ES2893006T3 - 1-(4-amino-5-bromo-6-(1 H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1 H-pirazol-4-ol y su uso en el tratamiento del cáncer - Google Patents

Abstract

Un compuesto que es 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol de fórmula: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

Description

DESCRIPCIÓN

1-(4-amino-5-bromo-6-(1 H-p¡razoM-il)pmm¡dm-2-¡l)-1 H-pirazol-4-ol y su uso en el tratamiento del cáncer

Campo de la invención

Esta invención se refiere a un metabolito activo de la 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡nd¡n-4-am¡na, a saber, 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol, el cual modula el receptor A2a de adenosina. En particular, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol, así como a procesos para su preparación y su uso en el tratamiento del cáncer.

Antecedentes de la Invención

El cáncer es un problema sanitario público importante en todo el mundo. En la actualidad, es la segunda causa de mortalidad más importante en los Estados Unidos y en varios países desarrollados, y se espera que supere a las enfermedades cardiacas como la principal causa de mortalidad en los próximos años (Siegel R L, et al., Cáncer Statistics, 2015, CA Cáncer J Clin 2015; 65:5-29. VC 2015 Sociedad Estadounidense contra el Cáncer y las referencias contenidas en este).

Se considera al cáncer una enfermedad compleja que está influida tanto por procesos cancerosos intrínsecos de las células como extrínsecos a las células. Varios estudios realizados en diversos modelos in vitro y en animales que incluyen, por ejemplo, metástasis pulmonar, células de adenocarcinoma pulmonar humano, células de melanoma murino, células de cáncer ovárico murino, células de cáncer de mama murino, han confirmado que la actuación sobre el sistema adenosinérgico tiene un potencial enorme para desarrollar diferentes tratamientos. Varias líneas de investigación resaltan la importancia de la adenosina como un factor autocrino y paracrino regulador crucial que se acumula en el microentorno neoplásico. La adenosina extracelular, que está presente normalmente en concentraciones elevadas en los tejidos cancerosos, es un mediador crucial en la alteración de las funciones celulares inmunitarias en el cáncer. Esto es debido posiblemente a que las rutas del receptor de la adenosina de las células inmunitarias que están sumamente reguladas experimentan alteraciones considerables en los tumores, y de esta manera se produce un cambio en las funciones de estas células de la supervisión inmunitaria y defensa del hospedador a la estimulación de la transformación y crecimiento de las células cancerosas, (Antonioli L et al., Immunity, inflammation and cáncer: a leading role for adenosine, Nature, 842, diciembre de 2013, volumen 13 y las referencias contenidas en este).

Como se sabe, los tumores utilizan numerosos mecanismos inmunosupresores para facilitar el crecimiento tumoral (Koebel CM. et al., Adaptive immunity maintains occult cancer in an equilibrium state, Nature. 2007, 450, 7171:903-907 y Schreiber RD. et al., Cancer immunoediting: Integrating immunity's roles in cancer suppression and promotion, Science.

2011, 331, 6024:1565-1570). Existen estudios que establecen que uno de tales mecanismos está mediado por el catabolismo del AMP extracelular en adenosina inmunosupresora (Ohta A. et al., A2A adenosine receptorprotects tumors from antitumor T cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103: 13132-13137 y Ohta A. et al., A2A adenosine receptor may allow expansion o f T cells lacking effector functions in extracellular adenosine-rich microenvironments. J Immunol. 2009, 183, 9:5487-5493). En primer lugar, el ATP extracelular será convertido en AMP por la ectoenzima CD39. Una desfosforilación adicional del AMP mediante la ectoenzima CD73 dará como resultado la producción de adenosina extracelular.

Durante este proceso, la actividad de la adenosina-cinasa también está suprimida, lo que provoca la inhibición de la actividad natural de esta enzima y un aumento en los niveles de adenosina. Por ejemplo, en condiciones hipóxicas durante la inflamación o dentro del microentorno tumoral, la inhibición de la adenosina-cinasa provoca un aumento de 15-20 veces en los niveles tanto extracelulares como intracelulares de la adenosina (Decking UK. et al., Hypoxia-induced inhibition of adenosine kinase potentiates cardiac adenosine release. Circ. Res. 1997; 81(2):154-164. doi: 10.1161/01.RES.81.2.154). La adenosina extracelular generada se une a cuatro receptores conocidos de la superficie celular (A1, A2A, A2B y A3) que se expresan en múltiples subconjuntos inmunitarios, incluidos los linfocitos T, linfocitos citolíticos naturales (NK, por sus siglas en inglés), linfocitos T citolíticos naturales, macrófagos, células dendríticas y células supresoras mieloides (MDSC, por sus siglas en inglés). Los subtipos de receptores A2A y A2B son esencialmente responsables de los efectos inmunosupresores de la adenosina. Comparten una ruta de señalización común, y dan como resultado ambos la activación de la adenilato ciclasa y la acumulación del AMPc intracelular. Se han proporcionado además varias pruebas que demuestran que el AMPc intracelular es la molécula señalizadora que inhibe la señalización del receptor de los linfocitos T en las etapas temprana y tardía de la ruta de activación de linfocitos T activada por el receptor de los linfocitos T (Ohta A, Sitkovsky M, Role o f G-protein-coupled adenosine receptors in downregulation o f inflammation and protection from tissue damage, Nature, 2001, 414: 916-920).

Se ha sugerido que la eliminación genética del receptor A²a o la inhibición de la señalización del receptor A²a utilizando antagonistas del receptor A²a previene la inhibición de los linfocitos T antitumorales y mejora el rechazo del tumor (Ohta A. et al., A ia adenosine receptor protects tumors from antitumor T cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006; 103: 13132­ 13137).

El receptor A²a funciona como un regulador negativo no redundante de linfocitos T activados para proteger tejidos normales de un daño inflamatorio colateral excesivo. Se ha propuesto que el receptor A²a también puede proteger «de manera errónea» los tejidos cancerosos. Se ha razonado que, si este fuera ciertamente el caso, entonces la desactivación genética o antagonismo farmacológico del receptor A²a prevendría la inhibición de los linfocitos T antitumorales y de esta manera mejoraría el rechazo del tumor por parte de estos linfocitos T desinhibidos (Sitkovsky M. et al., Adenosine A â receptor antagonists: blockade o f adenosinergic effects and Tregulatory cells, British Journal o f Pharmacology, 2008, 153, S457-S464).

El cáncer de pulmón es la causa principal de muerte por cáncer en todo el mundo y se ha convertido en el cáncer más común en todo el mundo desde 1985, tanto en lo que se refiere a la incidencia como a la mortalidad. De manera global, el cáncer de pulmón es el factor contribuyente más importante en los nuevos diagnósticos de cáncer (12,4 % de todos los nuevos casos de cáncer) y la mortalidad debida al cáncer (17,6 % de todas las muertes debidas al cáncer).

El cáncer de pulmón se genera en las células del epitelio respiratorio y se puede dividir en dos categorías amplias. El cáncer de pulmón microcítico (SCLC, por sus siglas en inglés) es un tumor sumamente maligno derivado de células que muestran características neuroendocrinas y supone un 15 % de los casos de cáncer de pulmón. El cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC, por sus siglas en inglés), que supone el 85 % restante de los casos, se divide además en 3 subtipos patológicos principales: adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas y carcinoma macrocítico. El adenocarcinoma en sí mismo supone un 38,5 % de todos los casos de cáncer de pulmón, suponiendo el carcinoma de células escamosas un 20 % y suponiendo el carcinoma macrocítico un 2,9 %. En las últimas décadas, la incidencia del adenocarcinoma ha aumentado de manera importante, y el adenocarcinoma ha reemplazado al carcinoma de células escamosas como el tipo más prevalente de NSCLC (De la Cruz, C et al., Lung Cancer: Epidemiology, Etiology, and Prevention, Clin Chest Med. diciembre de 2011; 32(4)).

Especialmente, en el caso de NSCLC, la etapa de la enfermedad determina el tratamiento, el cual incluye cirugía, radiación, quimioterapia doble con platino y recientemente terapias dirigidas que interrumpen las rutas de señalización responsables de la proliferación y supervivencia celulares. Las etapas más tempranas de la enfermedad se benefician de la quimioterapia sistémica (doble con platino, taxanos, gemcitabina, pemetrexed) (Azzoli CG. et al., 2011 Focused Update o f 2009 American Society o f Clinical Oncology Clinical Practice Guideline Update on Chemotherapy for Stage IV Non-Small-Cell Lung Cancer, J Oncol Pract. 2012; 8:63-6 doi:10.1200/JOP.2011.000374), que da como resultado una eficacia moderada, por lo tanto, la estrategia terapéutica multimodal se ha convertido en una opción de tratamiento importante para los pacientes con NSCLC. En varios estudios, se demostró que las combinaciones de dos o más fármacos tienen una eficacia superior pero a expensas de una mayor toxicidad (Yoshida T. et al., Comparison o f adverse events and efficacy between gefitinib and erlotinib in patients with non-small-cell lung cancer: a retrospective analysis, Med Oncol.

2013; 30:349).

Recientemente, se han estado desarrollando varias estrategias para reforzar las respuestas contra el cáncer de los linfocitos T y restaurar su capacidad para detectar y atacar células cancerosas, entre ellas se han desarrollado mAb que bloquean los eventos de linfocitos T mediados por la proteína 1 de muerte celular programada (PD-1) y el antígeno 4 asociado a linfocitos citotóxicos (CTLA4).

Ipilimumab, un mAb totalmente humano contra CTLA4, ha mostrado una tendencia hacia un beneficio clínico mayor entre pacientes con SQCLC (Lynch TJ. et al., Ipilimumab in combination with paclitaxel and carboplatin as first-line treatment in stage IIIB/IV non-small-cell lung cancer: Results from a randomized, double-blind, multicenter phase II study, J Clin Oncol.

2012; 30: 2046-54). Los mAb PD-1 (MEDI4735, BMS-936558, BMS-936559) han demostrado regresiones tumorales sostenidas notables en los pacientes con NSCLC avanzado con un pretratamiento importante (Brahmer JR. et al., Safety and activity o f anti-PD-L1 antibody in patients with advanced cancer, N Engl J Med. 2012; 366: 2455-65).

Existen estudios que muestran las alteraciones que provocan cambios en el microentorno tumoral extracelular. Una de tales alteraciones extracelulares es el aumento de las concentraciones de adenosina, que afectan al rechazo mediado por linfocitos T y estimulan la angiogénesis. El estudio mostró un número significativo de adenocarcinomas de pulmón que expresan el receptor A²a de adenosina, lo que refuerza las pruebas de antagonistas del receptor A²a de adenosina como terapias contra el cáncer (Mediavilla-Varela, M et al., Antagonism o f adenosine A2a receptor expressed by lung adenocarcinoma tumor cells and cancer associated fibroblasts inhibits theirgrowth, Cancer Biology & Therapy, septiembre de 2013, 14:9, 860-868).

A pesar del desarrollo de nuevos agentes terapéuticos, NSCLC sigue teniendo una tasa de supervivencia a 5 años de tan solo un 14 %, lo que da a entender que es necesario continuar la investigación para obtener tratamientos novedosos (Spira A. et al., Multidisciplinary management o f lung cancer, N Engl J Med. 2004; 350:379-92 doi: 10.1056/NEJMra035536).

El documento WO2011/121418 divulga una serie de derivados de aminopiridina como antagonistas del receptor A2a de adenosina para el uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Parkinson. Además, más adelante se investigó la eficacia de los compuestos descritos en el documento WO2011/121418 en el tratamiento del cáncer. Un compuesto particular en esta clase es 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina, que se ha determinado que es eficaz en el tratamiento del cáncer. A continuación se muestra la estructura de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina:

El documento PCT/IB2016/054834 divulga el uso de tal compuesto solo o combinado con uno o más agentes inmunoterapéuticos en el tratamiento del cáncer.

Compendio de la invención

La presente invención se refiere a un metabolito activo de la 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina, a saber, 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este. La presente invención proporciona además el compuesto anterior en una forma sustancialmente aislada. La presente invención proporciona además composiciones que comprenden 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona además un método para inhibir el receptor A2a de adenosina que comprende administrar 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

La presente invención proporciona además un método para tratar el cáncer en un sujeto que necesite tal tratamiento, que comprende administrar 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pyrazol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, solo o combinado con uno o más agentes inmunoterapéuticos.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1. ilustra un cromatograma de XIC, Q1 y espectro de MS/MS de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina en un patrón acuoso (MH+: 308).

La FIG. 2. ilustra un cromatograma de XIC, Q1 y espectro de MS/MS de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina en microsomas hepáticos humanos, 120 minutos (Mh : 308).

La FIG. 3. ilustra un cromatograma de XIC, Q1 y espectro de MS/MS de un producto monooxigenado de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina en microsomas hepáticos humanos, 120 minutos (MH+: 324).

La FIG. 4. ilustra un espectro de Q1 de patrones acuosos de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina (1 uM; MH+: 308) y sus productos monooxigenados: 1-(6-amino-5-bromo-2-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-4-ol (1 uM; MH+: 324) y 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol (1 uM; MH+: 324) y la identificación de 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol en microsomas hepáticos humanos, 120 minutos (MH+: 324).

Divulgación de la invención

Por lo tanto, la presente invención se refiere, en la realización 1, al siguiente compuesto: 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1 -il)pi rimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol:

; el cual se forma mediante el metabolismo de 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡ndm-4-amma en animales, seres humanos y/o en ensayos celulares in vitro.

En la realización 2, la presente invención se refiere a una forma aislada de 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razoM-¡l)p¡^m¡d¡n-2-il)-1H-pirazol-4-ol o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

En la realización 3, la invención es una composición farmacéutica que comprende 1-(4-ammo-5-bromo-6-(1H-pirazoM-¡l)p¡rim¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En la realización 4, la invención es una combinación, en particular una combinación farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razoM-¡l)p¡^m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes inmunoterapéuticos.

En la realización 5, la invención es un método para tratar el cáncer, en un sujeto que necesite tal tratamiento, comprendiendo el método: administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-p¡razoM-¡l)p¡^m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, solo o combinado con uno o más agentes inmunoterapéuticos.

En la realización 6, la invención se refiere al uso de 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, solo o combinado con uno o más agentes inmunoterapéuticos, para el tratamiento del cáncer.

En la realización 7, la invención se refiere al compuesto 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol de acuerdo con la realización 2 o una composición farmacéutica de acuerdo con la realización 3, para su uso en el tratamiento del cáncer.

En la realización 8, la invención se refiere a una combinación de 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-pirazol-4-ol y uno o más agentes inmunoterapéuticos, para su uso en el tratamiento del cáncer.

En la realización 9, la invención es un método para inhibir el receptor A2a de adenosina en un sujeto, donde el método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-il)-1H-pirazol-4-ol de acuerdo con la realización 2 o administrar una composición farmacéutica de acuerdo con la realización 3 a un sujeto.

En la realización 10, la invención se refiere al método de la realización 5, un uso de acuerdo con la realización 6, o el compuesto para su uso de acuerdo con la realización 7, o una combinación para su uso de acuerdo con la realización 8, donde el cáncer se selecciona entre un cáncer de pulmón, un melanoma, un cáncer renal, un cáncer hepático, un mieloma, un cáncer de próstata, un cáncer de mama, un cáncer colorrectal, un cáncer pancreático, un cáncer de cabeza y cuello, cáncer anal, cáncer gastroesofágico, cáncer de tiroides, cáncer cervicouterino, una enfermedad linfoproliferativa, un cáncer hematológico, linfoma de linfocitos T, linfoma de linfocitos B, un linfoma no hodgkiniano o una leucemia.

En la realización 11, la invención se refiere al método de la realización 5, un uso de acuerdo con la realización 6, o el compuesto para su uso de acuerdo con la realización 7 o una combinación para su uso de acuerdo con la realización 8, donde el cáncer son carcinomas, específicamente cáncer de pulmón y más específicamente cáncer de pulmón no microcítico.

En la realización 12, la invención se refiere al método de la realización 5, 10 u 11, un uso de acuerdo con la realización 6, 10 u 11, o la combinación para su uso de acuerdo con las realizaciones 9, 10 u 11, donde uno o más agentes inmunoterapéuticos se seleccionan del grupo constituido por anticuerpos anti-CTLA4, anticuerpos anti-PD-1 y anticuerpos anti-PD-L1.

En la realización 13, la invención se refiere al método de la realización 5, 10 u 11, un uso de acuerdo con la realización 6, 10 u 11, o la combinación para su uso de acuerdo con las realizaciones 9, 10 u 11, donde el agente inmunoterapéutico se selecciona del grupo constituido por: Ipilimumab, Tremelimumab, Nivolumab, Pembrolizumab, Pidilizumab (CT-011), AMP-224, AMP-514 (MEDI0680-Medimmune), MPDL3280A (Genentech Roche), MEDI4736, MSB0010718C (Merck Serono), YW243.55.S70 y MDX-1105.

En la realización 14, la invención se refiere al método de la realización 5, 10 u 11, un uso de acuerdo con la realización 6, 10 u 11, o la combinación para su uso de acuerdo con las realizaciones 9, 10 u 11, donde los agentes inmunoterapéuticos son un anticuerpo anti-PD-1.

En la realización 14A, la invención se refiere al método de la realización 5, 10 u 11, un uso de acuerdo con la realización 6, 10 u 11, o la combinación para su uso de acuerdo con las realizaciones 9, 10 u 11, donde los agentes inmunoterapéuticos son un anticuerpo anti-PD-1 seleccionado entre Nivulomab, Pembrolizumab, Pidilizumab, MEDI0680 (AMP514 Medimmune), AMP224 (Medimmune) y los anticuerpos descritos en el documento US 2015/0210769.

En la realización 15, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 14, donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 4, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 5 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID n O: 13, una secuencia de aminoácidos VLc Dr 2 de la Se Q ID NO: 14 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 15;

(b) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 1; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 2 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 10, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 11 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 12;

(c) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 41, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 5 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 13, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 14 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 15; o

(d) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 41; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 2 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 10, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 11 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 12.

En la realización 16, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 14, donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20.

En la realización 17, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 14, donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22.

En la realización 18, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 14, donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16.

En la realización 19, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 14, donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18.

En la realización 20, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 14-19, donde la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 300 mg una vez cada tres semanas.

En la realización 21, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 14-19, donde la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 400 mg una vez cada cuatro semanas.

En la realización 22, la invención se refiere al método de la realización 5, 10 u 11, un uso de acuerdo con la realización 6, 10 u 11, o la combinación para su uso de acuerdo con las realizaciones 9, 10 u 11, donde los agentes inmunoterapéuticos son un anticuerpo anti-PD-L1.

En la realización 22A, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 22, donde la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 se selecciona entre YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, MDX-1105 y un anticuerpo anti-PD-L1 descrito en el documento US 2016/0108123.

En la realización 23, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 22, donde la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 47, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 48 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 53 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 54;

(b) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 44; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 45 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 49, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 50 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 51;

(c) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 63, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 48 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 53 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 54; o

(d) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 63; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 45 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 49, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 50 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 51.

En la realización 24, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con la realización 22, donde la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 55 y un dominio variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 58.

En la realización 25, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 12-24, donde el agente inmunoterapéutico se administra conjuntamente en una única composición o se administra por separado en dos o más formas de composiciones diferentes.

En la realización 26, la invención se refiere al método, el uso o la combinación para su uso de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 12-24, donde el agente inmunoterapéutico se administra de forma concurrente con, antes o después de, el compuesto: -(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol.

En la realización 27, la invención es un proceso para preparar 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)-pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol de acuerdo con el Ejemplo 1.

Definición:

Tal como se utiliza en el presente documento, el término «cáncer» se utiliza para designar un grupo de enfermedades que conllevan un crecimiento celular anómalo con la posibilidad de invadir otras partes del cuerpo o extenderse a estas. Los cánceres se clasifican según el tipo de célula al que se asemejan las células tumorales y del que, por lo tanto, se supone que es el origen del tumor. Estos tipos incluyen carcinoma, sarcoma, linfoma y leucemia, tumor de células germinales y blastoma.

Tal como se utiliza en el presente documento, el término «carcinoma» se utiliza para designar cánceres derivados de células epiteliales. Este grupo incluye muchos de los cánceres más habituales, especialmente en personas de edad avanzada e incluye casi todos los que se desarrollan en la mama, próstata, pulmón, páncreas y colon.

Por ejemplo, el término «cáncer» incluye, sin carácter limitante, un tumor sólido, un cáncer hematológico (por ejemplo, leucemia, linfoma, mieloma, por ejemplo, mieloma múltiple) y una lesión metastásica. En una realización, el cáncer es un tumor sólido. Los ejemplos de tumores sólidos incluyen neoplasias malignas, por ejemplo, sarcomas y carcinomas, por ejemplo, adenocarcinomas de los diversos sistemas de órganos, tales como aquellos que afectan al pulmón, mama, ovario, linfoide, gastrointestinal (por ejemplo, de colon), anal, genitales y del tracto genitourinario (por ejemplo, renal, urotelial, de células de la vejiga, de próstata), de faringe, del SNC (por ejemplo, de cerebro, neural o de células gliales), de cabeza y cuello, de piel (por ejemplo, melanoma) y de páncreas, así como también adenocarcinomas que incluyen neoplasias malignas tales como cánceres de colon, cáncer rectal, carcinoma de células renales, cáncer de hígado, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer del intestino delgado y cáncer de esófago. El cáncer puede estar en una etapa temprana, intermedia, tardía o ser cáncer metastásico.

En una realización, el cáncer se selecciona entre un cáncer de pulmón (por ejemplo, un cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) (por ejemplo, un NSCLC con histología escamosa y/o no escamosa, o un adenocarcinoma de NSCLC)), un melanoma (por ejemplo, un melanoma avanzado), un cáncer renal (por ejemplo, un carcinoma de células renales), un cáncer de hígado, un mieloma (por ejemplo, un mieloma múltiple), un cáncer de próstata, un cáncer de mama (por ejemplo, un cáncer de mama que no expresa uno, dos o ninguno de entre: un receptor de estrógeno, receptor de progesterona o Her2/neu, por ejemplo, un cáncer de mama triple negativo), un cáncer colorrectal, un cáncer pancreático, un cáncer de cabeza y cuello (por ejemplo, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC, por sus siglas en inglés), cáncer anal, cáncer gastroesofágico, cáncer de tiroides, cáncer cervicouterino, una enfermedad linfoproliferativa (por ejemplo, una enfermedad linfoproliferativa posterior a un trasplante) o un cáncer hematológico, linfoma de linfocitos T, linfoma de linfocitos B, un linfoma no hogdkiniano, o una leucemia (por ejemplo, una leucemia mieloide o una leucemia linfoide).

En otra realización, el cáncer puede ser, por ejemplo, un cáncer descrito en la presente, tal como cáncer de pulmón (escamoso), cáncer de pulmón (adenocarcinoma), cáncer de cabeza y cuello, cáncer cervicouterino (escamoso), cáncer de estómago, cáncer de tiroides, melanoma, cáncer nasofaríngeo (por ejemplo, carcinoma nasofaríngeo recurrente local o metastásico diferenciado o no diferenciado) o cáncer de mama.

En otra realización, el cáncer se selecciona entre un carcinoma (por ejemplo, carcinoma avanzado o metastásico), melanoma o un carcinoma de pulmón, por ejemplo, un carcinoma de pulmón no microcítico.

En una realización, el cáncer es un cáncer de pulmón, por ejemplo, un cáncer de pulmón no microcítico o cáncer de pulmón microcítico.

Tal como se utiliza en el presente documento, la expresión «cáncer de pulmón» (que también se conoce como carcinoma del pulmón o carcinoma pulmonar) se utiliza para designar tumores pulmonares malignos caracterizados por un crecimiento celular descontrolado en los tejidos del pulmón.

Tal como se utiliza en el presente documento, la expresión «carcinoma pulmonar no microcítico» (NSCLC) se utiliza para designar cualquier tipo de cáncer de pulmón que no sea el carcinoma de pulmón microcítico (SCLC).

Tal como se utiliza en el presente documento, la expresión «tratamiento inmunoterapéutico» se refiere a una clase amplia de terapias designadas para suscitar la destrucción mediada por el sistema inmunitario de las células tumorales. En dichas terapias se utilizan agentes inmunoterapéuticos.

Tal como se utiliza en el presente documento, la expresión «agentes inmunoterapéuticos» se refiere a compuestos útiles para llevar a cabo el tratamiento inmunoterapéutico del cáncer, tales como un agente seleccionado del grupo constituido por anticuerpos anti-CTLA4, tales como Ipilimumab y Tremelimumab, anticuerpos anti-PD-1 tales como MDX-1106, MK3475, CT-011, AMP-224 o una molécula de anticuerpo anti-PD-1 tal como se describe en el documento WO2015/112900; y anticuerpos anti-PD-L1 tales como MEDW736, MDX-1105 o un anticuerpo anti-PD-L1 descrito en el documento US 2016/0108123.

Tal como se utiliza en la presente, la expresión «muerte programada 1» o «PD-1» (por su siglas en inglés) incluye isoformas de mamífero, por ejemplo, PD-1 humana, homólogos de especies de PD-1 humana y análogos que comprenden al menos un epítopo común con PD-1. La secuencia de aminoácidos de PD-1, por ejemplo, PD-1 humana, es conocida en la técnica, por ejemplo, Shinohara T et al. (1994) Genomics 23(3):704-6; Finger LR, et al. Gene (1997) 197(1-2): 177­ 87.

Tal como se utiliza en la presente, la expresión «ligando de muerte programada 1» o «PD-L1» (por su siglas en inglés) incluye isoformas de mamífero, por ejemplo, PD-L1 humano, homólogos de especies de PD-L1 humano y análogos que comprenden al menos un epítopo común con PD-L1. La secuencia de aminoácidos de PD-L1, por ejemplo, PD-L1 humano, es conocida en la técnica, por ejemplo, Dong et al. (1999) Nat Med. 5(12):1365-9; Freeman et al. (2000) J Exp Med. 192(7):1027-34).

Por «forma aislada» se entiende que el compuesto está exento de cualquiera de los componentes que lo acompañarían habitualmente cuando se forma metabólicamente in vivo. Por ejemplo, está exento de toda materia biológica, tal como componentes del suero, así como de otros metabolitos de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazoM-il)pirimindin-4-amina que se forman in vivo. Convenientemente, el compuesto se encuentra en forma aislada y purificada. Por «purificado/a» se entiende que el compuesto tiene convenientemente una pureza superior a un 75%, más convenientemente una pureza superior a un 90% y preferentemente una pureza superior a un 95% y de la forma más preferida una pureza superior a un 98%.

Tal como se utiliza en la presente, el término «combinación» se refiere a una combinación fija en una forma farmacéutica unitaria o a una administración combinada donde un compuesto de Fórmula I y un componente de la combinación (es decir, un agente inmunoterapéutico) se pueden administrar de manera independiente a la vez o por separado en intervalos de tiempo, especialmente donde esos intervalos permiten que los componentes de la combinación muestren un efecto cooperativo, por ejemplo, sinérgico. Los componentes individuales se pueden envasar en un kit o por separado. Uno de los componentes o ambos (por ejemplo, polvos o líquidos) se pueden reconstituir o diluir hasta una dosis deseada antes de la administración.

Se pretende que los términos «coadministración» o «administración combinada» o similares, tal como se utilizan en la presente, abarquen la administración del componente de la combinación seleccionado a un único sujeto que lo necesite (por ejemplo, un paciente), y se pretende que incluyan pautas de tratamiento en las que los agentes no se administren necesariamente por la misma vía de administración o a la vez.

Los términos «combinación farmacéutica» y «producto combinado» se utilizan indistintamente y se refieren a una combinación fija en una forma farmacéutica unitaria o a una combinación no fija o a un kit de partes para la administración combinada donde dos o más agentes terapéuticos se pueden administrar de manera independiente a la vez o por separado en intervalos de tiempo, especialmente donde esos intervalos permiten que los componentes de la combinación muestren un efecto cooperativo, por ejemplo, sinérgico. La expresión «combinación fija» significa que el compuesto de Fórmula I y un componente de la combinación (es decir, un agente inmunoterapéutico) se administran ambos a un paciente de forma simultánea en forma de una única entidad o dosificación. La expresión «combinación no fija» significa que el compuesto de Fórmula I y un componente de la combinación (es decir, el agente inmunoterapéutico), se administran ambos a un paciente como entidades separadas ya sea de forma simultánea, concurrente o secuencial sin límites de tiempo específicos, donde tal administración proporciona niveles terapéuticamente eficaces de los dos compuestos en el cuerpo del paciente. Esto último también se aplica a la politerapia, por ejemplo, la administración de tres o más agentes terapéuticos. En una realización preferida, la combinación farmacéutica es una combinación no fija.

La expresión «terapia combinada» se refiere a la administración de dos o más agentes terapéuticos para tratar un cáncer tal como se describe en la presente divulgación. Tal administración engloba la coadministración de estos agentes terapéuticos de una manera sustancialmente simultánea, tal como en una única cápsula que tiene una proporción fija de los principios activos. De manera alternativa, tal administración engloba la coadministración en envases múltiples o independientes (por ejemplo, comprimidos, cápsulas, polvos y líquidos) para cada principio activo. Los polvos y/o líquidos se pueden reconstituir o diluir hasta una dosis deseada antes de la administración. Además, tal administración también engloba el uso de cada tipo de agente terapéutico de una manera secuencial, ya sea aproximadamente a la vez o en momentos diferentes. En cualquier caso, la pauta de tratamiento proporcionará efectos beneficiosos de la combinación farmacológica para tratar las afecciones o trastornos descritos en la presente.

Tal como se utiliza en la presente, la expresión «sales farmacéuticamente aceptables» se refiere a sales que conservan la efectividad biológica y las propiedades de los compuestos de esta invención y que no son indeseadas desde un punto de vista biológico o de otra forma. En muchos casos, los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales de ácidos y/o bases en virtud de la presencia de grupos amino y/o carboxilo o grupos similares a estos. Se pueden formar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables con ácidos orgánicos e inorgánicos, por ejemplo, sales de tipo acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/dihidrogenofosfato/dihidrogenofosfato, sacarato, estearato, succinato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato. Los ácidos inorgánicos a partir de los cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico y ácido fosfórico. Los ácidos orgánicos a partir de los cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico y ácido salicílico. Se pueden formar sales de adición de base farmacéuticamente aceptables con bases orgánicas e inorgánicas. Las bases inorgánicas a partir de las cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso y aluminio; se prefieren particularmente las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio. Las bases orgánicas a partir de las cuales se pueden obtener sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas de origen natural, aminas cíclicas, resinas de intercambio iónico básicas, específicamente tales como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina y etanolamina. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir de un compuesto precursor, un resto básico o ácido, mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, tales sales se pueden preparar haciendo reaccionar formas de ácido libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base apropiada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na, Ca, Mg o K o similares), o haciendo reaccionar formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Tales reacciones se llevan a cabo habitualmente en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, se prefieren medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, donde sea factible. Se pueden consultar listas de sales adecuadas adicionales, por ejemplo, en «Remington's Pharmaceutical Sciences», 20.a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); y en «Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use» de Stahl y Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).

La presente invención incluye todos los compuestos marcados isotópicamente farmacéuticamente aceptables de la invención, es decir, los compuestos desde la primera hasta la decimoséptima realización, donde (1) uno o más átomos se remplazan por átomos que tienen el mismo número atómico, pero una masa atómica o número másico diferente de la masa atómica o número másico que se encuentra normalmente en la naturaleza y/o (2) la relación isotópica de uno o más átomos es diferente de la relación que se encuentra en la naturaleza.

Los ejemplos de isótopos adecuados para su inclusión en los compuestos de la invención comprenden isótopos de hidrógeno tales como 2H y 3H, de carbono tales como 11C, 13C y 14C, de cloro tales como 36Cl, de flúor tales como 18F, de yodo tales como 123I y 125I, de nitrógeno tales como 13N y 15N, de oxígeno tales como 15O, 17O y 18O, de fósforo tales como 32P y de azufre tales como 35S.

Determinados compuestos marcados isotópicamente desde la primera hasta la decimoséptima realización, por ejemplo, los que incorporan un isótopo radiactivo, son útiles en estudios de distribución de fármacos y/o sustratos en tejidos. Los isótopos radiactivos tritio, es decir, 3H, y carbono-14, es decir, 14C, son particularmente útiles para este propósito teniendo en cuenta la facilidad de su incorporación y los medios sencillos de detección.

La sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar determinadas ventajas terapéuticas que son el resultado de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una semivida in vivo incrementada o requisitos de dosificación reducidos y, por lo tanto, puede ser preferible en algunas circunstancias. En ciertos compuestos desde la primera hasta la decimoséptima realización, los residuos Rg o el anillo formado mediante la combinación de R8 y R⁹ pueden comprender uno o más átomos de deuterio para mejorar la estabilidad metabólica del compuesto in vivo.

La sustitución con isótopos emisores de positrones, tales como 11C, 18F, 15O y 13N, puede ser útil en estudios de topografía de emisión de positrones (PET) para examinar la ocupación del receptor de sustrato.

Los compuestos marcados isotópicamente desde la primera hasta la decimoséptima realización se pueden preparar generalmente mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en los Ejemplos y Preparaciones adjuntos utilizando un reactivo marcado isotópicamente apropiado en lugar del reactivo no marcado empleado previamente.

Los solvatos farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la invención incluyen aquellos en los que el disolvente de cristalización puede estar sustituido isotópicamente, por ejemplo, D²O, d6-acetona, d6-DMSO.

La expresión «portador farmacéuticamente aceptable», tal como se utiliza en la presente, incluye todos y cada uno de los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, surfactantes, antioxidantes, conservantes (por ejemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes retardantes de la absorción, sales, conservantes, fármacos, estabilizantes de fármacos, aglutinantes, excipientes, agentes disgregantes, lubricantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, colorantes, materiales similares y combinaciones de estos, que conocerían los expertos en la técnica (remítase, por ejemplo, a Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.a ed. Mack Printing Company, 1990, págs.

1289-1329). Salvo en lo que concierne a cualquier portador convencional que sea incompatible con el principio activo, se contempla su uso en las composiciones terapéuticas o farmacéuticas.

La expresión «una cantidad terapéuticamente eficaz» de un compuesto de la presente invención se refiere a una cantidad del compuesto de la presente invención que provocará la respuesta biológica o médica de un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de una actividad de una proteína o una enzima, o mejorará los síntomas, aliviará afecciones, ralentizará o retrasará la evolución de la enfermedad, o prevendrá una enfermedad, etc. En una realización no limitante, la expresión «una cantidad terapéuticamente eficaz» se refiere a la cantidad del compuesto de la presente invención que, cuando se administra a un sujeto, es eficaz para (1) aliviar, inhibir, prevenir y/o mejorar al menos parcialmente una afección, un trastorno o una enfermedad (i) mediado por el receptor A2a de adenosina de este o (ii) asociado con la adenosina o la actividad del receptor A2a de adenosina o (iii) caracterizado por una actividad anómala del receptor A2a de adenosina; o (2) reducir o inhibir la actividad del receptor A2a de adenosina de este. En otra realización no limitante, la expresión «una cantidad terapéuticamente eficaz» se refiere a la cantidad del compuesto de Fórmula I que, cuando se administra a una célula, o un tejido, o un material biológico no celular, o un medio, es eficaz para reducir o inhibir al menos parcialmente la actividad del receptor A²a; o reducir o inhibir al menos parcialmente la expresión del receptor A²a.

El término «sujeto», tal como se utiliza en la presente, se refiere a un animal. Preferentemente, el animal es un mamífero. Un sujeto también se refiere, por ejemplo, a primates (por ejemplo, seres humanos), vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, peces, aves y similares. En una realización preferida, el sujeto es un ser humano.

El término «inhibición» o «inhibir», tal como se utiliza en la presente, se refiere a la reducción o supresión de una afección, síntoma o trastorno o enfermedad dada, o a una disminución significativa en la actividad de base de una actividad o proceso biológico.

El término «tratar» o «tratamiento» de cualquier enfermedad o trastorno, tal como se utiliza en la presente, se refiere, en una realización, a mejorar la enfermedad o el trastorno (es decir, ralentizar o detener o reducir el desarrollo de la enfermedad o al menos uno de los síntomas clínicos de esta). En otra realización, «tratar» o «tratamiento» se refiere a aliviar o mejorar al menos un parámetro físico, incluidos aquellos que pueden no ser discernibles por el paciente. En otra realización más, «tratar» o «tratamiento» se refiere a modular la enfermedad o el trastorno, ya sea físicamente (por ejemplo, la estabilización de un síntoma discernible), fisiológicamente (por ejemplo, la estabilización de un parámetro físico) o ambos. En otra realización más, «tratar» o «tratamiento» se refiere a prevenir o retrasar el inicio o el desarrollo o la evolución de la enfermedad o del trastorno.

Tal como se utiliza en la presente, se debe interpretar que el término «un», «uno/a», «el/la» y términos similares utilizados en el contexto de la presente invención (especialmente en el contexto de las reivindicaciones) abarcan tanto el singular como el plural a menos que se indique lo contrario en la presente o el contexto lo contradiga claramente.

Todos los métodos descritos en la presente se pueden llevar a cabo en cualquier orden adecuado, a menos que se indique lo contrario en la presente o el contexto lo contradiga claramente. El uso de todos y cada uno de los ejemplos o el lenguaje ilustrativo (por ejemplo, «tal/es como») proporcionado en la presente tiene por objeto únicamente ilustrar mejor la invención y no supone ninguna limitación del alcance de la invención que por lo demás se reivindica.

El compuesto de la presente invención se obtiene en forma libre o como una sal de este. También se describen derivados que son profármacos de este.

La presente descripción también proporciona profármacos de los compuestos de la presente invención que se convierten in vivo en los compuestos de la presente invención. Un profármaco es un compuesto activo o inactivo que se modifica químicamente a través de la acción fisiológica in vivo, tal como la hidrólisis, el metabolismo y similares, para obtener un compuesto de esta invención después de la administración del profármaco a un sujeto. La idoneidad y las técnicas implicadas en la fabricación y el uso de los profármacos son muy conocidas por los expertos en la técnica. Los profármacos se pueden dividir conceptualmente en dos categorías no exclusivas: profármacos bioprecursores y profármacos portadores. Remítase a The Practice o f Medicinal Chemistry, Cap. 31-32 (Ed. Wermuth, Academic Press, San Diego, Calif., 2001). Por lo general, los profármacos bioprecursores son compuestos que son inactivos o tienen una actividad baja en comparación con el compuesto farmacológico activo correspondiente, que contienen uno o más grupos protectores y se convierten en una forma activa por metabolismo o solvólisis. Tanto la forma farmacológica activa como cualesquiera productos metabólicos liberados deberían tener una toxicidad aceptablemente baja.

Los profármacos portadores son compuestos farmacológicos que contienen un resto de transporte, por ejemplo, que mejoran la captación y/o suministro localizado a uno o varios sitios de acción. De forma deseable para tal profármaco portador, la conexión entre el resto farmacológico y el resto de transporte es un enlace covalente, el profármaco es inactivo o menos activo que el compuesto farmacológico y cualquier resto de transporte liberado es aceptablemente atóxico. Para los profármacos en los que se pretende que el resto de transporte potencie la captación, habitualmente la liberación del resto de transporte debería ser rápida. En otros casos, es deseable utilizar un resto que proporcione una liberación lenta, por ejemplo, ciertos polímeros u otros restos tales como ciclodextrinas. Los profármacos portadores se pueden utilizar, por ejemplo, para mejorar una o más de las siguientes propiedades: mayor lipofilia, mayor duración de los efectos farmacológicos, mayor especificidad por un sitio, menor toxicidad y reacciones adversas, y/o mejora en la formulación del fármaco (por ejemplo, estabilidad, hidrosolubilidad, supresión de una propiedad organoléptica o fisicoquímica indeseada). Por ejemplo, la lipofilia se puede aumentar mediante esterificación de (a) grupos hidroxilo con ácidos carboxílicos lipófilos (por ejemplo, un ácido carboxílico que tenga al menos un resto lipófilo).

Algunos profármacos ilustrativos son, por ejemplo, derivados de tipo O-acilo de alcoholes o de un alcohol arílico. Se prefieren derivados de tipo éster farmacéuticamente aceptables que se puedan convertir mediante solvólisis en condiciones fisiológicas. Además, se han enmascarado aminas como derivados sustituidos con arilcarboniloximetilo que son escindidos por esterasas in vivo y liberan el fármaco libre y formaldehído (Bundgaard, J. Med. Chem. 2503 (1989)). Además, se han enmascarado fármacos que contienen un grupo NH ácido, tal como imidazol, imida, indol y similares, con grupos N-aciloximetilo (Bundgaard, Design o f Prodrugs, Elsevier (1985)). Se han enmascarado grupos hidroxi como ésteres y éteres. El documento EP 039 051 (Sloan y Little) divulga profármacos de ácido hidroxámico de tipo base de Mannich, su preparación y uso.

Además, los compuestos de la presente invención, incluidas sus sales, también se pueden obtener en forma de sus hidratos o pueden incluir otros disolventes utilizados para su cristalización.

Composición, combinación farmacéutica, dosificación y administración

En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención y un portador, por ejemplo, un portador farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede formularse para vías de administración particulares tales como la administración oral, administración oftálmica (por ejemplo, administración tópica, inyección intravitreal, implante (incluido el intravitreal, transescleral, sub-Tenon y similares, de depósito o similares) y administración parenteral, etc. Además, las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar en forma sólida, que incluye cápsulas, comprimidos, píldoras, gránulos, polvos o supositorios, o en forma líquida, que incluye soluciones, suspensiones o emulsiones. Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales tales como esterilización y/o pueden contener diluyentes inertes, agentes lubricantes o agentes tampón convencionales, así como adyuvantes tales como conservantes, estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes y tampones, etc.

Habitualmente, las composiciones farmacéuticas son comprimidos y cápsulas de gelatina que comprenden el principio activo junto con

a) diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina;

b) lubricantes, por ejemplo, sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o calcio y/o polietilenglicol; para comprimidos también

c) aglutinantes, por ejemplo, silicato de magnesio y aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica y/o polivinilpirrolidona; si se desea

d) disgregantes, por ejemplo, almidones, agar, ácido algínico o su sal de sodio, o mezclas efervescentes; y/o

e) absorbentes, colorantes, sabores y edulcorantes.

Los comprimidos se pueden recubrir con películas o con un recubrimiento entérico de acuerdo con métodos conocidos en la técnica.

Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen una cantidad eficaz de un compuesto de la invención en forma de comprimidos, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones destinadas a uso oral se preparan de acuerdo con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo constituido por agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes con el fin de proporcionar preparados farmacéuticamente elegantes y apetitosos. Los comprimidos contienen el principio activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables atóxicos que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes son, por ejemplo, diluyentes inertes tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes granulantes y desintegrantes, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o goma arábiga; y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos no se recubren o se recubren mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregación y la absorción en el tubo gastrointestinal y, de esta manera, proporcionar una acción sostenida durante un periodo más largo. Por ejemplo, se puede emplear un material que retrase el tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las formulaciones para uso oral se pueden presentar como cápsulas de gelatina dura donde el principio activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda, donde el principio activo se mezcla con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.

Ciertas composiciones inyectables son soluciones o suspensiones isotónicas acuosas, y favorablemente se preparan supositorios a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Dichas composiciones pueden esterilizarse y/o contener adyuvantes tales como agentes conservantes, estabilizantes, humectantes o emulsionantes, promotores de disolución, sales para regular la presión osmótica y/o tampones. Además, también pueden contener otras sustancias valiosas desde el punto de vista terapéutico. Dichas composiciones se preparan de acuerdo con métodos convencionales de mezcla, granulación o recubrimiento, respectivamente, y contienen aproximadamente un 0,1-75 %, o contienen aproximadamente un 1-50 %, del principio activo.

Ciertas composiciones inyectables incluyen implantes oculares y formulaciones de depósitos oculares que son adecuados para la administración intraocular, periocular, subconyuntival y/o sub-tenon. Las composiciones inyectables habituales comprenden un compuesto desde la primera hasta la decimoséptima realización, combinado con un material polimérico biodegradable o biocompatible.

La presente invención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas anhidras que comprenden los compuestos de la presente invención como principios activos, ya que el agua puede facilitar la degradación de ciertos compuestos. Las composiciones farmacéuticas y las formas farmacéuticas anhidras de la invención se pueden preparar utilizando ingredientes anhidros o que contengan poca humedad, y condiciones de baja humectación o baja humedad. Una composición farmacéutica anhidra se puede preparar y almacenar de manera que se mantenga su naturaleza anhidra. Por consiguiente, las composiciones anhidras se envasan preferentemente utilizando materiales que se sabe que evitan la exposición al agua, de manera que puedan incluirse en kits de formularios adecuados. Los ejemplos de envases adecuados incluyen, sin carácter limitante, envases de láminas metálicas selladas herméticamente, plásticos, recipientes de dosis unitarias (por ejemplo, viales), envases de tipo blíster y envases de tiras.

La invención proporciona además composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas que comprenden uno o más agentes que reducen la velocidad a la que se descompondrá el compuesto de la presente invención como principio activo. Tales agentes, que se denominan en la presente «estabilizantes», incluyen, sin carácter limitante, antioxidantes tales como el ácido ascórbico, tampones de pH o tampones salinos, etc.

En una realización preferida, el 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en el tratamiento del cáncer es para su administración por vía oral o parenteral, preferentemente por vía oral.

La combinación o composición farmacéutica de la presente invención puede estar en una dosificación unitaria de aproximadamente 1-1o0o mg del (de los) principio(s) activo(s) para un sujeto de aproximadamente 50-70 kg, o de aproximadamente 1-500 mg o de aproximadamente 1-250 mg o de aproximadamente 1-150 mg o de aproximadamente 0,5-100 mg o de aproximadamente 1-50 mg de los principios activos. La dosificación terapéuticamente eficaz de un compuesto, la composición farmacéutica o las combinaciones de estos depende de la especie del sujeto, el peso corporal, la edad y el estado del individuo, el trastorno o enfermedad que se esté tratando, o su gravedad. Un facultativo, médico o veterinario experto puede determinar fácilmente la cantidad eficaz de cada uno de los principios activos necesaria para prevenir, tratar o inhibir el avance del trastorno o la enfermedad.

Las propiedades de dosificación citadas anteriormente se pueden demostrar en pruebas in vivo e in vitro que utilizan convenientemente mamíferos, por ejemplo, ratones, ratas, perros, monos u órganos aislados, tejidos y preparados de estos. Los compuestos de la presente invención se pueden aplicar in vitro en forma de soluciones, por ejemplo, preferentemente soluciones acuosas, e in vivo por vía enteral, parenteral, convenientemente por vía intravenosa, por ejemplo, en forma de una suspensión o en solución acuosa. La dosificación in vitro puede variar entre concentraciones de aproximadamente 10'3 molar y 10'9 molar. Una cantidad terapéuticamente eficaz in vivo puede variar en función de la vía de administración entre aproximadamente 0,1-500 mg/kg o entre aproximadamente 1-100 mg/kg.

En otras realizaciones, se proporciona una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de acuerdo con desde la primera hasta la decimoséptima realización y al menos un portador.

Kits terapéuticos

En una realización, la invención proporciona un kit que comprende dos o más composiciones farmacéuticas separadas, y al menos una de ellas contiene un compuesto de fórmula (I). En una realización, el kit comprende medios para mantener por separado dichas composiciones, tales como un recipiente, frasco dividido o envase de aluminio dividido. Un ejemplo de un kit de este tipo es un envase de tipo blíster, como los utilizados habitualmente para el envasado de comprimidos, cápsulas y similares.

El kit de la invención se puede utilizar para administrar diferentes formas farmacéuticas, por ejemplo, orales y parenterales, para administrar las composiciones separadas a intervalos posológicos diferentes, o para valorar las composiciones separadas entre sí. Para facilitar el cumplimiento, el kit de la invención normalmente comprende instrucciones para su administración.

En las terapias combinadas de la invención, el compuesto de Fórmula I y el otro agente inmunoterapéutico pueden ser fabricados y/o formulados por el mismo fabricante o por diferentes fabricantes. Además, el compuesto de la invención y el otro agente terapéutico pueden ser integrados en una terapia combinada: (i) antes de dispensar el producto combinado a los médicos (por ejemplo, en el caso de un kit que comprenda el compuesto de la invención y el otro agente terapéutico); (ii) por parte de los propios médicos (o bajo la dirección del médico) poco antes de la administración; (iii) en los propios pacientes, por ejemplo, durante la administración secuencial del compuesto de la invención y el otro agente terapéutico.

En consecuencia, la invención proporciona el uso de 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para tratar el cáncer, donde el medicamento se prepara para su administración con otro agente inmunoterapéutico. La invención también proporciona el uso de un agente inmunoterapéutico para tratar el cáncer, donde el medicamento se administra con 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

La invención también proporciona 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, para su uso en un método de tratamiento del cáncer, donde el 1-(4-amino-5-bromo6-(1H-p¡razoM-¡l)pmmidm-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol se prepara para su administración con otro agente inmunoterapéutico. La invención también proporciona otro agente inmunoterapéutico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, donde el otro agente inmunoterapéutico se prepara para su administración con 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡d¡n-2-il)-1H-pirazol-4-ol. La invención también proporciona 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡rim¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol para su uso en un método de tratamiento del cáncer, donde 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡rim¡d¡n-2-¡l)-1H-pirazol-4-ol se administra con otro agente inmunoterapéutico. La invención también proporciona otro agente inmunoterapéutico para su uso en un método de tratamiento del cáncer, donde el otro agente terapéutico se administra con 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol.

La invención también proporciona el uso de 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol para tratar el cáncer, donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de un intervalo de 24 horas) con otro agente inmunoterapéutico. La invención también proporciona el uso de otro agente inmunoterapéutico para tratar el cáncer, donde el paciente ha sido tratado previamente (por ejemplo, dentro de un intervalo de 24 horas) con 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡rim¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

Terapia combinada

En una realización, una combinación farmacéutica (o producto combinado) comprende un compuesto de fórmula (I) o un cocristal o sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes inmunoterapéuticos seleccionados del grupo constituido por anticuerpos anti-CTLA4 tales como Ipilimumab y Tremelimumab, anticuerpos anti-PD-1 tales como MDX-1106 (Nivolumab), MK3475 (Pembrolizumab), CT-011 (Pidilizumab), AMP-224, AMP-514 (MEDI0680 Medimmune) o una molécula de anticuerpo anti-PD-1 tal como se describe en el documento WO2015/112900 (US2015/0210769); y anticuerpos anti-PD-L1 tales como MPDL3280A, MEDI4736, MSB0010718C (Merch Sorono), YW243.55.S70, MDX-1105 0 moléculas de anticuerpos anti-PD-L1 que se divulgan en el documento US 2016/0108123, presentado el 13 de octubre de 2015, titulado «Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof».

Los componentes del producto combinado están en la misma formulación o en formulaciones independientes.

En una realización preferida, el producto combinado comprende un compuesto de fórmula (I) o un cocristal o sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes inmunoterapéuticos útiles en el tratamiento del cáncer, específicamente en el tratamiento inmunoterapéutico del cáncer, y tal agente se selecciona del grupo constituido por anticuerpos anti-PD-1PD-1 tales como MDX-1106, MK3475, CT-011, AMP-224 o una molécula de anticuerpo anti-PD-1 tal como se describe en el documento WO2015/112900 (US2015/0210769); y anticuerpos anti-PD-L1 tales como MPDL3280A, MEDI4736, MDX-1105 o moléculas de anticuerpos anti-PD-L1 que se divulgan en el documento US 2016/0108123.

Ejemplos de una molécula de anticuerpo anti-PD-1

En una realización preferida, el producto combinado comprende un compuesto de Fórmula (I) o un cocristal o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una molécula de anticuerpo anti-PD-1 tal como las que se describen en la presente.

PD-1 es un miembro de la familia CD28/CTLA-4 que se expresa, por ejemplo, en linfocitos T CD4+ y CD8+, linfocitos B y Tregs activados. Regula de manera negativa la señalización y función de los linfocitos T efectores. PD-1 es inducido en los linfocitos T infiltrantes de tumores y puede dar como resultado un agotamiento o disfunción funcionales (Keir et al. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-1 suministra una señal coinhibidora tras la unión a cualquiera de sus dos ligandos, Ligando de muerte programada 1 (PD-L1) o Ligando de muerte programada 2 (PD-L2). PD-L1 se expresa en varios tipos de células, incluidos los linfocitos T, linfocitos citolíticos naturales (NK), macrófagos, células dendríticas (DC), linfocitos B, células epiteliales, células del endotelio vascular, así como también en muchos tipos de tumores. La elevada expresión de PD-L1 en tumores murinos y humanos se ha relacionado con desenlaces clínicos negativos en diversos cánceres (Keir et al. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). PD-L2 se expresa en células dendríticas, macrófagos y algunos tumores. El bloqueo de la ruta de PD-1 ha conseguido validación preclínica y clínica para la inmunoterapia contra el cáncer. Tanto los estudios preclínicos como los clínicos han demostrado que el bloqueo anti-PD-1 puede restaurar la actividad de los linfocitos T efectores y da como resultado una respuesta antitumoral robusta. Por ejemplo, el bloqueo de la ruta de PD-1 puede restaurar la función agotada/disfuncional de los linfocitos T efectores (por ejemplo, función de proliferación, secreción de IFN-g o citolítica) y/o inhibir la función de los linfocitos Treg (Keir et al. (2008) Annu. Rev. Immunol. 26:677-704; Pardoll et al. (2012) Nat Rev Cancer 12(4):252-64). El bloqueo de la ruta de Pd -1 se puede llevar a cabo con un anticuerpo, un fragmento de unión al antígeno de este, una inmunoadhesina, una proteína de fusión u oligopéptido de PD-1, PD-L1 y/o PD-L2.

En una realización, el inhibidor de PD-1 es una molécula de anticuerpo anti-PD-1. En una realización, el inhibidor de PD-1 es una molécula de anticuerpo anti-PD-1 tal como se describe en el documento US 2015/0210769, publicado el 30 de julio de 2015, titulado «Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof».

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende al menos una, dos, tres, cuatro, cinco o seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) (o de manera colectiva todas las CDR) de una región variable de la cadena ligera y pesada que comprenden una secuencia de aminoácidos que se muestra en la Tabla A (por ejemplo, de las secuencias de regiones variables de la cadena ligera y pesada de BAP049-Clon-E o BAP049-Clon-B que se divulgan en la Tabla A), o codificadas por una secuencia de nucleótidos que se muestra en la Tabla A. En algunas realizaciones, las CDR están de acuerdo con la definición de Kabat (por ejemplo, como se expone en la Tabla A). En algunas realizaciones, las CDR están de acuerdo con la definición de Chothia (por ejemplo, como se expone en la Tabla A). En algunas realizaciones, las CDR están de acuerdo con las definiciones de CDR combinadas de tanto Kabat como Chothia (por ejemplo, como se expone en la Tabla A). En una realización, la combinación de CDR de Kabat y Chothia de VHCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos GYTFTTYWMH (SEQ ID NO: 41). En una realización, una o más de las CDR (o de manera colectiva todas las CDR) tienen uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más cambios, por ejemplo, sustituciones o deleciones de aminoácidos (por ejemplo, sustituciones de aminoácidos conservativas), respecto a la secuencia de aminoácidos que se muestra en la Tabla A o codificada por una secuencia de nucleótidos que se muestra en la Tabla A.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una región variable de la cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 1, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 2 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 10, una secuencia de aminoácidos Vl Cd R2 de la SEQ ID NO: 11 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 12, cada una de las cuales se divulga en la Tabla A.

En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH que comprende una VHCDR1 codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 24, una VHCDR2 codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 25 y una VHCDR3 codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 26; y una VL que comprende una VLCDR1 codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 29, una VLCDR2 codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 30 y una VLCDR3 codificada por la secuencia de nucleótidos de la s Eq ID NO: 31, cada una de las cuales se divulga en la Tabla A.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 o una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 6. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20 o una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 20. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16 o una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 16. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16.

En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 7 o una secuencia de nucleótidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 7. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VL codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 21 o 17, o una secuencia de nucleótidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 21 o 17. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una VH codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 7 y una VL codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID n O: 21 o 17.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 o una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 8. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22 o una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 22. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18 o una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 18. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18.

En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una cadena pesada codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 9 o una secuencia de nucleótidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 9. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una cadena ligera codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 23 o 19, o una secuencia de nucleótidos que presenta una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o 99 % o superior respecto a la SEQ ID NO: 23 o 19. En una realización, la molécula de anticuerpo comprende una cadena pesada codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 9 y una cadena ligera codificada por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 23 o 19.

Las moléculas de anticuerpos que se describen en la presente se pueden producir mediante vectores, células hospedadoras y métodos descritos en el documento US 2015/0210769.

Definiciones

Las regiones VH y VL se pueden subdividir en regiones de hipervariabilidad, denominadas «regiones determinantes de la complementariedad» (c Dr ), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas «regiones de armazón» (FR o FW, por sus siglas en inglés).

La extensión de la región de armazón y las CDR se ha definido de forma precisa mediante una serie de métodos (remítase a Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences o f Proteins o f Immunological Interest, quinta edición, Departamento de Salud y Servicios Humanos de EE. UU., publicación NIH N.° 91-3242, y Chotia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917; y la definición de AbM utilizada por el software de modelización de anticuerpos AbM de Oxford. Remítase, en general, por ejemplo, a Protein Sequence and Structure Analysis o f Antibody Variable Domains. En: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. y Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg).

Las expresiones «región determinante de la complementariedad» y «CDR», tal como se utilizan en la presente, se refieren a las secuencias de aminoácidos dentro de las regiones variables del anticuerpo que confieren especificidad y afinidad de unión por el antígeno. En general, hay tres CDR en cada región variable de la cadena pesada (HCDR1, HCDR2, HCDR3) y tres CDR en cada región variable de la cadena ligera (LCDR1, LCDR2, LCDR3).

Los límites exactos de la secuencia de aminoácidos de una CDR dada pueden determinarse fácilmente utilizando uno cualquiera de una serie de esquemas muy conocidos, que incluyen los descritos por Kabat et al. (1991), «Sequences of Proteins of Immunological Interest», 5.a edición, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda (esquema de numeración de «Kabat») o por Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (esquema de numeración de «Chothia»). Tal como se utilizan en la presente, las CDR definidas de acuerdo con el esquema de numeración de «Chothia» también se denominan en ocasiones «bucles hipervariables».

Por ejemplo, según Kabat, los residuos aminoacídicos de las CDR en el dominio variable de la cadena pesada (VH) están numerados como 31-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) y 95-102 (HCDR3); y los residuos aminoacídicos de las Cd R en el dominio variable de la cadena ligera (VL) están numerados como 24-34 (l Cd R1), 50-56 (LCDR2) y 89-97 (LCDR3). Según Chothia, los aminoácidos de las CDR en la VH están numerados como 26-32 (HCDR1), 52-56 (h Cd R2) y 95-102 (HCDR3); y los residuos aminoacídicos en la VL están numerados como 26-32 (LCd R1), 50-52 (LCDr 2) y 91-96 (LCDR3). Al combinar las definiciones de CDR de Kabat y Chothia, las CDR consisten en los residuos aminoacídicos 26-35 (HCDR1), 50-65 (HCDR2) y 95-102 (HCDR3) en la VH humana y los residuos aminoacídicos 24-34 ( LCDR1), 50-56 (LCDR2) y 89-97 (LCDR3) en la VL humana.

En general, a menos que se indique específicamente, las moléculas de anticuerpos anti-PD-1 pueden incluir cualquier combinación de una o más CDR de Kabat y/o CDR de Chothia, por ejemplo, que se describen en la Tabla A. En una realización, se utilizan las siguientes definiciones para las moléculas de anticuerpos anti-PD-1 descritas en la Tabla A: HCDR1 de acuerdo con las definiciones de CDR combinadas de Kabat y Chothia, y HCCDR 2-3 y LCCDR 1-3 de acuerdo con la definición de CDR de Kabat. Según todas las definiciones, cada una de las VH y VL incluye habitualmente tres CDR y cuatro FR, que se disponen desde el extremo amino hasta el extremo carboxi en el siguiente orden: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

Los cálculos de identidad de la secuencia u homología entre secuencias (los términos se utilizan indistintamente en la presente) se llevan a cabo como se indica a continuación.

Para determinar el porcentaje de identidad de dos secuencias de aminoácidos, o de dos secuencias de ácido nucleico, las secuencias se alinean con el fin de conseguir una comparación óptima (por ejemplo, se pueden introducir huecos en una o ambas de entre una primera y una segunda secuencia de aminoácidos o de ácido nucleico para una alineación óptima y las secuencias no homólogas se pueden descartar a efectos de comparación). En una realización preferida, la longitud de una secuencia de referencia alineada a efectos de comparación tiene una longitud de al menos un 30 %, preferentemente al menos un 40 %, más preferentemente al menos un 50 %, 60 % y aún más preferentemente al menos un 70 %, 80 %, 90 %, 100 % respecto a la secuencia de referencia. A continuación, se comparan los residuos aminoacídicos o nucleótidos en las posiciones de aminoácidos o posiciones de nucleótidos correspondientes. Cuando una posición en la primera secuencia está ocupada por el mismo residuo aminoacídico o nucleótido que la posición correspondiente en la segunda secuencia, entonces las moléculas son idénticas en esa posición (tal como se utiliza en la presente, la «identidad» de un aminoácido o ácido nucleico es equivalente a la «homología» del aminoácido o ácido nucleico).

El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias, teniendo en cuenta el número de huecos y la longitud de cada hueco, que es necesario introducir para una alineación óptima de las dos secuencias.

La comparación de secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias puede realizarse utilizando un algoritmo matemático. En una realización preferida, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se determina utilizando el algoritmo de Needleman y Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48: 444-453) que ha sido incorporado al programa GAP en el paquete de software GCG (disponible en www.gcg.com), utilizando una matriz Blossum 62 o una matriz PAM250, y un peso de hueco de 16, 14, 12, 10, 8, 6 o 4 y un peso de longitud de 1,2, 3, 4, 5 o 6. En otra realización preferida más, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de nucleótidos se determina utilizando el programa GAP en el paquete de software GCG (disponible en www.gcg.com), utilizando una matriz NWSgapdna.CMP y un peso de hueco de 40, 50, 60, 70 u 80 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6. Un conjunto particularmente preferido de parámetros (y el que se debería utilizar a menos que se especifique de otro modo) consiste en una matriz de puntuación Blossum 62 con una penalización por hueco de12, una penalización por extensión de hueco de 4 y una penalización por hueco de desplazamiento del marco de 5.

El porcentaje de identidad entre dos secuencias de aminoácidos o nucleótidos se puede determinar utilizando el algoritmo de E. Meyers y W. Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17) que se ha incorporado en el programa ALIGN (versión 2.0), utilizando una tabla de residuos de peso PAM120, una penalización por longitud de hueco de 12 y una penalización por hueco de 4.

Las secuencias de proteínas y ácidos nucleicos que se describen en la presente se pueden utilizar como una «secuencia de consulta» para realizar una búsqueda en bases de datos públicas con el fin de, por ejemplo, identificar otros miembros de la familia o secuencias relacionadas. Tales búsquedas se pueden realizar utilizando los programas NBLAST y XBLAST (versión 2.0) de Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10. Se pueden realizar búsquedas de nucleótidos de BLAST con el programa NBLAST, puntuación = 100, longitud de palabra = 12 para obtener secuencias de nucleótidos homólogas a la molécula de ácido nucleico de la invención. Se pueden realizar búsquedas de proteínas de BLAST con el programa XBLAST, puntuación = 50, longitud de palabra = 3 para obtener secuencias de aminoácidos homólogas a las moléculas de proteínas de la invención. Para obtener alineaciones con huecos a efectos comparativos, se puede utilizar Gapped BLAST tal como se describe en Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Cuando se utilizan los programas BLAST y Gapped BLAST, se pueden utilizar los parámetros por defecto de los programas respectivos (por ejemplo, XBLAST y NBLAST). Remítase a www.ncbi.nlm.nih.gov.

Una «sustitución conservativa de aminoácidos» es una en la que el residuo aminoacídico se remplaza por un residuo aminoacídico que tiene una cadena lateral similar. En la técnica se han definido familias de residuos aminoacídicos que tienen cadenas laterales similares. Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares sin carga (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadenas laterales apolares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptófano), cadenas laterales con ramificaciones beta (por ejemplo, treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (por ejemplo, tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina).

Tabla A . Secuencias de aminoácidos nucleótidos de moléculas de anticuer os anti-PD-1 a modo de eem lo

Otros inhibidores de PD-1 a modo de ejemplo

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 es Nivolumab (Bristol-Myers Squibb), que también se conoce como MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, BMS-936558 u OPDIVO®. El Nivolumab (clone 5C4) y otros anticuerpos anti-PD-1 se divulgan en los documentos US 8008 449 y WO 2006/121168. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una o más de las secuencias de CDR (o de manera colectiva todas las secuencias de CDR), la secuencia de la región variable de la cadena ligera o la cadena pesada o la secuencia de la cadena ligera o la cadena pesada de Nivolumab, por ejemplo, tal como se describe en la Tabla B.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 es Pembrolizumab (Merck & Co), que también se conoce como Lambrolizumab, MK-3475, MK03475, SCH-900475 o KEYTRUDA®. El Pembrolizumab y otros anticuerpos anti-PD-1 se divulgan en Hamid, O. et al. (2013) New England Journal o f Medicine 369 (2): 134-44 y los documentos US 8354 509 y WO 2009/114335. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una o más de las secuencias de CDR (o de manera colectiva todas las secuencias de CDR), la secuencia de la región variable de la cadena ligera o la cadena pesada o la secuencia de la cadena ligera o la cadena pesada de Pembrolizumab, por ejemplo, tal como se describe en la Tabla B.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 es Pidilizumab (CureTech), que también se conoce como CT-011. El Pidilizumab y otros anticuerpos anti-PD-1 se divulgan en Rosenblatt, J. et al. (2011) J Immunotherapy 34(5): 409­ 18 y los documentos US 7695 715, US 7332 582 y US 8686 119. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una o más de las secuencias de CDR (o de manera colectiva todas las secuencias de CDR), la secuencia de la región variable de la cadena ligera o la cadena pesada o la secuencia de la cadena ligera o la cadena pesada de Pidilizumab, por ejemplo, tal como se describe en la Tabla B.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 es MEDI0680 (Medimmune), que también se conoce como AMP-514. MEDI0680 y otros anticuerpos anti-PD-1 se divulgan en los documentos US 9205 148 y WO 2012/145493. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 comprende una o más de las secuencias de CDR (o de manera colectiva todas las secuencias de CDR), la secuencia de la región variable de la cadena ligera o la cadena pesada o la secuencia de la cadena ligera o la cadena pesada de MEDI0680.

Otros anticuerpos anti-PD-1 conocidos incluyen los que se describen, por ejemplo, en los documentos WO 2015/112800, WO 2016/092419, WO 2015/085847, WO 2014/179664, WO 2014/194302, WO 2014/209804, WO 2015/200119, US 8 735 553, US 7488 802, US 8927 697, US 8993 731 y US 9102 727.

En una realización, el anticuerpo anti-PD-1 es un anticuerpo que compite por la unión con, y/o se une al mismo epítopo en, PD-1 en comparación con uno de los anticuerpos anti-PD-1 que se describen en la presente.

En una realización, el inhibidor de PD-1 es un péptido que inhibe la ruta de señalización de PD-1, por ejemplo, tal como se describe en el documento US 8907053. En una realización, el inhibidor de PD-1 es una inmunoadhesina (por ejemplo, una inmunoadhesina que comprende una porción de unión a PD-1 o extracelular de PD-L1 o PD-L2 fusionada a una región constante (por ejemplo, una región Fc de una secuencia de inmunoglobulina). En una realización, el inhibidor de PD-1 es AMP-224 (B7-DCIg (Amplimmune), por ejemplo, que se divulga en los documentos WO 2010/027827 y WO 2011/066342).

Tabla B . Secuencias de aminoácidos de otras moléculas de anticuer os anti-PD-1 a modo de eem lo

Ejemplo de una molécula de anticuerpo anti-PD-L1

En una realización, el producto combinado comprende un compuesto de Fórmula (I) o un cocristal o sal farmacéuticamente aceptable de este, y una molécula de anticuerpo anti-PD-L1 tal como las que se describen en la presente.

Se ha descrito el ligando de muerte programada 1 (PD-L1) como un ligando para el receptor inmunoinhibidor de muerte programada 1 (PD-1). La unión de PD-L1 a PD-1 da lugar a la inhibición de la proliferación de linfocitos y secreción de citocinas mediadas por el receptor de los linfocitos T (Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34). Por lo tanto, el bloqueo de PD-L1 puede dar lugar a una mejora de la inmunidad antitumoral.

Varios tipos de células expresan PD-L1. Por ejemplo, se expresa PD-L1 en linfocitos T activados, células dendríticas (DC), linfocitos citolíticos naturales (NK), macrófagos, linfocitos B, monocitos y células del endotelio vascular. PD-L1 se expresa en muchos cánceres, incluido el carcinoma de pulmón, ovario y colon y diversos mielomas humanos (Iwai et al. (2002) PNAS 99:12293-7; Ohigashi et al. (2005) Clin Cancer Res 11:2947-53; Okazaki et al. (2007) Intern. Immun. 19:813-24; Thompson et al. (2006) Cancer Res. 66:3381-5). La expresión de PD-L1 se correlaciona de manera muy marcada con un pronóstico desfavorable en diversos tipos de cáncer incluidos el cáncer de riñón, ovario, vejiga, mama, gástrico y pancreático.

Muchos linfocitos T infiltrantes de tumores expresan predominantemente PD-1 en comparación con los linfocitos T en tejidos normales y linfocitos T de la sangre periférica. Esto indica que el aumento regulado de PD-1 en los linfocitos T reactivos en tumores puede contribuir a respuestas inmunitarias antitumorales deficientes (Ahmadzadeh et al. (2009) Blood 114:1537-44). Por lo tanto, la señalización de PD-L1 mediada por células tumorales que expresan PD-L1 que interaccionan con linfocitos T que expresan PD-1 puede conllevar la atenuación de la activación de los linfocitos T y la evasión de la supervisión inmunitaria (Sharpe et al. (2002) Nat Rev Immunol. 2:116-26; Keir et al. (2008) Annu Rev Immunol. 26:677-704). El bloqueo de PD-1 puede inhibir la diseminación hematógena de células tumorales poco inmunógenas debido a un mayor reclutamiento de linfocitos T efectores (Iwai et al. (2005) Int. Immunol. 17:133-144).

Anti-PD-L1 puede potenciar la inmunidad de los linfocitos T, por ejemplo, bloqueando sus interacciones inhibidoras tanto con PD-1 como con B7-1. Anti-PD-1 también puede permitir la regulación inmunitaria mediante PD-L2/PD-1. Tanto PD-1 como B7-1 se expresan en los linfocitos T, linfocitos B, DC y macrófagos, lo que proporciona la posibilidad de interacciones bidireccionales entre B7-1 y PD-L1 en estos tipos de células. PD-L1 en las células no hematopoyéticas puede interaccionar tanto con B7-1 como con PD-1 en los linfocitos T.

En algunas realizaciones, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 se selecciona entre YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C o MDX-1105.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-L1 es MSB0010718C. MSB0010718C (también denominado A09-246-2; Merck Serono) es un anticuerpo monoclonal que se une a PD-L1. MSB0010718C y otros anticuerpos anti-PD-L1 humanizados se divulgan en el documento WO2013/079174, y tienen una secuencia divulgada en la presente (o una secuencia sustancialmente idéntica o similar a esta, por ejemplo, una secuencia que tiene una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o superior respecto a la secuencia especificada). Las secuencias de aminoácidos de la cadena pesada y ligera de MSB0010718C incluyen al menos las siguientes:

Cadena pesada (SEQ ID NO: 24 tal como se divulga en el documento WO2013/079174)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITF

YADKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS

(SEQ ID NO: 42)

Cadena ligera (SEQ ID NO: 25 tal como se divulga en el documento WO2013/079174)

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSN

RPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ

ID NO: 43)

En una realización, el inhibidor de PD-L1 es YW243.55.S70. El anticuerpo YW243.55.S70 es un anti-PD-L1 descrito en el documento WO 2010/077634 (las secuencias de la región variable de la cadena pesada y ligera se muestran en las SEQ ID NOs. 20 y 21, respectivamente) y que tiene una secuencia divulgada en este (o una secuencia sustancialmente idéntica o similar a esta, por ejemplo, una secuencia que tiene una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o superior respecto a la secuencia especificada).

En una realización, el inhibidor de PD-L1 es MDX-1105. MDX-1105, también conocido como BMS-936559, es un anticuerpo anti-PD-L1 descrito en el documento WO2007/005874 y que tiene una secuencia divulgada en este (o una secuencia sustancialmente idéntica o similar a esta, por ejemplo, una secuencia que tiene una identidad de al menos un 85 %, 90 %, 95 % o superior respecto a la secuencia especificada).

En una realización, el inhibidor de PD-L1 es MDPL3280A (Genentech / Roche). MDPL3280A es un anticuerpo monoclonal humano de tipo IgG1 con Fc optimizado que se une a PD-L1. MDPL3280A y otros anticuerpos monoclonales humanos contra PD-L1 se divulgan en la Patente de EE. UU. N.°: 7943743 y la Publicación de EE. u U. N.°: 20120039906.

En otra realización, el inhibidor de PD-L1 es una molécula de anticuerpo anti-PD-LI divulgada en el documento US 2016/0108123, presentado el 13 de octubre de 2015, titulado «Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof».

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 incluye al menos uno o dos dominios variables de la cadena pesada (incluye opcionalmente una región constante), al menos uno o dos dominios variables de la cadena ligera (incluye opcionalmente una región constante) o ambos, y comprende la secuencia de aminoácidos de cualquiera de BAP058-hum01, BAP058-hum02, BAP058-hum03, BAP058-hum04, BAP058-hum05, BAP058-hum06, BAP058-hum07, BAP058-hum08, BAP058-hum09, BAP058-hum10, BAP058-hum11, BAP058-hum12, BAP058-hum13, BAP058-hum14, BAP058-hum15, BAP058-hum16, BAP058-hum17, BAP058-Clon-K, BAP058-Clon-L, BAP058-Clon-M, BAP058-Clon-N o BAP058-Clon-O; o como se describe en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123, o codificada por la secuencia de nucleótidos en la Tabla 1; o una secuencia sustancialmente idéntica (por ejemplo, con una identidad de al menos un 80 %, 85 %, 90 %, 92 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o superior) respecto a cualquiera de las secuencias mencionadas anteriormente.

En otra realización más, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 incluye al menos una, dos o tres regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de una región variable de la cadena pesada y/o una región variable de la cadena ligera de un anticuerpo descrito en la presente, por ejemplo, un anticuerpo seleccionado entre cualquiera de BAP058-hum01, BAP058-hum02, BAP058-hum03, BAP058-hum04, BAP058-hum05, BAP058-hum06, BAP058-hum07, BAP058-hum08, BAP058-hum09, BAP058-hum10, BAP058-hum11, BAP058-hum12, BAP058-hum13, BAP058-hum14, BAP058-hum15, BAP058-hum16, BAP058-hum17, BAP058-Clon-K, BAP058-Clon-L, BAP058-Clon-M, BAP058-Clon-N o BAP058-Clon-O; o como se describen en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123, o codificadas por la secuencia de nucleótidos en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123; o una secuencia sustancialmente idéntica (por ejemplo, con una identidad de al menos un 80 %, 85 %, 90 %, 92 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o superior) respecto a cualquiera de las secuencias mencionadas anteriormente.

En otra realización más, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 incluye al menos una, dos o tres CDR (o de manera colectiva todas las CDR) de una región variable de la cadena pesada que comprenden una secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123, o codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123. En una realización, una o más de las CDR (o de manera colectiva todas las CDR) tienen uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más cambios, por ejemplo, sustituciones o deleciones de aminoácidos, respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123, o codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Tabla 1 del documento 2016/0108123.

En otra realización más, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 incluye al menos una, dos o tres CDR (o de manera colectiva todas las CDR) de una región variable de la cadena ligera que comprenden una secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123, o codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Tabla 1. En una realización, una o más de las CDR (o de manera colectiva todas las CDR) tienen uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más cambios, por ejemplo, sustituciones o deleciones de aminoácidos, respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123, o codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Tabla 1 del documento 2016/0108123. En ciertas realizaciones, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 incluye una sustitución en una CDR de la cadena ligera, por ejemplo, una o más sustituciones en una CDR1, CDR2 y/o CDR3 de la cadena ligera.

En otra realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 incluye al menos una, dos, tres, cuatro, cinco o seis CDR (o de manera colectiva todas las CDR) de una región variable de la cadena pesada y ligera que comprenden una secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 1, o codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123. En una realización, una o más de las CDR (o de manera colectiva todas las CDR) tienen uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o más cambios, por ejemplo, sustituciones o deleciones de aminoácidos, respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123, o codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la Tabla 1 del documento 2016/0108123.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 incluye al menos una, dos o tres CDR o bucles hipervariables de una región variable de la cadena pesada de un anticuerpo descrito en la presente, por ejemplo, un anticuerpo seleccionado entre cualquiera de BAP058-hum01, BAP058-hum02, BAP058-hum03, BAP058-hum04, BAP058-hum05, BAP058-hum06, BAP058-hum07, BAP058-hum08, BAP058-hum09, BAP058-hum10, BAP058-hum11, BAP058-hum12, BAP058-hum13, BAP058-hum14, BAP058-hum15, BAP058-hum16, BAP058-hum17, BAP058-Clon-K, BAP058-Clon-L, BAP058-Clon-M, BAP058-Clon-N o BAP058-Clon-O, de acuerdo con la definición de Kabat y Chothia (por ejemplo, al menos una, dos o tres CDR o bucles hipervariables de acuerdo con la definición de Kabat y Chothia tal como se exponen en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123); o codificados por la secuencia de nucleótidos de la Tabla 1 del documento US 2016/0108123; o una secuencia sustancialmente idéntica (por ejemplo, con una identidad de al menos un 80 %, 85 %, 90 %, 92 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o superior) respecto a cualquiera de las secuencias mencionadas anteriormente; o que tienen al menos una alteración aminoacídica, pero no más de dos, tres o cuatro alteraciones (por ejemplo, sustituciones, deleciones o inserciones, por ejemplo, sustituciones conservativas) respecto a una, dos o tres CDR o bucles hipervariables de acuerdo con Kabat y/o Chothia que se muestran en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123.

En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 puede incluir VHCDR1 de acuerdo con Kabat et al. ((1991), «Sequences of Proteins of Immunological Interest», 5.a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD) o el bucle hipervariable 1 de VH de acuerdo con Chothia et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817, o una combinación de estos, por ejemplo, tal como se muestra en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123. En una realización, la combinación de CDR según Kabat y Chothia de VHCDR1 comprende la secuencia de aminoácidos GYTFTSYWMY (SEQ ID NO: 63) o una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a esta (por ejemplo, que tiene al menos una alteración aminoacídica, pero no más de dos, tres o cuatro alteraciones (por ejemplo, sustituciones, deleciones o inserciones, por ejemplo, sustituciones conservativas)). La molécula de anticuerpo anti-PD-L1 puede incluir además, por ejemplo, VHCDR2-3 de acuerdo con Kabat et al. y VLCDR1-3 de acuerdo con Kabat et al., por ejemplo, tal como se muestra en la Tabla 1 del documento US 2016/0108123.

En una realización preferida, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 para su uso en la invención comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 47, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 48 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 53 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 54;

(b) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 44; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 45 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 49, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 50 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 51;

(c) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 63, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 48 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 53 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 54; o

(d) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 63; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 45 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 53 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 54.

En un aspecto de la realización anterior, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 para su uso en la invención comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 55 y un dominio variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 58.

En un aspecto de la realización anterior, la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 para su uso en la invención comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 62 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 60.

Tabla C. Secuencias de aminoácidos y nucleótidos para el mAb anti-PD-L1 humanizado BAP058-hum013. Se muestran las secuencias de aminoácidos y nucleótidos de las CDR de la cadena pesada y ligera, las regiones variables de la cadena pesada y ligera y las cadenas pesada y ligera.

Dosificación y administración del agente inmunoterapéutico

El agente inmunoterapéutico (tal como una molécula de anticuerpo anti-PD-1 o una molécula de anticuerpo anti-PD-LI) se puede administrar al sujeto de manera sistémica (por ejemplo, por vía oral, parenteral, subcutánea, intravenosa, rectal, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, transdérmica o por inhalación o instalación intracavitaria), por vía tópica o por aplicación a las membranas mucosas, tales como la nariz, garganta y tubos bronquiales.

Las dosificaciones y las pautas terapéuticas del agente inmunoterapéutico (por ejemplo, una molécula de anticuerpo anti-PD-1 o molécula de anticuerpo anti-PD-L1) pueden ser determinadas por un experto. En ciertas realizaciones, el agente inmunoterapéutico (por ejemplo, molécula de anticuerpo anti-PD-1) se administra por inyección (por ejemplo, por vía subcutánea o intravenosa) con una dosis de aproximadamente 1 a 30 mg/kg, por ejemplo, de aproximadamente 5 a 25 mg/kg, de aproximadamente 10 a 20 mg/kg, de aproximadamente 1 a 5 mg/kg o de aproximadamente 3 mg/kg. La programación posológica puede variar, por ejemplo, de una vez a la semana a una vez cada 2, 3 o 4 semanas. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 10 a 20 mg/kg en semanas alternas. En otra realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 1 a 10 mg/kg, o de aproximadamente 1 a 5 mg/kg o de aproximadamente 3 mg/kg cada 4 semanas.

Por ejemplo, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra o se utiliza con una dosis fija o invariante. En algunas realizaciones, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra por inyección (por ejemplo, por vía subcutánea o intravenosa) con una dosis (por ejemplo, con una dosis fija) de aproximadamente 200 mg a 500 mg, por ejemplo, de aproximadamente 250 mg a 450 mg, de aproximadamente 300 mg a 400 mg, de aproximadamente 250 mg a 350 mg, de aproximadamente 350 mg a 450 mg, o de aproximadamente 300 mg a aproximadamente 400 mg. La programación posológica (por ejemplo, programación posológica fija) puede variar de, por ejemplo, una vez a la semana a una vez cada 2, 3, 4, 5 o 6 semanas. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 300 mg a 400 mg una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 300 mg una vez cada tres semanas. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 400 mg una vez cada cuatro semanas. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 300 mg una vez cada cuatro semanas. En una realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 400 mg una vez cada tres semanas.

En otra realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis fija de aproximadamente 300 mg a 400 mg una vez cada tres semanas o una vez cada cuatro semanas. En un subconjunto de esta realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis fija de aproximadamente 400 mg cada cuatro semanas. En otro subconjunto más de esta realización, la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis fija de aproximadamente 300 mg cada tres semanas.

Ejemplos

Se pretende que los siguientes ejemplos ilustren la invención y no se deben interpretar como limitaciones de esta. Las temperaturas se indican en grados centígrados. Si no se menciona lo contrario, todas las evaporaciones se realizan a presión reducida, preferentemente entre aproximadamente 15 mm de Hg y 100 mm de Hg (= 20-133 mbar). La estructura de los productos finales, intermedios y materiales de partida se confirma mediante métodos analíticos estándar, por ejemplo, microanálisis y características espectroscópicas, por ejemplo, MS, IR, RMN. Las abreviaturas utilizadas son las convencionales en la técnica.

Todos los materiales de partida, bloques estructurales, reactivos, ácidos, bases, agentes deshidratantes, disolventes y catalizadores utilizados para sintetizar los compuestos de la presente invención se pueden adquirir de proveedores comerciales o se pueden producir mediante métodos de síntesis orgánica conocidos por el experto en la técnica (Houben-Weyl 4.a Ed. 1952, Methods o f Organic Synthesis, Thieme, Volumen 21). Además, los compuestos de la presente invención se pueden producir mediante métodos de síntesis orgánica conocidos por un experto en la técnica tal como se muestra en los siguientes ejemplos.

La invención se ilustra, pero de ningún modo se limita, mediante los siguientes Ejemplos.

Abreviaturas

ACN acetonitrilo

ac. acuoso

a ancho

BSA albúmina de suero bovino

CPBA: ácido 3-clorobenzoperoxoico

d doblete

dd doblete de dobletes

DCM diclorometano

DMF N,N-dimetilformamida

DMSO sulfóxido de dimetilo

EtOAc acetato de etilo

g gramos

h hora(s)

HPLC cromatografía líquida de alta resolución

PI patrón interno

LCMS cromatografía líquida acoplada con espectrometría de masas

M molar

m multiplete

MeOH metanol

min minutos

ml mililitro(s)

mmol milimoles

MS espectrometría de masas

m/z relación entre masa y carga

NADPH beta-nicotinamida dinucleótido fosfato, forma reducida

RMN resonancia magnética nuclear

ppm partes por millón

ta temperatura ambiente

tR tiempo de retención

s singlete

sat. saturado

t triplete

THF tetrahidrofurano

Métodos UPLC:

UPLC 2 min: Waters UPLC Acquity; columna: Acquity HSS T3, 1,8 mm, 2,1*50 mm, a 60 °C, eluyente A: agua 0.05 % de HCOOH acetato de amonio 3.75 mM, B: ACN 0.04 % de HCOOH, gradiente: de un 5 a un 98 % de B en 1,4 min, flujo: 1,0 ml/min.

UPLC 10 min: Waters UPLC Acquity; columna: Acquity HSS T3, 1,8 mm, 2,1*50 mm, a 60 °C, eluyente A: agua 0.05 % de HCOOH acetato de amonio 3.75 mM, B: ACN 0.04 % de HCOOH, gradiente: de un 5 a un 98 % de B en 9,4 min, se mantiene 0,4 min, flujo: 1 ml/min.

Ejemplo 1: Preparación de 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol

A una solución enfriada de 6-cloro-2-(metiltio)pirimidin-4-amina (15,0 g, 85 mmol) en DMF (150 ml), se añadió N-bromosuccinimida (16,7 g, 94 mmol) en porciones con agitación a 0 °C. Después de 10 min, la reacción se desactivó mediante la adición de agua a 0 °C. La mezcla de reacción se diluyó con salmuera y se extrajo 3 veces con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron dos veces con una solución acuosa saturada de NaHCO3 y a continuación salmuera, se separaron y se filtraron a través de un separador de fases con Na2SO4 para secarlas. El filtrado se concentró al vacío para obtener el compuesto del título (18,8 g, 74 mmol, 80 % de rendimiento, 92 % de pureza) como un sólido incoloro, el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. M/z = 254/256/258 [M+H]+, Rt = 0,95 min (UPLC 2 min), 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) 58,03 (s a, 1H), 7,25 (s a, 1H), 2,42 (s, 3H).

5-Bromo-2-(met¡lt¡o)-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na

Una mezcla de 5-bromo-6-cloro-2-(metiltio)pirimidin-4-amina (17,8 g, 70 mmol), 1H-pirazol (4,7 g, 69 mmol) y KOfBu (7,9 g, 70 mmol) en DMF (250 ml) se agitó a 60 °C durante 16 horas. El disolvente se redujo al vacío y el residuo se diluyó con una solución acuosa saturada de NaHCO3 y se extrajo 3 veces con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se separaron y se filtraron a través de un separador de fases con Na2SO4 para secarlas. El filtrado se concentró al vacío para obtener el compuesto del título (20 g, 64 % de pureza), el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. M/z = 286/288/290 [M+H]+, Rt = 0,85 min (UPLC 2 min), 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) 58,35 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,03 (s a, 1H), 7,81 (s a, 1H), 7,26 (s a, 1H), 6,55 (s, 1H), 2,46 (s, 3H).

5-Bromo-2-(met¡lsulf¡n¡l)-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na

A una suspensión de 5-bromo-2-(metiltio)-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina (20 g, 64 % de pureza) en DCM (100 ml), se añadió una solución de ácido 3-clorobenzoperoxoico (9,3 g, 53,7 mmol) en DCM (100 ml) gota a gota con agitación en 20 min a 0 °C y la mezcla resultante se agitó a 23 °C durante 16 horas. La mezcla de reacción se filtró para recolectar el precipitado y se lavó con DCM. El sólido se secó al vacío para obtener el compuesto del título (2,4 g, 7,6 mmol, 11 % de rendimiento en dos pasos) como un sólido incoloro. M/z = 302/304 [M+H]+, Rt = 0,53 min (UPLC 2 min), 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) 58,63 (s a, 1H), 8,38 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,60-6,61 (m, 1H), 2,86 (s, 3H).

ácido (1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-¡l)borón¡co

A una mezcla de 5-bromo-2-(metilsulfinil)-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina (50 mg, 0,17 mmol) y ácido (1H-pirazol-4-il)borónico (18 mg, 0,17 mmol) en DMF (1 ml), se añadió Cs2CO3 (54 mg, 0,17 mmol) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a 23 °C. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo 3 veces con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y a continuación salmuera, se separaron y se filtraron a través de un separador de fases con Na2SO4 para secarlas. El filtrado se concentró al vacío para obtener el compuesto del título (30 mg, 0,066 mmol, 40 % de rendimiento), el cual se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. M/z = 350/352 [M+H]+, Rt = 0,55 min (UPLC 2 min).

1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol

A una solución agitada enérgicamente del ácido (1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-il)borónico (30 mg, 0,066 mmol) en THF (1 ml), se añadió una solución acuosa de NaOH al 25 % p (0,021 ml, 0,13 mmol) y una solución acuosa de H²O² al 30 % (0,020 ml, 0,20 mmol) a 0 °C. Después de 30 minutos, se añadió otra solución acuosa de H²O² al 30 % (0,020 ml, 0,20 mmol) y la mezcla se agitó a la misma temperatura durante 2,5 horas en total. La mezcla de reacción se desactivó con una solución acuosa saturada de NH4Cl, a continuación se diluyó con agua y se extrajo 4 veces con DCM y 3 veces con una mezcla de DCM/MeOH 4/1. Las fases orgánicas combinadas se filtraron a través de un separador de fases para secarlas y el filtrado se concentró al vacío. El producto crudo se absorbió sobre isolute y se purificó mediante cromatografía en columna (ISCO, columna redisep con 12 g de sílice, flujo: 30 ml/min, disolvente: CH²Ch:MeOH se parte de 1:0, se mantiene durante 3 min, a continuación se modifica hasta 96:4 en 25 min). Las fracciones del producto se combinaron y se concentraron al vacío para obtener el compuesto del título (14 mg, 0,040 mmol, 60 % de rendimiento) como un sólido incoloro. M/z = 322/324 [M+H]+, Rt = 0,58 min (UPLC 2 min); Rt = 2,27 min; pureza a 254 nm: >95 % (UPLC 10 min), 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) 59,23 (s a, 1H), 8,44 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,32 (s a, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,90-7,81 (m, 1H), 7,46 (s a, 2H), 6,63-6,50 (m, 1H).

Como alternativa, se podría hacer reaccionar en primer lugar 6-cloro-2-(metiltio)pirimidin-4-amina con pirazol en presencia de una base, para generar 2-(metiltio)-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina; seguido de un tratamiento con NBS para generar 5-bromo-2-(metiltio)-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina.

Ejemplo 1A: Preparación de 1-(6-am¡no-5-bromo-2-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-1H-p¡razol-4-ol

A una solución de 5-bromo-6-doro-2-(metiltio)pirimidin-4-amina 13 g (52 mmol) en 450 ml de DCM, se añadieron gota a gota lentamente 13 g (57 mmol) del ácido m-cloroperbenzoico (77 %) (Sigma-Aldrich) disueltos en 100 ml de DCM. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El precipitado blanco formado se filtró, se lavó varias veces con DCM y se secó. Se obtuvieron 14 g (99 %) del compuesto del título. M/z = 270/272 [M+H]+, Rt = 0,56 min (UPLC 2 min), 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,17 (d, 2H), 2,78 (s, 3H).

5-bromo-6-cloro-2-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na

Se suspendieron 2 g (7,4 mmol) de 5-bromo-6-cloro-2-(metilsulfinil)pirimidin-4-amina en 30 ml de DMF. A esta suspensión, se añadieron 0,5 g (7,4 mmol) de 1H-pirazol 1,5 g (4,4 mmol) de carbonato de cesio. La mezcla de reacción se agitó enérgicamente a temperatura ambiente durante 10 min. La solución se vertió sobre 200 ml de agua fría. El precipitado formado se filtró, se lavó con agua fría y se secó. El producto deseado se obtiene como un sólido blanco (1,5 g, 72 %). M/z = 274/276 [M+H]+, Rt = 0,80 min (UPLC 2 min), 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,44 (d, 1H), 8,15 (d, 2H), 7,81 (d, 1H), 6,56 (dd, 1H).

ácido (1-(6-am¡no-5-bromo-2-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-1H-p¡razol- 4-¡l)borón¡co

Una mezcla de 0,10 g (0,36 mmol) de 5-bromo-6-cloro-2-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina, 0,14 g (0,73 mmol) de 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol y 0,12 g (0,36 mmol) de carbonato de cesio en 10 ml de acetonitrilo se agitó durante 4 h a 60 °C en un tubo de vidrio sellado. A continuación, el disolvente se eliminó a presión reducida. El sólido obtenido se lavó con éter/pentano y se secó. La mezcla de ácido borónico y éster borónico se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional.

1-(6-am¡no-5-bromo-2-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-1H-p¡razol-4-ol

A una solución del ácido (1-(6-amino-5-bromo-2-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-4- il)borónico o 5-bromo-2-(1H-pirazol-1-il)-6-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-amina en THF (2,5 ml), enfriada hasta 0 °C, se añadieron 2 ml de NaOH 1 N y H²O² (30 %) (0,23 ml, 2,32 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La reacción se acidificó hasta un pH de 3-4 mediante la adición de HCl 1 N, se extrajo con acetato de etilo y se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró al vacío. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice utilizando DCM-MeOH (2-5 %). M/z = 322/324 [M+H]+, Rt = 0,58 min (UPLC 2 min); 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) 59,18 (s a, 1H), 8,57-8,78 (m, 1H), 8,29 (s a, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,40 (s a, 1H), 6,55 (s, 1H).

Ejemplo 2 - A¡slam¡ento/caracter¡zac¡ón del metabol¡to de 5-bromo-2.6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-am¡na: Ident¡f¡cac¡ón del metabol¡to in v itro en m¡crosomas humanos, de rata y perro utilizando cromatografía líquida y espectrometría de masas

Abreviaturas:

ACN: acetonitrilo

CC: curva de calibrado

PI: patrón interno

DMSO: sulfóxido de dimetilo

MRM: monitorización de reacción múltiple

NADH: nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (reducido)

Rpm: revolución por minuto

Microsomas hepáticos

Microsomas hepáticos de rata (macho, agrupación, Sprague Dawley)

Fuente: XenoTech, LLC (Kansas, EE. UU.)

Contenido proteico: 20 mg/ml

Número de catálogo: R I 000, Número de lote: 0710623

Microsomas hepáticos de perro (macho, agrupación, Beagle)

Fuente: XenoTech, LLC (Kansas, EE. UU.)

Contenido proteico: 20 mg/ml

Número de catálogo: D I 000, Número de lote: 0810143

Microsomas hepáticos humanos (género mixto, agrupación)

Fuente: XenoTech, LLC (Kansas, EE. UU.)

Contenido proteico: 20 mg/ml

Número de catálogo: H061 0, Número de lote: 101042

Soluciones patrón y reactivos

Artículo de prueba

Se preparó una solución patrón 2 mM y 0,2 mM de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina en DMSO para las incubaciones in vitro. El contenido orgánico final en las incubaciones de microsomas hepáticos fue de un 0,5 %.

Se preparó una solución patrón 2,5 mM de 1-(6-amino-5-bromo-2-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-4-ol y de 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-6-ol por separado en DMSO. Las soluciones patrón se diluyeron adicionalmente en acetonitrilo para obtener una concentración 1 uM de 1-(6-amino-2-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-4-ol y 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-6-ol para los análisis cromatográficos.

Se preparó una solución patrón 0,1 mM de diclofenaco y verapamilo en DMSO para las incubaciones in vitro. El contenido orgánico final en las incubaciones de microsomas hepáticos fue de un 0,5 %.

Incubación es de microsomas in vitro

Se incubó proteína microsómica hepática (25 ul para 0,5 mg/ml; 15 ul para 0,3 mg/ml), NADPH (100 ul, concentración final de 2 mM) y tampón de fosfato (870 ul para 0,5 mg/ml; 880 ul para 0,3 mg/ml) en un tubo de microcentrífuga en una incubadora con agitador orbital durante 10 min que se mantuvo a 37 °C. Las reacciones se iniciaron añadiendo 5 ul de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina 2 mM y 0,2 mM (concentraciones finales de 10 uM para 0,5 mg/ml de proteína; concentración final de 1 uM para 0,3 mg/ml de proteína; concentración de DMSO final de un 0,5 %) y las muestras se incubaron a 37 °C. Se tomaron alícuotas (200 ul) del tubo de reacción a los 0, 60 y 120 minutos y la reacción se desactivó mediante la adición de 100 ul de acetonitrilo. Las reacciones se llevaron a cabo por duplicado. Las muestras desactivadas se centrifugaron a 14000 rpm (aproximadamente 21 000 g) durante 10 minutos (centrífuga Eppendorf 5810 R) y el sobrenadante se analizó mediante LCMs /MS.

Se llevaron a cabo incubaciones de control (sin adición de NADPH) e incubaciones de blanco (sin adición de artículo de prueba) de forma individual para cada especie. Estas muestras se tomaron a los 0 y 120 min y se desactivaron utilizando acetonitrilo. El sobrenadante se analizó para detectar cualquier interferencia de la matriz y degradación que no fuera microsómica. Como control positivo, se utilizó diclofenaco en microsomas hepáticos humanos y de rata, y verapamilo en microsomas hepáticos de perro. Los experimentos de control y la reacción se llevaron a cabo de forma individual. Los datos de recambio metabólico del diclofenaco y verapamilo coincidieron con los datos del historial interno.

Condiciones de instrumentación y métodos analíticos

Las muestras se procesaron utilizando un método de precipitación de proteínas y a continuación se analizaron empleando un gradiente lineal con un tiempo de análisis de 28 min en un instrumento de HPLC acoplado con espectrometría de masas tándem (espectrómetro de masas API 4000). Cada muestra se inyectó y se sometió a un barrido por separado de Q1 (MIH+/MH-) y MS/MS.

Los diferentes picos de metabolitos posibles se identificaron en un barrido de Q1 después de evaluar la interferencia de la matriz utilizando muestras de blanco exentas del artículo de prueba, y se confirmaron a partir del patrón de fragmentación (barrido de MS/MS). En la tabla 9 se presenta un resumen del método analítico.

Tabla 9: Condiciones cromato ráficas de es ectrometría de masas

Método analítico modificado:

También se desarrolló un método analítico alternativo para incrementar los tiempos de retención y para evaluar otros metabolitos además del metabolito M-1 identificado. Se cromatografiaron soluciones acuosas de 1-(6-amino-5-bromo-2(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-1H-p¡razol-4-ol y 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol (1 uM) conjuntamente con las muestras ¡ncubadas in vitro empleando un método analít¡co mod¡f¡cado para conf¡rmar la ¡dent¡dad. En la tabla 10 se presenta un resumen del método mod¡f¡cado.

Tabla 10: Condiciones cromatográficas y de espectrometría de masas modificadas

Determ¡nac¡ón del balance de masa en m¡crosomas hepát¡cos humanos

Se d¡luyó en ser¡e una soluc¡ón patrón de 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡nd¡n-4-am¡na y 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol en DMSO para obtener concentrac¡ones de soluc¡ones enr¡quec¡das de 1, 0,5 y 0,25 mM y 0,5, 0,25 y 0,125 mM, respect¡vamente.

Se prepararon patrones de cal¡brado de 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡nd¡n-4-am¡na y 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol añad¡endo 5 ul de las soluc¡ones enr¡quec¡das respect¡vas a 995 ul de tampón de ¡ncubac¡ón para obtener muestras de 10, 5, 2,5 y 1,25 uM para 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡nd¡n-4-am¡na y muestras de 5, 2,5, 1,25 y 0,625 uM para 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol.

Se d¡luyó una alícuota de 200 ul de estas muestras enr¡quec¡das de 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡nd¡n-4-am¡na y 1-(6-am¡no-5-bromo-2-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-4-¡l)-1H-p¡razol-4-ol con 100 ul de aceton¡tr¡lo. Se d¡luyó ad¡c¡onalmente una alícuota (25 ul) de estas muestras con 100 ul de patrón ¡nterno (Haloper¡dol, 1 ug/ml en aceton¡tr¡lo).

Las muestras de incubación también se prepararon de un modo similar al de los patrones de calibrado añadiendo 25 ul de la muestra desactivada con 100 ul de patrón interno.

A continuación, las muestras de incubación se cuantificaron independientemente para determinar 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pi rimindin-4-amina y

1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol en modo MRM, y en la tabla 11 se presentan los detalles del método.

Tabla 11: Condiciones cromato ráficas de es ectrometría de masas-análisis de MRM

Resultados

Las muestras in vitro se evaluaron para determinar la presencia de metabolitos. En la Tabla 1 y a continuación se presentan los valores de MH+ (Q I) y los iones de los productos (MS/MS) en diferentes tiempos de retención para los posibles metabolitos de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina con el patrón de fragmentación.

Tabla 1: Patrón de fragmentación para la (5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina) original y sus metabolitos

En la Tabla 2 se presenta un resumen de estos posibles metabolitos de 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razoM-il)pmmmdm-4-amma detectados en las diferentes especies.

T l 2 R m n l m li - r m -2 - 1H- r z l-1-il r m n n-4- m n

X indica presencia

En la Tabla 3 se presenta la abundancia relativa del compuesto original y su metabolito en muestras de microsomas. Tabla 3: Abundanc¡a relat¡va de 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡nd¡n-4-am¡na (10 uM) y sus metabol¡tos detectados en m¡crosomas hepát¡cos ut¡l¡zando anál¡s¡s de MRM

El compuesto original es 5-bromo-2,6-d¡(1H-p¡razol-1-¡l)pmm¡nd¡n-4-am¡na

ND: no detectado; la abundancia relativa del compuesto original y sus metabolitos son valores cuantitativos; se calcula considerando que la eficacia de ionización es similar para el compuesto original y sus metabolitos; * se consideró que los valores de % restante superiores a un 100% eran 100 para los cálculos.

En las Figuras 1 a 3 se presentan cromatogramas de iones extraídos (XIC), espectros de Q1 y MS/MS de patrones acuosos y muestras de microsomas seleccionadas.

Se produjo un metabolito de monooxigenación (M-I, 6,22 min) en microsomas hepáticos de rata, perro y humanos. El porcentaje de metabolito respecto al compuesto original ^-bromo^^-diOH-pirazoM-iOpirim indin^-amina) fue uniformemente bajo. Sin embargo, este análisis asume una eficacia de ionización igual para el compuesto original y el metabolito (Tabla 3).

Independientemente, se estudió la pérdida en función del tiempo de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina (1 uM), diclofenaco (control positivo para rata y ser humano, 0,5 uM), verapamilo (control positivo para perro, 0,5 uM) en microsomas hepáticos (0,3 mg/ml de concentración proteica). Los resultados se presentan en la Tabla 4 y la Tabla 5. Tabla 4: Pérdida en función del tiempo de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazoM-il)pirim indin-4-amina (1uM), incubación en mi r m h i h m n rr r m ml

El compuesto original es 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina

Se consideró que los valores de % restantes superiores a un 100 % eran 100 para los cálculos

Tabla 5: Pérdida en función del tiempo de los controles positivos (0,5 uM), incubación en microsomas hepáticos 03 m /ml

Las incubaciones de control de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina (sin adición de NADPH) fueron estables hasta 120 min, lo cual indica que no se produce metabolismo que no esté mediado por CYP. Las incubaciones de blanco (sin adición de artículo de prueba) no mostraron ninguna interferencia de la matriz (Tabla 4).

El metabolismo relativo de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina para concentraciones de 1 uM y concentraciones de proteína microsómica de 0.3 mg/ml en las especies evaluadas fue DLM>HLM>RLM. Los resultados se presentan en la Tabla 6.

Tabla 6: Metabolismo relativo de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazoM-il)pirim indin-4-amina en diferentes especies Microsomas Concentración final Concentración % de metabolismo del Concentración de del compuesto final de proteína compuesto original a analito metabolizado original (uM) los 120 min (uM)*

m /ml

| Ser humano |__________________ |__________________| 76________ 78_______ | 0,76_______0,78_____ |

* La concentración de analito metabolizado (uM) se calcula utilizando la siguiente Fórmula:

Concentración de analito metabolizado = (% de metabolismo a los 120 min X concentración final de compuesto original)/100.

El compuesto original es 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina

Se sintetizó 1-(6-amino-5-bromo-2-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-4-ol y 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol. A continuación se presentan las estructuras de estos compuestos.

Posteriormente, se determinó la identidad del metabolito detectado en las muestras de incubación de microsomas humanos mediante una cromatografía conjunta con los compuestos, 1-(6-amino-5-bromo-2-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-4-il)-1H-pirazol-4-ol y 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol, realizando la monitorización en modo Q1. Los resultados de la cromatografía conjunta confirmaron la identidad del metabolito (M-I) detectado en las muestras de microsomas como 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol. El cromatograma se presenta en la Figura 4.

La 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina y su metabolito (M-I, 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol) se identificaron en las muestras de microsomas hepáticos humanos incubadas en modo MRM utilizando un patrón de curva de calibrado de 4 puntos. El porcentaje de metabolito M-I en microsomas hepáticos humanos es de aproximadamente un 15-20% después de 60 minutos de incubación con el compuesto original. Se consiguió un balance de masa de aproximadamente un 95 a un 107 % para el metabolismo en microsomas hepáticos humanos. Los resultados se presentan en la Tabla 7. En la Tabla 8 se presenta un resumen de la curva de calibrado para 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina y 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol.

Tabla 7: Balance de masa del metabolismo de 5-bromo-2,6-di(1H-pirazoM-il)pirim indin-4-amina en microsomas h i h m n iliz n n li i MRM

a Los valores se encuentran dentro de un 20 % /- de ULOQ (límite superior de cuantificación)

Tabla 8: Resumen de la curva de calibrado para 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina y 1-(4-amino-5-r m - - 1H- ir z M -il irim i in-2-ilHH- ir z l-4- l n m i r m h i h m n

El metabolito M-I formado en los microsomas hepáticos humanos representa un 15-20 % del compuesto original. El metabolito M-I formado en rata y perro no se ha determinado cuantitativamente y, por consiguiente, la formación de este metabolito puede ser más elevada o más baja que en microsomas hepáticos humanos.

En conclusión, la 5-bromo-2,6-di(1H-pirazol-1-il)pirimindin-4-amina se metaboliza mediante una ruta de oxidación en los microsomas humanos y de las especies preclínicas evaluadas in vitro y el metabolito detectado fue idéntico a 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol según se confirmó cromatográficamente.

Ejemplo 3: Ensayo de unión de radioligando a hA2A in v itro

Se determinó la afinidad de unión del compuesto mediante un ensayo de competición de unión de un radioligando (RLB) utilizando [3H]-ZM241385 (ARC, n.° de cat. ART0884) como radioligando y membranas preparadas a partir de células HEK-293 que expresaban de forma estable el receptor A2A de adenosina humano (Perkin Elmer RBHA2AM400UA) utilizando Tris 50 mM de pH 7,5, MgCh1 mM, 0,1 mg/ml de BSA, 0,2 U/ml de adenosina desaminasa como tampón de ensayo. Las membranas se acoplaron previamente a microesferas de SPA de aglutinina de germen de trigo (WGA) con silicato de itrio (YSI) (Perkin Elmer RPNQ0023) antes de la equilibración con el radioligando (3H-ZM241385 2 nM, 0,5 ug/pocillo de membrana con hA2A, 50 ug/pocillo de YSI WGA, concentración final) y un intervalo de concentraciones del compuesto de prueba (concentración final de DMSO de un 0,3%) en un volumen final de 100 ul. La unión no específica (NSB) se determinó con XAC 10 |jM. Se utilizaron placas de ensayo blancas de 384 pocillos (Greiner # 781207). Las placas de ensayo se incubaron a temperatura ambiente hasta el equilibrio (1,5 horas) antes de someterlas a centrifugación y recuento en un contador de centelleo beta (TopCount NXT), registrándose la medición como recuentos por minuto (CPM). El valor de CPM se convirtió en porcentaje de inhibición utilizando la siguiente ecuación:

(sample - NSB) - (TB - NSB)

(TB— NSB) ^{x 100}

Donde la unión total (TB) es la unión en ausencia de compuesto competidor.

El valor de CI⁵⁰ obtenido a partir de las curvas de respuesta-concentración se convirtió en la constante de inhibición (Ki) utilizando la ecuación de Cheng-Prusoff.

jemplo 1

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto que es 1-(4-am¡no-5-bromo-6-(1H-p¡razol-1-¡l)p¡r¡m¡d¡n-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol de fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable de este.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, donde el compuesto se encuentra en una forma aislada.

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.

4. Una combinación que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con la realización 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, y uno o más agentes ¡nmunoterapéuticos.

5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, solo o combinado con uno o más agentes ¡nmunoterapéuticos, para su uso en el tratamiento del cáncer, opcionalmente donde el compuesto está presente en la composición de la reivindicación 2.

6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de este, o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3 para su uso en un método de inhibición del receptor A2a de adenosina en un sujeto.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3 o una combinación de acuerdo con la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de un cáncer que se selecciona entre un cáncer de pulmón, un melanoma, un cáncer renal, un cáncer hepático, un mieloma, un cáncer de próstata, un cáncer de mama, un cáncer colorrectal, un cáncer pancreático, un cáncer de cabeza y cuello, cáncer anal, cáncer gastroesofágico, cáncer de tiroides, cáncer cervicouterino, una enfermedad linfoproliferativa o un cáncer hematológico, linfoma de linfocitos T, linfoma de linfocitos B, un linfoma no hodgkiniano o una leucemia, opcionalmente donde el cáncer es un carcinoma, concretamente cáncer de pulmón y más concretamente cáncer de pulmón no microcítico.

8. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 5 o 7, o una composición farmacéutica para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, o una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, donde uno o más agentes ¡nmunoterapéuticos se seleccionan del grupo constituido por anticuerpos ant¡-CTLA4, anticuerpos ant¡-PD-1 y anticuerpos ant¡-PD-L1, preferentemente donde el agente ¡nmunoterapéutico se selecciona del grupo constituido por: Ipilimumab, Tremelimumab, Nivolumab, Pembrolizumab, Pidilizumab (CT-011), AMP-224, AMP-514 (MEDI0680), MPDL3280A, MEDI4736, MSB0010718C, YW243.55.S70 y MDX-1105, más preferentemente donde el agente ¡nmunoterapéutico es un anticuerpo ant¡-PD-1.

9. Un compuesto para su uso o una composición farmacéutica para su uso o una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 4, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 5 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 13, una secuencia de aminoácidos VLc Dr 2 de la SEQ ID NO: 14 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 15;

(b) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 1; una secuencia de aminoácidos v Hc DR2 de la SEQ ID NO: 2 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID No : 3; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 10, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 11 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 12;

(c) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 41, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 5 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 13, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 14 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 15; o

(d) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 41; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 2 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 3; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 10, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 11 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 12,

o

donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 20,

o

donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 22,

o

donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una VH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 6 y una VL que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16,

o

donde el anticuerpo anti-PD-1 comprende una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 8 y una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 18.

10. Un compuesto para su uso o una composición farmacéutica para su uso o una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, donde la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 300 mg una vez cada tres semanas,

o

donde la molécula de anticuerpo anti-PD-1 se administra con una dosis de aproximadamente 400 mg una vez cada cuatro semanas.

11. Un compuesto para su uso o una composición farmacéutica para su uso o una combinación para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8, 9 o 10, donde los agentes inmunoterapéuticos son un anticuerpo anti-PD-L1, opcionalmente

donde la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada (VH) que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 47, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 48 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una región variable de la cadena ligera (VL) que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 53 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 54;

(b) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 44; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 45 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 49, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 50 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 51;

(c) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 63, una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 48 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 52, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 53 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 54; o

(d) una VH que comprende una secuencia de aminoácidos VHCDR1 de la SEQ ID NO: 63; una secuencia de aminoácidos VHCDR2 de la SEQ ID NO: 45 y una secuencia de aminoácidos VHCDR3 de la SEQ ID NO: 46; y una VL que comprende una secuencia de aminoácidos VLCDR1 de la SEQ ID NO: 49, una secuencia de aminoácidos VLCDR2 de la SEQ ID NO: 50 y una secuencia de aminoácidos VLCDR3 de la SEQ ID NO: 51.

12. Un compuesto para su uso o una composición farmacéutica para su uso o una combinación para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, donde la molécula de anticuerpo anti-PD-L1 comprende un dominio variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 55 y un dominio variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 58.

13. Un compuesto para su uso o una composición farmacéutica para su uso o una combinación para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, donde el agente inmunoterapéutico se administra conjuntamente en una única composición o se administra por separado en dos o más formas de composiciones diferentes.

14. Un compuesto para su uso o una composición farmacéutica para su uso o una combinación para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, donde el agente inmunoterapéutico se administra conjuntamente en una única composición o se administra de forma concurrente con, antes o después de, el compuesto: 1-(4-amino-5-bromo-6-(1H-pirazol-1-il)pirimidin-2-il)-1H-pirazol-4-ol.

15. Un proceso para preparar 1-(4-ammo-5-bromo-6-(1H-p¡razoM-¡l)-pmm¡dm-2-¡l)-1H-p¡razol-4-ol tal como se representa en un esquema sintético que es: