FI114807B - Glukaanien entsyymikäsittely - Google Patents
Glukaanien entsyymikäsittely Download PDFInfo
- Publication number
- FI114807B FI114807B FI964339A FI964339A FI114807B FI 114807 B FI114807 B FI 114807B FI 964339 A FI964339 A FI 964339A FI 964339 A FI964339 A FI 964339A FI 114807 B FI114807 B FI 114807B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- glucan
- yeast
- insoluble
- linked
- residue
- Prior art date
Links
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 title claims abstract description 110
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title description 11
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 51
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 48
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 108010045275 endo-1,6-beta-glucanase Proteins 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 10
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 9
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 7
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims 6
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims 4
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 claims 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 abstract description 7
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 abstract description 4
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 abstract description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 36
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 27
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 17
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical group [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 9
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 9
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 9
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 9
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 9
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 9
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 229940081969 saccharomyces cerevisiae Drugs 0.000 description 5
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 101000689231 Aeromonas salmonicida S-layer protein Proteins 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 229920000715 Mucilage Polymers 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000235528 Rhizopus microsporus var. chinensis Species 0.000 description 1
- 241000277263 Salmo Species 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 235000019728 animal nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012143 dye reagent concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 208000010824 fish disease Diseases 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- ASHGTUMKRVIOLH-UHFFFAOYSA-L potassium;sodium;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[K+].OP([O-])([O-])=O ASHGTUMKRVIOLH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012258 stirred mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
- A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
- A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G3/42—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds characterised by the carbohydrates used, e.g. polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
114807
Glukaanien entsyymikäsittely Tämä keksintö koskee rakenteellisesti modifikoituja hiivaglukaaneja, jotka ovat erityisesti mutta eivät yksin-5 omaan peräisin Saccharomyces-suvusta, ja saatavissa käyttämällä β-(1-6)-glukanaasia. Tällaisten modifioitujen glukaanien käyttöä rokote- ja eläinrehuformulaatioissa kuvataan.
Keksinnön tausta EP-patenttihakemuksen nro 91 111 143.3 (julkaisu 10 nro 0 466 037 A2) perusteella tiedetään, että vesieläinten immuunijärjestelmää voidaan stimuloida antamalla tehokas määrä hiivan soluseinän glukaania. Tiedetään lisäksi, että rokotteiden vaikutusta sellaisiin vesieläimiin voidaan tehostaa antamalla tehokas määrä sellaista hiivan soluseinän 15 glukaania yhdessä rokoteantigeenien kanssa.
Sellaiset glukaanikoostumukset ovat hienojakoisia glukaaneja, kuten ne jotka ovat peräisin hiivasta Saccharomyces cerevisiae. Sellaiset hienojakoiset glukaanit ovat makromolekyylisiä ja ne koostuvat glukoosiyksiköiden ket-20 justa, jota liittävät yhteen β-(1-3)- ja β-(1-6)-sidokset, ja mainittu glukaani on haarautunut β-(1,3)-glukaani, jossa ! . : on β-(1,3)-sidoksellisia ja β-(1,6)-sidoksellisia ketjuja.
, ; KS Biotech-Mackzymal tarjoaa sellaisia hienojakoi- ; siä glukaaneja kauppanimellä "MacroGard", ja ne ovat makro- 25 fagi/monosyytti-solusarjan tehokkaita aktivaattoreita. Niinpä sellaisilla hienojakoisilla glukaaneilla on perin- > * 1 pohjainen vaikutus immuunijärjestelmään.
‘ Vaikka Saccharomyces cerevisiaesta peräisin oleval la tietyllä glukaanilla ajatellaan olevan monia erilaisia •k 30 edullisia vaikutuksia kalaan ja muihin eläimiin, glukaanin käyttökelpoisuus hienojakoisena ja näin ollen liukenematto-mana muotona on rajoitettu.
Lisäksi nyt uskotaan, että β-(1-3)-haarojen läsnä- • · olo myötävaikuttaa niihin haluttuihin farmaseuttisiin etui- I » * * t ’ * 35 hin, jotka on tarkoitus hankkia hienojakoisesta glukaanis- • » :.'*i ta.
114807 2
Niinpä järjestelmä, jossa β-(1-3)-sidokselliset haarat saatetaan helpommin saataville glukaanissa, olisi hyvin suotava.
Keksinnön yhteenveto 5 On havaittu, että käsittelemällä sellainen hienoja koinen glukaani, joka on peräisin hiivaorganismeista, erityisesti Saccharomyces-suvun hiivaorganismeista, ja erityisesti Saccharomyces cerevisiae -hiivasta, β-(1-6)-glukanaa-silla, saadaan modifioitu hienojakoinen glukaani, jolle on 10 tunnusmerkillistä, että sillä on tehostunut aktiivisuus, mitä tulee immuunijärjestelmän stimulaation aikaansaamiseen.
Niinpä tämän keksinnön yhdessä suoritusmuodossa tarjotaan uusi hiivasta peräisin oleva β-(1-3)-glukaani, 15 joka on kuten patenttivaatimuksessa 1 on määritelty ja josta ylläolevassa mainittiin, jolle hiivaglukaanille on tunnusmerkillistä, että sillä on tehostunut kyky stimuloida kalan ja muiden eläinten immuunijärjestelmää.
Toisessa tämän keksinnön suoritusmuodossa tarjotaan 20 uusi menetelmä sellaisen hiivasta peräisin olevan vesiliukoisen β-(1-3)-glukaanin tuottamiseksi, jolla on tehostunutta farmaseuttista aktiivisuutta.
: Toisessa tämän keksinnön suoritusmuodossa tarjotaan j ·’ uusi menetelmä sellaisen hiivasta peräisin olevan β— (1—3) — 25 glukaanin tuottamiseksi, joka on hyödyllinen tehostettaessa ; · eläinlääketieteellisten rokotteiden vaikutusta.
, Vielä toisessa tämän keksinnön suoritusmuodossa tarjotaan uusi rehulaadun glukaanikoostumus, joka on hyö-. dyllinen ainesosa tavanomaisissa eläinrehuissa.
30 Tämän keksinnön muut suoritusmuodot ja edut käyvät ilmi seuraavasta selitysosasta ja patenttivaatimuksista.
Menetelmä β-(1-6)-glukanaasilla käsitellyn glukaa- : nin ("MacroGard") valmistamiseksi
Glukaani, jolla on kauppanimi "MacroGard", on pe-, . 35 räisin Saccharomyces cerevisiaesta, kuten esitetään EP- ’ patenttihakemuksessa nro 91 111 143.3. Vaikka sellaisen 114807 3 glukaanin tiedetään stimuloivan kalan immuunijärjestelmää, on havaittu, että sen käsittely β-(1-6)-glukanaasilla tehostaa sen aktiivisuutta.
Sellainen glukaanin glukanaasikäsittely suoritetaan 5 suspendoimalla glukaanipartikkeli puskuroituun liuokseen pHrssa, joka on noin 4 - noin 8, ja lämpötilassa joka on noin 20 - noin 50 °C. Soveliaita puskuroituja liuoksia voivat olla natriumasetaatti, ammoniumasetaatti tai natrium-kaliumfosfaatti. Tässä edullisia puskuriliuoksia ovat nat-10 riumasetaatti tai ammoniumasetaatti. Glukaanin entsymaatti-nen pilkkominen aloitetaan lisäämällä puskuroituun liuokseen β-(1-6)-glukanaasia.
Sellaisia β-(1-6)-glukanaaseja, jotka soveltuvat hiivaglukaanin modifikaatioon, ovat ne, jotka hankitaan 15 mikro-organismista, joka voi olla Trichoderma lonqibrachia-tum, Trichoderma reesei, Trichoderma harzianum, Rhizopus chinensis, Gibberella fuiikuroi, Bacillus circulans, Mucor lilmalis ja Acinetobacter. Näistä erityisen edullinen glu-kanaasi on se joka saadaan lajista Trichoderma harzianum.
