FI68636B - Poroest oorganiskt baerarmaterial med en organisk stationaer fas foer anvaendning vid kromatografi och foerfarande foer frmstaellning av detta - Google Patents

Poroest oorganiskt baerarmaterial med en organisk stationaer fas foer anvaendning vid kromatografi och foerfarande foer frmstaellning av detta Download PDF

Info

Publication number
FI68636B
FI68636B FI812002A FI812002A FI68636B FI 68636 B FI68636 B FI 68636B FI 812002 A FI812002 A FI 812002A FI 812002 A FI812002 A FI 812002A FI 68636 B FI68636 B FI 68636B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
group
groups
organic
inorganic
vinyl monomers
Prior art date
Application number
FI812002A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI68636C (fi
FI812002L (fi
Inventor
Jan Andre Jozef Schutijser
Original Assignee
Akzo Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Akzo Nv filed Critical Akzo Nv
Publication of FI812002L publication Critical patent/FI812002L/fi
Publication of FI68636B publication Critical patent/FI68636B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI68636C publication Critical patent/FI68636C/fi

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/261—Synthetic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/264—Synthetic macromolecular compounds derived from different types of monomers, e.g. linear or branched copolymers, block copolymers, graft copolymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B01J20/267—Cross-linked polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28057—Surface area, e.g. B.E.T specific surface area
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B01J20/289—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers bonded via a spacer
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3257—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3257—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such
    • B01J20/3263—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur together with at least one silicon atom, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure containing at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. an heterocyclic or heteroaromatic structure
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/327—Polymers obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3276—Copolymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/328—Polymers on the carrier being further modified
    • B01J20/3282—Crosslinked polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F292/00—Macromolecular compounds obtained by polymerising monomers on to inorganic materials
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
    • Y10T428/2991—Coated
    • Y10T428/2993—Silicic or refractory material containing [e.g., tungsten oxide, glass, cement, etc.]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
    • Y10T428/2991—Coated
    • Y10T428/2993—Silicic or refractory material containing [e.g., tungsten oxide, glass, cement, etc.]
    • Y10T428/2995—Silane, siloxane or silicone coating
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/31504—Composite [nonstructural laminate]
    • Y10T428/31652—Of asbestos
    • Y10T428/31663—As siloxane, silicone or silane

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Graft Or Block Polymers (AREA)
  • Polymerisation Methods In General (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Pigments, Carbon Blacks, Or Wood Stains (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Ceramic Products (AREA)
  • Laminated Bodies (AREA)

