ES2939945T3

ES2939945T3 - Procedimiento de preparación del ácido aminobenzoico o de un derivado del ácido aminobenzoico

Info

Publication number: ES2939945T3
Application number: ES16797903T
Authority: ES
Inventors: Gernot Jäger; Wolfgang Beckmann; Amgad-Salah Moussa; Guenter Olf; Guido Becker; Hasan Akyildiz; Andreas Damm; Thomas Hamedinger; Wolf Kloeckner; Swantje Behnken
Original assignee: Covestro Intellectual Property GmbH and Co KG
Current assignee: Covestro Intellectual Property GmbH and Co KG
Priority date: 2015-11-20
Filing date: 2016-11-17
Publication date: 2023-04-28
Anticipated expiration: 2036-11-17
Also published as: CA3004384A1; US11168341B2; BR112018010215A2; CN108291242A; KR20180077191A; HUE061332T2; EP3377640A1; WO2017085170A1; US20180334694A1; EP3377640B1

Abstract

La invención se refiere a un método para producir ácido aminobenzoico o un derivado del ácido aminobenzoico mediante la fermentación de una materia prima adecuada bajo la influencia de microorganismos adecuados y la obtención de un caldo de fermentación que contiene aminobenzoato y/o ácido aminobenzoico. En particular, la invención se refiere a la etapa de obtención del ácido aminobenzoico a partir del caldo de fermentación, en donde la cristalización del ácido aminobenzoico se lleva a cabo mediante un tratamiento ácido simple de una etapa en presencia de cristales semilla. El ácido aminobenzoico cristalizado de esta manera simple se puede separar fácilmente de las aguas madres, limpiarse más si es necesario y luego suministrarse a las diferentes aplicaciones. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Procedimiento de preparación del ácido aminobenzoico o de un derivado del ácido aminobenzoico

La presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de ácido orto-aminobenzoico o de un derivado del ácido orto-aminobenzoico por medio de la fermentación de una materia prima adecuada, bajo la influencia de microorganismos adecuados, obteniéndose un caldo de fermentación que comprende orto-aminobenzoato y/o ácido orto-aminobenzoico. Más concretamente, la presente invención se refiere a la etapa de recuperación del ácido ortoaminobenzoico a partir del caldo de fermentación, en la que la cristalización del ácido orto-aminobenzoico se lleva a cabo mediante un mero tratamiento ácido de una sola etapa en presencia de cristales de semilla, y la presencia de los cristales de semilla se consigue al añadir el caldo de fermentación y el ácido a una suspensión de cristales de siembra cargada en el reactor, en donde los cristales de siembra cargados en la suspensión consisten en al menos el 90 %, con respecto a la masa total de todos los cristales de siembra cargados en la suspensión, de la modificación de la forma I del ácido orto-aminobenzoico. El ácido orto-aminobenzoico cristalizado de esta forma tan sencilla puede separarse fácilmente del licor madre, purificarse todavía más si es necesario y usarse después para una amplia variedad de aplicaciones.

La producción fermentativa de ácido aminobenzoico o de productos que pueden obtenerse por conversión química posterior del ácido aminobenzoico (en lo sucesivo, derivados del ácido aminobenzoico) se describe en la bibliografía. Para la producción fermentativa de ácido aminobenzoico, cabe citar como ejemplo lo siguiente Balderas-Hemandez, V. E. et al, "Metabolic engineering for improving anthranilate synthesis from glucose in Escherichia coli", Microb. Cell. Fact. 2009, 8, 19 (doi: 10.118611475-2859-8-19). También pueden encontrarse publicaciones sobre este tema en la literatura sobre patentes; véanse, por ejemplo el documento WO 2015/124686 A1 y el documento WO 2015/124687 A1 así como la bibliografía citada en cada caso. Wiklund et al. (Per Wiklund et al., Current Organic Synthesis, 2006, 3, 379 - 402) describen productos que se pueden obtener a partir de la transformación del ácido aminobenzoico.

Otros ácidos, tales como los L-aminoácidos o los ácidos nucleicos, también se han preparado por medio de fermentación, tal como se describe en el documento EP 2 130924 A1. En el procedimiento allí descrito, el producto deseado precipita ya en el caldo de fermentación, por lo que se puede prescindir de una etapa de cristalización separada. Opcionalmente, se añaden cristales de semilla durante la fermentación .

En S. Gracin et al, Crystal Growth & Design, 2004, 4, 1013 - 1023 se discute el polimorfismo y la cristalización del ácido para-aminobenzoico. El documento no aborda aspectos específicos del aislamiento del ácido paraaminobenzoico a partir de caldos de fermentación . Sin embargo, aislar un compuesto diana de un caldo de fermentación es cualquier cosa menos trivial. Puede implicar varias etapas, tales como la extracción, la filtración, la adsorción o la cristalización. Incluso es posible que todas estas etapas sean necesarias para obtener el compuesto deseado con la pureza suficiente. Sin embargo, cada una de estas etapas ocasiona inevitablemente un trabajo adicional y, por lo tanto, costes. Además, cuantos más etapas sean necesarias para aislar el compuesto diana, menor será el rendimiento. Por lo tanto, generalmente es deseable mantener lo más pequeño posible el número de etapas para aislar el compuesto diana con la pureza deseada.

Los procedimientos de fermentación suelen tener lugar en un medio acuoso. Por lo tanto, es especialmente deseable poder aislar el compuesto diana producido por fermentación directamente de este medio acuoso y, por ejemplo, poder prescindir de disolverlo usando un disolvente orgánico.

Generalmente se sabe que la solubilidad del ácido orto-aminobenzoico como compuesto anfótero se puede minimizar ajustando el pH de manera selectiva. Los dos valores de pKs son 2,2 y 4,9, respectivamente (cf. Zapala et al., Biophys. Chem., 140 (1-3) (2009) 91 - 98), que corresponde a un mínimo de solubilidad a un pH de aproximadamente 3,5.

Por lo tanto, en realidad cabría esperar que el aislamiento del ácido orto-aminobenzoico a partir de caldos de fermentación fuera posible sin grandes esfuerzos. Totalmente al contrario de lo anterior, el documento JP04-330290A describe un procedimiento de varias etapas para el aislamiento del ácido orto-aminobenzoico, en el que 1. (1) opcional y preferentemente, las proteínas presentes en el caldo de fermentación se precipitan ajustando el pH del caldo de fermentación a un pH de 4 a 6,

2. (2) la biomasa se separa del caldo de fermentación (y éste se "esteriliza"), y a continuación

3. (3) se lleva a cabo una decoloración ajustando el pH a un valor comprendido entre 5 y 10 y la posterior adsorción en una columna adecuada,

4. (4) la solución que contiene ácido orto-aminobenzoico se concentra antes

5. (5) y solo entonces se puede iniciar la cristalización del ácido orto-aminobenzoico mediante el ajuste del pH al pH correspondiente al punto isoeléctrico del ácido orto-aminobenzoico, tras lo cual finalmente

6. (6) se separan los cristales precipitados.

Así pues, el procedimiento implica de dos a tres etapas de ajuste del pH y, por lo tanto, es multietapa con respecto al ajuste del pH necesario para la cristalización. Además, el ácido orto-aminobenzoico, que se aísla elaboradamente en cinco o seis etapas, solo tiene una pureza del 94 % y también solo se obtiene con un rendimiento relativamente bajo del 67 % del rendimiento teóricamente posible. El procedimiento es complejo y requiere un cambio del valor del pH de dos a tres veces, lo que naturalmente va acompañado de un aumento de la carga salina de las aguas residuales. Además, el ácido orto-aminobenzoico es sensible a la temperatura y puede descarboxilarse en anilina, un derivado del ácido aminobenzoico. Esto último resulta problemático, incluso si la anilina es el producto diana real de la secuencia de síntesis, ya que una descarboxilación prematura en este punto puede provocar pérdidas de rendimiento debido a una solubilidad en agua comparativamente alta de la anilina en los valores de pH relevantes. Por lo tanto, es conveniente aislar el ácido orto-aminobenzoico lo antes posible y a la temperatura más baja posible.

El documento WO 2015/124687 A1 divulga en la página 17 la recuperación del ácido orto-aminobenzoico (ácido antranílico) de un caldo de la fermentación por medio de la adición de ácido de un modo general, pero no enseña ningún detalle en la realización exacta de esta etapa.

Por lo tanto, era necesario seguir mejorando la producción fermentativa de ácido aminobenzoico o derivados del ácido aminobenzoico y, en particular, la etapa de aislamiento del ácido aminobenzoico a partir del caldo de fermentación.

En respuesta a esta necesidad, un objetivo de la presente invención es un procedimiento para preparar ácido ortoaminobenzoico o un derivado del orto-isómero del ácido aminobenzoico, que comprende las etapas de:

1. (I) fermentación de una materia prima que comprende al menos un compuesto fermentable que contiene carbono, preferentemente seleccionada del grupo que consiste en hidrolizado de almidón, zumo de caña de azúcar y zumo de remolacha azucarera, usando microorganismos de una especie seleccionada del grupo que consiste en Escherichia coli, Pseudomonas putida y Corynebacterium glutamicum , obteniéndose un caldo de fermentación que comprende orto-aminobenzoato y/o ácido orto-aminobenzoico;

2. (II) pretratamiento opcional del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I), que comprende

1. (1) separación del microorganismo del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) sin ajuste del pH, obteniéndose un caldo de fermentación empobrecido en microorganismos; y/o

2. (2) decoloración del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) o, si se realiza la etapa (II) (1), del caldo de fermentación empobrecido en microorganismos obtenido en la etapa (II) (1), sin ajuste del pH;

3. (III) tratamiento en una etapa del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) o en la etapa (II) (1) o en la etapa (II) (2) en un reactor con ácido , de tal manera que el ácido orto-aminobenzoico se separa del caldo de fermentación;

4. (IV) aislamiento del ácido orto-aminobenzoico separado en la etapa (III), quedando licor madre;

5. (V) purificación adicional opcional del ácido orto-aminobenzoico obtenido en la etapa (IV), preferentemente mediante el lavado con agua;

6. (VI) conversión adicional opcional del ácido ortoaminobenzoico obtenido en la etapa (IV) o en la etapa (V) para obtener un derivado del ácido aminobenzoico;

en la que la etapa (III) se lleva a cabo de tal manera que los cristales de siembra de ácido orto-aminobenzoico están presentes y la presencia de los cristales de siembra se consigue de tal manera que el caldo de fermentación y el ácido se añaden a una suspensión de cristales de siembra cargada en el reactor, en donde los cristales de siembra cargados en la suspensión en al menos el 90 %, con respecto a la masa total de todos los cristales de siembra cargados en la suspensión, consisten en la modificación de la forma I del ácido orto-aminobenzoico.

El tratamiento ácido en la etapa (III) es por lo tanto "de una sola etapa" en el sentido de que el valor diana del pH deseado se ajusta directamente mediante la adición de ácido, sin necesidad de para valores de pH entre el pH inicial (es decir, el pH del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) o en la etapa (II) (1) o en la etapa (II) (2), dependiendo de si se lleva a cabo la etapa opcional (II) y, en caso afirmativo, de qué subetapas se compone) y el pH diana (es decir, el pH que se obtiene una vez completado el tratamiento con ácido en la etapa (III)) se lleven a cabo etapas intermedias (tales como filtración, centrifugación, tratamiento cromatográfico en columna y similares). Por lo tanto, el ajuste del valor de pH deseado mediante el tratamiento con ácido de una sola etapa descrito solo se lleva a cabo en la tapa (III) del procedimiento según la invención. De este modo, según la invención, el caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) se somete directamente a la etapa (III) o se somete directamente a la etapa (II) y el producto del procedimiento de la etapa (II) (es decir, el producto del procedimiento obtenido en la etapa (II) (1) o en la etapa (II) (2)) se somete entonces directamente a la etapa (III). "Directo"significa "sin etapas intermedias". En otras palabras: La etapa (II) consiste en la etapa (II) (1) y/o la etapa (II) (2). Según la invención, las etapas (II) (1) y (II) (2) se llevan a cabo "sin ajuste del pH", es decir, sin tratamiento con ácido. La multitud de ajustes de pH (tratamientos ácidos) descritos en la técnica anterior se reduce, por tanto, a un único ajuste de pH (tratamiento ácido) en el procedimiento según la invención.

A los efectos de la presente invención, el término "cristales de semilla " significa

1. (i) cristales de ácido orto-aminobenzoico (que también pueden proceder de una fuente externa, por ejemplo, comprados) cargados en el reactor a partir de la etapa (III), y

2. (ii) cristales de ácido orto-aminobenzoico formados in situ en el reactor a partir de la etapa (III) durante la ejecución en continuo de esta etapa, que sirven como cristales semilla para la separación de más ácido ortoaminobenzoico (la denominada nucleación secundaria), como se explicará más adelante.

En el contexto de la presente invención, el término "derivado del ácido orto-aminobenzoico" significa un producto obtenido por medio de una conversión química adicional del ácido orto-aminobenzoico. El procedimiento según la invención permite obtener de forma sencilla ácido ortoaminobenzoico de gran pureza. No suele ser necesario recristalizar el ácido orto-aminobenzoico obtenido antes de su uso posterior; por lo tanto, preferentemente, la etapa (V), si se lleva a cabo, no implica recristalización. El licor madre que queda en el procedimiento según la invención después de la etapa (IV) contiene ácido orto-aminobenzoico solo en pequeñas cantidades, preferentemente no superiores a la solubilidad termodinámica. Así se minimiza la carga de aguas residuales. El procedimiento según la invención también permite la recuperación de ácido ortoaminobenzoico en tamaños de cristal tales que tras la separación del licor madre en la etapa (IV) o, si se lleva a cabo, tras la separación del agua de lavado en la etapa (V), se obtiene un contenido de humedad residual que permite el uso posterior del ácido ortoaminobenzoico incluso sin procedimientos de secado complejos.

Las formas de realización de la invención se describen con más detalle a continuación. Las distintas formas de realización pueden combinarse entre sí de cualquier manera, siempre que lo contrario no resulte evidente para el experto en la materia a partir del contexto general.

La etapa (I) del procedimiento según la invención puede llevarse a cabo según cualquier procedimiento conocido en la técnica anterior. Se prefieren especialmente los procedimientos descritos en los documentos WO 2015/124686 A1 y WO 2015/124687 A1 usando bacterias como microorganismos. En este contexto, se hace especial referencia al documento WO 2015/124687 A1(i) de la página 15, línea 8 a la página 16, línea 30, (ii) Ejemplo 1 (página 29, líneas 4 a 26), (iii) Ejemplo 3 (especialmente la página 34, líneas 10 a 18), (iv) Ejemplo 4 (especialmente la página 55, líneas 9 a 31).

No hace falta decir que la producción fermentativa de ácido orto-aminobenzoico requiere una fuente de nitrógeno además de una fuente de carbono. Si el compuesto fermentable que contiene carbono que se va a usar en la etapa (I) no contiene ya un compuesto adecuado que contenga nitrógeno como fuente de nitrógeno, se añadirá dicho compuesto. Preferentemente, el compuesto que contiene nitrógeno se selecciona del grupo formado por gas amoniaco, agua amoniacal, sales de amonio (especialmente sulfato de amonio y cloruro de amonio) y urea.

Según la invención, los microorganismos usados en la etapa (I) comprenden una especie seleccionada del grupo que consiste en Escherichia coli, Pseudomonas putida y Corynebacterium glutamicum. De manera particularmente preferente, los microorganismos consisten únicamente en representantes de exactamente una de estas especies. Se prefiere especialmente Corynebacterium glutamicum ATTC 13032.

El valor de pH que debe mantenerse en la fermentación depende del microorganismo usado. La fermentación en la etapa (I) se lleva a cabo en particular a un valor de pH tal que se evite en gran medida o totalmente una precipitación espontánea del ácido orto-aminobenzoico ya presente en el caldo de fermentación, es decir, la etapa (I) se lleva a cabo en particular a un valor de pH > 6,5. Los microorganismos tales como Corynebacterium glutamicum, Pseudomonas putida o Escherichia coli se cultivan preferentemente a valores de pH esencialmente neutros (es decir, preferentemente a un valor de pH comprendido entre 6,5 y 8,0).

En cualquier caso, el microorganismo de la etapa (I) se selecciona según la invención de tal manera que el ortoisómero del ácido aminobenzoico y/o el aminobenzoato se formen (selectivamente) en la fermentación. Dentro de este contexto, "selectivamente" significa que no se forman otros isómeros o que solo se forman en proporciones subordinadas (es decir, en proporciones -determinadas por cromatografía líquida de alto rendimiento, HPLC- de no más del 0,50 % en total, preferentemente de no más del 0,25 %, muy preferentemente de no más del 0,10 %, excepcionalmente muy preferentemente de no más del 0,05 %, en cada caso basándose en el total de todos los isómeros del ácido aminobenzoico). Los microorganismos de una especie seleccionada del grupo que consiste en Escherichia coli, Pseudomonas putida y Corynebacterium glutamicumson resultan particularmente adecuados para este fin. En lo sucesivo, las expresiones "ácido aminobenzoico" y "aminobenzoato" significan también el isómero orto si no se indica explícitamente.

Para obtener una bacteria adecuada, se dispone básicamente de dos vías, que en una realización preferente también pueden combinarse:

1. (i) Las reacciones enzimáticas en la vía metabólica del ácido aminobenzoico de la célula bacteriana pueden incrementarse para que el ácido aminobenzoico se produzca más rápido de lo que se consume.

2. (ii) Las reacciones posteriores por las que el ácido aminobenzoico se convierte en otros metabolitos o productos (por ejemplo, triptófano) pueden reducirse o eliminarse, de tal modo que incluso la tasa de formación de ácido aminobenzoico en cepas de tipo salvaje es suficiente para provocar una acumulación de ácido aminobenzoico en la célula.

Los procedimientos para obtener bacterias con las propiedades antes mencionadas son conocidos en la técnica anterior. Las bacterias adecuadas pueden identificarse, por ejemplo, mediante el cribado en busca de mutantes que liberen ácido aminobenzoico en el medio circundante. Sin embargo, se prefiere la modificación selectiva de enzimas clave mediante técnicas de ingeniería genética. Con los procedimientos habituales de ingeniería genética, la expresión génica y la actividad enzimática pueden aumentar, disminuir o incluso suprimirse por completo a voluntad. Se obtienen cepas recombinantes.

De manera particularmente preferente, las bacterias que se usarán en la etapa (I) contienen una modificación de la actividad de la antranilato fosforribosiltransferasa que reduce dicha actividad enzimática. Esta modificación reduce o impide por completo la conversión del orto-aminobenzoato en N-(5-fosfo-D-ribosil)-antranilato. Esto provoca una acumulación de ácido aminobenzoico en la célula. El término "actividad antranilato fosforribosiltransferasa" se refiere a una actividad enzimática que cataliza la conversión de orto-aminobenzoato en N-(5-fosfo-D-ribosil)-antranilato.

En la bacteria Corynebacterium glutamicum, la actividad antranilato fosforribosiltransferasa es codificada por el gen trpD (cg3361, Cgl3032, NCgl2929). En el caso de Pseudomonas putida , la codificación se realiza a través del gen trpD (PP_0421) dentro del operón trpDC .

La reducción descrita de la actividad de la antranilato fosforribosiltransferasa puede lograrse en principio de tres maneras:

1. (i) Se puede modificar la regulación de la expresión del gen de la actividad antranilato fosforribosiltransferasa para reducir o impedir la transcripción del gen o su posterior traducción.

2. (ii) Se pueden modificar la secuencia de ácido nucleico del gen de la actividad antranilato fosforribosiltransferasa para que la enzima codificada por el gen modificado tenga una actividad específica menor.

3. (iii) Se puede sustituir el gen nativo de la actividad antranilato fosforribosiltransferasa por otro gen procedente de un organismo diferente y que codifique una enzima con una actividad antranilato fosforribosiltransferasa específica inferior a la de los genes nativos anteriormente mencionados (por ejemplo, trpD o trpDC).

Independientemente del microorganismo usado, el caldo de fermentación al comienzo de la fermentación en la etapa (I) comprende células recombinantes del microorganismo usado y al menos un compuesto fermentable que contiene carbono (y al menos un compuesto que contiene nitrógeno como fuente de nitrógeno, ya sea como componente del compuesto que contiene carbono o añadido). Preferentemente, el caldo de fermentación también contiene otros componentes seleccionados del grupo que consiste en sistemas tampón, nutrientes inorgánicos, aminoácidos, vitaminas y otros compuestos orgánicos que son necesarios para el crecimiento o el metabolismo de mantenimiento de las células recombinantes. El caldo de fermentación es a base de agua. Una vez iniciado el procedimiento de fermentación, el caldo de fermentación también comprende ácido aminobenzoico y/o aminobenzoato (dependiendo del pH al que se lleve a cabo la fermentación), el producto de fermentación objetivo.

A efectos de la presente invención, se entiende por compuesto fermentable que contiene carbono cualquier compuesto orgánico o mezcla de compuestos orgánicos que puedan ser usado por las células recombinantes del microorganismo empleado para producir ácido aminobenzoico. La producción de ácido aminobenzoico puede tener lugar en presencia o en ausencia de oxígeno.

Se da preferencia a los compuestos fermentables que contienen carbono y que pueden servir además como fuente de energía y de carbono para el crecimiento de las células recombinantes del microorganismo usado. Son especialmente adecuados el hidrolizado de almidón, el zumo de caña de azúcar, el zumo de remolacha azucarera y los hidrolizados de materias primas lignocelulósicas. También son adecuados la glicerina y los compuestos C1, especialmente el monóxido de carbono.

En una forma de realización preferente, la etapa (I) se lleva a cabo de forma continua, es decir, los reactivos se incorporan de manera continua al reactor de fermentación y el producto se extrae de manera continua del reactor de fermentación. En el procesamiento en continuo, el microorganismo puede descargarse con la corriente de producto; sin embargo, el microorganismo suele autorreplicarse, por lo que no suele ser necesario un suministro de microorganismo fresco (aunque, por supuesto, puede hacerse si es necesario). También es posible la retención celular para evitar la descarga de microorganismos.

En otra forma de realización preferente, la etapa (I) se lleva a cabo en un modo de procedimiento discontinuo (denominado "modo por lotes"). En una variante del modo de funcionamiento discontinuo (el llamado"modo incorporado por lotes"), los reactivos se incorporan al reactor de fermentación de forma continua o a intervalos, preferentemente de forma continua, durante tanto tiempo como lo permita el volumen del reactor sin que se extraigan productos del mismo. La reacción se detiene tras añadir la máxima cantidad posible de reactivos y la mezcla de productos se retira del reactor de fermentación.

Independientemente del modo exacto de funcionamiento, el aparato de reacción en el que se lleva a cabo la etapa (I) (en lo sucesivo, reactor de fermentación) comprende preferentemente equipos para medir parámetros importantes del procedimiento, tales como la temperatura, el pH del caldo de fermentación, la concentración de sustrato y de producto, el contenido de oxígeno disuelto y la densidad celular del caldo de fermentación. En particular, el reactor de fermentación comprende preferentemente medios para ajustar al menos uno (preferentemente todos) de los parámetros de procedimiento mencionados.

Los reactores de fermentación adecuados son tanques de agitación, reactores de membrana, reactores de flujo de tapón o reactores de bucle (véase, por ejemplo, Bioprozesstechnik, Horst Chmiel, ISBN-10: 3827424763, Spektrum Akademischer Verlag). Los reactores de tanque de agitación y los reactores de bucle (especialmente los reactores airlift, en los que la circulación del líquido en el reactor se consigue mediante la aplicación de gas) son especialmente adecuados para las fermentaciones aeróbicas y anaeróbicas.

La etapa (II) (1) opcional, la separación del microorganismo del caldo de fermentación, es conocida per se en la técnica anterior y se lleva a cabo en el contexto de la presente invención, en particular por filtración o centrifugación. Preferentemente, esta etapa, si se realiza, se lleva a cabo tal como se describe en los documentos WO 2015/124686 A1 y WO 2015/124687 A1. En este contexto, se hace especial referencia al documento WO 2015/124687 A1 de la página 15, línea 8 a la página 15, línea 17.

La etapa (II) (2 ) opcional, que, si se realiza, sigue a continuación en la etapa (I) o en la etapa (II) (1), se lleva a cabo preferentemente haciendo pasar caldo de fermentación o caldo de fermentación empobrecido en microorganismos sobre una columna de empaquetamiento sólido para eliminar por adsorción los colorantes. Como posible fase sólida se puede usar, por ejemplo, tierra de diatomeas o paquetes de intercambio iónico. La etapa (II) (2) se realiza preferentemente si en el caldo de fermentación de las etapas (I) o (II) (1) están presentes sustancias coloreadas que puedan interferir con la cristalización posterior.

En la etapa (III) del procedimiento según la invención, se ajusta el pH añadiendo ácido al caldo de fermentación para que cristalice el ácido aminobenzoico. Este tipo de cristalización también se denomina cristalización reactiva. Esto se hace preferentemente de tal manera que el pH de la mezcla resultante sea igual, o al menos próximo, al del punto isoeléctrico del orto-isómero del ácido aminobenzoico. Por lo tanto, el pH se ajusta preferentemente a un valor comprendido entre 3,0 y 4,7, más preferentemente a un valor comprendido entre 3,2 y 3,7, más preferentemente a un valor comprendido entre 3,4 y 3,6, es decir, próximo o correspondiente al punto isoeléctrico a pH 3,5.

El ácido que se considera es cualquier ácido que se pueda usar para ajustar un pH igual, o al menos próximo, al punto isoléctrico del orto-isómero del ácido aminobenzoico. Para ello se usan preferentemente ácidos minerales fuertes, en particular ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y/o ácido fosfórico. Preferentemente, el ácido usado en la etapa (III) comprende ácido clorhídrico, más preferentemente ácido clorhídrico de una concentración del 15 % en masa al 37 % en masa, más preferentemente ácido clorhídrico de una concentración del 18 % en masa al 25 % en masa. Es particularmente preferente que el ácido no comprenda ningún otro ácido además de este ácido clorhídrico, con la excepción del licor madre reciclado opcionalmente añadido de la etapa (IV) (es decir, no se añade ningún otro ácido de una fuente externa). Cuando se usa una mezcla de ácido clorhídrico y una porción del licor madre obtenido en la etapa (IV) como ácido usado en la etapa (III), preferentemente se mezcla con ácido clorhídrico de entre el 1,0 % en masa y el 50 % en masa del total del licor madre obtenido en la etapa (IV).

El reactor de la etapa (III) puede ser uno de los diseños de reactor químico convencionales comúnmente usados por los expertos en la materia. Algunos ejemplos son los tanques de agitación o los cristalizadores de circulación forzada, como los del "tipo Oslo". Los posibles reactores para la etapa (III) (también denominada "cristalizador") se muestran en los dibujos adjuntos:

FIG. 1 muestra un cristalizador con cristalización de circulación forzada sin elementos agregados. Significa: (1) Posibles dispositivos de suministro de caldo de fermentación o de ácido, (2) bomba o trituradora, (3) intercambiador de calor, (4) separación sólido-líquido (por ejemplo, filtración).

FIG. 2 muestra un cristalizador con cristalización de circulación forzada y elementos agregados, en el que el circuito de recirculación se introduce a un lado del clasificador. Significa: (1) Posibles dispositivos de suministro de caldo de fermentación o de ácido, (2) bomba o trituradora, (3) intercambiador de calor, (4) separación sólido-líquido (por ejemplo, filtración), (5) clasificador, (6) zona de decantación.

FIG. 3 muestra un cristalizador con cristalización de circulación forzada y elementos agregados, en el que el circuito de recirculación de la parte inferior del clasificador se usa para la fluidización. Significa: (1) Posibles dispositivos de suministro de caldo de fermentación o de ácido, (2) bomba o trituradora, (3) intercambiador de calor, (4) separación sólido-líquido (por ejemplo, filtración), (5) clasificador, (6) zona de decantación.

Se ha demostrado la utilidad de incorporar el caldo de fermentación y el ácido al reactor en la etapa (III) a través de dispositivos de suministro separados espacialmente (en la medida de lo posible). De este modo se garantiza que los reactivos se mezclen lo mejor posible con el contenido del reactor antes de que se produzca la reacción ácido-base (cf. p. ej. B. Beckmann, Crystallization, Wiley 2013, pp. 175 a 176). Las tuberías, preferentemente con válvulas de cierre, pueden considerarse dispositivos de suministro. En una forma de realización, el dispositivo de suministro de caldo de fermentación y el dispositivo de suministro de ácido están dispuestos en lugares opuestos de la pared del reactor (sustancialmente) perpendiculares a la misma. En otra forma de realización, el dispositivo de suministro para el caldo de fermentación y el dispositivo de suministro para el ácido están dispuestos (sustancialmente) paralelos a la pared del reactor, estando los dispositivos de suministro opuestos y lo más cerca posible, en particular directamente, de la pared del reactor.

Es posible dividir el reactor usado en la etapa (III) en cámaras mediante elementos agregados adecuados. Las posibles cámaras resultantes son las zonas de estabilización (6) o clasificadores (5) que se muestran en la FIG. 2 y la FIG. 3. La dirección del flujo puede ajustarse seleccionando la geometría del agitador y el modo de funcionamiento. También es posible dotar al reactor de un circuito de bombeo externo, en cuyo caso uno de los dos reactivos -caldo de fermentación o ácido- se añade al circuito de bombeo y el otro directamente al reactor (véanse los dibujos). Si un reactor funciona con un clasificador y un circuito de recirculación, el circuito de recirculación se usa en la parte inferior del clasificador para la fluidificación o en el lateral del clasificador.

También se ha encontrado útil, en la etapa (III), cuando esta etapa se lleva a cabo en continuo, incorporar

■ el ácido con tal velocidad de dosificación y

■ el caldo de fermentación con una velocidad de dosificación tal

al reactor y retirar una suspensión de producto (es decir, ácido aminobenzoico suspendido en caldo de fermentación acidificado [= licor madre]) del reactor de forma intermitente o continua, preferentemente continua, de tal manera que resulte un tiempo de residencia de la suspensión en el reactor de % h a 10 h, preferentemente de % h a 2 h. A los efectos de la presente invención, por realización en continuo de la etapa (III) se entiende un modo de funcionamiento en el que el ácido y el caldo de fermentación se incorporan de manera continua al reactor desde la etapa (III) y el producto (es decir, el ácido aminobenzoico suspendido en el caldo de fermentación acidificado [= licor madre]) se retira del reactor al menos de manera intermitente (modo de funcionamiento semicontinuo) o preferentemente también de manera continu (modo de funcionamiento totalmente continuo).

Cuando la etapa (III) se realiza de manera discontinua, se prefiere llevar a cabo el tratamiento con ácido en la etapa (III) durante un periodo de % h a 10 h, preferentemente de % h a 2 h. A los efectos de la presente invención, por realización discontinua de la etapa (III) se entiende un modo de funcionamiento en el que todos los reactantes se introducen en el reactor y reaccionan en él durante un período de tiempo deseado. Una vez completada la etapa (III), se aísla el ácido aminobenzoico separado de la mezcla de reacción obtenida (etapa (IV); véanse los detalles más adelante). Así, en esta realización, el ácido aminobenzoico se obtiene por lotes.

Independientemente del modo de funcionamiento (en continuo o discontinuo), los parámetros de funcionamiento exactos vienen determinados (entre otras cosas) por el tamaño de cristal deseado, que puede establecerse mediante el tiempo de residencia/tiempo de reacción y el grado de sobresaturación (los tamaños de cristal grandes se ven favorecidos por tiempos de residencia/tiempos de reacción largos y grados de sobresaturación bajos).

La presencia de cristales de semilla de ácido aminobenzoico durante el tratamiento con ácido de la etapa (III) puede realizarse de la siguiente manera:

Según la invención, la presencia de cristales de semilla de ácido aminobenzoico en la etapa (III) se consigue añadiendo el caldo de fermentación y el ácido a una suspensión de cristales de semilla introducida en el reactor. Estos cristales de semilla pueden proceder de un lote de producción anterior o de una fuente externa. Este enfoque se usa cuando la etapa (III) se lleva a cabo de forma discontinua y cuando se pone en funcionamiento una separación del ácido aminobenzoico llevada a cabo de forma continua en la etapa (III) del procedimiento según la invención. Preferentemente, en ambos casos, la suspensión usada es una suspensión de los cristales de semilla en una porción del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) o en la etapa (II) (1) o en la etapa (II) (2), suspendiéndose preferentemente los cristales de semilla en el 1,0 % en masa al 20 % en masa del caldo de fermentación total usado en la etapa (III).

Preferentemente, la etapa (III) del procedimiento según la invención se lleva a cabo de forma continua, tal como se ha definido anteriormente. En esta forma de realización, se pretende iniciar la separación continua de ácido aminobenzoico por tratamiento con ácido en la etapa (III) del procedimiento según la invención introduciendo una suspensión de cristales de semilla en el reactor, al que se añaden entonces de manera continua el caldo de fermentación y el ácido. El ácido aminobenzoico comienza entonces a precipitar, por lo que el valor del pH puede servir como variable de control de la velocidad de precipitación. Una vez iniciada la precipitación de ácido aminobenzoico en el reactor de la etapa (III), los cristales de ácido aminobenzoico depositados in situ actúan como cristales de semilla para la precipitación de más ácido aminobenzoico. En esta forma de realización de la invención, la presencia de cristales de semilla -además de los cristales de semilla cargados para la puesta en marcha- de ácido aminobenzoico en la etapa (III) se consigue así preferentemente suministrando continuamente caldo de fermentación y ácido al reactor y retirando una suspensión de ácido aminobenzoico del reactor de forma intermitente o continua, preferentemente de forma continua, ajustándose el suministro de caldo de fermentación y ácido y la retirada de la suspensión de tal manera que los cristales de ácido aminobenzoico, que actúan como cristales de semilla, estén siempre presentes en la parte de la mezcla de reacción en el reactor (es decir, en la parte de la mezcla de reacción que no se retira). Preferentemente, el suministro de caldo de fermentación y de ácido y la eliminación de la suspensión se ajustan de tal modo que la cantidad de ácido aminobenzoico eliminado en un periodo a través de la suspensión descargada corresponda a la cantidad de ácido aminobenzoico recién separado en el mismo periodo. La generación continua de núcleos de cristalización por nucleación secundaria, necesaria para un procedimiento continuo, puede llevarse a cabo por cualquiera de los procedimientos conocidos por el experto; por ejemplo, por impactos con un agitador o por bombeo (cf. también Beckmann, Cristalización, Wiley 2013, p. 203 a 233). Los detalles dependen del diseño real del reactor de la etapa (III) (el "cristalizador") y del tamaño de cristal deseado; puede ser necesaria la clasificación. La clasificación puede realizarse con la ayuda de un clasificador o de un hidrociclón. En el caso del control continuo del procedimiento, el suministro de cristales de siembra procedentes de una fuente externa -comprados o de un lote de producción anterior- solo es, por lo tanto, necesario durante la puesta en marcha; no es necesario ni preferente suministrar permanentemente cristales de siembra procedentes de dicha fuente externa durante la deposición de ácido aminobenzoico realizada de forma continua.

Independientemente de la forma de realización elegida, la proporción de cristales de semilla cargados en suspensión, si los hay, se ajusta preferentemente en la etapa (III) en el procedimiento según la invención a un valor del 0,50 % en masa al 30 % en masa, basado en la masa total del ácido aminobenzoico que se depositará en la etapa (III). Para ello, la masa total de ácido aminobenzoico que debe separarse en la etapa (III) se basa de manera simplificada en la masa de ácido aminobenzoico al 100 % de separación. Se obtiene de forma sencilla a partir de las concentraciones y cantidades de entrada conocidas.

El procedimiento según la invención se usa para preparar ácido ortoaminobenzoico o un derivado de ácido aminobenzoico correspondiente. Se prevé que los cristales de siembra cargados en la suspensión en la etapa (III) estén constituidos al menos en un 90 %, preferentemente al menos en un 95 %, basado en la masa total de todos los cristales de siembra cargados en la suspensión, por la modificación de la Forma I, según la nomenclatura descrita en Ojala, W. H.; Etter, M. C., J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 10288 - 10293. Con esto se provoca una cristalización preferente de esta modificación, lo que se traduce en un aumento del rendimiento.

La etapa (IV), el aislamiento del ácido aminobenzoico separado en la etapa (III), es conocido per se en la técnica anterior y se lleva a cabo preferentemente por filtración o centrifugación según la invención. Preferentemente, esta etapa se realiza tal como se describe en dl documento WO 2015/124687 A1. En este contexto, se hace especial referencia al documento 2015/124687 A1, de la página 17, línea 13, a la página 17, línea 16. La filtración puede realizarse a presión reducida, a presión ambiente o a presión aumentada. Si la etapa (III) se realiza de forma continua, la etapa (IV) también se realiza preferentemente de forma continua, es decir, la suspensión tomada en la etapa (III) de forma discontinua o continua se aísla directamente a continuación de la etapa (III) de forma discontinua o continua.

La etapa opcional (V), la purificación adicional del ácido aminobenzoico obtenido en la etapa (IV), es conocido per se en la técnica anterior (véase sobre todo el documento WO 2015/124687 A1 y, en particular, el documento WO 2015/124687 A1, de la página 18, línea 4, a la página 18, línea 6) y se realiza preferentemente según la invención mediante uno o varios lavados con medios de lavado acuosos, en particular agua. Para evitar pérdidas de rendimiento, el valor de pH del medio acuoso de lavado puede ajustarse al mismo valor que en la etapa (III) una vez completada la adición de ácido; así, en esta forma de realización, el lavado se lleva a cabo con un ácido diluido, en particular el mismo ácido usado en la etapa (III), en lugar de agua. El producto restante tras la eliminación del medio acuoso de lavado por filtración, si es necesario con el apoyo de la aplicación de una presión reducida o aumentada, generalmente tiene una humedad residual tan baja debido a los grandes tamaños de los cristales que se puede prescindir de costosas etapas de secado adicionales antes de su uso posterior. Si se omite la etapa (V), lo mismo se aplica al producto obtenido tras la etapa (IV).

El ácido aminobenzoico obtenido según la invención se hace reaccionar preferentemente hasta convertirlo en un derivado del ácido aminobenzoico, es decir, se lleva a cabo preferentemente la etapa (V I). Otras reacciones seleccionadas del ácido aminobenzoico obtenido en la etapa (VI) son:

(VI-1) Descarboxilación a anilina;

(VI-2) Descarboxilación seguida de reacción catalizada por ácido con formaldehído para formar di- y poliaminas de la serie del difenilmetano;

(VI-3) Descarboxilación seguida de reacción catalizada por ácido con formaldehído, seguida de reacción con fosgeno para formar diisocianatos y poliisocianatos de la serie del difenilmetano;

(VI-4) Conversión en un compuesto azoico, en particular en un colorante azoico;

(VI-5) Conversión en amidas;

(VI-6) Conversión en polímeros conductores, como el ácido poliantranílico en particular.

La descarboxilación del ácido orto-aminobenzoico a anilina (VI-1) es conocida per se y puede llevarse a cabo dentro del alcance de la presente invención del mismo modo que se describe en la bibliografía. Las prácticas adecuadas se describen, por ejemplo, en los documentos WO 2015/124686 A1 y WO 2015/124687 A1 . La descarboxilación se lleva a cabo preferentemente a una temperatura comprendida entre 150 °C y 250 °C, más preferentemente a entre 160 °C y 220 °C y más preferentemente a entre 180 °C y 200 °C. La descarboxilación puede realizarse de forma puramente térmica, pero también catalítica. Las zeolitas, por ejemplo, son adecuadas como catalizadores.

La reacción posterior de la anilina así obtenida con formaldehído para formar di- y poliaminas de la serie de difenilmetano (VI-2) también se conoce per se y puede llevarse a cabo según cualquier procedimiento de la técnica antrior. La preparación en continuo o parcialmente discontinua de d i-y poliaminas de la serie del difenilmetano a partir de anilina y formaldehído se desvela, por ejemplo, en los documentos EP 1 616 890 A1, US-A-5286760, EP-A451442 y WO-A-99/40059. La reacción se produce bajo catálisis ácida. El ácido clorhídrico es preferentemente adecuado como catalizador ácido.

La conversión posterior de las di- y poliaminas de la serie de difenilmetano así obtenidas con fosgeno para formar diy poliisocianatos de la serie de difenilmetano (VI-3) también se conoce per se y puede llevarse a cabo según cualquier procedimiento del estado de la técnica. Los procedimientos adecuados se describen, por ejemplo, en los documentos EP 2077 150 B1, EP 1616857 A1, EP 1873 142 A1 y EP 0314985 B1.

La conversión del ácido aminobenzoico obtenido según la invención en compuestos azoicos , en particular en colorantes azoicos (VI-4), puede llevarse a cabo según cualquier procedimiento del estado de la técnica. Se remite, por ejemplo, a la conocida producción de rojo de metilo o índigo (Per Wiklund et al., Current Organic Synthesis, 2006, 3, 379 -402).

La conversión del ácido aminobenzoico obtenido según la invención en amidas (VI-5) también puede llevarse a cabo según cualquier procedimiento del estado de la técnica. Cabe mencionar, por ejemplo, la amina primaria del ácido antranílico (2-aminobencilamida), que se usa, entre otras cosas, como material de partida para la producción de productos farmacéuticos (Per Wiklund et al., Current Organic Synthesis, 2006, 3, 379 - 402).

La conversión en polímeros conductores, como el ácido poliantranílico en particular, se describe por ejemplo en Bhavana Guptaa et al, Polymers Advanced Technologies, 2011, 22, 1982-1988.

Ejemplos

En todos los ejemplos, cada uno de los caldos de fermentación usados se preparó por medio de la fermentación de cepas recombinantes de Corynebacterium glutamicum ATTC-13032, que presentan una deleción o una expresión reducida del gen trpD que codifica la antranilato fosforribosiltransferasa - tal como se describe en el documento WO 2015/124687 A1, en particular en la página 6, líneas 8 a 28, y en el Ejemplo 3 (corresponde a la etapa (I) del procedimiento según la invención). Para empobrecer el microorganismo usado, se filtró el caldo de fermentación (etapa (II) del procedimiento según la invención).

Ejemplo 1 (Comparación: realización discontinua del tratamiento con ácido - adición de ácido clorhídrico al caldo de fermentación cargado sin cristales de semilla)

Se dispusieron 100 g de un caldo de fermentación, con un contenido de ácido orto-aminobenzoico de 91 g/L y un pH de 6,9, en un recipiente de vidrio esmerilado y se ajustaron a un pH de 3,6 durante 1 h con ácido clorhídrico a una fracción de masa del 10 %. Para ello se necesitaron 29,2 g de ácido clorhídrico, lo cual corresponde a una relación de equivalencia de 1,1 (corresponde a la etapa (III) del procedimiento según la invención, salvo por los cristales de siembra que faltan).

Tras un tiempo de agitación posterior de 1 h, se aisló el cristalizado por medio de filtración (etapa (IV) del procedimiento según la invención) y se lavó con agua (etapa (V) del procedimiento según la invención).

La resistencia del filtro fue de a = 5,310+101/m2, la humedad residual de la torta fue del 30,7 % y el rendimiento aislado del 88 %. El tamaño del cristal se estimó, a partir de imágenes microscópicas, en 200 pm.

El cristalizado estaba presente en la modificación II, lo cual es desventajoso debido a su mayor solubilidad en comparación con la modificación I. El contenido de ácido orto-aminobenzoico del cristalizado era del 93 %.

Ejemplo 2 (Comparación: realización discontinua del tratamiento con ácido - adición de ácido clorhídrico al caldo de fermentación cargado sin cristales de semilla)

En una variación del Ejemplo 1, se usó un ácido clorhídrico al 37 %.

Se determinó que la resistencia del filtro era a = 5,0 10+101/m2 , que la humedad residual de la torta era del 61 % y que el rendimiento aislado era del 85 %. El tamaño del cristal se estimó, a partir de imágenes microscópicas, en 100 pm.

El cristalizado estaba presente en la modificación II. El contenido de ácido orto-aminobenzoico del cristalizado era del 94 %, el contenido de cenizas era del 0,55 %.

Ejemplo 3 (Comparación: realización discontinua del tratamiento con ácido - adición de ácido clorhídrico al caldo de fermentación cargado sin cristales de semilla)

En otra variación del Ejemplo 1, el ácido clorhídrico se añadió durante 5 min.

Se determinó que la resistencia del filtro era a = 4,9 10+101/m2 , que la humedad residual de la torta era del 46,7 % y que el rendimiento aislado era del 93 %. El tamaño del cristal se estimó, a partir de imágenes microscópicas, en 150 |jm.

El cristalizado estaba presente en la modificación II.

Ejemplo 4 (Según la invención: realización discontinua del tratamiento con ácido - incorporación continua de ácido clorhídrico y caldo de fermentación a una suspensión de cristales de semilla)

En el denominado procedimiento de incorporación por lotes se añadieron de manera continua ácido clorhídrico y caldo de fermentación a una suspensión de cristales de semilla de la Modificación I en caldo de fermentación con un valor de pH de 3,5. El caldo de fermentación (tanto el cargado como el incorporado) tenía un contenido de ácido ortoaminobenzoico de 91 g/L, el ácido clorhídrico tenía un contenido en masa del 17 %. La dosificación se llevó a cabo durante 2 h, con un pH que osciló entre 2,3 (brevemente al principio de la dosificación) y 3,5 (durante todo el tiempo restante de dosificación) (etapa (III) del procedimiento según la invención).

Tras un tiempo de agitación posterior de 1 h, se aisló por filtración el cristalizado ( etapa (IV) del procedimiento según la invención) y se lavó con agua (etapa (V) del procedimiento según la invención).

Se determinó que la resistencia del filtro era a = 6 10+101/m2 , que la humedad residual de la torta era del 30,5 % y que el rendimiento aislado era del 89 %. El tamaño del cristal se estimó, a partir de imágenes microscópicas, en 400 jm.

El cristalizado estaba presente en la modificación I. El contenido de ácido orto-aminobenzoico del cristalizado era del 98,5 %, el contenido de cenizas era del 0,03 %.

Ejemplo 5 (Realización semicontinua de la etapa (III) - incorporación de manera continua de ácido clorhídrico y caldo de fermentación, retirada intermitente de la suspensión para formar una suspensión de cristales de semilla)

El Ejemplo 5 se llevó a cabo de la misma manera que el Ejemplo 4, con la diferencia de que no solo se añadieron continuamente los reactivos caldo de fermentación y ácido clorhídrico, sino que también se retiró la suspensión por lotes, lo que se aproxima a una operación totalmente continua. La dosificación de los reactivos ácido clorhídrico y caldo de fermentación se realizó de forma que el tiempo de residencia de los cristales en el reactor fuera de unos 45 min. El valor del pH osciló entre 3,2 y 3,5. Se tomaron suspensiones cada 15 min (60 ml cada una para un tamaño total de preparación de 200 ml) y se caracterizaron.

La humedad residual en la torta de filtración fue del 1 % y el rendimiento aislado fue del 91 %. El tamaño del cristal se estimó, a partir de imágenes microscópicas, en 400 jm .

El cristalizado estaba presente en la modificación I. El contenido de ácido orto-aminobenzoico del cristalizado era del 99 %, el contenido de cenizas era del 0,02 %.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para preparar ácido orto-aminobenzoico o un derivado del ácido orto-aminobenzoico, que comprende las etapas de:

(I) fermentación de una materia prima que comprende al menos un compuesto fermentable que contiene carbono, usando microorganismos de una especie seleccionada del grupo que consiste en Escherichia coli, Pseudomonas putida y Corynebacterium glutamicum obteniéndose un caldo de fermentación que comprende orto-aminobenzoato y/o ácido orto-aminobenzoico;

(II) pretratamiento opcional del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I), que comprende

(1) separación del microorganismo del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) sin ajustar el pH, obteniéndose un caldo de fermentación empobrecido en microorganismos; y/o

(2) decoloración del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) o, si se realiza la etapa (II) (1), del caldo de fermentación empobrecido en microorganismos obtenido en la etapa (II) (1), sin ajuste del pH;

(III) tratamiento en una etapa del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) o en la etapa (II) (1) o en la etapa (II) (2) en un reactor con ácido, de tal manera que el ácido orto-aminobenzoico se separa del caldo de fermentación;

(IV) aislamiento del ácido orto-aminobenzoico separado en la etapa (III), quedando licor madre;

(V) purificación adicional opcional del ácido orto-aminobenzoico obtenido en la etapa (IV), preferentemente mediante el lavado con agua;

(VI) conversión adicional opcional del ácido ortoaminobenzoico obtenido en la etapa (IV) o en la etapa (V) para obtener un derivado del ácido ortoaminobenzoico;

en donde la etapa (III) se lleva a cabo de tal manera que los cristales de semilla de ácido orto-aminobenzoico están presentes y la presencia de los cristales de semilla se consigue de tal manera que el caldo de fermentación y el ácido se añaden a una suspensión de cristales de semilla cargada en el reactor, en donde los cristales de semilla cargados en la suspensión en al menos el 90 %, con respecto a la masa total de todos los cristales de semilla cargados en la suspensión, consisten en la modificación de la forma I del ácido orto aminobenzoico, según la nomenclatura de Ojala, W. H., Etter, M. C., J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 10288 -10293,

y en donde un derivado del ácido aminobenzoico denota un producto obtenido por medio de una conversión química adicional del ácido aminobenzoico.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que en la etapa (III) el pH de la mezcla resultante del tratamiento con ácido se ajusta a un valor en el intervalo de 3,0 a 4,7.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el tratamiento con ácido de la etapa (III) se lleva a cabo de tal manera que el pH de la mezcla resultante corresponde al del punto isoeléctrico del orto-isómero del ácido aminobenzoico.

4. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el ácido usado en la etapa (III) comprende ácido clorhídrico, ácido sulfúrico y/o ácido fosfórico.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el que el ácido usado en la etapa (III) es una mezcla de ácido clorhídrico y una parte del licor madre obtenido en la etapa (IV).

6. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que en la etapa (III) el caldo de fermentación y el ácido son introducidos en el reactor a través de dispositivos de suministro separados espacialmente.

7. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que en la etapa (III), al llevar a cabo en continuo la etapa (III)

■ el ácido a una velocidad de dosificación y

■ el caldo de fermentación a una velocidad de dosificación tales son incorporados al reactor y una suspensión de ácido aminobenzoico en licor madre es retirada del reactor, por lotes o continuamente, de tal manera que resulta un tiempo de residencia de la suspensión en el reactor de % h a 10 h

o, si la etapa (III) se lleva a cabo de manera discontinua, el tratamiento con ácido de una sola etapa se lleva a cabo durante un período de % h a 10 h.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los microorganismos usados en la etapa (I) comprenden Corynebacterium glutamicum ATTC 13032.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, en el que los microorganismos usados en la etapa (I) consisten únicamente en Corynebacterium glutamicum ATTC 13032.10

10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la suspensión de cristales de semilla es una suspensión de los cristales de semilla en una porción del caldo de fermentación obtenido en la etapa (I) o en la etapa (II).

11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que los cristales de semilla se suspenden en el 1,0 % al 20 % en masa del caldo de fermentación total usado en la etapa (III).

12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la etapa (III) se lleva a cabo de forma discontinua.

13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la etapa (III) se lleva a cabo en continuo y la presencia de cristales de siembra de ácido orto-aminobenzoico en la etapa (III) se consigue de tal manera que el caldo de fermentación y el ácido se incorporan de manera continua al reactor y una suspensión de ácido ortoaminobenzoico en licor madre es retirada de manera continua del reactor, en donde el suministro de caldo de fermentación y de ácido así como la retirada de la suspensión se ajustan de tal forma que en la porción de la mezcla de reacción que se encuentra en el reactor siempre hay presentes cristales de ácido orto-aminobenzoico.

14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que se lleva a cabo la etapa (VI) y comprende una de las siguientes conversiones:

(VI-1) Descarboxilación a anilina;

(VI-2) Descarboxilación seguida de reacción catalizada por ácido con formaldehído y formando di- y poliaminas de la serie del difenilmetano;

(VI-3) Descarboxilación seguida de reacción catalizada por ácido con formaldehído, seguida de conversión con fosgeno dando diisocianatos y poliisocianatos de la serie del difenilmetano;

(VI-4) Conversión en un compuesto azoico;

(VI-5) Conversión en amidas;

(VI-6) Conversión en polímeros conductores.

15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la materia prima de la etapa (I) se selecciona del grupo que consiste en hidrolizado de almidón, zumo de caña de azúcar y zumo de remolacha azucarera.