ES2909791T3 - Procesos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas - Google Patents

Procesos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas Download PDF

Info

Publication number
ES2909791T3
ES2909791T3 ES14872560T ES14872560T ES2909791T3 ES 2909791 T3 ES2909791 T3 ES 2909791T3 ES 14872560 T ES14872560 T ES 14872560T ES 14872560 T ES14872560 T ES 14872560T ES 2909791 T3 ES2909791 T3 ES 2909791T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
oil
cells
rpm
composition
microbial
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES14872560T
Other languages
English (en)
Inventor
Neil Francis Leininger
Ginger Shank
Xiao Dong
Iii Joseph William Pfeifer
Vidya Pai
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DSM IP Assets BV
Original Assignee
DSM IP Assets BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DSM IP Assets BV filed Critical DSM IP Assets BV
Application granted granted Critical
Publication of ES2909791T3 publication Critical patent/ES2909791T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/02—Pretreatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/02—Pretreatment
    • C11B1/025—Pretreatment by enzymes or microorganisms, living or dead
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
    • A23D9/00—Other edible oils or fats, e.g. shortenings, cooking oils
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C51/487—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C57/00—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C57/02—Unsaturated compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms with only carbon-to-carbon double bonds as unsaturation
    • C07C57/03—Monocarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B3/00—Refining fats or fatty oils
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B3/00—Refining fats or fatty oils
    • C11B3/001—Refining fats or fatty oils by a combination of two or more of the means hereafter
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/06—Lysis of microorganisms
    • C12N1/066—Lysis of microorganisms by physical methods
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados a partir de una o más células microbianas, en el que el proceso comprende: a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite; c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas; d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y e) recuperar el aceite; en el que (d) comprende además añadir un ácido que comprende ácido cítrico y comprende además añadir una base.

Description

DESCRIPCIÓN
Procesos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas
REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS
Esta solicitud reivindica el beneficio de la fecha de presentación de la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos n.° 61/919.000 presentada el 20 de diciembre de 2013 y 62/093.986 presentada el 18 de diciembre de 2014.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
En el presente documento se divulgan procesos para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas lisando las células para formar una composición de células lisadas, tratando la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite y a continuación recuperar el aceite de la emulsión que contiene aceite. En el presente documento se divulga además un aceite microbiano que comprende uno o más AGPI que se recupera de las células microbianas por al menos un proceso descrito en el presente documento.
El aceite microbiano que contiene uno o más AGPI se produce por microorganismos, tales como, por ejemplo, algas y hongos.
Un proceso típico para obtener aceite que contiene AGPI a partir de células microbianas implica cultivar microorganismos que pueden producir el aceite deseado en un fermentador, estanque o biorreactor para producir una biomasa celular microbiana; separar la biomasa del medio de fermentación en el que se cultivó la biomasa; secar la biomasa celular microbiana usando un disolvente orgánico inmiscible en agua (por ejemplo, hexano) para extraer el aceite de las células secas; y retirar el disolvente orgánico (por ejemplo, hexano) del aceite. Este proceso puede implicar además diluir el medio de fermentación que contiene la biomasa celular con agua seguido de centrifugación para separar la biomasa del medio de fermentación diluido.
Otro proceso para obtener aceite que contiene AGPI a partir de células microbianas implica cultivar microorganismos que pueden producir el aceite deseado en un fermentador, estanque o biorreactor para producir una biomasa celular microbiana; liberar el aceite que contiene AGPI en el medio de fermentación en el que se cultivaron las células usando fuerza mecánica (por ejemplo, homogeneización), tratamiento enzimático o tratamiento químico para romper las paredes celulares; y recuperar el aceite de la composición resultante que comprende aceite que contiene AGPI, residuos celulares y líquido usando un disolvente orgánico miscible en agua, por ejemplo, alcohol isopropílico. El aceite se puede separar mecánicamente de la composición y el alcohol se debe retirar tanto del aceite como de la corriente residual de biomasa acuosa.
El empleo a escala industrial de cualquiera de los procesos anteriores para obtener aceites que contienen AGPI a partir de células microbianas requiere el uso de una gran cantidad de disolvente orgánico volátil e inflamable, lo que crea condiciones operativas peligrosas y requiere el uso de equipos antideflagrantes costosos. Adicionalmente, el uso de un disolvente orgánico genera una corriente residual de disolvente orgánico que requiere la implementación de un proceso de recuperación de disolvente costoso para abordar los límites ambientales estrictos sobre emisiones de compuestos orgánicos volátiles (COV), lo que a su vez da como resultado la necesidad de más personal y equipo costoso.
Además, el uso de calor en los procesos anteriores para secar las células y/o retirar el disolvente del aceite recuperado puede degradar los aceites que contienen AGPI e incrementar el uso de energía, lo que puede incrementar además los costes de procesamiento. La degradación se produce cuando los aceites que contienen AGPI se exponen a oxígeno, tal como cuando se rompe la integridad de las paredes de células microbianas y/o las células microbianas se exponen a calor.
Un proceso sin disolvente para obtener aceite que contiene AGPI a partir de células microbianas implica cultivar microorganismos que pueden producir el aceite deseado en un fermentador, estanque o biorreactor para producir una biomasa celular microbiana; liberar el aceite que contiene AGPI en el medio de fermentación en el que se cultivaron las células usando fuerza mecánica (por ejemplo, homogeneización), tratamiento enzimático o tratamiento químico para romper las paredes celulares; y recuperar el aceite bruto de la composición resultante que comprende aceite que contiene AGPI, residuos celulares y líquido elevando el pH, añadiendo una sal, calentando y/o agitando la composición resultante. Sin embargo, este proceso sin disolvente para obtener aceite que contiene AGPI a partir de células puede requerir tiempos de recuperación de aceite largos, grandes cantidades de sal y/o muchas etapas, lo que puede incrementar los costes de procesamiento.
Como resultado, sigue existiendo la necesidad de un proceso para obtener aceites que contienen AGPI de alta calidad a partir de células microbianas que no use un disolvente orgánico volátil, se pueda realizar usando equipo fácilmente disponible, requiera un número mínimo de etapas, tenga tiempos de recuperación de aceite más cortos, y pueda proporcionar un alto rendimiento de aceite que contiene AGPI de alta calidad. El documento US 2011/0295028 describe un proceso para obtener un lípido de una célula lisando la célula, poniendo en contacto la célula con una base y/o sal y separando el lípido.
El documento US 2007/0003686 describe una composición de grasa sólida que incluye un aceite que tiene grasa saturada y un aceite microbiano que tiene un ácido graso poliinsaturado de cadena larga y un emulsionante. Se describe un proceso en el que una mezcla de células lisadas que es una emulsión se pone en contacto con una solución de isopropanol en agua, se mezcla por agitación y se somete a centrifugación para producir un producto no emulsionado.
El documento WO 2013/156720 describe un procedimiento para preparar una composición que es muy rica en escualeno producido por fermentación de microorganismos. El procedimiento se caracteriza por que comprende una etapa de purificación seleccionada del grupo que incluye: extracción con CO2 supercrítico en una columna de fraccionamiento a contracorriente de múltiples etapas con reflujo de extracto y destilación molecular de camino corto.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que al menos una de (a) o (b) comprende además elevar el pH de las células o composición de células lisadas.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que al menos una de (a) o (b) comprende además calentar las células o composición de células lisadas hasta al menos 50 °C.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que al menos una de (a) o (b) comprende además agitar las células o composición de células lisadas.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que (a) comprende además añadir una enzima.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que (b) comprende además añadir una sal.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que (c) comprende además centrifugar.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que (d) comprende además al menos uno de calentar hasta al menos 50 °C, añadir un ácido y añadir una base.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite,
en el que al menos una de (a) y (b) comprende elevar el pH de las células o composición de células lisadas, agitar las células o composición de células lisadas y calentar las células o composición de células lisadas.
En el presente documento se divulga un aceite microbiano obtenido por cualquiera de los procesos descritos en el presente documento.
Los rasgos característicos y ventajas de la invención se pueden entender más fácilmente por los expertos en la técnica tras leer la siguiente descripción detallada. Se debe apreciar que determinados rasgos característicos de la invención que, por motivos de claridad, se describen anteriormente y a continuación en el contexto de modos de realización separados, también se pueden combinar para formar subcombinaciones de los mismos. Sin embargo, el alcance de la invención se define por las reivindicaciones.
Los modos de realización identificados en el presente documento como ejemplares pretenden ser ilustrativos y no limitantes.
El término "aproximadamente" pretende capturar variaciones por encima y por debajo del número establecido que pueden lograr sustancialmente los mismos resultados que el número establecido.
En el presente documento se divulga un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) a partir de una o más células microbianas que comprende
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite.
En algunos modos de realización, al menos una de (a) o (b) comprende además elevar el pH de las células o composición de células lisadas. En algunos modos de realización, al menos una de (a) o (b) comprende además agitar las células o composición de células lisadas. En algunos modos de realización, al menos una de (a) o (b) comprende además calentar las células o composición de células lisadas. En algunos modos de realización, al menos una de (a) o (b) comprende además al menos uno de elevar el pH de las células o composición de células lisadas, agitar las células o composición de células lisadas y calentar las células o composición de células lisadas.
En algunos modos de realización, (a) comprende además añadir una enzima.
En algunos modos de realización, (b) comprende además añadir una sal.
En algunos modos de realización, (c) comprende además calentar. En algunos modos de realización, (c) comprende además centrifugar. La etapa (d) requiere añadir un ácido, a saber, ácido cítrico, así como añadir una base.
En algunos modos de realización, (d) comprende además calentar. (d) comprende además añadir un ácido, que comprende ácido cítrico. (d) comprende además añadir una base. En algunos modos de realización, (d) comprende además añadir un emulsionante.
En algunos modos de realización, (e) comprende además centrifugar el aceite. En algunos modos de realización, (e) comprende además refinar el aceite.
En el presente documento se divulga un aceite microbiano obtenido por cualquiera de los procesos descritos en el presente documento.
Los ácidos grasos se clasifican en base a la longitud y características de saturación de la cadena de carbono. Los ácidos grasos presentes en un aceite microbiano pueden tener de 4 a 28 átomos de carbono y se denominan ácidos grasos de cadena corta, cadena media o cadena larga en base al número de carbonos presentes en la cadena. Los ácidos grasos se denominan ácidos grasos saturados cuando no están presentes dobles enlaces entre los átomos de carbono, y se denominan ácidos grasos insaturados cuando están presentes dobles enlaces. Los ácidos grasos de cadena larga insaturados son monoinsaturados cuando solo está presente un doble enlace y son poliinsaturados cuando está presente más de un doble enlace.
El aceite microbiano descrito en el presente documento se refiere a aceite que comprende uno o más AGPI y se obtiene a partir de células microbianas.
Los ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) se clasifican en base a la posición del primer doble enlace del extremo metilo del ácido graso; los ácidos grasos omega-3 (n-3) contienen un primer doble enlace en el tercer carbono, mientras que los ácidos grasos omega-6 (n-6) contienen un primer doble enlace en el sexto carbono. Por ejemplo, el ácido docosahexaenoico (DHA) es un ácido graso poliinsaturado de cadena larga omega-3 (AGPI-CL) con una longitud de cadena de 22 carbonos y 6 dobles enlaces, a menudo designado como "22:6n-3". En un modo de realización, el AGPI se selecciona de un ácido graso omega-3, un ácido graso omega-6 y mezclas de los mismos. En otro modo de realización, el AGPI se selecciona de AGPI-CL. Todavía en otro modo de realización, el AGPI se selecciona de ácido docosahexaenoico (DHA), ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido araquidónico (ARA), ácido gamma-linolénico (GLA), ácido dihomo-gamma-linolénico (DGLA), ácido estearidónico (SDA) y mezclas de los mismos. En otro modo de realización, el AGPI se selecciona de DHA, ARA y mezclas de los mismos. En otro modo de realización, el AGPI es DHA. Aún en otro modo de realización, el AGPI es ARA.
Los AGPI-CL son ácidos grasos que contienen al menos 3 dobles enlaces y tienen una longitud de cadena de 18 o más carbonos o 20 o más carbonos. Los AGPI-CL de la serie omega-6 incluyen, pero no se limitan a, ácido dihomo-gammalinoleico (C20:3n-6), ácido araquidónico (C20:4n-6) ("ARA"), ácido docosatetraenoico o ácido adrénico (C22:4n-6) y ácido docosapentaenoico (C22:5n-6) ("DPA n-6"). Los AGPI-CL de la serie omega-3 incluyen, pero no se limitan a, ácido eicosatrienoico (C20:3n-3), ácido eicosatetraenoico (C20:4n-3), ácido eicosapentaenoico (C20:5n-3) ("EPA"), ácido docosapentaenoico (C22:5n-3) y ácido docosahexaenoico (C22:6n-3). Los AGPI-CL también incluyen ácidos grasos con más de 22 carbonos y 4 o más dobles enlaces incluyendo, pero sin limitarse a, C24:6(n-3) y C28:8(n-3).
Los AGPI pueden estar en forma de ácido graso libre, sal, éster de ácido graso (por ejemplo, éster metílico o etílico), monoacilglicerol (MAG), diacilglicerol (DAG), triacilglicerol (TAG) y/o fosfolípido (PL).
Los ácidos grasos altamente insaturados (AGAI) son ácidos grasos poliinsaturados omega-3 y/u omega-6 que contienen 4 o más enlaces carbono-carbono insaturados.
Como se usa en el presente documento, una "célula" se refiere a un biomaterial que contiene aceite, tal como biomaterial derivado de microorganismos oleaginosos. El aceite producido por un microorganismo u obtenido a partir de una célula microbiana se denomina "aceite microbiano". El aceite producido por algas y/u hongos también se denomina aceite de alga y/o fúngico, respectivamente.
Como se usa en el presente documento, una "célula microbiana" o "microorganismo" se refiere a organismos tales como algas, bacterias, hongos, levaduras, protistas y combinaciones de los mismos, por ejemplo, organismos unicelulares. En algunos modos de realización, una célula microbiana es una célula eucariota. Una célula microbiana incluye, pero no se limita a, algas doradas (por ejemplo, microorganismos del reino Stramenopiles); algas verdes; diatomeas; dinoflagelados (por ejemplo, microorganismos del orden Dinophyceae incluyendo miembros del género Crypthecodinium tales como, por ejemplo, Crypthecodinium cohnii o C. cohnii); microalgas del orden Thraustochytriales; levadura (ascomicetos o basidiomicetos); y hongos de los géneros Mucor, Mortierella, incluyendo pero sin limitarse a Mortierella alpina y Mortierella sect, schmuckeri y Pythium, incluyendo pero sin limitarse a Pythium insidiosum.
En un modo de realización, las células microbianas son del género Mortierella, género Crypthecodinium u orden Thraustochytriales. Todavía en otro modo de realización, las células microbianas son de Crypthecodinium Cohnii. Aún en incluso otro modo de realización, las células microbianas se seleccionan de Crypthecodinium Cohnii, Mortierella alpina, género Thraustochytrium, género Schizochytrium y mezclas de los mismos.
Todavía en otro modo de realización, las células microbianas incluyen, pero no se limitan a, microorganismos que pertenecen al género Mortierella, género Conidiobolus, género Pythium, género Phytophthora, género Penicillium, género Cladosporium, género Mucor, género Fusarium, género Aspergillus, género Rhodotorula, género Entomophthora, género Echinosporangium y género Saprolegnia. En otro modo de realización, ARA se obtiene de células microbianas del género Mortierella, que incluye, pero no se limita a, Mortierella elongata, Mortierella exigua, Mortierella hygrophila, Mortierella alpina, Mortierella schmuckeri y Mortierella minutissima. En otro modo de realización, A r a se obtiene a partir de células microbianas de Mortierella elongata IFO8570 Mortierella exigua IFO8571, Mortierella hygrophila IFO5941, Mortierella alpina IFO8568, ATCC16266, ATCC32221, ATCC42430, CBS219.35, CBS224.37, CBS250.53, CBS343.66, CBS527.72, CBS529.72, CBS608.70 y CBS754.68, y mutantes de los mismos. Todavía en otro modo de realización, las células microbianas son de Mortierella alpina.
Incluso en otro modo de realización, las células microbianas son de microalgas del orden Thraustochytriales, que incluye, pero no se limita a, los géneros Thraustochytrium (las especies incluyen arudimentale, aureum, benthicola, globosum, kinnei, motivum, multirudimentale, pachydermum, proliferum, roseum, estriatum); los géneros Schizochytrium (las especies incluyen aggregatum, limnaceum, mangrovei, minutum, octosporum); los géneros Ulkenia (las especies incluyen amoeboidea, kerguelensis, minuta, profunda, radiate, sailens, sarkariana, schizochytrops, visurgensis, yorkensis); los géneros Aurantiacochytrium; los géneros Oblongichytrium; los géneros Sicyoidochytium; los géneros Parientichytrium; los géneros Botryochytrium; y combinaciones de los mismos. Las especies descritas dentro de Ulkenia se considerarán que son miembros del género Schizochytrium. En otro modo de realización, las células microbianas son del orden Thraustochytriales. Aún en otro modo de realización, las células microbianas son de Thraustochytrium. Todavía en otro modo de realización, las células microbianas son de Schizochytrium. Todavía en otro modo de realización, las células microbianas se eligen del género Thraustochytrium, Schizochytrium o mezclas de los mismos.
En un modo de realización, el proceso comprende lisar células microbianas que comprenden un aceite microbiano para formar una composición de células lisadas. Los términos "lisis" y "lisado" se refieren a un proceso por el que se rompe la pared y/o membrana de la célula microbiana. En un modo de realización, la célula microbiana se lisa sometiéndola a al menos un tratamiento seleccionado de mecánico, químico, enzimático, físico y combinaciones de los mismos. En otro modo de realización, el proceso comprende lisar las células microbianas que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas, en el que el lisado se selecciona de mecánico, químico, enzimático, físico y combinaciones de los mismos.
En algunos modos de realización, antes de lisar la célula, la célula se puede lavar y/o pasteurizar. En algunos modos de realización, lavar las células incluye usar una solución acuosa, tal como agua, para retirar cualquier compuesto extracelular soluble en agua o dispersable en agua. En algunos modos de realización, la célula se puede lavar una, dos, tres o más veces. En algunos modos de realización, pasteurizar la célula incluye calentar la célula para inactivar cualquier enzima indeseable, por ejemplo, cualquier enzima que pueda degradar el aceite o reducir el rendimiento de AGPI. En algunos modos de realización, la célula se lava y a continuación se pasteuriza antes de lisarse. En algunos modos de realización, las células que se lisan están contenidas en un caldo de fermentación.
En algunos modos de realización, el proceso comprende lisar células microbianas sin lavar que comprenden un aceite microbiano para formar una composición de células lisadas. En algunos modos de realización, un caldo de fermentación que comprende células microbianas que comprenden aceite microbiano se lava primero con, por ejemplo, agua y a continuación las células se lisan para formar una composición de células lisadas. En otros modos de realización, el proceso comprende lisar células sin lavar en un medio de fermentación para formar una composición de células lisadas.
El tratamiento mecánico incluye, pero no se limita a, homogeneización, ultrasonidos, prensado en frío, molienda y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, el proceso comprende lisar las células por homogeneización. En algunos modos de realización, el proceso comprende lisar la célula con un homogeneizador.
La homogeneización incluye, pero no se limita a, procesos que utilizan una prensa celular de French, sonicador, homogeneizador, microfluidizador, molino de bolas, molino de varillas, molino de guijarros, molino de perlas, rodillo de molienda de alta presión, impactador de eje vertical, mezcladora industrial y mezclador de alto cizallamiento, mezclador de paletas, homogeneizador Polytron, homogeneizador industrial (por ejemplo, homogeneizador Niro Soavi VHP y homogeneizadores APV Rannie y APV Gaulin), procesadores de fluidos de alto cizallamiento industriales (por ejemplo, procesador de fluidos de alto cizallamiento Microfluidics), homogeneizadores de lisis celular/molino de perlas (por ejemplo, Dyno-Mill y Buhler), y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, las células fluyen a través de un homogeneizador que se calienta opcionalmente. En algunos modos de realización, la homogeneización adecuada puede incluir de 1 a 3 pasos a través de un homogeneizador a presiones altas y/o bien bajas.
En algunos modos de realización, la presión durante la homogeneización es de 150 bar a 1400 bar; de 150 bar a 1200 bar; de 150 bar a 900 bar; de 150 bar a 300 bar; de 300 bar a 1400 bar; de 300 bar a 1200 bar; de 300 bar a 900 bar; de 400 bar a 800 bar; de 500 bar a 700 bar; de o 600 bar. En algunos modos de realización, la presión durante la homogenización es de 13,8 MPa (2.000 psi) a 138Pa (20.000 psi); de 13,8 MPa (2.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de 13,8 MPa (2.000 psi) a 110 MPa (16.000 psi); de 13,8 MPa (2.000 psi) a 97 MPa (14.000 psi); de 13,8 MPa (2.000 psi) a 83 MPa (12.000 psi); de 13,8 MPa (2.000 psi) a 69 MPa (10.000 psi); de 13,8 MPa (2.000 psi) a 55 MPa (8.000 psi); de 13,8 MPa (2.000 psi) a 41 MPa (6.000 psi); de 13,8 MPa (2.000) psi a 28 MPa (4.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 110 MPa (16.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 97 MPa (14.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 83 MPa (12.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 69 MPa (10.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 55 MPa (8.000 psi); de 28 MPa (4.000 psi) a 41 MPa (6.000 psi); de 41 MPa (6.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi); de 41 MPa (6.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de 41 MPa (6.000 psi) a 110 MPa (16.000 psi); de 41 MPa (6.000 psi) a 97 MPa (14.000 psi); de 41 MPa (6.000 psi) a 83 MPa (12.000 psi); de 41 MPa (6.000 psi) a 69 MPa (10.000 psi); de 41 MPa (6.000 psi) a 55 MPa (8.000 psi); de 55 MPa (8.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi); de 55 MPa (8.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de 55 MPa (8.000 psi) a 110 MPa (16.000 psi); de 55 MPa (8.000 psi) a 97 MPa (14.000 psi); de 55 MPa (8.000 psi) a 83 MPa (12.000 psi); de 55 MPa (8.000 psi) a 69 MPa (10.000 psi); de 69 MPa (10.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi); de 69 MPa (10.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de 69 MPa (10.000 psi) a 110 MPa (16.000 psi); de 69 MPa (10.000 psi) a 97 MPa (14.000 psi); de 69 MPa (10.000 psi) a 83 MPa (12.000 psi); de 83 MPa (12.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi); de 83 MPa (12.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de 83 MPa (12.000 psi) a 110 MPa (16.000 psi); de 83 MPa (12.000 psi) a 97 MPa (14.000 psi); de 97 MPa (14.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi); de 97 MPa (14.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de 97 MPa (14.000 psi) a 110 MPa (16.000 psi); de 110 MPa (16.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi); de 110 MPa (16.000 psi) a 124 MPa (18.000 psi); de o de 124 MPa (18.000 psi) a 138 MPa (20.000 psi).
En algunos modos de realización, las células microbianas se mezclan en un mezclador de alto cizallamiento antes de homogeneizarse. En algunos modos de realización, el mezclador de alto cizallamiento opera en un intervalo de al menos 5.000 rpm; al menos 7.500 rpm; al menos 10.000 rpm; al menos 12.500 rpm; al menos 15.000 rpm; de 5.000 rpm a 15.000 rpm; de 5.000 rpm a 12.500 rpm; de 5.000 rpm a 10.000 rpm; de 5.000 rpm a 7.500 rpm; de 7.500 rpm a 15.000 rpm; de 7.500 rpm a 12.500 rpm; de 7.500 rpm a 10.000 rpm; de 10.000 rpm a 15.000 rpm; de 10.000 rpm a 12.500 rpm; o de 12.500 rpm a 15.000 rpm.
El tratamiento físico incluye, pero no se limita a, calentamiento, que incluye, pero no se limita a, resistivo, convección, vapor, baño de fluido, solar y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, las células se calientan en un depósito con bobinas resistivas en/sobre sus paredes. En algunos modos de realización, las células se calientan en un baño líquido con tubos que lo atraviesan.
El tratamiento químico incluye, pero no se limita a, elevar el pH de las células; reducir el pH de las células; poner en contacto las células con un producto químico; y combinaciones de los mismos.
En algunos modos de realización, las células se lisan elevando el pH de las células. En algunos modos de realización, el pH se eleva añadiendo una base. Las bases incluyen, pero no se limitan a, hidróxidos (por ejemplo, LiOH, NaOH, KOH y Ca (OH)2 , y combinaciones de los mismos); carbonatos (por ejemplo, Na2 CO3 , K2 CO3 , MgCO3, y combinaciones de los mismos); bicarbonatos (por ejemplo, UHCO3 , NaHCO3, KHCO3 , y combinaciones de los mismos); y combinaciones de los mismos. La base puede estar en forma de un sólido (por ejemplo, cristales, granulados y gránulos); un líquido (por ejemplo, una solución acuosa); y combinaciones de los mismos.
En algunos modos de realización, la base tiene un pKb de 1 a 12, de 1 a 10, de 1 a 8, de 1 a 6, de 1 a 5, de 2 a 12, de 2 a 10, de 2 a 8, de 2 a 6, de 2 a 5, de 3 a 10, de 3 a 6, de 3 a 5, de 4 a 10, de 4 a 8, de 4 a 6, de 5 a 10, o de 5 a 8. Como se usa en el presente documento, el término "pKb" se refiere al logaritmo negativo de la constante de asociación básica, Kb, de la base. Kb se refiere a la constante de equilibrio para la ionización de la base en agua,
K [ H B ] [ O H ]
en la que: B H2 O ^ HB+ OH"; y la Kb de la base, B, se define como: P ]
En algunos modos de realización, se añade una base en una cantidad de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 9 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 8 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 7 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 6 %, de aproximadamente un 3 % a aproximadamente un 6 %, de aproximadamente un 4 % a aproximadamente un 6 %, de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 6 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 4 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 3 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 3 % a aproximadamente un 4 %, o de aproximadamente un 4 % a aproximadamente un 5 % en peso (o volumen) del caldo celular para elevar el pH.
En algunos modos de realización, el pH de las células se puede elevar por un proceso cloroalcalino. En algunos modos de realización, el caldo de fermentación que contiene cloruro de sodio y las células se somete a electrólisis que da como resultado la formación de hidróxido de sodio, que eleva el pH de la célula. En algunos modos de realización, el caldo de fermentación incluye cloruro de calcio o cloruro de potasio en lugar de, o además de, cloruro de sodio, y la electrólisis da como resultado la formación de hidróxido de calcio o hidróxido de potasio, respectivamente, elevando de este modo el pH de la célula.
En algunos modos de realización, las células se lisan reduciendo el pH de las células. En algunos modos de realización, el pH se reduce añadiendo un ácido. Los ácidos incluyen, pero no se limitan a, sulfúrico; fosfórico; clorhídrico; bromhídrico; yodhídrico; hipocloroso; cloro; clórico; perclórico; flúor sulfúrico; nítrico; flúor antimónico; fluorobórico; hexafluorofosfórico; crómico; bórico; acético; cítrico; fórmico; y combinaciones de los mismos.
El tratamiento enzimático se refiere a poner en contacto las células con una o más enzimas. Las enzimas incluyen, pero no se limitan a, proteasas, celulasas, hemicelulosas, quitinasas, pectinasas y combinaciones de las mismas. Los ejemplos no limitantes de proteasas incluyen serina proteasas, treonina proteasas, cisteína proteasas, aspartato proteasas, metaloproteasas, ácido glutámico proteasas, alpacas y combinaciones de las mismas. Los ejemplos no limitantes de celulasas incluyen sacarasa, maltasa, lactasa, alfa-glucosidasa, beta-glucosidasa, amilasa, lisozima, neuraminidasa, galactosidasa, alfa-manosidasa, glucuronidasa, hialuronidasa, pululanos, glucocerebrosidasa, galactosilceramidasa, galactosilceramidasa, fructosidasa, hexosaminidasa., iduronatos, maltasa-glucoamilasa y combinaciones de los mismos. Un ejemplo no limitante de quitinasa incluye quitotriosidasa. Los ejemplos no limitantes de pectinasas incluyen cetolasa, pectina, poligalacturonato y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, algunas enzimas se activan calentando. En algunos modos de realización, la lisis no incluye el uso de enzimas.
Como se usa en el presente documento, una "composición de células lisadas" se refiere a una composición que comprende una o más células lisadas, incluyendo residuos celulares y otros contenidos de la célula, en combinación con aceite microbiano (de las células lisadas) y, opcionalmente, un caldo de fermentación que contiene líquido (por ejemplo, agua), nutrientes y células microbianas. En algunos modos de realización, una célula microbiana está contenida en un caldo de fermentación o medio que comprende agua. En algunos modos de realización, una composición de células lisadas se refiere a una composición que comprende una o más células lisadas, residuos celulares, aceite microbiano, el contenido natural de la célula y componentes acuosos de un caldo de fermentación. En un modo de realización, la composición de células lisadas comprende líquido, residuos celulares y aceite microbiano. En algunos modos de realización, una composición de células lisadas está en forma de una emulsión de aceite en agua que comprende una mezcla de una fase acuosa continua y una fase de aceite dispersa. En algunos modos de realización, una fase de aceite dispersa está presente en una concentración de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 60 %; de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 50 %; de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 40 %; de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 30 %; de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 20 %; de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 60 %; de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 50 %; de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 40 %; de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 30 %; de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 20 %; de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 60 %; de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 50 %; de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 40 %; de aproximadamente un 20 % a aproximadamente un 60 %; de un 20 % a un 50 %, de un 20 % a aproximadamente un 40 %; de aproximadamente un 30 % a aproximadamente un 60 %; de aproximadamente un 30 % a aproximadamente un 50 %; o de aproximadamente un 40 % a aproximadamente un 60 % en peso (o volumen) de una composición de células lisadas emulsionada.
En algunos modos de realización, la lisis de células microbianas da como resultado la formación de una emulsión a partir de materiales endógenos en la célula o biomasa celular incluyendo, pero sin limitarse a, proteínas, fosfolípidos, carbohidratos y combinaciones de los mismos. Los términos "emulsión" y "emulsionado" se refieren a una mezcla de dos o más fases o capas inmiscibles en la que una fase o capa está dispersa en otra fase o capa. Los términos "romper", "desemulsionar", "desemulsión", y "rotura" se refieren a un proceso de separación de fases o capas inmiscibles de una emulsión. Por ejemplo, en algunos modos de realización, un proceso de la presente invención rompe una emulsión que contiene aceite de una sola fase a dos o más fases. En algunos modos de realización, las dos o más fases incluyen una fase oleosa y una fase acuosa. En algunos modos de realización, un proceso de la presente invención rompe una emulsión que contiene aceite en al menos tres fases. En algunos modos de realización, las tres fases se seleccionan de una fase oleosa, una fase acuosa y una fase sólida. En algunos modos de realización, las fases se seleccionan de una fase oleosa, una fase de emulsión, una fase acuosa y una fase sólida.
En algunos modos de realización, el tamaño de partícula medio de las gotitas de aceite formadas durante la desemulsión se selecciona de 5 micrómetros a 50 micrómetros; de 5 micrómetros a 45 micrómetros; de 5 micrómetros a 40 micrómetros de 5 micrómetros a 35 micrómetros de 5 micrómetros a 30 micrómetros; de 5 micrómetros a 25 micrómetros de 5 micrómetros a 20 micrómetros de 5 micrómetros a 15 micrómetros; de 10 micrómetros a 50 micrómetros de 10 micrómetros a 45 micrómetros de 10 micrómetros a 40 micrómetros de 10 micrómetros a 35 micrómetros de 10 micrómetros a 30 micrómetros de 10 micrómetros a 25 micrómetros de 10 micrómetros a 20 micrómetros de 10 micrómetros a 15 micrómetros de 15 micrómetros a 50 micrómetros de 15 micrómetros a 45 micrómetros de 15 micrómetros a 40 micrómetros de 15 micrómetros a 35 micrómetros de 15 micrómetros a 30 micrómetros de 15 micrómetros a 25 micrómetros de 15 micrómetros a 20 micrómetros de 20 micrómetros a 50 micrómetros de 20 micrómetros a 45 micrómetros de 20 micrómetros a 40 micrómetros de 20 micrómetros a 35 micrómetros de 20 micrómetros a 30 micrómetros de 20 micrómetros a 25 micrómetros de 25 micrómetros a 50 micrómetros de 25 micrómetros a 45 micrómetros de 25 micrómetros a 40 micrómetros de 25 micrómetros a 35 micrómetros de 25 micrómetros a 30 micrómetros de 30 micrómetros a 50 micrómetros de 30 micrómetros a 45 micrómetros de 30 micrómetros a 40 micrómetros de 30 micrómetros a 35 micrómetros de 35 micrómetros a 50 micrómetros de 35 micrómetros a 45 micrómetros de 35 micrómetros a 40 micrómetros de 40 micrómetros a 50 micrómetros de 40 micrómetros a 45 micrómetros; y de 45 micrómetros a 50 micrómetros. En otro modo de realización, el tamaño de partícula medio de las gotitas de aceite formadas durante la desemulsión se selecciona de al menos 10 micrómetros, al menos 15 micrómetros, al menos 20 micrómetros, al menos 25 micrómetros, al menos 30 micrómetros, al menos 35 micrómetros y al menos 40 micrómetros o más. En otros modos de realización, el tamaño de partícula medio de las gotitas de aceite formadas durante la desemulsión se selecciona de al menos 10 micrómetros, al menos 15 micrómetros, al menos 20 micrómetros y al menos 25 micrómetros. En algunos modos de realización, el tamaño de partícula medio se puede medir usando, por ejemplo, un analizador de tamaño de partícula Beckman Coulter LS13320 (Beckman Coulter, Brea, CA). En algunos modos de realización, el tamaño de partícula medio se puede medir usando, por ejemplo, un analizador de tamaño de partícula Malvern MS2000 (Malvern Instruments Ltd., Worcestershire, Reino Unido).
En algunos modos de realización, el emulsionante es un detergente. En algunos modos de realización, el emulsionante es un tensioactivo. En algunos modos de realización, el emulsionante se añade antes de, durante o después de la lisis. En un modo de realización, el emulsionante se añade después de la lisis. En algunos modos de realización, el emulsionante se añade a la composición de células lisadas. Como se usa en el presente documento, el término "emulsionante" se refiere a una sustancia que estabiliza una emulsión. Los emulsionantes se seleccionan de emulsionantes iónicos, emulsionantes no iónicos y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, el emulsionante es un emulsionante iónico.
En algunos modos de realización, el emulsionante iónico se selecciona de emulsionantes aniónicos, emulsionantes catiónicos y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, los emulsionantes aniónicos pueden ser emulsionantes de sulfato aniónicos, tales como, por ejemplo, sulfatos de alquilo (por ejemplo, laurilsulfato de amonio, laurilsulfato de sodio (SLS)/dodecilsulfato de sodio (SDS) y combinaciones de los mismos), sulfatos de éter de alquilo (por ejemplo, lauriléter sulfato de sodio, miretsulfato de sodio y combinaciones de los mismos), y combinaciones de los mismos; emulsionantes de sulfonato aniónicos, tales como, por ejemplo, docusatos (por ejemplo, dioctilsulfosuccinato de sodio, tensioactivos de sulfonato de flúor (por ejemplo, tensioactivos de flúor), sulfonatos de alquilbenceno y combinaciones de los mismos); emulsionantes de fosfato aniónicos (por ejemplo, fosfato de éter de alquilarilo, fosfato de éter de alquilo y combinaciones de los mismos); emulsionantes de carboxilato aniónicos (por ejemplo, carboxilatos de alquilo, (por ejemplo, estearato de sodio, laurilsarcosina de sodio, tensioactivos de carboxilato de flúor (por ejemplo, tensioactivos de flúor, perfluorooctanoato y combinaciones de los mismos), y combinaciones de los mismos); y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, el emulsionante es un emulsionante aniónico. En un modo de realización, el emulsionante aniónico se selecciona de un emulsionante de sulfato aniónico, un emulsionante de sulfonato aniónico, un emulsionante de fosfato aniónico, un emulsionante de carboxilato aniónico y combinaciones de los mismos. En otro modo de realización, un emulsionante aniónico es un emulsionante de sulfato aniónico. Todavía en otro modo de realización,
un emulsionante de sulfato aniónico se selecciona de laurilsulfato de amonio, dodecilsulfato de sodio, lauriléter sulfato de sodio, miretsulfato de sodio y combinaciones de los mismos. Aún en incluso otro modo de realización,
un emulsionante de sulfato aniónico es dodecilsulfato de sodio.
En algunos modos de realización, el emulsionante catiónico puede ser una amina primaria dependiente del pH;
una amina secundaria dependiente del pH; una amina terciaria dependiente del pH; diclorhidrato de actinidina; un
catión de amonio cuaternario permanentemente cargado (por ejemplo, sales de alquiltrimetilamonio (por ejemplo, bromuro de acetiltrimetilamonio (CTAB)/bromuro de hexadeciltrimetilamonio, cloruro de acetiltrimetilamonio
(CTAC) y combinaciones de los mismos), cloruro de metilpiridinio (CPC), cloruro de benzalconio (BAC), cloruro de benzatina (BZT), 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxano, cloruro de benzatina, bromuro de dioctadecildimetilamonio (DODAB) y combinaciones de los mismos); y combinaciones de los mismos.
En algunos modos de realización, el peso molecular del emulsionante se selecciona de 500 g/mol o menos,
450 g/mol o menos, 400 g/mol o menos, 350 g/mol o menos, y 300 g/mol o menos. En otro modo de realización,
el peso molecular del emulsionante se selecciona de 250 g/mol a 500 g/mol, de 250 g/mol a 450 g/mol, de
250 g/mol a 400 g/mol, de 250 g/mol a 350 g/mol, de 250 g/mol a 300 g/mol, de 300 g/mol a 500 g/mol, de
300 g/mol a 450 g/mol, de 300 g/mol a 400 g/mol, de 300 g/mol a 350 g/mol, de 350 g/mol a 500 g/mol, de
350 g/mol a 450 g/mol, de 350 g/mol a 400 g/mol, de 400 g/mol a 500 g/mol, de 400 g/mol a 450 g/mol, y de
450 g/mol a 500 g/mol. Por ejemplo, el peso molecular de SDS es de 288 g/mol y el peso molecular de CTAB es
de 364 g/mol. Aún en otro modo de realización, el peso molecular del emulsionante se selecciona de 250 g/mol a
450 g/mol, de 250 g/mol a 400 g/mol, de 250 g/mol a 350 g/mol, y de 250 g/mol a 300 g/mol.
En algunos modos de realización, se añade un emulsionante como polvo. En algunos modos de realización, se
añade un emulsionante en una solución que tiene una concentración de emulsionante en una cantidad de un 5 %
a un 50 %, de un 5 % a un 45 %, de un 5 % a un 40 %, de un 5 % a un 35 %, de un 5 % a un 30 %, de un 10 % a
un 50 %, de un 10 % a un 45 %, de un 10 % a un 40 %, de un 10 % a un 35 %, de un 10 % a un 30 %, de un 15 %
a un 50 %, de un 15 % a un 45 %, de un 15 % a un 40 %, de un 15 % a un 35 %, de un 15 % a un 30 %, de un
20 % a un 50 %, de un 20 % a un 45 %, de un 20 % a un 40 %, de un 20 % a un 35 %, de un 20 % a un 30 %, de
un 25 % a un 50 %, de un 25 % a un 45 %, de un 25 % a un 40 %, de un 25 % a un 35 %, de un 25 % a un 30 %, de un 30 % a un 50 %, de un 30 % a un 45 %, de un 30 % a un 40 %, y de un 30 % a un 35 %.
En algunos modos de realización, se añade un emulsionante (por ejemplo, en forma de polvo o en solución) en
una cantidad seleccionada de un 0,2 % a un 10 %, de un 0,2 % a un 9,5 %, de un 0,2 % a un 9 %, de un 0,2 % a
un 8,5 %, de un 0,2 % a un 8 %, de un 0,2 % a un 7,5 %, de un 0,2 % a un 7 %, de un 0,2 % a un 6,5 %, de un
0,2 % a un 6 %, de un 0,2 % a un 5,5 %, de un 0,2 % a un 5 %, de un 0,2 % a un 4,5 %, de un 0,2 % a un 4 %, de
un 0,2 % a un 3,5 %, de un 0,2 % a un 3 %, de un 0,2 % a un 2,5 %, de un 0,2 % a un 2 %, de un 0,2 % a un 1,5 %, de un 0,2 % a un 1 %, de un 0,2 % a un 0,5 %, de un 0,5 % a un 10 %, de un 0,5 % a un 9,5 %, de un 0,5 % a un
9 %, de un 0,5 % a un 8,5 %, de un 0,5 % a un 8 %, de un 0,5 % a un 7,5 %, de un 0,5 % a un 7 %, de un 0,5 % a
un 6,5 %, de un 0,5 % a un 6 %, de un 0,5 % a un 5,5 %, de un 0,5 % a un 5 %, de un 0,5 % a un 4,5 %, de un
0,5 % a un 4 %, de un 0,5 % a un 3,5 %, de un 0,5 % a un 3 %, de un 0,5 % a un 2,5 %, de un 0,5 % a un 2 %, de
un 0,5 % a un 1,5 %, de un 0,5 % a un 1 %, de un 1 % a un 10 %, de un 1 % a un 9,5 %, de un 1 % a un 9 %, de
un 1 % a un 8,5 %, de un 1 % a un 8 %, de un 1 % a un 7,5 %, de un 1 % a un 7 %, de un 1 % a un 6,5 %, de un
1 % a un 6 %, de un 1 % a un 5,5 %, de un 1 % a un 5 %, de un 1 % a un 4,5 %, de un 1 % a un 4 %, de un 1 % a un 3,5 %, de un 1 % a un 3 %, de un 1 % a un 2,5 %, de un 1 % a un 2 %, de un 1 % a un 1,5 %, de un 1,5 % a un 10 %, de un 1,5 % a un 9,5 %, de un 1,5 % a un 9 %, de un 1,5 % a un 8,5 %, de un 1,5 % a un 8 %, de un 1,5 %
a un 7,5 %, de un 1,5 % a un 7 %, de un 1,5 % a un 6,5 %, de un 1,5 % a un 6 %, de un 1,5 % a un 5,5 %, de un
1.5 % a un 5 %, de un 1,5 % a un 4,5 %, de un 1,5 % a un 4 %, de un 1,5 % a un 3,5 %, de un 1,5 % a un 3 %, de
un 1,5 % a un 2,5 %, de un 1,5 % a un 2 %, de un 2 % a un 10 %, de un 2 % a un 9,5 %, de un 2 % a un 9 %, de
un 2 % a un 8,5 %, de un 2 % a un 8 %, de un 2 % a un 7,5 %, de un 2 % a un 7 %, de un 2 % a un 6,5 %, de un
2 % a un 6 %, de un 2 % a un 5,5 %, de un 2 % a un 5 %, de un 2 % a un 4,5 %, de un 2 % a un 4 %, de un 2 % a un 3,5 %, de un 2 % a un 3 %, de un 2 % a un 2,5 %, de un 2,5 % a un 10 %, de un 2,5 % a un 9,5 %, de un 2,5 % a un 9 %, de un 2,5 % a un 8,5 %, de un 2,5 % a un 8 %, de un 2,5 % a un 7,5 %, de un 2,5 % a un 7 %, de un
2.5 % a un 6,5 %, de un 2,5 % a un 6 %, de un 2,5 % a un 5,5 %, de un 2,5 % a un 5 %, de un 2,5 % a un 4,5 %, de un 2,5 % a un 4 %, de un 2,5 % a un 3,5 %, de un 2,5 % a un 3 %, de un 3 % a un 10 %, de un 3 % a un 9,5 %, de un 3 % a un 9 %, de un 3 % a un 8,5 %, de un 3 % a un 8 %, de un 3 % a un 7,5 %, de un 3 % a un 7 %, de un
3 % a un 6,5 %, de un 3 % a un 6 %, de un 3 % a un 5,5 %, de un 3 % a un 5 %, de un 3 % a un 4,5 %, de un 3 %
a un 4 %, y de un 3 % a un 3,5 % en peso (o volumen) del caldo celular o emulsión que contiene aceite. En otro
modo de realización, se añade un emulsionante (por ejemplo, en forma de polvo o en solución) en una cantidad seleccionada de un 0,2 % a un 5 %, de un 0,5 % a un 5 %, de un 1 % a un 5 %, de un 1,5 % a un 5 %, de un 2 %
a un 5 %, de un 2,5 % a un 5 %, y de un 3 % a un 5 % en peso (o volumen) del caldo celular o emulsión que contiene aceite. Aún en otro modo de realización, se añade un emulsionante en una cantidad de desde un 0,2 %
a un 10 % en peso de la emulsión que contiene aceite.
En algunos modos de realización, el emulsionante disminuye la tensión interfacial (es decir, tensión superficial) del caldo de fermentación o composición de células lisadas. Como se usa en el presente documento, el término
"tensión interfacial" o "tensión superficial" se refiere a la fuerza que actúa sobre una línea imaginaria de un metro de longitud en la interfase entre dos fases. En algunos modos de realización, la tensión interfacial de la emulsión formada por el emulsionante es menor que la de una emulsión formada por los materiales endógenos. En algunos modos de realización, la tensión interfacial se puede medir en dinas/cm.
En algunos modos de realización, el emulsionante incrementa un valor absoluto del potencial zeta del caldo de fermentación o composición de células lisadas (es decir, incrementa un potencial zeta positivo o disminuye un potencial zeta negativo). En algunos modos de realización, la adición de un emulsionante aniónico puede dar como resultado un cambio descendente en el potencial zeta del caldo celular o emulsión que contiene aceite (por ejemplo, disminuye un potencial zeta positivo o se incrementa un potencial zeta negativo). En algunos modos de realización, la adición de un emulsionante catiónico puede dar como resultado un cambio ascendente en el potencial zeta del caldo celular o emulsión que contiene aceite (por ejemplo, se incrementa un potencial zeta positivo o se incrementa un potencial zeta negativo). Como se usa en el presente documento, el término "potencial zeta" se refiere al potencial electrocinético entre partículas en la emulsión. En algunos modos de realización, el potencial zeta se puede medir en mV. En algunos modos de realización, el valor absoluto del potencial zeta de la emulsión formada por el emulsionante es mayor que el de una emulsión formada por los materiales endógenos.
En algunos modos de realización, la adición de un emulsionante iónico crea una emulsión de aceite en agua. En algunos modos de realización, la emulsión de aceite en agua incluye, pero no se limita a, aceite, agua y un emulsionante iónico.
En algunos modos de realización, el proceso comprende además elevar el pH de la emulsión que contiene aceite. En algunos modos de realización, el pH se eleva añadiendo una base a la emulsión que contiene aceite. Las bases que se pueden usar para desemulsionar la emulsión que contiene aceite son las mismas que las expuestas anteriormente en el presente documento. En algunos modos de realización, el pH se selecciona de aproximadamente 7 o más; aproximadamente 8 o más; aproximadamente 9 o más; aproximadamente 10 o más; aproximadamente 11 o más; y aproximadamente 12 o más. En otros modos de realización, el pH se selecciona de un pH de 7 a 13; de 7 a 12; de 7 a 11; de 7 a 10; de 7 a 9; de 8 a 13; de 8 a 12; de 8 a 11; de 8 a 10; de 8 a 9; de 9 a 12; de 9 a 11; de 9 a 10; de 10 a 12; y de 10 a 11.
En algunos modos de realización, el proceso comprende además añadir una sal a la composición de células lisadas. El término "sal" se refiere a un compuesto iónico formado reemplazando un ion de hidrógeno de un ácido con un metal (por ejemplo, un metal alcalino, un metal alcalinotérreo y un metal de transición) o un compuesto cargado positivamente (por ejemplo, NH4+). En algunos modos de realización, la sal puede ser una sal de metal alcalino, sales de metales alcalinotérreos, sales de sulfato o combinaciones de las mismas. Las especies iónicas cargadas negativamente presentes en una sal incluyen, pero no se limitan a, haluros, sulfato, bisulfato, sulfito, fosfato, hidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, carbonato, bicarbonato y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, una sal se selecciona de cloruro de sodio, sulfato de sodio, carbonato de sodio, cloruro de calcio, sulfato de potasio, sulfato de magnesio, glutamato monosódico, sulfato de amonio, cloruro de potasio, cloruro de hierro, sulfato de hierro, sulfato de aluminio, acetato de amonio y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, una sal no incluye NaOH. Una sal se puede añadir como un sólido (por ejemplo, en forma cristalina, amorfa, granulada y/o granular) y/o como una solución (por ejemplo, una solución diluida, una solución saturada o una solución sobresaturada) que contiene, por ejemplo, agua.
En algunos modos de realización, la sal se añade en una cantidad de 5 g/l a 25 g/l, de 5 g/l a 10 g/l, de 10 g/l a 15 g/l, de 15 g/l a 20 g/l, de 20 g/l a 25 g/l o de 10 g/l a 20 g/l.
En otros modos de realización, se añade una sal a la composición de células lisadas en una cantidad de un 20 % 0 menos, de un 15 % o menos, de un 10 % o menos, de un 7,5 % o menos, de un 5 % o menos, o de un 2 % o menos en peso (o volumen), de la composición de células lisadas. En algunos modos de realización, se añade una sal a una composición de células lisadas en una cantidad de desde aproximadamente un 0,05 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 15 %, de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 15 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 4 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 2,5 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 1,5 %, de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 1 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 15 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 4 %, 1 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 2,5 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 1,5 %, de aproximadamente un 1,5 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 1,5 % a aproximadamente un 4 %, de aproximadamente un 1,5 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 1,5 % a aproximadamente un 2,5 %, de aproximadamente un 1,5 % a aproximadamente un 2 %, de aproximadamente un 2 % a un 20 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 15 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 10 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 4 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 2,5 %, de aproximadamente un 2,5 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 2,5 % a aproximadamente un 4 %, de aproximadamente un 2,5 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 3 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 3 % a aproximadamente un 4 %, de aproximadamente un 4 % a aproximadamente un 5 %, de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 15 %, de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un l0 %, de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 15 %, o de aproximadamente un 15 % a aproximadamente un 20 %, en peso (o volumen), de caldo celular. Por ejemplo, cuando un caldo celular pesa 1.000 kg, la sal que se añade en una cantidad de un 0,5 % a un 20 %, en peso (o volumen), requiere la adición de 5 kg a 200 kg de sal. En algunos modos de realización, se añade una sal a una composición de células lisadas en una cantidad de desde aproximadamente un 0,05 % a aproximadamente un 20 %, de aproximadamente un 0,1 % a aproximadamente un 20 % en peso (o volumen), de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 15 % en peso (o volumen), o de aproximadamente un 2 % a aproximadamente un 10 % en peso (o volumen) del cultivo celular.
En algunos modos de realización, el proceso comprende calentar las células o la composición de células lisadas hasta al menos 10 °C, al menos 20 °C, al menos 25 °C, al menos 30 °C, al menos 35 °C, al menos 40 °C, al menos 45 °C, al menos 50 °C, al menos 55 °C, al menos 60 °C, al menos 65 °C, al menos 70 °C, al menos 75 °C, al menos 80 °C, al menos 85 °C, al menos 90 °C, al menos 95 °C, o al menos 100 °C. En otros modos de realización, el proceso comprende calentar la composición de células lisadas y/o células hasta de aproximadamente 10 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 10 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 10 °C a aproximadamente 80 °C, de aproximadamente 10 °C a aproximadamente 70 °C, de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 80 °C, de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 70 °C, de aproximadamente 30 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 30 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 30 °C a aproximadamente 80 °C, de aproximadamente 30 °C a aproximadamente 70 °C, de aproximadamente 40 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 40 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 40 °C a aproximadamente 80 °C, de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 80 °C, de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 70 °C, de aproximadamente 60 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 60 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 60 °C a aproximadamente 80 °C, de aproximadamente 70 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 70 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 80 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 80 °C a aproximadamente 90 °C, o de aproximadamente 90 °C a aproximadamente 100 °C. En otros modos de realización, el proceso comprende calentar las células o la composición de células lisadas de aproximadamente 70 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 70 °C a aproximadamente 90 °C, de aproximadamente 80 °C a aproximadamente 100 °C, de aproximadamente 80 °C a aproximadamente 90 °C, o de aproximadamente 90 °C a aproximadamente 100 °C. Aún en otros modos de realización, el proceso comprende calentar las células o la composición de células lisadas hasta al menos 70 °C, al menos 75 °C, al menos 80 °C, al menos 85 °C, al menos 90 °C, al menos 95 °C, o al menos 100 °C.
En algunos modos de realización, las células y/o una composición de células lisadas se pueden calentar en un sistema cerrado o en un sistema con un evaporador. En algunos modos de realización, las células y/o una composición de células lisadas se pueden calentar en un sistema con un evaporador de modo que una parte del agua presente en las células y/o la composición de células lisadas se retira por evaporación. En algunos modos de realización, el proceso comprende calentar células y/o una composición de células lisadas en un sistema con un evaporador para retirar hasta un 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 % o 50 % en peso (o volumen) de agua presente en las células y/o la composición de células lisadas. En algunos modos de realización, el proceso comprende calentar las células y/o una composición de células lisadas en un sistema con un evaporador para retirar de un 1 % a un 50 %, de un 1 % a un 45 %, de un 1 % a un 40 %, de un 1 % a un 35 %, de un 1 % a un 30 %, de un 1 % a un 25 %, de un 1 % a un 20 %, de un 1 % a un 15 %, de un 1 % a un 10 %, de un 1 % a un 5 %, de un 5 % a un 50 %, de un 5 % a un 45 %, de un 5 % a un 40 %, de un 5 % a un 35 %, de un 5 % a un 30 %, de un 5 % a un 25 %, de un 5 % a un 20 %, de un 5 % a un 15 %, de un 5 % a un 10 %, de un 10 % a un 50 %, de un 10 % a un 45 %, de un 10 % a un 40 %, de un 10 % a un 35 %, de un 10 % a un 30 %, de un 10 % a un 25 %, de un 10 % a un 20 %, de un 10 % a un 15 %, de un 15 % a un 50 %, de un 15 % a un 45 %, de un 15 % a un 40 %, de un 15 % a un 35 %, de un 15 % a un 30 %, de un 15 % a un 25 %, de un 15 % a un 20 %, de un 20 % a un 50 %, de un 20 % a un 45 %, de un 20 % a un 40 %, de un 20 % a un 35 %, de un 20 % a un 30 %, de un 20 % a un 25 %, de un 25 % a un 50 %, de un 25 % a un 45 %, de un 25 % a un 40 %, de un 25 % a un 35 %, de un 25 % a un 30 %, de un 30 % a un 50 %, de un 30 % a un 45 %, de un 30 % a un 40 %, de un 30 % a un 35 %, de un 35 % a un 50 %, de un 35 % a un 45 %, de un 35 % a un 40 %, de un 40 % a un 50 %, de un 40 % a un 45 %, o de un 45 % a un 50 % en peso (o volumen) de agua.
Los términos "agitar" y "agitación" se refieren a un proceso de afectar al movimiento en las células y/o la composición celular lisada a través de la aplicación de fuerza. En algunos modos de realización, el proceso comprende agitar las células y/o la composición de células lisadas agitando, mezclando, combinando, vibrando o una combinación de los mismos.
En algunos modos de realización, el agitador es un agitador de dispersión que dispersa una base y/o sal en las células y/o la composición de células lisadas. En algunos modos de realización, el agitador tiene una placa de calentamiento. En algunos modos de realización, el agitador tiene un manto para agitar. En algunos modos de realización, un agitador tiene uno o más impulsores. Como se usa en el presente documento, "impulsor" se refiere a un dispositivo dispuesto para impartir movimiento a las células o a una composición de células lisadas cuando se rota. Los impulsores adecuados para su uso con la presente invención incluyen impulsores de palas rectas, impulsores de palas Rushton, impulsores de flujo axial, impulsores de flujo radial, impulsores de disco de palas cóncavas, impulsores de alta eficacia, hélices, paletas, turbinas y combinaciones de los mismos.
En algunos modos de realización, el proceso de la invención comprende agitar las células y/o la composición de células lisadas a de 0,1 CV/1000 gal a 10 CV/1000 gal, de 0,5 CV/1000 gal a 8 CV/1000 gal, de 1 CV/1000 gal a 6 CV/1000 gal, o de 2 CV/1000 gal a 5 CV/1000 gal de composición (1 CV/1000 gal = 0,2 kW/m3). En algunos modos de realización, el proceso comprende agitar las células y/o la composición de células lisadas a de 0,1 CV/1000 gal a 10 CV/1000 gal de composición.
En algunos modos de realización, la invención comprende agitar a 10 rpm o menos, 20 rpm o menos, 50 rpm o menos, 100 rpm o menos, 150 rpm o menos, 200 rpm o menos, 250 rpm o menos, 300 rpm o menos, 350 rpm o menos, 400 rpm o menos, de 10 rpm a 400 rpm, de 10 rpm a 350 rpm, de 10 rpm a 300 rpm, de 10 rpm a 250 rpm, de 10 rpm a 200 rpm, de 10 rpm a 150 rpm, de 10 rpm a 100 rpm, de 10 rpm a 50 rpm, de 10 rpm a 20 rpm, de 20 rpm a 400 rpm, de 20 rpm a 350 rpm, de 20 rpm a 300 rpm, de 20 rpm a 250 rpm, de 20 rpm a 200 rpm, de 20 rpm a 150 rpm, de 20 rpm a 100 rpm, de 20 rpm a 50 rpm, de 50 rpm a 400 rpm, de 50 rpm a 350 rpm, de 50 rpm a 300 rpm, de 50 rpm a 250 rpm, de 50 rpm a 200 rpm, de 50 rpm a 150 rpm, de 50 rpm a 100 rpm, de 100 rpm a 400 rpm, de 100 rpm a 350 rpm, de 100 rpm a 300 rpm, de 100 rpm a 250 rpm, de 100 rpm a 200 rpm, de 100 rpm a 150 rpm, de 150 rpm a 400 rpm, de 150 rpm a 350 rpm, de 150 rpm a 300 rpm, de 150 rpm a 250 rpm, de 150 rpm a 200 rpm, de 200 rpm a 400 rpm, de 200 rpm a 350 rpm, de 200 rpm a 300 rpm, de 200 rpm a 250 rpm, de 250 rpm a 400 rpm, de 250 rpm a 350 rpm, de 250 rpm a 300 rpm, de 300 rpm a 400 rpm, de 300 rpm a 350 rpm, o de 350 rpm a 400 rpm. En algunos modos de realización, la agitación se produce a una tasa de 350 rpm o menos.
En algunos modos de realización, el proceso incluye agitar las células y/o una composición de células lisadas usando un agitador que tiene una velocidad de punta del impulsor de 90 pies/min a 1200 pies/min, de 200 pies/min a 1000 pies/min, de 300 pies/min a 800 pies/min, de 400 pies/min a 700 pies/min o de 500 pies/min a 600 pies/min (1 pie/min = 0,51 cm/s). En algunos modos de realización, el proceso comprende agitar con un agitador que tiene una velocidad de punta del impulsor de 200 pies/min a 1000 pies/min.
En algunos modos de realización, un proceso incluye agitar células y/o una composición de células lisadas usando un agitador que tiene una velocidad de punta del impulsor de 5 cm/s a 900 cm/s, de 5 cm/s a 750 cm/s, de 5 cm/s a 500 cm/s, de 5 cm/s a 350 cm/s, de 5 cm/s a 300 cm/s, de 5 cm/s a 250 cm/s, de 5 cm/s a 200 cm/s, de 5 cm/s a 150 cm/s, de 5 cm/s a 100 cm/s, de 5 cm/s a 50 cm/s, de 5 cm/s a 25 cm/s, de 25 cm/s a 900 cm/s, de 25 cm/s a 750 cm/s, de 25 cm/s a 500 cm/s, de 25 cm/s a 350 cm/s, de 25 cm/s a 300 cm/s, de 25 cm/s a 250 cm/s, de 25 cm/s a 200 cm/s, de 25 cm/s a 150 cm/s, de 25 cm/s a 100 cm/s, de 25 cm/s a 50 cm/s, de 50 cm/s a 900 cm/s, de 50 cm/s a 750 cm/s, de 50 cm/s a 500 cm/s, de 50 cm/s a 350 cm/s, de 50 cm/s a 300 cm/s, de 50 cm/s a 250 cm/s, de 50 cm/s a 200 cm/s, de 50 cm/s a 150 cm/s, de 50 cm/s a 100 cm/s, de 100 cm/s a 900 cm/s, de 100 cm/s a 750 cm/s, de 100 cm/s a 500 cm/s, de 100 cm/s a 350 cm/s, de 100 cm/s a 300 cm/s, de 100 cm/s a 250 cm/s, de 100 cm/s a 200 cm/s, de 100 cm/s a 150 cm/s, de 150 cm/s a 900 cm/s, de 150 cm/s a 750 cm/s, de 150 cm/s a 500 cm/s, de 150 cm/s a 350 cm/s, de 150 cm/s a 300 cm/s, de 150 cm/s a 250 cm/s, de 150 cm/s a 200 cm/s, de 200 cm/s a 900 cm/s, de 200 cm/s a 750 cm/s, de 200 cm/s a 500 cm/s, de 200 cm/s a 350 cm/s, de 200 cm/s a 300 cm/s, de 200 cm/s a 250 cm/s, de 250 cm/s a 900 cm/s, de 250 cm/s a 750 cm/s, de 250 cm/s a 500 cm/s, de 250 cm/s a 350 cm/s, de 250 cm/s a 300 cm/s, de 300 cm/s a 900 cm/s, de 300 cm/s a 750 cm/s, de 300 cm/s a 500 cm/s, de 300 cm/s a 350 cm/s, de 350 cm/s a 900 cm/s, de 350 cm/s a 850 cm/s, de 350 cm/s a 800 cm/s, de 350 cm/s a 750 cm/s, de 350 cm/s a 700 cm/s, de 350 cm/s a 650 cm/s, de 350 cm/s a 600 cm/s, de 350 cm/s a 550 cm/s, de 350 cm/s a 500 cm/s, de 350 cm/s a 450 cm/s, de 350 cm/s a 400 cm/s, de 400 cm/s a 900 cm/s, de 400 cm/s a 850 cm/s, de 400 cm/s a 800 cm/s, de 400 cm/s a 750 cm/s, de 400 cm/s a 700 cm/s, de 400 cm/s a 650 cm/s, de 400 cm/s a 600 cm/s, de 400 cm/s a 550 cm/s, de 400 cm/s a 500 cm/s, de 400 cm/s a 450 cm/s, de 450 cm/s a 900 cm/s, de 450 cm/s a 850 cm/s, de 450 cm/s a 800 cm/s, de 450 cm/s a 750 cm/s, de 450 cm/s a 700 cm/s, de 450 cm/s a 650 cm/s, de 450 cm/s a 600 cm/s, de 450 cm/s a 550 cm/s, de 450 cm/s a 500 cm/s, de 500 cm/s a 900 cm/s, de 500 cm/s a 850 cm/s, de 500 cm/s a 800 cm/s, de 500 cm/s a 750 cm/s, de 500 cm/s a 700 cm/s, de 500 cm/s a 650 cm/s, de 500 cm/s a 600 cm/s, de 500 cm/s a 550 cm/s, de 550 cm/s a 900 cm/s, de 550 cm/s a 850 cm/s, de 550 cm/s a 800 cm/s, de 550 cm/s a 750 cm/s, de 550 cm/s a 700 cm/s, de 550 cm/s a 650 cm/s, de 550 cm/s a 600 cm/s, de 600 cm/s a 900 cm/s, de 600 cm/s a 850 cm/s, de 600 cm/s a 800 cm/s, de 600 cm/s a 750 cm/s, de 600 cm/s a 700 cm/s, de 600 cm/s a 650 cm/s, de 650 cm/s a 900 cm/s, de 650 cm/s a 850 cm/s, de 650 cm/s a 800 cm/s, de 650 cm/s a 750 cm/s, de 650 cm/s a 700 cm/s, de 700 cm/s a 900 cm/s, de 700 cm/s a 850 cm/s, de 700 cm/s a 800 cm/s, de 700 cm/s a 750 cm/s, de 750 cm/s a 900 cm/s, de 750 cm/s a 850 cm/s, de 750 cm/s a 800 cm/s, de 800 cm/s a 900 cm/s, de 800 cm/s a 850 cm/s, o de 850 cm/s a 900 cm/s. El término "velocidad de punta del impulsor" se refiere a la velocidad de la parte más exterior del impulsor a medida que rota alrededor de su eje central.
En algunos modos de realización, la agitación (y etapas adicionales opcionales como se describe en el presente documento) se realiza en un recipiente que comprende un impulsor, en el que la proporción del diámetro de impulsor con respecto al volumen de recipiente es de 0,1 a 0,5, de 0,1 a 0,4, de 0,2 a 0,5, de 0,2 a 0,4, de 0,3 a 0,5 o de 0,3 a 0,4.
En algunos modos de realización, la agitación (y etapas adicionales opcionales como se describe en el presente documento) se realiza en un recipiente que comprende un impulsor, en el que la proporción del diámetro de impulsor con respecto al diámetro interior del recipiente es de al menos 0,25, al menos 0,34, al menos 0,65, de 0,25 a 0,65, de 0,25 a 0,33, de 0,3 a 0,6, de 0,3 a 0,5, de 0,3 a 0,4, de 0,34 a 0,65, de 0,34 a 0,6, de 0,34 a 0,55, de 0,37 a 0,55, de 0,4 a 0,65, de 0,4 a 0,6, de 0,4 a 0,5 o de 0,42 a 0,55.
En algunos modos de realización, la agitación comprende mezclar células y/o una composición de células lisadas de modo que las células y/o la composición de células lisadas se colocan bajo condiciones de flujo descritas por un número de Reynolds de 10 a 10.000, de 1.000 a 10.000, de 1.500 a 10.000 o de 2.000 a 10.000. En algunos modos de realización, una emulsión de células lisadas durante la agitación tiene un número de Reynolds de 2.000 o más, 3.000 o más, o 5.000 o más, o de 2.000 a 10.000, de 3.000 a 10.000, o de 5.000 a 10.000.
En algunos modos de realización, los recipientes de agitación pueden tener dos impulsores. En algunos modos de realización, los impulsores son impulsores de palas Rushton. En algunos modos de realización, los impulsores se separan entre sí por una distancia al menos igual a un diámetro del impulsor más pequeño. En algunos modos de realización, los impulsores son de 76,2 - 101,6 cm (de 30 pulgadas a 40 pulgadas), 83,8 - 94,0 cm (de 33 pulgadas a 37 pulgadas), 83,8 cm, 86,4 cm, 89,0 cm, 91,4 cm o 94,0 cm (33 pulgadas, 34 pulgadas, 35 pulgadas, 36 pulgadas o 37 pulgadas) de punta a punta. En algunos modos de realización, los recipientes de agitación tienen un volumen de al menos 10.000 litros, al menos 20.000 litros, al menos 30.000 litros, al menos 40.000 litros o al menos 50.000 litros. En algunos modos de realización, los recipientes de agitación tienen un diámetro interior de 228 cm a 279 cm, de 241 cm a 266 cm, 248 cm, 251 cm, 254 cm, 256 cm o 259 cm (de 90 pulgadas a 110 pulgadas, de 95 pulgadas a 105 pulgadas, 98 pulgadas, 99 pulgadas, 100 pulgadas, 101 pulgadas o 102 pulgadas). En algunos modos de realización, un primer impulsor se localiza de 38,1 a 50,8 cm, de 40,6 cm a 48,3 cm o de 43,2 cm a 45,7 cm (de 15 pulgadas a 20 pulgadas, de 16 pulgadas a 19 pulgadas o de 17 pulgadas a 18 pulgadas) de la parte inferior del recipiente de agitación y un segundo impulsor se localiza de 152 cm a 203 cm, de 165 cm a 190 cm, 173 cm, 175 cm, 178 cm, 180 cm, 182 cm, 185 cm, 188 cm o 191 cm (de 60 pulgadas a 80 pulgadas, de 65 pulgadas a 75 pulgadas, 68 pulgadas, 69 pulgadas, 70 pulgadas, 71 pulgadas, 72 pulgadas, 73 pulgadas, 74 pulgadas o 75 pulgadas) por encima del primer impulsor. En algunos modos de realización, una composición de células lisadas se agita a al menos 50 rpm, al menos 60 rpm o al menos 70 rpm. En algunos modos de realización, una composición de células lisadas se agita a de 50 rpm a 70 rpm, de 50 rpm a 60 rpm o de 60 rpm a 70 rpm.
En algunos modos de realización, el proceso comprende además agitar las células o composición de células lisadas.
En algunos modos de realización, el proceso comprende desemulsionar una emulsión que contiene aceite y a continuación separar el aceite de la emulsión.
En un modo de realización alternativo, el número de veces que se lava la composición de células lisadas se puede reducir en 1 vez, 2 veces, 3 veces o más. En algunos modos de realización, el lavado no es más de 1 vez, 2 veces o 3 veces.
En algunos modos de realización, el proceso se puede producir en un único recipiente. En algunos modos de realización, el único recipiente incluye un recipiente de fermentación. En algunos modos de realización, el recipiente de fermentación puede tener un volumen de al menos 20.000 litros, al menos 50.000 litros, al menos 100.000 litros, al menos 120.000 litros, al menos 150.000 litros, al menos 200.000 litros, o al menos 220.000 litros. En algunos modos de realización, el recipiente de fermentación puede tener un volumen de 20.000 litros a 220.000 litros, de 20.000 litros a 100.000 litros, de 20.000 litros a 50.000 litros, de 50.000 litros a 220.000 litros, de 50.000 litros a 150.000 litros, de 50.000 litros a 100.000 litros, de 100.000 litros a 220.000 litros, de 100.000 litros a 150.000 litros, de 100.000 litros a 120.000 litros, de 150.000 litros a 220.000 litros, de 150.000 litros a 200.000 litros, o de 200.000 litros a 220.000 litros.
En algunos modos de realización, una cantidad de células o una composición de células lisadas formada en un recipiente se puede transferir a uno o más recipientes de agitación. En algunos modos de realización, los recipientes de agitación pueden tener un volumen de al menos 20.000 litros, al menos 30.000 litros, al menos 40.000 litros o al menos 50.000 litros. En algunos modos de realización, los recipientes de agitación pueden tener un volumen de 20.000 litros a 50.000 litros, de 20.000 litros a 40.000 litros, de 20.000 litros a 30.000 litros, de 30.000 litros a 50.000 litros, de 30.000 litros a 40.000 litros o de 40.000 litros a 50.000 litros.
En general, los procesos descritos en el presente documento no utilizan un disolvente orgánico para obtener, separar o recuperar de otro modo un aceite microbiano de las células microbianas. En algunos modos de realización, no se usa ningún disolvente orgánico para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas.
En otro modo de realización, un disolvente orgánico no se añade a las células, no se añade a una composición de
células lisadas y/o no se añade a un aceite durante los procesos divulgados en el presente documento en una
cantidad o concentración suficiente para obtener un aceite microbiano. Los disolventes orgánicos incluyen disolventes polares, disolventes no polares, disolventes miscibles en agua, disolventes inmiscibles en agua y combinaciones de los mismos.
En algunos modos de realización, el proceso comprende además separar una emulsión que contiene aceite de
una composición de células lisadas. En algunos modos de realización, el proceso comprende separar una emulsión
que contiene aceite de una composición de células lisadas calentando la composición de células lisadas. En
algunos modos de realización, se separa un aceite de una composición de células lisadas desemulsionada centrifugando la composición de células lisadas. En algunos modos de realización, la separación comprende centrifugar a una temperatura de 10 °C a 100 °C. En algunos modos de realización, la emulsión que contiene aceite
se separa de la composición de células lisadas elevando primero el pH (por ejemplo, añadiendo una base que se
describe anteriormente en el presente documento) y a continuación centrifugar la emulsión que contiene aceite y
la composición de células lisadas para obtener la emulsión que contiene aceite.
En algunos modos de realización, el proceso comprende separar una emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas centrifugando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas
a una temperatura de al menos 10 °C, al menos 20 °C, al menos 25 °C, al menos 30 °C, al menos 35 °C, al menos
40 °C, al menos 45 °C, al menos 50 °C, al menos 55 °C, al menos 60 °C, al menos 65 °C, al menos 70 °C, al
menos 75 °C, al menos 80 °C, al menos 85 °C, al menos 90 °C, al menos 95 °C, o al menos 100 °C. En algunos
modos de realización, el proceso comprende separar una emulsión que contiene aceite de la composición de
células lisadas centrifugando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas a una temperatura
de 10 °C a 100 °C, de 10 °C a 90 °C, de 10 °C a 80 °C, de 20 °C a 100 °C, de 20 °C a 90 °C, de 20 °C a 80 °C, de
25 °C a 100 °C, de 25 °C a 90 °C, de 25 °C a 80 °C, de 25 °C a 75 °C, de 30 °C a 100 °C, de 30 °C a 90 °C, de
a 100 °C, de 40 °C a 90 °C, de 40 °C a 80 °C, de 50 °C a 100 °C, de 50 °C a 90 °C, de a 70 °C, de 60 °C a 100 °C, de 60 °C a 90 °C, de 60 °C a 80 °C, de 60 °C a 70 °C, de
Figure imgf000015_0001
a 90 °C, de 70 °C a 80 °C, de 80 °C a 100 °C, de 80 °C a 90 °C, o de 90 °C a 100 °C.
En algunos modos de realización, la centrifugación se realiza a una tasa de alimentación (de la composición de
células lisadas en una centrífuga) de 1 kilogramo por minuto (kg/min) a 500 kg/min, de 1 kg/min a 400 kg/min, de
1 kg/min a 300 kg/min, de 1 kg/min a 200 kg/min, de 1 kg/min a 100 kg/min, de 1 kg/min a 75 kg/min, de 1 kg/min
a 50 kg/min, de 1 kg/min a 40 kg/min, de 1 kg/min a 30 kg/min, de 1 kg/min a 25 kg/min, de 1 kg/min a 10 kg/min,
de 10 kg/min a 500 kg/min, de 10 kg/min a 400 kg/min, de 10 kg/min a 300 kg/min, de 10 kg/min a 200 kg/min, de
10 kg/min a 100 kg/min, de 10 kg/min a 75 kg/min, de 10 kg/min a 50 kg/min, de 10 kg/min a 40 kg/min, de
10 kg/min a 30 kg/min, de 20 kg/min a 500 kg/min, de 20 kg/min a 400 kg/min, de 20 kg/min a 300 kg/min, de
20 kg/min a 200 kg/min, de 20 kg/min a 100 kg/min, de 20 kg/min a 75 kg/min, de 20 kg/min a 50 kg/min, de
20 kg/min a 40 kg/min, de 25 kg/min a 500 kg/min, de 25 kg/min a 400 kg/min, de 25 kg/min a 300 kg/min, de
25 kg/min a 200 kg/min, de 25 kg/min a 100 kg/min, de 25 kg/min a 75 kg/min, de 25 kg/min a 50 kg/min, de
30 kg/min a 60 kg/min, de 30 kg/min a 50 kg/min, de 30 kg/min a 40 kg/min, de 50 kg/min a 500 kg/min, de
100 kg/min a 500 kg/min, o de 200 kg/min a 500 kg/min.
En algunos modos de realización, el proceso comprende centrifugar la composición de células lisadas a una fuerza centrífuga de 1.000 g a 25.000 g, de 1.000 g a 20.000 g, de 1.000 g a 10.000 g, de 2.000 g a 25.000 g, de 2.000 g
a 20.000 g, de 2.000 g a 15.000 g, de 3.000 g a 25.000 g, de 3.000 g a 20.000 g, de 5.000 g a 25.000 g, de 5.000 g
a 20.000 g, de 5.000 g a 15.000 g, de 5.000 g a 10.000 g, de 5.000 g a 8.000 g, de 10.000 g a 25.000 g, de 15.000 g
a 25.000 g, o al menos 1.000 g, al menos 2.000, g, al menos 4.000 g, al menos 5.000 g, al menos 7.000 g, al
menos 8.000 g, al menos 10.000 g, al menos 15.000 g, al menos 20.000 g, o al menos 25.000 g. Como se usa en
el presente documento, "g" se refiere a gravedad estándar o aproximadamente 9,8 m/s2. En algunos modos de realización, el proceso comprende centrifugar una composición de células lisadas desemulsionada a de 4.000 rpm
a 14.000 rpm, de 4.000 rpm a 10.000 rpm, de 6.000 rpm a 14.000 rpm, de 6.000 rpm a 12.000 rpm, de 8.000 a
14.000 rpm, de 8.000 rpm a 12.000 rpm, o de 8.000 rpm a 10.000 rpm.
En algunos modos de realización, el aceite se puede recuperar, por ejemplo, decantando, desespumando, aspirando, bombeando, succionando, extrayendo, sifonando o recuperando de otro modo el aceite microbiano de
la superficie de la composición separada.
En algunos modos de realización, el proceso comprende secar el aceite que se ha recuperado para retirar el agua
del aceite. En algunos modos de realización, secar el aceite puede incluir, pero no se limita a, calentar el aceite
para evaporar el agua. En algunos modos de realización, después del secado, el aceite tiene un porcentaje de contenido en agua en peso (o volumen) de aceite que es de menos de un 3 %, menos de un 2,5 %, menos de un
2 %, menos de un 1,5 %, menos de un 1 %, menos de un 0,5 %, menos de un 0,1 %, o un 0 %. En algunos modos
de realización, después del secado, el aceite tiene un porcentaje de contenido en agua en peso (o volumen) de
aceite de un 0 % a un 3 %, de un 0 % a un 2,5 %, de un 0 % a un 2 %, de un 0 % a un 1,5 %, de un 0 % a un 1 %, de un 0 % a un 0,5 %, de un 0,1 % a un 3 %, de un 0,1 % a un 2,5 %, de un 0,1 % a un 2 %, de un 0,1 % a un 1,5 %, de un 0,1 % a un 1 %, de un 0,1 % a un 0,5 %, de un 0,5 % a un 3 %, de un 0,5 % a un 2,5 %, de un 0,5 % a un 2 %, de un 0,5 % a un 1,5 %, de un 0,5 % a un 1 %, de un 1 % a un 3 %, de un 1 % a un 2,5 %, de un 1 % a un 2 %, de un 1 % a un 1,5 %, de un 1,5 % a un 3 %, de un 1,5 % a un 2,5 %, de un 1,5 % a un 2 %, de un 2 % a un 3 %, de un 2 % a un 2,5 %, o de un 2,5 % a un 3 %.
En el presente documento se divulga un aceite microbiano que se puede obtener a partir de células microbianas por cualquiera de los procesos divulgados en el presente documento. En algunos modos de realización, el aceite comprende al menos un 30 % en peso (o volumen) de ácido araquidónico. En algunos modos de realización, el aceite comprende al menos un 30 % en peso (o volumen) de ácido docosahexaenoico.
El valor de anisidina (VA) se determina de acuerdo con el procedimiento oficial AOCS Cd 18-90. En un modo de realización, el aceite descrito en el presente documento tiene un VA de menos de aproximadamente 50; menos de aproximadamente 40; menos de aproximadamente 30; menos de aproximadamente 20; menos de aproximadamente 15; o menos de aproximadamente 10. En algunos modos de realización, el aceite tiene un VA de menos de aproximadamente 50. El término valor de anisidina se refiere a la medida de productos de reacción secundarios, tales como aldehídos y cetonas que se producen durante la oxidación del aceite.
El valor de peróxido (VP) se determina de acuerdo con el procedimiento oficial AOCS Cd 8-53. En un modo de realización, el aceite descrito en el presente documento tiene un VP de menos de aproximadamente 20 meq/kg; menos de aproximadamente 10 meq/kg; o menos de aproximadamente 5 meq/kg. En algunos modos de realización, el aceite tiene un VP de menos de aproximadamente 5 meq/kg. El término valor de peróxido se refiere a la medida de productos de reacción primarios, tales como peróxidos e hidroperóxidos, que se producen durante la oxidación del aceite. Como se usa en el presente documento, el valor de peróxido se mide en meq/kg.
En algunos modos de realización, el aceite tiene un contenido en fósforo de 100 ppm o menos, 95 ppm o menos, 90 ppm o menos, 85 ppm o menos, 80 ppm o menos, 75 ppm o menos, 70 ppm o menos, 65 ppm o menos, 60 ppm o menos, 55 ppm o menos, 50 ppm o menos, 45 ppm o menos, 40 ppm o menos, 35 ppm o menos, 30 ppm o menos, 25 ppm o menos, 20 ppm o menos, 15 ppm o menos, 10 ppm o menos, 9 ppm o menos, 8 ppm o menos, 7 ppm o menos, 6 ppm o menos, 5 ppm o menos, 4 ppm o menos, 3 ppm o menos, 2 ppm o menos, o 1 ppm o menos. En algunos modos de realización, el aceite tiene un contenido en fósforo de aproximadamente 8 ppm o menos.
En algunos modos de realización, el aceite comprende uno o más AGPI. En algunos modos de realización, el aceite comprende al menos un 10 %, al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos un 25 %, al menos un 30 %, al menos un 35 %, al menos un 40 %, al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 % o al menos un 80 % de AGPI (en peso de AGPI). En algunos modos de realización, el aceite comprende al menos un 10 %, al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos un 25 %, al menos un 30 %, al menos un 35 %, al menos un 40 %, al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 % o al menos un 80 % de DHA (en peso de DHA), y/o al menos un 10 %, al menos un 15 %, o al menos un 20 % de DPA n-6 (en peso de DPA n-6), y/o al menos un 10 %, al menos un 15 %, o al menos un 20 % de EPA (en peso de EPA), y/o al menos un 10 %, al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos un 25 %, al menos un 30 %, al menos un 35 %, al menos un 40 %, al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 55 %, al menos un 60 %, al menos un 65 %, al menos un 70 %, al menos un 75 %, o al menos un 80 % de ARA (en peso de ARA). En algunos modos de realización, un aceite comprende menos de un 50 %, menos de un 40 %, menos de un 30 %, menos de un 20 %, menos de un 15 %, menos de un 10 % o menos de un 5 % de EPA (en peso de EPA). En algunos modos de realización, un aceite comprende menos de un 50 %, menos de un 40 %, menos de un 30 %, menos de un 20 %, menos de un 15 %, menos de un 10 % o menos de un 5 % de DHA (en peso de DHA). En algunos modos de realización, un aceite comprende menos de un 10 %, menos de un 5 %, menos de un 2 %, menos de un 1 % o menos de un 0,5 % en peso (o volumen) de esteroles.
En algunos modos de realización, un aceite comprende al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, o de un 50 % a un 95 %, de un 50 % a un 90 %, de un 50 % a un 85 %, de un 50 % a un 80 %, de un 50 % a un 75 %, de un 60 % a un 95 %, de un 60 % a un 90 %, de un 60 % a un 85 %, de un 70 % a un 95 %, de un 70 % a un 90 %, de un 70 % a un 85 %, de un 75 % a un 95 %, de un 75 % a un 90 %, de un o 75 % a un 85 %, en peso (o volumen) de triglicéridos.
En algunos modos de realización, los triglicéridos comprenden al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 35 %, al menos un 40 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 % o al menos un 80 % en peso (o volumen) de DHA. En algunos modos de realización, los triglicéridos comprenden al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 35 %, al menos un 40 %, al menos un 45 %, al menos un 50 %, al menos un 55 %, al menos un 60 %, al menos un 65 %, al menos un 70 %, al menos un 75 %, o al menos un 80 % en peso (o volumen) de ARA. En algunos modos de realización, los triglicéridos comprenden al menos un 50 %, al menos un 40 %, al menos un 30 %, al menos un 20 %, al menos un 15 %, al menos un 10 % o al menos un 5 % en peso (o volumen) de EPA.
En un modo de realización, el aceite microbiano obtenido y/o recuperado por cualquiera de los procesos descritos en el presente documento es un aceite bruto. En otro modo de realización, el aceite descrito en el presente documento es un aceite refinado. Un "aceite bruto" es un aceite obtenido de células microbianas sin procesamiento adicional. Un "aceite refinado" es un aceite obtenido tratando un aceite bruto con un proceso estándar de refinado, blanqueo y/o desodorización. Véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. n.° 5.130.242. En algunos modos de realización, el refinado incluye, pero no se limita a, refinado base, desgomado, tratamiento ácido, tratamiento alcalino, enfriamiento, calentamiento, blanqueo, desodorización, desacidificación y combinaciones de los mismos.
En algunos modos de realización, el proceso comprende concentrar un caldo de fermentación que comprende células microbianas. En algunos modos de realización, el proceso comprende concentrar la composición de células lisadas. Como se usa en el presente documento, "concentrar" se refiere a retirar agua de una composición. La concentración puede incluir, pero no se limita a, evaporación, secado químico, centrifugado y similares, y combinaciones de los mismos. En algunos modos de realización, una composición de células o una composición de células lisadas se concentra para proporcionar una concentración de aceite de al menos un 4 %, al menos un 5 %, al menos un 10 %, al menos un 15 %, al menos un 20 %, al menos un 25 %, o al menos un 30 % en peso (o volumen) de la composición. En algunos modos de realización, una composición de células o una composición de células lisadas se concentra para proporcionar una concentración de aceite de un 4 % a un 40 %, de un 4 % a un 30 %, de un 4 % a un 20 %, de un 4 % a un 15 %, de un 5 % a un 40 %, de un 5 % a un 30 %, de un 5 % a un 20 %, de un 10 % a un 40 %, de un 10 % a un 30 %, de un 10 % a un 20 %, de un 15 % a un 40 %, de un 15 % a un 30 %, de un 20 % a un 40 %, de un 20 % a un 30 %, de un 25 % a un 40 %, o de un 30 % a un 40 % en peso (o volumen) de la composición.
Las condiciones de cultivo eficaces para una célula microbiana para su uso con la invención incluyen, pero no se limitan a, condiciones de medios, biorreactor, temperatura, pH y oxígeno eficaces que permiten la producción de aceite. Un medio eficaz se refiere a cualquier medio en el que se cultiva típicamente una célula microbiana, por ejemplo, una célula microbiana de Thraustochytriales. Dichos medios típicamente comprenden un medio acuoso que tiene fuentes de carbono, nitrógeno y fosfato asimilables, así como sales, minerales, metales y otros nutrientes apropiados, tales como vitaminas. Las células microbianas para su uso con la presente invención se pueden cultivar en biorreactores de fermentación, matraces de agitación, tubos de ensayo, placas de microvaloración y placas de Petri convencionales.
En algunos modos de realización, una célula microbiana comprende al menos un 30 % en peso (o volumen) de aceite, al menos un 35 % en peso (o volumen) de aceite, al menos un 40 % en peso (o volumen) de aceite, al menos un 50 % en peso (o volumen) de aceite, al menos un 60 % en peso (o volumen) de aceite, al menos un 70 % en peso (o volumen) de aceite, o al menos un 80 % en peso (o volumen) de aceite. En algunos modos de realización, una célula microbiana para su uso con la presente invención puede producir al menos 0,1 gramos por litro por hora (g/l/h) de DHA, al menos 0,2 g/l/h de DHA, al menos 0,3 g/l/h de DHA, o al menos 0,4 g/l/h de d Ha . En algunos modos de realización, una célula microbiana para su uso con la presente invención puede producir al menos 0,01 gramos por litro por hora (g/l/h) de ARA, al menos 0,05 g/l/h de ARA, al menos 0,1 g/l/h de ARA, al menos 0,2 g/l/h de a Ra , al menos 0,3 g/l/h de ARA, o al menos 0,4 g/l/h de ARA.
En algunos modos de realización, un aceite obtenido de acuerdo con cualquiera de los procesos descritos en el presente documento, la biomasa gastada o combinaciones de los mismos se pueden usar directamente como alimento o ingrediente alimenticio, tal como un ingrediente en alimentos para bebés, leche de inicio, bebidas, salsas, productos lácteos (tales como leche, yogur, queso y helado), aceites (por ejemplo, aceites para cocinar o aliños para ensaladas) y productos horneados; complementos nutricionales (por ejemplo, en forma de cápsulas o comprimidos); alimentos o complementos alimenticios para cualquier animal no humano (por ejemplo, aquellos cuyos productos (por ejemplo, carne, leche o huevos) se consumen por seres humanos); complementos alimenticios; y productos farmacéuticos (en aplicación de tratamiento directa o adjunta). El término "animal" se refiere a cualquier organismo perteneciente al reino Animalia e incluye cualquier animal humano y animal no humano del que se derivan productos (por ejemplo, leche, huevos, carne de ave, ternera, cerdo o cordero). En algunos modos de realización, el aceite y/o biomasa se pueden usar en mariscos. Los mariscos se derivan, sin limitación, de pescado, crustáceos y moluscos. El término "productos" incluye cualquier producto derivado de dichos animales, incluyendo, sin limitación, carne, huevos, leche u otros productos. Cuando el aceite y/o biomasa se alimenta a dichos animales, se pueden incorporar aceites poliinsaturados a la carne, leche, huevos u otros productos de dichos animales para incrementar su contenido de estos aceites.
EJEMPLOS
Como se usa en el presente documento, el "rendimiento de extracción" es la cantidad, en peso, de lípido en la emulsión que contiene aceite expresada como porcentaje de la cantidad, en peso, de lípido en el caldo celular. El "rendimiento de refinado" es la cantidad, en peso, de lípido en el aceite refinado expresada como porcentaje de la cantidad, en peso, de lípido en la emulsión que contiene aceite. El "rendimiento total" es la cantidad, en peso, de lípido en el aceite refinado expresada como porcentaje de la cantidad, en peso, de lípido en el caldo celular.
Ejemplo 1
Un caldo celular sin lavar (75,9 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 184 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 10,5 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 19 horas. El pH de la composición de células lisadas se ajustó hasta 8,2 añadiendo NaOH 6 N, se agitó a 150 rpm y se mantuvo durante 4,5 horas. El pH de la composición de células lisadas se ajustó a 8,3 añadiendo NaOH6 N, se agitó a 150 rpm y se mantuvo durante 1 hora. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 87,2 %. La emulsión que contiene aceite recuperada tuvo un VA de 12,3 y contuvo un 1,24 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,2 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60­ 65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 86,2 %. El rendimiento total fue de un 75 %. El aceite refinado tuvo un VA de 10.
Tabla 1: Com aración de emulsión ue contiene aceite aceite refinado
Figure imgf000018_0001
Ejemplo 2
Un caldo celular sin lavar (78,3 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 184 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas con pH controlado a 7,5 con NaOH 6 N. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 9,7 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 18 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 8,3 añadiendo NaOH 6 N y se mantuvo durante 4,5 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 86,3 %. La emulsión que contiene aceite tuvo un VA de 12,9 y contuvo un 1,02 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,2 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 98,9 %. El rendimiento total fue de un 85,3 %. El aceite recuperado tuvo un VA de 13,5 y contuvo un 0,5 % de ácidos grasos libres.
Ejemplo 3
Un caldo celular sin lavar (86,5 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 185 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas con pH controlado a 7,5 con NaOH 6 N. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 9,9 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 18 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 8,5 añadiendo NaOH 6 N y se mantuvo durante 4 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 94,4 %. La emulsión que contiene aceite tuvo un VA de 4,5 y contuvo un 1,88 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,2 % en peso de emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 91,5 %. El rendimiento total fue de un 86,4 %. El aceite refinado tuvo un VA de 13,5 y contuvo un 0,5 % de ácidos grasos libres.
Ejemplo 4
Un caldo celular sin lavar (82,6 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 185 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas con pH controlado a 7,5 con NaOH 6 N. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 10,2 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 4 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 8,3 añadiendo NaOH 6 N y se mantuvo durante 11 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 7,8 añadiendo NaOH 6 N y se mantuvo durante 7 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 99,3 %. La emulsión que contiene aceite tuvo un VA de 4 y contuvo un 0,67 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,2 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 92,7 %. El rendimiento total fue de un 92,3 %. El aceite refinado tuvo un VA de 2,8 y contuvo un 0,54 % de ácidos grasos libres.
Ejemplo 5
Un caldo celular sin lavar (88,5 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 183 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas con pH controlado a 7,5 con NaOH 6 N. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 10,2 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 22 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 94 %. La emulsión que contiene aceite contuvo un 2,1 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50­ 55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,2 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 94,3 %. El rendimiento total fue de un 87 %. El aceite refinado contuvo un 0,62 % de ácidos grasos libres.
Ejemplo 6
Un caldo celular sin lavar (84,9 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 184 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 10,5 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 22 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 93,9 %. La emulsión que contiene aceite contuvo un 1,5 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,2 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 89,8 %. El rendimiento total fue de un 84,3 %.
Tabla 2: Com aración de emulsión ue contiene aceite aceite refinado
Figure imgf000020_0001
Ejemplo 7 (no de acuerdo con la invención)
Un caldo celular sin lavar (77,2 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron mecánicamente. Se añadió NaOH 6 N a la composición de células lisadas para ajustar el pH de la composición hasta 9,5, se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular, se agitó a 184 rpm, se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 25 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 91,1 %. La emulsión que contiene aceite contuvo un 1.7 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se calentó hasta 50-55 °C y se mantuvo durante 8 horas y 15 minutos. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 83.7 %. El rendimiento total fue de un 76,2 %.
Ejemplo 8
Un caldo celular sin lavar (74,8 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 184 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 10,5 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 23 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 82,8 %. La emulsión que contiene aceite contuvo un 1,1 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,2 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 94,9 %. El rendimiento total fue de un 78,5 %.
Ejemplo 9
Un caldo celular sin lavar (83,7 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 184 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 10,5 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCl en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 22 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 90,9 %. La emulsión que contiene aceite contuvo un 1,7 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,3 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento de refinado fue de un 78,2 %. El rendimiento total fue de un 78,2 %.
Ejemplo 10
Un caldo celular sin lavar (86,3 kg) que contenía células microbianas (Schizochytrium sp.) se pasteurizó a 60 °C durante 1 hora. Las células se lisaron añadiendo NaOH 6 N para ajustar el pH del caldo hasta 7,5 y se añadió la enzima Alkalize® (disponible de Novozymes (Franklinton, NC)) en una cantidad de un 0,5 % en base al peso del caldo celular, se agitó a una velocidad de 185 rpm, se calentó hasta 60 °C y se mantuvo durante 2 horas con pH controlado a 7,5 con NaOH 6 N. Mientras se mantuvo la agitación, el pH de la composición de células lisadas se ajustó a 10,5 añadiendo NaOH 6 N. Se añadió NaCI en una cantidad de un 2 % en peso del caldo celular y se calentó hasta 90 °C y se mantuvo durante 2 horas. Se formó una emulsión que contiene aceite y se separó de la composición de células lisadas calentando la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta 80 °C y a continuación centrifugando (Alfa Laval Disc Stack Centrifuge, LAPX404/Clara 20). El rendimiento de extracción fue de un 96,9 %. La emulsión que contiene aceite tuvo un VA de 1,5, un VP de <0,1 meg/kg y contuvo un 0,87 % de ácidos grasos libres. La emulsión que contiene aceite se colocó en un depósito de 20 l con protección de nitrógeno y se calentó hasta 50-55 °C y se añadió ácido cítrico al 50 % en una cantidad de un 0,3 % en peso de la emulsión y se mantuvo durante 15 minutos. La emulsión que contiene aceite se calentó además hasta 60-65 °C y se añadió NaOH en una cantidad de un 12,5 % en peso de la composición de ácidos grasos libres y peso de la emulsión que contiene aceite, y se mantuvo durante 30 minutos para refinar la emulsión. El aceite se separó de la emulsión por centrifugación. El rendimiento total fue de un 92,1 %. El aceite refinado tuvo un VA de 5,2, un VP de 0,52 meg/kg y contuvo un 0,24 % de ácidos grasos libres.
Tabla 3: Com aración de emulsión ue contiene aceite aceite refinado
Figure imgf000021_0001
Ejemplo 11
Los rendimientos de extracción y los tiempos de coalescencia para los ejemplos proporcionados en el presente documento se comparan con un proceso actual (dos ejemplos).
Tabla 4: Tiem os de coalescencia
Figure imgf000021_0002

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un proceso para obtener un aceite microbiano que comprende uno o más ácidos grasos poliinsaturados a partir de una o más células microbianas, en el que el proceso comprende:
a) lisar las células que comprenden el aceite microbiano para formar una composición de células lisadas; b) tratar la composición de células lisadas para formar una emulsión que contiene aceite;
c) separar la emulsión que contiene aceite de la composición de células lisadas;
d) desemulsionar la emulsión que contiene aceite; y
e) recuperar el aceite;
en el que (d) comprende además añadir un ácido que comprende ácido cítrico y comprende además añadir una base.
2. El proceso de la reivindicación 1, en el que al menos una de (a) o (b) comprende además elevar el pH de las células o la composición de células lisadas, preferentemente a aproximadamente 7 o más, más preferentemente de aproximadamente 7 a aproximadamente 11.
3. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que (a) comprende además controlar el pH de las células, preferentemente en el que controlar el pH de las células comprende añadir una base.
4. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que al menos una de (a) o (b) comprende además calentar las células o la composición de células lisadas hasta al menos 50 °C, preferentemente de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 100 °C.
5. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que (a) comprende además añadir una enzima en una cantidad de desde aproximadamente un 0,05 % a aproximadamente un 20 % en peso del caldo celular.
6. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que (b) comprende además añadir una sal en una cantidad de desde aproximadamente un 0,05 % a aproximadamente un 20 % en peso del caldo celular, preferentemente en el que la sal se selecciona del grupo que consiste en sales de metales alcalinos, sales de metales alcalinotérreos, sales de sulfato y combinaciones de las mismas.
7. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que
(i) al menos una de (a) o (b) comprende además agitar las células o la composición de células lisadas;
(ii) las celdas de (a) están sin lavar;
(iii) las células de (a) están contenidas en un caldo de fermentación
(iv) (c) comprende además centrifugar
(v) la composición de células lisadas comprende líquido, residuos celulares y aceite microbiano;
(vi) no se usa un disolvente orgánico para obtener el aceite de las células;
(vii) (e) comprende además centrifugar el aceite; y/o
(viii) (e) comprende además refinar el aceite.
8. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que (c) comprende además calentar la emulsión que contiene aceite y la composición de células lisadas hasta al menos 50 °C, preferentemente de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 100 °C.
9. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que (d) comprende además calentar la emulsión que contiene aceite hasta al menos 50 °C, preferentemente de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 100 °C.
10. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que (d) comprende además añadir una base que comprende hidróxido de sodio.
11. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que el ácido graso poliinsaturado se selecciona de un ácido graso omega-3, un ácido graso omega-6 y mezclas de los mismos, preferentemente en el que el ácido graso poliinsaturado se selecciona de ácido docosahexaenoico (DHA), ácido eicosatetraenoico (EPA), ácido eicosatetraenoico (DPA), ácido araquidónico (ARA), ácido gamma-linolénico (GLA), ácido duomo-gammalinolénico (DGLA), ácido sardónico (s Da ), y mezclas de los mismos, más preferentemente en el que el ácido graso poliinsaturado es el ácido docosahexaenoico (DHA) o ácido araquidónico (ARA).
12. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que las células microbianas son células de algas, levaduras, hongos, protistas o bacterias, preferentemente del género Mortierella, género sardonio u orden Thraustochytriales, más preferentemente del género Thraustoohytrium, Sohizoohytrium, o mezclas de los mismos, o de Mortierella Alpina.
13. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que el aceite
(x) comprende al menos un 30 % en peso de ácido araquidónico;
(xi) comprende al menos un 30 % en peso de ácido docosahexaenoico;
(xii) tiene un valor de anisidina de menos de aproximadamente 50;
(xiii) tiene un contenido en fósforo de aproximadamente 8 ppm o menos; y/o
(xiv) tiene un valor de peróxido de menos de aproximadamente 5 meq/kg.
14. El proceso de cualquier reivindicación precedente, en el que (a) y (b) se combinan juntas para formar una etapa de lisado y tratamiento de una sola etapa.
ES14872560T 2013-12-20 2014-12-19 Procesos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas Active ES2909791T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361919000P 2013-12-20 2013-12-20
US201462093986P 2014-12-18 2014-12-18
PCT/US2014/071469 WO2015095696A1 (en) 2013-12-20 2014-12-19 Processes for obtaining microbial oil from microbial cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2909791T3 true ES2909791T3 (es) 2022-05-10

Family

ID=53403738

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES14872560T Active ES2909791T3 (es) 2013-12-20 2014-12-19 Procesos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas

Country Status (16)

Country Link
US (2) US20160319218A1 (es)
EP (1) EP3083546B1 (es)
JP (2) JP2017500041A (es)
KR (1) KR102435265B1 (es)
CN (2) CN106029623A (es)
AU (1) AU2014369048B2 (es)
BR (1) BR112016014518B1 (es)
CA (1) CA2934509C (es)
ES (1) ES2909791T3 (es)
IL (1) IL246333B (es)
MX (1) MX2016008220A (es)
NZ (1) NZ721409A (es)
PL (1) PL3083546T3 (es)
SG (1) SG11201605066WA (es)
TW (1) TWI646189B (es)
WO (1) WO2015095696A1 (es)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1252324B1 (en) 2000-01-19 2010-10-20 Martek Biosciences Corporation Solventless extraction process
KR101961958B1 (ko) 2010-06-01 2019-03-25 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 세포로부터의 지질의 추출 및 이로부터의 생성물
US20160319218A1 (en) 2013-12-20 2016-11-03 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
CN105939710B (zh) 2013-12-20 2020-05-08 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于从微生物细胞获得微生物油的方法
JP6705581B2 (ja) 2013-12-20 2020-06-03 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ．Ｄｓｍ Ｉｐ Ａｓｓｅｔｓ Ｂ．Ｖ． 微生物細胞から微生物油を入手するための方法
SG11201605052XA (en) 2013-12-20 2016-07-28 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
WO2015095688A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
JP6738214B2 (ja) * 2016-06-17 2020-08-12 アースリサイクル株式会社 バイオ燃料の製造方法
JP6998934B2 (ja) 2016-07-13 2022-01-18 エボニック オペレーションズ ゲーエムベーハー 脂質含有細胞から脂質を単離する方法
CA3030467C (en) * 2016-07-13 2023-07-11 Evonik Degussa Gmbh Method for isolating lipids from lipid-containing cells
BR112019000435A2 (pt) * 2016-07-13 2019-04-30 Evonik Degussa Gmbh método para separar lipídios de uma biomassa contendo lipídios lisados
CA3030471C (en) * 2016-07-13 2023-06-20 Evonik Degussa Gmbh Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
IL247522A0 (en) * 2016-08-29 2016-11-30 Technion Res & Dev Foundation Removal of pollutants from organic matter
CN110462014A (zh) * 2016-12-27 2019-11-15 赢创德固赛有限公司 从含有脂质的生物质中分离脂质的方法
US11814665B2 (en) 2017-08-17 2023-11-14 Evonik Operations Gmbh Enhanced production of lipids by limitation of at least two limiting nutrient sources
EA202090440A1 (ru) 2017-09-21 2020-07-17 Эвоник Оперейшенс ГмбХ Улучшенное получение липидов путем ограничения по меньшей мере двух источников лимитирующих питательных веществ
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
CN111601872A (zh) * 2017-12-22 2020-08-28 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 包含至少一种具有至少20个碳原子的多不饱和脂肪酸(lc-pufa)的油
EP3775118A4 (en) * 2018-03-30 2022-03-09 DSM IP Assets B.V. PROCESS FOR EMULSION REDUCTION BY BOUILLON WASHING
BR112020023211A2 (pt) * 2018-05-15 2021-02-23 Evonik Operations Gmbh método de isolamento de lipídios de uma biomassa contendo lipídios com auxílio de sílica hidrofóbica
BR112020023222A2 (pt) 2018-05-15 2021-03-23 Evonik Operations Gmbh método de isolamento de lipídios a partir de uma biomassa contendo lipídios lisados por inversão por emulsão
WO2020016363A1 (en) 2018-07-20 2020-01-23 Total Raffinage Chimie Wet process for recovering oil produced by microorganism
CN109181843B (zh) * 2018-08-20 2020-08-11 梁云 在线加热分离微生物油脂的装置和方法以及微生物油脂
FR3085962B1 (fr) 2018-09-14 2021-06-18 Fermentalg Procede d'extracton d'une huile riche en pufa
US20220145211A1 (en) * 2019-03-14 2022-05-12 Dsm Ip Assets B.V. Methods of obtaining lipids from a microbial cell composition
BR112021016877A2 (pt) * 2019-03-14 2021-11-03 Dsm Ip Assets Bv Métodos de obtenção de lipídeos a partir de uma composição de célula microbiana por enzima e choque de ph
FR3111912A1 (fr) 2020-06-24 2021-12-31 Fermentalg Procédé de culture de microorganismes pour l’accumulation de lipides
KR20240150766A (ko) * 2022-01-17 2024-10-16 파이코일 바이오테크놀로지 인터내셔널, 아이엔씨. 장쇄 다중불포화 지방산을 포함하는 바이오재료 생산을 위한 신규한 트라우스토키트리드 균주

Family Cites Families (152)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2753362A (en) 1951-05-18 1956-07-03 Standard Brands Inc Process of extracting lipids from plant and animal tissue
GB808128A (en) 1955-12-01 1959-01-28 Nat Res Dev A method of increasing the fatty contents of such micro-organisms as yeasts, bacteria and moulds
US3089821A (en) 1959-10-28 1963-05-14 Merck & Co Inc Process for the preparation of lipids
DE2056896B2 (de) 1970-02-18 1979-12-06 Veb Schwermaschinenbau Kombinat Ernst Thaelmann Magdeburg, Ddr 3011 Magdeburg Verfahren zur gleichzeitigen Gewinnung von Fett und Protein aus pflanzlichen, ölhaltigen Rohstoffen und Zwischenprodukten
US3878232A (en) 1970-09-28 1975-04-15 Staley Mfg Co A E Extraction process to improve the quality and yield of crude vegetable oils
GB1466853A (en) 1973-05-22 1977-03-09 Simon Rosedowns Ltd Extraction
US4504473A (en) 1982-06-30 1985-03-12 Ribi Immunochem Research, Inc. Pyridine soluble extract of a microorganism
DE3248167A1 (de) 1982-12-27 1984-06-28 Wintershall Ag, 3100 Celle Trehaloselipidtetraester
EP0246324B1 (en) 1985-01-22 1993-01-27 Japan as represented by Director-General, Agency of Industrial Science and Technology Method for obtaining lipids from fungus bodies
JPS61170397A (ja) 1985-01-22 1986-08-01 Agency Of Ind Science & Technol モルテイエレラ属糸状菌体の多段抽出処理方法
US4792418A (en) 1985-08-14 1988-12-20 Century Laboratories, Inc. Method of extraction and purification of polyunsaturated fatty acids from natural sources
JPS6244170A (ja) 1985-08-19 1987-02-26 Agency Of Ind Science & Technol モルテイエレラ属糸状菌体の超臨界流体による抽出方法
US4680314A (en) 1985-08-30 1987-07-14 Microbio Resources, Inc. Process for producing a naturally-derived carotene/oil composition by direct extraction from algae
JPS62278987A (ja) 1986-05-26 1987-12-03 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 酵素反応生成物の回収方法
DK199887D0 (da) 1987-04-15 1987-04-15 Danisco Bioteknologi As Gaerstamme
JPS63304990A (ja) 1987-06-04 1988-12-13 Meiji Seika Kaisha Ltd 菌体内有効成分の抽出方法
FR2621327B1 (fr) 1987-10-06 1990-01-05 Commissariat Energie Atomique Procede de production et d'extraction de polysaccharides a partir d'une culture de porphyridium cruentum et dispositif pour la mise en oeuvre du procede
JPH0198494A (ja) 1987-10-09 1989-04-17 Agency Of Ind Science & Technol バイオリアクター
US5340594A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5130242A (en) 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US6451567B1 (en) 1988-09-07 2002-09-17 Omegatech, Inc. Fermentation process for producing long chain omega-3 fatty acids with euryhaline microorganisms
US5340742A (en) 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Process for growing thraustochytrium and schizochytrium using non-chloride salts to produce a microfloral biomass having omega-3-highly unsaturated fatty acids
US5173409A (en) 1989-12-08 1992-12-22 Ecogen Inc. Recovery of bt endotoxin protein from lysed cell mixtures
US5288619A (en) 1989-12-18 1994-02-22 Kraft General Foods, Inc. Enzymatic method for preparing transesterified oils
FR2656874B1 (fr) 1990-01-11 1992-04-03 Commissariat Energie Atomique Procede de production et d'extraction d'anti-oxydants a partir d'une culture de micro-organismes et photobioreacteur pour la mise en óoeuvre de ce procede.
US5407957A (en) 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
US5133963A (en) 1990-12-21 1992-07-28 Shuntaro Ise Method of producing commercially useful poultry products with increased concentrations of Omega-3 polyunsaturated fatty acids
US5658767A (en) 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US6270828B1 (en) 1993-11-12 2001-08-07 Cargrill Incorporated Canola variety producing a seed with reduced glucosinolates and linolenic acid yielding an oil with low sulfur, improved sensory characteristics and increased oxidative stability
FR2686619B1 (fr) 1992-01-28 1995-07-13 Commissariat Energie Atomique Procede de production selective de lipides poly-insatures a partir d'une culture de micro-algues du type porphyridium et cuve utilisee dans ce procede.
US5476787A (en) 1992-04-24 1995-12-19 Director-General Of Agency Of Industrial Science And Technology Method of removing nitrogen impurities from water using hydrocarbon-producing microalga
DE4219360C2 (de) 1992-06-12 1994-07-28 Milupa Ag Verfahren zur Gewinnung von Lipiden mit einem hohen Anteil von langkettig-hochungesättigten Fettsäuren
EP0928556A3 (en) 1993-04-27 1999-09-15 Cargill, Incorporated Non-hydrogenated canola oil for food applications
FR2719222B1 (fr) 1994-05-02 1996-06-21 Rocher Yves Biolog Vegetale Vésicules lipidiques, leur procédé de fabrication et leurs applications.
WO1996005278A1 (de) 1994-08-16 1996-02-22 Dr. Frische Gmbh Verfahren zur gewinnung von nicht wasserlöslichen, nativen produkten aus nativen stoffgemengen mit hilfe der zentrifugalkraft
US5583019A (en) * 1995-01-24 1996-12-10 Omegatech Inc. Method for production of arachidonic acid
DE69637953D1 (de) 1995-04-17 2009-07-30 Nat Inst Of Advanced Ind Scien Hoch ungesättigte fettsäurenproduzierende mikroorganismen und verfahren zur herstellung von hoch ungesättigten fettsäuren durch verwendung dieser mikroorganismen
ATE178087T1 (de) 1995-05-04 1999-04-15 Nestle Sa Verfahren zur fraktionierung von fettsäuren
JPH099981A (ja) 1995-06-28 1997-01-14 Sekiyu Sangyo Kasseika Center 油水二相系微生物反応における油水分離方法
GB9514649D0 (en) 1995-07-18 1995-09-13 Zeneca Ltd Extraction of triglycerides from microorganisms
JP3985035B2 (ja) 1995-09-14 2007-10-03 独立行政法人産業技術総合研究所 （ｎ−６）系ドコサペンタエン酸含有油脂ならびに該油脂の製造方法および用途
CN102351678A (zh) 1996-03-28 2012-02-15 Dsmip资产有限公司 粒状微生物生物质的制备及其有价值的化合物的分离方法
US6255505B1 (en) 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
ATE328104T1 (de) 1996-03-28 2006-06-15 Dsm Ip Assets Bv Mikrobielles polyungesättigte fettsäure enthaltendes öl und verfahren zur herstellung eines öls aus pasteurisierter und granulierter biomasse
AU2956397A (en) 1996-05-15 1997-12-05 Gist-Brocades B.V. Sterol extraction with polar solvent to give low sterol, high triglyceride, microbial oil
WO1998001536A1 (fr) 1996-07-03 1998-01-15 Sagami Chemical Research Center Micro-organismes produisant de l'acide docosahexanoique et procede de production de l'acide docosahexanoique
DK0935667T3 (da) 1996-07-23 2007-04-10 Nagase Chemtex Corp Fremgangsmåde til fremstilling af docosahexaensyre og docosapentaensyre
US5951875A (en) 1996-12-20 1999-09-14 Eastman Chemical Company Adsorptive bubble separation methods and systems for dewatering suspensions of microalgae and extracting components therefrom
GB9701705D0 (en) 1997-01-28 1997-03-19 Norsk Hydro As Purifying polyunsatured fatty acid glycerides
EP2175031A3 (en) 1997-03-04 2010-07-07 Suntory Holdings Limited Process for preparing highly unsaturated fatty acid and lipid containing highly unsaturated fatty acid
ES2337530T3 (es) 1997-05-02 2010-04-26 Dsm Ip Assets B.V. Aislamiento de cristales de carotenoide a partir de biomasa microbiana.
EP1905309A1 (en) 1997-05-27 2008-04-02 SemBioSys Genetics Inc. Uses of oil bodies
US7585645B2 (en) 1997-05-27 2009-09-08 Sembiosys Genetics Inc. Thioredoxin and thioredoxin reductase containing oil body based products
US6566583B1 (en) 1997-06-04 2003-05-20 Daniel Facciotti Schizochytrium PKS genes
JP3836231B2 (ja) 1997-10-17 2006-10-25 日本化学飼料株式会社 ホタテガイ中腸腺から得られる高度不飽和脂肪酸含有油及びその製造方法
CN1109482C (zh) 1997-11-12 2003-05-21 三菱电机株式会社 电发光体及其密封结构
WO1999032604A1 (en) 1997-12-23 1999-07-01 Dcv, Inc. Doing Business As Bio-Technical Resources Linoleate isomerase
WO1999057546A1 (en) 1998-05-05 1999-11-11 The University Of Tennessee Research Corporation An instrument and method for measurement of stability of oils
JP2000041684A (ja) 1998-07-29 2000-02-15 Daicel Chem Ind Ltd 新規なｄ−アミノアシラーゼおよびその製造方法、並びに該ｄ−アミノアシラーゼを利用したｄ−アミノ酸の製造方法
JP2000135096A (ja) 1998-08-28 2000-05-16 Tadayuki Imanaka 界面活性剤、その生産方法およびその利用方法
FR2782921B1 (fr) 1998-09-09 2002-09-20 Dior Christian Parfums Extrait lipidique de l'algue skeletonema, procede de preparation et utilisation dans des domaines cosmetique et pharmaceutique, notamment dermatologique
US6166231A (en) 1998-12-15 2000-12-26 Martek Biosciences Corporation Two phase extraction of oil from biomass
CA2260397A1 (en) 1999-01-29 2000-07-29 Atlantis Marine Inc. Method of converting rendered triglyceride oil from marine sources into bland, stable food oil
JP2000245492A (ja) 1999-03-02 2000-09-12 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 微生物抽出脂質
KR19990046733A (ko) 1999-04-20 1999-07-05 류성구 미생물슈도모나스에의한도코사핵사노인산(ｄｈａ)의제조방법
US6344349B1 (en) 1999-12-06 2002-02-05 Decant Technologies Llc Process and system for electrical extraction of intracellular matter from biological matter
EP1252324B1 (en) 2000-01-19 2010-10-20 Martek Biosciences Corporation Solventless extraction process
AU785124B2 (en) 2000-01-28 2006-09-28 Dsm Ip Assets B.V. Enhanced production of lipids containing polyenoic fatty acids by very high density cultures of thraustochytriales micro-organisms in fermentors
DE60134128D1 (de) 2000-04-12 2008-07-03 Westfalia Separator Gmbh Verfahren zur fraktionierung von öl- und polar lipid-enthaltenden rohstoffen
DE10018213A1 (de) 2000-04-12 2001-10-25 Westfalia Separator Ind Gmbh Verfahren zur Fraktionierung von öl-und lecithinhaltigen nativen Rohstoffen
EP1178103A1 (en) 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils
EP1178118A1 (en) 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
US20060060520A1 (en) 2001-06-25 2006-03-23 Bomberger David C Systems and methods using a solvent for the removal of lipids from fluids
AU2002323409A1 (en) 2001-08-24 2003-03-10 Martek Biosciences Boulder Corporation Products containing highly unsaturated fatty acids for use by women and their children during stages of preconception, pregnancy and lactation/post-partum
CA2469647C (en) 2001-12-12 2011-02-15 Daniel G. Dueppen Extraction and winterization of lipids from oilseed and microbial sources
CN1177024C (zh) 2002-03-27 2004-11-24 西南农业大学 水剂法生产食用菜籽蛋白和油脂的方法
AU2003237182B2 (en) 2002-05-03 2008-09-11 Dsm Ip Assets B.V. High-quality lipids and methods for producing by enzymatic liberation from biomass
KR101295390B1 (ko) 2003-10-02 2013-09-17 마텍 바이오싸이언스스 코포레이션 변형량의 염소 및 칼륨을 사용하는 미세조류 중에 고농도 디에치에이의 생산
ES2624952T3 (es) 2003-12-30 2017-07-18 Dsm Ip Assets B.V. Proceso de desaireación
US7038559B2 (en) 2004-02-23 2006-05-02 Ruby Richard C Vertically separated acoustic filters and resonators
AU2005217300B2 (en) 2004-03-01 2010-12-02 Suntory Holdings Limited Process for producing phospholipid containing long chain polyunsaturated fatty acid as constituent thereof and utilization of the same
JP2007534335A (ja) 2004-04-27 2007-11-29 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 攪拌タンク反応器システム
EP1597976B1 (en) 2004-05-21 2013-01-30 Nestec S.A. Use of polyol esters of fatty acids in aerated frozen confection with improved nutritional attributes
WO2006046943A2 (en) 2004-10-22 2006-05-04 Martek Biosciences Corporation Methods for producing lipids by liberation from biomass
DE102004062141A1 (de) 2004-12-23 2006-07-06 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh Verfahren zur Herstellung eines Rohöls aus Gemischen von Mikroorganismen und Pflanzen, das so hergestellte Öl sowie die spezifischen Verwendungen des so hergestellten und gegebenenfalls zusätzlich raffinierten Öls
DE102005003624A1 (de) 2005-01-26 2006-07-27 Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh Herstellung und Anwendung eines antioxidativ wirksamen Extraktes aus Crypthecodinium sp.
NZ563125A (en) 2005-06-03 2009-11-27 Mcfarlane Marketing Aust Pty L Lipid extract of mussels and method for preparation thereof
CA2611324C (en) 2005-06-07 2017-02-14 Ocean Nutrition Canada Limited Eukaryotic microorganisms for producing lipids and antioxidants
US8034391B2 (en) 2005-07-01 2011-10-11 Martek Biosciences Corporation Polyunsaturated fatty acid-containing oil product and uses and production thereof
US7527734B1 (en) 2005-11-15 2009-05-05 Shepherd Samuel L Rapid non-equilibrium decompression of microorganism-containing waste streams
US20090221705A1 (en) 2006-02-07 2009-09-03 Pal Rongved Omega 3
NZ573719A (en) 2006-07-05 2011-08-26 Photonz Corp Ltd Production of ultrapure eicosapentaenoic acid and polar lipids from largely heterotrophic culture of nitzschia laevis
EP1887011A1 (en) 2006-08-09 2008-02-13 Thermphos Trading GmbH Alpha amino acid phosphonic acid compounds, method of preparation and use thereof
EP2074214A2 (en) 2006-09-28 2009-07-01 Microbia, Inc. Production of sterols in oleaginous yeast and fungi
KR100810314B1 (ko) 2006-10-11 2008-03-04 삼성전자주식회사 휴대 단말기의 키 입력 장치
BRPI0720852A2 (pt) 2006-12-22 2014-03-11 Danisco Us Inc Genecor Division Desemulsificação auxiliada por enzima de extratos de lipídio aquosos
CN101224022B (zh) 2007-01-15 2012-10-31 天津科技大学 水酶法同时制备芝麻油和蛋白质的工艺方法
EP2160089A1 (en) 2007-06-14 2010-03-10 Nickolaos Mitropoulos Algae growth for biofuels
US20100226977A1 (en) 2007-08-29 2010-09-09 Aker Biomarine Asa Low viscosity phospholipid compositions
CA2839075A1 (en) 2007-08-29 2009-03-05 Aker Biomarine Asa A new method for making krill meal
EP2243181B1 (en) 2008-03-26 2015-05-06 Byd Company Limited Cathode materials for lithium batteries
ITMI20081203A1 (it) 2008-06-30 2010-01-01 Eni Spa Procedimento per l'estrazione di acidi grassi da biomassa algale
EP2145942A1 (de) 2008-07-15 2010-01-20 Lonza Ltd. Verfahren zur Isolierung von Ölen aus Zellen und Biomasse
CN102186966A (zh) 2008-08-04 2011-09-14 凯生物能公司 光合培养物的连续培养、收获和油提取
CA2739440C (en) 2008-10-02 2018-11-06 Feyecon B.V. Microalgae extract containing .omega.3-polyunsaturated fatty acids and method for extracting oil from micro-organisms
US9896642B2 (en) 2008-10-14 2018-02-20 Corbion Biotech, Inc. Methods of microbial oil extraction and separation
JP5731982B2 (ja) 2008-10-14 2015-06-10 ソラザイム, インコーポレイテッドSolazyme Inc 微細藻類バイオマスの食物組成物
CN101455240B (zh) 2008-12-29 2011-04-06 东北农业大学 水酶法提取南瓜籽油的方法
SE534278C2 (sv) 2009-02-17 2011-06-28 Alfa Laval Corp Ab Ett kontinuerligt förfarande för isolering av oljor från alger eller mikroorganismer
EP2406370A4 (en) 2009-03-10 2013-08-14 Srs Energy FRACTIONATION OF ALGAE BIOMASS
US9296985B2 (en) 2009-03-10 2016-03-29 Valicor, Inc. Algae biomass fractionation
US8207363B2 (en) 2009-03-19 2012-06-26 Martek Biosciences Corporation Thraustochytrids, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
BRPI0923968B1 (pt) 2009-03-19 2020-04-28 Dsm Ip Assets Bv composição, produto alimentício e alimento animal compreendendo óleo microbiano
US8476060B2 (en) 2009-04-13 2013-07-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Process for separating lipids from a biomass
SG175722A1 (en) 2009-04-14 2011-12-29 Solazyme Inc Methods of microbial oil extraction and separation
CN101531690B (zh) 2009-04-28 2011-09-14 浙江神茗山茶业科技有限公司 一种用水作溶剂直接从茶叶籽仁中提取茶皂素和茶叶籽油的工艺
US8580540B2 (en) 2009-05-26 2013-11-12 Solazyme, Inc. Fractionation of oil-bearing microbial biomass
KR101659765B1 (ko) 2009-09-28 2016-09-27 삼성전자주식회사 다중 모드 휴대용 단말기에서 전력 소모를 줄이기 위한 장치 및 방법
WO2011059745A1 (en) 2009-10-28 2011-05-19 The Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Bacterium for production of fatty acids
MY160121A (en) 2010-01-19 2017-02-28 Dsm Ip Assets Bv Eicosapentaenoic acid-producing microorganisms, fatty acid compositions, and methods of making and uses thereof
WO2011130576A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Solazyme, Inc. Oleaginous yeast food compositions
WO2011130573A1 (en) 2010-04-14 2011-10-20 Solazyme, Inc. Fuel and chemical production from oleaginous yeast
WO2011133181A1 (en) 2010-04-20 2011-10-27 Origin Oil, Inc. Systems, apparatuses, and methods for extracting non-polar lipids from an a aqueous algae slurry and lipids produced therefrom
AU2011242843A1 (en) * 2010-04-22 2012-09-27 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method for obtaining polyunsaturated fatty acid-containing compositions from microbial biomass
KR101961958B1 (ko) * 2010-06-01 2019-03-25 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 세포로부터의 지질의 추출 및 이로부터의 생성물
WO2011159682A1 (en) * 2010-06-14 2011-12-22 Raveendran Pottathil Methods for the production of algae derived oils
US9028696B2 (en) 2010-07-26 2015-05-12 Sapphire Energy, Inc. Process for the recovery of oleaginous compounds from biomass
JP5739530B2 (ja) 2010-07-26 2015-06-24 サファイア エナジー，インコーポレイティド バイオマスからの油性化合物の回収方法
BR112013002972A2 (pt) 2010-08-06 2016-06-07 Icm Inc método, bio-óleo, e, sistema para recuperar bio-óleo
US20120040428A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Paul Reep Procedure for extracting of lipids from algae without cell sacrifice
US20120129244A1 (en) 2010-10-17 2012-05-24 Michael Phillip Green Systems, methods and apparatuses for dewatering, flocculating and harvesting algae cells
CN101985637B (zh) 2010-11-02 2014-05-07 嘉必优生物工程（武汉）有限公司 一种微生物油脂的提取方法
ES2746074T3 (es) 2010-11-03 2020-03-04 Corbion Biotech Inc Aceites microbianos con puntos de fluidez reducidos, fluidos dieléctricos producidos a partir de estos y métodos relacionados
ES2490619T3 (es) 2010-11-08 2014-09-04 Neste Oil Oyj Método de extracción de lípidos a partir de biomasa
WO2012109642A1 (en) 2011-02-12 2012-08-16 Phycal, Inc. Aqueous extraction methods for high lipid microorganisms
CA2829296C (en) 2011-03-07 2019-10-29 ShuoCheng ZHANG Engineering thraustochytrid microorganisms
US20120238732A1 (en) * 2011-03-15 2012-09-20 Iowa State University Research Foundation, Inc. Oil extraction from microalgae
FR2975705B1 (fr) * 2011-05-27 2014-12-26 Roquette Freres Procede d'extraction du squalene a partir de microalgues
CN102433215A (zh) 2011-09-22 2012-05-02 厦门汇盛生物有限公司 一种从真菌或藻类中物理破壁提取油脂的方法
CN102388988B (zh) 2011-11-08 2013-01-23 中国农业科学院油料作物研究所 一种微生物油的分提方法
WO2013075116A2 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Heliae Development, Llc Omega 7 rich compositions and methods of isolating omega 7 fatty acids
CN105296552A (zh) * 2012-04-16 2016-02-03 罗盖特兄弟公司 用于精炼微藻产生的角鲨烯的方法
WO2014004999A1 (en) 2012-06-29 2014-01-03 BP Biofuels UK Limited Process for separation of renewable materials from microorganisms
KR20160101990A (ko) 2013-12-20 2016-08-26 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 바이오연료의 생산에 사용하기 위한 지질 추출 방법
JP6705581B2 (ja) 2013-12-20 2020-06-03 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ．Ｄｓｍ Ｉｐ Ａｓｓｅｔｓ Ｂ．Ｖ． 微生物細胞から微生物油を入手するための方法
WO2015095688A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
BR112016014208B1 (pt) 2013-12-20 2022-09-20 Dsm Nutricional Products Ag Método de extração de lipídeos a partir de uma população de micro-organismos
KR20240001258A (ko) 2013-12-20 2024-01-03 마라 리뉴어블즈 코퍼레이션 미생물로부터 오일을 회수하는 방법
CN105939710B (zh) 2013-12-20 2020-05-08 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于从微生物细胞获得微生物油的方法
US20160319218A1 (en) 2013-12-20 2016-11-03 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
SG11201605052XA (en) 2013-12-20 2016-07-28 Dsm Ip Assets Bv Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
US10472587B2 (en) 2014-07-07 2019-11-12 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Processes for producing industrial products from plant lipids

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201605066WA (en) 2016-07-28
KR20160100383A (ko) 2016-08-23
TW201529834A (zh) 2015-08-01
US20160319218A1 (en) 2016-11-03
EP3083546A4 (en) 2017-08-23
CA2934509A1 (en) 2015-06-25
EP3083546A1 (en) 2016-10-26
AU2014369048B2 (en) 2018-12-13
TWI646189B (zh) 2019-01-01
CA2934509C (en) 2022-05-03
JP2020054369A (ja) 2020-04-09
IL246333B (en) 2020-09-30
JP7164265B2 (ja) 2022-11-01
JP2017500041A (ja) 2017-01-05
PL3083546T3 (pl) 2022-05-16
AU2014369048A1 (en) 2016-07-07
MX2016008220A (es) 2017-02-20
WO2015095696A1 (en) 2015-06-25
CN116254148A (zh) 2023-06-13
US12104139B2 (en) 2024-10-01
US20190390135A1 (en) 2019-12-26
EP3083546B1 (en) 2022-03-02
CN106029623A (zh) 2016-10-12
KR102435265B1 (ko) 2022-08-22
BR112016014518B1 (pt) 2022-06-14
IL246333A0 (en) 2016-08-31
NZ721409A (en) 2022-10-28
BR112016014518A2 (es) 2017-09-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2909791T3 (es) Procesos para obtener aceite microbiano a partir de células microbianas
AU2014369046B2 (en) Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
US10342772B2 (en) Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
CA2934506C (en) Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
CA2934491C (en) Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
BR112016014514B1 (pt) Processo para a obtenção de um óleo microbiano que compreende um ou mais ácidos graxos poli-insaturados a partir de uma ou mais células microbianas e óleo