Description

1 68636
Kromatografiässä käytettävä amidiryhmiä sisältävällä polymeerillä päällystetty huokoinen epäorgaaninen kantaja-aine ja menetelmä sen valmistamiseksi 5 Keksintö koskee kantaja-ainetta, joka on käyttökelpoi nen sellaisenaan kromatografiässä tai lähtömateriaalina, johon voidaan sitoa ionisia ryhmiä, ligandeja tai biomakromo-lekyylejä sisältäviä yhdisteitä, jolloin sitä voidaan käyttää ioninvaihtajana, väliaineena affiniteettikromatografias-10 sa tai entsymaattisissa reaktioissa. Kantaja-aine koostuu huokoisista, epäorgaanisista, silanoiduista hiukkasista, joihin on kovalenttisesti sidottu stationäärifaasi, joka muodostuu amidiryhmiä sisältävistä (ko)polymeroiduista vi-nyylimonomeereista.
15 Edellä esitetyn kaltaista kantaja-ainetta on kuvattu mm. US-patenttijulkaisussa 3 983 299. Tällöin käytetty orgaaninen stationäärifaasi on ohut hiilihydraattikerros, kuten esim. dekstraania tai sakkarideja, joiden molekyylipai-no on <6 000. Tällaisen kantaja-aineen suurena haittana on, 20 että hiilihydraatti on luonnon aine, joka ei ole ainoastaan oksidatiivisen, vaan myös biologisen hajoamisen kohde. Toinen haitta on, että siihen lopullisesti sidottujen funktionaalisten ryhmien lukumäärä jää melko rajoitetuksi.
Keksintö tarjoaa uuden kantaja-ainetyypin, jolla ei 25 ole yllä mainittuja haittoja.
DE-patenttijulkaisusta 2 750 595 tunnetaan kantaja-aine, joka on tarkoitettu käytettäväksi kromatografiässä ja erityisesti affiniteettikromatografiässä ja joka perustuu huokoiseen, epäorgaaniseen aineeseen sekä orgaaniseen 30 stationäärifaasiin, joka on synteettistä polymeeriä, siinä ei kuitenkaan ole käytetty silanoitua ainetta ja orgaanisen stationäärifaasin ja epäorgaanisen aineen välillä on heikko sidos. Lisäksi mainitussa saksalaisessa patenttijulkaisussa ei mainita mitään silloitetun polymeerin käy-35 töstä. Johtuen osittain siitä, että käytetään ei-silanoi-tua ainetta ja tiettyjen vinyylimonomeereja, voi joissakin 2 68636 olosuhteissa sekä hydrolyyttinen stabiliteetti eikä kantaja-aineen absorptiotoiminta voi olla epätyydyttävä.
Keksintö tarjoaa hydrolyyttisesti hyvin kestävän kantaja-aineen, joka soveltuu erittäin hyvin käytettäväksi 5 edellä mainittuun tarkoitukseen, jossa kantaja-ainetta on käytettävä monia kertoja peräkkäin.
Keksintö koskee uutta kantaja-ainetta, joka koostuu huokoisista, epäorgaanisista silanoiduista hiukkasista, joihin on kovalenttisesti sidottu orgaaninen stationäärifaasi, 10 joka muodostuu (ko)polymeroiduista vinyylimonomeereistä ja sisältää amidiryhmiä. Kantaja-aineelle on tunnusomaista, että (A) epäorgaaninen aine on silanoitu orgaanisella si-laanilla, jonka kaava on 15 *2 I2
Er?i-,CH2)n-R4 (I) R3 jossa n = 1-5, edullisesti 3, on halogeeni tai alkoksi 20 (1-10 C), R2 ja R^ tarkoittavat halogeenia, alkoksia (1-10 C), alkyyliä (1-3 C) tai aryyliä (6-10 C), jolloin halogeeni- ja alkoksiryhmät R^, R£ ja R^ pysyvät muodostamaan -O-Si-sidoksen silaanin ja epäorgaanisen aineen välille viimemainitun pintahydroksyyliryhmien välityksellä, ja R^ 25 on amino, substituoitu amino, kuten esim. 6^-amino-alkyyli-(1-3 C)-amino, merkapto, esteriryhmä tai glysidoksi ja on edullisesti glysidoksi; ja (B) orgaaninen stationäärifaasi on silloitettu (ko)- polymeeri, joka on saatu additiopolymeroinnilla ja muodos- 30 tuu 0,1 - 140 ^moolista, edullisesti 5-25 /imoolista vinyy- 2 limonomeerejä kantaja-aineen epäorgaanisen pinnan m kohti, jolloin (ko)polymeeri sisältää vähintään 0,1 ^moolia amidi- 2 ryhmiä kantaja-aineen epäorgaanisen pinnan m kohti ja vi-nyylimonomeerit koostuvat kokonaan tai osittain bifunktio-35 naalisista vinyylimonomeereistä, jotka sisältävät amidiryhmiä ja joiden kaava on 3 68636
Re R, 0 H
I 5 I II i CH = C - C - N (CH2)m - 0R7 (II) jossa Rc ja R_ tarkoittavat vetyä, alkyyli- tai sykloalkyy-
D O
5 liryhmää, jossa on enintään 6 hiiliatomia tai enintään 10 hiiliatomia sisältävä aryyliryhmä, Ry on vety tai enintään 20 hiiliatomia sisältävä orgaaninen ryhmä, ja m on kokonaisluku 1-10, jolloin amidiryhmät on saatu osittain saattamalla (a) välimolekyyli, ligandi, biomakromolekyyli tai yh-10 diste, joka sisältää ionisen ryhmän, jolloin kussakin näistä on reaktiokykyinen ryhmä ja yksi tai useampi amidiryhmä, reagoimaan vinyylimonomeerin tai silloitetun (ko)polymeerin reaktiokykyisen ryhmän kanssa, tai (b) välimolekyyli, ligandi, biomakromolekyyli tai yh-15 diste, joka sisältää ionisen ryhmän, jolloin kussakin näistä on yksi tai useampi amino- ja/tai karboksyyliryhmä, reagoimaan yhden tai useamman silloitetussa (ko)polymeerissä olevan karboksyyli- ja/tai aminoryhmän kanssa.
Keksintö koskee myös menetelmää edellä kuvatun kanta-20 ja-aineen valmistamiseksi. Menetelmälle on tunnusomaista, että (A) epäorgaaninen aine silanoidaan sinänsä tunnetulla tavalla kaavan I mukaiselle orgaanisella silaanilla; (B) silanoitu epäorgaaninen aine saatetaan kosketuk-25 seen liuoksen kanssa, jossa vinyylimonomeerit on liuotettu haihtuvaan orgaaniseen liuottimeen tai orgaanisiin liuottimiin ja/tai veteen, ja sitten haihtuva liuotin poistetaan sekoittamalla alennetussa paineessa ja alle 40°C:n lämpötilassa haihduttimessa niin että epäorgaaninen aine peittyy 30 monomeeriseoksen muodostamalla ohuella kalvolla, minkä jälkeen kalvopäällysteen polymerointi ja samanaikaisesti muodostuneen (ko)polymeerin kovalenttinen sitominen silanoi-tuun aineeseen suoritetaan kuumentamalla hapettomassa atmosfäärissä, ja 35 (C) tarvittaessa saatu aine liitetään edelleen sinän sä tunnetulla tavalla yhdisteisiin, joissa on reaktiokykyi-siä ryhmiä.
4 68636
Uusi kantaja-aine sopii erittäin hyvin käytettäväksi teollisessa mittakaavassa. Sillä on erittäin edullisia, hyd-rofiilisia ominaisuuksia, suuri mekaaninen kestävyys ja se kestää suuria virtausnopeuksia. Se ei liukene vesiliuoksiin 5 eikä siinä ilmene epäspesifisiä vuorovaikutuksia biomakro-molekyylien kanssa. Aine voidaan helposti regeneroida ja se kestää mikrobien ja entsyymien hajotustoimintaa.
Termiä "bifunktionaalinen vinyylimonomeeri" käytetään tarkoittamaan monomeeria, jolla on vinyyliryhmän ohella ai-10 nakin yksi hydrofiilinen, funktionaalinen ryhmä, joka voi muodostaa kovalenttisia sidoksia, esim. kaavassa II ryhmä -OR^. "Osittain" on edullisesti >5 mooli-%.
Silanoitu epäorgaaninen aine, jossa on glysidoksiryh-miä, hydrolysoidaan, jolloin saadaan glyseryyliryhmiä ennen 15 (ko)polymerointia.
GB-patenttijulkaisusta 1 456 865 tunnetaan kvartsi-pitoinen, hiukkasmainen kantaja-aine kromatografiaa, erityisesti ioninvaihtokromatografiaa varten, jolloin orgaaninen stationäärifaasi on kantaja-aineen pintaan sidottu kopoly-20 meeri. Kvartsipitoinen aine on silanoitu vinyylisilaanilla ja silanoitu aine kopolymeroitu vinyylimonomeerin kanssa, jossa on yksi tai useampia olefiiniryhmää. Vinyylimonomeeri voi sisältää funktionaalisia ryhmiä, kuten halogeenin, hyd-roksyylin, metoksin, amidin, trikloorisilanyylin, karbok-25 syylihappo- ja esteriryhmän, mutta nämä ryhmät eivät näytä olevan välttämättömiä esimerkkien perusteella, jotka koskevat vinyylimonomeereja, kuten propyleenia, isobutyleenia, styreeniä sekä butadieenia, lukuunottamatta esimerkkiä 4, jossa vinyylimonomeeri on maleiinianhydridi. Sidottu oksas-30 kopolymeeri, joka vinyylimonomeerin valinnasta riippuen ei ole silloitettu tai on vähän silloitettu, voidaan edelleen silloittaa käyttämällä silloitusaineita, kuten divinyyli-bentseeniä tai diklooripropaania. Saatu tuote, jolla on pääosaltaan hydrofobisia ominaisuuksia, muutetaan sitten 35 edullisesti happo- tai emäs-ioninvaihto-oksaskopolymeeriksi 5 68636 sulfonoinnilla, fosfonoinnilla, karboksyloinnilla, hydrok-syloinnilla tai aituninoinnilla.
Vaihtoehtoisesti sidottu kopolymeeri saatetaan tehdä toiminnallisesti siten, että se saatetaan reagoimaan kela-5 tointi aineen kanssa, kelatointi aineen liittämiseksi sidottuun oksaskopolymeeriin, tai nitriiliryhmiä voidaan liittää siten, että alkyylinitriili saatetaan reagoimaan sidotussa kopolymeerissa olevien halogeeniatomien kanssa.
Tällä tunnetulla vinyylisilanoidulla kantaja-aineella, 10 johon kopolymeeri on kovalenttisesti sidottu, ei ole samoja erityisiä hydrofyylisiä ominaisuuksia eikä sitä suurta monipuolisuutta kormatografisissä sovellutuksissa kuin keksinnön mukaisella aineella. Tunnettu aine ei sovellu affini-teettikromatografiaan ja sillä on huonot ominaisuudet kokoon 15 perustuvassa ekskluusiokromatografiässä.
US-patenttijulkaisusta 3 984 349 tunnetaan kromatogra-fiässä käytettävä huokoinen hienojakoinen tai kolloidinen, epäorgaaninen kantaja-aine, joka sisältää pinnallaan hydrok-syyliryhmiä, jotka on muunnettu oksastamalla pintaan orgaa-20 ninen ryhmä -O-Si-sidoksen aikaansaamiseksi, jolloin orgaanisen ryhmän keskimääräinen molekyylipaino on yli 150 ja se sisältää ainakin yhden hydrofiilisen funktionaalisen ryhmän. Orgaaninen ryhmä on silaani, joka on valmistettu addi-tioimalla yhdiste, jossa on vinyyli- tai allyylipääte ja 25 ainakin yksi hydrofiilinen ryhmä sekä yksinkertainen silaani, tai kopolymeroimalla vinyylimonomeeri, joka sisältää ainakin yhden hydrofiilisen radikaalin, ja tyydyttämätön silaani, esim. orgaaninen silaani, jossa orgaaninen ryhmä sisältää tyydyttymättömän eteeniryhmän. Täten tuotettu si-30 lääni reagoi epäorgaanisen kantaja-aineen, esim. piihapon, kanssa. Tässä tapauksessa kantaja-aineen pinnalle muodostuu pitkiä (ko)polymeeriketjuja ("häntiä") ilman ristisidoksia tai jos on kysymyksessä kopolymeeri, joka sisältää molekyyliä kohti useita silaaniryhmiä, kaikki näistä silaaniryh-35 mistä eivät reagoi epäorgaanisen kantaja-aineen pinnan hyd-roksyyliryhmien kanssa, niin että tietyssä määrin tässä tunnetussa aineessa on vielä kantaja-aineesta itsestään joh- 6 68636 tuvia, häiritseviä, ei-spesifisiä adsorptio-ominaisuuksia tai sitten silaanien silanoliryhmästä johtuvia, häiritseviä, ei-spesifisiä adsorptio-ominaisuuksia. Erilaisia kromatografisia sovellutuksia (esim. kokoon perustuva ekskluu-5 siokromatografia, affiniteettikromatografia) tämä adsorptio-ilmiö häiritsee hyvin voimakkaasti. Kun esillä olevan keksinnön mukainen epäorgaaninen kantaja-aine päällystetään, saadaan kromatografinen kantaja-aine, jossa on täysin tai lähes täysin deaktivoitu epäorgaaninen pinta ja jolla on 10 erinomaiset hydrofiiliset ominaisuudet. Erilaiset huokoiset, epäorgaaniset aineet soveltuvat käytettäväksi keksinnön mukaisena alustana. Esimerkkejä niistä ovat alumiini-, titaani-, nikkeli-, sirkonium- sekä rautaoksidit, erilaiset silikaatit, kuten esim. savi, piimää, kaoliini, bentoniitti, 15 magnesiumsilikaatti (talkki), asbesti ja lasi. Etusija annetaan huokoiselle piidioksidille. Erityisen hyviä tuloksia saadaan piidioksidihelmillä. Rhone-Poluenc myy sopivia helmiä kauppanimellä Spherosil. Tarkastetun, huokoisen lasin suhteen tämän materiaalin etuna on, että se on käytännölli-20 sesti katsoen pallomaista. Ennen kaikkea sen hinta on jokseenkin alhainen.
Epäorgaanisten aineiden huokosten läpimitta on yleensä 50 - 10 000 A. Valittu läpimitta riippuu suunnitellusta käytöstä. Affiniteettikromatografiässä esim. käytetään 25 yleensä pallosia, joiden läpimitta on 250 - 3 000 A:n alueella .
Pallosten huokostilavuus on yleensä 0,01 - 3 ml/g:n alueella, mieluummin tilavuus on noin 1 ml/g. Pallosten 2 ominaispinta-ala on 0,5 - 1 000 m/g:n alueella, useimmiten 2 30 käytössä oleva alue on 5-500 m /g.
Valmistettaessa kantaja-ainetta affiniteettikromatograf iaa varten, pidetään parempana käyttää pallosia, joi- 2 den ominaispinta-ala on 25-100 m /g:n alueella, mikä vastaa pallosia, joiden huokosten läpimitta on vastaavasti 35 1 000 - 250 A:n alueella. Riippuen kantaja-aineen ajatel lusta käytöstä, sen valmistuksessa käytettävän epäorgaanisen aineen keskimääräinen läpimitta on yleensä 2 - 300 /am.
7 68636
Valmistettaessa kantaja-ainetta affiniteettikromato-grafiaa varten, voidaan käyttää pallosia, joiden keskimääräinen läpimitta on 50 - 3 000 ^um:n alueella, etusija annetaan pallosille, joiden keskimääräinen läpimitta on 100 -5 800 yum:n alueella. Kun kantaja-ainetta valmistetaan suur- paineliuoskromatografiaa (HPCL) varten, pidetään parempana käyttää pallosia, joiden keskimääräinen hiukkaskoko on 2 -50 /imin alueella.
Epäorgaaninen aine täytyy silanoida ennen kuin orgaa-10 ninen stationäärinen faasi sidotaan siihen kovalenttisesti. Tämä voi tehdä sinänsä tunnetulla tavalla. Silanoinnin tarkoituksena on tuoda epäorgaaniseen aineeseen reaktiokykyi-siä ryhmiä kovalenttisen sidoksen muodostamiseksi silloitettuun polymeeriin. Esimerkkejä silanointireaktioista, jotka 15 soveltuvat käytettäviksi kyseessä olevien kantaja-aineiden valmistukseen, kuvataan edellä mainitussa US-patenttijulkaisussa 3 983 299 sekä julkaisussa Journal of Chromatographic Sciencessa, _1_2, (1974), s. 486-498. Kuten edellä on esi tetty, epäorgaaninen aine silanoidaan kaavan I mukaisella 20 orgaanisella silaanilla. Edullisia kantaja-aineita ovat sellaiset, joissa epäorgaaninen aine silanoidaan V-aminopro-pyylisiloksiryhmillä, Y-merkaptopropyylisiloksiryhmillä tai hydrolysoidulla y-glysidoksipropyylisiloksiryhmillä, jolloin viimeksi mainittu ryhmä on edullisin.
25 On havaittu, että edellä mainittuihin käyttötarkoi tuksiin sopii parhaiten kantaja-aine, jossa silloitettu po- 2 lymeeri koostuu 5-25 /amoolista vinyylimonomerejä m kohti silanoidun epäorgaanisen aineen pinta-alaa. Erityisesti siinä tapauksessa, jossa kyseessä olevia kantaja-aineita 30 käytetään affiniteettikromatografiaan, on toivottavaa, että niillä on opitimaaliset hydrofiiliset ominaisuudet. Tämän vaatimuksen täyttää esillä oleva keksintö, jonka mukaisesti saadaan kantaja-aine, jossa on ainakin 0,1 /umoolia amidiryh- 2 miä silanoidun epäorgaanisen aineen pinta-alan m kohti.
35 Amidiryhmät eivät ole ainoastaan vastustuskykyisiä vesi- liuoksissa tapahtuvaa hydrolyyttistä hajoamista vastaan laa- 8 68636 jalti vaihtelevissa olosuhteissa, vaan ne kestävät myös mikrobi- ja/tai entsyymitoimintaa. Varsinaisessa käytännössä kantaja-aine sisältää 5-25 ^lmoolia amidiryhmiä silanoi- 2 dun epäorgaanisen aineen pinta-alan m kohti.
5 Kuten edellä on todettu amidiryhmien liittäminen or gaaniseen stationäärifaasiin saadaan aikaan käyttämällä ko-polymeroinnissa kaavan II mukaista bifunktionaalista vinyy-limonomeeria. Mainittu bifunktionaalinen vinyylimonomeeri voi olla amidiryhmien ainoa lähde. Kuitenkin on myös mah-10 dollista saada edullisesti amidiryhmiä osittain saattamalla välimolekyyli, ligandi, biomakromolekyyli tai yhdiste, joka sisältää ionisen ryhmän, jolloin kussakin näistä on reaktiivinen ryhmä ja yksi tai useampi amidiryhmä, reagoimaan vinyylimonomeerin tai silloitetun polymeerin reaktiokykyi-15 sen ryhmän kanssa. Kantaja-aineen ominaisuuksiin saatetaan myös suotuisasti vaikuttaa, jos amidiryhmät on saatu osittain saattamalla silloitetun polymeerin yksi tai useampi amino- ja/tai karboksyyliryhmä reagoimaan yhdisteen kanssa, joka sisältää välimolekyylin, ligandin tai biomakromolekyy-20 Iin tai ioniryhmän ja jossa on yksi tai useampi karboksyyli-ja/tai aminoryhmä.
On havaittu, että päällystetyt aineet, joihin on lisätty kaavan II mukaisia amidiryhmiä sisältäviä vinyylimo-nomeereja, ovat erityisen sopivia käytettäväksi nestefaasi-25 ekskluusiokromatografiässä, geelisuodatuksessa tai kokoon perustuvassa ekskluusiokromatografiässä (SEC). Huokoinen, epäorgaaninen aine käsittää edullisesti kavartsipalloja, joiden läpimitta on edullisesti 100-200 /un:n ja joita Rhone-Poulenc myy kauppanimellä Spherosil. Päällystettyjen pallo-30 jen suhteen on erittäin edullista, että tavallisissa vesi-liuoksissa ei tapahtu mitään adsorptiota tai esiinny bio-spesifistä vuorovaikutusta pallojen pinnan ja biomakromole-kyylien välillä.
N-(hydroksietyyli)akryyliamidi sekä N-metyloli(met)-35 akryyliamidi, edullisesti viimeksi mainittu, ovat amidiryhmiä sisältäviä vinyylimonomeereja, jotka erityisesti soveltuvat polymeeripäällysteiden valmistukseen.
9 6 c 6 3 6
Kaavan II mukaista bifunktionaalista vinyylimonomee-ria käytettäessä silloitus suoritetaan additiopolymeroinnin aikana. Siinä tapauksessa, että silanoidun aineen pinnalla on Y-aminopropyylisiloksiryhmiä, kovalenttinen sidos on 5 yleensä amidisidos, joka on saatu silaanin aminoryhmän reaktion avulla additiopolymeerin karboksyyliryhmän kanssa. N-metyloliamidiryhmien sisältyessä yhteen tai useampaan additiopolymeerin vinyylimonomeeriin, on epäorgaanista ainetta edullista käyttää Y-glyseryylipropyylisiloksiryhmiä. N-10 metyloliamidiryhmät voivat kuumennettaessa tai vaihtoehtoisesti hapon vähäisen määrän läsnäollessa reagoida toistensa kanssa tai Y-glyseryylipropyylisiloksiyhdisteen glyseryyli-ryhmän kanssa, jonka seurauksena additiopolymeeri silloit-tuu ja sitoutuu kovalenttisesti silanoituun aineeseen.
15 Paitsi silaanin valinta silanoidun epäorgaanisen ai neen saamiseksi ja (ko)polymeroinnissa käytetyn bifunktio-naalisen vinyylimonomeerin valinta, myös keksinnön mukaisen kantaja-aineen valmistusmenetelmä edistää mahdollisimman hyvien tuotteiden saamista. Silanoitua, epäorgaanista ai-20 netta saadaan tunnetuin menetelmin, kuten aiemmin on todettu. Silloitettu polymeeripäällyste saadaan seuraavan menetelmän avulla. Ensin monomeerit sekä mahdolliset di- ja/tai oliogomeerit liuotetaan haihtuvaan, orgaaniseen liuottimeen tai orgaanisiin liuottimiin ja/tai veteen ja lisätään sila-25 noituun, epäorgaaniseen aineeseen. Haihtuva liuos poistetaan tämän jälkeen edullisesti kiertohaihduttimessa sekoittaen, alennetussa paineessa sekä alhaisessa lämpötilassa (<40°C). Kun on lisätty liuotinta radikaali-initiaattoria varten, johon liuottimeen monomeerit eivät liukene tai tus-30 kin liukenevat, seosta kuumennetaan hapettomassa atmosfää rissä, jonka tuloksena monomeerit polymeroituvat ja muodostuu kovalenttinen sidos silanoituun aineeseen. Valinnaisesti radikaali-initiaattoria voidaan jo lisätä monomeerin liuokseen.
35 Kaavan II mukaisten bifunktionaalisten vinyylimono- meerien lisäksi voidaan kopolymeroinnissa käyttää myös mui- 10 68636 ta vinyylimonomeereja silloitetun polymeerin muodostamiseksi. Suunnitellusta käyttöalueesta riippuen lisävinyylimono-meerit voivat olla rakenteensa suhteen hyvin vaihtelevia.
Esimerkkeinä tällaisista monomeereista mainittakoon 5 epoksiyhdisteet, joissa on etyleenisesti tyydyttymätön ryhmä ja joita on kuvattu edellä mainitussa DE-patenttijulkaisussa 2 750 595. Myös vinyylimonomeerejä, joilla ei ole mitään reaktiokykyistä ryhmää, kuten eteeniä, propeenia, vi-nyylikloridia, vinyylifluoridia ja/tai vinyyliasetaattia, 10 voidaan käyttää, vaikka niiden käyttö e.o. keksinnössä on rajoitettu. Edellytyksenä on kuitenkin, että monomeerit voidaan helposti polymeroida additiopolymeeriksi, jolla on ajateltuun käyttöön tarvittavat ominaisuudet. Esim. jos ainetta on käytettävä ioninvaihtajana, voidaan harkita kopolyme-15 rointia, jossa käytetään vinyylimonomeeria, jossa on kationi- tai aninoniryhmä. Esimerkkejä yhdisteistä, joissa on anioniryhmä, ovat vinyylimonomeerit, joissa on karboksyyli-ryhmä tai sulfonihapporyhmä, kuten eteenisulfonihappo, al-lyylisulfonihappo, styreenisulfonihappo, 2-sulfoetyylimetak-20 rylaatti, 2-akryyliamido-2-metyylipropyylisulfonihappo, 3-metakryloyylioksi-2-hydroksi-propyylisulfonihappo, Lj-hyd-roksialkyleenisulfonihapon (met)akryloyyliesteri, jonka al-kyleeniryhmässä on 1-20 hiiliatomia, N-akryylitauriini, vinyylioksibentseenisulfonihappo sekä akryyli- tai metakryy-25 lihappo. Esimerkkejä vinyylimonomeereista, joissa on katio-niryhmä, ovat seuraavat kaavan mukaiset alkenyylipyridiinit:
Ra / Rb
Ia /¾ ΓϊΓ'^νΚ 30 ^><cH2>q-c=c- ; ^ Rc
EC
E ,R.
Ia / b
(CH2)q-C=C
35 Γΐ\ * k jj
N
11 68636 jossa q = 0 tai kokonaisluku 1-20 ja Rq, R^ ja Rc voivat olla samoja tai erilaisia ja merkitsevät vetyatomia tai al-kyyliryhmää, jossa on 1-20 hiiliatomia; aminoalkyyliakry-laatit ja metakrylaatit, kuten t-butyyliaminoetyylimetakry-5 laatti, dietyyliaminoetyyliakrylaatti, dimetyyliaminopropyy-limetakryyliamidi sekä metakryyliamidopropyylitrimetyyliam-moniumkloridi.
Lähtöaineiksi affiniteettikromatografiaa varten sopivat edullisesti vinyylimonomeerit, joissa on reagoivia ryh-10 miä, jotka voidaan liittää yhdisteisiin, joissa toisaalta on reaktiokykyinen ryhmä ja toisaalta ligandi, joka soveltuu käytettäväksi tietyllä affiniteettikromatografiän alueella. Termiä "affinitettikromatografia" määritellään siten, kuten on tehty kirjassa "Affinity Chromatography" Elsevier, 15 1978, s. 1 ja 2. Se ei käsitä vain affiniteettimenetelmiä biospesifisen adsorption mielessä, vaan myös hydrofobista kromatografiaa, kovalenttista kromatografiaa, affiniteetti-eluutiota sekä kantaja-aineiden, joihin oligonukleotidit ovat sidotut, vuorovaikutusten tutkimista. Affiniteettikro-20 matografiällä ymmärretään myös biomakromolekyylien yksinker taista eristämistä spesifisen sorbentin pinnalle. On myös tietenkin mahdollista käyttää vinyylimonomeerejä, joissa funktionaalinen ryhmä on sidottu ilman välittäjänä toimivaa kahta reagoivaa ryhmää.
25 Edellä mainittujen vinyylimonomeerien lisäksi, joissa on ainoninen tai kationinen ryhmä, voidaan esimerkkeinä reaktiokykyisiä ryhmiä siältävistä vinyylimonomeereista mainita halogenoidut monomeerit, kuten halogenoidut alkyy- liakrylaatit tai metakrylaatit. Tällaisia ovat esim. 2- 30 kloorietyyliakrylaatti ja 2-kloorietyylimetakrylaatti; ha- logenoitu alkyyliakryylihappo ja niistä johdetut yhdisteet, joilla on seuraava kaava: R, I d Y-C-C-COOR^, joissa R^ ja Re voivat olla samoja tai erilai-
35 R CHX
e 12 6 C 6 3 6 siä ja merkitsevät vetyatomia, metyyliryhmää tai etyyliryh-mää ja R^ merkitsee vetyatomia, alempaa alkyyliryhmää tai aryyliryhmää, X merkitsee vetyatomia, halogeenia, CN:a, aryyliryhmää, OH:a, COOH:a tai O-aryyliä ja Y merkitsee 5 kloori- tai bromiatomia; sekä halogeenimetyloitu styreeni, kuten esim. p-kloorimetyylistyreeni.
Esimerkkejä ovat edelleen: reaktiokykyiset hetero-sykliset vinyylimonomeerit, kuten esim. 2-(1-atsiridinyy]i)-etyylimetakrylaatti, allyyliglysidyylieetteri, glysidyyli-10 metakrylaatti, tioglysidyyliakrylaatti, N-vinyyli-2-pyrro- lidoni sekä maliinihapon anhydridi; vinyylimonomeerit, joissa on aldehydi-pääteryhmä, kuten esim. akroleiini sekä kro-tonaldehydi; vinyylimonomeerit, joissa on aminoryhmä, kuten esim. allyyliamiini, vinyyliamiini sekä p-aminostyreeni; 15 happamet monomeerit, kuten esim. maleiinihappo, fumaarihap-po, itakonihappo sekä seuraavan kaavan mukaiset hapot:
H H I I
CH^(CH2)tC=C-COOH, jossa t = 0 tai kokonaisluku 1-20; akryy-lihappo sekä siitä johdetut yhdisteet, kuten esim.