20 Glukaanin käsittelyssä käytettävä β-(1-6)-glukanaa- sin määrä on normaalisti välillä 1 - 50 U per gramma glu-' * kaania.
: / Entsymaattinen pilkkominen lopetetaan kuumentamalla ; > reaktioseos lämpötilaan, joka on välillä 80 - 100 °C, edul- 25 lisesti ajaksi joka on välillä 2-10 minuuttia. Muita kei-; noja lopettaa entsyymihajotus ovat esimerkiksi proteaasien . tai inhibiittoreiden lisääminen reaktioseokseen.
Entsyymi voidaan vaihtoehtoisesti poistaa yksinker- . taisesti pesemällä. Pestyt partikkelit resuspendoidaan sit- ‘ il 30 ten veteen, johon lisätään bakterisidi, kuten 0,3-prosent- * · tinen formaliini (v/v), ja varastoidaan noin 4 °C:n lämpö-: tilaan.
Tuloksena olevalle entsyymillä käsitellylle glu- kaanille on tunnusmerkillistä, että se on haarautunut β-(1-35 3)-glukaani, jossa on β-(1-3)-sidoksellisia sivuketjuja, ' · joita yhdistää β-(1-6)-sidos, ja siinä ei oleellisesti ole 114807 4 β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja. Tässä yhteydessä ilmauksen "β-(1-6)-ketjut" on tarkoitus sisältää haarat, joissa on enemmän kuin 1 β-(1-6)-sidoksellinen glukoosiyksikkö. β-(1- 6)-glukanaasi-entsyymillä katkaisu varmistaa sen, että 5 useimmat ketjut, joissa on enemmän kuin 4 β-(1-6)-sidok-sellista glukoosiyksikköä, katkaistaan irti.
Glukaanin hyödyllisyyden tehostamiseksi edelleen se altistetaan solubilisointiin. Sellainen solubilisoiva käsittely suoritetaan yleensä lämpötilassa, joka on välillä 10 noin 70 - 90 °C, noin 30 - 60 minuutin ajan, solubilisoivan agenssin läsnä ollessa. Erityisen edullinen solubilisoiva agenssi on muurahaishappo. Solubilisoinnin jälkeen solubilisoiva agenssi poistetaan ja tuloksena oleva glukaani keitetään tislatussa vedessä.
15 Glukaani voidaan käsitellä ensin entsyymillä ja so- lubilisoida sitten, tai päinvastoin solubilisoida ja käsitellä sitten entsyymillä.
Tämän keksinnön toisen suoritusmuodon mukaisesti tarjotaan β-(1-6)-glukanaasilla käsitelty rehulaadun glu-20 kaani, joka on peräisin hiivasta, esim. Saccharomyces cere-visiaesta. Sellainen rehulaadun glukaani voidaan hankkia * saattamalla hiivan soluseinä ensin kontaktiin vesipohjaisen : emäsliuoksen kanssa olosuhteissa, joilla voidaan saada ai- I .* kaan proteiinien ja lipidien uuttaminen niistä. Sellainen :· 25 uuttaminen suoritetaan yleisesti lämpötilassa, joka on alu- • eella noin 50 - 80 °C, noin 2-8 tunnin ajan. Tällä het- . kellä edullinen emäksinen uuttoagenssi on natriumhydroksi- di. Uuttamisen jälkeen soluseinät otetaan talteen vesipohjaisesta emäsliuoksesta ja ne pestään, jotta niistä saadaan ; ) 3 0 poistetuksi solubilisoidut soluseinän komponentit. Pesty ·' hiivan soluseinä neutraloidaan sitten käsittelemällä hapol- : la, kuten fosforihapolla. Tämän jälkeen neutraloitu, pesty ·;· glukaani pastöroidaan ja sitten kuivataan.
Soveliaita entsyymejä rehulaadun glukaanin käsitte-, . 35 lyä varten ovat ne, jotka ovat hyödyllisiä hyvin puhtaan ’* ’· glukaanin käsittelyssä.
114807 5
Entsyymillä käsitelty rehulaadun glukaani valmistetaan saattamalla glukaani kontaktiin β-(1-6)-glukanaasin kanssa samalla tavalla kuin mitä käytettiin hienojakoisen glukaanin entsyymikäsittelyssä. Tämän keksinnön mukainen, 5 β-(1-6)-glukanaasilla käsitelty rehulaadun glukaani on hyödyllinen eläinrehuformulaatioissa.
Seuraavat esimerkit esitetään keksinnön havainnollistamista varten.
Esimerkki 1 10 Tämä esimerkki tarjoaa menetelmän, jota käytetään hankkimaan immuunijärjestelmää stimuloiva glukaanipartikke-li, joka soveltuu hyödynnettäväksi valmistettaessa esillä olevan keksinnön mukaista hiivaglukaania.
500 g kuivaa Saccharomyces cerevisiae -hiivaa sus-15 pendoitiin 3 litraan 6-%:ista NaOH-vesiliuosta. Tätä suspensiota sekoitettiin sitten yli yön huoneenlämpötilassa. Sekoituksen jälkeen suspensiota sentrifugoitiin 2 000 g:n kiihtyvyydellä 25 minuuttia. Supernatantti kaadettiin pois ja liukenematon tähde resuspendoitiin sitten 3 litraan 20 3-%:ista NaOH:ta ja inkuboitiin 3 tuntia 75 °C:n lämpötilassa, mitä seurasi suspension jäähdyttäminen yli yön. Sus-' ’ pensiota sentrifugoitiin sitten 2 000 g:n kiihtyvyydellä 25 : minuuttia ja supernatantti dekantoitiin. Jäännös resuspen- ; : doitiin sitten 3-%:isessa NaOHrssa, kuumennettiin ja sent- 25 rifugoitiin aikaisemmin kuvatulla tavalla.
. Liukenematon jäljelle jäävä jäännös säädettiin sit- , ·. ten etikkahapolla pH-arvoon 4,5. Liukenematon jäännös pes tiin sitten 2 litralla vettä kolme kertaa ja otettiin talteen sentrifugoimalla 2 000 g:n kiihtyvyydellä 25 minuutin ‘ ; 30 ajan kunkin pesun jälkeen (supernatantti kaadettiin pois).
;·' Jäännös suspendoitiin sitten 3 litraan 0,5 M etikkahapon ; : vesiliuosta. Suspensiota kuumennettiin 3 tunnin ajan ·;·-· 90 °C:n lämpötilassa. Suspensio jäähdytettiin sitten huo- ’ . neenlämpötilaan. Jäähdytyksen jälkeen liukenematonta jään- * » * » · 35 nosta kerättiin sitten sentrifugoimalla 2 000 g:n kiihty-’* ’* vyydellä 25 minuutin ajan. Tämä käsittely (pH:n säätämises- 114807 e tä 4,5 reen jäähdytetyn jäännöksen keräämiseen) toistettiin 6 kertaa.
Liukenematon jäännös suspendoitiin sitten 3 litraan tislattua vettä ja sekoitettiin 30 minuutin ajan 100 °C:n 5 lämpötilassa, sitten jäähdytettiin ja sentrifugoitiin 2 000 g:n kiihtyvyydellä 25 minuutin ajan. Supernatantti kaadettiin pois. Liukenematon jäännös pestiin tällä tavalla 4 kertaa. Jäännös suspendoitiin sitten 2 litraan etanolia ja kuumennettiin 78 °C:n lämpötilaan 2 tunniksi. Tämä etanoli-10 pesu toistettiin 4 kertaa. Jäännös pestiin sitten 4 kertaa 3 litralla tislattua vettä huoneenlämpötilassa etanolin poistamiseksi, siten jäännös käsitellään vähintään 2 kertaa, jotta saadaan kuudes liukenematon hiivajäännös ja otetaan talteen liukenematon hiivajäännös jokaisen keittämisen 15 jälkeen; jonka jälkeen (g) pestään mainittu kuudes liukenematon hiivajäännös sopivissa olosuhteissa vedellä, jolloin mainitun kuudennen jäännöksen pesu suoritetaan vähintään 2 kertaa hiivaglukaanin saamiseksi ja liukenemattoman hiiva-jäännöksen talteenottamiseksi jokaisen pesun jälkeen.
