FI104378B - Menetelmä trombiinin valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä trombiinin valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI104378B FI104378B FI924975A FI924975A FI104378B FI 104378 B FI104378 B FI 104378B FI 924975 A FI924975 A FI 924975A FI 924975 A FI924975 A FI 924975A FI 104378 B FI104378 B FI 104378B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- thrombin
- prothrombin
- complex
- virus
- factor
- Prior art date
Links
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 claims abstract description 27
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 5
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 5
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 5
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 5
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 4
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 108010018823 anti-inhibitor coagulant complex Proteins 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229940105776 factor viii inhibitor bypassing activity Drugs 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 108010014806 prothrombinase complex Proteins 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 101001038021 Lonomia obliqua Lopap Proteins 0.000 description 1
- 102000006833 Multifunctional Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010047290 Multifunctional Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 108010074164 cyclohexylglycyl-alanyl-arginine-4-nitroanilide Proteins 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000011066 ex-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229910052712 strontium Inorganic materials 0.000 description 1
- CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N strontium atom Chemical compound [Sr] CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6429—Thrombin (3.4.21.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Amplifiers (AREA)
- Revetment (AREA)
Description
Menetelmä trombiinin valmistamiseksi 104378
Keksintö liittyy ihmis- tai eläinperäiseen trombiiniin.
5 Etenkin keksintö koskee menetelmää sen valmistamiseksi.
Seuraavassa selityksessä on myös selostettu sen käyttöä.
*
Veren hyytyminen läpikäy useita peräkkäisiä reaktioita, joissa veren hyytymistekijät aktivoidaan ja lopuksi muodostuu 10 fibriiniä aktivoidun protrombiinin (trombiinin) vaikuttaessa fibrinogeeniin. Protrombiinin muunto trombiiniksi tapahtuu hyvin hitaasti yksinään tekijällä Xa ja kalsiumilla. Se tapahtuu vasta silloin optimaalisesti, kun puolestaan esiintyy useiden tekijöiden kompleksi (protrombinaasikompleksi).
15 Tekijän Xa lisäksi tähän kompleksiin kuuluvat tekijä V, fosfolipidit ja kalsium. Tekijä Xa lohkaisee protrombiini-molekyylin (molekyylipaino 68 kD) proteolyyttisesti ja tuottaa siten aktiivisen trombiinientsyymin (molekyylipaino 30 kD) .
20
Plasmaproteaasi trombiini on monitoiminnallinen entsyymi, joka ei vaikuta ainoastaan koaguloivasti lohkaisemalla fib-rinogeenin fibriiniksi, vaan aktivoi myös hyytymistekijät V, VIII ja XIII ja lohkaisee oman proentsyyminsä (protrombii- 25 nin) .
• · «
Terapiassa trombiinia käytetään yksinään tai yhdessä fib- **“. rinogeenin kanssa verenvuotojen pysäyttämiseksi tai kirurgi* giassa kudos liimaukseen.
• · · *·’ 3o
Protrombiinin aktivointi protrombinaasikompleksin kautta on • · ·.*·: vaikeasti jäljiteltävissä ex situ, minkä johdosta on tehty !,! Σ useita kokeita trombiinin tuottamiseksi ihmis- tai eläinpe- räisten proteaasien vaikutuksella. Tällöin on ajateltava, I · 35 että on vältettävä tuotteen jokaista kosketusta ihmis- tai * « . eläinperäisen materiaalin kanssa infektioosisten aineiden aiheuttaman saastumisvaaran johdosta.
• t I
» · < I ·
Kokeet plasmasta eristetyn protrombiinikompleksin käsittele- 104378 2 luiseksi kalsiumioneilla sekä kalsiumioneilla ja naudan trom-boplastiinia sisältävällä suspensiolla ovat osoittaneet, että käsittely yksinomaan kalsiumioneilla johtaa muodostuneen trombiinin olennaisesti vähäisempään saantoon ja puhtauteen 5 kuin käsittely kalsiumioneilla ja tromboplastiinilla [Cryo biology 21 (1984) 661 - 663].
Julkaisusta DE-A - 38 43 126 on tunnettua, että trombiinia voidaan saada plasmasta, joka on adsorboitu matriisiin ja 10 käsitelty protrombiiniaktivaattorilla. Aktivaattorina maini taan esimerkiksi kalsiumionit, kalsiumionit ja tromboplastii-ni tai tekijä Xa. Aktivoinnin aikana ovat läsnä kaikki biologiset kofaktorit, jotka sidotaan samoin matriisiin.
15 Käytettäessä plasmaattista protrombiinia trombiinin talteen- ottamiseksi on vaarana, että se saastuu infektioosisilla aineilla (esim. hepatiittivirukset, HIV). Tämän lisäksi kaikissa mainituissa aktivointimenetelmissä suositellaan kalsium2+-ionien lisäksi biologisten kofaktoreiden käyttämis-20 tä lisänä, mikä muodostaa lisäsaastumislähteen.
Nyt on tosin tunnettua, että biologisten valmisteiden infek- tioosiset aineet voidaan inaktivoida luotettavasti lämpökä-
sittelyllä, etenkin yhdessä höyrykäsittelyn kanssa (AT-B
:':25 385.657). On kuitenkin osoittautunut, että trombiinia on ··· kuumennettava sen lämpölabiiliuden johdosta stabilisaattorei- « · · · .*.j den läsnäollessa (DE-A - 38 09 991) , jotta trombiinin aktii- • visuuteen ei vaikuteta haitallisesti. Stabilisaattoreiden • · · käyttö on kuitenkin kiistanalaista, koska lämpökäsittelyn . 30 aikana ei suojata ainoastaan trombiiniaktiivisuutta, vaan
I I I
myös virukset stabiloidaan.
• · · • # · ·:·· Keksinnön tehtävänä on saada aikaan virusturvallinen trom- ·:··· biini.
*.35 • * * *;;; Keksinnön mukaan virusturvallinen trombiini voidaan saada • · *·* virusinaktivoidusta protrombiinipitoisesta plasmafraktiosta 3 104378 3 aktivoimalla yksinomaan hyytymisaktiivisilla suoloilla, esimerkiksi kalsium-, strontium- tai sinkki-ioneilla. Tällaiset suolat edistävät trombiinin muodostumista vastaavista hyytymistekij öistä.
5
Keksintö perustuu siihen havaintoon, että infektioosiset aineet, jotka esiintyvät plasmaattisessa protrombiinissa, voidaan tehdä vaarattomiksi käsittelemällä protrombiini virusten inaktivoimiseksi vaikuttamatta olennaisesti haital-10 lisesti protrombiinista saatavan trombiinin biologiseen aktiivisuuteen.
On yllättävästi osoittautunut, että virusinaktivoidun pro-trombiinipitoisen fraktion aktivointi yksinään lisäämällä 15 hyytymisaktiivisia suoloja johtaa yksinkertaisella tavalla tuotteen suureen saantoon tai vast, puhtauteen lisäämättä siihen biologisia kofaktoreita, kuten hyytymistekijöitä V, Xa tai fosfolipidejä. Vältetään siis saastuminen aktivoinnin aikana, minkä johdosta myös tuotettu trombiini on lähtömate-20 riaalin tavoin virusturvallinen.
On osoittautunut edulliseksi tuottaa virusturvallinen trom-biini virusinaktivoidusta protrombiinikompleksista, etenkin : virusinaktivoidusta aktivoidusta protrombiinikompleksista.
::25 Aktivoidun protrombiinikompleksin aktivointi lisäämällä hyy- ··· tymisaktiivisia suoloja tapahtuu yllättävän suurella reak- IM» ;\j tionopeudella. Samoin optimoidaan trombiinin saanto.
• M • · · • · ·
Etenkin edullista on virusturvallisen trombiinin valmistus . 30 FEIBAsta. Aktivoitu protrombiinikompleksi tai vastaavasti • « · *,,* FEIBA voidaan valmistaa jo tunnettujen menetelmien avulla : (AT-B -350.726, AT-B - 368.883, EP-B - 0 041 173) protrom- ·:··; biinikompleksista.