20 C^C^HCOOH; vinyylialkyleenikarboksyylihappo, jossa on 2 -20 hiiliatomia alkyleeniryhmässä; p-vinyylibentsoehappo; alkyylivinyylieetteri, jossa on 1-18 hiiliatomia alkyyliryh-mässä; vinyylifenyylieetteri; hydroksialkyleenivinyylieet-teri, jossa on 2-20 hiiliatomia alkyleeniryhmässä; polyalky-25 leenioksidiglykolin vinyylieetteri, jossa on 2-20 alkyleeni-oksiyksikköä ja 2-5 hiiliatomia alkyleenioksidiyksikköä kohti; seuraavan kaavan mukaiset yhdisteet:
R 0 H A 19 n | I
CH2-C-C-N-CH-(Ci^)v-OH, jossa tarkoittaa vetyatomia tai 30 alkyyliryhmää, jossa on 1-8 hiiliatomia ja A merkitsee vety-atomia tai alkyyliryhmää, jossa on 1-20 hiiliatomia ja v on kokonaisluku 1-20.
13 68636
Eriyisen edullisia ovat yhdisteet, joiden kaava on HJZ = C , jossa Rr merkitsee vetyatomia tai metyyliä;
R9 HO
I II
5 Rg on -CH2NH2f -CH2-N-C-CH2X tai CH2OR1Q; X on halogeeni, edullisesti Br; ja R1Q on alkyyli, jossa on enintään 10 hiiliatomia, edullisesti metyyli, tai glysidioksi.
Käytettäessä kantaja-ainetta lähtöaineena, joka tehdään affiniteettikromatografiaan soveltuvaksi sitomalla sii-10 hen ligandeja, käytetään kuitenkin edullisesti silloitettua (ko)polymeeriä, jossa on yksi tai useampi vinyylimonomeeri, jossa on seuraavan kaavan mukainen reaktiokykyinen ryhmä;
/RS
H2C = C , jossa Rg = H tai CHg ja R^ merkitsee reaktio- 15 R11 kykyistä ryhmää, joka voi olla liittynyt väliryhmän välityksellä tai ilman sitä, ja jossa R^ merkitsee hydroksyyli-ryhmää tai yhtä tai useampaa seuraavista ryhmistä: 20 -°-N<j , -Μ<'Π , -ο-<Γ)-Ν02 • i o υ
25 o CHo0H
# / 2 -0-CH2-CH-CH2, -NH(CH2)p-CR12, -NH-C — CI^OH, o ^ch2oh i fl 30 -nhch2cnhch2cr12, -NHCH2CH2NH2,
F
NH„ , , -NH<^>-N02 N0o 2 35 14 68636 jolloin voi tarkoittaa samaa kuin ja p merkitsee kokonaislukua 2-10.
On edullista, että sellaisen vinyylimonomeerin mole-kyylipaino, jossa on reaktiokykyinen ryhmä ja mahdollises-5 ti myös väliryhmä, on enintään 1 000 ja edullisesti se on 70-400. Affiniteettikromatografiaa varten käytettäviä li-gandeja ovat esimerkiksi aminohapot, mononukleotidit, oli-gonukleotidit ja polynukleotidit, erilaiset orgaaniset väriaineet, entsyymi-inhibiittorit, polyaminohapot, lektii-10 nit, polysakkaridit, lipidit, antigeenit ja entsyymit.
Keksintöä kuvataan edelleen seuraavissa esimerkeissä.
Esimerkki I
V-glyseryylipropyylisiloksipiidioksidipallojen valmistus. 110 g kvartsipalloja (keskimääräinen huokosen läpi- 2 15 mitta 600 A; ominaispinta-ala 50 m /g; lämpmitta-alue 100-200 /um) käsiteltiin kahden tunnin ajan 400 ml:11a tislattua vettä ultraäänihauteessa 80°C:ssa. Sen jälkeen, kun pallot oli pesty vedellä, kunnes saatiin kirkas liuos, niitä aktivoitiin käsittelemällä suspensiota 40 ml :11a 4N HNO^:a. 20 Vedellä suoritetun pesun sekä kuivauksen jälkeen 460 ml tolueenia lisättiin pulloon, joka sisäli 100 g kvartsipalloja. Sen jälkeen pulloon pantiin V"-glysidoksipropyylitri-metoksisilaania 40 ml. Sen jälkeen, kun pullo oli kiinnitetty kiertohaihduttajaan, sitä kuumennettiin viiden tun-25 nin ajan öljyhauteella 90°C:ssa.
Jäähdytyksen jälkeen suspensio suodatettiin, pestiin 500 ml :11a tolueenia sekä yhdellä litralla setonia.
Kun asetoni oli poistettu vähennetyssä paineessa, palloja kuivattiin kahden tunnin ajan 50°C:ssa sekä vähennetyssä 30 paineessa suoritetun kuivauksen jälkeen hiilisisältö määritettiin noin 200 mg:sta palloja alkuaineanalyysin avulla.
68636
Sen todettiin olevan noin 2 %, mikä vastaa noin 280 /imoo-lia Y-glysidioksipropyylisiloksiryhmiä grammaa kohti helmiä. Tyhjökiertohaihduttimessa, joka sisälsi 300 ml vettä, jonka pH oli säädetty 2:ksi 10 % HClrlla, 105 g:sta näitä helmiä 5 kaasu poistettiin 1599,864 Pa:n (12 mmHg) paineessa.
Sen jälkeen ainetta sekoitettiin tunnin ajan yhden ilmakehän paineessa 90°C:n öljyhauteella. Sen jälkeen, kun aine oli jäähdytetty, helmet suodatettiin ja pestiin vedellä neutraaleiksi. Seuraavaksi helmiä kuivattiin kolmen tun-10 nin ajan 70°C:ssa ja ne jätettiin yöksi vähennettyyn paineeseen 120°C:seen. Alkuaineanalyysin perusteella saatiin Y-glyseryylipropyylisiloksiryhmien määräksi noin 280 ;umoo-lia grammaa kohti helmiä.
Esimerkki II
15 Esimerkin I mukaista menetelmää käyttäen piidioksi- palloja (huokoisen läpimitta 260 A, osaten koko 100-200 μ, ominaispinta-ala 108 m /g) käsiteltiin Y-glysidioksipro-pyylitrimetoksisilaanilla, joka sisälsi 500 /umoolia ^-gly-sidioksipropyylisiloksiryhmiä grammaa kohti piihappoa. Hyd-20 rolyysin jälkeen, jossa muodostui Y-glyseryylipropyylisi-loksipiihappoa, 25 g näitä palloja suspendoitiin 100 ml:aan dioksaania. Tähän suspensioon lisättiin 7,5 ml 60 paino-%lista N-metyloliakryyliamidin vesiliuosta. Dioksaani haihdutettiin pois tyhjökiertohaihduttimessa, kunnes pallot vie-25 rivät pullossa. Sen jälkeen lisättiin liuos, jossa oli 150 mg dientsoyyliperoksidia (20 % vettä) 10C ml:ssa nphek-saania. Sen jälkeen, kun suspensio oli pantu typpikehän alle, seosta polymeroitiin 1 1/2 tunnin ajan 70°C:ssa. Suspensio siirrettiin lasisuodattimeen ja pestiin asetonilla 30 ja metanolilla, jonka jälkeen helmet kuivattiin vähennetyssä paineessa 120°C:ssa. Alkuaineanalyysin perusteella hiilen määräksi saatiin 8,73 % ja typen määräksi 1,78 %. Kantaja-aineen grammaa kohti matriisissa oli 1 270 ^moolia N-metyloliakryyliamidia, joka oli polymeerin muodossa.
2 16 68636 Tämä vastaa 14,8 ^umoolia N-metyloliakryyliamidla m :ä kohti.
Esimerkki III
Käyttämällä esimerkin I mukaista menetelmää, kvartsi- 5 palloja kuormitettiin 300 ^umoolilla Ύ-glyseryylipropyyli- siloksiryhmiä grammaa kohti palloja (huokosen läpimitta 500 A, pallon läpimitta 100-200 ,u, ominaispinta-ala 2 ' 63 m /g). 100 g näitä palloja sekoitettiin 7,5 ml:n kanssa vesiliuosta, joka sisälsi 60 paino-% N-metyloliakryyliami-10 dia. 400 ml:aan vedetöntä etyyliasetaattia pantiin peräkkäin 2,882 g (40 ramol), akryylihappoa 5,524 g N-hydroksisuk-kinimidiä (48 mmol) sekä 9,078 g (44 mmol) N,N'-disyklo-heksyylikarbodi-imidiä, jonka jälkeen liuos suodatettiin yhden yön pituisen sekoituksen jälkeen. Suodos lisättiin 15 piihappopallojen muodostamaan suspensioon, jonka jälkeen etyyliasetaatti poistettiin vähennetyssä paineessa 40°C:ssa tyhjökiertohaihduttimessa. Pallojen päälle lisättiin sen jälkeen liuos, jossa oli 400 mg dibentsoyyliperoksidia 400 ml:ssa iso-oktaania. Suspensiota kuumennettiin typpi-20 kehässä 1 1/2 tunnin ajan 70°C:ssa, mikä sai aikaan kalvon polymeroitumisen pallojen pinnalle. Suodatuksen jälkeen pallot pestiin asetonilla ja metanolilla sekä kuivattiin sen jälkeen tyhjössä 120°C:ssa. Alkuaineanalyysin perusteella saatiin seuraavat tulokset: 25 C 6,54 % N 0,99 %
Mikrotitrauksen perusteella (lisäämällä etanoliamiinia sekä titraamalla takaisin HCl:lla) N-hydroksisukkinamidin aktivoimien karboksyyliryhmien määräksi saatiin 241 .umoo- 2 '
30 lia grammaa kohti tai 4,4 yumoolia m :ä kohti. N-metyloli-akryyliamidin määräksi saatiin 460 ^umoolia grammaa kohti. Esimerkki IV
Käyttämällä esimerkissä III kuvattua menetelmää, kvartsipalloja kuormitettiin 257 ^umoolilla Y-glyseryyli-35 propyylisiloksiryhmiä grammaa kohti palloja (huokosen läpimitta 500 Ä, pallon läpimitta 100-200 ^u, ominaispinta-ala 63 m2/g).
17 68636 100 g näitä palloja sekoitettiin 6,0 ml:n kanssa vesiliuosta, joka sisälsi 60 paino-% N-metyloliakryyliamidia (40 mmol).
400 ml:aan vedetöntä dioksaania lisättiin peräkkäin 5 7,4 g 6-akryyliamidopentaanikarboksyylihappoa /40 mmol oli valmistettu artikkelin mukaan, jonka ovat julkaisseet E. Brown et ai. julkaisussa J. of Chromatography 150 (1978) s. 101-110/, 5,524 g N-hydroksisukkinimidiä (48 mmol) sekä 9,078 g (44 mmol) Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä, jon-10 ka jälkeen liuos suodatettiin yhden yön sekoittamisen jälkeen. Etyyliasetaatti poistettiin täysin haihduttamalla samalla sekoittaen vähennetyssä paineessa 40°C:ssa. Pallojen päälle lisättiin tämän jälkeen liuos, jossa oli 400 mg dibentsoyyliperoksidia 400 mlrssa n-heksaania. Suspensiota 15 kuumennettiin typpikehässä 1 1/2 tunnin ajan 70°C:ssa, mikä sai aikaan kalvon polymeroitumisen pallojen pinnalle. Suodattamisen jälkeen pallot pestiin asetonilla ja metano-lilla sekä kuivattiin tämän jälkeen tyhjössä 120°C:ssa. Kantaja-aineen alkuaineanalyysi antoi seuraavat tulokset: 20 C 6,49 % N 1,05 %
Mikrotitrauksen avulla N-hydroksisukkinimidillä aktivoitujen karboksyyliryhmien määräksi saatiin 200 .umoolia gram- 2 maa kohti tai 3,7 yUmoolia m :ä kohti. Muodostuneen N-me-25 tyloliakryyliamidin määräksi saatiin 360 ^umoolia grammaa kohti.
Esimerkki V
Käyttämällä esimerkissä I kuvattua menetelmää, alu- miinipalloja (alumiini Woelm N^g, suuri resoluutio, suuri 30 nopeus, alumiinioksidi, jolla on hieno seulamitta, W 200 2 neutraali, ominaispinta-ala 200 m /g, osasten koko 18-30 /U) kuormitettiin 422 ^umoolilla Y-glyseryylipropyylisiloksi-ryhmiä pallojen grammaa kohti.
10 g silanoituja palloja lietettiin 50 ml:aan etyy-35 liasetaattia. Tähän lietteeseen lisättiin 3,80 ml vesi-liuosta, joka sisälsi 60 paino-% N-metyloliakryyliamidia. Etyyliasetaatin haihduttamisen jälkeen lisättiin liuos, 18 68636 jossa oli 150 mg dibentsoyylipercksidia (20 % vettä) 60 ml:ssa iso-okteenia. Sen jälkeen, kun suspensio saatettiin typpikehän alle, seosta polymeroitiin 1,5 tunnin ajan 70°C:ssa.
5 Pesun ja kuivauksen jälkeen tuotteen alkuaineanalyy si antoi hiilen määräksi 7,89 % ja typen määräksi 1,58 %. Alusaineen grammaa kohti siinä oli 1 130 ^umoolia N-mety- loliakryyliamidia polymeerin muodossa. Tämä vastaa 6,78 2 ^umoolia N-metyloliakryyliamidia m :ä kohti.
10 Esimerkki VI
Käyttämällä esimerkeissä I ja II kuvattua menetelmää, kvartsipalloja (huokosläpimitta 700 A, pallon läpimit- 2 ta 100-200 ^u, ominaispinta-ala 42 m /g) silanoitiin ja päällystettiin γ-glyseryylipropyylisiloksilla sekä poly-15 meroidulla N-metyloliakryyliamidilla. Alkuaineanalyysi antoi tuotteen hiilisisällöksi 3,15 % sekä typen määräksi 2 0,57 %. Amidiryhmien määrä oli 10,3 ^umol/m .
Esimerkki VII
Käyttäen esimerkin I mukaista menetelmää, kvartsi- 20 palloja kuormitettiin 250 ^umoolilla γ-glyseryylipropyyli- siloksiryhmiä pallojen grammaa kohti (huokosläpimitta 700 A, 2 pallon läpimitta 100-200 ^.u, ominaispinta-ala 42 m /g) .
5 g näitä palloja sekoitettiin 20 ml:n kanssa diok-saania, jonka jälkeen muodostuvaan suspensioon lisättiin 25 0,375 ml (2,5 mol) 60 paino-%:ista N-metyloliakryyliamidin vesiliuosta, 0,360 g (2,53 mmol) glysidyylimetakrylaattia sekä 10 mg atsobisisobutyronitriiliä (AIBN). Dioksaani poistettiin vähennetyssä paineessa 40°C:ssa tyhjökiertohaihdut-timessa.
30 Tämän jälkeen palloja kuumennettiin neljän tunnin ajan pullossa öljyhauteessa 80°C:ssa, minkä jälkeen palloja kuivattiin tyhjössä 100°C:ssa. Sen jälkeen, kun pallojen oli annettu jäähtyä, ne pestiin perusteellisesti asetonilla ja kuivattiin jälleen. Alkuaineanalyysin perusteella 35 saatiin hiilen määräksi 5,91 % ja typen määräksi 0,51 %.
Mikrotitrauksen perusteella epoksiryhmien määräksi saatiin 2 105 ^umoolia grammaa kohti tai ^,umooleja/m . N-sisällön 19 68636 perusteella voitiin laskea, että polymeerikalvoon oli liittynyt noin 310 ^umoolia N-metyloliakryyliamidia/g.
Esimerkki VIII
Käyttämällä esimerkissä I käytettyä menetelmää, kvart-5 sipalloja kuormitettiin 390 yumoolilla Y-glyseryylipropyy-lisiloksiryhmiä pallojen grammaa kohti (huokosläpimitta 650 Ä, pallon läpimitta 100-200 ^u, ominaispinta-ala 50 m^/g).
10 g näitä palloja lietettiin 300 mlraan dioksaa-10 nia, jonka jälkeen muodostuvaan suspensioon lisättiin 0,75 ml (5,00 mmol) 60 paino-%:ista N-metyloliakryyliami-din vesiliuosta. Sen jälkeen, kun liuotin oli haihdutettu, lisättiin 50 ml n-heksaania, johon oli liuotettu 25 mg di-bentsyyliperoksidia (20 % vettä). Polymeroinnin jälkeen 15 pallot pestiin asetonilla sekä metanolilla sekä kuivattiin sen jälkeen. Alkuaineanalyysin perusteella hiilen määräksi saatiin 4,45 % ja typen määräksi 0,54 %. Tämän jälkeen tämä kantaja-aine päällystettiin toisella polymeerikerroksel-la.
20 Lopuksi 0,370 g 6-akryyliamidopentaanikarboksyyli- happoa, 0,276 g N-hydroksisukkinimidiä sekä 0,454 g N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä saatettiin reagoimaan keskenään 20 mlrssa dioksaania.
Reaktioseoksen suodattamisen jälkeen liuos sekoitet-25 tiin 20 ml:n kanssa dioksaania, 0,150 ml:n kanssa 69 painoisista N-metyloliakryyliamidin vesiliuosta sekä 10 g:n kanssa piihappoainetta, jossa oli ensimmäinen kalvon muodostava polymeeri.
Dioksaanin haihduttamisen jälkeen lisättiin 60 ml 30 n-heksaania, joka sisälsi 30 mg liuotettua dibentsoyyliper-oksidia. Alkuaineanalyysin perusteella hiilen määräksi saatiin 6,48 % ja typpisisällöksi 0,96 %. Mikrotitrauksen perusteella N-hydroksisukkinimidillä aktivoitujen karboksyy- liryhmien määräksi saatiin 100 ,umoolia grammaa kohti eli 2 35 2,33 ^umoolia m :ä kohti.
20 68636
Esimerkki IX
10 g palloja, jotka oli käsitelty esimerkin IV menetelmän mukaisesti, käsiteltiin liuoksella, jossa oli 4,5 g hepariinia (175 USP-yksikköä/mg) 60 ml:ssa 0,1 molaarista 5 boraattipuskuria, pH 7,7.
Sen jälkeen, kun suspensiosta oli kaasu poistettu, sen pH pidettiin 8:ssa lisäämällä IM natriumhydroksidiliuos-ta ja sitä sekoitettiin 22 tunnin ajan. Seuraavaksi suspensio suodatettiin ja pestiin peräkkäin 400 ml :11a vettä, 10 600 ml:lla 3M NaClsa sekä 400 ml:lla vettä. Sen jälkeen, kun N-hydroksisukkinimidillä aktivoitujen karboksyyliryh-mien ylimäärä oli suljettu titraamalla IM etanoliamiinil-la, palloja pestiin 400 ml:lla vettä, 300 ml:lla 3M NaCl:a sekä 500 ml 0,01M trispuskuria (pH 7,4).
15 112,5 yumoolista hepariinin aminoryhmiä 86,5 ^umoo-
lia löydettiin fluoresenssispekroskopian avulla reaktion jälkeen liuoksesta sekä pesuaineista. Tällä tavalla heparii-nilla kuormitettu kantaja-aine pakattiin 50 x 16 mm:n suuruiseen pylvääseen, jolloin pakatun kolonnin tilavuus oli 20 10 ml. Pylväs käsiteltiin ensin 0,01 M trispuskurilla (pH
7,4). Seuraavaksi 60 ml härän plasmaa laskettiin pylvään läpi virtausnopeudella 22 ml tunnissa. Plasmassa oli anti-trombiini-III-aktiivisuutta 0,92 E/ml. 0,01M trispuskurilla suoritetun pesun jälkeen adsorboitunut aktiivisuus elu-25 oitiin 0,01M trispuskurilla sekä 3M NaCl:lla. Kokonaista-kaisinsaanto oli 75 %. Puhtaus oli 2,2 E mg kohti proteiinia, joka merkitsee puhdistuskertoimen arvoa 167.
Esimerkki X
5 g palloja, jotka oli päällystetty esimerkin VIII 30 menetelmän mukaisesti, käsiteltiin härän antitrombiini-III:n jäähdytetyllä liuoksella sekä 140 mg:11a hepariinia (jolla on vähimmäismäärä aminoryhmiä) 20 ml:ssa 0,1 molaarista fosfaattiliuosta (pH 7,4). Liuos sisälsi 11 mg antitrom-biini-III/ml ja antitrombiiniaktiivisuus oli 5,7 E/mg.
35 Sen jälkeen, kun palloista oli poistettu kaasu, liuosta sekoitettiin 24 tunnin ajan kiertotyhjöhaihdutti-messa. Seuraavaksi palloja pestiin lasisuodattimessa 21 63636 200 ml:lla 0,IM fosfaattipuskuria (pH 7). Jäljelle jääneet aktivoidut karboksyyliryhmät suljettiin titraamalla IM etanoliamiinilla, jonka jälkeen palloja pestiin peräkkäin 3M NaCl:a sisältävällä 0,1M fosfaattipuskurilla (pH 7,4) 5 sekä 0,15M NaClra sisältävällä 0,1M fosfaattipuskurilla (pH 7,4). Adsorboituneen antitrombiini-III:n määrä/g kantaja-ainetta määritettiin Folinin koementelmän mukaisesti ja sen todettiin olevan 8 mg/g kantaja-ainetta. Tämä aine pakattiin pylvääseen, jonka jälkeen määritettiin hepariinin 10 adsorptiokapasiteetti. Päätteeksi 0,15 M NaClra sisältävällä 0,02M fosfaattipuskurilla (pH 7,4) suoritetun tasapainottamisen jälkeen suuri hepariinin ylimäärä laskettiin pylvään läpi. Seuraavaksi adsorboitunut hepariini eluoitiin 3M natriumkloridia sisältävällä 0,02M fosfaattipuskurilla 15 (pH 7,4). Pylvään todettiin adsorboineen 140 ^ug heparii-nia pakatun kolonnin ml kohti.
Esimerkki XI
Käyttämällä esimerkissä III esitettyä menetelmää, piihappopalloja kuormitettiin 300 ^umoolilla Y-glyseryyli-20 propyylisiloksiryhmiä grammaa kohti palloja (huokosläpimit-ta 500 A, pallon läpimitta 100-200 ^u, ominaispinta-ala 63 m2/g).
Pinta päällystettiin esimerkissä III kuvatulla tavalla 407 ^umoolilla N-metyloliakryyliamidia sekä 104 25 ^umoolilla N-hydroksisukkinimidillä aktivoituja karboksyy-liryhmiä/g. Täten aktivoidusta aineesta 10 g erät reagoivat kunkin kanssa seuraavista primäärisistä amiineista: 1) p-aminobentsamidiini-hydrokloridi 2) etanoliamiini 30 3) n,N-dietyleenidiamiini 4) tauriini 5) heksyyliamiini 6) etyleenidiamiini sekä seuraavaksi meripihkahapon anhydridi.
35 1. 10 g kantaja-ainetta suspendoitiin liuokseen, jossa oli 2,4 g (11,5 mmol) p-aminobentsamidiinihydroklo-ridia 40 mlrssa 0,IM fosfaattipuskuria (pH 8). Sen jälkeen, 68636 4.4.
kun suspensiosta kaasu oli poistettu, sen pH säädettiin 8:aan 2N natriumhydroksidiliuoksella ja sitä sekoitettiin 16 tunnin ajan.
Sen jälkeen suspensio suodatettiin ja vaihtoehtoi-5 sesti sitä pestiin 0,1M asetaattipuskurilla, joka sisälsi IN NaCl:a (pH 4) sekä 0,1M fosfaatilla, joka sisälsi IM NaCl:a (pH 8) ja lopuksi vedellä.
Mikrotitrauksen avulla (lisäämällä ylimäärin etano-liamiinia ja titraamalla takaisin NaCltlla) todettiin, et-10 tei kantaja-aine, jota ei käsitelty pitempään, sisältänyt enää aktivoituja karboksyyliryhmiä. Lopputuotteen typen määrä oli 0,76 %, josta voitiin laskea, että 45 ^,umoolia/g kantaja-ainetta oli yhdistynyt. Tämä alusaine soveltuu hyvin proteaasien, kuten esim. trypsiinin eristämiseen Hixson 15 et al.:n julkaisussa Arch. Biochem. Biophys. 154 (1973) 501 sekä kirjassa Methods Enzymol. 37 (1974) 440 kuvaaman menetelmän avulla.
2. 10 g kantaja-ainetta lietettiin 30 ml:aan 0,01M etanoliamiiniliuosta. Sen jälkeen suspensiosta kaasu pois-20 tettiin, sitä sekoitettiin 30 minuutin ajan, se suodatettiin, pestiin vedellä, IM NaCl:lla ja jälleen vedellä. Mitatun typen määrä oli 0,71 %, joka käytännöllisesti katsoen vastaa aktivoitujen karboksyyliryhmien kvantitatiivista muuttumista.
25 3. 10 g kantaja-ainetta lietettiin liuokseen, jossa oli 0,32 ml (2,2 mmol) N,N-dietyylietyleenidiamiinia 25 ml:ssa dimetyyliformamidia. Sen jälkeen, kun liuoksesta oli poistettu kaasu, sitä sekoitettiin 16 tunnin ajan. Seu-raavaksi liete suodatettiin ja tämän jälkeen pestiin 30 200 ml:11a dimetyyliformamidia, 200 ml:11a vettä, 300 ml:11a IM NaClta sekä 300 ml:11a vettä. Alkuaineanalyysin perusteella typen määräksi saatiin 0,85 %. Tertiääristen amino-ryhmien lukumäärä/g tuotetta määritettiin titraamalla etik-kahapossa perkloorihapolla ja sen arvoksi saatiin 100 ^umoo-35 lia/g.
4. 10 g kantaja-ainetta lietettiin liuokseen, jossa oli 2,5 g (20 mmol) tauriinia 25 ml:ssa vettä sekä 3,1 ml *'3 68636 (21 mmol) trietyyliamiinia. Sen jälkeen, kun suspensiosta oli kaasu poistettu, sitä sekoitettiin 24 tunnin ajan. Suo--atuksen jälkeen lietettä pestiin peräkkäin vedellä, 2M NaCl:lla, 5 % suolahapolla sekä vedellä. Alkuaineanalyysin 5 perusteella rikin määräksi saatiin 0,30 paino-%, joka vastaa 93 ^umoolia sulfoetyyliryhmien liittymistä grammaa kohti. Kantaja-aine sopi käytettäväksi voimakkaasti happamena ioninvaihtajana.
5. 10 g kantaja-ainetta lietettiin liuokseen, jossa 10 oli 0,222 g (2,2 mmol) heksyyliamiinia 25 ml:ssa dimetyy-liformamidia. Sen jälkeen, kun liuoksesta kaasu oli poistettu, sitä sekoitettiin 16 tunnin ajan. Suodatuksen jälkeen alusaine pestiin peräkkäin 200 ml:11a dimetyyliform-amidia, 200 ml:lla vettä, 300 ml:lla IM NaCl:a sekä 15 300 ml :11a vettä. Alkuaineanalyysin perusteella typen mää räksi saatiin 0,70 %, joka vastaa käytännöllisesti katsoen kvantitatiivista konversiota. Täten valmistettu kantaja-aine sopi käytettäväksi hydrofobiseen (affiniteetti) kro-matografiaan, kuten on esitetty seuraavan kokeen avulla: 20 0,5 g kantaja-ainetta oli kosketuksissa liuoksen kanssa, jossa oli 5 mg mikrobialkuperää olevaa lipaasia (peräisin Chromobacterium Viscosumilta) 10 ml:ssa 0,05M Tris, 0,05M maleiinihapon anhydridipuskuria, joka sisälsi IM NaCl:a (pH 7,0). Aktiivisuus, joka oli määritetty 25 a. Louwersin sekä R. Ruyssen julkaisussa Pharmaceutical Enzymes (1978), Story Scientia, Gent (Belgia), kuvaaman menetelmän mukaan, oli 200 yksikköä (U) mg:aa kohti lipaasia. Kun kaasu oli poistettu, suspensiota inkuboitiin yön yli. Inkubaation jälkeen supernatantista saatiin 105 U:n 30 (10,5 %) lipaasiaktiivisuus. Adsorptio nousi 90 %:iin.
Sen jälkeen, kun supernatantti oli erotettu lasisella imu-suodattimella, pallot olivat kaksi kertaa kosketuksissa 5 ml:n kanssa vettä 45 minuutin ajan. Vesi näytti sisältävän 23 U lipaasiaktiivisuutta. Kun vesi oli poistettu imemällä, 35 palloja inkuboitiin kahden tunnin ajan 10 ml:ssa 50 %:ista etanolia. Supernatantti näytti sisältävän 867 U lipaasiaktiivisuutta, toisin sanoen eluaatissa oli 87 % alkuperäisestä lipaasiaktiivisuudesta.
24 63636 6. 10 g kantaja-ainetta lisättiin liuokseen, jossa oli 0,132 g (2,2 mmol) etyleenidiamiinia 25 ml:ssa dimetyy-liformamidia.
Tämän jälkeen suoritetun kaasun poistamisen jälkeen 5 liuosta sekoitettiin yhden yön ajan. Suspensio suodatettiin ja sitä pestiin peräkkäin 200 ml:11a dimetyyliformamidia, 200 ml:lla vettä, 300 ml:lla IM NaCl:a sekä 300 ml:11a vettä. Tämän kantaja-aineen analyysin perusteella, jossa aine kuivattiin ja titrattiin perkloorihapolla, 10 todettiin sen sisältävän 100 ^umoolia primäärisiä aminoryh-miä grammaa kohti.
5 g tällä tavalla primäärisin aminoryhmin kuormitettua kantaja-ainetta lietettiin 15 ml:aan 0,1M NaCl:a ja kaasu poistettiin. Tähän lietteeseen lisättiin samalla se-15 koittaen ja 30 minuutin pituisen ajanjakson aikana pieniä määriä jauhettua meripihkahapon anhydridiä. Kaikkiaan lisättiin 2 g (20 mmol). Mainitun jakson aikana lietteen pH pidettiin 6:ssa lisäämällä 20 %:ista natriumhydroksiliuos-ta. Suodatuksen jälkeen pallot pestiin peräkkäin vedellä, 20 0,1M NaCl:lla sekä vedellä. Täplälevykokeella määritettiin, olivatko kaikki aminohapot konvertoituneet. Tässä kokeessa yksi pisara ninhydriiniä oli kosketuksissa 10 mg:n kanssa näytettä 0,1 ml:ssa vettä. Pisaroiden muutuessa sinisiksi, toistettiin reaktio meripihkahapon anhydridin kanssa, kun-25 nes ninhydriinikokeessa pisarat eivät enää muuttuneet sinisiksi. Täten oli saatu heikosti hapan ioninvaihtaja. Kantaja-aineen havaittiin olevan sopivan affiniteettipylvään prekursorina.
Esimerkki XII
30 Tässä esimerkissä esitetään, että keksinnön mukais ten kantaja-aineiden hydrolyyttinen kestävyys on paljon parempi kuin yksinomaan silanoidun kantaja-aineen tai sila-noimattoman kantaja-aineen, joka on päällystetty risti-kytkypolymeerillä, joka on saatu polyaddition avulla ja 35 jossa on 0,1 - 140 ^umoolia vinyylimonomeereja/m epäorgaanista ainetta.
25 6 8 6 3 6
Kaikissa tapauksissa käytettiin kvartsipalloja (huo- kosläpimitta 650 A, pallon läpimitta 100-200 ,xx, ominais-2 pinta-ala 50 m /g).
Valmistettiin kolme kantaja-ainetyyppiä.
5 Tyyppi A valmistettiin esimerkin I menetelmän mu kaan käsittelemällä kvartsipalloja Ύ-glysidioksipropyyli-trimetoksisilaanilla. Alkuaineanalyysin perusteella hiilen määräksi saatiin 1,91 % . Y~glysidioksiryhmien hydrolyysin jälkeen kantaja-aine syntyi sitomalla Y-glyseryylipropyyli-10 siloksipiihapon pintaan kovalenttisesti päällyste, jonka muodosti ristikytkykopolymeeri, jossa oli 308 ^umoolia N-metyloliakryyliamidia ja 196 ^umoolia N-hydroksisukkin-imidiaktivoitua 6-akryyliamidipentaanikarboksyylihappoa grammaa kohti. N-hydroksisukkinimidillä aktivoidut karbok-15 syyliryhmät konvertoitiin titraamalla 1 molaarisella etano-liamiiniliuoksella. Alkuaineanalyysin perusteella syntyvän aineen todettiin sisältävän 5,86 % hiiltä ja 0,94 paino-% typpeä.
Tyyppi B valmistettiin päällystämällä silanoimat-20 tomat kvartsipallot suoraan ristikytkykopolymeerille, jonka muodosti 360 ^umoolia N-metyloliakryyliamidia sekä 210 ^umoolia N-hydroksisukkinimidillä aktivoitua 6-akryyli-amidopentaanikarboksyylihappoa/g. N-hydroksisukkinimidillä aktivoidut karboksyyliryhmät konvertoitiin titraamalla 25 etanoliamiiniliuoksella. Alkuaineanalyysin perusteella saadun aineen hiilen ja typen määrä oli vastaavasti 4,83 ja 1,05 paino-%.
Tyyppi C valmistettiin esimerkissä I esitetyn menetelmän mukaisesti päällystämällä piihappopallot Y-glysidi-30 oksipropyylitrimetoksisilaanilla. Alkuaineanalyysin perusteella hiilen määräksi saatiin 3,28 paino-%. Tämä vastaa 455 ^umoolia Y-glyseryylipropyylisiloksiryhmää grammaa kohti .
Täten valmistetuille kantaja-aineille (tyypit A, B 35 ja C) suoritettiin seuraavat hydrolyysikokeet: 2 g kantaja-ainetta sekoitettiin yhden viikon tai yhden päivän ajan 70°C:n lämpötilassa kolmessa eri puskuris- 26 68636 sa, joiden pH oli vastaavasti 8,8, 9,5 ja 4,0. Tuloksista on tehty yhteenveto seuraavassa taulukossa.
Taulukko
Kantaja-aine Tyyppi A Tyyppi B Tyyppi C
5 C % N % C% N% C% ennen hydrolyysiä 5,68 0,93 4,38 1,05 3,28 jälkeen hydrolyysin: 0,IM trispuskurissa pH 8 1 päivä - - 4,03 0,96 10 1 viikko 5,37 0,91 3,37 0,82 3,05x 0,2M boraattipuskurissa pH 9,5 1 viikko 5,26 0,89 - 1,2M asetaattipuskurissa 15 pH 4,0 1 päivä - - 3,89 0,94 1 viikko 5,37 0,90 - - 3,16 xKokeen päättyessä suspensio oli maidonvalkoinen, mikä il-20 maiseen läsnäolevan piihappo-osasia, jotka ovat tyypin C hydrolyyttisen hajoamisen tuloksia.
Yllä esitetyn taulukon tulosten perusteella tyypin A mukainen kantaja-aine (keksinnön mukaan) on hydrolyysin suhteen hyvin kestävä. Tyypin B mukainen kantaja-aine oli 25 paljon kestävämpi puskuria kohtaan, jolla oli korkea pH kuin puskuria kohtaan, jonka pH oli alhainen. C-tyyppinen kantaja-aine ei sovellu useimpiin käyttötarkoituksiin bio-makromolekyylien välisen vuorovaikutuksen vuoksi.
Esimerkki XIII
30 Esimerkissä I kuvatulla tavalla kvartsipalloja (huo- 2 kosläpimitta 500 A, ominaispinta-ala 63 m /g, pallon läpimitta 100-200 kuormitettiin 210 ^umoolilla Y-glyseryy- lipropyylisiloksiryhmiä grammaa kohti palloja.
10 g:aan silanoitua kvartsia lisättiin vesiliuos, 35 jossa oli 1,045 g (5,06 mmol) 3-dimetyyliaminopropyylimet-akryyliamidin hydrokloridia, 0,91 ml (6,0 mmol) N-metyloli-akryyliamidin vesiliuosta (60 paino-%:ista) sekä 30 ml 68636 metanolia. Metanolin haihduttamisen jälkeen lisättiin 45,5 mg AIBN:a (atsobis-isobutyronitriiliä) 35 ml:ssa iso-oktaania ja polymerointi saatiin aikaan.
Polymeroituneen tuotteen alkuaineanalyysi antoi hii-5 Ien määräksi 7,64 % ja typen määräksi 1,75 %. Mikrotitrauk-sen avulla määritettiin ioninvaihtajatuotteen heikosti emäksisten dimetyyliaminoryhmien määräksi 325 ,umoolia grammaa 2 ' kohti tai 6,1 ^umoolia/m .
Esimerkki XIV
10 Kuten esimerkissä I, kvartsipalloja (huokosläpimit- 2 ta 500 A, ominaispinta-ala 63 m /g, pallon läpimitta 100-200 ju) kuormitettiin 172 ^umoolilla V-glyseryylipropyyli-siloksiryhmiä grammaa kohti palloja.
40 g:aan silanoituja palloja lisättiin 7,6 ml met-15 akryyliamidopropyylitrimetyyliammoniumkloridin (18,1 mmol) vesiliuosta (40 paino-%), 3,64 ml N-metyloliakryyliamidin (24 mmol) vesiliuosta (60 paino-%) sekä 140 ml metanolia. Metanolin haihduttamisen jälkeen lisättiin 150 mg AIBN:a, joka oli liuotettu 140 ml saan iso-oktaania. Polymeroinnin 20 jälkeen pallot pestiin peräkkäin asetonilla, metanolilla, vedellä sekä 3M NaCl-liuoksella.
Kuivatun tuotteen alkuaineanalyysi antoi hiilen määräksi 7,32 % ja typen määräksi 1,59 %. Mikrotitrauksen perusteella ioninvaihtajän voimakkaasti emäksisten trimetyy- 25 liammoniumryhmien määräksi saatiin 255 ,umoolia grammaa 2 ' kohti tai 4,7 ^umoolia/m .
Esimerkki XV
a) Esimerkissä I kuvatulla tavalla kvartsipalloja 2 (huokosläpimitta 700 Ä, ominaispinta-ala 42 m /g, pallon 30 läpimitta 100-200 ^,u) kuormitettiin 143 ^umoolilla Y-gly-seryylipropyylisiloksiryhmiä grammaa kohti palloja.
50 g:aan silanoituja palloja lisättiin seos, jossa oli 5,18 g (25,0 mmol) 2-akryyliamido-2-metyylipropaani-sulfonihappoa, 3,5 ml (25,0 mmol) trietyyliamiinia, 4,55 ml 35 (6,0 mmol) N-metyloliakryyliamidin vesiliuosta (60 paino-%) sekä 150 ml metanolia. Metanolin haihduttamisen jälkeen lisättiin 250 mg AIBN:a, 50 mg p-tolueenisulfonihappoa sekä 200 ml iso-oktaania.
28 6 8 6 3 6
Saatu tuote pestiin polymeroinnin jälkeen peräkkäin asetonilla, metanolilla, vedellä sekä 5 % suolahapolla.
Alkuaineanalyysi: hiili 5,99 %, typpi 1,16 %, rikki 1,25 %.
5 Tuote sisälsi 438 yumoolia N-metyloliakryyliamidia sekä 390 ^umoolia 2-akryyliamido-2-metyylipropaanisulfoni-happoa grammaa kohti. Mikrotitrauksen perusteella sulfoni-happoryhmien määräksi saatiin 285 ^umoolia grammaa kohti.
b) 10 ml täten tuotettua kantaja-ainetta tavapaino-10 tettiin pylväässä 0,05M Sörensen-puskurilla pH 5,5:ssä.
30 ml hemoglobiinin liuosta (sisälsi 20 mg hemoglobiinia ml kohti) suodatettiin pylvään läpi. Pylvään pesun jälkeen, joka suoritettiin tasapainotuspuskurilla, hemoglobiini eluoitiin 0,05M Sörensen-puskurilla (pH 7,5), joka sisäl-15 si vastaavasti nO, 0,5M ja 2M NaCl:a. Kaikkiaan voitiin eluoida 104 mg hemoglobiinia, mikä antoi pylvään kapasiteetiksi 10 mg hemoglobiinia ml kohti pylvään kantaja-ainetta.
Esimerkki XVI
Esimerkissä I kuvatulla tavalla kvartsipalloja (huo- 2 20 kosläpimitta 500 A, ominaispinta-ala 63 m /g, pallon läpimitta 100-200 ^u) kuormitettiin 210 ^umoolilla Y-glyseryy-lipropyylisiloksiryhmiä pallojen grammaa kohti.
10 g:aan silanoituja palloja lisättiin seos, jossa oli 0,467 g (6,50 mmol) akryylihappoa, 0,66 g (6,50 mmol) 25 trietyyliamiinia, 0,91 ml (6,0 mmol) N-metyloliakryyliami-din vesiliuosta (60 paino-%) sekä 30 ml metanolia. Metanolin haihduttamisen jälkeen lisättiin 60 mg AIBN:a sekä 20 mg p-tolueenisulfonihappoa 30 ml:ssa iso-oktaania. Polymeroinnin jälkeen tuote pestiin peräkkäin asetonilla, metanolil-30 la, 5 % suolahapolla sekä vedellä.
Alkuaineanalyysi: hiili 5,03 %, typpi 0,67 %. Tuote sisälsi 480 ^umoolia N-metyloliakryyliamidia sekä noin 170 ^umoolia akryylihapporyhmiä grammaa kohti.
Kapasiteetti hemoglobiinille, esimerkin XV b mukaan 35 määritettynä, oli 11,6 mg/ml.
29 68636
Esimerkki XVII
Esimerkissä II tuotettuja palloja 10 g kuivatislat-tiin 650°C:ssa kahden tunnin ajan. Jäähdyttämisen jälkeen saatiin piihappopalloja, joiden hiili- ja typpisisältö 5 olivat alle 0,05 %. Pallot käsiteltiin ja päällystettiin uudelleen esimerkeissä I ja II kuvatulla tavalla. Saadun tuotteen hiilen määrä oli 8,63 % ja typen määrä 1,73 %.
Geelipermeaation kalibrointikäyrien, jotka oli saatu eluoimalla polystyreenistandardeja tetrahydrofuraanissa, 10 vertailu ilmaisi, että uudelleen suoritetun päällystyksen jälkeen aineen huokosläpimitan alue oli sama kuin alkuperäisellä päällystetyllä tuotteella.
Esimerkki XVIII
Esimerkissä VI valmistetut pallot tutkittiin geeli-15 permeaatio-ominaisuuksien (kokoon perustuva ekskluusio) suhteen erilaisten proteiinien avulla pH 7,0:ssa sekä 9,0:ssa käyttäen 0,02M fosfaattipuskuria, joka sisälsi 0,15M NaCl:a.
Pylväs (läpimitta 1 cm, korkeus 34,1 cm) täytettiin 20 palloilla. Ruiskutustilavuus 0,1 ml, jossa oli 1 mg pro- 2 teiinia millilitrassa. Virtaus oli 2,5 ml minuutissa cm kohti.
Tulokset:
Proteiini Molekyyli- pKj Kd 25 paino pH=7 pH=9 katalaasi 221 600 5,58 0,18 0,17 y-globuliini 153 000 7,0 0,15 0,15 seerumin albumiini 68 500 4,90 0,25 0,31 hemoglobiini 64 450 6,8 0,41 0,35 30 ovalbumiini 45 000 4,6 0,36 0,33 pepsiini 36 000 1,0 0,37 0,49 ^-laktoglobuliini 35 400 5,0 0,39 0,48 trypsinogeeni 23 560 9,3 0,47 0,32 myoglobiini 18 500 7,0 0,46 0,44 35 lysotsyymi 14 000 10,7 0,71 - sytokromi-C 13 000 10,65 0,49 x insuliini 5 750 5,50 0,62 0,55 30 68636 x eluutio mahdoton
V - V
Jakaantumiskerroin Kd = ^—_- - t Vo 5 Vr = ProteHnin retentiotilavuus
Vq = täysin ulkopuolelle jätetyn komponentin reten-tiotilavuus V = täysin läpäisevän komponentin retentiotilavuus
Esimerkki XIX
10 Esimerkin VI mukaista kantaja-ainetta, joka sisälsi p-aminobentsamidiiniryhmiä, käytettiin trypsiinin ja kymo-trypsiinin eristämiseen. Pylväs täytettiin palloilla. Tasa-painottamispuskurina käytettiin 0,1M natriumasetaattia (pH 5,5), joka sisälsi 0,1M NaCl:a sekä 0,001M CaCl2:a. Vir-15 tausnopeus oli 15,6 ml/h. Pylväs eluoitiin 0,1M glysiini-HCl-puskurilla (pH 2,0), joka sisälsi 0,1M NaCl:n sekä 0,001M CaCl2:a.
Aktivoitua haimajauhetta (30 g) uutettiin tavapai-nottamispuskurilla (100 ml) 5°C:ssa. 60 ml suodatettua uu-20 tetta pantiin pylvääseen. Pylväs pestiin tasapainottamis-puskurilla ja eluoitiin sitten glysiini-HCl-puskurilla.
Todettiin, että näin eluaatissa saatu trypsiini oli puhdistettu seitsemän kertaa ja kymotrypsiini noin kolme kertaa (trypsiinin aktiivisuus oli mitattu käyttämällä vä-25 riainetta synnyttävää substraattia S-2160; kymotrypsiinin aktiivisuus mitattiin potentiometrillä käyttämällä ATEE:ä substraattina.
Molemmat entsyymit todettiin noin 30 % puhtaiksi yksinkertaisen kromatografiavaiheen jälkeen.
30 Esimerkki XX
Esimerkissä III kuvatulla tavalla kvartsipallot (huokosläpimitta 3 200 A, pallon läpimitta 100-200 ,u, 2 ' ominaispinta-ala 12 m grammaa kohti) silanoitiin 28,8 ^umoolilla Y-glyseryylipropyylisiloksiryhmiä grammaa kohti 35 sekä päällystettiin N-metyloliakryyliamidin (150 ^umol) ja N-hydroksisukkinirnidyyliakryylihappoesterin (91 ^umol/g) kopolymeerillä. Palloja käsiteltiin liuoksella, jossa oli 31 68636 1 790 ^umoolia γ-glutamyylikysteinyyliglysiiniä (glutationi) 30 ml:ssa bikarbonaattipuskuria 0,1M, pH 8,5, 22 tunnin ajan.
Palloja pestiin peräkkäin 200 ml:11a 0,1M NaHCO^-pus-5 kuria (pH 8,5), 100 ml:11a 0,1M NaHCO^-puskuria (pH 9,5), joka sisälsi IM NaCl:a ja 0,001M EDTA:a, 100 ml 0,IM NaHCO^-puskuria (pH 4,3), joka sisälsi IM NaCl:a sekä 0,001M EDTA:a ja lopuksi 100 ml:11a 0,001M EDTA:a.
Sulfhydryyliryhmät aktivoitiin 2,2'-dipyridyylidi-10 sulfidilla, joka oli 0,1M TRIS-HCl-puskurissa, pH 8, ja sisälsi 0,3M NaCl:a sekä 0,01M EDTA:a
Saatu aine sisälsi 10 ^.umoolia aktivoituja sulfidi-ryhmiä grammaa kohti (määritetty spektrofotometrillä 343 nm:ssä /3-merkaptoetanolin kanssa tapahtuneen reaktion 15 jälkeen.
Näin saatu aine soveltui tioliryhmiä sisältävien proteiinien, esim. entsyymien, kuten ureaasin, eristämiseen .
Tämän aineen avulla myös entsyymit, kuten esim.
20 ureaasi, voidaan tehdä liikkumattomiksi niiden aktiivisuuden häviämättä. Ureaasilla kuormitettua pylvästä voidaan hyvin käyttää vesiliuosten virtsa-aineen määrittämiseen, esim. virtsasta, suorittamalla urealiuoksen perkolaatio pylvään lävitse sekä määrittämällä eluaatista NH^ NH^-25 elektrodin avulla.

Claims (6)

1. Kantaja-aine, joka on käyttökelpoinen sellaisenaan kromatografiässä tai lähtöaineena, johon voidaan sitoa yh-5 disteitä, jotka sisältävät ionisia ryhmiä, ligandeja tai bio-makromolekyylejä, jolloin sitä voidaan käyttää ioninvaihta-jana, väliaineena affiniteettikromatografiässä tai entsymaat-tisissa reaktioissa, joka kantaja-aine koostuu huokoisista, epäorgaanisista silanoiduista hiukkasista, joihin on kova-10 lenttisesti sidottu orgaaninen stationäärifaasi, joka muodostuu (ko)polymeroiduista vinyylimonomeereista ja sisältää amidiryhmiä, tunnettu siitä, että (A) epäorgaaninen aine on silanoitu orgaanisella si-laanilla, jonka kaava on 15 R2 ! R1-Si-(CH2)n-R4 (I) R3 20 jossa n = 1-5, edullisesti 3, on halogeeni tai alkoksi (1-10 C) , R2 ja R-j tarkoittavat halogeenia, alkoksia (1-10 C), alkyyliä (1-3 C) tai aryyliä (6-10 C) , jolloin halogeeni- ja alkoksiryhmät R^, R^ 3a R3 pysyvät muodostamaan -O-Si-sidoksen silaanin ja epäorgaanisen aineen välille viime-25 mainitun pintahydroksyyliryhmien välityksellä, ja on amino, substituoitu amino, kuten esim. (^-amino-alkyyli-(1-3 C)-amino, merkapto, esteriryhmä tai glysidoksi ja on edullisesti glysidoksi; ja (B) orgaaninen stationäärifaasi on silloitettu (ko)-30 polymeeri, joka on saatu additiopolymeroinnilla ja muodostuu 0,1 - 140 yumoolista, edullisesti 5-25 /jmoolista vinyylimono- 2 meerejä kantaja-aineen epäorgaanisen pinnan m kohti, jolloin (ko)polymeeri sisältää vähintään 0,1 ^moolia amidiryh- 2 miä kantaja-aineen epäorgaanisen pinnan m kohti ja vinyyli-35 monomeerit koostuvat kokonaan tai osittain bifunktionaalisis-ta vinyylimonomeereistä, jotka sisältävät amidiryhmiä ja joiden kaava on 33 686 36 Rj- Rc O H I I ii I CH = C - C - N - (CH2)m - 0R? (II) jossa R5 ja Rg tarkoittavat vetyä, alkyyli- tai sykloalkyyli-5 ryhmää, jossa on enintään 6 hiiliatomia tai enintään 10 hiili-atomia sisältävä aryyliryhmä, R7 on vety tai enintään 20 hiiliatomia sisältävä orgaaninen ryhmä, ja m on kokonaisluku 1-10, jolloin amidiryhmät on saatu osittain saattamalla (a) välimolekyyli, ligandi, biomakromolekyyli tai yhdis-10 te, joka sisältää ionisen ryhmän, jolloin kussakin näistä on reaktiokykyinen ryhmä ja yksi tai useampi amidiryhmä, reagoimaan vinyylimonomeerin tai silloitetun (ko)polymeerin reaktiokykyisen ryhmän kanssa, tai (b) välimolekyyli, ligandi, biomakromolekyyli tai yh-15 diste, joka sisältää ionisen ryhmän, jolloin kussakin näistä on yksi tai useampi amino- ja/tai karboksyyliryhmä, reagoimaan yhden tai useamman silloitetussa (ko)polymeerissä olevan karboksyyli- ja/tai aminoryhmän kanssa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen kantaja-aine, t u n-20 n e t t u siitä, että R,. on vety, R^ on vety tai metyyli, R^ on vety ja m on 1.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen kantaja-aine, tunnettu siitä, että vinyylimonomeerit käsittävät vähintään 5 mooli-% kaavan II mukaisia bifunktionaalisia 25 vinyylimonomeereja.
3;; 68636
4. Jonkin edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen kantaja-aine, tunnettu siitä, että (ko)polymeeri sisältää 5-25 /umoolia amidiryhmiä kantaja-aineen epäorgaanisen pinnan m2 kohti.
5. Jonkin edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen kantaja-aine, tunnettu siitä, että komonomeeri silloitettua kopolymeeria varten on yksi tai useampi vinyylimo-nomeeri, jossa on funktionaalinen ryhmä ja jonka kaava on 3 5 / Rr H-C = (III) R9 34 6 8 6 3 6 jossa Rg on H tai CH^, Rg on H 0 0 9 i it y ) -CH2~N-C-CH2X, -CH2OR10 tai -C-R.,1 ja on edullisesti -C-R11, X on halogeeni, edullisesti Br, R^q on enintään 10 hiiliato- 5 mia sisältävä alkyyli, edullisesti metyyli, tai glysidoksi, R^^ on funktionaalinen ryhmä, joka voi olla liittynyt tai ei ole liittynyt karbonyyliryhmään väliryhmän avulla, ja joka on hydroksyyli tai O O 10. il -O-N^ , -O-NCyQ) , -0<Q- NO, H " o O ° ^ CH2OH 15 -0-CH„-CH-CH„ , —NH (CH0) -CR1 - , -NH-C —CHo0H , A \ / A ^ p I A \ A '07 CH2OH o o li II -NHCH2CNHCH2CR12, -NHCH2CH2NH2, 20 -NHHQ>-NH2 -Nh^o2 ' -ΝΗΌ^ N02 25 joissa R^ 2 voi tarkoittaa samaa kuin R^ ja p on kokonaisluku 1-10, jolloin funtkionaalisen ryhmän ja mahdollisesti myös väliryhmän sisältävän vinyylikomonomeerin molekyylipai-no on ennintään 1 000 ja edullisesti 70-400.
6. Menetelmä jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukaisen 30 kantaja-aineen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että (A) epäorgaaninen aine silanoidaan sinänsä tunnetulla tavalla kaavan I mukaiselle orgaanisella silaanilla; (B) silanoitu epäorgaaninen aine saatetaan kosketukseen liuoksen kanssa, jossa vinyylimonomeerit on liuotettu 35 haihtuvaan orgaaniseen liuottimeen tai orgaanisiin liuottimiin ja/tai veteen, ja sitten haihtuva liuotin poistetaan 35 6 8 6 3 6 sekoittamalla alennetussa paineessa ja alle 40°C:n lämpötilassa haihduttimessa niin että epäorgaaninen aine peittyy mono-meeriseoksen muodostamalla ohuella kalvolla, minkä jälkeen kalvopäällysteen polymerointi ja samanaikaisesti muodostu-5 neen (ko)polymeerin kovalenttinen sitominen silanoituun aineeseen suoritetaan kuumentamalla hapettomassa atmosfäärissä, ja (C) tarvittaessa saatu aine liitetään edelleen sinänsä tunnetulla taval la yhdisteisiin, joissa on reaktiokykyisiä 10 ryhmiä. 36 68636
FI812002A 1980-06-27 1981-06-25 Poroest oorganiskt baerarmaterial med en organisk stationaer fas foer anvaendning vid kromatografi och foerfarande foer frmstaellning av detta FI68636C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL8003727 1980-06-27
NL8003727 1980-06-27

