ES2924915T3

ES2924915T3 - Inhibidores de RHO cinasa

Info

Publication number: ES2924915T3
Application number: ES13843426T
Authority: ES
Inventors: Masha Poyurovsky; Ji-In Kim; Kevin Liu; Alexandra Zanin-Zhorov
Original assignee: Kadmon Corp LLC
Current assignee: Kadmon Corp LLC
Priority date: 2012-10-05
Filing date: 2013-10-07
Publication date: 2022-10-11
Anticipated expiration: 2033-10-07
Also published as: HUE059305T2; US20150252025A1; CN113773308A; CN113637007A; US10183931B2; US9815820B2; EP4116293A2; LT2903618T; JP6419076B2; US20210147391A1; CN113620933A; CN113637008A; WO2014055996A3; PL2903618T3; JP6703075B2; JP2015533125A; CA2926478C; EP4116293A3; EP2903618A4; US20190308953A1

Abstract

La invención se refiere a inhibidores de ROCK1 y/o ROCK2. También se proporcionan métodos para tratar enfermedades y trastornos que implican la inhibición de ROCK1 y/o ROCK2. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores de RHO cinasa

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a inhibidores de ROCK1 y/o ROCK2. También se proporcionan métodos para inhibir ROCK1 y/o ROCK2 que son útiles para el tratamiento de enfermedades.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La proteína cinasa asociada a Rho (ROCK) es un regulador intracelular clave de la dinámica del citoesqueleto y la motilidad celular. La Rho-cinasa regula diversas dianas aguas abajo de RhoA a través de la fosforilación, incluyendo, por ejemplo, la cadena ligera de miosina, la subunidad de unión a fosfatasa de la cadena ligera de miosina, y la LIM-cinasa 2. Estos sustratos regulan la organización y la contractilidad del filamento de actina. En las células del músculo liso, la Rho-cinasa media la sensibilización al calcio y la contracción del músculo liso. La inhibición de Rho-cinasa bloquea la contracción muscular inducida por agonistas de 5-HT y fenilefrina. Cuando se introduce en células de músculo no liso, la Rho cinasa induce la formación de fibras de estrés, y es necesaria para la transformación celular mediada por RhoA. La Rho cinasa participa en una variedad de procesos celulares, incluyendo, pero sin limitarse a, la adhesión celular, la motilidad y migración celulares, el control del crecimiento, la contracción celular, y la citocinesis. La Rho cinasa también participa en la activación del sistema de transporte de intercambio de Na/H, la formación de fibras de estrés, la activación de la aducina, y procesos fisiológicos tales como la vasoconstricción, la constricción del músculo liso bronquial, el músculo liso vascular y la proliferación de células endoteliales, la agregación plaquetaria, y otros.

La inhibición de la actividad de la Rho-cinasa en modelos animales ha demostrado una serie de beneficios de la inhibición de la Rho-cinasa para el tratamiento de enfermedades humanas. Estas incluyen modelos de enfermedades cardiovasculares tales como hipertensión, aterosclerosis, restenosis, hipertrofia cardíaca, hipertensión ocular, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, disfunción eréctil del pene, trastornos del sistema nervioso central tales como degeneración neuronal y lesión de la médula espinal, y en neoplasias. Se ha demostrado que la inhibición de la actividad de la Rho cinasa inhibe el crecimiento y la metástasis de las células tumorales, la angiogénesis, los trastornos trombóticos arteriales tales como la agregación de plaquetas y la agregación de leucocitos, el asma, la regulación de la presión intraocular, y la resorción ósea. La inhibición de la actividad de la Rho cinasa en pacientes tiene beneficios para controlar el vasoespasmo cerebral y la isquemia tras una hemorragia subaracnoidea, reducción de la presión intraocular, aumento del flujo acuoso ocular por relajación del tejido de la red trabecular, mejora del flujo sanguíneo al nervio óptico, y protección de células ganglionares sanas.

En los mamíferos, la Rho-cinasa consiste en dos isoformas, ROCK1 (ROCKp; p160-ROCK) y ROCK2 (ROCKa). ROCK1 y ROCK2 se expresan y regulan de manera diferencial en tejidos específicos. Por ejemplo, ROCK1 se expresa de manera ubicua a niveles relativamente altos, mientras que ROCK2 se expresa preferentemente en el músculo cardiaco, cerebral y esquelético. Las isoformas también se expresan en algunos tejidos y en una forma específica de la etapa de desarrollo. ROCK1 es un sustrato para la escisión por caspasa-3 durante la apoptosis, mientras que ROCK2 no lo es. La calponina básica específica del músculo liso es fosforilada solo por ROCK2.

El documento WO 2008/054599 A2 se refiere a inhibidores de ROCK1 y ROCK2, que pueden ser selectivos para ROCK2, y a métodos para modular las propiedades farmacocinéticas y/o farmacodinámicas de dichos compuestos.

Dada la extensión de los procesos y enfermedades celulares involucrados, se desean compuestos que inhiban selectivamente una rho cinasa, o inhiban ROCK1 y ROCK2.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a un compuesto que inhibe ROCK 2, para uso en el tratamiento de un trastorno autoinmune en un sujeto, en el que el trastorno autoinmune es psoriasis, dermatitis atópica, eccema o enfermedad de injerto contra hospedante (EICH), y en la que el compuesto que inhibe ROCK2 es un compuesto de fórmula (XXXII):

a sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R1 se selecciona del grupo que consiste en -O-(CH2)y-CO2R12, -O-(CH2)y-C(=O)NR13R14, -O-(CH2)y-heteroarilo, -O-(CH2)y-cicloalquilo, -O-C(=O)-(CH2)y-NR13R14, -O-(CH2)z-NR13R14, -NH-C(=O)-(CH2)y-NR13R14, -NH-C(=O)-X-R15, -NH-(CH2)yNR13R14;

R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido en uno o más carbonos con de 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR16R17, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

0 R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

X se selecciona de un enlace covalente, O, NH, y alquilo de C1-C6;

R15 se selecciona del grupo que consiste en heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3,

o R15 se selecciona de -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -CO2R18, -O-(CH2)x-CO2R18, y -C(=O)NR16R17;

R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R16 y R17 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R18 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, aralquilo, heteroarilo, alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

x se selecciona de 0 a 6;

y se selecciona de 0 a 6;

z se selecciona de 2 a 6;

cada R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, y perfluoroalquilo inferior;

cada R3 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, y perfluoroalquilo inferior;

n se selecciona de 0 a 4; y

m se selecciona de 0 a 3.

Adicionalmente, se describen compuestos que tienen las fórmulas I-XXV, como se expone más abajo. En ciertos aspectos, la presente descripción proporciona un compuesto de fórmula I:

en la que:

X se selecciona de N o C -R 1;

Y se selecciona de N o C-R5;

Z se selecciona de N o C-R3;

R1 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, perfluoroalquilo inferior, y (alquilo inferior)-O-(alquilo inferior);

R2 es un grupo que tiene la fórmula -A-R10;

A se selecciona del grupo que consiste en un enlace covalente, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, y heterociclilo; R10 se selecciona del grupo que consiste en H, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, perfluoroalquilo inferior, alquilo de C1-C10, alquenilo de C2-C10, y -(M)*-(CH1)y-Rn;

M se selecciona del grupo que consiste en N-R20, CR21R22, y C=O;

x es 0 o 1;

R10 se selecciona de H y alquilo de C 1-5;

R21 y R22 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, y alquilo inferior, o alternativamente, R21 y R22 se pueden tomar, junto con el átomo al que están unidos, para formar un cicloalquilo de C3-6;

y es 0, 1, 2 , 3 , 4 , 5 , o 6 ;

R11 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, en el que los sustituyentes opcionales se seleccionan del grupo que consiste en alquilo inferior, cicloalquilo de C1-6, oxo, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, perfluoroalquilo inferior, y (alquilo inferior)-O-(alquilo inferior); alternativamente, R11 se selecciona del grupo que consiste en -NR13R14, -C(=O)NR13R14, y - C(=O)R12, y -CO2R12; R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, arilo, heteroarilo, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), aralquilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, alcoxi de C1-C6, (alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), hidroxi, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C6, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, (alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, (alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), oxo, hidroxi, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R3 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino perfluoroalquilo inferior, y (alquilo inferior)-O-(alquilo inferior);

R5 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino perfluoroalquilo inferior, y (alquilo inferior)-O-(alquilo inferior);

R6 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino perfluoroalquilo inferior, y (alquilo inferior)-O-(alquilo inferior);

R7 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo inferior; y

R8 es un sistema anular heterocíclico que contiene nitrógeno, que puede comprender 0-2 heteroátomos anulares adicionales seleccionados de N, O y S, y puede estar no sustituido o puede estar sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados de halo, CN, oxo, hidroxi, amino, alquilo inferior, perfluoroalquilo inferior, y alcoxi inferior.

El presente uso médico puede incluir composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención y un vehículo y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

El presente uso médico puede incluir composiciones que comprenden un compuesto sustancialmente puro de la invención y una sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o hidrato del mismo, y un excipiente y/o diluyente farmacéuticamente aceptable.

La presente descripción proporciona un método para inhibir una rho-cinasa en un mamífero. La presente descripción proporciona un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad, que comprende administrar al paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmulas l-XXV. En ciertos aspectos, el compuesto de Fórmulas I-XXV inhibe RO CK2. En ciertos aspectos, el compuesto de Fórmulas I-XXV inhibe selectivamente RO CK2. Las enfermedades y afecciones no limitativas tratadas según la presente descripción incluyen enfermedades cardiovasculares tales como hipertensión, aterosclerosis, restenosis, hipertrofia cardíaca, hipertensión ocular, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, disfunción eréctil del pene, trastornos del sistema nervioso central tales como degeneración neuronal y lesión de la médula espinal, trastornos trombóticos arteriales tales como agregación de plaquetas y agregación de leucocitos, asma, regulación de la presión intraocular, y reabsorción ósea. En neoplasias, la Rho-cinasa inhibe el crecimiento de células tumorales y la metástasis, y la angiogénesis.

La presente descripción proporciona un método para tratar un trastorno autoinmune en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. Los trastornos autoinmunes incluyen, sin limitación, artritis reumatoide, (esclerosis múltiple), lupus eritematoso sistémico (SLE; lupus), psoriasis, enfermedad de Crohn, dermatitis atópica, eccema, o enfermedad de injerto contra hospedante (GVHD).

La presente descripción proporciona un método para tratar un trastorno cardiovascular en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. Los trastornos cardiovasculares incluyen, sin limitación, hipertensión, arterosclerosis, restenosis, hipertrofia cardíaca, hipertensión ocular, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, o disfunción eréctil.

La presente descripción proporciona un método para tratar la inflamación en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. La inflamación incluye, sin limitación, asma, inflamación cardiovascular, inflamación renal o arterioesclerosis.

La presente descripción proporciona un método para tratar un trastorno del sistema nervioso central en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. Los trastornos del sistema nervioso central incluyen, sin limitación, degeneración neuronal o lesión de la médula espinal, así como enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica (ALS), o esclerosis múltiple.

La presente descripción proporciona un método para tratar un trastorno trombótico arterial en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. Los ejemplos no limitativos de trastornos trombóticos arteriales son la agregación de plaquetas, o la agregación de leucocitos.

La presente descripción proporciona un método para tratar un trastorno fibrótico en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. Ejemplos no limitativos de trastornos fibróticos son fibrosis hepática, fibrosis pulmonar, o fibrosis renal.

La presente descripción proporciona un método para mantener la estabilidad epitelial, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV.

La presente descripción proporciona un método para tratar el glaucoma, o regular la presión intraocular en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. Los ejemplos no limitantes de glaucoma incluyen glaucoma primario de ángulo abierto, glaucoma agudo de ángulo cerrado, glaucoma pigmentario, glaucoma congénito, glaucoma de tensión normal, o glaucoma secundario.

La presente descripción proporciona un método para tratar una enfermedad neoplásica en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV. Las enfermedades neoplásicas incluyen, sin limitación, linfoma, carcinoma, leucemia, sarcoma, o blastoma, tales como cáncer de células escamosas, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de hipófisis, cáncer de esófago, astrocitoma, sarcoma de tejido blando, cáncer de pulmón no microcítico, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma escamoso del pulmón, cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, glioblastoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, cáncer cerebral, cáncer de endometrio, cáncer de testículo, colangiocarcinoma, carcinoma de vesícula biliar, cáncer gástrico, melanoma, o cáncer de cabeza y cuello. La presente descripción también proporciona un método para tratar el síndrome metabólico, la resistencia a la insulina, la hiperinsulinemia, la diabetes tipo 2, o la intolerancia a la glucosa en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV.

Además, la presente descripción proporciona un método para tratar la osteoporosis o promover la formación ósea en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV.

La presente descripción también proporciona un método para tratar el síndrome metabólico, la resistencia a la insulina, la hiperinsulinemia, la diabetes tipo 2, o la intolerancia a la glucosa en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmulas I-XXV.

Se ha descubierto que la rho cinasa regula la función TH17 y Treg, así como la producción de IL-17 e IL-21 en las células del sistema inmunitario. Por consiguiente, la presente descripción proporciona un método para regular las respuestas inmunológicas usando inhibidores de la rho cinasa, incluyendo, sin limitación, compuestos de fórmulas I-XXV, así como compuestos de fórmulas XXX-XXXVI.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La Figura 1 muestra los compuestos de la presente descripción.

La Figura 2 muestra los compuestos de la presente descripción.

La Figura 3 muestra los compuestos de la presente descripción.

La Figura 4 muestra los compuestos de la presente descripción.

La Figura 5 muestra las curvas de respuesta a la dosis para la inhibición de ROCK1 frente a ROCK2. Los compuestos corresponden a los Ejemplos aquí, como sigue: K100-5, Ej. 12; KD-25, SLx-2119; 3272, Ej. 28; K100-04, Ej. 14; K100-16, Ej. 43; K100-21; Ej. 38; K100-23 Ej. 52; K100-24, Ej. 111; K100-25, Ej. 56; K100-26, Ej. 13; 3266, Ej. 26.

La Figura 6 compara la inhibición de ROCK1 y ROCK2 entre los compuestos de los Ejemplos 43, 48 y 118. La Figura 7 muestra el inhibidor selectivo de ROCK2, KD025 (SLx 2119), que inhibe la secreción (A) y la proliferación (B) de IL-17/IL-21 en células T CD4+ humanas in vitro.

La Figura 8 muestra que el ARNip de ROCK2, pero no el ARNip de ROCK1, inhibe la secreción de IL-17 e IL-21. Panel A, izquierda: anti-ARNip de ROCK1 redujo la expresión de Rock1 en alrededor de 75%. El anti-ARNip de ROCK2 redujo la expresión de Rock2 en alrededor de 85%. Panel A, derecha: el ARNip de ROCK2, pero no el ARNip de ROCK1, inhibió la expresión de IL-17 e IL-21. No se observó inhibición de IFN-g. Panel B: el ARNip de ROCK2, pero no el ARNip de r Oc K1, inhibió la fosforilación de Stat3, IRF4 y RORyt. Panel C: el ARNip de ROCK2, pero no el ARNip de ROCK1, inhibió la fosforilación de MLC.

La Figura 9 muestra que KD025 (SLx 2119) inhibe la fosforilación de STAT3. (A) Pretratamiento de células T con KD025, seguido de estimulación con anticuerpos anti-CD3/CD28. (B) Cultivo celular en condiciones de sesgo de Th17 durante 5 días, seguido de tratamiento con KD025 durante 3 horas. (C) Las células T CD4+ se activaron mediante anti-CD3/CD28, TGF-b e IL-1 b con KD0250 pM, 2,5 pM, 5 pM o 10 pM durante 48 horas

La Figura 10 muestra que el inhibidor selectivo de ROCK2, KD025, inhibe la producción ex-vivo de IL-17, IL-21 e IFN-g en células T CD4+ estimuladas con CD3/CD28 de pacientes con AR. Panel A: En pacientes con AR, KD025 inhibe la estimulación de TCR de IL-17 e IL-21, así como IFN-g. Panel B: La inhibición de la producción de IFN-g se correlaciona con la puntuación de la actividad de la enfermedad (DAS). Panel C: Frecuencia de células T productoras de IL-17 e IFN-g demostrada mediante tinción intracelular.

La Figura 11 muestra que KD025 activa la fosforilación de STA T5. Las células T CD 4+ recién purificado se cultivaron durante 2 días con anticuerpos estimulantes contra CD3/C D 28 (5 mg/ml), TGF-b (5 ng/ml), IL-1 b (50 ng/ml), y las dosis indicadas del inhibidor selectivo de R O CK2 KD025.

La Figura 12 muestra la expresión de Foxp3 en células T CD4+ humanas tratadas con las dosis indicadas del inhibidor selectivo de R O CK2 KD025.

La Figura 13 muestra el efecto de la inhibición de RO CK2 mediada por KD025 en Tregs sobre la secreción de IL-17 por células T CD 4+CD25-.

La Figura 14 muestra el efecto de la inhibición de RO CK2 mediada por KD025 sobre la fosforilación inducida por TGF-p de STAT3 , MLC, y SMAD2/3 en Tregs.

La Figura 15A -C muestra el efecto de la inhibición de RO CK2 mediada por KD025 sobre la estimulación de la producción de (A) IL-17, (B) IL-21 y (C) IFN-g en PBMC aisladas. Seis pacientes se trataron con 120 mg/día de KD025, los días 1 y 8- 14, y dos pacientes con placebo. Se aislaron PBMC en los días 1 y 15, y se examinó la producción de IL-17 e IL-21 en respuesta a la estimulación por anticuerpos anti-CD3/C D 28. Los pacientes 2 y 7 recibieron placebo. * = placebo administrado a los pacientes 2 y 7. Los paneles D-F muestran el efecto de dosis crecientes de KD025 sobre la estimulación de la producción de (D) IL-17, (E) IL-21 y (F) IFN-g en PBMC aisladas. Las Figuras 16A -C muestran secuencias de región variable de cadena pesada humana, cadena ligera lambda, y cadena ligera kappa, respectivamente, de anticuerpos anti-VEGFR2 identificados por presentación en fago. DESCRIPCIÓ N DETALLADA

La presente descripción se refiere a compuestos que tienen la fórmula I:

en la que:

X se selecciona de N o C -R 1;

Y se selecciona de N o C-R5;

Z se selecciona de N o C-R3;

R2 es un grupo que tiene la fórmula -A-R10;

A se selecciona del grupo que consiste en un enlace covalente, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, y heterociclilo; R10 se selecciona del grupo que consiste en H, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, perfluoroalquilo inferior, alquilo de C1-C10, alquenilo de C2-C10, y -(M)*-(CH1)y-Rn

M se selecciona del grupo que consiste en N-R20, CR21R22, y C=O;

x es 0 o 1;

R10 se selecciona de H y alquilo de C1-5;

R21 y R22 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, halógeno, y alquilo inferior, o alternativamente, R21 y R22 se pueden tomar, junto con el átomo al que están unidos, para formar un cicloalquilo de C 3-6;

y es 0, 1, 2 , 3 , 4 , 5 , o 6 ;

R11 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-6, cicloalquilo de C3-6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, en el que los sustituyentes opcionales se seleccionan del grupo que consiste en alquilo inferior, cicloalquilo de C i-6, oxo, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, perfluoroalquilo inferior, y (alquilo inferior)-O-(alquilo inferior); alternativamente, R11 se selecciona del grupo que consiste en -NR13R14, -C(=O)NR13R14, y -C(=O)R12, y -CO2R12; R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C10, arilo, heteroarilo, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), aralquilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de C1-C6, cicloalquilo de C3-C6, alcoxi de C1-C6, (alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), hidroxi, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R7 se selecciona del grupo que consiste en H y alquilo inferior; y

En ciertos aspectos, el sistema anular de R8 está saturado, contiene uno o más doble enlaces, o es aromático. El sistema anular que comprende R8 es preferiblemente un sistema anular monocíclico o bicíclico que tiene de 4 a 10 átomos anulares. En ciertos aspectos, R8 se selecciona de:

en los que R9 se selecciona de H, halógeno y alquilo inferior.

En ciertos aspectos, R2 es un grupo arilo sustituido, y es preferiblemente un grupo fenilo sustituido.

En ciertos aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula II, III o IV:

en las que R2, R6, R7, X y Z son como se definen anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula V o VI:

en las que R6, R7, X, Z y R10 son como se definen anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula VII:

en la que R6, R7, X, Z, y R10 son como se definen anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula IX:

en la que R6, R7, X y Z son como se definen anteriormente para la fórmula I, y T es -(CH2)y-Rn, en la que Y y R11 son como se definen anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula X:

en la que R6, R7, X y Z son como se definen anteriormente para la fórmula I, y R’ es R13 como se define anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XI:

en la que R6, R7, X y Z son como se definen anteriormente para la fórmula I, y Ti es R12 como se define anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XII:

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XIII:

en la que R6, R7, X y Z son como se definen anteriormente para la fórmula I, A es M como se define anteriormente para la fórmula 1, y W es R12 como se define anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XIV:

en la que X, Z y R13 son como se definen anteriormente para la fórmula I.

En ciertos aspectos, para cada uno de los compuestos descritos anteriormente, el resto

se puede seleccionar de un grupo heteroaromático tal como Y es N. En otros aspectos, tanto Y como X son N, y en aún otros aspectos, X, Y y Z son cada uno N. En aspectos preferidos, este grupo heteroaromático se selecciona de uno cualquiera de los siguientes grupos:

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XV:

en la que R6, R7, y R10 son como se definen anteriormente para la fórmula I.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XVI:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo aromático o heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, oxo, -OH, -NH2, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

R2 se selecciona de H y halo;

cada R3 y R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -NR31R32, perfluoroalquilo de C1-C3, -O-(CH2)aNR31R32, -NR31-(CH2)aNR33R34, -NR31-(CH2)aOR33, arilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, y -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6);

R31 y R32 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, y -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6);

o R31 y R32 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

R33 y R34 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H y alquilo de C1-C8;

a se selecciona de 0 a 6;

R5 se selecciona de H y alquilo de C1-C6;

R6 se selecciona del grupo que consiste en H, halo, y alquilo de C1-C6.

En una realización de la invención, R13 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C8, cicloalquilo de C3-C7, y un anillo heterocíclico de tres a doce miembros. En otra realización de la invención, R13 se selecciona del grupo que consiste en isopropilo, cicloalquilo, N-morfolino y 3-piridina. En una realización de la invención, R14 es H. En una realización de la invención, R1 es H. En otra realización de la invención, R1 es F. En una realización de la invención, R3 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8 y perfluoroalquilo de C1-C3. En otra realización de la invención, R3 se selecciona del grupo que consiste en H, CH3 y CF3. En una realización de la invención, R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, perfluoroalquilo de C1-C3 y un anillo heterocíclico de tres a doce miembros. En otra realización de la invención, R4 se selecciona del grupo que consiste en H, CH3, CF3, piperazinilo y N-morfolino.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XVII:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

X se selecciona del grupo que consiste en -NH-C(=O)-CHR13R14; -NH-C(=O)-(CH2)b-NR13R14; -C(=O)-NR13R14. R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, CN, y perfluoroalquilo de C1-C3;

cada R3 y R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -NR31R32, perfluoroalquilo de C1-C3, -O-(CH2)aNR31R32, arilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

a se selecciona de 0 a 6;

b se selecciona de 0 a 1.

En una realización de la invención, R13 es un anillo heterocíclico de tres a doce miembros. En otra realización de la invención, R13 se selecciona del grupo que consiste en isopropilo, cicloalquilo, N-morfolino, 3-piridinilo, tetrahidropiranilo, piperdinilo, y dióxido de tetrahidrotiopiranilo. En otra realización de la invención, R13 se selecciona del grupo que consiste en:

En una realización de la invención, R14 es H. En una realización de la invención, R3 y R4 son cada uno H.

En otro aspecto, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XVIII:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

cada R3 y R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -NR31R32, CF3, -O-(CH2)aNR31 R32, arilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

a se selecciona de 0 a 6;

R15 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -C(=O)-O-C(R)331, CF3, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico o aromático de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

x se selecciona de 1 a 3;

y se selecciona de 0 a 3;

z se selecciona de 0 a 3;

en la que y o z se seleccionan independientemente, y uno de los cuales es al menos 1.

En otros aspectos, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XIX:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo aromático o heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de Ci -C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

Y se selecciona del grupo que consiste en S, CH2, y -CR31R32-R2 se selecciona de H y halo;

R31 y R32 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, halo, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, y -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6);

o R31 y R32 se pueden tomar juntos para formar un anillo cicloalquilo o heterocíclico de tres a doce miembros que tienen hasta 3 heteroátomos que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

a se selecciona de 0 a 6.

En un aspecto, Y forma un cicloalcano de tres miembros. En otro aspecto, Y es fluoro.

En otro aspecto, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XX:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo aromático o heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos,

cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -NR31R32, CF3, -O-(CH2)aNR31R32, arilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

R5 se selecciona de H y alquilo de C1-C6.

En otro aspecto, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XXI:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -NR31R32, perfluoroalquilo de C1-C3, -O-(CH2)aNR31R32, arilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

a se selecciona de 0 a 6.

En otro aspecto, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XXII:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

R3 es H;

a se selecciona de 0 a 6.

En otro aspecto, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XXIII:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

x se selecciona de 0 a 1;

R2 se selecciona del grupo que consiste en ciclohexilpiridina, 1 H-pirazol, y piridina;

X se selecciona de N o CR3;

Y se selecciona de N o CR3;

Z se selecciona de N o CR4;

en la que al menos uno de X, Y, y Z es N;

R4 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -NR31R32, CF3, -O-(CH2)aNR31R32, -NR31-(CH2)aNR33R34, -NR31-(CH2)aOR33, arilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, y -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6);

a se selecciona de 0 a 6;

Q se selecciona del grupo NR5 y O;

R5 se selecciona de H y alquilo de C1-C6.

En otro aspecto, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XXIV:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

R12 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), amino, NR31R32, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo aromático o heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, oxo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

x se selecciona de 0 a 2;

cada R3 y R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, -CN, halo, -OH, -O-(alquilo de C1-C6), -O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -NR31R31, CF3, -O-(CH1)aNR31 R31, arilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C1-C6;

R31 y R32 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, cicloalquilo de C3-C7 y -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6);

a se selecciona de 1 a 6.

En otro aspecto, los compuestos útiles según la presente descripción incluyen aquellos que tienen la fórmula XXV:

o una sal farmacéuticamente aceptable o estereoisómero del mismo, en la que:

x se selecciona de 0 a 3;

R15 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, arilo, heteroarilo, anillo heterocíclico, y cicloalquilo de C3-C7;

o R31 y R32 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo y alquilo de C¹-C⁶;

a se selecciona de 1 a 6.

En otros aspectos, el compuesto inhibidor de ROCK2 se puede seleccionar de los compuestos de ROCK2 descritos en el documento PCT/US2006/011271, presentado el 27 de marzo de 2006. Por lo tanto, el compuesto inhibidor de ROCK2 puede tener la fórmula XXXI:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R1 se selecciona del grupo que consiste en -O-(CH2)y-CO2R12, -O-(CH2)y-C(=O)NR13 R14, -O-(CH2)y-heteroarilo, -O-(CH2)y-cicloalquilo, -O-C(=O)-(CH2)r NR13R14, -O-(CH2)z-NR13R14, -NH-C(=O)-(CH2)y-NR13R14, -NH-C(=O)-X-R15, -NH-(CH2)r NR13R14;

R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, oxo, OH, NH2, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

X se selecciona de un enlace covalente, O, NH, y alquilo de C1-C6;

R15 se selecciona del grupo que consiste en heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, OH, NH2, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R15 se selecciona de -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -CO2R18, -O-(CH2)*-CO2R18, y -C(=O)NR16R17;

R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C1-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, OH, NH2, CN y perfluoroalquilo de C1-C3;

x se selecciona de 0 a 6;

y se selecciona de 0 a 6;

z se selecciona de 2 a 6;

R4 se selecciona de -(CH2)a-NR43R44, -Y-R42, -O-(CH2)a-CO2R42, -O-(CH2)a-C(=O)NR43R44, -O-(CH2)aheteroarilo, -O-(CH2)a-cicloalquilo, -O-C(=O)-(CH2)a-NR43R44, -O-(CH2)^c-NR41R44, -NH-C(=O)-(CH2)a-NR43R44, -NH-C(=O)-Y-R45, -NH-C(=O)-(CH2) ^a -NR43R44;

R42 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR46R47, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR46R47, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R43 y R44 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C1-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR46R47, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR46R47, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R43 y R44 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

Y se selecciona de un enlace covalente, O, NH, y alquilo de C1-C6;

R45 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR46R47, -CO2R48, -O-(CH2)b-CO2R48, y -C(=O)NR46R47,

R46 y R47 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C1-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R46 y R47 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R48 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, aralquilo, heteroarilo, alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR46R47, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

a se selecciona de 0 a 6;

b se selecciona de 0 a 6;

c se selecciona de 2 a 6;

R5 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C6, -(CHi )d-C(=O)-NR53R54, -C(=O)-(CH2)d-NR53R54, -C(=O)-X-R55, y -C(=O)-(CH2)d-NR53R54;

R53 y R54 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR56R57, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR56R57, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R53 y R54 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R55 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR56R57, -CO2R58, -O-(CH2)e-CO2R58, y -C(=O)NR56R57,

R56 y R57 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C1-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R56 y R57 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R58 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, aralquilo, heteroarilo, alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR56R57, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

d se selecciona de 0 a 6;

e se selecciona de 0 a 6;

R6 se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C6, -(CH2)íC(=O)-NR63R64, -C(=O)-(CH2)í-NR63R64, -C(=O)-X-R65, y -C(=O)-(CH2)í-NR63R64;

R63 y R64 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR66R67, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR66R67, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R63 y R64 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R65 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR66R67, -CO2R68, -O-(CH2)s-CO2R68, y -C(=O)NR66R67,

R66 y R67 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C1-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R66 y R67 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

R68 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, aralquilo, heteroarilo, alquilo de C1-C6, -(alquilo de Ci -C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR66R67, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

r se selecciona de 0 a 6;

s se selecciona de 0 a 6;

n se selecciona de 0 a 4;

m se selecciona de 0 a 3; y

p se selecciona de 0 y 1.

En un aspecto de la Fórmula XXXI, R4 y R5 se seleccionan independientemente de H y alquilo de C1-C6. En otra realización, R4 y R5 son H.

En una realización de la invención, el compuesto de fórmula XXXI tiene la fórmula XXXII:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que R1, R2, R3, n y m son como para el compuesto de la fórmula I.

En otro aspecto, el compuesto de fórmula XXXI tiene la fórmula XXXIII:

En una realización de la invención, el compuesto de fórmula XXXI tiene la fórmula XXXIV:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

o R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, cicloalquilo de C3-C7, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

X se selecciona de un enlace covalente, O, NH, y alquilo de C1-C6;

o R16 y R17 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3; cada R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, y perfluoroalquilo inferior;

n se selecciona de 0 a 4; y

m se selecciona de 0 a 3.

En una realización de la invención, el compuesto de fórmula XXXI tiene la fórmula XXXIVa:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de Ci -Cs, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR16R17, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, cicloalquilo de C3-C7, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3; R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C1-C8, alquenilo de C2-C8, alquinilo de C2-C8, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3;

o R16 y R17 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3. En una realización de la invención, el compuesto de fórmula XXXI tiene la fórmula XXXV:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de Ci-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3; cada R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo inferior, CN, halo, hidroxi, alcoxi inferior, amino, y perfluoroalquilo inferior;

n se selecciona de 0 a 4; y

m se selecciona de 0 a 3.

En una realización de la invención, el compuesto de fórmula XXXI tiene la fórmula XXXVa:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C1-C6, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), -(alquilo de C1-C6)-NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-C(=O)NR16R17, -(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6)-O-(alquilo de C1-C6), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C3-C7, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C1-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3.

En otro aspecto, el inhibidor de rho cinasa tiene la fórmula XXXVI:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

n se selecciona de 0 a 4; y

m se selecciona de 0 a 3.

En un aspecto, el compuesto de fórmula XXXVI tiene la fórmula XXXVIa:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

o R16 y R17 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C1-C6, alquenilo de C2-C6, alcoxi de C1-C6, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C1-C3.

En una realización de la invención, el compuesto de fórmula XXXI es SLx-2119:

En realizaciones adicionales de la invención, el inhibidor de rho cinasa se selecciona del grupo que consiste en: 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-(2-metoxietil)acetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-(piridin-3-il)acetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-1 -(4-metilpiperazin-1 -il)etanona, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-1-morfolinoetanona, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-metilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-((R)-pirrolidin-3-il)acetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-((S)-pirrolidin-3-il)acetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-((R)-tetrahidrofuran-3-il)acetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-1 -(piperidin-1 -il)etanona, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-terc-butilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5 ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-etilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-(cianometil)acetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-ciclobutilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-isobutilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-(2,2,2-trifluoroetil)acetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-ciclohexilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-neopentilacetamida, 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenoxi)-N-(prop-2-inil)acetamida, N-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenil)-4-metilpiperazin-1 -carboxamida, 3-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenil)-1,1 -dimetilurea, N-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenil)-2-metoxiacetamida, 2-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenilamino)-2-oxoacetato de metilo, 1-(3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenil)-3-(2-(dimetilamino)etil)urea, N-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenil)-2-morfolinoacetamida, N-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenil)-3-(4-isopropilpiperazin-1-il)propanamida, y N-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)quinazolin-2-il)fenil)piperidin-4-carboxamida, y N-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)-6-(2-metoxietoxi)quinazolin-2-il)fenil)butiramida.

En otros aspectos, el inhibidor de rho cinasa es

o

El término “heteroátomo”, tal como se usa aquí, significa un átomo de cualquier elemento que no sea carbono o hidrógeno. Los heteroátomos preferidos son nitrógeno, oxígeno y azufre.

El término “alquilo” se refiere al radical de grupos alifáticos saturados, incluyendo grupos alquilo de cadena lineal y grupos alquilo de cadena ramificada. En realizaciones preferidas, un alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada tiene 10 o menos átomos de carbono en su cadena principal (por ejemplo, C1-C10 para cadena lineal, C3-C10 para cadena ramificada). Asimismo, los cicloalquilos preferidos tienen de 3 a 10 átomos de carbono en su estructura anular, y más preferiblemente tienen de 3 a 6 carbonos en la estructura anular.

A menos que el número de carbonos se especifique de otro modo, “alquilo inferior”, como se usa aquí, significa un grupo alquilo, como se define anteriormente, pero que tiene de uno a seis carbonos, y más preferiblemente de uno a cuatro átomos de carbono. Asimismo, “alquenilo inferior” y “alquinilo inferior” tienen longitudes de cadena similares (C2-C6). Los grupos alquilo preferidos son alquilos inferiores. En realizaciones preferidas, un sustituyente designado aquí como alquilo es un alquilo inferior.

El término “cicloalquilo” se refiere a grupos carbocíclicos saturados que tienen de 3 a 7 carbonos en el anillo. Los grupos cicloalquilo preferidos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.

El término “aralquilo”, como se usa aquí, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo arilo (por ejemplo, un grupo aromático o heteroaromático).

Los términos “alquenilo” y “alquinilo” se refieren a grupos alifáticos insaturados análogos en longitud y posible sustitución a los alquilos descritos anteriormente, pero que contienen al menos un doble o triple enlace respectivamente.

El término “arilo”, como se usa aquí, incluye grupos aromáticos monoanulares de 5 y 6 miembros que pueden incluir de cero a cuatro heteroátomos, por ejemplo benceno, pireno, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, triazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina y pirimidina. Los grupos arilo que tienen heteroátomos en la estructura del anillo también pueden denominarse “arilheterociclos”, “heteroaromáticos” o “heteroarilo”. El anillo aromático puede estar sustituido en una o más posiciones del anillo con los sustituyentes descritos anteriormente, por ejemplo halógeno, azida, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, alcoxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, sulfonamido, cetona, aldehído, éster, heterociclilo, restos aromáticos o heteroaromáticos, -CF3 y -CN. El término “arilo” también incluye sistemas anulares policíclicos que tienen dos o más anillos cíclicos en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos adyacentes (los anillos son “anillos condensados”), en los que al menos uno de los anillos es aromático, por ejemplo, los otros anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, cicloalquenilos, arilos y/o grupos heterocíclicos.

Los términos “heterociclilo” o “grupo heterocíclico” se refieren a estructuras anulares de 3 a 10 miembros, más preferiblemente anillos de 5 o 6 miembros, estructuras anulares las cuales incluyen uno a cuatro heteroátomos. Los heterociclos también pueden ser policiclos. Los grupos heterocíclicos incluyen, por ejemplo, tiofeno, tiantreno, furano, pirano, isobenzofurano, cromeno, xanteno, fenoxatiina, pirrol, imidazol, pirazol, isotiazol, isoxazol, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina, isoindol, indol, indazol, purina, quinolizina, isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftiridina, quinoxalina, quinazolina, cinolina, pteridina, carbazol, carbolina, fenantridina, acridina, pirimidina, fenantrolina, fenazina, fenarsazina, fenotiazina, furazano, fenoxazina, pirrolidina, oxolano, tiolano, oxazol, piperidina, piperazina, morfolina, lactonas, lactamas tales como azetidinonas y pirrolidinonas, sultanas, y sultonas. El anillo heterocíclico puede estar sustituido en una o más posiciones con los sustituyentes descritos anteriormente, como por ejemplo halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehído, éster, un heterociclilo, un resto aromático o heteroaromático, -CF3, y -CN.

Los términos “policiclilo” o “grupo policíclico” se refieren a dos o más anillos (por ejemplo, cicloalquilos, cicloalquenilos, arilos y/o heterociclilos) en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos contiguos, por ejemplo los anillos son “anillos condensados”. Los anillos que se unen a través de átomos no adyacentes se denominan anillos “en puente”. Cada uno de los anillos del grupo policíclico puede estar sustituido con los sustituyentes descritos anteriormente, por ejemplo halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehido, éster, un heterociclilo, un resto aromático o heteroaromático, -CF³, y -CN.

Como se usa aquí, el término “nitro” significa -NO². El término “halógeno” o “halo” designa -F, -Cl, -Br o -I. El término “hidroxilo” significa -OH.

Los términos “amina” y “amino” se refieren tanto a aminas sustituidas como no sustituidas, por ejemplo un resto que puede representarse mediante la fórmula general:

en la que cada uno de R, R’ y R” representa independientemente H, alquilo, alquenilo, alquinilo, aralquilo, arilo, y grupos heterocíclicos, y lo más preferible H o alquilo inferior.

Los términos “alcoxilo” o “alcoxi”, tal como se usan aquí, se refieren a un grupo alquilo, como se define anteriormente, que tiene un radical oxigeno unido al mismo. Los grupos alcoxilo representativos incluyen metoxi, etoxi, propiloxi, y terc-butoxi. El término alcoxi inferior se refiere a un grupo alcoxi que tiene de 1 a 6 átomos de carbono.

El término “oxo”, como se usa aquí, se refiere a un átomo de oxigeno que tiene un doble enlace con otro átomo, particularmente con carbono o azufre.

Como se usa aquí, la definición de cada expresión, por ejemplo alquilo, m, n, R, etc., cuando aparece más de una vez en cualquier estructura, se pretende que sea independiente de su definición en cualquier otra parte de la misma estructura.

Se entenderá que “sustituido”, “sustitución” o “sustituido con” incluye la condición implícita de que tal sustitución está de acuerdo con la valencia permitida del átomo sustituido y el sustituyente, y que la sustitución da como resultado un compuesto estable, por ejemplo que no sufre transformación espontánea, tal como por reordenamiento, ciclación, eliminación, etc.

Como se usa aquí, se contempla que el término “sustituido” incluya todos los sustituyentes permisibles de los compuestos orgánicos. En un aspecto amplio, los sustituyentes permisibles incluyen sustituyentes acíclicos y cíclicos, ramificados y no ramificados, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos de compuestos orgánicos. Los sustituyentes ilustrativos incluyen, por ejemplo, los descritos aquí anteriormente.

Ciertos compuestos de la presente invención pueden existir en formas geométricas o estereoisómeras particulares. La presente invención contempla todos estos compuestos, incluyendo isómeros cis y trans, enantiómeros R y S, diastereómeros, las mezclas racémicas de los mismos, y otras mezclas de los mismos, que caen dentro del alcance de la invención. Pueden estar presentes átomos de carbono asimétricos adicionales en un sustituyente tal como un grupo alquilo. Todos estos isómeros, así como sus mezclas, están incluidos en esta invención.

Ciertas realizaciones de los presentes compuestos pueden contener un grupo funcional básico, tal como amino o alquilamino, y, por lo tanto, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos farmacéuticamente aceptables. La expresión “sales farmacéuticamente aceptables”, en este contexto, se refiere a las sales de adición de ácidos orgánicos e inorgánicos, relativamente no tóxicas, de los compuestos de la presente invención. Las sales representativas incluyen las sales de hidrocloruro, hidrobromuro, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, y mesilato. (Véase, por ejemplo, Berge et al. “Pharmaceuticals Salts”, J. Pharm. Sci. (1977) 66:1-19).

En otros casos, los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más grupos funcionales ácidos, y, por tanto, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con bases farmacéuticamente aceptables. Las sales representativas incluyen sales alcalinas o alcalino-térreas tales como sales de litio, sodio, potasio, calcio, y magnesio. Las aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de bases incluyen etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, y piperazina. (Véase, por ejemplo, Berge et al., más arriba).

En un aspecto, la presente descripción proporciona compuestos de Fórmula I que son inhibidores de Rho-cinasa. La Rho cinasa (ROCK), una serina/treonina cinasa, sirve como proteína diana para la pequeña proteína de unión a GTP Rho, y es un mediador importante de numerosas funciones celulares, incluyendo las adherencias focales, la motilidad, la contracción del músculo liso, y la citocinesis. En el músculo liso, ROCK desempeña un papel importante en sensibilización al Ca2+ y el control del tono vascular. Modula el nivel de fosforilación de la cadena ligera de miosina II de la miosina II, principalmente a través de la inhibición de la miosina fosfatasa, y contribuye a la sensibilización al Ca2+ inducida por agonistas en la contracción del músculo liso.

La Rho cinasa se encuentra en dos formas, ROCK 1 (ROCKb; p160-ROCK) y ROCK 2 (ROCKa). En algunos aspectos, el compuesto de Fórmula I inhibe selectivamente ROCK1. En algunos aspectos, el compuesto de Fórmula I inhibe selectivamente ROCK2. En algunos aspectos, el compuesto de Fórmula I no es selectivo con respecto a la inhibición de ROCK1 y ROCK2.

Los métodos para determinar la inhibición de cinasas son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la actividad de cinasa de una enzima, y la capacidad inhibidora de un compuesto de ensayo, pueden determinarse midiendo la fosforilación de un sustrato específica de la enzima. Pueden emplearse ensayos y kits comerciales. Por ejemplo, la inhibición de la cinasa se puede determinar usando un ensayo IMAP® (Molecular Devices). Este método de ensayo implica el uso de un sustrato peptídico marcado fluorescentemente. La fosforilación del péptido marcado por una cinasa de interés promueve la unión del péptido a una nanopartícula basada en un metal trivalente a través de la interacción específica de alta afinidad entre el grupo fosfo y el metal trivalente. La proximidad a la nanopartícula da como resultado una mayor polarización de la fluorescencia. La inhibición de la cinasa por un inhibidor de cinasa evita la fosforilación del sustrato y, por lo tanto, limita la unión del sustrato marcado fluorescentemente a la nanopartícula. Dicho ensayo puede ser compatible con un formato de ensayo de micropocillos, lo que permite la determinación simultánea de IC50 de múltiples compuestos.

En otro aspecto de la presente descripción, se proporciona un método para tratar a un paciente que padece una enfermedad, que comprende administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención. La frase “cantidad terapéuticamente eficaz”, como se usa aquí, significa la cantidad de un compuesto, material, o composición que comprende un compuesto de la presente invención, que es eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado en al menos una subpoblación de células en un animal a una relación beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento médico, por ejemplo efectos secundarios razonables aplicables a cualquier tratamiento médico.

Los compuestos de la invención que inhiben Rho-cinasa y/o la fosforilación mediada por Rho-cinasa son útiles para el tratamiento de pacientes que padecen enfermedades cardiovasculares y no cardiovasculares que implican la función de Rho-cinasa, tales como hipertensión, hipertensión pulmonar, aterosclerosis, reestenosis, cardiopatía coronaria, hipertrofia cardíaca, hipertensión ocular, retinopatía, enfermedades isquémicas, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, disfunción eréctil del pene, trastorno circulatorio periférico, enfermedad oclusiva de las arterias periféricas, glaucoma (por ejemplo, regulación de la presión intraocular), pulmón fibroide, hígado fibroide, riñón fibroide, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), síndrome disneico del adulto, trastornos del sistema nervioso central tales como degeneración neuronal y lesión de la médula espinal. Además, los inhibidores de Rho-cinasa de la invención pueden usarse para tratar trastornos trombóticos arteriales tales como agregación de plaquetas y agregación de leucocitos, y resorción ósea.

En ciertos aspectos, un inhibidor de Rho-cinasa de la invención se usa para tratar la inflamación, que incluye, entre otros, asma, inflamación cardiovascular, inflamación renal, y arteriesclerosis.

Los inhibidores de Rho-cinasa de la presente descripción inhiben el crecimiento y la metástasis de células tumorales, y la angiogénesis, y son útiles para tratar enfermedades neoplásicas. Las enfermedades neoplásicas incluyen cualquier crecimiento o tumor maligno causado por una división celular anormal o descontrolada, y pueden diseminarse a otras partes del cuerpo a través del sistema linfático o del torrente sanguíneo. La enfermedad neoplásica incluye, sin limitación, linfoma (una neoplasia de tejido linfático que suele ser maligna), carcinoma (cualquier tumor maligno derivado de tejido epitelial), leucemia (neoplasia maligna de tejidos que forman la sangre; caracterizada por una proliferación anormal de leucocitos), sarcoma (un tumor generalmente maligno que surge del tejido conjuntivo (hueso o músculo, etc.), y blastoma (neoplasia en células precursoras). Los ejemplos no limitantes incluyen cáncer de células escamosas, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de hipófisis, cáncer de esófago, astrocitoma, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de pulmón no microcítico, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma escamoso de pulmón, cáncer de peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, glioblastoma, cáncer de cuello uterino, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer vulvar, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, cáncer de cerebro, cáncer de endometrio, cáncer de testículo, colangiocarcinoma, carcinoma de vesícula biliar, cáncer gástrico, melanoma, y varios tipos de cáncer de cabeza y cuello.

De acuerdo con un aspecto, los inhibidores de ROCK se usan para efectuar la pérdida de peso y/o limitar el aumento de peso. En una realización preferida, el inhibidor de ROCK es selectivo para ROCK2. Los inhibidores de ROCK-2 promueven la pérdida de peso en sujetos normales, y limitan el aumento de peso en sujetos propensos a la obesidad.

En un aspecto, un inhibidor de ROCK se usa para reducir o prevenir la resistencia a la insulina o restaurar la sensibilidad a la insulina. Por consiguiente, en un aspecto, los compuestos de la presente descripción se usan para promover o restaurar la absorción de glucosa dependiente de insulina. En otro aspecto, un inhibidor de ROCK de la invención se usa para promover o restaurar la tolerancia a la glucosa. En otro aspecto, un inhibidor de ROCK de la presente descripción se usa para tratar el síndrome metabólico. En otro aspecto, un inhibidor de ROCK de la presente descripción se usa para reducir o prevenir la hiperinsulinemia. En un aspecto, un inhibidor de ROCK se usa para tratar la diabetes (particularmente la diabetes tipo 2). Los inhibidores de ROCK de la presente descripción también se pueden usar para promover o restaurar la relajación mediada por insulina de las células del músculo liso vascular (VSMC). En realizaciones preferidas, el inhibidor de ROCK es selectivo para ROCK2.

En ciertos aspectos, los compuestos de la presente descripción se usan para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central. Dichos trastornos pueden implicar degeneración neuronal o daño físico al tejido neural, incluyendo, sin limitación, la enfermedad de Huntington, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis lateral amiotrófica (ALS), o la esclerosis múltiple. En ciertos aspectos, los compuestos de la presente descripción tienen propiedades particularmente útiles para el tratamiento de dichos trastornos, tales como una distribución beneficiosa en los tejidos del sistema nervioso central, y la capacidad de atravesar la barrera hematoencefálica.

La invención proporciona pan-inhibidores de ROCK (es decir, compuestos que inhiben ROCK1 y ROCK1), así como inhibidores de ROCK que son selectivos de la isoforma. Como se discutió anteriormente, en ciertas realizaciones de la invención, se puede preferir un inhibidor selectivo de ROCK2. Por ejemplo, un estudio observó que ROCK2 se sobreexpresa con frecuencia en el cáncer hepatocelular en comparación con los hígados no timoratos, mientras que la expresión de ROCK1 no se altera. Otros cánceres que pueden beneficiarse del tratamiento con un inhibidor selectivo de ROCK2 incluyen, pero no se limitan a, cáncer de colon y de vejiga. Por el contrario, se ha observado que los niveles de expresión de ROCK1 son más altos en los tumores mamarios. Cualquier cáncer se puede analizar para determinar si existe una sobreexpresión de ROCK1 y/o ROCK2, y tratarse en consecuencia. En ciertas circunstancias, las isoformas ROCK 1 y ROCK2 muestran similitud en la regulación de ciertas dianas aguas abajo,

En otro aspecto, las composiciones farmacéuticamente aceptables pueden comprender una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de los compuestos de Fórmula I, formulados junto con uno o más vehículos (aditivos) y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Como se describe en detalle a continuación, las composiciones farmacéuticas pueden formularse especialmente para su administración en forma sólida o líquida, incluyendo aquellas adaptadas para lo siguiente: (1) administración oral, por ejemplo empapamientos (disoluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), comprimidos, por ejemplo los destinados a la absorción bucal, sublingual y sistémica, bolos, polvos, gránulos, pastas para aplicación en la lengua; (2) administración parenteral, por ejemplo mediante inyección subcutánea, intramuscular, intravenosa o epidural como, por ejemplo, una disolución o suspensión estéril, o una formulación de liberación sostenida; (3) aplicación tópica, por ejemplo como una crema, ungüento, o un parche o aerosol de liberación controlada aplicada a la piel; (4) por vía intravaginal o intrarrectal, por ejemplo como un pesario, crema o espuma; (5) sublingualmente; (6) ocularmente; (7) por vía transdérmica; o (8) nasalmente.

La frase “farmacéuticamente aceptable” se emplea aquí para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones, y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del buen criterio médico, son adecuados para uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales con toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas o complicaciones, acordes con una relación beneficio/riesgo razonable.

La frase “vehículo farmacéuticamente aceptable”, como se usa aquí, significa un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como una carga líquida o sólida, diluyente, excipiente, auxiliar de fabricación (por ejemplo, lubricante, talco, estearato de magnesio, de calcio o de zinc, o ácido estérico), o material encapsulante de disolvente, implicado en portar o transportar el compuesto en cuestión desde un órgano, o parte del cuerpo, a otro órgano, o parte del cuerpo. Cada vehículo debe ser “aceptable” en el sentido de ser compatible con los demás ingredientes de la formulación y no perjudicial para el paciente. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidón de maíz y almidón de patata; (3) celulosa, y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa sódica, etilcelulosa y acetato de celulosa; (4) polvo de tragacanto; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja; (10) glicoles, tal como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) ésteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes amortiguadores, tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (15) ácido algínico; (16) agua libre de pirógenos; (17) disolución salina isotónica; (18) disolución de Ringer; (19) alcohol etílico; (20) disoluciones amortiguadas de pH; (21) poliésteres, policarbonatos y/o polianhídridos; y (22) otras sustancias compatibles no tóxicas empleadas en formulaciones farmacéuticas.

Como se expone anteriormente, ciertas realizaciones de los presentes compuestos pueden contener un grupo funcional básico, tal como amino o alquilamino, y, por lo tanto, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos farmacéuticamente aceptables. La expresión “sales farmacéuticamente aceptables”, a este respecto, se refiere a las sales de adición de ácidos inorgánicos y orgánicos relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Estas sales se pueden preparar in situ en el vehículo de administración o en el procedimiento de fabricación de la forma de dosificación, o haciendo reaccionar por separado un compuesto purificado de la invención en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado, y aislando la sal así formada durante la purificación posterior. Las sales representativas incluyen hidrobromuro, hidrocloruro, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, sales de glucoheptonato, lactobionato y laurilsulfonato. (Véase, por ejemplo, Berge et al. (1977) “Pharmaceuticals Salts”, J. Pharm. Sci. 66:1-19).

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos en cuestión incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario de los compuestos, por ejemplo de ácidos orgánicos o inorgánicos no tóxicos. Por ejemplo, tales sales no tóxicas convencionales incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos tales como hidrocloruro, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico y nítrico; y las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, palmítico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, ²-acetoxibenzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etanodisulfónico, oxálico, e isetiónico.

En otros casos, los compuestos de la presente invención pueden contener uno o más grupos funcionales ácidos, y, por lo tanto, son capaces de formar sales farmacéuticamente aceptables con bases farmacéuticamente aceptables. La expresión “sales farmacéuticamente aceptables”, en estos casos, se refiere a las sales de adición de bases orgánicas e inorgánicas relativamente no tóxicas de los compuestos de la presente invención. Estas sales también se pueden preparar in situ en el vehículo de administración o en el procedimiento de fabricación de la forma de dosificación, o haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de ácido libre con una base adecuada, tal como el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un catión metálico farmacéuticamente aceptable, con amoníaco o con un amina primaria, secundaria o terciaria orgánica farmacéuticamente aceptable. Las sales alcalinas o alcalino-térreas representativas incluyen las sales de litio, sodio, potasio, calcio, magnesio, y aluminio. Las aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de bases incluyen etilamina, dietilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina y piperazina. (Véase, por ejemplo, Berge et al., más arriba).

También pueden estar presentes en las composiciones agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como laurilsulfato de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes de liberación, agentes de recubrimiento, agentes edulcorantes, aromatizantes y perfumantes, conservantes y antioxidantes.

Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen: (1) antioxidantes solubles en agua, tales como ácido ascórbico, hidrocloruro de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; (²) antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol, y similares; y (3) agentes quelantes de metales, tales como ácido cítrico, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, y similares.

Las formulaciones pueden incluir aquellas adecuadas para administración oral, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificación unitaria, y se pueden preparar mediante cualquier método bien conocido en la técnica farmacéutica. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una única forma de dosificación variará dependiendo del hospedante que se esté tratando, el modo particular de administración. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una única forma de dosificación generalmente será la cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. Generalmente, del cien por ciento, esta cantidad oscilará de alrededor de ^{0 , 1}por ciento a alrededor de noventa y nueve por ciento del ingrediente activo, preferiblemente de alrededor de 5 por ciento a alrededor de 70 por ciento, lo más preferible de alrededor de 10 por ciento a alrededor de 30 por ciento.

Las formulaciones pueden comprender un excipiente seleccionado del grupo que consiste en ciclodextrinas, celulosas, liposomas, agentes formadores de micelas, por ejemplo ácidos biliares, y vehículos poliméricos, por ejemplo poliésteres y polianhídridos; y un compuesto de la presente invención. Una formulación antes mencionada puede hacer que un compuesto de la presente invención sea biodisponible por vía oral.

Los métodos para preparar estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de asociar un compuesto de la presente invención con el vehículo y, opcionalmente, uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme e íntimamente un compuesto de la presente invención con vehículos líquidos, o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después, si es necesario, dando forma al producto.

Las formulaciones adecuadas para la administración oral pueden estar en forma de cápsulas, sellos, píldoras, comprimidos, pastillas para chupar (usando una base aromatizada, generalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto), polvos, gránulos, o como una disolución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión de aceite en agua o de agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (usando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y gom arábiga), y/o como enjuagues bucales y similares, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como ingrediente activo. Un compuesto de la presente invención también se puede administrar como bolo, electuario o pasta.

En formas de dosificación sólidas para administración oral (cápsulas, comprimidos, píldoras, grageas, polvos, gránulos, trociscos y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico, y/o cualquiera de los siguientes: (¹) cargas o extendedores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y/o ácido silícico; (²) aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa, y/o goma arábiga; (3) humectantes, tal como glicerol; (4) agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o de tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos, y carbonato de sodio; (5) agentes retardantes de la disolución, tal como parafina; (⁶) aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario y tensioactivos, tales como poloxámero y laurilsulfato de sodio; (7) agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetílico, monoestearato de glicerol, y tensioactivos no iónicos; (⁸) absorbentes, tales como caolín y arcilla de bentonita; (9) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, laurilsulfato de sodio, estearato de zinc, estearato de sodio, ácido esteárico, y mezclas de los mismos; (^{1 0}) agentes colorantes; y (^{1 1}) agentes de liberación controlada, tales como crospovidona o etilcelulosa. En el caso de cápsulas, comprimidos y píldoras, las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes amortiguadores. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como cargas en cápsulas de gelatina blandas y de cubierta dura usando excipientes tales como lactosa o azúcares de leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.

Una comprimido se puede hacer por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos prensados se pueden preparar usando aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, disgregante (por ejemplo, glicolato de almidón sódico o carboximetilcelulosa sódica reticulada), agente tensioactivo o dispersante. Los comprimidos moldeados pueden fabricarse moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.

Los comprimidos y otras formas de dosificación sólidas de las composiciones farmacéuticas, tales como grageas, cápsulas, píldoras y gránulos, pueden opcionalmente ranurarse o prepararse con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. También se pueden formular para proporcionar una liberación lenta o controlada del ingrediente activo usando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberación deseado, otras matrices poliméricas, liposomas y/o microesferas. Pueden formularse para una liberación rápida, por ejemplo liofilizados. Pueden esterilizarse, por ejemplo mediante filtración a través de un filtro que retiene bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse en agua estéril, o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes de su uso. Estas composiciones también pueden contener opcionalmente agentes opacificantes, y pueden ser de una composición que liberen el o los ingredientes activos sola, o preferentemente, en una cierta porción del tracto gastrointestinal, opcionalmente de manera retardada. Los ejemplos de composiciones de inclusión que se pueden usar incluyen sustancias poliméricas y ceras. El ingrediente activo también puede estar en forma microencapsulada, si procede, con uno o varios de los excipientes descritos anteriormente.

Las formas de dosificación líquidas para la administración oral de los compuestos de la invención incluyen emulsiones, microemulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además del ingrediente activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes, tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos de sorbitán, y mezclas de los mismos.

Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, aromatizantes, colorantes, perfumantes y conservantes.

Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilen sorbitol y ésteres de sorbitán, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.

Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas para administración rectal o vaginal pueden presentarse como un supositorio, que puede prepararse mezclando uno o más compuestos de la invención con uno o más excipientes o vehículos no irritantes adecuados que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol, una cera de supositorio o un salicilato, y que es sólido a temperatura ambiente, pero líquido a temperatura corporal, y, por lo tanto, se derretirá en el recto o en la cavidad vaginal y liberará el compuesto activo.

Las formulaciones que son adecuadas para la administración vaginal también incluyen pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol que contienen los vehículos que se sabe que son apropiados en la técnica.

Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen polvos, aerosoles, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, disoluciones, parches e inhalantes. El compuesto activo puede mezclarse en condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable y con cualquier conservante, amortiguador o propulsor que pueda ser necesario.

Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener, además de un compuesto activo de esta invención, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, ácido silícico, talco y óxido de zinc, o mezclas de los mismos.

Los polvos y aerosoles pueden contener, además de un compuesto de esta invención, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicatos de calcio y poliamida en polvo, o mezclas de estas sustancias. Los aerosoles pueden contener además propulsores habituales, tales como clorofluorohidrocarbonos e hidrocarburos volátiles no sustituidos, tales como butano y propano.

Los parches transdérmicos tienen la ventaja añadida de proporcionar un suministro controlado de un compuesto de la presente invención al cuerpo. Dichas formas de dosificación pueden prepararse disolviendo o dispersando el compuesto en el medio apropiado. También se pueden usar potenciadores de la absorción para aumentar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad de dicho flujo se puede controlar proporcionando una membrana de control de la velocidad o dispersando el compuesto en una matriz polimérica o gel.

También se contemplan formulaciones oftálmicas, ungüentos para los ojos, polvos, disoluciones y similares.

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración parenteral pueden comprender uno o más compuestos de la invención en combinación con una o más disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotónicas estériles farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles que pueden reconstituirse en disoluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de su uso, que pueden contener azúcares, alcoholes, antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos, solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor previsto, o agentes de suspensión o espesantes.

Los ejemplos de vehículos acuosos y no acuosos adecuados que pueden emplearse en las composiciones farmacéuticas incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y similares), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tal como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables, tal como oleato de etilo. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tal como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de las dispersiones, y mediante el uso de tensioactivos.

Estas composiciones también pueden contener adyuvantes tales como conservantes, humectantes, emulsionantes y dispersantes. La prevención de la acción de los microorganismos sobre los compuestos en cuestión se puede asegurar mediante la inclusión de diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo parabeno, clorobutanol, ácido fenol sórbico, y similares. También puede ser deseable incluir agentes isotónicos, tales como azúcares, cloruro de sodio, y similares, en las composiciones. Además, la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede lograrse mediante la inclusión de agentes que retrasen la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina.

En algunos casos, para prolongar el efecto de un fármaco, es deseable retardar la absorción del fármaco por inyección subcutánea o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tiene poca solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende entonces de su velocidad de disolución, que, a su vez, puede depender del tamaño y la forma del cristal. Alternativamente, la absorción retardada de una forma de fármaco administrada por vía parenteral se logra disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo oleoso.

Las formas de depósito inyectables se fabrican formando matrices de microcápsulas de los compuestos en cuestión en polímeros biodegradables tales como polilactida-poliglicolida. Dependiendo de la relación de fármaco a polímero, y de la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos). Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con el tejido corporal.

Cuando los compuestos de la presente invención se administran como productos farmacéuticos a seres humanos y animales, pueden administrarse per se o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, 0,1 a 99% (más preferiblemente, 10 a 30%) de ingrediente activo en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las preparaciones pueden administrarse por vía oral, parenteral, tópica, o rectal. Por supuesto, se dan en formas adecuadas para cada vía de administración. Por ejemplo, se administran en forma de comprimidos o cápsulas, por inyección, inhalación, loción ocular, pomada, supositorio, etc. administración por inyección, infusión o inhalación; tópica por loción o ungüento; y rectal por supositorios. Se prefieren las administraciones orales.

Las frases “administración parenteral” y “administrado por vía parenteral”, como se usan aquí, significan modos de administración distintos de la administración entérica y tópica, normalmente por inyección, e incluyen, sin limitación, inyección intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal, e infusión.

Las frases “administración sistémica”, “administrado sistémicamente”, “administración periférica” y “administrado periféricamente”, como se usan aquí, significan la administración de un compuesto, fármaco u otro material que no sea directamente en el sistema nervioso central, de modo que ingrese al sistema nervioso central del paciente y, por lo tanto, está sujeto al metabolismo y otros procesos similares, por ejemplo la administración subcutánea.

Estos compuestos pueden administrarse a seres humanos y otros animales para terapia mediante cualquier vía de administración adecuada, incluyendo las vías oral, nasal, como, por ejemplo, un aerosol, rectal, intravaginal, parenteral, intracisternal y tópica, como polvos, ungüentos o gotas, incluyendo de forma bucal y sublingualmente.

Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, que pueden usarse en una forma hidratada adecuada, y/o las composiciones farmacéuticas, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la técnica.

Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas se pueden variar para obtener una cantidad del ingrediente activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente, una composición y un modo de administración en particular, sin ser tóxico para el paciente.

El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una variedad de factores, que incluyen la actividad del compuesto particular de la presente invención empleado, o el éster, sal o amida del mismo, la vía de administración, el tiempo de administración, la tasa de excreción o metabolismo del compuesto particular empleado, la velocidad y el grado de absorción, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, el sexo, el peso, el estado de salud general y antecedentes médicos del paciente que está siendo tratado, y factores similares bien conocidos en las técnicas médicas.

Un médico o veterinario que tenga una experiencia normal en la técnica puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad eficaz de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario podría iniciar dosis de los compuestos de la invención empleados en la composición farmacéutica a niveles más bajos que los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado, y aumentar gradualmente la dosis hasta lograr el efecto deseado.

En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será la cantidad del compuesto que sea la dosis más baja eficaz para producir un efecto terapéutico. Dicha dosis eficaz dependerá generalmente de los factores descritos anteriormente. Generalmente, las dosis orales, intravenosas, intracerebroventriculares y subcutáneas de los compuestos de esta invención para un paciente, cuando se usan para los efectos analgésicos indicados, oscilarán de alrededor de ^{0 , 0001}a alrededor de ^{10 0}mg por kilogramo de peso corporal por día.

En ciertas realizaciones, una dosis de un compuesto o una composición se administra a un sujeto todos los días, cada dos días, cada par de días, cada tercer día, una vez a la semana, dos veces a la semana, tres veces a la semana, o una vez cada dos semanas. Si se desea, la dosis diaria eficaz del compuesto activo se puede administrar como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más subdosis, administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo del día, opcionalmente en formas de dosificación unitaria. En algunas realizaciones, una dosis de un compuesto o una composición se administra durante 2 días, 3 días, 5 días, 7 días, 14 días, o 21 días. En determinadas realizaciones, una dosis de un compuesto o una composición se administra durante 1 mes, 1,5 meses, 2 meses, 2,5 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, ⁶meses o más.

Los programas de administración descritos anteriormente se proporcionan únicamente con fines ilustrativos, y no deben considerarse limitativos. Un experto en la técnica entenderá fácilmente que todas las dosis están dentro del alcance de la invención.

Si bien es posible que un compuesto de la presente invención se administre solo, es preferible administrar el compuesto como una formulación farmacéutica (composición).

El paciente que recibe este tratamiento es cualquier animal que lo necesite, incluyendo primates, en particular seres humanos, y otros mamíferos tales como equinos, bovinos, porcinos y ovinos; y aves y mascotas en general.

El compuesto de la invención se puede administrar como tal, o mezclado con vehículos farmacéuticamente aceptables, y también se puede administrar junto con agentes antimicrobianos tales como penicilinas, cefalosporinas, aminoglucósidos y glicopéptidos. La terapia conjunta, por lo tanto, incluye la administración secuencial, simultánea y separada del compuesto activo de manera que los efectos terapéuticos del primero administrado no desaparezcan por completo cuando se administre el siguiente.

La adición del compuesto activo de la invención al alimento para animales se logra preferiblemente preparando una premezcla de alimento adecuada que contiene el compuesto activo en una cantidad eficaz, e incorporando la premezcla en la ración completa.

Alternativamente, se puede mezclar en el alimento un concentrado intermedio o suplemento alimenticio que contenga el ingrediente activo. La forma en que se pueden preparar y administrar tales premezclas de alimentos y raciones completas se describe en libros de referencia (tales como “Applied Animal Nutrition”, W.H. Freedman and CO., San Francisco, U.S.A., 1969, o “Livestock Feeds and Feeding” O and B books, Corvallis, Ore., U.S.A., 1977).

Se puede emplear la tecnología de microemulsificación para mejorar la biodisponibilidad de agentes farmacéuticos lipofílicos (insolubles en agua). Los ejemplos incluyen Trimetrina (Dordunoo, S. K., et al., Drug Development and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991) y REV 5901 (Sheen, PC, et al., J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991). Entre otras, la microemulsificación proporciona una mayor biodisponibilidad al dirigir preferentemente la absorción al sistema linfático en lugar del sistema circulatorio, que de este modo evita el hígado, y evita la destrucción de los compuestos en la circulación hepatobiliar.

En un aspecto, las formulaciones contienen micelas formadas a partir de un compuesto de la presente invención y al menos un vehículo anfifílico, en las que las micelas tienen un diámetro medio menor que alrededor de ^{10 0}nm. Realizaciones más preferidas proporcionan micelas que tienen un diámetro medio menor que alrededor de 50 nm, e incluso realizaciones más preferidas proporcionan micelas que tienen un diámetro medio menor que alrededor de 30 nm, o incluso menor que alrededor de ²⁰nm.

Si bien se contemplan todos los vehículos anfifílicos adecuados, los vehículos actualmente preferidos son generalmente aquellos que tienen el estado Generalmente Reconocido como Seguro (GRAS), y que pueden tanto solubilizar el compuesto de la presente invención como microemulsionarlo en una etapa posterior cuando la disolución entra en contacto con una fase acuosa compleja (tal como la que se encuentra en el tracto gastrointestinal humano). Por lo general, los ingredientes anfifílicos que satisfacen estos requisitos tienen valores HLB (equilibrio hidrófilo a lipófilo) de 2 a 20, y sus estructuras contienen radicales alifáticos de cadena lineal en el intervalo de C^{- 6}a C-20. Los ejemplos son glicéridos grasos polietilenglicolizados y polietilenglicoles.

Los vehículos anfifílicos particularmente preferidos son los glicéridos de ácidos grasos polietilenglicolizados saturados y monoinsaturados, tales como los obtenidos a partir de diversos aceites vegetales total o parcialmente hidrogenados. Dichos aceites pueden consistir ventajosamente en glicéridos de tri-, di- y mono-ácidos grasos y ésteres de di- y monopolietilenglicol de los ácidos grasos correspondientes, con una composición de ácidos grasos particularmente preferida que incluye ácido cáprico 4-10, ácido cáprico 3-9, ácido láurico 40-50, ácido mirístico 14-24, ácido palmítico 4-14 y ácido esteárico 5-15%. Otra clase útil de vehículos anfifílicos incluye sorbitán y/o sorbitol parcialmente esterificado, con ácidos grasos saturados o monoinsaturados (serie SPAN) o análogos etoxilados correspondientes (serie TWEEN).

Se contemplan particularmente los vehículos anfifílicos disponibles comercialmente, que incluyen la serie Gelucire, Labrafil, Labrasol, o Lauroglycol (todos fabricados y distribuidos por Gattefosse Corporation, Saint Priest, Francia), monooleato de PEG, dioleato de PEG, monolaurato y di-laurato de PEG, lecitina, Polisorbato 80, etc. (producidos y distribuidos por varias compañías en EE.UU. y en todo el mundo).

Los polímeros hidrofílicos adecuados para uso en la presente invención son aquellos que son fácilmente solubles en agua, se pueden unir covalentemente a un lípido formador de vesículas, y que se toleran in vivo sin efectos tóxicos (es decir, son biocompatibles). Los polímeros adecuados incluyen polietilenglicol (PEG), poliláctico (también denominado polilactida), ácido poliglicólico (también denominado poliglicolida), un copolímero de ácido polilácticopoliglicólico, y alcohol polivinílico. Los polímeros preferidos son aquellos que tienen un peso molecular de alrededor de 100 o 120 daltons hasta alrededor de 5.000 o 10.000 daltons, y más preferiblemente de alrededor de 300 daltons a alrededor de 5.000 daltons. En una realización particularmente preferida, el polímero es polietilenglicol que tiene un peso molecular de alrededor de 100 a alrededor de 5.000 daltons, y más preferiblemente que tiene un peso molecular de alrededor de 300 a alrededor de 5.000 daltons. En una realización particularmente preferida, el polímero es polietilenglicol de 750 daltons (PEG(750)). Los polímeros usados en la presente invención tienen un peso molecular significativamente más pequeño, aproximadamente 100 daltons, en comparación con el gran MW (peso molecular) de 5.000 daltons o mayor que se usa en las técnicas estándar de pegilación. Los polímeros también se pueden definir por el número de monómeros que contienen; una realización preferida de la presente invención utiliza polímeros de al menos alrededor de tres monómeros, consistiendo dichos polímeros de PEG en tres monómeros (aproximadamente 150 daltons).

Otros polímeros hidrofílicos que pueden ser adecuados para uso en la presente invención incluyen polivinilpirrolidona, polimetoxazolina, polietiloxazolina, polihidroxipropilmetacrilamida, polimetacrilamida, polidimetilacrilamida, y celulosas derivatizadas tales como hidroximetilcelulosa o hidroxietilcelulosa.

Una formulación puede comprender un polímero biocompatible seleccionado del grupo que consiste en poliamidas, policarbonatos, polialquilenos, polímeros de ésteres acrílicos y metacrílicos, polímeros de polivinilo, poliglicolidas, polisiloxanos, poliuretanos y sus copolímeros, celulosas, polipropileno, polietilenos, poliestireno, polímeros de ácido láctico y ácido glicólico, polianhídridos, poli(orto)ésteres, poli(ácido bútico), poli(ácido valérico), poli(lactida-cocaprolactona), polisacáridos, proteínas, ácidos polihialurónicos, policianoacrilatos, y combinaciones, mezclas, o copolímeros de los mismos.

Las características de liberación de una formulación dependen del material de encapsulación, la concentración del fármaco encapsulado, y la presencia de modificadores de liberación. Por ejemplo, la liberación se puede manipular para que dependa del pH, por ejemplo usando un recubrimiento sensible al pH que se libera solo a un pH bajo, como en el estómago, o a un pH más alto, como en el intestino. Se puede usar un recubrimiento entérico para evitar que se produzca la liberación hasta después del paso por el estómago. Se pueden usar múltiples recubrimientos o mezclas de cianamida encapsuladas en diferentes materiales para obtener una liberación inicial en el estómago, seguida de una liberación posterior en el intestino. La liberación también se puede manipular mediante la inclusión de sales o agentes formadores de poros, que pueden aumentar la absorción de agua o la liberación del fármaco por difusión desde la cápsula. Para controlar la velocidad de liberación, también se pueden usar excipientes que modifican la solubilidad del fármaco. También se pueden incorporar agentes que mejoran la degradación de la matriz o la liberación de la matriz. Pueden añadirse al fármaco, añadirse como una fase separada (es decir, como partículas), o pueden disolverse conjuntamente en la fase de polímero dependiendo del compuesto. En todos los casos, la cantidad debe estar entre 0,1 y treinta por ciento (p/p de polímero). Los tipos de potenciadores de la degradación incluyen sales inorgánicas tales como sulfato de amonio y cloruro de amonio, ácidos orgánicos tales como ácido cítrico, ácido benzoico y ácido ascórbico, bases inorgánicas tales como carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de calcio, carbonato de zinc, e hidróxido de zinc, y bases orgánicas tales como sulfato de protamina, espermina, colina, etanolamina, dietanolamina, y trietanolamina, y tensioactivos como Tween® y Pluronic®. Los agentes formadores de poros que añaden microestructura a las matrices (es decir, compuestos solubles en agua tales como sales inorgánicas y azúcares) se añaden en forma de partículas. El intervalo debe estar entre uno y treinta por ciento (p/p de polímero).

La absorción también se puede manipular alterando el tiempo de residencia de las partículas en el intestino. Esto se puede lograr, por ejemplo, recubriendo la partícula con, o seleccionando como material de encapsulación, un polímero adhesivo mucosal. Los ejemplos incluyen la mayoría de los polímeros con grupos carboxilo libres, tales como el quitosano, las celulosas, y especialmente los poliacrilatos (como se usa aquí, poliacrilatos se refiere a polímeros que incluyen grupos acrilato y grupos acrilato modificados, tales como cianoacrilatos y metacrilatos).

Los compuestos de la invención se pueden administrar ventajosamente con segundos agentes a pacientes que lo necesiten. Cuando se administra un inhibidor de rho-cinasa con un segundo agente, el inhibidor de rho-cinasa y el segundo agente se pueden administrar de forma secuencial o concomitante. Secuencialmente significa que un agente se administra durante un tiempo, seguido de la administración del segundo agente, que puede ser seguido por la administración del primer agente. Cuando los agentes se administran secuencialmente, el nivel de un agente puede no mantenerse en un nivel terapéuticamente eficaz cuando se administra el segundo agente, y viceversa. Concomitantemente significa que el primer y el segundo agente se administran de acuerdo con un programa que mantiene a ambos agentes en un nivel sustancialmente eficaz desde el punto de vista terapéutico, aunque los agentes no se administren simultáneamente. Cada agente se puede administrar en dosis únicas o múltiples, y las dosis se pueden administrar en cualquier horario, incluyendo, sin limitación, dos veces al día, diariamente, semanalmente, cada dos semanas, y mensualmente.

La invención también incluye la administración adyuvante. La administración adyuvante significa que se administra un segundo agente a un paciente además de un primer agente que ya se está administrando para tratar una enfermedad o un síntoma de la enfermedad. En algunas realizaciones, la administración adyuvante implica administrar un segundo agente a un paciente en el que la administración del primer agente no trató suficientemente una enfermedad o un síntoma de la enfermedad. En otras realizaciones, la administración adyuvante implica la administración del segundo agente a un paciente cuya enfermedad ha sido tratada de forma eficaz mediante la administración del primer agente, con la expectativa de que el tratamiento adyuvante mejore el resultado del tratamiento. En algunas realizaciones, el efecto de administrar el primer y el segundo agente es sinérgico. En algunas realizaciones, la administración del primer y segundo agente previene o prolonga el tiempo hasta la recaída, en comparación con la administración de cualquiera de los agentes solo. En algunas realizaciones, la administración del primer y segundo agente permite una dosificación y/o frecuencia de administración reducidas del primer y segundo agente.

En una realización de la invención, un inhibidor de rho-cinasa de la invención y un agente antineoplásico se administran a un sujeto que los necesita. En otra realización, un inhibidor de rho-cinasa de la invención y un inhibidor de angiogénesis se administran a un sujeto que los necesita. En otra realización, un inhibidor de rho-cinasa de la invención y un agente antiinflamatorio se administran a un sujeto que los necesita. En aún otra realización, se administran un inhibidor de rho-cinasa de la invención y un inmunosupresor. El segundo agente puede ser una molécula pequeña, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, o radiación.

Los agentes antineoplásicos incluyen, sin limitación, agentes quimioterapéuticos citotóxicos, moléculas pequeñas y moléculas biológicas dirigidas, y radiación. Los compuestos y agentes que se pueden administrar para el tratamiento oncológico, además de un inhibidor de la rho cinasa de la invención, incluyen los siguientes: irinotecán, etopósido, camptotecina, 5-fluorouracilo, hidroxiurea, tamoxifeno, paclitaxel, capcitabina, carboplatino, cisplatino, bleomicina, dactomicina, gemcitabina, doxorrubicina, danorrubicina, ciclofosfamida, y radioterapia, que puede ser externa (por ejemplo, radioterapia de haz externo [EBRT]) o interna (por ejemplo, braquiterapia [BT]).

Las moléculas pequeñas y biológicas dirigidas incluyen, sin limitación, inhibidores de componentes de rutas de transducción de señales, tales como moduladores de tirosina cinasas e inhibidores de tirosina cinasas receptoras, y agentes que se unen a antígenos específicos de tumores. Los ejemplos incluyen inhibidores del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), incluyendo gefitinib, erlotinib y cetuximab, inhibidores de HER2 (por ejemplo, trastuzumab, trastuzumab emtansina (trastuzumab-DMl; T-DM1) y pertuzumab), anticuerpos y fragmentos anti-VEGF (por ejemplo, bevacizumab), anticuerpos que inhiben CD20 (por ejemplo, rituximab, ibritumomab), anticuerpos anti-VEGFR (por ejemplo, ramucirumab (IMC-1121B), IMC-1C11, y CDP791), anticuerpos anti-PDGFR, e imatinib. Los inhibidores de cinasas de tipo molécula pequeña pueden ser específicos para una tirosina cinasa particular, o ser inhibidores de dos o más cinasas. Por ejemplo, el compuesto N-(3,4-dicloro-2-fluorofenil)-7-({[(3aR,6aS)-2-metiloctahidrociclopenta[c]pirrol-5-il]metil}oxi)-6-(metiloxi)quinazolin-4-amina (también conocido como XL647, EXEL-7647 y KD-019) es un inhibidor in vitro de varias tirosina cinasas receptoras (RTK), incluyendo EGFR, EphB4, KDR (VEGFR), Flt4 (VEGFR3) y ErbB2, y también es un inhibidor de la cinasa SRC, que participa en las rutas que dan como resultado la falta de respuesta de los tumores a ciertos TKI. En un aspecto, el tratamiento de un sujeto que lo necesita comprende la administración de un inhibidor de rho-cinasa de Fórmula I y la administración de KD-019.

Dasatinib (BMS-354825; Bristol-Myers Squibb, Nueva York) es otro inhibidor de Src competitivo en el sitio de ATP, biodisponible por vía oral. Dasatanib también se dirige contra Bcr-Abl (aprobado por la FDA para uso en pacientes con leucemia mielógena crónica (CML) o leucemia linfoblástica aguda (ALL) con cromosoma Filadelfia positivo (Ph+)), así como contra c-Kit, PDGFR, c-FMS, EphA2, y cinasas de la familia Src. Otros dos inhibidores orales de tirosinas cinasas de Src y Bcr-Abl son bosutinib (SKI-^{6 0 6}) y saracatinib (AZD0530).

Según la invención, los inhibidores de la angiogénesis se pueden administrar a un sujeto junto con los compuestos de la invención. Los inhibidores de la angiogénesis incluyen cualquier sustancia que inhiba el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos. Por ejemplo, los inhibidores de la angiogénesis incluyen antagonistas de los receptores VEGF, P1GF y VEGF, incluyendo los anticuerpos descritos aquí. Por inhibidor se entiende un inhibidor de un proceso biológico o un inhibidor de una diana. A este respecto, un inhibidor de la angiogénesis es un agente que reduce la angiogénesis. Un inhibidor de Rho-cinasa es un agente, tal como un inhibidor competitivo de la unión de ATP, que inhibe una actividad intrínseca o bloquea una interacción de Rho-cinasa. Por antagonista se entiende una sustancia que reduce o inhibe una actividad o función en una célula asociada con una diana. Por ejemplo, un antagonista de VEGF reduce o bloquea una función en una célula que está asociada con VEGF. Un antagonista de VEGF puede actuar sobre VEGF, uniéndose a VEGF y bloqueando la unión a sus receptores, y/o puede actuar sobre otro componente celular implicado en la transducción de señales mediada por VEGF. De manera similar, un antagonista de VEGFR2 es un agente que reduce o bloquea la transducción de señales mediada por VEGFR2 uniéndose a VEGFR2 y bloqueando la unión de ligandos o la interacción con un sustrato de VEGFR2, o actúa sobre otro componente celular para reducir o bloquear la transducción de señales mediada por VEGFR2. Por lo tanto, los inhibidores de la angiogénesis incluyen nuevos anticuerpos anti-VEGFR2 expuestos aquí (Fig. 11), y antagonistas de VEGF, VEGFR1, VEGFR2, PDGF, PDGFR-p, neuropilina-1 (NRP1), y del complemento.

Los ejemplos de agentes de unión a VEGF incluyen anticuerpos VEGF y trampas de VEGF (es decir, dominios de unión a ligandos de receptores de VEGF). En general, una trampa de VEGF es una proteína que comprende dominios de unión a VEGF de una o más proteínas receptoras de VEGF. Las trampas de VEGF incluyen VEGFR-1 vsoluble, neuropilina soluble 1 (NRP1), v Eg FR-3 soluble (que se une a VEGF-C y VEGF-D), y aflibercept (Zaltrap; Eyelea; VEGF Trap R1R2), compuestos por segmentos de los dominios extracelulares de los receptores del factor de crecimiento endotelial vascular humano VEGFR1 y VEGFR2 fusionados con la región constante (Fc) de IgG1 humana. Conbercept (KH902) es una proteína de fusión que contiene el dominio extracelular 2 de VEGFR-1 (Flt-1) y el dominio extracelular 3, 4 de VEGFR-2 (KDR) fusionado con la porción Fc de IgG 1 humana. Varias trampas de VEGF que contienen dominios similares a Ig KDR y FLT-1 en diversas combinaciones se describen en la patente U.S. 8.216.575. Las DARPins (un acrónimo de proteínas de repetición de anquirina diseñadas) son proteínas miméticas de anticuerpos modificadas genéticamente que suelen exhibir una unión a proteínas diana altamente específica y de alta afinidad. DARPin® MP0112 es un inhibidor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), y ha entrado en ensayos clínicos para el tratamiento de la degeneración macular húmeda y el edema macular diabético.

Según la invención, la expresión de VEGF se puede seleccionar como una diana. Por ejemplo, el inhibidor de VEGF PTC299 se dirige contra VEGF después de la transcripción al unirse selectivamente a las regiones no traducidas (UTR) 5’ y 3’ del ARN mensajero (ARNm) de VEGF, evitando así la traducción de VEGF. Pegaptanib (Macugen) es un aptámero de ARN dirigido contra VEGF-165.

El factor de crecimiento placentario (P1GF) se ha implicado en la angiogénesis patológica. P1GF está estructuralmente relacionado con VEGF, y también es un ligando para VEGFR-1. En consecuencia, las trampas de VEGF que comprenden el dominio extracelular de VEGFR1 (véase más arriba) son útiles para dirigirlas contra P1GF.

El PDGF está compuesto por cuatro cadenas polipeptídicas que forman los homodímeros PDGF-AA, BB, CC y DD, así como el heterodímero PDGF-AB. Los receptores a y b de PDGF (PDGFR) median las funciones de PDGF. Específicamente, PDGFRa se une a PDGF-AA, -BB, -AB y -CC, mientras que PDGFRb interactúa con -BB y -DD. Los ejemplos no limitativos de agentes de unión a PDGF incluyen anticuerpos anti-PDGF y trampas de PDGF. Los agentes dirigidos contra PDGF incluyen Fovista™ (E10030, Ophthotech), un aptámero pegilado dirigido contra PDGF-B, y AX102 (Sennino et al., 2007, Cancer Res. 75(15):7359-67), un aptámero de oligonucleótidos de ADN que se une a PDGF-B.

Los agentes que se dirigen contra los receptores de PDGF incluyen ramucirumab (IMC-3G3, IgG¹humana), un anticuerpo anti-PDGFRa, crenolanib (CP-868596), un inhibidor selectivo de PDGFRa (IC⁵⁰= 0,9 nM) y PDGFRb (IC⁵⁰=1 ^{, 8}nM), y nilotinib (Tasigna®), un inhibidor de PDGFRa y PDGFRb y otras tirosina cinasas.

Los inhibidores de la angiogénesis incluyen agentes intracelulares que bloquean la transducción de señales mediada, por ejemplo, por VEGF, PDGF, ligandos de VEGF o receptores de PDGF, o el complemento. Los agentes intracelulares que inhiben los inhibidores de la angiogénesis incluyen los siguientes, sin limitación. Sunitinib (Sutent; SU11248) es un inhibidor panespecífico de tipo molécula pequeña de VEGFR1-VEGFR3, PDGFRa y PDGFRp, el receptor del factor de células madre (cKIT), Flt-3, y el receptor del factor 1 estimulante de colonias (CSF-1R). Axitinib (AG013736; Inlyta) es otro inhibidor de tirosina cinasa de tipo molécula pequeña que inhibe VEGFR-1-VEGFR-3, PDGFR y cKIT. Cediranib (AZD2171) es un inhibidor de VEGFR-1-VEGFR-3, PDGFRp, y cKIT. Sorafenib (Nexavar) es otro inhibidor molecular pequeño de varias tirosina proteína cinasas, incluyendo las cinasas VEGFR, PDGFR, y Raf. Pazopanib (Votrient; (GW786034) inhibe VEGFR-1, -2 y -3, cKIT y Pd Gf R. Foretinib (GSK1363089; XL880) inhibe VEGFR2 y MET. ^cP-547632 es un potente inhibidor de las cinasas VEGFR-2 y el factor de crecimiento de fibroblastos básico (FGF). E-3810 ((6-(7-((1-aminociclopropil)metoxi)-6-metoxiquinolin-4-iloxi)-N-metil-1-naftamida) inhibe las cinasas VEGFR-1, -2, y -3, y fGf R-1 y -2, en el intervalo nanomolar. Brivanib (BMS-582664) es un inhibidor de VEGFR-2 que también inhibe la señalización del receptor de FGF. CT-322 (Adnectin) es una proteína pequeña basada en un dominio de fibronectina humana, y se une e inhibe la activación de VEGFR2. Vandetanib (Caprelas; Zactima; ZD6474) es un inhibidor de las tirosina cinasas VEGFR2, EGFR, y RET. X-82 (Xcovery) es un inhibidor indolinónico de tipo molécula pequeña de la señalización a través de los receptores del factor de crecimiento VEGFR y PDGFR.

Los antiinflamatorios e inmunosupresores incluyen fármacos esteroideos tales como los glucocorticoides (por ejemplo, dexametasona), FK506 (tacrolimus), ciclosporina, fingolimod, interferón, tales como IPNp o IFNy, una proteína de unión al factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a) tal como infliximab (Remicade), etanercept (Enbrel), o adalimumab (Humira), y ácido micofenólico.

En ciertas realizaciones, los inhibidores de ROCK de la invención se coadministran con agentes usados para tratar trastornos metabólicos. Por ejemplo, para el tratamiento de la obesidad, los inhibidores de ROCK pueden combinarse con fármacos para la pérdida de peso, tales como fentermina, inhibidores de la adsorción de grasas (por ejemplo, Xenical), y supresores del apetito. Los procedimientos usados para ayudar a perder peso incluyen, por ejemplo, bandas estomacales, derivación estomacal, o grapado. Para la resistencia a la insulina o el síndrome metabólico o la hiperinsulinemia, los inhibidores de ROCK de la invención se pueden coadministrar con compuestos que reducen los niveles de colesterol, por ejemplo uno o más medicamentos tales como estatinas, fibratos, o ácido nicotínico. Para la hipertensión arterial asociada con tales enfermedades, los inhibidores de ROCK de la invención se pueden coadministrar con, por ejemplo, uno o más medicamentos antihipertensivos tales como diuréticos o inhibidores de la enzima conversora de la angiotensina (ACE). Los inhibidores de ROCK de la invención se pueden administrar en un programa de tratamiento que incluye cambios en el estilo de vida, tal como mayor actividad física, una dieta mejorada, y/o dejar de fumar. En ciertas realizaciones, el inhibidor de ROCK es selectivo para ROCK2.

Las células Th17 son un nuevo subconjunto de células T CD4+ auxiliares que segregan IL-17, IL-21 e IL-22. La actividad proinflamatoria de las células Th17 puede ser beneficiosa para el hospedante durante la infección, pero la función descontrolada de Th17 se ha relacionado y está activamente implicada en varias patologías autoinmunes y en el desarrollo de la enfermedad aguda de injerto contra hospedante (EICH), una enfermedad caracterizada por daño epitelial a los órganos diana que está mediado por células T maduras presentes en los inóculos de células madre o de médula ósea. De hecho, se detectan altos niveles de IL-17 en los sueros y biopsias de pacientes con artritis reumatoide (AR) y lupus eritematoso sistémico (LES), lo que se correlaciona con la destrucción del tejido sinovial y la actividad de la enfermedad. El papel patológico de la IL-17 en las articulaciones artríticas está asociado con su estimulación de la producción de citocinas proinflamatorias y un mayor reclutamiento de células T y células inmunitarias innatas. Además, el número de células Th17 aumentó significativamente en la sangre periférica de pacientes con AR, y se observaron concentraciones elevadas de IL-17 en los sobrenadantes de sus PBMC después de la estimulación con anticuerpos anti-CD3/CD28 ex-vivo. Además, en los pacientes con esclerosis múltiple (EM), las células Th17 reactivas a la mielina también están enriquecidas y producen grandes cantidades de IL-22 e IFN-g. Además, se detecta un número significativamente mayor de células IL-17+ en las áreas intestinales afectadas por la enfermedad, en comparación con las áreas sanas de los mismos sujetos con la enfermedad de Crohn (EC).

El desarrollo y la función de las células Th17 depende de la activación de rutas de señalización intracelulares específicas. El receptor nuclear de tipo receptor de esteroides RORyt se expresa selectivamente en las células Th17, y parece ser necesario para la producción de IL-17. Se ha observado que la inducción de RORyt está mediada por IL-⁶, IL-21 e IL-23 a través de un mecanismo dependiente de STAT3. STAT3 también se une directamente a los promotores de IL-17 e IL-21. Además de RORyt y STAT3, el factor 4 regulador de interferón (IRF4) es necesario para la diferenciación de las células Th17, ya que los ratones KO IRF4 no lograron generar una respuesta de Th17 y eran resistentes al desarrollo de respuestas autoinmunes. Estudios recientes han demostrado que la fosforilación de IRF4 por Rho-cinasa 2 (ROCK2) regula la producción de IL-17 e IL-21 y el desarrollo de autoinmunidad en ratones.

Según la invención, la dianización de células Th17 (secretoras de IL-17) mediante la inhibición de la rho-cinasa proporciona un método para tratar enfermedades mediadas por células Th17, en particular trastornos autoinmunes tales como psoriasis, dermatitis atópica, eccema y EHCI en seres humanos. En un aspecto, el inhibidor de la Rho cinasa es un compuesto de Fórmula I. En algunas realizaciones, el inhibidor de la rho-cinasa inhibe ROCK1 y ROCK2. En algunas realizaciones, el inhibidor de rho-cinasa inhibe selectivamente a ROCK2. La inhibición selectiva de ROCK2 proporciona el tratamiento de enfermedades mediadas por células Th17, y reduce o previene las toxicidades asociadas con la inhibición completa de la actividad de ROCK.

Las células T reguladoras (Tregs) desempeñan un papel crítico en el mantenimiento de la tolerancia inmunológica a los autoantígenos y en la inhibición de las respuestas autoinmunes, pero, al mismo tiempo, previenen una respuesta inmune eficaz contra las células tumorales. De hecho, las Treg aisladas de la sangre periférica de pacientes con enfermedades autoinmunes, tales como artritis reumatoide (AR) y esclerosis múltiple (EM), muestran un defecto en su capacidad para suprimir la función de las células T efectoras, mientras que el aumento de la acumulación de las Treg se correlaciona con una pobre pronóstico en muchos cánceres. Por lo tanto, el nivel de la función de Treg afecta al equilibrio entre la inmunidad efectiva y la evitación de la autorreactividad patológica.

El desarrollo y la función de las Treg dependen de la activación de rutas específicas de transducción de señales. TGF-b e IL-2 activan la expresión de los factores de transcripción Foxp3 y STAT5, que juegan un papel esencial en el control de la función supresora de las Treg. Por otro lado, las citocinas proinflamatorias inhiben la expresión de Foxp3 a través del aumento de la fosforilación de STAT3. Según la invención, la inhibición farmacológica de ROCK2 (por ejemplo, con inhibidores selectivos de ROCK2 tales como KD025, inhibición de ROCK2 mediada por ARNip específicos de ROCK2), pero no de ROCK1, conduce a una disminución de la fosforilación de STAT3, de los niveles del factor 4 regulador de interferón (IRF4) y de la proteína del receptor nuclear de tipo receptor de esteroides RORyt en células T humanas. Por lo tanto, la ruta de señalización de ROCK2 podría estar involucrada en la regulación de la función de las Treg.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención, pero no deben interpretarse como limitativos del alcance de la invención de ninguna manera.

EJEMPLOS

Las abreviaturas usadas en los siguientes ejemplos y preparaciones incluyen:

AC²O anhídrido acético

AcOH ácido acético

Bn bencilo

Celite® tierra de diatomeas

DCM diclorometano

DIEA diisopropiletilamina

DMAP 4-dimetilaminopiridina

DME ¹,²-dimetoxiletano

DMF dimetilformamida

DMSO dimetilsulfóxido

EDC hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodimida

EtOAc acetato de etilo

EtOH alcohol etílico o etanol

Et²O éter etílico

Et³N trietilamina

_ggramos

HOBt ¹-hidroxibenzotriazol

HPLC cromatografía de líquidos de alta presión

h hora(s)

MeCN acetonitrilo

min minuto(s)

MeOH alcohol metílico o metanol

ml mililitro

mmol milimoles

MS espectrometría de masas

RMN resonancia magnética nuclear

iPrOH iso-propanol

PyBOP® benzotriazol-¹-il-oxitripirrolidinofosfonio

rt temperatura ambiente

s singlete

t triplete

THF tetrahidrofurano

La espectrometría de masas se realizó por: SynPep Co., 6905 Ct. Dublin, CA 94568, o se registró en un LC-MS: módulo de separaciones Waters 2695 con un detector MS de cuadripolo simple Waters ZQ2000. A menos que se indique, toda la espectrometría de masas se llevó a cabo en modo ESI. Los espectros de RMN 1H se registraron en una máquina Varian de 400 MHz utilizando el software Mercury. En la medida en que la síntesis de los siguientes ejemplos de compuestos de la presente invención no se describe explícitamente en dicho ejemplo, la síntesis es como se describe aquí en términos generales, y el material de partida apropiado se puede seleccionar fácilmente para sintetizar el compuesto del ejemplo.

Ejemplo 1

2-Bromo-N-isoopropilacetamida

Una disolución de isopropilamina (5,0 g, 7,20 ml, 84,6 mmol) en 63 ml de DCM se enfrió a -10°C. A esto se añadió una disolución de bromuro de a-bromoacetilo (8,53 g, 3,68 ml, 42,3 mmol) en 10,5 ml de DCM. La mezcla de reacción se agitó durante 10 min. El bromuro de isopropilamonio se filtró de la mezcla, y el filtrado se concentró entonces a vacío para dar el compuesto del título como un sólido blanco (5,30 g, 70%).

Ejemplo 2

W-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida

Una mezcla de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (0,50 g, 2,27 mmol), 2-bromo-N-isoopropilacetamida (0,61 g, 3,41 mmol) y K²CO³(0,47 g, 3,41 mmol) en DMF (3 ml) se agitó a temperatura ambiente, seguido de la adición de agua con hielo. El precipitado se filtró y se lavó con agua, y se secó para proporcionar el compuesto del título (0,32 g, 44%).

Ejemplo 3

5-((2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 2,4-dicloropirimidina (1,99 g, 13,4 mmol), 5-amino-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (3,4 g, 14,7 mmol), DIEA (3 ml) y DMF (13 ml) se agitó a 65°C durante 7 h, se concentró a vacío, y se valoró con Et²O. El precipitado se filtró y se lavó con IPA, y se secó para proporcionar el compuesto del título (1,83 g, 40%).

Ejemplo 4

5-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-((2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,29 mmol), N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (130 mg, 0,41 mmol), Pd(dppf)Cl².CH²Cl²(20 mg, ^{0 , 02}mmol) y K²CO³(80 mg, 0,58 mmol) en dioxano/agua (10 y ²ml) se calentó en microondas durante 30 min. La reacción se trató y se purificó por cromatografía para proporcionar el compuesto del título (176 mg, 35%). Ejemplo 5

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida, sal de HCl

5-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo se recogió en HCl 4 M en dioxano y se agitó a rt durante ²h. Los volátiles se eliminaron a vacío para dar el compuesto del título como sal de HCl. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 512,6 (d, J = ^{6 , 8}Hz, ⁶H), 3,93 (m, 1 H), 4,51 (s, 2H), 6,75 (d, J = ⁶Hz, 1H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,44-7,59 (m, 3H), 7,87-7,91 (m, 3H), 8,09 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,31 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 10,19 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 13,10 (s, 1H). MS (ES+) m/e 403 (M+H)+.

Ejemplo 6

2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetato de terc-butilo

3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol, 2-bromoacetato de terc-butilo

Una mezcla de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (4 g, 18,2 mmol), 2-bromoacetato de terc-butilo (5,7 g, 27,3 mmol) y K²CO³(3,44 g, 27,3 mmol) en CH³CN (100 ml) se agitó a 70°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y se eliminó para dar un residuo. El residuo se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (4 g, 67%) como un sólido blanco.

Ejemplo 7

W-(2-cloropirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una mezcla del compuesto 2,4-dicloropirimidina (14,8 g, 0,1 mol), 1 H-indazol-5-amina (14,6 g, 110 mmol) y Et³N (15 g, 150 mmol) en EtOH (200 ml) se agitó a 80°C durante 3 horas. La mezcla de reacción se enfrió y se filtró. La torta filtrada se recogió y se secó para dar el compuesto 5 (15 g, 60%) como un sólido.

Ejemplo 8

5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una mezcla de N-(2-cloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (7,35 g, 30 mmol), Boc²O (18,9 g, 90 mmol) en CH²G ²(150ml) se añadió DMAP (3.6 g, 30 mmol) a 0°C durante 5 min. Después de 0,5 horas, la reacción se completó. La mezcla de reacción se lavó con agua, se secó sobre Na²SO⁴, y se eliminó para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna de gel para dar el compuesto del título ^{( 6}g, 67%) como un sólido blanco.

Ejemplo 9

5-((2-(3-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)(terc-butoxicarbonil)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (4 g, 8,9 mmol), 2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetato de terc-butilo (3,3 g, 10 mmol), KOAc (35 g, 360 mmol), Pd(dppf)²Cl²(400 mg) y Boc²O (3,9 g, 18 mmol) en dioxano/agua (10/1, 100 ml) se agitó a 100°C durante 3 días. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, y se eliminó para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna de gel para dar el compuesto del título (3 g, 54%) como un sólido.

Ejemplo 10

ácido 2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acético

Una mezcla del compuesto 5-((2-(3-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)(terc-butoxicarbonil)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (2 g) y CF³COOH (20 ml) en DCM (20 ml) se agitó a 25°C durante 2 horas. El disolvente se eliminó para dar el compuesto del título (1,5 g) como un sólido amarillo.

Ejemplo 11

(S)-3-(2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acetamido)pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de ácido 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acético (600 mg, 1,66 mmol), éster tercbutílico del ácido 3-amino-pirrolidin-1-carboxílico (300 mg, 1,62 mmol), HATU (760 mg, 2 mmol) y Et³N (250 mg, 2 mmol) en DMF (18 ml) se agitó a 25°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na²SO⁴y se concentró para dar un residuo, que se purificó por HPLC para dar el compuesto del título (300 mg, 50%) como un sólido.

Ejemplo 12

Sal de HCl de (R)-2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-(pirrolidin-3-il)acetamida

¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 51,84-1,96 (m, 1H), 2,07-2,19 (m, 1H), 3,07-3,38 (m, 4H), 4,40-4,42 (m, 1H), 4,65 (s, 2H), 7,36 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,56 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,90-7,94 (m, 2H), 8,14-8,29 (m, 2H), ^{8 , 66}(d, J = ^{6 , 8}Hz, 1H), 9,39-9,80 (m, 3H), 11,87 (s, 1H). MS (ES+) m/e 430 (M+H)+.

Ejemplo 13

Una mezcla del compuesto ácido 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acético (500 mg, 1,39 mmol), NH⁴CI (125 mg, 2 mmol), HATU (720 mg, 1^{, 89}mmol) y Et³N (200 mg, 2 mmol) en DMF (15 ml) se agitó a 25°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar un residuo, que se purificó por HPLC para dar el compuesto del título (60,1 mg, 12%) como un sólido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 54,52 (s, 2H), 6,78 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,19 (dd, J = 9,6 y 1,6 Hz, 1H), 7,40-7,62 (m, 5H), 7,84-7,87 (m, 2H), 8,11 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,33 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 10,35 (s, 1H). MS (ES+) m /e361 (M+H)+.

Ejemplo 14

Sal de TFA de 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-1 -(1,1-dioxidotiomorfolino)etanona

Una mezcla de compuesto ácido 2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acético (500 mg, 1,39 mmol), 1,1 dióxido de tiomorfolina (375 mg, 2,2 mmol), HATU (720 mg, 1,89 mmol) y Et3N (200 mg, 2 mmol) en DMF (15 ml) se agitó a 25 oC durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4 y se concentró para dar un residuo, que se purificó mediante prep-HPLC para dar el compuesto del título (54,6 mg, 10%) como un sólido. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 53,11 (b, 2H), 3,30 (b, 2H), 3,85 (b, 4H), 5,00 (s, 2H), 6,76 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,09 (s, 1 H), 7,16 (dd, J = 8,0 y 2,4 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,47-7,50 (m, 2H), 7,81 (s, 1 H), 7,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,12 (b, 1 H), 8,33 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 10,26 (s, 1H). MS (ES+) m/e 479 (M+H)+.

Ejemplo 15

N-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)morfolin-4-carboxamida

A una mezcla de trifosgeno (600 mg, 2 mmol) en THF (10 ml) se añadió gota a gota una disolución de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)anilina (836 mg, 4 mmol) y Et³N (1,2 g, 12 mmol) en THF (10 ml) durante 10 min a 40°C. Después de 0,5 h, se añadió morfolina (435 mg, 5 mmol) a la mezcla de reacción. Después de 15 min, la mezcla de reacción se inactivó con NH⁴Cl saturado, y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na²SO⁴y se concentró para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna de gel para dar el compuesto del título (530 mg, 50%) como un sólido blanco.

Ejemplo 16

5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(morfolin-4-carboxamido)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (300 mg, 0,7 mmol), N-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)morfolin-4-carboxamida (250 mg, 0,8 mmol), CsF (510 mg, 3 mmol), Pd(PPh³)⁴(120mg) y Boc²Ü (432 mg, 2 mmol) en dioxano/agua (10/1, 10 ml) se agitó a 130°C en microondas durante 20 min. Se combinaron tres vasijas. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na²SÜ⁴y se concentró para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (360 mg).

Ejemplo 17

Sal de HCl de N-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenil)morfolin-4-carboxamida

Una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(morfolina-4-carboxamido)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (360 mg, bruto) en MeÜH/HCl (4 M, 20 ml) se agitó a 25°C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró para dar el compuesto del título ^{( 68}mg) como una sal de HCl. ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 53,49 (s, 4H), 3,62 (s, 4H), 7,14 (b, 1H), 7,50 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,60-7,65 (m, 3H), 7,88 (d, J = ^{6 , 8}Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,28 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,46 (b, 1H), ^{8 , 6 8}(s, 1H), 9,00 (s, 1H), 11,77 (s, 1H). MS (ES+) m/e 416 (M+H)+.

Ejemplo 18

3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzoato de metilo

Una mezcla de N-(2-cloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (3,7 g, 15 mmol), ácido 3-metoxicarbonilfenilborónico (3,3 g, 18 mmol), K²CO³(4,14g, 30 mmol) y Pd(dppf)²Cl²(700 mg) en dioxano/agua (4/1,75 ml) se agitó a 100°C durante 16 horas. La mezcla de reacción se concentró para dar el compuesto del título (7 g, bruto), que se llevó directamente a la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.

Ejemplo 19

ácido 3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzoico

A una mezcla de 3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzoato de metilo (7 g, bruto) en dioxano (120 ml) se añadió NaOH (2 M, 120 ml). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 1,5 h, y luego se enfrió a rt y se extrajo con EtOAc (100 ml). La fase acuosa se separó y se acidificó con HCl (⁶M). La mezcla se filtró, y la torta del filtro se recogió, se secó para dar el compuesto del título (1,3 g, bruto), que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción.

Ejemplo 20

Sal de TFA de 3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)-N-(1,1-dioxidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)benzamida

La mezcla de ácido 3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzoico (400 mg, 1,2 mmol), 1,1 -dióxido de 4-aminotetrahidro-2H-tiopirano (300 mg, 1,4 mmol), HATU (720 mg, 1,89 mmol) y Et³N (200 mg, 2 mmol) en DMF (15 ml) se agitó a 25°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na²SO⁴y se concentró para dar un residuo, que se purificó por HPLC para dar el compuesto del título (81 mg, 20%) como un sólido. ¹H RMN (400 MHz, CD³OD) 52,19-2,24 (m, 2H), 2,31-2,33 (m, 2H), 3,12-3,15 (m, 2H), 3,34-3,38 (m, 2H), 4,23-4,28 (m, 1H), 6,93 (d, J = ^{6 , 8}Hz, 1H), 7,58-7,76 (m, 3H), 8,12 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,24 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,31 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 8,65 (s, 1H). MS (ES+) m/e 463 (M+H)+.

Ejemplo 21

4-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzamido)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de ácido 3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzoico (400 mg, 1,2 mmol), éster terc-butílico del ácido 4-amino-piperidin-1-carboxílico (300 mg, 1,5 mmol), HATU (720 mg, 1,89 mmol) y Et³N (200 mg, 2 mmol) en DMF (15 ml) se agitó a 25°C durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na²SO⁴y se concentró para dar un residuo, que se purificó por HPLC para dar el compuesto del título (200 mg, 30%) como un sólido.

Ejemplo 22

3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)-N-(piperidin-4-il)benzamida, sal de HCl

Una mezcla de 4-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)benzamido)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (200 mg) en HCl en MeOH (5 ml) se agitó a 25°C durante 3 h. Se eliminó el disolvente para proporcionar el compuesto del título (150 mg) como un sólido amarillo. ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 51,79-1,87 (m, 2H), 1,98-2,01 (m, 2H), 3,01-3,04 (m, 2H), 3,32-3,36 (m, 2H), 3,64-3,69 (m, 1H), 7,10-7,15 (m, 1 H), 7,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,75 (t, J = ⁸Hz, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,20 (s, 1 H), 8,36 (d, J = ^{6 , 8}Hz, 1H), 8,42 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 8,78 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 8,90 (s, 1 H), 8,96 (s, 1H), 11,73 (s, 1H). MS (ES+) m/e 414 (M+H)+.

Ejemplo 23

N-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una mezcla del compuesto 2,4-dicloro-5-metilpirimidina (5 g, 30,8 mmol) y 5-aminoindazol (4,1 g, 30,8 mmol) en etanol anhidro (100 ml) se añadió Na²CO³(16 g, 154 mmol). La mezcla resultante se calentó a 80°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se secó sobre Na²SO⁴anhidro y se concentró a vacío, seguido de cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con DCM:MeOH = 50:1) para proporcionar el compuesto del título (7 g, rendimiento 87%) como un sólido marrón.

Ejemplo 24

5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución de N-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina (5 g, 19,3 mmol) en DCM anhidro (100 ml) se añadió Boc²O (12,6 g, 57,9 mmol), TEA (5,85 g, 57,9 mmol) y DMAP (1,17 g, 9,56 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La fase orgánica se secó sobre Na²SO⁴anhidro, y el disolvente se eliminó a vacío, seguido de purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 10:1) para dar el compuesto del título (5 g, rendimiento 56%) como un sólido blanco.

Ejemplo 25

5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(ciclopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

A una mezcla de compuesto 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (1,9 g, 4,14 mmol), compuesto N-ciclopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (1,57 g, 4,97 mmol) y CsF (1,89 g, 12,42 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (5 ml) se añadió Pd(PPh³)⁴(239 mg, 0,21 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se secó sobre Na²SÜ⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 5:1) para dar el compuesto del título (1^{, 6}g, rendimiento 62%) como un sólido amarillo.

Ejemplo 26

Hidrocloruro de 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-il)amino)-5-metilpirimidin-2-il)fenoxi)-N-ciclopropilacetamida

A una disolución del compuesto 5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(ciclopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (500 mg, 0,81 mmol) en EtOAc (2 ml) se añadió HCl/EtOAc (10 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado formado se filtró y se lavó con EtOAc, se secó a vacío para proporcionar el compuesto del título (300 mg, rendimiento 89%) como un sólido amarillo. ¹H RMN (400 MHz, CD³OD) 50P.50-0,5 (m, 2H), 0,70-0,75 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,66-2,71 (m, 1 H), 4,51 (s, 2H), 7,27 (dd, J = 8,4 y 2,4 Hz, 1H), 7,49 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,64-7,68 (m, 2H), 7,72 (s, 1H), 8,04 (s, 2H), 8,20 (s, 1H), 8,28 (s, 1 H). MS (ES+) m/e 451 (M+H)+.

Ejemplo 27

5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)amino)-2-oxoetoxi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de tert-butilo

A una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (1,4 g, 3,05 mmol), 4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamido)piperidin-1-carboxilato de tercbutilo (1,68 g, 3,66 mmol) y CsF (1,39 g, 9,15 mmol) en 1,4-dioxano (20 ml) y agua (5 ml) se añadió Pd(PPh³)⁴(176 mg, 0,15 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se secó sobre Na²SO⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 1:1) para dar el compuesto del título (1,1 g, rendimiento 47%) como un sólido amarillo.

Hidrocloruro de 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-il)amino)-5-metilpirimidin-2-il)fenoxi)-N-(piperidin-4-il)acetamida

A una disolución de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)amino)-2-oxoetoxi)fenil)-5-metilpirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (700 mg, 0,92 mmol) en EtOAc (2 ml) se añadió HCl/EtOAc (10 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado formado se filtró y se lavó con EtOAc, se secó a vacío para proporcionar el compuesto del título (230 mg, rendimiento 54%) como un sólido amarillo.

¹H RMN (400 MHz, CD³OD) 51,73-1,84 (m, 2H), 2,01 -2,05 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 3,02-3,09 (m, 2H), 3,39-3,43 (m, 2H), 3,99-4,05 (m, 1H), 4,57 (s, 2H), 7,30 (dd, J = 8,4 y 2,4 Hz, 1H), 7,51 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,67-7,74 (m, 4H), 8,05 (s, 1 H), 8,20 (s, 1H), 8,24 (s, 1H). MS (ES+) m/e 494 (M+H)+.

Ejemplo 29

2-(3-bromofenoxi)acetato de terc-butilo

A una disolución de 3-bromofenol (5 g, 28,9 mmol) en MeCN (100 ml) se añadió bromoacetato de t-butilo (6,76 g, 34,7 mmol) y K²CO³(5,98 g, 43,3 mmol). La mezcla resultante se calentó a 80°C durante la noche bajo nitrógeno. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró para dar el residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (PE:EA = 50:1) para dar el compuesto del título (7 g, rendimiento 84%) como un aceite líquido.

Ejemplo 30

Cloruro de 2-(3-bromofenoxi)acetilo

A una disolución de 2-(3-bromofenoxi)acetato de terc-butilo (4,6 g, 16 mmol) en DCM anhidro (50 ml) se añadió TFA (18 g, 0,16 mol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después de que la TLC mostró que la reacción se había completado, la mezcla se concentró a presión reducida para obtener un ácido bruto. El ácido se disolvió en DCM anhidro (50 ml), se añadieron a la disolución cloruro de oxalilo (2,44 g, 19,2 mmol) y DMF (0,2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se concentró a presión reducida para proporcionar un sólido blanco, que se usó para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.

Ejemplo 31

2-(3-bromofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

A una disolución de cloruro de 2-(3-bromofenoxi)acetilo (2,3 g, 9,24 mmol) en DCM anhidro (30 ml) se añadió trietilamina (2,8 g, 27,7 mmol) y ciclopropilamina (632 mg, 11,1 mmol) a 0°C. Después, la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na²SO⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 5:1) para dar el compuesto del título (1,95 g, rendimiento 78%) como un sólido blanco.

Ejemplo 32

W-ciclopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida

A una mezcla de 2-(3-bromofenoxi)-N-ciclopropilacetamida (1,95 g, 7,25 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,76 g, 10,87 mmol) y KOAc (2,13 g, 21,7 mmol) en Dm So (20 ml) se añadió Pd(dppf)Cl²-DCM (265 mg, 0,36 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se secó sobre Na²SO⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 10:1) para dar el compuesto del título (¹,4 g, rendimiento 60%) como un sólido blanco.

Ejemplo 33

4-(2-(3-bromofenoxi)acetamido)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución de cloruro de 2-(3-bromofenoxi)acetilo (2,1 g, 8,43 mmol) en DCM anhidro (30 ml) se añadió trietilamina (2,56 g, 25,3 mmol) y 4-amino-1-Boc-piperidina (2,02 g, 10,1 mmol) a 0°C. Después, la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La reacción se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na²SO⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 5:1) para dar el compuesto del título (2,8 g, rendimiento 80%) como un sólido blanco.

Ejemplo 34

4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamido)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo

A una mezcla de 4-(2-(3-bromofenoxi)acetamido)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (2,8 g, 6,79 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,59 g, 10,2 mmol) y KOAc (1,99 g, 20,4 mmol) en DMSO (30 ml) se añadió Pd(dppf)Cl²-DCM (249 mg, 0,34 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se secó sobre Na²SO⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 5:1) para dar el compuesto del título (1,7 g, rendimiento 54%) como un sólido blanco.

N-(2-cloropirimidin-4-il)-6-fluoro-1 H-indazol-5-amina

A una mezcla de 2,4-dicloropirimidina (730 mg, 4,89 mmol) y 6-fluoro-5-aminoindazol (740 mg, 4,89 mmol) en etanol anhidro (15 ml) se añadió Na²CÜ³(1,56 g, 14,7 mmol). La mezcla resultante se calentó a 80°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se secó sobre Na²SÜ⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 3:1) para dar el compuesto del título (750 mg, rendimiento 58%) como un sólido pardo.

Ejemplo 36

5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución de N-(2-cloropirimidin-4-il)-6-fluoro-1 H-indazol-5-amina (750 mg, 2,85 mmol) en DCM anhidro (10 ml) se añadió Boc²Ü (1^{, 86}g, 8,55 mmol), TEA (864 mg, 8,55 mmol) y DMAP (173 mg, 1,42 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La fase orgánica se secó sobre Na²SÜ⁴anhidro, y el disolvente se eliminó a vacío para dar un residuo, que se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 20:1) para dar el compuesto del título (800 g, rendimiento 60%) como un sólido blanco.

Ejemplo 37

5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

A una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (920 mg, 1,98 mmol) en 1,4-dioxano (16 ml) y agua (4 ml) se añadió N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (760 mg, 2,38 mmol), Pd(PPh³)⁴(115 mg, 0,1 mmol) y CsF (906 mg, 5,96 mmol). La mezcla resultante se calentó a 100°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc, la fase orgánica se secó sobre Na²SÜ⁴anhidro y se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EA = 3:1) para dar el compuesto del título (600 mg, rendimiento 48%) como un sólido amarillo.

Ejemplo 38

Hidrocloruro de 2-(3-(4-((6-fluoro-1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-fluoro-1H-indazol-l-carboxilato de terc-butilo (520 mg, 0,84 mmol) en EtOAc (2 ml) se añadió HCl/EtOAc (10 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado formado se filtró y se lavó con EtOAc, se secó a vacío para proporcionar el compuesto del título (200 mg, rendimiento 56%) como un sólido amarillo.1H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 51,04 (d, J = 6,4 Hz, ⁶H), 3,88-3,93 (m, 1 H), 4,51 (s, 2H), 7,00 (b, 1 H), 7,22 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,49 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 7,75-7,79 (m, 2H), 7,93 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 8,09 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,36 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 11,09 (s, 1H). MS (ES+) m/e 457 (M+H)+.

Ejemplo 39

N-(2-cloro-5-metoxipirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A la mezcla de 2,4-dicloro-5-metoxipirimidina (3,56 g, 0,02 mol) en EtOH (80 ml) se añadió 1 H-indazol-5-amina (2,66 g, 0,02 mol), y después DIEA (7,8 g, 0,06 moles). La mezcla resultante se agitó a 45°C durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró. La torta se enjuagó con MTBE, y se recogió para dar el compuesto del título (4,4 g, rendimiento 81%) como un sólido marrón.

Ejemplo 40

5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloro-5-metoxipirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A la mezcla de N-(2-cloro-5-metoxipirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (4,2 g, 15,3 mmol) en DCM (50 ml) se añadió TEA (4,6 g, 45,9 mmol), (BOC)²O (8,32 g, 38,2 mmol) y DMAP (0,2 g). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante ¹h y se concentró, seguido de purificación mediante cromatografía en columna para proporcionar el compuesto del título (5,5 g, rendimiento 76%) como un sólido de color amarillo claro.

Ejemplo 41

5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-5-metoxipirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

A la disolución de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloro-5-metoxipirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (1,5 g, 3,16 mmol) en los disolventes (dioxano:agua=10:1, 33 ml) se añadieron N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (1,2 g, 3,79 mmol), (BOC)²O (1,38 g, 6,32 mmol), CsF (1,4 g, 9,48 mmol), y después Pd (PPh³⁾⁴(0,11 g, 0,095 mmol) bajo N². La mezcla resultante se agitó a 90°C durante 24 horas. La mezcla se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (0,98 g, rendimiento 49%) como un sólido blanco.

Ejemplo 42

2-(3-(4-(1 H-indazol-5-il)amino)-5-hidroxipirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

La mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-5-metoxipirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (1,2 g, 2 mmol) e hidrocloruro de piridina (7,8 g) se agitó a 140°C durante 1 hora. La reacción se enfrió a temperatura ambiente. Se añadió agua (20 ml), seguido de NH³.H²O para ajustar el pH a 6-7. La mezcla se filtró. La torta se recogió y se secó para dar el compuesto del título (0,46 g, rendimiento 55%) como un sólido gris.

Ejemplo 43

Sal de TFA de 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-il)amino)-5-(2-(dimetilamino)etoxi)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A la mezcla de 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-5-hidroxipirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (450 mg, 1,07 mmol) en THF (45 ml) se añadieron 2-(dimetilamino)etanol (115 mg, 1,29 mmol), y después PPh³(563 mg, 2,15 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 horas. Después, se añadió DEAD (374 mg, 2,15 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante la noche. El disolvente se eliminó a presión reducida, seguido de la adición de 10 ml de EtOAc y 10 ml de agua. Se añadió TFA para ajustar el pH = 4-5. La disolución acuosa se concentró y se purificó mediante prep-HPLC para dar el compuesto del título (0,1 g, rendimiento 10%) como un sólido amarillo. ¹H RMN (400 MHz, DMSO-de) 51,07 (d, J = 6,4 Hz, ⁶H), 2,94 (d, J = 4,0 Hz, ⁶H), 3,64-3,65 (m, 2H), 3,92 3,94 (m, 1 H), 4,48 (s, 2H), 4,52-4,53 (m, 2H), 7,02 (dd, J = 9,2 y 1,6 Hz, 1 H), 7,37 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,60-7,89 (m, 5H), 8,12-8,19 (m, 3H), 8,90 (s, 1H), 9,60 (b, 1H). MS (ES+) míe 490 (M+H)+.

Ejemplo 44

N-(2,6-dicloropirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una disolución de 2,4,6-tricloropirimidina (3,67 g, 20 mmol), 1 H-indazol-5-amina (2,66 g, 20 mmol) y TEA (3,03 g, 30 mmol) en EtOH (75 ml) se calentó a reflujo durante la noche. Después de eliminar el disolvente, el residuo se recristalizó en MeOH para proporcionar el compuesto del título (4,2 g, rendimiento 50%) como un sólido.

Ejemplo 45

N-(2-cloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una disolución de N-(2,6-dicloropirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina (4,2 g, 15 mmol), 1 -metilpiperazina (2,0 g, 20 mmol) y TEA (3,03 g, 30 mmol) en MeOH (75 ml) se sometió a reflujo durante la noche. Después de eliminar el disolvente, el residuo se recristalizó en DCM para dar el compuesto del título (3 g, rendimiento 58%) como un sólido.

Ejemplo 46

5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloro-6-(4-metilpiperazin-1 -il)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución de N-(2-cloro-6-(4-metilpiperazin-1 -il)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina (1,5 g, 4,4 mmol) en DCM (20 ml) se añadió TEA (0,93 g, 9,2 mmol), (Boc)²O (3 g, 13,9 mmol) y DMAP (1,1 g, 9,2 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo = 50:1 - 10:1) para dar el título (1,2 g, rendimiento 50%) como un sólido.

Ejemplo 47

5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-¹-carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloro-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (0,600 g, 1,1 mmol), Pd(dppf)Cl²(50 mg), CsF (0,501 g, 3,3 mmol) y N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (0,640 g, 2 mmol) en dioxano/agua (10:1, 10 ml) se agitó a 100°C durante la noche. Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó por HPLC para dar el compuesto del título (250 mg, rendimiento 32%).

Ejemplo 48

Sal de TFA de 2-(3-(4-(1 H-indazol-5-il)amino)-6-(4-metilpiperazin-1 -il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

Una disolución de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-6-(4-metilpiperazin-1 -il)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (250 mg, 0,36 mmol) en DCM (10 ml) y TFA (3,0 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla se concentró a vacío para proporcionar el compuesto del título (150 mg, rendimiento 70%) como un sólido. ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 51,02 (d, J = 6,4 Hz, ⁶H), 2,79 (s, 3H), 3,04 (b, 2H), 3,20-3,27 (m, 2H), 3,47-3,50 (m, 2H), 3,85-3,93 (m, 1H), 4,45 (s, 2H), 4,71-4,75 (m, 2H), 6,56 (s, 1H), 7,01 (dd, J = 8,4 y 2,4 Hz, 1H), 7,36 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,41-7,52 (m, 4H), 7,88 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,98 (s, 2H), 9,53 (s, 1H), 10,00 (s, 1H). MS (ES+) m/e 501 (M+H)+.

Ejemplo 49

N-(2-cloropirimidin-4-il)-6-metil-1 H-indazol-5-amina

Una disolución de 2,4-dicloropirimidina (0,69 g, 4,6 mmol), hidrocloruro de 6-metil-1H-indazol-5-ilamina (0,85 g, 4,6 mmol) y TEA (1,4 g, 13,8 mmol) en EtOH (16 ml) se calentó a reflujo durante la noche. Los volátiles se eliminaron para dar el compuesto del título bruto (1,7 g), que se usó para la siguiente etapa de reacción sin purificación.

Ejemplo 50

5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-6-metil-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución de N-(2-cloropirimidin-4-il)-6-metil-1 H-indazol-5-amina (1,7 g, bruto) en DCM (20 ml) se añadió TEA (0,93 g, 9,2 mmol), (BOC)²O (3 g, 13,9 mmol) y DMAP (1,1 g, 9,2 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo = 50:1 - 10:1) para dar el compuesto del título (0,45 g, rendimiento ^{2 1},¹% en ²etapas) como un sólido.

Ejemplo 51

5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-metil-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-6-metil-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (0,45 g, 1,67 mmol), Pd(dppf)Cl²(50 mg), Na²CO³(0,35 g, 3,34 mmol) y N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (0,64 g, 2 mmol) en dioxano/agua (10:1, 10 ml) se agitó a 100°C durante la noche. Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó por HPLC para dar el compuesto del título (180 mg, rendimiento 17%).

Ejemplo 52

Sal de TFA de N-isopropil-2-(3-(4-((6-metil-1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acetamida

A una disolución de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-6-metil-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (180 mg, 0,29 mmol) en DCM (10 ml) se añadió TFA (1,5 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche, y se concentró a vacío para proporcionar el compuesto del título (170 mg, rendimiento 96%). MS (ES+) m/e 417 (M+H)+.

Ejemplo 53

N-(2-cloropirimidin-4-il)-N-metil-1 H-indazol-5-amina

A una disolución de 2,4-dicloropirimidina (1,0 g, 6,7 mmol) en EtOH (20 ml) se añadió (1H-indazol-5-il)-metil-amina (1,0 g, ^{6 , 8}mmol) y TEA (2,02 g, 20 mmol). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante la noche. El disolvente se eliminó para dar el compuesto del título bruto (2,5 g), que se usó para la siguiente etapa de reacción sin purificación.

Ejemplo 54

5-((2-cloropirimidin-4-il)(metil)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución de N-(2-cloropirimidin-4-il)-N-metil-1H-indazol-5-amina (2,5 g, bruto) en DCM (50 ml) se añadieron TEA (2,0 g, 20 mmol), (BOC)²O (4,2 g, 19,2 mmol) y DMAP (1,0 g). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla se concentró a vacío, y se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (0,95 g, rendimiento 38,8% en 2 etapas) como un sólido.

Ejemplo 55

5-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)(metil)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución de 5-((2-cloropirimidin-4-il)(metil)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (0,6 g, 1,67 mmol) en el disolvente (dioxano:agua=4:1, 20 ml) se añadieron N-isopropil-2-[3-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-acetamida (0,6 g, 1,88 mmol), (BOC)²O (1,09 g, 5 mmol), K³PO⁴(1,06 g, 5 mmol), t-Bu³P (0,4 g, 2 mmol) y Pd²(dba⁾³(0,1 g) bajo N². La mezcla resultante se agitó a 100°C durante 24 horas, y se concentró a vacío para proporcionar el material bruto, que se llevó a la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.

Ejemplo 56

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)(metil)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida, sal de TFA

A 5-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)(metil)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo como antes se añadió HCl/MeOH (4 M, 5 ml), y la mezcla se agitó durante 2,0 h. El disolvente se eliminó a vacío, y el residuo se purificó por HPLC para dar el compuesto del título (120 mg) como una sal de TFA. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 51,20 (d, J = ^{6 , 8}Hz, ⁶H), 3,85 (s, 3H), 4,07-4,13 (m, 1H), 4,62 (s, 2H), 6,37-6,45 (m, 1H), 7,39 (dd, J = 10,4 y 2,0 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,60 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,79 (d, J = ^{8 , 8}Hz, 1 H), 7,86-7,89 (m, 2H), 7,91 (s, 1H), 8,05 (b, 1H), 8,18 (s, 1H). MS (ES+) m/e 417 (M+H)+.

Ejemplo 57

2-cloro-N-(1 H-pirazol-4-il)pirimidin-4-amina

La mezcla de 2,4-dicloropirimidina (200 mg, 2,41 mmol), 1H-pirazol-4-ilamina (431 mg, 2,89 mmol) y TEA (730 mg, 7,23 mmol) en /-PrOH ^{( 8}ml) se agitó a 50° durante la noche. Después de enfriar, la mezcla de reacción se concentró. El producto bruto se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación.

Ejemplo 58

4-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-pirazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una mezcla de (2-cloro-pirimidin-4-il)-(1 H-pirazol-4-il)-amina (470 mg, 2,41 mmol), TEA (730 mg, 7,23 mmol) y DMAP (607 mg, 4,82 mmol) en DCM seco (15 ml), se añadió lentamente Boc²O (1040 mg, 4,82 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el compuesto del título (200 mg, 0,5 mmol, 21% de rendimiento) como un sólido blanco.

Ejemplo 59

4-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-pirazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una mezcla de éster terc-butílico del ácido 4-[terc-butoxicarbonil-(2-cloro-pirimidin-4-il)-amino]-pirazol-1-carboxílico (118,5 mg, 0,3 mmol), W-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (134 mg, 0,42 mmol), Na²CO³(64 mg, 0,6 mmol) y Boc²O (130 mg, 0,6 mmol) en EtOH (3 ml) y H²O (0,3 ml), se añadió Pd(dppf)²Cl²(21 mg, 0,03 mmol). La mezcla se agitó a 130° bajo protección con N²en microondas durante 30 minutos. Después de enfriar, la mezcla se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida sobre gel de sílice, y después se purificó mediante P-HPLC para dar el compuesto del título (30 mg, 0,066 mmol, ^{2 2}% de rendimiento) como un sólido blanco.

Ejemplo 60

2-(3-(4-((1H-pirazol-4-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida, sal de TFA

A una disolución de 4-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-pirazol-1 -carboxilato de tercbutilo (167 mg, 0,369 mmol) en DCM (20 ml) se añadió TFA (2 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 h, y después se concentró para dar el compuesto del título (170 mg, 0,364 mmol, 98% de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 58,20-8,18 (d, J=7,2Hz, 1H), 8,07 (s 2H), 7,80-7,78 (d, 2H), 7,64-7,60 (t, J=⁸,⁸Hz, 1H), 7,40-7,40 (dd, J=9,6, 2,4Hz, 1 H), 6,91 -6,89 (d, J=7,2Hz, 1 H), 4,63 (s, 2H), 4,13-4,09 (m, 1H) 1,18-1,16(d, J=6,4Hz ⁶H). MS (ES+) m/e 353 (M+H)+.

5-((2-cloropirimidin-4-il)oxi)-1 H-indazol

La mezcla de 2,4-dicloropirimidina (184 mg, 1,232 mmol), 1H-indazol-5-ol (150 mg, 1,12 mmol) y TEA (340 mg, 3,36 mmol) en EtOH (5 ml) se agitó. a 80° durante la noche. Después de enfriar, la mezcla de reacción se concentró. El producto bruto se usó directamente para la siguiente etapa sin purificación.

Ejemplo 62

5-((2-cloropirimidin-4-il)oxi)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

A una mezcla agitada de 5-((2-cloropirimidin-4-il)oxi)-1 H-indazol (275 mg, 1,12 mmol), TEA (340 mg, 3,36 mmol) y DMAP (28 mg, 0,224 mmol) en DCM seco (5 ml), se añadió lentamente Boc²O (484 mg, 2,24 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h, y después se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el compuesto del título (200 mg, 0,57 mmol, 50% de rendimiento) como un sólido blanco.

Ejemplo 63

5-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)oxi)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una mezcla de 5-((2-cloropirimidin-4-il)oxi)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (104 mg, 0,3 mmol), N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (134 mg, 0,42 mmol), t-Bu3P (61 mg, 0,3 mmol), K³PO⁴.³H²O (160 mg, 0,6 mmol) y Boc²O (130 mg, 0,6 mmol) en dioxano (3 ml) y H²O (0,4 ml), se añadió Pd2(dba)3 (27 mg, 0,03 mmol). La mezcla se agitó a 80° bajo protección de N²durante la noche. Después de enfriar, la mezcla se concentró. El residuo se purificó mediante HPLC de fase inversa para dar el compuesto del título (58 mg, 0,115 mmol, 38% de rendimiento) como un sólido blanco.

Ejemplo 64

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)oxi)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida, sal de HCl

La disolución de 5-((2-(3-(2-(isopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)oxi)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (340 mg, 0,675 mmol) HCl (g)/EtOAc (40 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, y después se concentró para proporcionar el compuesto del título (272 mg, 0,621 mmol, 92% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 58,87-8,85 (d, J=6,4Hz, 1H), 8,25 (s 1 H), 7,78-7,71 (m, 2H), 7,69-7,65(m, 2H),7,50-7,43 (m, 3H), 7,30-727 (dd, J=8,0, 2,4Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,06-4,00 (m, 1H), 1,14-1,12(d, J=6,4Hz ⁶H). MS (ES+) m/e 404 (M+H)+.

Ejemplo 65

2-(3-(4-(1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-1-(piperazin-1-il)etanona, sal de HCl

El compuesto del título se preparó usando esencialmente el mismo procedimiento descrito para el ejemplo 12. . 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 53,24 (b, 4H), 3,82 (b, 4H), 5,00 (s, 2H), 6,93 (b, 1 H), 7,33 (dd, J = 7,6 y 1,6 Hz, 1 H), 7,56 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,79 (b, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,22 (d, J = 7,2 Hz, 2H). (ES+) m/e 430 (M+H)+.

Ejemplo 66

2-(3-(4-amino-6-cloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

Ejemplo 67

2-(3-(6-amino-2-cloropirimidin-4-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una mezcla de 4-amino-2,6-dicloropirimidina (1,016 g, 6,72 mmol), N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (2,032 g, 6,37 mmol) y CsF (2,858 g, 18,803 mmol) en 1,4-dioxano (31,2 ml) y H²O (6,3 ml) se añadió Pd(PPh³⁾⁴(0,362 g, 0,313 mmol). La mezcla resultante se agitó a 100°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con PE:EtOAc = 2:1) para obtener el compuesto 2-(3-(4-amino-6-cloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (670 mg, rendimiento 33%) como un polvo blanco y 2-(3-(6-amino-2-cloropirimidin-4-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (460 mg, rendimiento 22%) como un polvo blanco.

Ejemplo 68

2-(3-(4-amino-6-(4-metilpiperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una disolución del compuesto 2-(3-(4-amino-6-cloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (0,97 g, 3,031 mmol) en n-BuOH (15 ml) se añadió 1-metilpiperazina (1,5 g, 15 mmol), y se agitó a 120°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc:MeOH = 20:1) para obtener el compuesto del título (460 mg, rendimiento 39%) como un polvo amarillo claro.

Ejemplo 69

2-(3-(6-amino-2-(4-metilpiperazin-1 -il)pirimidin-4-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una disolución del compuesto 2-(3-(6-amino-2-cloropirimidin-4-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (0,436 g, 1,363 mmol) en n-BuOH (10 ml) se añadió 1-metilpiperazina (0,682 g, 6,815 mmol), y se agitó a 120°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con EtOAc:MeOH = 20:1) para obtener el compuesto del título (0,273 g, rendimiento 52%) como un polvo amarillo claro.

Ejemplo 70

N-isopropil-2-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(piridin-4-ilamino)pirimidin-2-il)fenoxi)acetamida

A una mezcla de compuesto 2-(3-(4-amino-6-(4-metilpiperazin-1 -il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (460 mg, 1,199 mmol), 4-yodopiridina (319,5 mg, 1,559 mmol), Pd2(dba)3 (109,8 mg, 0,12 mmol) y X-Phos (57 mg, 0,12 mmol) en ¹,4-dioxano anhidro (15 ml) se añadió Cs2CO3 (1,17 g, 3,3 mmol). La mezcla resultante se calentó a 120°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con 1,4-dioxano y se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró, y el residuo se lavó con EtOAc y se secó a vacío para obtener el compuesto del título (173 mg, rendimiento 31,3%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 51,17 (d, J = 6,4 Hz, ⁶H), 2,36 (s, 3H), 2,55 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 3,72 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 4,06-4,16 (m, 1H), 4,56 (s, 2H), 5,97 (s, 1H), 7,19 (dd, J = 8,0 y 2,4 Hz, 1 H), 7,39 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 7,98 (s, 1 H), 8,02 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 5,6 Hz, 1H). m/e 462 (M+H)+.

Ejemplo 71

N-isopropil-2-(3-(2-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(piridin-4-ilamino)pirimidin-4-il)fenoxi)acetamida

A una mezcla de compuesto 2-(3-(6-amino-2-(4-metilpiperazin-1 -il)pirimidin-4-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (493 mg, 1,286 mmol), 4-yodopiridina (290 mg, 1,415 mmol), Pd2(dba)3 (117,8 mg, 0,129 mmol) y X-Phos (61,4 mg, 0,129 mmol) en ¹,4-dioxano anhidro (15 ml) se añadió CS²CO³(1258 mg, 3,858 mmol). La mezcla resultante se calentó a 120°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con 1,4-dioxano y se filtró a través de una almohadilla de celite. El filtrado se concentró, y el residuo se lavó con EtOAc y se secó a vacío para obtener el compuesto del título (184 mg, rendimiento 31,0%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 5 1,17 (d, J = 6,4 Hz, ⁶H), 2,36 (s, 3H), 2,57 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,65 (b, 4H), 4,08-4,14 (m, 1H), 4,54 (s, 2H), 6,57 (s, 1H), 7,08 (dd, J = 8,0 y 2,4 Hz, 1 H), 7,39 (t, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,62 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,69-7,73 (m, 3H), 8,31 (d, J = 6,4 Hz, 1H). m/e 462 (M+H)+.

Ejemplo 72

4-((3-bromofenoxi)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 4-(hidroximetil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (1,5 g, 7,0 mmol), 3-bromofenol (1,5 g, 7,0 mmol) y PPh³(2,7 g, 10,5 mmol) se agitó en THF seco (30 ml) se agitó a 0°C en atmósfera de nitrógeno. A esta mezcla se añadió DEAD (1,8 g, 10,5 mmol) gota a gota durante un período de 5 min, y la reacción se monitorizó por TLC. Después de la desaparición completa del material de partida, el disolvente se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 9/1) para proporcionar el compuesto del título (2,4 g, bruto), que se usó directamente sin purificación adicional. m/e 372 (M+H)+.

Ejemplo 73

4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piperidin-1 -carboxitato de terc-butilo

Una disolución de 4-((3-bromofenoxi)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (2,4 g, 6,5 mmol), Pin²B²(2,5 g, 9,7 mmol), Pd(dppf)Cl²(250 mg) y acetato de potasio (1,9 g, 19,4 mmol) en 50 ml de dioxano se desgasificó y se lavó con N², calentado a 80°C durante 14 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (300 l), se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (EA:PE, 1:10) para dar el compuesto del título (600 mg, 22%) como un sólido amarillo. 1H RMN (300 MHz, CDCh) 57,38 (1 H, m), 7,27(2H, m), 6,96 (1 H, m), 3,82 (2H, d, J=6,0 Hz), 2,76 (1 H, m), 1,73 (4H, m), 1,84 (4H, m).

Ejemplo 74

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-((1 -(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)metoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-(terc-butoxicarbonil(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (642 mg, 1,44 mmol), 4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (600 mg, 1,44 mmol), ^kO^ac(564 mg, 5,76 mmol), Boc²O (604 mg, 2,88 mmol) y Pd(dppf)Cl²(70 mg) en dioxano/agua (30 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM, se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (PE/EA, 5/1) para dar el compuesto del título (300 mg, bruto) como un aceite amarillo. m/e 701 (M+H)+.

Ejemplo 75

N-(2-(3-(piperidin-4-ilmetoxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)metoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (250 mg, 0,36 mmol) se disolvió en 30 ml de HCl/Et²O (saturado). Se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con agua y se extrajo por EA. La fase acuosa se ajustó a 11 usando disolución saturada de NaHCO³. Se concentró, y el residuo se purificó adicionalmente por TLC preparativa para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (50 mg, 35%).

¹H RMN (300 MHz, CD³OD) 58,24 (2H, m), 8,04 (1 H, s), 7,90 (2H, m), 7,56 (2H, m), 7,38 (1 H, t, J =6,0 Hz), 7,04 (1H, dd, J =9,0 Hz, J =3,0 Hz), 6,65 (1H, d, J =6,0 Hz), 3,95 (2H, d, J =6,0 Hz), 3,42 (2H, d, J =3,0 Hz), 2,15 (2H, t, J =3,0 Hz), 2,12 (1H, m), 2,07 (2H, c, J =3,0 Hz), 1,69 (2H, c, J =3,0 Hz); m/e 401 (M+H)+.

Ejemplo 76

4-(3-bromofenoxi)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 4-hidroxipiperidin-1-carboxilato de terc-butilo (1,4 g, 7,0 mmol), 3-bromofenol (1,2 g, 7,0 mmol) y PPh3 (2,7 g, 10,4 mmol) se agitó en THF seco (35 ml) a 0°C en atmósfera de nitrógeno. A esta mezcla se añadió gota a gota DEAD (1,8 g, 10,4 mmol) durante un período de 5 min, y la reacción se monitorizó por TLC. Después de la desaparición completa del material de partida, el disolvente se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 9/1) para proporcionar el compuesto del título (1,3 g, 52%). m/e 357 (M+H)+.

Ejemplo 77

4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 4-(3-bromofenoxi)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (1,3 g, 3,5 mmol), Pin²B²(1,4 g, 5,3 mmol), Pd(dppf)Cl²(135 mg) y acetato de potasio (1,0 g, 10,6 mmol) en 20 ml de dioxano se desgasificó, se lavó con N², y se calentó a 80°C durante 14 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (200 ml), se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (EA:PE, 1:10) para dar el compuesto del título (500 mg, 36%) como un sólido amarillo. ¹H RMN (300 MHz, CDCb) 57,38 (1 H, m), 7,32 (1 H, m), 7,27(1 H, m), 7,25 (1H, m), 7,38 (1 H, m), 4,51 (1 H, m), 3,69 (2H, m), 3,36 (2H, m), 1,88 (2H, m), 1,74 (2H, m), 1,34 (2H, m).

Ejemplo 78

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-iloxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-(terc-butoxicarbonil(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (221 mg, 0,5 mmol), 4-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo (200 mg, 0,5 mmol), KOAc (196 mg, 2,0 mmol), BOC²O (210 mg, 1,0 mmol) y Pd(dppf)Cl²(40 mg) en dioxano/agua (30 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM, se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (PE/EA, 5/1) para dar el compuesto del título (180 mg, bruto) como un aceite amarillo. m/e 687(M+H)+.

Ejemplo 79

N-(2-(3-(piperidin-4-iloxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-iloxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (170 mg, 0,25 mmol) se disolvió en 30 ml de HCl/Et²O (saturado). Se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con agua y se extrajo por EA. La fase de agua se ajustó a 11 usando disolución saturada de NaHCO³. Se concentró, y el residuo se purificó adicionalmente por TLC preparativa para proporcionar el compuesto del título (20 mg, 21%) como un sólido amarillo. ¹H RMN (300 MHz, CD³OD) 58,26 (1 H, d, J =6,0 Hz), 8,18 (1H, s), 8,04 (1H, s), 7,96 (1H, s), 7,93 (1H, t, J =3,0 Hz), 7,56 (2H, m), 7,42 (1 H, t, J =9,0 Hz), 7,14 (1 H, dd, J =9,0 Hz, J =3,0 Hz), 6,87 (1H, d, J =6,0 Hz), 5,80 (1H, m), 3,38 (2H, m), 3,30 (2H, m), 2,16 (2H, m), 2,11 (2H, m); m/e 387 (M+H)+.

Ejemplo 80

2-(3-Bromo-4-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una disolución de 2-cloro-N-ciclopropilacetamida (1,7 g, 13,1 mmol), 3-bromo-4-fluorofenol (2,5 g, 13,1 mmol) y K²CO³(2,7 g, 19,6 mmol) en 20 ml de acetona se calentó a 60°C durante 16 h. La mezcla se filtró y se concentró para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 3/1) para dar el compuesto del título (2,5 g, 66%) como un sólido amarillo. m/e 289 (M+H)+.

Ejemplo 81

N-ciclopropil-2-(4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida

Una disolución de 2-(3-bromo-4-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida (2,5 g, 8,7 mmol), Pin²B²(3,3 g, 13,0 mmol), Pd(dppf)Cl²(330 mg) y acetato de potasio (2,6 g, 26,0 mmol) en 35 ml de dioxano se desgasificó y se lavó con N², calentado a 80°C durante 14 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (200 ml), se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (EA:PE, 1:5) para dar el compuesto del título (600 mg, 21%) como un sólido amarillo. m/e 336 (M+H)+.

Ejemplo 82

2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)-4-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una mezcla de N-(2-cloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (150 mg, 0,61 mmol), N-ciclopropil-2-(4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (205 mg, 0,61 mmol), KOAc (240 mg, 2,45 mmol) y Pd(dppf)Cl²(60 mg) en dioxano/agua (20 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM, se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (DCM/MeOH, 20/1), seguido de una purificación adicional por TLC preparativa para dar el compuesto del título (35 mg, 14%) como un sólido amarillo. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 58,26 (1H, d, J = 6,0 Hz), 8,17 (1H, s), 8,03 (1H, s), 7,52 (3H, m), 7,13 (2H, m), 6,70 (1H, d, J=6,0 Hz), 4,53 (2H, s), 2,72 (1H, t, J =3,0 Hz), 0,75 (2H, t, J =3,0 Hz), 0,57 (2H, t, J =3,0 Hz); m/e 419 (M+H)+.

Ejemplo 83

2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)-5-metilpirimidin-2-il)-4-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una mezcla de N-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina (209 mg, 0,80 mmol), N-ciclopropil-2-(4-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (270 mg, 0,80 mmol), KOAc (316 mg, 3,22 mmol) y Pd(dppf)Cl²(60 mg) en dioxano/agua (20 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM, se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (DCM/MeOH, 20/1), seguido de una purificación adicional por TLC preparativa para dar el compuesto del título (35 mg, 10%) como un sólido amarillo. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 58,16 (1H, s), 8,12 (1H, s), 8,02 (1H, s), 7,70 (1H, dd, J =9,0 Hz, J=3,0 Hz), 7,54 (1H, d, J=9,0 Hz), 7,44 (1H, m), 7,10 (2H, m), 4,46 (2H, s), 2,69 (1 H, m), 2,31 (3H, s), 0,73 (2H, t, J =3,0 Hz), 0,55 (2H, t, J=3,0 Hz); m/e 433 (M+H)+.

Ejemplo 84

2-(3-Bromo-5-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una disolución de 2-cloro-N-ciclopropilacetamida (2,8 g, 20,9 mmol), 3-bromo-5-fluorofenol (4,0 g, 20,9 mmol) y K²CO³(4,3 g, 31,4 mmol) en 40 ml de acetona se calentó a 60°C durante 16 h. La mezcla se filtró y se concentró para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 3/1) para dar el compuesto del título (4,3 g, 71 %) como un sólido amarillo. m/e 288 (M+H)+.

Ejemplo 85

N-ciclopropil-2-(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida

Una disolución de 2-(3-bromo-5-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida (4,3 g, 14,9 mmol), Pin²B²(5,7 g, 22,4 mmol), Pd(dppf)Cl²(600 mg) y acetato de potasio (4,4 g, 44,8 mmol) en 50 ml de dioxano se desgasificó y se lavó con N², calentado a 80°C durante 14 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (200 ml), se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (EA:PE, 1:5) para dar el compuesto del título (3,2 g, 64%) como un sólido amarillo. m/e 336 (M+H)+.

Ejemplo 86

2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)-5-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una mezcla de N-(2-cloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (340 mg, 1,4 mmol), N-ciclopropil-2-(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (650 mg, 1,9 mmol), CsF (835 mg, 5,5 mmol) y Pd(dppf)Cl²(200 mg) en dioxano/agua (20 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM, se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (DCM/MeOH, 20/1) para dar el compuesto del título (80 mg, 14%) como un sólido amarillo. 1H RMN (300 MHz, CD³OD) 58,26 (1H, d, J=6,0 Hz), 8,08 (1 H, s), 8,06 (1 H, s), 7,78(1 H, s), 7,65 (1H, dd, J =9,0 Hz, J =3,0 Hz), 7,58 (2H, s), 6,89(1 H, dt, J=9,0 Hz, J=3,0 Hz), 6,66 (1H, d, J=6,0 Hz), 4,58 (2H, s), 2,74 (1H, m), 0,76 (2H, t, J =3,0 Hz), 0,58 (2H, t, J =3,0 Hz); m/e 419 (M+H)+.

Ejemplo 87

2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)-5-metilpirimidin-2-il)-5-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una mezcla de N-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (360 mg, 1,4 mmol), N-ciclopropil-2-(3-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (650 mg, 1,9 mmol), CsF (835 mg, 5,5 mmol) y Pd(dppf)Cl²(200 mg) en dioxano/agua (20 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM, se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (DCM/MeOH, 20/1) para dar el compuesto del título (60 mg, 10%) como un sólido amarillo. ¹H RMN (300 MHz, CD³OD) 58,14 (1H, s), 8,04 (2H, m), 7,70 (2H, m), 7,57 (2H, m), 6,81 (1H, dt, J =9,0 Hz, J =3,0 Hz), 4,51 (2H, s), 2,72 (1 H, m), 2,29 (3H, s), 0,72 (2H, t, J =3,0 Hz), 0,57 (2H, t, J =3,0 Hz); m/e 433 (M+H)+.

Ejemplo 88

3-((3-bromofenoxi)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 3-(hidroximetil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (935 mg, 4,35 mmol), 3-bromofenol (753 mg, 4,35 mmol) y PPh³(1,71 mg, 6,53 mmol) se agitó en THF seco (30 ml) a 0°C en atmósfera de nitrógeno. A esta mezcla se añadió gota a gota DEAD (1,14 g, 6,53 mmol) durante un período de 5 min, y la reacción se monitorizó por TLC. Después de la desaparición completa del material de partida, la mezcla se vertió en EA (50 ml), se lavó con salmuera (3 x 20 ml), se secó sobre Na²SO⁴, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó mediante cromatografía en columna (PE/EA, 10/1) para obtener el compuesto del título (0,8 g, bruto). m/e 370 (M+H)+.

Ejemplo 89

3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piperidin-1 -carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 3-((3-bromofenoxi)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (0,7 g, 1,9 mmol), Pin²B²(0,72 g, 2,8 mmol), Pd(dppf)Cl²(154 mg) y acetato de potasio (556 mg, 5,67 mmol) en dioxano (50 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 80°C durante 14 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc ^{( 100}ml), se lavó con salmuera (3 x 30 ml), se secó sobre Na²SO⁴, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (EA:PE, 1:5) para dar el compuesto del título (0,9 g, bruto). m/e 418 (M+H)+.

Ejemplo 90

5-(terc-butoxicarbonilo(2-(3-((1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-ilo)metoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-(terc-butoxicarbonil(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (240 mg, 0,54 mmol), 3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piperidin-1-carboxilato de terc-butilo (270 mg, 0,65 mmol), CsF (788 mg, 5,4 mmol), Boc²O (353 mg, 1,62 mmol) y Pd(dppf)Cl²(88 mg) en dioxano/agua (20 ml/2 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C durante 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (100 ml), se lavó con salmuera (30 ml x 3), se secó sobre Na²SO⁴, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (DCM:MeOH, 50:1) para dar el compuesto del título (0,1 g) como un aceite amarillo. m/e 701 (M+H)+.

Ejemplo 91

N-(2-(3-(piperidin-3-ilmetoxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-((1 -(terc-butoxicarbonil)piperidin-3-il)metoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,14 mmol) se disolvió en HFIP (3 ml), la disolución se agitó a 150°C durante 1 h con M.W. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se purificó por pre-TLC (DCM:MeOH, 4:1) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (40 mg, 70%). ¹H RMN (400 MHz, CD³OD) 58,26 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,21 (s, 1 H), 8,07 (s, 1H), 7,91-7,88 (m, 2H), 7,61-7,52 (m, 2H), 7,44 (t, J =8,0 Hz, 1H), 7,14-7,12 (m, 1H), 6,74 (d, J =6,4 Hz, 1H), 4,11 -4,07 (m, 1 H), 3,97-3,93 (m, 1 H), 3,58-3,54 (m, 1 H), 3,41 -3,31 (m, 1 H), 3,00-2,89 (m, 2H), 2,36-2,27 (m, 1 H), 2,04-1,97 (m, 1 H), 1,85-1,78 (m, 1H), 1,56-1,45 (m, 1H); m/e 401 (M+H)+.

Ejemplo 92

3-(3-bromofenoxi)pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 3-hidroxipirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo (1,0 g, 5,8 mmol), 3-bromofenol (1,08 g, 5,8 mmol) y PPh3 (2,28 g, 8,7 mmol) en THF seco (35 ml) se agitó a 0°C en atmósfera de nitrógeno. A esta mezcla se añadió DEAD (1,51 g, 8,7 mmol) gota a gota durante un período de 5 min, y la reacción se monitorizó por TLC. Después de la desaparición completa del material de partida, la mezcla se vertió en EA (50 ml), se lavó con salmuera (20 ml x 3), se secó sobre Na2SO4, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 10/1) para producir el compuesto del título (0,8 g, bruto). m/e 342 (M+H)+.

Ejemplo 93

3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)pirrlidin-1 -carboxilato de terc-butilo

Una disolución de 3-(3-bromofenoxi)pirrolidin-1 -carboxilato de terc-butilo (0,8 g, 2,3 mmol), Pin²B²(1,91 g, 7,5 mmol), Pd(dppf)Cl²(408 mg) y acetato de potasio (1,47 g, 15 mmol) en dioxano (50 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 80°C durante 14 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (100 ml), se lavó con salmuera (3 x 30 ml), se secó sobre Na²SO⁴, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (EA:PE, 1:5) para dar el compuesto del título como un aceite amarillo (450 mg, bruto). m/e 390 (M+H)+.

Ejemplo 94

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-iloxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-(terc-butoxicarbonil(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (466 mg, 1,05 mmol), 3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)pirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (488 mg, 1,25 mmol), CsF (1,53 g, 10,5 mmol), Boc²O (687 mg, 3,15 mmol) y Pd(dppf)Cl²(172 mg) en dioxano/agua (30 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C durante 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (100 ml), se lavó con salmuera (3 x 30 ml), se secó sobre Na²SO⁴, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó mediante cromatografía en columna (PE/EA, 5/1) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (200 mg, 28,5%). m/e 673 (M+H)+.

Ejemplo 95

N-(2-(3-(pirrolidin-3-iloxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-(1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidin-3-iloxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (135 mg, 0,25 mmol) se disolvió en 2 ml de HCl conc. Se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Se añadieron 10 ml de agua, y entonces el pH 9-10 se ajustó con NaOH 1N. Se extrajo con EA (30 ml x 3), se secó sobre Na²SO⁴, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó mediante pre-TLC (DCM/MeOH, 5/1) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (45 mg, 62,5%). ¹H RMN (400 MHz, CD³OD) 5 8,27 (d, J =6,0 Hz, 1 H), 8,17 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,98 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,90-7,86 (m, 1H), 7,59-7,53 (m, 2H), 7,44 (t, J =8,0 Hz, 1 H), 7,11 (dd, J =2,0 Hz, J =2,4 Hz, 1 H), 6,67 (d, J =6,0 Hz, 1H), 5,28-5,26 (m, 1 H), 3,62-3,31 (m, 4H), 2,40-2,25 (m, 2H); m/e 373 (M+H)+.

Ejemplo 96

2-(5-Bromo-2-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una disolución de 2-cloro-N-ciclopropilacetamida (1,0 g, 7,5 mmol), 5-bromo-2-fluorofenol (1,44 g, 7,5 mmol) y K²CO³(1,55 g, 11,25 mmol) en 30 ml de acetona se calentó a 60°C durante 16 h. La mezcla se filtró y se concentró para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 2/1) para dar el título como un sólido amarillo (^{1 ,2}g, 55,3%). m/e 288 (M+H)+.

Ejemplo 97

N-ciclopropil-2-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida

Una disolución de 2-(5-bromo-2-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida (0,83 g, 2,88 mmol), Pin²B²(1,1 g, 4,33 mmol), Pd(dppf)Cl²(120 mg) y acetato de potasio (0,85 g, 8,64 mmol) en 35 ml de dioxano se desgasificó y se lavó con N², calentado a 80°C durante 14 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (100 ml), se lavó con salmuera (3 x 30 ml), se secó sobre Na2SO4, y se filtró. El filtrado se evaporó a presión reducida, y el aceite resultante se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 2/1) para dar el compuesto del título como un aceite (600 mg, 21%). m/e 336 (M+H)+.

Ejemplo 98

2-(5-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)-2-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una mezcla de N-(2-cloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (147 mg, 0,6 mmol), N-ciclopropil-2-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (300 mg, 0,89 mmol), KOAc (235 mg, 2,4 mmol) y Pd(dppf)Cl²(70 mg) en dioxano/agua (20 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C durante 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM (30 ml) y se filtró. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía en columna (DCM/MeOH, 10/1) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (35 mg, 14%).

1H RMN (400 MHz, DMSO) 513,01 (s, 1 H), 9,65 (s, 1 H), 8,33 (d, J=5,6 Hz, 1H), 8,21-8,20 (m, 1H), 8,09-7,96 (m, 3H), 7,62-7,55 (m, 2H), 7,39-7,34 (m, 1H), ^{6 , 6 8}(d, J =6,0 Hz, 1H), 4,64 (s, 2H), 2,70-2,65 (m, 1H), 0,63-0,59 (m, 2H), 0,48-0,43(m, 2H); m/e 419 (M+H)+.

Ejemplo 99

2-(5-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)-5-metilpirimidin-2-il)-2-fluorofenoxi)-N-ciclopropilacetamida

Una mezcla de N-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (100 mg, 0,38 mmol), N-ciclopropil-2-(2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (130 mg, 0,38 mmol), KOAc (151 mg, 1,55 mmol) y Pd(dppf)Cl²(50 mg) en dioxano/agua (20 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C durante 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM (30 ml) y se filtró. El filtrado se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH, 10/1) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (10 mg, 2,9%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 513,01 (s, 1H), 8,62 (s, 1 H), 8,21 (s, 1H), 8,17 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 8,11 -8,09 (m, 2H), 7,97-7,94 (m, 1 H),7,85-7,82 (m, 1H), 7,71 -7,68 (m, 1 H), 7,59-7,56 (m, 1H), 7,31 -7,26 (m, 1H), 4,58 (s, 2H), 2,68-2,63 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 0,66-0,58 (m, 2H), 0,47-0,43(m, 2H); m/e 433 (M+H)+.

Ejemplo 100

N-(6-cloro-2-(pirrolidin-1 -il)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una mezcla de N-(2,6-dicloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (0,88 g, 3,17 mol), pirrolidina (225 mg, 3,17 mmol) y DIPEA (818 mg, 6,34 mmol) en BuOH (30 ml) se agitó a 120°C durante 12 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se purificó por pre-HPLC para dar el compuesto del título como un sólido blanco (0,8 g, 80%). m/e 315 (M+H)+.

Ejemplo 101

5-(6-(3-(2-(ciclopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-2-(pirrolidin-1 -il)pirimidin-4-ilamino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de tercbutilo

Una mezcla de N-(6-cloro-2-(pirrolidin-1 -il)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina (300 mg, 0,95 mmol), N-ciclopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (452 mg, 1,43 mmol), CsF (1,38 g, 1,55 mmol) y Pd(dppf)Cl²(150 mg) en dioxano/agua (30 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C durante 16 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con dCm (50 ml) y se filtró. El filtrado se concentró y se purificó mediante cromatografía en columna (DCM/MeOH, 10/1) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (90 mg, 16%). m/e 570 (M+H)+.

Ejemplo 102

2-(3-(6-(1 H-indazol-5-ilamino)-2-(pirrolidin-1-il)pirimidin-4-il)fenoxi)-N-ciclopropilacetamida

5-(6-(3-(2-(ciclopropilamino)-2-oxoetoxi)fenil)-2-(pirrolidin-1 -il)pirimidin-4-ilamino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de tercbutilo (90 mg, 0,16 mmol) se disolvió en HFIP (2 ml), la disolución se agitó a 150°C durante 1 h con M.W. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se purificó por pre-TLC (DCM:MeOH, 4:1) para dar el compuesto del título como un sólido amarillo (35 mg, 46,7%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) 512,92 (s, 1H), 9,27 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,19 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,99 (s, 1 H), 7,60 (s, 1H), 7,56-7,47 (m, 3H), 7,39 (t, J =8,0 Hz, 1 H), 7,02 (dd, J =2,0 Hz, J =2,0 Hz, 1 H), 6,47 (s, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,63-3,60 (m, 4H), 2,73-2,66 (m, 1 H), 1,95-1,98 (m, 4H), 0,66-0,61 (m, 2H), 0,51 -0,47 (m, 2H); m/e 470 (M+H)+.

Ejemplo 103

3-(3-bromofenil)-N-ciclopropilpropanamida

Se añadió ácido 3-(3-bromofenil)propanoico (3,0 g, 13,1 mmol) a una disolución de SOCI2 (10 ml), y se agitó durante 2 horas a 70°C. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2Cl2 (20 ml), después se añadió gota a gota a la mezcla de ciclopropanamina (1,17 g, 19,6 mmol) y trietilamina (4,0 g, 39,3 mmol) a 0°C, entonces la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se inactivó con HCl 1N, y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó, y se concentró hasta obtener un residuo. El residuo se purificó por cromatografía (PE/EA: 1/1 a 1/2) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (2,8 g, 79%). 1H RMN (400 MHz, CDCh) 57,36 (m, 2H), 7,15 (m, 2H), 5,53 (s, 1 H), 2,94 (t, 2H), 2,68 (s, 1 H), 2,41 (t, 2H), 0,77(m, 2H), 0,44 (m, 2H). m/e 268 (M+H)+.

Ejemplo 104

N-ciclopropil-3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)propanamida

Se añadió PdCl²(dppf) (420 mg, 0,5 mmol) a la mezcla de 3-(3-bromofenil)-N-ciclopropilpropanamida (2,8 g, 10,3 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-octametil-2,2’-bi(1,3,2-dioxaborolano) (3,9 g, 15,5 mmol) y ^kO^ac(2,5 g, 25,7 mmol) en dioxano (80 ml). La mezcla se agitó durante la noche a 100°C bajo nitrógeno. Después, la mezcla de reacción se concentró a vacío, y el residuo se purificó por cromatografía (PE/EA: 5/1 a 1/1) para dar el compuesto del título como un sólido blanquecino (3,0 g, 92%). ¹H RMN (300 MHz, CDCh) 57,60 - 7,67 (m, 2H), 7,27 - 7,33 (m, 2H), 5,47 (s, 1 H), 2,92 - 2,97 (m, 2H), 2,41 (t, 2H), 2,04 (s, 1H), 1,34 (s, 12H), 0,70 - 0,72(m, 2H), 0,38- 0,40 (m, 2H); m/e 316 (M+H)+.

Ejemplo 105

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-(3-(ciclopropilamino)-3-oxopropil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Se añadió PdCl²(dppf) (165 mg, 0,21 mmol) a la mezcla de N-ciclopropil-3-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)propanamida (380 mg, 1,2 mmol), Boc2O (650 mg, 3,0 mmol), CsF (600 mg, 4,0 mmol) y 5-(tercbutoxicarbonil(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (446 mg, 1,0 mmol) en dioxano/H²O (30 ml, 10/1) bajo caudal de N². La mezcla se agitó durante 24 h a 100°C bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se extrajo con EA (60 ml) y se lavó con salmuera, se secó, se concentró a vacío, y el residuo se purificó por cromatografía (PE/EA: 5/1 a 1/5) para dar el compuesto del título (240 mg) como un aceite amarillo. m/e 599 (M+H)+.

Ejemplo 106

3-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)fenil)-N-ciclopropilpropanamida

5-(tert-butoxicarbonil(2-(3-(3-(ciclopropilamino)-3-oxopropil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de tercbutilo (220 mg, 0,367 mmol) se añadió a una mezcla de HCl saturado en éter etílico (30 ml). La mezcla se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Después, la mezcla se filtró, y el sólido amarillo se añadió a HCl (5 ml), después se agitó durante 10 minutos y se diluyó con H2O (50 ml), y se filtró. Los cristales blanquecinos obtenidos como sal de hidrocloruro se añadieron a NaHCO3 saturado (10 ml), y se agitó durante 2 h. La mezcla se filtró, y el sólido se lavó con H2O (10 ml), se secó para dar el compuesto del título (50 mg, 34%) como un sólido blanquecino. 1H RMN (300 MHz, DMSO) 513,00 (s, 1H) , 9,62(s, 1H) , 8,34 -8,32 (m, 3H) , 8,22 (m, 1H) , 8,06 (s, 1 H), 7,85 (s, 1H), 7,55 (m, 1 H), 7,40 (m, 3H), 6,66 (d, 1H), 2,90(m, 2H), 2,60 (m, 1H), 2,40 (m, 2H), 0,57 (m, 2H), 0,33 (m, 2H). m/e 399 (M+H)+.

Ejemplo 107

2-(3-bromofeniltio)-N-ciclopropilacetamida

Una disolución de 2-cloro-N-ciclopropilacetamida (1,33 g, 10 mmol), 3-bromobencenotiol (1,6 g, 8,5 mmol) y K²CO³(4,8 g, 35 mmol) en 30 ml de acetona se calentó a 70°C durante la noche. La mezcla se filtró y se concentró para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna (PE/EA, 1/1) para dar el compuesto del título (2,4 g, 96%) como un sólido blanco. 1H RMN 5 (300 MHz, CDCh) 7,39 (1H, m), 7,31 (1H, m), 7,14 (2H, m), 6,71 (1H, s), 3,58 (2H, s), 2,64-2,77 (1H, m), 0,73-0,84 (2H, m), 0,41 (2H, m); m/e 286 (M+H)+.

Ejemplo 108

N-ciclopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)feniltio)acetamida

Una disolución de 2-(3-bromofeniltio)-N-ciclopropilacetamida (2,43 g, 9,1 mmol), Pin²B²(3,5 g, 13,7 mmol), Pd(dppf)Cl²(730 mg) y acetato de potasio (2,67 g, 27,3 mmol) en 30 ml de dioxano se desgasificó y se lavó con N², calentado a 95°C durante 12 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con EtOAc (200 ml), se filtró, se concentró y se purificó por cromatografía (EA:PE, 1:1) para dar el compuesto del título (2,4 g, 82%) como un aceite amarillo. m/e 286 (M+h )+.

Ejemplo 109

5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-(2-(ciclopropilamino)-2-oxoetiltio)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de N-ciclopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)feniltio)acetamida (380 mg, 1,1 mmol), N-(2-cloropirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (246 mg, 1,0 mmol), CsF (730 mg, 5,0 mmol), Boc²O (650 mg, 3,0 mmol) y Pd(dppf)Cl²(1700 mg) en dioxano/agua (27 ml/3 ml) se desgasificó y se lavó con N², calentado a 100°C 24 h. La mezcla se concentró para dar un residuo, que se diluyó con DCM, se filtró, se concentró, y se purificó por cromatografía (DCM/MeOH, 20/1) para dar el compuesto del título bruto (200 mg) como un sólido amarillo. m/e 617 (M+H)+.

Ejemplo 110

2-(3-(4-(1 H-indazol-5-ilamino)pirimidin-2-il)feniltio)-N-ciclopropilacetamida

Una mezcla de 5-(terc-butoxicarbonil(2-(3-(2-(ciclopropilamino)-2-oxoetiltio)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (209 mg, 0,80 mmol) en HCl conc. (3 ml) se agitó durante 10 minutos, seguido de la adición de hielo. La mezcla de reacción se ajustó a pH 10 con disolución de NaHCO3, y se extrajo con CH²Cl²/MeOH (1/1,20 ml). Se filtró, y el filtrado se concentró para dar un residuo, que se purificó por cromatografía (DCM/MeOH, 20/1), seguido de una purificación adicional por pre-TLC para dar el compuesto del título (25 mg, 18%) como un sólido amarillo. 1H RMN (300 MHz, CD³OD) 58,36 (1H, m), 8,24 (1H, d, J=6 Hz), 8,14 (2H, m), 8,05 (1H, s), 7,56 (2H, s), 7,49 (1 H, m), 7,41 (1H, d, J=6Hz), 6,63 (1 H, d, J=6Hz), 3,60 (2H, s), 2,58 (1H, m), 0,61 (2H, m), 0,36 (2H, m); m/e 417 (M+H)+.

Ejemplo 111

2-(3-(4-aminopirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

Una mezcla de 2-cloropirimidin-4-amina (0,50 g, 3,8 mmol), W-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (1,46 g, 4,6 mmol), CsF (1,75 g, 11,4 mmol), y Pd(PPh³)⁴(0,2 g, 0,2 mmol) en una mezcla de dioxano (8 ml) y H²O (2 ml) se agitó a 100°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró a presión reducida para dar un residuo, que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con PE:EtOAc = 1:1) para proporcionar el compuesto del título (400 mg, rendimiento 36%) como aceite incoloro.

Ejemplo 112

N-isopropil-2-(3-(4-(piridin-4-ilamino)pirimidin-2-il)fenoxi)acetamida

Una mezcla del compuesto 2-(3-(4-aminopirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (300 mg, 1,1 mmol), 4-bromopiridina (258 mg, 1,3 mmol), Cs²CO³(1026 mg, 3,3 mmol), Pd²(dba)³(96 mg, 0,1 mmol) y X-Phos (51 mg, 0,1 mmol) en dioxano anhidro (30 ml) se agitó a 120°C durante la noche bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se filtró, el filtrado se concentró, el residuo se lavó con EtOAc, y después se filtró para proporcionar el compuesto del título (200 mg, rendimiento 52%) como un sólido blanco. ¹H RMN (400 MHz, CD³OD) 5 10,09 (s, 1H), 8,47-7,92 (m, 8H), 7,45 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,12-6,82 (m, 2H), 4,52 (s, 2H), 3,99-3,92 (m, 1H), 1,06 (d, J = 6,8 Hz, 6H); míe 364 (M+H)+.

Ejemplo 113

2-cloro-4-(4-(piridin-4-il)piperidin-1-il)pirimidina

2,4-Dicloropirimida (745 mg, 5 mmol), 1,2,3,4,5,6-hexahidro-[4,4’]bipiridinilo (811 mg, 5 mmol) y TEA (758 mg, 7,5 mmol) en EtOH (15 ml) se agitó a reflujo durante la noche. Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyendo con éter de petróleo:acetato de etilo = 5:1 - 1:1) para dar el compuesto del título (500 mg, rendimiento 36,4%) como un sólido blanco.

Ejemplo 114

N-isopropil-2-(3-(4-(4-(piridin-4-il)piperidin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)acetamida

Una mezcla de 2-cloro-4-(4-(piridin-4-il)piperidin-1-il)pirimidina (500 mg, 1,82 mmol), Pd(dppf)²Cl²(50 mg), Na²CO³(579 mg, 5,46 mmol) y N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (871 mg, 2,73 mmol) en dioxanoíagua (10:1, 10 ml) se agitó a 100°C durante la noche. Después de eliminar el disolvente, el residuo se purificó mediante P-HPLC para dar el compuesto del título (300 mg, rendimiento 35,2%) como un sólido. ¹H RMN (400 MHz, CD³OD) 58,80 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 8,23 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 7,83-7,81 (m, 2H), 7,59 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,37-7,20 (m, 2H), 5,54 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 4,62 (s, 2H), 4,52 (d, J = 14 Hz, 1H), 4,12-4,06 (m, 1H), 3,61 -3,47 (m, 4H), 2,26-1,89 (m, 4H), 1,17 (d, J = 7,6 Hz, 6H); míe 432 (M+H)+.

Ejemplo 115

4,6-dicloro-2-yodopirimidina

A una disolución del compuesto 4,6-dicloropirimidin-2-amina (39 g, 237,82 mmol) en CH3CN (300 ml) se añadió CH²I²O ^{0 0 0}ml), después se añadió t-BuONO (129,3 g, 1,25 mol), y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (30 g, rendimiento 46%) como un sólido amarillo.

Ejemplo 116

2-(3-(4,6-dicloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una mezcla del compuesto 4,6-dicloro-2-yodopirimidina (13,92 g, 50,64 mmol), N-isopropil-2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)acetamida (18 g, 56,39 mmol), Na2CO3 (13,88 g, 130,96) en DME (150 ml) y agua (50 ml) se añadió Pd(PPh3)4 (5,04 g, 4,36 mmol), y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche bajo N². Después, la mezcla de reacción se vertió en agua (100 ml), se extrajo con EtOAc (150 ml x 2), y la fase orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO4, y se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (9,05 g, rendimiento 52%) como un sólido blanco.

Ejemplo 117

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-cloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una disolución del compuesto 2-(3-(4,6-dicloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (5,7 g, 16,75 mmol) en iPrOH (110 ml), se añadieron DIPEA (6,5 g, 48,82 mmol) y 1 H-indazol-5-amina (2,23 g, 17,25 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (3,22 g, rendimiento 44%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 13,05 (s, 1H), 9,90 (s, H), 8,09 (b, 2H), 7,95-7,89 (m, 3H), 7,59-7,41 (m, 3H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,66 (s, 1 H), 4,51 (s, 2H), 4,00-3,94 (m, 1 H), 1,08 (d, J = 6,4 Hz, 6H); m/e 437 (M+H)+.

Ejemplo 118

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una disolución agitada de 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-cloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (300 mg, 0,687 mmol) en iprOH (20 ml), se añadieron Et3N (3 ml) y piperazina (592 mg, 6,87 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante la noche a 110°C. Después, la mezcla de reacción se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante prep-HPLC para proporcionar el compuesto del título (114 mg, rendimiento 34%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 5 12,91 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,94-7,89 (m, 3H), 7,51-7,35 (m, 3H), 7,04 (dd, J = 8,0 y 2,0 Hz, 1H), 5,82 (s, 1H), 4,50 (s, 2H), 3,98-3,92 (m, 1 H), 3,48 (b, 4H), 2,76 (b, 4H), 1,07 (d, J = 6,8 Hz, 6H); m/e 487 (M+H)+.

Ejemplo 119

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-morfolinopirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

El compuesto del título se sintetizó usando el mismo procedimiento que para 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (ejemplo 118) (112 mg, rendimiento 34%). ¹H Rm N (400 MHz, DMSO-d⁶) ó 12,93 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,03 (s, 1 H), 7,95-7,91 (m, 3H), 7,49-7,38 (m, 3H), 7,05 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,84 (s, 1 H), 4,50 (s, 2H), 3,94 (b, 1H), 3,69 (s, 4H), 3,52 (s, 4H), 1,06 (d, J = 6,8 Hz, 6H); m/e 488 (M+H)+.

Ejemplo 120

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-(4-metil-1,4-diazepan-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

El compuesto del título se sintetizó usando el mismo procedimiento que para 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (ejemplo 118) (100 mg, rendimiento 65%). ¹H R^mN (400 MHz, DMSO-d⁶) 512,94 (s, 1H), 9,00 (s, 1 H), 8,13 (s, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 7,97-7,91 (m, 3H), 7,53-7,05 (m, 4H), 5,75 (s, 1H), 4,53 (s, 2H), 4,02-3,62 (m, 5H), 2,64 (b, 2H), 2,50 (b, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,92 (b, 2H), 1,09 (d, J = 6,8 Hz, 6H); m/e 515 (M+H)+.

Ejemplo 121

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-(1,4-diazepan-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

El compuesto del título se sintetizó usando el mismo procedimiento que para 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (ejemplo 118) (110 mg, rendimiento 32%). 1H R^mN (400 MHz, DMSO-de) 512,90 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,11 (s, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 7,92-7,03 (m, 5H), 5,74 (s, 1 H), 4,50 (s, 2H), 3,96-3,68 (m, 3H), 2,85 (b, 2H), 2,66 (b, 2H), 2,31 (b, 2H), 1,77 (b, 2H), 1,07 (d, J = 6,8 Hz, 6H); m/e 501 (M+H)+. Ejemplo 122

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-(dimetilamino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

El compuesto del título se sintetizó usando el mismo procedimiento que para 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (ejemplo 118) (101 mg, rendimiento 33%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 512,90 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,97-7,88 (m, 3H), 7,48 (s, 2H), 7,38 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,03 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 5,73 (s, 1 H), 4,50 (s, 2H), 3,98-3,93 (m, 1 H), 3,07 (s, 6H), 1,08 (d, J = 6,8Hz, 6H); m/e 446 (M+H)+.

Ejemplo 123

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-(piperidin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

El compuesto del título se sintetizó usando el mismo procedimiento que para 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (ejemplo 118) (110 mg, rendimiento 33%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 512,91 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,09 (s, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 7,94-7,89 (m, 3H), 7,49-7,03 (m, 5H), 5,85 (s, 1H), 5,00 (s, 2H), 3,96-3,93 (m, 1 H), 3,58 (b, 4H), 1,55 (b, 6H), 1,07 (d, J = 6,8 Hz, 6H); m/e 486 (M+H)+.

Ejemplo 124

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-((2-metoxietil)(metil)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

El compuesto del título se sintetizó usando el mismo procedimiento que para 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (ejemplo 118) (110 mg, rendimiento 33%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 513,00 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,05-7,92 (m, 3H), 7,53 (s, 1H), 7,42 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,07 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,79 (s, 1H), 4,53 (s, 2H), 4,03-3,95 (m, 1 H), 2,78 (b, 2H), 3,59-3,56 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 1,10 (d, J = 6,8 Hz, 1H); m/e 490 (M+H)+.

Ejemplo 125

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-((2-(dimetilamino)etil)(metil)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

El compuesto del título se sintetizó usando el mismo procedimiento que para 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (ejemplo 118) (100 mg, rendimiento 29%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 512,91 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,09 (s, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 7,96-7,86 (m, 3H), 7,49-7,03 (m, 4H), 5,71 (s, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,00-3,92 (m, 1 H), 3,67 (b, 2H), 3,30 (b, 2H), 3,01 (s, 3H), 2,15 (s, 6H), 1,07 (d, J = 6,8 Hz, 6H); m/e 503 (M+H)+.

Ejemplo 126

2-(3-(4-cloro-6-(2-(dimetilamino)etoxi)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una disolución del compuesto 2-(3-(4,6-dicloropirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (1 g, 2,9 mmol) en tolueno (24 ml) se añadió NaOH (232 mg, 5,8 mmol) y 2-(dimetilamino)etanol (261 mg, 2,9 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 3 horas a 110°C. Después, la mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró, y se concentró a presión reducida para dar un residuo que se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluida con DCM:MeOH = 100:1) para dar el compuesto del título (550 mg, rendimiento 48%) como un sólido.

Ejemplo 127

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)-6-(2-(dimetilamino)etoxi)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida

A una disolución del compuesto 2-(3-(4-cloro-6-(2-(dimetilamino)etoxi)pirimidin-2-il)fenoxi)-N-isopropilacetamida (100 mg, 0,25 mmol) en EtOH (1 ml) se añadieron 1 H-indozal-5-amina (101,5 mg, 0,76 mmol) y TFA (0,25 ml). La mezcla resultante se calentó a 80°C durante la noche. La mezcla se concentró y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, y se purificó por Prep-TLC nuevamente para dar el compuesto del título (100 mg, rendimiento 16%) como un sólido amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, MeOD) 58,05-7,96 (m, 4H), 7,54-7,49 (m, 2H), 7,40-7,08 (m, 2H), 5,94 (s, 1H), 4,55 (s, 4H), 4,14-4,06 (m, 1H), 2,79-2,76 (m, 2H), 2,33 (s, 6H), 1,16 (d, J = 6,8 Hz, 6H); m/e 490 (M+H)+.

Ejemplo 128

morfolin-4-carboxilato de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenilo

A una mezcla de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (500 mg, 2,27 mmol), DMAP (277,3 mg) y Et³N (450,46 mg, 4,54 mmol) en DCM (10 ml) se añadió gota a gota a una disolución de cloruro de morfolin-4-carbonilo (339,5 mg, 2,27 mmol) en DCM (10 ml) a 0°C. Se añadió agua a la mezcla, y se extrajo con DCM (40 ml x 2). La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (600 mg, rendimiento 79%), que se usó directamente en la siguiente etapa.

Ejemplo 129

morfolin-4-carboxilato de 3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenilo

A una disolución agitada de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,2243 mmol) en EtÜH (3 ml) y H²O (0,3 ml) se añadieron Na²CÜ³(47,54 mg, 0,4485 mmol), (Boc)²Ü (93,29 mg, 0,4485 mmol) y morfolin-4-carboxilato de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenilo (149,44 mg, 0,4485 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se desgasificó burbujeando nitrógeno a través de la disolución, se añadió Pd(PPh³)²Cl²(15,07 mg, 0,02243 mmol), y la mezcla se calentó con radiación de microondas durante 20 minutos a 110°C. La mezcla se secó y se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM:MeOH=50:1) para dar el compuesto del título (50 mg, rendimiento 53%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 513,02 (s, 1H), 9,66 (s, 1 H), 8,33-8,18 (m, 4H), 7,55-7,51 (m, 3H), 7,25 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 3,64 (b, 6H), 3,45 (b, 2H); m/e 417 (M+H)+.

Ejemplo 130

dimetilcarbamato de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenilo

A una mezcla de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (500 mg, 2,23 mmol), DMAP (277,4 mg) y Et3N (450,46 mg, 4,46 mmol) en DCM (15 ml) se añadió gota a gota una disolución de cloruro dimetilcarbámico (238,6 mg, 2,23 mmol) en DCM (15 ml) a 0°C, y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió agua a la mezcla, y se extrajo con DCM (40 ml x 2). La fase orgánica se secó con Na2SÜ4 y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (500 mg, rendimiento 76%), que se usó directamente en la siguiente etapa.

Ejemplo 131

dimetilcarbamato de 3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenilo

A una disolución agitada de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,2243 mmol) en EtÜH (3 ml) y H²Ü (0,3 ml) se añadió Na²CÜ³(47,54 mg, 0,4485 mmol), (Boc)²Ü (93,29 mg, 0,4485 mmol) y dimetilcarbamato de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenilo (130,58 mg, 0,4485 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se desgasificó por infusión de nitrógeno a través de la disolución, se añadió Pd(PPh³)²Cl²(15,07 mg, 0,02243 mmol), y la mezcla se calentó con radiación de microondas durante 20 min a 110°C. La mezcla se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM:MeOH=50:1) para dar el compuesto del título (30 mg, rendimiento 37%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 513,02 (s, 1 H), 9,66 (s, 1 H), 8,34-8,04 (m, 5H), 7,55-7,47 (m, 3H), 7,21 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 3,07 (s, 3H), 2,94 (s, 3H); m/e 375 (M+H)+.

Ejemplo 132

3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina

A una disolución del compuesto 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (1,5 g, 6,8 mmol) en DMF (20 ml) se añadió NaH (0,82 g, 20,4 mmol) en porciones a 0°C con agitación. Después de 30 minutos, se añadió en porciones a 0°C el compuesto hidrocloruro de 3-(clorometil)piridina (1,4 g, 8,9 mmol), y la mezcla resultante se dejó calentar a 20°C y se agitó durante 16 horas. Se inactivó con agua, se extrajo con EtOAc (100 ml x 3), y los extractos se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se concentraron a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con PE:EA = 10:1 a 2:1) para dar el compuesto del título (1 g, rendimiento 50%) como un sólido blanco.

Ejemplo 133

1 H-indazol-5-il(2-(3-(piridin-3-ilmetoxi)fenil)pirimidin-4-il)carbamato de terc-butilo

Una mezcla de compuesto 3-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (1 g, 3,2 mmol), compuesto 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (670 mg, 1,5 mmol), K²CO³(414 mg, 3 mmol) y Pd(dppf)²Cl²(109 mg, 0,15 mmol) en dioxano (20 ml) y H²O (5 ml) se calentó a 90°C durante 16 horas bajo atmósfera de N². Después se concentró, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluida con DCM:MeOH = 100:1 a 20:1) para dar el compuesto del título (370 mg, rendimiento 50%) como un aceite rojo claro.

Ejemplo 134

(370 mg, 0,75 mmol) en DCM (5 ml) se añadió TFA (5 ml), y la disolución resultante se agitó a 20°C durante 3 horas. Se concentró, y el residuo se disolvió en DCM/MeOH (10:1, 100 ml), se lavó con disolución acuosa de K²CO³y salmuera, se secó sobre Na²SÜ⁴, se concentró, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluida con DCM:MeOH = 100:1 a 20:1), y se recristalizó en MeOH para producir el compuesto del título (110 mg, rendimiento 37%) como un sólido amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) ó 13,04 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 8,35 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,00-7,89 (m, 4H), 7,56-6,68 (m, ⁶H), 5,25 (s, 2H).

13,02 (s, 1 H), 9,66 (s, 1H), 8,33-8,18 (m, 4H), 7,55-7,51 (m, 3H), 7,25 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,67 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 3,64 (b, ⁶H), 3,45 (b, 2H); m/e 417 (M+H)+.

Ejemplo 135

4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina

A una disolución del compuesto 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (1,5 g, ^{6 , 8}mmol) en DMF (20 ml) se añadió NaH (0,82 g, 20,4 mmol) en porciones a 0°C con agitación. Después de 30 minutos, se añadió en porciones el compuesto 4-(clorometil)piridina (¹,4 g, 8,9 mmol) a ⁰°C, y la mezcla resultante se dejó calentar a ^{2 0}°C y se agitó durante 16 horas. Se inactivó con agua, se extrajo con EtÜAc (100 ml x 3), y los extractos se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na²SÜ⁴, se concentrarn, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluida con PE:EA = 10:1 a 2:1) para dar el compuesto del título (1 g, rendimiento 50%) como un sólido blanco.

Ejemplo 136

N-(2-(3-(piridin-4-ilmetoxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una mezcla de compuesto 4-((3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (139 mg, 0,44 mmol) ⁽⁶lotes), compuesto 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,22 mmol), Na²CÜ³(47 mg, 0,44 mmol), Boc²Ü (96 mg, 0,44 mmol) y Pd(PPh³)²Cl²(15,4 mg, 0,022 mmol) en EtÜH (2 ml) y H²Ü (0,2 ml) se calentó en un reactor de microondas a 110°C durante 20 minutos bajo atmósfera de N². Después, se enfrió, se diluyó con agua, se extrajo con DCM, los extractos se concentraron, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con DCM:MeÜH = 100:1 a 20:1), y se recristalizó en MeÜH para proporcionar el compuesto del título (110 mg, rendimiento 23%) como un sólido de color amarillo claro. ¹H RMN (400 MHz, MeÜD) 58,51 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 8,25 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,05-7,94 (m, 3H), 7,57-7,16 (m, ⁶H), 6,65 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,26 (s, 2H) ); m/e 395 (M+H)+.

Ejemplo 137

2-(3-(2-metoxietoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano

A una mezcla de 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (800 mg, 3,636 mmol) en DCM (20 ml) se añadieron KI (1,2 g, 7,273 mmol), K²CO³(1,307g 10,091 mmol) y 1-bromo-2-metoxietano (1,01 g, 7,273 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó durante la noche a 80°C. La mezcla se extrajo con DCM (30 ml x ²), y la fase orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna para dar el compuesto del título (550 mg, rendimiento 50%).

Ejemplo 138

N-(2-(3-(2-metoxietoxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una disolución agitada de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,2243 mmol) en EtOH (3 ml) y H²O (0,3 ml) se añadió Na2CO3 (47,54 mg, 0,4485 mmol), (Boc)²O (93,29 mg, 0,4485 mmol) y 2-(3-(2-metoxietoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (124,76 mg, 0,4485 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se desgasificó burbujeando nitrógeno a través de la disolución, después se añadió Pd(PPh3)2Cl2 (15,07 mg, 0,02243 mmol), y la mezcla se calentó con radiación de microondas durante 20 minutos a 110°C. La mezcla se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (DCM:MeOH=50:1) para dar el compuesto del título (40 mg, rendimiento 49%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 13,01 (s, 1H), 9,61 (s, 1 H), 8,32 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,01-7,91 (m, 3H), 7,55-7,36 (m, 3H), 7,04 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,65 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,16 (b, 2H), 3,68 (b, 2H); m/e 362 (M+H)+.

Ejemplo 139

1 H-indazol-5-il(2-(3-metoxifenil)pirimidin-4-il)carbamato de terc-butilo

A una disolución agitada de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,2243 mmol) en EtOH (3 ml) y H²O (0,3 ml) se añadieron Na2CO3 (47,54 mg, 0,4485 mmol), (Boc)²O (93,29 mg, 0,4485 mmol) y ácido (3-metoxifenil)borónico (68,17 mg, 0,4485 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se desgasificó burbujeando nitrógeno a través de la disolución, después se añadió Pd(PPh3)2Cl2 (15,07 mg, 0,02243 mmol), y la mezcla se calentó con radiación de microondas durante 20 min a 110°C. La mezcla se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el compuesto del título (80 mg, rendimiento 85%).

Ejemplo 140

N-(2-(3-metoxifenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una disolución agitada de 1 H-indazol-5-il(2-(3-metoxifenil)pirimidin-4-il)carbamato de terc-butilo (1 g, 2,39 mmol) en DCM (20 ml) se añadió TFA (10 ml) a temperatura ambiente, y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Después, la mezcla se concentró a presión reducida, y el residuo se purificó mediante prep-HPLC para dar el compuesto del título (200 mg, rendimiento 26%) como un sólido blanco. 1H R^mN (400 MHz, DMSO-d6) ó 13,05 (s, 1H), 10,02 (s, 1 H), 8,32 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,05 (s, 1 H), 7,89-7,42 (m, 3H), 7,09 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H); m/e 318 (M+H)+.

Ejemplo 141

4-(2-(3-bromofenoxi)etil)morfolina

A una disolución de 3-bromofenol (7,8 g, 45,2 mmol) en DMF (120 ml) se añadió 4-(2-cloroetil)morfolina (8,54 g, 45,2 mmol), K²CO³(414 mg, 3 mmol) y KI (7,5 mg, 45,2 mmol), y la mezcla resultante se calentó a 20°C y se agitó durante 16 horas. Se inactivó con agua, se extrajo con EtOAc (200 ml x 3), y los extractos se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se concentraron, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluida con DCM:MeOH = 100:1 a 20:1) para dar el compuesto del título (7 g, rendimiento 54%) como un líquido rojo.

Ejemplo 142

4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)etil)morfolina

Una mezcla de compuesto 4-(2-(3-bromofenoxi)etil)morfolina (1,1 g, 3,8 mmol), BIPN (1,47 mg, 5,8 mmol), KOAc (0,83 mg, 8,5 mmol) y Pd(dppf)²Cl²(0,28 mg, 0,38 mmol) en dioxano (15 ml) se calentó a 90°C durante 16 horas bajo atmósfera de N². Después, se concentró, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluida con DCM:MeOH = 100:1 a 20:1) para dar el compuesto del título (1 g, rendimiento 78%) como un aceite rojo claro.

Ejemplo 143

1 H-indazol-5-il(2-(3-(2-morfolinoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)carbamato de terc-butilo

Una mezcla de compuesto 4-(2-(3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)etil)morfolina (1 g, 3,2 mmol), compuesto 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (670 mg, 1,5 mmol), K²CO³(414 mg, 3 mmol) y Pd(dppf)²Cl²(109 mg, 0,15 mmol) en dioxano ^{( 20}ml) y H²O (5 ml) se calentó a 90°C durante 16 horas bajo atmósfera de N². Después, se concentró, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyendo con DCM:MeOH = 100:1 a 20:1) para dar el compuesto del título (380 mg, rendimiento 50%) como un aceite rojo claro.

Ejemplo 144

N-(2-(3-(2-morfolinoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una disolución del compuesto 1 H-indazol-5-il(2-(3-(2-morfolinoetoxi)fenil)pirimidin-4-il)carbamato de terc-butilo (380 mg, 0,75 mmol) en DCM (5 ml) se añadió TFA (5 ml), y la disolución resultante se agitó a 20°C durante 3 horas. Se concentró, y el residuo se disolvió en DCM/MeOH (10:1, 100 ml), se lavó con K²CO³acuoso y salmuera, se secó sobre Na2SO4, se concentró, y el residuo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluida con DCM:MeOH = 80:1 a 15:1) y se recristalizó en EtOAc y PE para proporcionar el compuesto del título (120 mg, rendimiento 39%) como un sólido amarillo claro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 513,04 (s, 1H), 9,65 (s, 1H), 8,36 (m, 3H), 8,08 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,57-7,38 (m, 3H), 7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), ^{6 , 6 8}(d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,17 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,58 (s, 4H), 2,73 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,67 (s, 4H); m/e 417 (M+H)+.

Ejemplo 145

5-((2-(3-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,22 mmol), ácido 3-acetilfenil)borónico (73,7 mg, 0,44 mmol), Na2CO3 (47,6 mg, 0,44 mmol), (Boc)²O (98 mg, 0,44 mmol), Pd(PPh3)Cl2 (16 mg, 0,022 mmol) en EtOH:H²O (3,3 ml, 10:1) se calentó con radiación de microondas durante 20 min a 110°C. Después de la reacción, se evaporó, se añadió EA y agua, la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na2SO4, se concentró y se purificó mediante gel de sílice para dar el compuesto del título (64 mg, rendimiento 67%).

Ejemplo 146

5-((2-(3-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

A una disolución agitada de 5-((2-(3-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (500 mg, 1,2 mmol), AcONH⁴(924 mg, 12 mmol) en MeOH (10 ml) se añadió NaBH³CN (91 mg, 1,44 mmol), la mezcla se agitó durante ⁶horas a reflujo. Después de la reacción, se evaporó, se diluyó con agua, y se filtró para dar el compuesto del título como un sólido blanco (300 mg, bruto).

Ejemplo 147

N-(2-(3-(1 -aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una disolución de 5-((2-(3-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (300 mg, bruto) en HCl/MeOH (20 ml) se agitó a 40°C durante ⁶h. Después de la reacción, se evaporó, entonces se añadió agua, el pH se ajustó a 9 con Na²CO³saturado, se filtró para dar el producto bruto, que se purificó por Pre-HPLC para dar el compuesto del título (100 mg) como un sólido blanco. ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 513,03 (s, 1H), 9,65 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,35 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 8,18 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 8,05 (s, 1H), 7,55-7,40 (m, 4H), 6,67 (d, J= 5,6 Hz, 1H), 4,12-4,07 (m, 1H), 2,08 (b, 2H), 1,31 (d, J = 6,4 Hz, 3H); m/e 331 (M+H)+.

Ejemplo 148

5-((2-(4-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (1,5 g, bruto), ácido (4-acetilfenil)borónico (1,12 g, ^{6 , 8}mmol), Na²CO³(721 mg, ^{6 , 8}mmol), (Boc)²O (1,48 g, ^{6 , 8}mmol), Pd(PPh³)Cl²(239 mg, 0,34 mmol) en EtOH:H²O (16,5 ml, 10:1) se calentó con radiación de microondas durante 20 min a 110°C. Después de la reacción, se evaporó, se añadió EA y agua, la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴, se concentró para dar el compuesto del título (^{2 , 6}g, bruto).

Ejemplo 149

5-((2-(4-(1 -aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

A una disolución agitada de 5-((2-(4-acetilfenil)pirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (2,6 g, 6,1 mmol), AcONH⁴(4,7 g, 61 mmol) en MeOH (60 ml) se añadió NaBHsCN (461 mg, 7,32 mmol), la mezcla se agitó durante 10 h a reflujo. Después de la reacción, el disolvente se evaporó, entonces se añadió agua, y se filtró para dar el compuesto del título (^{2 ,1}g, bruto).

Ejemplo 150

N-(2-(4-(1 -aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una disolución de 5-((2-(4-(1-aminoetil)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (2,1 g, bruto) en HCl/MeOH (60 ml) se agitó a 40°C durante ⁶h. Después de la reacción, el disolvente se evaporó, entonces se añadió agua, el pH se ajustó a 9 con Na²CO³saturado, se filtró para dar el producto bruto, que se purificó por Pre-HPLC para dar el compuesto del título (113,5 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMsO-d⁶) 5 13,02 (s, 1H), 9,58 (s, 1 H), 8,34-8,27 (m, 4H), 8,20 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,56 (s, 2H), 7,49 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,05-4,03 (m, 1H), 1,27 (d, J = 6,4 Hz, 3H); m/e 331 (M+H)+.

Ejemplo 151

2-(3-(2,2-dietoxietoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano

A una mezcla de compuesto 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (550 mg, 2,5 mmol), 2-bromo-1,1-dietoxietano (985 mg, 5 mmol), Cs²CO³(2,43 g, 7,5 mmol) en DMF (25 ml) se añadió KI (106 mg, 1 mmol), y la mezcla se agitó entonces durante la noche a 110°C. Después de la reacción, se añadió agua, después se extrajo con EA, se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴, se concentró para dar el compuesto del título (360 mg, bruto) como un aceite amarillo claro.

Ejemplo 152

5-((2-(3-(2,2-dietoxietoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 2-(3-(2,2-dietoxietoxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (100 mg, bruto), 5-((tercbutoxicarbonil)(2-cloropirimidin-4-il)amino)-1H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (70 mg, 0,15 mmol), Na²CO³(65 mg, 0,6 mmol), (Boc)²O (130 mg, 0,6 mmol), Pd(PPh³)Cl²(20 mg, 0,03 mmol) en EtOH:H²O (4,4 ml, 10:1) se calentó con radiación de microondas durante 20 min a 110°C. Después de la reacción, se evaporó, se añadió EA y agua, la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴, se concentró y se purificó por Pre-TLC para dar el compuesto del título (30 mg).

Ejemplo 153

2-(3-(4-((1 H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acetaldehído

A una disolución de 5-((2-(3-(2,2-dietoxietoxi)fenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (510 mg, 0,98 mmol) en THF (20 ml) se añadió gota a gota HCl 3 M (10 ml), y después la mezcla se agitó a reflujo durante 7 h. Después de la reacción, se evaporó, entonces se añadió agua, el pH se ajustó a 9 con Na2CO3 saturado, se filtró para dar el compuesto del título (420 mg, bruto).

Ejemplo 154

N-(2-(3-(2-(isopropilamino)etoxi)fenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una disolución agitada de 2-(3-(4-((1H-indazol-5-il)amino)pirimidin-2-il)fenoxi)acetaldehído (420 mg, bruto), isopropilamina (245 mg, 4,16 mmol) en MeOH (15 ml) se añadió NaBH³CN (131 mg, 2,08 mmol), y la mezcla se agitó 7 h a reflujo. Después de la reacción, se evaporó y se purificó por Pre-HPLC para dar el compuesto del título (90 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 513,02 (s, 1H), 9,65 (s, 1H), 8,34 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,94 (d, J = 3,2 Hz, 2H), 7,57-7,38 (m, 3H), 7,05 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,106 4,079 (m, 1H), 2,91 (s, 2H), 2,80-2,77 (m, 1H), 1,61 (b, 1H), 1,00 (d, J = 6,4 Hz, 6H); míe 389 (M+H)+.

Ejemplo 155

N-(2,6-dicloropirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una disolución agitada de 2,4,6-tricloropirimidina (5,5 g, 30 mmol) en EtOH (100 ml) se añadieron TEA (1,5 g, 45 mmol) y el compuesto 1 H-indazol-5-amina (3,99 g, 30 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a reflujo durante la noche. Después de eliminar el disolvente, el residuo se recristalizó en MeOH para dar el compuesto del título como un sólido (3,4 g, rendimiento 40%).

Ejemplo 156

4-(6-((1 H-indazol-5-il)amino)-2-cloropirimidin-4-il)piperazin-1-carboxilato de terc-butilo

A una disolución agitada de N-(2,6-dicloropirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina (1 g, 3,5 mmol) en EtOH (10 ml) se añadió TEA (1,4 g, 7 mmol) y el compuesto piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (0,67 g, 3,5 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a reflujo durante la noche. Después de la reacción, se añadió agua, la capa orgánica se separó, y salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (1,2 g), que se usó directamente para la siguiente etapa de reacción sin purificación adicional.

Ejemplo 157

5-((terc-butoxicarbonil)(6-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)-2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo

A una disolución agitada de 4-(6-((1H-indazol-5-il)amino)-2-cloropirimidin-4-il)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (1,2 g, bruto) en DCM (10 ml)) se añadieron (Boc)²O (3 g, 14 mmol), TEA (1,4 g, 14 mmol) y DMAP (0,5 g, 3,5 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Después de la reacción, se añadió agua, la capa orgánica se separó, se lavó con monohidrato de ácido cítrico y salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴, y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice para dar el compuesto del título (^{0 , 6}g).

Ejemplo 158

5-((terc-butoxicarbonil)(6-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1 -il)-2-(3-metoxifenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo

Una mezcla de 5-((terc-butoxicarbonil)(6-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)-2-cloropirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1 -carboxilato de terc-butilo (600 mg, 0,95 mmol), ácido (3-metoxifenil)borónico (160 mg, 1,05 mmol), Na²CO³(201 mg, 1,9 mmol), Pd(dppf)Cl²(70 mg, 0,095 mmol) en dioxano:H²O (^{6 , 6}ml, 10:1) se calentó con radiación de microondas durante 20 min a 140°C. Después de la reacción, se evaporó, se añadió EA y agua, la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴, se concentró y se purificó por gel de sílice para dar el compuesto del título (250 mg, rendimiento 37,5%).

Ejemplo 159

N-(2-(3-metoxifenil)-6-(piperazin-1-il)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una disolución de 5-((terc-butoxicarbonil)(6-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)-2-(3-metoxifenil)pirimidin-4-il)amino)-1 H-indazol-1-carboxilato de terc-butilo (250 mg) en DCM (5 ml) se añadió TFA (1 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se evaporó, después se añadió agua, el pH se ajustó a 9 con Na²CO³saturado, se filtró para dar el compuesto del título (115 mg, rendimiento 80%) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 5 12,98 (s, 1 H), 9,30 (s, 1H), 8,09 (s, 1H),8,00 (s, 1H), 7,53-7,37 (m, ⁶H), 7,03 (d, J = ^{8 , 8}Hz, 1H), 6,50 (s, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,73 (b, 4H), 3,39 (s, 1 H), 2,71 (b, 4H); m/e 402 (M+H)+.

Ejemplo 160

N-(2-cloro-6-(2-(dimetilamino)etoxi)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

A una disolución agitada de N-(2,6-dicloropirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina (2 g, 7 mmol) en EtOH (20 ml) se añadió TEA (2,8 g, 7 mmol) y 2-(dimetilamino)etanol (0,64 g, 7 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla se calentó a reflujo durante la noche. Después de la reacción, se añadió agua, la capa orgánica se separó, y salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴, y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título (1,5 g). El residuo se usó en la siguiente etapa.

Ejemplo 161

N-(6-(2-(dimetilamino)etoxi)-2-(3-metoxifenil)pirimidin-4-il)-1 H-indazol-5-amina

Una mezcla de N-(2-cloro-6-(2-(dimetilamino)etoxi)pirimidin-4-il)-1H-indazol-5-amina (1,5 g, 4,5 mmol), ácido (3-metoxifenil)borónico (661 mg, 5 mmol), Na²CO³(954 mg, 9 mmol), Pd(dppf)Cl²(300 mg, 0,45 mmol) en dioxano:H²O (22 ml, 10:1) se calentó con radiación de microondas durante 30 min a 140°C. Después de la reacción, se evaporó, se añadió EA y agua, la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera saturada, se secó sobre Na²SO⁴, y se concentró, que se purificó por Pre-HPLC para dar el compuesto del título como un sólido blanco (125 mg). ¹H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) 5 13,00 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,56-7,41 (m, 5H), 7,08-6,86 (m, 2H), 4,46-4,43 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 2,66-2,63 (m, 2H), 2,22 (s, 6H); míe 405 (M+H)+.

Ejemplo 162

Los siguientes compuestos se sintetizaron usando los procedimientos descritos anteriormente:

Ejemplo 181

Selectividad de compuestos ROCK1 y ROCK2

Las curvas de respuesta a la dosis para la inhibición de la Rho-cinasa se obtuvieron de un ensayo en placas de 96 pocillos basado en inmunología Millipore (número de catálogo CSA001 de Millipore). Las ROCK1 y ROCK2 activas purificadas se obtuvieron de Invitrogen (números de catálogo ROCKI, PV3691, y ROCK2, PV3759). Los componentes del kit incluyen placas de ensayo, que están recubiertas previamente con MYPT1 recombinante, que contiene una Thr696 fosforilable específicamente. Las actividades inhibidoras de los compuestos se miden según el protocolo del fabricante. Brevemente, se añaden concentraciones decrecientes de los compuestos de ensayo o del inhibidor de ROCK conocido Y-27963, de 50 uM a 0,003 uM, al amortiguador de reacción que contiene MgCl2 5 mM, y 10 mUnidades de ROCK1 o ROCK2 en el amortiguador de dilución de ensayo. Esta mezcla se deposita en la placa de 96 pocillos, y la reacción se inicia con la adición de ATP 2,5 uM. El ensayo transcurre a 30° Celsius durante 30 minutos, con agitación suave a 120 rpm. El ensayo finaliza lavando la placa 3 veces con disolución salina amortiguada con Tris y amortiguador de lavado Tween. Se añade anticuerpo anti-fosfo-MYPT1 (Thr696) a cada pocillo para detectar el sustrato fosforilado, y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente, después de lo cual se añade durante 1 hora a temperatura ambiente anticuerpo secundario anti-IgG de conejo conjugado con HRP. Después de lavar, el ensayo se desarrolla usando un reactivo de sustrato, y la absorbancia se lee a 450 nm en un Tecan Infinite M1000 que refleja la actividad de fosforilación de ROCK restante relativa.

Los datos que muestran la inhibición de ROCK1 y ROCK2, y la selectividad de ciertos compuestos para la inhibición de ROCK2, se presentan en la Tabla 1.

Las curvas de respuesta a la dosis para la inhibición de ROCK1 frente a ROCK2 se muestran en la Figura 5.

Ejemplo 182

Selectividad de compuestos ROCK1 y ROCK2

Las curvas de respuesta a la dosis para la inhibición de la Rho-cinasa se obtuvieron de un kit de ensayo de cinasa Z -LYTE™ de Invitrogen (número de catálogo de Invitrogen PV3793). Las ROCK1 y ROCK2 activas purificadas se obtuvieron de Invitrogen (números de catálogo ROCK1, PV3691, y ROCK2, PV3759). Los componentes del kit incluyen un péptido marcado con cumarina y fluoresceína basado en la cadena ligera ²de miosina (KKRPQRRYSNVF), un reactivo de desarrollo que contiene proteasa patentado, y un amortiguador de parada patentado que se usa para terminar la reacción de desarrollo. Las actividades inhibidoras de los compuestos se miden según el protocolo del fabricante. Brevemente, se añaden concentraciones decrecientes de compuestos de ensayo o el inhibidor de ROCK conocido Y-27963, de 10 uM a 2,56 x 10-5 uM, a amortiguador de reacción que contiene HEPES 50 mM pH 7,5, MgCl²10 mM, EGTA 5 mM y Brij-35 al 0,05%, y de ROCK1 a 0,18 ug/ml o ROCK2 a 0,8 ug/ml en amortiguador de dilución de ensayo. Esta mezcla se deposita en una placa blanca de área media de 96 pocillos, y la reacción se inicia con la adición de ATP 5 uM para ROCK1 o ATP 12 uM para ROCK2. El ensayo transcurre a temperatura ambiente durante ¹hora, seguido de la adición del reactivo de desarrollo, y la incubación adicional durante 1 hora a temperatura ambiente. A continuación se añade el reactivo de parada a la reacción, y se leen inmediatamente las señales de emisión de la cumarina y la fluoresceína en un lector de placas de fluorescencia Tecan Infinite M1000 (excitación: 400 nm; emisión 445 y 520 nm, respectivamente). Al comparar las relaciones de emisión de las muestras de ensayo con las muestras de control, se calculan los valores porcentuales de fosforilación, y la concentración de inhibidor que produce la mitad de inhibición de la actividad de la cinasa (IC⁵⁰) se determina usando Prisma. La Tabla 2 proporciona concentraciones de IC⁵⁰para los compuestos de los ejemplos anteriores. Varios de los compuestos también demostraron actividad en un ensayo preliminar que midió la inhibición de la fosforilación de la cadena ligera de miosina (pMLC). Para los compuestos marcados como ND, la actividad no se pudo determinar bajo las condiciones de ensayo empleadas.

Ejemplo 183

El inhibidor selectivo de ROCK2, KD025, inhibe la secreción y proliferación de IL-17/IL-21 en células T CD4+ humanas in vitro.

La activación de las células T en reposo, que da como resultado la secreción y proliferación de citocinas, implica dos señales distintas de las células presentadoras de antígenos (APC), imitadas por la coestimulación del complejo del receptor de células T (TCR)/CD3 y el receptor CD28. Usando células T CD4+ humanas recién purificadas y anticuerpos estimulantes contra CD3 y CD28 para estimular la secreción de IL-17 e IL-21 en respuesta a la activación del TCR, se encontró que el tratamiento con el inhibidor selectivo de ROCK2, KD025, inhibió significativamente la secreción de IL-17 e IL-21 de una manera dependiente de la dosis. Bajo las mismas condiciones, la inhibición de la secreción de IFN-g fue menos robusta y significativa solo a dosis altas (10 pM) del inhibidor (Fig. 7A). De manera similar, cualquier inhibición de la secreción de IL-2 se observó solamente a la concentración más alta (10 pM) de KD025. Según el efecto inhibidor sobre la secreción de citocinas, el tratamiento de las células T con KD025 disminuyó su capacidad de proliferación en respuesta a la estimulación de TCR in vitro (Figura 7B).

Ejemplo 184

El ARNip de ROCK2, pero no el ARNip de ROCK1, inhibe la secreción de IL-17 e IL-21

Para confirmar el papel de ROCK2 en la regulación de la secreción de IL-17 e IL-21 en células T humanas, silenciamos específicamente la expresión de ROCK1 y ROCK2 mediante interferencia de ARN. El ARN de interferencia pequeño (ARNip) específico de ROCK1 y ROCK2 redujo los niveles de expresión de proteínas en un 72% y 84%, respectivamente. El silenciamiento de ROCK2, pero no de ROCK1, redujo significativamente la IL-17 y la IL-21, con un efecto mínimo sobre la secreción de IFN-g en células T humanas (Fig. 8).

Ejemplo 185

KD025 inhibe la fosforilación de STAT3

STAT3 desempeña un papel fundamental en la diferenciación de Th17 mediante la regulación de la expresión de RORgt y la unión directa a los promotores de IL-17 e IL-21. Además, estudios recientes han demostrado que la estimulación de STAT3 dependiente de RhoA requiere actividad de ROCK, y conduce a la activación de la fosforilación de STAT3 en el aminoácido Y705. Usando dos diseños experimentales diferentes, se demostró que KD025 disminuye significativamente la fosforilación de STAT3. En un experimento, las células T se trataron previamente con KD025, y después se estimularon con anticuerpos anti-CD3/CD28. El pretratamiento con KD025 dio como resultado una fosforilación reducida de STAT3 (Fig. 9A). En un experimento diferente, las células se cultivaron en condiciones de sesgo de Th17 durante 5 días, y después se trataron con el inhibidor selectivo de ROCK2 durante 3 horas. La fosforilación de STAT3 se redujo mediante el tratamiento con el inhibidor de ROCK2 (Fig. 9B). En un experimento separado, se confirmó la fosforilación reducida de STAT3, así como de IFR4 y RORgT (Fig. 9C).

Ejemplo 186

KD025 disminuye la secreción de IL-17, IL-21 e IFN-g, y reduce el aumento de la frecuencia de células que expresan IFN-g e IL-17 en células T CD4+ de pacientes con AR

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria autoinmune crónica que conduce a la destrucción de la arquitectura articular. Los eventos patogénicos que intervienen en el desarrollo de la AR no se conocen por completo, aunque el papel central de las citocinas proinflamatorias, tales como TNF-a, IL-1 b, IFN-b, IL-6, y más recientemente, IL-17, en la inducción y el mantenimiento de la patogenia de la AR está bien documentado. Además, la frecuencia de células Th17 en sangre periférica de pacientes con AR aumenta significativamente en comparación con controles sanos, y se correlaciona con la puntuación de actividad de la enfermedad (DAS).

Células T CD4+ se purificaron de sangre periférica de pacientes con AR en diferentes etapas de la enfermedad, o de controles sanos, y se estimularon con anticuerpos anti-CD3/CD28 en presencia de KD025 ex-vivo. En las células T CD4+, el inhibidor selectivo de ROCK2 disminuyó significativamente la secreción de IL-17, IL-21 e IFN-g en respuesta a la estimulación de TCR de una manera dependiente de STAT3 (Fig. 10A). A diferencia de los controles sanos, el grado de inhibición de la secreción de IFN-g fue comparable a los niveles de inhibición de IL-17 e IL-21. Entre los pacientes con AR, la inhibición de la producción de IFN-g se correlacionó con la puntuación de actividad de la enfermedad (DAS). (Figura 10B). El cultivo de células T CD4+ de 2 pacientes con AR diferentes en presencia de KD025 redujo significativamente las frecuencias de las células productoras tanto de IL-17 como de IFN-g, como se demostró mediante la tinción intracelular (Fig. 10C).

Ejemplo 187

KD025 aumenta la fosforilación de STAT-5

La presencia de citocinas IL-6, TGF-b, IL-1 b, IL-23, y la estimulación antigénica de células T CD4+ conducen a la inducción de la secreción de IL-17 e IL-21 y al desarrollo del subconjunto efector de Th17. Al mismo tiempo, se inhibe el desarrollo y la función de las Treg. Para determinar el efecto de la inhibición de ROCK2 sobre las Tregs, células T CD4+ humanas recién purificadas se activaron usando anticuerpos estimulantes contra CD3/CD28 (5 pg/ml), TGF-b (5 ng/ml) e IL-1 b (50 ng/ml) durante 2 días en presencia de concentraciones de 0 pM, 0,5 pM, 1 pM y 2,5 pM del inhibidor selectivo de ROCK2 KD025. El análisis de transferencia Western indica que el tratamiento con KD025 aumenta significativamente la fosforilación de STAT5 en el sitio Y694 de una manera dependiente de la dosis. (Figura 11). Por lo tanto, la inhibición de ROCK2 disminuye la fosforilación de STAT3, mientras que la fosforilación de STAT5 aumenta en células T CD4+ humanas que se activan en condiciones de sesgo de Th17.

Ejemplo 188

KD025 aumenta la proporción de células Foxp3+ entre células T CD4+

Foxp3 es un factor de transcripción para Tregs específico del linaje, y es crucial para el desarrollo y la función inhibitoria de estas células. La señalización de STAT5 regula positivamente la inducción y estabilización de la expresión de Foxp3 en células T in vitro e in vivo. El tratamiento de células T CD4+ humanas con el inhibidor selectivo de ROCK2 KD025 aumentó significativamente el porcentaje de células Foxp3+ después de 5 días de activación de sesgo de Th17 in vitro. (Figura 12).

Ejemplo 189

KD025 aumenta la inhibición de Treg de la secreción de IL-17 en células T CD4+CD25

Treg CD4+CD25+ humanas recién purificadas se trataron con KD025 durante 3 horas, se lavaron, se mezclaron con células T efectoras CD4+CD25- en una relación 1:4 y 1:9 (Treg:Teff), y se activaron mediante el uso de anticuerpos estimuladores contra CD3 y CD28 durante 2 días. La inhibición de ROCK2 mediada por KD025 aumentó significativamente la capacidad de las Treg para suprimir la secreción de IL-17 en células T efectoras CD4+CD25-. (Figura 13).

Ejemplo 190

KD025 inhibe la fosforilación de STAT3 y MLC inducida por TGF-p de manera independiente de SMAD2/3

El inhibidor selectivo de ROCK2 KD025 disminuye la fosforilación de STAT3 y MLC inducida por TGF-p de una manera dependiente de la dosis, pero la fosforilación de SMAD2/3 permanece intacta. (Figura 14). TGF-p está implicado en el desarrollo y la función de los subconjuntos Th17 y Treg de células T. Sin embargo, cuando las Treg se regulan en un mecanismo de señalización dependiente de Smad2/3, el TGF-p regula las células Th17 de manera independiente a Smad2/3, lo que se considera una señalización inducida por TGF-p no canónica. Además, se demostró que las proteínas ROCK están implicadas en la señalización de TGF-p independiente de Smad en células cancerosas.

Ejemplo 191

El tratamiento de pacientes con KD025 inhibe la estimulación ex vivo de la producción de IL-17 e IL-21 en PBMC aisladas.

Ocho pacientes recibieron 120 mg/día de KD025 o placebo en los días 1 y 8-14 del ensayo. Se recolectaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) al comienzo y al final del ensayo, y se estimularon sembrándolas en placas con anticuerpos anti-CD3/CD28 inmovilizados durante 72 horas, y se midieron los niveles de IL-17, IL-21, e IFN-g. La Fig. 15 muestra que se podrían inducir altos niveles de IL-17 e IL-21 en PBMC aisladas el día 1 de seis de los sujetos. De esos seis sujetos, cinco recibieron el inhibidor selectivo de ROCK2 KD025, mientras que uno recibió placebo. La inducción de la secreción de IL-17 se inhibió significativamente en las PBMC aisladas de cuatro de cinco pacientes tratados con KD025 (Fig. 15B), y la inducción de la secreción de IL-21 se inhibió significativamente en las PBMC de los cinco pacientes tratados con KD025 (Fig. 15A). No se observó ningún efecto sobre IFN-g.

A continuación, se determinó la inhibición de la inducción de citocinas en veintidós pacientes a los que se les administró 40 mg/día, 120 mg/día, 240 mg/día, o 320 mg/día de KD025. La Fig. 15D-F muestra la relación dosis-respuesta para la secreción de IL-21, IL-17 e IFN-g, respectivamente.

Ejemplo 192

Anticuerpos anti-VEGFR2

Se identificaron dos anticuerpos neutralizantes, Mab 101 y Mab 102, que se unen a VEGFR2 humano, bloquean la unión del ligando VEGFA a hVEGFR2, e inhiben la fosforilación de VEGFR2 y la transducción de señales aguas abajo estimulada por VEGFA. La Tabla 3 y la Fig. 16 indican las secuencias de aminoácidos de las CDR y los dominios variables de los anticuerpos. Las Kd de Mab 101 y Mab 102 son alrededor de 6,6 mM y 1,7 nM, respectivamente.

La cadena pesada de Mab 101 se reorganizó con genes de cadena ligera k (biblioteca k) y genes de cadena ligera l (biblioteca l) . Se encontraron 20 variantes únicas de la cadena ligera l analizando la biblioteca l contra VEGFR2 humano y VEGFR2 de ratón. Se encontraron 22 variantes únicas de la cadena ligera k analizando la biblioteca k contra VEGFR2 humano y VEGFR2 de ratón. La Tabla 4 indica las secuencias de aminoácidos de las CDR y los dominios variables de las cadenas ligeras. Las Kd de los Mab 105, 106 y 107 mejoraron alrededor de 10 veces (0,24 nM, 0,22 nM y 0,12 nM, respectivamente).

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que inhibe ROCK 2 para uso en el tratamiento de un trastorno autoinmune en un sujeto, en el que el trastorno autoinmune es psoriasis, dermatitis atópica, eccema, o enfermedad de injerto contra hospedante (EICH), y en el que el compuesto que inhibe ROCK2 es un compuesto de la fórmula (XXXII):

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R1 se selecciona del grupo que consiste en -O-(CH²)y-CO²R12, -O-(CH²)y-C(=O)NR13R14, -O-(CH²)y-heteroarilo, -O-(CH²)y-cicloalquilo, -O-C(=O)-(CH²)y-NR13R14, -O-(CH²)z-NR13R14, -NH-C(=O)-(CH²)y-NR13R14, -NH-C(=O)-X-R15, -NH-(CH2)y-NR13R14;

R12 se selecciona del grupo que consiste en alquilo de C¹-C⁶, -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), -(alquilo de C¹-Ce)-NR16R17, -(alquilo de C¹-C⁶)-C(=O)NR16R17, -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C³-C⁷, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C¹-C⁶, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³; R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C¹-C⁸, alquenilo de C²-C⁸, alquinilo de C²-C⁸, -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), -(alquilo de C¹-C⁶)-NR16R17, -(alquilo de C¹-C⁶)-C(=O)NR16R17, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C³-C⁷, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, cicloalquilo de C³-C⁷, alcoxi de C¹-C⁶, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

0 R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C⁶, cicloalquilo de C³-C⁷, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

X se selecciona de un enlace covalente, O, NH, y alquilo de C¹-C⁶;

R15 se selecciona del grupo que consiste en heteroarilo, cicloalquilo de C³-C⁷, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C6, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³,

o R15 se selecciona de -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), -(alquilo de C¹-C⁶)-NR16R17, -CO²R¹⁸, -O-(CH²)x-CO²R¹⁸, y -C(=O)NR16R17;

R16 y R17 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C¹-C⁸, alquenilo de C²-C⁸, alquinilo de C²-C⁸, -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C³-C⁷, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C6, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C⁶, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

o R16 y R17 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C⁶, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³; R18 se selecciona del grupo que consiste en H, arilo, aralquilo, heteroarilo, alquilo de C¹-C⁶, -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), -(alquilo de C¹-C⁶)-NR16R17, -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alcoxi de C¹-C⁶, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

x se selecciona de 0 a 6;

y se selecciona de 0 a 6;

z se selecciona de 2 a 6;

n se selecciona de 0 a 4; y

m se selecciona de 0 a 3.

2. El compuesto para uso según la reivindicación 1, en el que el compuesto que inhibe ROCK2 es un compuesto de la fórmula

3. El compuesto para uso según la reivindicación 1, en el que el compuesto que inhibe ROCK2 es un compuesto de las fórmula XXXIV:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

R13 y R14 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, alquilo de C¹-C⁸, alquenilo de C²-C⁸, alquinilo de C²-C⁸, -(alquilo de C¹-C⁶)-O-(alquilo de C¹-C⁶), -(alquilo de C¹-C⁶)-NR16R17, -(alquilo de C¹-C⁶)-C(=O)NR16R17, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo de C³-C⁷, un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que contiene hasta 3 heteroátomos, cada uno de los cuales puede estar opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, cicloalquilo de C³-C⁷, alcoxi de C¹-C⁶, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

o R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C⁶, cicloalquilo de C³-C⁷, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

o R16 y R17 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C⁶, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

n se selecciona de 0 a 4; y

m se selecciona de 0 a 3.

4. El compuesto para uso según la reivindicación 1, en el que el compuesto que inhibe ROCK2 es un compuesto de la fórmula XXXIVa:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

o R13 y R14 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C⁶, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³;

o R16 y R17 se pueden tomar juntos para formar un anillo heterocíclico de tres a doce miembros que tiene hasta 3 heteroátomos, que está opcionalmente sustituido con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente de halo, alquilo de C¹-C⁶, alquenilo de C²-C⁶, alcoxi de C¹-C⁶, oxo, hidroxi, amino, ciano y perfluoroalquilo de C¹-C³.