ES2867048T3 - Derivados deuterados de ruxolitinib - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula I: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: Y6, Y7 e Y8 son cada uno hidrógeno y el compuesto (comp.) es el expuesto en la tabla a continuación: **(Ver fórmula)** en el que cada átomo no indicado como "D" (deuterio) está presente en su abundancia isotópica natural, y en el que una posición indicada específicamente como "D" tiene al menos un 90 % de incorporación de deuterio.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados deuterados de ruxolitinib

Solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de Estados Unidos n.° de serie 61/660428, presentada el 15 de junio de 2012, y la solicitud provisional de Estados Unidos n.° de serie 61/678795, presentada el 2 de agosto de 2012.

Antecedentes de la invención

Muchas medicinas actuales tienen malas propiedades de absorción, distribución, metabolismo y/o excreción (ADME) que evitan su uso más amplio o limitan su uso en determinadas indicaciones. Las malas propiedades de ADME también son una razón principal para el fracaso de candidatos de fármacos en ensayos clínicos. Aunque las tecnologías de formulación y estrategias de profármacos pueden emplearse en algunos casos para mejorar determinadas propiedades de ADME, estas estrategias a manudo no logran abordar los problemas de ADME subyacentes que existes para muchos fármacos y candidatos de fármacos. Uno de dichos problemas es el rápido metabolismo, que provoca que varios fármacos, que de lo contrario serían muy eficaces en el tratamiento de una enfermedad, se eliminen demasiado rápidamente del organismo. Una posible solución a la rápida eliminación de fármacos es la dosificación frecuente o alta para obtener un nivel en plasma suficientemente alto de fármaco. Esto, sin embargo, introduce varios posibles problemas de tratamiento tales como poco cumplimiento del paciente con la pauta posológica, efectos secundarios que llegan a ser más agudos con mayores dosis y coste aumentado del tratamiento. Un fármaco metabolizado rápidamente también puede exponer a los pacientes a metabolitos tóxicos o reactivos indeseables.

Otra limitación de ADME que afecta a muchas medicinas es la formación de metabolitos tóxicos o biológicamente reactivos. Como resultado, algunos pacientes que reciben el fármaco pueden experimentar toxicidades, o la dosificación segura de dichos fármacos puede limitarse de modo que los pacientes reciban una cantidad subóptima del agente activo. En determinados casos, modificar los intervalos de dosificación o estrategias de formulación puede ayudar a reducir los efectos adversos clínicos, pero a menudo la formación de dichos metabolitos indeseables es intrínseca al metabolismo del compuesto.

En algunos casos seleccionados, se coadministrará un inhibidor metabólico con un fármaco que se elimina demasiado rápidamente. Tal es el caso con la clase de fármacos inhibidores de proteasa que se usan para tratar la infección por el VIH. La FDA recomienda que estos fármacos se dosifiquen conjuntamente con ritonavir, un inhibidor de la enzima 3A4 de citocromo P450 (CYP3A4), la enzima típicamente responsable de su metabolismo (véase, Kempf, D.J. et al., Antimicrobial agents and chemotherapy, 1997, 41(3): 654-60). El ritonavir, sin embargo, provoca efectos adversos y aumenta la carga de píldoras de los pacientes con VIH que ya deben tomar una combinación de diferentes fármacos. Asimismo, el inhibidor de CYP2D6 quinidina se ha añadido al dextrometorfano con el propósito de reducir el rápido metabolismo de CYP2D6 del dextrometorfano en un tratamiento de labilidad afectiva. La quinidina, sin embargo, tiene efectos secundarios indeseados que limitan enormemente su uso en una posible politerapia (véase, Wang, L et al., Clinical Pharmacology and Therapeutics, 1994, 56(6 Pt 1): 659-67; y la etiqueta de la FDA para quinidina en www.accessdata.fda.gov).

En general, la combinación de fármacos con inhibidores de citocromo P450 no es una estrategia satisfactoria para disminuir la eliminación de fármacos. La inhibición de la actividad de una enzima CYP puede afectar al metabolismo y eliminación de otros fármacos metabolizados por esa misma enzima. La inhibición de CYP puede provocar que otros fármacos se acumulen en el organismo hasta niveles tóxicos.

Una estrategia potencialmente atractiva para mejorar las propiedades metabólicas de un fármaco es la modificación con deuterio. En esta estrategia, se intenta ralentizar el metabolismo mediado por CYP de un fármaco o reducir la formación de metabolitos indeseables remplazando uno o más átomos de hidrógeno con átomos de deuterio. El deuterio es un isótopo seguro, estable, no radioactivo de hidrógeno. En comparación con el hidrógeno, el deuterio forma enlaces más fuertes con carbono. En casos seleccionados, la fuerza de enlace aumentada conferida por el deuterio puede impactar positivamente en las propiedades de ADME de un fármaco, creando la posibilidad de eficacia, seguridad y/o tolerabilidad del fármaco mejoradas. Al mismo tiempo, como el tamaño y la forma del deuterio son esencialmente idénticos a los del hidrógeno, no se esperaría que el remplazo de hidrógeno por deuterio afectara a la potencia bioquímica y selectividad del fármaco en comparación con la entidad química original que contiene solamente hidrógeno.

Durante los últimos 35 años, se ha informado de efectos de la sustitución de deuterio sobre la tasa de metabolismo para un porcentaje muy pequeño de fármacos aprobados (véase, por ejemplo, Blake, MI et al., J Pharm Sci, 1975, 64:367-91; Foster, AB, Adv Drug Res 1985, 14:1-40 ("Foster"); Kushner, DJ et al., Can J Physiol Pharmacol 1999, 79­ 88; Fisher, MB et al., Curr Opin Drug Discov Devel, 2006, 9:101-09 ("Fisher")). Muchos de los ejemplos en estas referencias informan de un efecto local del isótopo deuterio (un efecto sobre la tasa de metabolismo en un sitio específico de deuteración en el sustrato) en lugar del efecto de deuteración sobre la estabilidad metabólica global del fármaco, es decir, el consumo de sustrato global mediante metabolismo. Los resultados presentados de esos estudios que miden el efecto de la sustitución con deuterio sobre la estabilidad metabólica global son variables e impredecibles. Para algunos compuestos, la deuteración provocaban eliminación metabólica disminuida in vivo. Para otros, no había cambio en el metabolismo. Otros más mostraron eliminación metabólica aumentada. La variabilidad en los efectos del deuterio también ha conducido a los expertos a cuestionar o desechar la modificación con deuterio como una estrategia de diseño de fármacos viable para inhibir el metabolismo adverso (véase, Foster en p. 35 y Fisher en p. 101).

Los efectos de la modificación con deuterio sobre las propiedades metabólicas de un fármaco no son predecibles incluso cuando los átomos de deuterio se incorporan en sitios conocidos de metabolismo. Solamente preparando realmente y ensayando un fármaco deuterado se puede determinar si la tasa de metabolismo diferirá y cuánto con respecto a la de su equivalente no deuterado. Véase, por ejemplo, Fukuto et al. (J. Med. Chem. 1991, 34, 2871-76). Muchos fármacos tienen múltiples sitios donde es posible el metabolismo. El uno o más sitios donde se requiere sustitución con deuterio y el grado de deuteración necesario para observar un efecto sobre el metabolismo, si lo hay, serán diferentes para cada fármaco.

El fosfato de ruxolitinib es una pirrolo[2,3-d]pirimidina sustituida con heteroarilo también conocida como fosfato de 3(fí)-ciclopentil-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrilo y como fosfato de (R)-3-(4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il)-3-ciclopentilpropanonitrilo, inhibe las cinasas asociadas a Janus (JAK) JAK1 y JAK2. Estas cinasas median la señalización de varias citocinas y factores de crecimiento importantes para la hematopoyesis y la función inmunitaria. La señalización de JAK implica el reclutamiento de STAT (transductores de señales y activadores de la transcripción) a receptores de citocinas, la activación y posterior localización de STAT en el núcleo que da lugar a la modulación de la expresión génica.

El fosfato de ruxolitinib está aprobado actualmente para el tratamiento de pacientes con mielofibrosis de riesgo intermedio o alto, incluyendo mielofibrosis primaria, mielofibrosis tras policitemia vera y mielofibrosis tras trombocitemia esencial. El fosfato de ruxolitinib también está actualmente en ensayos clínicos para el tratamiento de trombocitemia esencial, cáncer pancreático, cáncer de próstata, cáncer de mama, leucemia, linfoma no hodgkiniano, mieloma múltiple y psoriasis.

Se han identificado tres metabolitos en seres humanos como activos, que resultan de la hidroxilación en la posición 2 en el resto ciclopentilo, que resultan de la hidroxilación en la posición 3 en el resto ciclopentilo y la cetona resultante de la oxidación adicional en la posición 3 en el resto ciclopentilo. (Véase, Shilling, A.D. et al., Drug Metabolism and Disposition, 2010, 38(11): 2023-2031; ficha técnica de la FDA y documento US20080312258).

Las reacciones adversas hemáticas más comunes asociadas con la dosificación de ruxolitinib son trombocitopenia y anemia. Las reacciones adversas no hemáticas más comunes son hematomas, mareos y cefalea.

A pesar de las actividades beneficiosas del ruxolitinib, hay una necesidad continuada de nuevos compuestos para tratar las enfermedades y afecciones mencionadas anteriormente.

Sumario de la invención

Como se define en las reivindicaciones adjuntas, esta invención se refiere a un derivado deuterado novedoso de ruxolitinib, y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Esta invención también proporciona composiciones que comprenden el compuesto de esta invención y el uso de dichas composiciones en métodos de tratamiento de enfermedades y afecciones que se tratan beneficiosamente administrando un inhibidor de la cinasa asociada a Janus con selectividad por los subtipos 1 y 2 (JAK1/JAK2).

Descripción detallada de la invención

Definiciones

El término "tratar" significa reducir, suprimir, atenuar, disminuir, detener o estabilizar el desarrollo o progresión de una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad o trastorno definido en este documento), rebajar la gravedad de la enfermedad o mejorar los síntomas asociados con la enfermedad.

"Enfermedad" significa cualquier afección o trastorno que daña o interfiere con la función normal de una célula, tejido u órgano.

Se reconocerá que se produce alguna variación de la abundancia isotópica natural en un compuesto sintetizado dependiendo del origen de los materiales químicos usados en la síntesis. Por tanto, una preparación de ruxolitinib contendrá de forma inherente pequeñas cantidades de isotopólogos deuterados. La concentración de isótopos de hidrógeno y carbono estables abundantes de forma natural, a pesar de esta variación, es pequeña e irrelevante en comparación con el grado de sustitución isotópica estable del compuesto de esta invención. Véase, por ejemplo, Wada, E et al., Seikagaku, 1994, 66:15; Gannes, LZ et al., Comp Biochem Physiol Mol Integr Physiol, 1998, 119:725.

En el compuesto de esta invención, se entiende que cualquier átomo no indicado específicamente como un isótopo particular representa cualquier isótopo estable de ese átomo. Salvo que se indique de otro modo, cuando una posición se indica específicamente como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural. Además, cuando una posición se indica específicamente como "D" o "deuterio", se entiende que la posición tiene deuterio a una abundancia que es al menos 6000 veces mayor que la abundancia natural de deuterio, que es de un 0,015 % (es decir, al menos un 90 % de incorporación de deuterio).

La expresión "factor de enriquecimiento isotópico", como se usa en este documento, significa la relación entre la abundancia isotópica y la abundancia natural de un isótopo especificado.

En otras realizaciones, el compuesto de esta invención tiene un factor de enriquecimiento isotópico para cada átomo de deuterio indicado de al menos 6333,3 (un 95 % de incorporación de deuterio), al menos 6466,7 (un 97 % de incorporación de deuterio), al menos 6600 (un 99 % de incorporación de deuterio) o al menos 6633,3 (un 99,5 % de incorporación de deuterio).

El término "isotopólogo" se refiere a una especie en que la estructura química difiere del compuesto de esta invención solamente en la composición isotópica del mismo.

El término "compuesto", cuando se refiere al compuesto de esta invención, se refiere a una colección de moléculas que tienen una estructura química idéntica, excepto que puede haber variación isotópica entre los átomos constituyentes de las moléculas. Por tanto, estará claro para los expertos en la materia que un compuesto representado por una estructura química particular que contiene átomos de deuterio indicados, también contendrá menores cantidades de isotopólogos que tienen átomos de hidrógeno en una o más de las posiciones de deuterio indicadas en esa estructura. La cantidad relativa de dichos isotopólogos en el compuesto de esta invención dependerá de varios factores, incluyendo la pureza isotópica de reactivos deuterados usados para preparar el compuesto y la eficacia de incorporación de deuterio en las diversas etapas de síntesis usadas para preparar el compuesto. Sin embargo, como se expone anteriormente, la cantidad relativa de dichos isotopólogos en conjunto será de menos de un 49,9 % del compuesto. En otras realizaciones, la cantidad relativa de dichos isotopólogos en conjunto será de menos de un 47,5 %, menos de un 40 %, menos de un 32,5 %, menos de un 25 %, menos de un 17,5 %, menos de un 10 %, menos de un 5 %, menos de un 3 %, menos de un 1 % o menos de un 0,5 % del compuesto.

También se divulgan sales del compuesto de la invención. Una sal del compuesto de esta invención se forma entre un ácido y un grupo básico del compuesto, o una base y un grupo ácido del compuesto. De acuerdo con otra realización de la invención, el compuesto es una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable.

La expresión "farmacéuticamente aceptable", como se usa en este documento, se refiere a un componente, es decir, dentro del alcance del criterio médico razonable, adecuado para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y otros mamíferos sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica y similares, y son acordes a una relación de beneficio/riesgo razonable. Una "sal farmacéuticamente aceptable" significa cualquier sal atóxica que, tras su administración a un destinatario, puede proporcionar, directa o indirectamente, el compuesto de esta invención. Un "contraión farmacéuticamente aceptable" es una parte iónica de una sal que es atóxica cuando se libera de la sal tras su administración a un destinatario.

Los ácidos normalmente empleados para formar sales farmacéuticamente aceptables incluyen ácidos inorgánicos tales como bisulfuro de hidrógeno, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico, así como ácidos orgánicos tales como ácido para-toluenosulfónico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido bitartárico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido besílico, ácido fumárico, ácido glucónico, ácido glucurónico, ácido fórmico, ácido glutámico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido bencenosulfónico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido para-bromofenilsulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico y ácido acético, así como ácidos inorgánicos y orgánicos relacionados. Dichas sales farmacéuticamente aceptables, por tanto, incluyen sulfato, pirosulfato, bisulfato, sulfito, bisulfito, fosfato, monohidrogenofosfato, dihidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, decanoato, caprilato, acrilato, formiato, isobutirato, caprato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butina-1,4-dioato, hexina-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, tereftalato, sulfonato, xileno sulfonato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, p-hidroxibutirato, glicolato, maleato, tartrato, metanosulfonato, propanosulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato y otras sales. En una realización, las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las formadas con ácidos minerales tales como ácido clorhídrico y ácido bromhídrico, y especialmente las formadas con ácidos orgánicos tales como ácido maleico.

El compuesto de la presente invención contiene un átomo de carbono asimétrico. Por consiguiente, el compuesto de la presente invención puede existir como un estereoisómero individual que está sustancialmente exento del otro posible estereoisómero. La expresión "sustancialmente exento del otro estereoisómero", como se usa en este documento, significa que menos de un 25 % de otro estereoisómero, preferiblemente menos de un 10 % de otro estereoisómero, más preferiblemente menos de un 5 % de otro estereoisómero y muy preferiblemente menos de un 2 % de otro estereoisómero está presente. Los métodos de obtención o síntesis de un enantiómero individual para un compuesto dado son conocidos en la técnica y pueden aplicarse como factibles a compuesto finales o a material de partida o intermedios.

El término "mamífero", como se usa en este documento, incluye un ser humano o un animal no humano, tal como ratón, rata, cobaya, perro, gato, caballo, vaca, cerdo, mono, chimpancé, babuino o macaco. En una realización, el mamífero es un animal no humano. En otra realización, el mamífero es un ser humano.

La expresión "compuestos estables", como se usa en este documento, se refiere a compuestos que poseen estabilidad suficiente para permitir su fabricación y que mantienen la integridad del compuesto durante un periodo de tiempo suficiente para que sean útiles para los propósitos detallados en este documento (por ejemplo, formulación en productos terapéuticos, intermedios para su uso en producción de compuestos terapéuticos, compuestos intermedios aislables o almacenables, tratamiento de una enfermedad o afección sensible a agentes terapéuticos).

"D" y "d" se refieren ambos a deuterio. "Estereoisómero" se refiere tanto a enantiómeros como a diastereoisómeros. "Terc" y "t-" cada uno se refiere a terciario. "EE. UU." se refiere a Estados Unidos de América.

"Sustituido con deuterio" se refiere al remplazo de uno o más átomos de hidrógeno con un número correspondiente de átomos de deuterio.

En toda esta memoria descriptiva, una variable puede denominarse en general (por ejemplo, "cada R") o puede denominar específicamente (por ejemplo, R1, R2, R3, etc.). Salvo que se indique de otro modo, cuando una variable se denomina en general, se entiende que incluye todas las realizaciones específicas de esa variable particular. Compuestos terapéuticos

La presente invención en una realización proporciona el compuesto de fórmula I como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Por tanto, la presente invención en una realización proporciona un compuesto de fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

Y6, Y7 e Y8 son cada uno hidrógeno y el compuesto es el compuesto (comp.) expuesto en la tabla a continuación

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que cada átomo no indicado como "D" (deuterio) está presente en su abundancia isotópica natural, y en el que una posición indicada específicamente como "D" tiene al menos un 90 % de incorporación de deuterio.

