CN114224899B - 非达霉素用于制备抑制脓肿分枝杆菌活性的产品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了非达霉素用于制备抑制脓肿分枝杆菌活性的产品。本发明提供了非达霉素或其药学上可接受的盐或以非达霉素或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在制备用于抑制脓肿分枝杆菌活性的产品中的应用。本发明以采用微孔板二倍稀释法进行非达霉素抗脓肿分枝杆菌活性测定,结果表明,非达霉素对脓肿分枝杆菌标准株和临床分离的脓肿分枝杆菌均有较好的抑菌活性,有望发掘出非达霉素在预防和治疗脓肿分枝杆菌感染疾病中的新用途。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及非达霉素用于制备抑制脓肿分枝杆菌活性的产品。
背景技术
非结核分枝杆菌(non-tuberculous Mycobacteria,NTM)是指除结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。非结核分枝杆菌的特性有别于结核分枝杆菌,如对酸、碱比较敏感;对常用的抗结核菌药物具有极高的耐药性,如对异烟肼、利福平、链霉素等常用抗结核药物都存在不同程度的耐药;生长温度不如结核分枝杆菌严格;多存在于环境中;为条件致病菌。近年来,由NTM所引起的感染呈逐渐上升趋势,严重威胁人类健康。因此寻找NTM治疗效果较佳的药品非常有必要。
脓肿分枝杆菌,是一种快速生长型非结核分枝杆菌,为引起皮肤、软组织和骨的病变主要原因之一。脓肿分枝杆菌对常见的抗结核药物,如利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇等均不同程度耐药;对常见的治疗NTM的药物,如克拉霉素也有60%-80%耐药率,且大多菌株同时对多种抗结核药物耐药。
非达霉素(fidaxomicin)是由Optimer制药公司研发,于2011年5月27日获FDA批准的一种新型窄谱的大环内酯类抗菌药,用于治疗艰难梭菌感染。
目前尚未有非达霉素抑制脓肿分枝杆菌的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种非达霉素的新的用途。
第一方面,本发明要求保护a1)非达霉素或a2)其药学上可接受的盐或a3)以非达霉素或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在如下任一中的应用:
(A1)制备用于抑制脓肿分枝杆菌活性的产品;
(A2)抑制脓肿分枝杆菌活性。
第二方面,本发明要求保护a1)非达霉素或a2)其药学上可接受的盐或a3)以非达霉素或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在如下任一中的应用:
(B1)制备用于抗脓肿分枝杆菌感染的产品;
(B2)抗脓肿分枝杆菌感染。
第三方面,本发明要求保护a1)非达霉素或a2)其药学上可接受的盐或a3)以非达霉素或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在如下任一中的应用:
(C1)制备用于预防和/治疗由于脓肿分枝杆菌感染所致疾病的产品;
(C2)预防和/治疗由于脓肿分枝杆菌感染所致疾病。
第四方面,本发明要求保护a1)非达霉素或a2)其药学上可接受的盐或a3)以非达霉素或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在如下任一中的应用:
(D1)制备脓肿分枝杆菌抑菌剂;
(D2)作为脓肿分枝杆菌抑菌剂。
第五方面,本发明要求保护一种产品。
本发明所要求保护的产品,其活性成分为非达霉素或其药学上可接受的盐;所述产品具有如下任一用途:
(a1)抑制脓肿分枝杆菌活性;
(a2)抗脓肿分枝杆菌感染;
(a3)预防和/治疗由于脓肿分枝杆菌感染所致疾病。
第六方面,本发明要求保护一种脓肿分枝杆菌抑菌剂。
本发明所要求保护的脓肿分枝杆菌抑菌剂,其活性成分为非达霉素或其药学上可接受的盐。
在上述各方面中,所述脓肿分枝杆菌可为脓肿分枝杆菌标准株或脓肿分枝杆菌临床分离株或脓肿分枝杆菌感染的患者携带的脓肿分枝杆菌。
在本发明的一个具体实施方式中,所述脓肿分枝杆菌为脓肿分枝杆菌标准株ATCC19977。
在本发明的另一个具体实施方式中,所述脓肿分枝杆菌为脓肿分枝杆菌临床分离株。
在上述各方面中,所述产品均可为药品。
第七方面,本发明要求保护一种抑制脓肿分枝杆菌活性的方法。
本发明所要求保护的抑制脓肿分枝杆菌活性的方法,是使用非达霉素或其药学上可接受的盐或以非达霉素或其药学上可接受的盐为活性成分的物质抑制脓肿分枝杆菌活性。
其中,所述脓肿分枝杆菌可为脓肿分枝杆菌标准株或脓肿分枝杆菌临床分离株。
在所述方法中,所述非达霉素或其药学上可接受的盐或以非达霉素或其药学上可接受的盐为活性成分的物质的用量不小于其对待抑制的所述脓肿分枝杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。
所述方法为非疾病诊断治疗方法。如作为阳性对照用于开发脓肿分枝杆菌敏感药物。
在上述各方面中,所述非达霉素的分子式为C52H74Cl2O18;结构式如式I所示。
本发明以采用微孔板二倍稀释法进行非达霉素抗脓肿分枝杆菌活性测定,结果表明,非达霉素对脓肿分枝杆菌标准株和临床分离的脓肿分枝杆菌均有较好的抑菌活性,有望发掘出非达霉素在预防和治疗脓肿分枝杆菌感染疾病中的新用途。
附图说明
图1为非达霉素对临床分离的脓肿分枝杆菌菌株的MIC浓度分布。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南,并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。
非达霉素(CAS:873857-62-6):Sigma产品,货号:SML1750;CAS No.:873857-62-6;分子式:C52H74Cl2O18。结构式如式I所示。
脓肿分枝杆菌标准株:ATCC 19977。
实施例1、非达霉素对脓肿分枝杆菌标准菌株的抑菌活性检测
待测药物:非达霉素
1、在96孔板的每孔中加入100μl Mueller Hinton(MH)培养基;
2、完成步骤1后,取所述96孔板,在第12列加入100μl浓度为128μg/mL的待测药物溶液(采用DMSO配制),混匀后吸出100μl加入第11列,依次梯度稀释至第2列后,抽出100μl弃掉,第1列不含药物,为阳性对照孔。每个浓度设置3个复孔。
3、完成步骤2后,取所述96孔板,每孔加入100μl脓肿分枝杆菌标准菌株ATCC19977的菌悬液,使每孔中最终容积均为200μl,菌液终浓度2.5×105CFU/mL;各列孔内的最终药物浓度具体见表1。
脓肿分枝杆菌标准菌株ATCC 19977的菌悬液制备方法:将脓肿分枝杆菌标准菌株ATCC 19977接种于中性罗氏培养基中,37℃温箱中培养1周后刮取中性罗氏培养基上处于生长对数期菌株,磨菌比浊后用Mueller Hinton(MH)培养基稀释。
表1各列孔内的最终药物浓度
列数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
药物浓度(μg/mL) | 0 | 0.0625 | 0.125 | 0.25 | 0.5 | 1 | 2 | 4 | 8 | 16 | 32 | 64 |
4、完成步骤3后,将所述96孔板放至37℃温箱中,培养3天。
5、完成步骤4后,取所述96孔板,每孔加入20μl ALamar blue和50μl 5%Tween80,然后继续放至37℃温箱中培养24h。
6、完成步骤5后,取所述96孔板,读取最小抑菌浓度(MIC)并计算抑制率。
最小抑菌浓度(MIC)读取方法:最小抑菌浓度(MIC)即为能够抑制90%菌落生长的药物浓度。通过荧光检测(Ex/Em,530nm/600nm)抑制>90%还原型Alamar blue生成的最小药物浓度。
抑制率%=100%-(检测孔荧光值-背景荧光值)/(生长对照孔荧光值-背景荧光值)×100%。
背景荧光值为阴性对照的荧光值,生长对照孔荧光值为阳性对照的荧光值。
阴性对照为未加药物和菌液的培养基,阳性对照为未加药物的含菌培养基。
结果显示,非达霉素对脓肿分枝杆菌标准株ATCC 19977的MIC为2μg/mL。
实施例2、非达霉素对临床分离脓肿分枝杆菌菌株的抑菌活性检测
临床分离菌株:23株从脓肿分枝杆菌感染患者痰标本中分离培养出的菌株,经16SrRNA、hsp65、rpoB、16-23S rRNA间区测序鉴定为脓肿分枝杆菌。
待测药物:非达霉素。
按照实施例1中的方法,检测待测药物对23株临床分离脓肿分枝杆菌菌株的抑菌活性。
MIC结果如表2所示。MIC浓度分布统计结果如表3和图1所示。
表2非达霉素对临床分离脓肿分枝杆菌菌株的抑菌活性
表3非达霉素对临床分离脓肿分枝杆菌菌株的MIC浓度分布统计结果
药物浓度(μg/mL) | 0.0625 | 0.125 | 0.25 | 0.5 | 1 | 2 | 4 | 8 | 16 | 32 | 64 |
非达霉素 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 4 | 2 | 3 | 9 | 2 | 0 |
结果表明,非达霉素对临床分离的脓肿分枝杆菌有较好的抑菌活性,有望发掘出非达霉素在治疗脓肿分枝杆菌感染疾病中的新用途。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说,在不脱离本发明的宗旨和范围,以及无需进行不必要的实验情况下,可在等同参数、浓度和条件下,在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例,应该理解为,可以对本发明作进一步的改进。总之,按本发明的原理,本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进,包括脱离了本申请中已公开范围,而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围,可以进行一些基本特征的应用。
Claims (4)
1.非达霉素或其药学上可接受的盐在制备用于抗脓肿分枝杆菌感染的药品中的应用。
2.非达霉素或其药学上可接受的盐在制备用于治疗由于脓肿分枝杆菌感染所致疾病的药品中的应用。
3.非达霉素或其药学上可接受的盐在制备脓肿分枝杆菌抑菌剂中的应用。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用,其特征在于:所述脓肿分枝杆菌为脓肿分枝杆菌标准株或脓肿分枝杆菌临床分离株或脓肿分枝杆菌感染的患者携带的脓肿分枝杆菌。
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