ES2907254T3 - Un compuesto antisentido modificado para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Kennedy - Google Patents
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Abstract
Un compuesto antisentido modificado para su uso en un método de tratamiento o prevención de la enfermedad de Kennedy en un sujeto, en donde el compuesto antisentido modificado comprende un oligonucleótido antisentido modificado que consiste de 16 nucleósidos enlazados que tienen una secuencia de nucleobases que comprende una porción de nucleobases contigua que es complementaria con por lo menos una porción de 15 nucleobase de los nucleótidos 58722-58737 o 58752-58767 de la SEQ ID NO: 1, y en donde el oligonucleótido modificado comprende: un segmento de hueco que consiste de 9 desoxinucleósidos enlazados; un segmento de ala 5' que consiste de tres nucleósidos enlazados; y un segmento de ala 3' que consiste de cuatro nucleósidos enlazados; en donde el segmento de hueco está colocado entre el segmento de ala 5' y el segmento de ala 3'; cada uno de los tres nucleósidos enlazados del segmento de ala 5' comprende un azúcar de etilo restringido (cEt); los cuatro nucleósidos enlazados del segmento 3' del ala comprenden un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt) y un azúcar 2'-O-metoxietilo en la dirección 5' a 3'; cada enlace internucleosídico es un enlace fosforotioato; y cada citosina es una 5-metilcitosina.
Description
DESCRIPCIÓN
Un compuesto antisentido modificado para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Kennedy
Campo
La invención se refiere a compuestos antisentido para su uso en métodos para mejorar, tratar o prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto que porta una mutación en el gen del receptor de andrógenos (AR), como la expansión de una repetición de trinucleótido CAG, que está asociada con la enfermedad de Kennedy, administrando un antisentido compuesto dirigido a AR.
Antecedentes
La enfermedad de Kennedy, también conocida como atrofia muscular bulbar espinal, atrofia bulboespinal, neuropatía bulboespinal ligada a X (XBSN) o atrofia muscular espinal ligada a X tipo 1 (SMAX1), es una enfermedad neuromuscular degenerativa que afecta a los hombres que portan una mutación en el gen del receptor de andrógenos (AR) en el cromosoma X. La enfermedad de Kennedy está provocada por la expansión de una repetición del trinucleótido en el exón 1 del gen del receptor de andrógenos que codifica un tracto de poliglutamina en la proteína del receptor de andrógenos.
Hay una correlación positiva entre la longitud de la repetición de CAG y la gravedad de la enfermedad, y una correlación negativa entre la longitud de la repetición y la edad de aparición de la enfermedad. El número de repeticiones de CAG en pacientes con la enfermedad de Kennedy varía, pero puede estar en el intervalo de aproximadamente 36-62 repeticiones. La enfermedad de Kennedy se caracteriza por la degeneración y pérdida de las neuronas motoras inferiores en el tronco encefálico y la médula espinal, junto con debilidad progresiva, atrofia y fasciculación de los músculos bulbares y de las extremidades proximales combinado con el deterioro sensorial. La enfermedad de Kennedy habitualmente se desarrolla en la edad adulta media, pero la aparición y la gravedad de la enfermedad pueden variar desde la adolescencia hasta la vejez.
Actualmente no hay curas ni tratamientos para la enfermedad de Kennedy. Los hombres que padecen la enfermedad de Kennedy generalmente terminan en una silla de ruedas como resultado de la degeneración de las neuronas motoras y el desgaste muscular y, posteriormente, tienen un mayor riesgo de desarrollar otras dolencias.
La WO 2012/065051 se refiere a composiciones y métodos para tratar trastornos que dependen del receptor de andrógenos incluyendo cánceres.
La US 2011/319471 se refiere a antagonistas de LNA dirigidos al receptor de andrógenos.
Sumario
La invención se define por las reivindicaciones. Las realizaciones descritas en la presente que no constituyen parte de la invención se proporcionan únicamente por ilustración.
En la presente se proporciona un compuesto antisentido modificado para su uso en un método para tratar o prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto, en donde el compuesto antisentido modificado comprende un oligonucleótido antisentido modificado que consiste de 16 nucleósidos enlazados que tienen una secuencia de nucleobases que comprende una parte de nucleobases contigua que es complementaria a una parte de por lo menos 15 nucleobases de los nucleótidos 58722-58737 o 58752-58767 de la SEQ ID NO: 1, y en donde el oligonucleótido modificado comprende:
un segmento de hueco que consiste de 9 desoxinucleósidos enlazados;
un segmento de ala 5’ que consiste de tres nucleósidos enlazados; y
un segmento de ala 3’ que consiste de cuatro nucleósidos enlazados;
en donde el segmento de hueco está colocado entre el segmento de ala 5’ y el segmento de ala 3’; los tres nucleósidos enlazados del segmento de ala 5’ comprende cada uno un azúcar de etilo restringido (cEt), los cuatro nucleósidos enlazados del segmento de ala 3’ comprenden un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt), y un azúcar 2’-O-metoxietilo en la dirección 5’ a 3’; cada enlace internucleosídico es un enlace de fosforotioato; y cada citosina es una 5-metilcitosina.
Varias realizaciones de la presente se refieren al descubrimiento de que los compuestos antisentido dirigidos al receptor de andrógenos pueden mejorar, tratar o prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto que porta una mutación en el gen del receptor de andrógenos, como la expansión de una repetición del trinucleótido CAG, que está asociada con la enfermedad de Kennedy. Ciertas realizaciones se centran en aumentar la fuerza muscular, mejorar la atrofia muscular y/o inhibir la denervación muscular en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy, tratando de este modo la enfermedad de Kennedy. Ciertas realizaciones se refieren a la prevención de la
aparición de la enfermedad de Kennedy y sus síntomas o complicaciones en un sujeto que tiene una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy. Ciertas realizaciones se centran en prevenir la pérdida de fuerza muscular, prevenir la atrofia muscular, y/o prevenir la denervación muscular en un sujeto que tiene una mutación en el gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, previniendo de este modo la enfermedad de Kennedy.
Descripción detallada
Debe entenderse que tanto la descripción general anterior como la siguiente descripción detallada son solamente ejemplares e ilustrativas y no son restrictivas de la invención, como se reivindica. En la presente, el uso del singular incluye el plural a menos que se indique específicamente lo contrario. Como se usa en la presente, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se indique lo contrario. Además, el uso del término "que incluye" así como otras formas, como "incluye" e "incluido", no es limitativo. También, términos como "elemento" o "componente" abarcan tanto elementos y componentes que comprenden una unidad como elementos y componentes que comprenden más de una subunidad, a menos que se indique específicamente lo contrario.
Los encabezados de las secciones que se usan en la presente tienen únicamente propósitos organizativos y no deben interpretarse como una limitación de la materia descrita.
Se entiende que la secuencia expuesta en cada SEQ ID NO en los ejemplos contenidos en la presente es independiente de cualquier modificación en una fracción de azúcar, un enlace internucleosídico o una nucleobase. Como tales, los compuestos antisentido definidos por una SEQ ID NO pueden comprender, independientemente, una o más modificaciones a una fracción de azúcar, un enlace internucleosídico o una nucleobase. Los compuestos antisentido descritos por el número ISIS (N° ISIS) indican una combinación de secuencia de nucleobases, modificación química y motivo.
Definiciones
A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en relación con, y los procedimiento y técnicas de, química analítica, química orgánica sintética y la química farmacéutica y médica descritos en la presente, son los bien conocidos y usados comúnmente en la técnica. Pueden usarse técnicas estándar para la síntesis química y el análisis químico.
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos tienen los siguientes significados:
"2'-O-metoxietilo" (también 2'-MOE y 2'-O(CH2)2-OCH3) se refiere a una modificación de O-metoxi-etilo en la posición 2' de un anillo de furanosa. Un azúcar modificado con 2'-O-metoxietilo es un azúcar modificado.
"Nucleósido 2'-MOE" (también nucleósido 2'-O-metoxietilo) significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar modificado con 2'-MOE.
"Nucleósido 2’-sustituido" significa un nucleósido que comprende un sustituyente en la posición 2' del anillo de furanosilo distinto de H u OH. En ciertas realizaciones, los nucleósidos 2’-sustituidos incluyen nucleósidos con modificaciones de azúcares bicíclicos.
"Sitio objetivo 3' “ se refiere al nucleótido de un ácido nucleico objetivo que es complementario al nucleótido más 3' de un compuesto antisentido particular.
"Sitio objetivo 5' “ se refiere al nucleótido de un ácido nucleico objetivo que es complementario al nucleótido más 5' de un compuesto antisentido particular.
“5-metilcitosina” significa una citosina modificada con un grupo metilo unido a la posición 5. Una 5-metilcitosina es una nucleobase modificada.
“Aproximadamente” significa dentro de ±7% de un valor. Por ejemplo, si se expone, "los compuestos afectaron por lo menos a aproximadamente el 70% de la inhibición del receptor de andrógenos", se da a entender que los niveles del receptor de andrógenos se inhiben dentro de un intervalo del 63% y 77%.
"Administración" o "administrar" se refiere a vías de introducción de un compuesto antisentido proporcionado en la presente a un sujeto para realizar su función prevista. Un ejemplo de una vía de administración que puede usarse incluye, pero no se limita a, administración parenteral como inyección o infusión subcutánea, intravenosa o intramuscular.
“Mejoría” se refiere a una disminución de por lo menos un indicador, signo o síntoma de una enfermedad, trastorno o afección asociada. La gravedad de los indicadores puede determinarse mediante medidas subjetivas
u objetivas, que son conocidas por los expertos en la técnica.
“Animal” se refiere a un animal humano o no humano, incluyendo pero no limitado a, ratones, ratas, conejos, perros, gatos, cerdos y primates no humanos incluyendo pero no limitados a, monos y chimpancés.
“Actividad antisentido” significa cualquier actividad detectable o medible atribuible a la hibridación de un compuesto antisentido con su ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, la actividad antisentido es una disminución en la cantidad o expresión de un ácido nucleico o proteína objetivo codificada por tal ácido nucleico objetivo.
"Compuesto antisentido" significa un compuesto oligomérico que es capaz de hibridar con un ácido nucleico objetivo a través de enlaces de hidrógeno. Los ejemplos de compuestos antisentido incluyen compuestos de cadena sencilla y de cadena doble, como oligonucleótidos antisentido, ARNip, ARNhc, ARNmc y compuestos basados en ocupación.
“Inhibición antisentido” significa la reducción de los niveles de ácido nucleico objetivo en presencia de un compuesto antisentido complementario a un ácido nucleico objetivo en comparación con los niveles de ácido nucleico objetivo en ausencia del compuesto antisentido.
"Mecanismos antisentido" son todos aquellos mecanismos que implican la hibridación de un compuesto con el ácido nucleico objetivo, en donde el resultado o efecto de la hibridación es o la degradación del objetivo o la ocupación del objetivo con el estancamiento concomitante de la maquinaria celular que implica, por ejemplo, la transcripción o el corte y empalme.
“Oligonucleótido antisentido” significa un oligonucleótido de cadena sencilla que tiene una secuencia de nucleobases que permite la hibridación con una región o segmento correspondiente de un ácido nucleico objetivo.
"Complementariedad de bases" se refiere a la capacidad para el emparejamiento preciso de bases de nucleobases de un oligonucleótido antisentido con las nucleobases correspondientes en un ácido nucleico objetivo (es decir, hibridación), y está mediada por la unión de hidrógeno de Watson-Crick, Hoogsteen o Hoogsteen invertida entre las nucleobases correspondientes.
"Fracción de azúcar bicíclico" se refiere a una fracción de azúcar modificado que comprende un anillo de 4 a 7 miembros (incluyendo pero no limitado a un furanosilo) que comprende un puente que conecta dos átomos del anillo de 4 a 7 miembros para formar un segundo anillo, lo que da como resultado una estructura bicíclica. En ciertas realizaciones, el anillo de 4 a 7 miembros es un anillo de azúcar. En ciertas realizaciones, el anillo de 4 a 7 miembros es un furanosilo. En ciertas de tales realizaciones, el puente conecta el carbono 2' y el carbono 4' del furanosilo.
"Estructura de caperuza" o "fracción de caperuza terminal" significa modificaciones químicas que se han incorporado en cualquiera de los extremos terminales de un compuesto antisentido.
"cEt" o "etilo restringido" significa una fracción de azúcar bicíclico que comprende un puente que conecta el carbono 4' y el carbono 2', en donde el puente tiene la fórmula: 4'-CH(CH3)-O-2'.
"Nucleósido de etilo restringido" (también nucleósido cEt) significa un nucleósido que comprende una fracción de azúcar bicíclico que comprende un puente 4'-CH(CH3)-O-2'.
"Región químicamente distinta" se refiere a una región de un compuesto antisentido que es de alguna manera químicamente diferente de otra región del mismo compuesto antisentido. Por ejemplo, una región que tiene nucleótidos de 2'-O-metoxietilo es químicamente distinta de una región que tiene nucleótidos sin modificaciones de 2'-O-metoxietilo.
“Compuestos antisentido quiméricos” significa compuestos antisentido que tienen por lo menos 2 regiones químicamente distintas, cada posición teniendo una pluralidad de subunidades.
“Complementariedad” significa la capacidad de emparejamiento entre nucleobases de un primer ácido nucleico y un segundo ácido nucleico.
Se entenderá que “comprender”, “comprende” y “que comprende” implican la inclusión de un paso o elemento o grupo de pasos o elementos indicado pero no la exclusión de cualquier otro paso o elemento o grupo de pasos o elementos.
“Nucleobases contiguas” significa nucleobases inmediatamente adyacentes entre sí.
“Desoxirribonucleótido” significa un nucleótido que tiene un hidrógeno en la posición 2' de la porción de azúcar del nucleótido. Los desoxirribonucleótidos pueden modificarse con cualquiera de una variedad de sustituyentes. "Diseñar" o "diseñado para" se refieren al proceso de diseño de un compuesto oligomérico que hibrida específicamente con una molécula de ácido nucleico seleccionada.
“Eficacia” significa la capacidad de producir un efecto deseado.
“Expresión” incluye todas las funciones mediante las cuales la información codificada de un gen se convierte en estructuras presentes y que operan en una célula. Tales estructuras incluyen, pero no se limitan a, los productos de transcripción y traducción.
"Totalmente complementario" o "100% complementario" significa que cada nucleobase de un primer ácido nucleico tiene una nucleobase complementaria en un segundo ácido nucleico. En ciertas realizaciones, un primer ácido nucleico es un compuesto antisentido y un ácido nucleico objetivo es un segundo ácido nucleico.
"Gapmer" significa un compuesto antisentido quimérico en el que una región interna que tiene una pluralidad de nucleósidos que soportan la escisión de la RNasa H se coloca entre regiones externas que tienen uno o más nucleósidos, en donde los nucleósidos que comprenden la región interna son químicamente distintos del nucleósido o nucleósidos que comprenden las regiones externas. A la región interna puede hacerse referencia como "hueco" y a las regiones externas puede hacerse referencia como "alas".
“Hibridación” significa el apareamiento de moléculas de ácido nucleico complementarias. En ciertas realizaciones, las moléculas de ácido nucleico complementarias incluyen, pero no se limitan a, un compuesto antisentido y un objetivo de ácido nucleico. En ciertas realizaciones, las moléculas de ácido nucleico complementarias incluyen, pero no se limitan a, un oligonucleótido antisentido y un objetivo de ácido nucleico. "Identificar" o "seleccionar" un animal con la enfermedad de Kennedy o que tiene una mutación del gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy significa identificar o seleccionar un sujeto al que se le ha diagnosticado la enfermedad de Kennedy o una mutación del gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG en el gen de AR; o identificar o seleccionar a un sujeto que tiene algún síntoma de la enfermedad de Kennedy, incluyendo pero no limitado a, fatiga muscular, calambres musculares, debilidad muscular, atrofia muscular, espasmos o temblores musculares; y/o signos bulbares como dificultad para respirar, tragar y/o hablar.
“Inmediatamente adyacente” significa que no hay elementos intermedios entre los elementos inmediatamente adyacentes.
“Individuo” significa un animal humano o no humano seleccionado para tratamiento o terapia.
"Inducir", "inhibir", "potenciar", "elevar", "aumentar", "disminuir", “regular por incremento”, "regular por disminución”, o similares, generalmente denotan diferencias cuantitativas entre dos estados.
“Inhibir la expresión o actividad” se refiere a una reducción, bloqueo de la expresión o actividad y no indica necesariamente una eliminación total de expresión o actividad.
“Enlace internucleosídico” se refiere al enlace químico entre nucleósidos.
Oligonucleótidos antisentido "alargados" son aquellos que tienen uno o más nucleósidos adicionales con respecto a un oligonucleótido antisentido divulgado en la presente.
“Desoxinucleósido enlazado” significa una base de ácidos nucleicos (A, G, C, T, U) sustituida por desoxirribosa enlazada por un éster de fosfato para formar un nucleótido.
“Nucleósidos enlazados” significa nucleósidos adyacentes enlazados entre sí por un enlace internucleosídico. "Malapareamiento" o "nucleobase no complementaria" se refiere al caso en el que una nucleobase de un primer ácido nucleico no es capaz de emparejarse con la nucleobase correspondiente de un segundo ácido nucleico o ácido nucleico objetivo.
“Enlace internucleosídico modificado” se refiere a una sustitución o cualquier cambio de un enlace internucleosídico de origen natural (es decir, un enlace internucleosídico fosfodiéster).
“Nucleobase modificada” significa cualquier nucleobase distinta de adenina, citosina, guanina, timidina o uracilo.
Una “nucleobase no modificada” significa las bases de purina adenina (A) y guanina (G), y las bases de pirimidina timina (T), citosina (C) y uracilo (U).
"Nucleósido modificado" significa un nucleósido que tiene, independientemente, una fracción de azúcar modificado y/o una nucleobase modificada.
"Nucleótido modificado" significa un nucleótido que tiene, independientemente, una fracción de azúcar modificado, un enlace internucleosídico modificado o una nucleobase modificada.
"Oligonucleótido modificado" significa un oligonucleótido que comprende por lo menos un enlace internucleosídico modificado, un azúcar modificado y/o una nucleobase modificada.
“Azúcar modificado” significa sustitución y/o cualquier cambio de una fracción de azúcar natural.
"Monómero" se refiere a una sola unidad de un oligómero. Los monómeros incluyen, pero no se limitan a, nucleósidos y nucleótidos, ya sean naturales o modificados.
"Motivo" significa el patrón de nucleósidos no modificados y modificados en un compuesto antisentido.
“Fracción de azúcar natural” se refiere a una fracción de azúcar que se encuentra en el ADN (2'-H) o en el ARN (2'-OH).
“Enlace internucleosídico de origen natural” significa un enlace fosfodiéster de 3' a 5'.
“Nucleobase no complementaria” se refiere a un par de nucleobases que no forman enlaces de hidrógeno entre sí ni soportan de otro modo la hibridación.
“Ácido nucleico” se refiere a moléculas compuestas de nucleótidos monoméricos. Un ácido nucleico incluye, pero no se limita a, ácidos ribonucleicos (ARN), ácidos desoxirribonucleicos (ADN), ácidos nucleicos de cadena sencilla y ácidos nucleicos de cadena doble.
“Nucleobase” significa una fracción heterocíclica capaz de emparejarse con una base de otro ácido nucleico. "Complementariedad de nucleobases" se refiere a una nucleobase que es capaz de emparejamiento de bases con otra nucleobase. Por ejemplo, en el ADN, la adenina (A) es complementaria con la timina (T). Por ejemplo, en el ARN, la adenina (A) es complementaria con el uracilo (U). En ciertas realizaciones, nucleobase complementaria se refiere a una nucleobase de un compuesto antisentido que es capaz de emparejamiento de bases con una nucleobase de su ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, si una nucleobase en cierta posición de un compuesto antisentido es capaz de formar enlaces de hidrógeno con una nucleobase en cierta posición de un ácido nucleico objetivo, entonces se considera que la posición del enlace de hidrógeno entre el oligonucleótido y el ácido nucleico objetivo es complementaria en ese par de nucleobases.
“Secuencia de nucleobases” significa el orden de nucleobases contiguas independiente de cualquier azúcar, enlace y/o modificación de nucleobases.
“Nucleósido” significa una nucleobase enlazada con un azúcar.
“Mimético de nucleósido” incluye aquellas estructuras usadas para reemplazar el azúcar o el azúcar y la base y no necesariamente el enlace en una o más posiciones de un compuesto oligomérico como, por ejemplo, miméticos de nucleósidos que tienen miméticos morfolino, ciclohexenilo, ciclohexilo, tetrahidropiranilo, azúcar biciclo o triciclo, por ejemplo, unidades de azúcar no furanosa. Los miméticos de nucleótidos incluyen aquellas estructuras usadas para reemplazar el nucleósido y el enlace en una o más posiciones de un compuesto oligomérico como, por ejemplo, ácidos nucleicos peptídicos o morfolinos (morfolinos enlazados por -N(H)-C(=O)-O- u otro enlace no fosfodiéster). El sustituto del azúcar se superpone con el término un poco más amplio mimético de nucleósido, pero se pretende que indique el reemplazo de solamente la unidad de azúcar (anillo de furanosa. Los anillos de tetrahidropiranilo divulgados en la presente son ilustrativos de un ejemplo de un sustituto de azúcar en donde el grupo de azúcar furanosa ha sido reemplazado por un sistema de anillos de tetrahidropiranilo. "Mimético" se refiere a grupos que se sustituyen por un azúcar, una nucleobase y/o un enlace internucleosídico. En general, se usa un mimético en lugar del azúcar o la combinación de azúcar-enlace internucleosídico, y la nucleobase se mantiene para la hibridación con un objetivo seleccionado.
“Nucleótido” significa un nucleósido que tiene un grupo fosfato enlazado covalentemente a la porción de azúcar del nucleósido.
“Compuesto oligomérico” significa un polímero de subunidades monoméricas enlazadas que es capaz de hibridar
con por lo menos una región de una molécula de ácido nucleico.
“Oligonucleósido” significa un oligonucleótido en el que los enlaces internucleosídicos no contienen un átomo de fósforo.
"Oligonucleótido" significa un polímero de nucleósidos enlazados, cada uno de los cuales puede estar modificado o no modificado, independientemente uno de otro.
“Enlace fosforotioato” significa un enlace entre nucleósidos donde el enlace fosfodiéster se modifica reemplazando uno de los átomos de oxígeno que no forman un puente con un átomo de azufre. Un enlace fosforotioato es un enlace internucleosídico modificado.
“Porción” significa un número definido de nucleobases contiguas (es decir, enlazadas) de un ácido nucleico. En ciertas realizaciones, una porción es un número definido de nucleobases contiguas de un ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, una porción es un número definido de nucleobases contiguas de un compuesto antisentido.
“Prevenir” se refiere a retrasar o impedir la aparición o el desarrollo de una enfermedad, trastorno o afección durante un período de tiempo que va desde minutos hasta indefinidamente. Prevenir también significa reducir el riesgo de desarrollar una enfermedad, trastorno o afección. Se entenderá que el término “prevenir” incluye, pero no requiere, la prevención completa. Prevenir también puede referirse a retrasar o impedir la aparición o el desarrollo de síntomas que aparecen típicamente en la edad adulta como resultado de una mutación genética heredada.
"Prevención de la enfermedad de Kennedy" se refiere a realizar acciones que retrasan o impiden la aparición o el desarrollo de síntomas en un sujeto que típicamente aparecen en la edad adulta como resultado de que el sujeto tiene una mutación del gen de AR heredada asociada con la enfermedad de Kennedy. La prevención de la enfermedad de Kennedy incluye, pero no se limita a, la prevención de la pérdida de fuerza muscular, la prevención de la atrofia muscular y/o la prevención de la denervación muscular en un sujeto que tiene una mutación del gen de AR heredada asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG.
"Región" se define como una parte del ácido nucleico objetivo que tiene por lo menos una estructura, función o característica identificable.
"Ribonucleótido" significa un nucleótido que tiene un hidroxi en la posición 2' de la porción de azúcar del nucleótido. Los ribonucleótidos pueden modificarse con cualquiera de una variedad de sustituyentes.
"Segmentos" se definen como porciones más pequeñas o subporciones de regiones dentro de un ácido nucleico objetivo.
"Sitios", como se usa en la presente, se definen como posiciones únicas de nucleobases dentro de un ácido nucleico objetivo.
"Que hibrida específicamente" se refiere a un compuesto antisentido que tiene un grado suficiente de complementariedad entre un oligonucleótido antisentido y un ácido nucleico objetivo para inducir un efecto deseado, a la vez que muestra efectos mínimos o nulos sobre los ácidos nucleicos no objetivo en condiciones en las que se desea una unión específica, es decir, en condiciones fisiológicas en el caso de ensayos in vivo y tratamientos terapéuticos. Las "condiciones de hibridación estrictas" o "condiciones estrictas" se refieren a las condiciones en las que un compuesto oligomérico se hibridará con su secuencia objetivo, pero con un número mínimo de otras secuencias.
“Sujeto” significa un animal humano o no humano seleccionado para tratamiento o terapia.
“Síntomas” de la enfermedad de Kennedy incluyen, pero no se limitan a, uno o más de los siguientes: signos bulbares, como dificultad para respirar, tragar o hablar; disfagia; temblor de intención; temblores en las manos; neuropatía motora inferior; debilidad y/o atrofia muscular; denervación muscular; entumecimiento o pérdida de sensibilidad; disminución de los reflejos tendinosos profundos; fasciculaciones musculares (por ejemplo, contracciones musculares involuntarias); calambres musculares; espasmos musculares; músculos de la pantorrilla hipertrofiados; ginecomastia (mamas agrandadas); efecto afeminado de la deficiencia de andrógenos; impotencia; disfunción eréctil; fertilidad reducida; atrofia testicular; asimetría muscular; y/o creatina quinasa en suero elevada.
"Objetivo" se refiere a una proteína, cuya modulación se desea.
"Gen objetivo" se refiere a un gen que codifica un objetivo.
“Direccionamiento” significa el proceso de diseño y selección de un compuesto antisentido que hibridará específicamente con un ácido nucleico objetivo e inducirá un efecto deseado.
"Ácido nucleico objetivo", "ARN objetivo", "transcrito de ARN objetivo" y "ácido nucleico objetivo" significan todos un ácido nucleico capaz de ser el objetivo de compuestos antisentido.
"Región objetivo" significa una porción de un ácido nucleico objetivo a la que se dirigen uno o más compuestos antisentido.
"Segmento objetivo" significa la secuencia de nucleótidos de un ácido nucleico objetivo al que se dirige un compuesto antisentido. "Sitio objetivo 5' " se refiere al nucleótido más 5' de un segmento objetivo. "Sitio objetivo 3' " se refiere al nucleótido más 3' de un segmento objetivo.
“Cantidad terapéuticamente eficaz” significa una cantidad de un agente que proporciona un beneficio terapéutico a un individuo.
“Tratar la enfermedad de Kennedy” se refiere a realizar acciones que llevan a la mejora de la enfermedad de Kennedy o de los síntomas que la acompañan. La combinación de dichas acciones se engloba en el término “tratamiento”. La mejoría de la enfermedad de Kennedy incluye, pero no se limita a, aumentar la fuerza muscular, mejorar la atrofia muscular y/o inhibir la denervación muscular en un sujeto que padece la enfermedad de Kennedy.
Nucleobases "no modificadas" significan las bases de purina adenina (A) y guanina (G), y las bases de pirimidina timina (T), citosina (C) y uracilo (U).
“Nucleótido no modificado” significa un nucleótido compuesto de nucleobases de origen natural, fracciones de azúcar y enlaces internucleosídicos. En ciertas realizaciones, un nucleótido no modificado es un nucleótido de ARN (es decir, p-D-ribonucleósidos) o un nucleótido de ADN (es decir, p-D-desoxirribonucleósido).
Ciertas realizaciones
Tratamiento de la enfermedad de Kennedy
Ciertas realizaciones proporcionadas en la presente se refieren a la mejora o el tratamiento de la enfermedad de Kennedy en un sujeto mediante la administración de un compuesto antisentido, como se define en las reivindicaciones, dirigido al receptor de andrógenos. Por ejemplo, varias realizaciones se dirigen a aumentar la fuerza muscular, mejorar la atrofia muscular y/o inhibir la denervación muscular en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy administrando un compuesto antisentido dirigido al receptor de andrógenos. Un sujeto que padece la enfermedad de Kennedy puede identificarse y confirmarse mediante técnicas de diagnóstico molecular disponibles en la técnica, como ensayos basados en PCR para detectar expansiones de la repetición de CAG en el gen del receptor de andrógenos a partir de una muestra de sangre. El sujeto puede tener, por ejemplo, una expansión de alrededor de 36-62 repeticiones de trinucleótidos.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para mejorar o tratar la enfermedad de Kennedy en un sujeto comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano, mejorando o tratando de este modo la enfermedad de Kennedy en el sujeto.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para aumentar la fuerza muscular en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano, aumentando de este modo la fuerza muscular y mejorando o tratando la enfermedad de Kennedy en el sujeto. En varios aspectos, el músculo es un músculo de las extremidades proximales (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta).
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para mejorar la atrofia muscular en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano, mejorando de este modo la atrofia muscular y mejorando o tratando la enfermedad de Kennedy en el sujeto. En varios aspectos, mejorar la atrofia muscular aumenta el tamaño de las células musculares. En varios aspectos, el músculo es un músculo de las extremidades proximales (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta).
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para inhibir la denervación muscular en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano, inhibiendo de este modo la denervación muscular y mejorando o tratando la enfermedad de Kennedy en el sujeto. En varios aspectos, el músculo es un músculo de las extremidades proximales (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta).
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para inhibir la expresión de AR en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano, mejorando o tratando de este modo la enfermedad de Kennedy en el sujeto.
En la invención reivindicada, el oligonucleótido modificado consiste de 16 nucleósidos enlazados, un segmento de hueco que consiste de 9 desoxinucleósidos enlazadas, un segmento de ala 5’ que consiste de tres nucleósidos enlazadas, un segmento de ala 3’ que consiste de cuatro nucleósidos enlazados; los tres nucleósidos enlazados del segmento de al a5’ comprenden cada uno un azúcar de etilo restringido (cEt); los cuatro nucleósidos enlazados del segmento de ala 3’ comprenden un azúcar de etilo restringido (cEt), un ázucar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt), y un azúcar 2’-O-metoxietilo en la dirección 5’ a 3’; cada enlace internucleosídico es un enlace de fosforotioato; y cada citosina es una 5-metilcitosina.
Ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención se refieren a un método para reducir la expresión de AR en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy o una mutación del gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy que comprende administrar al sujeto un compuesto como se describe en la presente.
Ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención se refieren a un método para tratar a un sujeto con la enfermedad de Kennedy que comprende: a) identificar dicho sujeto con la enfermedad de Kennedy, y b) administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto. En ciertas realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto administrada al sujeto trata o reduce la enfermedad de Kennedy, o un síntoma de la misma, en el sujeto.
El compuesto antisentido modificado para el uso de la invención se dirige al receptor de andrógenos (AR) humano dentro del intrón 1.
En varios aspectos, el compuesto dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano dentro del exón 1 es capaz de inhibir el AR en mayor medida que un compuesto antisentido dirigido al dominio de unión al ligando, como EZN-4176, que está dirigido al exón 4 y corresponde a la SEQ ID NO: 58 descrita en la Patente de Estados Unidos N27.737.125.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para mejorar o tratar la enfermedad de Kennedy en un sujeto comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido a AR, con la condición de que el compuesto antisentido no tenga una secuencia de nucleobases que consista de cualquiera de las SEQ ID NO: 174-231, descritas en la Patente de Estados Unidos 7.737.125 como las SEQ ID NO: 2-80 y 86-106 e identificadas en la Tabla A.
Tabla A
continuación
continuación
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para mejorar o tratar la enfermedad de Kennedy en un sujeto comprende administrar al sujeto un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste de 12 a 30 nucleósidos enlazados y que tiene una secuencia de nucleobases que comprende una secuencia de nucleobases enumerada en cualquiera de las SEQ ID NO: 35-38. En ciertos aspectos, el compuesto antisentido es capaz de inhibir AR en mayor medida que un compuesto antisentido que tiene una secuencia de nucleobases que consiste de cualquiera de las SEQ ID NO: 174-231, descritas en la Patente de Estados Unidos N° 7.737.125 como las SEQ ID nO: 2-80 y 86-106 e identificadas en la Tabla A anterior.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para mejorar o tratar la enfermedad de Kennedy en un sujeto comprende administrar al sujeto un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste de 12 a 30 nucleósidos enlazados y que tiene una secuencia de nucleobases que consiste de una secuencia de nucleobases enumerada en cualquiera de las SEQ ID NO: 35-38. En ciertos aspectos, el compuesto antisentido es capaz de inhibir AR en mayor medida que un compuesto antisentido que tiene una secuencia de nucleobases que consiste de cualquiera de las SEQ ID NO: 174-231, descritas en la Patente de Estados Unidos N° 7.737.125 como las SEQ ID nO: 2-80 y 86-106 e identificadas en la Tabla A anterior.
La invención reivindicada implica administrar al sujeto un compuesto antisentido modificado dirigido a una región de un ácido nucleico del receptor de andrógenos. Tales compuestos u oligonucleótidos dirigidos a una región de un ácido nucleico del receptor de andrógenos tienen una porción de nucleobases contiguas que es complementaria a una porción de nucleobases de igual longitud de la región. La porción puede ser una porción de por lo menos 15 o 16 nucleobases contiguas complementaria a una porción de igual longitud de una región enumerada en la presente.
La invención reivindicada implica administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido a un ácido nucleico del receptor de andrógenos, en donde el compuesto antisentido u oligonucleótido modificado es por lo menos un 90% complementario dentro de la siguiente región de nucleótidos de la SEQ ID NO: 1: 58752-58767.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para mejorar o tratar la enfermedad de Kennedy en un sujeto comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido a un ácido nucleico del receptor de andrógenos, en donde el compuesto antisentido u oligonucleótido modificado es 100% complementario dentro de las siguientes regiones de nucleótidos de la SEQ ID NO:1: 58722-58737, o 58752-58767.
Prevención de la enfermedad de Kennedy
Ciertas realizaciones de la presente se refieren a la prevención de la enfermedad de Kennedy en un sujeto que tiene una mutación del gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy administrando un compuesto antisentido, como se define en las reivindicaciones, dirigido al receptor de andrógenos. Aunque la enfermedad de Kennedy se desarrolla típicamente en la edad adulta media, varias realizaciones están dirigidas a prevenir la
aparición o la gravedad de la enfermedad de Kennedy en hombres que portan una mutación del gen de AR para la enfermedad de Kennedy pero que actualmente se encuentran en la etapa presintomática. Varias realizaciones se dirigen a administrar un compuesto antisentido dirigido al receptor de andrógenos a un sujeto que porta una mutación del gen de AR para la enfermedad de Kennedy antes de la aparición de la enfermedad o sus síntomas asociados, previniendo de este modo la enfermedad de Kennedy en el sujeto. Estos sujetos pueden tener un historial familiar de enfermedad de Kennedy y pueden confirmarse como portadores de la mutación del gen de AR de la enfermedad de Kennedy mediante técnicas de diagnóstico molecular disponibles en la técnica, como ensayos basados en PCR para detectar expansiones de repetición de CAG en el gen del receptor de andrógenos a partir de una muestra de sangre. Varias realizaciones se dirigen a prevenir la pérdida de fuerza muscular, prevenir la atrofia muscular y/o prevenir la denervación muscular en un sujeto que tiene una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy administrando un compuesto antisentido dirigido al receptor de andrógenos. En ciertas realizaciones, el músculo es un músculo de una extremidad proximal (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta). En varios aspectos, el sujeto tiene una mutación del gen de AR caracterizada por una expansión de una repetición del trinucleótido CAG que se sabe que está genéticamente asociada con la enfermedad de Kennedy. El sujeto puede tener, por ejemplo, una expansión de aproximadamente 36-62 repeticiones de trinucleótidos.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos humano, previniendo de este modo la enfermedad de Kennedy o por lo menos un síntoma de la enfermedad de Kennedy en el sujeto. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para prevenir la pérdida de fuerza muscular en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano, evitando de este modo la pérdida de fuerza muscular en el sujeto. En varios aspectos, el músculo es un músculo de las extremidades proximales (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta). En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para prevenir la atrofia muscular en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano, previniendo de este modo la atrofia muscular en el sujeto. En varios aspectos, la prevención de la atrofia muscular evita la reducción del tamaño de las células musculares. En varios aspectos, el músculo es un músculo de las extremidades proximales (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta). En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para prevenir la denervación muscular en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humanos, previniendo por tanto la denervación muscular en el sujeto. En varios aspectos, el músculo es un músculo de las extremidades proximales (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta). En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para inhibir la expresión de AR en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido al receptor de andrógenos (AR) humanos, inhibiendo de este modo la expresión de AR en el sujeto y previniendo la enfermedad de Kennedy o por lo menos un síntoma de la enfermedad de Kennedy en el sujeto. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En la invención reivindicada, el oligonucleótido antisentido modificado consiste de 16 nucleósidos enlazados, un segmento de hueco que consiste de 9 desoxinucleósidos enlazados, un segmento de ala 5’ que consiste de tres nucleósidos enlazados, un segmento de ala 3’ que consiste de cuatro nucleósidos enlazados; los tres nucleósidos enlazados del segmento de ala 5’ comprenden cada uno un azúcar de etilo restringido (cEt); los
cuatro nucleósidos enlazados del segmento de ala 3’ comprenden un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt), y un azúcar 2’-O-metoxietilo en la dirección 5’ a 3’; cada enlace internucleosídico es un enlace de fosforotioato; y cada citosina es una 5-metilcitosina.
Ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención se refieren a un método para reducir la expresión de AR en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como la expansión de una repetición del trinucleótido CAG, que comprende administrar al sujeto un compuesto como se describe en la presente. En varios aspectos, el sujeto porta una porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana. Ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención se refieren a un método para en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como la expansión de una repetición del trinucleótido CAG, que comprende: a) identificar a dicho sujeto como portador de la mutación del gen de AR, y b) administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto. En ciertas realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto administrado al sujeto previene la enfermedad de Kennedy, o un síntoma de la misma, en el sujeto. En varios aspecto, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
El compuesto antisentido modificado para el uso de la invención se dirige al receptor de andrógenos (AR) humano dentro del intrón 1.
En varios aspectos, el compuesto dirigido al receptor de andrógenos (AR) humano dentro del intrón 1 es capaz de inhibir el AR en mayor medida que un compuesto antisentido dirigido al dominio de unión al ligando, como EZN-4176, que está dirigido al exón 4 y corresponde a la SEQ ID NO: 58 descrita en la Patente de Estados Unidos 7.737.125. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para tratar la enfermedad de Kennedy en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, comprende administrar al sujeto un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste de 12 a 30 nucleósidos enlazados y que tiene una secuencia de nucleobases que comprende una secuencia de nucleobases enumerada en cualquiera de las SEQ ID NO: 35-38. En ciertos aspectos, el compuesto antisentido es capaz de inhibir el AR en mayor medida que un compuesto antisentido que tiene una secuencia de nucleobases que consiste de cualquiera de las SEQ ID NO: 174-231, descritas en la Patente de Estados Unidos 7.737.125 e identificadas en la Tabla A anterior. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención, un método para prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, comprende administrar al sujeto un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste de 12 a 30 nucleósidos enlazados y que tiene una secuencia de nucleobases que consiste de una secuencia de nucleobases enumerada en cualquiera de las SEQ ID NO: 35-38. En ciertos aspectos, el compuesto antisentido es capaz de inhibir el AR en mayor medida que un compuesto antisentido que tiene una secuencia de nucleobases que consiste de cualquiera de las SEQ ID NO: 174-231, descritas en la Patente de Estados Unidos 7.737.125 e identificadas en la Tabla A anterior. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
La invención reivindicada implica administrar al sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido a una región de un ácido nucleico del receptor de andrógenos. En ciertas realizaciones, tales compuestos u oligonucleótidos dirigidos a una región de un ácido nucleico del receptor de andrógenos tienen una porción de nucleobases contiguas que es complementaria a una porción de nucleobases de igual longitud de la región. La porción puede ser una porción de por lo menos 15 o 16 nucleobases contiguas complementaria a una porción de igual longitud de una región enumerada en la presente. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
La invención implica administrar al sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido a una región de un ácido nucleico del receptor de andrógenos, en donde el compuesto antisentido u oligonucleótido modificado es por lo menos un 90% complementario dentro de la siguiente región de nucleótidos de la SEQ ID NO:1: 58752-58767. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o
sintomática temprana.
En ciertas realizaciones del compuesto antisentido modificado para el uso de la invención un método para prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto que porta una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy, como una expansión de la repetición del trinucleótido CAG comprende administrar al sujeto un compuesto antisentido u oligonucleótido modificado dirigido a una región de un ácido nucleico del receptor de andrógenos, en donde el compuesto antisentido u oligonucleótido modificado es 100% complementario dentro de las siguientes regiones de nucleótidos de la SEQ ID NO:1: 58722-58737, o 58752-58767. En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana.
En varios aspectos, el sujeto porta una mutación en el gen de AR asociada con la enfermedad de Kennedy pero se encuentra en la etapa presintomática o sintomática temprana. En varios aspectos, el músculo es un músculo de las extremidades proximales (por ejemplo, brazos y piernas) o un músculo bulbar (por ejemplo, boca, lengua y garganta).
Compuestos antisentido
Los compuestos oligoméricos incluyen, pero no se limitan a, oligonucleótidos, oligonucleósidos, análogos de oligonucleótidos, miméticos de oligonucleótidos, compuestos antisentido, oligonucleótidos antisentido y ARNip. Un compuesto oligomérico puede ser "antisentido" para un ácido nucleico objetivo, lo que significa que es capaz de experimentar hibridación con un ácido nucleico objetivo a través de enlaces de hidrógeno.
En ciertas realizaciones, un compuesto antisentido tiene una secuencia de nucleobases que, cuando se escribe en la dirección 5' a 3', comprende el complemento inverso del segmento objetivo de un ácido nucleico objetivo al que se dirige. En ciertas de tales realizaciones, un oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobases que, cuando se escribe en la dirección 5' a 3', comprende el complemento inverso del segmento objetivo de un ácido nucleico objetivo al que se dirige.
En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos antisentido pueden acortarse o truncarse. Por ejemplo, una única subunidad puede eliminarse del extremo 5' (truncamiento 5') o, alternativamente, del extremo 3' (truncamiento 3'). Un compuesto antisentido acortado o truncado dirigido a un ácido nucleico del receptor de andrógenos puede tener dos subunidades eliminadas del extremo 5' o, alternativamente, puede tener dos subunidades eliminadas del extremo 3' del compuesto antisentido. Alternativamente, los nucleósidos eliminados pueden dispersarse por todo el compuesto antisentido, por ejemplo, en un compuesto antisentido que tenga un nucleósido eliminado del extremo 5' y un nucleósido eliminado del extremo 3'. Cuando en un compuesto antisentido alargado está presente una única subunidad adicional, la subunidad adicional puede localizarse en el extremo 5' o 3' del compuesto antisentido. Cuando están presentes dos o más subunidades adicionales, las subunidades añadidas pueden ser adyacentes entre sí, por ejemplo, en un compuesto antisentido que tiene dos subunidades añadidas al extremo 5' (adición 5'), o alternativamente al extremo 3' (adición 3’), del compuesto antisentido. Alternativamente, las subunidades añadidas pueden dispersarse por todo el compuesto antisentido, por ejemplo, en un compuesto antisentido que tenga una subunidad añadida al extremo 5' y una subunidad añadida al extremo 3'.
Es posible aumentar o disminuir la longitud de un compuesto antisentido, como un oligonucleótido antisentido, y/o introducir bases malapareadas sin eliminar la actividad. Por ejemplo, en Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992), se probaron una serie de oligonucleótidos antisentido de 13-25 nucleobases de longitud para determinar su capacidad para inducir la escisión de un ARN objetivo en un modelo de inyección de ovocitos. Los oligonucleótidos antisentido de 25 nucleobases de longitud con 8 u 11 bases malapareadas cerca de los extremos de los oligonucleótidos antisentido fueron capaces de dirigir la escisión específica del ARNm objetivo, aunque en menor medida que los oligonucleótidos antisentido que no contenían malapareamientos. De manera similar, la escisión específica del objetivo se logró usando oligonucleótidos antisentido de 13 nucleobases, incluyendo aquellos con 1 o 3 malapareamientos.
Gautschi et al. (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, marzo de 2001) demostraron la capacidad de un oligonucleótido que tiene un 100% de complementariedad con el ARNm de bcl-2 y que tiene 3 malapareamientos con el ARNm de bcl-xL para reducir la expresión de tanto bcl-2 como bcl-xL in vitro e in vivo. Además, este oligonucleótido demostró una potente actividad antitumoral in vivo.
Maher y Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988) probaron una serie de oligonucleótidos antisentido de 14 nucleobases en tándem, y oligonucleótidos antisentido de 28 y 42 nucleobases compuestos por la secuencia de dos o tres de los oligonucleótidos antisentido en tándem, respectivamente, para determinar su capacidad para detener la traducción de DHFR humana en un ensayo de reticulocitos de conejo. Cada uno de los tres oligonucleótidos antisentido de 14 nucleobases solo fue capaz de inhibir la traducción, aunque a un nivel más modesto que los oligonucleótidos antisentido de 28 o 42 nucleobases.
Ciertos motivos y mecanismos de compuestos antisentido
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido tienen subunidades modificadas químicamente dispuestas en patrones, o motivos, para conferir a los compuestos antisentido propiedades como actividad inhibidora mejorada, afinidad de unión aumentada por un ácido nucleico objetivo o resistencia a la degradación por nucleasas in vivo.
Los compuestos antisentido quiméricos contienen típicamente por lo menos una región modificada para conferir una resistencia aumentada a la degradación por nucleasas, captación celular aumentada, afinidad de unión aumentada por el ácido nucleico objetivo y/o actividad inhibidora aumentada. Una segunda región de un compuesto antisentido quimérico puede conferir otra propiedad deseada, por ejemplo, servir como sustrato para la endonucleasa celular RNasa H, que escinde la cadena de ARN de un dúplex ARN:ADN.
La actividad antisentido puede resultar de cualquier mecanismo que implique la hibridación del compuesto antisentido (por ejemplo, oligonucleótido) con un ácido nucleico objetivo, en donde la hibridación finalmente da como resultado un efecto biológico. En ciertas realizaciones, se modula la cantidad y/o la actividad del ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, se reduce la cantidad y/o la actividad del ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, la hibridación del compuesto antisentido con el ácido nucleico objetivo finalmente da como resultado la degradación del ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, la hibridación del compuesto antisentido con el ácido nucleico objetivo no da como resultado la degradación del ácido nucleico objetivo. En ciertas de tales realizaciones, la presencia del compuesto antisentido hibridado con el ácido nucleico objetivo (ocupación) da como resultado una modulación de la actividad antisentido. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido que tienen un motivo o patrón químico particular de modificaciones químicas son particularmente adecuados para explotar uno o más mecanismos. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido funcionan a través de más de un mecanismo y/o a través de mecanismos que no han sido dilucidados. Por consiguiente, los compuestos antisentido descritos en la presente no están limitados por un mecanismo particular.
Los mecanismos antisentido incluyen, sin limitación, antisentido mediado por RNasa H; mecanismos de ARNi, que usan la vía RISC e incluyen, sin limitación, mecanismos de ARNip, ARNmc y microRNA; y mecanismos basados en la ocupación. Ciertos compuestos antisentido pueden actuar a través de más de uno de tales mecanismos y/o a través de mecanismos adicionales.
Antisentido mediado por RNasa H
En ciertas realizaciones, la actividad antisentido resulta por lo menos en parte de la degradación del ARN objetivo por la ARNasa H. La ARNasa H es una endonucleasa celular que escinde la cadena de ARN de un dúplex ARN:ADN. Se sabe en la técnica que los compuestos antisentido de cadena sencilla que son "similares al ADN" provocan actividad de ARNasa H en células de mamífero. Por consiguiente, los compuestos antisentido que comprenden por lo menos una porción de ADN o nucleósidos similares a ADN pueden activar la RNasa H, lo que da como resultado la escisión del ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido que utilizan RNasa H comprenden uno o más nucleósidos modificados. En ciertas realizaciones, tales compuestos antisentido comprenden por lo menos un bloque de 1-8 nucleósidos modificados. En ciertas de tales realizaciones, los nucleósidos modificados no soportan la actividad de la ARNasa H. En ciertas realizaciones, tales compuestos antisentido son gapmers, como se describe en la presente. En ciertas de tales realizaciones, el hueco del gapmer comprende nucleósidos de ADN. En ciertas de tales realizaciones, el hueco del gapmer comprende nucleósidos similares a ADN. En ciertas de tales realizaciones, el hueco del gapmer comprende nucleósidos de ADN y nucleósidos similares a ADN.
Ciertos compuestos antisentido que tienen un motivo gapmer se consideran compuestos antisentido quiméricos. En un gapmer, una región interna que tiene una pluralidad de nucleótidos que soporta la escisión de RNasaH se coloca entre regiones externas que tienen una pluralidad de nucleótidos que son químicamente distintos de los nucleósidos de la región interna. En el caso de un oligonucleótido antisentido que tiene un motivo gapmer, el segmento de hueco generalmente sirve como sustrato para la escisión de la endonucleasa, mientras que los segmentos del ala comprenden nucleósidos modificados. En ciertas realizaciones, las regiones de un gapmer se diferencian por los tipos de fracciones de azúcar que comprenden cada región distinta. Los tipos de fracciones de azúcar que se usan para diferenciar las regiones de un gapmer pueden incluir en algunas realizaciones p-D-ribonucleósidos, p-D-desoxirribonucleósidos, nucleósidos 2'-modificdos (tales nucleósidos 2’-modificdos pueden incluir 2’-MOE y 2 ’-O-CH3, entre otros), y nucleósidos modificados con azúcar bicíclicos (tales nucleósidos modificados con azúcar bicíclicos pueden incluir aquellos que tienen un etilo restringido). En ciertas realizaciones, los nucleósidos en las alas pueden incluir varias fracciones de azúcar modificado incluyendo, por ejemplo, fracciones de azúcar 2'-MOE y bicíclicas como etilo restringido o LNA. En ciertas realizaciones, las alas pueden incluir varias fracciones de azúcar modificado y no modificado. En ciertas realizaciones, las alas pueden incluir varias combinaciones de nucleósidos 2'-MOE, fracciones de azúcar bicíclicas como nucleósidos de etilo o nucleósidos LNA restringidos, y 2'-desoxinucleósidos.
Cada región distinta puede comprender fracciones de azúcar uniformes, fracciones de azúcar variantes o
alternas. El motivo ala-hueco-ala se describe frecuentemente como "X-Y-Z", donde "X" representa la longitud del ala de 5', "Y" representa la longitud del hueco y "Z" representa la longitud del ala de 3'. "X" y "Z" pueden comprender fracciones de azúcar uniformes, variantes o alternas. En ciertas realizaciones, "X" e "Y" pueden incluir uno o más 2'-desoxinucleósidos. "Y" puede comprender 2'-desoxinucleósidos. Como se usa en la presente, un gapmer descrito como "X-Y-Z" tiene una configuración tal que el hueco está colocado inmediatamente adyacente a cada ala 5' y ala 3'. Por tanto, no existen nucleótidos intermedios entre el ala 5' y el hueco, o el hueco y el ala 3'. Cualquiera de los compuestos antisentido descritos en la presente puede tener un motivo gapmer. En ciertas realizaciones, "X" y "Z" son iguales; en otras realizaciones son diferentes. En ciertas realizaciones, "Y" tiene entre 8 y 15 nucleósidos. X, Y o Z pueden tener cualquiera de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 o más nucleósidos.
En ciertas realizaciones, el compuesto antisentido dirigido a un ácido nucleico del receptor de andrógenos tiene un motivo gapmer en el que el hueco consiste de 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 nucleósidos enlazados.
En ciertas realizaciones, el oligonucleótido antisentido tiene un motivo de azúcar descrito por la Fórmula A como sigue: (J)m-(B)n-(J)p-(B)r-(A)t-(D)g-(A)v-(B)w-(J)x-(B)y-(J)z
en donde:
cada A es independientemente un nucleósido 2’-sustituido;
cada B es independientemente un nucleósido bicíclico;
cada J es independientemente un nucleósido 2’-sustituido o un 2’-desoxinucleósido';
cada D es un 2'-desoxinucleósido;
m es 0-4; n es 0-2; p es 0-2; r es 0-2; t es 0-2; v es 0-2; w es 0-4; x es 0-2; y es 0-2; z es 0-4; g es 6-14; siempre que:
por lo menos uno de m, n y r sea distinto de 0;
por lo menos uno de w e y sea distinto de 0;
la suma de m, n, p, r y t sea de 2 a 5; y
la suma de v, w, x, y, y z sea de 2 a 5.
Ocupación
En ciertas realizaciones, no se espera que los compuestos antisentido den como resultado la escisión o el ácido nucleico objetivo a través de la RNasa H o que den como resultado la escisión o el secuestro a través de la vía RISC. En ciertas de tales realizaciones, la actividad antisentido puede resultar de la ocupación, en donde la presencia del compuesto antisentido hibridado interrumpe la actividad del ácido nucleico objetivo. En ciertas de tales realizaciones, el compuesto antisentido puede modificarse uniformemente o puede comprender una mezcla de modificaciones y/o nucleósidos modificados y no modificados.
Ácidos nucleicos objetivo, regiones objetivo y secuencias de nucleótidos
Las secuencias de nucleótidos que codifican el receptor de andrógenos humano incluyen, sin limitación, las siguientes: N° de registro de GENBANK NT_011669.17_t Ru NC_5079000_5270000 (incorporada en la presente como SEQ ID NO: 1), N° de registro de GENBANK NM_000044.3 (incorporada en la presente como SEQ iD NO: 2), N° de registro de GENBANK NM_001011645.2 (incorporada en la presente como SEQ ID NO: 3), N° de registro de GENBANK FJ235916.1 (incorporada en la presente como SEQ ID NO: 4), N° de registro de GENBANK FJ235917.1 (incorporada en la presente como SEQ iD NO: 5), N° de registro de GENBANK FJ235918.1 (incorporada en la presente como SEQ ID NO: 6), N° de registro de g En BANK FJ235919.1 (incorporada en la presente como SEQ ID NO: 7) y N° de registro de GeNbANK FJ235920.1 (incorporada en la presente como SEQ iD NO: 8). Se entenderá que en varias realizaciones, la secuencia de nucleobases de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-8 puede tener repeticiones del trinucleótido CAG adicionales en el exón 1. En ciertas realizaciones, los compuestos en la presente se dirigen a las SEQ ID NO: 1-8 que tienen aproximadamente 36-62 repeticiones del trinucleótido CAG en el exón 1. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, los compuestos de la presente se dirigen al receptor de andrógenos que tiene aproximadamente 36-62 repeticiones del trinucleótido CAG que comienzan en la posición de la nucleobase 1287 (dentro del exón 1) de la SEQ ID NO: 2. Se pueden determinar fácilmente secuencias del receptor de andrógenos similares que tienen aproximadamente 36-62 repeticiones del trinucleótido CAG que comienzan en la posición de la nucleobase correspondiente dentro del exón 1 con respecto a cualquiera de las SEQ ID NO: 1 y 3-9, y los compuestos proporcionados en la presente pueden dirigirse a tales secuencias del receptor de andrógenos en varias realizaciones.
Los compuestos de la presente dirigidos al receptor de andrógenos, como cualquiera de las SEQ ID NO: 1 8 o una secuencia de receptor de andrógenos que tiene aproximadamente 36-62 repeticiones del trinucleótido CAG que comienzan en una posición de nucleobases correspondiente a la posición de nucleobase 1287 (dentro del exón 1) de la SEQ ID NO: 2, pueden usarse para mejorar, tratar o prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto. En ciertas realizaciones, los compuestos de la presente se dirigen al pre-ARNm del receptor de andrógenos, como un
pre-ARNm que tiene una secuencia de nucleobases representada por el N° de registro de GENBANK NT_011669.17_TRUNC_5079000_5270000 (incorporada en la presente como SEQ ID NO: 1), dentro del intrón 1. En ciertas realizaciones, los compuestos de la presente se dirigen al receptor de andrógenos en sentido ascendente del dominio de unión al ligando, que está codificado por los exones 4-8. En ciertos aspectos, los compuestos dirigidos al receptor de andrógenos en sentido ascendente del dominio de unión al ligando se dirigen a una región de AR en sentido ascendente del extremo 3' del exón 3. En ciertas realizaciones, los compuestos dirigidos al receptor de andrógenos en sentido ascendente del dominio de unión al ligando se dirigen dentro del exón 1 que codifica el Dominio N-terminal o los exones 2 y 3 que codifican el dominio de unión al ADN.
Hibridación
En algunas realizaciones, se produce la hibridación entre un compuesto antisentido divulgado en la presente y un receptor de andrógenos. El mecanismo más común de hibridación implica enlaces de hidrógeno (por ejemplo, enlace de hidrógeno de Watson-Crick, Hoogsteen o Hoogsteen invertido) entre nucleobases complementarias de las moléculas de ácidos nucleicos.
La hibridación puede producirse bajo condiciones variables. Las condiciones estrictas dependen de la secuencia y están determinadas por la naturaleza y la composición de las moléculas de ácidos nucleicos a hibridar.
Los métodos para determinar si una secuencia puede hibridar específicamente con un ácido nucleico objetivo son bien conocidos en la técnica. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido proporcionados en la presente pueden hibridar específicamente con el receptor de andrógenos.
Complementariedad
Un compuesto antisentido y un ácido nucleico objetivo son complementarios entre sí cuando un número suficiente de nucleobases del compuesto antisentido pueden formar enlaces de hidrógeno con las nucleobases del ácido nucleico objetivo, de tal manera que se produzca el efecto deseado (por ejemplo, inhibición antisentido de un ácido nucleico objetivo, como un ácido nucleico del receptor de andrógenos).
Las nucleobases no complementarias entre un compuesto antisentido y un ácido nucleico del receptor de andrógenos pueden tolerarse siempre que el compuesto antisentido siga siendo capaz de hibridar específicamente con un ácido nucleico objetivo. Además, un compuesto antisentido puede hibridar sobre uno o más segmentos de un ácido nucleico del receptor de andrógenos de tal manera que los segmentos intermedios o adyacentes no estén implicados en el evento de hibridación (por ejemplo, una estructura de bucle, malapareamiento o una estructura de horquilla).
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido proporcionados en la presente, o una porción específica de los mismos, son, o son por lo menos, un 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% complementarios a un ácido nucleico del receptor de andrógenos, una región objetivo, un segmento objetivo o una porción específica de los mismos. El porcentaje de complementariedad de un compuesto antisentido con un ácido nucleico objetivo puede determinarse usando métodos rutinarios.
Por ejemplo, un compuesto antisentido en el que 18 de las 20 nucleobases del compuesto antisentido son complementarias a una región objetivo y, por lo tanto, hibridarían específicamente, representaría una complementariedad del 90 por ciento. En este ejemplo, las nucleobases no complementarias restantes pueden estar agrupadas o intercaladas con nucleobases complementarias y no es necesario que sean contiguas entre sí o con nucleobases complementarias. Como tal, un compuesto antisentido que tiene 18 nucleobases de longitud que tiene cuatro nucleobases no complementarias que están flanqueadas por dos regiones de complementariedad completa con el ácido nucleico objetivo tendría una complementariedad general del 77,8% con el ácido nucleico objetivo y, por lo tanto, estaría dentro del alcance de la presente invención. El porcentaje de complementariedad de un compuesto antisentido con una región de un ácido nucleico objetivo puede determinarse rutinariamente usando programas BLAST (herramientas de búsqueda de alineación local básicas) y programas PowerBLAST conocidos en la técnica (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403410; Zhang y Madden, Genome Res., 1997, 7, 649656). El porcentaje de homología, identidad de secuencia o complementariedad puede determinarse, por ejemplo, mediante el programa Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, versión 8 para Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.), usando la configuración predeterminada, que usa el algoritmo de Smith y Waterman (Adv. Appl. Math., 1981,2, 482489).
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido proporcionados en la presente, o porciones específicas de los mismos, son completamente complementarios (es decir, 100% complementarios) con un ácido nucleico objetivo, o una porción específica del mismo. Por ejemplo, un compuesto antisentido puede ser completamente complementario con un ácido nucleico del receptor de andrógenos, o una región objetivo, o un segmento objetivo o secuencia objetivo del mismo. Como se usa en la presente, "completamente complementario" significa que cada
nucleobase de un compuesto antisentido es capaz de emparejarse de manera precisa con las nucleobases correspondientes de un ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, un compuesto antisentido de 20 nucleobases es completamente complementario con una secuencia objetivo que tiene 400 nucleobases de longitud, siempre que haya una porción correspondiente de 20 nucleobases del ácido nucleico objetivo que sea completamente complementaria con el compuesto antisentido. También puede usarse completamente complementario en referencia a una porción específica del primer y/o el segundo ácido nucleico. Por ejemplo, una porción de 20 nucleobases de un compuesto antisentido de 30 nucleobases puede ser "completamente complementario" con una secuencia objetivo que tiene 400 nucleobases de longitud. La porción de 20 nucleobases del oligonucleótido de 30 nucleobases es completamente complementaria con la secuencia objetivo si la secuencia objetivo tiene una porción de 20 nucleobases correspondiente en la que cada nucleobase es complementaria a la porción de 20 nucleobases del compuesto antisentido. Al mismo tiempo, el compuesto antisentido completo de 30 nucleobases puede ser o no completamente complementario con la secuencia objetivo, dependiendo de si las 10 nucleobases restantes del compuesto antisentido también son complementarias con la secuencia objetivo.
La localización de una nucleobase no complementaria puede estar en el extremo 5' o en el extremo 3' del compuesto antisentido. Alternativamente, la nucleobase o las nucleobases no complementarias pueden estar en una posición interna del compuesto antisentido. Cuando están presentes dos o más nucleobases no complementarias, pueden ser contiguas (es decir, enlazadas) o no contiguas. En una realización, una nucleobase no complementaria está localizada en el segmento del ala de un oligonucleótido antisentido gapmer.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido que tienen, o tienen hasta 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de longitud comprenden no más de 4, no más de 3, no más de 2, o no más de 1 nucleobase no complementaria con respecto a un ácido nucleico objetivo, como un ácido nucleico del receptor de andrógenos, o una porción específica del mismo.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido que tienen, o tienen hasta 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, o 30 nucleobases de longitud comprenden no más de 6, no más de 5, no más de 4, no más de 3, no más de 2, o no más de 1 nucleobase no complementaria con respecto a un ácido nucleico objetivo, como un ácido nucleico del receptor de andrógenos, o una porción específica del mismo.
Los compuestos antisentido proporcionados también incluyen aquellos que son complementarios con una porción de un ácido nucleico objetivo. Como se usa en la presente, "porción" se refiere a un número definido de nucleobases contiguas (es decir, enlazadas) dentro de una región o segmento de un ácido nucleico objetivo. Una "porción" también puede referirse a un número definido de nucleobases contiguas de un compuesto antisentido. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 8 nucleobases de un segmento objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 9 nucleobases de un segmento objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 10 nucleobases de un segmento objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 11 nucleobases de un segmento objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 12 nucleobases de un segmento objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 13 nucleobases de un segmento objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 14 nucleobases de un segmento objetivo. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido son complementarios con por lo menos una porción de 15 nucleobases de un segmento objetivo. También se contemplan compuestos antisentido que son complementarios con una porción de por lo menos 9, 10, 11 , 12 , 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o más nucleobases de un segmento objetivo, o un intervalo definido por dos cualquiera de estos valores.
Identidad
Los compuestos antisentido proporcionados en la presente también pueden tener un porcentaje definido de identidad con una secuencia de nucleótidos particular, SEQ ID NO, o compuesto representado por un número Isis específico, o una porción del mismo. Como se usa en la presente, un compuesto antisentido es idéntico a la secuencia divulgada en la presente si tiene la misma capacidad de emparejamiento de nucleobases. Por ejemplo, un ARN que contiene uracilo en lugar de timidina en una secuencia de ADN divulgada se consideraría idéntico a la secuencia de ADN ya que tanto el uracilo como la timidina se emparejan con la adenina. También se contemplan versiones acortadas y alargadas de los compuestos antisentido descritos en la presente, así como compuestos que tienen bases no idénticas con respecto a los compuestos antisentido proporcionados en la presente. Las bases no idénticas pueden estar adyacentes entre sí o estar dispersas por todo el compuesto antisentido. El porcentaje de identidad de un compuesto antisentido se calcula de acuerdo con el número de bases que tiene emparejamiento de bases idéntico con respecto a la secuencia con la que se está comparando.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido, o porciones de los mismos, son por lo menos un 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100% idénticos a uno o más de los compuestos antisentido o las SEQ ID NO, o una porción de los mismos, divulgados en la presente.
En ciertas realizaciones, una porción del compuesto antisentido se compara con una porción de igual longitud del ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, una porción de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 nucleobases se compara con una porción de igual longitud del ácido nucleico objetivo.
En ciertas realizaciones, una porción del oligonucleótido antisentido se compara con una porción de igual longitud del ácido nucleico objetivo. En ciertas realizaciones, una porción de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o 25 nucleobases se compara con una porción de igual longitud del ácido nucleico objetivo. Modificaciones
Un nucleósido es una combinación base-azúcar. La porción de nucleobase (también conocida como base) del nucleósido es normalmente una fracción de base heterocíclica. Los nucleótidos son nucleósidos que incluyen además un grupo fosfato enlazado covalentemente a la porción de azúcar del nucleósido. Para aquellos nucleósidos que incluyen un azúcar pentofuranosilo, el grupo fosfato puede enlazarse a la fracción hidroxilo 2', 3' o 5' del azúcar. Los oligonucleótidos se forman mediante el enlace covalente de nucleósidos adyacentes entre sí, para formar un oligonucleótido polimérico lineal. Dentro de la estructura del oligonucleótido, se suele hacer referencia a los grupos fosfato como formadores de los enlaces internucleosídicos del oligonucleótido.
Las modificaciones de los compuestos antisentido abarcan sustituciones o cambios en los enlaces internucleosídicos, fracciones de azúcar o nucleobases. A menudo se prefieren los compuestos antisentido modificados a las formas nativas debido a propiedades deseables como, por ejemplo, captación celular mejorada, afinidad mejorada por el ácido nucleico objetivo, estabilidad aumentada en presencia de nucleasas o actividad inhibidora aumentada.
También pueden emplearse nucleósidos modificados químicamente para aumentar la afinidad de unión de un oligonucleótido antisentido acortado o truncado por su ácido nucleico objetivo. En consecuencia, pueden obtenerse a menudo resultados comparables con compuestos antisentido más cortos que tienen tales nucleósidos químicamente modificados.
Enlaces internucleosídicos modificados
El enlace internucleosídico de origen natural del ARN y el ADN es un enlace fosfodiéster de 3' a 5'. Los compuestos antisentido que tienen uno o más enlaces internucleosídicos modificados, es decir, que no son de origen natural, se seleccionan a menudo frente a los compuestos antisentido que tienen enlaces internucleosídicos de origen natural debido a propiedades deseables, como, por ejemplo, una captación celular mejorada, una afinidad mejorada por los ácidos nucleicos objetivo y una estabilidad aumentada en presencia de nucleasas.
Los oligonucleótidos que tienen enlaces internucleosídicos modificados incluyen enlaces internucleosídicos que retienen un átomo de fósforo así como enlaces internucleosídicos que no tienen un átomo de fósforo. Los enlaces internucleosídicos que contienen fósforo representativos incluyen, pero no se limitan a, fosfodiésteres, fosfotriésteres, metilfosfonatos, fosforamidato y fosforotioatos. Los métodos de preparación de enlaces que contienen fósforo y que no contienen fósforo son bien conocidos.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico del receptor de andrógenos comprenden uno o más enlaces internucleosídicos modificados. En ciertas realizaciones, los enlaces internucleosídicos modificados son enlaces fosforotioato. En ciertas realizaciones, cada enlace internucleosídico de un compuesto antisentido es un enlace internucleosídico de fosforotioato.
Fracciones de azúcar modificado
Los compuestos antisentido pueden contener opcionalmente uno o más nucleósidos en donde se ha modificado el grupo azúcar. Tales nucleósidos modificados con azúcar pueden impartir una estabilidad a nucleasas mejorada, una afinidad de unión aumentada o alguna otra propiedad biológica beneficiosa a los compuestos antisentido. En ciertas realizaciones, los nucleósidos comprenden fracciones de anillo de ribofuranosa modificados químicamente. Los ejemplos de anillos de ribofuranosa modificados químicamente incluyen sin limitación la adición de grupos sustituyentes (incluyendo los grupos sustituyentes 5' y 2', formación de puentes de átomos del anillo no geminales para formar ácidos nucleicos bicíclicos (BNA), la sustitución del átomo de oxígeno del anillo de ribosilo con S, N(R), o C(R1)(R2) (R, R1 y R2 son cada uno independientemente H, alquilo C1-C12 o un grupo protector) y combinaciones de los mismos. Los ejemplos de azúcares modificados químicamente incluyen el nucleósido sustituido con 2'-F-5'-metilo (ver Solicitud internacional de PCT WO 2008/101157 Publicada el 21/08/08 para otros nucleósidos 5',2'-bis sustituidos divulgados) o el reemplazo del átomo de oxígeno del anillo de ribosilo con S con sustitución adicional en la posición 2' (ver la Solicitud de Patente de Estados Unidos publicada US2005-0130923, publicada el 16 de junio de 2005) o alternativamente 5'-sustitución de un BNA (ver Solicitud Internacional de PCT WO 2007/134181 Publicada el 22/11/07 en donde 4'-(CH2)-O-2' (LNA) está sustituido con, por ejemplo, un grupo 5'
metilo o 5'-vinilo).
Los ejemplos de nucleósidos que tienen fracciones de azúcar modificado incluyen sin limitación nucleósidos que comprenden grupos sustituyentes 5'-vinilo, 5'-metilo (R o S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2'-OCH2CH3, 2'-OCH2CH2F y 2'-O(CH2)2OCH3. El sustituyente en la posición 2' también puede seleccionarse de alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O alquilo C1 -C10, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), y O-CH2-C(=O)-N(R1)-(CH2)2-N(Rm)(Rn), donde cada R1, Rm y Rn es, independientemente, H o alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido.
Como se usa en la presente, "nucleósidos bicíclicos'' se refiere a nucleósidos modificados que comprenden una fracción de azúcar bicíclico. Los ejemplos de nucleósidos bicíclicos incluyen, sin limitación, nucleósidos que comprenden un puente entre los átomos del anillo de ribosilo 4' y 2'. En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido proporcionados en la presente incluyen uno o más nucleósidos bicíclicos que comprenden un puente 4' a 2'. Ejemplos de tales nucleósidos bicíclicos con puente 4' a 2' incluyen, pero no se limitan a una de las fórmulas: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' (también conocido como etilo restringido o cEt) y 4'-C-H(CH2OCH3)-O-2' (y análogos de la misma, ver la Patente de Estados Unidos 7.399.845, concedida el 15 de julio de 2008); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (y análogos de la misma, ver la Solicitud Internacional publicada WO/2009/006478, publicada el 8 de enero de 2009); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (y análogos de la misma, ver la Solicitud Internacional publicada WO/2008/150729, publicada el 11 de diciembre de 2008); 4'-CH2-ON(CH3)-2' (ver la Solicitud de Patente de Estados Unidos publicada US2004-0171570, publicada el 2 de septiembre de 2004); 4'-CH2-N(R)-O-2', en donde R es H, alquilo C1-C12 o un grupo protector (ver Patente de Estados Unidos 7.427.672, concedida el 23 de septiembre de 2008); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (ver Chattopadhyaya et al, J. Org Chem, 2009, 74, 118-134); y 4'-CH2-C(=CH2)-2' (y análogos de la misma, ver la Solicitud Internacional publicada WO 2008/154401, publicada el 8 de diciembre de 2008).
Informes adicionales referentes a nucleósidos bicíclicos pueden encontrarse en la bibliografía publicada (ver por ejemplo: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; y Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; Patentes de Estados Unidos N 6.268.490; 6.525.191; 6.670.461; 6.770.748; 6.794.499; 7.034.133; 7.053.207; 7.399.845; 7.547.684; y 7.696.345; Publicación de Patente de Estados Unidos N° US2008-0039618; US2009-0012281; Patentes de Estados Unidos N° de serie 60/989.574; 61/026.995; 61/026.998; 61/056.564; 61/086.231; 61/097.787; y 61/099.844; Solicitudes Internacionales de PCT publicadas WO 1994/014226; WO 2004/106356; WO 2005/021570; WO 2007/134181; WO 2008/150729; WO 2008/154401; y WO 2009/006478. Cada uno de los nucleósidos bicíclicos anteriores puede prepararse con una o más configuraciones estereoquímicas de azúcar que incluyen, por ejemplo, a-L-ribofuranosa y p-D-ribofuranosa (ver la solicitud internacional de PCT PCT/DK98/00393, publicada el 25 de marzo de 1999 como Wo 99/14226).
En ciertas realizaciones, los fracciones de azúcar bicíclico de los nucleósidos de BNA incluyen, pero no se limitan a, compuestos que tienen por lo menos un puente entre la posición 4' y 2' de la fracción de azúcar de pentofuranosilo en donde tales puentes comprenden independientemente 1 o de 2 a 4 grupos enlazados seleccionados independientemente de -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=O)-, -C(=NRa)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, y -N(Ra)-;
en donde:
x es 0, 1 o 2;
n es 1, 2, 3 o 4;
cada Ra y Rb es, independientemente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1 -C12, alquilo C1 -C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, radical heterociclo, radical heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical alicíclico C5-C7, radical alicíclico C5-C7 sustituido, halógeno, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, CN, sulfonilo (S (=O)2-J1), o sulfoxilo (S(=O)-J1); y
cada J1 y J2 es, independientemente, H, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2 -C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, acilo (C(=O)-H), acilo sustituido, un radical heterociclo, un radical heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo C1-C12 sustituido o un grupo protector.
En ciertas realizaciones, el puente de un fracción de azúcar bicíclico es -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- o -C(RaRb)-O-N(R)-. En ciertas realizaciones, el puente es 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' y 4'-CH2-N(R)-O-2'-, en donde cada R es, independientemente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12.
En ciertas realizaciones, los nucleósidos bicíclicos se definen además por su configuración isomérica. Por ejemplo, un nucleósido que comprende un puente 4'-2' metileno-oxi, puede estar en la configuración a-L o en la configuración p-D. Anteriormente, se han incorporado a-L-metilenoxi (4 '-CH2-O-2') BNA en oligonucleótidos antisentido que mostraban actividad antisentido (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21,6.365-6.372).
En ciertas realizaciones, los nucleósidos bicíclicos incluyen, pero no se limitan a, (A) a-L-metilenoxi (4’-CH2-O-2’) BNA, (B) p-D-metilenoxi (4'-CH2-O-2 ') BNA, (C) etilenoxi (4'-(CH2)2-O-2 ') BNA, (D) aminooxi (4'-CH2-ON(R)-2 ') BNA, (E) oxiamino (4'-CH2-N(R)-O-2 ') BNA, y (F) metil(metilenoxi) (4'-CH(CH3)-O-2 ') BNA, (G) metileno-tio (4’-CH2-S-2’) BNA, (H) metileno-amino (4'-CH2-N(R)-2 ') BNA, (I) metil carbocíclico (4'-CH2-CH(CH3)-2 ') BNA, (J) propileno carbocíclico (4'-(CH2)3-2 ') BNA y (K) vinilo BNA como se representa a continuación:
en donde Bx es la fracción de base y R es independientemente H, un grupo protector, alquilo C1 -C12 o alcoxi C1 -C12.
En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos bicíclicos que tienen la Fórmula I:
en donde:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
-Qa-Qb-Qc- es -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O- o -N(Rc)-O-CH2;
Rc es alquilo C1 -C12 o un grupo protector de amino; y
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, una fracción de fósforo o una unión covalente a un medio de soporte.
En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos bicíclicos que tienen la Fórmula II:
en donde:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, una fracción de fósforo o una unión covalente a un medio de soporte;
Za es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 sustituido, acilo, acilo sustituido, amida sustituida, tiol o tio sustituido.
En una realización, cada uno de los grupos sustituidos está, independientemente, mono o polisustituido con grupos sustituyentes seleccionados independientemente de halógeno, oxo, hidroxilo, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, y NJeC(=X)NJcJd, en donde cada Jc, Jd y Je es, independientemente, H, alquilo C1 -C6 o alquilo C1 -C6 sustituido y X es O o NJc.
En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos bicíclicos que tienen la Fórmula III:
en donde:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, una fracción de fósforo o una unión covalente a un medio de soporte;
Zb es alquilo C1 -C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alquilo C1 -C6 sustituido, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 sustituido o acilo sustituido (C(=O)-).
En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos bicíclicos que tienen la fórmula IV:
en donde:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, una fracción de fósforo o una unión covalente a un medio de soporte;
Rd es alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 o alquinilo C2-C sustituido 6 ;
cada qa, qb, qc y qd es, independientemente, H, halógeno, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 sustituido, alcoxilo C1-C6, alcoxilo C1-C6 sustituido, acilo, acilo sustituido, aminoalquilo C1-C6o aminoalquilo C1-C6 sustituido;
En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos bicíclicos que tienen la fórmula V:
en donde:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, una fracción de fósforo o una unión covalente a un medio de soporte;
qa, qb, qc y qt son cada uno, independientemente, hidrógeno, halógeno, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, alcoxi C1 -C12, alcoxi C1 -C12 sustituido, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)-NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk o N(H)C(=S)NJjJk;
o qe y qf juntos son =C(qg)(qh);
qg y qh son cada uno, independientemente, H, halógeno, alquilo C1-C12 o alquilo C1-C12 sustituido.
Se ha descrito la síntesis y preparación de los monómeros de metilenoxi (4'-CH2-O-2 ') BNA adenina, citosina, guanina, 5-metil-citosina, timina y uracilo, junto con sus propiedades de oligomerización y reconocimiento de ácidos nucleicos. (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). Los BNA y la preparación de los mismos también se describen en la WO 98/39352 y la WO 99/14226.
También se han preparado análogos de metilenoxi (4'-CH2-O-2') BNA y 2’-tio-BNA (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222).). También se ha descrito la preparación de análogos de nucleósidos bloqueados que comprenden dúplex de oligodesoxirribonucleótidos como sustratos para polimerasas de ácidos nucleicos (Wengel et al., WO 99/14226). Además, se ha descrito en la técnica la síntesis de 2’-amino-BNA, un nuevo análogo de oligonucleótido de alta afinidad conformacionalmente restringido (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Además, se han preparado 2’-amino- y 2’-metilamino-BNA y se ha informado con anterioridad sobre la estabilidad térmica de sus dúplex con cadenas de ARN y ADN complementarias.
En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos bicíclicos que tienen la fórmula VI:
en donde:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, una fracción de fósforo o una unión covalente a un medio de soporte;
cada qi, qj, qk y ql es, independientemente, H, halógeno, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, alcoxilo C1-C12, alcoxilo C1-C12 sustituido, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk o N(H)C(=S)NJjJk; y
qi y qj o ql y qk juntos son =C(qg)(qh), donde qg y qh son cada uno, independientemente, H, halógeno, alquilo C1-C12 o alquilo C1-C12 sustituido
Se ha descrito un nucleósido bicíclico carbocíclico que tiene un puente 4'-(CH2)3-2' y el puente análogo alquenilo 4'-CH=CH-CH2-2' (Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 y Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). También se ha descrito la síntesis y preparación de nucleósidos bicíclicos carbocíclicos junto con su oligomerización y estudios bioquímicos (Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26), 8362-8379).
Como se usa en la presente, "nucleósido bicíclico 4'-2' " o "nucleósido bicíclico 4' a 2' " se refiere a un nucleósido bicíclico que comprende un anillo de furanosa que comprende un puente que conecta dos átomos de carbono del anillo de furanosa conecta el átomo de carbono 2' y el átomo de carbono 4' del anillo de azúcar.
Como se usa en la presente, "nucleósidos monocíclicos" se refiere a nucleósidos que comprenden fracciones de azúcar modificado que no son fracciones de azúcar bicíclico. En ciertas realizaciones, la fracción de azúcar, o el análogo de la fracción de azúcar, de un nucleósido puede modificarse o sustituirse en cualquier posición.
Como se usa en la presente, "azúcar 2’-modificado" significa un azúcar furanosilo modificado en la posición 2'. En ciertas realizaciones, tales modificaciones incluyen sustituyentes seleccionados de: un haluro, que incluye pero no está limitado a, alcoxi sustituido y no sustituido, tioalquilo sustituido y no sustituido, aminoalquilo sustituido y no sustituido, alquilo sustituido y no sustituido, alilo sustituido y no sustituido y alquinilo. En ciertas realizaciones, las modificaciones 2' se seleccionan de sustituyentes que incluyen, pero no se limitan a: O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nF, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3, y O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2, donde n y m son de 1 a aproximadamente 10. También pueden seleccionarse otros grupos 2’-sustituyentes de: alquilo C1-C12, alquilo sustituido, alquenilo, alquinilo, alcarilo, aralquilo, O-alcarilo u O-aralquilo, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, heterocicloalquilo, heterocicloalcarilo, aminoalquilamino, polialquilamino, sililo sustituido, un grupo de escisión de ARN, un grupo informador, un intercalador, un grupo para mejorar las propiedades farmacocinéticas o un grupo para mejorar las propiedades farmacodinámicas de un compuesto antisentido y otros sustituyentes que tienen propiedades similares. En ciertas realizaciones, los nucleósidos modificados comprenden una cadena lateral 2'-Mo E (Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). Se ha descrito que dicha sustitución 2'-MOE tiene una afinidad de unión mejorada en comparación con los nucleósidos no modificados y con otros nucleósidos modificados, como 2'-0-metilo, O-propilo y O-aminopropilo. También se ha demostrado que los oligonucleótidos que tienen el sustituyente 2'-MOE son inhibidores antisentido de la expresión génica con características prometedoras para el uso in vivo (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176, Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637 y Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
Como se usa en la presente, un "nucleósido de tetrahidropirano modificado" o "nucleósido de THP modificado" significa un nucleósido que tiene un "azúcar" de tetrahidropirano de seis miembros sustituido por el residuo de pentofuranosilo en los nucleósidos normales (un sustituto del azúcar). Los nucleósidos de THP modificados incluyen, pero no se limitan a, lo que se denomina en la técnica ácido nucleico de hexitol (HNA), ácido nucleico de anitol (ANA), ácido nucleico de manitol (MNA) (ver Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854) o fluoro HNA (F-HNA) que tiene un sistema de anillo de tetrahidropirano como se ilustra a continuación:
En ciertas realizaciones, se seleccionan sustitutos de azúcar que tienen la fórmula VII:
en donde independientemente para cada uno de dichos por lo menos un análogo de nucleósido de tetrahidropirano de Fórmula VII:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, un grupo de enlace internucleosídico que enlaza el análogo de nucleósido de tetrahidropirano con el compuesto antisentido o uno de Ta y Tb es un grupo de enlace internucleosídico que une el análogo de nucleósido de tetrahidropirano con el compuesto antisentido y el otro de Ta y Tb es H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado uenlazado o un grupo 5’ o 3’-terminal;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 y q7 son cada uno independientemente, H, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 o alquinilo C2-C6 sustituido; y cada uno de Ri y R2 se selecciona de hidrógeno, hidroxilo, halógeno, alcoxi sustituido o no sustituido, NJ1J2, SJi , N3, OC(=X)Ji , OC(=X)NJi J2, NJ3C(=X)NJi J2 y CN, en donde X es O, S o NJi y cada Ji, J2 y J3 es, independientemente, H o alquilo C1-C6.
En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos de THP modificados de fórmula VII en donde qi , q2, q3, q4, q5, q6 y q7 son cada uno H. En ciertas realizaciones, por lo menos uno de qi , q2, q3, q4, q5, q6 y q7 es distinto de H. En ciertas realizaciones, por lo menos uno de qi , q2, q3, q4, q5, q6 y q7 es metilo. En ciertas realizaciones, se divulgan nucleósidos de THP de fórmula VII en donde uno de R1 y R2 es fluoro. En ciertas realizaciones, R1 es fluoro y R2 es H; Ri es metoxi y R2 es H, y Ri es metoxietoxi y R2 es H.
En ciertas realizaciones, los sustitutos de azúcar comprenden anillos que tienen más de 5 átomos y más de un heteroátomo. Por ejemplo, se ha informado de nucleósidos que comprenden fracciones de azúcar morfolino y su uso en compuestos oligoméricos (ver por ejemplo: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 4 i, 4503-45i0; y Patentes de Estados Unidos 5.698.685; 5.i66.3 i5; 5.i85.444; y 5.034.506). Como se usa aquí, el término "morfolino" significa un sustituto de azúcar que tiene la siguiente fórmula:
En ciertas realizaciones, los morfolinos pueden modificarse, por ejemplo, añadiendo o alterando varios grupos sustituyentes de la estructura de morfolino anterior. A tales sustitutos de azúcar se hace referencia en la presente como "morfolinos modificados".
También se divulgan, sin limitación, combinaciones de modificaciones, como nucleósidos sustituidos con 2’-F-5’-metilo (ver la Solicitud internacional de PCT WO 2008/i 0i 157 publicada el 2i/08/08 para otros nucleósidos 5’, 2’-bis sustituidos divulgados) y la sustitución del átomo de oxígeno del anillo de ribosilo con S y sustitución adicional en la posición 2’ (ver la Solicitud de Patente de Estados Unidos publicada US2005-0i 30923, publicada el i 6 de junio de 2005) o alternativamente 5’-sustitución de un ácido nucleico bicíclico (ver Solicitud Internacional de PCT WO 2007/i34i8i, publicada el 22/ii/07, en donde un nucleósido bicíclico 4’-CH2-O-2 ’ está además sustituido en la posición 5’ con un grupo 5’-metilo o 5’-vinilo). También se ha descrito la síntesis y la preparación de nucleósidos bicíclicos carbocíclicos junto con su oligomerización y estudios bioquímicos (ver, por ejemplo, Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, i29(26), 8362-8379).
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido comprenden uno o más nucleósidos de ciclohexenilo modificados, que es un nucleósido que tiene un ciclohexenilo de seis miembros en lugar del residuo de pentofuranosilo en los nucleósidos de origen natural. Los nucleósidos de ciclohexenilo modificados incluyen, pero no se limitan a, los descritos en la técnica (ver, por ejemplo, la Solicitud PCT publicada de titularidad compartida WO 20i0/036696, publicada el i 0 de abril de 20 i0, Robeyns et al., J. Am. química Soc., 2008, i30(6), i979-i984;
Horváth et al., Tetrahedron Letters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(30), 9340-9348; Gu et al.,, Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts et al., Nucleic Acids Research, 2005, 33(8), 2452-2463; Robeyns et al., Acta Crystallographica, Section F: Structural Biology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586; Gu et al., Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu et al., Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang et al., J. Org. Chem., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure et al., Nucleic Acids Research, 2001,29(24), 4941-4947; Wang et al., J. Org. Chem., 2001,66, 8478-82; Wang et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001,20(4-7), 785-788; Wang et al., J. Am. Chem., 2000, 122, 8595-8602; Solicitud de PCT publicada, WO 06/047842; y Solicitud de PCT publicada WO 01/049687). Ciertos nucleósidos de ciclohexenilo modificados tienen la fórmula X.
en donde independientemente 
análogo de nucleósido de ciclohexenilo de Fórmula X:
Bx es una fracción de base heterocíclica;
T3 y T4 son cada uno, independientemente, un grupo de enlace internucleosídico que une el análogo de nucleósido de ciclohexenilo con un compuesto antisentido o uno de T3 y T4 es un grupo de enlace internucleosídico que une el análogo de nucleósido de tetrahidropirano con un compuesto antisentido y el otro de T3 y T4 es H, un grupo protector de hidroxilo, un grupo conjugado enlazado o un grupo 5' o 3' terminal; y
q1, q2, q3, q4, q5, q6, q7 , q8 y q9 son cada uno, independientemente, H, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6, alquinilo C2-C6 sustituido u otro grupo sustituyente de azúcar.
Como se usa en la presente, "2’-modificado" o "2’-sustituido" se refiere a un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un sustituyente en la posición 2’ distinto de H u OH. Los nucleósidos 2’-modificados incluyen, pero no se limitan a, nucleósidos bicíclicos en donde el puente que conecta dos átomos de carbono del anillo de azúcar conecta el carbono 2 ’ y otro carbono del anillo de azúcar; y nucleósidos con sustituyentes 2 ’ que no forman puente, como alilo, amino, azido, tio, O-alilo, O-alquilo C1-C10, -OCF3, O-(CH2)2-O-CH3, 2 ’-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), o O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), donde cada Rm y Rn es, independientemente, H o alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido. Los nucleósidos 2’-modificados pueden comprender además otras modificaciones, por ejemplo, en otras posiciones del azúcar y/o en la nucleobase.
Como se usa en la presente, "2’-F" se refiere a un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un grupo fluoro en la posición 2 ’ del anillo de azúcar.
Como se usa en la presente, "2’-OMe" o "2 ’-OCH3" o "2’-O-metilo" se refiere cada uno a un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un grupo -OCH3 en la posición 2’ del anillo de azúcar.
Como se usa en la presente, "oligonucleótido" se refiere a un compuesto que comprende una pluralidad de nucleósidos enlazados. En ciertas realizaciones, se modifican uno o más de la pluralidad de nucleósidos. En ciertas realizaciones, un oligonucleótido comprende uno o más ribonucleósidos (ARN) y/o desoxirribonucleósidos (ADN).
También se conocen en la técnica muchos otros sistemas de anillos sustitutos de azúcar biciclo y triciclo que pueden usarse para modificar nucleósidos para su incorporación en compuestos antisentido (ver, por ejemplo, el artículo de revisión: Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854). Tales sistemas de anillos pueden experimentar varias sustituciones adicionales para mejorar la actividad.
Los métodos para la preparación de azúcares modificados son bien conocidos por los expertos en la materia. Algunas patentes de Estados Unidos representativas que enseñan la preparación de tales azúcares modificados incluyen, sin limitación, U.S.: 4.981.957; 5.118.800; 5.319.080; 5.359.044; 5.393.878; 5.446.137; 5.466.786; 5.514.785; 5.519.134; 5.567.811; 5.576.427; 5.591.722; 5.597.909; 5.610.300; 5.627.053; 5.639.873; 5.646.265; 5.670.633; 5.700.920; 5.792.847 y 6.600.032 y la Solicitud Internacional PCT/US2005/019219,
presentada el 2 de junio de 2005 y publicada como WO 2005/121371 el 22 de diciembre de 2005.
En los nucleótidos que tienen fracciones de azúcar modificado, las fracciones de nucleobases (naturales, modificadas o una combinación de las mismas) se mantienen para la hibridación con un ácido nucleico objetivo apropiado.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido comprenden uno o más nucleósidos que tienen fracciones de azúcar modificado. En ciertas realizaciones, la fracción de azúcar modificado es 2'-MOE. En ciertas realizaciones, los nucleósidos modificados con 2'-MOE están dispuestos en un motivo gapmer. En ciertas realizaciones, la fracción de azúcar modificado es un nucleósido bicíclico que tiene un grupo (4'-CH(CH3)-O-2') que forma un puente. En ciertas realizaciones, los nucleósidos modificados con (4'-CH(CH3)-O-2') están dispuestos a lo largo de las alas de un motivo gapmer.
Nucleobases modificadas
Las modificaciones o sustituciones de nucleobases (o bases) son estructuralmente distinguibles, pero funcionalmente intercambiables con, nucleobases no modificadas de origen natural o sintéticas. Tanto las nucleobases naturales como las modificadas son capaces de participar en los enlaces de hidrógeno. Tales modificaciones de nucleobases pueden impartir estabilidad de nucleasas, afinidad de unión o alguna otra propiedad biológica beneficiosa a los compuestos antisentido. Las nucleobases modificadas incluyen nucleobases sintéticas y naturales como, por ejemplo, 5-metilcitosina (5-me-C). Ciertas sustituciones de nucleobases, incluyendo las sustituciones de 5-metilcitosina, son particularmente útiles para aumentar la afinidad de unión de un compuesto antisentido por un ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, se ha demostrado que las sustituciones de 5-metilcitosina aumentan la estabilidad de dúplex de ácidos nucleicos en 0,6-1,2°C (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
Las nucleobases modificadas adicionales incluyen 5-hidroximetil citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metilo y otros derivados alquílicos de adenina y guanina, 2-propilo y otros derivados alquílicos de adenina y guanina, 2-tiouracilo, 2-tiotimina y 2 -tiocitosina, 5-halouracilo y citosina, 5-propinil (-CEC-CH3) uracilo y citosina y otros derivados alquinílicos de bases pirimidínicas, 6-azo uracilo, citosina y timina, 5-uracilo (pseudouracilo), 4-tiouracilo, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8-tioalquilo, 8-hidroxilo y otras adeninas y guaninas 8-sustituidas, 5-halo particularmente 5-bromo, 5-trifluorometilo y otros uracilos y citosinas 5-sustituidos, 7 -metilguanina y 7-metiladenina, 2-F-adenina, 2-amino-adenina, 8-azaguanina y 8-azaadenina, 7-deazaguanina y 7-deazaadenina y 3-deazaguanina y 3-deazaadenina.
Las fracciones de bases heterocíclicas también pueden incluir aquellas en las que la base de purina o pirimidina se reemplaza con otros heterociclos, por ejemplo, 7-desaza-adenina, 7-desazaguanosina, 2-aminopiridina y 2-piridona. Las nucleobases que son particularmente útiles para aumentar la afinidad de unión de compuestos antisentido incluyen pirimidinas 5-sustituidas, 6-azapirimidinas y purinas sustituidas en N-2, N-6 y O-6, incluyendo 2 aminopropiladenina, 5-propiniluracilo y 5-propinilcitosina.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico del receptor de andrógenos comprenden una o más nucleobases modificadas. En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos antisentido acortados o con huecos ampliados dirigidos a un ácido nucleico del receptor de andrógenos comprenden una o más nucleobases modificadas. En ciertas realizaciones, la nucleobase modificada es 5-metilcitosina. En ciertas realizaciones, cada citosina es una 5-metilcitosina.
Compuestos antisentido conjugados
Los compuestos antisentido pueden enlazarse covalentemente con una o más fracciones o conjugados que mejoran la actividad, la distribución celular o la captación celular de los oligonucleótidos antisentido resultantes. Los grupos conjugados típicos incluyen fracciones de colesterol y fracciones de lípidos. Los grupos conjugados adicionales incluyen carbohidratos, fosfolípidos, biotina, fenazina, folato, fenantridina, antraquinona, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas y colorantes.
Los compuestos antisentido también pueden modificarse para que tengan uno o más grupos estabilizadores que generalmente se unen a uno o ambos extremos terminales de los compuestos antisentido para mejorar propiedades como, por ejemplo, la estabilidad de las nucleasas. Incluidos en los grupos estabilizadores están las estructuras de caperuza. Estas modificaciones terminales protegen al compuesto antisentido que tiene el ácido nucleico terminal de la degradación por exonucleasas y pueden ayudar en la adminsitración y/o localización dentro de una célula. La caperuza puede estar presente en el extremo 5' terminal (caperuza 5'), o en el extremo 3' terminal (caperuza 3'), o puede estar presente en ambos extremos terminales. Las estructuras de caperuza son bien conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, caperuzas desoxiabásicas invertidas. Grupos de estabilización de 3' y 5' adicionales que pueden usarse para proteger uno o ambos extremos de un compuesto antisentido para impartir estabilidad de nucleasas incluyen los divulgados en la WO 03/004602 publicada el 16 de enero de 2003.
En ciertas realizaciones, los compuestos antisentido, incluyendo, pero no limitados a los particularmente adecuados para su uso como ARNmc, se modifican mediante la unión de uno o más grupos conjugados. En general, los grupos conjugados modifican una o más propiedades del oligonucleótido unido, incluyendo pero no limitado a la farmacodinámica, la farmacocinética, la estabilidad, la unión, la absorción, la distribución celular, la captación celular, la carga y la depuración. Los grupos conjugados se usan rutinariamente en las técnicas químicas y se enlazan directamente o a través de una fracción de enlace conjugada opcional o un grupo de enlace conjugado a un compuesto original como un oligonucleótido. Los grupos conjugados incluyen, sin limitación, intercaladores, moléculas informadoras, poliaminas, poliamidas, polietilenglicoles, tioéteres, poliéteres, colesteroles, tiocolesteroles, fracciones de ácido cólico, folato, lípidos, fosfolípidos, biotina, fenazina, fenantridina, antraquinona, adamantano, acridina, fluoresceínas, rodaminas, cumarinas y colorantes. Con anterioridad se han descrito ciertos grupos conjugados, por ejemplo: fracción de colesterol (Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 6553-6556), ácido cólico (Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1994,4,1053-1060), atioéter, por ejemplo, hexil-S-tritiltiol (Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660, 306-309; Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3, 2765-2770), un tiocolesterol (Oberhauser et al., Nucl Acids Res., 1992, 20, 533-538), una cadena alifática, por ejemplo, residuos de do-decan-diol o undecilo (Saison-Behmoaras et al., EMBO J., 1991, 10, 1111-1118; Kabanov et al. al, f EbS Lett, 1990, 259, 327-330;. Svinarchuk et al, Biochimie, 1993, 75, 49-54), un fosfolípido, por ejemplo, dihexadecil-rac-glicerol o trietil-amonio 1,2-di-O-hexadecil-rac-glicero-3-H-fosfonato (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654; Shea et al., Nucl. Acids Res., 1990, 18, 3777-3783), una poliamina o una cadena de polietilenglicol (Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14, 969-973), o ácido acético de adamantano (Manoharan et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 3651-3654), una fracción de palmitilo (Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264, 229-237), o una fracción de octadecilamina o hexilamino-carbonil-oxicolesterol (Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277, 923-937).
Para conjugados adicionales, incluidos los útiles para ARNmc y su colocación dentro de compuestos antisentido consultar, por ejemplo, Solicitud de Estados Unidos N° 61/583.963.
Ciertas Indicaciones
Como se muestra en los ejemplos a continuación, se ha demostrado que la administración de compuestos dirigidos a AR, como se describe en la presente, reduce la gravedad de los síntomas fisiológicos de la enfermedad de Kennedy, incluyendo la pérdida de fuerza muscular, la atrofia muscular, la reducción del tamaño de las células musculares y la denervación muscular. La capacidad de los compuestos ejemplificados a continuación de restaurar la fuerza muscular, el tamaño de las células musculares y/o la nervación muscular demuestra por lo tanto que los síntomas de la enfermedad de Kennedy pueden revertirse mediante el tratamiento con un compuesto como se describe en la presente.
Además, se ha demostrado que la administración de compuestos dirigidos a AR, como se describe en la presente, previene la aparición y/o la gravedad de los síntomas fisiológicos de la enfermedad de Kennedy, incluyendo la pérdida de fuerza muscular, la atrofia muscular, la reducción del tamaño de las células musculares y la denervación muscular. La capacidad de los compuestos ejemplificados a continuación para prevenir la aparición y/o la gravedad de la pérdida de fuerza muscular, la atrofia muscular, la reducción del tamaño de las células musculares y/o la denervación muscular demuestra, por lo tanto, que los síntomas de la enfermedad de Kennedy pueden revertirse mediante el tratamiento con un compuesto como se describe. Aquí en.
La enfermedad de Kennedy afecta a los hombres que tienen una mutación del gen AR heredada que implica la expansión de la repetición del trinucleótido CAG. La enfermedad de Kennedy se caracteriza por numerosos signos y/o síntomas físicos y fisiológicos. Cualquier síntoma que un experto en la técnica sepa que está asociado con la enfermedad de Kennedy puede mejorarse, tratarse o prevenirse mediante los métodos descritos anteriormente. En ciertas realizaciones, el síntoma puede incluir cualquiera o más de fatiga muscular, calambres musculares, debilidad muscular, atrofia muscular, espasmos o temblores musculares; y/o signos bulbares como dificultad para respirar, tragar y/o hablar.
Pruebas in vitro de oligonucleótidos antisentido
En la presente se describen métodos para el tratamiento de células con oligonucleótidos antisentido, que pueden modificarse adecuadamente para el tratamiento con otros compuestos antisentido.
Las células pueden tratarse con oligonucleótidos antisentido cuando las células alcanzan aproximadamente un 60-80% de confluencia en cultivo.
Un reactivo usado comúnmente para introducir oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye el reactivo de transfección de lípidos catiónicos LIPOFECTIN (Invitrogen, Carlsbad, CA). Los oligonucleótidos antisentido pueden mezclarse con LIPOFECTIN en OPTI-MEM 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para lograr la concentración final deseada de oligonucleótido antisentido y una concentración de LIPOFECTIN que puede variar de
2 a 12 ug/ml por 100 nM de oligonucleótido antisentido.
Otro reactivo usado para introducir oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye LIPOFECTAMINE (Invitrogen, Carlsbad, CA). El oligonucleótido antisentido se mezcla con LIPOFECTAMINE en medio de suero reducido OPTI-MEM 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para lograr la concentración deseada de oligonucleótido antisentido y una concentración de LIPOFECTAMINE que puede variar de 2 a 12 ug/ml por 100 nM de oligonucleótido antisentido.
Otra técnica usada para introducir oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye la electroporación.
Otra técnica más usada para introducir oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye la captación libre de los oligonucleótidos por las células.
Las células se tratan con oligonucleótidos antisentido mediante métodos rutinarios. Las células pueden recogerse 16-24 horas después del tratamiento con oligonucleótidos antisentido, momento en el que se miden los niveles de ARN o proteína de los ácidos nucleicos objetivo mediante métodos conocidos en la técnica y descritos en la presente. En general, cuando los tratamientos se realizan en múltiples repeticiones, los datos se presentan como la media de los tratamientos repetidos.
La concentración de oligonucleótido antisentido usada varía de una línea celular a otra. Los métodos para determinar la concentración óptima de oligonucleótidos antisentido para una línea celular particular son bien conocidos en la técnica. Los oligonucleótidos antisentido se usan típicamente en concentraciones que varían de 1 nM a 300 nM cuando se transfectan con LIPOFECTAMINE. Los oligonucleótidos antisentido se usan a concentraciones más altas que varían de 625 a 20.000 nM cuando se transfectan usando electroporación.
Aislamiento de ARN
El análisis de ARN puede realizarse en ARN celular total o ARNm poli(A)+. Los métodos de aislamiento de ARN son bien conocidos en la técnica. El ARN se prepara usando métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, usando el reactivo TRIZOL (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acuerdo con los protocolos recomendados por el fabricante.
Composiciones y métodos para formular composiciones farmacéuticas
Los compuestos antisentido pueden mezclarse con sustancias activas o inertes farmacéuticamente aceptables para la preparación de composiciones o formulaciones farmacéuticas. Las composiciones y los métodos para la formulación de composiciones farmacéuticas dependen de una serie de criterios que incluyen, pero no se limitan a, la vía de administración, la extensión de la enfermedad o la dosis a administrar.
Un compuesto antisentido dirigido al ácido nucleico del receptor de andrógenos puede utilizarse en composiciones farmacéuticas combinando el compuesto antisentido con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable adecuado. En ciertas realizaciones, un diluyente farmacéuticamente aceptable es agua, como agua estéril adecuada para inyección. Por consiguiente, en una realización, en los métodos descritos en la presente se emplea una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido dirigido al ácido nucleico del receptor de andrógenos y un diluyente farmacéuticamente aceptable. En ciertas realizaciones, el diluyente farmacéuticamente aceptable es agua. En ciertas realizaciones, el compuesto antisentido es un oligonucleótido antisentido proporcionado en la presente.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos antisentido abarcan cualquier sal farmacéuticamente aceptable, ésteres o sales de dichos ésteres, o cualquier otro oligonucleótido que, tras su administración a un animal, incluyendo un humano, sea capaz de proporcionar (directa o indirectamente) el metabolito o residuo biológicamente activo del mismo. Por consiguiente, por ejemplo, la divulgación también se refiere a sales farmacéuticamente aceptables de compuestos antisentido, profármacos, sales farmacéuticamente aceptables de tales profármacos y otros bioequivalentes. Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, pero no se limitan a, sales de sodio y potasio.
Un profármaco puede incluir la incorporación de nucleósidos adicionales en uno o ambos extremos de un compuesto antisentido que son escindidos por nucleasas endógenas dentro del cuerpo, para formar el compuesto antisentido activo.
En ciertas realizaciones, los compuestos o composiciones comprenden además un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
EJEMPLOS
Divulgación no limitativa
Aunque ciertos compuestos, composiciones y métodos descritos en la presente se han descrito con especificidad de acuerdo con ciertas realizaciones, los siguientes ejemplos sirven solo para ilustrar los compuestos descritos en la presente y no se pretende que limiten los mismos.
Ejemplo 1: Inhibición antisentido de AR humano en células HuVEC
Se diseñaron oligonucleótidos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de AR y se probaron sus efectos sobre el ARNm de AR in vitro. Los oligonucleótidos antisentido se probaron en una serie de experimentos que tenían condiciones de cultivo similares. Los resultados de cada experimento se presentan en tablas separadas que se muestran a continuación. Se transfectaron células HuVEC cultivadas a una densidad de 20.000 células por pocillo usando electroporación con oligonucleótido antisentido 500 nM. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 24 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda humano RTS3559 (secuencia directa TCCTTCACCAATGTCAACTCC, designada en la presente como SEQ ID NO: 9; secuencia inversa GAGCCATCCAAACTCTTGAGA, designada en la presente como SEQ ID NO: 10; secuencia de sonda AGTACCGCATGCACAAGTCCCG, designada en la presente como SEQ ID NO: 11) para medir los niveles de ARNm Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR, con respecto a las células de control no tratadas. Se probaron un total de 155 oligonucleótidos. En las tablas 1 y 2 solo se muestran aquellos oligonucleótidos que se seleccionaron para estudios adicionales.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos de nuevo diseño en las Tablas 1 y 2 se diseñaron como gapmers 3-10-3 (S)-cET. Los gapmers tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento de hueco central consiste de diez 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por segmentos de ala tanto en la dirección 5' como en la dirección 3' que comprenden tres nucleósidos. Cada nucleósido en el segmento del ala 5' y cada nucleósido en el segmento del ala 3' tiene una modificación (S)-cEt. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gapmer son enlaces de fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada gapmer son 5-metilcitosinas. "Sitio de inicio" indica el nucleósido más 5' al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. "Sitio de parada" indica el nucleósido más 3' al que se dirige el gapmer de la secuencia del gen humano. Cada gapmer enumerado en las Tablas 1 o 2 está dirigido o a la secuencia genómica de AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 1 (N° de registro de GENBANK NT_011669.17 truncado de los nucleótidos 5079000 a 5270000) o la secuencia de ARNm de AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 2 (N° de registro de GENBANK NM_000044.3), o ambos. 'n/a' indica que el oligonucleótido no se dirige a esa secuencia de genes en particular.
Tabla 1
Tab la 2
Ejemplo 2: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de AR humano en células HuVEC
Se seleccionaron los gapmers del estudio descrito anteriormente que mostraban una inhibición in vitro significativa del ARNm de AR y se probaron a varias dosis en células HuVEC. Las células se colocaron en placas a una densidad de 20.000 células por pocillo y se transfectaron usando electroporación con concentraciones de 18,5 nM, 55,6 nM, 166,7 nM, 500,0 nM y 1500,0 nM de oligonucleótido antisentido, como se especifica en las Tablas 3 y 4. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 16 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda de AR humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR, con respecto a las células de control no tratadas. Los oligonucleótidos antisentido se probaron en una serie de experimentos que tenían condiciones de cultivo similares. Los resultados de cada experimento se presentan en tablas separadas que se muestran a continuación.
En las Tablas 3 y 4 también se presenta la concentración inhibidora media máxima (IC50) de cada oligonucleótido. Como se ilustra, los niveles de ARNm del AR se redujeron de una manera dependiente de la dosis en las células tratadas de oligonucleótidos antisentido.
Tab la 3
Tabla 4
Ejemplo 3: Inhibición antisentido de AR humano en células HuVEC
Se diseñaron oligonucleótidos antisentido adicionales dirigidos a un ácido nucleico de AR y se probaron sus efectos sobre el ARNm de AR in vitro. Se transfectaron células HuVEC cultivadas a una densidad de 20.000 células por pocillo mediante electroporación con oligonucleótido antisentido 500 nM. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 24 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido total de ARN, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR, con respecto a las células de control no tratadas. Se probaron un total de 82 oligonucleótidos. En la Tabla 5 se muestran solo aquellos oligonucleótidos que fueron seleccionados para un estudio adicional.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos de nuevo diseño en la Tabla 5 se diseñaron como gapmers 3 10-3 (S)-cET. Los gapmers tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento de hueco central consiste de diez 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por segmentos de ala tanto en la dirección 5' como en la dirección 3' que comprenden tres nucleósidos. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación (S)-cEt. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación 2'-MOE. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gapmer son enlaces de fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada gapmer son 5-metilcitosinas. "Sitio de inicio" indica el nucleósido más 5' al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. “Sitio de parada” indica el nucleósido más 3’ al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. Cada gapmer enumerado en la Tabla 5 se dirige a la secuencia genómica de AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 1 (N° de Registro GENBANK NT_011669.17 truncada de los oligonucleótidos 5079000 a 5270000).
Tabla 5
Ejemplo 4: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de AR humano en células HuVEC
Se seleccionaron los gapmers de los estudios descritos anteriormente que mostraban una inhibición in vitro significativa del ARNm de AR y se probaron a varias dosis en células HuVEC. Las células se colocaron en placas a una densidad de 20.000 células por pocillo y se transfectaron usando electroporación con concentraciones de 31,3 nM, 62,5 nM, 125,0 nM, 250,0 nM, 500,0 nM y 1000,0 nM de oligonucleótido antisentido, como se especifica en la Tabla 6. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 16 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Para medir los niveles de ARNm se usó el conjunto de cebador sonda de AR humano RTS3559. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR, con respecto a las células de control no tratadas. Los oligonucleótidos antisentido se probaron en una serie de experimentos que tenían condiciones de cultivo similares. Los resultados de cada experimento se presentan en tablas separadas que se muestran a continuación.
En la Tabla 6 se presenta también la concentración inhibidora media máxima (IC50) de cada oligonucleótido. Como se ilustra, los niveles de ARNm del AR se redujeron de una manera dependiente de la dosis en las células tratadas de oligonucleótidos antisentido.
Tabla 6
Ejemplo 5: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de AR humano en células HuVEC
Se diseñaron oligonucleótidos antisentido adicionales como oligonucleótidos desoxi, MOE y (S)-cEt dirigidos a secuencias del gen AR y se probaron a varias dosis en células HuVEC. Los oligonucleótidos tienen 16 nucleósidos de longitud en donde el nucleósido tiene una modificación de azúcar MOE, una modificación de azúcar (S)-cEt o una modificación desoxi. La columna 'Química' describe las modificaciones de azúcar de cada oligonucleótido. 'k' indica una modificación de azúcar (S)-cEt; el número indica el número de desoxinucleósidos; de lo contrario, 'd' indica desoxirribosa; y 'e' indica una modificación de MOE. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gapmer son enlaces de fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada gapmer son 5-metilcitosinas. La SEQ ID NO enumerada en la tabla se refiere a la secuencia de oligonucleótidos. "Sitio de inicio" indica el nucleósido más 5' al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. “Sitio de parada” indica el nucleósido más 3’ al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. Cada gapmer enumerado en la Tabla 7 se dirige a la secuencia genómica de AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 1 (N° de Registro GENBANK NT_011669.17 truncada de los oligonucleótidos 5079000 a 5270000)
Tabla 7
Las células se colocaron en placas a una densidad de 20.000 células por pocillo y se transfectaron mediante electroporación con concentraciones de 62,5 nM, 125,0 nM, 250,0 nM, 500,0 nM y 1000,0 nM de oligonucleótido antisentido, como se especifica en las Tablas 8-10. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 16 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda de AR humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido total de ARN, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR con respecto a las células de control no tratadas. Los oligonucleótidos antisentido se probaron en una serie de experimentos que tenían condiciones de cultivo similares. Los resultados de cada experimento se presentan en tablas separadas que se muestran a continuación.
En las Tablas 8-10 se presenta también la concentración inhibidora media máxima (IC50) de cada oligonucleótido. Como se ilustra, los niveles de ARNm del AR se redujeron de manera dependiente de la dosis en algunas de las células tratadas con oligonucleótidos antisentido.
Tab la 8
Tabla 9
Tabla 10
Ejemplo 6: Inhibición antisentido de AR humano en células HuVEC
Se diseñaron oligonucleótidos antisentido adicionales dirigidos a un ácido nucleico de AR y se probaron para determinar sus efectos sobre el ARNm de AR in vitro. Se transfectaron células HuVEC cultivadas a una densidad de 20.000 células por pocillo usando electroporación con oligonucleótido antisentido 1000 nM. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 24 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido total de ARN, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR con respecto a las células de control no tratadas. Se probaron un total de 75 oligonucleótidos. En la Tabla 11 se muestran solo aquellos oligonucleótidos que fueron seleccionados para un estudio adicional.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos de nuevo diseño en la Tabla 11 fueron diseñados como gapmers 3-10-3 (S)-cET, gapmers 3-9-4 (S)-cEt, gapmers 4-8-4 (S)-cEt, gapmers 4- 9-3 (S)-cEt, gapmers 5-7-4 (S)-cEt, gapmers 5-8-3 (S)-cEt, gapmers, 6-7-3 (S)-cEt, u oligonucleótidos desoxi, MOE y (S)-cEt. Los gapmers 3-10-3 (S)-cEt tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento central consiste de diez 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por segmentos de ala tanto en la dirección 5' como en la dirección 3' que comprende tres nucleósidos. Los gapmers 3-9-4 (S)-cEt tienen 16 nucleósidos de longitud, en donde el segmento de hueco central consiste de nueve 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende tres nucleótidos y en la dirección 3' que comprende cuatro nucleósidos. Los gapmers 4-8-4 (S)-cEt tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento de hueco comprende ocho 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por segmentos de ala tanto en la dirección 5' como en la dirección 3' que comprende cuatro nucleósidos. Los gapmers 4-9-3 (S)-cEt tienen 16 nucleósidos de longitud, en donde el segmento de hueco central comprende nueve 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende cuatro nucleótidos y en la dirección 3' que comprende tres nucleósidos. Los gapmers 5-7-4 (S)-cEt tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento de hueco central comprende siete 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende cinco nucleótidos y en la dirección 3' que comprende tres cuatro nucleótidos. Los gapmers 5-8-3 (S)-cEt tienen 16 nucleósidos de longitud, en donde el segmento de hueco central comprende ocho 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende cinco nucleótidos y en la dirección 3' que comprende tres nucleósidos. Los gapmers 6-7-3 (S)-cEt tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento de hueco central consiste de siete 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende seis nucleótidos y en la dirección 3' que comprende tres nucleósidos. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación (S)-cEt. Los oligonucleótidos desoxi, MOE y (S)-cEt tienen 16 nucleósidos de longitud en donde el nucleósido tiene o una modificación de azúcar MOE, una modificación de azúcar (S)-cEt o una modificación desoxi. La columna ‘química’ describe las modificaciones de azúcar de cada oligonucleótido. 'k' indica una modificación de azúcar (S)-cEt; el número indica el número de desoxinucleósidos; de otro modo, 'd' indica desoxirribosa; y 'e' indica una modificación de MOE. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gapmer son enlaces de fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada gapmer son 5-metilcitosinas.
La SEQ ID NO enumerada en la tabla se refiere a la secuencia de oligonucleótidos. "Sitio de inicio" indica el nucleósido más 5' al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. "Sitio de parada" indica el nucleósido más 3' al que se dirige el gapmer en la secuencia de gen humano. Cada gapmer enumerado en la Tabla 11 está dirigido a la secuencia genómica del AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 1 (N° de acceso de GENBANK NT_011669.17 truncada a partir de los nucleótidos 5079000 a 5270000).
Tabla 11
continuación
Ejemplo 7: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de AR humano en células HuVEC
Los oligonucleótidos antisentido de los estudios descritos anteriormente que mostraban una inhibición in vitro significativa del ARNm de AR se seleccionaron y probaron a varias dosis en células HuVEC. Las células se colocaron en placas a una densidad de 20.000 células por pocillo y se transfectaron usando electroporación con concentraciones de 31,25 nM, 62,5 nM, 125,0 nM, 250,0 nM, 500,0 nM y 1000,0 nM de oligonucleótido antisentido, como se especifica en la Tabla 12. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 16 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda de AR humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR, con respecto a las células de control no tratadas. En la Tabla 12 también se presenta la concentración inhibidora media máxima (IC50) de cada oligonucleótido. Como se ilustra, los niveles de ARNm del AR se redujeron de una manera dependiente de la dosis en las células tratadas con oligonucleótido antisentido.
Tabla 12
Ejemplo 8: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de AR humano en células HuVEC
Los oligonucleótidos antisentido de los estudios descritos anteriormente que mostraban una inhibición in vitro significativa del ARNm de AR se seleccionaron y probaron a varias dosis en células HuVEC. Las células se colocaron en placas a una densidad de 20.000 células por pocillo y se transfectaron usando electroporación con concentraciones de 46,9 nM, 187,5 nM, 750,0 nM y 3000,0 nM de oligonucleótido antisentido, como se especifica en la Tabla 13. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda de AR humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR con respecto a las células de control no tratadas. En la Tabla 13 también se presenta la concentración inhibidora media máxima (IC50) de cada oligonucleótido. Como se ilustra, los niveles de ARNm del AR se redujeron de una manera dependiente de la dosis en las células tratadas con oligonucleótidos antisentido.
Tabla 13
Ejemplo 9: Inhibición antisentido de AR humano en células HuVEC
Se diseñaron oligonucleótidos antisentido adicionales dirigidos a un ácido nucleico de AR y se probaron para determinar sus efectos sobre el ARNm de AR in vitro. Se transfectaron células HuVEC cultivadas a una densidad de 20.000 células por pocillo usando electroporación con oligonucleótido antisentido 500 nM. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 24 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR con respecto a las células de control no tratadas. Se probaron un total de 616 oligonucleótidos. En las Tablas 14-21 sólo se muestran aquellos oligonucleótidos que se seleccionaron para estudios adicionales.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos de nuevo diseño en las Tablas 14-21 se diseñaron como gapmers 3-10-3 (S)-cET. Los gapmers tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento de hueco central comprende diez 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por segmentos de ala tanto en la dirección 5' como en la dirección 3' que comprenden tres nucleósidos. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación (S)-cEt. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gapmer son enlaces de fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada gapmer son 5-metilcitosinas.
La SEQ ID NO enumerada en la tabla se refiere a la secuencia de oligonucleótidos. "Sitio de inicio" indica el nucleósido más 5' al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. "Sitio de parada" indica el nucleósido más 3' al que se dirige el gapmer en la secuencia de gen humano. Cada gapmer enumerado en las Tablas 14-21 se dirige o a la secuencia genómica de AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 1 (N° de registro de GENBANK NT_011669.17 truncada de los nucleótidos 5079000 a 5270000) o la secuencia de ARNm de AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 2 (N° de registro GENBANK NM_000044.3), o ambas. 'n/a' indica que el oligonucleótido no se dirige a esa secuencia de genes en particular.
Tabla 14
Tabla 15
Tabla 16
Tabla 17
Tabla 18
Tabla 19
Tabla 20
Tabla 21
Ejemplo 10: Inhibición antisentido de AR humano en células HuVEC
Se diseñaron oligonucleótidos antisentido adicionales dirigidos a un ácido nucleico de AR y se probaron sus efectos sobre el ARNm de AR in vitro. Se transfectaron células HuVEC cultivadas a una densidad de 20.000 células por pocillo usando electroporación con oligonucleótido antisentido 1000 nM. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 24 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR con respecto a las células de control no tratadas. Se probaron un total de 385 oligonucleótidos. En las Tablas 22-26 sólo se muestran aquellos
oligonucleótidos que se seleccionaron para estudios adicionales.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos de nuevo diseño en las Tablas 22-26 se diseñaron como gapmers 3-10-3 (S)-cET. Los gapmers tienen una longitud de 16 nucleósidos, en donde el segmento de hueco central comprende diez 2'-desoxinucleósidos y está flanqueado por segmentos de ala tanto en la dirección 5' como en la dirección 3' que comprenden tres nucleósidos. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación (S)-cEt. Los enlaces internucleosídicos a lo largo de cada gapmer son enlaces de fosforotioato. Todos los residuos de citosina en cada gapmer son 5-metilcitosinas.
La SEQ ID NO enumerada en la tabla se refiere a la secuencia de oligonucleótidos. "Sitio de inicio" indica el nucleósido más 5' al que se dirige el gapmer en la secuencia del gen humano. "Sitio de parada" indica el nucleósido más 3' al que se dirige el gapmer en la secuencia de gen humano. Cada gapmer enumerado en las Tablas 22-26 se dirige a la secuencia genómica del AR humano, designada en la presente como SEQ ID NO: 1 (N° de registro de GENBANK NT_011669.17 truncada de los nucleótidos 5079000 a 5270000)
Tabla 22
Tabla 23
Tabla 24
Tabla 25
Tabla 26
Ejemplo 11: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de AR humano en células Hu VEC
Se seleccionaron los gapmers de los estudios descritos anteriormente que mostraban una inhibición in vitro significativa del ARNm de AR y probaron a varias dosis en células HuVEC. Las células se colocaron en placas a una densidad de 20.000 células por pocillo y se transfectaron usando electroporación con concentraciones de 46,9 nM, 187,5 nM, 750,0 nM y 3000,0 nM de oligonucleótido antisentido, como se especifica en las Tablas 27-35. Después de un período de tratamiento de aproximadamente 16 horas, se aisló el ARN de las células y se midieron los niveles de ARNm del AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda AR humano RTS3559 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido total de ARN, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de AR conr especto a las células de control no tratadas.
En las Tablas 27-35 se presenta también la concentración inhibidora media máxima (IC50) de cada oligonucleótido. Como se ilustra, los niveles de ARNm del AR se redujeron de manera dependiente de la dosis en algunas de las células tratadas con oligonucleótidos antisentido.
Tabla 27
Tabla 28
Tabla 29
Tabla 30
Tabla 31
Tabla 32
Tabla 33
Tabla 34
Tabla 35
Ejemplo 12: Eficacia de oligonucleótidos antisentido dirigidos al receptor de andrógenos humanos (AR) en un modelo de ratón transgénico
Se evaluó la eficacia de los oligonucleótidos ISIS dirigidos a AR en el modelo de ratón transgénico AR humano BAC, FxAR121. Estos ratones tienen obstrucción del tracto urinario aguda, el inicio del debilitamiento de la fuerza de prensión a las 10 semanas, e inicio de la muerte prematura a partir de la 16a semana. Se evaluó la supervivencia de los ratones después del tratamiento con oligonucleótido ISIS.
Tratamiento
A grupos de 10 ratones cada uno se les inyectó sistémicamente con 100 mg/kg/semana de ISIS 549372 o ISIS 549458. A un grupo de control de ratones se le inyectó sistémicamente solución salina tamponada con fosfato (PBS). Después de 4 semanas de dosificación, la dosis de oligonucleótido antisentido se redujo a 50 mg/kg/semana durante 8 semanas.
Análisis de supervivencia
Se monitorizó a los ratones diariamente y se registraron las muertes. Los datos de supervivencia de los
ratones en los grupos de tratamiento y control se presentan en la Tabla 36. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR mejoró significativamente la tasa de supervivencia de los ratones.
Tabla 36
Ejemplo 13: Eficacia de ISIS 549458 en el modelo de ratón transgénico AR
Se evaluó la eficacia de ISIS 549458 en el modelo de ratón transgénico (Tg) AR humano BAC, FxAR121. Se evaluó el peso corporal, la supervivencia y la fuerza de prensión.
Tratamiento
El tratamiento se inició cuando los ratones tenían 12 semanas de edad y se llevó a cabo hasta las 19 semanas. A un grupo de siete ratones Tg se les inyectó sistémicamente 50 mg/kg/semana de ISIS 549458 durante 8 semanas. A un grupo de control de cinco ratones Tg se le inyectó sistemáticamente solución salina tamponada con fosfato (PBS) durante 8 semanas. A otro grupo de cuatro ratones de tipo salvaje se le inyectó sistémicamente 50 mg/kg/semana de ISIS 549458 durante 8 semanas.
Análisis de supervivencia
Se monitorizó a los ratones diariamente y se registraron las muertes. Los datos de supervivencia de los ratones en los grupos de tratamiento y control se presentan en la Tabla 37. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR mejoró significativamente la tasa de supervivencia de los ratones Tg. Las semanas anotadas en la tabla indican la edad de los ratones.
Tabla 37
Análisis de peso corporal
Los ratones se pesaron periódicamente y se registraron los cambios de peso. Los datos se presentan en la Tabla 38. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR estabiliza significativamente los pesos de los ratones Tg en comparación con los del control, y es comparable a los pesos de los ratones WT. Las semanas anotadas en la tabla indican la edad de los ratones.
Tabla 38
Análisis de fuerza de prensión muscular
Las pruebas de prensión se realizaron con un medidor de fuerza de prensión (modelo 1027csx) adquirido de Columbus Instruments (Columbus, OH). Se probaron ratones no entrenados cinco veces seguidas sin descanso y se registró el número más alto de las cinco pruebas para cada ratón. Los datos se presentan en la Tabla 39. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR estabiliza significativamente la fuerza de prensión muscular de los ratones Tg en comparación con la del control y es comparable a la de los ratones WT. 'nd' indica que no hay datos porque no había ratones supervivientes en ese grupo en ese punto temporal.
Tabla 39
Análisis de ARN
Se aisló ARN del hígado de ratones WT y ratones Tg tratados con PBS o ISIS 549458. Las expresiones de ARNm de AR humano y de ratón se analizaron mediante RT-PCR. Los datos se presentan en la Tabla 40. Los resultados indican que, en comparación con la expresión de AR en ratones WT de 32 semanas de edad, el tratamiento de ratones WT o ratones Tg con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR inhibió la expresión de ARNm de AR humano.
Tabla 40
Análisis de atrofia muscular
Se evaluó la atrofia muscular del músculo del esfínter uretral externo (EUS) midiendo el diámetro mínimo de la fibra muscular EUC microscópicamente utilizando el sistema de imagenología Aperio-Indica. Los datos se presentan en la Tabla 41. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR mejora la atrofia muscular EUS de los ratones Tg de una manera dependiente de la dosis en comparación con la del control, y es comparable a la de los ratones WT.
Tabla 41
Ejemplo 14: Efecto de la inhibición dependiente de la dosis de AR en el modelo de ratón transgénico AR Se evaluó el efecto de la inhibición dependiente de la dosis de la expresión del ARNm de AR en ratones AR Tg después del tratamiento con ISIS 549458. Se evaluó el peso corporal, la supervivencia, la fuerza de prensión y el diámetro mínimo del músculo del esfínter uretral externo (EUS)
Tratamiento
El tratamiento se inició cuando los ratones tenían 11 semanas de edad. A grupos de 5-8 ratones Tg se les inyectaron sistémicamente 25 mg/kg/semana de ISIS 549458 durante 2 semanas, 4 semanas u 8 semanas. A un grupo de control de cinco ratones Tg se le inyectó sistemáticamente solución salina tamponada con fosfato (PBS) durante 8 semanas. A grupos de seis ratones de tipo salvaje se les inyectó sistémicamente PBS durante 8 semanas. Análisis de peso corporal
Los ratones se pesaron periódicamente y se registraron los cambios de peso. Los datos se presentan en la Tabla 42. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR estabiliza significativamente los pesos de los ratones Tg en comparación con los del grupo de ratones Tg de control. 'nd' indica que no hay datos porque no había ratones supervivientes en ese grupo en ese punto temporal.
Tabla 42
Análisis de fuerza de prensión muscular
Las pruebas de prensión se realizaron con un medidor de fuerza de prensión (modelo 1027csx) adquirido de Columbus Instruments (Columbus, OH). Se probaron ratones no entrenados cinco veces seguidas sin descanso y se registró el número más alto de las cinco pruebas para cada ratón. Los datos se presentan en la Tabla 43. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR estabiliza significativamente la fuerza de prensión muscular de los ratones Tg en comparación con la del control y es comparable a la de los ratones WT. 'nd' indica que no hay datos porque no había ratones supervivientes en ese grupo en ese punto temporal.
Tabla 43
Análisis de supervivencia
Se monitorizó a los ratones diariamente y se registraron las muertes. Los datos de supervivencia de los ratones en los grupos de tratamiento y control se presentan en la Tabla 44. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR mejoró significativamente la tasa de supervivencia de los ratones Tg. 'nd' indica que no hay datos porque no había ratones supervivientes en ese grupo en ese punto temporal.
Tabla 44
Análisis de ARN
Se aisló ARN del hígado y músculo de ratones Tg de 14 semanas de edad tratados con PBS, ratones WT tratados con ISIS 549458 durante 8 Semanas y ratones Tg tratados con ISIS 549458 durante 2 semanas, 4 semanas u 8 semanas. Los ratones sometidos a tratamiento se sacrificaron 10-11 semanas después de la dosis. La expresión de ARNm de AR humano se analizó mediante RT-PCR. Los datos se presentan en las Tablas 45 y 46. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos al AR humano inhibió específicamente la expresión del ARNm de AR humano en comparación con el control Tg.
Tabla 45
Tabla 46
Análisis de atrofia muscular
Se evaluó la atrofia muscular del músculo del esfínter uretral externo (EUS) midiendo el diámetro mínimo de la fibra muscular EUC microscópicamente usando el sistema de imagenología Aperio-Indica. Los datos se presentan en la Tabla 47. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR mejora la atrofia muscular EUS de los ratones Tg de manera dependiente de la dosis en comparación con la del control, y es comparable a la de los ratones WT.
Tabla 47
Ejemplo 15: Eficacia de ISIS 549458 en un modelo de ratón transgénico AR no sintomático
Se evaluó la eficacia de ISIS 549458 en el modelo de ratón AR (Tg) a las 6 Semanas de edad, cuando los síntomas de la enfermedad no se manifiestan. Se evaluaron el peso corporal, la supervivencia, la fuerza de prensión, la expresión génica muscular y el diámetro mínimo de la fibra muscular EUS.
Tratamiento
El tratamiento se inició cuando los ratones tenían 6 semanas de edad. A un grupo de diez ratones Tg se les inyectaron sistémicamente 50 mg/kg/semana de ISIS 549458 durante 4 semanas. A un grupo de control de nueve ratones Tg se le inyectó sistémicamente PBS durante 4 Semanas. A dos grupos de ratones de tipo salvaje se les inyectaron sistemáticamente 50 mg/kg/semana de ISIS 549458 o PBS durante 4 Semanas.
Análisis de peso corporal
Los ratones se pesaron periódicamente y se registraron los cambios de peso. Los datos se presentan en la Tabla 48. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR estabiliza significativamente el peso de los ratones Tg en comparación con el del control y es comparable al peso de los ratones WT.
Tabla 48
Análisis de fuerza de prensión muscular
Las pruebas de prensión se realizaron con un medidor de fuerza de prensión (modelo 1027csx) adquirido de Columbus Instruments (Columbus, OH). Se probaron ratones no entrenados cinco veces seguidas sin descanso y se promediaron los resultados de las cinco pruebas para cada ratón. Los datos se presentan en la Tabla 49. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR estabiliza significativamente la fuerza de prensión muscular de los ratones Tg en comparación con la del control y es comparable a la de los ratones WT.
Tabla 49
Análisis de atrofia muscular
La atrofia muscular se evaluó tanto en el músculo del esfínter uretral externo (EUS) como en el músculo cuádriceps mediante análisis de imagenología. Los datos se presentan en la Tabla 50. El efecto de la inhibición antisentido de la masa corporal magra total también se midió con un sistema Echo MRI (Echo Medical System, Houston, TX) cuando los ratones tenían 16 semanas de edad. Los datos se presentan en la Tabla 51. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR mejora significativamente la atrofia muscular EUS y previene la pérdida total de masa corporal magra de los ratones Tg en comparación con la del control, y es comparable a la de los ratones WT.
Tabla 50
Tabla 51
Análisis de ARN
Se aisló ARN del músculo cuádriceps de ratones de 10 y 16 semanas de edad, y se analizaron las expresiones de ARNm de AR humano y de ratón mediante RT-PCR. Los datos se presentan en la Tabla 52. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con oligonucleótidos antisentido dirigidos a AR humano inhibió específicamente la expresión del ARNm de AR humano en comparación con el control de PBS de la misma edad. También se midió la expresión de marcadores de denervación muscular, ARNm del receptor colinérgico (alfa nicotínico), ARNm del canal de calcio, dependiente de voltaje, tipo L, ARNm de subunidad alfa 1S, ARNm de miogenina y ARNm de MyoD1 en los ratones. Los datos se presentan en las Tablas 53-56. Los resultados indican que el tratamiento con ISIS 549458 inhibió las expresiones del receptor colinérgico, el canal de calcio y la miogenina en los ratones en comparación con el control Tg de PBS.
Tabla 52
Tabla 53
Tabla 54
Tabla 55
Tabla 56
Como los pacientes de Kennedy experimentan dificultad para hablar y tragar, se evaluó el tejido de la lengua en estos ratones.
Se aisló el ARN del tejido de la lengua de ratones de 16 semanas de edad tratados con ISIS 549458 y tratados con el control, y se analizó la expresión del ARNm de AR humano mediante RT-PCR. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con ISIS 549458 disminuyó la expresión de AR en un 77% en comparación con los ratones de 10 semanas sin tratar. Los resultados también mostraron que la expresión de AR humana en el grupo de control tratado con PBS aumentó en un 21% en comparación con los ratones de 10 semanas sin tratar. Por lo tanto, la expresión de AR humana en ratones de 16 semanas tratados con ISIS 549458 se redujo en más del 90% en comparación con los ratones de control de 16 semanas.
También se analizó la expresión de AR de ratón por RT-PCR. Los resultados indican que el tratamiento de los ratones con ISIS 549458 disminuyó la expresión de AR en un 18% en comparación con los ratones de 10
semanas sin tratar. Los resultados también mostraron que la expresión de AR humana en el grupo de control tratado con PBS aumentó en un 32% en comparación con los ratones de 10 semanas sin tratar. Por lo tanto, la expresión de AR de ratón en ratones de 16 semanas tratados con ISIS 549458 se redujo en un 50% en comparación con los ratones de control de 16 semanas.
Ejemplo 16: inhibición antisentido del ARNm del receptor de andrógenos (AR) humano en células C4-2B Las células C4-2B son células de adenocarcinoma de próstata humano independientes de andrógenos usadas comúnmente en el campo de la oncología y se han establecido como células cultivadas clínicamente relevantes (Thalmann, G.N. et al., Cancer Res. 1994. 54: 2577). MDV3100 o Enzalutamide es un fármaco experimental antagonista del receptor de andrógenos desarrollado por Medivation para el tratamiento del cáncer de próstata resistente a la castración. Se probó el efecto de ISIS 549372, ISIS 549458, ISIS 554221 e ISIS 549434 sobre los niveles de ARNm del AR en células C4-2B MR resistentes a MDV3100.
Las células se colocaron en placa a una densidad de 40.000 células/ml por pocillo y se cultivaron en medio RPMI1640 con suero bovino fetal al 10%. Las células se cultivaron en presencia de una concentración 5 pM de MDV3100 durante el transcurso de 2 meses para inducir resistencia a MDV3100. Se añadieron ISIS 549372, ISIS 549458, ISIS 549434 e ISIS 554221 cada uno a concentraciones de 0,04 pM, 0,20 pM, 1,00 pM y 5,00 pM de oligonucleótido antisentido al medio de cultivo para que las células lo captaran libremente. Se incluyó como control negativo un oligonucleótido de control, ISIS 347526 (secuencia TCTTATGTTTCCGAACCGTT (SEQ ID NO: 170) gapmer 5-10-5 MOE) sin región objetivo conocida en las secuencias de genes humanos. Después de un período de tratamiento de 2 días, se midieron los niveles totales de ARNm de AR mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se usó el conjunto de cebador sonda de AR humano hAR_LTS00943 (secuencia directa GCCCCTGGATGGATAGCTACT, designada en la presente como SEQ ID NO: 171; secuencia inversa CCACAGATCAGGCAGGTCTTC, designada en la presente como SEQ ID NO: 172; secuencia de sonda ACTGCCAGGGACCATGTTTTGCCC, designada en la presente como SEQ ID NO: 173) para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del AR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, medido por RIBOGREEN®. Los resultados se presentan en la Tabla 57 como porcentaje de inhibición de AR total con respecto a las células de control no tratadas. El tratamiento de las células con ISIS 549372, ISIS 549458 e ISIS 549434 redujo el ARNm de AR de longitud completa de una manera dependiente de la dosis más ampliamente que el tratamiento con ISIS 554221.
Tabla 57
Ejemplo 17: Inhibición antisentido del ARNm del receptor de andrógenos (AR) humano en células CWR22-RV1
El efecto de los niveles de ARNm de AR de ISIS 549372, ISIS 549434, ISIS 549458 e ISIS 554221 se probó en células CWR22-RV1. Las células CWR22-RV1 se colocaron en placas y los oligonucleótidos ISIS se añadieron individualmente al medio de cultivo a concentraciones de 1,7 nM, 5,0 nM, 16,7 nM o 50 nM. ISIS 347526 se incluyó como control negativo. Después de un período de tratamiento de 6 días, se midió la reducción objetivo y la capacidad proliferativa de las células cancerosas.
La inhibición antisentido del ARNm de longitud completa de AR se midió con el conjunto de cebador sonda RTS3559. Los resultados se presentan en la Tabla 58 como porcentaje de inhibición con respecto a las células no tratadas.
Tabla 58
Ejemplo 18: Efecto de la inhibición antisentido del ARNm del receptor de andrógenos (AR) humano mediante
Claims (7)
1. Un compuesto antisentido modificado para su uso en un método de tratamiento o prevención de la enfermedad de Kennedy en un sujeto, en donde el compuesto antisentido modificado comprende un oligonucleótido antisentido modificado que consiste de 16 nucleósidos enlazados que tienen una secuencia de nucleobases que comprende una porción de nucleobases contigua que es complementaria con por lo menos una porción de 15 nucleobase de los nucleótidos 58722-58737 o 58752-58767 de la SEQ ID NO: 1, y en donde el oligonucleótido modificado comprende: un segmento de hueco que consiste de 9 desoxinucleósidos enlazados;
un segmento de ala 5' que consiste de tres nucleósidos enlazados; y
un segmento de ala 3' que consiste de cuatro nucleósidos enlazados;
en donde el segmento de hueco está colocado entre el segmento de ala 5' y el segmento de ala 3'; cada uno de los tres nucleósidos enlazados del segmento de ala 5' comprende un azúcar de etilo restringido (cEt); los cuatro nucleósidos enlazados del segmento 3' del ala comprenden un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt), un azúcar de etilo restringido (cEt) y un azúcar 2'-O-metoxietilo en la dirección 5' a 3'; cada enlace internucleosídico es un enlace fosforotioato; y cada citosina es una 5-metilcitosina.
2. El compuesto antisentido modificado para el uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es una sal farmacéuticamente aceptable.
3. El compuesto antisentido modificado para el uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de sodio.
4. El compuesto antisentido modificado para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el compuesto antisentido modificado:
a) aumenta la fuerza muscular;
b) mejora la atrofia muscular, en donde la mejora de la atrofia muscular aumenta opcionalmente el tamaño de una célula muscular; y/o
c) inhibe la denervación muscular
en un sujeto que tiene la enfermedad de Kennedy.
5. El compuesto antisentido modificado para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, para su uso en un método para prevenir la enfermedad de Kennedy en un sujeto, en donde el sujeto tiene una mutación del gen del receptor de andrógenos (AR) asociada con la enfermedad de Kennedy.
6. El compuesto antisentido modificado para el uso de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el músculo es una extremidad proximal o un músculo bulbar.
7. El compuesto antisentido modificado para el uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde el sujeto tiene un gen de AR que comprende una expansión de la repetición del trinucleótido CAG, opcionalmente en donde el gen de AR comprende 36-62 repeticiones del trinucleótido CAG que comienzan en la posición de nucleobases 1287 de la SeQ ID NO: 2.
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|---|---|---|---|---|
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| US5034506A (en) | 1985-03-15 | 1991-07-23 | Anti-Gene Development Group | Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages |
| US5506337A (en) | 1985-03-15 | 1996-04-09 | Antivirals Inc. | Morpholino-subunit combinatorial library and method |
| US5166315A (en) | 1989-12-20 | 1992-11-24 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
| US5185444A (en) | 1985-03-15 | 1993-02-09 | Anti-Gene Deveopment Group | Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages |
| US5591722A (en) | 1989-09-15 | 1997-01-07 | Southern Research Institute | 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity |
| EP0497875B1 (en) | 1989-10-24 | 2000-03-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2' modified oligonucleotides |
| US5646265A (en) | 1990-01-11 | 1997-07-08 | Isis Pharmceuticals, Inc. | Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites |
| US5670633A (en) | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
| GB9009980D0 (en) | 1990-05-03 | 1990-06-27 | Amersham Int Plc | Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides |
| DE69032425T2 (de) | 1990-05-11 | 1998-11-26 | Microprobe Corp., Bothell, Wash. | Teststreifen zum Eintauchen für Nukleinsäure-Hybridisierungsassays und Verfahren zur kovalenten Immobilisierung von Oligonucleotiden |
| US6582908B2 (en) | 1990-12-06 | 2003-06-24 | Affymetrix, Inc. | Oligonucleotides |
| ES2103918T3 (es) | 1991-10-17 | 1997-10-01 | Ciba Geigy Ag | Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios. |
| US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
| FR2687679B1 (fr) | 1992-02-05 | 1994-10-28 | Centre Nat Rech Scient | Oligothionucleotides. |
| EP0577558A2 (de) | 1992-07-01 | 1994-01-05 | Ciba-Geigy Ag | Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte |
| EP0673559A1 (en) | 1992-12-14 | 1995-09-27 | Honeywell Inc. | Motor system with individually controlled redundant windings |
| AU6449394A (en) | 1993-03-30 | 1994-10-24 | Sterling Winthrop Inc. | Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them |
| US5801154A (en) | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
| US5446137B1 (en) | 1993-12-09 | 1998-10-06 | Behringwerke Ag | Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides |
| US5519134A (en) | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
| US5627053A (en) | 1994-03-29 | 1997-05-06 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid |
| US5597909A (en) | 1994-08-25 | 1997-01-28 | Chiron Corporation | Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use |
| US6770748B2 (en) | 1997-03-07 | 2004-08-03 | Takeshi Imanishi | Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue |
| JP3756313B2 (ja) | 1997-03-07 | 2006-03-15 | 武 今西 | 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体 |
| US6794499B2 (en) | 1997-09-12 | 2004-09-21 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
| DE69829760T3 (de) | 1997-09-12 | 2016-04-14 | Exiqon A/S | Bi- und tri-zyklische - nukleosid, nukleotid und oligonukleotid-analoga |
| US20030228597A1 (en) | 1998-04-13 | 2003-12-11 | Cowsert Lex M. | Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation |
| US6043352A (en) | 1998-08-07 | 2000-03-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides |
| BR0009884A (pt) | 1999-04-21 | 2002-01-08 | American Home Prod | Processos e composições para a inibição da função das sequências de polinucleotìdeos |
| AU776362B2 (en) | 1999-05-04 | 2004-09-09 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | L-ribo-LNA analogues |
| US6525191B1 (en) | 1999-05-11 | 2003-02-25 | Kanda S. Ramasamy | Conformationally constrained L-nucleosides |
| EP1244667B1 (en) | 1999-12-30 | 2006-04-05 | K.U. Leuven Research & Development | Cyclohexene nucleic acids |
| CA2452458A1 (en) | 2001-07-03 | 2003-01-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant chimeric oligonucleotides |
| EP1562971B1 (en) | 2002-11-05 | 2014-02-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
| AU2003295387A1 (en) | 2002-11-05 | 2004-06-03 | Isis Parmaceuticals, Inc. | Modified oligonucleotides for use in rna interference |
| US8090542B2 (en) | 2002-11-14 | 2012-01-03 | Dharmacon Inc. | Functional and hyperfunctional siRNA |
| US6673661B1 (en) | 2002-12-20 | 2004-01-06 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. | Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device |
| WO2004106356A1 (en) | 2003-05-27 | 2004-12-09 | Syddansk Universitet | Functionalized nucleotide derivatives |
| DK1661905T3 (da) | 2003-08-28 | 2012-07-23 | Takeshi Imanishi | Hidtil ukendte syntetiske nukleinsyrer af N-O-krydsbindingstype |
| AU2004274021B2 (en) | 2003-09-18 | 2009-08-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 4'-thionucleosides and oligomeric compounds |
| CA2569419A1 (en) | 2004-06-03 | 2005-12-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation |
| WO2006009629A2 (en) * | 2004-06-10 | 2006-01-26 | New York University | Methods and agents for maintaining muscle mass and for preventing muscle atrophy and biomarkers for monitoring same |
| US20080261905A1 (en) | 2004-11-08 | 2008-10-23 | K.U. Leuven Research And Development | Modified Nucleosides for Rna Interference |
| CA2640171C (en) | 2006-01-27 | 2014-10-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 6-modified bicyclic nucleic acid analogs |
| JP5441688B2 (ja) | 2006-05-11 | 2014-03-12 | アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド | ５’修飾二環式核酸類似体 |
| WO2008101157A1 (en) | 2007-02-15 | 2008-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| EP2170917B1 (en) | 2007-05-30 | 2012-06-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs |
| ES2386492T3 (es) | 2007-06-08 | 2012-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos carbocíclicos |
| CN101796062B (zh) | 2007-07-05 | 2014-07-30 | Isis制药公司 | 6-双取代双环核酸类似物 |
| WO2009067647A1 (en) | 2007-11-21 | 2009-05-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs |
| US8450290B2 (en) * | 2007-11-26 | 2013-05-28 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating androgen receptor dependent disorders including cancers |
| US7737125B2 (en) | 2007-11-26 | 2010-06-15 | Enzon Pharamaceuticals, Inc. | LNA antagonists targeting the androgen receptor |
| EP2265627A2 (en) | 2008-02-07 | 2010-12-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs |
| DK2356129T3 (da) | 2008-09-24 | 2013-05-13 | Isis Pharmaceuticals Inc | Substituerede alpha-L-bicykliske nukleosider |
| DK2361256T3 (da) | 2008-09-24 | 2013-07-01 | Isis Pharmaceuticals Inc | Cyclohexenyl-nukleinsyreanaloger |
| WO2011017521A2 (en) | 2009-08-06 | 2011-02-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs |
| EP2601204B1 (en) | 2010-04-28 | 2016-09-07 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| AU2011326034B2 (en) | 2010-11-12 | 2016-02-04 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Compositions and methods for treating androgen receptor dependent disorders including cancers |
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