ES2867152T3 - Composiciones y métodos para el tratamiento de infecciones y enfermedad pulmonar por micobacterias - Google Patents

Abstract

Una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico, para usar en un método para tratar un sujeto con una enfermedad pulmonar por micobacterias, el método que comprende la administración por vía oral al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la formulación y en donde la carga bacteriana en el sujeto se reduce en al menos un 90 % tras el tratamiento.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones y métodos para el tratamiento de infecciones y enfermedad pulmonar por micobacterias

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica el beneficio y se basa en la fecha de presentación de la solicitud de patente provisional de Estados Unidos N.° 62/151.218, presentada el 22 de abril de 2015.

Campo

Esta solicitud se refiere, en general, a antibióticos aminoglucósidos encocleados para tratar infecciones pulmonares por micobacterias.

Antecedentes

Los organismos del género Mycobacterium están ampliamente distribuidos en el entorno y pueden encontrarse formando biopelículas en tuberías del agua y tanques de agua potable. Algunas especies de micobacterias son altamente virulentas y pueden propagarse de hospedador a hospedador por la tos o por inhalación o por contacto directo, provocando lepra (M. leprae) o tuberculosis (M. tuberculosis). Otras especies de micobacterias son considerablemente menos virulentas y se denominan colectivamente micobacterias no tuberculosas (NTM; del inglés, non-tuberculous mycobacteria). Aunque las NTM son menos virulentas, en ciertas circunstancias pueden infectar hospedadores con sistemas inmunitarios debilitados o una fisiología concreta (tal como bronquiectasia). Tal infección del hospedador puede suceder por dos vías diferentes. Una es la ruta gastrointestinal, desde la que las bacterias pueden diseminarse y/o provocar infección de nódulos linfáticos. La otra es la vía respiratoria, mediante la que la bacteria provoca infección en individuos con afecciones pulmonares crónicas (bronquiectasia, enfisema, fibrosis quística, enfermedad pulmonar obstructiva crónica). La última vía de infección es común en individuos con enfermedad pulmonar subyacente y la infección pulmonar se asocia con la formación de biopelícula (Carter G, et al., AAC 48:4907, 2004; Yamazaki Y, et al., Cell Microbiol,8: 808. 2006). El documento WO 2012/151517 muestra la eficacia in vivo de cocleatos de amikacina contra la infección diseminada provocada por la inyección del complejo M. avium. Por otra parte, este documento describe un modelo pulmonar murino de infección de M. avium.

La amikacina (AMK) es un antibiótico aminoglucósido utilizado con más frecuencia para tratar infecciones adquiridas en hospitales de bacterias gramnegativas resistentes a múltiples fármacos, tales como Pseudomonas aeruginosa, Acinetobactery Enterobacter, así como para el tratamiento de la enfermedad pulmonar micobacteriana no tuberculosa (NTM), normalmente para la enfermedad pulmonar avanzada y/o cuando los fármacos de primera línea fracasan en controlar la infección.

No hay una forma oral disponible, dado que la amikacina libre no se absorbe por vía oral y la amikacina, por tanto, debe proporcionarse por vía intravenosa (IV) o intramuscular (IM). La amikacina liposomal para inhalación actualmente está en ensayos clínicos de fase avanzada para el tratamiento de enfermedades respiratorias, tales como fibrosis quística, Pseudomonas aeruginosa, infecciones micobacterianas no tuberculosas y bronquiectasia.

Los efectos secundarios adversos de amikacina son similares a los de otros aminoglucósidos. Los daños al riñón y pérdida de la audición son los efectos más importantes. Debido a este potencial, se controlan los niveles sanguíneos del fármaco y los marcadores de la función renal (creatinina).

Por consiguiente, las vías disponibles para administrar antibióticos aminoglucósidos, como la amikacina, están limitadas y su administración se debe controlar estrechamente debido a las cuestiones de toxicidad. Proporcionar una formulación oral para antibióticos aminoglucósidos como la amikacina y particularmente una con un perfil de toxicidad reducida, representa un avance principal en el tratamiento de infecciones micobacterianas, incluyendo la enfermedad pulmonar por NTM.

Sumario

La invención se define mediante las reivindicaciones. Cualquier materia objeto que esté fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona con fines de información únicamente. Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas o medicamentos de la presente invención para usar en el tratamiento del cuerpo humano o animal.

Los experimentos desvelados en la presente solicitud demuestran que los cocleatos de aminoglucosídicos (por ejemplo, amikacina) son eficaces matando Mycobacterium avium en biopelícula y en un modelo animal de enfermedad pulmonar micobacteriana no tuberculosa (NTM). Por tanto, la divulgación se dirige, en parte, a los métodos para tratar un sujeto con una infección por Mycobacterium avium, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico.

Una realización se dirige a una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico, para usar en un método para tratar un sujeto con una enfermedad pulmonar por micobacterias, el método que comprende la administración por vía oral al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la formulación y en donde la carga bacteriana en el sujeto se reduce en al menos un 90 % tras el tratamiento.

En una realización, la enfermedad pulmonar por micobacterias es la tuberculosis pulmonar. Normalmente, la tuberculosis pulmonar está provocada por M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti y M. canetti.

En otra realización, la enfermedad pulmonar por micobacterias es una enfermedad pulmonar micobacteriana no tuberculosa. En una realización, la NTM se selecciona del grupo que consiste en Mycobacterium avium, M. kanasasii, M. abscessus, M. xenopi, M. y M. intracellulare y el complejo Mycobacterium avium.

En una realización, el método de tratamiento reduce la carga bacteriana en al menos un 95 % o un 98 %. En una realización, el método de tratamiento reduce la carga bacteriana en al menos un 90 %, un 95 % o un 98 % tras al menos 4 semanas de tratamiento.

En una realización, el sujeto tiene enfermedad pulmonar refractaria tras un curso de terapia convencional y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico.

En una realización, el sujeto tiene enfermedad pulmonar refractaria tras al menos 6 meses de un curso de terapia previo y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico.

En una realización, el cocleato que comprende el antibiótico se administra como monoterapia. En otra realización, el cocleato que comprende el antibiótico se administra como parte de una terapia multifarmacológica.

En una realización, la terapia multifarmacológica comprende etambutol y un macrólido, tal como claritromicina o azitromicina. En una realización, la terapia multifarmacológica comprende adicionalmente rifamicina o rifampina.

En una realización, una dosis sin efecto adverso observado (NOAEL; del inglés, no observed adverse effects level) de los aminoglucósidos es mayor que 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 400, 500, 750, 1000, 1500 o 2000 mg/kg.

En una realización, el antibiótico aminoglucosídico se selecciona del grupo que consiste en amikacina, gentamicina, capreomicina, paromomicina, tobramicina, kanamicina y neomicina. En una realización, el antibiótico aminoglucosídico es amikacina.

En una realización, el antibiótico se administra en una posología de entre 5-20 mg/kg, como alternativa 5-15 mg/kg, como alternativa 5-10 mg/kg, como alternativa 10-15 mg/kg, como alternativa 10-20 mg/kg, como alternativa 5­ 10 mg/kg, como alternativa 5-25 mg/kg o como alternativa 1-30 mg/kg. En una realización, el antibiótico se administra en una posología de aproximadamente 400-1000 mg/día, como alternativa 200-2000 mg/día, como alternativa 100­ 4000 mg/día, como alternativa 300-800 mg/día, como alternativa 400-800 mg/día, como alternativa 200-800 mg/día, como alternativa 100-600 mg/día, como alternativa 200-600 mg/día, como alternativa 400-600 mg/día, como alternativa 300-700 mg/día.

En una realización, la formulación de cocleato comprende adicionalmente cloruro sódico. En una realización, la formulación de cocleato contiene cloruro sódico 1 mM a 1M o 0,5M a 1M.

En una realización, la formulación de cocleato comprende adicionalmente sales biliares. En una realización, la formulación de cocleato contiene sales biliares 0,1 mM a 100 M o 0,1 mM a 0,5 mM. En una realización, la sal biliar es una o más de las siguientes: colato, quenodesoxicolato, taurocolato, glicocolato, tauroquenodesoxicolato, glicoquenodesoxicolato, desoxicolato o litocolato.

En una realización, la formulación de cocleato se administra una vez al día, dos veces al día, tres veces al día o cuatro veces al día. En otra realización, la formulación de cocleato se administra una vez a la semana, dos veces a la semana, tres veces a la semana o cuatro veces a la semana. En una realización, la formulación de cocleato se administra diariamente durante al menos 4 semanas. En otra realización, la formulación de cocleato se administra diariamente durante al menos 1 mes, 2 meses, 3 meses, al menos 4 meses o al menos 6 meses.

En una realización, el sujeto es un mamífero. En una realización, el sujeto es un ser humano.

En una realización, el cocleato comprende uno o más lípidos cargados negativamente, en donde dichos uno o más lípidos cargados negativamente comprenden entre un 40 % a un 70 % del lípido total en el cocleato. En una realización, dichos uno o más lípidos cargados negativamente comprenden entre un 30 % a un 70 %, un 40 % a un 60 %, un 45 % a un 65 %, un 45 % a un 60 % o un 45 % a un 55 % del lípido total en el cocleato. En una realización, dichos uno o más lípidos cargados negativamente comprenden fosfatidilserina. En una realización, la fosfatidilserina es fosfatidilserina de soja. En otra realización, la fosfatidilserina es fosfatidilserina derivada de huevo o de bovino.

En una realización, el cocleato comprende adicionalmente uno o más lípidos o esteróles neutros o catiónicos. En una realización, dichos uno o más lípidos o esteroles neutros o catiónicos se seleccionan del grupo que consiste en fosfatidilcolina y esfingomielina.

En ciertas realizaciones, el método se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad pulmonar por el complejo Mycobacterium avium (MAC; del inglés, Mycobacterium avium complex), el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina).

Otro aspecto se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad pulmonar por micobacterias no tuberculosas (NTM), el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina).

Otro aspecto se dirige a un método para tratar un sujeto con tuberculosis pulmonar, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina).

Otro aspecto se dirige a un método para tratar un sujeto con una infección pulmonar por M. leprae o M. lepromatosis, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina).

Todavía otro aspecto se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad pulmonar por micobacterias no tuberculosas (NTM), el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina) y en donde el método de tratamiento reduce la carga bacteriana en al menos un 90 %, un 95 % o un 98 %. En una realización, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 90 %, un 95 % o un 98 % tras al menos 4 semanas de tratamiento.

Breve descripción de los dibujos

Los dibujos adjuntos, que se incorporan y constituyen parte de esta memoria descriptiva, ilustran ciertas realizaciones y junto con la descripción escrita, sirven para explicar ciertos principios de las composiciones y métodos desvelados en el presente documento.

La Fig. 1 muestra el tratamiento eficaz de la biopelícula del complejo Mycobacterium avium (MAC) en cultivo utilizando cocleatos de amikacina.

La Fig. 2 muestra el tratamiento eficaz de la enfermedad pulmonar por Mycobacterium no tuberculosa en ratones tratados diariamente durante 4 semanas con cocleatos de amikacina.

La Fig. 3 muestra que el límite sin efectos adversos (NOAEL) de amikacina encocleada (CAMK) en ratas es dos veces más elevado que la NOAEL de la amikacina inyectada.

Las Figs. 4A-B muestran la farmacocinética de la amikacina encocleada en ratas macho (A) y hembra (B). En los seres humanos, los niveles plasmáticos pico (Cmáx) no deben exceder los 35 mcg/ml y los niveles plasmáticos valle no deben exceder los 10 mcg/ml, niveles que se indican por las líneas horizontales superiores en las Figs.

4A-B.

Descripción detallada

A continuación, se hará referencia en detalle a diversas realizaciones ilustrativas, ejemplos de las cuales se ilustran en los dibujos adjuntos y se tratan en detalle en la descripción detallada a continuación. Debe entenderse que la siguiente descripción detallada se proporciona para dar al lector una comprensión más completa de ciertas realizaciones, características y detalles de aspectos de la invención.

1. Micobacteria

Las micobacterias son una familia de bacilos pequeños, con forma de bastoncillo que pueden clasificarse en 3 grupos principales con fines de diagnóstico y tratamiento. El primero es el complejo Mycobacterium tuberculosis, que puede causar tuberculosis pulmonar e incluye M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti y M. canetti. El segundo grupo es M. leprae y M. lepromatosis, que puede causar la enfermedad de Hansen o lepra. El tercer grupo es el de las micobacterias no tuberculosas (NTM), que incluye las otras micobacterias que pueden causar una enfermedad pulmonar semejante a tuberculosis, linfoadenitis, enfermedad de la piel o enfermedad diseminada. NTM incluye, pero sin limitación, complejo M. avium (MAC), M. avium, M. kansasii, M. abscessus, M. chelonae, M. fortuitum, M. genavense, M. gordonae, M. haemophilum, M. immunogenum, M. intracellulare, M. malmoense, M. marinum, M. mucogenicum, M. nonchromogenicum, M. scrofulaceum, M. simiae, M. smegmatis, M. szulgai, M. terrae, complejo M.

terrae, M. ulcerans y M. xenopi. MAC incluye al menos dos especies micobacterianas, M. avium y M. intracellulare. Estas dos especies no pueden distinguirse basándose en las pruebas físicas o bioquímicas tradicionales, pero hay sondas de ácido nucleico que pueden utilizarse para identificar y distinguir entre las dos especies.

Hay dos formas principales de enfermedad pulmonar por NTM: enfermedad cavitante y enfermedad nodular/bronquiectásica. La enfermedad cavitante se presenta normalmente en varones al final de la década de los 40 años y principios de los 50, que tienen un historial de fumadores de cigarrillo y a menudo, consumo excesivo de alcohol. Si no se trata, esta forma de enfermedad pulmonar por NTM generalmente es progresiva en 1-2 años y puede dar como resultado una destrucción pulmonar extensa cavitante y fallo respiratorio. La enfermedad nodular/bronquiectásica normalmente se presenta con infiltrados nodulares y nodulares intersticiales, con frecuencia implicando el lóbulo medio derecho o língula y normalmente en mujeres posmenopáusicas no fumadoras blancas. Esta forma de la enfermedad tiende a progresar más lentamente que la forma cavitante.

Además de la enfermedad pulmonar por NTM, las NTM pueden causar también enfermedad diseminada. La enfermedad diseminada debida a NTM está entre las infecciones más comunes y graves encontradas en individuos que sufren de la infección por VIH avanzada. La mayoría (más de un 90 %) de la enfermedad diseminada por NTM está provocada por MAC, con la mayoría abrumadora de estos casos provocados por M. avium. La enfermedad diseminada debida a NTM en individuos infectados con VIH normalmente sucede solo en pacientes que están inmunocomprometidos gravemente y tienen recuentos de linfocitos T CD4+ muy bajos. La enfermedad diseminada debida a n Tm se ha detectado también en pacientes trasplantados de órganos (por ejemplo, renales o cardiaco) inmunocomprometidos o en el uso de corticosteroides crónico.

La tuberculosis pulmonar es una infección aguda o crónica causada por Mycobacterium tuberculosis o a veces, otras cepas de micobacterias (M. bovis, M. africanum, M. microti y M. canetti) y se caracteriza por infiltrados pulmonares, formación de granulomas con caseificación, fibrosis y cavitación.

La lepra es una infección crónica, sistémica, caracterizada por las lesiones cutáneas progresivas y causada por M. leprae, un bacilo acidorresistente que ataca el tejido cutáneo y los nervios periféricos, produciendo lesiones cutáneas, infecciones y deformidades. La lepra puede causarla también M. lepromatosis. La lepra ocurre en tres formas distintas. La lepra lepromatosa es el tipo más grave y provoca daño en el tracto respiratorio superior, ojos y testículos, así como en nervios y piel. La lepra tuberculoide afecta a los nervios periféricos y ocasionalmente a la piel circundante, especialmente en la cara, brazo, piernas y nalgas. La lepra límite (dimórfica) tiene características de la lepra tanto lepromatosa como de la tuberculoide. Las lesiones cutáneas en este tipo de lepra son difusas y mal definidas.

2. Cocleatos y métodos para fabricar los mismos

Los cocleatos son cristales de lípidos anhidros, estables y de múltiples capas que se forman espontáneamente tras la interacción de lípidos cargados negativamente, tales como de fosfatidilserina y calcio (véanse, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos N.° 4.078.052; 5,643,574; 5840707; 5,994,318; 6153217; 6592894, así como las publicaciones PCT N.° WO 200404/091572; WO 2004/091578; WO 2005/110361, WO 2012/151517 y WO2014/022414 y la publicación de patente de Estados Unidos 2010/0178325). Los cocleatos tienen una estructura multicapa única que consiste en una lámina bicapa lipídica grande, continua, sólida enrollada en una espiral o como láminas apiladas, sin espacio acuoso interno. Esta estructura única proporciona protección de la degradación para las moléculas "encocleadas" asociadas. Dado que la estructura completa del cocleato es una serie de capas sólidas, los componentes en el interior de la estructura del cocleato permanecen intactos, incluso aunque las capas exteriores del cocleato puedan exponerse a condiciones ambientales rigurosas o enzimas. Las concentraciones de cationes divalentes in vivo en suero y secreciones mucosas son tales que la estructura de cocleato se mantiene. Por tanto, la mayoría de moléculas asociadas a cocleato están presentes en las capas internas de una estructura sólida, acuosa, estable, impermeable. Una vez dentro del interior de una célula, sin embargo, la baja concentración de calcio da como resultado la apertura del cristal de cocleato y la liberación de la molécula que se había formulado en los cocleatos. Por consiguiente, Las formulaciones de cocleato permanecen intactas en líquidos fisiológicos, incluyendo secreciones mucosas, plasma y líquido gastrointestinal, mediando de este modo el suministro de compuestos biológicamente activos por muchas vías de administración, incluyendo la oral, mucosa e intravenosa.

Los cocleatos pueden fabricarse utilizando métodos conocidos que incluyen, aunque no de forma limitativa, los descritos en las Patentes de Estados Unidos N.° 5.994.318 y 6.153.217. En una realización, el método incluye, en general, la combinación de un antibiótico aminoglucosídico con un lípido (preferentemente un fosfolípido cargado negativamente, tal como fosfatidilserina) en presencia de un disolvente, añadiendo una solución acuosa para formar liposomas y precipitando con un catión multivalente para formar un cocleato. En otra realización, el método incluye, en general, combinar un antibiótico aminoglucosídico con un liposoma en presencia de un disolvente, de manera que el antibiótico aminoglucosídico se asocia con el liposoma y precipita con un catión multivalente para formar un cocleato que contiene un agente farmacológicamente activo.

En una realización preferida, el catión divalente es un catión metálico divalente, tal como calcio, cinc, magnesio y bario. En una realización preferida, el catión metálico divalente es el calcio.

La etapa de introducción de un antibiótico aminoglucosídico en un liposoma en presencia de un disolvente puede lograrse de diversas maneras. En una realización, el antibiótico aminoglucosídico se incorpora mediante la introducción de una solución del disolvente y el antibiótico aminoglucosídico en el liposoma. Preferentemente, el liposoma está en una suspensión liposomal, preferentemente, una suspensión liposomal acuosa. En una realización preferida, la solución con el antibiótico se introduce en el liposoma mediante adición gota a gota de la solución. En otras realizaciones, la solución se puede añadir mediante flujo continuo o como un bolo. Además, la solución puede introducirse en lípido seco, con agua añadida antes, después o con la solución.

En otra realización, el antibiótico aminoglucosídico se introduce en el liposoma antes o después del disolvente. Por ejemplo, el antibiótico aminoglucosídico puede introducirse en una suspensión liposomal que incluye el disolvente. A continuación, la mezcla puede agitarse, mezclarse, agitarse vorticialmente o similar, para facilitar la asociación del antibiótico aminoglucosídico con el liposoma. El antibiótico aminoglucosídico introducido puede estar en forma de un polvo o un líquido.

Puede utilizarse también un antioxidante (por ejemplo, vitamina E) en la fabricación de cocleatos. El antioxidante puede introducirse con el antibiótico aminoglucosídico o con el liposoma. Preferentemente, se incorpora en la suspensión liposomal o en una solución del antibiótico aminoglucosídico y el disolvente.

El liposoma se puede preparar por cualquier método de preparación de liposomas conocido. Por tanto, los liposomas pueden prepararse, por ejemplo, mediante inyección de disolvente, hidratación de lípidos, evaporación inversa, criodesecación por congelación repetida y descongelación. Los liposomas pueden ser vesículas multilaminares (MLV) o unilaminares (ULV), incluyendo vesículas unilaminares pequeñas (SUV; del inglés, small unilamellar vesicles). La concentración de lípido en estas disoluciones liposomales puede ser de aproximadamente 0,1 mg/ml hasta 500 mg/ml. Preferentemente, la concentración de lípido es de aproximadamente 0,5 mg/ml a aproximadamente 50 mg/ml, más preferentemente de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 25 mg/ml.

Los liposomas pueden ser vesículas unilaminares grandes (LUV; del inglés, large unilamellar vesicles), vesículas plurilaminares estables (SPLV; del inglés, stable plurilamellar vesicles) o vesículas oligolaminares (OLV; del inglés, oligolamellar vesicles) preparadas, por ejemplo, mediante eliminación de detergente usando diálisis, cromatografía en columna, bioperlas sM-2, mediante evaporación de fase inversa (REV; del inglés, reverse phase evaporation) o mediante formación de vesículas unilaminares de tamaño intermedio mediante extrusión a alta presión. Methods in Biochemical Analysis, 33:337 (1988).

Se puede usar cualquier disolvente adecuado en estos métodos. Los disolventes adecuados para una aplicación dada pueden identificarse fácilmente por un experto en la materia. Preferentemente, el disolvente es un disolvente aceptable por la FDA. El disolvente puede ser un disolvente orgánico o un disolvente inorgánico. En una realización, el disolvente es un disolvente miscible en agua. En otra realización, el disolvente es agua o un tampón acuoso. Otros disolventes adecuados incluyen, aunque no de forma limitativa, dimetilsulfóxido (DMSO), una metilpirrolidona, N-metilpirrolidona (NMP), acetonitrilo, alcoholes, por ejemplo, etanol (EtOH), dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF) y combinaciones de los mismos. En general, la concentración de antibiótico aminoglucosídico dentro del disolvente está entre aproximadamente 0,01 mg/ml y 200 mg/ml. Preferentemente, la concentración de antibiótico aminoglucosídico está entre aproximadamente 0,05 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml, más preferentemente entre aproximadamente 0,1 mg/ml y 20 mg/ml.

El disolvente opcionalmente se puede eliminar, por ejemplo, antes de la formación de liposomas, en la etapa de liposoma y/o después de que se formen los cocleatos. Puede emplearse cualquier método de eliminación de disolvente conocido. Por ejemplo, el disolvente puede eliminarse de la suspensión liposomal mediante flujo tangencial y/o filtración y/o diálisis o de los cocleatos mediante lavado, filtración, centrifugación y/o diálisis. Los cocleatos pueden lavarse, por ejemplo, con tampón o agua, óptimamente con calcio u otro catión.

Puede introducirse un agente regulador del tamaño durante el método de fabricación del cocleato. Un agente regulador del tamaño, como se utiliza en el presente documento, se refiere a un agente que reduce el tamaño de partícula de un cocleato. Como se utiliza en el presente documento, la expresión "tamaño de partícula" se refiere al diámetro de partícula o en el caso de partículas que no son esféricas, a la dimensión mayor en una dirección de la partícula. El tamaño de partícula de los cocleatos puede medirse utilizando métodos convencionales, tales como un analizador de tamaño de partícula submicrónico. En ciertas realizaciones, el agente regulador del tamaño es un polinucleótido anclado a un lípido, un azúcar anclado a un lípido (glicolípido) o un polipéptido anclado a un lípido. En otras realizaciones, el agente regulador del tamaño es una sal biliar, tal como oxicolato, colato, quenodesoxicolato, taurocolato, glicocolato, tauroquenodesoxicolato, glicoquenodesoxicolato, desoxicolato o litocolato. Las sales biliares son ácidos biliares compuestos con un catión, normalmente sodio. Los ácidos biliares son ácidos esteroideos que se encuentran predominantemente en la bilis de mamíferos y que se encuentran disponibles en el mercado.

En ciertas realizaciones, el agente regulador del tamaño se añade al lípido o a los liposomas antes de la formación del cocleato precipitado. Por ejemplo, en una realización, el agente regulador del tamaño se introduce en una suspensión liposomal de la que se formarán posteriormente los cocleatos (por ejemplo, por adición de catión o diálisis). Como alternativa, el agente regulador de tamaño puede introducirse en una solución lipídica, antes o después de la adición de un antibiótico aminoglucosídico.

Puede usarse cualquier lípido adecuado para fabricar el cocleato. En una realización, el lípido cocleato incluye uno o más lípidos cargados negativamente. Como se utiliza en el presente documento, la expresión "lípido cargado negativamente" incluye lípidos que tienen un grupo de cabeza que porta una carga negativa formal en solución acuosa a un pH ácido, básico o fisiológico e incluye también lípidos que tienen un grupo de cabeza zwitteriónico.

Los cocleatos también pueden incluir lípidos no cargados negativamente (por ejemplo, lípidos positivos y/o neutros). Preferentemente, los cocleatos incluyen una cantidad considerable de lípidos cargados negativamente. En ciertas realizaciones, la mayor parte del lípido está cargado negativamente. En una realización, el lípido es una mezcla de lípidos, que comprende al menos un 50 % de lípido cargado negativamente. En otra realización, el lípido incluye al menos un 75 % de lípido cargado negativamente. En otras realizaciones, el lípido incluye al menos un 85 %, un 90 %, un 95 % o un 98 % de lípido cargado negativamente. En todavía otras realizaciones, el lípido cargado negativamente comprende entre un 30 %-70 %, un 35 %-70 %, un 40 %-70 %, un 45 %-65 %, un 45 %-70 %, un 40 %-60 %, un 50 %-60 %, un 45 %-55 %, un 45 %-65 % o un 45 %-50 % del lípido total en el cocleato.

El lípido cargado negativamente puede incluir lípidos basados en soja, lípidos basados en otras legumbres, lípidos basados en huevo, lípidos basados en bovino o lípidos basados en porcino. Preferentemente, el lípido incluye fosfolípidos, tales como los fosfolípidos basados en soja. El lípido cargado negativamente puede incluir fosfatidilserina, dioleoilfosfatidilserina (DOPS), ácido fosfatídico (PA), fosfatidilinositol (PI) y/o fosfatidilglicerol (PG) y/o una mezcla de uno o más de estos lípidos con otros lípidos. Adicionalmente o como alternativa, el lípido puede incluir fosfatidilcolina (PC), fosfatidiletanolamina (PE), difosfatidilglicerol (DPG), ácido dioleoilfosfatídico (DOPA), diestearoil fosfatidilserina (DSPS), dimiristoil fosfatidilserina (DMPS), dipalmitoil fosfatidilglicerol (DPPG) y similares. En una realización, la fosfatidilserina es fosfatidilserina de soja. En otra realización, la fosfatidilserina es fosfatidilserina derivada de huevo o de bovino.

3. Agentes antibacterianos

Los cocleatos para usar en los métodos descritos en el presente documento se asocian o se cargan con un agente antibacteriano (también denominado en el presente documento como antibiótico). La presente invención se refiere a cocleatos cargados con antibióticos aminoglucosídicos. En una divulgación adicional, a modo de ejemplo, el agente antibacteriano puede incluir, pero no se limita a, uno o más de los siguientes: inhibidores de la síntesis de proteínas; un inhibidor de iniciación de 30S, tal como antibióticos aminoglucosídicos (es decir, los antibióticos cubiertos por la presente invención, que incluyen estreptomicina, dihidroestreptomicina, neomicina, framicetina, paromomicina, ribostamicina, kanamicina, amikacina, arbekacina, bekanamicina, dibekacina, tobramicina, espectinomicina, higromicina B, paromomicina, capreomicina, gentamicina, netilmicina, sisomicina, isepamicina, verdamicina y astromicina); un antibiótico de unión a ARNt de 30S, tal como tetraciclinas, glicilciclinas o fluorociclinas (incluyendo doxiciclina, clortetraciclina, clomociclina, desmeclociclina, limeciclina, meclociclina, metaciclina, minociclina, oxitetraciclina, penimepiciclina, rolitetraciclina, tetraciclina, tigeciclina o eravaciclina); un inhibidor de iniciación de 50S, tal como antibióticos de oxazolidinona (incluyendo eperezolida, linezolida, posizolida, radezolida, ranbezolida, sutezolida y tedizolida); una peptidil transferasa, tal como anfenicoles o pleuromutilinas (incluyendo cloranfenicol, azidamfenicol, tianfenicol, florfenicol, retapamulina, tiamulina y valnemulina); un antibiótico de transpeptidación/traslocación, tal como macrólidos, cetólidos, fluorocetólidos, incosamidas o estreptograminas (incluida azitromicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina, fluritromicina, josamicina, midecamicina, miocamicina, oleandomicina, okitamicina, roxitromicina, espiramicina, troleandomicina, tilosina, telitromicina, cetromicina, solitromicina, fidaxomicina, carbomicina A, kitasamicina, clindamicina, lincomicina, pirlimicina, pristinamicina, quinupristina, dalfopristina y virginiamicina); un factor de elongación de proteínas, tal como antibacterianos esteroideos (incluyendo ácido fusídico); un inhibidor de la síntesis de peptidoglicanos/transpeptidasas, tal como una penicilina (incluyendo penicilinas naturales, bencilpenicilina y fenoximetilpenicilina; penicilinas resistentes a la p-lactamasa, meticilina, nafcilina, oxacilina, cloxacilina y dicloxacilina; aminopenicilinas, ampicilina, amoxicilina, pivampicilina, hetacilina, bacampicilina, metampicilina, talampicilina y epicilina; carboxipenicilinas, carbenicilina y ticarcilina; ureidopenicilinas, mezlocilina y piperacilina) o una cefalosporina (incluyendo cefacetrilo, cefadroxil, cefalexina, cefaloglicina, cefalonia, cefaloradina, cefalotina, cefapirina, Cefatrizina, Cefazaflur, Cefazedona, cefazolina, cefradina, cefroxadina, ceftezol, cefaclor, cefonicid, cefprozilo, cefuroxima, cefuzonam, cefmetazol, cefotetán, cefoxitina, loracarbef, cefbuperazona, cefmetazol, cefminox, cefotetán, cefoxitina, cefotiam, cefcapeno, cefdaloxima, cefdinir, cefditoreno, cefetamet, cefixima, cefmenoxima, cefodizima, cefotaxima, cefovecin, cefpimizol, cefpodoxima, cefteram, ceftamere, ceftibuteno, ceftiofur, ceftioleno, ceftizoxima, ceftriaxona, cefoperazona, ceftazidima, latamoxef, cefclidina, cefepima, cefluprenam, cefoselis, cefozoprano, cefpiroma, cefquinoma, flomoxef, ceftobiprol, ceftarolina, ceftolozano, cefaloram, cefaparol, cefcanel, cefedrolor, cefempidona, cefetrizol, cefivitril, cefmatilen, cefmepidium, cefoxazol, cefrotil, cefsumida, ceftióxido, cefuracetima y nitrocefina); un penems o carbapenem (incluyendo faropenem, ertapenem, doripenem, imipenem, meropenem, biapenem y panipenem); un monobactam (incluyendo aztreonam, tigemonam, carumonam, nocardicina A); un antibiótico glicopéptido (incluyendo vancomicina, oritavancina, telavancina, teicoplanina, dalbavancina y ramoplanina); un inhibidor de la beta-lactamasa (incluyendo clavulanato, sulbactam, tazobactam y avibactam) y otro antibiótico (incluyendo: fosfomicina, cicloserina, bacitracina, colistina, polimixina B, daptomicina, lisozima, gramicidina, isoniazida o teixobactina).

En ciertas realizaciones, el antibiótico aminoglucosídico de acuerdo con la invención es estreptomicina, dihidroestreptomicina, neomicina, framicetina, paromomicina, ribostamicina, kanamicina, amikacina, arbekacina, bekanamicina, dibekacina, tobramicina, espectinomicina, higromicina B, paromomicina, capreomicina, gentamicina, netilmicina, sisomicina, isepamicina, verdamicina y astromicina. En una realización, el aminoglucósido es amikacina.

4. Composiciones farmacéuticas

Los cocleatos descritos en el presente documento pueden prepararse como una composición farmacéutica. Las formas de preparación adecuadas para las composiciones farmacéuticas desveladas en el presente documento incluyen, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, cápsulas blandas, gránulos, polvos, suspensiones, emulsiones, microemulsiones, nanoemulsiones, formas de dosificación unitarias individuales, anillos, películas, supositorios, soluciones, cremas, jarabes, parches transdérmicos, ungüentos y geles.

Las composiciones farmacéuticas puede incluir otros excipientes farmacéuticamente aceptables, tales como, un tampón (por ejemplo, Tris-HCl, acetato, fosfato) de diferentes pH y fuerza iónica; un aditivo, tal como albúmina o gelatina, para evitar la absorción a las superficies; un inhibidor de proteasa; un potenciador de permeación; un agente solubilizante (por ejemplo, glicerol, polietilenglicerol); un antioxidante (por ejemplo, ácido ascórbico, metabisulfito sódico, hidroxianisol butilado); un estabilizante (por ejemplo, hidroxipropilcelulosa o hidroxipropilmetilcelulosa); un agente que aumente la viscosidad (por ejemplo, carbómero, dióxido de silicio coloidal, etilcelulosa, goma guar); un edulcorante (por ejemplo, aspartamo, ácido cítrico); un conservante (por ejemplo, timerosal, alcohol bencílico, parabenos); una ayuda de flujo (por ejemplo, dióxido de silicio coloidal), un plastificante (por ejemplo, dietil ftalato, trietil citrato); un emulsionante (por ejemplo, carbómero, hidroxipropilcelulosa, laurilsulfato sódico); un revestimiento de polímero (por ejemplo, poloxámeros o poloxaminas, succinato de acetato de hipromelosa); un agente de revestimiento y formador de película (por ejemplo, etilcelulosa, acrilatos, polimetacrilatos, succinato de acetato de hipromelosa); un adyuvante; un vehículo farmacéuticamente aceptable para formulaciones líquidas, tal como una solución acuosa (agua, solución alcohólica/acuosa, emulsión o suspensión, incluyendo solución salina y medios tamponados) o no acuosa (por ejemplo, propilenglicol, polietilenglicol y ésteres orgánicos inyectables, tales como oleato de etilo), suspensión, emulsión o aceite; y un vehículo parenteral (para una inyección intramuscular, subcutánea, intravenosa, intraarterial o intramuscular), incluyendo, aunque no de forma limitativa, solución de cloruro sódico, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, Ringer lactado y aceites fijos.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una sal, tal como un NaCI o una sal biliar, tal como oxicolato, colato, quenodesoxicolato, taurocolato, glicocolato, tauroquenodesoxicolato, glicoquenodesoxicolato, desoxicolato o litocolato. Las sales biliares son ácidos biliares compuestos con un catión, normalmente sodio. Los ácidos biliares son ácidos esteroideos que se encuentran predominantemente en la bilis de mamíferos y que se encuentran disponibles en el mercado. En una realización, las sales biliares comprenden colato. En otra realización, las sales biliares comprenden desoxicolato. En todavía otra realización, las sales biliares comprenden colato y desoxicolato. En otra realización, las sales biliares consisten en colato y desoxicolato.

En ciertas realizaciones, la concentración de NaCl es 1 mM a 1M, 1mM a 0,5M, 1mM a 0,1M, 1mM a 50 mM, 10 mM a 100 mM, 10 mM a 50 mM, 0,1M a 1M, 0,1M a 0,5M o 0,5M a 1M. En ciertas realizaciones, la concentración de sales biliares es sales biliares 1 mM a 100 mM, 1 mM a 50 mM, 1 mM a 25 mM, 1 mM a 10 mM, 1mM a 5 mM, 0,1 mM a 5 mM, 0,1 mM a 1 M o 0,1 mM a 0,5 mM.

Estos excipientes se proporcionan a modo de ejemplo y los expertos en la materia sabrán que serán otros excipientes o diferentes los que pueden proporcionar las mismas características químicas que los enumerados en el presente documento.

5. Dosificación y administración

Una composición farmacéutica que comprende un cocleato, como se desvela en el presente documento, se formula para que sea compatible con su vía de administración prevista. La formulación de cocleato de acuerdo con la presente invención se administra por vía oral, por ejemplo, administrando una suspensión, un comprimido, una cápsula, una perla u otra forma de administración oral.

En ciertas realizaciones, el antibiótico (por ejemplo, un aminoglucósido, tal como la amikacina) se administra en una posología de entre 5- 20, 5-10 mg/kg, 5-15, 10-15, 10-13 mg/kg, 10-20 mg/kg, 5-25 mg/kg o 1-30 mg/kg. Como alternativa, el antibiótico (por ejemplo, un aminoglucósido, tal como amikacina) puede administrarse en una posología fija de aproximadamente 200-1000 mg/día, 400-1000 mg/día, 200-800 mg/día, 300-800 mg/día, 400-800 mg/día, 500­ 700 mg/día, 200-2000 mg/día, 100-4000 mg/día, 100-600 mg/día, 200-600 mg/día, 400-600 mg/día o 300-700 mg/día, incluyendo, aunque no de forma limitativa aproximadamente 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500 o 4000 mg.

Debido a su baja toxicidad, el antibiótico encocleado puede administrarse más frecuentemente o durante una duración mayor que un antibiótico intravenoso. En ciertas realizaciones, el antibiótico encocleado puede administrarse una vez al día, dos veces al día, tres veces al día o cuatro veces al día. En otra realización, la formulación de cocleato se administra una vez a la semana, dos veces a la semana, tres veces a la semana o cuatro veces a la semana. En una realización, el antibiótico encocleado puede administrarse 2-3 veces semanalmente. En otras realizaciones, la formulación de cocleato se administra diariamente durante al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 semanas. En otra realización, la formulación de cocleato se administra diariamente durante al menos 3 meses, al menos 4 meses o al menos 6 meses.

6. Métodos de tratamiento

En esta sección, cualquier referencia a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas o medicamentos de la presente invención para usar en el tratamiento del cuerpo humano o animal.

Los cocleatos como se describe en el presente documento, pueden utilizarse en un método de tratamiento de un sujeto con una infección pulmonar por micobacterias. Una realización se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad pulmonar por Mycobacterium avium, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un aminoglucósido, incluyendo, por ejemplo, amikacina. En una divulgación, los métodos pueden utilizarse también para tratar otras infecciones micobacterianas.

Otra divulgación se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad micobacteriana no tuberculosa (NTM) diseminada, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico, tal como un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina). Normalmente, el sujeto con enfermedad por NTM diseminada es un paciente inmunocomprometido, tal como un paciente infectado con VIH.

Otro aspecto se dirige a un método para tratar un sujeto con una infección pulmonar por M. leprae o M. lepromatosis, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina).

Otro aspecto se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad pulmonar por micobacterias, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina). En una realización, la enfermedad pulmonar por micobacterias es la tuberculosis pulmonar. En otra realización, la enfermedad pulmonar por micobacterias es una enfermedad pulmonar micobacteriana no tuberculosa (NTM).

Por tanto, una realización se dirige a un método para tratar un sujeto con tuberculosis pulmonar, el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina). Normalmente, la tuberculosis pulmonar está provocada por M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microtii o M. canetti.

Otra realización se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad pulmonar micobacteriana no tuberculosa (NTM), el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un aminoglucósido, incluyendo, por ejemplo, amikacina. En ciertas realizaciones, la MTN se selecciona del grupo que consiste en Mycobacterium avium, M. kanasasii, M. abscessus, M. xenopi, M. avium y M. intracellulare. Normalmente, la NTM comprende al menos el complejo Mycobacterium avium.

En ciertas realizaciones, el método de tratamiento reduce la carga bacteriana en al menos un 90 %, un 91 %, un 92 %, un 93 %, un 94 %, un 95 %, un 96 %, un 97 %, un 98 %, un 99 % o un 100 %. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 95 %. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 98 %. En una realización, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 90 %, un 91 %, un 92 %, un 93 %, un 94 %, un 95 %, un 96 %, un 97 %, un 98 %, un 99 % o un 100 % tras al menos 4 semanas de tratamiento. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 95 % tras al menos 4 semanas de tratamiento. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 98 % tras al menos 4 semanas de tratamiento.

Todavía otro aspecto se dirige a un método para tratar un sujeto con enfermedad pulmonar por micobacterias no tuberculosas (NTM), el método que comprende administrar por vía oral al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico, tal como un antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina) y en donde el método de tratamiento reduce la carga bacteriana en al menos un 90 %, un 91 %, un 92 %, un 93 %, un 94 %, un 95 %, un 96 %, un 97 %, un 98 %, un 99 % o un 100 %. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 95 %. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 98 %. En una realización, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 90 %, un 91 %, un 92 %, un 93 %, un 94 %, un 95 %, un 96 %, un 97 %, un 98 %, un 99 % o un 100 % tras al menos 4 semanas de tratamiento. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 95 % tras al menos 4 semanas de tratamiento. En ciertas realizaciones, el método reduce la carga bacteriana en al menos un 98 % tras al menos 4 semanas de tratamiento. En otra divulgación la enfermedad por NTM es la enfermedad por NTM diseminada.

En ciertas realizaciones, el sujeto tiene enfermedad pulmonar refractaria tras un curso de terapia previo y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico. Como se utiliza en el presente documento, la "enfermedad pulmonar refractaria" se refiere a la enfermedad pulmonar que no responde (medido microbiológica, clínica o radiológicamente) a una terapia adecuada. En ciertas realizaciones, el sujeto tiene enfermedad pulmonar refractaria tras al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 meses de un curso de terapia previo y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico. Normalmente, el sujeto tiene enfermedad pulmonar refractaria tras al menos 6 meses de un curso de terapia previo y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico. El curso de terapia previo puede ser cualquier terapia utilizada para tratar una infección por micobacteria o enfermedad pulmonar por NTM. La enfermedad pulmonar refractaria puede referirse también a una enfermedad pulmonar donde el esputo se convierte en un cultivo de bacilos acidorresistentes negativo después de 12 meses de una terapia adecuada.

Normalmente, el curso de terapia de primera línea o convencional para la enfermedad pulmonar por NTM comprende una terapia multifarmacológica con etambutol y un macrólido, tal como claritromicina o azitromicina. La terapia multifarmacológica puede comprender adicionalmente rifamicina o rifampina. Para una enfermedad más avanzada o refractaria, la estreptomicina o amikacina intravenosa puede añadirse al régimen multifarmacológico.

Normalmente, el curso de terapia de primera línea o convencional para la forma nodular/bronquiectásica de la enfermedad normalmente incluye un macrólido (por ejemplo, claritromicina, 1000 mg tres veces semanalmente o azitromicina, 500-600 mg tres veces semanalmente), etambutol (25 mg/kg tres veces semanalmente) y rifampina (600 mg tres veces semanalmente).

Normalmente, el curso de terapia de primera línea o convencional para la forma cavitante de la enfermedad normalmente incluye un macrólido (por ejemplo, claritromicina, 500-1000 mg diariamente o azitromicina, 250-300 mg diariamente), etambutol (15 mg/kg diariamente), rifampina (450-600 mg diariamente) y opcionalmente estreptomicina o amikacina intravenosa, normalmente durante los 2-3 primeros meses de terapia (por ejemplo, 25 mg/kg 2-3 veces semanalmente).

Normalmente, el curso de terapia de primera línea o convencional para la enfermedad avanzada o grave o previamente tratada, normalmente incluye un macrólido (por ejemplo, claritromicina, 500-1000 mg diariamente o azitromicina, 250­ 300 mg diariamente), etambutol (15 mg/kg diariamente), rifabutina (150-300 mg diariamente) o rifampina (450-600 mg diariamente) y estreptomicina o amikacina intravenosas, normalmente durante los 2-3 primeros meses de terapia (por ejemplo, 25 mg/kg 2-3 veces semanalmente).

Normalmente, el curso de terapia de primera línea o convencional para la tuberculosis pulmonar incluye uno o más de isoniazida, rifampina, rifabutina, rifapentina, pirazinamida y etambutol, que se pueden complementar con estreptomicina, amikacina, kanamicina y capreomicina intravenosa o intramuscular.

En ciertas realizaciones, el cocleato que comprende el antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina) se administra como monoterapia. En otras realizaciones, el cocleato que comprende el antibiótico aminoglucosídico (por ejemplo, amikacina) se administra como parte de una terapia multifarmacológica, incluyendo, por ejemplo, un curso de terapia convencional para tratar la enfermedad pulmonar por NTM o tuberculosis pulmonar, tal como los cursos de terapia convencionales descritos en el presente documento.

En ciertas realizaciones, el sujeto ha recaído tras un curso de terapia previo y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico. Como se utiliza en el presente documento, la "recaída" se refiere a la recurrencia de la enfermedad pulmonar. En ciertas realizaciones, el sujeto recae tras al menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 meses de un curso de terapia previo y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico. El curso de terapia previo puede ser cualquier terapia utilizada para tratar una infección por micobacterias, enfermedad pulmonar por NTM, enfermedad por NTM diseminada, tuberculosis pulmonar o lepra, incluyendo los cursos de terapia convencionales descrito anteriormente y los conocidos en la técnica.

El sujeto es un ser humano o un mamífero no humano, tal como un perro, un gato o un animal de granja. Normalmente, el sujeto es un ser humano.

7. Toxicidad reducida

La administración oral de los aminoglucósidos encocleados, tales como amikacina, muestran una toxicidad reducida en comparación con la administración parenteral de aminoglucósidos no encocleados. Los pacientes tratados con aminoglucósidos parenterales no encocleados deben estar en observación clínica estrecha, debido a la ototoxicidad y nefrotoxicidad potenciales asociadas con su uso. La seguridad de la administración parenteral de los aminoglucósidos no encocleados para periodos de tratamiento mayores de 14 días no se ha establecido.

Para la administración parenteral de los aminoglucósidos no encocleados, la neurotoxicidad, manifestada como ototoxicidad auditiva vestibular y permanente, puede aparecer en pacientes con daño renal preexistente y en pacientes con función renal normal tratada en dosis más altas y/o durante periodos más largos de los recomendados. El riesgo de ototoxicidad inducida por aminoglucósidos es mayor en pacientes con daño renal. La sordera de altas frecuencias a menudo aparece primero y puede detectarse solo mediante una prueba audiométrica. El vértigo puede aparecer y puede ser la prueba de una lesión vestibular. Otras manifestaciones de neurotoxicidad pueden incluir entumecimiento, hormigueo en la piel, contracciones musculares y convulsiones. El riesgo de pérdida auditiva debida a los aminoglucósidos aumenta con el grado de exposición a concentraciones séricas de picos altos o de valles altos. Los pacientes que desarrollan un daño coclear pueden no tener síntomas durante la terapia para advertirles del desarrollo de toxicidad del nervio octavo y puede producirse una sordera bilateral irreversible parcial o total después de que el fármaco se haya suspendido. La ototoxicidad inducida por aminoglucósidos normalmente es irreversible. Los aminoglucósidos también son potencialmente nefrotóxicos. El riesgo de nefrotoxicidad es mayor en pacientes con una función renal deteriorada y en los que reciben dosis elevadas o terapia prolongada. La dosis sin efecto adverso observado (NOAEL) de la amikacina intravenosa es de 100 mg/kg.

La administración de aminoglucósidos como parte de una formulación de cocleatos reduce la toxicidad asociada con los aminoglucósidos y permite la administración de dosis más altas de aminoglucósidos. La NOAEL de un régimen de tratamiento de 7 días con amikacina encocleada en ratas es de 200 mg/kg o superior, dos veces el nivel de la amikacina intravenosa. Figura 3.

En ciertas realizaciones, la NOAEL del antibiótico encocleado administrado (por ejemplo, un aminoglucósido, tal como amikacina) es superior a 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 400 o 500 mg/kg.

Debido a las preocupaciones de toxicidad, en los seres humanos, los niveles plasmáticos pico (Cmáx) de amikacina no deben exceder los 35 pg/ml y los niveles plasmáticos valle no deben exceder los 10 pg/ml. En ciertas realizaciones, el Cmáx del antibiótico encocleado administrado (por ejemplo, un aminoglucósido, tal como amikacina) está entre aproximadamente 100-500 ng/ml (0,1-0,5 pg/ml) o aproximadamente 100-400 ng/ml (0,1-0,4 pg/ml). La menor toxicidad y los valores de Cmáx menores para los antibióticos encocleados, tales como amikacina, permite que los antibióticos se suministren por vía oral en dosis inferiores con eficacia mejorada y toxicidad reducida. Como alternativa, debido a la menor toxicidad, el antibiótico encocleado puede administrarse más frecuentemente y/o a dosis más altas con menos riesgo de consecuencias adversas.

Ejemplos

Los ejemplos proporcionados más adelante son simplemente con fines ilustrativos. Los expertos en la materia serán capaces de determinar fácilmente los métodos y equipamiento adecuados con el fin de producir formas de dispersión sólidas adecuadas como se describe en el presente documento.

EJEMPLO 1: Tratamiento de cocleato de biopelícula de micobacterias

Sistema: Se cultivaron células epiteliales alveolares A549 en un sistema transwell. Las células A549 se polarizaron después de 6 días e integridad. Las bacterias sembraron en la parte superior (superficie apical) de las células. Se permitieron siete días para la formación de biopelícula.

Bacterias: Inóculo de infección del complejo Mycobacterium avium (MAC) 104 (105 bacterias).

Tratamiento: Se suministraron 0,1 ml de los diferentes tratamientos en el fondo del pocillo diariamente. La superficie basolateral (fondo) de las células se sumergieron en el medio de cultivo tisular presente en el fondo del pocillo. Se analizaron tres réplicas por grupo experimental en dos experimentos diferentes.

Extracción: La biopelícula y las células epiteliales se lisaron y diluyeron y se sembraron en 7H10.

Grupos experimentales UFC/bacteria, 14 días Valor p

Sin tratamiento 7,4 ± 0,3 x 106 -Cocleato vacío 6,9 ± 0,5 x 106 p > 0,05

Amikacina libre (100 pg/ml) 3,2 ± 0,3 x 105 p = 0,02

Amikacina libre (20 pg/ml) 9,1 ± 0,4 x 105 p < 0,05

Cocleato-amikacina (NaCI 0,66 M) 100 pg/ml 5,7 ± 0,4 x 105 p = 0,02

Cocleato-amikacina (NaCI 0,66 m ) 20 pg/ml 1,8 ± 0,4 x 106 p < 0,05

Cocleato-amikacina (sal biliar 2 mM)

_{100 pg/ml} 4,8 ± 0,3 x 105 p = 0,02

Cocleato-amikacina (sal biliar 2 mM) 20 pg/ml 8,0 ± 0,5 x 105 p < 0,05

Conclusiones: se encuentran biopelículas de M. avium en infección pulmonar. Aunque el cocleato vacío no tuvo actividad contra M. avium en biopelícula, ambas preparaciones de cocleatos (sodio y sal biliar) mostraron una actividad significativa contra M. avium en el modelo. Figura 1. La actividad antibacteriana de los cocleatos fue similar a la actividad de la amikacina libre (Figura 1), sugiriendo que en ausencia de células infectadas (porcentaje pequeño de la infección total), ambas preparaciones lograron un efecto comparable. La administración oral de la amikacina encocleada muestra una actividad anti-M. avium en biopelícula.

EJEMPLO 2: Tratamiento de cocleatos en ratones con enfermedad pulmonar

Modelo experimental: Se infectaron ratones C57 BL/6 con 8,3 x 106 del complejo Mycobacterium avium (MAC) por vía intranasal y se permitió que la infección se estableciera durante 7 días. A continuación, la carga bacteriana basal se determinó en 10 ratones y se iniciaron los protocolos de tratamiento. Los ratones se trataron durante 4 semanas (por vía oral o con inyección intraperitoneal de amikacina libre). Los ratones se recogieron y se extrajeron los bazos, se homogeneizaron y se sembraron para determinar la carga bacteriana. Los grupos experimentales tuvieron 12 ratones cada uno.

Bacterias: 8,3 x 106 MAC 104/HBSS

Resultados (carga bacteriana):

Valor inicial 55 ± 0,4 x 10⁵

Cocleato vacío 43 ± 0,6 x 10⁵

Amikacina libre oral 2 2 ± 0,5 x 10^{5 m}

Amikacina libre IP 100 mg/kg 56 ± 0,4 x 10^{3 (2 ) (3)}

Amikacina de cocleato 100 mg/kg/NaCI 0,66 M 9 8 ± 0.6 x 10^{3 (2 )(3 )(4 )}

Amikacina de cocleato 100 mg/kg/sal biliar 2 mM 9 1 ± 0.4 x 10^{3 (2 )(3 )(4 )}

Amikacina de cocleato 100 mg/kg/ lavado Ca⁺⁺ 9,7 ± 0.3 x 10^{3 (2 )(3 )(4 )}

(1) p > 0,05 en comparación con liposomas vacíos

(2) p < 0,05 en comparación con liposomas vacíos

(3) p < 0,05 en comparación con la infección basal

(4) Aproximadamente un 75 % de amikacina incorporada en los cocleatos_______________________________

La amikacina libre y las preparaciones de amikacina de cocleatos fueron eficaces para el tratamiento de la infección pulmonar por el complejo M. avium. Figura 2. La amikacina de cocleato 100 mg/kg NaCI 0,66 M, la amikacina de cocleato 100 mg/kg sal biliar 2 mM (sin lavar) y la amikacina de cocleato 100 mg/kg (lavada más Ca++) tuvieron cargas de UFC reducidas muy similares en 4 semanas (9,1 a 9,8 x 103), que fueron todas dos órdenes de magnitud significativamente más bajas que los cocleatos vacíos y la infección basal. El grupo de AMK libre de 100 mg/kg IP tuvo una carga de UFC restante que fue aproximadamente la mitad (5,6 x 103) de la observada en los grupos de tratamiento de CAMK. El efecto observado fue bactericida para todas las preparaciones de cocleatos administradas por vía oral y de la amikacina libre administrada IP. Sorprendentemente, la CAMK oral redujo la carga bacteriana en un 98 % tras 4 semanas de tratamiento diario (Figura 2), en comparación con una reducción de solo un 76,3 % (hígado) y un 86,7 % (bazo) cuando se utilizó CAMK oral para tratar ratones con infección por M. avium diseminada. Como se ha indicado anteriormente, la eficacia de encocleado fue de aproximadamente un 75 % para los grupos de tratamiento de CAMK, los cuales normalizaron la dosis de 100 mg/kg/día a 75 mg/kg/día.

Los resultados histopatológicos sugirieron una no toxicidad similar entre las preparaciones de CAMK y AMK libre IP. En conjunto, se observó una no toxicidad (incluyendo la histopatología de los riñones).

En conclusión, los experimentos de anti-infectividad in vivo contra MAC en el modelo de infección pulmonar de ratón C57 BL/6 sugieren que tanto las preparaciones de sales biliares 2 mM como la formulación de NaCI 0,66 de sal elevada tienen una eficacia comparable respecto a la formulación de AMK libre IP de 100 mg/kg. Los resultados de histopatología sugieren una no toxicidad similar entre la CAMK preparada con sales biliares o NaCI 0,66 M de sal elevada. En conjunto, se observó una no toxicidad (incluyendo la histopatología de los riñones).

EJEMPLO 3: Perfil de toxicidad in vivo de amikacina encocleada

La amikacina (AMK) es un aminoglucósido de amplio espectro comúnmente administrado por vía parenteral. El tratamiento con AMK con frecuencia se asocia con oto- y nefrotoxicidad, por tanto, se requiere un control cuidadoso de los niveles sanguíneos. Para superar los problemas asociados con la administración y toxicidad de AMK, se ha desarrollado una formulación de cocleatos (CAMK) para el suministro oral.

Para evaluar la toxicidad de la CAMK, se administró a ratas Sprague Dawley macho y hembra (5/sexo/grupo) una dosis oral de 50 mg/kg/día o 200 mg/kg/día de CAMK en NaCI 0,66 M, en sales biliares 1 mM o en sales biliares 2 mM durante 7 días. Se administró AMK libre a 200 mg/kg/día oral y a 50 mg/kg/día intravenosa (iv). Las ratas se sacrificaron el Día 8. Los parámetros que se evaluaron incluyen la mortalidad/morbilidad, observaciones clínicas, pesos corporales, de fármacos en plasma, análisis toxicocinéticos, patología clínica, observaciones de necropsia, peso de los órganos e histopatología.

Todos los animales sobrevivieron a su sacrificio programado. No hubo observaciones clínicas relacionadas con el artículo de prueba considerables durante el periodo de tratamiento excepto mancha fecal y heces blandas, principalmente en machos. No hubo cambios considerables de peso corporal en los grupos tratados con CAMK.

No se observaron cambios en parámetros hematológicos en ninguno de los grupos tratados por vía oral que se atribuyeran al tratamiento con formulaciones de amikacina. Además, no se observaron cambios microscópicos en médula ósea o bazo.

El tratamiento con amikacina genérica a 50 mg/kg iv produjo una reducción en RBC (eritrocitos) y HGB (hemoglobina) con una disminución asociada en MCHC (concentración de hemoglobina corpuscular media) así como aumentos en REW, RET y REA en machos y disminuciones en MCH, RDW, RET y REA en hembras. Estos cambios pueden indicar eritropoyesis compensatoria, aunque, de nuevo, no se observaron efectos directos sobre la médula ósea al microscopio.

Se observaron aumentos modestos en colesterol, triglicéridos, proteína total y globulina esporádicamente en algunos de los grupos tratados con amikacina. Estos cambios generalmente fueron pequeños y no relacionados con la dosis claramente. Los cambios en algunos de estos niveles pueden estar asociados con cambios en el consumo de comida, pero la falta de diferencias en los pesos corporales entre grupos refuta esta hipótesis. Estos cambios pueden estar relacionados con cambios modestos en el hígado y se observaron disminuciones considerables en los pesos del hígado en varios grupos; sin embargo, estos cambios igualmente no estaban relacionados con la dosis claramente y el tamaño del hígado disminuido no es consecuente con los aumentos observados en estos parámetros. No hubo cambios microscópicos observados en el hígado que sugirieran efectos adversos de ninguna de las formulaciones de amikacina en el hígado, sugiriendo que todos estos cambios son de una significación toxicológica mínima.

Los cambios de pesos de órganos se observaron principalmente en los grupos de CAMK-NaCI y en los grupos tratados con amikacina genéricos. Las disminuciones de peso en corazón, riñón e hígado de un 10-16 % con las correspondientes disminuciones en las relaciones órgano respecto al peso corporal u órgano respecto al peso del cerebro (9,5-15 %) se observaron en hembras tratadas con CAMK-NaCI a 200 mg/kg. Con la amikacina genérica (AMK), se observaron aumentos en las relaciones riñón y bazo respecto al peso corporal (10-22 %) en machos en el grupo de amikacina genérica iv de 50 mg/kg, pero no en hembras. Estos hallazgos no se consideraron de significación toxicológica, debido a la falta de cambios histopatológicos dentro de estos órganos.

La CAMK en tres formulaciones de vehículo diferentes y control de vehículo (cocleatos vacíos) fue bien tolerada por las ratas Sprague Dawley a 50 y 200 mg/kg durante 7 días sin efectos aparentes sobre la mortalidad/morbilidad, observaciones clínicas, pesos corporales, consumo de comida, oftalmología o patología clínica (hematología, química clínica y coagulación). Entre los grupos de dosis, la CAMK oral proporcionó niveles plasmáticos 100 veces más bajos de AMK que la dosis iv. Hubo una tendencia hacia una exposición más baja el Día 7 frente al Día 1 en varios grupos de dosis. La información de prescripción de amikacina afirma que los niveles plasmáticos pico (Cmáx) de amikacina no deben exceder los 35 pg/ml y los niveles plasmáticos valle no deben exceder los 10 pg/ml. La Cmáx de todas las formulaciones de CAMK no excedió de los 0,5 pg/ml (500 ng/ml). Figura 3.

Basándose en los cambios en los pesos de los órganos, la dosis sin efecto adverso observado (NOAEL) se considera menor de 50 mg/kg para CAMK en NaCI y de 200 mg/kg para CAMK en sal biliar 1 mM y 2 mM. Figura 4. Esto se compara favorablemente con la NOAEL para amikacina inyectada en ratas, que es de 100 mg/kg. Figura 4. Los diversos cambios observados en todos los grupos de tratamiento fueron de significación toxicológica mínima; por tanto, la dosis máxima tolerada (MTD; del inglés, maximum tolerated dose) se considera que es mayor que 200 mg/kg/día para todas las formulaciones de dosis. Esta MTD es mucho más elevada que la dosis intravenosa recomendada actualmente de 25 mg/kg tres veces semanalmente para pacientes con enfermedad pulmonar por NTM.

La amikacina se administra normalmente por vía intravenosa (IV) o por vía intramuscular a 10-25 mg/kg/día para infecciones bacterianas (aproximadamente 300-500 mg como una dosis única para un ser humano típico de 70 kg) para fijar el objetivo en concentraciones pico de plasma (o suero) y valle menores de 35 pg/ml y 10 pg/ml, respectivamente. Tras 7 días, la exposición de dosis repetidas de solución de sales biliares de CAMK de 200 mg/kg en ratas, la exposición sistémica de amikacina representó menos de un 2 % de la exposición sistémica tras una dosis IV de 50 mg/kg. Se consideró que la NOAEL era de 200 mg/kg para CAMK. Por tanto, asumiendo una biodisponibilidad oral similar de CAMK en ratas y seres humanos, se esperaría que una dosis de CAMK de 800 mg produjera concentraciones de picos en plasma menores que la concentración valle típica observada tras la AMK IV, con concentraciones de CAMK valle en niveles considerablemente menores. Utilizando una conversión de 0,16 para el peso corporal entre ratas y seres humanos, la dosis equivalente en seres humanos (HED; del inglés, human equivalent dose) de la NOAEL observada en ratas se traduciría en una HED de 32 mg/kg/día. Para un ser humano típico de 70 kg, por tanto, la HED de la NOAEL es de 2240 mg/día. Aplicando un factor de seguridad de aproximadamente 10 veces, la dosis de inicio recomendada mínima es de aproximadamente 224 mg/día.

Los expertos en la técnica reconocerán o serán capaces de determinar usando sólo experimentación rutinaria, muchos equivalentes a las realizaciones específicas de la invención descrita en el presente documento. Se pretende que dichos equivalentes estén abarcados por las siguientes reivindicaciones.

Claims (14)

REIVINDICACIONES

1. Una formulación que comprende un cocleato, en donde el cocleato comprende un antibiótico aminoglucosídico, para usar en un método para tratar un sujeto con una enfermedad pulmonar por micobacterias, el método que comprende la administración por vía oral al sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de la formulación y en donde la carga bacteriana en el sujeto se reduce en al menos un 90 % tras el tratamiento.

2. La formulación para el uso según la reivindicación 1, en donde

(a) la enfermedad pulmonar por micobacterias es la tuberculosis pulmonar, preferentemente en donde la tuberculosis pulmonar está provocada por M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti y M. canetti; o (b) la enfermedad pulmonar por micobacterias es una enfermedad pulmonar micobacteriana no tuberculosa (NTM), preferentemente en donde la MTN se selecciona del grupo que consiste en Mycobacterium avium, M. kanasasii, M. abscessus, M. xenopi, M. avium, M. intracellulare y complejo Mycobacterium avium.

3. La formulación para usar de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde la carga bacteriana en el sujeto se reduce en al menos un 95 % o un 98 % tras el tratamiento y/o en donde la carga bacteriana en el sujeto se reduce en al menos un 90 %, un 95 % o un 98 % tras al menos 4 semanas de tratamiento.

4. La formulación para usar en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el sujeto tiene enfermedad pulmonar refractaria tras un curso de terapia convencional y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico aminoglucosídico, preferentemente en donde el sujeto tiene enfermedad pulmonar refractaria tras al menos 6 meses de un curso de terapia previo y antes de la administración del cocleato que comprende el antibiótico aminoglucosídico.

5. La formulación para usar en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde

(a) el cocleato que comprende el antibiótico aminoglucosídico es para la administración como monoterapia o (b) el cocleato que comprende el antibiótico aminoglucosídico es para la administración como parte de una terapia multifarmacológica, preferentemente en donde la terapia multifármacológica comprende etambutol y un macrólido, tal como claritromicina o azitromicina, preferentemente en donde la terapia multifarmacológica comprende adicionalmente rifamicina o rifampina.

6. La formulación para usar en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde una dosis sin efecto adverso observado (NOAEL) de los aminoglucósidos es mayor que 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 400, 500, 750, 1000 o 1500 mg/kg.

7. La formulación para usar en cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el antibiótico aminoglucosídico se selecciona del grupo que consiste en amikacina, gentamicina, paromomicina, capreomicina, tobramicina, kanamicina y neomicina, más preferentemente en donde el antibiótico aminoglucosídico es amikacina.

8. La formulación para usar en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde

(a) el antibiótico aminoglucósido es para la administración en una posología de entre 5-20 mg/kg, 5-15 mg/kg, 5­ 10 mg/kg, 10-15 mg/kg, 10-20 mg/kg, 5-10 mg/kg, 5-25 mg/kg o 1-30 mg/kg y/o

(b) el antibiótico aminoglucósido es para la administración en una posología de aproximadamente 400­ 1000 mg/día, 200-2000 mg/día, 100-4000 mg/día, 300-800 mg/día, 400-800 mg/día, 200-800 mg/día, 100­ 600 mg/día, 200-600 mg/día, 400-600 mg/día o 300-700 mg/día.

9. La formulación para usar en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la formulación de cocleato comprende adicionalmente cloruro sódico, preferentemente en donde la formulación de cocleato contiene cloruro sódico 1 mM a 1M o 0,5M a 1M.

10. La formulación para usar en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde la formulación de cocleato comprende adicionalmente sales biliares, preferentemente en donde

(a) la formulación de cocleato contiene sales biliares 0,1 mM a 100 M o 0,1 mM a 0,5 mM; y/o

(b) la sal biliar es una o más de las siguientes: colato, quenodesoxicolato, taurocolato, glicocolato, tauroquenodesoxicolato, glicoquenodesoxicolato, desoxicolato o litocolato.

11. La formulación para usar en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde

(a) la formulación de cocleato es para la administración una vez al día, dos veces al día, tres veces al día o cuatro veces al día; y/o

(b) la formulación de cocleato es para la administración diariamente durante al menos 1 mes, 2 meses, 3 meses, al menos 4 meses o al menos 6 meses.

12. La formulación para usar en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el sujeto es un mamífero, preferentemente en donde el sujeto es un ser humano.

13. La formulación para usar en una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el cocleato comprende uno o más lípidos cargados negativamente, en donde dichos uno o más lípidos cargados negativamente comprenden entre un 40 % a un 70 % del lípido total en el cocleato, preferentemente en donde dichos uno o más lípidos cargados negativamente comprenden entre un 45 % a un 60 % del lípido total en el cocleato, preferentemente en donde dichos uno o más lípidos cargados negativamente comprenden fosfatidilserina, más preferentemente en donde la fosfatidilserina es fosfatidilserina de soja.

14. La formulación para el uso según la reivindicación 13, en donde el cocleato comprende adicionalmente uno o más lípidos o esteroles neutros o catiónicos, preferentemente en donde dichos uno o más lípidos o esteroles neutros o catiónicos se seleccionan del grupo que consiste en fosfatidilcolina y esfingomielina.