FI62617B - Djurfodermedel - Google Patents

Description

U ifyfr-T’l Γβΐ mi KUULUTUSJULKAISU cn £Λ Π W|| W <11>UTLÄGGNINGSSKIUFT 62617 ^ v“'-^ (51) Kv.nJ/inta.3 A 2$ K 1/16 SUOMI—FINLAND (21) pM«*ttn»k*«M*-p«t«eMeicninf 770708 (22) H*k*mlip«ivt —An*ekn1ni*dk| öU.03.77 * (23) Alkupilvt —GIWjh*od»f 0L.03.77 (41) Tulkit |ulklMkal — Bllvlt off*ntH| 09.09.77

Patentti. ]a rekisteri hallitut NlhtMWp™ ,. tartj.lteta., ptm. -

Patent och rafitterttyralaan ' ' AmMcm uttagd och utl.ikrifwn publlcurad 29.10.82 (32)(33)(31) Pyydetty «tuotteut—te**rd priority 08.03.76

Ruotsi-Sverige(SE) 7603075“8 (71) Astra-Evos AB, Fack, S-151 20 Södertälje, Ruotsi-Sverige(SE) (72) Karl Erik Lennart Björck, Uppsala, Ruotsi-Sverige(SE) (7U) Berggren Oy Ab (5U) Eläinrehuaine - Djurfodermedel Tämä keksintö kohdistuu eläinrehuaineeseen, joka sisältää bak-teerinvastaisen järjestelmän, jolla on bakteerinvastainen vaikutus maha-suoliseudulla.

On tunnettua, että kotieläinkarja, erityisesti nuoret eläimet, ovat alttiina vakaville maha-suoli-infektioille, jotka pääasiallisesti johtuvat E.coli'n ja erilaisten Salmonella-lajien aiheuttamista infektioista. Ennestään tunnetut menetelmät näiden infektioiden eliminoimiseksi ovat siten käsittäneet joko antibioottien terapeuttisen määrän antamisen sillä uhalla, että muodostuu antibioottiselle aineelle resistenttejä bakteerila-jeja, tai karjan rokottamisen, mikä johtaa korkeisiin kustannuksiin sillä rokotteet ja rokotukset ovat suhteellisen kalliit. Muuan toinen kemoterapeuttisesti aktiivinen aine, jota on käytetty on mm. trimetoprimsulfa.

Nyt on yllättäen havaittu mahdolliseksi välttää nämä viimeksimainitut haitat ja ehkäistä ja/tai eliminoida tällaisia bakteeritartuntoja esillä olevalla eläinrehuaineella, joka sisältää sinänsä tunnettuja ravinto- ja rehuaineita sekä bakteerinvastai- 2 6261 7 sen järjestelmän, joka aktivoituu mahasuolikanavassa, ja jolle on tunnusomaista, että bakteerinvastainen järjestelmä sisältää laktoperoksidaasia ainakin 1 mg/kg rehuainetta (50 U/kg rehuai-netta), tiosyanaattia ainakin 16 ppm laskettuna natriumtiosyanaat-tina sekä peroksidia luovuttavaa, kiinteätä vesiliukoista ainetta, joka on alkalimetalliperkarbonaatti, maa-alkalimetalli-peroksidi tai karbamidiperoksidi, ainakin 21 ppm laskettuna natriumperkarbonaattina.

Keksinnön erään suositun suoritusmuodon mukaan lisätään tiosyanaattia ainakin 16 ppm ravintoaineesta laskettuna NaSCN:ksi, kiinteää vesiliukoista peroksidia luovuttavaa ainetta lisätään ainakin 21 ppm ravintoaineesta natriumperkarbonaattina laskettuna ja laktoperoksidaasia lisätään ainakin 1 mg/kg ravintoaineesta, jolloin laktoperoksidaasia lisätään puhdistetussa muodossa ja/tai laktoperoksidaasia sisältävän maitotuotteen muodossa ja jolloin peroksidia luovuttavan aineen ja tiosyanaatin välinen mo-laarinen suhde on pienempi kuin 4, edullisesti 1-2.

Eräässä suositussa suoritusmuodossa lisätään tiosyanaattia 160-3500, edullisesti 160-1750 ppm/kg ravintoainetta laskettuna NaSCN: ksi, peroksidia luovuttavaa ainetta määrässä 210-4000, edullisesti 210-2000 ppm/kg ravintoainetta natriumperkarbonaattina laskettuna ja laktoperoksidaasia 10-200, edullisesti 10-100 mg/kg.

Aktiivisten ainesosien yllä mainittuja määriä annetaan niin, että tiosyanaattia lisätään niin paljon, että sen pitoisuus ruuansula-tusseudulla on ainakin 0,1 mM, kiinteää vesiliukoista peroksidia luovuttavaa ainetta niin paljon, että sen pitoisuus ruuansulatus-seudulla H2°2:tena ilmaistuna on ainakin 0,1 mM ja laktoperoksidaasia puhdistetussa muodossa ja/tai laktoperoksidaasia sisältävän maitotuotteen muodossa niin paljon, että sen pitoisuus ruuansula-tusseudulla on ainakin 1 mg/1.

Vesiliukoinen peroksidinluovuttaja on edullisesti natriumperkarbo-naatti, joka on päällystetty suojakerroksella, joka liukenee suolistossa ja joka kerros edullisesti on selluloosa-asetaattifta-laattia.

Eläimet, joille rehuainetta tavallisesti annetaan, ovat sikoja,vasikoita ja siipikarjaa sekä turkistarhaeläimiä kuten minkkejä ja kettuja. Lemmikkieläimiä kuten kissoja ja koiria voidaan myös hoitaa.

3 6261 7

Tiosyanaatin määrä valitaan niin, että sen pitoisuudeksi saadaan ainakin 0,1, edullisesti 0,2-0,4 mM, jolloin 0,5-1,0 mM:n pitoisuudet voivat olla käyttökelpoisia määrätyissä tapauksissa ruuan-sulatusseudulla, jolloin pitoisuus ei saa ylittää myrkyllisiä pitoisuuksia (10 mM). Peroksidia luovuttavan aineen määrä valitaan niin, että saadaan ekvimolaarinen määrä H2°2:ta' so. niin että muodostuneen H202:n pitoisuus yltää ainakin 0,1, edullisesti 0,2-0,4 mM:ään. Vetyperoksidin pitoisuuden on kussakin tapauksessa oltava alle 4 kertaa tiosyanaatin pitoisuuden. Laktoperoksidaasin määrä riippuu entsyymin aktiviteetista, mutta olettaen, että 1 mg sisältää 50 yksikköä (U), on ainakin 1 mg entsyymiä oltava läsnä mahanesteen litraa kohti.

Liuoksessa tiosyanaatin pitoisuus on siten ainakin 0,1 mM, edullisesti 0,2-0,4 mM, peroksidia luovuttavan aineen pitoisuus on sellainen, että vetyperoksidin pitoisuus on 0,1 mM, edullisesti 0,2-0,4 mM ja laktoperoksidaasin pitoisuus on 1 mg/1 (50 U/l). Jälkimmäinen voi myös vaihdella mutta sen on oltava 1-2 mg/1 (50-100 U/l).

Yksi laktoperoksidaasiyksikkö on se määrä laktoperoksidaasia, joka muodostaa 1 mg pyrogalliinia pyrogallolista 80 sekunnissa pH-arvos-sa 6,0 ja 20°C:ssa.

Laktoperoksidaasin määrä nautaherassa (pastöroimaton) tai ultra-suodatetussa herassa voi luonnollisesti vaihdella. Naudan maito sisältää kirjallisuuden mukaan laktoperoksidaasia noin 30 mg/1, kun taas laktoperoksidaasin määrä ihmisen maidossa kirjallisuuden mukaan on 1/30 naudan maidosta. Laktoperoksidaasia löytyy myös muista naudan maitotuotteista kuten kuoritun maidon jauheesta, jota yhtä hyvin voidaan käyttää.

Käyttökelpoisia tiosyanaattisuoloja ovat natrium-, kalium- ja ammo-niumsuolat. Tiosyanaatin LDjQ-arvo on 484 mg/kg ruumiin painosta ruiskutettuna laskimonsisäisesti hiiriin ja 764 mg/kg ruumiin painosta rotille suun kautta annettaessa.

Kliinisessä käytössä keksinnön mukaisia yhdisteitä annetaan tavallisesti suun kautta tai peräsuoleen farmaseuttisena valmisteena, joka sisältää keksinnön mukaista bakteerinvastaista järjestelmää yhdessä farmaseuttisen kantajan kanssa.

Keksintöä selostetaan alla lähemmin esimerkkien avulla.

Esimerkki 1

Maidon korvike valmistettiin seuraavista ainesosista: 4 6261 7 2 kg ultrasuodatettua herajauhetta (500 mg laktoperoksidaasia/kg) 66 kg herajauhetta 8 kg rasvaa 20 kg eläinproteiinia 4 kg vitamiineja, mineraaleja 100 kg 21 g natriumperkarbonaattia 16 g natriumtiosynaattia.

Ainekset sekoitettiin perusteellisesti sekoittimessa. Käytettäessä lisätään vettä kuivaseokseen, kunnes saadaan 10 %:nen vesiliuos (10 %:nen kuivaseos). Tällaista maidon korvikeliuosta annetaan tavallisesti 4 litraa päivää ja vasikkaa kohti (= 400 g kuivatuotetta päivää kohti).

Natriumperkarbonaatin määrä voi vaihdella tällaisessa maidon korvikkeessa välillä 210-420 ppm ja tiosyanaatin määrä voi vaihdella välillä 160-320 ppm, jolloin natriumperkarbonaatti:NaSCN = 21:16.

