ES2886884T3 - Suministro dirigido de sustancias farmacéuticas que contienen amina terciaria - Google Patents

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Abstract

Una composición de conjugado de fármaco y ligando (LDC), en donde la composición de LDC está representada por la estructura de la Fórmula 1: **(Ver fórmula)** en donde "Ligando" es una unidad de ligando (L), en donde L es capaz de unirse selectivamente a un resto diana, y L es un anticuerpo o fragmento del mismo para definir un conjugado de anticuerpo y fármaco (ADC), en donde el resto diana es un antígeno capaz de unirse selectivamente al ADC, y en donde el antígeno es una proteína, glicoproteína o carbohidrato de la superficie celular accesible extracelularmente que se presenta preferentemente en las células anómalas en comparación con las células normales, en donde las células anómalas y normales son células de un mamífero, en donde las células anómalas son células hiperproliferativas; Lb es un enlazador primario; Q1 es Aa-Ww, en donde A es una unidad de extensión opcional de manera que el subíndice a es 0 cuando A está ausente o 1 cuando A está presente y está opcionalmente compuesto por dos, tres o cuatro subunidades; Q2 es W'w'-E-, en donde Q2, cuando está presente, está unido a V, Z1, Z2 o Z3; Ww y Ww' son unidades escindibles, en donde Ww de Q1 es capaz de escisión selectiva por una proteasa reguladora o intracelular en comparación con las proteasas séricas, o por glutatión a través del intercambio de disulfuro, o es más reactivo a la hidrólisis en condiciones más ácidas presentes en los lisosomas en comparación con el pH fisiológico del suero, W'-E de Q2 proporciona un enlace glicosídico escindible por una glicosidasa localizada intracelularmente, y el subíndice w es 0 o 1 de manera que W está ausente cuando w es 0 o W está presente cuando w es 1, y el subíndice w' es 0 o 1, en donde W'-E está ausente cuando w' es 0 o W'-E está presente cuando w' es 1, y en donde w + w' es 1 de manera que uno y solo uno de W, W' está presente; V, Z1, Z2 y Z3 son =N- o =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o halógeno, -NO2, -CN u otro grupo aceptor de electrones, un grupo donante de electrones, o el sustituyente -Q2 o -C(R8)(R9)-D+ de la Fórmula 1, en donde al menos uno de V, Z1, Z2 y Z3 es =C(R24)- cuando w es 1, y al menos dos de V, Z1, Z2 y Z3 son =C(R24)- cuando w' es 1, siempre que cuando w es 1, Q2 está ausente y uno y solo un R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que - C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y los sustituyentes Q1-J- y -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí, siempre que cuando w' es 1, uno y solo un R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y uno y solo otro R24 es Q2 de manera que Q2 está unido a otro de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y los sustituyentes Q2 y -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí; R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; R' es hidrógeno o es halógeno, -NO2, -CN u otro grupo aceptor de electrones, o es un grupo donante de electrones; E y J son independientemente -O-, -S- o -N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; D+ representa una estructura de un fármaco que contiene una amina terciaria cuaternizada; y el subíndice p es una carga de fármaco promedio que tiene un número que varía de 1 a 24; y en donde dicha escisión por proteasa, intercambio de disulfuro, hidrólisis ácida o escisión por glicosidasa da como resultado la liberación del fármaco (D) que contiene amina terciaria a partir de un compuesto conjugado de fármaco y ligando de la composición.

Description

DESCRIPCIÓN
Suministro dirigido de sustancias farmacéuticas que contienen amina terciaria
Antecedentes de la invención
La invención se refiere a conjugados ligando-fármaco (LDC) para el suministro dirigido de fármacos que contienen amina terciaria a células anómalas asociadas con un estado patológico dado o en las proximidades de tales células, como se define en las reivindicaciones. El ligando de direccionamiento de tal un LDC expone selectivamente las células anómalas, en contraste con las células normales distantes de las células anómalas, a un fármaco que contiene amina terciaria. Esa exposición selectiva se logra al concentrar el fármaco en el sitio de acción deseado mediante la unión del ligando de direccionamiento del LDC sobre las células anómalas o en sus proximidades. Como resultado, se reduce la exposición de células normales distantes al fármaco, reduciendo así los efectos secundarios no deseados al tiempo que se reduce la contribución de las células anómalas al estado patológico. En general, el diseño de un LDC implica la consideración de una variedad de factores, que incluye el requisito de que el fármaco tenga un sitio para unirse a un resto enlazador que une el fármaco al ligando de direccionamiento y sea capaz de liberar el fármaco en el sitio diana. Un compuesto que contiene amina terciaria puede no tener un sitio de unión adecuado, por lo que se necesita la modificación de un fármaco parental para la unión al resto enlazador de un LDC. En esos casos, el fármaco liberado no es el fármaco parental, sino el fármaco modificado. Por ejemplo, un fármaco que contiene una amina terciaria puede modificarse al eliminar uno de sus sustituyentes de amina para proporcionar una amina secundaria, que luego podría incorporarse en un LDC a través de un grupo funcional que contiene carbonilo. Sin embargo, a menudo el fármaco modificado tendrá una actividad biológica significativamente reducida o cambios no deseados en otras propiedades farmacológicas, en comparación con el fármaco parental que contiene amina terciaria.
Debido a la dificultad de proporcionar un sitio alternativo de conjugación y al deseo de retener la máxima actividad biológica de un fármaco que contiene amina terciaria, existe una necesidad en la técnica para los LDC que usen el nitrógeno de la amina terciaria como el sitio de conjugación con el fin de permitir la liberación del fármaco que contiene amina terciaria completamente activo en el sitio de acción diana. Incluso si la actividad biológica reducida o los cambios en otras propiedades farmacológicas son tolerables a través de la alteración de un fármaco que contiene una amina terciaria mediante la eliminación de uno de sus sustituyentes de nitrógeno, o cuando un sitio alternativo de conjugación está disponible o puede introducirse sin consecuencias graves para la actividad biológica deseada, sigue existiendo una necesidad en la técnica del uso del nitrógeno de amina terciaria como sitio de conjugación. Esa necesidad existe ya que es impredecible cuál de los posibles sitios de conjugación que podría presentar un fármaco que contiene amina terciaria proporcionará la liberación más eficiente del fármaco activo y, por tanto, el LDC más activa.
El documento WO 2013/173337 describe conjugados ligando-fármaco, enlazadores-fármaco, enlazadores y conjugados ligando-enlazador que comprenden un componente de ensamblaje enlazador autoestabilizante.
El documento EP2461830 describe compuestos relacionados estructuralmente con tubulisinas, conjugados de los mismos con un ligando, métodos para preparar y usar tales compuestos y conjugados, y composiciones que comprenden tales compuestos y conjugados.
Los documentos WO2014/194247 y WO 2014/193722 describen anticuerpos anti-ácido teicoico de pared, conjugados antibióticos de los mismos y métodos para usar los mismos.
Jeffrey, SC y otros (2006), Development and Properties of p-Glucuronide Linkers for Monoclonal Antibody-Drug Conjugates, Bioconjugate Chemistry, 17, 831-840 describe un enlazador basado en jS-glucurónido para unir agentes citotóxicos a anticuerpos monoclonales.
Doronina, SO y otros (2003), Development of potent monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapy, Nature Biotechnology, 21(7), 778-784 describe propiedades in vitro e in vivo de conjugados de anticuerpo monoclonal (MAb)-fármaco que comprenden los análogos de dolastatina 10 auristatina E y monometilauristatina E. Resumen de la invención
La invención se define por las reivindicaciones. Cualquier tema que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona solo con fines informativos. Cualquier referencia en la descripción a los métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método para el tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia.
Las modalidades principales de la invención son composiciones de Conjugado de fármaco y ligando (LDC), en donde una composición de LDC está representada por la estructura de la Fórmula 1
Figure imgf000003_0001
y en donde “Ligando', Lb, Q1, J, V, Z2, Z3, Z1, R', Q2, R8, R9 y D+ son como se definen en la reivindicación 1.
En algunos aspectos, W de Q1 está compuesto por un resto peptídico que tiene un enlace peptídico a J que se puede escindir selectivamente mediante una proteasa intracelular en comparación con las proteasas séricas, en donde la proteasa intracelular puede o no ser más específica para las células anómalas diana u otras células no deseadas en comparación con las células normales, y en donde la acción de la proteasa intracelular sobre W provocará la liberación de un fármaco que contiene amina terciaria (D) del LDC. En otros aspectos, el enlace peptídico se puede escindir mediante una proteasa que las células anómalas excretan en mayor medida que las células normales.
En otros aspectos, W es capaz de escisión selectiva por una proteasa reguladora en comparación con las proteasas de suero, en donde la proteasa reguladora puede o no ser más específica para las células anómalas u otras células no deseadas diana en comparación con las células normales.
En otros aspectos, W es capaz de escisión selectiva por una proteasa lisosomal en comparación con las proteasas de suero, en donde la proteasa lisosomal puede o no ser más específica para las células anómalas u otras células no deseadas diana en comparación con las células normales.
En otros aspectos, W de Q2 es un carbohidrato unido por enlace glicosídico, en donde el enlace glicosídico en W'-E de Q2 proporciona un sitio de escisión para una glicosidasa intracelular, en donde la acción de la glicosidasa sobre W'-E provoca la liberación del fármaco (D) que contiene amina terciaria del LDC, en donde la glicosidasa puede o no ser más específica para las células anómalas u otras células no deseadas diana en comparación con las células normales, o es capaz de escisión selectiva por una glicosidasa excretada en mayores cantidades por las células anómalas u otras células no deseadas diana en comparación con las células normales.
Otras modalidades principales de la invención proporcionan compuestos que tienen la estructura de la Fórmula 2:
Figure imgf000003_0002
en donde Lb', Q1 J, V, Z2, Z3, Z1, R, Q2, R8, R9 y D+ son como se definen en la reivindicación 19.
En algunos aspectos, Lb' tiene la estructura de uno de
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en donde R es hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; R' es hidrógeno o halógeno o R y R' son halógeno independientemente seleccionado; T es -Cl, -Br, -I, -O-mesilo u -O-tosilo u otro grupo saliente sulfonato; U es -F, -CI, -Br, -I, -O-N-succinimida, -O-(4-nitrofenil), -O-pentafluorofenilo, -O-tetrafluorofenilo u -OC(=O)-OR57; X2 es alquilenos C1-10, carbociclo C3-C8 ,-O-(alquilo C1-C6), -arileno-, alquileno C1-C10-arileno, -arileno-alquileno C1-C10, -alquileno C1-C10-(carbociclo C3-C6)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, heterociclo C3-C8 , -alquileno C1-C10-(heterociclo C3-C8)-, -heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10, -(CH2CH2O)u, o -CH2CH2O)u-CH2-, en donde u es un número entero que varía de 1 a 10 y R57 es alquilo o arilo C1-C6.
Breve descripción de las figuras
Figura 1. Tratamiento de xenoinjerto de linfoma de Hodgkin L540cy con un conjugado de fármaco y ligando de anticuerpo auristatina unido cuaternizado (cAC10-14) que tiene una unidad escindible por catepsina que libera fármaco que contiene amina terciaria libre (auristatina E) en comparación con el correspondiente conjugado de fármaco y ligando de anticuerpo unido a carbamato (cAC10-C) que libera fármaco desmetil (MMAE) contra sus respectivos conjugados de control no dirigidos h00-14 y h00-C.
Figura 2. Tratamiento de xenoinjerto de linfoma de Hodgkin L540cy con un conjugado de fármaco y ligando de anticuerpo auristatina unido cuaternizado (cAC10-8) que tiene una unidad escindible por glucoronidasa que libera fármaco que contiene amina terciaria libre (auristatina E) en comparación con el correspondiente conjugado de fármaco y ligando de anticuerpo unido a carbamato (cAC10-B) que libera fármaco desmetil (MMAE) contra sus respectivos conjugados de control no dirigidos h00-8 y h00-B.
Figura 3. Estabilidades plasmáticas ex vivo para LDC de auristatina unida cuaternizado que tienen una unidad escindible por catepsina o una unidad escindible por glucuronidasa.
Figura 4. Cinética de la liberación de fármaco libre que contiene amina terciaria (auristatina E) de un sistema modelo de LDC cuaternizado
Figura 5. Tratamiento de un modelo de xenoinjerto Karpas299 ALCL con conjugado de fármaco y ligando de tubulisina M cuaternizado, en donde la unidad de ligando de anticuerpo cAC10 se dirige al antígeno CD30, a DAR de 4 unidades de fármaco D+/mAb, dosis única i.p. a 0,3 mg/kg y 1 mg/kg frente a un conjugado de control no dirigido de un enlazador-fármaco cuaternizado idéntico y una carga equivalente.
Figura 6. Tratamiento del modelo de xenoinjerto de linfoma de Hodgkin L540cy con conjugado de fármaco y ligando de tubulisina M cuaternizado preparado a partir de Fármaco-Enlazador 32, en donde la unidad de ligando de anticuerpo cAC10 se dirige al antígeno CD30 a DAR de 6 unidades de fármaco D+/mAb, dosis única i.p. a 0,3 mg/kg y 1 mg/kg frente a tratamiento simulado.
Figura 7. Evaluación de la pérdida de acetato del componente tubuvalina de un conjugado de fármaco y ligando de tubulisina M preparado a partir de Fármaco-Enlazador 32 cuaternizado, que tiene la unidad escindible -Val-Ala-, a DAR de 6 unidades de fármaco D+/mAb administrado en dosis única i.p. a 0,3 mg/kg, 1 mg/kg y 3,0 mg/kg a un xenoinjerto L540cy, en donde la unidad de ligando de anticuerpo cAC10 del conjugado se dirige al antígeno CD30, frente a un conjugado de control de la extracción de sangre 4 días después de la dosificación el día 17 del estudio.
Figura 8. Evaluación de la pérdida de acetato del componente tubuvalina de un conjugado de fármaco y ligando de tubulisina M preparado a partir de Fármaco-Enlazador 32 cuaternizado, a DAR de 6 unidades de fármaco D+/mAb administrado en dosis única i.p. a 0,3 mg/kg, 1 mg/kg y 3,0 mg/kg a un xenoinjerto L540cy, en donde la unidad de ligando de anticuerpo cAC10 del conjugado se dirige al antígeno CD30, frente a un conjugado de control de la extracción de sangre 10 días después de la dosificación el día 11 del estudio.
Figura 9. Comparaciones de tratamientos del modelo de xenoinjerto de linfoma de Hodgkin L540cy a 0,6 mg/kg y 2 mg/kg, dosis única i.p., con conjugados de fármaco ligando, en donde la unidad de ligando de anticuerpo cAC10 del conjugado se dirige al antígeno CD30, que tiene 4 unidades de fármaco de tubulisina cuaternizada/Unidad de ligando de anticuerpo cAC10 en donde los conjugados se prepararon a partir del compuesto fármaco-enlazador 32, que ha cuaternizado la tubulisina M con la unidad escindible -Val-Ala-, y de los compuestos Fármaco Enlazador 79, 80 y 104, que han cuaternizado Tubu(OEt), Tubu(O-Pr) y unidades de fármaco de tubulisina M, respectivamente, y unidades enlazadoras de liberación condicional por glucuronidasa idénticas.
Figura 10. Comparaciones de tratamientos de modelo de xenoinjerto de linfoma de Hodgkin L540cy a 0,5 mg/kg o 0,6 mg/kg y 2 mg/kg, dosis única i.p., con conjugados de fármaco y ligando cAC10, en donde la unidad de ligando de anticuerpo se dirige al antígeno CD30, en donde un conjugado tiene 8 Unidades de fármaco de auristatina F cuaternizado/Unidad de ligando y se prepara a partir del compuesto fármaco-enlazador 189 frente a otro conjugado que tiene 4 unidades de fármaco de Tubu(O-CH3) cuaternizadas por unidad de ligando de anticuerpo cAC10 preparada a partir del compuesto fármaco-enlazador 78, con ambos conjugados que tienen unidades enlazadoras de liberación condicional por glucuronidasa idénticas.
Figura 11. Comparaciones de tratamientos del modelo de xenoinjerto de linfoma de Hodgkin L540cy a 0,4 mg/kg y 0,8 mg/kg, dosis única i.p., con conjugados de fármaco ligando cAC10 que tienen 4 restos de enlazadorfármaco, en donde la unidad de ligando de anticuerpo se dirige al antígeno CD30, en donde un conjugado tiene Dolastatina 10 cuaternizado y se prepara a partir de Fármaco-Enlazador 177 frente a un conjugado de Dolastatina 10 no cuaternizado preparado a partir de Fármaco Enlazador 183, en donde ambos conjugados tienen unidades de enlace de liberación condicional por glucuronidasa.
Figura 12. Perfil farmacocinético de conjugados de fármaco y ligando de 4 vs. 8 unidades de fármaco cuaternizadas que cargan y tienen unidades de ligando de IgG humanas en comparación con el anticuerpo no conjugado dosificado por vía intravenosa 1 mg/kg en ratas en donde los conjugados se preparan a partir de Fármaco Enlazador 32 que tiene unidades de fármaco de tubulisina M cuaternizadas y unidad de Enlazador de liberación condicional por catepsina y se preparan a partir de Fármaco Enlazador 113 que también tienen unidades de fármaco de tubulisina M, pero que tienen unidades enlazadoras de liberación condicional por glucuronidasa.
Figura 13. Perfil farmacocinético de un conjugado de fármaco y ligando con 8 unidades de fármaco cuaternizadas que cargan y tienen unidades de ligando de anticuerpo no dirigidos a dosis de 1 mg/kg i.v. en rata, en donde el conjugado se preparó a partir del compuesto 80 fármaco-enlazador, cuya unidad de fármaco cuaternizada es una variante de éter de tubulisina M en la que el resto acetato unido a O del componente de tubuvaleno se ha reemplazado con propoxi y que tiene una unidad enlazadora de liberación condicional de glucuronidasa.
Figura 14 Perfil farmacocinético de conjugados de fármaco ligando con carga de 8 unidades de fármaco cuaternizado en donde los conjugados se preparan a partir del compuesto 8 fármaco enlazador que tiene unidades de fármaco de auristatina E cuaternizadas y unidades enlazadoras de liberación condicional por catepsina, fármaco enlazador 177 que tiene una unidad de fármaco de Dolastatina 10 cuaternizado y unidad enlazadora de liberación condicional por glucuronidasa y el compuesto fármaco-enlazador 183 que tiene un conjugado de Dolastatina 10 no cuaternizado y que también tiene una unidad enlazadora de liberación condicional por glucuronidasa frente a un anticuerpo no dirigido no conjugado.
Descripción detallada de la invención
Definiciones
Como se usa en la presente descripción y a menos que se indique o se implique de otra manera por el contexto, los términos que se usan en la presente descripción tienen los significados definidos a continuación. A menos que esté contraindicado o implícito, por ejemplo, al incluir elementos u opciones mutuamente excluyentes, en estas definiciones y a lo largo de esta especificación, los términos "un" y "una" significan uno o más y el término "o" significa y/o cuando lo permite contexto. Como se usa en la descripción y en las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un/uno", "una" y "el/la" incluyen variaciones en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario.
En varios lugares de la presente descripción, por ejemplo, en cualquier modalidad descrita o en las reivindicaciones, se hace referencia a compuestos, composiciones o métodos que "comprenden" uno o más componentes, elementos o etapas especificados. Las modalidades de la invención también incluyen específicamente aquellos compuestos, composiciones, composiciones o métodos que son o que consisten en o que consisten esencialmente en esos componentes, elementos o etapas especificados. El término "compuesto de" se usa indistintamente con el término "que comprende" y se expresan como términos equivalentes. Por ejemplo, las composiciones, dispositivos, artículos de fabricación o métodos descritos que "comprenden" un componente o paso están abiertos e incluyen o leen esas composiciones o métodos más un componente(s) o etapa(s) adicional(es). Sin embargo, esos términos no abarcan elementos no citados que destruirían la funcionalidad de las composiciones, dispositivos, artículos de fabricación o métodos descritos para su propósito previsto. De manera similar, las composiciones, dispositivos, artículos de fabricación o métodos descritos que "consisten en" un componente o etapa están cerrados y no incluirían ni leerían sobre aquellas composiciones o métodos que tengan cantidades apreciables de un componente(s) adicional(es) o una etapa(s) adicional(es). Además, el uso del término "que incluye", así como también otras formas, tales como "incluye", "incluyen" e "incluido", no es limitante. Finalmente, el término "que consiste esencialmente en" admite la inclusión de elementos no citados que no tienen ningún efecto material sobre la funcionalidad de las composiciones, dispositivos, artículos de fabricación o métodos descritos para su propósito previsto y se define adicionalmente en la presente descripción. Los títulos de las secciones que se usan en la presente descripción son solo para fines organizativos y no deben interpretarse como limitantes de la materia objeto descrita. A menos que se indique lo contrario, se emplean métodos convencionales de espectroscopía de masas, RMN, HPLC, química de proteínas, bioquímica, técnicas de ADN recombinante y farmacología.
"Aproximadamente", como se usa en la presente descripción, cuando se usa en relación con un valor numérico o intervalo de valores proporcionado para describir una propiedad particular de un compuesto o composición, indica que el valor o intervalo de valores puede desviarse en un grado considerado razonable para un experto en la técnica sin dejar de describir la propiedad particular. Las desviaciones razonables incluyen aquellas que están dentro de la exactitud o precisión de los instrumentos utilizados para medir, determinar o derivar la propiedad en particular. Específicamente, el término "aproximadamente" cuando se usa en este contexto, indica que el valor numérico o intervalo de valores puede variar en un 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,9 %, 0,8 %, 0,7 %, 0,6 %, 0,5 %, 0,4 %, 0,3 %, 0,2 %, 0,1 % o 0,01 % del valor indicado o intervalo de valores, normalmente entre el 10 % y el 0,5 %, más típicamente del 5 % al 1 %, sin dejar de describir la propiedad particular.
"Retiene esencialmente", "que retiene esencialmente y términos similares como se usan en la presente descripción se refieren a una propiedad, característica o actividad de un compuesto o composición o fracción del mismo que no ha cambiado detectablemente o está dentro del error experimental de determinación de esa misma actividad, característica o propiedad de otro compuesto o composición o resto del que se derivó.
"Insignificantemente" o "insignificante", como se usa en la presente descripción, es una cantidad de una impureza por debajo del nivel de cuantificación por análisis de HPLC y, si está presente, representa de aproximadamente 0,5 % a aproximadamente 0,1 % p/p de la composición que contamina. En dependencia del contexto, esos términos también pueden significar que no se observa una diferencia estadísticamente significativa entre los valores medidos o los resultados o dentro del error experimental de la instrumentación utilizada para obtener esos valores. Las diferencias insignificantes en los valores de un parámetro determinado experimentalmente no implican que una impureza caracterizada por ese parámetro esté presente en una cantidad insignificante.
"Retiene sustancialmente", como se usa en la presente descripción, se refiere a un valor medido de una propiedad física de un compuesto o composición o fracción del mismo que es estadísticamente diferente de la determinación de esa misma propiedad física de otro compuesto o composición o fracción de la que se derivó, pero cuya diferencia no se traduce en una diferencia estadísticamente significativa en la actividad biológica en un sistema de prueba biológico adecuado para evaluar esa actividad (es decir, la actividad biológica se retiene esencialmente). Por tanto, la frase "retiene sustancialmente" se hace en referencia al efecto que tiene una propiedad física de un compuesto o composición sobre una actividad biológica que está explícitamente asociada con esa propiedad.
"Que contiene predominantemente", "que tiene predominantemente" y términos similares se refieren al componente principal de una mezcla. Cuando la mezcla es de dos componentes, entonces el componente principal representa más del 50 % en peso de la mezcla. Con una mezcla de tres o más componentes, el componente predominante es el que está presente en mayor cantidad en la mezcla y puede representar o no la mayoría de la masa de la mezcla.
El término "grupo aceptor de electrones" se refiere a un grupo funcional o átomo electronegativo que aleja la densidad de electrones de un átomo al que está unido de forma inductiva y/o mediante resonancia, lo que sea más dominante (es decir, un grupo funcional o átomo puede ser electrón que se retira de forma inductiva, pero en general puede ser una donación de electrones a través de resonancia), y tiende a estabilizar aniones o restos ricos en electrones. El efecto de extracción de electrones se transmite típicamente de manera inductiva, aunque en forma atenuada, a otros átomos unidos al átomo enlazado que se ha vuelto deficiente en electrones por el grupo de extracción de electrones (EWG), lo que afecta la electrofilia de un centro reactivo más remoto. Los grupos aceptores de electrones ilustrativos incluyen, pero no se limitan a, -C(=O), -CN, -NO2, -CX3 , -X, -C(=O)OR, -C(=O)NR2 , -C(=O)R, -C(=O)X, -S(=O)2R, -S(=O)2OR, -S(=O)2NHR, -S(=O)2NR2, -P(=O)(OR)2, -P(=O)(CH3)NHR, -NO, y -NR3+, en donde X es -F, -Br, -Cl o -I y R se selecciona, en cada caso, independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y alquilo C1-6. Los EWG ilustrativos también pueden incluir grupos arilo (por ejemplo, fenilo) dependiendo de la sustitución y ciertos grupos heteroarilo (por ejemplo, piridina). Por tanto, el término "grupos aceptores de electrones" también incluye arilos o heteroarilos que están además sustituidos con grupos aceptores de electrones. Típicamente, los grupos aceptores de electrones son -C(=O), -CN, -NO2 , -CX3 , y -X, en donde X es halógeno. En dependencia de sus sustituyentes, un resto alquilo insaturado también puede ser un grupo aceptor de electrones.
El término "grupo donante de electrones" se refiere a un grupo funcional o átomo electropositivo que aumenta la densidad de electrones de un átomo al que está unido inductivamente y/o mediante resonancia, lo que sea más dominante (es decir, un grupo funcional o un átomo puede ser un mediante resonancia, pero en general puede ser una extracción de electrones inductiva) y tiende a estabilizar cationes o sistemas pobres en electrones. El efecto de donación de electrones se transmite típicamente a través de resonancia a otros átomos unidos al átomo enlazado que ha sido enriquecido en electrones por el grupo donante de electrones (EWG), lo que afecta la nucleofilia de un centro reactivo más remoto. Los grupos donantes de electrones ejemplares incluyen, pero no se limitan a -OH y -NH2. En dependencia de sus sustituyentes, un resto arilo, heteroarilo o alquilo insaturado también puede ser un grupo donante de electrones.
"Resto", como se usa en la presente descripción, significa un segmento, fragmento o grupo funcional específico de una molécula o compuesto. Los restos químicos a veces se indican como entidades químicas que están embebidas o adjuntas (es decir, un sustituyente o grupo variable) a una molécula, compuesto o fórmula química.
Para cualquier grupo sustituyente o resto descrito en la presente descripción por un intervalo dado de átomos de carbono, el intervalo designado significa que se describe cualquier número individual de átomos de carbono. Por tanto, la referencia a, por ejemplo, "alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido", "alquenilo C2-6 alquenilo opcionalmente sustituido", "heterociclo C3-C8 opcionalmente sustituido" significa específicamente que un resto alquilo opcionalmente sustituido de 1, 2, 3 o 4 carbonos está presente como se define en la presente descripción, o un alquenilo de 2, 3, 4, 5 o 6 carbonos, o un resto de 3, 4, 5, 6, 7 u 8 carbonos que comprende un heterociclo o resto alquenilo opcionalmente sustituido como se define en la presente descripción está presente. Todas estas designaciones numéricas están destinadas expresamente a revelar todos los grupos de átomos de carbono individuales; y por lo tanto "alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido" incluye, metilo, etilo, alquilos de 3 carbonos, y alquilos de 4 carbonos, que incluyen todos sus isómeros de posición, ya sea sustituido o no sustituido. Por tanto, cuando un resto alquilo está sustituido, las designaciones numéricas se refieren a un resto de base no sustituido y no pretenden incluir átomos de carbono que pueden estar presentes en los sustituyentes de ese resto de base. Para ésteres, carbonatos, carbamatos y ureas como se definen en la presente descripción que se identifican por un intervalo dado de átomos de carbono, el intervalo designado incluye el carbono carbonilo del grupo funcional respectivo. Por tanto, un éster C1 se refiere a un éster de formato, un éster C2 se refiere a un éster acetato y una urea C1 no sustituida se refiere a NH2(C=O)NH2.
Los sustituyentes, restos y grupos orgánicos descritos en la presente descripción, y para cualquier otro resto descrito en la presente descripción, normalmente excluirán los restos inestables excepto cuando dichos restos inestables sean especies transitorias que se pueden utilizar para preparar un compuesto con suficiente estabilidad química para uno o más de los usos descritos en la presente descripción. Se excluyen específicamente los sustituyentes, restos o grupos mediante la operación de las definiciones proporcionadas en la presente descripción que dan como resultado aquellos que tienen un carbono pentavalente.
"Alquilo" como se usa en la presente descripción por sí mismo o como parte de otro término se refiere a metilo o una colección de átomos de carbono, en donde uno o más de los átomos de carbono está saturado (es decir, está compuesto por uno o más carbonos sp3) que están covalentemente unidos entre sí en disposiciones normales, secundarias, terciarias o cíclicas, es decir, en una disposición cíclica, ramificada, lineal o alguna combinación de los mismos. Cuando los átomos de carbono saturados contiguos están en una disposición cíclica, tales restos alquilo se denominan a veces cicloalquilo como se define en la presente descripción. Los sustituyentes de alquilo saturados contienen átomos de carbono saturados (es decir, carbonos sp3 ) y ningún átomo de carbono aromático sp2 o sp (es decir, no está sustituido con restos insaturados, aromáticos y heteroaromáticos). Los sustituyentes alquilo insaturados son restos alquilo sustituidos con restos como se describe en la presente descripción para restos alquenilo, alquinilo, arilo y heteroarilo.
Por tanto, a menos que se indique lo contrario, el término "alquilo" indicará un radical hidrocarbonado no cíclico saturado, opcionalmente sustituido con uno o más restos cicloalquilo o insaturados, aromáticos o heteroaromáticos o alguna combinación de los mismos, en donde el radical hidrocarbonado saturado tiene el número indicado de átomos de carbono saturados unidos covalentemente (por ejemplo, "alquilo C1-C6" o "alquilo C1-C6" significa un resto alquilo o grupo que contiene 1, 2, 3, 4, 5 o 6 contiguos no cíclicos átomos de carbono saturados y "alquilo C1-C8" se refiere a un resto o grupo alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono no cíclicos saturados contiguos). El número de átomos de carbono saturados en un resto o grupo alquilo puede variar y típicamente es 1­ 50, 1-30 o 1-20, y más típicamente es 1-8 o 1-6. Típicamente, un sustituyente alquilo es un resto alquilo C1-C8 saturado, o más típicamente es un resto alquilo C1-C6 o C1-C4, al que a veces se hace referencia a este último como alquilo inferior. Cuando no se indica el número de átomos de carbono, el grupo alquilo tiene de 1 a 8 átomos de carbono.
Cuando se hace referencia a un resto o grupo alquilo como sustituyente alquilo, ese sustituyente alquilo de una estructura de Markush u otro resto orgánico con el que está asociado es la cadena de átomos de carbono saturados contiguos unidos covalentemente a la estructura o resto a través de un carbono sp3 del sustituyente alquilo. Un sustituyente alquilo, como se usa en la presente descripción, contiene por lo menos un resto saturado y también puede contener (es decir, estar sustituido con) restos o grupos cicloalquilo, alquilo insaturado, aromáticos o heteroaromáticos. Por tanto, un sustituyente de alquilo puede comprender adicionalmente uno, dos, tres o más dobles enlaces, triples enlaces o cicloalquilo, restos aromáticos o heteroaromáticos o alguna combinación de los mismos seleccionados independientemente, típicamente un doble enlace, un triple enlace (es decir, está sustituido un alquenilo o resto alquinilo) o está sustituido con un resto cicloalquilo, aromático o heteroaromático.
Cuando se especifica un sustituyente, resto o grupo alquilo, las especies incluyen las derivadas de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un alcano parental (es decir, es monovalente) y pueden incluir metilo, etilo, 1 -propilo (npropilo), 2-propilo (/sopropilo, -CH(c H3)2), 1 -butilo (n-butilo), 2-metil-1 -propilo (/so-butilo, -CH2CH(CH3)2), 2-butilo (sec-butilo, -CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propilo (í-butilo, -C(CH3)3), amilo, isoamilo, sec-amilo y otros restos alquilo de cadena lineal, cíclica y ramificada.
"Alquileno", como se usa en la presente descripción por sí mismo como parte de otro término, se refiere a un dirradical de hidrocarburo saturado, ramificado, cíclico o de cadena lineal, sustituido o no sustituido, en donde uno o más de los átomos de carbono está insaturado (es decir, está compuesto de uno o más carbonos sp3), del número indicado de átomos de carbono, típicamente de 1 a 10 átomos de carbono, y que tiene dos centros radicales (es decir, es divalente) derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno del mismo átomo de carbono saturado o dos diferentes (es decir, sp3) de un alcano parental. Los restos alquileno incluyen además radicales alquilo como se describe en la presente descripción en los que se ha eliminado un átomo de hidrógeno de un resto saturado o del radical carbono de un radical alquilo para formar un dirradical. Típicamente, los restos alquileno incluyen restos divalentes derivados de la eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo de carbono saturado de un resto alquilo parental, pero no se limitan a: metileno (-CH2-), 1,2-etileno (-CH2CH2-), 1,3-propileno (-CH2CH2CH2-), 1,4-butileno (-CH2CH2CH2CH2-) y dirradicales similares. Típicamente, un alquileno es un hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que normalmente contiene solo carbonos sp3 (es decir, está completamente saturado a pesar de los átomos de carbono del radical).
"Cicloalquilo", como se usa en la presente descripción, es un radical de un sistema de anillo monocíclico, bicíclico o tricíclico, en donde cada uno de los átomos que forman el sistema de anillo (es decir, átomos del esqueleto) es un átomo de carbono y en donde uno o más de estos átomos de carbono en cada anillo del sistema de anillo cíclico está saturado (es decir, está compuesto por uno o más carbonos sp3). Por lo tanto, un cicloalquilo es una disposición cíclica de carbonos saturados pero también puede contener átomos de carbono insaturados y, por lo tanto, su anillo carbocíclico puede estar saturado o parcialmente insaturado o puede estar fusionado con un anillo aromático, donde los puntos de fusión a un cicloalquilo y anillo aromático son carbonos insaturados adyacentes del resto cicloalquilo o grupo o sustituyente y carbono aromático adyacente del anillo aromático.
A menos que se especifique lo contrario, un resto cicloalquilo, grupo o sustituyente puede estar sustituido con restos descritos para alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, alquilarilo y similares o puede estar sustituido con otros restos cicloalquilo. Los restos, grupos o sustituyentes cicloalquilo incluyen ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, adamantilo u otros restos cíclicos que tienen solo átomos de carbono. Los cicloalquilos incluyen además ciclobutilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptilo y ciclooctilo. En dependencia de su estructura, un sustituyente cicloalquilo puede ser un monorradical como se describió anteriormente para restos o grupos cicloalquilo o un dirradical (es decir, un cicloalquileno, tal como, pero no limitado a, ciclopropan-1,1-diilo, ciclobutan-1,1-diilo, ciclopentan-1,1-diilo, ciclohexan-1,1-diilo, ciclohexan-1,4-diilo, cicloheptan-1,1-diilo y similares).
Cuando se usa cicloalquilo como un grupo Markush (es decir, un sustituyente), el cicloalquilo se une a una fórmula de Markush u otro resto orgánico con el que está asociado a través de un carbono que está involucrado en el sistema de anillo carbocíclico del grupo cicloalquilo siempre que el carbono no sea un carbono aromático. Cuando un carbono insaturado de un resto alqueno que comprende el sustituyente cicloalquilo se une a una fórmula de Markush con la que está asociado, a veces se hace referencia al cicloalquilo como un sustituyente cicloalquenilo. El número de átomos de carbono en un sustituyente cicloalquilo se define por el número total de átomos del esqueleto del sistema de anillo. Ese número puede variar y típicamente varía de 3 a 50, 1-30 o 1-20, y más típicamente 3-8 o 3-6 a menos que se especifique lo contrario, por ejemplo, cicloalquilo C3-8 significa un sustituyente, resto o grupo cicloalquilo que contiene 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono carbocíclicos y cicloalquilo C3-6 significa un sustituyente, resto o grupo cicloalquilo que contiene 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono carbocíclicos. Por lo tanto sustituyentes cicloalquilo, restos o grupos por lo general tienen 3, 4, 5, 6, 7, 8 átomos de carbono en su sistema de anillo carbocíclico y pueden contener dobles enlaces exo o endo cíclicos o triples enlaces endo cíclicos o una combinación de ambos en donde los enlaces dobles o triples endocíclicos, o la combinación de ambos, no forman un sistema conjugado cíclico de 4n 2 electrones. Un sistema de anillo bicíclico puede compartir uno (es decir, es un sistema de anillo espiro) o dos átomos de carbono y un sistema de anillo tricíclico puede compartir un total de 2, 3 o 4 átomos de carbono, típicamente 2 o 3.
"Alquenilo", como se usa en la presente descripción, significa un sustituyente, resto o grupo que comprende uno o más restos con doble enlace (por ejemplo, un grupo funcional -CH=CH- o =CH2 para dobles enlaces endo y exo, respectivamente) o 1, 2, 3, 4, 5 o 6 o más, típicamente 1, 2 o 3 de tales restos y pueden estar sustituidos con un resto o grupo arilo tal como benceno, o átomos de carbono normales, secundarios, terciarios o cíclicos enlazados, es decir, lineales, ramificados, cíclico o cualquier combinación de los mismos a menos que el sustituyente alquenilo, resto o grupo es un resto vinilo (por ejemplo, un grupo -CH=CH2 grupo funcional). Un resto grupo o sustituyente alquenilo, que tiene múltiples dobles enlaces puede tener los dobles enlaces dispuestos contiguamente (es decir, un resto 1,3 butadienilo) o no contiguos con uno o más átomos de carbono saturados intermedios o una combinación de los mismos, siempre que un cíclico, la disposición contigua de dobles enlaces no forma un sistema conjugado cíclico de 4n 2 electrones (es decir, no es aromático).
Cuando se especifica un resto, grupo o sustituyente alquenilo, las especies incluyen, a modo de ejemplo y sin limitación, cualquiera de los restos o sustituyentes de grupos alquilo o cicloalquilo descritos en la presente descripción que tienen un exo o uno o más dobles enlaces endo, incluido el metileno (=CH2), metilmetileno (=CH-CH3), etilmetileno (=CH-CH2-CH3), =CH-CH2-CH2-CH3, y restos monovalentes derivados de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un carbono sp2 de un compuesto de alqueno parental. Tales restos monovalentes incluyen típicamente vinilo (-CH=CH2), alilo, 1 -metilvinilo, butenilo, isobutenilo, 3-metil-2-butenilo, 1-pentenilo, ciclopentenilo, 1- metilciclopentenilo, 1-hexenilo, 3-hexenilo, ciclohexenilo y otros radicales lineales, cíclicos y ramificados, todos los que contienen carbono contienen al menos un doble enlace. Cuando se usa alquenilo como un grupo Markush (es decir, es un sustituyente), el alquenilo se une a una fórmula de Markush u otro resto orgánico con el que está asociado a través de un carbono de doble enlace (es decir, un carbono sp2) del resto o grupo alquenilo. El número de átomos de carbono en un sustituyente alquenilo se define por el número de átomos de carbono sp2 del grupo funcional alqueno que lo define como un sustituyente alquenilo y el número total de átomos de carbono no aromáticos contiguos añadidos a cada uno de estos carbonos sp2. Ese número puede variar y, a menos que se especifique lo contrario, varía de 1 a 50, por ejemplo, típicamente 1-30 o 1-20, más típicamente 1-8 o 1-6, cuando el grupo funcional de doble enlace es exo en una estructura Markush, o puede varían y varían de 2 a 50, típicamente 2- 30 o 2-20, más típicamente 2 a 8 o 2-6, cuando el grupo funcional de doble enlace es endo a la estructura de Markush. Por ejemplo, alquenilo C2-8 o alquenilo C2-8 significa un resto alquenilo que contiene 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono en los que al menos dos son carbonos sp2 en conjugación entre sí y alquenilo C2 -6 o alquenilo C2-6 significa un resto alquenilo que contiene 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono en el que al menos dos son carbonos sp2 que están en conjugación entre sí. Típicamente, un sustituyente alquenilo es un resto alquenilo C2-C6 o C2-C4 que tiene dos carbonos sp2 que están en conjugación entre sí.
"Alquenileno", como se usa en la presente descripción por sí mismo como parte de otro término, se refiere a un sustituyente, resto o grupo que comprende uno o más restos de doble enlace, como se describió previamente para alquenilo, del número indicado de átomos de carbono, típicamente 1-10 átomos de carbono cuando el grupo funcional de doble enlace es exo a un resto más grande o 2-10, cuando el grupo funcional de doble enlace es endo en el resto de alquenileno, y tiene dos centros radicales derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno del mismo o dos diferentes átomos de carbono sp2 de un resto de doble enlace en un alqueno parental. Los restos alquenileno incluyen además radicales alquenilo como se describe en la presente descripción en los que un átomo de hidrógeno se ha eliminado del mismo o diferente átomo de carbono sp2 de un resto de doble enlace de un radical alquenilo para formar un dirradical, o de un carbono sp2 de un resto de doble enlace diferente unido para proporcionar otro radical de carbono. Típicamente, los restos alquenileno incluyen dirradicales que tienen la estructura de -C=C- o -C=C-X1-C=C- en donde X1 está ausente o es un alquileno como se define en la presente descripción.
"Alquinilo", como se usa en la presente descripción, significa un sustituyente, resto o grupo que comprende uno o más restos de triple enlace (es decir, un grupo funcional -CEC-), por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6 o más, típicamente 1 o 2 triples enlaces, que comprenden opcionalmente 1, 2, 3, 4, 5, 6 o más dobles enlaces (es decir, opcionalmente sustituidos con un resto alquenilo), siendo los enlaces restantes (si están presentes) enlaces simples y pueden ser más compuesto por átomos de carbono normales, secundarios, terciarios o cíclicos enlazados, es decir, lineales, ramificados, cíclicos o cualquier combinación de los mismos, a menos que el resto alquinilo sea etinilo.
Cuando se especifica un resto o grupo alquinilo, las especies incluyen, a modo de ejemplo y sin limitación, cualquiera de los restos, grupos o sustituyentes alquilo descritos en la presente descripción que tenga uno o más dobles enlaces, etinilo, propinilo, butinilo, isobutinilo, 3-metil-2-butinilo, 1-pentinilo, ciclopentinilo, l-metil-ciclopentinilo, 1-hexinilo, 3-hexinilo, ciclohexinilo y otros restos lineales, cíclicos y ramificados que contienen todos los carbonos que contienen al menos un triple enlace. Cuando se usa un alquinilo como grupo Markush (es decir, un sustituyente), el alquinilo se une a una fórmula de Markush con la que está asociado a través de uno de los carbonos sp del grupo funcional alquinilo. El número de átomos de carbono en un sustituyente alquinilo se define por los dos átomos de carbono sp del grupo funcional alquino que lo define como un sustituyente alquinilo y el número total de átomos de carbono contiguos no cíclicos, no aromáticos añadidos al carbono sp no sustituido por la estructura Markush. Ese número puede variar y varía de 2 a aproximadamente 50, típicamente 2-30 o 2-20 o más típicamente 2-8, a menos que se especifique lo contrario, por ejemplo, alquinilo C2-8 significa un resto alquinilo que contiene 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono. Los grupos alquinilo tendrán típicamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 átomos de carbono.
"Alquinileno", como se usa en la presente descripción por sí mismo como parte de otro término, se refiere a un sustituyente, resto o grupo que comprende uno o más restos de triple enlace, como se describió previamente para alquinilo, del número indicado de átomos de carbono, típicamente 2-10 átomos de carbono, y que tienen dos centros radicales derivados de la eliminación de dos átomos de hidrógeno de dos átomos de carbono sp diferentes de un resto de triple enlace en un alquino parental. Los restos alquinileno incluyen además radicales alquinilo como se describe en la presente descripción en los que se han eliminado dos átomos de hidrógeno de acetileno o de dos átomos de carbono sp de dos restos de triple enlace para formar un dirradical. Típicamente, los restos alquinileno incluyen dirradicales que tienen la estructura de -CeC- o -CeCXCeC- en donde X es un resto alquileno, alquenileno o arileno como se define en la presente descripción.
"Aromático", "sistema de anillo aromático" o términos similares como se usan en la presente descripción se refieren a un anillo plano que tiene un sistema de electrones pi deslocalizado que contiene electrones 4n+2 pi, donde n es un número entero positivo. Los anillos aromáticos se pueden formar a partir de cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez o más de diez átomos. Los aromáticos están opcionalmente sustituidos. El término "aromático" incluye grupos arilo carboxíclico ("arilo", por ejemplo, fenilo) y arilo heterocíclico (o "heteroarilo" o "heteroaromático") (por ejemplo, piridina). El término incluye grupos monocíclicos o policíclicos de anillo condensado (es decir, anillos que comparten pares adyacentes de átomos de carbono).
"Arilo" como se usa aquí significa un resto, sustituyente o grupo orgánico definido por un sistema de anillo aromático o un sistema de anillo condensado sin heteroátomos de anillo que comprenden 1, 2, 3 o 4 a 6 anillos, típicamente 1 a 3 anillos, donde los anillos están compuestos únicamente por átomos de carbono que participan en un sistema conjugado cíclicamente de 4n 2 electrones (regla de Hückel), típicamente 6, 10 o 14 electrones, algunos de los cuales pueden participar adicionalmente en la conjugación exocíclica con un heteroátomo (conjugado cruzado (por ejemplo, quinona). Los sustituyentes, restos o grupos arilo están formados típicamente por seis, ocho, diez o más átomos de carbono aromáticos. Los sustituyentes, restos o grupos arilo están opcionalmente sustituidos. Arilos ilustrativos incluyen C6-C10 arilos tales como fenilo y naftalenilo y fenantrilo. Como la aromaticidad en un resto arilo neutro requiere un número par o elecciones, se entenderá que un intervalo dado para ese resto no abarcará especies con un número impar de carbonos aromáticos. Cuando se usa arilo como un grupo Markush (es decir, un sustituyente), el arilo se une a una fórmula de Markush u otro resto orgánico con el que está asociado a través de un carbono aromático del grupo arilo.
En dependencia de la estructura, un grupo arilo puede ser monorradical (es decir, monovalente) o dirradical (es decir, un grupo arileno como se describe en la presente descripción, que es divalente).
"Arileno" o "heteroarileno" como se usa en la presente descripción por sí mismo o como parte de otro término, es un resto arilo o heteroarilo, grupo o sustituyente como se define en la presente descripción que forma dos enlaces covalentes (es decir, es divalente) dentro de un resto más grande, que puede estar en las configuraciones orto, meta o para o un resto dirradical aromático. Los arilenos ilustrativos incluyen, pero no se limitan a, fenil-1,2-eno, fenil-1,3-eno y fenil-1,4-eno como se muestra en las siguientes estructuras:
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"Arilalquilo", como se usa en la presente descripción, significa un sustituyente, resto o grupo donde un resto arilo está unido a un resto alquilo, es decir, -alquil-arilo, donde los grupos alquilo y arilo son como se describieron anteriormente, por ejemplo, -CH2-C6H5 o -CH2CH(CH3)-C6H5. Cuando arilalquilo se usa como un grupo Markush (es decir, un sustituyente) el resto alquilo del arilalquilo está unido a una fórmula Markush con el que está asociado a través de un carbono sp3 del resto alquilo.
"Alquilanlo", como se usa en la presente descripción, significa un sustituyente, resto o grupo en el que un resto alquilo está unido a un resto arilo, es decir, -aril-alquilo, donde los grupos arilo y alquilo son como se describieron anteriormente, por ejemplo, -C6H4-CH3 o -C6H4-CH2CH(CH3). Cuando se usa alquilarilo como un grupo Markush (es decir, un sustituyente), el resto arilo del alquilarilo se une a una fórmula de Markush con la que está asociado a través de un carbono sp2 del resto arilo.
"Alquilo opcionalmente sustituido", "alquenilo opcionalmente sustituido", "alquinilo opcionalmente sustituido", "alquilarilo opcionalmente sustituido", "arilalquilo opcionalmente sustituido", "heterociclo opcionalmente sustituido", "arilo opcionalmente sustituido", "heteroarilo opcionalmente sustituido", "opcionalmente alquilheteroarilo sustituido"," heteroarilalquilo opcionalmente sustituido "y términos similares se refieren a un alquilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, arilalquilo heterociclo, arilo, heteroarilo, alquilheteroarilo, heteroarilalquilo u otro sustituyente, resto o grupo como se define o describe en la presente descripción en donde el(los) átomo(s) de hidrógeno de ese sustituyente, resto o grupo se ha(n) reemplazado opcionalmente con diferente(s) resto(s) o grupo(s) o en donde una cadena de carbono alicíclico que comprende uno de esos sustituyentes, resto o grupo se interrumpe reemplazando átomo(s) de carbono de esa cadena con diferentes restos o grupos.
Los sustituyentes opcionales que reemplazan el(los) hidrógeno(s) en uno cualquiera de los anteriores sustituyentes, restos o grupos incluyen los seleccionados independientemente del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NH2, -OH, -N(CH3)2 , alquilo, fluoroalquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, heteroarilo, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, alquilsulfóxido, arilsulfóxido, alquilsulfona y arilsulfona o los seleccionados del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NH2, -OH, -NH(CH3), -N(CH3)2, -C(=O)OH (es decir, CO2H), -C(=O)O-alquilo(i.e., CO2-alquilo), -C(=O)NH2 , -C(=O)NH(alquilo), -C(=O)N(alquilo)2 , -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(alquilo), -S(=O)2N(alquilo)2 , alquilo, cicloalquilo, fluoroalquilo, heteroalquilo, alcoxi, fluoroalcoxi, -S-alquilo y -S(=O)2alquilo.
Típicamente, un sustituyente opcional que reemplaza hidrógeno(s) en cualquiera de los sustituyentes, restos o grupos anteriores se selecciona independientemente del grupo que consiste en alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, hidroxi, alcoxi, ariloxi, ciano, halógeno, nitro, haloalquilo, fluoroalquilo, y amino, incluyendo mono-, di- y tri-sustituidos grupos aminos, y los derivados de fluoralcoxi protegidos de los mismos, o se selecciona del grupo que consiste en halógeno, -CN, -NH2 , -OH, -NH(CH3), -N(CH3)2 , -CH3, -CH2CH3 , -CF3, -OCH3, y -OCF3. Típicamente, cualquiera de los sustituyentes, restos o grupos anteriores que está opcionalmente sustituido mediante la sustitución de uno o más de sus hidrógenos tiene su(s) hidrógeno(s) sustituido(s) con uno o dos de los sustituyentes opcionales anteriores, o más típicamente con uno de los sustituyentes opcionales anteriores. Un sustituyente opcional en un átomo de carbono alifático saturado dentro de un sistema de anillo acíclico o cíclico incluye además oxo (=O). Para un resto fenilo o heteroarilo de 6 miembros, la disposición de dos sustituyentes cualesquiera presentes en el anillo aromático o heteroaromático puede ser orto (o), meta (m) o para (p).
Típicamente, un sustituyente opcional que reemplaza al carbono en una cadena de carbono acíclico se selecciona del grupo que consiste en -O-, -C(=O)-, -C(=O)O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -NH-, -NHC(=O)-, -C(=O)NH-, S(=O)2NH-, -NHS(=O)2, -OC(=O)NH-, y -NHC(=O)O-.
Típicamente, cualquiera de los sustituyentes, restos o grupos anteriores que está opcionalmente sustituido por reemplazo de uno o más átomos de carbono alicíclicos tiene el(los) átomo(s) de carbono reemplazado(s) con uno o dos de los sustituyentes opcionales anteriores, o más típicamente con uno de los sustituyentes opcionales anteriores.
"Heterociclilo", como se usa en la presente descripción, significa un resto, sustituyente o grupo carbocíclico monovalente parental que incluye cicloalquilo, cicloalquenilo, arilo o una combinación fusionada de los mismos, en donde uno o más, pero no todos los átomos de carbono del esqueleto dentro de un anillo del resto carbocíclico parental se reemplaza independientemente por un heteroátomo, opcionalmente sustituido cuando se permite, incluyendo N, O, S, Se, B, Si, P, en donde dos o más heteroátomos pueden ser adyacentes entre sí o separados por uno o más átomos de carbono dentro del mismo sistema de anillo, típicamente por 1-3 átomos. Esos heteroátomos típicamente incluyen N, O o S. Por lo tanto, los heterociclos incluyen aquellos que tienen un anillo heteroaromático (también conocido como heteroarilo) o un anillo heterocicloalquilo, cualquiera de los cuales puede estar fusionado con un resto carbocíclico, arilo o heteroarilo e incluye restos heterocicloalquilo y heteroarilo fusionados con fenilo (es decir, benzo), siempre que cuando un resto heteroarilo se fusiona con un resto heterocicloalquilo o carbocíclico (es decir, cuando la parte heterocíclica del sistema de anillo condensado es monovalente), el sistema de anillo condensado resultante se clasifica como un heteroarilo y cuando un resto heterocicloalquilo se fusiona con un resto carbocíclico (es decir, cuando la porción carbocíclica del sistema de anillo condensado es monovalente), el sistema de anillo condensado resultante se clasifica como heterocicloalquilo.
Los heterociclos contienen típicamente un total de uno a cuatro heteroátomos en el(los) anillo(s), siempre que no todos los átomos del esqueleto de cualquier sistema de anillo en el resto heterocíclico sean heteroátomos, en donde cada heteroátomo en el(los) anillo(s), opcionalmente sustituido donde está permitido, se selecciona independientemente de O, S y N, en donde el grupo heterocíclico tiene un total de 4 a 10 átomos en su sistema de anillo monocíclico o condensado, y con la condición de que un anillo cualquiera no contenga dos átomos de O o S adyacentes. Los heterocicloalquilos tienen al menos 3 átomos en su sistema de anillo y los grupos heteroarilo tienen al menos 5 átomos en su sistema de anillo. Los heterociclos incluyen, a modo de ejemplo y no de limitación, heterociclos y heteroarilos, que son heterociclos aromatizados, según lo proporcionado por Paquette, Leo A.; "Principies of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamín, Nueva York, 1968), particularmente los Capítulos 1, 3, 4, 6, 7 y 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs "(John Wiley & Sons, Nueva York, 1950 al presente), en particular los volúmenes 13, 14, 16, 19 y 28; y J. Am. Chem. Soc. 1960, 82:5545-5473 particularmente 5566-5573).
Los heteroarilos contienen típicamente un total de uno a cuatro heteroátomos en el(los) anillo(s) del sistema de anillo heteroarilo, siempre que no todos los átomos del esqueleto de cualquier sistema de anillo en el resto heterocíclico sean heteroátomos, opcionalmente sustituidos donde se permita, y tengan 0-3 átomos N, 1-3 átomos N o 0-3 átomos N con 0-1 átomos O o 0-1 átomos S, siempre que esté presente al menos un heteroátomo. Un heteroarilo puede ser monocíclico o bicíclico. El sistema de anillo de un anillo heteroarilo contiene típicamente de 1 a 9 carbonos (es decir, heteroarilo C1-C9). Los heteroarilos monocíclicos incluyen heteroarilos C1-C5. Los heteroarilos monocíclicos incluyen aquellos que tienen sistemas de anillo de 5 o 6 miembros. Un heteroarilo de 5 miembros es un heteroarilo C1-C4 que contiene de 1 a 4 átomos de carbono y el número requerido de heteroátomos dentro de un sistema de anillo heteroaromático. Un heteroarilo de 6 miembros es un heteroarilo C1-C5 que contiene de 1 a 5 átomos de carbono y el número requerido de heteroátomos dentro de un sistema de anillo heteroaromático. Los heteroarilos de 5 miembros incluyen heteroarilos C1, C2, C3 y C4 que tienen cuatro, tres, dos o un heteroátomo aromático, respectivamente, y los heteroarilos de 6 miembros incluyen heteroarilos C2 , C3 , C4 y C5 que tienen cuatro, tres, dos o un heteroátomo(s) aromático, respectivamente. Los heteroarilos C1-C4 de 5 miembros se ejemplifican mediante restos monovalentes derivados de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un carbono aromático o un electrón de un heteroátomo aromático, cuando se permite, de los siguientes compuestos de heterociclo parentales: pirrol, furano, tiofeno, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, imidazol, pirazol, triazol y tetrazol. Los heteroarilos C2-C4 que tienen 6 miembros se ejemplifican por restos monovalentes derivados de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un carbono aromático o un electrón de un heteroátomo aromático, cuando se permite, de los siguientes compuestos de heterociclo parentales: piridina, piridazina, pirimidina y triazina. Heteroarilos bicíclicos (es decir, heteroarilos que han fusionados anillos aromáticos en los que al menos uno es heteroaromático) incluyen heteroarilos C6-C9 (es decir, restos heteroaromáticos que contienen un total de 6-9 átomos de carbono aromático y al menos un heteroátomo aromático). Algunos heteroarilos bicíclicos se ejemplifican mediante restos monovalentes derivados de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un carbono aromático o un electrón de un heteroátomo aromático, cuando se permite, de un anillo heteroaromático de los siguientes compuestos parentales de heterociclo 6,5-bicíclico: benzofurano (O1), isobenzofurano (O1), indol (N1), isoindol (N1), indolizina (N1), indolina (N1), isoindolina (N1), purina (N4), bencimidazol (N2), indazol (n2), benzoxazol (N1O1), benzisoxazol (N1O1), benzodioxol (O2), benzofurazán (N2O1), benzotriazol (N3), benzotiofurano (S1), benzotiazol (NISI), benzotiadiazol (N2S). Otros heteroarilos bicíclicos se ejemplifican por restos monovalentes derivados de la eliminación de un átomo de hidrógeno de un carbono aromático o un electrón de un heteroátomo aromático, cuando se permite, de un anillo heteroaromático de los siguientes compuestos parentales de heterociclo 6,6-bicíclico: cromeno (O1), isocromo (O1), cromano (O1), isocromano (O1), benzodioxano (O2), quinolina (N1), isoquinolina (N1), quinolizina (N1), benzoxazina (N1O1), benzodiazina (N2), piridopiridina (N2), quinoxalina (N2), quinazolina (N2), cinolina (n2), ftalazina (N2), naftiridina (N2), pteridina (N4). Para los compuestos heteroaromáticos 5,6- y 6,6-bicíclicos anteriores, las expresiones entre paréntesis indican la composición de heteroátomos del sistema de anillo aromático condensado. En dependencia de la estructura, un grupo heteroarilo puede ser monorradical o dirradical (es decir, un grupo heteroarileno).
Más típicamente, un heteroarilo es un resto arilo en donde 1, 2 o 3 de los átomos de carbono del(de los) anillo(s) aromático(s) de un resto arilo parental están reemplazados por un heteroátomo, opcionalmente sustituido cuando se permite, incluidos N, O y S, siempre que expresiones no todos los átomos del esqueleto de cualquier sistema de anillo aromático en el resto arilo son reemplazados por heteroátomos y más típicamente son reemplazados por oxígeno (-O-), azufre (-S-) nitrógeno (=N-) o -NR- en donde R es -H, un grupo protector o alquilo, arilo o nitrógeno sustituido con otro resto orgánico de una manera que retiene el sistema cíclico conjugado, en donde el heteroátomo de nitrógeno, azufre u oxígeno participa en el sistema conjugado a través de enlaces pi con un átomo adyacente en el sistema de anillos o a través de un solo par de electrones en el heteroátomo.
Los ejemplos no limitantes de heteroarilos incluyen piridilo, tiazolilo, pirimidinilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, pirazolilo, purinilo, imidazolilo, benzofuranilo, indolilo, isoindoilo, quinolinilo, isoquinolinilo, bencimidazolilo, piridazinilo, pirazinilo, bencilo-pirazinilo, benzotiopirano, benzotriazina, isoxazolilo, pirazolopirimidinilo, quinoxalinilo, tiadiazolilo, triazolilo y similares. Los heteroarilos monocíclicos incluyen, a modo de ejemplo y no de limitación, piridinilo, imidazolilo, pirimidinilo, pirazolilo, triazolilo, pirazinilo, tetrazolilo, furilo, tienilo, isoxazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isotiazolilo, pirrolilo, piridazilinilo, triazinilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo y furazanilo.
Los ejemplos no limitativos de heterociclos que no son heteroarilos incluyen tetrahidrotiofenilo, tetrahidrofuranilo, indolinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, 2-pirrolidonilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, decahidroquinolinilo, octahidroisoquinolinilo, 2H-pirrolilo, 3H-indolilo, 4H-quinolizinilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo, piperazinilo, quinuclidinilo, morfolinilo y oxazolidinilo.
Típicamente, un heterocicloalquilo es un grupo cicloalquilo, resto o sustituyente en donde 1, 2 o 3 carbonos de la cadena cicloalquilo se reemplazan con un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre y es un heterocicloalquilo C2-C10, más típicamente un heterocicloalquilo C4-C10. Los heterocicloalquilos no limitantes pueden contener 0-2 átomos de N, 0-2 átomos de O o 0-1 átomos de S o alguna combinación de los mismos, siempre que al menos uno de dichos heteroátomos esté presente en el sistema de anillo cíclico y pueda estar sustituido con uno o dos restos oxo (=O), como en pirrolidin-2-ona. Más típicamente, los heterocicloalquilos incluyen pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, morfolinilo, piperazinilo, indolinilo y monosacáridos.
Los heterocicloalquilos incluyen, a modo de ejemplo, pero no de forma limitativa, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrotienilo, oxazolidinonilo, tetrahidropiranilo, dihidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, homopiridinxanil, tiomorfolinilo, oxazolidinxanil, tioxanil, oxazolidinxanil, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridinilo, pirrolin-2-ilo, pirrolin-3-ilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, ditianilo, ditiolanilo, dihidropiranilo, dihidrotienilo, dihidrofuranilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 3azabiciclo[4.1.0]heptanilo, 3H-indolilo y quinolizinilo. Los heterocicloalquilos incluyen además todas las formas de anillo de carbohidratos, incluidos, entre otros, monosacáridos, disacáridos y oligosacáridos.
Cuando se usa heterociclo como un grupo de Markush (es decir, un sustituyente), el heterociclo se une a una fórmula de Markush con la que está asociado a través de un carbono o un heteroátomo del heterociclo, donde tal unión no da como resultado un estado de oxidación de ese carbono o heteroátomo formal inestable o no permitida. Un heterociclo que está unido a C está unido a una molécula a través de un átomo de carbono que a veces se describe como -C <heterociclo, donde C <representa un átomo de carbono en un anillo de heterociclo. Un heterociclo que está unido a N es un heterociclo que contiene nitrógeno que está unido a un anillo de heterociclo de nitrógeno a veces descrito como -N<heterociclo donde N< representa un átomo de nitrógeno en un anillo heterocíclico. Por tanto, los heterociclos que contienen nitrógeno pueden estar enlazados en C o enlazados en N e incluyen sustituyentes pirrol, que pueden ser pirrol-1-ilo (enlazado a N) o pirrol-3-ilo (enlazado a C), sustituyentes imidazol, que pueden ser imidazol-1-ilo o imidazol-3-ilo (ambos unidos a N) o imidazol-2-ilo, imidazol-4-ilo o imidazol-5-ilo (todos los cuales están unidos a C).
Un "heteroarilo de nitrógeno de 5 miembros" es un resto heteroaromático de 5 miembros que contiene al menos un átomo de nitrógeno en su sistema de anillo aromático y es un heteroarilo monocíclico o está fusionado con un arilo u otro sistema de anillo de heteroarilo y puede contener uno o más de otros heteroátomos independientemente seleccionados tales como N, O o S. Los heteroarilos de 5 miembros ilustrativos incluyen tiazol, imidazol, oxazol, triazol, pirrolopirimidinas, pirazolopirimidinas, indol e isoindol.
"Heteroarilalquilo", como se usa en la presente descripción, significa un sustituyente, resto o grupo en el que un resto heteroarilo está unido a un resto alquilo, es decir, -alquil-heteroarilo, donde los grupos alquilo y heteroarilo son como se describieron anteriormente. Cuando heteroarilalquilo se utiliza como un grupo Markush (es decir, un sustituyente) el resto alquilo del heteroarilalquilo está unido a una fórmula de Markush con el que está asociado a través de un carbono sp3 del resto alquilo.
"Alquilheteroarilo", como se usa en la presente descripción, significa un sustituyente, resto o grupo en el que un resto heteroarilo está unido a un resto alquilo, es decir, -heteroaril-alquilo, donde los grupos heteroarilo y alquilo son como se describieron anteriormente. Cuando heteroarilalquilo se utiliza como un grupo Markush (es decir, un sustituyente) el resto heteroarilo del heteroarilalquilo está unido a una fórmula de Markush con el que está asociado a través de un carbono sp2 o heteroátomo del resto alquilo.
"Resto unido a O", "sustituyente unido a O" y términos similares como se usan en la presente descripción se refieren a un grupo o sustituyente que está unido a un resto directamente a través de un átomo de oxígeno del grupo o sustituyente. Un grupo unido a O puede ser monovalente incluyendo grupos tales como -OH, acetoxi (es decir, -OC (=O)CH3), aciloxi (es decir, -OC(=O)Ra, en donde Ra es -H, opcionalmente alquilo sustituido, cicloalquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido o heterociclo opcionalmente sustituido), y además incluyen grupos monovalentes tales como ariloxi (Aril-O-), fenoxi (Ph-O-), heteroariloxi (heteroaril-O-), sililoxi, (es decir, R3SO-, en donde R independientemente es alquilo o arilo, opcionalmente sustituido), y -ORPR, en donde RPR es un grupo protector como se ha definido previamente, o un grupo unido a O puede ser divalente, es decir, =O o -X-(CH2)n-Y-, en donde X e Y son independientemente S y O y n es 2 a 3, para formar un sistema de anillo espiro con el carbono al que X e Y están unidos.
"Halógeno" o "halo", como se usa en la presente descripción, significa flúor, cloro, bromo o yodo y es típicamente -F o -Cl.
"Grupo protector", como se usa aquí, significa un resto que previene o reduce la capacidad del átomo o grupo funcional al que está unido de participar en reacciones no deseadas. Los grupos protectores típicos para átomos o grupos funcionales se proporcionan en Greene (1999), "Protective groups in organic synthesis, 3ra ed.", Wiley Interscience. En ocasiones, se usan grupos protectores de heteroátomos como oxígeno, azufre y nitrógeno para minimizar o evitar sus reacciones no deseadas con compuestos electrofílicos. Otras veces, el grupo protector se usa para reducir o eliminar la nucleofilicidad y/o basicidad del heteroátomo desprotegido. Los ejemplos no limitantes de oxígeno protegido se dan por -ORPR, en donde RPR es un grupo protector para hidroxilo, en el que el hidroxilo está típicamente protegido como un éster (por ejemplo, acetato, propionato o benzoato). Otros grupos protectores para hidroxilo evitan interferir con la nucleofilia de los reactivos organometálicos u otros reactivos altamente básicos, donde el hidroxilo está típicamente protegido como un éter, incluyendo alquil o heterocicloalquil éteres (por ejemplo, metil o tetrahidropiranil éteres), alcoximetil éteres (por ejemplo, metoximetilo o etoximetil éteres), aril éteres opcionalmente sustituidos y silil éteres (por ejemplo, trimetilsililo (TMS), trietilsililo (TES), terc-butildifenilsililo (TBDPS), terc-butildimetilsililo (TBS/TBDMS), triisopropilsililo (TIPS) y [2-(TIPS)trimetilsilil)etoxi]-metilsililo (SEM)). Los grupos protectores de nitrógeno incluyen aquellos para aminas primarias o secundarias como en -NHRPR o -N(Rp r )2-, en donde al menos uno de RPR es un grupo protector de átomo de nitrógeno o ambos RPR juntos comprenden un grupo protector.
Un grupo protector es un protector adecuado cuando es capaz de prevenir o evitar reacciones secundarias no deseadas o pérdida prematura del grupo protector bajo las condiciones de reacción requeridas para efectuar la transformación química deseada en otra parte de la molécula y durante la purificación de la molécula recién formada cuando se desee, y puede eliminarse en condiciones que no afecten negativamente a la estructura ni la integridad estereoquímica de esa molécula recién formada. A modo de ejemplo y no de limitación, un grupo protector adecuado puede incluir los descritos previamente para proteger grupos funcionales. Un grupo protector adecuado es típicamente un grupo protector usado en reacciones de acoplamiento de péptidos.
"Ester", como se usa en la presente descripción, significa un sustituyente, resto o grupo que contiene una estructura -C(=O)-O-(es decir, grupo funcional éster) en donde el átomo de carbono de la estructura no está conectado directamente a otro heteroátomo y está conectado a -H u otro átomo de carbono de un resto orgánico, y el átomo de oxígeno monovalente está unido al mismo resto orgánico para proporcionar una lactona o un resto orgánico diferente. Típicamente, los ésteres comprenden o consisten en restos orgánicos que contienen de 1 a 50 átomos de carbono, normalmente de 1 a 20 átomos de carbono o más típicamente de 1 a 8 átomos de carbono y de 0 a 10 heteroátomos seleccionados independientemente (por ejemplo, O, S, N, P, Si, pero normalmente O, S y N), típicamente 0-2 donde los restos orgánicos están unidos a través de la estructura -C(O)-O-(es decir, a través del grupo funcional éster). Cuando un éster es un sustituyente o un grupo variable de una estructura de Markush, ese sustituyente está unido a la estructura a través del átomo de oxígeno monovalente del grupo funcional éster. En esos casos el resto orgánico unido al carbono carbonilo del grupo funcional éster eomprende uno cualquiera de los grupos orgánicos descritos en la presente descripción, por ejemplo, restos alquilo C1-20, restos alquenilo C2-20, alquinilo C2-20, restos arilo C6-C10, heterociclos C4-8 o derivados sustituidos de cualquiera de estos, por ejemplo, que comprenden 1, 2, 3, 4 o más sustituyentes, donde cada sustituyente se elige independientemente. Los ésteres ilustrativos incluyen, a modo de ejemplo y no de limitación, ésteres de acetato, propionato, isopropionato, isobutirato, butirato, tasa de valor, isovalerato, caproato, isocaproato, hexanoato, heptanoato, octanoato, fenilacetato o ésteres de benzoato.
"Éter", como se usa en la presente descripción, significa un resto orgánico, grupo o sustituyente que comprende 1, 2, 3, 4 o más restos -O-(es decir, oxi) que no están unidos a resto(s) carbonilo, usualmente 1 o 2, en donde no hay dos restos -O- inmediatamente adyacentes (es decir, unidos directamente) entre sí. Típicamente, una estructura de éter está compuesta por o consiste en la fórmula resto orgánico -O- en donde el resto orgánico es como se describe para un resto orgánico unido a un grupo funcional éster. Más típicamente, un resto, grupo o sustituyente éter tiene la fórmula de resto orgánico -O- en donde el resto orgánico es como se describe en la presente descripción para un grupo alquilo opcionalmente sustituido. Cuando se usa éter como grupo Markush (es decir, un sustituyente éter), el oxígeno del grupo funcional éter se une a una fórmula Markush con la que está asociado. Cuando se usa éter como sustituyente en un grupo Markush, a veces se denomina grupo "alcoxi". Alcoxi incluye sustituyentes éter C1-C4 tales como, a modo de ejemplo y sin limitación, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi y butoxi.
"Amida" o "carboxamida", como se usa aquí, significa un resto que contiene una estructura -C(=O)N(R)2 o R-C(=O)N(R)-(es decir, grupo funcional carboxamida o amida, respectivamente) sin ningún otro heteroátomo unido directamente al carbono carbonilo de la estructura y donde R, seleccionado independientemente, es hidrógeno, un grupo protector o un resto orgánico en donde el resto orgánico es como se describe en la presente descripción para un resto orgánico unido a un grupo funcional éster y es típicamente un grupo alquilo opcionalmente sustituido. Típicamente, el hidrógeno o un resto orgánico, seleccionado independientemente de R, está unido al grupo funcional carboxamida o amida, en donde el resto orgánico también es como se describe en la presente descripción para un resto orgánico unido a un grupo funcional éster. Cuando se une a un resto orgánico, la estructura resultante está representada por el resto orgánico -C(=O)N(R)2, o resto orgánico R-C(=O)N(R)-. Cuando se menciona una amida como variable para una estructura de Markush, el nitrógeno de la amida se une a esa estructura. Para los sustituyentes carboxamida, el carbono carbonilo del grupo funcional amida está unido a la estructura Markush. Las amidas y carboxamidas se preparan típicamente condensando un haluro de ácido, tal como un cloruro de ácido, con una molécula que contiene una amina primaria o secundaria. Alternativamente, se usan reacciones de acoplamiento de amidas bien conocidas en la técnica de la síntesis de péptidos, que a menudo transcurren a través de un éster activado de una molécula que contiene ácido carboxílico. Se proporcionan preparaciones ilustrativas de enlaces amida a través de métodos de acoplamiento de péptidos en Benoiton (2006) Chemistry of peptide synthesis CRC Press, Bodansky "Peptide synthesis: A practical textbook" (1988) Springer-Verlag; Frinkin, M. y otros, "Peptide Synthesis" Ann. Rev. Biochem. (1974) 43: 419-443. Los reactivos usados en la preparación de ácidos carboxílicos activados se proporcionan en Han y otros, "Recent development of peptide coupling agents in organic synthesis" Tet. (2004) 60: 2447-2476.
"Carbonato" como se usa aquí, significa un sustituyente, resto o grupo que contiene una estructura -O-C (=O)-O-(es decir, grupo funcional carbonato). Típicamente, los grupos carbonato como se usan aquí comprenden o consisten en un resto orgánico, en donde el resto orgánico es como se describe en la presente descripción para un resto orgánico unido a un grupo funcional éster, unido a través de la estructura -O-C(=O)-O-, por ejemplo, resto orgánico -O-C(=O)-O-. Cuando se usa carbonato como grupo Markush (es decir, un sustituyente), uno de los átomos de oxígeno unidos por enlaces sencillos del grupo funcional carbonato se une a una fórmula de Markush con la que está asociado y el otro está unido a un átomo de carbono de un resto orgánico como se describió previamente para un resto orgánico unido a un grupo funcional éster.
"Carbamato" o "uretano" tal como se usa aquí significa un sustituyente, resto o grupo que contiene una estructura representada por -O-C(=O)N(Ra)-(es decir, grupo funcional carbamato) o -O-C(=O)N(Ra)2, -O-C(=O)NH(alquilo opcionalmente sustituido) o -O-C(=O)N(alquilo opcionalmente sustituido^ (es decir, sustituyentes carbamato ilustrativos) en donde Ra y alquilo opcionalmente sustituido se seleccionan independientemente en donde Ra, seleccionado independientemente, es hidrógeno, un grupo protector o un resto orgánico, en donde el resto orgánico es como se describe en la presente descripción para un resto orgánico unido a un grupo funcional éster y es típicamente un grupo alquilo opcionalmente sustituido. Típicamente, grupos carbamato como se usa en la presente invención comprenden o consisten en un resto orgánico, seleccionado independientemente de Ra, en donde el resto orgánico es como se describe en la presente descripción para un resto orgánico unido a un grupo éster funcional, unido a través de la estructura -O-C(=O)-N(Ra)-, en donde la estructura resultante tiene la fórmula del resto orgánico -O-C(=O)-N(Ra)- o resto orgánico -O-C(=O)-N(Ra)-. Cuando se usa carbamato como grupo de Markush (es decir, un sustituyente), el oxígeno (unido a O) o nitrógeno (unido a N) con enlaces sencillos del grupo funcional carbamato se une a una fórmula de Markush con la que está asociado. El enlace del sustituyente carbamato se indica explícitamente (unido a N o a O) o está implícito en el contexto al que se refiere este sustituyente.
"Urea" tal como se usa aquí significa un sustituyente, resto o grupo que contiene una estructura representada por -N(Ra)-C(=O)N(Ra)-(es decir, grupo funcional urea) y por lo general está representado por -NH-C(=O)NH (alquilo opcionalmente sustituido) o -NH-C(=O)N(alquilo opcionalmente sustituido)2-(es decir, alquilo opcionalmente sustituido son sustituyentes ilustrativos de urea), en donde Ra y alquilo opcionalmente sustituidos son seleccionado de forma independiente con cada Ra es independientemente -H, un grupo protector o un resto orgánico como se describe para un resto orgánico unido a un grupo éster funcional. Cuando un resto orgánico está unido a través de un grupo funcional urea la estructura resultante se representa por el resto orgánico -N(Ra)-C(=O)-N(Ra)- o el resto orgánico -N(Ra)-C(=O)-N(Ra)-. Cuando se usa urea como grupo Markush (es decir, como sustituyente), un nitrógeno de enlace simple del grupo funcional urea se une a una fórmula de Markush con la que está asociado, mientras que el otro nitrógeno de enlace simple no está sustituido o es mono o disustituido con uno o dos otros restos orgánicos seleccionados independientemente, en donde el(los) resto(s) orgánico(s) son como se describe en la presente descripción para un resto orgánico unido a un éster de grupo funcional éster.
"Anticuerpo", como se usa en este documento, se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos monoclonales intactos, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoespecíficos, anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo, anticuerpos biespecíficos) y fragmentos de anticuerpos que muestran la actividad biológica deseada siempre que el fragmento de anticuerpo tenga el número necesario de sitios de unión para un enlazador-fármaco. La forma nativa de un anticuerpo es un tetrámero y consiste en dos pares idénticos de cadenas de inmunoglobulina, cada par tiene una cadena ligera y una cadena pesada. En cada par, las regiones variables de la cadena ligera y pesada (VL y VH) juntas son responsables principalmente de la unión a un antígeno. Los dominios variables de la cadena ligera y la cadena pesada consisten en una región marco interrumpida por tres regiones hipervariables, también denominadas "regiones determinantes de la complementariedad" o "CDR". Las regiones constantes pueden ser reconocidas e interactuar con el sistema inmunitario (ver, por ejemplo, Janeway y otros, 2001, Immunol. Biology, 5ta Ed., Garland Publishing, Nueva York). Un anticuerpo puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD e IgA), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) o subclase. El anticuerpo puede derivarse de cualquier especie adecuada. En algunas modalidades, el anticuerpo es de origen humano o murino. Un anticuerpo puede ser, por ejemplo, humano, humanizado o quimérico. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo del mismo es un resto de direccionamiento de ligando ilustrativo que se incorpora en un LDC de la presente invención.
En algunos aspectos, un anticuerpo se une selectiva y específicamente a un epítopo en células hiperproliferativas o células de mamíferos hiperestimuladas (es decir, células anómalas), en donde el epítopo se presenta preferentemente por o es más característico de las células anómalas en contraste con las células normales, o se presenta preferentemente por o es más característico de las células normales en la vecindad de las células anómalas en contraste con las células normales no localizadas en las células anómalas. En esos aspectos, las células de mamífero son típicamente células humanas.
"Anticuerpo monoclonal", como se usa en la presente descripción, se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos, excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son muy específicos y se dirigen contra un único sitio antigénico. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea, y no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo por algún método en particular.
"Actividad citotóxica" se refiere a un efecto de destrucción celular de un fármaco o conjugado ligando-fármaco o un metabolito intracelular de un conjugado ligando-fármaco. La actividad citotóxica puede expresarse como el valor de IC50, que es la concentración (molar o en masa) por unidad de volumen a la que la mitad de las células sobreviven. "Actividad citostática", como se usa en la presente descripción, se refiere a un efecto antiproliferativo de un fármaco, conjugado ligando-fármaco o un metabolito intracelular de un conjugado ligando-fármaco que no depende de la muerte celular pero cuyo efecto se debe a la inhibición de la división celular de células hiperproliferativas, células inmunitarias hiperestimuladas u otras células anómalas o no deseadas.
Los términos "unión específica" y "se une específicamente" significan que un anticuerpo o anticuerpo en un LDC como el resto de direccionamiento es capaz de unirse, de una manera altamente selectiva, con su antígeno diana correspondiente y no con una multitud de otros antígenos. Típicamente, el anticuerpo o derivado de anticuerpo se une con una afinidad de al menos aproximadamente 1 x 10' 7 M, y preferentemente 10' 8 M a 10' 9 M, 10' 1° M, 10' 11 M o 10-12 M y se une al antígeno predeterminado con una afinidad que es al menos dos veces mayor que su afinidad de unión a un antígeno no específico (por ejemplo, BSA, caseína) distinto de un antígeno estrechamente relacionado. "Conjugado ligando-fármaco" o "LDC", como se usa el término en la presente descripción, se refiere a una construcción compuesta por una unidad de ligando de un resto de direccionamiento y una unidad de fármaco que contiene amina terciaria cuaternizada (D+) correspondiente en estructura a una amina terciaria que contienen fármaco que se unen entre sí a través de una unidad de enlace, en donde el LDC se une selectivamente a un resto diana a través de su unidad de ligando. En algunos casos, el término LDC es una pluralidad (es decir, composición) de compuestos LDC individuales que se diferencian principalmente por el número de unidades D+ unidas a cada Unidad de Ligando o la ubicación en la Unidad de Ligando en la que se unen las unidades D+. En otros casos, el término LDC se aplica a un miembro individual de la composición.
"Resto de direccionamiento", como se usa el término en la presente descripción, es un resto incorporado como una unidad de ligando en un LDC que se une selectivamente a un resto diana típicamente presente en, dentro o en las proximidades de células hiperproliferativas, células inmunitarias hiperestimuladas u otras células anómalas o no deseadas en comparación con otros restos presentes en, dentro o en las proximidades de las células normales donde estas células anómalas o no deseadas típicamente no están presentes. A veces, un resto diana está presente en, dentro o en las proximidades de anómalas en mayor abundancia en comparación con las células normales o el entorno de células normales donde las células anómalas normalmente no están presentes. En algunos casos, el resto de direccionamiento es un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno accesible característico de una célula anómala o es un antígeno accesible que es particular del entorno circundante en el que se encuentran estas células. En otros casos, el resto de direccionamiento es un ligando que se une específicamente a un receptor accesible característico de, o en mayor abundancia en, células anómalas u otras células no deseadas, o es un receptor accesible que es particular para las células del entorno circundante en el que las células anómalas se encuentran. Típicamente, un resto de direccionamiento es un anticuerpo como se define en la presente descripción que se une selectivamente a un resto diana de una célula de mamífero anómala o no deseada, más típicamente un resto diana de una célula humana anómala o no deseada.
"Células diana", como se usa el término en la presente descripción, son las células deseadas (es decir, células anómalas u otras células no deseadas) con las que un LDC está diseñada para interactuar con el fin de inhibir la proliferación u otra actividad no deseada de las células deseadas. En algunos casos, las células diana son células hiperproliferativas o células inmunitarias hiperactivas, que son células anómalas ilustrativas. Típicamente, esas células anómalas son células de mamífero y más típicamente son células humanas. En otros casos, las células diana están cerca de células anómalas o no deseadas, de manera que la acción del LDC sobre las células cercanas tiene un efecto deseado sobre las células anómalas o no deseadas. Por ejemplo, las células cercanas pueden ser células epiteliales que son características de la vasculatura anómala de un tumor. La selección de esas células vasculares por un LDC tendrá un efecto citotóxico o citostático sobre estas células, lo que inhibe la entrega de nutrientes a las células anómalas del tumor para tener indirectamente un efecto citotóxico o citostático sobre las células anómalas, y/o tener un efecto directo efecto citotóxico o citostático sobre las células anómalas al liberar un resto de fármaco activo en las proximidades de estas células.
"Resto diana", como se usa el término en la presente descripción, es un resto reconocido preferentemente por un resto de direccionamiento o unidad de ligando de un conjugado ligando-fármaco de ese resto de direccionamiento (es decir, está unido selectivamente por la unidad de ligando) y está presente en, dentro o en las proximidades de las células diana. A veces, el resto diana es un antígeno accesible para la unión selectiva por un anticuerpo, que es una fracción diana ilustrativa que se incorpora en un LDC como una unidad de ligando. En esos casos, tal un antígeno es una proteína de la superficie celular presente en células anómalas u otras células no deseadas, o está presente en células que son particulares del entorno circundante en el que se encuentran las células anómalas o no deseadas, como las células vasculares que son característica del entorno de células hiperproliferativas en un tumor. Más típicamente, el antígeno es una proteína de la superficie celular de una célula anómala u otra célula no deseada que es capaz de internalizarse al unirse con su ligando diana afín. En otros casos, el resto de direccionamiento es un ligando para un receptor de membrana celular accesible extracelularmente que puede internalizarse tras la unión del resto de direccionamiento o es capaz de un transporte pasivo o facilitador del LDC que se dirige al receptor de superficie celular. En algunos aspectos, el resto diana está presente en células de mamíferos anómalas o en células de mamíferos características del entorno de tales células anómalas.
"Conjugado anticuerpo-fármaco" o "ADC", como se usa el término en la presente descripción, se refiere a un LDC en donde el resto de direccionamiento es un anticuerpo, en donde el anticuerpo está unido covalentemente a una unidad de fármaco cuaternizada (D+), típicamente a través de una unidad enlazadora intermedia. A menudo, el término se refiere a una colección (es decir, población o pluralidad) de conjugados que tienen el mismo anticuerpo, unidad de fármaco y unidad enlazadora, pero que tienen una carga o distribución variable del resto enlazadorfármaco para cada anticuerpo (como por ejemplo cuando el número de D+ dos ADC cualesquiera en una pluralidad de tales construcciones es la misma, pero la ubicación de sus sitios de unión al resto de direccionamiento difiere). En esos casos, un ADC se describe mediante la carga de fármaco promedio de los conjugados. Un ADC obtenido a partir de los métodos descritos en la presente descripción tiene la estructura general de Ab-Lb-Lo-D+ en donde Lb-Lo define la unidad enlazadora en donde Lb es un resto de unión covalente de ligando a veces denominado enlazador primario (Lr) enlazador, llamada así porque ese resto es necesario para estar presente en una unidad de ligando de un ADC, Lo es un enlazador secundario susceptible a escisión enzimática (por ejemplo, proteasa o glicosidasa) o no enzimática (por ejemplo, reductiva o hidrolítica). En algunos casos, la escisión aumenta en el entorno de lo anómalo o se produce después de la internalización intracelular del ADC posterior a la unión del anticuerpo de dirección del ADC a su antígeno afín. D+ es una amina terciaria cuaternizada que contiene la unidad de fármaco D en donde D se libera como resultado de esa acción enzimática o no enzimática sobre Lo.
El número promedio de unidades de ligando por anticuerpo, o fragmento del mismo, en una composición de ADC (es decir, un número promedio para una población de conjugados de ADC que difieren por el número de unidades de fármaco conjugado o su ubicación en cada uno de los ADC que están presentes en esa población) se designa como p o cuando los enlazadores no están ramificados, p es el número medio de restos de fármaco enlazador. En ese contexto, p es un número que varía de aproximadamente 2 a aproximadamente 20 y típicamente es aproximadamente 2, aproximadamente 4 o aproximadamente 8. En otros contextos, p representa el número de unidades de fármaco, o unidades enlazador-fármaco cuando los enlazadores no están ramificados, que están unidos covalentemente a un solo anticuerpo de un ADC dentro de una población de conjugados anticuerpo-fármaco que difieren en el número o ubicación de unidades conjugadas enlazador-fármaco en cada uno de los ADC, y se designa como p'. En ese contenido, p' es un número entero que varía de 1 a 20, típicamente de 1 a 12, de 1 a 10 y más típicamente de 1 a 8.
El número promedio de unidades de fármacos por unidad de ligando en una preparación a partir de una reacción de conjugación puede caracterizarse por medios convencionales tales como espectroscopía de masas, ensayo ELISA, HIC y/o HPLC. También se puede determinar la distribución cuantitativa de los conjugados fármaco-enlazadorligando en términos de p. En algunos casos, la separación, la purificación y la caracterización de los conjugados ligando-fármaco homogéneos, en donde p es un cierto valor del conjugado ligando-fármaco con otras cargas de fármaco, puede lograrse por medios como HPLC de fase inversa o electroforesis.
"Antígeno" es una entidad que es capaz de unirse selectivamente a un anticuerpo no conjugado o un fragmento del mismo o a un ADC que comprende una Unidad de Ligando de un anticuerpo o fragmento del mismo. En algunos aspectos, el antígeno es una proteína, glicoproteína o carbohidrato de la superficie celular accesible extracelularmente que se presenta preferentemente por células anómalas u otras células no deseadas en comparación con las células normales. En algunos casos, las células no deseadas que tienen el antígeno son células hiperproliferativas en un mamífero. En otros casos, las células no deseadas que tienen el antígeno son células inmunitarias hiperactivas en un mamífero. En otros aspectos, el antígeno unido específicamente está presente en el entorno particular de células hiperproliferativas o células inmunitarias hiperactivas en un mamífero en contraste con el entorno que experimentan típicamente las células normales en ausencia de tales células anómalas. En otros aspectos más, el antígeno de la superficie celular es capaz de internalizarse tras la unión selectiva de un ADC asociado con células que son particulares del entorno en el que se encuentran células inmunitarias hiperproliferativas o hiperestimuladas en ausencia de tales células anómalas. Un antígeno es una fracción diana ilustrativa de un LDC en la que su unidad de ligando del resto diana es un anticuerpo que reconoce preferentemente ese antígeno a través de la unión selectiva.
Los antígenos asociados con células hiperproliferativas que son accesibles en la superficie celular a un ADC incluyen a modo de ejemplo y no de limitación CD19, CD70, CD30, CD33, NTB-A, avp6 y CD123.
"Precursor del resto de unión covalente de ligando" es un resto de una unidad de enlazador, o una subestructura de la misma utilizada en la preparación de una unidad de enlazador, que es capaz de unirse covalentemente a un resto de direccionamiento durante la preparación de un LDC con lo cual el precursor de la mitad de unión al ligando Lb') se convierte en un resto de unión covalente de ligando (Lb). En algunos aspectos, un resto Lb típicamente tiene un grupo funcional capaz de reaccionar con un nucleófilo o electrófilo nativo de un anticuerpo o fragmento del mismo o se introduce en un anticuerpo mediante transformación química o ingeniería genética. En algún aspecto, el nucleófilo es un grupo amino N-terminal de un péptido que comprende un anticuerpo o el grupo amino épsilon de un residuo de lisina. En otros aspectos, el nucleófilo es un grupo sulfhidrilo de un residuo de cisteína introducido por ingeniería genética o por reducción química de un disulfuro intercatenario de un anticuerpo. En algunos aspectos, el electrófilo es un aldehído introducido por oxidación selectiva del resto carbohidrato de un anticuerpo o es una cetona de un aminoácido no natural introducido en un anticuerpo usando un par de ARNt/ARNt sintetasa genéticamente modificado. Estos y otros métodos son revisados por Behrens y Liu "Methods for site-specific drug conjugation to antibodies" mAB (2014) 6(1): 46-53.
El "resto de unión covalente de ligando" es un resto derivado de la reacción del Lb' correspondiente en un precursor de unidad de ligando con el resto de direccionamiento. Por ejemplo, cuando Lb' está compuesto por un resto maleimida, la reacción de ese resto con un grupo sulfhidrilo reactivo de un resto dirigido convierte Lb' en Lb que está compuesto por un resto succinimida tio sustituido. En otro ejemplo, cuando Lb' está compuesto por un grupo funcional de ácido carboxílico activado, la reacción de ese grupo funcional con un grupo amino épsilon de una lisina en un resto de direccionamiento convierte el grupo funcional en una amida, en donde esa amida comprende el Lb resto de la unidad ligando adjunta. Otros restos Lb y su conversión de Lb' restos que contiene se describen en las modalidades de la invención. En algunos casos, un resto de direccionamiento se deriva con una molécula bifuncional para proporcionar un intermedio que se condensa con un resto precursor de unión covalente de ligando. Como resultado de esa condensación, el resto Lb así formado tiene átomos atribuibles a la molécula bifuncional y Lb'.
"Unidad enlazadora", como se usa el término en la presente descripción, se refiere a un resto orgánico en un conjugado de fármaco y ligando (LDC) intermedio entre una unidad de fármaco cuaternizada (D+) y una unidad de ligando de un resto de direccionamiento y unida covalentemente a una unidad de fármaco cuaternizada. Típicamente, una unidad enlazadora (LU) está compuesta por un resto de unión covalente de ligando (Lb) o un resto precursor de unión covalente de ligando (Lb') y un resto enlazador secundario como se describe en la presente descripción. En algunos aspectos, el precursor de unión covalente del ligando contiene un resto maleimida (M1). La unión del resto de direccionamiento a través de M1 se produce a través de un grupo sulfhidrilo de cisteína del resto de direccionamiento mediante la adición de Michael del grupo sulfhidrilo al sistema de anillo de maleimida de M1. Como resultado de esa adición, se obtiene un resto de succinimida (M2) que tiene un sistema de anillo de succinimida sustituido con azufre. La hidrólisis posterior de ese sistema de anillo, ya sea espontáneamente o en condiciones controladas, como cuando ese sistema es parte de un resto enlazador autoestabilizante (Ls s ), da como resultado un resto ácido succínico-amida (M3), que es un resto estabilizado (Ls ) ilustrativo, como se describe adicionalmente en la presente descripción. También unido covalentemente a Lb o Lb', que son enlazadores primarios (restos Lr ), hay un resto enlazador secundario (Lo), que además interviene entre el resto de direccionamiento y la unidad de fármaco cuaternizada en un LDC y está enlazado covalentemente a Lr a través de intermediación de un éter, éster, carbonato, urea, disulfuro, amida o grupo funcional carbamato, más típicamente a través de un éter, amida o grupo funcional carbamato.
"Enlazador primario", como se usa, es un resto de unión covalente de ligando (Lb) o un precursor de resto de unión covalente de ligando (Lb') y está presente como un componente de una unidad de Enlazador de un LDC o como un componente de un resto que contiene Lb' tal como Lb'-Lo o Lb'-Lo-D+ . El enlazador primario A Lb' está compuesto por un grupo funcional reactivo capaz de reaccionar con un grupo funcional electrófilo o nucleófilo de un resto de direccionamiento. Como resultado de esa reacción, el resto de direccionamiento se une covalentemente como una unidad de ligando a un enlazador primario Lb a través de un grupo funcional derivado del grupo funcional reactivo de Lb'.
El resto "enlazador secundario", como se usa en la presente descripción, se refiere a un resto orgánico en una unidad enlazadora en donde el enlazador secundario (Lo) está unido covalentemente a un resto Lb o Lb' (es decir, una unidad enlazadora primaria) a través de un grupo funcional entre el resto Lb o Lb' y el resto de la unidad enlazadora al que se puede unir covalentemente una unidad de fármaco cuaternizada. En un LDC, el enlazador secundario también se une covalentemente a una unidad de fármaco cuaternizada (D+) a través de la posición bencílica de un resto autodestructivo de tipo PAB o PAB que comprende una unidad espaciadora. Además de una unidad espaciadora (Y), los conectores secundarios se componen de un divisible (W) en el que W, Y y D+ están dispuestos en una relación lineal u ortogonal y pueden estar compuestos además por una unidad de extensión (A). Cuando está presente, A a veces comprende una subunidad A1, que es un resto de armazón que interconecta el grupo funcional reactivo de Lb', o el grupo funcional de Lb derivado del mismo, con el resto del enlazador secundario.
En un LDC, Lo se compone de una unidad espaciadora (Y) que contiene un resto autodestructivo (SI) unido covalentemente a una unidad de resto escindible (W) de manera que la escisión de W en condiciones más probables experimentadas por o en las proximidades de células anómalas en comparación con las células normales o su entorno normal da como resultado la autodestrucción del resto autoemolizante con la liberación concomitante de D. Por lo general, esa autodestrucción ocurre a través de una eliminación 1,6 en un resto SI como se describe en la presente descripción. En esos casos, el SI se une a un fármaco que contiene una amina terciaria mediante la cuaternización del nitrógeno de la amina terciaria de ese fármaco.
Un enlazador secundario (Lo) cuando se une a D+ se representa típicamente por la estructura de (1) o (2):
WV
- £ - A a— Ww----- Yy--------D+ - £ - A a--------Yy------D+
< Y (1) < V (2),
en donde Aa es una unidad extensora; Ww y Ww' son unidades divisibles; e Yy es una unidad espadadora, en donde a es 0 o 1, w o w' es 1 e y es 1. Cuando a es 1, la línea ondulada antes de Aa indica un enlace covalente de esa subunidad Lo con Lb' o Lb (resultante de Lb' después de su incorporación en un LDC). Cuando a es 0, esa línea ondulada indica la unión covalente de Lb' o Lb a una unidad Escindible W en la estructura (1) o Y en la estructura (2).
En algunos aspectos de la invención, Y en la estructura (1) está compuesta por o consiste en un resto autodestructivo (SI) como se describe en la presente descripción sustituido con W y D+ . En otros aspectos de la invención, Y en la estructura (2) está compuesta por o consiste en un resto autodestructivo como se describe en la presente descripción sustituido con D+ a través de un nitrógeno de amina cuaternaria y además está sustituido con W y Ligando-Lb-A- o Lb'-A-, en donde A está opcionalmente presente (es decir, A está unido al SI de Y cuando A está presente o Lb o Lb' está unido al SI de Y cuando A está ausente).
Típicamente, los enlazadores secundarios con estructura (1) están representados por
Figure imgf000019_0001
y los enlazadores secundarios con estructura (2) están representados por
Figure imgf000019_0002
en donde Y consiste en SI y E, J, V, Z1, Z2, Z3, R', R8 y R9 son como se definen en modalidades para PAB o unidades autodestructivas de tipo PAB.
"Resto de maleimida", como se usa en la presente descripción, es un resto precursor de unión covalente de ligando que tiene un sistema de anillo de maleimida. Un resto de maleimida (M1) es capaz de participar en la adición de Michael (es decir, adición de 1,4-conjugado) de un grupo sulfhidrilo derivado del resto de direccionamiento para proporcionar un resto de succinimida (M2) tio-sustituido, como se describe en la presente descripción, que estará presente en una unidad Enlazadora en un LDC. Un resto M1 está unido a lo que resta de la unidad de enlazador, a través de su nitrógeno de imida antes de su conversión a un resto de succinimida tio-sustituido. Aparte del nitrógeno de imida, un resto M1 está típicamente no sustituido, pero puede ser sustituido asimétricamente en el doble enlace cíclico de su sistema de anillo de maleimida. Tal sustitución típicamente da como resultado la adición regioquímicamente preferida de un grupo sulfhidrilo al carbono de doble enlace menos impedido o más electrónicamente deficiente (que depende de la contribución más dominante) del sistema de anillo de maleimida. Cuando está presente en un resto enlazador autoestabilizante (Lss), se espera que la hidrólisis controlada del sistema de anillo succinimida del resto succinimida tio-sustituido M2 derivado de dicho resto M1 sustituido proporcione isómeros regioquímicos de restos de ácido succínico-amida (M3) en un resto enlazador autoestabilizado (Ls ) que se deben a diferencias en la reactividad de los dos carbonilos de M2 atribuibles al sustituyente o sustituyentes que estaban presentes en el precursor M1.
"Resto de succinimida", como se usa en la presente descripción, es un resto orgánico del cual una unidad enlazadora está comprendida en un ADC y resulta de la adición de Michael de un grupo sulfhidrilo derivado de anticuerpo al sistema de anillo maleimida de un resto maleimida (M1). Por tanto, un resto de succinimida (M2) está compuesto por un sistema de anillo de succinimida tio-sustituido y tiene su nitrógeno de imida sustituido con el resto de la unidad enlazadora y está opcionalmente sustituido con sustituyente(s) que estaban presentes en el precursor M1. Típicamente, cuando A está presente el nitrógeno de imida se une covalentemente a un resto extensor (A) o subunidad del mismo (es decir, A1) como se describe en la presente descripción. A veces, M2-A (o M2-A1) proporciona un resto enlazador autoestabilizante (LSS) como se describe en la presente descripción.
"Resto de ácido succínico-amida", como se usa en la presente descripción, se refiere a ácido succínico que tiene un sustituyente amida que resulta del sistema de anillo succinimida tio-sustituido de un resto succinimida M2 que ha sufrido la rotura de uno de sus enlaces carbonil-nitrógeno por hidrólisis. La hidrólisis que da como resultado un resto de ácido succínico-amida (M3) proporciona una unidad enlazadora con menos probabilidades de sufrir una pérdida prematura de un anticuerpo en un LDC que tiene ese resto M3 a través de la eliminación del sustituyente tioanticuerpo. Cuando está presente en un resto enlazador autoestabilizante (Ls s ), se espera que la hidrólisis controlada del sistema de anillo succinimida del resto succinimida sustituido con tio M2 derivado de tal un resto M1 sustituido proporcione isómeros regioquímicos de restos M3 (individualmente denominados M3A y M3B) que se deben a diferencias en la reactividad de los dos carbonilos de carbono de M2 atribuibles al sustituyente o sustituyentes que estaban presentes en el precursor M1
"Enlazador autoestibilizante", como se usa en la presente descripción es un Lb que contiene resto de la unidad de Enlazador de un LDC, o precursor del mismo (es decir, un resto que contiene Lb') que bajo condiciones controladas es capaz de experimentar una transformación química a una resto enlazador autoestabilizado (Ls ), de manera que un LDC inicialmente compuesto por un resto autoestabilizante (Ls s ) se vuelve más resistente a la pérdida prematura del resto de direccionamiento del LDC. Típicamente, un resto Ls s además de un resto Lb o Lb' está compuesto por una unidad de extensión o una subunidad de la misma. En algunos casos que tienen Ls s , W e Y en una disposición lineal, Ls s se une covalentemente a través de una unidad de extensión u otra subunidad de la misma a una unidad escindible (W). En otros de esos casos que tienen W ortogonal a Ls s -Y, Ls s se une covalentemente a Y a través de una unidad de extensión u otra subunidad de la misma. Sin embargo, a veces no hay A intermedio presente y Ls s se une covalentemente directamente a W o Y en dependencia de la disposición relativa de los componentes del enlazador Ls s , W e Y. En algunos aspectos, un Ls s antes de su incorporación en un LDC contiene un resto maleimida (M1) como el resto Lb' (a través del cual se unirá un resto de direccionamiento) y una unidad de extensión (A) o subunidad de la misma (es decir, A1) y está representado por la fórmula de M1-A o M1-A1. Después de la incorporación en un LDC (es decir, después de la unión del resto de direccionamiento a través de la adición de Michael al resto maleimida) el resto M1-A (o M1-A1) de un Ls s se convierte en su resto succinimida sustituido con tio correspondiente M2-A (o M2-A1). Usualmente, Ls s también comprende una unidad básica (BU) como se describe en la presente descripción como un sustituyente de una unidad de extensión unida a M2 o su precursor M1. En esos aspectos, BU ayuda en la hidrólisis del resto succinimida de M2 a su correspondiente forma de anillo abierto M3 [es decir, M2-A(BU)- o M2-A1(BU) - se convierte en M3-A(BU) o M3-A1(BU)].
El "enlazador autoestabilizado" es un resto orgánico derivado de un resto Ls s , ambos restos que contienen Lb, de un LDC que se ha sometido a hidrólisis, normalmente en condiciones controladas, para proporcionar un nuevo resto que contiene Lb que es menos probable que revertir la reacción de condensación de un resto de direccionamiento con un Lb' que contiene resto que proporciona el resto que contiene el Lb original. Por lo general, un enlazador autoestabilizado (Ls ) está compuesto por una unidad de extensión o subunidad de la misma unida covalentemente a un resto obtenido a partir de la conversión de un resto succinimida (M2), que tiene un sistema de anillo succinimida tio-sustituido resultante de la adición de Michael de un grupo sulfhidrilo de un resto dirigido al sistema de anillo maleimida de M1, a otro resto en el que ese resto derivado de M2 tiene una reactividad reducida para la eliminación de su sustituyente tio en comparación con el sustituyente correspondiente en M2. En esos aspectos, el resto derivado de M2 tiene la estructura de un resto ácido succínico-amida (M3) correspondiente a M2 en donde M2 ha sufrido la hidrólisis de uno de sus enlaces carbonil-nitrógeno de su sistema de anillo succinimida. Esa hidrólisis puede ocurrir espontáneamente o más típicamente es catalizada por el grupo funcional básico de BU que está unido covalentemente a una unidad de extensión unida a M2 y está en la proximidad apropiada como resultado de esa unión para ayudar en la ruptura del nitrógeno carbonilo. El producto de esa hidrólisis tiene por tanto una función ácido carboxílico y una función amida sustituida en su nitrógeno amida, que corresponde al nitrógeno imida en el precursor Ls s que contiene M2 , por la estructura de la unidad de extensión antes mencionada. Normalmente, ese grupo funcional básico es un grupo amino cuya reactividad para la hidrólisis catalizada por bases está controlada por el pH. Por lo tanto, un enlazador autoestabilizado (Ls ) típicamente tiene la estructura de M3 enlazado covalentemente a una unidad de armazón o subunidad de la misma que a su vez está enlazado covalentemente a lo que resta del enlazador secundario Lo (Lo') en una disposición lineal y con la unidad básica unida covalentemente a la unidad de extensión unida a M3 ortogonal a Lo. Ls con M3, A, BU y Lo dispuestos de la manera indicada se representa mediante la fórmula de M3-A (BU)-Lo' o M3-Ai (BU)-Lo'.
Después de la hidrólisis, el enlazador autoestabilizado resultante (Ls) típicamente tiene la estructura de M3 enlazado covalentemente a la unidad de extensión sustituida con (M3-A(Bu)- o M3Ai (BU)-). Esa unidad de extensión, a su vez, está unida covalentemente a lo que resta de Lo(Lo') en una disposición lineal con la unidad básica dispuesta ortogonalmente con respecto a M3 y las otras unidades componentes Lo. Las estructuras ilustrativas de restos Lss y Ls con M2 o M3, A(BU) [o Ai (BU)] y Lo' dispuestos de la manera indicada se muestran a modo de ejemplo pero sin limitación por:
Figure imgf000021_0001
en donde el resto CH(CH2NH2)C(=O) indicado es la estructura de la unidad de extensión, o subunidad de la misma, unida covalentemente a la imida del nitrógeno amídico de M2 o M3 donde el resto -CH2NH2 es el sustituyente BU de esa unidad de extensión. El resto de las estructuras representa el resto succinimida M2 o el resto ácido succínicoamida M3 de la hidrólisis del anillo succinimida de M2, que están sustituidos en la imida o el nitrógeno amida correspondiente con un carbono sp3 de la unidad de extensión. La línea ondulada indica la unión de un grupo sulfhidrilo derivado de una fracción diana resultante de la adición de Michael de ese grupo al sistema de anillo de maleimida de M1. Dado que el sistema de anillo de succinimida de M2 está asimétricamente sustituido debido a su sustituyente tio derivado del resto de direccionamiento, los isómeros regioquímicos de los restos de ácido succínicoamida (M3) como se definen en la presente descripción que difieren en posición con respecto al grupo de ácido carboxílico liberado típicamente resultarán de la hidrólisis de M2. En la estructura anterior, el carbonilo de la unidad de extensión indicada ejemplifica un potenciador de la hidrólisis (HE) como se define en la presente descripción que se incorpora en la estructura de tal una unidad.
M3-A(BU) representa estructuras ilustrativas de restos de enlazador autoestabilizados (Ls ), ya que es menos probable que estas estructuras eliminen el sustituyente tio del resto de direccionamiento y, por lo tanto, provoquen la pérdida de ese resto, en comparación con el correspondiente Estructura M2-A(BU) de un resto Ls s . Esa estabilidad aumentada resulta de la mayor flexibilidad conformacional en M3 en comparación con M2 , que ya no limita al sustituyente tio en una conformación favorable para la eliminación de E2.
"Unidad básica", como se usa en la presente descripción, es un resto orgánico dentro de un resto enlazador autoestabilizante (Ls s ), como se describe en la presente descripción, que se puede llevar a un resto Ls correspondiente al participar en la hidrólisis asistida por bases del sistema de anillo de succinimida dentro de un resto M2 que comprende Ls s (es decir, cataliza la adición de agua de una molécula de agua a uno de los enlaces carbonil-nitrógeno de succinimida) y puede iniciarse en condiciones controladas tolerables por el resto de direccionamiento unido a Ls s . Para ese propósito, el grupo funcional básico de la unidad básica (BU) y su posición relativa en Ls s con respecto a su componente M2 se selecciona por su capacidad de enlace de hidrógeno a un grupo carbonilo de M2 que efectivamente aumenta su electrofilicidad y de ahí su susceptibilidad al ataque del agua. Alternativamente, esas variables se seleccionan de manera que una molécula de agua, cuya nucleofilicidad aumenta por la unión de hidrógeno al grupo funcional básico de BU, se dirija a un grupo carbonilo M2. Típicamente, BU, que actúa a través de cualquiera de los mecanismos, se compone de 1-6 átomos de carbono contiguos que conectan su grupo amino básico al resto Ls s al que está unido. Para aumentar la electrofilicidad de un carbonilo de M2 mediante enlaces de hidrógeno, se requiere que BU tenga una amina primaria o secundaria como su grupo funcional básico, mientras que el aumento de la nucleofilia del agua de la manera descrita anteriormente se puede hacer con una amina primaria, secundaria o terciaria como el grupo funcional básico. Con el fin de que una amina básica esté en la proximidad requerida para ayudar en la hidrólisis de un resto succinimida de M2 a su correspondiente amida de ácido carboxílico abierto de anillo M3 por cualquier mecanismo, la cadena de carbono que contiene amina de BU está típicamente unida a una extensión resto de Ls s en el carbono alfa de ese resto en relación con el punto de unión de A (o A-i ) al nitrógeno succinimida de M2 (y por lo tanto al nitrógeno maleimida de su correspondiente estructura M1-A o M1-Ai ). Típicamente, ese carbono alfa tiene la configuración estereoquímica (S).
"Unidad potenciadora de la hidrólisis", como se usa en la presente descripción, es un grupo o resto de extracción de electrones que es un sustituyente opcional de una unidad de extensión que comprende un resto Ls s . Cuando está presente, normalmente se incorpora una unidad potenciadora de hidrólisis (HE) en una unidad de extensión unida al nitrógeno imida de un resto M2 de manera que sus efectos de extracción de electrones aumentan la electrofilicidad de los grupos carbonilo succinimida en ese resto. Cuando la unidad de extensión también tiene un sustituyente BU, el efecto de HE sobre los grupos carbonilo junto con el efecto de BU, que depende de la basicidad del grupo funcional básico BU y la distancia de ese grupo funcional en relación con los carbonilo, están equilibrados para que la hidrólisis prematura de M1 o de M2 a M3 no ocurra o sea insignificante durante la preparación de un LDC a partir de un precursor de Ls s que tiene la estructura de M1-A(BU)-, pero permite la hidrólisis (es decir, la conversión de un resto -M2-A(BU)- que contiene LDC en su resto -M3-A(BU)- correspondiente) en condiciones controladas (como cuando el pH se aumenta intencionalmente) que son tolerables por la orientación adjunta mitad. Típicamente, la unidad HE es un resto carbonilo (es decir, cetona o -C(=O)-) o grupo funcional que contiene carbonilo localizado distal al extremo de la unidad de extensión que está unido a M2, o M3 derivado de él, y que también une covalentemente esa unidad de ensanchamiento a lo que resta del enlazador secundario. Los grupos funcionales que contienen carbonilo distintos de la cetona incluyen ésteres, carbamatos, carbonatos y ureas. Cuando HE es un grupo funcional que contiene carbonilo diferente a la cetona, el resto carbonilo de ese grupo funcional está típicamente unido a A. En algunos aspectos, como cuando no hay un sustituyente BU presente, la unidad HE puede estar lo suficientemente distante dentro de una unidad extensora del nitrógeno de la imida. al que la unidad de extensión está unida covalentemente de manera que no se observa ningún efecto discernible sobre la sensibilidad hidrolítica de los enlaces succinimida carbonil-nitrógeno de un resto que contiene M2.
"Unidad de extensión", como se usa el término en la presente descripción, se refiere a un resto orgánico en un enlazador secundario que separa físicamente el resto de direccionamiento de otros componentes intermedios de una unidad de enlazador que están distal a la unidad de extensión, como una unidad escindible y/o un unidad espaciadora. Las unidades de extensión se requieren normalmente cuando un resto Lb de un LDC no proporciona suficiente alivio estérico para permitir el procesamiento de la unidad de enlace en W de manera que pueda liberarse un fármaco que contiene amina terciaria incorporado en D+ . Una unidad de extensión (A) puede comprender uno o múltiples grupos o subunidades de extensión como se describe en la presente descripción. Antes de la incorporación en un LDC, A tiene grupos funcionales capaces de unir covalentemente un Lb' a una unidad Escindible (W) en ciertas construcciones enlazadoras (como cuando A, W e Y están en una disposición lineal) o a una unidad espaciadora (Y) en otras construcciones de enlazador (como cuando W es ortogonal a A-Y). En algunos aspectos de la invención, una unidad de extensión es capaz de unirse a más de una unidad escindible, unidad espaciadora y/o unidad de fármaco como, por ejemplo, cuando A representa un dendrímero u otra estructura ramificada multifuncional. En algunos aspectos de la invención, el enlazador secundario se une a un resto Lb o Lb' a través de una de sus subunidades de extensión mientras que otra o sus subunidades se enlazan covalentemente a lo que resta del enlazador secundario.
Una unidad de extensión (A), cuando está presente en un LDC, es una fracción orgánica unida covalentemente a una fracción de unión covalente de ligando o un precursor de fracción de unión covalente de ligando y a otra unidad de unión secundaria y puede comprender o consistir en dos, tres o más subunidades. Típicamente, A es una unidad distinta o tiene dos subunidades distintas denominadas A1 y Ao . En aquellos aspectos en los que A tiene dos subunidades, el subíndice a es 2 en conjugados Fármaco enlazador o Ligando Fármaco que se componen de restos como -Aa-Ww-Yy- o Aa-Yy(Ww )- y Aa como -A1-A2- a veces se denomina -A1-AO-. El número de átomos contiguos en una unidad de extensión se elige para aliviar la interferencia estérica del resto del ligando no dirigido por el resto de unión covalente del ligando que impediría la liberación del fármaco libre que contiene amina terciaria resultante del procesamiento dentro o en el sitio de células anómalas de W de un LDC compuesta por ese resto de unión de ligando covalente, unidad de extensión y unidad escindible. Normalmente, la unidad de extensión o una subunidad de la misma tiene de uno a seis átomos de carbono contiguos que se encuentran entre el resto de unión covalente del ligando o el precursor del resto de unión covalente del ligando y el grupo funcional que une covalentemente la unidad de extensión A a un espaciador o divisible (W). (Y) unidad del enlazador secundario o a otra subunidad de A. En algunos aspectos, ese grupo funcional también puede servir como unidad potenciadora de la hidrólisis (HE).
"Unidad de ramificación", como se usa en la presente descripción, se refiere a un resto orgánico trifuncional que es una subunidad opcional de una unidad de extensión (A). A veces A1 o Ao , que son subunidades de A, actúan como una unidad de ramificación y otras veces la unidad de ramificación es una subunidad adicional de A. Cuando A1 Ao y B están presentes como subunidades de A, B puede ser la unidad proximal subunidad a un resto de unión covalente de ligando (Lb) o su precursor Lb' (es decir, está antes de -A1-A0 -) o la subunidad distal de A (es decir, está después de -A1-A0 -). La unidad de ramificación es trifuncional para ser incorporada a una unidad de enlace secundaria (Lo ) o para conectar Lo a una unidad de enlace primaria (Lr ) y para conectarse adicionalmente a una Unidad de solubilización (S) cuando esa unidad está presente componente de una unidad de enlace (LU). En aquellos aspectos en los que A tiene dos subunidades en las que una subunidad es una unidad de ramificación, el subíndice a es 2 en el fármaco enlazador o los conjugados de fármaco ligando que se componen de restos como -Aa-Ww-Yy - o Aa-Yy (Ww)- y en estos casos Aa como -A1-A2- a veces se denomina -A-B- o -B-A-. En aquellos aspectos en los que A tiene tres dos subunidades en las que una subunidad es una unidad de ramificación, el subíndice a es 3 en Fármaco enlazador o ligando Fármaco conjugados que se componen de restos como -Aa-Ww-Yy - o Aa-Yy (Ww ) - y en estos casos Aa como -A1-A2-A3- a veces se denomina -A1-B-A0 o -B-A1-A0 - o -A1-A0 -B- en dependencia del orden relativo de A1, Ao y B en la unidad de enlace del compuesto de enlace de fármaco o conjugado de fármaco y ligando.
En algunos aspectos, un aminoácido natural o no natural u otro compuesto ácido que contiene amina que tiene una cadena lateral funcionalizada sirve como unidad de ramificación. Normalmente, cuando una unidad de ramificación (B) y una unidad de solubilización (S) son componentes de una unidad de enlace, la cadena lateral funcionalizada de B conecta S a lo que resta de LU. Las estructuras ilustrativas para B son las descritas en la presente descripción para otras subunidades de A (por ejemplo, A1, Ao ) siempre que la estructura tenga la triple funcionalidad requerida antes mencionada. En algunos aspectos, B es un resto de lisina, ácido glutámico o ácido aspártico en la configuración L o D en la que el grupo funcional épsilon-amino, ácido gamma-carboxílico o ácido beta-carboxílico, respectivamente, conecta la unidad solubilizante a lo que resta de LU.
"Unidad de solubilización", como se usa en la presente descripción, se refiere a un resto orgánico que es hidrófilo. Una unidad de solubilización (S), cuando está presente, se une covalentemente a una unidad de ramificación y sirve para contrarrestar, al menos en parte, la hidrofobicidad de una unidad de fármaco cuando la hidrofobicidad de una unidad de fármaco limita la carga media de fármaco de su conjugado de fármaco y ligando (LDC). Esa limitación en la conjugación de fármacos hidrófobos resulta típicamente de la agregación mediada por hidrófobos de compuestos de ADC individuales en una composición de a Dc . La incorporación de un agente solubilizante apropiado da como resultado una reducción detectable de especies agregadas según lo medido por cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) en comparación con un ADC de control apropiado que carece de la unidad solubilizante.
La "unidad escindible", como se define, proporciona un sitio reactivo en el que la reactividad a ese sitio es mayor dentro o alrededor de una célula hiperproliferante o una célula inmunitaria hiperestimulada (es decir, una célula anómala) en comparación con una célula normal, de manera que la acción sobre ese sitio da como resultado una exposición preferencial a la célula anómala de un fármaco que contiene amina terciaria. Esa exposición resulta de la eventual liberación de fármaco libre de un LDC que tiene esa unidad escindible. En algunos aspectos de la invención, W está compuesto por un sitio reactivo escindible por una enzima (es decir, W está compuesto por un sustrato enzimático) cuya actividad o abundancia es mayor dentro o alrededor de la hiperproliferación, inmunoestimulante u otra anomalía o celda no deseada. En otros aspectos, W se compone de un sitio reactivo escindible por otros mecanismos (es decir, no enzimáticos) más probablemente operable en el entorno dentro o alrededor de las células anómalas del sitio objetivo en comparación con el entorno de las células normales en las que se encuentran las células anómalas. normalmente no está presente. En otros aspectos más de la invención, es más probable que el sitio reactivo opere después de la internalización celular del LDC en una célula anómala. Es más probable que la internalización se produzca en esas células en comparación con las células normales debido a una mayor presentación del resto diana que es reconocida por el resto diana del LDC en la membrana celular de las células anómalas o no deseadas. Por lo tanto, es más probable que las células diana se expongan intracelularmente al resto de fármaco activo liberado de su LDC. La unidad escindible puede comprender uno o varios sitios susceptibles de escisión en esas condiciones del sitio objetivo, pero típicamente solo tiene uno de esos sitios.
En algunos aspectos de la invención, la unidad escindible es un sustrato para una proteasa reguladora, hidrolasa o glicosidasa localizada intracelularmente en las células diana (es decir, el sitio reactivo de W es un enlace peptídico o un enlace glicosídico escindible por la proteasa reguladora, hidrolasa o glicosidasa) donde el péptido o enlace glicosídico es capaz de escisión selectiva por la proteasa reguladora, hidrolasa o glicosidasa en comparación con proteasas, hidrolasas o glicosidasas de suero, donde la proteasa reguladora, hidrolasa o glicosidasa puede o no ser más específica de la células anómalas u otras no deseadas dirigidas en comparación con las células normales, o es capaz de escisión selectiva por una proteasa, hidrolasa o glicosidasa excretada en mayores cantidades por las células anómalas u otras no deseadas dirigidas en comparación con las células normales. Alternativamente, W proporciona un grupo funcional que cuando se incorpora a un LDC es susceptible al ambiente ácido de las lisozimas cuando la LDC se internaliza preferentemente en una célula anómala, o al mayor ambiente reductor en o alrededor de estas células en comparación con el ambiente de células normales en las que las células anómalas no suelen estar presentes, de manera que la liberación del fármaco libre que contiene amina terciaria expone preferentemente a las células anómalas a ese fármaco en comparación con las células normales.
La unidad escindible (W), antes de su incorporación a un LDC, es capaz de enlazarse con la unidad espaciadora (Y). Después de la incorporación en un LDC, W proporciona un enlace escindible (es decir, un sitio reactivo) que tras la acción de una enzima presente dentro de una célula hiperproliferante o células inmunitarias hiperactivadas o característica del entorno inmediato de estas células anómalas o no deseadas., o por acción no enzimática debido a condiciones experimentadas más probablemente por las células hiperproliferativas en comparación con las células normales, libera el fármaco libre que contiene amina terciaria. Alternativamente, W proporciona un enlace escindible sobre el que es más probable actuar intracelularmente en una célula hiperproliferante o una célula inmunitaria hiperactivada debido a la entrada preferencial en dichas células en comparación con las células normales. Típicamente, W en un ADC se une covalentemente a una unidad espaciadora (Y) que está compuesta por o consiste en un resto autodestructivo de manera que la acción enzimática sobre W desencadena la autodestrucción de ese resto dentro de YD + para liberar D.
Los grupos funcionales que proporcionan enlaces escindibles incluyen, a modo de ejemplo y no de limitación, (a) grupos sulfhidrilo que forman un enlace disulfuro, que son susceptibles a las mayores condiciones reductoras de las células anómalas en comparación con las células normales o el exceso de glutatión producido en condiciones hipóxicas, condiciones experimentadas por tales células, (b) grupos aldehído, cetona o hidrazina que forman una base de Schiff o grupos funcionales hidrazona, que son susceptibles a las condiciones ácidas de las lisozimas tras la intemalización selectiva de un LDC que tiene una unidad enlazadora con ese enlace escindible en una célula anómala en comparación con la internalización en células normales, (c) grupos carboxílicos o amino que forman un enlace amida, como en los enlaces peptídicos, que son susceptibles de escisión enzimática por proteasas producidas o excretadas preferentemente por células anómalas en comparación con las células normales o por una proteasa reguladora dentro de una célula diana (d) grupos amino o hidroxilo que forman ciertos grupos urea o carbamato o grupos carboxílicos o hidroxi que forman grupos éster o carbonato que son susceptibles de escisión enzimática por hidrolasas o esterasas que son producidas o excretadas preferentemente por células anómalas en comparación con las células normales.
Aún otros grupos funcionales que proporcionan enlaces escindibles se encuentran en azúcares o carbohidratos que tienen un enlace glicosídico que son sustratos para glicósidos que a veces pueden ser producidos preferentemente por células anómalas en comparación con células normales. Alternativamente, la enzima proteasa, hidrolasa o glicosidasa requerida para el procesamiento de la unidad enlazadora para liberar un fármaco activo que contiene amina terciaria no necesita ser producida preferentemente por células anómalas en comparación con células normales, siempre que la enzima de procesamiento no sea excretada por células normales a una extensión que provocaría efectos secundarios no deseados por la liberación prematura del fármaco libre. En otros casos, la enzima proteasa, hidrolasa o glicosidasa requerida puede excretarse, pero para evitar una liberación prematura no deseada del fármaco, se prefiere que la enzima de procesamiento se excrete en las proximidades de las células anómalas y permanezca localizada en ese entorno, ya sea producido por células anómalas. o células normales cercanas en respuesta al entorno anormal provocado por las células anómalas. A ese respecto, W se selecciona para que actúe preferentemente sobre él una proteasa, hidrolasa o glicosidasa en o dentro del entorno de las células anómalas en contraste con las enzimas que circulan libremente. En esos casos, es menos probable que un LDC libere el fármaco que contiene amina terciaria en la vecindad de las células normales ni se internalizaría en las células normales que producen pero no excretan la enzima seleccionada, ya que es menos probable que dichas células muestren una fracción diana. requerido para la entrada por la LDC.
En algunos aspectos, W está compuesto por un aminoácido o está compuesto por o consiste en una o más secuencias de aminoácidos que proporcionan un sustrato para una proteasa presente dentro de las células anómalas o localizada en el entorno de estas células anómalas. Por lo tanto, W puede comprender o consistir en un resto dipeptídico, tripéptido, tetrapéptido, pentapéptido, hexapéptido, heptapéptido, octapéptido, nonapéptido, decapéptido, undecapéptido o dodecapéptido incorporado en una unidad enlazadora a través de un enlace amida al SI de Y en el que ese resto es una secuencia de reconocimiento para esa proteasa. En otros aspectos, W está compuesto por o consiste en un resto carbohidrato unido al SI de Y por un enlace glicosídico que es escindible por una glicosidasa producida preferentemente por células anómalas, o se encuentra en tales células a las que un LDC, que está compuesto por ese SI y los restos carbohidrato tienen una entrada selectiva debido a la presencia del resto diana en las células anómalas.
"Unidad espadadora" como se usa en la presente descripción es un resto orgánico en un enlazador secundario (Lo) dentro de una unidad enlazadora que está unido covalentemente a una unidad escindible (W) o unidad extensora (A) (o a Lb o Lb' cuando A está ausente) dependiendo de su configuración entre sí. Por lo general, en una configuración, una unidad de fármaco cuaternizada (D+) y W están unidos covalentemente a Y, que a su vez está unido a A (o Lb o Lb' cuando A está ausente) de manera que W es ortogonal a lo que resta de Lo, mientras que en otra configuración W, Y, D+ están dispuestos en una configuración lineal con D+ unido a Y. En cualquier disposición, Y sirve para separar el sitio de escisión W de D+ para evitar interacciones estéricas de esa unidad que interferiría con la escisión de W siempre que esa escisión se realice mediante acción enzimática.
Por lo general, una unidad espaciadora está compuesta por o consiste en un resto autodestructivo (SI) como se define en la presente descripción en el que ese resto se une covalentemente a una unidad de escisión (W) de manera que el procesamiento in vivo de W activa el SI para que se autodestruya, liberando así el fármaco que contiene aminas terciarias libre. A menudo, SI de Y se une a W a través de un grupo funcional amida (o anilida) con Y también unido covalentemente al nitrógeno de amina cuaternaria de D+ a través de SI, de manera que la autodestrucción de SI da como resultado la liberación de fármaco que contiene amina terciaria libre.
"Resto autodestructivo", como se usa en la presente descripción, se refiere a un resto bifuncional dentro de una unidad espaciadora (Y) que tiene un resto orgánico que interviene entre el primer y segundo resto de grupo funcional e incorpora covalentemente estos restos en una molécula tripartita normalmente estable a menos que se active. En la activación, cuando se escinde el enlace covalente al primer resto del grupo funcional, el segundo resto del grupo funcional se separa espontáneamente de la molécula tripartita por autodestrucción del resto del resto SI. Esa autodestrucción en la activación libera el fármaco libre que contiene aminas terciarias (D). En algunos aspectos, la autodestrucción se produce después de la internalización celular de un LDC que comprende D+ y una unidad enlazadora que tiene un resto de autodestrucción (SI) en Y de la unidad enlazadora. El resto orgánico intermedio entre los restos de grupo funcional de un resto autodestructivo (SI) es a veces un resto de arileno o heteroarileno capaz de sufrir fragmentación para formar un meturo de quinona o estructura relacionada mediante eliminación 1,4 o 1,6 con concomitante liberación de fármaco libre que contiene aminas terciarias. Tales restos SI se ejemplifican mediante restos de alcohol p-aminobencílico (PAB) opcionalmente sustituidos, orto o para-aminobencilacetales, o compuestos aromáticos que son electrónicamente similares al grupo PAB (es decir, tipo PAB) tales como 2-aminoimidazol-5-metanol derivados (ver, por ejemplo, Hay y otros, 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237) y otros heteroarilos como se describe en la presente descripción.
Típicamente, para uno de los restos de grupo funcional en un resto SI, un carbono aromático de un grupo arileno o heteroarileno de un resto SI de tipo PAB o PAB incorporado en una unidad enlazadora se sustituye con un heteroátomo donante de electrones (EDG) unido a el sitio de escisión de W a través de un grupo funcional que comprende el heteroátomo en el que ese heteroátomo está funcionalizado de manera que su capacidad de donación de electrones se atenúa (es decir, el EDG está enmascarado por la incorporación de SI de Y en una unidad de enlace). El otro sustituyente que proporciona el segundo grupo funcional es un carbono bencílico que tiene un sustituyente de amina cuaternaria, en el que la amina cuaternaria, que comprende el fármaco que contiene amina terciaria, está unida a través del carbono bencílico unido a otro átomo de carbono aromático del arileno central o heteroarileno. grupo, en el que el carbono aromático que lleva el heteroátomo donante de electrones atenuado es adyacente (es decir, relación 1,2), o dos posiciones adicionales eliminadas (es decir, relación 1,4) de ese átomo de carbono bencílico. El EDG se elige de manera que el procesamiento del sitio de escisión de W restablezca la capacidad de donación de electrones del EDG enmascarado, lo que desencadena una eliminación 1,4 o 1,6 para expulsar el fármaco que contiene amina terciaria del sustituyente de amina cuaternaria bencílica.
Los restos SI relacionados con PAB o PAB cuando están presentes en un resto de enlazador secundario-D+ de estructura (1) que tiene un arileno o heteroarileno con los patrones de sustitución requeridos 1,2 o 1,4 que permiten la fragmentación 1,4- o 1,6 para liberar D de un resto de fármaco cuaternizado está representada por
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en donde D+ está unido en -C(R8)(R9)-D+ a través de un nitrógeno de la amina cuaternaria unido covalentemente al carbono bencílico mencionado anteriormente y J es el EDG enmascarado, en donde J, que está unido a W a través de la atenuación funcional grupo que comprende J, es -O-, -N(R33)-, o -S-, y R8, R9, R33, R', V, Z1, Z2, Z3 se definen en modalidades de unidades SI tipo PAB y PAB. Estas variables se seleccionan de manera que la reactividad de J cuando se libera del procesamiento de W en el sitio diana se equilibra con la reactividad de la amina terciaria eliminada de SI y la estabilidad del intermedio de tipo quinona-metida resultante de esa eliminación.
En algunos aspectos para un resto secundario de enlazador-D+ de estructura (1), el resto SI de tipo PAB o PAB unido a D+ tiene la estructura de
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Las modalidades proporcionan otras estructuras y sus definiciones de grupos variables que incorporan un resto SI en un resto de enlazador secundario-D+ de estructura (1).
En algunos aspectos para un enlazador secundario de estructura (2), un resto SI de tipo PAB o PAB cuando está presente en un enlazador secundario de estructura (2) tiene la estructura de
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en donde la línea ondulada a J indica unión covalente estable covalente (es decir, no procesada en el sitio diana) al Ligando-Lb - o Lb'- cuando a es 0 o a través de A o subunidad del mismo cuando a es 1, donde J es -O-, -N(R33) -, o -S- unido directamente a Lb, Lb', A o una subunidad de A o a través de un grupo funcional que comprende J, y donde R', R8, R9, V, Z1, Z2 y Z3 son como se definen en la Fórmula 1 y E, seleccionado independientemente de J, es un grupo donante de electrones tal como -O-, -N(R33)-, o -S-, en donde la capacidad donante del electrón de E es atenuada por la unión a W', en donde W”-E proporciona un sitio de escisión para una glicosidasa, y E y el carbono bencílico del grupo -C(R8)(R9)-D+ están unidos al grupo arileno o heteroarileno en las posiciones definidas por V, Z1, Z2 o Z3, de manera que E y el resto -C (R8)(R9)-D+ están en un 1,2 o 1,4 para permitir la fragmentación 1,4 o 1,6 que da como resultado la liberación del fármaco que contiene amina terciaria.
En algunos aspectos de un resto secundario de enlazador-D+ de estructura (2), el resto SI de tipo PAB o PAB unido a D tiene la estructura de
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Las modalidades proporcionan otras estructuras y sus definiciones de grupos variables que incorporan un resto SI en un resto de enlazador secundario-D+ de estructura (2).
El arileno o heteroarileno de un resto SI puede sustituirse adicionalmente para afectar la cinética de la eliminación 1,2 o 1,4 con el fin de modular la liberación de D o mejorar las propiedades fisicoquímicas del conjugado de ligando fármaco (por ejemplo, reducir la hidrofobicidad) en el que se incorpora.
Los ejemplos ilustrativos y no limitantes de estructuras SI que se modifican para acomodar sustituyentes de amina cuaternaria bencílica son proporcionados por Blencowe y otros "Self-immolative linkers in polymeric delivery systems" Polym. Chem. (2011) 2: 773-790; Greenwald y otros "Drug delivery systems employing 1,4- or 1,6-eíimination: poly(ethylene glycol) prodrugs of amine-containing compounds" J. Med. Chem. (1999) 42: 3657-3667; y en las patentes de EE. UU. núms. 7,091,186; 7,754,681; 7,553,816; y 7,989,434.
"Fármaco citotóxico", como se usa en la presente descripción, se refiere a un compuesto o un metabolito derivado de un LDC que ejerce un efecto anti-supervivencia sobre células hiperproliferativas, células inmunitarias hiperactivas u otras células anómalas o no deseadas. En algunos aspectos, el fármaco citotóxico actúa directamente sobre esas células o indirectamente actuando sobre la vasculatura anormal que respalda la supervivencia y/o el crecimiento de las células hiperproliferativas u otras células anómalas o no deseadas, o el fármaco citotóxico actúa dentro de los sitios de células inmunitarias hiperactivadas. Típicamente, las células anómalas o no deseadas sobre las que actúa el fármaco citotóxico son células de mamífero, más típicamente células humanas. La actividad citotóxica de un fármaco citotóxico puede ser expresada como un valor IC50, que es la concentración eficaz, cantidad típicamente molar por unidad de volumen, en el que la mitad de las células cancerosas en un sistema de modelo in vitro de células sobrevivir a la exposición al agente citotóxico. Por lo tanto, un valor de IC50 es dependiente del modelo. Típicamente, un agente citotóxico incorporado en un LDC tendrá un valor de IC50 en un modelo in vitro de células compuesto de células hiperproliferación de entre 100 nM a 0,1 pM o más típicamente de aproximadamente 10 nM a 1 pM. Un fármaco citotóxico altamente toxico tiene típicamente un valor de IC50 en tales modelos de aproximadamente 100 pM o inferior. Aunque los inhibidores resistentes a múltiples fármacos que revierten la resistencia a los fármacos citotóxicos no son citotóxicos por derecho propio, a veces se incluyen como fármacos citotóxicos.
"Fármaco citostático", como se usa en la presente descripción, se refiere a un compuesto o un metabolito derivado de un LDC que ejerce un efecto inhibidor sobre el crecimiento y la proliferación de células hiperproliferativas, células inmunitarias hiperactivas u otras células anómalas o no deseadas. En algunos aspectos, el fármaco citostático actúa directamente sobre esas células o indirectamente actuando sobre la vasculatura anormal que apoya la supervivencia y/o el crecimiento de las células hiperproliferativas u otras células anómalas o no deseadas, o el fármaco citotóxico actúa dentro de los sitios de células inmunitarias hiperactivadas infiltrantes. Típicamente, las células anómalas o no deseadas sobre las que actúa el fármaco citotóxico son células de mamífero, más típicamente células humanas. Aunque los inhibidores resistentes a múltiples fármacos que revierten la resistencia a los fármacos citostáticos no son citostáticos por derecho propio, a veces se incluyen como fármacos citostáticos.
"Malignidad hematológica", como se usa el término en la presente descripción, se refiere a un tumor de células sanguíneas que se origina a partir de células de origen linfoide o mieloide y es sinónimo del término "tumor líquido". Las neoplasias hematológicas pueden clasificarse como indolentes, moderadamente agresivas o muy agresivas.
"Linfoma", como se usa en la presente descripción, es una neoplasia maligna hematológica que usualmente se desarrolla a partir de células hiperproliferativas de origen linfoide. Los linfomas a veces se clasifican en dos tipos principales: linfoma de Hodgkin (LH) y linfoma no Hodgkin (LNH). Los linfomas también pueden clasificarse según el tipo de célula normal que más se asemeja a las células cancerosas de acuerdo con marcadores fenotípicos, moleculares o citogénicos. Los subtipos de linfoma bajo esa clasificación incluyen, sin limitación, neoplasias de células B maduras, neoplasias de células T maduras y células asesinas naturales (NK), linfoma de Hodgkin y trastornos linfoproliferativos asociados a inmunodeficiencia. Los subtipos de linfoma incluyen linfoma linfoblástico de células T precursoras (a veces denominado leucemia linfoblástica ya que los linfoblastos de células T se producen en la médula ósea), linfoma folicular, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de células del manto, linfoma linfocítico crónico de células B (a veces denominada leucemia debido a afectación de sangre periférica), linfoma MALT, linfoma de Burkitt, micosis fungoide y su variante más agresiva, enfermedad de Sézary, linfomas periféricos de células T no especificados de otra manera, esclerosis nodular del linfoma de Hodgkin y subtipo de celularidad mixta del linfoma de Hodgkin.
"Leucemia", como se usa el término en la presente descripción, es una neoplasia maligna hematológica que generalmente se desarrolla a partir de células hiperproliferativas de origen mieloide e incluye, sin limitación, leucemia linfoblástica aguda (a Ll ), leucemia mielógena aguda (AML), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mielógena crónica (CML) y leucemia monocítica aguda (AMoL). Otras leucemias incluyen leucemia de células pilosas (HCL), leucemia linfática de células T (T-PLL), leucemia linfocítica granular grande y leucemia de células T adultas.
"Unidad de fármaco cuaternizada", como se usa en la presente descripción, puede ser cualquier compuesto (D) que contenga amina terciaria que tenga una propiedad citotóxica, citostática, inmunosupresora o antiinflamatoria, típicamente contra células de mamíferos, que se haya incorporado en un LDC como su sal de amina cuaternaria correspondiente. (D+). El término "fármaco" no implica un compuesto que solo esté aprobado por una agencia reguladora para su uso en el tratamiento de un sujeto que tiene una enfermedad o afección hiperproliferativa o hiperinmune estimulada o que sería adecuado para tal propósito fuera del contexto de un LDC. Por tanto, D+ también incluye compuestos cuaternizados que en forma no conjugada (es decir, en forma "libre" que contiene amina terciaria y, por lo tanto, no están presentes en un LDC) serían inadecuados para la administración a un sujeto. Por ejemplo, un fármaco que contiene amina terciaria (D) cuando se incorpora en un LDC como D+ puede ser un compuesto citotóxico inapropiado para tratar un cáncer en un sujeto debido a una toxicidad sistémica intolerable a la dosis terapéutica requerida. En algunos aspectos, se obtiene un fármaco cuaternizado condensando el nitrógeno de amina terciaria de un fármaco que contiene amina terciaria con un enlazador secundario Lo que tiene un grupo saliente adecuado. En algunos aspectos, el fármaco que contiene amina terciaria incorporado en D+ será adecuado para su uso en el tratamiento del cáncer. En otros aspectos, el fármaco que contiene amina terciaria incorporado en D+ será adecuado para su uso en el tratamiento del cáncer. En algunos aspectos, un fármaco que contiene amina terciaria incorporado en D+ de un LDC será un compuesto citotóxico o citostático. En otros aspectos, un fármaco que contiene amina terciaria incorporado en D+ de un LDC será un compuesto antiinflamatorio o inmunosupresor. En otros aspectos más, el fármaco que contiene amina terciaria incorporado en D+ de un LDC será un inhibidor de resistencia a múltiples fármacos. Otros fármacos que contienen amina terciaria que pueden incorporarse en D+ se proporcionan adicionalmente mediante la definición de fármaco que contiene aminas terciarias.
"Fármaco que contiene amina terciaria", como se usa en la presente descripción, son aquellos compuestos que tienen actividades citotóxicas, citostáticas o antiinflamatorias y se caracterizan por un resto de amina terciaria alifática (D) que es capaz de liberarse de su resto de amina cuaternaria (D+) correspondiente. de un LDC posterior a la unión del resto diana del LDC a su fracción diana afín. A menudo, el compuesto que contiene amina terciaria se convierte en su forma cuaternizado cuando se incorpora por primera vez en un resto que contiene Lb o Lb'. Sin embargo, a veces se incorpora un precursor que contiene una amina secundaria o una amina primaria en el resto que contiene Lb o Lb', que luego se cuaterniza para formar el resto D+ del que es capaz de liberarse el fármaco que contiene amina terciaria. Por lo tanto, estructuras como L-Lb-Lo-D+ y Lb'-Lo-D+ no implican un método particular en el que se formó D+ y no requieren que un reactivo usado en su formación sea una amina terciaria que contiene fármaco.
Las clases de fármacos que contienen amina terciaria liberados de un LDC de la presente invención incluyen, por ejemplo, pero sin limitación, compuestos que tienen un grupo funcional de amina terciaria que son útiles en el tratamiento del cáncer o una enfermedad autoinmune. Esos compuestos incluyen agentes disruptores de microtúbulos, agentes de unión al surco menor del ADN, inhibidores de la replicación del ADN, agentes alquilantes del ADN, sensibilizadores de quimioterapia e inhibidores de la topoisomerasa como tubulisinas, auristatinas, dímeros de fenazina, ciertos inhibidores resistentes a múltiples fármacos (MDR) e inhibidores de nicotinamida fosforribosiltransferasa (NAMPT).
"Células hiperproliferativas", como se usa en la presente descripción, se refiere a células que se caracterizan por una proliferación celular no deseada o una tasa anormalmente alta o un estado persistente de división celular que no está relacionada o no está coordinada con la de los tejidos normales circundantes. Típicamente, las células hiperproliferativas son células de mamífero. En algunos aspectos, las células hiperproliferativas son células inmunitarias hiperestimuladas como se definen en la presente descripción, cuyo estado persistente de división celular se produce después del cese del estímulo que puede haber provocado inicialmente el cambio en su división celular. En otros aspectos, las células hiperproliferativas son células normales transformadas o células cancerosas y su estado descontrolado y progresivo de proliferación celular puede resultar en un tumor que es benigno, potencialmente maligno (premaligno) o francamente maligno. Las afecciones de hiperproliferación que resultan de células normales transformadas o células cancerosas incluyen, pero no se limitan a, aquellas caracterizadas como precáncer, hiperplasia, displasia, adenoma, sarcoma, blastoma, carcinoma, linfoma, leucemia o papiloma. Los precancerosos generalmente se definen como lesiones que exhiben cambios histológicos que están asociados con un mayor riesgo de desarrollo de cáncer y, a veces, tienen algunas, pero no todas, las propiedades moleculares y fenotípicas que caracterizan al cáncer. Los precánceres hormonales asociados o sensibles a hormonas incluyen neoplasia intraepitelial prostática (PIN), particularmente PIN de alto grado (HGPIN), proliferación acinar pequeña atípica (ASAP), displasia cervical y carcinoma ductal in situ. Las hiperplasias generalmente se refieren a la proliferación de células dentro de un órgano o tejido más allá de lo que normalmente se ve que puede resultar en el agrandamiento de un órgano o en la formación de un tumor o crecimiento benigno. Las hiperplasias incluyen, pero no se limitan a, hiperplasia endometrial (endometriosis), hiperplasia prostática benigna e hiperplasia ductal.
"Células normales", como se usa en la presente descripción, se refiere a células que experimentan una división celular coordinada relacionada con el mantenimiento de la integridad celular del tejido normal o la reposición de las células sanguíneas o linfáticas circulantes que se requiere por el recambio celular regulado, o la reparación del tejido necesaria por una lesión, o por una respuesta inmune o inflamatoria resultante de la exposición a patógenos u otra agresión celular, donde la división celular provocada o la respuesta inmune termina al completar el mantenimiento, reposición o eliminación de patógenos necesarios. Las células normales incluyen células que proliferan normalmente, células inactivas normales y células inmunitarias normalmente activadas.
Las "células inactivas normales" son células no cancerosas en su estado de reposo Go y no han sido estimuladas por el estrés o un mitógeno o son células inmunitarias que normalmente están inactivas o no han sido activadas por la exposición a citoquinas proinflamatorias.
"Células inmunitarias hiperestimuladas", como se usa el término en la presente descripción, se refiere a células involucradas en la inmunidad innata o adaptativa caracterizadas por una proliferación anómalamente persistente o un estado de estimulación inapropiado que ocurre después del cese del estímulo que inicialmente puede haber evocado el cambio en la proliferación o estimulación o que se produzca en ausencia de algún estímulo externo. A menudo, la proliferación persistente o el estado inadecuado de estimulación da como resultado un estado crónico de inflamación característico de un estado o afección patológica. En algunos casos, el estímulo que puede haber evocado inicialmente el cambio en la proliferación o estimulación no es atribuible a una agresión externa, sino que se deriva internamente como en una enfermedad autoinmune. En algunos aspectos, una célula inmunitaria hiperestimulada es una célula inmunitaria proinflamatoria que ha sido hiperactivada a través de la exposición crónica a citocinas proinflamatorias.
En algunos aspectos de la invención, un LDC se une a un antígeno presentado preferentemente por células inmunitarias proinflamatorias que proliferan de forma anormal o se activan de forma inapropiada. Esas células inmunitarias incluyen macrófagos activados clásicamente o células auxiliares T tipo 1 (Th1), que producen interferón-gamma (INF-y), interleucina-2 (IL-2), interleucina-10 (IL-10) y factor de necrosis tumoral. -beta (TNF-p), que son citocinas que participan en la activación de macrófagos y células T CD8+ .
"Glicosidasa", como se usa en la presente descripción, se refiere a una proteína capaz de escindir enzimáticamente un enlace glicosídico. Típicamente, el enlace glicosídico a escindir está presente en una unidad escindible (W) de un LDC. A veces, la glicosidasa que actúa sobre un LDC está presente intracelularmente en células hiperproliferativas, células inmunitarias hiperactivas u otras células anómalas o no deseadas a las que el LDC tiene acceso preferencial en comparación con las células normales, lo que se atribuye a la capacidad de direccionamiento del componente de unión a ligando (es decir, la unidad de ligando). A veces, el glucósido es más específico para las células anómalas o no deseadas o se excreta preferentemente por células anómalas o no deseadas en comparación con las células normales o está presente en mayor cantidad en las proximidades de las anormales o no deseadas en comparación con las cantidades de suero. A menudo, el enlace glucosídico en W sobre el que actúa una glicosidasa une el carbono anomérico de un resto carbohidrato (Su) a un oxígeno fenólico de un resto autodestructivo (SI) que comprende una unidad de extensión (Y) de manera que la escisión glicosídica de ese enlace desencadena la eliminación 1,4 o 1,6 de un fármaco que contiene amina terciaria del resto de amina cuaternaria unido a la posición bencílica de SI.
En los compuestos de enlace de fármacos o conjugados de fármaco ligando compuestos por restos como -Aa-Yy (Ww)-D+ en los que los subíndices w e y son cada uno de los -Y(W)- es típicamente un resto Su-O'-SI como se define en la presente descripción con A, W y D unidos a SI de una manera que permite la liberación autodestructiva del fármaco que contiene amina terciaria libre tras la acción de una glicosidasa. Tales restos -Y(W)- se denominan a veces una unidad de glucurónido en la que Su no se limita al ácido glucurónico.
Típicamente, un resto Su-O'-SI (donde -O'- representa el oxígeno del enlace glicosídico y Su es un resto carbohidrato) está representado por la estructura descrita para restos autoemolizantes donde E se une al resto arilo de SI es oxígeno con ese heteroátomo sustituido con un resto carbohidrato a través del átomo de carbono anomérico de ese resto. Más típicamente, Su-O'-SI tiene la estructura de:
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en donde R24A, R24B y R24C, es como se define para R24 en el resumen de la invención y se selecciona de manera que la capacidad de donación de electrones del -OH fenólico liberado del enlace glicosídico, la sensibilidad a la escisión selectiva por un glicosidasa del enlace glicosídico al resto carbohidrato Su, y la estabilidad del intermedio de metido de quinona tras la fragmentación se equilibra con la capacidad de salida de la amina terciaria de manera que la liberación eficiente de D de D+ a través de la eliminación de 1,4- o 1,6-. Esas estructuras Su-O'-SI son unidades de glucurónido representativas. Cuando el enlace glicosídico es a un ácido glucurónico, la glicosidasa capaz de la escisión enzimática de ese enlace glicosídico es una glucuronidasa. "Resto carbohidrato", como se usa en la presente descripción, se refiere a un monosacárido que tiene la fórmula empírica de Cm(H2O)n, en donde n es igual a m, que contiene un resto aldehído en su forma hemiacetal o un derivado del mismo en donde un resto CH2OH dentro de esa fórmula se ha oxidado a un ácido carboxílico (por ejemplo, ácido glucurónico por oxidación del grupo CH2OH en glucosa). Típicamente, un resto carbohidrato (Su) es una hexosa cíclica, como una piranosa, o una pentosa cíclica, como una furanosa. Por lo general, la piranosa es un glucurónido o hexosa en la conformación p-D. En algunos casos, la piranosa es un resto p-D-glucurónido (es decir, ácido p-D-glucurónico unido al resto autodestructivo -SI- mediante un enlace glicosídico que se puede escindir mediante p-glucuronidasa). A menudo, el resto carbohidrato no está sustituido (por ejemplo, es una hexosa cíclica o pentosa cíclica de origen natural). Otras veces, el resto carbohidrato puede ser un p-D-glucurónido sustituido (es decir, ácido glucurónico sustituido con uno o más grupos, tales como hidrógeno, hidroxilo, halógeno, azufre, nitrógeno o alquilo inferior).
"Aminoácido" como se usa en la presente descripción es un resto orgánico que contiene un ácido carboxílico y un grupo funcional amina alifática, típicamente un grupo funcional amino primario o secundario capaz de formar un enlace amida con otro resto orgánico a través de reacciones de formación de enlaces peptídicos estándar bien conocidas en el arte de la síntesis de péptidos. El aminoácido incluye aminoácidos naturales, no naturales y no clásicos como se define en la presente descripción. Un aminoácido hidrófobo contiene un sustituyente hidrófobo, típicamente un grupo alquilo C1-C6 unido a un átomo de carbono dentro de la cadena de átomos intermedios entre el ácido carboxílico y grupos funcionales amina y es típicamente en el átomo de carbono alfa en la amina o grupo funcional ácido carboxílico. Para un aminoácido natural hidrófobo, el sustituyente hidrófobo del carbono alfa es valina, alanina, leucina o isoleucina.
"Aminoácido natural" se refiere a los aminoácidos naturales arginina, glutamina, fenilalanina, tirosina, triptófano, lisina, glicina, alanina, histidina, serina, prolina, ácido glutámico, ácido aspártico, treonina, cisteína, metionina, leucina, asparagina, isoleucina y valina, en la configuración L o D, a menos que el contexto indique lo contrario. "Aminoácidos no naturales", como se usa en la presente descripción, son compuestos ácidos que contienen aminas que tienen la estructura básica de los aminoácidos naturales (es decir, son ácidos que contienen alfa-amino, pero tienen grupos R unidos al carbono alfa que no están presentes aminoácidos naturales.
"Aminoácidos no clásicos", como se usa en la presente descripción, son compuestos ácidos que contienen amina que no tienen su sustituyente amina unido al carbono alfa del ácido carboxílico (es decir, no es un alfa-aminoácido). Los aminoácidos no clásicos incluyen p-aminoácidos en los que se inserta un metileno entre el ácido carboxílico y los grupos funcionales amino en un aminoácido natural o un aminoácido no natural.
"Péptido", como se usa en la presente descripción, se refiere a un polímero de dos o más aminoácidos en donde el grupo ácido carboxílico de un aminoácido forma un enlace amida con el grupo alfa-amino del siguiente aminoácido en la secuencia peptídica. Los métodos para preparar enlaces amida en polipéptidos se proporcionan adicionalmente en la definición de amida.
Los péptidos pueden estar compuestos de aminoácidos naturales en la configuración L o D o aminoácidos no naturales o no clásicos, que incluyen, pero no se limitan a, ornitina, citrulina, ácido diaminobutírico, norleucina, pirilalanina, tienilalanina, naftilalanina y fenilglicina. Otros ejemplos de aminoácidos no naturales y no clásicos son los aminoácidos alfa* y alfa-disustituidos*, N-alquil aminoácidos*, ácido láctico*, derivados de haluros de aminoácidos naturales como trifluorotirosina*, p-Cl-fenilalanina*, p-Br-fenilalanina*, p-F-fenilalanina*, L-alil-glicina*, beta-alanina*, ácido L-alfa-amino butírico*, ácido L-gamma-amino butírico*, ácido L-alfa-amino isobutírico*, ácido L-épsilon-aminocaproico #, ácido 7-amino heptanoico*, L-metionina sulfona*, L-norleucina*, L-norvalina*, p-nitro-L-fenilalanina*, L-hidroxiprolina#, L-tioprolina*, derivados metílicos de fenilalanina (Phe) tal como 4-metil-Phe*, pentametil-Phe*, L-Phe (4-amino)#, L-Tyr (metil)*, L-Phe(4-isopropil)*, L-Tic (ácido 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico)*, ácido L-diaminopropiónico, L-Phe (4-bencil)*, ácido 2,4-diaminobutírico, 4-aminobutírico ácido (gamma-Abu), ácido 2-amino butírico (alfa-Abu), ácido 6-amino hexanoico (épsilon-Ahx), ácido 2-amino isobutírico (Aib), 3-ácido aminopropiónico, ornitina, norleucina, norvalina, hidroxiprolina, sarcosina, citrulina, homocitrulina, ácido cisteico, t-butilglicina, t-butilalanina, fenilglicina, ciclohexilalanina, fluoroaminoácidos, beta-metil aminoácidos, Calfa metil aminoácidos, N-metil-aminoácidos, naftil alanina y similares. La notación * indica un derivado que tiene características hidrófobas, # indica un derivado que tiene características hidrófilas y #* indica un derivado que tiene características anfipáticas.
Las secuencias de aminoácidos variantes en un péptido pueden incluir a veces grupos espaciadores adecuados insertados entre dos residuos de aminoácidos cualesquiera de la secuencia, incluidos grupos alquilo tales como grupos metilo, etilo o propilo además de espaciadores de aminoácidos tales como residuos de glicina o p-alanina. Además, un péptido puede comprender o consistir en peptoides. El término "peptoides" se refiere a estructuras de aminoácidos variantes donde el grupo sustituyente de carbono alfa está en el átomo de nitrógeno de la cadena principal en lugar del carbono alfa. Los procesos para preparar péptidos en forma peptoide son conocidos en la técnica (ver, por ejemplo, Simon y otros, Proc. Nat'l. Acad. Sci. (Estados Unidos) (1992) 89(20): 9367-9371; y Norwell, Trends Biotechnol. 13(4): 132-134 (1995)).
"Proteasa", como se define en la presente descripción, se refiere a una proteína capaz de escisión enzimática de un enlace carbonilo-nitrógeno tal como un enlace amida que se encuentra típicamente en un péptido. Las proteasas se clasifican en seis clases principales: serina proteasas, treonina proteasas, cisteína proteasas, proteasas de ácido glutámico, proteasas de ácido aspártico y metaloproteasas llamadas así por el residuo catalítico en el sitio activo que es principalmente responsable de escindir el enlace carbonil-nitrógeno de su sustrato. Las proteasas se caracterizan por diversas especificidades, que dependen de las identidades de los residuos en el lado N-terminal y/o C-terminal del enlace carbonilo-nitrógeno y diversas distribuciones.
Cuando W se compone de amida u otro grupo funcional que contiene nitrógeno-carbonilo que se puede escindir por una proteasa, ese sitio de escisión a menudo se limita a las reconocidas por las proteasas que se encuentran en células hiperproliferativas o células inmunitarias hiperestimuladas o dentro de células específicas del medio ambiente. en el que están presentes células hiperproliferativas o células inmunitarias hiperestimuladas. En esos casos, no se requiere necesariamente que la proteasa esté presente de manera preferencial o se encuentre en mayor abundancia en las células diana por la LDC ya que un LDC tendrá un acceso más pobre a aquellas células que no tienen preferencialmente la porción diana. Otras veces, la proteasa se excreta preferentemente por células anómalas o por células en el entorno en el que se encuentran esas células anómalas en comparación con las células normales o los entornos típicos en los que se encuentran esas células normales en ausencia de células anómalas. Por tanto, en aquellos casos en los que se excreta la proteasa, es necesario que la proteasa esté presente preferentemente o que se encuentre en mayor abundancia en las proximidades de las células diana de los LDC en comparación con las células normales.
Cuando se incorpora a un LDC, un péptido que comprende W presentará una secuencia de reconocimiento a una proteasa que escinde un enlace carbonilo-nitrógeno en W dando como resultado la fragmentación de la unidad enlazadora para provocar la liberación de un fármaco que contiene amina terciaria de D+. A veces, la secuencia de reconocimiento es reconocida selectivamente por una proteasa intracelular presente en las células anómalas a las que el LDC tiene acceso preferido en comparación con las células normales debido a que se dirigen a las células anómalas, o es producida preferentemente por células anómalas en comparación con las células normales, por el propósito de administrar apropiadamente el fármaco al sitio de acción deseado. Usualmente, el péptido es resistente a las proteasas circulantes con el fin de minimizar la expulsión prematura del fármaco que contiene amina terciaria y así minimizar la exposición sistémica no deseada al fármaco. Típicamente, el péptido tendrá uno o más aminoácidos no naturales o no clásicos en su orden de secuencia para tener esa resistencia. A menudo, el enlace amida que se escinde específicamente por una proteasa producida por una célula anómala es una anilida en la que el nitrógeno de esa anilida es un heteroátomo electrondonante naciente (es decir, J) de un resto SI que tiene las estructuras previamente definidas. Por tanto, la acción de la proteasa sobre dicha secuencia de péptidos en W da como resultado la liberación del fármaco del fragmento enlazador mediante eliminación 1,4 o 1,6 a través del resto arileno de SI.
Las proteasas reguladoras se localizan típicamente intracelularmente y son necesarias para la regulación de las actividades celulares que a veces se vuelven aberrantes o desreguladas en células anómalas u otras células no deseadas y lo son más. En algunos casos, cuando W se dirige a una proteasa que tiene distribución preferencial intracelularmente, esa proteasa es una proteasa reguladora, que participa en el mantenimiento o la proliferación celular. En algunos casos, esas proteasas incluyen catepsinas. Las catepsinas incluyen las serina proteasas, catepsina A, catepsina G, proteasas del ácido aspártico catepsina D, catepsina E y las cisteína proteasas, catepsina B, catepsina C, catepsina F, catepsina H, catepsina K, catepsina L1, catepsina L2, catepsina O, catepsina S, catepsina W y catepsina Z.
En otros casos, cuando W se dirige a una proteasa que se distribuye preferentemente extracelularmente en la vecindad de células inmunitarias hiperproliferativas o hiperestimuladas debido a la excreción preferencial por dichas células o por células vecinas cuya excreción es peculiar del entorno de células inmunitarias hiperproliferativas o hiperestimuladas, esa proteasa suele ser una metaloproteasa. Típicamente, esas proteasas están implicadas en la remodelación tisular, lo que ayuda a la invasividad de las células hiperproliferativas o la acumulación no deseada de células inmunitarias hiperactivas que da como resultado un mayor reclutamiento de tales células.
"Agente disruptor de tubulina" como se usa en la presente descripción se refiere a un compuesto citotóxico o citostático que se une a la tubulina o una subunidad de la misma y como resultado inhibe la elongación de tubulina o la polimerización de tubulina para afectar negativamente la dinámica de la tubulina, particularmente en células inmunitarias hiperproliferativas o hiperestimuladas. Los ejemplos de agentes anti-tubulina (es decir, agentes disruptores de tubulina) incluyen, pero no se limitan a, taxanos, alcaloides de la vinca, maitansina y maitansinoides, dolastatinas y auristatinas. Un agente disruptor de tubulina que contiene amina terciaria es un agente disruptor de tubulina como se define en la presente descripción que contiene o puede modificarse para contener un grupo funcional amina terciaria.
"Fármaco de dolastatina", como se usa el término en la presente descripción, son pentapéptidos aislados de fuentes marinas que tienen actividad citotóxica como agentes disruptores de tubulina. Dolastatina 10 y Dolastatina 15 son ejemplos de dolastatinas que contienen aminas terciarias y tienen las siguientes estructuras:
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Algunas dolastatinas ilustrativas están relacionadas con la dolastatina 10 en donde los sustituyentes fenilo y tiazol se reemplazan con restos arilo o heteroarilo seleccionados independientemente. Otras dolastatinas ilustrativas están relacionadas con la dolastatina 15 en donde el resto éster C-terminal se reemplaza por una amida en donde el nitrógeno amida está sustituido con un resto arilalquilo o heteroarilalquilo. Sus estructuras y estructuras de otras dolastatinas que contienen aminas terciarias ilustrativas y la forma de su incorporación en un LDC se proporcionan en las modalidades de unidades de fármaco cuaternizados.
"Fármaco de auristatina", como se usa el término en la presente descripción, es un agente disruptor de tubulina basado en peptidilo relacionado con la dolastatina 10. Algunas auristatinas que contienen aminas terciarias tienen la estructura de De o Df:
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en donde Z es -O-, -S- o -N(R19) -, y donde R10-R21 son como se definen en modalidades para fármacos auristatina que contienen amina terciaria cuaternizada. Cuando se incorpora en un LDC o un precursor de la misma, el nitrógeno indicado (|) del resto de amina terciaria se cuaterniza mediante unión covalente a Lo o Lo de un resto que contiene Lb o Lb ' que comprende Lo . Típicamente, ese resto cuaternizado de D+ resulta del enlace covalente del resto de amina terciaria con el carbono bencílico de un resto PAB o de tipo PAB del que comprende o consiste una unidad de unidad espaciadora (Y) autodestructiva en Lo. Las estructuras de otras auristatinas que contienen amina terciaria ilustrativas y la forma de su incorporación de tales fármacos en un LDC se proporcionan en las modalidades de unidades de fármaco cuaternizados basadas en auristatina e incluyen Auristatina E y Auristatina F.
"Fármaco de tubulisina", como se usa, es un agente disruptor de tubulina basado en péptidos que tiene actividad citotóxica, y está compuesto por un componente de aminoácido natural o no natural y otros tres componentes de aminoácido no naturales en los que uno de esos componentes se caracteriza por un resto heteroarileno de 5 o 6 miembros y otro proporciona una amina terciaria para su incorporación en una unidad de fármaco cuaternizada.
Algunas tubulisinas que contienen aminas terciarias tienen la estructura de Dg o Dh:
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Otras tubulisinas que contienen aminas terciarias tienen la estructura de Dg-1 o Dh-i :
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en donde el círculo representa un heteroarilo nitrogenado de 5 o 6 miembros, en donde los sustituyentes requeridos indicados para ese heteroarilo están en una relación 1,3 o meta entre sí con sustitución opcional en las posiciones restantes; R4, R4A, R4B, R8A son cada uno un alquilo opcionalmente sustituido, seleccionado independientemente; R7 es un arilalquilo opcionalmente sustituido o un heteroarilalquilo opcionalmente sustituido; R7A es un arilo opcionalmente sustituido o un heteroarilo opcionalmente; R2 es un sustituyente unido a O divalente (es decir, el doble enlace está presente o el carbono que tiene el grupo variable está disustituido por una sola instancia de R2), o el doble enlace está ausente (es decir, R2 está unido con enlace sencillo al carbono que tiene ese grupo variable) o R2 es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, o un sustituyente unido a O monovalente; m es 0 o 1; y R2A, R3, R5 y R6 son como se definen en modalidades para fármacos que contienen amina terciaria cuaternizada basados en tubulisina.
Las tubulisinas naturales tienen la estructura de
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y se dividen convenientemente en cuatro subunidades de aminoácidos, como lo indican las líneas verticales discontinuas, denominadas ácido N-metil-pipecolínico (Mep), isoleucina (Ile), tubuvalina (Tuv) y tubofenilalanina (Tup, cuando R7A es hidrógeno) o tubutirosina (Tut, cuando R7A es -OH). Hay aproximadamente una docena de tubulisinas de origen natural actualmente conocidas denominadas Tubulisina AI, Tubulisina U, Tubulisina V y Tubulisina Z, cuyas estructuras están indicadas por grupos variables para la estructura Dg-6 definida en modalidades de unidades de fármaco cuaternizado basadas en tubulisina.
Las pretubulisinas tienen la estructura DG o DH , en donde R3 es -CH3 y R2 es hidrógeno, y las desmetil tubulisinas tienen la estructura de DG , Dg _i , Dg-6, DH , Dh _i y otras estructuras de tubulisina dadas por las modalidades de unidades de fármaco cuaternizado a base de tubulisina, en donde R3 es hidrógeno, y en donde los otros grupos variables como se describen para tubulisinas. Pretubulisinas y desmetil tubulisinas y opcionalmente se incluyen en la definición de tubulisinas.
En las estructuras Dg , Dg -1, Dg -6, Dh , Dh -1 y otras estructuras de tubulisina descritas en la presente descripción en modalidades de unidades de fármaco cuaternizado basadas en tubulisina, el nitrógeno indicado (f) es el sitio de cuaternización cuando tales estructuras se incorporan en un LDC o un precursor del mismo. Cuando se incorpora a un LDC o un precursor del mismo, ese nitrógeno se cuaterniza por unión covalente a Lo o Lo de un resto que contiene Lb o Lb ' compuesto por Lo . Típicamente, ese resto cuaternizado de D+ resulta de la unión covalente del resto de amina terciaria al carbono bencílico de un resto PAB o de tipo PAB del que comprende o consiste una unidad Y en Lo. Las estructuras de otras tubulisinas y pretubulisinas que contienen amina terciaria ilustrativas y la forma de su incorporación en un LDC se proporcionan en modalidades de unidades de fármaco cuaternizado basadas en tubulisina.
Los métodos ilustrativos de preparación de fármacos de tubulisina y las relaciones estructura-actividad se proporcionan por Shankar y otros "Synthesis and structure-activity relationship studies of novel tubulysin U analogseffect on cytotoxicity of structural variations in the tubuvaline fragment" Org. Biomol. Chem. (2013) 11: 2273-2287; Xiangming y otros, "Recent advances in the synthesis of tubulysins" Mini-Rev. Med. Chem. (2013) 13: 1572-8; Shankar y otros, "Synthesis and cytotoxic evaluation of diastereomers and N-terminal analogs of Tubulysin-U" Tet. Lett. (2013) 54: 6137-6141; Shankar y otros, "Total synthesis and cytotoxicity evaluation of an oxazole analogue of Tubulysin U" Synlett (2011) 2011(12): 1673-6; Raghavan y otros, J. Med. Chem. (2008) 51: 1530-3; Balasubramanian, R. y otros, "Tubulysin analogs incorporating desmethyl and dimethyl tubuphenylalanine derivatives" Bioorg. Med. Chem. Lett. (2008) 18: 2996-9; y Raghavan y otros, "Cytotoxic simplified tubulysin analogues" J. Med. Chem. (2008) 51: 1530-3.
"Fármaco de dímero de fenazina", como se usa en la presente descripción, es un compuesto que contiene amina terciaria que tiene dos sistemas de anillos de fenazina fusionados con arilo unidos entre sí a través de grupos funcionales carboxamida en sus posiciones C-1 en donde el resto de unión está compuesto por un resto que contiene amina terciaria que está cuaternizado cuando se incorpora como D+ en un LDC de la presente invención. Algunos dímeros de fenazina que contienen aminas terciarias tienen la estructura de DI:
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en donde el Anillo A y el Anillo B se seleccionan independientemente de arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido fusionado a un sistema de anillo de fenazina opcionalmente sustituido con uno dos o tres sustituyentes RA y/o RB seleccionados independientemente, R9A y R9B se seleccionan independientemente de alquilo sustituidos opcionales o tomados junto con los átomos de nitrógeno a los que están unidos y los átomos de carbono intermedios entre estos átomos de nitrógeno comprenden un sistema de anillo heterocicloalquilo y en donde RA, RB, R11A, R11B, n, s y o se definen en modalidades para fármacos cuaternizados que contienen aminas terciarias.
Algunos dímeros de fenazina que contienen amina terciaria ilustrativos o fenazinas que tienen un arilo o heteroarilo fusionado que comprenden un dímero de fenazina de estructura Di se proporcionan por Moorthy y otros "Fused arylphenazines: scaffold for the development of bioactive molecules" Curr. Drug Targets (2014) 15(7): 681-8; Zhuo y otros, "Synthesis and biological evaluation of benzo[a]phenazine derivatives as a dual inhibitor of topoisomerase I and II" Org. Biomol. Chem. (2013) 11(24): 3989-4005; Kondratyuk y otros, "Novel marine phenazines as potential cancer chemopreventive and anti-inflammatory agents" Marine Drugs (2012) 10(2):451-64; Gamage y otros, "Phenazine-1-carboxamides: structure-cytotoxicity relationships for 9-substituents and changes in the H-bonding pattern of the cationic side chain" Bioorg. Med. Chem. (2006) 14(4): 1160-8; Yang y otros, "Novel synthetic isoquinolino[5,4-ab]phenazines: inhibition toward topoisomerase I, antitumor and DNA photo-cleaving activities" Bioorg. Med. Chem. (2005) 13(21): 5909-14. Gamage y otros, "Structure-activity relationships for pyrido-, imidazo-, pyrazolo-, pyrazino-, and pyrrolophenazinecarboxamides as topoisomerase-targeted anticancer agents" J. Med. Chem. (2002) 45(3): 740-3; Vicker y otros, "Novel angular benzophenazines: dual topoisomerase I and topoisomerase II inhibitors as potential anticancer agents" J. Med. Chem. (2002) 45(3):721-39; Mekapati y otros, "QSAR of anticancer compounds: bis(11-oxo-11H-indeno[1,2-b]quinoline-6-carboxamides), bis(phenazine-1-carboxamides), and bis(naphthalimides)" Bioorg. Med. Chem. (2001) 9(11):2757-62; Gamange y otros, "Dicationic bis(9-methylphenazine-1-carboxamides): relationship between biological activity and linker chain structure for a series of potent topoisomerase targeted anticancer agents" J. Med Chem. (2001) 44: 1407-1415; y Spicer y otros, "Bis(phenazine-l-carboxamides): structure-activity relationships for a new class of dual topoisomerase I/II-directed anticancer drugs" J. Med. Chem. (2000) 43(7): 1350-8.
"Fármacos inhibidores de MDR", como se usa en la presente descripción, son compuestos que contienen aminas terciarias que revierten o atenúan la resistencia a múltiples fármacos debido al eflujo mediado por transportadores de fármacos citotóxicos hidrófobos, citostáticos o antiinflamatorios, que confieren resistencia a células hiperproliferativas o células inmunitarias hiperactivadas a la acción de estos compuestos. Esos transportadores pertenecen típicamente a la familia de transportadores del casete de unión a ATP (ABC) e incluyen la glicoproteína P, la proteína resistente al cáncer de mama y la proteína 1 asociada a la resistencia a múltiples fármacos. Otros transportadores ABC que confieren MDR se describen en Xia y Smith "Drug efflux and multidrug resistance in acute leukemia: therapeutic impact and novel approaches to mediation" Mol. Pharmacol. (2012) 82(6): 1008-1021. Los fármacos inhibidores de MDR que contienen amina terciaria ilustrativos se proporcionan por Zinzi y otros "Small and innovative molecules as new strategy to revert MDR" Front. Oncol. (2014) doi: 10.3389/onc.2014.00002 e incluyen Tariquidar™ y Elacridar™ y sus derivados según lo proporcionado por Paleva y otros "Interactions of the multidrug resistance modulators Tariquidar and Elacridar and their analogues with p-glycoprotein" Chem. Med. Chem. (2013) doi: 10.1002/cmdc.201300233. Aunque los fármacos inhibidores de MDR que contienen aminas terciarias no son citotóxicos o citostáticos por derecho propio, se clasifican como tales para su inclusión en fármacos citotóxicos o citostáticos que contienen aminas terciarias que se liberan de un LDC de la presente invención.
Se proporcionan fármacos inhibidores de MDR ilustrativos que tienen una amina terciaria que se incorporan en una unidad de fármaco cuaternizada en modalidades para fármacos que contienen aminas terciarias cuaternizados. Normalmente, esos fármacos se caracterizan por una subestructura de isoquinolina cuyo nitrógeno es el sitio de cuaternización cuando se incorpora a un LDC. Por tanto, algunos inhibidores de MDR ilustrativos tienen la estructura de:
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en donde Ar es un arilo opcionalmente sustituido e incluyen Tariquidar™ y Elacridar™.
"Prevenir", "que previene" y términos similares, tal como se usan en la presente descripción, adquieren su significado normal y habitual en las técnicas médicas y, por tanto, no requieren que se evite con certeza cada caso al que se refiere el término.
"Metabolito intracelular", como se usa en la presente descripción, se refiere a un compuesto resultante de un proceso o reacción metabólica dentro de una célula en un LDC. El proceso o reacción metabólica puede ser un proceso enzimático tal como la escisión proteolítica de un enlazador peptídico de un LDC. Los metabolitos intracelulares incluyen, pero no se limitan a, el resto de direccionamiento y el fármaco libre que han sufrido escisión intracelular después de la entrada, difusión, captación o transporte hacia una célula diana.
"Escindido intracelularmente", "escisión intracelular" y términos similares usados en la presente descripción se refieren a un proceso o reacción metabólica dentro de una célula en un LDC o similar, mediante el cual se rompe la unión covalente, por ejemplo, el enlazador, entre la amina cuaternaria y el anticuerpo, dando como resultado el fármaco libre que contiene amina terciaria, u otro metabolito del conjugado disociado del resto de direccionamiento dentro de la célula. Los restos escindidos de los LDC son, por tanto, metabolitos intracelulares.
"Biodisponibilidad", como se usa en la presente descripción, se refiere a la disponibilidad sistémica (es decir, niveles en sangre/plasma) de una cantidad determinada de un fármaco administrado a un paciente. La biodisponibilidad es un término absoluto que indica la medición tanto del tiempo (velocidad) como de la cantidad total (extensión) del fármaco que llega a la circulación general a partir de una forma de dosificación administrada.
"Sujeto", como se usa en la presente descripción, se refiere a un primate o mamífero humano, no humano que tiene un trastorno de hiperproliferación, inflamatorio o inmunológico o propenso a tal un trastorno que se beneficiaría de la administración de una cantidad efectiva de un LDC. Los ejemplos no limitantes de un sujeto incluyen humano, rata, ratón, cobaya, mono, cerdo, cabra, vaca, caballo, perro, gato, pájaro y ave. Típicamente, el sujeto es un humano, primate no humano, rata, ratón o perro.
El término "inhibir" o "inhibición de" significa reducir en una cantidad medible o prevenir por completo. La inhibición de la proliferación de células hiperproliferativas para un ADC se determina típicamente en relación con las células no tratadas (tratadas simuladamente con vehículo) en un sistema de prueba adecuado como en cultivo celular (in vitro) o en un modelo de xenoinjerto (in vivo). Típicamente, se usa como control negativo un LDC compuesto por un resto dirigido a un antígeno que no está presente en las células hiperproliferativas o en las células inmunoestimulantes activadas de interés.
El término "cantidad con eficacia terapéutica" se refiere a una cantidad de un fármaco que es eficaz para tratar una enfermedad o trastorno en un mamífero. En el caso del cáncer, la cantidad con eficacia terapéutica del fármaco puede reducir el número de células cancerosas; reducir el tamaño del tumor; inhibir (es decir, desacelerar hasta cierto punto y preferentemente detener) la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; inhibir (es decir, desacelerar hasta cierto punto y preferentemente detener) la metástasis tumoral; inhibir, hasta cierto punto, el crecimiento tumoral; y/o aliviar, hasta cierto punto, uno o más de los síntomas asociados con el cáncer. En la medida en que el fármaco pueda inhibir el crecimiento y/o destruir las células cancerosas existentes, puede ser citostático y/o citotóxico. Para la terapia contra el cáncer, la eficacia puede medirse, por ejemplo, evaluando el tiempo hasta la progresión de la enfermedad (TTP) y/o determinando la tasa de respuesta (RR).
En el caso de trastornos inmunitarios resultantes de células inmunitarias hiperestimuladas, una cantidad terapéuticamente eficaz del fármaco puede reducir el número de células inmunitarias hiperestimuladas, el grado de su estimulación y/o infiltración en tejido por lo demás normal y/o aliviar a en cierta medida, uno o más de los síntomas asociados con un sistema inmunológico desregulado debido a células inmunitarias hiperestimuladas. Para los trastornos inmunitarios debidos a células inmunitarias hiperestimuladas, la eficacia se puede medir, por ejemplo, evaluando uno o más sustitutos inflamatorios, incluidos uno o más niveles de citocinas como los de IL-1p, TNFa, INFy y MCP-1, o números de macrófagos activados clásicamente.
En algunos aspectos de la invención, el conjugado ligando-fármaco se asocia con un antígeno en la superficie de una célula diana (es decir, una célula anómala que es una célula hiperproliferante), y el conjugado ligando-fármaco se absorbe dentro de una célula diana a través de endocitosis mediada por receptores. Una vez dentro de la célula, se escinden una o más unidades de escisión dentro de la unidad enlazadora, lo que da como resultado la liberación del fármaco que contiene amina terciaria. El fármaco que contiene amina terciaria liberado queda libre para migrar en el citosol e inducir actividades citotóxicas o citostáticas o, en el caso de células inmunitarias hiperestimuladas, puede inhibir alternativamente la transducción de señales proinflamatorias. En otro aspecto de la invención, el fármaco se escinde del conjugado ligando-fármaco fuera de la célula diana pero dentro de la vecindad de la célula diana de manera que la unidad que contiene amina terciaria liberada penetra posteriormente en la célula en lugar de liberarse en sitios distales.
El término "portador" como se usa el término en la presente descripción se refiere a un diluyente, adyuvante o excipiente con el que se administra un compuesto. Tales portadores farmacéuticos pueden ser líquidos, como agua y aceites, incluidos los de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo. Los portadores pueden ser solución salina, goma arábiga, gelatina, pasta de almidón, talco, queratina, sílice coloidal, urea. Además, se pueden utilizar agentes auxiliares, estabilizantes, espesantes, lubricantes y colorantes. En una modalidad, cuando se administra a un paciente, el compuesto o las composiciones y los vehículos farmacéuticamente aceptables son estériles. El agua es un portador ilustrativo cuando los compuestos se administran por vía intravenosa. También se pueden emplear soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como portadores líquidos, particularmente para soluciones inyectables. Los portadores farmacéuticos adecuados incluyen, además, excipientes tales como almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, creta, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche desnatada en polvo, glicerol, propileno, glicol, agua y etanol. Las presentes composiciones, si se desea, también pueden contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsionantes, o agentes tamponadores del pH.
"Tratar" o "tratamiento", y términos similares, a menos que el contexto indique lo contrario, se refieren a tratamiento terapéutico y medidas profilácticas para evitar recaídas, en donde el objetivo es inhibir o desacelerar (disminuir) un cambio o trastorno fisiológico no deseado, como el desarrollo o la propagación del cáncer o el daño tisular por inflamación crónica. Típicamente, los resultados clínicos beneficiosos o deseados de tales tratamientos terapéuticos, incluyen, entre otros, alivio de los síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, estado estabilizado (es decir, no empeoramiento) de la enfermedad, retraso o enlentecimiento de la evolución de la enfermedad, mejora o paliación del estado de la enfermedad y remisión (ya sea parcial o total), ya sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia o la calidad similar en comparación con la supervivencia esperada o la calidad de vida si no se recibe tratamiento. Aquellos que necesitan tratamiento incluyen los que ya padecen la afección o trastorno, así como los propensos a tener la afección o trastorno.
En el contexto del cáncer o una enfermedad relacionada con la inflamación crónica, el término "que trata" incluye cualquiera o todo el crecimiento inhibidor de células tumorales, células cancerosas o de un tumor; inhibir la replicación de células tumorales o células cancerosas, inhibir la diseminación de células tumorales o células cancerosas, disminuir la carga tumoral general o disminuir el número de células cancerosas, inhibir la replicación o estimulación de células inmunitarias proinflamatorias, inhibir o disminuir el estado inflamatorio crónico de un sistema inmunológico desregulado o disminuir la frecuencia y/o intensidad de los brotes experimentados por sujetos que tienen una afección o enfermedad autoinmune o mejorar uno o más síntomas asociados con el cáncer o una enfermedad o afección estimulada por hiperinmunidad.
"Sal farmacéuticamente aceptable", como se usa en la presente descripción, se refiere a sales orgánicas o inorgánicas farmacéuticamente aceptables de un compuesto. El compuesto típicamente contiene al menos un grupo amino y, por consiguiente, se pueden formar sales de adición de ácido con el grupo amino. Las sales ilustrativas incluyen, pero no se limitan a, sales de sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloruro, bromuro, yoduro, nitrato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartrato, oleato, tanato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato (es decir, 1,1'-metilenbis-(2-hidroxi-3-naftoato)).
Una sal farmacéuticamente aceptable puede implicar la inclusión de otra molécula, como un ion acetato, un ion succinato u otro contraión. El contraión puede ser cualquier porción orgánica o inorgánica que estabilice la carga en el compuesto original. Además, una sal farmacéuticamente aceptable puede tener más de un átomo cargado en su e s t r u c t u r a . L o s e j e m p l o s d o n d e m ú l t i p l e s á t o m o s c a r g a d o s s o n p a r t e d e la s a l f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e p u e d e n t e n e r m ú l t i p le s c o n t r a i o n e s . P o r lo t a n t o , u n a s a l f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e p u e d e t e n e r u n o o m á s á t o m o s c a r g a d o s y / o u n o o m á s c o n t r a io n e s .
5 T í p i c a m e n t e , u n a s a l f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e s e s e l e c c i o n a d e la s d e s c r i t a s e n P H S t a h l y C G W e r m u t h , e d i t o r e s , H a n d b o o k o f P h a r m a c e u t i c a l S a l t s : P r o p e r t ie s , S e l e c t i o n a n d U s e , W e i n h e i m / Z ü r i c h : W i l e y - V C H / V H C A , 200 2 . L a s e l e c c i ó n d e la s a l d e p e n d e d e la s p r o p i e d a d e s q u e d e b e e x h i b i r e l f á r m a c o , i n c l u i d a la s o l u b i l i d a d a c u o s a a d e c u a d a a v a r i o s v a l o r e s d e p H , s e g ú n la v í a d e a d m i n i s t r a c i ó n p r e v is t a , la c r i s t a l i n i d a d c o n c a r a c t e r í s t i c a s d e f l u j o y b a ja h i g r o s c o p i c i d a d ( e s d e c i r , a b s o r c i ó n d e a g u a f r e n t e a h u m e d a d r e l a t i v a ) a d e c u a d a p a r a m a n i p u l a c i ó n y v id a 10 ú t i l r e q u e r i d a m e d i a n t e la d e t e r m i n a c i ó n d e la e s t a b i l i d a d q u í m i c a y d e l e s t a d o s ó l i d o e n c o n d i c i o n e s a c e l e r a d a s ( e s d e c i r , p a r a d e t e r m i n a r la d e g r a d a c i ó n o c a m b i o s d e e s t a d o s ó l i d o c u a n d o s e a l m a c e n a a 40 ° C y 75 % d e h u m e d a d r e la t i v a ) .
" C a r g a " , " c a r g a d e f á r m a c o " , " c a r g a d e c a r g a ú t i l " o t é r m i n o s s i m i l a r e s r e p r e s e n t a n o s e r e f ie r e n a l n ú m e r o m e d i o d e 15 c a r g a s ú t i l e s ( " c a r g a ú t i l " y " c a r g a s ú t i l e s " s e u s a n e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n in d i s t i n t a m e n t e c o n " f á r m a c o " y " f á r m a c o s " ) e n u n a p o b la c ió n d e L D C ( e s d e c i r , u n a c o m p o s i c i ó n d e L D C q u e d i f i e r e e n e l n ú m e r o d e u n i d a d e s D u n i d a s q u e t i e n e n la m i s m a u b ic a c ió n o u b i c a c i o n e s d e c o n e x i ó n d i f e r e n t e s , p e r o p o r lo d e m á s e s e n c i a l m e n t e id é n t i c a s e n e s t r u c t u r a ) . L a c a r g a d e f á r m a c o p u e d e v a r i a r d e 1 a 24 f á r m a c o s p o r r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o . E s t o a v e c e s s e d e n o m i n a D A R , o r e l a c i ó n e n t r e f á r m a c o y r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o . L a s c o m p o s i c i o n e s d e L D C d e s c r i t a s 20 e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n t í p i c a m e n t e t i e n e n D A R d e 1 a 24 y , e n a l g u n o s a s p e c t o s , d e 1 a 8 , d e 2 a 8 , d e 2 a 6 , d e 2 a 5 y d e 2 a 4. L o s v a l o r e s t í p i c o s d e D A R s o n a p r o x i m a d a m e n t e 2 , a p r o x i m a d a m e n t e 4 , a p r o x i m a d a m e n t e 6 y a p r o x i m a d a m e n t e 8. E l n ú m e r o m e d io d e f á r m a c o s p o r a n t i c u e r p o , o v a l o r D A R , p u e d e c a r a c t e r i z a r s e p o r m e d io s c o n v e n c i o n a l e s t a l e s c o m o e s p e c t r o s c o p í a U V / v is i b le , e s p e c t r o m e t r í a d e m a s a s , e n s a y o E L I S A y H P L C . T a m b i é n s e p u e d e d e t e r m i n a r u n v a l o r D A R c u a n t i t a t i v o . E n a l g u n o s c a s o s , la s e p a r a c i ó n , p u r i f i c a c i ó n y c a r a c t e r i z a c i ó n d e 25 L D C h o m o g é n e o s q u e t i e n e n u n v a l o r d e D A R p a r t i c u l a r s e p u e d e l o g r a r p o r m e d i o s t a l e s c o m o H P L C d e f a s e in v e r s a o e l e c t r o f o r e s i s . L a D A R p u e d e e s t a r l im i t a d o p o r e l n ú m e r o d e s i t i o s d e u n ió n e n e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o .
P o r e je m p lo , c u a n d o e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n a n t i c u e r p o y e l s i t io d e u n ió n e s u n t i o l d e c i s t e í n a , u n 30 a n t i c u e r p o p u e d e t e n e r s o lo u n o o v a r i o s s u f i c i e n t e m e n t e r e a c t i v o t i o l g r u p o s q u e r e a c c i o n a n c o n u n a L b ' q u e c o n t i e n e r e s t o . A v e c e s , e l t i o l d e c i s t e í n a e s u n g r u p o t i o l d e r i v a d o d e u n r e s i d u o d e c i s t e í n a q u e p a r t i c ip o e n u n e n l a c e d i s u l f u r o e n t r e c a d e n a s . O t r a s v e c e s , e l t i o l d e c i s t e í n a e s u n g r u p o t i o l d e u n r e s i d u o d e c i s t e í n a q u e n o p a r t i c i p o e n u n e n la c e d i s u l f u r o e n t r e c a d e n a s , p e r o q u e s e i n t r o d u jo m e d i a n t e i n g e n i e r í a g e n é t i c a . T í p i c a m e n t e , m e n o s d e l m á x i m o t e ó r i c o d e r e s t o s D s e c o n j u g a c o n u n a n t i c u e r p o d u r a n t e u n a r e a c c i ó n d e c o n j u g a c i ó n . P o r 35 e je m p lo , u n a n t i c u e r p o p u e d e c o n t e n e r m u c h o s r e s i d u o s d e l i s in a q u e n o r e a c c i o n a n c o n u n a L b ' q u e c o n t i e n e r e s to , y a q u e s o lo lo s m a y o r í a d e lo s g r u p o s d e l i s in a r e a c t i v o s p u e d e n r e a c c i o n a r c o n e s e r e s to .
" A n t i b i ó t i c o " , c o m o s e d e f i n e e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n , s i g n i f i c a u n c o m p u e s t o d e o r ig e n n a t u r a l , s e m i s i n t é t i c o o s in t é t i c o q u e e je r c e p r in c ip a l o s e l e c t i v a m e n t e u n e f e c t o s o b r e la s c é lu l a s p r o c a r i o t a s ( p o r e je m p lo , b a c t e r i a s ) e n 40 c o m p a r a c i ó n c o n la s c é lu l a s d e m a m í f e r o . U n a n t i b i ó t i c o i n h i b e t í p i c a m e n t e e l c r e c i m i e n t o d e m i c r o o r g a n i s m o s s in u n a t o x i c i d a d s i g n i f i c a t i v a p a r a e l s e r h u m a n o o a n i m a l a l q u e s e le a d m i n i s t r a e l a n t i b i ó t i c o . L o s a n t i b i ó t i c o s in c lu y e n , p o r e je m p lo , p e n ic i l i n a s , c e f a l o s p o r i n a s , c a r b a p e n é m i c o s y a n s a m i s i n a s . L o s a n t i b i ó t i c o s s e u s a n p r i n c i p a l m e n t e e n e l t r a t a m i e n t o d e e n f e r m e d a d e s in f e c c io s a s . L o s f á r m a c o s c o n t e m p l a d o s p a r a la p r e s e n t e in v e n c ió n n o s o n a n t ib ió t i c o s .
45
I. Modalidades
E n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n s e p r o p o r c i o n a n c o n j u g a d o s l i g a n d o - f á r m a c o ( L D C ) c a p a c e s d e s u m i n i s t r a r p r e f e r e n t e m e n t e u n f á r m a c o q u e c o n t i e n e u n a a m in a t e r c i a r i a a c é l u l a s h i p e r p r o l i f e r a t i v a s o c é lu l a s i n m u n i t a r i a s 50 h i p e r a c t i v a s o e n la s p r o x i m i d a d e s d e t a l e s c é l u l a s a n ó m a l a s e n c o m p a r a c i ó n c o n la s c é l u l a s n o r m a l e s o e l e n t o r n o d e la s c é lu l a s n o r m a le s d o n d e la s c é lu l a s a n ó m a l a s t í p i c a m e n t e n o e s t á n p r e s e n t e s q u e s o n ú t i l e s p a r a t r a t a r e n f e r m e d a d e s y a f e c c i o n e s c a r a c t e r i z a d a s p o r e s t a s c é l u l a s a n ó m a la s .
1.1 G e n e r a l :
55
U n L D C t i e n e t r e s c o m p o n e n t e s p r in c ip a le s : ( 1 ) u n a u n i d a d d e l i g a n d o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o q u e s e u n e s e l e c t i v a m e n t e a u n r e s t o d ia n a p r e s e n t e e n , d e n t r o o e n la s p r o x i m i d a d e s d e c é lu l a s a n ó m a l a s u o t r a s c é lu l a s n o d e s e a d a s e n c o m p a r a c i ó n c o n o t r o s r e s t o s p r e s e n t e s e n , d e n t r o o e n la s p r o x i m i d a d e s d e c é lu l a s n o r m a l e s d o n d e e s t a s c é lu l a s a n ó m a l a s o n o d e s e a d a s n o r m a l m e n t e n o e s t á n p r e s e n t e s , o e s t á n p r e s e n t e s e n , d e n t r o o e n la s 60 p r o x i m i d a d e s d e c é lu l a s a n ó m a l a s u o t r a s c é lu l a s n o d e s e a d a s e n m a y o r a b u n d a n c i a e n c o m p a r a c i ó n c o n la s c é l u l a s n o r m a l e s o e l e n t o r n o d e la s c é l u l a s n o r m a l e s d o n d e la s a n ó m a l a s o c é l u l a s n o d e s e a d a s t í p i c a m e n t e n o e s t á n p r e s e n t e s , ( 2 ) u n a u n id a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a q u e i n c o r p o r a la e s t r u c t u r a c o r r e s p o n d i e n t e a u n f á r m a c o q u e c o n t i e n e u n a a m i n a t e r c i a r i a y ( 3 ) u n a U n i d a d E n l a z a d o r a q u e c o n e c t a D a la U n i d a d d e L i g a n d o y e s c a p a z d e l i b e r a r c o n d i c i o n a l m e n t e f á r m a c o q u e c o n t i e n e la a m in a t e r c i a r i a l ib r e d e n t r o o c e r c a d e c é lu l a s a n ó m a l a s o n o 65 d e s e a d a s q u e s o n la d i a n a d e la u n id a d d e l ig a n d o .
Un fármaco que contiene amina terciaria a usar en la presente invención es uno que ejerce su efecto principal o selectivamente (por ejemplo, efecto citotóxico, citostático) sobre células de mamífero en comparación con células procariotas. El resto diana es un epítopo de una proteína de membrana de presentación extracelular que se encuentra preferentemente en células anómalas o no deseadas en comparación con las células normales.
En algunos aspectos, una unidad de fármaco citotóxico, citostático, inmunosupresor o antiinflamatorio (D) que tiene un grupo amino terciario se incorpora a un LDC como una unidad de fármaco cuaternizada (D+) y tiene actividad intracelular hacia células hiperproliferativas, células inmunitarias hiperactivadas u otras células anómalas o no deseadas que en forma "libre" (es decir, D se libera de D+) pueden o no ser específicas de estas células. Por lo tanto, D puede tener actividad citotóxica, citostática, inmunosupresora o antiinflamatoria selectiva o inespecífica hacia células anómalas o no deseadas en comparación con las células normales que no están asociadas con las células anómalas o no deseadas. La especificidad hacia las células anómalas o no deseadas (es decir, las células diana) en cualquier situación resulta de la Unidad de Ligando (L) del LDC en la que se incorpora D. Además de L y D+, un LDC que se dirige a células anómalas o no deseadas normalmente tiene una unidad enlazadora que une covalentemente la unidad de fármaco cuaternizada a la unidad de ligando. En algunos aspectos, la Unidad de Ligando es de un anticuerpo, que es un resto de direccionamiento ejemplar, que reconoce células de mamíferos anormales que son células hiperproliferativas.
El resto diana reconocido por la unidad de ligando es un epítopo de una proteína de membrana de presentación extracelular que se encuentra preferentemente en células anómalas o no deseadas en comparación con las células normales. En algunos de esos aspectos, como requisito adicional, la proteína de membrana a la que se dirige la unidad de ligando debe tener un número de copias suficiente y ser internalizada tras la unión del LDC para administrar intracelularmente una cantidad eficaz de citotóxico, citostático e inmunosupresor unido. o fármaco antiinflamatorio preferentemente a las células anómalas. Debido a esas restricciones, el fármaco liberado de D+ es típicamente un compuesto altamente activo que, como fármaco independiente, normalmente no se puede administrar a un sujeto debido a los efectos secundarios intolerables de destrucción, daño o inhibición no deseada de células normales distantes o periféricas al deseado sitio de acción.
Dado que un fármaco que contiene una amina terciaria que tiene efectos periféricos adversos debe ser administrado selectivamente por su LDC, la unidad Enlazadora de un LDC no es simplemente una estructura pasiva que sirve como un puente entre un resto de direccionamiento y D+ a partir del cual el fármaco que contiene amina terciaria se libera, pero debe diseñarse cuidadosamente para que tenga estabilidad desde el sitio de administración del LDC hasta su administración al sitio objetivo y luego debe liberar de manera eficiente un resto de fármaco activo. Para llevar a cabo esta tarea un resto de direccionamiento se hace reaccionar con un Lb' que contiene resto para formar una Lb que contiene resto. Cuando así se formó el resto Lb que contiene es un LDC tales compuestos son típicamente compuestos por el resto de direccionamiento en la forma de una unidad de ligando, un resto de unión a ligando (Lb) también se conoce como un enlazador primario (Lr ), un fármaco que contiene amina terciaria cuaternizada (D+) y un enlazador secundario (Lo) intermedio entre Lb y D+.
1.1 Enlazador primario (Lr ):
Un enlazador primario (Lr ) es un resto de unión de ligando (Lb) o un precursor del resto de unión de ligando (Lb') y típicamente está presente como un componente de una unidad enlazadora de un LDC o un resto que contiene Lb' tal como Lb'-Lo o Lb'-Lo-D+ . El enlazador primario de un Lb' que contiene resto se compone de un grupo funcional capaz de reaccionar con un grupo funcional electrófilo o nucleófilo de un resto de direccionamiento. Como resultado de esa reacción, el resto de direccionamiento se une covalentemente a un enlazador primario a través de Lb, en donde el enlazador primario es ahora Lb que tiene un grupo funcional derivado de Lb'.
En algunas modalidades, Lb' en un resto que contiene Lb' tiene la estructura de uno de
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en donde R es hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; _T es -Cl, -Br, -I, -O-mesilo, -O-tosilo u otro grupo saliente sulfonato; U es -F, -Cl, -Br, -I, -ON-succinimida, -O-(4-nitrofenil), -O-pentafluorofenilo, tetrafluorofenilo u -O-C(=O)-OR57; _X2 es alquileno C1-10, carbociclo C3-C8 , -O-(alquilo C1-C6), -arileno-, alquileno C1-C10-arileno, -arileno-C1-C10 alquileno, alquileno-C1-C10-(carbociclo C3-C6)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10, heterociclo C3-C8 , alquileno-C1-C10-(heterociclo C3-C8)-, heterociclo-C3-C8)-alquileno C1-C10, -(CH2CH2OV o - CH2CH2O)u-CH2-, en donde u es un número entero que varía de 1 a 10 y R57 es alquilo o arilo C1-C6; y en donde la línea ondulada indica unión covalente a una subunidad de Lo.
En la interacción con un electrófilo o nucleófilo de un resto de direccionamiento, Lb' se convierte en un resto Ligando-Lb como se ejemplifica a continuación, donde ha tenido lugar una de tales interacciones:
Figure imgf000039_0002
Figure imgf000040_0005
10
15
Figure imgf000040_0001
20
Figure imgf000040_0002
e n d o n d e e l á t o m o i n d i c a d o ( # ) s e d e r i v a d e l r e s t o r e a c t i v o d e l l i g a n d o y X 2 e s c o m o s e d e f in e .
1 .2 E n l a z a d o r e s s e c u n d a r i o s ( U ) :
25
L o s e n l a z a d o r e s s e c u n d a r i o s e n u n L D C o u n p r e c u r s o r q u e c o n t i e n e L b ' d e l m is m o , e s u n r e s t o o r g á n i c o s i t u a d o e n t r e e l e n l a z a d o r p r i m a r i o ( L R) y la u n i d a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a ( D ) q u e p r o p o r c i o n a e l p r o c e s a m i e n t o d e u n a u n i d a d e s c i n d i b l e d e n t r o d e la u n i d a d e n l a z a d o r a d e l L D C . d e s p u é s d e la u n ió n s e l e c t i v a d e l r e s t o d e d i a n a d e L D C a s u r e s t o d e d i a n a a f í n p r e s e n t e e n , d e n t r o o e n la s p r o x i m i d a d e s d e c é l u l a s h i p e r p r o l i f e r a t i v a s , c é l u l a s i n m u n i t a r i a s 30 h i p e r a c t i v a s u o t r a s c é l u l a s a n ó m a l a s o n o d e s e a d a s d i r i g i d a s p o r L D C . E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , W p r o p o r c i o n a u n s u s t r a t o p a r a u n a p r o t e a s a q u e e s t á p r e s e n t e d e n t r o d e c é l u l a s h i p e r p r o l i f e r a t i v a s o c é l u l a s i n m u n i t a r i a s h i p e r a c t i v a s . S e p r e f i e r e n a q u e l l a s u n i d a d e s d e e s c i s i ó n q u e n o s o n r e c o n o c i d a s p o r p r o t e a s a s e x c r e t a d a s p o r c é l u l a s n o r m a l e s q u e n o e s t á n t í p i c a m e n t e e n p r e s e n c i a d e c é l u l a s h i p e r p r o l i f e r a t i v a s o c é l u l a s i n m u n i t a r i a s h i p e r a c t i v a s o s u s t r a t o s d e p r o t e a s a s q u e t i e n e n c i r c u l a c i ó n s i s t é m i c a p a r a m i n i m i z a r la l i b e r a c i ó n d e f á r m a c o s n o d i r i g id a . o e x p o s i c i ó n 35 s i s t é m i c a a l f á r m a c o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a d e b i d o a s u l i b e r a c i ó n p r e m a t u r a d e s u L D C . M á s p r e f e r i d a s s o n a q u e l l a s p r o t e a s a s q u e s o n p r o t e a s a s r e g u l a d o r a s o p r o t e a s a s q u e s e e n c u e n t r a n e n lo s l i s o s o m a s , q u e s o n c o m p a r t i m e n t o s c e l u l a r e s a lo s q u e s e a d m i n i s t r a u n L D C t r a s la i n t e r n a l i z a c i ó n d e u n r e c e p t o r d e la s u p e r f i c i e d e la m e m b r a n a a l q u e la L D C s e h a u n id o e s p e c í f i c a m e n t e . L a s p r o t e a s a s r e g u l a d o r a s y l i s o s o m a l e s s o n p r o t e a s a s i n t r a c e l u l a r e s i l u s t r a t i v a s .
40
E n u n a m o d a l i d a d , W d e n t r o d e u n e n l a z a d o r s e c u n d a r i o e s t á c o m p u e s t o p o r o c o n s i s t e e n u n r e s t o d i p e p t í d i c o q u e t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
45
Figure imgf000040_0003
50
e n d o n d e R 29 e s b e n c i l o , m e t i l o , i s o p r o p i l o , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
55
Figure imgf000040_0004
60
y R 30 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 4 - N H 2 , -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 , - ( C H 2 ) 3 N H ( C = N H ) N H 2 , o , - ( C H 2 ) 2 C O 2 H , e n d o n d e e l r e s t o d i p e p t í d i c o p r o p o r c i o n a u n s i t i o d e r e c o n o c i m i e n t o p a r a u n a p r o t e a s a r e g u l a d o r a o l i s o s ó m i c a .
65 E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , e l d i p é p t i d o e s v a l i n a - a l a n i n a ( v a l - a l a ) . E n o t r a m o d a l i d a d , W e s t á c o m p u e s t o p o r o c o n s i s t e e n e l d i p é p t i d o v a l i n a - c i t r u l i n a ( v a l - c i t ) . E n o t r a m o d a l i d a d , W e s t á c o m p u e s t o p o r o c o n s i s t e e n e l d i p é p t i d o
Figure imgf000041_0001
E n o t r a m o d a l i d a d , W d e n t r o d e u n e n l a z a d o r s e c u n d a r i o e s t á c o m p u e s t o p o r u n r e s t o c a r b o h i d r a t o u n i d o p o r e n la c e g l i c o s í d i c o q u e t i e n e u n s i t i o d e r e c o n o c i m i e n t o p a r a u n a g l i c o s i d a s a l o c a l i z a d a i n t r a c e l u l a r m e n t e . E n e s a s 10 m o d a l i d a d e s , W e s u n r e s t o c a r b o h i d r a t o u n i d o a E e n d o n d e W - E p r o p o r c i o n a e l s i t i o d e r e c o n o c i m i e n t o p a r a la e s c i s i ó n d e W d e E y e l e n l a c e e n t r e W y E e s u n e n la c e g l i c o s í d i c o . E n e s a s m o d a l i d a d e s , W - E t í p i c a m e n t e t e n e m o s la e s t r u c t u r a d e
15
20
Figure imgf000041_0002
25
d o n d e R 45 e s - C H 2O H o - C O 2 H y E e s u n r e s t o h e t e r o á t o m o t a l c o m o - O - , - S - o - N H - u n i d o a l r e s t o c a r b o h i d r a t o y a u n r e s t o a u t o d e s t r u c t i v o d e Y ( c o m o s e in d i c a m e d i a n t e la l í n e a o n d u l a d a ) d o n d e e l e n la c e a l r e s t o c a r b o h i d r a t o p r o p o r c i o n a u n s i t i o d e r e c o n o c i m i e n t o p a r a u n a g l i c o s i d a s a . P r e f e r e n t e m e n t e , e s e s i t i o e s r e c o n o c i d o p o r u n a g l i c o s i d a s a d e l i s o s o m a . E n a lg u n a s m o d a l i d a d e s , la g l i c o s i d a s a e s u n a g l u c u r o n i d a s a c o m o c u a n d o R 43 e s - C O 2 H .
30
L o s e n l a z a d o r e s s e c u n d a r i o s a d e m á s d e W t a m b i é n e s t á n c o m p u e s t o s p o r u n a u n id a d e s p a c i a d o r a ( Y ) y p u e d e n e s t a r c o m p u e s t o s a d i c i o n a l m e n t e p o r u n a u n i d a d d e e x t e n s i ó n ( A ) d i s p u e s t a c o n r e s p e c t o a W e n u n a r e l a c i ó n l in e a l u o r t o g o n a l r e p r e s e n t a d a p o r
35
Figure imgf000041_0003
40
r e s p e c t i v a m e n t e , e n d o n d e e l s u b í n d i c e w e s 1 , y e s 1 y e l s u b í n d i c e a e s 0 o 1 ;
45 e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a Y in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e Y a D y la l í n e a o n d u l a d a a A c u a n d o a e s 1 e n a m b a s e s t r u c t u r a s , o a W c u a n d o e s t á e n d i s p o s i c i ó n l i n e a l c o n Y - D o a Y c u a n d o W e s t á e n d i s p o s i c i ó n o r t o g o n a l c o n Y -D c u a n d o a e s 0 , i n d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e A , W o Y , r e s p e c t i v a m e n t e , a S c d e L b o L b '. E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , a , w e y s o n c a d a u n o .
50 L a s e s t r u c t u r a s d e a l g u n o s r e s t o s A , W e Y e n Lo i l u s t r a t i v o s y s u s s u s t i t u y e n t e s s e d e s c r i b e n e n lo s d o c u m e n t o s W O 200 4 / 01 09 57 , W O 200 7 / 0 3 86 58 , p a t e n t e d e E E . U U . n ú m . 6 , 21 4 , 34 5 , 7 , 498 , 298 , 7 , 968 , 68 7 y 8 , 163 , 888 , y U S P a t . P u b l . N o s . 20 09 - 0 1 11 75 6 , 2 00 9 - 0 0 18 0 86 y 200 9 - 0 2 74 713 .
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , l o s r e s t o s A o s u s s u b u n i d a d e s ( p o r e j e m p l o , A 1 , A o ) t i e n e n la e s t r u c t u r a d e
55
60
Figure imgf000041_0004
65
en donde la línea ondulada al resto carbonilo de cualquier estructura representa el punto de unión al extremo amino terminal de un resto dipeptídico que comprende W dispuesto linealmente con respecto a A o al resto autodestructivo de SI en Y descrito en la presente descripción al que W está unido a Y y está dispuesto ortogonal a A y en donde la línea ondulada al resto amino de cualquiera de las estructuras representa el punto de unión a un grupo funcional que contiene carbonilo de Sc en Lb o Lb';
en donde K y L son independientemente C, N, O o S, siempre que cuando K o L es O o S, R41 y R42 a K o R43 y R44 a L están ausentes, y cuando K o L son N, uno de R41, R42 a K o uno de R42, R43 a L están ausentes, y siempre que no se seleccionen dos L adyacentes independientemente como N, O o S;
en donde q es un número entero que varía de 0 a 12, y r es un número entero que varía de 1 a 12:
en donde G es hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -OH, -ORPR, -CO2H, CO2RPR, en donde RPR es un protector adecuado, -N(Rpr)(Rpr), en donde RPR son independientemente un grupo protector o RPR juntos forman un grupo protector adecuado, o -N(R45)(R46), en donde uno de R45, R46 es hidrógeno o RPR, en donde RPR es un grupo protector adecuado grupo protector, y el otro es hidrógeno u alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido;
en donde R38 es hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; R39-R44 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido, o ambos R39, R40 junto con el carbono al que están unidos comprenden un cicloalquilo C3-C6, o R41, R42 junto con K al que están unidos cuando K es C, o R43, R44 junto con L al que están unidos cuando L es C comprenden un cicloalquilo C3-C6, o R40 y R41, o R40 y R43, o R41 y R43 junto con el carbono o heteroátomo al que están unidos y los átomos intermedios entre esos carbono y/o heteroátomos comprenden un cicloalquilo o heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros, siempre que cuando K es O o S, R41 y R42 están ausentes, cuando K es N, uno de R41, R42 está ausente, cuando L es O o S, R43 y R44 están ausentes, y cuando L es N, uno de R43, R44 está ausente.
En algunas modalidades, R38 es hidrógeno. En otras modalidades, -K(R41)(R42) es -(CH2)-. En otras modalidades, cuando p no es 0, R39 y R40 son hidrógeno en cada caso. En otras modalidades, cuando q no es 0, -L(R43)(R44)- es -CH2- en cada caso.
En modalidades preferidas, G es -CO2H. En otras modalidades preferidas, K y/o L son C. En otras modalidades preferidas, q o p es 0. En otras modalidades preferidas, p q es un número entero que varía de 1 a 4.
En algunas modalidades, A o una subunidad de la misma tiene la estructura de -NH-alquileno C1-C10-C(=O)-, -NH-alquileno C1-C10-NH-C(=O)-alquileno C1-C10-C(=O)-, -NH-alquileno C rC 10-C(=O)-NH-alquileno C1-C10(C=O)-, -NH-(CH2CH2O)s-CH2(C=O)-, -NH-(carbociclo C3-C8)(C=O)-, -NH-(arileno-)-C(=O)-, y -NH-(heterociclo C3-C8-)C(=O).
En otras modalidades, A o una subunidad del mismo tiene la estructura de
Figure imgf000042_0001
en donde R13 es -alquileno C1-C10-, -carbociclo C3-C8-, -arileno-, -heteroalquileno C1-C30-, -heterociclo C3-C8-, -alquileno-arileno C1-C10-, -arileno-alquileno C1-C10-, -alquileno C1-C10-(carbociclo C3-C8)-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -alquileno C rC 10-(heterociclo C3-C8)-, -(heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, -(CH2CH2O)m 0(-CH2)1-3-, o -(CH2CH2NH)1-10(-CH2)1-3-. En algunas modalidades, R13 es -alquileno C1-C10 o -heteroalquileno C1-C30. En algunas modalidades, R13 es -alquileno C1-C10, -(CH2CH2O)1-10(-CH2)1-3-, o -(CH2CH2NH)1-10(-CH2)1-3-. En algunas modalidades, R13 es -alquileno C1-C10-polietilenglicol, o polietilenimina.
En modalidades más preferidas, A o una subunidad del mismo corresponde en estructura a un alfa-aminoácido, un resto beta-aminoácido u otro ácido que contiene amina. Otras modalidades de A y las subunidades A1 y Ao se describen en modalidades para LR-Lo como unidades enlazadoras.
En algunas modalidades, los restos Y son capaces de sufrir una reacción de eliminación 1,4 o 1,6 después del procesamiento enzimático de W unido covalentemente a Y (es decir, Y está compuesto por un SI). En algunas modalidades, SI de Y dispuesto linealmente en Lo tiene la estructura de:
1
Figure imgf000043_0002
15 e n d o n d e V , Z 1, Z 2 y Z 3 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e - C ( R 24) = o - N = ; U e s - O - , - S - o - N ( R 25)-;
R 24 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , h a ló g e n o , - N O 2 , - C N , - O R 25, - S R 26, - N ( R 27) ( R 2 ), a l q u i l o C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o - C ( R 29) = C ( R 30) - R 31, e n d o n d e R 25 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , R 26 e s a l q u i l o C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i lo 20 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o u o p c i o n a l m e n t e h e t e r o a r i l o s u s t i t u i d o , R 27 y R 28 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o a m b o s R 27 y R 28 j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e u n h e t e r o c i c l o d e 5 o 6 m ie m b r o s , R 29 y R 30 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , o a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , y R 31 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , - C ( = O ) O R 32 o -25 C ( = O ) N R 32, e n d o n d e R 32 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , R 8 y R 9 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; y R ' e s h i d r ó g e n o o e s h a l ó g e n o , - N O 2 , - C N u o t r o g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s o e s u n g r u p o d o n a n t e d e e le c t r o n e s ,
30 c o n la c o n d i c i ó n d e q u e n o m á s d e d o s d e lo s R 24 s e a n d is t i n t o s d e h id r ó g e n o ;
e n d o n d e J e s - O - , S - o - N ( R 33)-, e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ;
e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a E r e p r e s e n t a u n e n l a c e c o v a l e n t e d e E a u n g r u p o f u n c i o n a l d e W q u e in h i b e la 35 c a p a c i d a d d e d o n a c i ó n d e e l e c t r o n e s d e E lo s u f i c i e n t e c o m o p a r a e s t a b i l i z a r e l r e s t o a r i l e n o d e S I a e l i m i n a c i ó n 1 ,4 o 1 , 6 y e n d o n d e e l p r o c e s a m i e n t o e n z i m á t i c o d e W d a c o m o r e s u l t a d o la d e s i n h i b i c i ó n d e e s a c a p a c i d a d p a r a d e s e n c a d e n a r la e l i m i n a c i ó n q u e l i b e r a u n r e s t o d e f á r m a c o a c t i v o u n id o a Y ( p o r e je m p lo , c u a n d o E e s t á u n id o a l r e s t o c a r b o n i l o d e u n g r u p o f u n c i o n a l d e W q u e c o n t i e n e c a r b o n i l o ) ;
40 e n d o n d e t r a s la e l i m i n a c i ó n 1 , 4 o 1 , 6 s e l i b e r a u n c o m p u e s t o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a d e n t r o d e D .
Figure imgf000043_0001
p a r a u n a g l i c o s i d a s a d o n d e la d i s p o s i c i ó n o r t o g o n a l q u e i m p l i c a S I e s t á t í p i c a m e n t e r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000044_0001
e n d o n d e V , Z 1 y Z 3 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e - C ( R 24) = o - N = ; R 24 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o , h a l ó g e n o , -N O 2 , - C N , - O R 25, - S R 26, - N ( R 27) ( R 28) , - C ( R 29) = C ( R 30) - R 31 o C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ;
40
e n d o n d e R 25 e s h i d r ó g e n o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o c o n a lq u i l o C 1 -C 6 , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; R 26 e s a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , y R 27 y R 28 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o , a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o a m b o s R 27 y R 28 j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e 45 e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o d e 5 o 6 m i e m b r o s , R 29 y R 30 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o , o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , y R 31 e s h i d r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , - C N , - C ( = O ) O R 32 o - C ( = O ) N R 32; e n d o n d e R 32 e s h i d r ó g e n o , a lq u i lo C 1 - C 6 o p c io n a lm e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ;
50 R 8 y R 9 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; R ' e s h i d r ó g e n o o e s h a l ó g e n o , - N O 2 , - C N o d e o t r o g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s , o e s u n g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s ; R 45 e s - C H 2 O H , - C O 2 H ; E e s -O - o - N H - ; J e s - N H - ; y D e s c o m o s e d e f i n e e n la s m o d a l i d a d e s d e s c r i t a s p a r a u n i d a d e s d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d o s .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s c u a n d o W - Y e s t á d i s p u e s t o o r t o g o n a l m e n t e e n Lo S I d e Y t i e n e la e s t r u c t u r a d e
55
Figure imgf000045_0001
En modalidades preferidas, -E- es -O- o -NH- y V o Z3 es =C(R24), en donde R24 es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones. En otras modalidades preferidas, R8 y R9 son hidrógeno y V, Z1 o Z2 es =CH-. En otras modalidades preferidas, -J- es -NH, V, Z1 o Z2 es =CH- y R' es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones.
1.3 Lr-Lo como unidades enlazadoras
La unidad de fármaco cuaternario (D+) unida a cualquiera de los restos SI anteriores descritos en la presente descripción puede representar cualquier fármaco citotóxico, citostático, inmunosupresor o antiinflamatorio cuaternizado que tenga un resto de amina terciaria (es decir, D+ es un fármaco que contiene una amina terciaria cuaternizada) cuyo nitrógeno cuaternizado está unido a la posición bencílica de un resto SI.
En algunas modalidades -Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+ tiene la estructura de
Figure imgf000045_0002
donde A es una unidad de extensión opcional, opcionalmente compuesta por dos, tres o cuatro subunidades y el subíndice a es 0 o 1; Q2 es W'w-E-, en donde Q2, cuando está presente, está unido a V, Z1, Z2 o Z3; Ww y W'w son unidades escindibles; en donde Ww de Q1 es capaz de escisión selectiva por una proteasa producida por células anómalas dirigidas por el resto diana en comparación con las proteasas séricas circulantes, o por glutatión a través del intercambio de disulfuro, o es más reactivo a la hidrólisis en condiciones de pH más bajas presentes en lisosomas en comparación con el pH fisiológico del suero y W-E de Q2 es escindible por una glicosidasa, en donde el subíndice w es 0 o 1 y w' es 0 o 1, en donde w w' es 1 (es decir, uno y solo un W está presente); V, Z1, Z2 y Z3 son =N- o =C (R24)-, en donde R24 es hidrógeno o alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o halógeno, -NO2, -CN, u otro grupo aceptor de electrones o es un grupo donante de electrones, -Q2, o -C(R8)(R9)-D+, siempre que cuando w' sea 1 Q2 esté ausente y uno y solo uno R24 sea -C(R8)(R9) D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 y Q1-J- y los sustituyentes C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí,
siempre que cuando w' es 1 uno cualquiera solo R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 y uno y solo otro R24 es Q2 de manera que Q2 está unido a otro de V, Z1, Z2, Z3, y los sustituyentes Q2 y -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí; R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; E y J son independientemente -O-, -S- o -N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; D+ representa una estructura de un fármaco D que contiene una amina terciaria cuaternizada; y p es un número que varía de 1 a 24; en donde dicha escisión por proteasa, intercambio de disulfuro, hidrólisis o escisión por glicosidasa da como resultado la expulsión de D de D+.
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , - L b - L o - D o L b '- L o - D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000046_0001
e n d o n d e V , Z 1 y Z 2 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e = N - o = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24, i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o , e s h id r ó g e n o , a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s , y R 8 y R 9 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o y J e s - O - o - N ( R 33), e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o in f e r io r . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , - L b - L 6 - D o L b '-L o -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000046_0002
e n d o n d e V , Z 2 y Z 3 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e = N - o = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24, i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o , e s h id r ó g e n o , a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s , y R 8 y R 9 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o y J e s - O - o - N ( R 33), e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo i n f e r io r . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , - L b - L o - D o L b '-L o -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000046_0003
e n d o n d e V e s = N - o = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s , Z 1 e s = N - o = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s y R 8 y R 9 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o y J e s - O - o - N ( R 33), e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o in f e r io r .
E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s d e la a n t e r i o r m e n t e d e la s e s t r u c t u r a s - L b - L o - D o L b '- L o - D c o m p u e s t a s d e Q 2, V e s = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o , h a l ó g e n o o - N O 2 .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , - L b - L o - D o L b '- L o - D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000047_0001
e n d o n d e V y Z 1 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e = N - o = C ( R 24)-, e n d o n d e R 24, i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o , e s h id r ó g e n o , a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s y R 8 y R 9 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , J e s - O - o - N ( R 33), e n d o n d e R 33 e s h id r ó g e n o o a l q u i l o i n f e r i o r y R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o a c e p t o r d e e le c t r o n e s .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , - L b - L o - D o L b '-L o -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000047_0002
E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s d e la s e s t r u c t u r a s a n t e r i o r e s - L b - L o - D o L b '-L o -D c o m p u e s t a s d e Q 2 , Z 3 e s = C ( R 24)-, e n d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o , h a l ó g e n o o - N O 2.
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , - L b - L o - D o L b '-L o -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000047_0003
en donde V y Z3 son independientemente =N- o =C(R24)-, en donde R24, seleccionado independientemente, es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un grupo donante de electrones, R8 y R9 son independientemente hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, y J es -O- o -N(R33), en donde R33 es hidrógeno o alquilo inferior, y R' es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones.
En algunas modalidades, Lr -Lo-D+ (es decir, -Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+) tiene la estructura de
Figure imgf000048_0001
en donde V, Z1 y Z2 son independientemente =N- o =C(R24)-, en donde R24, seleccionado independientemente, es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un grupo donante de electrones, R8 y R9 son independientemente hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, y J es -O- o -N(R33), en donde R33 es hidrógeno o alquilo inferior, y R' es hidrógeno o un grupo donante de electrones.
En modalidades preferidas, al menos uno de V, Z1, Z2, Z3 en cualquiera de las estructuras anteriores Lr-Lo-D+ (es decir, -Lb-Lo-D+ y Lb'-Lo-D+) es -CH = o no es = N-.
En modalidades más preferidas, Lr-Lo-D+ (es decir, -Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+) tiene la estructura de
Figure imgf000049_0001
en donde V, Z1 o Z3 son =N- o =C(R24)-, en donde R24, seleccionado independientemente, es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un grupo donante de electrones, R8 y R9 son independientemente hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, y J es -O- o -N(R33), en donde R33 es hidrógeno o alquilo inferior, y R' es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones.
En modalidades más preferidas de R8 y R9, en donde cualquiera de las estructuras anteriores Lr-Lo compuestas de Q 1, son hidrógeno. En otras modalidades más preferidas en la una cualquiera de las estructuras anteriores Lr-Lo compuestas de Q1, V, Z1 o Z2 es =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o un grupo donante de electrones. Por tanto, algunas de esas modalidades más preferidas tienen la estructura de
Figure imgf000050_0001
En otras modalidades más preferidas, A en Q1, cuando A está presente (es decir, a es 1) en una cualquiera de las estructuras anteriores Lr-Lo compuestas de Q1, corresponde en estructura a un ácido que contiene amina en donde el terminal ácido carboxílico del ácido que contiene amina está unido a J como un éster o amida y su N-terminal está unido a Lb o Lb' a través de un grupo funcional que contiene carbonilo.
En otras modalidades, Lr-Lo-D+ (es decir, -Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+) tiene la estructura de
Figure imgf000051_0001
en donde V, Z1 o Z3 son =N- o =C(R24)-, en donde R24, seleccionado independientemente, es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un grupo donante de electrones, R8 y R9 son independientemente hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, y J es -O- o -N(R33), en donde R33 es hidrógeno o alquilo inferior, y R' es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones.
En modalidades más preferidas de R8 y R9, en donde cualquiera de las estructuras anteriores Lr-Lo compuestas de Q2, son hidrógeno. En otras modalidades más preferidas, V o Z3 es =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o un grupo donante de electrones. Por tanto, algunas de esas modalidades más preferidas tienen la estructura de
Figure imgf000052_0001
En otras modalidades más preferidas, A, cuando A está presente en una cualquiera de las estructuras anteriores Lr-Lo compuestas de Q2 , corresponde en estructura a un ácido que contiene amina en donde el terminal ácido carboxílico del ácido que contiene amina está unido a J como un éster o amida y su N-terminal está unido a Lb o Lb' a través de un grupo funcional que contiene carbonilo. En modalidades particularmente preferidas, -Lb-A- o Lb'-A en cualquiera de las modalidades anteriores -Lb-Lo-D+, Lb'-Lc-D+ o Lr -Lo-D+ tiene la estructura de M1-A, M1-A1-Ao-, M2-A o M2-A1-Ao- representada por:
Figure imgf000052_0002
en donde A1 y Ao son subunidades de A, Lb es un resto succinimida (M2) y Lb' es un resto maleimida (M1), en donde -[C(Rb1)(Rb1)]m-[HE]- es A o una subunidad (A1) de A; R y Ra2 son independientemente hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; Ra1 es hidrógeno, alquilo inferior o BU; HE es una unidad potenciadora de hidrólisis (HE) opcional; m es un número entero que varía de 0 a 6; cada Rb1 es independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido, o dos Rb1 junto con el(los) carbono(s) al(a los) que están unidos comprenden un cicloalquilo C3-C6 o uno Rb1 y HE junto con el carbono al que están unidos comprenden un cicloalquilo de 5 o 6 miembros o un heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros y el otro Rb1 es hidrógeno, opcionalmente sustituido alquilo C1-C6, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; BU es una unidad básica que tiene la estructura de -[C(R1)(R1)]-[C(R2)(R2)]n-N(R22)(R23), en donde n es 0, 1, 2 o 3, R1 son independientemente hidrógeno o alquilo inferior o dos R1 junto con el carbono al que están unidos comprenden un cicloalquilo C3-C6, R2 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido, o dos R2 junto con el(los) carbono(s) al(a los) que están unidos y cualquier carbono intermedio definen un cicloalquilo C3-C6, o un R1 y un R2 junto con los carbonos al que están unidos y cualquier carbono intermedio comprenden un cicloalquilo de 5 o 6 miembros y los R1 y R2 restantes son como se definen; R22 y R23 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o R22 y R23 junto con el nitrógeno al que están unidos comprenden un heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros; y en donde un resto sulfhidrilo de un resto de direccionamiento está unido a M2 como lo indica la línea ondulada al resto de succinimida y en donde la línea ondulada a HE (o a [C(Rb1)(Rb1)]m cuando HE no está presente) indica unión covalente a otra subunidad de A o W en aquellas modalidades donde Q1 está presente o a V, Z1, Z2 o Z3 de un resto SI en aquellas modalidades donde Q2 está presente.
En esas modalidades, -Lb y Lb' se denominan restos succinimida (M2) y -Lb-A-, Lb'-A, -Lb-A1- o Lb'-A1 correspondientes a ellos se denominan restos que contienen succinimida, que son restos Lss representativos.
En otras modalidades particularmente preferidas, -Lb-A- o -Lb-A1-Ao en una cualquiera de las anteriores modalidades que contiene Lb tiene la estructura de M3-A o M3-A1-Ao representado por:
Figure imgf000053_0001
en donde A1 y Ao son subunidades de A, y M3A y M3B son regioisómeros de M3 y en donde los grupos variables y la conectividad a un grupo sulfhidrilo de un resto de direccionamiento y HE (o [C(Rb1)(Rb1)]m) son como se definen para los restos que contienen succinimida correspondientes mostrados inmediatamente arriba. En las presentes modalidades, Lb se denomina un resto de ácido succínico-amida (M3) y -Lb-A-, Lb'-A, -Lb-A1 - o Lb'-A1 se denominan como restos que contienen amida de ácido succínico, que son restos Ls representativos.
En cualquiera de esas modalidades -Lb-A-, Lb'-A, -Lb-A1- y Lb'-A1 o M1-A, M1-A1-Ao-, M2-A, M2-A1-Ao-, M3-A y M3-A1-Ao cada Rb es independientemente preferentemente hidrógeno o alquilo inferior y m es 0 o 1, Ra1 es preferentemente hidrógeno, alquilo inferior o BU o Ra2 es preferentemente hidrógeno.
En cualquiera de las modalidades anteriores que comprenden Q1 en la que Q1 se compone de A o A1-Ao, las modalidades preferidas son aquellas donde W de Q1 está unido a A o Ao a través de un grupo funcional amida. En aquellas modalidades de preferencia A, A1 y Ao tener estructuras independientemente seleccionados correspondientes a los ácidos que contienen amina como se describe en la presente descripción para modalidades de unidad de extensión. En cualquiera de las modalidades anteriores de -Lb-A-, Lb'-A, -Lb-A1- y Lb'-A1 que comprenden A o A1, A y A1 tienen preferentemente estructuras correspondientes a amina que contiene ácidos como se describe en la presente descripción para modalidades unidad de extensión en donde a está unido a W o A1 está u n i d o a A o a t r a v é s d e u n g r u p o f u n c i o n a l a m i d a . E n c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s a n t e r i o r e s M 1- A , M 1- A i - A o , M 2- A , M 2- A i - A o - , M 3- A y M 3- A 1 - A o , p r e f e r e n t e m e n t e A , A 1 y A o t e n e r e s t r u c t u r a s in d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o s c o r r e s p o n d i e n t e s a lo s á c i d o s q u e c o n t i e n e n a m in a c o m o s e d e s c r i b e e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n p a r a la u n i d a d d e e x t e n s i ó n A y la s m o d a l i d a d e s d e la s u b u n i d a d A o . E n c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s Ls s o Ls a n t e r i o r e s q u e c o m p r e n d e n r e s t o s - A ( B U ) - o - A 1 ( B U ) - , A y A 1 t i e n e n p r e f e r e n t e m e n t e e s t r u c t u r a s c o r r e s p o n d i e n t e s a á c id o s q u e c o n t i e n e n a m in a s u s t i t u i d o s c o n B U , y s o n , p o r lo t a n t o , á c id o s q u e c o n t i e n e n d i a m i n o c o m o s e d e s c r i b e e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n p a r a m o d a l i d a d e s d e u n i d a d e s d e e x t e n s i ó n y u n i d a d e s b á s ic a s . E n lo s r e s t o s q u e c o n t i e n e n M 1, M 2 y M 3 q u e t i e n e n r e s t o s A o A 1 c o r r e s p o n d i e n t e s e n e s t r u c t u r a a u n á c id o q u e c o n t i e n e a m in a , e l n i t r ó g e n o a m í n i c o d e l á c i d o q u e c o n t i e n e a m i n a s e i n c o r p o r a c o m o e l n i t r ó g e n o i m í n i c o d e l s i s t e m a d e a n i l l o d e M 1 o M 2 o n i t r ó g e n o d e la a m i d a d e l r e s t o M 3. E n lo s r e s t o s q u e c o n t i e n e n Ls s o Ls , e l n i t r ó g e n o a m í n i c o N - t e r m i n a l d e l á c i d o q u e c o n t i e n e d i a m i n o s e i n c o r p o r a c o m o e l n i t r ó g e n o i m í n i c o d e l s i s t e m a d e a n i l l o d e M 1 o M 2 o e l n i t r ó g e n o a m id a d e l r e s t o M 3. P r e f e r e n t e m e n t e , p a r a c u a l q u i e r a d e lo s r e s t o s q u e c o n t i e n e n M 1, M 2 y M 3 a n t e r i o r e s o r e s t o s q u e c o n t i e n e n Ls s o Ls , e l á c id o c a r b o x í l i c o d e l á c i d o q u e c o n t i e n e a m i n a o e l á c i d o q u e c o n t i e n e d i a m i n o s e i n c o r p o r a e n u n g r u p o f u n c i o n a l a m i d a p a r a A o p a r a lo s r e s t o s q u e c o m p r e n d e n A 1 -A o - o W p a r a lo s r e s t o s q u e c o m p r e n d e n A c u a n d o A o n o e s t á p r e s e n t e .
Figure imgf000054_0001
E n e s a s y e n c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s a n t e r i o r e s q u e c o m p r e n d e n H E , H E e s p r e f e r e n t e m e n t e - C ( = O ) - . E n c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s a n t e r i o r e s d o n d e W d e Q 1 e s t á c o m p u e s t o p o r u n d i p é p t i d o q u e e s r e c o n o c i d o p o r u n a c a t e p s i n a p r o t e a s a , l o s d i p é p t i d o s p r e f e r i d o s t i e n e n la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000054_0002
e n d o n d e R 34 e s b e n c i lo , m e t i l o , i s o p r o p i l o , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000054_0003
y R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 4 - N H 2 , -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 , ( C H 2 ) 3 N H ( C = N H ) N H 2 , o - ( C H 2 ) 2 C O 2 H , e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a e n e l d i p é p t i d o N - t e r m i n a l i n d i c a u n ió n c o v a l e n t e a A o L b o L b' y la l í n e a o n d u l a d a e n e l d i p é p t i d o C -t e r m i n a l i n d i c a u n ió n c o v a l e n t e a J d e u n r e s t o S I .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s c o m p u e s t a s p o r Q 1, - L b- L o- D o L b' - L o-D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000055_0001
en donde Ai y Ao son subunidades de A, en donde Ao es una subunidad opcional (es decir, Ai se convierte en A cuando Ao está ausente), en donde R34 es metilo, isopropilo o -CH(OH)CH3 y R35 es metilo, -(CH2)3NH(C=O)NH2 o -(CH2)2CO2H, en donde R', R8, R9, J, V, Z1 y Z2 son como se definieron previamente para la Fórmula I. En modalidades más preferidas, R8 y R9 son hidrógeno. En otras modalidades más preferidas, J es -NH-. En otras modalidades más preferidas, J, V, Z1 y Z2 son cada uno -CH=. También son más preferidas aquellas modalidades en las que Lb' tiene la estructura de un resto maleimida (M1) o en donde Lb tiene la estructura de un resto succinimida (M2) o un resto ácido succínico-amida (M3).
En otras modalidades preferidas compuestas de Q1 un conjugado ligando fármaco o un compuesto de Enlazador fármaco de fórmula Lr-Lo-D+ tiene la estructura de
Figure imgf000055_0002
en donde el subíndice w es 1, 2, 3 o más, preferentemente 2, y donde W consiste o está compuesto por un dipéptido donde el dipéptido son subunidades secuenciales de aminoácidos de Ww donde la subunidad del dipéptido está en el extremo distal de Ww (es decir, el dipéptido tiene la fórmula -W2-W1-) y el enlace indicado es un enlace amida que se puede escindir específicamente mediante una proteasa intracelular en comparación con las proteasas séricas que circulan libremente. En algunas modalidades, cuando el subíndice a es 1, la unidad de extensión (A) es una unidad de ramificación. En otras modalidades, cuando Aa está compuesto por una Unidad de Ramificación (B) y el subíndice a es 2 o más, B está preferentemente en la subunidad distal de Aa. En otras modalidades, B está preferentemente conectado al extremo proximal de Ww y B está preferentemente en el extremo distal de Aa (por ejemplo, B es Ao cuando Aa es -A1-A0 - o Aa es -A1-A0 -B-) Para cualquiera de esas modalidades, la Unidad de Ramificación se sustituye por una Unidad de Solubilización.
En modalidades más preferidas, A o A1 y Ao en -A1-A0 - se representan independientemente por las estructuras (3) o (4):
Figure imgf000056_0001
en donde la línea ondulada al resto carbonilo de cualquier estructura representa el punto de unión de A o Ao a W o A i a Ao preferentemente a través de un grupo funcional amida y en donde la línea ondulada al resto amino de cualquier estructura representa el punto de unión de A o A1 a Lb o Lb' o a un grupo funcional de A1 que contiene carbonilo formando preferentemente un grupo funcional amida; en donde los grupos variables son como se definieron previamente para las estructuras que representan A. En modalidades preferidas, L está ausente (es decir, q es 0) y G es hidrógeno, BU, -CO2H o -NH2 o la cadena lateral de un amino natural ácido como ácido aspártico, ácido glutámico o lisina. En otras modalidades preferidas, L y K son carbono y R41, R42, R43 y R44 en cada caso es hidrógeno. En otras modalidades preferidas, R38-R44 en cada caso es hidrógeno. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (3) en donde K es nitrógeno y uno de R41, R42 está ausente y el otro es hidrógeno. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (4) en donde r es 1, K es nitrógeno y uno de R41, R42 está ausente y el otro es hidrógeno. En otras modalidades preferidas, p y q de estructura (3) son 0 o q y r de estructura (4) son 0. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (3) en donde p y q son ambos 0 y K junto con R41 y R42 es -C(=O)-. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (4) en donde q es 1 y L junto con R43 y R44 es -C(=O)-.
La estructura (3) y (4) también representan modalidades preferidas para W2 en -W3-W2-W1- y una unidad de ramificación proporcionada en el último caso G es-CO2H o -NH2 o la cadena lateral de un aminoácido de origen natural como el ácido aspártico, el ácido glutámico o la lisina.
En modalidades más preferidas, A, A1 o Ao tiene la estructura de (3a) o (4a)
Figure imgf000056_0002
en donde p o q es 0 o 1.
Cuando un resto Lss o Ls se compone de A o A1 las estructuras preferidas de A o A1 corresponden a las mostrados para (3), (3a), (4) y (4a) en donde R38 está ausente, G es una unidad básica (BU) y el nitrógeno N-terminal se incorporan en un resto M1 o M2 como el nitrógeno imínico de ese sistema de anillos de restos o se incorporan en un resto M3 como el nitrógeno amídico de la amida del ácido succínico.
En otras modalidades más preferidas, A o A1 y Ao de A corresponden independientemente en estructura a un alfaamino, beta-amino u otro ácido que contiene amina. Cuando un resto LSS o LS se compone de A o A1, se prefieren restos A o A1 que corresponden en estructura a una alfa-amino, beta-amino u otro ácido que contiene amina sustituido con BU (es decir, es un ácido que contiene diamino), en donde el nitrógeno N-terminal del alfa-amino, beta-amino u otro ácido que contiene amina sustituido con BU, que está representado por A(BU) o A1(BU), se incorpora en un M1 o el resto M2 como el nitrógeno imínico del sistema de anillo de ese resto o se incorpora en M3 como el nitrógeno amídico del resto amida del ácido succínico.
En esas modalidades, A(BU) o A1(BU) particularmente preferidos tienen la estructura de (3) o (3a) donde p es 0 y G es BU o tienen la estructura de (4) o (4a) donde q es 1 y G es BU. En modalidades compuestas por Q1 en donde A0 está presente, los ácidos que contienen amina particularmente preferidos que corresponden a Ao tienen la estructura de -NH2-X1-CO2H en donde X1 es un alquileno C1-C6 opcionalmente sustituido, que incluye ácido e-aminocaproico y ácido p-amino-propiónico.
En modalidades preferidas de Unidades Enlazadoras de los LDC y sus precursores fármaco-enlazador se compone de Q2 que proporciona un carbohidrato unido por enlace glicosídico que tiene un sitio de reconocimiento para una glicosidasa. En otras modalidades preferidas compuestas por Q2 , -Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+ tiene la estructura de:
Figure imgf000057_0001
en donde A i y Ao son subunidades de A donde Ao es una subunidad opcional (es decir, cuando Ao está ausente, A i se convierte en A), R45 es -CH2OH o -CO2H, y R8, R9, V, Z3, E y J son como se definieron previamente. En modalidades más preferidas, R8 y R9 son hidrógeno. En otras modalidades más preferidas, E es -O-. En otras modalidades más preferidas, J es -NH-. En otras modalidades más preferidas, uno o ambos de V y Z3 son -CH=. También son más preferidas aquellas modalidades en las que Lb' tiene la estructura de un resto maleimida (M1) o en las que Lb tiene la estructura de un resto succinimida (M2) o un resto ácido succínico-amida (M3). Son más preferidas aquellas modalidades en las que Lb'-A1 tiene la estructura de M1-A1, o Lb-A1 tiene la estructura dada anteriormente para M2-A1 o M3-A1.
En modalidades preferidas compuestas por Q2, Ao está presente y tiene la estructura previamente definida para (3), (3a), (4) o (4a), en donde la línea ondulada al resto carbonilo de cualquiera de las estructuras representa el punto de unión de Ao de J preferentemente a través de un grupo funcional amida y en donde la línea ondulada con el resto amino de cualquiera de estructura representa el punto de unión a un grupo funcional que contiene carbonilo de A1, formando preferentemente un grupo funcional amida; en donde los grupos variables son como se definieron previamente para las estructuras que representan A. En modalidades preferidas, L está ausente (es decir, q es 0) y G es hidrógeno, -CO2H o -NH2 o la cadena lateral de un aminoácido natural tal como ácido aspártico, ácido glutámico o lisina. En otras modalidades preferidas, L y K son carbono y R41, R42, R43 y R44 en cada caso es hidrógeno. En otras modalidades preferidas, R38-R44 en cada caso es hidrógeno. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (3) en donde K es nitrógeno y uno de R41, R42 está ausente y el otro es hidrógeno. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (4) en donde r es 1, K es nitrógeno y uno de R41, R42 está ausente y el otro es hidrógeno. En otras modalidades preferidas, p y q de estructura (3) son 0 o q y r de estructura (4) son 0. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (3) en donde p y q son ambos 0 y K junto con R41 y R42 es -C(=O)-. Otras modalidades preferidas tienen la estructura (4) en donde q es 1 y L junto con R43 y R44 es -C(=O)-.
En otras modalidades más preferidas, A o A1 y Ao de A corresponden independientemente en estructura a un alfaamino, beta-amino u ácido que contiene amina. En otras modalidades más preferidas que tienen un resto Ls s o Ls , ese resto está compuesto por A o A1 con estructuras preferidas correspondientes a las mostradas para (3), (3a), (4) y (4a) en donde R38 está ausente, G es una unidad básica (BU) y el nitrógeno N-terminal se incorpora en un resto M1 o M2 como el nitrógeno imínico de ese sistema de anillos de restos o se incorpora en un resto M3 como el nitrógeno amídico del ácido succínico amida. Otros restos preferidos A o A1 para Ls s o Ls corresponden en estructura a una alfa-amino, beta-amino u otro ácido que contiene amina sustituido con BU (es decir, es un ácido que contiene diamino), en donde el nitrógeno N-terminal del alfa-amino, beta-amino u otro ácido que contiene amina sustituido con BU, que está representado por A(BU) o A1(BU), se incorpora en un resto M1 o M2 como el nitrógeno imínico de que sistema de anillos de resto o se incorpora en M3 como el nitrógeno de la amida del resto amida de ácido succínico.
En modalidades compuestas por Q2 en donde Ao está presente, los ácidos que contienen amina particularmente preferidos que corresponden a Ao tienen la estructura de -NH2-X1-CO2H en donde X1 es un alquileno C1-C6 opcionalmente sustituido, que incluye ácido £-aminocaproico y ácido p-amino-propiónico.
Particularmente preferido son uno cualquiera de los anteriores Lb que contiene modalidades en donde el resto de direccionamiento unido a Lb es un anticuerpo.
1 .4 U n i d a d e s d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d o s
L a s c l a s e s ú t i l e s d e f á r m a c o s q u e c o n t i e n e n a m i n a s t e r c i a r i a s in c lu y e n , a m o d o d e e j e m p l o y s in l im i t a c ió n , a q u e l l o s q u e t i e n e n a c t i v id a d c i t o s t á t i c a o c i t o t ó x i c a s o b r e c é l u l a s a n ó m a l a s o c é lu l a s n o r m a le s e n la s p r o x i m i d a d e s d e 5 c é l u l a s a n ó m a l a s ( e s d e c i r , c é l u l a s a s o c i a d a s a t u m o r e s ) . E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , e l f á r m a c o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a t i e n e a c t i v i d a d c i t o s t á t i c a o c i t o t ó x i c a s o b r e c é l u l a s i n m u n i t a r i a s h i p e r e s t i m u l a d a s . E n o t r a s m o d a l i d a d e s , e l f á r m a c o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a t i e n e a c t i v id a d c i t o s t á t i c a o c i t o t ó x i c a s o b r e c é l u l a s t u m o r a l e s o c é lu l a s a s o c i a d a s a t u m o r e s . T a l e s f á r m a c o s q u e c o n t i e n e n a m i n a s t e r c i a r i a s i n c lu y e n t u b u l i s i n a s , d o l a s t a t i n a s y a u r i s t a t i n a s q u e t i e n e n u n r e s t o d e a m i n a t e r c i a r i a N - t e r m in a l , d ím e r o s d e f e n a z i n a e i n h i b i d o r e s d e M D R b a s a d o s 10 e n t e t r a h i d r o q u i n o l i n a .
1.4.1 D o l a s t a t i n a s y a u r i s t a t i n a s c u a t e r n i z a d a s
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , e l f á r m a c o a n t i p r o l i f e r a t i v o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a c u a t e r n i z a d a e s u n a d o l a s t a t i n a 15 q u e c o n t i e n e a m in a t e r c i a r i a , q u e i n c lu y e d o l a s t a t i n a 10 , d o l a s t a t i n a 15 y c o m p u e s t o s r e l a c i o n a d o s , e n d o n d e e l n i t r ó g e n o in d i c a d o ( f ) e j e m p l i f i c a d o p a r a d o l a s t a t i n a 10 y d o l a s t a t i n a 15 e s t á c u a t e r n i z a d o p o r c o v a l e n t e u n ió n a la p o s ic i ó n b e n c í l i c a d e u n r e s t o a u t o d e s t r u c t i v o d e t i p o P A B o P A B e n Lo.
20
25
Figure imgf000058_0001
30
35
Figure imgf000058_0002
40
E n e s a s m o d a l i d a d e s , l a s d o l a s t a t i n a s i l u s t r a t i v a s , q u e e s t á n r e l a c i o n a d a s c o n la d o l a s t a t i n a 10 , s o n a q u e l l a s e n la s q u e lo s s u s t i t u y e n t e s f e n i l o y t i a z o l d e la d o l a s t a t i n a 10 s e r e e m p l a z a n c o n r e s t o s a r i l o o h e t e r o a r i l o s e l e c c i o n a d o s in d e p e n d i e n t e m e n t e . O t r a s d o l a s t a t i n a s i l u s t r a t i v a s e s t á n r e l a c i o n a d a s c o n la d o l a s t a t i n a 15 e n la q u e e l r e s t o é s t e r 45 C - t e r m i n a l e s t á r e e m p l a z a d o p o r u n g r u p o f u n c i o n a l a m i d a e n e l q u e e l n i t r ó g e n o a m i d a d e e s e g r u p o f u n c i o n a l e s t á s u s t i t u i d o c o n u n r e s t o a r i l a l q u i l o o h e t e r o a r i l a l q u i l o .
L a s e s t r u c t u r a s p a r a o t r o s a g e n t e s d i s r u p t o r e s d e t u b u l i n a a b a s e d e d o l a s t a t i n a s o n la s s i g u i e n t e s , e n d o n d e e l n i t r ó g e n o in d i c a d o ( f ) s e c u a t e r n i z a m e d i a n t e u n ió n c o v a l e n t e a la p o s ic i ó n b e n c í l i c a d e u n r e s t o a u t o d e s t r u c t i v o d e 50 t i p o P A B o P A B :
1
1
2
Figure imgf000059_0002
2
e n d o n d e c a d a R 10, R 11 y R 18 e s u n a lq u i lo C 1 -C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o s e l e c c i o n a d o in d e p e n d i e n t e m e n t e y A r o A r i y A r 2 , s e l e c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e , s o n a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o . O t r o s m i m é t i c o s p e p t o i d e s d e d o l a s t a t i n a s q u e t i e n e n u n a a m i n a t e r c i a r i a c a p a z d e c u a t e r n i z a c i ó n s o n 30 p r o p o r c i o n a d o s p o r S c h m i t t y o t r o s " S y n t h e s i s o f d o l a s t a t i n 15 p e p t o i d s " B io o r g . M e d . C h e m . L e t t . ( 199 8 ) 8 ( 4 ) : 385 - 8 .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , R 10 y R 11 s o n m e t i l o . E n o t r a m o d a l i d a d p r e f e r i d a R 18 e s t - b u t i l o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , A r e s u n f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o A r1 y / o A r 2 , s e l e c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e , s o n f e n i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s m á s , A r 1 e s f e n i l o y A r 2 e s 2 - t i a z o l i l o .
Figure imgf000059_0001
65
en donde R10 y R11 son independientemente alquilo Ci -C8; R12 es hidrógeno, alquilo Ci -C8, cicloalquilo C3-C8 , arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 o -X1-(heterociclo C3-C8); R13 es hidrógeno, alquilo C1-C8, cicloalquilo C3-C8 , arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 y -X1-(heterociclo C3-C8); R14 es hidrógeno o metilo, o R13 y R14 tomados junto con el carbono al que están unidos comprenden un cicloalquilo C3-C8; R15 es hidrógeno o alquilo C1-C8; R16 es hidrógeno, alquilo C1-C8 , cicloalquilo C3-C8, arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 y -X1-(heterociclo C3-C8); R17 son independientemente hidrógeno, -OH, alquilo C1-C8 , cicloalquiloC3-C8 y O-(alquilo C1-C8); R18 es hidrógeno o alquilo C1-C8; R19 es -C(R19A)2-C(R19A)2-arilo, -C(R19A)2-C(R19A)2-(heterociclo C3-C8) o -C(R19A)2- C(R19A)2-(cicloalquilo C3-C8), en donde cada R19A es independientemente hidrógeno, alquilo C1-C8 , -OH o -alquilo C1-C8 ;
R20 es hidrógeno, alquilo C1-C20, arilo, heterociclo C3-C8 , -(R47O)m-R48, y -(R47O)m-CH(R49)2; R21 es arilalquilo, que incluye -CH2Ph, hidroxilalquilo, que incluye -CH(CH3)-OH o heterociclo C3-C8; Z es O, S, NH o NR46, en donde R46 es alquilo C1-C8; m es un número entero que varía de 1 a 1000; R47 es alquilo C2-C8 ; R48 es hidrógeno o alquilo C1-C8 ; R49 son independientemente -COOH, -(CH2)n-N(R50)2 , -(CH2)n-SO3H, o -(CH2)n-SO3-alquilo C1-C8 ; R50 son independientemente alquilo C1-C8 , o -(CH2)n-COOH; n es un número entero que varía de 0 a 6; y X1 es alquileno C1-C10.
Algunas auristatinas preferidas que tienen una amina terciaria N-terminal están representadas por la siguiente fórmula en la que el nitrógeno indicado (f) es el sitio de cuaternización cuando dichos compuestos se incorporan en un LDC como una unidad de fármaco cuaternizada (D+):
Figure imgf000060_0001
en donde R10 y R11 son independientemente alquilo C1-C6 en las estructuras De-1, De-2 y Df-1, Ar en De-1 o De-2 es arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido, y en Df-1 Z es -O-, o -NH-R20 es hidrógeno, alquilo C1-C6, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido, y R21 es alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, arilalquilo opcionalmente sustituido o heteroarilalquilo opcionalmente sustituido.
En modalidades más preferidas, R10 y R11 es metilo. En otras modalidades más preferidas en De-1 o De-2, Ar es fenilo opcionalmente sustituido o 2-piridilo opcionalmente sustituido. En otras modalidades más preferidas en Df-1, R21 es X1-SR21a o X1-Ar, en donde X1 es alquileno C1-C6, R21a es alquilo inferior y Ar es fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido. En otras modalidades preferidas -Z- es -O- y R20 es alquilo inferior. En otras modalidades preferidas Z es -NH- y R20 es fenilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. En otras modalidades, R21 es -X1-Ar, X es -NH- y R20 es Ar, en donde X1 y Ar seleccionados son independientemente como se definieron previamente para R21.
Algunas auristatinas preferidas que tienen una amina terciaria N-terminal están representadas por la siguiente fórmula en la que el nitrógeno indicado (f) es el sitio de cuaternización cuando dichos compuestos se incorporan en un LDC como una unidad de fármaco cuaternizada (D+):
Figure imgf000061_0001
Df /E-3
e n d o n d e R 10 y R 11 s o n m e t i l o , R 13 e s i s o p r o p i l o o - C H 2 - C H ( C H 3 ) 2 , y R 19B e s - C H ( C H 2 P h ) - 2 - t i a z o l , - C H ( C H 2 P h ) - 2 -p i r i d i l , - C H ( C H 2 - p - C l - P h ) , - C H ( C O 2 M e ) - C H 2 P h , - C H ( C O 2 M e ) - C H 2 C H 2 S C H 3 , C H ( C H 2 C H 2 S C H 3 ) C ( = O ) N H - 3 - q u in o l i l , -C H ( C H 2 P h ) C ( = O ) N H - p - C l - P h o R 19B t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000061_0002
L a s a u r i s t a t i n a s q u e c o n t i e n e n a m in a t e r c i a r i a p a r t i c u l a r m e n t e p r e f e r i d a s i n c o r p o r a d a s e n u n a u n i d a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a in c lu y e n , p e r o n o s e l im i t a n a , A u r i s t a t i n a E , A u r i s t a t i n a P E , A u r i s t a t i n a P H E , A u r i s t a t i n a P Y E , A u r i s t a t i n a E F P , A u r i s t a t i n a E B y A u r i s t a t i n a E V B .
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , u n r e s t o L b '- L o - D q u e i n c o r p o r a u n a d o l a s t a t i n a o u n a a u r i s t a t i n a q u e t i e n e u n a a m in a t e r c i a r i a N - t e r m in a l t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000062_0004
10
15
Figure imgf000062_0001
20
25
Figure imgf000062_0002
30
e n d o n d e L b ' e s u n r e s t o m a l e i m i d a ( M 1) y A , W , V , Z 1 y Z 2 s o n c o m o s e d e f i n i e r o n p r e v i a m e n t e p a r a la F ó r m u l a 1 y A r , A r 1, A r 2 y R 19 s o n c o m o s e d e f i n i e r o n p r e v i a m e n t e e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n p a r a t e r c i a r i o d o l a s t a t i n a s y a u r i s t a t i n a s q u e c o n t i e n e n a m i n a , e n la s q u e e l n i t r ó g e n o d e a n i l i n a d e S I ( d e l q u e c o n s i s t e la u n i d a d e s p a d a d o r a Y ) 35 e s t á u n id o a W a t r a v é s d e u n g r u p o f u n c i o n a l c a r b o n i l o d e a n i l i d a . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , u n o , d o s o t o d o s V , Z 1, Z 2 s o n = C H - . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , A r o A r 1 y A r 2 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o . E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , A r e s f e n i l o o A r1 y A r 2 s o n a m b o s f e n i l o y V , Z 1 y Z 2 s o n = C H - .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , u n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e f ó r m u l a L b '- L o - D q u e t i e n e u n a u n id a d 40 e s c i n d i b l e c o n p é p t i d o s e n la q u e D e s u n a a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d a t i e n e la e s t r u c t u r a d e u n o d e :
45
50
55
Figure imgf000062_0003
60 E n c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s a n t e r i o r e s c o m p u e s t a d e u n a m o d a l i d a d p r e f e r i d a d e u n i d a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o s o n a q u e l l o s d o n d e L b ' ( e s d e c i r , M 1) s e s u s t i t u y e c o n u n r e s t o L b q u e t a m b i é n e s t á u n i d o a u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o p a r a p r o p o r c i o n a r u n L D C e n d o n d e e s e r e s t o L b e s u n r e s t o M 2 o M 3 y / o A s e r e e m p l a z a c o n - A 1- A o , e n d o n d e A 1 y A o s o n s u b u n i d a d e s d e A .
65 E n c u a l q u i e r a d e lo s r e s t o s q u e c o n t i e n e n L b o L b ' a n t e r i o r e s , q u e c o m p r e n d e n u n a u n i d a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o c o r r e s p o n d i e n t e e n e s t r u c t u r a a D E , D F, D F-1, D E-1, D E-2 o D F/E-3, u n a u n i d a d e s c i n d i b l e p r e f e r i d a ( W ) está compuesta por un dipéptido reconocido por una proteasa de catepsina capaz de escindir el enlace anilida que une covalentemente W a SI. En modalidades más preferidas, W está compuesto por un dipéptido que tiene la estructura de
Figure imgf000063_0001
en donde R34 y R35 y las uniones indicadas por las líneas onduladas a A (o una subunidad de las mismas) y las unidades Y son como se definieron previamente. En modalidades particularmente preferidas, R34 es -CH(CH3)2 y R35 es -(CH2)3-NH(=O)NH2, o R34 es -CH(CH3)2 y R35 es -CH3; y en donde los carbonos alfa de R34 y R35 están en la misma configuración absoluta de un L-aminoácido.
En cualquiera de los restos que contienen Lb o Lb' anteriores que comprenden una unidad de fármaco de auristatina cuaternizado, una unidad de extensión A preferida o una subunidad de la misma (es decir, A1) corresponden en estructura a un alfa aminoácido, un beta amino ácido u otro ácido que contiene amina tal como un ácido que contiene amina que tiene la fórmula de NH2-X1-CO2H donde X1 es un alquileno C1-C6, en donde el nitrógeno N-terminal del ácido que contiene la amina corresponde al nitrógeno de maleimida o succinimida imida de un resto M1 o M2 o el nitrógeno amídico de un resto ácido succínico-amida (M3), y el grupo carbonilo corresponde al extremo C-terminal del ácido que contiene amina que está unido a W a través de un grupo funcional amida. Por tanto, los restos M1-A-, M2 -A o M3-A preferidos o los restos M1-A1-, M2-A1 o M3-A1 preferidos tienen la estructura de
Figure imgf000063_0002
Son más preferidas aquellas unidades A o subunidades de las mismas correspondientes o derivadas de ácido pamino propiónico, ácido Y-amino butírico o ácido £-amino caproico. Otros restos A o A1 preferidos corresponden en estructura a, o se derivan de, ácidos que contienen diamino que tienen la fórmula NH2-C(Ra1)(Ra2)-[C(Rb1)(Rb)]m-C(=O)OH, en donde Ra1 tiene la fórmula de -[C(R1)(R1)]-[C(R2)(R2)]n-N(R22)(R23), en donde los grupos variables son como se definieron previamente para los restos A(BU)- y A1(Bu )-. Más preferidos son aquellos restos A o A1 en donde Ra1 es -CH2NH2. Por tanto, un -A- o A1 preferido tiene la estructura de -C(Ra1)(Ra2)-[c(Rb1)(Rb1)]m-C(=O)-.
En modalidades más preferidas de fármacos enlazadores, los compuestos de fórmula Lb'-Lo-D+ que tienen una unidad de escisión peptídica W en la que D+ es una auristatina cuaternizado tienen las estructuras de:
Figure imgf000064_0001
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , s o n m á s p r e f e r i d o s lo s c o m p u e s t o s f á r m a c o - e n l a z a d o r d e f ó r m u l a L b' - L o- D q u e t i e n e n u n a
U n id a d e s c i n d i b l e d e p é p t i d o s , e n d o n d e D e s u n a a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o y u n a U n id a d d e e x t e n s i ó n c o m p u e s t a
p o r M 1 y X 1, t i e n e n la s e s t r u c t u r a s d e
Figure imgf000064_0002
E n c u a l q u i e r a d e lo s r e s t o s q u e c o n t i e n e n L b o L b' a n t e r i o r e s , q u e c o m p r e n d e n u n a u n i d a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a
c u a t e r n i z a d o c o r r e s p o n d i e n t e e n e s t r u c t u r a a De , Df , Df -1, De -1, De -2 o Df /e -3, A p u e d e c o n t e n e r 2 s u b u n i d a d e s d o n d e
- A - e n la s e s t r u c t u r a s a n t e r i o r e s s e r e e m p l a z a p o r - A r A o - , e n d o n d e A 1 t i e n e la e s t r u c t u r a d e f i n i d a a n t e r i o r m e n t e
p a r a A y d o n d e A o c o r r e s p o n d e e n e s t r u c t u r a a o t r o á c i d o q u e c o n t i e n e a m in a . S e p r e f i e r e n lo s r e s t o s - A 1- A o- q u e
t i e n e n la f ó r m u l a - C ( R a1) ( R a2) -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -( C = 0 ) - A o - , e n d o n d e R a1 t i e n e la f ó r m u l a d e - [ C ( R 1) ( R 1) ] -[ C ( R 2) ( R 2) ]n -N ( R 22) ( R 23) e n d o n d e A o e s t á u n i d o a W y A 1 e s t á u n id o a A o a t r a v é s d e g r u p o s f u n c i o n a l e s a m i d a y e n d o n d e e l c a r b o n o q u e t i e n e lo s s u s t i t u y e n t e s R A1 y R a2 e s t á u n i d o a l n i t r ó g e n o d e im i d a d e u n r e s t o M 1 o M 2 o a l n i t r ó g e n o d e
la a m i d a d e u n r e s t o a m i d a - á c i d o M 3. E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s - A 1 - A o - t i e n e la f ó r m u l a d e - C ( R a1) ( R a2) -[ C ( R b1) ( R b1) ] m -( C = O ) - N H -( C H 2 ) m - C ( = O ) - , - C ( R a1) ( R a2) -[ C ( R b1) ( R b1) ] m-( C = O ) - N H - C H ( C O 2 H ) -( C H 2 ) m - 1 - C ( = O ) - o -C ( R a1) ( R a2) -[ C ( R b1) ( R b1) ] m -( C = O ) - N H -( C H 2 ) m ” - 1 - C H ( C O 2 H ) - C ( = O ) - e n d o n d e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a
5 y m ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 5 y e n d o n d e lo s o t r o s g r u p o s v a r i a b l e s s o n c o m o s e d e f i n e n p a r a A . E n
u n o c u a l q u i e r a d e lo s a n t e r i o r e s r e s t o s q u e c o n t i e n e L b - A - o L b '- A - c o m p u e s t o s p o r u n a u n i d a d d e f á r m a c o d e
a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o c o r r e s p o n d i e n t e e n e s t r u c t u r a a De , Df , De -1, De -2 o Df , Df 1 o Df /e -3, p a r t i c u l a r m e n t e
p r e f e r i d o s s o n a q u e l l o s e n d o n d e L b' e s M 1, L b e s u n M 2 o L b e s M 3A o M 3B, e n d o n d e M 3A y d e l r e s t o á c id o s u c c í n i c o - a m i d a M 3 d e la a p e r t u r a d e l a n i l l o h i d r o l í t i c o d e M 2 , e n d o n d e M 1- A - , M 2- A - , M 3A- A - , M 3B- A ,
M 1- A 1 - A o , M 2- A 1 - A o , M 3A- A 1 - A o o M 3B- A 1 - A o t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
1
1
Figure imgf000065_0004
20
Figure imgf000065_0001
25
30
Figure imgf000065_0002
e n d o n d e la s l í n e a s o n d u l a d a s a lo s r e s t o s c a r b o n i l o i n d i c a n u n e n l a c e c o v a l e n t e a W y la o t r a l í n e a o n d u l a d a i n d i c a 35 u n e n l a c e c o v a l e n t e a u n g r u p o s u l f h i d r i l o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o .
M o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s d e c o m p u e s t o s d e F á r m a c o E n l a z a d o r e n d o n d e L b ' e s M 1 y D e s u n a a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o y - A 1- A o - t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C ( R a1) ( R a2) - [ C ( R b1) ( R b1) ] m - ( C = O ) - N H - ( C H 2) m - C ( = O ) - , t i e n e n la s e s t r u c t u r a s d e :
40
45
50
55
Figure imgf000065_0003
60
En otras modalidades, un compuesto fármaco-enlazador de fórmula Lb'-Lo-D+ está compuesto por una unidad de fármaco de dolastatina o auristatina cuaternizado y una unidad W escindible por una glicosidasa en donde el resto Lb'-Lo-D+ tiene la estructura de:
Figure imgf000066_0001
Figure imgf000067_0001
E n c u a l q u i e r a d e lo s r e s t o s q u e c o n t i e n e n L b o L b a n t e r i o r e s q u e c o m p r e n d e n u n f á r m a c o a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o y W c o m o u n a u n id a d e s c i n d i b l e c o n g l i c o s i d a s a ( e s d e c i r , u n a u n id a d d e g l u c u r ó n i d o ) A p u e d e c o n t e n e r 2 s u b u n i d a d e s e n la s q u e - A - e n la s e s t r u c t u r a s a n t e r i o r e s e s r e e m p l a z a d o p o r - A i - A o - , e n d o n d e A i t i e n e la e s t r u c t u r a 40 d e f i n i d a a n t e r i o r m e n t e p a r a A y e n d o n d e A o c o r r e s p o n d e e n e s t r u c t u r a a o t r o á c id o q u e c o n t i e n e a m in a . E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , u n r e s t o L b' - L 0- D c o m p u e s t o p o r u n a d o l a s t a t i n a c u a t e r n i z a d o o u n a u n id a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
45
50
Figure imgf000067_0002
55
60
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , L b ' ( e s d e c i r , M 1) s e r e e m p l a z a c o n u n r e s t o Lb q u e t a m b i é n e s t á u n i d o a u n r e s t o d i r e c c i o n a l p a r a p r o p o r c i o n a r u n L D C e n d o n d e e l r e s t o L b e s u n r e s t o M 2 o M 3. E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o u n id o c o v a l e n t e m e n t e a l S I a t r a v é s d e u n e n l a c e g l i c o s í d i c o t i e n e s u c a r b o n o a n o m é r i c o e n la c o n f i g u r a c i ó n p . E n o t r a s m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s R 45 e s - C O 2 H .
5
E n la s m o d a l i d a d e s q u e t i e n e n u n a u n i d a d d e e x t e n s i ó n y u n a u n id a d d e g lu c u r ó n i d o , s o n m á s p r e f e r i d a s a q u e l l a s q u e t i e n e n la s e s t r u c t u r a s d e :
10
15
20
25
30
35
Figure imgf000068_0001
40
E n la s m o d a l i d a d e s q u e t i e n e n u n a u n i d a d d e e x t e n s i ó n c o m p u e s t a p o r M 1 y X 1 y u n a u n i d a d d e g lu c u r ó n i d o , s o n 45 m á s p r e f e r i d a s a q u e l l a s q u e t i e n e n la s e s t r u c t u r a s d e :
1
1
2
2
3
Figure imgf000069_0001
35
e n d o n d e R 45 e s p r e f e r e n t e m e n t e - C O 2 H y m s u b í n d i c e e s 4 .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , A e n c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s a n t e r i o r e s s e r e e m p l a z a p o r - A 1- A o - c o m o s e d e f i n e e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n p a r a r e s t o s q u e c o n t i e n e n L b o L b ' c o m p u e s t o s p o r u n a u n i d a d d e f á r m a c o d e 40 a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o y u n a u n i d a d W e s c i n d i b l e p o r p r o t e a s a c o n - A 1- A o- q u e t i e n e la f ó r m u l a d e - C ( R a1) ( R a2) -[ C ( R b1) ( R b1) ] m -( C = O ) - N H -( C H 2) m , - C ( = O ) - , - C ( R a1) ( R a2) -[ C ( R b) ( R b) ] m -( C = O ) - N H - C H ( C O 2 H ) -( C H 2) m -1 - C ( = O ) - o -C ( R a1) ( R a2) -[ C ( R b1) ( R b1) ] m -( C = O ) - N H -( C H 2) m -1- C H ( C O 2 H ) - C ( = O ) - . O t r o s p r e f e r i d o r e s t o s - A 1- A o - s o n c o m o s e d e s c r i b e n p a r a la s c o r r e s p o n d i e n t e s u n i d a d e s d e f á r m a c o s t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d o .
45 E n e s a m o d a l i d a d , l o s c o m p u e s t o s e n la z a d o r e s d e f á r m a c o s p r e f e r i d o s t i e n e n la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000070_0001
1.4.1 Tubulisinas cuaternizadas
En un grupo de modalidades, el fármaco cuaternizado corresponde en estructura a una tubulisina que tiene una amina terciaria en el N-terminal, en donde el nitrógeno de esa amina terciaria se incorpora a la unidad de fármaco cuaternizada.
En algunas modalidades, el fármaco cuaternizado es una tubulisina representada por estructuras de la siguiente fórmula en donde el nitrógeno indicado (f) es el sitio de cuaternización cuando dichos compuestos se incorporan en un LDC como una unidad de fármaco cuaternizada (D+):
Figure imgf000070_0002
en donde el círculo representa un heteroarilo de nitrógeno de 5 o 6 miembros en donde los sustituyentes requeridos indicados con respecto a ese heteroarilo están en una relación 1,3 o meta entre sí con sustitución opcional en las posiciones restantes; R2 es XA-R2A, en donde Xa es -O-, -S-, -N(R2B)-, -CH2-, -(C=O)N(R2B)- o -O donde R2B es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, R2A es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, o -C(=O)RC’ en donde RC es hidrógeno, opcionalmente alquilo sustituido, o arilo opcionalmente sustituido o R2 es un sustituyente unido a O; R3 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; R4 , R4A , R4B, R5 y R6 son alquilo opcionalmente sustituido, seleccionados independientemente, un R7 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido y el otro R7 es arilalquilo opcionalmente sustituido o heteroarilalquilo opcionalmente sustituido, y m es 0 o 1. En otras modalidades, el fármaco cuaternizado es una tubulisina representada por la estructura DG en donde un R7 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, preferentemente alquilo inferior, y el otro R7 es un alquilo opcionalmente sustituido seleccionado independientemente, preferentemente alquilo C1 -C6 y m es 0 o 1, preferentemente 1, en donde el otro grupo variable es como se definió previamente.
En algunos aspectos, R2 es XA-R2A, en donde Xa es -O-, -S-, -N(R2B)- -CH2-, o -O(C=O)N(R2B)- en donde R2B es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, R2A es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o -C(=O)RC , en donde RC es hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o arilo opcionalmente sustituido o R2 es un sustituyente unido a O.
En algunos aspectos, R 2 es XA-R2A, en donde Xa es -O-, -S-, -N(R2B)- o -(C=O)N(R2B)- en donde R2A y R2B son independientemente hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido, o R2 es un sustituyente unido a O.
En otros aspectos, -N(R7)(R7) en Dg o Dh se reemplaza por -N(R7)-CH(R10)(CH2 R11) para definir los fármacos tubulisina cuaternizados de fórmula Dh ' y Dg ':
Figure imgf000071_0001
en donde R10 es alquilo C1-C6 sustituido con -CO2 H, o un éster del mismo, y R7 es hidrógeno o un alquilo C1-C6 independientemente seleccionado de R10, o R7 y R10 junto con los átomos al que están unidos definen un heterociclo de 5 o 6 miembros; y R11 es arilo o heteroarilo de 5 o 6 miembros, opcionalmente sustituido con uno o más, preferentemente 1 o 2, con mayor preferencia 1, el(los) sustituyente(s) seleccionado independientemente del grupo que consiste en halógeno, alquilo inferior, -OH y -O-alquilo C1-C6 , preferentemente -F, -CH3 y -OCH3 ; y los grupos de variables restantes son como se definen para Dg y Dh .
En otros aspectos más, un R7 en -N(R7)(R7) en Dg o Dh es hidrógeno o alquilo C1-C6 , y el otro R7 es un alquilo C1-C6 seleccionado independientemente opcionalmente sustituido con -CO2 H o un éster del mismo, o con un fenilo opcionalmente sustituido.
En algunas modalidades de estructura Dg y Dh , un R7 es hidrógeno y el otro R7 es un arilalquilo opcionalmente sustituido que tiene la estructura de:
Figure imgf000071_0002
en donde R7B es hidrógeno o un sustituyente unido a O, preferentemente hidrógeno u -OH en la posición para, y R8A es hidrógeno o alquilo inferior, preferentemente metilo; y donde la línea ondulada indica el punto de unión a lo que resta de DG o DH.
En modalidades preferidas de estructura Dg o Dh , un R7 es hidrógeno y el otro R7 es un arilalquilo opcionalmente sustituido que tiene la estructura de
Figure imgf000072_0001
en donde R7B es -H u -OH; y donde la línea ondulada indica el punto de unión a lo que resta de Dg o Dh.
En otras modalidades de estructura Dg y Dh, un R7 es hidrógeno o alquilo inferior, preferentemente hidrógeno o metilo, con mayor preferencia hidrógeno, y el otro R7 es arilalquilo opcionalmente sustituido que tiene la estructura de uno de
Figure imgf000072_0002
en donde Z es un alquileno opcionalmente sustituido o un alquenileno opcionalmente sustituido, R7B es hidrógeno o un sustituyente unido a O, preferentemente hidrógeno u -OH en la posición para, R8A es hidrógeno o alquilo inferior, preferentemente metilo, y el subíndice n es 0, 1 o 2, preferentemente 0 o 1; y donde la línea ondulada indica el punto de unión a lo que resta de Dg o Dh. En otras modalidades más de la estructura Dg y Dh -N(R7)(R7) es -NH(alquilo C1-Ca ) en donde el alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con -CO2 H o un éster del mismo, o con un fenilo opcionalmente sustituido. En modalidades preferidas -N(R7)(R7) se selecciona del grupo que consiste en -NH(CH3 ), -CH2CH2 Ph, and -CH2-CO2 H, -CH2CH2 CO2 H y -CH2CH2CH2CO2 H.
En algunas modalidades de estructura Dg ' y Dh ', R7 y R10 junto con los átomos a los que están unidos definen un heterociclo de 5 o 6 miembros opcionalmente sustituido en donde -N(R7)-CH(R10)(CH2 R11) tiene la estructura de:
Figure imgf000072_0003
en donde la línea ondulada indica el punto de unión a lo que resta de Dg ' o Dh '.
Algunas tubulisinas preferidas están representadas por la siguiente fórmula en donde el nitrógeno indicado (f) es el sitio de cuaternización cuando dichos compuestos se incorporan en un LDC como una unidad de fármaco cuaternizada (D+):
Figure imgf000073_0001
en donde el círculo representa un heteroarilo nitrogenado de 5 o 6 miembros en el que los sustituyentes requeridos indicados para ese heteroarilo están en una relación 1,3 o meta entre sí con sustitución opcional en las posiciones restantes; R2A es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido o R2A junto con el átomo de oxígeno al que está unido define un sustituyente unido a O; R3 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; R4, R4A, R4B, R5 y R6 son alquilo opcionalmente sustituido, seleccionados independientemente; R7A es arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido, R8A es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido y m es 0 o 1.
En algunas modalidades preferidas de estructura Dg , Dg -1 , Dh o Dh -1 , R4 es metilo o R4A y R4B son metilo. En otra modalidad preferida de estructura Dg ' o Dh ', R4 es metilo o R4A y R4B son metilo. En otras modalidades preferidas, R7A es fenilo opcionalmente sustituido. En otra modalidad preferida, R8A es metilo en la configuración (S). En aún otras modalidades preferidas, R2A junto con el átomo de oxígeno al que está unido define un sustituyente unido a O distinto de -OH, con mayor preferencia un éster, éter o un carbamato unido a O. En modalidades más preferidas, el círculo representa un nitrógeno-heteroarileno de 5 miembros con un resto oxazol o tiazol divalente particularmente preferido. En otras modalidades preferidas, R4 es metilo o R4A y R4B son metilo. En otras modalidades preferidas, R7 es arilalquilo opcionalmente sustituido, en donde arilo es fenilo y R7A es fenilo opcionalmente sustituido.
En otras modalidades de Dg , Dg ', Dg - i , Dh , Dh ' o Dh - i , el círculo representa un heteroarileno de nitrógeno de 5 miembros, preferentemente representado por la estructura
V b
en donde XB es O, S o NRB donde RB es hidrógeno o alquilo inferior. Preferentemente, el fármaco cuaternizado es una tubulisina representada por la estructura DG, DG' o Dg-1, en donde m es 1. Son más preferidas las tubulisinas representadas por la estructura DG, en donde m es 1 y el círculo representa un resto de tiazol divalente opcionalmente sustituido.
Otras tubulisinas preferidas están representadas por la siguiente fórmula en donde el nitrógeno indicado (f) es el sitio de cuaternización cuando dichos compuestos se incorporan en un LDC como una unidad de fármaco cuaternizada (D+):
Figure imgf000074_0001
en donde R2A junto con el átomo de oxígeno al que está unido define un sustituyente unido a O, preferentemente un éster, éter o carbamato de unido a O, R3 es alquilo inferior o -CH2OC(=O)R3A en donde R3A es alquilo inferior opcionalmente sustituido y R7B es hidrógeno o un sustituyente unido a O, preferentemente en la posición para. En modalidades más preferidas, R3 es metilo o R3A es metilo, etilo, propilo, isopropilo, isobutilo o -CH2C=(CH3)2. En otras modalidades preferidas, R2A es metilo, etilo, propilo (es decir, -OR2A es un éter) o es -C(=O)R2B (es decir, -OR2A es un éster) en donde R2B es alquilo inferior con R2B como metilo (es decir, -OR2A es acetato) más preferido. Las tubulisinas más preferidas que tienen una amina terciaria N-terminal como sitio de conjugación tienen la estructura de una de las siguientes fórmulas:
Figure imgf000074_0002
en donde R7B es hidrógeno u -OH, R3 es alquilo inferior, preferentemente metilo o etilo, y R2B y R2C son independientemente hidrógeno o alquilo inferior. En algunas modalidades preferidas de cualquiera de las estructuras
Dg , Dg -1 , Dg -2 , Dg -3 , Dg -4 , Dg -5 , Dh , Dh -1 y Dh -2, R3 es metilo o es -Ch2OC(=O)R3A, en donde R3A es alquilo opcionalmente sustituido. En otras modalidades preferidas de cualquiera de las estructuras Dg ' y Dh ', R3 es metilo o es -CH2OC(=O)R3A, en donde R3A es alquilo opcionalmente sustituido. En otras modalidades preferidas de cualquiera de esas estructuras, R3 es -C(R3A)(R3A)C(=O)-Xc , en donde XC es -OR3B o -N(R3C)(R3C), en donde cada
R3A, R3B y R3C es independientemente hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o cicloalquilo opcionalmente sustituido. Preferentemente, R3 es -C(R3A)(R3A)C(=O)-N(R3C)(R3C), con cada R3A hidrógeno, un R3C hidrógeno y el otro R3C n-butilo o isopropilo como más preferido.
En otras modalidades preferidas de cualquiera de las estructuras Dg ,
Figure imgf000075_0001
Dg -3 , Dg -4 , Dg -5 , Dh , Dh -2 , R3 es etilo o propilo
En otras modalidades preferidas de cualquiera de las estructuras Dg - i , Dg -2 , Dg -3 , Dg -4 , Dg -5 , Dg -6, Dh -i y Dh -2 , el heterociclo de núcleo de tiazol
Figure imgf000075_0002
es reemplazado por
Figure imgf000075_0003
En algunas modalidades preferidas de cualquiera de las estructuras Dg , Dg -i , Dg -2 , Dg -3 , Dg -4 , Dg -5 , Dh , Dh -i , Dh -2,
Dh -3 y Dh -4 , R3 es metilo o es -CH2OC(=O)R3A, en donde R3A está opcionalmente alquilo sustituido. En otras modalidades preferidas de cualquiera de esas estructuras, R3 es -C(R3A)(r3A)C(=O)-Xc , en donde XC es -OR3B o -N(R3C)(R3C), en donde cada R3A, R3B y R3C es independientemente hidrógeno, alquilo opcionalmente sustituido o cicloalquilo opcionalmente sustituido. Preferentemente, R3 es -C(R3A)(R3A)C(=O)-N(R3C)(R3C), con cada R3A es hidrógeno, un R3C es hidrógeno y el otro R3C es n-butilo o isopropilo más preferido.
En otras modalidades preferidas de cualquiera de las estructuras Dg -3 , Dg -4 , Dg -5 , Dh -3 y Dh -4 , el heterociclo del núcleo de tiazol
Figure imgf000075_0004
es reemplazado por
Figure imgf000075_0005
En modalidades más preferidas, la tubulisina tiene una estructura Dg-3 o Dg-4 en donde m es 1, R3 está opcionalmente sustituido metilo, etilo o propilo, preferentemente metilo, etilo o propilo.
En modalidades particularmente preferidas, la tubulisina tiene la estructura Dg -3 , en donde m es 1, R3 es metilo, etilo o propilo, -OC(O)R2B es -O-C(O)H, O-C(O)-alquilo Ci -C6 o -Oalquenilo C2-C6 , opcionalmente sustituido, preferentemente -OC(O)CH3 , -OC(O)CH2CH3 , -OC(O)CH(CH3)2 , -OC(O)C(CH3)3, o -OC(O)CH=CH2.
En otras modalidades particularmente preferidas, la tubulisina tiene la estructura Dg -4 , en donde m es 1, R3 es metilo, etilo o propilo y -OCH2 R2B es -OCH3 , -OCH2CH3 , -OCH2CH2CH3 o -OCH2OCH3.
Las tubulisinas especialmente preferidas que tienen una amina terciaria N-terminal como sitio de conjugación tienen la estructura de
1
Figure imgf000076_0004
15
20
Figure imgf000076_0001
25
e n d o n d e R 2B e s - C H 3 , - C H 2 C H 3 , - C H 2 C H 2 C H 3 , - C H ( C H 3 ) 2 , - C H 2 C H ( C H 3 ) 2 , - C H 2 C ( C H 3 ) 3 y e l n i t r ó g e n o i n d i c a d o ( f ) e s e l s i t io d e c u a t e r n i z a c i ó n c u a n d o d ic h o s c o m p u e s t o s s e in c o r p o r a n e n u n L D C c o m o u n a u n id a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a (D ) .
30
O t r a s t u b u l i s i n a s e s p e c i a l m e n t e p r e f e r i d a s q u e t i e n e n u n a a m in a t e r c i a r i a N - t e r m i n a l c o m o s i t io d e c o n j u g a c i ó n t i e n e n la e s t r u c t u r a d e
35
40
Figure imgf000076_0002
45
50
Figure imgf000076_0003
55
e n d o n d e R 2B e s h id r ó g e n o , m e t i l o u - O C H 3 ( e s d e c i r , - O C H 2 R 2B e s u n s u s t i t u y e n t e m e t i l e t i l , m e t o x i m e t i l é t e r ) . 60 E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , la t u b u l i s i n a in c o r p o r a d a c o m o D e n u n L D C e s u n a t u b u l i s i n a d e o r ig e n n a t u r a l q u e i n c lu y e t u b u l i s i n a A , t u b u l i s i n a B , t u b u l i s i n a C , t u b u l i s i n a D , t u b u l i s i n a E , t u b u l i s i n a F , t u b u l i s i n a G , t u b u l i s i n a H , t u b u l i s i n a I, t u b u l i s i n a U , t u b u l i s i n a V , T u b u l i s i n a W , T u b u l i s i n a X o T u b u l i s i n a Z , c u y a s e s t r u c t u r a s v i e n e n d a d a s p o r la s i g u i e n t e e s t r u c t u r a y d e f i n i c i o n e s d e g r u p o s v a r i a b l e s e n la s q u e e l n i t r ó g e n o i n d i c a d o ( f ) e s e l s i t io d e c u a t e r n i z a c i ó n c u a n d o d i c h o s c o m p u e s t o s s e in c o r p o r a n e n u n L D C c o m o u n a u n id a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a (D ) : 65
Figure imgf000077_0001
TABLA 1. Algunas tubulisinas que se encuentran naturalmente
Figure imgf000077_0003
En modalidades particularmente preferidas de estructura Dg -6, la tubulisina cuaternizado es tubulisina M, en donde
R3 es -CH3 , R2 es C(=O)CH3 y R7B es hidrógeno.
En algunas modalidades a Lb-, o su precursor que contiene Lb' compuesto por Lo y D+ incorpora un fármaco tubulisina en la unidad de amina cuaternaria en donde Lb-, o su precursor que contiene Lb'- tiene una estructura correspondiente a cualquiera de los restos -Lr-D+ , Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+, Ls s -Lo-D+, Ls -D+ , M1-A, M2-A, M3-A M2-A1, M3-A1 M1-A(BU), M2-A(BU), M3-A(BU), M1-A1(BU), M2-A1(BU) o M3-Ai (BU) descritos en la presente descripción en donde D+ cuaterniza el fármaco auristatina. En modalidades preferidas, una tubulisina que tiene la estructura de Dg , Dg -1 , Dg -2 , Dg -3, Dg -4, Dg -5, Dg -6, Dh , Dh -1, Dh -2 , Dh -3 o Dh -4 reemplaza De , De -1 , De -2 , Df , Df -1 o Df/g -3 en cada modalidad que tenga esa estructura de auristatina en el nitrógeno de amina terciaria indicado (f).
Así, algunas modalidades preferidas de -Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+ tienen la estructura de:
Figure imgf000077_0002
Figure imgf000078_0001
en donde Lb, Lb', Qi , V, Z1 y Z2 son como se describieron previamente para modalidades de restos que contienen Lb y Lb' compuestos por una unidad de fármaco de auristatina cuaternizado y Lo y Y unidades de los mismos comprenden o consisten en una unidad SI, y J es -O-, -S- o N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido.
Otras modalidades preferidas de -Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+ tienen la estructura de:
Figure imgf000078_0002
en donde R2A, R3, R4, R4A, R4B, R5, R6, R7A y R8A son como se describe para fármacos tubulisina en forma libre por Dg -1 y Dh -1 , en donde Lb, Lb', Q1 , V, Z1 y Z2 son como se describieron previamente para modalidades de restos que contienen Lb y Lb' compuestos por una unidad de fármaco de auristatina cuaternizado y unidades Lo y Y de los mismos compuestas o que consisten en un Unidad SI, y J es -O-, -S- o N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido.
En modalidades más preferidas, R7A es fenilo, opcionalmente sustituido con -OH o R8A es metilo. En otras modalidades más preferidas, R4 o R4A y R4B son metilo. En otras modalidades preferidas, J es -O-.
En otras modalidades preferidas, -Lb-Lo-D+ o Lb'-L6-D+ tiene la estructura de:
Figure imgf000079_0001
En modalidades más preferidas, R7A es hidrógeno u -OH en la posición para.
En cualquiera de los restos que contienen Lb o Lb anteriores compuestos por una unidad de fármaco tubulisina cuaternizado, Lb' es un resto maleimida (M1) o Lb es un resto succinimida (M2) o ácido succínico-amida (M3).
En modalidades preferidas de uno cualquiera de los restos anteriores que contiene Lb o Lb' compuestos de un fármaco tubulisina cuaternizado, R8 y R9 son hidrógeno. En otras modalidades preferidas, V, Z1 y Z2 son =CH-. En modalidades más preferidas -OR2 es un éster o R3 es alquilo inferior. En otras modalidades más preferidas, J es -NH-. En modalidades aún más preferida Q1 se compone de un dipéptido unido covalentemente a J a través de un grupo funcional amida que es escindible por una proteasa intracelular o de regulación así proteólisis de que los comunicados de grupo una SI capaces de 1,6-fragmentacion.
En cualquiera de las modalidades anteriores que comprenden una unidad de fármaco de tubulisina cuaternizada, las modalidades más preferidas son aquellas en las que Lb'(es decir, M1) se reemplaza con un resto Lb que también está unido a un resto de direccionamiento para proporcionar un LDC en la que ese resto Lb es un resto M2 o M3. En consecuencia, las modalidades más preferidas de Lb-Lo-D+ o Lb'-Lo-D+ tienen la estructura de una de las siguientes:
Figure imgf000080_0001
1
Figure imgf000081_0005
15 20 25
Figure imgf000081_0001
30 35
Figure imgf000081_0002
40 45 50
Figure imgf000081_0003
55 60 65
Figure imgf000081_0004
en donde R2, R2A, R3, R4, R4A, R4B, R5, R6 , R7, R7A y R8A son como se describen para los fármacos de tubulisina en forma libre en la estructura Dg , Dg ', Dg -1 , Dh , Dh ' o Dh -1 , Lb, Lb', A, V y Z3 son como se describieron previamente para los restos que contienen Lb y Lb' correspondientes compuestos por un unidad de fármaco de auristatina cuaternizado y unidades Lo y Y de las mismas que comprenden o consisten en una unidad SI; E y J son independientemente -O-, -S- o -N(R33), en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; y R45 es CO2 H o CH2OH. En modalidades más preferidas, J es -NH-. En otras modalidades preferidas, E es -O-.
Son más preferidas aquellas modalidades en donde Lb'es un resto maleimida (M1) o Lb es un resto succinimida (M2) o amida-ácido (M3).
En otras modalidades más preferidas, Lb'-Lo-D+ tiene la estructura de:
Figure imgf000082_0001
en donde A, R2A, R3 , R45, R7B y R45 son como se definieron previamente. En modalidades más preferidas uno o ambos de V, Z3 son =CH-.
En modalidades más preferidas, un resto Lb'-Lo-D+ o -Lb-Lo-D+ compuesto por una unidad de fármaco tubulisina cuaternizado tiene la estructura de:
1
Figure imgf000083_0004
15
20
25
Figure imgf000083_0001
30
35
40
Figure imgf000083_0002
45
50
55
Figure imgf000083_0003
60 e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e a u n g r u p o s u l f h id r i l o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o . E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r id a s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o u n i d o c o v a l e n t e m e n t e a l S I a t r a v é s d e u n e n l a c e g l i c o s í d i c o t i e n e s u c a r b o n o a n o m é r i c o e n la c o n f i g u r a c i ó n p . E n o t r a s m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s R 45 e s - C H 2O H o - C O 2 H .
E n c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s a n t e r i o r e s p a r a e l r e s t o q u e c o n t i e n e L b -, L b '- , M 1- , M 2- o M 3 c o m p u e s t o p o r u n 65 f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a , R 3 e s p r e f e r e n t e m e n t e m e t i l o o R 2 e s p r e f e r e n t e m e n t e a c e t a t o o m e s p r e f e r e n t e m e n t e 1. A d e m á s , s e p r e f i e r e n p a r a t a l e s r e s t o s q u e c o n t i e n e n L b-, L b'- , M 1- , M 2 - o M 3 s o n a q u e l l o s e n d o n d e R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i l o y - O R 2A e s - O C ( O ) C H 3 , - O C H 3 , - O C H 2 C H 3 o - O C H 2 C H 2C H 3.
1
Figure imgf000084_0005
15
20
Figure imgf000084_0001
25
30
Figure imgf000084_0002
35
40
Figure imgf000084_0003
45 e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e a u n g r u p o s u l f h i d r i l o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o y d o n d e R 34 e s b e n c i lo , m e t i l o , i s o p r o p i l o , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
50
Figure imgf000084_0004
55 y R 35 e s m e t i l o , -( C H 2) 4- N H 2 , -( C H 2) 3 N H ( C = O ) N H 2 , ( C H 2) 3 N H ( C = N H ) N H 2 , o - ( C H 2) 2 C O 2 H , y R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H .
O t r a s m o d a l i d a d e s p a r t i c u l a r m e n t e p r e f e r i d a s t i e n e n la e s t r u c t u r a d e :
1
Figure imgf000085_0004
1
20
25
30
Figure imgf000085_0001
35
40
45
Figure imgf000085_0002
50
55
60
Figure imgf000085_0003
65
e n d o n d e R 2 y R 3 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e m e t i l o , e t i l o o p r o p i l o o R 2 e s - C ( O ) C H 3 y R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo .
En cualquiera de los restos Lb que contiene compuestos de un medicamento tubulisina cuaternizado, se prefieren particularmente aquellos en los que el resto de direccionamiento es un anticuerpo unido y en cualquiera de los restos M2- o M3- que contienen compuesto de un fármaco tubulisina cuaternizado, se prefieren particularmente aquellos en los que el grupo sulfhidrilo enlazado es de un resto dirigido a un anticuerpo.
En cualquiera de las estructuras para un resto que contiene Lb o Lb' compuesto por A, A se reemplaza con -Ai -Ao-, en donde esas subunidades de A son como se describen para tales restos cuando están presentes en los correspondientes Lb - o Lb'- que contienen restos que comprenden una unidad de fármaco de auristatina cuaternizado y Lo que tiene una unidad de extensión. Otros restos de este tipo se describen adicionalmente a continuación para unidades de extensión en M1-A, M2-A, M3A-A y M3B.
Para cualquiera de los restos que contienen Lb, Lb', M1, M2 o M3 compuestos por un fármaco de tubulisina cuaternizada, un grupo de extensión preferido corresponde en estructura a un ácido que contiene amina como se define aquí con y -ácido aminocaproico más preferido. Por tanto, una unidad de extensión preferida tiene la estructura de -(CH2 )5-C(=O)-. Otros grupos de extensión preferidos tienen la fórmula de -C(Ra1)(Ra2)-[C(Rb1)(Rb1)]m-(C=O)-NH-(CH2)m'-C(=O)-, -C(Ra1)(Ra2)-[C(Rb1)(Rb1)]m-(C=O)-NH-CH(CO2 H)-(CH2)m '-i-C(=O)-o-C(Ra1)(Ra2)-[C(Rb1)(Rb1)]m-(C=O)-NH-(CH2)m '-i-CH(CO2 H)-C(=O)- en donde m es un número entero que varía de 0 a 5 y m' es un número entero que varía de 1 a 5 donde Ra1 es hidrógeno o tiene la fórmula de -[C(R- )(R- )]-[C(R2)(R2N(R22)(R23) y en donde los otros grupos variables son como se definieron previamente. Para esas unidades de camilla, se prefiere Ra1 es -CH2 NH2.
Son más preferidas aquellas unidades de extensión que proporcionan restos M- -A, M2-A, M3A-A y M3B que tienen las estructuras de:
Figure imgf000086_0001
Otras unidades de extensión más preferidas son las que proporcionan restos M -A i -Ao-, M2-Ai -Ao, M3A-Ai -Ao- y M3B-A i -Ao- que tienen las estructuras de :
Figure imgf000086_0002
A ú n o t r a s u n id a d e s d e e x t e n s ió n m á s p r e f e r i d a s s o n a q u e l l a s q u e p r o p o r c i o n a n r e s t o s M 1- A i - A o - , M 2- A i - A o , M 3A- A i -A o - y M 3B- A - i- A o - q u e t i e n e n lo s e s t r u c t u r a s d e :
5
10
Figure imgf000087_0001
15
20
Figure imgf000087_0002
25
1 .6 T r a t a m i e n t o d e la s a f e c c i o n e s d e h ip e r p r o l i f e r a c i o n
L o s c o n j u g a d o s l i g a n d o - f á r m a c o s o n ú t i l e s p a r a i n h i b i r la m u l t i p l i c a c i ó n d e u n a c é l u l a t u m o r a l o c a n c e r o s a , p r o v o c a r a p o p t o s i s e n u n a c é lu l a t u m o r a l o c a n c e r o s a , o p a r a t r a t a r e l c á n c e r e n u n p a c ie n t e . L o s c o n j u g a d o s l i g a n d o -30 f á r m a c o s e p u e d e n u t i l i z a r e n c o n s e c u e n c i a e n u n a v a r i e d a d d e s i t u a c i o n e s p a r a e l t r a t a m i e n t o d e c á n c e r e s . L o s c o n j u g a d o s l i g a n d o - f á r m a c o s e p u e d e n u s a r p a r a a d m i n i s t r a r u n f á r m a c o a u n a c é lu l a t u m o r a l o c a n c e r o s a . S in e s t a r l i m i t a d o s p o r la t e o r í a , la u n i d a d d e l i g a n d o d e u n c o n j u g a d o l i g a n d o - f á r m a c o p u e d e u n i r s e o s e a s o c i a c o n u n a n t í g e n o a s o c i a d o a la s u p e r f i c i e c e l u l a r d e c é lu l a c a n c e r o s a o a u n a c é lu l a t u m o r a l o r e c e p t o r , y t r a s la u n ió n e l c o n j u g a d o l i g a n d o - f á r m a c o s e p u e d e i n t r o d u c i r ( i n t e r n a l i z a r ) d e n t r o d e u n a c é lu l a t u m o r a l o c é lu l a c a n c e r o s a a 35 t r a v é s d e e n d o c i t o s i s m e d i a d a p o r a n t í g e n o s o r e c e p t o r e s u o t r o m e c a n i s m o d e i n t e r n a l i z a c i ó n . E l a n t í g e n o p u e d e e s t a r u n id o a u n a c é lu l a t u m o r a l o c a n c e r o s a o p u e d e s e r u n a p r o t e í n a d e la m a t r i z e x t r a c e l u l a r a s o c i a d a c o n la c é lu l a t u m o r a l o c a n c e r o s a . U n a v e z d e n t r o d e la c é lu l a , a t r a v é s d e u n m e c a n i s m o d e e s c is ió n e n z i m á t i c o o n o e n z i m á t i c o , d e p e n d i e n d o d e lo s c o m p o n e n t e s d e l s i s t e m a e n l a z a d o r , e l f á r m a c o s e l i b e r a d e n t r o d e la c é lu l a . A l t e r n a t i v a m e n t e , la u n id a d d e f á r m a c o s e p u e d e e s c i n d i r d e l c o n j u g a d o l i g a n d o - f á r m a c o e n la s p r o x i m i d a d e s d e la 40 c é lu l a t u m o r a l o la c é l u l a c a n c e r o s a , y la u n id a d d e f á r m a c o p u e d e p e n e t r a r p o s t e r i o r m e n t e e n la c é lu l a .
L o s c o n j u g a d o s l i g a n d o - f á r m a c o p u e d e n p r o p o r c i o n a r u n d i r e c c i o n a m i e n t o d e f á r m a c o s c o n t r a e l c á n c e r o t u m o r e s e s p e c í f i c o s d e la c o n j u g a c i ó n , r e d u c i e n d o a s í la t o x i c i d a d g e n e r a l d e l f á r m a c o .
45 L a s u n i d a d e s d e e n l a z a d o r p u e d e n e s t a b i l i z a r lo s c o n j u g a d o s l i g a n d o - f á r m a c o e n la s a n g r e , p e r o p u e d e n l i b e r a r f á r m a c o u n a v e z d e n t r o d e la c é lu l a .
L a u n id a d d e l i g a n d o p u e d e u n i r s e a la c é lu l a t u m o r a l o la c é lu l a c a n c e r o s a .
50 L a u n id a d d e l i g a n d o p u e d e u n i r s e a u n a n t í g e n o d e u n a c é lu l a t u m o r a l o c é lu l a c a n c e r o s a q u e s e e n c u e n t r a e n la s u p e r f i c i e d e la c é lu l a t u m o r a l o c a n c e r o s a .
L a u n id a d d e l i g a n d o p u e d e u n i r s e a u n a n t í g e n o d e la c é l u l a t u m o r a l o d e la c é lu l a c a n c e r o s a q u e e s u n a p r o t e í n a d e la m a t r i z e x t r a c e l u l a r a s o c i a d a c o n la c é lu l a t u m o r a l o la c é lu l a c a n c e r o s a .
55
L a e s p e c i f i c i d a d d e la u n id a d d e l i g a n d o p a r a u n a c é lu l a t u m o r a l o u n a c é lu l a c a n c e r o s a e n p a r t i c u l a r p u e d e s e r i m p o r t a n t e p a r a d e t e r m i n a r lo s t u m o r e s o c á n c e r e s q u e s e t r a t a n c o n m a y o r e f i c a c ia . P o r e je m p lo , u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o q u e t i e n e u n a u n id a d d e l i g a n d o B R 96 p u e d e s e r ú t i l p a r a t r a t a r c a r c i n o m a s p o s i t i v o s a a n t íg e n o , i n c l u i d o s lo s d e p u lm ó n , m a m a , c o lo n , o v a r i o s y p á n c r e a s . L o s c o n j u g a d o s l i g a n d o - f á r m a c o q u e t i e n e n u n a u n id a d 60 d e l i g a n d o d e u n ió n a n t i - C D 3 0 o a n t i - C D 7 0 p u e d e n s e r ú t i l e s p a r a t r a t a r n e o p l a s i a s h e m a t o l ó g i c a s .
O t r o s t i p o s p a r t i c u l a r e s d e c á n c e r e s q u e p u e d e n t r a t a r s e c o n c o n j u g a d o s d e u n f á r m a c o l i g a n d o i n c lu y e n , p e r o n o s e l im i t a n a , lo s s i g u i e n t e s t u m o r e s s ó l id o s , c á n c e r e s t r a n s m i t i d o s p o r la s a n g r e , l e u c e m i a s a g u d a s y c r ó n i c a s y l i n f o m a s .
65
L o s t u m o r e s s ó l i d o s in c lu y e n , p e r o n o s e l im i t a n a f i b r o s a r c o m a , m i x o s a r c o m a , l i p o s a r c o m a , c o n d r o s a r c o m a , s a r c o m a o s t e o g é n i c o , c o r d o m a , a n g i o s a r c o m a , e n d o t e l i o s a r c o m a , l i n f a n g i o s a r c o m a , l i n f a n g i o e n d o t e l i o s a r c o m a , s i n o v i o m a , m e s o t e l i o m a , t u m o r d e E w in g , l e i o m i o s a r c o m a , r a b d o m i o s a r c o m a , c á n c e r d e c o lo n , c á n c e r c o lo r r e c t a l , c á n c e r d e r iñ ó n , c á n c e r d e p á n c r e a s , c á n c e r ó s e o , c á n c e r d e m a m a , c á n c e r d e o v a r io , c á n c e r d e p r ó s t a t a , c á n c e r 5 d e e s ó f a g o , c á n c e r d e e s t ó m a g o , c á n c e r b u c a l , c á n c e r n a s a l , c á n c e r d e g a r g a n t a , c a r c i n o m a d e c é l u l a s e s c a m o s a s , c a r c i n o m a d e c é lu l a s b a s a le s , a d e n o c a r c i n o m a , c a r c i n o m a d e g l á n d u l a s s u d o r í p a r a s , c a r c i n o m a d e g l á n d u l a s s e b á c e a s , c a r c i n o m a p a p i la r , a d e n o c a r c i n o m a s p a p i la r e s , c i s t a d e n o c a r c i n o m a , c a r c i n o m a m e d u la r , c a r c i n o m a b r o n c o g é n i c o , c a r c i n o m a d e c é lu l a s r e n a le s , h e p a t o m a , c a r c i n o m a d e la s v í a s b i l i a r e s , c o r i o c a r c i n o m a , s e m in o m a , c a r c i n o m a e m b r i o n a r i o , t u m o r d e W i l m s , c á n c e r d e c u e l l o u t e r in o , c á n c e r d e ú t e r o , c á n c e r t e s t i c u l a r , c a r c i n o m a d e 10 p u lm ó n d e c é l u l a s p e q u e ñ a s , c a r c i n o m a d e v e j ig a , c á n c e r d e p u lm ó n , c a r c i n o m a e p i t e l i a l , g l i o m a , g l i o b l a s t o m a m u l t i f o r m e , a s t r o c i t o m a , m e d u l o b l a s t o m a , c r a n e o f a r i n g i o m a , e p e n d i m o m a , p in e a lo m a , h e m a n g i o b l a s t o m a , n e u r o m a a c ú s t i c o , o l i g o d e n d r o g l i o m a , m e n i n g i o m a , c á n c e r d e p ie l , m e la n o m a , n e u r o b l a s t o m a y r e t i n o b l a s t o m a .
L o s c á n c e r e s d e t r a n s m i s i ó n s a n g u í n e a in c lu y e n , p e r o n o s e l im i t a n a , le u c e m ia l i n f o b l á s t i c a a g u d a " A L L " , l e u c e m ia 15 l i n f o b l á s t i c a a g u d a d e c é l u l a s B , l e u c e m ia a g u d a l i n f o b l á s t i c a d e c é lu l a s T , l e u c e m i a m i e l o b l á s t i c a a g u d a " A M L " , l e u c e m i a p r o m i e l o c í t i c a a g u d a " A P L " , l e u c e m i a m o n o b l á s t i c a a g u d a , l e u c e m i a e r i t r o l e u c é m i c a , l e u c e m ia m e g a c a r i o b l á s t i c a a g u d a , l e u c e m ia m i e l o m o n o c í t i c a a g u d a , l e u c e m ia n o l i n f o c í t i c a a g u d a , l e u c e m ia i n d i f e r e n c i a d a a g u d a , l e u c e m i a m i e l o c í t i c a c r ó n i c a " L M C " , l e u c e m i a l i n f o c í t i c a c r ó n i c a " L L C " , l e u c e m i a d e c é l u l a s p i l o s a s y m i e lo m a m ú l t i p le .
20
L a s l e u c e m i a s a g u d a s y c r ó n i c a s in c lu y e n , p e r o n o s e l im i t a n a , l e u c e m i a s l i n f o b lá s t i c a s , m i e l ó g e n a s , l i n f o c í t i c a s y m i e l o c í t i c a s .
L o s l i n f o m a s i n c lu y e n , e n t r e o t r o s , e n f e r m e d a d d e H o d g k in , l i n f o m a n o H o d g k in , m i e l o m a m ú l t i p le , 25 m a c r o g l o b u l i n e m i a d e W a l d e n s t r o m , e n f e r m e d a d d e c a d e n a s p e s a d a s y p o l i c i t e m i a v e r a .
L o s c á n c e r e s , i n c lu id o s , e n t r e o t r o s , u n t u m o r , m e t á s t a s i s u o t r a s e n f e r m e d a d e s o t r a s t o r n o s c a r a c t e r i z a d o s p o r c é l u l a s h ip e r p r o l i f e r a n t e s , p u e d e n t r a t a r s e o i n h i b i r s e s u p r o g r e s i ó n m e d i a n t e la a d m i n i s t r a c i ó n d e u n a c o m p o s i c i ó n d e A D C .
30
S e p r o p o r c i o n a n m é t o d o s p a r a t r a t a r e l c á n c e r , q u e in c l u y e n a d m i n i s t r a r a u n p a c i e n t e q u e lo n e c e s i t e u n a c a n t i d a d e f i c a z d e u n a c o m p o s i c i ó n d e L D C y u n a g e n t e q u i m i o t e r a p é u t i c o . P u e d e q u e n o s e h a y a e n c o n t r a d o q u e e l c á n c e r q u e s e v a a t r a t a r c o n u n q u i m i o t e r á p i c o e n c o m b i n a c i ó n c o n u n L D C s e a r e f r a c t a r i o a l a g e n t e q u i m i o t e r a p é u t i c o . E l c á n c e r q u e s e v a a t r a t a r c o n u n q u i m i o t e r á p i c o e n c o m b i n a c i ó n c o n u n A D C p u e d e s e r r e f r a c t a r i o a l a g e n t e 35 q u i m i o t e r a p é u t i c o . L a s c o m p o s i c i o n e s d e L D C s e p u e d e n a d m i n i s t r a r a u n p a c ie n t e q u e t a m b i é n s e h a s o m e t i d o a c i r u g í a c o m o t r a t a m i e n t o p a r a e l c á n c e r .
E l p a c i e n t e t a m b i é n p u e d e r e c i b i r u n t r a t a m i e n t o a d ic i o n a l , c o m o r a d i o t e r a p i a . E l c o n j u g a d o l i g a n d o - f á r m a c o s e p u e d e a d m i n i s t r a r a l m i s m o t i e m p o q u e e l a g e n t e q u i m i o t e r a p é u t i c o o c o n r a d i o t e r a p i a . E l a g e n t e q u i m i o t e r a p é u t i c o 40 o la r a d i o t e r a p i a s e p u e d e n a d m i n i s t r a r a n t e s o d e s p u é s d e la a d m i n i s t r a c i ó n d e u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l ig a n d o .
S e p u e d e a d m i n i s t r a r u n a g e n t e q u i m i o t e r a p é u t i c o d u r a n t e u n a s e r ie d e s e s io n e s . P u e d e a d m i n i s t r a r s e u n o c u a l q u i e r a o u n a c o m b i n a c i ó n d e lo s a g e n t e s q u im i o t e r a p é u t i c o s , t a l e s c o m o a g e n t e s q u i m i o t e r a p é u t i c o s e s t á n d a r d e c u id a d o .
45
L o s m é t o d o s d e t r a t a m i e n t o d e l c á n c e r c o n u n c o n j u g a d o l i g a n d o - f á r m a c o p u e d e n p r o p o r c i o n a r u n a a l t e r n a t i v a a la q u i m i o t e r a p i a o la r a d i o t e r a p i a c u a n d o la q u i m i o t e r a p i a o la r a d i o t e r a p i a h a n d e m o s t r a d o o p u e d e n r e s u l t a r d e m a s i a d o t o x i c a s , p o r e je m p lo , p r o d u c e n e f e c t o s s e c u n d a r i o s in a c e p t a b l e s o i n s o p o r t a b l e s p a r a e l s u j e t o q u e e s t á s ie n d o t r a t a d o . E l p a c i e n t e q u e e s t á s ie n d o t r a t a d o p u e d e , o p c i o n a l m e n t e , s e r t r a t a d o c o n o t r o t r a t a m i e n t o c o n t r a e l 50 c á n c e r , c o m o c i r u g ía , r a d i o t e r a p i a o q u i m i o t e r a p i a , d e p e n d i e n d o d e q u é t r a t a m i e n t o s e c o n s i d e r e a c e p t a b l e o s o p o r t a b l e .
1 .7 C o m p o s i c i o n e s f a r m a c é u t i c a s q u e c o m p r e n d e n u n L D C
55 L a p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n p r o p o r c i o n a c o m p o s i c i o n e s f a r m a c é u t i c a s q u e c o m p r e n d e n u n a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e s c r i t o e n la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n y u n p o r t a d o r f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e . L a s c o m p o s i c i o n e s f a r m a c é u t i c a s p u e d e n e s t a r e n c u a l q u i e r f o r m a q u e p e r m i t a q u e u n L D C s e a d m i n i s t r e a u n p a c i e n t e p a r a e l t r a t a m i e n t o d e u n t r a s t o r n o a s o c i a d o c o n la e x p r e s i ó n d e l a n t í g e n o a l q u e s e u n e e l a n t i c u e r p o d e A D C . P o r e je m p lo , la s c o m p o s i c i o n e s f a r m a c é u t i c a s p u e d e n e s t a r e n f o r m a l í q u i d a o s ó l id a l i o f i l i z a d a .
60
L a s c o m p o s i c i o n e s f a r m a c é u t i c a s s e p u e d e n f o r m u l a r p a r a p e r m i t i r q u e u n c o m p u e s t o e s t é b io d i s p o n i b l e t r a s la a d m i n i s t r a c i ó n d e la c o m p o s i c i ó n a u n p a c ie n t e . T a l e s c o m p o s i c i o n e s p u e d e n t o m a r la f o r m a d e u n a o m á s u n id a d e s d e d o s i f i c a c i ó n , d o n d e , p o r e je m p lo , u n s ó l id o l i o f i l i z a d o p u e d e p r o p o r c i o n a r u n a ú n ic a u n id a d d e d o s i f i c a c i ó n c u a n d o s e r e c o n s t i t u y e c o m o u n a s o l u c i ó n o s u s p e n s i ó n t r a s la a d ic i ó n d e u n v e h í c u l o l í q u i d o a d e c u a d o .
65
Los materiales usados para preparar las composiciones farmacéuticas son preferentemente no tóxicos en las cantidades usadas. Será evidente para los expertos en la técnica que la dosis optima del (de los) ingrediente(s) activo(s) en la composición farmacéutica dependerá de una variedad de factores. Los factores de interés incluyen, sin limitación, el tipo de animal (por ejemplo, un ser humano), la forma particular de la composición farmacéutica, la forma de administración y la composición empleada.
La composición farmacéutica puede estar, por ejemplo, en forma líquida. El líquido puede ser útil para administrarlo mediante inyección. En una composición para administración por inyección, también se pueden incluir uno o más de un tensioactivo, conservante, agente humectante, agente dispersante, agente de suspensión, tampón, estabilizador y agente isotónico.
Las composiciones líquidas, ya sean soluciones, suspensiones u otra forma similar, pueden incluir, además, uno o más de los siguientes: diluyentes estériles tales como agua para inyección, solución salina, preferentemente solución salina fisiológica, solución de Ringer, cloruro de sodio isotónico, aceites fijos tales como mono o diglicéridos sintéticos que pueden servir como disolvente o medio de suspensión, polietilenglicoles, glicerina, ciclodextrina, propilenglicol u otros disolventes; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metil parabeno; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito de sodio; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminotetraacético; tampones tales como aminoácidos, acetatos, citratos o fosfatos; detergentes tales como tensioactivos no iónicos, polioles; y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro de sodio o dextrosa. Una composición parenteral puede envasarse en una ampolla, una jeringa desechable o un frasco de dosis múltiples fabricado de vidrio, plástico u otro material. La solución salina fisiológica es un adyuvante ilustrativo. Una composición farmacéutica inyectable es preferentemente estéril.
La cantidad del conjugado que es eficaz en el tratamiento de un trastorno o afección particular dependerá de la naturaleza del trastorno o afección y puede determinarse mediante técnicas clínicas estándar. Además, pueden emplearse opcionalmente ensayos in vitro o in vivo para ayudar a identificar los intervalos de dosificación óptimos. La dosis precisa que se empleará en las composiciones también dependerá de la vía de administración y de la gravedad de la enfermedad o trastorno, y debería decidirse según el criterio del médico y las circunstancias de cada paciente.
La composición farmacéutica comprende una cantidad eficaz de una composición de LDC de manera que se obtendrá una dosis adecuada para la administración a un sujeto que la necesite. Típicamente, esta cantidad es al menos aproximadamente 0,01 % en peso de la composición farmacéutica.
Para la administración intravenosa, la composición farmacéutica puede comprender de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg de una composición de LDC por kg de peso corporal del animal. En un aspecto, la composición farmacéutica puede incluir de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg de una composición de ADC por kg de peso corporal del animal. En otro aspecto, la cantidad administrada estará en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 25 mg/kg de peso corporal de una composición de ADC.
Generalmente, la dosis de una composición de LDC que se administra a un paciente es típicamente de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg del peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, la dosis administrada a un paciente está entre aproximadamente 0,01 mg/kg y aproximadamente 15 mg/kg del peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, la dosis administrada a un paciente está entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 15 mg/kg del peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, la dosis administrada a un paciente está entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 20 mg/kg del peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, la dosis administrada está entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 5 mg/kg o aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, la dosis administrada está entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 15 mg/kg del peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, la dosis administrada está entre aproximadamente 1 mg/kg y aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal del sujeto. En algunas modalidades, la dosis administrada está entre aproximadamente 0,1 a 4 mg/kg, preferentemente de 0,1 a 3,2 mg/kg, o con mayor preferencia de 0,1 a 2,7 mg/kg del peso corporal del sujeto durante un ciclo de tratamiento.
Un LDC puede administrarse por cualquier vía conveniente, por ejemplo, mediante infusión o inyección en bolo, mediante absorción a través de revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal). La administración puede ser sistémica o local. Se conocen varios sistemas de administración, por ejemplo, encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas, cápsulas, y pueden usarse para administrar un compuesto.
Los conjugados pueden formularse de acuerdo con procedimientos de rutina como una composición farmacéutica adaptada para la administración intravenosa a animales, particularmente seres humanos. Generalmente, los portadores o vehículos para la administración intravenosa son soluciones tampón acuosas isotónicas y estériles. Cuando sea necesario, las composiciones pueden incluir, además, un agente solubilizante. Las composiciones para la administración intravenosa pueden comprender opcionalmente un anestésico local como lidocaína para aliviar el dolor en el lugar de la inyección. Generalmente, los ingredientes se suministran por separado o mezclados en forma d e d o s i f i c a c i ó n u n i t a r ia , p o r e je m p lo , c o m o u n p o lv o l i o f i l i z a d o s e c o o c o n c e n t r a d o l ib r e d e a g u a e n u n r e c i p i e n t e h e r m é t i c a m e n t e c e r r a d o c o m o u n a a m p o l l a o b o ls i t a q u e in d i c a la c a n t i d a d d e a g e n t e a c t i v o . C u a n d o s e v a a a d m i n i s t r a r u n c o n j u g a d o p o r in f u s ió n , s e p u e d e d is p e n s a r , p o r e je m p lo , c o n u n a b o t e l l a d e in f u s ió n q u e c o n t e n g a a g u a o s o lu c i ó n s a l in a d e c a l id a d f a r m a c é u t i c a e s t é r i l . C u a n d o e l c o n j u g a d o s e a d m i n i s t r a m e d i a n t e i n y e c c i ó n , s e 5 p u e d e p r o p o r c i o n a r u n a a m p o l l a d e a g u a e s t é r i l p a r a in y e c c i ó n o s o l u c i ó n s a l in a p a r a q u e lo s i n g r e d i e n t e s s e p u e d a n m e z c l a r a n t e s d e la a d m i n i s t r a c i ó n .
L a s c o m p o s i c i o n e s f a r m a c é u t i c a s s e f o r m u l a n g e n e r a l m e n t e c o m o e s t é r i l e s , s u s t a n c i a l m e n t e i s o t ó n i c a s y e n t o t a l c o n f o r m i d a d c o n t o d a s la s n o r m a t i v a s d e B u e n a s P r á c t i c a s d e F a b r i c a c i ó n ( G M P ) d e la A d m i n i s t r a c i ó n d e D r o g a s y 10 A l i m e n t o s d e lo s E s t a d o s U n id o s .
L a s c o m p o s i c i o n e s f a r m a c é u t i c a s d e la p r e s e n t e d e s c r i p c i ó n c o m p r e n d e n c o m p o s i c i o n e s d e L D C d e la p r e s e n t e i n v e n c i ó n y u n v e h í c u l o f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e . E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , t o d a s , o s u s t a n c i a l m e n t e t o d a s , o m á s d e l 50 % d e lo s L D C e n la c o m p o s i c i ó n f a r m a c é u t i c a c o m p r e n d e n u n a s u c c i n i m i d a h i d r o l i z a d a t i o -15 s u s t i t u i d a . E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , m á s d e l 55 % , 60 % , 65 % , 70 % , 75 % , 80 % , 85 % , 90 % , 91 % , 92 % , 93 % , 94 % , 95 % , 96 % , 97 % , 98 % o 99 % d e lo s c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l i g a n d o p r e s e n t e s e n la c o m p o s i c i ó n f a r m a c é u t i c a c o m p r e n d e n u n a s u c c i n i m i d a t i o - s u s t i t u i d a h i d r o l i z a d a .
1 .8 P r e p a r a c i ó n
20
25
Figure imgf000090_0001
30
35
Figure imgf000090_0002
40
45
Figure imgf000090_0003
50
E l e s q u e m a 1 e s u n a p r e p a r a c i ó n i l u s t r a t i v a d e u n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e f ó r m u l a L b '- A 1( B U ) - A o - Y ( W ) - D e n d o n d e L b ' e s u n r e s t o M 1, Y e s u n r e s t o a u t o d e s t r u c t i v o P A B ( S I ) , W e s u n r e s t o c a r b o h i d r a t o ( S u ) u n id o a S I a t r a v é s d e u n e n la c e g l i c o s í d i c o e n d o n d e d ic h o e n l a c e s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a , y D e s u n a a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d o . E n e s e r e s t o L b '-L o -D p a r t i c u la r , la e s t r u c t u r a L b '- A 1 ( B U ) - r e p r e s e n t a u n r e s t o Lss i l u s t r a t i v o .
55
Figure imgf000091_0001
E l e s q u e m a 3 e s u n a p r e p a r a c i ó n i l u s t r a t i v a d e u n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r L b ' - A i ( B U ) - A o - Y ( W ) - D e n d o n d e L b ' e s u n r e s t o M 1, Y e s u n P A B a u t o d e s t r u c t i v o ( S I ) , W e s u n r e s t o c a r b o h i d r a t o ( S u ) u n id o a S I a t r a v é s d e u n e n l a c e g l i c o s í d i c o e n d o n d e d i c h o e n l a c e s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a , y D e s u n d í m e r o d e f e n a z i n a c u a t e r n i z a d o . E n e s e c o m p u e s t o L b '- L o - D p a r t i c u la r , la e s t r u c t u r a L b '- A 1- A o - r e p r e s e n t a u n r e s t o M 1- A - q u e t i e n e d o s 5 s u b u n i d a d e s d e e x t e n s i ó n ( e s d e c i r , - A - e s - A 1- A o - ) .
E s q u e m a 4
10
15
20
25
Figure imgf000092_0001
30
Figure imgf000092_0002
35
40
45
50
Figure imgf000092_0003
55
60
Figure imgf000092_0004
65
E l e s q u e m a 5 e s u n a p r e p a r a c i ó n i l u s t r a t i v a d e u n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r L b ' - A - W - Y - D y u n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r L b '- A ( B U ) - W - Y - D o b t e n i d o a p a r t i r d e l a c o p l a m i e n t o p e p t í d i c o d e l i n t e r m e d i o N H 2 - W - Y - D d e l e s q u e m a 4 c o n u n i n t e r m e d i o L b '- A - C O 2 H o L b ' - A ( B U ) - C O 2 H e n d o n d e L b 'e s u n r e s t o m a l e i m i d a ( M 1). L o s p r o d u c t o s a s í f o r m a d o s , M 1- A - W - Y - D y M 1- A ( B U ) - W - Y - D s o n u n e j e m p l o d e c o m p u e s t o s e n l a z a d o r e s d e f á r m a c o s L b '-L o -D 5 q u e t i e n e n u n a u n id a d d e f á r m a c o t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d o .
E s q u e m a 6
Figure imgf000093_0001
50
Esquema 7
Figure imgf000094_0001
El esquema 7 representa preparaciones ilustrativas de tubulisinas de fórmula Dg-4, en donde R7B es hidrógeno y R2B es hidrógeno, metilo o etilo, que tienen un éter (es decir, metil, etil o propil éter) como sustituyente unido a O que reemplaza al acetato en el resto tubuvalina de la tubulisina M y que no tienen el grupo funcional N, O-acetal químicamente inestable de tales tubulisinas. Los compuestos 64-66 se estabilizan adicionalmente en comparación con la tubulisina M reemplazando el sustituyente acetato de tubuvalina hidrolíticamente inestable con un resto éter. preferentemente metilo; y donde la línea ondulada indica el punto de unión a lo que resta de Dg o Dh.
En modalidades preferidas de estructura Dg o Dh, un R7 es hidrógeno y el otro R7 es un arilalquilo opcionalmente sustituido que tiene la estructura de
Figure imgf000094_0002
en donde R7B es -H u -OH; y donde la línea ondulada indica el punto de unión a lo que resta de Dg o Dh.
En otras modalidades de estructura Dg y Dh, un R7 es hidrógeno o alquilo inferior, preferentemente hidrógeno o metilo, con mayor preferencia hidrógeno, y el otro R7 es arilalquilo opcionalmente sustituido que tiene la estructura de uno de:
Figure imgf000095_0001
en donde Z es un alquileno opcionalmente sustituido o un alquenileno opcionalmente sustituido, R7B es hidrógeno o un sustituyente unido a O, preferentemente hidrógeno u -OH en la posición para, R8A es hidrógeno o alquilo inferior, preferentemente metilo, y el subíndice n es 0, 1 o 2, preferentemente 0 o 1; y donde la línea ondulada indica el punto de unión a lo que resta de Dg o Dh. En otras modalidades más de la estructura Dg y Dh -N(R7)(R7) es -NH(alquilo C1-Ca) en donde el alquilo C1-C6 está opcionalmente sustituido con -CO2 H o un éster del mismo, o con un fenilo opcionalmente sustituido. En modalidades preferidas -N(R7)(R7) se selecciona del grupo que consiste en -NH(CH3 ), -CH2CH2 Ph, and -CH2-CO2 H, -CH2CH2CO2 H y -CH2CH2CH2CO2 H.
En algunas modalidades de la estructura Dg ' y Dh ', R7 y R10 junto con los átomos a los que están unidos definen una estructura opcionalmente sustituida de 5 o 6 miembros.
Esquema 8
Figure imgf000095_0002
El esquema 8 representa una preparación ilustrativa de compuestos enlazadores de fármacos de fórmula Lb'-Lo-D+ en donde D+ es un compuesto de tubulisina cuaternizado que tiene un resto éter como sustituyente unido a O que reemplaza al acetato en el resto tubuvalina de la tubulisina M y que no tiene el grupo funcional N,O-acetal químicamente inestable de tales tubulisinas. En los compuestos ejemplificados, -Lo-D+ tiene la estructura de Aa-Yy(Ww )-D+ en donde los subíndices a, y, y w son cada uno. Por lo tanto, los compuestos 78-80 representan compuestos enlazadores de fármacos ilustrativos en donde W es un resto carbohidrato unido a una unidad espaciadora autodestructiva (Y) que tiene la estructura de un resto PAB a través de un enlace glicosídico escindible por una glicosidasa a la que está unido D+ en donde D+ es un compuesto de tubulisina cuaternizado. Los compuestos 78-80 representan además compuestos enlazadores de fármacos cuyos componentes Lb' están compuestos por un resto M1 y una unidad básica para proporcionar un componente enlazador autoestabilizante (Ls s ) d e u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o a p a r t i r d e s u c o n d e n s a c i ó n c o n u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o q u e t i e n e u n g r u p o f u n c i o n a l t i o l r e a c t i v o c o m o e n u n t i o l d e c i s t e í n a d e u n a n t i c u e r p o .
5
Figure imgf000096_0001
10
Figure imgf000096_0002
15
20
25
Figure imgf000096_0003
30
E s q u e m a 10
35
40
45
Figure imgf000096_0004
50
55
60
Figure imgf000096_0005
65
Figure imgf000097_0001
L o s e s q u e m a s 9 y 10 j u n t o s p r o p o r c i o n a n u n a p r e p a r a c i ó n a l t e r n a t i v a d e c o m p u e s t o s e n l a z a d o r e s d e f á r m a c o s d e f ó r m u l a L b '- L o - D e n d o n d e - L o - D t i e n e la e s t r u c t u r a d e A a - Y y ( W w ) - D e n d o n d e lo s s u b í n d i c e s a , y , y w s o n c a d a u n o , e n d o n d e - A - e s - A i - A o - . P o r lo t a n t o , e l c o m p u e s t o 104 r e p r e s e n t a u n c o m p u e s t o f á r m a c o e n l a z a d o r i l u s t r a t i v o d e f ó r m u l a L b - A i ( B U ) - A o - Y ( W ) - D e n d o n d e W e s u n r e s t o c a r b o h i d r a t o u n id o a u n a u n id a d e s p a c i a d o r a a u t o d e s t r u c t i v a ( Y ) q u e t i e n e la e s t r u c t u r a d e u n r e s t o P A B a t r a v é s d e u n e n l a c e g l i c o s í d i c o e s c i n d i b l e p o r u n a g l i c o s i d a s a a la q u e e s t á u n id o D e n d o n d e D e s u n c o m p u e s t o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d o . P a r a e l c o m p u e s t o 104, la t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d o e s la d e T u b u l i s i n a M q u e t i e n e u n r e s t o é t e r q u e r e t i e n e e l c o m p o n e n t e a c e t a t o d e t u b u v a l i n a p e r o n o t i e n e e l g r u p o f u n c i o n a l N , O - a c e t a l q u í m i c a m e n t e i n e s t a b l e d e t a l e s t u b u l i s i n a s .
E s q u e m a 11
Figure imgf000097_0002
Figure imgf000098_0001
El esquema 11 representa una síntesis ilustrativa de un intermedio W 'w-Yy-D+ para la preparación de un compuesto fármaco enlazador Lb'-Lo-D+ de fórmula Dg -3 , en donde R7B es -H y R2B es metilo, y en donde los subíndices w e y son cada uno 1 y donde W' es un precursor de W en un compuesto fármaco enlazador o conjugado de fármaco ligando preparado a partir del compuesto intermedio de compuesto fármaco enlazador. El compuesto 111 representa además un compuesto intermedio fármaco enlazador en donde W es un resto dipéptido e Y es una unidad espaciadora autodestructiva ejemplificada por un resto PAB. En el Compuesto 111 ese dipéptido está ejemplificado por -valina-glutamato-y D+ está ejemplificado por Tubulisina M cuaternizado.
Figure imgf000098_0002
El esquema 12 ejemplifica la preparación de un compuesto fármaco-enlazador Lb'-Lo-D+ de fórmula Dg-3, en donde R7B es -H y R2B es metilo, a partir de un intermedio de fórmula H-Ww-Yy-D+, a saber, el Compuesto 111, en donde los subíndices w e y son cada uno 1, y W, Y y D+ se ejemplifican mediante un resto dipeptídico (-valina-glutamato-), un resto PAB autodestructivo y tubulisina M cuaternizado, respectivamente. El compuesto 113 representa además el producto que tiene la fórmula de Lb'-A(BU)-W-Y-D+ a partir de la incorporación de un precursor del resto de unión c o v a l e n t e d e l i g a n d o ( L b ') e n u n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r , e n d o n d e L b '- A ( B U ) - s e c o m p o n e d e u n r e s t o m a l e i m i d a ( M 1), u n a U n id a d d e e x t e n s i ó n ( A ) s u s t i t u i d a p o r u n a U n id a d b á s ic a ( B U ) c o n d e n s a n d o e l C o m p u e s t o 6 q u e t i e n e r e s t o s M 1 y u n p r e c u r s o r d e U n i d a d d e e x t e n s i ó n s u s t i t u i d o c o n B U ( A a ') s u s t i t u i d o e n d o n d e e l s u b í n d i c e a e s 1 , e n d o n d e e s e p r e c u r s o r e n la c o n d e n s a c i ó n c o n W w - Y y - D d e l c o m p u e s t o 111 c o m p l e t a r á la f o r m a c i ó n d e l c o m p o n e n t e L o d e la u n id a d e n l a z a d o r a L b '- L 0- d e s p u é s d e la d e s p r o t e c c i ó n d e B O C .
Figure imgf000099_0001
Figure imgf000100_0001
r=c c c
152, R=CH(CH3), 157, R=CH(CH3)2
153, R=CH2CH(CH3)2 158, R=CH2CH(CH3)2
154, R=CH2C(CH3)3 159, R=CH2C(CH3)3
Los esquemas 13 y 14 juntos proporcionan síntesis ilustrativas de tubulisinas en donde el resto acetato del componente tubuvalina de Tubulisina M ha sido reemplazado por otros restos unidos a O que tienen la fórmula -OC(O)R2B como se muestra en la estructura Dg-3.
Figure imgf000100_0002
Figure imgf000101_0001
E l e s q u e m a 15 m u e s t r a u n a s í n t e s i s i l u s t r a t i v a d e u n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r p a r a la p r e p a r a c i ó n d e c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l i g a n d o q u e t i e n e n u n a u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a n o c u a t e r n i z a d o , e n d o n d e e l s u s t i t u y e n t e a c e t a t o u n i d o a O d e l c o m p o n e n t e d e t u b u v a l i n a d e d e s - m e t i l t u b u l i s i n a M s e h a s u s t i t u i d o p o r u n r e s t o é t e r c o m o s u s t i t u y e n t e u n id o a O u n id o a y e n d o n d e la u n i d a d d e f á r m a c o d e T u b ( O C H 3 ) e s t á u n i d a a t r a v é s d e s u c o m p o n e n t e N - t e r m i n a l a u n a u n id a d e n l a z a d o r a m e d i a n t e e l g r u p o f u n c i o n a l c a r b o n i l o d e la u n id a d d e e x t e n s ió n . U n L D C d e l C o m p u e s t o 172 r e p r e s e n t a u n c o n j u g a d o n o e s c i n d i b l e ( e s d e c i r , e s r e s i s t e n t e a la l i b e r a c ió n m e d i a d a p o r p r o t e a s a d e d e s - m e t i l T u b u l i s i n a M ( O C H 3 ) - O H l ib r e y t i e n e la f ó r m u l a g e n e r a l M 1- A D e n d o n d e M 1 e s e l r e s t o m a le i m i d a , la u n id a d e x t e n s o r a A e s u n a l q u i l e n o y la u n id a d D d e f á r m a c o n o c u a t e r n i z a d o e s d e s - M e T u b ( O C H 3 ) -O H . U n c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e e s e c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r t i e n e la f ó r m u l a g e n e r a l L - S - M 2- A - D , e n d o n d e M 2 e s u n r e s t o s u c c i n i m i d a r e s u l t a n t e d e la a d ic i ó n c o n j u g a d a d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o t i o l a M 1 d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r . U n r e s t o a c t i v o q u e f i n a l m e n t e s e l i b e r a d e la p r o t e ó l i s i s i n e s p e c í f i c a c u a n d o la u n id a d d e l i g a n d o d e l L D C e s d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o d e a n t i c u e r p o ( e s d e c i r , e s u n A D C ) t i e n e la e s t r u c t u r a d e C y s - S M 2- A - T u b ( O C H 3 ) - O H e n d o n d e e l r e s t o C y s - S - e s d e u n a m i n o á c i d o c i s t e í n a , la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o .
L o s c o m p u e s t o s e n l a z a d o r e s d e f á r m a c o s q u e r e e m p l a z a n la t u b u l i s i n a M c o n o t r a t u b u l i s i n a q u e c o n t i e n e a m in a t e r c i a r i a q u e r e t ie n e e l r e s t o a c e t a t o e n s u c o m p o n e n t e d e t u b u v a l i n a o r e e m p l a z a n e s e r e s t o c o n u n é t e r o u n s u s t i t u y e n t e d i f e r e n t e a c i lo x i o u n id o a O ( p o r e je m p lo , u n c a r b a m a t o u n id o a O ) d e f ó r m u l a Dg , Dg -i . Dg -2, Dg -3, Dg -4, Dg -5, Dg -6, Dg -7, Dg -8, Dh , Dh-i o Dh -2 s e p r e p a r a n d e f o r m a a n á l o g a a la d e l E s q u e m a 4 , E s q u e m a 7 , E s q u e m a 8 , E s q u e m a s 9 10 , E s q u e m a 11 , E s q u e m a 12 o E s q u e m a s 13 14 .
Figure imgf000102_0001
Esquema 16 muestra una síntesis ilustrativa de un compuesto enlazador fármaco para la preparación de conjugados Ligando Fármaco que tiene la fórmula de Lb'-A-i(BU)-Ao-Y(W)-D+ en donde Lb es un resto M1, Y es un resto PAB autodestructivo (SI), W es un resto carbohidrato (Su) unido a SI a través de un enlace glicosídico en donde dicho enlace se puede escindir mediante una glicosidasa, y D+ es Dolastatina 10 cuaternizado. En esa modalidad de fármaco-enlazador de fórmula Lb'-Lo-D+ la estructura Lb'-A1(BU)- representa un resto Ls s ilustrativo. El compuesto 177 es análogo al compuesto 8 del esquema 1 en donde la auristatina E cuaternizado se reemplaza por dolastatina 10 cuaternizado. Los conjugados de ligando-fármaco preparados a partir del compuesto 177 liberan dolastatina 10 libre, que es otro miembro de la clase de compuestos auristatina y que contiene un grupo funcional amina terciaria, tras la acción de la p-glucuronidasa.
El esquema 17 muestra una síntesis ilustrativa de un compuesto fármaco-enlazador para la preparación de conjugados de fármaco ligando en donde la monometil dolastatina 10 se conjuga a través de un grupo funcional carbamato a un resto PAB. Un conjugado de fármaco y ligando unido a carbamato no es adecuado para un fármaco que contiene amina terciaria en el que ese grupo funcional amina es el punto de unión a un resto PAB. Los conjugados del Compuesto 183 liberan un fármaco libre que contiene amina secundaria (es decir, monometil dolastatina 10) y los conjugados del Compuesto 177 liberan el fármaco libre que contiene el terciario parental (es decir, dolastatina 10) mediante el mismo procesamiento enzimático mediante p-glucuronidasa.
Figure imgf000103_0001
El esquema 18 muestra una síntesis ilustrativa de un compuesto fármaco-enlazador para la preparación de conjugados de fármaco ligando que tienen la fórmula Lb'-A-i(BU)-Ao-Y(W)-D+ en donde Lb' es un resto M1, Y es un resto PAB autodestructivo (SI), W es un resto carbohidrato (Su) unido a SI a través de un enlace glicosídico en donde dicho enlace se puede escindir mediante una glicosidasa, y D+ es Auristatina F cuaternizado. En esa modalidad de la fórmula Lb'-Lo-D+ la estructura Lb'-A1(BU)- representa un resto Lss ilustrativa. El compuesto 189 es análogo al compuesto 8, el compuesto 14 y el compuesto 17 de los esquemas 1, 4 y 17, respectivamente, en donde la auristatina E cuaternizado o la dolastatina 10 cuaternizado se reemplazan por m Ma F cuaternizado. MMAF es otro fármaco que contiene aminas terciarias de la clase de compuestos auristatina.
Los compuestos enlazadores de fármacos que reemplazan a Auristatina E, Dolastatina 10 o Auristatina F con compuestos de fórmula Da , Db , Dc , De , De -1, De-2, Df , Df-1, o De/f-3 se preparan de manera similar a la ejemplificada en el Esquema 1, Esquema 2, Esquema 5, Esquema 16 o Esquema 18 según sea apropiado.
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El esquema 19 muestra una síntesis ilustrativa de un compuesto fármaco-enlazador para la preparación de conjugados de fármaco ligando que tienen una unidad de fármaco de tubulisina no cuaternizado, en la que la unidad de fármaco de tubulisina M está unida a través de su componente C-terminal a una unidad enlazadora mediante el grupo funcional hidrazina de la unidad de extensión. Un LDC a partir del Compuesto 172 representa un conjugado escindible comprende el resto -W-Y-, en donde W es el dipéptido valina-Citrulina- y es de la fórmula general M1-A-W-Y-D o M1-A-W2-W1-PABC-D en donde M1 es el resto maleimida, la unidad de extensión A es un alquileno, W es una unidad de péptido escindible de fórmula -W2-W1-, en donde W1 es citrulina y W2 es valina, PABc es el resto paminobeniloxicarbonilo como unidad espaciadora autodestructiva Y, la unidad de extensión A es un alquileno y la unidad D de fármaco no cuaternizado es TubM-NHNH-. Un conjugado de fármaco y ligando de ese compuesto fármaco-enlazador tiene la fórmula general L-S-M2-A-W-Y-D o L-S-M2-A-W2-W1-PABC-D, en donde M2 es un resto succinimida resultante de la adición conjugada de un resto direccional tiol a M1 del compuesto Fármaco Enlazador. Un resto de fármaco activo que se libera de la proteólisis específica del contexto en W tiene la estructura de TubM-NH-NH2-.
II. Aspectos numerados de la descripción
1. Una composición de conjugado de fármaco y ligando (LDC), en donde la composición de LDC está representada por la estructura de la Fórmula 1:
Figure imgf000104_0002
en donde "Ligando" es uno de un resto de direccionamiento, que se une selectivamente a un resto diana; Lb es un resto de unión covalente de ligando; Q1 es Aa-Ww , en donde A es una unidad de extensión opcional, opcionalmente compuesta por dos, tres o cuatro subunidades, de manera que el subíndice a es 1 cuando A está presente y es 0 cuando A está ausente; Q2 es W'w -E-, en donde Q2 , cuando está presente, está unido a V, Z1, Z2 o Z3; Ww y W'w son unidades escindibles; en donde Ww de Q1 es capaz de escisión selectiva por una proteasa reguladora o intracelular en células anómalas u otras no deseadas en comparación con las proteasas séricas, en donde la proteasa reguladora puede o no ser más específica para las células anómalas u otras células no deseadas diana en comparación a las células normales, y en donde la acción de la proteasa reguladora sobre W provocará la liberación de un fármaco que contiene amina terciaria (D) del LDC, o Ww de Q1 es capaz de escindirse mediante una proteasa que es excretada por células anómalas para en mayor medida que las células normales, o es más reactivo a la hidrólisis en condiciones de pH más bajas presentes en los lisosomas en comparación con el pH fisiológico del suero,
y W'-E de Q2 proporciona un enlace glicosídico que se puede escindir mediante una glicosidasa localizada intracelularmente en células anómalas u otras células no deseadas en comparación con las glicosidasas séricas, en el que la glicosidasa puede o no ser más específica para las células anómalas u otras células no deseadas objetivo en comparación a células normales, o es capaz de escisión selectiva por una glicosidasa excretada en mayores cantidades por las células anómalas u otras células no deseadas diana en comparación con las células normales, donde el subíndice w es 0 o 1 de manera que W está ausente cuando w es 0 o es presente cuando w es 1, y w' es 0 o 1, donde W'-E está ausente cuando w' es 0 o está presente cuando w' es 1, y donde w w' es 1 (es decir, uno y solo uno de W, W 'está presente); V, Z1, Z2 y Z3 son =N- o =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o halógeno, -NO2 , -CN u otro grupo aceptor de electrones, un grupo donante de electrones, -Q2 , o -C(R8)(R9)-D+ , en donde al menos uno de V, Z1, Z2 y Z3 es =C(R24)- cuando w es 1 y al menos dos de V, Z1, Z2 y Z3 son =C(R24)- cuando w' es 1, siempre que cuando w sea 1, Q2 esté ausente y solo una R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y los sustituyentes Q1-J- y -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí, siempre que cuando w' sea 1, uno cualquiera solo R24 es -C(R8) (R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y uno y solo otro R24 es Q2 de manera que Q2 está unido a otro de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y Q2 y -C(R8)(R9)-D+ sustituyentes son orto o para entre sí; R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; E y J son independientemente -O-, -S- o -N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; R' es hidrógeno o es halógeno, -NO2 , -CN o de otro grupo de retirada de electrones, o es un grupo dador de electrones; D+ representa una estructura de un fármaco D que contiene una amina terciaria cuaternizada; y p es una carga de fármaco promedio que tiene un número que varía de 1 a 24; en el que dicha escisión por proteasa, intercambio de disulfuro, hidrólisis ácida o escisión por glicosidasa da como resultado la expulsión de D de un LDC de la composición de LDC.
En algunas modalidades, el fármaco D de D+ que contiene amina terciaria es una dolastatina tal como dolastatina 10 o dolastatina 15.
En algunas modalidades, el fármaco D de D+ que contiene amina terciaria es una dolastatina que tiene la estructura de Da, Db o Dc.
En otras modalidades, el fármaco D de D+ que contiene amina terciaria es una auristatina que contiene amina terciaria que incluye una auristatina que tiene la estructura de De , De -1, De -2, Dp, Df -1 y Df/g -3.
En modalidades preferidas, la amina terciaria que contiene auristatina incorporada en una unidad de fármaco cuaternizada es auristatina E, auristatina F, auristatina PE, auristatina PHE, auristatina PYE y auristatina C, GRP18112, GRP18290, GRP18158, auristatina M, auristatina MQ y auristatina M, auristatina MQ y auristatina PAC. Se prefieren auristatina E, auristatina F, auristatina PE, auristatina PHE y auristatina PYE con auristatina E y auristatina F más preferidas y auristatina E particularmente preferida.
En otras modalidades, el fármaco D de D+ de D+ que contiene amina terciaria es una tubulisina. En esas modalidades, se prefieren las tubulisinas naturales o tubulisinas que tienen la estructura de Dg -6. Otras tubulisinas preferidas incorporadas en una unidad de fármaco cuaternizada tienen la estructura de uno de Dg , Dg -i . Dg -2, Dg -3, Dg -4, Dg -5, Dg -6, Dh , Dh -i , y Dh-2 con los que tienen la estructura de Dg -3, Dg -4, Dg -5 más preferido.
En otras modalidades, el fármaco D de D+ que contiene amina terciaria es un dímero de fenazina que contiene amina terciaria, que preferentemente tiene la estructura de Di.
En otras modalidades, el fármaco D de D+ que contiene amina terciaria es un inhibidor de MDR, que preferentemente tiene una subestructura de isoquinolina cuyo nitrógeno es el sitio de cuaternización.
En modalidades preferidas D de D+ es tubulisina M o auristatina E. En otras modalidades preferidas Q1 está presente y proporciona un sitio de escisión para una proteasa reguladora. En otras modalidades preferidas, Q2 está presente y proporciona un sitio de escisión para una glicosidasa tal como una glucuronidasa.
E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r id a s , e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n a n t i c u e r p o y e l r e s t o d ia n a e s u n a n t í g e n o q u e e s r e c o n o c i d o s e l e c t i v a m e n t e p o r e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o d e l a n t i c u e r p o , e n d o n d e e l a n t í g e n o e s u n a n t í g e n o a c c e s i b l e d e la s u p e r f i c i e c e l u l a r p r e s e n t a d o p r e f e r e n t e m e n t e p o r a n o r m a l e s e n c o m p a r a c i ó n c o n la s c é lu l a s 5 n o r m a le s .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n l i g a n d o p a r a u n r e c e p t o r d e s u p e r f i c i e c e l u l a r a c c e s i b l e y e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n r e c e p t o r q u e s e u n e s e l e c t i v a m e n t e a l l i g a n d o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e n e l q u e e l r e c e p t o r e s p r e s e n t a d o p r e f e r e n t e m e n t e p o r c é l u l a s a n ó m a l a s e n c o m p a r a c i ó n c o n c é l u l a s n o r m a le s . 10
E n m o d a l i d a d e s p a r t i c u l a r m e n t e p r e f e r id a s , e l r e s t o d ia n a e s u n a n t í g e n o o r e c e p t o r d e s u p e r f i c i e c e l u l a r a c c e s i b l e e n e l q u e e l a n t í g e n o o r e c e p t o r s e in t e r n a l i z a d e s p u é s d e la u n ió n d e A D C e n e l q u e e l r e c e p t o r e s p r e s e n t a d o p r e f e r e n t e m e n t e p o r c é l u l a s a n ó m a l a s e n c o m p a r a c i ó n c o n c é l u l a s n o r m a le s .
15 E n m o d a l i d a d e s p a r t i c u l a r m e n t e p r e f e r id a s , e l r e s t o d ia n a e s u n t r a n s p o r t a d o r d e s u p e r f i c i e c e l u l a r a c c e s i b l e q u e e s t á e n m a y o r a b u n d a n c i a o e s m á s a c t i v o e n c é l u l a s a n ó m a l a s e n c o m p a r a c i ó n c o n la s c é l u l a s n o r m a le s , y e l r e s t o d i a n a e s u n s u s t r a t o d e e s e r e c e p t o r , e n e l q u e t r a s s u u n ió n a l t r a n s p o r t a d o r la L D C c o m p u e s t a p o r e s e r e s t o d e d i r e c c i ó n g a n a u n a e n t r a d a p r e f e r e n c i a l e n la s c é l u l a s a n ó m a l a s e n c o m p a r a c i ó n c o n la s c é l u l a s n o r m a le s .
20 2. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 e n la q u e la F ó r m u l a 1 t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 2 A o F ó r m u la 2 B :
25
30
Figure imgf000106_0001
35
Figure imgf000106_0002
40
45
Figure imgf000106_0003
50
Figure imgf000106_0004
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s Lb d e la F ó r m u l a 2 A e s u n r e s t o M 2 o M 3 e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n L D C d e la m o d a l i d a d 1 e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 2 A - 1 :
55
60
65
1
Figure imgf000107_0003
E n o t r a s m o d a l i d a d e s L b d e la f ó r m u l a 2 B e s u n r e s t o M 2 o M 3 e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n L D C d e la m o d a l i d a d 1 e s t á 15 r e p r e s e n t a d o p o r la 2 B - 1 e s t r u c t u r a d e la F ó r m u la :
20
25
Figure imgf000107_0001
30
E n c u a l q u i e r a d e e s t a s d o s m o d a l i d a d e s M e s u n r e s t o M 2 o M 3 ( e s d e c i r , L b - Q 1- d e la F ó r m u l a 2 A - 1 o F ó r m u la 2 B - 1 t i e n e la f ó r m u l a d e M 2- A - W o M 3- A - W ) .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s L b d e la F ó r m u l a 2 A - 1 o 2 B - 1 e s u n r e s t o M 2 y Q 1 e s A - W o - A 1- A o - W - , e n d o n d e A 1 y A o s o n 35 s u b u n i d a d e s d e A . P a r a a q u e l l a s m o d a l i d a d e s la c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 2 A - 2 o la F ó r m u l a 2 B - 2 :
40
45
Figure imgf000107_0002
50
55
60
en donde Lss es una unidad de ligando autoestabilizante y Ao es una subunidad de extensión opcional, en donde Lss es M2-Ai cuando Ao está presente, o es M2-A cuando Ao está ausente (es decir, Lb-Q1- de Fórmula 2A o Fórmula 2B tiene la fórmula de Ls s -W, cuando Ls s es M2-A o la fórmula de LSS-Ao-W, cuando Ls s es M2-Ar ).
En otras modalidades Lb de la Fórmula 2A-1 o 2B-1 es un resto M3 y Q1 es A-W o -A1-Ao-W-, en donde A1 y Ao son subunidades de A. Para aquellas modalidades del LDC composición de la modalidad 1 está representado por la estructura de la Fórmula 2A-1 o Fórmula 2B-1, en donde M es un resto M3 o por la Fórmula 2A-2 y la Fórmula 2B-2 cuando Lss se sustituye con un resto Ls .
En algunas modalidades que tienen una cualquiera de las estructuras anteriores, al menos una de V, Z1, Z2, Z3 es =C(R24)-. En modalidades preferidas que R24 es hidrógeno o un grupo donante de electrones. En modalidades más preferidas, dos o más de V, Z1, Z2 , Z3 son =C(R24)-, en donde los grupos variables R24 en cada caso son hidrógeno o uno es un grupo donante de electrones y el otro es hidrógeno.
En modalidades preferidas, cuando cualquiera de las estructuras anteriores tiene un V, Z1, Z2, Z3 =C(R24) - en donde R24 es un grupo donante de electrones, ese R24 es preferentemente orto o para al carbono aromático que tiene el sustituyente -C(R8)(R9)-D+. En modalidades preferidas, cuando R 'es un grupo donante de electrones, que R' es preferentemente orto o para con respecto al carbono aromático que tiene el grupo -C(R8)(R9)-D+ sustituyente.
En otras modalidades preferidas de cualquiera de las estructuras anteriores de R8 y R9 es hidrógeno.
Otras modalidades preferidas tienen la estructura Fórmula 2A-1 o Fórmula 2-A-2. En esa modalidad, se prefieren más cuando V y Z1 son =CH- y Z2 es =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o un grupo donante de electrones. En otras modalidades preferidas de Fórmula 2A-1 o Fórmula 2A-2, V, Z1 y Z2 son =CH-. En modalidades más preferidas de la Fórmula 2A-1 o la Fórmula 2A-2, R8 y R9 son hidrógeno y V, Z2 y Z3 son =CH-.
En otras modalidades más preferidas que tienen cualquiera de las estructuras de la Fórmula 2A, 2B, 2A-1, 2B-1, 2A-2, 2B-2 anteriores, el resto de direccionamiento (es decir, ligando) es un anticuerpo y p varía de 2-8. En otras modalidades más preferidas que tienen una cualquiera de las estructuras anteriores J es -NH- unido a un dipéptido que comprende W en Q1 para formar una anilida escindible grupo funcional por una proteasa reguladora. En otras modalidades más preferidas, la composición de LDC está representada por la Fórmula 2A. En modalidades particularmente preferidas, el resto de direccionamiento es un anticuerpo y Lb es un resto succinimida (M2) o ácidoamida succínico (M3). En otras modalidades particularmente preferidas, Q1 es -A1 -Ao -W-, en donde A1 y Ao son subunidades del ensanchador A y Lb -A1 es un resto enlazador autoestabilizante (Ls s ). Todavía en otras modalidades particularmente preferidas -Q1- es -A1-Ao-W-, en donde el subíndice w es 1 y en donde A1 y Ao son subunidades de extensión A y Lb-A1 es un resto enlazador (Ls ).
Las modalidades más preferidas son cualquiera de las estructuras anteriores de Fórmula 2A, 2B, 2A-1, 2B-1, 2A-2, 2B-2 en donde D+ es una auristatina cuaternizado que contiene una amina terciaria tal como Auristatina E o tiene la estructura cuaternizado De , De-i , De -2, Df , De -i , o Df/e -3.
Otras modalidades más preferidas son cualquiera de las estructuras anteriores de Fórmula 2A, 2B, 2A-1, 2B-1, 2A-2, 2B-2 en donde D+ es una tubulisina cuaternizado que contiene una amina terciaria tal como tubulisina M o que tiene la estructura de Dg cuaternizado, Dg -i . Dg -2, Dg -3, Dg -4, Dg -5, Dg -6, Dg -7, Dg -8, Dh , Dh -i o Dh -2.
Otras modalidades más preferidos son cualquiera de la fórmula anterior 2A, 2B, 2A-1, 2B-1, 2A-2, 2B-2 estructuras en las que D+ es un cuaternizado fenazina dímero que tiene la estructura de Di.
Aún otras modalidades más preferidas son cualquiera de las estructuras anteriores de Fórmula 2A, 2B, 2A-1, 2B-1, 2A-2, 2B-2 en donde D+ es un inhibidor de MDR basado en isoquinolina cuaternizado (es decir, un inhibidor de MDR que tiene una subestructura de isoquinolina en la que el nitrógeno de esa subestructura está cuaternizado) como Elacridar™ o Tariquidar™.
En algunas modalidades de Fórmula 2A-1 o Fórmula 2B-1 no está presente ninguna Unidad de Extensión (es decir, el subíndice a es 0). En otras modalidades, está presente una unidad de extensión en la Fórmula 2A-1 o Fórmula 2B-1 (es decir, el subíndice a es 1). En algunas modalidades, una unidad de extensión en la fórmula 2A-1 o la fórmula 2B-1 está presente como una sola unidad. En algunas de esas modalidades, A es una unidad de ramificación (B) que tiene un sustituyente de agente solubilizante (SA). En otras modalidades, la unidad de extensión, cuando está presente, consiste en 2, 3 o 4 subunidades, preferentemente 2 o 3 y con mayor preferencia 2 subunidades. En algunas de esas modalidades, una de las subunidades de A es una unidad de ramificación (B) que tiene un agente solubilizante (SA) como sustituyente (es decir, A1 , A2 , A3 o A4 , que son subunidades de A, es -B(SA)-). En otras de esas modalidades, no está presente ninguna Unidad de Ramificación en A en la Fórmula 2A-1 o Fórmula 2A-B cuando el subíndice a es 1.
En algunas modalidades de Fórmula 2A-1 o Fórmula 2B-1 cuando el subíndice a es 1 (es decir, está presente una unidad de extensión) -A- es -A1-A0- en donde A1 y Ao son subunidades de A. En algunas de esas modalidades, la s u b u n i d a d A i d e A e s - B ( S A ) - . E n o t r a s d e e s a s m o d a l i d a d e s , la s u b u n i d a d A o d e A e s - B ( S A ) - . T o d a v í a e n o t r a d e e s t a s m o d a l i d a d e s n i A 1 n i A o e s - B ( S A ) - ( e s d e c i r , s in u n id a d d e r a m i f i c a c i ó n e s t á p r e s e n t e ) o u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e n o e s t á p r e s e n t e e n A .
5 E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s d e F ó r m u la 2 A - 2 o F ó r m u l a 2 B - 2 -A o - , e s - A - c u a n d o A e s u n a s o la u n id a d y e s t á o p c i o n a l m e n t e p r e s e n t e o c u a n d o A e s t á c o m p u e s t a p o r o c o n s i s t e e n 1 , 2 , 3 o 4 s u b u n i d a d e s - A o - e s u n a s u b u n i d a d d e A , e n a l g u n a s d e e s a s m o d a l i d a d e s - A o - e s - B ( S A ) - c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e . E n o t r a s m o d a l i d a d e s d e F ó r m u l a 2 A - 2 o F ó r m u l a 2 B - 2 , n o e s t á p r e s e n t e u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e e n - A o - .
10 3. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 e n d o n d e la F ó r m u l a 1 t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 3 A o la F ó r m u l a 3 B :
15
20
Figure imgf000109_0001
25
30
35
Figure imgf000109_0002
40
4. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u la 1 t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 3 C o la F ó r m u l a 3 D :
45
50
55
Figure imgf000109_0003
60
65
Figure imgf000110_0001
5. La composición de LDC de la modalidad 1 en donde la estructura de la Fórmula 1 tiene la estructura de la Fórmula 3E o la Fórmula 3F:
Figure imgf000110_0002
En cualquiera de Fórmula 3A-3F, R8 y R9 son preferentemente hidrógeno. En otras modalidades preferidas de una estructura de la Fórmula 3A-3F, un grupo variable V, Z1, Z2 o Z3 es =C(R24)-. En modalidades preferidas que R24 es hidrógeno o un grupo donante de electrones en donde cuando que R24 es un grupo donante de electrones es preferentemente orto o para con respecto al carbono aromático que tiene el sustituyente -C(R8)(R9)-D+. En otras modalidades preferidas, cuando R' es un grupo donante de electrones, que R' es preferentemente orto o para con respecto al carbono aromático que tiene el sustituyente -C(R8)(R9)-D+. En otras modalidades preferidas, un grupo variable V, Z1, Z2 o Z3 es = C(R24)-, en donde R24 es un grupo aceptor de electrones orto al carbono aromático que tiene el sustituyente Q2 En las modalidades preferidas que tienen la estructura de la Fórmula 2B o 2F R' es preferentemente hidrógeno o un grupo aceptor de electrones tal como -NO2 o -Cl.
En otras estructuras de la Fórmula preferida 3A-3F J es -NH- y E en Q2 es -O-. En una modalidad más preferida, W es un carbohidrato en donde el enlace E-W de Q2 se puede escindir mediante una glicosidasa.
En modalidades preferidas, la composición de LDC de la modalidad 1 está representada por la Fórmula 3F en donde R' es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones y uno o ambos de V, Z3 es = C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno.
En algunas modalidades de Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3D, 3E o 3F no está presente ninguna Unidad de Extensión (es decir, el subíndice a es 0) En otras modalidades está presente una Unidad de Extensión en la Fórmula 3A o Fórmula 3B (es decir, el subíndice a es 1). En alguna modalidad de Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3D, 3E o 3F, una unidad de extensión está presente como una sola unidad. En algunas de esas modalidades, A es una unidad de ramificación que tiene un agente solubilizante. En otras modalidades, la unidad de extensión, cuando está presente, consiste en 2, 3 o 4 subunidades, preferentemente 2 o 3 y con mayor preferencia 2. En algunas de esas modalidades, una de las subunidades de A es una unidad de ramificación (B) que tiene un agente solubilizante (SA) como sustituyente (es decir, A1 , A2 , A3 o A4 , que son subunidades de A, es -B(SA)-). En otras de esas modalidades, no está presente ninguna Unidad de Ramificación en A cuando el subíndice a es 1 en la Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3D, 3E o 3F, las subunidades de A, es -B(SA)-). En otras de esas modalidades, no está presente ninguna Unidad de Ramificación en A cuando el subíndice a es 1 en la Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3D, 3E o 3F.
En algunas modalidades de Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3D, 3E o 3F cuando el subíndice a es 1 (es decir, hay una unidad de extensión) -A- es -ArA o- en donde A1 y Ao son subunidades de A. En algunas de esas modalidades A1 de A es -B(SA)-. En otra de esas modalidades, Ao de A es -B(SA)-. En aún otras de esas modalidades, ni A1 ni Ao es -B(SA)-(es decir, no hay una unidad de ramificación presente) o un agente solubilizante no está presente en A
En otras modalidades preferidas para cualquiera de las modalidades 1-5, -A- cuando está presente (es decir, cuando a es 1) se reemplaza por -A-i-Ao-, en donde A1 y Ao son subunidades de en donde Ao es una subunidad opcional (es decir, A1 se convierte en A cuando Ao está ausente o A es A-i-Ao cuando Ao está presente). En algunas de esas modalidades, -Ao- es -B(SA)- cuando Ao está presente. En otra de esas modalidades, -A1- es -B(SA)-. En otras modalidades de Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3D, 3E o 3F, no está presente un agente solubilizante en -Ao- o no está presente ninguna unidad de ramificación en A.
En modalidades más preferidas representadas por la Fórmula 3F, Lb es un resto M2 o M3 en donde la composición de LDC de la modalidad 1 está representada por la estructura de la Fórmula 3F-1 o la Fórmula 3F-2:
Figure imgf000111_0001
en donde M es un resto M2 o M3 y A1 y Ao son subunidades de una unidad de extensión A,
En modalidades más preferidas que tienen la estructura de la Fórmula 3F-1 o Fórmula 3F-2, R8 y R9 son hidrógeno, V y Z3 son =CH- y R' es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones, preferentemente -Cl o - NO2. En modalidades particularmente preferidas, "Ligando" de Fórmula 3F-1 o Fórmula 3F-2 es un anticuerpo. En otras modalidades particularmente preferidas de Fórmula 3F-1 o Fórmula 3F-2, M es M2, en donde M2-A o M2-A1 es un resto Lss. En todavía otras modalidades particularmente preferido de fórmula 3F-1 o Fórmula 3F-2 M es M3, en donde M3-A o M3-A1 es un resto Ls.
En algunas modalidades de Fórmula 3F-1, A es -B(SA)-, en donde B es una unidad de ramificación y SA es un agente solubilizante. En otras modalidades, A de Fórmula 3F-1 no es -B(SA) o no está compuesto por un agente solubilizante. En algunas modalidades de Fórmula 3F-2 Ao está presente en la que A1 o Ao es -B(SA)-. En otras modalidades de Fórmula 3F-1 o 3F-2, A o -A-i -Ao-, respectivamente, no comprende una unidad de ramificación. En todavía otras modalidades de la Fórmula 3F-1 o 3F-2 no agente solubilizante está presente en -A- o -Ai -Ao-.
En cualquiera de las modalidades preferidas para la Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, 3F, 3F-1 o 3F-2, son más preferidas aquellas en las que D + es una auristatina cuaternizado que contiene una amina terciaria tal como Auristatina E o que tiene la estructura de De , De-i , De -2, Df , Df-i , o Df/e -3 cuaternizados.
En cualquiera de las modalidades preferidas para la Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, 3F, 3F-1 o 3F-2 también son más preferidas aquellas en las que D+ es una tubulisina que contiene una amina terciaria cuaternizada, tal como tubulisina M o que tiene la estructura de Dg cuaternizado, Dg -i . Dg -2, Dg -3, Dg -4, Dg -5, Dg -6, Dg -7, Dg -8, Dh , Dh-i o Dh -2. En cualquiera de las modalidades preferidas para Fórmula 3A, 3B, 3C, 3D, 3E, 3F, 3F-1 o 3F-2 también son más preferidas aquellas en las que D + es un dímero de fenazina cuaternizado que tiene la estructura de Di.
Aún otras modalidades más preferidas son cualquiera de las estructuras anteriores de Fórmula 2A, 2B, 2A-1, 2B-1, 2A-2, 2B-2 en donde D+ es un inhibidor de MDR basado en isoquinolina cuaternizado (es decir, un inhibidor de MDR que tiene una subestructura de isoquinolina en la que el nitrógeno de esa subestructura está cuaternizado) como Elacridar o Tariquidar.
6. La composición de LDC de una cualquiera de las modalidades 1 a 5 en la que el resto de direccionamiento es un anticuerpo, definiendo así un conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC), y el resto de destino es un antígeno de superficie celular de células anómalas dirigidas capaces de internalización celular del ADC unido, en el que el antígeno está presente preferentemente en las células anómalas en comparación con las células normales.
En modalidades preferidas, el antígeno dirigido se selecciona del grupo que consiste en CD19, CD70, CD30, CD33, NTB-A, avp6, CD123 y LW-1. En otras modalidades preferidas, el antígeno diana es un antígeno de superficie celular accesible de una célula en hiperproliferación. En otras modalidades preferidas, el antígeno diana es un antígeno de superficie celular accesible de una célula inmunitaria hiperactivada.
7. La composición de LDC de una cualquiera de las modalidades 1 a 5, en donde el resto diana es un sustrato de un transportador de superficie celular y el resto diana es ese transportador de superficie celular, en la que el transportador dirigido en células anómalas es capaz de captar la LDC unida. compuesto por el sustrato como su resto de direccionamiento en el que ese transportador está presente preferentemente o es más activo en células anómalas en comparación con las células normales.
En modalidades preferidas, el transportador es un transportador de folato. En otras modalidades, el resto de direccionamiento es un ligando de un receptor de superficie celular y el resto de destino es ese receptor de superficie celular, en el que el receptor de destino en células anómalas es capaz de internalización celular de LDC unida que comprende el ligando del receptor como su resto de direccionamiento. donde el receptor diana está presente preferentemente en células anómalas en comparación con células normales.
8. La composición de LDC de la modalidad 1 o 2 en donde W de Q1 está compuesta por un resto peptídico que tiene un enlace peptídico a J que se puede escindir selectivamente mediante una proteasa reguladora en comparación con las proteasas séricas en las que la acción de una proteasa reguladora sobre W provocará la liberación intracelular de un fármaco que contiene amina terciaria (D) de un LDC de la composición.
9. La composición de LDC de la modalidad 3, 4 o 5 en donde W de Q2 es un carbohidrato unido por enlace glicosídico, en donde el enlace glicosídico W-E de Q2 proporciona un sitio de escisión para una glicosidasa donde la acción de la glicosidasa sobre WE provoca la liberación de amina terciaria -que contiene el fármaco (D) de un LDC de la composición.
10. La composición de LDC de la modalidad 8 en la que el resto peptídico de W está compuesto por o consiste en un resto dipeptídico que tiene la estructura de la Fórmula 6:
5
10
Figure imgf000113_0001
e n d o n d e R 34 e s b e n c i l o , m e t i l o , i s o p r o p i l o , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
15
20
Figure imgf000113_0002
y R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 4- N H 2 , -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 , - ( C H 2) 3 N H ( C = N H ) N H 2 , o - ( C H 2 ) 2C O 2 H , e n d o n d e e l e n l a c e 25 o n d u l a d o a l C - t e r m i n a l d e l d i p é p t i d o i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e a J d e l r e s t o a r i l e n o d e F ó r m u l a 2 A o 2 B y e l e n la c e o n d u l a d o a l N - t e r m i n a l d e l d i p é p t i d o i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e a lo q u e r e s t a d e W , s i lo q u e r e s t a e s t á p r e s e n t e , o a A o u n a s u b u n i d a d d e l m is m o , c u a n d o a e s 1 o a L b c u a n d o a e s 0 , y e n d o n d e la f i a n z a d e l d i p é p t i d o a J e s e s c i n d i b l e p o r u n a p r o t e a s a r e g u l a d o r a .
30 11. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 9 e n la q u e W e n Q 2 e s u n r e s t o c a r b o h i d r a t o q u e e s t á u n i d o p o r e n l a c e g l i c o s í d i c o a E , e n la q u e e l e n l a c e g l i c o s í d i c o s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a y e n d o n d e W - E t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 7 :
35
40
Figure imgf000113_0003
45 e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a r e p r e s e n t a E u n id o a u n o d e V , Z 1, Z 2 o Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C H ( R 24) - , e n d e E e s - O - , - S - o - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y e n d o n d e R 45 e s - C H 2 O H o - C O 2 H .
12. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 11 e n d o n d e 1 d e m a n e r a q u e A , o u n a s u b u n i d a d d e la m i s m a ( e s d e c i r , A 1) , e n Q 1 e s t á u n i d a a L b d e F ó r m u l a 1 , e n d o n d e - L b - A o - L b - A 1 d e F ó r m u l a 1 50 y t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 8 :
55
60
Figure imgf000113_0004
e n d o n d e e l r e s t o -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - r e p r e s e n t a la e s t r u c t u r a d e A o u n a s u b u n i d a d ( A 1) d e la m i s m a ; R y R a2 s o n 65 i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o o m e t i l o ; R a1 e s h i d r ó g e n o , m e t i l o , e t i l o o u n a u n i d a d b á s i c a ( B U ) ; H E e s u n a u n i d a d p o t e n c i a d o r a d e h i d r ó l i s i s ( H E ) o p c i o n a l ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ; c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o d o s R b1 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 o u n R b1 y H E j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y e l o t r o R b1 e s h id r ó g e n o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o c o n a lq u i lo 5 C 1- C 6 , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e -[ C ( R 1) ( R 1) ] -[ C ( R 2 ) ( R 2 ) ] n - N ( R 22) ( R 23), e n d o n d e n e s 0 , 1 , 2 o 3 , e n d o n d e c a d a R 1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo i n f e r i o r o d o s R 1 j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 ; c a d a R 2 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o a lq u i lo C 1- C 6 , a r i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o d o s R 2 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o 10 i n t e r m e d i o d e f i n e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 , o u n R 1 y u n R 2 j u n t o c o n lo s c a r b o n o s a lo s q u e e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o i n t e r m e d i o c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y lo s R 1 y R 2 r e s t a n t e s s o n c o m o s e d e f i n e n ; R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s ; y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l a n i l l o d e s u c c i n i m i d a i n d i c a la u n ió n c o v a l e n t e d e a z u f r e d e r i v a d o d e u n g r u p o s u l f h i d r i l o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o y la 15 o t r a l í n e a o n d u l a d a in d i c a la u n ió n c o v a l e n t e d e A ( o A 1 ) a lo q u e r e s t a d e la F ó r m u l a 1 , 2 A , 2 B , E s t r u c t u r a 2 A - 1 , 2 B -1 , 2 A - 2 , 2 B - 2 3 A - 3 F , 3 F - 1 o 3 F - 2 .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , R e s h id r ó g e n o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , [ H E ] e s t á p r e s e n t e y e s c a r b o n i l o ( e s d e c i r , - C ( = O ) - ) o u n g r u p o f u n c i o n a l q u e c o n t i e n e c a r b o n i l o e n d o n d e e l c a r b o n i l o d e e s e g r u p o f u n c i o n a l e s t á 20 p r e f e r e n t e m e n t e u n id o d i r e c t a m e n t e a l r e s t o [ C ( R b1) ( R b1)]m d e A o A 1. E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , c a d a R b y R a í y R a2 s o n h id r ó g e n o , e n d o n d e m e s 5 e s m á s p r e f e r id o .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , [ H E ] e s t á p r e s e n t e y e s c a r b o n i l o ( e s d e c i r , - C ( = O ) - ) y R a1 e s u n a u n id a d b á s ic a y R a2 e s h i d r ó g e n o c o n B U q u e t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 N H 2 m á s p r e f e r id a .
25
13. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 10 , e n d o n d e e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n a n t i c u e r p o c o n la F ó r m u l a 1 q u e t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 9 :
30
35
40
Figure imgf000114_0001
Figure imgf000114_0002
e n d o n d e R 8 e s h id r ó g e n o ; R 9 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; 45 R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i lo o - C H ( O H ) C H a ; R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) a N H ( C = O ) N H 2 o -( C H 2 ) 2 C O 2 H ; J e s - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y V y Z 1 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s d e R 8 y R 9 s o n h id r ó g e n o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , R 34 e s i s o p r o p i lo y R 35 e s -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 e n d o n d e lo s c a r b o n o s a lo s q u e e s t á n u n id o s e s t o s s u s t i t u y e n t e s e s t á n e n la m is m a 50 c o n f i g u r a c i ó n a b s o l u t a d e u n L - a m i n o á c i d o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s m e t i l o , e n d o n d e lo s c a r b o n o s a lo s q u e e s t á n u n id o s e s t o s s u s t i t u y e n t e s e s t á n e n la m i s m a c o n f i g u r a c i ó n a b s o l u t a d e u n L -a m i n o á c i d o .
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , A e n la F ó r m u l a 9 s e r e e m p l a z a c o n A 1- A o y / o L b e s u n r e s t o M 2 o M 3.
55
14. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 13 e n d o n d e e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n a n t i c u e r p o e n d o n d e la F ó r m u l a 1 t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 10 :
60
65
1
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Figure imgf000115_0001
15
e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e e l r e s t o -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A r A o ; R e s - H ; R a1 e s - H o u n a u n id a d b á s i c a ( B U ) , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 21), e n d o n d e R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o 20 o e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s ; R a2 e s h id r ó g e n o ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 5 ; c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ; R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i l o o - - C H ( O H ) C H 3 ; R 35 e s -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 , -( C H 2 ) 2 C O 2 H ; J e s - N H - ; V , Z 1 y Z 2 s o n = C H 2 - ; R 8 e s h id r ó g e n o ; y
25 R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y d o n d e S e s a z u f r e d e u n g r u p o s u l f h i d r i l o d e r i v a d o d e l r e s t o d e d i r e c c i ó n d e l a n t i c u e r p o .
15. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 11 , e n d o n d e e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n a n t i c u e r p o c o n la F ó r m u l a 1 q u e t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 11 :
30
35
40
45
Figure imgf000115_0002
50
Figure imgf000115_0003
e n d o n d e A 1 y A o s o n s u b u n i d a d e s s e le c c i o n a d a s i n d e p e n d i e n t e m e n t e d e A , e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A ( e s d e c i r , A 1 s e c o n v i e r t e e n A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y A e s A r A o c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e ) ; E e s - O - o - N H - ; 55 J e s - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; V y Z 3 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - ; R 8 e s h id r ó g e n o ; R 9 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; y R 45 e s - C O 2 H .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o e n la f ó r m u l a 11 s e r e e m p l a z a p o r o t r o r e s t o c a r b o h i d r a t o e n d o n d e e l e n l a c e g l i c o s í d i c o a e s e r e s t o s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a .
60
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s d e F ó r m u l a 11 - A 1- o - A o - e s - B ( S A ) - , e n d o n d e B e s u n a u n id a d d e r a m i f i c a c i ó n y S A e s u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e . E n o t r a s m o d a l i d a d e s , n i A 1 n i A o d e la F ó r m u l a 11 s o n - B ( S A ) o - A r A o - n o c o m p r e n d e n u n a g e n t e s o lu b i l i z a n t e .
65 16. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 15 e n d o n d e e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n a n t i c u e r p o e n d o n d e la F ó r m u l a 1 t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 12 :
1
1
2
Figure imgf000116_0003
25 e n d o n d e A i y A o s o n s u b u n i d a d e s s e le c c i o n a d a s in d e p e n d i e n t e m e n t e d e A , d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , d o n d e -[ C ( R b) ( R b) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e , d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A r A o ; e n d o n d e A o , c u a n d o e s t á p r e s e n t e , c o r r e s p o n d e e n e s t r u c t u r a a u n á c id o q u e c o n t i e n e a m in a u n id o a J a t r a v é s d e l c a r b o n i l o C - t e r m i n a l d e l á c i d o q u e c o n t i e n e a m in a ;
30 e n d o n d e R e s h id r ó g e n o ; R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o c a p t a d o r d e e l e c t r o n e s ; R a1 e s h i d r ó g e n o o u n a u n i d a d b á s ic a ( B U ) e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 23), e n d o n d e R 22 y R 23 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o o e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o . e l á t o m o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s ; R a2 e s h id r ó g e n o ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 5 ; c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ; R 45 e s - C O 2 H ; E e s - O - ; J e s - N H - , V y Z 3 35 s o n = C H 2 - ; R 8 e s h id r ó g e n o ; y R 9 e s h id r ó g e n o o m e t i l o ; y d o n d e S e s a z u f r e d e r i v a d o d e u n g r u p o s u l f h i d r i l o d e l a n t i c u e r p o .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o e n la f ó r m u l a 12 s e r e e m p l a z a p o r o t r o r e s t o c a r b o h i d r a t o e n d o n d e e l e n l a c e g l i c o s í d i c o a e s e r e s t o s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a .
40
17. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 14 , 15 o 16 e n la q u e A o , c u a n d o e s t á p r e s e n t e , t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 13 o la F ó r m u l a 14 :
45
50
Figure imgf000116_0001
Figure imgf000116_0002
55
e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l r e s t o c a r b o n i l o d e c u a l q u i e r a d e e s t r u c t u r a r e p r e s e n t a e l p u n t o d e u n ió n d e A o d e W y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a c o n e l r e s t o a m i n o d e c u a l q u i e r a d e e s t r u c t u r a r e p r e s e n t a e l p u n t o d e u n ió n d e A o a A 1 ; e n d o n d e K y L s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e C , N , O o S , s i e m p r e q u e c u a n d o K o L e s O o S , R 41 y R 42 a K o R 43 y R 44 60 a L e s t á n a u s e n t e s , y c u a n d o K o L s o n N , u n o d e R 41, R 42 a K o u n o d e R 43, R 44 a L e s t á n a u s e n t e s , y s i e m p r e q u e n o s e s e l e c c i o n e n d o s L a d y a c e n t e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e c o m o N , O o S ; d o n d e q e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 12 , y r e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 12 ; d o n d e G e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , -O H , -o Rg , - C O 2 H , CO2 Rg , d o n d e R G e s a l q u i l o C 1- C 6 , a r i l o o h e t e r o a r i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o R PR, d o n d e R PR e s u n g r u p o p r o t e c t o r a d e c u a d o , - N H 2 , o - N ( R G ) ( R G ), d o n d e R G s e l e c c i o n a d o in d e p e n d i e n t e m e n t e e s c o m o s e 65 d e f i n i ó p r e v i a m e n t e o a m b o s R G j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o t a n t o R G c o m o R PR j u n t o s f o r m a n u n g r u p o p r o t e c t o r a d e c u a d o ; e n la q u e R 38 e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1 C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; R 39- R 44 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o u o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o a m b o s R 39, R 40 j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , o R 41, R 42 j u n t o c o n K a l q u e e s t á n u n i d o s c u a n d o K e s C , o R 43, R 44 j u n t o c o n L a l q u e e s t á n u n id o s c u a n d o L e s C , c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 , o R 40 y R 41, o R 40 y R 43, o R 41 y R 43 5 j u n t o c o n e l c a r b o n o o h e t e r o á t o m o a l q u e e s t á n u n id o s y lo s á t o m o s in t e r m e d i o s e n t r e e s o s c a r b o n o y / o h e t e r o á t o m o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o o h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s , o e n e l q u e A o t i e n e u n a e s t r u c t u r a c o r r e s p o n d i e n t e a a l f a - a m i n o , b e t a - a m i n o u o t r o á c i d o q u e c o n t i e n e a m in a .
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s A o d e F ó r m u l a 13 o d e F ó r m u l a 14 e s u n a u n id a d d e r a m i f i c a c i ó n q u e t i e n e u n s u s t i t u y e n t e 10 a g e n t e s o l u b i l i z a n t e ( e s d e c i r - A o - e s - B ( S A ) - ) . E n e s o s c a s o s , G e s t á c o m p u e s t o p o r u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e ( S A ) y e s p r e f e r e n t e m e n t e la c a d e n a l a t e r a l d e u n D - o L - a m i n o á c i d o s u s t i t u i d o p o r e s e S A , y l o s g r u p o s v a r i a b l e s r e s t a n t e s s o n c o m o s e d e f in e n .
18. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 14 o 16 e n d o n d e e l c a r b o n o c o n a s t e r i s c o ( * ) i n d i c a d o e s t á 15 p r e d o m i n a n t e m e n t e e n la m is m a c o n f i g u r a c i ó n a b s o l u t a q u e e l c a r b o n o a l f a d e u n L - a m i n o á c i d o c u a n d o e s e c a r b o n o e s q u i r a l .
19. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 6 , e n d o n d e la F ó r m u l a 1 t i e n e u n a U n id a d d e L i g a n d o d e u n a n t i c u e r p o c o m o r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o , d e m a n e r a q u e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la 20 e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 16 A o la F ó r m u l a 16 B :
25
30
35
Figure imgf000117_0001
Figure imgf000117_0002
40
45
50
Figure imgf000117_0003
Figure imgf000117_0004
55 e n d o n d e Q 1 ' e s A o -W w , e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A d e m a n e r a q u e - Q 1'- e s - W w - c u a n d o A o e s t á a u s e n t e , o e s - A o - W w - c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A 1-A o , e n d o n d e e l r e s t o -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - s e c o n v i e r t e e n A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e o e s A 1 c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e , y d o n d e w e s 1 c u a n d o Q 2 e s t á a u s e n t e o e s 0 ( e s d e c i r , W e s t á a u s e n t e ) c u a n d o Q 2 e s t á p r e s e n t e ;
60 R e s h id r ó g e n o ; R a1 e s - H o B U d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 23), d o n d e R 22 y R 23 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s . c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s ; R a2 e s h id r ó g e n o ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 5 ; R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ; J e s - O - o -N H - ; Q 2 c u a n d o e s t á p r e s e n t e e s W - E , e n d o n d e E e s - O - o - N H - ; p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 24 ; y 65 d o n d e S e s a z u f r e d e r i v a d o d e u n g r u p o s u l f h i d r i l o d e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o d e l a n t i c u e r p o .
20 . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 19 e n d o n d e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 17 A o la F ó r m u l a 17 B :
5
10
Figure imgf000118_0001
15
20
25
Figure imgf000118_0002
30
e n d o n d e J e s - N H - ; u n o d e V , Z 1 e s = C ( R 24) - , d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o , - C l o - N O 2 , y e l o t r o V , Z 1 y Z 2 s o n = C H 2 -; R 8 e s h id r ó g e n o ; y R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o .
21 . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 19 e n d o n d e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á 35 r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 18 A o la F ó r m u l a 18 B :
40
45
50
Figure imgf000118_0003
Figure imgf000118_0004
55
60
65
1
1
Figure imgf000119_0003
2
Figure imgf000119_0001
e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c io n a l d e A , d o n d e e l r e s t o - [ C ( R b1) ( R b1) ]m - [ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s 25 A i c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A i - A o ; R e s - H ; R a1 e s - H o u n a u n id a d b á s i c a ( B U ) , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2- N ( R 22) ( R 23), e n d o n d e R 22 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o o R 22 a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ; R a2 e s h id r ó g e n o ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 5 ; R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ; R 8 e s h id r ó g e n o ; y R 9 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 30 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o e n la f ó r m u l a 18 A o 18 B s e r e e m p l a z a p o r o t r o r e s t o c a r b o h i d r a t o e n d o n d e e l e n l a c e g l i c o s í d i c o a e s e r e s t o s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a .
35 E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s d e F ó r m u l a 18 A o 18 B F ó r m u l a A o e s t á p r e s e n t e . E n a l g u n a s d e e s a s m o d a l i d a d e s - A o - e s - B ( S A ) - , e n d o n d e B e s u n a u n id a d d e r a m i f i c a c i ó n y S A e s u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e . E n o t r a s m o d a l i d a d e s , A o d e F ó r m u l a 18 A o F ó r m u la 18 B , s i e s t á p r e s e n t e , n o e s - B ( S A ) - o n o c o m p r e n d e u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e .
22 . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 21 e n d o n d e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á 40 r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 19 A o la F ó r m u l a 19 B :
45
50
55
60
Figure imgf000119_0002
65
Figure imgf000120_0001
en donde R es hidrógeno; Ra1 es hidrógeno o una unidad básica (BU), en donde BU tiene la estructura de -CH2-N(R22)(R23), en donde R22 y R23 son independientemente hidrógeno o metilo o ambos junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos comprenden un heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros; Ra2 es hidrógeno; m es un número entero que varía de 1 a 5; cada Rb1 es independientemente hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; HE está ausente o es -C(=O)-; R45 es -CO2 H; E es -O-; J es -NH-; V y Z3 es = CH2-; R8 es hidrógeno; y R9 es hidrógeno o metilo.
En otras modalidades, el resto carbohidrato en la fórmula 19A o 19B se reemplaza por otro resto carbohidrato en donde el enlace glicosídico a ese resto se puede escindir mediante una glicosidasa.
23. La composición de LDC de la modalidad 19, 20, 21 o 22 en donde el carbono con asterisco (*) indicado está predominantemente en la misma configuración absoluta que el carbono alfa de un L-aminoácido cuando ese carbono es quiral.
24. La composición de LDC de la modalidad 1 en donde -D+ tiene la estructura de la Fórmula 20 (De ') o Fórmula 21 (Df '):
Figure imgf000120_0002
en donde R10 y R11 son independientemente alquilo C1-C8; R12 es hidrógeno, alquilo C1-C8, cicloalquilo C3-C8, arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 o -X1-(heterociclo C3-C8); R13 es hidrógeno, alquilo C1-C8, cicloalquilo C3-C8, arilo, -X1-arilo, -X1_(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 y -X1-(heterociclo C3-C8); R14 es hidrógeno o metilo; o R13 y R14 tomados junto con el carbono al que están unidos comprenden un cicloalquilo C3-C8; R15 es hidrógeno o alquilo C1-C8; R16 es hidrógeno, alquilo C1-C8, cicloalquilo C3-C8, arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 y -X1-(heterociclo C3-C8); R17 son independientemente hidrógeno, -OH, alquilo C1-C8, cicloalquilo C3-C8 y O-(alquilo C1-C8); R18 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-C8 ; R19 es -C(R19A)2-C(R19A)2-arilo, -C(R19A)2-C(R19A)2-(heterociclo C3-C8 ) o -C(R19A)2-C(R19A)2-(cicloalquilo C3-C8), en donde R19A es hidrógeno, alquilo C1-C6 u -OH; R21 es arilo o heterociclo C3-C8 ; R20 es hidrógeno, alquilo C1-C20, arilo, heterociclo C3-C8 , -(R47O)m-R48 y -(R47O)m-CH(R49)2 ; m es un número entero que varía de 1 a 1000; R47 es alquilo C2-C8 ; R48 es hidrógeno o alquilo C1-C8 ; R49 son independientemente -COOH, -(CH2 )n-N(R50)2 , -(CH2)n-SO3 H, o -(CH2)n-SO3-alquilo C1-C8 ; R50 son independientemente alquilo C1-C8 , o -(CH2 )n-COOH; Z es O, S, NH o NR46, en donde R46 es alquilo C1-C8 ; X1 es alquileno C1-C10; y n es un número entero que varía de 0 a 6; y donde la línea ondulada a N+ indica unión covalente de D+ a lo que resta de la estructura de la Fórmula 1.
25. La composición de LDC de la modalidad 1 en donde -D+ tiene la estructura de la Fórmula 22 (Di')
Figure imgf000121_0001
en donde el Anillo A y el Anillo B son arilo o heteroarilo seleccionados independientemente, opcionalmente sustituidos en el Anillo A con uno, dos o tres sustituyentes RA y/u opcionalmente sustituidos en el Anillo B con uno, dos o tres sustituyentes RB, condensados con el anillo de fenazina sistemas en los que sistema de anillo de uno de fenazina está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres sustituyentes RC seleccionados de forma independiente y el otro anillo de fenazina está opcionalmente sustituido con uno, dos o tres seleccionados independientemente sustituyentes RD, en la que RA, RB, RC y RD, cuando está presente, son halógeno, alquilo opcionalmente sustituido o un sustituyente unido a O; R9A y R9B se seleccionan independientemente como alquilo opcional sustituido o se toman junto con los átomos de nitrógeno a los que están unidos y los átomos de carbono intermedios entre estos nitrógeno comprenden un sistema de anillo heterocicloalquilo y en donde n, s y o son independientemente números enteros que varían de 2 a 4; y donde la línea ondulada a N+ indica unión covalente de D+ a lo que resta de la estructura de la Fórmula 1.
26. La composición de LDC de la modalidad 1 en donde -D+ tiene la estructura de la Fórmula 23 (Dg -i ') o Fórmula 24 (Dh-i ')
Figure imgf000121_0002
e n d o n d e e l c í r c u l o r e p r e s e n t a u n h e t e r o a r i l o d e 5 m i e m b r o s o u n a r i l o o h e t e r o a r i l o d e 6 m i e m b r o s , e n e l q u e lo s s u s t i t u y e n t e s r e q u e r i d o s in d i c a d o s p a r a e s e h e t e r o a r i l o e s t á n e n u n a r e l a c i ó n 1 ,3 o m e t a e n t r e s í c o n s u s t i t u c i ó n o p c i o n a l e n la s p o s i c i o n e s r e s t a n t e s ; R 2A e s h id r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R 2A j u n t o c o n e l á t o m o d e o x í g e n o a l q u e e s t á u n id o d e f in e u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O d is t in t o d e - O H ; R 3 e s h id r ó g e n o o a lq u i lo 5 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; R 4, R 4A, R 4B, R 5 y R 6 s o n a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , s e l e c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e ; R 7A e s a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , R 8A e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o y m e s 0 o 1 ; y d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a N in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 1.
10 E n m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , R 7A e s f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , e l c í r c u l o r e p r e s e n t a t i a z o l . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s R 3 e s - C H 3. E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r id a s , R 7A e s f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , e l c í r c u l o r e p r e s e n t a t i a z o l y R 2A j u n t o c o n e l á t o m o d e o x í g e n o a l q u e e s t á u n i d o d e f i n e u n é s t e r .
15 27 . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 26 e n d o n d e e l r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o e s u n a n t i c u e r p o .
28 . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 27 e n d o n d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o s e d i r i g e a u n a n t í g e n o e n c é l u l a s d e m a m í f e r o .
20
29 . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 28 e n d o n d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o n o s e u n e a u n a n t í g e n o d e la s b a c t e r ia s .
30. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 28 e n d o n d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e u n r e s t o 25 d e d i r e c c i o n a m i e n t o n o s e u n e a p o l i s a c á r i d o s b a c t e r ia n o s .
31. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 28 e n d o n d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o n o s e u n e a lo s á c id o s t e i c o i c o s d e la p a r e d c e lu l a r .
30 32. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 23 e n d o n d e D n o c o r r e s p o n d e e n e s t r u c t u r a a u n a n t ib ió t i c o .
33. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 23 e n d o n d e D n o c o r r e s p o n d e e n e s t r u c t u r a a la u t i l i z a d a e n e l t r a t a m i e n t o d e in f e c c i o n e s b a c t e r ia n a s .
35
34. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 23 e n d o n d e D e s u n c o m p u e s t o q u í m i c o ú t i l e n e l t r a t a m i e n t o d e l c á n c e r q u e t i e n e u n g r u p o f u n c i o n a l a m i n a t e r c i a r i a o q u e p u e d e m o d i f i c a r s e p a r a t e n e r e s e g r u p o f u n c io n a l .
40 35. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 - 23 e n d o n d e D e s u n c o m p u e s t o q u í m i c o ú t i l e n e l t r a t a m i e n t o d e u n a e n f e r m e d a d a u t o i n m u n e q u e t i e n e u n g r u p o f u n c i o n a l a m in a t e r c i a r i a o q u e p u e d e m o d i f i c a r s e p a r a t e n e r e s e g r u p o f u n c io n a l .
1A. U n c o m p u e s t o q u e t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a I
45
50
55
Figure imgf000122_0001
Figure imgf000122_0002
60 e n d o n d e L b ' e s u n r e s t o p r e c u r s o r d e u n ió n c o v a l e n t e d e e n l a z a d o r ; Q 1 e s A a -W w , d o n d e e l s u b í n d i c e a e s 0 o 1 , y A e s u n a u n id a d d e e x t e n s i ó n o p c io n a l , c o m p u e s t a o p c i o n a l m e n t e p o r d o s , t r e s o c u a t r o s u b u n i d a d e s d e m a n e r a q u e e l s u b í n d i c e a e s 1 c u a n d o A e s t á p r e s e n t e y e s 0 c u a n d o A e s t á a u s e n t e ; Q 2 e s W '- E - , e n d o n d e Q 2, c u a n d o e s t á p r e s e n t e , e s t á u n i d o a V , Z 1, Z 2 o Z 3; W w y W 'w s o n u n i d a d e s e s c i n d i b l e s ; e n d o n d e W w d e Q 1 e s t á c o m p u e s t o p o r u n r e s t o p e p t í d i c o q u e t i e n e u n e n l a c e p e p t í d i c o a J q u e s e p u e d e e s c i n d i r s e l e c t i v a m e n t e m e d i a n t e u n a p r o t e a s a 65 r e g u l a d o r a e n c o m p a r a c i ó n c o n la s p r o t e a s a s s é r i c a s e n la s q u e la p r o t e a s a r e g u l a d o r a o i n t r a c e l u l a r p u e d e o n o s e r m á s e s p e c í f i c a p a r a la a n o m a l í a u o t r a c é lu l a s n o d e s e a d a s e n c o m p a r a c i ó n c o n la s c é l u l a s n o r m a le s , o e s c a p a z de escisión selectiva por una proteasa excretada en mayores cantidades por las células anómalas u otras no deseadas en comparación con las células normales, o está compuesto por un resto disulfuro que es escindible por glutatión a través del intercambio de disulfuro o está compuesto por un resto de hidrazona que es más reactivo a la hidrólisis en condiciones de pH más bajas presentes en los lisosomas en comparación con el pH fisiológico del suero (es decir, en condiciones más ácidas) cuando se incorpora a un LDC de Fórmula 1 cuya estructura corresponde a la de Fórmula I, y W'-E de Q2 proporcionan un enlace glicosídico escindible por una glicosidasa localizada intracelularmente donde la glicosidasa puede o puede no ser más específico para las células anómalas u otras células no deseadas en comparación con las células normales, o es capaz de escisión selectiva por una glicosidasa excretada en mayores cantidades por las células anómalas u otras no deseadas en comparación con las células normales cuando se incorpora a un LDC de la Fórmula 1 cuya estructura corresponde a la de la Fórmula I, donde el subíndice w es 0 o 1 de manera que W está ausente cuando w es 0 o está presente cuando w es 1, y w' es 0 o 1, donde W'-E está ausente cuando w' es 0 o está presente cuando w' es 1, y donde w w 'es 1 (es decir, uno y solo uno de W, W' está presente); V, Z1 Z2 y Z3 son =Nor = C(R24)-, donde R24 es hidrógeno o alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o halógeno,-NO2 , -CN u otro grupo aceptor de electrones, un grupo donante de electrones, -Q2, o -C(R8)(R9)-D+, donde al menos uno de V, Z1, Z2 y Z3 es =C(R24)- cuando w es 1 y al menos dos de V, Z1, Z2 y Z3 son =C(R24)- cuando w' es 1, siempre que cuando w sea 1 Q2 esté ausente y uno y solo uno R24 sea -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y los sustituyentes Q1-J- y -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí, y siempre que cuando w' sea 1 uno cualquiera solo uno R24 es -C(R8)(R9) -D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2 , Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y uno y solo otro R24 es Q2 de manera que Q2 está unido a otro de V, Z1 Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y el Q2 y -C(R8)(R9)-D+ sustituyentes son orto o para entre sí; R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; R' es hidrógeno o es halógeno, -NO2 , -CN o de otro grupo de retirada de electrones, o es un grupo dador de electrones; E y J son independientemente -O-, -S- o -N (R33) -, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; D+ representa una estructura de un fármaco D que contiene una amina terciaria cuaternizada; en el que dicha escisión por proteasa reguladora o intracelular, intercambio de disulfuro, hidrólisis ácida o escisión por glicosidasa da como resultado la expulsión de D de D+ de dicha LDC.
2A. El compuesto de la modalidad 1A en donde Lb' tiene la estructura de uno de
Figure imgf000123_0001
en donde R es hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; T es -Cl, -Br, -I, -O-mesilo u -O-tosilo; U es -F, -Cl, -Br, -I, -ON-succinimida, -O-(4-nitrofenil), -O-pentafluorofenilo, -O-tetrafluorofenilo u -O-C(=O)-OR57; X2 es alquileno C1-10, carbociclo C3-C8, -O-(alquilo C1-C6), -arileno-, alquileno C1-C10-arileno, arileno-alquileno C1-C10, alquileno Ci -Ci 0-(carbodclo C3-C6 )-, -(carbociclo C3-C8)-alquileno C1-C10-, heterocicloC3-C8 , alquileno C1-C10-(heterociclo C3-C8 )-, -heterociclo C3-C8)-alquileno C1-C10, -(CH2CH2O)u, o -CH2CH2O)u-CH2-, en donde u es un número entero que varía de 1 a 10 y R57 es alquilo o arilo C1-C6.
3A. El compuesto de la modalidad 2A en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula IIa o Fórmula IIb:
Figure imgf000124_0001
hidrógeno o metilo; E y J son independientemente -O- o -N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; el subíndice w es 1 y W de Fórmula IIa es un resto peptídico (es decir, W es de 2 o más subunidades de aminoácidos, preferentemente 2 a 4), en donde el enlace peptídico a J se puede escindir selectivamente mediante una proteasa reguladora o lisosómica en comparación a proteasas séricas, y W de Fórmula IIb es un carbohidrato unido por enlace glicosídico, en donde el enlace glicosídico a E en W'-E se puede escindir mediante una glicosidasa lisosómica o intracelular; R8 es hidrógeno; R9 es hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o fenilo opcionalmente sustituido. Preferentemente, el péptido W de Fórmula IIa es -W1-W2-, en el que W1 y W2 son subunidades de aminoácidos de W que juntas proporcionan un sitio de reconocimiento para una cisteína proteasa tal como una catepsina.
En algunas modalidades de Fórmula IIa o Fórmula IIb -A- es -B(SA)-, en donde B(SA) es una unidad de ramificación (B) sustituida por un agente solubilizante (SA). En otras modalidades, A de Fórmula IIa o Fórmula IIb -A- no comprende una Unidad de Ramificación. En algunas modalidades de Fórmula IIa o Fórmula IIa -A- es -A1-AO- en donde A1 o Ao es -B(SA)-. En otras modalidades de Fórmula IIa o Fórmula IIb, A no comprende una unidad de ramificación. En otras modalidades más de Fórmula IIa o IIb, no hay agente solubilizante presente en -A-.
4A. El compuesto de la modalidad 3A en donde el compuesto de Fórmula IIa tiene la estructura de la Fórmula IIIa o Fórmula IIIb:
1
1
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Figure imgf000125_0001
20
25
30
35
Figure imgf000125_0002
Figure imgf000125_0003
40 e n d o n d e e l s u b í n d i c e w e s 1 ; e l s u b í n d i c e w ' e s 1 ; A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e e l r e s t o -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A 0 e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A 0 e s t á p r e s e n t e , d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A 1- A 0 ; e n d o n d e R y R a2 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o ; R a1 e s h id r ó g e n o , m e t i l o , e t i lo o u n a u n id a d b á s i c a ( B U ) ; H E e s u n a u n i d a d p o t e n c i a d o r a d e h i d r ó l i s i s o p c i o n a l ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ; c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o 45 h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o d o s R b1 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s d e f in e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 o u n o R b1 y H E j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n i d o s d e f i n e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y e l o t r o R b1 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - [ C ( R 1) ( R 1) ] -[ C ( R 2) ( R 2) ]n -N ( R 22) ( R 23), d o n d e n e s 0 , 1 , 2 o 3 , c a d a R 1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o i n f e r i o r o d o s R 1 j u n t o c o n e l 50 c a r b o n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 , y c a d a R 2 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o d o s R 2 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o i n t e r m e d i o c o m p r e n d e u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , o u n R 1 y u n R 2 j u n t o c o n lo s c a r b o n o s a lo s c u a le s e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o in t e r m e d i o c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y lo s R 1 y R 2 r e s t a n t e s s o n c o m o s e d e f in e n ; R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e 55 h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ; R 8 e s h id r ó g e n o ; y R 9 e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6.
Figure imgf000125_0004
4A. E l c o m p u e s t o d e la m o d a l i d a d 2 A e n d o n d e e l c o m p u e s t o d e F ó r m u la I t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u la I V a o F ó r m u l a IV b :
65
Figure imgf000126_0001
60
R 35 e s m e t i l o , -( C H 2) 4- N H 2 , -( C H 2) 3 N H ( C = O ) N H 2 , -( C H 2 ) 3 N H ( C = N H ) N H 2 , o - ( C H 2) 2 C O 2 H ; y R 45 e s - C H 2O H o - C O 2 H . E n o t r a s m o d a l i d a d e s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o e n la f ó r m u l a I V b s e r e e m p l a z a p o r o t r o r e s t o c a r b o h i d r a t o e n e l q u e e l 65 e n l a c e g l i c o s í d i c o a e s e r e s t o s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a .
Figure imgf000127_0001
5A. E l c o m p u e s t o d e la m o d a l i d a d 4 A e n e l q u e e l c o m p u e s t o d e F ó r m u l a I V a o F ó r m u l a I V b t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a V a o la F ó r m u l a V b :
Figure imgf000127_0002
e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , d o n d e e l r e s t o - [ C ( R b) ( R b) ]m - [ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s A i c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A i - A o ; R e s - H e n d o n d e R e s h id r ó g e n o ; R a1 e s h i d r ó g e n o o B U e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2- N ( R 22) ( R 23), e n d o n d e R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o o e t i lo , o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ; R a2 e s h id r ó g e n o ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e i a 5 ; R bi e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C i - C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ; R 45 e s -C O 2 H ; E e s - O - ; J e s - N H - ; V , Z 1, Z 2 y Z 3 s o n c a d a u n o = C H 2- ; R 8 e s h id r ó g e n o ; y R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o .
E n o t r a s m o d a l i d a d e s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o e n la f ó r m u l a V b s e r e e m p l a z a p o r o t r o r e s t o c a r b o h i d r a t o e n e l q u e e l e n l a c e g l i c o s í d i c o a e s e r e s t o s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a .
E n a lg u n a s m o d a l i d a d e s d e F ó r m u la V a o F ó r m u l a V b , A o e s - B ( S A ) - . E n o t r a s m o d a l i d a d e s d e F ó r m u la I V a o F ó r m u l a IV b , A o n o e s - B ( S A ) - o n o c o m p r e n d e u n a g e n t e s o lu b i l i z a n t e .
6A. E l c o m p u e s t o d e la m o d a l i d a d 5 A e n e l q u e A o e n la f ó r m u l a V b t i e n e la e s t r u c t u r a d e
i 27
Figure imgf000128_0001
e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l r e s t o c a r b o n i l o d e l C - t e r m i n a l d e c u a l q u i e r e s t r u c t u r a r e p r e s e n t a e l p u n t o d e u n ió n a J y d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l r e s t o a m i n o d e l e x t r e m o N d e c u a l q u i e r a d e la s e s t r u c t u r a s r e p r e s e n t a e l p u n t o d e u n ió n a u n g r u p o f u n c i o n a l d e A 1 q u e c o n t i e n e c a r b o n i l o ; d o n d e K y L s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e C , N , O o S , s ie m p r e q u e c u a n d o K o L e s O o S , R 41 y R 42 a K o R 43 y R 44 a L e s t á n a u s e n t e s , y c u a n d o K o L s o n N , u n o d e R 41, R 42 a K o u n o d e R 43, R 44 a L e s t á n a u s e n t e s , y s i e m p r e q u e n o s e s e l e c c i o n e n d o s L a d y a c e n t e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e c o m o N , O o S ; d o n d e q e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 12 , y r e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 12 : d o n d e G e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , - O H , - O R G , - C O 2 H , C O 2 R G , e n d o n d e R G e s a l q u i l o C 1- C 6 , a r i l o o h e t e r o a r i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o R PR, e n d o n d e R PR e s u n p r o t e c t o r a d e c u a d o , - N H 2 o - N ( R G ) ( R G ), e n e l q u e R G s e l e c c i o n a d o i n d e p e n d i e n t e m e n t e e s c o m o s e d e f i n i ó p r e v i a m e n t e o a m b o s R G j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o a m b o s R G c o m o R PR j u n t o s f o r m a n u n g r u p o p r o t e c t o r a d e c u a d o ; e n la q u e R 38 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; R 39, R 44 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o u o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o a m b o s R 39, R 40 j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3-C a , o R 41, R 42 j u n t o c o n K a l q u e e s t á n u n i d o s c u a n d o K e s C , o R 43, R 44 j u n t o c o n L a l q u e e s t á n u n id o s c u a n d o L e s C , c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , o R 40 y R 41, o R 40 y R 43, o R 41 y R 43 j u n t o c o n e l c a r b o n o o h e t e r o á t o m o a l q u e e s t á n u n id o s y lo s á t o m o s in t e r m e d i o s e n t r e e s o s c a r b o n o y / o h e t e r o á t o m o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o o h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s , o e n e l q u e A 0 e n la F ó r m u l a V b t i e n e u n a e s t r u c t u r a q u e c o r r e s p o n d e a u n a l f a - a m i n o á c i d o , u n b e t a - a m i n o á c i d o u o t r o á c i d o q u e c o n t i e n e a m in a .
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , A 0 e s u n a u n id a d d e r a m i f i c a c i ó n q u e t i e n e u n s u s t i t u y e n t e d e a g e n t e s o l u b i l i z a n t e ( e s d e c i r , - A 0 - e s - B ( S A ) - ) . E n e s o s c a s o s , G e s t á c o m p u e s t o p o r u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e ( S A ) y e s p r e f e r e n t e m e n t e la c a d e n a l a t e r a l d e u n D - o L - a m i n o á c i d o s u s t i t u i d o p o r e s e S A , y lo s g r u p o s v a r i a b l e s r e s t a n t e s s o n c o m o s e d e f in e n .
8A. E l c o m p u e s t o d e la m o d a l i d a d 6 A e n d o n d e A 0 t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000128_0002
e n d o n d e X 3 e s t á a u s e n t e o e s X 2 , y e n d o n d e X 2 e s c o m o s e d e f i n e e n la m o d a l i d a d 2 A ; y R a e s la c a d e n a l a t e r a l d e l i s in a , á c i d o a s p á r t i c o o á c i d o g lu t á m ic o .
9A. E l c o m p u e s t o d e la m o d a l i d a d 7 A u 8 A e n d o n d e A 0 t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000128_0003
e n d o n d e R 46A y R 46B s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e H o a l q u i l o C 1- C 6 ( p r e f e r e n t e m e n t e m e t i l o ) o j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o u n o d e R 46A y R 46B e s h id r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 y e l o t r o e s u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e p r e f e r e n t e m e n t e u n id o a l h e t e r o á t o m o d e n i t r ó g e n o a t r a v é s d e u n g r u p o f u n c i o n a l a m id a . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , c a d a u n o d e R 46A y R 46B e s h id r ó g e n o o m e t i l o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , u n o d e R 46A y R 46B e s h i d r ó g e n o y e l o t r o e s u n a g e n t e s o l u b i l i z a n t e p r e f e r e n t e m e n t e u n id o a l h e t e r o á t o m o d e n i t r ó g e n o a t r a v é s d e u n g r u p o f u n c i o n a l a m id a .
10A. El compuesto de una cualquiera de las modalidades 1A a 6A, en donde A0 es una unidad de ramificación que tiene sustitución por un agente solubilizante.
11A. El compuesto de una cualquiera de las modalidades 1A a 9A A0 es lisina, preferentemente L-lisina, opcionalmente sustituida en su grupo £-amino con un agente solubilizante.
Otros aspectos enumerados de la descripción son:
1C. Una composición de conjugado de fármaco y ligando (LDC), en donde la composición de LDC está representada por la estructura de la Fórmula 1:
Figure imgf000129_0001
en donde "Ligando" es una Unidad de Ligando de un resto de direccionamiento, que se une selectivamente a un resto diana; Lb es un resto de unión covalente de ligando; Q1 es Aa-Ww , en donde A es una unidad de extensión opcional, opcionalmente compuesta por dos, tres o cuatro subunidades, de manera que el subíndice a es 0 cuando A está ausente o 1 cuando A está presente; Q2 es W'w -E-, en donde Q2 , cuando está presente, está unido a V, Z1, Z2 o Z3; Ww y W'w son unidades separables; en donde Ww de Q1 se puede escindir selectivamente por una proteasa reguladora o intracelular en comparación con las proteasas séricas en donde la proteasa reguladora o intracelular puede o no ser más específica para las células anómalas u otras no deseadas diana en comparación con las células normales, o es capaz de escisión selectiva por una proteasa excretada en mayores cantidades por las células anómalas u otras células no deseadas objetivo en comparación con las células normales, o por glutatión a través del intercambio de disulfuro, o es más reactivo a la hidrólisis en condiciones de pH más bajas presentes en los lisosomas en comparación con el pH fisiológico de suero, y W'-E de Q2 proporciona un enlace glicosídico selectivamente escindible por una glicosidasa localizada intracelularmente, donde la glicosidasa puede o no ser más específica para las células anómalas u otras células no deseadas diana en comparación con las células normales, o es capaz de Escisión selectiva por una glicosidasa excretada en mayores cantidades por las células anómalas u otras células no deseadas objetivo en comparación con células normales, donde el subíndice w es 0 o 1 de manera que W está ausente cuando w es 0 o está presente cuando w es 1, y w' es 0 o 1, donde W'-E está ausente cuando w' es 0 o es presente cuando w' es 1, y en donde w w' es 1 (es decir, uno y solo uno de W, W está presente); V, Z1, Z2 y Z3 son =N- o =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o halógeno, -NO2 , -CN u otro grupo aceptor de electrones, un grupo donante de electrones, -Q2, o -C(R8)(R9)-D+, en donde al menos uno de V, Z1, Z2 y Z3 es =C(R24)- cuando w es 1 y al menos dos de V, Z1, Z2 y Z3 son =C(R24)-cuando w' es 1, siempre que cuando w sea 1, Q2 esté ausente y solo una R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8) (R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y los sustituyentes Q1-J- y -C(R8)(R9)-D+ son orto o p a ra entre sí, siempre que cuando w' sea 1, uno cualquiera solo R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y uno y solo otro R24 es Q2 de manera que Q2 está unido a otro de V, Z1, Z2 , Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y Q2 y -C(R8)(R9)-D+ sustituyentes son o rto o p a ra entre sí; R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; E y J son independientemente -O-, -S- o -N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; R' es hidrógeno o es halógeno, -NO2 , -CN o de otro grupo de retirada de electrones, o es un grupo dador de electrones; D + representa una estructura de un fármaco D que contiene una amina terciaria cuaternizada; y p es una carga de fármaco promedio que tiene un número que varía de 1 a 24; en el que dicha escisión por proteasa, intercambio de disulfuro, hidrólisis ácida o escisión por glicosidasa da como resultado la expulsión de D de un LDC de la composición de LDC.
2C. La composición de LDC de la modalidad 1C en donde -D+ es una unidad de fármaco de auristatina cuaternizado.
3C. La composición de LDC de la modalidad 1C en donde -D+ tiene la estructura de De' o Df'
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10
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Figure imgf000130_0002
e n d o n d e R 10 y R 11 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e a l q u i l o C 1- C 8 ; R 12 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 , a r i lo , -X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8) , h e t e r o c i c l o C 3- C 8 o - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8) ; R 13 e s h i d r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 , a r i l o , - X 1- a r i l o , - X 1-25
e n d o n d e R 10 y R 11 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e a l q u i l o C 1- C 8 ; R 12 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 , a r i lo , -X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3- C 8) , h e t e r o c i c l o C 3- C 8 o - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3- C 8) ; R 13 e s h i d r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 , a r i l o , - X 1- a r i l o , - X 1-(c i c l o a l q u i l o C 3- C 8) , h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 y - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3- C 8 ) ; R 14 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; o R 13 y R 14 t o m a d o s j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 ; 30 R 15 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 8 ; R 16 e s h i d r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 , a r i l o , - X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8) , h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 y - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3- C 8) ; R 17 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o , - O H , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 y O -( a l q u i l o C 1- C 8) ; R 18 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 8 ; R 19 e s - C ( R 19A) 2 -C ( R 19A) 2- a r i l o , - C ( R 19A) 2- C ( R 19A) 2 -( h e t e r o c i c l o C 3- C 8) o - C ( R 19A) 2- C ( R 19A) 2 -( c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 ) , R 21 e s a r i l o o h e t e r o c i c l o C 3- C 8 ; e n d o n d e R 19A e s h i d r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 8 u - O H ; R 20 e s h i d r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 20 , a r i lo , 35 h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 , -( R 47O ) m - R 48 y -( R 47O ) m - C H ( R 49) 2 ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 1000 ; R 47 e s a lq u i lo C 2 - C 8 ; R 48 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 8 ; R 49 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e - C O O H , - ( C H 2 ) n - N ( R 50) 2 , -( C H 2) n - S O 3 H , o -( C H 2 )n - S O 3 - a l q u i l o C 1- C 8 ; R 50 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e a lq u i lo C 1- C 8 , o - ( C H 2V C O O H ; Z e s O , S , N H o N R 46 , e n d o n d e R 46 e s a lq u i lo C 1- C 8 ; X 1 e s a lq u i l e n o C 1- C 10 ; y n e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ; e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a N in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 1.
40
4 C . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
45
50
Figure imgf000130_0003
e n d o n d e R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 o - C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ; y p e s u n n ú m e r o c o m p r e n d i d o e n t r e 1 y 24 .
55 P r e f e r e n t e m e n t e , p v a r í a d e 1 a 8.
5 C . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
60
65
Figure imgf000131_0001
e n d o n d e A b e s u n a U n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o d e u n a n t i c u e r p o d e d i r e c c i o n a m i e n t o y e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3; R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 o - C H 2 C H 2C H 2N H ( C = O ) N H 2 ; y p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o d e 1 a 24 . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o d e 1 a 8.
6C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 4 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000131_0002
7C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 5 C e n d o n d e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000131_0003
e n d o n d e e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c id o c a r b o x í l i c o M 3.
8C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000131_0004
d o n d e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 24 . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
9C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000132_0001
10C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 8 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000132_0002
11C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 9 C e n d o n d e c a d a L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000132_0003
12C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e -D e s u n a u n i d a d d e f á r m a c o t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d o .
13C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a Dg -i ' o F ó r m u l a Dh -t:
Figure imgf000133_0001
indicados para ese heteroarilo están en una relación 1,3 entre sí con sustitución opcional en las posiciones restantes; R2A es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido o R2A junto con el átomo de oxígeno al que está unido define un sustituyente unido a O distinto de -OH;
R3 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; R4, R4A, R4B, R5 y R6 son alquilo opcionalmente sustituido, seleccionados independientemente; R7A es arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; R8A es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; y m es 0 o 1, en donde la línea ondulada a N+ indica un enlace covalente de D+ a lo que resta de la estructura de la Fórmula 1.
14C. La composición de LDC de la modalidad 1C en donde la composición de Fórmula 1 está representada por la estructura de
Figure imgf000133_0002
en donde R34 es isopropilo y R35 es CH3 o -CH2CH2CH2NH(C=O)NH2; R7B es hidrógeno u -OH; R2A es alquilo inferior, -C(=O)R2B o -C(=O)n Hr2B, en donde R2B es alquilo inferior; y p es un número comprendido entre 1 y 24. En modalidades preferidas, p es un número que varía de 1 a 8.
15C. La composición de LDC de la modalidad 1C en donde la composición de Fórmula 1 está representada por la estructura de
Figure imgf000134_0001
e n d o n d e R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a l q u i l o in f e r io r , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i lo in f e r io r ; y p e s u n n ú m e r o c o m p r e n d i d o e n t r e 1 y 24 . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
16C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 4 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000134_0002
17C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 5 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000134_0003
e n d o n d e e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p a l á c i d o c a r b o x í l i c o ;
R34 es isopropilo y R35 es CH3 o -CH2CH2CH2NH(C=O)NH2; R7B es hidrógeno u -OH; R2A es alquilo inferior, -C(=O)R2B o -C(=O)NHR2B, en donde R2B es alquilo inferior; y p' es un número entero comprendido entre 1 y 24. En modalidades preferidas, p' es un número entero de 1 a 8.
19C. La composición de LDC de la modalidad 1C en donde cada compuesto de LDC de la composición de Fórmula 1 está representado por la estructura de
Figure imgf000135_0001
en donde el resto Ab-S- está unido al carbono a o p en el ácido carboxílico M3; R7B es hidrógeno u -OH; R2A es alquilo inferior, -C(=O)R2B o -C(=O)NHR2B, en donde R2B es alquilo inferior; y p' es un número entero de 1 a 24. En modalidades preferidas, p' es un número entero de 1 a 8.
20C. La composición de LDC de la modalidad 18C en donde cada compuesto de LDC de la composición de Fórmula 1 está representado por la estructura de
Figure imgf000135_0002
21C. La composición de LDC de la modalidad 19C en donde cada compuesto de LDC de la composición está representado por la estructura de
Figure imgf000135_0003
22C. La composición de LDC de la modalidad 4C, 5C, 8C, 9C, 14C, 15C, 18C o 19C en donde A es -CH2(CH2)4(C=O)- o -CH2(CH2)4(C=O)NHCH2CH2(C=O)-.
23C. La composición de LDC de la modalidad 1C en donde -D+ es un dímero de fenazina cuaternizado
24C. La composición de LDC de la modalidad 1C en donde -D+ tiene la estructura de Di ':
Figure imgf000136_0001
e n d o n d e e l A n i l l o A y e l A n i l l o B s o n a r i lo o h e t e r o a r i l o s e l e c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o s c o n u n o , d o s o t r e s s u s t i t u y e n t e s R A y / o R B f u s i o n a d o s a u n s i s t e m a d e a n i l l o d e f e n a z i n a o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o c o n u n o d o s o t r e s s u s t i t u y e n t e s R C y / o R BD s e l e c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e , e n d o n d e R A , R B , R C y R D , c u a n d o e s t á p r e s e n t e , s o n h a ló g e n o in d e p e n d i e n t e m e n t e , o p c i o n a l m e n t e a l q u i l o o u n s u s t i t u y e n t e u n i d o a O s u s t i t u i d o s ; R 9A y R 9B s e s e l e c c i o n a n i n d e p e n d i e n t e m e n t e c o m o a lq u i l o o p c i o n a l s u s t i t u i d o o s e t o m a n j u n t o c o n lo s á t o m o s d e n i t r ó g e n o a lo s q u e e s t á n u n i d o s y lo s á t o m o s d e c a r b o n o i n t e r m e d i o s e n t r e e s t o s n i t r ó g e n o c o m p r e n d e n u n s i s t e m a d e a n i l l o h e t e r o c i c l o a l q u i l o y e n d o n d e n , s y o s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e n ú m e r o s e n t e r o s q u e v a r í a n d e 2 a 4 ; e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a N in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 1.
25C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000136_0002
e n d o n d e R A y R B e s t á n p r e s e n t e s y s o n a l q u i l o i n f e r io r .
26C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 2 5 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e L D C e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000136_0003
e n d o n d e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a e n t r e 1 y 24 .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , R 45 e s - C O 2 H . E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , e l c a r b o h i d r a t o e s á c i d o g l u c u r ó n i c o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s R A y R B s o n - C H 3. E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , L b e s u n r e s t o M 2 o M 3 , c o n m a y o r p r e f e r e n c i a d o n d e M 2- A e s u n r e s t o L ss o M 3- A e s u n r e s t o L s . E n o t r a s m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , A s e r e e m p l a z a c o n - A 1- A 0 - d e m a n e r a q u e M 2- A 1 e s u n r e s t o L ss o M 3- A 1 e s u n r e s t o L s . E n o t r a s m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
27C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 2 6 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000137_0001
e n d o n d e e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3 y p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
29C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 2 6 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000138_0001
e n d o n d e Q e s - W - A o - W - A 1- A 0 - y p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 24 . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
Figure imgf000138_0002
30C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 C e n d o n d e - D e s u n i n h i b i d o r d e M D R c u a t e r n i z a d o q u e t i e n e u n a s u b e s t r u c t u r a d e i s o q u in o l in a .
31C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 0 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000138_0003
e n d o n d e A r e s a r i lo o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o y p e s u n n ú m e r o q u e v a r i a d e 1 a 24.
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , R 45 e s - C O 2 H . E n m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , e l c a r b o h i d r a t o e s á c i d o g l u c u r ó n i c o . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s R A y R B s o n - C H 3. E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , " L i g a n d o " e s u n a n t i c u e r p o d e d i r e c c i o n a m i e n t o y L b e s u n r e s t o M 2 o M 3 , c o n m a y o r p r e f e r e n c i a d o n d e M 2- A e s u n r e s t o Lss o M 3- A e s u n r e s t o Ls.
E n o t r a s m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , A s e r e e m p l a z a c o n - A 1- A 0 - d e m a n e r a q u e M 2- A 1 e s u n r e s t o L ss o M 3- A 1 e s u n r e s t o L s . E n o t r a s m o d a l i d a d e s m á s p r e f e r i d a s , " L i g a n d o " e s u n a n t i c u e r p o d e d i r e c c i o n a m i e n t o y p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 24 . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
32C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 1 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000139_0001
e n d o n d e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
33C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 1 C e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o d e L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000139_0002
e n d o n d e e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3 y p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
34C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 0 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000140_0001
en donde Q es -W-A o -W-A1-A0- y p es un número que varía de 1 a 24.
En modalidades preferidas, W es un sustrato para una proteasa reguladora que escinde el enlace entre Q1 y el resto SI. En otras modalidades preferidas, "Ligando" es un anticuerpo de direccionamiento y Lb es un resto M2 o M3, con mayor preferencia donde M2-A o M2-A1 es un resto Lss o M3-A o M3-A1 es un resto Ls . En otras modalidades más preferidas, "Ligando" es un anticuerpo dirigido y p es un número que varía de 1 a 8.
35C. La composición de LDC de la modalidad 34C en la que la composición de Fórmula 1 está representada por la estructura de
Figure imgf000140_0002
36C. La composición de LDC de la modalidad 31C en donde cada compuesto de LDC de la composición de Fórmula 1 está representado por la estructura de
Figure imgf000141_0001
e n d o n d e e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p a l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3 y p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o d e 1 a 24 . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o d e 1 a 8.
37C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 1 C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u la 1 e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000141_0002
e n d o n d e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
38C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 1 C e n la q u e c a d a c o m p u e s t o d e L D C d e la c o m p o s i c i ó n d e F ó r m u l a 1 e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000142_0001
e n d o n d e e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3 y p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
39C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 1 C , 3 2 C , 3 3 C , 3 4 C , 3 5 C o 3 6 C e n la q u e A r t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000142_0002
e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a i n d i c a la u n ió n d e l r e s t o a r i l o a l g r u p o f u n c i o n a l c a r b o n i l o i n d i c a d o .
40C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 C - 3 9 C e n la q u e la u n i d a d d e l i g a n d o o A b e s d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o s e d i r i g e a u n a n t í g e n o e n c é l u l a s d e m a m í f e r o .
41C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 C - 3 9 C e n la q u e la U n i d a d d e L ig a n d o o A b d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o n o s e u n e a u n a n t í g e n o e n b a c t e r ia s .
42C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 C - 3 9 C e n la q u e la u n i d a d d e l i g a n d o o A b d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o n o s e u n e a p o l i s a c á r i d o s b a c t e r i a n o s .
43C. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 C - 3 9 C e n la q u e la u n i d a d d e l i g a n d o o A b d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o n o s e u n e a lo s á c i d o s t e i c o i c o s d e la p a r e d c e lu l a r .
1D. U n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a I:
en donde L'b es un precursor del resto de unión covalente de ligando; Q1 es Aa-Ww , en donde A es una unidad de extensión opcional de manera que el subíndice a es 0 cuando A está ausente o 1 cuando A está presente y está opcionalmente compuesto por dos, tres o cuatro subunidades; Q2 es W'w -E-, en donde Q2, cuando está presente, está unido a V, Z1 Z2 o Z3; Ww y W'w son unidades escindibles, en donde Ww de Q1 es capaz de escindirse selectivamente por una proteasa reguladora o intracelular en comparación con las proteasas séricas, o por glutatión a través del intercambio de disulfuro, o es más reactivo a la hidrólisis a pH más bajo (es decir, en condiciones más ácidas) presentes en los lisosomas en comparación con el pH fisiológico del suero, W'-E de Q2 proporciona un enlace glicosídico escindible por una glicosidasa localizada intracelularmente, y el subíndice w es 0 o 1 de manera que W está ausente cuando w es 0 o W está presente cuando w es 1, y el subíndice w' es 0 o 1, donde W'-E está ausente cuando w' es 0 o W'-E está presente cuando w' es 1, y donde w w' es 1 (es decir, uno y solo uno de W, W' está presente); V, Z1, Z2 y Z3 son =N- o =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o halógeno, -NO2 , -CN u otro grupo aceptor de electrones, un grupo donante de electrones, -Q2, o-C(R8)(R9)-D+, en donde al menos uno de V, Z1, Z2 y Z3 es =C(R24)- cuando w es 1, y al menos dos de V, Z1, Z2 y Z3 son =C(R24)- cuando w' es 1, siempre que cuando w sea 1, Q2 esté ausente y uno y solo uno R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-y los sustituyentes Q1-J- y -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí, siempre que cuando w' sea 1, uno cualquiera solo uno R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y uno y solo otro R24 es Q2 de manera que Q2 está unido a otro de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y Q2 y sustituyentes -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí; R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; R' es hidrógeno o es halógeno, -NO2 , -CN o de otro grupo aceptor de electrones, o es un grupo donante de electrones; E y J son independientemente -O-, -S- o -N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; D+ representa una estructura de un fármaco que contiene una amina terciaria cuaternizada; y el subíndice p es un número que varía de 1 a 24; y en el que dicha escisión por proteasa, intercambio disulfuro, hidrólisis ácida o escisión por glicosidasa da como resultado la expulsión del fármaco (D) que contiene amina terciaria libre del compuesto fármaco-enlazador, o un compuesto conjugado de fármaco y ligando o Conjugado N-acetil-cisteína derivado del mismo.
2D. El compuesto enlazador fármaco de la modalidad 1D, en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula IIA o Fórmula IIB:
Figure imgf000143_0001
3D. El compuesto enlazador-fármaco de la modalidad 1D en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula IIIA o Fórmula IIIB: es 1 (es decir, está presente uno y solo uno de W, W'); V, Z1, Z2 y Z3 son =N- o =C(R24)-, en donde R24 es hidrógeno o alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o halógeno, -NO2 , -CN u otro grupo aceptor de electrones, un grupo donante de electrones, -Q2, o -C(R8)(R9)-D+ , en donde al menos uno de V, Z1, Z2 y Z3 es =C(R24)- cuando w es 1, y al menos dos de V, Z1, Z2 y Z3 son =C(R24)- cuando w' es 1, siempre que cuando w sea 1, Q2 esté ausente y uno y solo uno R24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2 , Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y los sustituyentes Q1-J- y -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí, siempre que cuando w' sea 1, uno cualquiera solo uno R 24 es -C(R8)(R9)-D+ de manera que -C(R8)(R9)-D+ está unido a uno de V, Z1, Z2, Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)- y uno y solo otro R24 es Q2 de manera que Q2 está unido a otro de V, Z1, Z2 , Z3 cuando ese grupo variable es =C(R24)-, y Q2 y sustituyentes -C(R8)(R9)-D+ son orto o para entre sí; R8 y R9 son independientemente hidrógeno, alquilo, alquenilo o alquinilo, opcionalmente sustituido, o arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido; R' es hidrógeno o es halógeno, -NO2 , -CN o de otro grupo aceptor de electrones, o es un grupo donante de electrones; E y J son independientemente -O-, -S- o -N(R33)-, en donde R33 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; D+ representa una estructura de un fármaco que contiene una amina terciaria cuaternizada; y el subíndice p es un número que varía de 1 a 24; y en el que dicha escisión por proteasa, intercambio disulfuro, hidrólisis ácida o escisión por glicosidasa da como resultado la expulsión del fármaco (D) que contiene amina terciaria libre del compuesto fármaco-enlazador, o un compuesto conjugado de fármaco y ligando o conjugado N-acetil-cisteína derivado del mismo.
Figure imgf000144_0001
6D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 D a 5 D e n d o n d e L b '- t i e n e u n a e s t r u c t u r a s e l e c c i o n a d a d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n :
Figure imgf000145_0001
7D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 D - 6 D , e n d o n d e e l s u b í n d i c e a e s 1 d e m a n e r a q u e A e n Q 1 e s t á u n id o a L 'b d e la F ó r m u l a I y L b ' - A e s d e f ó r m u l a g e n e r a l M 1- A 1- A 0 - , e n d o n d e M 1 e s u n r e s t o m a le i m i d a y A 0 e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , d e m a n e r a q u e A e s d e d o s s u b u n i d a d e s c u a n d o A 0 e s t á p r e s e n t e o e s u n a s o la u n id a d c u a n d o A 0 e s t á a u s e n t e .
8D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 7 D e n d o n d e M 1- A 1- A 0- t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a V I I I : 1
Figure imgf000146_0003
15
e n d o n d e A 0 e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , d o n d e - [ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A 0 e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A 0 e s t á p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n - A 1- A 0- ; R y R a2 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o ; R a1 e s h id r ó g e n o , m e t i l o , e t i lo o u n a u n id a d b á s ic a ( B U ) ; H E e s u n a u n id a d p o t e n c i a d o r a d e h id r ó l i s i s ( H E ) o p c i o n a l ; m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ; c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 20 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o d o s R b1 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 o u n o R b1 y H E j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y e l o t r o R b1 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - [ C ( R 1) ( R 1) ] -[ C ( R 2 ) ( R 2 ) ] n - N ( R 22) ( R 23), e n d o n d e e l s u b í n d i c e n e s 25 0 , 1 , 2 o 3 ; c a d a R 1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo i n f e r i o r o d o s R 1, j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 , y c a d a R 2 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o d o s R 2 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n i d o s y c u a l q u i e r c a r b o n o i n t e r m e d i o d e f i n e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 , o u n R 1 y u n R 2 j u n t o c o n lo s c a r b o n o s a lo s q u e e s t á n u n i d o s y c u a l q u i e r c a r b o n o in t e r m e d i o c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y lo s 30 R 1 y R 2 r e s t a n t e s s o n c o m o s e d e f in e n ; R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s ; y la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e A ( o A 0 ) a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a V I I I .
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , e l r e s t o -[ C ( R 1) ( R 1) ] -[ C ( R 2 ) ( R 2 ) ] n - N ( R 22) ( R 23) e s t á p r e s e n t e c o m o s a l d e a d ic i ó n d e á c id o , 35 e n d o n d e la s a l d e a d ic i ó n d e á c id o e s la d e u n á c id o i n o r g á n ic o , p r e f e r e n t e m e n t e H C l o la d e u n á c id o o r g á n i c o t a l c o m o T F A . E n o t r a s m o d a l i d a d e s , la s a l d e a d i c i ó n d e á c i d o e s f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e .
9D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e m o d a l i d a d e s 7 D o 8 D e n la q u e M 1- A 1- A 0- d e la F ó r m u l a I t i e n e la e s t r u c t u r a d e
40
45
50
Figure imgf000146_0001
55
60
Figure imgf000146_0002
65
en donde R22 y R23 son cada uno hidrógeno o uno de R22, R23 es hidrógeno y el otro es un grupo protector de carbamato lábil a los ácidos; y el subíndice m es un número entero que varía de 0 a 4.
En algunas modalidades, el resto -N(R22)(R23) está presente como su sal de adición de ácido, en donde la sal de adición de ácido es la de un ácido inorgánico, preferentemente HCl o la de un ácido orgánico tal como TFA. En otras modalidades, la sal de adición de ácido es farmacéuticamente aceptable.
10D. El compuesto fármaco-enlazador de modalidad 7D, 8D o 9D en la que M1-A1-Aü- de la Fórmula I tiene la estructura de:
Figure imgf000147_0001
en donde el subíndice m es 0 o 4 y R22 y R23 son cada uno hidrógeno o uno de R22, R23 es hidrógeno y el otro es -C(O)Ot-Bu.
En algunas modalidades, el resto -N(R22)(R23) está presente como su sal de adición de ácido, en donde la sal de adición de ácido es la de un ácido inorgánico, preferentemente HCl o la de un ácido orgánico tal como TFA. En otras modalidades, la sal de adición de ácido es farmacéuticamente aceptable.
11D. El compuesto fármaco-enlazador de cualquiera de las modalidades 1D a 10D en donde W de Q1 está compuesto por o consiste en un resto peptídico que tiene un enlace peptídico a J que se puede escindir selectivamente mediante una proteasa reguladora o intracelular en comparación con las proteasas séricas en las que la acción de la proteasa reguladora en W provoca la liberación del fármaco que contiene amina terciaria libre (D) del compuesto de fármaco-enlazador o un compuesto conjugado de fármaco y ligando o conjugado de N-acetilcisteína derivado del mismo.
12D. El compuesto fármaco-enlazador de cualquiera de las modalidades 1D a 10D en donde W de Q2 es un carbohidrato unido por enlace glicosídico, en donde el enlace glicosídico W'-E de Q2 proporciona un sitio de escisión para una glicosidasa localizada intracelularmente la glicosidasa en W'-E provoca la liberación del fármaco que contiene amina terciaria (D) del compuesto fármaco-enlazador o un compuesto conjugado de fármaco y ligando o conjugado de N-acetil-cisteína derivado del mismo.
13D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 11D en donde el resto peptídico de W está compuesto por o consiste en un resto dipeptídico que tiene la estructura de la Fórmula VI:
Figure imgf000147_0002
e n d o n d e R 34 e s b e n c i l o , m e t i l o , i s o p r o p i l o , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000148_0001
y R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 4 - N H 2 , -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 , - ( C H 2) 3 N H ( C = N H ) N H 2 , o -( C H 2) 2C O 2 H , e n d o n d e e l e n l a c e o n d u l a d o a l C - t e r m i n a l d e l d i p é p t i d o i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e a J d e l r e s t o a r i l e n o d e F ó r m u l a I I A o I I B y e l e n l a c e o n d u l a d o a l N - t e r m i n a l d e l d i p é p t i d o i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e a lo q u e r e s t a d e W , s i lo q u e r e s t a e s t á p r e s e n t e , o p a r a a , o u n a s u b u n i d a d d e l m is m o , c u a n d o e l s u b í n d i c e a e s 1 o a L b c u a n d o a e s 0 , y e n la q u e la f i a n z a d e l d i p é p t i d o a J e s e s c i n d i b l e p o r u n a p r o t e a s a i n t r a c e l u l a r o d e r e g u l a c i ó n .
14D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 1 2 D e n d o n d e W e n Q 2 e s u n r e s t o c a r b o h i d r a t o q u e e s t á u n i d o p o r e n l a c e g l i c o s í d i c o a E , e n e l q u e e l e n l a c e g l i c o s í d i c o s e p u e d e e s c i n d i r m e d i a n t e u n a g l i c o s i d a s a i n t r a c e l u l a r y e n e l q u e W - E t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a V I I :
Figure imgf000148_0002
e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a r e p r e s e n t a E u n id o a u n o d e V , Z 1, Z 2 o Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24) , e n d o n d e E e s - O - , - S - o - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y e n d o n d e R 45 e s - C H 2O H o - C O 2 H .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , R 45 e s - C O 2 H . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , e l r e s t o c a r b o h i d r a t o d e W ' - E e s t á e n la c o n f i g u r a c i ó n D- .
15D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 1 1 D o 1 3 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a IX :
Figure imgf000148_0003
e n d o n d e R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s ; R 8 e s h id r ó g e n o ; R 9 e s h i d r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i l o o - C H ( O H ) C H 3 ; R 35 e s m e t i l o , -( C H 2) 3 N H ( C = O ) N H 2 o -( C H 2 ) 2 C O 2 H ; J e s - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y V y Z 1 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - .
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , A e s t á c o m p u e s t o p o r u n a l q u i l e n o C 1- C 6 , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o p o r u n a u n i d a d b á s ic a . E n o t r a s m o d a l i d a d e s , u n o o d o s d e V , Z 1, Z 2 e s = C H - y e l o t r o e s = N - . E n m o d a l i d a d e s p r e f e r i d a s , c a d a u n o d e V , Z 1, Z 2 e s = C H - .
16D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 1 5 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a X :
Figure imgf000149_0001
e n d o n d e e l a s t e r i s c o ( * ) d e s i g n a q u i r a l i d a d o a u s e n c i a d e la m i s m a e n e l c a r b o n o in d i c a d o ; A 0 e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A 0 e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A 0 e s t á p r e s e n t e , p o r lo q u e A s e c o n v i e r t e e n A 1- A 0 ; R e s - H ; R a1 e s - H o u n a u n i d a d b á s i c a ( B U ) , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 -N ( R 22) ( R 23), e n d o n d e R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o o e t i lo o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s ; R a2 e s h id r ó g e n o ; e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ; c a d a R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ; R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i l o o - C H ( O H ) C H 3 ; R 35 e s - ( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 , o -( C H 2 ) 2 C Ü 2 H ; J e s - N H - ; V , Z 1 y Z 2 s o n = C H 2 - ; R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s ; R 8 e s h id r ó g e n o ; y R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o .
E n m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , H E e s t á p r e s e n t e y e l s u b í n d i c e m v a r í a d e 0 a 4. E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , H E e s t á p r e s e n t e y e l s u b í n d i c e m e s 0 o 4 y A 0 e s t á a u s e n t e . E n o t r a s m o d a l i d a d e s p r e f e r id a s , R a1 e s B U y m e s 0.
E n a l g u n a s m o d a l i d a d e s , R a1 e s B U e n d o n d e e l - N ( R 22) ( R 23) d e B U e s t á p r e s e n t e c o m o s a l d e a d ic i ó n d e á c id o , m i e n t r a s q u e la s a l d e a d i c i ó n d e á c i d o e s la d e u n á c i d o in o r g á n i c o , p r e f e r e n t e m e n t e H C l o la d e u n á c i d o o r g á n i c o t a l c o m o u n T F A . E n o t r a s m o d a l i d a d e s , la s a l d e a d ic i ó n d e á c i d o e s f a r m a c é u t i c a m e n t e a c e p t a b l e .
17D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 1 2 D o 1 4 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a X I :
Figure imgf000149_0002
d e A ( e s d e c i r , A 1 s e c o n v i e r t e e n A c u a n d o A 0 e s t á a u s e n t e y A e s - A 1- A 0 - c u a n d o A 0 e s t á p r e s e n t e ) ; E e s - O - o -N H - ; J e s - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o , V y Z 3 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - ; R ' e s h i d r ó g e n o o un grupo aceptor de electrones; R8 es hidrógeno; R9 es hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido o fenilo opcionalmente sustituido; y R45 es -CO2 H o -CH2OH.
En modalidades preferidas R45 es -CO2 H y el resto carbohidrato de W'-E está en la configuración D.
18D. El compuesto fármaco-enlazador de las modalidades 12D, 14D o 17D en donde el compuesto tiene la estructura de la Fórmula XII:
Figure imgf000150_0001
en donde el asterisco (*) designa quiralidad o ausencia de la misma en el carbono indicado; A1 y A0 son subunidades seleccionadas independientemente de A, en donde A0 es una subunidad opcional de A, donde -[C(Rb1)(Rb1)]m-[HE]-es A cuando A0 está ausente y es A1 cuando A0 está presente, de manera que A se convierte en A1-A0 ; en donde A0 , cuando está presente, corresponde en estructura a un ácido que contiene amina unido a J a través del carbonilo C-terminal del ácido que contiene amina; R es hidrógeno; R' es hidrógeno o un grupo aceptor de electrones; Ra1 es hidrógeno o una unidad básica (BU) en donde BU tiene la estructura de -CH2-N(R22)(R23), en donde R22 y R23 son independientemente hidrógeno, metilo o etilo o ambos junto con el átomo del nitrógeno al que están unidos comprende un heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros; Ra2 es hidrógeno; el subíndice m es un número entero que varía de 0 a 6; cada Rb1 es independientemente hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; HE está ausente o es -C(=O)-; R45 es -CO2 H o -CH2OH; E es -O-; J es -NH-; V y Z3 son =c H2-; R8 es hidrógeno; y R9 es hidrógeno o metilo.
En algunas modalidades, Ra1 es BU en donde el -N(R22)(R23) de BU está presente como sal de adición de ácido, mientras que la sal de adición de ácido es la de un ácido inorgánico, preferentemente HCl o la de un ácido orgánico tal como un TFA. En modalidades preferidas, la sal de adición de ácido es uno farmacéuticamente aceptable y R45 es -CO2 H. En otras modalidades preferidas HE está presente y el subíndice m varía de 0 a 4 y R45 es -CO2 H. En otras modalidades preferidas HE está presente y el subíndice m es 0 o 4, A0 está ausente y R45 es -CO2 H. En otras modalidades preferidas Ra1 es BU, m es 0, Ao está presente y R45 es -CO2 H. En cualquiera de esas modalidades preferidas, el resto carbohidrato de Q2 está en la configuración D.
19D. El compuesto fármaco-enlazador de cualquiera de las modalidades 1D a 19D en donde A0 , cuando está presente, tiene la estructura de la Fórmula XIII o Fórmula XIV:
Figure imgf000150_0002
en donde la línea ondulada al resto carbonilo de cualquier estructura representa el punto de unión de A0 a W y en donde la línea ondulada al resto amino de cualquiera
en donde la línea ondulada al resto carbonilo de cualquier estructura representa el punto de unión de A0 a W y en donde la línea ondulada al resto amino de cualquier estructura representa el punto de unión de A0 a A1, en donde K y L son independientemente C, N, O o S, siempre que cuando K o L es O o S, R41 y R42 a K o R43 y R44 a L están ausentes, y cuando K o L son N, uno de R41, R42 a K o uno de R43, R44 a L están ausentes, y siempre que no se seleccionen dos L adyacentes independientemente como N, O o S; en donde el subíndice q es un número entero que varía de 0 a 12, y el subíndice r es un número entero que varía de 1 a 12; en donde G es hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, -OH, -ORG, -CO2H, CO2RG, en donde RG es alquilo C1-C6, arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido, o RPR, en donde RPR es un grupo protector adecuado, -NH2, o -N(RG)(RPG), en donde RG independientemente seleccionado es como se definió previamente o ambos RG junto con el nitrógeno al que están unidos comprende un heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros o ambos RPR juntos forman un grupo protector adecuado; en donde R38 es hidrógeno o alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido; R39-R44 son independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido u opcionalmente sustituido, o ambos R39, R40 junto con el carbono al que están unidos comprenden un cicloalquilo C3-C6, o R41, R42 junto con K al que están unidos cuando K es C, o R43, R44 junto con L al que están unidos cuando L es C, comprenden un cicloalquilo C3-C6, o R40 y R41, o R40 y R43, o R41 y R43 junto con el carbono o heteroátomo al que están unidos y los átomos intermedios entre esos carbono y/o heteroátomos comprenden un cicloalquilo o heterocicloalquilo de 5 o 6 miembros, o en donde A0 tiene una estructura correspondiente a alfa-amino, beta-amino u otro ácido que contiene amina.
20D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 18D en el que el carbono indicado con estrella (*) está predominantemente en la misma configuración absoluta que el carbono alfa de un L-aminoácido cuando el carbono indicado tiene quiralidad.
21D. El compuesto fármaco-enlazador de una cualquiera de las modalidades 1D-20D en donde -D+ es un agente disruptor de tubulina que contiene amina terciaria cuaternizada.
22D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 21D en donde el agente disruptor de tubulina cuaternizado -D+ es una unidad de fármaco de tubulisina cuaternizada.
23D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 22D en donde la unidad de fármaco de tubulisina cuaternizada-D+ tiene la estructura de la Fórmula Dg-1 o la Fórmula Dh-1':
Figure imgf000151_0001
indicados para ese heteroarilo están en una relación 1,3 entre sí con sustitución opcional en las posiciones restantes; R2A es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido o R2A junto con el átomo de oxígeno al que está unido define un sustituyente unido a O distinto de -OH; R3 es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; R4, R4A, R4B, R5 y R6 son alquilo opcionalmente sustituido, seleccionados independientemente; R7A es arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido; R8A es hidrógeno o alquilo opcionalmente sustituido; y el subíndice m es 0 o 1, en donde la línea ondulada indica la unión covalente de D+ a lo que resta del compuesto fármaco-enlazador.
24D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 2 3 D , e n d o n d e la u n i d a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000152_0001
e n d o n d e Z e s u n a l q u i l e n o i n f e r i o r o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n a l q u e n i l e n o i n f e r i o r o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; e l s u b í n d i c e q , q u e in d i c a e l n ú m e r o d e s u s t i t u y e n t e R 7B, e s 1 , 2 o 3 ; c a d a R 7B s e s e l e c c i o n a i n d e p e n d i e n t e m e n t e d e h i d r ó g e n o y u n s u s t i t u y e n t e u n i d o a O ; y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n i ó n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r .
25D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 2 4 D e n d o n d e la u n i d a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000152_0002
e n d o n d e R 2A e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R 2A j u n t o c o n e l á t o m o d e o x í g e n o a l q u e e s t á u n i d o d e f i n e u n s u s t i t u y e n t e u n i d o a O q u e n o s e a - O H ; R 3 e s a lq u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; R 5 y R 6 s o n lo s r e s i d u o s d e la c a d e n a l a t e r a l d e lo s a m i n o á c i d o s h i d r ó f o b o s n a t u r a l e s ; - N ( R 7) ( R 7) e s - N H ( a l q u i l o C 1- C 6) o - N H -N ( a l q u i l o C 1- C 6) 2 , e n d o n d e u n o y s o l o u n a lq u i lo C 1- C 6 e s t á o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o p o r - C O 2H , o u n é s t e r d e l m is m o , o p o r u n f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r .
26D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 2 5 D e n d o n d e - N ( R 7) ( R 7) s e s e l e c c i o n a d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n - N H ( C H 3 ) , - N H C H 2 C H 2 P h , y - N H C H 2- C O 2 H , - N H C H 2 C H 2 C O 2 H y - N H C H 2 C H 2 C H 2 C O 2 H .
27D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 2 3 D e n d o n d e la u n i d a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000152_0003
28D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 2 3 D a 2 7 D e n d o n d e e l s u s t i t u y e n t e u n id o a O - O R 2A e s d i s t i n t o d e - O H ( e s d e c i r , R 2A n o e s h i d r ó g e n o ) .
29D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 2 8 D e n d o n d e la u n i d a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000153_0001
e n d o n d e R 4A e s m e t i l o ; R 3 e s H , m e t i l o , e t i l o , p r o p i lo , - C H 2 - O C ( O ) R 3A, - C H 2 C H ( R 3B) C ( O ) R 3A o - C H ( R 3B) C ( O ) N H R 3A , e n d o n d e R 3A e s a lq u i lo C i - C 6 y R 3B e s H o a l q u i l o C i - C 6 , i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o d e R 3A; y - O R 2A e s u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O s e l e c c i o n a d o d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n - O R 2B, - O C ( O ) R 2B o - O C ( O ) N ( R 2B) ( R 2C) , e n d o n d e R 1B y R 2C s o n s e l e c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e d e l g r u p o q u e c o n s i s t e d e H , a lq u i l o C 1- C 6 y a l q u e n i l o C 2- C 6 ; y R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H .
30D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 2 9 D e n d o n d e la u n i d a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000153_0002
e n d o n d e R 2A y R 3 s e s e l e c c i o n a n in d e p e n d i e n t e m e n t e d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n m e t i l o , e t i l o , p r o p i lo e i s o p r o p i lo ; R 2B e s m e t i l o , e t i l o , p r o p i l o o i s o p r o p i l o o - O R 2A e s c o m o s e d e f i n i ó p r e v i a m e n t e ; R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo ; y R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H .
31D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 2 9 D e n d o n d e la u n i d a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000153_0003
e n d o n d e R 2B e s m e t i l o , e t i l o , p r o p i lo , i s o p r o p i l o o v i n i l o ; R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo ; y R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H . 32D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e u n a c u a l q u i e r a d e m o d a l i d a d 2 3 D - 2 9 D y 3 1 D e n d o n d e R 2B e s - C H 3 R 3 e s - C H 3 y R 7B e s H u - O H .
33D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e u n a c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 2 3 - 3 0 , e n d o n d e R 2A e s - C H 2C H 3 . 34D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e m o d a l i d a d e s 2 3 D - 2 9 D y 3 1 D e n d o n d e R 2B e s - C H 3 R 3 e s - C H 3 y R 7B e s H .
35D.
Figure imgf000154_0001
e n d o n d e R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 , i s o p r o p i l o , - C H 2 C H 2C H 2 N H ( C = O ) N H 2 o - C H 2 C H 2C O 2 H ; R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; y R 2A e s a lq u i lo C 1- C 6 , a lq u e n i l o C 2- C 6 , - O C H 2O R 2B, - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s h i d r ó g e n o , o a l q u i l o C 1- C 6.
36D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 3 5 D e n d o n d e R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 , o -C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ; R 7B e s h i d r ó g e n o u O H ; y R 2A e s a l q u i l o i n f e r io r , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a lq u i l o i n f e r io r .
37D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 3 5 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la :
Figure imgf000154_0002
e n d o n d e R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a lq u i l o C 1- C 6 , a l q u e n i l o C 2- C 6 , - - O C H 2O R 2B, - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s h i d r ó g e n o , o a lq u i l o C 1- C 6 ; y R 45 e s - C O 2 H o - C H 2 O H .
38D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 3 5 D e n d o n d e R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 , o -C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ; R 7B e s h i d r ó g e n o u O H ; y R 2A e s a l q u i l o i n f e r io r , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a lq u i l o i n f e r io r .
39D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 3 5 D o 3 6 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la
Figure imgf000154_0003
40D. El compuesto fármaco-enlazador de cualquiera de las modalidades 1D-8D, 15D, 17D y 35D-37D en donde Ao-A1-A0 - es -CH2(CH2)4(C=O)- o -CH2(CH2)4(C=O)NHCH2CH2(C=O)-.
41D. El compuesto fármaco-enlazador de cualquiera de las modalidades 35-40D y en donde R2A es -C(O)CH3 , metilo, etilo o propilo.
42D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 21D en donde el agente disruptor de tubulina cuaternizado -D+ es una unidad de fármaco de auristatina o dolastatina cuaternizado.
43D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 42D en donde el agente disruptor de tubulina cuaternizado -D+ es dolastatina 10 o dolastatina 15 cuaternizado.
44D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 42D en donde la unidad de fármaco de auristatina cuaternizado -D+ tiene la estructura de De' o Df':
Figure imgf000155_0001
en donde R10 y R11 son independientemente alquilo C1-C8 ; R12 es hidrógeno, alquilo C1-C8 , cicloalquilo C3-C8 , arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 o -X1-(heterociclo C3-C8); R13 es hidrógeno, alquilo C1-C8 , cicloalquilo C3-C8 , arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 y -X1-(heterociclo C3-C8); R14 es hidrógeno o metilo; o R13 y R14 tomados junto con el carbono al que están unidos comprenden un cicloalquilo C3-C8 ; R15 es hidrógeno o alquilo C1-C8 ; R16 es hidrógeno, alquilo C1-C8 , cicloalquilo C3-C8 , arilo, -X1-arilo, -X1-(cicloalquilo C3-C8), heterociclo C3-C8 y -X1-(heterociclo C3-C8); R17 son independientemente hidrógeno, -OH, alquilo C1-C8 , cicloalquilo C3-C8 y O-(alquilo C1-C8); R18 son independientemente hidrógeno o alquilo C1-C8 ; R19 es -C(R19A)2-C(R19A)2-arilo, -C(R19A)2-C(R19A)2-(heterociclo C3-C8) o -C(R19A)2-C(R19A)2-(cicloalquilo C3-C8), R21 es arilo o heterociclo C3-C8 ; en donde R19A es hidrógeno, alquilo C1-C8 u -OH; R20 es hidrógeno, alquilo C1-C20, arilo, heterociclo C3-C8 , -(R47O)m-R48 y -(R47O)m-CH(R49)2 ; el subíndice m es un número entero que varía de 1 a 1000; R47 es alquilo C2-C8 ; R48 es hidrógeno o alquilo C1-C8 ; R49 son independientemente -COOH, -(CH2)n-N(R50)2 , -(CH2V SO3H, o -(CH2)n-SO3-alquilo C1-C8 ; R50 son independientemente alquilo C1-C8 , o -(CH2)n-COOH; Z es O, S, NH o NR46, en donde R46 es alquilo C1-C8; X1 es alquileno C1-C10; y el subíndice n es un número entero que varía de 0 a 6; en donde la línea ondulada indica unión covalente de D+ a lo que resta de la estructura de la Fórmula 1.
45D. El compuesto fármaco-enlazador de la modalidad 44D en donde el compuesto tiene la estructura de la:
Figure imgf000156_0007
10
15
Figure imgf000156_0001
20
25
Figure imgf000156_0002
e n d o n d e R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 , - C H 2 C H 2 C O O H o - C H 2 C H 2C H 2 N H ( C = O ) N H 2.
30
46D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 4 5 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la :
35
Figure imgf000156_0003
40
45
Figure imgf000156_0004
50
Figure imgf000156_0005
55
60
Figure imgf000156_0006
65
Figure imgf000157_0001
e n d o n d e e l s u b í n d i c e m e s 4.
47D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 4 4 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000157_0002
e n d o n d e R 45 e s - C O 2 H o C H 2O H .
48D. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la m o d a l i d a d 4 7 D e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la : 1
Figure imgf000158_0005
15
20
25
Figure imgf000158_0001
30
35
Figure imgf000158_0002
40
45
Figure imgf000158_0003
50
55
60
Figure imgf000158_0004
65
Figure imgf000159_0001
e n d o n d e R 45 e s - C O 2 H o - C H 2O H ; y e l s u b í n d i c e m e s 4.
1E. U n a c o m p o s i c i ó n d e L D C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000159_0002
e n d o n d e A b e s u n a u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 , i s o p r o p i l o , - C H 2 C H 2C H 2 N H ( C = O ) N H 2 o - C H 2 C H 2 C O 2 H ; R 7B e s h id r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a l q u i l o C 1- C 6 , a l q u e n i l o C 2- C 6 , - O C H 2O R 2B, - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s h i d r ó g e n o , o a l q u i l o C 1- C 6 ; y e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
2E. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 E e n d o n d e R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 , o -C H 2C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ; R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a l q u i l o i n f e r i o r , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o i n f e r io r ; y e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
3E. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 E e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000159_0003
e n d o n d e A b e s u n a u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a lq u i lo C 1- C 6 , - O C H 2O R 2B - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 1B e s a l q u i l o C 1- C 6 o a lq u e n i l o C 2 - C 6 ; y e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
4E. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 E e n d o n d e R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a l q u i lo in f e r io r , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o in f e r io r ; y e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
5E. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 E e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000160_0001
e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n a t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y e l s u b í n d i c e m e s 4.
6E. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 3 E e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000160_0002
e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y e l s u b í n d i c e m e s 4.
1F. U n a c o m p o s i c i ó n d e L D C e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e :
1
Figure imgf000161_0004
15 e n d o n d e A b e s u n a u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p a l á c i d o c a r b o x í l i c o ; R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 o -C H 2C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ; R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a l q u i l o i n f e r i o r , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o in f e r io r ; y e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
20 2 F . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 F e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e l i g a n d o y f á r m a c o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
25
30
35
Figure imgf000161_0001
40 e n d o n d e A b e s u n a u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c id o c a r b o x í l i c o M 3; R 7B e s h id r ó g e n o u - O H ; R 2A e s a lq u i lo i n f e r io r , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i lo in f e r io r ; y e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
45 3 F . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 1 F e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e l i g a n d o y f á r m a c o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
50
55
Figure imgf000161_0002
60
65
Figure imgf000161_0003
e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3; e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y e l s u b í n d i c e m e s 4.
5 4 F . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la m o d a l i d a d 2 F e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e l i g a n d o y f á r m a c o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
10
15
Figure imgf000162_0001
20
25
30
Figure imgf000162_0002
35 e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3; e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y e l s u b í n d i c e m e s 4.
5 F . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 F o 2 F e n la q u e A e s - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) - o -40 C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) N H C H 2 C H 2 ( C = O ) - .
6 F . L a c o m p o s i c i ó n L D C d e c u a l q u i e r a d e la s m o d a l i d a d e s 1 E - 6 E y 1 F - 5 F e n d o n d e R 2A e s - C ( O ) C H 3 , m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo .
45 E j e m p l o s
G e n e r a l : Q u í m i c a
T o d o s lo s s o l v e n t e s a n h i d r o s c o m e r c i a l m e n t e d i s p o n i b l e s s e u s a r o n s in p u r i f i c a c i ó n a d ic i o n a l . L a c r o m a t o g r a f í a 50 a n a l í t i c a e n c a p a f i n a s e r e a l i z ó s o b r e lá m in a s d e a l u m i n i o d e g e l d e s í l i c e 60 F 254 ( E M D C h e m i c a l s , G i b b s t o w n , N J ) . L a c r o m a t o g r a f í a r a d ia l s e r e a l i z ó e n u n a p a r a t o d e C h r o m a t o t r o n ( H a r r i s R e s e a r c h , P a lo A l t o , C A ) . L a c r o m a t o g r a f í a e n c o l u m n a s e r e a l i z ó e n u n s i s t e m a d e p u r i f i c a c ió n r á p id o d e B i o t a g e I s o l e r a O n e ™ ( C h a r l o t t e , N C ) . L a H P L C a n a l í t i c a s e r e a l i z ó e n u n s i s t e m a d e s u m i n i s t r o d e d i s o l v e n t e V a r i a n P r o S t a r 2 1 0 ™ c o n f i g u r a d o c o n u n d e t e c t o r V a r ia n P r o S t a r 330 P D A . L a s m u e s t r a s s e e lu y e r o n d e u n a c o l u m n a d e f a s e in v e r s a C 12 P h e n o m e n e x 55 S y n e r g i ™ 2 , 0 x 150 m m , 4 p m , 80 A . L a f a s e m ó v i l á c id a c o n s i s t i ó e n a c e t o n i t r i l o y a g u a q u e c o n t e n í a n á c id o t r i f l u o r o a c é t i c o a l 0 , 05 % o á c i d o f ó r m i c o a l 0 ,1 % ( i n d i c a d o p a r a c a d a c o m p u e s t o ) . L o s c o m p u e s t o s s e e l u y e r o n c o n u n g r a d i e n t e l in e a l d e a c e t o n i t r i l o á c i d o d e s d e e l 5 % a 1 m in d e s p u é s d e la in y e c c i ó n , h a s t a e l 95 % a lo s 11 m in , s e g u i d o d e a c e t o n i t r i l o i s o c r á t i c o a l 95 % a lo s 15 m in ( v e l o c i d a d d e f l u j o = 1 , 0 m l / m in ) . L a L C - M S s e r e a l i z ó e n d o s s i s t e m a s d i f e r e n t e s . E l s i s t e m a d e L C - M S 1 c o n s i s t i ó e n u n e s p e c t r ó m e t r o d e m a s a s Z M D M i c r o m a s s c o n e c t a d o a 60 u n i n s t r u m e n t o d e H P L C H P A g i l e n t 1100 e q u i p a d o c o n u n a c o l u m n a d e f a s e i n v e r s a C 12 P h e n o m e n e x S y n e r g i 2 , 0 x 150 m m , 4 p m , 80 A . E l e l u y e n t e á c i d o c o n s i s t i ó e n u n g r a d i e n t e l in e a l d e a c e t o n i t r i l o d e l 5 % a l 95 % e n á c id o f ó r m i c o a c u o s o a l 0 ,1 % d u r a n t e 10 m in , s e g u i d o d e a c e t o n i t r i l o i s o c r á t i c o a l 95 % d u r a n t e 5 m in ( v e l o c i d a d d e f l u j o = 0 , 4 m l / m in ) . E l s i s t e m a d e L C - M S 2 c o n s i s t i ó e n u n e s p e c t r ó m e t r o d e m a s a s W a t e r s X e v o G 2 ™ T o f c o n e c t a d o a u n m ó d u l o d e s e p a r a c i o n e s W a t e r s 269 5 c o n u n d e t e c t o r d e m a t r i z d e f o t o d i o d o s W a t e r s 2996 ; la c o lu m n a , la s f a s e s 65 m ó v i le s , e l g r a d i e n t e y la v e l o c i d a d d e f l u j o f u e r o n lo s m is m o s q u e p a r a e l s i s t e m a d e L C - M S 1. E l s i s t e m a U P L C -M S 1 c o n s i s t í a e n u n d e t e c t o r d e m a s a s W a t e r s S Q c o n e c t a d o a u n L C A c q u i t y ™ U l t r a P e r f o r m a n c e e q u i p a d o c o n una columna de fase inversa Acquity UPLC BEH C18 2,1 x 50 mm, 1,7 |jm. La fase móvil ácida (ácido fórmico al 0,1 %) consistió en un gradiente de acetonitrilo al 3 %/agua al 97 % hasta acetonitrilo al 100 % (velocidad de flujo = 0,5 ml/min). El sistema UPLC-MS 2 consistía en un espectrómetro de masas Waters Xevo G2 ToF interconectado a un LC Waters Acquity H-Class Ultra Performance equipado con una columna de fase inversa Acquity UPLC BEH C18 2,1 x 50 mm, 1,7 jm. La fase móvil ácida (ácido fórmico al 0,1 %) consistió en un gradiente de acetonitrilo al 3 %/agua al 97 % hasta acetonitrilo al 100 % (velocidad de flujo = 0,7 ml/min). La HPLC preparativa se realizó en un sistema de suministro de disolvente Varian ProStar 210 configurado con un detector Varian ProStar 330 PDA. Los productos se purificaron en una columna de fase inversa C12 Phenomenex Synergi 10,0 x 250 mm, 4 pm, 80 A eluyendo con ácido trifluoroacético al 0,1 % en agua (disolvente A) y ácido trifluoroacético al 0,1 % en acetonitrilo (disolvente B). Los métodos de purificación generalmente consistieron en gradientes lineales de solvente A a solvente B, pasando de solvente A acuoso al 90 % a solvente A al 10 %. El caudal fue de 4,6 ml/min con monitoreo a 254 nm. Los datos espectrales de RMN se recogieron en un espectrómetro Varian Mercury de 400 MHz. Las constantes de acoplamiento (J) se expresan en hercios.
General: Biología
E n s a y o s in vitro. Las células cultivadas en crecimiento en fase logarítmica se sembraron durante 24 h en placas de 96 pocillos que contenían 150 j l de RPMI 1640 complementado con FBS al 20 %. Se prepararon diluciones en serie de conjugados de anticuerpo fármaco en medios de cultivo celular a una concentración de trabajo 4x; se añadieron 50 j l de cada dilución a las placas de 96 pocillos. Después de la adición de ADC, las células se incubaron con los compuestos de prueba durante 4 días a 37 °C. Después de 96 h, se evaluó la inhibición del crecimiento mediante Cell Titer Glo (Promega, Madison, WI) y se midió la luminiscencia en un lector de placas. El valor de IC50 , determinado por triplicado, se define aquí como la concentración que da como resultado una reducción del 50 % en el crecimiento celular con respecto a los controles no tratados.
M o d e l o s d e x e n o i n j e r t o in vivo. Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con el Comité para el uso y cuidado de animales en una instalación totalmente acreditada por la Asociación para la evaluación y acreditación del cuidado de animales de laboratorio. Se llevaron a cabo experimentos de eficacia en un modelo de xenoinjerto de linfoma de Hodgkin L540cy. Las células tumorales L540cy, como una suspensión celular, se implantaron subcutáneamente en ratones SCID inmunodeprimidos. Tras el injerto del tumor, los ratones se asignaron al azar a los grupos de estudio cuando el volumen tumoral promedio alcanzo aproximadamente 100 mm3. El ADC o los controles se dosificaron una vez mediante inyección intraperitoneal. El volumen tumoral en función del tiempo se determinó mediante la fórmula (L x W2)/2. Los animales se sacrificaron cuando los volúmenes tumorales alcanzaron 1000 mm3. Los ratones que mostraron regresiones duraderas se sacrificaron alrededor del día 100 después del implante.
E x p e r i m e n t o s d e e s t a b i l i d a d ex vivo. La evaluación de la carga de fármacos de los ADC humanizados en muestras de plasma de roedores mediante LC-MS de fase reversa se logró aislando primero los ADC con resina IgSelect™ (GE Healthcare), que se une selectivamente al dominio Fc humano. Los ADC se prepararon con 8 fármacos por anticuerpo de MDPR-glucurónido-amina cuaternaria-AE 8 o mDPR-Val-Cit-PAB-amina cuaternaria-AE (mDPR-vcPAB4-AE) 1 4 usando cAC10 completamente reducido. Los ADC (1,0 mg/ml) se incubaron en plasma estéril de rata y ratón durante 10 días a 37 °C. En ocho puntos de tiempo durante la incubación, se extrajo una alícuota de 50 j l de cada ADC y se congeló a -80 °C. Una vez completado el transcurso del tiempo, se purificaron los ADC de cada muestra y se analizaron mediante HPLC de fase inversa en línea con un espectrómetro de masas TOF para determinar la relación fármaco:anticuerpo.
E x p e r i m e n t o s d e l i b e r a c i ó n d e f á r m a c o s e n z i m á t i c o s . Se añadieron quince j l de solución madre de fármacoenlazador 10 mM de 8 en DMA a 27 j l de DMSO y se inactivaron con N-acetilcisteína (30 j l de solución madre 100 mM en PBS) en un tubo Eppendorf. Se añadieron 48 j l de PBS y se dejó reposar el tubo a temperatura ambiente durante 1 hora. Se prepararon reservas de enzimas al mismo tiempo disolviendo p-glucuronidasa (de hígado bovino, >1 000000 unidades/g de sólido) en NaOAc 100 mM hasta una concentración final de 1 o 2 mg/ml, después de lo cual se combinaron 38 jL de la solución de enlazador desactivada con 170 jL de solución madre de enzima reciente y 132 jL de NaOAc 100 mM luego se incubaron a 37 °C. Se tomaron 25 j l en cada momento, se añadieron a 150 j l de MeOH, se sellaron y se almacenaron a -80 °C hasta que se tomaron todos los momentos. A continuación, las muestras se centrifugaron a alta velocidad durante 20 minutos y se analizaron mediante UPLC-MS, contando los iones para el enlazador inactivó intacto y el fármaco liberado.
L i b e r a c i ó n i n t r a c e l u l a r d e f á r m a c o s . Para el estudio se usaron células TF1a, L428 y HCT-15. Las células que habían sido cultivadas en condiciones normales se cosecharon y se lavaron en medio fresco a ~ 5 x 105 células/ml. Para cada condición de tratamiento, 5-15x106 células se sembraron en frascos T25 o T150. Se añadió cOKT9-5023 (8-fármacos/Ab) a 1 jg/ml a los cultivos y se incubaron a 37 °C, CO2 al 5 % durante 24 h. Para las células en suspensión, se recogió un volumen conocido de cultivo celular mediante centrifugación (500 xg, 5 min, 4 °C) y se extrajo una alícuota del medio y se almacenó para análisis espectral de masas (-20 °C). Para las células adherentes, el medio se retiró cuidadosamente (una alícuota almacenada para análisis espectral de masas) y las células se levantaron con tripsina-EDTA seguido de centrifugación (500 xg, 5 min, 4 °C) para recoger el sedimento celular. Tanto para las células en suspensión como para las adherentes, los sedimentos celulares recolectados se resuspendieron en PBS helado y se extrajo una alícuota para la enumeración y determinación de los diámetros celulares promedio usando un analizador de viabilidad celular Vi-Cell XR2.03 (Beckman Coulter, Fullerton, CA). Las suspensiones celulares restantes se sedimentaron (500 xg, 5 min) y luego se lavaron una vez más con 1 ml de PBS enfriado con hielo. Los sedimentos resultantes se almacenaron a -20 °C.
Se generaron muestras sin tratar usando sedimentos de células sin tratar y medio de cultivo para usar en curvas de calibración. Los sedimentos de células sin tratar se enriquecieron con 4 pl de analito estándar 25X. Se suspendieron tanto los sedimentos celulares enriquecidos como los tratados mediante agitación con vórtex en 400 pl de patrón interno que contenía MeOH y se colocaron a -20 °C durante 15 min. A continuación, las muestras se centrifugaron a 16,000 xg y los sobrenadantes se prepararon para la extracción en fase sólida. Las muestras de medio de cultivo sin tratar (0,5 ml) se enriquecieron con 4 pl de estándar 25X. Tanto los medios de cultivo enriquecidos como los tratados se mezclaron con 10 pl de patrón interno y se prepararon para la extracción en fase sólida. Las muestras se sometieron a extracción en fase sólida y las soluciones que contenían el fármaco recuperadas se secaron y reconstituyeron para cuantificación mediante LC-MS/MS. Para derivar una ecuación para la cuantificación del fármaco liberado en las muestras experimentales desconocidas, el área de pico para cada estándar de fármaco se dividió por el área de pico obtenida para el estándar interno. Las relaciones de área de pico resultantes se representaron gráficamente como una función de las cantidades estándar añadidas y los puntos de datos se ajustaron a una curva mediante el uso de regresión lineal. Las relaciones de área de pico obtenidas para el fármaco liberado con respecto al patrón interno en las muestras experimentales se convirtieron en cantidades de fármaco utilizando la ecuación derivada.
Ejemplo 1: (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(bromometil)fenoxi)-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-tríil triacetato (2):
Un matraz secado a la llama se cargó con fragmento enlazador glucurónido conocido (Bioconjugate Chem. 2006, 17, 831-840) (1, 210 mg, 281 pmol) en 4,5 ml de THF anhidro. La solución se agitó a temperatura ambiente bajo N2. Se añadieron secuencialmente trifenilfosfina (111 mg, 421,5 pmol) y N-bromosuccinimida (75 mg, 421,5 pmol) y la solución se agitó durante 2 horas. La reacción se condensó a presión reducida y se purificó sobre sílice mediante una columna Biotage (Hexanos/EtOAc, 30 % -50 % -70 %) para proporcionar 2 (222 mg, 97 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr=2,36 min, m/z (ES+) encontrado 811,34.
Ejemplo 2: (S)-N-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-((((2S,3R,4S,5S,6S))-3,4,5-tríacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (4):
Un recipiente a presión se cargó con intermedio de unidad de extensor-glucurónido bromado (2, 111 mg, 137 pmol) del Ejemplo I y auristatina E (3, 100 mg, 137 pmol) en anhidro 2-butanona (4,2 ml). El recipiente de reacción se lavó abundantemente con N2 y se selló. Después, la reacción se agitó y se calentó a 80 °C durante 12 horas. La mezcla resultante se enfrió, se condensó a presión reducida y se purificó sobre sílice mediante una columna Biotage (CH2Ch/MeOH, 2 % -20 % -100 %) para proporcionar 4 (113 mg, 56 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 2,02 min, m/z (ES+) encontrado 1462,53.
Ejemplo 3: (S)-N-(3-(3-aminopropanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptano-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (5): Se cargó un matraz con glucurónido-AE (4, 113 mg, 77 pmol) en THF (1,3 ml) y MeOH (1,3 ml). Esta solución se agitó en atmósfera de N2 y se enfrió a 0 °C. LiOH H2O (19 mg, 462 pmol) se solubilizó en H2O (1,3 ml) gota a gota a continuación añadido. Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. Después, la reacción se inactivó con ácido acético (26 pl, 462 pmol) y se condensó a presión reducida. El residuo se recogió en DMSO mínimo y se purificó mediante LC preparativa para proporcionar 5 (34 mg, 40 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,20 min, m/z (ES+) encontrado 1100,51.
Ejemplo_______4. (S)-N-(3-(3-((S)-3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H pirrol-1-il)pmpanamido)pmpanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetmhidm-2H-pimn-2-il)oxi)bendl)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (7):
Se cargó un matraz con glucurónido-AE desprotegido (5, 34 mg, 31 pmol) en DMF anhidra (0,31 ml). Se añadió mDPR(Boc)-OSu (6, 14 mg, 37 pmol) bajo N2. Se añadió N,N-diisopropiletilamina (27 pl, 155 pmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después, la reacción se inactivó con ácido acético (27 pl) y se purificó mediante LC preparativa para proporcionar 7 (29 mg, 68 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,52 min, m/z (ES+) encontrado 1366,40.
Ejemplo_____ 5: (S)-N-(3-(3-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-tríhidroxitetrahidro-2Hpiran-2-il)oxi)bendl)-1-(((S)-1-(((3R,4S,SS)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutano-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (8):
Un matraz que contenía mDPR(Boc)-Glucurónido-AE (7, 29 mg, 21 pmol) se enfrió a 0 °C bajo N2. Se añadió gota a gota una solución de TFA al 10 % en CH2Ch (1,1 ml) y se agitó durante 4 horas. Después, la reacción se recogió en DMSO, se condensó a presión reducida y se purificó por LC preparativa para producir 8 (20 mg, 75 %). UPLC-MS analítica: tr= 1,23 min, m/z (ES+) encontrado 1266,39. HPLC-Ms analítica (sistema 2): tr= 9,53 min, m/z (ES+) encontrado 1266,70.
Ejemplo 6: (9H-fluoren-9-il)metil((S)-1-(((S)-1-((4-(bromometil)fenil)amino)-1-oxo-5-ureidopentan-2-il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)carbamato (10):
Se añadió dipéptido Fmoc-Val-Cit-PAB (9, 75 mg, 125 pmol) a un matraz secado a la llama en atmósfera de N2 y se enfrió a 0 °C. Se añadió gota a gota una solución de HBr al 33 % en ácido acético (1,3 ml). La solución se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Después, el HBr restante se eliminó mediante una corriente de N2 y la reacción se condensó adicionalmente a presión reducida. El residuo resultante se recogió en THF y se volvió a condensar 3 veces y luego se llevó adelante sin purificación adicional. UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 2,19 min, m/z (ES+) encontrado 664,47.
Ejemplo________ 7. (S)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencilo)-1-(((S)-1-(((3R,4S,Ss)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (11):
A un recipiente a presión cargado con dipéptido bromado crudo (10, 48 mg, 72 pmol) se le añadió auristatina E (3, 30 mg, 41 pmol) y 2-butanona anhidra (2,2 ml). El recipiente se lavó abundantemente con N2 y se selló. Después, la reacción se calentó a 80 °C con agitación durante 3 horas. Al no observar reacción por lC-MS, se añadió N,N-diisopropiletilamina (7 pL, 41 pmol) y la reacción se volvió a sellar durante 12 horas. La mezcla de reacción se condensó a presión reducida y se purificó mediante LC preparativa para proporcionar 11 (13 mg, 24 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,88 min, m/z (ES+) encontrado 1315,57.
Ejemplo 8: (S)-N-(4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,SS)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (12):
Se añadió Fmoc-Val-Cit-PAB-AE (11, 13 mg, 10 pmol) a un matraz con DMF anhidra (0,4 ml). Se añadió piperidina (0,1 ml) en N2. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se purificó directamente mediante LC preparativa para proporcionar 12 (8 mg, 74 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,27 min, m/z (ES+) encontrado 1093,62.
Ejemplo 9: (S)-N-(4-((7S,10S,13S)-7-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-10-isopropil-2,2-dimetil-4,8,11-trioxo-13-(3-ureidopropil)-3-oxa-5,9,12-triazatetradecanamido)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S, 2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil) pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N, N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (13):
Se cargó un matraz con Val-Cit-PAB-AE (12, 8 mg, 7,3 pmol) en DMF anhidra (146 pL). Se añadió mDPR(Boc)-OSu (6, 3,3 mg, 8,8 pmol) bajo N2. Se añadió N,N-diisopropiletilamina (6 pl, 35 pmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después, la reacción se inactivó con ácido acético (6 pl) y se purificó mediante LC preparativa para proporcionar 13 (2 mg, 17 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,66 min, m/z (ES+) encontrado 1359,51.
Ejemplo______ 10: (S)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3-metilbutanamido)-5-ureidopentanamido)bencil)-1-(((S)-]-(((3R,4S,5S)-]- (S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (14):
Un matraz que contiene mDPR(Boc)-Val-Cit-PAB-AE (13, 2 mg, 1,5 pmol) se enfrió a 0 °C bajo N2. Se añadió gota a gota una solución de TFA al 10 % en CH2Ch (294 pl) y se agitó durante 3 horas. Después, la reacción se recogió en DMSO, se condensó a presión reducida y se purificó por LC preparativa para producir 14 (2,2 mg, 99 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,30 min, m/z (ES+) encontrado 1259,69. HPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 9,22 min, m/z (ES+) encontrado 1259,78.
S e c a r g ó u n m a t r a z s e c a d o a la l l a m a c o n T u b u l i s i n a M ( 26, 1 0 m g , 14 | j m o l ) e n D C M a n h i d r o ( 0 , 7 m l ) y t - b u t a n o l ( 0 , 7 m l) . S e a ñ a d i e r o n d i i s o p r o p i l c a r b o d i i m i d a ( 3 , 2 j l , 21 j m o l ) y D M A P ( 0 , 0 8 m g , 0 , 7 j m o l ) y la r e a c c i ó n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e d u r a n t e 48 h o r a s . L a r e a c c ió n s e c o n d e n s ó , s e r e c o g i ó e n D M S O y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H p L c p r e p a r a t i v a p a r a p r o d u c i r 27 ( 3 , 5 m g , 3 2 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 1 ) : t= 1 , 3 5 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 784 , 56 .
E j e m p l o 18 : (2R)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-acetoxi-1-(4-(((2R,4S)-5-(terc-butoxi)-4-metil-5-oxo-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)-1-metilpiperidin-1-io (28):
S e c a r g ó u n r e c i p i e n t e a p r e s ió n c o n B o c - V a l - A l a - P A B - B r (25, 3 , 5 m g , 7 , 7 j m o l ) y t u b u l i s i n a M p r o t e g i d a ( 4 , 0 m g , 5 ,1 j m o l ) e n b u t a n o n a a n h i d r a ( 0 , 76 5 m l) . S e a ñ a d i ó N , N - d i i s o p r o p i l e t i l a m i n a ( 1 , 8 j l , 10 j m o l ) y la r e a c c ió n s e la v ó a b u n d a n t e m e n t e c o n n i t r ó g e n o . E l r e c i p i e n t e s e s e l ló y s e d e jó a g i t a r a 80 ° C d u r a n t e 12 h o r a s . L a r e a c c ió n s e c o n d e n s ó , s e r e c o g i ó e n D M S O y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o d u c i r 28 ( 3 , 5 m g , 5 8 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 1 ) : t r= 1 ,51 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 1 1 5 9 , 5 8 .
E j e m p l o 19 : (2R)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-acetoxi-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-(4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)-1-metilpiperidin-1-io (29):
U n m a t r a z q u e c o n t e n í a B o c - V a l - A l a - P A B - T u b M - O t B u (28, 3 , 5 m g , 3 j m o l ) s e e n f r ió a 0 ° C b a jo n i t r ó g e n o . S e a ñ a d i ó g o t a a g o t a u n a s o l u c i ó n d e T F A a l 10 % e n C H 2 O 2 ( 0 , 3 m l ) y s e a g i t ó d u r a n t e 4 h o r a s . L a r e a c c i ó n s e c o n d e n s ó , s e r e c o g i ó e n D M S O y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o d u c i r 29 ( 1 , 9 m g , 6 3 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 1 ) : t r= 1 , 0 5 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 1 0 0 3 , 6 0 .
E j e m p l o 2 0 : (2R)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-acetoxi-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)-1-metilpiperídin-1-io (30):
S e r e c o g i ó M C - O S u ( 18, 0 , 6 m g , 2 j m o l ) e n d i m e t i l f o r m a m i d a a n h i d r a ( 0 , 2 m l ) y s e a ñ a d i ó a u n m a t r a z q u e c o n t e n í a V a l - A l a - P A B - T u b M ( 29, 1 , 9 m g , 2 j m o l ) . S e a ñ a d i ó N , N - d i i s o p r o p i l e t i l a m i n a ( 1 , 0 m g , 8 j m o l ) y la r e a c c i ó n s e a g i t ó b a jo n i t r ó g e n o d u r a n t e 3 h o r a s . L a r e a c c ió n s e r e c o g i ó e n D m S o y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o d u c i r e l e n l a z a d o r 30 d e a m i n a c u a t e r n a r i a t u b u l i s i n a ( 1 , 2 m g , 5 3 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 1 ): t r= 1 , 2 5 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 1 1 9 6 , 4 5 .
E j e m p l o 2 1 : (2R)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-acetoxi-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-(4-((7S,10S,13S)-7-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)-10-isopropil-2,2,13-trimetil-4,8,11-trioxo-3-oxa-5,9,12-triazatetradecanamido)-bencil)-1-metilpiperidin-1-io (31):
S e r e c o g i ó M D P R ( B o c ) - O S u (6 , 1 , 3 m g , 3 , 5 j m o l ) e n d i m e t i l f o r m a m i d a a n h i d r a ( 0 , 3 m l ) y s e a ñ a d i ó a u n m a t r a z q u e c o n t e n í a V a l - A l a - P A B - T u b M ( 29, 3 , 2 m g , 3 , 2 j m o l ) . S e a ñ a d i ó N , N - d i i s o p r o p i l e t i l a m i n a ( 1 , 6 m g , 13 j m o l ) y la r e a c c i ó n s e a g i t ó b a jo n i t r ó g e n o d u r a n t e 3 h o r a s . L a r e a c c ió n s e r e c o g i ó e n D M S O y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o d u c i r 31 ( 2 , 0 m g , 4 9 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 2 ) : t r= 1 , 3 5 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 1269 , 76 .
E j e m p l o 2 2 : ((2R)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-acetoxi-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-3-metilbutanamido)propanamido)bencil)-1-metilpipendin-1-io (32):
U n m a t r a z q u e c o n t e n í a M D P R ( B o c ) - V a l - A l a - P A B - T u b M ( 31, 2 m g , 1 , 6 j m o l ) s e e n f r i ó a 0 ° C b a jo n i t r ó g e n o . S e a ñ a d i ó g o t a a g o t a u n a s o l u c i ó n d e T F A a l 10 % e n C H 2 O 2 ( 1 , 6 m l ) y s e a g i t ó d u r a n t e 4 h o r a s . L a r e a c c i ó n s e c o n d e n s ó , s e r e c o g i ó e n D M S O y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o d u c i r 32 ( 1 , 0 m g , 5 4 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 2 ) : t r= 1 , 0 2 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 1 1 6 9 , 7 2 .
E j e m p l o 2 3 : 2-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(((3R,4S,5S,6S)-3,4,5-triacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(4-(4,5-dimetoxi-2-(quinolin-3-carboxamido)benzamido)fenetil)-6,7-dimetoxi-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-2-io (34):
S e c a r g ó u n r e c i p i e n t e a p r e s i ó n c o n e l i n t e r m e d i o d e u n id a d d e e x t e n s i ó n - g l u c u r ó n i d o b r o m a d o ( 2, 7 8 m g , 9 6 j m o l ) d e l E je m p l o 1 y T a r i q u i d a r ( 33, 6 2 m g , 9 6 j m o l ) e n 2 - b u t a n o n a a n h i d r a ( 2 , 9 m l) . A c o n t i n u a c i ó n , e l r e c i p i e n t e d e r e a c c i ó n s e p u r g ó c o n n i t r ó g e n o y s e s e l ló . D e s p u é s , la r e a c c i ó n s e a g i t ó y s e c a l e n t ó a 80 ° C d u r a n t e 4 h o r a s , m o m e n t o e n e l q u e la L C / M S r e v e l ó la c o n v e r s i ó n e n u n p r o d u c t o c u a t e r n i z a d o . E l r e s u l t a n t e s e e n f r ió , s e c o n d e n s ó a p r e s ió n r e d u c i d a y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o p o r c i o n a r 34 ( 1 2 3 m g , 9 0 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 1 ) : t r= 2 , 0 5 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 1 3 7 7 , 7 4 . H P L C - M s a n a l í t i c a ( s i s t e m a 2 ) : t r= 1 1 , 2 3 m in , m/z ( E S ) e n c o n t r a d o 1377 , 47 .
Figure imgf000170_0001
en donde R7B es un sustituyente unido a O, preferentemente -OH, el subíndice n es 0, 1 o 2, preferentemente 0 o 1; y además incluyendo NH2-CH2-CO2 H, NH2-CH2CH2CO2 H y NH2-CH2CH2CH2CO2 H.
Ejemplo 28: Procedimiento general para el acoplamiento de amidas de dipéptidos de éster de alquilo de tubuvalinatubofenilalanina O-alquilados con L-isoleucina protegida con Fmoc.
Se disuelve FMOC-L- isoleucina (1,3-2 equivalentes) en dimetilformamida anhidra (50-200 mM) y se preactiva con HATU (1,5-2 equivalentes) y DIPEA (2 equivalentes); la mezcla se agita durante 10 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno. A continuación, se añade el ácido activado a los dipéptidos NH2-Tuv(O-éter)-Tup-O-alilo preparados de acuerdo con el Ejemplo 27; la reacción se agita a temperatura ambiente bajo nitrógeno y se controla mediante UPLC/MS. Una vez que la reacción deja de progresar o se completa, se añade ácido acético glacial (13 equivalentes) y los productos de tripéptido FMOC-Ile-Tuv(O-éter)-TupO-alilo resultantes se purifican mediante HPLC preparativa. Los compuestos 54, 55 y 56 (esquema 7) se prepararon a partir de los compuestos 51, 52 y 53, respectivamente, para ejemplificar el procedimiento general.
(2S,4R)-alilo 4-(2-((5S,8R,10R)-5-((S)-sec-butil)-1-(9H-fluoren-9-il)-8-isopropil-7-metil-3,6-dioxo-2,11-dioxa-4,7-diazadodecan-10-il)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (54): UPLC-Ms (sistema 1): tr= 2,07 min, m/z (ES+) calculado 837,43 (M+H)+, encontrado 837,20
(2S,4R)-alilo 4-(2-((5S,8R,10R)-5-((S)-sec-butil)-1-(9H-fluoren-9-il)-8-isopropil-7-metil-3,6-dioxo-2,11-dioxa-4,7-diazatridecan-10-il)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (55): UPLC-Ms (sistema 2): tr= 1,95 min, m/z (ES+) calculado 851,44 (M+H)+, encontrado 851,54.
(2S,4R)-alilo 4-(2-((5S,8R,10R)-5-((S)-sec-butil)-1-(9H-fluoren-9-il)-8-isopropil-7-metil-3,6-dioxo-2,11-dioxa-4,7-diazatetradecan-10-il)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (56): UPLC-MS (sistema 2): tr= 2,25 min, m/z (ES+) calculado 865,46 (M+H)+, encontrado 865,65.
Se preparan tripéptidos análogos de acuerdo con el procedimiento general de los Ejemplos 26-28 reemplazando la tubofenilalanina adecuadamente protegida del Compuesto 40 en el Ejemplo 26 con otras entradas de ácido que contienen aminoácidos o amina, adecuadamente protegidas y como se indica en el Esquema 7. Alternativamente o además de la sustitución de los tubufenilalanina adecuadamente protegido otros tripéptidos se obtienen mediante la sustitución de FMOC-L-isoleucina con otra adecuadamente protegido amino ácidos que tienen una cadena lateral hidrófoba, tales como FMOC-L-leucina
Ejemplo 29: Procedimiento general para el acoplamiento de amida de tripéptidos de éster alílico de isoleucinatubuvalina(O-éter)-tubofenilalanina con ácidos que contienen amina terciaria para la introducción del componente N-terminal de tubulisina.
Desprotección: Los tripéptidos con FMOC (FMOC-Ile-Tuv(O-éter)-TupO-alilo) preparados de acuerdo con el Ejemplo 28 se desprotegen mediante la eliminación del grupo protector FMOC usando piperidina al 20 % en dimetilformamida (20 mM), con agitación bajo nitrógeno a temperatura ambiente. Una vez que se logra la desprotección completa, según se controla por UPLC/MS, la mezcla de reacción se concentra por evaporación rotatoria. A continuación, el producto bruto se purifica mediante HPLC preparativa para proporcionar los tripéptidos de amina libres (NH2-Ile-Tuv(O-éter)-TupO-alilo). Los compuestos 57, 58 y 59 (esquema 7) se prepararon a partir de los compuestos 54, 55 y 56, respectivamente, para ejemplificar el procedimiento general.
(2S,4R)-alil 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-amino-N,3-dimetilpentanamido)-1-metoxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (57): UPLC-MS (sistema 1): tr= 1,30 min, m/z (ES+) calculado 637,34 (M+Na)+ , encontrado 637,57.
(2S,4R)-alil 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-amino-N,3-dimetilpentanamido)-1-etoxi-4-metilpentil)hiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (58): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,18 min, m/z (ES+) calculado 629,38 (M+H)+, encontrado 629,45.
(2S,4R)-alil 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-amino-N,3-dimetilpentanamido)-4-metil-1-propoxipentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (59): UPlC-MS (sistema 2): tr= 1,29 min, m/z (ES+) calculado 643,39 (M+H)+ , encontrado 643,55.
Acoplamiento de péptidos: Se disuelve ácido (R)-N-metil-pipecólico (D-Mep) 60 (1,5-2 equivalentes) en dimetilformamida anhidra (25-50 mM) y se preactiva con HATU (2 equivalentes) y DIPEA (4 equivalentes). equivalentes); la mezcla de reacción se agita durante 10 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se añade entonces el ácido activado a la NH2-Ile-Tuv(O-éter)-TupO-alil tripéptidos obtenidos a partir de la desprotección de Fmoc; la reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno y se controló mediante UPLC/MS. Una vez completada la reacción, se añade luego ácido acético glacial (14 equivalentes) y los productos tetrapéptidos (D-Mep-Ile-Tuv(O-éter)-TupO-alilo) se purifican mediante HPLC preparativa. Los compuestos 61, 62 y 63 (esquema 7) se prepararon a partir de los compuestos 57, 58 y 59, respectivamente, para ejemplificar el procedimiento general. (2S,4R)-alil 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-1-metoxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (61): UPLC-MS (sistema 1): tr= 1,29 min, m/z (ES+) calculado 762,42 (M+Na)+, encontrado 762,32.
(2S,4R)-alil 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-1-etoxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (62): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,25 min, m/z (ES+) calculado 754,46 (M+H)+, encontrado 754,55.
(2S,4R)-alil 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metil-1-propoxipentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (63): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,36 min, m/z (ES+) calculado 768,48 (M+H)+, encontrado 768,55.
Para obtener los correspondientes éteres de tubulisina como fármaco libre (D-Mep-Ile-Tuv(O-éter)-TupOH), los tetrapéptidos de éter de tubulisina protegidos con éster alílico se desprotegen para proporcionar éteres de tubulisina que tienen un resto ácido de tubofenilalanina libre mediante disolución en anhidro. diclorometano (20 mM) y tratamiento con tetraquis (trifenilfosfina) de paladio (0,1 equivalentes), trifenilfosfina (0,2 equivalentes) y pirrolidina anhidra (8 equivalentes), y la reacción se agita a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Una vez que la UPLC/MS revela la conversión en el producto ácido libre, la reacción se apaga con ácido acético glacial (22 equivalentes), se diluye con acetonitrilo y dimetilformamida y luego se concentra por evaporación rotatoria. A continuación, el éter de tubulisina crudo se purifica mediante HPLC preparativa. Los compuestos 64, 65 y 66 (esquema 7) se prepararon a partir de los compuestos 61, 62 y 63, respectivamente, para ejemplificar el procedimiento general.
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-1-metoxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (64): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,05 min, m/z (ES+) calculado 700,41 (M+H)+, encontrado 700,50.
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-1-etoxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (65): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,09 min, m/z (ES+) calculado 714,43 (M+H)+, encontrado 714,51
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metil-1-propoxipentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (66): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,19 min, m/z (ES+) calculado 728,44 (M+H)+, encontrado 728,54.
Éteres de tubulisina adicionales, incluidos aquellos que tienen variación (es) en las entradas de aminoácidos o ácidos que contienen amina que reemplazan la entrada de tubofenilalanina (Compuesto 40) del Ejemplo 27 como se muestra en el mismo, y/o el aminoácido FMOC (FMOC-Ile) del Ejemplo 28 se preparan reemplazando D-Mep con otras entradas de ácido pipecólico N-alquilado o con un ácido azetidinil-2-carboxílico N-alquilado, N-alquilado-D-prolina o N,N-di-alquil aminoácido como N,N-dimetilglicina.
Ejemplo 30: Preparación del precursor de Lss (S)-perfluorofenil 3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro- 1H-pirrol-1 -il)propanoato (68).
Un matraz cargado con mDPR(Boc)-OH (67) (Nature Biotech, 2014, 32, 1059-1062) 67 (500 mg, 1,76 mmol), a la que se añadió pentafluorofenol (324 mg, 1,76 mmol) una solución en DMF (8,8 ml) seguido de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (371 mg, 1,93 mmol)) como un sólido. La reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y luego se inactivó con 50 ml de NH4Cl saturado en H2O y 50 ml de H2O. La capa acuosa se extrajo con DCM dos veces, los extractos orgánicos se lavan a continuación con salmuera, se secaron sobre NaSO4 , y se condensaron a presión reducida para proporcionar el compuesto del título (589 mg, 74 %). UPLC-MS analítica (sistema 2): t= 1,51 min, m/z (ES+) calculado 473,07 (M+Na)+ , encontrado 473,14.
El compuesto 68, abreviado como mDPR(BOC)-OPFF es un precursor de Ls s ilustrativa (es decir, un tipo de resto que contiene Lb') de fórmula M1-A'(BU)-COOH en forma activada para la preparación de compuestos fármacoenlazador, incluidos los de fórmula general M1-A-i (BU)-Ao -W-Y-D+ y M1-A(b U)-Y(W) -D+ en donde M1 es un resto maleimida, A' es un precursor de sub(unidad) de extensión, A1 y Ao son subunidades de la unidad A de extensión, BU es una unidad básica, como un resto aminoalquilo, Y es una unidad espaciadora autodestructiva e -Y(W)- es un resto de glucurónido y comprende, por ejemplo, un residuo de ácido glucurónico como resto carbohidrato y un residuo de PAB como resto autodestructivo; y D+ es una tubulisina cuaternizado.
Ejemplo 31: Procedimiento general para preparar compuestos intermedios de fármaco-enlazador que incorporan un mecanismo de liberación de ácido glucurónico a partir de ásteres de tubulisina (O-éter)-alilo.
Los intermedios de compuestos de fármaco-enlazador ilustrativos de fórmula A'-Yy(W'w)-D+ donde los subíndices w' e y son cada uno 1, A' es precursor de unidad de extensión, D+ es una tubulisina unidad de fármaco (O-éter) cuaternizado y -Y(W')- es una unidad de glucurónido que se preparan a partir de ésteres de tubulisina (O-éter)-alilo del Ejemplo 29 de la siguiente manera. Los productos así obtenidos están representados por la fórmula general de FMOC-GlucQ-Tub(O-éter)-O-alilo.
Elaboración de la unidad enlazadora: Se carga un recipiente a presión con D-Mep-Ile-Tuv(O-éter)-Tup-O-alilo (1 equivalente) y el intermedio 2 de unidad de extensión-glucurónido bromado (1,5 equivalentes) del Ejemplo 1 en anhidro 2-butanona (50 mM). El recipiente de reacción se enjuaga con N2 y se cierra herméticamente. Después, la reacción se agita y se calienta a 60 °C durante 18 horas. La mezcla resultante se enfría, se condensa para dar un residuo a presión reducida, luego se transporta en bruto o se recoge en DMSO mínimo para purificarla mediante HPLC preparativa para proporcionar los compuestos del título. Los compuestos 69, 70 y 71 (esquema 8) se prepararon a partir de los compuestos 61, 62 y 63, respectivamente, y el compuesto 2 para ejemplificar el procedimiento general.
(2R)-1-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-triacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-5- (aliloxi)-4-metil-5-oxo-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-1-metoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (69): UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,61 min, m/z (ES+) calculado 1470,68 (M)+, encontrado 1471,68.
(2R)-1-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-triacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-5-(aliloxi)-4-metil-5-oxo-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-1-etoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (70): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,49 min, m/z (ES+) calculado 1484,69 (M)+, encontrado 1484.84.
(2R)-1-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-triacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-5- (aliloxi)-4-metil-5-oxo-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metil-1-propoxipentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (71): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,47 min, m/z (e S+) calculado 1498,71 (M)+, encontrado 1498.85.
Desprotección: Los productos FMOC-GlucQ-Tub(O-éter) -O-alilo se desprotegen globalmente en THF y MeOH enfriado a 0 °C. L iO H ^O (6,0 equivalentes) a la que se añade H2O gota a gota (1:1:1 de THF:MeOH:H2O, 50 mM de concentración final) después de lo cual la reacción se deja calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. El THF y el MeOH se eliminan a presión reducida y el precipitado resultante se resolubiliza usando DMSO mínimo y la mezcla se purifica mediante HPLC preparativa. Los productos desprotegidos globalmente se abrevian como H-GlucQ-Tub(O-éter)-OH. Los compuestos 72, 73 y 74 (esquema 8) se prepararon a partir de los compuestos 69, 70 y 71, respectivamente, para ejemplificar el procedimiento general.
(2R)-1-(3-(3-aminopropanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-ilo)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-ilo)carbamoil)tiazol-2-il)-1-metoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (72): Se desprotegió Fmoc-GlucQ-Tub(oMe)-OAlil 69 (17 mg, 12 pmol) como anteriormente para proporcionar 72 (4,3 mg, 34 %). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,08 min, m/z (ES+) calculado 1068,53 (M)+, encontrado 1068,66.
(2R)-1-(3-(3-aminopropanamido)-4-(((2S,3R,4S,SS,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-ilo)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-ilo)carbamoil)tiazol-2-il)-1-etoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (73): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 0,95 min, m/z (ES+) calculado 1082,55 (m )+, encontrado 1082,68.
(2R)-1-(3-(3-aminopropanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-ilo) oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-ilo)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metil-1-propoxipentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (74): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 0,98 min, m/z (ES+) calculado 1096,56 (m )+, encontrado 1096,67.
Ejemplo 32: Procedimiento general para la preparación de compuestos Fármaco Enlazador mediante acoplamiento de amida de un precursor de la subunidad Lss- Extensión con un intermedio fármaco-enlazador compuesto por una unidad de glucurónido y una unidad de fármaco de tubulisina (O-éter) cuaternizado.
Los ejemplos de compuestos de fármaco-enlazador de la fórmula Lb'-Aa-Yy(W'w )-D+ en donde los subíndices a, y, y w' son cada uno 1 y en donde Lb'-A- tiene la fórmula de M1-A-i (BU)-Ao-, en donde M1-A-i(BU)- representa un precursor de un autoestabilizante (Ls s ), que es un tipo de resto que contiene Lb' en un Conjugado de fármaco y ligando, en donde A1 es una subunidad de una unidad de extensión A con Ao como la otra subunidad, D+ es una unidad de fármaco tubulisina (O-éter) cuaternizado y -Y(W')- es una unidad de glucurónido, son preparados a partir de compuestos H-GlucQ-Tub(O-éter)-OH de la siguiente manera y se abrevia como mDPR-GlucQ-Tub(O-éter)-OH en donde mDPR- es un resto M1'A1(BU)-Ao -.
Elaboración de la unidad enlazadora: Se carga un matraz con la amina H-GlucQ-Tub(O-éter)-OH del Ejemplo 31 a la que se añade mDPR(Boc)-OPFP (68, 1,2 equivalentes) del Ejemplo 30 como una solución en DMF (10 mM). N,N-diisopropiletilamina (4,0 equivalentes) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La reacción se inactivó con AcOH (4,0 equivalentes), luego se diluyó en d Ms O (1 volumen) y se purificó mediante HPLC preparativa. Los compuestos 75, 76 y 77 (esquema 8) se prepararon a partir de los compuestos 72, 73 y 74, respectivamente, para ejemplificar el procedimiento general.
(2R)-1-(3-(3-((S)-3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-ilo))propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-ilo)-1-metoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (75): UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,22 min, m/z (ES+) calculado 1334,62 (M)+, encontrado 1334,68
(2R)-1-(3-(3-((S)-3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-ilo))propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-ilo)-1-etoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (76): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,19 min, m/z (ES+) calculado 1348,64 (M)+, encontrado 1348,79.
(2R)-1-(3-(3-((S)-3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-ilo))propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-ilo)-4-metil-1-propoxipentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (77): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,24 min, m/z (ES+) calculado 1362,65 (M)+, encontrado 1362,78.
Desprotección: Los productos de la formación de enlaces amida se desprotegen para eliminar el grupo protector BOC de la siguiente manera. Se carga un matraz con mDPR(BOC)-GlucQ-Tub(O-éter)-OH y se enfría a 0 °C. Se agrega una solución al 10 % de TFA en DCM (50 mM) y la reacción se deja calentar a temperatura ambiente mientras se agita durante 1 hora. A continuación, la reacción se diluye con DMSO (1 volumen), se elimina el DCM a presión reducida y luego se purifica mediante HPLC preparativa. Los compuestos 78, 79 y 80 (esquema 8) se prepararon a partir de los compuestos 75, 76 y 77, respectivamente, para ejemplificar el procedimiento general. (2R)-1-(3-(3-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-((((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-1-metoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (78): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,09 min, m/z (ES+) calculado 1234,57 (M)+, encontrado 1234,65.
(2R)-1-(3-(3-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-((((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-1-etoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidin-1-io (79): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 0,95 min, m/z (ES+) calculado 1248,59 (M)+, encontrado 1248,72.
(2R)-1-(3-(3-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-((((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)hiazol-2-il)-4-metil-1-propoxipentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1 -metilpiperidin-1 -io (80): UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,03 min, m/z (ES+) calculado 1262,60 (M)+, encontrado 1262,73.
4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-triacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(terc-butoxicarbonil)-1-metilpiperidin-1-io (98) (97 mg, 82 %). UPLC-MS analítica (sistema 2): t r= 1,32 min, m/z (ES+) calculado 930,40 (M)+, encontrado 930,49. A continuación, se eliminaron los grupos protectores del resto carbohidrato seguido de reprotección como el éster alílico para proporcionar el Compuesto 99 (Esquema 10) de la siguiente manera.
Desprotección de glicósidos: A un matraz secado a la llama cargado con el Compuesto 98 (97 mg, 104 jmol) que tiene grupos protectores de acetato y éster metílico en alcohol alílico anhidro (2,09 ml) bajo N2 , se le añadió Ti(OC2 H5)4 (87 |jL, 417 jmol) y la mezcla de reacción resultante se calentó a 80 °C con agitación durante 2 horas. Después, la reacción se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en 50 ml de HCl 1M. Después de descansar durante 45 minutos, el HCl se extrajo 3 veces con 50 ml de DCM. Los orgánicos resultantes se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 , se condensaron y se purificaron por HPLC preparativa para proporcionar (2R)-1-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonilo)amino)-propanamido)-4-(((2s,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(terc-butoxicarbonil)-1 -metilpiperidin-1-io (99) (42 mg, 48 %). UPLC-MS analítica (sistema 2): t= 1,18 min, m/z (e S+) calculado 830,39 (M)+, encontrado 830,49.
Ejemplo 35. Preparación de un compuesto intermedio fármaco-enlazador mediante acoplamiento de amida de un intermedio tripéptido de tubulisina que tiene un resto tubuvalina-(O-acilo) a un heterocicloalquilo de nitrógeno cuaternizado correspondiente al del fármaco de tubulisina libre. El Compuesto 99 (Esquema 10), abreviado como FMOC-Gluc(O-Alil)Q-D-Mep-OtBu, del Ejemplo 34 se desprotegió mediante la eliminación del grupo protector t-butil éster para proporcionar el Compuesto 100, que luego se acopló a la isoleucina-tubuvalina(OAc)-éster alílico de tubofenilalanina (Compuesto 95) del Ejemplo 33 mediante formación de enlaces peptídicos mediante los siguientes métodos.
Desprotección de N-terminal (D-Mep): un matraz que contenía FMOC-Gluc(O-alilo)Q-D-Mep-OtBu (99, 42 mg, 50 jmol) se enfrió a 0 °C bajo N2. Se añadió gota a gota una solución de TFA al 30 % en CH2Ch (2,5 ml) y se agitó durante 18 horas. La reacción se concentró a presión reducida, se recogió en DMSO mínimo y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 25 mg (64 %) de (2R)-1-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-ilo)oxi)bencil)-2-carboxi-1 -metilpiperidin-1-io (100). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,05 min, m/z (ES+) calculado 774,32 (M)+, encontrado 774,42.
Acoplamiento de péptidos: el Compuesto 100 (Esquema 10), abreviado como FMOC-Gluc(O-Alol)Q-D-Mep-OH, se condensó con tripéptido 95 mediante la adición del Compuesto 100 (28 mg, 36 jmol) y HATU (27 mg, 72 jmol) como sólidos a un matraz cargado con H-Ile-Tuv(OAc)-Tup-O-Alil (95, 23 mg, 36 jmol) seguido de DMF (0,714 ml). Luego se añadió N,N-diisopropiletilamina (25 jl, 143 jmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después, la reacción se recogió en DMSO y se purificó mediante LC preparativa para proporcionar 23 mg (46 %) de (2R)-1-(3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloxi)carbonil)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-acetoxi-1-(4-(((2R,4S)-5-(aliloxi)-4-metil-5-oxo-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-metilpiperidina-1-io (101). UPLC-Ms analítica (sistema 2): tr= 1,39 min, m/z (ES+) calculado 1398,66 (M)+, encontrado 1398,81.
Desprotección de glicósidos y Tup: el FMOC y los grupos protectores de alilo del producto FMOC-Gluc(O-Alil)Q-Mep-Ile-Tuv(OAc)-Tup-O-Alil (es decir, Compuesto 101), también abreviado como Fmoc-Gluc(O-Alil)Q-TubM-OAlil, mientras que retenía el acetato de tubuvalina, se logró de la siguiente manera. FMOC-Gluc(O-alilo)Q-TubM-Oalilo (101, 21 mg, 15 jmol) se recogió en DCM (1,5 ml) en agitación en atmósfera de N2. Se añadieron Pd(PPh3 )4 (3,5 mg, 3,1 jmol) y PPh3 (1,6 mg, 6,1 jmol) como sólidos seguido de pirrolidina (20,1 jL, 245 jmol). La reacción se agitó a 2 horas a temperatura ambiente, luego se recogió en 1 ml de DMSO, se condensó a presión reducida y se purificó por LC preparativa para proporcionar 13 mg (79 %) de (2R)-2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-acetoxi-1-(4-(((2R,4S)-4-carboxi-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)-1-(3-(3-aminopropanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-metilpiperidin-1-io (102). Up LC-MS analítica (sistema 2): tr= 0,94 min, m/z (ES+) calculado 1096,53 (M)+, encontrado 1096,65.
El compuesto 102, abreviado como H-GlucQ-TubM-OH, es un compuesto intermedio de fármaco-enlazador ilustrativo de la fórmula A'-Yy(W'w)-D+ en donde los subíndices y, y w' son cada uno 1 y en donde A' es un precursor de (sub)unidad de extensión, -Y(W)- es una unidad de glucurónido, que se compone de una unidad espaciadora PAB capaz de autodestruirse para liberar el fármaco de tubulisina (D) y un resto de ácido glucurónico, y D+ es tubulisina M cuaternizada. Para preparar compuestos intermedios de compuestos fármaco enlazador análogos que tengan tubulisina cuaternizada alternativa que contenga entradas de componentes de tubuvalina (O-acilo) en donde el resto acetato de BOC-Tuv(O-Ac)-Tup (OEt) (90) es reemplazado con un compuesto de fórmula general BOC-Tuv(O-Acil)-Tup(OEt) en el Ejemplo 33 para preparar H-Ile-Tuv(O-Acil)-Tup-O-alilo, correspondiente al Compuesto 95. Ese intermedio se lleva adelante de acuerdo con los Ejemplos 34 y 35 para proporcionar compuestos de fórmula general H-GlucQ-D-Mep-Ile-Tuv(O-Acil)-Tup-OH, abreviado además como H-GlucQ-Tub(O-Acil)-OH, que corresponde al compuesto intermedio de fármaco-enlazador del Compuesto 102.
Figure imgf000178_0001
e n d o n d e R 34 e s b e n c i l o , m e t i l o , i s o p r o p i l o , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
Figure imgf000178_0002
y R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 4- N H 2 , -( C H 2) 3 N H ( C = O ) N H 2 , ( C H 2) 3 N H ( C = N H ) N H 2 , o - ( C H 2) 2 C O 2 H , e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a e n e l d i p é p t i d o N - t e r m in a l i n d i c a u n ió n c o v a l e n t e a A o L b o L b' y la l í n e a o n d u l a d a e n e l d i p é p t i d o C -t e r m i n a l i n d i c a u n ió n c o v a l e n t e a J d e u n r e s t o S I .
E j e m p l o 3 8 : Procedimiento general para preparar compuestos de fármaco-enlazador mediante la introducción de un resto precursor de L ss en compuestos intermedios de fármaco-enlazador que incorporan un mecanismo de liberación de péptidos que tiene una unidad de fármaco de tubulisina(O-acilo) cuaternizado.
L o s c o m p u e s t o s d e f á r m a c o e n l a z a d o r d e la f ó r m u l a L b' - Y - W - D e n d o n d e L b'- e s M 1- A ( B U ) - y - Y - W - D c o r r e s p o n d e a i n t e r m e d i o s d e c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e l E j e m p l o 37 , s e i l u s t r a n p o r e l E s q u e m a 12. L a e j e m p l i f i c a c i ó n s e p r o p o r c i o n a d e la s i g u i e n t e m a n e r a p a r a la s í n t e s i s d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r m D P R - V a l - G l u - p A B Q - T u b M -O H ( 113 ) c u y a f ó r m u l a g e n e r a l i z a d a e s M 1- A ( B U ) - W 2 - W 1- P A B Q - T u b M - O H .
A c o p l a m i e n t o d e L s s ( m D P R ) : s e c a r g ó u n m a t r a z c o n H - V a l G l u P A B 4 - T u b M ( 111 , 22 , 5 m g , 2 1 , 2 ^ m o l ) e n D M F a n h i d r o ( 0 , 420 m l) , a l q u e s e a ñ a d i ó m D P R ( B o c ) - O S u ( 6 , 8 , 9 m g , 23 , 3 ^ m o l ) ) c o m o u n s ó l i d o b a jo N 2. S e a ñ a d ió N , N - d i i s o p r o p i l e t i l a m i n a ( 14 , 8 ^ l , 84 , 7 ^ m o l ) y la r e a c c i ó n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e d u r a n t e 3 h o r a s . D e s p u é s , la r e a c c i ó n s e i n a c t i v ó c o n á c id o a c é t i c o ( 14 , 8 ^ l ) y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o p o r c i o n a r 1 1 , 5 m g ( 40 % ) d e ( 2 R ) - 2 -( ( ( 2 S , 3 S ) - 1 -( ( ( 1 R , 3 R ) - 1 - a c e t o x i - 1 -( 4 -( ( ( 2 R , 4 S ) - 4 - c a r b o x i - 1 - f e n i l p e n t a n - 2 - i l ) c a r b a m o i l ) t i a z o l -2 - i l ) - 4 - m e t i l p e n t a n - 3 - i l ) ( m e t i l ) a m i n o ) - 3 - m e t i l - 1 - o x o p e n t a n - 2 - i l ) c a r b a m o i l ) - 1 -( 4 -( ( 7 S , 10 S , 1 3 S ) - 13 -( 2 - c a r b o x i e t i l ) - 7 -( 2 , 5 - d i o x o - 2 , 5 - d i h i d r o - 1 H - p i r r o l - 1 - i l ) - 1 0 - i s o p r o p i l - 2 , 2 - d i m e t i l - 4 , 8 , 11 - t r i o x o - 3 - o x a - 5 , 9 , 1 2 - t r i a z a t e t r a d e c a n a m i d o ) b e n c i l ) -1 - m e t i l p i p e r i d i n - 1 - i o ( 112 ) ( 11 , 5 m g , 40 % ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 2 ) : t r= 1 ,31 m in , m / z ( E S ) c a l c u l a d o 1 32 7 , 66 ( M ) , e n c o n t r a d o 1327 , 94 .
D e s p r o t e c c i ó n : U n m a t r a z c a r g a d o c o n M D P R ( B o c ) - V a l G l u P A B 4 - T u b M ( 112 , 11 , 5 m g , 8 , 6 m o l ) s e e n f r i ó a 0 ° C b a jo N 2. S e a ñ a d i ó g o t a a g o t a u n a s o l u c i ó n d e T F A a l 10 % e n C H 2 C h ( 0 , 8 6 m l ) y s e a g i t ó d u r a n t e 2 h o r a s . D e s p u é s , la r e a c c i ó n s e r e c o g i ó e n D M S O , s e c o n d e n s ó a p r e s ió n r e d u c i d a y s e p u r i f i c ó m e d i a n t e H P L C p r e p a r a t i v a p a r a p r o p o r c i o n a r 9 , 9 m g ( 93 % ) d e ( 2 R ) - 2 -( ( ( 2 S , 3 S ) - 1 -( ( ( 1 R , 3 R ) - 1 - a c e t o x i - 1 -( 4 -( ( ( 2 R , 4 S ) - 4 - c a r b o x i - 1 - f e n i l p e n t a n - 2 -i l ) c a r b a m o i l ) t i a z o l - 2 - i l ) - 4 - m e t i l p e n t a n - 3 - i l ) ( m e t i l o ) a m i n o ) - 3 - m e t i l - 1 - o x o p e n t a n - 2 - i l ) c a r b a m o i l ) - 1 -( 4 -( ( S ) - 2 -( ( S ) - 2 -( ( S ) - 3 -a m i n o - 2 -( 2 , 5 - d i o x o - 2 , 5 - d i h i d r o - 1 H - p i r r o l - 1 - i l ) p r o p a n a m i d o ) - 3 - m e t i l b u t a n a m i d o ) - 4 - c a r b o x i b u t a n a m i d o ) b e n c i l ) - 1 -m e t i l p i p e r i d i n - 1 - i o ( 1 1 3 ) . U P L C - M S a n a l í t i c a ( s i s t e m a 2 ) : t r= 0 , 9 9 m in , m/z ( e S ) c a l c u l a d o 1 2 2 7 , 6 1 ( M ) , e n c o n t r a d o 1 22 7 , 83 .
E j e m p l o 3 9 : Preparación de compuestos intermedios de tubulisina que tienen restos aciloxi alternativos en sustitución de acetato en el componente de tubuvalina.
L a p r e p a r a c i ó n d e lo s c o m p u e s t o s d e l t í t u l o p r o c e d e d e l c o m p u e s t o d e s a c e t i l t u b u v a l i n a p r o t e g i d o c o n B O C a t r a v é s d e l a c o p l a m i e n t o d e p é p t i d o s a t u b o f e n i l a l a n i n a c o m o s u é s t e r a l í l i c o . E l r e s t o a c i lo s e r e i n t r o d u c e l u e g o u s a n d o e l a n h í d r i d o d e á c id o a p r o p i a d o ( M é t o d o 1 ) , c o m o s e e j e m p l i f i c a p a r a p r o p i o n i l o x i y b u t i r i l o x i , o c l o r u r o d e á c id o ( M é t o d o 2 ) c o m o s e e j e m p l i f i c a p a r a c l o r u r o d e á c id o i s o b u t í r i c o p a r a r e e m p l a z a r e l r e s t o d e a c e t a t o d e t u b u v a l i n a ( e s d e c i r , i s o b u t i r i l o x i r e e m p l a z a a c e t o x i ) . A l t e r n a t i v a m e n t e , e l h i d r o x i l o d e t u b u v a l i n a s e e s t e r i f i c a m e d i a n t e la a c t i v a c i ó n c o n D C C d e u n á c i d o c a r b o x í l i c o a l i f á t i c o ( M é t o d o 3 ) , c o m o s e e j e m p l i f i c a p a r a la s u s t i t u c i ó n d e d im e t i l b u t i r i l o x i e i s o v a l e r i l o d e l r e s t o a c e t a t o d e t u b u v a l i n a . L o s c o m p u e s t o s o b t e n i d o s t i e n e n la f ó r m u l a g e n e r a l B O C - T u v ( O - a c i l ) - T u p - O - a l i l c o m o s e m u e s t r a e n e l E s q u e m a 13. E l g r u p o p r o t e c t o r B O C s e e l im i n a p a r a p e r m i t i r e l a c o p l a m i e n t o d e p é p t i d o s p a r a i n t r o d u c i r e l c o m p o n e n t e N - t e r m i n a l p a r a p r o p o r c i o n a r l o s a n á l o g o s d e t u b u l i s i n a M .
H i d r o l i s i s d e T u v : S e c a r g ó u n m a t r a z c o n a c e t a t o d e t u b u v a l i n a ( O r g . L e t t . , 2007 , 9 , 1605 - 160 7 ) 122 ( 225 m g , 56 0 ^ m o l ) d i s u e l t o e n m e t a n o l ( 5 m l ) y t e t r a h i d r o f u r a n o ( 5 m l ) , l u e g o s e e n f r i ó b a j o n i t r ó g e n o a 0 ° C e n u n b a ñ o d e h ie l o . S e d is o l v ió h i d r ó x i d o d e l i t io m o n o h i d r a t o (71 m g , 1680 ^ m o l ) e n a g u a ( 5 m l) y la s o l u c i ó n s e a ñ a d ió g o t a a g o t a a l m a t r a z d e r e a c c i ó n . D e s p u é s , la r e a c c i ó n s e a g i t ó a t e m p e r a t u r a a m b i e n t e h a s t a q u e U P L C / M S r e v e l ó u n a (2S,4R)-alil 4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-1-((3,3-dimetilbutanoil)oxi)-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoato (154): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,38 min, m/z (ES+) calculado 824,50 (M+H)+ , encontrado 824,60.
Los compuestos 155-159 de fórmula general D-Mep-Ile-Tuv(O-acil)-Tup-OH mostrados en el Esquema 14 y enumerados a continuación se prepararon de acuerdo con el procedimiento de desprotección de alilo anterior a partir de los Compuestos 150-154, respectivamente.
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metil-1-(propioniloxi)pentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (155): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,11 min, m/z (ES+) calculo 742,42 (M+H)+ , encontrado 742,51.
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-1-(butiriloxi)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (156): UPLC-MS (sistema 2): tr = 1,16 min, m/z (ES+) calculado 756,44 (M+H)+ , encontrado 756,54.
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-l-(isobutiriloxi)-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (157): UPLC-MS (sistema 1): tr= 1,23 min, m/z (ES+) calculado 756,44 (M+H)+, encontrado 756,82.
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-4-metil-1-((3-metilbutanoil)oxi)pentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (158): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,22 min, m/z (ES+) calculado 770,45 (M+H)+, encontrado 770,55.
Ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidina-2-carboxamido)pentanamido)-1-((3,3-dimetilbutanoil)oxi)-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (159): UPLC-MS (sistema 2): tr= 1,23 min, m/z (ES+) calculado 784,47 (M+H)+ , encontrado 784,57.
Compuestos de tubulisina O-acilo adicionales, incluidos los que tienen variación (S) en las entradas de aminoácidos o ácidos que contienen amina que reemplazan el resto de tubofenilalanina (Compuesto 40) del Ejemplo 39, como se muestra en el Ejemplo 27, y/o la entrada de aminoácidos FMOC (FMOC-Ile) del Ejemplo 40, se preparan reemplazando D-Mep con otras entradas de ácido pipecólico N-alquilado o con un ácido azetidinil-2-carboxílico N-alquilado, N-alquilado-D-prolina o N,N-dialquilo aminoácido como N,N-dimetilglicina.
Ejemplo 42: Preparación de un compuesto fármaco-enlazador que tiene una unidad de fármaco de tubulisina no escindible con unión N-terminal a una unidad de extensión.
Se preparó un compuesto fármaco-enlazador de fórmula general M1-A-D, en donde M1 es un resto maleimida, A es una unidad de extensión y D es una tubulisina con unión N-terminal al precursor de la unidad enlazadora M1-A como se muestra en el esquema 15. En que el Compuesto Esquema 172 ejemplifica un compuesto de fármaco-enlazador, cuya preparación se describe a continuación, donde la unidad de fármaco es desmetil-Tubulisina M (O-CH3) (170) en el que el sustituyente de acetato unido a O del componente tubuvalina ha sido reemplazado con -OCH3. Ese compuesto fármaco-enlazador proporciona un conjugado de fármaco y ligando (LDC) a través de la unión de una unidad de ligando a través de un grupo funcional tiol de un resto de direccionamiento que es resistente a la liberación del fármaco libre. Para un LDC derivado del Compuesto 172 y un resto de direccionamiento de anticuerpo, el resto activo liberado está típicamente representado por la estructura general de Cys-M2-A-D, en donde M2 es un resto succinimida resultante de la adición de Michael de un tiol de cisteína al resto maleimida del compuesto fármaco-enlazador M1-A-D. El resto activo eventualmente liberado de tales LDC puede considerarse una tubulisina M (O-éter) en la que el sustituyente metilo del resto D-Mep ha sido reemplazado por tiol, un resto alquilo sustituido. Des-metil-Tub(OMe)-O-alil: Se disolvió ácido (R)-N-BOC-pipecólico 60 (6 mg, 24 pmol) en dimetilformamida anhidra (0,46 ml, 25 mM) y se preactivó con HATU (9 mg, 24 pmol) y DIPEA (9 pl, 48 pmol); la mezcla se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno. A continuación, se añadió el ácido activado al tripéptido 57 de H-Ile-Tuv(OMe)-Tup-O-alilo (10 mg, 12 pmol) del Ejemplo 28; la reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno y se controló mediante UPLC/MS. Después, la reacción se inactivó con ácido acético y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 12 mg (cuant.) (R)-terc-butil 2-(((2S,3S)-1-(((1R,3R)-1-(4-(((2R,4S)-5-(aliloxi)-4-metil-5-oxo-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol-2-il)-1-metoxi-4-metilpentan-3-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil) piperidin-1-carboxilato (168). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr = 1,99 min, m/z (ES+) calculado 847,47 (M+Na)+, encontrado 847,87.
Desprotección: BOC-Tub(OMe)-OAlil (168, 12 mg, 15 pmol) se recogió en DCM (0,75 ml) en agitación en atmósfera de N2. Se añadieron Pd(PPh3)4 (1,7 mg, 1,5 pmol) y PPh3 (0,8 mg, 3 pmol) como sólidos seguido de pirrolidina (11 pl, 120 pmol). La reacción se agitó a 2 horas a temperatura ambiente, luego se recogió en DMSO, se condensó a presión reducida y se purificó por HPLC preparativa para proporcionar 9 mg (76 %) de (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-((R)-1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-2-carboxamido)-N,3-dimetilpentanamido)-1-metoxi-4-metilpentil)tiazol Ácido -4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (169): UPLC-MS analítica (sistema 1): t,= 1,80 min, m/z (ES+) calculado 786,45 (M+H)+, encontrado 786,67
Desprotección N-terminal: Un matraz cargado con BOC-TubOMe-OH se enfrió a 0 °C bajo N2 (169, 9 mg, 11 |jmol). Se añadió gota a gota una solución de TFA al 10 % en CH2Ch (0,5 ml) y se agitó durante 4 horas. Después, la reacción se recogió en DMSO, se condensó a presión reducida y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar (5 mg) 63 % de (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((Ácido 2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-piperidin-2-carboxamido)pentanamido)-1-metoxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (170). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr = 1,15 min, m/z (ES+) calculado 686,40 (M+H)+, encontrado 685,59.
Acoplamiento de Lb'-A-: Se disolvió ácido maleimidocaproico 171 (2 mg, 9,5 jmol) en dimetilformamida anhidra (0,5 ml, 20 mM) y se preactivó con HATU (2,3 mg, 6 jmol) y DIPEA (5 jl, 29 jmol); la mezcla se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno. A continuación, se añadió el ácido activado al éter metílico de tubulisina 170 (5 mg, 7,3 jmol); la reacción se agitó a temperatura ambiente bajo nitrógeno y se controló mediante UPLC/MS. Después, la reacción se inactivó con ácido acético y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 7 mg (cuant.) de ácido (2S,4R)-4-(2-((1R,3R)-3-((2S,3S)-2-((R)-1-(6-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)hexanoil)piperidin-2-carboxamido)-N,3-dimetilpentanamido)-1-metoxi-4-metilpentil)tiazol-4-carboxamido)-2-metil-5-fenilpentanoico (172). UPLC-MS analítica (sistema 1): tr= 1,60 min, m/z (ES+) calculado 879,47 (M+H)+ , encontrado 879,11.
Los conjugados de amina cuaternaria como se describen en la presente descripción liberan condicionalmente tubulisinas que tienen un componente N-terminal que contiene amina terciaria en el que el átomo de nitrógeno de ese componente está directamente sustituido por un resto alquilo (es decir, a través de un enlace nitrógeno-carbono). En contraste, el resto de fármaco activo liberado de forma no condicional de un conjugado de fármaco y ligando preparado a partir del compuesto 172 de fármaco-enlazador tiene un componente N-terminal que contiene una amina secundaria sustituida por un alquileno a través de un grupo funcional amida.
Ejemplo 43: Preparación de un compuesto fármaco-enlazador que tiene dolastatina 10 cuaternizado que incorpora una unidad de glucurónido.
Cuaternización: Se cargó un recipiente a presión con el producto intermedio 2 (62 mg, 76 jmol) de unidad de extensión-glucurónido bromado del Ejemplo 1 y dolastatina 10 (173, 45 mg, 51 jmol) en 2-butanona anhidra (1,0 ml). El recipiente de reacción se lavó abundantemente con N2 y se selló. Después, la reacción se agitó y se calentó a 80 °C durante 12 horas. La mezcla resultante se enfrió, se condensó a presión reducida y se llevó adelante sin purificación adicional para proporcionar (S)-N- (3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)-propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5-triacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R, 2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (174). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,42 min, m/z (ES+) calculado 1515,74 (M)+, encontrado 1515,91.
Desprotección de glicósidos: se cargó un matraz con FMOC-GlucQ-DIO (174, 39 mg, 26 jmol) en THF (0,42 ml) y MeOH (0,42 ml). Esta solución se agitó en atmósfera de N2 y se enfrió a 0 °C. LO HH 2O (8,6 mg, 206 jmol) se solubilizó en H2O (0,42 ml) gota a gota a continuación añadido. Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Después, la reacción se inactivó con ácido acético (12 jl, 206 jmol) y se condensó a presión reducida. El residuo se recogió en DMSO mínimo y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 7 mg (24 %) (S)-N-(3-(3-aminopropanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-((((3R, 4S, 5S)-3-metoxi -1-((S)-2-((1R, 2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-ilo)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (175). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 0,90 min, m/z (ES+) calculado 1153,62 (M)+, encontrado 1153,78.
Acoplamiento de Ls s (mDPR): Se cargó un matraz con H-GlucQ-D10 (175, 7,0 mg, 6,0 jmol) en DMF anhidra (0,62 ml). Se añadió mDPR(BOC)-OSu (6, 2,3 mg, 6,1 jmol) bajo N2. Se añadió N,N-diisopropiletilamina (4,2 jl, 24 jmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después, la reacción se inactivó con ácido acético (4,2 jl) y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 5,5 mg (64 %) de (S)-N-(3-(3-((S)-3-((tercbutoxicarbonilo)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R, 4S, 5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R, 2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propilo)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1 -oxobutan-2-aminio (176). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,18 min, m/z (ES+) calculado 1419,71 (M)+, encontrado 1419,87.
Desprotección de Ls s (MDPR): se enfrió a 0 °C bajo N2 un matraz que contenía MDPR (BOC) -GlucQ-D10 (176, 5,5 mg, 3,9 mol). Se añadió gota a gota una solución de TFA al 10 % en CH2Ch (0,39 ml) y se agitó durante 4 horas. A continuación, la reacción se recogió en DMSO, se condensó a presión reducida y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 5,1 mg (99 %) de (S)-N- (3-(3-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4, 5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1(((S)-1-(((3R, 4S, 5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1R, 2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil) pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio (177). UPLC-MS analítica: tr = 0,95 min, m/z (ES+) calculado 1319,66 (M)+, encontrado 1319,81.
Ejemplo 44: Preparación de un compuesto fármaco-enlazador que tiene Dolastatina 10 con unión de carbamato a una unidad de glucurónido
Unión de la unidad de fármaco carbamato: Se cargó un matraz con FMOC-Gluc-PNP (Bioconjugate Chem., 2006, 17, 831-840.) (178, 60 mg, 66 pmol) y monometildolastatina 10 (179, 46 mg, 60 pmol) en DMF anhidra (0,96 ml) a la que se añadió piridina (0,24 ml) seguida de HOBt (3,2 mg, 24 pmol). La reacción se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche, se condensó a presión reducida y se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (DCM/MeOH) para proporcionar 54 mg (59 %) de (2S,3R,4S,5S,6S)-2-(2-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)ammo)-0propanamido)-4-((5S, 8S,11S,12R)-11-((S)-sec-butilo)-5,8-diisopropil-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(tiazol-2-il) etil)amino) propil) -pirrolidin-1 -il)-2-oxoetil)-4,10-dimetil-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4,7,10-triazatetradecil)-fenoxi) -6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-3,4,5-triil triacetato (180). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,65 min, m/z (ES+) calculado 1545,71 (M+H)+, encontrado 1545,98.
Desprotección de glicósidos: se cargó un matraz con Fmoc-Gluc-MMDIO (180, 54 mg, 35 pmol) en THF (0,78 ml) y MeOH (0,78 ml). Esta solución se agitó en atmósfera de N2 y se enfrió a 0 °C. LO H H 2O (12 mg, 278 pmol) se solubilizó en H2O (0,78 ml) gota a gota a continuación añadido. Se dejó que la reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Después, la reacción se inactivó con ácido acético (17 pl, 278 pmol) y se condensó a presión reducida. El residuo se recogió en DMSO mínimo y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 9,6 mg (23 %) de ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-aminopropanamido)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-secbutil)-5,8-diisopropil-12-(2-((S)-2-((1R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil) pirrolidin-1 -il)-2-oxoetil)-4,10-ácido dimetil-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4,7,10-triazatetradecil) fenoxi)-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (181). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,13 min, m/z (ES+) calculado 1183,60 (M+H)+, encontrado 1183,70.
Acoplamiento de unidad glucurónido-fármaco: se cargó un matraz con H-Gluc-MMD10 (181, 9,6 mg, 8,1 pmol) en DMF anhidra (0,81 ml). Se añadió mDPR(Boc)-OSu (6, 3,4 mg, 8,9 pmol) en N2. Se añadió N,N-diisopropiletilamina (5,7 pl, 32 pmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después, la reacción se inactivó con ácido acético (5,7 pl) y se purificó mediante HPLC preparativa para proporcionar 5,2 mg (44 %) de Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-((S)-3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(5S, 8S,11S,12R)-11-((S)-sec-butil)-5,8-diisopropil-12-(2-((S)-2-((1R, 2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo -3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-4,10-dimetil-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4.7.10- triazatetradecil)fenoxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (182). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,40 min, m/z (ES+) calculado 1449,69 (M+H)+ , encontrado 1449,80.
Desprotección: un matraz que contenía mDPR(Boc)-Gluc-MMD10 se enfrió a 0 °C bajo N2 (182, 5,6 mg, 3,9 mol). Se añadió gota a gota una solución de TFA al 10 % en CH2Ch (0,39 ml) y se agitó durante 4 horas. Después, la reacción se recogió en DMSO, se condensó a presión reducida y se purificó por HPLC preparativa para proporcionar 5,2 mg (99 %) de Ácido (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(2-(3-(((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-((5S,8S,11S,12R)-11-((S)-sec-butil)-5,8-diisopropil-12-(2-((S)-2-((1R, 2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-4,10-dimetil-3,6,9-trioxo-2,13-dioxa-4.7.10- triazatetradecil)fenoxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-carboxílico (183). UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,13 min, m/z (ES+) calculado 1349,64 (M+H)+ , encontrado 1349,75.
El esquema 17 para el ejemplo 44 representa una secuencia de reacción ejemplar para preparar compuestos de fármaco-enlazador que tienen unidades de fármaco unidas a carbamato. Los conjugados de fármaco ligando que se pueden obtener a partir de dicho compuesto carbamato de fármaco-enlazador, que contienen unidades de fármaco no cuaternizados, pueden compararse con la versión cuaternizado cuya síntesis de los compuestos de enlace de fármaco cuaternizados necesarios se proporciona mediante la generalización del esquema 16. Para la adaptación a un compuesto carbamato de fármaco-enlazador, se debe eliminar un sustituyente alquilo del grupo de función de amina terciaria de un fármaco que contiene amina terciaria si su unión como unidad de fármaco debe ser a través del nitrógeno de ese grupo funcional. La liberación del fármaco libre de un conjugado de fármaco y ligando que tiene esa modificación en la unidad de fármaco liberará el fármaco modificado, que se espera que tenga propiedades diferentes en comparación con el fármaco original que puede ser indeseable.
Ejemplo 45: Preparación de un compuesto fármaco-enlazador que tiene Auristatina F cuaternizado que incorpora una unidad de glucurónido
Protección C-terminal de Auristatina F: Se cargó un matraz de fondo redondo con Auristatina F 184 (150 mg, 201 pmol) y se disolvió en alcohol alílico (10 ml). La reacción se enfrió a 0 °C y se añadió pirocarbonato de alilo (149 mg, 804 pmol) seguido de DMAP (7,3 mg, 60 pmol). La reacción se extruyó CO2 vigorosamente y se ralentizó después de 15 min. La reacción se analizó por UPLC después de agitar a TA durante 2 h y mostró > 90 % conv. La reacción se concentró al vacío y el crudo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (MeOH al 0-25 %). Las fracciones se concentraron a sequedad para proporcionar 111 mg (71 %) de (S)-alil 2-((2R, 3R)-3-((S)-1-((3R, 4S, 5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato ( 1 8 5 ) . UPLC-MS analítica (sistema 2): t= 1,1 min, m/z (ES+) calculado 786,54 (M+H)+, encontrado 786,72.
Cuaternización: A un matraz de 20 ml que contenía AF-OAlil 1 8 5 (111 mg, 141 pmol) se le añadió el intermedio 2 de unidad de extensión-glucurónido bromado (160 mg, 197 pmol) y DMF seco (5 ml). La solución se agitó a 65 °C durante 16 h y la reacción se completó mediante UPLC. La reacción se secó, se recogió en DMSO y se purificó por HPLC. Las fracciones de producto se concentraron hasta sequedad para proporcionar 85 mg (40 %) de (S)-N- (3-(3-((((9H-fluoren-9-il)metoxi)carbonil)amino)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6s)-3,4,5-triacetoxi-6-(metoxicarbonil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R, 4S, SS)-1-((S)-2-((1R, 2R)-3-(((S)-1-(aliloxi)-1-oxo-3-fenilpropano-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio ( 1 8 6 ) . UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,45 min, m/z (ES+) calculado 1516,77 (M)+, encontrado 1517,03.
Desprotección de glicósidos: Se añadió THF (4 ml) y MeOH (4 ml) a un vial de 20 ml que contenía GlucQ-AF-OAlil 186 protegido (85 mg, 56 pmol). La reacción se enfrió a 0 °C y se añadió una solución de LiOH (18 mg/ml en agua) en una porción. La reacción se agitó a TA durante 3 h y la reacción se completó mediante UPLC. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo se recogió en DMSO/H2O (1: 1). La HPLC preparativa seguida de liofilización proporcionó 42 mg (62 %) de (S)-N-(3-(3-aminopropanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,SS)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-carboxi-2-feniletil)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metilo -1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1- oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio ( 1 8 7 ) . UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 0,88 min, m/z (ES+) calculado 1114,63 (M)+, encontrado 1114,83.
Acoplamiento de Ls s (mDPR): Se cargó un vial de 3 ml con NH2-GluQ-AF 1 8 7 (42 mg, 39 pmol) y DMF seca (1,6 ml). La solución se agitó y se añadió mDPR-(Boc)-OPfp 6 8 (19 mg, 42 pmol). La reacción se agitó durante 5 min a TA y luego se añadió DIPEA (13 pl, 77 pmol). La reacción se agitó durante 1 h a TA y la reacción se completó mediante UPLC. La preparación por HPLC del crudo seguido de liofilización proporcionó 13 mg (24 %) de (S)-N-(3-(3-((S)-3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)-propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-carboxi-2- feniletil)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio ( 1 8 8 ) . UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 1,12 min, m/z (ES+) calculado 1380,72 (M)+, encontrado 1380,87.
Desprotección de Ls s (mDPR)-Ao-Y(W)-D+ : Un vial de 20 ml que contenía Boc-mDPR-GlucQ-AF (13 mg, 9 pmol) se enfrió a 0 °C y se añadió una solución al 20 % de TFA en dCm (1,0 ml). La reacción se dejó calentar lentamente a TA y se agitó durante 4 h, y la reacción se completó mediante UPLC. DMSO/0,1 % de TFA en H2O se añadió a la reacción y luego se purificó en HPLC para dar 1,5 mg (33 %) de (S)-N-(3-(3-((S)-3-amino-2-(2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il)propanamido)propanamido)-4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-carboxi-3,4,5-trihidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)bencil)-1-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R),2R)-3-(((S)-1-carboxi-2-feniletil)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-3-metil-1-oxobutan-2-il)amino)-N,N,3-trimetil-1-oxobutan-2-aminio ( 1 8 9 ) . UPLC-MS analítica (sistema 2): tr= 0,86 min, m/z (ES+) calculado 1280,67 (M)+ , encontrado 1280,80.
El Esquema 18 para el Ejemplo 45 y el Esquema 16 para el Ejemplo 43 junto con el Esquema 1 proporcionan rutas representativas para preparar compuestos de Fármaco-enlazador de fórmula general Lb'-Ao-Y(W)-D+, más específicamente M rA rA o-Y(W)-D+ en donde D+ es una auristatina cuaternizada (es decir, dolastatina 10, auristatina E o auristatina F, respectivamente). Otros compuestos de fármaco-enlazador de esa fórmula general se preparan con compuestos de auristatina adicionales que tienen un grupo funcional amina terciaria, particularmente cuando están presentes como grupo funcional de un componente de aminoácido N-terminal.
Ejemplo 46: Preparación de un compuesto fármaco-enlazador que tiene una unidad de fármaco de tubulisina liberable condicionalmente con unión C-terminal a una unidad de extensión.
Se sintetizó tubulisina M-hidrazida como un fármaco libre ( 1 9 0 ) y se acopló al compuesto intermedio de fármacoenlazador activado por Val-Cit-PAB-PNP ( 1 9 2 ) como se muestra en el Esquema 24. Brevemente, se acopló tubulisina M ( 2 6 ) a carbazato de butilo terciario mediante activación con 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida en presencia de hidroxibenzotriazol. El producto acoplado se desprotegió con BOC en condiciones estándar con ácido trifluoroacético en diclorometano para producir el fármaco libre, tubulisina M-hidrazida (1R,3R)-3-((2S,3S)-N,3-dimetil-2-((R)-1-metilpiperidin-2-carboxamido)pentanamido)-1-(4-(((2R,4S)-5-hidrazinil-4-metil-5-oxo-1-fenilpentan-2-il)carbamoil)tiazol -2-il)-4-metilpentil acetato ( 1 9 0 ) . Un compuesto fármaco-enlazador MC-Val-Cit-PABN-D escindible de fórmula general M1-A-W-Y-D, en donde M1 es un resto maleimida, A es un alquileno como unidad espaciadora, W es W2-W1-, en donde W1 es citrulina y W2 es valina, Y es un resto PAB como la unidad espaciadora autodestructiva unida a la unidad de fármaco tubulisina a través de un grupo funcional hidrazida, se preparó haciendo reaccionar el nitrógeno de la hidrazida con el intermedio del compuesto fármaco-enlazador activado por PNP 4-((S)-2-((S)-2-(6
T a b l a 2 . C i t o t o x i c i d a d in vitro d e u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o l i g a n d o d e t u b u l i s i n a M c u a t e r n i z a d o d i r i g i d o a c é l u l a s d e l in f o m a C D 30
Figure imgf000187_0002
E n p a r t i c u la r , K M - 2 , L 428 , L 5 4 0 c y - B V R y D e l / B Y R s o n l í n e a s c e l u l a r e s r e s i s t e n t e s a m ú l t i p l e s f á r m a c o s . S e p r e p a r ó u n a c o m p o s i c i ó n d e L D C e n la q u e s e e l i m i n ó e l s u s t i t u y e n t e m e t i l o d e l r e s i d u o M e p d e t u b u l i s i n a M y la a m in a s e c u n d a r i a r e s u l t a n t e s e u n ió a t r a v é s d e u n c a r b a m a t o a u n r e s t o a u t o d e s t r u c t i v o d e P A B q u e s e a c t i v a m e d i a n t e la e s c is ió n d e la c a t e p s i n a d e u n a u n id a d e s c i n d i b l e v a l i n a - c i t r u l i n a ( v c ) . S e e n c o n t r ó q u e la c o m p o s i c i ó n d e L D C , q u e s e p r e p a r ó a p a r t i r d e l c o m p u e s t o 172 d e f á r m a c o e n l a z a d o r c o m o s e d e s c r i b e e n e l E je m p l o 53 , e r a i n a c t i v a , lo q u e c o n f i r m a la im p o r t a n c i a d e l f a r m a c ó f o r o d e a m i n a t e r c i a r i a p a r a la a c t i v i d a d c i t o t ó x i c a d e la s t u b u l i s i n a s .
Figure imgf000187_0001
T a b l a 3. C i t o t o x i c i d a d in vitro d e u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d o d i r i g id o a c é lu l a s d e l i n f o m a C 71 e n c o m p a r a c i ó n c o n e l c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e t u b u l i s i n a n o c u a t e r n i z a d o q u e s e u n e a l c o m p o n e n t e C - t e r m i n a l
Figure imgf000187_0003
L o s v a l o r e s e n t r e p a r é n t e s i s i n d i c a n lo s p o r c e n t a j e s d e c é lu l a s v i a b l e s q u e q u e d a n e n la p a r t e i n f e r i o r d e la c u r v a d o s is - r e s p u e s t a . L o s n ú m e r o s d e c o p i a d e C D 71 p a r a la s l í n e a s c e l u l a r e s H T - 116 , L - 427 , K H - H 2 , L 540 c y , M M .1 R y H L 60 c y q u e s e p r o b a r o n s o n 5 K , 3 5 k , 121 K , 33 K , 3 2 K y 228 K , r e s p e c t i v a m e n t e . L o s r e s u l t a d o s d e la T a b la 3 s e c o n f i r m a n m e d i a n t e e l E j e m p l o 64 e n e l q u e e l A D C d e c O K T 9 - h i d r a z i d a q u e t i e n e e l r e s t o f á r m a c o e n l a z a d o r M C -V a l - C i t - P A B N - T u b M ( 19 2 ) s e c o m p a r a c o n e l A D C d e c O K T 9 p r e p a r a d o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r M C - V a l - A l a - P A B 4 - T u b M ( 30 )
L o s r e s u l t a d o s d e la T a b l a 2 y la T a b l a 3 in d i c a n q u e s e o b t ie n e n c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l i g a n d o p o t e n t e s e in m u n o l ó g i c a m e n t e e s p e c í f i c o s c u a n d o s e in c o r p o r a u n a t u b u l i s i n a e n t a l e s c o n s t r u c c i o n e s c o m o u n a u n id a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a y q u e t a l e s c o n j u g a d o s s o n a c t i v o s c o n t r a l í n e a s c e l u l a r e s m u l t i r r e s i s t e n t e s . A d e m á s , s e e n c o n t r ó s o r p r e n d e n t e m e n t e q u e e l c o n j u g a d o c u a t e r n i z a d o o b t e n i d o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o 30 t e n í a la c a p a c i d a d d e d e s t r u i r c é l u l a s q u e n o e x p r e s a b a n e l a n t í g e n o C D 30 c u a n d o e s a s c é l u l a s s e c o c u l t i v a b a n c o n c é l u l a s C D 30 q u e s o n e l o b je t i v o d e l c o n j u g a d o . A s í , la c o m p o s i c i ó n d e L D C m o s t r ó u n a I C 50 d e 6 n g / m l c o n t r a u n c o c u l t i v o d e c é l u l a s L 540 c y : U 268 L u c , c o n 0 % d e c é lu l a s v i a b l e s r e s t a n t e s e n la p a r t e i n f e r i o r d e la c u r v a d e d o s i s - r e s p u e s t a . L 5 40 c y s o n c D 30 y U 266 s o n C D 3 0 '
E j e m p l o 4 8 . Citotoxicidad in vitro de conjugados de fármaco ligando que tienen una auristatina cuaternizado como resto D+.
L a c i t o t o x i c i d a d d e l L D C c o m p u e s t o p o r e l a n t i c u e r p o m o n o c l o n a l c A C 10 , q u e s e d i r i g e a C D 30 , y a u r i s t a t i n a E c u a t e r n i z a d o h a c ia u n p a n e l d e l í n e a s c e l u l a r e s d e l i n f o m a C D 30 s e c o m p a r ó c o n u n c o n j u g a d o d e c o n t r o l e n d o n d e e l a n t i c u e r p o c A C 10 s e r e e m p l a z a p o r u n a n t i c u e r p o d e c o n t r o l ( h B U 12 ) q u e s e d i r i g e a C D 19 . T a m b i é n s e u t i l i z a n c é l u l a s d e c o n t r o l q u e n o t i e n e n a n t í g e n o C D 30 d e t e c t a b l e , p e r o q u e t i e n e n a n t í g e n o C 19 . L a c i t o t o x i c i d a d d e l c o n j u g a d o c A C 10 - D o c u r r e d e s p u é s d e s u i n t e r n a l i z a c i ó n c e l u l a r e n c é l u l a s C D 30 y la e s c i s i ó n d e la c a t e p s i n a d e l d i p é p t i d o V a l - C i t , q u e e s la u n id a d e s c i n d i b l e d e l L D C , p a r a lo s c o n j u g a d o s d e s i g n a d o s e n la T a b l a 4 c o m o v c P A B 4 - A E , o e s c is ió n p o r g l u c u r o n i d a s a d e l e n la c e g l i c o s í d i c o d e c a r b o h i d r a t o , q u e e s e l s i t io d e e s c is ió n d e la s u n i d a d e s e s c i n d i b l e s p a r a lo s c o n j u g a d o s c A C 10 d e s i g n a d o s c o m o g l u c 4 - A E , p a r a l i b e r a r a u r i s t a t i n a E l ib r e . A s i m i s m o , s e p r o d u c e c i t o t o x i c i d a d p a r a lo s c o n j u g a d o s a n á l o g o s d e h B U 12 c u a n d o e s t o s c o n j u g a d o s s e i n t e r n a l i z a n e n c é l u l a s C D 19 q u e t i e n e n n ú m e r o d e c o p i a s s u f i c i e n t e d e l a n t í g e n o r e le v a n t e . L o s r e s u l t a d o s d e e s t a s c o m p a r a c i o n e s s e p r o p o r c i o n a n e n la T a b la 4 e n la q u e I C 50 p a r a in h i b i c ió n d e l c r e c i m i e n t o c e l u l a r s e 5 p r o p o r c i o n a e n u n i d a d e s d e n g / m l .
Figure imgf000188_0001
15
20
25
Figure imgf000188_0002
Figure imgf000188_0003
L a s c o m p o s i c i o n e s d e L D C d e s i g n a d a s c o m o g l u c 4 - A E e n la T a b l a 4 s e o b t u v i e r o n d e l c o m p u e s t o 8 d e l E s q u e m a 1 y e l a n t i c u e r p o m o n o c l o n a l c A C 10 , q u e s e d i r i g e a la s c é l u l a s d e l i n f o m a C D 30 y e l a n t i c u e r p o m o n o c l o n a l h B U 12 , 35 q u e s e d i r i g e a la s c é l u l a s C 19 e n d o n d e D e s a u r i s t a t i n a E c u a t e r n i z a d o . E l L D C p r e d o m i n a n t e d e la c o m p o s i c i ó n , d e s p u é s d e la h i d r ó l i s i s c o n t r o l a d a d e l s i s t e m a d e a n i l l o d e s u c c i n i m i d a , e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la s i g u i e n t e e s t r u c t u r a :
40
45
50
Figure imgf000188_0004
55
Figure imgf000188_0005
T a n t o la c o m p o s i c i ó n d e v c P A B 4 - A E c o m o la d e g l u c 4 - A E c o n t i e n e n p r e d o m i n a n t e m e n t e L D C q u e t i e n e n 8 60 u n i d a d e s D p o r a n t i c u e r p o ( e s d e c i r , p ' e s 8 ) .
L o s r e s u l t a d o s p a r a e l p a n e l d e la l í n e a c e l u l a r d e A M L q u e e x p r e s a C D 3 3 s e m u e s t r a n e n la T a b l a 9. E l c o n j u g a d o d e u n ió n a C D 33 , h 2 H 12 - 30 , f u e p o t e n t e e n t o d a s la s l í n e a s c e l u l a r e s c o n I C 50 e n e l i n t e r v a l o d e 0 , 9 a 18 n g / m l . E l c o n j u g a d o e s t a b a in a c t i v o e n L 54 0 c y n e g a t i v o p a r a C D 33 , lo q u e i n d i c a u n a l t o g r a d o d e e s p e c i f i c i d a d i n m u n o l ó g i c a p a r a e s t e A D C .
T a b l a 9. C i t o t o x i c i d a d in vitro d e c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l i g a n d o d i r i g i d o s a c é l u l a s d e le u c e m i a C D 3 3 q u e t i e n e n u n i d a d e s d e f á r m a c o t u b u l i s i n a M c u a t e r n i z a d o s c o n h i d r o f o b i c i d a d v a r i a b l e d e u n id a d e n la z a d o r a .
Figure imgf000191_0002
E j e m p l o 53 . Citotoxicidad in vitro de conjugados de fármaco ligando dirigidos a células de linfoma CD30+ que tienen unidades de fármaco tubulisina M cuaternizados con hidrofobicidad variable de unidad enlazadora.
Figure imgf000191_0001
T a b l a 10 . C i t o t o x i c i d a d in vitro d e c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l i g a n d o q u e t i e n e n t u b u l i s i n a M c u a t e r n i z a d o d i r i g id a a c é l u l a s d e l i n f o m a C D 30 c o n h id r o f o b i c i d a d v a r i a b l e e n la u n id a d e n l a z a d o r a
Figure imgf000191_0003
E j e m p l o 54 : Citotoxicidades in vitro de conjugados de fármaco ligando que tienen unidades de fármaco no cuaternizados unidas a unidades enlazadoras a través del componente N-terminal de compuestos derivados de tubulisina
A n t e s d e la p r e s e n t e i n v e n c ió n , la c o n j u g a c i ó n c o n u n f á r m a c o q u e c o n t i e n e u n a a m in a t e r c i a r i a e n la q u e s e v a a u t i l i z a r e l n i t r ó g e n o a m í n i c o c o m o p u n t o d e u n ió n r e q u e r í a la e l i m i n a c i ó n d e u n s u s t i t u y e n t e a lq u i lo d e la a m in a t e r c i a r i a . L a a m i n a s e c u n d a r i a a s í o b t e n i d a p e r m i t e q u e s e v u e l v a a a l q u i l a r c o n u n c o m p o n e n t e d e u n id a d e n l a z a d o r a p a r a p r o p o r c i o n a r u n g r u p o f u n c i o n a l d e a m in a t e r c i a r i a c o m p l e t a m e n t e d i f e r e n t e o la a c i l a c ió n p a r a p r o p o r c i o n a r u n g r u p o f u n c i o n a l d e a m i d a s e c u n d a r i a . E n a m b o s e n f o q u e s s e e v i t a la l i b e r a c i ó n d e l f á r m a c o o r ig in a l . A d e m á s , e l r e s t o d e f á r m a c o a c t i v o q u e s e l i b e r a e s u n c o m p u e s t o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a o a m i d a d i f e r e n t e q u e p u e d e t e n e r u n a a c t i v i d a d b i o l ó g i c a a l t e r a d a e n c o m p a r a c i ó n c o n e l f á r m a c o o r i g i n a l o e s u n a a m i n a s e c u n d a r i a q u e p u e d e t e n e r u n a c i n é t i c a d e l i b e r a c ió n d e f i c i e n t e y / o u n a a c t i v id a d b i o l ó g i c a a l t e r a d a . D e t e r m i n a r e l r e s u l t a d o d e a p l i c a r la e s t r a t e g i a d e e l i m i n a r u n s u s t i t u y e n t e a lq u i lo d e la a m i n a t e r c i a r i a d e u n a t u b u l i s i n a p a r a p r o p o r c i o n a r u n p u n t o d e u n ió n p a r a u n a u n id a d d e f á r m a c o n o c u a t e r n i z a d o d e s - m e t i l - t u b u l i s i n a M y d e s - m e t i l - T u b ( O C H 3 ) : O H ( 170 ) s e p r e p a r a r o n d e a c u e r d o c o n lo s p r o c e d i m i e n t o s d e l d o c u m e n t o W O 2 01 3 / 0 8 5 92 5 y E je m p l o 42 ( v e r E s q u e m a 15 ) , r e s p e c t i v a m e n t e . E l c o m p u e s t o 170 e s a n á l o g o a la d e d e s m e t i l - t u b u l i s i n a M m e d i a n t e la s u s t i t u c i ó n d e l s u s t i t u y e n t e a c e t a t o u n i d o a O d e l c o m p o n e n t e t u b u v a l i n a d e d e s m e t i l t u b u l i s i n a M c o n e l r e s t o é t e r u n i d o a O - O C H 3. L a u n id a d e n l a z a d o r a q u e t i e n e la f ó r m u l a g e n e r a l d e M 1- A - , a b r e v i a d a c o m o M C , e n la q u e M 1 e s u n r e s t o m a l e i m i d a y la u n id a d d e e x t e n s i ó n A e s u n a lq u i le n o , s e u n e lu e g o a d e s - m e t i l - t u b u l i s i n a M y d e s m e t i l - T u b ( O C H 3 ) - O H a t r a v é s d e u n g r u p o f u n c i o n a l a m i d a p a r a p r o p o r c i o n a r lo s c o m p u e s t o s d e f á r m a c o - e n l a z a d o r 166 y 172 , r e s p e c t i v a m e n t e . C u a n d o s e i n c o r p o r a n e n c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l ig a n d o , lo s r e s t o s e n l a z a d o r e s d e e s o s d o s c o m p u e s t o s l i b e r a r á n d e f o r m a n o c o n d i c i o n a l u n r e s t o d e f á r m a c o a c t i v o q u e r e t i e n e u n r e s t o d e u n id a d e n l a z a d o r a ( e s d e c i r , e s u n c o m p u e s t o q u e c o n t i e n e a m i d a ) o u n a a m i n a s e c u n d a r i a c o m o d e s - m e t i l T u b u l i s i n a M o d e s m e t i l - T u b ( O C H 3 ) - O H , q u e r e s u l t a d e la e s c i s i ó n i n e s p e c í f i c a d e l e n l a c e a m id a . C o m o s e e s p e r a q u e e l ú l t im o t i p o d e l i b e r a c ió n s e a le n t o , lo s c o m p u e s t o s d e F á r m a c o - E n l a z a d o r , c o m o lo s c o m p u e s t o s 166 y 172 , s e c a r a c t e r i z a n p o r s e r e f i c a z m e n t e n o e s c i n d i b l e s .
Figure imgf000192_0001
T a b l a 11. C o m p a r a c i ó n d e c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l i g a n d o d e u n i d a d e s d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a y n o c u a t e r n i z a d o
Figure imgf000192_0003
E j e m p l o 5 5 . Citotoxicidad in vivo de un conjugado de ligando-fármaco que tiene una auristatina cuaternizada como resto D+.
Figure imgf000192_0002
T a m b i é n s e r e a l i z ó u n a c o m p a r a c i ó n e n t r e e l c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e a n t i c u e r p o d i r i g i d o c o n t r a C D 30 q u e in c o r p o r a u n a u n id a d d e f á r m a c o A E c u a t e r n i z a d o y u n a u n id a d d e g l u c u r ó n i d o p a r a la l i b e r a c i ó n c o n d i c i o n a l d e l f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a p o r u n a g l u c u r o n i d a s a y u n c o n j u g a d o s i m i l a r e n e l q u e la u n id a d d e f á r m a c o M M A E n o c u a t e r n i z a d o s e u n e a la u n id a d d e g lu c u r ó n i d o a t r a v é s d e u n c a r b a m a t o . P o r t a n t o , la c o m p o s i c i ó n d e c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e a n t i c u e r p o g l u c 4 - A E c u a t e r n i z a d o d e la T a b l a 4 , d e n u e v o c o n e l L D C p r e d o m i n a n t e q u e t i e n e 4 u n i d a d e s D p o r a n t i c u e r p o c A C 10 , c o n la c o m p o s i c i ó n d e g l u c - M M A E c o r r e s p o n d i e n t e . L o s e n l a z a d o r e s g l u c 4 - A E y g l u c - M M A E t a m b i é n s e c o n j u g a r o n c o n h O O , q u e c o m o s e i n d i c ó p r e v i a m e n t e e s u n a p r o t e í n a u n iv e r s a l q u e n o s e u n e ( y p o r lo t a n t o n o s e u n e a la s c é lu l a s d e l i n f o m a d e H o d g k in L 54 0 c y ) p a r a p r o p o r c i o n a r L D C d e c o n t r o l . L o s r e s u l t a d o s s e m u e s t r a n e n la F ig u r a 2. E n e s a F ig u r a 1, c A C 1 0 - g l c u 4 - A E , d e s i g n a d o c A C 10 - 8 , e s e l c o n j u g a d o d e A E c u a t e r n i z a d o , c A C 1 0 - B e s e l c o n j u g a d o c A C 1 0 - g l u c - M M E u n id o a c a r b a m a t o , y h 00 - g l u c 4 - A E , d e s i g n a d o c o m o h 00 - 8 , y h 00 - g l u - M M A E , d e s i g n a d o c o m o h 00 - B , s o n lo s r e s p e c t i v o s c o n j u g a d o s d e c o n t r o l . A l i g u a l q u e c o n e l c o n j u g a d o c A C 1 0 - v c P A B 4 - A E , e l r e s u l t a d o in vitro c o n e l c o n j u g a d o c A C 1 0 - g l u c 4 - A E , q u e l ib e r a u n a a m i n a t e r c i a r i a l ib r e q u e c o n t i e n e a u r i s t a t i n a ( A E ) , s e h a t r a d u c i d o d e u n a m a n e r a d e p e n d i e n t e d e la d o s is in vivo y e s s u p e r i o r a l c o n j u g a d o c o r r e s p o n d i e n t e ( c A C 1 0 - g l u c - M M A E ) q u e l i b e r a la v e r s i ó n d e s m e t i l d e e s a a u r i s t a t i n a ( M M A E ) . A d e m á s , la F ig u r a 1 y la F ig u r a 2 m u e s t r a n q u e lo s efectos in vivo d e lo s c o n j u g a d o s c u a t e r n i z a d o s s o n i n m u n o l ó g i c a m e n t e e s p e c í f i c o s .
E j e m p l o 5 6 . Citotoxicidad in vivo de un conjugado de ligando fármaco que tiene una tubulisina cuaternizada como resto D+ y unidad de escisión de péptido
E j e m p l o 5 9 . L ib e ra c ió n in tra c e lu la r de fá rm a co qu e con tien e am in a te rc ia ria lib re de u n a u n id a d de fá rm a co cu a te rn iz a d a en un c o n ju g a d o de fá rm a co y ligando .
L a s l í n e a s d e c é l u l a s M D R q u e s o n C D 71 s e e x p o n e n a u n L D C (1 M g /m l) c o m p u e s t a p o r u n a n t i c u e r p o d i r i g i d o a C D 71 ( c O K T 9 ) y u n i n h i b i d o r d e M D R c u a t e r n i z a d o ( T a r i q u i d a r ™ ) . L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e s i g n a d o c o m o c O K T 9 -g l u c 4 - T s e o b t u v o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o 36 d e l E s q u e m a 6 y p r e d o m i n a n t e m e n t e c o n t i e n e L D C q u e t i e n e n 8 u n i d a d e s D e n d o n d e D e s T a r i q u i d a r c u a t e r n i z a d o . E l L D C p r e d o m i n a n t e d e la c o m p o s i c i ó n , d e s p u é s d e la h i d r ó l i s i s c o n t r o l a d a d e l s i s t e m a d e a n i l l o s d e s u c c i n i m i d a , e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
Figure imgf000194_0001
e n d o n d e e l r e s t o A b - S - e s t á u n i d o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3 ; y p e s 8.
L a c o n c e n t r a c i ó n d e f á r m a c o a d m i n i s t r a d o y r e t e n i d o i n t r a c e l u l a r m e n t e l i b e r a d o d e l c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o s e m u e s t r a e n la T a b l a 12 y s e c o m p a r a c o n la c a n t i d a d d e f á r m a c o i n t r a c e l u l a r ( e s d e c i r , f á r m a c o u n i d o a p g p ) q u e r e s u l t a d e l t r a t a m i e n t o d e la s c é l u l a s c o n 50 n M d e f á r m a c o l i b r e . C o n e l t r a t a m i e n t o c o n L D C , lo s v a l o r e s e n t r e p a r é n t e s i s s o n c o n c e n t r a c i o n e s e x t r a c e l u l a r e s d e l i n h i b i d o r d e M D R q u e s e h a n f i l t r a d o d e la c é lu l a d ia n a , m i e n t r a s q u e lo s v a l o r e s e n t r e p a r é n t e s i s p a r a e l t r a t a m i e n t o c o n f á r m a c o l i b r e r e p r e s e n t a n la c a n t i d a d d e f á r m a c o l i b r e q u e p e r m a n e c e f u e r a d e la c é lu l a .
T a b l a 12 : S u m i n i s t r o d e f á r m a c o i n t r a c e l u l a r m e d i a n t e u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o q u e t i e n e u n i n h i b i d o r d e M D R c u a t e r n i z a d o .
Figure imgf000194_0002
L o s r e s u l t a d o s d e la T a b l a 12 in d i c a n q u e e l i n h i b i d o r d e M D R T a r i q u i d a r s e h a a d m i n i s t r a d o d e m a n e r a e f i c a z in t r a c e l u l a r m e n t e e n c é l u l a s M D R . C u a n d o s e a n a l i z a e n t é r m i n o s d e p m o l d e f á r m a c o l i b e r a d o d e 106 c é lu l a s , la c o m p o s i c i ó n d e c O K T 9 - g l u 4 - T l i b e r a 5 0 - 8 0 % d e s u c a r g a d e f á r m a c o a la s c é l u l a s d ia n a .
E j e m p l o 6 0 . C iné tica de la lib e ra c ió n de fá rm a co s e n z im á tic o s de un a u n id a d de fá rm a co cu a te rn iza d a
V e r s i o n e s d e N - a c e t i l c i s t e í n a ( N A C ) d e l c o n j u g a d o c a r b a m a t o c A C 1 0 - g l u c - M M A E y lo s c o n j u g a d o s d e f á r m a c o l i g a n d o c A C 10 - g l u c 4 - A E c u a t e r n i z a d o d e s c r i t o s e n e l E j e m p l o 53 ( e s d e c i r , c A C I O s e r e e m p l a z a c o n N A C , e n d o n d e p ' p a r a la e s t r u c t u r a c o r r e s p o n d i e n t e e s 1 ) s e s o m e t i e r o n a 0 , 5 m g / m l o 1 m g / m l d e g l u c u r o n i d a s a y s e c o m p a r a r o n c o n u n c o n t r o l q u e n o t e n í a g l u c u r o n i d a s a p r e s e n t e . L o s r e s u l t a d o s d e la F ig u r a 4 i n d i c a r o n q u e la c i n é t i c a d e l i b e r a c i ó n d e A E d e la u n i d a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a d e l c o n j u g a d o N A C - g l u c 4 - A E e s c o m p a r a b l e p a r a la c i n é t i c a d e l i b e r a c i ó n d e M M A E d e l c o n j u g a d o N A C - g l u c - M M A E , c o n l i b e r a c i ó n c o m p l e t a d e A E q u e o c u r r e d e n t r o d e 3 , 5 - 4 , 5 h o r a s e n d e p e n d e n c i a d e la c o n c e n t r a c i ó n d e e n z im a . E n la F i g u r a 4 , N A C - 8 e s e l c o n j u g a d o q u e t i e n e u n a u n id a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a q u e l i b e r a f á r m a c o l i b r e q u e c o n t i e n e a m in a t e r c i a r i a ( A E ) y N A C - B e s e l c o n j u g a d o d e c a r b a m a t o N A C - g l u c - M M A E q u e l i b e r a y la c o r r e s p o n d i e n t e d e s m e t i l a u r i s t a t i n a ( M m A E ) .
T a b l a 14 . C i t o t o x i c i d a d in v itro d e u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a d i r i g id o a l r e c e p t o r d e t r a n s f e r r i n a e n c o m p a r a c i ó n c o n e l c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e t u b u l i s i n a n o c u a t e r n i z a d a q u e t i e n e u n ió n a l c o m p o n e n t e C - t e r m in a l .
Figure imgf000197_0003
E l c o n j u g a d o q u e p o r t a T u b M - h i d r a z i d a ( 19 2 ) f u e s i g n i f i c a t i v a m e n t e m e n o s p o t e n t e q u e e l c o m p a r a d o r T u b M ( 30 ) u n id o a a m i n a c u a t e r n a r i a . L a t u b u l i s i n a d e r i v a t i z a d a o s c i l ó e n t r e 1 y 3 l o g a r i t m o s m e n o s p o t e n t e q u e la t u b u l i s i n a M p a r e n t a l .
E j e m p l o 6 5 : E va lu a c ió n in v itro de a u ris ta tin a F un id a a tra vé s de un e n la z a d o r de a m in a cu a te rn a ria de g lucu rón ido . E l c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o ( A D C ) d e a n t i c u e r p o c O K T 9 p r e p a r a d o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o 189 d e f á r m a c o e n l a z a d o r d e a u r i s t a t i n a F d e a m i n a c u a t e r n a r i a g lu c u r ó n i d o s e p r e p a r ó c o m o s e d e s c r i b e y s e c o n j u g ó a 8 -f á r m a c o s / A b p a r a c O K T - 9 , u n a n t i c u e r p o a n t i - r e c e p t o r d e t r a n s f e r r i n a . E l A D C r e s u l t a n t e s e p r o b ó e n u n p a n e l d e l í n e a s d e c é lu l a s c a n c e r o s a s p a r a c o m p a r a r l o c o n e l A D C c o r r e s p o n d i e n t e p r e p a r a d o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r - c a r b a m a t o M C - V a l - C i t - P A B C - M M A F 193 ( B i o c o n j u g a t e C h e m . , 2006 , 17 , 114 - 124 ) . L o s r e s u l t a d o s s e m u e s t r a n e n la T a b l a 13.
T a b l a 15. C i t o t o x i c i d a d d e u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o l i g a n d o d e a u r i s t a t i n a F c u a t e r n i z a d a d i r i g id o a l r e c e p t o r d e t r a n s f e r r i n a e n c o m p a r a c i ó n c o n u n c o n j u g a d o d e f á r m a c o l i g a n d o d e a u r i s t a t i n a n o c u a t e r n i z a d a c o r r e s p o n d i e n t e
Figure imgf000197_0004
E l c o n j u g a d o q u e t i e n e a u r i s t a t i n a F c o m o u n a u n id a d d e f á r m a c o d e a m i n a c u a t e r n a r i a p r e p a r a d o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r 189 , q u e t i e n e u n a u n id a d d e g l u c u r ó n i d o y e l p r e c u r s o r L S S a u t o e s t a b i l i z a n t e m D P R , p r o p o r c i o n a u n a c i t o t o x i c i d a d s i m i l a r a la q u e s e m u e s t r a e n la T a b l a 14 ( v a l o r e s d e I C 50 e n u n i d a d e s d e n g / m l ) a u n A D C p r e p a r a d o a p a r t i r d e l c o m p u e s t o 193 F á r m a c o - E n l a z a d o r V a l - C i t P A B ( v c P A B C ) - M M A F c a r b a m a t o e n la m a y o r í a d e la s l í n e a s c e lu l a r e s . E n c o n t r a s t e c o n e l C o m p u e s t o 189 , e s e c o m p u e s t o d e F á r m a c o - E n l a z a d o r t i e n e u n a u n id a d e n l a z a d o r a q u e n o c o n t i e n e u n p r e c u r s o r d e L s s y e s t á c o m p u e s t o p o r u n a u n id a d e s c i n d i b l e d e d ip é p t i d o . E n la s l í n e a s c e l u l a r e s d e A M L H L 60 y H L 60 / R V s e o b s e r v ó u n a m o d e s t a d i s m i n u c i ó n ( d e 2 a 3 v e c e s ) e n la p o t e n c i a c o n r e s p e c t o a l c o n t r o l V a l - C i t - P A B C c a r b a m a t o o b t e n i d o a p a r t i r d e 193 .
E j e m p l o 6 6 : C ito to x ic id a d de c o n ju g a d o s de fá rm a co lig a n d o de d ím e ro de fe n a z in a c u a te rn iza d a d ir ig id o s a cé lu la s can cero sas .
Figure imgf000197_0001
T a b l a 16. C i t o t o x i c i d a d d e c o n j u g a d o s f á r m a c o l i g a n d o d e d í m e r o d e f e n a z i n a c u a t e r n i z a d o s d i r i g i d o s a c é lu l a s c a n c e r o s a s C D 30 o C D 70
Figure imgf000197_0002
E l c o n j u g a d o d e u n ió n a n t i - C D 30 , c A C 1 0 - 19 , f u e p o t e n t e e n la l í n e a K a r p a s 2 99 L A C G ; m i e n t r a s q u e s u c o n t r o l , h 1 F 6 - 1 9 , q u e n o r e c o n o c e e l a n t í g e n o C D 30 , e r a i n a c t i v ó , lo q u e i n d i c a u n a l t o g r a d o d e e s p e c i f i c i d a d in m u n o l ó g i c a . T a n t o lo s c o n j u g a d o s c A C 10 - 1 9 y h 1 F 6 - 19 f u e r o n in a c t i v o s e n la s c é l u l a s L 5 40 c y C D 30 / C D 70 . E n la s c é l u l a s R C C C D 30 n e g a t i v a s / C D 7 0 p o s i t i v a s e l c o n j u g a d o e s p e c í f i c o d e a n t í g e n o C D 70 , h 1 F 6 - 1 9 , f u e s i g n i f i c a t i v a m e n t e m á s 5 p o t e n t e q u e s u c o n j u g a d o d e c o n t r o l c A C 10 - 1 9 , q u e n o r e c o n o c e e l a n t í g e n o C D 70 .

Claims (1)

  1. R E I V I N D I C A C I O N E S
    U n a c o m p o s i c i ó n d e c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o ( L D C ) , e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n d e L D C e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 1:
    Figure imgf000199_0001
    e n d o n d e
    " L i g a n d o " e s u n a u n id a d d e l i g a n d o ( L ) , e n d o n d e L e s c a p a z d e u n i r s e s e l e c t i v a m e n t e a u n r e s t o d i a n a , y L e s u n a n t i c u e r p o o f r a g m e n t o d e l m i s m o p a r a d e f i n i r u n c o n j u g a d o d e a n t i c u e r p o y f á r m a c o ( A D C ) , e n d o n d e e l r e s t o d i a n a e s u n a n t í g e n o c a p a z d e u n i r s e s e l e c t i v a m e n t e a l A D C , y e n d o n d e e l a n t í g e n o e s u n a p r o t e ín a , g l i c o p r o t e í n a o c a r b o h i d r a t o d e la s u p e r f i c i e c e l u l a r a c c e s i b l e e x t r a c e l u l a r m e n t e q u e s e p r e s e n t a p r e f e r e n t e m e n t e e n la s c é lu l a s a n ó m a l a s e n c o m p a r a c i ó n c o n la s c é l u l a s n o r m a le s , e n d o n d e la s c é lu l a s a n ó m a l a s y n o r m a le s s o n c é lu l a s d e u n m a m í f e r o , e n d o n d e la s c é l u l a s a n ó m a l a s s o n c é l u l a s h i p e r p r o l i f e r a t i v a s ;
    L b e s u n e n l a z a d o r p r im a r io ;
    Q 1 e s A a -W w , e n d o n d e A e s u n a u n id a d d e e x t e n s ió n o p c i o n a l d e m a n e r a q u e e l s u b í n d i c e a e s 0 c u a n d o A e s t á a u s e n t e o 1 c u a n d o A e s t á p r e s e n t e y e s t á o p c i o n a l m e n t e c o m p u e s t o p o r d o s , t r e s o c u a t r o s u b u n i d a d e s ;
    Q 2 e s W 'w - E - , e n d o n d e Q 2, c u a n d o e s t á p r e s e n t e , e s t á u n id o a V , Z 1, Z 2 o Z 3 ;
    W w y W w s o n u n i d a d e s e s c i n d i b l e s , e n d o n d e
    W w d e Q 1 e s c a p a z d e e s c i s i ó n s e l e c t i v a p o r u n a p r o t e a s a r e g u l a d o r a o i n t r a c e l u l a r e n c o m p a r a c i ó n c o n la s p r o t e a s a s s é r i c a s , o p o r g l u t a t i ó n a t r a v é s d e l i n t e r c a m b i o d e d is u l f u r o , o e s m á s r e a c t i v o a la h id r ó l i s i s e n c o n d i c i o n e s m á s á c id a s p r e s e n t e s e n lo s l i s o s o m a s e n c o m p a r a c i ó n c o n e l p H f i s i o l ó g i c o d e l s u e r o ,
    W ' - E d e Q 2 p r o p o r c i o n a u n e n l a c e g l i c o s í d i c o e s c i n d i b l e p o r u n a g l i c o s i d a s a lo c a l i z a d a i n t r a c e l u l a r m e n t e , y
    e l s u b í n d i c e w e s 0 o 1 d e m a n e r a q u e W e s t á a u s e n t e c u a n d o w e s 0 o W e s t á p r e s e n t e c u a n d o w e s 1 , y e l s u b í n d i c e w ' e s 0 o 1 , e n d o n d e W ' - E e s t á a u s e n t e c u a n d o w ' e s 0 o W ' - E e s t á p r e s e n t e c u a n d o w ' e s 1 , y e n d o n d e w w ' e s 1 d e m a n e r a q u e u n o y s o l o u n o d e W , W ' e s t á p r e s e n t e ;
    V , Z 1, Z 2 y Z 3 s o n = N - o = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o o a lq u i lo , a lq u e n i l o o a lq u in i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o h a ló g e n o , - N O 2 , - C N u o t r o g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s , u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s , o e l s u s t i t u y e n t e - Q 2 o - C ( R 8) ( R 9) -D d e la F ó r m u l a 1 , e n d o n d e a l m e n o s u n o d e V , Z 1, Z 2 y Z 3 e s = C ( R 24) - c u a n d o w e s 1 , y a l m e n o s d o s d e V , Z 1, Z 2 y Z 3 s o n = C ( R 24) - c u a n d o w ' e s 1, s i e m p r e q u e c u a n d o w e s 1 , Q 2 e s t á a u s e n t e y u n o y s o lo u n R 24 e s - C ( R 8 ) ( R 9) -D d e m a n e r a q u e -C ( R 8 ) ( R 9 ) -D e s t á u n id o a u n o d e V , Z 1, Z 2 , Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24) - y lo s s u s t i t u y e n t e s Q 1- J - y - C ( R 8) ( R 9) -D s o n o rto o p a ra e n t r e s í ,
    s i e m p r e q u e c u a n d o w ' e s 1 , u n o y s o lo u n R 24 e s - C ( R 8) ( R 9 ) - D d e m a n e r a q u e - C ( R 8 ) ( R 9 ) - D e s t á u n id o a u n o d e V , Z 1, Z 2 , Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24) - y u n o y s o lo o t r o R 24 e s Q 2 d e m a n e r a q u e Q 2 e s t á u n id o a o t r o d e V , Z 1, Z 2 , Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24) - , y lo s s u s t i t u y e n t e s Q 2 y - C ( R 8) ( R 9) -D son o rto o p a ra e n t r e s í ;
    R 8 y R 9 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo , a lq u e n i l o o a lq u in i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o a r i l o o h e t e r o a r i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    R ' e s h i d r ó g e n o o e s h a ló g e n o , - N O 2 , - C N u o t r o g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s , o e s u n g r u p o d o n a n t e 5 d e e le c t r o n e s ;
    E y J s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e - O - , - S - o - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h id r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    10 D r e p r e s e n t a u n a e s t r u c t u r a d e u n f á r m a c o q u e c o n t i e n e u n a a m i n a t e r c i a r i a c u a t e r n i z a d a ; y
    e l s u b í n d i c e p e s u n a c a r g a d e f á r m a c o p r o m e d i o q u e t i e n e u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 24 ; y e n d o n d e d ic h a e s c is ió n p o r p r o t e a s a , i n t e r c a m b i o d e d is u l f u r o , h id r ó l i s i s á c id a o e s c is ió n p o r 15 g l i c o s i d a s a d a c o m o r e s u l t a d o la l i b e r a c i ó n d e l f á r m a c o ( D ) q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a a p a r t i r d e u n c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n .
    L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 1 , e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 2 A o la F ó r m u l a 2 B :
    20
    Figure imgf000200_0001
    55
    60
    65
    Figure imgf000201_0001
    (Formula 3D
    1
    1
    Figure imgf000202_0005
    20
    25
    30
    Figure imgf000202_0001
    Figure imgf000202_0002
    35 L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 2 , e n d o n d e W d e Q 1 e s t á c o m p u e s t o p o r o c o n s i s t e e n u n r e s t o p e p t í d i c o q u e t i e n e u n e n l a c e p e p t í d i c o a J q u e s e p u e d e e s c i n d i r s e l e c t i v a m e n t e p o r u n a p r o t e a s a r e g u l a d o r a o i n t r a c e l u l a r e n c o m p a r a c i ó n c o n la s p r o t e a s a s s é r i c a s e n d o n d e la a c c ió n d e la p r o t e a s a r e g u l a d o r a s o b r e W p r o v o c a la l i b e r a c ió n d e l f á r m a c o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a ( D ) a p a r t i r d e u n c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n ,
    40
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l r e s t o p e p t í d i c o d e W e s t á c o m p u e s t o p o r o c o n s i s t e e n u n r e s t o d i p e p t í d i c o q u e t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 6 :
    45
    50
    Figure imgf000202_0003
    e n d o n d e R 34 e s b e n c i lo , m e t i l o , i s o p r o p i lo , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e 55
    60
    Figure imgf000202_0004
    65 y R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 4 - N H 2 , -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 , - ( C H 2 ) 3 N H ( C = N H ) N H o - ( C H 2 ) 2 C O 2 H ,
    e n d o n d e e l e n l a c e o n d u l a d o a l C - t e r m i n a l d e l d i p é p t i d o i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e a J d e l r e s t o a r i l e n o d e la F ó r m u l a 2 A o 2 B y e l e n l a c e o n d u l a d o a l N - t e r m i n a l d e l d i p é p t i d o i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e a lo q u e r e s t a d e W , s i lo q u e r e s t a e s t á p r e s e n t e , o a A , o u n a s u b u n i d a d d e l m is m o , c u a n d o a e s 1 o a L b c u a n d o e l s u b í n d i c e a e s 0 , y e n d o n d e e l e n l a c e d e l d i p é p t i d o a J e s e s c i n d i b l e p o r u n a p r o t e a s a i n t r a c e l u l a r o r e g u la d o r a , 5
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 9 :
    10
    15
    Figure imgf000203_0001
    20
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o d o n a n t e d e e le c t r o n e s ;
    25 R 8 e s h id r ó g e n o ;
    R 9 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i l o o - C H ( O H ) C H 3 ;
    30
    R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H o -( C H 2 ) 2 C O 2 H ;
    J e s - N ( R 33)-, e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y
    35 V y Z 1 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 10 :
    40
    45
    Figure imgf000203_0002
    50
    Figure imgf000203_0003
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ( A b - ) ;
    55
    e l a s t e r i s c o ( * ) d e s i g n a q u i r a l i d a d o a u s e n c i a d e la m i s m a e n e l c a r b o n o in d i c a d o ;
    A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e - [ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e , p o r lo q u e A s e c o n v i e r t e e n - A r A o - ;
    60
    R e s - H ;
    R a1 e s - H o u n a u n id a d b á s ic a ( B U ) , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 23), e n d o n d e R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o o e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l 65 q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ;
    R a2 e s h id r ó g e n o ;
    e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 5 c u a n d o H E e s t á p r e s e n t e o d e 1 a 5 c u a n d o H E e s t á a u s e n t e ;
    5
    c a d a R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ;
    10 R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i l o o - C H ( O H ) C H 3 ;
    R 35 e s -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 o -( C H 2 ) 2 C O 2 H ;
    J e s - N H - ;
    15
    V , Z 1 y Z 2 s o n = C H - ;
    R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o d o n a n t e d e e le c t r o n e s ;
    20 R 8 e s h id r ó g e n o ; y
    R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o .
    L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 3 , e n d o n d e W d e Q 2 e s u n c a r b o h i d r a t o u n id o p o r e n la c e 25 g l i c o s í d i c o , e n d o n d e e l e n l a c e g l i c o s í d i c o W ' - E d e Q 2 p r o p o r c i o n a u n s i t io d e e s c is ió n p a r a u n a g l i c o s i d a s a l o c a l i z a d a i n t r a c e l u l a r m e n t e e n d o n d e la a c c i ó n d e la g l i c o s i d a s a s o b r e W ' - E p r o v o c a la l i b e r a c i ó n d e f á r m a c o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a ( D ) a p a r t i r d e u n c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n , p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e W e n Q 2 e s u n r e s t o c a r b o h i d r a t o q u e e s t á u n id o p o r e n l a c e g l i c o s í d i c o a E , e n 30 d o n d e e l e n la c e g l i c o s í d i c o e s e s c i n d i b l e p o r u n a g l i c o s i d a s a l o c a l i z a d a in t r a c e l u l a r m e n t e , y e n d o n d e W ' - E t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u la 7 :
    35
    40
    Figure imgf000204_0001
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a r e p r e s e n t a E u n i d o a u n o d e V , Z 1, Z 2 o Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s 45 = C ( R 24),
    e n d o n d e E e s - O - , - S - o - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y
    e n d o n d e R 45 e s - C H 2O H o - C O 2 H ,
    50
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a
    55
    60
    1
    1
    Figure imgf000205_0002
    2
    Figure imgf000205_0001
    e n d o n d e
    25
    A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    A i y A o s o n s u b u n i d a d e s s e l e c c i o n a d a s in d e p e n d i e n t e m e n t e d e A , e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A d e m a n e r a q u e A i s e c o n v i e r t e e n A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y A e s - A i - A o - c u a n d o A o 30 e s t á p r e s e n t e ;
    E e s - O - o - N H - ;
    J e s - N ( R 33)-, e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ;
    35
    V y Z 3 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - ;
    R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o a c e p t o r d e e le c t r o n e s ;
    40 R 8 e s h id r ó g e n o ;
    R 9 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    R 45 e s - C O 2 H ; y
    45
    e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 12 :
    50
    55
    60
    65
    1
    1
    2
    Figure imgf000206_0002
    Figure imgf000206_0001
    25
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o A b ;
    e l a s t e r i s c o ( * ) d e s i g n a q u i r a l i d a d o a u s e n c i a d e la m i s m a e n e l c a r b o n o in d i c a d o , q u e e s t á 30 p r e d o m i n a n t e m e n t e e n la m i s m a c o n f i g u r a c i ó n a b s o l u t a q u e e l c a r b o n o a l f a d e u n L - a m i n o á c i d o c u a n d o e s e c a r b o n o i n d i c a d o t i e n e q u i r a l i d a d ;
    A 1 y A o s o n s u b u n i d a d e s s e l e c c i o n a d a s in d e p e n d i e n t e m e n t e d e A , e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A o e s t á 35 p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A r A o ; e n d o n d e A o , c u a n d o e s t á p r e s e n t e , c o r r e s p o n d e e n e s t r u c t u r a a u n á c id o q u e c o n t i e n e a m in a u n id o a J a t r a v é s d e l c a r b o n i l o C - t e r m i n a l d e l á c id o q u e c o n t i e n e a m in a ;
    R e s h id r ó g e n o ;
    40
    R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o a c e p t o r d e e le c t r o n e s ;
    R a1 e s h id r ó g e n o o R a1 e s u n a u n id a d b á s ic a ( B U ) q u e p a r t i c ip a e n la h id r ó l i s i s a s i s t i d a p o r b a s e d e l a n i l l o d e s u c c i n i m i d a , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 23), o u n a s a l d e a d ic i ó n d e 45 á c i d o d e l m is m o , e n d o n d e R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o o e t i lo o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ; R a2 e s h id r ó g e n o ;
    50 e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 5 c u a n d o H E e s t á p r e s e n t e o d e 1 a 5 c u a n d o H E e s t á a u s e n t e ;
    c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ;
    55
    R 45 e s - C O 2 H ;
    E e s - O - ;
    60 J e s - N H - ;
    V y Z 3 s o n = C H - ;
    R 8 e s h id r ó g e n o ;
    65 R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y
    e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ,
    e n d o n d e A o , c u a n d o e s t á p r e s e n t e , t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 13 o F ó r m u l a 14 :
    5
    10
    Figure imgf000207_0001
    15 e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l r e s t o c a r b o n i l o d e c u a l q u i e r e s t r u c t u r a r e p r e s e n t a e l p u n t o d e u n ió n d e A o a W y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l r e s t o a m i n o d e c u a l q u i e r e s t r u c t u r a r e p r e s e n t a e l p u n t o d e u n ió n d e A o a A 1 ,
    e n d o n d e K y L s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e C , N , O o S , s i e m p r e q u e c u a n d o K o L e s O o S , R 41 y R 42 20 p a r a K o R 43 y R 44 p a r a L e s t á n a u s e n t e s , y c u a n d o K o L s o n N , u n o d e R 41, R 42 p a r a K o u n o d e R 43,
    R 44 p a r a L e s t á n a u s e n t e s , y s i e m p r e q u e n o s e s e l e c c i o n e n d o s L a d y a c e n t e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e c o m o N , O o S ;
    e n d o n d e q e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 12 , y r e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 12 ; 25
    e n d o n d e G e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , - O H , - O R G , - C O 2 H , C O 2 R G , e n d o n d e R G e s a lq u i lo C 1- C 6 , a r i l o o h e t e r o a r i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R PR, e n d o n d e R PR e s u n g r u p o p r o t e c t o r a d e c u a d o , - N H 2 o - N ( R G ) ( R PG), e n d o n d e R G in d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o e s c o m o s e d e f in ió p r e v i a m e n t e o a m b o s R G j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n 30 h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o a m b o s R PR j u n t o s f o r m a n u n g r u p o p r o t e c t o r a d e c u a d o ;
    e n d o n d e R 38 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; R 39- R 44 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o a m b o s R 39, R 40 j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n 35 c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 , o R 41, R 42 j u n t o c o n K a l q u e e s t á n u n id o s c u a n d o K e s C , o R 43, R 44 j u n t o c o n L a l q u e e s t á n u n id o s c u a n d o L e s C , c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , o R 40 y R 41, o R 40 y R 43, o R 41 y R 43 [ [ a ] ] j u n t o c o n e l c a r b o n o o h e t e r o á t o m o a l q u e e s t á n u n id o s y lo s á t o m o s i n t e r m e d i o s e n t r e e s o s c a r b o n o y / o h e t e r o á t o m o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o o h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s , 40 e n d o n d e A o t i e n e u n a e s t r u c t u r a c o r r e s p o n d i e n t e a a l f a - a m i n o , b e t a - a m i n o u o t r o á c id o q u e c o n t i e n e a m in a .
    L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e c u a l q u i e r a d e la s r e i v i n d i c a c i o n e s 1 - 5 , e n d o n d e e l s u b í n d i c e a e s 1; e n d o n d e - L b - A a e n la F ó r m u la 1 e s - L b - A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e o - L b - A e s - L b - A 1- A c c u a n d o A o e s t á 45 p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A 1- A o
    e n d o n d e L b - A a - t ie n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a 8 :
    50
    55
    Figure imgf000207_0002
    e l r e s t o -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A o A 1 ;
    60 R y R a2 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o ;
    R a1 e s h id r ó g e n o , m e t i l o , e t i lo o R a1 e s u n a u n id a d b á s ic a ( B U ) q u e p a r t i c ip a e n la h id r ó l i s i s a s i s t i d a p o r b a s e d e l a n i l l o d e s u c c in i m id a ;
    65 H E e s u n a u n id a d p o t e n c i a d o r a d e h id r ó l i s i s ( H E ) o p c io n a l ;
    e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ;
    c a d a R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o d o s R b1 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) 5 a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 o u n R b1 y H E j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y e l o t r o R b1 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ;
    10 B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e -[ C ( R 1) ( R 1) ] -[ C ( R 2) ( R 2) ] n - N ( R 22) ( R 23),
    e n d o n d e e l s u b í n d i c e n e s 0 , 1 , 2 o 3 ;
    c a d a R 1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 4 o d o s R 1 j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e 15 e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , y c a d a R 2 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o d o s R 2 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o i n t e r m e d i o d e f i n e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , o u n R 1 y u n R 2 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o in t e r m e d i o c o m p r e n d e n u n 20 c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y lo s R 1 y R 2 r e s t a n t e s s o n c o m o s e d e f in e n ;
    R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ; y 25 e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l a n i l lo d e s u c c i n i m i d a d e L b i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e d e a z u f r e d e r i v a d o d e u n g r u p o s u l f h i d r i l o d e u n r e s t o d e d i r e c c i o n a m i e n t o y la o t r a l í n e a o n d u l a d a i n d i c a u n e n l a c e c o v a l e n t e d e A ( o A 1) a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n .
    Figure imgf000208_0001
    55 S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n i d a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    e l a s t e r i s c o ( * ) d e s i g n a q u i r a l i d a d o a u s e n c i a d e la m is m a e n e l c a r b o n o in d i c a d o ;
    Q 1' e s A o -W w , e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c io n a l d e A d e m a n e r a q u e - Q 1'- e s - W w c u a n d o A o e s t á 60 a u s e n t e o e s - A o - W w - c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e ,
    e n d o n d e -[ C ( R b) ( R b) ]m -[ H E ] - s e c o n v i e r t e e n A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e o e s A 1 c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e , y e n d o n d e e l s u b í n d i c e w e s 1 c u a n d o Q 2 e s t á a u s e n t e o w e s 0 d e m a n e r a q u e W e s t á a u s e n t e y Q 2 e s t á 65 p r e s e n t e ;
    R e s h id r ó g e n o ;
    R a1 e s B U e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 23), o u n a s a l d e a d ic i ó n d e á c id o d e l m is m o , e n d o n d e R 22 y R 23 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e 5 e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ;
    R a2 e s h id r ó g e n o ;
    e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 5 c u a n d o H E e s t á p r e s e n t e o d e 1 a 5 c u a n d o H E e s t á 10 a u s e n t e ;
    c a d a R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ;
    15
    J e s - O - o - N H - ;
    Q 2 c u a n d o e s t á p r e s e n t e e s W - E , e n d o n d e E e s - O - o - N H - ; y
    20 e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ;
    L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 7 , e n d o n d e lo s c o m p u e s t o s c o n j u g a d o s d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n t i e n e n la s e s t r u c t u r a s d e la F ó r m u l a 17 A y la F ó r m u l a 17 B :
    25
    30
    Figure imgf000209_0001
    35
    40
    45
    Figure imgf000209_0002
    e n d o n d e J e s - N H - ;
    50
    u n o d e V o Z 1 e s = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o , - C l o - N O 2 , y lo s o t r o s d e V , Z 1 y Z 2 s o n = C H - ; R 8 e s h id r ó g e n o ;
    55 R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y
    e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ;
    L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 7 , e n d o n d e lo s c o m p u e s t o s c o n j u g a d o s d e f á r m a c o y l i g a n d o d e 60 la c o m p o s i c i ó n t i e n e n la s e s t r u c t u r a s d e la F ó r m u l a 18 A y la F ó r m u l a 18 B :
    65
    1
    1
    Figure imgf000210_0003
    20
    25
    30
    35
    Figure imgf000210_0001
    Figure imgf000210_0002
    40
    e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e e l r e s t o - [ C ( R b1) ( R b1) ]m - [ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e o e l r e s t o e s A 1 c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n - A 1- A 0 - ; 45 R e s - H ;
    R a1 e s u n a u n id a d b á s ic a ( B U ) , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2- N ( R 22) ( R 23), o u n a s a l d e a d ic i ó n d e á c id o d e l m is m o , e n d o n d e R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o o m e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 50 m ie m b r o s ;
    R a2 e s h id r ó g e n o ;
    e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 5 c u a n d o H E e s t á p r e s e n t e o d e 1 a 5 c u a n d o 55 H E e s t á a u s e n t e ;
    c a d a R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ; y
    60
    R 8 e s h id r ó g e n o ; y
    R 9 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    65 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e lo s c o m p u e s t o s c o n j u g a d o s d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n t i e n e n la s e s t r u c t u r a s d e la F ó r m u l a 19 A y la F ó r m u l a 19 B
    5
    10
    15
    Figure imgf000211_0001
    20
    Figure imgf000211_0002
    25
    30
    35
    40
    Figure imgf000211_0003
    Figure imgf000211_0004
    45
    e n d o n d e
    R e s h id r ó g e n o ;
    50
    R a1 e s u n a u n i d a d b á s ic a ( B U ) , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2- N ( R 22) ( R 23), o u n a s a l d e a d i c i ó n d e á c i d o d e l m is m o , e n d o n d e R 22 y R 23 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s ;
    55
    R a2 e s h i d r ó g e n o ;
    e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 5 c u a n d o H E e s t á p r e s e n t e o d e 1 a 5 c u a n d o H E e s t á a u s e n t e ;
    60 c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = O ) - ;
    R 45 e s - C O 2 H ;
    65
    E e s - O - ;
    J e s - N H - ;
    V y Z 3 s o n = C H - ;
    5
    R 8 e s h id r ó g e n o ;
    R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y
    10 e l c a r b o n o i n d i c a d o ( * ) e s t á p r e d o m i n a n t e m e n t e e n la m i s m a c o n f i g u r a c i ó n a b s o l u t a q u e e l c a r b o n o a l f a d e u n L - a m i n o á c i d o c u a n d o e l c a r b o n o in d i c a d o t i e n e q u i r a l i d a d i g u r a c i ó n a b s o l u t a q u e e l c a r b o n o a l f a d e u n L - a m i n o á c i d o c u a n d o e l c a r b o n o i n d i c a d o t i e n e q u i r a l i d a d .
    10. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e c u a l q u i e r a d e la s r e i v i n d i c a c i o n e s 1 - 9 , e n d o n d e - D e s u n a g e n t e d i s r u p t o r d e 15 t u b u l i n a q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a c u a t e r n i z a d a ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d i s r u p t o r d e t u b u l i n a c u a t e r n i z a d o -D e s u n a u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a ,
    20 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a D g .-T o la F ó r m u l a D h --T:
    25
    30
    Figure imgf000212_0001
    35
    40
    Figure imgf000212_0002
    45
    e n d o n d e e l c í r c u l o r e p r e s e n t a u n n i t r ó g e n o - h e t e r o a r i l o d e 5 m i e m b r o s y e n d o n d e lo s s u s t i t u y e n t e s r e q u e r i d o s i n d i c a d o s p a r a e s e h e t e r o a r i l o e s t á n e n u n a r e la c ió n 1 , 3 e n t r e s í c o n s u s t i t u c i ó n o p c i o n a l e n la s p o s i c i o n e s r e s t a n t e s ;
    50
    R 2A e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R 2A j u n t o c o n e l á t o m o d e o x í g e n o a l q u e e s t á u n id o d e f i n e u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O d i s t i n t o d e - O H ;
    R 3 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    55
    R 4 , R 4A, R 4B, R 5 y R 6 s o n a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , s e l e c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e ;
    R 7A e s a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    60 R 8A e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; y
    m e s 0 o 1 ,
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la 65 c o m p o s i c i ó n .
    11. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 10 , e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    5
    10
    Figure imgf000213_0001
    15 e n d o n d e Z e s u n a l q u i l e n o C 1- C 4 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n a lq u e n i l e n o C 2 - C 4 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    e l s u b í n d i c e q , q u e i n d i c a e l n ú m e r o d e s u s t i t u y e n t e s R 7B, e s 1 , 2 o 3 ;
    20 e n d o n d e c a d a R 7B s e s e l e c c i o n a i n d e p e n d i e n t e m e n t e d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n h i d r ó g e n o y u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O ; y
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n ,
    25
    e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    30
    Figure imgf000213_0002
    35
    e n d o n d e R 2A e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R 2 j u n t o c o n e l á t o m o d e o x í g e n o a l q u e e s t á u n id o d e f i n e u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O q u e n o e s - O H ;
    40
    R 3 e s a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    R 5 y R 6 s o n lo s r e s i d u o s d e la c a d e n a l a t e r a l d e lo s a m i n o á c i d o s h i d r ó f o b o s n a t u r a le s ;
    45 - N ( R 7 ) ( R 7) e s - N H ( a l q u i l o C 1- C 6 ) o - N H - N ( a l q u i l o C 1- C 6 ) 2 , e n d o n d e u n o y s o lo u n a lq u i lo C 1- C 6 e s t á o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o p o r - C O 2 H , o u n é s t e r d e l m is m o , o p o r u n f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n ,
    50
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e - N ( R 7) ( R 7) s e s e l e c c i o n a d e l g r u p o q u e c o n s is t e e n - N H ( C H 3 ), -N H C H 2 C H 2 P h , y - N H C H 2- C O 2 H , - N H C H 2 C H 2 C O 2 H y - N H C H 2 C H 2 C H 2 C O 2 H ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l s u s t i t u y e n t e u n id o a O - O R 2A e s d i s t i n t o d e - O H d e m a n e r a q u e R 2A n o e s 55 h id r ó g e n o ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C H 2 C H 3.
    12. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 11 , e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    60
    5
    10
    Figure imgf000214_0001
    15 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    20
    25
    Figure imgf000214_0002
    e n d o n d e R 4A e s m e t i l o ;
    30
    R 3 e s H , m e t i l o , e t i lo , p r o p i lo , - C H 2 - O C ( O ) R 3A - C H 2 C H ( R 3B) C ( O ) R 3A o - C H ( R 3B) C ( O ) N H R 3A, e n d o n d e R 3A e s a lq u i lo C 1- C 6 y R 3B e s H o a l q u i l o C 1- C 6 , i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o d e R 3A; y
    - O R 2A e s u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O s e l e c c i o n a d o d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n - O C H 2 R 2B, - O C ( O ) R 2B y -35 O C ( O ) N ( R 2B) ( R 2C), e n d o n d e R 2B y R 2C s e s e l e c c i o n a n i n d e p e n d i e n t e m e n t e d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n H , a l q u i l o C 1- C 6 y a l q u e n i l o C 2 - C 6 ; y
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ,
    40 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C H 2 C H 3.
    13. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 12 , e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    45
    50
    Figure imgf000214_0003
    55
    R 2B e s - C H 3 , - C H 2 C H 3 , - C H ( C H 3 ) 2 , - C ( C H 3 ) 3 o - C H = C H 2 ;
    R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo ; y
    60 R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ;
    en d o n d e la unidad d e fá rm aco de tubulis ina cu a tern izad a -D+ tiene la estructura de:
    65
    1
    Figure imgf000215_0003
    15 e n d o n d e e l s u b í n d i c e m e s 1 ;
    R 2B e s - H , - C H 3 , - C H 2 C H 3 o - O C H 3 ;
    R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo ; y
    20
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ,
    e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e : 25
    30
    Figure imgf000215_0001
    35
    40
    45
    Figure imgf000215_0002
    50
    e n d o n d e R 2B e s - C H 3 , - C H 2 C H 3 , - C H 2 C H 2 C H 3 , - C H ( C H 3 ) 2 , - C H 2 C H ( C H 3 ) 2 , - C H 2 C ( C H 3 ) 3 , o
    55
    60
    1
    Figure imgf000216_0004
    15
    20
    25
    Figure imgf000216_0001
    e n d o n d e R 2B e s h id r ó g e n o , m e t i l o u - O C H 3 d e m a n e r a q u e - O C H 2 R 2B e s u n s u s t i t u y e n t e m e t i l e t i l , 30 m e t o x i m e t i l é t e r ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2B e s m e t i l o .
    14. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 1 , e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a 35 d e :
    40
    45
    Figure imgf000216_0002
    Figure imgf000216_0003
    50
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 , i s o p r o p i lo , - C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H o - C H 2 C H 2 C O 2 H ;
    55 R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ;
    R 2A e s a lq u i lo C 1- C 6 , a lq u e n i l o C 2 - C 6 , - O C H 2 O R 2B, - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 ; y
    60 e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e
    R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 o - C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ;
    65
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; y
    R 2A e s a l q u i l o C 1- C 4 , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o C 1- C 4 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e A e s - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) - o - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) N H C H 2 C H 2 ( C = O ) - ,
    5 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e :
    10
    15
    Figure imgf000217_0001
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    20
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y
    25 e l s u b í n d i c e m e s 4 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C ( O ) C H 3 , m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo .
    15. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 1 , e n d o n d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a 30 d e :
    35
    40
    Figure imgf000217_0002
    45
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ; R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ;
    50 R 2A e s a lq u i lo C 1- C 6 , - O C H 2O R 2B, - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a lq u i lo C 1- C a o a l q u e n i l o C 2 - C 6 ; y
    e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ,
    55 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; y
    R 2A e s a l q u i l o C 1- C 4 , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o C 1- C 4 , 60
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e A e s - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) - o -C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) N H C H 2 C H 2 ( C = O ) - ,
    65 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d a p o r la e s t r u c t u r a d e :
    1
    Figure imgf000218_0002
    15
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    20 e l s u b í n d i c e p e s u n n ú m e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y
    e l s u b í n d i c e m e s 4 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C ( O ) C H 3 , m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo .
    25
    16. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 1 , e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
    30
    35
    40
    Figure imgf000218_0001
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    45 S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o ;
    R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 o - C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ;
    50
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ;
    R 2A e s a l q u i l o C 1- C 4 , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o C 1- C 4 ; y 55 e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e A e s - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) - o - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) N H C H 2 C H 2 ( C = O ) - , p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á 60 r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
    65
    1
    Figure imgf000219_0003
    15
    20
    Figure imgf000219_0001
    25
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    30 e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3;
    e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y
    e l s u b í n d i c e m e s 4 ,
    35
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C ( O ) C H 3 , m e t i l o , e t i lo o p r o p i lo .
    17. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 1 , e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
    40
    45
    50
    Figure imgf000219_0002
    55
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    60 S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3;
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ;
    65
    R 2A e s a l q u i l o C 1- C 4 , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o C 1- C 4 ;
    e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e A e s - C H 2 ( C H 2 ) 4 C = O ) - o - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) N H C H 2 C H 2 ( C = O ) - ,
    5 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
    10
    15
    20
    Figure imgf000220_0001
    25
    30
    35
    Figure imgf000220_0002
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    40
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3;
    45 e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8 ; y
    e l s u b í n d i c e m e s 4 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C ( O ) C H 3 , m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo .
    50
    18. L a c o m p o s i c i ó n d e L D C d e la r e i v i n d i c a c i ó n 1 , e n d o n d e -D e s u n a u n id a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d a o u n a u n id a d d e f á r m a c o d e d o l a s t a t i n a c u a t e r n i z a d a ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e d o l a s t a t i n a c u a t e r n i z a d a e s d o l a s t a t i n a 10 c u a t e r n i z a d a o 55 d o l a s t a t i n a 15 c u a t e r n i z a d a ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d a - D t i e n e la e s t r u c t u r a d e D e ' o D f ':
    60
    65
    10
    Figure imgf000221_0004
    Figure imgf000221_0001
    15
    20
    Figure imgf000221_0002
    Figure imgf000221_0003
    25
    e n d o n d e R 10 y R 11 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e a l q u i l o C 1- C 8 ;
    30 R 12 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 , a r i lo , - X 1- a r i l o , - X 1-( c i d o a l q u i l o C 3- C 8 ), h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 o - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 );
    R 13 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 , a r i lo , - X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 ), h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 y - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 );
    35
    R 14 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ;
    R 13 y R 14 t o m a d o s j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 ;
    40 R 15 e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 8 ;
    R 16 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 , a r i lo , - X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 ), h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 y - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 );
    45 R 17 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , - O H , a l q u i l o C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 y O -( a l q u i l o C 1- C 8 );
    R 18 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 8 ;
    R 19 e s - C ( R 19A) 2- C ( R 19A) 2- a r i l o , - C ( R 19A) 2 - C ( R 19A) 2 -( h e t e r o c i c l o C 3- C 8 ) o - C ( r 19A) 2 - C ( R 19A) 2 -( c i c l o a l q u i l o 50 C 3 - C 8 ); R 21 e s a r i l o o h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 ; e n d o n d e R 19A e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 8 u - O H ;
    R 20 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 20 , a r i lo , h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 , -( R 47O ) m - R 48 y - ( R 47O ) m - C H ( R 49) 2 ;
    e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 - 1000 ;
    55
    R 47 e s a l q u i l o C 2 - C 8 ;
    R 48 e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 8 ;
    60 R 49 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e - C O O H , -( C H 2 ) n - N ( R 50) 2 , -( C H 2 ) n - S O 3 H o - ( C H 2 ) n - S O 3 - a l q u i l o C 1- C 8 ;
    R 50 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e a l q u i l o C 1- C 8 o -( C H 2 ) n - C O O H ;
    Z e s O , S , N H o N R 46, e n d o n d e R 46 e s a l q u i l o C 1- C 8 ;
    65
    X 1 e s a l q u i l e n o C 1- C 10 ; y
    e l s u b í n d i c e n e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ;
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la c o m p o s i c i ó n ,
    5
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e c a d a c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o d e la c o m p o s i c i ó n e s t á r e p r e s e n t a d o p o r la e s t r u c t u r a d e :
    10
    15
    20
    Figure imgf000222_0001
    25
    30
    35
    Figure imgf000222_0002
    40
    45
    50
    Figure imgf000222_0003
    55
    60
    1
    1
    Figure imgf000223_0003
    20
    25
    30
    Figure imgf000223_0001
    35
    40
    45
    Figure imgf000223_0002
    e n d o n d e A b e s u n a u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    50
    S e s u n á t o m o d e a z u f r e d e la u n id a d d e l i g a n d o d e a n t i c u e r p o ;
    e l r e s t o A b - S - e s t á u n id o a l c a r b o n o a o p e n e l á c i d o c a r b o x í l i c o M 3; y
    55 e l s u b í n d i c e p ' e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 8.
    19. U n c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a I:
    60
    65
    Figure imgf000224_0001
    e n d o n d e
    L 'b e s u n p r e c u r s o r d e l r e s t o d e u n ió n c o v a l e n t e d e l ig a n d o ;
    Q 1 e s A a -W w , e n d o n d e A e s u n a u n id a d d e e x t e n s ió n o p c i o n a l d e m a n e r a q u e e l s u b í n d i c e a e s 0 c u a n d o A e s t á a u s e n t e o 1 c u a n d o A e s t á p r e s e n t e y e s t á o p c i o n a l m e n t e c o m p u e s t o p o r d o s , t r e s o c u a t r o s u b u n i d a d e s ;
    Q 2 e s W 'w - E - , e n d o n d e Q 2, c u a n d o e s t á p r e s e n t e , e s t á u n id o a V , Z 1, Z 2 o Z 3 ;
    W w y W w s o n u n i d a d e s e s c i n d i b l e s , e n d o n d e
    W w d e Q 1 e s c a p a z d e e s c i s i ó n s e l e c t i v a p o r u n a p r o t e a s a r e g u l a d o r a o i n t r a c e l u l a r e n c o m p a r a c i ó n c o n la s p r o t e a s a s s é r i c a s , o p o r g l u t a t i ó n a t r a v é s d e l i n t e r c a m b i o d e d is u l f u r o , o e s m á s r e a c t i v o a la h id r ó l i s i s e n c o n d i c i o n e s m á s á c id a s p r e s e n t e s e n lo s l i s o s o m a s e n c o m p a r a c i ó n c o n e l p H f i s i o l ó g i c o d e l s u e r o ,
    W ' - E d e Q 2 p r o p o r c i o n a u n e n l a c e g l i c o s í d i c o e s c i n d i b l e p o r u n a g l i c o s i d a s a lo c a l i z a d a i n t r a c e l u l a r m e n t e , y
    e l s u b í n d i c e w e s 0 o 1 d e m a n e r a q u e W e s t á a u s e n t e c u a n d o w e s 0 o W e s t á p r e s e n t e c u a n d o w e s 1 , y e l s u b í n d i c e w ' e s 0 o 1 , e n d o n d e W ' - E e s t á a u s e n t e c u a n d o w ' e s 0 o W ' - E e s t á p r e s e n t e c u a n d o w ' e s 1 , y e n d o n d e w w ' e s 1 d e m a n e r a q u e u n o y s o l o u n o d e W , W ' e s t á p r e s e n t e ;
    V , Z 1, Z 2 y Z 3 s o n = N - o = C ( R 24) - , e n d o n d e R 24 e s h id r ó g e n o o a lq u i lo , a lq u e n i l o o a lq u in i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o h a ló g e n o , - N O 2 , - C N u o t r o g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s , u n g r u p o d o n a n t e d e e l e c t r o n e s , o e l s u s t i t u y e n t e - Q 2 o - C ( R 8) ( R 9) -D d e la F ó r m u l a 1 , e n d o n d e a l m e n o s u n o d e V , Z 1, Z 2 y Z 3 e s = C ( R 24) - c u a n d o w e s 1 , y a l m e n o s d o s d e V , Z 1, Z 2 y Z 3 s o n = C ( R 24) - c u a n d o w ' e s 1, s i e m p r e q u e c u a n d o w e s 1 , Q 2 e s t á a u s e n t e y u n o y s o lo u n R 24 e s - C ( R 8 ) ( R 9) - D d e m a n e r a q u e -C ( R 8 ) ( R 9 ) -D e s t á u n id o a u n o d e V , Z 1, Z 2 , Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24) - y lo s s u s t i t u y e n t e s Q 1- J - y - C ( R 8) ( R 9) -D s o n o rto o p a ra e n t r e s í ,
    s i e m p r e q u e c u a n d o w ' e s 1 , u n o y s o lo u n R 24 e s - C ( R 8) ( R 9 ) -D d e m a n e r a q u e - C ( R 8 ) ( R 9 ) -D e s t á u n id o a u n o d e V , Z 1, Z 2 , Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24) - y u n o y s o lo o t r o R 24 e s Q 2 d e m a n e r a q u e Q 2 e s t á u n id o a o t r o d e V , Z 1, Z 2 , Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24) - , y lo s s u s t i t u y e n t e s Q 2 y - C ( R 8) ( R 9) -D son o rto o p a ra e n t r e s í ;
    R 8 y R 9 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo , a lq u e n i l o o a lq u in i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o a r i l o o h e t e r o a r i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    R ' e s h i d r ó g e n o o e s h a ló g e n o , - N O 2 , - C N u o t r o g r u p o a c e p t o r d e e l e c t r o n e s , o e s u n g r u p o d o n a n t e d e e le c t r o n e s ;
    E y J s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e - O - , - S - o - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h id r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; y
    D e s u n a u n id a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a , e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o c u a t e r n i z a d a e s u n c o m p u e s t o ( D ) q u e c o n t i e n e u n a a m i n a t e r c i a r i a q u e t i e n e u n a p r o p ie d a d c i t o t ó x i c a , c i t o s t á t i c a , i n m u n o s u p r e s o r a o a n t i i n f l a m a t o r i a q u e s e h a in c o r p o r a d o a l L D C c o m o s u s a l d e a m i n a c u a t e r n a r i a c o r r e s p o n d i e n t e ; y
    e n d o n d e d ic h a e s c is ió n p o r p r o t e a s a , i n t e r c a m b i o d e d is u l f u r o , h id r ó l i s i s á c id a o e s c is ió n p o r 5 g l i c o s i d a s a d a c o m o r e s u l t a d o la e x p u ls ió n d e l f á r m a c o ( D ) q u e c o n t i e n e a m in a t e r c i a r i a l ib r e d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r , o u n c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o o c o n j u g a d o d e N -a c e t i l - c i s t e í n a d e r i v a d o d e l m i s m o o u n c o m p u e s t o d e C o n j u g a d o L i g a n d o F á r m a c o o C o n j u g a d o d e N -a c e t i l - c i s t e í n a d e r i v a d o d e l m is m o .
    Figure imgf000225_0001
    25
    30
    Figure imgf000225_0002
    35
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e L b '- t i e n e u n a e s t r u c t u r a s e l e c c i o n a d a d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n :
    40
    45
    50
    Figure imgf000225_0003
    55
    Figure imgf000225_0004
    60
    1
    Figure imgf000226_0004
    15
    e n d o n d e R e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    R ' e s h i d r ó g e n o o h a l ó g e n o o R y R ' s o n h a l ó g e n o i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o ;
    20
    T e s - C l , - B r , - I , - O - m e s i l o u - O - t o s i l o u o t r o g r u p o s a l i e n t e d e s u l f o n a t o ;
    Figure imgf000226_0001
    25
    X 2 e s a l q u i l e n o C 1- 10 , c a r b o c i c l o C 3 - C 8 , - O -( a l q u i l o C 1- C 6 ), - a r i l e n o - , a lq u i l e n o C 1- C 10- a r i l e n o , a r i l e n o -a l q u i l e n o C 1- C 10 , - a l q u i l e n o C 1- C 10-( c a r b o c i c l o C 3- C 6 ) - , - ( c a r b o c i c l o C 3 - C 8 ) - a l q u i l e n o C 1- C 10- , h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 , - a l q u i l e n o C 1- C 10-( h e t e r o c i c l o C 3- C 8 ) -, - h e t e r o c i c l o C 3- C 8 ) - a l q u i l e n o C 1- C 10 , -( C H 2 C H 2 O )u o - C H 2 C H 2O ) u - C H 2- , e n d o n d e e l s u b í n d i c e u e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 10 y 30 R 57 e s a l q u i l o C 1- C 6 o a r i lo .
    35
    40
    Figure imgf000226_0002
    45
    50
    55
    Figure imgf000226_0003
    60
    en d o n d e el c o m p u e s to tiene la estructura d e la Fórm ula IIIC o la Fórm ula IIID:
    65
    1
    Figure imgf000227_0004
    15
    20
    25
    Figure imgf000227_0001
    30
    e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a M IE o la F ó r m u l a I I IF :
    35
    40
    Figure imgf000227_0002
    45
    50
    55
    Figure imgf000227_0003
    60 particularmente en d o n d e U '- tiene una estructura se l e c c io n a d a del grupo q u e c o n s i s te en:
    65
    Figure imgf000228_0001
    R ' e s h i d r ó g e n o o h a l ó g e n o o R y R ' s o n h a l ó g e n o i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o ;
    T e s - C l , - B r , - I , - O - m e s i l o u - O - t o s i l o u o t r o g r u p o s a l i e n t e d e s u l f o n a t o ;
    Figure imgf000228_0002
    X 2 e s a l q u i l e n o C 1- 10 , c a r b o c i c l o C 3 - C 8 , - O -( a l q u i l o C 1- C 6 ), - a r i l e n o - , a lq u i l e n o C 1- C 10- a r i l e n o , a r i l e n o -a l q u i l e n o C 1- C 10 , - a l q u i l e n o C 1- C 10-( c a r b o c i c l o C 3- C 6 ) - , - ( c a r b o c i c l o C 3 - C 8 ) - a l q u i l e n o C 1- C 10- , h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 , - a l q u i l e n o C 1- C 10-( h e t e r o c i c l o C 3- C 8 ) -, - h e t e r o c i c l o C 3- C 8 ) - a l q u i l e n o C 1- C 10 , -( C H 2 C H 2 O )u o - C H 2 C H 2O ) u - C H 2- , e n d o n d e e l s u b í n d i c e u e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 10 y R 57 e s a l q u i l o C 1- C 6 o a r i lo .
    22.
    Figure imgf000228_0003
    particularmente en d o n d e M1-A1-Ao- t ie n e la e structura d e la Fórm ula VIII:
    1
    Figure imgf000229_0001
    15 e n d o n d e
    A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e - [ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s A i c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e , d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n - A i - A o - ;
    20 R y R a2 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o m e t i l o ;
    R a1 e s h id r ó g e n o , m e t i l o , e t i lo o u n a u n id a d b á s i c a ( B U ) ;
    H E e s u n a u n id a d p o t e n c i a d o r a d e h id r ó l i s i s ( H E ) o p c io n a l ;
    25
    m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ;
    c a d a R b1 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o d o s R b1 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) 30 a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 o u n R b1 y H E j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y e l o t r o R b1 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    35 B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e -[ C ( R 1) ( R 1) ] -[ C ( R 2) ( R 2) ] n - N ( R 22) ( R 23), o u n a s a l d e a d ic i ó n d e á c id o d e l m is m o ,
    e n d o n d e e l s u b í n d i c e n e s 0 , 1 , 2 o 3 ;
    40 c a d a R 1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 4 o d o s R 1 j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , y c a d a R 2 e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o d o s R 2 j u n t o c o n e l ( l o s ) c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o i n t e r m e d i o d e f i n e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , o u n R 1 y u n R 2 j u n t o c o n e l ( l o s ) 45 c a r b o n o ( s ) a l ( a lo s ) q u e e s t á n u n id o s y c u a l q u i e r c a r b o n o i n t e r m e d i o c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s y lo s R 1 y R 2 r e s t a n t e s s o n c o m o s e d e f in e n ;
    R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ; y 50
    la l í n e a o n d u l a d a in d i c a la u n ió n c o v a l e n t e d e A ( o A o ) a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u la V I I I ,
    e n d o n d e M 1- A 1- A o - d e la F ó r m u l a I t i e n e la e s t r u c t u r a d e
    55
    60
    65
    1
    Figure imgf000230_0004
    15
    20
    Figure imgf000230_0001
    25 u n a s a l d e a d ic i ó n d e á c i d o d e l m is m o ,
    e n d o n d e R 22 y R 23 s o n c a d a u n o h i d r ó g e n o o u n o d e R 22, R 23 e s h i d r ó g e n o y e l o t r o e s u n g r u p o p r o t e c t o r d e c a r b a m a t o lá b i l a lo s á c id o s ; y e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 4 , 30 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e M 1- A - i - A o - d e la F ó r m u l a I t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    35
    Figure imgf000230_0002
    40
    45
    Figure imgf000230_0003
    50 u n a s a l d e a d ic i ó n d e á c i d o d e l m is m o ,
    e n d o n d e e l s u b í n d i c e m e s 0 o 4 y R 22 y R 23 s o n c a d a u n o h i d r ó g e n o o u n o d e R 22, R 23 e s h id r ó g e n o y e l o t r o e s - C ( O ) O t - B u .
    55 23 . E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la r e i v i n d i c a c i ó n 20 , e n d o n d e W d e Q 1 e s t á c o m p u e s t o p o r o c o n s i s t e e n u n r e s t o p e p t í d i c o q u e t i e n e u n e n l a c e p e p t í d i c o a J q u e e s s e l e c t i v a m e n t e e s c i n d i b l e p o r u n a p r o t e a s a i n t r a c e l u l a r o r e g u l a d o r a e n c o m p a r a c i ó n c o n la s p r o t e a s a s s é r i c a s e n d o n d e la a c c ió n d e la p r o t e a s a r e g u l a d o r a s o b r e W p r o v o c a la l i b e r a c ió n d e l f á r m a c o l ib r e q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a ( D ) d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r o u n c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o o c o n j u g a d o d e N - a c e t i l - c i s t e í n a 60 d e r i v a d o d e l m is m o ,
    65
    Figure imgf000231_0002
    10
    e e n d o n d e R 34 e s b e n c i lo , m e t i l o , i s o p r o p i lo , i s o b u t i l o , s e c - b u t i l o , - C H ( O H ) C H 3 o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
    Figure imgf000231_0001
    45 e n d o n d e R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o d o n a n t e d e e le c t r o n e s ;
    R 8 e s h id r ó g e n o ;
    R 9 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    50
    R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i l o o - C H ( O H ) C H 3 ;
    R 35 e s m e t i l o , -( C H 2 ) 3 N H ( C = O ) N H 2 o -( C H 2 ) 2 C O 2 H ;
    55 J e s - N ( R 33)-, e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y
    V y Z 1 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a X :
    60
    65
    1
    Figure imgf000232_0003
    Figure imgf000232_0001
    15
    e l a s t e r i s c o ( * ) d e s i g n a q u i r a l i d a d o a u s e n c i a d e la m i s m a e n e l c a r b o n o in d i c a d o ;
    A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e - [ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y e s A i c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e , p o r lo q u e A s e c o n v i e r t e e n A 1- A 0 ;
    20
    R e s - H ;
    R a1 e s - H o u n a u n i d a d b á s i c a ( B U ) , e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 23), o u n a s a l d e a d ic i ó n d e á c id o d e l m is m o , e n d o n d e R 22 y R 23 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o o e t i lo o 25 a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s ;
    R a2 e s h id r ó g e n o ;
    30 e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 4 ;
    c a d a R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = 0 ) - ;
    35
    R 34 e s m e t i l o , i s o p r o p i l o o - C H ( 0 H ) C H 3 ;
    R 35 e s -( C H 2 ) 3 N H ( C = 0 ) N H 2 o -( C H 2 ) 2 C 02 H ;
    40 J e s - N H - ;
    V , Z 1 y Z 2 s o n = C H - ;
    R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o d o n a n t e d e e le c t r o n e s ;
    45
    R 8 e s h id r ó g e n o ; y
    R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o .
    50 24 . E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la r e i v i n d i c a c i ó n 21 , e n d o n d e W d e Q 2 e s u n c a r b o h i d r a t o u n id o p o r e n l a c e g l i c o s í d i c o , e n d o n d e e l e n la c e g l i c o s í d i c o W ' - E d e Q 2 p r o p o r c i o n a u n s i t io d e e s c is ió n p a r a u n a g l i c o s i d a s a l o c a l i z a d a in t r a c e l u l a r m e n t e e n d o n d e la a c c i ó n d e la g l i c o s i d a s a s o b r e W ' - E p r o v o c a la l i b e r a c ió n d e l f á r m a c o q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a ( D ) d e l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r o u n c o m p u e s t o c o n j u g a d o d e f á r m a c o y l i g a n d o o c o n j u g a d o d e N - a c e t i l - c i s t e í n a d e r i v a d o d e l m is m o ,
    55
    Figure imgf000232_0002
    60
    65
    1
    Figure imgf000233_0003
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a r e p r e s e n t a E u n i d o a u n o d e V , Z 1, Z 2 o Z 3 c u a n d o e s e g r u p o v a r i a b l e e s = C ( R 24), e n d o n d e E e s - O - , - S - o - N ( R 33) - , e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ; y
    15
    e n d o n d e R 45 e s - C H 2O H o - C O 2 H , p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u la X I :
    20
    25
    30
    35
    40
    Figure imgf000233_0001
    45
    Figure imgf000233_0002
    e n d o n d e
    50 A i y A o s o n s u b u n i d a d e s d e A s e l e c c i o n a d a s in d e p e n d i e n t e m e n t e , e n d o n d e A o e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A ( e s d e c i r , A i s e c o n v i e r t e e n A c u a n d o A o e s t á a u s e n t e y A e s - 1- A 0 - c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e ) ;
    E e s - O - o - N H - ;
    55
    J e s - N ( R 33)-, e n d o n d e R 33 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ;
    V y Z 3 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e = C H - o = N - ;
    60 R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o a c e p t o r d e e le c t r o n e s ;
    R 8 e s h id r ó g e n o ;
    R 9 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o ; y
    65
    R 45 e s - C O 2 H o - C H 2O H ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a X I I :
    1
    1
    2
    Figure imgf000234_0001
    25
    e n d o n d e
    e l a s t e r i s c o ( * ) d e s i g n a q u i r a l i d a d o a u s e n c i a d e la m i s m a e n e l c a r b o n o i n d i c a d o q u e e s t á p r e d o m i n a n t e m e n t e e n la m i s m a c o n f i g u r a c i ó n a b s o l u t a q u e e l c a r b o n o a l f a d e u n L - a m i n o á c i d o 30 c u a n d o e s e c a r b o n o i n d i c a d o t i e n e q u i r a l i d a d ;
    A 1 y A o s o n s u b u n i d a d e s s e le c c i o n a d a s in d e p e n d i e n t e m e n t e d e A , e n d o n d e A 0 e s u n a s u b u n i d a d o p c i o n a l d e A , e n d o n d e -[ C ( R b1) ( R b1) ]m -[ H E ] - e s A c u a n d o A 0 e s t á a u s e n t e y e s A 1 c u a n d o A o e s t á p r e s e n t e , d e m a n e r a q u e A s e c o n v i e r t e e n A 1- A 0 ; e n d o n d e A o , c u a n d o e s t á p r e s e n t e , c o r r e s p o n d e 35 e n e s t r u c t u r a a u n á c i d o q u e c o n t i e n e a m i n a u n i d o a J a t r a v é s d e l c a r b o n i l o C - t e r m i n a l d e l á c id o q u e c o n t i e n e a m in a ;
    R e s h id r ó g e n o ;
    40 R ' e s h i d r ó g e n o o u n g r u p o a c e p t o r d e e le c t r o n e s ;
    R a1 e s h i d r ó g e n o o u n a u n id a d b á s i c a ( B U ) e n d o n d e B U t i e n e la e s t r u c t u r a d e - C H 2 - N ( R 22) ( R 23), o u n a s a l d e a d ic i ó n d e á c id o d e l m is m o , e n d o n d e R 22 y R 23 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , m e t i l o o e t i l o o a m b o s j u n t o c o n e l á t o m o d e n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n i d o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o 45 d e 5 o 6 m ie m b r o s ;
    R a2 e s h id r ó g e n o ;
    e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 5 ;
    50
    c a d a R b1 e s in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    H E e s t á a u s e n t e o e s - C ( = 0 ) - ;
    55 R 45 e s - C O 2 H o - C H 2O H - ,
    E e s - O - ;
    J e s - N H - ;
    60
    V y Z 3 s o n = C H - ;
    R 8 e s h id r ó g e n o ; y
    65 R 9 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o .
    25. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e c u a l q u i e r a d e la s r e i v i n d i c a c i o n e s 1 9 - 2 4 , e n d o n d e A o , c u a n d o e s t á p r e s e n t e , t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a X I I I o la F ó r m u l a X I V :
    5
    10
    Figure imgf000235_0001
    15
    Figure imgf000235_0002
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l r e s t o c a r b o n i l o d e c u a l q u i e r e s t r u c t u r a r e p r e s e n t a e l p u n t o d e u n ió n d e A o a W y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a a l r e s t o a m i n o d e c u a l q u i e r e s t r u c t u r a r e p r e s e n t a e l p u n t o d e 20 u n ió n d e A 0 a A 1 ,
    e n d o n d e K y L s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e C , N , O o S , s i e m p r e q u e c u a n d o K o L e s O o S , R 41 y R 42 p a r a K o R 43 y R 44 p a r a L e s t á n a u s e n t e s , y c u a n d o K o L s o n N , u n o d e R 41, R 42 p a r a K o u n o d e R 43, R 44 p a r a L e s t á n a u s e n t e s , y s i e m p r e q u e n o s e s e l e c c i o n e n d o s L a d y a c e n t e s i n d e p e n d i e n t e m e n t e 25 c o m o N , O o S ;
    e n d o n d e e l s u b í n d i c e q e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e O a 12 , y e l s u b í n d i c e r e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 a 12 ;
    30 e n d o n d e G e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , - O H , - O R G , - C O 2 H , C O 2 R G , e n d o n d e R G e s a lq u i lo C 1- C 6 , a r i l o o h e t e r o a r i l o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R PR, e n d o n d e R PR e s u n g r u p o p r o t e c t o r a d e c u a d o , - N H 2 o - N ( R G ) ( R PG), e n d o n d e R G in d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o e s c o m o s e d e f in ió p r e v i a m e n t e o a m b o s R G j u n t o c o n e l n i t r ó g e n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m i e m b r o s o a m b o s R PR j u n t o s f o r m a n u n g r u p o p r o t e c t o r a d e c u a d o ;
    35
    e n d o n d e R 38 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; R 39- R 44 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o , o a m b o s R 39, R 40 j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 6 , o R 41, R 42 j u n t o c o n K a l q u e e s t á n u n id o s c u a n d o K e s C , o R 43, R 44 j u n t o c o n L a l 40 q u e e s t á n u n id o s c u a n d o L e s C , c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3- C 6 , o R 40 y R 41, o R 40 y R 43, o R 41 y R 43 j u n t o c o n e l c a r b o n o o h e t e r o á t o m o a l q u e e s t á n u n id o s y lo s á t o m o s in t e r m e d i o s e n t r e e s o s c a r b o n o y / o h e t e r o á t o m o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o o h e t e r o c i c l o a l q u i l o d e 5 o 6 m ie m b r o s , o e n d o n d e A o t i e n e u n a e s t r u c t u r a c o r r e s p o n d i e n t e a a l f a - a m i n o , b e t a - a m i n o u o t r o á c id o q u e c o n t i e n e 45 a m in a .
    26 . E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e c u a l q u i e r a d e la s r e i v i n d i c a c i o n e s 19 - 25 , e n d o n d e -D e s u n a g e n t e d i s r u p t o r d e t u b u l i n a q u e c o n t i e n e a m i n a t e r c i a r i a c u a t e r n i z a d a ,
    50 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l a g e n t e d i s r u p t o r d e t u b u l i n a c u a t e r n i z a d o -D e s u n a u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e la F ó r m u l a D g -1 o la F ó r m u l a D h -1 ':
    55
    60
    65
    5
    10
    Figure imgf000236_0001
    15
    20
    Figure imgf000236_0002
    25 e n d o n d e e l c í r c u l o r e p r e s e n t a u n n i t r ó g e n o - h e t e r o a r i l o d e 5 m i e m b r o s y e n d o n d e lo s s u s t i t u y e n t e s r e q u e r i d o s i n d i c a d o s p a r a e s e h e t e r o a r i l o e s t á n e n u n a r e la c ió n 1 , 3 e n t r e s í c o n s u s t i t u c i ó n o p c i o n a l e n la s p o s i c i o n e s r e s t a n t e s ;
    30
    R 2A e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R 2A j u n t o c o n e l á t o m o d e o x í g e n o a l q u e e s t á u n id o d e f i n e u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O d i s t i n t o d e - O H ;
    R 3 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    35
    R 4 , R 4A, R 4B, R 5 y R 6 s o n a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o , s e le c c i o n a d o s i n d e p e n d i e n t e m e n t e ;
    R 7A e s a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o h e t e r o a r i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    40 R 8A e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    y e l s u b í n d i c e m e s 0 o 1 ,
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e la e s t r u c t u r a d e l c o m p u e s t o 45 f á r m a c o - e n l a z a d o r .
    27 . E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la r e i v i n d i c a c i ó n 26 , e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    50
    55
    Figure imgf000236_0003
    60
    e n d o n d e Z e s u n a l q u i l e n o C 1- C 4 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o u n a lq u e n i l e n o C 2 - C 4 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    65 e l s u b í n d i c e q , q u e i n d i c a e l n ú m e r o d e s u s t i t u y e n t e s R 7B, e s 1 , 2 o 3 ;
    c a d a R 7B s e s e l e c c i o n a in d e p e n d i e n t e m e n t e d e h i d r ó g e n o y u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O ; y
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e l c o m p u e s t o f á r m a c o -e n la z a d o r ,
    5
    e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    10
    15
    Figure imgf000237_0001
    e n d o n d e R 2A e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o o R 2 j u n t o c o n e l á t o m o d e o x í g e n o a l q u e e s t á u n id o d e f i n e u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O q u e n o e s - O H ;
    20
    R 3 e s a l q u i l o C 1- C 6 o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ;
    R 5 y R 6 s o n lo s r e s i d u o s d e la c a d e n a l a t e r a l d e lo s a m i n o á c i d o s h i d r ó f o b o s n a t u r a le s ;
    25 - N ( R 7 ) ( R 7) e s - N H ( a l q u i l o C 1- C 6 ) o - N H - N ( a l q u i l o C 1- C 6 ) 2 , e n d o n d e u n o y s o lo u n a lq u i lo C 1- C 6 e s t á o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u i d o p o r - C O 2 H , o u n é s t e r d e l m is m o , o p o r u n f e n i l o o p c i o n a l m e n t e s u s t i t u id o ; y e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e l c o m p u e s t o f á r m a c o -e n la z a d o r ,
    30
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e - N ( R 7) ( R 7) s e s e l e c c i o n a d e l g r u p o q u e c o n s is t e e n - N H ( C H 3 ), -N H C H 2 C H 2 P h y - N H C H 2- C O 2 H , - N H C H 2 C H 2 C O 2 H y - N H C H 2 C H 2 C H 2 C O 2 H , p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l s u s t i t u y e n t e - O R 2A u n id o a O e s d is t i n t o d e - O H d e m a n e r a q u e R 2A n o e s h id r ó g e n o ,
    35 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C H 2 C H 3.
    28. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la r e i v i n d i c a c i ó n 26 , e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    40
    45
    Figure imgf000237_0002
    50
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    55
    60
    Figure imgf000237_0003
    65
    R 3 e s H , m e t i l o , e t i lo , p r o p i lo , - C H 2 - O C ( O ) R 3A, - C H 2 C H ( R 3B) C ( O ) R 3A o - C H ( R 3B) C ( O ) N H R 3A, e n d o n d e R 3A e s a l q u i l o C 1- C 6 y R 3B e s H o a l q u i l o C 1- C 6 , i n d e p e n d i e n t e m e n t e s e l e c c i o n a d o d e R 3A; y
    - O R 2A e s u n s u s t i t u y e n t e u n id o a O s e l e c c i o n a d o d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n - O C H 2 R 2B, - O C ( O ) R 2B o -5 O C ( O ) N ( R 2B) ( R 2C), e n d o n d e R 2B y R 2C s e s e l e c c i o n a n i n d e p e n d i e n t e m e n t e d e l g r u p o q u e c o n s i s t e e n H , a l q u i l o C 1- C 6 y a l q u e n i l o C 2 - C 6 ; y
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ,
    10 p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2A e s - C H 2 C H 3.
    29 . E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la r e i v i n d i c a c i ó n 28 , e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    15
    20
    Figure imgf000238_0001
    25
    Figure imgf000238_0002
    R 2B e s - C H 3 , - C H 2 C H 3 , - C H ( C H 3 ) 2 , - C ( C H 3 ) 3 o - C H = C H 2 ;
    30 R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo ; y
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ,
    e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    35
    40
    45
    Figure imgf000238_0003
    e n d o n d e e l s u b í n d i c e m e s 1;
    50
    R 2B e s - H , - C H 3 , - C H 2 C H 3 o - O C H 3 ;
    R 3 e s m e t i l o , e t i l o o p r o p i lo ; y
    55 R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ,
    e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e t u b u l i s i n a c u a t e r n i z a d a -D t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    60
    65
    1
    Figure imgf000239_0004
    15
    20
    Figure imgf000239_0001
    25
    e n d o n d e R 2B e s - C H 3 , - C H 2 C H 3 , - C H 2 C H 2 C H 3 , - C H ( C H 3 ) 2 , - C H 2 C H ( C H 3 ) 2 - C H 2 C ( C H 3 ) 3 ,
    o
    30
    35
    40
    Figure imgf000239_0002
    45
    50
    Figure imgf000239_0003
    55 e n d o n d e R 2B e s h id r ó g e n o , m e t i l o u - O C H 3 d e m a n e r a q u e - O C H 2 R 2B e s u n s u s t i t u y e n t e m e t i l e t i l , m e t o x i m e t i l é t e r ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e R 2B e s m e t i l o .
    60 30. El c o m p u e s to f á rm a c o -e n la z a d o r d e la reivindicación 19 en d o n d e el c o m p u e s to tiene la estructura de:
    65
    Figure imgf000240_0001
    d o n d e
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e
    R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 o - C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ;
    25
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; y
    R 2A e s a l q u i l o C 1- C 4 , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o C 1- C 4 ,
    30 e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
    35
    40
    Figure imgf000240_0002
    45
    e n d o n d e
    R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ;
    50
    Figure imgf000240_0003
    d o n d e
    R 45 e s - C O 2 H o - C H 2O H ,
    55
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e
    R 34 e s i s o p r o p i l o y R 35 e s - C H 3 o - C H 2 C H 2 C H 2 N H ( C = O ) N H 2 ;
    60 R 7B e s h i d r ó g e n o u - O H ; y
    R 2A e s a l q u i l o C 1- C 4 , - C ( = O ) R 2B o - C ( = O ) N H R 2B, e n d o n d e R 2B e s a l q u i l o C 1- C 4 ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e A e s - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) - o - C H 2 ( C H 2 ) 4 ( C = O ) N H C H 2 C H 2 ( C = O ) - .
    65
    31. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la r e i v i n d i c a c i ó n 30 e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e
    1
    Figure imgf000241_0005
    15
    32. E l c o m p u e s t o f á r m a c o - e n l a z a d o r d e la r e i v i n d i c a c i ó n 26 , e n d o n d e e l a g e n t e d i s r u p t o r d e t u b u l i n a c u a t e r n i z a d o -D e s u n a u n id a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a o d o l a s t a t i n a c u a t e r n i z a d a ,
    20
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l a g e n t e d i s r u p t o r d e t u b u l i n a c u a t e r n i z a d o - D e s d o l a s t a t i n a 10 o d o l a s t a t i n a 15 c u a t e r n i z a d a ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e la u n id a d d e f á r m a c o d e a u r i s t a t i n a c u a t e r n i z a d a - D t i e n e la e s t r u c t u r a d e D e ' o 25 D f ':
    30
    Figure imgf000241_0001
    35
    Figure imgf000241_0002
    40
    45
    Figure imgf000241_0003
    Figure imgf000241_0004
    50 e n d o n d e R 10 y R 11 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e a l q u i l o C 1- C 8 ;
    R 12 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 , a r i lo , - X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 ), h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 o - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 );
    55 R 13 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 , a r i lo , - X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 ), h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 y - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 );
    R 14 e s h i d r ó g e n o o m e t i l o ;
    60 R 13 y R 14 t o m a d o s j u n t o c o n e l c a r b o n o a l q u e e s t á n u n id o s c o m p r e n d e n u n c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 ;
    R 15 e s h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 8 ;
    R 16 e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 , a r i lo , - X 1- a r i l o , - X 1-( c i c l o a l q u i l o C 3- C 8 ), h e t e r o c i c l o 65 C 3 - C 8 y - X 1-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 );
    R 17 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h id r ó g e n o , - O H , a lq u i lo C 1- C 8 , c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 y O -( a l q u i l o C 1- C 8 );
    R 18 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e h i d r ó g e n o o a l q u i l o C 1- C 8 ;
    5 R 19 e s - C ( R 19A) 2- C ( R 19A) 2- a r i l o , - C ( R 19A) 2- C ( R 19A) 2-( h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 ) o - C ( R 19A)2 - C ( R 19A)2 -( c i c l o a l q u i l o C 3 - C 8 ); R 21 e s a r i l o o h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 ; e n d o n d e R 19A e s h id r ó g e n o , a lq u i lo C 1- C 8 u - O H ;
    R 20 e s h id r ó g e n o , a l q u i l o C 1- C 20 , a r i lo , h e t e r o c i c l o C 3 - C 8 , -( R 47O ) m - R 48 y - ( R 47O ) m - C H ( R 49) 2 ;
    10 e l s u b í n d i c e m e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 1 - 1000 ;
    R 47 e s a lq u i lo C 2 - C 8 ;
    R 48 e s h i d r ó g e n o o a lq u i lo C 1- C 8 ;
    15
    R 49 s o n i n d e p e n d i e n t e m e n t e - C O O H , -( C H 2 ) n - N ( R 50) 2 , -( C H 2 ) n - S O 3 H o - ( C H 2 ) n - S O 3 - a l q u i l o C 1- C 8 ; R 50 s o n in d e p e n d i e n t e m e n t e a l q u i l o C 1- C 8 o -( C H 2 ) n - C O O H ;
    20 Z e s O , S , N H o N R 46, e n d o n d e R 46 e s a lq u i lo C 1- C 8 ;
    X 1 e s a l q u i l e n o C 1- C 10 ; y
    e l s u b í n d i c e n e s u n n ú m e r o e n t e r o q u e v a r í a d e 0 a 6 ;
    25
    e n d o n d e la l í n e a o n d u l a d a in d i c a u n ió n c o v a l e n t e d e D a lo q u e r e s t a d e l c o m p u e s t o f á r m a c o -e n la z a d o r ,
    p a r t i c u l a r m e n t e e n d o n d e e l c o m p u e s t o t i e n e la e s t r u c t u r a d e :
    30
    35
    40
    Figure imgf000242_0001
    45
    50
    55
    Figure imgf000242_0002
    60
    65
    1
    Figure imgf000243_0004
    1
    20
    25
    Figure imgf000243_0001
    30
    35
    40
    Figure imgf000243_0002
    45
    50
    Figure imgf000243_0003
    55 e n d o n d e R 45 e s - C O 2 H o - C H 2O H ; y e l s u b í n d i c e m e s 4.
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