FI62098B - Foerfarande foer framstaellning av tiazolo(5,4-c)rifamycin sv och dess derivat - Google Patents

Description

- ------ ra1 KUULUTUSJULKAISU .

^ (1) UTLÄCONINOSSKRIFT 62098 c (4¾ Ρη tentti ayörn:tty 10 11 1932 Patent meddclat ^ ^ (51) κν.Ηι.3/ΐι«.α.3 C 0? D 5^13/18 SUO M I — FI N LAN D (21) Putunttlhukumu· —PutunCunuBkiiim 77126? (22) Hakwniapllvi — Amekntngtdug 21.01+.77 (23) AlkupUvt—GHtl|h«ttdt| 21.01+.77 (41) Tullut |ulkbukal —Uhrit offumitf 29 n 77 fktlVtU· 1» rekisterihallitut (44) Nihtivftkslpanon }« kuuL|ulk*l*un pvm. — n_ η?

Patent· och registerstyrelten Ambktn uthgd oeh utl.tkrlfun publlcurad 30.0 f. 02 (32)(33)(31) Pyydutty utuetkuui —B«fird prlorltut 28.05.76

Englanti-England(GB) 22206/76 (71) Gruppo Lepetit S.p.A., Via Durando, 38, 20158 Milano, Italia-Italien(lT) (72) Renato Cricchio, Varese, Italia-Italien(IT) (74) Munsterhielm Ky Kb (54) Menetelmä tiatsolo/5,4-c7rifamysiini SV:n ja sen johdannaisten valmistamiseksi - FÖrfarande för framställning av tiazolo/5,4-ς7_ rifamyein SV och dess derivat Tämä keksintö koskee kemiallista menetelmää tiatsolorifamysiini-johdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on

Me Me

Me| ntr il

RO y 0H M

J OH OH f Me

MeO ®>1 Me^/Λ^χΝΗ f o (I > 0 it b N< jossa R on vety tai CH^CO- ja R-^ on vety.

Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on CH^CO ja on vety, vastaa BE-patentissa 832 921 rifamysiini P:nä määriteltyä luonnontuotetta. Tämä mikrobiologisesti aktiivinen metaboliitti saatiin yhdessä muiden luonnontuotteiden kanssa A.T ,C. C.-numeroilla 31061+, 31065, 31066 identifioitujen Nocardia mediterranei-kantojen käymisellä.

2 62 O 98 Tämän keksinnönmukainen kemiallinen menetelmä tarjoaa yksinkertaisemman tavan edellä mainitun tuotteen valmistamiseksi mitä saantoihin, kustannuksiin ja tuotteen puhtauteen tulee.

Tämän keksinnön mukaisesti lähdettäessä rifamysiini S:stä saadaan noin 20-25 %:set saannot rifamysiini P:tä ja sen 25-desasetyy-lijohdannaista. Rifamysiini P:tä saadaan keskimäärin noin 370 mg/1. Lähtöaineena käytetty rifamysiini S valmistetaan joko hapettamalla rifamysiini SV:tä, joka on saatu FI-patentin 45 344 mukaisesti fer-mentoimalla eräitä Streptomyces Mediterranei ATCC 13 685 kannan mu-tantteja, jolloin saanto on noin 2000 mg/1, tämä rifamysiini SV hapetetaan rifamysiini Siksi melkein kvantitatiivisesti, saanto noin 1900 mg/1 rifamysiini S:ää, joka edelleen tämän keksinnön mukaisesti muutetaan rifamysiini Piksi, saanto 20-25 % eli 380-475 mg/1, tai rifamysiini S saadaan FI-patentin 37 669 mukaisesti, käsittelemällä rifamysiini Bin alkalimetallisuolaa ilmakehän hapen läsnäollessa (saanto noin 65 %); rifamysiini Bitä saadaan puhtaana yhdisteenä fer-mentoimalla Streptomyces Mediterranei ATCC 21 789 kantaa FI-patentin 51 207 mukaisesti, saanto noin 2290 mg/1 ja tämä muutetaan edellä esitetyllä tavalla, 65 %:n saannolla, rifamysiini Siksi, jota saadaan 1490 mg/1 ja tämä edelleen tämän keksinnön mukaisesti rifamysiini Piksi 20-25 Iin saannolla 300-375 mg/1. FI-kuulutusjulkaisun 54 327 mukaisesti saadaan rifamysiini Pitä alhaisempia saantoja (noin 90 mg/1). Lisäksi siinä saadaan rifamysiini Pin ja Qin seos, joka täytyy erottaa, jonka seurauksena sekä rifamysiini P että Q eivät ole niin puhtaita, kuin tämän keksinnön mukaisesti saadut yhdisteet.

Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on vety, t.s. rifamysiini Pm 25-desasetyylijohdannainen on uusi antibakteerinen yhdiste ja on myös tämän keksinnön kohteena.

Kemiallinen menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi käsittää sen, että rifamysiini S, jonka kaava on

Me Me Βί!ΧΛ>\

Ms Oh 11 0H o O-^Me

Me il 1

MeC > M?T

P oOoP

0-1-D 0

Me 0 jossa R on H tai CH CO, saatetaan reagoimaan kysteiiniesterin kanssa,

O

jonka kaava on 3 62098 HS-CHo-CH-C00Ro

2 I 2 (ID

nh2 jossa on alkyyli, sykloalkyyli, fenyyli tai bentsyyli, tai sen happoadditiosuolan kuten vetyhalogenidin tai sulfaatin kanssa.

Sanonta "alkyyli" tarkoittaa selityksessä ja vaatimuksissa suoraa tai haarautunutta, 1-8 hiiliatomia sisältävää alifaattista radikaalia. Sanonta "sykloalkyyli" tarkoittaa 5-8-jäsenistä syklo-alifaattista rengasta, jossa mahdollisesti voi olla yksi tai kaksi alempialkyylisubstituenttia. Selityksessä ja vaatimuksissa sanonnat "fenyyli" ja "bentsyyli" tarkoittavat substituoimatonta fenyyli- ja bentsyyliradikaalia sekä fenyyliä ja bentsyyliä joka on substituoitu yhdellä tai kahdella kloori-, bromi-, fluori-, nitro-, alempialkoksi-, syano-, trifluorimetyyli-, sulfaraoyyli- ja alempi-alkyy1i sulfonyyli ryhmällä.

Seuraavassa kaaviossa, jossa R^ ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä,esitetään yhteenvetona uuden kemiallisen menetelmän reaktio-kulku.

, 6209ö

Me Me HO L Me Me

Me'| 1 ' l| HO I

R0O 0 O^Me Me'l^ '

Me 1 OH i| I RQ t:' OH o Me

MeO > Me X AnH m OH OH Me A Ά r ,1 Me I I ' I l! l! MeO,>e AA,"

A 0 ! f if I

1 T 1 + iis-ch?-ch-coor2—> I A X J-S-CHo-CH-C00Rp o---Ϊ-------Tl o 2 I 2 A 2 I 2

Me 0 NH2 0-j---λ OH NH2

Me 0 ri famysiini S , hapettava / syklisointi

Me Me HO^A.

rA 0°h OH °A Me

MeO^/1 Me^ AA

/ „X Vi 0 — j- J N —-L COORp

Me 0

III

/ lievät aika- / li set hydro- /-/ H+ lyysioLosuh-/ (dekarhoksylointi) teet / I(R, =H) i.

ri i'arnysiini P-j ohdannainen s 62098

Kaav.';.n I mukaiset yhdisteet, joissa R on vety, voidaan valmistaa seka suoraan edellä mainitun menetelmän avulla että hydrolysoi- . maila vastaavia kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R on CH^CO, vah- ' vassa aikalisessa väliaineessa.

Reaktio, jossa valmistetaan kaavan III mukainen tiatsolorifamy-siinijohdannainen, voidaan suorittaa sekä yhdessä ainoassa vaiheessa että kahdessa vaiheessa. Kun reaktio suoritetaan kahdessa vaiheessa ha-petusaine, jota tarvitaan hapettavan syklisaation edistämiseksi, lisätään reak-tioseokseen sen jälkeen kun reaktio kysteiinijohdannaisen ja rifamy-siini S-komponentin välillä (ensimmäinen vaihe) on suoritettu loppuun. Ensimmäinen vaihe suoritetaan saattamalla noin ekvimolekulaariset määrät molempia reaktiokomponentteja kosketukseen veden kanssa sekoittu- i vassa orgaanisessa liuottimessa, kuten alemmassa alkanolissa, diok-saanissa ja tetrahydrofuraanissa. Reaktiolämpötila voi vaihdella huoneen lämpötilan ja reaktioseoksen kiehumalämpötilan välillä. Reaktioaika riippuu pääasiassa reaktiolämpötilasta ja määritetään yleensä tarkkailemalla rifamysiini S:n häviämistä ohutkerroskromatografialla. Näin saatu 3-(2-substituoitu etyylitio)-rifamysiini SV-välituote saatetaan sitten kosketukseen hapetusaineen kanssa toisessa reaktiovai-heessa. Mainittu hapetusaine voidaan valita suuresta joukosta yhdisteitä, jollaisia ovat kinonit, orgaaniset nitriitit, peroksidit, per-sulfaatit, typpihapoke, tetravalenttiset mangaani- ja lyijyjohdannai-set, trivalenttiset rautajohdannaiset, merkuri- ja kuprisuolat.

Edullisia hapetusaineita ovat esimerkiksi p-kinoni, 2,5-dime-tyyli-p-kinoni, 2,6-dimetoksi-p-kinoni, tetrakloori-p-kinoni (klora-niili), diklooridisyano-p-kinoni, durokinoni, rifamysiini S, alkyyli-nitriitit, vetyperoksidi, alkalimetallipersulfaatit, alkalimetalli-ferrisyanidit, kupriasetaatti, merkuriasetaatti ja mangaanidioksidi.

Kun ensimmäinen vaihe on saatettu loppuun reaktioseokseen lisätään hapetusainetta ja pH pidetään välillä 2 ja 6,5 , mieluimmin välillä ä· ja 5 ja aivan erityisesti välillä ä-,2 ja ä-,8 seuraavassa re-aktiovaiheessa. Sopiva tapa kontrolloida pH-arvo käsittää vesipitoisen puskurin lisäämisen. Tämä toinen reaktiovaihe, jota kutsutaan "hapettavaksi syklisaatioksi", suoritetaan mieluimmin huoneen lämpötilan ja reaktioseoksen kiehumalämpötilan välillä. Edullinen lämpötila-alue on noin l8°C - noin *+5°C. Reaktion kulkua seurataan yleensä ohutkerroskromatografialla (eluenttina kloroformi-metanoli 9:1) koska tiatsolorif amysi inin III muodostuminen havaitaan helposti fluori soivana keltaisena täplänä, jonka Rf-arvo on noin O,Kun reaktio on päätty- 6 62098 nyt seosta käsitellään edelleen hapetusaineen tai sen reaktiotuotteiden poistamiseksi. Käytetty menetelmä riippuu yleisesti käytetystä hapetusainetyypistä. Siihen liittyy yleensä suodatus ja uuttaus; erityisesti käytettäessä kinoneja hapetusaineina voi olla edullista poistaa muodostunut hydrokinonijohdannainen hapettamalla se uudestaan alkuperäiseksi kinoniksi ja samanaikaisesti uuttamalla viime mainituu sopivalla liuottimena. Kun reaktion sivutuotteet on poistettu tiatsolorifamysiini III voidaan helposti eristää kiteisenä tuotteena käyttämällä tavanomaisia menetelmiä.

