JP2024073563A - 放射性標識カンナビノイド受容体２リガンド - Google Patents
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Abstract
【課題】放射性標識リガンドとして使用され得る化合物を提供する。
【解決手段】式（Ｉ）
［式中、Ａは、ＣＨ又はＮであり；Ｒ１及びＲ２は、両方とも同時にエチルであり；そしてＲ３は、フルオロプロピル又はヘキサジュウテリオフルオロプロピルである（ただし、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１個は、少なくとも１個の放射性核種を含む）］で示される化合物又は薬学的に許容し得るその塩を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】式（Ｉ）
［式中、Ａは、ＣＨ又はＮであり；Ｒ１及びＲ２は、両方とも同時にエチルであり；そしてＲ３は、フルオロプロピル又はヘキサジュウテリオフルオロプロピルである（ただし、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１個は、少なくとも１個の放射性核種を含む）］で示される化合物又は薬学的に許容し得るその塩を提供する。
【選択図】なし
Description
本発明は、放射性標識カンナビノイド受容体２リガンドに関する。
本発明は詳しくは、式（Ｉ）：
［式中、
Ｒ１及びＲ２は、両方とも同時にエチルであり；そして
Ｒ３は、３－フルオロプロピルである（ただし、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１個は、少なくとも１個の放射性核種を含む）］で示される化合物又は薬学的に許容し得るその塩に関する。
カンナビノイド受容体は、Ｇタンパク質共役受容体スーパーファミリーに属する細胞膜受容体の一種である。現在、カンナビノイド受容体１（ＣＢ１）及びカンナビノイド受容体２（ＣＢ２）と呼ばれる、２つの既知のサブタイプがある。ＣＢ１受容体は広範囲に発現する。これは主に中枢神経系（即ち、扁桃体、小脳、海馬）で発現し、末梢での発現は少ない。ＣＮＲ２遺伝子によってコードされているＣＢ２は、マクロファージ、Ｂ細胞、及びＴ細胞のような免疫系の細胞上（Ashton, J. C. et al. Curr Neuropharmacol 2007, 5(2), 73-80; Miller, A. M. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 299-308; Centonze, D., et al. Curr Pharm Des 2008, 14(23), 2370-42）、並びに消化器系（Wright, K. L. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 263-70）において、大部分末梢で発現する。ＣＢ２受容体はまた脳にも存在し、主としてミクログリアに見られ、ニューロンには見られない（Cabral, G. A. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 240-51）。
ＣＢ２受容体アゴニストへの関心は、初期の化合物の幾つかが、慢性疼痛（Beltramo, M. Mini Rev Med Chem 2009, 9(1), 11-25）、アテローム動脈硬化（Mach, F. et al. J Neuroendocrinol 2008, 20 Suppl 1, 53-7）、骨量の調節（Bab, I. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 182-8）、神経炎症（Cabral, G. A. et al. J Leukoc Biol 2005, 78(6), 1192-7）、虚血／再灌流傷害（Pacher, P. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 252-62）、全身性線維症（Akhmetshina, A. et al. Arthritis Rheum 2009, 60(4), 1129-36; Garcia-Gonzalez, E. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6）及び肝線維症（Julien, B. et al. Gastroenterology 2005, 128(3), 742-55; Munoz-Luque, J. et al. J Pharmacol Exp Ther 2008, 324(2), 475-83）を含む多数のヒト疾患に前臨床モデルで有益な効果を有することが示されているという事実により、過去１０年間（現在は特許出願３０～４０件／年）着実に増加している。
虚血／再灌流（Ｉ／Ｒ）傷害は、脳卒中、心筋梗塞、心肺バイパス及びその他の血管手術、並びに臓器移植のような症状で発生する組織損傷の主な原因であるだけでなく、種々の病因の循環性ショックの経過を悪化させる末期臓器障害の主要な機序である。これら全ての症状は、正常な血液供給が途絶することで、組織酸素化が不十分になることを特徴とする。再酸素化、例えば、再灌流は、正常な組織酸素化を回復するための究極の治療法である。しかしながら、血液からの酸素及び栄養素の欠如は、循環の回復が更なる組織損傷をもたらす症状を作り出す。再灌流傷害の損傷は、ある程度は損傷組織の炎症反応に起因する。新しく戻った血液によってその領域に運ばれた白血球は、組織損傷に反応して、インターロイキンなどの多くの炎症性因子、更にはフリーラジカルを放出する。回復した血流は、細胞内に酸素を再導入し、これが、細胞内タンパク質、ＤＮＡ、及び細胞膜を損傷させる。
遠隔虚血プレコンディショニング（ＲＩＰＣ）は、虚血及び再灌流によって引き起こされる傷害に対する身体の内因性保護能力を利用するための方策を表す。これは、１つの臓器又は組織の一過性の非致死性の虚血及び再灌流が、その後に起こる遠隔臓器又は組織における「致死性」虚血再灌流傷害の発症に対する耐性を与えるという興味深い現象を説明している。幾つかの仮説が提案されているが、ある臓器又は組織の一過性虚血及び再灌流が保護をもたらす実際の機序は現在のところ不明である。
体液性仮説は、遠隔臓器又は組織で生成した内因性物質（アデノシン、ブラジキニン、オピオイド、ＣＧＲＰ、エンドカンナビノイド、アンジオテンシンＩ又はその他の未確認の体液性因子など）が血流に入り、標的組織のそれぞれの受容体を活性化し、それによって虚血プレコンディショニングに関与する心臓保護の種々の細胞内経路を動員することを提案している。
最近のデータは、エンドカンナビノイド類及びその受容体、特にＣＢ２が、プレコンディショニングに関与し、そして炎症反応のダウンレギュレーションによる再灌流傷害の防止に寄与している可能性があることを示している（Pacher, P. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 252-62）。具体的には、ＣＢ２ツールアゴニストを使用した最近の研究では、心臓（Defer, N. et al. Faseb J 2009, 23(7), 2120-30）、脳（Zhang, M. et al. J Cereb Blood Flow Metab 2007, 27(7), 1387-96）、肝臓（Batkai, S. et al. Faseb J 2007, 21(8), 1788-800）及び腎臓（Feizi, A. et al. Exp Toxicol Pathol 2008, 60(4-5), 405-10）でのＩ／Ｒ傷害を減少させるこの概念の有効性が証明された。
更には、ここ数年にわたり、増加している文献は、ＣＢ２が亜慢性期及び慢性期にも関心を持たれる可能性があることを示している。ＣＢ１及びＣＢ２の特異的アップレギュレーションは、線維症を伴う慢性疾患の動物モデルにおいて、線維症の進行に関与する細胞である筋線維芽細胞におけるＣＢ２の適切な発現と関連していることが示されている（Garcia-Gonzalez, E. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6; Yang, Y. Y. et al. Liver Int 2009, 29(5), 678-85）。
選択的ＣＢ２アゴニストによるＣＢ２受容体の活性化は、びまん性全身性硬化症において抗線維化作用を発揮することが実際に示されており（Garcia-Gonzalez, E. et al. Rheumatology (Oxford) 2009, 48(9), 1050-6）、そしてＣＢ２受容体は、実験的皮膚線維症において（Akhmetshina, A. et al. Arthritis Rheum 2009, 60(4), 1129-36）、及び慢性肝疾患に伴う線維形成を含む肝病態生理において（Lotersztajn, S. et al. Gastroenterol Clin Biol 2007, 31(3), 255-8; Mallat, A. et al. Expert Opin Ther Targets 2007, 11(3), 403-9; Lotersztajn, S. et al. Br J Pharmacol 2008, 153(2), 286-9）重要標的として浮上している。
組織内のＣＢ２を明確に検出する必要性は、この受容体への関心の高まりと共に生じた。適切なツールを用いて患者又は試料中のＣＢ２発現及び受容体占有を評価することによって、発現の標的細胞を検証でき、ヒト試験におけるＣＢ２リガンドの用量設定が可能になるか、又は診断目的で使用できるようになる。
これまでのところ、組織内のＣＢ２受容体タンパク質を検出するための効率的なツールは欠如しているが、これはＣＢ２受容体の発現レベルが低い結果である。ＣＢ２の検出ツールとして特異抗体を欠いているもう１つの理由は、ＣＢ２を免疫原として使用することの明らかな困難に起因する可能性がある。
ＣＢ２受容体を標的とする多数のＰＥＴトレーサーが近年報告された（Caille, F et al., Mol. Pharmaceutics, 2017, 14 (11), 4064-4078及びそこに言及されている参考文献）。これらは全て、短命の放射性同位元素１１Ｃ（崩壊半減期２０．３分）で標識されているか、又はＣＢ１受容体に対する選択性に欠けており、そして高い親油性という弱点があるため、信号対雑音比が好ましくない。ＣＢ２に対して高い選択性及び特異性を備え、１８Ｆ標識を含む新規のＰＥＴトレーサーが強く望まれる。詳しくは、より長寿命の１８Ｆ同位体（崩壊半減期１１０分）は、トレーサーの製造後のその流通及び利用が大幅に伸びよう。更に、１８Ｆの低い陽電子放出エネルギーにより、この同位体は、より高い空間分解能で画像を取得するのに好ましいＰＥＴ放射性核種になる。
低分子化学構造へのフッ素原子の組み込みは、その物理化学的及び生物学的特性に大きな影響を及ぼす（K. Muller et al, 2007, 317 (5846), 1881-1886）。よって放射性フッ素化が可能なＰＥＴトレーサー候補構造を検索する場合、１つの分子内に全ての所望の特性を維持し、かつ併せ持つ、適切な化合物を同定することは簡単ではない。
上記と同義の式（Ｉ）の化合物は、驚くべきことに、所望の特性を有することが特定され、非特異的結合が非常に減少していることが見い出された。
式（Ｉ）の化合物は、ＣＢ２受容体を組換え発現する細胞から調製された膜に特異的かつ選択的に結合することが判明した。更には、式（Ｉ）の化合物は、ＣＢ１及びＣＢ２受容体の両方の発現が高い臓器である脾臓組織のＣＢ２受容体を特異的に標識することが分かった。更には、ＣＢ２受容体欠損マウスから単離された脾臓組織では、式（Ｉ）の化合物による結合はなかった。この具体的な事例では、総結合シグナルは、式（Ｉ）の未標識（Ｒ１＝ＣＨ３）化合物の過剰によって減少させることができなかった。
したがって式（Ｉ）の化合物を、ヒト試験でのＣＢ２リガンドの用量設定のため、又は診断目的のため、例えば、受容体発現及び受容体占有を評価するための、例えば、組織オートラジオグラフィー及びＰＥＴイメージングにおいて使用することができる。
本説明において、「放射性核種」という用語は、不安定な核を有し、放射性崩壊を受ける原子の同位体を定義する。本発明の具体的な放射性核種は、［３Ｈ］、［１８Ｆ］、［１１Ｃ］及び［１４Ｃ］、更に詳しくは［３Ｈ］及び［１８Ｆ］である。
「結合定数」という用語は、受容体へのリガンドの結合反応に関連する平衡定数のことをいう。
「選択的結合」という用語は、非常に限定されたタイプの受容体へのリガンドの結合を特徴付ける。
よって本発明は以下に関する：
ＡがＣＨである式（Ｉ）の化合物；
Ｒ１及びＲ２の両方が、少なくとも１個の放射性核種を含むか、又はＲ３が、１個の放射性核種を含む、式（Ｉ）の化合物；
少なくとも１個の放射性核種が、［３Ｈ］、［１８Ｆ］及び［１１Ｃ］から独立して選択される、式（Ｉ）の化合物；
Ｒ１及びＲ２が、同時に両方とも－Ｃ３ＨＨ－Ｃ３ＨＨ２である、式（Ｉ）の化合物；
Ｒ３が、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２ １８Ｆ又は－ＣＤ２－ＣＤ２－ＣＤ２ １８Ｆである、式（Ｉ）の化合物；
以下：
２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピル；
２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）；及び