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI812002L FI812002L (fi) 1981-12-28
FI68636B true FI68636B (fi) 1985-06-28
FI68636C FI68636C (fi) 1985-10-10

Family

ID=19835525

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI812002A FI68636C (fi) 1980-06-27 1981-06-25 Poroest oorganiskt baerarmaterial med en organisk stationaer fas foer anvaendning vid kromatografi och foerfarande foer frmstaellning av detta

Country Status (13)

Country Link
US (1) US4415631A (fi)
EP (1) EP0043159B1 (fi)
JP (1) JPS5738937A (fi)
AT (1) ATE15378T1 (fi)
AU (1) AU548877B2 (fi)
CA (1) CA1170643A (fi)
DE (1) DE3172131D1 (fi)
DK (1) DK153406C (fi)
ES (1) ES8303463A1 (fi)
FI (1) FI68636C (fi)
GR (1) GR74357B (fi)
IE (1) IE51337B1 (fi)
ZA (1) ZA814216B (fi)

Families Citing this family (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58202043A (ja) * 1982-05-19 1983-11-25 Sumitomo Chem Co Ltd グラフトしたクロマトグラフ充填剤およびそれを用いる鏡像体混合物の分析法
US4560704A (en) * 1982-11-12 1985-12-24 Purdue Research Foundation Polyamine based bonded phase chromatography
JPS59193141A (ja) * 1983-04-18 1984-11-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規複合体とその製法
DE3328348A1 (de) * 1983-08-05 1985-02-14 Degussa Ag, 6000 Frankfurt Verfahren zur duennschichtchromatographischen trennung von enantiomeren
US4576927A (en) * 1983-11-25 1986-03-18 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Porous adsorbent for adsorbing low density lipoproteins
US4724207A (en) * 1984-02-02 1988-02-09 Cuno Incorporated Modified siliceous chromatographic supports
CA1253129A (en) * 1984-02-09 1989-04-25 Thomas R. Jones Porous inorganic materials
US4523997A (en) * 1984-03-02 1985-06-18 J. T. Baker Chemical Company Affinity chromatography matrix with built-in reaction indicator
US4782040A (en) * 1984-04-09 1988-11-01 Dow Corning Corporation Porous materials having a dual surface
US4600646A (en) * 1984-08-15 1986-07-15 E. I. Du Pont De Nemours And Company Metal oxide stabilized chromatography packings
JPS61210956A (ja) * 1985-03-15 1986-09-19 Cosmo Co Ltd クロマトグラフイ−用薄層棒
JPS6210005A (ja) * 1985-07-08 1987-01-19 Nippon Shiken Kogyo Kk 抗歯髄等組織刺激性及び抗為害性組成物
US4793920A (en) * 1985-12-11 1988-12-27 Lee Scientific, Inc. Chromatography columns with cast porous plugs and methods of fabricating same
US4927749A (en) * 1986-04-09 1990-05-22 Jeanette Simpson Reagent for cell separation
US4927750A (en) * 1986-04-09 1990-05-22 Jeanette Simpson Cell separation process
DE3619303A1 (de) * 1986-06-07 1987-12-10 Merck Patent Gmbh Optisch aktive adsorbentien
JP2504005B2 (ja) * 1986-11-17 1996-06-05 東ソー株式会社 充填剤およびその製法
US5000848A (en) * 1987-01-28 1991-03-19 Membrex, Inc. Rotary filtration device with hyperphilic membrane
US4906379A (en) * 1987-01-28 1990-03-06 Membrex, Inc. Hydrophilic article and method of producing same
CA1339812C (en) * 1988-02-19 1998-04-14 Tamami Koyama Filler for measuring enzyme activity, column packed with the filler, andmethod of measuring enzyme activity by using the column
US4919804A (en) * 1988-03-01 1990-04-24 University Of Florida Ultrasound driven synthesis of reversed and normal phase stationary phases for liquid chromatography
DE3811042A1 (de) * 1988-03-31 1989-10-19 Merck Patent Gmbh Ionenaustauscher
IL87004A (en) * 1988-07-06 1992-08-18 Technion Res & Dev Foundation Method and apparatus for bioaffinity separation
CA1327023C (en) * 1988-07-27 1994-02-15 Leonard T. Hodgins Rotary filtration device with hyperphilic membrane
US4957620A (en) * 1988-11-15 1990-09-18 Hoechst Celanese Corporation Liquid chromatography using microporous hollow fibers
JPH0678347B2 (ja) * 1989-01-13 1994-10-05 信越化学工業株式会社 有機けい素化合物
US5645717A (en) * 1989-01-13 1997-07-08 Bio-Rad Laboratories, Inc. Hydrophobic polymers from water-soluble monomers and their use as chromatography media
DK259789D0 (da) * 1989-05-26 1989-05-26 Kem En Tec Ltd Aps Partikulaert materiale
US5770416A (en) * 1989-05-26 1998-06-23 Upfront Chromatography A/S Permeable hollow particles having an outer shell of mechanically rigid porous material
US5053133A (en) * 1990-02-09 1991-10-01 Elias Klein Affinity separation with activated polyamide microporous membranes
US5211993A (en) * 1990-12-10 1993-05-18 Advanced Surface Technology, Inc. Method of making novel separation media
US5470463A (en) * 1992-06-19 1995-11-28 Sepracor Inc. Passivated porous supports and methods for the preparation and use of same
US5268097A (en) * 1992-06-19 1993-12-07 Sepracor Inc. Passivated and stabilized porous mineral oxide supports and method for the preparation and use of same
US5906734A (en) * 1992-06-19 1999-05-25 Biosepra Inc. Passivated porous polymer supports and methods for the preparation and use of same
US5445732A (en) * 1992-06-19 1995-08-29 Sepracor Inc. Passivated porous polymer supports and methods for the preparation and use of same
JP3583429B2 (ja) * 1993-07-16 2004-11-04 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング 疎水クロマトグラフィーのための分離剤
DE4333674A1 (de) * 1993-10-02 1995-04-06 Merck Patent Gmbh Nukleotidhaltiges Sorbens für die Affinitätschromatographie
DE4333821A1 (de) * 1993-10-04 1995-04-06 Merck Patent Gmbh Ionenaustauscher
DE4334353A1 (de) * 1993-10-08 1995-04-13 Merck Patent Gmbh Verfahren und Träger für die Gelpermeationschromatographie
US5374339A (en) * 1993-10-14 1994-12-20 Guillet; James E. Production of hydrogen peroxide
US5547760A (en) * 1994-04-26 1996-08-20 Ibc Advanced Technologies, Inc. Compositions and processes for separating and concentrating certain ions from mixed ion solutions using ion-binding ligands bonded to membranes
US5633085A (en) * 1994-06-10 1997-05-27 Potters Industries Inc. Durable composite particle and method of making same
US5906747A (en) * 1995-11-13 1999-05-25 Biosepra Inc. Separation of molecules from dilute solutions using composite chromatography media having high dynamic sorptive capacity at high flow rates
JP2862509B2 (ja) * 1996-05-28 1999-03-03 東洋電化工業株式会社 リパーゼ固定化用担体及び固定化リパーゼ
US5935429A (en) * 1997-01-03 1999-08-10 Bio-Rad Laboratories, Inc. Chromatography columns with continuous beds formed in situ from aqueous solutions
SE9700769D0 (sv) * 1997-03-04 1997-03-04 Pharmacia Biotech Ab Matriser för separation och separation som utnyttjar matriserna
US6156431A (en) * 1999-01-04 2000-12-05 United Chemical Technologies, Inc. Extraction material comprising treated silica and method for determination of gamma-hydroxybutyrate
US6689715B1 (en) * 2000-02-09 2004-02-10 Hammen Corporation Tethered polymer ligands
AU2003243105A1 (en) * 2002-06-27 2004-01-19 Akzo Nobel N.V. Adsorbent material and method of preparing an adsorbent material
US6994791B2 (en) * 2002-06-27 2006-02-07 Akzo Nobel N.V. Adsorbent material and method of preparing an adsorbent material
WO2004011681A1 (en) * 2002-07-26 2004-02-05 Applera Corporation Microfluidic device including purification column with excess diluent, and method
US8137548B2 (en) * 2003-10-17 2012-03-20 Zirchrom Separations, Inc. Chelator-modified inorganic oxide particles
JP3922648B2 (ja) * 2004-05-24 2007-05-30 株式会社資生堂 アフィニティー粒子及びアフィニティー分離方法
US7402243B2 (en) 2004-09-10 2008-07-22 Dionex Corporation Organosilanes and substrate bonded with same
US7468130B2 (en) * 2005-02-15 2008-12-23 Dionex Corporation Organosilanes and substrates covalently bonded with same and methods for synthesis and use same
FR2889078B1 (fr) 2005-07-27 2007-11-02 Aventis Pharma Sa Nouvelle methode de chromatographie d'affinite d'antithrombine iii
US20070089604A1 (en) * 2005-10-20 2007-04-26 Wu Chen Novel chromatographic stationary phase
DE102006061327A1 (de) * 2006-12-22 2008-06-26 Basf Construction Polymers Gmbh Pfropf-Copolymer, Verfahren zu dessen Herstellung und seine Verwendung
WO2008106043A2 (en) * 2007-02-26 2008-09-04 Alltech Associates Inc. Ultra-fast chromatography
CA2684244C (en) * 2007-04-16 2016-10-11 James Hardie International Finance B.V. Light weight additive, method of making and uses thereof
US7557232B2 (en) * 2007-05-25 2009-07-07 Dionex Corporation Compositions useful as chromatography stationary phases
WO2009116309A1 (ja) * 2008-03-19 2009-09-24 株式会社資生堂 アフィニティー粒子の製造方法、アフィニティー粒子及び分離方法
BRPI0822660A2 (pt) * 2008-05-21 2015-06-30 Basf Se Copolímero de enxerto, processo para a preparação do mesmo e seu uso
WO2010141426A1 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Waters Technologies Corporation Hybrid material for chromatographic separations
US11439977B2 (en) 2009-06-01 2022-09-13 Waters Technologies Corporation Hybrid material for chromatographic separations comprising a superficially porous core and a surrounding material
US9272260B2 (en) * 2009-08-14 2016-03-01 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Methods of synthesis and purification by use of a solid support
WO2012018598A1 (en) 2010-07-26 2012-02-09 Waters Technologies Corporation Superficially porous materials comprising a substantially nonporous core having narrow particle size distribution; process for the preparation thereof; and use thereof for chromatographic separations
US9758542B2 (en) 2011-11-01 2017-09-12 Purdue Research Foundation Protein chromatography matrices with hydrophilic copolymer coatings
US9669402B2 (en) 2012-03-08 2017-06-06 Bio-Rad Laboratories, Inc. Anionic exchange-hydrophobic mixed mode
GB2521524B (en) * 2012-05-15 2018-12-05 Waters Technologies Corp Chromatographic materials
KR102226564B1 (ko) * 2012-09-17 2021-03-10 더블유.알. 그레이스 앤드 캄파니-콘. 작용화된 미립자 지지체 물질 및 이의 제조 및 사용 방법
IN2015DN02055A (fi) 2012-09-17 2015-08-14 Grace W R & Co
US9610576B2 (en) * 2012-09-27 2017-04-04 Agilent Technologies, Inc. Hydrolytically stable ion-exchange stationary phases and uses thereof
JP6340317B2 (ja) * 2012-10-18 2018-06-06 Jnc株式会社 抗体精製用陽イオン交換クロマトグラフィー担体および抗体医薬の製造過程で生産される抗体単量体とその重合体の分離方法
EP3936226A3 (en) 2013-06-11 2022-03-16 Waters Technologies Corporation Chromatographic columns and separation devices comprising a superficially porous material; and use thereof for supercritical fluid chromatography and other chromatography
US9518960B2 (en) * 2013-10-02 2016-12-13 Waters Technologies Corporation System and method for rapid analysis of polycyclic aromatic hydrocarbons
WO2015094938A1 (en) * 2013-12-19 2015-06-25 3M Innovative Properties Company Laminated articles for microbial removal and low pressure drop filtration, methods of making, and methods of using same
US11229896B2 (en) 2014-01-16 2022-01-25 W.R. Grace & Co.—Conn. Affinity chromatography media and chromatography devices
CN106103515B (zh) * 2014-03-05 2020-04-14 Jsr株式会社 固相载体及其制造方法、配体键合固相载体及其制造方法和靶物质的检测或分离方法
ES2929099T3 (es) 2014-05-02 2022-11-24 Grace W R & Co Material de soporte funcionalizado y métodos de fabricación y uso de material de soporte funcionalizado
ES2896897T3 (es) 2015-06-05 2022-02-28 Grace W R & Co Agentes de clarificación para el bioprocesamiento de adsorbentes y métodos para producir y usar los mismos
EP3426389A1 (en) 2016-03-06 2019-01-16 Waters Technologies Corporation Hybrid material for chromatographic separations comprising a superficially porous core and a surrounding material
JP6774547B2 (ja) * 2016-07-14 2020-10-28 ヌーリオン ケミカルズ インターナショナル ベスローテン フェノーツハップＮｏｕｒｙｏｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｂ．Ｖ． 熱膨張性熱可塑性マイクロスフェアおよびそれらの調製方法
WO2022104385A2 (en) * 2020-11-13 2022-05-19 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Stability and activity of enzymes by immobilization
US20250073647A1 (en) * 2023-08-28 2025-03-06 Cytiva Us Llc Diethylamino ethyl polymers and methods of use
US12434218B2 (en) * 2023-11-28 2025-10-07 Phenomenex, Inc. Pore structure for separation of adeno-associated viruses (AAVS) from their aggregates

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2078974A5 (fi) * 1970-02-25 1971-11-05 Hoffmann La Roche
US3799799A (en) * 1971-04-01 1974-03-26 Fiberglas Canada Ltd Coating of mica reinforcement for composite materials
US3984349A (en) * 1971-07-26 1976-10-05 Societe Rhone-Progil Modified porous bodies
GB1456974A (en) * 1973-01-10 1976-12-01 Nat Res Dev Ion exchange materials
GB1456865A (en) * 1973-12-14 1976-12-01 Pye Ltd Method of bonding copolymers
US3983299A (en) * 1974-03-04 1976-09-28 Purdue Research Foundation Bonded carbohydrate stationary phases for chromatography
SE7712058L (sv) * 1976-11-12 1978-05-13 Ceskoslovenska Akademie Ved Tredimensionell berare av oorganiskt, porost material och en reaktiv polymer och ett forfarande for framstellning derav
JPS5383680A (en) * 1976-12-29 1978-07-24 Toray Silicone Co Filler for gas separation column
JPS54137398A (en) * 1978-04-18 1979-10-25 Sekisui Chemical Co Ltd Filled material for liquid chromatography

Also Published As

Publication number Publication date
IE51337B1 (en) 1986-12-10
EP0043159B1 (en) 1985-09-04
CA1170643A (en) 1984-07-10
DK282681A (da) 1981-12-28
GR74357B (fi) 1984-06-27
JPS6216133B2 (fi) 1987-04-10
DK153406C (da) 1988-11-28
DE3172131D1 (en) 1985-10-10
AU7231681A (en) 1982-01-07
IE811394L (en) 1981-12-27
DK153406B (da) 1988-07-11
US4415631A (en) 1983-11-15
ATE15378T1 (de) 1985-09-15
ZA814216B (en) 1982-07-28
AU548877B2 (en) 1986-01-09
EP0043159A1 (en) 1982-01-06
FI68636C (fi) 1985-10-10
ES503455A0 (es) 1982-12-16
ES8303463A1 (es) 1983-02-16
FI812002L (fi) 1981-12-28
JPS5738937A (en) 1982-03-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI68636B (fi) Poroest oorganiskt baerarmaterial med en organisk stationaer fas foer anvaendning vid kromatografi och foerfarande foer frmstaellning av detta
JP6043062B2 (ja) イオン交換クロマトグラフィー用グラフトコポリマー
WO1987006007A1 (en) Immobilized physiologically active material
CA1255827A (en) Polysaccharide supports
FI73229C (fi) Makroporoesa paerlpolymerisat, foerfarandet foer deras framstaellning och deras anvaendning.
JPH0441305B2 (fi)
JPS61166861A (ja) 変性シリカ質支持体
JPH0144725B2 (fi)
JP2012018135A (ja) 分離剤
US11389783B2 (en) Functionalized support material and methods of making and using functionalized support material
WO2018181738A1 (ja) 分離材
US7011963B1 (en) Process for synthesis of bead-shaped cross-linked hydrophilic support polymer
JP4879018B2 (ja) ポリエーテル分離用マトリックス及び分離方法
Ivanov et al. Polymer-coated adsorbents for the separation of biopolymers and particles
JP4044048B2 (ja) エナンチオ選択的カチオン交換材料
US20120024792A1 (en) Process for making improved chromatography media and method of use
CA2486563A1 (en) Endotoxin-binding ligands and their use
EP1352957A1 (en) Carriers for covalent immobilization of enzymes
AU610734B2 (en) Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
Bayramoglu et al. P (HPMA/EGDMA) beads grafted with fibrous chains by SI-ATRP method: agmatine functionalized affinity beads for selective separation of serum albumin
Zhao et al. Sorption of unconjugated bilirubin by means of novel immobilized β-cyclodextrin polymers
Camli et al. Nucleotide isolation by boronic acid functionalized hydrophilic supports
Denizli et al. Affinity microspheres and their application to lysozyme adsorption: Cibacron Blue F3GA and Cu (II) with poly (HEMA‐EGDMA)
JPH0788366A (ja) 分離剤の製造方法
DENIZLI* et al. Alkali blue 6B-derivatized poly (EGDMA/HEMA) microbeads for bilirubin removal from human plasma

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired

Owner name: AKZO N.V.