ES2938874T3 - Derivados de colano para su uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por FXR y TGR5/GPBAR1 - Google Patents

Derivados de colano para su uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por FXR y TGR5/GPBAR1 Download PDF

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Abstract

La presente invención se refiere a compuestos que tienen armazones de colano de fórmula (I), dichos compuestos para uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por FXR y TGR5/GPBAR1. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados de colano para su uso en el tratamiento y/o prevención de enfermedades mediadas por FXR y TGR5/GPBAR1
Campo de la invención
La presente invención se refiere a compuestos que tienen armazones de colano, dichos compuestos para su uso en el tratamiento y/o la prevención de enfermedades mediadas por FXR y TGR5/GPBAR1.
Estado de la técnica
Los ácidos biliares (BA) son moléculas de señalización que interactúan con dos tipos de receptores celulares dedicados, los receptores nucleares intracelulares y los receptores de la superficie celular. Los receptores nucleares incluyen el receptor farnesoide X (FXR), identificado como el sensor de ácido biliar endógeno (Makishima et al. Science, 1999, 284, 1362; Parks et al. Science 1999, 284, 1365).
Altamente expresado en tejidos enterohepáticos (hígado e intestino), el FXR regula la homeostasis de los ácidos biliares, incluyendo también las vías metabólicas la homeostasis de los lípidos y la glucosa (Zhang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006,103,1006). Además, los agonistas de FXR proporcionan efectos antiinflamatorios y antifibróticos y anticancerígenos (Renga et al. FASEB J. 2012, 26, 3021-3031).
El receptor de la superficie celular de los ácidos biliares (GPBAR1, M-BAR1, GP-BAR1, TGR5) pertenece a la superfamilia similar a la rodopsina de los receptores acoplados a la proteína G (Takeda et al. FEBS Lett. 2002, 520, 97; Kawamata et al. J. Biol. Chem. 2003, 278, 9435).
La unión del ligando a TGR5/GPBAR1 da como resultado la elevación de los niveles de AMPc intracelular con la consiguiente activación de una cascada de señalización. GPBAR1 es altamente expresado en el hígado y en el intestino, pero también en los músculos, el cerebro, el tejido adiposo, los macrófagosy las células endoteliales. En el tejido adiposo muscular y pardo, TGR5/GPBAR1 aumenta el gasto de energía y el consumo de oxígeno (Watanabe et al. Nature 2006, 439, 484) en las células L enteroendocrinas, la activación de TGR5/GPBAR1 estimula la secreción de péptido similar al glucagón (GLP)-1, una incretina que mejora la liberación de insulina en el páncreas, regulando así los niveles de glucosa en sangre, la motilidad gastrointestinal y el apetito (Thomas et al. Cell. Metab. 2009, 10, 167).
Figure imgf000002_0001
Químicamente, los BA son derivados de la cadena lateral de colesterol truncados. Su repertorio molecular se genera en primer lugar en el hígado con la producción de ácidos biliares primarios, ácido cólico (CA) y ácido quenodesoxicólico (CDCA). La transformación por microbios en el intestino genera ácidos biliares secundarios, ácido desoxicólico (DCA) y ácido litocólico (LCA). En el cuerpo humano, los ácidos biliares se conjugan con glicina y taurina. La actividad hacia los dos receptores de BA depende de la estructura, siendo CDCA, el activador de FXR endógeno más potente, y LCA y TLCA, los agonistas naturales más fuertes de TGR5/GPBAR1.
Se ha observado prurito colestásico como un efecto secundario grave asociado con el uso de agonistas de FXR en PBC y un estudio reciente indicó que TGR5/GPBAR1 es la diana molecular involucrada en el desarrollo de este efecto secundario (Alemi et al. J. Clin. Invest. 2013, 123, 1513-1530).
El documento WO2013192097 describe el ácido 6-alfa-etil-quenodesoxicólico (6-ECDCA), un potente y selectivo agonista de FXR dotado de efecto anticolostático. El documento WO2008002573 describe derivados de ácidos biliares como ligandos FXR para la prevención o el tratamiento de enfermedades o afecciones mediadas por FXR.
El documento WO2010014836 y Sato H. (J Med Chem. 2008, 51,4849) describen los moduladores de TGR5.
D'Amore C. et al. (J. Med. Chem. 2014, 57, 937) describen el diseño, la síntesis y la evaluación biológica de los agonistas duales de GP-BAR1/FXR. D'Amore et al. describen los compuestos BAR502 y BAR504 como intermedios de síntesis.
Iguchi Y. et al. (J Lipid Res. 2010, 51, 1432) describen la función de los alcoholes biliares como ligandos de TGR5.
Kihira K. et al. (Steroids 1992, 57(4), 193-198) describen los compuestos BAR107 como intermedios de la síntesis.
Swaan P. W.et al. (J. Comp. Aid. Mol. Des. 1997, 11, 581-588), en un modelo molecular del portador de ácido biliar intestinal analizaron el ursocolato (el compuesto 15 allí, BARn406 en la presente memoria) entre un conjunto de productos conjugados de ácido biliar. BARn406 resultó tener una capacidad indetectable para inhibir el transporte de ácido taurocólico en células CaCo-2.
Burns et al. (Steroids 2011, 76(3), 291-300) describen la síntesis y la actividad olfativa de derivados de ácidos biliares sulfatados en la posición 5 no naturales en la lamprea marina (Petromyzon marinus). El compuesto 9e descrito en ese documento (compuesto BAR407 en la presente memoria) no provocó una respuesta olfativa.
El objetivo de la presente invención es la identificación de nuevos compuestos que contengan el armazón químico del colano y que modulen FXR y/o TGR5/GPBAR1.
Compendio de la invención
El objeto de la presente invención es un compuesto elegido entre los siguientes: BAR704, BARn704, BAR710, BARn710 y BAR711, como se define en el presente documento. Estos compuestos tienen las siguientes fórmulas, incluyendo las sales y solvatos inorgánicos y orgánicos farmacéuticamente aceptables de los mismos:
Figure imgf000003_0001
Se ha encontrado que los compuestos descritos anteriormente son moduladores de FXR o/y TGR5/GPBAR1 y, por lo tanto, son útiles para el tratamiento de enfermedades mediadas por FXR y TGR5/GPBAR1.
Por lo tanto, para un aspecto, la presente invención se refiere a los compuestos anteriores para su uso como medicamento.
Para un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de la invención como se ha descrito anteriormente para su uso en la prevención y/o el tratamiento de trastornos gastrointestinales, enfermedades hepáticas, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, enfermedades metabólicas, enfermedades infecciosas, cáncer, trastornos renales, trastornos inflamatorios y trastornos neurológicos (tales como accidente cerebrovascular), dicho compuesto de la invención como se ha descrito anteriormente.
Descripción detallada de la invención
De acuerdo con la invención se proporcionan los compuestos BAR704, BARn704, BAR710, BARn710 y BAR711 como se han definido anteriormente. También se proporcionan los compuestos ilustrados a continuación, en donde que el compuesto BAR712 no es un compuesto de acuerdo con la invención.
Figure imgf000003_0002
También se proporciona en el presente documento el siguiente compuesto, que no forma parte de la presente invención:
Figure imgf000004_0001
También se proporcionan en el presente documento los siguientes compuestos, que no forman parte de la presente invención:
Figure imgf000004_0002
También se proporcionan en el presente documento los siguientes compuestos. Los compuestos BAR704, BARn704, BAR710, BARn710 y BAR711 forman parte de la presente invención, mientras que los compuestos BAR712 y BAR802 no forman parte de la presente invención:
Figure imgf000004_0003
Se ha encontrado que los compuestos de acuerdo con la invención son moduladores de FXR o TGR5/GPBAR1 altamente selectivos o moduladores duales de FXR y TGR5/GPBAR1 y, por lo tanto, son útiles como medicamentos en particular para su uso en la prevención y/o el tratamiento de trastornos gastrointestinales, enfermedades hepáticas, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, enfermedades metabólicas, trastornos metabólicos, enfermedades infecciosas, cáncer, trastornos renales, trastornos inflamatorios y trastornos neurológicos tales como el accidente cerebrovascular.
En ciertas realizaciones, la enfermedad hepática se selecciona del grupo que consiste en enfermedades hepáticas crónicas que incluyen cirrosis biliar primaria (PBC), xantomatosis cerebrotendinosa (CTX), colangitis esclerosante primaria (PSC), colestasis inducida por fármacos, colestasis intrahepática del embarazo, colestasis asociada a la nutrición parenteral, sobrecrecimiento bacteriano y colestasis asociada a sepsis, hepatitis autoinmunitaria, hepatitis viral crónica, enfermedad hepática alcohólica, enfermedad del hígado graso no alcohólico (NAFLD), esteatohepatitis no alcohólica (NASH), enfermedad de injerto contra anfitrión asociada al trasplante de hígado, trasplante de donante vivo, regeneración del hígado, fibrosis hepática congénita, enfermedad hepática granulomatosa, neoplasia maligna intra- o extrahepática, enfermedad de Wilson, hemocromatosis y deficiencia de alfa 1 -antitripsina.
En ciertas realizaciones, la enfermedad gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste en enfermedad inflamatoria intestinal (EII) (incluida la enfermedad de Crohn, la colitis ulcerosa y la colitis indeterminada), síndrome del intestino irritable (SII), sobrecrecimiento bacteriano, pancreatitis aguda y crónica, malabsorción, colitis post­ radiación y colitis microscópica.
En ciertas realizaciones, la enfermedad renal se selecciona del grupo que consiste en nefropatía diabética, nefropatía hipertensiva, enfermedad glomerular crónica, que incluye glomerulonefritis crónica y glomerulopatía de trasplante crónica, enfermedades tubulointersticiales crónicas y trastornos vasculares del riñón.
En ciertas realizaciones, la enfermedad cardiovascular se selecciona del grupo que consiste en aterosclerosis, dislipidemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hipertensión también conocida como hipertensión arterial, cardiopatía inflamatoria que incluye miocarditis y endocarditis, angina estable por cardiopatía isquémica, angina inestable, infarto de miocardio, enfermedad cerebrovascular incluyendo accidente cerebrovascular isquémico, enfermedad cardíaca pulmonar incluyendo hipertensión pulmonar, enfermedad arterial periférica (EAP), también conocida como enfermedad vascular periférica (PVD), enfermedad oclusiva de la arteria periférica y arteriopatía obliterante periférica.
En ciertas realizaciones, la enfermedad metabólica se selecciona del grupo que consiste en resistencia a la insulina, síndrome metabólico, diabetes tipo I y tipo II, hipoglucemia, trastornos de la corteza suprarrenal, incluyendo la insuficiencia de la corteza suprarrenal.
En ciertas realizaciones, el trastorno metabólico se selecciona del grupo que consiste en obesidad y afecciones asociadas a la cirugía bariátrica.
En ciertas realizaciones, el cáncer se selecciona del grupo de cáncer de hígado, cáncer de conducto biliar, cáncer de páncreas, cáncer gástrico, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de ovario y afecciones asociadas con la resistencia a la quimioterapia.
En ciertas realizaciones, el trastorno infeccioso se selecciona del grupo de enfermedades asociadas con la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (SIDA) y trastornos relacionados, infección por virus B y virus C.
En ciertas realizaciones, el trastorno inflamatorio se selecciona del grupo de artritis reumatoide, fibromialgia, síndrome de Sjogren, esclerodermia, síndrome de Behcet, vasculitis y lupus eritematoso sistémico.
Los datos sobre la actividad de ciertos compuestos de la invención y otros compuestos desvelados en el presente documento sobre FXR y TGR5/GPBAR1 se describen en la siguiente tabla. En esta tabla, las actividades para los compuestos de la invención y otros compuestos desvelados en el presente documento sobre FXR y GPBAR1 se compararon con las de los compuestos de referencia: es decir, CDCA para FXR y TLCA para TGR5/GPBAR1. Cada compuesto se probó a una concentración 10 microM y la actividad de transactivación de CDCA sobre FXR y de TLCA sobre CRE (es decir, TGR5/GPBAR1) se consideró igual a 100 %.
T l 1
Figure imgf000005_0001
(continuación)
Figure imgf000006_0002
Para un aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de la invención en donde los compuestos son agonistas duales de FXR y TGR5/GPBAR1, un compuesto, no de acuerdo con la presente invención, pero que tiene tal actividad agonista dual es BAR502. Sorprendentemente, BAR502 no induce picazón cuando se administra a animales colestáticos mediante la administración de ANIT o Estrógeno. En los síndromes colestáticos, se cree que la acumulación de ácidos biliares en el organismo causa picazón. Recientemente, se demostró que TGR5/GPBAR1 mediaba en la picazón causada por la administración intradérmica de DCAy LCA (Alemi et al. J. Clin. Invest. 2013, 123, 1513-1530). En ensayos clínicos, la administración a pacientes que padecen cirrosis biliar primaria (PBC) de ácido obeticólico ha provocado picazón severa en aproximadamente 80 % de los pacientes. Una ventaja específica y sorprendente de BAR502 es que este agente no induce picazón cuando se administra a animales que se vuelven colestáticos mediante la administración de a-naftil-isotiocianato (ANIT) o 17a-etinilestradiol (dos modelos validados de colestasis). En estos entornos experimentales, la administración de BAR502 aumenta la supervivencia, atenúa los niveles de fosfatasa alcalina en suero y modula de forma sólida la expresión hepática de genes diana de FXR canónicos, incluyendo OSTa, BSEP, SHP y MDR1, sin inducir prurito. En el modelo de 17a-etinilestradiol, BAR502 atenúa la colestasis y da forma al conjunto de ácidos biliares sin inducir picazón, lo que demuestra que en los modelos de colestasis no obstructiva, BAR502 atenúa la lesión hepática sin causar picazón.
En un aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de la invención en donde los compuestos son agonistas de FXR altamente selectivos sin efectos sobre GPBAR1 cuando se administran solos pero eficaces para inhibir la activación de GPBAR1 causada por TLCA (10 ^M), comportándose así como antagonistas de GPBAR1. En un aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de la invención en donde los compuestos son agonistas de GPBAR1 altamente selectivos sin efectos sobre FXR. En un aspecto, la presente invención se refiere a compuestos de la invención en donde los compuestos son antagonistas de GPBAR1 altamente selectivos sin efectos sobre FXR. La presente invención se podría comprender mejor a la luz de los ejemplos y la sección experimental a continuación. Los siguientes ejemplos son ejemplos de la presente invención solo en la medida en que se relacionan con la síntesis y prueba de los compuestos BAR704, BARn704, BAR710, BARn710 y BAR711. La síntesis y prueba de otros compuestos en los siguientes ejemplos es solo para propósitos de comparación.
Sección experimental
Química
Ejemplo 1. Preparación de compuestos de fórmula (I) en donde R2= H
Ejemplo 1A. Síntesis de derivados de bis-homo-ursodesoxicolano
Una secuencia de reacción de cuatro etapas en 1, que incluye la protección de las funciones alcohólicas en C3 y C7, la reducción del éster metílico de la cadena lateral y la posterior oxidación de Swern de recipiente único/homologación de Wittig C2 proporcionó el éster metílico protegido de A2425-bis-homoUDCA. La hidrogenación del doble enlace de la cadena lateral y la desprotección de la función alcohólica proporcionaron éster metílico de bis-homoUDCA 4, que se utilizó como material de partida en la preparación de BAR305 y su correspondiente alcohol, BAR304, mediante tratamiento con LiOH y LíBh4, respectivamente.
Figure imgf000006_0001
a) 2,6-lutidina, trifluorometanosulfonato de t-butildimetilsililo, CH2CI2, 0 °C; b) LÍBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, rendimiento cuantitativo a lo largo de dos etapas; c) DMSO, cloruro de oxalilo, TEA seco, CH2O 2, -78 °C a continuación (trifenilfosforaniliden)acetato de metilo, 76 %; d) H2, Pd(OH)2/C tipo Degussa, THF/MeOH 1:1, rendimiento cuantitativo; e) HCl 37 %, MeOH, rendimiento cuantitativo; f) NaOH 5 % en MeOH/H2O 1:1 v/v, 60 %; g) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 77 %.
Etapa a, b) Preparación de 3a,7p-di(ferc-butildimetilsililoxi)-5p-colan-24-ol (2)
El Compuesto 1 (1,2 g, 3 mmoles) se protegió en las dos funciones alcohólicas siguiendo el mismo procedimiento sintético descrito en J. Med. Chem. 2014, 57, 937 para obtener 1,9 g de 3a,7p-di(ferc-butildimetilsililoxi)-5p-colan-24-oato de metilo (rendimiento cuantitativo) en forma de agujas incoloras, que se sometió a la siguiente etapa sin ninguna purificación.
Se añadieron metanol (850 pL, 21 mmoles) y LiBH4 (10,5 mL, 2 M en THF, 21 mmoles) a una solución de éster metílico (1,9 g, 3 mmoles) en THF seco (30 mL) a 0 °C siguiendo el mismo procedimiento sintético descrito en J. Med. Chem.
2014, 57, 937. La purificación por medio de gel de sílice (hexano/acetato de etilo 99:1 y TEA al 0,5 %) proporcionó 2 en forma de un sólido de color blanco (1,8 g, rendimiento cuantitativo).
Etapa c) Preparación en recipiente único de 3a,7p-di(terc-butildimetilsililoxi)-25,26-bishomo-5p-col-24-en-26-oato de metilo (3).
Se añadió DMSO (2,1 mL, 30 mmoles) gota a gota durante 15 minutos a una solución de cloruro de oxalilo (7,5 mL, 15 mmoles) en diclorometano seco (30 mL) a -78 °C en atmósfera de argón. Después de 30 minutos, se añadió mediante una cánula una solución de 2 (1,8 g, 3 mmoles) en CH2Cl2 seco y la mezcla se agitó a -78 °C durante 30 min. Se añadió Et3N (2,5 mL, 18 mmoles) gota a gota. Después de 1 h, se añadió (trifenilfosforaniliden)- acetato de metilo (2,0 g, 6 mmoles) y la mezcla se dejó calentando a temperatura ambiente. Se añadió una solución saturada de NaCl y la fase acuosa se extrajo con éter dietílico (3x100 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron (Na2SO4) y se concentró. La purificación por medio de gel de sílice (hexano-acetato de etilo 95:5 y TEA al 0,5 %) proporcionó el compuesto 3 en forma de un aceite incoloro (1,5 g, 76 %).
Etapa d) Preparación de 3a,7p-di(terc-butildimetilsililoxi)-25,26-bishomo-5p-colan-26-oato de metilo. Una solución del compuesto 3 (1,5 g, 2,3 mmoles) en THF seco/MeOH seco (25 mL/25 mL, v/v) se hidrogenó en presencia de Pd(OH)2 al 5 % peso en carbón activado tipo Degussa (20 mg) siguiendo el mismo procedimiento sintético descrito en J. Med. Chem. 2014, 57, 937 proporcionando 3a,7p-di(terc-butildimetilsililoxi)-25,26-bishomo-5p-colan-26-oato de metilo (1,5 g, rendimiento cuantitativo) que se sometió a la etapa e) sin purificación.
Etapa e) Preparación de 3a,7p-dihidroxi-25,26-bishomo-5p-colan-26-oato de metilo (4)
Se disolvió 3a,7p-di(terc-butildimetilsililoxi)-25,26-bishomo-5p-colan-26-oato de metilo (1,5 g) en metanol (70 mL). A la solución, se le añadió HCl (2 mL, 37 % v/v) siguiendo el mismo procedimiento sintético descrito en J. Med. Chem.
2014, 57, 937 proporcionando 4 en forma de un sólido amorfo incoloro (1,0 g, rendimiento cuantitativo).
Etapa f) Preparación de ácido 3a,7p-dihidroxi-25,26-bishomo-5p-colan-26-oico (BAR305). Una porción de compuesto 4 (430 mg, 1 mmol) se hidrolizó con NaOH (400 mg, 10 mmoles) en una solución de MeOH:
H2O 1:1 v/v (20 mL) durante 4 h a reflujo. Una muestra analítica se purificó por medio de HPLC en un Nucleodur 100­ 5 C18 (5 pm; 4,6 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (95:5) como eluyente (velocidad de flujo 1 mL/min) (tR= 5 min). BAR305: C26H44O4
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,47 (2H, m, H-3 y H-7), 2,27 (2H, t, J = 7,2 Hz, H2-25), 0,96 (3H, s, H3-19), 0,94 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21 ), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8178,2, 72,1, 71,9, 57,6, 56,7, 44 ,8, 44,5, 44,0, 41,6, 40,7, 38,6, 38,0, 36,9, 36,8, 36,1, 35,3, 35,2, 30,9, 29,8, 27,9, 26,7, 26,6, 23,9,22,4, 19,3, 12,7.
Etapa g) 25,26-bishomo-5p-colan-3a,7p,26-triol (BAR304). El Compuesto 4 (500 mg, 1.2 mmoles) se redujo en las mismas condiciones operativa descritas en la etapa b). La purificación por medio de gel de sílice (CH2Cl2/metanol 9:1) proporcionó BAR304 en forma de un aceite incoloro (375 mg, 77 %). Una muestra analítica se purificó por medio de HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 4,6 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (85:15) como eluyente (velocidad de flujo 1 mL/min) (tR = 9 min).
BAR 304: C26H46O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,53 (2H, t, J = 6,5 Hz, H2-26), 3,48 (2H, m, H-3 y H-7), 0,95 (3H, s, H3-19), 0,93 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21 ), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN C13 se registró en Varían Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 572,1,71,9, 63,0, 57,5, 56,7, 44,7, 44,4, 44,0, 41,6, 40,7, 38,5, 37,9, 37,2, 37,0, 36,1,35,2, 33,7, 30,9, 29,8, 27,9, 27,4, 27,1,23,9, 22,4, 19,4, 12,7. Ejemplo 1B. Síntesis de 3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-il-23-sulfato de sodio (BAR106)y 3a,7p-dihidroxi-24-nor-5|3-colan-23-ol (BAR107)
Se preparó BAR106 a partir de UDCA mediante una secuencia de reacción que comprendía la performilación en los grupos hidroxilo, la degradación de un carbono de Beckmann en C24 y la transformación del grupo carboxilo C23 en el correspondiente intermedio éster metílico. La protección en los grupos hidroxilo en C-3 y C-7 como silil éteres, la reducción a éster metílico en C23, la sulfatación en la función alcohólica primaria en C23 y finalmente la desprotección proporcionaron BAR106 bruto en forma de una sal de amonio. La purificación en Amberlite y a continuación por medio de HPLC proporcionó el BAR106 del título en forma de una sal de sodio.
Figure imgf000008_0001
a) HCOOH, HClO4, 96 %; b) TFA, anhídrido trifluoroacético, NaNO2, 96 %; c) KOH 30 % en MeOH/H2O 1:1 v/v, 97 %; d) p-TsOH, MeOH seco, 98%; e) 2,6-lutidina, trifluorometanosulfonato de t-butildimetilsililo, CH2Cl2, 0 °C, 88 %; f) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, rendimiento cuantitativo; g) Et3N.SO3, DMF, 95 °C; h) HCl 37 %, MeOH, a continuación Amberlite CG-120, MeOH, 86 % a lo largo de dos etapas; i) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, rendimiento cuantitativo. Etapas a, d) Preparación de 3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-oato de metilo (6). El ácido ursodesoxicólico (2,0 g, 5,1 mmoles) se transformó en 3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-oato de metilo (6, 1,6 g, 87 %) siguiendo el mismo procedimiento sintético descrito en J. Med. Chem. 2014, 57, 937.
Etapa e) Preparación de 3a,7p-di(terc-butildimetilsililoxi)-5p-colan-24-oato de metilo
El Compuesto 6 (1,2 g, 3,0 mmoles) se protegió en los grupos hidroxilo en la mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1A, etapa a). La purificación por cromatografía instantánea sobre gel de sílice utilizando hexano/acetato de etilo 9:1 y trietilamina al 0,5 % como eluyente, proporcionó éster metílico protegido (1,6 g, 88 %).
Etapa f) Preparación de 3a,7p-di(terc-butildimetilsililoxi)-5p-colan-24-ol (7)
El éster metílico de cadena lateral (818 mg, 1,3 mmoles) se redujo en la mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1A, etapa b). La purificación por cromatografía instantánea sobre gel de sílice utilizando hexano/acetato de etilo 98:2 y tiretilamina al 0,5 % como eluyente, proporcionó 7 (770 mg, rendimiento cuantitativo).
Etapas g, h) Preparación de sulfato de 3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-il-23-sodio (BAR106)
El complejo de trietilamina-trióxido de azufre (2,0 g, 11 mmoles) se añadió a una solución de 7 (660 mg, 1,1 mmoles) en DMF seco (25 mL) siguiendo el mismo procedimiento sintético descrito en J. Med. Chem. 2014, 57, 937. La HPLC en Nucleodur 100-5 C18 (5 ^m; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (65:35) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min), proporcionó 442 mg (86 % a lo largo de dos etapas) de BAR106 (tR= 8,4 min).
BAR 106: C23H3gNaO6S
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 54,04 (2H, m, H2-23), 3,48 (2H, m, H-3 y H-7), 1,00 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21), 0,97 (3H, s, H3-19), 0,72 (3H, s, H3-18).
Etapa i) Preparación de 3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BAR107) El Compuesto 6 se transformó en BAR107 en las mismas condiciones operativas descritas en la etapa f.
BAR107: C23H4qO3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 53,60 (1H, m, H-7), 3,51 (1H, m, H-3), 3,50 (2H, m, H2-23), 0,97 (3H, d, ovl, Hs-21), 0,96 (3H, s, Hs-19), 0,72 (3H, s, H3-18).
El RMN C13 se registró en Varían Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 572,1,71,9, 60,8, 57,5, 57,1, 44 ,8, 44,5, 44,0, 41,6, 40,7, 39,9, 38,6, 38,0, 36,1,35,2, 34,1, 31,0, 29,8, 27,9, 23,9, 22,4, 19,5, 12,6;
Ejemplo 1C. Síntesis de sulfato de 7a-hidroxi-5p-colan-24-il-24-sodio (BAR402)
La tosilación y eliminación en el grupo hidroxilo C-3 en el éster metílico 8 seguido de reducción del doble enlace, posterior tratamiento con LiBH4 y sulfatación regioselectiva en el grupo hidroxilo primario C-24 proporcionaron BAR402.
Figure imgf000009_0001
a) p-TsCl, piridina, rendimiento cuantitativo; b) LiBr, Li2CO3, DMF, reflujo, c) H2, Pd(OH)2, THF/MeOH 1:1, temperatura ambiente, rendimiento cuantitativo; d) Líb H4, MeOH seco, THF, 0 °C, 79 °C; e) Et3N.SO3, DMS, 95 °C.
Etapas a-c) Preparación de 7-ceto-5p-colan-24-oato de metilo (9)
A una solución de 8 (965 mg, 2,5 mmoles) en piridina seca (100 mL), se le añadió cloruro detosilo (4,7 g, 25,0 mmoles) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Se vertió en agua fría (150 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 150 mL). La capa orgánica combinada se lavó con solución saturada de NaHCO3 (150 mL) y agua (150 mL), y a continuación se secó sobre MgSO4 anhidro y se evaporó a vacío para proporcionar 1,4 g de 3a-tosiloxi-7-ceto-5pcolan-24-oato de metilo (rendimiento cuantitativo). Se añadieron bromuro de litio (434 mg, 5,0 mmoles) y carbonato de litio (370 mg, 5,0 mmoles) a una solución de 3a-tosiloxi-7-ceto-5p-colan-24-oato (1,4 g, 2,5 mmoles) en DMF seco (30 mL), y la mezcla se calentó a reflujo durante 2 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se vertió lentamente en una solución de HCl al 10 % (20 mL) y se extrajo con CH2Cl2 (3 x 50 mL). La capa orgánica combinada se lavó sucesivamente con agua, solución saturada de NaHCO3 y agua, y a continuación se secó sobre MgSO4 anhidro y se evaporó hasta sequedad para proporcionar 965 mg de residuo oleoso (rendimiento cuantitativo), que se sometió a la siguiente etapa sin ninguna purificación. La hidrogenación en Pd(OH)2 en la mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1A, etapa d, proporcionó 975 mg de 9 (rendimiento cuantitativo), que se sometió a la siguiente etapa sin ninguna purificación.
Etapa d) Preparación de 5p-colan-7a, 24-diol
Tratamiento con LiBH4 en el compuesto 9 en la mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1A, etapa b y la purificación por medio de gel de sílice (acetato de etilo-hexano, 85:15) proporcionó 5p-colan-7a, 24-diol en forma de un sólido de color blanco (714 mg, 79 %).
Etapa e) Preparación de sulfato de 7a-hidroxi-5p-colan-24-il-24-sodio (BAR402).
La sulfatación en C24 se realizó en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1B, etapa g) para proporcionar BAR402 bruto en forma de una sal de amonio. RP18/HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 ^m; 10 mm d.i. x250 mm) con MeOH/H2O (90:10) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min) proporcionó BAR402 (tR= 6,6 min) en forma de una sal de sodio.
BAR402: C24H41NaO3S
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 53,96 (2H, t, J = 6,6 Hz, H2-24), 3,78 (1H, brs, H-7), 0,96 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21), 0,92 (3H, s, H3-19), 0,69 (3H, s, H3-18);
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 569,7, 69,4, 57,7, 51,6, 45,0, 43,8, 41,2, 41,0, 39,0, 37,1,37,0 36,3, 34,2, 33,3, 31,7, 29,5, 29,0, 27,3, 24,8, 24,3, 22,7, 21,9, 19,2, 12,3 Ejemplo 2. Preparación de compuestos de fórmula (I) en donde R2 =Et o =CH-CH
Ejemplo 2A. Síntesis de 6p-etil-3a,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR501)
La formación de éster metílico y la acetilación en el grupo hidroxilo C-3 en 7-KLCA facilitaron el compuesto intermedio a un 84% de rendimiento en dos etapas. La adición aldólica a un intermedio de silil enol éter generó 11 que se hidrogenó en el doble enlace exocíclico (H2 en Pd(OH)2) proporcionando 12 a un 80 % de rendimiento en tres etapas.
El tratamiento con NaBH4 en metanol seguido de la reducción con LÍBH4 en el producto de reacción bruto proporcionaron una mezcla cuya purificación por HPLC (88 % MeOH:H2O) proporcionó BAR501 puro con un rendimiento de 79 % con respecto a su epímero C7, BAR504-6b.
Figure imgf000010_0001
a) p-TsOH, MeOH seco; b) anhídrido acético, piridina, rendimiento 84 % a lo largo de dos etapas; c) DIPA, n-BuLi, TMSCl, TEA seco, THF seco -78 °C; d) acetaldehído, BF3(OEt)2, CH2Cl2, -60 °C, 80 % a lo largo de dos etapas. Etapas a-d). Preparación de 3a-acetoxi-6-etilideno-7-ceto-5p-colan-24-oato de metilo (11)
A una solución de ácido 7-cetolitocólico (5 g, 12,8 mmoles), disuelto en 100 mL de metanol seco, se le añadió ácido p-toluenosulfónico (11 g, 64,1 mmoles). La solución se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se inactivó mediante la adición de una solución saturada de NaHCO3. Después de la evaporación del metanol, el residuo se extrajo con EtOAc (3x150 mL). El extracto combinado se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4, y se evaporó para proporcionar el éster metílico en forma de un sólido amorfo (5,13 g, rendimiento cuantitativo).
En la solución del éster metílico (5,13 g, 12,7 mmoles) en piridina seca (100 mL), se añadió un exceso de anhídrido acético (8,4 mL, 89 mmoles). Cuando se completó la reacción, la piridina se concentró a vacío. El residuo se vertió en agua fría (100 mL) y se extrajo con AcOEt (3 x 150 mL). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4) y se concentraron para proporcionar un residuo que se purificó adicionalmente por cromatografía instantánea sobre gel de sílice utilizando hexano/acetato de etilo 8:2 y tiretilamina al 0,5 % como eluyente (4,8 g de 10 en forma de un sólido de color blanco, 84 % de rendimiento a lo largo de dos etapas).
A una solución de diisopropilamina (23 mL, 0,16 moles) en THF seco (50 mL) se le añadió gota a gota una solución de n-butil litio (60 mL, 2,5 M en hexano, 0,15 moles) a -78 °C. Después de 30 minutos, se añadió trimetilclorosilano (27,1 mL, 0,21 moles). Después de 30 minutos adicionales, se añadió una solución de compuesto 10 (4,8 g, 10,7 mmoles) en THF seco (70 mL). La reacción se agitó a -78 °C durante 45 minutos adicionales y a continuación se añadió trietilamina (54 mL, 0,38 moles). Después de 1 h, la mezcla de reacción se dejó calentar a -20 °C, se trató con solución acuosa saturada de NaHCO3 (100 mL) y se llevó a temperatura ambiente en 2 h. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x50 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron a continuación con solución saturada de NaHCO3, agua y salmuera. Después de secar sobre Na2SO4 anhidro, el residuo se evaporó a vacío para proporcionar 6 g de residuo de color amarillo, que se diluyó en CH2Cl2 seco (50 mL) y se enfrió a -78 °C. En esta solución agitada, se le añadieron gota a gota acetaldehído (3 mL, 53 mmoles) y BF3- OEt2 (13,5 mL, 0,107 moles). La mezcla de reacción se agitó durante 2 ha -60 °C y se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se sofocó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 y se extrajo con CH2Cl2. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 anhidro y concentraron a vacío.
La purificación por medio de gel de sílice (hexano-acetato de etilo 9:1 y TEA al 0,5 %) proporcionó el compuesto 11 (4,1 g, 80 %). El análisis de RMN demostró una razón diastereomérica E/Z > 95 %. La configuración E en el doble enlace exocíclico se estableció mediante el acoplamiento dipolar H3-26 (5 1,67)/H-5 (5 2,62) en espectro Noesy (400 MHz, tiempo de mezcla 400 ms).
(E)-3a-acetoxi-6-etiliden-7-ceto-5p-colan-24-oato (11): C29H44O5
El RMN H1 se registró en Varian Inova 400 MHz, utilizando CDCl3 como disolvente: 56,16 (1H, q, J = 7,0 Hz, H-25), 4,74 (1H, m, H-3), 3,64 (3H, s, COOCH3), 2,62 (1H, dd, J = 13,0, 3,6 Hz, H-5), 1,98 (3H, s, COCH3), 1,67 (3H, d, J = 7,0 Hz, Hs-26), 1,00 (3H, s, H3-19), 0,92 (3H, d, J = 6,0 Hz, H3-21), 0,67 (3H, s, H3-18).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CDCl3 como disolvente: 5204,5, 174,6, 170,7, 143,1, 130.2, 72,5, 54,5, 51,4, 50,7, 48,6, 45,2, 43,5, 39,1,38,9, 35,1, 34,9, 34,1,33,4, 31,0, 30,9, 28,4, 25,9(2C ), 22,8, 21,4, 21.2, 18,4, 12,7, 12,2.
Etapas e) Preparación de 3a-acetoxi-6p-etN-7-ceto-5p-colan-24-oato de metilo (12).
Una solución de 11 (4,0 g, 8,5 mimóles) en THF seco/MeOH seco (100 mL, 1:1 v/v) se hidrogenó en presencia de Pd(OH)2 al 20 % en peso sobre carbón activado (100 mg) tipo Degussa. La mezcla se transfirió a un aparato PARR convencional y se lavó con nitrógeno y a continuación con hidrógeno varias veces. El aparato fue sacudido bajo 344,738 Pa (50 psi) de H2. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 8 h.
El catalizador se filtró a través de Celite, y el producto filtrado recuperado se concentró a vacío para proporcionar 12 (4,0 g, rendimiento cuantitativo).
3a-Acetoxi-6p-etil-7-ceto-5p-colan-24-oato de metilo (12): C29H46O5
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 84,65 (1H, m, H-3), 3,66 (3H, s, COOCH3), 2,56 (1H, t, J =11,5 Hz, H-8), 2,35 (1H, m, H-23a), 2,22 (1H, m, H-23b), 1,99 (3H, s, COCH3), 1,22 (3H, s, Ha-19), 0,92 (3H, d, J = 6,3 Hz, H3-21 ), 0,83 (3H, t, J = 7,2 Hz, H3-26 ), 0,67 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8214,7, 174,3, 170,2, 72,6, 61,7, 54,8, 51,3, 49,0, 48,5, 45,3, 42,7, 42,3 (2C), 38,6, 35,4, 35,1, 35,0, 31,0, 30,8, 28,0 (2C), 26,4, 25,7, 24,7, 21,3, 21,1, 18,2, 12,9, 11,9. La configuración p del grupo etilo en C-6 se determinó mediante acoplamientos dipolares H3-26 (80,83)/H3-19 (81,22) y H-8 (82,56)/H-25 (81,83) en espectro Noesy (400 MHz, tiempo de mezcla 400 ms).
Etapas f, g) Preparación de 6p-etil-3a,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR501).
A una solución en metanol del compuesto 12 (1,18 g, 2,5 mmoles), se le añadió un gran exceso de NaBH4 a 0 °C. La mezcla se dejó a temperatura ambiente durante 2 horas y a continuación se añadieron gota a gota agua y MeOH durante un período de 15 minutos a 0 °C, observándose efervescencia. Después de la evaporación de los disolventes, el residuo se diluyó con agua y se extrajo con AcOEt (3x50 mL). El extracto combinado se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4, y se evaporó para proporcionar 1,3 g de un residuo bruto que se sometió a la siguiente etapa sin purificación adicional. El residuo bruto se trató con LiBH4 (2 M en THF) en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1A, etapa b). La purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (88:12) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min), proporcionó 802 mg de BAR501 (79 %, tR= 11 min).
Alternativamente, la etapa f se realizó con Ca(BH4)2, producido in situ.
A una solución de compuesto 12 (500 mg, 1,05 mmoles) y etanol absoluto (4 mL), a 0 °C, se le añadió CaCl2 (466 mg, 4,2 mmoles). A la misma solución se le añadió una solución de NaBH4 (159 mg, 4,2 mmoles) en etanol absoluto (4 mL). Después de 4 h a -5 °C, se añadió MeOH gota a gota. A continuación, después de la evaporación de los solventes, el residuo se diluyó con agua y se extrajo con AcOEt (3x50 mL). El extracto combinado se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4 y se evaporó para proporcionar 500 mg de un residuo bruto que se sometió a la etapa g sin purificación adicional.
BAR501: C26H46O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova 700 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,74 (1H, dd, J = 10,3, 6,0 Hz, H-7), 3,51 (1H, ovl, H-3), 3,49 (2H, ovl, H2-24), 1,00 (3H, s, H3-19), 0,97 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21 ), 0,96 (3H, t, J = 7,6 Hz, H3-26 ), 0,72 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN C13 se registró en Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 875,3 71,9, 63,6, 57,5, 56,5, 51,6, 45,7, 44,9, 42,1, 41,5, 40,4, 40,3, 37,1, 35,8, 32,4, 30,7, 30,3, 29,7, 29,6, 28,3, 26,2, 23,4, 22,1, 19,4, 14,8, 12,7.
Ejemplo 2B. Preparación de 6p-etil-3a,7a-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR504-6b)
Se preparó BAR504-6b como se describe en el Ejemplo 2A (tR= 20,4 min). BAR504-6b: C26H46O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova 700 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,60 (1H, s, H-7), 3,51 (2H, m, H2-24), 3,35 (1H, ovl, H-3), 2,30 (1H, q, J =13,5 Hz, H-4a), 0,97 (3H, d, J = 6,8 Hz, H3-21 ), 0,95 (3H, t, J = 7,3 Hz, H3-26), 0,94 (3H, s, H3-19), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN C13 se registró en Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 871,9, 71,8, 62,7, 56,8, 51,7, 50,5, 46,7, 42,5, 41,4, 40,1, 36,6, 36,4, 36,2, 36,0, 33,2, 32,4, 30,1, 29,5, 28,8, 28,5, 25,3, 23,9, 20,7, 18,4, 13,7, 11,4.
Ejemplo 2C. Síntesis de 6a-etil-3a,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BAR502), 6p-etil-3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn501) y 6p-etN-3a,7a-dihidroxi-24-n/-5p-colan-23-ol (BARn5o4-6b)
Se sometió 7-KLCA (1 g, 2,56 mmoles) a degradación de Beckmann en C24 y metilación en C-23 facilitando 13 con un rendimiento de 66 %. La acetilación en C-3 y alquilación proporcionaron 14 que se hidrogenó proporcionando 15.
El tratamiento con MeONa/MeOH proporcionó la hidrólisis concomitante en C-3 y la epimerización en C-6. La reducción simultánea en la función éster metílico de C-23 y en el grupo carbonilo C-7 proporcionó BAR502 con un rendimiento de 89 %. El intermedio 15 (250 mg, 0,54 mmoles) también se utilizó como material de partida en la preparación de BARn501 y BARn504-6b.
Figure imgf000012_0001
a) HCOOH, HClO4; b) TFA, anhídrido trifluoroacético, NaNO2; c) KOH 30 % en MeOH/H2O 1:1 v/v, 88 % a lo largo de tres etapas; d) p-TsOH, MeOH seco; e) anhídrido acético, piridina; f) DIPA, n-BuLi, TMSCl, TEA seco, THF seco -78 °C; g) acetaldehído, BFs(OEt)2, CH2Cl2, -60 °C, 60 % a lo largo de cuatro etapas; h) H2, Pd(OH)2, THF/MeOH 1:1, rendimiento cuantitativo; i) MeONa, MeOH; j) UBH4, MeOH, THF seco, 0 °C, 77 % a lo largo de dos etapas.
Etapas a-d) Preparación de 7-ceto-24-nor-LCA de metilo (13)
El Compuesto 13 (660 mg, 1,69 mmoles, 66 % a lo largo de cuatro etapas) se preparó a partir de 7-KLCA en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1B, etapas a-d).
Etapas e-h) Preparación de 3a-acetoxi-6p-etil-7-ceto-24-nor-5p-colan-23-oato de metilo (15). El Compuesto 13 (660 mg, 1,69 mmoles) se sometió a las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 2A, etapas b-d para obtener 603 mg de 14 (78 % a lo largo de tres etapas). El análisis de RMN demostró una razón diastereomérica E/Z > 95 %. La configuración E en el doble enlace exocíclico se estableció mediante el acoplamiento dipolar H3-25 (51,67)/H-5 (5 2,61) en espectro Noesy (400 MHz, tiempo de mezcla 400 ms).
(E)-3a-acetoxi-6-etNiden-7-ceto-24-nor-5p-colan-23-oato (14): C28H42O5
El RMN H1 se registró en Varian Inova 400 MHz, utilizando CDCl3 como disolvente: 56,17 (1H, q, J = 7,2 Hz, H-24), 4,75 (1H, m, H-3), 3,64 (3H, s, COOCH3), 2,61 (1H, dd, J = 13,1, 4,0 Hz, H-5), 1,98 (3H, s, COCH3), 1,67 (3H, d, J = 7,2 Hz, H3-25), 1,00 (3H, s, H3-19), 0,97 (3H, d, J = 6,8 Hz, H3-21), 0,67 (3H, s, H3-18).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CDCl3 como disolvente: 5204,5, 174,2, 170,5, 143,0, 130,6, 72,5, 54,7, 51,4, 50,7, 48,6, 45,3, 43,7, 41,5, 39,1,38,8, 34,6, 34,2, 33,6, 33,4, 28,5, 25,9 (2C), 22,8, 21,3 (2C), 19,7, 12,7, 12,1. La hidrogenación en Pd (OH)2 en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 2A, etapa e, proporcionó 600 mg de 15 (rendimiento cuantitativo).
La configuración p del grupo etilo en C-6 se determinó mediante acoplamientos dipolares H3-25 (50,83)/H3-19 (51,22) en espectro Noesy (400 MHz, tiempo de mezcla 400 ms). 3a-acetoxi-6p-etN-7-ceto-24-nor-5p-colan-23-oato (15): C28H44O5 El RMN H1 se registró en Varian Inova 400 MHz, utilizando CDCl3 como disolvente: 54,65 (1H, m, H-3), 3,67 (3H, s, COOCH3), 2,60 (1H, t, J =11,2 Hz, H-8), 2,43 (1H, dd, J =14,2,2,6 Hz, H-22a), 1,98 (3H, s, COCH3), 1,88 (1H, m ovl, H-6), 1,22 (3H, s, H3-19), 0,98 (3H, d, J =6,4 Hz, H3-21), 0,83 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-25), 0,70 (3H, s, H3-18). El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CDCl3 como disolvente: 5215,3, 174,0, 170,5, 72,8, 61,9, 55,0, 51,4, 49,2, 48,7, 45,5, 42,9, 42,6, 41,4, 38,7 (2C), 35,6, 35,3, 34,9, 28,3 (2C), 26,5, 25,9, 24,8, 21,4, 21,3, 19,6, 13,0, 12,1.
Etapas i, j) Preparación de 6a-etil-3a,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BAR502)
A una solución de compuesto 15 (450 mg, 1,0 mimóles) y metanol seco (4 mL), se le añadió MeONa (20 mL, 0,5 M en MeOH, 10 mmoles). Después de 24 h, se añadió gota a gota H2O. A continuación, después de la evaporación de los solventes, el residuo se diluyó con agua y se extrajo con AcOEt (3x50 mL). El extracto combinado se lavó con agua, se secó con Na2SO4 y se evaporó para proporcionar 16 que se sometió a la etapa g sin más purificación.
6a-EtN-3a-hidroxi-7-ceto-24-nor-5p-colan-23-oato de metilo (16): C26H42O4
El RMN H1 se registró en Varian Inova 400 MHz, utilizando CDCh como disolvente: 8 3,64 (3H, s, COOCH3), 3,45 (1H, m, H-3), 2,83 (1H, q, J = 7,3 Hz, H-6), 2,51 (1H, t, J = 11,2 Hz, H-8), 2,45 (1H, dd, J =14,5, 3,2 Hz, H-22a), 1,26 (3H, s, Ha-19), 0,98 (3H, d, J = 6,6 Hz, H3-21 ), 0,81 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-25), 0,73 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CDCh como disolvente: 8214,9, 175,4, 71,6, 56,2, 53,2, 52,0, 51,9, 51,0, 50,5, 45,2, 43,8, 42,2, 40,2, 36,7, 35,3, 34,8, 32,5, 30,5, 29,4, 25,6, 24,0, 22,9, 20,1, 20,0, 12,6, 12,4.
El Compuesto 16 se sometió a reducción con LiBH4 en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1A, etapa g. La cromatografía en gel de sílice eluyendo con hexano/EtOAc 6:4 proporcionó BAR502 (274 mg, 70 % en dos etapas). Se obtuvo una muestra analítica por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 4,6 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (88:12) como eluyente (velocidad de flujo 1 ml/min, tR= 10,8 min).
BAR502: C25H44O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,65 (1H, s, H-7), 3,61 (1H, m, H-23a), 3,53 (1H, m, H-23b) 3,31 (1H, m, H-3), 0,97 (3H, d, J = 6,6 Hz, H3-21 ), 0,92 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-25), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN-C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 873,2, 71,1, 60,7, 57,7, 51,4, 46,9, 43,8, 42,9, 41,3, 40,9, 39,8, 36,7, 36,5, 34,6, 34,5, 34,2, 31,2, 29,4, 24,5, 23,7, 23,4, 21,8, 19,3, 12,1, 11,9.
Etapas k, l). Preparación de 6p-etil-3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn501) y 6p-etil-3a,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn504-6b). El Compuesto 15 (100 mg, 0,22 mmoles) se sometió a las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 2A, etapas f-g. La purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (86:14) como eluyente (velocidad de flujo 3 ml/min), proporcionó 47 mg de BARn501 (54 %, tR= 11 min) y 20 mg de BARn504-6b (23 %, tR= 15 min).
BARn501: C25H44O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,73 (1H, dd, J = 10,5, 5,5 Hz, H-7), 3,61 (1H, m, H-23a), 3,51 (1H, m, ovl, H-23b), 3,51 (1H, m, ovl, H-3), 0,98 ( 3H, d, ovl, Ha-21), 0,97 (3H, s, H3-19), 0,96 (3H, t, ovl, H3-25), 0,70 (3H, s, Ha-18).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 875,2, 71,8, 60,8, 57,5, 56,6, 51,5, 45,5, 44,8, 42,0, 41,4, 40,7, 40,3, 39,9, 36,9, 36,0, 34,2, 30,5, 29,6, 28,3, 26,2, 23,4, 22,0, 19,4, 14,7, 12,9.
BARn504-6b: C25H44O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8 3,63 (1H, m, H-23a), 3,60 (1H, m, H-7), 3,55 (1H, m, H-23b), 3,37 (1H, m, H-3), 2,30 (1H, q, J = 12,5 Hz, H-4a), 0,97 (3H, d, J = 6,6 Hz, Ha-21), 0,95 (3H, s, Hs-19), 0,95 (3H, t, J = 7,0 Hz, Hs-25), 0,72 (3H, s, H-18).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 872,8, 72,7, 60,8, 57,9, 52,7, 51 ,4 , 47 ,5 , 43 ,7 , 42 ,3 , 41,0, 39,9, 37,5, 37,3, 36,7, 34,2, 33,3, 31,0, 29,6, 29,4, 26,2, 24,8, 21,6, 19,3 , 14,5, 12,1.
Ejemplo 2D. Síntesis de 6-etiliden-3a,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR503), 6a-etil-3a,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR501-6a), 6-etiliden-3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn503) y 6a-etil-3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn501-6a)
El intermedio 11 se sometió a reducción con NaBH4 seguida de tratamiento con LiBH4. Alternativamente, se llevó a cabo de manera directa el tratamiento con LiAlH4, lo que permitió la reducción concomitante en C-24 y C-7. BAR503 también se utilizó como material de partida para BAR501-6a por hidrogenación sobre catalizador Pd(OH)2. El mismo protocolo sintético se realizó en el intermedio 14 produciendo los derivados en la posición 23 correspondientes, BARn503 y BARn501-6a.
Figure imgf000014_0001
a) NaBH4, MeOH; b) LÍBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 85 % a lo largo de dos etapas; c) H2, Pd(OH)2, THF:MeOH 1:1 v/v.
Etapas a, b). Preparación de 6-etiliden-3a,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR503) y 6-etiliden-3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn503).
El Compuesto 11 (1 g, 2,11 mmoles) se sometió a las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 2A, etapas f, g. La purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 |jm; 10 mm d.i. x250 mm) con MeOH/H2O (88:12) como eluyente (velocidad de flujo de 3 ml/min), proporcionó 727 mg de BAR503 (85 % en dos etapas, tR= 9,2 min). Alternativamente, el tratamiento con LiAIH4 en l1 proporcionó BAR503.
BAR503: C26H44O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 55,66 (1H, q, J = 6,9 Hz, H-25), 3,90 (1H, d, J = 9,8 Hz, H-7), 3,55 (1H, m, H-3), 3,50 (2H, m, H2-24), 2,50 (1H, dd, J = 4,0, 13,1 Hz, H-5), 1,62 (3H, d, J = 6,9 Hz, Hs-26), 0,97 (3H, d, J =6,8 Hz, H3-21 ), 0,81 (3H, s, H3-19), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 5 142,7, 114,5, 73,4, 71,1, 63.6, 57,1,56,1, 45,2, 44,9, 44,2, 40,7, 40,2, 36,3, 36,2, 35,9, 34,7, 32,4, 30,2, 29,5, 28,8, 27,4, 22,6, 21,5, 18,5, 11,8, 11.7.
El mismo protocolo sintético se realizó con el intermedio 14. La purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 ^m; 10 mm d.i. x250 mm) con MeOH/H2O (86:14) como eluyente (velocidad de flujo 3 ml/min), proporcionó BARn503 (tR= 8 min).
BARn503: C25H42O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 55,66 (1H, q, J = 6,8 Hz, H-24), 3,92 (1H, d, J = 9,9 Hz, H-7), 3,60 (1H, m, H-23a), 3,56 (1H, m, H-3), 3,55 (1H, m, H-23b), 2,52 (1H, dd, J = 3,7, 13,2 Hz, H-5), 1,63 (3H, d, J = 6,8 Hz, H3-25), 0,98 (3H, d, J =6,5 Hz, H3-21), 0,95 (3H, s, H3-19), 0,71 (3H, s, H3- 18 ). El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 5 143,7, 115,4, 74,1, 71,8, 60,8, 58,0, 57,1, 46,1, 45,9, 45,1,41,6, 41,1, 39,9, 37,0, 36,4, 35,8, 34,1,30,9, 29,8, 28,1, 23,5, 22,5, 19,5, 12,7, 12,6. Etapa c). Preparación de 6a-etil-3a,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR501-6a) y 6a-etN-3a,7p-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn501-6a)
Se sometió BAR503 (350 mg, 0,86 mmoles) a las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 2A, etapa e, obteniendo BAR501-6a con rendimiento cuantitativo.
BAR501-6a: C26H46O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 53,50 (2H, t, J = 6,8 Hz, H3-24), 3,44 (1H, m, H-3), 3,07 (1H, t, J = 9,8 Hz, H-7), 0,96 (3H, d, J = 6,8 Hz, H3-21 ), 0,95 (3H, s, H3-19), 0,86 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-26 ), 0,71 (3H, s, H3- 18).
El RMN C13 se registró en Varian Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 576,5, 72,3, 63,6, 57,9, 57,3, 46,3, 45,0, 44,8, 41,8, 41,0, 39,9, 37,0, 36,4, 35,5, 33,3, 31,3, 31,0, 30,3, 29,8, 27,8, 24,3, 22,5, 22,0, 19,3, 12,8, 11,8. Se sometió BARn503 a las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 2A, etapa e, obteniendo BARn501-6a con rendimiento cuantitativo.
BARn501-6a: C25H44O3
El RMN H1 se registró en Varian Inova a 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 53,62 (1H, m, H-23a), 3,54 (1H, m, H-23b), 3,45 (1H, m, H-3), 3,08 (1H, t, J =9,8 Hz, H-7), 0,97 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21 ), 0,95 (3H, s, H3-19), 0,86 (3H, t, J = 7,4 Hz, Hs-25), 0,73 (3H, s, H3- I 8).
El RMN C13 se registró en Varían Inova a 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 576,4, 72,5, 60,8, 57,9, 57,2, 46,2, 45,1, 44,7, 41,8, 41,2, 40,0, 39,8, 36,5, 35,6, 34,2, 31,2, 30,9, 29,9, 27,9, 24,1,22,7, 22,0, 19,5, 12,7, 11,7. Ejemplo 2E Síntesis de 6a-etM-3a,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-nitrilo (BAR506)
Se transformó 7-KLCA en nitrilo 17 siguiendo el mismo procedimiento sintético descrito en el Ejemplo 1B, etapas a-b. La alquilación seguida de reducción del doble enlace y epimerización en C-6 en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 2A, etapas c-d y en el ejemplo 2C, etapa i, respectivamente proporcionaron 18. El tratamiento con LiBH4 como en el ejemplo 2C, etapa j, proporcionó el grupo hidroxilo 7a deseado en BAR506.
Figure imgf000015_0001
a) HCOOH, HGO4; b) TFA, anhídrido trifluoroacético, NaNO2; c) DIPA, n-BuLi, TMSCl, TEA seco, THF seco -78 °C; d) acetaldehído, BF3(OEt)2, CH2Cl2, -60 °C; e) H2, Pd(OH)2, TMF/MeOH 1:1; f) MeONa, MeOH; g) UBH4, MeOH, THF seco, 0 °C
BAR506: C25H41NO2
El RMN H1 se registró en Varian Inova 700 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 53,66 (1H, brs, H-7), 3,31 (1H, ovl, H-3), 2,46 (1H, dd, J =3,8, 16,9 Hz, H-22a), 2,34 (1H, dd, J =7,4, 16,9 Hz, H-22b), 1,16 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21), 0,91 (3H, t, J =7,5 Hz, Hs-25), 0,92 (3H, s, Hs-19), 0,73 (3H, s, H-18).
El RMN C13 se registró en Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 5120,3, 72,9, 70,9, 56,1,51,5, 46,7, 43,4, 42,9, 41,4, 40,2, 36,5, 36,2, 34,3 (2C), 34,2, 30,7, 29,2, 24,9, 24,4, 23,4, 23,3, 21,9, 18,5, 12,1, 11,6. EJEMPLO 2F. Síntesis de 6a-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR701), sulfato de 6a-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-il 24-sódico (BAR701solf), 6p-etil-7p-hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR702), 6a-etil-7p-hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR703), ácido 6a-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-oico (BAR704), sulfato de 6a-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-oil taurina sódico (BART704), 6p-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR705) y ácido 6a-etil-7p-hidroxi-5p-colan-24-oico (BAR711)
El Compuesto 12 se trató con MeONa en metanol para obtener la desacetilación en C-3 y la inversión en C-6. La tosilación, eliminación e hidrogenación del doble enlace en el anillo A dio 20. La hidrólisis en la función de éster metílico seguida del tratamiento con LiBH4 proporcionó BAR704 con un alto rendimiento químico. El intermedio 20 también se usó como material de partida para BAR701. La sulfatación en C-24 en una pequeña alícuota de BAR701 proporcionó BAR701solf.
Figure imgf000015_0002
a) MeONa, MeOH; b) p-TsCl, piridina, rendimiento cuantitativo a lo largo de dos etapas; c) LiBr, O2CO3, DMF, reflujo, d) H2, Pd(OHF, THF/MeOH 1 :1 , temperatura ambiente, 88 % a lo largo de dos etapas; e) NaOH, MeOH:H2O 1:1 v/v, 82 %; f) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 83 %; g) DMT-MM, Et¿N, taurina, DMF seco; h) UBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 77 %; i) Et3N.SO3, DMF, 95 °C.
Etapas a-f) Preparación de ácido 6a-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-oico (BAR704).
El Compuesto 12 (500 mg, 1,05mmoles) se trató con MeONa (2,1 mL, 0,5 M en MeOH, 1,05mmoles) en MeOH (5 mL) durante una noche en las mismas condiciones operativas del Ejemplo 2C, etapa i. La tosilación sobre el producto de reacción en bruto en las mismas condiciones operativas del Ejemplo 1C, etapa a, proporcionado 19 (620 mg, cantidad cuantitativa a lo largo de dos etapas). El intermedio 19 (500 mg, 0,85 mmoles) se sometió a las mismas condiciones operativas del Ejemplo 1C, etapas b, c, para obtener 312 mg de 20 (88 % a lo largo de dos etapas). El Compuesto 20 (200 mg, 0,48 mmoles) se hidrolizó con NaOH (96 mg, 2,4 mmoles) en una solución de MeOH:H2O 1:1 v/v (10 mL) en las mismas condiciones operativas del Ejemplo 1A, etapa f. El intermedio de ácido carboxílico en bruto (190 mg, 0,47 mmoles) se trató con L iB H (1,65 mL, 2 M en THF, 3,3 mmoles) y MeOH (133 pl, 3,3 mmoles) en THF seco (5 mL). La purificación por gel de sílice (CH2Cl2-MeOH 99:1) proporcionó 157 mg de BAR704 (83 %). En las mismas realizaciones, el tratamiento con LiBH4 después de la hidrólisis alcalina produjo pequeñas cantidades (alrededor del 10%) de ácido 6a-etil-7p-hidroxi-5p-colan-24-oico (BAR711) que se aisló mediante purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (88:12) como eluyente (caudal 3 mL/min, tR = 16 min).
BAR704: C26H44O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,65 (1H, br s, H-7), 2,34 (1H, m, H-23a), 2,20 (1H, m, H-23b), 0,96 (3H, d, J = 6,3 Hz, Ha-21), 0,92 (3H, s, H-19), 0,89 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-26), 0,70 (3H, s, H3- 18 ). La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8 178,0, 71,6, 57,4, 51,7, 48,7, 43,8, 43,3, 41,5, 41,1, 39,3, 37,4, 36,8, 34,6, 32,5 (2C), 29,3, 28,8, 25,1,24,6 (2C), 23,5, 22,5, 22,0, 18,8, 12,2, 12,1.
BAR711: C26H44O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 500 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,08 (1H, t, J = 9,6 Hz, H-7), 2,32 (1H, m, H-23a), 2,20 (1H, m, H-23b), 0,96 (3H, d, J = 6,2 Hz, Ha-21), 0,95 (3H, s, Ha-19), 0,85 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-26 ), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
Etapa g) Preparación de sulfato de 6o-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-oil taurina sódico (BART704)
Una alícuota de BAR704 (10 mg, 0,024 mmoles) en DMF seco (5 mL) se trató con DMT-MM (20,5 mg, 0,07 mmoles) y trietilamina (83 pL, 0,6 mmoles) y la mezcla se e agitó a temperatura ambiente durante 10 min. Después, a la mezcla se le añadió taurina (18 mg, 0,14 mmoles). Después de 3 h, la mezcla de reacción se concentró al vacío y se disolvió en agua (5 mL). La purificación en una columna de gel de sílice C18 y después HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (83:17) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min), dio 4,5 mg de BART704 (tR = 10 min).
BART704: C28H4sNNaO5S
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,65 (1H, br s, H-7), 3,58 (2H, t, J = 7,0 Hz, CH2-N), 2,96 (2H, t, J = 9,6 Hz, CH2-S), 2,25 (1H, m, H-23a), 2,10 (1H, m, H-23b), 0,97 (3H, d, J =6,4 Hz, H3-21 ), 0,92 (3H, s, H-19), 0,89 (3H, t, J = 7,1 Hz, H3-26 ), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
Etapa h) Preparación de 6a-etil-7a-hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR701)
El Compuesto 20 (100 mg, 0,24 mmoles) se trató en las mismas condiciones del Ejemplo 2C, etapa j. La purificación por Hp Lc en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (92:8) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min), dio 64 mg de BAR701 (tR= 31 min) y una pequeña cantidad de 6a-etil-7p-hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR703) (8 mg, tR= 24,8 min).
BAR701: C26H46O2
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,65 (1H, brs, H-7), 3,51 (2H, m, H2-24), 0,97 (3H, d, J = 6,3 Hz, H3-21 ), 0,92 (3H, s, H3-19), 0,89 (3H, t, J = 7,3 Hz, H3-26 ), 0,71 (3H, s, H3- 18 ). La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 871,6, 63,6, 57,6, 51,8, 48,7, 43,7, 43,3, 41,5, 41,1,39,3, 37,5, 37,0, 34,6, 33,2, 30,3, 29,4, 28,8, 25,1,24,6 (2C), 23,5, 22,5, 22,0, 19,2, 12,3, 12,1. BAR703 C26H46O2
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 500 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,51 (2H, m, H2-24), 3,07 (1H, t, J = 10,0 Hz, H-7), 0,96 (3H, d, J = 6,6 Hz, H3-21 ), 0,84 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-26 ), 0,95 (3H, s, H-19), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 876,3, 63,6, 57,9, 56,8, 46,3, 45,3, 45,0, 44,7, 41,7, 41,1,38,8, 37,0, 36,3, 33,3, 30,3, 28,1,27,9 (2C), 25,0 (2C), 22,0, 21,9 (2C), 19,4, 12,7, 11,6. Etapa i) Preparación de sulfato de 6a-etN-7a-hidroxi-5p-colan-24-M 24-sódico (BAR701solf)
La sulfatación en C-24 en una pequeña alícuota de BAR701 se realizó en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1B, etapa g) para dar BAR701solf en bruto como sal de amonio. RP18/HPLC en Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (82:18) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min) proporcionó BAR701solf (tR = 14,2 min ) como sal de sodio.
BAR701solf: C26H45NaO3S
La RMN H1 se registró en un Varían Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,96 (2H, t, J = 6,3 Hz, H2-24), 3,64 (1H, br s, H-7), 0,96 (3H, d, J = 6,6 Hz, H3-2 I), 0,91 (3H, s, H3-19), 0,88 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-26 ), 0,69 (3H, s, H3- I 8).
Preparación de 6p-etil-7p-hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR702) y 6p-etil-7a- hidroxi-5p-colan-24-ol (BAR705)
El Compuesto 12 (500 mg, 1,05mmoles) se trató con MeONa (2,1 mL, 0,5 M en MeOH, 1,05 mmoles) en MeOH (10 mL) en las mismas condiciones operativas del Ejemplo 2C, etapa i, excepto por el tiempo de retención (2 h). La tosilación del producto de reacción en bruto en las mismas condiciones operativas del Ejemplo 1C, etapa a, proporcionó 21 (620 mg, rendimiento cuantitativo a lo largo de dos etapas). El intermedio 21 (600 mg, 1,02 mmoles) se sometió a las mismas condiciones operativas del Ejemplo 1C, etapas b, c, para obtener 400 mg de 22 (94 %). El Compuesto 22 (350 mg, 0,84 mmoles) se redujo con NaBH4/LiBH4 en las mismas condiciones operativas del Ejemplo 2A, etapas f, g. La purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 mm; 10 mm d.i. 3250 mm) con MeOH/H2O (92:8) como eluyente (velocidad de flujo de 3 mL/min), proporcionó 180 mg de BAR702 (tR= 25 min ) y 75,4 mg de BAR705 (tR= 13 min). Alternativamente, la etapa e se realizó con Ca(BH4)2, producido in situ.
Figure imgf000017_0001
a) MeONa, MeOH; b) p-TsCl, piridina, rendimiento cuantitativo a lo largo de dos etapas; c) LiBr, O2CO3, DMF, reflujo; d) H;, Pd(OH)2, THF/MeOH 1:1, temperatura ambiente, 94% a lo largo de dos etapas; e) NaBH4, MeOH; f) Líb H4, MeOH seco, Th F, 0 °C, 78 % a lo largo de dos etapas.
BAR702: C26H46O2
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 700 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: □ 3,67 (1H, dd, J = 8,7, 4,7 Hz, H-7), 3,51 (2H, m, /-24 ), 0,98 (3H, s, H3-19), 0,97 (3H, d, J = 6,6 Hz, Ha-21), 0,96 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-26), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: □ 75,5, 63,8, 57,6, 56,5, 44.2, 43,7, 42,8, 41,0, 40,9, 40,8, 38,2 (2C), 36,9, 34,4, 32,8, 29,7, 28,9, 27,0, 26,1,24,7, 22,2, 22,0 (2C), 19,2, 13,9, 12.3.
BAR705: C26H46O2
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 700 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: □ 3,59 (1H, br s, H-7), 3,51 (2H, m, H-2-24), 2,23 (1H, dq, J = 13,9, 4,0 Hz, H-4a), 0,97 (3H, d, J = 6,6, Ha-21), 0,95 (3H, t, J = 7,1 Hz, H3-26), 0,94 (3H, s, Hs-19), 0,70 (3H, s, H3-18).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente □ 73,1,63,2, 57,3, 52,8, 51,4, 49,4, 43,8, 41,3, 39,7, 37,4 (2C), 37,2, 34,2, 32,6 (2C), 29,9, 29,5, 28,9, 28,3, 27,3, 24,5, 21,7, 21,2, 18,8, 14,3, 12,3.
EJEMPLO 2G. Síntesis de ácido 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-oico (BAR710), sulfato de 6a-etil-3p,7adihidroxi-5p-colan-24-oil taurina sódico (BART710), 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR706), sulfato de 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-il 24-sódico (BAR706solf), 6a-etil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR707), 6p-etil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR708) y 6p-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR709) y ácido 6aetil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-oico (BAR712).
En una inversión de protocolo convergente en C-3 en el derivado 19 seguido de tratamiento con MeONa/MeOH dio 23 que se usó como material de partida en la síntesis de BAR706, BAR706solf, BAR710 y BART710. La inversión en C-3 seguida de reducción en C-7 y C-24, produjo BAR708 y BAR709.
Figure imgf000018_0001
a) CH3COOK, DMF:H2O 5:1 v/v; b) NaOMe, MeOH, 74 % a lo largo de dos etapas; c) NaOH, MeOH:H2O 1:1 v/v; d) LÍBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 65 % a lo largo de dos etapas; e) DMT-MM, Et3N, taurina, DMF seco; f) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 58 %; g) Et3N.SO3, DMF, 95 °C; h) CH3COOK, DMF:H2O 5:1; i) NaBH4, MeOH; j) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 74 % a lo largo de tres etapas.
Etapas a-d) Preparación de ácido 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-oico (BAR710)
Una solución de 21 (600 mg, 1,0 mmoles) y CH3COOK (98 mg, 1,0 mmoles) disuelto en agua (2mL) y N,N'-dimetilformamida (DMF, 10 mL) se sometió a reflujo durante 2 h. La solución se enfrió a temperatura ambiente y después se añadió acetato de etilo y agua. La fase acuosa separada se extrajo con acetato de etilo (3 x 30 mL). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua, se secaron (Na2SO4) y se evaporaron a sequedad para dar 600 mg de mezcla. La purificación por gel de sílice (hexano-acetato de etilo 8:2 y TEA al 0,5 %) dio 350 mg de aceite. La inversión en C-6 en las mismas condiciones operativas como se describen que se describe en el Ejemplo 2C, etapa i, proporcionó 23 (320 mg, 74 % a lo largo de dos etapas) que se sometió a hidrólisis seguido de tratamiento con LiBH4 como se describe en el Ejemplo 2F, etapas e, F. La purificación por HPLC en Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (88:12) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min), dio 208 mg de BAR710 (65 %, tR = 11 min). Alternativamente, la inversión en C-3 en 21 seguida de hidrólisis alcalina y después el tratamiento con LiBH4 proporcionó BAR710 de una manera directa.
En las mismas realizaciones, el tratamiento con LiBH4 después de la hidrólisis alcalina produjo pequeñas cantidades (aproximadamente el 10 %) de ácido 6a-etil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-oico (BAR712) que se aisló mediante purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (88:12) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min, tR = 8 min)
BAR710: C26H44O4
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,97 (1H, br s, H-3), 3,67 (1H, br s, H-7), 2,33 (1H, m, H-23a), 2,21 (1H, m, H-23b), 0,96 (3H, d, J = 6,5 Hz, H3-21 ), 0,94 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 7,6 Hz, H3-26 ), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8 178,3, 71,3, 67,5, 57,4, 51,7, 43,8, 42,8, 41,5, 41,2, 41,0, 37,0, 36,7, 33,8, 32,4, 32,0, 31,1 (2C), 29,3, 28,3, 24,6, 24,2, 23,3, 22,2, 18,8, 12,3, 12,2.
BAR712: C26H44O4
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 500 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 84,01 (1H, brs, H-3), 3,06 (1H, t, J =9,7 Hz, H-7), 2,32 (1H, m, H-23a), 2,19 (1H, m, H-23b), 0,97 (3H, s, H3-19), 0,96 (3H, d, ovl, H3-21 ), 0,87 (3H, t, J = 7,7 Hz, H3-26 ), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
Etapa e) Preparación de sulfato de 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-oil taurina sódico (BART710)
Una alícuota de BAR710 (10 mg) se trató en las mismas condiciones del Ejemplo 2F, etapa g.
BART710: C28H48NNaO6S
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 500 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,97 (1H, br s, H-3), 3,67 (1H, br s, H-7), 3,59 (2H, t, J = 6,8 Hz, CH2-N), 2,96 (2H, t, J = 6,8 Hz, CH2-S), 0,97 (3H, d, J = 6,4 Hz, H3-21 ), 0,95 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 7,1 Hz, H3-26 ), 0,70 (3H, s, H3-18 ).
Etapas f) Preparación de 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR706) y 6a-etil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR707)
El intermedio 23 (500 mg, 1,16 mmoles) se trató con LiBH4 (4 mL, 8,1 mmoles) y MeOH (327 |j L, 8,1 mmoles) en THF seco (10 mL) como se describe en el Ejemplo 2C, etapa j. La purificación por HPLC en un Nucleodur 100-5 C18 (5 pm; 10 mm d.i. x 250 mm) con MeOH/H2O (88:12) como eluyente (velocidad de flujo 3 mL/min), dio BAR706 (250 mg, tR= 12,6 min) y una pequeña cantidad de 6a-etil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (bAr 707) (23 mg, tR= 8,2 min).
BAR706: C26H46O3
La RMN H1 se registró en un Varían Inova 500 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,97 (1H, br s, H-3) ,3,66 (1H, br s, H-7), 3,51 (2H, m, H2-24), 0,96 (3H, d, J = 6,6 Hz, H3-2 I), 0,94 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 7,5 Hz, H3-26 ), 0,70 (3H, s, H3- I 8).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 125 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 871,4, 67,4, 63,6, 57,6, 51,7, 43,7, 42,8, 41,5, 41,2, 41,1,37,1 (2C), 33,8, 33,2, 31,3 (2C), 30,3, 29,4, 28,3, 24,6, 24,2, 23,3, 22,3, 19,2, 12,7, 12,1. BAR707: C26H46O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 500 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 84,01 (1H, br s, H-3), 3,51 (2H, m, H2-24), 3,05 (1H, t, J = 9,7 Hz, H-7), 0,97 (3H, s, H3-19), 0,96 (3H, d, J = 6,4 Hz, H3-21 ), 0,88 (3H, t, J =7,6 Hz, H3-26 ), 0,72 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 876,3, 67,1,63,6, 57,8, 56,8, 45,0, 44,8, 44,5, 41,7, 40,3, 39,1,37,0, 35,9, 33,0, 31,2, 30,2, 29,8, 28,4, 28,0, 27,9, 24,8, 22,9, 21,8, 19,3, 12,8, 11,6. Etapa g) Preparación de sulfato de 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-il 24-sódico (BAR706solf)
La sulfatación en C-24 en una pequeña alícuota de BAR706 se realizó en las mismas condiciones operativas descritas en el ejemplo 1B, etapa g.
BAR706solf: C26H46NaO6S
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 500 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,97 (1H, br s ovl, H-3), 3,96 (2H, t ovl, H2-24), 3,65 (1H, br s, H-7), 0,96 (3H, d, J = 6,6 Hz, H3-21 ), 0,94 (3H, s, H3-19), 0,90 (3H, t, J =7,5 Hz, H3-26 ), 0,70 (3H, s, H3- 18).
Etapas h, i, j) Preparación de 6p-etil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR708) y 6p-etil-3p,7a-dihidroxi-5pcolan-24-ol (BAR709).
El Compuesto 19 se trató en las mismas condiciones operativas de la etapa a. La reducción de NaBH4/LiBH4 de 100 mg (0,23 mmoles) en las mismas condiciones operativas del Ejemplo 2A, etapas f, g, proporcionó una mezcla cuya purificación por HPLC (88 % MeOH:H2O) dio 6p-etil-3p,7p-dihidroxi-5p-colan-24-ol puro (BAR708) (48,3 mg, tR = 11 min) y 6p-etil-3p,7a-dihidroxi-5p-colan-24-ol (BAR709) (20,7 mg, tR = 13 min). Alternativamente, la etapa i se realizó con Ca(BH4)2, producido in situ.
BAR708: C26H46O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 700 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,59 (1H, br s, H-3), 3,57 (1H, dd, J = 12,6, 2,3 Hz, H-7), 3,51 (2H, m, H2-24), 0,98 (3H, s, H3-19), 0,96 (3H, ovl, H3-21 ), 0,96 (3H, t, ovl, H3-26 ), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8^ 75,2, 68,3, 63,6, 58,3, 57,1,45,7 (2C), 44,2, 41,8 (2C), 41,2, 40,0, 37,0, 35,9, 33,3, 31,1.30,3, 29,4 (2C), 26,6 (2C), 23,2 (2C), 19,3, 13,0, 12,3. BAR709: C26H46O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 700 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,91 (1H, br s, H-3), 3,60 (1H, br s, H-7), 3,51 (2H, m, H2-24), 2,45 (1H, t, J = 13,3 Hz, H-4a), 0,97 (3H, s, H3-19), 0,97 (3H, ovl, H3-21 ), 0,95 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-26 ), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 872,8, 67,4, 63,4, 57,2, 51,3, 51,2, 43,2, 41,6, 40,5, 37,3, 37,1 (2C), 36,9, 34,0, 33,3, 32,1,30,3, 29,3, 28,9, 28,6, 26,3, 24,9, 22,0, 19,3, 13,8, 12,1. EXAMPLE 2H. Síntesis de ácido 6a-etil-7a-hidroxi-24-nor-5p-colan-23-oico (BARn704), sulfato de 6a-etil-7ahidroxi-24-nor-5p-colan-23-oil taurina sódico (BARTn704), 6a-etil-7a-hidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn701) y sulfato de 6a-etil-7a-hidroxi-24-nor-5p-colan-23-il 23-sódico (BARn701solf)
BARn704, BARTn704, BARn701 y BARn701solf se prepararon a partir de 15 y siguiendo el mismo protocolo de síntesis descrito para sus homólogos C24 (Ejemplo 2F, etapas a-i).
Figure imgf000020_0001
a) MeONa, MeOH; b) p-TsCI, piridina, 73 % a lo largo de dos etapas; c) LiBr, LÍ2CO3, DMF, reflujo, d) H2, Pd(OH):, THF/MeOH 1:1, temperatura ambiente, rendimiento cuantitativo a lo largo de dos etapas; e) NaOH, MeOH:H2O 1:1 v/v, 80 %; f) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 92 %; g) DMT-MM, Et3N, taurina, DMF seco; h) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 70 %; i) Et3N.SO3, DMF, 95 °C.
BARn704: C25H42O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,64 (1H, brs, H-7), 2,41 (1H, dd, J = 11,0, 2,6 Hz, H-22a), 1,00 (3H, d, J =6,0 Hz, H3-21 ), 0,90 (3H, s, H3-19), 0,87 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-25), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8 178,9, 71,6, 57,5, 51,7, 48,6, 43,8, 43,4, 43,3, 41,5, 40,9, 39,1, 37,4, 35,2, 34,6, 29,4, 28,8, 25,0, 24,6 (2C), 23,5, 22,4, 22,0, 20,1, 12,2, 12,1. BARTn704: C2/H46NNaO5S
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,64 (1H, br s, H-7), 3,59 (2H, t, J = 6,8 Hz, CH2-N), 2,96 (2H, t, J = 6,8 Hz, CH2-S), 2,40 (1H, dd, J = 11,0, 2,8 Hz, H-22a), 1,00 (3H, d, J = 6,0 Hz, H3-21 ), 0,89 (3H, s, H3-19), 0,86 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-25), 0,70 (3H, s, H3-18 ).
BARn701: C25H44O2
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,66 (1H, br s, H-7), 3,61 (1H, m, H-23a), 3,54 (1H, m, H-23b), 0,96 (3H, d, J = 6,7 Hz, H3-21 ), 0,91 (3H, s, H3-19), 0,89 (3H, t, J = 7,3 Hz, H3-25), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 871,5, 60,8, 57,8, 51,7, 48,6, 43,8, 43,3, 41,5, 41,1,39,9, 39,2, 37,4, 34,5, 34,2, 29,4, 28,8, 25,0, 24,6 (2C), 23,5, 22,5, 22,0, 19,4, 12,2, 12,1. BARn701solf: C25H43NaOsS
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: S 4,02 (2H, m, H2-23), 3,65 (1H, br s, H-7), 0,97 (3H, d, J = 6,7 Hz, H3-21 ), 0,91 (3H, s, H3-19), 0,88 (3H, t, J = 7,5 Hz, H3-25), 0,70 (3H, s, H3- 18 ). EXAMPLE 2I. Síntesis de ácido 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-oico (BARn710), sulfato de 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-oN taurina sódico (BARTn710), 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-ol (BARn706) y sulfato de 6a-etil-3p,7a-dihidroxi-24-nor-5p-colan-23-il 23-sódico (BARn706solf)
Figure imgf000020_0002
a) CH3COOK, DMF:H2O 5:1 v/v; b) NaOH, MeOH:H2O 1:1 v/v; c) UBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 58 % a lo largo de dos etapas; d) DMT-MM, Et3N, taurina, DMF seco; e) UBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 57 %; f) Et3N.SO3, DMF, 95 °C. BARn710, BARTn710,BARn706 y BARn706solf se prepararon a partir de 24 y siguiendo el mismo protocolo de síntesis descrito para sus homólogos C24 (Ejemplo 2G,, etapas c-g).
BARn710: C25H42O4
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,97 (1H, br s, H-3), 3,66 (1H, br s, H-7), 2,42 (1H, dd, J = 11,3, 3,3 Hz, H-22a), 1,02 (3H, d, J = 6,0 Hz, H3-21 ), 0,94 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 7,3 Hz, H3-25), 0,73 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varían Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8 177,7, 71,3, 67,4, 57,4, 51,8, 43,8 (2C), 42,8, 41,5, 41,2, 41,0, 37,0, 35,1, 33,8, 31,3, 31,2, 29,4, 28,3, 24,6, 24,2, 23,3, 22,2, 20,0, 12,2, 12,1. BARTn710: C27H46NNaOaS
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,97 (1H, br s, H-3), 3,66 (1H, br s, H-7), 3,59 (2H, t, J = 6,8 Hz, CH2-N), 2,96 (2H, t, J = 6,8 Hz, CH2-S), 2,42 (1H, dd, J = 11,3, 3,3 Hz, H-22a), 1,00 (3H, d, J = 6,3 Hz, H3-21 ), 0,94 (3H, s, H3-19), 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-25), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
BARn706: C25H44O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,97 (1H, br s, H-3), 3,67 (1H, br s, H-7), 3,61 (1H, m, H-23a), 3,55 (1H, m, H-23b), 0,97 (3H, d, J = 6,6 Hz, H3-21 ), 0,95 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 7,4 Hz, H3-25), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 100 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 871,4, 67,4, 60,8, 57,9, 51,8, 43,8, 42,8, 41,5, 41,2, 41,1,39,9, 37,0, 34,2, 33,8, 31,3, 31,2, 29,4, 28,3, 24,6, 24,2, 23,3, 22,3, 19,4, 12,2, 12,1. BARn706solf: C25H43NaO6S
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 84,05 (2H, m, H2-23), 3,97 (1H, br s, H-3), 3,66 (1H, br s, H-7), 1,00 (3H, d, J = 6,0 Hz, H3-21 ), 0,94 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 6,9 Hz, H3-25), 0,71 (3H, s, H3- 18 ).
EJEMPLO 2J. Preparación de ácido 6a-etil-3a,7a-dihidroxi-25,26-bishomo-5p-colan-26-oico (BAR802), 6a-etil-3a,7a-dihidroxi-25, 26-bishomo-5p-colan-26-ol (BAR803) y sulfato 6a-etil-3a,7a-dihidroxi-25,26-bishomo-5pcolan-26-il-26-sódico (BAR804)
Figure imgf000021_0001
a) 2,6-lutidina, trifluorometanosulfonato de t-butildimetilsililo, CH2Cl2, 0 °C; b) LiBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 68 % a lo largo de dos etapas; c) DMSO, cloruro de oxalilo, TEA seco, CH2O 2, -78 °C después metil(trifenilfosforanilideno)acetato, 79 %; d) TT, Pd(OH)2/C tipo Degussa, THF/MeOH 1:1, rendimiento cuantitativo; e) HCl 37%, MeOH, 87%; f) NaOH 5% en MeOH/H2O 1:1 v/v, 89%; g) UBH4, MeOH seco, THF, 0 °C, 78%; h) Et3N.SO3, DMF, 95 °C, 25 %.
BAR802-804 se prepararon siguiendo los mismos protocolos sintéticos que en el Ejemplo 1A, etapas a-g. La sulfatación en una pequeña alícuota de BAR803 en las mismas condiciones operativas del ejemplo 1B, etapa g, proporcionó BAR804.
BAR802: C28H48O4
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,66 (1H, br s, H-7), 3,31 (1H, m ovl, H-3), 2,24 (2H, t, J = 7,3 Hz, H2-25), 0,95 (3H, d, J = 6,4 Hz, H3-21 ), 0,92 (3H, s, H3-19), 0,91 (3H, t, J = 6,9 Hz, H3-28 ), 0,70 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 8 186,7, 73,3, 71,3, 57,7, 51,7, 47,0, 43,7, 43,1, 41,6, 41,1, 37,1, 36,9, 36,8, 36,6, 34,5, 34,4 (2C), 31,3, 29,4, 27,0 (2C), 24,6, 23,8, 23,5, 22,0, 19,2, 12,2, 12,0.
BAR803: C28H50O3
La RMN H1 se registró en un Varian Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,64 (1H, br s, H-7), 3,53 (2H, t, J = 6,6 Hz, H2-26 ), 3,30 (1H, m ovl, H-3), 0,94 (3H, d, J = 6,7 Hz, H3-21 ), 0,91 (3H, s, H3-19), 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-28 ), 0,68 (3H, s, H3- 18 ).
La RMN C13 se registró en un Varian Inova 175 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 873,3, 71,3, 63,1,57,7, 51,7, 47,0, 43,7, 43,1,41,6, 41,1,37,1,36,8 (2C), 36,6, 34,5, 34,4, 33,7, 31,3, 29,5, 27,4, 27,0, 24,6, 23,8.23,5, 22,0, 19,3, 12,3, 12,0. BAR804: C2sH49NaO6S
La RMN H1 se registró en un Varían Inova 400 MHz, utilizando CD3OD como disolvente: 83,99 (2H, t, J = 6,6 Hz, H2-26), 3,65 (1H, br s, H-7), 3,31 (1H, m ovl, H-3), 0,94 (3H, d, J = 6,2 Hz, H3-21), 0,91 (3H, s, H3-19), 0,90 (3H, t, J = 7,0 Hz, H3-28 ), 0,69 (3H, s, H3- 18 ).
Actividades biológicas. La actividad de los compuestos seleccionados se probó in vitro utilizando un modelo de células completas transfectadas con genes informadores para establecer la selectividad de los compuestos que se muestran en la tabla 1 hacia FXR y TGR5/GPBAR1 en comparación con el ácido quenodesoxicólico (CDCA) y el TLCA. CDCA es un ácido biliar primario que funciona como un ligando endógeno para FXR, mientras que TLCA es un ligando fisiológico para TGR5/GPBAR1. En este ensayo, se cultivaron células HepG2 (una línea celular derivada de hígado) a 37 °C en medio esencial mínimo con sales de Earl que contenía 10 % de suero fetal bovino (FBS), 1 % de L-glutamina y 1 % de penicilina/estreptomicina. Las células HEK-293T se cultivaron a 37 °C en D-MEM que contenía 10% de suero fetal bovino (FBS), 1 % de L-glutamina y 1 % de penicilina/estreptomicina. Los experimentos de transfección se realizaron utilizando Fugene HD de acuerdo con las especificaciones del fabricante. Las células se sembraron en una placa de 24 pocillos a 5 x 104 células/pocillo. Para la transactivación mediada por FXR, las células HepG2 se transfectaron con 100 ng de pSG5-FXR, 100 ng de pSG5-RXR, 100 ng de pGL4.70, un vector que codifica el gen Renilla humano y 250 ng del vector informador p(hsp27)-TK-LUC que contenía el elemento de respuesta a FXR IR1 clonado del promotor de la proteína de choque térmico 27 (hsp27).
Para la transactivación mediada por GPBAR1, las células HEK-293T se transfectaron con 200 ng de pGL4.29, un vector informador que contenía un elemento de respuesta a AMPc (CRE) que impulsa la transcripción del gen informador luciferasa luc2P, con 100 ng de pCMVSPORT6-GPBAR1 humano, y con 100 ng de pGL4.70, un vector que codifica el gen Renilla humano. En los experimentos de control, las células HEK-293T se transfectaron solo con los vectores pGL4.29 y pGL4.70 para excluir cualquier posibilidad de que los compuestos pudieran activar el CRE de una manera independiente de GPBAR1. A las 24 h de la transfección, las células se estimularon durante 18 h con TLCA 10 |jM como agente de control o agonistas putativos de GPBAR1 a la misma concentración. Después de los tratamientos, las células se lisaron en 100 j L de tampón de lisis (Tris-fosfato 25 mM, pH 7,8; DTT 2 mM; 10 % de glicerol; 1 % de Triton X-100), y se sometieron a ensayo 20 j L de producto lisado celular para determinar la actividad luciferasa utilizando el sistema de ensayo de luciferasa. La luminiscencia se midió utilizando un luminómetro Glomax 20/20. Las actividades luciferasa se normalizaron frente a las actividades de Renilla. El antagonismo contra FXR de GPBAR1/TGR5 se midió como porcentaje de actividad en el ensayo de transactivación que demanda TLCA como ejemplo de agonismo.
Animales y protocolos. Se alojaron ratones con el gen GPBAR1 inactivado (“null”) (GPBAR1-B6 = ratones GPBAR12/2, generados directamente en un fondo C57BL/6NCrl) y compañeros de camada congénicos en C57BL/6NCrl a temperaturas (22 °C) y fotoperiodos (12:12 horas de ciclo de luz/oscuridad) controlados, permitiendo el acceso sin restricciones a comida convencional para ratones y agua del grifo y se aclimataron a estas condiciones durante al menos 5 días antes de su inclusión en un experimento.
Prueba de rascado. Se utilizaron ratones macho GPBAR1'/_ y sus compañeros de camada congénicos (de 8 a 12 semanas de edad) para estos estudios. El pelo en la base del cuello se afeitó y los ratones se colocaron en cilindros individuales en un estante de vidrio. Se dibujó una circunferencia de aprox. 0,5 cm de diámetro en el cuello y se inyectaron agentes de prueba en esta zona. Los ratones se aclimataron a la sala experimental, el aparato de retención y los investigadores durante períodos de 2 horas durante 2 días sucesivos antes de los experimentos. El comportamiento de rascado fue cuantificado por 2 observadores que desconocían los agentes o los genotipos probados. Un rasguño se definió como el levantamiento de la extremidad posterior al sitio de inyección y a continuación la colocación de la pata en el suelo, independientemente del número de golpes. Si los recuentos diferían en más de 5 rasguños durante un período de 30 minutos, ambos observadores reevaluaban los registros. Los resultados se expresaron como el número de eventos de rascado durante 30 o 60 minutos de observación. Los agentes probados fueron: DCA (25 jg), TLCA (25 jg), UDCA (25 jg ) y BAR502 (25 jg), o con ácido betulínico (50 jg), ácido oleanólico (50 jg). LCAy DCAse disolvieron en DMSO y los otros agentes en NaCl al 0,9 % (10 j L). En otro entorno experimental a los ratones GPBAR1'/_ y sus compañeros de camada congénicos se les administró alfa-naftilisotiocianato (ANIT) (25 mg/kg, per os) disuelto en aceite de oliva o aceite de oliva solo (ratones de control) o con la combinación de ANIT más BAR502 (15 mg/kg una vez al día, por os) durante 10 días. El día 5 se evaluó el rascado espontáneo durante 60 minutos y después de la inyección subcutánea de 25 jg de DCA. Los niveles séricos de bilirrubina total, aspartato aminotransferasa (AST) y fosfatasa alcalina se midieron mediante pruebas de química clínica de rutina realizadas en un analizador automático Hitachi 717. Para el modelo de estrógenos, a los ratones C57BL6 de tipo salvaje se les administraron 10 mg/kg i.p. con 17a-Etinilestradiol (17aE2) disuelto en PEG o PEG solo (ratones de control) o la combinación de 17aE2 y BAR502 (15 mg/kg al día, poros) durante 8 días. Al final del estudio, se registraron el rascado espontáneo y el rascado inducido por la inyección s.c. de 25 jg de DCA. También se midieron el peso de la vesícula biliar y los niveles séricos de bilirrubina y fosfatasa alcalina. A lo largo de los estudios, los investigadores fueron evaluados visualmente por lo menos dos veces al día de lunes a viernes y una vez al día durante el fin de semana por investigadores y por personal altamente capacitado de la instalación de animales, incluido el veterinario de la instalación de animales. Los animales se pesaron diariamente y se sacrificaron en los puntos de tiempo indicados o cuando sus condiciones clínicas se volvían críticas según lo evaluado mediante una reducción de peso corporal superior al 25 % del peso basal en 7 días. Además, los animales fueron sacrificados cuando en la evaluación diaria demostraron incapacidad para elevarse o deambular. Los ratones fueron sacrificados por una sobredosis de pentobarbital sódico (> 100 mg/kg i.p.).

Claims (6)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
Figure imgf000024_0001
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es ácido 6a-etil-hiddroxi-5p-colan-24-oico.
3. Un compuesto para su uso como medicamento, seleccionándose dicho compuesto del grupo que consiste en:
Figure imgf000024_0002
4. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde dicho compuesto es ácido 6a-etil-7ahidroxi-5p-colan-24-oico.
5. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, como modulador de FXR y/o TGR5/GPBAR1, en la prevención y/o el tratamiento de trastornos gastrointestinales, enfermedades hepáticas, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, enfermedades metabólicas, enfermedades infecciosas, cáncer, trastornos renales, trastornos inflamatorios y trastornos neurológicos.
6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 y al menos otro ingrediente farmacéutico.
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Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2545964A1 (en) 2011-07-13 2013-01-16 Phenex Pharmaceuticals AG Novel FXR (NR1H4) binding and activity modulating compounds
SI3626725T1 (sl) * 2014-05-29 2023-04-28 Bar Pharmaceuticals S.R.L. Derivati holana za uporabo pri zdravljenju in/ali preprečevanju bolezni, posredovanih s FXR in TGR5/GPBAR1
WO2016045480A1 (zh) * 2014-09-28 2016-03-31 上海源力生物技术有限公司 一种奥贝胆酸的制备方法
MX2017005935A (es) 2014-11-06 2018-01-11 Enanta Pharm Inc Análogos de ácido biliar como agonistas fxr/tgr5 y métodos de uso de los mismos.
CN105669811B (zh) * 2014-11-17 2020-09-04 正大天晴药业集团股份有限公司 新的7-酮-6β-烷基胆烷酸衍生物在制备奥贝胆酸以及其在医药领域的用途
PL3221331T3 (pl) 2014-11-19 2020-03-31 NZP UK Limited Steroidy, 6-alkilo-7-hydroksy-4-en-3-ony jako związki pośrednie do wytwarzania steroidowych modulatorów fxr
KR102546748B1 (ko) 2014-11-19 2023-06-22 엔제트피 유케이 리미티드 스테로이드 FXR 조절인자를 제조하기 위한 중간체로서의 6α-알킬-3,7-다이온 스테로이드
TWI686400B (zh) 2014-11-19 2020-03-01 英商Ｎｚｐ英國有限公司 化合物（二）
EP3221334B1 (en) 2014-11-19 2020-02-19 Nzp Uk Limited 6.alpha.-alkyl-6,7-dione steroids as intermediates for the production of steroidal fxr modulators
US10208081B2 (en) 2014-11-26 2019-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
US11578097B2 (en) 2014-11-26 2023-02-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tetrazole derivatives of bile acids as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
AU2015353473A1 (en) 2014-11-26 2017-06-08 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid analogs as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
CA2975257A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid analogs as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
CN107427527B (zh) 2015-03-31 2021-01-26 英安塔制药有限公司 作为fxr/tgr5激动剂的胆汁酸衍生物及其使用方法
DK3310801T3 (da) 2015-06-19 2021-06-21 Intercept Pharmaceuticals Inc Tgr5-modulatorer og fremgangsmåder til anvendelse deraf
KR20180052756A (ko) 2015-09-24 2018-05-18 인터셉트 파마슈티컬즈, 인크. 담즙산 유도체 제조를 위한 방법 및 중간체
US10323061B2 (en) 2016-02-23 2019-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Heteroaryl containing bile acid analogs as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
US10323060B2 (en) 2016-02-23 2019-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzoic acid derivatives of bile acid as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof
WO2017147159A1 (en) * 2016-02-23 2017-08-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Deuterated bile acid derivatives as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
JP6892457B2 (ja) * 2016-03-11 2021-06-23 インターセプト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ３−デスオキシ誘導体およびその医薬組成物
CN105859817A (zh) * 2016-05-09 2016-08-17 成都宇西医药技术有限公司 一种制备3α-羟基-6-乙烯基-7-酮基-5β-胆烷酸的方法
GB201608777D0 (en) 2016-05-18 2016-06-29 Dextra Lab Ltd Compounds
WO2017207648A1 (en) 2016-05-31 2017-12-07 Bionice, S.L.U Process and intermediates for the preparation of obeticholic acid and derivatives thereof
EP3464316A4 (en) * 2016-06-01 2020-02-19 Dr. Reddy's Laboratories Ltd. PROCESS FOR THE PREPARATION OF OBETICHOLIC ACID
CA2968836A1 (en) 2016-06-13 2017-12-13 Gilead Sciences, Inc. Fxr (nr1h4) modulating compounds
PL3730487T3 (pl) 2016-06-13 2022-08-16 Gilead Sciences, Inc. Pochodne azetydyny jako modulatory fxr (nr1h4)
IT201600068742A1 (it) * 2016-07-01 2018-01-01 Bar Pharmaceuticals Soc A Responsabilita Limitata Derivati dell'acido iodesossicolico e loro uso
WO2018102418A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Process for preparation of sulfonylurea bile acid derivatives
WO2018152171A1 (en) 2017-02-14 2018-08-23 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as fxr agonists and methods of use thereof
CN110461328A (zh) 2017-03-28 2019-11-15 吉利德科学公司 治疗肝疾病的治疗组合
CA3058754A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Process for preparation of sulfonyl carbamate bile acid derivatives
CN109021054B (zh) * 2017-06-09 2021-04-09 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种fxr激动剂
CN109021055B (zh) * 2017-06-09 2021-04-09 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 Fxr激动剂
CN109021056B (zh) * 2017-06-09 2021-03-09 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 法尼酯x受体激动剂
CN110869381B (zh) * 2017-07-26 2021-11-19 正大天晴药业集团股份有限公司 甾体类衍生物fxr激动剂的制备方法
WO2019085963A1 (zh) * 2017-11-02 2019-05-09 正大天晴药业集团股份有限公司 一种胆酸类化合物的制备方法
PL3911647T3 (pl) 2019-01-15 2024-05-20 Gilead Sciences, Inc. Związek izoksazolowy jako agonista fxr oraz zawierające go kompozycje farmaceutyczne
CN118388474A (zh) 2019-02-19 2024-07-26 吉利德科学公司 Fxr激动剂的固体形式
JP2022552655A (ja) 2019-10-07 2022-12-19 キャリーオペ，インク． Ｇｐｒ１１９アゴニスト
CN112824425B (zh) * 2019-11-21 2023-10-03 成都西岭源药业有限公司 一种6-位烯基取代胆酸化合物及其制备方法和应用
IT202000008515A1 (it) * 2020-04-21 2021-10-21 Bar Pharmaceuticals Soc A Responsabilita Limitata Metodo per la sintesi di un derivato del colano
UY39222A (es) 2020-05-19 2021-11-30 Kallyope Inc Activadores de la ampk
EP4172162A4 (en) 2020-06-26 2024-08-07 Kallyope Inc AMPK ACTIVATORS
IT202200011705A1 (it) * 2022-06-01 2023-12-01 Prec Bio Therapeutics S R L Derivati del colesterolo e loro usi
WO2024006537A1 (en) * 2022-07-01 2024-01-04 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Methods for ameliorating cognitive impairment using bile acid derivatives
IT202200018669A1 (it) 2022-09-13 2024-03-13 Bar Pharmaceuticals Soc A Responsabilita Limitata Combinazioni farmaceutiche comprendenti derivati del colano e loro usi
WO2024097247A1 (en) * 2022-10-31 2024-05-10 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Uses of farnesoid x receptor agonists

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1140079B1 (en) * 1998-12-23 2009-06-03 Glaxo Group Limited Assays for ligands for nuclear receptors
CA2440680C (en) * 2001-03-12 2010-06-01 Roberto Pellicciari Steroids as agonists for fxr
EP1568706A1 (en) * 2004-02-26 2005-08-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Novel steroid agonist for FXR
PL1734970T3 (pl) * 2004-03-12 2015-05-29 Intercept Pharmaceuticals Inc Leczenie zwłóknienia z zastosowaniem ligandów FXR
ITMI20050912A1 (it) 2005-05-19 2006-11-20 Erregierre Spa Processo di preparazione di acidi 3-a-ya(b)-diidrossi-6-a(b)-alchil-5b-colanici
WO2008002573A2 (en) * 2006-06-27 2008-01-03 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as fxr ligands for the prevention or treatment of fxr-mediated deseases or conditions
US8940719B2 (en) * 2006-07-03 2015-01-27 Academia Sinica Lithocholic acid analogues that inhibit sialyltransferase
FR2908310B1 (fr) * 2006-11-14 2009-07-10 Phytodia Produits agonistes de tgr5 et leurs applications
CN101679476B (zh) * 2007-01-19 2014-05-07 英特塞普特医药品公司 23取代的胆汁酸作为tgr5调节剂及其使用方法
EP1947108A1 (en) * 2007-01-19 2008-07-23 Intercept Pharmaceuticals, Inc. TGR5 modulators and methods of use thereof
EA020310B1 (ru) * 2008-07-30 2014-10-30 Интерсепт Фармасьютикалз, Инк. Модуляторы рецептора tgr5 и их применение
PL2376519T3 (pl) * 2008-11-19 2014-04-30 Intercept Pharmaceuticals Inc Modulatory TGR5 i sposoby ich zastosowania
EP3150620B1 (en) * 2008-11-19 2020-01-08 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Tgr5 modulators and methods of use thereof
WO2011150286A2 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Satiogen Pharmaceuticals,Inc. Bile acid recycling inhibitors and satiogens for treatment of diabetes, obesity, and inflammatory gastrointestinal conditions
WO2012047495A2 (en) * 2010-09-27 2012-04-12 Kythera Biopharmaceuticals, Inc. Methods for preparing synthetic bile acids and compositions comprising the same
CA2842707A1 (en) 2011-08-04 2013-02-07 Lumena Pharmaceuticals, Inc. Bile acid recycling inhibitors for treatment of pancreatitis
AU2013277429B2 (en) 2012-06-19 2016-01-14 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Preparation, uses and solid forms of obeticholic acid
BR112015009395A2 (pt) * 2012-10-26 2017-07-04 Intercept Pharmaceuticals Inc processo para preparação de derivados do ácido biliar
US20140206657A1 (en) * 2013-01-18 2014-07-24 City Of Hope Bile acid analog tgr5 agonists
CN103143021A (zh) * 2013-03-21 2013-06-12 中国药科大学 PPARα-UGT通路抑制剂在治疗炎性肠疾病中的应用
BR112015028399B1 (pt) * 2013-05-14 2021-11-16 Intercept Pharmaceuticals, Inc Derivados 11-hidroxila de ácidos biliares e conjugados de aminoácido dos mesmos como moduladores de receptor farnesoide x, composição farmacêutica e uso dos referidos derivados
AU2014296023B2 (en) * 2013-08-01 2020-02-06 The Penn State Research Foundation Inhibitors of the farnesoid X receptor and uses in medicine
WO2015183794A1 (en) * 2014-05-27 2015-12-03 City Of Hope Tgr5 agonist complexes for treating diabetes and cancer
SI3626725T1 (sl) 2014-05-29 2023-04-28 Bar Pharmaceuticals S.R.L. Derivati holana za uporabo pri zdravljenju in/ali preprečevanju bolezni, posredovanih s FXR in TGR5/GPBAR1
US20170233431A1 (en) * 2016-02-17 2017-08-17 City Of Hope Bile acid derivatives and methods for synthesis and use

Also Published As

Publication number Publication date
CN106661079B (zh) 2019-03-01
LT3149019T (lt) 2020-02-25
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DK3149019T3 (da) 2020-02-17
JP2017516856A (ja) 2017-06-22
PH12016502327A1 (en) 2017-02-06
MX2020004024A (es) 2021-12-10
LT3626725T (lt) 2023-03-10
RS64050B1 (sr) 2023-04-28
EP3626725A1 (en) 2020-03-25
PT3149019T (pt) 2020-02-19
DK3626725T3 (da) 2023-02-27
HRP20230170T1 (hr) 2023-03-31
CN110003301A (zh) 2019-07-12
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