FI77036C

FI77036C - Foerfarande foer framstaellning av antibiotiskt aktiva, med en kvaternaer kvaeveheterocyklisk ring substituerade 2-etyltiokarbapen-2-emderivat.

Info

Publication number: FI77036C
Application number: FI832175A
Authority: FI
Inventors: Choung Un Kim; Jr Peter Francis Misco
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1982-06-18
Filing date: 1983-06-15
Publication date: 1989-01-10
Also published as: FI832175A0; AU1589183A; PT76887A; AT381941B; IT8321682A0; DE3321864A1; CA1273009A; US4536335A; FI832175L; KR840005145A; FR2528847B1; MY8800124A; FI77036B; IL69002A; FR2528847A1; SE460791B; PT76887B; GB8316617D0; AU567294B2; HU191052B

Description

x 77036

Menetelmä antibioottisesti aktiivisten kvaternäärisellä typpiheterosyklisellä renkaalla substituoitujen 2-etyyli-tiokarbapen-2-eemijohdannaisten valmistamiseksi 5 Tämä keksintö koskee menetelmää uusien antibiootti sesti aktiivisten karbapeneemijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava (I) ch3 OH 9 ? \ I ^S-CH0-CH0-Ntt ) io ch3ch--'-f Y 2 2 i J-N \ 2

CT 'COOR

2 jossa R on paranitrobentsyyli tax vastaioni ja 0 on pyrrolidiini-, mortoliini-, tiomortoliini-, tiomorfo-liinioksidi-, 4-metyyli-l-piperatsiini- tai 4,4-dimetyy-lipiperatsiinirengas, joka on sitoutunut etyleeniryhmään 20 rengastypen välityksellä muodostaen täten kvaternäärisen . . ammoniumryhmän; tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi.

Kirjallisuudesta tunnetaan lukuisia yQ -laktaami-johdannaisia, joissa on karbapeneemirunko 25 65/^2

P-JL

0 ^ 4 30 Näiden karbapeneemijohdannaisten on ilmoitettu olevan käyttökelpoisia bakteerien vastaisina aineina ja/tai -laktamaasi-inhibiittoreina.

Ensimmäiset karbapeneemiyhdisteet olivat luonnontuotteita kuten tienamysiini, jonka kaava on 2 77036 Τ ψ Ν-γ'SCH0CH0NH0 5 1 0*J— —\

COOH

jota on saatu käyttämällä kantaa Streptomyces cattleya (US-patentti 3 950 357) . Tienamysiini on poikkeuksellisen 10 tehokas laajaspektrinen antibiootti, joka on huomattavan aktiivinen erilaisia Pseudomonas-lajeja vastaan, jotka tunnetusti ovat olleet resistantteja yö-laktaamiantibioot-tien suhteen.

Tienamysiinin ja sille läheisten, luonnossa esiin-15 tyvien karbapeneemijohdannaisten poikkeuksellisen biologisen aktiivisuuden vuoksi on valmistettu suuri määrä tienamysiinin johdannaisia. Näitä on kuvattu mm. EP-patentti-julkaisuissa 6639, 21 082, 24 832 ja 44 170; US-patentti-julkaisuissa 4 189 493, 4 194 047, 4 226 870 ja 4 235 920; 20 GB-patenttijulkaisuissa 1 604 275 ja 1 604 276; ja DE-ha-kemusjulkaisuissa 2 652 674 - 2 652 681, 2 724 560, 2 819 453 ja 2 819 479. Näihin tunnettuihin yhdisteisiin sisältyy myös yhdisteitä, joissa 2-aseman substituentissa on kvaternäärinen ammoniumryhmä. Esim. US-patenttijulkai-25 sun 4 226 870 mukaan 2-aseman substituentti voi olla mm.

? -S-CH2CH2-NH-C-CH2-j 30 ja US-patenttijulkaisussa 4 235 920 on kuvattu yhdisteitä, joilla on kaava OH 0 SCH2CH2NR1R2R7 -N -^ 0 2 35 O COÖ^ 3 77036 5 6 7 jossa R , R ja R ovat toisistaan riippumatta H tai substi-tuoitu tai substituoimaton alkyyli, alkenyyli, alkinyyli, sykloalkyyli, sykloalkenyyli, sykloalkenyylialkyyli, syk-loalkyylialkyyli, aryyli, aralkyyli, heteroaryyli tai he-5 teroaralkyyli.

EP-patenttijulkaisussa 21 082 on kuvattu yhdisteitä, joilla on kaava 10 Ψ ®Nn SCH~CH0NH-f \ ^Γ~ϊ if I u —N-^coo® 15 jossa & joka on liittyneenä tienamysiinin aminotyppiryhmään, mer-20 kitsee mono- tai polysyklistä N-pitoista heterosyklostä ryhmää ja R on H tai substituoitu tai substituoimaton al kyyli, aryyli, alkenyyli, heterosyklyylialkenyyli, aralke-nyyli, heterosyklyylialkyyli, aralkyyli, -NR2, COOR, CONR2, -OR tai CN.

25 Yhdistettä oh φ e»

___^\/SCH2CH2N(CH3) 3 A

S-N-\

30 0 C00H

jossa A on farmaseuttisesti hyväksyttävä anioni, on selostettu myös julkaisussa Recent Advances in the Chemistry of £>-Lactam Antibiotics, Royal Society of Chemistry, 35 London, 1981, s. 240-254, jossa sen bakteerienvastaiseksi keskimääräiseksi aktiivisuudeksi on ilmoitettu noin 1/1-2/3 tienamysiinin aktiivisuudesta.

77036 4

Vaikkakin edellä on mainituissa julkaisuissa selostettu karbapeneemijohdannaista, joissa on 2-substituentti-na ryhmä -S-A-Het 5 jossa A merkitsee alkyleeniryhmää ja Het merkitsee hetero-syklistä tai heteroaromaattista ryhmää, niissä ei ole kuvattu karbapaneemijohdannaisia, joissa Het olisi radikaali, jonka kaava on CH-j 10 jossa ®o 15 on edellä kaavan I yhteydessä määritelty kvaternäärinen typpiheterosyklinen ryhmä.

Kirjallisuudessa kuvattujen karbapeneemijohdannaisten suuresta määrästä huolimatta edelleen esiintyy tarvetta uusista karbapeneemeistä, jotka olisivat aktiivisuus-20 spektrinsä, tehokkuutensa, stabilisuutensa ja/tai toksisten sivuvaikutustansa osalta edullisempia kuin tunnetut karbapeneemijohdannaiset.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistetuille uusille karbapeneemijohdannaisille on tunnusomaista, että niissä 25 on 2-substituentti, jonka kaava on CH-,

-s-ch2ch2-n J

jossa

30 /'""N

on pyrrolidiini-, morfoliini-, tiomorfoliini-, tiomorfolii-nioksidi-, 4-metyyli-l-piperatsiini- tai 4,4-dimetyylipi-peratsiinirengas, joka on sitoutunut etyleeniryhmään ren-35 gastypen välityksellä muodostaen täten kvaternäärisen ammo-niumryhmän.

5 77036

Keksinnön mukaisesti valmistetut kaavan I mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita bakteerien vastaisia aineita.

Kaavan I mukaisissa uusissa yhdisteissä on karba-peneemirunko 5 6_ 7 N_1.3 ο-”* ja siten niitä voidaan nimittää l-karba-2-peneemi-3-karb-10 oksyylihappojohdannaisiksi. Vaihtoehtoisesti yhdisteiden voidaan katsoa omaavan perusrakenteen S_5/^x3

15 J-N-U

ja nimittää niitä 7-okso-l-atsabisyklo(3,2,0)hept-2-eeni- 2-karboksyylihappojohdannaisiksi. Vaikkakin tämän keksinnön mukaisesti valmistettaviin yhdisteisiin kuuluvat se-20 kä yhdisteet, joissa 5,6-asemien protonien suhteellinen stereokemia on cis-, että vastaavat trans-isomeerit, niin edulliset yhdisteet ovat 5R,6S(trans)-konfiguraatiossa kuten tienamysiini.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hy-25 väksyttäviä suoloja ovat toksittomat happoadditiosuolat, esim. suolat epäorgaanisten happojen kuten kloorivetyha-pon, bromivetyhapon, jodivetyhapon, fosforihapon, rikkihapon jne. kanssa ja suolat orgaanisten happojen kuten maleiinihapon, etikkahapon, sitruunahapon, meripihkahapon, 30 bentsoehapon, viinihapon, fumaarihapon, mantelihapon, as-korbiinihapon, maitohapon, glukonihapon ja omenahapon kanssa. Happoadditiosuolojen muodossa olevat kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan esittää kaavana 6 77036 CH3

OH H H _ \ /ifPN

CH3CH---1· 1r 22 vy 5 ^ N COOR2 jolloin R2 on H tai paranitrobentsyyli, jossa xf0 merkitsee happoanionia. Vasta-anioni X0 voidaan valita siten, että saadaan terapeuttiseen antoon soveltuvia farmaseutti-10 sesti hyväksyttäviä suoloja, mutta 5^ voi olla myös toksinen anioni, jolloin tämä ioni voidaan myöhemmin poistaa tai korvata farmaseuttisesti hyväksyttävällä anionilla terapeuttisen käyttöön soveltuvan aktiivisen lopputuotteen muodostamiseksi.

15 Edullisimmilla kaavan I mukaisilla yhdisteillä on absoluuttinen konfiguraatio 5R, 6S, 8R.

On ymmärrettävää, että tiettyjä kaavan I piiriin sisältyviä tuotteita voidaan muodostaa optisina isomeereinä samoin kuin niiden epimeerisinä seoksina. Tämän keksin-20 nön piiriin kuuluu kaikkien tällaisten optisten isomeerien ja epimeeristen seosten valmistus. Esimerkiksi 6-aseman hydroksietyylisubstituentti voi olla joko R- tai S-konfi-guraation mukainen ja saadut isomeerit samoin kuin niiden epimeeriset seokset sisältyvät tämän keksinnön piiriin.

25 Kaavan I mukaisia karbapeneemijohdannaisia valmis tetaan keksinnön mukaisesti siten, että a) (1) yhdisteen, jonka kaava (III) on

OH H H

30 CH^CH -1- \_I_I m

Qr \ 2'

COOR

2' jossa R on tavallinen helposti poistettavissa oleva karb-35 oksyylisuojaryhmä, annetaan reagoida inertissä orgaanises- 7 77036 sa liuottimessa difenyylikloorifosfaatin kanssa emäksen läsnäollessa, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (IV) on f : OP(OCfiH.) „ 5 CH-CH--f Y 6 5 2

3 1 IV

o ^ ^ 2'

ϋ COOR

2 ' jossa R on edellä määritelty; 10 (2) kaavan IV mukaisen yhdisteen annetaan reagoida inertissä orgaanisessa liuottimessa emäksen läsnäollessa merkaptaanireagenssin kanssa, jonka kaava on HS-CI^-Ci^-OH, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (V) on 15 ^ f ^/-v. . s-ch0-ch9-oh

ch3ch--γ Y V

O ^ COOR2' 2' 20 jossa R on edellä määritelty; (3) kaavan V mukaisen yhdisteen annetaan reagoida inetissä orgaanisessa liuottimessa ja emäksen läsnäollessa metaanisulfonyylikloridin tai sen kanssa toiminnallisesti ekvivalentin asylointiaineen kanssa, jolloin saadaan 25 yhdiste, jonka kaava (VI) on

H H

CH3?S--i^\^6-CH2-CH2-0S02CH3 <7- N -\ , Vl 30 O COOR2 2' jossa R on edellä määritelty; (4) kaavan VI mukaisen yhdisteen annetaan reagoida inertissä orgaanisessa liuottimessa jodidi-ionilähteen 35 kanssa siten, että metaanisulfonyylioksiryhmä korvautuu jodiryhmällä ja muodostuu yhdiste, jonka kaava (II) on β 77036

OH H H

I / S-CH0-CH0-I

CH-CH--X TT 1 1

3 I II

5 J-N--. 2,

COOR

2 1 jossa R on edellä määritelty; ja (5) kaavan II mukaisessa yhdisteessä suoritetaan nukleofiilinen korvausreaktio inertissä orgaanisessa liu-10 ottimessa hopeaionin läsnäollessa amiinin kanssa, jonka kaava on CH^o jossa

O

on edellä määritelty siten, että kaavan II mukaisen yhdisteen jodi korvautuu ryhmällä

CH

20 \<Q

ja muodostuu yhdistettä, jonka kaava (I') on 25 ?H H f <5 CH3CH--j/^^^S_CH2~CH2_N>v__y ^ S*-N-\ 2,

O COOR

jossa X® on vasta-ioni ja 30 -0 2' ja R ovat edellä määritellyt, ja tarvittaessa poistetaan 21 karboksyylisuojaryhmä R , jolloin saadaan vastaava suojaamaton kaavan I mukainen yhdiste tai sen farmaseuttises-35 ti hyväksyttävä suola, tai 9 77036

b) yhdisteen, jonka kaava (III) on OH H H

5 CH3™--YY III

^ N \ 2'

O COOR

2 1 jossa R on edellä määritelty, annetaan reagoida inertis-sä orgaanisessa liuottimessa difenyylikloorifosfaatin 10 kanssa emäksen läsnäollessa, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (IV) on OH H H ° 15 CH3CH-- ^COOR2' 2 1 jossa R on edellä määritelty, ja kaavan IV mukaisen yhdisteen annetaan reagoida tioliyhdisteen kanssa, jonka 20 kaava (VII) on CH3

HS“CH2“CH2-1^^) X<^ VII

0 25 jossa X on edellä määritelty, jolloin muodostuu yhdiste, jonka kaava on CH3 ΪΗ H S-CH^-CH^-N^) X0 30 CH~CH---( 7^ 2 2 ^ 2.

O COOR

jossa

35 -O

10 770 36 2 1 ja R ovat edellä määritellyt, ja tarvittaessa poistetaan 2 1 karboksyylisuojaryhmä R , jolloin saadaan vastaavaa suojaamaton kaavan I mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, ja haluttaessa muutetaan menetel- 2

5 mällä a) tai b) saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa R

on paranitrobentsyyli, kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi, 2 jossa R on vastaioni, poistamalla paranitrobentsyyliryh-mä katalyyttisellä hydrauksella.

Menetelmävaihtoehdossa a) kaavan III mukainen lähiö töaine saatetaan reagoimaan inertissä orgaanisessa liuot-timessa kuten metyleenikloridissa, asetonitriilissä tai dimetyyliformamidissa suunnilleen ekvimoolimäärän kanssa difenyylikloorifosfaattia emäksen kuten di-isopropyyli-etyyliamiinin, trietyyliamiinin, 4-dimetyyliaminopyridii-15 nin tai näiden kaltaisen emäksen läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan IV mukaista yhdistettä. Asylointi poistuvan difenyylifosforyylioksiryhmän saamiseksi 2-asemaan suoritetaan edullisesti lämpötilassa noin -20 - +40°C, edullisimmin noin 0°C. Kaavan IV mukainen välituote voi-20 daan haluttaessa eristää, mutta sitä voidaan haitatta käyttää seuraavassa vaiheessa eritämättä tai puhdistamatta.

Seuraavaksi kaavan IV mukainen välituote muutetaan tavallisella korvausreaktiolla kaavan V mukaiseksi välituotteeksi. Tällöin kaavan IV mukaisen välituotteen voi-25 daan antaa reagoida suunnilleen ekvimoolimäärän kanssa merkaptaanireagenssia, jonka kaava on HS-CHj-CI^-OH, inertissä orgaanisessa liuottimessa kuten dioksaanissa, dimetyyliformamidissa, dimetyylisulfoksidissa tai asetonitriilissä ja emäksen kuten di-isopropyylietyyliamiiniin, 30 trietyyliamiinin, natriumvetykarbonaatin, kaliumkarbonaa tin tai 4-dimetyyliaminopyridiinin läsnäollessa. Korvautumisen kannalta lämpötilalla ei ole ratkaisevaa merkitystä, mutta edullinen lämpötila-alue on noin -40-+25°C. Tarkoituksenmukaisimmin reaktio suoritetaan jäähdytystä 35 käyttäen, esim. noin 0°C:ssa.

n 77036

Kaavan V mukainen välituote asyloidaan sitten me-taanisulfonyylikloridilla tai sen kanssa ekvivalentilla toiminnallisella asylointiaineella kuten metaanisulfonihap-poanhydridillä inertissä orgaanisessa liuottimessa ja 5 emäksen läsnäollessa, jolloin yhdisteeseen saadaan poistuva metaanisulfonyylioksiryhmä. Asylointi suoritetaan inertissä orgaanisessa liuottimessa kuten tetrahydrofuraanis-sa, metyleenikloridissa, astonitriilissä tai dimetyyliform-amidissa ja sopivan emäksen kuten di-isopropyylietyyli-10 amiinin, trietyyliamiinin, 4-dimetyyliaminopyridiinin ja näiden kaltaisen emäksen läsnäollessa. Reaktio voidaan suorittaa laajalla lämpötila-alueella, esim. -40-+40°C:ssa, mutta suoritetaan edullisimmin jäähdyttämällä, esim. noin -30 - -40°C:ssa.

15 Saatu kaavan VI mukainen välituote saatetaan sen jälkeen korvausreaktioon, jossa metaanisulfonyylioksiryhmä korvautuu jodilla, niin että muodostuu kaavan II mukainen välituote. Tämän poistuvan jodisubstituentin on todettu helpottavan suuresti kaavan I mukaisten karbapeneemi-20 lopputuotteiden valmistusta.

Poistuvan metaanisulfonyylioksiryhmän korvaaminen jodilla suoritetaan antamalla kaavan VI mukaisen välituotteen reagoida jodidi-ionilähteen kanssa inertissä orgaanisessa liuottimessa kuten asetonissa, dimetyyliformamidis-25 sa tai dimetyylisulfoksidissa. Tällöin voidaan käyttää mitä tahansa yhdistettä, joka ionisoituu käytettävässä liuottimessa siten, että muodostuu jodidi-ioneja, esim. alkalimetallijodidia kuten NaJ:a tai KJ:a. Korvausreaktion lämpötilalla ei ole ratkaisevaa merkitystä, mutta huoneen 30 lämpötila tai sitä korkeammat lämpötilat ovat edullisim mat reaktion saattamiseksi loppuun kohtuullisen ajan kuluessa. Jodidi-ionilähdettä käytetään sellainen määrä, että jodidi-ioneja saadaan kaavan VI mukaisen välituotteen suhteen suunnilleen ekvivalenttimäärä tai ylimäärin.

35 Haluttuja kaavan I mukaisia karbapeneemijohdannai sia saadaan sitten kaavan II mukaisen yhdisteen jodisubsti- tuentti nukleofiilisesti halutulla typpipitoisella hetero- syklisellä nukleofiilisellä ryhmällä 12 7 70 3 6 CH- xo

Kaavan II mukaisen välituotteen annetaan reagoida ainakin ekvivalenttimäärin, edullisesti ylimäärin käytetyn amiinireagenssin kanssa inertissä orgaanisessa liuot-timessa ja hopea-ionin läsnäollessa. Sopiva inerttejä or-10 gaanisia liuottimia ovat esimerkiksi tetrahydrofuraani, dioksaani, metyleenikloridi, diglymi, dimetoksietaani ja näiden kaltaiset liuottimet. Hopea-ionilähteenä voidaan käyttää mitä tahansa hopeayhdistettä, joka pääasiallisesti ionisoituu liuottimessa antaen hopiaioneja ja neutraa-15 Iin anionin, esim. yhdistettä AgClO^. Yleensä on edullista käyttää hopeaionia suunnilleen ekvivalenttimäärin (kaavan II mukaisen yhdisteen suhteen) korvautumisen helpottamiseksi. Reaktio voidaan suorittaa laajalla lämpötilaalu-eella, esim. välillä noin -25 - noin +25°C, mutta edulli-20 sesti se suoritetaan noin 0°C:ssa. Näin saadussa kaavan I' mukaisessa yhdisteessä on siihen liittyneenä vasta-ioni (joka on peräisin esim. käytetystä hopeasuolasta), joka voidaan tässä vaiheessa korvata tavallisin menetelmin erilaisella vasta-anionilla, joka on farmaseuttises-25 ti hyväksyttävä. Vaihtoehtoisesti vasta-ioni voidaan pois taa myöhemmin suojauksen poistovaiheen aikana.

2'

Karboksyylisuojaryhmä R poistetaan kaavan 1' mukaisesta yhdisteestä tavallisin menetelmin kuten solvo-lyysin, kemiallisen pelkistyksen tai hydrauksen avulla.

30 Käytettäessä p-nitrobentsyylin, bentsyylin, bentshydryy- lin tai 2-naftyylimetyylin kaltaista suojaryhmää, joka voidaan poistaa hydraamalla katalyyttisesti, kaavan 1' mukaista yhdistettä voidaan käsitellä sopivassa liuottimessa kuten dioksaani-vesi-etanoli-seoksessa, tetrahydro-35 furaani-dietyylieetteri-puskuri-seoksessa, tetrahydrofu- raani-dikaliumvetyfosfaatin vesiliuos-isopropanoli- seoksessa tai vastaavassa liuottimessa vetypaineen ollessa 13 77036 1-4 ilmakehää hydrauskatalyytin kuten palladium/puuhiilen, palladiumhydroksidin, platinaoksidin tai näiden kaltaisen katalyytin läsnäollessa lämpötilan ollessa välillä 0-50°C, 2' noin 0,24-4 tunnin ajan. R :n ollessa o-nitrobentsyylin 5 kaltainen ryhmä, suojauksen poistoon voidaan käyttää myös fotolyysiä. 2,2,2-trikloorietyylin kaltaiset suojaryhmät voidaan poistaa lievän sinkkipelkistyksen avulla. Alkyyli- suojaryhmä voidaan poistaa katalyytillä, jonka muodostaa seos, jossa on palladium-yhdistettä ja trifenyylifosfii- 10 nia aproottisessa liuottimessa kuten tetrahydrofuraanis- sa, dietyylieetterissä tai metyleenikloridissa. Samalla tavalla muut tavalliset karboksyylisuojaryhmät voidaan poistaa alan asiantuntijan tuntemin menetelmin. Kaavan 1' 2' mukaisia yhdisteitä, joissa R on fysiologisesti hydro-15 lysoituva esteri kuten asetoksimetyyli, ftalidyyli, in-danyyli, pivaloyylioksimetyyli, metoksimetyyli, jne., voidaan antaa suoraan potilaalle suojausta poistamatta, koska sellaiset esterit hydrolysoituvat in vivo fysiologisissa olosuhteissa.

20 Tiettyjen yleiskaavan 1' mukaisten yhdisteiden val mistukseen voi sisältyä lisäreaktiovaihe juuri ennen suojauksen poistoreaktiota tai sen jälkeen. Täten esimerkiksi halutun heterosyklisen typpipitoisen substituentin 25 φ n^) sisältäessä sulfoksidi-ryhmän voidaan ensin valmistaa edellä mainitulla menetelmällä vastaava yhdiste, jossa on rikkipitoinen heterosyklinen ryhmä, ja saatua yhdistettä 30 käsitellään joko ennen karboksyylin suojauksen poistoa tai sen jälkeen hapettamalla, niin että muodostuu vastaava sulfoksidilopputuote.

Menetelmävaihtoehdossa b) käytetään kaavan IV mukaista välituotetta, jota voidaan valmistaa edellä selos-35 tetulla tavalla. Tavallisesti se valmistetaan in situ kaavan III mukaisesta yhdisteestä ja käytetään eristämättä 14 77036 tai puhdistamatta seuraavassa menetelmävaiheessa, jossa kaavan IV mukainen välituote reagoimaan kvaternäärisen amiinitiolin kanssa, jonka kaava on 5 CH0 e

HS-CH2-CH2-N J Xc VII

0 ... ... jossa X on vasta-anioni, joka on peräisin vahvasta hapos- 10 ta esim. Cl , Br , CH^SO^-, CF^SO^- tai CH3 -S03~ 15 on edellä määritelty. Reaktio suoritetaan inertissä liuot-timessa kuten asetonitriilissä, asetonitriili-H20-seok-sessa, asetonitriilidimetyyliformamidi-seoksessa, tetra-hydrofuraanissa, tetrahydrofuraani-H20-seoksessa tai ase-20 tonissa emäksen läsnäollessa. Emäksen luonteella ei ole ratkaisevaa merkitystä. Parhaat tulokset on kuitenkin saatu , kun on käytetty ei-nukleofiilistä tertiääristä amiini-emästä kuten di-isopropyylietyyliamiinia, 1,8-diata-bisyklo/"5,4,07undek-7-eeniä, 1,5-diatsabisyklo/"4,3, OJnon-25 5-eeniä tai tri(C^-C^)alkyyliamiinia kuten trietyyliamii-nia, tributyyliamiinia tai tripropyyliamiinia. Reaktio voidaan suorittaa laajalla lämpötila-alueella, esim. vä lillä -15°C - huoneen lämpötila, mutta edullisesti se suoritetaan lämpötilassa, joka on välillä noin -15-+15°C, 30 edullisimmin n. 0°C:ssa

Karbapeneemituotteessa, joka saadaan antamalla kaavan VII mukaisen kvaternäärisen amiinitiolin VII reagoida kaavan IV mukaisen välituotteen kanssa, on siihen as-

& A

sosioituneena vasta-anioni (s.o. (CgH^O)2P02 , Cl tai 35 anioni, joka on assosioituneena kvaternäärisen tiolin kanssa), joka voidaan tässä vaiheessa korvata tavallisin 15 77036 menetelmin erilaisella vasta-anionilla, esim. anionilla, joka on farmaseuttisesti hyväksyttävämpi. Vaihtoehtoisesti vasta-anioni voidaan poistaa myöhemmän suojauksen pois-tovaiheen aikana. Kvaternoidun karbapeneemi-yhdisteen ja 5 vasta-anionin muodostaessa liukenemattoman tuotteen, tuote voi kiteytyä erilleen muodostuessaan ja voidaan ottaa talteen puhtaana suodattamalla.

Sen jälkeen, kun haluttu kaavan 1' mukainen karba- peneemi-tuote on muodostettu edellä selostetun reaktio- 2 1 10 vaiheen mukaisesti, voidaan karboksyylisuojaryhmä R haluttaessa poistaa tavallisin menetelmin kuten edellä me-netelmävaihtoehdon a) yhteydessä on selostettu.

Kaavan VII mukaisia tioliyhdisteitä voidaan valmistaa esimerkiksi antamalla sulfidin, jonka kaava on 15 .S

H2C --S"CH2 reagoida edellä määritellyn heterosyklisen amiinin CH. ^ 20 ^ ja vahvan hapon kanssa. Reaktio voidaan suorittaa inertin orgaanisen liuottimen läsnäollessa tai ilman sitä, joka liuotin on edullisesti polaariton orgaaninen liuotin kuten metyleenikloridi, bentseeni, ksyleeni, tolueeni tai 25 näiden kaltainen liuotin. Amiini- ja sulfidireagenssien ollessa nesteitä tai kiinteän amiinin liuetessa nestemäiseen sulfidi-reagenssiin, on suositeltavaa, että reaktio suoritetaan lisäliuotinta käyttämättä.

Reaktiossa kulloinkin käytettävällä vahvalla hapol-30 la ei ole ratkaisevaa merkitystä ja se voi olla esimerkiksi vahva epäorgaaninen tai orgaaninen happo kuten kloorivetyhappo, bromivetyhappo, metaanisulfonihappo, p-tolueenisulfonihappo, trifluorimetaanisulfonihappo, jne.

Kaavan VII mukainen kvaternäärinen amiinitioliyh-35 diste voidaan muodostaa lämpötilassa noin -20 - noin 100°C. Edullinen lämpötila on yleensä alueella noin 50-70°C.

ie 77036

Sulfidireagenssia, aromaattista amiinia ja happoa käytetään edullisesti siten, että sulfidia ja happoa on suunnilleen ekvimoolimäärin ja amiinia ylimäärin, esim. kaksi - kolme moolia amiinia moolia kohden sulfidia tai 5 happoa.

Kvaternäärisessä amiinitioliyhdisteessä on siihen assosioituneena vasta-anioni, joka määräytyy kulloinkin käytetyn hapon perusteella. Tässä vaiheessa on tietenkin mahdollista suorittaa substituointi erilaisella vasta-10 anionilla tavallisin menetelmin käytettäväksi seuraavassa reaktiossa kaavan IV mukaisen karbapeneemivälituotteen kanssa.

Samoin kuin muut β-laktaamiantibiootit myös kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa tunnetuin mene-15 telmin farmaseuttisesti hyväksyttäviksi suoloiksi, jotka teholtaan ovat oleellisesti ekvivalentteja vapaiden kaavan I mukaisten yhdisteiden kanssa. Täten esimerkiksi kaa- 2 van I mukainen yhdiste, jossa R on anioninen varaus, voidaan liuottaa sopivaan neutraaliin liuottimeen ja sitten 20 lisätään ekvivalentti määrä farmaseuttisesti hyväksyttä vää happoa. Haluttu happoadditiosuola voidaan saada talteen tavallisin menetelmin, esim. saostamalla liuottimel-la, kylmäkuivaamalla, jne.

2

Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on vety tai an-25 ioninen varaus, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, voidaan myöskin muuttaa tavallisin menetelmin vastaa- 2 vaksi yhdisteeksi, jossa R on fysiologisesti hydrolysoituva esteriryhmä, tai kaavan I mukainen yhdiste, jossa 2 R on tavallinen karboksyylisuojaryhmä, voidaan muuttaa 2 30 vastaavaksi yhdisteeksi, jossa R on vety, anioninen varaus tai fysiologisesti hydrolysoituva esteriryhmä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Uudet yleiskaavan I mukaiset karbapeneemi-johdan-. 2 naiset, joissa R on vety, anioninen varaus tai fysiolo-35 gisesti hydrolysoituva karboksyylisuojaryhmä, tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat, ovat tehokkaita i7 77036 antibiootteja, joilla on erilaisten gram-positiivisten ja gram-negatiivisten bakteerien vastainen vaikutus ja niitä voidaan käyttää esimerkiksi eläinten rehuli-säaineina kasvun edistämiseksi, ravinnon säilytysainei-5 na, bakteerimyrkkyinä teollisissa sovellutuksissa, esimerkiksi vesipohjaisissa maaleissa ja paperitehtaiden kiertovedessä estämään haitallisten bakteerien lisääntymistä ja desinfioimisaineina torjumaan ja ehkäisemään haitallisten bakteerien lisääntyminen lää-10 kintä- ja hampaanhoitovälineistössä. Erityisen käyt tökelpoisia ne ovat kuitenkin hoidettaessa ihmisten ja muiden nisäkkäiden infektiotautia, jonka ovat aiheuttaneet gram-positiiviset tai gram-negatiiviset bakteerit.

15 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja farma seuttisesti tehokkaita yhdisteitä voidaan käyttää sellaisinaan tai formuloituina farmaseuttisiksi koostumuksiksi, jotka sisältävät aktiivisen karbapenee-mi-aineosan lisäksi farmaseuttisesti hyväksyttävää 20 kantajaa tai laimenninta. Yhdisteitä voidaan antaa eri tavoin; pääasiallisia edullisia tapoja ovat anto suun kautta, paikallisesti tai parenteraalisesti (laskimonsisäisenä tai lihaksensisäisenä ruiskeena). Farmaseuttiset koostumukset voivat olla kiinteänä 25 muotona kuten kapseleina, tabletteina, jauheina jne., tai nestemäisessä muodossa kuten liuoksina, suspensioina tai emulsioina. Injektoitaviksi tarkoitetut koostumukset, mikä tapa on ensisijainen antomuoto, voidaan valmistaa annosyksikkömuotoon ampulleihin 30 tai moniannoksisiin säiliöihin ja ne voivat sisältää formulointiaineita kuten suspendointiaineita, stabi- 18 77036 lointiaineita ja dispergointiaineita. Koostumukset voivat olla käyttövalmiissa muodossa, joka soveltuu käsiteltäväksi uudelleen antoajankohtana sopivan väliaineen kuten steriloidun veden kanssa.

5 Annettava annos riippuu suuresti kulloinkin käy tettävästä yhdisteestä, formuloidusta koostumuksesta, antotiestä, potilaan lajista ja kunnosta ja hoidettavasta kohdasta ja elimistöstä. Tietyn ensisijaisen annoksen ja antotien valinta jää siten hoitavan henkilön 10 harkinnan varaan. Yleensä kuitenkin yhdisteitä voidaan antaa parenteraalisesti tai suun kautta nisäkäskohteil-le määrin noin 5-200 mg/kg/päivä. Anto suoritetaan yleensä jaettuina annoksina, esim. kolme - neljä kertaa päivässä.

15 Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen karba- peneemien tehokas laajaspektrinen bakteerien vastainen aktiivisuus sekä in vitro että in vivo ja yhdisteiden alhainen toksisuus ilmenevät seuraavassa esitetyistä biologisista arvoista.

20 Aktiivisuus in vitro

Esimerkissä 1 valmistetun karbapeneemiyhdisteen näyte liuotettiin veteen ja laimennettiin ravintoliemellä, minkä jälkeen sen todettiin antavan seuraavat minimi-estokonsentraatiot (M.I.C) yksikköinä mikrogramma/ml 25 seuraavassa mainittujen mikro-organismien suhteen, jolloin määritys suoritettiin yli yön kestäneen in-kuboinnin (37°C) jälkeen putkilaimennusmenetelmällä. Vertailuyhdisteenä oli N-formimidoyyli-tienamysiini.

Esimerkin 1 karbapeneemijohdannaisen baktee-30 rien vastainen aktiivisuus i9 77036

In vitro MIC (mikrogrammaa/ml)

Uusi N-formimidoyyli-tiena-

Organismi yhdiste mysiini_ S. cneumor.i ae A-9585 0.002 0.004 S. pyogenes A-9604 0.002 0.001 S. aureus A-9537 0.008 0.004 S. aureus + 50% serun A-9537 0.016 0.016 S. aureus

(Pen-res.) A-9606 0.016 0.00S

S. faecalis A20688 1 0-= £· coll A15119 0-03 0.016 E. eoli A20341-1 0.03 0.03 X. onevcnoniae A-9664 0.06 0.13 K. sneimoniae A20463 0.13 0.06 P. .Tiirabilis A-9900 0.13 0.06 P. vulaaris A21559 0.03 0.03 ?. .T.orcanii A15153 0.13 0.13 P. rettceri A22424 0.25 0.25 S. marceseens A20019 0.06 0.03 ..: E. cloacae A-9569 0-25 0.06 E. cloacae A-9656 0.13 0.06 P. aeruoir.osa A-9843A 4 1 ?. aerucinosa A21213 0>25 0.25 3. fraqilis A22862 0.13 0.016 : ‘ ; B. fracilis A22053 0.25 0.06 3. fraqilis A22696 0.5 0.13 3. fraqilis A22863 0.13 1 20 77036

Aktiivisuus in vivo

Esimerkissä 1 valmistetun yhdisteen ja N-formimi-doyyli-tienamyysin terapeuttinen tehokkuus in vivo annettuina lihaksensisäisesti hiirille, hiiret oli koetta var-5 ten infektoitu erilaisilla organismeilla, on esitetty seuraavassa taulukossa. Siinä on mainittu PD^Q-arvo (annos, yksikköinä mg/kg, joka tarvitaan antamaan suoja 50 %:lle infektoiduista hiiristä).

Suojavaikutus lihaksensisäisesti käsitellyillä 10 infektoiduilla hiirillä_ PD^/käsittely (mg/kg)

Testiannos Esimer- N-formimido- (organismien kin 1 yylitienamy

Organismi lukumäärä yhdiste siini 15 P. mirabilis A-9900 4 x 10^ > 10 31/151 P. aeruginosa A-9843a 3 x 10^ 3 0,51 * Historialliset arvot 20 Käsittelyohjelma:

Hiiriä käsiteltiin lihaksensisäisesti yhdisteillä 0 ja 2 tuntia infektoinnin jälkeen; kussakin kokeessa käytettiin 5 hiirtä annosta kohden.

Toksisuus 25 Määritettiin esimerkissä 1 valmistetun yhdisteen toksisuus sen jälkeen, kun hiirille oli annettu sitä kal-lonsinäisesti; tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.

Toksisuus hiirille kallonsisäisen annon jälkeen__ 30 1LD50 Suurin annos (mg/kg)

Yhdiste (mcr/iccrl kliinisten toksisuus—

Ynoiste img/kg^ merkkien ilmaantumatta

Esimerkin 1 yhdiste >10 >10 N-formimidoyyli- 35 tienamysiini 32 **5

Keskiarvo 25/hiirtä/yhdiste 21 77036

Pitoisuus hiirien veressä lihaksensisäisen annon jälkeen_

Esimerkissä 1 valmistetun yhdisteen pitoisuudet veressä ja puoliintumisaika määritettiin sen jälkeen kun sitä oli annettu hiirille lihaksensisäisesti 20 mg/kg:n annos; tulokset on esitetty alla olevassa taulukossa.

Pitoisuus veressä (jttg/ml)

10 Yhdiste 10 20 30 45 60 90 *tj *AUC

minuutteja annon jälkeen (min) (/ug.t/ —— ' ml)

Esimerkin 1 yhdiste 13,7 10,2 5,7 2,1 <0,6 <0,6 11 *5,4 15 N-formimidoyyli- tienamysiini 12,6 9,9 7,3 2,6 0,7 <0,3 9 6

Yhdisteet liuotettiin 0,1-mol. fosfaattipuskuriin pH 7 .

20 Arvot ovat yhden kokeen arvoja; yhdistettä kohden käytetty 4 hiirtä.

*t| tarkoittaa puoliintumisöikaa minuutteina **AUC tarkoittaa veren konsentraatio-aika-käyrän alapuolista aluetta.

25 Virtsasta takaisin saadun esimerkissä 1 valmiste- - - tun yhdisteen määrä hiirille lihaksensisäisesti tapahtu- .1 .* neen annon (20 mg/kg) jälkeen on esitetty seuraavassa taulukossa.

Virtsasta takaisin saatu määrä; anto hiirille li- 30 haksensisäisesti annoksean 20 mg/kg_

Annoksesta takaisin saatu määrä, 5 0-3 3-6 6-24 0-2 - Yhdiste tunteja annon jälkeen_ 35 Esimerkin 1 yhdiste 18,8 0,6 0,1 19,5+3,2 N-formimidoyyli- tienamysiini 12,1 0,1 <0,1 12,2+3,6 22 7 7 0 3 6

Yhdisteet liuotettiin 0,1-mol. fosfaattipuskuriin pH 7.

Arvot ovat yhden kokeen arvoja; 4 hiirtä yhdistettä kohden.

5 Edellisten lisäksi saatuja biologisia arvoja

Aktiivisuus in vitro

Alla mainittujen karbapeneemiyhdisteiden (identifioitu esimerkin numerolla) näytteet liuotettiin ja laimennettiin ravintoliemellä, minkä jälkeen niiden todettiin 10 antavan seuraavat minimiestokonsentraatiot (M.I.C) yksikköinä mikrogramma/ml alla mainittujen mikro-organismien suhteen, jolloin määritys suoritettiin putkilaimen-nusmenetelmällä yli yön kestäneen inkuboinnin (37°C) jälkeen. Vertailuyhdisteenä oli N-formimidoyyli-tienamysiini. 15 MIC (jjg/ml)

Yhdiste (esimerkki no.)

Organismi Esim. 2 MK 0787 S. pneumoniaa A-9585 0.001 0.002 20 S. pyogenes A-9604 0.002 0.002 S. faecaiis A20688 0.25 0.25 S. aureus A-9537 0.008 0.002 S. aureus-50% serum A-9537 0.016 0.016 S. aureus (Pen-res.) A-9606 0.016 0.008 E. coli A15119 0.016 0.016 25 E. coli A20341-1 0.03 0.016 K. pneumoniae A-9664 0.06 0.03 K. pneumoniae A20463 0.13 0.13 E. cloacae A-9659 0.13 0.13 S. cloacae A-9656 0.13 0.06 P. mirabilis A-9900 0.06 0.03 30 p. vulgaris A21559 °·03 0.016 M. moraani! A15153 0.06 0.06 P. rettgeri A22424 0.13 0.13 S. marcescans A20019 0.06 0.03 P. aeruginosa A-9843a 32 1 P. aeruginosa A21213 8 0.13 35 23 77036 MIC (Jig/ml)

Yhdiste (esimerkki no.)

Organismi Esim. 3 1MK 0787 5

Sv pneumoniae A-9585 0.03 0.002 S. pyogenes A-9604 o.03 0.002 S. faecalis A20688 0>5 0>5 S. aureus A-9537 0.03 0.004 S. aureus-50% serum A-9537 0.13 0.016 S. aureus (Pen-res.) A-9606 0 03 0 003 10 E. coli A151I9 0.03 0.015 E. coli A20341-1 0.03 0.03 K. pneumoniae A-9664 0.13 0.06 K. pneumoniae A20468 0.25 0.13 E. cloacae A-9659 0.25 "ο.Οό 15 E. cloacae A-9656 0.5 0.06 P. mirabilis A-9900 0.13 0.06 P. vulgaris A21559 0.03 0.03 M. moroanii A15153 0.13 0.13 P. rettaeri A22424 0.5 0.12 S. mareascens A20019 0.06 0.03 2Q P. aeruginosa A-9843a 63 1 P. aeruginosa A21213 3 0.23 N-formimidoyyli-tienamysiini 24 770 36 MIC (pg/ml)

Yhdiste (esimerkki no.)

Esim. 5 Esim. 5 (yhdis- (yhdis- 5 Organismi Esim. 4 te B) te A) 1MK 0787 S. pneumoniae A-9585 0,004 0;004 0.004 0,001 S. pyoger.es A-9604 0,004 0,008 0,004 0,001 S. faecalis A20688 2 1 0,05 0,05 S. aureus A-9537 0,03 0,03 0,016 0,002 S. aureus-50% serum A-9537 0,06 0,06 0,03 Q,004 ^ S. aureus (Pen-res.) A-9606 0,06 0,06 0,03 0,004 E. coli A15119 0,13 0,13 0,03 0,015 E. coli A20341-1 0,13 0,13 0,03 0,015 K. pneumoniae A-9664 0,25 0,25 0,06 0,03 K. pneumoniae A20463 0 j 5 0,5 0,13 0,06 15 E. cloacae A-9659 1 0,5 0,13 0,06 E. cloacae A-9656 2 0,25 0,13 0,06 P. mirabills A-9900 0,25 0,25 0,13 0,03 ?. vuloaris A21559 0^25 0,25 0,06 0,015 M. morcanii A15153 1 0,5 0,13 0,06 P. rettaeri A22424 1 1· 0,25 0,13 2 g S. marcescens A20019 0.23 0,25 0,06 0,0.3 P. aerucinosa A-9 84 3a 1-6 32 1 P. aeruginosa A21213 1 32 15 0,13 N-formimidoyyli-tienamysiini 25 25 77036

Aktiivisuus in vivo

Eräiden tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden ja N-formimidoyyli-tienamysiinin (MK 0787) terapeuttinen teho in vivo, annettuna lihaksensisäisesti 5 hiirille, jotka oli koetta varten infektoitu erilaisilla mikro-organismeilla, on esitetty alla. Tässä on ilmoitettu PD5Q-arvo (annos mg/kg, joka tarvitaan antamaan suoja 50 %:lle infektoiduista hiiristä).

Suojavaikutus lihaksensisäisesti käsitellyillä 1 0 infektoiduilla hiirillä____ PD,-q käsittely (mg/kg)

Yhdiste P. aeruginosa P. aeruginosa S. aureus (Esimerkki no.) * A9843A_ * A20481_ * A-9606 15 Esim. 2 4,7 33 0,72

Esim. 5, yhd. B - - 0,39

Esim. 5, yhd. A >12,5 - 1,2

Esim. 4 2,7 - 1,6 MK 0787 1 0,4 0,07 20 Käsittelyohjelma: *Esim. 2 yhdisteen osalta hiiret infektoitiin vatsaonte- 9 lonsisäisesti 2 x 10 :llä organismilla (A9606), tai 1 x 10^:llä organismilla A9843A:ta ja A20481 :tä.

25 Esimerkkien 4 ja 5 yhdisteiden osalta hiiret infektoi- 7 tiin vatsaontelonsisäisesti ~ 9 x 10 :llä organismilla (A9606) tai 8 x 10^:llä organismilla (A9843A) . Hiiriä : käsiteltiin lihaksensisäisesti yhdisteillä 0 ja 2 tun- tia infektoinnin jälkeen.

26 7 7 0 3 6

Pitoisuudet veressä ja virtsasta takaisin saatu määrä_

Eräiden tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden pitoisuudet veressä ja puoliintumisaika, kun 5 niitä annettiin hiirille lihaksensisäisesti annos 20 mg/kg, on esitetty alla. Tällöin on esitetty myös hiirten virtsasta takaisin saadut määrät.

Farmakokineettiset parametrit hiirillä annettuna lihaksensisäisesti 20 mq/kq_ 10

Veri Virtsa

Yhdiste Cmaks Tl/2 **AUC Takaisin saatu (Esimerkki no) (ug/ml) (min.) (ug.t/ml) määrä_%_ 3 16,2 8 4,8 15+3 15 4 17,3 12 7,6 33+11 5, yhd. A 10,2 7 3,1 14+1 5, yhd. B 12,6 10 4,6 15+3 MK 0787 14,6 10 6 33+8 20 Yhdisteet on liuotettu 0,1-mol. fosfaattipuskuriin, pH 7.

Arvot perustuvat yhteen kokeeseen; 4 hiirtä yhdistettä kohden.

*Tl/2 tarkoittaa puoliintumisaikaa minuutteina **AUC tarkoittaa veren konsentraatio-aika-käyrän alapuolis-25 ta aluetta.

*** Talteen saatu määrä perustuu 0-6 tunnin keruuseen.

Keksinnön mukaisesti valmistetut uudet yhdisteet ovat dehydropeptidaasientsyymin DHP-I aiheuttamaa hajoamista vastaan yllättävästi kestävämpiä kuin ennestään tun-30 netut tienamysiinijohdannaiset. Niitä voidaan sen vuoksi käyttää ilman DHP-I-inhibiittoria, jonka käyttö on tarpeen tunnettujen tienamysiinijohdannaisten kanssa, koska nämä hajoavat DHP-I-entsyymin vaikutuksesta.

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.

„ 77036 27

Esimerkki 1 3-/2-(N-metyylipyrrolidiinium)etyylitio7-6K-^1-(R)_ hydroksietyyli7-7-okso-1-atsabisyklo/3,2,o7hept-2- eeni-2-karboksylaatin valmistus_____ 5 ’ OH e CH ·* 'I- o A. p-nitrobentsyyli-3- (2-hydroksietyylitio) -6<*..

/Ϊ-(R)-hydroksietyyli7-7-okso-1-atsabisyklo/3,2,0/^ — - - ^Pt ~ 2-eeni-2-karboksylaatti___

, c OH

15 J-N - o 'C02pN3

20 OH

2CH20H

Π I

# N COLONS

O * 25 2 pN3 » -CH2—^ N02

Liuos, jossa oli 1,69 g (4,85 mmoolia) p-nitro-bentsyyli-6c*.-/T-(R)-hydroksietyyli7~3,7-diokso-1-atsabisyklo(3,2/0)hept-2-eeni-2-karboksylaattia (1_) 35 20 ml:ssa asetonitriilia, jäähdytettiin typpiatmosfää- rin suojaamana 0°C:seen. Lisättiin liuos, jossa oli „ 77036 28 726 mg (7,18 mmoolia) di-isopropyylietyyliamiinia 2 ml:ssa asetonitriiliä ja sen jälkeen lisättiin tiputtamalla 3 minuutin kuluessa 1,51 g (5,60 mmoolia) difenyylikloori-fosfaattia 12 ml:ssa asetonitriiliä. Saatua liuosta se-5 koitettiin 0°:ssa 20 minuuttia, jolloin saatiin p-nitro-bentsyyli-3-(difenyylifosforyylioksi)-6θ<-/Τ-(4)-hydroksi-etyyli7"7-okso-1-atsabisyklo(3,2,0)hept-2-eeni-2-karbok-sylaattia. Tähän liuokseen lisättiin liuos, jossa oli 726 mg (7,18 mmoolia) di-isopropyylietyyliamiinia 2 mlrssa 10 asetonitriiliä ja sen jälkeen liuos, jossa oli 439 mg (5,63 mmoolia) 2-merkaptoetanolia 2 ml:ssa asetonitriiliä. Reaktioliuosta sekoitettiin 0°C:ssa 3 tuntia ja sitten laimennettiin 200 ml:11a etyyliasetaattia ja pestiin 200 ml:11a vettä, 100 ml:11a 20-prosenttista H-^PO^n 15 vesiluosta ja suolaliuoksella. Haihduttamalla kuivattu (MgSO^) liuos kuiviin saatiin puolikiinteätä ainetta, jota trituroitiin metyleenikloridin kanssa ja suodatettiin, jolloin saatiin 1,2 g (saanto 61 %) otsikon tuotetta 2 valkeana amorfisena kiinteänä aineena.

20 NMR (CMSO-d6) rf: 1,20 (3H, d, J=6,0 Hz), 2,9-3,2 (9H, m), 5,22 (1H, d, J = 8,5 Hz) ja 8,23 (2H, d, J=8,5 Hz); ir (KBr) >f maks.: 3500,1770 ja 1700 cm'1;

Analyysi, laskettu yhdisteelle c-|gH20N2°7S: C, 52,93; H, 4,94; N, 6,86; S, 7,85.

25 Saatu: C, 52,83; H, 4,90; N, 6,42; S, 8,31.

29 77036 B. p-nitrobentsyyli-3-(2-metaanisulfonyylioksi- etyylitio) -6oc-/T- (R) -hydroksietyyli7~7-okso-1 -atasbi-syklo(3,2,0)hept-2-eeni-2-karboksylaatti_

OH H

5 J----—SCH_CH_ OH v Ί | -7

-N-—C02pNB

2

10 OH H

I I

X—n--L· o- co2psa 15 3

Liuokseen, jossa oli 4,2 g (10,3 mmoolia) yhdistettä _2 200 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin -40°C:ssa 20 1,3 g (11,3 mmoolia) metaanisulfonyylikloridia ja sen jäl keen tiputtamalla 1,26 g (12,4 mmoolia) trietyyliamiinia 5 ml:ssa tetrahydrof uraaniaReaktiosesta sekoitettiin 5 tuntia -40°C:ssa, sitten sekoitettiin 2 tuntia -30°C:ssa typpiatmosfäärin suojaamana ja sen jälkeen se kaadettiin 25 seokseen, jossa oli etyyliasetaania (700 ml) ja 5-pro- senttista fosforihapon vesiliuosta (1000 ml). Orgaaninen kerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin MgS0^:lla, suodatettiin ja kondensoitiin siirapiksi. Tämä aine puhdistettiin silikageelillä kromatografioimalla /eluoimalla 30 metyleenikloridi-etyyliasetaatti-seoksella (tilavuussuhde 3:1 )_7, jolloin saatiin 3,55 g (saanto 75 %) otsikon yhdistettä valkeana amorfisena kiinteänä aineena.

NMR (CDCI3) $ : 1,25 (3H, d, J=6,0 Hz), 3,05 (3H, s), 3,06-3,40 (5H, m), 4,05-4,40 (4H, m), 5,25 (1H, d, J = 35 14,0 Hz), 5,50 (1H, d, J=14,0 Hz), 7,70 (2H, d, J=8,5 Hz), ja 8,23 (2H, d, J=8,5 Hz); ir (KBr) χ maks.: 3400, 1770 ja cm 1 * 30 77036

Analyysi, laskettu yhdisteelle c·] gH22N2^9S2 : C, 46,90; H, 4,56; N, 5,76;

Saatu: C, 46,52; H, 4,32; N, 5,91.

C. p-nitrobentsyyli-3- (2-jodietyylitio) -6os- 5 /Ϊ-(R)-hydroksietyyli7“7~okso-1-atsabisyklo(3,2,0)hept- 2-eeni-2-karboksylaatti______ OH 5 ^Ί-f/''Y'SCH2CS20SO2CH3 \ 10 I l I -7 V N L—co pN3 O 2

“ OH H

15 Ί-f JL-N ___ S' C0_pN3 O 2 4 20 Liuosta, jossa oli 350 mg (0,72 mmoolia) väliyh- distettä 3 ja 216 mg (1,4 mmoolia) natriumjodidia 20 ml:ssa asetonia, lämmitettiin kiehuttaen 4 tuhtia. Haihduttamalla asetoni pois saatiin valkeata amorfista kiinteätä ainetta, joka suspendoitiin eetteri (10 ml) -25 vesi (10 ml)-seokseen. Suodattamalla valkea kiinteä aine erilleen ja kuivaamalla vakuumissa saatiin 300 mg (saanto 80 %) otsikon yhdistettä 4 valkeana amorfisena jauheena.

NMR (DMSO-dg) cf: 1/18 (3H, d, J = 6,0 Hz), 3,20-3,60 30 (7H, m), 3,80-4,25 (2H, m), 5,10 (1H, d, J=5,5 Hz), 5,25 (1H, d, J = 12,0 Hz), 5,45 (1H, d, J=12,0 Hz), 7,70 (2H, d, J=8,5 Hz), ja 8,27 (2H, d, J=8,5 Hz); ir (KBr) maks.: 3500, 1768 ja 1700 cm \

Analyysi, laskettu yhdisteelle C1gHl9N206J: 35 C, 41,71; H, 3,70; N, 5,41; J, 24,48;

Saatu: C,42,10; H, 3,75; N, 5,97; J, 23,20 31 77036 D. 3-/2- (N-metyylipyrrolidiinium) etyylitig7-6ot-/T-(R)-hydroksietyyli7-7-okso-1-atsabisyklo/3,2,o7hept-2-eeni-2-karboksylaatti_ 5 ?H I AoCIO, ^ ^2^21 -1-—) N ^C02pNB CH3”n 4 N'V—^ 10 OH H CH.

I = _ ^ /^, θ P I vJ -4 15 i-n -^

/ C02pNB

5 20 ?H H CH, I "i® < " ^_z/ SCH2CH2—j l—* —^ e' 6 C02 25 Jäähdytettiin (5°C) liuokseen, jossa oli p-nitro-bentsyyli-3- (2-jodietyylitio) -6^-/T- (R) -hydroksietyyli7~ 7-okso-1-atsabisyklo/3,2,07hept-2-eeni-2-karboksylaattia 30 (728 mg; 1,4 mmoolia) 60 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraa- nia, lisättiin N-metyylipyrrolidiinia (301 mg; 3,5 moolia) ja sen jälkeen liuos, jossa oli hopeaperkloraattia (560 mg; 2,8 mmoolia) 5 ml:ssa tetrahydrofuraania. Reak-tiosesosta sekoitettiin 60 minuuttia 5°C:ssa. Sitten 35 liuotin haihdutettiin pois vakuumissa, jolloin saatiin yhdistettä 5^ keltaisena hartsina. Tätä hartsia uutettiin 32 77036 lämmittäen 2 gramman kanssa (CELITE'ä, jolloin saatiin amorfista kiinteätä ainetta. IR (KBr) »γ maks.: 3400, -1 1775, 1700 ja 1100 cm . Enempää puhdistamatta yhdistettä 5 hydrattiin seuraavasti: 5 Suspendoituun liuokseen, jossa yhdiste 5 oli 50 ml:ssa dietyylieetteriä ja 100 ml:ssa tetrahydrofu-raania, lisättiin liuos, jossa oli kaliumvetykarbonaat-tia (320 mg; 3,2 mmoolia) ja kaksiemäksistä kaliumfosfaattia (280 mg, 1,6 mmoolia) 125 ml:ssa vettä. Sitten 10 lisättiin 1 g 10-prosenttista palladium-puuhiiltä ja seosta hydrattiin 40 psi:n paineessa Parr'in ravisti-messa 60 minuuttia. Sitten seos suodatettiin ja katalyytti pestiin vedellä (2 x 10 ml). Yhdistetyt suodos ja pesunesteet uutettiin dietyylieetterillä (2 x 200 ml) ja’ sit-15 ten kylmäkuivattiin, jolloin saatiin ruskeata jauhetta.

Tämä raaka aine puhdistettiin C^g BONDAPAK-käänteisfaasi-kolonnissa (8 g) (Waters Associates) eluoimalla vedellä 8 psi:n paineessa. Kukin fraktio (20 ml) seulottiin suur-paine-nestekromatografiaa käyttäen, ja fraktiot, joiden 20 ultraviolettiabsorptio λ1τι3^3 oli 300 nm, otettiin talteen ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 65 mg (saanto 14 % yhdisteestä 4_ laskien) otsikon yhdistettä valkeana kiinteänä aineena.

NMR (D20) $: 1,23 (3H, d, J=6,0 Hz), 2,1-2,4 (4H, m), 25 3,10 (3H, s), 3,1^3,4 (12H, m), 3,95-4,30 (2H, m; IR (KBr) f maks.: 3400, 1760 ja 1590 cm ** . UVA^aj^ (CH3CH2OH) 297 mm (E = 6877) .

Esimerkki 2 3-/2- (n-metyyli-tiomorfoliinium) etyylitio7-6c(-/T' — (R) — 30 hydroksietyyli7“7-okso-1-atsabisyklo/3,2,o7hept-2-eeni-2-karboksylaatin valmistus_________ - 33 77036 A. N-metyyli-N-(2-merkaptoetyyli)-tiomorfoliinium- metaanisulfonaatti_ / \ 1) Ms OH HS Me / \

MeN S —--> s s \_y 2) / ®w / \ MsO®

Esijäähdytettyyn (jäähaude) N-metyylitiomorfolii- niin *(5,00 g, 42,7 mmoolia) lisättiin metaanisulfonihap- 10 poa (1,47 ml, 20,5 mmoolia) ja etyleenisulfidia (1,30 ml, 21,4 mmoolia). Seosta lämmitettiin 65°C:ssa 24 tuntia ja laimennettiin vedellä (25 ml). Vesiliuos pestiin dietyylieetterillä (3 x 25 ml), imettiin vakuumissa ja kaadettiin silikageeli-käänteisfaasikolonniin; otsikon 15 yhdiste eluoitiin vedellä. Sopivat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin tiolia öljynä (4,80 g, saanto 86 %) ; ir (kalvo Ym . : 2550 cm ^ 1 maxs.

(w, SH); Hmr (DMSO-dg) 6 : 3,25-2,95 (6H, m, CH2NW), 3,32 (3H, s, CH3N®), 3,20-2,65 (7H, m CH2S, SH) ja 20 2,32 ppm (3H, s, CH3S03).

B. para-nitrobentsyyli-3-/2-(N-metyyli-tiomorfolii- nium-dif enyylifosfaatti) -etyylitio7-6oc-/T1 - (R) -hydroksi-etyyli7~7-okso-1-atsabisyklo/3,2,0/hept-2-eeni-2-karboksylaatti_________ 25

OH 1) EtN(—<^)2 0H

''S—r~\ 21 —.

30 0^0“° KS^G O^^Yj CO PNB M* C0.PN3 Μ3?(Οφ) 4) EtN(-<)2 l 2 / 35 * J.M. Lehn ja J. Wagner, Tetrahedron, 2<S, 4227 (1970).

34 77036

Kylmää (jäähaude) liuosta, jossa oli para-nitro-bentsyyli-6«x-/T ' - (R) -hydroksietyyli7-3,7-diokso-1-atsabisyklo/3,2,07heptaani-2-karboksylaattia (557 mg, 1,60 mmoolia) CH^CNtssa (8 ml), käsiteltiin lisäämällä 5 tiputtamalla di-isopropyylietyyliamiinia (0,336 ml, 1.92 mmoolia) ja difenyylikloorifosfaattia (0,400 ml, 1.92 mmoolia) ja sekoitettiin 30 minuuttia. Reaktio-seosta käsiteltiin jälleen N-metyyli-N-(2-merkaptoetyyli)-tiomorfoliiniummetaanisulfonaatin (893 mg, 2,29 mmoolia) 10 kanssa CH^CNrssa (4 ml), ja di-isopropyylietyyliamiinin (0,336 ml, 1,92 mmoolia) kanssa ja sekoitettiin 30 minuuttia. Lius laimennettiin vedellä (20 ml) ja kaadettiin silikagaeli-käänteisfaasikolonniin. Haluttu yhdiste eluoitiin 50-prosenttisella asetonitriili-vesi-seoks’ella. 15 Sopivat fraktiot yhdistettiin, imettiin vakuumissa 2 tuntia ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (1,01 g, saanto 85 %) , ir (nujoli)y , : 1760 « ITlcl/C S · (s, p-laktaami C=0) ja 1510 cm (s, NC>2); 1Hmr (DMSO-dg) (5 : 8,25 (2H, d, J=8,8 Hz, H-aromaattinen) , 20 7,70 (2H, d, J=8,8 Hz, H-aromaattinen), 7,33-6,84 (10H, m, H-aromaattinen), 5,37 (2H, ABq:n keskus, J=14,2 Hz, CH2), 5,14 (1H, d, J=4,5 Hz, OH), 4,35-3,80 (2H, m, H-1' ja H-5), 3,75-3,45 (6H, m, CH2N+), 3,31 (3H, s, CH3N+), 3,45-2,75 (9H, m, CH2S, H-6 ja H-4) ja' 25 1,15 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH3).

C . 3-/2- (N-metyyli-tiomorfoliinium) etyylitio7-6*i- /T'-(R)-hydroksietyyli7-7-okso-1-atasbisyklo/3,2,07hept- 2-eeni-2-karboksylaatti_________

30 QH

^JL OH

Liuosta, jossa oli para-nitrobentsyyli-3-/2-(N-metyyli-tiomorfoliinium-difenyylifosfaatti)etyylitio?-6o».—/T' - (R) -hydroksietyyli7-7-okso-1-atsabisyklo/3,2 , o7~ hept-2-eeni-2-karboksylaattia (1,31 g, 1,76 mmoolia) 5 0,1-mol. pH 7,4-fosfaattipuskurissa (48,8 ml), tetra- hydrofuraania (20 ml) ja dietyylieetteriä (20 ml), hydrattiin 1O-prosenttisella Pd/C:llä (1,5 g) Parroin ravistimessa tunnin ajan 40 psi:n paineessa. Reaktio-seos laimennettiin dietyylieetterillä (40 ml) ja faa-10 sit erotettiin. Orgaaninen faasi pestiin vedellä (2 x 5 ml). Vesifaasit yhdistettiin, suodatettiin kovetetun suodatinpaperin # 52 läpi, pestiin dietyylieetterillä (2 x 20 ml) ja imettiin vakuumissa. Vesiliuos kaadettiin silikageeli-käänteisfaasikolonniin ja halut-15 tu karbapeneemi eluoitiin 5-prosenttisella asetonitriili-vesi-seoksella. Sopivat fraktiot yhdistettiin, ja kyl-mäkuivattiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä amorfisena kiinteänä aineena (205 mg, 31 %)? ir (nujoli) y ma]cs : 1750 (s, β-laktaami C = 0) ja 1590 cm ** 20 (s, C=0); 1Hmr (D20) ¢: 4,25-3,95 (2H, m, H-1', H-5), 3,70-3,40 (6H, m, CH2N + ) , 3,35 (1 h, dd, J = 6,1 Hz, J = 2,6 Hz, H-6) , 3,08 (3H, s, CH3N + ) , 3,25-2,75 (2H, CH2S, H-4), ja 1,24 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3); uv (H20, c 0,062) Λ maks> : 299 (£ 10,962); t^ 17,7 t 25 (0,1-mol. pH 7-fosfaattipuskuri, 37°C.

Esimerkki 3 (5R,6S)-3-/2-(1-metyylimorfoliino)etyylitio7-6-/7R)-1-hydroksietyyli7~7-okso-1-atsabisyklo/_3,2 ,o7hept-2- eeni-2-karboksylaatin valmistus_ 30 OH Me ,-- -Λ-o Γ \_/ >~N<02e 35 * 36 77036 A. 1-metyyli-1-(2-merkaptoetyyli)morfoliinium- trifluorimetaanisulfonaatti_ M®,—v kNJ+CF3S°3H +Δ -> Η*«2αΛ_> I e '—r7

Me CF3S03 N-metyylimorfoliiniin (3,29 ml, 0,30 moolia) 10 lisättiin tiputtamlla trifluorimetaanisulfonihappoa (1,327 ml, 0,015 moolia) 10°C:ssa, sen jälkeen etyleeni-sulfidia (0,89 ml, 0,015 moolia). Saatua keltaisen-ruskeata liuosta lämmitettiin öljyhauteella 50-60°C:ssa N3:n suojaamana 18 tuntia. Sitten haihtuva aine pois-15 tettiin vakuumissa ja jäljelle jäänyt öljy liuotettiin 10 ml:aan H20:ta. Vesiliuos pestiin dietyylieette-rillä (3x5 ml) ja sitten jäljelle jäänyt orgaaninen liuotin poistettiin vakuumissa. Saatu vesiliuos pantiin C.jg-käänteisfaasikolonniin, joka eluoitiin H20:lla, sit-20 ten 5-prosenttisella asetoninitriili-HjO-seoksella ja lopuksi 10-prosenttisella asetoninitriili-H20-seoksella, Haihduttamalla asiaan kuuluvat fraktiot kuiviin saatiin valkeata kiintetätä ainetta, joka kuivattiin vakuumissa (P205), jolloin saatiin tuotetta 1,92 g, 41 %).

25 ir (KBr) "f ma^s : 2560 (-SH) cm 1; 1 Hnmr (dg-asetoni) 6: 4,25-3,6 (m, 8H9. 3,49 (s, 3H, N-Me), 3,35-2,7 (m, 5H.

B. p-nitrobentsyyli-(5R,6S)-3-/2-(1-metyylimorfolii-no)etyylitio7~6-^TR)-1-hydroksietyyli7_7-okso-1-atsabi-syklo/3,2,07hept-2-eeni-2-karboksylaatti-difenyylifos- 30 faatti___ OH OH Me - - PQ-° -»v 0 C02pnb ^co.pnb il (0Ο)2ΡΟΘ 77036 37

Liuokseen, jossa oli p-nitrobentsyyli-(5R,6S)- 6-/7r)-1-hydroksietyyli7-3,7-diokso-1-atsabisyklo-/3,2,o7heptaani-2-karboksylaattia (0,348 g, 1,0 mmoolia) 25 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, lisättiin tiputtamalla 5 di-isopropyylietyyliamiinia (0,191 ml, 1,1 mmoolia) ja sitten difenyylikloorifosfaattia (0,228 ml, 1,1 mmoolia) 0°C:ssa N2:n suojaamana. Kun sekoitettu 0°C:ssa tunnin ajan, saatuun enolifosfaattiin lisättiin di-isopropyyli-et-yliamiinia (0,226 ml, 1,3 mmoolia), ja sen jälkeen 10 1-metyyli-1-(2-merkaptoetyyli)morfoliinium-trifluorime- taanisulfonaattia (0,373 g, 1,2 mmoolia). Reaktioseosta sekoitett-in huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia ja sitten konsentroitiin vakuumissa. Jäljelle jäänyt aine liuotettiin H20:hon ja pantiin C^g käänteisfaasikolonniin.' 15 Eluoimalla H^Orlla, sitten 20-prosenttisella asetonit- riili-H20-seoksella ja lopuksi 30-prosenttisella aseto-nitriili-H20-seoksella, sekä kylmäkuivaamalla asiaan kuuluvat fraktiot saatiin tuotetta (0,360 g, 40 %) amorfisena kiinteänä aineena.

20 ir (kalvo) 3300 (-OH), 1770 (fi-laktaami CO), 1700 (-CO^PNB) cm ^Hnmr (d,-asetoni) £: 8,25, 7,80

Δ O

(ABq, J=8,6 Hz, 4H, aromaattinen), 7,4-6,8 (m, 10H, difenyylifosfaatti) , 5,56, 5,27 (ABq, J=14,2 Hz, 2H, bentsyylinen), 4,42 (d t:stä, J=9,2 Hz, J'=2,7 Hz, 1H, ‘ · 25 H-5) , 4,1-2,7 (m, 17H), 3,40 (s, 3H, N-Me) , 1,22 (d, J=6,2 Hz, 3H, -CHMe).

: ‘ : C. (5R,6S)-3-/2-(1-metyylimorfoliino)etyylitio7“6- /7r)-1-hydroksietyyli/-7-okso-1-atsabisyklo/3,2,0/hept- : V: 2-eeni-2-karboksylaatti_ 30 38 77036

Liuokseen, jossa oli p-nitrobentsyyli-(5R,6S)-3-/2- (1 -metyylimorfoliino) etyylitio7-6-/"(R) -1-hydroksi-etyyli7~7-okso-1-atsabisyklo^3,2,o7hept-2-eeni-2-karbok-sylaatti-difenyylifosfaattia (0,360 g, 0,49 mmoolia) 5 13 ml:ssa fosfaattipuskuria (0,05-mol., pH 7,4), lisät tiin 0,36 g 10-prosenttista palladium-puuhiiltä, 20 ml tetrahydrofuraania ja 20 ml dietyylieetteriä. Tätä seosta hydrattiin (Parr) 32 psi:n paineessa tunnin ajan.

Seos suodatettiin Clete'n läpi ja suodatinkakku pestiin 10 H20:lla ja dietyylieetterillä. Vesifaasi erotettiin ja Ph säädettiin arvoon 7,0 lisäämällä pH 7-fosfaattipus-kuria. Kun jäljelle jääneet orgaaniset liuottimet oli poistettu vakuumissa, vesiliuos pantiin g-käänteisfaa-sikolonniin. Eluoimalla H20:lla ja kylmäkuivaamalla asian 15 mukaiset fraktiot saatiin 0,130 g amorfista kiinteätä ainetta. Tämä aine puhdistettiin uudelleen käänteis-faasi-hplc-kromatografiointia käyttäen, jolloin saatiin puhdasta tuotetta (0,058 g, 34 %) amorfisena kiinteänä aineena, ir (KBr) γ ma^s '· 3420 (br, OH), 1750 φ-laktaa-20 mi CO) , 1 590 (-CO-) cm-1; 1 Hnmr (D20) <f : 4,35-2,77 (m, 17H), 3,18 (s, 3H, N-Me), 1,23 (d, J = 6,3 Hz, 3H, CHMe); uv (Η.Ο)Λ 3, : 300 (£6344) nm; t, (pH 7,4, 36,8°C) 18,5 tuntia.

Esimerkki 4 25 (5R,6S)-3-/2-(1,4-dimetyyli-1-piperatsiinium)etyylitio7- 6-(R)-hydroksietyyli7-7-okso-1-atsabisyklo/3,2,o7hept- 2-eeni-2-karboksylaatin valmistus_ ; 30 rQr v-/ Z 8 c00® 35 39 77036 A. 1-(2-asetyylitiotyyli)-1,4-dimetyylipiperat- siiniumbromidi_ / \ . . 0 \ /1 \ „„ + —N N— Acetone „ ^ N N- ,Br

5 CH3CS-' ^ \_/ 5o'°C >CH3CS ^ W

Liuosta, jossa oli 2-bromietyyli-tioliasetaat-tia 1(2,20 g, 0,012 moolia) ja 1,4-dimetyylipiperatsii-nia (1,95 ml, 0,014 moolia) asetonissa (4 ml), sekoi-10 tettiin 50°C:ssa 65 tuntia. 25°C:seen jäähdyttämisen jälkeen nestefaasi dekantoitiin erilleen hartsista, jota trituroitiin kaksi kertaa dietyylieetterin kanssa; saatiin hygroskooppista kellertävää jauhetta, 3,2 g (90 %); ir (nujoli) : 1685 (tioesterin C=0) cm \

15 1Hmr (D.O) S: O

H ""’Λ 2,37 , 2,39 (2s, 6H, CH-^CO, ^N-CH3) , 3.18 (s, 3H, · 20 B. 1,4-dimetyyli-1-(2-merkaptoetyyli)piperatsiinium-bromidi-hydrokloridi j? ~ >Γλ- , ΒΓ"' HC1 : - . 25 CH3CS ^ w δ w

Liuosta, jossa oli 1-(2-asetyylitioetyyli)-1,4- ·· .’ dimetyyli-piperatsiiniumbromidia (1,1 g, 3,7 mmoolia) 6-norm. suolahapossa (4 ml), lämmitettiin 80°C:ssa typpi- 30 atmosfäärin suojaamana tunnin ajan. Liuos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin valkeata jauhetta, 0,41 g (38 %); 1Hmr (DMSO, d,) b —v —v /C—3 : 35 -XB3’'3·26 <s'IXi >· B. Hansen, Acta Chem. Scand. 11, 537-40 (1957) 40 77036

Analyysi, laskettu yhdisteelle CgH20N2SBrCl.H20: C 31,03; H 7,16; N 9,05; S 10,35; saatu; C 31,62; H 7,46; N 9,19; S 10,19.

C. (5R,6S) paranitrobentsyyli-3-/2-(1,4-dimetyyli- 5 1-piperatsiinium)-etyylitio7~6-/T-(R)-hydroksietyyli?- 7-okso-1-atsabisyklo/3,2,o7-hept-2-eeni-2-karboksylaat-ti-difenyylifosfaatti_ OH 1> NEt(iPr)2 10 I f >=0 2) ClP(OPh), -Τ/ΓΛ, - > " COOPNB ' HC1 * 3) HS ^ \ / 4) NEt(iPr)2 15

OH

J?. 8- ",—(ph0>2p0

COOPNB

20

Kylmään liuokseen (0°C), jossa oli (5R,6S) parani trobentsyyli-6-/T- (R)-hydroksietyyli7-3,7-diokso-1-atsabisyklo/3,2,07heptaani-2-(R)-karboksylaattia (0,465 g, 25 1,33 mmoolia) asetonitriilissä (2 ml) ja jota pidettiin typpiatmosfäärin suojaamana, lisättiin di-idopropyyli-etyyliamiinia (0,278 ml, 1,59 mmoolia) ja difenyyli-kloorifosfaattia (0,33 ml, 1,59 mmoolia). Reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia ja käsiteltiin suspension 30 kanssa, jossa oli 1,4-dimetyyli-1-(2-merkaptoetyyli)- piperatsiiniumbromidi-hydrokloridia (0,40 g, 1,37 moolia) seoksessa asetonitriili (3 ml) - vesi (1 ml) ja di-isopropyylietyyliamiinia (0,278 ml, 1,59 moolia). Kun oli sekoitettu 18 tuntia 5°C:ssa, seokseen lisättiin 35 kylmää vettä (15 ml). Saatu liuos kromatografioitiin 77036 41

PrepPak-500/C^g (Waters Associates) -kolonissa (2,5 x 7,5 cm) käyttämällä eluentteina 25-35 % asetonitriiliä sisältäviä vesiliuoksia, jolloin saatiin kellertävää jauhetta 0,50 g (50 %) kylmäkuivauksen jälkeen; 5 ir (KBr)y , : 19765 ( -lakataamin C=0), 1690 (PNB-

IuHKS · -t e esterin C=0), 1585 (fenyyli), 1512 (N02), 875 (N02> cm“ ' 1Kmr (DMSO, d6) £: 1,16, 1,18 (2d, J=6, 1 Hz, 3H, CH3CHOH), 2,44 (Sf ch3)# 10 -J 14 (e, vs, ), 5,31 (d, J=6 Hz, OH), 5,39 (ABq:n keskus, J=13 Hz, PNB;n CH2) , 6,6-7,4 (m, 10H, fosfaatin fenyyli), 7,71 (d, J=8,8 Hz, 2H, PNB:n Ho), 8,26 (d, J=8,8 Hz, PNB:n Hm).

15 D. (5R,6S)-3-/2-(1,4-dimetyyli-1-piperatsiinium)- etyylitio7-6-/T-(R)-hydroksietyyli7~7-okso-1-atsabisyklo-/3,2,07hept-2-eeni-2-karboksylaatti

OH

v /—o 20 *'1—n-, (Pho) io~ > // - buffer

<J N ~'‘"'COOPNB

OH

coo

Liuokseen, jossa oli (5R,6S) paranitrobentsyyli-30 3-/2-(1,4-dimetyyli-1-piperatsiinium)etyylitio7~6-/1-(R)- hydroksietyyli7-7-okso-1-atsabisyklo/3,2,07hept-2-eeni- 2-karboksylaatti-difenyylifosfaattia (0,47 g, 0,623 mmoolia) märässä tetrahydrofuraanissa (25 ml), lisättiin dietyylieetteriä (25 ml), puskuria yksiemäkinen 35 kaliumfosfaatti - natriumhydroksidi (13 ml, pH 7,22) ja 10-prosenttista palladium-puuhiiltä (0,47 g). Saatua 42 770 3 6 seosta hydrattiin 23°C:ssa 40 psi:n apineessa tunnin ajan. Saadut kaksi kerrosta erotettiin ja orgaaninen kerros uutettiin vedellä (2x7 ml). Vesikerrokset yd-distettiin, suodatettiin Celita-patjän läpi, pestiin 5 dietyylieetterillä (2 x 15 ml) ja kromatografioitiin PrepPak-500/C^g (Waters Associates)-kolonnissa (2,5 x 9,5 cm) käyttämällä eluenttina vettä, jolloin saatiin 0,097 g (43 %) tuotetta kylmäkuivauksen jälkeen; ir (KBr)Vmaks : 3000-3700 (OH), 1750 (^-laktaamin C=0), 10 1585 (karboksylaatti) cm ^mr (D20) 6 : 1,24 (d, J=6,4 Hz, 3H, CI^CHOH) , 2,33 (s, 3H, V—CH3) , 3r 15 (s, ' \j/+”3 ), 4.0-4.5 (m, H-5, CH3CHOH) , —' —t N 23 uv, (H20) Amaks>: 296 (£ 9476), /aJD 61,1° (C 0,26, 15 H20), t, = 12,4 t (mitattuna konsentraation ollessa 10 mol. fosfaattipuskurissa pH 7,4 36,8 Crssa).

Esimerkki 5 (5R,6S)-3-/2-(N-metyyli-tiomorfoliiniumoksidi)etyylitio?-6-/T-(R)-hydroksietyyli?-7-okso-1-atsabisyklo/3,2,o7~hept-2- 20 eeni-2-karboksylaatin valmistus_

OH

rO—\ }r—/ 25 ole Me\_/ CO 2

OH

30 λ — co^

35 OH

^'ΓτΛ_5 ΘΓΛ J-Lf" 2\_)~ co® 43 77036

Kylmään (-10°C liuokseen, jossa oli (5R,6S)-3-/2-(N-metyyli-tiomorfoliinium)etyylitio7~6-/T(R)-hydroksi-etyyli7~7-okso-1-atsabisyklo/3,2,07-hept-2-eeni-2-karboksylaattia (608 mg, 1,65 mmoolia) seoksessa, jossa 5 oli asetonitriiliä ja vettä suhteessa 1:1 (9 ml) lisät tiin pienin erin tunnin kuluessa m-klooriperbentsoehap-poa (334,8 mg, 2,65 mmoolia). Seos laimennttiin sitten vedellä (15 ml) ja pestiin dietyylieetterillä (3 x 15 ml).

Vesifaasia imettiin vakuumissa ja laskettiin 10 käänteisfaasi-silikageelikolonnin läpi (I^O), jolloin saatiin kiinteätä ainetta, joka koostui yhdisteiden seoksesta. Tämä seos erotettiin käänteisfaasi-HPLC_kromato-grafiointia käyttäen ja saatiin fraktiota A 52,4 mg (saanto 12 %) ja fraktiota B 23,6 mg (saanto 6 %) otsi-15 kon yhdisteen diastereomeereina? Fraktio A: ir (nu joli \?makg : 1750 (s, ^J-laktaami C=0) ja 1580 cm ^ (s, C = 0) ; 1 Hmr (E>20)<f: 4,26-2,91 (20H, m, H-4, H-5, H-6, H-1', CH2S, CH2S-0, CH3~N+ ja CH2N+) ja 1,24 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3); uv (H20, c, °/°6)Amaks>: 302 (£ 10425); 20 t^; 12 tuntia (0,065 mol., pH 7,4 fosfaattipuskuri, 37°C). Fraktio B: ir (nujoli) makg : 1750 (s, -laktaami C=0) ja 1585 cm"1 (s, C=0); 1Hmr (2C) : 3,86-2,90 (17H, m, H-4, H-5, H-6, H-11, CH2S, CH2S-0, CH2N+), 3,25 (3H, s, CH3N+) ja 1,24 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH3) ; uv (Η2<3, c, °^05^maks>* 25 2,99 (£ 6517); t^: 10,75 tuntia (0,065 mol., pH 7,4 puskuriliuos, 37 C.

44 77036

Esimerkki 6 (5R,6S)-3-/2-(1,4,4-trimetyyli-1-piperatsiinium)etyylitio7- 6-^7R-hydroksietyyli?-7-okso-1-atsabisyklo(3,2,0)hept-2-eeni-2-karboksylaatti-kloridin valmistus_ “3/-χ CH- /••Γ-ΤΛ \e V , Cl® 0 ^ coo® 10 A. 1-(2-asetyylitioetyyli)-1,4,4-trimetyylipiperatsii- nium-bromidijodidi_ 15 9 ._—_►

CH^ \_/ y OH, 55-60eC

20 9 >0H^+. Br", i' ♦

Suspensiota, jossa oli 1-(2-asetyylitioetyyli)- 1,4-dimetyyli-piperatsiiniumbromidia (1,48 g, 5,0 mmoolia) 25 isopropyylialkoholissa (10 ml), käsiteltiin metyylijodi- din (0,373 ml, 6,0 mmoolia) kanssa ja lämmitettiin 30 tuntia 55-60°C:ssa. Liuottimet haihdutettiin pois vakuumis-sa; jäännöstä trituroitiin heksaanin kanssa ja kiinteä aine suodatettiin erilleen, 1,85 g. Kiinteä aine liuotet-30 tiin kuumaan veteen (8 ml) ja liuotusta lamennettiin asetonilla kunnes se sameni (70-80 ml). Suorittamalla kaksi perättäistä kitytystä saatiin 1,5 g, (68 %) sp. 220-5°C hajoen, otsikon yhdistettä; ir (KBr)y : 1692 cm 1 (CO), 1Hmr (D20) St 2,40 (s, 3H, CH3C00) , 3,37 (s, N-CH3) , 3,39 35 (s, N-CH3), 3,99 (s); uv <H20) Amakg : 226 (£ 13114).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C^H2^N2OSBrJ: C 30,08, H 5,51, N 6,38; saatu; C 30,48, H 5,53, N 6,86.

77036 45 B. 1-(2-merkaptoetyyli)-1,4,4-trimetyylipiperatsiinium- biskloridi_____ \/ \ / HC1 6N Permutit

5 -*· «-1 C

^ ^n{+ , 2a‘ HS'' ^ \f \ 10

Seosta, jossa oli 1-(2-asetyylitioetyyli)-1,4,4-trimetyyli-piperatsiiniumbromidijodidia (1,84 g, 4,19 mmoolia) ja 6-norm, suolahappoa (15 ml), lämmitettiin 15 57°C:ssa typpiatmosfäärin suojaamana 2,5 tuntia. Liuos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Kiinteä aine suspen-doitiin veteen (10 ml) ja hyvin sekoitettuna suspensiota käsiteltiin Permutit S-1 Cl :n kanssa kunnes oli saatu sytymään liuos. Liuos kaadettiin Permutit S-1 Cl -ko-20 lonniin (1,2 x 60 cm). Kolonni eluoitiin vedellä (1,5 ml/ min.). Sopivat fraktiot yhdistettiin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin valkeata jauhetta 0,93 g, sp. 190-191°C, 85 %; ir (nujoli) maj^s : 2460 (SH); 1Hmr (D20) <5 : 3,4 ; ‘ (s, N-CH3) , 3,45 (s, N-CH3) , 4,07 (s).

25 Analyysi, laskettu yhdisteelle cgH22N2SC^2 . 0,75 H20: C 39,34, H 8,62, N 10,20, S 11,67; saatu: C 39,48 , H 8,39, N 10,55, S 11,15.

46 77036 C. (5R,6S)~paranitrobentsyyli-3-/2-(1,4,4-trimetyy" li-1-piperatsiinium)-etyylitio7“6-/TR-hydroksietyyli/"7-okso-1-atsabisyklo(3,2,0)hept-2-eeni-2-karboksylaatti“ biskloridi____ 5 OH 1) NEt(iPr)2 A—r^*\_ 2) a?(o?h)j 10 3) •COOPNB 4)

OH

Permutit S-l Cl vd,:+ NC00PN3

Kylmään liuokseen (5°C), jossa oli (5R,6S)-paranitrobentsyyli-6-/TR -hydroksietyyli7-3,7-diokso-20 1-atsabisyklo(3,2,0)heptaani-2R-karboksylaattia (0,94 g, 2,7 mmoolia) asetonitriilissä (3 ml), pidettynä typpiatmosfäärin suojaamana, lisättiin di-idopropyyli-etyyliamiinia (0,557 ml, 3,2 mmoolia) ja difenyyli-kloorifosfaattia (0,663 ml, 3,2 mmoolia). Reaktioseosta 25 sekoitettiin 5°C:ssa 30 minuuttia ja käsiteltiin di-isopropyylietyyliamiinin (0,599 ml, 3,44 mmoolia) ja vesiliuoksen (4 ml kanssa, jossa oli 1-(2-merkaptoetyy-li)-1,4,4-trimetyylipiperatsiiniumbiskloridia (0,90 g, 3,44 mmoolia). 1,25 tunnin kuluttua lisättiin di-isopro-30 pyylietyyliamiinia (0,1 ml, 0,57 mmoolia) ja sekoittamista jatkettiin 2 tuntia. Osa asetonitriilistä poistettiin vak-umissa ja saatu punainen seos kromatografioitiin PrepPak-500/C^g-kolonnissa (Water Associates) käyttämällä eluointiliuottimena seosta 25-75 % asetonitriiliä vedes-35 sä, jolloin saatiin kellertävää jauhetta (1,4 g) kylmä-kuivauksen jälkeen. Jauhe liuotettiin veteen ja liuos laskettiin Permutit S-1 Cl kolonnin (1,2 x 58 ml) läpi 47 77036 käyttämällä eluointiliuottimena vettä. Kylmäkuivaamalla sopivat fraktiot saatiin 1,17 g jauhetta, joka puhdistettiin uudelleen PrepPak -500/C^g-kolonnissa. Kylmäkuivaa-malla sopivat fraktiot saatiin kellertävää jauhetta, 5 0,80 g (53 %) ; ir <KBrW maks : 3400 (br, OH) , 1770 ( -laktaamin C=0), 1690 (PNB-esterin C=0), 1605 (aromaattinen), 1515 (N02), 1345 (N02) cm"1; 1Hmr (D20) 1,26 (d, J=6,3 Hz, 3H, CHgCHOH), 3,39 (s, NCH^, 4,00 (s), 5,37 (br, s, PNB:n CH2), 7,60 (d, J = 8,6 Hz, 2H, PNB;n 10 Ho), 8,20 (d, J=8,7 Hz, 2H, PNB:n Hm); uv (H20)^ maks : 276 (£ 12094), 306 (€ 10752).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C^H^N^O SC1 . 3H20: C 46,51, H 6,56, N 8,68, S 4,97, Cl 10,98; saatu: C 46,31, H 6,18, N 8,57, S 5,36, Cl 11,37.

15 D. (5R,6S)-3-/2-(1,4,4-trimetyyli-1-piperatsiinium)- etyylitio7-6-/1R-hydroksietyyli7_7-okso-1-atsabisyklo- (3,2,0)hept-2-eeni-2-karboksylaatti-kloridi_ OH -^ ^ A'rTV^t/\ * 2d —v 'COCPNB ,

OH

25 ί y/+ V+

Ncoo~

Seosta, jossa oli (5R,6S)-paranitrobentslyyli-3-/2-(1 ,4,4-trimetyyli-1 -piperatsinium) etyylitio7-6-30 /TR-hydroksietyyli7-7-okso-1-atsabisyklo(3,2,0)hept- 2-eeni-2-karboksylaatti-biskloridia (0,40 g, 0,68 mmoo-lia), fosfaattipuskuria (30 ml, 0,05-mol., pH 7,0), tetrahydrofuraania (10 ml), eetteriä (30 ml) ja 10-prosenttista palladium-puuhiiltä (0,40 g), hydrattiin 35 23°C:ssa 35 psi:n paineessa tunnin ajan. Saadut kaksi faasia erotettiin. Orgaaninen faasi uutettiin vedellä (10 ml). Vesifaasi suodatettiin Celite-patjän läpi, 48 77036 pestiin eetterillä (10 ml), konsentroitiin vakuumissa 10 mlrksi ja kromatografioitiin PrePak-500/C^g-kolonnis-sa (2,2 x 11 cm) eluoimalla vedellä, jolloin saatiin 70 mg (25 %) tuotetta kylmäkuivauksen jälkeen; 5 ir <KBrWmaks ·* 3400 (br, OH), 1755 (f>-laktaamin C=0) , 1585 (karboksylaatti cm % ^Hmr (D20) <5: 1,24 (3H, d, J=6,3 Hz, CHgCHOH), 3,36 (s, NCH^), 3,98 (s); uv (H2°)A maks.: 296 (£ 7987,; /«/d3 35,9° (c, 0,30, H20); t^ = 9,8 tuntia (mitattu konsentraation ollessa 10 10 ^ mol. fosfaattipuskurissa pH 7,4 36,8°C;ssa).

Claims

49 77036 Patenttivaatimus Menetelmä antibioottisesti aktiivisten kvaternääri-sellä typpiheterosyklisellä renkaalla substituoitujen 2-5 etyylitiokarbapen-2-eemijohdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava (I) on CH- 0H H ' 3\£T\ ch^ch -I-S-C»2-CB2-10J

10 J-N--V 2

0 COOR
2 ]Ossa R on paranitrobentsyyli tai vastaioni ja

15 O on pyrrolidiini-, morfOliini-, tiomorfoliini-, tiomorfolii-nioksidi-, 4-metyyli-l-piperatsiini- tai 4,4-dimetyylipi-peratsiinirengas, joka on sitoutunut etyleeniryhmään ren-20 gastypen välityksellä muodostaen täten kvaternäärisen am-moniumryhmän; tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) (1) yhdisteen, jonka kaava (III) on T" 25 OH H ? S- -V 2' N:oor 2' 30 jossa R on tavallinen helposti poistettavissa oleva kar-boksyylisuojaryhmä, annetaan reagoida inertissä orgaanisessa liuottimessa difenyylikloorifosfaatin kanssa emäksen läsnäollessa, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (IV) on 50 770 36 o OH „ „ Il 1 h ^OPiOC^Hj 0 CH3CH--p j|^ 6 5 2 IV J-N -\ 2' 5 0 ^ COOR 2' jossa R on edellä määritelty; (2) kaavan IV mukaisen yhdisteen annetaan reagoida inertissä orgaanisessa liuottimessa emäksen läsnäollessa 10 merkaptaanireagenssin kanssa, jonka kaava on HS-CH2-CH2-OH, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (V) on °H H / s-ch2-ch2-oh CH 3CH--f Y 2 2

15 N '1 V O ^ ^ COOR1 ' 2 1 jossa R on edellä määritelty; (3) kaavan V mukaisen yhdisteen annetaan reagoida 20 inertissä orgaanisessa liuottimessa ja emäksen läsnäollessa metaanisulfonyylikloridin tai sen kanssa toiminnallisesti ekvivalentin asylointiaineen kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (VI) on 25 ?H H, ^ S-CH9-CH2-0S02CH3 CH-CH--f 2 2 2 J J I I vi S- N \ 2' O Λ COOR 30 jossa R on edellä määritelty; (4) kaavan VI mukaisen yhdisteen annetaan reagoida inertissä orgaanisessa liuottimessa jodidi-ionilähteen kanssa siten, että metaanisulfonyylioksiryhmä korvautuu jodiryhmällä ja muodostuu yhdiste, jonka kaava (II) on 51 77036 °H H / s-ch.-ch.-i CH3CH--~lY II 5 & N \ 2' O COOR 2' jossa R on edellä määritelty; ja (5) kaavan II mukaisessa yhdisteessä suoritetaan nukleofiilinen korvausreaktio inertissä orgaanisessa liuot-10 timessa hopeaionin läsnäollessa amiinin kanssa, jonka kaava on CH0 Ä x0 jossa

15 O on edellä määritelty siten, että kaavan II mukaisen yhdisteen jodi korvautuu ryhmällä CH3 20 \0 . . ja muodostuu yhdistettä, jonka kaava (I *) on CH3 ···' OH H H ; 25 CH^CH _|_S-CH2-CH2-XnQc-

3. I w Ιο**-N-\ 2, COOR O jossa X on vasta-ioni ja 30 -Ό .2' ja R ovat edellä määritellyt, ja tarvittaessa poistetaan 2' karboksyylisuojaryhmä R , jolloin saadaan vastaava suo-35 jaamaton kaavan I mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, tai 52 7 7 0 3 6 b) yhdisteen, jonka kaava (III) on OH H H

5 CH3CH «ΊΓ _N _4 III O ^ ' 2' COOR 2' jossa R on edellä määritelty, annetaan reagoida iner-tissä orgaanisessa liuottimessa difenyylikloorifosfaatin 10 kanssa emäksen läsnäollessa, jolloin saadaan yhdiste, jonka kaava (IV) on H H ? 9H CH,CH--f X -3 I I iv 15 /-N-\ 2, o COOR 2' ]ossa R on edellä määritelty, ja kaavan IV mukaisen yhdisteen annetaan reagoida tioliyhdisteen kanssa, jonka 20 kaava (VII) on CH3 hs-ch2-ch^n O VII © 25 jossa X on edellä määritelty, jolloin muodostuu yhdiste, jonka kaava on CH3 OH H H \^\ 0 CHjCH —|-S‘CH2'CH2^vJ X ^

30 S-N-\ 2, O COOR jossa 35 2' 53 7 7 0 3 6 ja R ovat edellä määritellyt, ja tarvittaessa poistetaan 2 1 karboksyylisuojaryhmä R , jolloin saadaan vastaavaa suojaamaton kaavan I mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, ja haluttaessa muutetaan menetelmällä 2 5 a) tai b) saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on pa- ranitrobentsyyli, kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi, jossa 2 R on vastaioni, poistamalla paranitrobentsyyliryhmä katalyyttisellä hydrauksella. 54 7 7 0 3 6 Förfarande för framställning av antibiotiskt aktiva, med en kvaternär kväveheterocyklisk ring substituerade 2-5 etyltiokarbapen-2-emderivat med formeln (I) CH3 CHj^H-1_S-C"2-™>© i ^ ^ 2

10 CK COOR 2 väri R är paranitrobensyl eller en motjon och „ O är pyrrolidin-, morfolin-, tiomorfolin-, tiomorfolonoxid-, 4-metyl-l-piperazin- eller 4,4-dimetylpiperazinring, vil-ken är bunden tili etylengruppen via ringkväveatom och bildar sä en kvaternär ammoniumgrupp; 20 a) (1) en förening med formeln (III) OH H H CH-CH--° I TTT J-N-X 111 0/ ncoor2 2' väri R är en konventionell karboxylskyddsgrupp som kan lätt avlägsnas, omsätts med difenylklorfosfat i ett inert organiskt lösningsmedel i närvaro av en bas för erhällan-30 de av en förening med formeln (IV) OH H H ¾ CH,CH-|-f^yOP(OC6B5)2 J I I iv N \ 2'

35. COOR 2' 55 7 7 0 3 6 väri R är som ovan definierats, (2) föreningen med formeln IV omsätts i ett inert organiskt lösningsmedel i närvaro av en bas med ett mer-kaptanreagens med formeln HS-CH2CH2-OH för erhällande av 5 en förening med formeln (V) OH H H ChJh-|-S-CH2-CH2-°H l I V X-N-1 2 * 10 qS ^ COOR 2' . van R ar som ovan definierats; (3) föreningen med formeln V omsätts i ett inert organiskt lösningsmedel och i närvaro av en bas med metan- 15 sulfonylklorid eller ett med denna funktionellt ekvivalent acyleringsmedel för erhällande av en förening med formeln (VI) ?H H s-ch2-ch2-oso2ch3

20 CH3CH--f T VI /_N-> V \ 2' O COOR 2' van R är som ovan difinierats; 25 (4) föreningen med formeln VI omsätts i ett inert organiskt lösningsmedel med en jodidjonkälla sä att metan-sulfonyloxigruppen ersätts med en jodgrupp och man erhäll-er en förening med formeln (II) nH H H

30. S-CH2"CH2“I ch3ch--1 | 11 r N \ 2' O COOR 2' 56 7 7 0 3 6 väri R är som ovan definrerats ; och (5) föreningen med formeln II underkastas en nukleo-fil substitutionsreaktion i ett inert organiskt lösnings-medel i närvaro av silverjoner med en amin med formeln

5 CH0 Λ o o 10 är som ovan definierats, sä att jod i föreningen med formeln II ersätts med gruppen ch3 15 under bildande av en förening med formeln CH3 9H H ^ S-CH^-CH^f^^) X0 CH3iH--2 2 ^ 2o 0 \oOR2' väri β är en motjon och -© 2' 25 och R är sora ovan definierats, och att man vid behov 2' avlägsnar karboxylskyddsgruppen R för erhällande av motsvarande oskyddade förening med formeln I eller ett farmaceutiskt godtagbart sait därav, eller b) en förening med formeln (III)

30 OH H H CH-CH--
3 I | III <7 N \ 2' O COOR^