２－（１，２－ジトリチオエチル）－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－３，４－ジトリチオ－ブタン酸３－フルオロプロピル
から選択される式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩；
患者、動物又は試料中にＣＢ２受容体を特定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
患者、動物又は試料中のＣＢ２受容体をイメージングするための、式（Ｉ）の化合物の使用；
別の化合物がＣＢ２受容体に結合するかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
別の化合物がＣＢ２受容体に結合するかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用であって、ＣＢ２受容体に対する前記別の化合物の結合定数を測定することを更に含む使用；
ＰＥＴを用いた受容体占有試験によって、別の化合物がインビボでＣＢ２受容体に結合しているかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
ＣＢ１受容体の存在下での上記と同義の使用；
疾患がＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とするかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
疾患がＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とするかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用であって、疾患が、疼痛、アテローム動脈硬化、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性同種移植拒絶反応、慢性同種移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎、発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の調節、神経変性、脳卒中、一過性虚血性発作又はブドウ膜炎である使用；
疾患の患者又は組織での診断に使用するための、式（Ｉ）の化合物；
上記と同義の疾患の患者又は組織での診断に使用するための、式（Ｉ）の化合物であって、疾患が、健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較した前記患者又は組織でのＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とする化合物；
診断が、患者又は組織でのＣＢ２受容体の発現を健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較する工程を含む、上記と同義の使用するための化合物；
罹患した患者が、ＣＢ２リガンドの投与を含む処置に反応する見込みがあるかどうかを予測するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
罹患した患者が、ＣＢ２リガンドの投与を含む処置に反応する見込みがあるかどうかを予測するための、式（Ｉ）の化合物の使用であって、患者でのＣＢ２受容体の発現を健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較することを含む使用；
患者での薬物療法の効力を評価するための式（Ｉ）の化合物の使用であって、前記薬物療法の前、最中及び／又は後の患者でのＣＢ２受容体密度（即ち、ＣＢ２受容体発現）をモニターすることを含む使用；並びに
投与を必要とする患者に投与されるＣＢ２リガンドの必要用量を決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用。
ＡがＣＨである式（Ｉ）の化合物；
Ｒ１及びＲ２の両方が、少なくとも１個の放射性核種を含むか、又はＲ３が、１個の放射性核種を含む、式（Ｉ）の化合物；
少なくとも１個の放射性核種が、［３Ｈ］、［１８Ｆ］及び［１１Ｃ］から独立して選択される、式（Ｉ）の化合物；
Ｒ１及びＲ２が、同時に両方とも－Ｃ３ＨＨ－Ｃ３ＨＨ２である、式（Ｉ）の化合物；
Ｒ３が、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２ １８Ｆ又は－ＣＤ２－ＣＤ２－ＣＤ２ １８Ｆである、式（Ｉ）の化合物；
以下：
２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピル；
２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）；及び
２－（１，２－ジトリチオエチル）－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－３，４－ジトリチオ－ブタン酸３－フルオロプロピル
から選択される式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容し得るその塩；
患者、動物又は試料中にＣＢ２受容体を特定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
患者、動物又は試料中のＣＢ２受容体をイメージングするための、式（Ｉ）の化合物の使用；
別の化合物がＣＢ２受容体に結合するかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
別の化合物がＣＢ２受容体に結合するかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用であって、ＣＢ２受容体に対する前記別の化合物の結合定数を測定することを更に含む使用；
ＰＥＴを用いた受容体占有試験によって、別の化合物がインビボでＣＢ２受容体に結合しているかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
ＣＢ１受容体の存在下での上記と同義の使用；
疾患がＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とするかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
疾患がＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とするかどうかを決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用であって、疾患が、疼痛、アテローム動脈硬化、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性同種移植拒絶反応、慢性同種移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎、発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の調節、神経変性、脳卒中、一過性虚血性発作又はブドウ膜炎である使用；
疾患の患者又は組織での診断に使用するための、式（Ｉ）の化合物；
上記と同義の疾患の患者又は組織での診断に使用するための、式（Ｉ）の化合物であって、疾患が、健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較した前記患者又は組織でのＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とする化合物；
診断が、患者又は組織でのＣＢ２受容体の発現を健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較する工程を含む、上記と同義の使用するための化合物；
罹患した患者が、ＣＢ２リガンドの投与を含む処置に反応する見込みがあるかどうかを予測するための、式（Ｉ）の化合物の使用；
罹患した患者が、ＣＢ２リガンドの投与を含む処置に反応する見込みがあるかどうかを予測するための、式（Ｉ）の化合物の使用であって、患者でのＣＢ２受容体の発現を健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較することを含む使用；
患者での薬物療法の効力を評価するための式（Ｉ）の化合物の使用であって、前記薬物療法の前、最中及び／又は後の患者でのＣＢ２受容体密度（即ち、ＣＢ２受容体発現）をモニターすることを含む使用；並びに
投与を必要とする患者に投与されるＣＢ２リガンドの必要用量を決定するための、式（Ｉ）の化合物の使用。
本発明は更に、ＣＢ２受容体に結合している化合物を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物を、ＣＢ２受容体及び式（Ｉ）の化合物を含む試料と接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物が、ＣＢ２受容体への式（Ｉ）の化合物の結合に影響を与えるかどうかをモニターする工程
を含む方法に関する。
（ａ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物を、ＣＢ２受容体及び式（Ｉ）の化合物を含む試料と接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物が、ＣＢ２受容体への式（Ｉ）の化合物の結合に影響を与えるかどうかをモニターする工程
を含む方法に関する。
本発明はまた、ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物のＣＢ２受容体への結合強度を測定する工程を更に含む、上記と同義の方法に関する。
本発明はまた、ある細胞受容体をＣＢ２受容体として同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体を含むことが疑われる試料を式（Ｉ）の化合物と接触させる工程；及び
（ｂ）式（Ｉ）の化合物の結合が起こったかどうかをモニターする工程；及び
（ｃ）場合により試料を別の既知のＣＢ２リガンドと更に接触させ、前記既知のＣＢ２リガンドが式（Ｉ）の化合物をその結合部位から外したかどうかをモニターする工程
を含む方法に関する。
（ａ）ＣＢ２受容体を含むことが疑われる試料を式（Ｉ）の化合物と接触させる工程；及び
（ｂ）式（Ｉ）の化合物の結合が起こったかどうかをモニターする工程；及び
（ｃ）場合により試料を別の既知のＣＢ２リガンドと更に接触させ、前記既知のＣＢ２リガンドが式（Ｉ）の化合物をその結合部位から外したかどうかをモニターする工程
を含む方法に関する。
本発明はまた、ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物が試料と接触したときに前記化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を試料において測定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）少なくとも１つのＣＢ２受容体を含む試料を式（Ｉ）の化合物と接触させて、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）試料を、用量のＣＢ２受容体への結合が疑われる前記化合物及び式（Ｉ）の化合物と接触させる工程；
（ｃ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物による式（Ｉ）の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む方法に関する。
（ａ）少なくとも１つのＣＢ２受容体を含む試料を式（Ｉ）の化合物と接触させて、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）試料を、用量のＣＢ２受容体への結合が疑われる前記化合物及び式（Ｉ）の化合物と接触させる工程；
（ｃ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物による式（Ｉ）の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む方法に関する。
本発明はまた、ヒト被験者を含む生きている脊椎動物において、ある用量のＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物が脊椎動物に投与されたときに前記化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を測定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）脊椎動物に式（Ｉ）の化合物を投与して、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）用量のＣＢ２受容体への結合が疑われる前記化合物及び式（Ｉ）の化合物を脊椎動物に同時投与する工程；
（ｃ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物による式（Ｉ）の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む方法に関する。
（ａ）脊椎動物に式（Ｉ）の化合物を投与して、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）用量のＣＢ２受容体への結合が疑われる前記化合物及び式（Ｉ）の化合物を脊椎動物に同時投与する工程；
（ｃ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物による式（Ｉ）の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む方法に関する。
本発明はまた、投与を必要とするヒト被験者を含む脊椎動物に投与されるＣＢ２リガンドの必要用量を決定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）脊椎動物に式（Ｉ）の化合物を投与して、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）脊椎動物に様々な用量のＣＢ２リガンドを投与し、同時に脊椎動物に式（Ｉ）の化合物を投与する工程；
（ｃ）様々な用量のＣＢ２リガンドによる式（Ｉ）の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２リガンドによって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算して、用量／占有関係を決定する工程
を含む方法に関する。
（ａ）脊椎動物に式（Ｉ）の化合物を投与して、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）脊椎動物に様々な用量のＣＢ２リガンドを投与し、同時に脊椎動物に式（Ｉ）の化合物を投与する工程；
（ｃ）様々な用量のＣＢ２リガンドによる式（Ｉ）の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２リガンドによって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算して、用量／占有関係を決定する工程
を含む方法に関する。
上記工程（ａ）において、基準シグナルは１００％と見なされる。
本発明はまた、疾患がＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とするかどうかを決定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）試料を式（Ｉ）の化合物と接触させるか、又は前記疾患の患者及び健常試料又は健常被験者に式（Ｉ）の化合物を投与する工程；
（ｂ）両方の試料において式（Ｉ）の化合物の結合が起こったかどうかをモニターする工程；及び
（ｃ）両方の試料においてＣＢ２受容体に結合している式（Ｉ）の化合物の量を比較する工程
を含む方法に関する。
（ａ）試料を式（Ｉ）の化合物と接触させるか、又は前記疾患の患者及び健常試料又は健常被験者に式（Ｉ）の化合物を投与する工程；
（ｂ）両方の試料において式（Ｉ）の化合物の結合が起こったかどうかをモニターする工程；及び
（ｃ）両方の試料においてＣＢ２受容体に結合している式（Ｉ）の化合物の量を比較する工程
を含む方法に関する。
上述の工程を実行するためのイメージング技術には、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）又は単光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、特にＰＥＴが含まれるが、これらに限定されない。
本発明はまた、モニターにオートラジオグラフィーが使用される、本発明の方法に関する。
本発明は更に、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関する。
本発明はまた、診断薬として使用するための、即ち、疾患の診断に使用するための、式（Ｉ）の化合物に関する。
本発明はまた、疼痛、アテローム動脈硬化、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性同種移植拒絶反応、慢性同種移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎、発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の調節、神経変性、脳卒中、一過性虚血性発作又はブドウ膜炎の診断に使用するための、式（Ｉ）の化合物に関する。
式（Ｉ）の化合物の合成は、例えば、以下のスキームにより達成され得る。
目的化合物の２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピル（Ia）及び２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）のカルボン酸前駆体（１６）は、スキーム１に記載されるとおり、又は当業者には公知の別の合成の方策を適用することにより、市販の無水コハク酸（１）、１－メントール（２）及び５－ブロモ－６－クロロピリジン－２－カルボン酸（９）から生成され得る。
目的化合物（Ia）は、スキーム２に記載されるとおりカルボン酸（１６）及びビス－トシラート（１７）から出発して２工程の手順を介して入手できる。第２工程において、アセトニトリル中の［１８Ｆ］ＫＦ／Kryptofix 2.2.2を用いる担体未添加の求核置換、又は当業者に公知の他の任意の方法を介して、１８Ｆを高比放射能で導入することができる。
重水素化目的化合物（Ib）は、スキーム３に記載されるとおりカルボン酸（１６）及びヘキサジュウテロ ビス－トシラート（１９）から出発して２工程の手順を介して、その非重水素化類似体（Ia）と同様に入手できる。第２工程において、アセトニトリル中の［１８Ｆ］ＫＦ／Kryptofix 2.2.2を用いる担体未添加の求核置換、又は当業者に公知の他の任意の方法を介して、１８Ｆを高比放射能で導入することができる。
トリチウム化目的化合物（Ic）は、スキーム４に記載される手順、又は当業者に公知の他の任意の経路により、カルボン酸（１６）及びアミン（２４）から合成され得る。放射性標識工程において、ビス－オレフィン（２５）をトリチウムガスでの還元に付して、２－（１，２－ジトリチオエチル）－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－３，４－ジトリチオ－ブタン酸３－フルオロプロピルを与える。
よって本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、以下の工程：
（ａ）式（Ａ）：
（ａ）式（Ａ）：
で示される化合物を求核試薬［１８Ｆ］フッ化物と反応させる工程；又は
（ｂ）式（Ｂ）：
で示される化合物を［３Ｈ］２と反応させる工程
を含む方法に関する［式中、ＬＧは、脱離基であり、そしてＲ１～Ｒ３は、上記と同義である］。
脱離基は、例えば、ｐ－トリルスルホニルオキシ、４－ニトロベンゼンスルホニルオキシ、メタンスルホニルオキシ又はトリフルオロメタンスルホニルオキシである。
工程（ａ）において、［１８Ｆ］フッ化物試薬は、例えば、［１８Ｆ］ＫＦ／Ｋ２．２．２であってよい。
工程（ａ）は、例えば、アセトニトリル中で実施され得る。
工程（ａ）は、２５～２００℃の間の温度で実施され得るが、加熱は必須ではない。
本発明は更に、本発明の方法により製造される化合物に関する。
今から本発明を、限定的性質を持たない以下の実施例により説明する。
工程（ａ）において、［１８Ｆ］フッ化物試薬は、例えば、［１８Ｆ］ＫＦ／Ｋ２．２．２であってよい。
工程（ａ）は、例えば、アセトニトリル中で実施され得る。
工程（ａ）は、２５～２００℃の間の温度で実施され得るが、加熱は必須ではない。
本発明は更に、本発明の方法により製造される化合物に関する。
今から本発明を、限定的性質を持たない以下の実施例により説明する。
略語
rac－ＢＩＮＡＰ＝ラセミ２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル）；ＣＡＮ＝ケミカルアブストラクトサービス番号；ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＩＰＥＡ＝Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン；ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＤＰＰＡ＝ジフェニルホスホリルアジド；ＥＩ＝電子衝撃；ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル；ＨＡＴＵ＝ヘキサフルオロリン酸１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシド；ＬＡＨ＝水素化アルミニウムリチウム；ＬＣ＝液体クロマトグラフィー；ＬｉＴＭＰ＝リチウム２，２，６，６－テトラメチルピペリジド；ＭＳ＝質量分析；ＮＭＲ＝核磁気共鳴；ＮＭＲデータは内部テトラメチルシランに対するppm（百万分の一）（δ）として報告され、試料溶媒（特に断りない限りｄ６－ＤＭＳＯ）からの重水素ロックシグナルを基準とする；結合定数（Ｊ）はHertzで表される；ＰＴＳＡ＝ｐ－トルエンスルホン酸；Ｒｔ＝保持時間；ＳＯＲ＝比旋光度；ＴＢＴＵ＝テトラフルオロホウ酸Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－ウロニウム；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。
rac－ＢＩＮＡＰ＝ラセミ２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル）；ＣＡＮ＝ケミカルアブストラクトサービス番号；ＤＣＭ＝ジクロロメタン；ＤＩＰＥＡ＝Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン；ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；ＤＰＰＡ＝ジフェニルホスホリルアジド；ＥＩ＝電子衝撃；ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル；ＨＡＴＵ＝ヘキサフルオロリン酸１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシド；ＬＡＨ＝水素化アルミニウムリチウム；ＬＣ＝液体クロマトグラフィー；ＬｉＴＭＰ＝リチウム２，２，６，６－テトラメチルピペリジド；ＭＳ＝質量分析；ＮＭＲ＝核磁気共鳴；ＮＭＲデータは内部テトラメチルシランに対するppm（百万分の一）（δ）として報告され、試料溶媒（特に断りない限りｄ６－ＤＭＳＯ）からの重水素ロックシグナルを基準とする；結合定数（Ｊ）はHertzで表される；ＰＴＳＡ＝ｐ－トルエンスルホン酸；Ｒｔ＝保持時間；ＳＯＲ＝比旋光度；ＴＢＴＵ＝テトラフルオロホウ酸Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－ウロニウム；ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。
実験
全ての反応はフレームドライしたガラス製品で行われた。反応には分析グレードの溶媒を使用し、必要に応じて更に精製することなく無水溶媒を使用した。試薬は、特に断りない限り、評判の良い業者から購入し、それ以上精製することなく使用した。全ての１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Bruker Advance Ultra Shield ３００MHz 分光計で記録された。規定の重水素化溶媒に関連する化学シフトが報告される。質量スペクトルは、PE Sciex API 150EX LC / MS Turbo Spray Systemで記録された。フラッシュクロマトグラフィーは、種々の業者からの種々のサイズのプレパックシリカカラム（２３０～４００メッシュ、４０～６３μm）を使用する、Isco Combi Flash(登録商標)コンパニオンを用いて実施された。薄層クロマトグラフィーは、Merck KgaAから購入したプレコートプレート（２０×２０cm、シリカゲルＦ２５４）で行われ、２５４nm CAMAG ＵＶランプを使用するか、又は塩基性過マンガン酸カリウム溶液を使用して可視化された。全ての反応は、薄層クロマトグラフィー、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲの組合せを使用してモニターされた。
全ての反応はフレームドライしたガラス製品で行われた。反応には分析グレードの溶媒を使用し、必要に応じて更に精製することなく無水溶媒を使用した。試薬は、特に断りない限り、評判の良い業者から購入し、それ以上精製することなく使用した。全ての１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Bruker Advance Ultra Shield ３００MHz 分光計で記録された。規定の重水素化溶媒に関連する化学シフトが報告される。質量スペクトルは、PE Sciex API 150EX LC / MS Turbo Spray Systemで記録された。フラッシュクロマトグラフィーは、種々の業者からの種々のサイズのプレパックシリカカラム（２３０～４００メッシュ、４０～６３μm）を使用する、Isco Combi Flash(登録商標)コンパニオンを用いて実施された。薄層クロマトグラフィーは、Merck KgaAから購入したプレコートプレート（２０×２０cm、シリカゲルＦ２５４）で行われ、２５４nm CAMAG ＵＶランプを使用するか、又は塩基性過マンガン酸カリウム溶液を使用して可視化された。全ての反応は、薄層クロマトグラフィー、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲの組合せを使用してモニターされた。
２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピル
ａ）ブタン二酸ビス（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル
２Ｌの一つ口丸底フラスコに、撹拌器、ディーン・スターク・トラップ及び冷却器を取り付けた。フラスコに無水コハク酸（６４ｇ、０．６４mol、１当量）、１－メントール（２００ｇ、１．３mol、２当量）、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１．１ｇ、６．３９mmol、０．０１当量）及びトルエン（５７６mL）を仕込んだ。混合物を２４時間加熱還流し、２５℃に冷却し、ヘキサン（６４０mL）で希釈して、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（８００mL）、メタノール（３２０mL）及び水（３２０mL）の混合物中に注ぎ入れた。層を分離して、水相をヘキサン（２×３２０mL）で抽出した。有機相を合わせ、食塩水（６４０mL）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて濾過した。溶媒を減圧下で除去して、粗生成物をメタノール（２４０mL）に溶解した。溶液を＋４℃まで１６時間冷却して、無色の結晶を形成し、これを吸引濾過により収集した。結晶をメタノール（２４０mL）からの再結晶により精製して、純粋なブタン二酸ビス（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（２１２ｇ、８４％）を与えた。
ＳＯＲ値：ｔ≒２５℃で［－８７．６４°］、ＣＨＣｌ３中１．０１３２％溶液。
ＳＯＲ値：ｔ≒２５℃で［－８７．６４°］、ＣＨＣｌ３中１．０１３２％溶液。
ｂ）（１Ｓ，２Ｓ）－シクロプロパン－１，２－ジカルボン酸１，２－ビス（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル
ＴＨＦ中のブチルリチウムの１．８M溶液（１５２．２mmol、８４mL）をＴＨＦ ２２５mLに０℃でＮ２雰囲気下で加えた。撹拌下で、リチウムテトラメチルピペリジド（２８．２mL、１６７mmol）を２０分かけて滴下した。撹拌を０℃で１時間続けた。次に反応混合物を－７８℃に冷却した。ＴＨＦ（６０mL）中のブタン二酸ビス（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（３０ｇ、７６．１mmol）の溶液を２０分かけて滴下した。黄色の溶液を１時間撹拌した。ブロモクロロメタン（４．０８mL、６０．９１mmol）を２０分かけて滴下した。混合物を－７８℃で３時間撹拌した。ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液（１２０mL）を加えた。２５℃で３０分間撹拌後、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５０mL）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（２００mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して、真空で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１００～２００メッシュ、０．５～１％の酢酸エチル及びヘキサン）により精製して、標題化合物（３８ｇ、４２％）を無色の結晶として与えた。この物質をメタノール（３８０mL）から再結晶すると、純粋な（１Ｓ，２Ｓ）－シクロプロパン－１，２－ジカルボン酸１，２－ビス（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（２７ｇ、３６％）を与えた。
ＳＯＲ値：ｔ≒２５℃で［＋１８．１８°］、ＣＨＣｌ３中１．０２８８％溶液。
ＳＯＲ値：ｔ≒２５℃で［＋１８．１８°］、ＣＨＣｌ３中１．０２８８％溶液。
ｃ）（１Ｓ，２Ｓ）－シクロプロパン－１，２－ジカルボン酸モノ－（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－２－イソプロピル－５－メチル－シクロヘキシル）エステル
イソプロパノール（２５０mL）中の（１Ｓ，２Ｓ）－シクロプロパン－１，２－ジカルボン酸１，２－ビス（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（２５ｇ、６１．５８mmol）の溶液に、２５℃でＮａＯＨの５M溶液（１３．５４mL、６７．７３mmol）を加えた。混合物を７０℃で１６時間撹拌した。有機溶媒を減圧下で除去した。水（２００mL）を加え、混合物をジエチルエーテル（２×１５０mL）で洗浄した。水層を２N ＨＣｌ（ｐＨ≒２）で酸性化し、酢酸エチル（３×２５０mL）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮して、（１Ｓ，２Ｓ）－２－（｛［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル］オキシ｝カルボニル）シクロプロパン－１－カルボン酸（１１．４ｇ、６９％）をオフホワイト色の半固体として得た。
ｄ）（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロパン－１－カルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル
ＴＨＦ（２００mL）中の（１Ｓ，２Ｓ）－シクロプロパン－１，２－ジカルボン酸モノ－（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－２－イソプロピル－５－メチル－シクロヘキシル）エステル（２０ｇ、７４．６３mmol）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（５６mL）中のボランの１M溶液を－７８℃で滴下した。混合物を２５℃で１時間撹拌して、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５０mL）でクエンチした。有機溶媒を減圧下で除去した。水（５０mL）を加え、混合物を酢酸エチル（２×１００mL）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（８０mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５～１９％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロパン－１－カルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（１３．７ｇ、７２％）を帯黄色の半固体として得た。
ｅ）（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロパン－１－カルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル
ＤＭＦ（１４０mL）中の（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロパン－１－カルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（２０ｇ、７８．７４mmol）の撹拌溶液に、０℃でＮａＨ（４．７２ｇ、１１８．１１mmol）を加えた。混合物を２５℃で３０分間撹拌した。臭化ベンジル（１８．７mL、１５７．５mmol）を加えて、２５℃で３０分間撹拌を続けた。ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５０mL）を加えて、混合物をＥｔＯＡｃ（２×１５０mL）で抽出した。合わせた有機層を水（３×１２０mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１．９％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロパン－１－カルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（２２ｇ、８％）を淡黄色の油として得た。
ｆ）［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メタノール
ＴＨＦ（２００mL）中の（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロパン－１－カルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－５－メチル－２－（プロパン－２－イル）シクロヘキシル（１０ｇ、２９．０１mmol）の撹拌溶液に、０℃でＬＡＨ（５８．１mL、ＴＨＦ中１M）を加えた。反応混合物を０℃で４０分間撹拌して、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００mL）でクエンチした。有機溶媒を減圧下で除去した。溶液を酢酸エチル（３×１００mL）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３０～３５％酢酸エチル／ヘキサン）を用いて精製して、［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メタノール（５．３３ｇ、９５％）を淡黄色の油として得た。
ｇ）６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－ブロモピリジン－２－カルボン酸
ＤＭＦ（４５mL）中の５－ブロモ－６－クロロピリジン－２－カルボン酸（CAN 959958-25-9、４ｇ、１９．８０mmol）の溶液に、ＮａＨ（２．７７ｇ、６９．３１mmol）を０℃で何回かに分けて加え、０℃で２０分間撹拌した。ＤＭＦ（１５mL）中の［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メタノール（４．１８ｇ、２１．７８mmol）を０℃で滴下した。混合物を２５℃で１５分間撹拌し、８０℃まで３時間加熱し、２５℃に冷却して、２N ＨＣｌ水溶液でｐＨ≒２までクエンチした。水（１００mL）を加えて、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５０mL）で抽出した。合わせた有機層を水（４×５０mL）及び食塩水（５０mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、減圧下で濃縮し、６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－ブロモピリジン－２－カルボン酸（７．７ｇ、９９％）をオフホワイト色の粘性液体として得た。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は７６．８％、Ｒｔ＝２．６０分、ＭＳ 計算値：３９１、ＭＳ実測値：３９１．８（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ｈ）２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－ブロモピリジン－２－イル）ホルムアミド］－２－エチルブタン酸エチル
ＤＭＦ（１００mL）中の６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－ブロモピリジン－２－カルボン酸（１５．５ｇ、３９．５４mmol）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（２７．４９mL、１５８．１６mmol）、２－アミノ－２－エチルブタン酸エチル（CAN 189631-96-7、７．７３ｇ、３９．５４mmol）及びＴＢＴＵ（１５．２５ｇ、４７．４４９mmol）を加えた。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌し、水（１７０mL）中に注ぎ入れて、ＥｔＯＡｃ（３×２００mL）で抽出した。合わせた有機層を水（４×１２０mL）及び食塩水（１００mL）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過して乾燥させた。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５％酢酸エチル／ヘキサン）を介して精製して、２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－ブロモピリジン－２－イル）ホルムアミド］－２－エチルブタン酸エチル（２０．５ｇ、９７％）を淡褐色の油として得た。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９１．４７％、Ｒｔ＝２．５８分、ＭＳ 計算値：５３３、ＭＳ実測値：５３３．０（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ｉ）２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］－２－エチルブタン酸エチル
トルエン（１６０mL）中の２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－ブロモピリジン－２－イル）ホルムアミド］－２－エチルブタン酸エチル（４．０ｇ、７．５mmol）の溶液に、３－メトキシアゼチジン（１．３９ｇ、１１．３mmol）及び炭酸セシウム（７．３３ｇ、２２．５mmol）を加えた。混合物をアルゴンで１０分間脱気した。rac－ＢＩＮＡＰ（０．９３５ｇ、１．５０mmol）及び酢酸Ｐｄ（II）（０．３４ｇ、１．５０mmol）を加えた。混合物を１１０℃まで３時間加熱し、ＥｔＯＡｃ（１００mL）で希釈し、セライト床を通して濾過して、ＥｔＯＡｃ（３×１００mL）で洗浄した。濾液を濃縮して、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４２～５０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］－２－エチルブタン酸エチル（３．１ｇ、７６％）を淡褐色の油として得た。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９６．７％、Ｒｔ＝２．３７分、ＭＳ計算値：５３９、ＭＳ実測値：５３９．９（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ｊ）２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸エチル
ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ（１０：１）７３５mL中の２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－［（ベンジルオキシ）メチル］シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］－２－エチルブタン酸エチル（２６ｇ、４８．２４mmol）の撹拌溶液を３０分間脱気した。Ｐｄ／Ｃ（１０％）（６．５ｇ）を加えた。混合物を４０PSIの水素雰囲気下で２５℃で２８時間水素化し、セライト床を通して濾過して、１０％ ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（４×２００mL）で洗浄した。濾液から減圧下で溶媒を留去して、粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０～５０％ ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）を利用して精製して、２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸エチル（１９．３ｇ、８９％）を無色の粘性液体として得た。
ＳＯＲ値：ｔ≒２０℃で［＋１５．５１°］、ＭｅＯＨ中０．２５１４％。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９８．９％、Ｒｔ＝３．２６分、ＭＳ計算値：４４９、ＭＳ実測値：４４９．９（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９８．９％、Ｒｔ＝３．２６分、ＭＳ計算値：４４９、ＭＳ実測値：４４９．９（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ｋ）２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸
２５ml丸底フラスコ中で、２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸エチル（１００mg、０．２２mmol）をＴＨＦ（２．０mL）、ＭｅＯＨ（２．２mL）及び水（２．０mL）と合わせると、淡黄色の溶液を与えた。ＫＯＨペレット（６２mg、１．１１mmol）を加えた。混合物を９０℃に加熱した。１８時間後、有機溶媒を減圧下で除去した。水相を水（２０mL）で希釈して、ジエチルエーテル（２×１０mL）で抽出した。合わせた有機層を廃棄した。水相をｐＨ≒２（１M ＨＣｌ）に調整して、ＥｔＯＡｃ（３×１５mL）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（１０mL）で洗浄し、乾燥させ、濾過して減圧下で乾燥させて、純粋な２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸（９０mg、９６％）を無色の粘性塊として得た。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９５．５％、Ｒｔ＝２．００分、ＭＳ計算値：４１９、ＭＳ実測値：４２０．４（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ｌ）２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸３－｛［（４－メチルベンゼン）スルホニル］オキシ｝プロピル
ＤＭＦ（５mL）中の２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸（２６０mg、０．６２mmol）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２５６mg、１．８５mmol）及び４－メチルベンゼン－１－スルホン酸３－｛［（４－メチルベンゼン）スルホニル］オキシ｝プロピル（７１１mg、１．８５mmol）を加えた。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌し、水中に注ぎ入れ、１（N）ＨＣｌ水溶液でクエンチしてＥｔＯＡｃ（３×４０mL）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（３０mL）で洗浄し、乾燥させ、濾過して真空で濃縮して、粗生成物を得て、これをシリカカラム及びヘキサン中の２０～８０％ ＥｔＯＡｃを用いるCombiFlashにより精製して、純粋な２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸３－｛［（４－メチルベンゼン）スルホニル］オキシ｝プロピル（２５５mg、６５％）を無色の粘性塊として得た。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９０．７％、Ｒｔ＝３．４８分、ＭＳ計算値：６３３、ＭＳ実測値：６３４．４（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ｍ）２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピル
［１８Ｆ］フッ化物イオンは、Cyclone 18/9サイクロトロン（１８MeV、IBA Belgium）でのｅ１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ核反応を介して９８％濃縮１８Ｏ－水の衝撃から得られ、アニオン交換カートリッジ（Waters SepPak Accell QMA カートリッジカーボネート）にトラップされ、続いて水／ＭｅＣＮ（１：３）中のＫ２ＣＯ３（１mg/mL）及びKrypofix222（２．５mg/mL）の溶液で溶出された。揮発性物質を１１０℃で減圧下で、穏やかな窒素流により除去した。ＭｅＣＮ（３×１mL）を使用して共沸乾燥が行われた。２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸３－｛［（４－メチルベンゼン）スルホニル］オキシ｝プロピル（０．５mL ＭｅＣＮ中１mg）を加え、反応混合物を９０℃で１０分間撹拌した。次に反応混合物を水（２．５mL）で希釈して、粗生成物を、ACE 5 C-18-300（２５０×１０．０mm、５μm）カラム及び勾配溶媒系：Ｈ２Ｏ中の０．１％ Ｈ３ＰＯ４（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～８．０分、２０％ Ｂ；８．１～３０．０分、２０～９０％ Ｂ；３０．１～３５．０分、９０％ Ｂ；３５．１～３７．０分、９０～２０％ Ｂ；３７．１～４３．０分、２０％ Ｂと組合せた、放射線検出器VRM 202（Comecer, Netherlands）を備えた、半分取ＨＰＬＣ（Merck-Hitachi L2130システム）により精製した。４mL/分の流量を使用して、ＵＶシグナル検出を２３０nmで行った。半分取ＨＰＬＣの生成物画分を水３５mLに収集して、C18カートリッジ（Waters、５mL ＥｔＯＨ及び５mL水でプレコンディショニングされた）を通した。カートリッジを水（５mL）で洗浄して、続いて標題化合物を０．５mL ＥｔＯＨを使用して溶出した。放射性リガンドの２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピルを注射用水（ＷＦＩ）中の５％ ＥｔＯＨと処方した。２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピルは、５２～６５GBq/μmolの範囲のモル活性及び優れた放射化学的純度（＞９９％）で得られた。減衰補正された放射化学的収率は、９．０±０．４％であった。放射化学的及び化学的純度、比放射能、並びに化学的同一性を決定するために、ＵＶ検出器及びGabiStar放射線検出器（Raytest）を備えたAgilent 1100シリーズのＨＰＬＣシステムで分析品質管理を実施した。逆相ACE C18-ARカラム（５０×４．６mm、３mm）を、以下の分離条件と組合せて使用した：Ｈ２Ｏ中の０．１％ ＴＦＡ（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～２．０分、２０％ Ｂ；２．１～１２．０分、２０～９０％ Ｂ；１２．１～１４．０分、９０％ Ｂ；１４．１～１５．０分、９０～２０％ Ｂ；１５．１～２０．０分、２０％ Ｂ。１mL/分の流量を使用し、ＵＶシグナルを２３０nmで記録した。モル活性は、処方生成物のＵＶ強度を対応する非放射性標準物質の検量線と比較することによって算出された。
［１８Ｆ］フッ化物イオンは、Cyclone 18/9サイクロトロン（１８MeV、IBA Belgium）でのｅ１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ核反応を介して９８％濃縮１８Ｏ－水の衝撃から得られ、アニオン交換カートリッジ（Waters SepPak Accell QMA カートリッジカーボネート）にトラップされ、続いて水／ＭｅＣＮ（１：３）中のＫ２ＣＯ３（１mg/mL）及びKrypofix222（２．５mg/mL）の溶液で溶出された。揮発性物質を１１０℃で減圧下で、穏やかな窒素流により除去した。ＭｅＣＮ（３×１mL）を使用して共沸乾燥が行われた。２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸３－｛［（４－メチルベンゼン）スルホニル］オキシ｝プロピル（０．５mL ＭｅＣＮ中１mg）を加え、反応混合物を９０℃で１０分間撹拌した。次に反応混合物を水（２．５mL）で希釈して、粗生成物を、ACE 5 C-18-300（２５０×１０．０mm、５μm）カラム及び勾配溶媒系：Ｈ２Ｏ中の０．１％ Ｈ３ＰＯ４（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～８．０分、２０％ Ｂ；８．１～３０．０分、２０～９０％ Ｂ；３０．１～３５．０分、９０％ Ｂ；３５．１～３７．０分、９０～２０％ Ｂ；３７．１～４３．０分、２０％ Ｂと組合せた、放射線検出器VRM 202（Comecer, Netherlands）を備えた、半分取ＨＰＬＣ（Merck-Hitachi L2130システム）により精製した。４mL/分の流量を使用して、ＵＶシグナル検出を２３０nmで行った。半分取ＨＰＬＣの生成物画分を水３５mLに収集して、C18カートリッジ（Waters、５mL ＥｔＯＨ及び５mL水でプレコンディショニングされた）を通した。カートリッジを水（５mL）で洗浄して、続いて標題化合物を０．５mL ＥｔＯＨを使用して溶出した。放射性リガンドの２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピルを注射用水（ＷＦＩ）中の５％ ＥｔＯＨと処方した。２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピルは、５２～６５GBq/μmolの範囲のモル活性及び優れた放射化学的純度（＞９９％）で得られた。減衰補正された放射化学的収率は、９．０±０．４％であった。放射化学的及び化学的純度、比放射能、並びに化学的同一性を決定するために、ＵＶ検出器及びGabiStar放射線検出器（Raytest）を備えたAgilent 1100シリーズのＨＰＬＣシステムで分析品質管理を実施した。逆相ACE C18-ARカラム（５０×４．６mm、３mm）を、以下の分離条件と組合せて使用した：Ｈ２Ｏ中の０．１％ ＴＦＡ（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～２．０分、２０％ Ｂ；２．１～１２．０分、２０～９０％ Ｂ；１２．１～１４．０分、９０％ Ｂ；１４．１～１５．０分、９０～２０％ Ｂ；１５．１～２０．０分、２０％ Ｂ。１mL/分の流量を使用し、ＵＶシグナルを２３０nmで記録した。モル活性は、処方生成物のＵＶ強度を対応する非放射性標準物質の検量線と比較することによって算出された。
２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）
ａ）４－メチルベンゼンスルホン酸［１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－（ｐ－トリルスルホニルオキシ）プロピル］
ＤＣＭ（１mL）中の１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオプロパン－１，３－ジオール（７３mg、０．８７mmol）の溶液に、２，６－ルチジン（０．５mL、４．３４mmol）及び塩化トシル（４９６mg、２．６０mmol、３当量）を加えた。反応混合物を２５℃で１７時間撹拌し、ＤＣＭ（２０mL）で希釈し、１N ＨＣｌ水溶液（１０mL）で洗浄し、乾燥させ、濾過して真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中５～３０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、標題化合物（２０５mg、６１％）を白色の固体として得た。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９９．８４％、Ｒｔ＝３．４８分、ＭＳ計算値：３９０、ＭＳ実測値：４０８．１（［Ｍ＋ＮＨ４］＋）。
ｂ）２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸［１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－（ｐ－トリルスルホニルオキシ）プロピル］
ＤＭＦ（５．０mL）中の２－エチル－２－［（６－｛［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ｝－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－イル）ホルムアミド］ブタン酸（実施例１ｋ、５０mg、０．１２mmol）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４９mg、０．３５mmol）及び４－メチルベンゼンスルホン酸［１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－（ｐ－トリルスルホニルオキシ）プロピル］（９３mg、０．２４mmol）を加えた。反応混合物を１７時間撹拌し、水（３０mL）でクエンチしてＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（２０mL）で洗浄し、乾燥させ、濾過して真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～８０％ ＥｔＯＡｃ）により精製して、標題化合物（５０mg、６７％）を無色の液体として得た。
ＬＣＭＳ：カラムZorbax Ext C 18（５０×４．６mm）、５μ、（移動相：９０％［１０mmM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋１０％［ＣＨ３ＣＮ］～７０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋３０％［ＣＨ３ＣＮ］を１．５分で、更には～１０％［１０mM ＮＨ４ＯＡｃ水溶液］＋９０％［ＣＨ３ＣＮ］を３．０分で、この移動相組成を４分まで保持し、最後に５分で初期条件に戻す）。純度は９５．５％、Ｒｔ＝３．４７分、ＭＳ計算値：６３９、ＭＳ実測値：６４０．３（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
ｃ）２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）
［１８Ｆ］フッ化物イオンは、Cyclone 18/9サイクロトロン（１８MeV、IBA Belgium）でのｅ１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ核反応を介して９８％濃縮１８Ｏ－水の衝撃から得られた。［１８Ｆ］フッ化物は、アニオン交換カートリッジ（Waters SepPak Accell QMA カートリッジカーボネート）にトラップされ、続いて水／ＭｅＣＮ（１：３）中のＫ２ＣＯ３（１mg/mL）及びKrypofix222（２．５mg/mL）の溶液で溶出された。揮発性物質を１１０℃で減圧下で、穏やかな窒素流により除去した。ＭｅＣＮ（３×１mL）を使用して共沸乾燥が行われた。２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸［１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－（ｐ－トリルスルホニルオキシ）プロピル］（０．５mL ＭｅＣＮ中１mg）を加え、反応混合物を９０℃で１０分間撹拌した。次に反応混合物を水（２．５mL）で希釈して、粗生成物を、ACE 5 C-18-300（２５０×１０．０mm、５μm）カラム及び勾配溶媒系：Ｈ２Ｏ中の０．１％ Ｈ３ＰＯ４（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～８．０分、２０％ Ｂ；８．１～３０．０分、２０～９０％ Ｂ；３０．１～３５．０分、９０％ Ｂ；３５．１～３７．０分、９０～２０％ Ｂ；３７．１～４３．０分、２０％ Ｂと組合せた、放射線検出器VRM 202（Comecer, Netherlands）を備えた、半分取ＨＰＬＣ（Merck-Hitachi L2130システム）により精製した。４mL/分の流量を使用して、ＵＶシグナル検出を２３０nmで行った。半分取ＨＰＬＣの生成物画分を水３５mLに収集して、C18カートリッジ（Waters、５mL ＥｔＯＨ及び５mL水でプレコンディショニングされた）を通した。カートリッジを水（５mL）で洗浄して、続いて標題化合物を０．５mL ＥｔＯＨを使用して溶出した。放射性リガンドの２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）を注射用水（ＷＦＩ）中の５％ ＥｔＯＨと処方した。放射性リガンドの２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）は、２７～４４GBq/μmolの範囲のモル活性及び優れた放射化学的純度（＞９９％）で得られた。減衰補正された放射化学的収率は、５．０±１．１％であった。放射化学的及び化学的純度、比放射能、並びに化学的同一性を決定するために、ＵＶ検出器及びGabiStar放射線検出器（Raytest）を備えたAgilent 1100シリーズのＨＰＬＣシステムで分析品質管理を実施した。逆相ACE C18-ARカラム（５０×４．６mm、３mm）を、以下の分離条件と組合せて使用した：Ｈ２Ｏ中の０．１％ ＴＦＡ（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～２．０分、２０％ Ｂ；２．１～１２．０分、２０～９０％ Ｂ；１２．１～１４．０分、９０％ Ｂ；１４．１～１５．０分、９０～２０％ Ｂ；１５．１～２０．０分、２０％ Ｂ。１mL/分の流量を使用し、ＵＶシグナルを２３０nmで記録した。モル活性は、処方生成物のＵＶ強度を対応する非放射性標準物質の検量線と比較することによって算出された。
［１８Ｆ］フッ化物イオンは、Cyclone 18/9サイクロトロン（１８MeV、IBA Belgium）でのｅ１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ核反応を介して９８％濃縮１８Ｏ－水の衝撃から得られた。［１８Ｆ］フッ化物は、アニオン交換カートリッジ（Waters SepPak Accell QMA カートリッジカーボネート）にトラップされ、続いて水／ＭｅＣＮ（１：３）中のＫ２ＣＯ３（１mg/mL）及びKrypofix222（２．５mg/mL）の溶液で溶出された。揮発性物質を１１０℃で減圧下で、穏やかな窒素流により除去した。ＭｅＣＮ（３×１mL）を使用して共沸乾燥が行われた。２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸［１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－（ｐ－トリルスルホニルオキシ）プロピル］（０．５mL ＭｅＣＮ中１mg）を加え、反応混合物を９０℃で１０分間撹拌した。次に反応混合物を水（２．５mL）で希釈して、粗生成物を、ACE 5 C-18-300（２５０×１０．０mm、５μm）カラム及び勾配溶媒系：Ｈ２Ｏ中の０．１％ Ｈ３ＰＯ４（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～８．０分、２０％ Ｂ；８．１～３０．０分、２０～９０％ Ｂ；３０．１～３５．０分、９０％ Ｂ；３５．１～３７．０分、９０～２０％ Ｂ；３７．１～４３．０分、２０％ Ｂと組合せた、放射線検出器VRM 202（Comecer, Netherlands）を備えた、半分取ＨＰＬＣ（Merck-Hitachi L2130システム）により精製した。４mL/分の流量を使用して、ＵＶシグナル検出を２３０nmで行った。半分取ＨＰＬＣの生成物画分を水３５mLに収集して、C18カートリッジ（Waters、５mL ＥｔＯＨ及び５mL水でプレコンディショニングされた）を通した。カートリッジを水（５mL）で洗浄して、続いて標題化合物を０．５mL ＥｔＯＨを使用して溶出した。放射性リガンドの２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）を注射用水（ＷＦＩ）中の５％ ＥｔＯＨと処方した。放射性リガンドの２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）は、２７～４４GBq/μmolの範囲のモル活性及び優れた放射化学的純度（＞９９％）で得られた。減衰補正された放射化学的収率は、５．０±１．１％であった。放射化学的及び化学的純度、比放射能、並びに化学的同一性を決定するために、ＵＶ検出器及びGabiStar放射線検出器（Raytest）を備えたAgilent 1100シリーズのＨＰＬＣシステムで分析品質管理を実施した。逆相ACE C18-ARカラム（５０×４．６mm、３mm）を、以下の分離条件と組合せて使用した：Ｈ２Ｏ中の０．１％ ＴＦＡ（溶媒Ａ）、ＭｅＣＮ（溶媒Ｂ）；０．０～２．０分、２０％ Ｂ；２．１～１２．０分、２０～９０％ Ｂ；１２．１～１４．０分、９０％ Ｂ；１４．１～１５．０分、９０～２０％ Ｂ；１５．１～２０．０分、２０％ Ｂ。１mL/分の流量を使用し、ＵＶシグナルを２３０nmで記録した。モル活性は、処方生成物のＵＶ強度を対応する非放射性標準物質の検量線と比較することによって算出された。
２－（１，２－ジトリチオエチル）－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－３，４－ジトリチオ－ブタン酸３－フルオロプロピル
ａ）２－エチル－２－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）メトキシ）－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピコリンアミド）ブタノイルアジド
３０mL丸底フラスコ中で、２－エチル－２－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）メトキシ）－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピコリンアミド）ブタン酸（実施例１ｋ、３３８mg、８０２μmol、１当量）をトルエン（１４mL）に溶解した。トリエチルアミン（８１mg、１１６μL、８０２μmol、１当量）及びＤＰＰＡ（２２１mg、１７３μL、８０２μmol、１当量）を加えた。反応混合物を周囲温度で２４時間撹拌し、水（２０mL）に注ぎ入れてＡｃＯＥｔ（３×３０mL）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させて真空で濃縮した。粗生成物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１２０ｇ、ヘプタン中１０～７０％ ＡｃＯＥｔ）により精製して、標題化合物（１７７mg、０．３９６mmol、４８％）をオフホワイト色の固体として与えた。
1H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.32 (s, 2 H, NH), 7.54 - 7.59 (d, 3J = 7.9 Hz, 1 H, NPy-Cq-CH-CH), 6.46 - 6.53 (d, 3J = 7.9 Hz, 1 H, NPy-Cq-CH), 4.09 - 4.30 (m, 8 H, m, O-CH2, CH2-N-CH2, PO3-O-CH2, O-CH), 3.72 - 3.84 (m, 2 H, CH2-N-CH2), 3.23 (s, 3 H, O-CH3), 2.35 - 2.51 (m, 2 H, N3-CO-Cq-CH2), 1.68 - 1.89 (m, 2 H, N3-CO-Cq-CH2), 1.24 - 1.34 (m, 2 H, CH-CH2-CH), 0.74 (t, 3J = 7.5 Hz, 6 H, N3-CO-Cq-CH2-CH3), 0.63 - 0.72 (m, 2 H, CH-CH2-CH)
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２１Ｈ３０Ｎ６Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋計算値＝４４７．２３０４；実測値＝４４７．２２９６。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２１Ｈ３０Ｎ６Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋計算値＝４４７．２３０４；実測値＝４４７．２２９６。
ｂ）６－（（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）メトキシ）－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピコリンアミド
２５mL丸底フラスコ中で、２－エチル－２－（６－（（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）メトキシ）－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピコリンアミド）ブタノイルアジド（１７７mg、０．３９６mmol、１当量）をトルエン（１０．０mL）に溶解した。反応混合物を撹拌しながら３時間１１０℃まで加熱して、次に真空で濃縮した。ＴＨＦ（３mL）及び３N ＮａＯＨ（７mL）を加えた。反応混合物を撹拌しながら１時間９０℃まで加熱し、水（１０mL）に注ぎ入れてＡｃＯＥｔ（３×４０mL）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮して、標題化合物（８５mg、０．２７７mmol、７０％）を淡橙色の油として与えた。粗生成物質を更に精製することなく次の工程に使用した。
1H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.18(CO-NH2), 7.74 (d, 3J = 8.0 Hz, 1 H, NPy-Cq-CH-CH), 6.56 (d, 3J = 8.0 Hz, 1 H, NPy-Cq-CH), 3.99 - 4.41 (m, 7 H, O-CH2, CH2-N-CH2, O-CH, HO-CH2), 3.95 - 4.00 (m, 2 H, CH2-N-CH2), 3.29 (m, 3 H, O-CH3), 1.20 - 1.36 (CH-CH2-CH), 0.54 - 0.79 (m, 2 H, CH-CH2-CH)
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ１５Ｈ２１Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋計算値＝３０８．１４；実測値＝３０８．２０。
ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ１５Ｈ２１Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋計算値＝３０８．１４；実測値＝３０８．２０。
ｃ）６－（（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）メトキシ）－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピコリン酸
２５mL丸底フラスコ中で、６－（（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）メトキシ）－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピコリンアミド（８５mg、０．２７７mmol、１当量）をメタノール（３mL）及び水（５mL）に溶解した。水酸化ナトリウム（５５mg、１．３８mmol、５当量）を加えた。反応混合物を撹拌しながら１２時間８５℃まで加熱し、水（１０mL）及び１N ＨＣｌ（３mL）に注ぎ入れてＡｃＯＥｔ（３×２０mL）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮した。粗生成物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１２ｇ、ヘプタン中４０～１００％ ＡｃＯＥｔ）により精製して、標題化合物（６４mg、０．２０７mmol、７５％）を淡橙色の油として与えた。
1H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 7.72 (dd, 3J = 7.9 Hz, 4J = 2.9 Hz, 1 H, NPy-Cq-CH-CH), 6.56 (d, 3J = 7.9 Hz, 1 H, NPy-Cq-CH), 3.99 - 4.41 (m, 7 H, O-CH2, CH2-N-CH2, O-CH, HO-CH2), 3.97 - 3.99 (m, 2 H, CH2-N-CH2), 3.28 (m, 3 H, O-CH3), 1.18 - 1.32 (CH-CH2-CH), 0.56 - 0.81 (m, 2 H, CH-CH2-CH)
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ１５Ｈ２０Ｎ２Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋計算値＝３０９．１３７９；実測値＝３０９．１４５１。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ１５Ｈ２０Ｎ２Ｏ５［Ｍ＋Ｈ］＋計算値＝３０９．１３７９；実測値＝３０９．１４５１。
ｄ）２－アミノ－２－ビニルブタ－３－エン酸３－フルオロプロピル
３－フルオロプロパン－１－オール（１．５５ｇ、１．６１mL、１９．８mmol、当量：１８）及び２－アミノ－２－ビニルブタ－３－エン酸塩酸塩（CAN 1865695-91-5、１８０mg、１．１mmol、当量：１）を丸底フラスコに加えた。塩化チオニル（１．３１ｇ、７９８μL、１１mmol、当量：１０）を加えた。反応混合物を８０℃で１時間撹拌し、水（１０mL）に注ぎ入れてＣＨ２Ｃｌ２（２×２０mL）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して真空で濃縮した。粗生成物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ヘプタン中２０％～７０％ ＡｃＯＥｔ）により精製して、標題化合物を無色の油として与えた。ＬＣ－ＭＳ（ＵＶピーク面積／ＥＳＩ）９４％、１８７．１０８３［ＭＨ＋］。
ｅ）２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－２－ビニル－ブタ－３－エン酸３－フルオロプロピル
６－（（（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル）メトキシ）－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピコリン酸（１９．８mg、６４．１μmol、当量：０．８）及び２－アミノ－２－ビニルブタ－３－エン酸３－フルオロプロピル（１５mg、８０．１μmol、当量：１）をＣＨ２Ｃｌ２（１．３４mL）に溶解した。Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン（４１．４mg、５５．２μL、３２０μmol、当量：４）及び次に１－（ビス（ジメチルアミノ）メチレン）－１Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジン－１－イウム ３－オキシド ヘキサフルオロリン酸塩（Ｖ）（３６．６mg、９６．１μmol、当量：１．２）を加えた。反応混合物を周囲温度で１時間撹拌し、水（１０mL）に注ぎ入れてＣＨ２Ｃｌ２（４×２０mL）で抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して真空で濃縮した。粗生成物質をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１２ｇ、ヘプタン中２０％～７０％ ＡｃＯＥｔ）により精製して、標題化合物を無色の油として与えた。ＬＣ－ＭＳ（ＵＶピーク面積／ＥＳＩ）９８％、４７８．２３９９［ＭＨ＋］。
ｆ）２－（１，２－ジトリチオエチル）－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－３，４－ジトリチオ－ブタン酸３－フルオロプロピル
２mlのトリチウム化フラスコ中で、２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－２－ビニル－ブタ－３－エン酸３－フルオロプロピル（２．０mg、４．２μmol、１．０当量）及びＰｄ／Ｃ（１０％）（０．８９mg、０．８４μmol、０．２当量）をジメチルホルムアミド（０．４ml）に懸濁した。フラスコをトリチウムマニホールド（RC-TRITEC）に取り付け、凍結脱気（freeze-pump-thaw）した。トリチウムガスを導入し、黒色の懸濁液をトリチウム雰囲気下で５６０mbarで３時間激しく撹拌した。溶液を液体窒素で冷却し、反応容器内の過剰なトリチウムガスを廃棄トリチウム用のウラントラップに再吸収させた。溶媒を凍結乾燥し、不安定なトリチウムをメタノール（３×１ml）との凍結乾燥により除去した。残りの黒い残渣をメタノール（１０ml）に懸濁し、１７mm Titan ＨＰＬＣフィルター（０．４５μm、ＰＴＦＥ）で濾過して、純度＞９０％の粗生成物８．２１GBq（２２２mCi）を与えた。粗生成物を濃縮して、溶離液としてアセトニトリル［Ａ］及び水中５％アセトニトリル［Ｂ］（勾配：１０％［Ａ］、９０％［Ｂ］～９９％［Ａ］、１％［Ｂ］を１２分で、３分間保持し、次に５分で初期条件に戻す）を使用する分取ＨＰＬＣ（SunFire C18、５μm、４．６×２５０mm）により精製した。ＭＳ分析で測定された、放射化学的純度が９８．７％、比放射能が４．１８TBq/mmol（１１３Ci/mmol）の標題化合物 ４．５９GBq（１２４mCi）が得られた。化合物はエタノール溶液として保存された。MS m/z: 482.3 [M+H]+ (1%), 484.3 [M(3H)+H]+ (5%), 486.3 [M(3H2)+H]+(13%), 488.3 [M(3H3)+H]+ (21%), 490.3[M(3H4)+H]+(12%), 492.3[M(3H5)+H]+ (20%),494.3 [M(3H6)+H]+(12%),496.3 [M(3H7)+H]+ (4%).
２mlのトリチウム化フラスコ中で、２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－２－ビニル－ブタ－３－エン酸３－フルオロプロピル（２．０mg、４．２μmol、１．０当量）及びＰｄ／Ｃ（１０％）（０．８９mg、０．８４μmol、０．２当量）をジメチルホルムアミド（０．４ml）に懸濁した。フラスコをトリチウムマニホールド（RC-TRITEC）に取り付け、凍結脱気（freeze-pump-thaw）した。トリチウムガスを導入し、黒色の懸濁液をトリチウム雰囲気下で５６０mbarで３時間激しく撹拌した。溶液を液体窒素で冷却し、反応容器内の過剰なトリチウムガスを廃棄トリチウム用のウラントラップに再吸収させた。溶媒を凍結乾燥し、不安定なトリチウムをメタノール（３×１ml）との凍結乾燥により除去した。残りの黒い残渣をメタノール（１０ml）に懸濁し、１７mm Titan ＨＰＬＣフィルター（０．４５μm、ＰＴＦＥ）で濾過して、純度＞９０％の粗生成物８．２１GBq（２２２mCi）を与えた。粗生成物を濃縮して、溶離液としてアセトニトリル［Ａ］及び水中５％アセトニトリル［Ｂ］（勾配：１０％［Ａ］、９０％［Ｂ］～９９％［Ａ］、１％［Ｂ］を１２分で、３分間保持し、次に５分で初期条件に戻す）を使用する分取ＨＰＬＣ（SunFire C18、５μm、４．６×２５０mm）により精製した。ＭＳ分析で測定された、放射化学的純度が９８．７％、比放射能が４．１８TBq/mmol（１１３Ci/mmol）の標題化合物 ４．５９GBq（１２４mCi）が得られた。化合物はエタノール溶液として保存された。MS m/z: 482.3 [M+H]+ (1%), 484.3 [M(3H)+H]+ (5%), 486.3 [M(3H2)+H]+(13%), 488.3 [M(3H3)+H]+ (21%), 490.3[M(3H4)+H]+(12%), 492.3[M(3H5)+H]+ (20%),494.3 [M(3H6)+H]+(12%),496.3 [M(3H7)+H]+ (4%).
放射性リガンド結合アッセイ及びマイクロＰＥＴ試験
安定にトランスフェクトされた細胞又は脾臓組織を、１５mmol/L Hepes、０．３mmol/L ＥＤＴＡ、１mmol/L ＥＧＴＡ、２mmol/L ＭｇＣｌ２、cOmplete ＥＤＴＡ不含プロテアーゼインヒビター（Roche Applied Science, Rotkreuz, Switzerland）（ｐＨ７．４）中で、ガラスポッターを使用して、４７，８００ｇで４℃で３０分間の遠心分離を使用してホモジナイズした。次にペレットを同じ緩衝液で２回、再ホモジナイズして遠心分離した（４７，８００ｇ、４℃、３０分）。次に最終ペレットを７５mmol/L Tris、０．３mmol/L ＥＤＴＡ、１mmol/L ＥＧＴＡ、１２．５mmol/L ＭｇＣｌ２、２５０mmol/L ショ糖（ｐＨ７．４）にタンパク質濃度１～３mg/mLで再懸濁し、分注し、ドライアイスで凍結して－８０℃保存した。
安定にトランスフェクトされた細胞又は脾臓組織を、１５mmol/L Hepes、０．３mmol/L ＥＤＴＡ、１mmol/L ＥＧＴＡ、２mmol/L ＭｇＣｌ２、cOmplete ＥＤＴＡ不含プロテアーゼインヒビター（Roche Applied Science, Rotkreuz, Switzerland）（ｐＨ７．４）中で、ガラスポッターを使用して、４７，８００ｇで４℃で３０分間の遠心分離を使用してホモジナイズした。次にペレットを同じ緩衝液で２回、再ホモジナイズして遠心分離した（４７，８００ｇ、４℃、３０分）。次に最終ペレットを７５mmol/L Tris、０．３mmol/L ＥＤＴＡ、１mmol/L ＥＧＴＡ、１２．５mmol/L ＭｇＣｌ２、２５０mmol/L ショ糖（ｐＨ７．４）にタンパク質濃度１～３mg/mLで再懸濁し、分注し、ドライアイスで凍結して－８０℃保存した。
式（Ｉ）の化合物０．０５～２．４nM及び膜タンパク質４０μgを使用して、飽和結合を実行した。CP55940（１０μM）を使用して、非特異結合を規定した。アッセイ緩衝液は、５０mmol/L Tris－ＨＣｌ、５mmol/L ＭｇＣｌ２、２．５mmol/L ＥＧＴＡ、及び０．１％脂肪酸不含ＢＳＡ（ｐＨ７．４）で構成されていた。最終容量が２５０μｌ／ウェルになるよう膜を追加してアッセイを開始した。０．３％ポリエチレンイミンに予浸したPackard GF/Bフィルターを介したFiltermateセルハーベスターで、アッセイ液を室温で２時間インキュベートし、次に真空濾過して、洗浄緩衝液（５０mmol/L Tris－ＨＣｌ、５mmol/L ＭｇＣｌ２、２．５mmol/L ＥＧＴＡ、及び０．５％脂肪酸不含ＢＳＡ（ｐＨ７．４））で濯いだ。
競合結合の場合、非標識（Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＨ２ＣＨ３、Ｒ３＝ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）式（Ｉ）の化合物濃度の上昇の存在下又は非存在下の［３Ｈ］－CP55940 ０．３nMと共に、あるいはCP55940（１０μM）の存在下又は非存在下の式（Ｉ）の化合物（Ｒ１＝Ｒ２＝ＣＨＴＣＨ２Ｔ、Ｒ３＝ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｆ）１．５nM及び増加量の膜調製物（２．５～８０μg）と共に、３０℃で６０分間、５０mmol/L Tris－ＨＣｌ、５mmol/L ＭｇＣｌ２、２．５mmol/L ＥＧＴＡ、０．１％脂肪酸不含ＢＳＡ及び１％ ＤＭＳＯ（ｐＨ７．４）緩衝液の最終容量０．２mLで、穏やかに振盪しながらインキュベートした。全ての結合反応は、０．５％ポリエチレンイミンに予浸したＧＦ／Ｂフィルタープレート（Packard）での真空濾過と続いての０．５％脂肪酸不含ＢＳＡを含む氷冷結合緩衝液２mLでの７回の短い洗浄により終了させた。プレートを５０℃で１時間乾燥させ、結合した放射性標識を測定するために液体シンチレーション計測法を使用した。ＩＣ５０値とヒルの傾きは、ActivityBase（ID Business Solution、Ltd.）を使用した４パラメーターのロジスティックモデルによって決定された。
結果を表１及び図１に示す。
表１は、ヒトＣＢ１受容体及びヒトＣＢ２受容体を組換え発現する細胞において、非選択的ＣＢ１／ＣＢ２放射性リガンドの［３Ｈ］CP55940を使用したとき、対ヒトＣＢ１受容体（Ｋｉ＞１０，０００nM）で、ヒトＣＢ２受容体（Ｋｉ ０．７nM）への式（Ｉ）の非標識化合物の高い結合選択性を示している。
Claims (35)
- 式（Ｉ）：
［式中、
Ａは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１及びＲ２は、両方とも同時にエチルであり；そして
Ｒ３は、フルオロプロピル又はヘキサジュウテリオフルオロプロピルである（ただし、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の少なくとも１個は、少なくとも１個の放射性核種を含む）］で示される化合物又は薬学的に許容し得るその塩。 - Ａが、ＣＨである、請求項１記載の化合物。
- Ｒ１及びＲ２の両方が、少なくとも１個の放射性核種を含むか、又はＲ３が、１個の放射性核種を含む、請求項１又は２記載の化合物。
- 少なくとも１個の放射性核種が、［３Ｈ］、［１８Ｆ］及び［１１Ｃ］から独立して選択される、請求項１～３のいずれか一項記載の化合物。
- Ｒ１及びＲ２が、同時に両方とも－Ｃ３ＨＨ－Ｃ３ＨＨ２である、請求項１～４のいずれか一項記載の化合物。
- Ｒ３が、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２ １８Ｆ又は－ＣＤ２－ＣＤ２－ＣＤ２ １８Ｆである、請求項１～５のいずれか一項記載の化合物。
- ２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸３－［１８Ｆ］フルオロプロピル；
２－エチル－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］ブタン酸（１，１，２，２，３，３－ヘキサジュウテリオ－３－［１８Ｆ］フルオロ－プロピル）；及び
２－（１，２－ジトリチオエチル）－２－［［６－［［（１Ｓ，２Ｓ）－２－（ヒドロキシメチル）シクロプロピル］メトキシ］－５－（３－メトキシアゼチジン－１－イル）ピリジン－２－カルボニル］アミノ］－３，４－ジトリチオ－ブタン酸３－フルオロプロピル
から選択される、請求項１～６のいずれか一項記載の化合物又は薬学的に許容し得るその塩。 - 患者又は試料中にＣＢ２受容体を特定するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の使用。
- 患者又は試料中のＣＢ２受容体をイメージングするための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の使用。
- 別の化合物がＣＢ２受容体に結合しているかどうかを決定するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の使用。
- ＣＢ２受容体に対する前記別の化合物の結合定数を測定することを更に含む、請求項１０記載の使用。
- ＣＢ１受容体の存在下での、請求項１０又は１１記載の使用。
- 疾患が、ＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とするかどうかを決定するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の使用。
- 疾患が、疼痛、アテローム動脈硬化、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性同種移植拒絶反応、慢性同種移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎、発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の調節、神経変性、脳卒中、一過性虚血性発作又はブドウ膜炎である、請求項１３記載の使用。
- 患者又は組織での疾患の診断に使用するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物。
- 疾患が、健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較した前記患者又は組織でのＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とする、請求項１５記載の使用のための化合物。
- 診断が、患者又は組織でのＣＢ２受容体の発現を健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較する工程を含む、請求項１５又は１６記載の化合物。
- 罹患した患者が、ＣＢ２リガンドの投与を含む処置に反応する見込みがあるかどうかを予測するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の使用。
- 患者でのＣＢ２受容体の発現を健常被験者又は組織でのＣＢ２受容体の発現と比較することを含む、請求項１８記載の使用。
- 患者での薬物療法の効力を評価するための請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の使用であって、前記薬物療法の前、最中及び／又は後の患者でのＣＢ２受容体密度をモニターすることを含む使用。
- 投与を必要とする患者に投与されるＣＢ２リガンドの必要用量を決定するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の使用。
- ＣＢ２受容体に結合している化合物を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物を、ＣＢ２受容体及び請求項１～７のいずれか一項記載の化合物を含む試料と接触させる工程；並びに
（ｂ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物が、ＣＢ２受容体への請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の結合に影響を与えるかどうかをモニターする工程
を含む方法。 - ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物のＣＢ２受容体への結合強度を測定する工程を更に含む、請求項２２記載の方法。
- ＣＢ２受容体への選択的結合が疑われる化合物のＣＢ２受容体への結合定数を測定することを更に含む、請求項２３記載の方法。
- ある細胞受容体をＣＢ２受容体として同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）ＣＢ２受容体を含むことが疑われる試料を請求項１～７のいずれか一項記載の化合物と接触させる工程；及び
（ｂ）請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の結合が起こったかどうかをモニターする工程；及び
（ｃ）場合により試料を別の既知のＣＢ２リガンドと更に接触させ、前記既知のＣＢ２リガンドが請求項１～７のいずれか一項記載の化合物をその結合部位から外したかどうかをモニターする工程
を含む方法。 - ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物が試料と接触したときに前記化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を試料において測定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）少なくとも１つのＣＢ２受容体を含む試料を請求項１～７のいずれか一項記載の化合物と接触させて、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）試料を、用量のＣＢ２受容体への結合が疑われる前記化合物及び請求項１～７のいずれか一項記載の化合物と接触させる工程；
（ｃ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物による請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２受容体への結合が疑われる化合物によって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算する工程
を含む方法。 - 投与を必要とする脊椎動物、特にヒト被験者に投与されるＣＢ２リガンドの必要用量を決定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）脊椎動物に請求項１～７のいずれか一項記載の化合物を投与して、基準シグナルを決定する工程；
（ｂ）脊椎動物に様々な用量のＣＢ２リガンドを投与し、同時に脊椎動物に請求項１～７のいずれか一項記載の化合物を投与する工程；
（ｃ）様々な用量のＣＢ２リガンドによる請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の置換をモニターする工程；及び
（ｄ）ＣＢ２リガンドによって占有されるＣＢ２受容体の割合を計算して、用量／占有関係を決定する工程
を含む方法。 - 疾患がＣＢ２受容体の発現の変化を特徴とするかどうかを決定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）試料に請求項１～７のいずれか一項記載の化合物と接触させるか、又は前記疾患の患者及び健常試料又は健常被験者に請求項１～７のいずれか一項記載の化合物を投与する工程；
（ｂ）両方の試料において請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の結合が起こったかどうかをモニターする工程；及び
（ｃ）両方の試料においてＣＢ２受容体に結合している請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の量を比較する工程
を含む方法。 - モニターに、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、単光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、又はオートラジオグラフィーが使用される、請求項８～２８のいずれか一項記載の使用、方法又は使用のための化合物。
- 請求項１～７のいずれか一項記載の化合物を含む医薬組成物。
- 診断薬として使用するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物。
- 疼痛、アテローム動脈硬化、加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、緑内障、糖尿病、炎症、炎症性腸疾患、虚血再灌流傷害、急性肝不全、肝線維症、肺線維症、腎線維症、全身性線維症、急性同種移植拒絶反応、慢性同種移植腎症、糖尿病性腎症、糸球体腎症、心筋症、心不全、心筋虚血、心筋梗塞、全身性硬化症、熱傷、火傷、肥厚性瘢痕、ケロイド、歯肉炎、発熱、肝硬変若しくは肝腫瘍、骨量の調節、神経変性、脳卒中、一過性虚血性発作又はブドウ膜炎の診断に使用するための、請求項１～７のいずれか一項記載の化合物。
- 請求項１～７のいずれか一項記載の化合物の製造方法であって、以下の工程：
（ａ）式（Ａ）：
で示される化合物を求核試薬［１８Ｆ］フッ化物と反応させる工程；又は
（ｂ）式（Ｂ）：
で示される化合物を［３Ｈ］２と反応させる工程
を含む方法［式中、ＬＧは、脱離基であり、そしてＲ１～Ｒ３は、請求項１～６のいずれか一項と同義である］。 - 請求項３２の製造方法により製造される化合物。
- 本明細書に前記の発明。
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