La síntesis del compuesto de fórmula I puede conseguirse fácilmente por químicos sintética de habilidades normales por referencia a la Síntesis ejemplar y Ejemplos divulgados en este documento. Se divulgan procedimientos pertinentes análogos a los de uso para la preparación del compuesto de fórmula I e intermedios del mismo, por ejemplo, en la patente de Estados Unidos 7598257 y en Organic Letters, 2009, 11(9): 1999-2009.

Dichos métodos pueden realizarse utilizando reactivos correspondientemente deuterados y, opcionalmente, otros reactivos y/o intermedios que contienen isótopos para sintetizar los compuestos definidos en este documento, o recurriendo a protocolos sintéticos convencionales conocidos en la técnica para introducir átomos isotópicos a una estructura química.

Síntesis ejemplar

Los compuestos de fórmula I pueden prepararse de manera análoga a las síntesis presentadas en la patente de Estados unidos 7598257 y en Organic Letters, 2009, 11(9): 1999-2009 usando materiales de partida apropiadamente deuterados.

Otros derivados deuterados de ruxolitinib pueden prepararse como se muestra en los esquemas a continuación.

El esquema 1 divulga una preparación ejemplar de compuesto 127 (en el que Y1, cada Y2 y cada Y3 son deuterio e Y4, cada Y5, Y6, Y7 e Y8 son hidrógeno). De una manera análoga a la descrita en el documento WO 2010/083283, se trata 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina 11 (Aldrich) disponible en el mercado con hidruro de sodio y cloruro de SEM para producir 12, que se hace reaccionar con 13 disponible en el mercado para proporcionar 14. En lugar de 11, también puede usarse 4-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina en la primera etapa para proporcionar la 4-bromo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina protegida con SEM (análoga a 12), que puede hacerse reaccionar con 13 para proporcionar 14. La reacción de 14 con 15, preparado como se divulga en el esquema 2a a continuación, se realiza de manera análoga a la descrita en Lin, Q. etal. Org. Lett. 2009, 11, 1999, para dar 16. La reacción se realiza en presencia de ligando quiral 27, preparado como se describe en Lin, Q. et al. Se convierte 16 en 17 por tratamiento con NH⁴OH y I² . El grupo protector de SEM de 17 entonces se desprotege con LiBF4 y NH⁴OH para dar compuesto 127.

Como se muestra en el esquema 2a, se trata 18 disponible en el mercado con iluro de fosfonio 20 y DCI/D2O para proporcionar 19, que se trata con 20 y DiBAl-H para producir 15.

También pueden prepararse compuestos análogos a 15. Por ejemplo, como se muestra en el esquema 2b, puede convertirse 21 disponible en el mercado en 23 de manera análoga a la divulgada en el esquema 2a. Como otro ejemplo, como se muestra en el esquema 2c, puede convertirse 24 disponible en el mercado en 26 de manera análoga a la divulgada en el esquema 2a y el esquema 2b. Puede convertirse 23, de manera similar a la divulgada en el esquema 1, en un compuesto de fórmula I en la Y1 y cada Y3 son deuterio e Y4, cada Y2, cada Y5, Y6, Y7 e

Y8 son hidrógeno. Asimismo, puede convertirse 26, de manera similar a la divulgada en el esquema 1, en un compuesto de fórmula I en la que Y1 y cada Y2 son deuterio e Y4, cada Y3, cada Y5, Y6, Y7 e Y8 son

No se pretende que las estrategias y compuestos específicos mostrados anteriormente sean limitantes. La idoneidad de un grupo químico en una estructura de compuesto para su uso en la síntesis de otro compuesto está dentro del conocimiento de un experto en la materia.

Métodos adicionales de síntesis del compuesto de fórmula I y sus precursores sintéticos, incluyendo los de rutas no mostradas explícitamente en los esquemas de este documento, pertenecen a los medios de los químicos de habilidad normal en la técnica. Las transformaciones de química sintética y las metodologías de grupo protector (protección y desprotección) útiles en la síntesis de los compuestos aplicables son conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, las descritas en Larock R, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); Greene, TW et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 3.a Ed., John Wiley and Sons (1999); Fieser,

L et al., Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); y Paquette, L, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) y ediciones posteriores de los mismos.

Composiciones

La invención también proporciona composiciones farmacéuticas apirógenas que comprenden una cantidad eficaz del compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto; y un vehículo farmacéuticamente aceptable. El uno o más vehículos son "aceptables" en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y, en el caso de un vehículo farmacéuticamente aceptable, no perjudicial para el destinatario de los mismos en una cantidad usada en el medicamento.

Los excipientes, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas de esta invención incluyen, aunque sin limitación, intercambiadores de iones, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como seroalbúmina humana, sustancias tamponantes tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato de disodio, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de cinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias basadas en celulosa, polietilenglicol, carboximetilcelulosa sódica, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y lanolina.

Si se requiere, la solubilidad y biodisponibilidad del compuesto de la presente invención en composiciones farmacéuticas pueden potenciarse por métodos bien conocidos en la técnica. Un método incluye el uso de excipientes lipídicos en la formulación. Véase "Oral Lipid-Based Formulations: Enhancing the Bioavailability of Poorly Water-Soluble Drugs (Drugs and the Pharmaceutical Sciences)", David J. Hauss, ed. Informa Healthcare, 2007; y "Role of Lipid Excipients in Modifying Oral and Parenteral Drug Delivery: Basic Principles and Biological Examples", Kishor M. Wasan, ed. Wiley-Interscience, 2006.

Otro método conocido de potenciación de la biodisponibilidad es el uso de una forma amorfa del compuesto de esta invención opcionalmente formulada con un poloxámero, tal como LUTROL™ y PLURONIC™ (BASF Corporation), o copolímero de bloque de óxido de etileno y óxido de propileno. Véase la patente de Estados Unidos 7014866; y las publicaciones de patente de Estados Unidos 20060094744 y 20060079502.

Las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen las adecuadas para administración oral, rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica). En determinadas realizaciones, el compuesto de la invención se administra por vía transdérmica (por ejemplo, usando un parche transdérmico o técnicas iontoforéticas). Otras formulaciones pueden presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, comprimidos, cápsulas de liberación mantenida y en liposomas, y pueden prepararse por cualquier método bien conocido en la técnica de farmacia. Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD (20.a ed. 2000).

Dichos métodos preparativos incluyen la etapa de poner en asociación con la molécula a administrar ingredientes tales como el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las composiciones se preparan poniendo en asociación uniforme e íntimamente los ingredientes activos con vehículos líquidos, liposomas o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después, si fuera necesario, dando forma al producto.

En determinadas realizaciones, el compuesto se administra por vía oral. Las composiciones de la presente invención adecuadas para administración oral pueden presentarse como unidades diferenciadas tales como cápsulas, sobrecitos o comprimidos que contienen, cada uno, una cantidad predeterminada del ingrediente activo; un polvo o gránulos; una solución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; una emulsión líquida de aceite en agua; una emulsión líquida de agua en aceite; metidas en liposomas; o como un bolo, etc. Dichas cápsulas de gelatina pueden ser útiles para contener dichas suspensiones, que pueden aumentar beneficiosamente la tasa de absorción del compuesto.

En el caso de comprimidos para uso oral, los vehículos que se usan normalmente incluyen lactosa y almidón de maíz. También se añaden típicamente agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio. Para administración oral en una forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz deshidratado. Cuando se administran suspensiones acuosas por vía oral, el ingrediente activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, pueden añadirse determinados agentes edulcorantes y/o aromatizantes y/o colorantes.

Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen grageas que comprenden los ingredientes en una base aromatizada, habitualmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; y pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y goma arábiga.

Las composiciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones de inyección estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hace que la formulación sea isotónica con la sangre del destinatario pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones pueden presentarse en recipientes de dosis unitaria o múltiples dosis, por ejemplo, ampollas precintadas y viales, y pueden almacenarse en un estado secado por congelación (liofilizado) que requiere solamente la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Pueden prepararse soluciones y suspensiones de inyección en el momento a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.

Dichas soluciones de inyección pueden estar en forma de, por ejemplo, una suspensión acuosa u oleaginosa estéril. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con técnicas conocidas en la técnica usando agentes de dispersión o humectantes adecuados (tales como, por ejemplo, Tween 80) y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente atóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están manitol, agua, solución de Ringer y solución ¡sotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos estériles como un disolvente o medio de suspensión. Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo suave, incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados glicéridos son útiles en la preparación de inyectables, ya que son aceites farmacéuticamente aceptables naturales, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas. Estas soluciones o suspensiones oleosas también pueden contener un diluyente o dispersante alcohólico de cadena larga.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse en forma de supositorios para administración rectal. Estas composiciones pueden prepararse mezclando el compuesto de esta invención con un excipiente no irritante adecuado que es sólido a temperatura ambiente, pero líquido a la temperatura rectal y, por lo tanto, se fundirá en el recto para liberar los componentes activos. Dichos materiales incluyen, aunque sin limitación, manteca de cacao, cera de abejas y polietilenglicoles.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse mediante aerosol nasal o inhalación. Dichas composiciones se preparan de acuerdo con técnicas bien conocidas en la técnica de formulación farmacéutica y pueden prepararse como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, promotores de la absorción para potenciar la biodisponibilidad, fluorocarburos y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo: Rabinowitz JD y Zaffaroni AC, patente de Estados Unidos 6803031, cedida a Alexza Molecular Delivery Corporation.

La administración tópica de las composiciones farmacéuticas de esta invención es especialmente útil cuando el tratamiento deseado implica zonas u órganos fácilmente accesibles por aplicación tópica. Para aplicación tópica, de forma tópica a la piel, la composición farmacéutica debe formularse con una pomada adecuada que contiene los componentes activos suspendidos o disueltos en un vehículo. Los vehículos para administración tópica del compuesto de esta invención incluyen, aunque sin limitación, aceite de vaselina, vaselina líquida, vaselina filante, propilenglicol, compuesto de polioxietileno polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Como alternativa, la composición farmacéutica puede formularse con una loción o crema adecuada que contiene el compuesto activo suspendido o disuelto en un vehículo. Los vehículos adecuados incluyen, aunque sin limitación, aceite de vaselina, monoestearato de sorbitano, polisorbato 60, cera de ésteres cetílicos, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua. Las composiciones farmacéuticas de esta invención también pueden aplicarse tópicamente a la poción baja del tubo gastrointestinal por formulación de supositorio rectal o en una formulación de enema adecuada. También se incluyen parches tópicos transdérmicos y administración iontoforética en esta invención.

La aplicación de los presentes productos terapéuticos puede ser local, para administrarlos al sitio de interés. Pueden usarse diversas técnicas para proporcionar las presentes composiciones al sitio de interés, tal como inyección, uso de catéteres, trocares, proyectiles, gel Pluronic, stents, polímeros de liberación mantenida de fármacos u otro dispositivo que proporcione acceso interno.

Por tanto, de acuerdo con otra realización más, el compuesto de esta invención puede incorporarse en composiciones para recubrir un dispositivo médico implantable, tales como prótesis, válvulas artificiales, injertos vasculares, stents o catéteres. Los recubrimientos adecuados y la preparación general de dispositivos implantables recubiertos son conocidos en la técnica y se ejemplifican en las patentes de Estados Unidos 6099562; 5886026; y 5304121. Los recubrimientos típicamente son materiales poliméricos biocompatibles tales como un polímero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietilenglicol, poli(ácido láctico), acetato de etilenvinilo y mezclas de los mismos. Los recubrimientos pueden cubrirse además opcionalmente mediante un acabado adecuado de fluorosilicona, polisacáridos, polietilenglicol, fosfolípidos o combinaciones de los mismos para conferir características de liberación controlada en la composición. Los recubrimientos para dispositivos invasivos tienen que incluirse dentro de la definición de excipiente, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable, como se usan esos términos en este documento.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un método de recubrimiento de un dispositivo médico implantable, que comprende la etapa de poner en contacto dicho dispositivo con la composición de recubrimiento descrita anteriormente. Será obvio para los expertos en la materia que el recubrimiento del dispositivo se producirá antes de su implante en un mamífero.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un método de impregnación de un dispositivo de liberación de fármacos implantable, que comprende la etapa de poner en contacto dicho dispositivo de liberación de fármaco con el compuesto de esta invención o una composición de esta invención. Los dispositivos de liberación de fármacos implantables incluyen, aunque sin limitación, cápsulas o balines poliméricos biodegradables, cápsulas poliméricas difundibles no degradables y obleas poliméricas biodegradables.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un dispositivo médico implantable recubierto con el compuesto de esta invención o una composición que comprende el compuesto de esta invención, de modo que dicho compuesto es terapéuticamente activo.

De acuerdo con otra realización, la invención proporciona un dispositivo de liberación de fármacos implantable impregnado con o que contiene el compuesto de esta invención o una composición que comprende el compuesto de esta invención, de modo que dicho compuesto se libera desde dicho dispositivo y es terapéuticamente activo.

Cuando un órgano o tejido es accesible porque se retira del sujeto, dicho órgano o tejido puede bañarse en un medio que contenga una composición de esta invención, una composición de esta invención puede depositarse sobre el órgano o una composición de esta invención puede aplicarse de cualquier otra manera conveniente.

En otra realización, una composición de esta invención comprende además un segundo agente terapéutico. El segundo agente terapéutico puede seleccionarse de cualquier compuesto o agente terapéutico conocido por tener o que demuestra propiedades ventajosas cuando se administra con un compuesto que tiene el mismo mecanismo de acción que ruxolitinib. Dichos agentes incluyen los indicados como útiles en combinación con ruxolitinib.

Preferiblemente, el segundo agente terapéutico es un agente útil en el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección seleccionada de mielofibrosis, incluyendo mielofibrosis primaria, policitemia vera, mielofibrosis tras policitemia vera, mielofibrosis idiopática crónica, mielofibrosis tras trombocitemia esencial y trombocitemia esencial, cáncer pancreático, cáncer de próstata, cáncer de mama, leucemia, linfoma no hodgkiniano, mieloma múltiple, psoriasis y alopecia areata.

En una realización, el segundo agente terapéutico se selecciona de lenalidomida, panobinostat, capecitabina, exemestano y combinaciones de los mismos.

En otra realización, la invención proporciona formas de dosificación separadas del compuesto de esta invención y uno o más de cualquiera de los segundos agentes terapéuticos descritos anteriormente, en las que el compuesto y el segundo agente terapéutico se asocian entre sí. La expresión "asociados entre sí", como se usa en este documento, significa que las formas de dosificación separadas se compactan conjuntamente o se adhieren de otro modo entre sí de modo que es muy evidente que las formas de dosificación separadas están destinadas a venderse y administrarse conjuntamente (en menos de 24 horas entre sí, consecutivamente o simultáneamente).

En las composiciones farmacéuticas de la invención, el compuesto de la presente invención está presente en una cantidad eficaz. Como se usa en este documento, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad que, cuando se administra en una pauta posológica apropiada, es suficiente para tratar el trastorno diana.

La interdependencia de las dosificaciones para animales y seres humanos (basándose en miligramos por metro cuadrado de superficie corporal) se describe en Freireich et al., Cancer Chemother. Rep, 1966, 50: 219. El área superficial corporal puede determinarse aproximadamente a partir de la altura y el peso del sujeto. Véase, por ejemplo, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y., 1970, 537.

En una realización, una cantidad eficaz del compuesto de esta invención puede variar de 1 mg a 500 mg, tal como de 5 mg a 100 mg, tal como de 5 mg a 50 mg. Ejemplos de intervalos de 40 mg a 50 mg, de 25 mg a 40 mg, de 25 mg a 50 mg, de 20 mg a 40 mg, de 20 mg a 50 mg, de 10 mg a 25 mg, de 10 mg a 20 mg, de 5 mg a 25 mg, de 5 mg a 20 mg y de 5 mg a 10 mg. En una realización, se administra una dosis de 10 mg, 20 mg, 40 mg y 50 mg una vez al día. En una realización se administra una dosis de 5 mg, 10 mg, 20 mg, 40 mg y 50 mg dos veces al día.

Las dosis eficaces también variarán, como reconocen los expertos en la materia, dependiendo de las enfermedades tratadas, la gravedad de la enfermedad, la vía de administración, el sexo, la edad y estado de salud general del sujeto, el uso de excipientes, la posibilidad de uso conjunto con otros tratamientos terapéuticos tal como el uso de otros agentes y el criterio del médico a cargo. Por ejemplo, pueden determinarse directrices para seleccionar una dosis eficaz por referencia a la ficha técnica para ruxolitinib.

Para composiciones farmacéuticas que comprenden un segundo agente terapéutico, una cantidad eficaz del segundo agente terapéutico es entre aproximadamente un 20 % y un 100 % de la dosificación normalmente utilizada en una pauta de monoterapia usando justo ese agente. Preferiblemente, una cantidad eficaz es entre aproximadamente un 70 % y un 100 % de la dosis de monoterapia normal. Las dosificaciones de monoterapia normales de estos segundos agentes terapéuticos son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2.a edición, Appleton y Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, edición de lujo, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000).

Se espera que algunos de los segundos agentes terapéuticos mencionados anteriormente actúen sinérgicamente con el compuesto de esta invención. Cuando esto sucede, permitirá que la dosificación eficaz del segundo agente terapéutico y/o el compuesto de esta invención se reduzca desde la necesaria en una monoterapia. Esto tiene la ventaja de minimizar los efectos secundarios tóxicos del segundo agente terapéutico o el compuesto de esta invención, mejoras sinérgicas en la eficacia, facilidad mejorada de administración o uso y/o gasto global reducido de la preparación o formulación del compuesto.

Métodos de tratamiento

En este documento se divulga un método de inhibición de una o más de las cinasas asociadas a Janus (JAK) JAK1 y JAK2 en una célula, que comprende poner en contacto una célula con el compuesto de fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En este documento también se divulga el compuesto de esta invención, o una composición de esta invención, para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad que se trata beneficiosamente mediante ruxolitinib en un sujeto que lo necesita, comprendiendo dicho método la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz del compuesto de esta invención o una composición de esta invención. El sujeto puede ser un paciente que necesita dicho tratamiento. Dichas enfermedades son bien conocidas en la técnica y se divulgan en, aunque sin limitación, la siguiente patente: patente de Estados Unidos 7598257. Dichas enfermedades incluyen, aunque sin limitación, enfermedades que implican el sistema inmunitario incluyendo, por ejemplo, rechazo de trasplantes de órganos (por ejemplo, rechazo de aloinjertos y enfermedad de injerto contra hospedador); enfermedades autoinmunitarias tales como esclerosis múltiple, artritis reumatoide, artritis juvenil, diabetes de tipo I, lupus, psoriasis, enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, miastenia grave, nefropatías por inmunoglobulina, trastornos autoinmunitarios tiroideos; afecciones alérgicas tales como asma, alergia alimentaria, dermatitis atópica y rinitis; enfermedades víricas tales como virus de Epstein Barr (EBV), hepatitis B, hepatitis C, VIH, VLTH 1, virus de la varicela-zóster (VVZ) y virus del papiloma humano (VPH); trastornos de la piel tales como psoriasis (por ejemplo, psoriasis vulgar), dermatitis atópica, erupción cutánea, irritación cutánea, sensibilización de la piel (por ejemplo, dermatitis por contacto o dermatitis alérgica por contacto; cáncer, incluyendo los caracterizados por tumores sólidos (por ejemplo, cáncer de próstata, cáncer renal, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer gástrico, cáncer de mama, cáncer pulmonar, cánceres de la cabeza y el cuello, cáncer de tiroides, glioblastoma, sarcoma de Kaposi, enfermedad de Castleman, melanoma), cánceres hemáticos (por ejemplo, linfoma, leucemia tal como leucemia linfoblástica aguda o mieloma múltiple), y cáncer de piel tal como linfoma cutáneo de linfocitos T (LCLT) y linfoma cutáneo de linfocitos B (cuyos ejemplos incluyen síndrome de Sézary y micosis fungoide; trastornos mieloproliferativos (TMP) tales como policitemia vera (PV), trombocitemia esencial (TE), metaplasia mieloide con mielofibrosis (MMM), leucemia mielomonocítica crónica (LMMC), síndrome hipereosinofílico (SHE), enfermedad sistémica de mastocitos (ESM); inflamación y enfermedades inflamatorias, tales como enfermedades inflamatorias del ojo (por ejemplo, iritis, uveítis, escleritis, conjuntivitis o enfermedad relacionada), enfermedades inflamatorias de las vías respiratorias (por ejemplo, las vías respiratorias altas incluyendo la nariz y los senos paranasales tales como rinitis o sinusitis o las vías respiratorias bajas incluyendo bronquitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica y similares), miopatía inflamatoria tal como miocarditis; síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) y choque séptico; lesiones de reperfusión por isquemia o una enfermedad o afección relacionada con un acontecimiento isquémico inflamatorio tal como apoplejía o paro cardiaco; anorexia; caquexia; fatiga tal como la resultante de o asociada con cáncer; reestenosis; esclerodermitis; fibrosis; afecciones asociadas con hipoxia o astrogliosis tal como, por ejemplo retinopatía diabética, cáncer o neurodegeneración; gota; tamaño aumentado de la próstata debido a, por ejemplo, hipertrofia prostática benigna o hiperplasia prostática benigna.

En una realización, la invención proporciona el compuesto de esta invención, o una composición de esta invención, para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad o afección seleccionada de: mielofibrosis, incluyendo mielofibrosis primaria, mielofibrosis tras policitemia vera, mielofibrosis tras trombocitemia esencial, trombocitemia esencial o una combinación de los mismos; cáncer pancreático; cáncer pancreático; cáncer de mama; leucemia; linfoma no hodgkiniano; mieloma múltiple; psoriasis y una combinación de los mismos en un sujeto que lo necesita, comprendiendo dicho método la etapa de administrar al sujeto una cantidad eficaz del compuesto de esta invención o una composición de esta invención.

En una realización particular, el compuesto de esta invención, o una composición de esta invención, es para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad o afección seleccionada de mielofibrosis, incluyendo mielofibrosis primaria, mielofibrosis tras policitemia vera y mielofibrosis tras trombocitemia esencial en un sujeto que lo necesita.

Identificar un sujeto que necesita dicho tratamiento puede ser a criterio del sujeto o un profesional sanitario y puede ser subjetivo (por ejemplo, opinión) u objetivo (por ejemplo, medible mediante un ensayo o método de diagnóstico).

En otra realización, cualquiera de los métodos anteriormente de tratamiento comprende la etapa adicional de coadministrar al sujeto que lo necesita uno o más segundos agentes terapéuticos. La elección del segundo agente terapéutico puede hacerse de cualquier segundo agente terapéutico conocido por ser útil para la coadministración con ruxolitinib. La elección del segundo agente terapéutico también depende de la enfermedad o afección particular a tratar. Ejemplos de segundos agentes terapéuticos que pueden emplearse en los métodos de esta invención son los expuestos anteriormente para su uso en composiciones de combinación que comprenden un compuesto de esta invención y un segundo agente terapéutico.

En particular, el compuesto de fórmula I puede usarse en politerapias que incluyen coadministrar el compuesto de fórmula I y un segundo agente terapéutico a un sujeto que lo necesita para el tratamiento de las siguientes afecciones (con el segundo agente terapéutico particular indicado en paréntesis siguiendo a la indicación: mielofibrosis (lenalidomida o panobinostat); cáncer pancreático (capecitabina); y cáncer de mama (exemestano).

El término "coadministrado", como se usa en este documento, significa que el segundo agente terapéutico puede administrarse junto con el compuesto de esta invención como parte de una sola forma de dosificación (tal como una composición de esta invención que comprende el compuesto de la invención y un segundo agente terapéutico como se describe anteriormente) o como múltiples formas de dosificación separadas. Como alternativa, el agente adicional puede administrarse antes de, consecutivamente con o después de la administración del compuesto de esta invención. En dicho tratamiento de politerapia, tanto el compuesto de esta invención como el uno o más segundos agentes terapéuticos se administran por métodos convencionales. La administración de una composición de esta invención, que comprende tanto el compuesto de la invención como un segundo agente terapéutico, a un sujeto no anula la administración separada de ese mismo agente terapéutico, cualquier otro segundo agente terapéutico o el compuesto de esta invención a dicho sujeto en otro momento durante un ciclo de tratamiento.

Las cantidades eficaces de estos segundos agentes terapéuticos son bien conocidas por los expertos en la materia y pueden encontrarse directrices para la dosificación en patentes y solicitudes de patente publicadas mencionadas en este documento, así como en Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2.a edición, Appleton y Lange, Stamford, Conn. (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, edición de lujo, Tarascon Publishing, Loma Linda, Calif. (2000), y otros textos médicos. Sin embargo, pertenece al ámbito del experto en la materia determinar el intervalo de cantidad eficaz óptima del segundo agente terapéutico.

En una realización de la invención, cuando se administra un segundo agente terapéutico a un sujeto, la cantidad eficaz del compuesto de esta invención es menor de lo que sería su cantidad eficaz cuando no se administra segundo agente terapéutico. En otra realización, la cantidad eficaz del segundo agente terapéutico es menor de los que sería su cantidad eficaz cuando no se administra el compuesto de esta invención. De esta manera, pueden minimizarse los efectos secundarios indeseados asociados con dosis altas de cualquier agente. Otras posibles ventajas (incluyendo, sin limitación, pautas posológicas mejoradas y/o costes reducidos de los fármacos) serán evidentes para los expertos en la materia.

Ejemplos

Ejemplo de referencia 1. Síntesis de (R)-3-(4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il)-3-(22,5,5-d4-ciclopentil)propanonitrilo (compuesto 107).

Esquema 3. Preparación del compuesto 107

Etapa 1.2,2,5,5-d4-ciclopentano-1,1 -dicarboxilato de dietilo (32). A una solución de malonato de dietilo (6,57 ml, 43,3 mmol) en etanol (40 ml) se le añadió una solución al 21 % en peso de etóxido de sodio en etanol (32,3 ml, 86,6 mmol) seguido de 1,1,4,4-tetradeutero-1,4-dibromobutano (31, 5,53 ml, 45,5 mmol, CDN Isotopes, 98 % átom. D). La solución resultante se agitó a reflujo durante dos horas, después se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con exceso de agua. La mayoría del etanol se retiró después mediante destilación y la solución acuosa resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 75 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron N 2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 32 como un aceite amarillo siguió adelante sin purificación. (9,45 g, 100 %).

Etapa 2. Ácido 2,2,5,5-d4-ciclopentano-1-carboxílico (33). A una solución de 32 (9,45 g, 43,3 mmol) en etanol (20 ml) se le añadió una solución 5 M de hidróxido de sodio (20 ml). Después se añadió agua adicional (15 ml) y la reacción se agitó a reflujo durante tres horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la reacción se diluyó con exceso de agua y la mayoría del etanol se retiró mediante destilación. La solución acuosa se hizo ácida (pH < 2) con HCl 1 N y posteriormente se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido naranja claro resultante se transfirió a un matraz de presión y se añadió agua (140 ml). El matraz de presión se precintó y la reacción se agitó a 160 °C durante 15 horas, después se enfrió hasta temperatura ambiente. La reacción se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 33 (4,37 g, 86 %) como un aceite ámbar que se usó sin purificación.

Etapa 3. 22,5,5-d4-N-Metoxi-N-metilciclopentanocarboxamida (34). A una solución de 33 (4,37 g, 37,0 mmol) en acetonitrilo (60 ml) a 0 °C se le añadió clorhidrato de N,0-dimetilhidroxilamina (4,33 g, 44,4 mmol), t Bt U (12,5 g, 38,9 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (19,0 ml, 111 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con NaHCO3 sat., se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto resultante se purificó por cromatografía en columna (SÍO², 0-50 % de acetato de etilo/hexanos) para producir 34 (2,22 g, 37 %) como un aceite transparente. EM (IEN) 162,3 [(M H)+].

Etapa 4. 2,2,5,5-d4-Ciclopentano-1-carboxaldehído (35). A una solución de 34 (2,22 g, 13,8 mmol) en THF (50 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución 1 M de LiAlH4 en THF (24,8 ml, 24,8 mmol). La reacción se agitó a 0 °C durante una hora, después se interrumpió mediante adición secuencial gota a gota de agua (940 gl), NaOH al 15 % (940 gl) y agua (2,82 ml). La reacción interrumpida se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, después se filtró a través de Celite® y se concentró a presión reducida. El aceite resultante se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 35 (850 mg, 60 %) como un aceite transparente que se usó sin purificación.

Etapa 5. 3-(2,2,5,5-d4-Ciclopentil)acrilonitrilo (36). A una solución 1 M de terc-butóxido de potasio en THF (8,74 ml, 8,74 mmol) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución de cianometilfosfonato de dietilo (1,48 ml, 9,15 mmol) en THF (12 ml). La reacción se calentó hasta temperatura ambiente, se agitó durante 15 minutos, después se enfrió hasta 0 °C. Después se añadió gota a gota aldehido 35 (850 mg, 8,32 mmol) como una solución en THF (3 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas, después se diluyó con exceso de agua y se extrajo con éter dietílico (1 x 50 ml) y acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 36 (1,17 g, > 100 %) como un aceite naranja claro que se usó sin purificación.

Etapa 6. Pivalato de (+/-)-(4-(1-(2-ciano-1-(2,2,5,5-d4-ciclopentil)etil)-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)metilo ((+/-)38). A una solución de 37 (400 mg, 1,34 mmol, preparación descrita en Lin, Q. et al. Org. Lett., 2009, 11, ^{1999-2002) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió 36 (418 mg, 3,34 mmol) seguido de} DbU ^{(421 gl, 2,81 mmol). La} reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se concentró a vacío reducido. La mezcla en bruto resultante se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con HCl 1 N, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación mediante cromatografía en columna en fase normal (SiO², 0-60 % de acetato de etilo/hexanos) seguida de cromatografía en columna en fase inversa (C18, 5-70 % de acetonitrilo/agua que contenía ácido fórmico al 0,1 %) produjo (+/-)38 (68 mg, 12 %) como una espuma blanca. RMN de 1H (DMSO-ófe, 400 MHz) 5 8,84 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,74 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 6,24 (s, 2H), 4,54 (td, J = 9,7, 4,3 Hz, 1H), 3,30­ 3,15 (m, 2H), 2,39 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 1,68 - 1,36 (m, 4H), 1,08 (s, 9H); EM (IEN) 425,3 [(M H)+].

Etapa 7. Pivalato de (R)-(4-(1 -(2-ciano-1 -(2,2,5,5-tetradeuterociclopentil)etil)-1 H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)metilo ((R)-38). El compuesto racémico (+/-)38 (62 mg) se disolvió en acetonitrilo a una concentración de 30 mg/ml y se sometió a separación quiral por HPLC preparativa en una columna Daicel ChiralPak AD (20 x 250 mm, 10 gm) con 500 gl de solución de (+/-)38 por inyección usando un método isocrático: 30 % de isopropanol (+ 0,1 % de dietilamina)/ 70 % de hexano (+ 0,1 % de dietilamina) a un caudal de 17 ml/min. En estas condiciones se consiguió separación basal con (S)-38 eluyendo a los 15,0 minutos y (R)-38 eluyendo a los 20,2 minutos.

Las fracciones que contenían cada enantiómero se combinaron y se concentraron produciendo 28 mg de (S)-38 como una película incolora y 29 mg de (R)-38 como una película incolora.

Etapa 8. (R)-3-(4-(7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il)-3-(2,2,5,5-tetradeuterociclopentil)propanonitrilo (compuesto 107). El compuesto (R)-38 (28 mg, 0,066 mmol, 1 equiv.) se disolvió en metanol (1 ml) en un vial de centelleo de 20 ml. Se añadió hidróxido de sodio (0,13 ml de una solución 1 M, 0,13 mmol, 2 equiv.) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. La reacción se diluyó con agua (10 ml) y salmuera (20 ml). La mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (20 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se evaporaron. El material en bruto se purificó usando un sistema de cromatografía automatizado Analogix eluyendo con 0 a 6 % de metanol en diclorometano. Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron produciendo compuesto 107 como una espuma blanca. Se encontró que la pureza ^{quiral era > 99 % ee (Chiralpak} Od ^{4,6 x 250 mm, 10 um, 70 % (hexano 0,1 % de dietilamina) 30 % (isopropanol} + 0,1 % de dietilamina), 1 ml/min, 254 nm, tiempo de retención = 8,85 min).

Ejemplo de referencia 2. Síntesis de (R)-3-(4-(7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il)-3-(3,3,4,4-d4-ciclopentil)propanonitrilo (compuesto 103).

Esquema 4. Preparación del compuesto 103

Etapa 1.3,3,4,4-d4-Ciclopentano-1,1-dicarboxilato de dietilo (40). A una solución de malonato de dietilo (3,25 ml, 21,4 mmol) en etanol (20 ml) se le añadió una solución al 21 % en peso de etóxido de sodio en etanol (16,0 ml, 42,8 mmol) seguido de 2,2,3,3-tetradeutero-1,4-dibromobutano (39, 4,95 g, 22,5 mmol, CDN Isotopes, 98 % átom. D). La solución resultante se agitó a reflujo durante dos horas, después se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con exceso de agua. La mayoría del etanol se retiró después mediante destilación y la solución acuosa resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 75 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 40 como un aceite amarillo que siguió adelante sin purificación. (4,67 g, 100 %).

Etapa 2. Ácido 3,3,4,4-d4-ciclopentano-1-carboxílico (41). A una solución de 40 (4,67 g, 21,4 mmol) en etanol (10 ml) se le añadió una solución 5 M de hidróxido de sodio (10 ml). Después se añadió agua adicional (10 ml) y la reacción se agitó a reflujo durante tres horas. Después enfriar hasta temperatura ambiente, la reacción se diluyó con exceso de agua y la mayoría del etanol se retiró mediante destilación. La solución acuosa se hizo ácida (pH < 2) con HCl 1 N y posteriormente se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido naranja claro resultante se transfirió a un matraz de presión y se añadió agua (70 ml). El matraz de presión se precintó y la reacción se agitó a 160 °C durante 15 horas, después se enfrió hasta temperatura ambiente. La reacción se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 41 (1,93 g, 76 %) como un aceite ámbar que se usó sin purificación.

Etapa 3. 3,3,4,4-d4-N-Metoxi-N-metilciclopentanocarboxamida (42). A una solución de 41 (1,93 g, 16,3 mmol) en acetonitrilo (30 ml) a 0 °C se le añadió clorhidrato de N,0-dimetilhidroxilamina (1,91 g, 19,6 mmol), TBTU (5,50 g, 17,1 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (8,52 ml, 48,9 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con NaHCO3 sat., se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto resultante se purificó por cromatografía en columna (SiO2, 0-40 % de acetona/hexanos) para producir 42 (1,47 g, 56 %) como un aceite transparente. EM (IEN) 162,3 [(M H)+].

Etapa 4. 3,3,4,4-d4-Ciclopentano-1-carboxaldehído (43). A una solución de 42 (1,47 g, 9,12 mmol) en THF (35 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución 1 M de LiAlH4 en THF (16,4 ml, 16,4 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora, después se interrumpió a 0 °C mediante adición secuencial gota a gota de agua (623 gl), NaOH al 15 % (623 gl) y agua (1,87 ml). La reacción interrumpida se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, después se filtró a través de Celite® y se concentró a presión reducida. El aceite resultante se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 43 (767 mg, 82 %) como un aceite transparente que se usó sin purificación.

Etapa 5. 3-(3,3,4,4-d4-Ciclopentil)acrilonitrilo (44). A una solución de cianometilfosfonato de dietilo (0,607 ml, 3.75 mmol) en THF (10 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución 1 M de terc-butóxido de potasio en THF (3,75 ml, 3,75 mmol). La reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Después se añadió gota a gota aldehido 43 (767 mg, 7,51 mmol) como una solución en THF (3 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se diluyó con exceso de agua/salmuera 1:1 y se extrajo con MTBE (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El aceite resultante se disolvió en CH2CL (100 ml) y se lavó con NaHSO3 (3 x 25 ml). La capa orgánica se secó (Na2SO4), se filtró y se concentró a presión reducida para producir 44 (537 mg, 57 %) como un aceite naranja claro que se usó sin purificación.

Etapa 6. Pivalato de (+/-)-(4-(1 -(2-ciano-1 -(3,3,4,4-d4-ciclopentil)etil)-1 H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)metilo ((+/-)45). A una solución de 37 (514 mg, 1,72 mmol, preparación descrita en Lin, Q. et al. Org. Lett., 2009, 11, ^{1999-2002) en acetonitrilo (15 ml) se le añadió 44 (537 mg, 4,29 mmol) seguido de} DbU ^{(540 gl, 3,61 mmol). La} reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se concentró a vacío reducido. La mezcla en bruto resultante se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con HCl 1 N, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación mediante cromatografía en columna en fase normal (SiO2, 0-60 % de acetato de etilo/hexanos) produjo (+/-)45 (368 mg, 50 %) como una espuma blanca. RMN de 1H (DMSO-afe, 400 MHz) 58,84 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7.75 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,24 (s, 2H), 4,53 (td, J = 9,7, 4,2 Hz, 1H), 3,32 - 3,14 (m, 2H), 2,41 (c, J = 8,7 Hz, 1H), 1,79 (dd, J = 12,6, 7,6 Hz, 1H), 1,36 - 1,11 (m, 3H), 1,08 (s, 9H); EM (IEN) 425,2 [(M H)+].

Etapa 7. Pivalato de (R)-(4-(1-(2-ciano-1-(3,3,4,4-d4-ciclopenlil)etil)-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)metilo ((R)-45). La separación quiral de (+/-)45 se consigue siguiendo el método analítico desarrollado para el análogo totalmente de protio (Lin, Q. et al. Org. Lett. 2009, 11, 1999-2002). Se obtienen enantiómeros individuales de (+/-)45 mediante HPLC quiral usando una columna ChiralCel OD-H (4,6 x 50 mm, 5 gm) y una fase móvil de 10 % de etanol y 90 % de hexanos a un caudal de 1 ml/min. Se ha mostrado que el enantiómero (R) totalmente de protio es el segundo pico en eluir con un tiempo de retención de 18,1 minutos. El enantiómero (S) totalmente de protio eluye primero a los 14,0 minutos. Se espera que los análogos (R)-45 y (S)-45 deuterados tengan tiempos de retención muy similares a los enantiómeros respectivos totalmente de protio. Cambiar la escala de este método a una ChiralCel OD-H semipreparativa permite la separación de cantidades mayores de (R)-45.

Etapa 8. (R)-3-(4-(7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il)-3-(3,3,4,4-d4-ciclopentil)propanonitrilo (compuesto 103). El tratamiento de (R)-45 con hidróxido de sodio acuoso en metanol de manera análoga al procedimiento descrito en Lin, Q. et al. Org. Lett. 2009, 11, 1999-2002 para el análogo totalmente de protio produce compuesto 103.

El compuesto 103 también puede prepararse a partir de (+/-)45 mediante (R)-45 usando sustancialmente las mismas condiciones divulgadas anteriormente para la preparación de compuesto 107 a partir de (+/-)38 mediante (R)-38.

Ejemplo de referencia 3. Síntesis de (R)-3-(4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il)-3-(ciclopentildg)propanonitrilo (compuesto 127).

Esquem Preparación ^{de i} compuesto 127

¡Rl-52 Compuesto 127

Etapa 1. 2,2,3,3,4,4,5,5-d8-Ciclopentano-1,1-dicarboxilato de dietilo (47). A una solución de malonato de dietilo (6,24 ml, 41,1 mmol) en etanol (40 ml) se le añadió una solución al 21 % en peso de etóxido de sodio en etanol (30,7 ml, 82,2 mmol) seguido de 1,1,2,2,3,3,4,4-octadeutero-1,4-dibromobutano (46, 9,67 g, 43,2 mmol, CDN Isotopes, 98 % átom. D). La solución resultante se agitó a reflujo durante dos horas, después se enfrió hasta temperatura ambiente y se diluyó con exceso de agua. La mayoría del etanol se retiró después mediante destilación y la solución acuosa resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 75 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 47 como un aceite amarillo (9,12 g, 100 %) que siguió adelante sin purificación.

Etapa 2. Ácido perdeuterociclopentano-1-carboxílico (48). A una solución de 47 (9,12 g, 41,1 mmol) en etanol (20 ml) se le añadió una solución 5 M de hidróxido de sodio (20 ml). Después se añadió agua adicional (15 ml) y la reacción se agitó a reflujo durante tres horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, la reacción se diluyó con exceso de agua y la mayoría del etanol se retiró mediante destilación. La solución acuosa se hizo ácida (pH < 2) con HCl 1 N y posteriormente se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El sólido naranja claro resultante se transfirió a un matraz de presión y se añadió D²O (120 ml). El matraz de presión se precintó y la reacción se agitó a 160 °C durante 15 horas, después se enfrió hasta temperatura ambiente. La reacción se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na²SO⁴), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 48 (4,58 g, 90 %) como un aceite amarillo que se usó sin purificación.

Etapa 3. W-Metoxi-W-metil(ciclopentano-dg)carboxamida (49). A una solución de 48 (4,58 g, 37,2 mmol) en acetonitrilo (60 ml) a 0 °C se le añadió clorhidrato de W,0-dimetilhidroxilamina (4,35 g, 44,6 mmol), TBTU (12,5 g, 39,1 mmol) y W,W-diisopropiletilamina (19,4 ml, 112 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se diluyó con HCl 1 N y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con NaHCOa sat., se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. El producto resultante se purificó por cromatografía en columna (SiO², 0-50 % de acetato de etilo/hexanos) para producir 49 (3,41 g, 55 %) como un aceite transparente. EM (IEN) 167,2 [(M H)+].

Etapa 4. Perdeuterociclopentano-1-carboxaldehído (50). A una solución de 49 (3,41 g, 20,5 mmol) en THF (80 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución 1 M de LiAlH4 en THF (37,0 ml, 37,0 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante una hora, después se interrumpió a 0 °C mediante adición secuencial gota a gota de D²O (1,41 ml), NaOD/D²O al 15 % (1,41 ml) y D²O (4,23 ml). La reacción interrumpida se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, después se filtró a través de Celite® y se concentró a presión reducida. El aceite resultante se diluyó con DCI/D2O 1 N y se extrajo con éter dietílico (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 50 (1,79 g, 82%) como un aceite transparente que se usó sin purificación.

Etapa 5.3-(Perdeuterociclopentil)acrilonitrilo (51). A una solución de cianometilfosfonato de dietilo (1,35 ml, 8,34 mmol) en THF (25 ml) a 0 °C se le añadió gota a gota una solución 1 M de terc-butóxido de potasio en THF (8,34 ml, 8,34 mmol). La reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Después se añadió gota a gota aldehído 50 (1,79 g, 16,7 mmol) como una solución en THF (5 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se diluyó con exceso de agua/salmuera 1:1 y se extrajo con MTBE (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida para producir 51 (1,61 g, 74 %) como un aceite naranja claro que se usó sin purificación.

Etapa 6. Pivalato de (+/-)-(4-(1-(2-ciano-1-(ciclopentil-dg)etil)-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)metilo ((+/-)52). A una solución de 37 (619 mg, 2,07 mmol, preparación descrita en Lin, Q. et al. Org. Lett., 2009, 11, 1999­ 2002) en acetonitrilo (15 ml) se le añadió 51 (673 mg, 5,17 mmol) seguido de DBU (650 gl, 4,35 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, después se concentró a vacío reducido. La mezcla en bruto resultante se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con HCl 1 N, se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron a presión reducida. La purificación mediante cromatografía en columna en fase normal (SiO2, 0-60 % de acetato de etilo/hexanos) produjo (+/-)52 (447 mg, 50 %) como una espuma blanca. RMN de 1H (DMSO-afe, 400 MHz) 58,84 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,75 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,24 (s, 2H), 4,53 (dd, J = 9,6, 4,2 Hz, 1H), 3,32 - 3,13 (m, 2H), 1,08 (s, 9H); EM (IEN) 430,3 [(M H)+].

Etapa 7. Pivalato de (R)-(4-(1-(2-ciano-1-(ciclopentil-d9)etil)-1H-pirazol-4-il)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il)metilo ((R)-52). La separación quiral de (+/-)52 se consigue siguiendo el método analítico desarrollado para el análogo totalmente de protio (Lin, Q. et al. Org. Lett. 2009, 11, 1999-2002). Se obtienen enantiómeros individuales de (+/-)52 mediante HPLC quiral usando una columna ChiralCel OD-H (4,6 x 50 mm, 5 gm) y una fase móvil de 10 % de etanol y 90 % de hexanos a un caudal de 1 ml/min. Se ha mostrado que el enantiómero (R) totalmente de protio es el segundo pico en eluir con un tiempo de retención de 18,1 minutos. El enantiómero (S) totalmente de protio eluye primer a los 14,0 minutos. Se espera que los análogos deuterados (R)-52 y (S)-52 tengan tiempos de retención muy similares a los enantiómeros respectivos totalmente de protio. El cambio de escala de este método a una ChiralCel OD-H semipreparativa permite la separación de cantidades mayores de (R)-52,

Etapa 8. (R)-3-(4-(7H-Pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1 H-pirazol-1 -il)-3-(ciclopentil-do)propanonitrilo (compuesto 127). El tratamiento de (R)-52 con hidróxido de sodio acuoso en metanol de manera análoga al procedimiento descrito en Lin, Q. et al. Org. Lett. 2009, 11, 1999-2002 para el análogo totalmente de protio produce compuesto 127.

El compuesto 127 también puede prepararse a partir de (+/-)52 mediante (R)-52 usando sustancialmente las mismas condiciones divulgadas anteriormente para la preparación de compuesto 107 a partir de (+/-)38 mediante (R)-38.

Ejemplo 4. Evaluación de la estabilidad metabólica

Ensayo microsómico: Se obtienen microsomas hepáticos humanos (20 mg/ml) de Xenotech, LLC (Lenexa, KS). Se adquieren fosfato de dinucleótido de p-nicotinamida y adenina, forma reducida (NADPH), cloruro de magnesio (MgCL) y dimetilsulfóxido (DMSO) de Sigma-Aldrich.

Determinación de la estabilidad metabólica: Se preparan soluciones madre 7,5 mM de los compuestos de ensayo en DMSO. Las soluciones madre 7,5 mM se diluyen hasta 12,5-50 gM en acetonitrilo (ACN). Los microsomas hepáticos humanos a 20 mg/ml se diluyen hasta 0,625 mg/ml en tampón de fosfato de potasio 0,1 M, pH 7,4, que contenía MgCl2 3 mM. Los microsomas diluidos se añaden a los pocillos de una placa de polipropileno de 96 pocillos profundos por triplicado. Se añade una alícuota de 10 gl del compuesto de ensayo 12,5-50 gM a los microsomas y la mezcla se precalienta durante 10 minutos. Las reacciones se inician mediante la adición de solución de NADPH precalentada. El volumen de reacción final es de 0,5 ml y contiene 0,5 mg/ml de microsomas hepáticos humanos, compuesto de ensayo 0,25-1,0 gM y NADPH 2 mM en tampón de fosfato de potasio 0,1 M, pH 7,4 y MgCl23 mM. Las mezclas de reacción se incuban a 37 °C y se retiran alícuotas de 50 gl a 0, 5, 10, 20 y 30 minutos y se añaden a placas de 96 pocillos de poco profundos que contienen 50 gl de ACN helado con patrón interno para detener las reacciones. Las placas se almacenan a 4 °C durante 20 minutos, después de lo que se añaden 100 gl de agua a los pocillos de la placa antes de la centrifugación para sedimentar las proteínas precipitadas. Los sobrenadantes se transfieren a otra placa de 96 pocillos y se analizan para las cantidades de precursor restante por CL-EM/EM usando un espectrómetro de masas Applied Biosystems API 4000. Se sigue el mismo procedimiento para el equivalente no deuterado del compuesto de fórmula I y el control positivo, 7-etoxicumarina (1 gM). El ensayo se hace por triplicado.

Análisis de datos: Los t1/2 in vitro para los compuestos de ensayo se calculan a partir de las pendientes de la regresión lineal de la relación del % de precursor restante (In) frente al tiempo de incubación.

t'/2 in vitro = 0,693/k

k = -[pendiente de regresión lineal del % de precursor restante (In) frente a tiempo de incubación] El análisis de datos se realiza usando el programa informático Microsoft Excel.

Sin más descripción, se cree que un experto en la materia puede, usando la descripción precedente y los ejemplos ilustrativos, preparar y utilizar el compuesto de la presente invención y poner en práctica los métodos definidos en las reivindicaciones.

Claims (18)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula I:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

Y6, Y7 e Y8 son cada uno hidrógeno y el compuesto (comp.) es el expuesto en la tabla a continuación:

en el que cada átomo no indicado como "D" (deuterio) está presente en su abundancia isotópica natural, y en el que una posición indicada específicamente como "D" tiene al menos un 90 % de incorporación de deuterio.

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que cuando una posición se indica específicamente como "D", esa posición tiene al menos un 95 % de incorporación de deuterio.

3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que cuando una posición se indica específicamente como "D", esa posición tiene al menos un 97 % de incorporación de deuterio.

4. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende el compuesto de la reivindicación 2 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

6. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende el compuesto de la reivindicación 3 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. La composición de la reivindicación 4, que comprende además un agente terapéutico seleccionado de lenalidomida, panobinostat, capecitabina, exemestano y combinaciones de los mismos.

8. La composición de la reivindicación 5, que comprende además un agente terapéutico seleccionado de lenalidomida, panobinostat, capecitabina, exemestano y combinaciones de los mismos.

9. La composición de la reivindicación 6, que comprende además un agente terapéutico seleccionado de lenalidomida, panobinostat, capecitabina, exemestano y combinaciones de los mismos.

10. Un compuesto como se define en la reivindicación 1, o una composición farmacéutica de la reivindicación 4, para su uso en un método de tratamiento de mielofibrosis, cáncer pancreático, cáncer de próstata, cáncer de mama, leucemia, linfoma no hodgkiniano, mieloma múltiple, psoriasis o una combinación de los mismos, en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar al sujeto un compuesto como se define en la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de la reivindicación 4.

11. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en el que el compuesto es el definido en la reivindicación 2.

12. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en el que el compuesto es el definido en la reivindicación 3.

13. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en el que la mielofibrosis es mielofibrosis primaria, mielofibrosis tras policitemia vera, mielofibrosis tras trombocitemia esencial, trombocitemia esencial o una combinación de las mismas.

14. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la mielofibrosis es mielofibrosis primaria, mielofibrosis tras policitemia vera, mielofibrosis tras trombocitemia esencial, trombocitemia esencial o una combinación de las mismas.

15. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que la mielofibrosis es mielofibrosis primaria, mielofibrosis tras policitemia vera, mielofibrosis tras trombocitemia esencial, trombocitemia esencial o una combinación de las mismas.

16. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 10, en el que el método comprende además administrar al sujeto que lo necesita un agente terapéutico seleccionado de lenalidomida, panobinostat, capecitabina, exemestano y combinaciones de los mismos.

17. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el método comprende además administrar al sujeto que lo necesita un agente terapéutico seleccionado de lenalidomida, panobinostat, capecitabina, exemestano y combinaciones de los mismos.

18. Un compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el método comprende además administrar al sujeto que lo necesita un agente terapéutico seleccionado de lenalidomida, panobinostat, capecitabina, exemestano y combinaciones de los mismos.