20 Esimerkki 2 Tämä esimerkki tarjoaa menetelmän, jolla voidaan hankkia glukaanipartikkeleita, joissa oleellisesti ei ole ; · β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja, käyttämällä β-(1-6)-gluka- · naasia, joka on eristetty Trichoderma harzianumista.
25 200 mg glukaanipartikkeleita, jotka oli valmistettu : ; esimerkin 1 mukaisesti, suspendoitiin 40 ml:aan 50 mM ammo- . niumasetaattipuskuria, pH 5,0, yhdessä β-(1-6)-glukanaasin kanssa (10 U) 37 °C:n lämpötilassa 6 tunnin ajaksi jatkuvasti sekoittaen. Glukaanipartikkeleiden entsymaattinen ha-I 30 jotus lopetettiin kuumentamalla suspensio 100 °C:n lämpöti- ** laan 5 minuutin ajaksi. Partikkelit pestiin sitten kolme : : kertaa 200 ml :11a steriiliä tislattua H20:ta sentrifugoi- ·;·*: maila 2 000 g:n kiihtyvyydellä 10 minuutin ajan, minkä jäl keen saatiin 185 mg kuivattua, entsyymikäsiteltyä glukaa-, . 35 nia.
7 114807
Entsyymikäsittely katkaisee vain β-(1-6)-sidokset β-(1-6)-sidoksellisten ketjujen sisällä, mutta se ei poista β-(1-6)-sidoksellista glukosyylitähdettä, joka lähtee haa-rautumiskohdista. Tuloksena oleva entsyymikäsitelty glukaa-5 ni voidaan karakterisoida haarautuneeksi β-(1-3)-glukaanik-si, jossa on β-(1-3)-sidokselliset sivuketjut, joita yhdistää β-(1-6)-sidos, ja jossa ei oleellisesti ole β-(1-6)-3Ϊ-doksellisia ketjuja, eli siinä ei ole β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja paitsi niissä ketjuissa, joissa on 4 tai vähemmän 10 β-(1-6)-sitoutuneita glukoosiyksikköjä.
Esimerkki 3 Tämä esimerkki tarjoaa menetelmän, jolla voidaan solubilisoida glukaanipartikkeleita, jotka on valmistettu esimerkin 1 mukaisesti, muurahaishappoa (HCOOH) käyttävällä 15 hydrolyysillä.
2,0 g glukaanipartikkeleita suspendoitiin 1,0 litraan 90-%:ista muurahaishappoa ja kuumennettiin 80 °C:n lämpötilaan 45 minuutiksi jatkuvasti sekoittaen. Suspensio jäähdytettiin 35 °C:n lämpötilaan ja muurahaishappo haihdu-20 tettiin. Hydrolysoidut partikkelit sisältävää jäännöstä keitettiin 500 ml:ssa tislattua vettä 3 tunnin ajan, minkä : jälkeen jäähdytetty suspensio suodatettiin 0,44 pm:n suo- / dattimen läpi, pakastettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saa- . : tiin 1,9 g kuivia solubilisoituja partikkeleita. Lyofili- ·· 25 soidut solubilisoidut partikkelit liuotettiin sitten 100 . ml:aan tislattua vettä ja dialysoitiin käyttäen dialyysi- , membraaniletkua, jonka nimellinen molekyylipainoraja (NMWC0) oli 5 000 daltonia, hanavettä vastaan 24 tunnin . ajan, ja lyofilisoitiin sitten. Tämä tuotti 1,8 g solubili- ' ; 30 soitua glukaanituotetta.
’;** Esimerkki 4 ; Tämä esimerkki osoittaa sellaisten glukaanipartik- ·;·· kelien, jotka on valmistettu esimerkin 1 mukaisesti, ja sellaisten β-(1-6)-glukanaasilla käsiteltyjen glukaanipar- 35 tikkelien, jotka on valmistettu esimerkin 2 mukaisesti, biologiset vaikutukset lohen immuunivasteisiin.
• i * * · 114807 8 Käytettiin Aerpmonas salmonicida SS. salmonicidan A-kerros-positiivista isolaattia, johon viitataan nimellä kanta nro 3 175/88 (Vikanin eläinlääketieteellinen kalantutkimuslaitos, Namsos, Norja). Bakteeria kasvatettiin ai-5 vo-sydänuute-elatusaineessa (Difco, USA) 30 tunnin ajan 14 °C:n lämpötilassa ravistelevassa inkubaattorissa, ja bakteerin sisältävä elatusainetta sentrifugoitiin 10 minuutin ajan 3 000 g:n kiihtyvyydellä. Sakka resuspendoi-tiin 0,9-%:iseen suolahappoon ja bakteeri tapettiin lisää-10 mällä suspensioon 0,5-%:inen formaliini (v/v) ja inkuboi-malla 14 °C:n lämpötilassa 24 tuntia. Formalinisoitu viljelmä pestiin sitten steriilillä 0,9-%:isella suolaliuoksella ja resuspendoitiin tiheyteen 2 x 109 bakteeria/ml 0,9-%:iseen suolaliuokseen, joka oli 0,3 % formaliinin 15 suhteen. Bakteerisuspensiot sekoitettiin yhtä suureen tilavuuteen suolaliuosta tai eri glukaanisuspensioihin (10 mg/ml suolaliuoksessa). Formaliini lisättiin rokotteisiin niin, että sen loppukonsentraatio oli 0,3 % (v/v).
Näitä kokeita suoritettaessa käytettiin kahta ryh-20 mää koekaloja. Rokotekokeessa käytettiin 20 - 40 g:n painoisia lohen esismoltteja ("presmolts"). Kokeessa, jossa : seerumi kerättiin veren lysotsyymiaktiivisuuden mittaami seksi glukaani-injektion jälkeen, käytettiin 50 - 70 g:n ·. lohia. Kaloja pidettiin 150 litran tankeissa, joissa oli ’ 25 ilmastettua tuoretta vettä, 12 °C:n lämpötilassa, ja niil le syötettiin mielinmäärin kaupallisia pellettejä kahdesti päivässä.
Rokotekokeessa 40 kalaa kussakin ryhmässä injektoitiin vatsaontelonsisäisesti 0,1 ml:11a eri rokotevalmis-30 teitä tai kontrollina glukaanittomalla rokotteella. Veri : kerättiin tyhjiöputkiin (Venoject, Terumo-Europe, Belgia) 10 kalasta kussakin ryhmässä 6, 10 ja 18 viikkoa injektion . jälkeen. Verinäytteiden annettiin hyytyä yli yön 4 °C:n lämpötilassa ja seerumit kerättiin sen jälkeen kun putkia • 35 oli sentrifugoitu 2 000 g:n lämpötilassa 10 minuutin ajan.
114807 9
Yksittäiset seeruminäytteet siirrettiin Micronic-seerumi-putkiin (Flow Laboratories Ltd., Lugano, Sveitsi) ja varastoitiin -80 °C:n lämpötilaan, kunnes niitä tarvittiin.
Jotta saataisiin mitattua glukaanien vaikutus veren 5 lysotsyymiaktiivisuuteen, lohia injektoitiin vatsaontelon-sisäisesti 0,3 ml:11a eri glukaaneja suolaliuoksessa tai negatiivikontrollina 0,3 ml:11a suolaliuosta. Glukaanit annettiin konsentraationa 10 mg/ml. Verinäytteitä kerättiin 10 kalasta kustakin ryhmästä 10 ja 20 päivää injek-10 tion jälkeen käyttämällä tyhjiöputkia (Venoject). Putkia pidettiin jäillä, kunnes ne sentrifugoitiin 2 000 g:n kiihtyvyydellä 10 minuutin ajan, ja yksittäiset seerumi-näytteet siirrettiin Micronic-seerumiputkiin ja ne varastoitiin -80 °C:n lämpötilaan, kunnes niitä tarvittiin.
15 Lysotsyymiaktiivisuus mitattiin turbidimetrisellä menetelmällä, jossa käytettiin substraattina lyofilisoitua Micrococcus lvsodeikticusta (0,2 mg/ml) 0,04 M natrium-fosfaattipuskurissa, pH 5,75. Seerumi (20 μΐ) lisättiin 3 ml:aan suspensiota ja absorbanssin pieneneminen 540 nm:n 20 aallonpituudella mitattiin 0,5 minuutin ja 4,5 minuutin kuluttua 22 °C:n lämpötilassa. Yksi yksikkö lysotsyymiak-:'i . tiivisuutta määritettiin 0,0001 min'1:n absorbanssin vähe- . nemisenä. Tulokset ilmaistaan lysotsyymiaktiivisuuden kes kiarvona 10 kalasta saadussa seerumissa (taulukot 1 ja 2).
25 A. salmo-nicidan A-kerrosta vastaan suunnatun spe sifisen vasta-aineen taso lohiseerumeissa mitattiin entsyymiin kytketyllä immunosorbenttimäärityksellä (ELISA). A-kerrosproteiini puhdistettiin kokonaisista A. salmonici-da -soluista [Bj0rnsdottir ym. (1992), Journal of Fish 30 Diseases, 15:105 - 118] ja proteiinipitoisuus määritettiin ί [Bradford, M.M. (1976), Analytical Biochemistry, 72:248 - 254] käyttämällä väriainereagenssikonsentraattia (Bio-Rad I · . Laboratories, Richmont, USA). Mikrotiitterilevyt päällys- > · tettiin 100 pl:lla A-kerrosproteiinia (5 pg/ml) 50 mM kar-* 35 bonaattipuskurissa, pH 9,6, ja inkuboitiin yli yön 4 °C:n
s I
’ » 114807 ίο lämpötilassa. Jatkomenettely suoritettiin, kuten ovat kuvanneet Hävardstein ym. [Journal of Fish Diseases (1990), 12:101 - 111]. Yhdistetyissä seeruminäytteissä oleva vas-ta-ainetiitteri määritettiin ennen kuin yksittäiset seeru-5 minäytteet mitattiin kolmella eri laimennoksella (1:500, 1:1 000 ja 1:2 000). Absorbanssi luettiin 492 nm:n aallonpituudella Multiscan MCC/340 MK II:ssa (Flow Laboratories Ltd). Tulokset ilmaistaan keskimääräisenä vasta-ainevas-teena bakteerin A-kerrokselle 10 kalasta saadun seerumin 10 laimennoksella 1:2 000 (taulukot 1 ja 2).
Taulukko 1. Erot glukaanipartikkeleiden ja B-(1-6)-gluka-naasilla käsiteltyjen glukaanipartikkeleiden biologisissa vaikutuksissa Atlantin lohen immuunivastineisiin 15
Suola- Käsittele- 8-(1-6)-glu- liuoskont- mättömät konaasilla rolli glukaani- käsitellyt partikke- glukaanipar- lit tikkelit
Lysotsyymiaktii-visuus injektion j älkeen 20 (yksiköitä/ml) 10 päivää 304 505 529 20 päivää_330_407_454_
Rokote Rokote, Rokote, jos- ,· ilman glu- jossa kä- sa 8-(1-6)- kaania sittele- glukanaasil- mättömiä la käsitel- : glukaani- tyjä glukaa- partikke- nipartikke- leita leita
Vasta-ainevaste 25 injektion jäl keen (absorbans-: si) 6 viikkoa 0,165 0,255 0,376 : : 10 viikkoa 0,059 0,355 0,500 30 18 viikkoa 0,037 0,197 0,142 > * : Sekä käsittelemättömän että β-(l-6)-glukanaasilla käsiteltyjen glukaanipartikkelien injektio indusoi merkit- > » » 11 114807 tävästi korkeamman (p < 0,01) lysotsyymiaktiivisuuden seerumissa suolaliuoskontrolliin verrattuna sekä 10 että 20 päivää injektion jälkeen. Päivänä 20 injektion jälkeen ly-sotsyymitasot kalassa, joka oli injektoitu β(l-6)-gluka-5 naasilla käsitellyillä glukaanipartikkeleilla, olivat merkitsevästi korkeammat (p < 0,05) verrattuna kalaan, joka injektoitiin käsittelemättömillä partikkeleilla.
β- (1,6)-glukanaasilla käsitellyt glukaanipartikke-lit indusoivat merkitsevästi korkeamman (p < 0,05) vasta-10 ainevasteen rokotteelle verrattuna rokotteeseen ilman ad-juvanttia, kaikissa kolmessa näytteenottoajassa, kun taas käsittelemättömät glukaanipartikkelit indusoivat merkitsevästi korkeamman vasteen 10 ja 18 viikkoa injektion jälkeen. β-( 1,6)-glukanaasilla käsitellyt glukaanipartikkelit 15 indusoivat merkitsevästi korkeamman (p < 0,05) vasta-aine-vasteen kuin käsittelemättömät glukaanipartikkelit 10 viikkoa injektion jälkeen, kun taas näiden kahden välillä ei havaittu mitään merkitseviä eroja 6 ja 18 viikkoa injektion jälkeen.
♦ - * ' : » 114807 12
Taulukko 2. Glukaanipartikkeleiden ja solubilisoidun glu-kaanin biologiset vaikutukset
Suola- Käsittele- Solubilisoi- liuoskont- mättömät dut glukaa- rolli glukaani- nipartikke- partikke- lit lit 5 Lysotsyymiaktii- visuus injektion jälkeen (yksiköitä/ml) 10 päivää 304 505 603 10 20 päivää_330_407_773_
Rokote Rokote, Rokote, jos- ilman glu- jossa kä- sa solubili- kaania sittele- soituvia mättöraiä glukaanipar- glukaani- tikkeleita partikkeleita
Adj uvanttivaiku-tus injektion j älkeen (absor-15 banssi) 6 viikkoa 0,165 0,255 0,184 10 viikkoa 0,059 0,355 0,349 18 viikkoa 0,037 0,197 0,120 20 Solubilisoitujen glukaanipartikkeleiden injektio indusoi merkitsevästi korkeamman (p < 0,01) lysotsyymiak-: tiivisuuden kuin käsittelemättömät glukaanipartikkelit sekä 10 että 20 päivää injektion jälkeen. Solubilisoitujen : glukaanipartikkeleiden ja käsittelemättömien glukaanipar- ; 25 tikkeleiden välillä ei voitu havaita mitään merkitseviä eroja missään näyteaikapisteessä, mitä tulee kykyyn indu-, soida vasta-ainevaste rokoteantigeenille. Molemmat indu soivat merkitsevästi korkeamman (p < 0,05) vasta-ainevas-teen kuin rokote ilman adjuvanttia 10 ja 18 viikkoa injek- • 30 tion jälkeen, mutta ei 5 viikkoa injektion jälkeen.
* t > ? * 114807 13
Esimerkki 5 Tämä esimerkki tarjoaa menetelmän sellaisen glukaa-nikoostumuksen hankkimiseksi, joka soveltuu käytettäväksi eläinten ruokinnassa.
5 1 000 kg Saccharomyces cerevisiaen kuivaa solusei- nämateriaalia suspendoitiin 5 300 litraan vettä 65 °C:n lämpötilassa ruostumattomasta teräksestä tehdyssä tankissa. Soluseinäsuspensioon vedessä lisättiin 227 litraa 50-%:ista (w/w) NaOH:ta niin että saatiin aikaan noin 10 5-%:inen emäskonsentraatio. Tuloksena olevaa seosta sekoitettiin sitten noin 4 tunnin ajan noin 60 °C:n lämpötilassa.
