FI79320C - Foerfarande foer framstaellning av fysiologiskt aktiva pterokarpanfoereningar. - Google Patents

Description

i 79320 5

Menetelmä fysiologisesti aktiivisten pterokarpaaniyhdis-teiden valmistamiseksi Tämä keksintö koskee oleellisesti puhtaiden, kiteis-5 ten pterokarpaaniyhdisteiden, eristämistä luonnontuotteiden raakauutteista.

Tiedetään, että plantaasityöntekijät Amazonin yläjuoksun viidakossa ovat käyttäneet etelä-amerikkalaisessa cabeca de negra-puun juuriuutetta oraalisesti vastamyrkky-10 nä kärmeen ja hämähäkin myrkkyjä vastaan. Etelä-Amerikassa tunnetaan noin kymmenen cabeca de negra-lajin muunnosta. Enempää aktiivisten komponenttien luonnetta kuin sivuvaikutusten, farmakologisen aktiivisuuden, stabiliteetin jne. tutkimuksia ei tiedetä julkaistun keksinnön mukaisesti val-15 mistetuista yhdisteistä. Pterokarpaaneja, joilla on mikrobeja tappavia ominaisuuksia, on mainittu kirjallisuudessa, kts. Heterocyles, Voi. 15, 1163 (1981).

Keksintö koskee tarkemmin sanottuna menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten pterokarpaaniyhdisteiden val-20 mistamiseksi, joiden kaava on R1

ho °N H

| “ Λ%0 rasemaattina tai optisina isomeereinä, jossa kaavassa joko 30 R* on ryhmä -CH2CH=C(CH3)CH2OH ja R2 on vetyatomi, tai R* on vetyatomi ja R2 on ryhmä -ΟΗ2ΟΗ2-ΟΗ(CH3)CH2OH. Mukavuussyistä edellä olevan kaavan mukaisista yhdisteistä, joissa R^ on CH2CH=C (CH-j) CH2OH ja R^ on vety käytetään jäljempänä nimitystä kabenegriini I (3-hydroksi-4-(3-hydroksimetyyli-35 buteeni-2)-8,9-metyleenidioksipterokarpaani) ja yhdisteistä, joissa R2 on CH2CH=C (CH-j) CH2OH ja R* on vety, käytetään 2 79320 nimitystä kabenegriini II (2-(3-hydroksimetyylibutyyli)- 3-hydroksi-8,9-metyleeni-dioksipterokarpaani) tai yhdisteet I ja II samassa järjestyksessä.

Yhdisteillä kabenegriini I ja kabenergriini II on 5 farmaseuttista käyttöä nisäkkäiden hoidossa, ihminen mukaanluettuna, joita myrkylliset käärmeet ja hyönteiset ovat pistäneet. Toisin sanoen nämä yhdisteet toimivat voimakkaina vastamyrkkyinä käärmeen- ja hyönteismyrkkyjen vaikutuksia vastaan. Yhdisteet I ja II ovat myös hyödyl-10 lisiä hoidettaessa muiden tunnettujen orgaanisten myrkkyjen, kuten E. coli-hajautumismyrkyn ja Clostridium botu-linum-lajin tuottaman myrkyn vaikutuksia, joista yleisesti käytetään nimitystä lihamyrkytys ravintomyrkytyksessä. Farmaseuttinen hyödyllisyys osoitetaan yleisesti niiden myrk-15 kyjen vaikutuksien hoidossa nisäkkäillä, joita patogeeniset bakteerit (hajautumismyrkyt ja eritysmyrkyt) tuottavat ja jotka vaikuttavat uhrin hermostoon ja erityisesti, kun hengityselinten halvausta ilmenee. Hoito sydän-verisuoni-myrkkyjen vaikutuksia vastaan osoitetaan myös.

20 Kyseisiä yhdisteitä voidaan antaa oraalisesti neste- muodossa suspensiossa tai liuotettuna yhteensopivaan farmaseuttiseen kantoaineeseen. Puhdasta kiteistä materiaalia : voidaan antaa oraalisesti kapseli- tai tablettimuodossa, kun se on seostettu sopiviin farmaseuttisiin kantoainei-25 siin. Vaihtoehtoisesti kumpi tahansa yhdisteistä kabenegriini I tai II voidaan liuottaa sopivaan nestemäiseen farmaseuttiseen kantoaineeseen ja antaa liuosta suonensisäisesti käsiruiskulla tai katetrilla, kun käytettävissä on tarkkailulaite hoidon vaikutusten määrittämiseen. Halut-30 taessa yhdisteitä (I) ja (II) voidaan sekoittaa yhteen eri suhteissa ja valmistaa seos yllä kuvatulla tavalla sopivien farmaseuttisesti kantoaineiden kanssa.

Suunnilleen 1/2 kiloa cabeca de negra-puun pestyä juurta pilkotaan palasiksi jotka voidaan sitten jauhaa, 35 pulveroida tai käsitellä muulla tavoin kuiturakenteen murskaamiseksi. Tämä vaihe voidaan suorittaa sekoittimessa 3 79320 tai laboratoriohomogeenisaattorissa. Juuria, joissa ilmenee hometta tai sientä, ei pidä käyttää. Pulveroitu juuri asetetaan suureen lasipulloon tai muuhun sopivaan astiaan, joka voidaan peittää, ja sen jälkeen sekoittaa. Riittävä 5 määrä veden ja 1-4 hiiliatomia sisältävän alifaattisen alkoholin seosta, edullisesti etanolia ja vettä suhteessa 77:23 lisätään pulveroidun juuren peittämiseksi ja sekoitetaan ripeästi muutamia minuutteja. Astian, joka sisältää etanolin vesiliuosta ja juurta, annetaan seistä ympäristön 10 lämpötilassa vähintään 48 tuntia silloin tällöin sekoittaen. Tämän jakson päätyttyä alkoholin vesiliuos, joka sisältää raakauutteen, erotetaan juuresta jollakin sopivalla keinolla, esimerkiksi kaatamalla keskitiheän suodatinpaperin läpi. Pulveroitu juuri heitetään pois. Suodatetulla 15 liuoksella on vahvan teen väri.

Seuraavaa menettelyä käytettiin aktiivisten yhdisteiden eristämiseen yllä valmistetusta raakauutteesta.

Etanolin vesiliuokseen saatu raakauute (135 ml) vä-kevöitiin lämmittämällä varovasti tyhjössä, jolloin saatiin 20 1,2 g ruskeaa öljymäistä jäännöstä. Tätä väkevöityä mate riaalia käsiteltiin 50-%:isella metanolin vesiliuoksella ja liuos uutettiin ravistamalla voimakkaasti 5-8 hiiliatomia sisältävän alifaattisen hiilivedyn, edullisesti hek-• saanin kanssa. Heksaanikerros erotettiin ja heitettiin pois.

25 Vesikerros uutettiin eetterillä voimakkaasti ravistaen. Eetterikerros ja vesikerros erotettiin ja eetterikerros (640 mg) asetettiin sivuun. Vesikerros uutettiin n-butyyli-alkoholilla voimakkaasti ravistaen, n-butyylialkoholiker-ros erotettiin ja pantiin sivuun mahdollista tutkimusta 30 varten ja vesikerros heitettiin pois.

Yllä uutettu eetterikerros erotetaan hyvin tunnetuilla kromatografiamenetelmillä. Edullisesti yllä uutettu eetterikerros saatetaan korkeapainenestekromatografiin .*.· (HPLC) käyttäen Sephadex LH-20-hartsia ensimmäisenä vaihee- 35 na ja seuraavana vaiheena piihappogeeliä käyttäen metanolin vesiliuosta eluointiliuottimena. Tämä menettely johtaa 4 79320 kahteen jakeeseen ja ensimmäinen erotetaan edelleen HPLC:lla käyttäen Partisil-10-massaa ja eluoiden 3 % me-tanolia sisältävällä metyleeniklorilla, jolloin saadaan puhtaat kiinteät yhdisteet.

5 Kabenegriini I:ksi tunnistettua yhdistettä saadaan talteen valkoisena kiteisenä materiaalina 44 mg:n saalis. Saadaan terävä 167-168°C:n sulamispiste ja analyysi osoittaa koostumuksen olevan C21H20°6' Yhdisteen I Rf-arvo ohut-levykromatografiassa käytettäessä piihappogeeliä-CO/Kiesel-10 guhr F-254 ja bentseeni/etyyliasetaatti/metanolia (15/4/1) oli 0,53.

Yhdisteen I UV-, CD- ja IR-arvot ovat seuraavat: UV/MeOH:ssa/:209 nm/£75 000/, 233 nm olkapää, £24 000/, 309 nm/£ 13 000/ 15 CD/MeOH:ssa/:213 nm/A £ -25,28/, 220 nm /Δ i -2,00/,238 nm/A £ -9,84/; 302 nm/A £ +3,15/ IR/CHCI3: ssa/: 3550 cm-·*-, 1600 cm"^, 1113 cm”^ 925 cm-·*·.

Näiden spetritietojen lisäksi mitattiin seuraavat 1H-NMR-, 13C-NMR- ja MS- (El)- tiedot koskien kabenegriini 20 I:ä.

1H-NMR: 183/3H, d, 1 Hz, 4'-CH3/; 3,40/2H, br, d, 7 Hz, C 1'/; - 3,40/2H, ddd, 7, 7,5 Hz, C 6a/; 3,61/2H, d, d, 11,7 Hz, c 6 /* /; 25 3,9 0/2H, -0CH20-/; 3,99/2H, br, s, -CH2-OH/; 4,28/lH, dd, 11,5 Hz, C 6 / ; 5,45/lH, br, t, 7 Hz, C 2'/; 5,45/lH, d, 7 Hz, C 11a/, 30 6,41/1H, s, C 10/; 6,52/1H, d, 9 Hz, C 2/; 6,70/lH, s, C 7/; 7,23/lH, d, 9 Hz, C 1/ppm.

5 79320 13C-NMR: 13,74/4'-CH3/; 21,88/C l'/?40,16/C 6a/; 66,72/C 5/; 68,72/-CH2-OH/; 79,10/C 11a/; 93,77/C 10/; 104,73/C7/; 109,6/C 2/; 112,63/C 4 tai C la/; 115,01/C 4 tai C la/; 5 118,04/C 60/; 123,49/C 2·/; 129,15/C 1/; 136,07/C 3’/; 141,67/C 8/; 148,06/C 9/; 154,20/C 10a tai C 4a/; 154,20/C 10a tai C 4a/; 155,08/C 3/ppm.

MS/18 eV/: 10 M+ = 368, 50 % m/e = 350, 100 %; 335, 95 %; 335, 95 %; 176, 65 %; 161, 90 %.

Yllä kuvatusta HPLC:stä talteen saadun materiaalin toinen näyte koostui suunnilleen 10 mg:n Ö1jyseoksesta.

15 Tätä toista aktiivista jaetta, joka oli saatu yllä kuvatusta eetterikerroksen HPLC:stä, käsitellään seuraavasti kabenergiini II-yhdisteen saamiseksi. Seos saatettiin lisä-HPLC:in käyttäen yu-Bondapack C 18-kolonnia ja meta-noli/asetonitriili/H20/n-PrOH(71/71/59/2). Yhdistettä II

20 saatiin olennaisesti puhtaasa -95 - 100 % -kiteisessä muodossa n. 1 mg:n saalis. Tämän yhdisteen rakenne perustuu seuraaviin fysikaalisiin vakioihin ja analyysi (MS) osoittaa koostumuksen olevan ^22^22^6’ 1H-NMR: 0,69/3H, d, 5,8 Hz, 3'-CH3/; r 25 2,50/2H, m, C 1'/; 2,67/2H, m, C 1'/; 2,94/lH, ddd, 9,1, 6,3, 4,9 Hz, C 6a/; 3,10/2H, dd, 8,8, 2,7 Hz, -CH2-OH/; 3,18/2H, dd, 8,8, 4,4 Hz, -CH2-OH/; 30 3,50/lH, dd, 9,1, 0,1 Hz, C 6β / ; 3,86/lH, dd, 9,1 4,9 Hz, C 6öt/; 5,27/lH, d, 6,3 Hz, C 11a/; 5,30/2H, -OCH20-/; 5,33/2H, -OCH20-/; 35 6,36/lH, C 10/; 6,52/lH, C 4/; 6 79320 1H-NMR: 6,53/lH, C 7/; 7,08/lH, C 1/ppm.

UV/MeOH:ssa/:204 nm/£ 116 000/. 230 nm/£ 8 000/, 292 nm/£ 9 400/, 308 nm/£ 11 800/ 5 CD/MeOH:ssa/: 237 nm/Δ£ -6,68/, 280 nm/Δ £ -0,46/, 299 ηιη/Δ£ -1,72/.

NMR-tulokset osoittavat yhdisteen (II) rakenteen olevan kohdan C-3' epimeerin 3:l-seoksen. Molempien yhdisteiden kabenegriini I ja kabenegriini II rakenteet on 10 vahvistettu niiden vastaavien rasemaattien synteesillä.

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut uudet yhidsteet ovat sopivia terapeuttisesti aktiivisten seosten valmistukseen, jotka ovat vastamyrkkyjä myrkyllisten käärmeen- ja hyönteispuremien hoitoon nisäkkäillä (ihminen mu-15 kaanluettuna).

Ne ovat myös sopivia patogeenisten bakteerimyrkkyjen, kuten E. coli-hajautumismyrkkyjen, lihamyrkytysten ja muiden hoitoon, joilla on keskushermostovaikutuksia ja niihin liittyvää hengityshalvausta, ja sydänverisuonimyrkkyjen 20 vaikutusten hoitoon nisäkkäillä.

Mitä tulee yllä esitetyillä uuttomenetelmillä saatuihin uusiin yhdisteisiin, fysiologisesti aktiivisten yhdisteiden läsnäolo määritettiin in vivo-kokeilla käyttäen hiiriä. Koe-eläimet olivat Swiss Webster-valkohiiriä, kum-25 paakin sukupuolta ja painoivat 20-25 g. Jokainen koe-eläin-ten ryhmä myrkytettiin kaksi ja puoli kertaa tappavalla annoksella käärmenmyrkkyä, joka oli saatu Fer de Lance-yhtiöltä (Borhrops atrox), vatsaontelonsisäisellä ruiskeella. Hoidon puutteessa myrkytetyt eläimet menehtyivät 30 muutamassa minuutissa.

Yhdisteiden (I) ja (II) konsentraatit, jotka oli saatu jokaisesta yllä esitetyn uuttokaavion jakeesta, kokeiltiin vastamyrkkyaktiivisuuden suhteen ruiskuttamalla hiiriin välittömästi myrkyttämisen jälkeen kustakin ja-35 keesta eristetyn materiaalin vesipitoista etanoliliuosta (77:23). Jokaista eläintä käsiteltiin 0,25 mltlla vastaa- 7 79320 via liuoksia. Tämän pöytäkirjan perusteella eloonjäämiseen tarvittava minimiannos oli 2,8 mg/kg kabenegriini I:ä ja 2,0 mg/kg kabenegriini II:a.

Toksikologiset tutkimukset osoittavat että kabeneg-5 riini I:n ja kabenegriini II:n etanoli/vesiliuosten antaminen terveille koe-eläimille ei aiheuttanut mitään merkittäviä muutoksia elinten fysiologisissa toiminnoissa. Antaminen voi tapahtua suonensisäisellä tai lihaksensisäisellä ruiskeella tai oraalisesti mahaletkun kautta. Mi-10 tään merkittävää muutosta ei havaita valtimoverenpaineessa, sydämen lyöntinopeudessa, hengityksessä, EKG:ssä tai kes-kuslaskimopaineessa millä hetkellä tahansa yhdisteiden I ja II antamisen jälkeen normaaleille, terveille (ts. myr-kyttämättömille) eläimille.

15 Vastamyrkyn antaminen ei muuta merkittävästi lepo- toiminta jännitteitä, päätelevyjännitteitä, hermoimpulsin siirtymistä, hermo-lihastoimintaa tai aivoaaltoaktiivisuut-ta koe-eläimillä.

1. Vastamyrkkyvaikutukset käärmeenmyrkkyä vastaan 20 koirilla

Myrkyttäminen kuolettavalla annoksella käärmeenmyrkkyä, kuten Bothrops atrox, Crotalus adamanteuns tai Crotalus atrox aiheuttaa äkillisen valtimoverenpaineen laskun, sydämen lyöntinopeuden laksun ja keskuslaskimo-25 paineen kohoamisen. Tätä seuraa näiden parametrien osittainen palautuminen ja sitten täydellinen hengityksen ja sydänverisuonten lysähtäminen. Kuolema näyttää johtuvan ääreisverisuonten lysähtämisen ja normaalin hengitysmeka-nismin katkeamisen yhdistelmästä. Lisäksi näillä myrkyillä 30 osoittautuu olevan jotakin vaikutusta koe-eläinten keskushermostoon. Tätä CNS-vaikutusta osoittaa aivojen sekä alfa- että betaryhmän (EEG) lasku. Tähän muutokseen liittyy myös impulssin siirron lasku motoorisissa hermoissa ja hermolihaksiston vähittäinen salpautuminen, joka on 35 samantapainen kuin curaremyrkyn aiheuttama. Myrkyillä ei ollut mitään vaikutusta lihasten reagointiin suoralle ärsytykselle.

8 79320

Seitsemän täyskasvuisen jäniskoiran sarjaa käytetään kabenegriini I:n ja II:n tehokkuuden tutkimiseen myrkkyjä vastaan. Koirat nukutetaan Na-pentobarbitaalilla (30 mg/kg) ja niitä tarkkaillaan muutosten suhteen valti-5 moverenpaineessa, sydämen lyöntinopeudessa, elektrokardiogrammissa ja hengityksessä. Koirille annetaan kuolettavat annokset (5-10 kertaa LD50) lyofilisoitua, uudelleen muodostettua Bothrops atroxmyrkkyä (Fer de Lance) (2,5-5,0 mg/kg) tai (10 mg/kg) etelä-amerikkalaisen kalkkarokäär-10 meen myrkkyä.

15 minuutin kuluessa myrkyttämisestä havaitaan yhdenmukaisesti huomattavaa sydämen lyöntinopeuden ja verenpaineen laskua. 15-30 minuutin kuluttua hengitys niinikään laskee keskimäärin 20-5 minuuttiin. Hoito aloitetaan, kun 15 havaitaan ankaria vaikeuksia sydänverisuonissa ja ilmeisiä hengitysvaikeuksia (tavallisesti 15-30 minuutin kuluttua myrkyttämisestä).

Valmistetaan kabenegriini I:n liuos liuottamalla 32 mg yhdisteen kiteistä materiaalia 100 ml:aan vesipi-20 toista etanolia (25:75). Samoin valmistetaan liuos, jossa on 24 mg kabenegriini II:a 100 ml:ssa vesipitoista etano-· lia (15:75). Annokset potilaalle antamista varten valmis- tetaan sekoittamalla erikseen 5 ml yhdisteen (I) ja (II) alkoholiliuosta 50 ml:aan vettä.

25 Kummankin liuoksen antaminen tapahtuu putken avulla, joka on asetettu ja työnnetty koiran mahalaukkuun. Hoito on seuraava: Mitään välitöntä reaktiota ei havaita hoidon seurauksena. Verenpaine, sydämen lyöntinopeus ja hengitys pysyvät kaikki äärimmäisen alhaisina. Suunnilleen 30 mi-30 nuutin kuluttua yhdisteen (I) ja (II) alkoholiliuoksen ensimmäisen annoksen jälkeen tapahtuu hidas vähittäinen hengityksen paraneminen, mitä seuraa sydämen lyöntinopeuden ja verenpaineen osittainen elpyminen. Jatkuvaa hoitoa annetaan 30 minuutin välein 50 ml:ssa vettä, kunnes kaikki 35 tarkkaillut elintoiminnot palautuvat 10 %:n sisälle tar-kistusarvoista. Tehokas annosalue on 10-20 ml vastamyrkky- 9 79320 uutetta eläintä kohti. Tarvitaan 2-4 annosta. 8-10 tunnin seurannan jälkeen eläimet sijoitetaan säilytyshäkkiin ravinnon ja veden kanssa. 24 tunnin kuluttua kaikki 7 koiraa osoittavat merkkejä laantuneesta aktiivisuudesta. 72 tun-5 nin kuluttua kaikki koirat ottavat ravintoa ja vettä. Mitään lisähoitoa ei tarvita.

2. Kabenegriini I:n ja II:n aktiivisuus E. coli-ha-jautumismyrkkyä vastaan Käytetään kolmea täysikasvuista jäniskoiraa kabe-10 negriini I:n ja II:n tehokkuuden osoittamiseksi hoidettaessa E. coli-hajautumismyrkyn aiheuttamaa shokkia. Koirat nukutetaan Na-pentabarbitaalilla (39 mg/kg) ja niitä tarkkaillaan muutosten suhteen valtimoverenpaineessa, sydämen lyöntinopeudessa, EKG:ssä ja hengityksessä. Kuolet-15 tavat annokset (1 mg/kg) E. coli-hajautumismyrkkyä ruiskutetaan suonensisäisesti katetriin, joka on asetettu koirien takaraajan suoneen. Ensimmäisessä kokeessa ei aloitettu mitään vastamyrkkyhoitoa ja eläin kuoli 2 tunnin kuluttua ruiskeen antamisesta. Kolmessa muussa tapauksessa vasta-20 myrkkyhoito aloitetaan samaan aikaan, kun ankara sydänverisuonten lysähtäminen ja hengitysvaikeuksia ilmenee. Näitä esiintyy tavallisesti noin 1 1/2 tunnin kuluessa myrkyn ruiskuttamisesta.

Näin hoidetut eläimet jäävät henkiin ja saavat takai-25 sin normaalin aktiivisuuden.

3. Eristetty sydänpreparaatti (Langendorff)

Kahden koiransydänpreparaatin sarja kokeiltiin vasta-myrkkyvaikutuksen mittaamiseksi sepelvaltimon verivirtaan, sydämen lyöntinopeuteen, EKG:en, sydänkammion supistumis-30 voimaan ja valtimonsuonien vastukseen, kun kabenegriini Isä ja Iisa annetaan joko ennen tai jälkeen kuolettavan myrk-kyaltistuksen. Havaitaan, että hoito osoittautuu kykeneväksi voittamaan myrkyn toksiset vaikutukset sydänverisuoni-toimintoihin. Näitä vaikutuksia ovat supistumisvoiman ja 35 sydämen lyöntinopeuden lasku. Valtimosuonien vastus kasvaa myös vähitellen myrkyn antamisen jälkeen. Kun liuoksia, 10 79320 jotka sisältävät 0,05 kg/ml joko yhdistettä (I) tai yhdistettä (II), ruiskutetaan suoraan kiertoon ennen altistusta trooppisen kalkkarokäärmeen myrkylle, mitään haitallista vaikutusta sydämeen ei havaita. Sen sijaan supistumisvoi-5 ma ja valtimon verivirtaus kasvavat n. 15-20 %.

Kun joko yhdistettä (I) ja yhdistettä (II) annetaan trooppisen kalkkarokäärmeen myrkyn kuolettavan altistuksen jälkeen, vastamyrkky palauttaa supistusvoiman ja sydämen lyöntinopeuden normaalitasoille ja kumoaa myrkyttä-10 misen aiheuttamat vähäiset rytmihäiriöt.

4. Neurofysiologinen toiminta

Uusien yhdisteiden vastamyrkkyvaikutus kolmen koiran ja yhden kissan hermolihastoiminnan, toimintatehoon ja aivojen aaltoaktiivisuuteen kokeiltiin kuolettavilla 15 annoksilla Fer de Lance-myrkkyä myrkyttämisen jälkeen.

Käärmeenmyrkky alentaa sekä aivojen aaltoaktiivi-suutta että hermosysäyksen siirtoa. Nämä palautetaan lähes ellei täysin normaalitasoille antamalla kabenegriini I:ä ja II:a. Toimintateho ja hermolihastoiminta pysyvät alen-20 tuneina suunnilleen 30-60 minuuttia kummallakin yhdisteellä tapahtuneen käsittelyn jälkeen. Tätä seuraa hidas, vähittäinen palauutminen tarkistuseläimen tasoille 12-24 tunnin kuluttua.

Tietyissä kokeissa, joissa tapahtuu täydellinen her-25 molihasten salpautuminen eivätkä eläimet enää kykene itse hengittämään, vaaditaan keinotekoista ilmanvaihtoa, kunnes yhdisteen toiminta on käynyt ilmeiseksi. Tämä voi tapahtua myrkyttämisen jälkeen, mutta vakiinnuttuaan eläimet kykenevät itse hengittämään eikä lisähoitoa tarvita.

30 Myrkky heikentää merkittävästi (25-35 %) aivokuoren sähköistä aktiivisuutta. Nämä muutokset palautetaan normaaliksi antamalla yhdisteitä kabenegriini I ja II. Hoidon jälkeen mitään muita muutoksia ei havaita.

Näiden tutkimusten tulokset osoittavat, että kabe-35 negriini I:n ja II.n oraaliset tai suonensisäiset annokset kykenevät hoitamaan tautitiloja, joiden arvellaan kliini- 11 79320 sesti olevan luonteeltaan joko sydänmyrkkyä ja/tai hermomyrkkyjä, ilman havaittavia luontaisia sivuvaikutuksia.

Kuten yllä mainittiin, keksinnön mukaisesti valmistetut uudet yhdisteet ovat sopivia erilaisten farmaseut-5 tisten seosten valmistukseen, edullisesti oraaliseen käyttöön tai ruoansulatuskanavan ulkopuolisiin ruiskeisiin.

Sopivia farmaseuttisia kantoaineita oraaliseen käyttöön ovat nesteet, jotka ovat vaarattomia vatsan limakalvolle. Nestekantoaineet voivat olla tyyppiä, joihin voi-10 daan valmistaa yhdisteiden I ja II stabiili suspensio.

Vaihtoehtoisesti nestekantoaine voi olla kabenegriini I:n tai II:n liuotin. Jälkimmäisessä tapauksessa nestemäinen farmaseuttinen kantoaineliuos voidaan valmistaa joko oraaliseen käyttöön tai ruoansulatuskanavan ulkopuoliseen ruis-15 keeseen.

Oraaliseen käyttöön tarkoitetut uudet seokset voidaan valmistaa myös sekoittamalla kabenegriini I:ä ja II:a sopiviin alalla tunnettuihin farmaseuttisiin kantoainei-siin. Nämä kuivat seokset voidaan saattaa mihin tahansa 20 sopivaan annostusmuotoon nielemällä nautittavaksi, kuten pillereiksi, tableteiksi ja kapseleiksi. Mikrokapselointi-tekniikkaa voidaan käyttää halutun annoksen jatkuvan vapautumisen aikaansaamiseksi, mikäli potilaan kulloinenkin tila edellyttää tätä hoitomuotoa.

25 Monissa tapauksissa joko myrkyllisen toksiinin luon- ne tai potilaan huonontuneen tilan tyyppi edellyttää, että annetaan nestemäinen annos, jotta varmistettaisiin yhdisteiden terapeuttisten vaikutusten välitön alkaminen. Sellaisten eläinten tai potilaiden tehokas hoito, jotka ovat 30 tajuttomia tai joiden elintoiminnot ovat pitkälle kehittyneessä heikkenemistilassa, vaativat oraalisten annosten antamista mahaletkun kautta tai suonensisäistä ruisketta käsiruiskeella tai katetrilla.

Claims (3)

12 79320

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten ptero-karpaaniyhdisteiden valmistamiseksi, joiden kaava on 5 Η<Υγ°Ί ^ r2 η^Τ_ΊΓ^Γ°)

10 O-k^\0/ rasemaattina tai optisina isomeereinä, jossa kaavassa joko R^· on ryhmä -CH2CH=C(CH3)CH^OH ja R^ on vetyatomi, tai R^ on vetyatomi ja R^ on ryhmä -CH2CH2-CH(CH3)CH2OH; t u n - 15. e t t u siitä, että se käsittää seuraavat vaiheet: a) cabeca de negri-puu hienonnettua juurta uutetaan 1-4 hiiliatomia sisältävän alkoholin vesiliuoksella kunnes uute, sen jälkeen kun juurimatriaali on erotettu, on vahvan teen väristä; 20 b) uute haihdutetaan öljymäiseksi jäännökseksi; c) saatu öljymäinen jäännös liuotetaan metanolin vesiliuokseen ja näin saatu liuos uutetaan 5-8 hiilivetyä sisältävällä alifaattisella hiilivedyllä; d) vaiheesta c) saatu vesifaasi uutetaan eetterillä; 25 e) vaiheesta d) saatu eetterifaasi erotetaan sinänsä tunnetulla tavalla kromatografoimalla.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että uutto vaiheessa c) suoritetaan heksaanilla.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että erotus vaiheessa d) suoritetaan korkeapainenestekromatografiän avulla, että eluointi-aineena käytetäään metanolia ja että otetaan talteen ensimmäinen ja toinen jae, jolloin ensimmäisestä jakeesta 7 1 35 saadaan talteen yhdiste I, jossa R on vety ja R on 3- i3 79320 hydroksimetyyli-but-2-en-l-yyli, ja jolloin toisesta ja- • 1 · 7 keesta saadaan talteen yhdiste II, jossa R on vety ]a R on 3-hydrometyyli-but-l-yyli. 14 79320