ES2828715T3

ES2828715T3 - Agentes de formación de imágenes por PET

Info

Publication number: ES2828715T3
Application number: ES16702985T
Authority: ES
Inventors: Yves Auberson; Emmanuelle Briard; Berndt Oberhauser; Darren Legrand
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2015-01-20
Filing date: 2016-01-20
Publication date: 2021-05-27
Anticipated expiration: 2036-01-20
Also published as: BR112017015455A2; CA2974311A1; EP3247706B1; US10865195B2; CN107406419B; US20180273509A1; CN107406419A8; US20200017474A1; AU2016209906A1; US10450298B2; JP2020158532A; MX2017009452A; JP2018511648A; EP3247706A1; EA201791643A1; JP6723264B2; KR20170103960A; WO2016116875A1; CN107406419A

Abstract

Un compuesto de la Formula general (I) **(Ver fórmula)** y/o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en donde R es halogeno, -CF3, -OCF3, -OCH3, -CH3 o CN; y A es un grupo piridinilo u oxazolilo sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de halo-(alquilo C1-6), halo- (alquil C1-3)oxi(alquilo C2-4) o halo-(alquil C1-3)oxi (alquil C2-4)oxi(alquilo C2-4).

Description

DESCRIPCIÓN

Agentes de formación de imágenes por PET

Sumario

Esta solicitud se refiere a nuevos compuestos, en particular a nuevos compuestos radiactivos, sales de compuestos de este tipo, su preparación y el uso de nuevos compuestos radiactivos de este tipo como radiotrazadores/marcadores para técnicas de formación de imágenes y herramientas de diagnóstico en el campo de enfermedades o trastornos mediados por y/o relacionado con la enzima autotaxina, tal como fibrogénesis, prurito, cirrosis, cáncer, dolor neuropático y enfermedad renal.

La autotaxina (ATX), también conocida como ectonucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa (ENPP2), es una ectoenzima secretada que se sabe que posee actividad de lisofosfolipasa D (Umezu-Goto et al., 2002), y es la responsable de producir el mediador lipídico bioactivo ácido lisofosfatídico (LPA) por hidrólisis de lisofosfatidilcolina (LPC) (Tokumura et al., 2002). El LPA está altamente implicado en la patogénesis de un cierto número de enfermedades fisiopatológicas, incluyendo el cáncer (Liu et al., 2009; Mills y Moolenaar, 2003), dolor neuropático (Inoue et al., 2004) y fibrosis (Tager et al., 2008). Después de la producción de LPA, el lípido se une a receptores específicos acoplados a proteína G, de los cuales hay siete isoformas conocidas (Noguchi et al., 2009). La unión de LPA activa múltiples vías de señalización (Mills y Moolenaar, 2003), incluyendo la migración celular (van Dijk et al., 1998), la proliferación y la supervivencia (Brindley, 2004). Otras respuestas celulares incluyen la contracción del músculo liso, la apoptosis y la agregación plaquetaria (Tigyi y Parrill, 2003).

La ATX se identificó originalmente como un factor estimulante de la motilidad celular tras el aislamiento de células de melanoma A2058 humanas (Stracke et al., 1992). El trabajo posterior sobre la enzima se centró en su papel como factor de motilidad debido a su expresión aberrante en muchos tipos de cáncer, incluido el cáncer de mama y renal (Stassar et al., 2001), el linfoma de Hodgkin (Baumforth et al., 2005), linfoma folicular (Masuda et al., 2008), así como fibrosis de pulmón y riñón (Hama et al., 2004). Diez años después de su descubrimiento, ATX se caracterizó como una lisofosfolipasa secretada (lisoPLD) (Tokumura et al., 2002; Gesta et al., 2002). Desde entonces, los ratones inactivados en el gen ATX han demostrado que el eje de señalización ATX-LPA juega un papel vital durante el desarrollo embrionario del sistema cardiovascular y neural (Tanaka et al., 2006; van Meeteren et al., 2006), lo que resulta en una letalidad embrionaria temprana (Bachner et al., 1999).

ATX pertenece a una familia de proteínas denominadas nucleótido pirofosfatasa/fosfodiesterasa (NPP), codificadas por el gen ENPP. La familia consiste en siete enzimas relacionadas estructuralmente (ENPP 1-7) conservadas en los vertebrados, que están numeradas de acuerdo con su descubrimiento. Originalmente se definieron por su capacidad de hidrolizar enlaces pirofosfato o fosfodiéster de diversos nucleótidos y derivados de nucleótidos in vitro (Stefan et al., 1999; Goding et al., 1998; Gijsbers et al., 2001), aunque ENPP2 y ésteres de fosfato de colina (ENPP6 y 7) tienen actividad específica para otras moléculas extracelulares no nucleotídicas. ENPP2 (ATX) es único dentro de la familia, ya que es la única proteína secretada, mientras que otros miembros de ENPP son proteínas transmembranales (Stefan et al., 2005).

Se pueden utilizar técnicas de formación de imágenes nucleares no invasivas para obtener información básica y de diagnóstico sobre la fisiología y bioquímica de sujetos vivos, incluidos animales de experimentación, pacientes y voluntarios. Estas técnicas se basan en el uso de instrumentos de formación de imágenes que pueden detectar la radiación emitida por los radiotrazadores administrados a sujetos vivos. La información obtenida puede ser reconstruida para proporcionar imágenes planas y tomográficas, que revelan la distribución y/o concentración del radiotrazador en función del tiempo.

La tomografía por emisión de positrones (PET) es la técnica de formación de imágenes no invasiva que ofrece la resolución espacial y temporal más alta de todas las modalidades de formación de imágenes de la medicina nuclear y tiene la ventaja adicional de que puede permitir la verdadera cuantificación de las concentraciones de trazadores en los tejidos. La técnica implica el uso de radiotrazadores marcados con radionucleidos emisores de positrones que están diseñados para tener propiedades in vivo, que permiten la medición de parámetros relacionados con la fisiología o bioquímica de una diversidad de procesos en el tejido vivo.

La tomografía por emisión de positrones (PET) es una técnica de formación de imágenes funcional de la medicina nuclear que produce una imagen tridimensional de los procesos funcionales del cuerpo. El sistema detecta pares de rayos gamma emitidos indirectamente por un radionucleido emisor de positrones (trazador), que se introduce en el cuerpo en una molécula biológicamente activa. A continuación, se construyen imágenes tridimensionales de la concentración del marcador dentro del cuerpo mediante análisis informático. En los escáneres PET-CT modernos, la formación de imágenes tridimensionales se logra a menudo con la ayuda de una tomografía computarizada de rayos X realizada en el paciente durante la misma sesión, en la misma máquina.

Los radionucleidos utilizados en la exploración por PET son típicamente isótopos con semividas cortas, tales como el carbono 11 (~20 min), nitrógeno-13 (~10 min), oxígeno-15 (~2 min), flúor-18 (~110 min) o rubidio-82 (~1.27 min). Estos radionucleidos se incorporan en compuestos que normalmente utiliza el cuerpo, tales como glucosa (o análogos de glucosa), agua o amoníaco, o en moléculas que se unen a receptores u otros sitios de acción del fármaco. Compuestos marcados de este tipo se conocen como radiotrazadores. La tecnología PET se puede utilizar para rastrear la ruta biológica de cualquier compuesto en seres humanos vivos (y también en muchas otras especies), con la condición de que se pueda marcar radiactivamente con un isótopo de p Et . Por lo tanto, los procesos específicos que se pueden probar con PET son prácticamente ilimitados.

Debido a la corta semivida de la mayoría de los radioisótopos emisores de positrones, los radiotrazadores se han producido tradicionalmente utilizando un ciclotrón en estrecha proximidad con la instalación de formación de imágenes por PET. La semivida del flúor 18 es lo suficientemente larga como para que los radiotrazadores marcados con flúor 18 puedan fabricarse comercialmente en ubicaciones externas y enviarse a centros de formación de imágenes. La tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT) es una técnica de formación de imágenes de la medicina nuclear similar a la PET. También utiliza un trazador marcado radiactivamente y se basa en la detección de rayos gamma. En contraposición con la PET, el marcador radiactivo utilizado en SPECT, p. ej., 123I, emite una radiación gamma que se mide directamente. Los autores de la invención han descubierto que determinados compuestos radiomarcados se pueden utilizar para sondar autotaxina in vitro e in vivo utilizando técnicas autorradiográficas o modalidades de formación de imágenes moleculares, tales como PET o SPECT. Los compuestos descritos en esta memoria pueden marcarse con radioisótopos emisores de electrones, positrones o gamma, tales como los arriba descritos, que incluyen, pero no se limitan a 3H, 13N, 11C, C14, 18F, 123I, 124I, 125I y/o 131I.

Descripción

En un primer aspecto, esta solicitud proporciona un compuesto de la Fórmula general (I)

(I),

y/o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

R es halógeno, -CF³, -OCF³, -OCH³, -CH³o CN; y

A es un grupo piridinilo u oxazolilo sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de halo-(alquilo C¹-⁶), haloalquil C1-3)oxi(alquilo C²-⁴) o halo-(alquil C1-3)oxi (alquil C2-4)oxi(alquilo C²-⁴).

En otro aspecto, esta solicitud proporciona un compuesto de Fórmula I que opcionalmente contiene 3H.

En otro aspecto, esta solicitud proporciona un compuesto de Fórmula I, en donde en R es -CF³u -OCF³y en donde cada uno de estos grupos puede contener opcionalmente al menos un 18F.

En aún otro aspecto, esta solicitud proporciona un compuesto de Fórmula I, en que " halo" o "halógeno" es un resto seleccionado de F, Br, Cl o I. En todavía otro aspecto, halo o halógeno se selecciona de 18F, 19F, 123I, 124I, 125I o 131I. En un aspecto adicional, esta solicitud proporciona un compuesto de Fórmula I, en que el átomo de carbono numerado con "1" se selecciona de 11C, 12C o 14C.

Los compuestos descritos en esta memoria son inhibidores de autotaxina. En su forma no radiactiva (es decir, cuando solo contienen 12C, 19F o 127I), estos compuestos pueden utilizarse como agentes terapéuticos para enfermedades en las que está implicada la autotaxina. En su forma radiomarcada, los compuestos de la invención pueden utilizarse como agentes de diagnóstico, para la formación de imágenes o para radioterapia. Más específicamente, en su forma radiomarcada con 3H-, 11C-, 14C, 18F-, 123I-, 124I-, 125I- o 131I, los compuestos descritos en esta memoria pueden utilizarse para diagnóstico o formación de imágenes, o como agentes de radioterapia. En particular, los derivados radiomarcados con 3H y 14C pueden utilizarse para ensayos de unión de radioligando in vitro y ex vivo o autorradiografía. Derivados radiomarcados con 11C, 18F, 123I y 124I pueden ser adecuados, adicionalmente, para la formación de imágenes in vivo utilizando SPECT (tomografía computarizada de fotón único) o PET (tomografía por emisión de positrones), p. ej., para formar imágenes de la concentración de proteína autotaxina, o para medir la ocupación del sitio de unión por una molécula que se une a la autotaxina. Derivados radiomarcados con 131I pueden ser adecuados como agentes formadores de imágenes y para la radioterapia, p. ej., para el tratamiento de tumores que expresan autotaxina.

Aplicaciones de ligandos de autotaxina radiomarcados pueden incluir, pero no se limitan a estudios clínicos para cuantificar la concentración de proteína autotaxina en los tejidos, para estadificar o controlar la progresión de la enfermedad, o para medir el efecto de un tratamiento terapéutico sobre la expresión de la proteína de autotaxina (véase, p. ej., Hepatology 201256(4):1391-400 para el enlace entre la expresión de ATX y el prurito de la colestasis). Ligandos de autotaxina radiomarcados también se pueden utilizar ex vivo o in vivo para determinar la ocupación del receptor de un fármaco que se une a autotaxina, así como para formar imágenes de tumores asociados con células que expresan autotaxina, p. ej., carcinoma hepatocelular humano (véase, p. ej., Molecular Cancer 2010, 9 :71).

De acuerdo con lo anterior, la presente solicitud describe agentes para uso como marcadores o agentes radioterapéuticos para formar imágenes de cáncer, o agentes utilizados para el seguimiento de las terapias y de las enfermedades en las que participa autotaxina, por ejemplo, prurito de la colestasis, cirrosis, diabetes, enfermedades renales, dolor, fibrosis de órganos, p. ej., fibrosis pulmonar idiopática.

Por consiguiente, se describe un método para la detección de autotaxina en un sujeto con una necesidad reconocida de la misma, que comprende: (i) la administración de un compuesto de fórmula (I) tal como se describe en cualquier lugar de esta memoria, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a dicho sujeto; y (ii) detectar la absorción de dicho compuesto mediante formación de imágenes por PET o SPECT in vivo. Se cree que el método proporcionará información y datos que tienen utilidad en el diagnóstico y la investigación clínica de trastornos en los que participa la autotaxina. En particular, el sujeto es un mamífero, lo más adecuadamente un ser humano que tiene o se sospecha que tiene un trastorno en el que está implicado la autotaxina. El método se puede realizar cuantitativamente de manera que se pueda determinar la cantidad o el cambio en la cantidad de autotaxina, o la densidad o el cambio en la densidad de autotaxina para diagnosticar o seguir el progreso de una enfermedad. Alternativamente, el método puede utilizarse para localizar autotaxina in vivo.

Se describe adicionalmente un método para cuantificar el porcentaje o cambio en el porcentaje de autotaxina no unida en un sujeto después de la administración de un ligando que se une a autotaxina, que comprende:

(i) administración de un compuesto radiomarcado de fórmula (I) tal como se definió arriba, o una sal o solvato del mismo a dicho sujeto;

(ii) detectar la absorción de dicho compuesto radiomarcado de fórmula (I) administrado en la etapa (i) mediante formación de imágenes por PET o SPECT in vivo;

(iii) permitir que pase una cantidad de tiempo adecuada de manera que el compuesto administrado en la etapa (i) se haya desintegrado radiactivamente; luego (iv) administración de una cantidad eficaz de (a) un ligando de autotaxina no radiomarcado, o (b) un agente no radiomarcado que influye en el nivel endógeno de sustratos de autotaxina, y administración contemporánea de un compuesto radiomarcado de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo como se define en la etapa (i); y (v) detectar la captación de dicho compuesto de fórmula (I) administrado en la etapa (iv) mediante formación de imágenes por PET o SPECT in vivo.

El tiempo que se deja transcurrir en la etapa (iii) es adecuadamente más de 4 veces la semivida del isótopo radiactivo, más adecuadamente al menos 6 veces la semivida del isótopo radiactivo, y más adecuadamente es tal que la señal de PET o SPECT del compuesto radiomarcado de fórmula (I) administrada en la etapa (i) ya no es detectable.

Además, se describe un método para la detección de autotaxina en un sujeto con una necesidad reconocida de la misma, que comprende: (i) administración de un compuesto radiomarcado de fórmula (I) tal como se describe en cualquier parte en esta solicitud, o una sal o solvato del mismo a dicho sujeto;

(iii) administración de una cantidad eficaz de (a) un ligando de autotaxina no radiomarcado, o (b) un agente no radiomarcado que influye en el nivel endógeno de sustratos de autotaxina; y

(iv) detectar la absorción de dicho compuesto de fórmula (I) administrado en la etapa (i) mediante formación de imágenes por PET o SPECT in vivo.

Un experimento de formación de imágenes por PET o SPECT proporcionará una imagen tridimensional de la distribución de radiactividad, después de la inyección del trazador (p. ej., un compuesto de Fórmula I adecuadamente marcado) en un sujeto animal o humano sin tratamiento previo o pre-tratado.

Brevemente, después del marcaje con un radioisótopo adecuado para la formación de imágenes por PET o SPECT (p. ej., 11C, 18F o 123I), el compuesto de la invención se inyectará en la circulación sanguínea de un sujeto animal o humano sin tratamiento previo o pre-tratado. Después de un período de espera opcional que permite que la molécula se distribuya en el cuerpo, se colocará al sujeto en un escáner PET o SPECT y se reconstruirá una imagen de distribución de radiactividad después de registrar un número suficiente de eventos de desintegración. Para facilitar la interpretación, se puede realizar una exploración de rayos X por Resonancia Magnética o Tomografía Computarizada en paralelo a la exploración por PET o SPECT. Para medir la expresión de la diana (p. ej., para estudiar una enfermedad en la que está implicada la autotaxina, o para detectar tumores que expresan autotaxina), el compuesto radiomarcado puede inyectarse sin pre-tratamiento de la terapia. Para medir la ocupación de autotaxina por la unión de un fármaco a autotaxina, o para medir el efecto de una terapia sobre la expresión de la autotaxina, el compuesto radiomarcado se inyectará después del tratamiento con el fármaco o después del tratamiento y se comparará con el valor de referencia, es decir, la señal de radiactividad observada antes de la terapia con el fármaco del tratamiento.

Además, la distribución de radiactividad derivada de un compuesto marcado de Fórmula I se puede medir mediante autorradiografía ex vivo o in vitro. Como un ejemplo, general, a un animal se le inyecta un compuesto radiomarcado de Fórmula I (con o sin pretratamiento con un fármaco o una terapia) y posteriormente se sacrifica. A continuación, se congela o embebe el animal completo o un órgano de interés, se corta en rodajas y se forma una imagen después de la aplicación de la rodaja contra una película radiográfica o una placa de formación de imágenes, p. ej., utilizando una placa de fósforo fotoestimulable y creando una imagen con un phosphorimager.

Sección experimental

Ejemplos

Los siguientes Ejemplos, pretenden ilustrar la invención y no deben interpretarse como limitaciones de la misma.

Condiciones Generales:

Los espectros de masas se adquirieron en sistemas LC-MS, SFC-MS o GC-MS utilizando métodos de ionización por electroproyección, químicos y de impacto de electrones de una gama de instrumentos de la siguiente configuración: Sistemas HPLC Agilent 1100 con un espectrómetro de masas Agilent 6110. [M+H]+ se refiere al ion molecular protonado de la especie química.

Los espectros de RMN se adquirieron en un espectrómetro de RMN Bruker AVANCE de 400MHz o 500MHz o 600MHz utilizando ICON-NMR, bajo el control del programa TopSpin. Los espectros se midieron a 298 K, a menos que se indique lo contrario, y se midieron por referencia a la resonancia del solvente.

Instrumentación

Métodos MS: Sistemas HPLC Agilent 1100 con un Espectrómetro de Masas Agilent 6110.

2 min Bajo pHv03:

Columna: Waters Acquity CSH 1,7 |jm, 2,1 x 50 mm

Temperatura: 50 o C

Fase móvil: A: Agua Ácido Fórmico al 0,1% B: acetonitrilo 0,1% de ácido fórmico Velocidad de flujo: 1,0 mL/min

Gradiente: 0,0 min 5% de B, 0,2-1.8 min 5-98% de B, 1,8-2,1 min 98% de B, 2,1-2,3 min 98% de B 2 min Bajo pHv01:

Columna: Waters Acquity CSH 1,7 jm , 2,1 x 50 mm

Temperatura: 50 o C

Fase móvil: A: Agua Ácido Fórmico al 0,1% B: Acetonitrilo Ácido Fórmico al 0,1% Caudal: 1,0 mL/min

Gradiente: 0,0min 5% de B, 0,2-1,55 min 5-98% de B, 1,55-1,75 min 98% de B, 1,75-1,8 min 98- 5% de B

2 min Bajo pH:

Columna: Waters Acquity CSH 1,7 jm , 2,1 x 50 mm

Temperatura: 50 o C

Gradiente: 0,0 min 5% de B, 0,2-1,3 min 5-98% de B, 1,3-1,55 min 98% de B, 1,55-1,6 min 98- 5% de B

10 min Bajo pH:

Columna: Waters Acquity CSH 1,7 |jm, 2,1 x 100 mm

Temperatura: 50 o C

Fase móvil: A: Agua Ácido Fórmico al 0,1% B: Acetonitrilo Ácido Fórmico al 0,1%

Caudal: 0,7 mL/min

Gradiente: 0,0 min 2% de B, 0,5-8,0 min 2-98% de B, 8,0-9,0 min 98% de B, 9,0-9,1 min 98-2% de B

2 min Alto pHv03:

Columna: Waters Acquity CSH 1,7 jm , 2,1 x 50 mm

Temperatura: 50 o C

Fase móvil: A: Agua 0.1% de Amoniaco B: Acetonitrilo 0,1% de Amoniaco

Caudal: 1,0 mL/min

Gradiente: 0,0min 5% de B, 0,2-1,8min 5-98% de B, 1,8-2,1min 98% de B, 2,1-2,3min 98-5% de B

2 min Análisis Final:

Columna: Waters Acquity HSS 1,8 jm , 2,1 x 50 mm

Temperatura: 60 o C

Fase móvil: A: Agua Ácido Fórmico al 0,05% B: Acetonitrilo Ácido Fórmico al 0,04%

Caudal: 1 mL/min

Gradiente: de 5 a 98% de B en 1,4 min

HPLC analítica:

Columna: Zorbax XDB - C185 j , 150 x 4,6 mm

Temperatura: 40 o C

Fase móvil: A: Agua TFA al 0,01% B: Acetonitrilo/MeOH (1:1)

Caudal: 1 mL/min

Gradiente: de 5 a 95% de B en 5 min

Abreviaturas:

BOC butilo terciario carboxi

br ancho

d doblete

dd doblete de dobletes

DCM diclorometano

DIPEA dietilisopropilamina

DMA N,N-dimetilformamida

DME 1,4-dimetoxietano

DMF N,N-dimetilformamida

DMSO sulfóxido de dimetilo

EtOAc acetato de etilo

h hora(s)

HPLC cromatografía líquida de alta presión

LCMS cromatografía líquida y espectrometría de masas

MeOH metanol

MS espectrometría de masas

m o mult multiplete

mg miligramo

min minuto(s)

mL mililitro

mmol milimol

MTBE metil butil terciario éter

m/z relación masa a carga

RMN resonancia magnética nuclear

ppm partes por millón

rac racémico

Rt tiempo de retención

s singulete

t triplete

TBME metil terc.-butil éter

TFA ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

Preparación de Compuestos Intermedios

Compuesto Intermedio A

(R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

Etapa 1: 2-(2-bromo-5-dorobencil)-5-metil-2H-tetrazol

5-metil-2H-tetrazol (77 g, 913 mmol) en un matraz con DMF seca (400 mL) a 0°C utilizando un baño de hielo. Se añadió carbonato de potasio (168 g, 1217 mmol) en porciones, seguido de la adición gota a gota de 1-bromo-2-(bromometil)-4-clorobenceno (173 g, 608 mmol) en DMF (400 mL). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se vertió en agua y la suspensión resultante se recogió por filtración. El sólido se trituró con iso-hexano y el sólido no disuelto se separó por filtración. El filtrado se concentró a presión reducida, dando un sólido blanco que se suspendió en agua y se agitó durante la noche. El producto se filtró y se lavó con agua para proporcionar el compuesto del título.

LCMS: Rt 1,15 min; MS m/z 289,0 [M+H]+; 2 min Bajo pHv01

Etapa 2: 3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acrilato de (E)-etilo

2- (2-bromo-5-clorobencil) -5-metil-2H-tetrazol (15 g, 52,2 mmol), tri-o-tolilfosfina (0,794 g, 2,61 mmol) y trietilamina (10,56 g, 104 mmol) se colocaron en un matraz con DMF seca y desgasificada (80 mL). Se añadió acrilato de etilo (7,83 g, 78 mmol) seguido de diacetato de paladio (0,586 g, 2,61 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 100°C durante la noche. La mezcla se dejó enfriar, se diluyó con EtOAc (150 mL) y se filtró para separar los sólidos. La mezcla de reacción se repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y el disolvente se separó in vacuo. Cuando se separó ~el 75% del disolvente, precipitó un sólido que se recogió por filtración y se secó para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido blanco.

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 57,92 (1H, d), 7,89 (1H, d), 7,59 (1H, d), 7,51 (1H, d of d), 6,59 (1H, d), 6,09 (2H, s), 4,20 (2H, c), 2,41 (3H, s), 1,26 (3H, t).

Etapa 3: Ácido (E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acrílico

3- (4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acrilato de (E)-etilo (8,75 g, 28,5 mmol) se colocó en un matraz con EtOH (100 mL). Se añadió NaOH 2 M (57,1 mL, 114 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El etanol se separó in vacuo y la mezcla de reacción se acidificó con HCL ac. 2M. El precipitado resultante se recogió por filtración, se lavó con agua y se secó para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido blanco.

LCMS: tR = 0,99 min; MS m/z 279,2 [M+H]+; Método 2 min Bajo pH v01

Etapa 4: 4-(3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acriloil)-3-metilpiperazina-1-carboxilato de (R,E)-terc.-butilo

A ácido (E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acrílico (1,29 g, 4,63 mmol) en NMP (15 mL) se le añadió HATU (2,112 g, 5,55 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se añadió 3-metilpiperazina-1-carboxilato de (R) -terc.-butilo (0,927 g, 4,63 mmol) seguido de DIPEA (1,617 mL, 9,26 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con EtOAc. La porción orgánica se lavó con agua, bicarbonato de sodio sat. ac., agua, salmuera y se secó sobre un separador de fases. El disolvente se separó a presión reducida. La purificación del producto bruto por cromatografía sobre sílice utilizando un gradiente de EtOAc al 0 - 100% en isohexano proporcionó el compuesto del título.

LC-MS: Rt = 1,23 min; [M+H]+ 461,3, Método 2 min Bajo pH.

Etapa 5: (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

A 4-(3-(4-doro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acriloil)-3-metilpiperazina-1-carboxilato de (R,E)-terc.-butilo (2,1 g, 4,56 mmol) en DCM (22 mL) se añadió TFA (4,21 mL, 54,7 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El disolvente se separó a presión reducida. El residuo resultante se cargó en un cartucho Isolute® SCX-2 eluyendo con MeOH, seguido de NH³2 M en MeOH. Las fracciones se concentraron a presión reducida para proporcionar el compuesto del título.

LC-MS: Rt = 2,40 min; [M+H]+ 361,6, Método 10 min Bajo pH.

Compuesto Intermedio B

(R,E)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

Etapa 1: 2-(2-bromo-5-(trifluorometil)bencil)-5-metil-2H-tetrazol

A una solución agitada de 5-metil-2H-tetrazol (19,44 g, 231 mmol) en DMF (154 mL) a 10°C bajo N²se añadió K²CO³(42,6 g, 308 mmol). La suspensión resultante se enfrió a -2°C (baño de sal de hielo) y se añadió una solución de 1-bromo-2-(bromometil)-4-(trifluorometil)benceno (49 g, 154 mmol) en DMF ^{( 66}mL). gota a gota durante 30 min, manteniendo la temperatura interna por debajo de 5 ° C. Una vez completada la adición, la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y la suspensión blanca resultante se agitó durante la noche. Se añadió lentamente agua (400 mL) a la mezcla que luego se extrajo con EtOAc (2 x 500 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (500 mL), se secaron (MgSO4) y se concentraron en vacío para producir un aceite incoloro. Se añadió isohexano (150 mL) y la suspensión resultante se filtró y el sólido se lavó con iso-hexano (2 x 50 mL). El filtrado se concentró en vacío para producir un aceite incoloro. La purificación por cromatografía sobre sílice eluyendo con EtOAc al 0-50% en isohexano proporcionó el compuesto del título.

LCMS: Rt 1,30 min; MS m/z 321,3 [M+H]+; Método 2 min Bajo pH v03

Etapa 2: 3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)4-(trifluorometil)fenil)acrilato de (E)-etilo

A una solución agitada de 2-(2-bromo-5-(trifluorometil)bencil)-5-metil-2H-tetrazol (17 g, 52,9 mmol) en DMF (76 mL) se añadió tri-o-tolilfosfina (0,806 g, 2,65 mmol) y trietilamina (14,76 mL, 106 mmol). La solución se desgasificó burbujeando N²a través de ella durante 20 min. Se añadieron Pd(OAc)²(0,594 g, 2,65 mmol) y acrilato de etilo (^{8 , 66}mL, 79 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 90 °C bajo N². Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se repartió entre agua (150 mL) y EtOAc (250 mL). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con más EtOAc (250 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (2 x 250 mL), se secaron (MgSO4) y se concentraron en vacío para producir el compuesto del título en forma de un aceite naranja.

LCMS: Rt 1,36 min; MS m/z 341,5 [M+H]+; Método 2 min Bajo pH v03

Etapa 3: Ácido (E)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)acrílico

A una solución agitada de 3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)4-(trifluorometil)fenil)acrilato de (E)-etilo bruto (18,02 g, asumir 53,0 mmol) en EtOH (212 mL) se añadió lentamente NaOH ac. 2 M (79 mL, 159 mmol). La solución naranja resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla resultante se concentró en vacío hasta un volumen de 100 ml y luego se filtró. Se añadió lentamente HCl 5 M (38 mL) para ajustar el pH a 2, tras lo cual comenzó a cristalizar un sólido en la solución. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h para permitir la cristalización completa. La suspensión resultante se filtró y la torta del filtro se lavó con EtOH ac. al 50% (2 x 20 mL). El sólido se secó en vacío a 40 °C durante la noche para proporcionar el compuesto del título.

LCMS: Rt 1,14 min; MS m/z 313,4 [M+H]+; Método 2 min Bajo pH v03

Etapa 4: 3-metil-4-(3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)acriloil)piperazina-1-carboxilato de (R,E)-terc.-butilo

Se añadió T3P® al 50% en acetato de etilo (4,5 mL, 7,7 mmol) a una solución de ácido (E)-3-(4-(difluorometil)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acrílico (2 g, 6,41 mmol), 3-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-terc.-butilo (2,0 g, 6,4 mmol) y TEA (3,6 mL, 25,6 mmol) en DCM (20 mL) y la mezcla resultante se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con bicarbonato de sodio ac. Sat. (100 mL). La solución acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 100 mL). Las soluciones orgánicas combinadas se lavaron con agua (50 mL), salmuera (50 mL), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron en vacío. La purificación se realizó mediante cromatografía en columna de gel de sílice eluyendo con un gradiente de iso-hexano a acetato de etilo. Las fracciones de producto se combinaron y se evaporaron en vacío para dar un sólido blanco.

LC MS: Rt 1,39 min; [M-100+H]+ 395,3, Método 2 min Bajo pHv03

Etapa 5: (R,E)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

Se añadió TFA (10 mL) a una solución de 2-(3-metil-4-(3-(2- ((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)acriloil)piperazin-1-il)acetato de (R, E) -terc.-butilo (2,7 g, 5,46 mmol) en DCM (10 mL) y la mezcla resultante se agitó durante 1 h. Se añadió tolueno (100 mL) y la reacción se concentró en vacío. La goma resultante se agitó en dietil éter (250 mL), se añadió agua (1 mL) y el sólido resultante se recogió por filtración, se lavó con éter y se secó en vacío para dar el compuesto del título en forma de una sal trifluoroacetato.

LC MS: Rt = 0,74 min; [M+H]+ 395,0, 397,5, Método 2 min Bajo pHv03.

Compuesto Intermedio C:

5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)picolinaldehído

Etapa 1: 2-(2-((6-metilpiridin-3-il)oxi)etoxi)etanol

Una suspensión de 6-metilpiridin-3-ol (1,5 g, 13,75 mmol), dietilenglicol monoclorohidrina (5,83 mL, 55,0 mmol), K²CO³(2,85 g, 20,62 mmol) y Nal (0,11 g, 0,76 mmol) en DMF (18,6 mL) se agitó a 85°C durante 16 h bajo una atmósfera de argón. La mezcla de reacción se dejó enfriar a TA, se diluyó con EtOAc y se lavó dos veces con agua. La capa acuosa se extrajo con DCM/i-PrOH (4/1). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un separador de fases y se concentraron. Las capas orgánicas combinadas se secaron y concentraron para dar un producto bruto en forma de un aceite púrpura que se purificó mediante cromatografía de resolución instantánea DCM/MeOH (100/0 a 90/10) para proporcionar 5,0 g de un aceite pardo.

LC MS: Rt = 0,32 min; [M+H]+ 198,1,2 min Análisis Final

Etapa 2: 4-metilbencenosulfonato de 2-(2-((6-metilpiridin-3-il)oxi)etoxi)etilo

A una solución agitada de 2-(2-((6-metilpiridin-3-il)oxi)etoxi)etanol (2,35 g, 4,05 mmol) en CH²O ²(10 mL) se añadió lentamente cloruro de p-tolilsulfonilo (1,87 g, 9,72 mmol) seguido de trietilamina (2,82 mL, 20,26 mmol) a 0°C, bajo argón. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH²O ²y agua. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre un separador de fases y se concentró para dar el producto bruto en forma de un aceite pardo, que se purificó mediante cromatografía de resolución instantánea (ciclohexano/EtOAc, de 100/0 a 0/100) para proporcionar 1,02 g del producto deseado en forma de un aceite amarillo.

LC MS: Rt = 0,85 min; [M+H]+ 352,4, 2 min Análisis Final

Etapa 3: 5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)-2-metilpiridina

A una solución de 4-metilbencenosulfonato de 2-(2-((6-metilpiridin-3-il)oxi)etoxi)etilo (1,02 g, 2,48 mmol) en THF (15,7 mL) se añadió TBAF (1 M en THF) (12,40 mL, 12,40 mmol) y la solución resultante se agitó a 65°C durante 30 min. El disolvente se evaporó y el residuo se recogió en EtOAc y se lavó con agua. La capa acuosa se extrajo dos veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un separador de fases y se concentraron para dar el producto bruto en forma de un aceite pardo, que se purificó mediante cromatografía de resolución instantánea (ciclohexano/EtOAc: 100/0 a 0/100) para proporcionar el compuesto del título en forma de un aceite naranja (465 mg).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2,41 (s, 3H) 3,64 - 3,72 (m, 1H) 3,76 - 3,83 (m, 3H) 4,16 (dd, J=5,44, 3,73 Hz, 2H) 4,45 - 4,53 (m, 1H) 4,61 - 4,64 (m, 1H) 7,18 (d, J=8,56 Hz, 1H) 7,31 (dd, J=8,50, 3,00 Hz, 1H) 8,17 (d, J=2,93 Hz, 1H)

LC MS: Rt = 0,44 min; [M+H]+ 200,1,2 min Análisis Final

Etapa 4: 5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)-2-metilpiridina 1-óxido

A una solución de 5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)-2-metilpiridina (465 mg, 2,1 mmol) en CHCl3 (10,6 mL) a 0°C se añadió ácido m-cloroperbenzoico (435 mg, 2,52 mmol). La mezcla resultante se agitó a 0°C durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió bruscamente con una solución saturada de Na2CO3 y se extrajo dos veces con CH²O ². Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un separador de fases y se concentraron para dar 562 mg de producto bruto en forma de un aceite amarillo.

LC MS: Rt = 0,48 min; [M+H]+ 216,1,2 min Análisis Final

Etapa 5: Acetato de (5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)piridin-2-il)metilo

A anhídrido acético (2018 pl, 21,39 mmol) se añadió a 80°C 5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)-2-metilpiridina 1-óxido (562 mg, 1,645 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 130°C y se agitó durante 30 min. La mezcla resultante se vertió en agua helada y luego se agitó a TA durante 15 min. El producto se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con NaHCO3 ac. sat. y salmuera. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre un separador de fases y se concentraron para dar el producto bruto en forma de un aceite pardo que se purificó por cromatografía de resolución instantánea (ciclohexano/EtOAc, 100:0 a 60/40) para proporcionar 352 mg del compuesto del título en forma de un aceite amarillo.

LC MS: Rt = 0,71 min; [M+H]+ 258,1,2 min Análisis Final

Etapa 6: (5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)piridin-2-il)metanol

A una solución de acetato de (5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)piridin-2-il)metilo (352 mg, 1,08 mmol) en EtOH (4,7 mL) y agua (0,82 mL) se añadió NaOH (86 mg, 2,16 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a reflujo durante 1 h. Los disolventes se evaporaron y el residuo se extrajo dos veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre un separador de fases y se concentraron para dar 282 mg de producto bruto en forma de un aceite naranja.

LC MS: Rt = 0,43 min; [M+H]+ 216,1,2 min Análisis Final

Etapa 7: 5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)picolinaldehído

A una solución de (5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)piridin-2-il)metanol (282 mg, 1,05 mmol) en CH²Cl²(4,0 mL) se añadió MnO²(911 mg, 10,5 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a TA durante 2 días. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó tres veces con EtOAc. El filtrado se evaporó a sequedad para dar 185 mg de producto bruto en forma de un aceite amarillo.

LC MS: Rt = 0,65 min; [M+H]+ 214,0, 2 min Análisis Final

Compuesto Intermedio D

2-(fluorometil)oxazol-4-carbaldehído

Etapa 1: 2-(fluorometil)oxazol-4-carboxilato de metilo

A una solución de 2-(clorometil)oxazol-4-carboxilato de metilo (1,0 g, 5,70 mmol) en CH³CN (28,5 mL) se añadió TBAF (1 M en THF) (17,09 mL, 17,09 mmol) a TA. La solución verde resultante se agitó durante 21 h bajo argón a TA. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo dos veces con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un Separador de Fases y se concentraron para dar un producto bruto en forma de un aceite naranja. El producto bruto se purificó por HPLC preparativa (Waters SunFire C18ODB, 5 pm, 30 x 100, eluyente: 1% de MeCN/99% de H²O a 30% de MeCN/70% de H²O en 20 min, H²O contiene TFA al 0,1%, caudal 40 mL/min). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se diluyeron con EtOAc y se lavaron con NaHCO3 ac. sat. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un separador de fases y se concentraron para dar 291 mg de producto bruto en forma de un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 3,76 (s, 3 H) 5,43 (s, 1 H) 5,55 (s, 1 H) 8,91 (d, J=1,34 Hz, 1 H)

LC MS Rt 0,49 min; [M+H]+ 160,0; 2 min Análisis Final

Etapa 2: (2-(fluorometil)oxazol-4-il)metanol

A una solución de 2-(fluorometil)oxazol-4-carboxilato de metilo (291 mg, 1,46 mmol) en THF (3,6 mL) a -78°C bajo argón, se añadió gota a gota DIBAL-H (1 M en THF) (3,22 mL, 3,22 mmol). Después, la mezcla de reacción se agitó a -78°C durante 3 h y a TA durante 16 h. UPLC/MS mostró material de partida restante, por lo tanto, la mezcla de reacción se enfrió a -78°C y se añadió DIBAL-H (1M en THF) (3,22 mL, 3,22 mmol) y se agitó a -78°C durante 3 h. La mezcla resultante se diluyó con CH²Cl²a -78°C, luego se enfrió bruscamente con MeOH/agua/NaOH ac. 2 M. y se agitó durante 15 min. Se añadió Na2SO4 a TA y la suspensión se agitó durante 15 min. Las sales se separaron por filtración y el filtrado se concentró en vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía de resolución instantánea (CH²Ch/MeOH de 100/0 a 95/5) para proporciona el compuesto del título en forma de un aceite amarillo (79 mg)

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 4,31 - 4,34 (m, 2H) 5,32 (s, 1H) 5,44 (s, 1H) 7,84 - 8,03 (m, 1H)

LC MS Rt 0,32 min; [M+H]+ 132,0; 2 min Análisis Final

Etapa 3: 2-(fluorometil)oxazol-4-carbaldehído

A una solución de (2-(fluoroetoxi)oxazol-4-il)metanol (78 mg, 0,6 mmol) en CH²O ²(6 mL) se añadió MnO²(517 mg, 5,95 mmol). La mezcla resultante se agitó a TA durante 2 días. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se lavó tres veces con CH²O ². El filtrado se evaporó a sequedad para dar 32 mg de producto bruto. El producto bruto se utilizó en la siguiente etapa sin purificación ulterior.

LC MS Rt 0,34 min; [M+H]+ 130,0; 2 min Análisis Final

Preparación de los Ejemplos

Ejemplo 1:

(R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona

Etapa 1: (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-hidroxipiridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

Una solución agitada de (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1- (2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (compuesto intermedio A) (3,0 g, 8,3 mmol) en DCE (60 mL) se trató con 5-hidroxipiridina-2-carboxaldehído (2,0 g, 16,6 mmol), triacetoxiborohidruro de sodio (3,5 g, 16,62 mmol) y ácido acético (0,95 mL) a 0°C. La mezcla resultante se agitó a TA durante 17 h. Se evaporó el disolvente, se añadió agua al residuo y se extrajo la fase acuosa con EtOAc. La capa orgánica se lavó con NaHCO3 ac. sat, salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró en vacío. El residuo se purificó mediante cromatografía de resolución instantánea sobre gel de sílice.

HLPC Rt: 5,7 min (HPLC analítica)

Etapa_____ 2j. (R,E)-3-(4-doro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

A una solución de (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-hidroxipiridin-2)-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (1,5 g, 3,2 mmol) en DMF (15 mL) se añadió CS²CO³(1,53 g, 4,8 mmol) seguido de 1-bromo-2-fluoroetano (488 mg, 3,8 mmol) bajo N². La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y la solución acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las soluciones orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron en vacío. El producto bruto se purificó mediante HPLC preparativa.

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 100°C) 5 ppm 1,26 - 1,31 (m, 4 H) 2,09 (d, J=3,26 Hz, 1 H) 2,24 (dd, J=11,36, 3,83 Hz, 1 H) 2,44 (s, 3 H) 2,72 (d, J=11,29 Hz, 1 H) 2,82 - 2,90 (m, 1 H) 3,10 - 3,24 (m, 1 H) 3,52 - 3,65 (m, 2 H) 4,02 - 4,17 (m, 1 H) 4,29 - 4,34 (m, 1 H) 4,36 - 4,42 (m, 1 H) 4,46 - 4,58 (m, 1 H) 4,66 - 4,74 (m, 1 H) 4,78 - 4,86 (m, 1 H) 5,96 (s, 2 H) 7,03 (d, J=15,43 Hz, 1 H) 7,42 (d, J=1,76 Hz, 2 H) 7,44 - 7,51 (m, 2 H) 7,71 (d, J=15,31 Hz, 1 H) 7,81 (d, J=8,41 Hz, 1 H) 8,26 (t, J=1,76 Hz, 1 H)

LC MS: Rt = 0,87 min; [M+H]+ 514,1, 2 min Análisis Final

Ejemplo 2:

(R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-ona

El compuesto del título se preparó mediante un método similar al del Ejemplo 1, pero a partir de (R,E)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (compuesto intermedio B).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 100°C) 5 ppm 1,29 (d, J=6,78 Hz, 3H) 2,00 - 2,14 (m, 1H) 2,21 - 2,29 (m, 1H) 2,44 (s, 3H) 2,66 - 2,76 (m, 1H) 2,84 - 2,92 (m, 1H) 3,12 - 3,25 (m, 1H) 3,60 (d, J=10,67 Hz, 2H) 4,06 - 4,17 (m, 1H) 4,28 - 4,34 (m, 1H) 4,35 - 4,42 (m, 1H) 4,45 - 4,58 (m, 1H) 4,66 - 4,74 (m, 1H) 4,78 - 4,87 (m, 1H) 6,06 (s, 2H) 7,11 (d, J=15,43 Hz, 1H) 7,42 (d, J=1,88 Hz, 2H) 7,77 (d, J=5,65 Hz, 3H) 7,92 - 8,04 (m, 1H) 8,26 (s, 1H)

LC MS: Rt = 0,92 min; [M+H]+ 548,0, 2 min Análisis Final

Ejemplo 3:

(R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)propan-1-ona

Una solución de (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-ona (46 mg, 0,084 mmol) y Pd/C (^{1 0}%) (5,72 mg, 5,38 pmol) e EtOH (4,00 mL) se agitó a TA bajo hidrógeno durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró sobre Celite y se concentró. El residuo se recogió en 1 mL de MeOH y se purificó mediante HPLC preparativa (Waters SunFire C18ODB, 5 pm, 30x100, eluyente: 5% de MeCN/95% de H²O a 50% de MeCN/50% de H²O en 20 min, H²O contiene TFA al 0,1%, caudal 40 mL/min). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y liofilizaron durante la noche. El polvo blanco resultante se diluyó con EtOAc y se lavó con una solución saturada de NaHCO3. La capa acuosa se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un separador de fases, se concentraron y se secaron en vacío para dar el compuesto del título (22 mg, 47%).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1,16 - 1,22 (m, 3H) 1,27 - 1,31 (m, 1H) 1,92 - 2,13 (m, 2H) 2,46 (s, 3H) 2,55 -2,85 (m, 4H) 3,04 - 3,07 (m, 3H) 3,48 - 3,62 (m, 2H) 3,78 - 4,03 (m, 1H) 4,28 - 4,41 (m, 2H) 4,66 - 4,85 (m, 2H) 5,96 -6,08 (m, 2H) 7,35 - 7,44 (m, 2H) 7,53 - 7,71 (m, 3H) 8,21 - 8,29 (m, 1H)

LC MS: Rt = 0,89 min; [M+H]+ 550,1, 2 min Análisis Final

Ejemplo 4:

(R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona

A (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (compuesto intermedio A) (80 mg, 0,22 mmol) en MeOH (2,0 mL) se añadieron AcOH (0,2 mL) y 5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)picolinaldehído (compuesto intermedio C) (93 mg, 0,33 mmol). Después de agitar durante 5 min, se añadió 2-picolina borano (44,2 mg, 0,35 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 20 h. Los componentes volátiles se evaporaron y el residuo se purificó por HPLC preparativa (Waters SunFire C18ODB, 5 |jm, 30 x 100, eluyente: 5% de MeCN/95% de H²O a 50% de MeCN/50% de H²O en 20 min, H²O contiene TFA al 0,1%, caudal 40 mL/min). Las fracciones deseadas se concentraron. El residuo se recogió en EtOAc y se lavó con una solución saturada de NaHCO3. La capa acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un separador de fases y se concentraron para dar 63 mg de un aceite amarillo.

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6, 100°C) 5 ppm 1,28 (d, J=6,78 Hz, 3H) 2,01 - 2,15 (m, 1H) 2,25 (dd, J=11,48, 3,07 Hz, 1H) 2,44 (s, 3H) 2,73 (d, J=11,42 Hz, 1H) 2,88 (d, J=11,29 Hz, 1H) 3,17 (s a., 1H) 3,52 - 3,66 (m, 2H) 3,70 - 3,76 (m, 1H) 3,78 - 3,88 (m, 3H) 4,12 (d, J=12,55 Hz, 1H) 4,18 - 4,28 (m, 2H) 4,44 - 4,56 (m, 2H) 4,57 - 4,65 (m, 1H) 5,96 (s, 2H) 7,03 (d, J=15,31 Hz, 1H) 7,40 (d, J=1,76 Hz, 2H) 7,44 - 7,51 (m, 2H) 7,71 (d, J=15,31 Hz, 1H) 7,81 (d, J=8,41 Hz, 1H) 8,24 (t, J=1,69 Hz, 1H)

LC MS Rt 0,87 min; [M]+ 558,2, 560,1; 2 min Análisis Final

Ejemplo 5:

(R,E)-1-(4-((5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-ona

El compuesto del título se preparó mediante un método similar al del Ejemplo 4, a partir de (R, E)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il) prop-2-en-1-ona (compuesto intermedio B) y 5-(2-(2-fluoroetoxi)etoxi)picolinaldehído (compuesto intermedio C).1

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1,29 (d, J=6,65 Hz, 3 H) 2,09 (td, J=11,67, 3,14 Hz, 1 H) 2,24 (dd, J=11,36, 3,70 Hz, 1 H) 2,40 - 2,46 (m, 3 H) 2,72 (d, J=11,29 Hz, 1 H) 2,88 (d, J=11,17 Hz, 1 H) 3,12 - 3,27 (m, 1 H) 3,50 - 3,64 (m, 2 H) 3,70 - 3,75 (m, 1 H) 3,78 - 3,87 (m, 3 H) 4,12 (d, J=13,80 Hz, 1 H) 4,19 - 4,26 (m, 2 H) 4,43 - 4,54 (m, 2 H) 4,57 4,65 (m, 1 H) 6,06 (s, 2 H) 7,11 (d, J=15,43 Hz, 1 H) 7,40 (d, J=1,13 Hz, 2 H) 7,69 - 7,84 (m, 3 H) 7,99 (d, J=8,53 Hz, 1 H) 8,24 (s, 1 H)

LC MS Rt 0,92 min; [M+H]+ 592,2; 2 min Análisis Final

Ejemplo 6:

(R, E)-1-(4-((2-(fluoroetoxi)oxazol-4-M)metM)-2-metNpiperazm-1-N)-3-(2-((5-metN-2H-tetrazol-2-M)metN)-4-(trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-ona

El compuesto del título se preparó mediante un método similar al del Ejemplo 4, a partir de (R, E)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(trifluorometil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il) prop-2-en-1-ona (compuesto intermedio B) y 2 (trifluorometil)oxazol-4-carbaldehído (compuesto intermedio D).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 1,27 (d, J=6,97 Hz, 3H) 2,05-2,11 (m, 1H) 2,23-2,27 (m, 1H) 2,44 (s, 3H) 2,76 2,80 (m, 1H) 2,90-2,95 (m, 1H) 3,10-3,20 (m, 1H) 3,5 (s, 2H) 4,1 (d, 1H) 4,5 (s, 1H) 4,45 (d, 2H) 6,06 (s, 2H) 7,1 (d, 1H) 7,70 - 7,80 (m, 4H) 7,98-8,01 (m, 1H)

LC MS Rt 0,89 min; [M+H]+ 508,3; 2 min Análisis Final

Ejemplo 7: (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-(2-[18F]fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

Etapa 1: Síntesis de 4-metilbencenosulfonato de (R,E)-2-((6-((4-(3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acriloil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)piridin-3-il)oxi)etilo

Cs2CO3 (446 mg, 1,37 mmol) se añadió a una solución de di(p-toluensulfonato) de etileno (475 mg, 1,28 mmol) en DMF (20 mL) bajo argón a TA, seguido de la adición de (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-hidroxipiridin-2-il)metil)-2 metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (200 mg, 0,43 mmol) en DMF (20 mL) a lo largo de un período de 1 h. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con agua y la solución acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las soluciones orgánicas combinadas se secaron (Separador de Fases) y se concentraron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía de resolución instantánea sobre gel de sílice (ciclohexano/EtOAc 100:0 a 0:100) para obtener el producto deseado en forma de un aceite incoloro (180 mg, 62%). 1H RMN (400 MHz, 300°C, DMSO-d6) 5 ppm 1,12-1,27 (m, 3H), 1,97 (s, 1H), 2,11 (s, 1H), 2,40 (d, J=4,0 Hz, 6H), 2,64 (d, J=11,3 Hz, 1H) 2,80 (d, J=11,0 Hz, 1H), 3,27 (s, 1H), 3,44-3,59 (m, 2H), 4,01 (c, J=7,1 Hz, 1H), 4,22 (dd, J=5,3, 2,8 Hz, 2H), 4,34 (dd, J= 5,3, 2,8 Hz, 2H), 4,4 (s, 1H), 6,03-5,91 (m, 2H), 7,11 (d, J=15,2 Hz, 1H), 7,29 (dd, J=⁸,⁶, 2,9 Hz, 1H), 7,35 (d, J=^{8 , 6}Hz, 1H), 7,43-7,51 (m, 4H), 7,70 (d, J=15,2 Hz, 1H), 7,78 (d, J=8,3 Hz, 2H), 7,87 (d, J=9,1 Hz, 1H), 8,07 (d, J=2,8 Hz, 1H); LC MS: Rt 1,06 min; [M]+ 666,5; Método: 2 min Análisis Final.

Etapa 2: Síntesis del Ejemplo 7

(R, E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-(2-[18F]fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

En un vial de reacción sellado, [¹⁸F]KF/Kryptofix 222 en DMSO anhidro se añadió a 4-metilbencenosulfonato de (R,E)-2-((6-((4-(3-(4-doro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acriloil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)piridin-3-il)oxi)etilo y se calentó durante 10 minutos a 140°C. El producto marcado se purificó mediante HPLC semi-preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 250 x 10 mm; eluyente: CHsCN/^O/NEts (50/50/0.1); caudal: 4 mL/min). El análisis por HPLC (Waters XBridge C^{1 8}, 150 x 4,6 mm; MeOH/H²O/NEt³(70/30/0,08), 1 mL/min) dio un tiempo de retención de 6,37 minutos. La comparación con una traza de HPLC de referencia fría (6,28 minutos) confirmó que el producto era el ejemplo 7 , que se obtuvo con un rendimiento radioquímico corregido por desintegración del ⁸%.

Ejemplo 8: (E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-((2R)-4-((5-(2-fluoroetoxi-1,2-t2)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-¹-il)prop-²-en-¹-ona

Etapa 1: Síntesis de 4-(p-tolil)bencenosulfonato de [3H]2-2-fluoroetilo:

6,15 mg (21,0 |jmol) de 4'-metil-[1,1'-bifenil]-4-sulfonato de (E)-2-fluorovinilo y 7,07 mg (8,78 |jmol; 0,42 eq.) de catalizador de Crabtree (Strem 77-9500) se disolvieron en 0,75 mL de diclorometano (Fluka 66740). La solución de color naranja intenso se desgasificó tres veces en el colector de alto vacío y se agitó bajo una atmósfera de gas tritio (8,7 Ci) durante 3,5 h a temperatura ambiente. La presión inicial cuando el disolvente aún estaba congelado era de 347 mbar, mientras que la presión máxima a temperatura ambiente era de 962 mbar. El disolvente se separó in vacuo y el tritio lábil se intercambió añadiendo 1 mL de metanol (Fluka 65543), agitando la solución y separando el disolvente de nuevo en vacuo. Este proceso se repitió tres veces. Finalmente, el sólido seco se extrajo con 5 mL de THF. La actividad del producto bruto fue de 1003 mCi (37,1 GBq). Se determinó que la pureza radioquímica (RCP) era del 74% utilizando el siguiente sistema de HPLC: Macherey Nagel Nucleodur Gravity C18 (5 jm , 4,6 x 150 mm); disolventes: A, NH⁴OAc ac. 10 mM; B, MeCN; gradiente: 0 min 40% de B; 10 min 100% de B; 14,5 min 100% B; 15 min 40% de B; detección a 254 nm; caudal 1,0 ml/min; 30°C. El producto bruto se utilizó para la siguiente etapa sin purificación ulterior.

Síntesis de Ejemplo 8

100 mCi (3,7 GBq) de 4-(p-tolil)bencenosulfonato de [³H]²-²-fluoroetilo bruto (0,5 ml, 2,1 jmol) se evaporaron a sequedad y se añadió una solución de 3,04 mg (6,5 jmol; 3,1 eq.) de (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-hidroxipiridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1 -il)prop-2-en-1 -ona en 0,25 ml de DMF. Luego, la solución se trató con 4,36 mg (13,4 jmol; 6,4 eq.) de carbonato de cesio y se agitó en un baño de agua a 50°C durante 2,2 h. Un control de reacción por HPLC (condiciones como las anteriores) mostró una conversión cuantitativa del material de partida marcado y la RCP se determinó en 63%. La mezcla de reacción se purificó por HPLC utilizando las siguientes condiciones: Macherey Nagel Nucleodur Gravity C18, 5 jm , ⁸x 150 mm; disolventes: A, NH⁴OAc 10 mM; B, MeCN; gradiente: 0 min 48,5% de B; ⁸min 48,5% de B; 8,5 min 95% de B; 12,5 min 95% de B; 13 min 48,5% de B.; detección a 254 nm y 230 nm; caudal: 3,1 ml/min; 20°C. El compuesto deseado eluyó después de 6,7 min.

El producto deseado se aisló de la mezcla de disolventes por HPLC mediante extracción en fase sólida: El volumen de las fracciones se redujo parcialmente en el evaporador rotatorio y el producto se extrajo con un cartucho Phenomenex StrataX (3 mL, 100 mg) que se eluyó con 10 mL de etanol. El producto extraído con una actividad de 40,5 mCi (1,50 GBq) mostró un RCP de > 99%. La actividad específica se determinó en 38,5 Ci/mmol (1,43 TBq/mmol). La comparación con una traza de HPLC de referencia fría confirmó la identidad del producto. Condiciones de HPLC: Macherey Nagel Nucleodur Gravity C18, 4,6 x 150 mm (5 |jm); fase móvil: A, NH4ÜAc 10 mM; B, MeCN; gradiente: 0 min 35% de B; 10 min 95% de B; 14,5 min 95% de B; 15 min 35% de B; caudal 1,0 mL/min. Tiempo de retención de referencia (detección UV): 7,14 min; Tiempo de retención del producto (detección de radiactividad): 7,25 min. El retraso entre la señal de radio y UV se debe al sistema de detección en serie.

1) (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-(2-(2-[18F]fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

El precursor 4-metilbencenosulfonato de (R,E)-2-(2-((6-((4-(3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acriloil)-3-metilpiperazi n-1 -il)metil)pi ridi n-3-il)oxi)etoxi)etilo se puede preparar mediante un procedimiento al compuesto 4 a partir de (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (compuesto intermedio A) y 4-metilbencenosulfonato de 2-(2-((6-formilpiridin-3-il)oxi)etoxi)etilo.

La síntesis de (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-(2-(2-[18F]fluoroetoxi)etoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona se puede realizar tratando 4-metilbencenosulfonato de (R,E)-2-(2-((6-((4-(3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acriloil)-3-metilpiperazin-1-il)metil)piridin-3-il)oxi)etoxi)etilo con [18F]KF/K222 o [18F]TBAF en un disolvente polar no prótico, tal como DMF, DMSO o CH³CN.

il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)[carbonil-11C]prop-2-en-1-ona

como se muestra a continuación:

La aminación reductora de 5-hidroxipicolinaldehído con 2-metilpiperazina-1-carboxilato de (R)-bencilo utilizando triacetoxiborohidruro de sodio y ácido acético puede proporcionar 4 -((5-hidroxipi ridi n-2-il)metil)-2-metilpiperazina-1carboxilato de (R)-bencilo. Este compuesto intermedio puede reaccionar adicionalmente con tosilato de 2-fluoroetilo en presencia de una base tal como carbonato de potasio seguido de hidrogenación utilizando paladio sobre carbono e hidrógeno gaseoso para conducir a (R)-1-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-3-metilpiperazina.

(E)-2-(2-(2-bromovinil)-5-clorobencil)-5-metil-2H-tetrazol se puede preparar mediante irradiación con microondas de ácido (E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)acrílico en presencia de N-bromosuccinimida y una cantidad catalítica de acetato de litio. El bromuro de arilvinilo resultante puede convertirse en bromuro de (E)-(4-cloro-2 - ((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)estiril)magnesio utilizando magnesio en THF.

El compuesto del título se puede preparar tratando bromuro de (E)-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)estiril)magnesio con [11C]CÜ²para formar el haluro de [11C]carboximagnesio y luego se transforma en el ácido [11C]carboxílico. A continuación, éste podría convertirse en un cloruro de ácido y tratarse con (R)-1 ((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-3-metilpiperazina para proporcionar la amida deseada.

3) (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-[18F](trifluorometil)fenil)prop-2-en-1-ona

El precursor (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-yodo-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona se puede obtener siguiendo un protocolo similar al ejemplo 1, partiendo de 5-metil-2H-tetrazol y 1-bromo-2-(bromometil)-4-yodobenceno.

Siguiendo el protocolo reseñado por Huiban et al (Nature Chemistry, 2013) para la trifluorometilación de [18F] en la fase tardía de (hetero)arenos a partir de fluoruro [18F], este ejemplo muestra una posible ruta sintética para generar (R)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-[18F](trifluorometil)fenil) prop-2-en-1-ona. [18F]CFaCu se puede generar in situ a partir de clorodifluoroacetato de metilo, Cul, TMEDA y [18F]fluoruro pueden reaccionar con (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-yodo-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona para proporcionar el compuesto del título.

4) Síntesis de (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metN-2H-tetrazol-2-M)metM)fenM)-1-(4-((5-(2-fluoro[3H2]etoxi)piridm-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona

La síntesis de [3H]2-fluoroetil-4-metilbencenosulfonato se reseñó por Cochrane et al (Journal of Labelled Compounds, 2013, 56, 447-450). El compuesto del título se puede obtener tratando (R,E)-3-(4-cloro-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)-1-(4-((5-hidroxipiridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona con [3H]2-fluoroetil-4-metilbencenosulfonato en presencia de una base tal como carbonato de cesio.

5) Síntesis de ejemplos con contenido en [11C]CN, p. ej., (R,E)-4-(3-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-M)metM)-2-metNpiperazin-1-N)-3-oxoprop-1-en-1-N)-3-((5-metN-2H-tetrazol-2-N)metN)benzonitrNo

El grupo [11C]CN se puede introducir en (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metN)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-isociano-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona a través de una reacción de cianación mediada por paladio. [11C]HCN se puede convertir en [11C]CuCN y se puede hacer reaccionar con (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-yodo-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona a través de una reacción de Rosenmund-von Braun.

6) Síntesis de ejemplos con contenido en [11C]OCH3, p. ej., (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-M)metN)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-[11C]metoxi-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona

El precursor del compuesto del título ((R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-hidroxi-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona), se puede obtener de acuerdo con el esquema de síntesis dado para el ejemplo 1, utilizando (3-bromo-4-(bromometil)fenoxi)triisopropilsilano preparado a partir del alcohol correspondiente y 5-metil-2H-tetrazol para proporcionar (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-((triisopropilsilil)oxi)fenil)prop-2-en-1-ona. La posterior desprotección del fenol utilizando TBAF en THF puede proporcionar el precursor requerido.

La metilación de (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-hidroxi-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona utilizando [11C]CH3I en presencia de una base puede conducir al compuesto del título.

7) Síntesis de ejemplos con contenido en [123I]-, [124I] o [131I], p. ej., (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridm-2-M)metil)-2-metilpiperazm-1-il)-3-(4-[123I]yodo-2-((5-metM-2H-tetrazol-2-M)metM)feml)prop-2-en-1-ona

Un precursor de estannano se puede se puede preparar haciendo reaccionar (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(4-yodo-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)fenil)prop-2-en-1-ona con bis(tributilestaño) en presencia de un catalizador de paladio, tal como Pd(PPh3)4:

El tratamiento de (R,E)-1-(4-((5-(2-fluoroetoxi)piridin-2-il)metil)-2-metilpiperazin-1-il)-3-(2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-(tributilestannil)fenil)prop-2-en-1-ona con [123I]NaI, [124I]NaI o [131I]NaI en presencia de un agente oxidante tal como cloroamina-T puede producir los compuestos del título (*I = [123I], [124I] o [131I])

Datos biológicos

Los compuestos descritos en esta memoria son inhibidores de ATX y pueden ensayarse en los siguientes ensayos.

Reactivos - LPC (oleoil (18:1)) se adquirió de Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL) y se solubilizó en metanol hasta 20 mM. Rojo Amplex se obtuvo de Invitrogen Life Technologies (Paisley, Reino Unido) y se disolvió en DMSO a 10 mM. La colina oxidasa y la peroxidasa de rábano (HRP) se obtuvieron de Sigma Aldrich (Dorset, Reino Unido) y se disolvieron en HBSS hasta 20 U/ml y 200 U/ml, respectivamente. Todos los reactivos se almacenaron a -20°C en partes alícuotas de un solo uso. Todas las mediciones experimentales se realizaron en tampón del ensayo preparado inmediatamente antes de usar (HBSS, 0,01% de BSA esencialmente exento de ácido graso).

Proteína- Se preparó ATX humana recombinante en Novartis (Basel, CH) en una preparación de células de riñón embrionario humano (HEK) y se almacenó en partes alícuotas de un solo uso de reservas de 26 mg/ml (26 ^|jM) almacenadas a -80°C.

Método - Todas las mediciones experimentales deben realizarse en placas negras de poliestireno de 384 pocillos (volumen bajo, fondo redondo, Corning (3676)). Se utilizó un PerkinElmer EnVision (Intensidad de Fluorescencia/Monocromador de Absorbancia) o un lector de placas Tecan Infinite serie 200 PRO para detectar cambios en la intensidad de la fluorescencia.

Evaluación de inhibición de ATX- La actividad de ATX se determinó por medición de colina liberada en las reacciones que contienen ATX (10 nM), colina oxidasa (0,1 U/ml), HRP (100 U/ml), rojo amplex (50 j M) y LPC 18:1 (10 j M). Compuestos de la invención deben prepararse como diluciones seriadas de 10 puntos a partir de 1 j M por duplicado y pre-incubarse con ATX a 37°C durante 20 minutos antes de la adición de los reactivos restantes. La colina liberada se midió a partir de los cambios en la intensidad de la fluorescencia (Aex 530 nm, Aem 590 nm) del producto resurofina a 37 °C cada 2 minutos durante un período de 40 minutos. La actividad de ATX se midió como la pendiente de la porción lineal de la curva de progreso, generalmente entre 14 y 24 minutos.

Análisis de datos- Los datos de la pendiente se exportaron al prisma Graphpad (software Graphpad, San Diego, CA), en que los datos se ajustaron a la ecuación 1.

Ecuación 1:

Y = parte inferior (parte superior - parte inferior)/(1 10A((Log CI50-X)*factor de pendiente))

Los valores CI⁵⁰se determinaron a partir de la concentración de compuesto que redujo la actividad total en un 50% y representan la media de n > 2.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la Fórmula general (I)

( I ) ,

y/o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde

R es halógeno, -CF³, -OCF³, -OCH³, -CH³o CN; y

A es un grupo piridinilo u oxazolilo sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de halo-(alquilo C^1-6), halo-(alquil C1-3)oxi(alquilo C^2-4) o halo-(alquil C1-3)oxi (alquil C2-4)oxi(alquilo C^2-4).

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que contiene 3H.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R es -CF³u -OCF³.

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, que contiene al menos un 18F.

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde R es hidrógeno.

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 5, en donde R se elige de 18F, 19F, 123I, 124I, 125I, 127I o 131I.

7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde A contiene al menos uno de 18F, 19F, 123I, 124I, 125I, 127I o

8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el átomo de carbono numerado "1" se elige de 11C, 12C o 14C.

9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es

y/o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10. Un compuesto seleccionado del grupo constituido por:

y

y/o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende al menos un átomo elegido de 3H, 18F, 11C o 14Q.

12. Uso de un compuesto y/o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, como agentes de diagnóstico para la formación de imágenes por PET o SPECT.

13. Uso de un compuesto y/o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, como marcadores para la formación de imágenes del cáncer, o agentes para uso en la monitorización de terapias y enfermedades en las que está implicada la autotaxina, seleccionándose de prurito de colestasis, cirrosis, diabetes, enfermedades renales, dolor, fibrosis de órganos y fibrosis pulmonar idiopática.

14. Uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 10 a 11, que es

o

una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como agente de diagnóstico para la formación de imágenes por PET o SPECT.

15. Uso de un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 10-11, que es

, o

16. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 9, que es

, o

17. Un compuesto, que es:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

18. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 17, que es

o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.

19. Un compuesto de acuerdo las reivindicaciones 1 - 11 o 17 - 18 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en forma radiomarcada, para uso en radioterapia.