FI73229C - Makroporoesa paerlpolymerisat, foerfarandet foer deras framstaellning och deras anvaendning. - Google Patents

Makroporoesa paerlpolymerisat, foerfarandet foer deras framstaellning och deras anvaendning. Download PDF

Info

Publication number
FI73229C
FI73229C FI842078A FI842078A FI73229C FI 73229 C FI73229 C FI 73229C FI 842078 A FI842078 A FI 842078A FI 842078 A FI842078 A FI 842078A FI 73229 C FI73229 C FI 73229C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
polymer
monomers
group
vinyl
carbon atoms
Prior art date
Application number
FI842078A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI842078A0 (fi
FI73229B (fi
FI842078A (fi
Inventor
Otto Mauz
Siegfried Noetzel
Klaus Sauber
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=25811132&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI73229(C) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of FI842078A0 publication Critical patent/FI842078A0/fi
Publication of FI842078A publication Critical patent/FI842078A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI73229B publication Critical patent/FI73229B/fi
Publication of FI73229C publication Critical patent/FI73229C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F20/00—Homopolymers and copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride, ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F20/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms, Derivatives thereof
    • C08F20/52—Amides or imides
    • C08F20/54—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C12N11/087—Acrylic polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G, L chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Silicates, Zeolites, And Molecular Sieves (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Macromonomer-Based Addition Polymer (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Graft Or Block Polymers (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

1 73229
Suurihuokoisia helmipolymeraatteja, menetelmä niiden valmistamiseksi ja niiden käyttö
On tunnettua sitoa biologisesti aktiivisia aineita, 5 kuten entsyymejä, vasta-aineita, antigeenejä, hormoneja ja niiden kaltaisia aineita, polymeerisille kantaja-aineille ko-valenttisten sidosten avulla tarkoituksena esimerkiksi stabiloida, puhdistaa tai tehdä veteen liukenemattomiksi entsyymejä. Siten immobilisoiduilla biologisesti aktiivisilla aineilla 10 on huomattavia etuja liukenevaan muotoon nähden: ensiksikin erottaminen sedimentoimalla reaktion päätyttyä yksinkertaistuu, toiseksi valmisteiden stabiilisuus ja uudelleenkäytettävyys paranee moninkertaiseksi.
DE-kuulutusjulkaisussa 2 237 316 kuvataan kantaja-15 aineina käytettäviä paisuvia, silloitettuja helmipolymeraatte ja, joita valmistetaan kopolymeroimalla reaktiivisia ryhmiä sisältäviä monomeereja, silloittuvia monomeereja ja hydrofiilisiä monomeereja. Reaktiivisina ryhminä käytetään tällöin halogeenialkyyli-, epoksidi-, karboksyylihappokloridi-, 20 karboksyylihappoanhydridi-, karboksyylihappoatsidi-, karbok-syylihappofenyyliesteri- ja hydroksaamihapporyhmiä. Näillä kantaja-aineilla on kuitenkin joukko haittapuolia; biologisesti aktiivisten aineiden kiinnittyminen joihinkin niistä on suhteellisen hidasta; niiden aktiivisuus on osittain epätyydyt-25 tävä ja käytettäessä anhydridimuotoja joudutaan lisäämään varauksellisia yhdisteitä.
DE-hakemusjulkaisun 2 102 514 perusteella on tunnettua lisätä hydrofiiliseen polymeeriin oksiraaniryhmiä, joita sitten käytetään biologisesti aktiivisen aineen sitomiseen.
30 Hydrofiilisinä polymeereinä mainitaan myös sellaiset, jotka sisältävät akryyliamidiryhmiä. Näiltä kantajilta puuttuu kuitenkin helmimäinen muoto ja huokoinen rakenne. Siten ne eivät sovellu esimerkiksi käytettäviksi pylväsmenetelmään.
Tämän keksinnön päämääränä oli saada aikaan polymeerinen 35 materiaali, erityisesti biologisesti aktiivisten aineiden 73229 kantaja-aine, jonka pohjana ovat (met)akryyliamidijohdannaiset, ja joilla ei ole alalla tunnettujen aineiden haittapuolia, ja jolla on erityisesti helmimäinen muoto ja riittävä huokoisuus. Lisäksi keksinnön päämääränä oli ke-5 hittää tähän tarkoitukseen soveltuva menetelmä.
Tämän tehtävän ratkaisemiseksi tarjoaa keksintö polymeraatin, joka koostuu pääosin yksiköistä, jotka ovat lähtöisin monomeereista, joilla on kaava (I),
10 X
CH =C-C-NH-R-Y (I)
^ »I
0 jossa X on vety tai metyyli, R on alifaattinen C^_^2-}iii-15 livetyryhmä, edullisesti C1_6~hiilivetyryhmä ja varsinkin metyleeni, ja Y on OH tai NH^, edullisesti OH, jolloin vähintään osa ryhmistä Y on reagoinut välihaarayhdis-teen (spacer) kanssa, sekä yksiköistä, jotka ovat lähtöisin vähintään yhdestä muusta monomeerista, joka on kaavan (I) mukaisten monomeerien kanssa kopolymeroituva ja kuu-20 luu hydrofiilisiä radikaaleja sisältävien monomeerien ryhmään ja on edullisesti N-vinyylipyrrolidoni, (met)akryyli-amidi, (met)akryylihapon alkyyli- tai hydroksialkyylieste-ri, jonka alkyyliryhmässä on 2-6 hiiliatomia, N-vinyyli-N-alkyyliasetamidi, jonka alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliato-25 mia, tai vinyyliasetaatti tai vinyleenikarbonaatti hydrolysoituina polymeraatin muodostuksen jälkeen, sekä mahdollisesti vähintään yhdestä silloittavasta monomeeristä, joka on ryhmästä, jonka muodostavat N,N'-alkyleenibis-(met)-akryyliamidi, jonka alkyleenisosassa on enintään 12, edul-30 lisesti enintään 6 hiiliatomia, glyoksaalibisakryyliamidi, trisakryloyyliperhydrotriatsiini, N,N'-divinyylietyleeni-ja -propyleenirurea, jolloin polymeraattihiukkasten keskimääräinen hiukkaskoko on 20-800 pm, jolle polymeraatille on tunnusomaista, että polymeraattihiukkaset ovat pääosin 35 muodoltaan pallomaisia ja niiden keskimääräinen huokoskoko 5-2000 nm.
73229
Lisäksi keksintö koskee menetelmää tällaisten poly-meraattien valmistamiseksi polymeroimalla yhdisteitä, joilla on kaava (I),
5 X
CH_-C-C-NH-R-Y (I),
^ »I
O
jossa X, R ja Y ovat edellä määritellyt, vähintään yhden 10 muun, niiden kanssa kopolymeroituvan monomeerin kanssa, joka kuuluu hydrofiilisiä radikaaleja sisältävien monomee-rien ryhmään ja on edullisesti N-vinyylipyrrolidoni, (met)-akryyliamidi, (met)akryylihapon alkyyli- tai hydroksialkyy-liesteri, jonka alkyyliryhmässä on 2-6 hiiliatomia, N-vi-15 nyyli-N-alkyyliasetamidi, jonka alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, tai vinyyliasetaatti tai vinyleenikarbonaatti hydrolysoituina polymeraatin muodostuksen jälkeen, sekä mahdollisesti vähintään yhdestä silloittavasta monomeeris-tä, joka on ryhmästä, jonka muodostavat N,N'-alkyleenibis-20 (met)akryyliamidi, jonka alkyleeniosassa on enintään 12, edullisesti enintään 6 hiiliatomia, glyoksaalibisakryyliami-di, trisakryloyyliperhydrotriatsiini, N,N'-divinyylietylee-ni- ja -propyleeniurea jolloin polymerointi tehdään nestemäisessä dispergointiaineessa, joka on C^_2Q~hiilivety tai 25 ohut parafiiniöljy ja joka ei polymerointiolosuhteissa liuota monomeereja eikä polymeraattia, radikaalimekanismilla vaikuttavan initiaattorin ja dispersion stabiloijan läsnäollessa, jolle menetelmälle on tunnusomaista, että dispersion stabiloijana käytetään maleiinihappoanhydridin ja vi-30 nyyli-Cg_2Q-alkyylieetterin tai vinyyliesterin, jonka kar-boksyylihapporyhmässä on 6-30 C-atomia, tai pitkäketjui-
sen CQ _ -^-olefiinin kopolymeraattia. ö"*3U
Keksintö koskee lisäksi siten valmistettujen polymeerien käyttöä, edullisesti välihaarayhdisteiden (spacer) 35 kanssa tapahtuneen reaktion jälkeen, kantaja-aineina kantajalle sidottujen biologisesti aktiivisten aineiden valmistukseen .
4 73229
Keksinnön mukainen polymeraatti sisältää kaavan (I) mukaisista monomeereista peräisin olevia yksiköitä tarkoituksenmukaisesti 5-90 mol-%, edullisesti 10-80 mol-% ja erityisesti 15-60 mol-% polymeerin kokonaismäärästä. Edel-5 lä annettuja määriä suuremmat ja pienemmät määrät ovat periaatteessa mahdollisia, niihin liittyy kuitenkin yleensä haittapuolia. Optimaalinen määrä edellä annetulla alueella riippuu mm. halutusta täyttötiheydestä, biologisesti aktiivisen aineen molekyylipainosta ja sen kaltaisista tekijöistä. 10 Yllä olevassa kaavassa (I) on ryhmä R, kuten edellä mainittiin, alifaattinen C^_^2-hiilivetyryhmä, joka voi olla lineaarinen, haaroittunut tai syklinen (sykloalifaatti- nen). Ryhmä R on edullisesti C. „-alkyleeniryhmä. Esimerkin keinä tällaisista ryhmistä mainittakoon: metyleeni, etylee-15 ni, propyleeni, isopropyleeni-n-butyleeni, isobutyleeni, pentyleeni, heksyleeni, 2-etyyliheksyleeni, syklopentylee-ni, sykloheksyleeni, metyleenisykloheksyyli, tms. Ryhmä Y on yllä olevassa kaavassa (I) edullisesti OH-ryhmä, jolloin tämä puolestaan on edullisesti primaarinen. Vastaa-20 via kaavan (I) mukaisia monomeereja ovat siten N-metyloli-(met)akryyliamidi, N-(2-hydroksietyyli)(met)akryyliamidi, N-(3-hydroksipropyyli)(met)akryyliamidi, N-(2-hydroksipro-pyyli)(met)akryyliamidi, N-(2-aminoetyyli)(met)akryyli-amidi, N-(3-aminopropyyli)(met)akryyliamidi, N-(6-amino-25 heksyyli)(met)akryyliamidi, jne. Voidaan käyttää myös tällaisten monomeerien seoksia.
Vähintään osa, edullisesti vähintään 0,5-mol-%:n ja erityisesti 1-40 mol-%:n ryhmistä Y annetaan keksinnön mukaisessa helmipolymeraateissa ylitä määrää 0,1-20 mol-%, 30 edullisesti 1-10 mol-% monomeeriyksiköiden kokonaismäärästä .
Välihaarayhdisteinä (spacer) pidetään yhdisteitä, jotka reagoivat keksinnön mukaisen helmipolymeraatin (-CONH-R-Y-)-sivuketjun ryhmän Y kanssa ja tuovat samal-35 la mukanaan reaktiivisen ryhmän, edullisesti epoksiryhmän, joka puolestaan voi reagoida biologisesti aktiivisen ai- 15 73229 neen kanssa. Ainakin osa ryhmistä Y on siis välihaarayh-dis.teen kanssa tapahtuneen reaktion jälkeen korvattuna ryhmillä (II), 5 Y'-B-Z (II) joissa Y' on 0 tai NH, B on orgaaninen ryhmä (tarkasti tulkiten välihaara), erityisesti C^_^2~hiilivetyryhmä, joka voi mahdollisesti olla heteroatomien, kuten 0, NH, 10 S, jne., katkaisema, ja Z on funktionaalinen ryhmä, joka voi muodostaa kovalenttisen sidoksen biologisesti aktiivisen yhdisteen kanssa. Tällaisiin ryhmiin kuuluvat esimerkiksi ryhmät -CH-CH_, -CH-CH„, COX (X = H, OH, halo- \ / λ \ < 2
O NH
15 geeni, -N^, -OR; R = C^__g-alkyyliryhmä, -CH(OR2) (R edel-
OR
lä määritelty), -C (R edellä määritelty), ^NH-HCl -N2J+ tai -NC0.
20 Y' on edullisesti happi, B alifaattinen, erityi sesti suoraketjuinen C1_g-hiilivetyryhmä, aryyliryhmä tai alkyyliaryyliryhmä ja Z - CH-y:H2.
Ό
Esimerkkejä ryhmistä Y' -B-Z ovat: 25 .0 / \ -0-(CH0) -CH-CH ; n = 1-8 2 n ^ NH / \ -0-(CH_) -CH-CH ; n = 1-8 2 n ^ ^0 30 -0-(CH_) -C n = 1-8 2 n
X X = H, OH, halogeeni, N^, OR
H OR
I / -0-(CH ) -C n = 1-6 2 n \ 35 ^ OR R = C1_6-alkyyliryhmä 6 73229
. NH-HC1 V
-0-(CHo) -C n = 1-6 2 n OR R = C^_g-alkyyliryhmä 5 -o-(ch2)^x· x' = nh2, n2] + , NCO.
Helinipolymeraatti sisältää keksinnön mukaisesti vielä vähintään yhtä muuta monomeeriyksikköä, joka on peräisin kaavan (I) mukaisten monomeerien kanssa kopolymeroituvasta mono-meerista. Tässä yhteydessä tulevat edullisesti kyseeseen kak-10 si muuta keskenään erilaista monomeeriyksikköä.
Tällainen monomeeriyksikkö on edullisesti peräisin hydrofiilisiä ryhmiä sisältävästä monomeerista, joka antaa kantajana käytettävälle polymeerille riittävän hydrofiilisyyden ja riittävän turpoavuuden vedessä. Tämä on tärkeää siksi, 15 että kiinnitysreaktio biologisesti aktiivisen aineen kanssa tehdään useimmiten vesipitoisessa systeemissä ja hydrofiili-sen, biologisesti aktiivisen aineen tulee voida diffundoitua kantaja-aineelle. Tällaisiin monomeereihin kuuluvat esimerkiksi DE-hakemusjulkaisussa 2 237 316 komponentteina c) anne-20 tut monomeerit. Tämän keksinnön yhteydessä ovat edullisia: N-vinyylipyrrolidoni, (met)arkyyliamidi, (met)akryylihappo-alkyyliesteri, jonka alkyyliryhmässä on 2-6 C-atomia, (met)-akryylihapon hydroksialkyyliesteri, jonka alkyyliryhmässä on 2-6 C-atomia, N-vinyyli-N-alkyyliasetamidi (C^_4~alkyyli), 25 vinyyliasetaatti ja vinyleenikarbonaatti. Viimeiset kaksi monomeeria antavat kuitenkin hydrofiilisia ominaisuuksia vasta polymeraatin vastaavan saippuoinnin jälkeen. Läsnä voi olla mahdollisesti myös useampia näistä hydrofiilisistä mo-nomeeriyks iköistä.