Reaktio, jossa muodostuu välituotetta III, voidaan suorittaa yhdessä ainoassa vaiheessa käytettäessä sellaista hapetusainet-ta, joka ei vaikuta epäedullisesti molempiin muihin reaktiokompo-nentteihein. Tähän tarkoitukseen sopivia hapetusaineita ovat rifa-raysiini S itse tai tetrasubstituoitu kinoni kuten durokinoni, klo-raniili tai dikloori-disyano-p-kinoni. Kun menetelmä suoritetaan yhdessä ainoassa vaiheessa liuotetaan noin ekvimolaariset määrät rifa-mysiini-S-substraattia ja kysteiiniesteriä veden kanssa sekoittuvaan orgaaniseen liuottimeen, kuten alempaan alkanoliin, dioksaaniin, tetrahydrofuraaniin, käyttämällä mukana ainakin stökiömetristä määrää sopivaa hapetusainetta. Seoksen annetaan seistä lämpötilassa l8°C - *+5°C vesipitoisen puskurisysteemin läsnäollessa pH-arvossa 2-6,5 , mieluimmin *+ - 5 ja aivan erityisesti *+,2 - *+,8. Reaktion kulkua tarkkaillaan ohutkerroskromatografiällä jossa havaitaan lähtöaineena käytetyn rifamysiini S:n häviäminen ja uuden keltaisen fluorisoivan täplän läsnäolo, jonka aiheuttaa tiatsolorifamysiini III, 10 - 80 tunnin reaktioajan jälkeen reaktio on yleensä päättynyt ja seosta käsitellään edelleen sivutuotteiden poistamiseksi ja tiatsolorifamysiinin eristämiseksi kuten edellä selitettiin.

Edellä esitetyn menetelmän vaihe, joka käsittää 3-(2-subs-tituoidun etyylitio)-rifamysiini SV-johdannaisen syklisoinnin on yllättävä, koska odotettavissa olisi ljV-tiatsiini-rifamysiinin syntyminen, t.s. kuusiatomia sisältävän renkaan muodostuminen eikä viisiatomisen. Tämän menetelmän mukaan saadaan kuitenkin tiatsolorifamysiini- johdannainen, jota ei alan ammattimies olisi koskaan osannut odottaa.

Edellä selitetyn menetelmän mukaan saatu tiatsolorifamysii-niesteri III dekarboksyloidaan sitten lievällä alkalisella hydro- 7 62098 lyysillä ja sen jälkeen hapottamalla kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi, jossa R1 on vety. Sopivat hydrolyyttiset olosuhteet aikaansaadaan laimeilla alkalihydroksideilla tai alkalikarbonaateilla.

Keksinnön erään edullisen suoritusmuodon mukaan välituote III liuotetaan seokseen, jossa on veden kanssa sekoittuvaa orgaanista liuotinta ja 10 #:sta natriumkarbonaattia, ja annetaan sen sitten seistä huoneen lämpötilassa 2-6 tuntia. Hapottamalla vahvalla mineraalihapolla, uuttamalla veden kanssa sekoitturaattomalla liuottimena ja väkevöimällä orgaaninen uute saadaan edelleen mainittu kaavan I mukainen tuote. Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on CH^CO , on todettu identtiseksi sellaisen rifamysiini P:n näytteen kanssa, joka on saatu BE-patentin 832 921 mukaisella käymisellä. Identtisyys on varmistettu määrittämällä fysiko-kemial-liset ominaisuudet, kuten sulamispiste, kromatograafinen käyttäytyminen eri orgaanisissa liuotinsysteemeissä, elementaarianalyy-si, massaspektri, ydinmagneettinen resonanssispektri, IR:n, UV-ja näkyvän valon absorptiospektrit ja myös mikrobiologisilla kokeilla.

Kuten edellä mainittiin yhdiste, jossa R on CH-^CO , voidaan helposti muuttaa vastaavaksi desasetyloiduksi johdannaiseksi vahvalla alkalisella hydrolyysillä. Sopivia hydrolyyttisiä olosuhteita saadaan esimerkiksi käyttämällä ainakin 10 #:sia vesipitoisia alkalimetallihydroksideja tai alkalimetallialkoksideja ja hydridejä. Näitä hydrolyyttisiä olosuhteita voidaan käyttää jo dekarboksylointi-vaiheessa, jolloin saadaan suoraan kaavan I mukainen 25-desasetyylijohdannainen.

Edellä selitetyn menetelmän avulla saadut yhdisteet ovat käyttökelpoisia antibakteerisina aineina. Niillä on erityisesti erittäin 8 6209ö korkea antibakteerinen teho In vitro ja in vivo grarc-positiivisia ja grara-negatiivisia mikro-organismeja, kuten Staphylococcus aureus1ta. Streptococcus haemolvticus1ta. Streptococcus faecalis'ta. Diplococcus pneumoniae1taT Proteus vulgaris*ta ja Mycobacterium tuberculosis1ta. vastaan.

25-deasetyyli-rifamysiini P on uusi yhdiste, jonka antimikro-binen aktiviteetti in vitro esitetään seuraavassa:

Pienin estävä konsentraatio tyag/ml)

StaphyLococcus aureus 0,025

Staphylococcus aureus Tour 0,1

Staphylococcus aureus Tour + 30% naudan seerumia 0,05

Streptococcus haemolyticus 0,1

Streptococcus faecalis 0,^

Diplococcus pneumoniae 0,1

Proteus vulgaris 0,78

Escherichia coli 6,25

Klebsiella pneumoniae 12,5

Pseudomonas aeruginosa 12,5

Mycobacterium tuberculosis H-^Ry 0,62

Seuraavat esimerkit on tarkoitettu havainnollistamaan, mutta ei rajoittamaan keksintöä.

Esimerkki 1

Rifamysiini P:n valmistus (I; R = CH^CO , R^ = H)

Liuokseen, jossa on 7 g rifamysiini S:ää (0,01 moolia) 300 ml:ssa metanolia ja 20 mlrssa puskuria pH *+,6 (sitruunahapon ja Na2HP0^_ · 12 Η^Οιη vesipitoinen liuos) lisätään 0,850 g (0,005 moolia, kysteiini-metyyliesteri-hydrokloridia ja saadun liuoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 72 tuntia kunnes ohutkerroskromatografia (CHCL^ :CH^0H 9:1 eluoimisaineena) osoittaa lähtö-rifamysiini S:n hävinneen, uuden täplän läsnäolon, jonka Rf on noin 0,^·, ja rifamysiini SV:stä johtuvan täplän läsnäolon, jonka Rf on 0,05, sekä pieniä määriä sivutuotteita. Reaktioseos laimennetaan 1 1:11a vettä ja uutetaan sitten 500 ml:lla etyyliasetaattia. Orgaaniseen faasiin lisätään liuos, jossa on 6 g kaliumferrisyanidia 500 ml:ssa puskuria pH 7,38 ja seosta hämmennetään muutamia minuutteja rifamysiini SV:n hapetta- 9 tZU^Ö miseksi rifamysiini S:ksi joka puolestaan uutetaan etyyliasetaatilla. Yhdistetyt puskuroidut liuokset hapotetaan 10 %isella HCltilä ja uutetaan sitten etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi erotetaan, pestään vedeLlä, kuivataan ja väkevöidään tyhjössä pieneen tilavuuteen. Tuote kiteytyy ja jäähdyttämisen jälkeen se kerätään suodattimelle ja kuivataan (2,1+ g). Tämä yhdiste vastaa kaavan III mukaista tiatsolorifa-mysiiniä, jossa R on CH^CO ja R2 on CHg . Yhdisteellä on seuraavat tunnusmerkit:

Sulamispiste: 190 - 205°C (hajoten) CJV ja näkyvät absorptiojuovat (puskuri pH 7,38) K maks „1% E1 cm 225 573 29 5 36k 39^ 238 2 g edellä selitetyn menetelmän mukaan saatua yhdistettä liuotetaan seokseen, jossa on 150 ml asetonia ja 100 ml 10 foists. vesipitoista natriumkarbonaattia, ja annetaan seistä huoneen lämpötilassa 1+ tuntia samalla hämmentäen.

Liuos hapotetaan 10 %i sella HClrllä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi erotetaan, pestään vedellä, kuivataan (Na^SO^) ja väkevöidään pieneen tilavuuteen. Rifamysiini P kiteytyy. Saanto 1,7 g ·

Tuotteella on seuraavat tunnusmerkit:

Sulamispiste: yhdiste sulaa yli 190°C:sessa hajoten.

Elementaarianalyysi(%): C H N S

laskettu OggH^g^O^S:lie 61,77 6,27 3,79 ^,3^ saatu 60,27 6,35 3,68 1+,19 UV ja näkyvät absorptioj uovat:

Yhdisteellä on seuraavat arvot metanoli 0,1 N HC1 J) maks(mp) El^om Amaks(nyi) El^cm 1+08 176 1+16 175 350 (olka) 303 292 300 31^ 231 ^5 0 268 31+9 228 1+21+

Spektri on esitetty täydellisenä kuviossa 1.

ίο 62098

Infrapunaspektri: Tärkeimmät absorptiopiikit Nujol'issa esiintyvät seuraavilla taajuuk-silla (em ^): 3700-3200 (m, br); 3120-3080 (w); 3000-2850 (vs); l5-65(s); 1380(b) :Nujol; 17 25 (m); l65-0(m,br); 1580 (m) j 1520 (m); 1325(m); 1250 (s, br)} 1155 (m); 1130(w); 1070 (m,br), 101+5 (w); 975(m); 950 (m); 9 20 (w); 880(m); 805(w); 760(w); 730 (w).

Identtisyys sellaisen rifamysiini P:n kanssa joka on saatu käymisellä, varmistetaan myös määrittämällä kromatograafinen käyttäytyminen eri systeemeissä ja massa- ja ydinmagneettiset resonanssi spektrit (kuvio 2).

Esimerkki 2

Rifamysiini P:n valmistus

Liuokseen, jossa on 7 g rifamysiini S:ää 300 mlrssa metanolia lisätään 1,8 g kysteiini-metyyliesterin hydrokloridia ja 1,53 ml tri-etyyliamiinia. Seosta keitetään palautus jäähdyttäen 20 minuuttia ja jäähdyttämisen jälkeen kaadetaan veteen. Hapottamisen jälkeen vesipitoinen seos uutetaan etyyliasetaatilla ja uute haihdutetaan kuiviin jolloin saadaan 6 g 3-(2-amino-2-karbometoksi-etyylitio)-rifamysiini SV:tä joka sulaa yli L60°C hajoten. Yhdisteellä on seuraavat tunnusmerkit:

Elementaarianalyysi: C H N S

laskettu C^H^^O-^S: lie 59,26 6,55 3,37 3,86 saatu 57,38 6,51 3,22 3,65 UV ja näkyvät absorptiojuovat (puskuri 7,38): 3 raakr, E^cm 227 *+55 318 260 1+55· 160 8,30 mg edellä selitettyä tuotetta liuotetaan 30 ml:aan metanolia ja 2 ml:aan puskuria pH 5-,6 (sitruunahapon ja Na^HPO^ · 12 1^0^ vesipitoinen liuos) ja seokseen lisätään 23Ο mg diklooridisyano-p--kinonia. 15 tunnin kuluttua huoneen lämpötilassa reaktioseos haihdutetaan ja jäännös liuotetaan kloroformiin. Orgaaninen faasi uutetaan sen jälkeen vesipitoisella puskurilla pH 8,05-. Vesipitoinen puskuri hapotetaan erottamisen jälkeen kloroformifaasista ja uutetaan sitten etyyliasetaatilla. Väkevöimällä etyyliasetaattiliuos saadaan n 62098 kaavan III mukainen tiatsolorifamysiinijohdannainen (R = CH^CO, R0 = j *- CH^) kiteytymään. Saanto 200 mg.

Tämä tuote muutetaan rifamysiini P:ksi esimerkissä 1 selitetyn menetelmän mukaan, saanto on 15,65 % teoreettisesta määrästä.

Reaktio toistetaan käyttämällä 2,3-dikloori-5,6-disyano-p--kinonin asemesta jotakin seuraavista hapetusaineista: tetrakloori--p-kinoni, mangaanidioksidi, 2,5-dimetyyli-p-kinoni, 2,6-dimetoksi--p-kinoni, tetrametyyli-p-kinoni, p-kinoni. Kussakin tapauksessa saannot ovat samaa suuruusluokkaa kuin edellä.

Esimerkki 3

Rifamysiini P:n valmistus

Liuokseen, jossa on 7 g rifamysiini S:ää 200 mljssa metanolia lisätään 1,8 g kysteiini-metyyliesterin hydrokloridia ja 1,53 g tri-etyyliamiinia. Seosta keitetään palautus jäähdyttäen 20 minuuttia ja sen jälkeen lisätään 20 ml puskuria pH *+,6 ja 2,2 g dikloori- disyano--p-kinonia. Seoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 15 tuntia ja käsitellään sitten kuten esimerkissä 1 on selitetty rifamysiini P:n valmistamiseksi. Saanto on 2,8 g otsikossa mainittua yhdistettä. Esimerkki b 25-desasetyyli-rifamysiini P:n valmistus (I; R = H, R^ = H)

Liuokseen, jossa on 750 mg rifamysiini P:tä seoksessa, jossa on bO ml asetonia ja 10 ml vettä, lisätään 20 ml 10 $6: s ta natriumhydrok-sidia 0-5°C:sessa samalla hämmentäen. Seos pidetään 2b tuntia huoneen lämpötilassa ja kaadetaan sitten jääveteen, joka on hapotettu pH-ar-voon noin 2 laimealla HCljllä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen uute väkevöidään kuiviin, liuotetaan kloroformiin ja puhdistetaan sitten pylväskromatografoimalla piihappogeelissä (eluoimisaineena CHCl^, jossa on kasvavat määrät CH^OH aina 3 $:iin asti).

Yhdistetyt yhtenäiset fraktiot haihdutetaan kuiviin ja jäännös-tuotteen liuottamisen jälkeen etyyliasetaattiin se saostetaan lisäämällä petrolieetteriä. Saanto *+00 mg. Tuotteella on seuraavat tunnusmerkit: Sulamispiste: yhdiste sulaa 172-17^0:sessa hajoten.

Elementaarianalyysi: C H N S

laskettu :lie 62,05 6,36 bf02 b,6ö saatu 61,98 6,32 b^Ob L, 56 UV-spektri on käytännöllisesti katsoen identtinen rifamysiini P:n spektrin kanssa.

NMR-spektri on esitetty täydellisenä kuviossa 3.

Claims (3)

1. Menetelmä tiatsolo|j?, >+-c] rifamys.il ni SV-johdannai sen valmistamiseksi , jonka kaava (I) on Me Me MeJ Γ II RO / OH o | OH OH 7 Me MeoiJ®> MeJ | 1 f 0 0—I—ί Ν«·0/ α> Me Ο jossa R on vety tai CH^CO ja on vety, tunnettu siitä, että rifamysiini S tai sen 25-desasetyylijohdannainen saatetaan reagoimaan kysteiiniesterin kanssa, jonka kaava on HS-CHo-CH-C00Ro 2 1 2 NH2 jossa R? tarkoittaa 1-8 hiiliatomia sisältävää alkyyliä,5-8 jäsenistä sykloalkyyliä, fenyyliä tai bentsyyliä, tai sen happoadditiosuolan kanssa, veden kanssa sekoittuvassa orgaanisessa liuottimessa huoneen lämpötilan ja reaktioseoksen kiehumalämpötilan välillä, jolloin saadaan 3--(2-substituoitu etyylitio)-rifamysiini SV-johdannainen, jonka kaava on Me Me Me ( T Π RV oSHOH°7^Me J /χ— S-CH„-GH-C00Ro I 0 Y Y 2 | 2 °-1-\[ OH NH2 Me O jossa R ja Rp tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan mainittu johdannainen kosketukseen hapetusaineen kanssa, joka on kinoni, orgaaninen nitriitti, peroksidi, persulfaatti, typpihapoke, tetravalenttinen mangaani- ja lyijyjohdannainen, trivalenttinen rautajohdannainen, 13 62098 merkuri- tai kuprisuola, säädetyssä pH-arvossa 2-6,5, ja näin saatu tiatsolorifamysiini-karboksiesteri dekarboksiloidaan.

2. Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat därav, att det kontrollerade pH-värdet är raellan 5-,2 - 5-,8.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kontrolloitu pH-arvo on *+,2-^,8.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuotin on alempi alkanoli, dioksaani tai tetrahydrofu-raani. k. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hapetusaine on p-kinoni, 2,5-dimetyyli-p-kinoni, 2,6-di-metoksi-p-kinoni, tetrakloori-p-kinoni* diklooridisyano-p-kinoni, durokinoni, rifamyysini S, alkyylinitriitti, vetyperoksidi, alkali-metalli persulfaatti , alkalimetalliferrisyanidi, kupriasetaatti, mer-kuriasetaatti tai mangaanidioksidi.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reaktio rifamysiini S-johdannaisen ja kysteiinijohdannaisen välillä ja saadun 3-(2-substituoidun etyylitio)-rifamysiini SV:n jälkeenpäin saattamisen sitten kosketukseen hapetusaineen kanssa suoritetaan yhdessä ainoassa menetelmävaiheessa.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että rifamysiini S-johdannainen ja kysteiinijohdannainen saatetaan reagoimaan rifamysiini S:n, durokinonin, kloraniilin tai diklo.ori-disyano-p-kinonin läsnäollessa, säädetyssä pH-arvossa *t, 2 - ^+,8.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä rifamysiini P:n valmistamiseksi, tunnettu siitä, että tiatsolorifamysiini--karboksiesteri dekarboksyloidaan lievällä alkali sella hydrolyysillä ja sen jälkeen hapottamalla. l. Förfarande för framställning av ett tiazolo^5,1+-c| rifamycin--SV derivat med formeln (I) Me Me H0 Mel Jk I 2°y OH OH °y^Me «•O1 (I, j 1 f (I) °-f-J Me 0 ^K1 , 62098 lb i vilken R är väte eller CH^CO och R^ är väte, kännetecknat därav, att rifamycin S eller dess 25-desacetyldeirvat omsättes med en cystelnester med formeln hs-ch2-ch-coor2 nh2 1 vilken R2 betecknar alkyl med 1-8 kolatomer, cykloalkyl med 5-8 med-lemmar, fenyl eller bensyl eller med ett syra-additionssalt därav i ett med vatten blandbart organiskt lösningsmedel vid en temperatur raellan rumstemperaturen och reaktionsblandningens kokningstemperatur, varvid ett 3-(2-substituerat etyltio)-rifamycin SV-derivat med formeln Me Me H0 Me] I il RO y OH o Me J °H °,H ^ Me ) O3^j0-S-CH2-CH-COOR2 0-1-- OH NH2 Me 0 erhilles, i vilken R och R2 betecknar detsamma som ovan, nämnda deri-vat bringas i kontakt med ett oxidationsmedel, vilket är en kinon, en organisk nitrit, en peroxid, ett persulfat, salpetersyrlighet, ett tetravalent mangan- eller blyderivat, ett trivalent järnderivat, ett merkuri- eller kuprisalt, vid ett kontrollerat pH-värde mellan 2 - 6,5 , och den sa erhällna triazolorifamycin-karboxiestern dekar-boxyleras.

3. Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat därav, att lösningsmedlet är en lägre alkanol, dioxan eller tetra-hydrofuran. 5-, Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat därav, att oxidationsmedlet är en p-kinon, 2,5-dimetyl-p-kinon,2,6--dimetoksi-p-kinon,tetraklor-p-kinon, diklordicyano-p-kinon, duro-kinon, rifamycin S, en alkylnitrit, väteperoxid, alkalimetallpersulfat, alkalimetallferricyanid, kupriacetat, merkuriacetat eller mangandioxid.