FI57616C - Foerfarande foer aktivering av kolesteroloxidas - Google Patents
Foerfarande foer aktivering av kolesteroloxidas Download PDFInfo
- Publication number
- FI57616C FI57616C FI3513/74A FI351374A FI57616C FI 57616 C FI57616 C FI 57616C FI 3513/74 A FI3513/74 A FI 3513/74A FI 351374 A FI351374 A FI 351374A FI 57616 C FI57616 C FI 57616C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cholesterol
- extinction
- cholestenone
- detergent
- enzyme
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
.1 r-, KUULUTUSJULKAISU c rj , Λ r jäT* [B] (11) UTLAGG N I NGSSKRI FT 5761 6 1¾¾ ¢45) Pc. te r; L ti LO CO 1030 ^ ^ (51) Ky.!k.3/Int.a.3 e 12 Q 1/60, G 01 N 33/92 SUOMI —FINLAND (21) PwenttJh«lMnHi· — PatmtaMBtalng 3513/7¾ (22) H«k*mltpllvl—Aiweknlnfidtf 0^.12.7¾ ^ (23) Alku pilvi—Gittl(h«tsdt| OU.12.7¾ (41) Tulkit luikituksi — Bllvlt offamllg 08.06.75
Patmtti- j. r.ki.terih.llltui NlhUvUalpwon ). kuuLJullu.™ pvm.-
Patent- och ragiitarrtyraltan AnsOksn utisgd och utUkrtften pubiicmd 30.05.80 (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus —Begird prlorltet 07.12.73 16.08.7¾ Saksan Liittotasavalta-Förbunds-republiken Tyskland(DE) P 2361169.0 P 2U393U8.lt (71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, 6800 Mannheim- Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Peter Roeschlau, Tutzing/Obb., Gunter Lang, Tutzing/Obb.,
Klaus Beaucamp, Tutzing/Obb., Erich Bernt, Munchen,
Wolfgang Gruber, Tutzihg-Unterzeismering, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7U) Berggren Oy Ab (5U) Menetelmä kolesterolioksidaasin aktivoimiseksi - Förfarande för aktivering av kolesteroloxidas
Keksintö koskee menetelmää, jonka avulla voidaan aktivoida koleste- rolioksidaasi.
Saksalaisesta kuulutusjulkaisusta 2 22U 132 tunnetaan menetelmä, jonka avulla voidaan määrittää kolesteroli siten, että kolesteroli inkuboidaan vesiväliainessa kolesterolioksidaasin kanssa ja sen jälkeen määritetään joko hapen kulutus tai muodostunut tai kolestenoni. Tästä menetelmästä tunnetaan myös kolesterolin määrityksessä käytettävä reagenssi, joka muodostuu kolesterolioksi-daasista ja systeemistä, jolla määritetään HjOj, tai systeemistä, jolla määritetään kolestenoni. Nyttemmin on havaittu, että kolesterolioksidaasi ei ole riittävän stabiili varastoitaessa, vaan inaktivoituu suhteellisen nopeasti. Kun tutkittiin tätä epästabiilisuutta, todettiin, että inaktivoituminen aiheutuu mitättömän pienistä pesuainemääristä, jotka ovat peräisin entsyymin valmistusvaiheesta ja seuraavat sen mukana epäpuhtauksina. Tämä valmistaminen tapahtuu esimerkiksi saksalisessa hakemusjulkaisussa 2 22¾ 131 selostetun menetelmän mukaan siten, että koles-teronia muuttava mikro-organismi liotetaan särkemällä soluseinämät 2 57616 ei-ionogeenistä pinta-aktiivista ainetta sisältävällä puskuriliuoksella ja uutetaan, uute sentrifugoidaan ja heitetään pois tällöin saatu sakka. Jäännös kaadetaan anioninvaihtajan joukkoon, entsyymi eluoidaan ei-ionogeenistä pinta-aktiivista ainetta sisältävän puskuriliuoksen avulla ja eristetään eluaatista. Kun nämä puhdistusaineen jäännökset oli poistettu, saavutettiin tulokseksi, että entsyymi kesti varastointia täysin riittävästi. Mutta tällöin huomattiin, että puhdistusaineen jäännöksistä vapautettu entsyymi oli menettänyt selvästi aktiivisuuttaan. Jos entsyymiä käytetään esimerkiksi kolesterolin määritykseen, on tästä seurauksena, että on joko käytettävä vasta valmistettua preparaattia tai käytettävä huomattavasti suurempia entsyymimääriä testiin tai pidennettävä mittausaikaa huomattavasti.
