FI80598C - Foerfarande foer framstaellning av en enzymberedning. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av en enzymberedning. Download PDFInfo
- Publication number
- FI80598C FI80598C FI842555A FI842555A FI80598C FI 80598 C FI80598 C FI 80598C FI 842555 A FI842555 A FI 842555A FI 842555 A FI842555 A FI 842555A FI 80598 C FI80598 C FI 80598C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- enzymes
- enzyme
- lipids
- preparation
- krill
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 121
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 121
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 48
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 30
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 13
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 10
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 claims description 9
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000018389 Exopeptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010091443 Exopeptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 claims description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 112
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 241000239366 Euphausiacea Species 0.000 description 26
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 12
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 12
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 10
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 10
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 9
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 8
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 8
- 108090000270 Ficain Proteins 0.000 description 7
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 7
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 6
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 6
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 235000019836 ficin Nutrition 0.000 description 6
- POTUGHMKJGOKRI-UHFFFAOYSA-N ficin Chemical compound FI=CI=N POTUGHMKJGOKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 6
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 108010086613 Streptodornase and Streptokinase Proteins 0.000 description 5
- -1 bandage Substances 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 5
- 241001417902 Mallotus villosus Species 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 4
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 4
- 244000038022 Chenopodium capitatum Species 0.000 description 3
- 235000004391 Chenopodium capitatum Nutrition 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 3
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 235000019890 Amylum Nutrition 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 2
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000239370 Euphausia superba Species 0.000 description 2
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 2
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 2
- 229940001501 fibrinolysin Drugs 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000036074 healthy skin Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 229960004533 streptodornase Drugs 0.000 description 2
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGGVALXERJRIRO-UHFFFAOYSA-N 4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-2-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-1H-pyrazol-5-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)O MGGVALXERJRIRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108010071195 Nucleotidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007533 Nucleotidases Human genes 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010039792 Seborrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 230000002358 autolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000000678 effect on lipid Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 229940040145 liniment Drugs 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000010422 painting Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 238000011458 pharmacological treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 108010016297 plasmin drug combination deoxyribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 229940071089 sarcosinate Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000012209 synthetic fiber Substances 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6402—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from non-mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
- C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
- C11D3/16—Organic compounds
- C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
- C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
1 80598
MENETELMÄ ENTSYYMIVALMISTEEN VALMISTAMISEKSI
Keksintö koskee menetelmää entsyymivalmisteen 5 valmistamiseksi, kuten on määritelty patenttivaatimuksen 1 johdanto-osassa.
Patenttiselityksessä ja vaatimuksessa käytettynä termi entsyymi tarkoittaa aktiivista entsyymiä, mikäli toisin ei ole mainittu.
10 Ao valmiste on tarkoitettu sekä imettäväisten terapeuttista puhdistusta että ei-terapeuttista puhdistusta varten yleensä. Käsite puhdistus on tällöin käytetty laveimmassa merkityksessään, so tarkoittaen kuolleen samaten kuin elävän aineen, kuten erityyppisten 15 tekstiilien, hiuksien, turkiksien, ihon, muovien, nahan, kynsien, korvien, peilien, lasin, posliinin, hammasproteesin, metallien, kivien, hampaiden, julkisivujen, untuvien, taideteoksien kuten maalauksien jne. puhdistusta. Puhdistus käsittää myös ihmisten ja eläimien 20 puhdistuksen poistaen sellaisia aineita, kuten märkää (märkivä erite), fibriiniä, koaguloitunutta verta, verirupia ja kuollutta kudosta. Tämä viimeinen puhdis-tustyyppi on erityisen tärkeä haavojen, palovammojen ja tulehtumien käsittelyssä esim. ns entsymaattista hajo-25 tusta varten, mutta voidaan toteuttaa myös muilla elävän ruumiin alueilla, joissa saastumista voi esiintyä. Virtsaputki ja virtsarakko ovat esimerkkejä tällaisista muista alueista. Entsyymien normaali sulattava vaikutus eläimissä, samaten kuin niiden autolyyttinen toiminta 30 eläimissä post mortem, eivät sisälly termiin puhdistus.
Krillissä (joka kuuluu lahkoon Euphausiaceae) esiintyy seos erilaisista entsyymeistä, kuten esim. proteinaasit (hapan ja neutraali, alkalinen pH-optimi), peptidaasit (ekso- ja endopeptidaasit), lipaasit, fos-35 folipaasit, amylaasit ja muut hiilihydraattia hajottavat entsyymit, fosfataasit, nukleaasit, nukleotidaasit ja esteraasit (T.E. Ellingsen; Biokjemiske Studier over 2 80598
Antarktisk Krill; tohtorinväitöskirja; Institutt for Teknisk Biokjemi, Norjan teknillinen korkeakoulu, Trondheim (1982)). Krillin vesiuutoksessa esiintyvää proteo-lyyttistä (trypsiinin kaltaista) aktiivisuutta on tut-5 kittu ja kuvattu (C.-S. Chen et ai? J. Food Biochem. 2 (1978) p. 349 - 66)). Erilaisia proteaasiaktiivisuuksia villakuoreen vesiuutoksissa on kuvattu aiemmin (A. Gildberg; Autolysis of Fish Tissue - General Aspects; Thesis; Institute of Fisheries, Troms0n yliopisto, Norja 10 (1982)).
Niin aikaisin kuin 1913 ehdotettiin entsyymien käyttöä pesuaineissa. Entsyymikokoomukset kuolleiden aineiden puhdistusta varten, esim. pesuaineissa, on aiemmin perustunut erilaisiin mikrobisiin proteaaseihin 15 suvusta Bacillus. Yksi tällainen yleisesti käytetty proteaasi on subtilisin, joka on johdettu suvuista Bacillus subtilis ja merkitty mm. nimillä AlcalaseR (Novo Industry, Kööpenhamina, Tanska). Erilaisia lipaa-seja on myös käytetty puhdistusta varten, erityisesti 20 lipidien hajottamisen mahdollistamiseksi. Entsyymien lisäksi tällaiset ainekokoomukset ovat sisältäneet myös erilaisia anionisia, kationisia ja neutraaleja pesuaineita yhdessä valkaisuaineiden kuten perboraattien kanssa. Tähän mennessä käytetyt entsyymit ovat olleet, 25 kuten entsyymit yleensä, suhteellisen epästabiileja.
Tärkeimmät markkinoilla olevat entsyymikokoomukset yllä mainittujen komponenttien hajottamista varten ovat ennen muuta streptokinaasi - streptodornaasi (VaridaseR, Lederle Lab., American Cyanamid Company, 30 Wayne, New Jersey, USA), stabiloitu kiteinen trypsiini (Trypure**, Novo Industry, Kööpenhamina, Tanska) ja härän fibrinolysiini yhdistettynä deoksiribonukleaasiin (ElaseR, Barke Davis & Company, Detroit, Michigan, USA) . Streptokinaasi vaikuttaa kuolleeseen aineeseen pääasias-35 sa vaikutuksensa perusteella DNA;an ja streptodornaasilia on erityinen fibrinolyyttinen vaikutus. Trypsiini vaikuttaa proteolyyttisesti, ja sitä uutetaan härän
II
3 80598 haimasta. Fibrinolysiini - deoksiribonukleaasi on yhdistelmä kahdesta entsyymistä, yhdestä fibriiniä hajottavasta entsyymistä ja yhdestä deoksiribonukleiinihap-poon vaikuttavasta, joka on tärkeä komponentti märässä.
5 Erästä spesifistä pepsiinin kaltaista, lajista
Mallotus villosus (villakuore) saatavaa entsyymiä (Pepsiini I) on ehdotettu käytettäväksi palovammojen lääkehoidossa (Gildberg (A.; mainittu yllä s. 89 - 90)).
Yhden spesifisen entsyymin käytöllä, joka vaikuttaa 10 yhdentyyppisiin substraatteihin, voidaan hajottaa haavoissa olevia epäpuhtauksia. Kuitenkin tämän pepsiinin kaltaisen entsyymin yhdistelmää muiden entsyymien kanssa ei ole ehdotettu ihmisten terapeuttista puhdistusta varten.
15 Yllä mainituissa entsyymivalmisteissa on useita puutteita. Ne ovat kaikki suhteellisen epästabiileja, mikä johtaa niiden aktiivisuuden nopeaan vähenemiseen varastoinnin tai käytön aikana. Niiden aktiivisuudet ovat usein rajoittuneita tiettyyn pH-väliin, esim. 20 neutraali - kohtuullisen aikaiinen pH. Niiden aktiivisuudet ovat useissa tapauksissa myös rajoittuneita tiettyihin lämpötilaväleihin. Lämpötilassa yli +50 *C havaitaan aktiivisuuden nopea lasku, ja huoneenlämpö-tilassa tai normaalissa ulkoilman lämpötilassa niiden 25 aktiivisuudet ovat alhaisia.
Tuotteiden VaridaseR, Trypure** ja ElaseR vaikutus on suhteellisen heikko niiden käyttötarkoituksissa. Vain kohtuullinen hajotusvaikutus saavutetaan tavallisesti kolmen viikon pituisen käsittelyjakson jälkeen. 30 Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on tuoda esiin menetelmä entsyymivalmisteen valmistamiseksi, jolla on kyky hajottaa biologisia epäpuhtauksia aiempia paremmin. Toisena tarkoituksena on tuoda esiin menetelmä paremman entsyymikokoomuksen valmistamiseksi käytet-35 täväksi epäpuhtauksia sisältävien biologista alkuperää olevien aineiden tai tällaisten aineiden hajoamistuotteiden poistamiseksi, epäpuhtauksien sekä proteiineja 4 80 598 että lipidejä sisältävien saasteiden poistamiseksi. Edelleen keksinnön tarkoituksena on tuoda esiin uusi ja parannettu menetelmä entsyymivalmisteen valmistamiseksi erityisesti fibriinin, koaguloituneen veren ja kuolleen 5 kudoksen poistamiseksi hajottamalla nämä osa-aineet ja edistäen siten niiden poistamista lisäämättä huomattavasti niiden vesipitoisuutta.
Keksinnölle tunnusomaisten seikkojen osalta viitataan patenttivaatimuksiin.
10 Keksinnön mukaan valmistettava entsyymivalmiste on kykenevä liuottamaan biologista alkuperää olevia epäpuhtauksia ja on peräisin johdanto-osassa mainituista eläimistä. Entsyymiseoksia voidaan saada näistä eläimistä hyvällä saaliilla ja yksinkertaisella tavalla. Par-15 haita ja hyödyllisimpiä lähteitä entsyymivalmisteille ovat eläimet, jotka kuuluvat lahkoon Euphausiaceae, esim. Antarktinen krilli (Euphausiaceae superba), Euphausiaceae crystallorophias, ja sukulaislajit sekä muut krillilajit käsittäen lajit Meganyctibhanes norvegica, 20 Tysanoessa inernis sekä muut sukulaislajit.
Tärkeimmät entsyymiaktiivisuudet keksintöä varten näyttävät olevan peräisin eläimien ruuansulatuskanavasta. Eläimistä saatavien erilaisten entsyymiaktiivisuuksien monimutkainen seos on todennäköisesti 25 selitys sille, miksi ainekokoomus aiheuttaa hämmästyttävän nopean biologisten epäpuhtauksien hajoamisen huolimatta niiden alkuperästä. Entsyymit ovat aktiivisia alkaalisessa, neutraalissa ja happamassa väliaineessa, ja niitä voidaan käyttää hyväksi puhdistusainekokoomuk-30 sissa yhdessä erilaisten pinta-aktiivisten aineiden kanssa (tensidit ja emulgaattorit) ja/tai muiden komponenttien kanssa, kuten kantajat ja lisäaineet.
Se tosiasia, että ainekokoomus sisältää entsyy-miseoksen, tekee sen hyödylliseksi epäpuhtauksien pois-35 tossa, jotka sisältävät seoksia aineista, jotka on valittu ryhmästä lipidit, fosfolipidit, biologiset polymeerit kuten proteiinit, peptidit, nukleiinihapot,
II
5 80598 mukopolysakkaridit ja polysakkaridit, sekä tällaisten yhdisteiden hajoamistuotteet. Nämä yhdisteet ovat läsnä märässä, veriruvessa ja kuolleissa kudoksissa.
Keksinnön mukaan erityisen hyviä tuloksia 5 saavutetaan, jos ainekokoomuksessa on entsyymejä, joilla on molekyylipaino 15000 - 80000 Dalton tai tällaisten entsyymien aktiivisia aggregaatteja. Erityisesti entsyymejä, joiden molekyylipaino on noin 20000 - 40000 Dal ton, pidetään parhaimpina. Nämä vaihteluvälit soveltuvat 10 entsyymeille, jotka on saatu homogenisoitujen eläimien vesiuutoksella, so erityisesti uutoksen aikana vesiliukoisessa muodossa oleviin entsyymeihin.
Keksinnön eräs sovellutus koskee uutta aineko-koomusta entsyymipuhdistusta varten ja menetelmää sen 15 valmistamiseksi. Menetelmälle on tunnusomaista se, että lahkon Euphausiaceae eläimestä tai kalasta peräisin oleva entsyymivalmiste sekoitetaan, liuotetaan, sidotaan tai muulla tavoin yhdistetään yhteen tai useampaan veteen liukenemattomaan tai vesiliukoiseen vesipitoiseen 20 tai ei-vettä sisältävään kantajaan, mikäli tarpeen, sopivien lisäaineiden kanssa. Uusi ainekokoomus voi olla ihovoiteen, ihojauheen, pastan, voiteen, sprayn, geelin, linimentin, siteen, öljyn, tabletin, siirapin, rakeisen tuotteen, kapselin jne muodossa.
25 Nykyisin parhaimpana pidetyssä sovellutuksessa valmisteessa käytettävät entsyymit ovat vesiliukoisia ja/tai niiden molekyylipainot ovat yllä mainituissa rajoissa.
Käytettäessä entsyymivalmistetta poistettava 30 tai hajotettava epäpuhtaus saatetaan kosketuksiin keksinnön mukaan valmistetun entsyymikokoomuksen kanssa, joka sisältää tehollisen määrän entsyymejä, esim. pro-teolyyttisesti ja/tai lipolyyttisesti tehollisen määrän entsyymejä, jonka jälkeen ainekokoomus poistetaan maini-35 tusta aineesta yhdessä hajonneiden ja liuenneiden epäpuhtauksien kanssa. Nykyisin parhaana pidetyssä sovellutuksessa käytetään entsyymejä (käsittäen niiden ak- 6 80598 tiiviset aggregaatit), joiden molekyylipaino on noin 15000 - 80000 Dalton, tai tällaisten entsyymien aktiivisia aggregaatteja. Parhaimpina pidetään erityisesti entsyymejä, joiden molekyylipainot ovat noin 20000-5 40000 Dalton. Hyvin suuria etuja saavutetaan kuolleiden aineiden, kuten märän, verirupien ja kuolleen kudoksen sekä fibriinin tai koaguloituneen veren poistossa. Tämä pätee erityisesti silloin, kun aineet poistetaan elävästä kudoksesta.
10 Ajanjakso, joka tarvitaan hajottamaan ja/tai liuottamaan epäpuhtaudet, vaihtelee tapauksesta toiseen, mutta se on valittava riittävän pitkäksi mahdollistamaan hajottaminen ja/tai liuottaminen entsyymien vaikutuksesta. Käsittely voidaan myös toistaa, mikäli tarpeen.
15 On mahdollista käyttää ainekokoomuksia, joissa yksi tai useampi näistä entsyymeistä on poistettu sinänsä tunnetuin menetelmin, esim. lisäämällä yhdelle entsyymille spesifistä inhibiittoria tai poistamalla kyseinen entsyymi.
20 Proteolyyttinen aktiivisuus on optimilämpöti- lassa korkea pH-välillä 5-10. pH-optimi on välillä 7 - 9. Lämpötilaväli hyvää proteolyyttistä aktiivisuutta varten on 25 - 70 'C, ja optimilämpötila on välillä 30 - 55 °C. Aktiivisuus säilyy aina lämpötilaan 0 *C asti.
25 Yllä mainittuja lämpötila- ja pH-välejä voidaan kaikkia käyttää keksinnön eri sovellutuksissa, vaikka tietyissä potentiaalisissa sovellutuksissa voidaan käyttää myös muita liikkumavälejä.
Entsyymien valmistus eläimistä toteutetaan 30 tunnetuin menetelmin. Täten tuoreet tai tuoreina pakastetut eläimet homogenisoidaan ja uutetaan esim. vedel-lisellä väliaineella. Saatu uute voidaan lyofilisoida ja varastoida. Uutos voidaan edelleen puhdistaa esim. uuttamalla se lipidiä liuottavalla liuottimena lipidien 35 uuttamiseksi; jos lisäpuhdistus on tarpeen, geeli-, ultra- tai membraanisuodatusta voidaan käyttää. Muut puhdistusvaiheet, jotka ovat potentiaalisesti hyödyl-
II
7 80598 lisiä, ovat ionivaihto ja affiniteettikromatografia. Uuttaminen ja homogenisointi pitäisi toteuttaa kylmässä alle tai lähellä +5 eC.
