ES2925212T3 - Compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo, método de preparación y uso médico del mismo - Google Patents

Compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo, método de preparación y uso médico del mismo Download PDF

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Abstract

La presente invención se refiere a un compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo que actúa como inhibidor de FGFR, un método de preparación del mismo y un uso médico del mismo. En particular, la presente invención se refiere a un compuesto como se muestra en la fórmula general (I) y una de sus sales farmacéuticamente aceptables; una composición farmacéutica que incluye el compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; un método para tratar y/o prevenir enfermedades asociadas con FGFR, particularmente tumores, usando el compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; y un método de preparación para el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención también se relaciona con el uso del compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica que incluye el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un fármaco para tratar y/o prevenir enfermedades asociadas con FGFR, particularmente tumores. , en donde la definición de cada grupo sustituyente en la fórmula general (I) es la misma que en la descripción. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo, método de preparación y uso médico del mismo
Campo técnico
La presente invención se refiere a un nuevo compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo que actúa como un inhibidor de FGFR o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; una composición farmacéutica que incluye el compuesto o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; un método de preparación para el compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo o una de sus sales farmacéuticamente aceptables; el uso del compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica que incluye el compuesto heterocíclico sustituido con alquinilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la preparación de un fármaco para tratar y/o prevenir enfermedades asociadas con FGFR, particularmente tumores.
Antecedentes técnicos
El receptor del factor de crecimiento de fibroblastos (FGFR) es un tipo de receptor tirosina quinasa (RTK) compuesto estructuralmente por un dominio de unión a ligando extramembrana, un único dominio transmembrana y una tirosina quinasa intramembrana. Incluye principalmente cuatro subtipos, FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4. Él y su ligando, el factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) juegan un papel regulador importante en la señalización celular. Como señal estimuladora extracelular, el FGF se une al dominio extracelular de FGFR, lo cual provoca la fosforilación de su tirosina quinasa intramembrana, lo cual activa una serie de vías de señalización de regulación negativa que regulan la proliferación, diferenciación y metástasis celular.
Una variedad de tumores están estrechamente relacionados con la expresión y activación de FGF/FGFR, como el cáncer de pulmón de células no pequeñas, el cáncer de mama, el cáncer gástrico, el cáncer de hígado, el cáncer de vejiga, el cáncer de endometrio, el cáncer de próstata, el cáncer de cuello uterino, el cáncer de colon y el cáncer de esófago, mieloma y melanoma, etc. (Clin. Cáncer Res. 2012, 18, 1855). Los estudios han demostrado que la amplificación de FGFR1 representa el 20 % del cáncer de pulmón de células no pequeñas, la amplificación de FGFR2 representa aproximadamente el 5 % del cáncer gástrico, la mutación de FGFR3 representa aproximadamente el 70 % del cáncer de vejiga no invasivo y el FGFR4 se amplifica en el cáncer de hígado (PloS One 2012, 7, e36713). Por lo tanto, el desarrollo de inhibidores dirigidos a FGFR se ha convertido en un tema candente en la investigación de fármacos antitumorales. Drug Disc. Today 2014, 19, 51).
Actualmente existen en el mercado algunos medicamentos que no son específicos de FGFR, como sunitinib de Pfizer, lenvatini de Eisai y nintedanib de Boehringer Ingelheim, pero actualmente no hay ningún inhibidor específico de FGFR disponible. Los inhibidores de FGFR específicos que ingresan a las clínicas incluyen HMPL-453, bGJ-398, LY-2874455, AZ-4547, JNJ-42756493, TAS-120, ARQ-087 y BLU-554.
El documento EP 3 023 100 A1 se refiere a fármacos antitumorales para la administración intermitente de inhibidores de FGFR.
El documento WO 2008/075068 A3 describe acilaminopirazoles como inhibidores de FGFR.
El desarrollo de los inhibidores de FGFR ha atraído la atención de muchas empresas biofarmacéuticas, pero todavía es necesario desarrollar nuevos compuestos debido a son promisorios en el tratamiento de varios tumores malignos. A través de los esfuerzos continuos de los inventores, la presente invención ha diseñado un compuesto que tiene una estructura representada por la fórmula general (II), y se ha encontrado que un compuesto que tiene tal estructura presenta una función y un efecto excelentes.
Resumen de la invención
La presente descripción muestra un compuesto (que no es parte de la invención) representado por la fórmula general (I) como un inhibidor de FGFR, un profármaco del mismo, un derivado isotópico estable del mismo, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un isómero del mismo o una mezcla de los mismos:
Figure imgf000002_0001
en donde:
A es N o CR2;
El anillo B es un anillo de benceno o un anillo de heteroarilo de 5-6 miembros, en donde el anillo de benceno y el anillo de heteroarilo están opcionalmente sustituidos con uno o más G1;
R1 se selecciona independientemente de H, halógeno, ciano, alquilo C1-6 o -NHR3;
R2 se selecciona independientemente de H, halógeno, ciano, alquilo C1-6, en donde el alquilo está opcionalmente sustituido con halógeno, ciano, hidroxi o alquilo -OC1-6;
R3 se selecciona independientemente de H, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, cicloalquilo y heterociclilo están opcionalmente sustituidos con halógeno, cianuro, -OR4, -NR5R6, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros;
X está ausente o es alquileno C1-6;
Y está ausente o se selecciona de cicloalquileno C3-8, heterociclileno de 3-8 miembros, arileno o heteroarileno, en donde el cicloalquileno, el heterociclileno, el arileno y el heteroarileno están opcionalmente sustituidos con uno o más G2;
Z se selecciona independientemente de ciano, -NR7CN,
Figure imgf000003_0001
el enlace a es un doble enlace o un triple enlace;
en el caso de que el enlace a sea un doble enlace, Ra, Rb y Rc se seleccionan cada uno independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más G3;
Ra y Rb o Rb y Rc opcionalmente junto con el átomo de carbono al que están enlazados forman un anillo opcional de 3-6 miembros que contiene un heteroátomo;
en el caso de que el enlace a sea un enlace triple, Ra y Rc están ausentes, Rb se selecciona independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más G4;
R4 se selecciona independientemente de H, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más G5;
G1, G2, G3, G4 y G5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-8, heterociclilo de 3-8 miembros, arilo C6-10, heteroarilo de 5-10 miembros, -OR8, -OC(O)NR8R9, -C(O)OR8, -C(O)NR8R9, -C(O)R8, -NR8R9, -NR8C(O)R9, -NR8C(O)NR9R10, -S(O)mR8 y -NR8S(O)mR9, en donde el alquilo, el alquenilo, el alquinilo, el cicloalquilo, el heterociclilo, el arilo y el heteroarilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, C1-6 alquilo, C3-8 cycloalquilo, 3-8 membered heterociclilo, -OR11, -OC(O)NR11R12, -C(O)OR11, -C(O)NR11R12, -C(O)R11, -NR11R12, -NR11C(O)R12,-NR11C(O)NR12R13, -S(O)mR11 y -NR11S(O)mR12; R4, R5, R6, R8, R9, R10, R11, R12, y R13 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, un cicloalquilo C3-8, heterociclilo monocíclico de 3-8 miembros, heteroarilo monocíclico y fenilo; y m es 1 o 2.
Una modalidad de la presente descripción (que no forma parte de la invención) se relaciona con el compuesto representado por la fórmula general (I) como se mencionó anteriormente, un profármaco del mismo, un derivado isotópico estable del mismo, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un isómero del mismo, o una mezcla de los mismos, en donde A es N o CH, y preferentemente N.
Otra modalidad de la presente descripción (que no forma parte de la invención) se relaciona con el compuesto representado por la fórmula general (I) como se mencionó anteriormente, un profármaco del mismo, un derivado isotópico estable del mismo, una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un isómero del mismo, o una mezcla de los mismos, en donde el anillo B es un anillo de benceno.
La presente invención proporciona un compuesto representado por la fórmula general (II),
Figure imgf000004_0001
en donde,
Ga, Gb, Gc, y Gd se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterociclilo de 3-8 miembros, -OR8, - NR8R9 y -C(O)NR8R9, en donde el alquilo, cicloalquilo o heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3- 8 o heterociclilo de 3-8 miembros
A es N;
R1 se selecciona independientemente de H, -NH2 y -NHR3; y R3 se selecciona independientemente de alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con halógeno, ciano, -OR4, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros;
X está ausente o es alquileno C1-6;
Y está ausente o es cicloalquileno C3-8 o heterociclileno de 3-8 miembros,
Z se selecciona independientemente de ciano,
Figure imgf000004_0002
el enlace a es un doble enlace o un triple enlace;
en el caso de que el enlace a sea un doble enlace, Ra, Rb y RO se seleccionan cada uno independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, heterociclilo de 3-6 miembros, -OR8 y -NR8R9;
en el caso de que el enlace a sea un enlace triple, Ra y Rc están ausentes, Rb se selecciona independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, heterociclilo de 3-6 miembros, -OR8 y NR8R9;
R4, R8 y R9 se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6,
o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero, o un derivado isotópico 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S o 36Cl del mismo.
Otra modalidad de la presente invención se refiere a un compuesto como se muestra en la fórmula general (III) más abajo:
Figure imgf000004_0003
en donde,
Ga y Gb se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, ciano, alquilo Ci-6, cicloalquilo C3-8, heterociclilo de 3-8 miembros, -OR8, -NR8R9 y -C(O)NR8R9, en el que el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, 3- heterociclilo de 8 miembros, en el que A, R1, R8, R9, X, Y, Z son como se definen anteriormente para la Fórmula (II).
Otra modalidad de la presente invención se refiere al compuesto representado por la fórmula general (II) como se mencionó anteriormente, en donde R 1 se selecciona independientemente de H, -NH2 y -NH-alquilo C1-6.
En una modalidad de la presente invención, R1 puede ser H o -NH2.
En una modalidad de la presente invención, Ga, Gb, Gc, y Gd se seleccionan cada uno independientemente de - O­ alquilo C1-2 y halógeno.
En una modalidad de la presente invención, R1 se selecciona independientemente de H, -NH2 y -NHR3; y R3 se selecciona independientemente de alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están sustituidos con halógeno, ciano, -OR4, -NR5R6, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros.
Otra modalidad de la presente invención se refiere a los compuestos que se muestran en la fórmula general (II) y (III), en donde,
X está ausente o es alquileno C1-6;
Y está ausente o es cicloalquileno C3-8 o heterociclileno de 3-8 miembros,
Z se selecciona independientemente de ciano
Figure imgf000005_0001
el enlace a es un doble enlace o un triple enlace;
en el caso de que el enlace a sea un doble enlace, Ra, Rb y Rc se seleccionan cada uno independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, heterociclilo de 3-6 miembros, -OR8 y -NR8R9;
en el caso de que el enlace a sea un enlace triple, Ra y Rc están ausentes, Rb se selecciona independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, heterociclilo de 3-6 miembros, -OR8 y -NR8R9;
R4, R8 y R9 se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6,
o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero, o un derivado isotópico 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S o 36Cl del mismo.
Otra modalidad de la presente invención se relaciona con el compuesto representado por la fórmula general (II) como se mencionó anteriormente, en donde el compuesto se selecciona de:
Figure imgf000006_0001
continuado
Figure imgf000007_0001
continuado
Figure imgf000008_0001
continuado
Figure imgf000009_0001
continuado
Figure imgf000010_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero, o un derivado isotópico 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S o 36Cl del mismo.
Los compuestos de la presente invención tienen un efecto inhibidor significativo sobre la actividad de FGFR. Los compuestos de la presente invención son efectivos para inhibir la actividad de FGFR1, FGFR2, FGFR3 o FGFR4, preferentemente con un IC50 de 100 a 1000 nM para inhibir FGFR1, FGFR2, FGFR3 o FGFR4, con mayor preferencia un IC50 de menos de 100 nM, con la máxima preferencia una IC50 de menos de 10 nM. En particular, los compuestos de la presente invención tienen un efecto inhibidor significativo sobre la proliferación celular de células tumorales (por ejemplo, células tumorales Hep3B, RT4 y SNU-16), preferentemente con una IC50 de 100 a 1000 nM, con mayor preferencia con una IC50 de menos de 100 nM, y con la máxima preferencia que tiene un IC50 de menos de 10 nM.
Los compuestos de la presente invención son, por lo tanto, útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades asociadas con FGFR que incluyen, pero no se limitan a, tumores y enfermedades inflamatorias tales como osteoartritis. Los compuestos de la presente invención son útiles para tratar o prevenir tumores relacionados con FGFR, tales como cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de esófago, melanoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de células renales, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de endometrio, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata y cáncer de hígado (por ejemplo, carcinoma hepatocelular), más concretamente, cáncer de hígado, cáncer gástrico, cáncer de pulmón de células no pequeñas y cáncer de vejiga.
Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general (II), o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S o 36Cl derivado isotópico del mismo, en la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad mediada por FGFR, tal como un tumor o una enfermedad inflamatoria que incluye, pero no limitado a, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de esófago, melanoma, rabdomiosarcoma, cáncer de células renales, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de endometrio, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata y cáncer de hígado. La presente invención se refiere además a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S o 36Cl derivado isotópico del mismo, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un medicamento que comprende el compuesto de fórmula general (II) o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S o 36Cl derivado isotópico del mismo o una composición farmacéutica, en donde el medicamento se usa para tratar o prevenir una enfermedad mediada por FGFR, tal como un tumor y una enfermedad inflamatoria.
De acuerdo con la presente invención, el medicamento puede estar en cualquier forma de dosificación farmacéutica que incluye, entre otras, una tableta, una cápsula, una solución, una preparación liofilizada y una inyección.
La preparación farmacéutica de la presente invención puede administrarse en forma de unidad de dosificación que contiene una cantidad predeterminada del ingrediente activo por unidad de dosificación. Tal unidad puede comprender, por ejemplo, de 0,5 mg a 1 g, preferentemente de 1 mg a 700 mg, particularmente preferentemente de 5 mg a 300 mg, de un compuesto de la presente invención, en dependencia de la enfermedad que se esté tratando, el método de administración, así como la edad, el peso y el estado del paciente, o un preparado farmacéutico puede administrarse en forma de unidades de dosificación que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosificación. Las formulaciones de unidades de dosificación preferidas son aquellas que contienen las dosis diarias o fraccionadas indicadas anteriormente o sus fracciones correspondientes del ingrediente activo. Además, las preparaciones farmacéuticas de este tipo pueden prepararse mediante el uso de métodos bien conocidos en el campo de la farmacia.
Las preparaciones farmacéuticas de la presente invención pueden adaptarse para la administración mediante cualquier método de administración adecuado que se desee, por ejemplo, por vía oral (incluye bucal o sublingual), rectal, nasal, tópica (incluye bucal, sublingual o transdérmica), vaginal o parenteral (incluye subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérmica). Las formulaciones pueden prepararse, por ejemplo, al combinar el ingrediente activo con uno o más excipientes o uno o más adyuvantes, mediante el uso de cualquiera de los métodos conocidos en el campo farmacéutico.
Descripción de las modalidades
A menos que se indique de otra manera, los siguientes términos usados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones de la presente solicitud tienen los siguientes significados.
La expresión "Cx-y" tal como se usa aquí indica un rango del número de átomos de carbono, en donde x e y son ambos números enteros, por ejemplo, un grupo cicloalquilo C3-8 significa un grupo cicloalquilo que tiene de 3 a 8 átomos de carbono, es decir, un grupo cicloalquilo que tiene 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono. Además, debe entenderse que "C3-8" también abarca cualquier subintervalo contenido en él, como C3-7, C3-6, C4-7, C4-6, C5-6 y similares.
"Alquilo" se refiere a un grupo hidrocarbilo lineal o ramificado saturado que contiene de 1 a 20 átomos de carbono, por ejemplo, de 1 a 18 átomos de carbono, de 1 a 12 átomos de carbono, de 1 a 8 átomos de carbono, de 1 a 6 átomos de carbono, o de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos no limitantes de los grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo, sec-butilo, n-pentilo, 1,1 -dimetilpeopilo, 1,2-dimetilpropilo, 2,2-dimetilpropilo, 1 -etilpropilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, n-hexilo, 1 -etil-2-metilpropilo, 1, 1,2-trimetilpropilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo y 2-etilbutilo. El grupo alquilo puede estar sustituido o no sustituido.
"Alquenilo" se refiere a un grupo hidrocarbilo lineal o ramificado que contiene al menos un doble enlace carbonocarbono y usualmente de 2 a 20 átomos de carbono, por ejemplo, de 2 a 8 átomos de carbono, de 2 a 6 átomos de carbono o de 2 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos no limitantes de grupos alquenilo incluyen etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1 -butenilo, 2-butenilo, 3-butenilo, 2-metil-2-propenilo, 1,4-pentadienilo y 1,4-butadienilo. El grupo alquenilo puede estar sustituido o no sustituido.
"Alquinilo" se refiere a un grupo hidrocarbilo de cadena lineal o ramificada que contiene al menos un triple enlace carbono-carbono y usualmente de 2 a 20 átomos de carbono, por ejemplo, de 2 a 8 átomos de carbono, de 2 a 6 átomos de carbono o de 2 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos no limitantes de grupos alquinilo incluyen etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1 -butinilo, 2-butinilo y 3-butinilo. El grupo alquinilo puede estar sustituido o no sustituido.
"Cicloalquilo" se refiere a un grupo sustituyente hidrocarbilo cíclico saturado que contiene de 3 a 14 átomos de carbono cíclicos. El grupo cicloalquilo puede ser un anillo de un solo carbono y normalmente contiene de 3 a 7 átomos de carbono en el anillo. Los ejemplos no limitantes de grupos cicloalquilo monocíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. El grupo cicloalquilo puede ser alternativamente estructuras de dos 0 tres anillos fusionadas, como decahidronaftilo. El grupo cicloalquilo puede estar sustituido o no sustituido.
"Grupo heterocíclico o heterocíclico" se refiere a un grupo cíclico monocíclico o policíclico saturado o parcialmente insaturado que contiene de 3 a 20 átomos cíclicos, por ejemplo de 3 a 16, de 3 a 14, de 3 a 12, de 3 a 10, de 3 a 8, de 3 a 6, o de 5 a 6 átomos cíclicos, en los que uno o más de los átomos cíclicos se seleccionan del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno o S(O)m (donde m es un número entero de 0 a 2), pero no incluye el resto del anillo de -OO-, -OS- o -SS-, los átomos cíclicos restantes son carbono. Preferentemente, comprende de 3 a 12 átomos cíclicos, con mayor preferencia de 3 a 10 átomos cíclicos, con la máxima preferencia 5 o 6 átomos cíclicos, en donde de 1 a 4 son heteroátomos, con mayor preferencia de 1 a 3 son heteroátomos, con la máxima preferencia de 1 a 2 son heteroátomos. Los ejemplos no limitantes de grupos heterocíclicos monocíclicos incluyen pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiperazinilo, oxearilo y azetidinilo. Los grupos heterocíclicos policíclicos incluyen grupos heterocíclicos policíclicos fusionados, con puente o espiro. El grupo heterocíclico o heterocíclico puede estar sustituido o no sustituido.
"Arilo" se refiere a un grupo monocíclico aromático o policíclico fusionado que contiene de 6 a 14 átomos de carbono, preferentemente de 6 a 10 miembros, tal como fenilo y naftilo, con la máxima preferencia fenilo. El anillo de arilo puede fusionarse con un anillo de heteroarilo, heterociclilo o cicloalquilo, en donde el anillo al que está unida la estructura principal es un anillo de arilo, los ejemplos no limitantes incluyen:
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el grupo arilo puede estar sustituido o no sustituido.
"Heteroarilo o anillo de heteroarilo" se refiere a un sistema heteroaromático que contiene de 5 a 14 átomos cíclicos, en donde de 1 a 4 átomos cíclicos se seleccionan de heteroátomos que incluyen oxígeno, azufre y nitrógeno. El grupo heteroarilo tiene preferentemente de 5 a 10 miembros. Con mayor preferencia, el grupo heteroarilo tiene 5 o 6 miembros, tales como furilo, tienilo, piridilo, pirrolilo, N-alquilpirrolilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, imidazolilo, tetrazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo y similares. El anillo de heteroarilo puede fusionarse con un anillo de arilo, heterocíclico o cicloalquilo, en donde el anillo al que está unida la estructura principal es un anillo de heteroarilo, los ejemplos no limitantes incluyen:
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el grupo heteroarilo puede estar sustituido o no sustituido.
"Halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo.
"Ciano" se refiere a -CN.
"Opcional" u "opcionalmente" se refiere a que el evento o entorno descrito posteriormente puede ocurrir, pero no necesariamente, incluido cuando el evento o entorno ocurre o no ocurre. Por ejemplo, "grupo heterocíclico opcionalmente sustituido por un grupo alquilo" se refiere a que un grupo alquilo puede estar presente, pero no necesariamente, y la descripción incluye el caso en el que el grupo heterocíclico está sustituido con un grupo alquilo y el caso en el que el grupo heterocíclico no está sustituido con un grupo alquilo.
"Sustituido" se refiere a uno o más átomos de hidrógeno en el grupo, preferentemente 5, con mayor preferencia de 1 a 3 átomos de hidrógeno, independientemente entre sí, sustituidos con un número correspondiente de sustituyentes. No hace falta decir que los grupos sustituyentes están solo en sus posibles posiciones químicas, y un experto en la materia podrá determinar (mediante experimentación o teoría) las sustituciones que pueden o no ser posibles sin un esfuerzo excesivo. Por ejemplo, un grupo amino o un grupo hidroxilo que tiene un hidrógeno libre que puede ser inestable cuando se asocia con un átomo de carbono que tiene un enlace insaturado (por ejemplo, olefínico). Dichos grupos sustituyentes incluyen, entre otros, hidroxilo, amino, halógeno, ciano, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-8 y similares.
"Composición farmacéutica" se refiere a una composición que comprende uno o más compuestos descritos en la presente descripción, o una sal farmacéuticamente aceptable o un profármaco del mismo, y otros componentes tales como portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables. El propósito de la composición farmacéutica es facilitar la administración a un organismo y facilitar la absorción del ingrediente activo y por lo tanto ejerce una actividad biológica deseada.
"Isómero" se refiere a un compuesto que tiene la misma fórmula molecular pero que difiere en la naturaleza o secuencia de sus enlaces atómicos o en la disposición espacial de sus átomos, lo que se denomina "isómero". Un isómero cuyo espacio atómico está dispuesto de manera diferente se denomina "estereoisómero". Los estereoisómeros incluyen isómeros ópticos, isómeros geométricos e isómeros conformacionales.
Los compuestos de la presente invención pueden existir en forma de isómero óptico. Estos isómeros ópticos están en la configuración "R" o "S" en dependencia de la configuración de los sustituyentes alrededor del átomo de carbono quiral. Los isómeros ópticos incluyen enantiómeros y diastereómeros. Los métodos para preparar y aislar isómeros ópticos son conocidos en la técnica.
Los compuestos de la presente invención también pueden existir en forma de isómero geométrico. La presente invención tiene varios isómeros geométricos y mezclas de los mismos que resultan de la distribución de sustituyentes alrededor de dobles enlaces carbono-carbono, dobles enlaces carbono-nitrógeno, grupos cicloalquilo o grupos heterocíclicos. Los grupos sustituyentes alrededor del doble enlace carbono-carbono o el enlace carbononitrógeno se designan como configuración Z o E, y los grupos sustituyentes alrededor del cicloalquilo o heterociclo se designan en configuración cis o trans.
Los compuestos de la invención también pueden exhibir tautomerismo, tal como tautomerización de ceto-enol.
Debe entenderse que la presente invención incluye cualquier forma tautomérica o estereoisómera y mezclas de las mismas, y no se limita a ninguna de las formas tautoméricas o estereoisómeras usadas en la nomenclatura o fórmula estructural química del compuesto.
"Isótopos" son todos los isótopos de los átomos que se encuentran en los compuestos de la presente invención. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico pero diferente número de masa. Ejemplos de isótopos adecuados para incorporar a los compuestos de la presente invención son hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, es decir, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F y 36Cl. Los compuestos marcados isotópicamente de la presente invención pueden prepararse generalmente por medios técnicos convencionales conocidos por un experto en la materia o por métodos análogos a los descritos en los ejemplos adjuntos, mediante el uso de los reactivos marcados isotópicamente en lugar de los reactivos marcados no isotópicamente. Dichos compuestos tienen una variedad de usos potenciales, por ejemplo, como estándar y reactivo en la determinación de una actividad biológica. En el caso de los isótopos estables, dichos compuestos tienen el potencial de alterar ventajosamente las propiedades biológicas, farmacológicas o farmacocinéticas.
"Profármaco" se refiere a que un compuesto puede administrarse en forma de profármaco. Un profármaco es un derivado que puede convertirse en el compuesto biológicamente activo bajo una condición fisiológica in vivo, por ejemplo, por oxidación, reducción, hidrólisis, etc., cada uno de los cuales se lleva a cabo mediante el uso de una enzima o sin la participación de una enzima. Un ejemplo de un profármaco es un compuesto en el que un grupo amino en un compuesto de la invención está acilado, alquilado o fosforilado, tales como eicosilamino, alanilamino, pivaloiloximetilamino, o en donde el grupo hidroxi está acilado, alquilado, fosforilado o convertido en un borato, por ejemplo, acetoxi, palmitoiloxi, pivaloiloxi, succiniloxi, fumariloxi, alaniloxi y similares, o una molécula portadora en la que el grupo carboxilo está esterificado o amidado, o en donde el grupo tiol forma un puente disulfuro con un grupo que administra selectivamente un fármaco a la diana y/o al citosol de la célula, tal como un péptido. Estos compuestos pueden prepararse a partir de, por ejemplo, los compuestos mencionados anteriormente de acuerdo con ciertos métodos conocidos.
"Sal farmacéutica" o "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal hecha de una base o ácido farmacéuticamente aceptable, que incluye bases o ácidos inorgánicos y bases o ácidos orgánicos, en el caso de que los compuestos de la presente invención contengan uno o más grupos ácidos o básicos, la presente invención también incluye sus correspondientes sales farmacéuticamente aceptables. Así, los compuestos de la presente invención que contienen un grupo ácido pueden estar presentes en forma de sal y pueden usarse de acuerdo con la presente invención, por ejemplo, como una sal de metal alcalino, una sal de metal alcalinotérreo o como una sal de amonio. Los ejemplos más específicos de tales sales incluyen sales de sodio, sales de potasio, sales de calcio, sales de magnesio o sales con amoníaco o aminas orgánicas tales como etilamina, etanolamina, trietanolamina o aminoácidos. Los compuestos de la presente invención que contienen un grupo básico pueden estar presentes en forma de sal y pueden usarse de acuerdo con la presente invención en forma de sus sales de adición con ácidos inorgánicos u orgánicos. Los ejemplos de ácidos adecuados incluyen ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido naftalenodisulfónico, ácido oxálico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido piválico, ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido málico, ácido sulfámico, ácido fenilpropiónico, ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido isonicotínico, ácido cítrico, ácido adípico y otros ácidos conocidos a una persona con conocimientos ordinarios en la técnica. Si un compuesto de la presente invención contiene grupos tanto ácidos como básicos en la molécula, la presente invención incluye, además de las formas de sal mencionadas anteriormente, sales internas o de amonio internas. Cada sal puede obtenerse por métodos convencionales conocidos por un experto en la técnica, por ejemplo, al ponerlas en contacto con un ácido o base orgánico o inorgánico en un disolvente o dispersante, o mediante intercambio aniónico o catiónico con otras sales.
Por lo tanto, cuando se hace referencia a "compuesto", "compuesto de la invención" o "compuestos de la invención" en esta solicitud, incluye todas esas formas de compuestos, tales como una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S, o 36Cl derivado isotópico de los mismos.
Como se usa en la presente descripción, el término "tumor" incluye tumores benignos y tumores malignos (por ejemplo, cáncer).
Como se usa en la presente descripción, el término "cáncer" incluye varios tumores malignos en los que está involucrado el FGFR, incluidos, entre otros, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de esófago, melanoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de células renales, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de endometrio, cáncer de cuello uterino, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata y cáncer de hígado (como el carcinoma hepatocelular), más específicamente cáncer de hígado, cáncer de estómago, cáncer de pulmón de células no pequeñas cáncer y cáncer de vejiga.
Como se usa en la presente descripción, el término "enfermedad inflamatoria" se refiere a cualquier enfermedad inflamatoria en la que el FGFR está implicado en el inicio de la inflamación, tal como la osteoartritis.
Como se usa en la presente descripción, el término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad que incluye un compuesto de la presente invención que es eficaz para inhibir la función de FGFR y/o para tratar o prevenir la enfermedad.
Procesos de síntesis
La presente invención también proporciona métodos para preparar los compuestos. La preparación de los compuestos de fórmula general (II) de la presente invención puede llevarse a cabo mediante los siguientes métodos y modalidades ilustrativos, pero los métodos y modalidades de ninguna manera deben interpretarse como limitantes del alcance de la presente invención. Los compuestos de la presente invención también pueden sintetizarse mediante otras técnicas sintéticas conocidas por un experto en la técnica, o puede emplearse una combinación de métodos conocidos en la técnica y los métodos de la invención. El producto obtenido en cada etapa de la reacción se obtiene mediante técnicas de separación conocidas en la técnica que incluyen, entre otras, extracción, filtración, destilación, cristalización, separación cromatográfica y similares. Los materiales de partida y los reactivos químicos requeridos para la síntesis pueden sintetizarse de manera convencional o comprar de acuerdo con la literatura (disponible al buscar en SciFinder).
El compuesto de pirazol de fórmula general (II) de la presente invención puede sintetizarse según la ruta descrita en el proceso A: 1) el material de partida A1 se somete a una reacción de Sandmeyer para obtener A2, o puede bromarse para obtener A3, donde R1 puede ser -CN o un éster (-COOR, en donde R es un grupo alquilo); 2) a 2 o A3 y un precursor XL~NP (en donde X es un grupo saliente y L~NP es un grupo funcional que contiene un grupo amino protegido, P es un grupo protector para un grupo amino) tienen una reacción de sustitución que se produce bajo catálisis de la base para formar A4, alternativamente, éste y un precursor que tiene un grupo hidroxilo (HO-L~NP) pueden someterse a una ligera reacción de retardo (reacción de Mitsunobu) para obtener A4; 3) cuando R 1 de A4 es -CN, se hidroliza a una amida A5 en la condición de NaOH4-hO2; cuando R 1 de A4 es un éster (-COOR, en donde R es un grupo alquilo), primero se hidroliza en condiciones básicas (como LiOH) a un ácido carboxílico y luego se somete a amidación para obtener A5; 4) A5 y un alquino se acoplan a través de una reacción de Sonogashira para obtener A6; 5) se desprotege un grupo amino en A6 para obtener A7; 6) un grupo amino en A7 se derivatiza con un reactivo químico (por ejemplo, BrCN, cloruro de acriloílo, etc.) que contiene un grupo funcional reactivo con un residuo de cisteína en el dominio de unión del ligando de quinasa para obtener el compuesto objetivo A8.
Enfoque A:
Figure imgf000015_0001
Alternativamente, puede sintetizarse de acuerdo con la ruta descrita en el enfoque B. En la segunda etapa, se introduce el grupo protector Q del pirazol NH, y en la quinta etapa, se obtiene el intermedio común B7 de la desprotección, y luego el pirazol n H de B7 se hace reaccionar con diferentes precursores con el grupo amino protegido en una reacción de sustitución, que luego se somete a desprotección y derivatización para obtener el producto objetivo A8.
Enfoque B:
Figure imgf000015_0002
El compuesto de pirazol de fórmula general (I) de la presente invención también puede sintetizarse de acuerdo con la ruta descrita en el enfoque C: 1) A4 se acopla primero con un alquino a través de Sonogashira para obtener C1; 2) el -NH 2 en C1 se sustituye en una reacción de catálisis básica, o se somete a una aminación reductora para formar C2; 3) el CN en C2 se hidroliza a la amida C3 en condiciones de NaOH4-hO2, en algunos casos se protege primero con Boc-NH- y luego se hidroliza; finalmente se obtiene desprotegido y derivatizado para obtener el producto objetivo C5; C5 también puede obtener por sustitución directa de A8.
Enfoque C:
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En los esquemas de reacción anteriores de los Enfoques AC, la "B" es un anillo de benceno que está sustituido por Ga, Gb, Gc Y Gd como se define en relación con la Fórmula (II).
Ejemplos
La estructura de un compuesto se determina mediante resonancia magnética nuclear (NMR) o espectrometría de masas (MS). La NMR se midió con Bruker AVANCE-400 o Varian Oxford-300 NMR, y el disolvente fue dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-Ó6), cloroformo deuterado (CDCb), metanol deuterado (CD3OD), y el estándar interno fue tetrametilsilano (TMS), el cambio químico se proporciona en la unidad de 10'6 (ppm).
La MS se midió mediante el uso de un espectrómetro de masas Agilent SQD (ESI) (fabricante: Agilent, modelo: 6120).
Las mediciones de HPLC se realizaron con un cromatógrafo de líquidos de alta presión Agilent 1200 DAD (columna Sunfirc C18, 150 x 4,6 mm, 5 pm) y un cromatógrafo de líquidos de alta presión Waters 2695-2996 (columna Gimini C18 de 150 x 4 ,6 mm, 5 pm).
La placa de gel de sílice para cromatografía de capa fina usa la placa de gel de sílice Qingdao Ocean GF254. La especificación de la placa de gel de sílice usada en la cromatografía de capa fina (TLC) es de 0,15 mm a 0,2 mm. La especificación para la separación y purificación por cromatografía en capa fina es la placa de silicona de 0,4 mm a 0,5 mm.
La cromatografía en columna generalmente usa gel de sílice de 200 a 300 mallas Qingdao Ocean como soporte. Los materiales de partida conocidos de la presente invención pueden sintetizarse de acuerdo con los métodos conocidos en la técnica, o pueden adquirirse de ABCR GmbH & Co. KG, Acros Organics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc., Beijing Coupling Chemicals y otras compañías.
En los ejemplos de la presente invención, a menos que se especifique de otra manera, todas las reacciones se llevaron a cabo bajo una atmósfera de argón o una atmósfera de nitrógeno.
Una atmósfera de argón o una atmósfera de nitrógeno se refiere a que el matraz de reacción está conectado a un globo de argón o nitrógeno que tiene un volumen de aproximadamente 1 L.
Una atmósfera de hidrógeno se refiere a que el matraz de reacción está conectado a un globo de hidrógeno de aproximadamente 1 L de volumen.
La reacción de hidrogenación presurizada se llevó a cabo mediante el uso de un generador de hidrógeno de alta pureza GCD-500G y un hidrogenador de presión media BLT-2000 de Beijing Jiawei Kechuang Technology Co., Ltd.
La reacción de hidrogenación usualmente se evacúa, se carga con hidrógeno y se opera repetidamente tres veces. La reacción de microondas usó un reactor de microondas tipo CEM Discover-SP.
En los ejemplos de la presente invención, a menos que se especifique de otra manera, la temperatura de reacción fue la temperatura ambiente y el intervalo de temperatura fue de 20 °C a 30 °C.
El progreso de la reacción en los ejemplos se controló mediante cromatografía en capa fina (TLC), y el sistema usado para la reacción fue A: un sistema de diclorometano y metanol; B: un sistema de éter de petróleo y acetato de etilo, la relación de volumen de los disolventes se ajustó en función de la polaridad del compuesto.
El sistema del eluyente de cromatografía en columna usado en el proceso de purificación del compuesto y el sistema de agente de revelado usado para revelar en la cromatografía en capa fina incluyen A: un sistema de diclorometano y metanol; B: un sistema de éter de petróleo y acetato de etilo, la relación de volumen de los solventes se ajustó de acuerdo con la polaridad del compuesto, y puede agregarse una pequeña cantidad de trietilamina y un reactivo ácido o básico para el ajuste.
Ejemplo 1
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000017_0001
Etapa 1
Éster terc-butílico del ácido (R)-3-(toluenosulfoniloxi) pirrolidina-1-carboxílico
El compuesto éster terc-butílico del ácido (R)-3-hidroxipirrolidin-1 -carboxílico 1a (3,5 g, 18,7 mmol), trietilamina (5,25 mL, 37,9 mmol), 4-dimetilaminopiridina (0,35 g, 2,87 mmol) se disolvieron en diclorometano (50 mL) y luego se añadió cloruro de p-toluenosulfonilo (5,4 g, 28,1 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas, luego se añadió agua (50 mL) para la dilución y acetato de etilo (100 mL x 3) se usó luego para la extracción, las fases orgánicas resultantes se combinaron y luego se secaron con sulfato de sodio anhidro, luego se eliminó el desecante por filtración y el solvente se evaporó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 2/1), de manera que se obtuvo el producto del título éster terc-butílico del ácido (R)-3-(toluenosulfoniloxi) pirrolidina-1-carboxílico 1b (6,0 g, materia oleosa de color amarillo), y el rendimiento fue del 94 %.
MS m/z (ESI): 364[M+23]
Etapa 2
((3,5-di metoxife nil)etinil) trimetilsilano
La mezcla de 1-bromo-3,5-dimetoxibenceno 1c (6,51 g, 30 mmol), trimetilsilil acetileno (8,8 g, 90 mmol), cloruro de bis(trifenilfosfina) paladio (1,05 g, 1,5 mmol), yoduro cuproso (0,56 g, 3,0 mmol), trietilamina (80 mL) y N,N-dimetilformamida (150 mL) se calentó a 80 °C y se agitó bajo nitrógeno durante 12 horas; la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente; se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo), para obtener el producto del título ((3,5-dimetoxifenil)etinil) trimetilsilano 1d (6,2 g, sólido marrón), y el rendimiento fue del 88 %.
MS m/z (ESI): 235 [M+1]
Etapa 3
1-etinil-3,5-dimetoxi benceno
((3,5-dimetoxifenil)etinil)trimetilsilano 1d (3,0 g, 12,8 mmol) se disolvió en metanol (100 mL) y se añadió carbonato de potasio (3,5 g, 25,6 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas; se filtró y el filtrado resultante se concentró a presión reducida; el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo), para obtener el producto del título 1-etinil-3,5-dimetoxibenceno 1e (2 g, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 96 %.
Etapa 4
Éster etílico del ácido 3-yodo-1H-pirazol-4-carboxílico
El éster etílico del ácido 3-amino-1H-pirazol-4-carboxílico 1f (4,7 g, 30,3 mmol) se disolvió en ácido clorhídrico concentrado (12 M, 40 mL) y se enfrió hasta 0 °C, se añadió una solución de nitrito de sodio (4,25 g, 60 mmol) (7,5 mL) y luego se agitó durante 5 min, luego se añadió lentamente una solución de yoduro de potasio (12,5 g, 75 mmol) (17,5 mL) y se continuó la agitación durante 30 minutos, la mezcla de reacción se vertió en una solución acuosa saturada de tiosulfato de sodio (200 mL) y se extrajo con acetato de etilo (400 mL x 3 ), las fases orgánicas se combinaron y se secaron con sulfato de sodio anhidro, luego se eliminó el desecante por filtración y el solvente se eliminó a presión reducida; el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 2/1), para obtener el producto del título, 1 g de éster etílico del ácido 3-yodo-1H-pirazol-4-carboxílico (6,4 g, sólido amarillo pálido), y el rendimiento fue del 80 %.
MS m/z (ESI): 267 [M+1]
Etapa 5
Formiato de (S)-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-yodo-1 H-pirazol-4-etilo
Una mezcla de éster etílico del ácido 1-yodo-1H-pirazol-4-carboxílico 1 g (4,5 g, 17 mmol), éster terc-butílico del ácido (R)-3-(toluenosulfoniloxi)pirrolidin-1-carboxílico 1b (6,1 g, 17,8 mmol), carbonato de cesio (7,5 g, 20,4 mmol) y N,N-dimetilformamida (50 mL) se calentaron a 80 °C y se agitaron durante 3 horas, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y luego se vertió en una solución saturada de bicarbonato de sodio (200 mL), que luego se extrajo con acetato de etilo (300 mL x 3); las fases orgánicas se combinan y se secan sobre sulfato de sodio anhidro, luego se filtran para eliminar el desecante y el solvente se elimina a presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1 a 2/ 1), para obtener el producto del título (S)-1 -(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-yodo-1 H-pirazol-4-etil formiato 1H (3,1 g, sólido amarillo pálido), y el rendimiento fue del 42 %.
MS m/z (ESI): 458 [M+23]
Etapa 6
Formiato de (S)-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-4-etilo
Una mezcla de formiato de (S)-1 -(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-yodo-1 H-pirazol-4-etilo 1 h (1 g, 2,25 mmol), 1-acetileno-3,5-dimetoxibenceno 1e (0,75 g, 4,5 mmol), cloruro de bis(trifenilfosfina) paladio (175 mg, 0,25 mmol), yoduro cuproso (95 mg, 0,5 mmol), trietilamina (12,5 mL) y N,N-dimetilformamida (12,5 mL) se calentó hasta 80 °C y se agitó durante 12 horas, la mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y el disolvente se eliminó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/ acetato de etilo = 2/1), para obtener el producto del título formiato de (S)-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H -pirazol-4-etilo (0,95 g, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 90 %.
MS m/z (ESI): 414 [M+1-56]
Etapa 7
Ácido (S)-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-fórmico
Se disolvió formiato de (S)-1-(1 -(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-4-etilo 1i (0,30 g, 0,64 mmol) en tetrahidrofurano (3 mL) y se añadió una solución de hidróxido de sodio (4 M, 2 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se acidificó con ácido clorhídrico (6 M, 1 mL), y luego se extrajo con acetato de etilo (10 mL * 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, y el desecante se eliminó por filtración, el solvente se eliminó a presión reducida, para obtener el producto del título (S)-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-formiato 1j (200 mg, sustancia oleosa de color amarillo claro), y el rendimiento fue del 71 %.
MS m/z (ESI): 386 [M+1-56]
Etapa 8
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico Una mezcla de (S)-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-formiato 1j (220 mg, 0,5 mmol), cloruro de amonio (270 mg, 5 mmol), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) (228 mg, 0,6 mmol), N, N-diisopropiletilamina (129 mg, 1 mmol) y N,N-dimetilformamida (5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche y luego se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo, las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía preparativa sobre una capa delgada de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título éster tercbutílico del ácido (S) -3-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 1k (140 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 64%.
MS m/z (ESI): 385 [M+1-56]
Etapa 9
(S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 1k (50 mg, 0,11 mmol), ácido clorhídrico (6 M, 5 mL) y dioxano (5 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y luego se eliminó el solvente a presión reducida para obtener el producto del título (S)-3 -((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 1 l (42 mg, una sal de clorhidrato, producto bruto), y el rendimiento fue del 100 %.
MS m/z (ESI): 341 [M+1]
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Una mezcla de clorhidrato de (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 1l (30 mg, 0,08 mmol), N,N -diisopropiletilamina (31 mg, 0,24 mmol) y tetrahidrofurano (15 mL) se añadió gota a gota de una solución de cloruro de acriloílo (11 mg, 0,12 mmol) en tetrahidrofurano (5 mL), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, y luego se inactivó con agua (30 mL), se extrajo con acetato de etilo, las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y luego se filtraron para eliminar el desecante, el solvente se eliminó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía preparativa sobre una fina capa de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título de (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 1 (15 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 50 %.
MS m/z (ESI): 395[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 68,10 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 6,96 (brs, 1H), 6,71 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,54 - 6,52 (m, 1H), 6,46 - 6,39 (m, 2H), 5,80 (brs, 1H), 5,76 - 5,72 (m, 1H), 5,01 - 4,92 (m, 1H), 4,13 - 4,00 (m, 2H), 3,90 - 3,75 (m, 8H), 2,62 - 2,44 (m, 2H).
Ejemplo 2
1-(1 -acriloilpiperidin-4-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000020_0001
Formiato de 3-yodo-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pirazol-4-etilo
Se disolvió un compuesto de formiato de 3-yodo-1H-pirazol-4-etilo 1 g (2,01 g, 7,5 mmol) en tetrahidrofurano (80 mL) y se enfrió hasta 0 °C, se añadió hidruro de sodio (dispersión de aceite mineral al 60 %, 0,42 g, 10,5 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y a la mezcla de reacción se le añadió cloruro de 2-(trimetilsilil)etoximetilo (1,76 g, 10,5 mmol), se continuó la agitación durante 15 horas y luego se añadió salmuera saturada (100 mL) a la mezcla de reacción, que luego se extrajo con acetato de etilo (150 mL x 2), las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera saturada (100 mL), el solvente se eliminó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna en gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1 a 1/2), para obtener el producto del título formiato de 3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-etilo (2,6 g, sustancia oleosa incolora), y el rendimiento fue del 87 %.
MS m/z (ESI): 397[M+1]
Etapa 2
Ácido 3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxílico
El compuesto formiato de 3-yodo-1 -((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1 H-pirazol-4-etilo 2a (2,6 g, 6,5 mmol) se disolvió en tetrahidrofurano (40 mL), se añadió una solución acuosa de hidróxido de litio (1 M, 13 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, que luego se diluyó con agua (20 mL) y se acidificó hasta pH = 4-5 con ácido clorhídrico (1 M), que luego se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera saturada (100 mL), el disolvente se eliminó a presión reducida y luego se secó para obtener el producto del título ácido 3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxílico 2b (2,03 g, sólido blanco), y el rendimiento fue del 85 %.
MS m/z (ESI): 391[M+23]
Etapa 3
3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se mezclaron el compuesto ácido 3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxílico 2b (2,03 g, 5,5 mmol), diisopropiletilamina (2,13 g, 16,5 mmol) y N,N- dimetilformamida (20 mL), luego se añadió secuencialmente hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) (2,5 g, 6,6 mmol) y 1-hidroxibenzotriazol (890 mg, 6,6 mmol), después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, se añadió cloruro de amonio sólido (1,47 g, 27,5 mmol), se continuó la agitación durante 15 horas y luego se añadió salmuera saturada (30 mL) a la mezcla de reacción, que se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 3 ), y las fases orgánicas se combinaron y lavaron con salmuera saturada (100 mL), después de eliminar el disolvente a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título 3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxamida 2c (2,3 g, sustancia aceitosa amarilla), y el rendimiento fue del 100 %.
MS m/z (ESI): 368[M+1]
Etapa 4
3-((3,5-Dimetoxifenil)etinil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Los compuestos de 3-yodo-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxamida 2c (2,7 g, 7,3 mmol), 1 -etinil-3,5-dimetoxibenceno (1,78 g, 11 mmol), trietilamina (2,2 g, 21,9 mmol), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (512 mg, 0,73 mmol) y tetrahidrofurano anhidro (70 mL), se sometieron a desoxigenación y se agitaron a temperatura ambiente durante 15 horas en atmósfera de argón, luego se eliminó el disolvente a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo/éter de petróleo = 10/1 a 2/1), para obtener el producto del título 3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxamida 2d (1,5 g, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 51 %.
MS m/z (ESI): 402[M+1]
Etapa 5
3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se mezclaron 3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-1H-pirazol-4-carboxamida 2d (1,4 g, 3,5 mmol), etilendiamina (525 mg, 8,75 mmol) y tetrahidrofurano (30 mL) y luego se añadió una solución de fluoruro de tetrabutilamonio en tetrahidrofurano (1 M, 17,5 mL, 17,5 mmol), después de calentar a reflujo durante 15 horas, enfriar hasta temperatura ambiente y se añadió salmuera saturada (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (100 mL x 3), las fases orgánicas resultantes se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, luego se eliminó el desecante por filtración y el disolvente se eliminó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título 3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 2e (600 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 63 %.
MS m/z (ESI): 272[M+1]
Etapa 6
Éster terc-butílico del ácido 4-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)piperidina-1-carboxílico Los compuestos 3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 2e (180 mg, 0,66 mmol), éster terc-butílico del ácido 4-bromopiperidina-1-carboxílico (264 mg, 0,99 mmol), carbonato de potasio (182 mg, 1,32 mmol) y N,N-dimetilformamida (10 mL) se mezclaron y luego se calentaron hasta 75 °C y se agitaron durante 15 horas, luego se añadió agua, la solución resultante se extrajo con acetato de etilo. (50 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera saturada, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el disolvente se eliminó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido 4-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidin-1 -carboxílico 2f (120 mg, sólido amarillo, que contiene regioisómero), y el rendimiento fue del 40 %.
MS m/z (ESI): 477[M+23]
Etapa 7
3-((3,5-Dimetoxifenil)etinil)-1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
El compuesto éster terc-butílico del ácido 4-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)piperidina-1-carboxílico 2f (120 mg, 0,26 mmol, una mezcla) se disolvió en etanol (20 mL), y luego se agregó cloruro de hidrógeno en etanol (4 M, 1 mL, 4 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, el disolvente se eliminó a presión reducida, después de disolver el residuo en metanol (20 mL), se ajustó la solución a pH = 8 a 9 con una solución saturada de bicarbonato de sodio, luego se eliminó el solvente a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 10/1), para obtener el producto del título 3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 2 g (25 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 27 %.
MS m/z (ESI): 355[M+1]
Etapa 8
1-(1 -acriloilpiperidin-4-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-4-carboxamida
El compuesto 3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 2 g (25 mg, 0,07 mmol), cloruro de alqueno propionilo (10 mg, 0,11 mmol), carbonato ácido de sodio sólido (18 mg, 0,21 mmol), agua (2 mL) y tetrahidrofurano (10 mL) se mezclaron a 0 °C y se agitaron a esta temperatura durante 10 horas, lo que luego se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3 ), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, luego se eliminó el desecante por filtración y el disolvente se eliminó a presión reducida, luego el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 10 /1), para obtener el producto del título 1-(1 -acriloilpiperidin-4-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-4-carboxamida 2 (17 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 60 %.
MS m/z (ESI): 409[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) ó 8,10 (s, 1H), 7,01 (brs, 1H), 6,72 (d, J = 2,2 Hz, 2H), 6,62 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,55 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,33 (dd, J = 16,8, 1,5 Hz, 1H), 5,80 (brs, 1H), 5,76 (dd, J = 10,6, 1,6 Hz, 1H), 4,81 (brs, 1H), 4,40 (t, J = 11,4 Hz, 1H), 4,18 (brs, 1H), 3,82 (s, 6H), 3,26 (brs, 1H), 2,89 (brs, 1H), 2,42 - 2,25 (m, 2H), 2,08 - 2,00 (m, 2H).
Los ejemplos 3-6 se llevaron a cabo de acuerdo con el procedimiento proporcionado en el Ejemplo 2:
Ejemplo 3
1-(1-acriloilazetidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000022_0001
MS m/z (ESI): 381 [M+1 ]
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 6 8,43 (s, 1H), 7,30 (s, 2H), 6,73 (d, J = 2,2 Hz, 2H), 6,60 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,38 (dd, J = 17,0, 10,3 Hz, 1H), 6,16 (dd, J = 17,0, 2,1 Hz, 1H), 5,73 (dd, J = 10,3, 2.1 Hz, 1H), 5,41 - 5,28 (m, 1H), 4,71 (t, J = 8 ,6 Hz, 1H), 4,50 (dd, J = 9,2, 4,9 Hz, 1H), 4,46 - 4,36 (m, 1H), 4,20 (dd, J = 10,7, 4,8 Hz, 1H), 3,78 (s, 6 H).
Ejemplo 4
Figure imgf000023_0001
MS m/z (ESI): 383[M+1]
1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 6 8,24 (s, 1H), 7,10 - 6,90 (m, 2H), 6,76 (s, 2H), 6,69 - 6,54 (m, 2H), 6,07 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 5,64 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,37 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,89 - 3,80 (m, 8 H), 2,94 (s, 3H).
Ejemplo 7
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000024_0001
Etapa 1
5-amino-3-bromo-1H-pirazol-4-carbonitrilo
El compuesto 5-amino-1H-pirazol-4-carbonitrilo 7a (20 g, 185 mmol) se disolvió en N,N-dimetilformamida (200 mL) y se enfrió hasta 0 °C, luego se añadió en porciones N-bromosuccinimida (34 g, 190 mmol), se elevó la temperatura hasta temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas, luego se vertió la solución de reacción en una solución de sulfito de sodio, se extrajo con acetato de etilo (200 mL x 3), y luego se combinaron las fases y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título 5 -amino-3-bromo-1H-pirazol-4-carbonitrilo 7b (32 g, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 93 %.
MS m/z (ESI): 187/189[M+1]
Etapa 2
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-ciano-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Una mezcla de 5-amino-3-bromo-1H-pirazol-4-carbonitrilo 7b (10 g, 53,8 mmol), éster terc-butílico del ácido 3-(toluenosulfoniloxi)pirrolidin-1-carboxílico (22 g, 64,5 mmol), carbonato de cesio (58 g, 107,6 mmol) y acetonitrilo (250 mL) se calentó hasta 90 °C y se hizo reaccionar durante 4 horas, luego se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y la torta de filtración resultante se lavó con diclorometano, los filtrados se combinaron y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4 -ciano-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 7c (5 g, aceite amarillo), y el rendimiento fue del 26 %.
MS m/z (ESI): 300/302[M+1-56]
Etapa 3
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-ciano-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 7c (5 g, 14,1 mmol), yoduro cuproso (0,6 g, 2,8 mmol), trietilamina (9 mL), dicloruro de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio (2 g, 2,8 mmol) y N,N-dimetilformamida (150 mL) se calentó hasta 80 °C bajo argón y luego se añadió en porciones 1-etinil-3,5-dimetoxibenceno (14 g, 84,5 mmol), luego se agitó durante 2 horas y luego se enfrió hasta temperatura ambiente, se vertió la solución de reacción en agua, se extrajo con acetato de etilo (200 mL x 3); a continuación, las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 7d (5 g, aceite marrón), y el rendimiento fue del 81 %.
MS m/z (ESI): 382[M+1-56]
Etapa 4
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 7d (5 g, 11,4 mmol), hidróxido de sodio (1,5 g, 37,5 mmol, disuelto en 2 mL de agua), etanol (50 mL) y dimetil sulfóxido (10 mL) se enfrió hasta 0 °C, se añadió peróxido de hidrógeno (20 mL), se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, la solución de reacción se vertió luego en una solución de sulfito de sodio, se extrajo con acetato de etilo (100 mL x 3), y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-5-amino-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico, y el rendimiento fue del 96 %.
MS m/z (ESI): 400[M+1-56]
Etapa 5
(S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
El compuesto éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 7e (5 g, 11 mmol) se disolvió en diclorometano (100 mL), luego se agregó ácido trifluoroacético (15 mL), luego se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se concentró a presión reducida para obtener el producto del título (S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 -(pirrolidin-3-il)-1 H-pirazol-4-carboxamida 7f (7,1 g, sustancia oleosa marrón, trifluoroacetato, crudo), y el rendimiento fue >100 %, el producto se usó en la siguiente reacción sin purificación.
MS m/z (ESI): 356[M+1]
Etapa 6
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
El compuesto (S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 7f (7,1 g, 11 mmol, trifluoroacetato, crudo) se disolvió en tetrahidrofurano (50 mL) y se enfrió hasta 0 °C, se añadieron secuencialmente una solución saturada de bicarbonato de sodio (20 mL) y cloruro de acriloílo (900 mg, 10 mmol), se agitó durante 30 minutos, luego la solución de reacción se vertió en agua (100 mL) y se extrajo con diclorometano (100 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2), para obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 7 (1,9 g, sólido blanco), y el rendimiento fue del 42 %.
MS m/z (ESI): 410[M+1]
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 67,18 (brs, 1H), 6,75 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,69 - 6,55 (m, 3H), 6,20 - 6,14 (m, 1H), 5,72 - 5,67 (m, 1H), 5,03 - 4,91 (m, 1H), 4,01 - 3,96 (m, 1H), 3,84 - 3,70 (m, 7H), 3,66 - 3,60 (m, 1H), 3,55 - 3,48 (m, 1H), 2,36 - 2,21 (m, 2H).
Ejemplo 8
(S,E)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol -4-carboxamida
Figure imgf000026_0001
Etapa 1
(S,E)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol -4-carboxamida
Una mezcla de ácido (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoico (23 mg, 0,14 mmol), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurea (HATU) (64 mg, 0,17 mmol), (S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 7f (50 mg, 0,14 mmol), N,N-diisopropiletilamina (2 mL) y diclorometano (3 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, la solución de reacción se vertió en agua y se extrajo con diclorometano (20 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía líquida de alta resolución, para obtener el producto del título (S,E)-5 -amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 8 (2,4 mg, sólido blanco, formiato), y el rendimiento fue del 4 %.
MS m/z (ESI): 467[M+1]
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 68,27 (brs, 1H), 7,20 (brs, 1H), 6,75 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,70 - 6,61 (m, 3H), 6,44 -6,35 (m, 1H), 5,01 - 4,93 (m, 1H), 4,01 - 3,93 (m,1H), 3,77 (s, 6H), 3,74 - 3,64 (m, 3H), 3,06 - 3,03 (m, 2H), 2,38 -2,24 (m, 2H), 2,17 - 2,15 (m, 6H).
Ejemplo 9
(S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(2-fluoroacriloil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000027_0001
Etapa 1
(S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(2-fluoroacriloil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
El compuesto (S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 7f (50 mg, 0,14 mmol) y 2 -ácido fluoroacrílico (15 mg, 0,17 mmol) se disolvieron en diclorometano, luego se añadió N,N-diisopropiletilamina (54 mg, 0,42 mmol) y O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N hexafluorofosfato de '-tetrametiluronio (HATU) (69 mg, 0,18 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL), se extrajo con diclorometano (10 mL x 3), y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice en capa fina (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título (S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(2-fluoroacriloil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 9 (3,6 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 6 %.
MS m/z (ESI): 428 [M+1]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 6,62 (t, J = 2,5 Hz, 2H), 6,47 (t, J = 2,3 Hz, 1H), 5,39 (dd, J = 47,2, 3,5 Hz, 1H), 5,16 (ddd, J = 16,6, 5,7, 3,5 Hz, 1H), 4,86 - 4,81 (m, 1H), 4,02 - 3,91 (m, 2H), 3,87 - 3,72 (m, 2H), 3,71 (s, 6 H), 2,34 -2,23 (m, 2H).
Ejemplo 10
(S)-5-amino-1-(1-(but-2-inil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000028_0001
Etapa 1
(S)-5-amino-1-(1-(but-2-inil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
(S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 7f (50 mg, 0,14 mmol) y 2-butinoico (14 mg, 0,17 mmol) se disolvieron en diclorometano, luego se añadió N,N-diisopropiletilamina (54 mg, 0,42 mmol) y O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'- hexafluorofosfato de tetrametiluronio (HATU) (69 mg, 0,18 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego la mezcla de reacción se diluyó con agua (10 mL), se extrajo con diclorometano (10 mL x 3) y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice en capa fina (diclorometano/metanol = 20 /1 ), para obtener el producto del título (S)-5-amino-1-(1-(but-2-inil)pirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 10 (5,1 mg, sólido amarillo pálido) y el rendimiento fue del 9 %.
MS m/z (ESI): 422 [M+1]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 6,62 (t, J = 2,1 Hz, 2H), 6,47 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 4,85 - 4,81 (m, 1H), 4,01 - 3,86 (m, 2H), 3,77 - 3,62 (m, 7,5H), 3,54 - 3,46 (m, 0,5H), 2,32 - 2,27 (m, 2H), 1,95 - 1,93 (m, 3H).
Ejemplo 11
(S,E)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(4-metoxibut-2-enoil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000028_0002
Etapa 1
Ácido (E)-4-bromobut-2-enoico
Se mezclaron (E)-4-bromobut-2-enoato de metilo 11a (3 g, 16,8 mmol), monohidrato de hidróxido de litio (1,1 g, 25,3 mmol), tetrahidrofurano (50 mL) y agua (50 mL) a 0 °C y se agitó durante 2 horas más; una vez completada la reacción, el tetrahidrofurano se lavó con éter de petróleo y la fase acuosa se ajustó a pH = 1 con ácido clorhídrico 2 M y luego se extrajo con acetato de etilo (100 mL * 2), después se combinaron las fases orgánicas, el disolvente se evaporó a presión reducida, para obtener el producto del título (E) ácido 4-bromobut-2-enoico 11b (2,3 g, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 83 %.
MS m/z (ESI): 163[M-1]
Etapa 2
Ácido (E)-4-metoxibut-2-enoico
El compuesto ácido (E)-4-bromobut-2-enoico 11b (100 mg, 0,61 mmol) se disolvió en metanol (5 mL), se añadió metóxido de sodio en metanol (30 %, 0,55 mL, 3,05 mmol) y luego se agitó durante 15 horas, la mezcla de reacción se eliminó con el disolvente a presión reducida y luego se disolvió en agua, luego se ajustó a pH = 1 con ácido clorhídrico diluido y luego se extrajo con diclorometano (10 mL * 3), las fases orgánicas se combinaron, y el disolvente se evaporó a presión reducida, para obtener el producto del título de ácido (E)-4-metoxibut-2-enoico 11c (50 mg, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 71 %.
1H NMR (400 MHz, CDCla) 67,13 - 7,03 (m, 1H), 6,15 - 6,07 (m, 1H), 4,18 - 4,11 (m, 2H), 3,48 - 3,38 (s, 3H). Etapa 3
(S,E)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(4-metoxibut-2-enoil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4- carboxamida El compuesto ácido (E)-4-metoxibut-2-enoico 11c (22 mg, 0,19 mmol), diisopropiletilamina (67 mg, 0,52 mmol), (S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil) etinilo)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 7f (50 mg, 0,13 mmol), hexafluorofosfato de 2-(7-oxobenzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (72 mg, 0,19 mmol) y N,N-dimetilformamida (10 mL) se mezclaron y agitaron durante 2 horas, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se disolvió en acetato de etilo (30 mL) y luego se lavó secuencialmente con agua y salmuera saturada, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título de (S,E)-5-amino -3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(1-(4-metoxibut-2-enoil)pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida (30 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 51 %.
MS m/z (ESI): 454[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 66,98 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 6,86 (brs, 1H), 6,72 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 6,54 (s, 1H), 6,39 (dd, J = 27,7, 16,0 Hz, 1H), 5,54 (brs, 1H), 4,73 - 4,70 (m, 1H), 4,14 - 4,12 (m, 2H), 4,05 - 4,00 (m, 2H), 3,95 - 3,93 (m, 1H), 3,82 (s, 6H), 3,77 - 3,68 (m, 1H), 3,43 (d, J = 10,1 Hz, 3H), 2,72 (brs, 0,5H), 2,54 (brs, 0,5H), 2,43 - 2,35 (m, 1H).
Ejemplo 12
(S)-5-amino-1-(1-cianopirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000030_0001
Etapa 1
(S)-5-amino-1-(1-cianopirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se disolvió el compuesto (S)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 7f (50 mg, 0,14 mmol) en tetrahidrofurano (2 mL), y luego se agregó trietilamina (1 mL), se enfrió hasta 0 °C, se agregó bromuro de cianógeno (17 mg, 0,15 mmol), se agitó a 0 °C durante 2 horas, la temperatura de reacción se elevó luego hasta temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 2 horas, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice en capa fina (diclorometano/metanol = 15/1), para obtener el producto del título (S)-5 -amino-1-(1-cianopirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 12 (18 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 34 %.
MS m/z (ESI): 381[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 6 6,77 (brs, 1H), 6 ,68 (d, J = 1,9 Hz, 2H), 6,50 (s, 1H), 5,75 (s, 2H), 5,67 (brs, 1H), 4,79 -4,73 (m, 1H), 3,84 - 3,73 (m, 9H), 3,61 - 3,53 (m, 1H), 2,53 - 2,43 (m, 1H), 2,37 - 2,26 (m, 1H).
Los ejemplos 13 a 16 se sintetizaron con referencia a las etapas operativas del Ejemplo 7:
Ejemplo 13
(R)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000030_0002
MS m/z (ESI): 410[M+1]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 6,73 (d, J = 1,9 Hz, 2H), 6,71 - 6,60 (m, 1H), 6,58 (brs, 1H), 6,32 (dd, J = 16,8, 1,7 Hz, 1H), 5,84 - 5,74 (m, 1H), 5,04 - 4,91 (m, 1H), 4,09 (m, 0,5H), 3,98 (td, J = 11,1, 4,0 Hz, 1H), 3,91 (dd, J = 7,8, 5,6 Hz, 1H), 3,86 (dd, J = 9,9, 4,4 Hz, 1H), 3,81 (s, 6 H), 3,73 - 3,63 (m, 0.5H), 2,47 (dd, J = 13,2, 6,7 Hz, 1H), 2,38 (dd, J = 13,6, 7,0 Hz, 1H).
Ejemplo 14
1-(1-acriloilazetidin-3-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000031_0001
MS m/z (ESI): 396[M+1]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 6,75 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,60 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,45 - 6,28 (m, 2H), 5,80 (dd, J = 10,1, 2,1 Hz, 1H), 5,29 - 5,21 (m, 1H), 4,79 - 4,64 (m, 2H), 4,54 - 4,47 (m, 1H), 4,46 - 4,39 (m, 1H), 3,82 (s, 6 H). Ejemplo 15
1-(1-acriloilpiperidin-4-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000031_0002
EM m/z (ESI): 424[M+1]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 6 ,88 - 6,78 (m, 1H), 6,73 (d, J = 2,2 Hz, 2H), 6,58 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,24 (dd, J= 16,8, 1,7 Hz, 1H), 5,78 (dd, J= 10,7, 1,7 Hz, 1H), 4,73 (d, J= 13,2 Hz, 1H), 4,47 - 4,36 (m, 1H), 4,30 (d, J = 13,3 Hz, 1H), 3,81 (s, 6 H), 3,32 - 3,24 (m, 1H), 2,91 (t, J = 9,9 Hz, 1H), 2,02 (d, J = 4,5 Hz, 4H).
Ejemplo 16
1-((1-acriloilpirrolidin-3-il)metil)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000031_0003
EM m/z (ESI): 424[M+1]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 6,73 (s, 2H), 6 ,66 - 6,55 (m, 2H), 6,28 (d, J = 16,7 Hz, 1H), 5,75 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,13 - 3,99 (m, 2H), 3,82 (s, 6 H), 3,78 - 3,61 (m, 2H), 3,48 (dd, J = 14,8, 7,4 Hz, 1H), 3,39 - 3,34 (m, 1H), 2,94 -2,75 (m, 1H), 2,20 - 2,02 (m, 1H), 1,94 - 1,71 (m, 1H).
Ejemplo 17
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((2-fluoro-3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000032_0001
Etapa 1
1-etinil-2-fluoro-3,5-d imetoxibence n o
La mezcla de 1-etinil-3,5-dimetoxibenceno 1e (2 g, 12,3 mmol) se disolvió en acetonitrilo (15 mL) y se enfrió hasta 0 °C, luego se añadió en porciones una sal de 1-clorometil-4-fluoro-1, bis(tetrafluoroborato) de 4-diazonio diciclo 2.2.2 octano (6,6 g, 18,5 mmol), luego se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, la solución de reacción se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con diclorometano (30 mL x3), y las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, luego el sistema se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 30/1), para obtener el producto del título 1-etinil-2-fluoro-3,5-dimetoxibenceno 17a (800 mg, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 36 %.
1H NMR (400 MHz, CDCla) 66.46 (dd, J = 6.9, 2.9 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 4.5, 3.0 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.22 (s, 1H).
Luego se sintetizó el Ejemplo 17 con referencia al procedimiento de las etapas primera a sexta del Ejemplo 7 proporcionado anteriormente, pero en la tercera etapa, se usó 1-etinil-2-fluoro-3,5-dimetoxibenceno para sustituir 1-etinil-3,5-dimetoxibenceno.
MS m/z (ESI): 428[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 67,00 (brs, 1H), 6,59 - 6,57 (m, 2H), 6,49 - 6,39 (m, 2H), 5,74 - 5,70 (m, 1H), 5,52 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 5,35 (brs, 1H), 4,73 - 4,64 (m, 1H), 4,07 - 3,90 (m, 3H), 3,88 (s, 3H), 3,78 (d, J = 5,3 Hz, 3H), 3,75 -3,67 (m, 1H), 2,72 - 2,67 (m, 0,5H), 2,54 - 2,31 (m, 1,5H).
Ejemplo 18
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((5-cloro-2-fluorofenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000033_0001
((2-fluoro-5-clorofenil)etinil)trimetilsilano
Se mezclaron 2-fluoro-5-clorobromobenceno 18a (11,0 g, 52,8 mmol), etiniltrimetilsilano (7,7 g, 79 mmol) y trietilamina (60 mL), y luego se añadieron yoduro cuproso (100 mg, 0,53 mmol) y cloruro de ditrifenilfosfina paladio (1,86 g, 2,65 mmol), la mezcla de reacción se calentó hasta 80 °C en atmósfera de nitrógeno y se continuó la agitación durante 4 horas, una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente de la solución a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 100/1), para obtener el producto del título ((2-fluoro-5-clorofenil)etinil)trimetilsilano 18b (11,0 g, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 90 %.
1H NMR (400 MHz, CDCb) 67,45 (dd, J = 6,0, 2,7 Hz, 1H), 7,28 - 7,22 (m, 1H), 7,02 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 0,29 (s, 9H). Etapa 2
4-cloro-2-etinil-1-fluorobenceno
Se mezclaron ((2-fluoro-5-clorofenil)etinil)trimetilsilano 18b (11,0 g, 48 mmol), carbonato de potasio (8,1 g, 58 mmol), diclorometano (80 mL) y metanol (40 mL) y se agitaron a temperatura ambiente durante 18 horas, una vez finalizada la reacción, se eliminó el disolvente de la solución a presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 100/1), para obtener producto del título 4-cloro-2-etinil-1-fluorobenceno 18c (5,5 g, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 74 %.
1H NMR (400 MHz, CDCb) 67,45 (dd, J = 6,0, 2,7 Hz, 1H), 7,31 - 7,27 (m, 1H), 7,04 (t, J = 8,0, 1H), 3,35 (s, 1H). Luego se sintetizó el Ejemplo 18 con referencia al procedimiento de las etapas primera a sexta del Ejemplo 7 proporcionado anteriormente, pero en la tercera etapa, se usó 4-cloro-2-etinil-1-fluorobenceno para sustituir 1-etinil-3,5-dimetoxibenceno.
MS m/z (ESI): 402[M+1]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 67,62 - 7,61 (m, 1H), 7,47 - 7,45 (m, 1H), 7,24 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 6,69 - 6,56 (m, 1H), 6,30 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,77 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 5,02 - 1,91 (m, 1H), 4,09 - 3,95 (m, 2H), 3,84 - 3,78 (m, 2H), 2,46 (dd, J = 13,1, 6,6 Hz, 1H), 2,37 (dd, J = 13,6, 6,9 Hz, 1H).
Ejemplo 19
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000034_0001
Etapa 1
4-cloro-3-bromobenzoato de metilo
Se disolvió ácido 4-cloro-3-bromobenzoico 19a (2 g, 8,5 mmol) en metanol (400 mL) y se enfrió hasta 0 °C, luego se añadió gota a gota cloruro de acetilo (2,3 g, 30 mmol) y se continuó la agitación durante 18 horas después de finalizada la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1), para obtener el producto del título metil 4-cloro -3-bromobenzoato 19b (1,2 g, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 57 %.
1H NMR (400 MHz, CDCI3) 68,31 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,93 (dd, J = 8,3, 1,9 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H).
Etapa 2
benzoato de 4-cloro-3-((trimetilsilil)etinil) metilo
El compuesto 4-cloro-3-bromobenzoato de metilo 19b (1,2 g, 4,8 mmol), trimetilsililacetileno (0,95 g, 9,7 mmol), acetato de paladio (108 mg, 0,48 mmol), trifenilfosfina (254 mg, 0,97 mmol), yoduro cuproso (185 mg, 0,97 mmol) y trietilamina (25 mL) se mezclaron en un tubo sellado, se calentó y se agitó a 100 °C durante 15 horas, después de que se completó la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida y se purificó el residuo. mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1), para obtener el producto del título benzoato de 4-cloro-3-((trimetilsilil)etinil) metilo 19c (1 g, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 78 %.
1H NMR (400 MHz, CDCla) 68,19 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,91 (dd, J = 8,4, 2,1 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 0,30 (s, 9H).
Etapa 3
4-cloro-3-etinilbenzoato de metilo
Se disolvió benzoato de 4-cloro-3-((trimetilsilil)etinil) metilo 19c (1 g, 3,76 mmol) en metanol (20 mL), luego se añadió carbonato de potasio (1,04 g, 7,52 mmol), después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se lavó con agua y luego se filtró para obtener el producto del título 4-cloro-3-etinilbenzoato de metilo 19d (380 mg, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 52 %.
1H NMR (400 MHz, CDCla) 68,23 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,96 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,44 (s, 1H).
Etapa 4
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-carbamoil-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Se mezclaron el compuesto éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-ciano-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 7c (2,20 g, 6,2 mmol), una solución acuosa de hidróxido de sodio (0.5 M, 12.4 mL, 6.2 mmol), una solución acuosa de peróxido de hidrógeno (30 %, 15 mL) y sulfóxido de dimetilo (30 mL), después de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, la reacción se diluyó con salmuera saturada (50 mL) y luego se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 3), luego se combinaron las fases orgánicas, se eliminó el disolvente a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/ metanol = 100/1 a 20/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-carbamoil-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -ca rboxílico 19e (1,92 g, sólido amarillo claro), y el rendimiento fue del 83 %.
MS m/z (ESI): 374[M+1]
Etapa 5
Ester terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((2-cloro-5-(carbometoxi <metoxicarbonil>)fenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-carbamoil-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 19e (770 mg, 2,1 mmol), trietilamina (6 mL), dicloruro de paladio de 1,1'-bisdifenilfosfinoferroceno (307 mg, 0,42 mmol), yoduro cuproso (80 mg, 0,42 mmol) y N,N-dimetilformamida (20 mL) se mezclaron, se desoxigenaron y luego se calentaron hasta 90 °C bajo atmósfera de argón, luego se añadió gota a gota una solución de 4-cloro-3-etinilbenzoato de metilo 19d (3,20 g, 16,5 mmol) en N,N-dimetilformamida (2 mL), y se continuó la agitación durante 12 horas, el disolvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((2 -cloro-5-(carbometoxi <metoxicarbonil>)fenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 19f (420 mg, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 41 %.
MS m/z (ESI): 488[M+1]
Etapa 6
Ácido (S)-3-((5-amino-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-4-carbamoil-1H-pirazol-3-il)etinil)-4-clorobenzoico Se disolvió el éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((2-cloro-5-(carbometoxi <metoxicarbonil>)fenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 19f (100 mg, 0,2 mmol) en una mezcla de disolventes de metanol (4 mL) y agua (4 mL), luego se añadió hidróxido de sodio (25 mg, 0,61 mmol) y se continuó la agitación durante 2 horas, una vez completada la reacción, el disolvente orgánico se eliminó a presión reducida y el residuo se ajustó a pH = 4 a 5 con ácido clorhídrico (1 M), y luego se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 2), las fases orgánicas resultantes se combinaron y lavaron con salmuera saturada, luego se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron, el filtrado se eliminó con disolvente a presión reducida, para obtener el producto del título ácido (S)-3-((5-amino-1 -(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-4-carbamoil-1H-pirazol-3-il)etinil)-4-clorobenzoico 19 g (80 mg, sólido marrón) y el rendimiento fue del 84 %.
MS m/z (ESI): 418[M+H-56]
Etapa 7
Ester terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1- carboxílico
Se disolvió ácido (S)-3-((5-amino-1-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-il)-4-carbamoil-1H-pirazol-3-il)etinil)-4-clorobenzoico 19g (80 mg, 0,17 mmol) en N,N-dimetilformamida (2,5 mL), luego se añadieron secuencialmente clorhidrato de metilamina (34 mg, 0,50 mmol), diisopropiletilamina (129 mg, 1 mmol) y 2-(7-benzotriazol)-hexafluorofosfato de N,N,N',N'-de tetrametilurea (64 mg, 0,17 mmol), la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se inactivó con agua, luego se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron, se eliminó el solvente a presión reducida y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 100/1 a 0/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3 -(5-amino-4-carbamoil-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 19h (41 mg, sólido pardo), y el rendimiento fue del 50 %.
MS m/z (ESI): 387[M+H-Boc]
Etapa 8
Clorhidrato de (S)-5-amino-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-formamida Se disolvió el éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 19h (40 mg, 0,08 mmol) en acetato de etilo (5 mL), luego se agregó una solución de cloruro de hidrógeno en etanol (33 %, 3 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después de que se completó la reacción. el disolvente se eliminó a presión reducida para obtener el producto del título clorhidrato de (S)-5-amino-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il) -1H-pirazol-4-formamida 19i (40 mg, crudo, sólido pardo), y el producto se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
MS m/z (ESI): 387[M+H]
Etapa 9
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se mezclaron el compuesto clorhidrato de (S)-5-amino-3-((2-cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-formamida 19i (40 mg, 0,08 mmol, crudo), cloruro de acriloílo (7,5 mg, 0,08 mmol), una solución acuosa de carbonato de potasio (0,4 M, 1,0 mL, 0,4 mmol) y tetrahidrofurano (5 mL) a 0 °C y se agitaron a esta temperatura durante 0,5 horas, luego se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 2), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 100/1 a 10/1), para obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((2- cloro-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 19 (18 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 51 % en dos etapas.
MS m/z (ESI): 441[M+H]
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 68,65 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,90 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,3 Hz, 1H),7,43 (s, 1H), 6,70 - 6,62 (m, 4H), 6,19 - 6,15 (m, 1H), 5,70 (t, J = 10,2 Hz, 1H), 5,03 - 4,94 (m, 1H), 3,80 - 3,54 (m, 4H), 2,78 (d, J = 3,8 Hz, 3H), 2,36 - 2,25 (m, 2H).
Ejemplo 20
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3-metoxi-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000037_0001
Etapa 1
3-bromo-5-metoxi-N-metilbenzamida
Se disolvió ácido 3-bromo-5-metoxibenzoico 20a (500 mg, 2,17 mmol) en N,N-dimetilformamida (15 mL), luego se añadieron secuencialmente clorhidrato de metilamina (291 mg, 4,35 mmol), diisopropiletilamina (1,12 g, 8,68 mmol) y 2 -(7-benzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametilurea hexafluorofosfato (1,24 g, 3,26 mmol), el sistema de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se inactivó con agua, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1), para obtener el producto del título 3-bromo-5-metox¡-N-met¡lbenzamida 20b (500 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 95 %.
MS m/z (ESI): 244[M+H]
Etapa 2
3-metox¡-N-met¡l-5-((tr¡met¡ls¡l¡l)et¡n¡l)benzam¡da
Se mezclaron el compuesto 3-bromo-5-metoxi-N-metilbenzamida 20b (500 mg, 2,1 mmol), trimetilsililacetileno (302 mg, 3,1 mmol), acetato de paladio (47 mg, 0,21 mmol), trifenilfosfina (110 mg, 0,42 mmol), yoduro cuproso (80 mg, 0,42 mmol) y trietilamina (20 mL) en un tubo sellado y luego se calentaron hasta 100 °C y se agitaron durante 15 horas, después de que se completó la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1), para obtener el producto del título 3-metox¡-N-met¡l-5-((tr¡met¡ls¡l¡l)et¡n¡l)benzam¡da, 20c (220 mg, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 41 %.
MS m/z (ESI): 262[M+H]
Etapa 3
3-et¡n¡l-5-metox¡-N-met¡lbenzam¡da
Se disolvió 3-metox¡-N-met¡l-5-((tr¡met¡ls¡l¡l)et¡n¡l)benzam¡da 20c (220 mg, 0,84 mmol) en metanol (8 mL), luego se añadió carbonato de potasio (233 mg, 1,68 mmol), después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1), para obtener el producto del título 3-etinil-5- metoxi-N-metilbenzamida 20d (140 mg, sólido amarillo claro), y el rendimiento fue del 88 %.
MS m/z (ESI): 190[M+H]
Etapa 4
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-am¡no-4-carbamo¡l-3-((3-metox¡-5-(met¡lcarbamo¡l)fen¡l)et¡n¡l)-1H-p¡razol-1-carboxílico
Se mezclaron éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-carbamoil- 1 H-pirazol-1 -¡l)p¡rrol¡d¡n-1 -carboxílico 19e (329 mg, 0,88 mmol), trietilamina (2 mL), 1,1'-b¡sd¡fen¡lfosf¡noferroceno dicloruro de paladio (129 mg, 0,2 mmol), yoduro cuproso (34 mg, 0,18 mmol) y N,N-dimetilformamida (8 mL), luego se desoxigenaron y se calentaron hasta 90 °C bajo una atmósfera de argón, luego se añadió gota a gota una solución de 3-et¡n¡l-5-metox¡-N-met¡lbenzam¡da 20d (1,00 g, 5,3 mmol) en N,N-dimetilformamida (2 mL), se continuó la agitación durante 12 horas, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-carbamoil-3-((3-metoxi-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1H-pirazol-1-carboxílico 20e (400 mg, crudo, sólido marrón). MS m/z (ESI): 383[M+H-100]
Etapa 5
Clorhidrato de (S)-5-amino-3-((3-metoxi-5-(metilcarbamoil)fenil)etinil)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida Se disolvió éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-am¡no-4-carbamo¡l-3-((3-metox¡-5-(met¡lcarbamo¡l)fen¡l)et¡n¡l)-1H-pirazol-1-carboxílico 20e (400 mg, crudo) en diclorometano (5 mL), luego se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en etanol (30%, 3 mL), se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después de que se completó la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida, para obtener el producto del título (S)-5-amino-3-((3-metoxi-5-(met¡lcarbamo¡l)fen¡l)et¡n¡l)-1-(p¡rrol¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razol-4-carboxam¡da clorhidrato 20f (300 mg, crudo, sólido marrón). El producto se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación.
MS m/z (ESI): 383[M+H]
Etapa 6
(S)-1-(1-acr¡lo¡lp¡rrol¡d¡n-3-¡l)-5-am¡no-3-((3-metox¡-5-(met¡lcarbamo¡l)fen¡l)et¡n¡l)-1H-p¡razol-4-carboxam¡da
Se mezclaron el compuesto (S)-5-am¡no-3-((3-metox¡-5-(met¡lcarbamo¡l)fen¡l)et¡n¡l)-1-(p¡rrol¡d¡n-3-¡l)-1H-p¡razol-4-carboxamida clorhidrato 20f (150 mg, 0,39 mmol, crudo), cloruro de acriloílo (42 mg, 0,47 mmol), bicarbonato de sodio (131 mg, 1,56 mmol), agua (4 mL) y tetrahidrofurano (8 mL) se mezclaron a 0 °C y se agitaron a esta temperatura durante 0,5 horas, y se extrajo con acetato de etilo (20 mLx2), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 20/1), para obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3-metoxi-5-(metilcarbamoil) fenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 20 (60 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 35 % en dos etapas.
MS m/z (ESI): 437[M+H]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 67,59 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,73 - 6,58 (m, 1H), 6,36 - 6,28 (m, 1H), 5,83 - 5,75 (m, 1H), 5,04 - 4,93 (m, 1H), 4,12 - 3,91 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,86 - 3,66 (m, 2H), 2,93 (s, 3H), 2,51 - 2,44 (m, 1H), 2,42 - 2,34 (m, 1H).
Ejemplo 21
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000039_0001
Etapa 1
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(3-bromo-4-ciano-5-(metilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Se disolvieron el compuesto éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-3-bromo-4-ciano-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 7c (178 mg, 0,5 mmol) y ácido bencenosulfónico monohidrato (12 mg, 0,07 mmol) en ortoformiato de trietilo (4 mL) y se calentaron a reflujo durante 2 horas, después de que terminó la reacción, el solvente se eliminó a presión reducida y el residuo se dispersó en agua, luego se extrajo. con acetato de etilo (30 mL x 2), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, el filtrado se eliminó con disolvente a presión reducida, el residuo se disolvió en etanol (10 mL), y se enfrió hasta 0 °C, se añadió borohidruro de sodio (89 mg, 2,35 mmol) y luego se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, después de completar la reacción, se inactivó con salmuera saturada y luego se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 2), se combinaron las fases orgánicas, se eliminó el disolvente a presión reducida y se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 100/1 a 1/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(3-bromo-4-ciano-5-(metilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 21a (178 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 100 %.
MS m/z (ESI): 314[M+H-56]
Etapa 2
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Se mezclaron éster terc-butílico del ácido (S)-3-(3-bromo-4-ciano-5-(metilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 21a (1,85 g, 5,0 mmol), trietilamina (20 mL), dicloruro de paladio de 1,1'-bisdifenilfosfinoferroceno (816 mg, 1 mmol), yoduro cuproso (190 mg, 1 mmol) y N,N-dimetilmetil amida (20 mL), se desoxigenaron y luego se calentó hasta 90 °C en una atmósfera de argón, luego se añadió gota a gota una solución de 1 -etinil-3,5-dimetoxibenceno (4,86 g, 30 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 mL), se continuó la agitación durante 12 horas, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 50/1 a 0/1), para obtener el producto del título (S)-3-(4- éster terc-butílico del ácido ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 21b (2,1 g, sólido marrón), y el rendimiento fue del 80 %.
MS m/z (ESI): 496[M+H-56]
Etapa 3
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-piridil Ziliden-1 -il)pirrolidina-1 -carboxílico
Se disolvieron éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 21b (225 mg, 0,5 mmol) en diclorometano (10 mL), luego se añadieron secuencialmente trietilamina (150 mg, 1,5 mmol), anhídrido Boc (218 mg, 1 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (6 mg, 0,05 mmol). después de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas, se añadió salmuera saturada (10 mL), y luego se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 2), las fases orgánicas se combinaron y el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 50/1 a 1/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-4 -ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-piridil Ziliden-1 -il)pirrolidin-1-carboxílico 21c (200 mg, sólido amarillo pálido), y el rendimiento fue de 72 %
MS m/z (ESI): 440[M+H-112]
Etapa 4
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((terc-Butoxicarbonil)(metil)amino)-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Se mezclaron éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-piridil Ziliden-1 -il)pirrolidina-1 -carboxílico 21c (55 mg, 0,1 mmol), una solución acuosa de hidróxido de sodio (0,5 M, 0,1 mL, 0,05 mmol), una solución acuosa de peróxido de hidrógeno (30 %, 0,5 mL) y sulfóxido de dimetilo (1 mL) y se agitaron a temperatura ambiente durante 2 horas, los reactivos se diluyeron con salmuera saturada (10 mL) y se extrajeron con acetato de etilo (20 mL x 2), las fases orgánicas se combinaron, el disolvente se eliminó a presión reducida, y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 100/1 a 1/100), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((terc-butoxicarbonil)(metil)amino)-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 21d (30 mg, sólido marrón), y el rendimiento fue del 50 %.
MS m/z (ESI): 414[M+H-156]
Etapa 5
Clorhidrato de (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se disolvió éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((terc-Butoxicarbonil)(metil)amino)-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 21 d (570 mg, 1 mmol) en acetato de etilo (10 mL), luego se agregó una solución de cloruro de hidrógeno en etanol (33 %, 5 mL) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente a presión reducida para obtener el producto del título clorhidrato de (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 21e (400 mg, crudo, sólido marrón). Este producto se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional.
MS m/z (ESI): 370[M+H]
Etapa 6
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se mezclaron el compuesto clorhidrato de (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 21e, cloruro de acriloílo (254 mg, 2,82 mmol), una solución acuosa de carbonato de potasio (2,5 M, 4,7 mL, 11,78 mmol) y tetrahidrofurano (10 mL) y agitaron a esta temperatura durante 0,5 horas, luego se extrajo con acetato de etilo (50 mLx2), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el disolvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 100/1 a 10/1), para obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida 21 (720 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 76 %.
MS m/z (ESI): 424[M+H]
1HNMR (400 MHz, CDCla) 66,88 (s, 1H), 6,69 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 6,51 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,46 - 6,40 (m, 2H), 5,74 - 5,72 (m, 1H), 5,52 - 5,48 (m, 1H), 5,06 - 5,01 (m, 1H), 4,09 - 3,94 (m, 3H), 3,80 (s, 6H), 3,72 - 3,70 (m, 1H), 3,00 (s, 3H), 2,71 - 2,56 (m, 1H), 2,45 - 2,35 (m, 1H).
Ejemplo 22
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((2-fluoro-3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000041_0001
El Ejemplo 22 se sintetizó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 21, pero en la segunda Etapa, se usó 1-etinil-2-fluoro-3,5-dimetoxibenceno para sustituir el 1-etinil-3,5-dimetoxibenceno.
MS m/z (ESI): 442[M+H]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 67,08 (s, 1H), 6,68 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,60 - 6,57 (m, 2H), 6,51 - 6,40 (m, 2H), 5,74 -5,69 (m, 1H), 5,35 (s, 1H), 5,08 - 4,99 (m, 1H), 4,11 - 4,08 (m, 1H),4,05 - 3,94 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,75 - 3,65 (m, 1H), 3,00 (t, J = 5,2 Hz, 3H), 2,72 - 2,58 (m, 1H), 2,44 - 2,33 (m, 1H).
Ejemplo 23
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((5-cloro-2-fluorofenil)etinil)-5-(metilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000041_0002
El Ejemplo 23 se sintetizó de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 21, pero en la segunda etapa, se usó 4-cloro-2-etinil-l-fluorobenceno para sustituir el 1-etinil-3,5-dimetoxibenceno.
MS m/z (ESI): 416[M+H]
1H NMR (400 MHz, CDCla) ó 7,56 - 7,52 (m, 1H), 7,35 - 7,33 (m, 1H), 7,08 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 7,02 - 6,92 (m, 1H), 6,51 - 6,39 (m, 2H), 5,74 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 5,55 - 5,44 (m, 1H), 5,09 - 4,98 (m, 1H), 4,14 - 3,90 (m, 3H), 3,80 -3,65 (m, 1H), 3,01 (s, 3H), 2,74 - 2,55 (m, 1H), 2,49 - 2,34 (m, 1H).
Ejemplo 24
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(etilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000042_0001
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-etilamino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 7d (500 mg, 1,14 mmol) e hidruro de sodio (91 mg, 2,28 mmol, 60 %) se añadió a N,N-dietilacetamida (5 mL) y se agitó durante 10 minutos, luego se añadió yodoetano (106 mg, 0,68 mmol), y se agitó durante 0,5 horas, la solución de reacción se vertió en agua y luego se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía preparativa líquida de alta resolución de fase inversa [acetonitrilo/agua (que contiene 0,1 % de ácido fórmico): 50 %- 90%], para obtener el producto del título éster terc-butílico de ácido (S)-3-(5-etilamino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 24a (70 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 22 %.
MS m/z (ESI): 410[M+1-56]
Etapa 2
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-etilamino-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
(S)-3-(5-etilamino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1-carboxílico terc-butil éster 24a (55 mg, 0.12 mmol) se disolvió en sulfóxido de dimetilo (3 mL), luego se agregó peróxido de hidrógeno (2 mL) e hidróxido de sodio (300 mg, 7.5 mmol), luego de agitar a temperatura ambiente durante 10 minutos, se calentó hasta 40 °C, una vez completada la reacción, se diluyó con agua (20 mL) después de enfriar, se extrajo con acetato de etilo (30 mL) y se lavó con agua (20 mL x 3), la fase orgánica se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía preparativa líquida de alta resolución de fase inversa [acetonitrilo/agua (que contiene 0,1 % de ácido fórmico): 50 %-90 %], para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-etilamino-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 24b (15 mg), y el rendimiento fue del 26 %.
MS m/z (ESI): 484 [M+1]
Etapa 3
(S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(etilamino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se disolvió éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-etilamino-4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 24b (15 mg, 0,031 mmol) en diclorometano (2 mL), luego se añadió ácido trifluoroacético (0,5 mL), se agitó durante media hora, después de completar la reacción, el sistema de reacción se concentró a presión reducida, para obtener producto del título (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(etilamino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 24c (20 mg, crudo, aceite marrón), y el rendimiento fue >100 %. El producto se usó en la siguiente reacción sin purificación.
MS m/z (ESI): 384[M+1]
Etapa 4
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(etilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Se disolvió el compuesto (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(etilamino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 24c (20 mg, 0,031 mmol, crudo) en tetrahidrofurano (5 mL) y luego se agregó una solución saturada de bicarbonato de sodio (2 mL), luego se añadió una solución de cloruro de acriloílo (2,7 mg, 0,03 mmol) en tetrahidrofurano, se agitó durante 0,5 horas, la solución de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se disolvió en acetato de etilo (30 mL) y luego se lavó con agua (20 mL x 3), las fases orgánicas se concentraron a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía líquida preparativa de alto rendimiento de fase inversa. [acetonitrilo/agua (que contiene 0,1 % de ácido fórmico): 20 %-70 %], para obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3, 5-dimetoxifenil)etinil)-5-(etilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida 24 (4,7 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 24 %.
MS m/z (ESI): 438[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 68,87 (brs, 1H), 6,74 (s, 2H), 6,54 (s, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,48 - 6,40 (m, 2H), 5,74 - 5,69 (m, 1H), 5,06 - 4,97 (m, 2H), 4,13 - 3,93 (m, 3H), 3,84 (s, 6H), 3,80 - 3,67 (m, 1H), 3,42 (brs, 2H), 2,75 - 2,35 (m, 2H), 1,31 - 1,25 (m, 3H).
Ejemplo 25
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(isopropilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000044_0001
Etapa 1
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(isopropilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 7d (600 mg, 1,37 mmol), carbonato de cesio (893 mg, 2,74 mmol) y acetonitrilo (25 mL) se agitó durante 10 minutos, luego se añadió rápidamente 2-bromopropano (186 mg, 1,51 mmol), se calentó a 72 °C, se agitó durante 6 horas, y luego se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 2/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-(isopropilamino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 25a (600 mg, sólido amarillo pálido), y el rendimiento fue del 91 %.
MS m/z (ESI): 424[M+1-56]
El ejemplo 25 se sintetizó con referencia a la operación de las etapas segunda a cuarta realizadas en el ejemplo 24. MS m/z (ESI): 452[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 66,88 (brs, 1H), 6,70 (s, 2H), 6,54 (s, 1H), 6,51 - 6,39 (m, 2H), 6,03 (t, J = 10,3 Hz, 1H), 5,74 - 5,69 (m, 1H), 5,49 (brs, 1H), 4,96 - 4,87 (m, 1H), 4,09 - 3,86 (m, 3H), 3,80 - 3,66 (m, 7H), 3,45 - 3,43 (m, 1H), 2,69 - 2,32 (m, 2H), 1,27 - 1,15 (m, 6H).
Ejemplo 26
(S)-1-(1 -acriloilpirrolidin-3-il)-5-((ciclopropilmetil)amino)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000045_0001
Etapa 1
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-((ciclopropilmetil)amino)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida Se disolvió el compuesto (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 7 (50 mg, 0,12 mmol) en acetonitrilo (2 mL), y luego se le añadió carbonato de cesio (80 mg, 0,24 mmol) y (bromometil) ciclopropano (19 mg, 0,13 mmol), se calentó hasta 70 °C, se agitó durante 4 horas, luego se vertió la solución de reacción en agua (30 mL), y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el residuo se preparó mediante cromatografía en una capa delgada de gel de sílice (diclorometano/metanol = 12 /1) para la purificación, a fin de obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-((ciclopropilmetil)amino)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinilo)-1H-pirazol-4-carboxamida 26 (14 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 28 %.
MS m/z (ESI): 464[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 66,89 (brs, 1H), 6,71 (s, 2H), 6,54 (s, 1H), 6,51 - 6,37 (m, 2H), 5,76 - 5,71 (m, 1H), 5,40 (brs, 1H), 5,03 - 4,95 (m, 1H), 4,06 - 3,89 (m, 3H), 3,82 (s, 6H), 3,78 - 3,67 (m, 1H), 3,06 - 3,02 (m, 2H), 2,69 - 2,52 (m, 1H), 2,46 - 2,35 (m, 1H), 1,15 - 0,98 (m, 1H), 0,63 - 0,60 (m, 2H), 0,29 - 0,27 (m, 2H).
Ejemplo 27
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2,2,2-trifluoroetil)amino)-1H-pirazol-4- carboxamida
Figure imgf000046_0001
Etapa 1
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2,2,2-trifluoroetil)amino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidina-1 -carboxílico
Se añadieron éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico 7d (430 mg, 0,98 mmol), una solución acuosa de trifluoroacetaldehído (75 %) (304 mg, 1,96 mmol) y titanato de tetraetilo (448 mg, 1,96 mmol) a diclorometano (15 mL), se agitó durante 2 horas, una vez completada la reacción, se añadió borohidruro de sodio (75 mg, 1,96 mmol) a la mezcla de reacción y se continuó la agitación a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3), la fase orgánica se combinó y se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se eliminó el desecante por filtración, y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó rápidamente mediante una columna, para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2,2,2-trifluoroetil)amino)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 27a (120 mg, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 26 %.
MS m/z (ESI): 464[M+1-56]
El ejemplo 27 se sintetizó mediante referencia a la operación de las etapas segunda a cuarta realizadas en el ejemplo 24.
MS m/z (ESI): 492[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 66,92 (brs, 1H), 6,70 (s, 2H), 6,52 (s, 1H), 6,47 - 6,39 (m, 2H), 6,31 - 6,25 (m, 1H), 5,75 - 5,65 (m, 1H), 5,65 (brs, 1H), 5,05 - 4,98 (m, 1H), 4,10 - 3,88 (m, 3H), 3,80 (s, 6H), 3,75 - 3,61 (m, 3H), 2,63 - 2,34 (m, 2H).
Ejemplo 28
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-metoxietil)amino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000047_0001
El ejemplo 28 se sintetizó siguiendo el procedimiento del ejemplo 25, pero en la primera etapa se usó 1-bromo-2-metoxietano para sustituir el 2-bromopropano.
MS m/z (ESI): 468[M+1]
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 67,32 (brs, 1H), 6,74 (d, J = 2,2 Hz, 2H), 6,64 (dd, J = 16,8, 10,4 Hz, 1H), 6,60 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,50 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 6,16 (dd, J = 16,8, 5,0 Hz, 1H), 5,68 (t, J = 10,8 Hz, 1H), 5,15 - 5,05 (m, 1H), 4,05 - 4,01 (m, 0,5H), 3,86 - 3,81 (m, 1,5H), 3,77 (s, 6H), 3,70 - 3,61 (m, 1H), 3,59 - 3,50 (m, 1H), 3,46 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 3,39 - 3,34 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 2,42 - 2,23 (m, 2H).
Ejemplo 29
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000047_0002
Etapa 1
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((2-acetoxietil)amino)-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 7d (300 mg, 0,685 mmol), acetato de 2-bromoetilo (126 mg, 0,753 mmol), carbonato de cesio (447 mg, 1,37 mmol) y acetonitrilo (4 mL) se calentó hasta 90 °C, se agitó durante 2 horas, la solución de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en agua (50 mL), y luego se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 15/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((2-acetoxietil)amino) -4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 29a (148 mg, sólido amarillo), y el rendimiento fue del 41 %.
MS m/z (ESI): 468[M+1-56]
Etapa 2
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1-carboxílico
Se añadió la mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((2-acetoxietil)amino)-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 - carboxílico 29a (68 mg, 0,146 mmol), etanol (5 mL) y sulfóxido de dimetilo (1 mL) con una solución saturada de hidróxido de sodio (3 mL) y peróxido de hidrógeno (4 mL), se agitó a 30 °C durante 1 hora, después de completar la reacción, la solución de reacción se vertió en una solución saturada de sulfito de sodio (30 mL) y se extrajo con acetato de etilo (30 mLx3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 29b (110 mg, sustancia oleosa amarilla cruda), y el rendimiento fue >100 %. El producto se usó en la siguiente reacción sin purificación.
MS m/z (ESI): 444[M+1-56]
Etapa 3
(S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida
Compuesto éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-carbamoil-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico El 29b (110 mg, 0,146 mmol, crudo) se disolvió en una solución de ácido clorhídrico en metanol (5 mL), se calentó hasta 40 °C y se agitó durante 1 hora, después de que se completó la reacción, y el sistema de reacción se concentró a presión reducida para obtener el producto del título (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1 -(pirrolidin-3-il) -1H-pirazol-4-carboxamida 29c (160 mg, sólido blanco crudo), y el rendimiento fue >100 %. El producto se usó en la siguiente reacción sin purificación.
MS m/z (ESI): 400[M+1]
Etapa 4
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1H-pirazol-4-carboxamida
El compuesto (S)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1-(pirrolidin-3-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 29c (160 mg, 0,146 mmol, crudo) se disolvió en tetrahidrofurano (5 mL) y luego se añadió una solución saturada de bicarbonato de sodio (10 mL) y luego se añadió cloruro de acriloílo (12 mg, 0,13 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos,
Una vez completada la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía preparativa de alta resolución de fase inversa [acetonitrilo/agua (con 0,2 % de ácido fórmico): 20 % a 60 %], para obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-hidroxietil)amino)-1H-pirazol-4-carboxamida 29 (6 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 9 %.
MS m/z (ESI): 454[M+1]
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 67,36 (brs, 1H), 6,76 (brs, 1H), 6,74 (s, 2H), 6,70 - 6,60 (m, 2H), 6,55 - 6,52 (m, 1H), 6,17 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 5,69 (t, J = 10,9 Hz, 1H), 5,16 - 5,10 (m, 1H), 4,87 (s, 1H), 4,06 - 4,0 (m, 0,5H), 3,83 -3,81 (m, 1,5H), 3,77 (s, 6H), 3,68 - 3,63 (m, 2H), 3,55 - 3,53 (m, 2H), 3,28 - 3,26 (m, 2H), 2,38 - 2,27 (m, 2H). Ejemplo 30
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((3-morfolinopropil)amino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000049_0001
Etapa 1
4-metilbencenosulfonato de 3-morfolinopropilo
El compuesto 3-morfolinopropan-1-ol 30a (500 mg, 3,45 mmol) se disolvió en diclorometano (100 mL) y luego se añadió 4-dimetilaminopiridina (42 mg, 0,34 mmol), trietilamina (1,04 g, 10,3 mmol) y cloruro de p-toluenosulfonilo (988 mg, 5,17 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, una vez completada la reacción, la solución de reacción se vertió en agua (50 mL) y luego se extrajo con diclorometano (50 mL * 3), las fases orgánicas se combinados y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 2/1), para obtener el producto del título 3-morfolinopropil 4-metilbencenosulfonato 30b (660 mg, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 64 %.
MS m/z (ESI): 300[M+1]
El Ejemplo 30 se sintetizó con referencia al procedimiento del Ejemplo 25, pero en la primera etapa, se usó 4-metilbencenosulfonato de 3-morfolinopropilo para sustituir el 2-bromopropano.
MS m/z (ESI): 537[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 68,23 (brs, 1H), 7,12 (brs, 1H), 6,94 (brs, 1H), 6,69 (s, 2H), 6,52 (s, 1H), 6,49 - 6,40 (m, 2H), 5,92 (brs, 1H), 5,74 - 5,70 (m, 1H), 5,03 - 4,96 (m, 1H), 4,09 - 3,90 (m, 3H), 3,80 - 3,68 (m, 11H), 3,28 (brs, 2H), 2,89 (brs, 6H), 2,69 - 2,33 (m, 2H), 1,93 (brs, 2H).
Ejemplo 31
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-morfolinoetil)amino)-1H-pirazol-4-carboxamida
Figure imgf000050_0001
El Ejemplo 31 se sintetizó con referencia al procedimiento del Ejemplo 25, pero en la primera etapa, el 2-bromopropano se sustituyó por 4-(2-cloroetil)morfolina.
MS m/z (ESI): 523[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) 68,14 (s, 1H), 6,95 (brs, 1H), 6,69 (s, 2H), 6,63 (brs, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,49 - 6,39 (m, 2H), 6,14 (brs, 1H), 5,75 - 5,70 (m, 1H), 5,06 - 4,98 (m, 1H), 4,11 - 3,85 (m, 3H), 3,80 - 3,72 (m, 11H), 3,37 - 3,33 (m, 2H), 2,80 - 2,73 (m, 2H), 2,65 (brs, 4H), 2,45 - 2,32 (m, 2H).
Ejemplo 32
(S)-1-(1 -acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-(pirrolidin-1 -il)etil)amino)-1 H-pirazol -4-carboxamida
Figure imgf000050_0002
Etapa 1
4-metilbencenosulfonato de 2-bromoetilo
Se disolvieron el compuesto 2-bromoetanol 32a (500 mg, 4,0 mmol), 4-dimetilaminopiridina (246 mg, 2,02 mmol) y trietilamina (1,22 g, 12,1 mmol) en diclorometano (50 mL), se enfriaron hasta 0 °C y luego se añadió cloruro de ptoluenosulfonilo (1,15 g, 6,05 mmol) en porciones, una vez finalizada la adición, se agitó a temperatura ambiente durante la noche, una vez completada la reacción, la reacción se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con diclorometano (50 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1), para obtener el producto del título 2-bromoetil 4-metilbencenosulfonato 32b (600 mg, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 53 %. MS m/z (ESI): 277[M+1]
Etapa 2
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((2-bromoetil)amino)-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-carboxílico Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-amino-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-il)pirrolidin-1 -carboxílico 7d (400 mg, 0,92 mmol), 4-metilbencenosulfonato de 2-bromoetilo (380 mg, 1,37 mmol), carbonato de cesio (600 mg, 1,84 mmol) y acetonitrilo (10 mL) se calentó hasta 70 °C, se agitó durante 2 horas, la solución de reacción se vertió en agua (50 mL) y se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante una columna rápida de purificación, para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((2-bromoetil)amino)-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-carboxílico 32c (240 mg, sustancia oleosa marrón), y el rendimiento fue del 48 %. MS m/z (ESI): 408[M+1-56-80]
Etapa 3
Éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-(pirrolidin-1 -il)etil)amino)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1-carboxílico
Una mezcla de éster terc-butílico del ácido (S)-3-(5-((2-bromoetil)amino)-4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-1-carboxílico 32c (240 mg, 0,44 mmol), pirrolidina (47 mg, 0,66 mmol), carbonato de cesio (288 mg, 0,88 mmol) y acetonitrilo (5 mL) se calentó hasta 70 °C, se agitó durante 1,5 horas y se vertió la solución de reacción. en agua (30 mL), y luego se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 10/1), para obtener el producto del título éster terc-butílico del ácido (S)-3-(4-ciano-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((2-(pirrolidin-1 -il)etil)amino)-1 H-pirazol-1 -il)pirrolidin-1 -carboxílico 32d (200 mg, sustancia oleosa amarilla), y el rendimiento fue del 85 %.
MS m/z (ESI): 479[M+1-56]
El ejemplo 32 se sintetizó con referencia a las etapas de operación de la segunda a la cuarta etapas realizadas en el ejemplo 24.
MS m/z (ESI): 507[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCla) ó 8,38 (s, 1H), 6,99 (brs, 1H), 6,69 (s, 2H), 6,51 (s, 1H), 6,47 - 6,36 (m, 2H), 5,72 - 5,67 m, 2H), 5,16 - 5,08 (m, 1H), 4,12 - 3,86 (m, 3H), 3,80 - 3,62 (m, 9H), 3,33 - 3,29 (m, 6H), 2,62 - 2,34 (m, 2H), 2,07 (brs, 4H).
Ejemplo 33
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((tetrahidro-2H-piran-4-il)amino)-1H-pirazol- 4-carboxamida
Figure imgf000052_0001
Etapa 1
4-yodotetrahidro-2H-pirano
Se disolvieron 4-hidroxitetrahidro-2H-pirano 33a (2,04 g, 20 mmol), trifenilfosfina (6,81 g, 26) e imidazol (2,04 g, 30 mmol) en diclorometano (100 mL), se enfriaron hasta 0 °C y luego se añadió yodo (6,09 g, 24 mmol) y se agitó a 45 °C durante 14 horas, la reacción se inactivó con agua y luego se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 2), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1), para obtener el producto del título 4-yodotetrahidro-2H-pirano 33b (2,12 g, sólido blanco), y el rendimiento fue del 50 %.
1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 64,62 (dt, J = 13,9, 4,5 Hz, 1H), 3,68 - 3,64 (m, 2H), 3,47 - 3,42 (m, 2H), 2,13 - 1,97 (m, 4H).
El Ejemplo 33 se sintetizó siguiendo el procedimiento del Ejemplo 24, pero en la primera etapa, se usó 4-yodotetrahidro-2H-pirano para sustituir el yoduro de etilo.
MS m/z (ESI): 494[M+H]
1H NMR (400 MHz, CDaOD) 66,74 (t, J = 2,2 Hz, 2H), 6,71 - 6,62 (m, 1H), 6,60 - 6,58(m, 1H), 6,36 - 6,30 (m, 1H), 5,82 - 5,77 (m, 1H), 5,18 - 5,12 (m, 1H), 4,04 - 3,94 (m, 6H), 3,81 (s, 6H), 3,52 - 3,46 (m, 3H), 2,55 - 2,39 (m, 2H), 1,94 - 1,92 (m, 2H), 1,60 - 1,55 (m, 2H).
Ejemplo 34
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((1-metilpiperidin-4-il)amino)-1H-pirazol-4- carboxamida
Figure imgf000053_0001
Etapa 1
4-yodo-1-metilpiperidina
Se mezclaron 4-hidroxi-1 -metilpiperidina 34a (2,3 g, 20 mmol), trifenilfosfina (6,81 g, 26 mmol), imidazol (2,04 g, 30 mmol) y diclorometano (100 mL) y se enfriaron hasta 0 °C, y luego se añadió yodo (6,09 g, 24 mmol) y la agitación continuó durante 18 horas, después de que terminó la reacción, se inactivó con agua y luego se extrajo con diclorometano (50 mL x 2), las fases orgánicas se combinaron y se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, el desecante se eliminó por filtración, y el sistema de reacción se concentró a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (diclorometano/metanol = 10 / 1 ), para obtener el producto del título 4-yodo -1 -metilpiperidina 34b (2,25 g, sólido blanco), y el rendimiento fue del 50 %.
MS m/z (ESI): 226[M+H]
Etapa 2
(S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((1-metilpiperidin-4-il)amino)-1H-pirazol-4- carboxamida Se mezclaron el compuesto (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-5-amino-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-1H-pirazol-4-carboxamida 7 (210 mg, 0,5 mmol), 4-yodo-1-metilpiperidina 34b (450 mg, 2 mmol), carbonato de potasio (207 mg, 1,5 mmol) y acetonitrilo (10 mL) y se calentaron y agitaron a 90 °C durante 13 horas, el disolvente se eliminó bajo presión reducida de la mezcla de reacción, y luego la mezcla de reacción se disolvió en agua, y luego se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 2), la fase orgánica se combinó y el solvente se eliminó a presión reducida, el residuo se purificó mediante cromatografía líquida preparativa inversa, para obtener el producto del título (S)-1-(1-acriloilpirrolidin-3-il)-3-((3,5-dimetoxifenil)etinil)-5-((1 -metilpiperidin-4-il) amino)-1H-pirazol-4-carboxamida 34 (8,1 mg, sólido blanco), y el rendimiento fue del 3,2 %.
MS m/z (ESI): 507[M+H]
1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6 6,77 (s, 2H), 6,68-6,65 (m, 1H), 6,59 (s, 1H), 6,34 - 6,30 (m, 1H), 5,81 - 5,78 (m, 1H), 5,69 - 5,67 (m, 1H), 5,03 - 5,00 (m, 1H), 4,98 - 5,95(m, 1H), 4,92 - 4,90 (m, 1H), 4,36 (s, 2H), 4,12 - 4,07 (m, 1H), 4,00 - 3,98 (m, 1H), 3,93 - 3,90 (m, 1H), 3,86 - 3,84 (m, 1H), 3,81 (s, 6 H), 3,72 - 3,68 (m, 1H), 2,53 - 2,47 (m, 3H), 2,40 - 2,38 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2,27 - 2,21 (m, 1H).
Experimentos biológicos
Prueba de inhibición de la actividad de FGFR
El efecto de los compuestos de la presente invención sobre la actividad in vitro de FGFR se evaluó mediante la medición del nivel de fosforilación del sustrato en una reacción de quinasa mediante el uso del kit de ensayo de quinasa HTRF (Tabla 1).
Prueba de inhibición de la actividad de FGFR1
Los métodos experimentales se resumen de como sigue:
El tampón de reacción contiene los siguientes componentes: tampón/quinasa 5X enzimático diluido 5 veces (Cisbio, Cat. núm. 62EZBFDD) (su principal componente es HEPES 50 mM, pH 7,0), MgCl25 mM y DTT 1 mM; una proteína FGFR1 recombinante humano de dominio catalítico (aminoácido 308-731), que fue purificada por la empresa, una solución de quinasa de 0,6 ng/pl diluida con el tampón de reacción; una solución de reacción de sustrato que contiene sustrato de tirosina quinasa biotinilado 400 nM diluido por el tampón de reacción (Cisbio, Cat. núm.
62TK0PEC) y ATP 40 pM; una solución de prueba que contiene 0,125 ng/pL de anticuerpo de jaula marcado con Eu3+ (Cisbio, Cat. núm. 61T66KLB) diluido con un tampón de prueba (Cisbio, cat. núm. 62SDBRDF) y XL665 marcado con estreptavidina 25 nM (Cisbio, Cat. núm. 610SAXLB).
Los compuestos se diluyeron a 1 mM en DMSO, luego se diluyeron 4 veces en serie con DMSO hasta una concentración mínima de 0,061 pM, y cada concentración se diluyó 40 veces más con el tampón de reacción. Si el valor IC50 de un compuesto es muy bajo, la concentración inicial del compuesto puede reducirse.
Se añadieron 4 pL de solución compuesta y 2 pL de solución de quinasa FGFR1 a una placa de ensayo de 384 pozos (Thermo, Cat. No. 264706), bien mezclado e incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente; luego se añadieron 4 pL de la solución de reacción del sustrato y se incubó la mezcla de reacción durante 60 minutos a temperatura ambiente; y luego la reacción se terminó al añadir un volumen igual de 10 pL de la solución de prueba, y la mezcla se mezcló uniformemente y se dejó reposar a temperatura ambiente. Después de 60 minutos, el producto fosforilado fue reconocido simultáneamente por el anticuerpo de jaula marcado con Eu3+ (donante) y el anticuerpo XL665 marcado con estreptavidina (receptor), después de la excitación con láser, se produce una transferencia de resonancia de energía entre el donante y el aceptor, que están cerca uno del otro. otro, y la energía se transfirió del donante (620 nm) al aceptor (665 nm), que pudo ser detectado por un lector de microplacas EnVision (Perkin Elmer). La relación de 665/620 se correlaciona positivamente con el grado de fosforilación del sustrato, por lo que se detectó la actividad de la quinasa FGFR1.
En este experimento, el grupo sin la enzima era un grupo de inhibición del 100 %, el grupo con la enzima pero sin el compuesto era un grupo de inhibición del 0 %. El porcentaje de inhibición de la actividad de FGFR1 por el compuesto se calculó así mediante el uso de la siguiente fórmula:
Porcentaje de inhibición = 100-100* (relacióncompuesto - relación100% inhibición) / (relación0% inhibición - relación100% inhibición)
El valor IC50 del compuesto se calculó a partir de los 10 puntos de concentración mediante el uso del software XLfit en Excel mediante la siguiente fórmula:
Y = Inferior+(Superior-Inferior)/(1 10A((loglCó0 -X)*factor de pendiente))
Donde Y es el porcentaje de inhibición, Inferior es el valor de la plataforma inferior de la curva S, Superior es el valor de la plataforma superior de la curva S, X es el logaritmo de la concentración del compuesto a probar y el factor de pendiente es el coeficiente de pendiente de la curva.
Prueba de inhibición de la actividad de FGFR2
Los métodos experimentales se resumen como sigue:
El tampón de reacción contiene los siguientes componentes: tampón/quinasa 5X enzimático diluido 5 veces (Cisbio, Cat. núm. 62EZBFDD) (su principal componente es HEPES 50 mM, pH 7,0), MgCl25 mM y DTT 1 mM; una proteína FGFR2 recombinante humana de dominio catalítico (aminoácido 400-821), que se adquirió de Yiqiao Shenzhou Biotech Co., Ltd., una solución de quinasa de 0,45 ng/pl diluida con el tampón de reacción; una solución de reacción de sustrato que contiene sustrato de tirosina quinasa biotinilado 800 nM diluido por el tampón de reacción (Cisbio, Cat. núm. 62TK0PEC) y ATP 50 pM; una solución de prueba que contiene 0,125 ng/pL de anticuerpo de jaula marcado con Eu3+ (Cisbio, Cat. núm. 61T66KLB) diluido con un tampón de prueba (Cisbio, cat. núm. 62SDBRDF) y XL665 marcado con estreptavidina 50 nM (Cisbio, Cat. núm. 610SAXLB).
Los compuestos se diluyeron a 1 mM en DMSO, luego se diluyeron 4 veces en serie con DMSO hasta una concentración mínima de 0,061 pM, y cada concentración se diluyó 40 veces más con el tampón de reacción. Si el valor IC50 de un compuesto es muy bajo, la concentración inicial del compuesto puede reducirse.
Se añadieron 4 pL de solución compuesta y 2 pL de solución de quinasa FGFR2 a una placa de ensayo de 384 pozos (Thermo, Cat. núm. 264706), bien mezclado e incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente; luego se añadieron 4 pL de la solución de reacción del sustrato y se incubó la mezcla de reacción durante 60 minutos a temperatura ambiente; y luego la reacción se terminó al añadir un volumen igual de 10 pL de la solución de prueba, y la mezcla se mezcló uniformemente y se dejó reposar a temperatura ambiente. Después de 60 minutos, el producto fosforilado fue reconocido simultáneamente por el anticuerpo de jaula marcado con Eu3+ (donante) y el anticuerpo XL665 marcado con estreptavidina (receptor), después de la excitación con láser, se produce una transferencia de resonancia de energía entre el donante y el aceptor, que están cerca uno del otro, y la energía se transfirió del donante (620 nm) al aceptor (665 nm), que pudo detectarse con un lector de microplacas EnVision (Perkin Elmer). La relación de 665/620 se correlaciona positivamente con el grado de fosforilación del sustrato, por lo que se detectó la actividad de la quinasa FGFR2.
En este experimento, el grupo sin la enzima era un grupo de inhibición del 100 %, el grupo con la enzima pero sin el compuesto era un grupo de inhibición del 0 %. El porcentaje de inhibición de la actividad de FGFR2 por parte del compuesto se calculó mediante el uso de la siguiente fórmula:
Porcentaje de inhibición = 100-100* (relacióncompuesto - relación100% inhibición) / (relación0% inhibición - relación100% inhibición)
El valor IC50 del compuesto se calculó a partir de los 10 puntos de concentración mediante el uso del software XLfit en Excel mediante la siguiente fórmula:
Y = Inferior+(Superior-Inferior)/(1 10A((loglCó0-X)*factor de pendiente))
Donde Y es el porcentaje de inhibición, Inferior es el valor de la plataforma inferior de la curva S, Superior es el valor de la plataforma superior de la curva S, X es el logaritmo de la concentración del compuesto a probar y el factor de pendiente es el coeficiente de pendiente de la curva.
Prueba de inhibición de la actividad FGFR3
Los métodos experimentales se resumen como sigue:
El tampón de reacción contiene los siguientes componentes: tampón/quinasa 5X enzimático diluido 5 veces (Cisbio, Cat. núm. 62EZBFDD) (su principal componente es HEPES 50 mM, pH 7,0), M gC2 mM y DTT 1 mM; una proteína FGFR3 recombinante humana de dominio catalítico (aminoácido 399-806), que se adquirió de Yiqiao Shenzhou Biotech Co., Ltd., una solución de quinasa de 0,3 ng/pl diluida con el tampón de reacción; una solución de reacción de sustrato que contiene sustrato de tirosina quinasa biotinilado 1000 nM diluido por el tampón de reacción (Cisbio, Cat. núm. 62TK0PEC) y ATP 90 pM; una solución de prueba que contiene 0,125 ng/pL de anticuerpo de jaula marcado con Eu3+ (Cisbio, Cat. núm. 61T66KLB) diluido con un tampón de prueba (Cisbio, cat. núm. 62SDBRDF) y XL665 marcado con estreptavidina 62,5 nM (Cisbio, Cat. núm. 610sAx LB).
Los compuestos se diluyeron hasta 1 mM en DMSO, luego se diluyeron 4 veces en serie con DMSO hasta una concentración mínima de 0,061 pM, y cada concentración se diluyó 40 veces más con el tampón de reacción. Si el valor IC50 de un compuesto es muy bajo, la concentración inicial del compuesto puede reducirse.
Se añadieron 4 pL de solución de compuesto y 2 pL de solución de quinasa FGFR3 a una placa de ensayo de 384 pozos (Thermo, Cat. núm. 264706), bien mezclado e incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente; luego se añadieron 4 pL de la solución de reacción del sustrato y se incubó la mezcla de reacción durante 60 minutos a temperatura ambiente; y luego la reacción se terminó al añadir un volumen igual de 10 pL de la solución de prueba, y la mezcla se mezcló uniformemente y se dejó reposar a temperatura ambiente. Después de 60 minutos, el producto fosforilado fue reconocido simultáneamente por el anticuerpo de jaula marcado con Eu3+ (donante) y el anticuerpo XL665 marcado con estreptavidina (receptor), después de la excitación con láser, se produce una transferencia de resonancia de energía entre el donante y el aceptor, que están cerca uno del otro, y la energía se transfirió del donante (620 nm) al aceptor (665 nm), que pudo detectarse mediante un lector de microplacas EnVision (Perkin Elmer). La relación de 665/620 se correlaciona positivamente con el grado de fosforilación del sustrato, por lo que se detectó la actividad de la quinasa FGFR3.
En este experimento, el grupo sin la enzima era un grupo de inhibición del 100 %, el grupo con la enzima pero sin el compuesto era un grupo de inhibición del 0 %. El porcentaje de inhibición de la actividad de FGFR3 por el compuesto se calculó mediante el uso de la siguiente fórmula:
Porcentaje de inhibición = 100-100* (relacióncompuesto - relación100% inhibición) / (relación0% inhibición - relación100% inhibición) El valor IC50 del compuesto se calculó a partir de los 10 puntos de concentración mediante el uso del software XLfit en Excel mediante la siguiente fórmula:
Y = Inferior+(Superior-Inferior)/(1 10A((loglC50 -X)*factor de pendiente)) Donde Y es el porcentaje de inhibición, Inferior es el valor de la plataforma inferior de la curva S, Superior es el valor de la plataforma superior de la curva S, X es el logaritmo de la concentración del compuesto a probar y el factor de pendiente es el coeficiente de pendiente de la curva.
Prueba de inhibición de la actividad de FGFR4
Los métodos experimentales se resumen como sigue:
El tampón de reacción contiene los siguientes componentes: tampón/quinasa 5X enzimático diluido 5 veces (Cisbio, Cat. núm. 62EZBFDD) (su principal componente es HEPES 50 mM, pH 7,0), MgCl25 mM y DTT 1 mM; una proteína de dominio catalítico FGFR4 recombinante humano (aminoácido 460-802), que se adquirió del Centro de Tecnología de Investigación de Proteínas de la Universidad de Tsinghua, una solución de quinasa de 0,5 ng/pl diluida por el tampón de reacción; una solución de reacción de sustrato que contiene sustrato de tirosina quinasa biotinilado 500 nM diluido por el tampón de reacción (Cisbio, Cat. núm. 62TK0PEC) y ATP 90 pM; una solución de prueba que contiene 0,125 ng/pL de anticuerpo de jaula marcado con Eu 3+ (Cisbio, Cat. núm. 61T66KLB) diluido con un tampón de prueba (Cisbio, cat. núm. 62SDBRDF) y XL665 marcado con estreptavidina 31,25 nM (Cisbio, cat. núm.
610SAXLB).
Los compuestos se diluyeron a 1 mM en DMSO, luego se diluyeron 4 veces en serie con DMSO hasta una concentración mínima de 0,061 pM, y cada concentración se diluyó 40 veces más con el tampón de reacción. Si el valor IC50 de un compuesto es muy bajo, la concentración inicial del compuesto puede reducirse.
Se añadieron 4 pL de solución compuesta y 2 pL de solución de quinasa FGFR4 a una placa de ensayo de 384 pozos (Thermo, Cat. núm. 264706), bien mezclado e incubado durante 15 minutos a temperatura ambiente; luego se añadieron 4 pL de la solución de reacción del sustrato y se incubó la mezcla de reacción durante 60 minutos a temperatura ambiente; y luego la reacción se terminó al añadir un volumen igual de 10 pL de la solución de prueba, y la mezcla se mezcló uniformemente y se dejó reposar a temperatura ambiente. Después de 60 minutos, el producto fosforilado fue reconocido simultáneamente por el anticuerpo de jaula marcado con Eu3+ (donante) y el anticuerpo XL665 marcado con estreptavidina (receptor), después de la excitación con láser, se produce una transferencia de resonancia de energía entre el donante y el aceptor, que están cerca uno del otro, y la energía se transfirió del donante (620 nm) al aceptor (665 nm), que pudo detectarse mediante un lector de microplacas EnVision (Perkin Elmer). La relación de 665/620 se correlaciona positivamente con el grado de fosforilación del sustrato, por lo que se detectó la actividad de la quinasa FGFR4.
En este experimento, el grupo sin la enzima era un grupo de inhibición del 100 %, el grupo con la enzima pero sin el compuesto era un grupo de inhibición del 0 %. El porcentaje de inhibición de la actividad de FGFR4 por el compuesto se calculó mediante el uso de la siguiente fórmula:
Porcentaje de inhibición = 100-100* (relacióncompuesto - relación100% inhibición) / (relación0% inhibición - relación100% inhibición) El valor IC50 del compuesto se calculó a partir de los 10 puntos de concentración mediante el uso del software XLfit en Excel mediante la siguiente fórmula:
Y = Inferior+(Superior-Inferior)/(1 10A((loglC50 -X)*factor de pendiente)) Donde Y es el porcentaje de inhibición, Inferior es el valor de la plataforma inferior de la curva S, Superior es el valor de la plataforma superior de la curva S, X es el logaritmo de la concentración del compuesto a probar y el factor de pendiente es el coeficiente de pendiente de la curva.
Tabla 1
Figure imgf000057_0001
Los compuestos en los ejemplos de la presente invención tienen un efecto inhibidor significativo sobre la actividad de FGFR, preferentemente con una IC50 de 100 a 1000 nM, con mayor preferencia una IC50 de menos de 100 nM y con la máxima preferencia una IC50 de menos de 10 nM.
Determinación de la inhibición de la proliferación de células Hep3B
El efecto de los compuestos de la presente invención sobre la proliferación celular de la línea celular de hepatoma Hep3B se evaluó mediante el uso de un ensayo de viabilidad celular luminiscente (Tabla 2).
Los métodos experimentales se resumen como sigue:
Reactivo CellTilter-Glo (Promega, cat. núm. G7572) consta de polvo liofilizado CTG y tampón CTG. Antes de su uso, el polvo liofilizado debe disolverse en el tampón.
El compuesto se diluyó con DMSO (Sigma, Cat. núm. D5879) a 5 mM, luego se diluyó en serie 4 veces con DMSO hasta una concentración mínima de 0,31 pM, y cada punto de concentración se diluyó 50 veces más con un medio DMEM libre de FBS (ThermoFisher, Cat. núm. 11995073). Si el valor IC50 del compuesto fuera muy bajo, la concentración inicial del compuesto podría reducirse.
Se cultivaron células Hep3B (obtenidas del Centro de Recursos Celulares de los Institutos de Ciencias Biológicas de Shanghái, Academia de Ciencias de China) en medio de cultivo completo DMEM que contenía una solución mixta de FBS al 10 % (GBICO, Cat. núm. 10099-141) y 100 U/mL de estreptomicina (ThermoFisher, cat. núm. 15140122). Cuando las células alcanzaron una confluencia del 80-90 % en el recipiente de cultivo, se digirieron las células con tripsina al 0,25 % (que contenía EDTA) (ThermoFisher, Cat. núm. 25200056), se dispersó y luego se sembró en una placa de cultivo blanca de 384 pocillos (ThermoFisher, cat. núm. 164610), cada pocillo contiene aproximadamente 1000 células (27 pl de medio de cultivo completo DMEM), luego las placas de 384 pocillos se incubaron durante toda la noche (18 a 20 horas) en un incubadora a 37 °C, CO2 al 5 %.
Después de la incubación durante toda la noche, se agregaron 3 pL de compuesto diluido de DMEM a cada pozo, que luego se centrifugó suavemente para mezclar bien, y luego la placa de 384 pozos se colocó en una incubadora a 37 °C, CO2 al 5 % para continuar con el cultivo, y después de 72 horas, se sacó la placa y se dejó reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se añadieron 15 pL de reactivo CTG por pozo, que se calentó hasta temperatura ambiente, la placa se agitó suavemente en un agitador durante 3 minutos para garantizar una lisis celular suficiente, se dejó reposar durante 10 minutos para estabilizar la señal de luminiscencia y luego se leyó la señal de luminiscencia con EnVision (Perkin Elmer).
La señal luminiscente del grupo BLU9931 (Cancer Discovery 2015, 5, 424) con Blueprint 10 pM se usó como señal de inhibición del 100 %, y la señal luminiscente del grupo DMSO al 0,2 % se usó como señal de inhibición del 0 %.
El porcentaje de inhibición de la proliferación de células Hep3B por parte del compuesto podría calcularse mediante la siguiente fórmula:
Porcentaje de inhibición = 100-100* (señalcompuesto - señal100% inhibición) / (señal0% inhibición - señal100% inhibición) El valor IC50 del compuesto se calculó a partir de 8 puntos de concentración mediante el uso del software XLfit (ID Business Solutions Ltd., Reino Unido) mediante la siguiente fórmula:
Y = Inferior+(Superior-Inferior)/(1 10 A((loglCó0 -X)*factor de pendiente)) Donde Y es el porcentaje de inhibición, Inferior es el valor de la plataforma inferior de la curva S, Superior es el valor de la plataforma superior de la curva S, X es el logaritmo de la concentración del compuesto a probar y el factor de pendiente es el coeficiente de pendiente de la curva.
Determinación de la inhibición de la proliferación de células RT4
El efecto de los compuestos de la presente invención sobre la proliferación celular de la línea celular de cáncer de vejiga RT4 se evaluó mediante el uso de un ensayo de viabilidad celular luminiscente (Tabla 2).
Para conocer el método experimental, consulte el método para determinar la inhibición de la proliferación de células Hep3B. Las células RT4 se obtuvieron del Centro de Recursos Celulares de los Institutos de Ciencias Biológicas de Shanghai, Academia de Ciencias de China, y el control positivo fue ((S)-1-(3-(4-Amino-3-((3,5 -dimetoxifenil)etinil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il)pirrolidin-1 -il)prop-2-en-1 -ona) descrito en el Ejemplo 1 de la solicitud de patente de Taiho WO2015008844A1.
Determinación de la inhibición sobre la proliferación de células SNU-16
El efecto de los compuestos de la presente invención sobre la proliferación celular de la línea celular de cáncer gástrico SNU-16 se evaluó mediante el uso de un ensayo de viabilidad celular luminiscente (Tabla 2).
Para conocer el método experimental, consulte el método para determinar la inhibición de la proliferación de células Hep3B. Las células SNU- 16 son HB-8064 de ATCC, el control positivo fue BJG398 de Novartis.
Tabla 2
Figure imgf000058_0001
Los compuestos en los ejemplos de la presente invención tienen efectos inhibidores significativos sobre la proliferación celular de Hep3B, RT4 y SNU-16, respectivamente, preferentemente con un IC50 de 100 a 1000 nM, y con mayor preferencia un IC50 de menos de 100 nM.

Claims (8)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto como se muestra en la fórmula general (II):
Figure imgf000060_0001
en donde:
Ga, Gb, Gc y Gd se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterociclilo de 3-8 miembros, -OR8, -NR8R9 y -C(O)NR8R9, en donde el alquilo, cicloalquilo o heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8 o heterociclilo de 3-8 miembros, R1 se selecciona independientemente de H, -NH2 y -NHR3; y R3 se selecciona independientemente de alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con halógeno, ciano, -OR4, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o heterociclilo de 3-6 miembros;
X está ausente o es alquileno C1-6;
Y está ausente o es cicloalquileno C3-8 o heterociclileno de 3-8 miembros,
Z se selecciona independientemente de ciano,
Figure imgf000060_0002
el enlace a es un doble enlace o un triple enlace;
en el caso donde el enlace a es un doble enlace, Ra, Rb y Rc se seleccionan cada uno independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, heterociclilo de 3-6 miembros, -OR8 y -NR8R9;
en el caso donde el enlace a es un enlace triple, Ra y R° están ausentes, Rb se selecciona independientemente de H, ciano, halógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 y heterociclilo de 3-6 miembros, en donde el alquilo, el cicloalquilo y el heterociclilo están opcionalmente sustituidos con uno o más grupos sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, ciano, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6, heterociclilo de 3-6 miembros, -OR8 y -NR8R9;
R4, R8 y R9 se seleccionan cada uno independientemente de H y alquilo C1-6,
o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un derivado isotópico 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 18F, 31P, 32P, 35S, o 36Cl del mismo.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde Ga, Gb, Gc y Gd son cada uno independientemente alquilo -OC1-2 o halógeno.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es
Figure imgf000060_0003
4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de los siguientes:
Figure imgf000061_0001
5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de los siguientes:
Figure imgf000062_0001
6. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, y un portador y un excipiente farmacéuticamente aceptables.
7. Un medicamento que comprende el compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6.
8. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6 para su uso en un método para tratar o prevenir una enfermedad asociada a FGFR, en donde la enfermedad asociada a FGFR es cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de esófago, melanoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de células renales, mieloma múltiple, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de endometrio, cáncer de cuello uterino, cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de vejiga, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata o cáncer de hígado.
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