ES2960313T3 - Métodos para expandir selectivamente células que expresan un TCR con una región constante murina - Google Patents
Métodos para expandir selectivamente células que expresan un TCR con una región constante murina Download PDFInfo
- Publication number
- ES2960313T3 ES2960313T3 ES18786145T ES18786145T ES2960313T3 ES 2960313 T3 ES2960313 T3 ES 2960313T3 ES 18786145 T ES18786145 T ES 18786145T ES 18786145 T ES18786145 T ES 18786145T ES 2960313 T3 ES2960313 T3 ES 2960313T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cells
- tcr
- mtcr
- express
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 106
- 241001529936 Murinae Species 0.000 title claims abstract description 64
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 338
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 151
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 68
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 65
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 60
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 60
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 60
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 36
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 36
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 29
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 16
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 11
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims description 9
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 6
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 claims description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 3
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 claims description 2
- 239000004234 Yellow 2G Substances 0.000 claims description 2
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 claims description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 2
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 claims 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 8
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 114
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 106
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 52
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 41
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 29
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 23
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 22
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 21
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 18
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 16
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 12
- 102100034893 E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 Human genes 0.000 description 12
- 101001019732 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 Proteins 0.000 description 12
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 12
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 12
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 10
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 description 10
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 8
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 4
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 108010069941 DNA receptor Proteins 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 102100029987 Erbin Human genes 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000884279 Homo sapiens CD276 antigen Proteins 0.000 description 2
- 101001010810 Homo sapiens Erbin Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 1-oxidanylurea Chemical compound N[14C](=O)NO VSNHCAURESNICA-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 1
- 102000015790 Asparaginase Human genes 0.000 description 1
- 108010024976 Asparaginase Proteins 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108700031361 Brachyury Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006448 Bronchiolitis Diseases 0.000 description 1
- COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N Busulfan Chemical compound CS(=O)(=O)OCCCCOS(C)(=O)=O COVZYZSDYWQREU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007279 Carcinoid tumour of the gastrointestinal tract Diseases 0.000 description 1
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 description 1
- 206010062746 Carditis Diseases 0.000 description 1
- 241001466804 Carnivora Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000699679 Cricetulus migratorius Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010021042 Hypopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010056305 Hypopharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010024291 Leukaemias acute myeloid Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 1
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 description 1
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010028729 Nasal cavity cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241001617329 Norovirus isolates Species 0.000 description 1
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034811 Pharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101710173693 Short transient receptor potential channel 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010073062 Transcription Activator-Like Effectors Proteins 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039094 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 208000023915 Ureteral Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046392 Ureteric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 206010065867 alveolar rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002255 anal canal Anatomy 0.000 description 1
- 201000007696 anal canal cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229960003272 asparaginase Drugs 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 229960002092 busulfan Drugs 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000000959 ear middle Anatomy 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000024519 eye neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 201000007487 gallbladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000006866 hypopharynx cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 201000006747 infectious mononucleosis Diseases 0.000 description 1
- 208000021646 inflammation of heart layer Diseases 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H magnesium;potassium;trisodium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;acetate;tetrachloride;nonahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[Mg+2].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].CC([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H 0.000 description 1
- 208000006178 malignant mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000713 mesentery Anatomy 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 201000003956 middle ear cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 201000007425 nasal cavity carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000010309 neoplastic transformation Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 201000008106 ocular cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 208000029211 papillomatosis Diseases 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 201000002628 peritoneum cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 201000003437 pleural cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- -1 rituximab Chemical compound 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 201000002314 small intestine cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004149 tartrazine Substances 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 201000011294 ureter cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464403—Receptors for growth factors
- A61K39/464406—Her-2/neu/ErbB2, Her-3/ErbB3 or Her 4/ ErbB4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464448—Regulators of development
- A61K39/46445—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin
- A61K39/464451—Apoptosis related proteins, e.g. survivin or livin p53
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/46449—Melanoma antigens
- A61K39/464491—Melan-A/MART
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/27—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by targeting or presenting multiple antigens
- A61K2239/28—Expressing multiple CARs, TCRs or antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2301—Interleukin-1 (IL-1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2307—Interleukin-7 (IL-7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2312—Interleukin-12 (IL-12)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2315—Interleukin-15 (IL-15)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2321—Interleukin-21 (IL-21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
- C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Abstract
Se describen métodos para expandir selectivamente una serie de células T. Los métodos pueden comprender: modificar células T humanas para expresar un TCR, en donde el TCR comprende una región constante murina; producir una población de células que comprende varias células T humanas que expresan el TCR y varias células T humanas que no expresan el TCR; y cultivar la población de células en presencia de (i) células alimentadoras irradiadas, (ii) una o más citoquinas, y (iii) un anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo tiene especificidad antigénica por la constante murina. región del TCR, para expandir selectivamente el número de células T que expresan el TCR sobre el número de células T que no expresan el TCR. También se describen poblaciones relacionadas de células, composiciones farmacéuticas y métodos para tratar o prevenir el cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Métodos para expandir selectivamente células que expresan un TCR con una región constante murinaReferencia cruzada a solicitudes relacionadas
Esta solicitud de patente reivindica el beneficio de la solicitud de patente provisional estadounidense n.° 62/568.339, presentada el 5 de octubre de 2017.
Declaración referente a investigación o desarrollo patrocinado federalmente
Esta invención se realizó con apoyo del gobierno bajo el número de proyecto Z1A BC 010985 de los Institutos Nacionales de Salud, Instituto Nacional del Cáncer. El gobierno tiene ciertos derechos en la invención.
Material presentado electrónicamente
Se presenta simultáneamente una lista de secuencias de nucleótidos/aminoácidos legible por ordenador e identificada tal como sigue: un archivo ASCII (texto) de 8.876 bytes denominada “740358_ST25.txt”, con fecha del 24 de septiembre de 2018.
Antecedentes de la invención
El tratamiento del cáncer administrando células que se han modificado para expresar un receptor de células T (TCR) ha producido resultados clínicos positivos en algunos pacientes. No obstante, sigue habiendo obstáculos para el éxito más generalizado de tales terapias. Por ejemplo, una baja eficiencia de la administración del gen que codifica para el TCR exógeno puede dar como resultado bajos números de células que expresan el TCR exógeno. Por consiguiente, existe una necesidad no satisfecha de métodos mejorados de producción de células que expresan un TCR exógeno.
Breve sumario de la invención
Una realización de la invención proporciona un método de expansión selectiva de un número de células T, comprendiendo el método: modificar células T humanas para que expresen un TCR, en donde el TCR comprende una región constante murina; producir una población de células que comprende un número de las células T humanas que expresan el TCR y un número de células T humanas que no expresan el TCR; y cultivar la población de células en presencia de (i) células alimentadoras irradiadas, (ii) una o más citocinas, y (iii) un primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde el primer anticuerpo tiene especificidad antigénica por la región constante murina del TCR, para expandir selectivamente el número de las células T humanas que expresan el TCR con respecto al número de las células T humanas que no expresan el TCR.
Breve descripción de las varias vistas del/de los dibujos(s)
La figura 1A es un esquema que ilustra un constructo de nucleótidos que codifica para una región variable de cadena a de TCR humano (hVa), una región constante de cadena a de TCR murino (mCa), una secuencia de ligador sintético (L), una región variable de cadena p de TCR humano (hVp) y una región constante de cadena B de p de TCR murino (mCp).
La figura 1B es un esquema que ilustra un método de expansión selectiva del número de células T que expresan el mTCR según una realización de la invención.
La figura 2 muestra datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran (i) la expresión de CD3, CD4 o CD8 y (ii) la expresión de mTCRp detectada por FACS en células electroporadas con mTCR anti-ERBB2 mutado o mTCR anti-ERBB2IP mutado (ERBB2mutTCR o ERBB2IPmutTCR) que se sometieron a un protocolo de expansión rápida (REP) convencional usando Ac OKT3 o expansión selectiva usando Ac H57. Células T electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado; sin ADN/TCR) sirvieron como control negativo. Los números en los gráficos de puntos son los porcentajes de células mTCR+ detectadas.
Las figuras 3A y 3B son gráficos que muestran el porcentaje (%) de células mTCR p+ anti-ERBB2IP mutado (ERBB2IPmutTCR) (A) o mTCRp+ anti-ERBB2 mutado (ERBB2mutTCR) (B) que también expresan CD3, CD4 o CD8 detectadas tras la expansión selectiva con diversas concentraciones (ng/ml) del Ac H57. Células T electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado; sin ADN/TCR) sirvieron como control negativo. Células electroporadas que se sometieron a REP convencional con Ac OKT3 Ab en lugar de expansión selectiva con Ac H57 Ab sirvieron como control positivo para el crecimiento de células T no específicas.
La figura 4A es un esquema que ilustra un método de expansión selectiva del número de células T que expresan un TCR que comprende una región constante murina (mTCR) según una realización de la invención.
La figura 4B es un esquema que ilustra la unión del Ac H57 a la región constante de cadena p de TCR murino (mCp) de un TCR. Los otros componentes del TCR incluyen una región variable de cadena a de TCR humano (hVa), una región constante de cadena a de TCR murino (mCa), una secuencia de ligador sintético (L) y una región variable de cadena p de TCR humano (hVp).
Las figuras 5A-5D muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD3 y la expresión de la cadena p de TCR murino (mTCRp) detectada por FACS en células no transfectadas, no teñidas (A), células no transfectadas, teñidas (B), células electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR/transposón (Tn)) (C) y células electroporadas con el plásmido SBTS que codifica para el mTCR (4149-TCRa2b2/pSBSO) y el plásmido SBTS que codifica para transposasa descrito en el ejemplo 3 (pKan-CMV-SB 11) (D). Los números en los gráficos de puntos son los porcentajes de células CD3+/mTCRp+ (cuadrante superior derecho), CD3+/mTCRp- (cuadrante inferior derecho), CD37mTCRp_ (cuadrante inferior izquierdo) y CD3-/mTCRp+ (cuadrante superior izquierdo).
La figura 6 muestra datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD3 y la expresión de mTCRp detectada por FACS en células electroporadas con mTCR que se sometieron a expansión selectiva al número inicial indicado de células electroporadas (células mTCR+ en REP con las concentraciones indicadas de Ac H57 (ng/ml). Células electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) sirvieron como control negativo. Los números en los gráficos de puntos son los porcentajes de células CD3+/mTCRp+ (cuadrante superior derecho), CD3+/mTCRp- (cuadrante inferior derecho), CD37mTCRp- (cuadrante inferior izquierdo) y CD37mTCRp+ (cuadrante superior izquierdo).
La figura 7 muestra datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD3 y la expresión de mTCRp detectada por FACS en células electroporadas con mTCR que se sometieron a una segunda expansión con Ac H57 o Ac OKT3 y que se tiñeron o no se tiñeron. También se muestran datos experimentales (gráfico de puntos) que ilustran la expresión de CD4 y CD8 detectada por FACS en células electroporadas con mTCR que se sometieron a la segunda expansión con Ac OKT3.
Las figuras 8A y 8B muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD8 y la expresión de TCR anti-MART-1 detectada mediante FACS para células no transducidas (UT) (figura 8B) y transducidas (figura 8A) antes de la expansión (antes del protocolo de expansión rápida (REP)).
La figura 8C muestra datos experimentales (gráfico de puntos) que ilustran la expresión de CD8 y la expresión de TCR anti-MART-1 detectada mediante FACS para las células no transducidas de la figura 8A antes de la expansión (antes de REP) y tras la dilución hasta aproximadamente el 5 % de células mTCRb+.
La figura 9 muestra datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD8 y la expresión de TCR anti-MART-1 detectada por FACS para células UT o las células transducidas diluidas de la figura 8C tras la expansión con (i) 50 CU o 500 CU de IL-2 y (ii) Ac OKT3 o Ac H57 (“mTCRb”).
La figura 10A es un gráfico que muestra el porcentaje de células transducidas detectado para células UT o las células transducidas diluidas de la figura 8C tras la expansión con (i) 50 CU o 500 CU de IL-2 y (ii) Ac OKT3 o Ac H57 (“mTCRb”).
La figura 10B es un gráfico que muestra la expansión en veces lograda para células UT o las células transducidas diluidas de la figura 8C tras la expansión con (i) 50 CU o 500 CU de IL-2 y (ii) Ac OKT3 o Ac H57 (“mTCRb”).
Las figuras 11A-11C muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD8 y la expresión de mTCRb detectada por FACS antes de la expansión de células UT (figura 11A) o células transducidas con un TCR anti-MART-1 antes (figura 11B) y después (figura 11C) de una dilución de cuatro veces.
Las figuras 12A-12E muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD8 y expresión de mTCRb detectada por FACS tras la expansión de células UT (figura 12E) o las células transducidas con TCR diluidas de la figura 11C con OKT3 y 500 CU de IL-2 (figura 12A), H57 (mTCRb) y 500 CU de IL-2 (figura 12B), H57 (mTCRb) y 50 CU de IL-2 (figura 12C), o H57 (mTCRb) y sin IL-2 (figura 12D).
La figura 13A es un gráfico que muestra el porcentaje de células transducidas detectado para células UT o las células transducidas diluidas de la figura 11C tras la expansión con (i) 0 CU, 50 CU o 500 CU de IL-2 y (ii) Ac OKT3 Ab o Ac H57 (“mTCRb”).
La figura 13B es un gráfico que muestra la expansión en veces lograda para células UT o las células transducidas diluidas de la figura 11C tras la expansión con (i) 0 CU, 50 CU o 500 CU de IL-2 y (ii) Ac OKT3 o Ac H57 (“mTCRb”).
Las figuras 14A-14F muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD8 y la expresión de mTCRb detectada por FACS antes de la expansión (figura 14A) o tras la expansión de células transducidas con OKT3 (30 ng/ml) (figura 14B) o H57 (mTCRb) (5 ng/ml (figura 14F), 10 ng/ml (figura 14E), 50 ng/ml (figura 14D) o 500 ng/ml (figura 14C)).
La figura 15 es un gráfico que muestra la expansión en veces lograda para células transducidas con mTCR tras la expansión con OKT3 (30 ng/ml) o H57 (mTCRb) (5, 10, 50 o 500 ng/ml).
Las figuras 16A-16E muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD8 y la expresión de mTCRb detectada por FACS tras una segunda ronda de expansión de células transducidas con mTCR que se sometieron a una primera ronda de expansión con H57. La segunda ronda de expansión se llevó a cabo con OKT3 (30 ng/ml) (figura 16A) o H57 (mTCRb) (5 ng/ml (figura 16E), 10 ng/ml (figura 16D), 50 ng/ml (figura 16C) o 500 ng/ml (figura 16B)).
El gráfico de la figura 17 muestra la expansión en veces lograda para células transducidas con mTCR tras una segunda ronda de expansión de células transducidas con mTCR que se sometieron a una primera ronda de expansión con H57. La segunda ronda de expansión se llevó a cabo con OKT3 (30 ng/ml) o H57 (mTCRb) (5, 10, 50 o 500 ng/ml).
La figura 18 muestra datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD3 y expresión de mTCRb detectada por FACS el día tras la electroporación de p Bm C de los donantes 1 y 2 con 4149-HUWE1-TCR1 o 4149-TP53-TCRa2b2. PBMC no teñidas, PBMC no transfectadas y PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) sirvieron como controles negativos.
Las figuras 19A-19B muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD3 y la expresión de mTCRb por PBMC de los donantes 1 y 2 que se transpusieron con 4149-HUWE1-TCR1 o 4149-TP53-TCRa2b2 y que se sometieron a una ronda de expansión con H57 (figura 19B). PBMC no teñidas (figura 19A) y PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) (figura 19B) sirvieron como controles negativos.
Las figuras 20A-20B muestran datos experimentales (gráficos de puntos) que ilustran la expresión de CD3 y la expresión de mTCRb por PBMC de los donantes 1 y 2 que se transpusieron con 4149-HUWE1-TCR1 o 4149-TP53-TCRa2b2 y que se sometieron a una ronda de expansión con H57 (figura 20B) seguido por expansión usando el REP convencional. PBMC no teñidas (figura 20A) y PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) (figura 20B) sirvieron como controles negativos.
La figura 21A es un gráfico que muestra la concentración de IFN-y secretado tras el cocultivo de (i) DC pulsadas con DMSO, péptido HUWE1 WT o péptido HUWE1 mutado (mut), con (ii) células del donante 1 transpuestas con 4149-HUWE1-TCR1. DC cultivadas solas sirvieron como control. Media ± EEM; n=3 réplicas técnicas.
La figura 21B es un gráfico que muestra la concentración de IFN-y secretada tras el cocultivo de (i) DC pulsadas con DMSO, péptido TP53 WT o péptido TP53 mut con (ii) células del donante 1 transpuestas con 4149-TP53-TCRa2b2. DC cultivadas solas sirvieron como control. Media ± EEM; n=3 réplicas técnicas.
La figura 21C es un gráfico que muestra la concentración de IFN-y secretada tras el cocultivo de (i) DC pulsadas con DMSO, péptido HUWE1 WT, péptido HUWE1 mut, con (ii) células del donante 2 transpuestas con 4149-HUWE1-TCR1. DC cultivadas solas sirvieron como control. Media ± EEM; n=3 réplicas técnicas.
La figura 21D es un gráfico que muestra la concentración de IFN-y secretado tras el cocultivo de (i) DC pulsadas con DMSO, péptido TP53 WT o péptido TP53 mut con (ii) células del donante 2 transpuestas con 4149-TP53-TCRa2b2. DC cultivadas solas sirvieron como control. Media ± EEM; n=3 réplicas técnicas.
La figura 22 es un esquema que ilustra un método de expansión selectiva del número de células T que expresan un TCR que comprende una región constante murina (mTCR) según una realización de la invención.
La figura 23A es un gráfico que muestra el número total de células en una cubeta medido a cuatro puntos de tiempo durante el método descrito en el ejemplo 14: tras la electroporación (barras blancas), tras la expansión selectiva con H57 (barras rayadas), tras el enriquecimiento con perlas conjugadas con H57 (barras grises) y tras REP convencional con OKT3 (barras negras). Las células se electroporaron con 4149-HUWE1-TCR1 o 4149-TP53-TCRa2b2. Se siguió adelante con cubetas por triplicado en paralelo de manera que los datos mostrados sean la media /- EEM (n=3).
La figura 23B es un gráfico que muestra el porcentaje de células CD3+mTCR+ en una cubeta medido a cuatro puntos de tiempo durante el método descrito en el ejemplo 14: tras la electroporación (barras blancas), tras la expansión selectiva con H57 (barras rayadas), tras el enriquecimiento con perlas conjugadas con H57 (barras grises) y tras REP convencional con OKT3 (barras negras). Las células se electroporaron con 4149-HUWE1-TCR1 o 4149-TP53-TCRa2b2. Se siguió adelante con cubetas por triplicado en paralelo de manera que los datos mostrados sean la media /- EEM (n=3).
Las figuras 23C-23D son gráficos que muestran el porcentaje de células transpuestas con 4149-HUWE1-TCR1 (mTCR+) (figura 23C) o transpuestas con 4149-TP53-TCRa2b2 (mTCR+) (figura 23D) células medidas el día 28 (tras REP con OKT3) del método descrito en el ejemplo 14. PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) sirvieron como control negativo. Simulado se indica mediante (1) y células transpuestas con TCR se indican mediante (2). Se siguió adelante con cubetas por triplicado en paralelo de manera que los datos mostrados sean la media /- EEM (n=3).
La figura 23E es un gráfico que muestra el porcentaje de células CD4+ mTCRp+ (barras blancas) o CD8+mTCRp+ (barras negras) medido el día 28 (tras REP con OKT3) del método descrito en el ejemplo 14. El TCR era 4149-HUWE1-TCR1 o 4149-TP53-TCRa2b2. Se siguió adelante con cubetas por triplicado en paralelo de manera que los datos mostrados sean la media /- EEM (n=3).
La figura 24A es un gráfico que muestra el porcentaje de células positivas para los marcadores indicados medido antes (día 1) (barras blancas) o después (día 28) (barras negras) de la expansión de los números de células. Las células se transpusieron con el 4149-HUWE1-TCR1.
La figura 24B es un gráfico que muestra el porcentaje de células mTCRp+ con los fenotipos indicados medido antes (día 1) (barras blancas) o después (día 28) (barras negras) de la expansión de los números de células. Las células se transpusieron con el 4149-HUWE1-TCR1. Los fenotipos son células T de memoria central (T<cm>), células T madre de memoria (células T<scm>), células T indiferenciadas (T<n>), células T de memoria efectoras (T<em>) y células T RA de memoria efectora (T<emra>).
La figura 24C es un gráfico que muestra el porcentaje de células positivas para los marcadores indicados medido antes (día 1) (barras blancas) o después (día 28) (barras negras) de la expansión de los números de células. Las células se transpusieron con el 4149-TP53-TCRa2b2.
La figura 24D es un gráfico que muestra el porcentaje de células mTCRp+ con los fenotipos indicados medido antes (día 1) (barras blancas) o después (día 28) (barras negras) de la expansión de los números de células. Las células se transpusieron con el 4149-TP53-TCRa2b2.
La figura 25A es un gráfico que muestra la concentración de IFN-y secretada tras el cocultivo de (i) DC pulsadas con DMSO o 10, 1 o 0,1 |jg/ml de péptido HUWE1 WT (barras blancas) o péptido HUWE1 mut (barras negras) con (ii) células transpuestas con 4149-HUWE1-TCR1.
La figura 25B es un gráfico que muestra la concentración de IFN-y secretado tras el cocultivo de (i) DC pulsadas con DMSO o 10, 1 o 0,1 jg/ml de péptido TP53 WT (barras blancas) o péptido TP53 mut (barras negras) con (ii) células transpuestas con 4149-TP53-TCRa2b2.
Descripción detallada de la invención
Una realización de la invención proporciona un método de expansión selectiva del número de células T. El método comprende modificar células T humanas para que expresen un TCR, en donde el TCR comprende una región constante murina (a continuación en el presente documento, “mTCR”). Los métodos de la invención pueden proporcionar una cualquiera o más de una variedad de ventajas. Por ejemplo, los métodos de la invención pueden proporcionar la expansión selectiva de los números de células T que expresan el mTCR con respecto al número de células que no expresan el mTCR. Los métodos de la invención pueden proporcionar poblaciones de células con una mayor proporción de células que expresan el mTCR en comparación con poblaciones de células preparadas mediante métodos que no expanden selectivamente el número de células T tal como se describe en el presente documento. Sin querer restringirse a ninguna teoría o mecanismo particular, se cree que poblaciones de células con una mayor proporción de células que expresan el mTCR pueden proporcionar uno o ambos de destrucción mejorada de células cancerosas diana y tratamiento de cáncer en comparación con poblaciones de células con una menor proporción de células que expresan el mTCR.
Un TCR comprende generalmente dos polipéptidos (es decir, cadenas polipeptídicas), tal como una cadena a de un TCR, una cadena p de un TCR, una cadena y de un TCR, una cadena 8 de un TCR, o una combinación de las mismas. Tales cadenas polipeptídicas de los TCR se conocen en la técnica. El mTCR puede comprender cualquier secuencia de aminoácidos, siempre que el mTCR comprenda una región constante murina y pueda unirse específicamente a y reconocer inmunológicamente un antígeno, tal como un antígeno asociado a una afección o epítopo del mismo.
El mTCR puede ser un TCR exógeno, es decir, un TCR que no es nativo para (que no se produce de manera natural en) la célula T. Un TCR exógeno puede ser un TCR recombinante. Un TCR recombinante es un TCR que se ha generado a través de expresión recombinante de uno o más genes que codifican para la cadena a, p, y y/o 8 de TCR exógenos. En la técnica se conocen métodos de preparación de TCR recombinantes.
En una realización de la invención, el mTCR comprende dos cadenas polipeptídicas, cada una de las cuales comprende una región variable que comprende una región determinante de complementariedad (CDR) 1, una CDR2 y una CDR3 de un TCR. Preferiblemente, el mTCR comprende la CDR1 de una cadena a, la CDR2 de una cadena a, la CDR3 de una cadena a, la CDR1 de una cadena p, la CDR2 de una cadena p y la CDR3 de una cadena p.
En una realización, el mTCR puede comprender una secuencia de aminoácidos de una región variable de un TCR que comprende las CDR expuestas anteriormente. En este sentido, el TCR puede comprender una región variable de cadena a y una región variable de cadena p.
En una realización de la invención, el mTCR comprende además una región constante murina además de la región variable o las CDR descritas anteriormente. Preferiblemente, el mTCR comprende tanto una región constante murina de cadena a como una región constante murina de cadena p. Tal como se usa en el presente documento, el término “murino”, cuando se refiere a un TCR o cualquier componente de un TCR descrito en el presente documento (por ejemplo, región determinante de complementariedad (CDR), región variable, región constante, cadena alfa y/o cadena beta), significa un TCR (o componente del mismo) que se deriva de un ratón, es decir, un TCR (o componente del mismo) que se originó de o se expresó, en un momento, por una célula T de ratón.
El mTCR puede comprender una cadena a de TCR que comprende una región variable y una región constante y una cadena p de TCR que comprende una región variable y una región constante. La región variable de cadena a y la región variable de cadena p se denominan a continuación en el presente documento conjuntamente “región variable” del TCR. La región constante de cadena a y la región constante de cadena p se denominan a continuación en el presente documento conjuntamente “región constante” del TCR.
En una realización de la invención, el mTCR es un TCR murino. Un TCR murino puede comprender cadenas polipeptídicas derivadas totalmente de un ratón. En este sentido, el TCR murino puede comprender una región variable murina y una región constante murina. Los ejemplos de TCR murinos incluyen, pero no se limitan a, los dados a conocer en las patentes estadounidenses n.os 8.216.565 y 9.487.573 y la solicitud de patente estadounidense n.° 15/528.8l3.
En otra realización de la invención, el mTCR es un TCR quimérico o híbrido compuesto por secuencias de aminoácidos derivadas de TCR de dos especies de mamíferos diferentes, concretamente, una especie de ratón y otra que no es de ratón. Por ejemplo, el mTCR puede comprender una región variable humana y una región constante murina. Se dan a conocer ejemplos de TCR quiméricos que comprenden una región variable humana y una región constante de ratón en las solicitudes de patente n.os PCT/US2016/050875, PCT/US2017/044615, PCT/US2017/027865, las publicaciones de solicitud de patente estadounidense n.os 2013/0274203, 2017/0145070 y 2016/0152681; y la patente estadounidense n.° 8.785.601.
En una realización de la invención, el mTCR es un TCR específico de antígeno. Las frases “específico de antígeno” y “especificidad antigénica”, tal como se usan en el presente documento, significan que el mTCR puede unirse específicamente a y reconocer inmunológicamente un antígeno, o un epítopo del mismo, de manera que la unión del mTCR al antígeno, o el epítopo del mismo, provoca una respuesta inmunitaria.
El antígeno que reconoce el mTCR específico de antígeno puede ser cualquier antígeno que sea característico de una afección. Por ejemplo, el antígeno puede ser, pero no se limita a, un antígeno de cáncer (también denominado antígeno tumoral o antígeno asociado a tumor) o un antígeno viral. En la técnica se conocen antígenos virales e incluyen, por ejemplo, cualquier proteína viral, por ejemplo, env, gag, pol, gp120, timidina cinasa, y similares.
El término “antígeno de cáncer”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier molécula (por ejemplo, proteína, polipéptido, péptido, lípido, hidrato de carbono, etc.) única o predominantemente expresado o sobreexpresado por una célula tumoral o célula cancerosa, de manera que el antígeno está asociado con el tumor o cáncer. El antígeno de cáncer puede expresarse adicionalmente por células normales, no tumorales o no cancerosas. Sin embargo, en tales casos, la expresión del antígeno de cáncer por células normales, no tumorales o no cancerosas no es tan robusta como la expresión por células tumorales o cancerosas. En este sentido, las células tumorales o cancerosas pueden sobreexpresar el antígeno o expresar el antígeno a un nivel significativamente mayor, en comparación con la expresión del antígeno por células normales, no tumorales o no cancerosas. Además, el antígeno de cáncer puede expresarse adicionalmente por células de un estado de desarrollo o maduración diferente. Por ejemplo, el antígeno de cáncer puede expresarse adicionalmente por células de la fase embrionaria o fetal, células que no se encuentran normalmente en un huésped adulto. Alternativamente, el antígeno de cáncer puede expresarse adicionalmente por células madre o células precursoras, células que no se encuentran normalmente en un huésped adulto. En la técnica se conocen antígenos de cáncer e incluyen, por ejemplo, mesotelina, CD19, CD22, CD276 (B7H3), gp100, MART-1, variante III de receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFRVIII), TRP-1, TRP-2, tirosinasa, KRAS mutado, NY-ESO-1 (también conocido como CAG-3), MAGE-1,<m>A<g>E-3, etc.
En una realización, el antígeno de cáncer es un neoantígeno. Un neoantígeno es un antígeno específico de tumor o específico de cáncer generado a partir de mutaciones génicas que se producen en células tumorales o células cancerosas durante la transformación neoplásica. Un neoantígeno puede ser único para el paciente. En una realización preferida, el neoantígeno es un neoantígeno inmunogénico.
El antígeno de cáncer puede ser un antígeno expresado por cualquier célula de cualquier cáncer o tumor, incluidos los cánceres y tumores descritos en el presente documento. El antígeno de cáncer puede ser un antígeno de cáncer de solo un tipo de cáncer o tumor, de manera que el antígeno de cáncer está asociado con o es característico de solo un tipo de cáncer o tumor. Alternativamente, el antígeno de cáncer puede ser un antígeno de cáncer (por ejemplo, puede ser característico) de más de un tipo de cáncer o tumor. Por ejemplo, el antígeno de cáncer puede expresarse tanto por células de cáncer de mama como de próstata y no expresarse en absoluto por células normales, no tumorales o no cancerosas.
La afección que está asociada con o se caracteriza por el antígeno reconocido por el mTCR específico de antígeno puede ser cualquier afección. Por ejemplo, la afección puede ser un cáncer o una afección viral, tal como se comenta en el presente documento.
El cáncer puede ser cualquier cáncer, incluido cualquiera de cáncer linfocítico agudo, leucemia mieloide aguda, rabdomiosarcoma alveolar, cáncer de hueso, cáncer de cerebro, cáncer de mama, cáncer de ano, canal anal o anorrecto, cáncer de ojo, cáncer de conducto biliar intrahepático, cáncer de las articulaciones, cáncer de cuello, vesícula biliar o pleura, cáncer de nariz, cavidad nasal u oído medio, cáncer de la cavidad bucal, cáncer de vulva, leucemia linfocítica crónica, cáncer mieloide crónico, cáncer de colon, cáncer de esófago, cáncer de cuello uterino, tumor carcinoide gastrointestinal, linfoma de Hodgkin, cáncer de hipofaringe, cáncer de riñón, cáncer de laringe, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, mesotelioma maligno, melanoma, mieloma múltiple, cáncer de nasofaringe, linfoma no Hodgkin, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de peritoneo, epiplón y mesenterio, cáncer de faringe, cáncer de próstata, cáncer de recto, cáncer renal (por ejemplo, carcinoma de células renales (CCR)), cáncer de intestino delgado, cáncer de tejidos blandos, cáncer de estómago, cáncer testicular, cáncer de tiroides, uréter cáncer y cáncer de vejiga urinaria.
Para los fines del presente documento, “afección viral” significa una afección que puede transmitirse de persona a persona o de organismo a organismo y está provocada por un virus. En una realización de la invención, la afección viral está provocada por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus del herpes, virus de la viruela, hepadnavirus, virus del papiloma, adenovirus, coronavirus, ortomixovirus, paramixovirus, flavivirus y calicivirus. Por ejemplo, la afección viral puede estar provocada por un virus seleccionado del grupo que consiste en virus respiratorio sincitial (VRS), virus influenza, virus del herpes simple, virus de Epstein-Barr, virus de la varicela, citomegalovirus, virus de la hepatitis A, virus de la hepatitis B, virus de la hepatitis C, virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), virus linfotrópico T humano, calicivirus, adenovirus y virus Arena.
La afección viral puede ser, por ejemplo, gripe, neumonía, herpes, hepatitis, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, síndrome de fatiga crónica, síndrome respiratorio agudo repentino (SARS), gastroenteritis, enteritis, carditis, encefalitis, bronquiolitis, papilomatosis respiratoria, meningitis, VIH/SIDA y mononucleosis.
El método de la invención comprende modificar células T humanas para que expresen el mTCR. Las células T pueden aislarse o purificarse. El término “aislado”, tal como se usa en el presente documento, significa haberse retirado de su entorno natural. El término “purificado”, tal como se usa en el presente documento, significa que se ha aumentado su pureza, en donde “pureza” es un término relativo y no debe interpretarse necesariamente como pureza absoluta. Células T “purificadas” se refiere a células T que se han separado de otros componentes naturales, tales como tejidos, células, proteínas, ácidos nucleicos, etc.
Las células T pueden ser cualquier célula T humana, tal como células T cultivadas, por ejemplo, células T primarias o células T de una línea de células T cultivadas, por ejemplo, Jurkat, SupT1, etc., o células T obtenidas de un ser humano. Si se obtienen de un ser humano, las células T pueden obtenerse de numerosas fuentes, incluidas, pero sin limitarse a, sangre, médula ósea, ganglios linfáticos, timo, bazo u otros tejidos o fluidos. Las células también pueden enriquecerse o purificarse. Las células T pueden ser cualquier tipo de células T y pueden estar en cualquier etapa de desarrollo, incluidas, entre otras, células T doble positivas CD4+/CD8+, células T auxiliares CD4+, por ejemplo, células Th1 y Th2, células T CD4+, células T CD8+ (por ejemplo, células T citotóxicas), células mononucleares de sangre periférica (PBMC), leucocitos de sangre periférica (PBL), células infiltrantes de tumores (TIL), células T de memoria, células T indiferenciadas, y similares.
El método puede comprender modificar las células T humanas para que expresen el mTCR usando cualquier técnica adecuada para introducir el mTCR, o un ácido nucleico que codifica para el mTCR, en las células T humanas, y obtener la expresión del mTCR por las células T humanas. Tales técnicas se describen, por ejemplo, en Green y Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4a ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, Nueva York (2012). Los ejemplos de técnicas que pueden ser útiles para modificar las células T humanas para que expresen el TCR incluyen, pero no se limitan a, técnicas de transfección, transformación, transducción, electroporación y edición génica. En una realización de la invención, las células T humanas se modifican usando transposones, vectores lentivirales o vectores retrovirales. Los ejemplos de transposones incluyen, pero no se limitan a, el sistema de transposones SLEEPING BEAUTY (SBTS) (disponible en Intrexon (Germaintown, MD) y Ziopharm (Boston, MA)), el sistema de transposones PIGGYBAc (disponible de Transposagen, Lexington, KY) y el sistema de transposones Tol2. Los ejemplos de técnicas de edición génica pueden incluir el sistema de repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas (CRISPR)/Cas (Chenget al.,Cell Res., 23: 1163-71 (2013)), meganucleasas, nucleasas de dedos de zinc (ZFN) y nucleasas basadas en efectores de tipo activador de la transcripción (TALEN).
El método comprende además producir una población de células que comprende un número de las células T humanas que expresan el mTCR y un número de las células T humanas que no expresan el mTCR. La modificación de las células T humanas para que expresen el mTCR puede llevarse a cabo con eficiencia variable. Por consiguiente, la modificación de las células T humanas para que expresen el mTCR puede dar como resultado una población mixta de células que incluye células que expresan el mTCR, así como células que no expresan el mTCR.
El método comprende además cultivar la población de células en presencia de (i) células alimentadoras irradiadas, (ii) una o más citocinas, y (iii) un primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde el primer anticuerpo se une específicamente a la región constante murina del mTCR, para expandir selectivamente el número de las células T humanas que expresan el mTCR con respecto al número de las células T humanas que no expresan el mTCR (también denominado en el presente documento “expansión selectiva”).
Las células alimentadoras irradiadas pueden comprender cualquier célula alimentadora irradiada adecuada para expandir el número de células T. En una realización de la invención, las células alimentadoras irradiadas comprenden (i) células alimentadoras alogénicas irradiadas; (ii) células alimentadoras autólogas irradiadas; o (ii) tanto (i) como (ii). El número de células alimentadoras irradiadas empleadas no está limitado y puede seleccionarlo el experto en la técnica dependiendo de una variedad de factores tales como, por ejemplo, la aplicación y el número deseado de células que ha de obtenerse. Por ejemplo, múltiplos de 2 * 107 células alimentadoras irradiadas pueden ser útiles para la expansión en estudios de investigación a pequeña escala. Múltiplos de 1 * 108 células alimentadoras irradiadas pueden ser útiles para una expansión a media escala. Múltiplos de aproximadamente 2 a aproximadamente 30 de 5 * 108 células alimentadoras irradiadas pueden ser útiles para expansión a gran escala (por ejemplo, producción clínica) (normalmente hasta aproximadamente 1,5 * 1010). Por ejemplo, el método puede emplear de aproximadamente 1 * 109 a aproximadamente 4 * 109 células alimentadoras alogénicas y/o células alimentadoras autólogas, preferiblemente de aproximadamente 2 * 109 a aproximadamente 3 * 109 células alimentadoras alogénicas y/o células alimentadoras autólogas.
La una o más citocinas pueden comprender una cualquiera o más citocinas adecuadas para expandir el número de células T. En una realización de la invención, la una o más citocinas comprenden una cualquiera o más de interleucina (IL)-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IL-21.
El método puede comprender además cultivar la población de células en presencia de un primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde el primer anticuerpo se une específicamente a la región constante murina del mTCR. El primer anticuerpo puede ser cualquier tipo de inmunoglobulina que se conozca en la técnica. Por ejemplo, el primer anticuerpo puede ser un anticuerpo recombinante. El primer anticuerpo puede ser de cualquier isotipo, por ejemplo, IgA, IgD, IgE, IgG (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4), IgM, etc. El primer anticuerpo puede ser monoclonal o policlonal. El primer anticuerpo puede ser un anticuerpo que se produce de manera natural, por ejemplo, un anticuerpo aislado y/o purificado de un mamífero, por ejemplo, conejo, cabra, caballo, pollo, hámster, ser humano, etc. Alternativamente, el primer anticuerpo puede ser un anticuerpo modificado genéticamente, por ejemplo, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo quimérico. El primer anticuerpo puede estar en forma monomérica o polimérica. Además, el primer anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, puede tener cualquier nivel de afinidad o avidez por la región constante murina del mTCR.
En una realización de la invención, el primer anticuerpo comprende dos cadenas polipeptídicas (una cadena pesada y una cadena ligera), cada una de las cuales comprende una región variable que comprende una región determinante de complementariedad (CDR) 1, una CDR2 y una CDR3 de un anticuerpo. El primer anticuerpo puede comprender una CDR1 de cadena pesada, una CDR2 de cadena pesada, una CDR3 de cadena pesada, una CDR1 de cadena ligera, una CDR2 de cadena ligera y una CDR3 de cadena ligera. En una realización de la invención, el primer anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera.
La porción de unión a antígeno del primer anticuerpo puede ser cualquier porción que tenga al menos un sitio de unión a antígeno. En una realización de la invención, la porción de unión a antígeno puede comprender la CDR1 de cadena pesada, la CDR2 de cadena pesada, la CDR3 de cadena pesada, la CDR1 de cadena ligera, la CDR2 de cadena ligera y la CDR3 de cadena ligera del anticuerpo. En otra realización de la invención, la porción de unión a antígeno puede comprender la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera del anticuerpo. La porción de unión a antígeno del primer anticuerpo puede ser un fragmento Fab (Fab), fragmento F(ab')2, fragmento Fab', fragmento Fv, fragmento de región variable de cadena sencilla (scFv), fragmento de región variable estabilizado con disulfuro (dsFv), scFv2CH3, scFv4, scFv3, scFv2, scFv-Fc o un (scFv)2. Un fragmento de región variable de cadena sencilla (scFv), que es una proteína de fusión que incluye el dominio variable (V) de una cadena pesada de anticuerpo unido a un domino V de una cadena ligera de anticuerpo por medio de un péptido sintético, puede generarse usando técnicas de ADN recombinante de rutina. De manera similar, pueden prepararse fragmentos de región variable estabilizados con disulfuro (dsFv) mediante tecnología de ADN recombinante. Sin embargo, las porciones de unión a antígeno del primer anticuerpo no están limitadas a estos tipos a modo de ejemplo de porciones de unión a antígeno. Los anticuerpos, y porciones de unión a antígeno de los mismos, se denominan conjuntamente a continuación en el presente documento “anticuerpos” a menos que se especifique lo contrario.
El primer anticuerpo puede ser cualquier anticuerpo que se una específicamente a la región constante murina del mTCR. En una realización de la invención, el primer anticuerpo se une específicamente a la región constante murina del mTCR y no se une a ninguna porción de un TCR humano, por ejemplo, una región constante de TCR humano o cualquier porción del complejo de TCR humano. El complejo de TCR comprende las cadenas a y p de TCR con tres cadenas de señalización diméricas: CD38/g, CD3y/g y CD247 C/C o C/n. Las cadenas CD38/g y CD3y/g se denominan conjuntamente complejo de CD3.
El primer anticuerpo puede unirse específicamente a la región constante murina de la cadena a del mTCR o la región constante murina de la cadena p del mTCR. En una realización preferida, el primer anticuerpo se une específicamente a la región constante murina de la cadena p del mTCR. La región constante murina de la cadena p del mTCR, a la que se une el anticuerpo específicamente, puede comprender o consistir en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 (la secuencia de aminoácidos de una región constante murina de longitud completa de la cadena p del mTCR). El primer anticuerpo puede unirse específicamente a cualquier porción de la región constante murina de la cadena p del mTCR. Por ejemplo, el primer anticuerpo puede unirse específicamente a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 (la secuencia de aminoácidos de un epítopo mínimo a modo de ejemplo de la región constante murina de longitud completa de la cadena p del mTCR). En una realización de la invención, el primer anticuerpo se une específicamente a los residuos de aminoácido D2, R4, N5, T7, E101, D103, K104, W105, P106, E107, G108, S109 y P110 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
Están disponibles comercialmente anticuerpos que se unen específicamente a la región constante murina del mTCR. Por ejemplo, un anticuerpo que se une específicamente a la región constante murina de la cadena p del mTCR es el anticuerpo H57 (también denominado H57-597) (disponible de Biolegend, San Diego, CA). H57 es un anticuerpo IgG de hámster armenio y se describe, por ejemplo, en Kuboet al.,J. Immunol., 142(8): 2736-42 (1989) y Grégoireet al.,PNAS, 88: 8077-81 (1991). El epítopo del anticuerpo H57 se describe, por ejemplo, en Wanget al.,EMBO J., 17(1): 10-26 (1998). El anticuerpo H57 se une específicamente a los residuos de aminoácido D2, R4, N5, T7, E102, D104, K105, W106, P107, E108, G109, S110 y P111 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
En una realización de la invención, el primer anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera. Por ejemplo, el primer anticuerpo (Ab) puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 (la región variable de la cadena pesada de Ac H57) o SEQ ID NO: 4 (la región variable de la cadena ligera de Ac H57), o ambas SEQ ID NO: 3 y 4. Preferiblemente, el primer anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de ambas de SEQ ID NO: 3 y 4. En una realización de la invención, el primer anticuerpo comprende la región determinante de complementariedad (CDR) 1, la CDR2 y la CDR3 de la cadena pesada de Ac H57 de SEQ ID NO: 3 y la CDR1, la CDR2 y la CDR3 de la cadena ligera de Ac H57 de SEQ ID<n O :>4.
En una realización de la invención, el primer anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera que comprende las regiones variables expuestas anteriormente. Por ejemplo, el primer anticuerpo puede comprender, consistir en o consistir esencialmente en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5 (la cadena pesada de Ac H57) o SEQ ID NO: 6 (la cadena ligera de Ac H57), o ambas SEQ ID NO: 5 y 6. Preferiblemente, el primer anticuerpo comprende las secuencias de aminoácidos de ambas de SEQ ID NO: 5 y 6.
El cultivo de la población de células en presencia de (i) células alimentadoras irradiadas, (ii) una o más citocinas y (iii) un anticuerpo, tal como se describe en el presente documento, expande ventajosamente de manera
selectiva el número de células T que expresan el mTCR con respecto al número de células T que no expresan el
mTCR. En este sentido, los métodos de la invención pueden proporcionar, ventajosamente, poblaciones de
células con una mayor proporción de células que expresan el mTCR en comparación con métodos de expansión
del número de células que no emplean un anticuerpo que se une específicamente a la región constante murina
del TCR. En una realización de la invención, el método aumenta el número de células T que expresan el mTCR
en de aproximadamente 5 veces o menos a aproximadamente 4.000 veces o más. Por ejemplo, los métodos de
la invención pueden aumentar el número de células que expresan mTCR en de aproximadamente 5 veces a aproximadamente 4.000 veces, de aproximadamente 100 veces a aproximadamente 3.500 veces, de aproximadamente 1.000 veces a aproximadamente 3.000 veces, de aproximadamente 1.500 veces a aproximadamente 2.500 veces, de aproximadamente 10 veces a aproximadamente 1.000 veces, de aproximadamente 50 veces a aproximadamente 850 veces, de aproximadamente 100 veces a aproximadamente
900 veces, de aproximadamente 150 veces a aproximadamente 850 veces, de aproximadamente 200 veces a aproximadamente 800 veces, de aproximadamente 250 veces a aproximadamente 750 veces, de aproximadamente 300 veces a aproximadamente 700 veces, de aproximadamente 350 veces a aproximadamente 650 veces o de aproximadamente 400 veces a aproximadamente 600 veces. Por ejemplo, los
métodos de la invención pueden aumentar el número de células que expresan mTCR en aproximadamente 10
veces, aproximadamente 50 veces, aproximadamente 100 veces, aproximadamente 150 veces, aproximadamente 200 veces, aproximadamente 250 veces, aproximadamente 300 veces, aproximadamente 350
veces, aproximadamente 400 veces, aproximadamente 450 veces, aproximadamente 500 veces, aproximadamente 550 veces, aproximadamente 600 veces, aproximadamente 650 veces, aproximadamente 700
veces, aproximadamente 750 veces, aproximadamente 800 veces, aproximadamente 850 veces, aproximadamente 900 veces, aproximadamente 950 veces, aproximadamente 1.000 veces, o un intervalo de dos cualesquiera de los valores anteriores. La expansión en veces anterior puede lograrse a lo largo de un periodo
de aproximadamente 10 a aproximadamente 14 días, preferiblemente de aproximadamente 14 días. La expansión en veces lograda por los métodos de la invención puede ser altamente variable y puede ser dependiente del donante.
En una realización de la invención, el método produces una población de células expandida selectivamente, en
donde de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 95 % de las células en la población expandida selectivamente expresan el TCR que comprende una región constante murina. En este sentido, el método puede
producir una población de células expandida selectivamente, en donde de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 95 %, de aproximadamente el 15 % a aproximadamente el 90 %, de aproximadamente el
20 % a aproximadamente el 85 %, de aproximadamente el 25 % a aproximadamente el 80 %, de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 75 %, de aproximadamente el 35 % a aproximadamente el
70 % o de aproximadamente el 40 % a aproximadamente el 65 % de las células en la población expandida selectivamente expresan el mTCR. El método puede producir una población de células expandida selectivamente, en donde aproximadamente el 10 %, aproximadamente el 15 %, aproximadamente el 20 %, aproximadamente el 25 %, aproximadamente el 30 %, aproximadamente el 35 %, aproximadam aproximadamente el 45 %, aproximadamente el aproximadamente el 55 %, aproximadam aproximadamente el 65 %, aproximadamente el 70 %, aproximadamente el 75 %, aproximadam aproximadamente el 85 %, aproximadamente el 90 %, aproximadamente el 95 %, o un intervalo de dos cualesquiera de los valores anteriores, de las células en la población expandida selectivamente expresan el
mTCR.
Los métodos de la invención pueden producir, ventajosamente, cualquier número de células que expresan mTCR
T que pueden ser adecuadas para cualquier de una variedad de aplicaciones. En una realización de la invención,
el método puede producir de aproximadamente 1 * 106 a aproximadamente 1 * 1011 o más células T que
expresan el mTCR. Por ejemplo, en recipientes pequeños (por ejemplo, un frasco T25), los métodos de la
invención pueden producir de aproximadamente 1 * 106 a aproximadamente 1 * 107 células T que expresan el
mTCR. En un recipiente más grande (por ejemplo, un frasco T175), los métodos de la invención pueden producir
de aproximadamente 5 * 106 a aproximadamente 3 * 107 células T que expresan el mTCR. En otros recipientes
(por ejemplo, un frasco GREX, disponible de Wilson Wolf Manufacturing, New Brighton, MN), los métodos de la
invención pueden producir de aproximadamente 1 * 109 a aproximadamente 1 * 1010 células T que expresan el
mTCR. Una población de aproximadamente 1 * 106 a aproximadamente 1 * 1010 células T que expresan el
mTCR puede ser útil para experimentos de cribado a pequeña escala. También puede obtenerse un mayor
número de células que expresan el mTCR, por ejemplo, aproximadamente 1,5 * 1010 o más usando los métodos
de la invención, por ejemplo, para aplicaciones clínicas. El número de células T que expresan el mTCR producidas mediante los métodos de la invención puede ser altamente variable y puede ser dependiente del donante.
El método puede comprender llevar a cabo no más de una única ronda de expansión selectiva de los números
de células que expresan mTCR o múltiples rondas de expansión selectiva de los números de células que
expresan mTCR. En una realización de la invención, el método comprende llevar a cabo una o más rondas de expansión selectiva tal como se describe en el presente documento con respecto a otros aspectos de la
invención, seguido por una o más rondas de expansión no selectiva de los números de células. En este sentido, el método puede comprender además cultivar la población de células en presencia de (i) una o ambas de células alimentadoras alogénicas irradiadas y células alimentadoras autólogas irradiadas, (ii) una o más citocinas y (iii) un segundo anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al complejo de CD3 humano (también denominado en el presente documento “expansión no selectiva”). La expansión de los números de células T puede lograse mediante cualquiera de varios métodos tal como se describe en, por ejemplo, la patente estadounidense 8.034,334; la patente estadounidense 8.383.099; la publicación de solicitud de patente estadounidense n.° 2012/0244133; Dudleyet al.,J. Immunother., 26:332-42 (2003); y Riddellet al.,J. Immunol. Methods, 128:189-201 (1990). Por ejemplo, los números de células T pueden expandirse de manera no selectiva usando un anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al complejo de CD3 humano en presencia de linfocitos alimentadores y o bien interleucina-2 (IL-2) o bien interleucina-15 (IL-15), prefiriéndose IL-2. Un ejemplo de anticuerpo que se une específicamente al complejo de CD3 humano es OKT3 (disponible de Ortho-McNeil, Raritan, N.J.).
Múltiples rondas de expansión selectiva, o una o más rondas de expansión selectiva seguido por una o más rondas de expansión no selectiva, pueden aumentar el número de mTCR en aproximadamente 100.000 veces o más. En una realización de la invención, el método produce una población de células, en donde de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 99 % de las células en la población expresan el TCR que comprende una región constante murina. Múltiples rondas de expansión selectiva, o una o más rondas de expansión selectiva seguido por una o más rondas de expansión no selectiva, pueden producir una población de células, en donde de aproximadamente el 25 % a aproximadamente el 95 %, de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 90 %, de aproximadamente el 35 % a aproximadamente el 85 %, de aproximadamente el 40 % a aproximadamente el 80 %, de aproximadamente el 45 % a aproximadamente el 75 % o de aproximadamente el 50 % a aproximadamente el 70 % de las células en la población expresan el mTCR. El método puede producir una población de células, en donde aproximadamente el 20 %, aproximadamente el 25 %, aproximadamente el 30 %, aproximadamente el 35 %, aproximadamente el 40 %, aproximadamente el 45 %, aproximadamente el 50 %, aproximadamente el 55 %, aproximadamente el 60 %, aproximadamente el 65 %, aproximadamente el 70 %, aproximadamente el 75 %, aproximadamente el 80 %, aproximadamente el 85 %, aproximadamente el 90 %, aproximadamente el 95 %, aproximadamente el 99 %, o un intervalo de dos cualesquiera de los valores anteriores, de las células en la población expresan el mTCR.
En una realización de la invención, el método comprende además separar las células T humanas que expresan el TCR de las células T humanas que no expresan el TCR usando el primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente la región constante murina del TCR. En este sentido, el método puede comprender poner en contacto físicamente una población mixta de células que comprende células que expresan el mTCR y células que no expresan el mTCR con el anticuerpo de modo que el anticuerpo se una específicamente a la región constante murina del TCR. El anticuerpo puede estar unido a un soporte, por ejemplo, perlas. El método puede comprender además lavar el anticuerpo y las células de modo que todas o una parte de las células que no expresan el mTCR se eliminen de las células que sí expresan el mTCR. El método puede comprender además eluir las células que expresan mTCR del anticuerpo. Se describen ejemplos de técnicas para separar células T, por ejemplo, en Denigeret al.,Mol. Ther., 24(6): 1078-89 (2016) y Fieldet al.,PLoS One, 8(6): e68201 (2013).).
Los métodos de la invención pueden proporcionar ventajosamente una población de células que está enriquecida en células que expresen el mTCR. Por consiguiente, una realización de la divulgación proporciona una población de células que comprende un número expandido selectivamente de células T preparadas mediante cualquiera de los métodos descritos en el presente documento. La población de células puede ser una población heterogénea que comprende las células que expresan mTCR junto con al menos otra célula, por ejemplo, una célula T que no expresa el mTCR, o una célula distinta de una célula T, por ejemplo, una célula B, un macrófago, un neutrófilo, un eritrocito, un hepatocito, una célula endotelial, una célula epitelial, una célula muscular, una célula cerebral, etc. Alternativamente, la población de células puede ser una población sustancialmente homogénea, en la que la población comprende principalmente de (por ejemplo, que consiste esencialmente en) células T que expresan mTCR. La población también puede ser una población clonal de células, en la que todas las células de la población son clones de una única célula T que expresa el mTCR, de modo que todas las células de la población expresan el mTCR. En una realización de la divulgación, la población de células es una población clonal que comprende células T que expresan el mTCR.
Las poblaciones de células dadas a conocer pueden aislar y/o purificar. El término “aislado”, tal como se usa en el presente documento, significa haberse retirado de su entorno natural. El término “purificado”, tal como se usa en el presente documento, significa que se ha aumentado su pureza, en donde “pureza” es un término relativo y no debe interpretarse necesariamente como pureza absoluta. Por ejemplo, la pureza puede ser de al menos aproximadamente el 50 %, puede ser mayor de aproximadamente el 60 %, aproximadamente el 70 %, aproximadamente el 80 %, aproximadamente el 90 %, aproximadamente el 95 % o puede ser de aproximadamente el 100 %.
Las poblaciones de células dadas a conocer pueden formularse en una composición, tal como una composición farmacéutica. En este sentido, la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de las poblaciones de células descritas en el presente documento y un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas dadas a conocer pueden comprender cualquiera de las poblaciones de células dadas a conocer en combinación con otro(s) agente(s) o fármaco(s) farmacéuticamente activo(s), tal(es) como agentes quimioterápicos, por ejemplo, asparaginasa, busulfano, carboplatino, cisplatino, daunorubicina, doxorubicina, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, metotrexato, paclitaxel, rituximab, vinblastina, vincristina, etc.
Preferiblemente, el portador es un portador farmacéuticamente aceptable. Con respecto a las composiciones farmacéuticas, el portador puede ser cualquiera de los usados convencionalmente para células T. Los métodos para preparar composiciones administrables se conocen o resultan evidentes para los expertos en la técnica y se describen con más detalle, por ejemplo, en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22a edición, Pharmaceutical Press (2012). Se prefiere que el portador farmacéuticamente aceptable sea uno que no tenga efectos secundarios perjudiciales o toxicidad en las condiciones de uso.
La elección del portador puede determinarse mediante el método particular usado para administrar la población de células dada a conocer. Por consiguiente, existe una variedad de formulaciones adecuadas de la composición farmacéutica de la divulgación. Las formulaciones adecuadas pueden incluir cualquiera de aquellas para administración parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intratumoral o interperitoneal. Puede usarse más de una vía para administrar las poblaciones de células dadas a conocer y, en ciertos casos, una vía particular puede proporcionar una respuesta más inmediata y más eficaz que otra vía.
Preferiblemente, la población de células dada a conocer se administra mediante inyección, por ejemplo, por vía intravenosa. El portador farmacéuticamente aceptable para células para inyección puede incluir cualquier portador isotónico tal como, por ejemplo, solución salina normal (aproximadamente el 0,90 % p/v de NaCl en agua, aproximadamente 300 mOsm/l de NaCl en agua o aproximadamente 9,0 g de NaCl por litro de agua), disolución de electrolitos NORMOSOL R (Abbott, Chicago, IL), PLASMA-LYTE A (Baxter, Deerfield, I<l>), aproximadamente el 5 % de dextrosa en agua o lactato de Ringer. En una realización, el portador farmacéuticamente aceptable se complementa con albúmina sérica humana. Una composición farmacéutica para infusión puede contener o no IL-2. Si la composición farmacéutica contiene IL-2, entonces puede usarse una concentración de aproximadamente 300 Ul/ml.
Para los fines de la divulgación, la cantidad o dosis (por ejemplo, número de células) administrada debe ser suficiente para efectuar, por ejemplo, una respuesta terapéutica o profiláctica, en el mamífero a lo largo de un período de tiempo razonable. Por ejemplo, la dosis (por ejemplo, número de células) debe ser suficiente para unirse a un antígeno asociado a una afección, o detectar, tratar o prevenir una afección en un período de desde aproximadamente 2 horas o más, por ejemplo, de 12 a 24 o más horas, desde el momento de la administración. En determinadas realizaciones, el período de tiempo podría ser incluso más largo. La dosis estará determinada por la eficacia de la población de células y la afección del mamífero (por ejemplo, ser humano), así como por el peso corporal del mamífero (por ejemplo, ser humano) que va a tratarse.
En la técnica se conocen muchos ensayos para determinar una dosis administrada. Para los fines de la divulgación, podría usarse un ensayo, que comprende comparar el grado en que se lisan células diana o se secreta IFN-y por células T que expresan el mTCR tras la administración de una dosis dada de tales células T a un mamífero entre un conjunto de mamíferos a cada uno de los cuales se le administra una dosis diferente de células T, para determinar una dosis inicial que va a administrarse a un mamífero. El grado en que se lisan células diana o se secreta IFN-y tras la administración de una determinada dosis puede someterse a ensayo mediante métodos conocidos en la técnica.
La dosis de la población de células dada a conocer también estará determinada por la existencia, naturaleza y alcance de cualquier efecto secundario adverso que pueda acompañar a la administración de una población particular de células. Normalmente, el médico tratante decidirá la dosificación de la población de células con la que tratar a cada paciente individual, teniendo en cuenta una variedad de factores, tales como la edad, el peso corporal, la salud general, la dieta, el sexo, la población de células dada a conocer que va a administrarse, la vía de administración y la gravedad de la afección que está tratándose. En una realización, el número de células administradas por infusión puede variar, por ejemplo, de desde aproximadamente 1 x 106 hasta aproximadamente 1 * 1012 células o más. En ciertas realizaciones, pueden administrarse al menos aproximadamente 1,5 * 1010 células.
La población de células producida mediante los métodos de la invención puede ser útil para tratar o prevenir afecciones, por ejemplo, cáncer. Por consiguiente, otra realización de la divulgación proporciona un método de tratamiento o prevención de una afección en un mamífero, comprendiendo el método expandir selectivamente un número de células T de acuerdo con cualquiera de los métodos descritos en el presente documento con respecto a otros aspectos de la invención y administrar el número expandido selectivamente de células T al mamífero en una cantidad eficaz para tratar o prevenir la afección en el mamífero.
Para los fines de los métodos dados a conocer, en los que se administran poblaciones de células, las células pueden ser células que son alogénicas o autólogas para el mamífero. Preferiblemente, las células son autólogas para el mamífero.
En una realización de la divulgación, la afección es cáncer. El cáncer puede ser cualquiera de los cánceres descritos en el presente documento con respecto a otros aspectos de la invención.
En una realización de la divulgación, la afección es una afección viral. La afección viral puede ser cualquiera de las afecciones virales descritas en el presente documento con respecto a otros aspectos de la invención.
Tal como se usa en el presente documento, el término “mamífero” se refiere a cualquier mamífero, incluidos, pero sin limitarse a, mamíferos del orden Rodentia, tales como ratones y hámsteres, y mamíferos del orden Logomorpha, tales como conejos. Se prefiere que los mamíferos sean del orden Carnivora, incluidos felinos (gatos) y caninos (perros). Se prefiere más que los mamíferos sean del orden Artiodactyla, incluidos bovinos (vacas) y porcinos (cerdos) o del orden Perssodactyla, incluidos equinos (caballos). Lo más preferido es que los mamíferos sean del orden Primates, Ceboides o Simoides (monos) o del orden Antropoides (humanos y simios). Un mamífero especialmente preferido es el ser humano.
Los términos “tratar” y “prevenir”, así como las palabras que se derivan de ellos, tal como se usan en el presente documento, no implican necesariamente un tratamiento o una prevención del 100 % o completo. Más bien, existen grados variables de tratamiento o prevención que un experto en la técnica reconoce que tienen un posible beneficio o efecto terapéutico. En este sentido, los métodos dados a conocer pueden proporcionar cualquier cantidad de cualquier nivel de tratamiento o prevención del cáncer en un mamífero. Además, el tratamiento o la prevención proporcionado por el método dado a conocer puede incluir el tratamiento o la prevención de una o más afecciones o síntomas de la afección, por ejemplo, cáncer, que está tratándose o previniéndose. Por ejemplo, el tratamiento o la prevención proporcionado por el método dado a conocer puede incluir promover la regresión de un tumor. Además, para los fines del presente documento, “prevención” puede abarcar retrasar la aparición de la afección, o un síntoma o afección de la misma.
Los siguientes ejemplos ilustran mejor la invención, pero, por supuesto, no deben interpretarse de ninguna manera como limitativos de su alcance.
EJEMPLO 1
Este ejemplo demuestra que expandir selectivamente el número de células T que expresan un TCR que incluye una región constante murina (mTCR) aumenta el número de células que expresan el mTCR.
Se aislaron ARN que codifica para dos TCR, uno que tiene especificidad antigénica para el neoantígeno ERBB2 mutado, específico del cáncer y otro que tiene especificidad antigénica por el neoantígeno ERBB2IP mutado, específico del cáncer a partir de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL) aislados de un paciente con cáncer. se amplificó ADNc a partir del RNA a través de transcripción inversa, seguido por amplificación por PCR de las copias de ADNc. Se prepararon constructos de mTCR (uno para cada TCR) tal como se describe en Denigeret al.,Mol. Ther., 24(6):1078-89 (2016). En resumen, se fusionaron las regiones TCR-a-V-J humanas con la cadena constante TCR-a de ratón, y se fusionaron las regiones TCR-p-V-D-J humanas con las cadenas TCR-p de ratón, con una secuencia de ligador sintético situada entre las cadenas alfa (a) y beta (P) (figura 1A). Ambos constructos de mTCR se sintetizaron y se clonaron en plásmidos del sistema de transposones SLEEPING BEAUTY (SBTS)) (disponibles de Intrexon (Germantown, Md ) y Ziopharm (Boston, MA)) y descritos en Denigeret al.,PLoS One, 10(6): e0128151 (2015) y Singhet al.,Cancer Res., 71(10): 3516-27 (2011).
En la figura 1B se muestra un esquema que ilustra un método de electroporación de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) con un mTCR y de expansión selectiva del número de células T mTCR+ según una realización de la invención. Tal como se muestra en la figura 1B, se electroporaron selectivamente un plásmido SBTS que codifica para uno de cada uno de los dos mTCR (15 |ig) y un plásmido SBTS que codifica para transposasa (5 |ig) en PBMC autólogas (2 * 107) usando un dispositivo y kit AMAXA NUCLEOFECTOR II (Lonza, Basilea, Suiza). Después de 24 horas, se obtuvo una población mixta de células electroporadas que comprendía células que expresaban el mTCR y células que no expresaban el mTCR.
Tal como se muestra en la figura 1B, el número de células T que expresan la región constante de TCR murino (células T mTCR+) en la población mixta se expandió selectivamente. Para expandir selectivamente las células T mTCR+, se cocultivaron células de la población mixta de células electroporadas (2 * 106) con linfocitos de sangre periférica (PBL) irradiados (2 * 107) en presencia de (i) anticuerpo (Ac) H57 (Biolegend, San Diego, CA) o anticuerpo OKT3, (ii) IL-2 y (iii) IL-21.
Tras la expansión selectiva del número de células T mTCR+, se tiñeron las células con (i) Ac anti-CD3, Ac anti-CD4 o Ac anti-CD8 y (ii) anticuerpo anti-mTCRp (H57). PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) sirvieron como control negativo.
Se contaron las células teñidas mediante clasificación celular activada por fluorescencia (FACS). Los resultados se muestran en la figura 2. Tal como se muestra en la figura 2, la expansión selectiva con el Ac H57 aumentó el número de células T mTCR+ anti-ERBB2 mutado y el número de células T mTCR+ anti-ERBB2IP mutado en comparación con OKT3.
EJEMPLO 2
Este ejemplo demuestra que se obtiene un mayor número de mTCR+ con mayores concentraciones de Ac H57. Se electroporaron PBMC con el constructo de mTCR anti-ERBB2IP o el mTCR anti-ERBB2 tal como se describe en el ejemplo 1. El número de células T que expresan la región constante de TCR murino (células T mTCR+) en la población mixta se expandió selectivamente tal como se describe en el ejemplo 1 con diversas concentraciones de Ac H57 (0 ng/ml, 1 ng/ml, 5 ng/ml, 10 ng/ml, 25 ng/ml, 50 ng/ml, 100 ng/ml, 250 ng/ml o 500 ng/ml).
Tras la expansión selectiva del número de células T mTCR+, se tiñeron las células con (i) Ac anti-CD3, Ac anti-CD4 o Ac anti-CD8 y (ii) anticuerpo anti-mTCRp (H57). PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) sirvieron como control negativo. Células electroporadas que se sometieron a REP convencional con Ac OKT3 (30 ng/ml) en lugar de la expansión selectiva con Ac H57 sirvieron como control positivo para el crecimiento de células T no específicas.
Se contaron las células teñidas mediante FACS. Los resultados se muestran en las figuras 3A y 3B. Tal como se muestra en las figuras 3A y 3B, se obtuvo un mayor número de células mTCR+ anti-ERBB2 mutado y mTCR+ anti-ERBB2IP mutado con mayores concentraciones de Ac H57.
EJEMPLO 3
Este ejemplo demuestra un método de expansión selectiva del número de células T que expresan un mTCR. Se aisló ARN que codifica para un TCR que tiene especificidad antigénica para un neoantígeno p53-Y220C específico del cáncer a partir de linfocitos infiltrantes de tumores aislados de un paciente con cáncer de ovario 4149. Se amplificó ADNc a partir del ARN a través de transcripción inversa, seguido por amplificación por PCR de las copias de ADNc. Se prepararon constructos de mTCR fusionando las regiones TCR-a-V-J humanas con la región constante TCR-a de ratón, y las regiones TCR-p-V-D-J humanas con las cadenas constantes TCR-p de ratón, con una secuencia de ligador sintético situada entre las cadenas a y p (figura 4B). Se sintetizaron constructos de mTCR y se clonaron en un plásmido SBTS.
En la figura 4A se muestra un esquema que ilustra un método de electroporación de PBMC con el mTCR y de expansión selectiva del número de células T mTCR+ según una realización de la invención. Tal como se muestra en la figura 4A, se obtuvieron PBMC autólogas del paciente y crioconservaron. Se descongelaron PBMC crioconservadas (200 g) a 20-23 °C durante 10 minutos. Se colocaron las PBMC en medios 50/50 (3 * 106 células/ml) y se cultivaron durante 2 horas a 37 °C. Se electroporaron el plásmido SBTS que codifica para el mTCR y un plásmido SBTS que codifica para transposasa en las PBMC autólogas usando un dispositivo y kit AMAXA NuClEOFECTOR II (Lonza, Basilea, Suiza). La disolución NUCLEOFECTOR de células T humanas (300 |il) contenía el plásmido SBTS que codifica para el mTCR (45 |ig) y el plásmido SBTS que codifica para transposasa (15 |ig). Se añadió esta disolución NUCLEOFECTOR de células T humanas a las cubetas (100 |il por cubeta). Se cultivaron las células electroporadas en pocillos (5 ml de medios 50/50/pocillo) durante la noche a 37 °C. Después de >18 horas, se incubó benzonasa 50 U/ml a 37 °C durante 1 hora. Se obtuvo una población mixta de células electroporadas que comprendía células que expresaban el mTCR y células que no expresaban el mTCR.
Tal como se muestra en la figura 4A, después de más de 18 horas de cultivo a 37 °C, se expandió selectivamente el número de células T que expresan la región constante de TCR murino (células T mTCR+) en la población mixta. Para expandir selectivamente las células T mTCR+, se cocultivaron las células T mTCR+ (5 * 105) con linfocitos de sangre periférica irradiados (PBL) (1 * 108) en presencia de Ac H57 (Biolegend, San Diego, CA) (250 ng/ml), IL-2 (50 Ul/ml) e IL-21 (30 ng/ml).
Tras la expansión selectiva del número de células T mTCR+, se expandió adicionalmente el número de células T mTCR+ usando el protocolo de expansión rápida (REP) convencional (véase el ejemplo 5). En el REP convencional, se cocultivaron las células T mTCR+ expandidas selectivamente (5 * 106) con PBL irradiados (5 * 108), anticuerpo OKT3 (30 ng/ml) e IL-2 (3000 Ul/ml). El anticuerpo OKT3 reacciona con un epítopo en la subunidad épsilon dentro del complejo de CD3 humano.
EJEMPLO COMPARATIVO 1
Este ejemplo demuestra el número de células electroporadas que expresan el mTCR en ausencia de expansión selectiva.
Se electroporaron PBMC autólogas con el plásmido SBTS que codifica para el mTCR y el plásmido SBTS que codifica para transposasa tal como se describe en el ejemplo 4. Los controles negativos incluyeron PBMc autólogas no transfectadas y PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado). Se tiñeron las células electroporadas con anticuerpo anti-CD3 y anticuerpo anti-mTCRp (H57). PBMC autólogas no teñidas, no transfectadas sirvieron como todavía otro control negativo.
El día siguiente de la electroporación, se contaron las células teñidas mediante FACS sin experimentar expansión selectiva tal como se describe en el ejemplo 4. La FACS se activó en linfocitos/células PI(neg). PI es una tinción para células muestras. Las células PI(neg) son células vivas.
Los resultados se muestran en las figuras 5A-5D. Tal como se muestra en las figuras 5A-5D, un modesto número de las células en la población total (aproximadamente el 5 % de las células totales) expresaron el mTCR tras la electroporación sin experimentar expansión selectiva.
EJEMPLO 4
Este ejemplo demuestra que expandir selectivamente células T electroporadas con el anticuerpo H57 aumenta selectivamente el número de células que expresan un TCR que incluye una región constante murina en la población mixta.
Se electroporaron PBMC autólogas con el plásmido SBTS que codifica para el mTCR y el plásmido SBTS que codifica para transposasa, tal como se describe en el ejemplo 3. Diversos números iniciales de células T mTCR+ (1 x 105, 5 x 105 o 10 x 105) se expandieron selectivamente tal como se describe en el ejemplo 3 usando diversas concentraciones de Ac H57 (250 ng/ml, 500 ng/ml o 750 ng/ml). El experimento normalizó la entrada hasta 5 x 105 células T mTCR+ basándose en las frecuencias iniciales. Por ejemplo, una expresión de mTCR del 5 % significó que 1 x 107 células totales entraron en el protocolo de expansión para lograr 5 x 105 células T mTCR+. PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) sirvieron como control negativo. Las células electroporadas y expandidas selectivamente se tiñeron con anticuerpo anti-CD3 y anticuerpo antimTCRp (H57).
Se contaron las células teñidas mediante FACS. La FACS se activó en linfocitos/células PI(neg). Los resultados se muestran en la figura 6 y las tablas 1-2. Tal como se muestra en la figura 6 y las tablas 1-2, la expansión selectiva con el Ac H57 aumentó el número de células T mTCR+ en la población.
TABLA 1
TABLA 2
EJEMPLO 5
Este ejemplo demuestra que una segunda expansión con Ac OKT3 tras una primera expansión con Ac H57 aumenta adicionalmente el número de células mTCR+.
Las células electroporadas que ya se habían sometido a expansión selectiva (i) a un número inicial de 5 x 105 células T mTCR+ con (ii) 250 ng/ml de Ac H57, tal como se describió en el ejemplo 4 (denominada en este ejemplo “la primera expansión”), se expandieron adicionalmente en un frasco GREX (Wilson Wolf Manufacturing, St Paul, MN) usando (i) el REP convencional con Ac OKT3, tal como se describe en el ejemplo 3 o (ii) Ac H57, tal como se describe en el ejemplo 4 (denominada en este ejemplo “la segunda expansión”).
Tras la segunda expansión, se tiñeron las células con anticuerpo anti-CD3 y anticuerpo anti-mTCRp (H57). Se contaron las células teñidas mediante FACS. La FACS se activó en linfocitos/células Pl(neg). Los resultados se muestran en la figura 7.
Tal como se muestra en la figura 7, una segunda expansión con Ac OKT3 Ab tras una primera expansión con Ac H57 aumenta adicionalmente el número de células mTCR+. La segunda expansión con el Ac o KT3 aumentó el número de células mTCR+ en una mayor medida en comparación con la segunda expansión con el Ac H57. El porcentaje de células viables, el número total de células, el cambio en veces en el número de células logrado por la segunda expansión, el número de células mTCR+ y el cambio en veces en células mTCR+ logrado por la segunda expansión también se midieron en las células que se sometieron a la segunda expansión con el Ac OKT3 y el Ac H57 y se compararon. Los resultados se muestran en la tabla 3. Tal como se muestra en la tabla 3, una segunda expansión con Ac OKT3 tras una primera expansión con Ac H57 aumenta adicionalmente el número de células mTCR+. La segunda expansión con el Ac OKT3 aumentó el número de células mTCR+ en una mayor medida en comparación con la segunda expansión con el Ac H57.
TABLA 3
EJEMPLO 6
Este ejemplo demuestra que expandir selectivamente el número de células T que expresan un mTCR aumenta el número de células que expresan el mTCR.
Se transdujeron PBL con un vector gammaretroviral que codifica para un TCR anti-MART-1 F5 murino (mF5) usando métodos convencionales el día 0. El día 10, se prepararon células transducidas para la expansión secundaria. Se llevó a cabo la expansión usando (i) concentraciones variables de IL-2, (ii) razones variables de células alimentadoras y (iii) o bien Ac OKT3 (30 ng/ml) o bien Ac H57 (50 ng/ml), tal como se expone en la tabla 4.
TABLA 4
Célula Razón alimentadora
mF5 sOKT3 500 200:1
mF5 sOKT3 50 200:1
mF5 mTCRb 500 200:1
mF5 mTCRb 50 200:1
UTD sOKT3 500 200:1
UTD sOKT3 50 200:1
UTD mTCRb 500 200:1
UTD mTCRb 50 200:1
Los gráficos de FACS en las figuras 8A-8B muestran los porcentajes de células transducidas y no transducidas que expresan CD8 y el TCR anti-MART-1 F5 murino (mF5) antes de la expansión con Ac OKT3 o Ac H57 (protocolo de expansión rápida previo (REP)). La eficiencia de transducción antes de la expansión era del 83,9 %. Esta población transducida se diluyó en medio de cultivo celular hasta aproximadamente un 5% de células positivas para cadena beta de TCR murino (mTCRb+) (figura 8C) antes de la expansión.
Los resultados tras la expansión del número de células en la población inicial de mTCRb+ al 5 % de la figura 8C con (i) OKT3 (50 ng/ml) o H57 (50 ng/ml) en (ii) o bien 500 o bien 50 CU/IL -2 se muestran en las figuras 9 y 10A-10B. El número de células se expandió aproximadamente 1500 - 2300 veces con OKT3, pero no mostró una expansión selectiva del número de células en la población de células mTCRb+. Alternativamente, el número de células se expandió menos (500-800 veces) con H57, sin embargo, mostraron un aumento de 4-8 veces en el porcentaje de células mTCRb+. En general, el uso de H57 en la expansión dio como resultado más células mTCRb+.
EJEMPLO 7
Este ejemplo demuestra que expandir selectivamente el número de células T que expresan un mTCR aumenta el número de células que expresan el mTCR.
Se transdujeron PBL con un vector retroviral que codifica para el TCR F5 murino tal como se describe en el ejemplo 6. La expresión de CD8 y mTCRb por las células transducidas antes de la expansión con H57 u OKT3 (población celular inicial) se muestra en las figuras 11A-11C. La población inicial de mTCR+ tenía originalmente un 64,7 % de células mTCRb+ (figura 11B). La población inicial de mTCR+ se diluyó cuatro veces hasta un 14 % de mTCRb+ (figura 11C).
El número de células transducidas y UT se expandió con (i) sin IL-2, 50 CU de IL-2 o 500 CU de IL-2 usando (ii) Ac OKT3 o Ac H57. Los resultados se muestran en las figuras 12A-12E y 13A-13B.
Después de la expansión, la población de OKT3 no mostró una expansión selectiva de la población global de células mTCRb+ con porcentajes aproximadamente iguales (5%) de células CD8+ y transducidas con CD8. En comparación, ambas poblaciones expandidas con H57 (500 o 50 CU/IL-2, respectivamente) mostraron una expansión selectiva de mTCRb+, al 31,2 % y 59,1 %, respectivamente. La expansión con H57 usando 50 CU/IL-2 mostró una expansión de células mTCRb+ casi 2 veces mayor en comparación con las células cultivadas en 500 CU/IL-2.
Tal como se muestra en las figuras 13-13B, los números de células expandidas con OKT3 o H57 se expandieron aproximadamente 1400-1600 veces en presencia de 500 CU/IL-2. Sin embargo, la expansión con H57 más 50 CU/IL-2 se expandió aproximadamente 3500 veces, más del doble que en las otras condiciones sometidas a prueba.
EJEMPLO 8
Este ejemplo demuestra que expandir selectivamente el número de células T que expresan un mTCR aumenta el número de células que expresan el mTCR.
Se transdujeron PBL con un vector retroviral que codifica para el TCR F5 murino tal como se describió en el ejemplo 6. La expresión de CD8 y mTCRb por las células transducidas antes de la expansión con H57 u OKT3 (pre-REP) se muestra en las Figuras 14A-14F.
Los números de células transducidas se expandieron usando (i) 50 CU de IL-2 y (ii) Ac OKT3 (30 ng/ml) o Ac H57 (500, 50, 10, 5 ng/ml). Los resultados se muestran en las figuras 14A-14F y la figura 15. Tal como se muestra en las figuras 14A-14F y la figura 15, la concentración de anticuerpo H57 puede titularse hacia abajo 10 veces sin ningún efecto perjudicial sobre la expansión selectiva de mTCRb+. Además, la expansión en veces global fue similar entre todos los grupos sometidos a prueba. También se observó una expansión preferente de células CD8- después de la expansión con H57.
EJEMPLO 9
Este ejemplo demuestra una expansión adicional del número de células que se sometieron a una primera ronda de expansión con H57 en el ejemplo 8 con una segunda ronda de expansión con OKT3 o H57.
Las células transducidas con mTCR que se sometieron a la expansión con Ac H57 en el ejemplo 8 se sometieron a una segunda expansión con OKT3 o H57 para determinar si se podía lograr un enriquecimiento adicional de las células mTCRb+. Las condiciones de expansión fueron idénticas a las descritas en el ejemplo 8.
Los resultados se muestran en las figuras 16A-16E y la figura 17. Una segunda expansión con OKT3 no enriqueció adicionalmente las células mTCRb+, pero el número de células se expandió 1000 veces más. Una segunda expansión con H57 no añadió ningún enriquecimiento adicional para las células mTCRb+ y puede haber dado como resultado una ligera disminución en las células mTCRb+ a 500 y 50 ng/ml. La expansión en veces de las poblaciones que se sometieron a una segunda expansión con H57 fue baja, oscilando entre 200 y 500 veces.
EJEMPLO 10
Este ejemplo demuestra que se expresan TCR específicos de mutación por transposones el día siguiente a la electroporación.
Tal como se muestra en la figura 4A, se obtuvieron PBMC autólogas del donante 1 sano y del donante 2 sano y se crioconservaron. Se descongelaron PBMC crioconservadas y se centrifugaron (200 g) a 20-23 °C durante 10 minutos. Las PBMC se colocaron en medios 50/50 ( 3 * 106 células/ml) y se cultivaron durante 2 horas a 37 °C. Se electroporaron el plásmido SBTS que codifica para uno de los dos mTCR y un plásmido SBTS que codifica para transposasa en PBMC autólogas utilizando un dispositivo y kit AMAXA NUCLEOFECTOR II (Lonza, Basilea, Suiza). Los dos mTCR fueron (1) 4149-HUWE1-TCR1 (clase I) y (2) 4149-TP53-TCRa2b2 (clase II). La disolución NUCLEOFECTOR de células T humanas (300 |il) contenía el plásmido SBTS que codifica para el mTCR (45 |ig) y el plásmido SBTS que codifica para la transposasa (15 |ig). Después del período de reposo de 2 horas, se recogieron PBMC no adherentes mediante centrifugación (200 g) a 20-23 °C durante 10 minutos, se eliminó el medio y se reemplazó con la disolución NUCLEOFECTOR de células T humanas con plásmidos SBTS (se añadieron 100 |il por cubeta). Se cultivaron las células electroporadas en pocillos (5 ml de medios 50/50/pocillo) durante la noche a 37 °C. Después de >18 horas, se incubaron benzonasa 50 U/ml a 37 °C durante 1 hora. Se obtuvo una población mixta de células electroporadas que comprendía células que expresaban el mTCR y células que no expresaban el mTCR.
El día siguiente a la electroporación, las células electroporadas se tiñeron con (i) Ac anti-CD3 y (ii) Ac antimTCRp. PBMC no teñidas, PBMC no transfectadas y PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) sirvieron como controles negativos. Se midió la expresión de CD3 y el mTCR por las células electroporadas mediante FACS (compuerta: linfocitos/vivos (PI-)). Los resultados se muestran en la figura 18. Tal como se muestra en la figura 18, los transposones expresaron TCR específicos de mutación el día siguiente a la electroporación.
EJEMPLO 11
Este ejemplo demuestra que una ronda de expansión con H57 conduce a un crecimiento selectivo del número de células T mTCR+.
Se electroporaron PBMC de los donantes 1 y 2 tal como se describió en el ejemplo 10. Tal como se muestra en la figura 4A, después de más de 18 horas de cultivo a 37 °C, se expandió selectivamente el número de células T que expresan la región constante de TCR murino (células T mTCR+) en la población mixta. Para expandir selectivamente el número de células T mTCR+, se cocultivaron las células T mTCR+ (5 x 105) con PBL irradiados (1 x 108) en presencia de Ac H57 (Maine Biotechnology Services, Portland, ME) (250 ng/ml), IL-2 (50 UI/ml) e IL-21 (30 ng/ml).
Las células expandidas selectivamente se tiñeron y evaluaron mediante FACS tal como se describió en el ejemplo 10. PBMC no teñidas (figura 19A) y PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) (figura 19B) sirvieron como controles negativos. Los resultados se muestran en las figuras 19A-19B. En las figuras 19A-19B, se determinaron los recuentos de células el día 14 después de una ronda de expansión con H57 de un frasco T175. Tal como se muestra en las figuras 19A-19B, una ronda de expansión con H57 condujo a un crecimiento selectivo del número de células T mTCR+.
EJEMPLO 12
Este ejemplo demuestra que una expansión adicional de los números de células que se sometieron a una primera ronda de expansión con H57 con una segunda ronda de expansión con OKT3 en frascos permeables a gases da como resultado una expansión a gran escala del número de células T transpuestas con<t C r .>
Se electroporaron PBMC de los donantes 1 y 2 tal como se describió en el ejemplo 10. Los números de células transpuestas se expandieron selectivamente con anticuerpo H57 tal como se describió en el ejemplo 11. Tras la expansión selectiva de los números de células T mTCR+, los números de células T mTCR+ se expandieron adicionalmente usando REP convencional. En el REP convencional, las células T mTCR+ expandidas selectivamente (5 x 106) se cocultivaron con PBL irradiados (5 x 108), anticuerpo OKT3 (30 ng/ml) e IL-2 (3000 UI/ml).
Las células expandidas selectivamente se tiñeron y evaluaron mediante FACS tal como se describió en el ejemplo 10. PBMC no teñidas (figura 20A) y PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) (figura 20B) sirvieron como controles negativos. Los recuentos de células el día 14 después del REP convencional de un frasco permeable a gases GREX-100 (Wilson Wolf Corporation, St. Paul,<m N )>se muestran en la tabla 5. El porcentaje de células mTCR+ el día 14 después de la expansión selectiva con H57 son se muestra en la tabla 6.
TABLA 5
TABLA 6
Los resultados se muestran en las figuras 20A-20B. Tal como se muestra en las figuras 20A-20B, la expansión adicional de los números de células que se sometieron a una primera ronda de expansión con H57 con una segunda ronda de expansión con OKT3 en frascos permeables a gases dio como resultado una expansión a gran escala de los números de células T transpuestas con TCR.
EJEMPLO 13
Este ejemplo demuestra que células T transpuestas con TCR expandidas selectivamente con el anticuerpo H57 son específicas para el neoantígeno mutado afín.
Se electroporaron PBMC de los donantes 1 y 2 tal como se describió en el ejemplo 10. Los números de células electroporadas se expandieron selectivamente con anticuerpo H57 tal como se describió en el ejemplo 11. El 4149-HUWE1-TCR1 reconoce HUWE1 mutado. El 4149-TP53-TCRa2b2 reconoce TP53 mutado (Y220C).
Se pulsaron DC inmaduras con péptido HUWE1 de tipo natural (WT), péptido HUWE1 mutado, TP53 WT o TP53 mutado. Se pulsaron péptidos HUWE1 a 1 |ig/ml. Se pulsaron péptidos TP53 a 10 ng/ml. Se incubaron cocultivos de 5*104 DC inmaduras pulsadas con péptidos y 105 células T durante la noche a 37 °C. DC cultivadas solas y DC pulsadas con DMSO sirvieron como controles. Se midió la secreción de IFN-y mediante ELISA (ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas).
Los resultados se muestran en las figuras 21A-21D. Tal como se muestra en las figuras 21A-21D, las células T transpuestas con TCR se expandieron selectivamente con el anticuerpo H57 reconocido como neoantígeno mutado afín.
EJEMPLO 14
Este ejemplo demuestra un método de expansión selectiva del número de células T que expresan un mTCR. En la figura 22 se muestra un esquema que ilustra un método de electroporación de PBMC con el mTCR y de expansión selectiva del número de células T mTCR+ según una realización de la invención. Tal como se muestra en la figura 22, se obtuvieron PBMC autólogas del paciente y se crioconservaron. Algunas de las PBMC se agotaron de células CD4+ con columnas LD. Las PBMc crioconservadas se descongelaron en medio completo (CM) y se centrifugaron a 175 g durante 10 minutos a aproximadamente 22 °C. Las células se lavaron en solución salina equilibrada de Hank (HBSS) y se contaron. El recuento de células fue de 6 * 107.
Tal como se muestra en la figura 22, se electroporaron el plásmido SBTS que codifica para el mTCR (4149-HUWE1-TCR1 o 4149-TP53-TCRa2b2) y un plásmido SBTS que codifica para transposasa en las PBMC autólogas usando un dispositivo y kit AMAXA NUCLEOFECTO<r>II (Lonza, Basilea, Suiza). La disolución NUCLEOFECTOR de células T humanas (300 |il) contenía el plásmido SBTS que codifica para el mTCR (45 |ig) y el plásmido SBTS que codifica para transposasa (15 |ig). Esta disolución NUCLEOFECTOR de células T humanas se añadió a las células y luego se añadió la mezcla de células y ADN a las cubetas (100 |il por cubeta). Tal como se muestra en la figura 22, las células electroporadas se cultivaron en pocillos (CM (5 ml), IL-2 (50 Ul/ml) e IL-21 (30 ng/ml) por pocillo) durante la noche a 37 °C. Después de >18 horas, se incubó benzonasa 50 U/ml a 37 °C durante 1 hora. Se recogieron las células, se tiñeron y se midió la expresión de mTCR mediante FACS. Se obtuvo una población mixta de células electroporadas que comprendía células que expresaban el mTCR (mTCR+>1%) y células que no expresaban el mTCR.
Tal como se muestra en la figura 22, después de más de 18 horas de cultivo a 37 °C, se expandió selectivamente el número de células T que expresan la región constante de TCR murino (células T mTCR+) en la población mixta. Para expandir selectivamente las células T mTCR+, se cocultivaron las células electroporadas (5 * 106) con PBL irradiados (1 * 108) en presencia de Ac H57 (Maine Biotechnology Services, Portland, ME) (250 ng/ml), IL-2 (50 Ul/ml) e IL-21 (30 ng/ml).
Tal como se muestra en la figura 22, las células se cultivaron durante 13 días. Durante este período de 13 días, las células se alimentaron cada 2-3 días con 50/50 CM con IL-2 (50 UI/ml) e IL-21 (30 ng/ml).
Tal como se muestra en la figura 22, las células mTCR+ se enriquecieron adicionalmente poniendo en contacto las células con microperlas (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Alemania) conjugadas con anticuerpo antibiotina y anticuerpo H57 biotinilado en una columna LS (Miltenyi Biotec).
Tras el enriquecimiento de las células mTCR+ con las perlas conjugadas con H57, se expandió adicionalmente el número de células T mTCR+ usando el REP convencional. En el REP convencional, las células T mTCR+ expandidas selectivamente (5 * 106) se cocultivaron con PBL irradiados (5 * 108), anticuerpo OKT3 (30 ng/ml) e IL-2 (3000 Ul/ml).
El cronograma seguido fue tal como sigue:
• día 0 = electroporación (2*107 PBMC totales (TP53-TCR) o PMBC agotadas en CD4 (HUWE1-TCR)) • día 1 = REP con H57 (frasco T175; 5*106 células, 1*108 PBMC irradiadas, H57 250 ng/ml, IL-2 50 Ul/ml, IL-21 30 ng/ml)
• día 14 = enriquecimiento con perlas de H57 (AcM H57-biotina (GMP), perlas de biotina CliniMACS, columnas LS)
• día 15 = REP con OKT3 (frasco GREX-100; 5e6 células, 5e8 PBMC irradiadas, OKT3 30 ng/ml, IL-2 3000 Ul/ml)
• día 28 = Cosecha, fenotipo, cocultivo.
EJEMPLO 15
Este ejemplo demuestra el número total de células y el porcentaje de células CD3+mTCR+ obtenidas en cuatro puntos de tiempo durante el método descrito en el ejemplo 14.
Se llevó a cabo el método descrito en el ejemplo 14. Se midieron el número total de células en una cubeta y el porcentaje de células CD3+mTCR+ en una cubeta en cuatro puntos de tiempo durante el método descrito en el ejemplo 14: tras la electroporación, tras la expansión selectiva con H57, tras el enriquecimiento con perlas conjugadas con H57 y tras el REP convencional con OKT3.
Quedaron células después de la electroporación y el enriquecimiento con perlas conjugadas con H57. Los recuentos no se ajustaron para reflejar los rendimientos teóricos sino más bien los rendimientos reales.
Los resultados se muestran en la figura 23A (número total de células) y la figura 23B (porcentaje de células CD3+mTCR+).
EJEMPLO 16
Este ejemplo demuestra el porcentaje de células mTCRp+ medido el día 28 (después de REP con OKT3) del método descrito en el ejemplo 14.
Se llevó a cabo el método descrito en el ejemplo 14. Se midió el porcentaje de células mTCRp+ mediante FACS el día 28 (después de REP con OKT3). Los resultados se muestran en las figuras 23C-23D. Las PBMC electroporadas con tampón de electroporación solo (simulado) (sin TCR) sirvieron como control negativo en las figuras 23C-23D.
Se midió el porcentaje de células CD4+ mTCRp+ o CD8+mTCRp+ mediante FACS el día 28 (después de REP con OKT3). Los resultados se muestran en las figuras 23E.
EJEMPLO 17
Este ejemplo demuestra el fenotipo de células de memoria de las células antes (día 1) y después (día 28) de la expansión del número de células tal como se describió en el ejemplo 14.
Se llevó a cabo el método descrito en el ejemplo 14. La expresión de los marcadores del fenotipo de la memoria se midió antes (día 1) o después (día 28) de la expansión del número de células. Los resultados se muestran en las figuras 24A-24D.
EJEMPLO 18
Este ejemplo demuestra la especificidad de las células T tras la expansión del número de células tal como se describió en el ejemplo 14.
Se llevó a cabo el método descrito en el ejemplo 14. Se pulsaron DC inmaduras con péptido HUWE1 WT, péptido HUWE1 mutado, péptido TP53 WT o péptido TP53 mutado a una concentración de 10, 1 o 0,1 |ig/ml. Se incubaron cocultivos de DC inmaduras pulsadas con péptidos y células T transpuestas durante la noche a 37 °C. DC pulsadas con DMSO sirvieron como control. Se midió la secreción de IFN-y mediante ELISA. Los resultados se muestran en las figuras 25A-25B.
El uso de los términos “un” y “una” y “el/la” y “al menos uno” y referentes similares en el contexto de la descripción de la invención (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones) debe interpretarse que cubre tanto el singular como el plural, a menos que se indique lo contrario en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente. El uso del término “al menos uno” seguido de una lista de uno o más elementos (por ejemplo, “al menos uno de A y B”) debe interpretarse que significa un elemento seleccionado de los elementos enumerados (A o B) o cualquier combinación de dos o más de los elementos enumerados (A y B), a menos que se indique lo contrario en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente. Los términos “que comprende”, “que tiene”, “que incluye” y “que contiene” deben interpretarse como términos abiertos (es decir, que significan “que incluye, pero sin limitarse a”), a menos que se indique lo contrario. La enumeración de intervalos de valores en el presente documento simplemente pretende servir como método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que se encuentre dentro del intervalo, a menos que se indique lo contrario en el presente documento, y cada valor separado se incorpora en la memoria descriptiva como si se enumerara individualmente en el presente documento. Todos los métodos descritos en el presente documento pueden realizarse en cualquier orden adecuado a menos que se indique lo contrario en el presente documento o que el contexto lo contradiga claramente. El uso de todos y cada uno de los ejemplos, o expresiones a modo de ejemplo (por ejemplo, “tal como”) proporcionados en el presente documento, pretende simplemente iluminar mejor la invención y no supone una limitación en el alcance de la invención a menos que se reivindique lo contrario. Ninguna expresión en la memoria descriptiva debe interpretarse en el sentido de que indica que algún elemento no reivindicado sea esencial para la práctica de la invención.
Claims (15)
1. Método de expansión selectiva de un número de células T, comprendiendo el método:
modificar células T humanas para que expresen un TCR, en donde el TCR comprende una región constante murina;
producir una población de células que comprende un número de las células T humanas que expresan el TCR y un número de células T humanas que no expresan el TCR; y
cultivar la población de células en presencia de (i) células alimentadoras irradiadas, (ii) una o más citocinas y (iii) un primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde el primer anticuerpo se une específicamente a la región constante murina del TCR, para expandir selectivamente el número de las células T humanas que expresan el TCR con respecto al número de las células T humanas que no expresan el TCR.
2. Método según la reivindicación 1, que comprende además separar las células T humanas que expresan el TCR de las células T humanas que no expresan el TCR usando el primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo.
3. Método según la reivindicación 1 o 2, en donde el TCR tiene especificidad antigénica por un antígeno de cáncer.
4. Método según la reivindicación 1 o 2, en donde el TCR tiene especificidad antigénica por un antígeno viral.
5. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde la una o más citocinas comprenden una o más de IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IL-21.
6. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende además cultivar la población de células en presencia de (i) una o ambas de células alimentadoras alogénicas irradiadas y células alimentadoras autólogas irradiadas, (ii) una o más citocinas y (iii) un segundo anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al complejo de CD3 humano.
7. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el primer anticuerpo se une específicamente a la región constante murina de la cadena p del TCR.
8. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde modificar las células T humanas para que expresen el TCR comprende modificar las células T humanas para que expresen el TCR usando transfección, transformación, transducción, electroporación, un transposón, una meganucleasa, una nucleasa de dedos de zinc, una nucleasa efectora de tipo activador de la transcripción (TALEN) o un sistema de repeticiones palindrómicas agrupadas y regularmente interespaciadas (CRISPR)-Cas.
9. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el primer anticuerpo se une específicamente a los residuos de aminoácido D2, R4, N5, T7, E101, D103, K104, W105, P106, E107, G108, S109 y P110 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
10. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde el primer anticuerpo comprende la secuencia de aminoácidos de ambas de SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 4.
11. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el método produce una población de células expandida selectivamente, en donde de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el 75 % de las células en la población expandida selectivamente expresan el TCR que comprende la región constante murina.
12. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde el método produce una población de células expandida selectivamente, en donde de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 99 % de las células en la población expandida selectivamente expresan el TCR que comprende la región constante murina.
13. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, que comprende aumentar el número de células T que expresan el TCR que comprende la región constante murina en de aproximadamente 10 veces a aproximadamente 1.000 veces.
14. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde el TCR comprende una región variable murina.
15. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en donde el TCR comprende una región variable humana.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762568339P | 2017-10-05 | 2017-10-05 | |
| PCT/US2018/052432 WO2019070435A1 (en) | 2017-10-05 | 2018-09-24 | METHODS FOR SELECTIVE EXPANSION OF CELLS EXPRESSING A TCR WITH A CONSTANT MURINE REGION |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2960313T3 true ES2960313T3 (es) | 2024-03-04 |
Family
ID=63841049
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES18786145T Active ES2960313T3 (es) | 2017-10-05 | 2018-09-24 | Métodos para expandir selectivamente células que expresan un TCR con una región constante murina |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20200254018A1 (es) |
| EP (2) | EP4269595A3 (es) |
| JP (2) | JP2020535832A (es) |
| KR (1) | KR20200064107A (es) |
| CN (1) | CN111417720A (es) |
| AU (1) | AU2018345400A1 (es) |
| CA (1) | CA3077595A1 (es) |
| ES (1) | ES2960313T3 (es) |
| FI (1) | FI3692140T3 (es) |
| IL (1) | IL273698A (es) |
| MA (1) | MA50748A (es) |
| SG (1) | SG11202003112QA (es) |
| WO (1) | WO2019070435A1 (es) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3209732A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Drew Caldwell DENIGER | Recombinant vectors comprising polycistronic expression cassettes and methods of use thereof |
| WO2023150562A1 (en) * | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Alaunos Therapeutics, Inc. | Methods for activation and expansion of t cells |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2202310T3 (es) * | 1991-12-13 | 2004-04-01 | Xoma Corporation | Metodos y materiales para la preparacion de dominios variables de anticuerpos modificados y sus usos terapeuticos. |
| AU6969096A (en) * | 1995-09-05 | 1997-03-27 | General Hospital Corporation, The | Monoclonal lymphocytes and methods of use |
| JP2003276960A (ja) * | 2002-03-26 | 2003-10-02 | Mitsubishi Electric Corp | エレベーター制御システム |
| WO2004021995A2 (en) | 2002-09-06 | 2004-03-18 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Departement Of Health And Human Services | Immunotherapy with in vitro-selected antigen-specific lymphocytes after nonmyeloablative lymphodepleting chemotherapy |
| JP4773361B2 (ja) * | 2003-11-10 | 2011-09-14 | アルター・バイオサイエンス・コーポレーション | 可溶性ｔｃｒ分子とその使用方法 |
| US20090304657A1 (en) * | 2006-05-03 | 2009-12-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Chimeric t cell receptors and related materials and methods of use |
| CA2674445C (en) | 2007-01-12 | 2016-06-07 | Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Gp100-specific t cell receptors and related materials and methods of use |
| US8785601B2 (en) | 2009-01-28 | 2014-07-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | T cell receptors and related materials and methods of use |
| US8383099B2 (en) | 2009-08-28 | 2013-02-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Adoptive cell therapy with young T cells |
| US9345748B2 (en) | 2010-09-21 | 2016-05-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-SSX-2 T cell receptors and related materials and methods of use |
| WO2012129201A1 (en) | 2011-03-22 | 2012-09-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods of growing tumor infiltrating lymphocytes in gas-permeable containers |
| CA2874486C (en) | 2012-05-22 | 2021-08-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Murine anti-ny-eso-1 t cell receptors |
| IL286786B (en) * | 2012-09-14 | 2022-09-01 | The Us Secretary Department Of Health And Human Services Office Of Technology Transfer National Inst | T cell receptors that recognize mhc mage–a3 are restricted type ii |
| US9822162B2 (en) * | 2013-07-15 | 2017-11-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-human papillomavirus 16 E6 T cell receptors |
| IL290655B1 (en) * | 2014-05-29 | 2024-01-01 | Us Health | Anti-human papillomavirus 16 E7 T-cell chelates |
| EP3848456A1 (en) * | 2014-10-02 | 2021-07-14 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Methods of isolating t cells having antigenic specificity for a cancer-specific mutation |
| EP3220928B1 (en) * | 2014-11-20 | 2022-10-05 | UMC Utrecht Holding B.V. | A method of obtaining a preparation enrichmed in engineered t cells with exogenous immune receptors |
-
2018
- 2018-09-24 WO PCT/US2018/052432 patent/WO2019070435A1/en active Application Filing
- 2018-09-24 CA CA3077595A patent/CA3077595A1/en active Pending
- 2018-09-24 US US16/652,948 patent/US20200254018A1/en active Pending
- 2018-09-24 FI FIEP18786145.5T patent/FI3692140T3/fi active
- 2018-09-24 CN CN201880076862.9A patent/CN111417720A/zh active Pending
- 2018-09-24 SG SG11202003112QA patent/SG11202003112QA/en unknown
- 2018-09-24 KR KR1020207012314A patent/KR20200064107A/ko unknown
- 2018-09-24 AU AU2018345400A patent/AU2018345400A1/en active Pending
- 2018-09-24 JP JP2020519092A patent/JP2020535832A/ja active Pending
- 2018-09-24 MA MA050748A patent/MA50748A/fr unknown
- 2018-09-24 EP EP23185846.5A patent/EP4269595A3/en active Pending
- 2018-09-24 EP EP18786145.5A patent/EP3692140B1/en active Active
- 2018-09-24 ES ES18786145T patent/ES2960313T3/es active Active
-
2020
- 2020-03-30 IL IL273698A patent/IL273698A/en unknown
-
2023
- 2023-12-26 JP JP2023220106A patent/JP2024050551A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019070435A8 (en) | 2020-01-30 |
| JP2024050551A (ja) | 2024-04-10 |
| CN111417720A (zh) | 2020-07-14 |
| US20200254018A1 (en) | 2020-08-13 |
| JP2020535832A (ja) | 2020-12-10 |
| MA50748A (fr) | 2020-08-12 |
| WO2019070435A1 (en) | 2019-04-11 |
| AU2018345400A1 (en) | 2020-05-07 |
| EP4269595A3 (en) | 2023-12-06 |
| CA3077595A1 (en) | 2019-04-11 |
| SG11202003112QA (en) | 2020-05-28 |
| EP3692140A1 (en) | 2020-08-12 |
| EP3692140B1 (en) | 2023-07-19 |
| IL273698A (en) | 2020-05-31 |
| KR20200064107A (ko) | 2020-06-05 |
| FI3692140T3 (fi) | 2023-10-11 |
| EP4269595A2 (en) | 2023-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2923895T3 (es) | Receptores de antígeno quimérico (CARS) dirigidos a neoplasisas malignas hematológicas, composiciones y métodos de uso de los mismos | |
| ES2841983T3 (es) | Método y composiciones para inmunoterapia celular | |
| ES2717530T3 (es) | Inmunorreceptores y epítopos de células T específicos de Claudina-6 | |
| ES2869972T3 (es) | Sistemas de receptores de antígenos quiméricos dirigidos por mAb para clasificar/agotar células inmunitarias genomanipuladas | |
| ES2764471T3 (es) | Receptores de antígeno quimérico y procedimientos de fabricación | |
| ES2784315T3 (es) | Terapia génica combinada del receptor de linfocitos T para el cáncer contra epítopos restringidos a MHC I y II del antígeno tumoral NY-ESO-1 | |
| ES2871349T3 (es) | Expansión selectiva y controlada de células NK educadas | |
| AU2019266398A1 (en) | Methods and compositions for treating cancer | |
| CA3055200A1 (en) | Compositions and methods for immunotherapy | |
| ES2930010T3 (es) | Células T dirigidas a células T | |
| JP7450892B2 (ja) | Ｎｋ細胞のための人工ｈｌａ陽性フィーダー細胞株及びその使用 | |
| ES2748224T3 (es) | Receptores de antígeno y usos de los mismos | |
| JP7475088B2 (ja) | ヒトメソセリンを特異的に認識する細胞表面分子、ｉｌ－７、及びｃｃｌ１９を発現する免疫担当細胞 | |
| JP2024050551A (ja) | マウス定常領域を伴うｔｃｒを発現する細胞を選択的に増幅するための方法 | |
| US20220119476A1 (en) | Activation of Antigen Presenting Cells and Methods for Using the Same | |
| JP2020508657A (ja) | Ｉｌ−１３ｒａ２を標的とする抗体及びその応用 | |
| WO2022164959A1 (en) | Improved immune cell therapy | |
| JP2024510898A (ja) | Ｒｏｒ１を標的とするキメラ抗原受容体 | |
| CN115461377A (zh) | 结合cd20的二聚体抗原受体（dar） | |
| WO2023288271A1 (en) | T cell receptors (tcr) to human papillomavirus proteins, compositions, and uses thereof | |
| WO2021211663A1 (en) | Chimeric myd88 receptors | |
| NZ723544B2 (en) | Claudin-6-specific immunoreceptors and t cell epitopes |