FI78069C - Foerfarande foer framstaellning av saosom laekemedel anvaendbara acylerade enamidfoereningar. - Google Patents

Description

78069

Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten asyloitujen enamidi-yhdisteiden valmistamiseksi - Förfarande för framställning av säsom läkemedel användbara acylerade enamidföreningar Tämän keksinnön kohteena on menetelmä asyloitujen enamidiyh-disteiden, joita ovat asyloidut enamidit sekä niiden suolat, valmistamiseksi. Näitä yhdisteitä voidaan erityisesti käyttää syöpäsairauksien ehkäisemiseen tai hoitoon.

DE-patenttijulkaisussa 2 201 478 kuvataan a-asyyliaminoakryy-lihappoestereitä, joita voidaan kuvata kaavalla NK- C - R' CH, « C ^ g N J* jossa R' ei voi olla fenyyli, jos R on metyyli ja jossa R on eri kuin vety (käytännössä aikyyliryhmä). Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavissa yhdisteissä R on vety (tai suola) kun se viitejulkaisussa on alkyyli. Viitejulkaisun mukaisia yhdisteitä käytetään insektisideinä.

US-patentissa 2,449,191 kuvataan yhdisteitä, joilla on kaava CH3 /NH " n “ CH2 ‘fenyyli \ / o

Nc - c <./

^ OH

jotka yhdisteet ovat β,β-dimetyyliakryylihapon johdannaisia. Näitä yhdisteitä käytetään Penicillium-homeen ravintoliuoksissa.

Julkaisussa Synthesis n:o 7, s. 457-458 (heinäkuu 1977) kuvataan sivulla 457 (oikea palsta) yhdiste 4c, jonka kaava on 2 78069 NH - C - CH- -fenyyli ch2 . C/ B 2 x<

^OH

Tämän hakemuksen mukaisissa yhdisteissä fenyyli on substituoi-tu alkoksilla, alkyylitiolla tai bentsyylioksilla. Viitejul-kaisussa ei mainita yhdisteiden käyttöalaa.

Keksinnön mukaisesti valmistettavat enamidiyhdisteet ovat yhdisteitä» joilla on seuraava yleinen kaava HH - C - CH r( / n I o— z «n s.

jossa kaavassa Z tarkoittaa Ci-C4~alkoksia» bentsyylioksia tai Cx~C4-alkyylitioryhmää» tai näiden yhdisteiden suoloja.

Näiden yhdisteiden suolat voivat olla esimerkiksi ammonium-suoloja, alkalimetallisuoloja kuten natrium- tai kaliumsuo-lat, maa-alkalimetallisuoloja kuten magnesium- ja kalsium-suolat» ja orgaanisten emästen kanssa muodostettuja suoloja.

Keksinnön mukaisesti valmistettavia edullisia asyloituja enamidiyhdisteitä ovat kaavan 3 78069

KE - C - CE

/ " 2 ' a O--OCH, CH - C 0 3 \ 0 <Il>

V

noh mukaiset (metoksifenyyliasetyyliJdehydroalaniinit. Näistä edullisin asyloitu enamidiyhdiste on sellainen, jossa metok-sisubstituentti on para-asemassa.

Keksinnön mukaisten asyloitujen enamidiyhdisteiden valmistusmenetelmässä saatetaan kaavan 1' "0 mukainen amidi, jossa kaavassa Z tarkoittaa samaa kuin yllä, reagoimaan kaavan CH3COCOOH mukaisen palorypälehapon kanssa. Reaktio voidaan suorittaa saattamalla 1 mooli amidia yhteen 1,2 moolin kanssa juuri tislattua palorypälehappoa ja kuumentamalla näitä bentseenissä palautusjäähdytyslämpötilaan laitteessa, joka on varustettu vedenerottimellä. Palautus-jäähdytys lopetetaan kun veden eroaminen lakkaa. Seoksen annetaan seistä kunnes muodostuu sakka ja suodatetaan sitten, ja sakkaa käsitellään kyllästetyllä NaHC03-liuoksella. Fraktio, joka on liukenematon emäksiseen liuokseen, ja joka sisältää reagoimattoman amidin, erotetaan ja suodokseen lisätään sitten vähitellen väkevää kloorivetyhappoa, kunnes pH on n. 3,5 ja muodostuu sakka. Suodatuksen ja etanolista suoritetun uudelleenkiteyttämisen jälkeen saadaan 30 - 95 %:n saanto. Saattaa tapahtua, että bentseenissä tapahtuvan pa- 4 78069 lautusjäähdytyksen jälkeen ei muodostu sakkaa; siinä tapauksessa bentseeni haihdutetaan ja jäännös käsitellään samalla tavalla kuin yllä on selitetty.

