ES3072950T3 - Cationic lipid, liposome containing cationic lipid, and nucleic-acid pharmaceutical composition containing liposome and preparation and application thereof - Google Patents

Cationic lipid, liposome containing cationic lipid, and nucleic-acid pharmaceutical composition containing liposome and preparation and application thereof

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ES3072950T3
ES3072950T3 ES22783962T ES22783962T ES3072950T3 ES 3072950 T3 ES3072950 T3 ES 3072950T3 ES 22783962 T ES22783962 T ES 22783962T ES 22783962 T ES22783962 T ES 22783962T ES 3072950 T3 ES3072950 T3 ES 3072950T3
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lipids
reaction
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Wengui Weng
Chao Liu
Ailan Wang
Sheng Lin
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Xiamen Sinopeg Biotech Ltd
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Abstract

La presente invención proporciona un nuevo lípido catiónico con la estructura mostrada en la fórmula general (1), específicamente un lípido catiónico ramificado con nitrógeno, un liposoma que contiene dicho lípido catiónico, una composición farmacéutica de ácido nucleico en liposomas que también contiene dicho lípido catiónico, así como su preparación y aplicación. La definición de cada símbolo en la fórmula se encuentra aquí definida. El liposoma catiónico que contiene el lípido catiónico de la fórmula (1), según la presente invención, puede mejorar la tasa de carga y la tasa de liberación de fármacos de ácido nucleico. La preparación de la composición farmacéutica de ácido nucleico en liposomas catiónicos descrita en la presente invención presenta buena biocompatibilidad celular y mayor capacidad de transfección génica, lo que permite mejorar los efectos terapéuticos y/o preventivos de los fármacos de ácido nucleico. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0002] Lípido catiónico, liposoma que contiene un lípido catiónico y composición farmacéutica de ácido nucleico que contiene liposoma y formulación y aplicación de la misma
[0003] Campo técnico
[0004] La presente invención se refiere al campo del suministro de fármacos, específicamente a un lípido catiónico como portador farmacéutico, en particular a un lípido catiónico ramificado a través de nitrógeno, a liposomas que contienen el lípido, a composiciones farmacéuticas de ácido nucleico que contienen el liposoma, a formulaciones de las composiciones y a la aplicación de las mismas.
[0005] Antecedentes de la invención
[0006] Un liposoma es una microvesícula formada al encapsular los fármacos en la bicapa lipídica. La nanopartícula liposómica contiene liposomas y fármacos de ácido nucleico, que es similar en estructura a la de una biopelícula y es un nanomaterial biocompatible y no tóxico. El liposoma puede encapsular fármacos hidrosolubles y liposolubles, con ventajas tales como la reducción de la dosis del fármaco, liberación sostenida, liberación dirigida del fármaco y protección de los ácidos nucleicos encapsulados frente a la degradación y depuración en suero. Además, el nanoliposoma es también Sun portador de antígenos excelente, que no solo puede encapsular una serie de antígenos con diferentes propiedades fisicoquímicas y adyuvantes inmunitarios, proteger los antígenos de polipéptidos de proteínas frente a la degradación, sino que también puede promover la fagocitosis y la presentación de antígenos por las células presentadoras de antígenos, potenciando de esta manera la respuesta inmunitaria específica del cuerpo. Por lo tanto, las nanopartículas liposómicas se utilizan ampliamente en el campo del suministro de fármacos.
[0007] En base a las ventajas anteriormente mencionadas, la nanopartícula liposómica, como nuevo tipo de vector de vacuna, ha atraído una amplia atención. Las nanopartículas liposómicas se utilizan gradualmente en el desarrollo de vacunas antivíricas, vacunas antibacterianas, vacunas antiparasitarias, vacunas antitumorales y así sucesivamente. Los liposomas neutros y los liposomas catiónicos que llevan carga positiva en la superficie son los vectores de vacuna a escala nanométrica más comúnmente utilizados. Los liposomas catiónicos no solo son excelentes portadores de antígenos de proteínas/péptidos, sino que también son nuevos adyuvantes inmunológicos, que pueden activar directamente las células presentadoras de antígenos y potenciar la respuesta inmunitaria inducida por las vacunas. Por lo tanto, los liposomas catiónicos se utilizan ampliamente para encapsular y transportar fármacos de ácido nucleico en el campo de las vacunas.
[0008] El proceso de encapsulación y transporte de fármacos de ácido nucleico por los liposomas catiónicos es como sigue: (i) se forma un complejo de liposoma catiónico-fármaco de ácido nucleico a través de interacción electrostática entre los lípidos catiónicos con carga positiva y los ácidos nucleicos con carga negativa; (ii) la interacción electrostática entre el liposoma con carga positiva y la membrana celular con carga negativa promueve la adsorción de los complejos de liposoma catiónico-fármaco de ácido nucleico en la superficie celular, seguida de endocitosis y formación de endosomas; (iii) el movimiento de lípidos con carga negativa desde la capa externa hasta la capa interna de la membrana endosómica es promovido electrostáticamente debido a la presencia de lípidos catiónicos en el interior de la cavidad del endosoma y de esta manera se forman pares iónicos neutros, seguido por la separación de los fármacos de ácido nucleico de los liposomas catiónicos y la entrada en el citoplasma; (iv) los fármacos de ácido nucleico se transfectan en las células y realizan las funciones correspondientes dentro de la célula. Los liposomas catiónicos desempeñan una función importante en todo el proceso de fármacos de ácido nucleico que se suministran en las células y las moléculas de ácido nucleico que expresan patógenos (por ejemplo, bacterias y virus), péptidos específicos o fragmentos de proteína (antígeno) de antígenos tumorales in vivo y finalmente estimulan respuestas inmunitarias específicas.
[0009] Los liposomas catiónicos están compuestos usualmente de lípidos catiónicos, lípidos neutros, lípidos esteroides y lípidos PEGilados bajo condiciones apropiadas. Los lípidos catiónicos y los ácidos nucleicos se unen electrostáticamente entre sí, mientras que los colípidos (lípidos neutros y lípidos esteroides) desempeñan una función en la prevención de la oxidación de lípidos, conexión de ligandos a la superficie de los liposomas o la reducción de la agregación de las partículas de lípidos. Los lípidos catiónicos, generalmente moléculas anfifílicas, tienen una región lipófila que contiene uno o más grupos hidrocarburo y una región hidrófila que contiene al menos un grupo de cabeza polar con carga positiva. Los lípidos catiónicos y los ácidos nucleicos u otras moléculas gigantes forman un complejo que presenta carga positiva global, mientras que la superficie de la membrana celular es carga global negativa, lo que facilita la entrada de los ácidos nucleicos y otras moléculas gigantes en el citoplasma a través de la membrana protoplasmática de las células, mejorando de esta manera la eficiencia de transporte de los fármacos de ácido nucleico.
[0010] Los documentos CN110167922, CN110520409 y WO2021/055835 se refieren cada uno a lípidos catiónicos representados por la fórmula estructural especificada, que se pueden utilizar en composiciones de dichos lípidos catiónicos con ácidos nucleicos como una nanopartícula de lípido. El documento WO2020/072605 se refiere a lípidos que comprenden una amina de una fórmula específica útiles para la formulación de nanopartículas de lípidos.
[0011] Aunque los lípidos catiónicos han realizado los últimos avances en el suministro de fármacos, sigue existiendo una necesidad de lípidos catiónicos mejorados que sean adecuados para usos terapéuticos regulares en este campo.
[0012] Resumen de la invención
[0013] La invención proporciona lípidos catiónicos novedosos, liposomas catiónicos que contienen los lípidos, composiciones farmacéuticas de ácido nucleico que contienen los liposomas y formulaciones de los mismos. Las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico pueden suministrar fármacos de ácido nucleico en las células, mejorar la eficiencia de transporte de los fármacos de ácido nucleico, mejorando de esta manera el efecto terapéutico de los fármacos de ácido nucleico.
[0014] Los propósitos anteriormente descritos de esta invención se pueden realizar mediante las siguientes realizaciones.
[0015] En una realización, la invención se refiere a un lípido catiónico, en el que la estructura de dicho lípido catiónico es una de las siguientes estructuras:
[0017]
[0019] en el que la estructura del lípido catiónico se selecciona de una de las siguientes estructuras:
[0021]
[0022]
[0024] En otra realización:
[0025] En el presente documento se proporciona un liposoma catiónico que contiene lípidos catiónicos de acuerdo con la invención
[0026] En otra realización:
[0027] En el presente documento se proporciona una composición farmacéutica de liposoma-ácido nucleico que contiene liposomas catiónicos y fármacos, dichos liposomas catiónicos contienen lípidos catiónicos de acuerdo con la invención y fármacos de ácido nucleico.
[0028] En otra realización:
[0029] En el presente documento se proporciona una formulación de composiciones farmacéuticas de liposoma-ácido nucleico, que contiene la composición farmacéutica de liposoma-ácido nucleico anteriormente mencionada y diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
[0030] En comparación con la técnica anterior, la presente invención aporta los siguientes efectos beneficiosos: El lípido catiónico novedoso de la presente invención está ramificado a través de nitrógeno, en el que el centro de nitrógeno se puede protonar fácilmente bajo pH fisiológico para producir una carga positiva parcial y de esta manera el lípido es capaz de unirse a ácidos nucleicos con carga negativa, mejorando la eficiencia de carga de los fármacos de ácido nucleico.
[0031] La superficie de la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico preparada con el lípido catiónico novedoso en la presente invención es de carga positiva, lo que promueve la adsorción a superficies celulares con carga negativa a través de interacción electrostática. La composición entra en las células a través de endocitosis seguida por la formación de endosomas. Los grupos hidroxilo, grupos amino, grupos carboxilo, etc., en el terminal del lípido catiónico en la presente invención se pueden protonar fácilmente bajo condiciones ácidas. El lípido catiónico en la presente invención presenta carga positiva parcial después de protonarse en endosomas ácidos e interactúa electrostáticamente con lípidos con carga negativa en la membrana endosómica, lo que da como resultado que los lípidos con carga negativa se muevan desde el exterior hacia la cavidad interna del endosoma y, en consecuencia, formen pares iónicos neutros que consisten también en los lípidos con carga positiva. Eventualmente, los fármacos se suministran al citoplasma después de separarse de los liposomas catiónicos, mejorando de esta manera la eficiencia de transformación de los ácidos nucleicos. La composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico preparada con el lípido catiónico novedoso en la presente invención tiene alta estabilidad en suero, alta capacidad de complejación génica, alta biocompatibilidad y alta eficiencia de transfección génica, lo que conduce a mejorar el efecto terapéutico de los fármacos génicos, especialmente de los fármacos de ácido nucleico.
[0032] El terminal del lípido catiónico novedoso en la presente invención puede contener también grupos fluorescentes o grupos de direccionamiento; de acuerdo con lo anterior, las composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico que contienen el lípido catiónico novedoso pueden tener también función fluorescente o de direccionamiento, mejorando además los efectos terapéuticos y/o de diagnóstico genético de los fármacos de ácido nucleico.
[0033] Descripción detallada de la invención
[0034] A menos que se indique lo contrario, los términos relacionados en la presente invención se definen como sigue. En la presente invención y a menos que se especifique lo contrario, una estructura con isómeros se puede referir a cualquier forma de los isómeros. Por ejemplo, cuando están presentes isómeros cis y trans, se puede referir a una estructura cis o a una estructura trans; cuando están presentes los isómeros E y Z, se puede referir a una estructura (E) o a una estructura (Z); y cuando están presentes las propiedades de rotación óptica, se puede referir a un isómero levógiro o a un isómero dextrógiro.
[0035] En la presente invención, un intervalo numérico se puede marcar mediante un guion (por ejemplo, 1-6) o mediante una línea ondulada (por ejemplo, 1~6). En la presente invención y a menos que se especifique lo contrario, un intervalo de números enteros representa el grupo de todos los números enteros incluidos entre los criterios de valoración. Por ejemplo, el intervalo de números enteros de 1 a 6 representa el grupo compuesto por 1, 2, 3, 4, 5 y 6. El intervalo numérico en la presente invención incluye, pero no se limita a, el intervalo de números enteros, el intervalo de no enteros, el intervalo de porcentajes y el intervalo de fracciones; a menos que se especifique lo contrario, todos los intervalos numéricos anteriores incluyen dos criterios de valoración. Los términos “incluir”, “contener” y expresiones similares en la presente invención se interpretarán, a menos que se especifique lo contrario, como “que incluye pero no se limita a”, “incluye pero no se limitan a” o “incluye pero no se limita a”, etc., en la descripción y las reivindicaciones con carácter abierto e inclusivo.
[0036] En la presente invención, cuando dos o más objetos se seleccionan “cada uno independientemente preferiblemente” de múltiples niveles de opciones preferibles, los objetos no se seleccionan necesariamente de opciones preferibles del mismo nivel. Se permite que uno sea seleccionado de un rango más amplio de opciones mientras que otro es seleccionado de un rango más restringido de opciones. También se permite que uno sea seleccionado del rango máximo de opciones mientras que otro sea seleccionado de cualesquier opciones permitidas. También se permite que los objetos sean seleccionados de opciones preferibles del mismo nivel. Por ejemplo, “R<1>y R<2>son cada uno independientemente preferiblemente un grupo alquilo lineal, más preferiblemente un grupo alquilo lineal C<1-25>, más preferiblemente un grupo alquilo lineal C<1-17>” incluye, pero no se limita a, una de las siguientes situaciones: que R<1>sea un grupo alquilo lineal C<1-25>mientras que R<2>es un grupo alquilo lineal C<1-17>, que R<1>sea un grupo alquilo lineal C<1-17>mientras que R<2>es un grupo alquilo lineal C<1->25
, que R<1>y R<2>sean ambos grupos alquilo lineales C<1-25>y que R<1>y R<2>sean ambos grupos alquilo lineales C<1->17.
[0037] En la presente invención y a menos que se especifique lo contrario, para grupos de ligamiento divalentes, por ejemplo, grupo hidrocarbileno, grupo alquileno, grupo arileno, enlace amida y similares, cualquiera de los dos extremos de conexión se podría elegir para conectarse a otro grupo. Por ejemplo, cuando un enlace amida sirve como grupo de ligamiento divalente entre C-CH<2>CH<2>- y -CH<2>-D, tanto C-CH<2>CH<2>-C(=O)NH-CH<2>-D y C-CH<2>CH<2>-NHC(=O)-CH<2>-D son permitidos.
[0038] En la presente invención, cuando la distinción entre los grupos terminales de los sustituyentes de un grupo de ligamiento se vuelve cuestionable, se utiliza “ ” para indicar la ubicación de conexión entre el grupo de
[0040] ligamiento y el otro grupo. Por ejemplo, en las fórmulas estructurales
y
[0042]
, se utilizan para indicar las ubicaciones de conexión entre los grupos de
[0043] ligamiento divalentes y los otros grupos; las dos fórmulas estructurales anteriormente mencionadas representan -CH(CH<2>CH<2>CH<3>)<2>- y -CH<2>CH<2>CH(CH<3>)<2>-CH<2>CH<2>-, respectivamente.
[0044] En la presente invención, un número o un intervalo numérico escrito en el subíndice de “C” se puede utilizar para indicar el número de átomos de carbono de un grupo. Por ejemplo, un grupo C<1-12>es un grupo que tiene de 1 a 12 átomos de carbono; C<1-30>indica “que tiene de 1 a 30 átomos de carbono”. “Grupo alquilo C<1-12>sustituido” significa un grupo alquilo C<1-12>con uno o más átomos de hidrógeno sustituidos. “Grupo alquilo C<1-12>sustituido” significa un grupo alquilo con uno o más átomos de hidrógeno sustituidos que tiene de 1 a 12 átomos de carbono restantes. Por ejemplo, cuando un grupo se puede seleccionar de entre grupos alquileno C<1-12>, puede ser cualquier grupo alquileno con el número de átomos de carbono en el rango indicado por el subíndice, es decir, el grupo se puede seleccionar del grupo que consiste en grupos alquileno C<1>, C<2>, C<3>, C<4>, C<5>, C<6>, C<7>, C<8>, C<9>, C<10>, C<11>y C<12>. En la presente invención y a menos que se especifique lo contrario, un subíndice que es un intervalo numérico indica que el subíndice puede ser cualquier número entero dentro del intervalo que incluye los dos criterios de valoración.
[0045] En la presente invención, los heteroátomos no están particularmente limitados, e incluyen pero no se limitan a O, S, N, P, Si, F, Cl, Br, I, B, etc.
[0046] En la presente invención, el heteroátomo utilizado para la sustitución se denomina como “átomo sustituyente” y el grupo utilizado para la sustitución se denomina como “grupo sustituyente”.
[0047] En la presente invención, un grupo “sustituido” indica que al menos un átomo de hidrógeno del grupo (cualquier grupo anteriormente mencionado, a menos que se especifique lo contrario, por ejemplo, grupos alifáticos, grupos hidrocarburo, grupos alquilo o grupos alquileno) es reemplazado por un sustituyente, dicho sustituyente, incluye pero no se limita a, átomo de halógeno (F, Cl, Br o I), grupo oxo (=O), grupo hidroxilo (-OH), grupo hidrocarbiloxi (-OR<d>, en el que R<d>es un grupo alquilo C<1-12>), grupo carboxilo (-COOH), grupo amina (-NR<c>R<c>, en el que ambos R<c>son cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>), grupo alquilo C<1-12>y grupo cicloalquilo. En algunas realizaciones, dicho grupo sustituyente es un grupo alquilo C<1-12>. En otra realización, dicho sustituyente es un grupo cicloalquilo. En otra realización, dicho sustituyente es un grupo halo, por ejemplo, fluoro. En otra realización, dicho sustituyente es un grupo oxo. En otra realización, dicho sustituyente es un grupo hidroxilo. En otra realización, dicho sustituyente es un grupo alcoxi. En otra realización, dicho sustituyente es un grupo carboxilo. En otra realización, dicho sustituyente es un grupo amina. En la presente invención, “espaciado atómico” se refiere a la distancia medida en términos del número de átomos de la cadena principal, sin tener en cuenta grupos pendientes o cadenas laterales, que es usualmente la distancia atómica más corta. El espaciado atómico se puede utilizar para representar la longitud de un grupo de ligamiento. Por ejemplo, el espaciado atómico entre A y B en A-CO-NH-B es 2, que en A-p-Ph-CH<2>-B es 5 (en el que p-Ph es p-fenileno) y el de A-CH(CH<2>CH<2>CH<2>CH<3>)-B es 1. Los “átomos de la cadena principal” que constituyen el espaciado atómico pueden ser solo átomos no hidrógeno. En cuanto a los grupos de ligamiento divalentes que contienen estructuras cíclicas, el espaciado atómico implica segmentos cíclicos particulares y se debe adoptar el menor número de átomos calculado. Por ejemplo, el espaciado atómico del p-fenileno, a saber, 1,4-fenileno, es 4, el espaciado atómico del m-fenileno es 3 y el espaciado atómico del o-fenileno es 2. Para otro ejemplo, el espaciado atómico de -CH<2>-, -CH(CH<3>)-, -C(CH<3>)<2>-, -CH(CH<2>Ph)<2>- y -C(CH<2>OX)- son todos 1.
[0048] En la presente invención, “ligador de cadena carbonada” o “grupo de ligamiento de cadena carbonada” se refiere al grupo de ligamiento cuyos átomos de la cadena principal son todos carbono, permitiéndose heteroátomos o grupos que contienen heteroátomos en las cadenas laterales que sustituyen a los átomos de hidrógeno conectados a los átomos de carbono de la cadena principal. Cuando un “átomo de la cadena principal” es un heteroátomo, también se puede denominar “heteroátomo de la cadena principal”. Por ejemplo,
[0050] A-S-CH<2>-B, A-O-CH<2>-B y
(en el que el espaciado atómico es 4) se considera que contienen heteroátomos en la cadena principal. Los ligadores de cadena carbonada incluyen grupos hidrocarbileno y aquellos cuyos grupos pendientes contienen heteroátomos; dichos ligadores de cadena carbonada cuyos grupos pendientes contienen heteroátomos incluyen, pero no se limitan a, grupo oxo (=O), grupo tioxo (=S), grupo imino (=N-R, en el que R es hidrógeno o un grupo orgánico y en el que el nitrógeno está conectado al carbono de la cadena principal a través de un doble enlace carbono-nitrógeno), grupo oxahidrocarbonado que forma un enlace éter, grupo tia-hidrocarbonado que forma un enlace tioéter y grupo azahidrocarbonado en forma de grupo amino terciario, etc. La cadena principal del “ligador de cadena carbonada” está compuesta enteramente por átomos de carbono y se permite que los grupos pendientes de la cadena carbonada contengan heteroátomos, es decir, la cadena principal se construye al conectar grupos metileno o grupos metileno sustituidos. Dichos grupos metileno sustituidos pueden tener un sustituyente monovalente, dos sustituyentes monovalentes o un sustituyente divalente (por ejemplo, un oxígeno divalente (=O), un grupo
[0052] metilenoxi (-CH<2>O-) que forma un anillo de tres miembros
con el átomo de carbono de la cadena principal). Dichos grupos metileno sustituidos pueden tener un átomo de hidrógeno sustituido (por ejemplo, -CH(CH<3>)-), dos átomos de hidrógeno sustituidos respectivamente (por ejemplo, -(CH<3>)C(OCH<3>)-) o dos átomos de hidrógeno sustituidos simultáneamente (por ejemplo, grupos carbonilo, grupos tiocarbonilo, -C(=NH)- y -
[0054] C(=N<+>H<2>)-) o contener un grupo pendiente cíclico (por ejemplo,
, en el que el espaciado atómico es 1).
[0055] En la presente invención, los enlaces amino secundarios y los enlaces hidrazina indican que ambos lados de “-NH-” están terminados por grupos hidrocarbileno, por ejemplo, -CH<2>-NH-CH<2>-; mientras que -C(=O)-NH- se describe como un enlace amida, en lugar de contener un enlace amino secundario.
[0056] En la presente invención, un compuesto, un grupo o un átomo se pueden sustituir y contener heteroátomos al mismo tiempo, por ejemplo, cuando un átomo de hidrógeno en un compuesto o grupo es reemplazado por un nitrobenceno y cuando -CH<2>-CH<2>-CH<2>- es reemplazado por -CH<2>-S-CH(CH<3>)-.
[0057] En la presente invención, el “enlace de ligamiento” sin ningún átomo es solo para conexión, es decir, cuando un grupo se denota como un enlace de ligamiento, se considera que no existe.
[0058] En la presente invención, “cada uno independientemente en cada ocurrencia”, “en cada ocurrencia, independientemente” y expresiones similares no solo significan que diferentes objetos de la descripción pueden ser cada uno independientemente cualquier opción de sus propias definiciones dadas, sino que también significan que el mismo objeto en diferentes posiciones puede ser cada uno independientemente cualquier opción de su definición; dicho objeto, incluye pero no se limita a, los grupos anteriormente mencionados. Por ejemplo, en -Z-L<4>-Z-, siempre que “Z, en cada ocurrencia, se seleccione independientemente del grupo que consiste en -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-,
[0060] -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)S- y
, en el que R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>”, dos grupos Z en “-Z-L<4>-Z-” pueden ser los mismos o diferentes y dos grupos R<c>en “- NR<c>C(=O)NR<c>-” pueden ser los mismos o diferentes, cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>.
[0061] En la presente invención, “grupo” contiene al menos un átomo, refiriéndose al radical que queda de un compuesto que pierde uno o más átomos. Con respecto a un compuesto, el grupo restante formado por la eliminación de otros grupos también se denomina “residuo”. La valencia de los grupos no está particularmente limitada, dichos grupos incluyen grupo monovalente, grupo divalente, grupo trivalente, grupo tetravalente, ..., grupo hectovalente, etc. En los que, los grupos con valencia igual o mayor de dos se definen colectivamente como grupos de ligamiento. Un grupo de ligamiento puede contener también solo un átomo, tal como grupo oxo y grupo tio.
[0062] En la presente invención, “hidrocarburos” se refiere a una clase de compuestos que contienen solo átomos de carbono y átomos de hidrógeno.
[0063] En la presente invención, los hidrocarburos se clasifican en hidrocarburos alifáticos e hidrocarburos aromáticos (también denominados como arenos, hidrocarburos aromáticos o de arilo) en cuanto al tipo de grupo hidrocarburo. Los hidrocarburos que no contienen anillos de fenilo ni anillos de fenilo sustituidos con hidrocarbilo se definen como hidrocarburos alifáticos. Los hidrocarburos que contienen al menos un anillo de fenilo o anillo de fenilo sustituido con hidrocarbilo se definen como hidrocarburos aromáticos. Un hidrocarburo aromático puede contener uno o más grupos hidrocarbilo alifáticos, tales como tolueno, difenilmetano, 2,3-dihidroindeno, etc.
[0064] En la presente invención, los hidrocarburos se clasifican en hidrocarburos saturados e hidrocarburos insaturados en términos de la saturación o insaturación. Todos los hidrocarburos aromáticos son hidrocarburos insaturados. Los hidrocarburos alifáticos saturados se denominan también alcanos. El grado de insaturación de los hidrocarburos alifáticos insaturados no está particularmente limitado. Por ejemplo, los hidrocarburos alifáticos insaturados incluyen, pero no se limitan a, alquenos que contienen dobles enlaces carbono-carbono, alquinos que contienen triples enlaces carbono-carbono, dienos que contienen dos dobles enlaces carbonocarbono conjugados y similares. Cuando las porciones alifáticas de los hidrocarburos aromáticos están saturadas, dichos hidrocarburos aromáticos se denominan también aralcanos, tales como el tolueno.
[0065] En la presente invención, las estructuras de los hidrocarburos no están particularmente limitadas, incluyen estructuras lineales (de cadena recta) sin grupos pendientes, estructuras ramificadas con grupos pendientes, estructuras que contienen anillos, estructuras dendríticas, estructuras de peine, estructuras hiperramificadas, etc. A menos que se especifique lo contrario, las estructuras preferibles incluyen estructuras lineales sin grupos pendientes, estructuras ramificadas con grupos pendientes y estructuras que contienen anillos, correspondientes a hidrocarburos lineales (hidrocarburos acíclicos no ramificados), hidrocarburos ramificados e hidrocarburos cíclicos (ciclohidrocarburos), respectivamente. En los que, los hidrocarburos que no contienen anillos se denominan hidrocarburos de cadena abierta (hidrocarburos acíclicos), que incluyen, pero no se limitan a, estructuras lineales sin grupos pendientes y estructuras ramificadas con grupos pendientes. Los hidrocarburos de cadena abierta pertenecen a los hidrocarburos alifáticos. Por lo tanto, los hidrocarburos lineales se denominan también hidrocarburos alifáticos lineales y los hidrocarburos ramificados se denominan también hidrocarburos alifáticos ramificados.
[0066] En la presente invención, los hidrocarburos con cualquier átomo de carbono reemplazado por un heteroátomo se denominan generalmente hidrocarburos heterosustituidos (heterohidrocarburos).
[0067] En la presente invención, los heterohidrocarburos derivados alifáticos se refieren a heterohidrocarburos que se derivan de hidrocarburos alifáticos, que incluyen hidrocarburos heterocíclicos derivados alifáticos (heterociclohidrocarburos derivados alifáticos o hidrocarburos cicloalifáticos heterosustituidos) e hidrocarburos heterosustituidos de cadena abierta derivados alifáticos (hidrocarburos alifáticos de cadena abierta heterosustituidos). Los heterohidrocarburos derivados alifáticos saturados se denominan también heteroalcanos.
[0068] En la presente invención, “grupo hidrocarburo” se refiere al residuo de una molécula de hidrocarburo con al menos un átomo de hidrógeno eliminado. De acuerdo con el número de hidrógenos eliminados, los grupos hidrocarburo se pueden clasificar en grupos hidrocarburo monovalentes (con un átomo de hidrógeno eliminado; denominados también como grupos hidrocarbilo), grupos hidrocarburo divalentes (con dos átomos de hidrógeno eliminados; denominados también como grupos hidrocarbileno), grupos hidrocarburo trivalentes (con tres átomos de hidrógeno eliminados) y similares. De acuerdo con lo anterior, un grupo hidrocarburo de valencia n es aquel con n átomos de hidrógeno eliminados, en comparación con la molécula original. A menos que se especifique lo contrario, los grupos hidrocarburo en la presente invención se refieren a grupos hidrocarburo monovalentes. En la presente invención, las fuentes de los grupos hidrocarburo no están particularmente limitadas; por ejemplo, se pueden derivar de hidrocarburos alifáticos o hidrocarburos aromáticos, de hidrocarburos saturados o hidrocarburos insaturados, de hidrocarburos lineales, hidrocarburos ramificados o hidrocarburos cíclicos o de hidrocarburos o heterohidrocarburos, etc. De acuerdo con el grado de saturación, los grupos hidrocarburo se pueden derivar de alcanos, alquenos, alquinos, dienos, etc. Con respecto a los hidrocarburos cíclicos, los grupos hidrocarburo se pueden derivar de hidrocarburos alicíclicos o hidrocarburos aromáticos o de hidrocarburos monocíclicos o hidrocarburos policíclicos. Con respecto a los hidrocarburos heterocíclicos, los grupos hidrocarburo pueden derivar de hidrocarburos heterocíclicos derivados alifáticos o hidrocarburos heterocíclicos derivados aromáticos.
[0069] En la presente invención, “grupo alifático” se refiere al residuo de una molécula de hidrocarburo alifático con al menos un átomo de hidrógeno eliminado. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alifáticos se refieren a grupos hidrocarburo monovalentes. El grupo alifático incluye grupos alifáticos saturados y grupos alifáticos insaturados.
[0070] En la presente invención, “grupo alquilo” se refiere a grupos hidrocarburo derivados de alcanos, a menos que se especifique lo contrario, con cualquier átomo de hidrógeno eliminado; dicho grupo alquilo puede ser lineal o ramificado, sustituido o no sustituido. Ejemplos específicos incluyen que un grupo propilo se refiere a un grupo 1-propilo o a un grupo isopropilo y que un grupo propileno se puede referir a un grupo 1,3-propileno, a un grupo 1,2-propileno o a un grupo isopropilideno.
[0072] En la presente invención, “grupo hidrocarburo insaturado” se refiere al grupo hidrocarburo derivado de un hidrocarburo insaturado que pierde uno o más átomos de hidrógeno. Los grupos hidrocarburo formados al eliminar los átomos de hidrógeno unidos a átomos de carbono insaturados de hidrocarburos insaturados pueden incluir grupos alquenilo, grupos alquinilo, grupos dienilo y similares, por ejemplo, grupo propenilo y grupo propinilo. De acuerdo con el tipo de enlace insaturado, los grupos hidrocarburo formados al eliminar los átomos de hidrógeno unidos a átomos de carbono saturados de hidrocarburos insaturados incluyen grupos alquenil-hidrocarbilo, grupos alquinil-hidrocarbilo, grupos dienil-hidrocarbilo y similares, tales como grupo alilo y grupo propargilo.
[0074] En la presente invención, “grupo alquenilo” se refiere a un grupo alquenilo sustituido o no sustituido con estructura lineal o estructura ramificada, que contiene dos o más átomos de carbono (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, ..., 20 o más átomos de carbono) y al menos un doble enlace carbono-carbono. “Grupo alquenilo C<2-15>” se refiere a un grupo alquenilo sustituido o no sustituido con estructura lineal o estructura ramificada, que contiene de 2 a 15 átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono, es decir, un grupo alquenilo puede contener uno, dos, tres, cuatro o más dobles enlaces carbono-carbono. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alquenilo incluyen grupos alquenilo sustituidos y no sustituidos en la presente invención.
[0076] En la presente invención, “grupo alquinilo” se refiere a un hidrocarburo opcionalmente sustituido con estructura lineal o estructura ramificada, que contiene dos o más átomos de carbono (tales como 2, 3, 4, 5, ..., 20 o más átomos de carbono) y al menos un triple enlace carbono-carbono. “Grupo alquinilo C<2-15>” se refiere a un grupo alquinilo sustituido o no sustituido con estructura lineal o estructura ramificada, que contiene de 2 a 15 átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono, es decir, un grupo alquinilo puede contener uno, dos, tres, cuatro o más triples enlaces carbono-carbono. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alquinilo incluyen grupos alquinilo sustituidos y no sustituidos en la presente invención.
[0078] En la presente invención, “peso molecular” es sinónimo de masa molecular relativa, refiriéndose a la masa de una molécula dada. El “peso molecular promedio” de un compuesto representado por una fórmula general se refiere a la masa molecular del compuesto en la materia macroscópica y, a menos que se especifique lo contrario, también se refiere al “peso molecular promedio numérico” (M<n>). El peso molecular promedio numérico se puede utilizar para describir el peso molecular de bloques o sustancias que son polidispersas o monodispersas. La unidad de medida del “peso molecular” y del “peso molecular promedio” es el dalton (Da), a menos que se especifique lo contrario. El peso molecular de la cadena de polietilenglicol también se puede medir en “grado de polimerización” que es, específicamente, el número de unidades de repetición (unidades de oxietileno, es decir, unidades EO) en la molécula del compuesto. De acuerdo con lo anterior, el promedio y el promedio numérico del número de unidades de repetición se pueden medir en “grado de polimerización promedio”, preferiblemente en “grado de polimerización promedio numérico”.
[0080] En la presente invención, los términos “estable” (o “puede permanecer estable”) y “degradable” (o “se puede degradar”) son un par de conceptos opuestos.
[0082] En la presente invención, el término “ser degradable o poder degradarse” significa que un grupo o un compuesto se puede escindir en dos o más residuos mediante la ruptura de enlaces químicos. Si un grupo de ligamiento permanece íntegro, independientemente del cambio estructural mediante reacciones químicas, entonces todavía cae dentro del alcance de los “grupos estables”. Las condiciones para ser “degradable” no están particularmente limitadas, pudiendo ser condición fisiológica in vivo o entorno fisiológico simulado in vitro u otras condiciones, preferiblemente condiciones fisiológicas in vivo o entorno fisiológico simulado in vitro. Dichas condiciones fisiológicas no están particularmente limitadas, e incluyen, pero no se limitan a, entornos fisiológicos de suero, corazón, hígado, bazo, pulmón, riñón, hueso, músculo, grasa, cerebro, ganglio linfático, intestino delgado, gónadas, etc. y dichos entornos fisiológicos podrían ser intracelulares o en la matriz extracelular y podrían estar en tejidos normales o en tejidos patológicos (por ejemplo, tumor, tejido inflamado). Dicho entorno fisiológico simulado in vitro no está particularmente limitado e incluye, pero no se limita a, solución salina fisiológica, tampón, medio de cultivo y similares. La tasa de degradación no está particularmente limitada, por ejemplo, degradación rápida mediante enzimólisis o degradación lenta mediante hidrólisis fisiológica, etc. Dichas condiciones fisiológicas in vivo incluyen condiciones fisiológicas durante el tratamiento, tales como radiación ultravioleta, terapia térmica, etc. Las condiciones para ser “degradable” incluyen, pero no se limitan a, iluminación con luz, calor, baja temperatura, condición enzimática, condición de oxidaciónreducción (redox), condición ácida, condición básica, condición fisiológica, entorno fisiológico simulado in vitro, etc., preferiblemente iluminación con luz, calor, condición enzimática, condición de oxidación-reducción, condición ácida, condición básica, etc. Dicho “degradable” significa que la degradación puede ocurrir bajo la estimulación de cualquiera de las condiciones anteriores. Dicha condición de iluminación con luz incluye, pero no se limita a, luz visible, luz ultravioleta, luz infrarroja, luz infrarroja cercana, luz infrarroja media, etc. Dicha condición de calor significa una temperatura superior a la temperatura fisiológica normal y normalmente significa una temperatura superior a 37 °C y también normalmente inferior a 45 °C, preferiblemente inferior a 42 °C. Dicha baja temperatura se refiere a la temperatura por debajo de la temperatura fisiológica humana, preferiblemente por debajo de 25 °C, más preferiblemente ≤10 °C, con ejemplos específicos tales como temperatura de refrigeración, temperatura de congelación, temperatura terapéutica de nitrógeno líquido, 2~10 °C, 4~8 °C, 4 °C, 0 °C, -20 ± 5 °C, etc. Dicha condición enzimática no está particularmente limitada y se incorporan todas las enzimas que se pueden generar fisiológicamente, por ejemplo, peptidasas, proteasas y liasas. Dicha condición de oxidación-reducción no está particularmente limitada, por ejemplo, transformación redox o transformación de hidrogenación entre un grupo mercapto y un enlace disulfuro. Dichas condiciones ácida y básica se refieren principalmente a las condiciones de pH de partes internas del cuerpo tales como tejidos normales, tejidos patológicos y órganos o tejidos en el período de tratamiento; por ejemplo, el estómago está bajo condición ácida y la ubicación del tumor también está bajo condición ácida. Dicho “degradable” significa que la degradación se puede realizar a través del metabolismo (por ejemplo, efecto fisiológico, enzima, oxidación-reducción, etc.), estimulación del microambiente en áreas específicas del cuerpo (por ejemplo, condición ácida y condición básica) o estimulación terapéutica clínica (por ejemplo, iluminación con luz, calor, baja temperatura), etc. Cabe señalar que algunas condiciones en química orgánica, tales como la escisión de enlaces bajo ácido fuerte, base fuerte y alta temperatura (por ejemplo, por encima de 100 °C), que son extremas con respecto a los organismos vivos, no están incluidas en el alcance de las condiciones degradables en la presente invención. Por ejemplo, aunque el enlace éter se puede escindir bajo condiciones de ácido fuerte (por ejemplo, ácido bromhídrico), se clasifica como un grupo de ligamiento estable en la presente invención.
[0083] En la presente invención, siempre que un grupo de ligamiento pueda seguir existiendo como un grupo de ligamiento completo (es decir, un grupo de ligamiento que pueda estar conectado de manera estable a los grupos adyacentes de forma covalente), se definirá como “estable”, en el que se permiten cambios químicos sin romper la integridad del grupo de ligamiento. Dichos cambios químicos no están particularmente limitados, incluyen, pero no se limitan a, isomerización, oxidación, reducción, ionización, protonación, desprotonación, sustitución, etc. Las condiciones para ser “estable” no están particularmente limitadas, incluyen, pero no se limitan a, iluminación con luz, calor, baja temperatura, condición enzimática, oxidación-reducción, condición neutra, condición ácida, condición básica, condición fisiológica, entorno fisiológico simulado in vitro, etc., preferiblemente iluminación con luz, calor, condición enzimática, oxidación-reducción, condición ácida, condición básica, etc. Un grupo o compuesto que es “estable” indica que los componentes pueden permanecer conectados de manera estable en el ciclo metabólico in vivo y el peso molecular no se reducirá debido a la escisión de la cadena siempre que el grupo o compuesto mantenga la integridad, sin estimulación particular (por ejemplo, condición de pH en áreas específicas e iluminación con luz, calor y baja temperatura en el tratamiento).
[0085] En la presente invención, “estable” no es un concepto absoluto con respecto a un grupo de ligamiento particular. Por ejemplo, un enlace amida es mucho más estable que un enlace éster bajo condiciones ácidas o básicas. De acuerdo con lo anterior, los grupos de ligamiento “estables” en la presente invención incluyen enlaces amida. Sin embargo, un enlace peptídico que es un tipo de enlace amida formado mediante deshidratacióncondensación de dos aminoácidos que proporcionan respectivamente un grupo α-carboxilo y un grupo α-amino como grupos reactivos, también se podría romper bajo condiciones enzimáticas específicas, y por lo tanto también se puede clasificar como un grupo de ligamiento “degradable”. De manera similar, el grupo carbamato (grupo uretano), el grupo tiocarbamato (grupo tiouretano) y similares, podrían ser un grupo de ligamiento “estable” o un grupo de ligamiento “degradable”. Más generalmente, los grupos uretano, grupos tiouretano y similares, tienden a degradarse lentamente, mientras que el enlace amida distinto del enlace peptídico puede permanecer estable en el ciclo metabólico in vivo. Para otro ejemplo, los enlaces éster comunes se degradarán bajo condiciones ácidas o básicas, mientras que los enlaces éster en algunas estructuras especiales se degradarán bajo exposición UV. Para otro ejemplo, aunque algunos enlaces químicos se pueden degradar bajo condiciones enzimáticas específicas, todavía se pueden considerar estables si la circulación en el uso clínico (por ejemplo, administración en el punto de atención) no pasa o básicamente no pasa a través de las condiciones enzimáticas.
[0087] Para definir más claramente la degradabilidad del compuesto en la presente invención, se proporciona un criterio de referencia, que es un umbral de porcentaje específico (por ejemplo, 90 %) de enlaces químicos que permanecen intactos dentro de un intervalo de tiempo limitado. Tomando el 90 % como ejemplo, el porcentaje toma usualmente la curva farmacocinética como referencia, en base al porcentaje de pérdida que cumple los criterios de evaluación clínica. Con respecto a los fármacos pegilados intravenosos, por ejemplo, cuando la concentración plasmática (calculada por los ingredientes farmacéuticos eficaces, incluyendo fármacos pegilados y componentes no pegilados después de la degradación) es inferior al 15 % de la concentración inicial (u otras proporciones que sean más consistentes con los criterios de evaluación clínica), el 85 % restante se toma como valor base; si la proporción de un grupo de ligamiento sin enlaces químicos escindidos excede el 90 %, entonces el grupo de ligamiento se considera un grupo estable en la presente invención; por el contrario, si no se cumple dicho 90 %, entonces el grupo de ligamiento pertenece a los grupos degradables. La estabilización hidrolítica y la degradación enzimática reportadas en la literatura publicada también están incluidas en la presente invención. Por ejemplo, la tasa de hidrólisis en el proceso de estabilización hidrolítica reportada en la literatura publicada también se incluye en el presente documento, refiriéndose preferiblemente a la tasa de hidrólisis inferior al 1-2 % (generalmente 2 %; porcentaje en masa o molar) por día bajo condiciones fisiológicas. La tasa de hidrólisis de los enlaces químicos típicos se puede encontrar en la mayoría de los manuales químicos estándar. En la presente invención, “grupo protector de hidroxilo” incluye todos los grupos que se pueden utilizar como grupos protectores de hidroxilo comunes. El grupo protector de hidroxilo es preferiblemente alcanoilo (por ejemplo, acetilo, butirilo), alcanoilo aromático (por ejemplo, benzoílo), bencilo, trifenilmetilo, trimetilsililo, t-butildimetilsililo, alilo, acetal o cetal. La eliminación de los grupos acetilo se lleva a cabo generalmente bajo condiciones básicas, más comúnmente por amonólisis con NH<3>/MeOH o por metanólisis catalizada por anión metanol. El grupo bencilo se puede eliminar fácilmente mediante hidrogenólisis catalizada por paladio en solución neutra a temperatura ambiente o mediante reacción de reducción con sodio metálico en etanol o amoniaco líquido. El grupo trifenilmetilo se elimina generalmente mediante hidrogenólisis catalítica. Los grupos trimetilsililo se eliminan generalmente utilizando reactivos que contienen iones fluoruro (por ejemplo, fluoruro de tetrabutilamonio/THF anhidro, etc.). El éter de t-butildimetilsililo es relativamente estable, pudiendo soportar condiciones de hidrólisis de ésteres con hidróxido de potasio alcohólico y condiciones de reducción suaves (por ejemplo, Zn/CH<3>OH y similares), de tal manera que se puede eliminar mediante iones fluoruro (por ejemplo, Bu<4>N<+>F-) en solución de THF o mediante ácido acético acuoso a temperatura ambiente.
[0089] En la presente invención, “grupo protector de carboxilo” se refiere al grupo protector que se puede transformar en un grupo carboxilo mediante la hidrólisis de sí mismo o la reacción de desprotección de un grupo carboxilo protegido. El grupo protector de carboxilo se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en un grupo alquilo (por ejemplo, un grupo metilo, un grupo etilo y un grupo butilo) y un grupo aralquilo (por ejemplo, un grupo bencilo) y más preferiblemente se selecciona del grupo que consiste en un grupo butilo (tBu), un grupo metilo (Me) y un grupo etilo (Et). En la presente invención, “grupo carboxilo protegido” se refiere al grupo protegido por un grupo protector de carboxilo apropiado, seleccionado preferiblemente del grupo que consiste en un grupo metoxicarbonilo, un grupo etoxicarbonilo, un grupo t-butiloxicarbonilo y un grupo benciloxicarbonilo. Dichos grupos protectores de carboxilo se pueden eliminar a través de hidrólisis catalizada por ácidos o álcalis o a través de reacciones de pirólisis ocasionalmente; por ejemplo, los grupos t-butilo se pueden eliminar bajo condiciones ácidas suaves y el grupo bencilo se puede eliminar por hidrogenólisis. El reactivo utilizado para la eliminación de los grupos protectores de carboxilo se selecciona del grupo que consiste en TFA, H<2>O, LiOH, NaOH, KOH, MeOH, EtOH y combinaciones de los mismos, se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en la combinación de TFA y H<2>O, la combinación de LiOH y MeOH y la combinación de LiOH y EtOH. Un grupo carboxilo protegido puede experimentar desprotección y luego producir el ácido libre correspondiente; dicha desprotección se conduce en presencia de un álcali y dicho álcali forma una sal farmacéuticamente aceptable con dicho ácido libre producido mediante dicha desprotección.
[0091] En la presente invención, “grupo protector de amino” incluye todos los grupos que se utilizan como grupos protectores de amino en general, tales como un grupo aril alquilo C<1-6>, un grupo alcoxi C<1-6>alquilo C<1-6>, un grupo alcoxicarbonilo C<1-6>, un grupo ariloxicarbonilo, un grupo alquilsulfonilo C<1-6>, un grupo arilsulfonilo, un grupo sililo, etc. Los grupos protectores de amino se seleccionan preferiblemente del grupo que consiste en un grupo tbutoxicarbonilo (Boc), un grupo p-metoxibenciloxicarbonilo (Moz) y un grupo 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc). El reactivo utilizado para la eliminación de los grupos protectores de amino se selecciona del grupo que consiste en TFA, H<2>O, LiOH, NaOH, KOH, MeOH, EtOH y combinaciones de los mismos, se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en la combinación de TFA y H<2>O, la combinación de LiOH y MeOH y la combinación de LiOH y EtOH. El reactivo utilizado para la eliminación del grupo protector de Boc puede ser TFA o HCl/EA, preferiblemente TFA. El reactivo utilizado para la eliminación del grupo protector de Fmoc puede ser la solución de piperidina al 20 % en N,N-dimetilformamida (DMF).
[0093] En la presente invención, “activación de grupo carboxilo” se refiere a la activación de grupos carboxilo con reactivo activador de carboxilo, en el que el grupo carboxilo activado puede promover reacciones de condensación, por ejemplo, al inhibir la generación de impurezas racémicas y al acelerar la tasa de reacción mediante catálisis, etc. “Grupo activador de carboxilo” se refiere al residuo del reactivo activador de carboxilo. Dicho reactivo activador de carboxilo se selecciona del grupo que consiste en N-hidroxisuccinimida (NHS), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI), N-hidroxi-5-norborneno-2,3-dicarboximida (HONb), N,N’-diciclohexilcarbodiimida (DCC) y cualquier combinación de los mismos, seleccionándose preferiblemente del grupo que consiste en la combinación de NHS/EDCI, NHS/DCC y HONb/DCC, más preferiblemente la combinación de NHS/EDCI.
[0095] En la presente invención, “catión” se refiere a la estructura correspondiente que presenta una carga positiva, ya sea de forma permanente o no permanente sino en respuesta a ciertas condiciones tales como el pH. Por lo tanto, los cationes incluyen cationes permanentes y compuestos, grupos o átomos cationizables. Los cationes permanentes se refieren a las estructuras correspondientes (compuestos, grupos o átomos) que portan cargas positivas bajo condiciones de cualquier valor de pH o actividad de iones de hidrógeno de su entorno; típicamente, la presencia de un átomo de nitrógeno cuaternario se acompaña por una carga positiva. Cuando un compuesto porta múltiples de dichas cargas positivas, se puede denominar catión permanente. Una sustancia cationizable se refiere a un compuesto, grupo o átomo que está cargado positivamente a un pH más bajo y no cargado a un pH más alto de su entorno. Más aún, en entornos no acuosos donde el pH no se puede determinar, un compuesto, grupo o átomo catiónico está cargado positivamente a una concentración alta de iones de hidrógeno y no cargado a una concentración o actividad baja de iones de hidrógeno, lo que depende de las propiedades individuales del compuesto cationizable o policationizable, especialmente del pKa de los grupos o átomos cationizables que están cargados o no cargados al pH o concentración de iones de hidrógeno correspondientes. En el entorno acuoso diluido, la ecuación de Henderson-Hasselbalch se puede utilizar para estimar la fracción de compuestos, grupos o átomos cationizables con carga positiva, lo que es bien conocido por los expertos en la técnica. Por ejemplo, en algunas realizaciones, si un compuesto o fracción es cationizable, se prefiere que esté cargado positivamente a un valor de pH de aproximadamente 1 a 9, preferiblemente de 4 a 9, de 5 a 8 o incluso de 6 a 8, más preferiblemente a un valor de pH de o inferior a 9, de o inferior a 8, de o inferior a 7, aún más preferiblemente a valores de pH fisiológicos, por ejemplo, aproximadamente 7.3 a 7.4, es decir, bajo condiciones fisiológicas, particularmente bajo condiciones de sal fisiológica de la célula in vivo. En otras realizaciones, se prefiere que el compuesto o fracción cationizable sea predominantemente neutro a valores de pH fisiológicos, por ejemplo, aproximadamente 7.0-7.4, pero que se cargue positivamente a valores de pH más bajos. En algunas realizaciones, el rango preferido de pKa para el compuesto o fracción cationizable es de aproximadamente 5 a aproximadamente 7.
[0097] En la presente invención, “liposoma catiónico” se refiere al liposoma que está cargado positivamente o es ionizable. Excepto para las moléculas representadas por la fórmula general (1), los liposomas catiónicos incluyen, pero no se limitan a, cloruro de N,N-dioleil-N,N-dimetilamonio (DODAC), bromuro de N,N-diestearil-N,N-dimetilamonio (DDAB), 1,2-dioleoil-3-trimetilamonio-propano (DOTAP), cloruro de N-[1-(2,3-dioleoiloxi)propil]-N,N,N-trimetilamonio (DOTMA), 1,2-dioleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DODMA), 3-(didodecilamino)-N1,N1,4-tridodecil-1-piperazinetanamina (KL10), N1-[2-(didodecilamino)etil]-N1,N4,N4-tridodecil-1,4-piperazinadietanamina (KL22), 14,25-ditridecil-15,18,21,24-tetraaza-octatriacontano (KL25), 1,2-dilinoleiloxi-N,N-dimetilaminopropano (DLin-DMA), 2,2-dilinoleil-4-dimetilaminometil-[1,3]-dioxolano (DLin-K-DMA), 4-(dimetilamino)butanoato de heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-ilo (DLin-MC3-DMA), 2,2-dilinoleil-4-(2-dimetilaminoetil)-[1,3]-dioxolano (DLin-KC2-DMA) y mezclas de los mismos.
[0099] En la presente invención, “lípido PEG” (es decir, lípido PEGilado) se refiere a las moléculas que contienen tanto fracciones de lípidos como de PEG. Excepto para las moléculas representadas por la fórmula general (2), los lípidos PEG incluyen, pero no se limitan a, 1,2-dimiristoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol (PEG-DMG), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[amino(polietilenglicol)] (PEG-DSPE), PEG-colesterol, PEG-diacilglicamida (PEG-DAG), PEG-dialquiloxipropilo (PEG-DAA), que incluyen específicamente PEG500-dipalmitoilfosfatidilcolina, PEG2000-dipalmitoilfosfatidilcolina, PEG500-estearilfosfatidiletanolamina, PEG2000-diestearilfosfatidiletanolamina, PEG500-1,2-dioleoilfosfatidiletanolamina, PEG2000-1,2-dioleoilfosfatidiletanolamina y PEG2000-2,3-diestearoilglicerol, etc.
[0101] En la presente invención, “lípido neutro” se refiere a cualquier sustancia lipídica que no está cargada o que existe en forma de zwitterión neutro al pH elegido, preferiblemente fosfolípido. Los lípidos neutros incluyen, pero no se limitan a, 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DLPC), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-fosfocolina (DMPC), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DOPC), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DSPC), 1,2-diundecanoil-sn-glicero-fosfocolina (DUPC), 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (POPC), 1,2-di-O-octadecenil-sn-glicero-3-fosfocolina (18:0 Diéter PC), 1-oleoil-2-colesterilhemisuccinil-sn-glicero-3-fosfocolina (OChemsPC), 1-hexadecil-sn-glicero-3-fosfocolina (C16 Lyso PC), 1,2-dilinolenoil-sn-glicero-3-fosfocolina, 1,2-diarachidonoil-sn-glicero-3-fosfocolina, 1,2-didocosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfocolina, 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE), 1,2-diftanoilsn-glicero-3-fosfoetanolamina (ME 16.0 PE), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, 1,2-dilinoleoil-snglicero-3-fosfoetanolamina, 1,2-dilinolenoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, 1,2-diarachidonoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, 1,2-didocosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, sal de sodio de 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-(1-glicerol) (DOPG), dioleoilfosfatidilserina (DOPS), dipalmitoilfosfatidilglicerol (DPPG), palmitoiloleoilfosfatidiletanolamina (POPE), diestearoilfosfatidiletanolamina (DSPE), dipalmitoilfosfatidiletanolamina (DPPE), dimiristoilfosfoetanolamina (DMPE), 1-estearoil-2-oleoilfosfatidiletanolamina (SOPE), 1-estearoil-2-oleoil-fosfatidilcolina (SOPC), esfingomielina, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ácido fosfatídico, palmitoiloleoilfosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, lisofosfatidiletanolamina (LPE) y combinaciones de los mismos. El lípido neutro puede ser sintético o natural.
[0103] En la presente invención, el “lípido esteroide” se selecciona del grupo que consiste en colesterol, coprostanol, sitosterol, ergosterol, campesterol, estigmasterol, brassicasterol tomatidina, ácido ursólico, α-tocoferol y mezclas de los mismos.
[0105] En la presente invención, “residuo de aminoácido” es un aminoácido del cual, formalmente, se ha eliminado un átomo de hidrógeno de un grupo amino y/o del cual, formalmente, se ha eliminado un grupo hidroxilo de un grupo carboxilo y/o del cual, formalmente, se ha eliminado un átomo de hidrógeno de un grupo sulfhidrilo y/o con un grupo amino protegido y/o con un grupo carboxilo protegido y/o con un grupo sulfhidrilo protegido. De manera imprecisa, el residuo de aminoácido se puede describir como aminoácido. La fuente del aminoácido en la presente invención, a menos que se especifique lo contrario, no está particularmente limitada; es decir, dicho aminoácido puede ser natural o no natural o una mezcla de los mismos. La configuración del aminoácido en la presente invención no está particularmente limitada, que puede ser de tipo L o de tipo D o una mezcla de los mismos.
[0106] En la presente invención, “fuente de grupo funcional” se refiere a la estructura o molécula que tiene actividad de reacción o actividad de reacción potencial, fotosensibilidad o fotosensibilidad potencial, propiedad de direccionamiento o propiedad de direccionamiento potencial. Dicho “potencial” indica que la estructura o molécula se puede convertir en un grupo reactivo mediante un proceso químico que incluye, pero no se limita a, modificación funcional (injerto, sustitución, etc.), desprotección, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación, transformación de grupos salientes, etc. o generar luminiscencia o propiedad de direccionamiento a través de estímulos externos de iluminación con luz, calor, enzimas, moléculas de unión específicas o microambiente in vivo, etc. La luminiscencia no está particularmente limitada, incluye, pero no se limita a, luz visible, fluorescencia, fosforescencia, etc.
[0107] En la presente invención, “forma variante” se refiere a una estructura que se puede transformar en el grupo reactivo objetivo después de cualquier proceso de cambio químico seleccionado del grupo que consiste en oxidación, reducción, hidratación, deshidratación, reordenamiento electrónico, reordenamiento estructural, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación, sustitución, desprotección, transformación de grupos salientes, etc.
[0108] En la presente invención, “forma variante de grupo reactivo” se refiere a un grupo reactivo que permanece reactivo después de al menos un proceso de cambio químico seleccionado de oxidación, reducción, hidratación, deshidratación, reordenamiento electrónico, reordenamiento estructural, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación, sustitución, desprotección, transformación de grupos salientes, etc. o una forma no reactiva de un grupo reactivo protegido.
[0109] En la presente invención, “micromodificación” se refiere a un proceso de modificación química que se puede completar a través de reacciones químicas simples. Dichas reacciones químicas simples incluyen principalmente desprotección, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación, transformación de grupos salientes, etc. De acuerdo con lo anterior, “forma variante con micromodificación” se refiere a una estructura que se puede transformar en el grupo reactivo objetivo después de reacciones químicas simples seleccionadas de desprotección, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación, transformación de grupos salientes, etc., dicha transformación de grupos salientes incluye la transformación de la forma de éster a la forma de cloruro de acilo.
[0110] En la presente invención, “adyuvante” o “componente adyuvante” es típicamente un agente (por ejemplo, farmacológico o inmunológico) o composición que puede modificar (por ejemplo, potenciar) la eficacia de otros agentes (por ejemplo, fármacos o vacunas). Convencionalmente, el término se refiere en el contexto de la invención a un compuesto o composición que sirve como portador o sustancia auxiliar para inmunógenos y/u otros compuestos farmacéuticamente activos. Se debe interpretar en un sentido amplio y se refiere a un amplio espectro de sustancias que son capaces de aumentar la inmunogenicidad de los antígenos incorporados en o coadministrados con un adyuvante en cuestión. En el contexto de la presente invención, un adyuvante preferiblemente potenciará el efecto inmunogénico específico de los agentes activos de la presente invención. Típicamente, “adyuvante” o “componente adyuvante” tiene el mismo significado y se pueden utilizar mutuamente. Los adyuvantes se pueden dividir, por ejemplo, en inmunopotenciadores, sistemas de suministro de antígenos o incluso combinaciones de los mismos.
[0111] En la presente invención, “relación N/P” se refiere a la relación molar de átomos de nitrógeno en lípidos catiónicos a fosfato en ácidos nucleicos.
[0112] En la presente invención, “ácido nucleico” se refiere a ADN, ARN o su forma modificada, que incluyen las bases de purina o pirimidina en el ADN (adenina “A”, citosina “C”, guanina “G”, timina “T”) y las bases de purina o pirimidina en el ARN (adenina “A”, citosina “C”, guanina “G”, uracilo “U”).
[0113] En la presente invención, “ARN” se refiere a ácido ribonucleico que puede ser de origen natural o no natural. Por ejemplo, un ARN puede incluir componentes modificados y/o de origen no natural tales como una o más nucleobases, nucleósidos, nucleótidos y ligadores. Un ARN puede incluir una estructura de caperuza, un nucleósido terminador de cadena, un bucle de tallo, una secuencia de poli A y/o una señal de poliadenilación. Un ARN puede tener una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de interés. Por ejemplo, un ARN puede ser un ARN mensajero (ARNm). La traducción de un ARNm que codifica un polipéptido particular, por ejemplo, la traducción in vivo de un ARNm en el interior de una célula de mamífero, puede producir el polipéptido codificado. Los ARN se pueden seleccionar del grupo no limitante que consiste en ARN de interferencia pequeña (ARNip), ARN de interferencia asimétrica (ARNia), microARN (ARNmi), ARN sustrato de Dicer (ARNsd), ARN de horquilla pequeña (ARNhp), ARNm (ARN mensajero), ARN guía único (ARNgu), ARNm de Cas9 y mezclas de los mismos.
[0114] En la presente invención, el oligonucleótido antisentido y el ARN de interferencia pequeña (ARNip) pueden inhibir la expresión del gen objetivo y de la proteína objetivo in vitro o in vivo.
[0115] En la presente invención, el ARNm de FLuc puede expresar la proteína luciferasa que emite bioluminiscencia en presencia de sustrato de fluoresceína, por lo que FLuc se utiliza comúnmente en cultivos de células de mamífero para medir la expresión génica y la actividad celular.
[0117] En la presente invención, “inhibir la expresión de un gen objetivo” se refiere a la capacidad de los ácidos nucleicos para silenciar, reducir o inhibir la expresión de un gen objetivo. Para examinar el grado de silenciamiento génico, una muestra de prueba (por ejemplo, una muestra de células en cultivo que expresan el gen objetivo) se pone en contacto con ácidos nucleicos que inhiben la expresión del gen objetivo. La expresión del gen objetivo en la muestra de prueba o animal de prueba se compara con la expresión del gen objetivo en una muestra de control (por ejemplo, una muestra de células en cultivo que expresan el gen objetivo) que no se pone en contacto ni se le administran los ácidos nucleicos. A la expresión del gen objetivo en la muestra de control se le puede asignar un valor del 100 %. En realizaciones particulares, la inhibición de la expresión de un gen objetivo se logra cuando el nivel de expresión del gen objetivo en la muestra de prueba o el mamífero de prueba en relación con el nivel de expresión del gen objetivo en la muestra de control o el mamífero de control es de aproximadamente 95 %, 90 %, 85 %, 80 %, 75 %, 70 %, 65 %, 60 %, 55 %, 50 %, 45 %, 40 %, 35 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 % o 0 %.
[0119] En la presente invención, los ensayos adecuados para determinar el nivel de expresión del gen objetivo incluyen, pero no se limitan a, transferencias por punto, transferencias Northern, hibridación in situ, ELISA, inmunoprecipitación, función enzimática y ensayos fenotípicos.
[0121] En la presente invención, “transfección” se refiere a la introducción de una especie (por ejemplo, un ARN) en una célula. La transfección puede ocurrir, por ejemplo, in vitro, ex vivo o in vivo.
[0123] En la presente invención, “antígeno” se refiere típicamente a una sustancia que puede ser reconocida por el sistema inmunitario, preferiblemente reconocida por el sistema inmunitario adaptativo y desencadenar una respuesta inmunitaria específica de antígeno, por ejemplo, formando anticuerpos y/o células T específicas de antígeno como parte de la respuesta inmunitaria adaptativa. Típicamente, el antígeno puede ser o puede contener un péptido o una proteína que se puede presentar a las células T por el MHC. En la presente invención, el antígeno puede ser un producto de traducción de la molécula de ácido nucleico proporcionada (preferiblemente ARNm como se define en el presente documento). En este contexto, fragmentos, variantes y derivados de péptidos y proteínas que contienen al menos un epítopo también se definen como antígenos.
[0124] En la presente invención, “suministro” se refiere a suministrar una entidad al objetivo, por ejemplo, suministrar fármacos y/o agentes terapéuticos y/o agentes profilácticos a sujetos, dichos sujetos son tejidos y/o células de humanos y/u otros animales.
[0126] En la presente invención, “portador farmacéuticamente aceptable” se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo administrado junto con el agente terapéutico, que, dentro del alcance de un juicio médico razonable, es adecuado para el contacto con tejidos de humanos y/u otros animales sin causar toxicidad excesiva, irritación, reacción alérgica u otros problemas o complicaciones correspondientes a una relación beneficio/riesgo razonable. Los portadores farmacéuticamente aceptables que se pueden utilizar en la composición farmacéutica en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, líquidos estériles, tales como agua y aceite, que incluyen aquellos procedentes de petróleo, animal, vegetal o síntesis, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, etc. Cuando dicha composición farmacéutica se administra por vía intravenosa, el agua es un portador de ejemplo. La solución salina fisiológica, la glucosa y la solución acuosa de glicerol también se pueden utilizar como portadores líquidos, especialmente como inyección. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, maltosa, creta, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerilo, talco, cloruro de sodio, leche desnatada en polvo, glicerol, propilenglicol, agua, etanol, etc. Dicha composición puede contener también una pequeña cantidad de agente humectante, emulsionante o tampón de pH según sea necesario. Las preparaciones orales pueden contener portadores estándar, tales como manitol de grado farmacéutico, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, celulosa, carbonato de magnesio, etc. Específicamente, los excipientes incluyen, pero no se limitan a, antiadherentes, antioxidantes, aglutinantes, recubrimientos, coadyuvantes de compresión, desintegrantes, tintes (colorantes), emolientes, emulsionantes, cargas (diluyentes), formadores de película o recubrimientos, aromas, fragancias, agentes de deslizamiento (potenciadores del flujo), lubricantes, conservantes, tintas de impresión, adsorbentes, agentes de suspensión o dispersión, edulcorantes y aguas de hidratación. Más específicamente, los excipientes incluyen, pero no se limitan a, hidroxitolueno butilado (BHT), carbonato de calcio, fosfato de calcio (dibásico), estearato de calcio, croscarmelosa, polivinilpirrolidona entrecruzada, ácido cítrico, crospovidona, cisteína, etilcelulosa, gelatina, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, lactosa, estearato de magnesio, maltitol, manitol, metionina, metilcelulosa, metilparabeno, celulosa microcristalina, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, povidona, almidón pregelatinizado, propilparabeno, palmitato de retinilo, goma laca, dióxido de silicio, carboximetilcelulosa de sodio, citrato de sodio, glicolato de almidón de sodio, sorbitol, almidón (de maíz), ácido esteárico, sacarosa, talco, dióxido de titanio, vitamina A, vitamina E (α-tocoferol), vitamina C y xilitol.
[0127] En la presente invención, las composiciones farmacéuticas pueden actuar de forma sistemática o local. Para este propósito, se pueden administrar por rutas apropiadas tales como inyección (por ejemplo, inyección intravenosa, intraarterial, subcutánea, intraperitoneal o intramuscular, que incluyen instilación) y suministro transdérmico y también se pueden administrar por las rutas oral, bucal, transnasal, transmucosa o tópica o en forma de preparación oftálmica o por inhalación. Con respecto a estas rutas de administración, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden administrar en formas de dosificación adecuadas. Dichas formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a, comprimidos, cápsulas, grageas, agentes de azúcar duro, polvos, aerosoles, cremas, ungüentos, supositorios, geles, pastas, lociones, pomadas, suspensiones acuosas, soluciones inyectables, elixires y jarabes.
[0128] En la presente invención, las vacunas son materiales preventivos o terapéuticos que proporcionan al menos un antígeno o función antigénica. El antígeno o la función antigénica pueden estimular el sistema inmunitario adaptativo del cuerpo para proporcionar una respuesta inmunitaria adaptativa.
[0129] En la presente invención, tratamiento se refiere al manejo y cuidado de pacientes para combatir enfermedades, obstáculos o síntomas, que tiene como objetivo retrasar el desarrollo de enfermedades, obstáculos o síntomas, reducir o aliviar síntomas y complicaciones y/o curar o eliminar enfermedades, obstáculos o síntomas. Los pacientes que se van a tratar son preferiblemente mamíferos, especialmente humanos.
[0130] La invención reivindicada describe un lípido catiónico, en el que la estructura de dicho lípido catiónico es una de las siguientes estructuras:
[0133]
[0135] en el que la estructura del lípido catiónico se selecciona de una de las siguientes estructuras:
[0138]
[0139]
[0141] Se divulgan adicionalmente en el presente documento, pero no forman parte de la invención como se reivindica: 1.1. El lípido catiónico, en el que su estructura está representada por la siguiente fórmula general (1):
[0143]
[0145] en el que, N es un centro de ramificación de átomo de nitrógeno;
[0146] en el que, L<1>y L<2>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo de ligamiento divalente, dicho grupo de ligamiento divalente se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -O(CR<c>R<c>)sO-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>- y -NR<c>C(=O)S-; en el que, R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>; en el que s es 2, 3 o 4;
[0147] en el que, L<3>es un enlace de ligamiento, -L<4>-, -Z-L<4>-, -L<4>-Z-, -Z-L<4>-Z-, -L<4>-Z-L<5>-, -Z-L<4>-Z-L<5>- o -L<4>-Z-L<5>-Z-; dichos L<4>y L<5>son grupos de ligamiento de cadena carbonada, cada uno independientemente se representa por -(CR<a>R<b>)<t>-(CR<a>R<b>)<o>-(CR<a>R<b>)<p>-; en el que, t, o y p son cada uno independientemente un número entero de 0 a 12, dichos t, o y p no son simultáneamente 0; R<a>y R<b>son, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>; dicho Z, en cada ocurrencia, se selecciona independientemente del grupo que consiste en -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)S- y
en el que R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>;
[0148] B<1>y B<2>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo alquileno C<1-30>;
[0150] R<1>y R<2>son cada uno independientemente un grupo alifático C<5-30>o
en el que, t es un número entero de 0 a 12; t<1>y t<2>son cada uno independientemente un número entero de 0 a 5; t<3>y t<4>son cada uno independientemente 0 o 1, no son 0 simultáneamente; R<e>y R<f>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un grupo alquilo C<1-15>, un grupo alquenilo C<2-15>y un grupo alquinilo C<2-15>;
[0151] R<3>se selecciona del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, -R<d>, -OR<d>, -NR<d>R<d>, -SR<d>, -C(=O)R<d>, -
[0152] C(=O)OR<d>, -OC(=O)R<d>, -OC(=O)OR<d>y
en el que, R<d>es, en cada ocurrencia, independientemente un grupo alquilo C<1-12>, en el que G<1>es un grupo de ramificación terminal con valencia de k+1, en el que j es 0 o 1 y en el que F contiene el grupo funcional R<01>; cuando j es 0, G<1>está ausente; cuando j es 1, G<1>protruye F con el número de k, en el que k es un número entero de 2 a 8;
[0153] A se selecciona del grupo que consiste en -(CR<a>R<b>)<s>O-, -O(CR<a>R<b>)<s>-, -(CR<a>R<b>)<s>S-, -S(CR<a>R<b>)<s>-, -(CR<a>R<b>)<s>O(CR<a>R<b>)<s>S-, -(CR<a>R<b>)<s>S(CR<a>R<b>)<s>O-, -(CR<a>R<b>)<s>NR<c>(CR<a>R<b>)<s>S-, -(CR<a>R<b>)<s>S(CR<a>R<b>)<s>NR<c>-, -(CR<a>R<b>)<s>NR<c>(CR<a>R<b>)<s>O- y -(CR<a>R<b>)<s>O(CR<a>R<b>)<s>NR<c>-, en el que s es 2, 3 o 4 y en el que R<a>y R<b>son, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>;
[0154] cuando A es -(CR<a>R<b>)<s>O- u -O(CR<a>R<b>)<s>-, n es un número entero de 2 a 6; cuando A no es ni -(CR<a>R<b>)<s>O- ni -O(CR<a>R<b>)<s>-, n es un número entero de 1 a 6;
[0155] dicho grupo alquilo, grupo alquileno, grupo alcoxi y grupo hidrocarburo alifático son cada uno independientemente sustituidos o no sustituidos.
[0156] 1.1.1. L<1>, L<2>, L<3>, L<4>, L<5>, L<7>, L<8>, Z, Z<1>, Z<2>
[0157] Las estructuras de L<1>, L<2>, L<3>, L<4>, L<5>, L<7>, L<8>, Z, Z<1>y Z<2>no están particularmente limitadas, que incluyen, pero no se limitan a, estructuras lineales, estructuras ramificadas o estructuras que contienen anillos.
[0158] En la presente divulgación, los números de átomos no hidrógeno de L<1>, L<2>, L<3>, L<4>, L<5>, L<7>, L<8>, Z, Z<1>y Z<2>no están particularmente limitados, siendo cada uno independientemente preferiblemente de 1 a 50, más preferiblemente de 1 a 20 y más preferiblemente de 1 a 10. Dicho átomo no hidrógeno es un átomo de carbono o un heteroátomo. Dicho heteroátomo incluye, pero no se limita a, O, S, N, P, Si, B, etc. Cuando el número de átomos no hidrógeno es 1, puede ser un átomo de carbono o un heteroátomo. Cuando el número de átomos no hidrógeno es mayor de 1, la especie de átomos no hidrógeno no está particularmente limitada, y puede ser una sola especie o una combinación de dos o más especies, dichos átomos no hidrógeno son cualquier combinación seleccionada de átomos de carbono y átomos de carbono, átomos de carbono y heteroátomos y heteroátomos y heteroátomos.
[0159] En la presente divulgación, dos grupos reactivos idénticos o diferentes pueden formar un grupo de ligamiento divalente después de la reacción. Las condiciones de reacción están relacionadas con los tipos de grupos de ligamiento covalentes resultantes y la técnica anterior se puede introducir en el presente documento. Por ejemplo, un grupo amino puede reaccionar con un éster activo, un formiato activo, un éster sulfonato, un aldehído, un compuesto α,β-insaturado, un ácido carboxílico, un epóxido, un isocianato o un isotiocianato para obtener un grupo de ligamiento divalente tal como un enlace amida, un enlace uretano, un enlace amino, un enlace imida (que se puede reducir adicionalmente a un grupo amino secundario), un enlace amino, un enlace amida, un enlace hidroxialquilamino, un enlace urea (un enlace carbamida o un enlace ureido) y un enlace tiourea, respectivamente; un grupo mercapto puede reaccionar con un éster activo, un formiato activo, un grupo sulfonato, un grupo mercapto, un grupo maleimido, un grupo aldehído, un enlace α,β-insaturado, un grupo carboxilo, un grupo yodoacetamida y un grupo anhídrido para obtener un grupo de ligamiento divalente tal como un enlace tioéster, un enlace tiocarbonato, un enlace tioéter, un enlace disulfuro, un enlace tioéter, un ligamiento tiohemiacetal, un enlace tioéter, un enlace tioéster, un enlace tioéter y un ligamiento imida, respectivamente; un enlace insaturado puede reaccionar con un grupo mercapto para obtener un grupo tioéter; un grupo carboxilo o un haluro de acilo puede reaccionar con un grupo mercapto y un grupo amino para obtener un enlace tioéster y un enlace amida, respectivamente; un grupo hidroxilo puede reaccionar con un grupo carboxilo, un isocianato, un epóxido o un grupo clorocarboniloxi para obtener un grupo de ligamiento divalente tal como un enlace éster, un enlace carbamato, un enlace éter y un grupo carbonato, respectivamente; un grupo carbonilo o un grupo aldehído puede reaccionar con un grupo amino, hidrazinas y hidrazidas para obtener un grupo de ligamiento divalente tal como un enlace imina, un enlace hidrazona y un enlace acilhidrazona, respectivamente; los grupos reactivos incluyen un grupo azido, un grupo alquinilo, un grupo alquenilo, un grupo mercapto, un grupo azido, un grupo dienilo, un grupo maleimido, un grupo 1,2,4-triazolina-3,5-diona, un grupo ditioéster, una hidroxilamina, una hidrazida, un acrilato, un grupo aliloxi, un isocianato, un tetrazol y similares, pueden experimentar reacciones de clic para formar varios grupos de ligamiento que incluyen, pero no se limitan a, un ligamiento triazol, un ligamiento isoxazol, un enlace tioéter y similares.
[0160] La estabilidad de los grupos de ligamiento divalentes L<1>, L<2>, L<3>, L<4>, L<5>, L<7>, L<8>, Z, Z<1>y Z<2>no está particularmente limitada; cualquiera de dichos grupos de ligamiento divalentes o un grupo de ligamiento divalente conjunto que consiste en cualquiera de dichos grupos de ligamiento divalentes y sus grupos heteroátomo adyacentes, es independientemente un grupo de ligamiento estable STAG o un grupo de ligamiento degradable DEGG. 1.1.1.1. L<1>, L<2>
[0161] En la presente divulgación, L<1>y L<2>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo de ligamiento divalente, dicho grupo de ligamiento divalente se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -O(CR<c>R<c>)<s>O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>- y -NR<c>C(=O)S-; en el que, R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>.
[0162] En una realización específica de la presente divulgación, L<1>y L<2>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un enlace de ligamiento, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -O(CH<2>)<s>O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NHC(=O)-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)O-, -SC(=O)NH- y -NHC(=O)S-.
[0163] En una realización específica de la presente divulgación, preferiblemente uno de L<1>y L<2>es un enlace de ligamiento, y el otro se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -O(CH<2>)<s>O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NHC(=O)-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)O-, -SC(=O)NH- y -NHC(=O)S-.
[0164] En una realización específica de la presente divulgación, preferiblemente L<1>y L<2>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -O(CH<2>)<s>O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NHC(=O)-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)O-, -SC(=O)NH- y -NHC(=O)S-.
[0165] En una realización específica de la presente divulgación, preferiblemente L<1>y L<2>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O- y -OC(=O)O-.
[0166] En una realización específica de la presente divulgación, preferiblemente uno de L<1>y L<2>se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O- y -OC(=O)O- y el otro se selecciona del grupo que consiste en -C(=O)O-, -OC(=O)O- y -C(=O)-.
[0167] En una realización específica de la presente divulgación, preferiblemente uno de L<1>y L<2>se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O- y -OC(=O)O- y el otro es -C(=O)-.
[0168] En una realización específica de la presente divulgación, preferiblemente L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)- o ambos -C(=O)O- o ambos -OC(=O)O-; más preferiblemente L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O- o ambos -OC(=O)O-. En una realización, R<c>es preferiblemente un átomo de hidrógeno; o, R<c>es preferiblemente un grupo alquilo C<1-12>, más preferiblemente un grupo alquilo C<1-8>, más preferiblemente un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo butilo, un grupo butilo, un grupo pentilo o un grupo hexilo.
[0169] 1.1.1.2. L<7>, L<8>
[0170] En la presente divulgación, L<7>y L<8>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo de ligamiento divalente, dicho grupo de ligamiento divalente se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>- y -NR<c>C(=O)S-, en el que R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>.
[0171] En una realización, R<c>es preferiblemente un átomo de hidrógeno; o, R<c>es preferiblemente un grupo alquilo C<1-12>, más preferiblemente un grupo alquilo C<1-8>, más preferiblemente un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo butilo, un grupo butilo, un grupo pentilo o un grupo hexilo.
[0172] 1.1.1.3. L<3>
[0173] En la presente divulgación, L<3>es un enlace de ligamiento seleccionado del grupo que consiste en -L<4>-, -Z-L<4>-, -L<4>-Z-, -Z-L<4>-Z-, -L<4>-Z-L<5>-, -Z-L<4>-Z-L<5>- y -L<4>-Z-L<5>-Z-; dichos L<4>y L<5>son grupos de ligamiento de cadena carbonada, cada uno independientemente se representa por -(CR<a>R<b>)<t>-(CR<a>R<b>)<o>-(CR<a>R<b>)<p>-; en el que, t, o y p son cada uno independientemente un número entero de 0 a 12, no son simultáneamente 0; R<a>y R<b>son, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>; dicho Z, en cada ocurrencia, se selecciona independientemente del grupo que consiste en -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C =O-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -
[0175] NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)S-
, en el que R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>.
[0176] En una realización, dicho R<c>es preferiblemente un átomo de hidrógeno.
[0177] En una realización, L<3>se selecciona del grupo que consiste en un enlace de ligamiento, -(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>Z-, -Z(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>Z(CH<2>)<t>- y -Z(CH<2>)<t>Z-, en el que t es un número entero de 0 a 12, y Z se selecciona del grupo que consiste en -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-,
-NR<c>C(=O)-, -
[0179] C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)S- y . Preferiblemente, L<3>se selecciona del grupo que consiste en un enlace de ligamiento, -(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>O-, -(CH<2>)<t>C(=O)-, -(CH<2>)<t>C(=O)O-, -(CH<2>)<t>OC(=O)-, -(CH<2>)<t>C(=O)NH-, -(CH<2>)<t>NHC(=O)-, -(CH<2>)<t>OC(=O)O-, -(CH<2>)<t>NHC(=O)O-, -(CH<2>)<t>OC(=O)NH-, -(CH<2>)<t>NHC(=O)NH-, -O(CH<2>)<t>-, -C(=O)(CH<2>)<t>-, -C(=O)O(CH<2>)<t>-, -OC(=O)(CH<2>)<t>-, -C(=O)NH(CH<2>)<t>-, -NHC(=O)(CH<2>)<t>-, -OC(=O)O(CH<2>)<t>-, -NHC(=O)O(CH<2>)<t>-, -OC(=O)NH(CH<2>)<t>-, -NHC(=O)NH(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>O(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>C(=O)(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>C(=O)O(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>OC(=O)(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>C(=O)NH(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>NHC(=O)(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>OC(=O)O(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>NHC(=O)O(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>OC(=O)NH(CH<2>)<t>-, -(CH<2>)<t>NHC(=O)NH(CH<2>)<t>-, -O(CH<2>)<t>O-, -C(=O)(CH<2>)<t>C(=O)-, -C(=O)O(CH<2>)<t>C(=O)O-, -OC(=O)(CH<2>)<t>OC(=O)-, -C(=O)O(CH<2>)<t>OC(=O)-, -OC(=O)(CH<2>)<t>C(=O)O-, -OC(=O)O(CH<2>)<t>OC(=O)O-, -C(=O)NH(CH<2>)<t>C(=O)NH-, -NHC(=O)(CH<2>)<t>NHC(=O)-, -NHC(=O)(CH<2>)<t>C(=O)NH-, -C(=O)NH(CH<2>)<t>NHC(=O)-, -NHC(=O)O(CH<2>)<t>NHC(=O)O-, -OC(=O)NH(CH<2>)<t>OC(=O)NH-, -NHC(=O)O(CH<2>)<t>OC(=O)NH-, -OC(=O)NH(CH<2>)<t>NHC(=O)O-, -NHC(=O)NH(CH<2>)<t>NHC(=O)NH-, -C(=O)(CH<2>)<t>O-, -C(=O)(CH<2>)<t>C(=O)O-, -C(=O)(CH<2>)<t>OC(=O)-, -C(=O)(CH<2>)<t>OC(=O)O-, -C(=O)(CH<2>)<t>NHC(=O)O-, -C(=O)(CH<2>)<t>OC(=O)NH- y -C(=O)(CH<2>)<t>NHC(=O)NH-.
[0180] 1.1.2. Descripción de grupos estables y degradables
[0181] En la presente divulgación, un grupo de ligamiento estable denominado STAG o un grupo de ligamiento degradable denominado DEGG, puede ser parte de cualquiera de los grupos de ligamiento divalentes anteriormente mencionados que incluyen L<3>, L<4>, L<5>, L<7>, L<8>, Z, Z<1>y Z<2>o cualquier grupo de ligamiento divalente conjunto que consiste en dicho grupo de ligamiento divalente anteriormente mencionado y sus grupos heteroátomo adyacentes.
[0182] 1.1.2.1. Grupos ligadores divalentes estables: STAG
[0183] Las condiciones para que los grupos de ligamiento divalentes estables, STAG, sean estables no están particularmente limitadas, que incluyen, pero no se limitan a, iluminación con luz, calor, baja temperatura, condición enzimática, oxidación-reducción, condición ácida, condición básica, condición fisiológica, entorno fisiológico simulado in vitro, etc., preferiblemente iluminación con luz, calor, condición enzimática, oxidaciónreducción, condición ácida, condición básica, etc.
[0184] El tipo de STAG no está particularmente limitado, incluye, pero no se limita a, el grupo de ligamiento divalente estable que consiste en cualquiera de uno, dos o más grupos seleccionados del grupo que consiste en un grupo alquileno, un grupo heteroalquilo divalente, un doble enlace carbono-carbono, un triple enlace carbonocarbono, un grupo dienilo divalente, un grupo cicloalquilo divalente, un grupo cicloalquenilo divalente, un grupo cicloalquenilhidrocarbilo divalente, un grupo cicloalquinilo divalente, un grupo arileno, un grupo heterocíclico derivado alifático, un grupo heterofenileno (con uno o más heteroátomos en el anillo), un grupo aroheterocíclico, un grupo heterocíclico heterofusionado, un grupo alquileno sustituido, un grupo heteroalquileno sustituido, un grupo heteroalquilo divalente sustituido, un doble enlace sustituido, un triple enlace sustituido, un grupo dienilo divalente sustituido, un grupo cicloalquilo divalente sustituido, un grupo cicloalquenilo divalente sustituido, un grupo cicloalquenilhidrocarbilo divalente sustituido, un grupo cicloalquinilhidrocarbilo divalente sustituido, un grupo arileno sustituido, un grupo heterocíclico derivado alifático sustituido, un grupo heterofenileno sustituido, un grupo aroheterocíclico sustituido, un grupo heterocíclico heterofusionado sustituido, enlace éter, un enlace tioéter, enlace urea, un enlace tiourea, un enlace carbamato, un enlace tiocarbamato, -P(=O)-, un grupo sililo divalente sin átomos de hidrógeno activos, un grupo de ligamiento divalente que contiene boro, un grupo amino secundario, un grupo amino terciario, un grupo carbonilo, un grupo tiocarbonilo, un grupo amido, un grupo tioamido, un grupo sulfonamido, un grupo enamina, un ligamiento triazol, un ligamiento 4,5-dihidroisoxazol y el esqueleto de un aminoácido y sus derivados.
[0185] Específicamente, un grupo de ligamiento divalente estable STAG incluye, pero no se limita a, las estructuras enumeradas o divulgadas en las referencias CN104530413A, CN104530415A y CN104530417A. Tomando CN104530417A como un ejemplo, los párrafos correspondientes son [0627]~[0704]. La manera en que dos o más grupos de ligamiento divalentes estables se combinan en un STAG no está particularmente limitada, limitada, que incluye pero no se limita a, las enumeradas o divulgadas en el párrafo [0704] de CN104530417A.
[0186] 1.1.2.2. Grupo de ligamiento divalente degradable: DEGG
[0187] Las condiciones para ser “degradable” no están particularmente limitadas, que incluyen, pero no se limitan a, iluminación con luz, calor, condición enzimática, oxidación-reducción, condición ácida, condición básica, condición fisiológica, entorno fisiológico simulado in vitro, etc., preferiblemente iluminación con luz, calor, condición enzimática, oxidación-reducción, condición ácida, condición básica, etc.
[0188] El grupo de ligamiento divalente formado por la combinación de un grupo de ligamiento divalente degradable DEGG y un grupo de ligamiento divalente estable STAG es un grupo de ligamiento degradable. Los grupos de ligamiento divalentes degradables que contienen anillos arilo también se pueden formar por la combinación de anillos arilo y grupos de ligamiento divalentes degradables.
[0189] El tipo de DEGG no está particularmente limitado, incluye, pero no se limita a, el grupo de ligamiento divalente degradable que contiene cualquiera de uno, dos o más grupos seleccionados del grupo que consiste en un enlace disulfuro, un enlace viniléter, un grupo éster, un grupo tioéster, un grupo tiocarboxilato (por ejemplo, un enlace tioato, un enlace monotioéster), un grupo ditioéster, un grupo carbonato, un grupo tiocarbonato, un grupo ditiocarbonato, un grupo tritiocarbonato, un grupo carbamato, un grupo tiocarbamato, un grupo ditiocarbamato, un grupo acetal, un grupo acetal cicloacetal, un grupo mercaptal, un grupo azaacetal, un grupo azaciloacetal, un grupo azatiaacetal, un grupo ditioacetal, un grupo hemiacetal, un grupo tiohemiacetal, un grupo azahemiacetal, un grupo cetal, un grupo tiocetal, un grupo azacetal, un grupo azaciclocetal, un grupo azatiacetal, un enlace imina (por ejemplo, -CH=N-), un enlace hidrazona, un enlace acilhidrazona, un enlace oxima (por ejemplo, -C(alquilo)=N-O-, un enlace iminoxi, un enlace iminooxi, un enlace oximino, por ejemplo, -O-N=CH-), un enlace tioxima (por ejemplo, -C(alquilo)=N-S-), un enlace semicarbazona, un enlace tiosemicarbazona, un enlace hidrazino, un enlace acilhidrazino, un grupo tiocarbonil-hidrazino (-C(=S)-NH-NH-), un grupo azocarbonil-hidrazino (por ejemplo, -N=N-C(=O)-NH-NH-), un grupo azo-tiocarbonil-hidrazino (por ejemplo, -N=N-C(=S)-NH-NH-), un grupo formiato de hidrazino, un grupo tioformiato de hidrazino, un grupo carbohidrazida, un grupo tiocarbohidrazida, un grupo azo, un grupo isourea, un grupo isotiourea, un grupo alofanato, un grupo tioalofanato, un grupo guanidino, un grupo amidino, un grupo aminoguanidino, un grupo aminoamidino, un grupo iminocarbonil-oxi (por ejemplo, -C(=NH)-O-), un grupo iminocarbonil-tioxi (por ejemplo, -C(=NH)-S-), un grupo sulfonato, un grupo sulfinato, un grupo sulfonilhidrazino, un grupo sulfonilureido, un grupo maleimida, un grupo ortoéster maleimida, un grupo fosfato, un grupo fosfirato, un grupo fosfinato, un grupo fosfonato, un grupo fosfosilicato, un grupo silicato, un grupo amida, grupo tioamida, un enlace sulfonamida, un grupo poliamida, un grupo fosfamida, un grupo fosforamidito, un grupo pirofosfamida, un grupo ciclofosfamida, un grupo ifosfamida, un grupo tiofosfamida, un grupo aconitilo, un fragmento de péptidos, el esqueleto de un nucleótido y derivados del mismo y el esqueleto de un desoxinucleótido y derivados del mismo. En el presente documento, dicho grupo carbamato, grupo tiocarbamato, grupo amida, grupo fosfamida y similares, pueden existir como un grupo de ligamiento estable o como un grupo de ligamiento degradable, dependiendo de las características del entorno en el que se utilizan.
[0190] Específicamente, un grupo de ligamiento divalente degradable STAG incluye, pero no se limita a, las estructuras enumeradas o divulgadas en las referencias CN104530413A, CN104530415A y CN104530417A. Tomando CN104530417A como un ejemplo, los párrafos correspondientes son [0705]~[0725].
[0191] 1.1.3. B<1>, B<2>, B<3>, B<4>
[0192] En la presente divulgación, B<1>y B<2>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo alquileno C<1-30>.
[0193] En una realización, B<1>y B<2>son, preferiblemente, cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo alquileno C<1-20>; más preferiblemente, uno de B<1>y B<2>es un enlace de ligamiento, y el otro es un grupo alquileno C<1-20>que se selecciona específicamente del grupo que consiste en un grupo metileno, un grupo etileno, un grupo propileno, un grupo butileno, un grupo pentileno, un grupo hexileno, un grupo heptileno, un grupo octileno, un grupo nonileno, un grupo decileno, un grupo undecileno, un grupo dodecileno, un grupo tridecileno, un grupo tetradecileno, un grupo pentadecileno, un grupo hexadecileno, un grupo heptadecileno, un grupo octadecileno, un grupo nonadecileno y un grupo eicosileno.
[0194] En la presente divulgación, B<3>y B<4>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo alquileno C<1-12>.
[0195] 1.1.4. R<1>, R<2>
[0196] En la presente divulgación, R<1>y R<2>son cada uno independientemente un grupo alifático C<5-30>o
[0198]
, en el que, t es un número entero de 0 a 12, t<1>y t<2>son cada uno
[0199] independientemente un número entero de 0 a 5, t<3>y t<4>son cada uno independientemente 0 o 1, no son simultáneamente 0; R<e>y R<f>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un grupo alquilo C<1-15>, un grupo alquenilo C<2-15>y un grupo alquinilo C<2-15>.
[0201] En una realización específica de la presente divulgación, R<1>y R<2>son, preferiblemente, cada uno independientemente un grupo alifático C<5-30>, más preferiblemente un grupo alifático C<10-30>, más preferiblemente un grupo alifático C<10-20>.
[0203] En una realización específica de la presente divulgación, R<1>y R<2>son, preferiblemente, cada uno independientemente un grupo alquilo lineal, un grupo alquilo ramificado, un grupo alquenilo lineal, un grupo alquenilo ramificado, un grupo alquinilo lineal o un grupo alquinilo ramificado, preferiblemente un grupo alquilo lineal; más preferiblemente, cada uno independientemente un grupo alquilo lineal C<1-25>; más preferiblemente, cada uno independientemente un grupo alquilo lineal C<1-17>; más preferiblemente, cada uno independientemente un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo, un grupo decilo, un grupo undecilo, un grupo dodecilo, un grupo tridecilo, un grupo tetradecilo, un grupo pentadecilo, un grupo hexadecilo, un grupo heptadecilo, un grupo octadecilo, un grupo nonadecilo, un grupo eicosilo, un grupo heneicosilo, un grupo docosilo, un grupo tricosilo, un grupo lignoceroilo, un grupo (Z)-tridec-8-enilo, un grupo (Z)-tetradec-9-enilo, un grupo (Z)-pentadec-8-enilo, un grupo (Z)-hexadec-9-enilo, un grupo (Z)-heptadec-5-enilo, un grupo (Z)-heptadec-8-enilo, un grupo (E)-heptadec-8-enilo, un grupo (Z)-heptadec-10-enilo, un grupo (8Z,11Z)-heptadec-8,11-dienilo, un grupo (Z)-octodec-6-enilo, un grupo (Z)-octodec-9-enilo, un grupo (E)-octodec-9-enilo, un grupo (Z)-octodec-11-enilo, un grupo (9Z,12Z)-octodec-9,12-dienilo, un grupo (9Z,12Z,15Z)-octodec-9,12,15-trienilo, un grupo (8Z,11Z,14Z)-octodec-8,11,14-trienilo, un grupo (Z)-eicos-11-enilo, un grupo (11Z,14Z)-eicos-11,14-dienilo, un grupo (Z)-nonadec-10-enilo, un grupo (10Z,13Z)-nonadec-10,13-dienilo, un grupo 2,6,10-trimetilundec-1,5,9-trienilo, un grupo 3,7,11-trimetildodec-2,6,10-trienilo o un grupo 3,7,11,15-tetrametilhexadec-2-eniltridecilo.
[0205] En una realización específica de la presente divulgación, R<1>y R<2>son, preferiblemente, cada uno
[0207] independientemente representados como
; en el que, R<e>y R<f>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un grupo alquilo C<1-15>, un grupo alquenilo C<2-15>y un grupo alquinilo C<2-15>, más preferiblemente seleccionados del grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo, un grupo decilo, un grupo undecilo, un grupo dodecilo, un grupo tridecilo, un grupo tetradecilo, un grupo vinilo, un grupo propenilo, un grupo alilo, un grupo butenilo, un grupo alil carbinilo, un grupo pentenilo, un grupo neopentilo, un grupo hexenilo, un grupo neohexenilo, un grupo heptenilo, un grupo neoheptenilo, un grupo octenilo, un grupo neooctenilo, un grupo nonenilo, un grupo neononenilo, un grupo decenoilo, un grupo neodecenoilo, un grupo etinilo, un grupo propinilo, un grupo propargilo, un grupo butinilo, un grupo butinodiilo, un grupo pentinilo, un grupo neopentilo, un grupo hexinilo, un grupo neohexilo, un grupo heptinilo, un grupo neoheptilo, un grupo octinilo, un grupo neooctilo, un grupo noninilo, un grupo neononilo, un grupo decinilo y un grupo neodecilo, más preferiblemente seleccionados del grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo y un grupo decilo. Además preferiblemente, R<1>y R<2>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en las siguientes estructuras:
[0209]
[0210]
[0211] y , en as que, es un n mero entero de 0 a 12; preferiblemente, t es 0 o un número entero de 1 a 12; más preferiblemente, t es 0, 1, 2, 3 o 4. 1.1.5. R<3>, R
[0212] En la presente divulgación, R<3>se selecciona del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, -R<d>, -OR<d>, -
[0213] NR<d>R<d>, -SR<d>, -C(=O)R<d>, -C(=O)OR<d>, -OC(=O)R<d>, -OC(=O)OR<d>, y
en el que, R<d>es, en cada ocurrencia, independientemente un grupo alquilo C<1-12>, en el que G<1>es un grupo de ramificación terminal con valencia de k+1, en el que j es 0 o 1 y en el que F contiene el grupo funcional R<01>; cuando j es 0, G<1>está ausente; cuando j es 1, G<1>protruye F con el número de k, en el que k es un número entero de 2 a 8.
[0214] En la presente divulgación, R se selecciona del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo,
[0215] un grupo alcoxi, -C(=O)R<d>, -C(=O)OR<d>, -OC(=O)R<d>, -OC(=O)OR<d>, y
en el que, R<d>es, en cada ocurrencia, independientemente un grupo alquilo C<1-12>, en el que G<1>es un grupo de ramificación terminal con valencia de k+1, en el que j es 0 o 1 y en el que F contiene el grupo funcional R<01>; cuando j es 0, G<1>está ausente; cuando j es 1, G<1>protruye F con el número de k, en el que k es un número entero de 2 a 8.
[0216] 1.1.5.1. R<d>
[0217] En la presente divulgación, R<d>es, en cada ocurrencia, independientemente un grupo alquilo C<1-12>.
[0218] En una realización específica de la presente divulgación, R<d>es preferiblemente un grupo alquilo C<1-8>, específicamente un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo o un grupo octilo.
[0219] 1.1.5.2. G<1>
[0220] En la presente divulgación, j es 0 o 1; cuando j es 0, G<1>está ausente; cuando j es 1, G<1>existe como un grupo de ramificación terminal con valencia de k+1 y protruye F con el número de k, en el que F contiene el grupo funcional, en el que k es un número entero de 2 a 8, preferiblemente 2, 3 o 4.
[0221] En una realización específica de la presente divulgación, G<1>es preferiblemente un grupo de ramificación trivalente o más, preferiblemente trivalente o tetravalente; preferiblemente, G<1>es un grupo de ramificación trivalente; más preferiblemente, G<1>es un grupo de ramificación trivalente seleccionado de los residuos de glicerol o aminoácidos.
[0223] En la presente divulgación, con respecto a la bifuncionalización terminal que también se denomina endobifuncionalización, G<1>se deriva preferiblemente de compuestos de molécula pequeña que contienen dos grupos hidroxilo no protegidos o protegidos (por ejemplo, p-toluenosulfonato de trietanolamina, monomercaptoacetato de glicerilo, 2-cloro-3’,4’-dihidroxiacetofenona y sus formas protegidas con hidroxilo), dos grupos mercapto no protegidos o protegidos (por ejemplo, dimercapto-propanol y su forma protegida con mercapto), dos grupos amino primarios, dos grupos amino secundarios, dos grupos amino primarios protegidos o dos grupos amino secundarios protegidos, en los que dichos compuestos de molécula pequeña incluyen alcoholes, tioles, aminas primarias, aminas secundarias, sulfonatos y haluros, etc. G<1>también se puede derivar del grupo que consiste en alcoholes que contienen dos grupos amino primarios (por ejemplo, 1,3-diamino-2-propanol), aldehídos que contienen un grupo epoxi, alcoholes que contienen un grupo epoxi (por ejemplo,
[0225]
sulfonatos que contienen un grupo epoxi, haluros que contienen un grupo epoxi y compuestos
[0226] que contienen un grupo epoxi y otro tipo diferente de grupo reactivo. G<1>también se puede derivar del producto obtenido por reacción de adición de Michael de una amina primaria con dos moléculas de éster de ácido acrílico. G<1>también se puede derivar del proceso en el que se utiliza ácido lipoico para el taponamiento y luego el enlace disulfuro sufre reacciones de reducción y apertura de anillo, y finalmente se obtienen dos grupos mercapto terminales.
[0228] En la presente divulgación, con respecto a la trifuncionalización terminal, G<1>deriva preferiblemente de moléculas pequeñas tetrafuncionalizadas (htetraSM) que contienen tres grupos hidroxilo y un tipo diferente de grupo reactivo. Dichas moléculas htetraSM incluyen, pero no se limitan a, ácido N-tris(hidroximetil)metil-2-aminoetanosulfónico, ácido 3-[tris(hidroximetil)metilamino]-1-propanosulfónico, 6-O-tosil-α-D-glucopiranósido de metilo, 2-(bromometil)-2-(hidroximetil)-1,3-propanodiol, tris(hidroximetil)aminometano, 2-amino-1,3,4-octadecanotriol, 3-aminopropilsilanotriol, 4-(2-amino-1-hidroxietil)-1,2-bencenodiol, 4-[1-hidroxi-2-(propan-2-ilamino)etil]benceno-1,2-diol, alcohol 3,4-dihidroxi-α-(metilaminometil)bencílico, 2,5-anhidro-1-azido-1-desoxi-D-glucitol, 2,3,4-trihidroxibutanal (L-eritrosa, D-eritrosa, L-(+)-treosa y D-(+)-treosa), 2,3,4-trihidroxibenzaldehído, 3,4,5-trihidroxibenzaldehído, N-[tris(hidroximetil)metil]glicina, ácido 2,3,4-trihidroxibutírico (que incluye, pero no se limita a, ácido eritórbico y ácido treónico), ácido 2,4,6-trihidroxibenzoico, ácido shikímico, ácido 3,4,5-trihidroxibenzoico, ácido 2,3,4-trihidroxibenzoico, ácido arjunólico, 1,4,7-tris(tert-butoxicarbonil)-1,4,7,10-tetraazaciclododecano, tri-(tert-butoxicarbonil)espermina, 1,4,7-tris(tert-butoxicarbonil)-1,4,7,10-tetraazaciclododecano, similares y formas protegidas con hidroxilo de las moléculas htetraSM anteriormente mencionadas. Las moléculas htetraSM también pueden ser ácido cítrico, ácido laricíco, ácido N-(2-hidroxietil)etilendiamina-triacético, triacrilato de pentaeritritol, ácido 4-amino-4-(2-carboxietil)-heptanodioico, 4-amino-4-(3-(tert-butoxi)-3-oxopropil)heptanodioato de di-tert-butilo o similares. El compuesto resultante formado mediante la reacción basada en un alquenilo, triclorosilano y cloruro de alilmagnesio, junto con la formación de un centro de ramificación de átomo de silicio tetravalente, de acuerdo con la literatura “Macromolecules, Vol. 33, No. 12, 2000”, también está incluido. Las moléculas pequeñas trifuncionalizadas, tales como 1,4,7-tris(tert-butoxicarbonilmetil)-1,4,7,10-azaciclotetradecano (NOTA), también están incluidas y requieren una cantidad en exceso en la reacción.
[0230] 1.1.5.3. F que contiene el grupo funcional R<01>
[0232] En un aspecto específico de la presente divulgación, F es preferiblemente -(Z<2>)<q>-(Z<1>)<q1>-R<01>, en el que q y q1 son cada uno independientemente 0 o 1; Z<1>y Z<2>son cada uno independientemente un grupo de ligamiento divalente, más preferiblemente -L<4>-, -Z-L<4>-Z-, -L<4>-Z-L<5>-, -Z-L<4>-Z-L<5>o -L<4>-Z-L<5>-Z-; R<01>es un grupo funcional capaz de interaccionar con sustancias relacionadas con bio.
[0234] En un aspecto específico de la presente divulgación, R<01>es preferiblemente un grupo funcional, una forma variante de grupo funcional, un grupo funcional de direccionamiento terapéutico o un grupo funcional fluorescente, en el que dichas formas variantes incluyen precursores de grupos funcionales, formas activas con grupos funcionales como precursores, formas activas sustituidas, formas protegidas y formas no protegidas; en el que, dichos precursores de grupos funcionales se refieren a estructuras que se pueden transformar en el grupo funcional mediante al menos un proceso de oxidación, reducción, hidratación, deshidratación, reordenamiento electrónico, reordenamiento estructural, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación y desprotonación; en el que, las formas variantes de grupos funcionales se refieren a aquellas que permanecen reactivas después de al menos un proceso de cambio químico seleccionado de oxidación, reducción, hidratación, deshidratación, reordenamiento electrónico, reordenamiento estructural, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación, sustitución y desprotección, o formas no reactivas después de la protección; dicho R<01>es más preferiblemente un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste en grupos funcionales en las siguientes clases A~H y formas variantes de los mismos o seleccionado del grupo que consiste en grupos funcionales de las siguientes clases I~J:
[0235] Clase A: grupos éster activos, y análogos de los mismos; en los que, los grupos éster activos incluyen un grupo éster succinimidilo, un grupo éster p-nitrofenilo, un grupo éster o-nitrofenilo, un grupo éster benzotriazol, un grupo éster 1,3,5-triclorofenilo, un grupo éster 1,3,5-trifluorofenilo, un grupo éster pentafluorofenilo, un grupo éster iminazol, en los que los análogos de grupos éster activos incluyen un grupo 2-tioxo-3-tiazolidina-formiato, un grupo 2-tioxo-tiazolidina-3-carboxilato, un grupo 2-tioxo-pirrolidina-carboxilato, un grupo 2-tioxo-pirrolidinaformiato, un grupo 2-tioxo-benzotiazol-formiato y un grupo 1-oxo-3-tioxoisoindolin-formiato;
[0236] Clase B: un grupo sulfonato, un grupo sulfinato, un grupo sulfonilo, un grupo sulfóxido, un grupo 1,3-disulfonil-2-propilcarbonilfenilo y un grupo (2-sulfonilmetil)acrilo; Clase C: un grupo hidroxilamino, un grupo mercapto, un grupo amino primario, secundario, un átomo de halógeno, un grupo haloacetilamino, un grupo tetrametilpiperidiniloxi, un grupo dioxapiperidiniloxi, un grupo sal de amonio, un grupo hidrazino, un grupo disulfuro, un grupo éster, un grupo tioéster (con un enlace -S-C(=O)-), un grupo tiocarboxilato (por ejemplo, un grupo tioato con un enlace -O-(C=S)-), un grupo carbonato, un grupo éster tiocarbonato, un grupo éster ditiocarbonato, un grupo éster tritiocarbonato, un grupo xantato, un grupo pertiocarbonato, un grupo tetrasulfuro, un grupo O-carbonilamidoxilo, un grupo acilamino (es decir, amido o amida), un grupo imida, un grupo acilhidrazino, un grupo sulfonilhidrazino, un grupo hidrazona, un grupo imino, un grupo enoamino, un grupo alquinilamino, un grupo uretano, un grupo tiouretano, un grupo ditiouretano y un grupo amino protegido; Clase D: un grupo carboxilo, un grupo ácido sulfónico, un grupo ácido sulfénico, un grupo ácido hidroxámico, un grupo ácido tiohidroxámico, un grupo ácido xantogénico, un grupo acilhaluro (es decir, un grupo haloacilo), un grupo clorosulfonilo, un grupo aldehído, un grupo glioxal, un grupo acetal, un grupo hemiacetal, un grupo aldehído hidratado, un grupo ceto, un grupo cetal, un grupo hemicetal, un grupo cetona hidratada, un grupo ortoácido, un grupo ortoéster, un grupo cianato, un grupo tiocianato, un grupo isocianato, un grupo éster, un grupo haluro de oxicarbonilo, un grupo oxazolinilo, un grupo isoxazolinilo, un grupo tioformilo, un grupo tiona (es decir, un grupo tiocetona), un grupo tioacetal, un grupo hidrato de tiona, un grupo tiocetal, un grupo tioéster (con un enlace -S-C(=O)-), un grupo tiocarboxilato (por ejemplo, un grupo tioato con un enlace -O-(C=S)-), un grupo ditiocarboxilato, un grupo tiohemiacetal (un grupo hemitioacetal), un grupo monotiohidrato, un grupo ditiohidrato, un grupo tiolhidrato, un grupo ácido tiocarbonil monotiocarboxílico, un grupo ácido tiohidroxil monotiocarboxílico, un grupo ácido ditiocarboxílico, un grupo ureido, un grupo tioureido, un grupo guanidino y su forma protonada del mismo, un grupo amidino y su forma protonada del mismo, un grupo anhídrido, un grupo ácido escuárico, un grupo escuarato, un grupo ácido semiescuárico, un grupo semiescuarato, un grupo N-carbamoil-3-imidazol, un grupo yoduro de N-carbamoil-3-metilimidazolio, un grupo ácido imídico, un grupo éster imídico, un grupo nitrona, un grupo oxima y un grupo pseudourea;
[0237] Clase E: un grupo maleimido, un grupo acrilato, un grupo N-acrilamida, un grupo metacrilato, un grupo N-metacrilamida, un grupo maleimido protegido, un grupo ácido maleámico, un grupo 1,2,4-triazolina-3,5-diona, un grupo azo lineal, un grupo azo cíclico, un grupo cicloalquenilo; en los que, el grupo cicloalquenilo incluye un grupo ciclooctenilo, un grupo norbornenilo, 7-oxabiciclo[2.2.1]hept-5-en-2-ilo, un grupo dicicloheptadienilo, un grupo 7-oxa-dicicloheptadienilo;
[0238] Clase F: un grupo epoxi, un grupo etenilo, un grupo propenilo, un grupo alquenil-hidrocarbilo, un grupo alquinilo y un grupo alquinil-hidrocarbilo.
[0239] Clase G,
[0240] Clase Ga: un grupo cicloalquinilo, un grupo cicloalquinilo heterosustituido, un grupo dienilo conjugado lineal, un grupo dienilo conjugado cíclico, un grupo dienilo conjugado cíclico heterosustituido con heteroátomos en el anillo y un grupo 1,2,4,5-tetrazinilo;
[0241] Clase Gb: un grupo azida, un grupo óxido de nitrilo, un grupo ciano, un grupo isociano, un grupo aldoxima, un grupo diazo, un grupo diazonio, un grupo azoxi, un grupo nitrilimina, un grupo N-aldimina óxido, un grupo tetrazol, un grupo 4-acetil-2-metoxi-5-nitrofenoxi y su forma diazo y otros grupos funcionales que pueden experimentar reacciones de cicloadición 1,3-dipolar;
[0242] Clase H: un grupo hidroxilo, un grupo hidroxilo protegido, un grupo siloxi, un grupo dihidroxilo protegido, un grupo trihidroxisililo, un grupo trihidroxisililo protegido; en los que, el grupo hidroxilo incluye un grupo hidroxilo alcohólico, un grupo hidroxilo fenólico, un grupo hidroxilo enólico y un grupo hidroxilo hemiacetal;
[0243] Clase I: grupos de direccionamiento y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos;
[0244] Clase J: grupos fluorescentes, tales como un grupo fluoresceína, un grupo rodamina, un grupo antracenilo, un grupo pirenilo, un grupo cumarina, un grupo amarillo fluorescente 3G, un grupo carbazol, un grupo imidazol, un grupo indol, un grupo galeinamonohidrato y cualquier residuo de derivado funcional de los mismos.
[0245] Además, R<01>se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en grupos funcionales de las clases A~J, formas variantes de las clases A~H y derivados funcionales de las clases I~J, dicha forma variante es un precursor de grupo funcional, una forma activa con grupo funcional como precursor, una forma activa sustituida, una forma protegida o una forma no protegida:
[0247] Clase A:
[0249]
[0251] Clase B:
[0253]
[0255] Clase C:
[0257]
[0260] Clase D:
[0262]
[0263]
[0264] Clase E:
[0265]
[0267] Clase F:
[0268]
[0270] Clase G:
[0271] Clase Ga:
[0272]
[0273] Clase Gb:
[0275]
[0276] Clase H:
[0277]
[0279] Clase I:
[0281]
[0283] O grupo J:
[0285]
[0286]
[0288] en las que, M<5>es un átomo de anillo (átomo formador de anillo) seleccionado del grupo que consiste en un átomo de carbono, un átomo de nitrógeno, un átomo de fósforo y un átomo de silicio. El número de átomos de anillo de una estructura cíclica que contiene M<5>es de 3 a 50, preferiblemente de 3 a 32, más preferiblemente de 3 a 18 y más preferiblemente de 5 a 18; dicha estructura cíclica se deriva del grupo que consiste en ciclohexano, anillo de furanosa, anillo de piranosa, benceno, tetrahidrofurano, pirrolidina, tiazolidina, ciclohexeno, tetrahidropirano, piperidina, 1,4-dioxano, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina, 1,3,5-triazina, 1,4,7-triazaciclononano, ciclotripéptido, indeno, indano, indol, isoindol, purina, naftaleno, dihidroantraceno, xanteno, tioxanteno, dihidrofenantreno, 10,11-dihidro-5H-dibenzo[a,d]cicloheptano, dibenzociclohepteno, 5-dibenzosuberenona, quinolina, isoquinolina, fluoreno, carbazol, iminodibencilo, acenafteno (o 1,2-dihidroacenaftileno), dibenzociclooctino, aza-dibenzociclooctino y formas sustituidas y formas heterosustituidas de los mismos;
[0289] en el que, Y<1>es un grupo saliente conectado a un grupo sulfonilo, un grupo sulfinilo, un grupo oxisulfonilo (un grupo sulfonato) o un grupo oxisulfinilo (un grupo sulfinato), que se selecciona del grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo, un grupo decilo, un grupo vinilo, un grupo fenilo, un grupo bencilo, un grupo p-metilfenilo, un grupo 4-(trifluorometoxi)fenilo, un grupo trifluorometilo y un grupo 2,2,2-trifluoroetilo;
[0290] en el que, W es F, Cl, Br o I;
[0291] en el que, W<2>es F, Cl, Br o I;
[0292] en el que, W<3>es un grupo saliente, seleccionado del grupo que consiste en F, Cl, Br, I y PhS;
[0294] en el que
son estructuras cíclicas (o estructuras de anillo) cuyos esqueletos contienen un átomo de nitrógeno, un ion nitrógeno-onio, un doble enlace carbono-carbono, un enlace azo, un triple enlace carbono-carbono, un enlace disulfuro, un grupo anhídrido, un grupo imida y un ligamiento dienileno, respectivamente, seleccionándose dichas estructuras cíclicas del grupo que consiste en anillos de carbono, heteroanillos, benzoheteroanillos, anillos de carbono sustituidos, heteroanillos sustituidos y benzoheteroanillos sustituidos;
[0295] en el que, M es un átomo de carbono, un átomo de nitrógeno, un átomo de fósforo o un átomo de silicio del esqueleto del anillo;
[0296] en el que, M<8>es un átomo de carbono, un átomo de nitrógeno, un átomo de fósforo o un átomo de silicio del esqueleto del anillo; el número de átomos de anillo de la estructura cíclica donde se encuentra M<8>es de 4 a 50, preferiblemente de 4 a 32 y más preferiblemente de 5 a 32;
[0297] en el que, M<22>es un átomo de carbono, un átomo de nitrógeno, un átomo de fósforo o un átomo de silicio de un anillo alicíclico o un heterociclo derivado alifático; el número de átomos de anillo de la estructura cíclica donde se encuentra M<22>es 4, 5, 6, 7 u 8;
[0298] en el que, R<22>es un grupo terminal o un grupo de ligamiento divalente, que está conectado a un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, que es, un átomo de hidrógeno o cualquier átomo o grupo seleccionado de R<21>o R<33>;
[0299] en el que, R<21>es un grupo de ligamiento divalente y participa en la formación de un anillo; R<21>es un grupo hidrocarbileno C<1-20>, un grupo heterohidrocarbilo C<1-20>divalente, un grupo hidrocarbileno C<1-20>sustituido, un grupo heterohidrocarbilo divalente C<1-20>sustituido o la combinación de cualquiera de dos o tres cualesquiera de los mismos; R<21>es preferiblemente un grupo metileno, un grupo etileno, un grupo propileno, un grupo butileno, un grupo pentileno, un grupo hexileno, un grupo heptileno, un grupo octileno, un grupo nonileno, un grupo decileno, un grupo 1,2-fenileno, un grupo bencileno, un grupo oxa-alquileno C<1-20>, un grupo tia-alquileno C<1-20>, un grupo aza-alquileno C<1-20>, un grupo aza-arilhidrocarbileno o cualquier forma sustituida de los mismos o la combinación de dos o más de una forma idéntica o formas diferentes o formas sustituidas de los mismos; en el que, R<33>es un grupo terminal conectado a un átomo de oxígeno o un átomo de azufre, que se selecciona del grupo que consiste en un grupo hidrocarbilo C<1-20>, un grupo heterohidrocarbilo C<1-20>, un grupo hidrocarbilo C<1-20>sustituido y un grupo heterohidrocarbilo C<1-20>sustituido, se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo, un grupo decilo, un grupo bencilo, un grupo alilo y formas sustituidas de los mismos;
[0300] en el que, R<4>es un átomo de hidrógeno, un átomo sustituyente o un grupo sustituyente, que está unido al átomo de carbono de una estructura con la fórmula de -(R<4>)C=N<+>=N<->o -(R<4>)C--N<+>=N; R<4>es preferiblemente un átomo o grupo seleccionado del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo, un grupo decilo, un grupo alilo, un grupo propenilo, un grupo etenilo, un grupo fenilo, un grupo metilfenilo, un grupo butilfenilo y un grupo bencilo;
[0301] en el que, R<8>, R<9>, R<10>, R<11>y R<12>son cada uno independientemente un átomo de hidrógeno, un átomo sustituyente o un grupo sustituyente, que se conecta al doble enlace (-C=C-) y R<8>, R<9>, R<10>, R<11>y R<12>pueden ser iguales o diferentes en una misma molécula; R<8>, R<9>, R<10>, R<11>y R<12>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, un átomo de flúor y un grupo metilo; con respecto a los grupos funcionales de la clase E3, R<8>es preferiblemente un grupo metilo;
[0302] en el que, R<24>es un grupo terminal conectado a un enlace disulfuro, seleccionado del grupo que consiste en un grupo alquilo C<1-20>, un grupo arilo y un grupo fenilo heterosustituido;
[0303] en el que, R<27>es un sustituyente conectado a un grupo azo, seleccionado del grupo que consiste en un grupo fenilo, un grupo fenilo sustituido y un grupo fenilo heterosustituido;
[0304] en el que, R<30>es un grupo hidrocarbilo, seleccionado del grupo que consiste en un grupo alquilo C<1-20>, un grupo bencilo y un grupo bencilo en el que el anillo de benceno está sustituido con grupos hidrocarbilo C<1-20>; en el que, M<19>, M<20>y M<21>son cada uno independientemente un átomo de oxígeno o un átomo de azufre y en una misma molécula pueden ser iguales o diferentes;
[0305] en el que, X<6>es un grupo terminal conectado al átomo de oxígeno de un grupo éster, y puede ser un grupo protector de hidroxilo o un grupo LG<4>; LG<4>se selecciona del grupo que consiste en un grupo alquilo C<1-20>, un grupo arilo, un grupo aralquilo, un grupo heteroalquilo C<1-20>, un grupo heteroarilo, un grupo heteroarilalquilo, un grupo alquilcarbonilo C<1-20>, un grupo arilcarbonilo, un grupo arilalquilcarbonilo, un grupo heteroalquilcarbonilo C<1-20>, un grupo heteroarilcarbonilo, un grupo heteroarilalquilcarbonilo, un grupo alcoxicarbonilo C<1-20>, un grupo ariloxicarbonilo, un grupo arilalcoxicarbonilo, un grupo (alquiltio)carbonilo C<1-20>, un grupo (ariltio)carbonilo, un grupo (arilalquiltio)carbonilo, un grupo alquilaminocarbonilo C<1-20>, un grupo arilaminocarbonilo,
[0306] un grupo arilalquilaminocarbonilo, un grupo heteroalcoxicarbonilo C<1-20>, un grupo heteroariloxicarbonilo, un grupo heteroarilalcoxicarbonilo, un grupo hetero(alquiltio)carbonilo C<1-20>, un grupo hetero(ariltio)carbonilo, un grupo hetero(arilalquiltio)carbonilo, un grupo heteroalquilaminocarbonilo C<1-20>, un grupo heteroarilaminocarbonilo, un grupo heteroarilalquilaminocarbonilo, un grupo (alquil)tiocarbonilo C<1-20>, un grupo (aril)tiocarbonilo, un grupo (arilalquil)tiocarbonilo, un grupo hetero(alquil)tiocarbonilo C<1-20>, un grupo hetero(aril)tiocarbonilo, un grupo hetero(arilalquil)tiocarbonilo, un grupo alcoxi-tiocarbonilo C<1-20>, un grupo ariloxi-tiocarbonilo, un grupo arilalcoxi-tiocarbonilo, un grupo (alquiltio)tiocarbonilo C<1-20>, un grupo (ariltio)tiocarbonilo, un grupo (arilalquiltio)tiocarbonilo, un grupo alquilaminotiocarbonilo C<1-20>, un grupo arilaminotiocarbonilo, un grupo arilalquilaminotiocarbonilo, un grupo heteroalquiloxi-tiocarbonilo C<1-20>, un grupo heteroariloxi-tiocarbonilo, un grupo heteroarilalcoxi-tiocarbonilo, un grupo hetero(alquiltio)tiocarbonilo C<1-20>, un grupo hetero(ariltio)tiocarbonilo, un grupo hetero(arilalquiltio)tiocarbonilo, un grupo heteroalquilaminotiocarbonilo C<1-20>, un grupo heteroarilaminotiocarbonilo, un grupo heteroarilalquilaminotiocarbonilo y formas sustituidas de los mismos; en el que, el átomo sustituyente o grupo sustituyente es un átomo de flúor, un grupo alcoxi o un grupo nitro;
[0307] en el que, X<11>es un grupo terminal conectado a un grupo carbonilo o un grupo tiocarbonilo, seleccionado de grupos alquilo C<1-20>;
[0308] en el que, X<12>es un grupo terminal conectado a un grupo carbonato o un grupo tiocarbonato, seleccionado de grupos hidrocarbilo C<1-20>;
[0309] en el que, X<5>es un grupo terminal conectado a un grupo tioxi, seleccionado de un grupo protector de mercapto y un grupo LG<2>;
[0310] en el que, LG<2>se selecciona del grupo que consiste en un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo t-butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo, un grupo decilo, un grupo undecilo, un grupo dodecilo, un grupo tridecilo, un grupo tetradecilo, un grupo pentadecilo, un grupo hexadecilo, un grupo heptadecilo, un grupo octadecilo, un grupo nonadecilo, un grupo eicosilo, un grupo alilo, un grupo tritilo, un grupo fenilo, un grupo bencilo, un grupo metilbencilo, un grupo nitrobencilo, un grupo t-butil tio, un grupo benciltio, un grupo 2-piridiltio, un grupo acetilo, un grupo benzoílo, un grupo metoxicarbonilo, un grupo etoxicarbonilo, un grupo t-butoxicarbonilo, un grupo fenoxicarbonilo, un grupo benciloxicarbonilo, un grupo (metiltio)carbonilo, un grupo (etiltio)carbonilo, un grupo (t-butiltio)carbonilo, un grupo (feniltio)carbonilo, un grupo (benciltio)carbonilo, un grupo 2-piridilcarbonilo, un grupo metilaminocarbonilo, un grupo etilaminocarbonilo, un grupo t-butilaminocarbonilo, un grupo bencilaminocarbonilo, un grupo etil-tiocarbonilo, un grupo fenil-metiltiocarbonilo, un grupo metoxi-tiocarbonilo, un grupo etoxi-tiocarbonilo, un grupo t-butiloxi-tiocarbonilo, un grupo fenoxi-tiocarbonilo, un grupo benciloxitiocarbonilo, un grupo (metiltio)tiocarbonilo, un grupo (etiltio)tiocarbonilo, un grupo (t-butiltio)tiocarbonilo, un grupo (feniltio)tiocarbonilo, un grupo (benciltio)tiocarbonilo, un grupo metilaminotiocarbonilo, un grupo etilaminotiocarbonilo, un grupo t-butilaminotiocarbonilo, un grupo bencilaminotiocarbonilo, un grupo halohidrocarbilo C<1-10>, un grupo trifluoroacetilo, un grupo nitrofenilo y formas sustituidas de los mismos; en el que, el átomo sustituyente o grupo sustituyente es un átomo de flúor, un grupo alcoxi o un grupo nitro; en el que, Q es un átomo o un sustituyente que puede promover el efecto inductivo y el efecto conjugado de los electrones de los enlaces insaturados; cuando Q está conectado al anillo, el número de Q puede ser uno o mayor que uno; cuando el número de Q es mayor que uno, pueden tener la misma estructura o ser una combinación de dos o más estructuras diferentes; cuando Q es un grupo sustituyente, puede ser una estructura lineal, una estructura ramificada que porta grupos pendientes o una estructura que contiene anillos;
[0311] en el que, Q<3>es un átomo de hidrógeno o un sustituyente que puede promover el efecto inductivo y el efecto conjugado de los electrones de los enlaces insaturados, que puede ser cualquier átomo o grupo seleccionado del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, un átomo de flúor, un átomo de cloro, un átomo de bromo, un átomo de yodo, un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo n-propilo, un grupo isopropilo, un grupo butilo, un grupo pentilo, un grupo hexilo, un grupo heptilo, un grupo octilo, un grupo nonilo, un grupo decilo, un grupo etenilo, un grupo propenilo, un grupo alilo, un grupo propinilo, un grupo propargilo, un grupo ciclopropilo, un grupo ciclopropenilo, un grupo fenilo, un grupo bencilo, un grupo butilfenilo, un grupo p-metilfenilo, un grupo pnitrofenilo, un grupo o-nitrofenilo, un grupo p-metoxifenilo, un grupo azafenilo, un grupo metoxi, un grupo etoxi, un grupo fenoxi, un grupo benciloxi, un grupo metiltio, un grupo etiltio, un grupo feniltio, un grupo benciltio, un grupo trifluorometilo, un grupo 2,2,2-trifluoroetilo y formas sustituidas de los mismos;
[0312] en el que, Q<5>es un átomo de hidrógeno, un grupo metilo, un grupo etilo o un grupo propilo; cuando Q<5>está conectado al anillo, el número de Q puede ser uno o mayor que uno; cuando el número de Q es mayor que uno, pueden tener la misma estructura o ser una combinación de dos o más estructuras diferentes;
[0313] en el que, Q<6>es un átomo de hidrógeno o un grupo metilo; Q<7>es un átomo de hidrógeno, un grupo metilo, un grupo fenilo o un grupo fenilo sustituido; en una misma molécula, Q<6>y Q<7>pueden ser idénticos o diferentes entre sí;
[0314] en el que, Q<8>es un átomo sustituyente o grupo sustituyente de un grupo imidazol, que se selecciona del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, un grupo metilo, un grupo etilo, un grupo propilo, un grupo butilo y un grupo fenilo; el número de Q8 puede ser uno o mayor que uno; cuando el número de Q<8>es mayor que uno, pueden tener la misma estructura o ser una combinación de dos o más estructuras diferentes;
[0315] en el que, Q<11>es un grupo sustituyente conectado a un átomo de nitrógeno de un grupo tetrazol y se selecciona del grupo que consiste en un grupo fenilo, un grupo fenilo sustituido y un grupo azafenilo;
[0316] en el que, PG<2>es un grupo protector de mercapto y el grupo mercapto protegido se representa como SPG<2>que se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en un sulfuro (o un tioéter), un disulfuro, un tioéter de sililo y un tiocarboxilato;
[0317] en el que, PG<3>es un grupo protector de alquinilo, preferiblemente un grupo sililo;
[0318] en el que, PG<4>es un grupo protector de hidroxilo y el grupo hidroxilo protegido se representa como OPG<4>que se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en un éter, un éter de sililo, un éster, un carbonato y un sulfonato;
[0319] en el que, PG<5>es un grupo protector de amino y el grupo amino protegido se representa como NPG<5>que se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en un carbamato, una amida, una imida, una N-alquil amina, una N-aril amina, una imina, una enamina, un imidazol, un pirrol y un indol;
[0320] en el que, PG<6>es un grupo protector de dihidroxilo y forma una estructura de acetal cíclico de cinco o seis miembros con dos átomos de oxígeno; PG<6>es un grupo metileno o un grupo metileno sustituido; en el que, el sustituyente de PG<6>es un sustituyente hidrocarbilo o un sustituyente que contiene heteroátomo, seleccionado del grupo que consiste en un grupo metileno, un grupo 1-metilmetileno, un grupo 1,1-dimetilmetileno, un grupo 1,1-ciclopentileno, un grupo 1,1-ciclohexileno, un grupo 1-fenilmetileno y un grupo 3,4-dimetilfenilmetileno; en el que, PG<8>es un grupo protector de ácido ortocarbónico o ácido ortosilícico.
[0321] 1.1.5.4. Ejemplos específicos de R3
[0322] En un aspecto específico de la presente divulgación, R<3>contiene preferiblemente un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo, un grupo alcoxi, un grupo hidroxilo alcohólico, un grupo hidroxilo alcohólico protegido, un grupo tiol, un grupo tiol protegido, un grupo carboxilo, un grupo carboxilo protegido, un grupo amino, un grupo amino protegido, un grupo aldehído, un grupo aldehído protegido, un grupo éster, un grupo carbonato, un grupo uretano, un grupo succinimidilo, un grupo maleimido, un grupo maleimido protegido, un grupo dimetilamino, un grupo alquenilo, un grupo alquenoato, un grupo azido, un grupo alquinilo, un grupo folato, un grupo rodamina o un grupo biotinilo y más preferiblemente contiene H, CH<3>, -(CH<2>)<t>OH, -(CH<2>)<t>SH, -OCH<3>, -OCH<2>CH<3>, -H<2>NH<2>- H<2>= H - = H<2>= H - = H - H<2>N - = H<2>H - = H -
[0324]
[0326] 1.1.5.5. El espaciado atómico entre R<3>y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno
[0327] La longitud de la cadena carbonada y el espaciado atómico entre dos grupos tienen una gran influencia en las propiedades de los compuestos.
[0328] En un aspecto específico de la presente divulgación, el espaciado atómico entre R<3>y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno es mayor o igual a 6, preferiblemente de 6 a 50, más preferiblemente de 6 a 35, más preferiblemente de 6 a 25, aún más preferiblemente de 6 a 15.
[0329] Ejemplos específicos: en el Ejemplo-1, el grupo entre R<3>(un átomo de hidrógeno) y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno es -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>O-, por lo que el espaciado atómico entre R<3>y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno es 6; en el Ejemplo-2 y el Ejemplo-4, el grupo entre R<3>(-OH) y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno es -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>-, por lo que el espaciado atómico entre R<3>y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno es 8; en el Ejemplo-8, el grupo entre R<3>(un átomo de hidrógeno) y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno es -CH<2>CH<2>NHC(=O)CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>O-, por lo que el espaciado atómico entre R<3>y el centro de ramificación de átomo de nitrógeno es 10.
[0330] 1.1.6. A
[0331] En la presente divulgación, A se selecciona del grupo que consiste en -(CR<a>R<b>)<s>O-, -O(CR<a>R<b>)<s>-, -(CR<a>R<b>)<s>S-, -S(CR<a>R<b>)<s>-, -(CR<a>R<b>)<s>O(CR<a>R<b>)<s>S-, -(CR<a>R<b>)<s>S(CR<a>R<b>)<s>O-, -(CR<a>R<b>)<s>NR<c>(CR<a>R<b>)<s>S-, -(CR<a>R<b>)<s>S(CR<a>R<b>)<s>NR<c>-, -(CR<a>R<b>)<s>NR<c>(CR<a>R<b>)<s>O- y -(CR<a>R<b>)<s>O(CR<a>R<b>)<s>NR<c>-, en el que, s es 2, 3 o 4 y R<a>y R<b>son, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>.
[0332] En un aspecto específico de la presente divulgación, A es preferiblemente -CH<2>CH<2>O-, -OCH<2>CH<2>-, -CH(CH<3>)CH<2>O-, -OCH(CH<3>)CH<2>-, -CH<2>CH<2>S-, -SCH<2>CH<2>-, -CH<2>CH<2>NHCH<2>CH<2>O-, -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>NH-, -CH<2>CH<2>SCH<2>CH<2>O- o -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>S-, más preferiblemente -CH<2>CH<2>O-, -OCH<2>CH<2>-, -CH<2>CH<2>SCH<2>CH<2>O- o -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>S-, aún más preferiblemente -CH<2>CH<2>O- u -OCH<2>CH<2>-.
[0333] 1.1.7. Ejemplos de fórmulas generales específicas
[0334] En una realización de aspecto de la presente divulgación, cuando A es -CH<2>CH<2>O-, -OCH<2>CH<2>-, -CH(CH<3>)CH<2>O-, -OCH(CH<3>)CH<2>-, -CH<2>CH<2>S-, -SCH<2>CH<2>-, -CH<2>CH<2>NHCH<2>CH<2>O-, -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>NH-, -CH<2>CH<2>SCH<2>CH<2>O- o -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>S- en la fórmula general (1), la estructura del lípido catiónico en la presente divulgación es preferiblemente la estructura de cualquier fórmula seleccionada del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
[0336]
y
[0337]
[0339] en las que, las definiciones de L<1>, L<2>, L<3>, B<1>, B<2>, R<1>, R<2>, R<3>y n son las mismas que en la fórmula general (1). En un aspecto específico de la presente divulgación, cuando L<1>y L<2>en la fórmula general (1) se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un enlace de ligamiento, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -O(CH<2>)<s>O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NHC(=O)-, -C(=O)NH-, -NHC(=O)NH-, -OC(=O)NH-, -NHC(=O)O-, -SC(=O)NH- y -NHC(=O)S-, la estructura del lípido catiónico en la presente divulgación es preferiblemente la estructura de cualquier fórmula seleccionada del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
[0342]
[0344] en las que, las definiciones de L<3>, B<1>, B<2>, R<1>, R<2>, R<3>, A y n son las mismas que en la fórmula general (1); dicho A es preferiblemente seleccionado del grupo que consiste en -CH<2>CH<2>O-, -OCH<2>CH<2>-, -CH<2>CH<2>S-, -SCH<2>CH<2>-, -CH<2>CH<2>NHCH<2>CH<2>O-, -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>NH-, -CH<2>CH<2>SCH<2>CH<2>O- y -CH<2>CH<2>OCH<2>CH<2>S-, más preferiblemente -CH<2>CH<2>O- u -OCH<2>CH<2>-.
[0345] 1.1.8. Ejemplos de estructuras específicas
[0346] En algunos aspectos específicos de la presente divulgación, se obtienen finalmente lípidos catiónicos con las siguientes estructuras, que incluyen, pero no se limitan a, las siguientes estructuras:
[0349]
[0350]
[0351]
[0354] 
[0355]
[0358] 
[0359]
[0362] 
[0363]
[0365] 
[0366]
[0368] 2. Preparación de lípidos catiónicos
[0369] En la presente divulgación, cualquiera de los lípidos catiónicos anteriormente mencionados se puede preparar mediante métodos que incluyen, pero no se limitan a, los siguientes:
[0370] 2.1. Método-1:
[0371] Etapa 1: activar el terminal carboxilo del ácido A-1 (o A-1’) que contiene un grupo carboxilo no protegido, utilizando agentes activadores de carboxilo, a partir de los cuales se obtiene el éster A-2 (o A-2’) que contiene un terminal carboxilo activado; en el que, B<1>’ y B<2>’ son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo alquileno que tiene un grupo metileno menos que B<1>o B<2>; en el que, R<1>’ y R<2>’ son cada uno independientemente R<1>o R<2>o un grupo alifático que tiene un grupo metileno menos que R<1>o R<2>; en el que, R<7>es un grupo activador de carboxilo, y cuando B<1>’ o L<1>no es un enlace de ligamiento, R<1>’ es R<1>y cuando tanto B<1>’ como L<1>son enlaces de ligamiento, R<1>’ es un grupo alifático que tiene un grupo metileno menos que R<1>y cuando B<2>’ o L<2>no es un enlace de ligamiento, R<2>’ es R<2>, y cuando tanto B<2>’ como L<2>son enlaces de ligamiento, R<2>’ es un grupo alifático que tiene un grupo metileno menos que R<2>;
[0372] Etapa 2: llevar a cabo la reacción de condensación del éster A-2 (o A-2’) que contiene un terminal carboxilo activado con el derivado de amina primaria A-3 (o A-3’) que contiene un grupo terminal fuente de nitrógeno para obtener el intermedio de amida A-4 (o A-4’);
[0373] Etapa 3: utilizar un reactivo reductor para reducir el intermedio de amida A-4 (o A-4’) al intermedio de amina secundaria A-5 (o A-5’);
[0374] Etapa 4: llevar a cabo la reacción de acoplamiento del intermedio de amina secundaria A-5 (o A-5’) con la molécula pequeña funcionalizada de doble extremo A-6 para obtener el derivado de lípido catiónico A-7 (o A-7’); en el que, los dos grupos funcionales terminales de A-6 pueden ser iguales o diferentes; en el que, el extremo R<3>’ de A-6 contiene el grupo funcional R<01>o una forma variante con micromodificación de R<01>; dicha forma variante con micromodificación se refiere al grupo que se puede transformar en R<01>a través de cualquier proceso de reacción química seleccionado de desprotonación, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes; en el que, F<1>en A-6 contiene grupos funcionales activos que pueden reaccionar con el grupo amino del intermedio de amina secundaria A-5 (o A-5’) para obtener el centro de ramificación de átomo de nitrógeno y el grupo de ligamiento divalente L<3>; cuando R<3>’ es R<3>, la estructura de A-7 (o A-7’) está representada por la fórmula general (1);
[0375] cuando R<3>’ no es R<3>, A-8 (o A-8’) representado por la fórmula general (1) se obtiene mediante micromodificación terminal de A-7 (o A-7’); dicha micromodificación terminal se selecciona del grupo que consiste en desprotección, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes.
[0376] Etapa 1:
[0378]
[0381] Etapa 2:
[0383]
[0386] Etapa 3:
[0388]
[0389] o
[0392]
[0394] en las que, L<3>, L<1>, L<2>, B<1>, B<2>, R<3>, R<1>, R<2>y n son los mismos que en la fórmula general (1) y no se describen de nuevo aquí.
[0395] En un aspecto específico de la presente divulgación y con respecto al Método-1 anteriormente mencionado, dicho A-1 es preferiblemente R<1>’-COOH o R<2>’-COOH, dicho A-3 es preferiblemente R<1>-NH<2>o R<2>-NH<2>, dicho agente activador de carboxilo se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en N-hidroxisuccinimida (NHS), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI), N-hidroxi-5-norborneno-2,3-dicarboximida (HONb) y N,N’-diciclohexilcarbodiimida (DCC) y dicho lípido catiónico se produce preferiblemente mediante las siguientes rutas:
[0398]
[0400] 2.2. Método-2:
[0401] Etapa 1: llevar a cabo la reacción de acoplamiento del derivado de amina primaria B-2 (o B-2’) que contiene un grupo terminal fuente de nitrógeno, con la molécula pequeña funcionalizada de doble extremo B-1, a partir del cual se obtiene el derivado de amina secundaria B-3 (o B-3’); en el que, los dos grupos funcionales terminales de B-1 pueden ser iguales o diferentes; el extremo R<3>’ de B-1 contiene el grupo funcional R<01>o una forma variante con micromodificación de R<01>; dicha forma variante con micromodificación se refiere al grupo que se puede transformar en R<01>a través de cualquier proceso de reacción química seleccionado de desprotonación, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes; F<1>contiene grupos funcionales activos, que pueden reaccionar con el grupo amino de la amina primaria B-2 (o B-2’) para obtener el derivado de amina secundaria B-3 (o B-3’) que contiene el grupo de ligamiento divalente L<3>;
[0402] Etapa 2: llevar a cabo la reacción de alquilación del derivado de amina secundaria B-3 (o B-3’) con B-4 (o B-4’) que contiene el grupo funcional F<N>, a partir del cual se obtiene el derivado de lípido catiónico B-5 (o B-5’); dicho F<N>es un grupo funcional que puede reaccionar con grupos amino o grupos amino secundarios, preferiblemente -OMs, -OTs, -CHO, -F, -Cl o -Br;
[0403] cuando R<3>’ es R<3>, la estructura de B-5 (o B-5’) está representada por la fórmula general (1);
[0404] cuando R<3>’ no es R<3>, B-6 (o B-6’) representado por la fórmula general (1) se obtiene mediante micromodificación terminal de B-5 (o B-5’); dicha micromodificación terminal se selecciona del grupo que consiste en desprotección, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes.
[0405] Etapa 1:
[0407]
[0409] Etapa 2:
[0411]
[0413] en las que, L<3>, L<1>, L<2>, B<1>, B<2>, R<3>, R<1>, R<2>y n son los mismos que en la fórmula general (1) y no se describen de nuevo aquí.
[0414] En un aspecto específico de la presente divulgación y con respecto al Método-2 anteriormente mencionado, dicho B-3 (o B-3’) es R<1>-NH<2>o R<2>-NH<2>, dicho B-4 o B-4’ es R<2>-L<2>-B<2>-Br o R<1>-L<1>-B<1>-Br, y dicho F<1>contiene el grupo -OMs.
[0415] 2.3. Método-3:
[0416] Etapa 1: llevar a cabo la reacción de la molécula pequeña C-1 con la molécula pequeña C-2 para obtener el intermedio de molécula pequeña C-3 que contiene el grupo de ligamiento divalente L<1>, el grupo funcional F<N>en un terminal y el grupo alifático R<1>en el otro terminal; en el que, F<3>y F<4>son cada uno independientemente un grupo funcional, que pueden reaccionar entre sí y formar el grupo de ligamiento divalente L<1>; en el que, C-2 contiene un par de grupos heterofuncionales que consisten en F<3>y F<N>; dicho F<N>es un grupo funcional que puede reaccionar con grupos amino o grupos amino secundarios, preferiblemente -OMs, -OTs, -CHO, -F, -Cl o -Br;
[0417] Etapa 2: llevar a cabo la reacción de alquilación de dos intermedios de molécula pequeña C-3 con el derivado de amina primaria C-4 que contiene un grupo terminal fuente de nitrógeno, a partir del cual se obtiene el lípido catiónico C-5; en el que, el extremo R<3>’ contiene el grupo funcional R<01>o una forma variante con micromodificación de R<01>; dicha forma variante con micromodificación se refiere al grupo que se puede transformar en R<01>a través de cualquier proceso de reacción química seleccionado de desprotonación, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes;
[0418] cuando R<3>’ es R<3>, la estructura de C-5 está representada por la fórmula general (1);
[0419] cuando R<3>’ no es R<3>, se obtiene C-6 representado por la fórmula general (1) mediante micromodificación terminal de C-5; dicha micromodificación terminal se selecciona de desprotección, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes;
[0420] en las que, L<3>, L<1>, L<2>, B<1>, B<2>, R<3>, R<1>, R<2>y n son los mismos que en la fórmula general (1) y no se describen de nuevo aquí.
[0421] Etapa 1:
[0423]
[0425] 2.4. Método-4:
[0426] Etapa 1: llevar a cabo la reacción de la molécula pequeña D-1 con la molécula pequeña D-2 para obtener el intermedio de molécula pequeña D-3 que contiene el grupo de ligamiento divalente L<1>, un grupo hidroxilo en un terminal y el grupo alifático R<1>en el otro terminal; en el que, F<3>y F<4>son cada uno independientemente un grupo funcional, que pueden reaccionar entre sí y formar el grupo de ligamiento divalente L<1>; en el que, D-2 contiene un par de grupos funcionales heterogéneos que consisten en F<3>y un grupo hidroxilo;
[0427] Etapa 2: oxidar el grupo hidroxilo del intermedio de molécula pequeña D-3 a un grupo aldehído, a partir del cual se obtiene el intermedio de molécula pequeña D-4 que contiene un grupo aldehído; en el que, B<1>’ es un grupo alquileno con un grupo metileno menos que B<1>;
[0428] Etapa 3: llevar a cabo la reacción de adición de dos intermedios de molécula pequeña D-4 que contienen un grupo aldehído con el derivado de amina primaria D-5 que contiene un grupo terminal fuente de nitrógeno, a partir del cual se obtiene el lípido catiónico D-6; en el que, el extremo R<3>’ contiene el grupo funcional R<01>o una forma variante con micromodificación de R<01>; dicha forma variante con micromodificación se refiere al grupo que se puede transformar en R<01>a través de cualquier proceso de reacción química seleccionado de desprotonación, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes;
[0429] cuando R<3>’ es R<3>, la estructura de D-6 está representada por la fórmula general (1);
[0430] cuando R<3>’ no es R<3>, D-7 representado por la fórmula general (1) se obtiene mediante micromodificación terminal de D-6; dicha micromodificación terminal se selecciona de desprotección, complejación y descomplejación de sales, ionización, protonación, desprotonación y cambio de grupos salientes; en el que, R<1>es el mismo que R<2>, B<1>es el mismo que B<2>y L<1>es el mismo que L<2>.
[0431] Etapa 1:
[0432]
[0435] Etapa 3:
[0438]
[0440] en las que, L<3>, L<1>, L<2>, B<1>, B<2>, R<3>, R<1>, R<2>y n son los mismos que en la fórmula general (1) y no se describen de nuevo aquí.
[0441] R<1>’, R<1>, R<2>’ y R<2>en los Método-1 a Método-4 anteriores pueden ser residuos eterificados de derivados de
[0444]
[0445] hidrocarburo alifático, que se representan como en la que, t es un número entero de 0 a 12, t<1>y t<2>son cada uno independientemente un número entero de 0 a 5, y t<3>y t<4>son cada uno independientemente 0 o 1 y no son 0 simultáneamente; en el que, R<e>y R<f>se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en un grupo alquilo C<1-15>, un grupo alquenilo C<2-15>y un grupo alquinilo C<2-15>; el compuesto que contiene los residuos eterificados se puede comprar de fuentes comerciales
[0447]
[0449] o sintetizar; por ejemplo, se puede comprar o sintetizar, en el que la síntesis puede utilizar la reacción de adición entre alcohol y aldehído, por ejemplo, la reacción de adición entre una molécula de
y dos moléculas de R<e>-OH cuando R<e>es el mismo que R<f>; para otro ejemplo,
[0451]
también se puede comprar o sintetizar, en el que la síntesis puede utilizar la
[0453] reacción entre
y un agente alquilante relevante, dicho agente alquilante
[0456]
[0457] preferiblemente es un haluro; por ejemplo, se puede obtener después de la desprotección de un producto obtenido mediante la reacción entre una molécula de glicerol que contiene grupos hidroxilo protegidos con TBS y dos moléculas de bromuro de hexilo.
[0458] 2.5. Descripción de materiales y/o etapas relevantes en el proceso de preparación
[0459] 2.5.1. Agente activador de carboxilo, agente condensante, agente oxidante y agente reductor
[0460] En la presente divulgación, “activación de grupos carboxilo” se refiere al tratamiento de activación para grupos carboxilo utilizando agentes activadores de carboxilo, en el que los grupos carboxilo activados pueden promover reacciones de condensación, por ejemplo, al inhibir la generación de impurezas racémicas, acelerar la tasa de reacción mediante catálisis, etc. Un “grupo activador de grupos carboxilo” se refiere al residuo de un agente activador de carboxilo. Dicho agente activador de carboxilo se selecciona del grupo que consiste en N-hidroxisuccinimida (NHS), 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI), N-hidroxi-5-norborneno-2,3-dicarboximida (HONb), N,N’-diciclohexilcarbodiimida (DCC) y combinaciones de los mismos, preferiblemente la combinación de NHS/EDCI, NHS/DCC o HONb/DCC y aún más preferiblemente la combinación de NHS/EDCI.
[0461] En la presente divulgación, el agente condensante no está particularmente limitado, preferiblemente N,N’-diciclohexilcarbodiimida (DCC), clorhidrato de 1-etil-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC·HCl), hexafluorofosfato de 2-(7-azabenzotriazol-N,N,N’,N’-tetrametiluronio (HATU) o hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio (HBTU) y más preferiblemente DCC. Generalmente, el equivalente molar del agente condensante es de 1 a 20 veces el del ácido carboxílico, preferiblemente de 5 a 10 veces y se pueden agregar catalizadores adecuados tales como 4-dimetilaminopiridina (DMAP) a la reacción.
[0462] En la presente divulgación, el agente oxidante no está particularmente limitado siempre que sea un compuesto o una combinación de múltiples compuestos capaces de aumentar la valencia del sustrato, preferiblemente bis(trifluoroacetato) de feniliodo(III), 1,4-benzoquinona, tribromuro de benciltrimetilamonio, dicromato de piridinio, ozono, oxígeno, ácido fluorhídrico, hipoclorito de sodio, acetato cobáltico, acetato de cobalto, acetato manganoso, acetato de paladio(II), acetato cúprico, ácido monoperoxiftálico, yodo, N-yodosuccinimida, yodoxibenceno, ácido 2-yodilbenzoico, dimetildioxirano, cloruro de oxalilo-sulfóxido de dimetilo, DDQ, diclorotris(trifenilfosfina)rutenio, dióxido de manganeso, (diacetoxiyodo)benceno, ácido periódico, periodato de sodio, periodato de sodio-tetraóxido de osmio, permanganato de potasio, perborato de sodio, ácido perbenzoico, peróxido de dibenzoilo, peróxido de níquel, peróxido de hidrógeno, hidroperóxido de cumilo, hidroperóxido de 1-butilo, ácido peracético, ácido m-cloroperbenzoico, N-clorosuccinimida, clorocromato de piridinio, cloruro de paladio-cloruro cúprico, aducto de peróxido de hidrógeno urea, tetrafluoroborato de trifenilcarbenio, óxido de tributilestaño, trifluoruro de cobalto, oxitrifluoruro de vanadio, trióxido de cromo, triacetato de manganeso, TEMPO, nitrato cérico de diamonio, bromo, N-óxido de piridina, óxido de plata, ácido O-etilperoxicarbónico, acetilacetonato de manganeso, acetilacetonato de vanadilo, isopropóxido de aluminio, peroximonosulfato, dicloroyodobenceno, similares o cualquier combinación de los mismos y más preferiblemente oxígeno, hipoclorito de sodio, peróxido de hidrógeno, dicloroyodobenceno, peroximonosulfato, similares o cualquier combinación de los mismos; el equivalente molar del agente oxidante es de 1 a 50 veces el del grupo hidroxilo del compuesto intermedio, preferiblemente de 1 a 20 veces y más preferiblemente de 5 a 10 veces.
[0463] En la presente divulgación, el agente reductor no está particularmente limitado siempre que pueda reducir la base de Schiff formada por la reacción de una amina con un aldehído o cetona a un grupo amino, preferiblemente borohidruro de sodio, cianoborohidruro de sodio, hidruro de litio y aluminio, borano, diborano, hidruro de diisobutilaluminio, diisopinocanfeilborano, borohidruro de litio, borohidruro de zinc, borano-piridina, borano-sulfuro de metilo, borano-tetrahidrofurano, similares o cualquier combinación de los mismos y más preferiblemente cianoborohidruro de sodio; el equivalente molar del agente reductor es de 1 a 50 veces el del grupo amino que se va a modificar, preferiblemente de 1 a 20 veces y más preferiblemente de 5 a 10 veces. En la presente divulgación, la temperatura de reacción es de 0 a 200 °C, preferiblemente de 0 a 100 °C y más preferiblemente de 0 a 25 °C; el tiempo de reacción es preferiblemente de 10 min a 48 h y más preferiblemente de 30 min a 24 h. El producto obtenido se puede purificar mediante un medio de purificación tal como extracción, recristalización, tratamiento de adsorción, precipitación, precipitación inversa, diálisis de membrana y extracción supercrítica.
[0464] En la presente divulgación, el solvente de reacción puede estar ausente o ser un solvente aprótico que incluye tolueno, benceno, xileno, acetonitrilo, acetato de etilo, éter de dietilo, éter de tert-butilo y metilo, tetrahidrofurano, cloroformo, diclorometano, dimetilsulfóxido, dimetilformamida y dimetilacetamida; dicho solvente aprótico es preferiblemente tetrahidrofurano, diclorometano, dimetilsulfóxido o dimetilformamida. En la presente divulgación, las bases utilizadas en las reacciones son generalmente bases orgánicas, tales como trimetilamina, piridina, 4-dimetilaminopiridina, imidazol y N,N-diisopropiletilamina y más preferiblemente trimetilamina y piridina. El equivalente molar de la base es de 1 a 50 veces el de los ácidos carboxílicos, preferiblemente de 1 a 10 veces y más preferiblemente de 2 a 3 veces.
[0465] 2.5.2. “Protección” y “desprotección” de grupos relevantes involucrados en el proceso de reacción
[0466] En la presente divulgación, el proceso de reacción también involucra los procesos de “protección” y “desprotección” de grupos relevantes. Para evitar que un grupo funcional afecte la reacción, el grupo funcional se protege usualmente. Además, cuando hay dos o más grupos funcionales y solo el grupo funcional objetivo necesita reaccionar, los otros grupos funcionales se deben proteger por lo tanto. El grupo protector no solo protege el grupo funcional de manera estable, sino que también necesita eliminarse fácilmente según sea necesario. Por lo tanto, en la síntesis orgánica, es importante eliminar solo el grupo protector unido al grupo funcional especificado bajo condiciones apropiadas.
[0467] En la presente divulgación, “grupo protector de carboxilo” se refiere al grupo protector que se puede transformar en un grupo carboxilo mediante la hidrólisis de sí mismo o la reacción de desprotección de un grupo carboxilo protegido. El grupo protector de carboxilo se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en un grupo alquilo (por ejemplo, un grupo metilo, un grupo etilo y un grupo butilo) y un grupo aralquilo (por ejemplo, un grupo bencilo), se selecciona más preferiblemente del grupo que consiste en un grupo butilo (tBu), un grupo metilo (Me) y un grupo etilo (Et). En la presente divulgación, “grupo carboxilo protegido” se refiere al grupo protegido por un grupo protector de carboxilo apropiado, seleccionado preferiblemente del grupo que consiste en un grupo metoxicarbonilo, un grupo etoxicarbonilo, un grupo t-butiloxicarbonilo y un grupo benciloxicarbonilo. Dichos grupos protectores de carboxilo se pueden eliminar a través de hidrólisis catalizada por ácidos o álcalis, o a través de reacciones de pirólisis ocasionalmente; por ejemplo, los grupos t-butilo se pueden eliminar bajo condiciones ácidas suaves, y los grupos bencilo se pueden eliminar por hidrogenólisis. El reactivo utilizado para la eliminación de grupos protectores de carboxilo se selecciona del grupo que consiste en TFA, H<2>O, LiOH, NaOH, KOH, MeOH, EtOH y combinaciones de los mismos, preferiblemente la combinación de TFA y H<2>O, la combinación de LiOH y MeOH o la combinación de LiOH y EtOH. Un grupo carboxilo protegido puede experimentar desprotección y luego producir el ácido libre correspondiente; dicha desprotección se conduce en presencia de un álcali, y dicho álcali forma una sal farmacéuticamente aceptable con dicho ácido libre producido mediante dicha desprotección.
[0468] En la presente divulgación, “grupo protector de amino” incluye todos los grupos que se utilizan como grupos protectores de amino en general, tales como un grupo aril alquilo C<1-6>, un grupo alcoxi C<1-6>alquilo C<1-6>, un grupo alcoxicarbonilo C<1-6>, un grupo ariloxicarbonilo, un grupo alquilsulfonilo C<1-6>, un grupo arilsulfonilo, un grupo sililo, etc. Un grupo protector de amino es preferiblemente un grupo t-butoxicarbonilo (Boc), un grupo pmetoxibenciloxicarbonilo (Moz) o un grupo 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc). El reactivo utilizado para la eliminación de grupos protectores de amino se selecciona del grupo que consiste en TFA, H<2>O, LiOH, NaOH, KOH, MeOH, EtOH y combinaciones de los mismos, preferiblemente la combinación de TFA y H<2>O, la combinación de LiOH y MeOH o la combinación de LiOH y EtOH. El reactivo utilizado para la eliminación del grupo protector Boc es TFA o HCl/EA, preferiblemente TFA. El reactivo utilizado para la eliminación del grupo protector Fmoc es la solución de piperidina al 20 % en N,N-dimetilformamida (DMF).
[0469] En la presente divulgación, dichos grupos hidroxilo protegidos por grupos protectores de hidroxilo no están particularmente limitados, por ejemplo, grupos hidroxilo alcohólicos, grupos hidroxilo fenólicos y similares. Dichos grupos amino protegidos por grupos protectores de amino no están particularmente limitados, tales como los de aminas primarias, aminas secundarias, hidrazinas y amidas. Los grupos amino en la presente divulgación no están particularmente limitados, que incluyen, pero no se limitan a, grupos amino primarios, grupos amino secundarios, grupos amino terciarios e iones de amonio cuaternario.
[0470] En la presente divulgación, la desprotección de grupos hidroxilo está relacionada con los tipos de grupos protectores de hidroxilo. Dichos tipos de grupos protectores de hidroxilo no están particularmente limitados; por ejemplo, se pueden utilizar grupos bencilo, éter de sililo, acetal, cetal o grupos tert-butilo para proteger grupos hidroxilo terminales y los métodos de desprotección correspondientes incluyen los siguientes:
[0471] A: Eliminación de grupos bencilo
[0472] La eliminación de grupos bencilo se puede lograr mediante hidrogenación utilizando un catalizador de reducción hidrogenativa y un donante de hidrógeno. Como se utiliza en el presente documento, el contenido de agua debe ser menor del 1 % para facilitar la reacción.
[0473] El catalizador de reducción hidrogenativa no está particularmente limitado, preferiblemente paladio o níquel. El portador del catalizador no está particularmente limitado, preferiblemente alúmina o carbono y más preferiblemente carbono. La cantidad de paladio es de 1 a 100 % en peso de la de compuestos que contienen grupos hidroxilo protegidos, preferiblemente de 1 a 20 % en peso.
[0474] El solvente de reacción no está particularmente limitado, siempre que permita que los reactivos y los productos se disuelvan. Los solventes preferibles incluyen metanol, etanol, acetato de etilo, tetrahidrofurano y ácido acético, en el que el metanol es más preferible. El donante de hidrógeno no está particularmente limitado, preferiblemente gas hidrógeno, ciclohexeno, 2-propanol, formiato de amonio o similares. La temperatura de reacción es preferiblemente de 25 a 40 °C. El tiempo de reacción no está particularmente limitado, que está correlacionado negativamente con la cantidad de catalizador utilizada y es preferiblemente de 1 a 5 horas. B: Desprotección de acetales o cetales
[0475] Los compuestos utilizados para proteger grupos hidroxilo en forma de acetales o cetales son preferiblemente éter de etil vinilo, tetrahidropirano, acetona, 2,2-dimetoxipropano, benzaldehído o similares, mientras que la desprotección de dichos acetales o cetales se debe llevar a cabo bajo condiciones ácidas y el pH de la solución es preferiblemente de 0 a 4. El ácido no está particularmente limitado, pero es preferiblemente ácido acético, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido clorhídrico o ácido nítrico y más preferiblemente ácido clorhídrico. El solvente de reacción no está particularmente limitado siempre que permita la disolución de los reactivos y los productos, preferiblemente agua. La temperatura de reacción es preferiblemente de 0 a 30 °C.
[0476] C: Desprotección de éteres de sililo
[0477] Los grupos hidroxilo protegidos en forma de éteres de sililo incluyen grupos de éter de trimetilsililo, éter de trietilsililo, éter de tert-butildimetilsililo, éter de tert-butildifenilsililo y similares. La desprotección de dichos éteres de sililo utiliza compuestos que contienen iones fluoruro, en los que dicho compuesto es preferiblemente fluoruro de tetrabutilamonio, fluoruro de tetraetilamonio, ácido fluorhídrico o fluoruro de potasio y más preferiblemente fluoruro de tetrabutilamonio o fluoruro de potasio. La cantidad del compuesto que contiene flúor es de 5 a 20 y preferiblemente de 8 a 15 equivalentes molares por equivalente molar del iniciador. Cuando la cantidad del compuesto que contiene flúor utilizada es menor de 5 equivalentes molares por equivalente molar de grupos hidroxilo protegidos, la desprotonación podría no ser completa. Cuando la cantidad de reactivo de desprotección utilizada excede los 20 equivalentes molares por equivalente molar del iniciador, el exceso de reactivo tiende a causar dificultad en el proceso de purificación y resultar en reacciones secundarias en etapas posteriores. El solvente de reacción no está particularmente limitado siempre que pueda disolver los reactivos y los productos, preferiblemente un solvente aprótico y más preferiblemente tetrahidrofurano o diclorometano. La temperatura de reacción es preferiblemente de 0 a 30 °C; cuando es inferior a 0 °C, la tasa de reacción es relativamente lenta y el grupo protector no se puede eliminar por completo.
[0478] D: Eliminación de grupos t-butilo
[0479] La eliminación de grupos tert-butilo se lleva a cabo bajo condiciones ácidas y el pH de la solución es preferiblemente de 0 a 4. El ácido no está particularmente limitado, pero es preferiblemente ácido acético, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido clorhídrico o ácido nítrico y más preferiblemente ácido clorhídrico. El solvente de reacción no está particularmente limitado siempre que pueda disolver los reactivos y los productos, preferiblemente agua. La temperatura de reacción es preferiblemente de 0 a 30 °C.
[0480] Con respecto a los métodos para la funcionalización de extremo, se prefiere que q sea 0, q<1>sea 1 y Z<1>sea un grupo 1,2-metileno. Cuando q no es 0 y un grupo de ligamiento (por ejemplo, grupo aminoácido, grupo succinilo, etc.) está presente entre A y R<01>, se puede utilizar la técnica anterior capaz de generar Z<2>o Z<1>, que incluye, pero no se limita a, alquilación, condensación, reacciones de clic, etc. y llevarse a cabo con referencia a los siguientes métodos de funcionalización lineal.
[0481] 2.5.3. Reacción de alquilación
[0482] En la presente divulgación, las reacciones de alquilación son preferiblemente aquellas basadas en grupos hidroxilo, grupos mercapto o grupos amino, correspondientes a la formación de enlaces éter, enlaces tioéter y grupos amino secundarios o terciarios, respectivamente. Los ejemplos específicos son los siguientes:
[0483] 2.5.3.1. Reacción de alquilación de alcoholes sustrato con sulfonatos o haluros
[0484] El intermedio de amina se puede obtener mediante la sustitución nucleófila del alcohol sustrato con un sulfonato o haluro bajo condiciones básicas. En el que, la cantidad del sulfonato o haluro es de 1 a 50 y preferiblemente de 1 a 5 equivalentes molares por equivalente molar del alcohol sustrato. Cuando la cantidad del sulfonato o haluro es menor de 1 equivalente molar por equivalente molar del alcohol sustrato, la sustitución puede no ser completa, causando dificultad en el proceso de purificación. Cuando la cantidad del sulfonato o haluro excede los 50 equivalentes molares por equivalente molar del alcohol sustrato, el exceso de sulfonato o haluro tiende a causar dificultad en el proceso de purificación y resultar en reacciones secundarias en las etapas posteriores. El producto resultante es una mezcla de intermedio de éter y exceso de sulfonato o haluro y se puede purificar mediante un medio de purificación tal como resina de intercambio aniónico, tratamiento de ósmosis, tratamiento de ultrafiltración y similares. En el que, la resina de intercambio aniónico no está particularmente limitada siempre que el producto objetivo se pueda someter a intercambio iónico y adsorberse en la resina, preferiblemente la resina de intercambio iónico de una amina terciaria o sal de amonio cuaternario basada en dextrano, agarosa, poliacrilato, poliestireno, poli(difeniletileno) o similares. Los solventes utilizados para el tratamiento de ósmosis y el tratamiento de ultrafiltración no están limitados, generalmente son agua o un solvente orgánico. Dicho solvente orgánico no está particularmente limitado siempre que el producto se pueda disolver en él mismo, preferiblemente diclorometano, cloroformo o similares.
[0485] El solvente de reacción no está limitado, preferiblemente es un solvente aprótico tal como tolueno, benceno, xileno, acetonitrilo, acetato de etilo, tetrahidrofurano, cloroformo, diclorometano, dimetilsulfóxido, dimetilformamida y dimetilacetamida y más preferiblemente dimetilformamida, diclorometano, dimetilsulfóxido o tetrahidrofurano.
[0486] La base puede ser una base orgánica tal como trietilamina, piridina, 4-dimetilaminopiridina, imidazol y diisopropiletilamina, o una base inorgánica tal como carbonato de sodio, hidróxido de sodio, bicarbonato de sodio, acetato de sodio, carbonato de potasio e hidróxido de potasio, preferiblemente una base orgánica y más preferiblemente trietilamina o piridina. La cantidad de la base es de 1 a 50 y preferiblemente de 1 a 10 y más preferiblemente de 3 a 5 equivalentes molares por equivalente molar del sulfonato o haluro.
[0487] 2.5.3.2. Reacción de alquilación de aminas sustrato con sulfonatos o haluros
[0488] A. Reacción de alquilación de aminas sustrato con sulfonatos o haluros
[0489] El intermedio de amina se puede obtener mediante la sustitución nucleófila de la amina sustrato con un sulfonato o haluro bajo condiciones básicas. En el que, la cantidad del sulfonato o haluro es de 1 a 50 y preferiblemente de 1 a 5 equivalentes molares por equivalente molar de la amina sustrato. Cuando la cantidad del sulfonato o haluro es menor de 1 equivalente molar por equivalente molar de la amina sustrato, la sustitución puede no ser completa, causando dificultad en el proceso de purificación. Cuando la cantidad del sulfonato o haluro excede los 50 equivalentes molares por equivalente molar de la amina sustrato, el exceso de sulfonato o haluro tiende a causar dificultad en el proceso de purificación y resultar en reacciones secundarias en las etapas posteriores.
[0490] El producto resultante es una mezcla de intermedio de amina y exceso de sulfonato o haluro, y se puede purificar mediante un medio de purificación tal como resina de intercambio aniónico, tratamiento de ósmosis, tratamiento de ultrafiltración y similares. En el que, la resina de intercambio aniónico no está particularmente limitada siempre que el producto objetivo se pueda someter a intercambio iónico y adsorberse en la resina, preferiblemente la resina de intercambio iónico de una amina terciaria o sal de amonio cuaternario basada en dextrano, agarosa, poliacrilato, poliestireno, poli(difeniletileno) o similares. Los solventes utilizados para el tratamiento de ósmosis y el tratamiento de ultrafiltración no están limitados, generalmente son agua o un solvente orgánico. Dicho solvente orgánico no está particularmente limitado siempre que el producto se pueda disolver en él mismo, preferiblemente diclorometano, cloroformo o similares.
[0491] El solvente de reacción no está limitado, preferiblemente es un solvente aprótico tal como tolueno, benceno, xileno, acetonitrilo, acetato de etilo, tetrahidrofurano, cloroformo, diclorometano, dimetilsulfóxido, dimetilformamida y dimetilacetamida y más preferiblemente dimetilformamida, diclorometano, dimetilsulfóxido o tetrahidrofurano.
[0492] La base puede ser una base orgánica tal como trietilamina, piridina, 4-dimetilaminopiridina, imidazol y diisopropiletilamina o una base inorgánica tal como carbonato de sodio, hidróxido de sodio, bicarbonato de sodio, acetato de sodio, carbonato de potasio e hidróxido de potasio, preferiblemente una base orgánica y más preferiblemente trietilamina o piridina. La cantidad de la base es de 1 a 50 y preferiblemente de 1 a 10 y más preferiblemente de 3 a 5 equivalentes molares por equivalente molar del sulfonato o haluro.
[0493] 2.5.3.3. Reacción de alquilación de aminas sustrato con derivados de aldehído
[0494] La amina sustrato reacciona con un derivado de aldehído para obtener un intermedio de imina, seguido de la obtención de un intermedio mediante reactivos reductores. En el que, la cantidad del derivado de aldehído es de 1 a 20 y preferiblemente de 1 a 2 y más preferiblemente de 1 a 1.5 equivalentes molares por equivalente molar de la amina sustrato. Cuando la cantidad de aldehído excede los 20 equivalentes molares por equivalente molar de la amina sustrato, el exceso de reactivo tiende a causar dificultad en el proceso de purificación y resultar en reacciones secundarias en las etapas posteriores. Cuando la cantidad de aldehído es menor de 1 equivalente molar por equivalente molar de la amina sustrato, la sustitución puede no ser completa, causando que el proceso de purificación sea difícil. En el que, el producto resultante se puede obtener después de la purificación mediante medios tales como resina de intercambio catiónico, tratamiento de ósmosis, tratamiento de ultrafiltración y similares. Dicha resina de intercambio catiónico no está particularmente limitada siempre que se pueda someter a intercambio iónico con cationes de amonio cuaternario y realizar el aislamiento. Los solventes utilizados para el tratamiento de ósmosis y el tratamiento de ultrafiltración no están limitados, generalmente son agua o un solvente orgánico. Dicho solvente orgánico no está particularmente limitado siempre que el producto se pueda disolver en él mismo, preferiblemente diclorometano, cloroformo o similares. El solvente de reacción no está limitado, preferiblemente es un solvente orgánico tal como metanol, etanol, agua, tolueno, benceno, xileno, acetonitrilo, acetato de etilo, tetrahidrofurano, cloroformo, diclorometano, dimetilsulfóxido, dimetilformamida, dimetilacetamida y similares y más preferiblemente agua o metanol. El reactivo reductor no está particularmente limitado siempre que la imina se pueda reducir a una amina, preferiblemente borohidruro de sodio, hidruro de litio y aluminio, cianoborohidruro de sodio, Zn/AcOH o similares y más preferiblemente cianoborohidruro de sodio. La cantidad molar del reactivo reductor es generalmente de 0.5 a 50 veces y preferiblemente de 1 a 10 veces la de los derivados de aldehído.
[0495] 2.5.3. La funcionalización de extremo lineal
[0496] El método para la funcionalización de extremo lineal (es decir, funcionalización lineal del grupo terminal) no está particularmente limitado, pero está relacionado con el tipo de grupo funcional final o su forma protegida. El método incluye principalmente la funcionalización del grupo hidroxilo terminal y la conversión de un grupo reactivo en el grupo funcional objetivo o su forma protegida.
[0497] El método para la funcionalización del grupo hidroxilo terminal se describe en el presente documento, que consiste en convertir el grupo hidroxilo terminal de A en un grupo de las clases A~J mediante funcionalización de extremo. Un método de preparación específico se describe en los párrafos [0960] a [1205] del documento CN104530417A. La fórmula general de la reacción es la siguiente:
[0499]
[0502] en la que, las definiciones de q, Z<2>, q<1>, Z<1>y R<01>son las mismas que las definidas anteriormente.
[0503] La conversión de grupos reactivos en los grupos funcionales objetivo o formas protegidas de los mismos se puede lograr mediante cualquiera de los siguientes enfoques:
[0504] Enfoque 1: modificación directa. El grupo funcional objetivo o su forma protegida se puede obtener mediante modificación directa de un grupo reactivo. Dicha modificación directa incluye, por ejemplo, la conversión de un grupo carboxilo a un grupo haluro de acilo, un grupo hidrazida, un grupo éster, un grupo tioéster o un grupo ditioéster, la conversión de un grupo hidroxilo, un grupo mercapto, un grupo alquinilo, un grupo amino, un grupo carboxilo o similares a la forma protegida correspondiente y la modificación de un grupo hidroxilo, un grupo amino o similares con un anhídrido.
[0505] Enfoque 2: reacción de acoplamiento entre dos grupos reactivos. Dicha reacción de acoplamiento utiliza un reactivo heterofuncional que contiene tanto un grupo reactivo como el grupo funcional objetivo o su forma protegida como material, siendo dicho grupo reactivo capaz de reaccionar con el grupo terminal de A para introducir el grupo funcional objetivo o su forma protegida. Los modos y métodos para la reacción entre dos grupos reactivos no están particularmente limitados, en los que las condiciones de reacción están relacionadas con los tipos de grupos de ligamiento divalentes formados mediante la reacción. Se puede utilizar la técnica anterior disponible, como la reacción de alquilación, la reacción de adición de alquenos, la reacción de adición de alquinos, la combinación de la reacción de Schiff-base y la reacción de reducción, la reacción de condensación y similares, en el presente documento. En los que, la reacción de alquilación se basa preferiblemente en un grupo mercapto o un grupo amino, correspondiente a la formación de un enlace tioéter y un grupo amino secundario o terciario, respectivamente. En los que, la reacción de condensación incluye, pero no se limita a, aquellas que forman un enlace éster, un enlace tioéster, un enlace amida, un enlace imina (-C=N-), un enlace hidrazona, un enlace carbamato o similares. El grupo funcional objetivo o su forma protegida también se puede introducir mediante reacciones de clic utilizando materiales tales como un reactivo heterofuncional que contiene tanto el grupo funcional objetivo o su forma protegida como un grupo reactivo seleccionado del grupo que consiste en un grupo azido, un grupo alquinilo, un grupo alquenilo, un grupo tritioéster, un grupo mercapto, un grupo dienilo, un grupo furilo, un grupo 1,2,4,5-tetrazinilo, un grupo cianato y similares. La reacción entre dos grupos reactivos está acompañada de la formación de nuevos enlaces. Los representantes típicos de los grupos de ligamiento divalentes recién formados incluyen enlace amida, enlace uretano, enlace éster, enlace amino secundario, enlace tioéter, grupo triazol y similares.
[0506] Enfoque 3: combinación de modificación directa y reacción de acoplamiento; en el que, el grupo funcional objetivo o su forma protegida se puede obtener mediante dicha combinación.
[0507] En la presente invención, los materiales en cada método de preparación se pueden sintetizar o comprar. Los intermedios y productos finales preparados en la presente invención se pueden purificar mediante el método de purificación que incluye, pero no se limita a, extracción, recristalización, tratamiento de adsorción, precipitación, precipitación inversa, diálisis de membrana, extracción supercrítica y similares. La caracterización de la estructura y el peso molecular de los productos finales puede utilizar métodos que incluyen, pero no se limitan a, RMN, electroforesis, espectrofotómetro UV-visible, FTIR, AFM, GPC, HPLC, MALDI-TOF, espectroscopía de dicroísmo circular y similares.
[0508] 3.1. El liposoma catiónico
[0509] En la presente invención, se proporciona en el presente documento un liposoma catiónico que contiene un lípido catiónico como se describe en la invención. Se divulga adicionalmente en el presente documento, pero no forma parte de la invención reivindicada, un liposoma catiónico que contiene cualquier lípido catiónico anterior cuya estructura está representada por la fórmula general (1).
[0510] En una realización, el liposoma catiónico contiene no solo el lípido catiónico cuya estructura está representada por la fórmula general (1), sino también uno o más lípidos seleccionados del grupo que consiste en lípidos neutros, lípidos esteroides y lípidos PEGilados, preferiblemente contiene lípidos neutros, lípidos esteroides y lípidos PEGilados simultáneamente. Dicho lípido neutro es preferiblemente un fosfolípido.
[0511] En una realización específica de la presente invención, los lípidos neutros en los liposomas catiónicos incluyen preferiblemente, pero no se limitan a, 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3-fosfocolinas (DLPC), 1,2-dimiristoleoil-snglicero-3-fosfocolinas (DMPC), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolinas (DOPC), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolinas (DPPC), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas (DSPC), 1,2-diundecanoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas (DUPC), 1-plamitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolinas (POPC), 1,2-di-O-octadecenil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas (18:0 Diéter PC), 1-oleoil-2-colesterilhemisuccinil-sn-glicero-3-fosfocolinas (OChemsPC), 1-O-hexadecil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas (C16 Lyso PC), 1,2-dilinolenoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas, 1,2-diarachidonoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas, 1,2-didocosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfoetanolaminas (DOPE), 1,2-diftanoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas (ME 16.0 PE), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-dilinolenoil-snglicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-diarachidonoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-didocosahexaenoil-snglicero-3-fosfoetanolaminas, sales de sodio de 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-(1-glicerol) (DOPG), dioleoil fosfatidilserinas (DOPS), dipalmitoil fosfatidilgliceroles (DPPG), palmitoil oleoilfosfatidiletanolaminas (POPE), diestearoil fosfatidiletanolaminas (DSPE), dipalmitoil fosfatidiletanolaminas (DPPE), dimiristoleoil fosfoetanolaminas (DMPE), 1-estearoil-2-oleoil-estearoiletanolaminas (SOPE), 1-estearoil-2-oleoilfosfatidilcolinas (SOPC), esfingomielinas, fosfatidilcolinas, fosfatidiletanolaminas, fosfatidilserinas, fosfatidilinositoles, ácidos fosfatídicos, palmitoiloleoil fosfatidilcolinas, lisofosfatidilcolinas, lisofosfatidiletanolaminas (LPE) y combinaciones de las mismas.
[0512] En una realización específica de la presente invención, los lípidos esteroides en los liposomas catiónicos son preferiblemente colesteroles, coprostanoles, sitosteroles, ergosteroles, campesteroles, estigmasteroles, brassicasterol tomatidinas, ácidos ursólicos, α-tocoferoles o cualquier mezcla de los mismos.
[0513] En una realización específica de la presente invención, los lípidos PEG en los liposomas catiónicos son preferiblemente 1,2-dimiristoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol (PEG-DMG), 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[amino(polietilenglicol)] (PEG-DSPE), PEG-colesterol, PEG-diacilglicamida (PEG-DAG), PEG-dialquiloxipropilo (PEG-DAA), PEG500-dipalmitoilfosfatidilcolina, PEG2000-dipalmitoilfosfatidilcolina, PEG500-estearilfosfatidiletanolamina, PEG2000-diestearilfosfatidiletanolamina, PEG500-1,2-dioleoilfosfatidiletanolamina, PEG2000-1,2-dioleoilfosfatidiletanolamina o PEG2000-2,3-diestearoilglicerol. En una realización específica de la presente invención, los lípidos PEGilados en los liposomas catiónicos están representados preferiblemente por la fórmula general (2):
[0516]
[0518] o sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos; en la que, L<7>y L<8>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo de ligamiento divalente, dicho grupo de ligamiento divalente se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>-y -NR<c>C(=O)S-; en el que, R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>;
[0519] L<3>se selecciona del grupo que consiste en un enlace de ligamiento, -L<4>-, -Z-L<4>-, -L<4>-Z-, -Z-L<4>-Z-, -L<4>-Z-L<5>-, -Z-L<4>-Z-L<5>- y -L<4>-Z-L<5>-Z-; dichos L<4>y L<5>son grupos de ligamiento de cadena carbonada y están cada uno independientemente representados por -(CR<a>R<b>)<t>-(CR<a>R<b>)<o>-(CR<a>R<b>)<p>-, en el que t, o y p son cada uno independientemente un número entero de 0 a 12, no son simultáneamente 0, y en el que R<a>y R<b>son, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>; dicho Z, en cada ocurrencia, se selecciona independientemente del grupo que consiste en -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>-
[0521]
en el que R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno
[0522] o un grupo alquilo C<1-12>;
[0523] B<3>y B<4>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo alquileno C<1-12>;
[0524] R<1>y R<2>son cada uno independientemente un grupo alifático C<1-30>;
[0525] R se selecciona del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo, un grupo alcoxi, -C(=O)R<d>,
[0527] -C(=O)OR<d>, -OC(=O)R<d>-, -OC(=O)OR<d>y
en el que, R<d>es un grupo alquilo C<1-12>, G<1>es un grupo de ramificación terminal con valencia de k+1, en el que j es 0 o 1 y en el que F contiene los grupos funcionales; cuando j es 0, G<1>está ausente; cuando j es 1, G<1>protruye F con el número de k, en el que k es un número entero de 2 a 8;
[0528] A es -(CR<a>R<b>)<s>O- u -O(CR<a>R<b>)<s>-; en el que, s es 2, 3 o 4; R<a>y R<b>son cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>;
[0529] n<1>es un número entero de 20 a 250;
[0530] dicho grupo alquilo, grupo alquileno, grupo alcoxi y grupo alifático son cada uno independientemente sustituidos o no sustituidos.
[0531] En una realización específica de la presente invención, los lípidos PEGilados en los liposomas catiónicos se seleccionan de las siguientes estructuras:
[0533]
[0534]
[0536] En una realización específica de la presente invención, se prefiere que cualquier liposoma catiónico anterior contenga del 20 %-80 % de los lípidos catiónicos representados por la fórmula general (1), del 5 %-15 % de lípidos neutros, del 25 %-55 % de lípidos esteroides y del 0.5 %-10 % de lípidos PEGilados, dicho porcentaje es el porcentaje molar de cada tipo de lípido con respecto al total de lípidos en una solución que contiene un solvente.
[0537] En una realización específica de la presente invención, se prefiere que, en cualquier liposoma catiónico anterior, el porcentaje molar de lípidos catiónicos con respecto al total de lípidos en una solución que contiene un solvente sea del 30 % al 65 %, preferiblemente aproximadamente 35 %, 40 %, 45 %, 46 %, 47 %, 48 %, 49 %, 50 % o 55 %.
[0538] En una realización específica de la presente invención, se prefiere que, en cualquier liposoma catiónico anterior, el porcentaje molar de lípidos neutros con respecto al total de lípidos en una solución que contiene un solvente sea del 7.5 % al 13 %, preferiblemente aproximadamente 8 %, 9 %, 10 %, 11 % o 12 %.
[0539] En una realización específica de la presente invención, se prefiere que, en cualquier liposoma catiónico anterior, el porcentaje molar de lípidos esteroides con respecto al total de lípidos en una solución que contiene un solvente sea del 35 % al 50 %, preferiblemente aproximadamente 40 %, 41 %, 42 %, 43 %, 44 %, 45 %, 46 %, 47 %, 48 %, 49 % o 50 %.
[0540] En una realización específica de la presente invención, se prefiere que, en cualquier liposoma catiónico anterior, el porcentaje molar de lípidos pegilados con respecto al total de lípidos en una solución que contiene un solvente sea del 0.5 % al 5 %, preferiblemente del 1 % al 3 % y más preferiblemente aproximadamente 1.5 %, 1.6 %, 1.7 %, 1.8 % o 1.9 %.
[0541] 3.2. Preparación de liposomas catiónicos
[0542] En la presente invención, los liposomas catiónicos se pueden preparar mediante métodos que incluyen, pero no se limitan a, el método de dispersión de película delgada, método de dispersión ultrasónica, método de evaporación en fase inversa, método de liofilización, método de congelación-descongelación, método de doble emulsión, método de inyección y combinaciones de los mismos, preferiblemente por el método de dispersión de película delgada, método de dispersión ultrasónica, método de evaporación en fase inversa o una combinación de los mismos.
[0543] Entre los métodos de preparación para liposomas catiónicos en la presente invención, dicho método de dispersión de película delgada podría incluir las siguientes etapas:
[0544] Etapa (1): pesar lípidos catiónicos, lípidos esteroides, lípidos neutros y lípidos PEGilados, disolverlos completamente en solventes orgánicos, agitarlos bien, eliminar los solventes orgánicos mediante evaporación rotativa al vacío para obtener una película oleosa y secar adicionalmente con una bomba de vacío para eliminar los solventes orgánicos;
[0545] Etapa (2): agregar tampón fosfato con crioprotector disuelto y utilizar ultrasonidos en baño de agua para obtener una emulsión translúcida;
[0546] Etapa (3): agregar la emulsión a un homogeneizador de alta presión para sobretratamiento y luego agregar la emulsión homogeneizada sobretratada al extrusor de liposomas para el paso por membrana con el fin de obtener liposomas catiónicos;
[0547] Etapa (4): opcionalmente, secar dichos liposomas catiónicos en un liofilizador para obtener un polvo de liposoma catiónico;
[0548] en el que, dicho solvente orgánico es preferiblemente diclorometano, cloroformo, metanol o una combinación de los mismos, más preferiblemente cloroformo, metanol o la combinación de los mismos; en el que, la tasa de rotación de la evaporación rotativa al vacío es preferiblemente de 30 a 300 rpm, más preferiblemente de 50 a 200 rpm y aún más preferiblemente de 100 a 170 rpm; y en el que, la temperatura de la evaporación rotativa al vacío es preferiblemente de 10 a 200 °C, más preferiblemente de 20 a 200 °C y aún más preferiblemente de 40 a 80 °C;
[0549] el tiempo de dicho secado con una bomba de vacío es preferiblemente de 1 a 72 h, más preferiblemente de 5 a 48 h y aún más preferiblemente de 15 a 36 h;
[0550] la concentración másica de dicho crioprotector disuelto en tampón fosfato es preferiblemente de 0.1 a 80 %, preferiblemente de 1 a 50 % y más preferiblemente de 5 a 20 %;
[0551] la frecuencia de dicha ultrasonicación en baño de agua es preferiblemente de 10 a 300 kHz, más preferiblemente de 30 a 200 kHz y aún más preferiblemente de 60 a 150 kHz;
[0552] el tiempo de dicha ultrasonicación en baño de agua es preferiblemente de 0.1 a 5 h, más preferiblemente de 0.2 a 2 h y aún más preferiblemente de 0.25 a 1 h;
[0553] la presión de dicho homogeneizador de alta presión es preferiblemente de 50 a 240 MPa, más preferiblemente de 80 a 200 MPa y aún más preferiblemente de 100 a 150 MPa;
[0554] el número de veces de dicho sobretratamiento del homogeneizador de alta presión es preferiblemente cualquier número entero de 1 a 50, más preferiblemente cualquier número entero de 3 a 20 y aún más preferiblemente cualquier número entero de 5 a 10;
[0555] la presión de dicho extrusor de liposomas es preferiblemente de 50 a 300 MPa, más preferiblemente de 80 a 250 MPa y aún más preferiblemente de 120 a 200 MPa;
[0556] el número de veces de dicho paso por membrana del extrusor de liposomas es preferiblemente cualquier número entero de 1 a 50, más preferiblemente cualquier número entero de 3 a 30 y aún más preferiblemente cualquier número entero de 5 a 20;
[0557] el tiempo de dicho secado en un liofilizador es preferiblemente de 1 a 120 h, más preferiblemente de 5 a 72 h y aún más preferiblemente de 10 a 36 h.
[0558] En los métodos de preparación para liposomas catiónicos en la presente invención, la relación de liposoma catiónico a tampón fosfato con crioprotector disuelto podría ser de 1 mg: (0.1~100) mL, preferiblemente de 1 mg: (0.3~50) mL y más preferiblemente de 1 mg: (0.5~5) mL.
[0559] 4.1. Composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico
[0560] En una realización, la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico contiene un liposoma catiónico de acuerdo con la invención y fármacos de ácido nucleico, en la que el liposoma catiónico contiene un lípido catiónico de acuerdo con la invención. Se divulga adicionalmente en el presente documento, pero no forma parte de la invención reivindicada, cualquier liposoma catiónico anterior y fármacos de ácido nucleico, en la que el liposoma catiónico contiene cualquier lípido catiónico anterior cuya estructura está representada por la fórmula general (1).
[0561] En una realización específica de la presente invención y con respecto a la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico, dicho fármaco de ácido nucleico se selecciona del grupo que consiste en ARN, ADN, ácido nucleico antisentido, plásmido, ARNm (ARN mensajero), ácido nucleico de interferencia, aptámero, inhibidor de ARNmi (antagomir), microARN (ARNmi), ribozima y ARN de interferencia pequeña (ARNip), se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en ARN, ARNmi y ARNip.
[0562] En una realización específica de la presente invención, la composición farmacéutica de liposoma catiónicoácido nucleico se utiliza preferiblemente como un fármaco seleccionado del grupo que consiste en fármacos para tratar cualquier enfermedad de cáncer, tumor maligno, enfermedades hepáticas, hepatitis, diabetes, gota, reumatismo, artritis reumatoide, demencia senil y enfermedades cardiovasculares, fármacos antialérgicos, agentes antiinfecciosos, agentes antibióticos, agentes antivíricos, agentes antifúngicos, vacunas, depresores del sistema nervioso central, estimulantes del sistema nervioso central, fármacos psicotrópicos, fármacos respiratorios, fármacos del sistema nervioso periférico, fármacos que actúan en uniones sinápticas o uniones neuroefectoras, fármacos activos del músculo liso, agentes histaminérgicos, agentes antihistamínicos, fármacos para la sangre y el sistema hematopoyético, fármacos gastrointestinales, agentes esteroides, agentes citostáticos, antihelmínticos, antipalúdicos, agentes antiprotozoarios, agentes antimicrobianos, agentes antiinflamatorios, inmunosupresores, fármacos o compuestos para el Alzheimer, agentes de formación de imagen, antídotos, antiespasmódicos, relajantes musculares, fármacos antiinflamatorios, supresores del apetito, fármacos para la migraña, inotropos, antipalúdicos, agentes antieméticos/agentes antieméticos, broncodilatadores, fármacos antitrombóticos, fármacos antihipertensivos, fármacos antiarrítmicos, antioxidantes, antiasmáticos, diuréticos, moduladores de lípidos, antiandrógenos, antiparasitarios, anticoagulantes, antineoplásicos, fármacos hipoglucémicos, agentes nutricionales, aditivos, suplementos de crecimiento, agentes antienteritis, vacunas, anticuerpos, reactivos de diagnóstico, agentes de contraste, hipnóticos, sedantes, psicoestimulantes, tranquilizantes, fármacos antiparkinsonianos, analgésicos, fármacos ansiolíticos, fármacos para infecciones musculares y fármacos para enfermedades auditivas; más preferiblemente utilizado como un fármaco para tratar hemofilia, fibrosis quística, hipercolesterolemia familiar, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de esófago, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, cáncer de nasofaringe, tumor cerebral, cáncer de cuello uterino, cáncer de sangre, cáncer de hueso, SIDA o infección vírica.
[0563] En la presente invención, se prefiere adicionalmente que dichos fármacos incluyan, pero no se limiten a, doxorrubicina, mitoxantrona, camptotecina, cisplatino, bleomicina, ciclofosfamida, estreptozotocina, actinomicina D, vincristina, vinblastina, citosina arabinósido, antraciclina, mostaza nitrogenada, tiotepa, clorambucilo, raquelmicina, melfalán, carmustina, lomustina, busulfán, dibromomanitol, mitomicina C, dicloruro de cis-diamminoplatino(II), metotrexato, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, citosina arabinósido, dacarbazina de 5-fluorouracilo, dibucaína, clorpromazina, propranolol, demorol, labetalol, clonidina, hidralazina, imipramina, amitriptilina, doxepina, fenitoína, difenhidramina, clorfeniramina, prometazina, gentamicina, ciprofloxacina, cefoxitina, miconazol, terconazol, econazol, isoconazol, butoconazol, clotrimazol, itraconazol, nistatina, naftifina, anfotericina B, agentes antiparasitarios, hormonas, antagonistas hormonales, inmunomoduladores, antagonistas de neurotransmisores, fármacos para el glaucoma, vitaminas, tranquilizantes, agentes de formación de imagen, taxol, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, mitomicina, etopósido, tenipósido, colchicina, daunorrubicina, quinizarina, mitramicina, 1-dihidrotestosterona, glucocorticoide, procaína, tetracaína, lidocaína, puromicina y maitansinoide.
[0564] En una realización específica de la presente invención, la relación N/P de dichos liposomas catiónicos a dichos ácidos nucleicos es preferiblemente (0.1~100):1, más preferiblemente (0.2~30):1 y aún más preferiblemente (0.5~20):1.
[0565] En una realización específica de la presente invención, la solución de trabajo de la formulación de la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico es preferiblemente agua desionizada, agua ultrapura, tampón fosfato o solución salina fisiológica, más preferiblemente tampón fosfato o solución salina fisiológica y aún más preferiblemente solución salina fisiológica; la relación de liposomas catiónicos a solución de trabajo es preferiblemente (0.05~20) g:100 mL, más preferiblemente (0.1~10) g:100 mL y aún más preferiblemente (0.2~5) g:100 mL.
[0566] 5. Formulación de la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico
[0567] En la presente invención, la formulación de la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico contiene cualquier composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico anterior y diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables, dicho diluyente o excipiente es preferiblemente agua desionizada, agua ultrapura, tampón fosfato o solución salina fisiológica, más preferiblemente tampón fosfato o solución salina fisiológica y aún más preferiblemente solución salina fisiológica.
[0568] En la presente invención, la formulación de la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico podría incluir las siguientes etapas:
[0569] Etapa (1): equilibrar dichos liposomas catiónicos en el diluyente o excipiente;
[0570] Etapa (2): agregar fármacos de ácido nucleico a la mezcla de los liposomas catiónicos equilibrados y el diluyente o excipiente, para la complejación;
[0571] en el que, el tiempo de equilibrio es de 0.1 a 12 h, preferiblemente de 0.2 a 6 h y más preferiblemente de 0.5 a 3 h; en el que, el tiempo de complejación es de 0.1 a 12 h, preferiblemente de 0.2 a 5 h y más preferiblemente de 0.5 a 2 h.
[0572] Los siguientes ejemplos específicos son descripciones adicionales de los métodos de preparación de lípidos catiónicos, liposomas catiónicos y composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico, y de los ensayos de actividad biológica para las composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico; dichos ejemplos específicos se divulgan para ilustrar adicionalmente la invención, pero no se deben considerar como una limitación del alcance de la presente invención. En los que, en las realizaciones de preparación de lípidos catiónicos, las estructuras de los productos finales se caracterizan por RMN y el peso molecular se confirma por MALDI-TOF.
[0573] Ejemplo-1: Lípido catiónico (E1-1)
[0576]
[0578] E1-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0580]
[0581] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 782 Da.
[0582] El proceso de preparación es el siguiente:
[0583] Etapa a: En un matraz bajo protección de nitrógeno, se disolvió ácido 2-hexildecanoico (S1-1, 100.00 g, 390.6 mmol) en DCM anhidro (1 L). Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0~10 °C, se agregaron cuidadosamente 1,6-hexanodiol (S1-2, 92.19 g, 781.3 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP, 57.18 g, 468.7 mmol) y luego se agregó en lotes clorhidrato de 1-etil-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI, 82.56 g, 430.0 mmol), después de lo cual la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó la reacción. Después de reaccionar durante 16 h, S1-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC. La solución de reacción se lavó dos veces con una solución mixta de HCl 0.4 N/NaCl al 10 % (500 mL) y luego se lavó una vez con una solución salina saturada. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro y el producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración. El producto crudo se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el intermedio de molécula pequeña de derivado de alcohol S1-3 (79.02 g).
[0585] Etapa b: El producto de condensación anterior (S1-3, 50.02 g, 140.5 mmol) se disolvió en 500 mL de DCM. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron 2,2,6,6-tetrametilpiperidinoxi (Tempo, 11.00 mg) y una solución de KBr (20.06 g, 168.6 mmol) disuelta en 50 mL de agua y luego se agregó en forma de gotas una solución de NaClO (182.6 mmol), después de lo cual se continuó la reacción hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. La reacción se apagó con una solución de sulfito de sodio. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente, se extrajo dos veces con 500 mL de DCM, las fases orgánicas se combinaron, se secaron con MgSO<4>anhidro, se filtraron y concentraron para obtener el producto crudo. El producto crudo se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S1-4 (23.12 g).
[0586] Etapa c: El producto de oxidación anterior (S1-4, 20.00 g, 56.5 mmol) se disolvió en una solución mixta de 200 mL de THF y 20 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron 2-(2-aminoetoxi)etanol (S1-5, 2.82 g, 26.9 mmol) y ácido acético glacial (1.61 g, 26.9 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes triacetoxiborohidruro de sodio (NaBH(OAc)<3>, 17.49 g, 82.5 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción, luego la temperatura de la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 200 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron con MgSO<4>anhidro, se filtraron y concentraron para obtener el producto crudo. El producto crudo se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E1-1 (12.09 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E1-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.07 (t, 4H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.32 (m, 2H), 1.71-1.22 (m, 64H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E1-1 se determinó para ser 781.76 Da mediante MALDI-TOF.
[0589]
[0592] Ejemplo-2: Lípido catiónico (E2-1)
[0595]
[0596] E2-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0598]
[0599] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es -CH<3>. El peso molecular es de aproximadamente 796 Da.
[0600] El proceso de preparación es el siguiente:
[0601] El producto de oxidación (S1-4, 10.00 g, 28.2 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 100 mL de THF y 10 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron 1-(2-aminoetoxi)-2-metoxietano (S2-1, 1.61 g, 13.5 mmol) y ácido acético glacial (0.81 g, 13.5 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(9.86 g, 47.1 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción y luego la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 100 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron con MgSO<4>anhidro, se filtraron y concentraron para obtener el producto crudo. El producto crudo se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E2-1 (5.93 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E2-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.07 (t, 4H), 3.71(t, 2H), 3.63 (t, 4H), 3.30 (s, 3H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.32 (m, 2H), 1.70-1.22 (m, 64H), 0.89 (t, 12H). El peso molecular de E2-1 se determinó para ser 795.71 Da mediante MALDI-TOF.
[0604]
[0606] Ejemplo de Referencia-3: Lípido catiónico (E3-1)
[0609]
[0611] E3-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0613]
[0614] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>S-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 1 y R<3>es -CH<2>CH<2>OH. El peso molecular es de aproximadamente 782 Da.
[0615] El proceso de preparación es el siguiente:
[0616] El producto de oxidación (S1-4, 5.00 g, 14.1 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 50 mL de THF y 5 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron 2-(2-aminoetilmercapto)etanol (S3-1, 0.81 g, 6.7 mmol) y ácido acético glacial (0.40 g, 6.7 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(5.00 g, 23.6 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 50 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y luego se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E3-1 (2.64 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E3-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.06 (t, 4H), 3.70 (t, 2H), 2.75-2.45 (m, 10H), 2.32 (m, 2H), 1.70-1.22 (m, 64H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E3-1 se determinó para ser 782.37 Da mediante MALDI-TOF.
[0617]
[0619] Ejemplo-4: Lípido catiónico (E4-1)
[0622]
[0624] E4-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es -CH<2>CH<2>-, B<1>y B<2>son
[0626] ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
, A es -O(CR<a>R<b>)<s>-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es -OH. El peso molecular es de aproximadamente 826 Da.
[0627] El proceso de preparación es el siguiente:
[0628] El producto de oxidación (S1-4, 5.00 g, 14.1 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 50 mL de THF y 5 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron trietilenglicolamina (S4-1, 1.00 g, 6.7 mmol) y ácido acético glacial (0.40 g, 6.7 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(5.00 g, 23.6 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción y luego la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 50 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y luego se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E4-1 (3.15 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E4-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.08 (t, 4H), 3.81-3.58 (m, 10H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.32 (m, 2H), 1.70-1.23 (m, 64H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de E4-1 se determinó para ser 825.73 Da mediante MALDI-TOF.
[0631]
[0633] Ejemplo-5: Lípido catiónico (E5-1)
[0636]
[0637] E5-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es -CH<2>CH<2>O-, B<1>y B<2>
[0639] son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
, A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es -CH<2>CH<2>OH. El peso molecular es de aproximadamente 869 Da. El proceso de preparación es el siguiente:
[0640] El producto de oxidación (S1-4, 5.00 g, 14.1 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 50 mL de THF y 5 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron tetraetilenglicolamina (S5-1, 1.29 g, 6.7 mmol) y ácido acético glacial (0.40 g, 6.7 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(5.00 g, 23.6 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción y luego la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 50 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y luego se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E5-1 (3.54 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E5-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.07 (t, 4H), 3.85-3.55 (m, 14H), 2.64 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.32 (m, 2H), 1.70-1.22 (m, 64H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E5-1 se determinó para ser 869.37 Da mediante MALDI-TOF.
[0643]
[0645] Ejemplo de Referencia-6: Lípido catiónico (E6-1)
[0648]
[0650] E6-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -O-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>
[0653]
[0654] y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 754 Da.
[0655] El proceso de preparación es el siguiente:
[0656] Etapa a: En un matraz bajo protección de nitrógeno, se disolvió 2-hexil-1-decanol (compuesto S6-1, 24.20 g, 100.0 mmol) en 250 mL de THF. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0~10 °C, se agregó cuidadosamente hidruro de sodio (6.00 g, 150.0 mmol, 60 %). Después de reaccionar durante 0.5 h, se agregó cuidadosamente (6-bromohexiloxi)-tert-butildimetilsilano (S6-2, 26.46 g, 90.0 mmol) y luego la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó durante 12 h. Cuando S6-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC, se agregaron 100 mL de agua para apagar la reacción y la solución de reacción se concentró para eliminar THF. El residuo de la concentración se extrajo dos veces con 100 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y luego se separó y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S6-3 (25.25 g).
[0657] Etapa b: En un matraz bajo protección de nitrógeno, el producto de sustitución (S6-3, 25.00 g, 54.8 mmol) se disolvió en 250 mL de THF, y se agregó una solución de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 110 mL, 1N en THF). Después de reaccionar durante 1 h, los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC y se agregaron 100 mL de agua para apagar la reacción. La solución de reacción se concentró para eliminar THF y el residuo se extrajo dos veces con 100 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S6-4 (16.33 g).
[0658] Etapa c: El producto de condensación (S6-4, 16.28 g, 47.6 mmol) se disolvió en 200 mL de DCM. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron Tempo (4.00 mg) y una solución de KBr (0.29 g, 2.4 mmol) disuelta en 20 mL de agua purificada, seguido de la adición lenta de una solución de NaClO (57.2 mmol). Luego, se continuó la reacción hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución de sulfito de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se extrajo dos veces con 200 mL de DCM después de volver a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S6-5 (12.94 g, 80 %).
[0659] Etapa d: El producto de oxidación (S6-5, 12.92 g, 38.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 150 mL de THF y 15 mL de metanol. Cuando la temperatura de la solución se enfrió a 0 °C, se agregaron S1-5 (1.90 g, 18.1 mmol) preparado de acuerdo con la etapa a del Ejemplo-1, así como ácido acético glacial (1.09 g, 18.1 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(13.44 g, 63.4 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 200 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO4 anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E6-1 (6.37 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E6-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 3.84 -3.55 (m, 14H), 2.65 (t, 2H), 2.48 (m, 4H), 1.82 -1.22 (m, 66H), 0.86 (t, 12H). El peso molecular de E6-1 se determinó para ser 753.96 Da mediante MALDI-TOF.
[0662]
[0664] Ejemplo de Referencia-7: Lípido catiónico (E7-2)
[0667]
[0669] E7-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0671] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es
El peso molecular es de aproximadamente 854 Da.
[0672] El proceso de preparación es el siguiente:
[0673] Etapa a: En un matraz bajo protección de nitrógeno, se disolvió ácido 2-hexiloctanoico (S7-1, 100.00 g, 438.6 mmol) en DCM anhidro (1 L). Cuando la temperatura de la solución se enfrió a 0~10 °C, se agregaron cuidadosamente S1-2 (92.19 g, 781.3 mmol) preparado de acuerdo con la etapa a del Ejemplo-1 y DMAP (57.18 g, 468.7 mmol) y luego se agregó EDCI (82.56 g, 430.0 mmol) en lotes. Luego, la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó la reacción durante 16 h. Cuando S7-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC, la solución de reacción se lavó dos veces con una solución mixta de HCl 0.4 N/NaCl al 10 % (500 mL) y luego se lavó una vez con una solución salina saturada. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S7-2 (84.90 g).
[0674] Etapa b: El producto de condensación (S7-2, 50.00 g, 152.4 mmol) se disolvió en 500 mL de DCM. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron Tempo (11.00 mg) y una solución de KBr (20.06 g, 168.6 mmol) disuelta en 50 mL de agua purificada y luego se agregó lentamente una solución de NaClO (182.6 mmol). Luego, se continuó la reacción hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución de sulfito de sodio para apagar la reacción, después de lo cual la solución de reacción se extrajo dos veces con 500 mL de DCM después de volver a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S7-3 (23.05 g).
[0675] Etapa c: El producto de oxidación (S7-3, 20.00 g, 61.3 mmol) se disolvió en una solución mixta de 200 mL de THF y 20 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S7-4 (21.73 g, 32.1 mmol, obtenido por el acoplamiento de lisina protegida con bis-Fmoc con S1-5 preparado de acuerdo con la etapa c del Ejemplo-1) y ácido acético glacial (1.61 g, 26.9 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(17.49 g, 82.5 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo de la concentración se extrajo dos veces con 200 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E7-1 que contiene dos grupos amino protegidos con Fmoc (24.00 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E7-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ 7.20- 7.80 (m, 16H), 4.37-4.45 (d, 4H), 4.42 (m, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.20 (m, 2H), 4.07 (t, 4H), 3.63 (t, 4H), 2.69 (m, 2H), 2.66 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.32 (m, 2H), 1.76-2.00 (m, 2H), 1.72-1.22 (m, 56H), 1.24-1.66 (m, 4H), 0.86 (t, 12H).
[0676] Etapa d: Eliminación del grupo protector Fmoc. E7-1 (10.00 g, 7.7 mmol) se trató con una solución de piperidina al 20 % en DMF. El solvente se eliminó por evaporación rotativa y luego el residuo se disolvió en diclorometano, se precipitó con éter anhidro, se filtró y se recristalizó con isopropanol para obtener el lípido catiónico E7-2 que contiene dos grupos amino libres (6.45 g, 98.1 %). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E7-2 fueron los siguientes: 4.36 (t, 1H). Los picos característicos de Fmoc desaparecieron del espectro de RMN-<1>H. El peso molecular de E7-2 se determinó como 853.85 Da mediante MALDI-TOF.
[0677]
[0679] Ejemplo de Referencia-8: Lípido catiónico (E8-1)
[0682]
[0684] E8-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es -CH<2>CH<2>-, B<1>y B<2>son
[0686] ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -S(CR<a>R<b>)<s>-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es -OH. El peso molecular es de aproximadamente 718 Da.
[0687] El proceso de preparación es el siguiente:
[0688] Etapa a: En un matraz bajo protección de nitrógeno, se disolvió ácido 2-hexilnonanoico (S8-1, 100.00 g, 537.6 mmol) en DCM anhidro (1 L). Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0~10 °C, se agregaron cuidadosamente S1-2 (92.19 g, 781.3 mmol) preparado de acuerdo con la etapa a del Ejemplo-1 y DMAP (57.18 g, 468.7 mmol) y luego se agregó EDCI (82.56 g, 430.0 mmol) en lotes. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó durante 16 h. Cuando S8-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC, la solución de reacción se lavó dos veces con una solución mixta de HCl 0.4 N/NaCl al 10 % (500 mL) y luego se lavó una vez con una solución salina saturada. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S8-2 (87.35 g).
[0689] Etapa b: El producto de condensación S8-2 (50.00 g, 174.8 mmol) se disolvió en 500 mL de DCM. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron Tempo (11.00 mg) y una solución de KBr (20.06 g, 168.6 mmol) disuelta en 50 mL de agua purificada y luego se agregó lentamente una solución de NaClO (182.6 mmol). Luego, se continuó la reacción hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución de sulfito de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se extrajo dos veces con 500 mL de DCM después de volver a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S8-3 (24.78 g).
[0690] Etapa c: El producto de oxidación (S8-3, 20.00 g, 70.4 mmol) se disolvió en una solución mixta de 200 mL de THF y 20 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron (S8-4, 6.41 g, 35.4 mmol) y ácido acético glacial (1.61 g, 26.9 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(17.49 g, 82.5 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 200 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E8-1 (11.79 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E8-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.07 (t, 4H), 3.70 (t, 2H), 2.81 (m, 4H), 2.75-2.45 (m, 10H), 2.32 (m, 2H), 1.72-1.22 (m, 44H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de ES-1 se determinó para ser 717.50 Da mediante MALDI-TOF.
[0693]
[0695] Ejemplo de Referencia-9: Lípido catiónico (E9-2)
[0698]
[0700] E9-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)O-, L<3>es -CH<2>CH<2>NHC(=O)-
[0703]
[0704] , B<1>y B<2>son ambos -CH<2>CH<2>-, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 744 Da.
[0705] El proceso de preparación es el siguiente:
[0706] Etapa a: En un matraz redondo de 1000 mL seco y limpio, se disolvió carbonato de succinimidilo de N,N’-dietil-
[0708] 1,3-propanodiamina con un grupo amino protegido con Fmoc
(S9-2, 96.54 g, 233.2 mmol) en diclorometano. Se agregó DMAP (62.59 g, 513.0 mmol) y se agitó bien. Luego, se agregó 2-hexil-1-octanol S9-1 (100.0 g, 467.3 mmol) a la solución de reacción que se agitó durante otras 16 h. Cuando se completó la reacción, la solución de reacción se secó por evaporación rotativa, seguido de recristalización con isopropanol y purificación en columna de gel de sílice. Luego, se obtuvo un derivado de etilamina con un grupo amino protegido con Fmoc (S9-3, 127.86 g, 93.9 %).
[0709] Etapa b: Desprotección de S9-3 que contiene un grupo amino protegido con Fmoc. Se trató S9-3 (50.00 g, 85.6 mmol) con la solución de piperidina/DMF al 20 %, después de lo cual el solvente se eliminó por evaporación rotativa y luego el residuo se disolvió en diclorometano. Después de que la solución de reacción cruda se
[0711] enfriara a 0~10 °C, se agregaron
(S9-4, 13.00 g, 52.4 mmol) y TEA (7.80 g, 77.1 mmol) bajo protección de nitrógeno. Luego, la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente, y la reacción se continuó durante la noche. Cuando la TLC indicó que los materiales se consumieron completamente, se agregaron 100 mL de agua para apagar la reacción. La solución de reacción se extrajo dos veces con 100 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E9-1 (27.54 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E9-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.22 (m, 8H), 3.75 (t, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.59 (t, 2H), 3.14 (m, 2H), 2.65 (t, 2H), 2.60 (t, 2H), 2.51 (t, 4H), 2.32(m, 2H), 1.82-1.22 (m, 40H), 0.98 (m, 9H), 0.88 (t, 12H), 0.21 (m, 6H).
[0712] Etapa c: En un matraz bajo protección de nitrógeno, el producto de sustitución (E9-1, 20.00 g, 23.2 mmol) se disolvió en 250 mL de THF y se agregó una solución de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 110 mL, 1N en THF). Después de reaccionar durante 1 h, los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC y luego se agregaron 100 mL de agua para apagar la reacción. La solución de reacción se concentró para eliminar THF y el residuo se extrajo dos veces con 100 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E9-2 (15.14 g, 87.7 %). El pico característico de TBS desapareció en el espectro de RMN-<1>H. El peso molecular de E9-2 se determinó como 744.52 Da mediante MALDI-TOF.
[0715]
[0717] Ejemplo de Referencia-10: Lípido catiónico (E10-1)
[0720]
[0722] E10-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C =O)O-, L<3>es un enlace de
[0724] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos heptileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y
[0726] R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es
El peso molecular es de aproximadamente 772 Da.
[0727] El proceso de preparación es el siguiente:
[0728] Etapa a: En un matraz bajo protección de nitrógeno, se disolvió ácido 2-pentilheptanoico (S10-1, 100.00 g, 499.5 mmol) en DCM anhidro (1 L). Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0~10 °C, se agregaron cuidadosamente 1.7-heptanodiol (S10-2, 132.00 g, 999.1 mmol) y DMAP (73.12 g, 599.4 mmol) y luego se agregó EDCI (105.48 g, 549.4 mmol) en lotes. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó la reacción. Después de reaccionar durante 16 h, S10-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC. La solución de reacción se lavó dos veces con una solución mixta de HCl 0.4 N/NaCl al 10 % (500 mL) y luego se lavó una vez con una solución salina saturada. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S10-3 (89.20 g).
[0729] Etapa b: El producto de condensación (S10-3, 50.00 g, 159.1 mmol) se disolvió en 500 mL de DCM. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron Tempo (12.40 mg) y una solución de KBr (22.72 g, 190.9 mmol) disuelta en 50 mL de agua purificada y luego se agregó lentamente una solución de NaClO (206.8 mmol). Luego, se continuó la reacción hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución de sulfito de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se extrajo dos veces con 500 mL de DCM después de volver a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S10-4 (25.90 g).
[0730] Etapa c: El producto de oxidación (S10-4, 20.00 g, 64.0 mmol) se disolvió en una solución mixta de 200 mL de THF y 20 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S10-
[0731] 5 (5.50 g, 30.7 mmol, obtenido por la reacción entre S10-5 y
) y ácido acético glacial (1.84 g, 30.7 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(19.80 g, 93.4 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 200 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E10-1 (13.30 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E10-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.13 (m, 4H), 3.65- 3.77 (m, 6H), 3.48 (d, 4H), 3.30 (m, 1H), 3.01(m,4H), 2.51 (t, 2H), 2.13 (m, 2H), 1.60-1.26 (m, 52H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E10-1 se determinó para ser 771.27 Da mediante MALDI-TOF.
[0734]
[0736] Ejemplo de Referencia-11: Lípido catiónico (E11-2)
[0739]
[0740] E11-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es -CH<2>CH<2>O-, B<1>y B<2>
[0742] son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos
[0743] átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es
El peso molecular es de aproximadamente 869 Da. El proceso de preparación es el siguiente:
[0744] Etapa a: El producto de oxidación (S1-4, 10.00 g, 28.2 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 100 mL de THF y 10 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S11-1 (3.11 g, 13.5 mmol) y ácido acético glacial (0.81 g, 13.5 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(10.00 g, 47.1 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 100 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E11-1 que contiene un grupo amino protegido con Boc (6.31 g).
[0747]
[0749] Etapa b: Eliminación del grupo protector Boc. En un matraz redondo de 500 mL seco y limpio, se preparó una solución de ácido trifluoroacético/diclorometano (1:2, v/v). La solución de E11-1 (5.00 g, 5.1 mmol) en diclorometano se agregó lentamente en forma de gotas en un baño de hielo. La reacción se continuó durante 2 h a temperatura ambiente. La solución de reacción se concentró, seguido de la adición de agua purificada y luego se extrajo con diclorometano. El extracto se secó con MgSO<4>anhidro, se filtró y se concentró. El lípido catiónico que contiene un grupo amino libre (E11-2, 4.00 g, 90.3 %) se obtuvo después de recristalización. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E11-2 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ 4.05 (m, 4H), 3.71-3.57 (m, 10H), 3.49 (t, 2H), 3.01(m,4H), 2.85 (t, 2H), 2.51(t, 2H), 2.13 (m, 2H), 1.60-1.25 (m, 64H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de E11-2 se determinó para ser 868.70 Da mediante MALDI-TOF.
[0750] Ejemplo de Referencia-12: Lípido catiónico (E12-1)
[0753]
[0755] E12-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tridecilo, R<2>es un grupo tetradecilo, B<1>y B<2>son ambos enlaces de ligamiento, L<1>es un grupo carbonilo (-C(=O)-), L<2>y L<3>son ambos enlaces de ligamiento, A es -CH<2>CH<2>O-, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 512 Da.
[0756] El proceso de preparación es el siguiente:
[0757] Etapa a: En un matraz de reacción bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo y luego se agregaron secuencialmente S12-2 (2.66 g, 9.6 mmol), S12-1 (1.75 g, 8.0 mmol) y DIPEA (1.03 g, 8.0 mmol) con agitación lenta, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h. La reacción se completó cuando el material S12-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Luego, la solución de reacción se concentró, se disolvió en diclorometano y se extrajo con una solución mixta de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio en secuencia. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El derivado de amina secundaria S12-3 (2.58 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación adicional mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
[0758] Etapa b: S12-3 (2.15 g, 5.0 mmol), S12-4 (1.95 g, 6.0 mmol) y TEA (0.76 g, 7.5 mmol) se disolvieron en diclorometano (30 mL) y la reacción se agitó durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se disolvió en 30 mL de agua y se extrajo dos veces con EtOAc (30 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se agregó cloruro de sodio, seguido de extracción dos veces con diclorometano (30 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se concentraron para obtener el producto crudo. Bajo protección de nitrógeno, se agregaron 15 mL de tetrahidrofurano y 15 mL de solución de TBAF en tetrahidrofurano (1 M) al producto crudo. Después de reaccionar durante la noche, se eliminó el grupo protector TBS y luego la solución de reacción se secó con sulfato de sodio anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener el lípido catiónico E12-1 (1.64 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E12-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ 3.83-3.45 (m, 6H), 3.35 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.23 (t, 2H), 1.56-1.46 (m, 4H), 1.26-1.19 (m, 42H), 0.86 (t, 6H). El peso molecular de E12-1 se determinó para ser 511.64 Da mediante MALDI-TOF.
[0761]
[0763] Ejemplo de Referencia-13: Lípido catiónico (E13-2)
[0766]
[0768] E13-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tridecilo, R<2>es un grupo tetradecilo, B<1>y B<2>son ambos enlaces de ligamiento, L<1>es un grupo carbonilo, L<2>y L<3>son ambos enlaces de ligamiento, A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es -CH<2>CHO. El peso molecular es de aproximadamente 554 Da.
[0769] El proceso de preparación es el siguiente:
[0770] Etapa a: S13-1 (6.67 g, 30.0 mmol) y tolueno (120 mL) se sometieron a eliminación azeotrópica de agua a 140 °C. Después de destilar 40 mL de solvente, la temperatura de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se agregaron TEA (6.07 g, 60.0 mmol) y MsCl (6.19 g, 54.0 mmol) y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después de completar la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (120 mL) y se extrajo dos veces con EtOAc (60 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (60 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron, se filtraron, se concentraron y se disolvieron en isopropanol a 50 °C. Después de recristalización en un baño de hielo y filtración, se obtuvo el compuesto S13-2 (8.11 g, 90 %).
[0771] Etapa b: El compuesto S13-2 (6.00 g, 20.0 mmol) se disolvió en 120 mL de agua con agitación a temperatura ambiente. Se agregaron carbonato de potasio (27.60 g, 200.0 mmol), compuesto S12-3 (21.3 g, 100.0 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio (27.60 g, 200.0 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. Al completarse la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con diclorometano (120 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (120 mL). La fase orgánica se retuvo, se secó con sulfato de sodio anhidro y se filtró. El filtrado se concentró para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo S13-3 (5.60 g).
[0772] Etapa c: El compuesto S13-3 (5.01 g, 12.0 mmol), S12-4 (4.68 g, 14.4 mmol) y TEA (1.82 g, 18.0 mmol) se disolvieron en diclorometano (50 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución de reacción se concentró y se disolvió en 50 mL de agua, y se extrajo adicionalmente dos veces con diclorometano (50 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (50 mL) y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo E13-1 se obtuvo después de filtración y concentración, seguido de desprotección del grupo acetal. Después de purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se obtuvo el lípido catiónico E13-2 (5.26 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ 9.87 (s, 1H), 4.17 (s, 2H), 3.83-3.45 (m, 6H), 3.35 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.23 (t, 2H), 1.56-1.46 (m, 4H), 1.26-1.19 (m, 42H), 0.86 (t, 6H). El peso molecular de E13-1 se determinó para ser 553.54 Da mediante MALDI-TOF.
[0775]
[0777] Ejemplo de Referencia-14: Lípido catiónico (E14-1)
[0780]
[0782] E14-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tridecilo, R<2>es un grupo tetradecilo, B<1>y B<2>son ambos enlaces de ligamiento, L<1>es un grupo carbonilo, L<2>y L<3>son ambos enlaces de ligamiento, A
[0784] es -(CR<a>R<b>)<s>O-, en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es
[0785] El peso molecular es de aproximadamente 620 Da.
[0786] El proceso de preparación es el siguiente:
[0787] Etapa a: S14-1 (10.70 g, 50.0 mmol) y tolueno (200 mL) se sometieron a eliminación azeotrópica de agua a 140 °C. Después de destilar 60 mL de solvente, la temperatura de reacción se enfrió a temperatura ambiente. Se agregaron TEA (10.12 g, 100.0 mmol) y MsCl (10.31 g, 90.0 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (200 mL) y se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron, se filtraron, se concentraron y se disolvieron en isopropanol a 50 °C. Después de recristalización en un baño de hielo y filtración, se obtuvo el compuesto S14-2 (12.96 g, 88.8 %).
[0788] Etapa b: S14-2 (9.34 g, 32.0 mmol) se disolvió con 100 mL de agua con agitación a temperatura ambiente. Se agregaron carbonato de potasio (44.16 g, 320.0 mmol), S12-3 (34.08 g, 160.0 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio (1.03 g, 3.2 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. Al completarse la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2) y las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL). La fase orgánica se retuvo, se secó con sulfato de sodio anhidro y se filtró. El filtrado se concentró para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo S14-3 (8.39 g, 64.1 %). Etapa c: S14-3 (7.65 g, 18.7 mmol), S12-4 (7.29 g, 22.4 mmol) y TEA (2.84 g, 28.1 mmol) se disolvieron en diclorometano (100 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución de reacción se concentró y se disolvió con 100 mL de agua, y se extrajo adicionalmente dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se agregó algo de cloruro de sodio, seguido de extracción dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y luego se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite. Se obtuvo así el lípido catiónico E14-1 (9.56 g, 82.6 %). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 3.83-3.45 (m, 8H), 3.35 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.62-2.42 (m, 4H), 2.34 (t,2H), 2.23 (t, 2H), 2.00 (s, 1H), 1.56-1.46 (m, 4H), 1.26-1.19 (m, 42H), 0.87 (t, 6H). El peso molecular de E14-1 se determinó para ser 619.15 Da mediante MALDI-TOF.
[0789]
[0791] Ejemplo de Referencia-15: Lípido catiónico (E15-2)
[0794]
[0796] E15-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tetradecilo, R<2>es un grupo tridecilo, B<1>y B<2>son ambos enlaces de ligamiento, L<1>es un enlace de ligamiento, L<2>es un grupo carbonilo, L<3>es un enlace de ligamiento, A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es -C(=O)CH<2>CH<2>COOH. El peso molecular es de aproximadamente 612 Da.
[0797] El proceso de preparación es el siguiente:
[0798] Etapa a: El compuesto S15-1 (13.11 g, 50.0 mmol) y tolueno (250 mL) se sometieron a eliminación azeotrópica de agua a 140 °C. Después de destilar 80 mL de solvente, la temperatura de reacción se enfrió a temperatura ambiente. Se agregaron TEA (10.12 g, 100.0 mmol) y MsCl (10.31 g, 90.0 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (200 mL) y se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (150 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron, se filtraron, se concentraron y se disolvieron con isopropanol a 50 °C. Después de recristalización en un baño de hielo y filtración, se obtuvo el compuesto S15-2 (14.96 g, 87.9 %).
[0799] Etapa b: S15-2 (8.85 g, 26.0 mmol) se disolvió con 100 mL de agua con agitación a temperatura ambiente. Se agregaron carbonato de potasio (35.88 g, 260.0 mmol), compuesto S12-3 (27.69 g, 130.0 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio (0.84 g, 2.6 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 h. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con diclorometano (200 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 mL). La fase orgánica se retuvo, se secó con sulfato de sodio anhidro y se filtró. El filtrado se concentró para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo S15-3 (7.89 g). Etapa c: S15-3 (7.32 g, 16.0 mmol), S12-4 (6.24 g, 19.2 mmol) y TEA (2.43 g, 24.0 mmol) se disolvieron en diclorometano (100 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución de reacción se concentró, se disolvió con 100 mL de agua y se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se agregó cloruro de sodio, seguido de extracción dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL). Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el lípido catiónico E15-1 (8.94 g, 83.6 %).
[0800] Etapa d: Eliminación del grupo protector tBu. En un matraz redondo de 500 mL seco y limpio, se preparó una solución de ácido trifluoroacético/diclorometano (1:2, v/v). Se agregó en forma de gotas una solución de E15-1 (8.95 g, 13.4 mmol) en diclorometano a la solución anterior en un baño de hielo, y la reacción se continuó durante 2 h a temperatura ambiente. Al completarse la reacción, la solución de reacción se concentró, seguido de la adición de agua purificada y extracción con diclorometano. El extracto se secó con MgSO<4>anhidro, se filtró y luego se concentró. El lípido catiónico E15-2 (7.38 g, 92.1 %) se obtuvo después de recristalización. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ 4.17 (t, 2H), 3.71-3.60 (m, 4H), 3.35 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.70-2.47 (m, 4H), 2.23 (t, 2H), 1.56-1.46 (m, 4H), 1.26-1.19 (m, 42H), 0.87 (t, 6H). El peso molecular de E15-2 se determinó para ser 611.51 Da mediante MALDI-TOF.
[0801]
[0803] Ejemplo-16: Lípido catiónico (E16-2, E16-4)
[0804] Ejemplo-16.1: Lípido catiónico (E16-2)
[0807]
[0810] E16-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tridecilo, R<2>es
B<1>es un enlace de ligamiento, B<2>es un grupo hexileno, L<1>es un grupo carbonilo, L<2>es -C(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 668 Da.
[0811] El proceso de preparación es el siguiente:
[0812] Etapa a: En un matraz bajo protección de nitrógeno, se disolvió ácido 2-heptildecanoico (S16-1, 10.00 g, 37.0 mmol) en DCM anhidro (100 mL). Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0~10 °C, se agregaron cuidadosamente 1,6-hexanodiol (S1-2, 8.73 g, 74.0 mmol) y DMAP (78.14 g, 407.0 mmol) y luego se agregó EDCI (78.14 g, 407.0 mmol) en lotes. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó la reacción. Después de 16 h de reacción, S16-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC. La solución de reacción se lavó dos veces con 500 mL de solución mixta de HCl 0.4 N/NaCl al 10 % y luego se lavó una vez con una solución salina saturada. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S16-2 (8.10 g).
[0813] Etapa b: El producto de condensación (S16-2, 8.00 g, 21.6 mmol) se disolvió en 80 mL de DCM. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron Tempo (1.20 mg) y una solución de KBr (3.08 g, 25.9 mmol) disuelta en 50 mL de agua purificada y luego se agregó lentamente una solución de NaClO (17.5 mmol). Luego, se continuó la reacción hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Luego, se agregó una solución de sulfito de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se extrajo dos veces con 50 mL de DCM después de volver a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S16-3 (3.98 g).
[0814] Etapa c: El producto de oxidación S16-3 (3.98 g, 10.8 mmol) se disolvió en una solución mixta de 50 mL de THF y 5 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron el derivado de amina S12-1 (2.58 g, 9.8 mmol) y ácido acético glacial (0.58 g, 9.8 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(6.23 g, 29.4 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 200 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S16-4 (3.45 g).
[0815] Etapa d: S16-4 (3.45 g, 5.6 mmol), S16-5 (1.66 g, 6.7 mmol) y TEA (0.85 g, 8.4 mmol) se disolvieron en diclorometano (100 mL) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución de reacción se concentró, se disolvió con 100 mL de agua y se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se agregó algo de cloruro de sodio, seguido de extracción dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución de NaCl (100 mL) y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el lípido catiónico E16-1 que contiene un grupo hidroxilo protegido con TBS (3.91 g, 84.5 %).
[0817] Etapa e: En un matraz bajo protección de nitrógeno, E16-1 (3.91 g, 4.7 mmol) se disolvió en 50 mL de THF, seguido de la adición de una solución de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 50 mL, 1N en THF). La reacción se continuó durante la noche para eliminar el grupo protector TBS. Luego, la solución de reacción se extrajo, se concentró y se secó con MgSO<4>anhidro. El lípido catiónico E16-2 (2.92 g, 87.5 %) se obtuvo después de filtración, concentración y recristalización. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 4.08 (t, 2H), 3.75-3.43 (m, 6H), 3.35 (t, 2H), 3.15 (t, 2H), 2.26-2.25 (m, 3H), 1.60-1.46 (m, 10H), 1.32-1.25 (m, 46H), 0.88 (t, 9H). El peso molecular de E16-2 se determinó para ser 667.64 Da mediante MALDI-TOF.
[0820]
[0823] Ejemplo-16.2: Lípido catiónico (E16-4)
[0826]
[0829] E16-4 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tridecilo, R<2>es
B<1>es un enlace de ligamiento, B<2>es un grupo hexileno, L<1>es un grupo carbonilo, L<2>es -C(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 654 Da.
[0831] El material S16-3 utilizado en el Ejemplo-16.1 se reemplazó con S1-4
[0832] )y se realizó el mismo proceso de preparación de E16-2 para obtener el lípido catiónico E16-4. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 4.08 (t, 2H), 3.75-3.43 (m, 6H), 3.35 (t, 2H), 3.15 (t, 2H), 2.26-2.25 (m, 3H), 1.60-1.46 (m, 10H), 1.32-1.25 (m, 44H), 0.88 (t, 9H). El peso molecular de E16-4 se determinó para ser 653.72 Da mediante MALDI-TOF.
[0833]
[0835] Ejemplo-17: Lípido catiónico (E17-2, E17-4)
[0836] Ejemplo-17.1: Lípido catiónico (E17-2)
[0839]
[0842] E17-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tetradecilo, R<2>es
[0843] B<1>es un enlace de ligamiento, B<2>es un grupo hexileno, L<1>es un enlace de ligamiento, L<2>es -C(=O)O-, L<3>es -CH<2>CH<2>-, A es -O(CR<a>R<b>)<s>-, en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un grupo hidroxilo. El peso molecular es de aproximadamente 698 Da.
[0844] El proceso de preparación es el siguiente:
[0845] Etapa a: S16-5 (3.45 g, 5.6 mmol) se disolvió en THF anhidro (120 mL). Se agregó lentamente NaH (60 %, 2.24 g, 56.0 mmol) a la solución en un baño de hielo y la reacción se llevó a cabo durante 1 h en un baño de hielo. Luego, se agregó el compuesto S12-5 (1.85 g, 6.7 mmol) para continuar la reacción con agitación en un baño de hielo durante otra 1 h. Luego, la reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo y se agregó lentamente metanol para apagar la reacción. Después de agitar durante 30 minutos, se agregó agua (300 mL) y se mezcló con la solución. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (150 mL * 2) y la fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E17-1 (3.44 g, 75.8 %).
[0846] Etapa b: En un matraz bajo protección de nitrógeno, E17-1 (3.44 g, 4.2 mmol) se disolvió en 50 mL de THF, seguido de la adición de una solución de fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 50 mL, 1N en THF). La reacción se llevó a cabo durante la noche para eliminar el grupo protector TBS. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo, se concentró y se secó con MgSO<4>anhidro. El lípido catiónico E17-2 (2.57 g, 87.0 %) se obtuvo después de filtración, concentración y recristalización. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 4.09 (t, 2H), 3.73-3.48 (m, 10H), 2.51 (t, 4H), 2.26-2.25 (m, 3H), 1.56-1.46 (m, 10H), 1.32-1.25 (m, 48H), 0.87 (t, 9H). El peso molecular de E17-2 se determinó para ser 697.51 Da mediante MALDI-TOF.
[0849]
[0850] Ejemplo-17.2: Lípido catiónico (E17-4)
[0853]
[0856]
[0857] E17-4 corresponde a la fórmula general (1), en la que, R<1>es un grupo tetradecilo, R<2>es
[0858] B<1>es un enlace de ligamiento, B<2>es un grupo hexileno, L<1>es un enlace de ligamiento, L<2>es -C(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, A es –(CR<a>R<b>)<s>O-, en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 654 Da.
[0859] El material S16-5 utilizado en el Ejemplo-17.1 se reemplazó con S16-6 (Ejemplo-16.2) y se realizó el mismo proceso de preparación de E17-2 para obtener el lípido catiónico E17-4.
[0860] Ejemplo de Referencia-18: Lípido catiónico (E18-1)
[0863]
[0865] E18-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0867] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, en
[0869] la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es
El peso molecular es de aproximadamente 956 Da.
[0870] El proceso de preparación es el siguiente:
[0871] Etapa a: El producto de oxidación S1-4 (8.85 g, 25.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 100 mL de THF y 10 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S18-1 (3.35 g, 12.0 mmol) y ácido acético glacial (0.72 g, 12.0 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(8.90 g, 42.0 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción, la solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con DCM (100 mL * 2) y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E18-1 (6.02 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E18-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 4.26 (s, 2H), 4.21 (t, 2H), 4.07 (t, 4H), 3.67 (t, 2H), 3.52 (t, 2H), 3.48 (t, 4H), 3.30 (d, 2H), 2.63 (t, 2H), 2.53 (t, 4H), 2.24 (m, 2H), 1.66-1.50 (m, 13H), 1.43-1.17 (m, 56H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E18-1 se determinó para ser 955.61 Da mediante MALDI-TOF.
[0872]
[0875] Ejemplo de Referencia-19: Lípido catiónico (E19-2)
[0878]
[0881] E19-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0883] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-
[0885] , en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es
El peso molecular es de aproximadamente 882 Da.
[0887] El proceso de preparación es el siguiente:
[0889] Etapa a: El producto de oxidación (S1-4, 8.85 g, 25.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 100 mL de THF y 10 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S19-1 (2.46 g, 12.0 mmol) y ácido acético glacial (0.72 g, 12.0 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(8.90 g, 42.0 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con DCM (100 mL * 2) y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E19-1 (5.48 g).
[0891] Etapa b: eliminación del grupo protector Boc. En un matraz redondo de 500 mL seco y limpio, se preparó una solución de ácido trifluoroacético/diclorometano (1:2, v/v) y se agregó en forma de gotas una solución de E19-1 (5.00 g, 5.1 mmol) en diclorometano en un baño de hielo. La reacción se llevó a cabo durante 2 h a temperatura ambiente, después de lo cual la solución de reacción se concentró, se agregó algo de agua purificada y se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se secó con MgSO<4>anhidro, se filtró y se concentró. El lípido catiónico E19-2 (4.13 g, 91.8 %) se obtuvo después de recristalización. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E19-2 fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 4.21 (t, 2H), 4.07 (t, 4H), 3.64 (t, 2H), 3.52 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 3.06 (t, 2H), 2.63 (t, 2H),2.52 (t, 4H), 2.24 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.66-1.50 (m, 12H), 1.45-1.17 (m, 52H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de E19-2 se determinó para ser 881.78 Da mediante MALDI-TOF.
[0892]
[0894] Ejemplo de Referencia-20: Lípido catiónico (E20-2)
[0897]
[0899] E20-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C =OO-, L<3>es un enlace de
[0901]
[0902] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O(CR<a>R<b>)<s>NR<c>-, en la que R<a>, R<b>y R<c>son todos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 1 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 781.21 Da.
[0903] El proceso de preparación es el siguiente:
[0904] Etapa a: El producto de oxidación (S1-4, 8.85 g, 25.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 100 mL de THF y 10 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S20-1 (2.45 g, 12.0 mmol) y ácido acético glacial (0.72 g, 12.0 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(8.90 g, 42.0 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con DCM (100 mL * 2) y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto E20-1 (5.82 g).
[0905] Etapa b: eliminación del grupo protector Boc. Se preparó una solución de ácido trifluoroacético/diclorometano (1:2, v/v) y se agregó en forma de gotas una solución de E20-1 (5.29 g, 6.0 mmol) en diclorometano en un baño de hielo. La reacción se llevó a cabo durante 2 h a temperatura ambiente. Luego, la solución de reacción se concentró, se agregó algo de agua purificada y se extrajo con diclorometano. El extracto se secó con MgSO<4>anhidro, se filtró y se concentró. El lípido catiónico E20-2 (4.45 g) que contiene un grupo amino libre se obtuvo después de recristalización. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E20-2 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.05 (m, 4H), 3.71-3.49 (m, 4H), 3.01(m,4H), 2.85 (t, 2H), 2.51(t, 2H), 2.13 (m, 2H), 1.60-1.25 (m, 64H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de E20-2 se determinó para ser 780.66 Da mediante MALDI-TOF.
[0908]
[0909] Ejemplo de Referencia-21: Lípido catiónico (E21-1)
[0912]
[0914] E21-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0916]
[0917] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-
[0919] , en la que R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es El peso molecular es de aproximadamente 933 Da.
[0920] El proceso de preparación es el siguiente:
[0921] Etapa a: El producto de oxidación (S1-4, 8.85 g, 25.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-1 se disolvió en una solución mixta de 100 mL de THF y 10 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S21-1 (3.06 g, 12.0 mmol) y ácido acético glacial (0.72 g, 12.0 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(8.90 g, 42.0 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con DCM (100 mL * 2) y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto E21-1 (5.65 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 6.49 (s, 2H), 4.25-4.10 (m, 6H), 3.62 (t, 2H), 3.52 (t, 2H), 3.15 (t, 1H), 2.63 (t, 2H),2.50 (t, 4H), 2.32 (t, 2H), 2.24 (m, 2H), 1.89 (m, 2H), 1.66-1.50 (m, 12H), 1.45-1.17 (m, 52H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de E21-1 se determinó para ser 932.79 Da mediante MALDI-TOF.
[0924]
[0926] Ejemplo-22: Lípido catiónico (E22-1)
[0929]
[0930] E22-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)-, L<3>es un enlace de
[0932]
[0933] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 781 Da.
[0934] El proceso de preparación es el siguiente:
[0935] Etapa a: En un matraz bajo protección de nitrógeno, se disolvió ácido 7-hidroxiheptanoico (S22-1, 14.60 g, 100.0 mmol) en DCM anhidro (200 mL). Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0~10 °C, se agregaron cuidadosamente 7-pentadecanol (S22-2, 45.60 g, 200.0 mmol) y DMAP (14.64 g, 120.0 mmol) y luego se agregó EDCI (21.12 g, 110.0 mmol) en lotes. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y se continuó la reacción. Después de 16 h de reacción, S22-1 se consumió completamente de acuerdo con TLC. La solución de reacción se lavó dos veces con 100 mL de solución mixta de HCl 0.4 N/NaCl al 10 % y luego se lavó una vez con una solución salina saturada. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el intermedio derivado de alcohol de molécula pequeña S22-3 (20.79 g).
[0936] Etapa b: El producto de condensación (S22-3, 20.00 g, 56.2 mmol) se disolvió en 200 mL de DCM. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron Tempo (3.00 mg) y una solución de KBr (8.02 g, 67.4 mmol) disuelta en 50 mL de agua purificada a la solución anterior y luego se agregó lentamente una solución de NaClO (73.1 mmol). Luego, se continuó la reacción hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC y se agregó una solución de sulfito de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se extrajo dos veces con 200 mL de DCM después de volver a temperatura ambiente. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto de oxidación S22-4 (9.59 g). Etapa c: El producto de oxidación (S22-4, 8.00 g, 22.6 mmol) se disolvió en una solución mixta de 100 mL de THF y 10 mL de metanol. Después de que la temperatura de la solución se enfriara a 0 °C, se agregaron S1-5 (1.19 g, 11.3 mmol) y ácido acético glacial (0.68 g, 11.3 mmol) y luego se agregó lentamente en lotes NaBH(OAc)<3>(7.19 g, 33.9 mmol). Después de la alimentación, se continuó la reacción durante 2 h hasta que los materiales se consumieron completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio para apagar la reacción. La solución de reacción se devolvió a temperatura ambiente y luego se concentró para eliminar THF y metanol. El residuo se extrajo dos veces con 100 mL de DCM y las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E22-1 (4.76 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E22-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.87 (m, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.30 (t, 4H), 1.71-1.22 (m, 64H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E22-1 se determinó para ser 781.42 Da mediante MALDI-TOF.
[0939]
[0941] Ejemplo-23: Lípido catiónico (E23-1)
[0944]
[0945] E23-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0947]
[0948] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 814 Da.
[0949] El proceso de preparación es el siguiente:
[0950] Etapa a: Bajo protección de nitrógeno, se disolvió carbonato de 6-bromohexil-4-nitrofenilo (S23-1, 4.48 g, 13.0 mmol, preparado mediante la reacción entre cloroformiato de 4-nitrofenilo y 6-bromo-1-hexanol) en DCM (100 mL) y se agregó en forma de gotas S22-2 (11.86 g, 52.0 mmol) con agitación a temperatura ambiente, seguido de la adición lenta en forma de gotas de piridina (1.28 mL, 16.25 mmol) en más de 10 minutos y luego se agregó DMAP (0.32 g, 2.6 mmol) en un lote. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo con agua purificada y DCM respectivamente. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con solución salina y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S23-2 (5.86 g).
[0951] Etapa b: Bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo (100 mL), S23-2 (5.56 g, 12.8 mmol), S1-5 (0.60 g, 5.8 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA, 1.50 g, 11.6 mmol) se agregaron sucesivamente con agitación lenta. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h. La reacción se continuó hasta que el material S1-5 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró, se disolvió con diclorometano y luego se extrajo con una solución de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio en secuencia. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El lípido catiónico E23-1 (3.67 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E23-1 fueron los siguientes: RMN<1>H(400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.21(t,4H), 4.12 (m, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.51 (m, 4H), 1.72-1.25 (m, 64H), 0.90 (t, 12H). El peso molecular de E23-1 se determinó para ser 813.84 Da mediante MALDI-TOF.
[0954]
[0956] Ejemplo-24: Lípido catiónico (E24-1)
[0959]
[0961] E24-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de
[0963] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos
R<1>y R<2>son ambos
[0965]
[0966] A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 814 Da.
[0967] El proceso de preparación es el siguiente:
[0968] Etapa a: Bajo protección de nitrógeno, se disolvió carbonato de 5-bromopentil-4-nitrofenilo (S24-1, 4.30 g, 13.0 mmol, preparado mediante la reacción entre cloroformiato de 4-nitrofenilo y 5-bromopentil-1-hexanol) en DCM (100 mL), se agregó en forma de gotas 2-hexil-1-decanol (S24-2, 12.58 g, 52.0 mmol) con agitación a temperatura ambiente, se agregó lentamente en forma de gotas piridina (1.28 mL, 16.25 mmol) en más de 10 min y luego se agregó DMAP (0.32 g, 2.6 mmol) en un lote. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con DCM. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con solución salina y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S24-3 (6.14 g).
[0969] Etapa b: Bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo (100 mL), S24-3 (5.56 g, 12.8 mmol), S1-5 (0.60 g, 5.8 mmol) y DIPEA (1.50 g, 11.6 mmol) se agregaron sucesivamente con agitación lenta. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h. La reacción se continuó hasta que el material S1-5 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró, se disolvió con diclorometano y luego se extrajo con una solución de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio sucesivamente. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El lípido catiónico E24-1 (3.58 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E24-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.26 (d, 4H), 4.20 (t, 4H), 3.71 (t, 2H), 3.64 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.50 (m, 4H), 2.08 (m, 2H), 1.72-1.18 (m, 60H), 0.89 (t, 12H). El peso molecular de E24-1 se determinó para ser 813.67 Da mediante MALDI-TOF.
[0972]
[0974] Ejemplo-25: Lípido catiónico (E25-1)
[0977]
[0979] E25-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es
[0981]
[0982] A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 786 Da.
[0983] El proceso de preparación es el siguiente:
[0984] Etapa a: Bajo protección de nitrógeno, S24-2 (10.59 g, 32.0 mmol) se disolvió en DCM (30 mL), se agregó en forma de gotas 1-undecanol (S25-1, 22.02 g, 128.0 mmol) con agitación a temperatura ambiente, se agregó lentamente en forma de gotas piridina (3.2 mL, 40.0 mmol) en más de 25 min y luego se agregó DMAP (0.78 g, 6.4 mmol) en un lote. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con DCM. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con solución salina y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el carbonato de 5-bromopentilundecilo (S25-2, 3.03 g).
[0985] Etapa b: Bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo (70 mL), S25-2 (3.51 g, 9.6 mmol), S1-5 (0.84 g, 8.0 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA, 1.03 g, 8.0 mmol) se agregaron sucesivamente con agitación lenta. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h. La reacción se continuó hasta que el material S1-5 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró, se disolvió con diclorometano y luego se extrajo con una solución de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio en secuencia. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El derivado de amina secundaria S25-3 (2.33 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
[0986] Etapa c: se disolvió S25-3 (2.33 g, 6.0 mmol) en THF anhidro (60 mL), se agregó lentamente NaH (60 %, 2.40 g, 60.0 mmol) en un baño de hielo, y la reacción se continuó durante 1 h en el baño de hielo. Se agregó S25-4 (3.43 g, 7.2 mmol, preparado mediante la reacción entre carbonato de 7-bromoheptil-4-nitrofenilo y 9-heptadecanol, cuyo proceso se puede referir al Ejemplo-22) y la reacción se devolvió a temperatura ambiente después de agitar en un baño de hielo durante 1 h y luego se continuó durante la noche. Luego, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 100 mL de agua y se mezclaron con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E25-1 (3.56 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E25-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.22 (t, 2H), 4.16 (t, 4H), 4.13 (m, 1H), 3.70 (t, 2H), 3.62 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.48 (m, 4H), 1.72-1.25 (m, 62H), 0.90 (t, 9H). El peso molecular de E25-1 se determinó para ser 785.66 Da mediante MALDI-TOF.
[0989]
[0991] Ejemplo-26: Lípido catiónico (E26-1)
[0994]
[0996] E26-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo hexileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es
[0998]
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>
[0999] es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 786 Da.
[1000] El proceso de preparación es el siguiente:
[1001] Etapa a: Bajo protección de nitrógeno, S23-1 (11.04 g, 32.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-23 se disolvió en DCM (200 mL), se agregó en forma de gotas S26-1 (34.56 g, 128.0 mmol) con agitación a temperatura ambiente, se agregó lentamente en forma de gotas piridina (3.2 mL, 16.3 mmol) en más de 25 minutos y luego se agregó DMAP (0.78 g, 6.4 mmol) en un lote. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con DCM. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con solución salina y se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se separó y purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el producto S26-2 (3.66 g).
[1002] Etapa b: S25-3 (2.33 g, 6.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-25 se disolvió en THF anhidro (60 mL), se agregó lentamente NaH (60 %, 2.40 g, 60.0 mmol) en un baño de hielo, y la reacción se continuó durante 1 h en el baño de hielo. Se agregó S26-2 (3.43 g, 7.2 mmol) y la reacción se agitó en un baño de hielo durante 1 h. Después de volver a temperatura ambiente, la reacción se continuó durante la noche. Luego, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo, se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 100 mL de agua y se mezclaron con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (150 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E26-1 (3.57 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E26-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.26 (d, 2H), 4.21(t, 2H), 4.16 (t, 4H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.07 (m, 1H), 1.72-1.18 (m, 60H), 0.90 (t, 9H). El peso molecular de E26-1 se determinó para ser 785.67 Da mediante MALDI-TOF.
[1005]
[1007] Ejemplo-27: Lípido catiónico (E27-1)
[1010]
[1012] E27-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>es -OC(=O)-, L<2>es -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es
[1014]
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un
[1015] átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 770 Da.
[1016] El proceso de preparación es el siguiente:
[1017] Etapa a: Bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo (100 mL), S25-4 (10.45 g, 21.88 mmol), S1-5 (1.84 g, 17.5 mmol) y DIPEA (2.20 g, 17.0 mmol) se agregaron en secuencia con agitación lenta, seguido de agitación a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h. La reacción se continuó hasta que el material S1-5 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró y se disolvió en diclorometano y luego se extrajo con una solución de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio en secuencia. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El derivado de amina secundaria S27-1 (7.54 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
[1018] Etapa b: S27-1 (5.68 g, 12.0 mmol) se disolvió en THF anhidro (60 mL), se agregó lentamente NaH (60 %, 4.80 g, 120.0 mmol) en un baño de hielo, y la reacción se continuó durante 1 h en el baño de hielo. Se agregó S27-2 (5.01 g, 14.4 mmol, preparado mediante la reacción entre ácido 8-bromooctanoico y 1-nonanol, cuyo proceso se puede referir al Ejemplo-16) y la reacción se agitó en un baño de hielo durante 1 h. Luego, la reacción se devolvió a temperatura ambiente antes de continuar durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo, y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 200 mL de agua para mezclar con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (200 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (200 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E27-1 (6.93 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E27-1 fueron los siguientes: RMN<1>H(400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.21(t,2H), 4.12 (m, 1H), 4.07 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.51(m,4H), 2.37 (t, 2H), 1.72-1.25 (m, 62H), 0.90 (t, 9H). El peso molecular de E27-1 se determinó para ser 769.69 Da mediante MALDI-TOF.
[1021]
[1024] Ejemplo-28: Lípido catiónico (E28-1)
[1027]
[1030] E28-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>es -C(=O)O-, L<2>es -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es
[1032]
[1033] A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 770 Da.
[1035] El proceso de preparación es el siguiente:
[1037] Etapa a: se disolvió S27-1 (5.68 g, 12.0 mmol) en THF anhidro (60 mL). En un baño de hielo, se agregó lentamente NaH (60 %, 4.80 g, 120.0 mmol) a la solución, después de lo cual se continuó la reacción durante 1 h. Luego, se agregó S28-1 (5.01 g, 14.4 mmol, preparado mediante la reacción entre ácido láurico y 5-bromo-1-pentanol, cuyo proceso se puede referir al Ejemplo-16) y la reacción se continuó durante otra 1 h con agitación en el baño de hielo. Después de volver a temperatura ambiente, la reacción se continuó durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo, y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de agitar durante 30 minutos, se agregaron 200 mL de agua y se mezclaron con agitación. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (200 mL * 2) y la fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (200 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (200 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E28-1 (6.87 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E28-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.20 (t, 2H), 4.12 (m, 1H), 4.08 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.64 (t, 2H), 2.50 (m, 4H), 2.37 (t, 2H), 1.72-1.25 (m, 62H), 0.88 (t, 9H). El peso molecular de E28-1 se determinó para ser 769.58 Da mediante MALDI-TOF.
[1040]
[1041] Ejemplo-29: Lípido catiónico (E29-1)
[1044]
[1046] E29-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>es -OC(=O)O-, L<2>es -OC(=O)-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es
[1048] A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 770 Da.
[1049] El proceso de preparación es el siguiente:
[1050] S25-3 (4.67 g, 12.0 mmol) se disolvió en THF anhidro (60 mL). Bajo baño de hielo, se agregó lentamente NaH (60 %, 4.80 g, 120.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 1 h. Luego, se agregó S29-1 (6.62 g, 14.4 mmol, preparado mediante la reacción entre ácido 8-bromooctanoico y 9-heptadecanol, cuyo proceso se puede referir al Ejemplo-16) y la reacción se agitó bajo baño de hielo durante otra 1 h antes de volver a temperatura ambiente y la reacción se continuó durante la noche. Luego, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo, y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 100 mL de agua para mezclar con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2) y la fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E29-1 (6.52 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E29-1 fueron los siguientes: RMN<1>H(400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.86 (m, 1H), 4.16 (t, 4H), 3.70 (t, 2H), 3.62 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.48 (m, 4H), 2.30 (t, 2H), 1.72-1.25 (m, 62H), 0.88 (t, 9H). El peso molecular de E29-1 se determinó para ser 769.47 Da mediante MALDI-TOF.
[1053]
[1055] Ejemplo-30: Lípido catiónico (E30-1)
[1058]
[1060] E30-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>es -OC(=O)O-, L<2>es -C(=O)O-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 770 Da.
[1061] El proceso de preparación es el siguiente:
[1062] Etapa a: S25-3 (4.67 g, 12.0 mmol) se disolvió en THF anhidro (60 mL). Bajo baño de hielo, se agregó lentamente NaH (60 %, 4.80 g, 120.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 1 h. Luego, se agregó S30-1 (6.62 g, 14.4 mmol, preparado mediante la reacción entre ácido 2-octildecanoico y 7-bromo-1-heptanol, cuyo proceso se puede referir al Ejemplo-16) y la reacción se agitó bajo baño de hielo durante otra 1 h antes de volver a temperatura ambiente y continuarse durante la noche. Luego, la solución de reacción se colocó nuevamente en un baño de hielo, y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 100 mL de agua para mezclar con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2) y la fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el lípido catiónico E30-1 (6.79 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E30-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ 4.16 (t, 4H), 4.08 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.62 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.48 (m, 4H), 2.25 (m, 1H), 1.72-1.25 (m, 62H), 0.88 (t, 9H). El peso molecular de E30-1 se determinó para ser 769.38 Da mediante MALDI-TOF.
[1065]
[1068] Ejemplo-31: Lípido catiónico (E31-1)
[1071]
[1074] E31-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>es -C(=O)O-, L<2>es -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de
[1076]
[1077] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 798 Da.
[1079] El proceso de preparación es el siguiente:
[1081] Etapa a: Bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo (50 mL), se agregaron en secuencia S23-2 (3.65 g, 8.38 mmol), S1-5 (0.70 g, 6.7 mmol) y DIPEA (0.87 g, 6.7 mmol) con agitación lenta, y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h con agitación. La reacción se continuó hasta que el material S1-5 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró y se disolvió en diclorometano y luego se extrajo con una solución de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio en secuencia. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El derivado de amina secundaria S31-1 (2.70 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice.
[1083] Etapa b: se disolvió S31-1 (2.75 g, 6.0 mmol) en THF anhidro (60 mL). Bajo baño de hielo, se agregó lentamente NaH (60 %, 2.40 g, 60.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 1 h. Luego, se agregó S31-2 (3.01 g, 7.2 mmol, preparado mediante la reacción entre 6-bromo-1-hexanol y ácido 2-hexildecanoico, cuyo proceso se puede referir al Ejemplo-16) y la reacción se agitó durante otra 1 h antes de volver a temperatura ambiente y la reacción se continuó durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 100 mL de agua para mezclar con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2) y la fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E31-1 (3.52 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E31-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.21 (t, 2H), 4.12 (m, 1H), 4.08 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.51(m,4H), 2.25 (m, 1H), 1.72-1.25 (m, 64H), 0.90 (t, 12H). El peso molecular de E31-1 se determinó para ser 797.72 Da mediante MALDI-TOF.
[1084]
[1086] Ejemplo-32: Lípido catiónico (E32-1)
[1089]
[1091] E32-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>es -OC(=O)-, L<2>es -OC(=O)O-, L<3>es un enlace de
[1093]
[1094] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 798 Da.
[1095] El proceso de preparación es el siguiente:
[1096] El compuesto S31-1 (2.75 g, 6.0 mmol) preparado de acuerdo con el Ejemplo-31 se disolvió en THF anhidro (60 mL). Bajo baño de hielo, se agregó lentamente NaH (60 %, 2.40 g, 60.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 1 h. Luego, se agregó S31-2 (3.01 g, 7.2 mmol, preparado mediante la reacción entre ácido 7-bromoheptanoico y 7-pentadecanol, cuyo proceso se puede referir al Ejemplo-16) y la reacción se agitó durante otra 1 h antes de volver a temperatura ambiente y continuarse durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se colocó nuevamente en un baño de hielo, y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 100 mL de agua para mezclar con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2) y la fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E32-1 (3.63 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E32-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.87 (m, 1H), 4.21 (t, 2H), 4.13 (m, 1H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 2.65 (t, 2H), 2.51 (m, 4H), 2.30 (t, 2H), 1.72-1.25 (m, 64H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de E32-1 se determinó para ser 797.72 Da mediante MALDI-TOF.
[1099]
[1101] Ejemplo-33: Lípido catiónico (E33-1)
[1104]
[1105] E33-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C =OO-, L<3>es un enlace de
[1106]
[1107] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos butileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 846 Da.
[1108] El proceso de preparación es el siguiente:
[1109] Etapa a: se disolvió 1,3-propanodiol (S33-1, 9.50 g, 50 mmol) que contiene un grupo hidroxilo protegido con TBS en 200 mL de diclorometano. Se agregó clorocromato de piridinio (PCC, 16.13 g, 75.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante al menos 2 h a 15 °C. Después de completar la reacción, la solución de reacción se filtró, se concentró bajo presión reducida y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener S33-2 (6.02 g).
[1110] Etapa b: se disolvieron el compuesto S33-2 (5.64 g, 30.0 mmol) y 1-octanol (S33-3, 9.75 g, 75.0 mmol) en 200 mL de diclorometano, seguido de la adición de ácido p-toluenosulfónico monohidrato (TsOH·H<2>O, 1.14 g, 6.0 mmol) y sulfato de sodio anhidro (10.65 g, 75.0 mmol). La reacción se condujo durante al menos 24 h a 15 °C, y la solución se filtró y concentró bajo presión reducida. Se agregaron 15 mL de tetrahidrofurano y 15 mL de solución de TBAF en tetrahidrofurano (1 M), luego la reacción se condujo durante la noche para eliminar el grupo protector TBS. Luego, la solución de reacción se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener S33-4 (2.84 g).
[1111] Etapa c: Bajo atmósfera de argón y en un matraz redondo que contenía diclorometano con S33-4 (2.53 g, 8.0 mmol) disuelto, ácido 6-bromohexanoico (S33-5, 1.71 g, 8.8 mmol) y DMAP (0.27 g, 2.2 mmol), se agregó DCC (2.72 g, 13.2 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 16 h a temperatura ambiente. Después de completar la reacción, el precipitado se eliminó por filtración, y el filtrado se concentró y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener S33-6 (3.38 g).
[1112] Etapa d: Bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo (50 mL), se agregaron en secuencia S33-6 (2.47 g, 5.0 mmol), S1-5 (0.21 g, 2.0 mmol) y DIPEA (0.26 g, 2.0 mmol) con agitación lenta, la reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h con agitación. La reacción se continuó hasta que el material S1-5 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró y se disolvió en diclorometano y luego se extrajo con una solución de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio en secuencia. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El lípido catiónico E33-1 (1.40 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E33-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.64 (m, 2H), 4.20 (t, 4H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 3.52-3.36 (m, 8H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.30 (t, 4H), 1.98 (m, 4H), 1.72-1.21 (m, 48H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E33-1 se determinó para ser 845.86 Da mediante MALDI-TOF.
[1115]
[1117] Ejemplo-34: Lípido catiónico (E34-1, E34-2)
[1120]
[1121] E34-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)-, L<3>es un enlace de
[1123] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos heptileno, R<1>y R<2>son ambos
A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 874 Da.
[1124] El proceso de preparación es el siguiente:
[1125] Etapa a: Bajo atmósfera de argón, glicerol (S34-1, 3.09 g, 15.0 mmol) que contiene un grupo hidroxilo protegido con TBS, K<2>CO<3>(6.21 g, 45.0 mmol) y 1-bromohexano (S34-2, 2.71 g, 16.5 mmol) se disolvieron en 60 mL de DMF. La mezcla se agitó durante 16 h a 110 °C. Después de confirmar la finalización de la reacción por cromatografía de capa fina, se precipitó al verter la solución de reacción en agua (200 mL). El precipitado se filtró y se disolvió en 100 mL de THF, seguido de la adición de 100 mL de solución de TBAF en tetrahidrofurano (1 M) y luego la reacción se condujo durante la noche para eliminar el grupo protector TBS. Después de la desprotección, la solución de reacción se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener S34-3 (2.32 g).
[1126] Etapa b: Bajo atmósfera de argón y en un matraz redondo que contenía S34-3 (1.72 g, 6.6 mmol), ácido 8-bromooctanoico (S34-4, 1.33 g, 6.0 mmol) y DMAP (0.18 g, 1.5 mmol) disueltos en diclorometano (30 mL), se agregó DCC (1.85 g, 9.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 16 h a temperatura ambiente. Después de completar la reacción, el precipitado se eliminó por filtración y el filtrado se concentró y purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener S34-5 (2.33 g).
[1127] Etapa c: Bajo protección de nitrógeno, se agregó acetonitrilo (50 mL), se agregaron en secuencia S34-5 (2.33 g, 5.0 mmol), S1-5 (0.21 g, 2.0 mmol) y DIPEA (0.26 g, 2.0 mmol) con agitación lenta, y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 h con agitación. La reacción se continuó hasta que el material S1-5 se consumió completamente de acuerdo con TLC. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró y se disolvió en diclorometano y luego se extrajo con una solución de HCl 0.6 M/NaCl al 10 % y una solución saturada de bicarbonato de sodio en secuencia. Después de asegurarse de que no había producto en la fase acuosa, las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO<4>anhidro. El lípido catiónico E34-1 (1.45 g) se obtuvo después de filtración, concentración y purificación mediante cromatografía en columna de gel de sílice. Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E34-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ: 4.97 (m, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 3.59-3.40 (m, 16H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.30 (t, 4H), 1.71-1.21 (m, 52H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E34-1 se determinó para ser 873.81 Da mediante MALDI-TOF.
[1130]
[1132] Siguiendo el proceso de preparación de E34-1, se obtuvo el lípido catiónico E34-2 (1.58 g) adoptando las mismas cantidades molares de materiales que incluyen S34-1, bromuro de heptilo (S34-6), S34-4 y S1-5. La estructura se proporciona a continuación:
[1135]
[1137] E34-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC =O -, L<3>es un enlace de
[1139]
[1140] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos heptileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 930 Da.
[1141] Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E34-2 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ 4.97 (m, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 3.59-3.40 (m, 16H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.30 (t, 4H), 1.72-1.21 (m, 60H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E34-2 se determinó para ser 929.84 Da mediante MALDI-TOF.
[1144]
[1147] Ejemplo-35: Lípido catiónico (E35-1, E35-2)
[1150]
[1153] E35-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es
[1155] A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 758 Da.
[1157] El proceso de preparación es el siguiente:
[1159] El compuesto S27-1 (2.84 g, 6.0 mmol) se disolvió en THF anhidro (60 mL). Bajo baño de hielo, se agregó lentamente NaH (60 %, 2.40 g, 60.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 1 h. Luego, se agregó el compuesto S34-5 (3.34 g, 7.2 mmol) y la reacción se agitó durante otra 1 h antes de volver a temperatura ambiente y continuarse durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se colocó nuevamente en un baño de hielo, y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregó agua (100 mL) para mezclar con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el lípido catiónico E35-1 (3.37 g). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E35-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ 4.97 (m, 1H), 4.07 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 3.59-3.40 (m, 8H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.30 (t, 4H), 1.71-1.21 (m, 50H), 0.88 (t, 9H). El peso molecular de E35-1 se determinó para ser 757.69 Da mediante MALDI-TOF.
[1162]
[1165] Siguiendo el proceso de preparación de E35-1, se obtuvo el lípido catiónico E35-2 (3.35 g) adoptando las mismas cantidades molares de materiales incluyendo S27-1 y S34-8. La estructura se proporciona a continuación:
[1168]
[1169] E35-2 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -OC(=O)-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un grupo pentileno, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo undecilo, R<2>es
[1171]
[1172] A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 786 Da.
[1173] Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E35-2 fueron los siguientes: RMN<1>H (400 MHz, CDCl<3>) δ 4.97 (m, 1H), 4.07 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.63 (t, 4H), 3.59-3.40 (m, 8H), 2.65 (t, 2H), 2.49 (m, 4H), 2.30 (t, 4H), 1.70-1.22 (m, 54H), 0.88 (t, 9H). El peso molecular de E35-2 se determinó para ser 785.71 Da mediante MALDI-TOF.
[1176]
[1178] Ejemplo-36: Lípido catiónico (E36-1)
[1181]
[1183] E36-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>es -C(=O)-, L<2>es -OC(=O)-, L<3>es un enlace de ligamiento, B<1>es un enlace de ligamiento, B<2>es un grupo heptileno, R<1>es un grupo heptadecilo, R<2>es
[1185]
[1186] A es -(CR<a>R<b>)<s>O-, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 2 y R<3>es un átomo de hidrógeno. El peso molecular es de aproximadamente 874 Da.
[1187] El proceso de preparación es el siguiente:
[1188] Etapa a: Bajo atmósfera de argón y en un matraz redondo que contenía S34-7 (2.53 g, 8.8 mmol), ácido 8-aminocaprílico con un grupo protector Boc (S36-1, 2.07 g, 8.0 mmol) y DMAP (0.24 g, 2.0 mmol) disueltos en diclorometano (100 mL), se agregó DCC (2.47 g, 12.0 mmol) y luego la reacción se condujo durante 16 h a temperatura ambiente. Después de completar la reacción, el precipitado se eliminó por filtración. Se agregó ácido trifluoroacético (TFA) hasta que su concentración alcanzó 0.1 M. Después de 4 horas de reacción, el pH se ajustó a neutro. La solución de reacción se concentró, se agregó agua purificada, y la solución de reacción se extrajo con diclorometano. El extracto se concentró, se precipitó, se filtró, se secó y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice en secuencia para obtener el intermedio con un grupo amino libre S36-2 (2.82 g).
[1189] Etapa b: Dietilenglicol (S36-3, 0.36 g, 1.2 mmol) con un grupo hidroxilo terminal protegido por TBS y el otro grupo hidroxilo terminal protegido por OMs se agregó en 50 mL de agua y se disolvió a temperatura ambiente con agitación. Se agregaron K<2>CO<3>(1.66 g, 12.0 mmol), S36-2 (2.58 g, 6.0 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio (0.04 g, 0.12 mmol) y la solución de reacción se agitó durante 72 h a temperatura ambiente. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con diclorometano (50 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (50 mL). La fase orgánica se retuvo, se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener S36-4 (2.54 g).
[1190] Etapa c: El compuesto S36-4 (1.90 g, 3.0 mmol), éster N-hidroxisuccinimida de ácido esteárico (S36-5, 1.48 g, 3.6 mmol) y TEA (0.45 g, 4.5 mmol) se disolvieron en diclorometano (50 mL) y se hicieron reaccionar durante la noche a temperatura ambiente con agitación. La solución de reacción se concentró y se disolvió en 50 mL de agua y luego se extrajo dos veces con EtOAc (50 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se agregó algo de cloruro de sodio antes de extraerse dos veces con diclorometano (50 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (50 mL) y se concentraron bajo presión reducida. Se agregaron THF (30 mL) y una solución de TBAF en tetrahidrofurano (1M, 30 mL) al residuo de la concentración, la reacción se llevó a cabo durante la noche para eliminar el grupo protector TBS. Luego, la solución de reacción se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró, se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice para obtener el lípido catiónico E36-1 (1.98 g). Los datos principales del espectro de RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 4.97 (m, 1H), 3.70 (t, 2H), 3.63-3.42 (m, 12H), 3.35 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.30 (t, 2H), 2.23 (t, 2H), 1.72-1.25 (m, 60H), 0.89 (t, 9H). El peso molecular de E36-1 se determinó para ser 783.78 Da mediante MALDI-TOF.
[1193]
[1196] Ejemplo de Referencia-37: Lípido catiónico (E37-1)
[1199]
[1202] E37-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[1204]
[1205] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -CR<a>R<b s>O CR<a>R<b s>NR<c>-, R<a>, R<b>R<c>son todos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 1 y R<3>es
[1207]
El peso molecular es de aproximadamente 1204 Da.
[1209] El proceso de preparación es el siguiente:
[1211] En un matraz redondo de 250 mL seco y limpio, se agregaron ácido fólico (S37-2, 3.75 g, 8.5 mmol), E20-2 (3.90 g, 5.0 mmol), piridina (40 mL) y DCC (4.64 g, 22.5 mmol) disueltos en DMSO, y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 4 h con agitación. Después de completar la reacción, la solución de reacción se concentró bajo presión reducida por evaporación rotativa para eliminar la piridina, y el residuo se extrajo dos veces con 100 mL de DCM. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice y el eluyente de interés se recogió y concentró para obtener el lípido catiónico E37-1 (5.59 g, 92.8 %). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 8.68 (s, 1H), 7.68 (d, 1H), 6.67 (d, 1H), 4.51 (d, 2H), 4.36 (m, 1H), 4.06 (m, 4H), 3.83-3.45 (m, 6H), 2.63 (t, 2H), 2.53 (t, 4H), 2.34 (t, 2H), 2.18 (m, 2H), 2.08-1.94 (m, 2H), 1.56-1.46 (m, 8H), 1.36-1.19 (m, 56H), 0.88 (t, 12H). El peso molecular de E37-1 se determinó para ser 1203.87 Da mediante MALDI-TOF.
[1212]
[1213] Ejemplo de Referencia-38: Lípido catiónico (E38-1)
[1216]
[1218] E38-1 corresponde a la fórmula general (1), en la que, L<1>y L<2>son ambos -C(=O)O-, L<3>es un enlace de
[1220]
[1221] ligamiento, B<1>y B<2>son ambos grupos hexileno, R<1>y R<2>son ambos A es -(CR<a>R<b>)<s>O(CR<a>R<b>)<s>NR<c>-, R<a>, R<b>y R<c>son todos átomos de hidrógeno, s es 2, n es 1 y R<3>es El peso molecular es de aproximadamente 1006 Da.
[1222] El proceso de preparación es el siguiente:
[1223] En un matraz redondo de 250 mL seco y limpio, se agregaron éster succinimida de biotina (S38-1, 1.88 g, 5.5 mmol) disuelto en DMF y S38-1 (3.90 g, 5.0 mmol) disuelto en DCM. Después de mezclarse adecuadamente por agitación, también se agregó trietilamina (2.3 mL, 16.5 mmol). La reacción se llevó a cabo a temperatura ambiente hasta completarse, lo que se monitorizó por TLC. Luego, la solución de reacción se filtró, se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice. El eluyente de interés se recogió, se concentró y se liofilizó para obtener el lípido catiónico E38-1 (3.65 g, 72.5 %). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 4.18 (s, 2H), 4.06 (m, 4H), 3.84-3.55 (m, 6H), 3.27 (m, 1H), 2.83 (d, 2H), 2.63 (t, 2H), 2.52 (t, 4H), 2.22-2.18 (m, 4H), 1.70-1.40 (m, 12H), 1.36-1.19 (m, 58H), 0.87 (t, 12H). El peso molecular de E38-1 se determinó para ser 1006.62 Da mediante MALDI-TOF.
[1226]
[1228] Ejemplo de Referencia-39: Preparación del lípido PEGilado E39-1
[1229] Ejemplo de Referencia-39.1: Preparación del lípido PEGilado E39-1
[1232]
[1234] E39-1 corresponde a la fórmula general (2), en la que, R<1>y R<2>son ambos grupos tetradecilo, B<3>y B<4>son ambos enlaces de ligamiento, L<7>y L<8>son ambos enlaces de ligamiento, L<3>es -CH<2>CH<2>O- o -CH<2>CH<2>-, A es -CH<2>CH<2>O-u -OCH<2>CH<2>-, en la que, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n<1>≈45 y R es un grupo metilo o un grupo metoxi. El peso molecular es de aproximadamente 2450 Da.
[1235] El proceso de preparación es el siguiente:
[1236] Etapa a: El compuesto S39-1 (20.00 g, 10.0 mmol, mPEG-OH, M<w>≈2000, n<1>≈45, PDI = 1.03) y tolueno (200 mL) se sometieron a eliminación azeotrópica de agua a 140 °C. Después de destilar 60 mL de solvente, la temperatura de reacción se redujo a temperatura ambiente. Se agregaron TEA (2.02 g, 20.0 mmol) y MsCl (2.05 g, 18.0 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (200 mL) y se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron, se filtraron, se concentraron, se disolvieron con isopropanol a 50 °C y luego se recristalizaron en un baño de hielo. Después de filtración, se obtuvo el compuesto S39-2 (18.00 g, 90 %). Etapa b: El compuesto S39-2 (18.00 g, 9.0 mmol) se disolvió con 80 mL de agua con agitación a temperatura ambiente. Se agregaron carbonato de potasio (12.42 g, 90.0 mmol), compuesto S39-3 (9.58 g, 45.0 mmol) y bromuro de tetrabutilamonio (0.29 g, 0.9 mmol) y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 72 h con agitación. Después de completar la reacción, la solución de reacción se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2) y las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL). La fase orgánica se retuvo, se secó con sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo S39-4 (12.00 g).
[1237] Etapa c: El compuesto S39-4 (12.00 g, 6.0 mmol) se disolvió en THF anhidro (120 mL). Bajo baño de hielo, se agregó lentamente NaH (60 %, 2.40 g, 60.0 mmol) y la reacción se llevó a cabo durante 1 h. Luego, se agregó el compuesto S39-5 (8.28 g, 30.0 mmol) y la reacción se agitó durante otra 1 h antes de volver a temperatura ambiente y continuarse durante la noche. Después de completar la reacción, la solución de reacción se colocó en un baño de hielo, y se agregó lentamente 2 mL de metanol para apagar la reacción. Después de 30 minutos de agitación, se agregaron 300 mL de agua para mezclar con la solución mientras se agitaba. La mezcla se extrajo dos veces con EtOAc (150 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se extrajo dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (100 mL), se secaron con sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para obtener el producto crudo que se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice, se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el lípido PEGilado E39-1 (9.00 g, 75 %). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E39-1 fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 3.85-3.45 (m, 182H), 3.37 (s, 3H), 3.15 (t, 2H), 2.94 (t, 2H), 2.62 (t, 2H), 1.58- 1.48 (m, 4H), 1.36-1.19 (m, 44H), 0.86 (t, 6H). El peso molecular de E39-1 se determinó para ser 2447 Da mediante MALDI-TOF, PDI= 1.03.
[1240]
[1242] Ejemplo de Referencia-39.2: Preparación del lípido PEGilado E39-2
[1245]
[1247] E39-2 corresponde a la fórmula general (2), en la que, R<1>es un grupo tridecilo, R<2>es un grupo tetradecilo, B<3>y B<4>son ambos enlaces de ligamiento, L<7>es un grupo carbonilo, L<8>es un enlace de ligamiento, L<3>es -CH<2>CH<2>-, A es -OCH<2>CH<2>-, en la que, R<a>y R<b>son ambos átomos de hidrógeno, s es 2, n<1>≈45 y R es un grupo metoxi. El peso molecular es de aproximadamente 2460 Da.
[1248] El proceso de preparación es el siguiente:
[1249] Se disolvieron el compuesto S39-4 (11.26 g, 5.0 mmol), S39-5 (1.95 g, 6.0 mmol) y trietilamina (TEA, 0.76 g, 7.5 mmol) en diclorometano (100 mL) y se hicieron reaccionar a temperatura ambiente durante la noche con agitación. Luego, la solución de reacción se concentró, se disolvió con 100 mL de agua y se extrajo dos veces con EtOAc (100 mL * 2). La fase acuosa se retuvo y se agregó algo de cloruro de sodio antes de extraerse dos veces con diclorometano (100 mL * 2). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron por retroextracción con una solución de NaCl (100 mL). Las fases orgánicas se secaron con MgSO<4>anhidro. El producto crudo se obtuvo después de filtración y concentración y se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH = 10:1), se concentró y se secó con una bomba de aceite para obtener el compuesto objetivo E39-2 (10.1 g, 84.8 %). Los datos principales del espectro de RMN-<1>H de E39-2 fueron los siguientes: RMN<1>H (500 MHz, CDCl<3>) δ: 3.84-3.45 (m, 182H), 3.37 (s, 3H), 3.35 (t, 2H), 3.18 (t, 2H), 2.27 (t, 2H), 1.56-1.40 (m, 4H), 1.36-1.18 (m, 46H), 0.87 (t, 6H). El peso molecular de E39-2 se determinó para ser 2461 Da mediante MALDI-TOF, PDI= 1.03.
[1252]
[1254] Ejemplo-40: Preparación de liposomas catiónicos
[1255] En esta realización, se prepararon múltiples grupos de liposomas catiónicos para comparación. En la composición de cada grupo de liposomas catiónicos, el lípido neutro era DSPC y el lípido esteroide era colesterol, mientras que la diferencia residía en los lípidos catiónicos y los lípidos PEGilados; en los que, para el grupo de control, el lípido catiónico era DLin-MC3-DMA (abreviado como MC3) y el lípido PEGilado era PEG2k-DMG (abreviado como DMG); para los grupos experimentales L-1 a L-18 y L-29, los lípidos catiónicos eran los preparados en los ejemplos anteriores y los lípidos PEGilados eran PEG-DMG; para los grupos experimentales L-19 a L-28, los lípidos catiónicos eran los preparados en los ejemplos anteriores y los lípidos pegilados eran el lípido pegilado E39-1 o E39-2; los detalles específicos se muestran en la Tabla 1.
[1256] El proceso de preparación para los liposomas catiónicos es el siguiente:
[1257] Etapa a: se pesaron el lípido catiónico CL (15.0 µmol), distearoilfosfatidilcolina (DSPC, 3.0 µmol), colesterol (12.0 µmol) y el lípido PEGilado (0.45 µmol) en una relación molar de 50:10:40:1.5 para cada grupo desde L-0 hasta L-28 enumerados en la Tabla 1 y se agregaron a un matraz redondo de 100 mL. Luego, se agregaron 30 mL de cloroformo para disolver los sólidos y se agitaron bien;
[1258] Etapa b: El solvente (cloroformo) se eliminó mediante evaporador rotativo a 140 rpm y 55 °C para generar una película oleosa delgada que se secó con una bomba de vacío durante 12 h para asegurar que el cloroformo se eliminara por completo;
[1259] Etapa c: En un matraz, se agregaron 30 mL de tampón fosfato (PBS, pH = 7.4) que contenía lactosa al 10 %. La solución de reacción se sonicó mediante un limpiador ultrasónico a una frecuencia del 90 % durante 30 min para generar una emulsión translúcida;
[1260] Etapa d: La emulsión se agregó a un homogeneizador de alta presión y se sobretrató 5 veces bajo una presión de 100 MPa; luego, la emulsión se agregó al extrusor de liposomas y se extruyó 10 veces bajo una presión de 150 MPa para preparar polvos de liposomas catiónicos de los grupos L-0 a L-28.
[1261] Siguiendo las etapas y condiciones anteriores pero con otra relación molar de lípido catiónico, DSPC, colesterol y lípido PEGilado de 48:9:42:1.5, se pesaron el lípido catiónico CL (16.0 µmol), distearoilfosfatidilcolina (DSPC, 3.0 µmol), colesterol (14.0 µmol) y el lípido pegilado PL (0.5 µmol) y se utilizaron para preparar el polvo de liposoma catiónico de L-29.
[1262] Ejemplo-41: Preparación de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico y formulaciones de las mismas
[1263] Etapa a: Se utilizó 0.03 mL de solución salina fisiológica como solución de trabajo para las formulaciones de composiciones farmacéuticas de ácido nucleico;
[1264] Etapa b: Se pesó 0.1 mg de liposoma catiónico (de L-0 a L-29) preparado de acuerdo con el Ejemplo-40, se disolvió en solución salina fisiológica y se equilibró durante 30 minutos. La relación N/P era de 10/1, de acuerdo con la cual se pesó 1.00 µg de ARNip, se disolvió en 10 µL de solución salina fisiológica y se complexó con liposomas catiónicos disueltos en solución salina fisiológica durante 30 min para preparar un grupo de control (L-0/ARNip) y formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico (abreviadas como “formulaciones LNP/ARNip”, que incluyen L-1/ARNip a L-29/ARNip) de la presente invención.
[1265] Ejemplo-42: Ensayos de actividad biológica para las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico
[1266] (1) Determinación del tamaño de nanopartícula y la capacidad de complejación génica
[1267] Se utilizó un experimento de electroforesis en gel para evaluar la capacidad de complejación génica del LNP/ARNip de cada grupo. Se pesaron 0.8 g de agarosa y se disolvieron en 40 mL de solución TAE. La solución se calentó en un microondas hasta que los gránulos de agarosa se disolvieron completamente y luego se enfrió. Se agregaron 5 µL de colorante de ácido nucleico (Gel Green) al gel de agarosa enfriado y luego el gel de agarosa se agregó a la cubeta del gel y se secó con aire natural. Se agregó LNP/ARNip mezclado con 2 µL de tampón de carga al pocillo del gel de agarosa y el voltaje de electroforesis se ajustó a 90 V. La electroforesis se llevó a cabo a temperatura ambiente durante 10 min. Los resultados mostraron que el ARNip libre estaba esencialmente ausente tanto en los grupos experimentales (L-1/ARNip~L-29/ARNip) como en el grupo de control (L-0/ARNip), lo que indica que las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico preparadas con los lípidos catiónicos de la presente invención tenían una alta capacidad de complejación génica y los lípidos catiónicos ionizables se podían combinar adecuadamente con ácidos nucleicos con carga negativa debido a sus cargas positivas parciales.
[1268] Tabla 1. Resumen de las formulaciones de liposomas y el tamaño de partícula y la eficiencia de encapsulación de LNP/ARNip preparados con los liposomas
[1270]
[1271]
[1274] Determinación de la eficiencia de encapsulación: El LNP/ARNip se ultracentrifugó (4 °C, 60000 rpm, 1 h) con una ultracentrífuga. La concentración de ARNip no encapsulado en el sobrenadante se determinó mediante un cuantificador de ácidos nucleicos. Se calculó la eficiencia de encapsulación de los liposomas para ARNip. Los resultados se resumen en la Tabla 1, que indican que los liposomas catiónicos de la presente invención (L-1~L-29) tenían una mayor eficiencia de encapsulación para fármacos de ácido nucleico. MC3 es un liposoma catiónico bien establecido disponible comercialmente. Con el mismo lípido PEGilado DMG, la eficiencia de encapsulación de L-1 que contenía el lípido catiónico E1-1, L-3 que contenía el lípido catiónico E4-1, L-14 que contenía el lípido catiónico E34-1, L-15 que contenía el lípido catiónico E34-2 y L-16 que contenía el lípido catiónico E35-1 de la presente invención para ARNip eran todas superiores a las de MC3; L-19~L-28 que contenían los lípidos PEGilados preparados en la presente invención también mostraron una mayor eficiencia de encapsulación; el liposoma catiónico L-29 que se preparó con una relación diferente de lípidos también mostró una mayor eficiencia de encapsulación para ácido nucleico.
[1276] Determinación del tamaño de partícula: En esta realización, el tamaño de partícula del LNP/ARNip se determinó mediante dispersión de luz dinámica (DLS). El tamaño medido del LNP/ARNip tenía una uniformidad relativamente alta y los valores de PDI eran todos inferiores a 0.3. Los tamaños de partícula del LNP/ARNip preparados con los liposomas catiónicos de la presente invención estaban en el rango de 90~120 nm.
[1278] (2) Ensayos de citotoxicidad (biocompatibilidad)
[1280] La citotoxicidad de las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico en la presente invención se examinó mediante el ensayo MTT. Las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico se disolvieron en el medio de cultivo y se prepararon a la concentración requerida, y se pudo agregar una cantidad apropiada de solubilizante cuando fuera necesario. Utilizando el modelo de células HeLa a una densidad de 1 × 10<4>células/pocillo, la suspensión celular se inoculó en una placa de 96 pocillos (100 µL/pocillo). Después de la inoculación, las células se incubaron en un incubador de células a 37 °C, 4 % de CO<2>durante 24 h. Después de 24 horas de incubación, se desechó el medio de cultivo. Luego, se agregaron 100 µL de medio de cultivo que contenía 3.3 µg/mL de LNP/ARNip (formulación de composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico preparada de acuerdo con el Ejemplo-41) en cada pocillo del grupo experimental; se agregaron 100 µL de medio de cultivo fresco en cada pocillo del grupo de control en blanco; cada grupo a cada concentración utilizó 6 pocillos. Las células Hela se incubaron con las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico durante 24 h, seguido de la adición de 20 µL de solución de PBS que contenía 5 mg/mL de MTT en cada pocillo. Después de la incubación con MTT durante 4 h, se desechó la mezcla de medio celular y tampón que contenía MTT, seguido de la adición de 150 µL de DMSO por pocillo para disolver los cristales de formazán púrpura formados en las células vivas. Después de agitar suficientemente, la absorbancia se determinó utilizando un lector de microplacas. De acuerdo con los resultados calculados a partir de la absorbancia medida, la supervivencia celular de las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico preparadas en la presente invención eran todas superiores al 95 % en contraste con el grupo de control blanco, lo que indica que las formulaciones modificadas con los lípidos PEGilados de la presente invención ofrecían una gran biocompatibilidad.
[1282] (3) Ensayos para la eficiencia de transporte de ácidos nucleicos
[1284] Para examinar la eficiencia del transporte de ácido nucleico utilizando las formulaciones de composiciones farmacéuticas de liposoma catiónico-ácido nucleico preparadas con los lípidos catiónicos de la presente invención, se utilizaron las células Luc-Hela que podían expresar establemente luciferasa como modelo para evaluar la eficiencia de transporte de ácido nucleico para dichas formulaciones (de acuerdo con el Ejemplo-41) en la relación N/P de 10/1. Cuando la densidad celular alcanzó el 80 % en la placa de 96 pocillos, dichas formulaciones se agregaron cada una respectivamente al medio de cultivo. Las células se incubaron en un incubador de células a 37 °C, 4 % de CO<2>durante 24 h. Luego, se desechó el medio de cultivo y se reemplazó por uno que contenía 3.3 µg/mL de LNP/ARNip para incubación adicional durante 24 h. Después de la incubación, las células se trataron con tampón de lisis y la intensidad fluorescente se midió utilizando un kit de ensayo de luciferasa y un detector de quimioluminiscencia. Se estableció otro grupo (el grupo de ARNip) con ARNip desnudo añadido a las células cultivadas a la misma dosis. Considerando que los ARNip transfectados podían inhibir la expresión del gen de la luciferasa (o ARNm de Fluc), las células no tratadas se utilizaron como grupo de control negativo (es decir, el grupo de células blanco). La expresión (intensidad fluorescente) del gen objetivo en el grupo de células blanco se designó como 100 %. Los resultados se muestran en la Figura 1. La intensidad fluorescente del grupo de ARNip fue aproximadamente del 78 %, la del grupo L-0/ARNip fue aproximadamente del 43 %, la del grupo L-1/ARNip fue aproximadamente del 33 %, la del grupo L-3/ARNip fue aproximadamente del 35 %, la del grupo L-9/ARNip fue aproximadamente del 48 %, la del grupo L-14/ARNip fue aproximadamente del 34 % y la del grupo L-26/ARNip fue aproximadamente del 36 %. En comparación con el grupo de células en blanco y el grupo de ARNip, el grupo de control positivo (es decir, el grupo de control L-0/ARNip) y los grupos experimentales (L-1/ARNip~L-29/ARNip) mostraron un buen efecto inhibitorio sobre el gen de la luciferasa, lo que indica que los liposomas catiónicos podían mejorar la eficiencia de transporte de los fármacos de ácido nucleico. Más aún, todos los grupos experimentales excepto L-9/ARNip tenían un mejor efecto inhibitorio sobre el gen de la luciferasa que el grupo de control L-0/ARNip, lo que indica que los liposomas catiónicos preparados con los lípidos catiónicos de la presente invención podían mejorar la eficiencia de transporte de ácido nucleico en mayor medida.

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES
1. Un lípido catiónico en el que, la estructura de dicho lípido catiónico es una de las siguientes estructuras:
en el que la estructura del lípido catiónico se selecciona de una de las siguientes estructuras:
2. Un liposoma catiónico, en el que, el liposoma catiónico contiene cualquier lípido catiónico anterior de acuerdo con la reivindicación 1.
3. El liposoma catiónico de acuerdo con la reivindicación 2, en el que, el liposoma catiónico contiene uno o más lípidos seleccionados del grupo que consiste en lípidos neutros, lípidos esteroides y lípidos PEGilados, más preferiblemente contiene lípidos neutros, lípidos esteroides y lípidos PEGilados simultáneamente; en el que, dicho lípido neutro es preferiblemente fosfolípido; más preferiblemente en el que, dicho lípido neutro se selecciona del grupo que consiste en 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1,2-dimiristoleoil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1,2-diestearoil-snglicero-3-fosfatidilcolinas, 1,2-diundecanoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas, 1-plamitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1,2-di-O-octadecenil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas, 1-oleoil-2-colesterilhemisuccinil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1-O-hexadecil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas, 1,2-dilinolenoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas, 1,2-diaraquidonoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolinas, 1,2-didecosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfocolinas, 1,2-dioleoil-snglicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-difitanil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-dilinoleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-dilinolenoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-diaraquidonoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, 1,2-didecosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfoetanolaminas, sales de sodio de 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-rac-(1-glicerol), dioleoil fosfatidilserinas, dipalmitoilfosfatidilgliceroles, palmitoiloleoil fosfatidiletanolaminas, diestearoil fosfatidiletanolaminas, dipalmitoil fosfatidiletanolaminas, dimiristoleoil fosfoetanolaminas, 1-estearoil-2-oleoil-estearoiletanolaminas, 1-estearoil
2-oleoil-fosfatidilcolinas, esfingomielinas, fosfatidilcolinas, fosfatidiletanolaminas, fosfatidilserinas, fosfatidilinositoles, ácidos fosfatídicos, palmitoiloleoil fosfatidilcolinas, lisofosfatidilcolinas, lisofosfatidiletanolaminas y combinaciones de los mismos; o
en el que, dicho lípido esteroideo se selecciona del grupo que consiste en colesteroles, coprostanoles, sitosteroles, ergosteroles, campesteroles, estigmasteroles, brasicasterol tomatidinas, ácidos ursólicos, αtocoferoles y cualquier mezcla de los mismos; o
en el que, dicho lípido PEGilado se selecciona del grupo que consiste en 1,2-dimiristoil-sn-glicerol metoxipolietilenglicol, 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-[amino(polietilenglicol)], PEG-colesterol, PEG-diacilglicamida y PEG-dialquiloxipropilo, incluye específicamente PEG500-dipalmitoilfosfatidilcolina, PEG2000-dipalmitoilfosfatidilcolina, PEG500-estearilfosfatidiletanolamina, PEG2000-diestearilfosfatidiletanolamina, PEG500-1,2-dioleoilfosfatidiletanolamina, PEG2000-1,2-dioleoilfosfatidiletanolamina y PEG2000-2,3-diestearoilglicerol o
en el que, la estructura de dicho lípido PEGilado se representa por la fórmula general (2):
o sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos;
en el que, L<7>y L<8>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo de ligamiento divalente, dicho grupo de ligamiento divalente se selecciona del grupo que consiste en -OC(=O)-, -C(=O)O-, - OC(=O)O-, -C(=O)-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>- y -NR<c>C(=O)S-; en el que, R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>;
en el que, L<3>se selecciona del grupo que consiste en un enlace de ligamiento, -L<4>-, -Z-L<4>-Z-, -L<4>-Z-L<5>-, -Z-L<4>-Z-L<5>- y -L<4>-Z-L<5>-Z-; dichos L<4>y L<5>son grupos de ligamiento de cadena carbonada, que se representan cada uno independientemente por -(CR<a>R<b>)<t>-(CR<a>R<b>)<o>-(CR<a>R<b>)<p>-; en el que, t, o y p son cada uno independientemente un entero de 0 a 12, no son simultáneamente 0; en el que, R<a>y R<b>son, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>; en el que, dicho Z, en cada ocurrencia, se selecciona independientemente del grupo que consiste en -C(=O)-, -OC(=O)-, -C(=O)O-, -OC(=O)O-, -O-, -S-, -C(=O)S-, -SC(=O)-, -NR<c>C(=O)-, -C(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)NR<c>-, -OC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)O-, -SC(=O)NR<c>-, -NR<c>C(=O)S-
y ; en el que, R<c>es, en cada ocurrencia, independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-12>;
en el que, B<3>y B<4>son cada uno independientemente un enlace de ligamiento o un grupo alquileno C<1-12>; en el que, R<1>y R<2>son cada uno independientemente un grupo alifático C<1-30>;
en el que, R se selecciona del grupo que consiste en un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo, un grupo alcoxi, -C(=O)R<d>, -C(=O)OR<d>, -OC(=O)R<d>y -OC(=O)OR<d>; en el que, R<d>es un grupo alquilo C<1-12>;
en el que, A es -(CR<a>R<b>)<s>O- o -O(CR<a>R<b>)<s>-; en el que, s es 2, 3 o 4; en el que, R<a>y R<b>, son cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C<1-6>;
en el que, n<1>es un entero desde 20 hasta 250;
en el que, dicho grupo alquilo, grupo alquileno, grupo alcoxi y grupo alifático son cada uno independientemente sustituidos o no sustituidos o en el que, la estructura de dicho lípido PEGilado se selecciona de las siguientes estructuras:
4. El liposoma catiónico de acuerdo con la reivindicación 3, en el que, el liposoma catiónico contiene 20-80 % de lípidos catiónicos, 5-15 % de lípidos neutros, 25-55 % de lípidos esteroides y 0.5-10 % de lípidos PEGilados, dicho porcentaje es el porcentaje molar de cada tipo de lípido relativo a los lípidos totales en una solución que contiene un solvente.
5. El liposoma catiónico de acuerdo con la reivindicación 4, en el que, el porcentaje molar de los lípidos catiónicos relativos a los lípidos totales en una solución que contiene un solvente es 30 % a 65 %, preferiblemente aproximadamente 35 %, 40 %, 45 %, 46 %, 47 %, 48 %, 49 %, 50 % o 55 %; o
en el que, el porcentaje molar de los lípidos neutros relativo a los lípidos totales en una solución que contiene un solvente es 7.5 % a 13 %, preferiblemente aproximadamente 8 %, 9 %, 10 %, 11 % o 12 %; o en el que, el porcentaje molar de los lípidos esteroides relativo a los lípidos totales en una solución que contiene un solvente es 35 % a 50 %, preferiblemente aproximadamente 40 %, 41 %, 42 %, 43 %, 44 %, 45 %, 46 %, 47 %, 48 %, 49 % o 50 %; o
en el que, el porcentaje molar de los lípidos PEGilados relativo a los lípidos totales en una solución que contiene un solvente es 0.5 % a 5 %, preferiblemente 1 % a 3 %, y más preferiblemente aproximadamente 1.5 %, 1.6 %, 1.7 %, 1.8 % o 1.9 %.
6. Una composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico, en la que, la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico contiene el liposoma catiónico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 5 y el fármaco de ácido nucleico; en la que, dicho fármaco de ácido nucleico se selecciona del grupo que consiste en ADN, ácido nucleico antisentido, plásmido, ARNm, ácido nucleico interferente, aptámero, antagomir, ARNmi, ribozima, y ARNip, preferiblemente ADN, ARNm, ARNmi, o ARNip.
7. Una formulación de la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico, en la que, la formulación de la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico contiene la composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 6 y diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables; en la que, dicho diluyente o excipiente es preferiblemente agua desionizada, agua ultrapura, tampón fosfato o solución salina fisiológica, más preferiblemente tampón fosfato o solución salina fisiológica, y aún más preferiblemente solución salina fisiológica.
8. La composición farmacéutica de liposoma catiónico-ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 6 o 7 para uso como un medicamento en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de cáncer y tumor maligno, infección, una enfermedad viral, una enfermedad fúngica o para uso en la prevención de una enfermedad, en la que la composición es una vacuna.
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