Keksinnön tarkoituksena on sen vuoksi keksiä menetelmä kolesteroliok-sidaasin aktivoimiseksi. Keksinnön tarkoituksena on nimenomaan saada aikaan sellainen menetelmä, jossa on mahdollista käyttää ensiksikin puhdistusaineista täysin vapaata ja sen ansiosta riittävän varastoi-miskestävyyden omaavaa kolesterolioksidaasia ja toiseksi saada käytettävän entsyymin aktiivisuus sellaiseksi, että se vastaa juuri valmistetun entsyymin aktiivisuutta, josta ei vielä ole eristetty pieniä puhdistusainemääriä.
Keksinnön mukaisesti tämä onnistuu kolesterolioksidaasin aktivoimis- menetelmän avulla, joka on tunnettu siitä, että lisätään noin 0,005-20 paino-% vähintään yhtä pinta-aktiivista yhdistettä, jolla on lipofiilisiä ja hydrofiilisiä ominaisuuksia, kolesterolioksidaasiin ennen sen käyttöä määritykseen.
Pinta-aktiivisena yhdisteenä, jolla on lipofiilisiä ja hydrofiilisiä ominaisuuksia, käytetään etupäässä ei-ionogeenisiä puhdistusaineita, joilla on vähintään yksi OH-ryhmä molekyylissä. Mieluimmin käytetään erityisesti alkyyli-, aryyli- ja aralkyylialkoholien polyoksietyleeni-johdannaisia. Esimerkkeinä tällaisista erityisen suosituista pinta-aktiivisista yhdisteistä mainittakoon polyoksietyleeni-alkyylieette-rit, polyoksietyleenialkyylikarbonihappoesterit, polyoksietyleeni-sorbitan-alkyylikarbonihappoesterit, polyoksietyleeni-glyseriini-alkyylikarbonihappoesterit, polyoksietyleeni-alkyyliamiinit, polyoksi-etyleeni-polyoksipropyleeni-lohkarepolymerisaatit, polyoksietyleeni-alkyylitioeetterit, polyoksietyleeni-alkyyliaryylieetterit. Erikois-esimerkkejä ovat hydroksipolyetoksi-dodekaani, alkyylifenolien etylee-nioksidi-liitäntätuotteet, sorbitanhydridien polyetoksietyleenij oh- 3 5761 6 dannaiset yms. Myös merkaptaanien avulla modifioidut polyoksietyleeni-johdannaiset ovat osoittautuneet jokseenkin yhtä hyvin soveltuviksi.
Kun käytetään mainitunlaisia, erikoisen edullisia pinta-aktiivisia yhdisteitä, niin tavallisesti riittää, kun niitä lisätään suunnilleen 0,005-0,1 painoprosenttia.
Näihin luokkiin kuuluvia yhdisteitä on kaupan useimmiten kokonaisia sarjoja, jotka eroavat toisistaan oksietyleeniryhmien lukumäärän puolesta. Käyttökelpoisimpia ovat vesiliukoiset edustajat, joilla on keskinkertainen määrä oksietyleeniryhmiä (noin 5-20). Tyypit, joissa on alempi oksietyleeniryhmien määrä, ovat useimmiten vain dispergoituvia ja sen vuoksi vähemmän käyttökelpoisia. Vielä enemmän etoksiloidut yhdisteet (lukumäärä suurempi kuin 25) ovat tosin vesiliukoisia, mutta niin hydrofiilisiä, että se alentaa niiden vaikutusta.
Yhtä hyviä tuloksia saadaan myös fysiologisilla pinta-aktiivisilla aineilla, joihin sopii edellä oleva määritelmä, esimerkiksi desoksi-kolaateilla.
Tämän lisäksi ovat myös muut pinta-aktiiviset aineet, joilla on sekä lipofiilisiä että hydrofiilisiä ominaisuuksia ja jotka sisältävät vähintäin yhden OH-ryhmän, osoittautuneet käyttökelpoisiksi. Esimerkkinä näistä mainittakoon etanoli, butyylidiglykoli ja heksyleeni-glykoli. Tämän kaltaisia alempia mono- ja dialkoholeja täytyy kuitenkin lisätä suhteellisen suuria määriä, 10-20 tilavuusprosenttia, jotta saataisiin aikaan haluttu aktivoituminen, ja niiden sopivuus täytyy kulloinkin todeta kokeilemalla. Mutta esimerkiksi metanolilla, etyleeniglykolilla, polyetyleeniglykolilla, sykloheksanolilla, glyse-riinillä, lesitiinillä ja saponiinilla ei saada aikaan minkäänlaista aktivoitumista. Sopivia ovat myös sellaiset pinta-aktiiviset yhdisteet, joilla on kyllä lipofiilisiä ja hydrofiilisiä ominaisuuksia, mutta ei yhtään OH-ryhmää.
Anionisista kostutusaineista ovat erikoisesti sappihappojen kuten kolihapon, taurokolihapon ja desoksikolihapon suolat hyvin sopivia, edelleen rasvahappojen suolat ja rasvahapposarkosidit. Erikoisen merkittäviä ovat rikkihapon johdannaiset, joilla on tunnetusti lisäksi se ominaisuus, että ne stabilisoivat useiden indikaattorien (esimerkiksi o-tolidiini, heterosykliset atsiinit) värilliset radikaaliset oksi- * 57616 daatiotuotteet. Näitä ovat esimerkiksi seuraavat luokat: sulfomeri-pihkahappoesterit, alkyyliaryylisulfonaatit, alkyylisulfaatit, alkyy-lipolyoksietyleenisulfaatit.
Kationisista kostutusaineista voidaan käyttää esimerkiksi alkyylipyri-diini- tai trimetyyliammoniumsuoloja, mutta myös monimutkaisemman rakenteen omaavia yhdisteitä kuten esimerkiksi bentsetoniumkloridia.
Amfoteerisistä kostutusaineista voidaan käyttää esimerkiksi imidatso-liumbetaiineja.
Erikoisesimerkkejä ovat natriumdi-(2-etyyliheksyyli)-sulfosukkinaatti, natriumdodekyylisulfaatti, natriumoleaatti, bentsalkoniumkloridi ja setyylipyridiinikloridi.
Sellaisia ionisia tai amfoteerisiä puhdistusaineita voidaan edullisesti käyttää yhdessä edellä mainittujen ei-ionisten puhdistusaineiden kanssa. Sopivat määrät vastaavat ei-ionisten puhdistusaineiden määriä.
Ei-ionisia, vähintäin yhden OH-ryhmän sisältäviä pinta-aktiivisia puhdistusaineita pidetään suosituimmassa asemassa, koska ne aikaansaavat noin 5~10 kertaisesti voimakkaamman aktivoinnin ja siten vastaavan reaktionopeuden nousun eli siis reaktioajan lyhentymisen verrattuna muihin käyttökelpoisiin pinta-aktiivisiin aineisiin. Ne vaikuttavat myös jo vähäisempinä määrinä.
Alkyyliryhmillä tarkoitetaan tässä sellaisia, joissa on korkeintaan noin 20 C-atomia, etupäässä 12-18 C-atomia.
Kolesterolioksidaasin inaktivoituminen puhdistusaineiden jäännösten läsnäollessa tulee erikoisen selvästi ilmi silloin, kun entsyymi on ammoniumsulfaattiliuoksessa. Jäljessä tulevassa taulukossa 1 on esitettynä eri suuruisten puhdistusainemäärien vaikutus entsyymin stabiilisuuteen varastoinnin aikana 1 M-ammoniumsulfaatissa lämpötilassa 33°C. Kokeet suoritettiin käyttäen erästä oktyylifenoli-etyleenioksidi-liitäntätuotetta.
5 57616
Kolesterolioksidaasin aktiivisuus laskettuna prosenteissa vasta-valmistetusta entsyymistä
Puhdistusaine Päiviä ilman 0,02>ί 0,05 ί 0,15? 0,6 % 10 d 89 % 60 % 10 5? 7 5? 3 5? 22 d 85 5? 48 5? 15? 15? 15?
Pinta-aktiivisen yhdisteen vaikuttava määrä, mikä lisätään keksinnön mukaisessa menetelmässä, on riippuvainen yhdisteen molekyylipainosta ja hydrofobisten ja hydrofiilisten ominaisuuksien asteesta. Liian pieni määrä ei aktivoi lainkaan, liian suuri määrä aiheuttaa entsyymin denaturoitumisen, mikä on yleisesti tunnettu vaikutus pinta-aktiivisten aineiden ollessa kyseessä. Sopivat konsentraatioalueet samoin kuin optimaaliset konsentraatiot voidaan todeta jokaiselle sopivalle pinta-aktiiviselle aineelle kokeiden avulla. Esimerkiksi hydroksipolyetoksidodekaanille ovat sopivat rajat 0,15-0,6 painoprosenttia, oktyylifenolietyleenioksidi-liitäntätuotteille 0,03-0,1 painoprosenttia, sorbitanhydridien polyoksietyleenijohdannaisille 0,15-0,6 painoprosenttia, natriumdesoksikolaatille 0,03-0,05 painoprosenttia, merkaptaanilla modifioiduille alkyylifenolietyleenioksidi-liitäntä-tuotteille (esimerkiksi Sterox SE) 0,005-0,02 painoprosenttia.
Ei-ionogeenisistä pinta-aktiivisista polyoksietyleeni-yhdisteistä ovat varsinkin sellaiset käyttökelpoisia, joissa hydrofobisen jäännöksen suhde polyoksietyleeniketjuun on tasapainoitettu, ja jotka ovat vesiliukoisia.
Hydrofobisen jäännöksen ja polyoksietyleeniketjun suhteen mittaluku on ns. HLB-arvo (vrt. W.C. Griffin, J.Soc.Cosmetic. Chem. 1, 311 (1950) ja 5, 249 (1954).
Erikoisen sopivia ovat sellaiset pinta-aktiiviset aineet, joiden HLB-arvot ovat välillä 10-17· Nämä arvot on tosin käsitettävä vain ohjearvoiksi, koska vaikutus on riippuvainen lisäksi myös hydrofobisen jäännöksen luonteesta.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1 0,05 ml seerumia kaadetaan 10 ml:n joukkoon 0,5 M-kaliumfosfaatti-puskuria, pH 7,5, joka sisältää 0,4 5? hydroksipolyetoksidodekaania.
6 57616
Luetaan ekstinktio (E^) 240 nm:llä sopivalla spektraalifotometrillä ja aloitetaan reaktio lisäämällä 0,02 ml (= 0,1 U) varastointia kestävää, puhdistusaineista täysin vapaata kolesterolioksidaasia 1 M-ammoniumsulfaattiliuoksessa.
3 minuutin kuluttua luetaan ekstinktio (Eg) uudelleen. Muodostuneen kolestenonin ja sen avulla kolesterolin konsentraatio saadaan ensimmäisen ja toisen lukeman välisestä erosta, jolloin on otettava huomioon kolestenonin molaarinen ekstinktiovakio 240 nm:llä.
Kun suoritettiin mittaus eräällä tyypillisellä näytteellä, saatiin 62 mg % vapaata kolesterolia ja 167 mg % kokonaiskolesterolia (saippuoimisen jälkeen).
Vertailumittaus ilman pinta-aktiivisen aineen lisäystä vaati 15 minuutin reaktioajan.
Puhdistusaineen jäännösten poistaminen, jotta entsyymi säilyisi paremmin varastoituneena, tapahtuu tarkoituksenmukaisesti käyttämällä hydrofobeja adsorbenssihartseja. Tähän soveltuvat hyvin esimerkiksi firma Bioradin kaupallisella nimellä Bio-beads samoin kuin Röhm u. Haasin XAD-hartsien nimellä myymät tuotteet.
Esimerkki 2 0,05 ml seerumia lisätään 10 ml:aan 0,5 M-kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,5, joka sisältää 0,02 % hydroksipolyetoksidodekaania ja 0,03 % natriumdesoksikolaattia. Luetaan ekstinktio (E^) 240 nm:llä sopivalla spektraalifotometrillä ja reaktio aloitetaan lisäämällä 0,02 ml (= 0,1 U) varastointia kestävää, puhdistusaineista täysin vapaata kolesterolioksidaasia 1 M-ammoniumsulfaattiliuoksessa.
3 minuutin kuluttua luetaan ekstinktio (Eg) uudelleen. Muodostuneen kolestenonin ja sen avulla kolesterolin konsentraatio saadaan ensimmäisen ja toisen lukeman välisestä erosta, jolloin on otettava huomioon 2 kolestenonin molaarinen ekstinktiovakio 240 nm:llä (ε = 15,5 cm / ^uMooli).
Kun suoritettiin mittaus eräällä tyypillisellä näytteellä, saatiin 65 mg % vapaata kolesterolia ja 170 mg % kokonaiskolesterolia ·(saippuoimisen jälkeen).
7 57616
Esimerkki 3 0,05 ml seerumia kaadetaan 10 mitään 0,5 M-kaliumfosfaatti-puskuria, pH 7,5, joka sisältää 0,02 % hydroksipolyetoksidodekaania ja 0,1 % sekundääristä alkyylisulfaattia. Luetaan ekstinktio (E^) 2*10 nmtllä sopivalla spektraalifotometrillä ja aloitetaan reaktio lisäämällä 0,02 ml ( = 0,1 U) varastointia kestävää, puhdistusaineesta täysin vapaata kolesterolioksidaasia 1 M-ammoniumsulfaattiliuoksessa.
3 minuutin kuluttua luetaan ekstinktio (E2) uudelleen. Muodostuneen kolestenonin ja sen avulla kolesterolin konsentraatio saadaan ensimmäisen ja toisen lukeman välisestä erosta, jolloin on otettava huomioon kolestenonin molaarinen ekstinktiovakio 2*10 nmrllä.
Kun suoritettiin mittaus eräälle tyypilliselle näytteelle, saatiin 62 mg % vapaata kolesterolia ja 167 mg % kokonaiskolesterolia (saippuoimisen jälkeen).
Esimerkki *1 0,5 ml seerumia kaadetaan 10 ml:aan 0,5 M-kaliumfosfaatti-puskuria, pH 7,5, joka sisältää 0,0*1 % N-lauryylidietanoliamidia. Luetaan ekstinktio (E1) 2*10 nmrssä sopivalla spektraalifotometrillä ja aloitetaan reaktio lisäämällä 0,02 ml (=0,1 U) varastointia kestävää, puhdistusaineesta vapaata kolesterolioksidaasia 1 M-ammoniumsulfaattiliuoksessa.
Ekstinktio (E2) luetaan uudelleen 3 minuutin kuluttua. Muodostuneen kolestenonin ja siten kolesterolin konsentraatio saadaan ensimmäisen ja toisen lukeman välisestä erotuksesta, jolloin on otettava huomioon o kolestenonin molaarinen ekstinktiovakio 2*10 nm:ssä (=15,5 cm /^umooli).
Mittaus tyypillisellä näytteellä antoi 62 mg % vapaata kolesterolia ja I67 mg % kokonaiskolesterolia (saippuoimisen jälkeen). Vertailumitta-us ilman pinta-aktiivista ainetta vaati 15 minuutin reaktioajan.
Esimerkki 5 0,5 ml seerumia kaadetaan 10 ml:aan 0,5 M-kaliumfosfaatti-puskuria, pH 7,5, joka sisältää 0,2 % dodekyylitrimetyyliammoniumkloridia.
Luetaan ekstinktio (E1) 2*t0 nm:ssä sopivalla spektraalifotometrillä ja aloitetaan reaktio lisäämällä 0,02 ml (=0,1 U) varastointia kestävää, puhdistusaineesta vapaata kolesterolioksidaasia 1 M-ammoniumsulfaattiliuoksessa.
8 57616
Ekstinktio (E2) luetaan uudelleen 3 minuutin kuluttua. Muodostuneen kolestenonin ja siten kolesterolin konsentraatio saadaan ensimmäisen ja toisen lukeman välisestä erotuksesta, jolloin on otettava huomioon kolestenonin mölaarinen ekstinktiovakio 240 nm:ssä (=15,5 cm /^umooii).
Mittaus tyypillisellä näytteellä antoi 62 mg % vapaata kolesterolia ja 167 mg % kokonaiskolesterolia (saippuoimisen jälkeen). Vertailu-mittaus ilman pinta-aktiivista ainetta vaati 15 minuutin reaktio-a j an.
Esimerkki 6 0,5 ml seerumia kaadetaan 10 ml:aan 0,5 M-kaliumfosfaatti-puskuria, pH 7,5, joka sisältää 0,08 % dioktyylinatriumsulfosukkinaattia. Luetaan ekstinktio (E^) 240 nm:ssä sopivalla spektraalifotometril-lä ja aloitetaan reaktio lisäämällä 0,02 ml (=0,1 U) varastointtia kestävää, puhdistusaineesta vapaata kolesterolioksidaasia 1 M-am-moniumsulfaattiliuoksessa.
Ekstinktio (E2) luetaan uudelleen 3 minuutin kuluttua. Muodostuneen kolestenonin ja siten kolesterolin konsentraatio saadaan ensimmäisen ja toisen lukeman välisestä erotuksesta, jolloin on otettava huomioon kolestenonin mölaarinen ekstinktiovakio 240 o nmrssä (=15,5 cm /^umooli).
Mittaus tyypillisellä näytteellä antoi 62 mg % vapaata kolesterolia ja 167 mg % kokonaiskolesterolia (saippuoimisen jälkeen). Ver-tailumittaus ilman pinta-aktiivista ainetta vaati 15 minuutin re-aktioajan.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI792601A FI792601A (fi) | 1973-12-07 | 1979-08-21 | Diagnostiskt medel foer bestaemning av kolesterin och kolesterinestrar |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2361169A DE2361169C3 (de) | 1973-12-07 | 1973-12-07 | Verfahren zur Aktivierung von von Detengensspuren befreiter Cholesterinoxydase |
| DE2361169 | 1973-12-07 | ||
| DE742439348A DE2439348C3 (de) | 1973-12-07 | 1974-08-16 | Diagnostisches Mittel zum Nachweis und zur Bestimmung von Cholesterin und Cholesterinestern in Körperflüssigkeiten |
| DE2439348 | 1974-08-16 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI351374A FI351374A (fi) | 1975-06-08 |
| FI57616B FI57616B (fi) | 1980-05-30 |
| FI57616C true FI57616C (fi) | 1980-09-10 |
Family
ID=25766212
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI3513/74A FI57616C (fi) | 1973-12-07 | 1974-12-04 | Foerfarande foer aktivering av kolesteroloxidas |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5733954B2 (fi) |
| AR (1) | AR201067A1 (fi) |
| AT (1) | AT338441B (fi) |
| BE (1) | BE822843A (fi) |
| CA (1) | CA1044582A (fi) |
| CH (1) | CH613046A5 (fi) |
| DD (1) | DD115759A5 (fi) |
| DE (2) | DE2361169C3 (fi) |
| DK (1) | DK136293C (fi) |
| FI (1) | FI57616C (fi) |
| FR (1) | FR2254026B1 (fi) |
| GB (1) | GB1435400A (fi) |
| HK (1) | HK49279A (fi) |
| HU (1) | HU170109B (fi) |
| IL (1) | IL46073A (fi) |
| IT (1) | IT1026827B (fi) |
| NL (2) | NL170022C (fi) |
| SE (2) | SE7415324L (fi) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL48804A (en) * | 1975-01-29 | 1979-05-31 | Baxter Travenol Lab | Imminological reagent comprising a mixture of polyethyleneglycol and a nonionic surfactant |
| DE2612725C3 (de) * | 1976-03-25 | 1979-05-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Cholesterin |
| US4161425A (en) * | 1976-07-01 | 1979-07-17 | Beckman Instruments, Inc. | Enzymatic reagent system for total cholesterol assay using oxygen-rate method |
| US4275151A (en) | 1977-02-03 | 1981-06-23 | Eastman Kodak Company | Hydrolysis of protein-bound cholesterol esters |
| US4275152A (en) | 1977-02-03 | 1981-06-23 | Eastman Kodak Company | Hydrolysis of protein-bound cholesterol esters |
| CA1104041A (en) * | 1977-02-03 | 1981-06-30 | Charles T. Goodhue | Hydrolysis of protein-bound cholesterol esters |
| US4298345A (en) | 1977-11-21 | 1981-11-03 | Damon Corporation | Method and apparatus for chemical spot test analysis |
| US4409326A (en) * | 1980-07-10 | 1983-10-11 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized enzymatic solutions and method for determining total cholesterol in human serum |
| JPS5791197A (en) * | 1980-11-20 | 1982-06-07 | Toyobo Co Ltd | Reagent for measuring activity of substrate or enzyme |
| DE3239236A1 (de) * | 1982-02-18 | 1983-09-01 | Amano Pharma Co Ltd | Verfahren zur quantitativen bestimmung von physiologischen komponenten in biologischen fluessigkeiten oder gasen |
| FR2556010B1 (fr) * | 1982-02-18 | 1988-07-29 | Amano Pharma Co Ltd | Procede pour la determination quantitative de composants physiologiques dans des fluides biologiques |
| US5047327A (en) * | 1982-04-02 | 1991-09-10 | Ivan E. Modrovich | Time-stable liquid cholesterol assay compositions |
| EP0100217B1 (en) * | 1982-07-23 | 1987-10-07 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5621391B2 (fi) * | 1971-09-22 | 1981-05-19 |
-
1973
- 1973-12-07 DE DE2361169A patent/DE2361169C3/de not_active Expired
-
1974
- 1974-08-16 DE DE742439348A patent/DE2439348C3/de not_active Expired
- 1974-11-13 CA CA213,624A patent/CA1044582A/en not_active Expired
- 1974-11-15 AR AR256556A patent/AR201067A1/es active
- 1974-11-18 IL IL46073A patent/IL46073A/en unknown
- 1974-11-19 NL NLAANVRAGE7415037,A patent/NL170022C/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-11-29 GB GB5175774A patent/GB1435400A/en not_active Expired
- 1974-11-29 FR FR7439225A patent/FR2254026B1/fr not_active Expired
- 1974-12-02 BE BE151061A patent/BE822843A/xx unknown
- 1974-12-02 JP JP13826074A patent/JPS5733954B2/ja not_active Expired
- 1974-12-04 FI FI3513/74A patent/FI57616C/fi active
- 1974-12-04 HU HUBO1525A patent/HU170109B/hu unknown
- 1974-12-04 DD DD182779A patent/DD115759A5/xx unknown
- 1974-12-05 IT IT30230/74A patent/IT1026827B/it active
- 1974-12-05 AT AT974074A patent/AT338441B/de not_active IP Right Cessation
- 1974-12-05 CH CH1619474A patent/CH613046A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-12-06 SE SE7415324A patent/SE7415324L/ not_active Application Discontinuation
- 1974-12-06 DK DK637074A patent/DK136293C/da active
-
1979
- 1979-07-19 HK HK492/79A patent/HK49279A/xx unknown
-
1981
- 1981-06-15 SE SE8103735A patent/SE8103735L/sv not_active Application Discontinuation
-
1982
- 1982-03-31 NL NL8201349A patent/NL8201349A/nl not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL8201349A (nl) | 1982-08-02 |
| NL170022B (nl) | 1982-04-16 |
| HK49279A (en) | 1979-07-27 |
| JPS5733954B2 (fi) | 1982-07-20 |
| GB1435400A (en) | 1976-05-12 |
| AU7557874A (en) | 1976-05-20 |
| SE7415324L (fi) | 1975-06-09 |
| DE2361169B2 (de) | 1978-01-19 |
| DE2439348B2 (de) | 1977-09-15 |
| IL46073A (en) | 1977-05-31 |
| DD115759A5 (fi) | 1975-10-12 |
| DK637074A (fi) | 1975-07-28 |
| DE2439348A1 (de) | 1976-03-04 |
| FI57616B (fi) | 1980-05-30 |
| ATA974074A (de) | 1976-12-15 |
| AR201067A1 (es) | 1975-02-06 |
| DE2361169C3 (de) | 1978-09-14 |
| CH613046A5 (en) | 1979-08-31 |
| HU170109B (fi) | 1977-04-28 |
| DK136293B (da) | 1977-09-26 |
| DE2361169A1 (de) | 1975-06-19 |
| JPS5089588A (fi) | 1975-07-18 |
| NL7415037A (nl) | 1975-06-10 |
| AT338441B (de) | 1977-08-25 |
| FI351374A (fi) | 1975-06-08 |
| CA1044582A (en) | 1978-12-19 |
| FR2254026B1 (fi) | 1977-11-04 |
| IT1026827B (it) | 1978-10-20 |
| NL170022C (nl) | 1982-09-16 |
| BE822843A (fr) | 1975-06-02 |
| FR2254026A1 (fi) | 1975-07-04 |
| SE8103735L (sv) | 1981-06-15 |
| DK136293C (da) | 1978-02-20 |
| DE2439348C3 (de) | 1979-03-01 |
| IL46073A0 (en) | 1975-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI57616C (fi) | Foerfarande foer aktivering av kolesteroloxidas | |
| US4164448A (en) | Activation of cholesterol oxidase for cholesterol assay | |
| Goldstein et al. | The inhibition of enzymes by tannins | |
| London et al. | Renaturation of Escherichia coli tryptophanase after exposure to 8 M urea: evidence for the existence of nucleation centers | |
| Heyns et al. | A 3 (17) β-hydroxysteroid dehydrogenase in raterythrocytes: Conversion of 5α-dihydrotestosterone into 5α-androstane-3β, 17β-diol and purification of the enzyme by affinity chromatography | |
| Fuchs et al. | Studies on the mechanism of the enzymic catalysis of disulfide interchange in proteins | |
| US4212938A (en) | Reagent and method for the determination of cholesterol | |
| Gregory | A rapid assay for peroxidase activity | |
| JPH0427839B2 (fi) | ||
| Thorpe et al. | Flavin analog studies of pig kidney general acyl-CoA dehydrogenase | |
| DIBBELT et al. | Human placental sterylsulfatase. Interaction of the isolated enzyme with substrates, products, transition-state analogues, amino-acid modifiers and anion transport inhibitors | |
| Cremonesi et al. | Enzymatic dehydrogenation of steroids by β-hydroxysteroid dehydrogenase in a two-phase system | |
| Fukushima et al. | Two Kinds of High Energy Phosphorylated Intermediate, with and without Bound ADP, in the Reaction of Na+-K+-denendent ATPase | |
| Heikel et al. | The effect of 17-alpha-ethinyl-substituted steroids on adenosine triphosphatases of rat liver plasma membrane. | |
| DE2224132C2 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Cholesterin | |
| Fink | The Trypsin-catalyzed Hydrolysis of Nα-Benzyloxycarbonyl-l-Lysine p-Nitrophenyl Ester in Dimethylsulfoxide at Sub-Zero Temperatures | |
| Thomas et al. | Inactivation of human placental 17 beta, 20 alpha-hydroxysteroid dehydrogenase by 16-methylene estrone, an affinity alkylator enzymatically generated from 16-methylene estradiol-17 beta. | |
| Adams et al. | Enzymic synthesis of steroid sulphates I. Association-dissociation equilibria in the steroid alcohol sulphotransferase of human adrenal gland extracts | |
| Lotlikar et al. | Reactive phosphate ester of the carcinogen 2-(N-hydroxy) acetamidofluorene | |
| AU604177B2 (en) | Homogeneous aqueous solution electrolyte test | |
| Jonsson et al. | Demonstration of ribonuclease activity in sections from carnoy fixed rat pancreas | |
| Freeman | The colorimetric determination of chloramphenicol | |
| JPS6127709B2 (fi) | ||
| JPH0751095A (ja) | 生体成分測定試薬 | |
| JP2000186281A (ja) | ステロ―ルエステルの添加による生物学的液体の安定化 |