I
'.35 Keksintö koskee myös menetelmä virusturvallisen trombiinin ·;;; valmistamiseksi ja se on tunnettu toimenpiteiden siitä yhdis-
• I
’··' telmästä, että 104378 4 - aktivoitu protrombiinikompleksi valmistetaan protrom-biinipitoisesta plasmatraktiosta, - aktivoitu protrombiinikompleksi käsitellään infekti-oosisten aineiden inaktivoimiseksi, ja 5 - käsiteltyyn aktivoituun protrombiinikompleksiin lisätään hyytymisaktiivisia suoloja trombiinin tuottamiseksi.
Trombiini puhdistetaan edullisesti edelleen ioninvaihdinkro-matografiällä ja/tai affiniteettikromatografiällä.
10
Yllä olevan selityksen mukainen virusturvallinen trombiini soveltuu etenkin farmaseuttisten valmisteiden käyttämiseksi tai diagnostisten aineiden valmistamiseksi.
15 Keksintöä selitetään vielä lähemmin seuraavien esimerkkien avulla, jolloin esimerkit 3 ja 4 koskevat esimerkin 1 mukaisesti valmistetun trombiinin edelleenpuhdistusta.
Esimerkki l 20 15 lista ihmisen kryosakkaköyhää veriplasmaa sidottiin pro-trombiini (tekijä II) hyytymistekijöiden VII, IX ja X lisäksi
J · I
: anioninvaihtimeen (DEAE-Sephadex) . Tekijää II sisältävä : fraktio eluoitiin 0,5-molaarisella NaCl-liuoksella, sitten :*:’25 tässä liuoksessa suolakonsentraatiota vähennettiin 0,15 •j. mooliin/1 diasuodattamalla ja tämän jälkeen jäädytyskuivatet- ···· tiin.
• · · • · • · · • « · • « «
Mahdollisten läsnäolevien taudinaiheuttajien inaktivoimiseksi . ?0 tätä fraktiota kuumennettiin julkaisun AT-B - 385.657 mukai- • · · sesti 10 tunnin ajan 60 °C:ssa ja 1 tunnin ajan 80 °C:ssa.
* · * V ' Protrombiiniaktiivisuus oli 5.250 E (yksikköä). Protrombiini « ·;·: liuotettiin liuokseen suhteessa 2,5 E/ml ja sekoitettiin hitaasti CaCl2:n (2,5 mmoolia/1) kanssa +30 °C:ssa pH-arvossa \35 7; 80 minuutin kuluttua trombiiniaktiivisuudeksi määritettiin 4 · ·
··; (kromogeenisen substraatin Th-1 (Fa. Immuno) avulla) 48 E/l E
i tekijää II.
104378 5
Trombiinituotanto pysäytettiin jäähdyttämällä +4 °C:seen ja lisäämällä etyleenidiaminotetraetikkahappoa (EDTA). Ca-komp-leksi poistettiin ultrasuodatus/diasuodatuksen avulla ultra-suodatuskalvolla (huokoskoko: 10.000). Tämän jälkeen konsent-5 raatti valmistettiin farmaseuttiseksi valmisteeksi.
Esimerkki 2 20 ml FEIBA-pitoista liuosta (IMMUNO AG, Wien), jonka FEIB-10 aktiivisuus oli 966 yksikköä ja 992 yksikköä tekijää II, laimennettiin 0,9 %:sella NaCl-liuoksella 330 ml:aan ja sekoitettiin hitaasti CaCl2:n (2,75 mmoolia/1) kanssa +30 °C:ssa. 90 minuutin kuluttua trombiiniaktiivisuus saavutti maksimin, joka oli 51 yksikköä/yksikkö tekijää II. Aktivointi 15 pysäytettiin jäähdyttämällä liuos +4 °C:seen ja lisäämällä natriumsitraattia.