Kaavan I mukaisia asyloituja enamidiyhdisteitä voidaan valmistaa myös jollain muulla sopivalla orgaanisella synteesillä. Voidaan esimerkiksi käyttää menetelmää, jota on käytetty FR-patentissa B-2,349,567 (SUMITOMO CHEMICAL COMPANY).

Keksinnön mukaisesti valmistettavia asyloituja enamidiyhdisteitä voidaan käyttää lääkeaineina ja erityisesti ihmis- ja eläinlääketieteessä, kaikkien pahanlaatuisten kasvainten, kuten eri syistä johtuvien syöpien hoitoon, riippumatta sen kudoksen iästä ja histologisesta tilasta, jossa nämä syövät ovat muodostuneet. Yhdisteitä voidaan myös käyttää näiden samojen tautien ehkäisyyn, käyttämällä yhdisteitä esimerkiksi elintarvikkeiden lisäaineina.

Farmaseuttiset koostumukset, jotka sisältävät aktiivisena aineosana yllä määriteltyä asyloitua enamidiyhdistettä voivat edelleen sisältää antineoplastista (kasvainten kasvua ehkäisevää) ainetta samanaikaiseen, erilliseen tai pitkäaikaiseen käyttöön sytostaattisessa hoidossa. Tunnetuilla an-tineoplastisilla aineilla on yleensä vakavia haittavaikutuksia, koska ne ovat hyvin myrkyllisiä, mikä aiheuttaa erityisen haitallisia sekundäärisiä vaikutuksia, kuten normaalien kudosten tuhoutumista. Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä sisältävillä farmaseuttisilla koostumuksilla on sekä pienempi myrkyllisyys että parannettu terapeuttinen vaikutus verrattuna tunnettuihin koostumuksiin, jotka sisältävät ainoastaan antineoplastisia aineita.

Antineoplastisella aineella tarkoitetaan mitä tahansa ainetta, jota voidaan käyttää syöpäsolujen tuhoamiseen tai estämään niiden ilmestymistä tai lisääntymistä. Antineoplastisi-na aineina tunnetaan useita hyvin erilaisen kemiallisen luon 5 78069 teen omaavia aineita; niitä ovat alkyloivat aineet kuten syklofosfamidi, melfalaani, klorambusiili, klormetiini ja muut typpisinapit (nitrogen mustards), etyleeni-iminit, esim. tiotepa, sulfonihappoesterit, esim. busulfaani, antimetabo-liitit kuten metotreksaatti ja muut anti-foolihappoyhdisteet, merkaptopuriini ja muut antipuriiniyhdisteet, fluorourasii-li, sytarabiini ja muut antipyrimidiiniyhdisteet, atsaserii-ni, hormonaaliset muuttajat kuten androgeenit, estrogeenit, ovulaation aikana syntyvät aineet (progestational agents) ja glukokortikoidit, entsyymit kuten asparaginaasi, antibiootit kuten bleomysiini, daktinomysiini, daunorubisiini, merakti-nomysiini, mitomysiini, rufokromysiini, metramysiini, dokso-rubisiini (jota joskus kutsutaan adriamysiiniksi), kasviuutteet kuten Vinca- ja Colchicum-suvun kasveista saatavat alkaloidit ja muut fusoriaalimyrkyt, radioaktiiviset isotoopit kuten natriumradiofosfaatti, natriumradiojodidi tai muut yhdisteet kuten metyyliglyoksaali-bis-(guanyyli-hydratsoni), podofyllotoksiinin johdannaiset, mitotaani, pipobromaani, nitrosoureat ja hydroksiurea. Keksinnön mukaisissa farmaseuttisissa koostumuksissa läsnä olevat antineoplastiset yhdisteet ovat mieluimmin typpisinappeja, antibiootteja ja antipyrimidiiniyhdisteitä ja erityisesti syklofosfamidi, daunorubisiini, doksorubisiini ja fluorourasiili.

Mainittuja farmaseuttisia koostumuksia voidaan käyttää ihmis-ja eläinlääketieteessä kaikkien pahanlaatuisten tuumorien kasvun kuten syöpien hoitoon ja ehkäisyyn.

Nämä farmaseuttiset koostumukset voivat sisältää myös muita aktiivisia aineita, joita voidaan käyttää syöpien ehkäisyyn ja hoitoon tarkoitettuina farmaseuttisissa koostumuksissa, ja erityisesti askorbiinihappoa.

Ne tietenkin sisältävät myös valmistelisäaineita, jotka tekevät mahdolliseksi koostumuksen antamisen sopivasti, esim. pulvereina, tabletteina, voiteina, lotioneina, kapseleina, 6 78069 päällystettyinä tabletteina, pillereinä, ampulleina, siirappeina, emulsioina, peräpuikkoina, injektioina tai liuoksina. Nämä lisäaineet voivat olla sopivasti kiinteitä tai nestemäisiä aineita, orgaanisia tai epäorgaanisia liuottimia tai farmaseuttisia apuaineita, kuten vesi, parafiinityyppiset orgaaniset liuottimet, liivate, laktoosi, tärkkelys, magne-siumstearaatti, talkki, kasvi- ja eläinrasvat ja -öljyt, kumi, polyalkeeniglykolit tai sideaineet ja muut tavanomaiset apuaineet.

Farmaseuttiset koostumukset sisältävät yleensä 10 - 99 pai-no-% keksinnön mukaisesti valmistettavia asyloituja enamidi-yhdisteitä ja valinnaisesti antineoplastista ainetta. Koostumuksissa läsnäolevan antineoplastisen aineen ja kaavan i mukaisten asyloitujen enamidiyhdisteiden painomäärien suhde on yleensä välillä 1/10 - 10/1, mieluimmin välillä 1/4-4/1.

Kaavan I mukaisia asyloituja enamidiyhdisteitä ja farmaseuttisia koostumuksia voidaan antaa pahanlaatuisten tuumorien kasvun kuten syöpien hoitamiseksi tai ehkäisemiseksi kaikille nisäkkäille, mutta erityisesti ihmispotilaille, ja niitä annetaan yhden tai useamman "annosyksikön" muodossa, farmaseuttisesti tehokas määrä.

Kaikkia antomenetelmiä voidaan käyttää, kuten oraalista, rektaalista tai parenteraalista antoa samoin kuin antoa levittämällä iholle erityyppisiä voiteita tai iholappuja. Parenteraalisella annolla ymmärretään laskimon- ja lihaksensisäistä injektioita sekä perfuusiota.

Farmaseuttisia koostumuksia voidaan antaa oraalisesti ihmis-lääketieteessä annostusyksiköinä, jotka yleensä sisältävät ainakin 0,05 mg ja korkeintaan 500 mg, edullisesti 0,5 - 50 mg kaavan I mukaisia asyloituja enamidiyhdisteitä ja valinnaisesti antineoplastista ainetta, yhdessä ei-toksisen farmaseuttisesti hyväksyttävän liuottimen kanssa. Valinnaisesti 7 78069 em. koostumukset ja antineoplastiset aineet voidaan antaa erikseen ja eri aikoina; siinä tapauksessa on edullista antaa farmaseuttinen koostumus ennen antineoplastisten aineiden antoa, jolloin jälkimmäistä annetaan 1-24 tunnin kuluttua .

"Annostusyksiköllä" ymmärretään tässä yksikköannosta, joka voidaan antaa potilaalle ja voidaan helposti käsitellä ja pakata, siten että se pysyy fysikaalisesti stabiilin yksik-köannoksen muodossa, joka sisältää aktiivista aineosaa joko yksinään tai sekoitettuna kiinteiden tai nestemäisten farmaseuttisten laimentimien tai apuaineiden kanssa.

Farmaseuttiset koostumukset voidaan antaa annosyksiköiden muodossa kerran tai useamman kerran päivässä sopivin väliajoin, mutta ottaen aina huomioon potilaan kunnon ja lääkärin antamat ohjeet. Koostumusten sopiva päiväannos vaihtelee yleensä välillä 0,01 mg - 50 mg ruumiinpainokiloa kohti.

Annettaessa parenteraalisesti, erityisesti laskimon- tai lihaksensisäisellä injektiolla, farmaseuttisia koostumuksia annetaan esimerkiksi vesipitoisina liuoksina tai suspensioina, annosyksiköinä, jotka sisältävät 0,5 - 50 mg kaavan I mukaista asyloitua enamidiyhdistettä, valinnaisesti yhdessä antineoplastisen aineen kanssa, jolloin annostusyksikkö liuotetaan tai suspendoidaan välittömästi ennen käyttöä tai se on käyttövalmiissa muodossa yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän liuottimen kanssa; esimerkki käyttövalmiista muodosta on injektoitava ampulli.

Hoidossa, jossa tarvitaan jatkuvaa käsittelyä, pillerit tai kapselit voivat olla sopiva farmaseuttisen koostumuksen muoto, koska näin saavutetaan pitkäkestoinen vaikutus annettaessa lääkeaine oraalisesti.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

β 78069

Esimerkki 1; Para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniinin valmistus 4,95 g (3 x 10"2 moolia) para-(metoksifenyyli)-asetamidia pannaan ympäristön lämpötilassa 250 ml:n lasipulloon, joka on varustettu vedenerottajalla. Sitten lisätään 3,2 g (3,6 x 10~2 moolia) juuri tislattua palorypälehappoa ja 120 ml bent-seeniä. Tämä seos kuumennetaan sitten palautusjäähdytysläm-pötilaan; kun liuottimen palautuminen alkaa, liuos tulee kirkkaaksi ja samenee sitten vähitellen para-(metoksi-fenyy-liasetyyli)-dehydroalaniinin saostuessa. Palautusjäähdytystä jatketaan kunnes vettä ei enää erotu, mikä vaatii noin 48 tuntia, minkä jälkeen bentseeni poistetaan (strip off) tyhjössä.

Para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniini uutetaan kyllästetyn NaHC03~liuoksen avulla, ja sitten suodatetaan pois 1,7 g reagoimatonta para-(metoksifenyyli)asetamidia.

Kun suodatus on suoritettu loppuun, lisätään tipoittain muutama millilitra kloorivetyhappoa kunnes on saavutettu pH-arvo n. 3 tai 4. Para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroala-niini saostuu ja otetaan talteen suodattamalla ja uudelleen-kiteyttämällä etanolista. Saadaan 4,45 g para-(metoksifenyyliasetyyli )-dehydroalaniinia, ja saanto on 62 S. Saadun tuotteen sulamispisteen havaittiin olevan 186 °C. Infrapunaspekt-rissä (KBr) havaitaan seuraavat absorptiojuovat: 3400 αη"Ί (-OH) , 1700 cm-1 (C=0), 1620 cm-1 (OC) , 1510 cm-1, 1420 cm“l ja 1300 cm-l. Massaspektrografiässä saatiin huippu 235:ssä.

Para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniinille, liuotettuna dimetyylisulfoksidiin, saadaan ydinmagneettiresonanssi-spektrissä seuraavat kemialliset siirtymät; arvot on annettu (S (ppm): 9 78069 1 H s 8,96 2 H m 7,20 2 H m 6,86 1 H s 6,32 1 H s 5,69 3 H s 3,73 2 H s 3,61

Esimerkit 2-6

Seuraamalla esimerkissä 1 esitettyä menetelmää, valmistettiin yleisen kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa Z tarkoittaa kulloinkin alla olevassa taulukossa esitettyä ryhmää.

Esimerkki Z Saanto Sulamis- n:o (*) piste (°C) 2 -OC2H5 41 142 3 -OCH2“C6H5 62 188 4 -OCH2-CH2_ch3 30 178 5 -OCH(CH3)2 18 173 6 -SCH3 71 209 Näillä yhdisteillä on samanlainen detoksifioiva vaikutus kuin esimerkin 1 mukaisella yhdisteellä.

Esimerkki 7: Natrium-α-(para-metoksifenyyli)-asetamidoakry-laatin natrium-N-(para-metoksifenyyliasetyyli)-dehydroala-ninaatin valmistus 2,35 g (10“2 moolia) (para-metoksifenyyliasetyyli-dehydro-alaniini)-happoa liuotetaan 100 ml:aan metanolia, joka sisältää 0,54 g natriummetanolaattia.

Haihduttamalla liuotin saadaan valkea kiinteä aine.

Uudelleenkiteyttämällä isopropanolista saadaan 2,25 g (87 %) natriumsuolaa.

ίο 7 8 0 6 9

Sulamispiste: 112 °C (polymeroituminen).

NMR (D20) 6(ppm): 7,0-6,5(4H,m> 5,7(lH,s) 5,4(1H,S) 4,5(H20) 3,5(3H,s) 3,3(2H ,s).

Esimerkki 8; Farmaseuttinen koostumus

Farmaseuttinen koostumus valmistetaan sekoittamalla 4 g esimerkin 1 mukaisesti saatua para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniinia ja 3,2 g syklofosfamidia.

Miljoona "Taper Liver Tumor"-syöpäsolua injektoidaan intra-peritoneaalisesti kymmenelle hiirelle, joista jokainen painaa n. 30 g. 48 tunnin kuluttua tästä injektiosta annetaan yllä mainittua farmaseuttista koostumusta, jälleen intrape-ritoneaalisesti, 180 mg hiiren painokiloa kohti.

Vertailun vuoksi kymmenelle samanlaiselle hiirelle, joille niinikään on annettu miljoona "Taper Liver Tumor"-syöpäsolua, annetaan ainoastaan syklofosfamidia intraperitoneaali-sella injektiolla 48 tuntia syöpäsolujen antamisen jälkeen, ja kymmenelle muulle samanlaiselle hiirelle annetaan ainoastaan miljoona "Taper Liver Tumor"-syöpäsolua eikä niitä käsitellä sen jälkeen enää mitenkään.

Hiiriryhmästä, jota ei käsitellä mitenkään syöpäsolujen antamisen jälkeen, kaikki kuolevat 18. ja 23. päivän välillä.

Hiiriryhmästä, jota käsitellään ainoastaan syklofosfamidil-la, kaikki kuolevat 22. ja 25. päivän välillä.

Hiiriryhmässä, jota käsitellään keksinnön mukaisella farmaseuttisella koostumuksella, hiiret kuolevat vasta 28. ja 39. päivän välillä.

11 78069

Askitiksen hoito keksinnön mukaisesti valmistettua yhdistettä sisältävällä farmaseuttisella koostumuksella pidentää siis oleellisesti käsiteltyjen hiirten elinaikaa.

Esimerkki 9: Syklofosfamidia ja para-(metoksifenyyliasetyy-li)-dehydroalaniinia sisältävät farmaseuttiset koostumukset; käytetyn para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniinin määrän vaihtelu

Miljoona "Taper Liver Tumor"-syöpäsolua injektoidaan kahdentoista täysikasvuisen uroshiiren ryhmille, NMRI-kantaa int-raperitoneaalisesti; hiirten paino on n. 30 g. 48 tuntia tämän injektion jälkeen keksinnön mukaisesti valmistettua yhdistettä sisältäviä erilaisia farmaseuttisia koostumuksia annetaan hiirille, taas intraperitoneaalisesti, jolloin annettavassa koostumuksessa läsnäolevan para-(metoksifenyyliasetyyli )-dehydroalaniinin määrä vaihtelee, ja samoin annetaan myös koostumuksia, joissa on ainoastaan syklofosfamidia.

Sen jälkeen mitataan kolme parametriä: (a) hiirten keskipainon vaihtelu viidentenä päivänä syöpäkasvainten ymppäämisen jälkeen (variation of the mean weight, V.M.W.) , (b) 12:n em. koostumuksella tai pelkästään syklofosfamidilla käsitellyn hiiren keskimääräinen elinaika (mean survival, M.S.), (c) em. koostumuksella käsiteltyjen hiirten elinajan pidentyminen suhteessa pelkästään syklofosfamidilla käsiteltyjen kontrollihiirten elinaikaan (prolongation of survival, P.S.).

Saadut tulokset on luetteloitu alla olevassa taulukossa, jossa para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniinia merkitään koodilla S 86. Tulokset osoittavat hiirten elinajan pidentyvän, jos annetaan farmaseuttista koostumusta, joka sisältää 25, 50 tai 100 mg/kg annokset S 86:a; kuolettava annos (LD50) S 86:a on suurempi kuin 400 mg ruumiinpainon ki- 12 7 80 6 9 loa kohti hiirellä/ tämän määrän ollessa suurin mahdollinen, joka voidaan injektoida hiireen, johtuen tuotteen heikosta liukoisuudesta.

TAULUKKO I

Farmaseuttinen koostumus V.M.W M.S. P.S.

ja annettu annos (päivää) (%)

Syklofosfamidi 80 mq/kq_-1_24_

Syklofosfamidi 80 mg/kg -7,8 18 -25 + S 86_400 mq/kq_

Syklofosfamidi 80 mg/kg -5 24 0 + S 86_200 mq/kq_

Syklofosfamidi 80 mg/kg -3 26 +15 + S 86_100 mq/kq_

Syklofosfamidi 80 mg/kg -2 27,5 +15 + S 86_50 mq/kq_

Syklofosfamidi 80 mg/kg -4 26 +9 + S 86_25 mq/kq_

Esimerkki 10; Syklofosfamidia ja para-(metoksifenyyliasetyy-li)-dehydroalaniinia sisältävät farmaseuttiset koostumukset: annetun syklofosfamidin määrän vaihtelu

Miljoona "Taper Liver Tumor"-syöpäsolua injektoidaan intra-peritoneaalisesti 12:n täysikasvuisen uroshiiren ryhmille, NMRI-kantaa, hiirten painon ollessa n. 30 g. 48 tunnin kuluttua tästä injektiosta hiirille annetaan keksinnön mukaisesti valmistettua yhdistettä sisältäviä farmaseuttisia koostumuksia, taas intraperitoneaalisesti, koostumuksessa läsnäolevan syklofosfamidin määrän vaihdellessa; samoin annetaan ainoastaan syklofosfamidia sisältäviä koostumuksia.

Sen jälkeen mitataan kolme parametriä: (a) hiirten keskipainon vaihtelu viidentenä päivänä syöpä- i3 7806 9 kasvainten ymppäämisen jälkeen (V.M.W.), (b) 12:n em. farmaseuttisilla koostumuksilla tai pelkästään syklofosfamidilla käsitellyn hiiren keskimääräinen elinaika (M.S.) , (c) em. koostumuksilla käsiteltyjen hiirten elinajan piteneminen verrattuna samansuuruisella syklofosfamidiannoksella käsiteltyjen kontrollihiirten elinaikaan (P.S.).

Saadut tulokset on esitetty alla olevassa taulukossa, jossa para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniinia merkitään koodilla S 86. Tulokset osoittavat merkittävää pidentymistä elinajassa, kun annetaan em. farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät syklofosfamidia annoksina 360 mg/kg tai enemmän. On myös huomattava, että hiirten keskipaino vaihte-lee vähemmän silloin, kun hiiriä on käsitelty em. farmaseuttisilla koostumuksilla kuin silloin, kun niitä on käsitelty syklofosfamidilla.

i4 7 8069

TAULUKKO II

Farmaseuttinen koostumus V.M.W. M. S. P.S.

ja annettu annos (päivää) (%)

Syklofosfamidi 80 mq/kg_-2,2_21_

Syklofosfamidi 80 mg/kg -2,6 22 +5 + S 86_50 mq/kg_

Syklofosfamidi 180 mq/kg_-4,4_23_

Syklofosfamidi 180 mg/kg -3 18,5 -17 + S 86_50 mq/kg_

Syklofosfamidi 360 mq/kg_-6,6_31_

Syklofosfamidi 360 mg/kg -10 34 +10 + S 86_50 mg/kg_

Syklofosfamidi 450 mq/kg_-14_20_

Syklofosfamidi 450 mg/kg -10,4 34 +70 + S 86_50 mq/kg_

Syklofosfamidi 540 mq/kg_-18,6_12_

Syklofosfamidi 540 mg/kg -11,6 38,5 +204 + S 86_50 mq/kg_

Esimerkki 11: Poksorubisiinin myrkyllisyyden inhibitio in vivo

Doksorubisiinin yksittäisen annoksen (10 mg/kg) subkutaani injektio rotalle aiheuttaa maksassa sytokromi P450:n minimimäärän 20 %:n pienenemisen, laskun bentso(a)pyreenihydroksy-laasiaktiivisuudessa ja 85 %:n pienenemisen aldriini-mono-oksygenaasiaktiivisuudessa. Kysteamiinin, jota käytetään vertailu-antitoksisena aineena, antaminen ei suojaa doksorubisiinin vaikutukselta sytokromi P450:n tasoon. Toisaalta lasku bentso(a)pyreenihydroksylaasiaktiivisuudessa jää alle 20 %:n ja aldriini-mono-oksygenaasiaktiivisuuden pieneneminen vähenee 40 %:iin.

Yksittäisannos (10 mg/kg) koostumusta, joka sisälsi samansuuruiset painomäärät doksorubisiinia ja para-(metoksifenyy- is 7 8 0 6 9 liasetyyli)-dehydroalaniinia, injektoitiin rottiin. Havaittiin 60 %:n lisäys sytokromi P450:n minimimäärissä, 20 %:n kasvu bentso(a)pyreenihydroksylaasiaktiivisuudessa ja 5 %sn lasku aldriini-mono-oksygenaasiaktiivisuudessa.

Näistä kokeista käy ilmi, että keksinnön mukaisesti valmistettava asyloitu enamidiyhdiste suojaa täysin doksorubisii-nin yllämainituilta kolmelta toksiselta vaikutukselta.

Esimerkki 12; Farmaseuttinen koostumus

Farmaseuttinen koostumus valmistetaan sekoittamalla 4 g esimerkin 1 mukaisesti saatua para-(metoksifenyyliasetyyli)-dehydroalaniinia ja 0,2 g doksorubisiinia.

Miljoona L311 leukemiasolua injektoidaan intraperitoneaali-sesti kuuden rotan ryhmään, LOU/2-kantaa, rottien keskimääräisen ruumiinpainon ollessa 160 g. L311-leukemia on kasvain, joka voidaan siirrostaa LOU/2-kannan rottiin; tämä kasvain on kuvattu artikkelissa C. Deckers, F. Mare, L. Deckers-Passeu ja A. Trouet, Adriamycin Review, Osa I, 1973, sivut 79-86.

48 tuntia tämän injektion jälkeen ylläkuvattua farmaseuttista koostumusta annetaan rotille, taas intraperitoneaalises-ti, 105 mg rotan painokiloa kohti.

Vertailun vuoksi kahdentoista samanlaisen rotan ryhmälle, jolle myös on annettu miljoona L311-leukemiasolua, annetaan intraperitoneaalisesti ainoastaan doksorubisiinia 48 tunnin kuluttua L311-leukemiasolujen antamisen jälkeen, ja kahdentoista samanlaisen rotan ryhmää, jolle myös on annettu miljoona L311-leukemiasolua, ei käsitellä jälkeenpäin mitenkään .

Keskimääräinen elinaika leukemiasolujen antamisen jälkeen on 15,9 päivää käsittelemättömillä leukeemisilla rotilla, 27,6

Claims (3)

16 78069 päivää niillä, joita on käsitelty ainoastaan doksorubisii-nilla ja 33,6 päivää rotilla, joita oli käsitelty em. koostumuksella. Käsittelemättömistä leukeemisista rotista ensimmäinen kuolee neljätoista päivää leukemiasolujen antamisen jälkeen. Vastaava luku on kuusitoista päivää doksorubisiinilla käsiteltyjen rottien tapauksessa ja kaksikymmentäyksi päivää em. koostumuksella käsitellyillä rotilla. Leukemian hoito keksinnön mukaisesti valmsitttavilla yhdisteillä saa siten aikaan merkittävän elinajan pidentymisen leukeemisilla rotilla.