ES2896255T3 - Nuevo agente terapéutico para enfermedades por prionoides - Google Patents

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Abstract

Una envoltura de virus Sendai inactivado para su uso en un método para prevenir y/o tratar el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide.

Description

DESCRIPCIÓN
Nuevo agente terapéutico para enfermedades por prionoides
Campo técnico
Campo técnico:
La presente invención se refiere a un medicamento para tratar el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa, que comprende una envoltura de virus Sendai inactivado como principio activo y una aplicación combinada del medicamento y un inhibidor de puntos de control inmunitario.
Antecedentes de la técnica
La demencia es un deterioro cognitivo que causa dificultades en la vida diaria y en la vida social debido al declive crónico o la pérdida de funciones mentales normalmente desarrolladas por un trastorno estructural adquirido del cerebro. Hay varios tipos de demencia, tal como la demencia de tipo Alzheimer, demencia vascular, demencia con cuerpos de Lewy y demencia frontotemporal, pero la demencia de tipo Alzheimer, entre otras, es la más común, se dice que representa el 60 % de las causas de demencia.
Si bien se presume que la neurodegeneración debida a la acumulación de p amiloide es más probable, existen varias hipótesis sobre la causa de la demencia de tipo Alzheimer y también se sugiere la conexión con el sistema inmunitario (Bibliografía no perteneciente a patente 1 y 2). También se han creado algunos tratamientos médicos para la demencia y, en particular, la demencia de tipo Alzheimer, pero no se ha creado ningún tratamiento radical.
El virus Sendai (virus hemaglutinante de Japón (HVJ, por sus siglas en inglés)) ha llamado la atención por provocar la fusión de las células tumorales de Erich. Se ha analizado su actividad de fusión de la membrana celular (en lo sucesivo en el presente documente, denominada actividad de fusión) y también se ha estudiado el uso de HVJ como vector de transfección. Sin embargo, HVJ tiene una alta inmunogenicidad y, cuando la proteína NP se produce en gran cantidad, se sabe que induce CTL en particular y también existe la preocupación de que se inhiba la síntesis de proteínas del hospedador. Por consiguiente, se ha creado un método para producir partículas fusionadas (HVJ-liposoma) mediante la fusión de liposomas que encapsulan un gen o una proteína y HVJ inactivado por irradiación ultravioleta, lo que ha hecho posible la transfección no invasiva de células y organismos vivos (Bibliografía de patente 1, Bibliografía no perteneciente a patentes 3 y 4).
Los presentes inventores han creado un nuevo vector de transfección híbrido combinando un virus que tiene alta potencia (alta eficacia) de suministro de genes y un vector no vírico que tiene baja citotoxicidad e inmunogenicidad (baja toxicidad) y han construido un liposoma vírico fusogénico que tiene una envoltura fusogénica derivada de HVJ. En este sistema de suministro, el liposoma cargado con ADN se fusiona con HVJ inactivado con UV para formar un HVJ-liposoma (400-500 nm de diámetro), un liposoma vírico fusogénico. La ventaja del suministro mediado por fusión es que el ADN transfectado está protegido de la degradación endosómica y de la degradación lisosómica en las células aceptoras. Por ejemplo, el ADN incorporado en el HVJ-liposoma se puede suministrar de forma segura a células de mamífero (bibliografía de patente 2). Asimismo, se puede introducir de manera eficaz ARN, oligonucleótidos y fármacos en las células in vitro e in vivo. Adicionalmente, los presentes inventores han inventado un vector de transfección que encapsula un gen exógeno mediante congelación-descongelación o mezclando la envoltura de HVJ (HVJ-E, por sus siglas en inglés) con un tensioactivo como vector de transfección que tiene una envoltura vírica, estando disponible para transfectar de manera segura y estable una amplia gama de tejidos en el organismo vivo, y tener una alta actividad de transfección (Bibliografía de Patentes 3 y 4). Esto hizo posible introducir de manera eficaz una sustancia en el cerebro o los nervios centrales utilizando HVJ-E (Bibliografía de patentes 5 y 6). Adicionalmente, los inventores han descubierto que HVJ-E muestra un efecto adyuvante inmunitario encapsulando un agente quimioterapéutico tal como un agente anticanceroso en HVJ-E y transfectando la HVJ-E en células o en el organismo vivo (Bibliografía de patentes 7 y 8).
Los inventores han descubierto que la propia HVJ-E tiene el efecto activador de la inmunidad antitumoral y el efecto inductor de la muerte celular específico de las células cancerosas y es útil como agente anticanceroso (publicaciones de patentes 8 y 9) y han estado realizando un ensayo clínico dirigido por médicos para pacientes con melanoma maligno, pacientes con cáncer de próstata y pacientes con mesotelioma pleural maligno.
Listado de citas
Bibliografía de patentes
Bibliografía de Patente 1: patente de los Estados Unidos n.° 5631237
Bibliografía de Patente 2: WO2001/057204
Bibliografía de Patente 3: Patente japonesa abierta a inspección pública n.° 2002-065278
Bibliografía de Patente 4: WO2004/035779
Bibliografía de Patente 5: WO2006/011600
Bibliografía de Patente 6: WO2005/095613
Bibliografía de Patente 7: WO2004/039406
Bibliografía de Patente 8: WO2005/094878
Bibliografía de Patente 9: WO2010/032764
Bibliografía no perteneciente a patentes
Bibliografía no perteneciente a patente 1: Schenk et al., Nature. 8 de julio de 1999, 400 (6740), págs. 173-177 Bibliografía no perteneciente a patente 2: Baruch et al., Nature Medicine, febrero de 2016 vol. 22, N.° 2, págs. 135­ 137
Bibliografía no perteneciente a patente 3: Dzau et al., PNAS 1996, Vol. 93, N.° 21, págs. 11421-11425 Bibliografía no perteneciente a patente 4: Kaneda et al., Mol. Med. Today, 1999, Vol. 5, Edición 7, págs. 298-303
Sumario de la invención
Problema técnico
Un objeto de la invención es encontrar un nuevo efecto de HVJ-E y establecer su aplicación clínica.
Solución al problema
Los inventores han descubierto que la administración de HVJ-E a ratones modelo de la enfermedad de Alzheimer creada por la administración de p amiloide da lugar a una mejora significativa de la memoria a corto plazo. Adicionalmente, se ha descubierto que la aplicación combinada de un anticuerpo anti-PD-1 con HVJ-E da lugar a una mejora sinérgica del efecto.
La presente invención se ha completado basándose en los hallazgos anteriormente mencionados y se refiere a una envoltura de virus Sendai inactivado para su uso en un método para prevenir y/o tratar el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide, como se define en las reivindicaciones.
Efectos ventajosos de la invención
La presente invención proporciona un nuevo agente terapéutico para su uso en un método para tratar y/o prevenir el deterioro cognitivo que incluye la demencia de tipo Alzheimer y/o una enfermedad neurodegenerativa. El deterioro cognitivo o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide tal como p amiloide, por ejemplo, demencia de tipo Alzheimer, se pueden tratar con HVJ-E de manera más eficaz mediante una aplicación combinada con un inhibidor de puntos de control inmunitario. El efecto combinado de HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario es sinérgico y, por lo tanto, la aplicación combinada puede disminuir las dosis de los agentes en comparación con la administración única y reducir los efectos secundarios.
Breve descripción de los dibujos
[Figura 1] La Figura 1 ilustra un aparato para la prueba del laberinto en Y y un método para calcular la tasa de alternancia espontánea. En la figura, como se ilustra en el ejemplo de cálculo, si un animal se mueve en el orden ACBA-BACBAB, donde los brazos del laberinto en forma de Y se denominan A, B y C, entonces el número de alternancia espontánea es 5 de ACB, CBA, BAC, ACB, CBA y esto se divide por 8, que es el número obtenido restando 2 del número total de entradas 10, y multiplicado por 100 para obtener una tasa de alternancia espontánea de 62,5. La tasa de alternancia espontánea (%) = [5/(10-2)] x 100 = 62,5 %
[Figura 2] La Figura 2 ilustra el resultado (HVJ-E se administra por vía subcutánea) de la prueba del laberinto en Y. Figura 2A: el número de entradas totales, Figura 2B: el número de alternancia espontánea (el número de respuestas correctas), y la Figura 2C: la tasa de alternancia espontánea (la tasa de respuesta correcta). Desde la izquierda en todos los paneles, el grupo de control negativo (grupo administrado con vehículo), el grupo administrado con HVJ-E, el grupo administrado con el anticuerpo anti-PD-1, el grupo de aplicación combinada de HVJ-E anticuerpo anti-PD-1 y el grupo de control positivo (grupo administrado con donepezilo).
[Figura 3] La figura 3 ilustra el resultado (HVJ-E se administra por vía subcutánea) de la prueba pasiva (latencia de reacción). Figura 3A: día 1 (día 10 después de la administración de la sustancia de prueba), Figura 3B: día 2 (día 11 después de la administración de la sustancia de prueba). Desde la izquierda en todos los paneles, el grupo de control negativo (grupo administrado con vehículo), el grupo administrado con HVJ-E, el grupo administrado con el anticuerpo anti-PD-1, el grupo de aplicación combinada de HVJ-E anticuerpo anti-PD-1 y el grupo de control positivo (grupo administrado con donepezilo).
[Figura 4] La figura 4 ilustra el resultado de la prueba del laberinto en Y (HVJ-E se administra por vía intranasal). Figura 4A: el número de entradas totales, Figura 4B: el número de alternancia espontánea (el número de respuestas correctas), y la Figura 4C: la tasa de alternancia espontánea (la tasa de respuesta correcta). Desde la izquierda en todos los paneles, el grupo de control negativo (grupo administrado con vehículo), el grupo administrado con HVJ-E por vía intranasal, el grupo de aplicación combinada de HVJ-E (intranasal) anticuerpo anti-PD-1, el grupo de control positivo (grupo administrado con donepezilo) y el grupo de aplicación combinada de HVJ-E (subcutánea) anticuerpo anti-PD-1. En la figura 4, la operación simulada indica un grupo de operación simulada, el vehículo indica el grupo administrado con vehículo, i.n. indica administración intranasal y s.c. indica administración subcutánea.
[Figura 5] La figura 5 ilustra el resultado de la prueba del laberinto en Y (HVJ-E se administra por vía intranasal). Figura 5A: el número de entradas totales, Figura 5B: el número de alternancia espontánea (el número de respuestas correctas), y la Figura 5C: la tasa de alternancia espontánea (la tasa de respuesta correcta). Desde la izquierda en todos los paneles, el grupo de control negativo (grupo administrado con vehículo), el grupo administrado con HVJ-E por vía nasal (10 mNAU/organismo), el grupo administrado con HVJ-E por vía nasal (50 mNAU/organismo), el grupo administrado con HVJ-E por vía nasal (100 mNAU/organismo ) y el grupo de control positivo (grupo administrado con donepezilo). En la figura 5, vehículo indica el grupo administrado con vehículo.
Descripción de realizaciones
La presente invención se refiere a un medicamento para su uso en un método para prevenir y/o tratar el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide, que comprende una envoltura de virus Sendai inactivado (HVJ-E) como principio activo.
1. Medicamento que comprende envoltura de virus Sendai "virus Sendai (HVJ)"
El "virus Sendai (HVJ)" es un virus de ARN monocatenario de cadena negativa del género Respirovirus de la familia Paramyxoviridae, infecta ratones y ratas y provoca una enfermedad respiratoria. En el lado exterior de la partícula vírica, existe una envoltura, que es una estructura membranosa, y cubre el genoma del virus y las proteínas de la cápside. Las proteínas de la envoltura son componentes de la membrana responsables de la actividad de fusión celular cuando el virus se adhiere e invade una célula hospedadora y desempeñan un papel importante en la infección vírica, tal como la evasión inmunitaria.
"Envoltura de virus Sendai (HVJ-E)"
La "envoltura de virus Sendai (HVJ-E)" según la presente invención es un virus Sendai inactivante que se ha inactivado y perdió la capacidad de replicación (Kaneda et al., Hemagglutinating Virus of Japan (HVJ) Envelope Vector as a Versatile Gene Delivery System. Mol. Ther. 2002, 6, 219-226). HVJ-E no tiene la infectividad y la capacidad proliferativa en el hospedador ya que el ARN genómico vírico se ha inactivado completamente,
La proteína hemaglutinina-neuraminidasa (HN, por sus siglas en inglés) y la proteína Fusion (F), que son proteínas en la membrana de HVJ-E, mantienen la capacidad de fusión de la membrana celular incluso después de la inactivación del ARN vírico. Por lo tanto, es posible encapsular un gen o un fármaco en la envoltura de HVJ inactivado y suministrarlo a las células de interés. Asimismo, HVJ-E se puede usar para el tratamiento del cáncer solo o encapsulando un agente anticanceroso ya que tiene el efecto adyuvante de aumentar la inmunidad tumoral (mencionado anteriormente, documento WO2005/094878, documento WO2010/032764). Antes de la presente solicitud, no se sabía que HVJ-E tiene el efecto preventivo y terapéutico sobre el deterioro cognitivo y las enfermedades neurodegenerativas con la acumulación de un prionoide tal como la enfermedad de Alzheimer.
"Preparación de HVJ-E"
La HVJ-E según la presente invención se puede obtener inactivando HVJ. El HVJ que se va a utilizar puede ser de tipo silvestre o un mutante con una modificación apropiada siempre que no provoque un efecto de deterioro como medicamento. Los ejemplos de HVJ de tipo silvestre que se pueden usar incluyen ATCC (R) VR-105(TM), ATCC (R) VR-907(TM) y similares, disponibles comercialmente. Preferentemente, el virus se purifica antes de la inactivación mediante una combinación de centrifugación o ultrafiltración y una columna de intercambio iónico.
Los ejemplos del HVJ mutante incluyen HVJ-E en la que HN se ha eliminado utilizando un ARNip específico del ARNm o similar; HVJ-E modificada para expresar una proteína de fusión de una proteína HN modificada y una proteína deseada en la superficie externa de la HVJ-E conectando un polipéptido deseado al extremo C de la región particular de la proteína HN que compone la HVJ-E (véase la patente japonesa abierta al público n.° 2011-050292); otras HVJ-Es en las que se modifica una proteína de membrana, y similares.
La inactivación del virus no está particularmente limitada siempre que elimine la capacidad de replicación del virus en las células hospedadoras, preferentemente células humanas y puede llevarse a cabo mediante irradiación ultravioleta, irradiación de rayos gamma, tratamiento químico (tratamiento con agentes alquilantes), tratamiento térmico o similares, pero se prefieren la irradiación ultravioleta y la irradiación con haz gamma desde el punto de vista de que el efecto sobre las proteínas en la membrana de la envoltura es pequeño. En el caso de irradiación ultravioleta e irradiación con rayos gamma, el virus se puede inactivar irradiando una suspensión de HVJ con un rayo ultravioleta (generalmente de aproximadamente 90 a 200 milijulios/cm2) o con un rayo gamma (generalmente de aproximadamente 5 a 20 grays). Asimismo, en el caso del tratamiento con agentes alquilantes, el virus puede inactivarse añadiendo un agente alquilante tal como p propiolactona a una suspensión del HVJ e incubando la suspensión. Los métodos específicos para preparar HVJ-E se describen en detalle en Kaneda et al., 2002, documento WO01/57204 (ejemplo 8), patente japonesa abierta al público n.° 2002-065278 y documento WO03/014338 mencionados anteriormente.
"Medicamento que comprende HVJ-E"
El medicamento que comprende HVJ-E según la presente invención puede comprender un transportador y/o aditivo farmacológicamente aceptable. Los ejemplos de dicho transportador y aditivo incluyen una carga, un aglutinante, un lubricante, un disolvente, un disgregante, un agente solubilizante, un agente de suspensión, un emulsionante, un agente isotonizante, un estabilizante, un agente calmante, un antiséptico, un antioxidante, un corrector, un colorante, un tampón, un superplastificante y similares, pero no se limitan a los mismos y se pueden usar otros transportadores y/o aditivos comúnmente utilizados.
De manera específica, los ejemplos del relleno incluyen rellenos orgánicos tal como sacáridos tal como lactosa, glucosa y D-manitol, almidones y celulosa tal como celulosa cristalina; cargas inorgánicas tal como carbonato cálcico y caolín; y similares.
Los ejemplos del aglutinante incluyen almidón pregelatinizado, gelatina, goma arábiga, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, celulosa microcristalina, D-manitol, trehalosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, polivinilpirrolidona, alcohol polivinílico y similares.
Los ejemplos del lubricante incluyen ácido esteárico, sales de ácidos grasos tales como estearatos, talco, silicatos y similares.
Algunos ejemplos del disolvente incluyen agua purificada, soluciones salinas fisiológicas, soluciones de tampón fosfato y similares.
Los ejemplos del desintegrante incluyen hidroxipropilcelulosa de baja sustitución, celulosa y almidones químicamente modificados y similares.
Los ejemplos del agente solubilizante incluyen polietilenglicol, propilenglicol, trehalosa, benzoato de bencilo, etanol, carbonato de sodio, citrato de sodio, salicilato de sodio, acetato de sodio y similares.
Ejemplos del agente de suspensión o emulsionante incluyen lauril sulfato de sodio, goma arábiga, gelatina, lecitina, monoestearato de glicerilo, alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, celulosa tal como carboximetilcelulosa de sodio, polisorbato, aceite de ricino polioxietileno hidrogenado y similares.
Los ejemplos del agente isotonizante incluyen cloruro de sodio, cloruro de potasio, sacáridos, glicerina, urea y similares.
Los ejemplos de estabilizante incluyen polietilenglicol, sulfato de sodio dextrano, aminoácidos y similares.
Los ejemplos de agentes calmantes incluyen glucosa, gluconato de calcio, clorhidrato de procaína y similares.
Los ejemplos del antiséptico incluyen p-hidroxibenzoatos, clorobutanol, alcohol bencílico, alcohol fenetílico, ácido deshidroacético, ácido sórbico y similares.
Los ejemplos del antioxidante incluyen antioxidantes solubles en agua tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio y sulfito de sodio; antioxidantes liposolubles tal como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo y a-tocoferol; y agentes quelantes de metales tales como ácido cítrico, ácido etilendiaminatetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico y ácido fosfórico.
Los ejemplos del corrector incluyen edulcorantes y aromatizantes comúnmente utilizados en el campo de la medicina, y similares, y los ejemplos del colorante incluyen agentes colorantes comúnmente utilizados en el campo de la medicina.
HVJ-E se puede formular con un polímero tal como el ácido hialurónico, ácido poliláctico, ácido algínico y gelatina y/o un agente de cationización tal como gelatina cationizada (patente japonesa abierta al público n.° 2008-308.440), entre otros.
La vía de administración del medicamento según la presente invención no está particularmente limitada y la administración puede ser oral o parenteral. Los ejemplos específicos de administración parenteral incluyen inyección, administración transnasal, administración pulmonar, administración transdérmica y similares. Los ejemplos de las inyecciones incluyen inyección intravenosa, inyección intramuscular, inyección intraperitoneal, inyección subcutánea, inyección intraósea, inyección intraespinal e inyección intradérmica. El modo de administración puede seleccionarse según la edad y los síntomas del paciente.
La dosis del medicamento según la presente invención se puede determinar dependiendo del propósito de su uso y la vía de administración. Cuando se administra a seres humanos, puede seleccionarse una dosis, por ejemplo, en el intervalo de 200 mNAU a 20.000 mNAU en términos de HVJ-E por dosis. Como alternativa, puede seleccionarse una dosis, por ejemplo, en el intervalo de 3.000 a 60.000 mNAU/organismo por paciente.
El medicamento según la presente invención puede administrarse en combinación con otro agente siempre que no cause un efecto de deterioro sobre el propósito de la presente invención. Como se describe anteriormente, se puede encapsular un ácido nucleico o un agente en HVJ-E. También, en la presente invención, un agente o similar útil para el tratamiento del deterioro cognitivo o una enfermedad neurodegenerativa puede encapsularse en HVJ-E siempre que no cause un efecto de deterioro sobre el propósito de la presente invención.
"Deterioro cognitivo y/o enfermedad neurodegenerativa"
El medicamento que comprende HVJ-E es útil para el tratamiento y/o profilaxis del deterioro cognitivo con la acumulación de un prionoide y/o una enfermedad neurodegenerativa con la acumulación de un prionoide.
El "prionoide" es una proteína que se considera que causa la expansión de una o unas lesiones mediante la transmisión de una proteína liberada mal plegada a las células vecinas, y los ejemplos del prionoide incluyen p amiloide, asinucleína, huntingtina, tau fosforilada y similares. Ejemplos representativos del prionoide son "p amiloide" y "asinucleína" que se describen a continuación.
El "p amiloide" es un péptido que es un componente clave de la placa senil, que es un cambio patológico principal en la demencia de tipo Alzheimer. El p amiloide (en lo sucesivo en el presente documento, también denominado "Ap") es un péptido altamente hidrófobo que se produce cortando mediante p- y Y-secretasa a partir de la proteína precursora (APP: precursor de la proteína p amiloide) e incluye Ap i-40 que consiste en 40 aminoácidos y Api-42 que consiste en 42 aminoácidos. Api-42 es más fibrilogénica que Api-40 y se ha propuesto una hipótesis de que Ap i-42 forma agregados y a continuación Ap i-40 se agrega sobre el núcleo de los agregados de Api-42 para formar fibrillas. Sin embargo, se considera que es necesaria la modificación por otro u otros factores de riesgo (tal como apolipoproteína E y presenilina i.2 ) para la acumulación de p amiloide. Ap tiene la toxicidad sobre células nerviosas y causa necrosis y similares.
La "a-sinucleína" es una proteína que tiene funciones desconocidas que se encuentra principalmente en los tejidos neurales y consiste en 140 restos de aminoácidos codificados por el gen SNCA. La a-sinucleína se descubrió por primera vez como un componente del amiloide cuyos fragmentos se acumulan en la enfermedad de Alzheimer, pero se considera que es una causa de enfermedades neurodegenerativas, incluida la enfermedad de Parkinson.
Los ejemplos del "deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide" incluyen, pero sin limitación, demencia de tipo Alzheimer, deterioro cognitivo leve (MCI por sus siglas en inglés), angiopatía amiloidea cerebral, demencia con cuerpos de Lewy, enfermedad de Parkinson, tauopatía y enfermedad de Creutzfeldt-Jakob y similares.
En la presente invención, el término "tratamiento" significa que varios síntomas provocados por deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide mejoran mediante la administración del medicamento según la presente invención a un sujeto. Asimismo, la palabra "profilaxis" significa que se previene la aparición y el empeoramiento del deterioro cognitivo y/o enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide.
2. Combinación de HVJ-E e inhibidor de puntos de control inmunitario
Los presentes inventores han confirmado que la administración de un inhibidor de puntos de control inmunitario a ratones modelo de la enfermedad de Alzheimer da lugar a una mejora del comportamiento y también han demostrado que el efecto del mismo presenta un efecto sinérgico mediante una aplicación combinada con HVJ-E. Más específicamente, la presente invención también proporciona un medicamento para prevenir y/o tratar el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide mediante la combinación (usando una combinación de o mezclando) una envoltura de virus Sendai (HVJ-E) y un inhibidor de puntos de control inmunitario.
"Medicamento que comprende HVJ-E e inhibidor de puntos de control inmunitario en combinación"
En la presente invención, el "medicamento para prevenir y/o tratar el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide, que comprende HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario en combinación "significa un medicamento en el que HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario se combinan para administrarlos simultáneamente, por separado o secuencialmente en la profilaxis y/o el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa. En una realización, el medicamento según la presente invención se proporciona en forma de un fármaco combinado que comprende HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario juntos. Asimismo, en otra realización, el medicamento según la presente invención se proporciona como una aplicación combinada de agentes por separado que comprenden HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario y los agentes se usan simultánea o secuencialmente. Adicionalmente, en otra realización, el medicamento según la presente invención puede proporcionarse como un kit compuesto por un o unos agentes que comprenden HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario.
En la presente invención, la "aplicación combinada" de HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario significa la administración o el uso de HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario en combinación y el orden o los intervalos de administración de los mismos no están limitados. Asimismo, el "fármaco combinado" de HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario significa un medicamento formulado mediante la combinación de determinadas cantidades de HVJ-E y de un inhibidor de puntos de control inmunitario (fármaco combinado de dosis fija).
La administración (uso) combinada de HVJ-E y un inhibidor de puntos de control inmunitario permite dosis más bajas que las dosis en uso de cualquiera de los fármacos por sí solo y, por lo tanto, puede reducir el riesgo de efectos secundarios.
"Inhibidor de puntos de control inmunitario"
El "inhibidor de puntos de control inmunitario" significa inhibir el punto de control inmunitario e inhibir el efecto de sustancias y/o moléculas que suprimen el sistema de defensa de la inmunidad adquirida. El punto de control inmunitario es una molécula que suprime el sistema de defensa de la inmunidad adquirida frente a patógenos tales como las células cancerosas, bacterias y virus y ejemplos del mismo incluyen PD-1, que se expresa en la superficie de los linfocitos T efectores, PD-L1 y PD-L2, que se expresan en la superficie de las células tumorales, CTLA-4, que se expresa en la superficie de los linfocitos T activados o los linfocitos T supresores Treg, y CD80 (B7-1) y CD86 (B7-2), que se expresan en la superficie de las células dendríticas, así como B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA), KIR, CD137, LAG-3, TIM-3, TIGIT, OX40, BTLA y similares.
Las secuencias de aminoácidos de los inhibidores de puntos de control inmunitario mencionados anteriormente y las secuencias de nucleótidos de los genes que los codifican ya se conocen y se divulgan en bases de datos públicas (las secuencias de ácidos nucleicos: GenBank, DDBJ y EMBL, las secuencias de aminoácidos: SwissProt, PIR y PDB). Por ejemplo, la información del gen de la PD-1 humana (muerte celular programada 1 de Homo sapiens (PDCD1), ARNm) se divulga como número de referencia de GenBank NM 005018 y la información de la proteína del mismo (precursor de la proteína de muerte celular programada 1 [Homo sapiens] ) se divulga como número de referencia NP 005009. Los inhibidores de puntos de control inmunitario (por ejemplo, ácidos nucleicos antisentido, ARNip, ARNhc y anticuerpos) descritos a continuación pueden diseñarse y obtenerse basándose en la información divulgada utilizando una tecnología conocida en el campo. La información sobre los inhibidores de puntos de control inmunitario se muestra junta a continuación.
T l 1
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continuación
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En la presente invención, el "inhibidor de puntos de control inmunitario" no está particularmente limitado, siempre que sea una sustancia que suprima la expresión o actividad del punto de control inmunitario anteriormente mencionado.
La "sustancia que suprime la expresión del punto de control inmunitario" puede ser aquella que actúa a cualquier nivel, tal como a nivel de transcripción del gen del punto de control inmunitario, a nivel de regulación postranscripcional, a nivel de traducción en proteína y a nivel de modificación postraduccional. Por consiguiente, los ejemplos de la sustancia que suprime la expresión del punto de control inmunitario incluyen una sustancia que inhibe la transcripción del gen, una sustancia que inhibe el procesamiento del producto de transcripción inicial a ARNm, una sustancia que inhibe el transporte del ARNm al citoplasma, una sustancia que promueve la degradación del ARNm, una sustancia que inhibe la traducción del ARNm a la proteína, una sustancia que inhibe la modificación postraduccional del punto de control inmunitario y similares. Se puede utilizar preferentemente una sustancia que actúe a cualquiera de los niveles, pero se prefiere una sustancia que inhiba la traducción del ARNm a la proteína en términos de inhibición directa de la producción del punto de control inmunitario.
Los ejemplos de la sustancia que inhibe específicamente la traducción del ARNm del punto de control inmunitario a la proteína incluyen un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos complementaria o sustancialmente complementaria a la secuencia de nucleótidos del ARNm que codifica el punto de control inmunitario o una parte del mismo.
Los ejemplos de la secuencia de nucleótidos complementaria o sustancialmente complementaria a la secuencia de nucleótidos del ARNm del punto de control inmunitario incluyen
(a) secuencias de nucleótidos complementarias o sustancialmente complementarias a la secuencia de nucleótidos que codifica el punto de control inmunitario, o
(b) una secuencia de nucleótidos que se hibrida con una secuencia de cadena complementaria de la secuencia de nucleótidos que codifica el punto de control inmunitario en condiciones muy estrictas y que es complementaria o sustancialmente complementaria a una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína que tiene sustancialmente la misma actividad que el punto de control inmunitario.
La expresión "sustancialmente complementaria" se refiere a tener una complementariedad de aproximadamente un 70 % o más, preferentemente aproximadamente un 80 % o más, más preferentemente aproximadamente un 90 % o más, lo más preferentemente aproximadamente un 95 % o más entre secuencias de nucleótidos. Asimismo, la "actividad" se refiere al efecto de suprimir la actividad antitumoral de los linfocitos T frente a las células cancerosas. La expresión "sustancialmente igual" indica que la actividad del mismo es cualitativamente (por ejemplo, fisiológica o farmacológicamente) la misma. Por lo tanto, los factores cuantitativos tales como el grado de actividad (p. ej., de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 veces, preferentemente de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2 veces) o el peso molecular de la proteína pueden ser diferentes. La medición de la actividad del punto de control inmunitario puede realizarse según los métodos conocidos per se.
Ejemplos de condiciones muy estrictas incluyen hibridación a 45 °C en 6 x SSC (cloruro de sodio/citrato de sodio) y después lavar a 65 °C en 0,2 x SSC/SDS al 0,1 % una vez o más.
La "parte de una secuencia de nucleótidos complementaria o sustancialmente complementaria a la secuencia de nucleótidos del ARNm del punto de control inmunitario" no está particularmente limitada, siempre que pueda unirse específicamente al ARNm del punto de control inmunitario y no está particularmente limitada en longitud y posición, siempre que pueda inhibir la traducción de la proteína a partir del ARNm, pero comprende una parte que tiene al menos 10 nucleótidos o más, preferentemente aproximadamente 15 nucleótidos o más, y más preferentemente aproximadamente 20 nucleótidos o más complementarios o sustancialmente complementarios a la secuencia diana en términos de especificidad de secuencia.
De manera específica, el ejemplo preferido del ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos complementaria o sustancialmente complementaria a la secuencia de nucleótidos del ARNm del punto de control inmunitario o una parte del mismo incluye cualquiera de los siguientes de (i) a (iii):
(i) un ácido nucleico antisentido del ARNm del punto de control inmunitario,
(ii) ARNip del ARNm del punto de control inmunitario,
(iii) un ácido nucleico que puede generar un ARNip del ARNm del punto de control inmunitario.
(i) Ácido nucleico antisentido del ARNm del punto de control inmunitario
El ácido nucleico antisentido del ARNm del punto de control inmunitario en la presente invención (el ácido nucleico antisentido según la presente invención) es un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos complementaria o sustancialmente complementaria a la secuencia de nucleótidos del ARNm o una parte de la misma y que tiene la función de suprimir la síntesis de proteínas formando una doble cadena específica y estable y que se une al ARNm diana y tiene la función de suprimir la síntesis de proteínas. El ácido nucleico antisentido puede ser cualquiera de un ADN bicatenario, un ADN monocatenario, un a Rn bicatenario, un ARN monocatenario, un híbrido de ADN:ARN.
La región diana del ácido nucleico antisentido no está particularmente limitada en longitud siempre que pueda inhibir la traducción del punto de control inmunitario como resultado de la hibridación con el ácido nucleico antisentido y puede ser la secuencia de longitud completa del ARNm que codifica la proteína o una secuencia parcial de la misma, e incluye una secuencia corta de aproximadamente 10 nucleótidos a una secuencia larga de la secuencia total del ARNm o el producto de transcripción inicial. Se prefiere un oligonucleótido que consiste en aproximadamente 10 a aproximadamente 40 nucleótidos, y en particular de aproximadamente 15 a aproximadamente 30 nucleótidos, teniendo en cuenta las cuestiones tales como la facilidad de síntesis, antigenicidad y translocación intracelular, pero sin limitación a los mismos. De manera específica, se pueden seleccionar las secuencias tales como un bucle de horquilla 5' terminal, 6 pares de nucleótidos se repiten en el extremo 5', una región 5' terminal no traducida, el codón de iniciación de la traducción, una región codificante de proteínas, el codón de parada de la traducción de ORF, una región 3' terminal no traducida, una región palindrómica 3' terminal o un bucle en horquilla 3' terminal del punto de control inmunitario como región diana preferida del ácido nucleico antisentido, pero sin limitación particular a los mimos.
La molécula de nucleótidos que compone el ácido nucleico antisentido puede ser ADN o ARN natural, pero puede tener varios tipos de modificación química para mejorar la estabilidad (química y/o antienzimáticamente) y la actividad específica (afinidad por el ARN). Los ácidos nucleicos antisentido pueden estar en forma de antígeno. Cualquiera de los ácidos nucleicos antisentido que comprende tal modificación puede sintetizarse químicamente mediante una técnica conocida per se.
(ii) ARNip del ARNm del punto de control inmunitario
Como se usa en el presente documento, un ARN bicatenario compuesto por un oligoARN complementario al ARNm del punto de control inmunitario y una hebra complementaria del mismo, el denominado ARNip, también comprende una secuencia de nucleótidos del ARNm del punto de control inmunitario y una secuencia de nucleótidos complementaria o sustancialmente complementaria de la misma o también se define una parte de la misma para incluirse en el ácido nucleico. El ARNip puede diseñarse utilizando un programa informático disponible comercialmente (por ejemplo: RNAi Designer; Invitrogen) basado en la información de la secuencia de nucleótidos sobre el ARNm diana.
La molécula de ribonucleótidos que compone el ARNip también puede modificarse para mejorar su estabilidad y actividad específica de manera similar al ácido nucleico antisentido mencionado anteriormente. Sin embargo, la actividad del ARNi se puede perder a partir del ARNip en el que todas las moléculas de ribonucleótidos del ARN de tipo natural se reemplazan con moléculas modificadas y, por lo tanto, es necesaria la introducción de los nucleótidos modificados mínimos que permitan que funcione el complejo RISC.
El ARNip se puede preparar sintetizando respectivamente una hebra en sentido y una hebra antisentido de la secuencia diana del ARNm con un sintetizador automático de ADN/ARN, desnaturalizando de aproximadamente 90 a aproximadamente 95 °C durante aproximadamente 1 minuto en una solución tampón de hibridación apropiada, e hibridando después de aproximadamente 30 a aproximadamente 70 °C durante aproximadamente 1 a aproximadamente 8 horas. Asimismo, el ARNip también se puede preparar sintetizando ARN de horquilla corta (ARNhc) para que sea un precursor del ARNip y cortando con dicer.
(iii) Ácido nucleico capaz de generar ARNip del ARNm del punto de control inmunitario
Como se usa en el presente documento, los ácidos nucleicos diseñados de tal manera que el ARNip del ARNm del punto de control inmunitario mencionado anteriormente se produzca en el organismo también se define como incluido en el ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos complementaria o sustancialmente complementaria a la secuencia de nucleótidos o una parte del ARNm del punto de control inmunitario. Los ejemplos de dichos ácidos nucleicos incluyen vectores de expresión que se han construido para expresar el ARNhc mencionado anteriormente y similares. El ARNhc se puede preparar diseñando un oligoARN que comprende una secuencia de nucleótidos en la que una cadena en sentido y una cadena antisentido de la secuencia espaciadora de la secuencia diana en el ARNm están conectadas mediante al inserción de una secuencia espaciadora capaz de formar una estructura de bucle apropiada (p. ej., aproximadamente 15 a 25 nucleótidos) y sintetizarla con un sintetizador automático de ADN/ARN. El vector de expresión que comprende un casete de expresión de ARNhc se puede preparar produciendo un ADN bicatenario que codifica el ARNhc mencionado anteriormente mediante un método convencional e insertándolo en un vector de expresión apropiado. Como vector de expresión del ARNhc, se puede utilizar un vector que tenga un promotor Pol III tal como origen U6 o H1.
La actividad inhibidora de estos ácidos nucleicos sobre la expresión del punto de control inmunitario se puede examinar utilizando un transformante en el que se ha introducido un gen del punto de control inmunitario, sistemas de expresión génica del punto de control inmunitario in vivo e in vitro o un sistema de traducción de proteínas del punto de control inmunitario in vivo o in vitro.
La sustancia que suprime la expresión del punto de control inmunitario según la presente invención no se limita a los ácidos nucleicos anteriormente mencionados y puede ser otra sustancia tal como un compuesto de bajo peso molecular siempre que inhiba directa o indirectamente la producción del punto de control inmunitario.
En la presente invención, la "sustancia que suprime la actividad del punto de control inmunitario" puede ser cualquier sustancia siempre que suprima un efecto de control de la actividad antitumoral de la célula cancerosa de los linfocitos T.
De manera específica, la "sustancia que suprime la actividad del punto de control inmunitario" incluye un anticuerpo específico del punto de control inmunitario. El anticuerpo puede ser un anticuerpo policlonal o un anticuerpo monoclonal. Estos anticuerpos pueden producirse según el proceso de fabricación de anticuerpos o antisueros conocidos públicamente per se. El isotipo del anticuerpo no está particularmente limitado, pero ejemplos de los mismos incluyen preferentemente IgG, IgM o IgA, y de forma especialmente preferente IgG. Asimismo, el anticuerpo no está particularmente limitado siempre que tenga al menos una región determinante de la complementariedad (CDR) que reconozca y se una específicamente a un antígeno diana y puede ser una molécula de anticuerpo completa, así como un fragmento tal como Fab, Fab' o F(ab')2 , una molécula conjugada producida por ingeniería genética, tal como scFv, scFv-Fc, un minicuerpo o un diacuerpo o un derivado de los mismos que se modifica con una molécula que tiene el efecto de estabilización de proteínas, tal como polietilenglicol (PEG).
Los ejemplos preferidos del "inhibidor de puntos de control inmunitario" incluyen un anticuerpo anti-PD-1, un anticuerpo anti-PD-L1, un anticuerpo anti-PD-L2, un anticuerpo anti-CTLA-4, un anticuerpo anti-KIR, un anticuerpo anti-CD137, un anticuerpo anti-LAG-3, un anticuerpo anti-OX40, un anticuerpo anti-CD80, un anticuerpo anti-CD86, un anticuerpo anti-B7-H3, un anticuerpo anti-B7-H4, un anticuerpo anti-B7-H5, un anticuerpo anti-TIM-3, anticuerpo anti-TIGIT y un anticuerpo anti-BTLA. Entre ellos, se prefieren un anticuerpo anti-PD-1, un anticuerpo anti-PD-L1 y un anticuerpo anti-CTLA-4 y se prefiere más un anticuerpo anti-PD-1.
El "anticuerpo anti-PD-1" utilizado en la presente invención no está particularmente limitado siempre que pueda unirse a PD-1 e inhibir la función como punto de control inmunitario. Los ejemplos del anticuerpo anti-PD-1 incluyen los ya aprobados y vendidos como medicamento y los que están en creación y pueden usarse de manera adecuada. Ejemplos de dicho un "anticuerpo anti-PD-1" incluyen, pero sin limitación, Nivolumab (Opdivo (GSK/ Ono pharmaceutical)), Pembrolizumab (MK-3475 (Merck)), que es un anticuerpo IgG4 humanizado, Pidilizumab (CT-011 (CureTech)), REGN-2810/SAR-439684 (Regen-eron), PDR-001 (Novartis), AMP-514/MEDI-0680 (Amplimmune), Ts R-042 (AnaptysBio), PF-06801591 (Pfizer), JS-001 (Shanghai Junshi Biosciences), IBI-308 (Innovent Biologics) y BGB-A317 (BeiGene).
El "anticuerpo anti-PD-L1" que se utilizará en la presente invención no está particularmente limitado, siempre que pueda unirse a PD-L1 e inhibir la función como punto de control inmunitario. Los ejemplos del anticuerpo anti-PD-L1 incluyen los ya aprobados (vendidos) como medicamento y los que están en creación y pueden usarse de manera adecuada. Los ejemplos de dicho "anticuerpo anti-PD-L1" incluyen, pero sin limitación, atezolizumab (MPDL3280A/RG-7446 (Roche/Chugai Pharmaceutical Co., Ltd ), Durvalumab (MEDI4736 (AstraZeneca)), avelumab (MSB0010718C (Merck)), MED10680/AMP-514 (Medimmune), MDX-1105/BMS-936559 (BMS), INCAGN-1876 (Agenus), LY-3300054 (Eli Lilly) y CA-170 (Aurigene Discovery Technology)).
El "anticuerpo anti-CTLA-4" que se utiliza en la presente invención no está particularmente limitado siempre que pueda unirse a c TlA-4 e inhibir la función como punto de control inmunitario. Los ejemplos del anticuerpo anti-CTLA-4 incluyen los ya aprobados (vendidos) como medicamento y los que están en creación y pueden usarse de manera adecuada. Ejemplos de dicho un "anticuerpo anti-CTLA-4" incluyen, pero sin limitación, Ipilimumab (MDX-010), tremelimumab (CP675/206 (Pfizer)) y AGEN-1884 (4-Antibody).
Además de los descritos anteriormente, Lirilumab (IPH2102/BMS-986015), que es un anticuerpo contra receptor de tipo inmunoglobulina de linfocitos citolíticos (KIR), Urelumab (BMS-663513) y Pf -05082566, que son anticuerpos anti-CD137, BMS-986016, que es un anticuerpo anti-LAG-3, MEDI6469, que es un anticuerpo anti-OX40, MSB0011359C/M-7824(Merck), que es una proteína de fusión bifuncional que se dirige a PD-LA y TGF-p, están en creación como un inhibidor de puntos de control inmunitario.
Los anticuerpos descritos anteriormente pueden producirse mediante un método convencional. En este caso, el anticuerpo es preferentemente un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo completamente humano para reducir la antigenicidad xenogénica en seres humanos.
El "inhibidor de puntos de control inmunitario" según la presente invención puede comprender un transportador y/o un aditivo farmacológicamente aceptables. Los ejemplos de dicho transportador y aditivo incluyen una carga, un aglutinante, un lubricante, un disolvente, un disgregante, un agente solubilizante, un agente de suspensión, un emulsionante, un agente isotonizante, un estabilizante, un agente calmante, un antiséptico, antioxidante, un corrector, un colorante, un tampón, un superplastificante y similares, pero no se limitan a los mismos y se pueden usar otros transportadores y/o aditivos comúnmente utilizados. Los ejemplos específicos del transportador y aditivo son los descritos anteriormente.
La vía de administración del "inhibidor de puntos de control inmunitario" de la presente invención no está particularmente limitada. Se prefiere la administración parenteral. Los ejemplos específicos de administración parenteral incluyen inyección, administración transnasal, administración pulmonar, administración transdérmica y similares. Los ejemplos de las inyecciones incluyen inyección intravenosa, inyección intramuscular, inyección intraperitoneal e inyección subcutánea. El modo de administración se puede seleccionar según la edad y los síntomas del paciente.
Cuando un inhibidor de puntos de control inmunitario y HVJ-E se encuentran y proporcionan en agentes separados en el medicamento según la presente invención, las formas farmacéuticas y las vías de administración de estos agentes pueden ser diferentes o iguales. Asimismo, además, se pueden combinar una o más preparaciones diferentes.
La dosis del "inhibidor de puntos de control inmunitario" según la presente invención se puede determinar basándose en el uso previsto y la vía de administración del mismo. La dosis se ajusta para proporcionar una respuesta óptima (por ejemplo, respuesta terapéutica) deseada. Debido a que el principio activo es un anticuerpo, la dosis está en el intervalo de aproximadamente 0,0001 a 100 mg/kg y normalmente de 0,01 a 5 mg/kg de peso corporal del paciente. Por ejemplo, la dosis es de aproximadamente 0,3 mg/kg de peso corporal, 1 mg/kg de peso corporal, 3 mg/kg de peso corporal, 5 mg/kg de peso corporal o 10 mg/kg de peso corporal, o en el intervalo de 1 a 10 mg/kg. Las pautas de administración típicas son, por ejemplo, administración una vez a la semana, administración una vez cada 2 semanas, administración una vez cada 3 semanas, administración una vez cada 4 semanas, administración una vez al mes, una vez en una administración de 3 meses, o una vez en una administración de 3 a 6 meses. Por ejemplo, en el caso de la administración por infusión IV, la dosis es de 1 mg/kg de peso corporal o 3 mg/kg de peso corporal. La frecuencia de la dosis se puede determinar en función de los síntomas. El inhibidor puede administrarse en un solo bolo o dividirse en varias dosis para ganar tiempo. Por ejemplo, puede administrarse 6 veces cada 4 semanas y después cada 3 semanas, o puede administrarse cada 3 semanas, o puede administrarse una vez a 3 mg/kg de peso corporal y después 1 mg/kg de peso corporal cada 3 semanas.
Cuando HVJ-E y el inhibidor de puntos de control inmunitario según la presente invención se administran en combinación, el orden de administración no está limitado y HVJ-E puede administrarse después de la administración del inhibidor de puntos de control inmunitario, o ambos pueden administrarse simultáneamente, o el inhibidor de puntos de control inmunitario puede administrarse después de la administración de HVJ-E. Preferentemente, el inhibidor de puntos de control inmunitario se administra después de la administración de HVJ-E.
Cuando HVJ-E y el inhibidor de puntos de control inmunitario se administran secuencialmente, el intervalo de administración de HVJ-E y el inhibidor de puntos de control inmunitario no está particularmente limitado y puede establecerse de modo que se obtenga el efecto combinatorio deseado, teniendo en cuenta la vía de administración, la forma farmacéutica, la dosis, la concentración residual y similares. Por ejemplo, el intervalo de administración es de 0 horas a 7 días, preferentemente de 0 horas a 3 días, más preferentemente de 0 a 24 horas, y más preferentemente de 0 horas a 12 horas. Se puede determinar el intervalo de administración, por ejemplo, basándose en el resultado del análisis de la concentración en sangre del agente o de un metabolito del mismo en el paciente por un método conocido.
Ejemplos
En lo sucesivo en el presente documento, la presente invención se describirá en detalle con referencia a los ejemplos, pero la presente invención no se limita a estos ejemplos.
Ejemplo 1: Mejora del efecto de la administración de agente único de HVJ-E o anticuerpo anti-PD-1 y la administración combinada de los mismos sobre la discapacidad de aprendizaje en ratones modelo de administración única de p amiloide
1. Material y método
Sustancia de prueba:
(1) HVJ-E (número de lote: 140523, GenomIdea, Inc.)
(2) LEAF (TM) anti-CD279 de ratón purificado (anticuerpo anti-PD-1, número de lote: B203991, BioLegend Inc.) Sustancia de control positivo
Comprimido de 5 mg de Aricept (R) (hidrocloruro de donepezilo, número de lote: 61A53K, Eisai Co., Ltd.) Vehículo:
(1) Metolosa (R) SM -100 (metilcelulosa (en lo sucesivo en el presente documento denominada MC), número de lote 5065340, Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.)
(2) Agua para inyección (número de lote: 5C74N, Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.)
Solución de trehalosa al 5 % (número de lote: 160523, GenomIdea, Inc.)
(3) Sal tamponada con fosfato (número de lote: 1259290, DS Pharma Biomedical Co., Ltd.)
Sustancia para la preparación del modelo:
Proteína p amiloide (25-35) (p amiloide, número de lote: AW14089, PolyPeptide Laboratories)
Vehículo para sustancia para preparación de modelos:
Agua para inyección (número de lote: K5F71, Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.)
Muestra de administración:
Preparación de vehículo (MC al 0,5 %)
Se pesa una cantidad necesaria de MC (balanza electrónica: se utiliza XP205DR o PB3002-S/FACT, Mettler Toledo International Inc.) y después se agita y se prepara para estar a una concentración de 0,5 % p/v con agua para inyección. La solución de MC al 0,5 % preparada se mantiene refrigerada (temperatura de control: de 2,0 a 8,0 °C) y se utiliza en los 7 días posteriores a la preparación.
Preparación de vehículo (PBS)
Los comprimidos de sal tamponada con fosfato se disuelven con 100 ml por comprimido de agua para inyección y se esterilizan por filtración con un filtro (MILLIPORE) con un tamaño de poro de 0,22 pm.
Preparación de la sustancia de prueba (HVJ-E)
Una cantidad necesaria de sustancias de prueba se lleva a temperatura ambiente y las tapas de aluminio se retiran completamente de los viales dejando solamente tapones de goma. Una jeringa desechable de 1 ml (Terumo Corporation) hecha de polipropileno con una aguja (Terumo Corporation) se llena con 1 ml de agua para inyección. El exterior del tapón de goma se limpia con algodón con etanol, después se perfora el tapón de goma con la aguja anteriormente mencionada unida a la jeringa desechable de polipropileno de 1 ml, y se añade el 1 ml por vial de agua para inyección de manera que descienda a lo largo de la pared.
El vial se agita en círculo mientras se evita que se formen burbujas en el líquido y se adhiere el líquido al tapón de goma para disolver completamente la sustancia y producir una solución blanca homogénea. La concentración de HVJ-E en esta preparación es de 10.000 mNAU/ml (que contiene trehalosa al 5 %). Se quita el tapón de goma y se transfiere todo el contenido a un tubo de polipropileno utilizando una micropipeta evitando que se formen burbujas en el líquido. El tubo en el que se ha transferido la solución se coloca inmediatamente en hielo y se diluye con una solución acuosa de trehalosa al 5 % para preparar una solución de dosificación a una concentración predeterminada (2.000 mNAU/ml). Se almacena en hielo después de la preparación y se vuelve a poner a temperatura ambiente justo antes de la administración. Preparación de la sustancia de prueba (anticuerpo anti-PD-1)
El anticuerpo (1 vial: 1 mg/ml) se usa tal cual. Se almacena en hielo hasta la administración y se vuelve a poner a temperatura ambiente justo antes de la administración.
Preparación de la sustancia de control positivo
Se prepara en función de una sal del mismo (factor de conversión: 1,10).
La cantidad necesaria de comprimidos de donepezilo se coloca en un mortero de ágata y se muele lo suficiente y se añade gradualmente MC al 0,5 % hasta una concentración predeterminada.
Preparación de sustancia para generación de modelo
El p amiloide se disuelve a 2 mM con agua para inyección y la mezcla se incuba a 37 °C durante 4 días para preparar una solución de p amiloide. La operación se realiza en una mesa limpia y los instrumentos y recipientes a utilizar son aquellos que se han esterilizado.
Frecuencia de preparación
La MC al 0,5 % se prepara una o más veces por semana, la sustancia para la generación del modelo se prepara una vez 4 días antes de la administración, y el vehículo (PBS), la sustancia de ensayo y la sustancia de control positivo se preparan siempre que se necesitan.
Sistema de prueba
Especies y cepas animales
Ratón (SPF): Slc: ddY
Macho, 5 semanas de edad, 50 animales
Intervalo de pesos corporales un día después de la adquisición (23 a 28 g)
Fuente: Japan SLC, Inc.
Inspección de cuarentena y aclimatación
Los animales adquiridos se ponen en cuarentena durante un período de 5 días y se aclimatan durante los siguientes 4 días. Durante este periodo, se mide el peso corporal (una balanza electrónica: se utiliza una de PB3002, PG2002-S, PB3002-S/FACT y MS1602S/02, Mettler Toledo International Inc.) 3 veces y las condiciones generales se examinan una vez al día como inspección de la cuarentena y la aclimatación. Los animales que se confirme que no presentan cambios en el peso corporal y que no presentan anomalías en las condiciones generales se asignan a los grupos. Los animales que presentan cambios en el peso corporal y anomalías en las condiciones generales se sacrifican con ácido carbónico gaseoso.
Asignación de grupo
La asignación de grupo se realiza después de la estratificación basada en el peso corporal utilizando un sistema informático (IBUKI, Nihon Bioresearch Inc.) de manera que los pesos corporales promedio de los grupos sean casi idénticos mediante muestreo aleatorio. El exceso de animales después de la asignación de grupo se sacrifica utilizando ácido carbónico gaseoso el día de la asignación de grupo.
Identificación de animales individuales
Los animales se identifican mediante una combinación de marcas en la cola con una tinta a base de aceite y la aplicación de un tinte en una extremidad el día de la adquisición. Después de la asignación de grupo, los animales se identifican marcando sus colas con los números de los animales con una tinta a base de aceite del mismo color que las etiquetas de las jaulas (excepto el grupo de operación simulada, que está marcado con tinta negra). Las jaulas están etiquetadas con etiquetas en las que se escriben los números de prueba, la fecha de adquisición y los números de animales para la inspección de cuarentena y aclimatación durante el período de inspección de cuarentena y aclimatación y se etiquetan con etiquetas de diferentes colores entre los grupos en las que se escriben los números de prueba, los nombres de los grupos, las dosis y los números de los animales después de la asignación de grupo.
Condiciones ambientales y mantenimiento de los animales
Los animales se mantienen en una sala de cría (sala 9 en el edificio E, excepto durante el período de inspección de cuarentena, en el que los animales se mantienen en la habitación 10 en el edificio E) mantenidos en las siguientes condiciones: temperatura controlada: de 20,0 a 26,0 °C, humedad controlada: del 40,0 al 70,0 %, luz y oscuridad durante 12 horas cada una (iluminación: 6:00 de la mañana a 6:00 de la tarde) y el número de ventilación: 12 veces/h (con aire fresco a través de un filtro). Se mantienen hasta 10 animales por jaula o hasta 5 animales por jaula después de la asignación de grupo en grupos en jaulas de plástico (ancho: 310 x largo: 360 x alto: 175 mm) en la que se coloca una lámina de suelo esterilizada en autoclave. Los comederos se cambian una o más veces en 2 semanas y las botellas de suministro de agua y las jaulas de plástico se cambian dos o más veces por semana. La limpieza y esterilización de la sala de cría de animales se realizan todos los días.
Pienso
Pienso sólido (MF, Oriental Yeast Co., Ltd.) que no contiene proteína de leche en los 5 meses posteriores a que la producción se colocara en comederos y los animales se alimentaran libremente. Se confirma que las concentraciones de contaminantes, el número de bacterias y el contenido de ingredientes nutricionales en los piensos cumplen las normas de las instalaciones de prueba para todos los lotes de piensos utilizados.
Organización para los análisis: Eurofins Scientific Analytics (contaminantes) y Oriental Yeast Co., Ltd. (la cantidad de bacterias e ingredientes nutricionales)
Vía de administración
Vehículo (MC al 0,5 %) y sustancia de control positivo: oral
La administración oral forzada se realiza utilizando una jeringa desechable (Terumo Corporation) hecha de polipropileno con una sonda oral desechable (Fuchigami Kikai Co., Ltd.) para ratones. En el momento de la operación de administración, cada muestra de administración se mezcla por inversión para cada animal y se aspira en una jeringa.
Cantidad de dosificación de líquido: calculada como 10 ml/kg a partir del peso corporal el día de la administración Frecuencia de dosis: total 11 veces de una vez al día Hora de administración: entre las 9:00 de la mañana y las 12:00 del mediodía, pero la administración el día de la inyección de p amiloide y el día del examen es la siguiente. El día de la inyección de p amiloide, la administración se realiza después de la inyección de p amiloide (después de la emergencia).
El día del examen, la administración se realiza aproximadamente 1 hora (+ 10 minutos) antes de la medición. Razón de la selección: es un método habitual utilizado en las instalaciones de prueba.
Vehículo (solución de trehalosa al 5 %) y HVJ-E: Subcutánea (área dorsocervical)
La administración subcutánea en el área dorsocervical se realiza utilizando una jeringa desechable (Terumo Corporation) hecha de polipropileno con una aguja desechable (Terumo Corporation). En el momento de la operación de administración, cada muestra de administración se mezcla por inversión para cada animal y se aspira en una jeringa.
Cantidad de dosificación de líquido: calculada como 5 ml/kg a partir del peso corporal el día de la administración Frecuencia de dosis: total 6 veces de una vez en 2 días.
Hora de administración: entre las 9:00 de la mañana y las 12:00 del mediodía, pero la administración el día de la inyección de p amiloide y el día del examen es la siguiente.
El día de la inyección de p amiloide, la administración se realiza después de la inyección de p amiloide (después de la emergencia).
El día del examen, la administración se realiza aproximadamente 1 hora (+ 10 minutos) antes de la medición.
Vehículo (PBS) y anticuerpo anti-PD-1: intraperitoneal
La administración intraperitoneal se realiza utilizando una jeringa desechable (Terumo Corporation) hecha de polipropileno con una aguja desechable (Terumo Corporation). En el momento de la operación de administración, cada muestra de administración se mezcla por inversión para cada animal y se aspira en una jeringa.
Cantidad de dosificación de líquido: 0,25 ml por animal.
Frecuencia de dosis: Total dos veces de una vez el día 1 de administración y una vez el día 4 de administración. Hora de administración: entre las 9:00 de la mañana y las 12:00 del mediodía Razón de la selección: Es un método habitual utilizado en las instalaciones de prueba.
[Tabla 2]
Configuración de grupo y dosis
Número de Nombre del grupo Dosis Vía de administración animales 1. Control de vehículo* Oral 8
2. HVJ-E** 10.000 mNAU/kg Subcutánea
intraperitoneal 8 3. Anticuerpo anti-PD-1*** 250 pg/organismo Intraperitoneal
subcutánea 8 4. HVJ-E anticuerpo anti- 10.000 mNAU/kg 250 Subcutánea
PD-1 pg/organismo intraperitoneal 8 5. Donepezilo 0,5 mg/kg Oral 8 *MC al 0,5 % se administra por vía oral.
** HVJ-E se administra por vía subcutánea y el vehículo (PBS) se administra por vía intraperitoneal.
*** El anticuerpo anti-PD-1 se administra por vía intraperitoneal y el vehículo (solución de trehalosa al 5 %) se administra por vía subcutánea en el área dorsocervical.
Razón para el establecimiento de dosis
Las dosis de HVJ-E y del anticuerpo anti-PD-1 se establecieron en dosis que se esperaba que proporcionaran suficientes efectos farmacológicos. La dosis de donepezilo se estableció basándose en los datos de antecedentes en las instalaciones de prueba a una dosis que se esperaba que proporcionara un efecto farmacológico suficiente.
Elementos de observación y examen
Programa experimental
El día de inicio de la administración de la muestra de administración se denomina día 1 de administración y el p amiloide se inyecta el día 3 de administración. Posteriormente, la prueba del laberinto en Y se realiza el día 9 de la administración, la prueba de evitación pasiva se realiza el día 10 al 11 de la administración, el cerebro se extirpa después de la prueba de evitación pasiva (prueba de retención).
Condiciones generales
Las condiciones generales se observan antes de la administración una vez al día.
Cuando un ratón está muriendo (un estado en el que disminuye el propio movimiento, la respiración y/o el pulso son anormales, la temperatura corporal se reduce, el animal está acostado de lado, en decúbito prono, o similares y disminuye la respuesta a la estimulación externa), el estado se determina como un punto final humanitario y el animal se sacrifica usando ácido carbónico gaseoso.
Medición del peso corporal
Se mide el peso corporal (una balanza electrónica: se utiliza una de PB3002, PG2002-S, PB3002-S/FACT y MS1602S/02, Mettler Toledo International Inc.) todos los días de administración. El peso corporal se mide antes de la administración.
Inyección de p amiloide
Se administra 40 mg/kg de pentobarbital sódico (Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.), por vía intraperitoneal (cantidad de dosificación de líquido: 10 ml/kg) a los animales para anestesiarlos. Después de la anestesia, se administra clorhidrato de levobupivacaína (Popscaína (R), inyección al 0,25 %, Maruishi Pharmaceutical Co., Ltd.) por vía subcutánea (0,1 ml) en el cuero cabelludo. Se eliminan los pelos parietales del animal y se fija la cabeza con un aparato de estereotaxis cerebral. El cuero cabelludo se abre después de la esterilización con una tintura de yodo para exponer el cráneo y el tejido conectivo del cráneo se extrae con un hisopo de algodón. Después, se seca el cráneo con un soplador para encontrar la posición del bregma más fácilmente. Usando un taladro dental, se efectúa un orificio para insertar un tubo de acero inoxidable en el cráneo en la posición de 1 mm de lado (el lado derecho) y 0,2 mm posterior al bregma. El tubo de acero inoxidable se conecta a un tubo de silicona que tiene un diámetro exterior de 0,5 mm y se inserta una microjeringa perpendicularmente a una profundidad de 2,5 mm desde la superficie del hueso. Se inyectan 3 j l de una solución de p amiloide (6 jmol/3 j l ) en el ventrículo cerebral con una bomba de microjeringa durante 3 minutos. Después de la inyección, el tubo de acero inoxidable se deja insertado durante 3 minutos y después se saca lentamente. Posteriormente, se quita el tubo de acero inoxidable, el agujero craneal se tapa con un astringente de médula ósea no absorbible (Nestop (R), Alfresa Pharma Corporation) y se sutura el cuero cabelludo. El animal se retira del aparato de estereotaxis cerebral y se devuelve a la jaula de animales. El tubo de acero inoxidable y el tubo de silicona se utilizan después de la esterilización.
Prueba de laberinto en Y (prueba de alternancia espontánea)
Aparato (Figura 1).
Para la prueba, se utilizó un laberinto de plástico en forma de Y (UNICOM) que tiene 3 brazos divergentes cada uno en un ángulo de 120 ° y que tiene una longitud de 39,5 cm, en el que el ancho del suelo es de 4,5 cm y la altura de la pared es de 12 cm. Antes de la medición, la iluminancia del suelo del aparato se ajusta de 10 a 40 Lux.
Métodos de medición
La prueba se realiza aproximadamente 1 hora después de la administración. Se coloca un animal en uno de los brazos del laberinto en forma de Y y se le permite explorar el laberinto libremente durante 8 minutos. Se registra el orden de los brazos en los que se mueve el animal dentro del tiempo de medición y el número de veces que se mueve a otro brazo se cuenta como el número total de entradas. A continuación, en este registro se examinan las combinaciones de 3 brazos diferentes seleccionados consecutivamente por el animal y el número de combinaciones se expresa como la alternancia espontánea. Adicionalmente, la tasa de alternancia espontánea se calcula utilizando la siguiente ecuación.
Tasa de alternancia espontánea (%) = [el número de alternancia espontánea/(el número total de entradas - 2)] x 100
Prueba de evitación pasiva
Para la prueba, se utiliza una etapa a través del aparato de respuesta de evitación pasiva (con compartimentos oscuros y claros: un producto hecho en la compañía, SHOCK SCRAMBLER: UNICOM) que tiene un compartimento de luz (ancho: 100 x largo: 100 x alto: 300 mm) y un compartimento oscuro (W: 240 x largo: 245 x alto: 300 mm) que proporcionan estimulación eléctrica desde la rejilla del suelo, organizada en partes por una puerta central de guillotina. Se coloca un animal en el compartimento de la luz y la puerta de guillotina se abre tranquilamente 10 segundos después. Se mide el tiempo antes de que el animal entre en el compartimento oscuro (latencia de respuesta).
En la prueba de adquisición (día 1), la puerta de guillotina se cierra al mismo tiempo que el animal entra en el compartimento oscuro y se proporciona la estimulación eléctrica (0,2 mA, 2 segundos, un método desordenado). Se registra la presencia o ausencia de llanto del animal ante la estimulación eléctrica. La latencia de respuesta es de hasta 300 segundos.
La prueba de retención (día 2) finaliza cuando el animal entra en el compartimento oscuro o se mantiene en el compartimento claro durante 300 segundos.
Los animales que terminaron la prueba de retención se sacrifican con ácido carbónico gaseoso.
Análisis de resultados
Para cada categoría de evaluación, el promedio y el error estándar de cada grupo se calculan y analizan de la siguiente manera.
Análisis estadístico
La prueba de significación se realiza mediante pruebas de comparación entre 2 grupos en el grupo de control de vehículo y el grupo con HVJ-E, el grupo de control del vehículo y el grupo con anticuerpo anti-PD-1, el grupo de control del vehículo y el grupo con HVJ-E anticuerpo anti-PD-1, el grupo con HVJ-E y el grupo con HVJ-E anticuerpo anti-PD-1, el grupo con anticuerpo anti-PD-1 y el grupo con HVJ-E anticuerpo anti-PD-1 y el grupo de control del vehículo y el grupo con donepezilo.
Para las pruebas de comparación entre 2 grupos, la homocedasticidad se prueba mediante la prueba F y la prueba t de Student cuando es homocedasticidad y la prueba de Aspin-Welch cuando es heteroscedasticidad.
El nivel de significación establece en 5 % y los resultados se describen como menos del 5 % (p <0,05) y menos del 1 % (p <0,01). La prueba de significación se realiza utilizando un programa de estadística disponible comercialmente (SAS system, Sa S Institute Japan Ltd.).
Resultados
(1) Prueba de laberinto en Y (el número de alternancia espontánea, tasa de alternancia espontánea)
El resultado de la prueba del laberinto en Y se muestra en la figura 2. El grupo de aplicación combinada con HVJ-E anticuerpo anti-PD-1 mostró una tasa de alteración espontánea significativamente mayor (P <0,01) en comparación con el grupo de control de vehículo y el valor numérico fue equivalente al grupo con donepezilo. Asimismo, la tasa de alternancia espontánea del grupo de aplicación combinada de HVJ-E anticuerpo anti-PD-1 mostró una tasa de alternancia espontánea significativamente mayor en comparación con la administración única (grupo con HVJ-E o grupo con anticuerpo anti-PD-1) y se descubrió interacción positiva en interacción aditiva e interacción multiplicativa, indicando efecto sinérgico.
(2) Prueba de evitación pasiva (latencia de respuesta)
El resultado de la prueba pasiva (latencia de respuesta) se muestra en la figura 3. El grupo con anticuerpo anti-PD-1 y el grupo de aplicación combinada con HVJ-E anticuerpo anti-PD-1 mostraron un efecto significativamente mayor en comparación con el grupo de control de vehículo, aunque fueron ligeramente inferiores al grupo con donepezilo. Asimismo, la latencia de respuesta del grupo de aplicación combinada HVJ-E anticuerpo anti-PD-1 fue significativamente diferente de la del grupo de administración única con HVJ-E.
Análisis
Schenk et al. han informado que la inmunización de ratones modelo de Alzheimer hecha por sobreproducción de Ap con Ap1-42 dio como resultado una mejora patológica (Nature 400: 173-, 1999, enumerada anteriormente) y una mejora del comportamiento (Nature 408:979- and 982-, 2000). Adicionalmente, han informado de que la administración periférica de un anticuerpo anti-Ap dio como resultado una mejora patológica (Nature Med 6: 916-, 2000). Asimismo, Baruch et al. han informado de que la administración de un anticuerpo PD-1 a ratones modelo de Alzheimer dio como resultado una mejora patológica (Nature Med 22: 135-, 2016, enumerado anteriormente).
Basándose en los resultados de este ejemplo y el hecho descrito anteriormente, se considera que tanto HVJ-E como el anticuerpo anti-PD-1 (inhibidor de puntos de control inmunitario) eliminan Ap, que es una sustancia extraña mediante la activación de la inmunidad natural y la inmunidad adquirida y mejora las afecciones patológicas de la enfermedad de Alzheimer. Sin embargo, la aplicación combinada de HVJ-E y el anticuerpo anti-PD-1 tuvo un efecto significativamente mayor en comparación con la administración única, y el hecho sugiere la posibilidad de que los mecanismos de acción de ambos sean diferentes. Asimismo, HVJ-E mostró un efecto que mejora en gran medida incluso en una sola administración, y el hecho sugiere que HVJ-E contribuye a la mejora de las afecciones patológicas por una vía distinta a la activación de la inmunidad adquirida sola. Mediante este experimento, se demostró que el tratamiento más eficaz del deterioro cognitivo y las enfermedades neurodegenerativas con acumulación de un prionoide tal como Ap, incluida la demencia de tipo Alzheimer, puede ser posible mediante el uso de HVJ-E sola o en combinación con un inhibidor de puntos de control inmunitario.
Ejemplo 2: Mejora del efecto de la administración única y combinada de HVJ-E y anticuerpo anti-PD-1 sobre la discapacidad de aprendizaje en ratones modelo de administración única de p amiloide (comparación entre la administración subcutánea y la administración intranasal de HVJ-E)
La prueba del laberinto en Y se realizó con el mismo método descrito en el ejemplo 1, excepto que se creó un grupo de administración intranasal de HVJ-E además del grupo de administración subcutánea de HVJ-E. La vía de administración y la configuración del grupo se muestran a continuación.
Vía de administración
Vehículo (MC al 0,5 %) y sustancia de control positivo: oral El mismo procedimiento descrito en el ejemplo 1 Vehículo (solución de trehalosa al 5 %) y HVJ-E: intranasal o subcutánea
La administración intranasal se realiza mediante la administración en una cavidad nasal usando una micropipeta (Eppendorf AG). La administración subcutánea se realiza utilizando una jeringa desechable (Terumo Corporation) hecha de polipropileno con una aguja desechable (Terumo Corporation). En el momento de la operación de administración, cada muestra de administración se mezcla para cada animal y se aspira en una jeringa.
La administración intranasal se realiza en las siguientes condiciones.
Cantidad de dosificación de líquido: la administración se realiza en ambas cavidades nasales (10 pl/nariz) con una cantidad líquida de 5 pl por cavidad de un animal.
Frecuencia de dosis: total 9 veces de una vez al día
La administración subcutánea se realiza en las siguientes condiciones.
Cantidad de dosificación de líquido: calculada como 5 ml/kg a partir del peso corporal el día de la administración Frecuencia de dosis: total 6 veces de una vez en 2 días.
El horario de la administración intranasal y subcutánea es entre las 9:00 de la mañana y las 12:00 del mediodía, pero la administración el día de la inyección de p amiloide y el día del examen se realiza de la siguiente manera.
El día de la inyección de p amiloide, la administración se realiza después de la inyección de p amiloide (después de la emergencia).
El día del examen, la administración se realiza aproximadamente 1 hora (+ 10 minutos) antes de la medición.
Vehículo (PBS) y anticuerpo anti-PD-1: intraperitoneal
El mismo procedimiento descrito en el ejemplo 1
[Tabla 3]
Configuración de grupo y dosis
Nombre del grupo Dosis Vía de administración Número de animales 1. Operación simulada - Intranasal intraperitoneal 8 (continuación)
Nombre del grupo Dosis Vía de administración Número de animales 2. Control de vehículo - Intranasal intraperitoneal 8 3. HVJ-E*** 100 mNAU/organismo Intranasal intraperitoneal 8
HVJ-E**** anticuerpo anti- 100 mNAU/organismo 250
4. PD-1 pg/organismo Intranasal intraperitoneal 8
5. Donepezilo 0,5 mg/kg Oral 8
HVJ-E***** anticuerpo anti- 10.000 mNAU/kg 250
6. 1 pg/organismo Subcutánea intra PD- peritoneal 8 * El vehículo (solución de trehalosa al 5 %) se administra por vía intranasal y el vehículo (PBS) se administra por vía intraperitoneal.
** MC al 0.5 % se administra por vía oral.
*** HVJ-E se administra por vía intranasal y el vehículo (PBS) se administra por vía intraperitoneal.
**** h v J-E se administra por vía intranasal y el anticuerpo anti-PD-1 se administra por vía intraperitoneal.
***** h v j -E se administra por vía subcutánea y el anticuerpo anti-PD-1 se administra por vía intraperitoneal._______
Resultados
Prueba de laberinto en Y (el número de alternancia espontánea, tasa de alternancia espontánea)
El resultado de la prueba del laberinto en Y se muestra en la figura 4. El grupo de administración intranasal de HVJ-E mostró un número significativamente mayor de alternancia espontánea (P <0,05) y una tasa de alternancia espontánea (P <0,01) en comparación con el grupo de control de vehículo y el valor numérico fue equivalente al grupo con donepezilo. Al mismo tiempo, en el grupo de aplicación combinada con el anticuerpo anti-PD-1, el grupo de administración de HVJ-E (administración intranasal) anticuerpo anti-PD-1 no fue significativamente diferente del grupo de control de vehículo, pero el grupo de administración de HVJ-E (administración subcutánea) anticuerpo anti-PD-1 tuvo una tasa de alternancia espontánea significativamente mayor (P <0,01) en comparación con el grupo de control de vehículo.
Análisis
En los experimentos descritos en este ejemplo, se confirmó que la discapacidad de aprendizaje de los ratones mejoró notablemente en el grupo de administración intranasal de h Vj -E (el grupo al que no se administró el anticuerpo anti-PD-1) en comparación con el grupo de administración de vehículo. Asimismo, en los experimentos descritos en este ejemplo, se confirmó que el efecto de la aplicación combinada de HVJ-E y el anticuerpo anti-PD-1 fue diferente entre la administración intranasal y la administración subcutánea. Se considera que HVJ-E atrae células NK, linfocitos T CD4+ y linfocitos T CD8+ a la lesión tumoral mediante la inducción de la producción de quimiocinas a partir de las células tumorales, células dendríticas y macrófagos e induce la transformación dominante Th1 para aumentar el efecto antitumoral de las células NK y los linfocitos T efectores (Cancer Res. 2007). Asimismo, también se ha informado que HVJ-E actúa también sobre neutrófilos e induce la transformación dominante N1 para aumentar el efecto antitumoral (Chang CY, et al., Oncotarget. 5 de julio de 2016; 7 (27): 42195-42207). Se considera que PD-1 se expresa principalmente en linfocitos tal como linfocitos T y linfocitos B, así como en células de médula ósea y macrófagos (Yuan B, et al., Immunol Lett. noviembre de 2016; 179: 114-121), y también se considera que HVJ-E actúa sobre varios tipos de células inmunitarias como se describe anteriormente. Se considera que la inmunidad de la mucosa y la inmunidad sistémica se activan simultáneamente mediante la administración intranasal de HVJ-E y HVJ-liposoma (Yasuoka E, et al., J Mol Med (Berl). marzo de 2007; 85 (3): 283-92, Sakaue G, et al., J Immunol. 1 de enero de 2003; 170 (1) 495-502). Parece que la diferencia entre la administración intranasal y la subcutánea está relacionada con este mecanismo de acción de Hv J-E. En cualquier caso, se espera que HVJ-E sea capaz de tratar de manera más eficaz el deterioro cognitivo y las enfermedades neurodegenerativas con acumulación de un prionoide tal como Ap, incluida la demencia de tipo Alzheimer mediante la optimización de la formulación y la vía de administración.
Ejemplo 3: Mejora del efecto de la administración intranasal única de HVJ-E sobre la discapacidad de aprendizaje en ratones modelo de administración única de p amiloide (prueba de dosis-respuesta)
En los ejemplos 1 y 2, la administración única y combinada de HVJ-E y un anticuerpo anti-PD-1 a animales en los que se ha inducido una discapacidad de aprendizaje por la administración intraventricular única de p amiloide mostró un efecto de mejora mayor en la prueba del laberinto en Y (deterioro de la memoria a corto plazo) que la administración única intranasal de Hv J-E. En este ejemplo, para confirmar la respuesta a la dosis de la administración intranasal única de HVJ-E, el efecto de mejora de la administración intranasal única de HVJ-E a diversas concentraciones sobre la discapacidad de aprendizaje se evaluó en la prueba del laberinto en Y utilizando ratones de administración intraventricular única de p amiloide, que es un modelo de la enfermedad de Alzheimer.
La prueba del laberinto en Y se realizó con el mismo método descrito en el ejemplo 1, excepto que se cambió la dosis de HVJ-E. La vía de administración y la configuración del grupo se muestran a continuación.
Vía de administración
Sustancia de control positivo: oral
El mismo procedimiento descrito en el ejemplo 1
Vehículo (solución de trehalosa al 5 %) y HVJ-E: intranasal
La administración intranasal se realiza mediante la administración en una cavidad nasal usando una micropipeta (Eppendorf AG). La administración subcutánea se realiza utilizando una jeringa desechable (Terumo Corporation) hecha de polipropileno con una aguja desechable (Terumo Corporation) como en el ejemplo 1. En el momento de la operación de administración, cada muestra de administración se mezcla para cada animal y se aspira en una jeringa. La administración intranasal se realiza en las siguientes condiciones.
Cantidad de dosificación de líquido: la administración se realiza en ambas cavidades nasales (10 pl/nariz) con una cantidad líquida de 5 pl por cavidad de un animal.
Frecuencia de dosis: total 9 veces de una vez al día
El horario de administración es entre las 9:00 de la mañana y las 12:00 del mediodía, pero la administración el día de la inyección de p amiloide y el día del examen se realiza de la siguiente manera.
El día de la inyección de p amiloide, la administración se realiza después de la inyección de p amiloide (después de la emergencia).
El día del examen, la administración se realiza aproximadamente 1 hora (+ 10 minutos) antes de la medición.
[Tabla 4]
Configuración de grupo y dosis________________
Nombre del grupo Dosis Vía de administración Número de animales 1. Control de vehículo* Intranasal 8
2. HVJ-E 10
mNAU/organismo Intranasal 8
3. HVJ-E 50
mNAU/organismo Intranasal 8
4. HVJ-E 100
mNAU/organismo Intranasal 8
5. Donepezilo 0,5 mg/kg Oral 8
* El vehículo (solución de trehalosa al 5 %) se administra por vía intranasal.
Resultados
Prueba de laberinto en Y (el número de alternancia espontánea, tasa de alternancia espontánea)
El resultado de la prueba del laberinto en Y se muestra en la figura 5. De manera similar al resultado del ejemplo 2, el grupo de administración intranasal de HVJ-E (100 mNAU/organismo) mostró una tasa de alternancia espontánea significativamente mayor (P <0,01) en comparación con el grupo de control de vehículo y el valor numérico fue equivalente al grupo con donepezilo.
La prueba t entre 2 grupos en el grupo de administración de HVJ-E y el grupo de vehículo proporcionó valores de p de 0,0204 y 0,0515 respectivamente para 50 mNAU/organismo y 10 mNAU/organismo, lo que indica una diferencia significativa para 50 mNAU/organismo y también la misma tendencia para 10 mNAU/organismo (el valor de p para 100 mNAU/organismo fue 0,0000368). A partir de lo anterior, se confirmó el efecto dependiente de la dosis de la administración intranasal única de HVJ-E. Adicionalmente, se espera que el efecto de HVJ-E aumente optimizando la dosis y la vía de administración.
Disponibilidad industrial
La presente invención es útil para la prevención y/o el tratamiento del deterioro cognitivo y/o enfermedades neurodegenerativas con acumulación de un prionoide.

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Una envoltura de virus Sendai inactivado para su uso en un método para prevenir y/o tratar el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide.
2. La envoltura de virus Sendai para su uso según la reivindicación 1, en donde la envoltura de virus Sendai es una envoltura de virus Sendai de tipo silvestre.
3. La envoltura de virus Sendai para su uso según la reivindicación 1 o 2, en donde el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide es una cualquiera seleccionada de demencia de tipo Alzheimer, deterioro cognitivo leve (MCI), angiopatía amiloidea cerebral, demencia con cuerpos de Lewy, enfermedad de Parkinson, tauopatía y enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.
4. La envoltura de virus Sendai para su uso según la reivindicación 3, en donde el deterioro cognitivo y/o una enfermedad neurodegenerativa con acumulación de un prionoide es demencia de tipo Alzheimer.
5. La envoltura de virus Sendai para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el prionoide es p amiloide.
6. La envoltura de virus Sendai para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la envoltura de virus Sendai se aplica o administra en combinación con un inhibidor de puntos de control inmunitario.
7. La envoltura de virus Sendai para su uso según la reivindicación 6, en donde la envoltura de virus Sendai y el inhibidor de puntos de control inmunitario se aplican o administran simultánea o secuencialmente.
8. La envoltura de virus Sendai para su uso según la reivindicación 6 o 7, en donde la envoltura de virus Sendai y el inhibidor de puntos de control inmunitario se proporcionan como un fármaco combinado, una administración combinada de agentes separados o un kit.
9. La envoltura de virus Sendai para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde el inhibidor de puntos de control inmunitario es uno o más seleccionados del grupo que consiste en un anticuerpo anti-PD-1, un anticuerpo anti-PD-L1, un anticuerpo anti-PD-L2, un anticuerpo anti-CTLA-4, un anticuerpo anti-KIR, un anticuerpo anti-CD137, un anticuerpo anti-LAG-3, un anticuerpo anti-OX4o, un anticuerpo anti-CD80, un anticuerpo anti-CD86, un anticuerpo anti-B7-H3, un anticuerpo anti-B7-H4, un anticuerpo anti-B7-H5, un anticuerpo anti-TIM-3, anticuerpo anti-TIGIT y un anticuerpo anti-BTLA.
10. La envoltura de virus Sendai para su uso según la reivindicación 9, en donde el inhibidor de puntos de control inmunitario es un anticuerpo anti-PD-1, un anticuerpo anti-PD-L1 o un anticuerpo anti-CTLA-4.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5631237A (en) 1992-12-22 1997-05-20 Dzau; Victor J. Method for producing in vivo delivery of therapeutic agents via liposomes
TWI303663B (en) 2000-02-02 2008-12-01 Kaneda Yasufumi Inactivated virus envelope
JP2002065278A (ja) 2000-08-31 2002-03-05 Anges Mg Inc Ｈｖｊの融合タンパク質を含有する遺伝子移入ビヒクル
US20040253272A1 (en) 2001-08-02 2004-12-16 Yasufumi Kaneda Process for producing inactivated virus envelopes
CN1596130A (zh) * 2001-11-28 2005-03-16 安琪士多摩奇株式会社 治疗神经退行性疾病的基因治疗药物
EP1535993A4 (en) 2002-08-27 2007-03-21 Anges Mg Inc METHOD FOR TRANSFERRING A BIOMOLECULE USING A VIRAL ENVELOPE AND COMPOSITION AND SYSTEM THEREOF
CA2501701A1 (en) 2002-11-01 2004-05-13 Genomidea Inc. Chemotherapeutic agent-incorporated pharmaceutical preparation
WO2005095613A1 (ja) 2004-03-30 2005-10-13 Genomidea Inc. Rad51の発現抑制剤、該発現抑制剤を有効成分として含む医薬、及びその使用
JP4855250B2 (ja) 2004-03-31 2012-01-18 ジェノミディア株式会社 抗腫瘍作用を有する組成物
JPWO2006011600A1 (ja) 2004-07-29 2008-05-01 アンジェスＭｇ株式会社 脳機能改善のための医薬および方法
WO2007139120A1 (ja) * 2006-05-30 2007-12-06 Osaka University アミロイドβクリアランス促進剤
JP2008308440A (ja) 2007-06-14 2008-12-25 Genomidea Inc 癌治療用薬剤送達ビヒクルおよびその製造方法ならびにそれを用いた製剤
ES2532808T3 (es) 2008-09-16 2015-03-31 Genomidea Inc. Agente terapéutico/profiláctico para cáncer de próstata
JP5666110B2 (ja) 2009-08-31 2015-02-12 ジェノミディア株式会社 高機能化ｈｖｊ−ｅの開発
US10144778B2 (en) * 2014-03-12 2018-12-04 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US9394365B1 (en) * 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US11166995B2 (en) * 2016-11-01 2021-11-09 Osaka University Anticancer agent comprising HVJ-E and immune checkpoint protein inhibitor

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