Esimerkki 3 20 20.000 yksikköä (E) esimerkin 1 mukaisesti'valmistettua trombiinia adsorboitiin pylvääseen, jossa oli 20 ml tuotetta S-Sepharose, 10,5 mS/cm:n johtavuudessa pH-arvossa 6,0. Tämän jälkeen pestiin 140 ml:11a 150-mmolaarista NaCl-liuosta sitoutumattomien proteiinien poistamiseksi.
f < :t: 25 ·;· Trombiinipitoinen fraktio eluoitiin 100 ml: 11a 750-mmolaaris- * · · ta NaCl-liuosta, konsentroitiin, diasuodatettiin ja valmis- • t tettiin lopuksi farmaseuttiseksi valmisteeksi.
• · « . 30 Trombiiniaktiivisuuden saanto oli yli 90 %.
• · · • · · • · *·* * Esimerkki 4 • « < < · ·:·· 10.000 yksikköä (E) esimerkin 1 mukaisesti valmistettua *,35 trombiinia levitettiin pylvääseen, jossa oli 10 ml lysiini- ·;;; Sepharose-yhdistelmää, joka oli tasapainotettu 150 mmoolin • · *·*·' natriumasetaattiliuoksella, pH 6,7. Kuormitettu pylväs pes- 6 104378 tiin samalla puskurilla ja trombiinipitoinen fraktio eluoi-tiin 300-mmolaarisella lysiiniliuoksella; trombiiniaktiivi-suus oli 9400 E ja spesifinen aktiivisuus oli 1850 E/mg proteiinia.
1 » · I
·** 9 4 · · · 9 · • · · • · * • · · • · ·
I I I
f 9 9 « « · • · II· '
I · I
• · I
* :··«»» .
• f I · II·
Claims (2)
1. Menetelmä virusturvallisen trombiinin valmistamiseksi, tunnettu toimenpiteiden siitä yhdistelmästä, että 5. aktivoitu protrombiinikompleksi valmistetaan protrombii- nipitoisesta plasmafraktiosta, - aktivoitu protrombiinikompleksi käsitellään infekti-oosisten aineiden inaktivoimiseksi, ja - käsiteltyyn aktivoituun protrombiinikompleksiin lisätään 10 hyytymisaktiivisia suoloja trombiinin tuottamiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että trombiini puhdistetaan edelleen ioninvaihdinkro-matografiällä ja/tai affiniteettikromatografiällä. » I I « I I I ' 1 I • I i I % · ’ I | ··♦ 9 *949 * I I · · • 49 9 9 •99 9 4 9 4 4 · 9 9 • •9 4 · · • · • 444 9 9 4 *99 • t « · · *14 9 9 9 · 8 104378
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT218391 | 1991-11-04 | ||
| AT0218391A AT398079B (de) | 1991-11-04 | 1991-11-04 | Präparation mit thrombinaktivität sowie verfahren zu ihrer herstellung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI924975A0 FI924975A0 (fi) | 1992-11-04 |
| FI924975L FI924975L (fi) | 1993-05-05 |
| FI104378B true FI104378B (fi) | 2000-01-14 |
Family
ID=3529491
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI924975A FI104378B (fi) | 1991-11-04 | 1992-11-04 | Menetelmä trombiinin valmistamiseksi |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5714370A (fi) |
| EP (1) | EP0541507B1 (fi) |
| JP (1) | JP2572513B2 (fi) |
| AT (2) | AT398079B (fi) |
| AU (1) | AU645715B2 (fi) |
| CA (1) | CA2081703C (fi) |
| CZ (1) | CZ281502B6 (fi) |
| DE (1) | DE59209922D1 (fi) |
| DK (1) | DK0541507T3 (fi) |
| ES (1) | ES2165355T3 (fi) |
| FI (1) | FI104378B (fi) |
| HR (1) | HRP921171B1 (fi) |
| HU (1) | HU213867B (fi) |
| MX (1) | MX9206303A (fi) |
| NO (1) | NO312125B1 (fi) |
| PL (1) | PL170156B1 (fi) |
| SI (1) | SI9200299B (fi) |
| SK (1) | SK330992A3 (fi) |
| YU (1) | YU96192A (fi) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT402891B (de) * | 1991-06-20 | 1997-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes |
| DE4137996A1 (de) * | 1991-11-19 | 1993-05-27 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung eines virussicheren thrombinkonzentrates |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
| AU6653094A (en) * | 1992-12-16 | 1994-07-04 | Immuno Aktiengesellschaft | Process for preparing a virus-safe biological composition |
| DE4320294A1 (de) * | 1993-06-18 | 1994-12-22 | Immuno Ag | Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen |
| JPH07308190A (ja) * | 1994-05-18 | 1995-11-28 | Green Cross Corp:The | トロンビンの製造方法 |
| US5506127A (en) * | 1994-09-21 | 1996-04-09 | Proba; Zbigniew | Therapeutic grade thrombin produced by chromatography |
| GB9503750D0 (en) * | 1995-02-24 | 1995-04-12 | Common Services Agency | Thrombin preparation |
| AT404597B (de) | 1995-11-24 | 1998-12-28 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von proteinen |
| JP3944267B2 (ja) * | 1996-08-09 | 2007-07-11 | 財団法人化学及血清療法研究所 | プロトロンビンの活性化方法および該方法に基づくトロンビンの製造方法 |
| US7435425B2 (en) | 2001-07-17 | 2008-10-14 | Baxter International, Inc. | Dry hemostatic compositions and methods for their preparation |
| US8303981B2 (en) | 1996-08-27 | 2012-11-06 | Baxter International Inc. | Fragmented polymeric compositions and methods for their use |
| US6066325A (en) * | 1996-08-27 | 2000-05-23 | Fusion Medical Technologies, Inc. | Fragmented polymeric compositions and methods for their use |
| US8603511B2 (en) | 1996-08-27 | 2013-12-10 | Baxter International, Inc. | Fragmented polymeric compositions and methods for their use |
| AT405608B (de) * | 1997-04-08 | 1999-10-25 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von pathogenen, insbesondere von viren, in einem biologischen material |
| AT405485B (de) | 1997-05-28 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Eine das vwf-propeptid enthaltende pharmazeutische präparation |
| WO2001000667A2 (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-04 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-thrombin peptide from anopheles albimanus salivary gland |
| US7795218B2 (en) | 2001-04-12 | 2010-09-14 | Bioaxone Therapeutique Inc. | ADP-ribosyl transferase fusion variant proteins |
| GB0216002D0 (en) * | 2002-07-10 | 2002-08-21 | Nat Blood Authority | Process and composition |
| US8834864B2 (en) * | 2003-06-05 | 2014-09-16 | Baxter International Inc. | Methods for repairing and regenerating human dura mater |
| US7927626B2 (en) | 2003-08-07 | 2011-04-19 | Ethicon, Inc. | Process of making flowable hemostatic compositions and devices containing such compositions |
| MX2008014847A (es) * | 2006-05-31 | 2009-04-30 | Baxter Int | Metodo para crecimiento interno en la celula dirigido y regeneracion controlada de los tejidos en la cirugia espinal. |
| TWI436793B (zh) | 2006-08-02 | 2014-05-11 | 巴克斯特國際公司 | 快速作用之乾密封膠及其使用和製造方法 |
| TWI461227B (zh) | 2007-10-30 | 2014-11-21 | Baxter Int | 再生生物功能性膠原生物基質用來治療內臟或體壁缺陷的用途 |
| EP2259803B2 (en) | 2008-02-29 | 2019-03-13 | Ferrosan Medical Devices A/S | Device for promotion of hemostasis and/or wound healing |
| AR081227A1 (es) | 2008-12-11 | 2012-07-18 | Baxter Int | Preparaciones basadas en fibrinogenos y polisacaridos sulfatados |
| KR101105026B1 (ko) * | 2009-04-06 | 2012-01-16 | 김기영 | 다방향 굴절형 핸드 그라인더 |
| US9039783B2 (en) | 2009-05-18 | 2015-05-26 | Baxter International, Inc. | Method for the improvement of mesh implant biocompatibility |
| ES2532428T3 (es) | 2009-06-16 | 2015-03-26 | Baxter International Inc | Esponja hemostática |
| MX2012007056A (es) | 2009-12-16 | 2012-09-28 | Baxter Healthcare Sa | Esponja hemostatica. |
| SA111320355B1 (ar) | 2010-04-07 | 2015-01-08 | Baxter Heathcare S A | إسفنجة لايقاف النزف |
| JP6289096B2 (ja) | 2010-06-01 | 2018-03-07 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 乾燥した安定な止血組成物を作製するためのプロセス |
| WO2011151386A1 (en) | 2010-06-01 | 2011-12-08 | Baxter International Inc. | Process for making dry and stable hemostatic compositions |
| EP2575775B1 (en) | 2010-06-01 | 2018-04-04 | Baxter International Inc. | Process for making dry and stable hemostatic compositions |
| AU2012318258B2 (en) | 2011-10-11 | 2015-07-09 | Baxter Healthcare S.A. | Hemostatic compositions |
| EP4137165A1 (en) | 2011-10-11 | 2023-02-22 | Baxter International Inc. | Hemostatic compositions |
| WO2013060770A1 (en) | 2011-10-27 | 2013-05-02 | Baxter International Inc. | Hemostatic compositions |
| US20140377248A1 (en) * | 2011-12-23 | 2014-12-25 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Method for the manufacturing of di-chain proteins for use in humans |
| RU2657955C2 (ru) | 2012-03-06 | 2018-06-18 | Ферросан Медикал Дивайсиз А/С | Контейнер под давлением, содержащий гемостатическую пасту |
| RU2636240C2 (ru) | 2012-06-12 | 2017-11-21 | Ферросан Медикал Дивайсиз А/С | Сухая гемостатическая композиция |
| CN105358071B (zh) | 2013-06-21 | 2018-07-31 | 弗罗桑医疗设备公司 | 真空膨胀的干组合物和用于保留该干组合物的注射器 |
| WO2015086028A1 (en) | 2013-12-11 | 2015-06-18 | Ferrosan Medical Devices A/S | Dry composition comprising an extrusion enhancer |
| US11046818B2 (en) | 2014-10-13 | 2021-06-29 | Ferrosan Medical Devices A/S | Dry composition for use in haemostasis and wound healing |
| CN107206165B (zh) | 2014-12-24 | 2020-10-23 | 弗罗桑医疗设备公司 | 用于保持并混合第一和第二物质的注射器 |
| CA2986981A1 (en) | 2015-07-03 | 2017-01-12 | Ferrosan Medical Devices A/S | Syringe for mixing two components and for retaining a vacuum in a storage condition |
| US20210128778A1 (en) | 2017-03-09 | 2021-05-06 | Baxter International Inc. | Solvent deposition system and methods |
| EP3790600B1 (en) | 2018-05-09 | 2023-12-27 | Ferrosan Medical Devices A/S | Method for preparing a haemostatic composition |
| CN119685296A (zh) * | 2024-12-27 | 2025-03-25 | 中科世生(河南)生物科技有限公司 | 一种凝血酶的制备方法 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT350726B (de) * | 1976-08-30 | 1979-06-11 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer blut- gerinnungsfoerdernden praeperation aus menschlichem blutplasma |
| DE2902158A1 (de) * | 1979-01-20 | 1980-07-31 | Biotest Serum Institut Gmbh | Verfahren zur herstellung von fibrinogen, einem die gerinnungsfaktoren ii, vii, ix und x enthaltenden prothrombinkomplex, antithrombin iii und einer loesung von lagerstabilen serumproteinen |
| US4357321A (en) * | 1980-01-28 | 1982-11-02 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Method and composition for treating clotting factor inhibitors |
| DE3019612A1 (de) * | 1980-05-22 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisiertes thrombinpraeparat |
| US4364861A (en) * | 1980-05-27 | 1982-12-21 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them |
| US4404132A (en) * | 1980-05-27 | 1983-09-13 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood coagulation promoting product |
| AT368883B (de) * | 1980-07-22 | 1982-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer neuen blutgerinnungsfoerdernden praeparation auf basis von humanproteinen |
| US4480029A (en) * | 1981-04-27 | 1984-10-30 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Biological indicators and their use |
| US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
| US4764369A (en) * | 1983-07-14 | 1988-08-16 | New York Blood Center Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| AT385657B (de) * | 1984-03-09 | 1988-05-10 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| US4613501A (en) * | 1984-12-21 | 1986-09-23 | New York Blood Center, Inc. | Inactivation of viruses in labile blood derivatives |
| US4673733A (en) * | 1985-04-11 | 1987-06-16 | Sudhish Chandra | Treatment of biological and pharmaceutical products adsorbed on a solid phase with virus and pyrogen inactivating agents |
| JPS63243032A (ja) * | 1987-03-27 | 1988-10-07 | Green Cross Corp:The | トロンビンの加熱処理方法 |
| DE3843126C3 (de) * | 1988-12-22 | 1994-10-06 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung eines hochreinen Thrombinkonzentrates |
| CA2007545A1 (en) * | 1989-01-13 | 1990-07-13 | Yahiro Uemura | Production method for protein-containing composition |
| IE73210B1 (en) * | 1990-01-24 | 1997-05-07 | Warner Lambert Co | Process for the production of thrombin and high purity thrombin preparation thereby obtained |
| ATE177781T1 (de) * | 1990-02-20 | 1999-04-15 | Baxter Int | Gereinigtes, virusfreies menschliches thrombin |
| FR2679251B1 (fr) * | 1991-07-18 | 1993-11-12 | Nord Assoc Essor Transfusion San | Procede de preparation d'un concentre de thrombine humaine destine a un usage therapeutique. |
| DE4137996A1 (de) * | 1991-11-19 | 1993-05-27 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung eines virussicheren thrombinkonzentrates |
-
1991
- 1991-11-04 AT AT0218391A patent/AT398079B/de not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-10-27 AU AU27361/92A patent/AU645715B2/en not_active Ceased
- 1992-10-27 HU HU9203366A patent/HU213867B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-10-29 CA CA002081703A patent/CA2081703C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-02 ES ES92890232T patent/ES2165355T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-02 EP EP92890232A patent/EP0541507B1/de not_active Revoked
- 1992-11-02 DE DE59209922T patent/DE59209922D1/de not_active Revoked
- 1992-11-02 DK DK92890232T patent/DK0541507T3/da active
- 1992-11-02 AT AT92890232T patent/ATE206757T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-11-02 HR HRA2183/91A patent/HRP921171B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-11-03 MX MX9206303A patent/MX9206303A/es unknown
- 1992-11-03 PL PL92296460A patent/PL170156B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1992-11-03 NO NO19924229A patent/NO312125B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-11-04 YU YU96192A patent/YU96192A/sh unknown
- 1992-11-04 JP JP4294962A patent/JP2572513B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-11-04 CZ CS923309A patent/CZ281502B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-11-04 FI FI924975A patent/FI104378B/fi not_active IP Right Cessation
- 1992-11-04 SK SK3309-92A patent/SK330992A3/sk unknown
- 1992-11-04 SI SI9200299A patent/SI9200299B/sl not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-01 US US08/458,082 patent/US5714370A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI104378B (fi) | Menetelmä trombiinin valmistamiseksi | |
| US4876241A (en) | Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants | |
| US5639730A (en) | Method of producing a virus-safe biological preparation | |
| AU737566B2 (en) | An immunotolerant prothrombin complex preparation | |
| AU4353399A (en) | Pharmaceutical factor vii preparation | |
| IL201146A (en) | Process for producing a virus-inactivated thrombin preparation | |
| AU711298B2 (en) | Therapeutic grade thrombin production and products | |
| EP0292003B1 (en) | Stabilzation of biological and pharmaceutical products during inactivation of viral and bacterial contaminants | |
| SK281266B6 (sk) | Spôsob získavania enzýmov z proenzýmov | |
| AU739845B2 (en) | A method for inactivating pathogens, in particular viruses, in a biological material | |
| JP2965069B2 (ja) | 蛋白質含有組成物の製造方法 | |
| JP3947247B2 (ja) | 活性蛋白質組成物の製造方法 | |
| MXPA99008941A (es) | Preparacion del complejo de protrombina inmunotolerante |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |