尔药物公司 弹性蛋白酶的全氟烷基酮抑制剂及其制备方法
US6693072B2 (en) * 1994-06-02 2004-02-17 Aventis Pharmaceuticals Inc. Elastase inhibitors
SI0804465T1 (en) * 1994-06-02 2003-12-31 Aventis Pharmaceuticals Inc. Novel elastase inhibitors
ES2161293T3 (es) * 1994-06-02 2001-12-01 Merrell Pharma Inc Derivados de enol acilados como profarmacos de inhibidores de la elastasa.
GB9502152D0 (en) * 1995-02-03 1995-03-29 Zeneca Ltd Proline derivatives
US6172044B1 (en) 1995-12-01 2001-01-09 Aventis Pharmaceuticals Inc. Acylated enol derivative of α-ketoesters and α-ketoamides
US5948886A (en) * 1996-11-20 1999-09-07 Hoechst Marion Roussel, Inc. Acylated enol derivatives of α-ketoesters and α-ketoamides
US6492421B1 (en) 1997-07-31 2002-12-10 Athena Neurosciences, Inc. Substituted phenylalanine type compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6939855B2 (en) 1997-07-31 2005-09-06 Elan Pharmaceuticals, Inc. Anti-inflammatory compositions and method
US6362341B1 (en) 1997-07-31 2002-03-26 Athena Neurosciences, Inc. Benzyl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US7030114B1 (en) 1997-07-31 2006-04-18 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6583139B1 (en) * 1997-07-31 2003-06-24 Eugene D. Thorsett Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6423688B1 (en) * 1997-07-31 2002-07-23 Athena Neurosciences, Inc. Dipeptide and related compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6559127B1 (en) * 1997-07-31 2003-05-06 Athena Neurosciences, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6682554B2 (en) * 1998-09-05 2004-01-27 Jomed Gmbh Methods and apparatus for a stent having an expandable web structure
JP2000256396A (ja) 1999-03-03 2000-09-19 Dainippon Pharmaceut Co Ltd 複素環式化合物およびその中間体ならびにエラスターゼ阻害剤
GB9928882D0 (en) * 1999-12-08 2000-02-02 Zeneca Ltd Assay method
US6403612B2 (en) * 2000-01-31 2002-06-11 Merck & Co., Inc. Thrombin receptor antagonists
US20040006093A1 (en) * 2000-10-17 2004-01-08 Thorsett Eugene D. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
EP2163652B2 (en) 2002-01-28 2023-05-31 Life Technologies Corporation Preparing crude biological extracts using protease, suitable for preparing cDNA
MXPA04007552A (es) * 2002-02-05 2004-11-10 Dainippon Pharmaceutical Co Compuestos heterociclicos que tienen actividad inhibidora de elastasa e intermediarios de los mismos.
US7964350B1 (en) 2007-05-18 2011-06-21 Applied Biosystems, Llc Sample preparation for in situ nucleic acid analysis
US8211637B2 (en) 2008-12-19 2012-07-03 Life Technologies Corporation Proteinase K inhibitors, methods and compositions therefor
US10710957B2 (en) 2017-01-09 2020-07-14 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Motuporamine derivatives as antimicrobial agents and antibiotic enhancers against resistant gram-negative bacteria
WO2019018185A1 (en) 2017-07-15 2019-01-24 Arisan Therapeutics Inc. ENANTIOMERICALLY PURE ADAMATANE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF FILOVIRUS INFECTIONS

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB195212A (en) * 1922-01-30 1923-03-29 Edward Crawshaw Improvements in expansion joints between steam boilers and their settings or flue walls
US4277395A (en) * 1980-06-16 1981-07-07 Richardson-Merrell Inc. Novel enzyme inhibitors
EP0124317B1 (en) * 1983-04-27 1990-04-11 Ici Americas Inc. Proline derivatives
US4518528A (en) * 1983-05-19 1985-05-21 Rasnick David W α Amino fluoro ketones
GB8600263D0 (en) * 1985-01-22 1986-02-12 Ici America Inc Peptide derivatives
ZA86746B (en) * 1985-02-04 1986-09-24 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
CH672792A5 (fi) * 1985-02-19 1989-12-29 Sandoz Ag
ATE71934T1 (de) * 1985-06-07 1992-02-15 Ici America Inc Selektionierte difluorverbindungen.
EP0249349B1 (en) * 1986-06-05 1992-10-14 Ici Americas Inc. Difluoroketo compounds

Also Published As

Publication number Publication date
PL150268B1 (en) 1990-05-31
KR910002689B1 (ko) 1991-05-03
HU206370B (en) 1992-10-28
CN86101066A (zh) 1986-11-05
FI84171C (fi) 1991-10-25
CZ278063B6 (en) 1993-08-11
DE3686172D1 (de) 1992-09-03
HUT39464A (en) 1986-09-29
NO860190L (no) 1986-07-23
PL257573A1 (en) 1987-03-23
EP0189305A2 (en) 1986-07-30
CA1341023C (en) 2000-06-13
JPH0680039B2 (ja) 1994-10-12
NO169493B (no) 1992-03-23
ES557048A0 (es) 1987-08-01
AU594658B2 (en) 1990-03-15
HK18097A (en) 1997-02-13
CN1027640C (zh) 1995-02-15
PH26575A (en) 1992-08-19
GB8600263D0 (en) 1986-02-12
ES8707551A1 (es) 1987-08-01
AU5262386A (en) 1986-07-31
DE3686172T2 (de) 1993-01-14
IL77680A (en) 1990-12-23
IE860180L (en) 1986-07-22
PT81887A (en) 1986-02-01
DK172736B1 (da) 1999-06-21
JPH0759591B2 (ja) 1995-06-28
NO169493C (no) 1992-07-01
FI860281A (fi) 1986-07-23
ES551113A0 (es) 1987-05-16
ES8706169A1 (es) 1987-05-16
KR860005835A (ko) 1986-08-13
GR860169B (en) 1986-05-15
JPH05246984A (ja) 1993-09-24
CS39586A3 (en) 1992-01-15
US4910190A (en) 1990-03-20
DK30886A (da) 1986-07-23
ES557363A0 (es) 1988-07-01
IE58957B1 (en) 1993-12-01
EP0189305B1 (en) 1992-07-29
EP0189305A3 (en) 1988-10-05
JPS61218518A (ja) 1986-09-29
UA39093C2 (uk) 2001-06-15
DK30886D0 (da) 1986-01-21
US5726158A (en) 1998-03-10
FI860281A0 (fi) 1986-01-21
SK278095B6 (en) 1995-12-06
ZW1486A1 (en) 1987-09-30
ES8802526A1 (es) 1988-07-01
PT81887B (pt) 1988-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI84171B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva peptidderivat.
US5055450A (en) Peptide derivatives
CA2189526C (en) Perfluoroalkyl ketone inhibitors of elastase and processes for making the same
FI91072B (fi) Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten heterosyklisten peptidien valmistamiseksi ja niiden valmistuksessa käyttökelpoisia välituotteita
RU2223967C2 (ru) Ингибиторы фактора VIIa
EP0132304A2 (en) Hydroxy substituted peptide compounds
JPH02256657A (ja) Ｎ―置換アミド
CA2170896A1 (en) Kininogen inhibitors
AU689589B2 (en) Novel elastase inhibitors
US5194588A (en) Aminoalcohol intermediates for peptide derivatives
EP0276101A2 (en) Substituted peptide derivatives
US6693072B2 (en) Elastase inhibitors
US6069232A (en) Polyfluoroalkyl tryptophan tripeptide thrombin inhibitors
CA2191844C (en) Acylated enol derivatives as prodrugs of elastase inhibitors
MXPA96006031A (en) Inhibitors of elastase perfluoroalquilic cetone and processes to manufacture
DD247683A5 (de) Verfahren zur herstellung von peptidderivaten
MXPA96006030A (en) Novedous elast inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
TC Name/ company changed in patent

Owner name: ZENECA INC.

FG Patent granted

Owner name: ZENECA INC.

MA Patent expired