ES2877799T3 - Sal de derivado de quinolina, formas polimórficas de la misma, métodos de preparación de la misma, composición y aplicaciones - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772, **(Ver fórmula)** Ditartrato de SPH1772

Description

DESCRIPCIÓN
Sal de derivado de quinolina, formas polimórficas de la misma, métodos de preparación de la misma, composición y aplicaciones
La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente china n.° CN201511030013.4, presentada el 31 de diciembre de 2015.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a una sal de derivado de quinolina y una forma cristalina, un método de preparación, una composición y un uso de los mismos.
Técnicas anteriores
El compuesto 3-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-6-(6-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)-1 H-[1,2,3]triazolo[4,5-¿>]pirazin-1 -il)metil)quinolina, abreviado como SPH1772 (la estructura se muestra a continuación), se ha descrito en la patente CN104109166A. SPH1772 es un inhibidor oral en investigación altamente potente y selectivo del receptor de tipo tirosina quinasa c-Met del factor de crecimiento de hepatocitos (HGF, Hepatocyte Growth Factor). SPH1772 se está desarrollando para el tratamiento de varios tumores sólidos, incluido el Cáncer de Pulmón No Microcítico (CPNM), cáncer de hígado, cáncer intestinal y cáncer de ovario, y otros cánceres.
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El polimorfismo (aparición de diferentes formas cristalinas) es una propiedad de algunas moléculas y complejos moleculares. Una sola molécula puede dar lugar a diferentes polimorfos con diferentes estructuras cristalinas y propiedades físicas como el punto de fusión, el comportamiento térmico (por ejemplo, medido mediante Análisis TermoGravimétrico-"ATG" o Calorimetría Diferencial de Barrido [CDB]), el patrón de Difracción de Rayos X en Polvo (DRXP o DRX en polvo), la identificación genética mediante absorción infrarroja y el espectro de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) de estado sólido. Se pueden utilizar una o más de una de estas técnicas para distinguir diferentes polimorfos de un compuesto.
El descubrimiento de materiales que tengan propiedades de procesamiento deseables, tales como la facilidad de manipulación, la facilidad de procesamiento, la estabilidad en almacenamiento y la facilidad de purificación, o pueden servir como formas cristalinas intermedias deseables que faciliten la purificación o conversión en otras formas polimórficas. Los polimorfos y solvatos de un compuesto farmacéutico o una sal del mismo también pueden proporcionar una oportunidad para mejorar el rendimiento de un producto farmacéutico. Amplía el repertorio de materiales disponibles para la optimización de la formulación para un científico de formulación, por ejemplo, proporcionando un producto con diferentes propiedades (p. ej., mejores características de procesamiento o manipulación, perfil de disolución mejorado o vida útil mejorada). Por al menos estas razones, existe la necesidad de una forma sólida de la base libre de SPH1772 y la sal de la misma.
Contenido de la presente invención
La presente invención proporciona una sal de compuesto de quinolina, y una forma cristalina, un método de preparación, una composición y un uso de los mismos. El ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo presenta las siguientes excelentes propiedades, incluida una alta estabilidad, gran biodisponibilidad, excelentes propiedades farmacocinéticas y mejor eficacia in vivo que la base libre de SPH1772.
La presente invención proporciona un compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772,
Figure imgf000002_0002
El ácido tartárico del compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772 es preferiblemente ácido L-tartárico (es decir, la estructura del compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772 es
Figure imgf000003_0001
La presente invención proporciona una forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo representado por el ángulo de difracción 20 que comprende máximos característicos a 7,5 ± 0,2°, 9,2 ± 0,2°, 14,5 ± 0,2°, 16,6 ± 0,2°, 20,3 ± 0,2° y 28,8 ± 0,2°; la diana utilizada en la difracción de rayos X en polvo es diana de Cu.
Preferiblemente, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo representado por el ángulo de difracción 20 que comprende máximos característicos en los valores que se muestran en la columna de la izquierda de la Tabla 1:
Tabla 1: Listado de máximos de DRXP de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772
Figure imgf000003_0002
Preferiblemente, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo representado por el ángulo de difracción 20 que comprende máximos característicos e intensidad relativa en los valores que se muestran en la Tabla 1.
Preferiblemente, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo representado por el ángulo de difracción 20 como se muestra en la Figura 1.
Preferiblemente, el punto de fusión de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 es 202 °C.
Preferiblemente, la CDB de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 tiene un máximo endotérmico principal a 199,4 °C (la CDB es calorimetría diferencial de barrido).
La forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 se puede preparar según el contenido descrito en las realizaciones de la presente solicitud y el conocimiento común en la técnica.
La presente invención también proporciona un método de preparación para la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 que comprende, en un disolvente orgánico, hacer reaccionar el compuesto SPH1772 con ácido tartárico; en donde el disolvente orgánico es un disolvente alcohólico, un disolvente de éster, un disolvente mixto de DCM:MeOH = 6:1 a 9:1 v/v, un disolvente de éter o un disolvente de cetona.
En el método de preparación para la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, el disolvente alcohólico es preferiblemente metanol; el disolvente de éster es preferiblemente acetato de etilo; el disolvente de éter es preferiblemente tetrahidrofurano; el disolvente de cetona es preferiblemente acetona. La proporción en volumen/masa del disolvente orgánico con respecto al SPH1772 es preferiblemente de 40 ml/g a 80 ml/g, más preferiblemente de 60 a 70 ml/g. La proporción molar del SPH1772 con respecto al ácido tartárico es preferiblemente de 1:2,0 a 1:2,2, más preferiblemente de 1:2,1; la temperatura de reacción es preferiblemente de 40 a 60 °C, más preferiblemente de 50 °C; el tiempo de reacción es preferiblemente de 24 h a 72 h, más preferiblemente de 24 h a 48 h.
El método de preparación para la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 comprende preferiblemente añadir el ácido tartárico a la "mezcla del compuesto SPH1772 y del disolvente orgánico". El ácido tartárico se añade preferiblemente durante 1 a 5 minutos, más preferiblemente 2 minutos; el ácido tartárico también puede participar en la reacción en forma de una "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico", en la "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico", la proporción en volumen/molar del disolvente orgánico con respecto al ácido tartárico es preferiblemente de 3,5:1 a 4,5:1 ml/mmol, más preferiblemente de 4:1 ml/mmol. Cuando el ácido tartárico participa en la reacción en forma de una "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico", la velocidad de adición de la "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico" es preferiblemente de 1 a 5 ml/min, más preferiblemente de 2,5 ml/min. El compuesto SPH1772 y el disolvente orgánico se mezclan preferiblemente mediante la adición del compuesto SPH1772 al disolvente orgánico, dando la "mezcla del compuesto SPH1772 y el disolvente orgánico".
El método de preparación para la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, una vez completada la reacción, puede además comprender un tratamiento posterior que incluya filtrar la solución de reacción, dando la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772. Después de la filtración, se puede incluir además una operación de lavado de la torta de filtración con el disolvente orgánico. Después de la filtración, se puede incluir además una operación de secado de la torta de filtración; el secado se realiza preferiblemente al vacío; el secado al vacío es preferiblemente de 40 a 60 °C, más preferiblemente de 50 °C.
La presente invención también proporciona un método de preparación para una forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, que es cualquiera de los siguientes métodos:
método 1: se somete la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un experimento de cristalización por infiltración de gas-líquido; en donde el buen disolvente es THF:H2O = 19:1 v/v; el antidisolvente es butanona (MEK);
método 2: se somete una solución de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en 1,4-dioxano a un experimento de cristalización por evaporación del disolvente a temperatura ambiente;
método 3: se somete la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un experimento de cristalización inducida por superpolímero; en donde cuando la proporción en masa de polivinilpirrolidona (PVP): alcohol polivinílico (PVA): cloruro de polivinilo (PVC): acetato de polivinilo (PVAC): hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC): metilcelulosa (MC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano; cuando la proporción en masa de policaprolactona (PCL): polietilenglicol (PEG): polimetilmetacrilato (PMMA): alginato de sodio (SA): hidroxietilcelulosa (HEC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano o tetrahidrofurano: agua = 19:1 v/v.
En la presente invención, el experimento de cristalización por infiltración de gas-líquido es un método convencional para preparar una forma cristalina en la técnica, y la operación específica comprende un recipiente pequeño que contiene una "solución saturada de un compuesto en un buen disolvente" abierto se coloca en un recipiente grande que contiene un antidisolvente, el recipiente grande se sella y se deja reposar, cuando el sólido precipita, se recoge el sólido; en donde el recipiente pequeño no se puede sumergir en el antidisolvente contenido en el recipiente.
En la presente invención, el método 1 del método de preparación para la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772 comprende preferiblemente que se puede preparar una solución saturada de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en el buen disolvente mezclando la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772. con el buen disolvente y recogiendo el sobrenadante; en donde la proporción de masa/volumen de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 con respecto al buen disolvente es preferiblemente de 4 a 6 mg/ml.
En la presente invención, el experimento de cristalización por evaporación de disolvente a temperatura ambiente es un método convencional para preparar una forma cristalina en la técnica, y la operación específica comprende que un recipiente que contiene una "solución transparente de un compuesto en un disolvente" se sella con una membrana de sellado y se coloca a temperatura ambiente, tras perforar la membrana de sellado con algunos orificios (p. ej., de 2 a 4 orificios), el disolvente se evapora de manera natural hasta secarse, dando un sólido.
En la presente invención, en el método 2 del método de preparación para la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, la solución de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en 1,4-dioxano puede comprender mezclar la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 con 1,4-dioxano, a continuación, recoger el líquido sobrenadante; la proporción en masa/volumen de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 con respecto al 1,4-dioxano es preferiblemente de 5 a 10 mg /ml.
En la presente invención, el experimento de cristalización inducida por superpolímero es un método convencional para preparar una forma cristalina en la técnica, y la operación específica comprende que, tras mezclar una solución saturada de un compuesto en un disolvente suficientemente con un superpolímero (normalmente, se utilizan ultrasonidos para mezclar lo suficiente), el recipiente se cubre con una membrana de sellado perforada, se evapora el disolvente a temperatura ambiente y el sólido se recoge.
En la presente invención, en el método 3 del método de preparación para la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, el volumen/masa de la solución saturada de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 con respecto al superpolímero es preferiblemente de 0,75:1 a 1,5:1.
La presente invención también proporciona una forma cristalina B de ditartrato de SPH1772 preparada mediante el método de preparación para la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772 mencionado anteriormente.
La presente invención también proporciona un método de preparación para una forma cristalina C de ditartrato de SPH1772, que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es W,W-dimetilformamida.
En la presente invención, el experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido es un método convencional para preparar una forma cristalina en la técnica, y la operación específica comprende que un recipiente pequeño abierto que contiene un compuesto se coloca en un recipiente grande que contiene un disolvente, el recipiente grande se sella y se deja reposar, cuando el sólido precipita, se recoge el sólido.
En la presente invención, en el método de preparación para la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772, la proporción de masa/volumen de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 con respecto al disolvente es preferiblemente de 4 a 7 mg/ml, más preferiblemente de 5 mg/ml.
La presente invención también proporciona una forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 preparada mediante el método de preparación para la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 mencionado anteriormente.
La presente invención también proporciona un método de preparación para una forma cristalina D de ditartrato de SPH1772, que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es DMSO.
En la presente invención, en el método de preparación para la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772, la proporción de masa/volumen de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 con respecto al disolvente es preferiblemente de 4 a 7 mg/ml, más preferiblemente de 5 mg/ml.
La presente invención también proporciona una forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 preparada mediante el método de preparación para la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 mencionado anteriormente.
La presente invención también proporciona un uso de ditartrato de SPH1772 en la preparación de un inhibidor de la tirosina quinasa c-Met.
La presente invención también proporciona un uso de ditartrato de SPH1772 en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad asociada con la sobreexpresión o actividad de la tirosina quinasa c-Met.
La presente invención también proporciona un uso de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en la preparación de un inhibidor de tirosina quinasa c-Met.
La presente invención también proporciona un uso de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad asociada con la sobreexpresión o actividad de la tirosina quinasa c-Met.
La presente invención también proporciona una composición que comprende una dosis eficaz de ditartrato de SPH1772 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también proporciona una composición que comprende una dosis eficaz de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también proporciona la forma cristalina de ditartrato de SPH1772 seleccionada del grupo que consiste en la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 para usar como un inhibidor de la tirosina quinasa c-Met.
La presente invención también proporciona un uso de la forma cristalina de ditartrato de SPH1772 seleccionada del grupo que consiste en la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la profilaxis de una enfermedad asociada con la sobreexpresión o actividad de la tirosina quinasa c-Met.
La presente invención también proporciona una composición que comprende la forma cristalina de ditartrato de SPH1772 seleccionada del grupo que consiste en la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
En la presente invención, el excipiente farmacéuticamente aceptable es un excipiente farmacéuticamente convencional en la técnica, la selección del excipiente farmacéuticamente aceptable varía dependiendo de la vía de administración y de la característica de acción, preferiblemente incluye cargas, diluyentes, adhesivos, agentes humectantes, disgregantes, lubricantes, emulsionantes y agentes de suspensión.
En la presente invención, la vía de administración de la composición farmacéutica puede ser administración oral, inyección (intravenosa, intramuscular, subcutánea e intracoronaria), administración sublingual, administración bucal, administración rectal, administración transuretral, administración transvaginal, administración nasal, administración por inhalación o administración tópica, preferiblemente administración oral.
En la presente invención, la enfermedad asociada con la sobreexpresión o actividad de la tirosina quinasa c-Met es una enfermedad convencional provocada por el cambio de la tirosina quinasa c-Met en la técnica, preferiblemente incluye cáncer, sarcoma musculoesquelético, sarcoma de tejidos blandos, malignidad hematopoyética y otros tumores. El cáncer incluye preferiblemente cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de cuello de útero, cáncer de colon, cáncer de esófago, cáncer de estómago, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de hígado, cáncer nasofaríngeo, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata y cáncer de tiroides; el sarcoma musculoesquelético preferiblemente incluye osteosarcoma, sarcoma sinovial y rabdomiosarcoma; el sarcoma de tejidos blandos incluye preferiblemente histocitoma/fibrosarcoma fibroso maligno, leiomiosarcoma y sarcoma de Kaposi; la neoplasia maligna hematopoyética incluye preferiblemente mieloma múltiple, linfoma, leucemia de linfocitos T del adulto, leucemia mieloide aguda y leucemia mielógena crónica; los otros tumores incluyen preferiblemente tumor de glioblastoma, astrocitoma, melanoma, mesotelioma y carcinosarcoma embrionario.
Salvo que se indique lo contrario, en la presente invención, el ácido tartárico generalmente se refiere a ácido L-tartárico. Por ejemplo, el ácido tartárico contenido en el ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina A a D del mismo se refiere generalmente a ácido L-tartárico. La estructura del ácido L-tartárico es
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En la presente solicitud, la sal del compuesto de quinolina SPH1772 o el polimorfo del mismo (el ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo) se caracteriza generalmente por datos gráficos "como se muestra en la figura". Estos datos incluyen (p. ej.) patrón de difracción de rayos X en polvo, espectro FTIR (Fourier Transform Infrared Spectroscopy, espectroscopia infrarroja transformada de Fourier) y espectro de RMN de estado sólido. Un experto comprenderá que estas representaciones de los datos pueden estar sujetas a pequeños cambios, tales como la intensidad relativa del máximo y la posición del máximo, debido a factores tales como cambios en la respuesta del instrumento, y cambios en la concentración y pureza de la muestra que son bien conocidos por el experto. No obstante, el experto en la técnica podrá comparar fácilmente los datos gráficos de las figuras de la presente memoria con los datos gráficos generados a partir de una forma de cristal desconocida y confirmar si los dos conjuntos de datos gráficos caracterizan la misma forma de cristal o dos formas de cristal diferentes. En la presente memoria, se hace referencia al ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo como caracterizado por datos gráficos "como se muestra en la figura" y, por lo tanto, se entenderá que puede incluir cualquier forma cristalina de ditartrato de SPH1772 o forma cristalina A del mismo caracterizada por datos gráficos con cambios menores (como los conocidos por el experto en la técnica) en comparación con las figuras de la presente invención.
El término DRXP y la expresión DRX en polvo son utilizados indistintamente en la bibliografía científica por los expertos en la técnica del análisis de difracción de rayos X en polvo, y la presente solicitud no hace distinción entre estas dos expresiones o sus abreviaturas.
Como se emplea en la presente memoria, salvo que se indique lo contrario, la DRXP se realiza utilizando una radiación de Cu Ka de longitud de onda A = 1,5406 Á.
Los artículos (p. ej., la mezcla de reacción) se pueden caracterizar en la presente memoria por estar a, o permitir que alcancen, la "temperatura ambiente", a menudo abreviada como "TA". Esto significa que la temperatura del artículo es cercana a la temperatura del espacio, o igual que la temperatura del espacio, pudiendo ser un ejemplo del espacio la sala o la vitrina donde se ubica el artículo. Normalmente, la temperatura ambiente es de aproximadamente 20 °C a aproximadamente 30 °C, o de aproximadamente 22 °C a aproximadamente 27 °C, o de aproximadamente 25 °C. El método o la etapa de la presente memoria pueden denominarse "durante la noche". Se refiere a, por ejemplo, el intervalo de tiempo de un método o una etapa que abarca la noche cuando el método o la etapa puede no observarse activamente. El intervalo de tiempo es de aproximadamente 8 a aproximadamente 20 horas, o de aproximadamente 10 a 18 horas, normalmente de aproximadamente 16 horas.
Como se emplea en la presente memoria, la expresión "presión reducida" se refiere a una presión de aproximadamente 1 kPa (10 mbar) a aproximadamente 5 kPa (50 mbar).
Como se emplea en la presente memoria, el término "aislado" se refiere a cualquiera de los siguientes casos: la sal de SPH1772 o el polimorfo de la misma en la presente invención, y correspondiente a SPH1772 o al polimorfo de la sal de SPH1772 físicamente separado de la mezcla de reacción formada a partir del mismo.
La presente invención se refiere a un Ingrediente Farmacéutico Activo IFA (p. ej., ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo) que contiene un isómero óptico individual de SPH1772, una mezcla de enantiómeros individuales o un racemato.
En la presente invención, el ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo generalmente presenta una higroscopicidad reducida. Debido a que estas sales no tienen una absorción de agua tan fuerte como las sales comparativas de la técnica, tienen ventajas en una formulación galénica.
Preferiblemente, en la presente invención, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 está al menos en forma de cristal parcial, y un mayor grado de cristalinidad produce una sal de SPH1772 más estable.
Preferiblemente, en la presente invención, el ditartrato de SPH1772 tiene un contenido de agua de menos del 0,1 % al 8 % en peso, más preferiblemente del 0,5 % al 5 % en peso, más preferiblemente del 0,8 % al 3,5 % en peso. En la presente invención, el ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo existe preferiblemente en una forma aislada y sustancialmente pura tal como >95 % en peso, preferiblemente >98 % en peso, más preferiblemente >99 % en peso.
En la presente invención, el ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo existe preferiblemente en forma de micropartícula.
Los reactivos y materias primas utilizados en la presente invención están disponibles en el mercado.
El efecto positivo y progresivo de la presente invención es que el ditartrato de SPH1772 o la forma cristalina A del mismo expresa las siguientes excelentes propiedades que incluyen alta estabilidad, gran biodisponibilidad, excelentes propiedades farmacocinéticas y mejor eficacia in vivo que la base libre de SPH1772.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 es un patrón de DRXP de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772.
La Figura 2 es el patrón de DRXP de la forma cristalina A de SPH1772.
La Figura 3 es el patrón de DRXP de la forma cristalina B de SPH1772.
La Figura 4 es el patrón de DRXP de la forma cristalina A del monotartrato de SPH1772.
La Figura 5 es una curva de concentración de fármaco-tiempo del compuesto de ensayo en rata obtenida en la Realización del efecto 3.
La Figura 6 es un histograma del área bajo la curva del compuesto de ensayo en rata obtenido en la Realización del efecto 3.
La Figura 7 es un histograma de la concentración máxima del compuesto de ensayo en rata obtenido en la Realización del efecto 3.
La Figura 8 es una curva de crecimiento del volumen tumoral en ratones de cada grupo de tratamiento y grupo de control en el modelo de hepatoma humano MHCC97H.
La Figura 9 es una curva de crecimiento del volumen tumoral en ratones de cada grupo de tratamiento y grupo de control en el modelo de tumor de pulmón humano LU2503.
Descripción detallada de la realización preferida
Las siguientes realizaciones ilustran adicionalmente la presente invención, pero la presente invención no se limita a las mismas. Los métodos experimentales que no especifican las condiciones específicas en las siguientes realizaciones se seleccionan según métodos y condiciones convencionales, o según la descripción del producto. En las realizaciones de la presente invención, la unidad M se refiere a mol/l, nM se refiere a nmol/l, mM se refiere a mmol/l.
Salvo que se indique lo contrario, el ácido tartárico en las siguientes realizaciones es ácido L-tartárico.
Salvo que se indique lo contrario, los dispositivos y métodos de ensayo incluidos en las realizaciones de la presente invención fueron los siguientes:
Patrón de DRXP: las muestras se analizaron en un difractómetro de rayos X en polvo PANalytical Empyrean; las condiciones de medición fueron las siguientes:
Figure imgf000008_0002
Contenido de humedad residual: determinado según el método de Karl Fischer como se describe en Ph. Eur. 6a edición, 2008, sección 2.5.12. Las mediciones se realizaron utilizando un valorador Karl Fischer DL31 de Mettler Toledo. Normalmente, se analizaron muestras de sal de 50 mg a 100 mg.
IR: Tipo Perkin Elmer de modo de reflexión difusa;
CDB: calorímetro de barrido diferencial TA Q200/2000;
ATG: Analizador termogravimétrico TA Q500/5000;
Figure imgf000008_0001
Punto de fusión: aparato de intervalo de fusión Lab India Visual;
HPLC (High Performance Liquid Chromatography): cromatografía líquida de alto rendimiento;
La cromatografía líquida de alto rendimiento se realizó en HPLC Agilent 1100 y 1260.
Figure imgf000009_0001
RMN en solución: El espectro de resonancia magnética nuclear de la solución se determinó en un espectrómetro de RMN Bruker 400M con DMSO-afe como disolvente.
Realización 1: forma cristalina A de SPH1772
Se cargó una mezcla de 5,0 g (11,8 mmol) de SPH 1772 y 100 ml de DMF en un matraz de fondo redondo de tres bocas equipado con una aguja magnética, un termómetro y un globo de nitrógeno, se calentó hasta 110 °C, se disolvió lentamente hasta obtenerse una solución transparente, se agitó a esta temperatura durante 30 minutos, se detuvo el calentamiento y se dejó reposar durante la noche a temperatura ambiente. Se filtró la mezcla y se lavó la torta de filtración con 20 ml de DMF. Se transfirió la torta de filtración anterior a un matraz de fondo redondo de tres bocas equipado con una aguja magnética, un termómetro y un balón de nitrógeno, y se añadieron 100 ml de etanol anhidro. Se calentó la mezcla hasta 50 °C y se agitó a esta temperatura durante 2 horas, se detuvo el calentamiento, y se enfrió hasta la temperatura ambiente. Se filtró la mezcla y se lavó la torta filtrante con 20 ml de etanol anhidro. Se colocó el sólido en un horno de vacío a 50 °C durante 2 horas, dando 4,0 g (80 %) de producto blanco. El listado de máximos de DRXP de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 se muestra a continuación; el patrón de DRXP se muestra en la Figura 2.
Figure imgf000009_0002
Figure imgf000010_0001
La CDB mostró un máximo endotérmico principal a 273,0 °C.
IR (cm-1): 3432,3, 1618,2, 1575,9, 1541,7, 1195,9, 1126,6, 1099,6, 917,8, 817,7 y 616,9.
Disolvente residual - no detectado.
Punto de fusión = 270,5 °C.
RMN de 1H (5ppm, DMSO-de,400 MHz) 9,22 (s, 1H), 9,17 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,46 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,76 (dd, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 6,15 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,90 (s, 3H).
Realización 2: preparación de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772
Se añadió acetato de etilo (10 ml) a la base libre de SPH1772 (250,8 mg, 0,59 mmol), se agitó la mezcla a temperatura ambiente, dando una suspensión blanca, se añadió una solución de ácido tartárico (187,5 mg, 1,25 mmol) en acetato de etilo (5 ml) durante dos minutos. La mezcla se agitó a 50 °C durante 24 horas, luego se filtró y se enjuagó la torta de filtración con MeOH (5 ml), se transfirió el sólido a un horno de vacío a 50 °C y se secó durante la noche, dando 370,5 mg (rendimiento del 86,3 %) de sólido blanco.
La CDB mostró un máximo endotérmico principal a 199,4 °C.
El patrón de DRXP se muestra en la Figura 1, el listado de máximos de DRXP se muestra a continuación:
Figure imgf000010_0002
Figure imgf000011_0002
IR (cm-1): 3415,3, 3225,4, 3117,1,2356,6, 1742,6, 1714,0, 1579,5, 1541,8, 1191,2, 1135,7, 1076,4, 873,7 y 608,2. Disolvente residual - no detectado.
Punto de fusión = 202 °C.
La RMN de 1H indicó la existencia de tartrato.
RMN de 1H (5ppm, DMSO-afe, 400 MHz) 9,22 (s, 1H), 9,18 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,46 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,99 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,76 (dd, Ji = 8,4 Hz, J2= 2,0 Hz, 1H), 6,16 (s, 2H), 4,33 (s, 4H), 3,95 (s, 3H), 3,90 (s, 3H).
Realización 3: estudio del polimorfismo del tartrato de SPH1772
La forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 utilizada en esta realización se preparó en su totalidad a partir de la Realización 2.
El estudio del polimorfismo se realizó en 96 tipos de condiciones, incluida la adición de antidisolvente, la agitación a temperatura ambiente, la infiltración de gas-sólido, la infiltración de gas-líquido, enfriando lentamente, la evaporación del disolvente a temperatura ambiente y la cristalización inducida por superpolímero, etc. El sólido obtenido en el ensayo ha sido completamente separado y caracterizado.
(1) Adición de antidisolvente
Se añadieron 15 mg de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un vial de 20 ml, se añadió un buen disolvente apropiado para disolver el sólido, se añadió gota a gota un antidisolvente con agitación. Una vez precipitado el sólido, el sólido se separó por centrifugación. Si se añadieron 15 ml de antidisolvente y no precipitó ningún sólido después de agitar durante la noche, se dejó que la solución se evaporara a temperatura ambiente y se aisló el sólido de la misma. En la Tabla 2, se muestra el resultado.
Tabla 2: antidisolvente añadido y forma cristalina
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Figure imgf000012_0001
Nota: En la tabla, acetona:H2O = 4:1, v/v; * indica que el sólido se obtiene mediante agitación durante la noche a 5 °C; ** indica que el sólido se obtiene por evaporación del disolvente a temperatura ambiente.
El método de adición de antidisolvente se realizó en 18 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así formas cristalinas que incluían la forma cristalina A del monotartrato de SPH1772, la forma cristalina A de SPH1772 y la forma cristalina B de SPH1772.
(2) Método de infiltración de gas-sólido
Se añadieron 10 mg de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un vial de 3 ml, Se añadieron 2 ml de disolvente a un vial de 20 ml, el vial de 3 ml se colocó abierto en el vial de 20 ml, y el vial de 20 ml se selló. El sólido se recogió después de que el vial permaneciera a temperatura ambiente durante 7 días. En la Tabla 3, se muestra el resultado.
Tabla 3: el disolvente utilizado en el experimento de infiltración de gas-sólido y la forma cristalina obtenida
Figure imgf000012_0003
El método de infiltración de gas-sólido se realizó en 14 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así formas cristalinas que incluían la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772.
(3) Método de agitación a temperatura ambiente:
Se añadieron 15 mg de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un vial de 1,5 ml, se añadió 1,0 ml de diferentes disolventes o disolventes mixtos para formar una suspensión, que se sometió a agitación magnética con una temperatura establecida de 25 °C (800 rpm), después de aproximadamente 3,5 días, el sólido se separó por centrifugación y la solución que se volvió transparente tras agitar se evaporó a temperatura ambiente, y se separó el sólido. En la Tabla 4, se muestra el resultado.
Tabla 4: el disolvente utilizado en el experimento de agitación a temperatura ambiente y la forma cristalina obtenida
Figure imgf000012_0002
Figure imgf000013_0001
en donde, aa se refiere a la actividad del agua.
El método de agitación a temperatura ambiente se realizó en 19 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772.
(4) Método de agitación a 50 °C:
se añadieron 15 mg de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un vial de vidrio de 1,5 ml, se añadieron respectivamente 0,5 ml de disolvente enumerado en la Tabla 5 para formar una suspensión, que se agitó a 50 °C durante 3,5 días, luego, el sólido se recogió por centrifugación y se sometió a medición de DRXP. En la Tabla 5, se muestra el resultado.
Tabla 5: el disolvente utilizado en el experimento de agitación a 50 °C y la forma cristalina obtenida
Figure imgf000013_0002
El experimento de agitación a 50 °C se realizó en 14 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772.
(5) Experimento de enfriamiento lento
Se añadieron 30 mg de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un vial de 3 ml, Se añadió 1,0 ml de diferentes disolventes, la mezcla se agitó a 50 °C durante aproximadamente 2 horas y se filtró, dando una solución saturada de la misma, la solución se enfrió hasta 5 °C a una velocidad de 0,1 °C/min, y luego precipitó un sólido. La muestra en la que no precipitó el sólido se evaporó a temperatura ambiente, y se separó el sólido. En la Tabla 6, se muestra el resultado.
Tabla 6: el disolvente utilizado en el experimento de enfriamiento lento y la forma cristalina obtenida
Figure imgf000014_0001
Nota: * se refiere a que el sólido se obtuvo mediante la evaporación del disolvente a temperatura ambiente.
El experimento de enfriamiento lento se realizó en 6 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así un sólido amorfo de tartrato de SPH1772.
(5) Experimento de infiltración de gas-líquido:
Se añadieron 15 mg de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un vial de 3 ml, se añadieron respectivamente 2,5 ml de disolvente enumerado en la Tabla 7, se filtró, se colocó el sobrenadante en un vial de 3 ml, se utilizó otro vial de 20 ml al que se añadieron aproximadamente 3 ml de antidisolvente, se colocó el vial de 3 ml abierto en un vial de 20 ml, luego se selló el vial de 20 ml y se dejó reposar a temperatura ambiente. Cuando se observó un precipitado, el precipitado se midió mediante DRXP. En la Tabla 7, se muestra el resultado.
Tabla 7: el disolvente en el experimento de infiltración de gas-líquido y la forma cristalina obtenida
Figure imgf000014_0002
Nota: THF:H2O = 19:1, v/v.
La difusión de gas-líquido se realizó en 13 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina A de la base libre de SPH1772.
(7) Experimento de cristalización por evaporación de disolvente a temperatura ambiente
Se añadieron 15 mg de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 a un vial de 3 ml, se añadieron 1,5 ml-3,0 ml de disolvente correspondiente o disolvente mixto para preparar una solución transparente, o para obtener una solución transparente tras la filtración, se selló la solución con una membrana de sellado y se colocó a temperatura ambiente, se perforó con 2 a 4 orificios para que se evapora de manera natural, dando un sólido.
Tabla 8: el disolvente en la cristalización por evaporación del disolvente a temperatura ambiente y la forma cristalina obtenida
Figure imgf000015_0001
Nota: N/D se refiere a poco sólido.
El experimento de cristalización por evaporación del disolvente a temperatura ambiente se realizó en 5 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así la forma cristalina B del tartrato de SPH1772.
(8) Experimento de cristalización inducida por superpolímero
Se pesaron 15 mg de compuesto y se formularon en una solución saturada en el buen disolvente enumerado en la Tabla 9, se añadieron de 1,5 a 3,0 ml por porción de la solución saturada a un vial de 3 ml que contenía 2 mg de polímero mixto correspondiente. Se mezcló la mezcla suficientemente por ultrasonidos, se cubrió el vial con una membrana de sellado, se perforó con algunos orificios en la membrana de sellado y la mezcla se evaporó a temperatura ambiente, el sólido se recogió y se caracterizó por DRXP. En la Tabla 9, se muestra el resultado.
Tabla 9: el disolvente en el experimento de cristalización inducida por superpolímero y la forma cristalina obtenida
Figure imgf000015_0002
Nota: la proporción en masa del superpolímero A: polivinilpirrolidona (PVP): alcohol polivinílico (PVA): cloruro de polivinilo (PVC): acetato de polivinilo (PVAC): hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC): metilcelulosa (MC) es de 1:1:1:1:1:1. La proporción en masa de superpolímero B: policaprolactona (PCL): polietilenglicol (PEG): polimetilmetacrilato (PMMA): alginato de sodio (SA): hidroxietilcelulosa (HEC) es de 1:1:1:1:1.
El experimento de cristalización inducida por superpolímero se realizó en 8 tipos de condiciones experimentales, obteniéndose así la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772.
En las presentes realizaciones, según el resultado de la DRXP, se obtuvieron cuatro formas cristalinas de ditartrato (A a D), el resultado de la identificación indicó que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 era anhidra, la forma cristalina B y la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 eran la forma cristalina de desproporción de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 era un solvato de DMSO. Debido a la posible estabilidad débil de la forma cristalina B, la forma cristalina C y la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 fue la forma cristalina preferida. Al mismo tiempo, también se obtuvieron la forma cristalina A del monotartrato de SPH1772 y la forma cristalina B de SPH1772, la forma cristalina A del monotartrato de SPH1772 era anhidra y la forma cristalina B de SPH1772 era un solvato de DMAc.
Los datos de caracterización son los siguientes:
(1) Forma cristalina A del monotartrato de SPH1772
La CDB mostró un máximo endotérmico principal a 209,2 °C. Disolvente residual: acetona, acetato de etilo - no detectado. Punto de fusión = 202,1 °C. La Rm N de 1H confirmó la forma cristalina A del monotartrato de SPH1772.
RMN de 1H (5ppm, DMSO-ds, 400 MHz) 9,22 (s, 1H), 9,18 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,46 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,99 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,76 (dd, Ji = 8,4 Hz, J2= 2,0 Hz, 1H), 6,15 (s, 2H), 4,28 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,90 (s, 3H).
El patrón de DRXP se muestra en la Figura 4, los máximos de DRXP se enumeran a continuación:
Figure imgf000016_0002
(2) Forma cristalina B de SPH1772
Punto de fusión = 263,2 °C. La CDB mostró máximos endotérmicos principales a 113,9 °C, 171,7 °C y 268,8 °C. Disolvente residual: DMAc = 51,5 %. La RMN de 1H confirmó la forma cristalina B de SPH1772.
RMN de 1H (5ppm, DMSO-afe, 400 MHz) 9,22 (s, 1H), 9,17 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,46 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,99 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,76 (dd, Ji = 8,4 Hz, J2 = 2,0 Hz, 1H), 6,15 (s, 2H), 3,95 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 2,94 (s, 15H), 2,79 (s, 15H), 1,96 (s, 15H).
El patrón de DRXP se muestra en la Figura 3, los máximos de DRXP se muestran a continuación:
Figure imgf000016_0001
Realización del efecto 1: actividad inhibidora de la actividad de tirosina quinasa c-Met
Materiales y reactivos:
quinasa c-Met, adquirida en Carna Biosciences, Inc. artículo n° 08-151;
dimetilsulfóxido, adquirido en Sigma-Aldrich, artículo n.° D8418;
ATP, adquirido en Sigma-Aldrich, artículo n.° A7699;
solución de TDT, adquirido en Sigma-Aldrich, artículo n.° 43816;
solución de EDTA, adquirida en GIBCO, artículo n.° 15575;
kit de ensayo kit HTRF kinEASE-TK y componentes relacionados, adquirido en Cisbio Bioassays, en donde el artículo n.2 del kit HTRF kinEASE-TK es 62TK0PEC;
placa de compuesto de 96 pocillos, adquirida en Thermo Scientific, artículo n.° 267245;
placa de 384 pocillos, adquirida en Greiner Bio-One, artículo n.° 784075;
Se adquirieron otros reactivos químicos convencionales en Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
El ensayo de quinasa in vitro utiliza tecnología de fluorescencia homogénea de resolución temporal (HTRF, Homogeneous Time-Resolved Fluorescence) para seleccionar los compuestos de ensayo en la quinasa c-Met a una concentración de ATP de Km (en donde, Km representa la constante de Michaelis, la unidad es mol/l, que es la concentración de ATP a la que la velocidad de reacción enzimática es la mitad de la velocidad máxima de reacción). Durante el experimento, la concentración inicial del compuesto de ensayo se seleccionó para que fuera de 111,11 nM, cada compuesto estableció 10 concentraciones diluidas en serie, el factor de dilución fue de 3, cada concentración estableció 2 pocillos duplicados, se utilizó INCB28060 (Capmatinib) como patrón de control.
Todas las muestras se formularon a una solución madre 10-2 M utilizando DMSO y se almacenaron en pequeñas cantidades a -80 °C para usar.
Método experimental:
1, Se prepara un tampón de reacción x1 (el tampón de reacción adquirido estaba a alta concentración, se requirió su dilución cuando se usó, se diluyó hasta la concentración final requerida para el experimento, que se denominó tampón de reacción x1).
Se prepara tampón de reacción x1 adecuado para cada quinasa utilizando tampón enzimático x5 en el kit HTRF kinEASE-TK.
2, Se prepara y se transfiere compuesto x5 (p. ej., la concentración final de compuesto requerida para el experimento fue de 1 pm, a continuación, la concentración de la muestra se formuló primero hasta 5 pm, denominada compuesto x5).
1) Dilución del compuesto: se tomó una solución madre 10 mM del compuesto de ensayo, en una placa de compuesto de 96 pocillos, se usó DMSO para diluir la solución con múltiples etapas para preparar compuesto x100 como concentración inicial, a continuación, se utilizó esta concentración como la primera concentración, se utilizó diluida con factor de dilución de 3 con DMSO para preparar 10 concentraciones en serie; a continuación, se añadió 1 pl de cada dilución en serie a 19 pl de tampón de reacción x1 para preparar el compuesto x5 para usar;
2) se transfiere compuesto x5: se transfirieron 2 pl de compuesto x5 de una placa de 96 pocillos a una placa de 384 pocillos; se añadieron al pocillo de control libre de compuesto 2 pl del siguiente líquido: 19 pl de tampón de reacción x1 con una adición de 1 pl de DMSO; se añadieron 2 pl de EDTA 250 mM al pocillo de control Min.
En la presente realización, los datos de la actividad inhibidora del compuesto de ensayo sobre la actividad de tirosina quinasa c-Met se muestran en la Tabla 10.
Tabla 10: los datos de la actividad inhibidora del compuesto de ensayo sobre la actividad de tirosina quinasa c-Met
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La CI50 de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina A de SPH1772 sobre la inhibición de la tirosina quinasa c-Met fue menor que la del compuesto de referencia positivo INCB28060, lo que indica que la actividad inhibidora in vitrofue mayor que la de INCB28060.
Realización del efecto 2: actividad inhibidora sobre la proliferación de células H1993 de cáncer de pulmón humano Materiales y reactivos:
kit de recuento celular Cell Counting Kit-8, adquirido en Dojindo, artículo n.° CK04;
célula de cáncer de pulmón humano H1993, adquirida en ATCC, artículo n.° CRL-5909;
RPMI 1640, adquirido en GIBCO, artículo n° 11875-093;
estrep./pen., adquirida en GIBCO, artículo n° 15240-062;
suero fetal bovino FBS (Fetal Bovine Serum), adquirido en GIBCO, artículo n° 10099-141;
placa de cultivo celular de 96 pocillos, adquirida en Coming, artículo n.° 3599;
placa de compuesto de 96 pocillos, adquirida en Thermo Scientific, artículo n.° 267245;
Se adquirieron otros reactivos químicos convencionales en Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.
En la presente realización, se utilizó el reactivo del kit recuento celular Cell Counting Kit-8 (CCK-8) para seleccionar el compuesto SPH1772 y la sal del mismo para inhibir la proliferación de células tumorales contra la estirpe celular H1993 de cáncer de pulmón humano, que se utilizó para evaluar la actividad inhibidora in vitro de los compuestos de ensayo sobre esta estirpe celular.
CCK-8 es un kit para detectar la proliferación celular, la supervivencia celular y la citotoxicidad, y un método alternativo al método de MTT. Durante el experimento, la concentración inicial del compuesto de ensayo se seleccionó para que fuera de 111,11 nM, cada compuesto estableció 9 concentraciones diluidas en serie, el factor de dilución fue de 3, cada concentración estableció 2 pocillos duplicados, se utilizó INCB28060 (Capmatinib) como patrón de control.
Todas las muestras se formularon a una solución madre 10-2 M con DMSO y se almacenaron en pequeñas cantidades a -80 °C para usar.
Método experimental:
1, Cultivo celular e inoculación: el primer día del experimento, se tomaron células cultivadas normales, cuando las células estaban en la fase de crecimiento exponencial, las células se dispersaron por digestión y, a continuación, se inocularon en una placa de cultivo celular de 96 pocillos a una densidad de 5,5 x 104 células/ml (que representa 55000 células por ml), 90 pl por pocillo; una vez completada la inoculación, se colocó la microplaca a 37 °C en condiciones de CO2 al 5 % durante la noche.
2, Dosificación a las células: el segundo día del experimento, se sacó la microplaca de la incubadora, se añadió compuesto x10 a cada pocillo de la microplaca, se añadieron 10 pl por pocillo, cada concentración estableció 2 pocillos duplicados, cada compuesto tenía 9 concentraciones de dosificación. Según diferentes estirpes celulares, la concentración inicial de cada compuesto fue diferente.
3, Adquisición de datos: se incubaron el compuesto y las células durante 72 horas, se sacó la microplaca que contenía las células de la incubadora, se añadieron 10 pl de solución de reacción del kit de recuento celular Cell Counting Kit-8 a cada pocillo y se colocó la microplaca en una incubadora durante 2-3 horas. Se midieron los valores de absorbancia a 450 nm en la Flexstation 3 y se estableció el valor de 650 nm como la longitud de onda de referencia.
4, Se calculó la actividad inhibidora in vitro del compuesto mediante la siguiente fórmula: velocidad de inhibición de la proliferación celular: velocidad de inhibición (%) = (valor de control de la señal- valor de dosificación de la señal)/valor de control de la señal x 100 %. Según la velocidad de inhibición de cada concentración, se utilizó el método LOGIT para calcular la concentración inhibidora del 50 % (IC50).
Tabla 11: actividad inhibidora in vitro del compuesto de ensayo sobre la proliferación de la estirpe celular H1993
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La forma cristalina A de SPH1772 y la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 presentan una mejor actividad inhibidora sobre la proliferación de células H1993 que el compuesto de referencia positivo INCB28060, y un efecto inhibidor más potente sobre la proliferación de la estirpe celular H1993 in vitro por debajo del nivel nM.
Realización del efecto 3: Estudio farmacocinético en ratas
Fármacos, animales y reactivos:
Los compuestos experimentales analíticos y en animales fueron proporcionados por Central Research Institute Pharmacy. El acetonitrilo era un reactivo puro de HPLC (Merck), el ácido fórmico (HCOOH) era un reactivo puro de HPLC fabricado por CNW. Otros reactivos orgánicos puros analíticos fueron proporcionados por Shanghai Chemical Reagent Co., Ltd. de Sinopharm (Grupo). Se preparó agua pura analítica a partir de agua desionizada mediante el sistema de purificación de agua MilliQ.
Ratas SD, macho, 180-200 g, proporcionadas por Shanghai Sciple Rubicam Ex Animal Co., Ltd.
Instrumentos experimentales: El sistema de análisis de cromatografía líquida/espectrometría de masas (LC/MS/MS, Liquid Chromatography/Mass Spectrometry) consistía en Waters AcQuity UPLC en conexión en serie con el detector de espectrómetro de masas IFA 4000 Q-trap.
Método experimental:
Se sometieron a ultrasonidos todas las soluciones madre del compuesto de ensayo y se calentaron para aclararse, y se formularon hasta una solución 25 nM con DMSO.
Todas las muestras se dosificaron a 20 gmol/kg.
Las ratas SD se dividieron en 3 grupos (tres ratas por grupo), las ratas recibieron por administración intragástrica la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina A de SPH1772 e hidrocloruro de INCB28060 (8 ml/kg, 2,5 mM) a una dosis de 20 gmol/kg, respectivamente. Se recogieron muestras de sangre (aproximadamente 0,4 ml en cada punto de tiempo) a través del plexo venoso oftálmico antes de la administración intragástrica, y 5, 15, 30, 60, 90, 120, 240, 360, 480, 720 y 1440 min después de la administración intragástrica, respectivamente. La muestra de sangre se centrifugó a 8000 rpm durante 5 min, el plasma se recogió en un tubo de centrífuga y se almacenó a -20 °C para usar.
Tratamiento de la muestra de plasma: se precipitaron las proteínas en 50 gl de la muestra de plasma con 200 gl de acetonitrilo que contenía patrón interno (Propranolol (PRO), 2,5 ng/ml). Se agitó con formación de vórtice durante 10 min, se centrifugó a 6000 g durante 10 min, se tomó el sobrenadante y se diluyó 5 veces con la fase móvil, y el sobrenadante se inyectó en una placa de 96 pocillos para su análisis.
Método de medición de la muestra:
1, Instrumentos
Sistema de cromatografía líquida: Sistema de cromatografía líquida Acquity UPLC (que incluía bomba de infusión binaria, muestreador automático, horno de columna, desgasificador), Waters Corporation, EE.UU.
Sistema de MS/MS: espectrómetro de masas de triple cuadrupolo IFA 4000 Q-Trap con ionización por electronebulización (ESI, ElectroSpray lonization), Applied Biosystems, EE.UU.
Adquisición de datos: Software Analyst 1.5.1, Applied Biosystems, EE.UU.
2, Condiciones de la LC
Columna analítica: columna BEH C18, tamaño de partícula de 1,7 gm, 50 x 2,1 mm de D.I., Waters Corporation, EE.UU.
Caudal: 0,3 ml/min; volumen de inyección: 2 gl; temperatura de la columna de 45 °C. El procedimiento de elución en gradiente fue:
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3, Condiciones de la MS
La fuente de iones fue una fuente de ionización por electronebulización (Turbo lonspray, ESI); la tensión de electronebulización fue de 5500 V; la temperatura fue de 500 °C; la presión del gas 1 de la fuente de iones (N2) fue de 344,7 kPa (50 psi); la presión del gas 2 de la fuente de iones (N2) fue de 344,7 kPa (50 psi); la presión del gas de cortina (N2) de 137,8 kPa (20 psi); la presión del gas de colisión (CAD) fue media; el tiempo de barrido fue de 100 ms; la detección en el modo de iones positivo; el modo de barrido fue el monitoreo de reacciones múltiples (MRM), la reacción iónica y la energía de colisión (EC) para el análisis cuantitativo, y el potencial de desagrupamiento (PD) se muestran en la siguiente tabla:
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El intervalo lineal de la curva patrón de SPH1772 en plasma de rata fue de 0,01 a 22,5 gM, el límite inferior de cuantificación fue de 0,01 gM. El intervalo lineal de la curva patrón de hidrocloruro de INCB28060 en plasma de rata fue de 0,002 a 5 pM, el límite inferior de cuantificación fue de 0,002 pM. Los parámetros farmacocinéticos in vivo de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, la forma cristalina A de SPH1772 e hidrocloruro de INCB28060 se muestran en las Tablas 12 a 14. La curva de concentración de fármaco-tiempo del compuesto de ensayo en ratas se muestra en la Figura 5, y el histograma del área bajo la curva (AUC(0-t)) del compuesto de ensayo en ratas se muestra en la Figura 6; el histograma de la concentración máxima (Cmáx) del compuesto de ensayo en ratas se muestra en la Figura 7.
Tabla 12: concentración en plasma de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en ratas
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Tabla 13: concentración en plasma de la forma cristalina A de SPH1772 en ratas
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Tabla 14: concentración en plasma de la forma cristalina A del hidrocloruro de INCB28060 en ratas
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Tabla 15: datos farmacocinéticos in vivo del compuesto de ensayo en ratas
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Como se muestra en la tabla, cuando la dosis fue de 20 pmol/kg, el AUC(0-24 h) de la forma cristalina A de SPH1772 fue de 4057,55 pM*min, el a Uc (0-24 h) de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 fue de 8802,13 pM*min. En comparación con la forma cristalina A de SPH1772, el valor de AUC de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 aumentó 2,17 veces y la Cmáx aumentó 1,80 veces. A la misma dosis, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 presenta mejores propiedades farmacocinéticas que la forma cristalina A de SPH1772. En conjunto, la exposición del hidrocloruro de INCB28060 en ratas no fue tan buena como la de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 y la forma cristalina A de SPH1772.
Realización del efecto 4: Evaluación del efecto antitumoral de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en la estirpe celular de hepatoma humano MHCC97H en modelo de xenoinjerto de ratones lampiños BALB/c
4.1 Método experimental
Se inocularon por vía subcutánea células MHCC97H en ratones lampiños BALB/c para desarrollar un modelo tumoral de carcinoma hepatocelular humano trasplantado por vía subcutánea. El experimento se dividió en grupos que incluían la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 (0,05 mg/kg, 0,5 mg/kg y 5 mg/kg), control positivo de hidrocloruro de INC280 (5 mg/kg) y grupo de control de vehículo, 10 ratones en cada grupo, administración intragástrica una vez al día, con una duración de 21 días. La eficacia se basó en la velocidad de inhibición tumoral relativa (ICT) y en el tiempo de retraso del crecimiento tumoral, la seguridad se evaluó según el peso y la muerte del animal.
4.2 Animales experimentales
ratones lampiños BALB/c, hembra, de 7 a 9 semanas de vida (la edad en la que los ratones fueron inoculados con células tumorales), peso de 19,5 a 23,9 g, 75 animales. Se adquirieron ratones lampiños BALB/c en Shanghai Lingchang Biotechnology Co., Ltd., número de certificado del animal: 2013001816956. Entorno de crianza: nivel de SPF.
4.3 Células y reactivos relacionados
Se cultivó MHCC97H (filial del Hospital Zhongshan de la Universidad de Fudan) en DMEM que contenía suero bovino fetal al 10 %. Las células MHCC97H se recogieron durante la fase de crecimiento exponencial, se volvieron a suspender las células en PBS hasta una concentración adecuada para la inoculación del tumor subcutáneo en ratones.
4.4 Modelización y agrupación de animales
Se volvieron a suspender 0,2 ml 1 x 107 células MHCC97H en PBS, y se inoculó por vía subcutánea Matrigel (1:1) en el lado derecho de 75 ratones. Cuando el volumen tumoral medio alcanzó 157 mm3, los ratones se agruparon aleatoriamente en función del volumen tumoral. La fórmula para calcular el volumen tumoral fue el diámetro largo x diámetro corto2/2.
4.5 Criterio de juicio de los resultados
Velocidad de inhibición tumoral relativa ICT (%): ICT = 1-T/C (%). El % de T/C es la velocidad relativa de proliferación tumoral, que es el porcentaje del volumen tumoral relativo o del peso tumoral en el grupo de tratamiento con respecto al del grupo de control en un momento determinado. T y C son, respectivamente, el volumen tumoral relativo (VTR) o el peso tumoral (PT) del grupo de tratamiento y del grupo de control en un momento determinado.
La fórmula fue la siguiente: % de T/C = Tvtr/Cvtr* 100 % (Tvtr: VTR medio en el grupo de tratamiento; Cvtr: VTR medio en el grupo de control; VTR = W V 0, V0 era el volumen tumoral del animal cuando se agruparon, y Vt era el volumen tumoral del animal después del tratamiento). O % de T/C = Tpt/Cpt x 100 % (Tp t : peso tumoral medio en el grupo de tratamiento al final del experimento; Cp t : peso tumoral medio en el grupo de control al final del experimento).
4.6 Criterio de valoración experimental
1,5 h y 24 h después de la última dosis, se recogieron sangre y el tumor, se pesó el tumor y se tomaron fotografías.
4.7 Análisis estadístico
Todos los resultados experimentales se expresaron como volumen tumoral medio ± ETM (Error Típico de la Media). El análisis estadístico entre diferentes grupos se realizó en el mejor punto del tratamiento farmacológico (generalmente después de la última dosis). Se utilizó el método de ensayo t para muestras independientes para evaluar si había una diferencia significativa entre el volumen tumoral relativo y el peso tumoral del grupo de tratamiento en comparación con los del grupo de control. Todos los datos fueron analizados con SPSS 18.0. Se consideró que p < 0,05 tenía diferencias significativas.
4.8 Resultados experimentales
El volumen tumoral medio de los ratones al Día 25 después de la dosificación en el grupo de control de disolvente fue de 1815 mm.3. El volumen tumoral medio al Día 25 después de la dosificación en el grupo de tratamiento de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 (0,05 mg/kg) fue de 469 mm3, la velocidad de inhibición tumoral relativa ICT (%) fue del 74 %. El volumen tumoral medio al Día 25 después de la dosificación en el grupo de tratamiento de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 (0,5 mg/kg) fue de 60 mm3, la velocidad de inhibición tumoral relativa ICT (%) fue del 97 %. El volumen tumoral medio al Día 25 después de la dosificación en el grupo de tratamiento de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 (5 mg/kg) fue de 22 mm3, la velocidad de inhibición tumoral relativa ICT (%) fue del 99 %. El volumen tumoral medio al Día 25 después de la dosificación en el grupo de tratamiento de INC280 (5 mg/kg) fue de 166 mm3, la velocidad de inhibición tumoral relativa ICT (%) fue del 91 %. El resultado del análisis del peso tumoral coincidió básicamente con el resultado del análisis del volumen tumoral relativo. El crecimiento tumoral en cada grupo de tratamiento y en el grupo de control se muestra en la Tabla 16, Tabla 17 y Figura 8.
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Tabla 17: peso tumoral en cada grupo
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En el grupo de tratamiento de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en el modelo de hepatoma humano MHCC97H descrito anteriormente, ningún animal murió, no se mostró toxicidad significativa por los fármacos y fueron bien tolerados durante el período de tratamiento.
Realización del efecto 5: Evaluación del efecto antitumoral de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en el xenoinjerto de tumor de pulmón derivado del paciente modelo LU2503
5.1 Información del modelo
Para este experimento farmacodinámico, se utilizó un xenoinjerto de tumor pulmonar de una paciente HuPrime® modelo LU2503. Había una deleción en el exón 14 del gen m Et en este modelo. Al mismo tiempo, el modelo tenía una ligera caquexia y tendía a tener una tendencia al colapso del tumor.
5.2 Método experimental
Se recogió tejido tumoral de ratones portadores de tumor de xenoinjerto de tumor pulmonar HuPrime® modelo LU2503 (R11P6) y se cortó en bloques tumorales de 2 a 3 mm de diámetro inoculados por vía subcutánea en el escapulario anterior derecho de ratones lampiños BALB/c. Cuando el volumen tumoral medio alcanzó aproximadamente 139 mm3, los ratones se dividieron aleatoriamente en 6 grupos experimentales según el volumen tumoral, 8 ratones en cada grupo, 4 ratones por jaula. El día de la agrupación se definió como el Día 0. La dosificación comenzó el Día 0 y finalizó el Día 20. El experimento terminó el Día 21. El experimento se dividió en grupos de forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 (0,3 mg/kg, 3 mg/kg y 30 mg/kg), control positivo de INC280 (30 mg/kg), control positivo de Crizotinib (30 mg/kg) y grupo de vehículo, 8 ratones en cada grupo, administración intragástrica una vez al día, con una duración de 21 días.
5.3 Animales experimentales
ratones lampiños BALB/c, hembra, de 8 a 9 semanas de vida (la edad en la que los ratones fueron inoculados con células tumorales), 52 animales. Se adquirieron ratones lampiños BALB/c del Instituto de Investigación Biomédica de Nanjing de la Universidad de Nanjing, Número de licencia: SCXK (Su) 2015-0001; Número de certificación de calidad: 201602064. Entorno de crianza: nivel de SPF.
5.4 Agrupación de animales
Cuando el volumen tumoral medio alcanzó 139 mm3, los ratones se agruparon aleatoriamente en función del volumen tumoral. La fórmula para calcular el volumen tumoral fue el diámetro largo x diámetro corto2/2.
5.5 El criterio de juicio de resultados se refiere a 4.5
5.6 El criterio de valoración experimental se refiere a 4.6
5.7 El análisis estadístico se refiere a 4.7
5.8 Resultados experimentales
El Día 21 después de la agrupación y del tratamiento, el porcentaje de cambio de peso de los ratones portadores de tumores del 1er grupo (INC280, 30 mg/kg, 1 vez/día x 21), 2° grupo (vehículo, 1 vez/día x 21), 3er grupo (forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, 0,3 mg/kg, 1 vez/día x 21), 4° grupo (forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, 3 mg/kg, 1 vez/día x 21), 5° grupo (forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, 30 mg/kg, 1 vez/día x 21) y 6° grupo (Crizotinib, 30 mg/kg, 1 vez/día x 21) fue -5,00 %, -9,86 %, -1,61 %, -1,88 %, -2,01 % y 3,26 %, respectivamente.
El Día 21 después de la agrupación y del tratamiento, el volumen tumoral medio del grupo de vehículo alcanzó 1886,32 mm3. El tumor en otros grupos retrocedió por completo, la velocidad relativa de proliferación tumoral (% de T/C) fue del 0,00 %, teniendo un efecto estadísticamente significativo sobre el crecimiento tumoral anti-LU2503 (p <0,05). El volumen tumoral de los ratones portadores de tumores en cada grupo de tratamiento y grupo de vehículo en diferentes momentos se muestra en la Tabla 18, Tabla 19 y Figura 9.
Tabla 18: volumen tumoral de ratones portadores de tumores en cada grupo de tratamiento y grupo de vehículo
Volumen tumoral (mm3)
1er grupo 2a grupo 3er grupo 4° grupo 5° grupo 6° grupo Días después forma cristalina A forma cristalina A forma cristalina A
del tratamiento INC280 vehículo de ditartrato de de ditartrato de de ditartrato de Crizotinib SPH1772 SPH1772 SPH1772
30 mg/kg - 0,3 mg/kg 3 mg/kg 30 mg/kg 30 mg/kg
0 139,14 ± 139,13 ± 139,09 ± 19,03 138,85 ± 16,77 138,93 ± 18,13 138,99 ±
19,30 17,81 18,22 86,20 ± 216,85 ± 78,65 ± 2 71,49 ± 9,02 74,25 ± 7,03 67,62 ± 8,136,49 27,34 7,77
23,03 ± 495,06 ± 21,63 ± 6 22,13 ± 2,10 24,04 ± 2,67 13,38 ± 2,674,10 68,25 2,93
10,55 ± 928,64 ± 12,83 ± 9 15,19 ± 2,89 9,15 ± 2,23 6,07 ± 1,651,97 143,77 2,68
13 5,89 ± 1433,91 ± 8,95 ± 0,91 4,78 ± 1,56 2,19 ± 1,44 8,30 ±
1,81 245,76 2,08 5,07 ± 1972,58 ± 8,27 ± 16 6,22 ± 1,65 2,25 ± 1,47 0,00 ± 0,001,99 339,36 2,55
19 1,53 ± 2176,65 ± 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 2,77 ±
1,53 314,52 2,77 0,00 ± 1886,32 ± 2,11 ±
21 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,00 0,00 ± 0,000,00 271,80 2,11
Nota: Los datos se expresaron como la "media ± error típico".
Tabla 19: efecto inhibidor del tumor en el xenoinjerto de tumor pulmonar HuPrime® modelo LU 2503
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En este estudio, se utilizó la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 en monoterapia y tuvo un efecto estadísticamente significativo sobre el crecimiento del xenoinjerto de tumor pulmonar anti-HuPrime® modelo LU2503 a una dosis de 0,3 mg /kg, 3 mg/kg y 30 mg/kg. A la misma dosis, el efecto de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 sobre el crecimiento del xenoinjerto de tumor pulmonar anti-HuPrime® modelo LU2503 fue equivalente al de INC280 y Crizotinib.
Se ha de entender que la descripción anterior de dos realizaciones preferidas pretende ser puramente ilustrativa de los principios de la invención, en lugar de ser exhaustiva, y que los cambios y variaciones serán evidentes para los expertos en la técnica, y que la presente invención no pretende limitarse a algo que no sea lo expresamente establecido en las siguientes reivindicaciones.

Claims (10)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772,
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2. El compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 1, en donde el ácido tartárico es ácido L-tartárico.
3. Una forma cristalina A del compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 1 o 2, que tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo representado por el ángulo de difracción 20 que comprende máximos característicos a 7,5 ± 0,2°, 9,2 ± 0,2°, 14,5 ± 0,2°, 16,6 ± 0,2°, 20,3 ± 0,2° y 28,8 ± 0,2°; la diana utilizada en la difracción de rayos X en polvo es diana de Cu.
4. La forma cristalina A del compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3, en donde el punto de fusión de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 es 202 °C y/o la CDB de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 tiene un máximo endotérmico principal a 199,4 °C.
5. Un método de preparación para la forma cristalina A del compuesto de quinolina ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4, que lo comprende en un disolvente orgánico, el compuesto SPH1772 reacciona con ácido tartárico; en donde el disolvente orgánico es un disolvente alcohólico, disolvente de éster, DCM: MeOH = 6:1 a 9:1 v/v, disolvente de éter o disolvente de cetona.
6. El método de preparación según la reivindicación 5, en donde el disolvente alcohólico es metanol;
y/o el disolvente de éster es acetato de etilo;
y/o el disolvente de éter es tetrahidrofurano;
y/o el disolvente de cetona es acetona;
y/o la proporción en volumen/masa del disolvente orgánico con respecto al SPH1772 es de 40 ml/g a 80 ml/g; y/o la proporción molar del SPH1772 con respecto al ácido tartárico es de 1:2,0 a 1:2,2;
y/o la temperatura de reacción es de 40 a 60 °C;
y/o el tiempo de reacción es de 24 h a 72 h;
y/o el método de preparación para la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 comprende añadir el ácido tartárico a la "mezcla del compuesto SPH1772 y del disolvente orgánico";
y/o el método de preparación para la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772, una vez completada la reacción, además comprende que la solución de reacción se filtra, dando la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772.
7. El método de preparación según la reivindicación 5 o 6, en donde la proporción en volumen/masa del disolvente orgánico con respecto a SPH1772 es de 60 a 70 ml/g;
y/o la proporción molar del SPH1772 con respecto al ácido tartárico es de 1:2,1;
y/o la temperatura de reacción es de 50 °C;
y/o el tiempo de reacción es de 24 h a 48 h;
y/o cuando el ácido tartárico participa en la reacción en forma de una "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico", en la "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico", la proporción en volumen/molar del disolvente orgánico con respecto al ácido tartárico es de 3,5:1 a 4,5:1 ml/mmol, preferiblemente de 4:1 ml/mmol; y/o cuando el ácido tartárico participa en la reacción en forma de una "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico", la velocidad de adición de la "solución de ácido tartárico en el disolvente orgánico" es de 1 a 5 ml/min, preferiblemente de 2,5 ml/min.
8. El ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 1 o 2, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4, una forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, una forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 y/o una forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 para usar como inhibidor de la tirosina quinasa c-Met, en donde
la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante uno cualquiera de los siguientes métodos 1 a 3:
método 1: se somete la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 a un experimento de cristalización por infiltración de gas-líquido; en donde el buen disolvente es THF:H2O = 19:1 v/v; el antidisolvente es butanona;
método 2: se somete una solución de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 en 1,4-dioxano a un experimento de cristalización por evaporación del disolvente a temperatura ambiente;
método 3: la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización inducida por superpolímero; en donde cuando la proporción en masa de polivinilpirrolidona (PVP): alcohol polivinílico (PVA): cloruro de polivinilo (PVC): acetato de polivinilo (PVAC): hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC): metilcelulosa (MC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano; cuando la proporción en masa de policaprolactona (PCL): polietilenglicol (PEG): polimetilmetacrilato (PMMA): alginato de sodio (SA): hidroxietilcelulosa (HEC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano o tetrahidrofurano: agua = 19:1 v/v;
la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante el siguiente método que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es W,W-dimetilformamida;
la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante el siguiente método que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es DMSO.
9. El ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 1 o 2, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4, una forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, una forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 y/o una forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 para usar en el tratamiento y/o LA profilaxis de una enfermedad asociada con la sobreexpresión o actividad de la tirosina quinasa c-Met, en donde
la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante uno cualquiera de los siguientes métodos 1 a 3:
método 1: se somete la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 a un experimento de cristalización por infiltración de gas-líquido; en donde el buen disolvente es THF:H2O = 19:1 v/v; el antidisolvente es butanona;
método 2: se somete una solución de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 en 1,4-dioxano a un experimento de cristalización por evaporación del disolvente a temperatura ambiente;
método 3: la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización inducida por superpolímero; en donde cuando la proporción en masa de polivinilpirrolidona (PVP): alcohol polivinílico (PVA): cloruro de polivinilo (PVC): acetato de polivinilo (PVAC): hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC): metilcelulosa (MC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano; cuando la proporción en masa de policaprolactona (PCL): polietilenglicol (PEG): polimetilmetacrilato (PMMA): alginato de sodio (SA): hidroxietilcelulosa (HEC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano o tetrahidrofurano: agua = 19:1 v/v;
la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante el siguiente método que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es W,W-dimetilformamida;
la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante el siguiente método que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es DMSO.
10. Una composición, que comprende el ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 1 o 2, la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4, una forma cristalina B de ditartrato de SPH1772, una forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 y/o una forma cristalina D de ditartrato de SPH1772, y un excipiente farmacéuticamente aceptable, en donde
la forma cristalina B de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante uno cualquiera de los siguientes métodos 1 a 3:
método 1: se somete la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 a un experimento de cristalización por infiltración de gas-líquido; en donde el buen disolvente es THF:H2O = 19:1 v/v; el antidisolvente es butanona;
método 2: se somete una solución de la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 en 1,4-dioxano a un experimento de cristalización por evaporación del disolvente a temperatura ambiente;
método 3: la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización inducida por superpolímero; en donde cuando la proporción en masa de polivinilpirrolidona (PVP): alcohol polivinílico (PVA): cloruro de polivinilo (PVC): acetato de polivinilo (PVAC): hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC): metilcelulosa (MC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano; cuando la proporción en masa de policaprolactona (PCL): polietilenglicol (PEG): polimetilmetacrilato (PMMA): alginato de sodio (SA): hidroxietilcelulosa (HEC) como superpolímero es de 1:1:1:1:1, el disolvente es 1,4-dioxano o tetrahidrofurano: agua = 19:1 v/v;
la forma cristalina C de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante el siguiente método que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es W,W-dimetilformamida;
la forma cristalina D de ditartrato de SPH1772 se prepara mediante el siguiente método que comprende que la forma cristalina A de ditartrato de SPH1772 según la reivindicación 3 o 4 se somete a un experimento de cristalización por infiltración de gas-sólido; en donde el disolvente es DMSO.
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