Alkuperäisen uuttovaiheen jälkeen suspensio laimennettiin 8 000 kg:11a vettä noin 65 °C:n lämpötilassa ruos-15 tumattomassa teräksessä valmistetussa tankissa, sekoitettiin pesten tankkia niin, että seoksen paino kaksinkertaistui. Tuloksena oleva laimennettu seos pidettiin sitten noin 60 °C:n lämpötilassa, samalla kun sitä sekoitettiin noin 15 minuutin ajan. Tämän jälkeen tuloksena oleva se-20 koitettu laimennettu suspensio sentrifugoitiin suutinsent-rifugissa (Alfa Laval DX209). Supernatantti kaadettiin . pois. Tuloksena olevaa konsentroitua soluseinäsuspensiota tuotiin jatkuvasti toiseen teräksiseen sekoitettavaan pe-sutankkiin, joka sisälsi 8 000 kg vettä, ja seosta säädet-25 tiin lisäämällä vettä niin, että loppupainoksi saatiin 14 500 kg. Tuloksena olevaa suspensiota sekoitettiin sit-‘ ten 15 minuutin ajan 60 - 65 °C:n lämpötilassa. Tämän jäl- keen sekoitettu seos sentrifugoitiin.
Tuloksena olevaa soluseinäsuspensiota lisättiin ' 30 jatkuvasti kolmanteen astiaan, joka sisälsi 8 000 kg vet tä. Lisättiin vielä 60 °C:n lämpöistä vettä, jolloin saatiin loppupainoksi 14 500 kg. Tuloksena olevaa suspensiota , sekoitettiin 15 minuutin ajan 60 - 65 °C:n lämpötilassa ja * sentrifugoitiin tämän jälkeen.
» » 114807 14
Sentrifugoinnin jälkeen tuloksena oleva soluseinä-konsentraatti siirrettiin ruostumattomasta teräksestä tehtyyn varastotankkiin, jossa suspensio jäähdytettiin noin 5 - 10 °C:n lämpötilaan. Tuloksena oleva jäähdytetty sus-5 pensio käsiteltiin ruostumattomasta teräksestä valmistetussa ravisteltavassa tankissa sellaisella määrällä fosfo-rihappoa (H3P04), että saatiin suspensio jonka pH oli 5,5 -7,5.
Neutraloinnin jälkeen tuloksena oleva neutraloitu 10 seos alistettiin pastörointiin kuumentamalla se 75 °C:n lämpötilaan 18 sekunnin ajaksi viemällä seos linjassa olevaan levylämmönvaihtimeen.
Pastöroinnin jälkeen tuloksena oleva pastöroitu seos sumutuskuivattiin sitten sumutuskuivattimessa, jossa 15 sisääntuleva ilma pidettiin lämpötilassa, joka oli ainakin 140 - 150 °C ja ulostulevan ilman lämpötila oli noin 65 -70 °C, jolloin saatiin 300 kg kuivaa glukaanituotetta.
Esimerkki 6 Tämä esimerkki tarjoaa rehulaadun glukaanin käsit-20 telymenetelmän β-(l-6)-glukanaasilla ja käsittelyn vaikutuksen.
25 g rehulaadun glukaania, joka oli valmistettu esimerkin 5 mukaisesti, suspendoitiin 1,25 litraan 50 mM ·. natriumasetaattia, pH 5,0, 2 litran kartiomaisessa pullos- ^ 25 sa. Glukaanipartikkelit pidettiin suspensiossa ravistele malla, suspensio lämmitettiin 30 °C:n lämpötilaan ja Tric-hoderma harzianumista saatu puhdistettu β-( 1-6)-glukanaasi lisättiin niin, että loppukonsentraatio oli 1,8 U/g glukaania .
, 30 Jotta saataisiin seurattua, missä ajassa β-(1-6)- ; sidoksellinen glukoosi poistui entsymaattisesti glukaani- partikkelista, suspensiosta otettiin 1 ml:n eriä eri aika-. pisteissä, ne sentrifugoitiin 2 000 g:n kiihtyvyydellä ja 0,2 ml supernatanteista analysoitiin silmälläpitäen va-: 35 paata, pelkistävää hiilihydraattia [Nelson ym. (1944), 15 114807
Journal of Biological Chemistry, 153:315 - 80]. Glukaani-suspensiota inkuboitiin 28 tunnin ajan, missä ajassa vapaan, pelkistävän hiilihydraatin vapautumisnopeuden havaittiin olevan hyvin pieni. Glukaanipartikkelit pelletoi-5 tiin sitten sentrifugoimalla 2 000 g:n kiihtyvyydellä, pestiin kerran 50 mM natriumasetaatilla, pH 5,0, ja kerran vedellä.
Hienojakoinen kuiva jauhe, joka soveltuu käytettäväksi rehun lisäaineena, valmistettiin märästä glukaanista 10 dehydroimalla ensin pelletti neljä kertaa etanolilla huoneenlämpötilassa, mitä seurasi ilmakuivatus huoneenlämpö-tilassa.
Tulokset rehulaadun glukaanin käsittelystä T. har-zianumista peräisin olevalla β-(1,6)-glukanaasilla edellä 15 kuvatulla tavalla esitetään taulukossa 3.
Taulukko 3. Glukoosin vapautuminen rehulaadun glukaanista T. haraΐ«muni»ta peräisin olevalla 6-(l-6)-glukanaasilla käsittelyn aikana 20 ^^^====ee=====_===_====^===_==|
Entsyymireaktio, aika (h) Vapautunutta glukoosia, , (% glukaanissa olevasta : glukoosin kokonaismääräs- __tä)_ 0 0,0 0,5 1,9 :· 1 2,6 : 25 2 3,3 : 3 3,7 4 4,0 5 4,3 2 5,5 30 8 | 5,6 • fill· ' · III*
Claims (7)
114807
1. Haarautunut β-(1-3)-glukaani, jossa on β— (1—3) — sidoksellisia sivuketjuja, joita yhdistää β-(1-6)-sidos, ja 5 siinä ei ole β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja paitsi niissä ketjuissa, joissa on 4 tai vähemmän β-(1-6)-sitoutunutta glukoosiyksikköä, jolloin mainittu glukaani on saatavissa menetelmällä, jossa saatetaan kontaktiin liukenematon, hienojakoinen haarautunut β-(1-3)-glukaani, joka on peräisin 10 hiivasta ja jossa on β-(1-3)-sidoksellisia ja β—(1—6) — sidoksellisia ketjuja, β-(1-6)-glukanaasin kanssa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen glukaani, tunnettu siitä, että mainittu liukenematon hienojakoinen β-(1-3)-glukaani, jossa on β-(1-3)-sidoksellisia ja β—(1— 15 6)-sidoksellisia ketjuja, valmistetaan menetelmällä, joka käsittää seuraavat vaiheet: a) soveliaille glukaania sisältäville hiivasoluille tehdään emäsuutto soveliaalla uuttavalla emäksen vesiliuoksella soveliaissa olosuhteissa, jolloin saadaan ensimmäinen 20 liukenematon hiivajäännös, b) mainittu ensimmäinen liukenematon hiivajäännös » * uutetaan kuumalla emäksellä soveliaalla uuttavalla emäksen ,·' vesiliuoksella soveliaissa uutto-olosuhteissa, jolloin uut- l to kuumalla emäksellä suoritetaan ainakin 2 kertaa, jolloin ;· 25 saadaan toinen liukenematon hiivajäännös ja liukenematon : hiivajäännös otetaan talteen kuumalla emäksellä uuton jäl keen, minkä jälkeen * · c) pestään mainittu toinen liukenematon hiivajään- . nös soveliaalla hydrolysoivalla hapolla soveliaissa olosuh- ; 30 teissä veden kanssa pH:ssa, joka on välillä noin pH 4 - « ·’ noin pH 7, jolloin saadaan kolmas liukenematon hiivajäännös : ja mainittu kolmas liukenematon hiivajäännös otetaan tal- ;··: teen pesun jälkeen, d) mainittu kolmas liukenematon hiivajäännös hydro- • > · · , . 35 lysoidaan hellävaraisissa happohydrolyysiolosuhteissa, jol- * ’· loin happohydrolyysi suoritetaan ainakin 3 kertaa, jolloin 1 1 4807 saadaan neljäs liukenematon hiivajäännös ja otetaan talteen hiivajäännös kunkin happohydrolyysin jälkeen, minkä jälkeen e) mainittu neljäs liukenematon hiivajäännös keitetään soveliaissa olosuhteissa vedessä, jolloin mainitun 5 neljännen liukenemattoman hiivajäännöksen keitto suoritetaan ainakin 2 kertaa, jolloin saadaan viides liukenematon hiivajäännös ja liukenematon hiivajäännös otetaan talteen kunkin keittämisen jälkeen, ja f) mainittu viides liukenematon hiivajäännös keite-10 tään soveliaissa olosuhteissa etanolissa, jolloin mainitun viidennen hiivajäännöksen keitto etanolissa suoritetaan ainakin 2 kertaa, jolloin saadaan kuudes liukenematon hiiva-jäännös ja liukenematon hiivajäännös otetaan talteen kunkin keittämisen jälkeen, minkä jälkeen 15 g) mainittu kuudes liukenematon hiivajäännös pes tään soveliaissa olosuhteissa vedessä, jolloin mainitun kuudennen hiivajäännöksen pesu suoritetaan ainakin 2 kertaa, jolloin saadaan hiivaglukaani, ja liukenematon hiiva-jäännös otetaan talteen kunkin pesun jälkeen.
3. Solubilisoitu β-(1-3)-glukaani, jossa on β-(1- 3)-sidoksellisia sivuketjuja, joita yhdistää β-(1-6)-sidos, * ja siinä ei ole β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja paitsi niissä ,· ketjuissa, joissa on 4 tai vähemmän β-(1-6)-sitoutunutta ’ glukoosiyksikköä, jolloin mainittu glukaani on saatavissa ;· 25 menetelmällä, jossa saatetaan patenttivaatimuksen 1 tai 2 ; mukainen haarautunut glukaanituote kontaktiin solubilisoi- . *. van agenssin kanssa.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen solubilisoitu glukaanituote, tunnettu siitä, että mainittu solu-' 30 bilisoiva agenssi on muurahaishappo ja mainittu haarautunut glukaani saatetaan kontaktiin mainitun solubilisoivan • agenssin kanssa lämpötilassa, joka on alueella 70 - 90 °C. t": 5. Liukenematon hienojakoinen hiivaglukaani, joka on erityisesti peräisin hiivasuvusta Saccharomyces ja eri-35 tyisesti hiivalajista Saccharomyces cerevisiae, t u n - • · · ’ * n e t t u siitä, että se on haarautunut β- (1-3) -glukaani, 114807 jossa on β-(1-3)-sidoksellisia sivuketjuja, joita yhdistää β-(1-6)-sidos, ja siinä ei ole β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja paitsi niissä ketjuissa, joissa on 4 tai vähemmän β-(1-6)-sitoutunutta glukoosiyksikköä.
6. Haarautunut β-(1-3)-rehulaadun hiivaglukaani, jossa on β-(1-3)-sidoksellisia sivuketjuja, joita kiinnittää β-(1,6)-sidos, ja jossa ei ole β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja paitsi niissä ketjuissa, joissa on 4 tai vähemmän β-(1-6)-sitoutunutta glukoosiyksikköä, jolloin mainittu 10 glukaani on saatavissa menetelmällä, jossa saatetaan kontaktiin liukenematon, hienojakoinen, haarautunut β—(1—3)— rehulaadun glukaani, joka on peräisin hiivasta ja jossa on β-(1-3)-sidoksellisia ja β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja, β-(1-6)-glukanaasin kanssa.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen rehulaadun glu kaani, tunnettu siitä, että mainittu liukenematon, hienojakoinen, haarautunut β-(1-3)-rehulaadun glukaani, jossa on β-(1-3)-sidoksellisia ja β-(1-6)-sidoksellisia ketjuja, valmistetaan menetelmällä, joka käsittää seuraavat 20 vaiheet: a) hiivasoluseinät saatetaan kontaktiin emäksisen • vesiliuoksen kanssa soveliaissa olosuhteissa, jotta saadaan aikaan proteiinien ja lipidien uuttaminen siitä, : b) tuloksena olevat uutetut hiivasoluseinät erote- ·· 25 taan mainitusta emäksisestä vesiliuoksesta, c) tuloksena olevat erilliset hiivasolut pestään niin, että tämä poistaa edelleen solubilisoidut soluseinä-komponentit niistä, d) pestyt hiivasoluseinät neutraloidaan, ja 30 e) pastöroidaan neutraloidut, pestyt soluseinät ja * · ;·’ tämän jälkeen kuivataan tuloksena olevat pastöroidut, neut- : raloidut, pestyt soluseinät. • 1 1 · ♦ i 1 » 1 · • · * t < 1 · 19 1 1 4807
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO941581 | 1994-04-29 | ||
| NO941581A NO300692B1 (no) | 1994-04-29 | 1994-04-29 | Solubilisert forgrenet ß-1,3-glukan og anvendelse derav samt anvendelse av usolubilisert forgrenet ß-1,3-glukan |
| PCT/IB1995/000265 WO1995030022A1 (en) | 1994-04-29 | 1995-04-18 | Enzyme treatment of glucans |
| IB9500265 | 1995-04-18 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI964339A0 FI964339A0 (fi) | 1996-10-28 |
| FI964339A FI964339A (fi) | 1996-10-28 |
| FI114807B true FI114807B (fi) | 2004-12-31 |
Family
ID=19897060
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI964339A FI114807B (fi) | 1994-04-29 | 1996-10-28 | Glukaanien entsyymikäsittely |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7883875B2 (fi) |
| EP (1) | EP0759089B1 (fi) |
| JP (3) | JP3992730B2 (fi) |
| AT (1) | ATE222958T1 (fi) |
| AU (1) | AU703251B2 (fi) |
| CA (1) | CA2189010C (fi) |
| DE (1) | DE69527955T2 (fi) |
| DK (1) | DK0759089T3 (fi) |
| ES (1) | ES2182898T3 (fi) |
| FI (1) | FI114807B (fi) |
| NO (1) | NO300692B1 (fi) |
| WO (1) | WO1995030022A1 (fi) |
Families Citing this family (52)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO300692B1 (no) | 1994-04-29 | 1997-07-07 | Biotec Mackzymal As | Solubilisert forgrenet ß-1,3-glukan og anvendelse derav samt anvendelse av usolubilisert forgrenet ß-1,3-glukan |
| US5786343A (en) * | 1997-03-05 | 1998-07-28 | Immudyne, Inc. | Phagocytosis activator compositions and their use |
| US8912165B2 (en) | 1999-03-12 | 2014-12-16 | Biotec Pharmacon Asa | Methods of skin treatment and use of water-soluble β-(1,3) glucans as active agents for producing therapeutic skin treatment agents |
| US6875754B1 (en) | 1999-03-12 | 2005-04-05 | Biotec Asa | Use of water-soluble β-(1,3) glucans as agents for producing therapeutic skin treatment agents |
| DE19911055A1 (de) * | 1999-03-12 | 2000-09-21 | Cognis Deutschland Gmbh | Verwendung von oberflächenaktiven Gemischen |
| DE19911052A1 (de) | 1999-03-12 | 2000-09-21 | Cognis Deutschland Gmbh | Sonnenschutzmittel |
| DE19911058B4 (de) * | 1999-03-12 | 2004-09-30 | Biotec Asa | Verwendung von nanoskaligen wasserlöslichen β-(1,3)-Glucanen |
| US8501710B2 (en) * | 1999-03-12 | 2013-08-06 | Biotec Pharmacon Asa | Methods of skin treatment and use of water-soluble β-(1,3) glucans as active agents for producing therapeutic skin treatment agents |
| DE19911057C2 (de) * | 1999-03-12 | 2001-01-25 | Cognis Deutschland Gmbh | Haarkosmetische Zubereitungen |
| DE19911056B9 (de) * | 1999-03-12 | 2005-09-08 | Biotec Asa | Kosmetische Zubereitungen und deren Verwendung |
| DE19911053B4 (de) | 1999-03-12 | 2004-10-28 | Biotec Asa | Kosmetische und/oder pharmazeutische Zubereitungen |
| DE19917743C2 (de) * | 1999-04-20 | 2003-08-14 | Biotec Asa | Desodorierende Zubereitungen |
| DE19917744A1 (de) * | 1999-04-20 | 2000-10-26 | Cognis Deutschland Gmbh | Dekorative kosmetische Zubereitungen |
| DE19920557B4 (de) * | 1999-05-05 | 2004-09-09 | Biotec Asa | Verfahren zur Herstellung von Kollagenfreien kosmetischen Zubereitungen |
| US20020009463A1 (en) * | 2000-02-23 | 2002-01-24 | Jan Raa | Novel, non-antigenic, mucosal adjuvant formulation which enhances the effects of substances, including vaccine antigens, in contact with mucosal body surfaces |
| US7906492B2 (en) | 2001-01-16 | 2011-03-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Therapy-enhancing glucan |
| US7507724B2 (en) | 2001-01-16 | 2009-03-24 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Therapy-enhancing glucan |
| BE1014638A6 (fr) | 2002-02-12 | 2004-02-03 | Univ Liege | Methode de preparation de derives de la paroi cellulaire a partir de biomasse. |
| GB0211118D0 (en) | 2002-05-15 | 2002-06-26 | Polonelli Luciano | Vaccines |
| US7018986B2 (en) * | 2002-09-20 | 2006-03-28 | Immudyne | Use of beta glucans for the treatment of osteoporosis and other diseases of bone resorption |
| US20050180964A1 (en) | 2003-03-17 | 2005-08-18 | Puntenney Steven B. | Methods and compositions for the inhibition of growth of infectious Aspergillus fumigatus and other mycotic organisms in the gut of mammalian and avian species |
| JP2004210895A (ja) * | 2002-12-27 | 2004-07-29 | Immudyne Japan:Kk | 免疫機能を有する可能性β−グルカンの製造方法及び用途 |
| DE602004020117D1 (de) | 2004-02-13 | 2009-04-30 | Alpron Co Ltd | Verfahren zur herstellung von aus hefe stammendem glucan |
| US20050220846A1 (en) | 2004-04-05 | 2005-10-06 | Puntenney Steven B | Use of beta-1,3 (4)-endoglucanohydrolase, beta-1,3 (4) glucan, diatomaceous earth, mineral clay and glucomannan to augment immune function |
| AU2004218698B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-06-09 | Biotec BetaGlucans AS | Method |
| JP4570949B2 (ja) * | 2004-12-13 | 2010-10-27 | 株式会社アルプロン | 酵母由来グルカンの製造方法 |
| BRPI0520481B1 (pt) * | 2005-08-10 | 2020-11-10 | Steven Bruce Puntenney | composição de b-1, 3 (4) - endoglucanohidrolase, b-1, 3 (4) glucanas, terra diatomácea, argila mineral e glucomananas e método de uso para aumentar a função imunológica |
| EP1984004A4 (en) * | 2006-01-17 | 2010-03-03 | Sloan Kettering Inst Cancer | THE THERAPY REINFORCING GLUCAN |
| US8323644B2 (en) | 2006-01-17 | 2012-12-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Therapy-enhancing glucan |
| US8142798B2 (en) | 2006-04-26 | 2012-03-27 | OmniGen Research, L.L.C. | Augmentation of titer for vaccination in animals |
| US8580253B2 (en) * | 2006-11-06 | 2013-11-12 | Whitehead Institute | Immunomodulating compositions and methods of use |
| US9457047B2 (en) | 2006-11-06 | 2016-10-04 | Whitehead Institute | Immunomodulating compositions and methods of use thereof |
| WO2008102151A1 (en) * | 2007-02-21 | 2008-08-28 | Biotec Pharmacon Asa | Medical uses of glucans |
| CN101711112B (zh) * | 2007-05-08 | 2015-11-25 | 生物高聚物工程公司Dba生物治疗公司 | 粒状可溶的葡聚糖制备 |
| FI20070471A0 (fi) * | 2007-06-13 | 2007-06-13 | Glykos Finland Oy | Ravinnelisäkompositiota |
| EP2211900A1 (en) * | 2007-11-19 | 2010-08-04 | Calanus AS | Bioactive copepod-compositions, processes for the production thereof, and use thereof to prevent or treat hosts infested by phylogenetically similar ectoparasites |
| US9439954B2 (en) | 2007-11-26 | 2016-09-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Conjugated beta-1,3-linked glucans |
| BRPI0900639C1 (pt) * | 2009-02-13 | 2011-12-20 | Hebron Farmaceutica Pesquisa Desenvolvimento E Inovacao Tecnologica Ltda | composição farmacêutica e uso desta para tratamento e/ou prevenção de doenças do trato respiratório |
| PT3130396T (pt) | 2009-03-27 | 2021-05-12 | Bend Res Inc | Processo de secagem por pulverização |
| WO2012014978A1 (ja) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | 国立大学法人北海道大学 | 免疫アジュバント |
| WO2012031129A2 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | Bend Research, Inc. | Spray-drying apparatus and methods of using the same |
| US9084944B2 (en) | 2010-09-03 | 2015-07-21 | Bend Research, Inc. | Spray-drying apparatus and methods of using the same |
| EP2618924A1 (en) | 2010-09-24 | 2013-07-31 | Bend Research, Inc. | High-temperature spray drying process and apparatus |
| GB201020193D0 (en) | 2010-11-29 | 2011-01-12 | Biotec Pharmacon Asa | Glucan compositions |
| GB201020191D0 (en) | 2010-11-29 | 2011-01-12 | Biotec Pharmacon Asa | Glucan gels |
| GB201020190D0 (en) | 2010-11-29 | 2011-01-12 | Biotec Pharmacon Asa | Glucans |
| WO2012120290A2 (en) | 2011-03-04 | 2012-09-13 | Sana Pharma As | Cosmetic formulations |
| FR2981075A1 (fr) | 2011-10-11 | 2013-04-12 | Kitozyme | Procede de preparation de glucans a partir d'aspergillus niger |
| MD4329C1 (ro) * | 2013-10-30 | 2015-09-30 | Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы | Procedeu de cultivare a tulpinii de levuri Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-20 |
| WO2015123456A1 (en) | 2014-02-12 | 2015-08-20 | OmniGen Research, L.L.C. | Composition and method for promoting reduction of heat stress in animals |
| CA2962719A1 (en) | 2014-10-31 | 2016-05-06 | Bend Research Inc. | Process for forming active domains dispersed in a matrix |
| WO2017044832A1 (en) | 2015-09-09 | 2017-03-16 | Omnigen Research, Llc | A composition and/or combination for aquaculture |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2764463A (en) | 1953-05-26 | 1956-09-25 | Underwood Corp | Magnetic recording system |
| US3954979A (en) * | 1972-11-24 | 1976-05-04 | Ceres Products Company, Inc. | Process for preparing stabilized yeast and compositions and tableting composition and method |
| JPS5432076B2 (fi) | 1973-09-14 | 1979-10-11 | ||
| JPS54138115A (en) * | 1978-04-17 | 1979-10-26 | Kirin Brewery | Antiicancer agent |
| GB2076418A (en) | 1980-05-22 | 1981-12-02 | Sankyo Co | Hydrolyzed polysaccharide |
| JPS6019619B2 (ja) | 1980-09-19 | 1985-05-17 | 株式会社日立製作所 | Ｘ線管用回転陽極 |
| SE456911B (sv) | 1983-12-19 | 1988-11-14 | Olle Larm | Vattenloeslig, aminerad beta-1,3-bunden d-glukan och makrofagstimulerande komposition innehaallande densamma |
| JPS60196195A (ja) | 1984-03-21 | 1985-10-04 | Dainippon Seito Kk | イ−ストグルカンの製造法 |
| US4992540A (en) | 1984-11-28 | 1991-02-12 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan composition and process for preparation thereof |
| US5082936A (en) | 1984-11-28 | 1992-01-21 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan composition and process for preparation thereof |
| US5028703A (en) * | 1988-03-11 | 1991-07-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan composition and process for preparation thereof |
| US4810646A (en) | 1984-11-28 | 1989-03-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Glucan compositions and process for preparation thereof |
| US5057503A (en) * | 1989-01-23 | 1991-10-15 | The Brigham And Women's Hospital | Derivativized polysaccharides with biologic activity, method of their isolation, and uses therefor |
| CA1330303C (en) | 1989-02-20 | 1994-06-21 | Libor Henry Nikl | Composition and process to enhance the efficacy of a fish vaccine |
| US5488040A (en) * | 1989-09-08 | 1996-01-30 | Alpha-Beta Technology, Inc. | Use of neutral soluble glucan preparations to stimulate platelet production |
| US5622939A (en) * | 1992-08-21 | 1997-04-22 | Alpha-Beta Technology, Inc. | Glucan preparation |
| JPH05502018A (ja) * | 1989-09-08 | 1993-04-15 | アルファ ベータ テクノロジー，インコーポレイティッド | 免疫系活性化方法 |
| JPH05503952A (ja) * | 1989-09-08 | 1993-06-24 | アルファ ベータ テクノロジー，インコーポレイティッド | 可溶性グルカン類の製造方法 |
| US6020324A (en) * | 1989-10-20 | 2000-02-01 | The Collaborative Group, Ltd. | Glucan dietary additives |
| CA2040374C (en) * | 1990-07-06 | 1998-06-16 | Gunnar Rorstad | Process for enhancing the resistance of aquatic animals to disease |
| NO300692B1 (no) | 1994-04-29 | 1997-07-07 | Biotec Mackzymal As | Solubilisert forgrenet ß-1,3-glukan og anvendelse derav samt anvendelse av usolubilisert forgrenet ß-1,3-glukan |
-
1994
- 1994-04-29 NO NO941581A patent/NO300692B1/no not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-04-18 ES ES95914485T patent/ES2182898T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-18 DE DE69527955T patent/DE69527955T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-18 JP JP52809395A patent/JP3992730B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-18 WO PCT/IB1995/000265 patent/WO1995030022A1/en active IP Right Grant
- 1995-04-18 AU AU21464/95A patent/AU703251B2/en not_active Ceased
- 1995-04-18 CA CA2189010A patent/CA2189010C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-18 AT AT95914485T patent/ATE222958T1/de active
- 1995-04-18 DK DK95914485T patent/DK0759089T3/da active
- 1995-04-18 EP EP95914485A patent/EP0759089B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-10-28 FI FI964339A patent/FI114807B/fi not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-03-30 US US11/093,427 patent/US7883875B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-05-16 JP JP2007130872A patent/JP2007228974A/ja active Pending
- 2007-12-06 US US11/951,811 patent/US8142785B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-11-13 JP JP2008290653A patent/JP2009051863A/ja active Pending
-
2010
- 2010-12-27 US US12/978,923 patent/US8252295B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO300692B1 (no) | 1997-07-07 |
| JP2009051863A (ja) | 2009-03-12 |
| JP3992730B2 (ja) | 2007-10-17 |
| EP0759089A1 (en) | 1997-02-26 |
| CA2189010C (en) | 2010-07-13 |
| US8142785B2 (en) | 2012-03-27 |
| DK0759089T3 (da) | 2003-01-06 |
| FI964339A0 (fi) | 1996-10-28 |
| NO941581D0 (fi) | 1994-04-29 |
| ES2182898T3 (es) | 2003-03-16 |
| AU2146495A (en) | 1995-11-29 |
| WO1995030022A1 (en) | 1995-11-09 |
| FI964339A (fi) | 1996-10-28 |
| AU703251B2 (en) | 1999-03-25 |
| US8252295B2 (en) | 2012-08-28 |
| DE69527955D1 (de) | 2002-10-02 |
| US20080124349A1 (en) | 2008-05-29 |
| JPH09512708A (ja) | 1997-12-22 |
| US7883875B2 (en) | 2011-02-08 |
| DE69527955T2 (de) | 2003-04-10 |
| US20050255565A1 (en) | 2005-11-17 |
| JP2007228974A (ja) | 2007-09-13 |
| ATE222958T1 (de) | 2002-09-15 |
| EP0759089B1 (en) | 2002-08-28 |
| NO941581L (no) | 1995-10-30 |
| CA2189010A1 (en) | 1995-11-09 |
| US20110104208A1 (en) | 2011-05-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI114807B (fi) | Glukaanien entsyymikäsittely | |
| US9320291B2 (en) | Production of a saccharide composition comprising glucans and mannans by alkaline and acid hydrolysis of yeast cells | |
| EP2226336B1 (en) | Bacterial capsular polysaccharide for use as vaccines or for linking to proteins in conjugate vaccines | |
| JP6005558B2 (ja) | リポ多糖、リポ多糖製造方法及びリポ多糖配合物 | |
| KR101467903B1 (ko) | 흑미의 담자균류균사 발효 및 생물전환공정을 통해 생산된 면역증강제 | |
| Taylor et al. | Chemical and biological properties of an extracellular lipopolysaccharide from Escherichia coli grown under lysine-limiting conditions | |
| FR2853908A1 (fr) | Produit immunomodulateur obtenu a partir d'une culture de bifidobacterium et compositions le contenant | |
| JP2835894B2 (ja) | ビフィズス菌増殖促進剤 | |
| CA2265696C (en) | Method for purifying gbs toxin/cm101 | |
| WO2008032134A1 (es) | Proceso para la obtencion de glucan de levadura por autolisis de celulas de levadura saccharomyces cerevisiae de panaderia | |
| US20030091596A1 (en) | Immunomodulator, immunomodulator food | |
| JP4091136B2 (ja) | 免疫賦活剤 | |
| JPH03227939A (ja) | 免疫能賦活化物質及びその製造法 | |
| US4157278A (en) | Immunostimulatory agents | |
| KR100974080B1 (ko) | 열처리를 이용한 태반 추출물의 제조 방법 | |
| CN115477708B (zh) | 一种抑菌酵母活性多糖及制备方法、鉴定方法和应用 | |
| RU2101020C1 (ru) | Препарат, обладающий иммуностимулирующим действием | |
| NO178345B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av en ekstracellulær eksopolymer | |
| BR102016028658A2 (pt) | processo para a obtenção de ribonucleotídeos, parede celular, mananas e ¿-glucanas | |
| Stacey | Aspects of immunochemistry (concluded) | |
| KR20030021673A (ko) | 항산화 효과를 증진시키는 상황버섯의 균사체 제조법 | |
| EP0004214A1 (fr) | Nouvelles compositions pharmaceutiques à base d'enzyme bactérien | |
| CN111466482A (zh) | 脾脏提取物及含有脾脏提取物的产品 | |
| Pazur | The structure and antigenicity of novel polysaccharides from microorganisms and plants | |
| BR102016028658B1 (pt) | Processo para a obtenção de ribonucleotídeos, parede celular, mananas e ¿-glucanas |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |