ES2936864T3 - Derivado de pirimidinosulfamida y método de preparación y aplicación médica del mismo - Google Patents

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Maoyi Lei
Junmiao Li
Yu Xu
Ran Wei
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Abstract

Se describen una serie de compuestos de pirimidina sulfamida y aplicaciones de los mismos en la preparación de un fármaco para una enfermedad relacionada con un antagonista del receptor ETA. En particular, se describe un compuesto derivado representado por la fórmula (I) o un tautómero o una composición farmacéuticamente aceptable del mismo. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivado de pirimidinosulfamida y método de preparación y aplicación médica del mismo
Referencia a la solicitud relacionada
La presente solicitud reivindica la siguiente prioridad:
Documento CN201711168111.3, fecha de presentación 21 de noviembre de 2017.
Campo de la invención
La presente divulgación se relaciona con una clase de compuestos derivados de pirimidinosulfamida y su uso en la fabricación de un medicamento para una enfermedad relacionada con el antagonista de receptores ETa. Específicamente, se divulga un compuesto derivado de fórmula (I), uno de sus tautómeros o una de sus composiciones farmacéuticamente aceptables.
Técnica anterior
La endotelina (ET) es una familia de péptidos isómeros que contienen 21 aminoácidos, todos los cuales tienen un extremo C hidrófobo que consiste en 6 residuos de aminoácido idénticos y 2 enlaces disulfuro intracatenarios. Hay tres isoformas de endotelina codificadas por diferentes genes en el cuerpo humano, a saber, ET-1, ET-2 y ET-3. Entre ellas, ET-1 tiene la actividad vasoconstrictora más fuerte, siendo las venas de 3 a 10 veces más altas que las arterias, que es la principal isoforma que causa la enfermedad. ET-1 es el tipo más abundante de la familia de las endotelinas y también tiene la función más importante. Se expresa principalmente en el endotelio vascular y también se distribuye en tejidos no vasculares como el corazón, riñón, pulmón, glándula suprarrenal y otros órganos.
La ET no solo funciona como un factor vascular que modula la presión arterial, sino también como una hormona que induce muchas progresiones (como la proliferación, la apoptosis y la migración) celulares que conducen a la hipertrofia, remodelación, fibrosis e inflamación de los tejidos. Los niveles de ET-1 en plasma y tejido aumentarán en diversas enfermedades tales como hipertensión arterial pulmonar, hipertensión, septicemia, aterosclerosis, infarto agudo de miocardio, insuficiencia cardiaca congestiva, migraña, asma y similares. Por lo tanto, los antagonistas de los receptores de endotelina se investigan ampliamente como agentes terapéuticos con mucho potencial.
Los receptores de endotelina pertenecen a los receptores acoplados a proteína G, que principalmente tienen tres tipos: ETa, ETb y ETc . Tienen diferentes distribuciones en diferentes tejidos y órganos, tienen diferentes afinidades por los tres subtipos de endotelina y tienen una gran diferencia en los efectos fisiológicos. Los receptores ETA de endotelina se distribuyen principalmente en las células del músculo liso y se unen selectivamente a ET-1 y median en la contracción del músculo liso vascular. Los receptores ETb de endotelina se dividen en dos subtipos, a saber, ETb1 y ETb2, donde el primero se distribuye en las células endoteliales y media en la liberación del factor relajante derivado del endotelio (EDRF), la prostaciclina (PGI2) y el óxido nítrico (NO), provocando así vasodilatación, mientras que el segundo se localiza en el músculo liso vascular, el efecto es el mismo que el del receptor ETa para mediar directamente en la contracción de vasos sanguíneos venosos y la afinidad del receptor ETb de endotelina para ET-1, ET-2 y ET-3 es similar. El receptor ETc es un receptor selectivo de ET-3, distribuido principalmente en las células neuronales, y funciona como un neurotransmisor. ET-1 actúa principalmente a través de los receptores ETa y ETb. El antagonista del receptor de la endotelina se puede dividir en el antagonista de receptores ETa, el antagonista de receptores ETb y el antagonista doble de ETa/ETb, de los cuales se han demostrado los efectos preclínicos y/o clínicos en una variedad de enfermedades tales como hemorragia subaracnoidea, insuficiencia cardíaca, hipertensión arterial pulmonar, hipertensión primaria, hipertensión refractaria, inflamación neurogénica, nefropatía diabética, glomeruloesclerosis focal y segmentaria, insuficiencia renal, inflamación neurogénica, vasoespasmo cerebral después de insuficiencia renal e infarto de miocardio y similares. Los antagonistas de receptores ETA altamente selectivos inhiben el fuerte efecto vasoconstrictor de la ET-1, al tiempo que evitan alguna respuesta adversa de los antagonistas dobles de receptores ETa/ETb no selectivos, lo que reduce los efectos secundarios clínicos.
La patente WO02/053557 divulga un compuesto, macitentán, que puede usarse para tratar enfermedades asociadas con la acción de la endotelina.
Figure imgf000002_0001
Contenido de la presente invención
La presente divulgación proporciona un compuesto de fórmula (I), uno de sus isómeros geométricos o estereoisómeros o una de sus sales farmacéuticamente aceptables,
Figure imgf000003_0001
donde
R1 se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH y NH2 ;
R2 se selecciona de H y alquilo C1-3, donde el alquilo C1-3 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R;
R3 se selecciona de H, alquilo C1-6, heteroalquilo C1-6, -alquil(C1-3)-cicloalquilo(C3-6), cicloalquilo C3-6 y -alquil(C1-3)-heterocicloalquilo(de 3-7 miembros), donde el alquilo C1-6, heteroalquilo C1-6, -alquil(C1-3)-cicloalquilo(C3-6), cicloalquilo C3-6 o -alquil(C1-3)-heterocicloalquilo(de 3-7 miembros) está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R;
o R2 y R3 están conectados para formar un anillo de 3-8 miembros opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R; el anillo B se selecciona de heterocicloalquilo de 3-7 miembros y heteroarilo de 5-6 miembros, el heterocicloalquilo de 3-7 miembros o el heteroarilo de 5-6 miembros está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R;
R se selecciona independientemente de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2 , CN, alquilo C1-6 y heteroalquilo C1-6, donde el alquilo C1-6 o heteroalquilo C1-6 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R';
R' se selecciona independientemente de F, Cl, Br, I, OH, NH2 , CN, Me, CH2F, CHF2 , CF3 y Et;
cada uno del heteroalquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-7 miembros y heteroarilo de 5-6 miembros contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos o grupos de heteroátomos seleccionados independientemente de N, -O-, -S-, -NH-, -S(=O)2- y -S(=O)-.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, R se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2 , CN, alquilo C1-3, alquil(C1-3)-S(=O)2- y alquil(C1-3)-O-, donde el alquilo C1-3, alquil(C1-3)-S(=O)2- o alquil(C1-3)-O- está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R', y otras variables son como se definen en la presente divulgación.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, R se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, Et,
OII o w
,.S1>
y , , o o está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R', y otras variables son como se definen en la presente divulgación.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, R se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, CH2F, CHF2,
O
' 1
C F 3 , Et, y O y otras variables son como se definen en la presente divulgación. En algunas realizaciones de la presente divulgación, R2 se selecciona de H y Me, y otras variables son como se definen en la presente divulgación.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, R3 se selecciona de H, alquilo C1-4, alquil(C1-4)-O-alquilo(C1-4), ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclopropilo, -alquil(C1-3)-tetrahidrofuranilo y -alquil(C1-3)-tetrahidropiranilo, donde el alquilo C1-4, alquil(C1-4)-O-alquilo(C1-4), ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclopropilo, -alquil(C1-3)-tetrahidrofuranilo o -alquil(C1-3)-tetrahidropiranilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R, y otras variables son como se definen en la presente divulgación.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, R3 se selecciona de H, Me, Et,
Figure imgf000003_0002
Figure imgf000004_0001
opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R, y otras variables son como se definen en la presente divulgación. En al unas realizaciones de la presente divul ación, R3 se selecciona de H, Me, Et,
Figure imgf000004_0002
Figure imgf000004_0003
y otras variables son como se definen en la presente
divulgación.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, R2 y R3 están conectados para formar un heterocicloalquilo de 6­ 8 miembros opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R.
R 2 v n . R 3
En al unas realizaciones de la presente divul ación, la unidad estructural se selecciona de
Figure imgf000004_0004
está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R, y
otras variables son como se definen en la presente divulgación.
FVN' R3
En al unas realizaciones de la presente divulgación, la unidad estructural se selecciona de
Figure imgf000004_0005
y otras variables son como se definen en la presente divulgación.
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el anillo B se selecciona de tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, 1,3-dioxolanilo, pirrolidinilo, tiazolilo, pirazolilo e imidazolilo, donde el tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, 1,3-dioxolanilo, pirrolidinilo, tiazolilo, pirazolilo o imidazolilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R, y otras variables son como se definen en la presente divulgación.
Figure imgf000004_0006
En al unas realizaciones de la presente divulgación, la unidad estructural \ se selecciona de
Figure imgf000004_0007
otras variables son como se definen en la presente divulgación.
Se pueden obtener otras realizaciones de la presente divulgación mediante la combinación arbitraria de variables. En algunas realizaciones de la presente divulgación, el compuesto, su geometría o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable se selecciona de
Figure imgf000005_0001
donde, R, Ri o R2 es como se define en la presente divulgación.
La presente divulgación también proporciona un compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable, que se selecciona de
Figure imgf000005_0002
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable se selecciona de
Figure imgf000007_0002
La divulgación también proporciona una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o su sal farmacéuticamente aceptable como ingrediente activo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente divulgación también proporciona un uso del compuesto o sus sales farmacéuticamente aceptables o las composiciones en la fabricación de un medicamento relacionado con antagonistas de receptores ETa .
En algunas realizaciones de la presente divulgación, el medicamento relacionado con el antagonista de receptores ETa es un medicamento para indicaciones tales como hipertensión arterial pulmonar, hipertensión primaria, hipertensión refractaria, nefropatía diabética y vasoespasmo intracraneal.
Definición y descripción
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos, cuando se usan en las descripciones y las reivindicaciones de la presente divulgación, tienen los siguientes significados. Un término o expresión específicos no deben considerarse indefinidos o poco claros en ausencia de una definición particular, sino que debe entenderse en el sentido ordinario. Cuando aparece un nombre comercial en este documento, se pretende hacer referencia a su correspondiente producto o ingrediente activo del mismo. El término "farmacéuticamente aceptable" se usa en este documento en relación con aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son adecuados para usar en contacto con tejidos humanos y animales dentro del alcance del juicio médico confiable, sin toxicidad, irritación, reacción alérgica u otros problemas o complicaciones excesivos, de acuerdo con una relación riesgo/beneficio razonable.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal del compuesto de la presente divulgación que se prepara haciendo reaccionar el compuesto que tiene un sustituyente específico de la presente divulgación con un ácido o base relativamente atóxicos. Cuando el compuesto de la presente divulgación contiene un grupo funcional relativamente ácido, se puede obtener una sal por adición de base poniendo en contacto la forma neutra del compuesto con una cantidad suficiente de base en una solución pura o un disolvente inerte adecuado. La sal por adición de base farmacéuticamente aceptable incluye una sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amina orgánica o magnesio o sales similares. Cuando el compuesto de la presente divulgación contiene un grupo funcional relativamente básico, se puede obtener una sal por adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra del compuesto con una cantidad suficiente de ácido en una solución pura o un disolvente inerte adecuado. Ejemplos de la sal por adición de ácido farmacéuticamente aceptable incluyen una sal de ácido inorgánico, en la que el ácido inorgánico incluye, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido nítrico, ácido carbónico, bicarbonato, ácido fosfórico, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, ácido sulfúrico, hidrogenosulfato, ácido yodhídrico, ácido fosforoso y similares; y una sal de ácido orgánico, en la que el ácido orgánico incluye, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido isobutírico, ácido maleico, ácido malónico, ácido benzoico, ácido succínico, ácido subérico, ácido fumárico, ácido láctico, ácido mandélico, ácido ftálico, ácido bencenosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido cítrico, ácido tartárico y ácido metanosulfónico, y similares; y una sal de aminoácido (como arginina y similares), y una sal de un ácido orgánico como ácido glucurónico y similares. Ciertos compuestos específicos de la presente divulgación que contienen grupos funcionales tanto básicos como ácidos pueden convertirse en cualquier sal por adición de base o ácido.
La sal farmacéuticamente aceptable de la presente divulgación se puede preparar a partir del compuesto original que contiene un resto ácido o básico mediante un método químico convencional. Generalmente, esta sal se puede preparar haciendo reaccionar la forma de ácido o base libre del compuesto con una cantidad estequiométrica de una base o ácido apropiados en agua o un disolvente orgánico o una de sus mezclas.
El compuesto de la presente divulgación puede tener una forma geométrica o estereoisómera específica. La presente divulgación contempla todos estos compuestos, incluidos el isómero cis y trans, el enantiómero (-) y (+), el enantiómero (R) y (S), el diastereoisómero, el isómero (D), el isómero (L) y la mezcla racémica y otras mezclas, por ejemplo, una mezcla enriquecida en enantiómero o diastereoisómero, todos los cuales están incluidos dentro del alcance de la presente divulgación. El sustituyente, como alquilo, puede tener un átomo de carbono asimétrico adicional. Todos estos isómeros y sus mezclas están incluidos dentro del alcance de la presente divulgación.
A menos que se especifique lo contrario, el término "enantiómero" o "isómero óptico" se refiere a estereoisómeros que son imágenes especulares entre sí.
A menos que se especifique lo contrario, el término "isómero cis-trans" o "isómero geométrico" está provocado por la incapacidad para girar libremente de un enlace doble o un enlace simple de átomos de carbono en el anillo.
A menos que se especifique lo contrario, el término "diastereoisómero" se refiere a estereoisómeros en los que las moléculas tienen dos o más centros quirales y no son imágenes especulares entre sí.
A menos que se especifique lo contrario, "(D)"o "(+)" significa dextrorrotación, "(L)" o "(-)" significa levorrotación, "(DL)" o "(±)" significa racemización.
A menos que se especifique lo contrario, la configuración absoluta de un centro estereogénico está representada por
un enlace sólido en cuña( y un enlace discontinuo en cuña ( X y la configuración relativa de un centro
estereogénico está representada por un enlace sólido lineal K ) V un enlace discontinuo lineal )• Una línea ondulada r " ) ) representa un enlace sólido en cuña ( ' ) o un enlace discontinuo en cuña (
Figure imgf000009_0001
O representa un
enlace sólido lineal ( - O o un enlace discontinuo lineal (*' )•
A menos que se indique lo contrario, los términos "tautómero" o "forma tautómera" se refieren al hecho de que los diferentes isómeros funcionales están en equilibrio dinámico a temperatura ambiente y pueden convertirse rápidamente entre sí. Si los tautómeros son posibles (como en solución), se puede lograr el equilibrio químico de los isómeros. Por ejemplo, los tautómeros protónicos (también conocidos como tautómeros prototrópicos) incluyen interconversiones por transferencia de protones, como la isomerización ceto-enol y la isomerización imina-enamina. El tautómero de valencia incluye la transformación mutua de algunos electrones de enlace. Un ejemplo específico de tautomerización ceto-enol es la interconversión entre dos tautómeros de pentano-2,4-diona y 4-hidroxipent-3-en-2-ona.
A menos que se especifique lo contrario, los términos "enriquecido en un isómero", "enriquecido isómeramente", "enriquecido en un enantiómero" o "enriquecido enantiómeramente" se refieren a que el contenido de uno de los isómeros o enantiómeros es inferior al 100%, y el contenido del isómero o enantiómero es 60% o más, o 70% o más, u 80% o más, o 90% o más, o 95% o más, o 96% o más, o 97% o más, o 98% o más más, o 99% o más, o 99,5% o más, o 99,6% o más, o 99,7% o más, o 99,8% o más, o 99,9% o más.
A menos que se especifique lo contrario, los términos "exceso de isómero" o "exceso de enantiómero" se refieren a la diferencia entre los porcentajes relativos de los dos isómeros o enantiómeros. Por ejemplo, cuando el contenido de uno de los isómeros o enantiómeros es del 90% y el otro es del 10%, entonces el exceso de isómero o enantiómero (valor de ee) es del 80%.
Se puede preparar un isómero (R) y (S) o D y L ópticamente activo usando síntesis quiral o reactivos quirales u otras técnicas convencionales. Si se va a obtener un tipo de enantiómero de cierto compuesto de la presente divulgación, el enantiómero deseado puro se puede obtener mediante síntesis asimétrica o acción derivada del auxiliar quiral seguido de la separación de la mezcla diastereoisómera resultante y la escisión del grupo auxiliar. Alternativamente, cuando la molécula contiene un grupo funcional básico (como amino) o un grupo funcional ácido (como carboxilo). El compuesto reacciona con un ácido o una base ópticamente activos apropiados para formar una sal del isómero diastereoisómero que a continuación se somete a resolución diastereoisómera a través del método convencional en la técnica para dar el enantiómero puro. Además, el enantiómero y el diastereoisómero generalmente se aíslan mediante cromatografía que usa una fase estacionaria quiral y, opcionalmente, se combina con un método derivado químico (como carbamato generado a partir de amina). El compuesto de la presente divulgación puede contener una proporción no natural de isótopo atómico en uno o más de uno de los átomos que constituyen el compuesto. Por ejemplo, el compuesto se puede radiomarcar con un isótopo radiactivo, como tritio (3H), yodo-125 (125I) o C-14 (14C). Para otro ejemplo, el hidrógeno puede ser reemplazado por hidrógeno pesado para formar un fármaco deuterado, y el enlace compuesto por bario y carbono es más fuerte que el enlace compuesto por hidrógeno y carbono comunes. En comparación con los fármacos no deuterados, los fármacos deuterados tienen efectos secundarios reducidos y mayor estabilidad del fármaco, mejoran la eficacia y prolongan la semivida biológica del fármaco. Todas las variaciones isotópicas del compuesto de la presente divulgación, radiactivas o no, están incluidas dentro del alcance de la presente divulgación.
"Opcional" u "opcionalmente" significa que el evento o condición posterior puede producirse pero no es un requisito, que el término incluye el caso en el que el evento o la condición se produce y el caso en el que el evento o la condición no se produce.
El término "sustituido" significa que uno o más átomos de hidrógeno en un átomo específico están sustituidos con el sustituyente, incluidas las variantes deuteradas e hidrogenadas, siempre que la valencia del átomo específico sea normal y el compuesto sustituido sea estable. Cuando el sustituyente es un oxígeno (es decir, =O), significa que se sustituyen dos átomos de hidrógeno. Las posiciones en un anillo aromático no se pueden sustituir con una cetona. El término "opcionalmente sustituido" significa que un átomo puede estar sustituido o no con un sustituyente, a menos que se especifique lo contrario. El tipo y el número del sustituyente pueden ser arbitrarios siempre que se puedan lograr químicamente.
Cuando cualquier variable (como R) aparece en la constitución o estructura del compuesto más de una vez, la definición de la variable en cada aparición es independiente. Así, por ejemplo, si un grupo está sustituido con 0-2 R, el grupo puede estar opcionalmente sustituido con hasta dos R, donde la definición de R en cada aparición es independiente. Por otra parte, solo se permite una combinación del sustituyente y/o su variante cuando la combinación dé como resultado un compuesto estable.
Cuando el número de un grupo de ligazón es 0, como -(CRR)ü-, significa que el grupo de ligazón es un enlace simple.
Cuando una de las variables se selecciona de un enlace simple, significa que los dos grupos ligados por el enlace simple están conectados directamente. Por ejemplo, cuando L en A-L-Z representa un enlace simple, la estructura de A-L-Z es en realidad A-Z.
Cuando un sustituyente está vacante, significa que el sustituyente no existe. Por ejemplo, cuando X está vacante en A-X, la estructura de A-X es en realidad A. Cuando no se indica por qué átomo están unidos los sustituyentes enumerados al grupo sustituido, dicho sustituyente puede estar enlazado a través de cualquiera de sus átomos, por ejemplo, el grupo piridilo como sustituyente puede estar enlazado al grupo sustituido a través de uno cualquiera de los átomos de carbono del anillo de piridina. Cuando el grupo de ligazón enumerado no indica la dirección de ligazón, la
dirección de ligazón es arbitraria, por ejemplo, el grupo de ligazón L contenido
Figure imgf000010_0001
es -MW-,
entonces -MW- puede ligar el anillo A y el anillo B para formar
Figure imgf000010_0002
en la misma dirección que
el orden de lectura de izquierda a derecha, y formar
Figure imgf000010_0003
la dirección contraria al orden de lectura de izquierda a derecha. Las combinaciones de los grupos de ligazón, sus sustituyentes y/o variantes solo se permiten si dichas combinaciones dan como resultado compuestos estables.
A menos que se especifique lo contrario, el término "hetero" representa un heteroátomo o un grupo heteroatómico (por ejemplo, un grupo atómico que contiene un heteroátomo), incluido el átomo excepto el carbono (C) y el hidrógeno (H) y el grupo atómico que contiene el heteroátomo, por ejemplo, incluido oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S), silicio (Si), germanio (Ge), aluminio (Al), boro (B), -O-, -S-, =O, =S, -C(=O)O-, -C(=O)-, -C(=S)-, -S(=O), -S(=O)2-, y el grupo que consiste en -C(=O)N(H)-, -N(H)-, -C(=NH)-, -S(=O)2N(H)- y -S(=O)N(H)-, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido.
A menos que se especifique lo contrario, el término "anillo" se refiere a un cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, heterocicloalquenilo, cicloalquinilo, heterocicloalquinilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido. El llamado anillo incluye un anillo simple, un anillo doble, un anillo en espiral, un anillo condensado o un anillo con puente. El número de átomos en el anillo generalmente se define como el número de miembros del anillo, por ejemplo, un "anillo de 5 a 7 miembros" significa que de 5 a 7 átomos están dispuestos en un anillo. A menos que se especifique lo contrario, el anillo contiene opcionalmente de 1 a 3 heteroátomos. Por lo tanto, un "anillo de 5 a 7 miembros" incluye, por ejemplo, fenilo, piridinilo y piperidinilo; por otra parte, el término "anillo de heterocicloalquilo de 5 a 7 miembros" incluye piridilo y piperidinilo, pero excluye fenilo. El término "anillo" también incluye un sistema de anillos que contiene al menos un anillo, en el que cada anillo cumple independientemente la definición.
A menos que se especifique lo contrario, el término "heterociclo" se refiere a un anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico estable que contiene un heteroátomo o un grupo de heteroátomos, que puede ser saturado, parcialmente insaturado o insaturado (aromático) y puede contener átomos de carbono y uno, dos, tres o cuatro heteroátomos de anillo seleccionados independientemente de N, O y S, donde cualquiera de los heterociclos puede estar condensado a un anillo de benceno para formar un anillo bicíclico. Los heteroátomos nitrógeno y azufre opcionalmente pueden estar oxidados (es decir, NO y S(O)p, p es 1 o 2). El átomo de nitrógeno puede estar sustituido o no sustituido (es decir, N o NR, donde R es H u otros sustituyentes ya definidos en este documento). El heterociclo puede estar enlazado al grupo colgante de cualquier heteroátomo o átomo de carbono para formar una estructura estable. Si el compuesto resultante es estable, el heterociclo descrito en este documento puede tener una sustitución en una posición de carbono o nitrógeno. El átomo de nitrógeno en el heterociclo está opcionalmente cuaternizado. En una realización preferida, cuando el número total de átomos de S y O del heterociclo es superior a 1, los heteroátomos no son adyacentes entre sí. En otra realización preferida. El número total de átomos de S y O del heterociclo no es más de 1. Como se usa en el presente documento, el término "grupo heterocíclico aromático" o "heteroarilo" se refiere a un anillo aromático heterocíclico monocíclico o bicíclico de 5, 6 o 7 miembros o bicíclico de 7, 8, 9 o 10 miembros estable que contiene átomos de carbono y uno, dos, tres o cuatro heteroátomos en el anillo seleccionados independientemente de N, O y S. El átomo de nitrógeno puede estar sustituido o no sustituido (es decir, N o NR, donde R es H u otros sustituyentes ya definidos en este documento). Los heteroátomos nitrógeno y azufre pueden opcionalmente estar oxidados (es decir, NO y S(O)p , p es 1 o 2). Vale la pena señalar que el número total de átomos de S y O de un heterociclo aromático no es más de uno. El anillo con puente también se incluye en la definición del heterociclo. Un anillo con puente se forma cuando uno o más de un átomo (es decir, C, O, N o S) liga dos átomos de carbono o nitrógeno no adyacentes. Un anillo con puente preferido incluye, pero no se limita a, un átomo de carbono. Dos átomos de carbono, un átomo de nitrógeno, dos átomos de nitrógeno y un grupo carbono-nitrógeno. Vale la pena señalar que un puente siempre convierte un anillo monocíclico en un anillo tricíclico. En un anillo con puente, el sustituyente en el anillo también puede estar presente en el puente.
Ejemplos del compuesto heterocíclico incluyen, pero no se limitan a: acridinilo, azocinilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzomercaptofuranilo, benzomercaptofenilo, benzoxazolilo, benzoxazolinilo, benzotiazolilo, benzotriazolilo, benzotetrazolilo, benzoisoxazolilo, benzoisotiazolilo, benzoimidazolinilo, carbazolilo, 4aH-carbazolilo, carbolinilo, cromanilo, cromeno, cinolinilo decahidroquinolinilo, 2H,6H-1,5,2-ditiazinilo, dihidrofuro[2,3-£>]tetrahidrofuranilo, furanilo, furazanilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, imidazolilo, 1 H-indazolilo, indolenilo, indolinilo, indolizinilo, indolilo, 3H-indolilo, isobenzofuranilo, isoindolilo, isoindolinilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, metilendioxifenilo, morfolinilo, naftiridinilo, octahidroisoquinolinilo, oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, oxazolidinilo, oxazolilo, hidroxindolilo, pirimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, fenazina, fenotiazina, benzoxantinilo, fenoloxazinilo, ftalazinilo, piperazinilo, piperidinilo, piperidonilo, 4-piperidonilo, piperonilo, pteridinilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridoxazolilo, piridoimidazolilo, piridotiazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, 4H-quinolizinilo, quinoxalinilo, quinuclidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrazolilo, 6H-1,2,5-tiadiazinilo, 1,2,3-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tiantrenilo, tiazolilo, isotiazoliltienilo, tienoxazolilo , tienotiazolilo, tienoimidazolilo, tienilo, triazinilo, 1H-1,2,3-triazolilo, 2H-1,2,4-triazolilo, 1H-1,2,4-triazolilo, 4H-1,2,4-triazolilo y xantenilo. También se incluyen compuestos de anillos condensados y compuestos tipo espiro.
A menos que se especifique lo contrario, el término "hidrocarbilo" o sus hipónimos (p. ej., alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo, etc.), por sí mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un radical hidrocarbonado lineal, de cadena ramificada o cíclico o cualquiera de sus combinaciones, pueden estar completamente saturados (p. ej., alquilo), mono o poliinsaturados (p. ej., alquenilo, alquinilo y arilo), pueden estar mono, di o polisustituidos, pueden ser monovalentes (p. ej., metilo), divalentes (por ejemplo, metileno) o multivalentes (por ejemplo, metenilo), también pueden incluir un grupo divalente o multivalente, tiener un número específico de átomos de carbono (por ejemplo, C1-C12 indica de 1 a 12 átomos de carbono, C1-12 se selecciona de C1, C2 , C3 , C4 , C5, C6 , C7 , C8 , C9 , C10, C11 y C12; C3-12 se selecciona de C3 , C4 , C5 , C6 , C7 , C8 , C9 , C10, C11 y C12). El término "hidrocarbilo" incluye, pero no se limita a, hidrocarbilo alifático e hidrocarbilo aromático, el hidrocarbilo alifático incluye hidrocarbilo lineal y cíclico, incluye específicamente, pero no se limita a, alquilo, alquenilo y alquinilo. El hidrocarbilo aromático incluye, pero no se limita a, hidrocarbilo aromático de 6-12 miembros como fenilo, naftilo y similares. En algunas realizaciones, el término "hidrocarbilo" se refiere a un grupo lineal o ramificado o una de sus combinaciones que puede estar completamente saturado, mono o poliinsaturado y puede incluir un grupo divalente o multivalente. Ejemplos del grupo hidrocarbilo saturado incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, terc-butilo, isobutilo, sec-butilo, ciclohexilo, (ciclohexil)metilo, ciclopropilmetilo y el homólogo o isómero de n-amilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo y otros grupos atómicos. El hidrocarbilo insaturado tiene uno o más de un doble o triple enlace. Ejemplos del alquilo insaturado incluyen, pero no se limitan a, vinilo, 2-propenilo, butenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3-propinilo, 3-butinilo y más homólogos e isómeros superiores.
A menos que se especifique lo contrario, el término "heterohidrocarbilo" o sus hipónimos (tales como heteroalquilo, heteroalquenilo, heteroalquinilo y heteroarilo, etc.), por sí mismo o como parte de otro sustituyente, se refiere a un grupo hidrocarbonado lineal, ramificado o cíclico estable o cualquiera de sus combinaciones, que tiene un número específico de átomos de carbono y al menos un heteroátomo. En algunas realizaciones, el término "heteroalquilo" por sí mismo o en combinación con otro término se refiere a un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificado estable o una de sus combinaciones que tiene un número específico de átomos de carbono y al menos un heteroátomo. En una realización específica, un heteroátomo se selecciona de B, O, N y S, donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados y el átomo de nitrógeno está opcionalmente cuaternizado. El heteroátomo o grupo de heteroátomos puede ubicarse en cualquier posición interior de un heterohidrocarbilo, incluida la posición en la que el hidrocarbilo se une a la parte restante de la molécula. Pero los términos "alcoxi", "alquilamino" y "alquiltio" (o tioalquilo) se utilizan en el sentido convencional y se refieren a un grupo alquilo conectado a la ICtante de la molécula a través de un átomo de oxígeno, un amino o un átomo de azufre, respectivamente. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, -CH2-CH2-O-CH3 , -CH2-CH2-NH-CH3 , -CH2-CH2-N(CH3)-CH3 , -CH2-S-CH2-CH3 , - CH2-CH2 , -S(O)-CH3 , -CH2-CH2-S(O)2-CH3 , -CH=CH-O-CH3 , -CH2-CH=N-OCH3 y -CH=CH-N(CH3)-CH3. Pueden estar presentes hasta dos heteroátomos consecutivos, como -CH2-NH-OCH3.
A menos que se especifique lo contrario, el término "ciclohidrocarbilo", "heterociclohidrocarbilo" o sus hipónimos (tales como arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo, heterocicloalquenilo, cicloalquinilo, heterocicloalquinilo, etc.) por sí mismos o en combinación con otro término se refiere a "hidrocarbilo” o "heterohidrocarbilo" ciclados. Además, para heterohidrocarbilo o heterociclohidrocarbilo (p. ej., heteroalquilo y heterocicloalquilo), un heteroátomo puede ocupar la posición en la que el heterociclo se une a la posición restante de la molécula. Ejemplos del cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopentilo, ciclohexilo, 1-ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo y similares. Ejemplos no limitativos de heterocicloalquilo incluyen 1 -(1,2,5,6-tetrahidropiridilo), 1 -piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo, 4-morfolinilo, 3-morfolinilo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofurano-3-ilo, tetrahidrotiofen-2-ilo, tetrahidrotiofen-3-ilo, 1 -piperazinilo y 2-piperazinilo.
A menos que se especifique lo contrario, el término "heterocicloalquilo" por sí mismo o en combinación con otros términos indica un "heteroalquilo" ciclado y, además, con respecto al "heterocicloalquilo", el heteroátomo puede ocupar la posición de unión del grupo heterocicloalquilo al resto de la molécula. En algunas realizaciones, el heterocicloalquilo es heterocicloalquilo de 4-6 miembros; en otras realizaciones, el heterocicloalquilo es un heterocicloalcano de 5-6 miembros. Ejemplos de grupos heterocicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, pirrolidinilo, pirazolidinilo, imidazolidinilo, tetrahidrotienilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, dioxanilo, ditianilo, isoxazolidinilo, isotiazolidinilo, 1,2-oxazinilo, 1,2-tiazinilo, hexahidropiridazinilo, homopiperazinilo, homopiperidinilo u oxepanilo.
A menos que se especifique lo contrario, el término "alquilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado saturado de cadena lineal o ramificado, que puede estar monosustituido (p. ej., -CH2 F) o polisustituido (p. ej., -CF3), puede ser monovalente (por ejemplo, metilo), divalente (por ejemplo, metileno) o multivalente (por ejemplo, metenilo). Ejemplos de alquilo incluyen metilo (Me), etilo (Et), propilo (como n-propilo e isopropilo), butilo (como n-butilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo), pentilo (como n-pentilo, isopentilo, neopentilo) y similares.
A menos que se especifique lo contrario, cicloalquilo incluye cualquier hidrocarbilo cíclico o policíclico estable, y cualquier átomo de carbono está saturado, puede estar monosustituido o polisustituido y puede ser monovalente, divalente o multivalente. Ejemplos de cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, norbornanilo, [2.2.2]biciclooctano, [4.4.0]biciclodecanilo y similares.
A menos que se especifique lo contrario, el término "halo" o "halógeno" por sí mismo o como parte de otro sustituyente se refiere a un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Por otra parte, el término "haloalquilo" pretende incluir monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "halo-alquilo(C1-C4)" incluye, pero no se limita a, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo y similares. Ejemplos de haloalquilo incluyen, pero no se limitan a, trifluorometilo, triclorometilo, pentafluoroetilo y pentacloroetilo. .
El término "alcoxi" representa cualquier alquilo definido anteriormente que tiene un número específico de átomos de carbono unidos por un puente de oxígeno. A menos que se especifique lo contrario, alcoxi C1-6 incluye alcoxi C1, C2 , C3 , C4 , C5 y C6. Ejemplos de alcoxi incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, n-butoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, n-pentiloxi y s-pentoxi.
A menos que se especifique lo contrario, el término "arilo" se refiere a un sustituyente aromático poliinsaturado, puede estar mono-, di- o polisustituido, puede ser monovalente, divalente o multivalente, puede ser un solo anillo o un anillo múltiple (por ejemplo, de uno a tres anillos, en los que al menos un anillo es aromático), que están condensados entre sí o conectados covalentemente. El término "heteroarilo" se refiere a un arilo (o anillo) que contiene de uno a cuatro heteroátomos. En un ejemplo ilustrativo, el heteroátomo se selecciona de B, O, N y S, donde los átomos de nitrógeno y azufre están opcionalmente oxidados y el átomo de nitrógeno está opcionalmente cuaternizado. Un heteroarilo puede unirse a la parte restante de una molécula a través de un heteroátomo. Ejemplos no limitativos de arilo o heteroarilo incluyen fenilo, naftilo, bifenilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, pirazinilo, oxazolilo, feniloxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, furanilo, tienilo, piridilo, pirimidinilo, benzotiazolilo, purinilo, bencimidazolilo, indolilo, isoquinolilo, quinoxalinilo, quinolilo, 1 -naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1 -pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-fenil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-bencimidazolilo, 5-indolilo, 1 -isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo y 6-quinolilo. El sustituyente de cualquiera de los sistemas de anillo arílico y heteroarílico se selecciona del sustituyente aceptable descrito a continuación.
A menos que se especifique lo contrario, cuando el arilo se combina con otros términos (como ariloxi, ariltio, arilalquilo), el arilo incluye el anillo arílico y heteroarílico como se definió anteriormente. Así, el término "aralquilo" pretende incluir el grupo (p. ej., bencilo, fenetilo, piridilmetilo, etc.) en el que un arilo está unido a un alquilo, incluido un alquilo en el que el átomo de carbono (p. ej., metileno) ha sido reemplazado por un átomo tal como oxígeno, por ejemplo, fenoximetilo, 2-piridiloxi, 3-(1-naftiloxi)propilo y similares.
El término "grupo saliente" se refiere a un grupo funcional o átomo que puede ser reemplazado por otro grupo funcional o átomo a través de una reacción de sustitución (tal como una reacción de sustitución por afinidad). Por ejemplo, grupos salientes representativos incluyen triflato; cloro, bromo y yodo; grupo sulfonato, como mesilato, tosilato, p-bromobencenosulfonato, p-toluenosulfonatos y similares; aciloxi, tal como acetoxi, trifluoroacetoxi y similares.
El término "grupo protector" incluye, pero no se limita a, "grupo protector de amino", "grupo protector de hidroxi" o "grupo protector de tio". El término "grupo protector de amino" se refiere a un grupo protector adecuado para bloquear la reacción secundaria en el nitrógeno de un amino. Grupos protectores de amino representativos incluyen, pero no se limitan a: formilo; acilo, tal como alcanoílo (por ejemplo, acetilo, tricloroacetilo o trifluoroacetilo); alcoxicarbonilo, como terc-butoxicarbonilo (Boc); arilmetoxicarbonilo como benciloxicarbonilo (Cbz) y 9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc); arilmetilo como bencilo (Bn), tritilo (Tr), 1,1-bis-(4'-metoxifenil)metilo; sililo como trimetilsililo (TMS) y terc-butildimetilsililo (TBS) y similares. El término "grupo protector de hidroxi" se refiere a un grupo protector adecuado para bloquear la reacción secundaria en un hidroxi. Grupos protectores de hidroxi representativos incluyen, pero no se limitan a: alquilo como metilo, etilo y terc-butilo; acilo como alcanoílo (p. ej., acetilo); arilmetilo como bencilo (Bn), p-metoxibencilo (PMB), 9-fluorenilmetilo (Fm) y difenilmetilo (benzhidrilo, DPM); sililo como trimetilsililo (TMS) y terc-butildimetilsililo (TBS) y similares.
El compuesto de la presente divulgación se puede preparar mediante una variedad de métodos sintéticos bien conocidos por los expertos en la técnica, incluida la siguiente realización enumerativa, la realización formada por la siguiente realización enumerativa en combinación con otros métodos de síntesis química y el reemplazo equivalente bien conocido por los expertos en la técnica. La realización preferida incluye, pero no se limita a, la realización de la presente divulgación.
Los compuestos de la presente divulgación pueden tener diversos usos o indicaciones, incluidos, pero no limitados a, los usos o indicaciones específicos enumerados en la presente solicitud.
El disolvente utilizado en la presente divulgación está disponible comercialmente. La presente divulgación emplea las siguientes abreviaturas: ac significa agua; HATU significa 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-W,W,W',W-hexafluorofosfato de tetrametiluronio; EDC significa hicrocloruro de W-(3-dimetilaminopropil)-W-etilcarbodiimida; m-CPBA significa ácido 3-cloroperoxibenzoico; eq significa equivalente; CDI significa carbonildiimidazol; DCM significa diclorometano; PE significa éter de petróleo; DIAD significa azodicarboxilato de diisopropilo; DMF significa W,W-dimetilformamida; DMSO significa dimetilsulfóxido; EtOAc significa ésteres de ácido acético; EtOH significa etanol; MeOH significa metanol; CBz significa benciloxicarbonilo, que es un grupo protector de amina; BOC significa terc-butoxicarbonilo, que es un grupo protector de amina; HOAc significa ácido acético; NaCNBH3 significa cianoborohidruro de sodio; Ta representa la temperatura ambiente; O/N significa durante la noche; THF significa tetrahidrofurano; Boc2O representa dicarbonato de di-terc-butilo; TFA significa ácido trifluoroacético; DIPEA significa diisopropiletilamina; SOCl2 significa cloruro de tionilo; CS2 significa disulfuro de carbono; TsOH significa ácido p-toluenosulfónico; NFSI significa W-fluoro-W-(fenilsulfonil)bencenosulfonamida; NCS significa 1-cloropirrolidina-2,5-diona; n-Bu4NF significa tetrabutilamonio; iPrOH representa 2-propanol; pf significa punto de fusión; LDA significa diisopropilaminolitio; DEA significa dietilamina; ACN significa acetonitrilo.
Los compuestos se nombran manualmente o mediante el programa ChemDraw® , los compuestos disponibles comercialmente utilizan sus nombres del directorio de proveedores.
Efectos técnicos: todos los compuestos de la presente divulgación exhiben una actividad antagonista muy alta contra receptores ETa humanos in vitro, y la selectividad para ETa/ETb es más de 10000 veces; los compuestos de la divulgación son superiores al compuesto de control macitentán en experimentos de caracterización de la inducción mediada por PXR de la expresión de CYP3A. Al caracterizar los experimentos del efecto inhibidor sobre 5 isoenzimas principales del citocromo P450 microsómico hepático humano, los compuestos de la presente divulgación son superiores al macitentán; el efecto inhibidor de los compuestos de la presente divulgación sobre las bombas de exportación de sales biliares es mucho más débil que el macitentán, lo que reduce significativamente el riesgo de desarrollar hepatotoxicidad. Los compuestos de la presente divulgación tienen buenas propiedades farmacocinéticas tanto en ratas SD como en perros beagle.
Descripción detallada de la realización preferida
Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente la presente divulgación, pero la presente divulgación no se limita a ellos. La presente divulgación se ha descrito en detalle en el texto, y también se han divulgado sus realizaciones específicas, para un experto en la técnica, es obvio modificar y mejorar las realizaciones de la presente divulgación dentro del alcance de la presente divulgación.
Realización de referencia 1: fragmento BB-1
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Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-1-2
A temperatura ambiente, se disolvió el compuesto BB-1-1 (30,00 g, 211,97 mmol, 18,40 ml) en diclorometano (200 ml), a continuación la mezcla se enfrió hasta 0°C, se añadió lentamente gota a gota (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 1 hora) una solución de terc-butanol (15,71 g, 211,97 mmol, 20,40 ml) en diclorometano (100 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. El compuesto BB-1-2 buscado (producto bruto) se retuvo en el disolvente de reacción diclorometano y se utilizó directamente en la siguiente reacción.
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-1-3
A temperatura ambiente, se disolvieron el compuesto 2,2,2-trifluoroetilamina (8,00 g, 80,77 mmol, 6,35 ml) y trietilamina (24,52 g, 242,30 mmol, 33,59 ml) en diclorometano (100,00 ml), a continuación la mezcla se enfrió hasta 0°C, y se añadió gota a gota lentamente (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 1 hora) una solución del compuesto BB-1-2 (80,77 mmol, producto bruto) en diclorometano, y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 14 horas. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, se añadió agua (150 ml) al residuo, se extrajo con diclorometano (100 ml) y se descartó la fase orgánica. La fase acuosa se ajustó hasta un pH de 5-6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-1-3 buscado (sólido blanco, 15,00 g, producto bruto). RMN 1H (400 MHz, DMSO_afe) 5: 3,55 (q, j=9,8 Hz, 2H), 1,37 (s, 9H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-1-4
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-1-3 (15,00 g, 53,91 mmol) a agua (150,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-1-4 buscado (sólido amarillo, 7,50 g, producto bruto). RMN 1H (400 MHz, DMSO_afe) 5: 7,51 (t, j=7,0 Hz, 1H), 6,83 (s, 2H), 3,69-3,54 (m, 2H). RMN 19F (400 MHz, DMSO_de) 5: -70,81 (s, 3F).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-1-5
A temperatura ambiente, se disolviero el compuesto BB-1-4 (1,56 g, 8,78 mmol) y terc-butóxido de potasio (1,97 g, 17,55 mmol) en dimetilsulfóxido (80,00 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. A continuación, se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (2,00 g, 8,78 mmol) a la mezcla de reacción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 10 horas. Una vez completada la reacción, se añadió agua (100 ml), el pH se ajustó hasta 5-6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (50 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-4/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-1-5 buscado (sólido amarillo, 1,90 g, rendimiento: 58,56%). RMN 1H (400 MHz, DMSO_afe) 5: 8,60 (s, 1H), 7,51 (t, j=7,0 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 3,84 (q, j=9,6 Hz, 2H).
Etapa 5: Síntesis del compuesto BB-1
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,73 g, 15,42 mmol) a etilenglicol (52,68 g, 848,46 mmol, 47,46 ml) y éter dimetílico de etilenglicol (10 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C en atmósfera de nitrógeno y se agitó durante 0,5 horas, se añadió una solución de compuesto BB-1-5 (1,90 g, 5,14 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (20 ml) a la solución y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml), el pH se ajustó hasta 5-6 con ácido clorhídrico diluido 2 M, a continuación la mezcla se extrajo con acetato de etilo (60 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 8/1 -3/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-1 buscado (sólido amarillo, 1,55 g, rendimiento: 76,31%). MS-ESI m/z: 394,7 [M+H]+, 396,7 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCL) 5: 8,33 (s, 1H), 6,04 (s, 1H), 4,53 (t, j=4,4 Hz, 2H), 3,93 (t, j=4,4 Hz, 2H), 3,67 (q, j=8,6 Hz, 2H). RMN 19F (400 MHz, CDCh) 5: -71,87 (s, 3F).
Realización de referencia 2: fragmento BB-2
Figure imgf000014_0001
Ruta sintética:
Figure imgf000015_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-2-1
A temperatura ambiente, se añadieron hidrocloruro de etilamina (5,00 g, 61,32 mmol) y trietilamina (18,61 g, 183,96 mmol, 25,49 ml) a diclorometano (100,00 ml), a continuación la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y se añadió gota a gota lentamente (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 1 hora) una solución del compuesto BB-1-2 (61,32 mmol, producto bruto) en diclorometano y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida. Se añadió agua (150 ml) al residuo, se extrajo con diclorometano (100 ml) y se descartó la fase orgánica. La fase acuosa se ajustó hasta un pH de 5-6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y a continuación se eliminó el disolvente a presión reducida para obtener el compuesto BB-2-1 buscado (sólido blanco, 6,00 g, producto bruto). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 5,07 (t, j=5,6 Hz, 1H), 3,13-3,01 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,16 (t, j=7,3 Hz, 3H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-2-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-2-1 (7,02 g, 31,30 mmol) a agua (200,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-2-2 buscado (aceite amarillo, 2,87 g, producto bruto). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 4,80 (s, 2H), 4,57 (s, 1H), 3,23-3,14 (m, 2H), 1,24 (t, j=7,3 Hz, 3H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-2-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-2-2 (2,87 g, 23,12 mmol) y terc-butóxido de potasio (5,19 g, 46,24 mmol) a dimetilsulfóxido (80,00 ml), a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (5,27 g, 23,12 mmol) a la mezcla de reacción y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (150 ml), el pH se ajustó hasta 5-6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la solución se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (50 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-4/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-2-3 buscado (sólido amarillo, 2,40 g, rendimiento: 32,89%). RMN 1H (400 MHz, DMSO_afe) 5: 8,59 (s, 1H), 2,96 (q, j=7,1 Hz, 2H), 1,02 (t, j=7,0 Hz, 3H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-2
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,50 g, 13,41 mmol) a una solución mixta de etilenglicol (33,30 g, 536,49 mmol, 30,00 ml) y éter dimetílico de etilenglicol (10 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-2-3 (1,41 g, 4,47 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (20 ml) a la solución en una porción, y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 16 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml), el pH se ajustó hasta 5-6 con ácido clorhídrico diluido 2 M y a continuación la mezcla se extrajo con acetato de etilo (60 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 8/1-3/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-2 buscado (sólido amarillo, 1,36 g, rendimiento: 87,21%). MS-ESI m/z: 340,7 [M+H]+, 342,7 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,38 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 5,54 (t, j=5,9 Hz, 1H), 4,60 (t, j=4,8 Hz, 2H), 4,00 (t, j=4,0 Hz, 2H), 3,19-3,03 (m, 2H), 2,45 (s ancho, 1H), 1,21 (t, j=7,2 Hz, 3H).
Realización de referencia 3: fragmento BB-3
Figure imgf000016_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-3-1
A temperatura ambiente, se disolvieron n-propilamina (7,61 g, 128,70 mmol, 10,57 ml) y trietilamina (14,21 g, 140,40 mmol, 19,47 ml) en diclorometano (100,00 ml), a continuación la mezcla se enfrió hasta 0°C, a continuación se añadió lentamente una solución del compuesto BB-1-2 (117,00 mmol, producto bruto) en diclorometano a la solución de reacción (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (200 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (200 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-3-1 buscado (sólido blanco, 21,00 g, rendimiento: 75,32%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 2,93 (t, j=7,0 Hz, 2H), 1,58-1,48 (m, 2H), 1,46-1,37 (s, 9H), 0,88 (t, j=7,4 Hz, 3H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-3-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-3-1 (20,00 g, 83,93 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 1 hora en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-3-2 buscado (aceite incoloro, 10,00 g, rendimiento: 86,22%). RMN 1H (400 MHz, DMSO_afe) 5: 6,44 (s, 2H), 2,88-2,78 (m, 2H), 1,52-1,43 (m, 2H), 0,87 (t, j=7,5 Hz, 3H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-3-3
A temperatura ambiente, se disolvió el compuesto BB-3-2 (18,19 g, 131,66 mmol) en dimetilsulfóxido (300,00 ml), a continuación se añadió terc-butóxido de potasio (19,70 g, 175,54 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. A continuación, se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (20,00 g, 87,77 mmol) a la solución de reacción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 48 horas. Una vez completada la reacción, se añadió salmuera saturada (1000 ml), el pH se ajustó hasta 4-5 con ácido clorhídrico diluido al 10% y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (500 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-3-3 buscado (sólido blanco, 15,00 g, rendimiento: 51,85%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,58 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 5,52-5,54 (m, 1 H), 3,07 (q, j=6,8 Hz, 2H), 1,59-1,64 (m, 2H), 0,96 (t, j=7,2 Hz, 3H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-3
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (10,21 g, 91,02 mmol) a etilenglicol (56,50 g, 910,19 mmol) y la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno. A continuación, se añadió una solución del compuesto BB-3-3 (15,00 g, 45,51 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (50,00 ml) a la solución y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 48 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (200 ml), el pH se ajustó hasta 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron, el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo) = 10/1-1/1, relación de volumen) para obtener el compuesto BB-3 buscado (sólido amarillo, 7,10 g, rendimiento: 40,13%). MS-ESI m/z: 354,8 [M+H]+, 356,8 [M+H+2]+ . RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5: 8,39 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 5,59-5,62 (m, 1H), 4,83-4,75 (m, 2H), 4,02-4,00 (m, 2H), 3,04 (q, j=6,8 Hz, 2H), 2,05 (s ancho, 1 H) 1,63-1,57 (m, 2H), 0,95 (t, j=7,2 Hz, 3H).
Realización de referencia 4: fragmento BB-4
Figure imgf000017_0001
A temperatura ambiente, se disolvieron el compuesto 2-metoxietilamina (2,00 g, 26,63 mmol, 2,33 ml) y trietilamina (5,39 g, 53,26 mmol, 7,38 ml) en diclorometano (100,00 ml) y a continuación la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, se añadió lentamente una solución del compuesto BB-1-2 (26,63 mmol, producto bruto) en diclorometano a la solución de reacción (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 15 horas. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y se añadió agua (100 ml) al residuo, se ajustó el pH hasta 5 con ácido clorhídrico 1 M y se extrajo la mezcla con acetato de etilo (100 ml x 3 ). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-4-1 buscado (sólido blanco, 6,00 g, rendimiento: 88,59%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 7,37 (s, 1H), 5,50 (s ancho, 1H), 3,53 (t, j=5,0 Hz, 2H), 3,40 (s, 3H), 3,26 (d, j=4,8 Hz, 2H), 1,51 (s, 9H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-4-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-4-1 (6,00 g, 23,59 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-4-2 buscado (sólido amarillo, 2,00 g, rendimiento: 54,99%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 5,52 (s ancho, 2H), 3,58-3,48 (m, 2H), 3,41-3,19 (m, 5H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-4-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-4-2 (1,12 g, 7,24 mmol) y terc-butóxido de potasio (2,22 g, 19,75 mmol) a dimetilsulfóxido (20,00 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (1,50 g, 6,58 mmol) a la solución de reacción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 6 horas. Una vez completada la reacción, se añadió agua (100 ml), el pH se ajustó hasta 6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: diclorometano/metanol = 30/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-4-3 buscado (sólido amarillo, 1,40 g, rendimiento: 61,56%). RMN 1H (400 MHz, CDCL) 5: 8,57 (s, 1H), 7,89 (s ancho, 1 H), 5,99 (s ancho, 1 H), 3,36 (br d, j=2,3 Hz, 2H), 3,32-3,20 (m, 5H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-4
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,36 g, 12,15 mmol) a etilenglicol (22,20 g, 357,66 mmol, 20,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas, y a continuación se añadió la solución del compuesto BB-43 (1,40 g, 4,05 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (10,00 ml) a la solución y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 12 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (50 ml), el pH se ajustó hasta 3 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: cloruro de metileno/metanol = 20/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-4 buscado (sólido amarillo, 1,20 g, rendimiento: 76,63%). MS-ESI m/z: 370,8 [M+H]+, 372,8 [M+H]+. RMN 1H (400 MHz, CDCL) 5: 8,39 (s, 1H), 7,64 (s ancho, 1H), 6,03-5,94 (m, 1H), 4,65-4,54 (m, 2H), 3,99 (d, j=3,0 Hz, 2H), 3,49 (t, j=5,0 Hz, 2H), 3,33-3,19 (m, 5H), 2,39 (t, j=5,3 Hz, 1H).
Realización de referencia 5: fragmento BB-5
Figure imgf000018_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-5-1
A temperatura ambiente, se disolvieron el compuesto 2-etoxietilamina (5,00 g, 56,09 mmol) y trietilamina (11,35 g, 112,18 mmol, 15,55 ml) en diclorometano (50,00 ml) en atmósfera de nitrógeno, la mezcla se enfrió hasta 0°C y a continuación se añadió gota a gota una solución del compuesto BB-1-2 (56,09 mmol, producto bruto) en diclorometano a la solución de reacción y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (80 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (80 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-5-1 buscado (sólido blanco, 11,00 g, rendimiento: 73,09%). RMN 1H (400 MHz, CDCL) 5: 7,41 (s, 1H), 5,43 (t, j=5,7 Hz, 1H), 3,50 (t, j=5,0 Hz, 2H), 3,46-3,40 (m, 2H), 3,19 (q, J=5,5 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,14 (t, j=7,0 Hz, 3H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-5-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-5-1 (10,00 g, 37,27 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 12 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (80 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-5-2 buscado (sólido blanco, 5,20 g, rendimiento: 82,95%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) ó: 5,02 (t, j=5,8 Hz, 1H), 5,00-4,88 (m, 2H), 3,63-3,57 (m, 2H), 3,55 (d, j=7,0 Hz, 2H), 3,33 (d, j=5,0 Hz, 2H), 1,22 (t, j=6,2 Hz, 3H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-5-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-5-2 (5,00 g, 29,72 mmol) y terc-butóxido de potasio (10,01 g, 89,17 mmol) a dimetilsulfóxido (50,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 35°C y se agitó durante 0,5 horas, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (6,77 g, 29,72 mmol) a la solución de reacción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a 35°C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se añadió ácido clorhídrico (0,5 M, 50 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-3/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-5-3 buscado (sólido amarillo claro, 2,10 g, rendimiento: 16,76%). MS-ESI m/z: 358,9 [M+H]+, 360,8 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCL) ó: 8,49 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 5,99 (t, J=5,5 Hz, 1H), 3,47-3,43 (m, 2H), 3,34 (d, j=7,0 Hz, 2H), 3,18 (d, j=4,7 Hz, 2H), 1,05 (t, j=6,9 Hz, 3H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-5
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,87 g, 16,68 mmol) a etilenglicol (33,30 g, 536,49 mmol, 30,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-5-3 (2,00 g, 5,56 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (20,00 ml) a la solución y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 12 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió ácido clorhídrico (0,5 M, 50 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-5 buscado (sólido amarillo claro, 1,30 g, rendimiento: 60,69%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) ó: 8,38 (s, 1H), 7,67 (s ancho, 1H), 6,09 (d, j=5,0 Hz, 1H), 4,72-4,52 (m, 2H), 4,00 (s ancho, 2H), 3,62-3,50 (m, 2H), 3,47-3,36 (m, 2H), 3,31-3,20 (m, 2H), 2,46 (s ancho, 1H), 1,21-1,05 (m, 3H).
Realización de referencia 6: fragmento BB-6
Figure imgf000019_0001
A temperatura ambiente, se disolvieron el compuesto 2-n-propoxietilamina (5,00 g, 48,47 mmol) y trietilamina (9,81 g, 96,94 mmol, 13,44 ml) en diclorometano (50,00 ml), la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C en atmósfera de nitrógeno y a continuación se añadió gota a gota lentamente una solución del compuesto BB-1-2 (48,47 mmol, producto bruto) en diclorometano a la solución de reacción y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se añadió agua (80 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (80 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-6-1 buscado (sólido blanco, 11,00 g, rendimiento: 80,37%).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-6-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-6-1 (11,00 g, 38,96 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 2 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (80 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-6-2 buscado (sólido blanco, 5,60 g, rendimiento: 78,87%). RMN 1H (400 MHz, CDCta) 5: 5,01-4,96 (m, 1H), 4,90 (s ancho, 2H), 3,58-3,66 (m, 2H), 3,41-3,47 (m, 2H), 3,34 (d, J=4,5 Hz, 2H), 1,55-1,68 (m, 2H), 0,90-0,96 (m, 3H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-6-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-6-2 (5,00 g, 27,44 mmol) y terc-butóxido de potasio (9,24 g, 82,32 mmol) a dimetilsulfóxido (50,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 35°C y se agitó durante 0,5 horas, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (6,25 g, 27,44 mmol) a la solución de reacción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a 35°C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se añadió ácido clorhídrico (0,5 M, 50 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1 -3/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-6-3 buscado (sólido amarillo claro, 2,00 g, rendimiento: 18,15%). MS-ESI m/z: 372,8 [M+H]+, 374,8 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,48 (s, 1 H), 7,77 (s, 1H), 5,96 (t, j=5,6 Hz, 1H), 3,43-3,47 (m, 2H), 3,24 (t, j=6,6 Hz, 2H), 3,18 (d, j=4,7 Hz, 2H), 1,43 (d, j=7,2 Hz, 2H), 0,81 (t, j=7,4 Hz, 3H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-6
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,80 g, 16,06 mmol) a etilenglicol (33,30 g, 536,49 mmol, 30,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-6-3 (2,00 g, 5,35 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (20,00 ml) a la solución y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 12 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió ácido clorhídrico (0,5 M, 30 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-6 buscado (sólido amarillo claro, 1,20 g, rendimiento: 56,18%). RMN 1H (400 MHz, CDCta) 5: 8,39 (s, 1H), 7,67 (s, 1H), 6,08 (t, j=5,7 Hz, 1H), 4,56-4,65 (m, 2H), 3,97-4,03 (m, 2H), 3,52-3,57 (m, 2H), 3,33 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,24 (q, J=5,5 Hz, 2H), 2,44 (s ancho, 1H), 1,44-1,59 (m, 2H), 0,90 (t, j=7,4Hz, 3H).
Realización de referencia 7: fragmento BB-7
Figure imgf000020_0001
Ruta sintética:
Figure imgf000021_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-7-1
A temperatura ambiente, se disolvieron n-butilamina (2,83 g, 38,64 mmol, 3,82 ml) y trietilamina (3,91 g, 38,64 mmol, 5,36 ml) en diclorometano (100 ml) y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, a continuación una solución del compuesto BB-1-2 (46,37 mmol, producto bruto) en diclorometano se añadió gota a gota lentamente a la solución de reacción (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida. Se añadió diclorometano (200 ml) al residuo y se lavó con ácido clorhídrico diluido 1 M (80 ml) y agua (100 ml x 2), respectivamente. La fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-7-1 buscado (sólido blanco, 3,00 g, rendimiento: 30,77%). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5: 2,98 (q, j=8,0 Hz, 2H), 1,47 (t, j=4,0 Hz 2H), 1,24-1,38 (m, 11 H), 0,86 (t, j=4,0 Hz, 3H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-7-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-7-1 (3,00 g, 11,89 mmol) a agua (150,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 0,5 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con diclorometano (50 ml). La fase orgánica se descartó y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). A continuación, las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-7-2 buscado (aceite incoloro, 1,10 g, rendimiento: 60,78%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 3,06 (q, j=8,0 Hz, 2H), 1,46-1,54 (m, 2H), 1,32 (s, 2H), 0,87 (t, j=8,0 Hz, 3H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-7-3
A temperatura ambiente, se disolvió el compuesto BB-7-2 (1,10 g, 7,23 mmol) en dimetilsulfóxido (50,00 ml), a continuación se disolvió terc-butóxido de potasio (1,22 g, 10,85 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno. A continuación, se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (1,98 g, 8,68 mmol) a la solución de reacción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente durante 3 horas a temperatura ambiente bajo protección con nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió salmuera saturada (50 ml), el pH se ajustó hasta 4-5 con ácido clorhídrico diluido al 10% y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (80 ml). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (50 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-7-3 buscado (sólido blanco, 350,00 mg, rendimiento: 9,58%). MS-ESI m/z: 342,7 [M+H]+, 344,7 [M+H+2]+ . RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,49 (s, 1H), 7,74 (s, 1H), 5,41 (t, j=6,0 Hz, 1H), 3,00 (q, j=7,2 Hz, 2H), 1,47 (q, j=7,6 Hz, 2H), 1,28 -1,32 (m, 2H), 0,84 (t, j=7,2 Hz, 3H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-7
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido potásico (343,36 mg, 3,06 mmol) a etilenglicol (3,17 g, 51,00 mmol, 2,85 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-7-3 (350,00 mg, 1,02 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (20,00 ml) a la solución en una porción, y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua helada (50 ml), se ajustó hasta pH 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: diclorometano/metanol = 20/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-7 buscado (sólido amarillo, 300,00 mg, rendimiento: 79,66%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,30 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 5,44 (t, j=6,0 Hz, 1H), 4,52 (t, j=4,8 Hz, 2H), 3,92 (q, j=3,2 Hz, 2H), 2,98 (q, j=6,8 Hz, 2H), 2,31 (t, j=6,0 Hz, 1 H), 1,45 (q, j=8,0 Hz, 2H), 1,26-1,32 (m, 2H), 0,83 (t, j=7,2 Hz, 3H).
Realización de referencia 8: fragmento BB-8
Figure imgf000022_0001
A temperatura ambiente, se disolvieron ciclobutilamina (5,00 g, 70,30 mmol, 6,02 ml) y trietilamina (8,54 g, 84,36 mmol, 11,70 ml) en diclorometano (100,00 ml) y la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, a continuación se añadió gota a gota una solución del compuesto BB-1-2 (84,36 mmol, producto bruto) en diclorometano a la solución de reacción (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 15 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se extrajo con agua (100 ml x 3). Las fases acuosas se combinaron, se ajustaron hasta pH 5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajeron con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-8-1 buscado (sólido blanco, 12,00 g, rendimiento: 68,19%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 5,35 (d, j=9,8 Hz, 1H), 3,94­ 3,84 (m, 1H), 3,15 (d, j=7,3 Hz, 1 H), 2,38-2,30 (m, 2H), 2,03-1,90 (m, 2H), 1,77-1,61 (m, 2H), 1,50 (s, 9H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-8-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-8-1 (5,00 g, 19,98 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-8-2 buscado (sólido blanco, 2,90 g, rendimiento: 96,63%). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5: 4,72-4,48 (m, 2H), 4,07-3,81 (m, 1H), 2,47-2,25 (m, 2H), 2,04-1,90 (m, 2H), 1,83-1,65 (m, 2H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-8-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-8-2 (2,90 g, 19,31 mmol) y terc-butóxido de potasio (4,33 g, 38,62 mmol) a dimetilsulfóxido (80,00 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (3,52 g, 15,45 mmol) a la solución de reacción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 15 horas. Una vez completada la reacción, se añadió agua (150 ml), el pH se ajustó hasta 6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1 -3/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-8-3 buscado (sólido amarillo, 2,50 g, rendimiento: 37,90%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,59 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 5,71 (d, j=8,5 Hz, 1H), 4,10-3,74 (m, 1H), 2,30-2,17 (m, 2H), 1,94-1,79 (m, 2H), 1,74-1,58 (m, 2H). Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-8
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (2,46 g, 21,96 mmol) a etilenglicol (22,20 g, 357,66 mmol, 20,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-8-3 (2,50 g, 7,32 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (80,00 ml) a la solución y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (200 ml), se ajustó hasta pH 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-8 buscado (sólido amarillo, 1,1 g, rendimiento: 40,92%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,41 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 5,72 (br d, y=8,8 Hz, 1H), 4,81 -4,42 (m, 2H), 4,03-3,96 (m, 2H), 3,96-3,87 (m, 1H), 2,31 -2,16 (m, 2H), 1,93-1,79 (m, 2H) ), 1,73-1,61 (m, 2H).
Realización de referencia 9: fragmento BB-9
Figure imgf000023_0001
A temperatura ambiente, se disolvieron ciclopropilmetilamina (5,00 g, 70,30 mmol) y trietilamina (14,23 g, 140,60 mmol, 19,49 ml) en diclorometano (100,00 ml), la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C y a continuación se añadió una solución del compuesto BB-1-2 (70,30 mmol, producto bruto) en diclorometano (tiempo de goteo de aproximadamente 0,5 horas), la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y se añadió agua (100 ml) al residuo, se ajustó hasta pH 5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-9-1 buscado (sólido blanco, 11,00 g, rendimiento: 62,51%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 2,94 (dd, y=4,0, 6,8 Hz, 2H), 1,53-1,44 (m, 9H), 1,11-0,94 (m, 1H), 0,64-0,52 (m, 2H), 0,30-0,12 (m, 2H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-9-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-9-1 (10,00 g, 39,95 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-9-2 buscado (sólido blanco, 5,00 g, rendimiento: 83,33%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 4,64-4,54 (m, 2H), 3,64 (s ancho, 1H), 3,03-2,86 (m, 2H), 1,16-0,98 (m, 1H), 0,63-0,42 (m, 2H), 0,29-0,10 (m, 2H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-9-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-9-2 (4,94 g, 32,91 mmol) y terc-butóxido de potasio (4,92 g, 43,88 mmol) a dimetilsulfóxido (80,00 ml), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (5,00 g, 21,94 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (100 ml), el pH se ajustó hasta 6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-3/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-9-3 buscado (sólido blanco, 5,00 g, rendimiento: 66,71%). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) ó: 8,57 (s, 1H), 7,80 (s ancho, 1 H), 5,63 (t, j=5,4 Hz, 1H), 2,96 (t, j=6,7 Hz, 2H), 1,09-0,86 (m, 1 H), 0,62-0,39 (m, 2H), 0,26-0,03 (m, 2H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-9
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (4,93 g, 43,91 mmol) a etilenglicol (22,20 g, 357,66 mmol, 20,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas, y a continuación se añadió una solución del compuesto BB-9-3 (5,00 g, 14,64 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (80,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 15 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (200 ml), se ajustó el pH hasta 3 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-9 buscado (aceite amarillo, 3,50 g, rendimiento: 65,10%). RMN 1H (400 MHz, CDCh): 8,45-8,29 (m, 1H), 7,68 (s ancho, 1 H), 5,74 (t, j=5,5 Hz, 1H), 4,73-4,52 (m, 2H), 4,04-3,93 (m, 2H), 2,93 (t, j=6,5 Hz, 2H), 2,04 (s, 1H), 1,11-0,78 (m, 1H), 0,62-0,41 (m, 2H), 0,14 (q, j=5,0 Hz, 2H).
Realización de referencia 10: fragmento BB-10
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Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-10-1
A 0°C, se añadieron hidrocloruro de ciclobutilmetilamina (5,00 g, 41,12 mmol), trietilamina (10,40 g, 102,80 mmol, 14,25 ml) y diclorometano (50,00 ml) a una solución del compuesto BB-1-2 (41,12 mmol, producto bruto) en diclorometano, y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (60 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (60 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-10-1 buscado (sólido amarillo, 7,20 g, rendimiento: 66,24%).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-10-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-10-1 (7,00 g, 26,48 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 2 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-10-2 buscado (aceite incoloro, 3,80 g, rendimiento: 87,38%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 5,10-4,92 (m, 2H), 3,15-3,10 (m, 2H), 2,54-2,50 (m, 1H), 2,07-2,04 (m, 2H), 1,90-1,88 (m, 2H), 1,88-1,69 (m, 2H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-10-3
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (3,14 g, 28,00 mmol) a una solución del compuesto BB-10-2 (2,30 g, 14,00 mmol) en dimetilsulfóxido (40,00 ml), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (3,19 g, 14,00 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (80 ml), el pH se ajustó hasta 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (40 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-10-3 buscado (sólido amarillo, 3,10 g, rendimiento: 62,29%). RMN 1H (400 MHz, CDCta) 5: 8,49 (s, 1H), 7,79 (s, 1 H), 5,45 (t, j=6,0 Hz, 1H), 3,03-2,98 (m, 2H), 2,53-2,33 (m, 1 H), 2,04-1,98 (m, 2H), 1,84-1,78 (m, 2H), 1,63-1,57 (m, 2H) ).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-10
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,89 g, 16,88 mmol) a etilenglicol (15,79 g, 254,55 mmol, 14,23 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-10-3 (3,00 g, 8,44 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (30,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 120°C y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (60 ml), el pH se ajustó hasta 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (30 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-10 buscado (aceite amarillo, 2,50 g, rendimiento: 77,73%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,39 (s, 1H), 7,65 (s ancho, 1H), 5,52 (t, j=6,0 Hz, 1H), 4,71-4,49 (m, 2H), 4,02 (br d, j=3,8 Hz, 2H), 3,12-3,01 (m, 2H), 2,60-2,47 (m, 1 H), 2,43 (s ancho, 1 H), 2,09-2,01 (m, 2H), 1,98-1,77 (m, 2H) , 1,74-1,64 (m, 2H).
Realización de referencia 11: fragmento BB-11
Figure imgf000025_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-11-1
A 0°C, se añadió lentamente gota a gota una solución del compuesto BB-1-2 (78,00 milimoles, producto bruto) en diclorometano a una solución de 3-metoxipropilamina (6,95 g, 78,00 milimoles, 7,99 ml) y trietilamina (15,79 g, 156,00 milimoles, 21,63 ml) en diclorometano (50,00 ml) (el tiempo de goteo fue aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas. Una vez completada la reacción, se añadió agua (200 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (150 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (200 ml), respectivamente, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-11-1 buscado (sólido blanco, 16,00 g, rendimiento: 76,45%). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) ó: 3,42 (t, j=5,8 Hz, 2H), 3,28 (s, 3H), 3,15-3,04 (m, 2H), 1,91-1,64 (m, 2H), 1,43 (s, 9H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-11-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-11-1 (16,00 g, 59,63 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-11-2 buscado (aceite incoloro, 8,50 g, rendimiento: 84,74%). RMN 1H (400 MHz, DMSO _o6) 5: 6,49-6,38 (m, 3H), 3,37-3,32 (m, 2H), 3,23-3,19 (m, 3H), 2,96-2,82 (m, 2H), 1,73-1,63 (m, 2H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-11-3
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (2,67 g, 23,78 mmol) a una solución del compuesto BB-11-2 (2,00 g, 11,89 mmol) en dimetilsulfóxido (10,00 ml), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (2,71 g, 11,89 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (60 ml), el pH se ajustó hasta 4 con ácido clorhídrico diluido 0,5 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (30 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-11-3 buscado (sólido blanco, 3,30 g, rendimiento: 77,21%). RMN 1H (400 MHz, DMSO _de) 5: 8,59 (s, 1H), 3,29-3,25 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 2,96 (t, j=6,9 Hz, 2H), 1,70-1,62 (m, 2H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-11
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (2,06 g, 18,35 mmol) a etilenglicol (30,24 g, 487,25 mmol, 27,25 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-11-3 (3,30 g, 9,18 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (10,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 24 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (60 ml), se ajustó el pH hasta 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (30 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-11 buscado (aceite amarillo, 2,20 g, rendimiento: 61,34%). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5: 8,51-8,08 (m, 1H), 7,65 (s, 1H), 6,10 (t, j=5,9 Hz, 1H), 4,67-4,45 (m, 2H), 4,01 (d, j=3,8 Hz, 2H), 3,53-3,39 (m, 2H), 3,34 (s, 3H), 3,26-3,13 (m, 2H), 2,46 (s ancho, 1 H), 1,85 (q, j=6,0 Hz, 2H).
Realización de referencia 12: fragmento BB-12
Figure imgf000026_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-12-1
A 0°C, se añadió lentamente una solución del compuesto BB-1-2 (74,19 mmol, producto bruto) en diclorometano a una solución de 3-etoxipropil-1 -amina (7,65 g, 74,19 mmol, 8,90 ml) y trietilamina (22,52 g, 222,58 mmol, 30,85 ml) en diclorometano (40,00 ml) (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 1 hora) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 14 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y se añadió agua (200 ml) al residuo y se extrajo con diclorometano (100 ml). La fase orgánica se descartó y la fase acuosa se ajustó hasta un pH de 5-6 con ácido clorhídrico diluido 1 M, a continuación la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-12-1 buscado (sólido amarillo, 17,00 g, producto bruto). RMN 1H (400 MHz, DMSO_afe) ó: 10,80 (s, 1H), 7,51 (t, 7=5,8 Hz, 1 H), 3,40-3,37 (m, 2H), 2,93 (q, 7=6,4 Hz, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,74-1,61 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,10 (t, 7=6,8 Hz, 3H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-12-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-12-1 (17,00 g, 60,21 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron, y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-12-2 buscado (aceite amarillo, 9,00 g, producto bruto). RMN 1H (400 MHz, DMSO _d6) ó: 6,46 (s, 2H), 6,41 (t, 7=6,2 Hz, 1H), 3,43-3,37 (m, 4H), 2,90 (q, 7=6,4 Hz, 2H), 1,75-1,60 (m, 2H), 1,10 (t, 7=7,0 Hz, 3H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-12-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-12-2 (1,60 g, 8,78 mmol) y terc-butóxido de potasio (1,97 g, 17,55 mmol) a dimetilsulfóxido (20,00 ml), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora en atmósfera de nitrógeno, se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (2,00 g, 8,78 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 11 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (100 ml), el pH se ajustó hasta 5-6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con agua (50 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1 -4/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-12-3 buscado (sólido amarillo, 1,30 g, rendimiento: 39,64%). RMN 1H (400 MHz, Dm So _afe) ó: 8,59 (s, 1 h ), 3,34-3,29 (m, 4H), 2,98 (t, 7=6,8 Hz, 2H), 1,69-1,61 (m, 2H), 1,06 (t, 7=6,8 Hz, 3H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-12
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,17 g, 10,44 mmol) a una solución mixta de etilenglicol (35,63 g, 574,20 mmol, 32,10 ml) y éter dimetílico de etilenglicol (10,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-12-3 (1,30 g, 3,48 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (20,00 ml) a la mezcla en una porción, y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml), se ajustó hasta un pH de 5-6 con ácido clorhídrico diluido 2 M y se extrajo con acetato de etilo (60 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1-1/3, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-12 buscado (sólido blanco, 1,10 g, rendimiento: 79,17%). MS-ESI m/z: 398,9 [M+H]+, 400,9 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) ó: 8,29 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,02 (t, 7=6,0 Hz, 1H), 4,52 (t, 7=4,6 Hz, 2H), 3,99-3,87 (m, 2H), 3,46-3,31 (m, 4H), 3,11 (q, 7=6,4 Hz, 2H), 2,38 (t, 7=6,0 Hz, 1H), 1,80-1,71 (m, 2H), 1,14 (t, 7=7,0 Hz, 3H).
Realización de referencia 13: fragmento BB-13
Figure imgf000027_0001
Ruta sintética:
Figure imgf000028_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-13-1
A 0°C, se añadió lentamente una solución del compuesto BB-1-2 (49,43 milimoles, producto bruto) en diclorometano a una solución de 2-tetrahidrofurfurilamina (5,00 g, 49,43 milimoles, 5,10 ml) y trietilamina (10,00 g, 98,86 milimoles, 13,70 ml) en diclorometano (50,00 ml) (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (90 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (200 ml), respectivamente, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-13-1 buscado (sólido blanco, 8,30 g, rendimiento: 59,90%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 5,75 (d, j=4,8Hz, 1H), 4,02 (dd, j=3,9, 6,7 Hz, 1 H), 3,88-3,64 (m, 2H), 3,30-2,83 (m, 2H), 2,06-1,76 (m, 3H), 1,71-1,18 (m, 10H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-13-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-13-1 (8,00 g, 28,54 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 2 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-13-2 buscado (aceite incoloro, 4,90 g, rendimiento: 95,27%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 5,18-5,01 (m, 1H), 4,07-3,91 (m, 1H), 3,86-3,61 (m, 2H), 3,27­ 2,90 (m, 2H), 1,96-1,74 (m, 3H), 1,62-1,41 (m, 1 H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-13-3
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (3,86 g, 34,40 mmol) a una solución del compuesto BB-13-2 (3,10 g, 17,20 mmol) en dimetilsulfóxido (20,00 ml), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (3,92 g, 17,20 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (60 ml), el pH se ajustó hasta 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (30 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-13-3 buscado (sólido amarillo, 2,10 g, rendimiento: 32,85%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,65-8,36 (m, 1H), 8,08-7,70 (m, 1H), 5,99-5,80 (m, 1H), 4,08-3,90 (m, 1H), 3,82-3,55 (m, 2H), 3,25­ 3,13 (m, 1H), 3,04-2,89 (m, 1H), 1,98-1,72 (m, 3H), 1,60-1,44 (m, 1H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-13
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,27 g, 11,30 mmol) a etilenglicol (10,58 g, 170,40 mmol, 9,53 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución de compuesto BB-13-3 (2,10 g, 5,65 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (30,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 120°C y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (60 ml), se ajustó hasta pH 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-13 buscado (aceite amarillo, 1,80 g, rendimiento: 78,35%). MS-ESI m/z: 396,8 [M+H]+, 398,8 [M+H+2]+.
Realización de referencia 14: fragmento BB-14
Figure imgf000029_0001
A 0°C, se añadió una solución del compuesto BB-1-2 (43,41 mmol, producto bruto) en diclorometano a una solución de 4-(aminometil)tetrahidro-2H-pirano (5,00 g, 43,41 mmol) y trietilamina (8,79 g, 86,82 mmol, 12,04 ml) en diclorometano (50,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 12 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (80 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (80 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (200 ml), respectivamente, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-14-1 buscado (aceite blanquecino, 5,20 g, rendimiento: 40,69%).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-14-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-14-1 (5,00 g, 16,99 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 12 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (80 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-14-2 buscado (aceite amarillo claro, 1,70 g, rendimiento: 51,51%).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-14-3
A 35°C, una mezcla del compuesto BB-14-2 (1,70 g, 8,75 mmol) y terc-butóxido de potasio (2,95 g, 26,25 mmol) en dimetilsulfóxido (50,00 ml) se agitó durante 0,5 horas, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (1,99 g, 8,75 mmol), la mezcla de reacción se agitó a 35°C durante 12 horas. Una vez completada la reacción, se añadió a la mezcla ácido clorhídrico diluido 0,5 M (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-14-3 buscado (sólido amarillo, 1,20 g, rendimiento: 12,80%). MS-ESI m/z: 384,8 [M+H]+, 386,8 [M+H+2]+.
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-14
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,05 g, 9,33 mmol) a etilenglicol (33,30 g, 536,49 mmol, 30,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-14-3 (1,20 g, 3,11 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (20,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 12 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió ácido clorhídrico diluido 0,5 M (30 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml x 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-0/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-14 buscado (sólido amarillo claro, 200,00 mg, rendimiento: 14,59%). MS-ESI m/z: 410,9 [M+H]+, 412,9 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,38 (s, 1H), 7,62 (s ancho, 1H), 5,65 (t, j=6,5 Hz, 1H), 4,60 (t, j=4,8 Hz, 2H), 4,05-3,89 (m, 4H), 3,38 (t, j=10,8 Hz, 2H), 2,93 (t, j=6,5 Hz, 2H), 1,86-1,75 (m, 1H), 1,71 -1,61 (m, 2H), 1,31 -1,22 (m, 2H).
Realización de referencia 15: fragmento BB-15
Figure imgf000030_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-15-1
A 0°C, se añadió lentamente gota a gota una solución del compuesto BB-1-2 (31,32 milimoles, producto bruto) en diclorometano a una solución mixta de hidrocloruro de 2-aminoetilmetilsulfona (5,00 g, 31,32 milimoles) y trietilamina (6,34 g, 62,64 milimoles, 8,68 ml) en diclorometano (50,00 ml) (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 18 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (100 ml) y la mezcla se extrajo con diclorometano (100 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con ácido clorhídrico diluido 1 M (50 ml) y salmuera saturada (80 ml), respectivamente, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-15-1 buscado (sólido blanco 5,00 g, rendimiento: 52,81%). RMN 1H (400 MHz, DMSO_afe) 5: 11,04 (s, 1H), 7,83 (s ancho, 1 H), 3,44 (s ancho, 2H), 3,35-3,30 (m, 2H), 3,02 (s, 3H), 1,44 (s, 9H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-15-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-15-1 (4,80 g, 15,87 mmol) a agua (100,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 2 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se extrajo con acetato de etilo (100 ml), la fase orgánica se descartó y la fase acuosa se concentró a presión reducida para obtener el compuesto BB-15-2 buscado (aceite incoloro, 2,10 g, rendimiento: 65,43%). RMN 1H (400 MHz, MeOD) 5: 3,55-3,47 (m, 2H), 3,41-3,35 (m, 2H), 3,06-3,02 (s, 3H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-15-3
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (2,22 g, 19,78 mmol) a una solución del compuesto BB-15-2 (2,00 g, 9,89 mmol) en dimetilsulfóxido (20,00 ml), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (2,25 g, 9,89 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 15 horas a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua (60 ml), el pH se ajustó hasta 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (30 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-15-3 buscado (sólido amarillo, 1,80 g, rendimiento: 43,98%). MS-ESI m/z: 392,8 [M+H]+, 394,8 [M+H+2]+ . RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 5: 8,60 (s, 1H), 6,36 (s ancho, 1H), 3,66 (q, j=6,0 Hz, 2H), 3,46-3,25 (m, 2H), 3,09-2,82 (m, 3H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-15
En atmósfera de nitrógeno y a 40°C, una mezcla de etilenglicol (4,28 g, 68,95 mmol, 3,86 ml) y terc-butóxido de potasio (513,07 mg, 4,57 mmol) se agitó durante 0,5 horas y a continuación se añadió una solución del compuesto BB-15-3 (0,9 g, 2,29 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (30,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 60°C y se agitó durante 3 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (60 ml), se ajustó hasta pH 4 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-15 buscado (aceite amarillo claro, 327,27 mg, rendimiento: 33,40%). MS-ESI m/z: 440,9 [M+Na]+ , 442,9 [M+Na+2]+ .
Realización de referencia 16: fragmento BB-16
Figure imgf000031_0001
A 0-5°C, se añadió lentamente gota a gota una solución del compuesto BB-1-2 (9,19 milimoles, producto bruto) en diclorometano a una solución de 3-azabiciclo[3.1.0]hexano en hidrocloruro (900,00 mg, 7,53 milimoles) y trietilamina (2,28 g, 22,58 milimoles) en diclorometano (10 ml) (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 1 hora) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y se añadió agua (20 ml) al residuo, se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (25 ml x 4 ). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-16-1 buscado (sólido blanco, 1,90 g, rendimiento: 96,19%). RMN 1H (400 MHz, CDCta) 5: 3,56-3,68 (m, 4H), 1,55-1,59 (m, 2H), 1,51 (s, 9H), 0,69-0,74 (m, 1 H), 0,41-0,45 (m, 1H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-16-2
A temperatura ambiente, se añadió ácido trifluoroacético (3,30 g, 28,96 mmol) a una solución del compuesto BB-16-1 (1,90 g, 7,24 mmol) en diclorometano (10,00 ml) en una porción, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, el disolvente de la mezcla de reacción se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-16-2 buscado (sólido blanquecino, 1,44 g, rendimiento: 72,00%, sal de trifluoroacetato). RMN 1H (400 MHz, CDCta) 5: 3,28-3,36 (m, 4H), 1,54-1,59 (m, 2H), 0,61-0,69 (m, 1 H), 0,44-0,58 (m, 1H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-16-3
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,75 g, 15,63 mmol) a una mezcla de la sal de trifluoroacetato del compuesto BB-16-2 (1,44 g, 5,21 mmol) en dimetilsulfóxido (30,00 ml) en una porción, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (1,42 g, 6,25 mmol) a la mezcla, la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua helada (60 ml), el pH se ajustó hasta 4-5 con ácido clorhídrico diluido 4 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (200 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron, el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo). = 10/1-1/1, relación de volumen) para obtener el compuesto BB-16-3 buscado (sólido marrón, 1,40 g, rendimiento: 74,14%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) ó: 8,59 (s, 1H), 7,80 (s ancho, 1H), 3,73-3,79 (m, 2H), 3,66-3,72 (m, 2H), 1,58-1,62 (m, 2H), 0,69-0,76 (m , 1 H), 0,33 (q, y=4,3 Hz, 1H).
Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-16
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (760,78 mg, 6,78 mmol) a etilenglicol (22,20 g, 357,67 mmol), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, y a continuación se añadió una solución del compuesto BB-16-3 (799,18 mg, 2,26 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (10,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 39 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua helada (60 ml) al residuo, se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (60 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (120 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-16 buscado (sólido amarillo, 520,00 mg, rendimiento: 59,45%). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5: 8,38 (s, 1H), 7,63 (s ancho, 1H), 4,55-4,61 (m, 2H), 3,94-4,02 (m, 2H), 3,69-3,74 (m, 2H), 3,64-3,69 (m , 2H), 2,48 (s ancho, 1 H), 1,49-1,58 (m, 2H), 0,62-0,71 (m, 1H), 0,30-0,37 (m, 1 H).
Realización de referencia 17: fragmento BB-17
Figure imgf000032_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto BB-17-1
A 0°C, se añadió gota a gota una solución del compuesto BB-1-2 (12,39 mmol, producto bruto) en diclorometano a una solución de 2-oxa-6-azaespiro[3,3]heptano (1,17 g, 11,80 mmol) y trietilamina (3,58 g, 35,40 mmol) en diclorometano (10 ml) (tiempo de goteo aproximadamente 1 hora), la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida, se añadió agua al residuo (20 ml), se ajustó el pH hasta 4-5 con ácido clorhídrico diluido 5 M y se extrajo con acetato de etilo (25 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-17-1 buscado (sólido blanco, 1,70 g, rendimiento: 51,76%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 7,07 (s ancho, 1H), 4,79 (s, 4H); 4,34 (s, 4H), 1,52 (s, 9H).
E ta p a 2 : S ín te s is d e l c o m p u e s to BB-17-2
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto BB-17-1 (1,70 g, 6,11 mmol) a agua (10,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 1 hora. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (30 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-17-2 buscado (sólido blanco, 920,00 mg, rendimiento: 84,49%). RMN 1H (400 MHz, CDCta) 5: 4,78 (s, 4H), 4,39 (s ancho, 2H), 4,04 (s, 4H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-17-3
A temperatura ambiente, el compuesto BB-17-2 (920,00 mg, 5,16 mmol) y terc-butóxido de potasio (1,50 g, 13,37 mmol) se añadieron a dimetilsulfóxido (15,00 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. A continuación, se añadió a la mezcla 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (1,41 g, 6,19 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Una vez completada la reacción, se añadió agua helada (40 ml), el pH se ajustó hasta 4-5 con ácido clorhídrico diluido 4 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (40 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (120 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante una placa de cromatografía preparativa (eluyente: diclorometano/metanol = 10/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-17-3 buscado (sólido marrón, 430,00 mg, rendimiento: 16,43%). MS-ESI m/z: 368,8 [M+H]+, 370,8 [M+H+2]+. Etapa 4: Síntesis del compuesto BB-17
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (390,49 mg, 3,48 mmol) a etilenglicol (15,23 g, 245,36 mmol), la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, y a continuación, se añadió lentamente gota a gota una solución del compuesto BB-17-3 (430,00 mg, 1,16 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (10,00 ml) a la mezcla y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 48 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua helada (30 ml) al residuo, se ajustó el pH hasta 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 4). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (120 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: diclorometano/metanol = 10/1, relación de volumen) para obtener el compuesto BB-17 buscado (sólido amarillo, 150,00 mg, rendimiento: 30,86%). MS-ESI m/z: 417,0 [M+Na]+, 417,0 [M+Na+2]+.
Realización de referencia 18: fragmento BB-18
Figure imgf000033_0001
Ruta sintética:
Figure imgf000034_0001
A 0°C, se añadió gota a gota una solución de terc-butóxido de potasio (7,22 g, 64,31 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) a una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (22,97 g, 64,31 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora en atmósfera de nitrógeno, a continuación la mezcla de reacción se enfrió hasta 0°C, y se añadió una solución del compuesto BB-18-1 (10,00 g, 42,87 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) en una porción. La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 64 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadieron secuencialmente agua (50 ml) y éter de petróleo (50 ml), y se separó el líquido. La fase acuosa se extrajo con éter de petróleo (50 ml x 2). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (150 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/0-10/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-18-2 buscado (aceite incoloro, 5,20 g, rendimiento: 48,56%). MS-ESI m/z: 232,0 [M+H]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 7,40-7,29 (m, 5H), 5,15 (s, 2H), 4,76 (s, 2H), 3,51 (t, j=5,8 Hz, 4H), 2,19 (t, j=5,8 Hz, 4H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto BB-18-3
A -40°C, se añadió gota a gota una solución de ácido trifluoroacético (10,25 g, 89,92 mmol) en diclorometano (10 ml) a una solución de dietilcinc (1 M, 89,92 ml) en diclorometano (50 ml), la mezcla de reacción se agitó a -40°C durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno y a continuación se añadió una solución de diyodometano (24,08 g, 89,92 mmol) en diclorometano (10 ml) a la mezcla, la mezcla de reacción se agitó a -40°C durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno. A continuación, se añadió una solución del compuesto BB-18-2 (5,20 g, 22,48 mmol) en diclorometano (10 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadieron diclorometano (30 ml) y solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (80 ml) y se agitó durante 5 minutos, seguido de precipitación, filtración y separación del líquido. La fase orgánica se lavó con salmuera saturada (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró, el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 100/1-10/1, relación de volumen) para obtener un aceite amarillo, que se separó nuevamente por HPLC preparativa para obtener el compuesto BB-18-3 buscado (aceite amarillo claro, 4,00 g, rendimiento: 47,46%). MS-ESI m/z: 246,0 [M+H]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 7,40-7,29 (m, 5H), 5,15 (s, 2H), 3,57­ 3,47 (m, 4H), 1,35 (s ancho, 4H), 0,34 (s, 4H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto BB-18-4
A temperatura ambiente, se añadió paladio sobre carbono húmedo (150,00 mg, pureza: 10%) a una solución del compuesto BB-18-3 (1,50 g, 6,11 mmol) en tetrahidrofurano (15,00 ml) y la mezcla de reacción se hizo reaccionar en una atmósfera de hidrógeno (3,5 MPa) y se agitó a temperatura ambiente durante 40 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se filtró, seguido de la adición de ácido clorhídrico/acetato de etilo (4 M, 10 ml), se agitó durante 15 minutos y se concentró a presión reducida para obtener el compuesto BB-18-4 (sólido amarillo, 900,00 mg, rendimiento: 99,76%, hidrocloruro). RMN 1H (400 MHz, DMSO_de) 5: 9,13 (s ancho, 2H), 3,02 (s ancho, 4H), 1,54 (t, j=5,0 Hz, 4H), 0,37 (s, 4H).
E ta p a 4 : S ín te s is d e l c o m p u e s to BB-18-5
A 0°C, se añadió gota a gota una solución del compuesto BB-18-4 (1,20 g, 8,13 mmol, hidrocloruro) en diclorometano (20 ml) a una solución del compuesto BB-1-2 (8,54 mmol, producto bruto) en diclorometano y una mezcla de diclorometano (10 ml) y trietilamina (3,29 g, 32,52 mmol) (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 1 hora). La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida y se añadió agua (20 ml) al residuo, se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 4 M (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo ( 25 ml x 4). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto BB-18-5 (sólido amarillo claro, 1,32 g, rendimiento: 55,91%). RMN 1H (400 MHz, CDCta) 5: 7,05 (s ancho, 1H), 3,47-3,40 (m, 4H), 1,52 (s, 9H), 1,50-1,47 (m, 4H), 0,38 (s, 4H).
Etapa 5: Síntesis del compuesto BB-18-6
A temperatura ambiente, se añadió ácido trifluoroacético (1,53 g, 13,42 mmol) a una solución del compuesto BB-19-5 (580,00 mg, 2,00 mmol) en diclorometano (3,00 ml) en una porción, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para obtener el compuesto BB-18-6 (sólido amarillo claro, 600,00 mg, rendimiento: 98,50%, trifluoroacetato). RMN 1H (400 MHz, CDCta)5: 3,23 (t, j=5,5 Hz, 4H), 1,50 (t, j=5,5 Hz, 4H), 0,36 (s, 4H).
Etapa 6: Síntesis del compuesto BB-18-7
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (1,39 g, 12,42 mmol) a una solución del compuesto BB-18-6 (1,26 g, 4,14 mmol, trifluoroacetato) en dimetilsulfóxido (10,00 ml) en una porción, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió 5-bromo-4,6-dicloropirimidina (1,04 g, 4,55 mmol) a la mezcla de reacción, la mezcla de reacción se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua helada (20 ml), el pH se ajustó hasta 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (120 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante una placa de cromatografía (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto BB-18-7 (aceite amarillo, 600,00 mg, rendimiento: 35,86%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,53 (s, 1H), 4,40 (s ancho, 1H), 3,20-3,28 (m, 4H), 1,49-1,55 (m, 4H), 0,35 (s, 4H).
Etapa 7: Síntesis del compuesto BB-18
A temperatura ambiente, se añadió terc-butóxido de potasio (353,46 mg, 3,15 mmol) a una solución de etilenglicol (16,03 g, 258,27 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (3,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió una solución del compuesto BB-18-7 (400,00 mg, 1,05 mmol) en éter dimetílico de etilenglicol (5,00 ml) a la solución de reacción y la mezcla de reacción se calentó hasta 110°C y se agitó durante 40 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua helada (30 ml) al residuo, se ajustó hasta un pH de 5-6 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía (eluyente: acetato de etilo/éter de petróleo = relación en volumen 1/1) para obtener el compuesto BB-18 (aceite amarillo, 180,00 mg, rendimiento: 42,09%). RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,37 (s, 1H), 4,61-4,56 (m, 2H), 4,01 -3,97 (m, 2H), 3,54-3,47 (m, 4H), 1,52-1,45 (m, 4H), 0,36-0,31 ( m, 4H).
Realización 1: WX001
Figure imgf000035_0001
Ruta sintética:
Figure imgf000036_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto WX001-2
A 0°C, se añadió lentamente gota a gota diclorosulfóxido (58,11 g, 488,46 mmol, 35,43 ml) a una solución del compuesto WX001-1 (80 g, 444,06 mmol) en metanol (400 ml) (el tiempo de goteo fue de aproximadamente 0,5 horas) y la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 10 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y se añadió agua (300 ml) al residuo y se extrajo con acetato de etilo (300 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (300 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron, y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto WX001-2. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 6,80-6,71 (m, 3H), 5,94 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,55 (s, 2H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto WX001-3
A 0°C, se añadió gota a gota lentamente una solución del compuesto WX001-2 (35 g, 180,24 mmol) en carbonato de dimetilo (118,51 g, 1,32 mol, 110,76 ml) a una solución mixta de hidruro de sodio (10,81 g, 270,36 mmol, pureza: 60%) en carbonato de dimetilo (118,51 g, 1,32 mol , 110,76 ml) (el tiempo de goteo es de aproximadamente 1 hora), la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió agua helada (500 ml) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (300 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (300 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1 -5/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX001-3. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 7,00-6,93 (m, 1H), 6,85-6,77 (m, 2H), 5,98 (s, 2H), 4,58 (s, 1H), 3,78 (s, 6H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto WX001-4
A 0°C, se añadió en porciones un bloque de sodio (10,94 g, 475,78 mmol) a metanol anhidro (150 ml), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno y a continuación se añadió una solución del compuesto WX001-3 (40 g, 158,59 mmol) en metanol (100 ml) a la solución de reacción. La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno, a continuación se añadió acetato de formamidina (19,81 g, 190,31 mmol) a la solución de reacción en una porción y la mezcla de reacción se agitó adicionalmente a temperatura ambiente durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y se añadió al residuo ácido clorhídrico diluido 2 M (200 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, durante los cuales precipitó una gran cantidad de sólido blanco. La mezcla de reacción se filtró, la torta de filtración se lavó con metanol (50 ml x 2) y la torta de filtración se recogió y se secó al vacío para obtener el compuesto WX001-4.
Etapa 4: Síntesis del compuesto WX001-5
A temperatura ambiente, se añadió el compuesto WX001-4 (24 g, 103,36 mmol) a oxicloruro de fósforo (594,00 g, 3,87 mol, 360,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 90°C y se agitó durante 5 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, la solución de reacción se vertió lentamente en agua helada (1000 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas y a continuación se extrajo con acetato de etilo (1000 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (1000 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX001-5. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,78 (s, 1H), 6,96 (d, j=8,3 Hz, 1H), 6,78 (dd, j=2,5, 4,0 Hz, 2H), 6,09 (s, 2H).
E ta p a 5 : S ín te s is d e l c o m p u e s to WX001-6
A temperatura ambiente, se disolvieron el compuesto 2-(5-bromopirimidin-2-il)oxietanol (8,06 g, 36,79 mmol) y el compuesto WX001-5 (11 g, 40,88 mmol) en tolueno (100 ml), a continuación la mezcla se enfrió hasta 0°C, se añadió terc-butóxido de potasio (9,17 g, 81,76 mmol) en porciones y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, se añadió ácido clorhídrico diluido 0,5 M (100 ml) a la solución de reacción y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX001-6. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,54-8,48 (m, 3H), 6,86-6,74 (m, 3H), 6,02 (s, 2H), 4,80-4,74 (m, 2H), 4,73-4,64 (m, 2H).
Etapa 6: Síntesis del compuesto WX001
A temperatura ambiente, se disolvieron el compuesto sulfamida (1,52 g, 15,83 mmol) y el compuesto WX001-6 (6,5 g, 14,39 mmol) en dimetilsulfóxido (100 ml) y a continuación se añadieron en una porción carbonato de potasio (5,97 g, 43,17 mmol) y trihidrato de fluoruro de tetrabutilamonio (9,08 g, 28,78 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 70°C y se agitó durante 5 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadieron ácido clorhídrico diluido 0,5 M (100 ml) y agua (500 ml) y se extrajo con acetato de etilo (400 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (500 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1, a continuación diclorometano/acetato de etilo = 5/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX001 buscado. MS-ESI m/z: 510,8 [M+H]+, 512,8 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, DMSO_de) 5: 9,29 (s, 1H), 8,72 (s, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,21 (s, 2H), 6,91 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 6,76-6,61 (m, 2H ), 6,05 (s, 2H), 4,69-4,62 (m, 2H), 4,62-4,54 (m, 2H).
Realización 2: WX002
Figure imgf000037_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto WX002-2
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto WX002-1 (8,00 g, 37,37 mmol), bis(pinacolato)diboro (11,39 g, 44,84 mmol) y acetato de potasio (7,33 g, 74,74 mmol) a 1,4-dioxano (100,00 ml), a continuación se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (5,47 g, 7,47 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 10 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. Se añadió agua (100 ml) al residuo y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 20/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX002-2 buscado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,92 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,89 (d, j=8,0 Hz, 1 H), 7,78 (d, j=8,0 Hz, 1H), 1,30 (s, 12H).
E ta p a 2 : S ín te s is d e l c o m p u e s to WX002-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-2 (250,00 mg, 732,75 pmol) y el compuesto WX002-2 (287,04 mg, 1,10 mmol) a 1,4-dioxano (15,00 ml), a continuación se añadió una solución de carbonato de potasio (303,82 mg, 2,20 mmol) en agua (5,00 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas en atmósfera de nitrógeno y a continuación se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II) (160,85 mg, 219,83 pmol) a la mezcla. La mezcla de reacción se calentó hasta 80°C y se agitó durante 11 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml), se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 1) y se descartó la fase orgánica. La fase acuosa se ajustó hasta un pH de 5-6 con ácido clorhídrico diluido 3 M y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX002-3 buscado. MS-ESI m/z: 395,9 [M+H]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) ó: 9,01 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,05 (s, 1 H), 8,02 (s, 1H), 7,31 (d, j=8,3 Hz, 1 H), 7,06 (s, 1H), 5,52 (t, j=6,0 Hz, 1H), 4,44 (t, j=4,4 Hz, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,08-2,98 (m, 2H), 2,58 (s ancho, 1H), 1,15 (t, j=7,2 Hz, 3 H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto WX002
A temperatura ambiente, se añadió hidruro de sodio (194,20 mg, 4,86 mmol, pureza: 60%) a tetrahidrofurano anhidro (20,00 ml), a continuación se añadió una solución del compuesto WX002-3 (240,00 mg, 606,89 pmol) en N,N-dimetilformamida anhidra (1 ml) y se añadió una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina (234,78 mg, 1,21 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (1 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 70°C y se agitó durante 2 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió una solución saturada de cloruro de amonio (30 ml), se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante HPLC preparativa (fase móvil: acetonitrilo/agua; sistema básico: NH4HCO3 y NH3-H2Ü) para obtener el compuesto WX002 buscado. MS-ESI m/z: 552,0 [M+H]+, 554,0 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 9,08 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,43 (s, 2H), 8,04 (d, j=2,0 Hz, 2H), 7,34 (dd, j=8,5, 1,3 Hz, 1H), 6,87 (s ancho, 1H), 5,58 (s, 1H), 4,74 (t, j=4,4 Hz, 2H), 4,62 (t, j=4,4 Hz, 2H), 3,15-3,02 (m, 2H), 1,21 (t, j=7,3 Hz, 3H).
Refiriéndose al método de síntesis de la realización 2 (BB-2 en la etapa 2 se reemplazó por la estructura correspondiente del fragmento 2), se sintetizaron las realizaciones de la tabla 1.
Tabla 1: Fórmula estructural de las realizaciones 3-7
Figure imgf000038_0001
Los datos de LCMS y RMN H de cada realización se muestran en la tabla 2.
T a b la 2 : D a to s d e R M N y L C M S d e la s realizaciones 3-7
Figure imgf000039_0002
Realización 8: WX008
Figure imgf000039_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto WX008-2
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto WX008-1 (3,00 g, 14,92 mmol), bis(pinacolato)diboro (7,58 g, 29,84 mmol) y acetato de potasio (4,39 g, 44,76 mmol) a 1,4-dioxano (30,00 ml), a continuación se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (3,28 g, 4,48 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 80°C y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. Se añadió agua (30 ml) al residuo y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron, el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida y el residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/0-100/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX008-2 buscado. RMN 1H (400 MHz, CDCis) 5:7,38 (dd, j=7,8, 0,8 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,85 (d, j=7,8 Hz, 1H), 5,97 (s, 2H), 1,35 (s, 12H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto WX008-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-3 (300,00 mg, 844,57 pmol), el compuesto WX008-2 (419,04 mg, 1,69 mmol) y fosfato de potasio (537,83 mg, 2,53 mmol) a N,N-dimetilformamida (20,00 ml), a continuación se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (185,39 mg, 253,37 pmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 80°C y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml), se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 1) y se descartó la fase orgánica. La fase acuosa se ajustó hasta un pH de 5-6 con ácido clorhídrico diluido 3 M y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante una placa de cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2, relación en volumen) para obtener el compuesto WX008-3 buscado. MS-ESI m/z: 397,0 [M+H]+.
Etapa 3: Síntesis del compuesto WX008
A temperatura ambiente, se añadió hidruro de sodio (145,30 mg, 3,63 mmol, pureza: 60%) a tetrahidrofurano anhidro (20 ml), a continuación se añadió una solución del compuesto WX008-3 (180,00 mg, 454,06 pmol) en N,N-dimetilformamida anhidra (1 ml) y se añadió a esto una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina (175,66 mg, 908,13 pmol) en tetrahidrofurano anhidro (1 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta 70°C y se agitó durante 2 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió una solución saturada de cloruro de amonio (30 ml), se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). . Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante HPLC preparativa (fase móvil: acetonitrilo/agua; sistema neutro) para obtener el compuesto WX008 buscado. MS-ESI m/z: 552,8 [M+H]+, 554,8 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCb) 5: 8,49 (s, 2H), 8,43 (s, 1H), 6,87 (d, j=8,3 Hz, 1 H), 6,73-6,68 (m, 2H), 6,03 (s, 2H), 5,61 (t, j=6,2 Hz, 1 H), 4,73 (q, j=5,0 Hz, 2H), 4,64 (t, j=4,8 Hz, 2H), 2,96 (q, j=6,8 Hz, 2H), 1,64-1,57 (m, 2H), 0,94 (t, j=7,4 Hz, 3H).
Refiriéndose al método de síntesis de la realización 8 (BB-3 en la etapa 2 se reemplazó por la estructura correspondiente del fragmento 2), se sintetizaron las realizaciones de la tabla 3.
Tabla 3: Fórmula estructural de las realizaciones 9-22
Figure imgf000040_0001
Figure imgf000041_0001
Los datos de LCMS y RMN H de cada realización se muestran en la tabla 4.
T a b la 4 : D a to s d e R M N y L C M S d e la s realizaciones 9-22
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000043_0003
Realización 23 y Realización 24: WX023 y WX024
Figure imgf000043_0001
El compuesto WX021 (500,00 mg, 839,74 pmol) se resolvió mediante cromatografía de fluidos supercríticos (condiciones de separación, columna: chiralpak AD-350 * 4,6 mm de DI, 3 pm; fase móvil: A: dióxido de carbono; B: isopropanol (dietilamina al 0,05%), 40%; temperatura de la columna: 40°C; longitud de onda: 220 nm) para obtener la muestra con un tiempo de retención de 1,149 min como WX023 (% ee: 100%) y la muestra con un tiempo de retención de 3,199 min como WX024 (% ee: 100%).
Realización 25: WX025
Figure imgf000043_0002
Ruta sintética:
Figure imgf000044_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto WX025-2
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto WX025-1 (400,00 mg, 2,03 mmol), bis(pinacolato)diboro (618,60 mg, 2,44 mmol), acetato de potasio (597,72 mg, 6,09 mmol) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II) (297,09 mg, 406,03 pmol) a dioxano (20,00 ml), la mezcla de reacción se calentó hasta 100°C y se agitó durante 15 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, el disolvente se eliminó a presión reducida y se añadió agua (100 ml) al residuo y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = relación de volumen 1/1) para obtener el compuesto WX025-2 buscado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,70 (s, 1H), 7,99-7,98 (m, 1H), 7,51 (d, j=8,8 Hz, 1H), 7,37 (d, j=8,8 Hz, 1H), 6,48 (s, 1H), 1,36 (s, 12H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto WX025-3
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-3 (300,00 mg, 844,57 pmol), el compuesto WX025-2 (309,24 mg, 1,27 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaladio(II) (123,59 mg, 168,91 pmol) y carbonato de potasio (350,18 mg, 2,53 mmol) a una mezcla de dioxano (20,00 ml) y agua (2,00 ml) y la mezcla de reacción se calentó hasta 80°C y se agitó durante 10 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml), se ajustó hasta pH 5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2, relación en volumen) para obtener el compuesto WX025-3 buscado. MS-ESI m/z: 393,0 [M+H]+.
Etapa 3: Síntesis del compuesto WX025
A temperatura ambiente, se añadieron una solución del compuesto WX025-3 (180,00 mg, 346,76 pmol) en N,N-dimetilformamida (2 ml) y una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina (67,07 mg, 346,76 pmol) en tetrahidrofurano (1 ml) a una mezcla de hidruro de sodio (83,08 mg, 2,08 mmol, pureza: 60%) en tetrahidrofurano anhidro (20 ml) en una porción. La mezcla de reacción se calentó hasta 70°C y se agitó durante 2 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió una solución saturada de cloruro de amonio (50 ml), se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). . Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante HPLC preparativa (fase móvil: acetonitrilo/agua; sistema básico: NH4HCO3 y NH3H2O) para obtener el compuesto WX025 buscado. MS-ESI m/z: 549,0 [M+H]+, 551,0 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,53 (s, 1H), 8,46-8,44 (m, 3H), 8,03 (s, 1H), 7,62 (d, j=9,2 Hz, 1H), 6,98 (d, j=9,2 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,64 (s, 1 H), 4,78-4,76 (m, 2H), 4,67­ 4,65 (m, 2H), 3,02-3,00 (m, 2H), 1,65-1,63 (m, 2H), 0,99 (t,j=7,2 Hz, 3H).
Refiriéndose al método de síntesis de la realización 25 (BB-3 en la etapa 2 se reemplazó por la estructura correspondiente del fragmento 2), se sintetizaron las realizaciones de la tabla 5.
T a b la 5 : F ó rm u la e s tru c tu ra s d e la s realizaciones 26-27
Figure imgf000045_0002
Los datos de LCMS y RMN H de cada realización se muestran en la tabla 6.
Tabla 6 : Datos de RMN y LCMS de las realizaciones 26-27
Figure imgf000045_0003
Realización 28: WX028
Figure imgf000045_0001
Etapa 1: Síntesis del compuesto WX028-2
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto WX028-1 (2,00 g, 10,15 mmol), bis(pinacolato)diboro (3,87 g, 15,23 mmol) y acetato de potasio (2,99 g, 30,45 mmol) a acetonitrilo (30,00 ml), a continuación se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (1,11 g, 1,52 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 60°C y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua (20 ml) al residuo y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (80 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo) para obtener el compuesto WX028-2 buscado. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 5: 7,99 (s, 1H), 7,72-7,69 (m, 1H), 7,69 (d, j=2,0 Hz, 1H), 7,64-7,61 (m, 1H), 6,80 (d, j=1,2 Hz, 1H), 1,39 (s, 12H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto WX028-3
A temperatura ambiente, se añadió paladio sobre carbono húmedo (50,00 mg, pureza: 10%) a una solución del compuesto WX028-2 (1,50 g, 6,15 mmol) en metanol (30,00 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente en atmósfera de hidrógeno (1,05 kg/cm2 [15 psi]). Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se filtró y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto WX028-3 buscado. RMN 1H (400 MHz, CDCla) 5: 7,32 (d, j=7,0 Hz, 1H), 7,21 (m, 2H), 4,55 (t, j=8,5 Hz, 2H), 3,22 (t, j=8,5 Hz, 2H), 1,34 (s, 12H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto WX028-4
A temperatura ambiente, se añadieron una solución de carbonato de potasio (254,51 mg, 1,84 mmol) en agua (2,00 ml) y [(bis(1-adamantil)-N-n-butilfosfina]-2-(2-aminobifenil)]dicloropaladio (40,00 mg) a una solución del compuesto BB-18 (250,00 mg, 613,83 pmol) y el compuesto WX028-3 (226,60 mg, 920,74 pmol) en dioxano (20,00 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta 60°C y se agitó durante 16 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. A continuación, se añadió agua (15 ml) a la mezcla, se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (20 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (60 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX028-4 buscado. MS-ESI m/z: 447,2 [M+H]+.
Etapa 4: Síntesis del compuesto WX028
A temperatura ambiente, se añadieron una solución del compuesto WX028-4 (220,00 mg, 492,70 pmol) en N,N-dimetilformamida y 5-bromo-2-cloropirimidina (190,61 mg, 985,40 pmol) a una mezcla de hidruro de sodio (300,00 mg, 7,50 mmol, pureza: 60%) en tetrahidrofurano anhidro (15,00 ml) en una porción. La mezcla de reacción se calentó hasta 75°C y se agitó durante 1,5 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la solución se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió solución saturada de cloruro de amonio (20 ml), se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (30 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/ 1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX028 buscado. MS-ESI m/z: 603,1 [M+H]+, 605,1 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 8,48 (s, 2H), 8,46 (s, 1H), 7,23 (d, j=7,5 Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 6,69 (d, j=7,5 Hz, 1H), 6,63 (s, 1H), 4,74-4,70 (m, 2H), 4,66-4,64 (m, 2H), 4,63-4,59 (m, 2H), 3,49-3,44 (m, 4H), 3,25 (t, j=8,5 Hz, 2H), 1,48-1,44 (m, 4H), 0,34 (s, 4H).
Refiriéndose al método de síntesis de la realización 28 (BB-18 en el etapa 3 se reemplazó por la estructura correspondiente del fragmento 2), se sintetizaron las realizaciones de la tabla 7.
T a b la 7 : F ó rm u la e s tru c tu ra l d e la s realizaciones 29-32
Figure imgf000047_0002
Los datos de LCMS y RMN H de cada realización se muestran en la tabla 8.
Tabla 8 : Datos de RMN y LCMS de las realizaciones 29-32
Figure imgf000047_0003
Realización 33: WX033
Figure imgf000047_0001
Ruta sintética:
Figure imgf000048_0001
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto WX033-1 (2,50 g, 12,69 mmol), bis(pinacolato)diboro (6,44 g, 25,38 mmol) y acetato de potasio (3,74 g, 38,07 mmol) a W,W-dimetilformamida (20,00 ml), a continuación se añadió [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II) (1,86 g, 2,54 mmol). La mezcla de reacción se calentó hasta 90°C y se agitó durante 12 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (100 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 30/1-20/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX033-2 buscado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5:8,14 (s, 1H), 7,79 (d, j=8,3 Hz, 1H), 7,64 (d, j=2,0 Hz, 1H), 7,53 (d, j=8,3 Hz, 1H), 6,79 (d, j=1 ,5 Hz, 1 H), 1,39 (s, 12H).
Etapa 2: Síntesis del compuesto WX033-3
A temperatura ambiente, el compuesto WX033-2 (500,00 mg, 2,05 mmol) se disolvió en metanol (30,00 ml), a continuación se añadió paladio sobre carbono húmedo (200,00 mg, pureza: 10%) y la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se agitó durante 48 horas bajo atmósfera de hidrógeno (1,05 kg/cm2 [15 psi]). Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró a través de tierra de diatomeas y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida para obtener el compuesto WX033-3 buscado. RMN 1H (400 MHz, CDCh) 5: 7,62 (s, 1H), 7,60-7,50 (m, 1H), 6,78-6,77 (m,1 H), 4,60-4,56 (t, j=8,8 Hz, 2H), 3,22-3,17 (t, j=8,8 Hz, 2H), 1,33(s, 12H).
Etapa 3: Síntesis del compuesto WX033-4
A temperatura ambiente, se añadieron el compuesto BB-3 (500,00 mg, 703,81 pmol), el compuesto WX033-3 (259,82 mg, producto bruto), carbonato de potasio (291,82 mg, 2,11 mmol) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(II) (103,00 mg, 140,76 pmol) a una mezcla de dioxano (20,00 ml) y agua (2,00 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta 80°C y se agitó durante 10 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua (100 ml) al residuo, se ajustó hasta pH 5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX033-4 buscado. MS-ESI m/z: 395,0 [M+H]+.
Etapa 4: Síntesis del compuesto WX033
A temperatura ambiente, se añadieron secuencialmente una solución del compuesto WX033-4 (140,00 mg, 314,28 pmol) en W,W-dimetilformamida (2,00 ml) y una solución de 5-bromo-2-cloropirimidina (121,58 mg, 628,56 pmol) en tetrahidrofurano (1 ml) a una solución de hidruro de sodio (75,43 mg, 1,89 mmol, pureza: 60%) en tetrahidrofurano anhidro (20,00 ml) en una porción. La mezcla de reacción se calentó hasta 70°C y se agitó durante 2 horas en atmósfera de nitrógeno. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se añadió una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (50 ml), se ajustó hasta un pH de 4-5 con ácido clorhídrico diluido 1 M y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera saturada (50 ml), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y el disolvente del filtrado se eliminó a presión reducida. El residuo se separó mediante cromatografía preparativa (eluyente: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, relación en volumen) para obtener el compuesto WX033 buscado. MS-ESI m/z: 551,1 [M+H]+, 553,1 [M+H+2]+. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5: 8,50 (s, 2H), 8,43 (s, 1H), 7,07 (s, 1 H), 7,01 -6,97 (m, 2H), 6,83-6,78 (m, 1 H), 5,65 (s, 1 H), 4,73-4,71 (m, 2H), 4,65-4,61 (m, 4H), 3,25-3,20 (m, 2H), 2,98-2,93 (m, 2H), 1,60-1,56 (m, 2H), 0,96 (t, j=7,6Hz, 3H).
Refiriéndose al método de síntesis de la realización 33 (BB-3 en la etapa 3 se reemplazó por el fragmento 2), se sintetizó la realización de la tabla 9.
Tabla 9: Fórmula estructural de la realización 34
Figure imgf000049_0001
Los datos de LCMS y RMN H de la realización se muestran en la tabla 10.
Tabla 10: Datos de RMN y LCMS de la realización 34
Figure imgf000049_0002
Realización experimental 1: Prueba in vitro del efecto antagonista contra receptor ETa humano Propósito experimental:
La actividad antagonista de los compuestos contra receptores ETa humanos expresados endógenamente en células SK-N-MC se evaluó midiendo el efecto de los compuestos sobre los cambios en la señal de iones Ca2+ citoplásmicos inducida por antagonistas de receptores ETA humanos usando métodos de detección de fluorescencia. La actividad funcional del efecto antagonista sobre receptores ETa se probó en Eurofins-Cerep SA según procedimientos estándar actuales. Protocolo experimental:
1. Las células se suspendieron en solución de medio de Eagle con modificación de Dulbecco (DMEM, Invitrogen) complementado con FCSd al 1%, a continuación se distribuyeron en una placa de 384 pocillos (100 pl/pocillo) a una densidad de 5x10345células/pocillo;
2. Se mezcló probenecid en solución salina equilibrada de Hank (HBSS, Invitrogen) complementada con ácido 4-(2-hidroxietil)piperazin-1 -etanosulfónico 20 mM (Hepes, Invitrogen) (pH 7,4) con sonda fluorescente (Fluo4 NW, Invitrogen), la mezcla se añadió a cada pocillo, a continuación se equilibró con células a 37°C durante 60 minutos y a continuación se equilibró con células a 22°C durante 15 minutos;
3. La placa de prueba se colocó en un lector de microplacas (CellLux, PerkinElmer), se añadió una solución de DMSO o tampón de HBSS con una concentración apropiada del compuesto de prueba y el control positivo, y se añadió endotelina-1 1 nM o tampón de HBSS (control de base) después de 5 minutos, y a continuación se midió el cambio en la intensidad de fluorescencia proporcional a la concentración de iones Ca2+ de lisosomas celulares libres;
4. Los resultados se mostraron como el porcentaje de inhibición de la respuesta de control a endotelina-1 1 nM; 5. El control positivo estándar fue BQ-123, se probaron varias concentraciones en cada experimento. Los datos se analizaron usando Prism para generar una curva de respuesta a la concentración, y se calcularon los valores de IC50 de los compuestos.
Realización experimental 2: Prueba in vitro de efectos antagonistas contra receptor ETa humano Propósito experimental:
La actividad antagonista del compuesto frente a receptores ETb humanos expresados en células CHO transfectadas se evaluó midiendo el efecto del compuesto sobre los cambios en la señal de iones Ca2+ citoplásmicos inducida por antagonistas de receptores ETb humanos. La actividad funcional del efecto sobre receptores ETB se probó en Eurofins-Cerep SA según los procedimientos estándar actuales.
Protocolo experimental:
1. Las células se suspendieron en tampón de DMEM (Invitrogen) y a continuación se distribuyeron en una placa de 384 pocillos (100 pl/pocillo) a una densidad de 3x104 células/pocillo;
2. Se mezcló probenecid en tampón de HBSS (Invitrogen) complementado con Hepes 20 mM (Invitrogen) (pH 7,4) con sonda fluorescente (Fluo4 NW, Invitrogen), la mezcla se añadió a cada pocillo y a continuación se equilibró con células a 37°C durante 60 minutos y a continuación se equilibró con células a 22°C durante 15 minutos;
3. La placa de prueba se colocó en un lector de microplacas (CellLux, PerkinElmer), se añadió una solución de DMSO o tampón de HBSS con una concentración apropiada del compuesto de prueba y el control positivo, y se añadió endotelina-1 0,3 nM o tampón de HBSS (control de base) después de 5 minutos, y a continuación se midió el cambio en la intensidad de fluorescencia proporcional a la concentración de iones Ca2+ de lisosomas celulares libres;
4. Los resultados se mostraron como el porcentaje de inhibición de la respuesta de control a endotelina-1 0,3 nM; 5. El control positivo estándar fue BQ-788, se probaron varias concentraciones en cada experimento. Los datos se analizaron usando Prism para generar una curva de respuesta a la concentración, y se calcularon los valores de IC50 de los compuestos.
Tabla 11: Actividad antagonista in vitro de los compuestos de la presente divulgación frente a receptores ETa y ETb humanos y su selectividad para ETB
Figure imgf000050_0001
Conclusión:
Todos los compuestos de la presente divulgación exhiben una actividad antagonista muy alta contra receptores ETa humanos in vitro. La selectividad de los compuestos de la presente divulgación para ETa y ETb es de más de 10000 veces.
Realización experimental 3: Ensayo del receptor X de pregnano (PXR) humano
Propósito experimental:
Se evaluó el efecto de los compuestos sobre la inducción de la expresión de CYP3A mediada por PXR.
Materiales y dispositivos experimentales:
Figure imgf000051_0001
Protocolo experimental:
1. Las células DPX2 se descongelaron en condiciones estériles.
2. La solución de células DPX2 se distribuyó en una placa de 96 pocillos (100 pl/pocillo) y la placa se colocó en una incubadora de CO2 al 5%/37°C durante la noche.
3. El medio de alimentación cuantitativo se descongeló en un baño de agua a 37°C. El control positivo rifampicina se descongeló a temperatura ambiente. Se prepararon una serie de compuestos de prueba y diluciones de control positivo en medio de alimentación cuantitativo. Las células se aspiraron cuidadosamente de cada pocillo sin alterar las células durante la aspiración y se descartó el medio. Se transfirieron 100 pl de cada concentración de compuesto de prueba a pocillos premarcados. El funcionamiento del grupo de control positivo y del grupo en blanco fue el mismo. La placa se volvió a colocar en la incubadora durante 24 horas de exposición.
4. Prueba de actividad enzimática:
(1) Se añadieron 7 pl de Luciferin-IPA a 7 pl de medio de alimentación cuantitativo, la mezcla se mezcló por inversión y se vertió en un depósito de reactivo Luciferin-IPA.
(2) Se sacó la placa de 96 pocillos de la incubadora y se aspiró cuidadosamente el medio de cada pocillo. Se añadieron 50 pl del reactivo Luciferin-IPA a cada pocillo y la placa celular se volvió a colocar en la incubadora durante 60 minutos.
(3) Durante la incubación, el tampón P450-Glo se vertió en el reactivo de detección de luciferina y la mezcla se mezcló por inversión.
(4) Se sacó la placa de 96 pocillos de la incubadora y se transfirieron 40 pl de solución de cada pocillo a la placa blanca de 96 pocillos correspondiente, y la posición correspondiente de cada pocillo coincidía con la placa celular original.
(5) Después de transferir la solución P450-Glo™ a la placa de réplica, se transfirieron 10 ml de tampón de titulación celular (tampón de CTF) a un tubo cónico estéril de 15 ml, seguido de la adición de 5 pl de reactivo CellTiter-Fluor™, y la mezcla se mezcló por inversión.
(6) Se utilizó un pipeteador de líquidos de múltiples canales, se añadieron suavemente 100 pl de CellTiter-Fluor™ a la placa de 96 pocillos donde se cultivaron originalmente las células y, a continuación, se volvió a colocar la placa celular en la incubadora durante 60 minutos.
(7) A cada pocillo de la placa de réplica se le añadieron 40 pl de reactivo de detección de luciferina/tampón P450-Glo, se agitó y se incubó durante 20 minutos a temperatura ambiente.
(8) Después de la incubación con el reactivo de detección de luciferina durante 20 minutos, se usó un fotómetro (ajustado de 1 a 5 segundos. Tiempo de lectura) para medir la luminiscencia de cada pocillo de la placa blanca de 96 pocillos. Debe usarse un ajuste de ganancia relativamente alto.
(9) Se añadió tampón de detección de luciferasa ONE-Glo™ al reactivo de detección ONE-Glo™ y la mezcla se mezcló por inversión.
(10) Después de incubar durante 60 minutos a 37°C, se sacó de la incubadora la placa original de 96 pocillos. El lector se ajustó al modo de fluorescencia, la longitud de onda de excitación se ajustó a 380-400 nm, la longitud de onda de emisión se ajustó a 505 nm y se midió la intensidad de fluorescencia de cada pocillo.
(11) Se sacó la placa celular del lector enzimático y se añadieron 100 pl de reactivo de detección ONE-Glo™ a cada pocillo. La mezcla se mezcló agitando las placas y se incubó a temperatura ambiente durante 5 minutos. (12) El lector enzimático se ajustó a 5 segundos para la preagitación y 5 segundos para la lectura de pocillos, y se midió la intensidad de fluorescencia en cada orificio. Deben utilizarse ajustes altos de ganancia (sensibilidad) del instrumento.
5. El efecto de activación del fármaco sobre PXR se reflejó por la inducción en número de veces, es decir, la inducción en número de veces de cada grupo = valor de actividad de luciferasa del grupo de tratamiento con fármaco/valor de actividad de luciferasa del grupo de control de disolvente, y la inducción en número de veces se usó para predecir el efecto de inducción sobre CYP3A4.
El control positivo fue rifampicina, se probaron seis concentraciones en cada experimento. Los datos se analizaron usando Prism para generar una curva de respuesta a la concentración y se calculó el valor de EC50 del compuesto.
Resultados experimentales:
Los resultados de la prueba se muestran en la tabla 12.
Tabla 12: Resultados del efecto de inducción del compuesto de la presente divulgación sobre la expresión de CYP3A mediada por PXR
Figure imgf000052_0001
* Error de cálculo de la curva de simulación
Conclusión:
El compuesto WX013 de la presente divulgación tiene un efecto de inducción relativamente débil sobre la expresión de CYP3A mediada por PXR, y el compuesto macitentán tiene un efecto de inducción relativamente fuerte sobre la expresión de CYP3A mediada por PXR. Por lo tanto, en el experimento de caracterización de la inducción de la expresión de CYP3A mediada por PXR, WX013 es superior a macitentán.
Realización experimental 4: Ensayo de inhibición de isoenzimas del citocromo P450 microsómico hepático humano
Propósito experimental:
El propósito del ensayo fue evaluar la actividad inhibidora de las muestras contra isoenzima del citocromo P450 microsómico hepático humano (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 y CYP3A4) utilizando el sustrato de sonda de 5 en 1 de la isoenzima CYP.
Protocolo experimental:
Se adquirieron microsomas hepáticos humanos (HLM) mixtos de Corning Inc. (Steuben, Nueva York, EE. UU.) y se almacenaron por debajo de -80°C antes de su uso. La solución de trabajo del compuesto de prueba que se ha diluido en concentraciones en serie se añadió a un sistema de incubación que contenía microsomas hepáticos humanos, sustratos de sonda y cofactores del sistema circulatorio, y se usó un control que contenía disolvente sin el compuesto de prueba como control de la actividad enzimática (100%). La concentración del metabolito producido por el sustrato de sonda en la muestra se determinó usando un método de cromatografía de líquidos-espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS). Se realizó un análisis de regresión no lineal sobre el porcentaje medio de actividad frente a la concentración de los sujetos usando SigmaPlot (V.11). El valor de IC50 se calculó mediante una ecuación logarítmica inversa de tres parámetros o cuatro parámetros.
Resultados experimentales:
Los resultados de la prueba se mostraban en la tabla 13.
Tabla 13: Resultados de la inhibición de los compuestos de la presente divulgación sobre la isoenzima del citocromo P450 microsómico hepático humano
Figure imgf000052_0002
Conclusión:
Los compuestos WX005, WX013 y WX025 de la presente divulgación tienen efectos inhibidores muy débiles sobre cinco isoenzimas principales de CYP. El macitentán tiene efectos inhibidores débiles sobre cuatro isoenzimas principales de CYP, y los efectos inhibidores sobre las isoenzimas CYP2C9 son moderados. Por lo tanto, WX005, WX013 y WX025 eran superiores al macitentán en el experimento de caracterización sobre la inhibición de cinco isoenzimas principales de la citocina microsómica hepática humana P450.
Realización experimental 5: Prueba de inhibición del compuesto sobre la bomba de transferencia de sales biliares (BSEP)
Propósito experimental:
Este experimento evalúa si el compuesto de prueba tiene un efecto inhibidor durante el proceso de transporte de la bomba de transferencia de sales biliares (BSEP) usando LC/MS/MS para detectar la capacidad de absorción de la bomba de transferencia de sales biliares (BSEP) al sustrato taurina TCA.
Materiales experimentales:
Figure imgf000053_0001
Preparación de la solución:
1. Tampón A:
HEPES 50 mM pH 7,4, KNO3100 mM, Mg(NO3)210 mM, sacarosa 50 mM.
2. Tampón B:
TRIS 10 mM pH 7,4, KNO3100 mM, Mg(NO3)210 mM, sacarosa 50 mM.
3. Tampón de ATP:
Preparado con tampón A, ATP 8,16 mM y ácido taurocólico 4,08 pM estaban contenidos en 12 ml de tampón A.
4. Búfer de AMP:
Preparado con tampón A, AMP 8,16 mM, ácido taurocólico 4,08 pM, 12 ml de tampón A estaban contenidos en el tampón A.
5. Solución vesicular de BSEP-Hi5-VT:
Se preparó una solución que contenía 5 pg/pl de BSEP-Hi5-VT con tampón A.
Preparación de la muestra:
1. El compuesto se diluyó hasta 100 mM con DMSO; a continuación se diluyó en serie 3 veces para una dilución de 11 puntos; la concentración mínima fue de 0,169 pM.
2. La referencia positiva gliburida se diluyó hasta 20 mM con DMSO; a continuación se diluyó dos veces en serie para una dilución de 11 puntos; la concentración mínima fue de 19,5 pM.
Protocolo experimental:
1. Se transfirieron 0,3 pl de una solución del compuesto en DMSO o una solución de DMSO diluida a los pocillos correspondientes de la placa del compuesto usando ECHO, respectivamente.
2. Se añadieron 14,7 pl de tampón de ATP al compuesto y a los pocillos correspondientes de cero por ciento de efecto (ZPE), respectivamente.
3. Se añadieron 14,7 pl de tampón de AMP a los pocillos correspondientes de 100% de efecto (HPE), respectivamente.
4. La placa se agitó durante 10 minutos a 25°C.
5. Se añadieron 15 pl de solución vesicular de BSEP-Hl5-VT a todos los pocillos, respectivamente, y la placa se agitó durante otros 40 minutos a 25°C.
6. Se añadieron inmediatamente 5 pl de una solución de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 0,5 M a todos los pocillos, seguido de la adición de 65 pl de tampón B y se completó toda la reacción.
7. Se transfirieron 95 pl de líquido a la placa de filtración desde la placa de compuestos al final de la reacción usando un instrumento.
8. Después de colocar la placa de recepción de líquido debajo de la placa de filtración, se eliminó el líquido usando una centrífuga y se descartó el líquido de la placa de recepción.
9. Se añadieron 90 pl de tampón B a la placa de filtración. Después de colocar la placa de recepción de líquido debajo de la placa de filtración, se eliminó el líquido usando una centrífuga y la placa de recepción de líquido se descartó y la placa de filtración se lavó tres veces en total.
10. La placa de filtración se secó durante la noche.
11. Al día siguiente, se añadieron a la placa de filtración 80 pl de solución de metanol/agua (80/20, relación en volumen).
12. La placa se agitó durante 15 minutos después de unir la placa de filtración a la membrana.
13. Se colocó una nueva placa de recepción de líquido debajo de la placa de filtración y la placa de filtración se centrifugó durante 5 minutos y todos los líquidos de la placa de filtración se filtraron a la placa de recepción. 14. Se añadieron 15 pl de solución de estándar interno a cada pocillo en la placa de recepción de líquido y la placa se selló con una membrana.
15. El contenido de ácido taurocólico en la placa de recepción se detectó usando LC/MS/MS.
Se probaron varias concentraciones en cada experimento. Los datos se analizaron usando Prism para generar una curva de respuesta a la concentración, y se calcularon los valores de IC50 de los compuestos.
Resultados experimentales:
Los resultados experimentales se muestran en la tabla 14.
Tabla 14: Efecto inhibidor del compuesto de la presente divulgación sobre la bomba de transporte de sales biliares
(BSEP)
Figure imgf000055_0001
Conclusión:
El efecto inhibidor del compuesto WX013 de la presente divulgación sobre la bomba de transporte de sales biliares (BSEP) fue extremadamente débil, pero el efecto inhibidor del macitentán fue fuerte. Por lo tanto, el efecto inhibidor de WX013 sobre la bomba de transporte de sales biliares fue mucho más débil que el del macitentán, lo que reducía significativamente el riesgo de desarrollar hepatotoxicidad.
Realización experimental 6: Evaluación de la farmacocinética de los compuestos en ratas
Propósito experimental:
Se seleccionaron ratas SD macho como animales de prueba en este estudio, y se midió cuantitativamente la concentración de fármaco en el plasma de las ratas en diferentes momentos mediante inyección intravenosa o administración gástrica oral del compuesto de prueba usando el método de LC/MS/MS para evaluar las características farmacocinéticas de los compuestos de prueba en ratas.
Materiales experimentales:
Ratas Sprague Dawley (SD) (macho, 200-300 g, 7-10 semanas de edad, Beijing Viton Lihua o Shanghai Slake).
Protocolo experimental:
Se inyectó una solución transparente del compuesto de prueba en ratas SD a través de la vena caudal (ayuno durante la noche), o se administró por vía oral por sonda (ayuno durante la noche). Para la administración intravenosa, se recogieron 200 pl de sangre yugular mediante venopunción a las 0 horas (antes de la dosificación) y a las 0,0833, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas después de la dosificación, que a continuación se colocaron en un tubo de anticoagulación complementado con EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). La mezcla del tubo de anticoagulación se sometió a turbulencia para mezclar a fondo a 4°C y a continuación se centrifugó a 13000 rpm durante 10 minutos para recoger el plasma. Para la administración por sonda oral, se recogieron 200 pl de sangre yugular mediante venopunción a las 0 horas (antes de la dosificación) y a las 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas después de la dosificación, que a continuación se colocaron en un tubo de anticoagulación complementado con EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). La mezcla del tubo de anticoagulación se sometió a turbulencia para mezclar a fondo y a continuación se centrifugó a 13000 rpm durante 10 minutos para recoger el plasma. La concentración de fármaco en plasma se midió mediante el método de LC/MS/MS, y los parámetros farmacocinéticos relacionados se calcularon usando el programa de farmacocinética WinNonlin™ Versión 6.3 (Pharsight, Paul View, CA) en el método trapezoidal logarítmico lineal de modelo no compartimentado.
Resultados experimentales:
Los resultados experimentales se muestran en la tabla 15.
Tabla 15: Parámetros farmacocinéticos de los compuestos de la divulgación en ratas
Figure imgf000055_0002
Conclusión:
Los compuestos WX001 y WX013 de la presente divulgación tienen una velocidad de depuración plasmática baja (< 5 ml/min/kg) y una alta biodisponibilidad oral (> 70%) en ratas.
Realización experimental 7: Evaluación de la farmacocinética de compuestos en perros beagle
Propósito experimental:
Se seleccionaron perros beagle macho como los animales probados en este estudio, y se midió cuantitativamente la concentración de fármaco en plasma de los perros beagle en diferentes momentos a través de inyección intravenosa o administración gástrica por perfusión oral de los compuestos de prueba usando el método de LC/Ms /MS para evaluar las características farmacocinéticas de los compuestos de prueba en los perros beagle.
Materiales experimentales:
Perro beagle (macho, 6-15 kg, más de 6 meses de edad, Beijing Marshall Biotechnology Co., Ltd.).
Protocolo experimental:
Una solución transparente del compuesto de prueba se inyectó por vía intravenosa en perros beagle (ayuno durante la noche), o se administró por vía oral a perros beagle por sonda (ayuno durante la noche). Para la administración intravenosa, se recogieron 500 gl de sangre de los vasos periféricos a las 0 horas (antes de la dosificación) y a las 0. 0833, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas después de la dosificación, que a continuación se introdujeron en un tubo de anticoagulación complementado con EDTA-K2 (Suzuki Healthcare Medical Co., Ltd.). Para la administración gástrica oral, se recogieron 500 gl de sangre de los vasos periféricos a las 0 horas (antes de la dosificación) y a las 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8 y 24 horas después de la dosificación, que a continuación se introdujeron en un tubo de anticoagulación complementado con EDTA-K2. La mezcla en el tubo de anticoagulación se sometió a turbulencia para mezclar a fondo y a continuación se centrifugó a 13000 rpm durante 10 minutos para recoger el plasma. La concentración de fármaco en plasma se midió mediante el método de LC/MS/MS, y los parámetros farmacocinéticos relacionados se calcularon usando el programa de farmacocinética WinNonlin™ Versión 6.3 (Pharsight, Paul View, CA) en el método trapezoidal logarítmico lineal con modelo no compartimentado.
Resultados experimentales:
Los resultados experimentales se muestran en la tabla 16.
Tabla 16: Parámetros farmacocinéticos de los compuestos de la presente divulgación en perros beagle
Figure imgf000056_0001
Conclusión:
Los compuestos WX001 y WX013 de la presente divulgación tienen una baja velocidad de depuración plasmática (< 5 ml/min/kg) y una alta biodisponibilidad oral (> 50%) en perros beagle.

Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula (I), uno de sus isómeros geométricos o estereoisómeros o una de sus sales farmacéuticamente aceptables,
Figure imgf000057_0001
donde,
R1 se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH y NH2;
R2 se selecciona de H y alquilo C1-3, donde el alquilo C1-3 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R;
R3 se selecciona de H, alquilo C1-6, heteroalquilo C1-6, -alquil(C1-3)-cicloalquilo(C3-6), cicloalquilo C3-6 y -alquil(C1-3)-heterocicloalquilo(de 3-7 miembros), donde el heteroalquilo C1-6, -alquil(C1-3)-cicloalquilo(C3-6), cicloalquilo C3-6 y -alquil(C1-3)-heterocicloalquilo(de 3-7 miembros) está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R;
o R2 y R3 están conectados para formar un anillo de 3 a 8 miembros opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R; el anillo B se selecciona de heterocicloalquilo de 3-7 miembros y heteroarilo de 5-6 miembros, donde el heterocicloalquilo de 3-7 miembros o el heteroarilo de 5-6 miembros está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R;
R se selecciona independientemente de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, alquilo C1-6 y heteroalquilo C1-6, donde el alquilo C1-6 o el heteroalquilo C1-6 está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R';
R' se selecciona independientemente de F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, CH2F, CHF2, CF3 y Et;
cada uno del heteroalquilo C1-6, heterocicloalquilo de 3-7 miembros y heteroarilo de 5-6 miembros contiene uno, dos, tres o cuatro heteroátomos o grupos de heteroátomos seleccionados independientemente de N, -O-, -S-, -NH-, -S(=O)2- y -S(=O)-.
2. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según la reivindicación 1, donde R se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, alquilo C1-3, alquil(C1-3)-S(=O)2- y alquil(C1-3)-O-, donde el alquilo C1-3, alquil(C1-3)-S(=O)2- o alquil(C1-3)-O- está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R'; opcionalmente, R2 se selecciona de H y Me;
opcionalmente, R3 se selecciona de H, alquilo C1-4, alquil(C1-4)-O-alquilo(C1-4), ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclopropilo, -alquil(C1-3)-tetrahidrofuranilo y -alquil(C1-3)-tetrahidropiranilo, donde el alquilo C1-4, alquil(C1-4)-O-alquilo(C1-4), ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclobutilo, -alquil(C1-3)-ciclopropilo, -alquil(C1-3)-tetrahidrofuranilo o -alquil(C1-3)-tetrahidropiranilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R.
3. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según la o
Figure imgf000057_0002
^sI>I reivindicación 2, donde R se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, Me, Et, y 0 ’ donde o
,0 .
Figure imgf000057_0003
II
el Me, Et, ' o O está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R'; opcionalmente, R3 se
Figure imgf000057_0004
, .
4. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según la reivindicación 3, donde R se selecciona de H, F, Cl, Br, I, OH, N H 2 , C N , Me, C H 2 F , C H F 2 , F C 3 , Et,
Figure imgf000058_0006
5. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde R2 y R3 están conectados para formar un heterocicloalquilo de 6-8 miembros opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R.
6. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según la
Rz' r R3
Figure imgf000058_0001
reivindicación 5, donde la unidad estructural se selecciona ’ donde el
Figure imgf000058_0002
está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R.
7. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según la
R2' r Rs
Figure imgf000058_0003
reivindicación 6, donde la unidad estructural ' se selecciona
8. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde el anillo B se selecciona de tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, 1,3-dioxolanilo, pirrolidinilo, tiazolilo, pirazolilo e imidazolilo, donde el tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, 1,3-dioxolanilo, pirrolidinilo, tiazolilo, pirazolilo o imidazolilo está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres R.
9. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según la
Figure imgf000058_0004
reivindicación 8, donde la unidad estructural \ se selecciona de
Figure imgf000058_0005
10. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, que se selecciona de
Figure imgf000059_0001
donde R, Ri o R2 es como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.
11. Un compuesto según la reivindicación 1, uno de sus isómeros geométricos o estereoisómeros o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, donde el compuesto se selecciona de
Figure imgf000059_0002
Figure imgf000060_0001
Figure imgf000061_0001
12. El compuesto, su isómero geométrico o estereoisómero o su sal farmacéuticamente aceptable según la reivindicación 11, que se selecciona de
Figure imgf000061_0002
13. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 como ingrediente activo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
14. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 o la composición según la reivindicación 13, para el uso como antagonista de los receptores ETa.
15. El compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 o la composición según la reivindicación 13, para el uso en el tratamiento de la hipertensión arterial pulmonar, la hipertensión primaria, la hipertensión refractaria, la nefropatía diabética y el vasoespasmo intracraneal.
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