Esimerkki 2

Lisärehu porsaille valmistettiin seuraavista ainesosista: 66.0 kg rehujauhoa (höyrykäsitelty ohra) 2+ 10.0 kg rautasuoloja (Fe -suoloja) 3,5 kg vitamiineja (vitamiineja A, D, E ja C) 0,5 kg hivenaineita (Cu, Co, J, Mn, Zn) 20.0 kg ultrasuodatettua herajauhetta (500 mg LP/kg) 100,0 kg ja 210 g natriumperkarbonaattia 160 g natriumtiosyanaattia

Ainekset sekoitettiin huolellisesti sekoittimessa. Rehu annettiin kuivassa muodossa suoraan lattialta porsaille, joiden ikä oli kahdesta päivästä 28 päivään. Tällaisen rehun päiväannos on noin 5 g sikaa kohti, jolloin määrä kussakin ruokintatapahtumassa on noin 0,5 g porasta kohti. Natriumperkarbonaatin määrä voi vaihdella tällaisessa rehussa välillä 2100-4200 ppm ja natriumtiosyanaatin vä- 5 6261 7

Iillä 1600-3200 ppm, jolloin suhde natriumperkarbonaatti: NaSCN = 21:16.

Esimerkki 3

Seuraavista aineksista valmistettiin rehua porsaille. Rehua on tarkoitus käyttää, kun emäsian maitoa ei ole käsillä tai harkitaan hyvin aikaista vieroitusta.

60.0 kg kuorittua maitojauhetta 3.5 kg ultrasuodatettua herajauhetta (500 mg LP/kg) 15.0 kg viljaa (jauhettuja, höyryllä käsiteltyjä kauroja ja/tai ohraa) 5.0 kg rasvaa 3.0 kg hydrolysoitua maissitärkkelystä 2.5 kg raakasokeria 6.0 kg glukoosia 5.0 kg vitamiineja ja mineraaleja 100.0 kg ja 35 g natriumperkarbonaattia 27 g natriumtiosyanaattia

Ainekset sekoitettiin perusteellisesti sekoittimessa. Rehu annettiin kuivassa muodossa porsaille, jolloin rehua annettiin mielin määrin. Päiväsyönti oli noin 30-50 g riippuen porsaan iästä.

Natriumperkarbonaatin määrää voidaan tällöin vaihdella 350-700 ppm ja natriumtiosyanaatin määrää 270-540 ppm, jolloin natriumperkarbonaatti: NaSCN on 21:16.

Esimerkki 4

Vitaminoitu mineraalirehu sioille, kuten emäsioille, valmistettiin seuraavista aineksista.

33.0 kg kalsiums-uolaa 35.0 kg kalsium/fosforisuolaa (CaHPO^ . 2H20) 13.0 kg natriumkloridia 0,4 kg B-vitamiiniseosta

0,4 kg vitamiineja A, C, D ja E

1,2 kg hivenaineseosta (Fe, Zn, Mn, Cu, J) 17.0 kg ultrasuodatettua herajeuhetta (500 mg LP/kg) 100.0 ka 6 - 6261 7 ja 174 g natriumperkarbonaattia 135 g natriumtiosyanaattia.

Mineraalirehun ainekset sekoitettiin perusteellisesti ja laimennettiin sinänsä tunnetuilla vilja- ja proteiinilähteillä. Loppuse-oksessa käytettiin 3 % vitaminoitua mineraalirehua. Vaihtoehtoisesti voidaan vitaminoitua mineraalirehua antaa noin 30-150 g eläintä ja päivää kohti suoraan kaukaloon ilman lisäyksiä. Natriumperkarbonaa-tin määrä voi tällöin vaihdella 1740-3480 ppn ja natriumtiosyanaatin määrä 1350-2700 ppiri, natriumperkarbonaatti: NaSCN ollessa 21:16.

Esimerkki 5

Seuraavista aineksista valmistettiin elektrolyyttiseos: 1,0 kg kaliumkloridia 20.0 kg natriumkloridia 15.0 kg natriumbikarbonaattia 64.0 kg glukoosia 100,0 kg ja 97 g natriumperkarbonaattia 75 g natriumtiosyanaattia 5 g laktoperoksidaasia (50 U/mg).

Perusteellisesti sekoitettua elektrolyyttiseosta käytetään seuraavasti: 25 g siitä liuotetaan 1 litraan vettä ja annetaan porsaalle tai vasikalle noin 10 % ruumiin painosta päivittäin havaittaessa kuivuutta tai kuivuuden ehkäisemiseksi.

Natriumperkarbonaatin määrä voi vaihdella 970-1940 ppm ja natriumtiosyanaatin määrä 750-1500 ppm, jolloin natriumperkarbonaatin määrä natriumtiosyanaattimäärään nähden on 21:16.

Esimerkeissä 1-5 käytettyjä natriumperkarbonaatteja suojattiin liian aikaiselta reaktiolta siten, että niiden granulaatit päällystettiin vasta suolikanavassa liukenevalla polymeerikerroksella. Tällaisia polymeerejä ovat vahat, selluloosa-asetaattiftalaatti, sekä sen kaltaiset suolikanavassa liukenevat polymeerit. Voidaan edelleen käyttää kaksoiskerrosta, jos ennen antamista tapahtuvan liettymisen tulisi antaa alkalinen ympäristö.

6261 7 7

Biologinen vaikutus

Neljä 10 ml heraa sisältävää koeputkea, joissa oli 21 ppm (0,25 mM) natriumtiosyanaattia haudutettiin 30°C:ssa, joka hera oli ympätty Ps. fluoresenssilla EF 1998. Yksi putkista oli kontrollina. Kolmeen muuhun koeputkeen lisättiin natriumperkarbonaattia määrässä, joka vastasi 0,1, 0,2 ja 0,3 mM H202· Bakteerien määrä määritettiin ympättäessä ja 2 tuntia ymppäyksen jälkeen. Laktoperoksidaasia oli läsnä 5 ^ug/ml. Tulokset on annettu alla olevassa taulukossa 1.

Taulukko 1

Natriumperkarbonaattia Bakteerien lukumäärä/ml määrässä, joka vastaa mM H2C>2 0 tuntia 2 tuntia

Kontrolli (0,0 mM) 2,1 · 106 2,1 * 106 0,1 mM 2,1 · 106 1,8 · 105 0,2 mM 2,1 · 106 2,8 · 103 0,3 mM 2,1 · 106 2,6 · 103

Kuten tästä nähdään saatiin voimakas parannus bakteerinvastaisessa vaikutuksessa, kun 0,2 mM H202 tai enemmän on läsnä. Jo 0,1 mM:n H2C>2 lisäys antaa kuitenkin voimakkaan bakteereja tappavan vaikutuksen .

Ps. fluoresenssia EF 1998 haudutettiin +30°C:ssa kahdessa koeputkessa 1) ja 2), jolloin putki 1) sisälsi 1 g kaupallista maidon korviketta, jossa oli 15 % ultrasuodatettua herajauhetta, 57 % herajauhetta, 8 % rasvaa, 16 % eläinproteiinia ja 4 % vitamiineja sekä mineraaleja 10 ml:ssa vettä, jolloin se sisälsi 50 ^ug lakto-peroksidaaseja ja 27,5 ppm natriumperkarbonaattia lisättiin siihen ja jolloin putki 2) sisälsi saman määrän maidon korviketta (50 ^ug laktoperoksidaasia) ja jolloin 21 ppm natriumtiosyanaattia ja 27,5 ppm natriumperkarbonaattia lisättiin.

Bakteerien lukumäärä koeputkissa on annettu alla olevassa taulukossa 2, jossa on annettu tulokset 0, 2, 4 ja 6 tunnin jälkeen.

Taulukko 2 Näyte 0246 tuntia

Koeputki 1 4,5*106 3,5‘106 5,3*106 6,0-106

Koeputki 2 4,5‘106 3,5-105 5,3-104 5,6-103

Kuten taulukosta ilmenee on bakteerien lukumäärä putkessa 2) 6 8 6261 7 tunnin jälkeen ainoastaan 1/1000 koeputken 1) määrästä samana ajankohtana, jolloin ei mitään tai ainoastaan vähäistä kasvua on tapahtunut koeputkessa 1), mutta sen sijaan on koeputkessa 2) bakteereja kuollut.

Bakteerinvastaisen järjestelmän vaikutusta määritettiin koelasissa. Tällöin erilaisia E.coli-kantoja haudutettiin +37°C:ssa vesiliuoksessa, jossa oli 5 g herajauhetta/100 ml, 21 ppm natriumtiosyanaat-tia ja natriumperkarbonaattia määrässä, joka vastasi 0,25 mM - E.coli'n kuolintulos 2 tunnin jälkeen on annettu alla olevassa taulukossa 3.

Taulukko 3 E. coli-kanta Prosentuaalinen kuolema 0-139 299/66 >99,98 0-149 853/67 >99,98 0-138 355/67 >99,95 0-8 915/66 >99,99 0-147 949/66 >99,99 0-141 220/65 >99,99

Useat yllä testatuista E.coli-kannoista ovat vastustuskykyisiä antibiooteille. Tulokset osoittavat siten järjestelmän korkeaa sovellutusastetta.

Korkeasta sovellutusasteesta on myös osoituksena se, että järjestelmällä on myös vaikutus gram-positiivisiin bakteereihin.

E.coli'n 9703 vastaisessa testissä käytettiin vasikoille tarkoitettua maidon korviketta, jossa oli 45 paino-% kuorittua maitojauhetta (>40 mg LP/kg) , 22,5 paino-% herajauhetta, 12,5 paino-% soijajauhetta, 15,0 paino-% eläinrasvaa, 4,5 paino-% laktoosia ja 0,5 paino-% vitamiineja. Kantaa haudutettiin +37°C:ssa maidon korvikkeen 10 %:sessa vesiliuoksessa, jossa oli 5 ^ug/ml laktoperoksidaasia. Käytettiin kahta eri väkevyyttä natriumtiosyanaattia ja kolmea eri väkevyyttä I^C^ta natriumperkarbonaatin muodossa, kuten alla olevassa taulukossa 4 on esitetty.

9 6261 7

Taulukko 4

Pitoisuus mM:na Bakteerien lukumäärä/ml SCN H2°2 0 tunnin 2 tunnin jälkeen jälkeen 0,25 0 2,5‘106 7,7-107 0,25 0,25 2,5-106 5,3'104 0,50 0 1,8*106 1,0-108 0,50 0,50 1,8-106 1,5-104

Kuten taulukosta 4 ilmenee antaa bakteerinvastainen järjestelmä voimakkaan bakteereja tappavan vaikutuksen molemmissa testatuissa pitoisuuksissa, samalla kun on osoitettu, että SCN ei sinänsä anna mitään vaikutusta, mutta bakteerien kasvu jatkuu, kun mitään perok-sidia luovuttavaa ainetta ei ole läsnä.

Peroksidia luovuttava aine voi myös olla alkalimetallipersulfaatti, joka reaktiossa antaa vetyperoksidia ja sulfaattia.

10 6261 7 Föreliggande uppfinning avser ett djurfodermedel innehällande ett antibakteriellt system, som i magtarmkanalen utövar en antibakte-riell effekt.

Det är tidigare känt att husdjursbesättningar, speciellt unga djur, är utsatta för svära gastrointestinala infektioner som huvudsak-ligen härrör frän infektioner av E. coli och olika Salmonella-arter. Hittills kända sätt att eliminera dessa infektioner är därvid an-tingen att tillföra terapeutisk mängd antibiotika, med ätföljande risk för uppkomsten av antibiotikaresistenta bakteriestammar, eller att vaccinera djurbesättningarna vilket drar höga kostnader eftersom vaccin och vaccinering är förhällandevis dyrt. Ett annat kemotera-peutiskt aktivt medel som använts är bl.a. trimetoprimsulfa.

Det har nu överraskande visat sig möjligt att undvika dessa sist-nämnda nackdelar och att förebygga och/eller eliminera sädana bakte-rieinfektioner genom föreliggande djurfodermedel innehällande i och för sig kända närings- och foderämnen samt ett i magtarmkanalen aktiverbart antibakteriellt system, och som karaktäriseras av att det antibakteriella systemet omfattar laktoperoxidas i en mängd av ätminstone 1 mg/kg fodermedel (50 U/kg fodermedel), ett tiocyanat i en mängd av· ätminstone 16 ppm beräknat som natriumtiocyanat, samt en fast, vattenlöslig peroxiddonator, som är en alkalimetallperkar-bonat, jordalkalimetallperoxid eller karbamidperoxid i en mängd av ätminstone 21 ppm beräknad som natriumperkarbonat.

Enligt en föredragen utföringsform av uppfinningen tillsättes ett tiocyanat i en mängd av ätminstone 16 ppm av näringsmedlet beräknat som NaSCN, en fast vattenlöslig peroxiddonator tillsättes i en mängd av ätminstone 21 ppm av näringsmedlet beräknad som natriumperkarbonat och laktoperoxidas tillsättes i en mängd av ätminstone 1 mg/kg näringsmedel, varvid laktoperoxidasen tillsättes i renad form och/ eller i form av en laktoperoxidasinnehällande mjölkprodukt och varvid det molära förhällandet mellan peroxiddonator och tiocyanat är mindre än 4, företrädesvis 1-2.

Enligt en föredragen utföringsform tillsättes tiocyanat i en mängd av 160-3500, företrädesvis 160-1750 ppm/kg näringsmedel beräknat som NaSCN, peroxiddonatorn i en mängd av 210-4000, företrädesvis 210-2000 ppm/kg näringsmedel beräknad som natriumperkarbonat och laktoperoxidas i en mängd av 10-200, företrädesvis 10-100 mg/kg.

6261 7 11

De ovan nämnda mängderna av de aktiva ingredienserna ges sa, att man tillsätter tiocyanat i sadan mängd att koncentrationen därav i digestionskanalen är ätminstone 0,1 mM, en fast vattenlöslig peroxiddonator i sadan mängd att koncentrationen därav i digestionskanalen uttryckt som är ätminstone 0,1 mM och laktoperoxidas i renad form och/eller i form av en laktoperoxidasinnehällande mjölk-produkt i sadan mängd att koncentrationen därav i digestionskanalen är ätminstone 1 mg/1.

Den vattenlösliga peroxiddonatorn utgöres företrädesvis av natrium-perkarbonat, vilket överdragits med ett i tarmkanalen lösligt skydds-skikt, som företrädesvis utgöres av cellulosaacetatftaiat.

Djuren tili vilka fodermedlet vanligen ges, utgöres av svin, kalvar och fjäderfä samt pälsfarmsdjur, säsom minkar och rävar. Älsklings-djur, säsom katter och hundar kan ocksä behandlas.

Mängden tiocyanat väljes sä att man uppnär en koncentration av ätminstone 0,1, företrädesvis 0,2-0,4 mM, varvid koncentrationer av 0,5-1,0 mM i vissa fall kan vara användbara i digestionskanalen, varvid koncentrationen ej skall överstiga toxiska koncentrationer (10 mM). Mängden peroxiddonator väljes sä att en ekvimolär mängd &2Q2 erhälles, dvs. att koncentrationen av bildad H2O2 uppgär tili ätminstone 0,1, företrädesvis 0,2-0,4 mM. Väteperoxidkoncentrationen bör i vart och ett fall vara mindre än 4 gänger tiocyanatkoncentra-tionen. Laktoperoxidäsmängden är beroende pä enzymets aktivitet men baserat pä ett antagande att 1 mg enzym häller 50 enheter (U), bör minst 1 mg enzym ingä per liter digestionsvätska.

I en lösning är sälunda tiocyanatkoncentrationen ätminstone 0,1 mM, företrädesvis 0,2-0,4 mM, peroxiddonatorkoncentrationen sädan att I^C^-koncentratiönen är 0,1 mM, företrädesvis 0,2-0,4 mM, samt lakto-peroxidaskoncentrationen 1 mg/1 (50 U/l). Den senare kan ocksä varie-ras men bör vara 1-2 mg/1 (50-100 U/l).

En laktoperoxidasenhet är den mängd laktoperoxidas, som bildar 1 mg pyrogallin av pyrogallol under 80 sekunder vid pH-värdet 6,0 och 20°C.

Mängden laktoperoxidas i nötkreaturs vassle (opastöriserad) eller i ultrafiltrerad vassle kan helt naturligt variera. Nötkreaturs mjölk innehäller laktorperoxidas enligt litteraturen i en mängd av ca 62617 30 mg/1, medan mängden laktoperoxidas i människorajölk enligt litte-raturen är 1/30 av den i nötkreaturs mjölk. Laktoperoxidas finns ocksä i andra mjölkprodukter frän nötkreatur, säsom i skummjölks-pulver, som lika väl kan användas.

Användbara salter av tiocyanat är natrium-, kalium- och ammonium-salter. LD^g-värdet för tiocyanat är 484 mg/kg kroppsvikt vid intra-venös injicering i möss och 764 mg/kg kroppsvikt vid oral administre-ring tili rättor.

Vid klinisk användning administreras föreningarna enligt uppfinningen vanligtvis oralt eller rektalt i form av ett farmaceutiskt preparat, som innehäller ett antibakteriellt system enligt uppfinningen i kombination med en farmaceutisk bärare. Uppfinningen beskrivs i det följande närmare med hjälp av exempel.

Exempel 1

Ett mjölkersättningsmedel framställdes frän följande ingredienser: 2 kg ultrafiltrer.at vasslepulver (500 mg laktoperoxidas/kg) 66 kg vasslepulver 8 kg fett 20 kg animaliskt protein 4 kg vitaminer, mineraler 100 kg samt 21 g natriumperkarbonat 16 g natriumtiocyanat.

Ingredienserna blandades omsorgsfullt i en blandare. Vid användning försättes den torra blandningen med vatten tills en 10%-vattenlös-ning erhälles (10 % torrblandning). En sädan lösning av mjölkersättningsmedel ges normalt 4 liter per dag och kalv (= 400 g av den torra produkten per dag).

Mängden natriumperkarbonat kan varieras i en sädan mjölkersättnings-produkt mellan 210-420 ppm och mängden tiocyanat mellan 160-320 ppm, varvid natriumperkarbonat: NaSCN = 21:16.

Exempel 2

Tillskottsfoder för grisar framställdes frän följande ingredienser: 6261 7 13 66.0 kg fodermjöl (ängpreparerad havre) 2+ 10.0 kg järnsalter (Fe -salter) 3.5 kg vitaminer (vit. A, D, E och C) 0,5 kg spärelement (Cu, Co, J, Mn, Zn) 20.0 kg ultrafiltrerat vasslepulver (500 mg LP/kg) 100.0 kg samt 210 g natriumperkarbonat 160 g natriumtiocyanat

Ingredienserna blandades omsorgsfullt i en blandare. Fodret ut-fodrades i torr form direkt pä golvet tili grisarna frän 2 dagars älder tili 28 dagars aider. Dagransonen av ett sädant foder är ca 5 g per gris, varvid mängden vid varje matningstillfälle är ca 0,5 g per gris. Mängden natriumperkarbonat kan varieras i ett sädant foder mellan 2100-4200 ppm och mängden natriumtiocyanat mellan 1600-3200 ppm, varvid förhällandet natriumperkarbonat:

NaSCN = 21:16.

Exempel 3

Foder för grisar framställdes frän följande ingredienser. Man har för avsikt att använda detta foder när suggmjölk ej finns att tillgä eller när en mycket tidig avvänjning är aktuell.

60.0 kg skummjölkspulver 3.5 kg ultrafiltrerat vasslepulver (500 mg LP/kg) 15.0 kg spannmäl (mald, ängpreparerad havre och/eller korn) 5.0 kg fett 3.0 kg hydrolyserad majsstärkelse 2.5 kg räsocker 6.0 kg glukos _5,0 kg vitaminer och mineraler 100.0 kg samt 35 g natriumperkarbonat 27 g natriumtiocyanat

Ingredienserna blandades omsorgsfullt i en blandare. Fodret gavs i torr form till grisarna som fick fri tillgäng tili fodret. Den dagliga konsumtion var ca 30-50 g beroende pä grisens älder. Mängden 14 _ .

6261 7 natriumperkarbonat kan härmed varieras mellan 350-700 ppm och mängden natriumtiosyanat mellan 270-540 ppm, varvid natriumperkarbonat: NaSCN är 21:16.

Exempel 4

Ett vitaminerat mineralfoder till svin, s&som suggor framställdes frän följande ingredienser.

33.0 kg kalciumsalt 35.0 kg kalcium/fosforsalt (CaHPO^ - 21^0) 13.0 kg natriumklorid

0,4 kg B-vitaminblandning 0,4 kg vitamin A,D och E

1,2 kg spirelementblandning (Fe, Zn, Mn, Cu, J) 17.0 kg ultrafiltrerat vasslepulver (500 mg LP/kg) 100.0 kg samt 174 g natriumperkarbonat 135 g natriumtiocyanat

Mineralfoderingredienserna blandades väl och utblandades med spann-mäl och proteinkällor av i och för sig kända slag. 3 % vitaminerat mineralfoder användes i slutblandningen. Alternativt kan det vita-minerade mineralfodret ges i mängder av ca 30-150 g per djur och dygn direkt in i träget utan inblandning. Mängden natriumperkarbonat kan härvid varieras mellan 740-3480 ppm och mängden natriumtiocyanat mellan 350-2700 ppm, varvid natriumperkarbonat: NaSCN är 21:16.

Exempel 5

En elektrolytblandning framställdes av följande ingredienser.

1,0 kg kaliumklorid 20.0 kg natriumklorid 15.0 kg natriumbikarbonat 64.0 kg glukos 100.0 kg samt 97 g natriumperkarbonat 75 g natriumtiocyanat 5 g laktoperoxidas (50 U/mg).

6261 7

Den väl blandade elektrolytblandningen användes enligt följande: 25 g därav löses i 1 liter vatten och tillföres gris eller kalv i en mängd av ca 10 % av kroppsvikten dagligen vid konstaterad dehydrering eller för att förebygga dehydrering.

Mängden natriumperkarbonat kan varieras mellan 970-1940 ppm och mängden natriumtiocyanat mellan 750-1500 ppm, varvid mängden natriumperkarbonat: mängden natriumtiocyanat = 21:16.

Den i exemplen 1-5 använda natriumperkarbonaten har skyddats mot för tidig reaktion genom att granulat därav överdragits med ett först i tarmkanalen lösligt skikt av en polymer. Sadana polymerer är vaxer, cellulosaacetatftaiat samt liknande i tarmkanalen lösliga polymerer. Vidare kan dubbelskikt användas om en uppslamning före administrering skulle ge en alkalisk miljö.

Biologisk effekt 4 provrör innehällande 10 ml vassle med innehäll av 21 ppm (0,25 mM) natriumtiocyanat inkuberades vid 30°C, varvid vasslen inokulerats med Ps. fluorescens EF 1998. Ett rör utgjorde kontroll. Natriumperkarbonat motsvarande 0,1, 0,2 respektive 0,3 mM sattes tili respektive övriga tre rör. Mängden bakterier bestämdes vid inoku-leringen samt 2 timmar efter inokuleringen. Laktoperoxidas var närvarande i en mängd av 5 ^-ug/ml. Resultatet framgär av tabell 1 nedan.

Tabell 1

Natriumperkarbonat i en Antal bakterier/ml mängd motsvarande mM H2O2 0 tim 2 tim

Kontroll (0,0 mM) 2,1 · 106 2,1 · 106 0,1 mM 2,1 106 1,8 · 105 0,2 mM 2,1 · 106 2,8 · 103 0,3 mM 2,1 * 106 2,6 · 103

Sora framgär därav sker en markant förbättring av den antibakteriella effekten dä 0,2 mM eller mer finns närvarande. Redan tillsatsen av 0,1 mM H2C>2 ger dock en markant baktericid effekt.

Ps. fluorescens EF 1998 inkuberades vid +30°C i tvä provrör 1) och 2), varvid rör 1) innehöll 1 g av en kommersiell mjölkersättnings- 16 6261 7 produkt bestäende av 15 % ultrafiltrerat vasslepulver, 57 % vassle-pulver, 8 % fett, 16 % animaliskt protein, samt 4 % vitaminer och mineraler i 10 ml vatten, varvid den innehöll 50 ^ug laktoperoxidas sarat tillsattes natriumperkarbonat 27,5 ppm och varvid rör 2) innehöll samma mängd mjölkersättningsmedel, (50 ^ug laktoperoxidas), samt tillsattes 21 ppm natriumtiocyanat och 27,5 ppm natriumperkarbonat.

Mängden bakterier i provrören framgär av endanstäende tabell 2 där resultatet efter 0, 2, 4 och 6 timmar framgär.

Tabell 2

Prov 0246 timmar

Provrör 1 4,5 · 106 3,5 · 106 5,3 * 106 6,0 * 106

Provrör 2 4,5 * 106 3,5 · 105 5,3 · 104 5,6 · 103

Som framgär av tabellen är mängden bakterier i rör 2) efter 6 timmar endast 1/1000 av mängden i rör 1) vid samma tidpunkt, varvid ingen eller ringa tillväxt skett i provrör 1) utan i stället avdödning skett i provrör 2).

Det antibakteriella systemets effekt bestämdes in vitro. Därvid inkuberades olika E. coli stammar vid +37°C i en vattenlösning av 5 g vasslepulver/100 ml, 21 ppm natriumtiocyanat och natriumperkarbonat i en mängd motsvarande 0,25 mM Resultat av E. coli- avdödningen efter 2 timmar framgär av nedanstäende tabell 3.

Tabell 3 E. coli-stam Procentuell avdödning 0-139 299/66 >99,98 0-149 853/67 >99,98 0-138 355/67 >99,95 0-8 915/66 >99,99 0-147 949/66 >99,99 0-141 220/65 >99,99

Flera av de textade E. coli-stammarna är antibiotikaresistenta.

Resultäten utvisar en mycket hög användningsgrad för systemet.

17 6261 7 Hög användningsgrad föreligger även genom att systemet utövar effekt även pä grampositiva bakterier.

I en test mot E.coli 9703 användes en för kalvar avsedd mjölkersätt-ningsprodukt innehällande 45 vikt-% skummjölkspulver (240 mg LP/kg), 22,5 vikt-% vasslepulver, 12,5 vikt-% sojapulver, 15,0 vikt-% animaliskt fett, 4,5 vikt-% laktos och 0,5 vikt-% vitaminer. Stammen inkuberades vid +37°C i en 10%-ig vattenlösning av mjölkersättnings-medlet innehällande 5 ^ug/ml laktoperoxidas. Tvä olika koncentra-tioner av natriumtiocyanat och tre olika koncentrationer av H2O2 i natriumperkarbonatform användes, säsom av nedastäende tabell 4 framgär.

Tabell 4

Koncentration i mM Antal bakterier/ml SCN **2^2 efter 0 tim efter 2 tim 0,25 0 2,5 · 106 7,7 - 107 0,25 0,25 2,5 · 106 5,3 · 104 0,50 0 1,8 · 106 1,0 · 108 0,50 0,50 1,8 · 106 1,5 · 104

Som av tabell 4 framgär ger det antibakteriella systemet en kraftig baktericid effekt vid de bäda testade koncentrationerna samtidigt som det pävisas att SCN- i och för sig ej har nägon effekt, utan bakterietillväxten fortsätter dä ingen peroxiddonator är närvarande.

Peroxiddonatorn kan ocksä utgöras av ett alkalimetallpersulfat, som vid reaktionen ger väteperoxid och sulfat.

Claims (9)

18 6261 7

1. Eläinrehuaine, joka sisältää sinänsä tunnettuja ravinto- ja rehuaineita sekä bakteerinvastaisen järjestelmän, joka aktivoituu mahasuolikanavassa, tunnettu siitä, että bakteerinvastai-nen järjestelmä sisältää laktoperoksidaasia ainakin 1 mg/kg rehu-ainetta (50 U/kg rehuainetta), tiosyanaattia ainakin 16 ppm laskettuna natriumtiosyanaattina sekä peroksidia luovuttavaa, kiinteätä vesiliukoista ainetta, joka on alkalimetalliperkarbonaatti, maa-alkalimetalliperoksidi tai karbamidioeroksidi ainakin 21 ppm laskettuna natriumperkarbonaattina.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen eläinrehuaine, tunnettu siitä, että laktoperoksidaasi on puhtaassa muodossa.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen eläinrehuaine, tunnet-t u siitä, että laktoperoksidaasi esiintyy laktoperoksidaasia sisältävänä maitotuotteena.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen eläinrehuaine, tunnet-t u siitä, että peroksidia luovuttava kiinteä vesiliuokoinen aine on natriumperkarbonaattia.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen eläinrehuaine, tunnet-t u siitä, että natriumperkarbonaatti on varustettu suolikanavas-sa liukenevalla suojakerroksella.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen eläinrehuaine, tunnet-t u siitä, että suojakerros on selluloosa-asetaattiftalaattia.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen eläinrehuaine, tunnet-t u siitä, että peroksidia luovuttavan aineen ja tiosyanaatin välinen molaarinen suhde on pienempi kuin 4:1, edullisimmin 1-2:1. 1 Patenttivaatimusten 1 ja 7 mukainen eläinrehuaine, tunnettu siitä, että tiosyanaattia on läsnä 160-3500 ppm, edullisimmin 160-1750, peroksidia luovuttavaa ainetta on läsnä 210-4000, edullisimmin 210-2000 ppm, ja laktoperoksidaasia on läsnä 10-200, edullisimmin 10-100 mg/kg. 6261 7 19

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen eläinrehuaine, tunnet-t u siitä, että peroksidia luovuttava aine on magnesiumperoksi-dia.