30 Kaavan (I) mukaisen monomeerin suhde hydrofiiliseen komponenttiin riippuu tässä yhteydessä myös sidottavan entsyymin lajista. Entsyymin tai substraatin, jonka tulee reagoida entsyymin kanssa, molekyylipainon ollessa hyvin suuri on tarkoituksenmukaista suurentaa moolisuhdetta hydrofiilisen konpo-35 nentin hyväksi, sillä steerisistä syistä eivät lähellä olevat, 7 73229 hydroksyyliryhmien muuntamisen kautta saadut sitoutumis-kykyiset väliryhmät voi osallistua reaktioon ja voivat joskus jopa vaikuttaa häiritsevästi. Lisäksi määräytyy hydrofiilisen komponentin määrä myös keksinnön mukaisesti 5 edullisesti läsnäolevan silloitettavan komponentin määrän mukaan. Mitä suurempi sen määrä on, sitä suurempi on yleensä myös tarvittava hydrofiilisen komponentin määrä, jotta kantajapolymeeristä tulisi riittävä hydrofiilinen ja turpoava. Yleensä on hydrofiilis(t)en monomeeriyksi-10 kö(ide)n osuus polymeereissä keksinnön mukaisesti 5-70 mol-%, edullisesti 20 - 50 mol-% ja erityisen edullisesti 30 - 50 mol-% polymeerin määrästä. Polymeraatin hydrofiili-syys on joka tapauksessa riittävä silloin, kun polymeraat-ti olisi vesiliukoinen ilman silloitusainetta (katso jäl-15 jempänä). Turpoavuus vedessä on riittävä yleensä silloin, kun polymeraatti silloituksen jälkeen turpoaa korkeintaan 39-kertaiseksi, edullisesti 3-10 -kertaiseksi alkuperäiseen kaatotilavuuteensa nähden.
Kaavan (I) mukaisen monomeerin kanssa kopolyme-20 roituvana lisäyhdisteenä keksinnön mukainen polymeeri si sältää edullisesti silloittavia monomeeriyksiköitä, kuten alalla tunnettuja yksiköitä. Tyypillisiä tämän ryhmän aineita ovat: glykolien divinyylieetterit, kuten etyleeni-glykolidivinyylieetteri, butaanidiolidivinyylieetteri, 25 heksaanidiolidivinyylieetteri, N,N'-alkyleenibis(met)ak- ryyliamidit, joissa on korkeintaan 12 C-atomia, edullisesti korkeintaan 6 C-atomia sisältävä suoraketjuinen tai haaroittunut alkyleeniryhmä, kuten N,N'-metyleenibisak-ryyliamidi, N,N'-etyleenibisakryyliamidi, N,N'-heksame-30 tyleenibisakryyliamidi, N,N'-metyleenibismetakryyliamidi, N,N'-etyleenibismetakryyliamidi, N,N'-heksametyleenibis-metakryyliamidi, N,N'-etylideenibisakryyliamidi, glyok-saalibisakryyliamidi, (1,2-bisakryyliamidi-l,2-dihydrok- sietaani), bisakryyliamidietikkahappo, etyleeniglykoli-35 bismetakryylihappoesteri, butaanidiolibismetakryylihappo- esteri, triallyylisyanuraatti, trisakryloyyliperhydro- 73229 8 triatsiini, divinyylibentseeni, adipiinihappodivinyyli-esteri, N ,N'-divinyylietyleeniurea, N, N'-divinyylipropy-leeniurea, etylideenibis-3-(N-vinyylipyrrolidoni), N,N'-divinyylidi-imidatsolyyli(2,2')- ja 1,1'-bis(3,3'-vinyyli-5 bentsimidatsolid-2-oni)-l,4-butaani, vinyyliakrylaatti, allyylimetakrylaatti, jne. Läsnä voi olla myös useampia erilaisia silloittavia monomeeriyksiköitä. Jotkut näistä silloitusaineista, esimerkiksi N,N'-divinyylietyleeniurea, N,N'-divinyylipropyleeniurea, etylideenibis-3-(n-vinyyli-10 pyrrolidoni), N,N'-divinyylidi-imidatsolyyli(2,2')- ja 1,1'-bis(3,3'-vinyylibentsimidatsolid-2-oni)-1,4-butaani ja Ν,Ν'-metyleenibisakryyliamidi, voivat edistää myös polymeerien hydrofiilisyyttä.
Silloittavan monomeerin määrä ja siten silloitus-15 tiheys riippuu tällöin käyttötarkoituksesta. Sekoituksella varustetussa astiassa tehtäviin entsyymireaktioihin tai diagnostisiin valmisteisiin saattaa pienempi silloitus-tiheys olla edullinen, jos sitä vastoin tuotetta käytetään pylvään täytteenä, on helmipolymeraatin hyvä muotopysy-20 vyys ja siten suuri silloitustiheys edellytyksenä. Käyttötarkoituksen mukaan voi silloittavan monomeerin määrä siten olla korkeintaan 60 mol-% polymeerin määrästä laskettuna. Se on edullisesti 1-50 mol-%, erityisen edullisesti 5-40 mol-%. Kuten edellä jo mainittiin, on sil-25 loittavan komponentin määrällä ja hydrofiilisen komponen tin määrällä tietty keskinäinen suhde. Useimmiten valitaan silloittavan komponentin määrä siten, että helmipo-lymeraatti paisuu tetrahydrofuraanissa korkeintaan 14-kertaiseksi, edullisesti 0-8 -kertaiseksi alkuperäiseen 30 kaatotilavuuteensa nähden.
Vesiliukoisiin kantajiin on kiinnostusta silloin, kun kantajaan ja biologisesti aktiivisen aineen välinen reaktio tehdään kantaja-aineen vesiliuoksessa. Silloitta-maton kantajapolymeeri voidaan mahdollisesti silloittaa 35 myös jälkeenpäin tehtävällä kemiallisella reaktiolla tun netulla tavalla, esimerkiksi di-isosyanaatin avulla. Poly- 9 73229 meerin tulisi tässä tapauksessa sisältää jonkin verran suurempi osuus kaavan (I) mukaisista monomeereista peräisin olevia yksiköitä.
Mahdollisina, ei-hydrofiilisinä ja ei-silloitta-5 vina monomeeri-lisäyksiköinä voi läsnä olla esimerkiksi yksiköitä, jotka ovat peräisin: akryyli- ja metakryyli-happoestereistä, joiden alkyyliryhmä sisältää 5 - 15 C-atomia, (met)akryylinitriilistä, vinyyliestereistä, joiden karboksyylihapporyhmä sisältää 4-18 C-atomia, kuten vi-10 nyylibutyraatista, vinyylistearaatista ja haaroittuneiden C10-12""icarb°ksyylihaPPojen vinyyliestereistä; sekä lisäksi aromaattisista vinyyliyhdisteistä, kuten styreenistä tai Of-metyyli styreenistä.
Näitä monomeeriyksiköitä voi polymeereissä olla 15 4-40 mol-%, edullisesti 8-20 mol-% polymeerin määrästä laskettuna.
Keksinnön mukaiset helmipolymeerit koostuvat etupäässä pallomaisista hiukkasista, joiden keskimääräinen hiukkaskoko kuivassa, paisuttamattomassa tilassa on 20 20 - 800 yum, edullisesti 50 - 300 ^um, ja joilla on edul lisesti kapea hiukkaskokojakautuma. Kulloinkin optimaalinen hiukkaskoko riippuu ennen kaikkea kulloisestakin käyttötarkoituksesta. Ilman painetta tehtävissä pylväsmenetel-missä valitaan hiukkaskoko annetuissa rajoissa suuremmaksi 25 kuin painomenetelmissä. Keksinnön mukaisen helmipolyme- raatin helmet ovat pääasiassa suurihuokoisia helmiä. Tämä ilmenee keksinnön mukaisena keskimääräisenä huokosläpimit-tana, joka on 5 - 2000 nm, edullisesti 10 - 1000 nm.
Huokosläpimitan (huokostilavuuden) määritys tapah-30 tuu siten, että ensin määritetään huokostilavuus kapillaa-ripainemenetelmällä (elohopeaporosimetria) (katso Ullmanns Encyclopädie der technischen Chemie", osa 5 (1980) 751-752). Tästä arvosta saadaan sitten keskimääräinen huokosläpimitta laskemalla sivulla 752, vasemmalla 35 palstalla, mainitun kirjallisuuskohdan yläpuolella olevan yhtälön avulla. Huokoskokomääritys voidaan lisäksi tehdä myös rasterielektronimikroskopian avulla.
73229 10
Keksinnön mukaiset helmipolymeraatit soveltuvat erityisesti biologisesti aktiivisten aineiden kantajiksi. Niitä voidaan kuitenkin käyttää muihinkin tarkoituksiin, esimerkiksi ioninvaihtimina, adsorptioaineiksi kromato-5 grafisiin menetelmiin, jne.
Keksinnön mukainen menetelmä näiden helmipolyme-raattien valmistamiseksi toteutetaan helmipolymeraattisen valmistuksessa tavallisissa, tunnetuissa olosuhteissa, esimerkiksi DE-hakemusjulkaisussa 2 237 316 tai DE-hake-10 musjulkaisussa 2 556 759 kuvatulla tavalla, uudistaen menetelmää kuitenkin siten, että käytetään erityisiä dispersion stabiloijia.
Tähän tarkoitukseen käytetään edullisesti male-iinihappoanhydridin ja vinyylialkyylieetterin, edullises-15 ti vinyyli-n-alkyylieetterin, jonka alkyyliryhmä sisältää 6-30 C-atomia, edullisesti 10 - 20 C-atomia, tai vinyyli-esterin, jonka karboksyylihapporyhmä sisältää 6 - 30 C-atomia, edullisesti 10 - 20 C-atomia, tai pitkäketjuisen O^-olefiinin, joka sisältää 8-30 C-atomia, edullisesti 20 10 - 20 C-atomia, muunnettuja kopolymeerejä. Esimerkkeinä tällaisista vinyylialkyylieettereistä, vinyyliestereistä ja pitkäketjuisista °C-olefiineistä mainittakoon tässä: vinyylioktyylieetteri, vinyylidekyylieetteri, vinyylidode-kyylieetteri, vinyylistearyylieetteri, vinyylimyrisyyli-25 eetteri, etyyliheksaanihappovinyyliesteri, isononaanihap- povinyyliesteri, versatiinihappovinyyliesteri, lauriini-happovinyyliesteri, steariinihappovinyyliesteri ja haaroittuneiden C1Q_12-karboksyylihappojen vinyyliesterit; 1-okteeni, 1-dekeeni, 1-dodekeeni, 1-tetradekeeni, 1-okta-30 dekeeni ja 1-trikoseeni.
Nämä dispersion stabiloijät vaikuttavat jo määrinä 0,001 p-% monomeerien kokonaismäärästä laskettuna. Useimmiten käytettävä määrä on 0,005 - 10 p-%, edullisesti 0,01 - 5 p-% (monomeerien kokonaismäärästä laskettuna).
35 Näiden dispersion stabiloijina käytettävien kopo- lymeerien redusoitu ominaisviskositeetti (RSV) on yleensä 11 73229 0,01 - 1,0 dl/g (määritetty 0,6 % liuokselle tolueenissa lämpötilassa 25°C). Edullinen alue on maleiinihappoanhyd-ridin ja binyylialkyylieetterin tai vinyyliesterien kopo-lymeereille vastaavasti 0,05 - 1,0 dl/g ja maleiinihappo-5 anhydridin ja pitkäketjuisten *>f-olefiinien kopolymeereil- le 0,01 - 0,1 dl/g. Moolisuhde maleiinihappoanhydridin ja vinyylialkyylieetterin, vinyyliesterin tai pitkäketjuisen Qf-olefiinin välillä on yleensä 1:4 - 1:1, edullisesti 1:2 - 1:1 ja erityisen edullisesti 1:1.
10 Radikaalimekanismilla vaikuttavina initiaatto- reina tulevat keksinnön mukaisesti kyseeseen sellaiset, jotka liukenevat hyvin monomeerifaasiin ja nestemäiseen dispersioväliaineeseen mahdollisimman vähän. Esimerkkejä tällaisista aineista ovat orgaaniset peroksidit, kuten 15 di-tert-butyyliperoksidi, dibentsoyyliperoksidi, bis(o- metyylibentsoyyli)peroksidi, tertbutyylihydroperoksidi, kumeenihydroperoksidi, di-isopropyyliperoksidikarbonaatti, sykloheksanoniperoksidi, tai alifaattiset atsoyhdisteet, kuten fö£'-atsodi-isovoihapponitriili, atsobissyaaniva-20 leriaanahappoa, l,l'-atsosykloheksaani-l,l'-dikarboksyy- lihapponitriili ja atsodikarboksyyliamidi. Käytettäessä vettä tai veden ja vesiliukoisten aineiden seoksia inert-tinä aineena, käytetään vesiliukoisia initiaattoreita, kuten ammonium-, natrium- ja kaliumperoksidisulfaattia, 25 sykloheksyylikarbonaattikaliumsulfaattiperoksidia, meri- pihkahappoperoksidia, ja tertbutyylipermaleinaattia. Mahdollisesti voidaan käyttää myös vastaavia redoksisystee-mejä. Initiaattorin määrä on useimmiten 0,01 - 5, edullisesti 0,1-2 p-% (monomeerien kokonaismäärästä las-30 kettuna).
Nestemäisinä dispergointiaineina keksinnön mukai sen helmipolymeroinnin suorittamiseksi käytetään ennen kaikkea sellaisia orgaanisia yhdisteitä, jotka ovat normaaliolosuhteissa nestemäisiä, joiden kiehumispiste on 35 yli 60°C, edullisesti 85 - 300°C, ja jotka eivät liuota 73229 12 monomeereja, polymeeriä eivätkä edullisesti myöskään ini-tiaattoria polymerointiolosuhteissa tai liuottavat niitä vain hyvin vähän, epätoivottavan emulsiopolymeroitumisen välttämiseksi. Hyvin soveltuvia ovat esimerkiksi hiilive-5 dyt, jotka sisältävät 6-20, edullisesti 12 - 16 hiili-atomia, erityisesti parafiinit. Myös erilaisten yhdisteiden seoksia voidaan käyttää dispergointiaineena. Soveltuvia hiilivetyjä tai hiilivetyseoksia ovat esimerkiksi n-heksaa-ni, n-heptaani, n-oktaani- sykloheksaani- iso-oktaani, 10 bensiinifraktiot, joiden kiehumislämpötila-alue on 90 - 170°C, sekä kevyt parafiiniöljy (Deutsches Arzneibuch, 7. Ausgabe, DAB 7). Monomeerifaasin suhde dispergointiaine-faasiin voi vaihdella laajoissa rajoissa, esimerkiksi alueella 1:1 - 1:50, edullisesti 0,5:1 - 1:15 (painosuhde).
15 Mahdollisimman suuren helmipolymeraattien huokoi suuden aikaansaamiseksi lisätään polymerointisysteemiin tai edullisesti monomeereihin edullisesti tiettyjä inert-tejä, nestemäisiä komponentteja (inerttejä aineita). Tällaisiksi tulee ymmärtää sellaiset aineet, joihin monomee-20 rit liukenevat hyvin tai sekoittuvat, mutta jotka toisaalta ovat dispergointiaineeseen käytännöllisesti katsoen liukenemattomia ja siten sekoittumattomia. Sen perusteella, miten inertit aineet vaikuttavat vastaaviin kopolymeerei-hin, voidaan ne jakaa paisutus- ja/tai saostusaineisiin.
25 Hydrofiilisessä matriisissa toimivat polaariset inertit aineet yleensä paisuttavina aineina, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidi, dimetyylisulfoksidi, dioksaani, vesi, jne., kun taas polaarittomat aineet, kuten glyseriinitra-setaatti, jne., toimivat kopolymeraattia saostavana ainee-30 na. Optimaalinen inertti aine tai inerttien aineiden seos on helppo löytää muutamin yksinkertaisin rutiinikokein. Erityisesti silloin, kun pyritään helmipolymeraatteihin, joiden silloittumisaste on suhteellisen alhainen, on suositeltavaa käyttää polaarisen ja polaarittoman inertin 35 aineen seosta. Inertti aine ei osallistu polymerointiin, 13 73229 mutta joutuu kuitenkin polymeraatin ympäröimäksi ja liukenee jälleen pois jälkikäsittelyssä. Siten syntyy pysyviä huokosia. Huokoskokoon vaikuttavat inertin aineen laatu ja määrä, mutta myös silloittavan komponentin mää-5 rä.
Inerttiä ainetta voidaan käyttää joko yksinään tai seoksena. Esimerkkeinä mainittakoon: metanoli ja sen korkeammat homologit, etyleeniglykoli, metyyliglykoli pro-pyyliglykoli, dietyleeniglykoli, trietyleeniglykoli, bu-10 taanidioli (1,4), glyseriini, polyetyleeniglykolit, po- lypyrrolidonit, dietyleeniglykolin dimetyylieetteri, glyseriini triasetaatti, etyleenikarbonaatti, formamidi, di-metyyliformamidi, dimetyylisulfoksidi, dioksaani, vesi, jne.
15 Lisättävän inertin aineen määrä on hyvin vaihte- leva. Se riippuu mm. kantaja-aineen monomeerikoostumuk-sesta, erityisesti sen silloitusainepitoisuudesta, halutusta huokoisuudesta (huokoskoosta) sekä kantaja-aineen täsmällisestä käyttötarkoituksesta. Siten suositellaan 20 korkean silloitusasteen yhteydessä vastaavasti suurta inertin aineen määrää tietyn huokoisuuden (huokoskoon) saavuttamiseksi. Silloitusasteen pysyessä vakiona on huokoisuus (huokoskoko) samoin sitä suurempi, mitä enemmän inerttiä ainetta käytetään. On luonnollista, että 25 tätä määrää voidaan lisätä vain tietyissä rajoissa, sillä muuten suurihuokoisten helmien seinämien paksuus ja siten niiden mekaaninen lujuus pienenee liikaa. Useimmissa tapauksissa inertin aineen määrä, joka on 0,02 -5 kertainen, edullisesti 0,04 - 3 kertainen käytettyyn 30 monomeerien määrään nähden, johtaa tyydyttäviin tulok siin.
Kaavan (I) mukaista monomeeria samoin kuin yhtä tai useampaa lisäkopolymeeriä käytetään sellaisia määriä, että saadaan polymeeri, jossa monomeeriyksiköiden määrä 35 on edellä annettu. Tätä varten käytetään kaavan (I) mukaista monomeeria yleensä 5-90 mol-%, edullisesti 73229 14 10 - 80 mol-% monomeeriseoksen kokonaismäärästä. Hydro-fiilisten monomeerien määrä on puolestaan useimmiten 5-70 mol-%, edullisesti 20 - 50 mol-% monomeeriseoksen kokonaismäärästä ja silloittavien monomeerien määrä -5 silloin kun niitä käytetään - korkeintaan 60 mol-%, edullisesti 1-50 mol-%, monomeerien kokonaismäärästä.
Kaavan (I) mukaisten monomeerien valmistus tapahtuu tunnetulla tavalla, esimerkiksi antamalla (met)akryy-lihappokloridin reagoida kaavan I^N-R-Y mukaisten yhdis-10 teiden kanssa soveltuvan happoakseptorin läsnäollessa.
Keksinnön mukainen menetelmä toteutetaan tarkoituksenmukaisesti sekoittimella varustetussa reaktioasti-assa lämpötilassa joka on useimmiten 20 - 150°C, edullisesti 65 - 125°C. Helmipolymeraatin hiukkaskokoa säädel-15 lään tunnetulla tavalla sekoitusnopeutta ja faasisuhdet-ta muuttamalla. Erityisen edullista on käyttää pystysuorassa asennossa olevaa, lieriömäistä, tasapohjaista astiaa, joka on varustettu keskellä olevalla pystysekoit-timella, jonka akseli ulottuu melkein astian pohjaan 20 asti. Reaktioastia on edullisesti alipainetta kestävä, ja se voidaan varustaa palautusjäähdyttimellä, syöttö-suppilolla, kaasunsyöttöputkella ja lämpötilan mittauslaitteella. Astian kuumennus ja jäähdytys tapahtuu yleensä nestehauteella, esimerkiksi öljy- tai vesihauteella.
25 On edullista toteuttaa keksinnön mukainen mene telmä ilman hapelta suojattuna. Reaktioastia huuhdotaan siksi ennen työn aloittamista inertillä kaasulla, edullisesti typellä.
Polymeroitumisreaktion loputtua poistetaan rea-30 goimattomat monomeerit reaktioastiasta, esimerkiksi haihduttamalla alipaineessa, edullisesti 0,1 - 15 torrin paineessa. Ylimääräisten monomeerien poiston jälkeen erotetaan dispergointiaine kiinteästä polymeeristä esimerkiksi dekantoimalla, suodattamalla tai imemällä. Sen 35 jälkeen polymeeri pestään tarvittaessa matalalla kiehu- 15 73229 valla orgaanisella liuottimena, esimerkiksi hiilivedyllä, alemmalla alkoholilla tai asetonilla, ja kuivataan. Polymeraatin kuivaaminen tehdään useimmiten lämpötilassa 20 - 100°C, edullisesti 40 - 80°C; kuivaus ali-5 paineessa on suositeltavaa.
Käytettäessä keksinnön mukaista helmipolymeraat-tia biologisesti aktiivisten aineiden kantajamateriaalina annetaan sen edullisesti - kuten jo mainittiin - reagoida välihaarojen kanssa. Välihaaroina tulevat keksinnön mu-10 kaisesti kyseeseen tähän tarkoitukseen käytettävät tunne tut homo- ja heterobifunktionaaliset yhdisteet, joiden toisen funktionaalisen ryhmän kautta tapahtuu sitoutuminen kiinnitettävään biologisesti aktiiviseen aineeseen, (katso DE-patenttijulkaisut 2 421 789 ja 2 552 510 sekä 1.5 Ullmanns Encyclopädie der technischen Chemie, 4. p. , osa 10, s. 540 ja "Characterization of Immobilized Biocatalysts", Verlag Chemie, Weinheim (1979) 53). Keksinnön mukaisesti käytetään välihaaroina edullisesti yhdisteitä, jotka sisältävät epoksiryhmiä, kuten epikloorihyd-20 riiniä tai sen homologeja ( C^^'-epoksi-ω -halogeenialkaa-neja) sekä diepoksideja, kuten etyleeniglykoli-1,2-digly-sidyylieetteriä ja butaanidioli-1,4-diglysidyylieetteriä.
Reaktio esimerkiksi epoksiryhmiä sisältävien väli-haarojen kanssa tehdään sinänsä tunnetulla tavalla käyt-25 täen ylimäärää epoksiyhdistettä yleensä 2-6 tunnin aikana lämpötilassa 50 - 200°C, edullisesti emäksisten ka-talysaattoreiden, kuten tertiaaristen amiinien, alkalien, dimetyyliformamidin, jne. läsnäollessa ja mahdollisesti käyttäen inerttejä laimennusaineita, kuten dioksaania, 30 jne. Epoksidoitujen polymeerihiukkasten eristäminen ta pahtuu samoin tunnetulla tavalla imemällä ja pesemällä matalalla kiehuvalla, polymeerihiukkasiin vaikuttamattomalla orgaanisella liuottimena, kuten asetonilla tai dietyylieetterillä. Inertit orgaaniset pesuaineet pois-35 tetaan sitten 40 - 60°C:ssa ja alipaineessa (200 mm) typpeä suojakaasuna käyttäen vakuumilämpökaapissa.
73229 16
Yllättäen ilmenee, että siten saaduilla epoksidi-ryhmiä sisältävillä polymeereillä on merkittävästi korkeampi aktiivisuus kuin DE-kuulutusjulkaisun 2 237 316 mukaisesti epoksidiryhmiä sisältäviä monomeerejä suoraan 5 polymeroimalla valmistetuilla tuotteilla.
"Biologisesti aktiivisina aineina" pidetään tunnettuja in vivo tai in vitro vaikuttavia luonnon tai keinotekoisesti valmistettuja aineita, kuten entsyymejä, aktivaattoreita, inhibiittoreita, antigeenejä, vasta-ainei-10 ta, vitamiineja, hormoneja, efektoreita, antibiootteja, proteiineja, tms. Viimeisenä mainittuihin kuuluvat myös proteiinit, jotka sisältävät tiettyjä ei-proteiinisubsti-tuentteja, kuten metalli-ioneja, polysakkarideja, porfy-riiniryhmiä, adeniinidinukleotidejä, ribonukleiinihappoja, 15 fosfolipidejä, jne. Myös polypeptidifragmentit, esimer kiksi entsyymimolekyylien aktiiviset osat, luetaan kuuluviksi biologisesti aktiivisiin aineisiin.
Edellä mainituista biologisesti aktiivisista aineista ovat keksinnön mukaisesti edullisia entsyymit.
20 Esimerkkejä entsyymeistä ovat adenyylidesaminaasi, alko-holidehydrogenaasi, asparaginaasi, karboksipeptidaasi, kymotrypsiini, difosfoesteraasi, <Y-glykosidaasi, glykoo-si-isomeraasi, glukoosioksidaasi, glykoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasi, heksokinaasi, invertaasi, β-laktamaasi, 25 laktaasi, laktaattidehydrogenaasi, erilaiset lektiinit, NAD-kinaasi- neuramidaasi, papaiini, peroksidaasi, fos-fataasit (emäksiset ja happamat), 5'-fosfodiesteraasi, pyruvaattikinaasi, ribonukleaasi ja trypsiini.
Esimerkkejä muista biologisesti aktiivisista ai-30 neista ovat hormonit, kuten insuliini ja mitä erilaisimmat hypofyysin hormonit, proteiinit gammaglobuliinifrak-tion, esimerkiksi ryhmien G, M, A, D ja E vasta-aineet, muut veren tekijät, esimerkiksi antihemofiliatekijä, veren hyytymistekijä, spesifiset vasta-aineet, esimerkik-35 si hepatiitti-, polio-, finnitauti-, sikotauti-, influens sa- tai kaniinivasta-aineet, antigeenit, kuten hepatiiti-, 17 73229 polio-, finnitauti-, sikotauti-, influenssa- tai kaniini-antigeenit, joita käytetään puhdistukseen tai soveltuvien vasta-ainereaktioiden stimulointiin, jolloin antigeeni (liukenemattomaksi tehtynä) pysyy liukenemattomassa muo-5 dossa eikä siten tunkeudu vasta-aineeseen eikä pääse vau rioittamaan sitä, samoin kuin yleiset elimistön proteiinit, kuten hemoglobiini ja albumiini.
Biologisesti aktiivisen aineen sitomisreaktio tehdään tunnetulla tavalla, kuten suurin piirtein DE-10 hakemusjulkaisussa 2 407 340 tai DE-patenttijulkaisuissa 2 215 687, 2 421 789 ja 2. 552 510 kuvatulla tavalla. Reaktio tehdään useimmiten huoneen lämpötilassa tai sitä viileämmässä. Jälkimmäistä tapaa käytetään erityisesti silloin, kun sidottava biologisesti aktiivinen aine on luon-15 nostaan epästabiili; tässä tapauksessa on lämpötila alle +10°C, edullisesti 0 - 5°C.
Sitomisreaktio tehdään edullisesti väliaineessa, jonka pH on lähellä neutraalia, esimerkiksi 5-9, sillä tällä pH-alueella useimmat biologisesti aktiiviset aineet 20 ovat stabiileimmillaan. Yleensä ei ole tarpeellistakaan käyttää voimakkaammin happamia tai emäksisiä olosuhteita, sillä keksinnön mukaiset suurihuokoiset helmipolymeraatit reagoivat nopeasti jo neutraalialueella useimpien kyseeseen tulevien aineiden kanssa. Täten syntyvällä sidoksella 25 on tyydyttävä varastointistabiilisuus ja korkea käyttö- stabiilisuus.
Yhtä paino-osaa kohden sidottavaa biologisesti aktiivista ainetta käytetään edullisesti noin 10 - 80 paino-osaa kantajapolymeeriä, erityisesti sellaista, joka 30 sisältää vähintään 50 mol-% kaavan (I) mukaisista mono- meereista saatavia yksiköitä. Suurempia kantajapolymeeri-määriä on tarkoituksenmukaista käyttää silloin, kun kaavan (I) mukaisista monomeereistä saatavat yksiköt muodostavat vähemmän kuin 50 mol-% polymeeristä.
35 Keksintöä valaistaan seuraavassa tarkemmin esi merkkien avulla.
73229 18
Dispersion stabiloijan valmistus (maleiinihappoan-hydridin ja vinyylistearyylieetterin kopolymeeri)
Sekoituksella varustettuun astiaan laitettiin 98 g maleiinihappoanhydridiä (1 mol) ja 296 g vinyyli-5 stearyylieetteriä (1 mol) 250 ml:ssa asetonia, lisättiin 5 ml di-isopropyyliperkarbonaattia (40 % liuos ftalaa-tissa) ja seosta polymeroitiin typen alla sekoittaen 5 h 60°C:ssa.
Saostunut tuote erotettiin imemällä jäähdytyksen 10 jälkeen ja pestiin useaan kertaan asetonilla.
Monomeerien moolisuhde kopolymeerissä oli 1:1 ja RSV-arvo oli 0,224 dl/g (mitattu 0,6 % liuokselle tolu-eenissa 25°C:ssa).
I. Keksinnön mukaisen polymeerisen kantaja-aineen 15 valmistus
Esimerkki 1 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja N, N'-metyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Sekoittimella, lämpömittarilla, typensyöttöputkel-20 la ja palautusjäähdyttimellä varustettuun pyörökolviin laitettiin 800 ml ohutta parafiiniöljyä DAB 7 (disper-gointiaine), 2,0 g maleiinihappoanhydridin ja 1-oktade-keenin kopolymeraattia (moolisuhde 1:1; RSV-arvo O, 064 dl/g, mitattu 0,6 % liuokselle tolueenissa 25 25°C:ssa), 33,3 g N-metyloliakryyliamidia, 36,7 g N- vinyylipyrrolidonia, 30 g N,N'-metyleenibisakryyliami-dia, 2 g atsodi-isovoihapponitriiliä, 212 ml dimetyyli-formamidia ja 90 ml polyetyleeniglykolia (molekyylipaino noin 400 ).
30 Tätä seosta lämmitettiin sitten sekoittaen ja hitaasti. Lämpötilan ollessa noin 65°C alkoi eksoterminen reaktio, jolloin lämpötila kohosi noin 80°C:een.
Tätä lämpötilaa pidettiin yllä termostoidun öljyhauteen avulla 1 h ja nostettiin sitten hauteen lämpötila 4 h:ksi 35 90°C:een polymeroinnin saattamiseksi loppuun. Sitten 19 73229 lämpöhaude poistettiin ja panoksen annettiin jäähtyä sekoittaen 40°C:een. Sen jälkeen sekoitus lopetettiin, jolloin jonkin ajan kuluttua helmien muotoinen polyme-raatti laskeutui pohjaan. Pääosa parafiiniöljystä dekan-5 toitiin sitten pois ja sen jälkeen loppuosa poistettiin imemällä seulan läpi. Saatu polymeraatti käsiteltiin sitten sekoittaen petrolieetterillä kiinni tarttuneen parafiiniöljyn poistamiseksi. Sitten tuotetta sekoitettiin ensin metanolin ja sitten asetonin kanssa ja uutettiin 10 lopuksi kiehuvalla asetonilla reagoimattomien monomeerien samoin kuin dispergaattorin liuottamiseksi pois. Polymeraatti kuivattiin lopuksi vakuumilämpökaapissa 50°C:ssa yön yli ja seulottiin.
Saanto oli 95 g (- 95 % teoreettisesta) silloittu-15 nutta kopolymeraattia.
Suurin piirtein samanlainen tuote saadaan, kun käytetään vastaavaa, maleiinihappoanhydridistä ja dode-keenista valmistettua dispersion stabiloijaa.
15 g seulafraktiota 50 - 100 um paisutettiin 16 h 20 100 ml:ssa epikloorihydriiniä, pidettiin sitten 4 h 115°C:n lämpötilassa, jäähdytettiin 25°C:een ja imettiin liuos pois. Sitten helmiä sekoitettiin kahdesti 200 ml:ssa asetonia 30 min, imettiin liuotin pois ja kuivattiin yön yli vakuumilämpökaapissa 40°C:ssa typpi suojakaasuna.
25 Saatiin 14,6 g helmimäistä tuotetta, jonka kaato- tiheys oli 340 g/1 ja epoksiekvivalentti luku 143.
Esimerkki 2 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja N,N'-metyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti 30 Ristipalkkisekoittimella, palautusjäähdyttimellä ja typensyöttöputkella varustettuun lieriömäiseen astiaan laitettiin 900 ml parafiiniöljyä (DAB 7), 0,2 g edellä kuvattua maleiinihappoanhydridin ja vinyylistearyylieet-terin kopolymeraattia, 44,1 g N-metyloliakryyliamidia, 35 48,4 g N-vinyylipyrrolidonia, 7,5 g N,N'-metyleenibis- 73229 20 akryyliamidia, 2 g atsodi-isovoihapponitriiliä, 126 ml dimetyyliformamidia ja 48 g polyetyleeniglykolia (mole-kyylipaino 400). Hauteen lämpötila korotettiin typpeä syöttäen hitaasti 65°C:een ja polymeroitiin ja käsitel-5 tiin tuote esimerkin 1 mukaisesti.
Saanto oli 89,1 g ( = 89,1 % teoreettisesta) sil-loittunutta tuotetta.
Suurin piirtein samanlainen tuote saadaan, kun dispersion stabiloijana käytetään vastaavaa maleiinihap-10 poanhydridin ja vinyylidodekyylieetterin kopolymeraattia.
Muuttaminen epoksiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaa-totiheys oli 367 g/1 ja epoksiekvivalenttiluku 320.
Esimerkki 3 15 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyyli-N-metyyliaseta- midin ja N,N'-metyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Esimerkin 1 mukaisessa laitteistossa ja saman esimerkin mukaisissa olosuhteissa polymeroitiin seuraava panos: 20 900 ml parafiiniöljyä, 0,2 g esimerkin 2 mukaista maleiinihappoanhydridin ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia, 46,7 g N-metyloliakryyliamidia, 45,8 g N-vinyyli-N-metyyli-asetamidia, 7,5 g N, N'-metyleenibisak-ryyliamidia, 2,0 g atsodi-isovoihapponitriiliä, 126 ml 25 dimetyyliformamidia ja 38 ml polyetyleeniglykolia (mole- kyylipaino 400).
Tuote käsiteltiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.
Saanto oli 94 g ( = 94 % teoreettisesta) silloit-tunutta kopolymeraattia.
30 Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteek si tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaatotiheys oli 287 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 193.
Esimerkki 4 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja 35 N,N'-divinyylietyleeniurean kopolymeraatti 21 73229
Esimerkin 2 mukaisessa laitteistossa ja esimerkin 1 mukaisissa olosuhteissa polymeroitiin seuraava panos: 900 ml parafiiniöljyä, 0,2 g esimerkissä 2 käytettyä maleiinihappoanhydridin ja vinyylistearyylieetterin 5 kopolymeraattia, 40,5 g N-metyloliakryyliamidia, 44,5 g N-vinyylipyrrolidonia, 15 g N,N'-divinyylietyleeniureaa, 2.0 g atsodi-isovoihapponitriiliä, 126 ml dimetyyliforma-midia ja 48 ml polyetyleeniglykolia (molekyylipaino 400).
Tuote käsiteltiin esimerkin 1 mukaisella tavalla. 10 Saanto: 96 g ( = 96 % teoreettisesta) silloittu- nutta kopolymeraattia.
Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaatotiheys oli 493 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 284. 15 Esimerkki 5 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja glyoksaalibisakryyliamidin kopolymeraatti.
Esimerkin 2 mukaisessa laitteistossa ja esimerkin 1 mukaisissa olosuhteissa polymeroitiin seuraava panos: 20 900 ml parafiiniöljyä, 0,2 g esimerkin 2 mukaista maleiinihappoanhydridin ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia, 44,1 g N-metyloliakryyliamidia, 48,4 g N-vinyylipyrrolidonia, 7,5 g glyoksaalibisakryyliamidia, 2.0 g atsodi-isovoihapponitriiliä, 126 g dimetyyliforma-25 midia ja 48 ml polyetyleeniglykolia (molekyylipaino 400).
Tuote käsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti.
Saanto: 94 g (94 % teoreettisesta) silloittunutta kopolymeraattia.
Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteek-30 si tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Tuotteen kaatopaino oli 340 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 442.
Esimerkki 6 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja N,N',N"-trisakryloyyliperhydrotriatsiinin kopolymeraatti 55 Esimerkin 2 mukaisessa laitteistossa ja esimerkin 1 mukaisissa olosuhteissa polymeroitiin seuraava panos: 22 73229 900 ml parafiiniöljyä, 0,2 g maleiinihappoanhyd-ridin ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia (kuten esimerkissä 2), 45,3 g N-metyloliakryyliamidia, 49,7 g N-vinyylipyrrolidonia, 5,0 g N,N'N"-trisakryloyyliperhyd-5 rotriatsiinia, 2 g atsodi-isohapponitriiliä, 126 ml dime-tyyliformamidia ja 48 ml polyetyleeniglykolia (molekyyli-paino 400) .
Tuote käsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti.
Saanto: 79 g ( = 79 % teoreettisesta) silloittu-10 nutta kopolymeraattia.
Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaa-totiheys oli 233 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 357.
Esimerkki 7 15 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja N,N'-metyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Esimerkin 2 mukaisessa laitteistossa ja esimerkin 1 mukaisissa olosuhteissa polymeroitiin seuraava seos: 900 ml parafiiniöljyä, 0,2 g maleiinihappoanhydri-20 din ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia (kuten esimerkissä 2), 40,5 g N-metyloliakryyliamidia, 44,5 g N-vinyylipyrrolidonia, 15 g N,N'-metyleenibisakryyliami-dia, 2 g atsodi-isovoihapponitriiliä, 126 g dimetyyli-formamidia ja 45 ml etyleeniglykolia.
25 Tuote käsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti.
Saanto: 96 g (96 % teoreettisesta) silloittunutta kopolymeraattia.
Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Tuotteen kaatotiheys 30 oli 553 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 211.
Esimerkki 8 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja N,N'-metyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Esimerkin 2 mukaisessa laitteistossa ja esimerkin 35 1 mukaisissa olosuhteissa polymeroitiin seuraava panos: 23 73229 900 ml parafiiniöljyä, 1 g maleiinihappoanhydri-din ja 1-oktadekeenin kopolymeraattia (kuten esimerkissä 1), 40,5 g N-metyloliakryyliamidia, 44,5 g N-vinyyli-pyrrolidonia, 15 g metyleenibisakryyliamidia, 2 g atsodi-5 isovoihapponitriiliä ja 45 ml glyseriinitriasetaattia.
Polymerointiaika oli 1 h 70°C:ssa ja 4 h 80°C:ssa.
Tuote käsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti.
Saanto: 98 g (98 % teoreettisesta) silloittunutta kopolyme raatti a.
10 Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteek si tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaatotiheys oli 240 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 214.
Esimerkki 9 N-metyloliakryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja 15 N,N'-metyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Esimerkin 2 mukaisessa laitteistossa ja esimerkin 1 mukaisissa olosuhteissa polymeroitiin seuraava seos: 900 ml parafiiniöljyä, 0,2 g maleiinihappoanhydri-din ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia (kuten 20 esimerkissä 2), 44,1 g N-metyloliakryyliamidia, 48,4 g N-vinyylipyrrolidonia, 7,5 g N,N'-metyleenibisakryyliamidia, 2,0 g ammoniumperoksidisulfaattia, 30 ml tislattua vettä ja 106 ml diasetonialkoholia.
Polymerointi kesti 5 h 80°C:ssa. Tuote käsiteltiin 25 esimerkin 1 mukaisesti.
Saanto: 72 g (72 % teoreettisesta).
Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaatotiheys oli 180 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 460.
30 Esimerkki 10 N-(2-hydroksietyyli)-akryyliamidin, N-vinyylipyrrolidonin ja N,N'-metyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Sekoittimella, lämpömittarilla, typensyöttöput-35 keila ja palautusjäähdyttimellä varustettuun pyörökolviin 73229 24 laitettiin 800 g ohutta parafiiniöljyä OAB 7 (dispergoin-tiaine), 2,0 g maleiinihappoanhydridin ja okradekeenin kopolymeraattia (moolisuhde 1:1, RSV-arvo 0,064 dl/g, mitattu 0,6 % liuokselle tolueenissa 25°C:ssa), 43,3 g 5 N-(2-hydroksietyyli)-akryyliamidia, 41,7 g N-vinyylipyr-rolidonia, 15 g Ν,Ν'-metyleenibisakryyliamidia, 2 g atso-di-isovoihapponitriiliä, 212 ml dimetyyliformamidia ja 90 ml polyetyleeniglykolia (molekyylipaino noin 400).
Tätä seosta lämmitettiin hitaasti ja sekoittaen.
10 Lämpötilassa noin 65°C alkoi eksoterminen reaktio, jol loin lämpötila kohosi noin 80°C:een. Tätä lämpötilaa pidettiin yllä termostoidun öljyhauteen avulla 1 h ja nostettiin sitten hauteen lämpötila 90°C:een 4 h:n ajaksi polymeroitumisen loppuunsaattamiseksi. Sen jälkeen pois-15 tettiin öljyhaude ja panoksen annettiin jäähtyä 40°C:een sekoittaen. Sitten lopetettiin sekoitus, minkä jälkeen helmimäinen polymeraatti laskeutui pohjaan jonkin ajan kuluttua. Pääosa parafiiniöljystä dekantoitiin pois ja loppuosa poistettiin imemällä siivilän läpi. Saatu poly-20 meraatti käsiteltiin sitten petrolieetterillä siihen tarttuneen parafiiniöljyn poistamiseksi. Sen jälkeen tuotetta sekoitettiin metanolissa, sitten asetonissa ja lopuksi uutettiin kiehuvalla asetonilla reagoimattomien monomeerien sekä dispergaattorin liuottamiseksi pois.
25 Lopuksi polymeraatti kuivattiin vakuumilämpökaapissa yön yli 50°C:ssa ja seulottiin.
Saanto oli yli 95 g (yli 95 % teoreettisesta) silloittunutta kopolymeraattia.
Suurin piirtein samanlainen tuote saadaan, kun 30 käytetään vastaavaa, maleiinihappoanhydristä ja dodekee-nista valmistettua dispersion stabiloijaa.
15 g seulafraktiota 50 - 100 ^um paisutettiin 16 h 100 ml:ssa epikloorihydriiniä, pidettiin sitten 4 h 115°C, jäähdytettiin 25°C:een ja imusuodatettiin.
35 Sitten tuotetta sekoitettiin kahdesti 200 ml:ssa asetonia 73229 25 30 min, imusuodatettiin ja kuivattiin yön yli vakuumiläm-pökaapissa 40°C typen alla.
Saanto oli 14,3 g helmimäistä tuotetta, jonka kaa-totiheys oli 440 g/1 ja epoksidiekvivaIenttiluku 182.
5 Esimerkki 11 N-(2-hydroksietyyli)-akryyliamidin, N-vinyylipyr-rolidonin ja N,N'-etyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Ristipalkkisekoittimella, palautusjäähdyttimellä, lämpömittarilla ja typensyöttöputkella varustettuun sy-10 linterimäiseen astiaan laitettiin 900 ml parafiiniöljyä (DAB 7), 0,2 g esimerkin 1 mukaista maleiinihappoanhydri-din ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia, 47,1 g N-(2-hydroksietyyli)-akryyliamidia, 45,4 g N-vinyylipyr-rolidonia, 7,5 g N,N'-etyleenibisakryyliamidia, 2 g atso-15 di-isovoihapponitriiliä, 126 ml dimetyyliformamidia ja 48 ml polyetyleeniglykolia (molekyylipaino 400). Hauteen lämpötila nostettiin typpeä syöttäen hitaasti 65°C:een, polymeroitiin esimerkin 1 mukaisesti ja käsiteltiin.
Saanto oli 92,3 g (92,3 % teoreettisesta) silloit-20 tunutta tuotetta.
Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaa-totiheys oli 385 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 340.
Esimerkki 12 25 N-(2-hydroksietyleeni)-akryyliamidin, N-vinyyli- pyrrolidonin ja N,N'-heksametyleenibisakryyliamidin kopolymeraatti
Ristipalkkisekoittimella, palautusjäähdyttimellä, lämpömittarilla ja typensyöttöputkella varustettuun sy-30 linterimäiseen astiaan laitettiin 900 ml parafiiniöljyä (DAB 7), 0,2 g esimerkin 1 mukaista maleiinihappoanhydri-din ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia, 43,3 g N-(2-hydroksietyyli)-akryyliamidia, 41,7 g N-vinyylipyr-rolidonia, 15 g heksametyleenibisakryyliamidia, 2 g atsi-35 di-isovoihapponitriiliä, 126 ml dimetyyliformamidia ja 26 73229 48 ml polyetyleeniglykolia (molekyylipai.no 400). Hauteen lämpötila korotettiin typpeä syöttäen hitaasti 65°C:een, polymeroitiin ja käsiteltiin sitten esimerkin 1 mukaisesti.
5 Saanto oli 85,3 g (85,3 % teoreettisesta) silloit- tunutta tuotetta.
Muutaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaa-totiheys oli 420 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 280.
10 Esimerkki 13 N-(2-hydroksietyyli)-akryyliamidin, N-vinyylipyr-rolidonin ja N,N'-divinyylietyleeniurean kopolymeraatti-Ristipalkkisekoittimella, palautusjäähdyttimellä, lämpömittarilla ja typensyöttöputkella varustettuun sy-15 linterimäiseen astiaan laitettiin 900 ml parafiiniöljyä (DAB 7), 0,2 g esimerkin 1 mukaista maleiinihappoanhyd-ridin ja vinyylistearyylieetterin kopolymeraattia, 43,3 g N-(2-hydroksietyyli)-akryyliamidia, 41,7 g N-vinyylipyr-rolidonia, 15,0 g N,N'-divinyylietyleeniureaa, 2 g atsodi-20 isovoihapponitriiliä, 126 ml dimetyyliformamidia ja 48 ml polyetyleeniglykolia (molekyylipaino 400). Typpeä syöttäen korotettiin hauteen lämpötila hitaasti 65°C:een ja polymeroitiin ja käsiteltiin sitten esimerkin 1 mukaisesti.
25 Saanto oli 87,3 g (87,3 % teoreettisesta) silloit- tunutta tuotetta.
Muuttaminen epoksidiryhmiä sisältäväksi tuotteeksi tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Helmimäisen tuotteen kaa-totiheys oli 395 g/1 ja epoksidiekvivalenttiluku 287.
30 II. Keksinnön mukaisen polymeerisen kantaja-aineen ja biologisesti aktiivisten aineiden välinen reaktio Esimerkki 14
Esimerkin 1 mukaisesti valmistettuun kantajaan (0,2 g) lisättiin 1100 ^ul penisilliiniasylaasiliuosta 35 (25 mg/ml, 243 ky/ml), joka oli 1 M kaliumfosfaatin 27 73229 (puskuri) suhteen, ja jonka pH oli 8,0. 72 h kestäneen kiinnityksen jälkeen helmet pestiin 1 M suolaliuoksella ja puskuriliuoksella perusteellisesti. Imusuodatuksen jälkeen kosteaa materiaalia saatiin 678 mg, jonka aktiivi-5 suus oli 279 ky/g, mitattuna Autotitratorlaitteella 37°C:ssa pH:ssa 7,8 penisilliinihapon kaliumsuola substr-raattina. Kuivapainon mukaan laskettuna vastaava luku oli 916 ky/g. Lähtöaktiivisuus ja pesuveden aktiivisuus huomioon ottaen oli sitoutumissaanto ( = aktiivisuus kantajal-10 la/syötetty aktiivisuus) 69 %.*')-arvo oli 0,82 (*) = havaittu aktiivisuus/syötetty aktiivisuus miinus pesuveden aktiivisuus).
Esimerkki 15
Esimerkin 2 mukaisesti valmistettuun kantajaan 15 (0,2 g) lisättiin 1000 ,ul trypsiiniliuosta (6,25 mg/ml, -2 345 ky/ml), joka oli 1,6 x 10 M bentsamidiinin ja 1 M kaliumfosfaatin (puskuri) suhteen, ja jonka pH oli 7,8.
72 h kestäneen kiinnityksen jälkeen helmet pestiin perusteellisesti 1 M NaCl-liuoksella ja puskuriliuoksella.
20 Imusuodatuksen jälkeen saatiin 589 mg kosteita helmiä, joiden aktiivisuus oli 385 ky/g mitattuna Autotitratorlaitteella 37°C:ssa pH:n ollessa 8,1 käyttäen substraattina N'bent soyy1i-L-argini inietyy1ies terihydroklor idia (BAEE). Kuivapainon mukaan laskettuna aktiivisuus oli 25 1429 ky/g. Lähtö- ja pesuveden aktiivisuudet huomioon ottaen saatiin sitoutumissaannoksi 60 %.*}-arvo oli 0,61.
Esimerkki 16
Esimerkin 2 mukaisesti valmistettuun kantajaan (0,2 g) lisättiin 1000 ^ul ureaasiliuosta (30 mg/ml, 30 45,5 ky/ml), joka oli 1 M kaliumfosfaatin (puskuri) suh teen, ja jonka pH oli 8,0. 72 h kestäneen kiinnityksen jälkeen helmet pestiin perusteellisesti 1 M NaCl-liuoksel-la ja puskuriliuoksella. Saatiin 561 mg imusuodatuksen jälkeen kosteita helmiä, joiden aktiivisuus oli 47 ky/g 35 mitattuna Autotitratorilla 30°C:ssa pH 6,l:ssä urea 73229 28 substraattina. Kuivapainon mukaan laskettuna aktiivisuus oli 132 ky/g. Lähtöaktiivisuus ja pesuveden aktiivisuus huomioon ottaen oli sitoutumissaanto 83 %. -arvo oli 0,87.
5 Esimerkki 17
Esimerkin 2 mukaisesti valmistettuun kantajaan (0,2 g) lisättiin 1000 ^ul penisilliiniasylaasiliuosta (25 mg/ml, 243 ky/ml), joka oli 1 M kaliumfosfaatin (puskuri) suhteen, ja jonka pH oli 8,0. 72 h kestäneen 10 kiinnityksen jälkeen helmet pestiin perusteeellisesti 1 M NaCl-liuoksella ja puskuriliuoksella. Saatiin 597 mg imusuodatuksen jälkeen kosteita helmiä, joiden aktiivisuus oli 356 ky/g mitattuna Autotitratorilla 37°C:ssa pH 7,8:ssa penisi11iinihapon kaliumsuola substraattina.
15 Kuivapainon mukaan lasketun aktiivisuus oli 1063 ky/g.
Sitoutumissaanto oli 88 %, 'J)-arvo oli 0,90.
Esimerkki 18
Esimerkin 11 mukaisesti valmistettuun kantajaan (0,2 g) lisättiin 900 ^ul penisilliiniasylaasiliuosta 20 (25 mg/ml, 280 ky/ml), joka oli 1 M kaliumfosfaatin (puskuri) suhteen, ja jonka pH oli 8,0. 72 h kestäneen kiinnityksen jälkeen helmet pestiin perusteellisesti 1 M NaCl-liuoksella ja puskuriliuoksella. Saatiin 665 mg imusuodatuksen jälkeen kosteata materiaalia, jonka aktii-25 visuus oli 250 ky/g mitattuna Autotitratorilla 37°C:ssa pH:n ollessa 7,8 ja käyttäen penisilliinihapon kalium-suolaa substraattina.
Kuivapainon mukaan laskettuna oli aktiivisuus 831 ky/g. Lähtöaktiivisuus ja pesuveden aktiivisuus huo-30 mioon ottaen saatiin sitoutumissaannoksi ( = aktiivisuus kantajalla/syötetty aktiivisuus) 67 %. -arvo oli 0,68.
Esimerkki 19
Esimerkin 12 mukaisesti valmistettuun kantajaan (0,2 g) lisättiin 700 ^ul trypsiiniliuosta (6,25 mg/ml, 35 440 ky/ml), joka oli 1,6 x 10 ^ M bentsamidiinin suhteen 29 73229 ja 1 M kaliumfosfaatin (puskuri) suhteen, ja jonka pH oli 7,8. 72 h kestäneen kiinnityksen jälkeen helmet pestiin huolellisesti 1 M NaCl-liuoksella ja puskuriliuoksella. Saatiin 657 mg imusuodatuksen jälkeen kosteata materiaa-5 lia, jonka aktiivisuus oli 460 ky/g mitattuna Autotitra-tor-laitteella 37°C:ssa pH:n ollessa 8,1 ja käyttäen N'-bentsoyyli-L-arginiinietyyliesterihydrokloridia (BAEE) substraattina. Kuivapainon mukaan laskettuna aktiivisuus oli 1200 ky/g. Lähtöaktiivisuus ja pesuveden aktiivisuus 10 huomioon ottaen saatiin sitoutumissaannoksi 80 %. η -arvo oli 0,9.
Esimerkki 20
Esimerkin 13 mukaisesti valmistettuun kantajaan (0,2 g) lisättiin 1000 ^ul penisilliiniliuosta (25 mg/ml, 15 293 ky/ml), joka oli 1 M kaliumfosfaatin (puskuri) suh teen ja jonka pH oli 8,0. 72 h kestäneen kiinnityksen jälkeen helmet pestiin perusteellisesti 1 M NaCl-liuok-sella ja puskuriliuoksella. Saatiin 661 mg imusuodatuk-sen jälkeen kosteaa materiaalia, jonka aktiivisuus oli 20 310 ky/g mitattuna Autotitrator-laitteella 37°C:ssa pH:n ollessa 7,8 käyttäen penisilliinihapon kaliumsuolaa substraattina. Kuivapainon mukaan laskettuna oli aktiivisuus 1025 ky/g. Sitoutumissaanto oli 70 %. -arvo oli 0,95.

Claims (11)

73229
1. Polymeraatti, joka koostuu pääosin yksiköistä, jotka ovat lähtöisin monomeereista, joilla on kaava (I) 5 X CH =C-C-NH-R-Y (I) ~ Il o 10 jossa X on vety tai metyyli, R on alifaattinen C^_^2-^ii-livetyryhmä, edullisesti C^_g-hiilivetyryhmä ja varsinkin metyleeni, ja Y on OH tai NH2» edullisesti OH, jolloin vähintään osa ryhmistä Y on reagoinut välihaarayhdisteen (spacer) kanssa, sekä yksiköistä, jotka ovat lähtöisin 15 vähintään yhdestä muusta monomeerista, joka on kaavan (I) mukaisten monomeerien kanssa kopolymeroituva ja kuuluu hydrofiilisiä radikaaleja sisältävien monomeerien ryhmään ja on edullisesti N-vinyylipyrrolidoni, (met)akryyliamidi, (met)akryylihapon alkyyli- tai hydroksialkyyliesteri, jon-20 ka alkyyliryhmässä on 2-6 hiiliatomia, N-vinyyli-N-alkyyli-asetamidi, jonka alkyyliryhmässä on 1-4 hiiliatomia, tai vinyyliasetaatti tai vinyleenikarbonaatti hydrolysoituina polymeraatin muodostuksen jälkeen, sekä mahdollisesti vähintään yhdestä silloittavasta monomeeristä, joka on ryh-25 mästä, jonka muodostavat N,N'-alkyleenibis-(met)akryyliamidi, jonka alkyleeniosassa on enintään 12, edullisesti enintään 6 hiiliatomia, glyoksaalibisakryyliamidi, trisakry-loyyliperhydrotriatsiini, N,N'-divinyylietyleeni- ja -pro-pyleeniurea, jolloin polymeraattihiukkasten keskimääräinen 30 hiukkaskoko on 20-800 pm, tunnettu siitä, että poly-meraattihiukkaset ovat pääosin pallomaisia muodoltaan ja niiden keskimääräinen huokosläpimitta on 5-2000 nm.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen polymeraatti, tunnettu siitä, että keskimääräinen huokosläpimitta 35 on 10-1000 nm.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen polymeraatti, tunnettu siitä, että välihaarayhdiste tuo poly- 73229 meraattiin epoksidiryhmiä, joiden määrä on 0,1-20 mol-% polymeerin kokonaismäärästä laskettuna.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen poly-meraatti, tunnettu siitä, että se koostuu pääosin 5 10-80 mol-%:sta yksiköitä, jotka ovat lähtöisin kaavan (I) mukaisista monomeereista, 20-50 mol-%:sta yksiköitä, jotka ovat lähtöisin hydrofiilisiä ryhmiä sisältävistä monomeereista, ja 1-50 mol-%:sta yksiköitä,jotka ovat lähtöisin silloittavia ryhmiä sisältävistä monomeereista.
5. Menetelmä jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukai sen polymeraatin valmistamiseksi polymeroimalla yhdisteitä, joilla on kaava (TT, X
15 CH =C-C-NH-R-Y (I), Il o jossa X, R ja Y ovat patenttivaatimuksessa 1 määritellyt, vähintään yhden muun, niiden kanssa kopolymeroituvan mono-20 meerin kanssa, joka kuuluu hydrofiilisiä radikaaleja sisältävien monomeerien ryhmään ja on edullisesti N-vinyylipyr-rolidoni, (met)akryyliamidi, (met)akryylihapon alkyyli- tai hydroksialkyyliesteri, jonka alkyyliryhmässä on 2-6 hiili-atomia, N-vinyyli-N-alkyyliasetamidi, jonka alkyyliryhmässä 25 on 1-4 hiiliatomia, tai vinyyliasetaatti tai vinyleenikar-bonaatti hydrolysoituina polymeraatin muodostuksen jälkeen, sekä mahdollisesti vähintään yhdestä silloittavasta mono-meeristä, joka on ryhmästä, jonka muodostavat N,N'-alkylee-nibis-(met)akryyliamidi, jonka alkyleeniosassa on enintään 30 12, edullisesti enintään 6 hiiliatomia, glyoksaaalibisakryy- liamidi, trisakryloyyliperhydrotriatsiini, N,N'-divinyyli-etyleeni- ja -propyleeniurea jolloin polymerointi tehdään nestemäisessä dispergointiaineessa, joka on Cg_2Q-hiilivety tai ohut parafiiniöljy ja joka ei polymerointiolosuhteissa 35 liuota monomeereja eikä polymeraattia, radikaalimekanismil-la vaikuttavan initiaattorin ja dispersion stabiloijan läs- 73229 näollessa, tunnettu siitä, että dispersion stabi-loijana käytetään maleiinihappoanhydridin ja vinyylial-kyylieetterin, jonka alkyyliryhmä sisältää 6-30 C-atomia, tai vinyyliesterin, jonka karboksyylihapporyhmä sisältää 5 6-30 C-atomia, tai pitkäketjuisen o<-olefiinin, joka sisäl tää 8-30 C-atomia, vuorottelevaa kopolymeraattia.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että dispersion stabiloijaa käytetään 0,005-10 p-% monomeeriseoksen määrästä laskettuna.
7. Patenttivaatimuksen 5 tai 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että dispersion stabiloijana käytettävän kopolymeraatin RSV-arvo on 0,01-1,0 dl/g (mitattuna 0,6 % liuokselle tolueenissa lämpötilassa 25°C).
8. Jonkin patenttivaatimuksen 5-7 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että vinyylialkyylieetteri on vi- nyylistearyylieetteri ja pitkäketjuinen ^-olefiini on 1-oktadekeeni.
9. Jonkin patenttivaatimuksen 5-8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että polymerointisysteemi sisältää 20 helmipolymeraatin huokoisuuden lisäämiseksi ainetta, joka liukenee hyvin monomeereihin tai on niiden kanssa sekoittuva, mutta on dispergointiaineeseen käytännöllisesti katsoen liukenematon.
10. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukaisen polyme-25 raatin käyttö, tunnettu siitä, että polymeraattia käytetään, edullisesti välihaarayhdisteen kanssa tapahtuneen reaktion jälkeen, kantajalle sidottujen, biologisesti aktiivisten aineiden valmistukseen.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen käyttö, t u n -30 n e t t u siitä, että biologisesti aktiiviset aineet ovat entsyymejä. 7 700Q
FI842078A 1983-05-28 1984-05-24 Makroporoesa paerlpolymerisat, foerfarandet foer deras framstaellning och deras anvaendning. FI73229C (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3319506 1983-05-28
DE3319506 1983-05-28
DE3404021 1984-02-06
DE19843404021 DE3404021A1 (de) 1983-05-28 1984-02-06 Makroporoese perlpolymerisate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI842078A0 FI842078A0 (fi) 1984-05-24
FI842078A FI842078A (fi) 1984-11-29
FI73229B FI73229B (fi) 1987-05-29
FI73229C true FI73229C (fi) 1987-09-10