Vesiuutoksella saatavia entsyymivalmisteita 5 voidaan käyttää suoraan, tai mikäli tarpeen, lisäpuhdis-tuksen jälkeen. Useimmissa tapauksissa on edullista lyofilisoida valmiste, josta lipidit on uutettu. Tällaisissa tapauksissa saatava jauhe voidaan varastoida pitkäksi aikaa. Jokainen käyttöalue edellyttää tiettyjä 10 ainekokoomuksia tai näiden muotoja. Tällaiset muodot ovat sinänsä tunnettuja. Täten keksintö koskee erilaisissa fysikaalisissa muodoissa olevia entsyymikokoomuk-sia, kuten nyofilisoituja entsyymejä, homogeenisia vedellisiä liuoksia tai yllä mainittuja ja uusina esi-15 tettyjä entsyymikokoomuksia. Kussakin ainekokoomuksessa olevien entsyymien tarkka määrä vaihtelee tapauksesta toiseen - puhtaasta lyofilisoidusta uutoksesta hyvin monimutkaisiin pesuainekokoomuksiin. Entsyymimäärän pitäisi olla riittävä hajottamaan ja/tai liuottamaan 20 aiotut saasteet aiheuttamatta tarpeettomia vastakkais-vaikutuksia aineeseen, josta epäpuhtaudet on tarkoitus poistaa. Muut komponentit uudessa puhdistusainekokoomuk-sessa pitäisi valita niin, että ne eivät vaikuta siihen vastakkaisesti olosuhteissa, joissa sitä käytetään.
25 Lopullisessa ainekokoomuksessa läsnäolevan entsyymivalmisteen määrä voi vaihdella välillä 0,0001-100 p-%. Proteaasiaktiivisuuden suhteen lopullinen ainekokoomus voi sisältää 0,0001 - 0,1 entsyymiyksik- köä/mg. Riippuen käytettävän entsyymivalmisteen puh-30 taudesta, myös muita pitoisuusrajoja voidaan soveltaa. Yllä mainitut entsyymiyksiköt on annettu μ-mooleina tyrosiiniekvivalenttia/min kaseiinisubstraattina.
Keksinnön mukaan valmistettavien entsyymikökoo-muksien yhteydessä voidaan käyttää erilaisia lisäaineita 35 ja kantajia. Sopivia kantajia voivat olla steriilit, vedelliset ja fysiologisesti hyväksyttävät suolaliuokset, orgaaniset ja epäorgaaniset geeliä muodostavat 8 80598
aineet, esim. polymeerit, silikoniöljyt ja muut aineet ja näiden seokset, jotka aiheuttavat ainekokoomuksen halutut fysikaaliset ominaisuudet. Lisäaineiden joukossa voidaan mainita antimikrobiset aineet, hajusteet, eri-5 laiset anioniset, kationiset, amfoteeriset ioniset ja neutraalit pinta-aktiiviset aineet (tensidit ja emul-gaattorit). Tällaiset komponentit ovat jo sinänsä tunnettuja muiden entsyymikokoomuksien yhteydestä pesula-käyttöä ja entsymaattista hajotusta varten, tunnetaan 10 esim. julkaisuista DE 2 130 833, GB 1 280 497, GB
1 29 6901, GB 1 573 964, US 3 627 688, US 3 855 142, US
4 212 761, US 4 243 546, US 4 242 219, US 4 287 082, US
4 305 837 ja US 4 307 081.
Vahingoittuneiden kudoksien käsittelemiseksi on 15 edullista käyttää ainekokoomusta, joka sisältää fysiologisesti ja farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan tai ei kantajaa ollenkaan. Tällainen ainekokoomus voi olla steriili. Sterilisointi voidaan toteuttaa esim. steriilillä suodatuksella silloin, kun ainekokoomus on liuos. 20 Steriilit ainekokoomukset voidaan myös muodostaa sekoittamalla steriilejä komponentteja aseptisissa olosuhteissa.
Keksinnön erilaiset sovellutukset ilmenevät tarkemmin selitykseen liitetyistä patenttivaatimuksista. 25 Alla keksintöä havainnollistetaan erilaisilla ei-rajoit-tavilla esimerkeillä.
Esimerkki 1 A. Krilliuutoksen valmistus
Krilli, Euphausia superba, pyydystetty Antark-30 tiksen kesän aikana ja jäädytetty välittömästi sekä varastoitu noin 2 vuotta lämpötilassa noin -80 °C, tuodaan huoneeseen, lämpötila noin +5 'C. Kun krilli on melkein sulanut, 25 g krilli sekoitetaan 50 ml ionivaih-detun veden kanssa, jonka lämpötila on 0 °C. Seos homo-35 genisoidaan ja sentrifugoidaan sitten kylmässä (noin 0 •C) noin puolen tunnin ajan, 12500 g. Punainen pinnalla oleva neste dekantoidaan ja otetaan talteen, pohjalle n 9 80598 laskeutunut jäännös suspendoidaan uudelleen 50 ml ioni-vaihdettuun veteen ja sentrifugoidaan kuten yllä. Uusi pinnalla oleva neste dekantoidaan ja yhdistetään ensimmäisestä uutoksesta saatuun pinnalla olevaan nesteeseen.
5 Lipidien poistamiseksi uutoksesta 20 ml CC1* lisätään yhdistettyyn pinnalla olevaan nesteeseen ja homogenisoidaan kylmässä (0 °C). Seos sentrifugoidaan kylmässä 10 min ajan, 2500 g. Vesifaasi poistetaan ja uutetaan vielä kerran eduilla ja sentrifugoidaan, kuten 10 on kuvattu yllä. Vesifaasi käytetään kohdan IB mukaisesti, jossa sitä on nimitetty vesiuutokseksi.
B. Jatkopuhdistus qeelikromatografiällä 20 ml kohdasta A saatua vesiuutosta johdetaan kromatografiin, SephadexR-G-l00 (dekstraani liittynyt 15 ristisidoksilla epikloorihydriniin, Pharmacia Fine Chemical AB, Uppsala, Ruotsi) kolonnissa, halkaisija
3,1 cm ja korkeus 69 cm. Kolonni saatetaan tasapainoon ja eluoidaan (30 ml/h) puskurilla Tris-HCl (0,05 M, pH
7,5) lämpötilassa +5 °C. Fraktiot kerätään talteen.
20 Eluointiprofiilia tarkkaillaan spektrofotometrisesti mittaamalla UV-adsorptio aallonpituudella 280 nm ja proteolyyttinen aktiivisuus fraktioista määrätään erikseen. Entsymaattisesti aktiiviset fraktiot yhdistetään ja dialysoidaan ionivaihdettua vettä vasten. Lopuksi 25 yhdistetyt fraktiot lyofilisoidaan ja käytetään keksinnön mukaan.
Proteolyyttinen aktiivisuus fraktioissa ja lyofilisoidussa valmisteessa määrätään käyttäen hemoglobiinia ja/tai kaseiinia substraatteina (Rick, W.I.; 30 Methods of Enzymatic Analysis; Ed Bergmeyer, H.U.; Voi 2, s. 1013 - 23 (1974); Academic Press, New York).
Suoritettaessa geelikromatografia entsyymiaktiivisuus havaitaan pääasiassa fraktioissa vastaten molekyylipai-noja 20000 - 40000 Dalton.
35 Esimerkki 2
Villakuoreuutoksen valmistus
Villakuore (Mallotus villosus), pyydystetty ίο 80 598
Finnmarkin (Norja) rannikon ulkopuolella syyskuussa, pakastettiin ja varastoitiin lämpötilassa -20 *C vuoden ajan. Pakastettu villakuore pantiin sitten lämpötilaan 5 eC. 24 h kuluttua sisälmykset käsittäen ruuansulatus-5 kanavan poistettiin osittain sulaneesta villakuoreesta. 25 g sisälmyksiä sekoitettiin 50 ml ionivaihdetun veden kanssa ja homogenisoitiin lämpötilassa 0 *C. Seos sent-rifugoitiin sen jälkeen puolen tunnin ajan, 12500 g. Osittain sakkainen pinnalla oleva neste dekantoitiin ja 10 otettiin talteen. Pohjalle painunut kerros suspendoitiin uudelleen 50 ml ionivaihdettuun veteen ja sentrifugoi-tiin kuten yllä. Uusi pinnalla oleva neste dekantoitiin ja yhdistettiin ensimmäisestä uutoksesta saatuun pinnalla olevaan nesteeseen.
15 Lipidien poistamiseksi uutoksesta 20 ml CC14 lisättiin yhdistettyyn pinnalla olevaan nesteeseen ja homogenisoitiin kylmässä 0 'C. Seos sentrifugoitiin 15 min ajan kylmässä, 2500 g. Vesifaasi poistettiin ja uutettiin vielä kerran hiilitetrakloridilla ja sentrifu-20 goitiin, kuten on kuvattu yllä. Vesifaasi lyofilisoitiin lopuksi.
Esimerkki 3
Ainekokoomukset sisältäen entsyymejä Mallotus villosus'sta 25 A. 10 mg villakuoreesta (esimerkin 2 mukaises ti) lyofilisoitua entsyymivalmistetta sekoitettiin 0,4 mg kalsiumasetaatin kanssa ja amylum resorb.(tärk.) lisättiin 1 g asti (BiosorbR; Arbrook, Kirkton Campus, Livingston, Skotlanti).
30 Homogeeninen saatu jauhe sekoitettiin 10 g fysiologisen natriumkloridiliuoksen (salive) kanssa käytettäväksi kosteisiin siteisiin.
B. 10 mg lyofilisoitua villakuorevalmistetta (esimerkistä 2) sekoitetaan polyetyleeniglykoligeelin 35 kanssa (sisältäen yhtä suuret osat Macrogol 600 ja Macrogol 800, Hoechst, Länsi-Saksan Liittotasavalta) 1 g saakka. Saadaan A 1 % entsyymikokoomusta, jolla on 11 11 80598 puolikiinteä, homogeeninen konsistenssi.
Esimerkki 4
Ainekokoomus sisältäen krillientsvvmelä liuoksessa 5 10 mg lyofilisoitua entsyymivalmistetta (esi merkistä 1 B) sekoitetaan 0,4 mg kalsiumasetaatin kanssa ja amylum resorb. lisätään 1 g saakka. Näin saatu homogeeninen jauhe sekoitetaan ravistamalla 10 g suolaliuoksen kanssa ja saatu ainekokoomus käytetään steriilin 10 hauteen imeyttämiseksi, jolla on koko 3 x 3 cm ja joka sisältää 4 kerrosta harsokangasta. Kosteata haudetta käytetään kuollutta kudosta sisältävään haavaan. Har-sokangas kääritään kahdesti hauteen ympärille sen kiinnittämiseksi. Tämä side kiinnitetään sitten liimalaas-15 tarilla. Haude imeytetään joka neljäs tunti ainekokoo-muksella. Käytön rajoittamiseksi ainoastaan siihen osaan haudetta, joka peittää haavan, seosta lisätään käyttäen injektioneulaa, jossa on suuri aukko. Kerran päivässä koko side poistetaan ja korvataan uudella siteellä. 20 Tämän operaation aikana hajonneet ja hajaantuneet kuolleet osat on poistettava mekaanisesti. Toteutetussa käsittelyssä haava puhdistui 1 viikon kuluttua.
Esimerkki 5
Krillientsvvmien vaikutus kuolleisiin aineisiin 25 Krillientsyymien vaikutuksen tutkimiseksi ihmisten ihossa oleviin kuolleisiin komponentteihin toteutettiin seuraava koe. Kuollutta kudosta levitettiin kahden ihmisen oikean käden yläpuolen vahingoittumattomalle iholle. Kuollut kudos oli peräisin jalan haavas-30 ta. Aine muodostui hajonneesta kollageenikudoksesta, koaguloituneesta verestä, fibriinistä, märästä ja ruvis-ta. Kuhunkin ihmiseen annosteltu määrä oli 0,5 g.
Kuollut kudos peitettiin kussakin ihmisessä hauteella (pinta-ala 10 cma), mikä oli imeytetty esimer-35 kin 4 mukaan valmistetulla krillientsyymikokoomuksella. Jokainen haude peitettiin harsokankaalla. Neljän tunnin jälkeen molemmat hauteet olivat lähes täysin kuivia, ja 12 80598 sen vuoksi täytyi lisätä lisää entsyymikokoomusta. 12 tunnin kuluttua haude poistettiin ja kumpaankin käteen jäänyt kuollut kudos punnittiin erillisesti. Aine osoitti hajoamisen merkkejä, ja niiden paino oli vähentynyt 5 noin 20 %. Iho, joka oli kosketuksissa kuolioisen aineen kanssa kokeen aikana, oli vahingoittumaton. Mitään negatiivista symptomia ei todettu koehenkilöissä.
Esimerkki 6
In vivo koe pienen kuoliohaavan omaavalla 10 henkilöllä A
Henkilö, jolla oli pieni kuolioista ainetta sisältävä mätähaava oikeassa etusormessaan, käsitteli itsensä 5 päivän ajanjakson ajan päivittäin käyttäen l % krillientsyymiliuosta (valmistettu esimerkin 4 mu-15 kaan). Vahingoittunut alue kesti entsyymikokoonpanon hyvin ja osoitti merkittävää pyrkimystä puhdistua ja kasvaa epiteeliä. Mitään vastakkaisia vaikutuksia ei havaittu.
Esimerkki 7 20 Puhdistusvaikutus lipidirikkaassa talivuotoi sessa ihossa krillientsvvmien vaikutuksesta yhdistettynä amfoteeriseen tensidiin Käytettiin tavanomaista pesuainetta sisältäen 18,00 p-% alkyyli-imidatsolinia, 1,90 p-% lauryylipoly-25 peptidin kondensaattia, 1,7 p-% undekylenyylipolypep- tidin kondensaattia, 28,00 p-% muunneltua alkyylieet-terisulfaattia puskuroituna rasva-aineilla (lanoliini), 1,4 p-% kookospähkinäamiinisarkosinaattia, 1,9 p-% undekyleenihappoa, 2,00 p-% undekyleenimonoetanoliamidin 30 sulfosuggenaattia, maitohappoa q.s. pH 6,4 ja vettä loput 100 % saakka.
Lyofilisoitua krillientsyymivalmistetta (esimerkistä 1 B) lisättiin pesuaineeseen antaen 1 p-% entsyymi-pesuainekokoomuksen. 10 cma ala ihosta alueella 35 regio sternalis kahdessa ihmisessä, joilla oli ilmeinen seborrhoea oleosa tällä alueella, valittiin kokeeseen. Nämä alueet pestiin kahdesti päivässä 5 päivän ajan il n 80598 entsyymi-pesuainekokoomuksella. Näytteet samasta alueesta otettiin sekä ennen pesua että pesun jälkeen. Näytteet kerättiin ja analysoitiin fotometrisesti Schaeffer H. ja Kuhn-Bussius H. mukaan (Arch. Klin. u. exper. Der-5 matoi. 238 (1970) S. 429).
Tulos osoitti merkittävää ihottuman vähenemistä kummallakin kahdesta tutkitusta henkilöstä. Täten tämä indikoi ihon lipidin hajoamista käytetyn entsyymikokoo-muksen vaikutuksesta. Suhteellisesti hyvin pieni vaiku-10 tus havaittiin silloin, kun mainitut kaksi henkilöä käyttivät vain pesuainetta ilman entsyymejä.
Esimerkki 8
Vertailevat pesukokeet tekstiilillä. A ver tailu E. superba’n (krilli) entsyymin, aika lase'n R ia 15 tislatun veden kesken
Homogeenisestä kangaspalasta leikattiin samanlaiset kappaleet (5x5 cm). Kangas oli kaksinkertaista ja toinen puoli oli silkkiä ja toinen puoli kuitukudosta koostuen puuvillan ja synteettisten kuitujen seoksesta. 20 Kuusi palaa tahrattiin verellä, kuusi maidolla ja kuusi indian-musteella. Kuuteen erlenmeyer-pulloon lisättiin 100 ml lyofilisoidun krillientsyyrain vesiliuosta (0,5 p/til.-%). Lyofilisoitu krillientsyymi oli saatu esimerkistä 1 B. Kuuteen muuhun erlenmeyer-pulloon lisättiin 25 100 ml 0,5 p/til.-% AlcalaseR-liuosta (Novo Industri, Kööpenhamina, Tanska) tislatussa vedessä. 100 ml tislattua vettä lisättiin 6 muuhun erlenmeyer-pulloon. Jokaiseen kahdesta pullosta sisältäen krillientsyymiliuosta, jokaiseen kahdesta pullosta sisältäen AlcalaseR-liuosta 30 ja jokaiseen kahdesta pullosta sisältäen tislattua vettä lisättiin 1 veren tahraama kangaskappale. Analogisesti muut tahratut kappaleet lisättiin jäljellä oleviin pulloihin niin, että vain yksi kappale oli kussakin pullossa. Täten jokaisen ainekokoomuksista annettiin vaikuttaa 35 kahteen verellä, maidolla ja indian-musteella tahrattuun kankaaseen. Tämän jälkeen pulloja sekoitettiin ravistellen vesikylvyssä 1 tunnin ajan lämpötilassa +45 °c.
14 80598 Tämän käsittelyn jälkeen pesuneste dekantoitiin ja 100 ml tislattua vettä lisättiin kuhunkin pulloon. Sitten pullot suljettiin kumitulpalla ja sekoitettiin voimakkaasti yhden minuutin ajan. Tämän jälkeen kangaspalat 5 kerättiin ja pestiin hitaasti virtaavan vesihanan alla 10 minuuttia. Kappaleet käärittiin puhtaisiin valkeisiin pyyheliinoihin ja niiden annettiin kuivua.
Pesun vaikutus so. vaatteiden kirkkaus määrättiin sitten kaksoissokkotestillä, so. tutkija ei tiennyt 10 sitä, millä pesuainekokoomuksella kukin kappale oli käsitelty. Pesuvaikutus, so kankaan kirkkaus ja puhtaus arvioitiin silmämäärin käyttäen arvosteluasteikkoa: 0 = täysin puhdas kangas; 1 = merkityksettömiä määriä likaa jäljellä; 2 = kohtuullinen määrä likaa jäljellä; 3 = 15 huomattavia määriä likaa jäljellä. Tulokset pesuista on esitetty taulukossa 1.
Taulukko 1 0,5 p/til.-% krillientsyymin; 0,5 p/til.-% 20 AlcalaseR,n tislatussa vedessä; ja tislatun veden ilman entsyymilisäystä pesuvaikutus.
0,5 % krilli- 0,5 % Alcala- Tisl.
entsyymi, seR tisl. vesi 25 tisl. vesi vesi
Epäpuht. Kangas Kangas Kangas Kangas Kangas Kangas _1_2_1_2_1_2_
Veri 1 1 2 2 2 3 30 Maito 1 1 2 1 2 2
Indian- muste 2 2 2 2 3 3
Taulukosta 1 voidaan nähdä, että krillistä 35 saatava entsyymikokoomus on tehokkaampaa kuin Alcalase** tai tislattu vesi. Vastaavia kokeita voidaan suorittaa analogisella ainekokoomuksella sisältäen villakuore-
II
is 80598
Esimerkki 9
Fibrlinln. kuolleen kudoksen ia koaguloituneen veren hajoaminen A. Fibriini 5 Fibriini leikeltiin palasiksi, jotka vaihteli- vat painoltaan 0,2 - 0,3, g. Kutakin käytettyä entsyymi-kokoomusta varten numeroitiin 20 koeputkea ja jokaiseen näistä pantiin etukäteen punnittu pala fibriiniä. Kahteenkymmeneen koeputkeen, sisältäen vast, jokaisen 10 ainekokoomuksen, lisättiin yhtä suuret määrät entsyymi-kokoomusta. VaridaseR*a käytettiin laimennuksessa 1:20 (p/til.-%) perustuen kaupalliseen valmisteeseen) tislatussa vedessä. TrypureR,a käytettiin konsentraatiossa 1:15 (p/til.-% perustuen kaupalliseen valmisteeseen) 15 suolaliuoksessa. Muiden entsyymien valmisteita käytettiin laimennettuina suolaliuokseen ja näin saadut aine-kokoomuksen konsentraatiot on esitetty taulukossa 2. Käytetyt krillientsyymit ja villakuore-entsyymit olivat lyofilisoituja tuotteita, jotka oli saatu esimerkkien 1 20 B ja vast. 2 mukaan. Tutkimus suoritettiin lämpötilassa +33 “C, joka oli sama kuin haavojen lämpötila. 12 h ja vast. 24 h jälkeen reaktiot pysäytettiin ja jäljellä oleva fibriini kerättiin ja säilytettiin kostealla suodatinpaperilla 60 s sekä punnittiin. Papain, Ficin 25 ja Pankreatin saatiin E. Merck*lta, Darmstadt, Saksan Liittotasavalta.
Taulukko 2
Erilaisten entsyymivalmisteiden vaikutus fib-30 riinin, konsentraatiot on annettu p/til.-%.
tarkoittaa o - 25 % painohäviö tarkoittaa 26 - 50 % painohäviö --- tarkoittaa 51 - 75 % painohäviö ---- tarkoittaa 76 - 100 % painohäviö 35 ie 80598
Luenta kuluttua
Entsyymi 12 h 24h
Trypure» ---- ei mitään jäljellä
5 VaridaseR
Ficin 1 % -
Papain l %
PankreatinR l % --- ---
Krillientsyymit l % ---- ei mitään 10 jäljellä
Villakuore- entsyymit 1 % ---- ei mitään jäljellä
Fibriini liukeni lyhyimmässä ajassa ainekokoo-15 mukseen, joka sisälsi krillientsyymejä, villakuore-entsyymejä ja TrypureR,a annetussa järjestyksessä. VaridaseR ja AlcalaseR olivat samanlaisia kuin Ficin, ja Papain'lla oli heikoin vaikutus.
B. Kuolleen kudoksen hajotus 20 Kuoliokudokset leikeltiin palasiksi 0,2 ”0,3 g. Kutakin käytettyä entsyymikokoomusta varten numeroitiin 20 koeputkea, ja jokaiseen näistä koeputkista pantiin etukäteen punnittu määrä kuollutta kudosta. Kuhunkin 20 koeputkeen lisättiin kutakin liuosta ja 25 yhtä suuret määrät kutakin entsyymikokoomusta. Käytetyt ainekokoomukset on annettu taulukossa 3, ja niiden konsentraatiot on annettu p/til.-% suolaliuoksessa. VaridaseR ja TrypureR laimennettiin esimerkin 8 A mukaisesti. 12, 24, 36 ja 72 h aikavälien jälkeen hajotus 30 pysäytettiin ja kuolleet kudokset kerättiin sekä punnittiin; tulokset taulukossa 3.
Ilmeisesti AlcalaseR, krillientsyymit ja villakuore-entsyymit ovat todella kykeneviä liuottamaan kuolleita kudoksia eivätkä lisää niiden vesipitoisuutta 35 kuten VaridaseR, TrypureR ja suolaliuos. Kuitenkin, tarkasteltaessa niiden vaikutusta kuoliokudoksiin, PapainR ja PankreatinR osoittavat samat tendenssit kuin
II
17 80 598 markkinoilla olevat ainekokoomukset, so painon lisäys seurauksena vesipitoisuuden lisäyksestä. Ficin'lla on samanlainen vaikutus mutta heikompi kuin AlcalaseRI11a, krillientsyymeillä ja villakuore-entsyymeillä.
5 C. Koaguloituneen veren hajoaminen
Koaguloitunutta verta leikeltiin palasiksi ja annosteltiin koeputkiin, jotka järjestettiin samoin kuin esimerkissä 9A ja B. Käytetyt entsyymivalmisteet oli liuotettu suolaliuokseen, ja ainekokoomuksien kon-10 sentraatiot (p/til.-%) on esitetty taulukossa 4. Aikavälien 12 ja vast. 24 h kuluttua hajotus pysäytettiin, ja verisaostumat kerättiin sekä punnittiin. Tulokset on esitetty taulukossa 4.
Taulukko 3 15 Eri entsyymikokoomuksien vaikutus kuollee seen kudokseen, konsentraatiot on esitetty p/til.-%.
---- painohäviö 76 - 100 % --- painohäviö 51 - 75 % painohäviö 26 - 50 % 20 - painohäviö 1 - 25 % 0 status quo 0 % + painolisäys 1 - 25 % ++ painolisäys 26 - 50 % +++ painolisäys 51 - 75 % 25 ++++ painolisäys 76 - 100 %
Entsyymi- Luenta kokoomus konsent. 12 h 24 h 36 h 72 h
Varidase* l:20(p/til.) +++ +++ 30 TrypureR l:15(p/til.) ++ ++
Ficin 0,5 % 0 0 0 1,0 % + 0 — --- 2,0 % +
Papain 0,5 % 0 + + 35 1,0 % 0 + + 2,0 % + + + +
AlcalaseR 0,5 % 0 - 0 ie 80598 1,0 % -- 2,0 % ----
Krillient-syymit 0,5 % 5 1,0 % — --- --- --- 2,0 % - --- ---- ----
Villakuore- entsyymit 0,5 % — — --- 2,0 % - — — --- 10 Pankreatin** 0,5 % o ++ ++ ++ 1,0 % + +++ +++ +++ 2,0 % ++ ++++ +++ +++
Taulukko 4 15 Eri entsyymikokoomuksien vaikutus koagulon tuneeseen vereen.
painohäviö 0 - 25 % painohäviö 26 - 50 % --- painohäviö 51 - 75 % 20 ---- painohäviö 76 - 100 %
Entsyymikokoomus Luenta jälkeen konsent. 12 h 25h
VaridaseR 1:20 (p/til.) 25 Saliini 0,9 % -
Ficin 1,0 %
Papain 1,0 %
Alcalase** 1 % -
Pankreatin1* 1,0 % 30 Krillient- syymit 1,0 % ----
Villakuore- entsyymit 1,0 % --- 35 Taulukosta 4 nähdään, että koaguloituneen veren osalta krillientsyymit olivat ylivoimaisia vil-lakuore-entsyymeihin nähden, jotka molemmat osoittivat
II
19 80598 entsyymeihin nähden, jotka molemmat osoittivat ylivoimaista vaikutusta muihin tutkittuihin entsyymikokoomuk-siin nähden.
Esimerkki 10 5 Tutkimukset eri entsvvmlkokoomuksien vaikutuk sesta terveeseen ihoon
Erilaisia entsyymien Ficin, Papain, Alcalase” ja Pankreatin* sekä krillientsyymien ja villakuore-entsyymien liuoksien - kaikki konsentraatiossa 1 p/til.-10 % - levitettiin (0,3 ml) kahden koehenkilön terveelle iholle ja peitettiin ohuella siteellä. Mitään merkkiä tulehduksesta ei havaittu iholla 12 h jälkeen. Sama havainto tehtiin käytettäessä entsyymejä VaridaseR ja TrypureR. Täten entsyymit eivät ilmeisesti vaikuta 15 kuolleisiin kudoksiin kokeissa käytetyissä konsentraa-tioissa.
20
Claims (7)
1. Menetelmä entsyymivalmisteen valmistamiseksi, jolla on kyky liuottaa biologisia epäpuhtauksia, 5 erityisesti peptidejä ja lipidejä sisältäviä epäpuhtauksia, tunnettu siitä, että lahkoon Euphausiaceae kuuluvia eläimiä homogenisoidaan ja homogenaatista erotetaan ekstrahoimalla liuotinaineen avulla entsyymi-valmiste, joka sisältää entsyymiseoksen, jossa on endo- 10 ja eksopeptidaaseja.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että homogenaatista erotetaan lipidejä.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen mene- 15 telmä, tunnettu siitä, että entsyymivalmiste sterilisoidaan.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ekstraktio suoritetaan vedellä tai vesipitoisella liuotinaineella.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että entsyymivalmis-teesta poistetaan lipidejä ja se lyofilisoidaan.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että menetelmässä 25 erotetaan entsyymejä, joiden molekyylipaino on 15.000- 80.000 Dalton tai jotka ovat tällaisten entsyymien aktiivisia agregaatteja.
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että eristettyyn 30 entsyymiseokseen kuuluu entsyymejä, jotka ovat kykeneviä liuottamaan ja poistamaan epäpuhtauksia, jotka kuuluvat aineryhmään: fosfolipidit, proteiinit, peptidit, nuk- leinihapot, polysakkaridit, mukopolysakkaridit ja näiden hajoamistuotteet. Il 2i 8 0 5 98
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8206022 | 1982-10-25 | ||
| SE8206022A SE8206022D0 (sv) | 1982-10-25 | 1982-10-25 | Nedbrytning av nekrotisk vevnad, fibrin, pus, purulent exudat, blodkoagler medelst enzymer fran fisk (lodde), skaldjur (krill), vexter (papain,ficin) samt alcalase och pancreatin |
| SE8302268 | 1983-04-22 | ||
| SE8302268A SE8302268L (sv) | 1983-04-22 | 1983-04-22 | Ny kombination av proteolytiska och lipolytiska enzymer lemplig som tvettkomposition |
| PCT/SE1983/000359 WO1984001715A1 (en) | 1982-10-25 | 1983-10-24 | Enzyme composition for therapeutical and/or non-therapeutical cleaning, the use thereof and preparation of the composition |
| SE8300359 | 1983-10-24 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI842555A0 FI842555A0 (fi) | 1984-06-25 |
| FI842555A FI842555A (fi) | 1984-06-25 |
| FI80598B FI80598B (fi) | 1990-03-30 |
| FI80598C true FI80598C (fi) | 1990-07-10 |
Family
ID=26658270
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI842555A FI80598C (fi) | 1982-10-25 | 1984-06-25 | Foerfarande foer framstaellning av en enzymberedning. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4963491A (fi) |
| EP (1) | EP0107634B1 (fi) |
| JP (2) | JPS59501908A (fi) |
| AU (1) | AU573730B2 (fi) |
| CA (1) | CA1220740A (fi) |
| DE (1) | DE3379589D1 (fi) |
| DK (1) | DK166566B1 (fi) |
| FI (1) | FI80598C (fi) |
| WO (1) | WO1984001715A1 (fi) |
Families Citing this family (102)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE454566B (sv) * | 1984-04-24 | 1988-05-16 | Lars G I Hellgren | Farmaceutisk komposition innehallande en verksam mengd av vattenlosliga proteinaser som extraherats fran ett vattenlevande djur valt av ordningen euphausiaceae eller slektet mallotus |
| JPS6130527A (ja) * | 1984-07-20 | 1986-02-12 | Kao Corp | 血栓溶解剤 |
| SE8703064D0 (sv) * | 1987-08-06 | 1987-08-06 | Viggo Mohr | Method for isolating active enzyme preparations from animal tissues |
| SE8801701D0 (sv) * | 1988-05-05 | 1988-05-05 | Pharmacia Ab | Production technology based on enzymic method |
| NO164844C (no) * | 1988-10-24 | 1990-11-21 | Norsk Hydro As | Fremgangsmaate ved utvinning av enzymer fra krepsdyr. |
| US5238843A (en) * | 1989-10-27 | 1993-08-24 | Genencor International, Inc. | Method for cleaning a surface on which is bound a glycoside-containing substance |
| US5258304A (en) * | 1989-10-27 | 1993-11-02 | Genencor International, Inc. | Method of removing microorganisms from surfaces with Type II endoglycosidase |
| GB2248858B (en) * | 1990-10-17 | 1994-04-27 | Metra Oy Ab | Vacuum toilet system with treated rinse liquid |
| CA2112123A1 (en) * | 1991-06-24 | 1993-01-07 | Bill H. Mcanalley | Wound cleanser |
| US5945102A (en) * | 1994-11-22 | 1999-08-31 | Phairson Medical Inc. | Crustacean and fish derived multifunctional enzyme |
| US6030612A (en) * | 1994-11-22 | 2000-02-29 | Phairson Medical Inc. | Antimicrobial uses of multifunctional enzyme |
| SE9201628D0 (sv) * | 1992-05-22 | 1992-05-22 | Phairson Medical Ab | Pharmaceutical composition |
| US5958406A (en) * | 1994-11-22 | 1999-09-28 | Phairson Medical Inc. | Acne treatment with multifunctional enzyme |
| US20060134641A1 (en) * | 1992-05-22 | 2006-06-22 | Franklin Richard L | Treating viral infections with krill enzymes |
| US7947270B2 (en) * | 1992-05-22 | 2011-05-24 | Arcimboldo Ab | Removing dental plaque with krill enzymes |
| JPH0776700A (ja) * | 1993-07-14 | 1995-03-20 | Senju Pharmaceut Co Ltd | コンタクトレンズ用剤の安定化方法 |
| SE9303899D0 (sv) * | 1993-11-22 | 1993-11-22 | Phairson Medical Inc | Läkemedel |
| EP0759764A1 (en) * | 1994-06-07 | 1997-03-05 | Kristian Hellgren | Composition for dental use comprising krill enzyme |
| US6232088B1 (en) | 1995-02-08 | 2001-05-15 | Phairson Medical, Inc. | Treatment and prevention of immune rejection reactions |
| US6040155A (en) * | 1996-08-28 | 2000-03-21 | Kay; John | Multifunctional protein and DNA sequence encoding same |
| US6001067A (en) | 1997-03-04 | 1999-12-14 | Shults; Mark C. | Device and method for determining analyte levels |
| US7192450B2 (en) | 2003-05-21 | 2007-03-20 | Dexcom, Inc. | Porous membranes for use with implantable devices |
| US7885697B2 (en) | 2004-07-13 | 2011-02-08 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| US20050033132A1 (en) | 1997-03-04 | 2005-02-10 | Shults Mark C. | Analyte measuring device |
| US8346337B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-01-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8480580B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-07-09 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8688188B2 (en) | 1998-04-30 | 2014-04-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US9066695B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-06-30 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8974386B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-03-10 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6175752B1 (en) | 1998-04-30 | 2001-01-16 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8465425B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-06-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6949816B2 (en) | 2003-04-21 | 2005-09-27 | Motorola, Inc. | Semiconductor component having first surface area for electrically coupling to a semiconductor chip and second surface area for electrically coupling to a substrate, and method of manufacturing same |
| CA2251265A1 (en) * | 1998-10-21 | 2000-04-21 | Universite De Sherbrooke | Process for lipid extraction of aquatic animal tissues producing a dehydrated residue |
| WO2002000908A2 (en) * | 2000-09-25 | 2002-01-03 | Novozymes A/S | Methods for processing crustacean material |
| US6548556B2 (en) | 2000-12-27 | 2003-04-15 | Healthpoint, Ltd. | Stable enzymatic wound debrider |
| US6560471B1 (en) | 2001-01-02 | 2003-05-06 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US20030032874A1 (en) | 2001-07-27 | 2003-02-13 | Dexcom, Inc. | Sensor head for use with implantable devices |
| US6702857B2 (en) | 2001-07-27 | 2004-03-09 | Dexcom, Inc. | Membrane for use with implantable devices |
| DE60220415T2 (de) | 2001-07-27 | 2008-02-14 | Neptune Technologies & Bioressources Inc., Laval | Flavonoide und mehrfach ungesättigte fettsäuren enthaltende natürliche phospholipide maritimen ursprungs sowie deren anwendungen |
| US9282925B2 (en) | 2002-02-12 | 2016-03-15 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for replacing signal artifacts in a glucose sensor data stream |
| US8364229B2 (en) | 2003-07-25 | 2013-01-29 | Dexcom, Inc. | Analyte sensors having a signal-to-noise ratio substantially unaffected by non-constant noise |
| US7613491B2 (en) | 2002-05-22 | 2009-11-03 | Dexcom, Inc. | Silicone based membranes for use in implantable glucose sensors |
| US8260393B2 (en) | 2003-07-25 | 2012-09-04 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for replacing signal data artifacts in a glucose sensor data stream |
| US8010174B2 (en) | 2003-08-22 | 2011-08-30 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for replacing signal artifacts in a glucose sensor data stream |
| US7223386B2 (en) * | 2002-03-11 | 2007-05-29 | Dow Corning Corporation | Preparations for topical skin use and treatment |
| US7226978B2 (en) | 2002-05-22 | 2007-06-05 | Dexcom, Inc. | Techniques to improve polyurethane membranes for implantable glucose sensors |
| WO2004056985A2 (ja) * | 2002-12-19 | 2004-07-08 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | オキアミ粗酵素液の製法、その粗酵素液とその凍結品、およびそれらを用いた飼料 |
| US7134999B2 (en) | 2003-04-04 | 2006-11-14 | Dexcom, Inc. | Optimized sensor geometry for an implantable glucose sensor |
| US7875293B2 (en) | 2003-05-21 | 2011-01-25 | Dexcom, Inc. | Biointerface membranes incorporating bioactive agents |
| US8423113B2 (en) | 2003-07-25 | 2013-04-16 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
| US8282549B2 (en) | 2003-12-09 | 2012-10-09 | Dexcom, Inc. | Signal processing for continuous analyte sensor |
| US9763609B2 (en) | 2003-07-25 | 2017-09-19 | Dexcom, Inc. | Analyte sensors having a signal-to-noise ratio substantially unaffected by non-constant noise |
| US8761856B2 (en) | 2003-08-01 | 2014-06-24 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
| US8160669B2 (en) | 2003-08-01 | 2012-04-17 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| US9135402B2 (en) | 2007-12-17 | 2015-09-15 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
| US8275437B2 (en) | 2003-08-01 | 2012-09-25 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| US7959569B2 (en) | 2003-08-01 | 2011-06-14 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
| US20080119703A1 (en) | 2006-10-04 | 2008-05-22 | Mark Brister | Analyte sensor |
| US20190357827A1 (en) | 2003-08-01 | 2019-11-28 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
| US8060173B2 (en) | 2003-08-01 | 2011-11-15 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
| US7774145B2 (en) | 2003-08-01 | 2010-08-10 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| US8788006B2 (en) | 2003-08-01 | 2014-07-22 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data |
| US7591801B2 (en) | 2004-02-26 | 2009-09-22 | Dexcom, Inc. | Integrated delivery device for continuous glucose sensor |
| US8369919B2 (en) | 2003-08-01 | 2013-02-05 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
| US7920906B2 (en) | 2005-03-10 | 2011-04-05 | Dexcom, Inc. | System and methods for processing analyte sensor data for sensor calibration |
| US20140121989A1 (en) | 2003-08-22 | 2014-05-01 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing analyte sensor data |
| US9247900B2 (en) | 2004-07-13 | 2016-02-02 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
| WO2005051170A2 (en) | 2003-11-19 | 2005-06-09 | Dexcom, Inc. | Integrated receiver for continuous analyte sensor |
| US11633133B2 (en) | 2003-12-05 | 2023-04-25 | Dexcom, Inc. | Dual electrode system for a continuous analyte sensor |
| US8423114B2 (en) | 2006-10-04 | 2013-04-16 | Dexcom, Inc. | Dual electrode system for a continuous analyte sensor |
| US8364231B2 (en) | 2006-10-04 | 2013-01-29 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
| EP1711790B1 (en) | 2003-12-05 | 2010-09-08 | DexCom, Inc. | Calibration techniques for a continuous analyte sensor |
| US8808228B2 (en) | 2004-02-26 | 2014-08-19 | Dexcom, Inc. | Integrated medicament delivery device for use with continuous analyte sensor |
| US8277713B2 (en) | 2004-05-03 | 2012-10-02 | Dexcom, Inc. | Implantable analyte sensor |
| US20070045902A1 (en) | 2004-07-13 | 2007-03-01 | Brauker James H | Analyte sensor |
| US7640048B2 (en) | 2004-07-13 | 2009-12-29 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
| US8452368B2 (en) | 2004-07-13 | 2013-05-28 | Dexcom, Inc. | Transcutaneous analyte sensor |
| US7202074B2 (en) * | 2004-07-22 | 2007-04-10 | University Of Chile | Protein and nucleic acid sequence encoding a KRILL-derived cold adapted trypsin-like activity enzyme |
| US20060182705A1 (en) * | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Cruse Maria K | Composition for reduction and prevention of wrinkles on the skin |
| US8133178B2 (en) | 2006-02-22 | 2012-03-13 | Dexcom, Inc. | Analyte sensor |
| US8744546B2 (en) | 2005-05-05 | 2014-06-03 | Dexcom, Inc. | Cellulosic-based resistance domain for an analyte sensor |
| WO2006110193A2 (en) | 2005-04-08 | 2006-10-19 | Dexcom, Inc. | Cellulosic-based interference domain for an analyte sensor |
| EP1991110B1 (en) | 2006-03-09 | 2018-11-07 | DexCom, Inc. | Systems and methods for processing analyte sensor data |
| US20080071157A1 (en) | 2006-06-07 | 2008-03-20 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Analyte monitoring system and method |
| EP2144625B1 (en) | 2006-12-05 | 2022-02-09 | Marizyme, Inc. | A controlled release enzymatic composition and methods of use |
| US20200037874A1 (en) | 2007-05-18 | 2020-02-06 | Dexcom, Inc. | Analyte sensors having a signal-to-noise ratio substantially unaffected by non-constant noise |
| EP2152350A4 (en) | 2007-06-08 | 2013-03-27 | Dexcom Inc | INTEGRATED MEDICINE DELIVERY DEVICE FOR USE WITH A CONTINUOUS ANALYZING SUBSTANCE SENSOR |
| EP4098177A1 (en) | 2007-10-09 | 2022-12-07 | DexCom, Inc. | Integrated insulin delivery system with continuous glucose sensor |
| US8417312B2 (en) | 2007-10-25 | 2013-04-09 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
| US20100330000A1 (en) * | 2007-11-06 | 2010-12-30 | Kristian Hellgren | Enzymes for treatment of gingivitis |
| US9839395B2 (en) | 2007-12-17 | 2017-12-12 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing sensor data |
| WO2009105709A1 (en) | 2008-02-21 | 2009-08-27 | Dexcom, Inc. | Systems and methods for processing, transmitting and displaying sensor data |
| EP2424435B1 (en) | 2009-04-30 | 2021-06-02 | Dexcom, Inc. | Performance reports associated with continuous sensor data from multiple analysis time periods |
| CN102724913A (zh) | 2009-09-30 | 2012-10-10 | 德克斯康公司 | 经皮分析物传感器 |
| JP5827625B2 (ja) | 2009-10-29 | 2015-12-02 | アカスティ ファーマ インコーポレイテッド | 濃縮治療用リン脂質組成物 |
| JP5637431B2 (ja) * | 2010-08-10 | 2014-12-10 | 独立行政法人国立高等専門学校機構 | オキアミ由来のタンパク質分解酵素の生成方法および当該酵素を用いたタンパク質分解方法 |
| WO2012142502A2 (en) | 2011-04-15 | 2012-10-18 | Dexcom Inc. | Advanced analyte sensor calibration and error detection |
| KR20150002765A (ko) | 2012-04-05 | 2015-01-07 | 아르침볼도 아베 | 생물막의 제거에 사용하기 위한 남극 크릴새우 유래의 효소 혼합물 |
| EP3121272A1 (en) | 2015-07-24 | 2017-01-25 | Zymetech ehf. | Novel fish trypsin isoforms and their use |
| US11943876B2 (en) | 2017-10-24 | 2024-03-26 | Dexcom, Inc. | Pre-connected analyte sensors |
| US11331022B2 (en) | 2017-10-24 | 2022-05-17 | Dexcom, Inc. | Pre-connected analyte sensors |
| EP3720294A1 (en) | 2017-12-04 | 2020-10-14 | Rimfrost Technologies AS | Method for producing a protein phospholipid complex from a crustacean catch |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB284668A (en) * | 1927-02-03 | 1928-11-01 | Alfred Ehrenreich | Method of treatment of the glands of the plagiostomi with a view to obtaining a new description of chemical products |
| GB368888A (en) * | 1930-01-21 | 1932-03-17 | H Th Boehme Ag | Improvements in carrying out fermentation processes |
| GB377128A (en) * | 1931-03-11 | 1932-07-21 | H Th Boehme Ag | A process for the production of ferment preparations |
| US2503313A (en) * | 1947-04-14 | 1950-04-11 | Levin Ezra | Production of dried, defatted enzymatic material |
| FR1015566A (fr) * | 1948-04-15 | 1952-10-15 | Heviferm Lab G M B H | Procédé d'obtention de préparations stables de ferments, sous une quantité dosable, à partir d'intestins de poissons de mer ou d'eau douce et d'autres animaux aquatiques |
| US3003917A (en) * | 1959-01-14 | 1961-10-10 | Nat Drug Co | Wound healing composition |
| US3409719A (en) * | 1967-05-23 | 1968-11-05 | Baxter Laboratories Inc | Debridement agent |
| GB1273545A (en) * | 1968-06-24 | 1972-05-10 | Albright & Wilson | Multi-enzyme cleaning compositions |
| US3697451A (en) * | 1969-01-02 | 1972-10-10 | Witco Chemical Corp | Stable enzyme containing liquid detergent |
| US4307081A (en) * | 1974-01-08 | 1981-12-22 | Gerold K. V. Klein | Enzyme mixture |
-
1983
- 1983-10-24 AU AU22041/83A patent/AU573730B2/en not_active Expired
- 1983-10-24 JP JP58503493A patent/JPS59501908A/ja active Granted
- 1983-10-24 EP EP83850279A patent/EP0107634B1/en not_active Expired
- 1983-10-24 WO PCT/SE1983/000359 patent/WO1984001715A1/en active IP Right Grant
- 1983-10-24 DE DE8383850279T patent/DE3379589D1/de not_active Expired
- 1983-10-25 CA CA000439619A patent/CA1220740A/en not_active Expired
-
1984
- 1984-06-22 DK DK308684A patent/DK166566B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-06-25 FI FI842555A patent/FI80598C/fi not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-01-27 US US07/302,190 patent/US4963491A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-09-03 JP JP4236141A patent/JPH0662994B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05262665A (ja) | 1993-10-12 |
| DK166566B1 (da) | 1993-06-14 |
| EP0107634B1 (en) | 1989-04-12 |
| DK308684A (da) | 1984-06-22 |
| FI80598B (fi) | 1990-03-30 |
| DE3379589D1 (en) | 1989-05-18 |
| FI842555A0 (fi) | 1984-06-25 |
| US4963491A (en) | 1990-10-16 |
| JPH0517209B2 (fi) | 1993-03-08 |
| JPH0662994B2 (ja) | 1994-08-17 |
| DK308684D0 (da) | 1984-06-22 |
| EP0107634A3 (en) | 1986-10-08 |
| AU2204183A (en) | 1984-05-22 |
| CA1220740A (en) | 1987-04-21 |
| AU573730B2 (en) | 1988-06-23 |
| JPS59501908A (ja) | 1984-11-15 |
| WO1984001715A1 (en) | 1984-05-10 |
| EP0107634A2 (en) | 1984-05-02 |
| FI842555A (fi) | 1984-06-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI80598C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en enzymberedning. | |
| US4801451A (en) | Cleaning with enzymes from krill | |
| Jimenez-Porras | Biochemistry of snake venoms | |
| JP5053096B2 (ja) | ブロメラインからの創傷清拭組成物及びその製造方法 | |
| EP0838213B1 (en) | Use of Krill Enzymes for the Treatment of Dental Plaque | |
| Anheller et al. | Biochemical and biological profile of a new enzyme preparation from Antarctic krill (E. superba) suitable for debridement of ulcerative lesions | |
| JPH0631317B2 (ja) | トリグラミン、血小板凝集抑制性ポリペプチド | |
| DE69432795T2 (de) | Porphyromonas gingivalis arginin-spezifische proteinase kodierende sequenzen | |
| KR100263147B1 (ko) | 콘텍트렌즈용제제의안정화방법 | |
| US5387517A (en) | Thiol activated protease from stem bromelain for treating devitalized tissue | |
| WO1998055604A1 (en) | Hydrophilic composition containing protease produced by vibrio | |
| US4873222A (en) | Placenta-derived anticoagulating substance | |
| KR100513301B1 (ko) | 발 세정용 조성물 | |
| KR20220123526A (ko) | 조성물 및 제조 방법 | |
| KR100329962B1 (ko) | 피부표면의 케라틴층을 분해하는 단백질 분해효소와 이를 생산하는 미생물 및 그 배양액을 함유하는 화장품 조성물 | |
| KR101191613B1 (ko) | 파라옥소나아제 함유 제제 | |
| NO165093B (no) | Enzymsammensetning for rensing, bruken av den og framstilling av sammensetningen. | |
| CN1041170C (zh) | 菠萝蛋白酶脱痂制剂及其制备方法 | |
| KR100320948B1 (ko) | 상표초로부터분리·정제한혈전용해성세린프로테아제및그의제조방법 | |
| FI109766B (fi) | Menetelmä eskaraasia sisältävän proteolyyttisen seoksen valmistamiseksi | |
| Borkow et al. | Echinhibin-1—an inhibitor of Sendai virus isolated from the venom of the snake Echis coloratus | |
| KR20090026446A (ko) | 마늘기름 추출방법 및 마늘기름을 함유하는 여드름 진정 및개선용 화장료 조성물 | |
| KR100453574B1 (ko) | 곤충 유래의 혈전용해성 세린프로테아제와 그 추출방법 및이를 이용한 식·의약조성물 | |
| KR100190331B1 (ko) | 콘텍트 렌즈용 동결 건조약제의 제조방법 | |
| Barnes et al. | Studies on the reproduction of cirripedes. IV. The protein amino-acid composition and gel electrophoresis of the oviducal sac and egg case |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: MEDISAN PHARMACEUTICALS AB |
|
| MA | Patent expired |
Owner name: ANTARCTIC PHARMA AB |