FI56771C - Foerfarande foer rening av ett vaextextrakt av loev fraon zoapatle-vaexten saosom montanoa tomentosa eller montanoa floribunda-vaexten innehaollande livmodertoemmande foereningar - Google Patents

Description

9

X

Γβ1 /(MV KUULUTUSJULKAISU ____ 4&[α ^ (11) UTLÄGGNINGSSKRIFT 567 7 1 C (45) P~* "t lv* t/Li ssyur.u- 1y lv) 1x 1930 Patent meddelat ^ v ^ (51) Kv.ik.*/if»t.ci.· A 61 K 35/7® C 07 G 17/00 C 07 D 313/0^ SUOMI —FINLAND (21) Patanttlhakemu· — Patantameknlnf 751085 (22) H*k«mlsptlvi — AnaMuilnpdtf IO.OU.75 (23) Alkupiivl—GHtl|h«tad«| 10.0U.75 (41) Tullut luikituksi — Bllvlt offantllf 07.08.76

Patentti- ja rekisterihallit!» (44) NihUviktipuxxi |i kuuL]uikaisun pvm. —

Patent· och registerctyrelsen Antttktn utkgd och uti.*krifcen puUkand ,31.12.79 (32)(33)(31) Pyjrduttjr atuoikaut—Baglrd prleritat 06.02.75 USA(US) 5U7U15 Toteennäytetty-Styrkt (71) Ortho Pharmaceutical Corporation, Raritan, New Jersey, USA(US) (72) Jose Luis Mateos, Mexico City, Luis Noriega, Mexico City, Mexico(MX), Richard Huettemann, Hazlet, New Jersey, Ramesh Kanojia, Somerville,

New Jersey, Michael Wachter, Somerville, New Jersey, USA(US) (7U) Oy Kolster Ab (5U) Menetelmä Zoapatle-kasvin, kuten Montanoa tomentosa tai Montanoa fluoribunda-kasvin lehdistä saadun, kohdun tyhjentäviä yhdisteitä sisältävän kasviuutteen puhdistamiseksi - Förfarande för rening av ett växtextrakt av löv frän Zoapatle-växten, säsom Montanoa tomentosa eller Montanoa fluoribunda-växten, inneh&llande livmodertömmande föreningar

Keksinnön kohteena on menetelmä Zoapatle-kasvin, kuten Montanoa tomentosa-tai Montanoa floribunda-kasvin lehdistä saadun, kohdun tyhjentäviä yhdisteitä sisältävän orgaanisen kasviuutteen puhdistamiseksi, joilla yhdisteillä on kaava CH- CH3 3 2 56771

PIT

CH I 3 CH

jossa R merkitsee ryhmää tai \s#^, CH ' CH CH3 jolloin R:n merkitessä ryhmää 3 i J yhdisteellä on seuraavat fysikaaliset tunnus- ch3V^ arvot: IR (laimentamaton): 2,90, 5,96 ja 6,21 ρα&\

PDCI

NMRjJjg 36 : 6,11, 5,U8, U,25, U,13, 3,56, 2,11, 2,08, 1,U8, 1,13 ja 1,01 miljoonasosaa,

CH

ja jolloin R:n merkitessä ryhmää 3^^ yhdisteellä on seuraavat fysikaaliset

. . CH_A

tunnusarvot: 3 IR (laimentamat on): 2,91 ja 5,88 ;um', NMRTMSl3i : 5»Ul» k*26> U»15’ 3,58, 3»18» 2>18> 1>76> 1’67’ 1»15 ja 1»oU miljoonasosaa, jolloin joko käsitellään mainittua kasvimateriaalia vedellä noin 100°C:ssa ennen sen uuttamista orgaanisella liuottimena, edullisesti etyyliasetaatilla, jota seuraa uutteen jatkopuhdistus edullisesti bentseenillä ja heksaanilla, tai mainittu orgaaninen kasviuute pestään vedellä huoneen lämpötilassa.

Zoapatle-kasvi ( tai oikeammin kasvit) on pensas, joka on korkeudeltaan n. 2 m ja joka kasvaa villinä Meksikossa. Kasvitieteellisesti se Cervantes'in mukaan tunnetaan nimellä Montanoa tomentosa, se kuuluu Compositae-heimoon Heliant-heae-ryhmään’, toinen laji (tai muunnos) on Montanoa floribunda. Kasvia on kuvattu yksityiskohtaisesti teoksessa Las Plantas Medicinales de Mexico, kolmas painos, Ediciones Botas (I9hh). Kasvia on käytetty vuosisatoja "teen" muodossa tai muiden raakojen vesipitoisten valmisteiden muodossa etupäässä synnytyksen aikaansaamiseen tai kuukautisten aiheuttamiseen ihmisillä. Sen käyttö on kuvattu kirjallisuudessa, mutta tarkkoja kemiallisia ja farmakologisia tutkimuksia ei ole suoritettu.

Se vähäinen määrä perustavaa laatua olevaa työtä, joka on tehty, on johtopäätöksiltään ristiriitaista.

Zoapatle-kasvia on kansan keskuudessa käytetty tyypillisesti katkeranmakui-seena "teenä", joka on valmistettu kasvin lehdistä keittämällä niitä vedessä siten kuin kuumaa juomaa valmistetaan.

Meksikossa naiset, joiden kuukautisjakso on jäänyt pois ja jotka oletettavasti ovat raskaana, juovat tätä teetä', myöskin monet varmuudella raskaana olevat naiset juovat tätä teetä päättääkseen ei-toivotun raskauden. "Tee" sisältää todennäköisesti moninaisten aineiden seoksen, joista monet voivat olla haitallisia ja halutun vaikutuksen kannalta tarpeettomia. Luonnon kasviaineet sisältävät tunnetusti yleensä erittäin monia eri aineita. Ne sisältävät yleensä monia yhdisteitä,

bo/ 7 I

joilla on samanlaiset kemialliset ja fysikaaliset ominaisuudet, sekä myös yhdisteitä, joilla on täysin erilaiset ominaisuudet, ja yleensä eri yhdisteiden erottaminen ja tunnistaminen on vaikeata. Ennen tätä keksintöä ei menetelmää vaikuttavien aineiden eristämiseksi ja puhdistamiseksi Zoapatle-kasvista ole kuvattu.

Kohdun tyhjentävällä aineella tarkoitetaan ainetta, joka saa lämminveristen eläinten kohdun supistumaan, jolloin kohdun sisältö tulee ulos. Tällaisia aineita käytetään yleensä kuukautisten aikaansaamiseen, rakkulamaisen rypälealkion ulos-ajamiseen, sikiön ulosajamiseen tai resorboimiseen, keskenmenon tai viivästyneen synnytyksen aikaansaamiseen ja tilanteissa, joissa kohdun sisältö, kuten sikiö tai istukka, tulisi poistaa.

Kohdun tyhjentävien aineiden läsnäolo raakauutteessa määritetään menetelmillä, joita käytetään naaraseläinten kohdun supistumisen ja tiineyden keskeytymisen havaitsemiseen. Raakauutteella suoritetuilla kokeilla on havaittu kohdun supistumisia käytettäessä n. 150-500 mg/kg uutetta. Tiineyden keskeytyminen marsuilla on havaittu raakauutteen annoksilla 300-500 mg/kg.

Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytetään lähtöaineena raakaa Zoapatle-kasviuutetta, jonka puhdistaminen suoritetaan siten, että a) mainittu vedellä esikäsitelty tai pesty kasviuute liuotetaan veden kanssa sekoittumattomaan orgaaniseen liuottimeen, edullisesti dietyylieetteriin, huoneen lämpötilassa, b) saatua liuosta käsitellään huoneen lämpötilassa heikon emäksen, kuten natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella, ja orgaaninen faasi erotetaan, jolloin edullisesti ennen orgaanisen faasin erottamista lisätään vedetöntä natriumsul-faattia, c) saatu orgaaninen faasi kromatografoidaan huoneen lämpötilassa adsorboivaa ainetta, kuten piihappogeeliä, sisältävällä pylväällä, jolloin kohdun tyhjentävä aines adsorboituu pylvääseen, d) pylväs eluoidaan polaarisen ja ei-polaarisen liuottimen seoksella, edullisesti isopropanolin ja kloroformin seoksella, huoneen lämpötilassa, e) kohdun tyhjentävää ainetta sisältävät fraktiot yhdistetään, liuotin haihdutetaan pois ja haihdutusjäännös liuotetaan veden kanssa sekoittumattomaan orgaaniseen liuottimeen, kuten bentseeniin, f) liuos kromatografoidaan orgaanista polymeerigeeliä, kuten vinyyliase-taattisekapolymeeriä, sisältävällä pylväällä huoneen lämpötilassa, g) pylväs eluoidaan ei-polaarisella liuottimella, kuten bentseenillä, huoneen lämpötilassa, ja kerätään kohdun tyhjentäviä yhdisteitä sisältävät fraktiot, ja h) kohdun tyhjentävät yhdisteet otetaan talteen, jolloin toisesta fraktiosta

CH

saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R merkitsee ryhmää CH„ ,3 CH3/ li 56 ΊΊ 1 ja toisesta fraktiosta saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R merkitsee ryhmää ch3v~.

ch3/^'

Kerätyt fraktiot haihdutetaan kuiviin huoneen lämpötilassa n. U0°C:ssa. Kerättyjen fraktioiden koostumusta tarkkaillaan käyttäen ohutlevykromatografiaa tai kaasukromatografiaa. Vaihtoehtoisesti raakauutteen liuos voidaan kromatogra-foida suoraan poistamatta liuotinta. Liuos voidaan väkevöidä ennen kromatogra-foimisvaihetta käsittelyn helpottamiseksi.

Raakauute sisältää ainakin kolme pääkomponenttia, kuten kaasukromatografia osoittaa. Keksinnön mukaisella menetelmällä saadaan puhtaana kaksi kemiallisesti erilaista kohdun tyhjentävää yhdistettä, kuten kaasukromatografisesti ja NMR- ja IR-spektreillä on osoitettu. Eristettyjen aineiden kohdun tyhjentävät ominaisuudet määritetään mittaamalla kohdun supistuksien määrä ja aste, jossa tiineys keskeytyy naaraseläimellä. Jos halutaan, voidaan vähäisiä epäpuhtauksia poistaa puhdistetuista yhdisteistä käyttäen edelleen kromatografiaa adsorptioaineilla kuten esimerkiksi piihapolla tai Florisililla. Pylväs eluoidaan orgaanisella liuottimelle tai liuotinseoksella, kloroformi-isopropanolin ollessa edullinen liuotinseos, ja koottujen jakeiden koostumusta seurataan käyttäen ohutlevykromatografiaa.

Puhdistetut kohdun tyhjentävät yhdisteet ovat vaikuttavia annostettuna 1,0 mg - n. 100 mg/kg. Kulloinkin käytettävä tarkka annos riippuu eläinlajista, jolle yhdistettä annetaan. Yhdiste voidaan antaa valmisteina, jotka on valmistettu hyväksyttävän farmaseuttisen käytännön mukaisesti. Sopivia valmisteita ovat liuokset, suspensiot ja kiinteät annosmuodot.

5 5 o 7 / \

Esimerkki 10 kg Zoapatle-kasvin lehtiä ja 113 litraa vettä pannaan 378 litran höyry-vaipalla varustettuun ruostumattomaan terässäiliöön. Seosta kuumennetaan 98-100°C;ssa 2,5 tuntia jaksottain sekoittaen. Kuuma seos suodatetaan metalli-lankaverkon läpi, jolloin saadaan n. 95 litraa kirkasta, tummaa uutetta. Kiinteä jäännös säiliössä pestään 15 litralla kuumaa vettä, suodatetaan ja suodos yhdistetään edellä saatuun uutteeseen. Yhdistetyt vesiuutteet uutetaan 113 litralla etyyliasetaattia. Seosta sekoitetaan voimakkaasti, ja sen annetaan erottua. Pinnalla oleva vaahtokerros juoksutetaan pois emulsion hajottamiseksi, ja etyyliasetaattia erotetaan niin paljon kuin mahdollista. Seokseen lisätään vielä γ6 litraa etyyliasetaattia, ja edellä esitetty prosessi toistetaan. Yhdistetyt, etyy-liasetaattiuutteet haihdutetaan 50°C;ssa tyhjössä. Jäännös uutetaan kolmella " annoksella kuumaa (75-80°) bentseeniä (yhteensä 10 l). Bentseeniuutteet haihdute taan 50°C:ssa tyhjössä, ja jäännöstä keitetään palautusjäähdyttäen kolme kertaa yhteensä 8 litran kanssa heksaania. Heksaanilla pesty jäännös liuotetaan 2 li ΙΟ raan asetonia, liuokseen lisätään 10 g aktiivihiiltä (Nuchar^), ja seosta sekoitetaan yksi tunti huoneen lämpötilassa. Hiili poistetaan suodattamalla, ja suodos tislataan 30°C:ssa tyhjössä, jolloin saadaan 69 g raakauutetta.

Edellä mainitulla tavalla valmistettu raakauute (50 g) liuotetaan eetteriin (51), liuos suodatetaan ja pestään kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella (500 ml). Eetteri kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan vaaleankeltainen öljy (Uit,6 g). Tämä öljy liuotetaan sitten kloroformiin (U00 ml) ja liuos lisätään pylvääseen (10 x 120 cm), joka on täytetty 2,5 kg:lla neutraalia piihappoa kloroformissa. Pylväs eluoidaan kloroformilla, kloroformi-isopropanoli-seoksilla ja kerätään 100 jaetta. Jakeet haihdutetaan kuiviin tyhjössä alle Uo°C:n lämpötilassa. Pylväs eluoidaan seuraavasti:

Jae Tilavuus/jae Eluoimisaine „ (ml) 1-7 650 CHC13 3-20 500 isopropanoli:CHCl3(l:Ul,7) 31-60 500 isopropanoli:CHCl3(l:33,3) 61-105 500 isopropanoli:CHCl3(l:28,6) 106-110 500 isopropanoli:CHCl3(l:25) 6 5 o 7 71

Jakeiden koostumusta tarkkaillaan ohutkerroskromatografialla /piihappogee-li, isopropanoli-kloroformi (1:12,5)7 ja ohjelmoidulla kaasukromatografialla (150-250°C) £3 % 0V1T metyylisilikoni-fenyylisilikoni(l:l)-pylväs7. Jakeet n:o 78-81+ yhdistetään, ja liuotin poistetaan tyhjössä, jolloin saadaan öljymäinen jäännös (5>1 g), joka sisältää ainakin 3 pääkomponenttia, mikä osoitetaan käyttäen kaasukromatografiaa.

Osa jäännöksestä (3,2 g) liuotetaan sitten bentseeniin (50 ml), ja liuos lisätään pylvääseen (10 x 89 cm), joka on täytetty 2 kg:11a OR-PVA Merck-O-geeli 2 000 (vinyyliasetaattisekapolymeeri, joka turpoaa orgaanisissa liuottimissa, tuottaa E.M. Merck, Inc.) bentseenissä. Pylväs eluoidaan bentseenillä ja yhteensä 1+7 jaetta kerätään. Ohutkerroskromatografiaa ja kaasukromatografiaa käytetään jakeiden koostumuksen tarkkailemiseen.

Jae Tilavuus/jae (ml) 1-7 1 000 8-1+5 300 U6-U7 1 000

Jakeet 23-33 sisältävät 1,73 g (5** %) käytetystä aineesta.

A) Jakeet 2U—25 haihdutetaan, jolloin saadaan öljymäinen yhdiste (0,251 g)» jonka kaava on

CH 0 /-\ CH OH

CH3 CH3 CH3 ja fysikaaliset tunnusarvot IR (laimentamaton) ji: 2,90, 5»96 ja 6,21 NMR^g1^: 6,11 (leveä s, 1, -C-CH-C); 5,*+8 (m, 1, C=CH-CH20H): 1+,19 (d, 2, C=CH-CH20H); 1+,13 (s, 2, C-O-CH^-C»); 3,56 /leveä t, 1, -CH(0H)7; 2,10 (d, 3, H3C-C=C); 1,13 (s, 3, C-0-C-CH_3); 1,07 £d, 6, C^-CHiCH^^

Massaspektri {ja/ej: 33^ /M-l8J, 225, ll+0, 111, 95, 8l, 69 UV(etanoli ):/v» 239 nm /£= 8 5007 rflSJl

Kemiallinen ionisoituminen: M + H = 353; molekyylipaino = 352.

B) Jae 31 haihdutetaan, jolloin saadaan öljymäinen yhdiste (0,326 g), jonka kaava on

-v CHgOH

ch3\>^\ CH3 CH3 CH3 167) \ 7 ja fysikaaliset tunnusarvot

IR (laimentamaton) μ: 2,91 ja 5>88 O

5,^1 (m, 2, >C=CH-CH OH ja >C=CH-CH -C); U,20 (d, 2, C=CH-C^OH) ;

Irlo | ¢. & U

U,15 (s, 2, C-O-CHg-C*); 3,58 £eveä t, 1, >CH(0H)7; 3,18 (d, 2, C^H-CI^-C-); 1,71 6, C=C-(CE3)J-, 1,15 (s, 3, C-0-C-CH3)

Massaspektri {ja/ej: 320 /m-1§7, 251, 233, 221, 171» 1^+3, lUl, 137, 125, H3, 97, 95, 81, 69

Kemiallinen ionisoituminen: M+ + H = 339; molekyylipaino = 338.

Seuraavaa yleistä menetelmää käytetään kohdun supistumisen havaitsemiseksi. Menettelytapa I

Kehittyneitä naaraspuolisia Uuden Seelannin kaniineja nukutetaan natrium-pentobarbitaalilla ja niiltä poistetaan munasarjat. Viikon toipumisajan jälkeen kaniineja käsitellään 5 pg:lla/päivä ihonalaisesti 17/i~estradiolia kuutena peräkkäisenä päivänä, mitä seuraa käsittely 1,0 mg:lla/päivä ihonalaisesti progesteronia seitsemänä peräkkäisenä päivänä. Kaniinien kohtu ja munajohtimet läpihuuhdellaan 72 tuntia viimeisen progesteroni-annoksen jälkeen muunnetun Heilman'in & ai menetelmän mukaisesti (Fertil. Steril. 23:221-229). Munajohdin ja kohtu huuhdellaan nopeudella 53 μΐ/min. Kohtu huuhdellaan putkella, joka ulottuu 1,0 cm kohdun aukkoon munajohtimen päästä. Kohtu sidotaan kohdun ja munajohtimen liittymäkohdassa. Toinen kanyyli sijoitetaan 1,0 cm kohdun sisään emättimeen tehdyn pienen aukon kautta huuhtelunesteen kokoamiseksi. Testattavaa ainetta annetaan laskimonsisäisesti kaulalaskimon kautta kantajassa, joka sisältää polyetyleeniglykoli 200:aa, polyetyleeniglykoli 400:aa, etanolia ja fosfaatti-puskuria. Kanyyli kytketään P23-Dc Stathan-muuttimeen, joka puolestaan on kytketty Grass Model 5-polygrafin ja kohdun supistuma mitataan.

Jakeesta 31 saatava yhdiste annettuna laskimonsisäisesti on vaikuttava aikaansaaden kohdun supistuksia ja munajohtimen tyhjenemisen 72 tuntia progesteronilla käsitellyillä kaniineilla annoksilla 1,0-U,0 mg/kg. Jakeista 2^-25 saatu yhdiste on tehokas annettuna annoksin 25-^0 mg/kg.

Seuraavaa yleistä menettelytapaa käytetään tiineyden keskeytymisen havaitsemiseen munasolun kiinnittymisen tapahduttua.

Menettelytapa II

Kehittyneitä Hartley-kantaa olevia naaraspuolisia marsuja astutetaan jatkuvasti (yksiavioisesti) koirailla, kunnes ontelossa havaitaan emätintulppa. Tätä aikaa pidetään ensimmäisenä tiineyspäivänä. 5~6 naaraan ryhmille annetaan testiaineita vatsaontelon sisäisesti menettelytavassa I kuvatussa kantajassa tiineyden 22. päivänä. Marsut lopetetaan tiineyden 25-^5. päivänä ja tutkitaan resorption tai keskenmenon todistamiseksi.

Jakeesta 31 saatu aine osoittautui annoksella 25~Ö5 mg/kg annettuna vatsaontelon sisäisesti tehokkaaksi keskeyttämään tiineys.

Claims (1)

1. θ 5677 1 Patenttivaatimus: Menetelmä Zoapatle-kasvin, kuten Montanoa tomentosa- tai Montanoa flori-bunda-kasvin lehdistä saadun, kohdun tyhjentäviä yhdisteitä sisältävän orgaanisen kasviuutteen puhdistamiseksi, joilla yhdisteillä on kaava A-O"" CH3 CH3 CH 9^3 qjj jossa R merkitsee ryhmää SV/Sj* tai 3V#s\ , CH-/ CH / CH C“3 jolloin R:n merkitessä ryhmää 3\ J. yhdisteellä on seuraavat fysikaaliset CH / ^ tunnusarvot: IR (laimentamaton): 2,90, 5,96 ja 6,21 ;umi 3cT : 6,11, 5,^8, U,25, U,13, 3,56, 2,11, 2,08, 1,U8, 1,13 ja 1,01 miljoonasosaa, ja jolloin R:n merkitessä ryhmää CH-. yhdisteellä on seuraavat fysikaaliset CH / tunnusarvot: IR (laimentamaton): 2,91 ja 5,88 ΟΤ)ΓΛ NMRjJ^A3cf: 5,U1, k ,2 6, U, 15, 3,58, 3,18, 2,18, 1,76, 1,6?, 1,15 ja 1,0U miljoonasosaa, jolloin joko käsitellään mainittua kasvimateriaalia vedellä noin 100°C:ssa ennen sen uuttamista orgaanisella liuottimena, edullisesti etyyliasetaatilla, jota seuraa uutteen jatkopuhdistus edullisesti bentseenillä ja heksaanilla, tai mainittu orgaaninen kasviuute pestään vedellä huoneen lämpötilassa, tunnettu siitä, että a) mainittu vedellä esikäsitelty tai pesty orgaaninen kasviuute liuotetaan veden kanssa sekoittumattomaan orgaaniseen liuottimeen, edullisesti dietyyli-eetteriin, huoneen lämpötilassa, b) saatua liuosta käsitellään huoneen lämpötilassa heikon emäksen, kuten natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella, ja orgaaninen faasi erotetaan, jolloin edullisesti ennen orgaanisen faasin erottamista lisätään vedetöntä natriumsulfaattia, c) saatu orgaaninen faasi kromatografoidaan huoneen lämpötilassa adsorboivaa ainetta, kuten piihappogeeliä, sisältävällä pylväällä, jolloin kohdun tyhjentävä aines adsorboituu pylvääseen, 9 5 υ 7 7 \ d) pylväs eluoidaan polaarisen ja ei-polaarisen liuottimen seoksella, edullisesti isopropanolin ja kloroformin seoksella, huoneen lämpötilassa, e) kohdun tyhjentävää ainetta sisältävät fraktiot yhdistetään, liuotin haihdutetaan pois, ja haihdutusjäännös liuotetaan veden kanssa sekoittumattomaan orgaaniseen liuottimeen, kuten bentseeniin, f) liuos kromatografoidaan orgaanista polymeerigeeliä, kuten vinyyliase-taattisekapolymeeriä, sisältävällä pylväällä huoneen lämpötilassa, g) pylväs eluoidaan ei-polaarisella liuottimena, kuten bentseenillä, „ huoneen lämpötilassa, ja kerätään kohdun tyhjentäviä yhdisteitä sisältävät fraktiot, ja h) kohdun tyhjentävät yhdisteet otetaan talteen, jolloin toisesta fraktiosta rm saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R merkitsee ryhmää „„ 3 ja toisesta 5)^ fraktiosta saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R merkitsee ryhmää CV 10 5677 1 Förfarande för rening av ett organiskt växtextrakt av löv frän Zoapatle-växten, säsom Montanoa tomentosa eller Montanoa floribunda-växten, innehällande livmodertömmande föreningar med formeln ? 50 V CH3 CH3 CH där R betecknar gruppen CH , 3 eller CH, x , CH^A CH3 / CH varvid när R betecknar gruppen CH, 3 föreningen har följande fysikaliska kännetecken: n3' IR (outspädd): 2,90, 5 »96 och 6,21 CT)C"\ NMRjj^X3(f: 6,11, 5,^8, 1+,25, 1+,13, 3,56, 2,11 , 2,08, 1,1+8, 1,13 och 1,01 miljonte-delar, och varvid när R betecknar gruppen CH,> föreningen har följande fysikaliska kännetecken: 5 IR (outspädd): 2,91 och 5,88,1ml', NMR^-Scf: 5,in, kt26, 1+,15, 3,58, 3,18, 2,18, 1,76, 1 ,67, 1 ,15 och 1,0U miljonte-delar, varvid man antingen behandlar det nämnda växtmaterialet med vatten vid ca 100°C innan det extraheras med ett organiskt lösningsmedel, lämpligen etylacetat, varpä följer vidarerening av extraktet med lämpligen bensen eller hexan, eller det nämnda organiska växtextraktet tvättas med vatten vid rumstemperatur, känneteck-n a t därav, att a) det nämnda med vatten förbehandlade eller tvättade organiska växtextraktet upplöses i ett med vatten icke-blandbart organiskt lösningsmedel, lämpligen i dietyleter, vid rumstemperatur, b) den erhällna lösningen behandlas vid rumstemperatur med en vattenlösning av en svag bas, säsom natriumvätekarbonat, och den organiska fasen separeras, varvid man fördelaktigt tillsätter vattenfritt natriumsulfat före separeringen av den organiska fasen, c) den erhällna organiska fasen kromatograferas vid rumstemperatur pä en kolonn innehällande ett adsorberande medel, säsom kiselsyregel, varvid det liv-