Family

ID=25811132

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI842078A FI73229C (fi) 1983-05-28 1984-05-24 Makroporoesa paerlpolymerisat, foerfarandet foer deras framstaellning och deras anvaendning.

Country Status (17)

Country Link
US (1) US4568706A (fi)
EP (1) EP0129719B1 (fi)
AT (1) ATE38678T1 (fi)
AU (1) AU564409B2 (fi)
BR (1) BR8402533A (fi)
CA (1) CA1251890A (fi)
DE (2) DE3404021A1 (fi)
DK (1) DK261084A (fi)
ES (1) ES8502133A1 (fi)
FI (1) FI73229C (fi)
GR (1) GR81579B (fi)
HU (1) HUT36151A (fi)
IL (1) IL71946A (fi)
NO (1) NO842097L (fi)
NZ (1) NZ208287A (fi)
PH (1) PH22516A (fi)
PT (1) PT78643B (fi)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3344912A1 (de) * 1983-12-13 1985-06-20 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Vernetzte polymerisate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung
DE3413904A1 (de) * 1984-04-13 1985-10-24 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Polymerisate auf basis von polyvinylencarbonat und/oder polyhydroxymethylen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung
DE3521684A1 (de) * 1985-06-18 1986-12-18 Dr. Müller-Lierheim KG, Biologische Laboratorien, 8033 Planegg Verfahren zur beschichtung von polymeren
EP0205790B1 (de) * 1985-06-18 1992-01-08 Anawa München Aktiengesellschaft Biologische Laboratorien Träger für die Kultivierung von menschlichen und/oder tierischen Zellen in einem Fermenter
US4691026A (en) * 1985-07-30 1987-09-01 Air Products And Chemicals, Inc. Self- and hydroxyl reactive formaldehyde-free cyclic hemiamidal and hemiamide ketal crosslinking monomers
US4788288A (en) * 1985-07-30 1988-11-29 Air Products And Chemicals, Inc. Self-and Hydroxyl reactive formaldehyde-free cyclic hemiamidal and hemiamide ketal crosslinking monomers
US4663410A (en) * 1985-08-06 1987-05-05 Air Products And Chemicals, Inc. Polymers of self- and hydroxyl reactive formaldehyde-free cyclic hemiamidal and hemiamide ketal crosslinking monomers
GB8521192D0 (en) * 1985-08-23 1985-10-02 Courtaulds Plc Polymeric carrier materials
DE3537259A1 (de) * 1985-10-19 1987-04-23 Hoechst Ag Copolymerisat, verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung als enzymtraeger
US4745025A (en) * 1986-02-19 1988-05-17 Air Products And Chemicals, Inc. Nonwoven products bonded with binder emulsions of vinyl acetate/ethylene copolymers having improved solvent resistance
US4698384A (en) * 1986-02-19 1987-10-06 Air Products And Chemicals, Inc. Nonwoven binder emulsions of vinyl acetate/ethylene copolymers having improved solvent resistance
DE3629176A1 (de) * 1986-08-28 1988-03-17 Hoechst Ag Vernetzte polymerisate mit carbonatestergruppen und verfahren zu ihrer herstellung
CA2013023A1 (en) * 1989-04-17 1990-10-17 Milan F. Sojka Method of making highly adsorptive copolymers
US5100477A (en) * 1989-05-15 1992-03-31 Dow Corning Corporation Decontamination of toxic chemical agents
JPH0383914A (ja) * 1989-08-18 1991-04-09 W R Grace & Co ドラッグキャリアー
TW198064B (fi) * 1990-12-24 1993-01-11 Hoechst Ag
CN1039017C (zh) * 1992-07-11 1998-07-08 南开大学 大孔聚丙烯酰胺系列树脂的合成方法
US6228340B1 (en) 1997-08-25 2001-05-08 The Regents Of The University Of California Method for the production of macroporous ceramics
DE19804518C2 (de) * 1998-02-05 2000-10-05 Roehm Gmbh Verfahren zur Herstellung von perlförmigen Mischpolymerisaten auf Acrylatbasis, danach hergestellte Trägerpolymermaterialien und deren Verwendung
US6464850B1 (en) * 1998-07-31 2002-10-15 Biowhittaker Molecular Applications, Inc. Method for producing hydrophilic monomers and uses thereof
SE0201623D0 (sv) * 2002-05-30 2002-05-30 Amersham Biosciences Ab Macroporous cross-linked polymer particles
KR101115903B1 (ko) * 2003-04-16 2012-02-13 세키스이가가쿠 고교가부시키가이샤 자성체 내포 입자 및 그의 제조 방법, 면역 측정용 입자,및 면역 측정 방법
US7276283B2 (en) * 2004-03-24 2007-10-02 Wisconsin Alumni Research Foundation Plasma-enhanced functionalization of carbon-containing substrates
US8029902B2 (en) * 2006-12-11 2011-10-04 Wisconsin Alumni Research Foundation Plasma-enhanced functionalization of substrate surfaces with quaternary ammonium and quaternary phosphonium groups
JP2022539240A (ja) * 2019-07-03 2022-09-07 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗体薬物コンジュゲートの精製

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3594333A (en) * 1967-07-26 1971-07-20 Univ California Formylated aromatic polymers and method of making same
DE1795235C3 (de) * 1968-08-27 1974-06-06 Pharmacia Fine Chemicals Ab, Uppsala (Schweden) Trennmittel zur Gelfiltration
DE2237316C3 (de) * 1972-07-29 1985-08-29 Roehm Gmbh, 6100 Darmstadt Verfahren zur Herstellung perlförmiger, vernetzter, wasserunlöslicher Mischpolymerisate und ihre Verwendung
JPS52137482A (en) * 1976-05-14 1977-11-16 Kyoritsu Yuki Kogyo Kenkyusho:Kk Preparation of acrylamide polymer
DE2722751C2 (de) * 1977-05-20 1990-06-21 Röhm GmbH, 6100 Darmstadt Perlpolymerisat mit einem Teilchendurchmesser von 5 bis 1000 &mu;m und innerem Hohlraum
JPS54160300A (en) * 1978-06-08 1979-12-18 Toyo Soda Mfg Co Ltd Hydrophilic separating carrier and making method thereof
US4266610A (en) * 1978-11-28 1981-05-12 Phillips Petroleum Company Sulfonate-cosurfactant mixtures for use in hard brines during oil recovery operations

Also Published As

Publication number Publication date
DE3404021A1 (de) 1984-11-29
PH22516A (en) 1988-09-12
HUT36151A (en) 1985-08-28
EP0129719A2 (de) 1985-01-02
FI842078A0 (fi) 1984-05-24
IL71946A0 (en) 1984-09-30
FI73229B (fi) 1987-05-29
ATE38678T1 (de) 1988-12-15
DK261084D0 (da) 1984-05-25
NO842097L (no) 1984-11-29
AU564409B2 (en) 1987-08-13
CA1251890A (en) 1989-03-28
GR81579B (fi) 1984-12-11
NZ208287A (en) 1986-10-08
EP0129719B1 (de) 1988-11-17
ES532831A0 (es) 1985-01-01
IL71946A (en) 1987-11-30
FI842078A (fi) 1984-11-29
AU2877084A (en) 1984-11-29
US4568706A (en) 1986-02-04
DE3475199D1 (en) 1988-12-22
EP0129719A3 (en) 1986-02-12
ES8502133A1 (es) 1985-01-01
BR8402533A (pt) 1985-04-02
PT78643A (de) 1984-06-01
DK261084A (da) 1984-11-29
PT78643B (de) 1986-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI73229C (fi) Makroporoesa paerlpolymerisat, foerfarandet foer deras framstaellning och deras anvaendning.
EP0354909B1 (en) Variable crosslinked polymeric supports
EP0296926B1 (fr) Polymères composites, leur préparation et leur utilisation en chromatographie liquide
FI85028C (fi) Foernaetade polymer, foerfarande foer deras framstaellning och deras anvaendning.
FR2482112A1 (fr) Nouveaux copolymeres hydrophiles a base de n-(tris (hydroxymethyl) methyl) acrylamide, procedes pour leur preparation, gels aqueux desdits copolymeres et leur utilisation comme echangeurs d&#39;ions
FI72985B (fi) Vinylenkarbonatpolymer, foerfarande foer dess framstaellning, och dess anvaendning.
JP5681166B2 (ja) 疎水性モノマー、疎水的に誘導体化された支持体、並びにその製造及び使用方法
EP0012751A1 (en) PRODUCTION OF CARRIERS ACTIVATED WITH TRICHLOR-S-TRIAZINE.
US7011963B1 (en) Process for synthesis of bead-shaped cross-linked hydrophilic support polymer
US4931476A (en) Crosslinked polymers and a process for their preparation
US4767620A (en) Crosslinked polymers with carbonate ester groups, and a process for their preparation
JP2008530280A (ja) マクロ孔質プラスチックパール材料
JPS59232101A (ja) 巨孔性ビ−ズ重合体およびその製造方法
Ding et al. New supports for enzyme immobilization based on copolymers of vinylene carbonate and acrylamide
EP0216499A2 (en) Polymeric carrier materials
JPS62151752A (ja) クロマトグラフイ−用担体及びその製造方法
CZ20002843A3 (cs) Opatření k přípravě nosičových polymerních materiálů ve formě porézních polymerních perliček
MXPA00007605A (es) Aparato para sintesis de materiales de soporte de polimero en la forma de perlas de polimero poroso

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed

Owner name: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT