ES2748162T3 - Compuestos conjugados - Google Patents

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Abstract

Un compuesto que es: A. un compuesto de la fórmula (I):**Fórmula** en donde: A es un grupo conector auto-inmolativo; D se selecciona del grupo que consiste en: en donde * indica un punto de unión del grupo D al grupo A; R15 es una cadena lateral de uno de los siguientes aminoácidos: L-lisina, L-citrulina, L-arginina, Lglutamina o L-treonina; R16 es una cadena lateral de un aminoácido hidrófobo; R19 es un grupo alquileno; R32 es un grupo alquileno o un grupo O-alquileno en donde el O está unido al grupo carbonilo de D2; E se selecciona del grupo que consiste en:**Fórmula** en donde * indica un punto de unión del grupo E al grupo D; R20 es H o alquilo C1-C6; R21 es un grupo alquileno; g es 0 cuando R20 es H o g es 1 cuando R20 es alquilo C1-C6; a condición de que E sea E18 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que E sea E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 o E96 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4; y a condición de que E sea E91, E92 o E95 solo cuando D sea D5 y a condición de que E sea E97 solo cuando D sea D2; G está ausente o G es una secuencia de aminoácidos de hasta 6 aminoácidos, unida mediante su extremo N al grupo E y mediante su extremo C al grupo J; J es un antígeno peptídico, opcionalmente sustituido en sus extremos N y/o C con hasta 6 aminoácidos seleccionados del grupo de restos flanqueantes naturales para el antígeno, y opcionalmente terminado con NH2 en el extremo C de manera que se proporcione una amida de extremo C, y unido al grupo G mediante su extremo N o, en donde G está ausente, unido al grupo E mediante su extremo N; R1 es H o glucosilo, a condición de que si R1 es glucosilo entonces R2 y R3 sean ambos OH y R4 sea CH2OH; R2 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR10; a condición de que si R2 es H, F u OR10, entonces R1 sea H, R3 sea OH y R4 sea CH2OH; R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR10; a condición de que si R3 es H, F u OR10, entonces R1 sea H, R2 sea OH y R4 sea CH2OH; R4 es CH3, CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2PO3H2, CH2OP(O)(OH)2, CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2, CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2, CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2, CH2N(R11)2, CH2NHSO2R11; a condición de que si R4 es distinto de CH2OH, entonces R1 es H y R2 y R3 son OH; R6 es OR12, OH o H; R7 es OR12, OH o H; a condición de que al menos uno de R6 y R7 sea OR12; en donde cuando R6 es OR12, R7 es H, R8 es alquilo C1-C15 y X es O, ---------- indica un doble enlace opcional que une el carbono adyacente a R7 con el carbono adyacente a R8; R8 es H o alquilo C1-C15 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada, en donde la cadena de carbono incorpora opcionalmente uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, uno o más átomos de oxígeno y/o un grupo arilo opcionalmente sustituido terminal o no terminal; R10 es glucosilo; R11 es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6 o aralquilo; R12 es acilo C6-C30 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada opcionalmente sustituida con uno o más grupos hidroxi en las posiciones 2 y/o 3 del grupo acilo y/o un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido y que opcionalmente incorpora uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, y/o uno o más grupos arileno opcionalmente sustituidos y en donde la cadena de carbono se sustituye opcionalmente con uno o más átomos de deuterio; en donde los sustituyentes opcionales en los grupos arilo y arileno se pueden seleccionar de halógeno, ciano, dialquilamino,C1-C6 amida, nitro, alcoxi C1-C6, aciloxi C1-C6 y tioalquilo C1-C6; X es O, CH2 o S; n es 1 cuando X es O o S; o n es 0 o 1 cuando X es CH2; en donde donde X es CH2, entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es α-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10 o CH2OR11; y: o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R), (2S, 3S, 4S), (2R, 3S, 4S), (2R, 3S, 4R) o (2S, 3R, 4S); o R6 es OR12 y R7 es H, y R8 es C13H27 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S); en donde donde X es S, entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es α-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 o CO2H; y: o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R); o R6 es OR12 y R7 es H y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S); o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; o B. un compuesto de la fórmula (II):**Fórmula** en donde A, D, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R32, y n son todos como se define en la reivindicación 1A; Z se selecciona del grupo que consiste en:**Fórmula** en donde * indica un punto de unión del grupo Z al grupo D, excepto como se define para Z23; R20 es como se ha definido anteriormente para la fórmula (I); R23 es arilo, aralquilo o alquilo opcionalmente sustituido; R24 es alquilo C1-C6; R25 es p-C6H4L en donde L es H, metoxi, COOH, C(O)NHCH2COOH o CH2CH2NMe2; R26 es aralquilo; R27 es H o alquilo C1-C6; R28 es alquileno; R31 es (CH2CH2O)k k es un número entero desde 2 hasta 100; W es un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido; o W es un sistema de anillos bicíclicos o tricíclicos condensados que comprende un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido condensado con uno o más grupos arilo o uno o más grupos cicloalquilo; en donde el anillo de ciclooctinilo contiene opcionalmente un átomo de N dentro del anillo, átomo de N que se sustituye opcionalmente con un grupo acilo; y en donde el anillo de ciclooctinilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, alcoxi y aralquilo, en donde la parte de arilo de este grupo se sustituye opcionalmente con un ácido carboxílico; y en donde * o uno de los sustituyentes opcionales comprende un punto de unión de Z23 al grupo D; a condición de que Z sea Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15, Z16, Z17 o Z18 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4 y a condición de que Z sea Z12 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que Z sea Z5 o Z20 solo cuando D sea D5, y a condición de que Z sea Z21, Z22 o Z23 solo cuando D sea D2; excluyendo el compuesto que tiene la fórmula**Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos conjugados
CAMPO DE LA DIVULGACIÓN
La presente divulgación se refiere generalmente a ciertos análogos de esfingoglucolípidos y derivados de péptido de los mismos, composiciones que comprenden estos compuestos, que incluyen composiciones farmacéuticas y composiciones de adyuvante, procesos de preparación de los compuestos, y métodos de prevención o tratamiento de enfermedades o afecciones usando dichos compuestos, especialmente enfermedades o afecciones relacionadas con cáncer, infección, trastornos atópicos, enfermedad autoinmunitaria o diabetes.
ANTECEDENTES
Los linfocitos T citolíticos espontáneos (NKT) invariantes son un subconjunto de linfocitos T que participan en una amplia variedad de enfermedades. En algunas circunstancias pueden potenciar la respuesta a la infección (Kinjo, Illarionov et al. 2011) y cáncer (Wu, Lin et al. 2011), pero también poseen la capacidad de suprimir enfermedad autoinmunitaria (Hong, Wilson et al. 2001) y diabetes de tipo II. La activación de linfocitos NKT también puede conducir a respuestas inmunitarias no deseables tales como las relacionadas con alergia (Wingender, Rogers et al.
2011), autoinmunidad (Zeng, Liu et al.2003) y aterosclerosis (Tupin, Nicoletti et al. 2004).
A diferencia de los linfocitos T convencionales que están restringidos por moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) que presentan antígenos de péptido, los linfocitos NKT están únicamente restringidos por proteínas CD1d (Bendelac, Savage et al. 2007). Las proteínas CD1d pertenecen a la familia CD1 que contiene cinco miembros, CD1a-e. Al igual que las moléculas de MHC, los miembros de la familia CD1 contienen todos una región de unión al antígeno que está flanqueada por dos hélices a antiparalelas que se sientan encima de una hoja p. A diferencia de las moléculas de MHC, la región de unión de las proteínas CD1 contiene dos sitios de unión hidrófobos grandes que son aptos para unir los antígenos de lípido en vez de antígenos basados en péptido (Li, Girardi et al.
2010). La a-galactosilceramida (a-GalCer) es el antígeno de linfocitos NKT más estudiado y activa potentemente linfocitos NKT humanos y de ratón (Kawano, Cui et al. 1997). En estudios en animales, se informa que la a-GalCer es útil en el tratamiento de varias enfermedades que incluyen cáncer (Morita, Motoki et al. 1995; Motoki, Morita et al.
1995) y enfermedad autoinmunitaria (Hong, Wilson et al. 2001). El compuesto también se ha mostrado que funciona como un potente adyuvante de vacuna en el tratamiento y la profilaxis de cáncer y enfermedad infecciosa (Silk, Hermans et al. 2004). Esta actividad de adyuvante se ha atribuido a interacciones estimulantes entre linfocitos NKT activados y células dendríticas (DCs), las células presentadoras de antígenos más potentes en el cuerpo. Como consecuencia, las DCs se vuelven capaces de promover respuestas inmunitarias adaptativas fuertes (Fujii, Shimizu et al. 2003; Hermans, Silk et al.2003).
Existe un interés considerable en las vacunas terapéuticas para el tratamiento de cáncer. El objetivo es estimular la expansión clonal de linfocitos T dentro de un hospedador que son capaces de reconocer y destruir células tumorales, dejando los tejidos normales intactos. Esta especificidad se basa en el reconocimiento de fragmentos de proteínas únicos, derivados de tumor, presentados por moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) sobre la superficie celular del tumor. Las vacunas usadas en este contexto normalmente implican la inyección de "antígenos tumorales" asociados a tumor definidos, o sus fragmentos de péptido, junto con adyuvantes inmunitarios capaces de conducir una respuesta inmunitaria. En ausencia de dichos adyuvantes, puede suceder el resultado opuesto, siendo los antígenos tumorales en realidad "tolerados" por el sistema inmunitario en vez de provocar el rechazo tumoral. Los avances en esta terapia son, por tanto, dependientes de combinaciones apropiadas de antígeno y adyuvante (Speiser y Romero 2010).
Cuando se incorpora en una vacuna, a-GalCer debe ser primero adquirida por células presentadoras de antígenos en el hospedador, y luego presentada a linfocitos NKT dentro del entorno local (Fujii, Shimizu et al. 2003; Hermans, Silk et al. 2003). Este proceso pone los dos tipos de célula en estrecha asociación, que permite que señales estimulantes pasen del linfocito NKT a la célula presentadora de antígenos.
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Y, lo que es más importante, si las mismas células presentadoras de antígenos adquieren los antígenos definidos de la vacuna, las señales estimulantes recibidas a través de la interacción con linfocitos NKT se pueden traducir directamente en una capacidad superior para provocar la proliferación clonal de linfocitos T específicos de antígeno con capacidad para destruir (Hermans, Silk et al. 2003; Semmling, Lukacs-Kornek et al. 2010). Una forma de lograr esto es cargar células presentadoras de antígenos ex vivo con material antigénico y ligandos de linfocitos NKT (Petersen, Sika-Paotonu et al. 2010). Aunque es un enfoque prometedor, en la clínica esto requiere leucaféresis y el cultivo ex vivo de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) durante 7 días en una instalación estéril altamente controlada para generar células presentadoras de antígenos suficientes, que es un proceso engorroso y costoso. Una alternativa es dirigir las células presentadoras de antígenos in vivo, con unión covalente de antígeno a ligando de linfocitos NKT que asegura la entrada en la misma célula. Aunque se usa satisfactoriamente con otros compuestos de adyuvante inmunitario, que incluye la unión covalente de un agonista de TLR2 a péptidos MUC1 (Cai, Huang et al. 2011), el enfoque no se ha considerado como fácilmente aplicable a a-GalCer debido a que la unión química del péptido dará como resultado un conjugado con capacidad significativamente reducida, o ninguna, para estimular linfocitos NKT. En particular, se requieren los restos de lípido específicos de a-GalCer para la unión óptima en los sitios A y F de CD1d, y se requiere que el grupo de cabeza polar se sitúe apropiadamente para la interacción con el receptor de linfocitos T del linfocito NKT (Borg, Wun et al. 2007), imponiendo restricciones particularmente importantes a la estructura del glucolípido completo para actividad.
Aunque a-GalCer tiene actividad biológica considerable, no tiene limitaciones tales como mala solubilidad (Ebensen, Link et al. 2007), falta de eficacia en ensayos clínicos humanos (Giaccone, Punt et al. 2002), promoción de anergia de linfocitos T (Parekh, Wilson et al. 2005) y generación de tanto citocinas Th1 como Th2 que puedan contribuir a resultados mixtos en estudios modelo.
El documento de patente WO 2008/128062 se refiere a compuestos inmunogénicos que sirven de ligandos para linfocitos NKT y a métodos de uso de los mismos en la modulación de respuestas inmunitarias. El documento de patente WO 2007/051004 se refiere a composiciones farmacéuticas que se pueden usar para inmunizar sujetos usando, por ejemplo, antígenos de lípido, glicano, o ácido nucleico. Estos antígenos están conjugados con un glucoesfingolípido. El documento de patente WO 2014/017928 se refiere a análogos de esfingolípido, composiciones que comprenden estos compuestos, procesos de preparación de los compuestos, y métodos de prevención o tratamiento de enfermedades o afecciones referentes a infección, trastornos atópicos, enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer.
Es un objeto de la invención proporcionar compuestos novedosos o vacunas útiles como agentes para tratar enfermedades o afecciones referentes al cáncer, infección, enfermedad autoinmunitaria, trastornos atópicos o cáncer, o al menos proporcionar una alternativa útil.
DECLARACIONES DE LA INVENCIÓN
La invención proporciona un compuesto que es:
A. un compuesto de la fórmula (I):
Figure imgf000003_0001
en donde:
A es un grupo conector auto-inmolativo;
D se selecciona del grupo que consiste en:
en donde * indica un punto de unión del grupo D al grupo A;
R15 es una cadena lateral de uno de los siguientes aminoácidos: L-lisina, L-citrulina, L-arginina, L-glutamina o L-treonina;
R16 es una cadena lateral de un aminoácido hidrófobo;
R19 es un grupo alquileno;
R32 es un grupo alquileno o un grupo O-alquileno en donde el O está unido al grupo carbonilo de D2; E se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000004_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo E al grupo D;
R20 es H o alquilo C1-C6 ;
R21 es un grupo alquileno;
g es 0 cuando R20 es H o g es 1 cuando R20 es alquilo C1-C6 ;
a condición de que E sea E18 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que E sea E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 o E96 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4; y a condición de que E sea E91, E92 o E95 solo cuando D sea D5 y a condición de que E sea E97 solo cuando D sea D2;
G está ausente o G es una secuencia de aminoácidos de hasta 6 aminoácidos, unida mediante su extremo N al grupo E y mediante su extremo C al grupo J;
J es un antígeno peptídico, opcionalmente sustituido en sus extremos N y/o C con hasta 6 aminoácidos seleccionados del grupo de restos flanqueantes naturales para el antígeno, y opcionalmente terminado con NH2 en el extremo C de manera que se proporcione una amida de extremo C, y unido al grupo G mediante su extremo N o, en donde g está ausente, unido al grupo E mediante su extremo N;
R1 es H o glucosilo, a condición de que si R1 es glucosilo entonces R2 y R3 sean ambos OH y R4 sea CH2OH;
R se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR ; a condición de que si R es H, F u OR , entonces R1 sea H, R3 sea OH y R4 sea CH2OH;
R se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR ; a condición de que si R es H, F u OR , entonces R1 sea H, R2 sea OH y R4 sea CH2OH;
R4 es CH3 , CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2 PO3H2 , CH2OP(O)(OH)2 , CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2 , CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2 , CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2 , CH2N(R11)2, CH2NHSO2R11; a condición de que si R4 es distinto de CH2OH, entonces R1 sea H y R2 y R3 sean OH;
R6 es OR12, OH o H;
R7 es 1 OR 2 , OH o H; a condición de que al menos uno de R 6 y R 7 se 1a O 2R ; en donde cuando R6 es OR12, R7 es H, R8 es alquilo C1-C15 y X es O, -----..... indica un doble enlace opcional que une el carbono adyacente a R D 77 c i-*on e Il i- c* n a v r i* b * ono n a/JdimyaAcnenn+nte i-, a” R8
R8 es H o alquilo C1-C15 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada, en donde la cadena de carbono incorpora opcionalmente uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, uno o más átomos de oxígeno y/o un grupo arilo opcionalmente sustituido terminal o no terminal;
R10 es glucosilo;
R11 es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6 o aralquilo;
R12 es acilo C6-C30 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada opcionalmente sustituida con uno o más grupos hidroxi en las posiciones 2 y/o 3 del grupo acilo y/o un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido y que opcionalmente incorpora uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, y/o uno o más grupos arileno opcionalmente sustituidos y en donde la cadena de carbono se sustituye opcionalmente con uno o más átomos de deuterio; en donde los sustituyentes opcionales en los grupos arilo y arileno se pueden seleccionar de halógeno, ciano, dialquilamino, amida C1-C6, nitro, alcoxi C1-C6, aciloxi C1-C6 y tioalquilo C1-C6;
X es O, CH2 o S;
n es 1 cuando X es O o S; o n es 0 o 1 cuando X es CH2 ;
en donde donde X es CH2 , entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10 o CH2OR11; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R), (2S, 3S, 4S), (2R, 3S, 4S), (2R, 3S, 4R) o (2S, 3R, 4S); o R6 es OR12 y R7 es H, y R8 es C13H27 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
en donde donde X es S, entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos oH; R4 es CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 o CO2H; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R); o R6 es OR12 y R7 es H y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o
B. un compuesto de la fórmula (II):
Figure imgf000006_0001
en donde A, D, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R32 y n son todos como se define en la reivindicación 1A;
Z se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000006_0002
en donde * indica un punto de unión del grupo Z al grupo D, excepto como se define para Z23;
R20 es como se ha definido anteriormente para la fórmula (I);
R23 es arilo, aralquilo o alquilo opcionalmente sustituido;
R24 es alquilo C1-C6 ;
R25 es P-C6H4L en donde L es H, metoxi, COOH, C(O)NHCH2COOH o CH2CH2NMe2 ;
R26 es aralquilo;
R27 es H o alquilo C1-C6 ;
R28 es alquileno;
R31 es (CH2CH2O)k
k es un número entero desde 2 hasta 100;
W es un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido; o W es un sistema de anillos bicíclicos o tricíclicos condensados que comprende un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido condensado con uno o más grupos arilo o uno o más grupos cicloalquilo; en donde el anillo de ciclooctinilo contiene opcionalmente un átomo de N dentro del anillo, átomo de N que se sustituye opcionalmente con un grupo acilo; y en donde el anillo de ciclooctinilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, alcoxi y aralquilo, en donde la parte de arilo de este grupo se sustituye opcionalmente con un ácido carboxílico; y en donde * o uno de los sustituyentes opcionales comprende un punto de unión de Z23 al grupo D;
a condición de que Z sea Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15, Z16, Z17 o Z18 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4 y a condición de que Z sea Z12 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que Z sea Z5 o Z20 solo cuando D sea D5, y a condición de que Z sea Z21, Z22 o Z23 solo cuando D sea D2; excluyendo el compuesto que tiene la fórmula
Figure imgf000007_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los aspectos y realizaciones adicionales de la invención se citan en las reivindicaciones adjuntas.
DECLARACIONES DE LA DIVULGACIÓN
En un primer aspecto, la divulgación proporciona un compuesto de la fórmula (I):
Figure imgf000007_0002
en donde:
A es un grupo conector auto-inmolativo;
D se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000007_0003
en donde * indica un punto de unión del grupo D al grupo A;
R15 es una cadena lateral de uno de los siguientes aminoácidos: L-lisina, L-citrulina, L-arginina, L-glutamina o L-treonina;
R16 es una cadena lateral de un aminoácido hidrófobo;
R19 es un grupo alquileno;
R32 es un grupo alquileno o un grupo O-alquileno en donde el O está unido al grupo carbonilo de D2;
E se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000008_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo E al grupo D;
R20 es H o alquilo inferior;
R21 es un grupo alquileno;
g es 0 cuando R20 es H o g es 1 cuando R20 es alquilo inferior;
a condición de que E sea E18 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que E sea E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 o E96 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4; y a condición de que E sea E91, E92 o E95 solo cuando D sea D5 y a condición de que E sea E97 solo cuando D sea D2;
G está ausente o G es una secuencia de aminoácidos de hasta 6 aminoácidos, unida mediante su extremo N al grupo E y mediante su extremo C al grupo J;
J es un antígeno peptídico, opcionalmente sustituido en sus extremos N y/o C con hasta 6 aminoácidos seleccionados del grupo de restos flanqueantes naturales para el antígeno, y opcionalmente terminado con NH2 en el extremo C de manera que se proporcione una amida de extremo C, y unido al grupo G mediante su extremo N o, en donde G está ausente, unido al grupo E mediante su extremo N;
R1 es H o glucosilo, a condición de que si R1 es glucosilo entonces R2 y R3 sean ambos OH y R4 sea CH2OH; R 2 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR 10 ; a condición de que si R 2 es H 1, F u 0 OR , entonces R1 sea H, R3 sea OH y R4 sea CH2OH;
R 3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR 10 ; a condición de que si R 3 es H, F u OR 10 , entonces R1 sea H, R2 sea OH y R4 sea CH2OH;
R es CH 11
3 , CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2O R '1, CH2OSO3H CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R1 CH2 PO3H2 , CH2OP(O)(OH)2 , CH2OP(O)(OH)(OR11) CH2OP(O)(OR11)2 CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R1 CH2NHCONH2 , CH2NHCONHR11, CH _2NHCON( ,R 11, )_2, , CH2N(R11)2 , CH2NHSO2 R11 a condición de que si R es distinto de CH2OH, entonces R1 es H y R2 y R3 son OH;
R6 es OR12, OH o H;
R ea OR12; en donde cuando R 7 7 es OR12, OH o H; a condición de que al menos uno de R6 y R7 s 6 es OR12, R es H, R8 es alquilo C1-C15 y X es O ,..... indica un doble enlace opcional que une el carbono adyacente a R 7 con el carbono adyacente a R8;
R8 es H o alquilo C1-C15 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada, en donde la cadena de carbono incorpora opcionalmente uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, uno o más átomos de oxígeno y/o un grupo arilo opcionalmente sustituido terminal o no terminal;
R10 es glucosilo;
R11 es alquilo inferior, alquenilo inferior o aralquilo;
R12 es acilo C6-C30 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada opcionalmente sustituida con uno o más grupos hidroxi en las posiciones 2 y/o 3 del grupo acilo y/o un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido y que opcionalmente incorpora uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, y/o uno o más grupos arileno opcionalmente sustituidos y en donde la cadena de carbono se sustituye opcionalmente con uno o más átomos de deuterio; en donde los sustituyentes opcionales en los grupos arilo y arileno se pueden seleccionar de halógeno, ciano, dialquilamino, amida C1-C6 , nitro, alcoxi C1-C6 , aciloxi C1-C6 y tioalquilo C1-C6 ;
X es O, CH2 o S;
n es 1 cuando X es O o S; o n es 0 o 1 cuando X es CH2 ;
en donde donde X es CH2 , entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10 o CH2OR11; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R), (2S, 3S, 4S), (2R, 3S, 4S), (2R, 3S, 4R) o (2S, 3R, 4S); o R6 es OR12 y R7 es H, y R8 es C13H27 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
en donde donde X es S, entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 o CO2H; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R); o R6 es OR12 y R7 es H y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Preferentemente, el compuesto de la fórmula (I) es un compuesto de la fórmula (la):
Figure imgf000010_0001
en donde
Figure imgf000010_0002
R32, n, g, se han definido anteriormente para la fórmula (I);
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Preferentemente, el compuesto de la fórmula (I) es un compuesto de la fórmula (Ib):
Figure imgf000010_0003
en donde:
A es un grupo conector auto-inmolativo;
D se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000010_0004
en donde * indica un punto de unión del grupo D al grupo A;
R15 es una cadena lateral de uno de los siguientes aminoácidos: L-lisina, L-citrulina, L-arginina, L-glutamina o
L-treonina;
R16 es una cadena lateral de un aminoácido hidrófobo;
R19 es un grupo alquileno;
E se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000010_0005
Figure imgf000011_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo E al grupo D;
R20 es H o alquilo inferior;
R21 es un grupo alquileno;
g es 0 cuando R20 es H o g es 1 cuando R20 es alquilo inferior;
a condición de que E sea E18 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que E sea E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 o E96 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4; y a condición de que E sea E91, E92 o E95 solo cuando D sea D5;
G está ausente o G es una secuencia de aminoácidos de hasta 6 aminoácidos, unida mediante su extremo N al grupo E y mediante su extremo C al grupo J;
J es un antígeno peptídico, opcionalmente sustituido en sus extremos N y/o C con hasta 6 aminoácidos seleccionados del grupo de restos flanqueantes naturales para el antígeno, y opcionalmente terminado con NH2 en el extremo C de manera que se proporcione una amida de extremo C, y unido al grupo G mediante su extremo N o, en donde G está ausente, unido al grupo E mediante su extremo N;
R1 es H o glucosilo, a condición de que si R1 es glucosilo entonces R2 y R3 sean ambos OH y R4 sea CH2OH; 2 10 2 1 0 R se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR ; a condición de que si R es H, F u OR , entonces R1 sea H, R3 sea OH y R4 sea CH2OH;
R se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR ; a condición de que si R es H, F u OR , entonces R1 sea H, R2 sea OH y R4 sea CH2OH;
R4 es CH3 , CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2PO3H2 , CH2OP(O)(OH)2 , CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2 , CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2 , CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)2 , CH2N(R11)2 , CH2NHSO2 R11; a condición de que si R4 es distinto de CH2OH, entonces R1 es H y R2 y R3 son OH;
R6 es OR12, OH o H;
6 7 1 2R7 es 1 OR 2 , OH o H; a condición de que al menos uno de R y R sea OR ; en donde cuando R6 es OR12, R 7 es H, R8 es alquilo C1-C15 y X es O ,........... indica un doble enlace opcional que une el carbono adyacente a R 7 con el carbono adyacente a R8 ;
R8 es H o alquilo C1-C15 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada, en donde la cadena de carbono incorpora opcionalmente uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, uno o más átomos de oxígeno y/o un grupo arilo opcionalmente sustituido terminal o no terminal;
R10 es glucosilo;
R11 es alquilo inferior, alquenilo inferior o aralquilo;
R12 es acilo C6-C30 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada opcionalmente sustituida con uno o más grupos hidroxi en las posiciones 2 y/o 3 del grupo acilo y/o un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido y que opcionalmente incorpora uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, y/o uno o más grupos arileno opcionalmente sustituidos y en donde la cadena de carbono se sustituye opcionalmente con uno o más átomos de deuterio; en donde los sustituyentes opcionales en los grupos arilo y arileno se pueden seleccionar de halógeno, ciano, dialquilamino, amida C1-C6 , nitro, alcoxi C1-C6 , aciloxi C1-C6 y tioalquilo C1-C6 ;
X es O, CH2 o S;
n es 1 cuando X es O o S; o n es 0 o 1 cuando X es CH2 ;
en donde donde X es CH2 , entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10 o CH2OR11; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R), (2S, 3S, 4S), (2R, 3S, 4S), (2R, 3S, 4R) o (2S, 3R, 4S); o R6 es OR12 y R7 es H, y R8 es los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
en donde donde X es S, entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 o CO2H; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R); o R6 es OR12 y R7 es H y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En otro aspecto, la divulgación proporciona un compuesto de la fórmula (II):
Figure imgf000012_0001
en donde A, D, X, R1, R2, R3
Figure imgf000012_0002
R8, n so Rn1 t0o,dos c Ro1m1,o se R ha12n, R de15fi,n Rid1o6, R32 y anteriormente para la fórmula (I);
Z se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000013_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo Z al grupo D, excepto como se define para Z23;
R20 es como se ha definido anteriormente para la fórmula (I);
R23 es arilo, aralquilo o alquilo opcionalmente sustituido;
R24 es alquilo inferior;
R25 es P-C6H4L en donde L es H, metoxi, COOH, C(O)NHCH2COOH o CH2CH2NMe2 ;
R26 es aralquilo;
R27 es H o alquilo inferior;
R28 es alquileno;
R31 es (CH2CH2OX
k es un número entero desde 2 hasta 100;
W es un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido; o W es un sistema de anillos bicíclicos o tricíclicos condensados que comprende un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido condensado con uno o más grupos arilo o uno o más grupos cicloalquilo; en donde el anillo de ciclooctinilo contiene opcionalmente un átomo de N dentro del anillo, átomo de N que se sustituye opcionalmente con un grupo acilo; y en donde el anillo de ciclooctinilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, alcoxi y aralquilo, en donde la parte de arilo de este grupo se sustituye opcionalmente con un ácido carboxílico; y en donde * o uno de los sustituyentes opcionales comprende un punto de unión de Z23 al grupo D;
a condición de que Z sea Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15, Z16, Z17 o Z18 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4 y a condición de que Z sea Z12 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que Z sea Z5 o Z20 solo cuando D sea D5, y a condición de que Z sea Z21, Z22 o Z23 solo cuando D sea D2;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Preferentemente, el compuesto de la fórmula (II) es un compuesto de la fórmula (IIa):
Figure imgf000014_0001
en donde A, D, X, Z, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R19, R20, R21, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R31, W, k y n son todos como se han definido anteriormente para la fórmula (II);
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Preferentemente, el compuesto de la fórmula (II) es un compuesto de la fórmula (IIb):
Figure imgf000014_0002
Figure imgf000014_0003
anteriormente para la fórmula (Ib);
Z se selecciona del grupo que consiste en:
0
Figure imgf000014_0004
en donde * indica un punto de unión del grupo Z al grupo D;
R es como se ha definido anteriormente para la fórmula (I);
R23 es arilo, aralquilo o alquilo opcionalmente sustituido;
R24 es alquilo inferior;
R25 es P-C6H4L en donde L es H, metoxi, COOH, C(O)NHCH2COOH o CH2CH2NMe2 ;
a condición de que Z sea Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15 o Z16 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4 y a condición de que Z sea Z12 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que Z sea Z5 solo cuando D sea D5;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Preferentemente, A se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000015_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo A al grupo D;
cada Q1, el mismo o diferente, se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, alquilo, alcoxi, halógeno, nitro, arilo; o, junto con el anillo al que se une, forma un grupo arilo bicíclico condensado;
p es un número entero desde 1 hasta 4;
Alq1 es alquilo C1-C4 de cadena lineal; y
R29 es H o alquilo inferior;
a condición de que A sea A1 solo cuando D sea D1 y a condición de que A sea A2 solo cuando D sea D2, D3 o D5 y a condición de que A sea A3 solo cuando D sea D1, D3 o D4 y a condición de que A sea A4 solo cuando D sea D2, D3 o D5 y a condición de que A sea A5 solo cuando D sea D1, D3 o D4.
Más preferentemente, A es A1 o A2. Todavía más preferentemente, A es A1 en donde R 29 es H, o A es A2 en donde Q1 es H.
Preferentemente, Q1 en A2 o A3 es H. Más preferentemente, Q1 en A2 o A3 es H y p es 4. Alternativamente preferentemente, Q1 en A2 o A3 es Me u OMe y p es 2, en donde los grupos Me u OMe están situados orto- con respecto al heteroátomo en el anillo aromático.
Preferentemente, D es D1.
Alternativamente preferentemente, D es D2.
Alternativamente preferentemente, D es D3.
Alternativamente preferentemente, D es D4.
Alternativamente preferentemente, D es D5.
Preferentemente, R15 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000015_0002
y
Figure imgf000016_0001
Más preferentemente, R15 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000016_0002
Preferentemente, R16 es una cadena lateral de uno de los siguientes aminoácidos: L-fenilalanina, L-valina, L-leucina, L-isoleucina, L-norleucina, L-metionina, L-triptófano o L-tirosina; es decir, preferentemente, R16 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000016_0003
Más preferentemente, R16 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000016_0004
Preferentemente, E es uno cualquiera de E1 a E8, E93 o E94. Más preferentemente, E es uno cualquiera de E1 a E4, E93 o E94.
Preferentemente, E es E3 en donde R20 es H. Alternativamente preferentemente, E es E4 en donde R20 es metilo. Alternativamente preferentemente, E es E7 en donde R20 es H.
Alternativamente preferentemente, E es E97.
Preferentemente, E es E97 cuando D es D2, en donde R32 es O-alquileno, preferentemente OCH2.
Lo más preferentemente, E es:
Figure imgf000016_0005
en donde * indica un punto de unión del grupo E al grupo D.
Preferentemente, Z es Z23, Z22, Z21, Z20, Z19, Z18, Z4, Z3 o Z1. Lo más preferentemente, Z es Z4.
Preferentemente, W es un anillo de ciclooctinilo condensado con un cicloalquil anillo, preferentemente un anillo de ciclopropilo.
Preferentemente, Z23 es
Figure imgf000016_0006
Preferentemente, k es un número entero desde 10 hasta 32. Más preferentemente, k es un número entero desde 19 hasta 32. Más preferentemente, k es 10.
Preferentemente, G es
Figure imgf000017_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo G al grupo E.
Alternativamente preferentemente, G está ausente.
Preferentemente, J es un péptido que contiene dentro de su secuencia uno o más epítopes que se unen a moléculas de MHC e inducen respuestas de linfocitos T.
Más preferentemente J se selecciona del grupo que consiste en: AMLGTHTMEV (SEQ ID NO:1), MLGTHTMEV (SEQ ID NO:2), EAAGIGILTV (SEQ ID NO:3), AAGIGILTV (SEQ ID NO:4), AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID NO:5), AAGIGILTVILGVL (SEQ ID NO:6), AARAVFLAL (SEQ ID NO:7), ACDPHSGHFV (SEQ ID NO:8), ACYEFLWGPRALVETS (SEQ ID NO:9), ADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID NO:10), AEEAAGIGILT (SEQ ID NO:11), AEEAAGIGIL (SEQ ID NO:12), AELVHFLLL (SEQ ID NO:13), AELVHFLLLKYRAR (SEQ ID NO:14), AEPINIQTW (SEQ ID NO:15), AFLPWHRLF (SEQ ID NO:16), AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO:17), ALCRWGLLL (SEQ ID NO:18), ALDVYNGLL (SEQ ID NO:19), ALFDIESKV (SEQ ID NO:20), ALGGHPLLGV (SEQ ID NO:21), ALIHHNTHL (SEQ ID NO:22), ALKDVEERV (SEQ ID NO:23), ALLAVGATK (SEQ ID NO:24), ALLEIASCL (SEQ ID NO:25), ALNFPGSQK (SEQ ID NO:26), ALPYWNFATG (SEQ ID NO:27), ALSVMGVYV (SEQ ID NO:28), ALWPWLLMAT (SEQ ID NO:29), ALWPWLLMA (SEQ ID NO:30), ALYVDSLFFL (SEQ ID NO:31), ANDPIFVVL (SEQ ID NO:32), APPAYEKLSAEQ (SEQ ID NO:33), APRGPHGGAASGL (SEQ ID NO:34), APRGVRMAV (SEQ ID NO:35), ARGPESRLL (SEQ ID NO:36), ASGPGGGAPR (SEQ ID NO:37), ATGFKQSSKALQRPVAS (SEQ ID NO:38), AVCPWTWLR (SEQ ID NO:39), AWISKPPGV (SEQ ID NO:40), AYVCGIQNSVSANRS (SEQ ID NO:41), CATWKVICKSCISQTPG (SEQ ID NO:42), CEFHACWPAFTVLGE (SEQ ID NO:43), CLSRRPWKRSWSAGSCPGMPHL (SEQ ID NO:44), CMTWNQMNL (SEQ ID NO:45), CQWGRLWQL (SEQ ID NO:46), CTACRWKKACQR (SEQ ID NO:47), DPARYEFLW (SEQ ID NO:48), DTGFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRV (SEQ ID NO:49), DVTFNIICKKCG (SEQ ID NO:50), EAAGIGILTV (SEQ ID NO:51), EADPTGHSY (SEQ ID NO:52), EAFIQPITR (SEQ ID NO:53), EDLTVKIGDFGLATEKSRWSGSHQFEQLS (SEQ ID NO:54), EEAAGIGILTVI (SEQ ID NO:55), EEKLIVVLF (SEQ ID NO:56), EFYLAMPFATPM (SEQ ID NO:57), EGDCAPEEK (SEQ ID NO:58), EIIYPNASLLIQN (SEQ ID NO:59), EKIQKAFDDIAKYFSK (SEQ ID NO:60), ELTLGEFLKL (SEQ ID NO:61), ELVRRILSR (SEQ ID NO:62), ESRLLEFYLAMPF (SEQ ID NO:63), ETVSEQSNV (SEQ ID NO:64), EVDPASNTY (SEQ ID NO:65), EVDPIGHLY (SEQ ID NO:66), EVDPIGHVY (SEQ ID NO:67), EVISCKLIKR (SEQ ID NO:68), EVYDGREHSA (SEQ ID NO:69), EYLQLVFGI (SEQ ID NO:70), EYLSLSDKI (SEQ ID NO:71), EYSKECLKEF (SEQ ID NO:72), EYVIKVSARVRF (SEQ ID NO:73), FIASNGVKLV (SEQ ID NO:74), FINDEIFVEL (SEQ ID NO:75), FLDEFMEGV (SEQ ID NO:76), FLEGNEVGKTY (SEQ ID NO:77), FLFLLFFWL (SEQ ID NO:78), FLIIWQNTM (SEQ ID NO:79), FLLHHAFVDSIFEQWLQRHRP (SEQ ID NO:80), FLLLKYRAREPVTKAE (SEQ ID NO:81), FLTPKKLQCV (SEQ ID NO:82), FLWGPRALV (SEQ ID NO:83), FMNKFIYEI (SEQ ID NO:84), FMVEDETVL (SEQ ID NO:85), FPSDSWCYF (SEQ ID NO:86), FRSGLDSYV (SEQ ID NO:87), FSWAMDLDPKGA (SEQ ID NO:88), GARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPL (SEQ ID NO:89), GDNQIMPKAGLLIIV (SEQ ID NO:90), GELIGILNAAKVPAD (SEQ ID NO:91), GFKQSSKAL (SEQ ID NO:92), GLASFKSFLK (SEQ ID NO:93), GLCTLVAML (SEQ ID NO:94), GLPPDVQRV (SEQ ID NO:95), GLYDGMEHLI (SEQ ID NO:96), GRAMLGTHTMEVTVY (SEQ ID NO:97), GVALQTMKQ (SEQ ID NO:98), GVGSPYVSRLLGICL (SEQ ID NO:99), AKFVAAWTLKAAA (SEQ ID NO:100), GVLLKEFTVSGNILTIRLT (SEQ ID NO:101), GVLVGVALI (SEQ ID NO:102), GVYDGREHTV (SEQ ID NO:103), HLFGYSWYK (SEQ ID NO:104), HLIRVEGNLRVE (SEQ ID NO:105), HLSTAFARV (SEQ ID NO:106), HLYQGCQVV (SEQ ID NO:107), HQQYFYKIPILVINK (SEQ ID NO:108), HTMEVTVYHR (SEQ ID NO:109), IALNFPGSQK (SEQ ID NO:110), IGRIAECILGMNPSR (SEQ ID NO:111), IISAVVGIL (SEQ ID NO:112), ILAKFLHWL (SEQ ID NO:113), ILDSSEEDK (SEQ ID NO:114), ILDTAGREEY (SEQ ID NO:115), ILHNGAYSL (SEQ ID NO:116), ILSRDAAPLPRPG (SEQ ID NO:117), ILTVILGVL (SEQ ID NO:118), IMDQVPFFS (SEQ ID NO:119), IMDQVPFSV (SEQ ID NO:120), IMIGVLVGV (SEQ ID NO:121), INKTSGPKRGKHAWTHRLRE (SEQ ID NO:122), ISGGPRISY (SEQ ID NO:123), ISPNSVFSQWRVVCDSLEDYD (SEQ ID NO:124), ISQAVHAAHAEINEAGR (SEQ ID NO:125), ITDQVPFSV (SEQ ID NO:126), ITKKVADLVGF (SEQ ID NO:127), KASEKIFYV (SEQ ID NO:128), KAVYNFATM (SEQ ID NO:129), KCDICTDEY (SEQ ID NO:130), KEFTVSGNILT (SEQ ID NO:131), KEFTVSGNILTI (SEQ ID NO:132), KELEGILLL (SEQ ID NO:133), KHAWTHRLRERKQLWYEEI (SEQ ID NO:134), KIFGSLAFL (SEQ ID NO:135), KIFSEVTLK (SEQ ID NO:136), KIFYVYMKRKYEAM (SEQ ID NO:137), KIFYVYMKRKYEAMT (SEQ ID NO:138), KILDAVVAQK (SEQ ID NO:139), KINKNPKYK (SEQ ID NO:140), KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT (SEQ ID NO:141), KKLLTQHFVQENYLEY (SEQ ID NO:142), KMDAEHPEL (SEQ ID NO:143), KNCEPWPNAPPAYEKLSAE (SEQ ID NO:144), KRYFKLSHLQMHSRKH (SEQ ID NO:145), KSSEKIVYVYMKLNYEVMTK (SEQ ID NO:146), KTWGQYWQV (SEQ ID NO:147), KVAELVHFL (SEQ ID NO:148), KVHPVIWSL (SEQ ID NO:149), KVLEYVIKV (SEQ ID NO:150), KYDCFLHPF (SEQ ID NO:151), KYVGIEREM (SEQ ID NO:152), LAALPHSCL (SEQ ID NO:153), LAAQERRVPR (SEQ ID NO:154), LAGIGILTV (SEQ ID NO:155), LAMPFATPM (SEQ ID NO:156), LGFKVTLPPFMRSKRAADFH (SEQ ID NO:157), LGPGRPYR (SEQ ID NO:158), LHHAFVDSIF (SEQ ID NO:159), LIYRRRLMK (SEQ ID NO:160), LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO:161), LKLSGVVRL (SEQ ID NO:162), LLANGRMPTVLQCVN (SEQ ID NO:163), LLDGTATLRL (SEQ ID NO:164), LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO:165), LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ (SEQ ID NO:166), LLFGLALIEV (SEQ ID NO:167), LLGATCMFV (SEQ ID NO:168), LLGPGRPYR (SEQ ID NO:169), LLGRNSFEV (SEQ ID NO:170), LLKYRAREPVTKAE (SEQ ID NO:171), LLLDDLLVSI (SEQ ID NO:172), LLLLTVLTV (SEQ ID NO:173), LLWSFQTSA (SEQ ID NO:174), LLYKLADLI (SEQ ID NO:175), LMLQNALTTM (SEQ ID NO:176), LPAWGLSPGEQEY (SEQ ID NO:177), LPHSSSHWL (SEQ ID NO:178), LPRWPPPQL (SEQ ID NO:179), LPSSADVEF (SEQ ID NO:180), LSHLQMHSRKH (SEQ ID NO:181), LSRLSNRLL (SEQ ID NO:182), LTDLQPYMRQFVAHL (SEQ ID NO:183), LWWVNNQSLPVSP (SEQ ID NO:184), LYATVIHDI (SEQ ID NO:185), LYSACFWWL (SEQ ID NO:186), LYVDSLFFL (SEQ ID NO:187), MEVDPIGHLY (SEQ ID NO:188), MIAVFLPIV (SEQ ID NO:189), MIFEKHGFRRTTPP (SEQ ID NO:190), MKLNYEVMTKLGFKVTLPPF (SEQ ID NO:191), MLAVISCAV (SEQ ID NO:192), MLLAVLYCL (SEQ ID NO:193), MLMAQEALAFL (SEQ ID NO:194), MPFATPMEA (SEQ ID NO:195), MPREDAHFIYGYPKKGHGHS (SEQ ID NO:196), MSLQRQFLR (SEQ ID NO:197), MVKISGGPR (SEQ ID NO:198), NLVPMVATV (SEQ ID NO:199), NPPSMVAAGSVVAAV (SEQ ID NO:200), NSIVKSITVSASG (SEQ ID NO:201), NSNHVASGAGEAAIETQSSSSEEIV (SEQ ID NO:202), NSQPVWLCL (SEQ ID NO:203), NTYASPRFK (SEQ ID NO:204), NYARTEDFF (SEQ ID NO:205), NYKRCFPVI (SEQ ID NO:206), NYNNFYRFL (SEQ ID NO:207), PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA (SEQ ID NO:208), PFATPMEAELARR (SEQ ID NO:209), PGSTAPPAHGVT (SEQ ID NO:210), PGTRVRAMAIYKQ (SEQ ID NO:211), PGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR (SEQ ID NO:212), PLLENVISK (SEQ ID NO:213), PLPPARNGGL (SEQ ID NO:214), PLQPEQLQV (SEQ ID NO:215), PLTSIISAV (SEQ ID NO:216), PRALAETSYVKVLEY (SEQ ID NO:217), PVTWRRAPA (SEQ ID NO:218), PYYFAAELPPRNLPEP (SEQ ID NO:219), QCSGNFMGF (SEQ ID NO:220), QCTEVRADTRPWSGP (SEQ ID NO:221), QGAMLAAQERRVPRAAEVPR (SEQ ID NO:222), QGQHFLQKV (SEQ ID NO:223), QLAVSVILRV (SEQ ID NO:224), QNILLSNAPLGPQFP (SEQ ID NO:225), QQITKTEV (SEQ ID NO:226), QRPYGYDQIM (SEQ ID NO:227), QYSWFVNGTF (SEQ ID NO:228), RAGLQVRKNK (SEQ ID NO:229), REPFTKAEMLGSVIR (SEQ ID NO:230), REPVTKAEML (SEQ ID NO:231), RIAECILGM (SEQ ID NO:232), RKVAELVHFLLLKYR (SEQ ID NO:233), RKVAELVHFLLLKYRA (SEQ ID NO:234), RLLEFYLAMPFA (SEQ ID NO:235), RLLQETELV (SEQ ID NO:236), RLMKQDFSV (SEQ ID NO:237), RLPRIFCSC (SEQ ID NO:238), RLSSCVPVA (SEQ ID NO:239), RLVDDFLLV (SEQ ID NO:240), RMPEAAPPV (SEQ ID NO:241), RMPTVLQCVNVSVVS (SEQ ID NO:242), RNGYRALMDKS (SEQ ID NO:243), RNGYRALMDKSLHVGTQCALTRR (SEQ ID NO:244), RPGLLGASVLGLDDI (SEQ ID NO:245), RPHVPESAF (SEQ ID NO:246), RQKRILVNL (SEQ ID NO:247), RSDSGQQARY (SEQ ID NO:248), RTKQLYPEW (SEQ ID NO:249), RVIKNSIRLTL (SEQ ID NO:250), RVRFFFPSL (SEQ ID NO:251), RYQLDPKFI (SEQ ID NO:252), SAFPTTINF (SEQ ID NO:253), SAWISKPPGV (SEQ ID NO:254), SAYGEPRKL (SEQ ID NO:255), SEIWRDIDF (SEQ ID NO:256), SELFRSGLDSY (SEQ ID NO:257), SESIKKKVL (SEQ ID NO:258), SESLKMIF (SEQ ID NO:259), SFSYTLLSL (SEQ ID NO:260), SHETVIIEL (SEQ ID NO:261), SIINFEKL (SEQ ID NO:262), SLADTNSLAV (SEQ ID NO:263), SLFEGIDIYT (SEQ ID NO:264), SLFPNSPKWTSK (SEQ ID NO:265), SLFRAVITK (SEQ ID NO:266), SLGWLFLLL (SEQ ID NO:267), SLLMWITQC (SEQ ID NO:268), SLLMWITQCFLPVF (SEQ ID NO:269), SLLQHLIGL (SEQ ID NO:270), SLPYWNFATG (SEQ ID NO:271), SLSKILDTV (SEQ ID NO:272), SLYKFSPFPL (SEQ ID NO:273), SLYSFPEPEA (SEQ ID NO:274), SNDGPTLI (SEQ ID NO:275), SPRWWPTCL (SEQ ID NO:276), SPSSNRIRNT (SEQ ID NO:277), SQKTYQGSY (SEQ ID NO:278), SRFGGAVVR (SEQ ID NO:279), SSALLSIFQSSPE (SEQ ID NO:280), SSDYVIPIGTY (SEQ ID NO:281), SSKALQRPV (SEQ ID NO:282), SSPGCQPPA (SEQ ID NO:283), STAPPVHNV (SEQ ID NO:284), SVASTITGV (SEQ ID NO:285), SVDYFFVWL (SEQ ID NO:286), SVSESDTIRSISIAS (SEQ ID NO:287), SVYDFFVWL (SEQ ID NO:288), SYLDSGIHF (SEQ ID NO:289), SYLQDSDPDSFQD (SEQ ID NO:290), TFPDLESEF (SEQ ID NO:291), TGRAMLGTHTMEVTVYH (SEQ ID NO:292), TLDSQVMSL (SEQ ID NO:293), TLDWLLQTPK (SEQ ID NO:294), TLEEITGYL (SEQ ID NO:295), TLMSAMTNL (SEQ ID NO:296), TLNDECWPA (SEQ ID NO:297), TLPGYPPHV (SEQ ID NO:298), TLYQDDTLTLQAAG (SEQ ID NO:299), TMKQICKKEIRRLHQY (SEQ ID NO:300), TMNGSKSPV (SEQ ID NO:301), TPRLPSSADVEF (SEQ ID NO:302), TSCILESLFRAVITK (SEQ ID NO:303), TSEKRPFMCAY (SEQ ID NO:304), TSYVKVLHHMVKISG (SEQ ID NO:305), TTEWVETTARELPIPEPE (SEQ ID NO:306), TVSGNILTIR (SEQ ID NO:307), TYACFVSNL (SEQ ID NO:308), TYLPTNASL (SEQ ID NO:309), TYYRPGVNLSLSC (SEQ ID NO:310), VAELVHFLL (SEQ ID NO:311), VFGIELMEVDPIGHL (SEQ ID NO:312), VGQDVSVLFRVTGALQ (SEQ ID NO:313), VIFSKASSSLQL (SEQ ID NO:314), VISNDVCAQV (SEQ ID NO:315), VLDGLDVLL (SEQ ID NO:316), VLFYLGQY (SEQ ID NO:317), VLHWDPETV (SEQ ID NO:318), VLLKEFTVSG (SEQ ID NO:319), VLLQAGSLHA (SEQ ID NO:320), VLPDVFIRCV (SEQ ID NO:321), VLPDVFIRC (SEQ ID NO:322), VLRENTSPK (SEQ ID NO:323), VLYRYGSFSV (SEQ ID NO:324), VPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR (SEQ ID NO:325), VPLDCVLYRY (SEQ ID NO:326), VRIGHLYIL (SEQ ID NO:327), VSSFFSYTL (SEQ ID NO:328), VVLGVVFGI (SEQ ID NO:329), VVPCEPPEV (SEQ ID NO:330), VWGAVGVG (SEQ ID NO:331), VYFFLPDHL (SEQ ID NO:332), WEKMKASEKIFYVYMKRK (SEQ ID NO:333), WLPFGFILI (SEQ ID NO:334), WNRQLYPEWTEAQRLD (SEQ ID NO:335), WQYFFPVIF (SEQ ID NO:336), WRRAPAPGA (SEQ ID NO:337), YACFVSNLATGRNNS (SEQ ID NO:338), YFSKKEWEKMKSSEKIVYVY (SEQ ID NO:339), YLEPGPVTA (SEQ ID NO:340), YLEPGPVTV (SEQ ID NO:341), YLNDHLEPWI (SEQ ID NO:342), YLQLVFGIEV (SEQ ID NO:343), YLSGANLNL (SEQ ID NO:344), YLVPQQGFFC (SEQ ID NO:345), YMDGTMSQV (SEQ ID NO:346) YMIMVKCWMI (SEQ ID NO:347), YRPRPRRY (SEQ ID NO:348), YSVYFNLPADTIYTN (SEQ ID NO:349), YSWRINGIPQQHTQV (SEQ ID NO:350), YVDFREYEYY (SEQ ID NO:351), YYWPRPRRY (SEQ ID NO:352) IMDQVPFFS (SEQ ID NO:353), SVDYFFVWL (SEQ ID NO:354), ALFDIESKV (SEQ ID NO:355), NLVPMVATV (SEQ ID NO:356) y GLCTLVAML (SEQ ID NO:357), SVASTITGV (SEQ ID NO:358), VMAGDIYSV (SEQ ID NO:359), ALADGVQKV (SEQ ID NO:360), LLGATCMFV (SEQ ID NO:361), SVFAGVVGV (SEQ ID NO:362), ALFDGDPHL (SEQ ID NO:363), YVDPVITSI (SEQ ID NO:364), STAPPVHNV (SEQ ID NO:365), LAALPHSCL (SEQ ID NO:366), SQDDIKGIQKLYGKRS (SEQ ID NO:367), FLPSDFFPSV (SEQ ID NO:368), FLPSDFFPSV (SEQ ID NO:369), TLGEFLKLDRERAKN (SEQ ID NO:370), TFSYVDPVITSISPKYGMET (SEQ ID NO:371), AMTQLLAGV (SEQ ID NO:372), KVFAGIPTV (SEQ ID NO:373), AIIDGVESV (SEQ ID NO:374), GLWHHQTEV (SEQ ID NO:375), NLDTLMTYV (SEQ ID NO:376), KIQEILTQV (SEQ ID NO:377), LTFGDWAV (SEQ ID NO:378), TMLARLASA (SEQ ID NO:379), IMDQVPFSV (SEQ ID NO:380), MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHD (SEQ ID NO:381), LPQLCTELQTTI (SEQ ID NO:382), HDIILECVYCKQQLLRREVY (SEQ ID NO:383), KQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN (SEQ ID NO:384), RDLCIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKI (SEQ ID NO:385), DKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTL (SEQ ID NO:386), HYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIR (SEQ ID NO:387), YGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCPEEK (SEQ ID NO:388), RCINCQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWT (SEQ ID NO:389), DKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL (SEQ ID NO:390), MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEE (SEQ ID NO:391), LYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVT (SEQ ID NO:392), GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR (SEQ ID NO:393), TLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP (SEQ ID NO:394), ALPFGFILV (SEQ ID NO:395), TLADFDPRV (SEQ ID NO:396), IMDQVPFSV (SEQ ID NO:397), SIMTYDFHGA (SEQ ID NO:398), AQYIKANSKFIGITEL (SEQ ID NO:399), FLYDDNQRV (SEQ ID NO:400), YLIELIDRV (SEQ ID NO:401), NLMEQPIKV (SEQ ID NO:402), FLAEDALNTV (SEQ ID NO:403), ALMEQQHYV (SEQ ID NO:404), ILDDIGHGV (SEQ ID NO:405), KLDVGNAEV (SEQ ID NO:406),TFEFTSFFY (SEQ ID NO:407), SWPDGAELPF (SEQ ID NO:408), GILGFVFTL (SEQ ID NO:409), ILRGSVAHK (SEQ ID NO:410) SVYDFFVWLKFFHRTCKCTGNFA (SEQ ID NO:411), DLAQMFFCFKELEGW (SEQ ID NO:412), AVGALEGPRNQDWLGVPRQL (SEQ ID NO:413) y RAHYNIVTF (SEQ ID NO:414).
Todavía más preferentemente J se selecciona del grupo que consiste en:
IMDQVPFSV, YLEPGPVTV, LAGIGILTV, YMDGTMSQV, SIINFEKL, ISQAVHAAHAEINEAGR, KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT, KAVYNFATM, MLMAQEALAFL, SLLMWITQC, GARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPL, VPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHR, ESRLLEFYLAMPF, SLLMWITQCFLPVF, ILHNGAYSL, GVGSPYVSRLLGICL, AKFVAAWTLKAAA, IMDQVPFFS, SVDYFFVWL, ALFDIESKV, NLVPMVATV y GLCTLVAML.
Alternativamente más preferentemente, J se selecciona del grupo que consiste en: SVASTITGV, VMAGDIYSV, ALADGVQKV, LLGATCMFV, SVFAGVVGV, ALFDGDPHL, YVDPVITSI, STAPPVHNV, LAALPHSCL, SQDDIKGIQKLYGKRS, FLPSDFFPSV, FLPSDFFPSV, TLGEFLKLDRERAKN, TFSYVDPVITSISPKYG MET, AMTQLLAGV, KVFAGIPTV, AIIDGVESV, GLWHHQTEV, NLDTLMTYV, KIQEILTQV, LTFGDVVAV, TMLARLASA, IMDQVPFSV, MHQKRTAMFQDPQERPRKLPQLCTELQTTIHD, LPQLCTELQTTI, HDIILECVYCKQQLLRREVY, KQQLLRREVYDFAFRDLCIVYRDGN, RDLCIVYRDGNPYAVCDKCLKFYSKI, DKCLKFYSKISEYRHYCYSLYGTTL, HYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLIR, YGTTLEQQYNKPLCDLLIRCINCQKPLCPEEK, RCINCQKPLCPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRWT, DKKQRFHNIRGRWTGRCMSCCRSSRTRRETQL, MHGDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCYEQLNDSSEEE, LYCYEQLNDSSEEEDEIDGPAGQAEPDRAHYNIVT, GQAEPDRAHYNIVTFCCKCDSTLRLCVQSTHVDIR, TLRLCVQSTHVDIRTLEDLLMGTLGIVCPICSQKP, ALPFGFILV, TLADFDPRV, IMDQVPFSV, SIMTYDFHGA, FLYDDNQRV, YLIELIDRV, NLMEQPIKV, FLAEDALNTV, ALMEQQHYV, ILDDIGHGV y KLDVGNAEV
Preferentemente, Z es uno cualquiera de Z1 a Z5. Todavía más preferentemente, Z es Z1. Todavía más preferentemente, Z es Z1 en donde R20 es metilo.
Preferentemente, la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros de la fórmula (I) o fórmula (II) es a-D-galacto.
Preferentemente, X es O.
Preferentemente, R23 es 2-sulfoetilo.
Preferentemente, R12 es acilo C26. Alternativamente preferentemente, R12 es acilo C11.
Preferentemente, R8 es alquilo C10 a C14, lo más preferentemente alquilo C13.
Preferentemente, n en la fórmula (I) o fórmula (II) es 1, la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros de la fórmula (I) o fórmula (II) es a-D-galacto, R6 es OH y R7 es OR12. Se prefiere además que n en la fórmula (I) o fórmula (II) sea 1, la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros de la fórmula (I) o fórmula (II) sea a-D-galacto, R6 sea OH, R7 sea OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 sea (2S, 3S, 4R).
Alternativamente preferentemente, n en la fórmula (I) o fórmula (II) es 0, X es CH2 , la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros de la fórmula (I) o fórmula (II) es a-D-galacto, R6 es OH y R7 es OR12. Se prefiere además que n en la fórmula (I) o fórmula 6 II) sea 0, la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros de la fórmula (I) o fórmula (II) sea a-D-galacto, R6 sea OH, R7 sea OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 sea ( 2s, 3S, 4R).
Preferentemente, en la fórmula (I) o fórmula (II) cuando X es O, R6 es OR12, R7 es H, R8 es alquilo C1-C15 y ........... es un doble enlace que une el carbono adyacente a R7 con el carbono adyacente a R8, entonces la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 es (2S, 3S).
Preferentemente, R1 es H.
También se prefiere que R2 sea OH. Más preferentemente, R1 es H y R2 es OH.
Preferentemente, R3 es OH.
Preferentemente, R4 es CH2OH. También se prefiere que R4 sea CH2OH y R1 sea H. Se prefiere además que R4 sea CH2OH, R2 sea Oh y R1 sea H. Más preferentemente, R4 es CH2OH, R1 es H y R2 y R3 son ambos OH.
Preferentemente, R6 es OH. Alternativamente se prefiere que R6 sea OR12.
Preferentemente, R7 es OR12. Más preferentemente R7 es OR12 y R6 es OH. Todavía más preferentemente, R7 es OR12, R6 es OH y X es O.
Alternativamente se prefiere que R7 sea OH. Más preferentemente R6 es OR12 y R7 es OH.
Alternativamente se prefiere que R6 y R7 sean ambos OR12.
Alternativamente se prefiere que R7 sea H y R6 sea OR12.
Preferentemente, R8 es alquilo C1-C15. Más preferentemente, R8 es alquilo C1-C15 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada que no contiene dobles enlaces, triples enlaces, átomos de oxígeno o grupos arilo. Preferentemente, R8 es alquilo C13. Todavía más preferentemente, R8 es alquilo C13 que tiene una cadena de carbono lineal que no contiene dobles enlaces, triples enlaces, átomos de oxígeno o grupos arilo. Alternativamente preferentemente, R8 es alquilo C5. Más preferentemente, R8 es alquilo C5 que tiene una cadena de carbono lineal que no contiene dobles enlaces, triples enlaces, átomos de oxígeno o grupos arilo. Todavía más preferentemente, R8 es alquilo C1-C15, R7 es OR12 y R6 es OH. Todavía más preferentemente, R8 es alquilo C1-C15, R7 es OR12, R6 es OH y X es O.
Preferentemente, R11 es alquilo, más preferentemente alquilo inferior.
Preferentemente, R12 es acilo que tiene una cadena de carbono lineal desde 6 hasta 30 átomos de carbono de longitud. Más preferentemente, R12 es acilo C26. Más preferentemente, R12 es acilo C26 que tiene una cadena de carbono lineal que no contiene dobles enlaces, triples enlaces, átomos de oxígeno, grupos arilo y que está sin sustituir. Más preferentemente, X es O y R12 es acilo que tiene una cadena de carbono lineal desde 6 hasta 30 átomos de carbono de longitud.
Alternativamente preferentemente, R12 es acilo que tiene una cadena de carbono lineal desde 6 hasta 30 átomos de carbono de longitud y que tiene un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido. Más preferentemente, R12 es acilo C11 que tiene un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido. Todavía más preferentemente, el grupo arilo opcionalmente sustituido es fenilo, opcionalmente sustituido con un halógeno, por ejemplo un flúor, por ejemplo el grupo arilo opcionalmente sustituido es p-fluorofenilo. Más preferentemente, X es O y R12 es acilo que tiene una cadena de carbono lineal desde 6 hasta 30 átomos de carbono de longitud y que tiene un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido.
Preferentemente, R26 es bencilo.
Preferentemente, cualquier halógeno en el compuesto de la fórmula (I) o (II) es flúor.
Preferentemente, el compuesto de la fórmula (I) es un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: (a)
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(b)
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(c)
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(d)
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(e)
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(f)
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(g)
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(h)
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(i)
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(j)
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(k)
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(i)
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(m)
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(n)
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(o)
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(p)
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(q)
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y
(r)
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Preferentemente, el compuesto de la fórmula (II) es un compuesto seleccionado del grupo que consiste en:
(aa)
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(bb)
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(cc)
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(dd)
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(ee)
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(ff)
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(gg)
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(hh)
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(ii)
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(jj)
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(kk)
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(ll)
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(mm)
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(nn)
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(oo)
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(pp)
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y
(qq)
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o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otro aspecto la divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto la divulgación proporciona una composición inmunogénica que comprende un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) y un diluyente farmacéuticamente aceptable y opcionalmente un antígeno.
En otro aspecto la divulgación proporciona una vacuna que comprende un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) y un diluyente farmacéuticamente aceptable y opcionalmente un antígeno.
En otro aspecto la divulgación proporciona un compuesto de la fórmula (I) o (II), y opcionalmente un antígeno, para su uso en la preparación de una vacuna.
El antígeno puede ser, o puede ser una combinación de, una bacteria tal como Bacillus Calmette-Guérin (BCG), un virus, una proteína o péptido. Los ejemplos de antígenos adecuados incluyen, pero no se limitan a, tumor 1 de Wilms (WT1) (Li, Oka et al. 2008), antígeno asociado a tumor MUC1 (Brossart, Heinrich et al. 1999), proteína 2 de membrana latente (LMP2) (Lu, Liang et al. 2006), VPH E6E7 (Davidson, Faulkner et al. 2004), NY-Es O-1 (Karbach, Gnjatic et al. 2010), proteína relacionada con tirosinasa (Trp)-2 (Noppen, Levy et al. 2000; Chang 2006), survivina (Schmitz, Diestelkoetter et al. 2000; Friedrichs, Siegel et al. 2006; Ciesielski, Kozbor et al. 2008), MART-1 (Bettinotti, Kim et al. 1998; Jager, Hohn et al. 2002), CEA691 (Huarte, Sarobe et al. 2002) y glucoproteína 100 (gp100) (Levy, Pitcovski et al. 2007), epítopes auxiliares (Alexander, Sidney et al 1994), topoisomerasa II a, precursor de la subunidad (38 de integrina, proteína de unión Abl C3, TACE/ADAM 17, placoglobina de unión, EDDR1 y BAP31 (Berinstein, Karkada et al 2012).
En otro aspecto adicional la divulgación proporciona un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) en combinación con al menos otro compuesto, por ejemplo un segundo compuesto de fármaco, por ejemplo un agente antibacteriano o un agente antineoplásico tal como Vemurafenib (PLX4032), Imatinib o Carfilzomib.
En otro aspecto más la divulgación proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) como un medicamento.
En otro aspecto la divulgación proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) para tratar o prevenir una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer. En otro aspecto la divulgación proporciona el uso de una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II), para tratar o prevenir una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer.
En otro aspecto la divulgación proporciona un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) para su uso en la fabricación de un medicamento.
En otro aspecto la divulgación proporciona una composición farmacéutica para tratar o prevenir una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer, que comprende un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II).
En otro aspecto la divulgación proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer.
En otro aspecto la divulgación proporciona un método de tratamiento o prevención de una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer que comprende administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) a un paciente que requiere tratamiento. En otro aspecto la divulgación proporciona un método de tratamiento o prevención de una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer que comprende la administración secuencial de cantidades farmacéuticamente eficaces de uno o más compuestos de la fórmula (I) o fórmula (II) a un paciente que requiere tratamiento. Los compuestos de la fórmula (I) o (II) se pueden formular como una vacuna, para administración secuencial separada. La administración secuencial puede incluir dos o más etapas de administración, preferentemente en donde los compuestos de la fórmula (I) o (II) se administran 1 a 90 días separados, preferentemente 14 a 28 días separados. La administración secuencial puede incluir administrar el mismo compuesto de la fórmula (I) o (II) dos o más veces. Alternativamente, la administración secuencial puede incluir administrar compuestos diferentes de la fórmula (I) o (II) dos o más veces. Alternativamente, la administración secuencial puede incluir administrar un compuesto de la fórmula (I) o (II) una o más veces, y administrar agalactosilceramida una o más veces.
En otro aspecto la divulgación proporciona el uso de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) en combinación con al menos otro compuesto, por ejemplo un segundo compuesto de fármaco, por ejemplo un agente antibacteriano o un agente antineoplásico tal como Vemurafenib (PLX4032), Imatinib o Carfilzomib, para tratar o prevenir una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer.
En otro aspecto la divulgación proporciona un método de tratamiento o prevención de una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer que comprende administrar a un paciente una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) en combinación con al menos otro compuesto, por ejemplo un segundo compuesto de fármaco, por ejemplo un agente antibacteriano o un agente antineoplásico tal como Vemurafenib (PLX4032), Imatinib o Carfilzomib. El compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) y el otro compuesto se pueden administrar por separado, simultáneamente o secuencialmente.
Las enfermedades o afecciones incluyen cáncer, por ejemplo melanoma, carcinoma de próstata, mama, pulmón, glioma, linfoma, colon, cabeza y cuello y nasofaríngeo (NPV); enfermedades infecciosas, por ejemplo VIH; infecciones bacterianas; enfermedades atópicas, por ejemplo asma; o enfermedades autoinmunitarias.
En otro aspecto la divulgación proporciona un método de tratamiento o prevención de asma que comprende administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II) a un paciente que requiere tratamiento.
En otro aspecto la divulgación proporciona una vacuna para prevenir asma que comprende administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II).
En otro aspecto la divulgación proporciona un método de modificación de una respuesta inmunitaria en un paciente, que comprende administrar un compuesto de la fórmula (I) o fórmula (II), y opcionalmente un antígeno, al paciente. Preferentemente el paciente es un ser humano.
Preferentemente el compuesto es un compuesto de la fórmula (I). El compuesto de la fórmula (I) se puede seleccionar del grupo que consiste en los compuestos (a) a (r), como se han definido anteriormente.
Alternativamente preferentemente, el compuesto es un compuesto de la fórmula (II). El compuesto de la fórmula (II) se puede seleccionar del grupo que consiste en los compuestos (aa) a (qq), como se han definido anteriormente. Los compuestos de la fórmula (I) y fórmula (II) se describen en el presente documento como los "compuestos de la divulgación". Un compuesto de la divulgación incluye un compuesto en cualquier forma, por ejemplo en forma libre o en forma de una sal o un solvato.
Se apreciará que cualquiera de los sub-alcances desvelados en el presente documento, por ejemplo con respecto a X, R , R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R19, R20, R21, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R , R31, R32, n, k, g, W, Alq1, Q1, Z, A, D, E, G y J, se pueden combinar con cualquiera de los otros sub-alcances desvelados en el presente documento para producir sub-alcances adicionales.
DESCRIPCIÓN DETALLADA
Definiciones
El término "cáncer" y términos similares se refieren a una enfermedad o afección en un paciente que normalmente se caracteriza por crecimiento celular anormal o no regulado. El cáncer y la patología del cáncer se pueden asociar, por ejemplo, con metástasis, interferencia con el funcionamiento normal de células vecinas, liberación de citocinas u otros productos secretores a niveles anormales, proliferación celular, formación o crecimiento tumoral, supresión o agravación de la respuesta inflamatoria o inmunológica, neoplasia, tumor premaligno, tumor maligno, invasión de tejidos u órganos circundantes o distantes, tales como ganglios linfáticos, etc. Los cánceres particulares se describen con detalle en el presente documento. Los ejemplos incluyen carcinoma de pulmón, glioma, linfoma, colon, cabeza y cuello y nasofaríngeo (NPV), melanoma, leucemia mielógena crónica (CML), mieloma, próstata, mama, glioblastoma, carcinoma de células renales, cánceres hepáticos.
"Infecciones" y términos similares se refieren a enfermedades o afecciones de un paciente que comprenden crecimiento interno y/o externo o establecimiento de microbios. Los microbios incluyen todas las formas vivas demasiado pequeñas para ser vistas a simple vista, que incluyen bacterias, virus, hongos y protozoos. Se incluyen bacterias aerobias y anaerobias, y bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, tales como cocos, bacilos, espiroquetas y micobacterias. Los trastornos infecciosos articulares se describen con detalle en el presente documento. Los ejemplos incluyen infecciones bacterianas o virales, por ejemplo VIH.
"Trastornos atópicos" y términos generales se refieren a una enfermedad o afección de un paciente que normalmente se caracteriza por una respuesta inmunitaria anormal o regulada por incremento, por ejemplo, una respuesta inmunitaria mediada por IgE, y/o respuesta inmunitaria de células Th2. Esto puede incluir reacciones de hipersensibilidad (por ejemplo, hipersensibilidad de tipo I), en particular, como se asocia a rinitis alérgica, conjuntivitis alérgica, dermatitis atópica y asma alérgica (por ejemplo, extrínseca). Normalmente, los trastornos atópicos están asociados con uno o más de rinorrea, estornudos, congestión nasal (vías respiratorias superiores), sibilancias, disnea (vías respiratorias inferiores), picor (por ejemplo, ojos, piel), edema de los cornetes nasales, dolor de senos con la palpación, hiperemia conjuntival y edema, liquenificación de la piel, estridor, hipotensión y anafilaxis. Los trastornos atópicos particulares se describen con detalle en el presente documento.
El término "paciente" incluye animales humanos y no humanos. Los animales no humanos incluyen, pero no se limitan a, aves y mamíferos, en particular, ratones, conejos, gatos, perros, cerdos, ovejas, cabras, vacas, caballos y zarigüeyas.
"Tratamiento" y términos similares se refieren a métodos y composiciones para prevenir, curar o mejorar una enfermedad, trastorno o afección médica, y/o reducir al menos un síntoma de dicha enfermedad o trastorno. En particular, esto incluye métodos y composiciones para prevenir o retrasar la aparición de una enfermedad, trastorno, o afección médica; para curar, corregir, reducir, ralentizar o mejorar los efectos físicos o de desarrollo de una enfermedad, trastorno o afección médica; y/o para prevenir, terminar, reducir o mejorar el dolor o sufrimiento provocado por la enfermedad, trastorno o afección médica.
El término "aminoácido" incluye tanto aminoácidos naturales como no naturales.
El término "antígeno" se refiere a una molécula que contiene uno o más epítopes (lineales, superpuestos, conformacionales, o una combinación de estos) que, tras la exposición a un sujeto, inducirá una respuesta inmunitaria que es específica para ese antígeno.
El término "conector auto-inmolativo" significa cualquier grupo químico que, por unión covalente, une un segundo y un tercer grupo químico, en donde el enlace covalente entre el conector auto-inmolativo y el segundo grupo químico es metabólicamente escindible in vivo y en donde, tras la escisión de este enlace covalente in vivo, el conector autoinmolativo se desprende del tercer grupo químico mediante transposiciones espontáneas del enlace químico. Al menos uno, preferentemente ambos, del segundo y tercer grupos químicos es un agente biológicamente activo, por ejemplo farmacéuticamente activo, o profármaco del mismo. Lo más preferentemente, cada uno del segundo y tercer grupos químicos es independientemente un estimulante inmunitario (por ejemplo, agonista de receptores del reconocimiento de patrones, agonista de TLR o agonista de linfocitos NKT), un antígeno (por ejemplo péptido, proteína o hidrato de carbono), o un grupo de direccionamiento (por ejemplo, anticuerpo o glucano). En algunos ejemplos, tras el desprendimiento del conector auto-inmolativo del segundo grupo químico, se fragmenta el conector auto-inmolativo y se desprende del tercer grupo químico. Los ejemplos de conectores auto-inmolativos se describen en Philip L. Carl, Prasun K. Chakravarty, John A. Katzenellenbogen, Journal of Medicinal Chemistry, 1981, Vol. 24, No. 5, pg 479; y Simplicio et al., Molecules, 2008, vol. 13, pg 519. El enlace covalente entre el conector autoinmolativo y el segundo grupo químico se puede escindir por, por ejemplo, una esterasa, una peptidasa, una fosfatasa, una fosfolipasa o una hidrolasa, o a modo de un proceso de oxidación-reducción o dependiente de pH.
El término "alquilo" significa cualquier radical de hidrocarburo saturado que tiene hasta 30 átomos de carbono e incluye cualquier grupo alquilo C1-C25, C1-C20, C1-C15, C1-C10 o C1-C6 , y pretende incluir grupos alquilo cíclicos (que incluyen bicíclicos condensados) (denominados algunas veces en el presente documento "cicloalquilo"), grupos alquilo de cadena lineal y cadena ramificada, y grupos alquilo de cadena lineal o ramificada sustituidos con grupos alquilo cíclicos. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen: grupo metilo, grupo etilo, grupo n-propilo, grupo iso-propilo, grupo ciclopropilo, grupo n-butilo, grupo iso-butilo, grupo sec-butilo, grupo f-butilo, grupo n-pentilo, grupo 1,1-dimetilpropilo, grupo 1,2-dimetilpropilo, grupo 2,2-dimetilpropilo, grupo 1 -etilpropilo, grupo 2-etilpropilo, grupo nhexilo, grupo ciclohexilo, grupo ciclooctilo y grupo 1 -metil-2-etilpropilo.
El término "alquileno" significa un dirradical correspondiente a un grupo alquilo. Los ejemplos de grupos alquileno incluyen grupo metileno, grupo ciclohexileno, grupo etileno. Un grupo alquileno puede incorporar uno o más grupos alquileno cíclico en la cadena de alquileno, por ejemplo, "alquileno" puede incluir un grupo ciclohexileno unido a un grupo metileno. Cualquier grupo alquileno se puede sustituir opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en hidroxilo, halógeno, por ejemplo flúor, alquilo, por ejemplo metilo, y arilo. Cualquier alquileno puede incluir opcionalmente uno o más restos arileno dentro de la cadena de alquileno, por ejemplo, se puede incluir un grupo fenileno dentro de una cadena de alquileno.
El término "alquilo inferior" significa cualquier radical de hidrocarburo saturado que tiene desde 1 hasta 6 átomos de carbono y pretende incluir tanto grupos alquilo de cadena lineal como ramificada.
Cualquier grupo alquilo se puede sustituir opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en SO3H (o una sal del mismo), hidroxi y halógeno, por ejemplo flúor.
El término "alquenilo" significa cualquier radical de hidrocarburo que tiene al menos un doble enlace, y que tiene hasta 30 átomos de carbono, e incluye cualquier grupo alquenilo C2-C25, C2-C20, C2-C15, C2-C10 o C2-C6 , y pretende incluir tanto grupos alquenilo de cadena lineal como ramificada. Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen: grupo etenilo, grupo n-propenilo, grupo iso-propenilo, grupo n-butenilo, grupo iso-butenilo, grupo sec-butenilo, grupo fbutenilo, grupo n-pentenilo, grupo 1,1 -dimetilpropenilo, grupo 1,2-dimetilpropenilo, grupo 2,2-dimetilpropenilo, grupo 1 -etilpropenilo, grupo 2-etilpropenilo, grupo n-hexenilo y grupo 1 -metil-2-etilpropenilo.
El término "alquenilo inferior" significa cualquier radical de hidrocarburo que tiene al menos un doble enlace, y que tiene desde 2 hasta 6 átomos de carbono, y pretende incluir tanto grupos alquenilo de cadena lineal como ramificada.
Cualquier grupo alquenilo se puede sustituir opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alcoxi, hidroxi y halógeno, por ejemplo flúor.
El término "arilo" significa un radical aromático que tiene 4 a 18 átomos de carbono e incluye radicales heteroaromáticos. Los ejemplos incluyen grupos monocíclicos, así como grupos condensados tales como grupos bicíclicos y grupos tricíclicos. Los ejemplos incluyen grupo fenilo, grupo indenilo, grupo 1 -naftilo, grupo 2-naftilo, grupo azulenilo, grupo heptalenilo, grupo bifenilo, grupo indacenilo, grupo acenaftilo, grupo fluorenilo, grupo fenalenilo, grupo fenantrenilo, grupo antracenilo, grupo ciclopentaciclooctenilo y grupo benzociclooctenilo, grupo piridilo, grupo pirrolilo, grupo piridazinilo, grupo pirimidinilo, grupo pirazinilo, grupo triazolilo (incluyendo un grupo 1-H-1,2,3-triazol-1 -ilo y uno 1-H-1,2,3-triazol-4-ilo), grupo tetrazolilo, grupo benzotriazolilo, grupo pirazolilo, grupo imidazolilo, grupo bencimidazolilo, grupo indolilo, grupo isoindolilo, grupo indolizinilo, grupo purinilo, grupo indazolilo, grupo furilo, grupo piranilo, grupo benzofurilo, grupo isobenzofurilo, grupo tienilo, grupo tiazolilo, grupo isotiazolilo, grupo benzotiazolilo, grupo oxazolilo y grupo isoxazolilo.
El término "arileno" significa un dirradical correspondientes a un grupo arilo. Los ejemplos incluyen grupo fenileno. El término "aralquilo" significa un grupo arilo que está unido a un resto alquileno, donde arilo y alquileno son como se han definido anteriormente. Los ejemplos incluyen grupo bencilo.
Cualquier grupo arilo o aralquilo se puede sustituir opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo, halógeno, ciano, dialquilamino, amida (tanto unida en N como unida en C: -NHC(O)R y -C(O)NHR), nitro, alcoxi, aciloxi y tioalquilo.
El término "alcoxi" significa un grupo OR, donde R es alquilo como se ha definido anteriormente. El término "alcoxi inferior" significa un grupo OR, donde R es "alquilo inferior" como se ha definido anteriormente.
El término "acilo" significa un grupo C(=O)R', donde R' es alquilo como se ha definido anteriormente.
El término "aciloxi" significa un grupo OR", donde R" es acilo como se ha definido anteriormente.
El término "glucosilo" significa un radical derivado de un monosacárido, disacárido u oligosacárido cíclico por retirada del grupo hidroxi del hemiacetal. Los ejemplos incluyen a-D-glucopiranosilo, a-D-galactopiranosilo, p-D-galactopiranosilo, a-D-2-desoxi-2-acetamidogalactopiranosilo.
El término "amida" incluye tanto amidas unidas en N (-NHC(O)R) como unidas en C (-C(O)NHR).
Está previsto que el término "sal farmacéuticamente aceptable" se aplique a sales no tóxicas derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos, que incluyen, por ejemplo, las siguientes sales de ácido: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2 -hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2 -naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, p-toluenosulfonato, salicilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato y undecanoato.
A efectos de la divulgación, cualquier referencia a los compuestos desvelados incluye todas las posibles formulaciones, configuraciones y conformaciones, por ejemplo, en forma libre (por ejemplo, como un ácido libre o base), en forma de sales o hidratos, en forma de isómeros (por ejemplo cis/trans isómeros), estereoisómeros tales como enantiómeros, diaestereómeros y epímeros, en forma de mezclas de enantiómeros o diaestereómeros, en forma de racematos o mezclas racémicas, o en forma de enantiómeros individuales o diaestereómeros. Las formas específicas de los compuestos se describen con detalle en el presente documento.
Como se usa en esta memoria descriptiva, las palabras "comprende", "que comprende", y palabras similares, no se deben interpretar en un sentido exclusivo o exhaustivo. En otras palabras, pretenden significar "que incluye, pero no se limitan a".
Cualquier referencia a los documentos del estado de la técnica en esta memoria descriptiva no se debe considerar como una admisión de que dicho estado de la técnica sea ampliamente conocido o forme parte del conocimiento general común en el campo.
Los compuestos de la divulgación
Los compuestos de la divulgación, particularmente los ejemplificados, son útiles como productos farmacéuticos, particularmente para el tratamiento o la prevención de enfermedades o afecciones relacionadas con cáncer, infección, trastornos atópicos o enfermedad autoinmunitaria. Los compuestos de la divulgación también son útiles como adyuvantes de vacuna o simples vacunas. Por ejemplo, se puede formular un compuesto de la divulgación en una vacuna junto con uno o más antígenos.
Los compuestos de la divulgación son útiles en tanto la forma de base libre como en la forma de sales y/o solvatos. Los átomos de carbono del resto acíclico de los compuestos de la fórmula (I) y fórmula (II) se enumeran como se muestra a continuación. Esta es la numeración usada en el presente documento para indicar estos átomos de carbono.
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Se ha encontrado que los compuestos de la fórmula (I) y (II) de la divulgación (por ejemplo, los compuestos mostrados como la fórmula (I') en el Esquema 1) son útiles como simples vacunas sintéticas o adyuvantes de vacuna. Sin desear quedar ligado a teoría, los solicitantes proponen que dichos compuestos son químicamente estables, pero se pueden escindir enzimáticamente o en sitios específicos in vivo. Los compuestos de la fórmula (I) constituyen conjugados antígeno-adyuvante (AAC) que pueden servir de precursores para las aminas (I") (por ejemplo, CN089) y componente que contiene antígeno. El componente de antígeno se puede entonces procesar adicionalmente por la célula presentadora de antígenos y, por último lugar, cargar y presentar por las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC). Las aminas (I") pueden experimentar a su vez migración de acilo ^N , que conduce a amidas (III) (por ejemplo, a-GalCer).
Ventajosamente, este enfoque proporciona la incorporación de una variedad de grupos "desencadenantes" para permitir el control de la tasa de liberación de amidas (III) (tales como a-GalCer) y antígenos de péptido.
Figure imgf000032_0002
En una realización adicional de la divulgación, se pueden modificar químicamente los compuestos (I") para producir una serie de compuestos de profármaco, que son compuestos de la fórmula (I) y (II) de la divulgación (por ejemplo, compuestos (a) a (r) y (aa) a (qq) como se muestra anteriormente y los mostrados en los Esquemas 2 y 4.
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Cuando se inyecta en ratones, CN152 o CN175 activa potentemente DCs en un modo dependiente de linfocitos NKT, como se define por el incremento de la expresión del CD86 marcador de activación sobre la superficie de DCs esplénicas (Figura 1). Sin desear quedar ligado a teoría, los solicitantes suponen que la actividad observada es debida a la reversión de CN152 o CN175 a a-GalCer por la acción de esterasas y/o proteasas seguido por migración de acilo O^N.
Ventajosamente, la vacunación de ratones con CN152 es inmunológicamente superior a la vacunación con los componentes individuales (a-GalCer y péptido). Por ejemplo, la vacunación con CN152 (que contiene el péptido SIINFEKL - un epítope de proteína de ovoalbúmina pollo que se une a la molécula de MHC H-2Kb) da como resultado una mayor población de linfocitos T específicos de péptido (definidos como células Va2+ CD45.1+ por citometría de flujo) en comparación con la vacunación con a-GalCer y péptido SIINFEKL mezclados, o a-GalCer y el mismo péptido con la sustitución del extremo N requerida para el enlace (CN159). El aumento de la actividad depende de un subconjunto de células presentadoras de antígenos esplénicas conocidas como DCs langerina+ CD8 a+ (Figura 2).
El aumento en los linfocitos T específicos de péptido para los compuestos conjugados de la divulgación se traduce en una vacuna mucho más fuerte como se demuestra por la capacidad superior de los linfocitos T inducidos para destruir células diana portadoras de péptido in vivo. Esta actividad depende de linfocitos NKT y CD1d, ya que la citotoxicidad no se observa en animales genéticamente deficientes en la expresión de CD1d (Figura 3).
Un compuesto conjugado de la divulgación que contiene características químicas de tanto CN152 (es decir, el enlace oxima) como CN175 (el grupo conector para-aminobencilo), CN174, también posee potente citotoxicidad en un ensayo in vivo (Figura 4).
Aunque menos potente que CN175, un compuesto conjugado de la divulgación que contiene tanto grupos funcionales oxima como aciloxicarbamato también induce una mayor población de respuesta de linfocitos T en comparación con los controles mezclados (Figura 5).
El agotamiento de linfocitos NKT por a-GalCer está bien documentado (Parekh, Wilson et al. 2005). Por tanto, se observa que la re-administración de a-GalCer tras vacunaciones previas que contenían a-GalCer libre da como resultado activación no medible de DCs. Sin embargo, es sorprendente que la administración de a-GalCer tras la vacunación con CN152, CN165 o CN166 no conduzca a cierta activación de DCs (Figuras 6 y 7).
Ventajosamente, esto indica que los compuestos de la divulgación, tales como CN152 o compuestos de profármaco tales como CN165 o CN166, no agotan completamente los linfocitos NKT, a diferencia de a-GalCer. Sigue quedando un conjunto de células respondedoras, que hacen posible incluir una "etapa de refuerzo" cuando se usan compuestos conjugados de la divulgación tales como CN152 en protocolos de vacunación. De hecho, la administración repetida de cualquiera de CN152 o CN175 induce la expansión adicional de linfocitos T (Figura 8 ) mientras que no se observa lo mismo para la administración repetida de a-GalCer con el péptido largo KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT ('1SQ-SNNFEKL").
La vacunación de ratones con CN152 o CN175 después de la sensibilización con a-GalCer péptido también conduce a una respuesta de linfocitos T (Figura 9). Esto es muy sorprendente, puesto que cabría esperar que los linfocitos NKT estuvieran agotados en este momento (14 días después de la sensibilización con a-GalCer) y la respuesta de linfocitos T observada para los conjugados (es decir, CN152 y CN175) fuera dependiente de CD1d (Figura 3).
El aumento de la respuesta de linfocitos T observado con los compuestos conjugados de la divulgación en comparación con la administración mixta también se traduce en un aumento del efecto antitumoral como terapia para el modelo murino para melanoma, B16-OVA (Figura 10).
El aumento de la citotoxicidad observada para los compuestos conjugados de la divulgación no se limita al epítope de CD8 SIINFEKL, como se demuestra por CN178, que contiene el epítope CD8 de la glucoproteína del virus de la linfocoriomengitis ("gp33"; KAVYNFATM) y puede inducir una potente respuesta citotóxica T en comparación con los controles mixtos, que incluye el péptido sustituido del extremo N (lev-FFRK-gp33, que se prepara como se describe en el Esquema 3 para CN 153) (Figura 11).
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También se puede observar una respuesta significativa de linfocitos T, en términos de citotoxicidad, para una vacuna que contiene una secuencia de péptidos modificada del antígeno asociado a tumor gp100 [gp1 0 0 25-33(27P)]. En particular, CN197 induce citotoxicidad superior en comparación con controles mixtos (Figura 12).
Los linfocitos T CD4+ específicos de alérgeno promueven el asma alérgica estimulando la producción de anticuerpos IgE y reclutando leucocitos en las vías respiratorias. A diferencia, los linfocitos T CD8 + específicos de alérgeno que se han diferenciado en linfocitos T citotóxicos (CTLs) pueden desempeñar una función protectora (Enomoto, Hyde et al. 2012). Sin embargo, estos enfoques requieren generalmente la transferencia adoptiva de linfocitos T CD8 + específicos de alérgeno, ya que las estrategias de vacunación comunes con alérgenos completos acarrearían el riesgo de agravar la enfermedad mediante la activación de linfocitos T CD4+ específicos de alérgeno que son fundamentales para el desarrollo de la respuesta alérgica (Wills-Karp, 1999). En modelos de inflamación de las vías respiratorias usando ovoalbúmina como alérgeno modelo, la vacunación de ratones sensibilizados con CN152 una semana antes de la exposición es suficiente para suprimir significativamente la infiltración de leucocitos en los pulmones, mientras que no lo es la vacunación con a-GalCer y péptido ("sin conjugar", Figura 13). El compuesto conjugado de la divulgación CN178, que contiene un antígeno irrelevante, tampoco previene significativamente la infiltración de leucocitos, aunque tiene cierto impacto sobre la infiltración de eosinófilos (Figura 13).
Por tanto, el compuesto CN188, que contiene un epítope de unión a HLA-A2 inmunodominante de citomegalovirus (NLVPMVATV) (es decir, conjugado de a-GalCer-NLV), es superior al antígeno de péptido mixto y a-GalCer en la expansión de linfocitos T CD8 humanos específicos de péptido de un donante sero-positivo para citomegalovirus en un ensayo in vitro (Figura 14).
Otros aspectos
Los compuestos de la divulgación se pueden administrar a un paciente mediante una variedad de vías, que incluyen por vía oral, por vía parenteral, por espray de inhalación, por vía tópica, por vía rectal, por vía nasal, por vía bucal, por vía intravenosa, por vía intramuscular, por vía intradérmica, por vía subcutánea o mediante un reservorio implantado, preferentemente por vía intravenosa. La cantidad de compuesto a administrar variará ampliamente según la naturaleza del paciente y la naturaleza y el grado del trastorno 2que se va a tratar. Normalmente, la dosificación para un ser humano adulto estará en el intervalo 50-15000 pg/m2. La dosificación requerida específica para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores, que incluyen la edad del paciente, peso corporal, salud general, sexo, etc.
Para administración por vía oral, los compuestos de la divulgación se pueden formular en preparaciones sólidas o líquidas, por ejemplo comprimidos, cápsulas, polvos, disoluciones, suspensiones y dispersiones. Dichas preparaciones se conocen bien en la técnica ya que son otras pautas de dosificación oral no enumeradas aquí. En la forma de comprimido, los compuestos pueden ser comprimidos con bases de comprimido convencionales tales como lactosa, sacarosa y almidón de maíz, junto con un aglutinante, un agente de disgregación y un lubricante. El aglutinante puede ser, por ejemplo, almidón de maíz o gelatina, el agente disgregante puede ser almidón de patata o ácido algínico, y el lubricante puede ser estearato de magnesio. Para administración por vía oral en forma de cápsulas, se pueden emplear diluyentes tales como lactosa y almidón de maíz secado. Se pueden añadir otros componentes tales como colorantes, edulcorantes o aromatizantes.
Cuando se requieren suspensiones acuosas para uso oral, el principio activo se puede combinar con vehículos tales como agua y etanol, y se pueden usar agentes emulsionantes, agentes de suspensión y/o tensioactivos. También se pueden añadir colorantes, edulcorantes o aromatizantes.
Los compuestos también se pueden administrar por inyección en un diluyente fisiológicamente aceptable tal como agua o solución salina. El diluyente puede comprender uno o varios de otros componentes tales como etanol, propilenglicol, un aceite o un tensioactivo farmacéuticamente aceptable. En una realización preferida, los compuestos se administran por inyección intravenosa, donde el diluyente comprende una disolución acuosa de sacarosa, L-histidina y un tensioactivo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo Tween 20.
Los compuestos también se pueden administrar por vía tópica. Los vehículos para administración tópica de los compuestos incluyen aceite mineral, vaselina líquida, vaselina filante, propilenglicol, polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Los compuestos pueden estar presentes como componentes en lociones o cremas, para administración tópica a la piel o las membranas mucosas. Dichas cremas pueden contener los compuestos activos suspensos o disueltos en uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Los vehículos adecuados incluyen aceite mineral, monoestearato de sorbitano, polisorbato 60, cera de éster cetílico, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua.
Los compuestos se pueden administrar adicionalmente por medio de sistemas de liberación sostenida. Por ejemplo, se pueden incorporar en un comprimido o cápsula que se disuelve lentamente.
Síntesis de los compuestos de la divulgación
El solicitante ha encontrado sorprendentemente que, en la síntesis de a-GalCer, la desprotección hidrogenolítica del compuesto 1 con Pd(OH)2 conduce al aislamiento de cantidades significativas de CN089 (Esquema 5). En particular, cuando 1 se somete a hidrogenólisis catalizada por Pd(OH)2 en 3:7 de CHCh/MeOH a 35 °C, además del producto esperado, se aísla un compuesto más polar con un rendimiento de 17 %. Se determina que este compuesto es la amina CN089, un isómero de a-GalCer en el que la cadena de acilo C26 ha experimentado una migración 1,3 N^O. La localización del grupo acilo en O4 de la cadena lateral se establece usando técnicas de RMN 2D. Aunque las migraciones intramoleculares N ^O de grupos acilo son conocidas en la bibliografía, normalmente se promueven en medios fuertemente ácidos (Baadsgaard y Treadwell 1955; Drefahl y Horhold 1961; Butler, O'Regan et al. 1978; Schneider, Hackler et al. 1985; Johansen, Korno et al. 1999). Sin desear quedar ligado a teoría, el solicitante supone que, en el presente caso, parecería que se produce una cierta cantidad de HCI a partir del disolvente CHCh en las condiciones hidrogenolíticas, que conduce a la migración observada.
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Las condiciones alternativas para la formación de CN089 (Esquema 6) son del siguiente modo: cuando se calienta a-GalCer en 1,4-dioxano con HCl ac., se efectúa la migración N ^O de la cadena de acilo C26 y se aísla CN089 con un rendimiento de 65-70 % después de la cromatografía.
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La estrategia de síntesis global para los compuestos de la divulgación incluye, por tanto, la isomerización de a-GalCer o sus congéneres (que son compuestos de la fórmula (III) como se muestra anteriormente en el Esquema 1) en condiciones ácidas dando compuestos con un grupo amino libre donde el ácido graso ha migrado a un átomo de O en la cadena de esfingosina (compuestos de la fórmula (I") como se muestra en el Esquema 1), seguido por la posterior funcionalización de la amina libre dando compuestos de la fórmula (I) o fórmula (II) de la divulgación. Ciertas dianas pueden no estar accesibles por este enfoque. Una estrategia alternativa, mostrada en el Esquema 8, implica la síntesis de productos interm edios protegidos en N 6, seguido por la acilación del (de los) grupo(s) hidroxilo de la cadena de esfingosina con R 12 dando los compuestos 7. Después de diversas transformaciones de grupos funcionales, el grupo protector de N se escinde dando compuestos de la fórmula (I"), que se convierten en compuestos de la fórmula (I) o fórmula (II) en el modo usual.
Los compuestos (I") se preparan según los siguientes procedimientos generales:
M étodo g enera l (1) para la s íntesis de com puestos de la fórm ula (I")
(en donde R 4 es Me, CH 2 OH, CH 2 OR 10 , CH 2 OR 11 , CO 2 H; R 6 es OH y R 7 es OR 12 , o R 6 es H y R 7 es OR 12 , o R 6 = OR 12 y R 7 = H.)
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Se sintetizan materiales de partida de la fórmula (III) (en donde R 4 es Me, CH 2 OH, CH 2 OR 10 , CH 2 OR 11 o CO 2 H; y R 6 es OH y R 7 es OH, o R 6 es H y R 7 es OH, o R 6 es Oh y R 7 es H) según los métodos de la bibliografía referenciados en el presente documento, y en algunos casos, combinando elementos de dos o más métodos de la bibliografía (para una reciente revisión de análogos de a-GalCer sintetizados, véase Banchet-Cadeddu et al. (Banchet-Cadeddu, Henon et al. 2011)). Por ejemplo, una etapa clave en todas las síntesis de a-GalCer es el acoplamiento de un donante adecuadamente protegido con un aceptor adecuadamente funcionalizado en una reacción de glucosilación. Se ha usado una amplia variedad de donantes en la síntesis de análogos de a-GalCer, que permite la variación de los grupos R1-R4 y la estereoquímica de estos grupos. Se ha informado de métodos para la síntesis de donantes donde R1 es glucosilo (Veerapen, Brigl et al. 2009 ) 4 R2 o R3 es O-glucosilo (Kawano, Cui et al. 1997), R2 o R3 es cualquiera de H o F (Raju, (Castillo et al. 2009), R4 es Me (Tashiro, Nakagawa et al. 2008), CH2OR10 (Uchimura, Shimizu et al. 1997), CH2OR11 (Tashiro, Nakagawa et al. 2008) o CO2H (Deng, Mattner et al. 2011). También se ha empleado una variedad igualmente grande de aceptores. Por ejemplo, se han sintetizado los 8 estereoisómeros de un aceptor de fitoesfingosina protegido en un enfoque que también permite la modificación del grupo R8 (Park, Lee et al. 2008; Baek, Seo et al. 2011). Además, también se han descrito derivados de 3-desoxi (Baek, Seo et al. 2011) y 4-desoxi-fitoesfingosina (Morita, Motoki et al. 1995; Howell, So et al. 2004; Du, Kulkarni et al. 2007). La combinación de estos aceptores con diversos donantes conduce a derivados de a-GalCer protegidos que se transforman, por los métodos de la bibliografía referenciados anteriormente, en los análogos de a-GalCer sin proteger, que comprenden los materiales de partida (III) (donde X es O) en el presente método general 1. Para los materiales de partida (III) en los que X es CH2 y R7 es OH, se han descrito síntesis (Chen, Schmieg et al. 2004; Lu, Song et al. 2006; Wipf y Pierce 2006; Pu y Franck 2008). Está disponible la variación del grupo R4 adaptando la química del grupo protector usada en los productos intermedios XI y XII en los procedimientos informados.
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Para materiales de partida (III) donde X es CH2 y R7 es H, estos se sintetizan según los métodos informados (Chen, Schmieg et al. 2004) usando esfingosina como material de partida en lugar de fitoesfingosina. Para materiales de partida (III) en los que X es S, se han descrito las síntesis (Dere y Zhu 2008; O'Reilly y Murphy 2011).
El material de partida (III) (~5 mM) se agita en un disolvente adecuado (por ejemplo 10:1 de 1,4-dioxano-agua) con ácido (por ejemplo, HCl 1 M, TFA) a una temperatura apropiada (60 - 100 °C) hasta que se determina que la reacción está ~75 % completa (CCF). Se retiran los disolventes y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice.
M étodo g enera l a lternativo (2) para la síntesis de com puestos de la fórm ula (I").
(en donde X es O; R1 es H; R2 y R3 son OH; R4 es Me, CH2OH, CH2OCOR11, CH2SH SR11, CH2SOR11, CH 1 CH2
2SO2 R11, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2 , CH2NHCONHR 1 CH2NHCON(R11)2 CH2NHSO2R11 CH2 PO3H2 , CH2OSO3H o CH2OPO3H; R6 es OR12 y R7 es OH, o R_6 es OH y R7 es OR12, o R6 y R7 son OR12, o R6 es H y R7 es OR12, o R6 es OR12 y R7 es H.)
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Los grupos hidroxilo libres del compuesto 2a-c (Sakurai y Kahne 2010) (Esquema 6 ) son o bien bencilados o bien pmetoxibencilados usando NaH como base en THF o DMF. Los productos 3a-c se convierten en aceptores 4a-c siguiendo los procedimientos informados para los compuestos de dibencilo correspondientes (Plettenburg, Bodmer-Narkevitch et al. 2002; Lee, Farrand et al. 2006). Se obtiene PMB éter 4d a partir de D-r/bo-fitoesfingosina como se informa para el Bn éter correspondiente (Trappeniers, Goormans et al. 2008; Baek, Seo et al. 2011). Se obtiene PMB éter 4e a partir de esfingosina por a) conversión del grupo amino en una azida con trifluorometanosulfonilazida; b) protección con TBDPS del grupo hidroxilo primario; c) protección con PMB del grupo hidroxilo secundario; d) desililación. La glucosilación se efectúa usando un donante de tricloroacetimidato de glucosilo apropiadamente protegido (1,5 equiv) y TMSOTf (0,1 equiv) como activador en THF seco/éter. Los grupos protectores apropiados incluyen bencilo y di-íerc-butilsilileno. El grupo azido de 5a-e se reduce en condiciones de Staudinger (PMe3 , THF luego NaOH ac.) seguido por protección de amina con Boc2O en CH2Cl2. Los grupos de PMB de 6a-e se escinden con o bien CAN o DDQ en CH2Cl2-agua y los grupos hidroxilo libres se esterifican con el ácido carboxílico apropiado (R12OH) en presencia de DCC, DMAP dando los ésteres 7a-e. La escisión del grupo di-íerc-butilsililo con TbAf da los productos intermedios 8a-e que se pueden tratar de diversas formas para proporcionar los compuestos de la fórmula (I") con una variedad de grupos R4 diferentes. Por ejemplo, la hidrogenólisis seguida por desprotección de N-Boc da los compuestos de la fórmula (I") donde R4 es CH2OH. Alternativamente, el grupo hidroxilo primario de 8 se puede esterificar, sulfatar o fosforilar, y posteriormente desproteger de un modo similar, dando los compuestos de la fórmula (I") donde R4 es CH2OCOR11, CH2OSO3H o CH2OPO3H2. La conversión del grupo hidroxilo primario de 8 en un grupo saliente (por ejemplo, yoduro, tosilato, compuestos 9a-e) seguido por desplazamiento nucleófilo da acceso a tioéteres y derivados relacionados, amidas, carbamatos, ureas, N-sulfonatos y fosfonatos que, después de la retirada de grupos protectores, conduce a compuestos adicionales de la fórmula (I").
Las aminas (I") se transforman adicionalmente en compuestos de la fórmula (II) (como se muestra a continuación en el método general 3) según los siguientes procedimientos generales:
M étodo g enera l (3) para la s íntesis de com puestos de la fórm ula (II)
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Para la preparación de compuestos de la fórmula (II) (Esquema 9), se agitan una mezcla de amina (I") (0,05 - 0,1 M), carbono activado o éster 10-18 (donde D(PG) puede ser D como se define en el presente documento para la fórmula (I) y (II) o una forma protegida de D, y donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de Z) (1,05 - 2 equiv) y NEt3 (0 - 10 equiv) en un disolvente adecuado (por ejemplo piridina, piridina-CHCh, CHCh-MeOH, DMF, DMSO) a temperatura ambiente hasta que la reacción esté esencialmente completa (CCF). Se puede añadir dietilamina para extinguir el reactivo en exceso. Después de la concentración de la mezcla, el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice y/o gel de sílice C18. Se retiran posteriormente cualquier grupo protector en D(PG) y/o Z(PG), por métodos convencionales (Isidro-Llobet, Alvarez et al. 2009). Los productos desprotegidos se purifican por cromatografía sobre gel de sílice y/o gel de sílice C18.
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Alternativamente (Esquema 9a), se hace reaccionar la amina (I") (0,05 - 0,1 M) con carbono activado o éster 39 (Dubowchik, Firestone et al. 2002) (donde PG' se define como un grupo protector de amina, por ejemplo, Fmoc, Boc, Alloc, preferentemente Fmoc) en condiciones similares a la reacción mostrada en el Esquema 9). Se retira PG' por métodos convencionales (Isidro-Llobet, Alvarez et al. 2009), por ejemplo piperidina/DMF para la retirada del grupo Fmoc, y la amina resultante se acopla con un reactivo que contiene el componente Z(PG), donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de Z. El reactivo puede ser a) un ácido carboxílico (20), en cuyo caso se emplean activadores del acoplamiento de péptidos convencionales (por ejemplo, HBTU, HATU); o b) un éster activado (por ejemplo, éster de NHS, éster de pNP, anhídrido carbónico mixto) que deriva de ácido carboxílico 20 por métodos convencionales; o c) un carbono activado 49 (preferentemente carbonato de pNP) que deriva del alcohol correspondiente. Se retira posteriormente cualquier grupo protector en D(PG) y/o Z(PG), por métodos convencionales (Isidro-Llobet, Alvarez et al. 2009). Los productos desprotegidos se purifican por cromatografía sobre gel de sílice y/o gel de sílice C18.
M étodo g enera l (4) para la s íntesis de reactivos 10
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Se sintetizan los ésteres 10 (donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de Z) mediante la reacción de alcoholes 4-hidroxibencílicos 19 con ácidos carboxílicos 20 o sus ésteres activados según o por adaptación de procedimientos de la bibliografía (Greenwald, Pendri et al. 1999). En algunos casos, puede ser ventajoso usar una forma protegida de 19, por ejemplo, 4-hidroxibencil THP éter o 4-hidroxibenzaldehído. Los productos de alcohol bencílico se convierten posteriormente en los carbonatos de pnitrofenilo 10 correspondientes por reacción con bis(carbonato de p-nitrofenilo) y base de Hünig en DMF (Dubowchik, Firestone et al. 2002). Los alcoholes bencílicos 19 están comercialmente disponibles o se obtienen por derivatización simple de alcoholes 4-hidroxibencílicos comercialmente disponibles. Los ácidos 20 están comercialmente disponibles, o están accesibles por transformaciones químicas convencionales de materiales de partida comunes (por ejemplo, ácidos alquenoicos terminales, ácidos hidroxialcanoicos, ácidos haloalcanoicos, ácidos aminoalcanoicos, ácidos alcanodioicos), o siguiendo los métodos de la bibliografía: (Iha, van Horn et al. 2010) para Z = Z8 ; (Hudlicky, Koszyk et al. 1980) para Z = Z12; (Saxon y Bertozzi 2000) para Z = Z14; (Tam, Soellner et al.
2007) para Z = Z15. También pueden estar accesibles los ácidos 20 que contienen un grupo ceto (Z = Z1) acoplando reactivos de alquenilo 2-metalados con ésteres haloalcanoicos (Hatakeyama, Nakagawa et al. 2009), seguido por ozonólisis del doble enlace. En ciertos casos, los grupos Z en 20 se pueden usar en la forma protegida Z(PG) (por ejemplo, ftalimidas para Z8 y Z9, tioéster o disulfuro para Z10, acetal o alqueno para Z16, Tbeoc-Thz para Z17 (Fang, Wang et al. 2012).
M étodo g enera l (5) para la s íntesis de reactivos 11
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Se preparan dipéptidos 11 (donde R15(PG) puede ser R15 como se define en el presente documento para la fórmula (I) o una forma protegida de R15 y donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de Z) haciendo reaccionar aminas 21 (Dubowchik, Firestone et al. 2002) con el ácido 20 apropiado usando el método de cloroformiato (Chaudhary, Girgis et al. 2003) dando productos de amida. Brevemente, se disuelven 20 (1,3 equiv) en disolvente (por ejemplo, en CH2Cl2 , THF, éter) y se tratan a 0 °C con NEt3 (1,4 equiv) seguido por cloroformiato de isobutilo (1,25 equiv) y, después de ~30 min, la disolución resultante se transfiere a una disolución de la amina 21 en CH2Cl2/MeOH. La reacción generalmente está completa en el plazo de 2 h a temperatura ambiente. Un método alternativo implica la reacción de 21 con el éster de NHS de 20 en un disolvente aprótico polar (por ejemplo, DMF, NMP) (Dubowchik, Firestone et al. 2002). También se pueden hacer reaccionar las aminas 21 con carbonos activados 49 (preferentemente carbonato de pNP) derivados del alcohol correspondiente, dando productos de carbamato. El grupo hidroxilo de los productos de amida o carbamato resultantes se convierte posteriormente en los carbonatos de p-nitrofenilo 11 correspondientes por reacción con bis(carbonato de p-nitrofenilo) y base de Hünig en DMF (Dubowchik, Firestone et al. 2002).
M étodo g enera l (6) para la s íntesis de reactivos de carbonato y carbam ato 12-15
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Se preparan carbamatos 12 y carbonatos 13 (donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de Z) haciendo reaccionar alcoholes 4-hidroxibencílicos 19 o alcoholes 4-aminobencílicos 22 con isocianatos o carbonatos de NHS activados como se ha informado (Greenwald, Pendri et al.
1999). En algunos casos, puede ser ventajoso usar una forma protegida de 19, por ejemplo, 4-hidroxibencil THP éter o 4-hidroxibenzaldehído. Los productos de alcohol bencílico se convierten posteriormente en los carbonatos de pnitrofenilo 12, 13 correspondientes por reacción con bis(carbonato de p-nitrofenilo) y base de Hünig en DMF (Dubowchik, Firestone et al.2002).
Se preparan carbamatos 14 y carbonatos 15 de una manera similar, a partir de fenoles 23 o anilinas 24, con manipulaciones convencionales para la conversión del grupo silil éter en un éster activo (véanse Métodos generales 8 y 9).
M étodo genera l (7) para la s íntesis de reactivos 16
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Se preparan ésteres 16 (donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de Z) haciendo reaccionar carbonatos de a-haloalquil-4-nitrofenilo 25, por ejemplo, carbonato de yodometil-4-nitrofenilo (Gangwar, Pauletti et al. 1997) o carbonato de a-cloroetil-4-nitrofenilo) (Alexander, Cargill et al. 1988), con un ácido carboxílico 20, ya sea en presencia de Ag2O o Cs2CO3 , o como la sal preformada, en un disolvente anhidro (por ejemplo, MeCN, tolueno, dioxano, DMF), a una temperatura entre 20 y 80 °C.
M étodo genera l (8) para la s íntesis de reactivos 17
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Se sintetizan ésteres 17 (donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de Z) a partir de fenoles 23 según o adaptando los procedimientos de la bibliografía (Carpino, Triolo et al. 1989; Amsberry y Borchardt 1991; Amsberry, Gerstenberger et al. 1991; Nicolaou, Yuan et al. 1996; Greenwald, Choe et al.2000).
M étodo genera l (9) para la s íntesis de reactivos 18
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Se sintetizan dipéptidos 18 (donde Z(PG) puede ser Z como se define en el presente documento para la fórmula (II) o una forma protegida de z ) a partir de ésteres de ácido o-nitrofenilacético 26 (Esquema 15), obtenidos de fuentes comerciales, o mediante procedimientos conocidos, o por homologación de Ardnt-Eistert de los ésteres de ácido 6 -nitrobenzoico correspondientes (Atwell, Sykes et al. 1994)). Los ésteres 26 se dialquilan geminalmente con un yoduro de alquilo y una base adecuada (por ejemplo, NaH, KOBu, n-BuLi), opcionalmente en presencia de 18-corona-6. El producto dialquilado se somete, mediante el cloruro de ácido, a homologación de Arndt-Eistert (CH2N2 ; luego calor o Ag (II)). El grupo carboxilo se reduce al nivel de oxidación de alcohol para prevenir la lactamización prematura y se protege el alcohol resultante como TBDMS éter. Después de la reducción del grupo nitro, la amina 24 resultante se acopla con dipéptidos 27 (Dubowchik, Firestone et al. 2002). La escisión de Fmoc va seguida por formación de amida o carbamato (véase el Método general 5). Finalmente, la desililación, oxidación y activación del ácido carboxílico resultante por métodos convencionales da los reactivos 18.
M étodo g enera l (10) para e l acoplam iento del antígeno a com puestos de la fórm ula (II) p o r ligación de tioleno donde Z es Z2, Z 10 o Z 17
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Z es Z2: Se disuelven el compuesto de la fórmula (II) y péptido-tiol 28a o péptido de cisteinilo del extremo N 28b en un disolvente apropiado. Los sistemas de disolvente adecuados pueden incluir cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, terc-butanol, agua, o mezclas de los mismos. Después de purgar con Ar, la mezcla se agita en presencia de un iniciador de radicales en condiciones fotoquímicas (Campos, Killops et al. 2008), o alternativamente, en condiciones térmicas (Dondoni 2008). Después de completarse la reacción, el producto se purifica por cromatografía en la fase sólida apropiada (por ejemplo, gel de sílice, sílice C4 y/o C18).15
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Z es Z10 o Z17: Se hace reaccionar el compuesto de la fórmula (II) con el péptido de alquenoílo del extremo N 29 en las condiciones descritas anteriormente.
Método general (11) para el acoplamiento del antígeno a compuestos de la fórmula (II) por cicloadición azidaalquino donde Z es Z4, Z7 o Z23
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Z es Z4: Se agitan el compuesto de la fórmula (II) y el péptido de alquinoílo del extremo N 30 con sulfato de cobre (II) (hasta 0,1 mM), un ligando de coordinación (por ejemplo TBTA, THPTA o Bim(Py)2 , preferentemente TBTA) (Presolski, Hong et al. 2010) y un agente reductor (por ejemplo, cobre metal, ácido ascórbico o TCEP, preferentemente cobre metal) en un sistema desoxigenado de disolventes acuosos-orgánicos (Rostovtsev, Green et al. 2002). Los disolventes orgánicos adecuados pueden incluir cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, terc-butanol, o mezclas de los mismos. Después de completarse la reacción, el producto en bruto se puede aislar del catalizador mediante precipitación en EDTA ac. (pH 7,7) y separación del sedimento por centrifugación. Alternativamente, se pueden emplear catalizadores de pentametilciclopentadienil-rutenio para proporcionar productos regioisoméricos (Zhang, Chen et al. 2005; Majireck y Weinreb 2006). El producto se purifica por cromatografía en la fase sólida apropiada (por ejemplo, gel de sílice, sílice C4 y/o C18).
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Z es Z7: Se hace reaccionar el compuesto de la fórmula (II) con péptido funcionalizado con azido 31 en las condiciones descritas anteriormente.
Z es Z23: Se mezcla el compuesto de la fórmula (II) con péptido funcionalizado con azido 31 en un disolvente apropiado a TA. Después de completarse la reacción, se retira el disolvente y se purifica el producto por cromatografía en la fase sólida apropiada (por ejemplo, gel de sílice, sílice C4 y/o C18).
Método general (12) para el acoplamiento del antígeno a compuestos de la fórmula (II) por adición del conjugado tiol-maleimida donde Z es Z3, Z10 o Z17
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Z es Z3: Se disuelven el compuesto de la fórmula (II) y péptido-tiol 28a o péptido de cisteinilo del extremo N 28b en un sistema de disolventes apropiado, opcionalmente en presencia de exceso de TCEP para garantizar que el tiol sigue en el estado reducido. Los disolventes adecuados pueden incluir cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, terc-butanol, agua, o mezclas de los mismos. La mezcla se agita a 4 °C hasta ta. Después de completarse la reacción, se purifica el producto por cromatografía en la fase sólida apropiada (por ejemplo, gel de sílice, sílice C4 y/o C18).
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Z es Z10 o Z17: Se hace reaccionar el compuesto de la fórmula (II) con péptido funcionalizado con maleimido 32 en las condiciones descritas anteriormente.
M étodo genera l (13) para e l acoplam iento de l antígeno a com puestos de la fórm ula (II) p o r form ación de oxim a o hidrazona donde Z es Z1, Z8 o Z9
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Z es Z1: Se agitan el compuesto de la fórmula (II) y cualquiera de péptido funcionalizado con aminooxi 33 o derivado de hidrazida 34 a temperatura ambiente en la cantidad mínima de un sistema de disolventes acuosos-orgánicos requerido para la disolución de ambos componentes. Los disolventes orgánicos adecuados pueden incluir cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, terc-butanol, o mezclas de los mismos. Se pueden incorporar acetato de anilinio (Dirksen, Hackeng et al. 2006) o trifluoroacetato de anilinio (hasta 200 mM) como tanto tampón (pH 3,5-5,0) como catalizador para la reacción. Después de completarse la reacción, el producto se purifica por cromatografía en la fase sólida apropiada (es decir, gel de sílice, sílice C4 y/o C18).
Figure imgf000045_0002
Z es Z8 o Z9: Se hacen reaccionar el compuesto de la fórmula (II) y péptido funcionalizado con aldehído 35, obtenido por tratamiento con peryodato del péptido precursor de serina del extremo N (Geoghegan y Stroh 1992), o péptido funcionalizado con ceto 36 en las condiciones descritas anteriormente.
Método general (14) para el acoplamiento del antígeno a compuestos de la fórmula (II) por intercambio de disulfuro donde Z es Z10 o Z11
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Z es Z11: Se dejan reaccionar el compuesto de la formula (II) (preparado haciendo reaccionar un tiol precursor con disulfuro de dipiridilo) y cualquiera del tiol de péptido 28a o péptido de cisteinilo del extremo N 28b a temperatura ambiente bajo una atmósfera inerte en un sistema de disolventes apropiado tamponado hasta pH 6,5-7,5 (Widdison, Wilhelm et al. 2006). Los disolventes adecuados pueden incluir cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, terc-butanol, agua o mezclas de los mismos.
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Z es Z10: Se hacen reaccionar el compuesto de la fórmula (II) y péptido funcionalizado con disulfuro 37 en las condiciones descritas anteriormente.
M étodo g enera l (15) para e l acoplam iento del antígeno a com puestos de la fórm ula (II) p o r cicloadición de D iels-A lder donde Z es Z12
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Z es Z12: Se dejan reaccionar el compuesto de la fórmula (II), el resto de dieno el cual está comercialmente disponible o se obtiene siguiendo los métodos de la bibliografía (Hudlicky, Koszyk et al. 1980; Choi, Ha et al. 1989), y péptido funcionalizado con maleimido 32 en un sistema de disolventes apropiado (por ejemplo, cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, terc-butanol, agua o mezclas de los mismos) a pH < 6,5 (de Araujo, Palomo et al. 2006).
Método general (16) para el acoplamiento del antígeno a compuestos de la fórmula (II) por ligación química nativa donde Z es Z13
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Se dejan reaccionar el compuesto de la fórmula (II) y péptido de cisteinilo del extremo N 28b en un sistema de disolventes apropiado (por ejemplo, cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, ferc-butanol, agua o mezclas de los mismos) siguiendo los protocolos de la bibliografía (Hackenberger y Schwarzer 2008).
M étodo g enera l (17) para e l acoplam iento del antígeno a com puestos de la fórm ula (II) p o r ligación de S taudinger donde Z es Z 14 o Z4
Figure imgf000047_0002
Z es Z14: Se dejan reaccionar el compuesto de la fórmula (II) y el péptido de azido 31 en un sistema de disolventes apropiado (por ejemplo, cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, ferc-butanol, agua o mezclas de los mismos) siguiendo los protocolos de la bibliografía (Saxon y Bertozzi 2000).
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Z es Z4: Se dejan reaccionar el compuesto de la fórmula (II) y el péptido 38 (preparado siguiendo los protocolos de la bibliografía) (Kiick, Saxon et al. 2002) descritos anteriormente.
M étodo g enera l (18) para e l acoplam iento del antígeno a com puestos de la fórm ula (II) p o r ligación de S taudinger sin traza donde Z es Z 15 o Z4
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Z es Z15: Se dejan reaccionar el compuesto de la fórmula (II), en donde el grupo tioéster Z15 se prepara siguiendo los procedimientos de la bibliografía (Soellner, Tam et al. 2006), y el péptido de azido 31 en un sistema de disolventes apropiado (por ejemplo, cloroformo, THF, metanol, DMF, Dm So , ferc-butanol, agua o mezclas de los mismos) siguiendo los protocolos de la bibliografía (Soellner, Tam et al. 2006; Tam, Soellner et al. 2007).
M étodo g enera l (19) para e l acoplam iento del antígeno a com puestos de la fórm ula (II) donde Z es Z 16 o Z 17
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Z es Z16: Se dejan reaccionar el compuesto de la fórmula (II), en donde el grupo aldehido Z16 se obtiene de la escisión ozonolítica de un alqueno precursor, o desprotección con ácido de un acetal precursor, y el péptido de cisteinilo del extremo N 28b en un sistema de disolventes apropiado (por ejemplo, cloroformo, THF, metanol, DMF, DMSO, terc-butanol, agua o mezclas de los mismos) a pH 5-7, siguiendo los protocolos de la bibliografía (Liu y Tam 1994; Liu, Rao et al. 1996).
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Z es Z17: Se dejan reaccionar el compuesto de la fórmula (II) y el péptido terminado con aldehído 35, descritos anteriormente.
M étodo g enera l (20) para la s íntesis del antígeno peptíd ico G-J
Se sintetizan péptidos funcionalizados según los métodos informados que utilizan síntesis de péptidos en fase sólida (SPPS) (Amblard, Fehrentz et al. 2006). En particular, se puede emplear el enfoque de protección de Fmoc (Atherton, Fox et al. 1978; Campos y Noble 1990) en una resina apropiadamente funcionalizada (por ejemplo, resina de cloruro de tritilo, resina de cloruro de 2-clorotritilo, resina de Wang, resina de Sasrin, resina de HMPB) para la síntesis de péptidos funcionalizados. Se construyen péptidos con amidas de extremo C en amida de Rink, Pal, MBHA o resinas Sieber. Sigue una breve descripción, usando resina de cloruro de tritilo: Se hincha resina de cloruro de tritilo (1 g) en DCM seco durante 30 min. Después de este tiempo se añaden Fmoc-AA-OH (1,131 g, 3,20 mmoles) y DIPEA (0,669 mL, 3,84 mmoles) con DCM seco bajo una atmósfera de argón y se agita la reacción durante 1 h. Se transfiere la resina a un recipiente de reacción sinterizado y se lava con DCM. Se prepara una disolución que contiene HBTU (7,59 g) y 4,18 mL de DIPEA (4,18 mL) en DMF seca (50 mL) y se usan 8 mL de esta disolución para cada acoplamiento. La secuencia de reacción para el acoplamiento es del siguiente modo; hinchar la resina en DCM durante 30 min, para cada iteración (i), lavar minuciosamente con DMF (ii), desproteger con 20 % de piperidina en DMF durante 5 min (x2) (iii), lavar con DMF (iv), hinchar con DCM (v), lavar con DMF (vi), añadir aminoácido y 8 mL de disolución de acoplamiento y agitar durante 30 min. Se repiten las etapas (i)-(vi) hasta el fin del péptido. Finalmente, mientras que el péptido está todavía unido a la resina, se acopla un ácido apropiadamente funcionalizado al extremo N libre dando los péptidos funcionalizados unidos a la resina completamente protegidos 28 - 38. Escisión de la resina: se tratan las perlas con 95:2,5:2,5 de TFA:TIS:agua durante 3 h, durante este tiempo las perlas viran a un color rojo brillante. Después de 3 h, se filtran las perlas y se lavan con TFA. Se evapora TFA y se precipita el péptido y se lava con éter para proporcionar el péptido en bruto. Se purifica el material por HPLC preparativa de fase inversa, eluyendo con 10-50 % de acetonitrilo agua con 0,1 % de TFA. El material se caracteriza por EM-CL.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
La Figura 1 muestra la expresión de CD86 en células dendríticas. Los datos muestran que la inyección de compuestos de la divulgación induce la activación de linfocitos iNKT y la posterior maduración de células dendríticas, como se indica por regulación por incremento de la expresión del marcador de activación CD8 6. Se inyectan grupos de ratones C57BL/6 (n = 3) por vía intravenosa con 0,571 nmoles de los compuestos indicados y se extraen los bazos 20 h después para el análisis de expresión de CD8 6 en células dendríticas CD11c+ por marcado por anticuerpo y citometría de flujo. Se presentan el índice de fluorescencia media (IFM) ± EEM.
La Figura 2 muestra la enumeración de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido SIINFEKL tras la administración intravenosa de compuestos de la divulgación como vacunas en ratones. Los compuestos se inyectan para dar la dosis molar equivalente del péptido SIINFEKL en cada caso. Para aumentar la sensibilidad del ensayo, todos los ratones donan inicialmente una cohorte de 10.000 linfocitos T específicos de SIINFEKL de un ratón transgénico que codifica un receptor de linfocitos T para este antígeno (ratones OT-1) por inyección intravenosa de las células un día antes de administrar las vacunas. Para discriminar los linfocitos T donados de los del hospedador, las células donadas presentan expresión congénica de la variante de CD45.1 de la molécula CD45. Es, por tanto, posible enumerar linfocitos T específicos de SIINFEKL en sangre por citometría de flujo usando anticuerpos para CD45.1 junto con anticuerpos para el receptor transgénico de linfocitos T (Va2). Los experimentos se realizan en ratones /anp-EGFPDTR, que expresan el receptor de la toxina diftérica humana del promotor de langerina. Esto permite el agotamiento selectivo de DCs langerina+ CD8 a+ por administración de toxina diftérica en algunos animales antes de administrar los compuestos (Farrand, Dickgreber, et al. 2009). Se inyectan animales de control con el diluyente solución salina tamponada con fosfato (PBS). Los datos muestran que la inyección del conjugado a-GalCer-SIINFEKL (CN152) induce una mayor población de linfocitos T específicos de SIINFEKL que la inyección de los componentes mixtos (a-GalCer/SIINFEKL), o derivados mixtos de estos componentes (a-GalCer/CN159 o CN146/CN159), y que esta respuesta depende de DCs langerina+ CD8 a+. Cada punto representa un animal diferente; se presentan la media por grupo de tratamiento ± EEM.
La Figura 3 muestra la capacidad citotóxica de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido SIINFEKL tras la administración intravenosa de compuestos de la divulgación como vacunas en ratones naturales, o ratones que son deficientes en la expresión de CD1d. Los compuestos se inyectan dando la dosis molar equivalente de péptido SIINFEKL, en cada caso de 0,571 nmoles. Se usa citometría de flujo para evaluar la destrucción de células diana comprendidas de esplenocitos singénicos cargados ex vivo con SIINFEKL 5 pM inyectado por vía intravenosa 7 días después de la vacunación. Para discriminar las dianas del tejido hospedador, se marcan las células inyectadas con el colorante fluorescente éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CFSE). También se inyecta una cohorte de esplenocitos singénicos (sin péptido) marcados con el colorante fluorescente CellTracker Orange para servir de controles. La destrucción se define como el porcentaje de dianas cargadas de péptido destruidas con respecto a las células de control. Cada grupo de tratamiento contuvo 5 animales. Se inyectan los animales de control con el diluyente solución salina tamponada con fosfato (PBS). Los datos muestran que la inyección de los conjugados (es decir, tanto CN152 como CN175) induce linfocitos T específicos de SIINFEKL con mayor capacidad citotóxica que la inyección de los componentes mixtos (a-GalCer/SIINFEKL), y que esta respuesta depende de linfocitos NKT, que están ausentes en animales deficientes en CD1d. Se muestra el porcentaje medio de destrucción por grupo ± EEM.
La Figura 4 muestra the citotóxico capacidad de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido SIINFEKL tras la administración intravenosa de compuestos de la divulgación como vacunas en ratones (n = 5 por grupo de tratamiento). Se evalúa la actividad citotóxica como en la Figura 3. Se muestra el porcentaje medio de destrucción por grupo ± EEM.
La Figura 5 muestra la enumeración de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido SIINFEKL tras la administración intravenosa de compuestos de la divulgación, o derivados de péptido con a-Galcer, como vacunas en ratones (n = 5 por grupo de tratamiento). Se mide la acumulación de linfocitos T específicos de antígeno en la sangre en respuesta a la vacunación 7 días después, como se describe para la Figura 2.
La Figura 6 muestra el impacto de la vacunación previa con los compuestos de la divulgación en respuestas a a-GalCer libre dos semanas después. Se usa citometría de flujo para evaluar la regulación por incremento de CD8 6 en células dendríticas esplénicas después de la inyección intravenosa de 200 ng de a-GalCer, que se usa como lectura de la actividad de linfocitos NKT. Se presentan el índice de fluorescencia media (IFM) ± EEM. En cada caso donde la vacuna original contenga a-GalCer libre en vez del conjugado de a-GalCer (CN152), los linfocitos NKT llegan a agotarse y no son capaces de responder a una dosis posterior de a-GalCer libre, permaneciendo los niveles de CD86 similares a los animales de control intactos inyectados con solución salina tamponada con fosfato (PBS). A diferencia, cuando el conjugado CN152 se usa para vacunar inicialmente animales, el agotamiento no es completo, se observa alguna regulación por incremento de CD86 en células dendríticas tras la exposición posterior a a-GalCer libre. Cada punto representa un animal diferente; se presenta la media por grupo de tratamiento (n = 3) ± EEM. ***p<0,001, ** p<0,01, * p<0,05.
La Figura 7 muestra el impacto de la administración de los compuestos de profármaco indicados de la divulgación (CN165 y CN166) sobre las respuestas a a-GalCer libre dos semanas después, evaluado como se describe para la Figura 6.
La Figura 8 muestra la enumeración de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido SIINFEKL tras la administración intravenosa de CN175 (0,571 nmoles), o péptido ISQ-SIINFEKL (0,571 nmoles) con a-Galcer (0,571 nmoles), como vacunas en ratones, evaluada en los tiempos indicados en sangre como se describe para la Figura 2. Los datos muestran que la sensibilización (día 0) con el conjugado de a-GalCer-SIINFEKL CN175 o ISQ-SIINFEKL con a-GalCer induce, en ambos casos, una población significativa de linfocitos T específicos de SIINFEKL, día 7, en comparación con el grupo de control. A diferencia, el refuerzo con CN175 (día 14) y no con ISQ-SIINFEKL/a-GalCer mixto induce una respuesta secundaria de linfocitos T en el día 21. Similarmente, una segunda etapa de refuerzo con CN175 (día 42) y no con ISQ-SIINFEKL/a-GalCer mixto induce una respuesta adicional de linfocitos T en el día 49.
La Figura 9 muestra la enumeración de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido SIINFEKL tras la sensibilización inicial por administración intravenosa de SIINFEKL con a-GalCer ("no conjugado") seguido por el refuerzo repetido con los compuestos indicados de la divulgación (CN175 o CN152), o con más vacuna sin conjugar. Los datos muestran que el refuerzo con SIINFEKL y a-GalCer en cualquiera del día 14 o 35 no induce una respuesta fácilmente medible de linfocitos T en la sangre. A diferencia, el refuerzo con cualquiera de CN152 o CN175 en el día 14 o 35 induce respuestas medibles de linfocitos T en el día 21 o 42.
La Figura 10 muestra el efecto antitumoral de la vacunación con vacuna conjugada CN175 (0,571 nmoles) en comparación con la vacunación con péptido SIINFEKL (0,571 nmoles) y a-GalCer (0,571 nmoles) juntos. Se monitoriza la progresión de tumores subcutáneos de B16.OVA en animales tratados cinco días después de la exposición del tumor a CN175 intravenosa o péptido SIINFEKL y a-GalCer o con PBS. Se muestran los tamaños medios tumorales por grupo (n = 5) ± EEM. Estos datos muestran que la vacunación con CN175 da como resultado actividad antitumoral superior en comparación con el control o grupos mixtos.
La Figura 11 muestra la capacidad citotóxica de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido KAVYNFATM tras la administración intravenosa de compuestos de la divulgación (es decir, CN178) o mezclas del antígeno de péptido y a-GalCer como vacunas en ratones. Se usa citometría de flujo para evaluar la destrucción de células diana comprendidas de esplenocitos singénicos cargados ex vivo con KAVYNFATM 5 pM inyectado por vía intravenosa 7 días después de la vacunación. Los datos muestran que la inyección del conjugado CN178 induce linfocitos T específicos de KAVYNFATM con elevada capacidad citotóxica en comparación con los grupos mixtos. La Figura 12 muestra la capacidad citotóxica de linfocitos T con especificidad por el antígeno de péptido PRNQDWLGV de gp100 tras la administración intravenosa de compuestos de la divulgación (es decir, CN197) o mezclas del antígeno de péptido y a-GalCer como vacunas en ratones. Todos los animales recibieron una cohorte de 10000 linfocitos T específicos de gp100 antes de la vacunación. Se usa citometría de flujo para evaluar la destrucción de células diana comprendidas de esplenocitos singénicos cargados ex vivo con PRNQDDWLGV 5 pM inyectado por vía intravenosa 7 días después de la vacunación. Los datos muestran que la inyección del conjugado CN197 induce linfocitos T específicos de PRNQDWLGV con elevada capacidad citotóxica en comparación con los grupos mixtos.
La Figura 13 muestra que las vacunas de profármaco específicas de alérgeno reducen la inflamación de las vías respiratorias alérgicas en animales sensibilizados. Se evalúa el tratamiento con los compuestos CN152 o CN178, a-GalCer mixto y OVA257, o CTL específicos de alérgeno activados in vitro, en ratones inicialmente sensibilizados por administración i.p con OVA en alumbre en el día 1 y 14, y luego se exponen a OVA por administración intranasal en el día 24. Los animales de control reciben PBS intranasal en lugar de exposición, y los grupos de control positivo reciben exposición, pero no tratamiento ("OVA"). Se administran vacunas de profármaco y a-GalCer mixto y péptido siete días antes de la exposición (día 17), mientras que los CTL específicos de OVA257 activados in vitro se administran un día antes de la exposición (día 23). Se evalúan los números totales de células en líquido BAL (izquierda) y los números de eosinófilos (derecha), tres días después de la exposición por citometría de flujo. Los datos muestran que la vacuna específica de antígeno CN152 y no CN178 o vacunas mixtas reducen el número total de células de infiltración en BAL. Los datos también muestran que CN152 es superior a tanto CN178 como grupos mixtos en suprimir la infiltración de eosinófilos.
La Figura 14 muestra el análisis de poblaciones de linfocitos T específicos de NLVPMVATV en células mononucleares de sangre periférica humanas después de una semana de cultivo con a-GalCer solo, péptido NLVPMVATV solo, péptido mixto y a-GalCer, o compuesto conjugado CN188 ("conjugado de a-GalCer-NLV"). La evaluación es por citometría de flujo con HLA-A2/ pentámeros NLVPMVATV fluorescentes junto con anticuerpos contra CD8 y CD3. Se muestra el porcentaje de linfocitos T CD8 + específicos de péptido de todos los linfocitos T (células CD3+).
ABREVIATURAS RMN Espectrometría de resonancia magnética nuclear
EM-AR Espectrometría de masas de alta resolución
ESI Ionización por electropulverización
Cbz Benciloxicarbonilo
TA Temperatura ambiente
THF Tetrahidrofurano
PBS Solución salina tamponada con fosfato
HPLC Cromatografía líquida de alta resolución
FCS Suero bovino fetal
EM Espectrometría de masas
CL-EM Cromatografía de líquidos-espectrometría de masas
TFA Ácido trifluoroacético
CCF Cromatografía en capa fina
DMF Dimetilformamida
DMSO Sulfóxido de dimetilo
DCM Diclorometano
NMP N-metil-2-pirrolidona
DDQ 2,3-Dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona
PMB p-Metoxibencilo
DMAP 4-Dimetilaminopiridina
TMS Trimetilsililo
DCC N,N'-diciclohexilcarbodiimida
DIPEA N,N-diisopropiletilamina
TBDPS terc-Butildifenilsililo
TBAF Fluoruro de tetra-n-butilamonio
THP Tetrahidropiranilo
EEDQ 2-Etoxi-1 -etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina
EDCI 1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida
CAN Nitrato de amonio cérico
Tbeoc-Thz /V-(2-(ferc-Butildisulfanil)etoxicarbonil)-L-tiazolidina-4-carboxílico ácido
HBTU Hexafluorofosfato de 2-(1 H-benzotriazol-1 -il)-1,1,3,3-tetrametiluronio.
TCEP Tris(2-carboxietil)fosfina)
TBTA Tris(benciltriazolilmetil)amina
THPTA Tris(3-hidroxipropiltriazolilmetil)amina
Bim(Py) 2 ((2-Bencimidazolil)metil)-bis-((2-piridil)metil)amina
EDTA Ácido etilendiaminatetraacético
IPA Alcohol isopropílico
EJEMPLOS
Los ejemplos descritos en el presente documento son para los fines de ilustrar realizaciones de la divulgación. Otras realizaciones, métodos y tipos de análisis están dentro de las capacidades de los expertos habituales en la técnica y no se necesitan describir con detalle en el presente documento. Se considera que otras realizaciones dentro del alcance de la materia son parte de la presente divulgación.
Se obtienen comercialmente los disolventes anhidros. Se llevan a cabo reacciones sensibles al aire bajo Ar. Se realiza cromatografía en capa fina (CCF) en hojas de aluminio recubiertas con sílice 60 F254. Se realiza cromatografía en columna ultrarrápida en gel de sílice Merck o SiliCycle (40 - 63 gm) o gel de sílice de fase inversa SiliCycle (C18) (40 - 63 gm). Se registran los espectros de RMN en un espectrómetro Bruker de 500 MHz. Los espectros de RMN 1H se referencian a tetrametilsilano a 0 ppm (patrón interno) o a pico de disolvente residual (CHCl3 7,26 ppm, CHD2OD 3,31 ppm, CHÜ2S(O)CÜ3 2,50 ppm). Los espectros de RMN 13C se referencian a tetrametilsilano a 0 ppm (patrón interno) o al pico de disolvente deuterado (CDCh 77,0 ppm, CD3OD 49,0 ppm, CD3S(O)CD339,52 ppm). Las mezclas de disolventes CDCl3-CD3OD siempre se referencian al pico de metanol. Se registran espectros de masas de ionización por electropulverización de alta resolución en un espectrómetro de masas Q-Tof Premier.
Ejemplo 1.1 - Síntesis de (2S,3S,4fi)-2-amino-1-0-a-D-galactopiranosil-4-0-hexacosanoil-octadecano-1,3,4-triol (CN089) mediante hidrogenólisis del compuesto 1
Figure imgf000052_0001
Se agita una mezcla de compuesto 1 (324 mg, 0,303 mmoles) y 20 % de Pd(OH)2/C (300 mg) en 3:7 de CHCh/MeOH (30 mL) bajo un balón de hidrógeno a 35 °C durante 21 h. Se filtra la mezcla a través de Celite, lavando con 3:1 de CHC^/MeOH (2 x 100 mL), y se concentra el filtrado. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en gel de sílice (1 :4 de i-PrOH/CHCl, luego 1 :4 de EtOH/CHCb) proporcionando el compuesto del título CN089 (45 mg, 17 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCI3/Cd3OD 2:1) 50,87-0,90 (m, 6 H), 1,22-1,36 (m, 68 H), 1,54-1,67 (m, 3 H), 1,79-1,84 (m, 1 H), 2,35-2,38 (m, 2 H), 3,27-3,30 (m, 1 H), 3,51-3,55 (m, 1 H), 3,70-3,72 (m, 1 H), 3,75 (dd, J = 3,3, 10,0 Hz, 1 H), 3,79-3,81 (m, 2 H), 3,83-3,86 (m, 2 H), 3,97 (d, J = 3,3 Hz, 1 H), 4,11 (dd, J = 2,9, 10,8 Hz, 1 H), 4,87 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 4,92 (dt, J = 2,8, 8 , 8 Hz, 1H); 13C RMN (126 MHz, CDCI3/CD3OD 2:1) 514,2, 23,0, 25,3, 25,4, 29,5, 29,65, 29,66, 29,68, 29,74, 29,9, 29,96, 29,99, 30,03, 31,5, 32,3, 34,8, 53,2, 62,2, 64,9, 69,3, 70,1, 70,3, 71,15, 71,18, 73,5, 99,9, 174,6; HRMS-ESI m/z calculado para C50H100NO9 [M+H]+ 858,7398, encontrado 858,7396.
Ejemplo 1.2 - Síntesis de (2S,3S,4fi)-2-amino-1-0-a-D-galactopiranosil-4-0-hexacosanoil-octadecano-1,3,4-triol (CN089) mediante isomerización de a-GalCer
Figure imgf000052_0002
Se calienta a-GalCer (195 mg, 0,227 mmoles) bajo Ar en 10:1:2 de 1,4-dioxano/agua/HCl 1 M (61 mL) a 85 °C durante 35 min, luego se enfría hasta 5 °C. Se purifica el precipitado recogido sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 10:90 a 20:80) proporcionando el compuesto del título CN089 como un sólido blanco (121 mg, 62 %).
Ejemplo_____ 2 - Síntesis de (2S,3S,4fi)-1-0-a-D-galactopiranosil-4-hexacosanoil-2-((4-oxopentanoiloxi)metoxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN146)
Figure imgf000052_0003
Ejemplo 2.1 - 4-Oxopentanoato de (4-nitrofenoxi)carboniloximetilo (41)
Se prepara la sal de plata de ácido levulínico añadiendo una disolución de AgNÜ3 (700 mg, 4,1 mmoles) en agua (10 mL) a la sal de sodio de ácido levulínico (4,3 mmoles en ~10 mL de agua, preparado por basificación del ácido levulínico con NaOH ac 1 M hasta pH 7-8). Después de 30 min, se aísla por filtración el precipitado resultante y se lava con agua fría seguido por Et2O. El producto se seca a vacío proporcionando la sal de plata como un sólido blanco (636 mg, 69 %). Se protege de la luz una mezcla de 4-nitrofenilcarbonato de yodometilo (40) (Gangwar, Pauletti et al. 1997) (105 mg, 0,325 mmoles, secado por destilación azeotrópica con tolueno), tamices moleculares de 4Á (~250 mg) y levulinato de plata (89 mg, 0,40 mmoles) en tolueno seco (1,5 mL) y se agita a 40 °C. Después de 4 h, la mezcla se diluye con Et2O, se filtra a través de Celite, y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en gel de sílice (30 % a 40 % de EtOAc/éter de petróleo) proporcionando el compuesto del título (41) (85 mg, 84 %) como un aceite incoloro. 1H RMN (500 MHz, cDch) 52,20 (s, 3H), 2,67-2,70 (m, 2H), 2,80-2,83 (m, 2H), 5,88 (s, 2H), 7,38-7,48 (m, 2H), 8,24-8,34 (m, 2H); 13C RMN (126 MHz, CDCla) 527,7, 29,7, 37,6, 82,5, 121,8, 125,4, 145,7, 151,5, 155,1, 171,2, 206,0; HRMS (ESI): m/z calculado para C^aNOeNa [M+Na]+ 334,0539, encontrado 334,0544.
Ejemplo 2.2 - (2S,3S,4fí)-1-0La-DLGalactop¡ranos¡l-4-hexacosano¡l-2-((4-oxopentanoiloxi)metoxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN146)
Figure imgf000053_0001
A una disolución de amina CN089 (22 mg, 0,026 mmoles) en ak-piridina (0,30 mL) se añade una disolución de 4-oxopentanoato de (4-nitrofenoxi)carboniloximetilo (41) (8,0 mg, 0,026 mmoles) en CDCh (0,15 mL). El progreso de la reacción se sigue en un tubo de RMN. Después de 3 h a ta, se añade NEt3 (2,5 mg, 0,025 mmoles) y se deja que la reacción continúe durante 2,25 h adicionales, tiempo después del cual se ha consumido >95 % de la amina CN089. Se concentran los volátiles a presión reducida y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en gel de sílice (1,5:40:60 a 1,5:45:55 MeOH/dioxano/CHCl3) proporcionando el compuesto del título CN146 (14,1 mg, 53 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) 50,88-0,90 (m, 6 H), 1,24-1,34 (m, 6 8 H), 1,60-1,72 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,31-2,42 (m, 2H), 2,62-2,64 (m, 2H), 2,80-2,83 (m, 2H), 3,71-3,83 (m, 8 H), 3,88 (a d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,95 (a d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,86 (d, J = 3,2 Hz, 1H) 4,94-4,98 (m, 1H), 5,68-5,76 (m, 2H); 13C RMN (126 MHz, 1:1 CDCls/CDsOD) 514,3, 23,2, 25,6, 25,9, 28,3, 29,3, 29,7, 29,79, 28,84, 29,86, 29,92, 30,0, 30,1, 30,15, 30,18, 30,21, 32,43, 32,44, 35,1, 38,1, 53,0, 62,3, 68,1, 69,7, 70,4, 70,8, 71,4, 72,1, 75,2, 80,7, 100,5, 155,6, 172,7, 175,0, 208,5; HRMS (ESI): m/z calculado para Cs/H^NOuNa [M+Na]+ 1052,7589, encontrado 1052,7578.
Ejemplo_____ 3 - Síntesis de ^S^S^RH-O-a-D-galactopiranosiM-hexacosanoil^-^-(azido)hexanoilmetoxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN215)
Ejemplo 3.1 - 6-Azidohexanoato de (4-nitrofenoxi)carboniloximetilo (50)
Figure imgf000053_0002
Se protege de la luz una mezcla de 4-nitrofenilcarbonato de yodometilo (40) (Gangwar, Pauletti et al. 1997) (340 mg, 1,05 mmoles), ácido 6 -azidohexanoico (210 mg, 1,34 mmoles), óxido de plata (100 mg, 0,43 mmoles) y tamices moleculares de 4Á (~500 mg) en acetonitrilo seco (5 mL) y se agita a ta. Después de 24 h, se filtra la mezcla a través de Celite, se lava con EtOAc (20 mL) y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en gel de sílice (EtOAc/tolueno 0:10 a 1:4) proporcionando el compuesto del título 50 como un aceite incoloro (150 mg, 40 %). 1H RMN (500 MHz, CDCl3) 51,42-1,48 (m, 2 H),1,60-1,66 (m, 2 H), 1,68-1,74 (m, 2 H), 2,45 (dd, J = 7,4, 7,4 Hz, 2 H), 3,28 (dd, 6 ,8 , 6 , 8 Hz, 2 H), 7,41 (dd, J = 2,2, 9,2 Hz, 2 H), 8,29 (dd, J = 2,2, 9,2 Hz, 2 H); 3C RMN (126 MHz, CDCl3) 523,9, 26,0, 28,4, 33,5, 51,6, 82,5, 121,6, 125,3, 145,6, 151,4, 155,0, 171,6; HRMS-ESI: m/z calculado para C u^s^O zN a [M+Na]+ 375,0917, encontrado 375,0917.
Ejemplo 3.2 - ^S^S^RH-O-a-D-GalactopiranosiM-hexacosanoil^-^-(azido)hexanoiloximetoxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN215)
Figure imgf000054_0001
A una disolución de amina CN089 (25 mg, 0,029 mmoles) en piridina (1 mL) se añade una disolución de 6 -azidohexanoato de (4-nitrofenoxi)carboniloximetilo (50) (20 mg, 0,056 mmoles) en CH2Cl2 (0,15 mL) seguido por Et3N (1 mL). Después de 0,5 h a ta, se diluye la mezcla con MeOH y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en gel de sílice (MeOH/CHCb 0:10 a 2 :8 ) proporcionando el compuesto del título CN215 como un sólido blanco (21 mg, 67 %). 1H RMN (500 MHz, 3:1 CDW CD 3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 1,23-1,35 (m, 68 H), 1,40-1,46 (m, 2 H), 1,60-1,71 (m, 8 H), 2,33-2,37 (m, 2 H), 2,40 (dd, J = 7,5, 7,5 Hz, 2 H), 3,29 (dd, J = 6,7, 6,7 Hz, 2 H), 3,72-3,80 (m, 8 H), 3,87 (dd, J = 2,3, 10,3 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 2,9 Hz, 1 H), 4,86 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,91-4,94 (m, 1 H), 5,73 (s, 2 H), 6,78 (d, J = 8,5 Hz, 1 H); 13C RMN (126 MHz, 3:1 CDCla/CDaOD) 513,6, 22,3, 23,7, 24,7, 25,0, 25,8, 28,2, 28,5, 28,9, 29,0, 29,1, 29,2, 29,3, 31,6, 33,4, 34,3, 50,9, 51,8, 61,5, 67,5, 68,7, 69,5, 70,0, 70,3, 71,3, 74,3, 79,8, 99,5, 154,5, 172,5, 174,2; HRMS-ESI: m/z calculado para C58H110N4O13Na[M+Na]+ 1093,7967, encontrado 1093,7972.
Ejemplo_____ 4 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-0La-D-galactop¡ranos¡l-4-hexacosano¡l-2-(6-(maleimido)hexanoilmetoxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN157)
Ejemplo 4.1 - 6-Maleimidohexanoato de (4-nitrofenoxi)carboniloximetilo (51)
Figure imgf000054_0002
A una mezcla de 4-nitrofenilcarbonato de yodometilo (40) (Gangwar, Pauletti et al. 1997) (70 mg, 0,22 mmoles), ácido 6 -maleimidohexanoico (40 mg, 0,19 mmoles) y tamices moleculares de 4Á (~500 mg) en acetonitrilo seco (5 mL) se añade Ag2O (25 mg, 0,11 mmoles) y se agita la reacción, protegida de la luz. Después de 3 h, se diluye la mezcla con EtOAc, se filtra a través de Celite y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en gel de sílice (EtOAc/éter de petróleo = 0:1 a 4:6) proporcionando el compuesto del título 51 como un aceite incoloro (25 mg, 33 %). 1H RMN (500 MHz, CDCla) 51,32-1,38 (m, 2 H), 1,59-1,65 (m, 2 H), 1,67-1,73 (m, 2 H), 2,42 (dd, J = 7,3, 7,3 Hz, 2 H), 3,52 (dd, J = 7,3, 7,3 Hz, 2 H), 5,88 (s, 2 H), 6,69 (s, 2 H), 7,40-7,44 (m, 2 H), 8,28-8,31 (m, 2 H); 13C RMN (126 MHz, CDCla) 523,9, 26,0, 28,1, 29,7, 33,6, 37,5, 82,5, 121,7, 122,4, 125,4, 134,1, 145,7, 151,5, 155,1, 107,8, 171,7; HRMS (ESI) m/z calculado para C18H18N2OgNa[M+Na]+: 429,0910, encontrado 429,0905.
Ejemplo 4.2 - (2S,3S,4fí)-1-0La-D-Galactopiranosil-4-hexacosanoil-2-(6-(maleimido)hexanoilmetoxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN157)
Figure imgf000054_0003
A una disolución de amina CN089 (21 mg, 0,024 mmoles) en piridina seca (3 mL) se añade una disolución de 6 -maleimidohexanoato de (4-nitrofenoxi)carboniloximetilo (51) (8,0 mg, 0,026 mmoles) en CH2Cl2 (3 mL) seguido por Et3N (2 mL). Después de 2 h, se concentran los volátiles a presión reducida y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en gel de sílice (MeOH/CHCb = 0 :1 a 2 :8 ) proporcionando el compuesto del título CN157 como un sólido blanco (14 mg, 23 %). 1H RMN (500 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 1,23-1,34 (m, 70 H), 1,58­ 1,70 (m, 8 H), 2,33-2,39 (m, 4 H), 3,52 (dd, J = 7,3, 7,3 Hz, 2 H), 3,71-3,79 (m, 8 H), 3,88 (dd, J = 2,5, 10,3 Hz, 1 H), 3,96 (d, J = 3,0 Hz, 1 H), 4,86 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,93 (m, 1 H), 5,70-5,75 (m, 1 H), 6,73 (s, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) 514,2, 22,9, 24,2, 25,3, 25,6, 26,3, 28,4, 29,1,29,4, 29,6, 29,7, 29,9, 32,2, 33,9, 34,8, 37,8, 52,4, 62,1, 68,1, 69,3, 70,1, 70,5, 70,9, 72,0, 74,9, 80,4, 100,1, 134,4, 155,1, 171,4, 173,1, 174,8; HRMS (ESI) m/z calculado para C62Hn2N2O15Na [M+Na]+: 1147,7960, encontrado 1147,7960.
Ejemplo 5 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-0La-D-galactopiranosil-4-0Lhexacosanoil-2-(W-Cbz-Phe-Lys-4-aminobenciloxicarbonilamino) octadecano-1,3,4-triol (CN166)
Ejemplo 5.1 - W-Cbz-Phe-Lys(Alloc)OH (42)
Figure imgf000055_0001
Se sintetiza el compuesto del título con un rendimiento de 59 %, siguiendo el procedimiento de la bibliografía (Dubowchik, Firestone et al. 2002). 1H RMN (500 MHz, d6 -DMSO) 5 1,26-1,45 (m, 4 H), 1,57-1,65 (m, 1 H), 1,69­ 1,77 (m, 1 H), 2,73 (dd, J = 11,1, 13,7 Hz, 1 H), 2,92-3,04 (m, 3 H), 4,16-4,20 (m, 1 H), 4,28-4,33 (m, 1 H), 4,44-4,49 (m, 2 H), 4,94 (s, 2 H), 5,15 (app dq, J = 1,4, 10,4 Hz, 1 H), 5,25 (app dq, J = 1,7, 17,2 Hz, 1 H), 5,85-5,93 (m, 1 H), 7,13-7,34 (10 H), 7,43 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 8,16-8,21 (m, 1 H); 13C RMN (126 MHz, d6 -DMSO) 522,6, 29,0, 30,8, 37,4, 39,8 (obscured by solvent), 52,0, 55,9, 64,1, 65,2, 116,8, 126,2, 127,4, 127,6, 128,0, 128,2, 129,2, 133,8, 137,0, 138,1, 155,8, 155,9, 171,6, 173,5; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C ^ 3N3NaO7 : 534,2216. Encontrado 534,2209
Ejemplo 5.2 - Alcohol W-Cbz-Phe-Lys(Alloc)-4-ammobencílico (43)
Figure imgf000055_0002
Se disuelve una mezcla de dipéptido 42 (243 mg, 0,475 mmoles), 1-hidroxibenzotriazol hidratado (74 mg, 0,54 mmoles) y alcohol 4-aminobencílico (118 mg, 0,958 mmoles) en THF (5 mL) bajo Ar y se enfría en un baño de hielo. Se añade W-metilmorfolina (54 pL, 0,49 mmoles), seguido por EDCI (97 mg, 0,51 mmoles) y se agita la mezcla sobre hielo durante 2 h, luego a ta durante 2 h. Se acidifica la mezcla a pH ~3 con ácido cítrico ac y se extrae con EtOAc, y se secan los extractos (salmuera, mgSO4) y se concentra a presión reducida. Se tritura el residuo sólido con dietil éter, y posteriormente se purifica dos veces por cromatografía en columna sobre gel de sílice (primera columna: MeOH/CH2Cl2 = 2:98 a 7:93; segunda columna EtOAc/éter de petróleo = 8:2 a 1:0) proporcionando el compuesto del título 43 (70 mg, 24 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCh 3 drops CD3OD) 51,28­ 1,36 (m, 2 H), 1,47-1,53 (m, 2 H), 1,61-1,70 (m, 1 H), 1,82-1,89 (m, 1 H), 2,96-3,00 (m, 1 H), 3,08-3,13 (m, 3 H), 4,41-4,45 (m, 2 H), 4,50-4,54 (m, 2 H), 4,62 (s, 2 H), 5,03-5,10 (m, 2 H), 5,17-5,19 (m, 1 H), 5,25-5,29 (m, 1 H), 5,84­ 5,92 (m, 1 H), 7,13-7,19 (m, 5 H), 7,27-7,35 (m, 7 H), 7,51 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, CDCh 3 drops CD3OD) 522,0, 28,8, 30,9, 37,9, 39,8, 53,2, 55,9, 64,1, 65,2, 6 6 ,8 , 117,2, 119,9, 126,7, 127,3, 127,5, 127,6, 127,9, 128,2, 128,3, 128,8, 132,5, 135,7, 136,7, 136,9, 155,9, 156,5, 169,4, 171,5; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C34H40N4NaO7 : 639,2795. Encontrado 639,2786.
Ejemplo 5.3 - 4-Nitrofenilcarbonato de W-Cbz-Phe-Lys(Alloc)-4-ammobencilo (44)
Figure imgf000055_0003
A una disolución enfriada en hielo de alcohol 43 (70 mg, 0,11 mmoles) en THF seco (5 mL) se añade piridina (46 pL, 0,57 mmoles), seguido por cloroformiato de 4-nitrofenilo (46 mg, 0,23 mmoles) y se agita la mezcla a ta durante la noche. Después de diluir con EtOAc, se lava la fase orgánica con 10 % de ácido cítrico ac. y agua, luego se seca (salmuera, mgSO4) y se concentra a presión reducida. Se tritura el residuo sólido con tolueno, y posteriormente se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2= 0:100 a 5:95) proporcionando el compuesto del título 44 (63 mg, 71 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CDCh 3 drops CD3OD) 51,27-1,37(m, 2 H), 1,48-1,54 (m, 2 H), 1,61-1,70 (m, 1 H), 1,83-1,91 (m, 1 H), 2,98-3,03 (dd, J = 7,2, 13,3 Hz, 1 H), 3,09­ 3,16 (m, 3 H), 4,41-4,46 (m, 2 H), 4,50-4,57 (m, 2 H), 5,07 (s, 2 H), 5,18 (d, J= 10,5 Hz, 1 H), 5,25-5,29 (m, 3 H), 5,84-5,92 (m, 1 H), 7,13-7,19 (m, 5 H), 7,27-7,42 (m, 9 H), 7,61 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 8,27 (d, J = 9,1 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, CDCh 3 drops CD3OD) 522,0, 28,8, 30,7, 37,8, 39,8, 53,2, 55,8, 65,2, 6 6 ,8 , 70,3, 117,2, 119,8, 121,4, 124,9, 126,7, 127,6, 127,9, 128,2, 128,35, 128,8, 129,2, 129,6, 132,5, 135,6, 135,7, 138,3, 145,1, 152,1, 155,2, 155,9, 156,5, 169,5, 171,5; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C41H43N5NaOn: 804,2857. Encontrado 804,2852.
Ejemplo 5.4 - (2S,3S,4fi)-1-0-a-D-Galactopiranosil-4-0-hexacosanoil-2-[W-Cbz-Phe-Lys(£-W-Alloc)-4-aminobenciloxicarbonilamino]octadecano-1,3,4-triol (45)
Figure imgf000056_0001
A una mezcla de CN089 (18 mg, 0,021 mmoles) en piridina (0,25 mL) bajo Ar se añade pNP-carbonato 44 (18 mg, 0,023 mmoles) suspendido en 17:1 de CHCh-MeOH (0,53 mL), seguido por Et3N (4,5 pL, 0,032 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 18 h, se añade una porción adicional de Et3N ( 6 pL, 0,043 mmoles). Después de 16 h adicionales, se concentran suavemente los volátiles en un evaporador rotatorio y se añade más piridina (0,25 mL), seguido por Et3N (4 pL, 0,029 mmoles). Después de 24 h, se inactiva el exceso de reactivo de carbonato con Et2NH (10 pL, 10 min) y se concentra la mezcla a sequedad. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCh = 0 :1 a 1 :9) proporcionando el compuesto del título 45 (16,4 mg, 52 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, 1:1 CDW CD 3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 1,15-1,42 (m, 70 H), 1,48-1,55 (m, 2 H), 1,60-1,74 (m, 5 H), 1,84-1,91 (m, 1 H), 2,31-2,41 (m, 2 H), 2,94 (dd, J = 8,4, 13,7 Hz, 1 H), 3,10-3,16 (m, 3 H), 3,68­ 3,81 (m, 8 H), 3,86 (dd, J = 2,2, 10,4 Hz, 1 H), 3,89 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 4,42-4,46 (m, 2 H), 4,50-4,51 (m, 2 H), 4,85 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,96-5,00 (m, 1 H), 5,03-5,10 (m, 4 H), 5,15-5,18 (m, 1 H), 5,25-5,29 (m, 1 H), 5,85-5,92 (m, 1 H), 7,14-7,23 (m, 5 H), 7,27-7,35 (m, 7 H), 7,56 (d, J = 8,1 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 1:1 CDW CD 3OD) 514,30, 14,32, 23,2, 25,6, 25,9, 29,2, 29,7, 29,88, 29,91, 29,93, 30,08, 30,13, 30,19, 30,22, 30,3, 32,2, 32,46, 32,48, 35,1, 38,6, 40,9, 52,9, 54,4, 57,1, 62,4, 65,9, 67,0, 67,4, 68,5, 69,7, 70,4, 70,9, 71,4, 72,3, 75,3, 100,6, 117,6, 120,8, 120,9, 127,4, 128,3, 128,6, 128,98, 129,02, 129,2, 129,3, 129,8, 133,3, 133,6, 137,0, 137,1, 138,4, 157,4, 158,0, 171,1, 173,0, 175,1; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para Cs5H137N5NaO17: 1522,9907. Encontrado 1522,9888.
Ejemplo 5.5 - (2S,3S,4fi)-1-0La-D-Galactopiranosil-4-0Lhexacosanoil-2-(WLCbz-Phe-Lys-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN166)
A una mezcla del compuesto 45 (16 mg, 0,011 mmoles) y complejo de borano-dimetilamina (3,4 mg, 0,058 mmoles) disuelto en 14:1 de CH2Cl2-MeOH (0,16 mL) recién desgasificado, se añade una cantidad catalítica de Pd(PPh3)4 (aproximadamente 0,5 mg, 0,4 pmoles) y se agita la mezcla a ta bajo Ar. Después de 80 min, se filtra la mezcla de reacción mediante un tapón corto de sílice (0,15 g), lavando con 50 % a 75 % de MeOH/CH2Cl2 (12 mL de cada uno). Se concentran los lavados y se purifican por cromatografía en columna en gel de sílice C18 (MeOH 0,5 % de TFA) proporcionando la sal de TFA del compuesto del título CN166 (15,4 mg, 94 %) como un vidrio incoloro. 1H RMN (500 MHz, 1:1 CDW CD 3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 1,15-1,51 (m, 70 H), 1,60-1,75 (m, 7 H), 1,87-1,94 (m, 1 H), 2,31-2,41 (m, 2 H), 2,86-2,90 (a m, 2 H), 2,95 (dd, J = 8,4, 13,8 Hz, 1 H), 3,13 (dd, J = 6,1, 13,8 Hz, 1 H), 3,67-3,80 (m, 8 H), 3,85-3,87 (m, 2 H), 4,38-4,41 (m, 1 H), 4,46-4,49 (m, 1 H), 4,85 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,97-5,13 (m, 5 H), 7,12-7,16 (m, 1 H), 7,19-7,20 (m, 4 H), 7,28-7,36 (m, 7 H), 7,56 (d, J = 8,0 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 1:1 CDCl3/CD3OD) 514,31, 14,33, 22,9, 23,23, 23,24, 25,7, 26,0, 27,4, 29,3, 29,8, 29,9, 30,0, 30,1,30,18, 30,24, 30,26, 30,28, 30,31, 31,9, 32,52, 32,54, 35,2, 38,5, 40,0, 53,1, 54,2, 57,3, 62,4, 67,0, 67,4, 6 8 ,6 , 69,7, 70,5, 70,9, 71,4, 72,4, 75,4, 100,8, 120,9, 127,5, 128,2, 128,7, 129,05, 129,10, 129,2, 129,8, 133,6, 137,0, 137,1, 138,4, 157,5, 157,6, 171,0, 173,3, 175,2; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para Cs1H133N5NaO15: 1438,9696. Encontrado 1438,9686.
Ejemplo 6 - Síntesis de (2S,3S,4fl)-1-0-a-D-galactopiranosil-4-0-hexacosanoil-2-(W-Cbz-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN165)
Ejemplo 6.1 - Alcohol W-Cbz-Val-Cit-4-aminobencílico (47)
Figure imgf000056_0002
Se agita una mezcla de ácido 46 (Dubowchik, Firestone et al. 2002) (200 mg, 0,49 mmoles) y alcohol 4-aminobencílico (64 mg, 0,52 mmoles) bajo Ar a 20 °C en 1:1 de MeOH/1,4-dioxano ( 6 mL) hasta que los materiales de partida estén casi disueltos (1 h). Se añade EEDQ (242 mg, 0,98 mmoles) y la agitación continúa a 20 °C durante 3,5 d. Se retiran los disolventes a presión reducida y se tritura el residuo sólido con EtOAc, y posteriormente se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 5:95 a 15:85) proporcionando el compuesto del título 47 (106 mg, 42 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, CD3OD) 50,95 (d J = 6 , 8 Hz, 3 H), 0,97 (d J = 6 , 8 Hz, 3 H), 1,52-1,63 (m, 2 H), 1,71-1,78 (m, 1 H), 1,87-1,94 (m, 1 H), 2,03-2,11 (m, 1 H), 3,07-3,12, (m, 1 H), 3,15-3,21, (m, 1 H), 3,98 (d, J = 6 , 8 Hz, 1 H), 4,50-4,52 (m, 1 H), 4,55 (s, 2 H), 5,10 (s, 2 H), 7,26-7,36 (m, 7 H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, CD3OD) 5 18,6, 19,7, 27,8, 30,5, 31,9, 40,3, 55,0, 62,3, 64,8, 67,8,121,3, 128,6, 128,8, 129,0, 129,5, 138,2, 138,6, 138,8, 158,8, 162,3, 172,2, 174,4; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C26H35N5NaO6: 536,2485. Encontrado 536,2495.
Ejemplo 6.2 - 4-Nitrofenilcarbonato de W-Cbz-Val-Cit-4-aminobencilo (48)
Figure imgf000057_0001
A una disolución de alcohol 47 (30 mg, 0,058 mmoles) y carbonato de bis(4-nitrofenilo) (23 mg, 0,076 mmoles) en DMF anhidra (0,5 mL) bajo Ar se añade piridina (0,10 mL), seguido por i-Pr2NEt (10,5 pL, 0,060 mmoles) y se agita la reacción a ta. Después de 16 h, se concentra la mezcla a presión reducida y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2= 0:1 a 1:9), proporcionando el compuesto del título 48 (30 mg, 76 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, 5:1 CDCl3/CD3OD) 50,94 (d J = 6,8 Hz, 3 H), 0,98 (d J = 6,8 Hz, 3 H), 1,51-1,57 (m, 2 H), 1,67-1,74 (m, 1 H), 1,88-1,95 (m, 1 H), 2,05-2,13 (m, 1 H), 3,09-3,14, (m, 1 H), 3,20­ 3,26, (m, 1 H), 4,01 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,56 (dd, J = 4,9, 9,0 Hz, 1 H), 5,08-5,14 (m, 2 H), 5,26 (s, 2 H), 7,29-7,41 (m, 9 H), 7,64 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 8,26-8,29 (m, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 5:1 CDCl3/CD3OD) 5 17,8, 19,2, 26,3, 29,3, 31,0, 39,1, 53,3, 60,8, 67,2, 70,8, 120,2, 121,9, 125,4, 127,9, 128,3, 128,6, 129,7, 130,1, 136,3, 138,8, 145,5, 152,6, 155,7, 157,1, 160,5, 170,6, 172,6; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C33H38N6NaO10: 701,2536. Encontrado 701,2540.
Ejemplo 6.3 - (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-Galactopiranosil-4-O-hexacosanoil-2-(W-Cbz-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN165)
Figure imgf000057_0002
A una mezcla de CN089 (17 mg, 0,020 mmoles) en piridina (0,25 mL) bajo Ar se añade pNP-carbonato 48 (15 mg, 0,022 mmoles) disuelto en piridina (0,25 mL), seguido por Et3N (4,5 pL, 0,032 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 18 h, se añade una porción adicional de Et3N (3 pL, 0,022 mmoles) y se agita la reacción durante 4 h adicionales antes de extinguir el exceso de reactivo de carbonato con Et2NH (10 pL, 10 min). Se concentra la mezcla a sequedad y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3 = 5:95 a 15:85), seguido por cromatografía en columna en gel de sílice C18 (MeOH), y finalmente por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm, 30 x 250 mm, 35 °C, 50 mL/min; Fase móvil A = 80:20:0,05 de MeOH/agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,05 de MeoH/TFA; 0-10 min: 0-100 % de B; 10-34 min: 100 % de B; 34-35 min: 100-0 % de B; 35-37 min: 100 % de A) proporcionando el compuesto del título CN165 (21 mg, 76 %) como un sólido blanco. 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,94 (d J = 6,7 Hz, 3 H), 0,98 (d J = 6,5 Hz, 3 H), 1,20-1,40 (m, 68 H), 1,50-1,76 (m, 7 H), 1,87-1,96 (m, 1 H), 2,05-2,13 (m, 1 H), 2,29-2,41 (m, 2 H), 3,07-3,15 (m, 1 H), 3,18­ 3,26 (m, 1 H), 3,63-3,81 (m, 8 H), 3,83-3,90 (m, 2 H), 4,01 (d, J = 6,4 Hz, 1 H), 4,52-4,57 (m, 1 H), 4,80-4,86 (m, 1 H), 4,91-5,00 (m, 2 H), 5,04-5,16 (m, 3 H), 7,27-7,37 (m, 7 H), 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 5 14,2, 18,1, 19,4, 23,0, 25,4, 25,6, 26,7, 29,2, 29,5, 29,65, 29,67, 29,7, 29,86, 29,88, 29,92, 29,95, 29,98, 30,02, 31,2, 32,2, 34,9, 39,3, 52,5, 53,7, 61,1, 62,3, 66,7, 67,4, 68,4, 69,3, 70,3, 70,6, 70,8, 72,3, 75,0, 100,3, 120,5, 128,2, 128,5, 128,8, 129,0, 133,0, 136,6, 138,1, 157,0, 157,6, 161,3, 171,0, 173,1, 174,9; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C77H132N6NaO16: 1419,9598. Encontrado 1419,9584.
Ejemplo 7 - Síntesis de -(2S,3S,4fí)-1-O-a-D-galactopiranosil-4-O-hexacosanoil-2 (W-(6-azidohexanoil)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN172)
Ejemplo 7.1 - Alcohol A/-(6-azidohexanoil)-Val-Cit-4-aminobencílico (53)
A una disolución con agitación de ácido 6 -azidohexanoico (85,0 mg, 0,541 mmoles) en CH2CI2 anhidro (3,3 mL) a 0 °C se añade Et3N (80 pL, 0,57 mmoles), seguido por cloroformiato de isobutilo ( 68 pL, 0,52 mmoles). Después de 30 min, se transfiere la disolución por cánula a un matraz separado que contiene amina 52 (Dubowchik, Firestone et al. 2002) (166 mg, 0,438 mmoles) disuelta en 3:1 de CH2Cl2-MeOH (4 mL) a 0 °C. Se aclara el matraz original con CH2Cl2 (2 x 0,5 mL), que se transfiere al segundo matraz. Después de 5 min, se calienta la mezcla de reacción hasta ta y se agita durante 2,5 h. Después de la concentración de los disolventes a presión reducida, se tritura sucesivamente el sólido resultante con tolueno, dietil éter, acetona y MeCN, y se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3 = 10:90 a 14:86) proporcionando el compuesto del título 53 como un sólido blanco (160 mg, 71 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCla/CDaOD) 50,95-97 (m, 6 H), 1,39-1,45 (m, 2 H), 1,53­ 1,77 (m, 7 H), 1,88-1,95 (m, 1 H), 2,04-2,11 (m, 1 H), 2,29 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,09-3,15, (m, 1 H), 3,20-3,26 (1 H), 3,28 (t, J = 6,9 Hz, 2 H), 4,19, (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,54 (dd, J = 5,0, 8 , 8 Hz, 1 H), 4,59 (s, 2 H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 518,4, 19,4, 25,6, 26,6, 28,9, 29,6, 31,0, 36,2, 39,4, 51,6, 53,6, 59,4, 64,3, 120,5, 127,9, 137,4, 137,7, 161,0, 170,9, 172,8, 174,9; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C24Ha8NeNaO5 : 541,2863; encontrado 541,2860.
Ejemplo 7.2 - 4-Nitrofenilcarbonato de W-(6-azidohexanoil)-Val-Cit-4-aminobencilo (54)
Figure imgf000058_0001
A una mezcla de alcohol 53 (158 mg, 0,305 mmoles) en DMF anhidra (2,5 mL) se añade W,W-diisopropiletilamina ( 66 pL, 0,38 mmoles) seguido por carbonato de bis(4-nitrofenilo) (116 mg, 0,381 mmoles) y se agita la reacción bajo Ar a ta durante 41 h. Después de concentrar la mezcla a alto vacío, se purifica el producto en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH3Cl2 = 6:94 a 11:89) proporcionando el compuesto del título 54 como un sólido blanquecino (206 mg, 99 %). 1H RMN (500 MHz, d6 -DMsO) 50,84 (d, J = 6 , 8 Hz, 3 H), 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1,27-1,33 (m, 2 H), 1,34-1,64 (m, 7 H), 1,68-1,75 (m, 1 H), 1,95-2,02 (m, 1 H), 2,13-2,24 (m, 2 H), 2,92-2,98 (m, 1 H), 3,00-3,06, (m, 1 H), 4,18-4,21 (m, 1 H), 4,38-4,42 (m, 1 H), 5,24 (s, 2 H), 5,39 (s, 2 H), 5,96 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,55-7,58 (m, 2 H), 7,65 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,81 (d, J = 8 , 6 Hz, 1 H), 8,06 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 8,29-8,33 (m, 2 H), 10,03 (s, 1 H); 13C RMN (126 MHz, d6 -DMSO) 5 18,2, 19,2, 24,8, 25,7, 26,8, 27,9, 29,2, 30,3, 34,9, 38,5, 50,5, 53,1, 57,6, 70,2, 119,0, 122,5, 125,3, 129,3, 129,4, 139,3, 145,1, 151,9, 155,3, 158,8, 170,7, 171,3, 172,3; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C31H41NgNaOg: 706,2925; encontrado 706,2913.
Ejemplo 7.3 - (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-Galactop¡ranos¡l-4-0-hexacosano¡l-2-(W-(6-az¡dohexano¡l)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN172)
Figure imgf000058_0002
A una mezcla de CN089 (61 mg, 0,071 mmoles) y pNP-carbonato 54 (54 mg, 0,079 mmoles) en piridina anhidra (1,0 mL) bajo Ar se añade Et3N (20 pL, 0,14 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 26 h, se concentra la mezcla a sequedad bajo alto vacío, y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 5:95 a 20:80), seguido por cromatografía en columna en gel de sílice C18 (MeOH/CH2Cl2 = 100:0 a 90:10), proporcionando el compuesto del título CN172 como un sólido blanco (57 mg, 57 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,95-0,98 (m, 6 H), 1,24-1,37 (m, 68 H), 1,39-1,45 (m, 2 H), 1,53-1,77 (m, 11 H), 1,87-1,94 (m, 1 H), 2,04-2,11 (m, 1 H), 2,27-2,32 (m, 2 H), 2,33-2,40 (m, 2 H), 3,09-3,14 (m, 1 H), 3,21-3,26 (m, 1 H), 3,28 (t, J = 6 , 8 Hz, 2 H), 3,66-3,80 (m, 8 H), 3,85-3,87 (m, 2 H), 4,18 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,53 (dd, J = 5,1, 8 , 6 Hz, 1 H), 4,85 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,93-4,99 (m, 2 H), 5,10-5,18 (m, 1 H), 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,57 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCh/CD3OD) 5 14,2, 18,5, 19,4, 23,0, 25,4, 25,6, 25,7, 26,7, 28,9, 29,2, 29,6, 29,69, 29,72, 29,8, 29,90, 29,92, 29,96, 30,02, 30,06, 31,0, 32,3, 35,0, 36,2, 39,4, 51,6, 52,6, 53,7, 59,4, 62,3, 6 6 ,8 , 68,4, 69,4, 70,2, 70,7, 71,0, 72,3, 75,1, 100,4, 120,5, 129,1, 133,0, 138,3, 157,1, 161,1, 171,0, 172,9, 175,0; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para CzsH^s^NaO^: 1424,9941; encontrado 1424,9940.
Ejemplo 8 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-0-a-D-galactop¡ranos¡l-4-0-hexacosanoil-2-(W-(5-hexeno¡l)-Val-C¡t-4-aminobenciloxicarbonilamino) octadecano-1,3,4-triol (CN173)
Ejemplo 8.1 - Alcohol W-(5-hexeno¡l)-Val-C¡t-4-am¡nobencílico (55)
Figure imgf000059_0001
A una disolución con agitación de ácido 5-hexenoico (39 mg, 0,34 mmoles) en CH2CI2 anhidro ( 2 mL) a 0 °C se añade Et3N (50 pL, 0,36 mmoles), seguido por cloroformiato de isobutilo (43 pL, 0,33 mmoles). Se calienta la disolución hasta ta y se agita durante 45 min, antes de transferir por cánula a una matraz separado que contiene amina 52 (Dubowchik, Firestone et al. 2002) (100 mg, 0,264 mmoles) en 5:1 de CH2Cl2-MeOH (2,4 mL) a 0 °C. Se aclara el matraz original con CH2Cl2 (0,5 mL), que se transfiere al segundo matraz. Después de 10 min, se calienta la mezcla de reacción hasta ta y se añade MeOH (1 mL) para ayudar en la agitación de la mezcla heterogénea.
Después de 85 min a ta, se inactiva la reacción con Et2NH (25 pL) y se concentran los disolventes a presión reducida. Se tritura sucesivamente el sólido resultante con dietil éter y CH2Cl2 proporcionando el compuesto del título
55 como un sólido blanquecino (114 mg, 91 %). 1H RMN (500 MHz, d6 -DMSO) 50,84 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,86 (d, J
= 6,7 Hz, 3 H), 1,32-1,48 (m, 2 H), 1,53-1,64 (m, 3 H), 1,67-1,74 (m, 1 H), 1,95-2,02 (m, 3 H), 2,13-2,24 (m, 2 H),
2,91-2,97 (m, 1 H), 2,99-3,05, (m, 1 H), 4,19 (dd, J = 6,9, 8,5 Hz, 1 H), 4,36-4,41 (m, 1 H), 4,42 (d, J = 5,7 Hz, 2 H),
4,93-4,96 (m, 1 H), 4,98-5,02 (m, 1 H), 5,07 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 5,38 (s, 2 H), 5,74-5,84 (m, 1 H), 5,97 (t, J = 5,6 Hz,
1 H) 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,81 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,03 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 9,88 (s, H); f3C RMN (126 MHz, d6 -DMSO) 5 18,2, 19,2, 24,6, 26,7, 29,3, 30,3, 32,7, 34,6, 38,6, 53,0, 57,7, 62,6, 115,0, 118,9, 126,9, 137,4, 137,5, 138,3, 158,8, 170,3, 171,2, 172,3; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C24H3/N5NaO5 :
498,2692; encontrado 498,2699.
Ejemplo 8.2 - 4-Nitrofenilcarbonato de W-(5-hexenoil)-Val-C¡t-4-aminobenc¡l (56)
Figure imgf000059_0002
A una disolución de alcohol 55 (110 mg, 0,231 mmoles) en DMF anhidra (2,0 mL) se añade carbonato de bis(4-nitrofenilo) (95 mg, 0,31 mmoles) seguido por W,W-diisopropiletilamina (48 pL, 0,28 mmoles) y se agita la reacción bajo Ar a ta durante 7 h. Se precipita el producto mediante la adición de dietil éter y se filtra, lavando con dietil éter y CH2Cl2. Se purifica el producto en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 2:98 a
6:94) proporcionando el compuesto del título 56 como un sólido blanco (80 mg, 54 %). 1H RMN (500 MHz, d6 -DMSO) 50,84 (d, J = 6 , 8 Hz, 3 H), 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 1,33-1,49 (m, 2 H), 1,55-1,64 (m, 3 H), 1,68-1,75 (m, 1
H), 1,95-2,02 (m, 3 H), 2,13-2,24 (m, 2 H), 2,91-2,98 (m, 1 H), 3,00-3,06, (m, 1 H), 4,19 (dd, J = 6 ,8 , 8 , 6 Hz, 1 H),
4,37-4,41 (m, 1 H), 4,93-4,96 (m, 1 H), 4,98-5,02 (m, 1 H), 5,24 (s, 2 H), 5,39 (s, 2 H), 5,75-5,84 (m, 1 H), 5,97 (t, J =
5,6 Hz, 1 H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,55-7,58 (m, 2 H), 7,65 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,81 (d, J = 8 , 6 Hz, 1 H), 8,07 (d,
J = 7,5 Hz, 1 H), 8,29-8,32 (m, 2 H), 10,04 (s, 1 H); 13C RMN (126 MHz, d6 -DMSO) 5 18,2, 19,2, 24,6, 26,8, 29,2,
30,3, 32,7, 34,6, 38,5, 53,1, 57,7, 70,2, 114,9, 119,0, 122,6, 125,4, 129,3, 129,4, 138,3, 139,3, 145,2, 151,9, 155,3, 158,9, 170,7, 171,3, 172,3; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C31H40NsNaOg: 663,2754; encontrado 663,2764.
Ejemplo 8,3 - (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-Galactop¡ranos¡l-4-0Lhexacosano¡l-2-(W-(5-hexeno¡l)-Val-C¡t-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN173)
Figure imgf000059_0003
A una disolución de CN089 (17 mg, 0,020 mmoles) en piridina anhidra (0,3 mL) se añade pNP-carbonato 56 (16 mg,
0,025 mmoles), Et3N (9 pL, 0,065 mmoles) y MeOH (0,1 mL), y se agita la mezcla a ta. Después de 22 h, se añade
Et3N adicional (5 pL, 0,036 mmoles) y la agitación continua durante 19 h adicionales. Se inactiva la reacción con
Et2NH (15 pL) y se concentra la mezcla a sequedad bajo alto vacío. La purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 10:90 a 14:86), seguido por trituración del producto con agua, proporciona el compuesto del título CN173 como un sólido blanco (14,8 mg, 55 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 50,87­
0,90 (m, 6 H), 0,95-0,97 (m, 6 H), 1,22-1,39 (m, 68 H), 1,52-1,76 (m, 9 H), 1,87-1,95 (m, 1 H), 2,03-2,12 (m, 3 H), 2,27-2,30 (m, 2 H), 2,33-2,38 (m, 2 H), 3,08-3,13 (m, 1 H), 3,21-3,26 (m, 1 H), 3,66-3,80 (m, 8 H), 3,85-3,87 (m, 2 H), 4,19 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,54 (dd, J = 5,0, 8,7 Hz, 1 H), 4,85 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,93-5,05 (m, 4 H), 5,10-5,19 (m, 1 H), 5,75-5,83 (m, 1 H), 7,32 (d, J = 8,1 Hz, 2 H), 7,56 (d, J = 8,1 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCI3/CD3OD) 5 14,2, 18,5, 19,4, 23,0, 25,2, 25,4, 25,7, 26,6, 29,2, 29,5, 29,66, 29,69, 29,8, 29,87, 29,89, 29,93, 29,96, 29,99, 30,04, 31,0, 32,3, 33,5, 34,9, 35,7, 39,3, 52,6, 53,7, 59,4, 62,3, 66,8, 68,4, 69,4, 70,2, 70,6, 70,9, 72,3, 75,0, 100,4, 115,5, 120,4, 129,1, 132,9, 138,1, 138,2, 157,0, 161,1, 171,0, 172,8, 174,9, 175,0; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C75H134N6NaO15: 1381,9829; encontrado 1381,9825.
Ejemplo 9 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-0La-D-galactopiranosil-4-0Lhexacosanoil-2-(W-levulinoil-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN171)
Ejemplo 9.1 - Alcohol W-levulinoil-Val-Cit-4-aminobencílico (57)
Figure imgf000060_0001
A una disolución con agitación de ácido levulínico (40 mg, 0,34 mmoles) en CH2CI2 anhidro (2,0 mL) a 0 °C se añade Et3N (50 gL, 0,36 mmoles), seguido por cloroformiato de isobutilo (43 gL, 0,33 mmoles). Se calienta la disolución hasta ta y se agita durante 45 min, antes de transferir por cánula a un matraz separado que contiene amina 52 (Dubowchik, Firestone et al. 2002) (100 mg, 0,264 mmoles) en 5:1 de CH2Cl2-MeOH (2,4 mL) a 0 °C. Se aclara el matraz original con CH2Cl2 (0,5 mL), que se transfiere al segundo matraz. Después de 5 min, se calienta la mezcla de reacción hasta ta y se añade MeOH (1 mL) para ayudar en la agitación de la mezcla heterogénea. Después de 85 min a ta, la reacción se inactiva con Et2NH (25 gL) y se concentran los disolventes a presión reducida. El sólido resultante se tritura sucesivamente con dietil éter y CH2Cl2, y se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 10:90 a 18:82) proporcionando el compuesto del título 57 como un sólido blanco (94 mg, 75 %). 1H RMN (500 MHz, d6-DMSO) 50,84 (d, J = 6,8 Hz, 3 H), 0,86 (d, J = 6,8 Hz, 3 H), 1,32-1,48 (m, 2 H), 1,56­ 1,63 (m, 1 H), 1,68-1,75 (m, 1 H), 1,94-2,03 (m, 1 H), 2,07 (s, 3 H), 2,35-2,46 (m, 2 H), 2,59-2,70 (m, 2 H), 2,91-2,98 (m, 1 H), 2,99-3,05, (m, 1 H), 4,16 (dd, J = 6,6, 8,4 Hz, 1 H), 4,35-4,39 (m, 1 H), 4,43 (d, J = 5,7 Hz, 2 H), 5,07 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 5,38 (s, 2 H), 5,95 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,88 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,98 (d, J = 7,7 Hz, 1 H), 9,79 (s, 1 H); 13C RMN (126 MHz, d6-DMSO) 518,1, 19,2, 26,8, 29,0, 29,3, 29,6, 30,3, 38,1, 38,653,1, 57,8, 62,6, 118,8, 126,9, 137,4, 137,5, 158,8, 170,3, 171,1, 171,7, 207,5; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C23H35N5NaO6 : 500,2485; encontrado 500,2485.
Ejemplo 9.2 - 4-Nitrofenilcarbonato de W-levulinoil-Val-Cit-4-aminobencilo (58)
Figure imgf000060_0002
A una disolución de alcohol 57(89 mg, 0,19 mmoles) en DMF anhidra (1,7 mL) se añade carbonato de bis(4-nitrofenilo) (67 mg, 0,22 mmoles) seguido por A/,W-diisopropiletilamina (39 gL, 0,22 mmoles) y se agita la reacción bajo Ar a ta durante 7 h. Se precipita el producto mediante la adición de dietil éter y se filtra, lavando con dietil éter y CH2Cl2. Se purifica el producto en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 4:96 a 8:92) proporcionando el compuesto del título 58 como un sólido blanco (70 mg, 58 %). 1H RMN (500 MHz, 2:3 CDCl2/CD2OD) 51,00-1,03 (m, 6 H), 1,53-1,69 (m, 2 H), 1,78-1,86 (m, 1 H), 1,98-2,05 (m, 1 H), 2,08 (s, 3 H), 2,15­ 2,23 (m, 1 H), 2,44-2,50 (m, 1 H), 2,61 (ddd, J = 5,1, 8,7, 15,6 Hz, 1 H), 2,76-2,82 (m, 1 H), 2,88 (ddd, J = 5,4, 8,7, 18,6 Hz, 1 H), 3,13-3,23 (m, 1 H), 4,16 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 4,52 (dd, J = 4,7, 9,7 Hz, 1 H), 5,27 (s, 2 H), 7,40-7,44 (m, 4 H), 7,69 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 8,21-8,31 (m, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:3 CDCl2/CD2OD) 5 18,3, 19,5, 27,3, 29,6, 29,76, 29,83, 30,7, 39,0, 39,9, 54,4, 60,6, 71,3, 120,9, 122,7, 125,9, 130,1, 131,1, 139,6, 146,3, 153,4, 156,5, 161,5, 171,7, 173,3, 175,2, 210,3; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C50H38N6NaO10: 665,2547; encontrado 665,2553.
Ejemplo 9.3 - (2S,3S,4fí)-1-0La-D-Galactopiranosil-4-0Lhexacosanoil-2-(W-levulinoil-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino) octadecano-1,3,4-triol (CN171)
Figure imgf000061_0001
A una mezcla de CN089 (16 mg, 0,019 mmoles) y pNP-carbonato 58 (14 mg, 0,022 mmoles) en 10:3,5:1 de piridina/MeOH/CHCl3 (0,58 mL) se añade Et3N (5 pL, 0,036 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 6 h, se añade Et3N adicional (5 pL, 0,036 mmoles) y la agitación continúa durante 15 h adicional. Se inactiva la reacción con Et2NH (5 pL) y se concentra la mezcla a sequedad bajo alto vacío. La purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2= 10:90 a 20:80), seguido por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm,
30 x 250 mm, 40 °C, 50 mL/min; Fase móvil A = 80:20:0,05 de MeOH/agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,05 de MeOH/TFA; 0-10 min: 0-100 % de B; 10-29 min: 100 % de B; 29-30 min: 100-0 % de B; 30-31 min: 100 % de A) proporciona el regioisómero de 3-O-acilo CN217 (3,2 mg, 13 %) seguido por el compuesto del título CN171. Una trituración final con agua da el producto como un sólido blanco (6,4 mg, 25 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCla/CDaOD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,99-1,01 (m, 6 H), 1,22-1,40 (m, 68 H), 1,52-1,73 (m, 6 H), 1,76-1,84 (m, 1 H),
1,95-2,03 (m, 1 H), 2,08 (s, 3 H), 2,15-2,24 (m, 1 H), 2,31-2,41 (m, 2 H), 2,43-2,48 (m, 1 H), 2,57-2,62 (m, 1 H), 2,74­
2,80 (m, 1 H), 2,89 (ddd, J = 5,3, 8 ,8 , 18,7 Hz, 1 H), 3,12-3,24 (m, 2 H), 3,66-3,81 (m, 8 H), 3,85-3,88 (m, 2 H), 4,16
(d, J = 6,1 Hz, 1 H), 4,51 (dd, J = 4,6, 9,4 Hz, 1 H), 4,85 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 4,93-5,00 (m, 2 H), 5,09-5,16 (m, 1 H),
7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,61 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCla/CDaOD) 514,2, 18,1, 19,4, 23,0, 25,4, 25,7, 26,8, 29,2, 29,56, 29,60, 29,69, 29,71, 29,74, 29,8, 29,90, 29,92, 29,95, 29,98, 30,01, 30,1, 30,4, 32,27, 32,29, 35,0, 38,8, 39,5, 52,6, 53,9, 60,1, 62,3, 6 6 ,8 , 68,4, 69,4, 70,2, 70,7, 71,0, 72,3, 75,1, 100,4, 120,5, 129,0,133,0, 138,3, 157,1, 161,0, 171,1, 172,9, 174,7, 175,0,210,0; HRMS-ESI [M+Na]+calculado para C74H132N6NaO16: 1383,9598; encontrado 1383,9594.
Figure imgf000061_0002
Datos para C N (500 MHz, 2:1 CDCls/CDsOD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,99-1,01 (m, 6 H), 1,23-1,42 (m, 68
H), 1,48-1,71 -1,85 (m, 1 H), 1,96-2,03 (m, 1 H), 2,08 (s, 3 H), 2,16-2,23 (m, 1 H), 2,30-2,38 (m, 2 H),
2,42-2,47 (m, 2,57-2,63 (m, 1 H), 2,74-2,80 (m, 1 H), 2,87-2,93 (m, 1 H), 3,13-3,25 (m, 2 H), 3,53-3,57 (m, 1 H), 3,62-3,79 (m, 3,84 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 3,88 (dd, J = 4,8, 10,8 Hz, 1 H), 4,14-4,17 (m, 1 H), 4,18-4,21 (m, 1 H), 4,49-4,53 (m, 4,84-4,87 (m, 1 H), 4,91-4,97 (m, 2 H), 5,12-5,17 (m, 1 H), 7,31 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,60 (d, J = 8,3 Hz, 2 H);
Figure imgf000061_0003
6 MHz, 2:1 CDCls/CDsOD) 5 selected peaks: 14,2, 18,1, 19,4, 23,0, 25,3, 25,8, 26,8, 29,6, 29,7, 30,0, 30,3, 32,3, 33,5, 34,7, 38,8, 39,4, 52,1, 54,0, 60,2, 62,3, 6 6 ,8 , 69,3, 70,3, 70,6, 71,1, 76,6, 100,2, 120,5, 129,0; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C z ^ ^ ^ N a O ^ : 1383,9598; encontrado 1383,9586.
Ejemplo 10 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-0La-D-galactop¡ranos¡l-4-0Lhexacosano¡l-2-(W-male¡m¡dohexano¡l-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN211)
Ejemplo 10.1 - 4-Nitrofenilcarbonato de W-fluorenilmetoxicarbonil-Val-Cit-4-aminobencilo (BJC209)
Figure imgf000061_0004
A una disolución de alcohol 59 (Dubowchik, Firestone et al. 2002) (270 mg, 0,45 mmoles) en DMF (4 mL) bajo Ar se añade carbonato de bis(4-nitrofenilo) (220 mg, 0,72 mmoles), seguido por i-Pr2NEt (90 pL, 0,51 mmoles) y se agita la reacción a ta. Después de 18 h, se diluye la mezcla con MeOH (10 mL), luego se concentra a presión reducida y el residuo se destila azeotrópicamente con tolueno (4 x 10 mL). Se purifica el producto en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3= 0:1 a 1:4), proporcionando el compuesto del título 60 como un sólido amarillo (219 mg, 64 %). 1H RMN (500 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) 50,95 (d, J = 6 , 8 Hz, 3H), 0,97 (d, J = 6 , 8 Hz, 3H), 1,50-1,60 (m, 2H), 1,68-1,75 (m, 1H), 1,89-1,96 (m, 1H), 2,06-2,13 (m, 1H), 3,08-3,13, (m, 1 H), 3,21-3,26, (m, 1H), 4,00 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 6,5, 6,5 Hz, 1H), 4,35-4,38 (m, 1H), 4,45-4,49 (m, 1H), 4,56-4,58 (m, 1H), 5,25 (s, 2H), 7,31 (dd, J = 7,5, 7,5 Hz, 2H), 7,38-7,41 (m, 6H), 7,61-7,64 (m, 4H), 7,77 (d, J = 7,7 Hz, 2H); 13C RMN (126 MHz, 3:1 CDCla/CDaOD) 5 18,1, 19,3, 26,6, 29,5, 31,2, 39,2, 53,5, 61,0, 67,3, 70,9, 120,2, 120,4, 122,1, 125,2, 125,3, 125,5, 127,3, 128,0, 129,8, 139,0, 141,6, 144,0, 144,1, 145,7, 152,8, 155,9, 157,4, 160,8, 170,9, 172,9;
HrMS-ESI: m/z calculado para C40H42N6O10Na [M+Na]+ 789,2860, encontrado 789,2853.
Ejemplo 10.2 -(2S,3S,4fí)-1-0La-D-Galactop¡ranos¡l-4-0Lhexacosano¡l-2-(W-fluoren¡lmetox¡carbon¡l-Val-C¡t-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (61)
Figure imgf000062_0001
A una mezcla de CN089 (112 mg, 0,131 mmoles) y pNP-carbonato 60 (138 mg, 0,180 mmoles) en piridina anhidra (1,8 mL) bajo Ar se añade Et3N (24 pL, 0,17 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 23 h, se concentra la mezcla a sequedad bajo alto vacío, y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 5:95 a 13:87) proporcionando el compuesto del título 61 como un sólido blanco (122 mg, 63 %). 1H RMN (500 MHz, 2:3 CDCla/CDaOD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,95-0,98 (m, 6 H), 1,24-1,37 (m, 68 H), 1,51-1,78 (m, 7 H), 1,89-1,96 (m, 1 H), 2,07-2,13 (m, 1 H), 2,32-2,42 (m, 2 H), 3,07-3,13 (m, 1 H), 3,20-3,25 (m, 1 H), 3,66-3,81 (m, 8 H), 3,84-3,87 (m, 2 H), 3,99 (d, J = 6,7 Hz, 1 H), 4,24 (t, J = 6,9 Hz, 1 H), 4,37 (dd, J = 6,9, 10,5 Hz, 1 H), 4,45 (dd, J = 6,9, 10,5 Hz, 1 H), 4,54 (dd, J = 5,2, 8,6 Hz, 1 H), 4,84 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,97-5,03 (m, 2 H), 5,06-5,10 (m, 1 H), 7,30-7,33 (m, 4 H), 7,38-7,41 (m, 2 H), 7,58 (d, J = 8,1 Hz, 2 H), 7,63-7,65 (m, 2 H), 7,78 (d, J = 7,6 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCls/CDsOD) 5 14,3, 18,2, 19,4, 23,0,25,5, 25,7,26,7,29,2, 29,6, 29,27, 29,74, 29,8, 29,93, 29,95, 29,98, 30,02, 30,05, 30,08, 30,10, 31,4, 32,3, 35,0, 39,4, 47,6, 52,7, 53,8, 61,2, 62,3, 66,8, 67,4, 68,4, 69,4, 70,2, 70,7, 71,0, 72,3, 75,1, 100,4, 120,3, 120,5, 125,40, 125,44, 127,5, 128,2, 129,1, 133,0, 138,2, 141,7, 144,2, 144,3, 157,1, 157,6, 161,1, 171,1, 173,2, 175,0; HRMS-ESI m/z calculado para C84H137N6O16 [M+H]+: 1486,0091; encontrado 1486,0099.
Ejemplo 10.3 - (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-Galactop¡ranos¡l-4-O-hexacosanoil-2-(Val-C¡t-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (62)
Figure imgf000062_0002
A una mezcla del compuesto 61 (125 mg, 0,0841 mmoles) en DMF (2 mL) se añade piperidina (0,2 mL) a 0 °C. Se agita la mezcla a 0 °C durante 5 min, luego a ta durante 40 min. Se concentran los disolventes a sequedad bajo alto vacío, y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 15:85 a 35:65) proporcionando el compuesto del título 62 como un sólido blanco (95 mg, 89 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 50,87-0,91 (m, 9 H), 1,00 (d, J = 6,9 Hz, 3 H), 1,23-1,35 (m, 68 H), 1,49-1,77 (m, 7 H), 1,87-1,94 (m, 1 H), 2,07-2,13 (m, 1 H), 2,32-2,39 (m, 2 H), 3,10-3,16 (m, 1 H), 3,21 (d, J = 4,9 Hz, 1 H), 3,24-3,29 (m, 1 H), 3,65­ 3,80 (m, 8 H), 3,85-3,87 (m, 2 H), 4,57 (dd, J = 5,3, 8,5 Hz, 1 H), 4,85 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,92-4,99 (m, 2 H), 5,10­ 5,15 (m, 1 H), 7,33 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,56 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 13C RMN (75 MHz, 3:1 CDCh/CD3OD) 514,1, 16,8, 19,5, 22,8, 25,2, 25,5, 26,4, 29,0, 29,4, 29,5, 29,6, 29,7, 29,8, 29,9, 30,0, 31,9, 32,1, 34,8, 39,2, 52,3, 53,1, 60,4, 62,1, 6 6 ,6 , 68,2, 69,2, 70,0, 70,5, 70,6, 72,2, 74,9, 100,1, 120,3, 128,9, 132,9, 138,0, 156,8, 160,8, 171,1, 174,8, 175,7; HRMS-ESI m/z calculado para CsgH^/NsOu [M+H]+: 1263,9410, encontrado 1263,9419.
Ejemplo 10.4 - (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-Galactop¡ranos¡l-4-O-hexacosano¡l-2-(W-male¡midohexano¡l-Val-C¡t-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN211)
Figure imgf000063_0001
A una disolución de amina 62 (10,4 mg, 0,00823 mmoles) y éster de NHS de ácido 6 -maleimidohexanoico (Leonard y Brunckova 2010) (3,3 mg, 0,011 mmoles) en DMF (80 uL) se añade Et3N (0,9 mg, 0,009 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 4 h, se concentra la mezcla bajo alto vacío, y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2= 8:92 a 14:86) proporcionando el compuesto del título CN211 como un sólido blanco (11,2 mg, 93 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,94­ 0,97 (m, 6 H), 1,23-1,36 (m, 70 H), 1,49-1,77 (m, 11 H), 1,87-1,94 (m, 1 H), 2,03-2,10 (m, 1 H), 2,24-2,30 (m, 2 H), 2,31-2,41 (m, 2 H), 3,09-3,14 (m, 1 H), 3,20-3,26 (m, 1 H), 3,51 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 3,66-3,81 (m, 8 H), 3,85-3,87 (m, 2 H), 4,17 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 4,53 (dd, J = 5,1, 8 , 6 Hz, 1 H), 4,85 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 4,92-4,98 (m, 2 H), 5,10-5,15 (m, 1 H), 6,74 (s, 2 H), 7,31 (d, J = 8,1 Hz, 2 H), 7,56 (d, J = 8,1 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCI3/CD3OD) 5 14,2, 18,5, 19,4,23,0, 25,4, 25,5, 25,6, 26,6, 28,5, 29,2, 29,5, 29,58, 29,63, 29,65, 29,73, 29,84, 29,86, 29,90, 29,93, 29,97, 30,01, 31,0, 32,2, 34,9, 36,2, 37,9, 39,3, 52,5, 53,7, 59,4, 62,3, 66,7, 68,4, 69,4, 70,2, 70,6, 70,8, 72,3, 75,0, 100,3, 120,4, 129,0, 132,9, 134,5, 138,2, 157,0, 161,0, 171,0, 171,5, 172,8,174,9; HRMS-ESI m/z calculado para C79H137N/NaO17 [M+Na]+: 1478,9969, encontrado 1478,9971.
Ejemplo 11 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-galactopiranosil-4-O-hexacosanoil-2-(W-(biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetoxicarbonil)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN209)
Figure imgf000063_0002
A una disolución de amina 62 (6,5 mg, 0,0051 mmoles) en DMF (50 gL) se añade 4-nitrofenilcarbonato de biciclo[6.1.0]non-4-in-9-ilmetilo (Dommerholt, Schmidt et al. 2010) (2,0 mg, 0,0063 mmoles) seguido por Et3N (1,5 gL, 0,011 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 20 h, se concentra la mezcla bajo alto vacío, y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CH2Cl2 = 5:95 a 15:85) proporcionando el compuesto del título CN209 como un sólido blanco (6,4 mg, 86 %). 1H RMN (500 MHz, 2:3 CDCI3/CD3OD) 50,68­ 0,78 (m, 3 H), 0,88-0,90 (m, 6 H), 0,95 (d, J = 6 , 8 Hz, 3 H), 0,99 (d, J = 6 , 8 Hz, 3 H), 1,23-1,41 (m, 70 H), 1,50-1,78 (m, 7 H), 1,89-1,96 (m, 1 H), 2,08-2,14 (m, 3 H), 2,22-2,30 (m, 2 H), 2,32-2,42 (m, 4 H), 3,09-3,14 (m, 1 H), 3,20-3,26 (m, 1 H), 3,66-3,81 (m, 8 H), 3,84-3,87 (m, 2 H), 3,95-4,03 (m, 3 H), 4,55 (dd, J = 5,3, 8,3 Hz, 1 H), 4,84 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,97-5,03 (m, 2 H), 5,06-5,11 (m, 1 H), 7,30-7,33 (m, 2 H), 7,58 (d, J = 8,2 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:3 CDCI3/CD3OD) 5 14,34, 14,36, 18,3, 19,6, 21,7, 23,29, 23,31, 23,7, 23,8, 24,4, 25,8, 26,0, 27,2, 29,3, 29,9, 30,00, 30,03, 30,2, 30,25, 30,31, 30,34, 30,4, 31,6, 32,59, 32,62, 33,9, 35,2, 39,8, 53,2, 54,2, 61,5, 62,5, 67,0, 6 8 ,6 , 69,8, 70,2, 70,6, 71,0, 71,6, 72,4, 75,4, 99,3, 100,8, 120,8, 129,3, 133,4, 138,7, 157,6, 158,5, 161,6, 171,5, 173,7, 175,2; HRMS-ESl m/z calculado para C80H138N6NaO16 [M+Na]+: 1462,0067, encontrado 1462,0061.
Ejemplo 12 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-galactopiranosil-4-O-hexacosanoil-2-(W-(biotinoil)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN201)
Figure imgf000063_0003
A una disolución de amina 62 (10,9 mg, 0,00862 mmoles) en DMF (0,10 mL) se añade éster de NHS de D-(+)-biotina (5,4 mg, 0,016 mmoles) seguido por Et3N (3,2 mg, 0,032 mmoles) y se agita la mezcla a ta durante 2 días. Se diluye la mezcla heterogénea con MeOH (1 mL) y agua (0,2 mL), y se filtra, lavando con MeOH. Se purifica el precipitado recogido por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3 = 10:90 a 30:70) proporcionando el compuesto del título CN201 como un sólido blanco (8,3 mg, 64 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCI3/CD3OD) 50,87­ 0,90 (m, 6 H), 0,95-0,98 (m, 6 H), 1,23-1,35 (m, 68 H), 1,41-1,47 (m, 2 H), 1,50-1,79 (m, 11 H), 1,87-1,94 (m, 1 H), 2,06-2,13 (m, 1 H), 2,24-2,41 (m, 4 H), 2,74 (d, J = 12,8 Hz, 1 H), 2,93 (dd, J = 5,0, 12,8 Hz, 1 H), 3,10-3,22 (m, 3 H), 3,66-3,80 (m, 8 H), 3,84-3,87 (m, 2 H), 4,18 (d, J = 6 , 8 Hz, 1 H), -4,30 (m, 1 H), 4,48-4,53 (m, 2 H), 4,85 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,93-4,98 (m, 2 H), 5,12-5,16 (m, 1 H), 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,58 (d, J = 8,3 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCI3/CD3OD) 514,2, 18,4, 19,5, 23,0, 25,4, 25,7, 26,0, 26,7, 28,34, 28,37, 29,2, 29,5, 29,6, 29,70, 29,72, 29,79, 29,91, 29,93, 29,96, 30,02, 30,8, 32,3, 35,0, 35,8, 39,5, 40,6, 52,6, 54,0, 55,8, 59,5, 60,6, 62,2, 62,3, 66,8, 68,4, 69,4, 70,3, 70,7, 70,9, 72,3, 75,1, 100,4, 120,5, 129,1, 133,0, 138,3, 157,1, 161,1, 164,9, 171,1, 173,0, 175,0, 175,3; HRMS-ESI m/z calculado para C7gH140N8NaO16S [M+Na]+: 1512,0006, encontrado 1512,0006.
Ejemplo 13 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-0-a-D-galactopiranosil-4-0-hexacosanoil-2-(W-(wmercapto(poli(etilenooxi))acetil)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN200)
Ejemplo 13.1 - (2S,3S,4fí)-1-0-a-D-Galactopiranosil-4-0-hexacosanoil-2-(W-(w-(isobutoxicarboniltio)(poli(etilenooxi))acetil)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (63)
Figure imgf000064_0001
A una disolución de ácido w-mercaptopoli(etilenooxi)acético (Mw promedio 1.000) (5,9 mg, 0,0053 mmoles) en CH2CI2 anhidro (0,2 mL) a 0 °C se añade i-Pr2NEt (7,4 mg, 0,057 mmoles), seguido por cloroformiato de isobutilo (6,2 gL, 0,048 mmoles). Se agita la disolución a 0 °C durante 45 min, luego a ta durante 15 min, antes de concentrar a sequedad. Se co-evapora dos veces el residuo con tolueno para expulsar el exceso de reactivo de cloroformiato de isobutilo. Se disuelve el producto intermedio de anhídrido mixto en 18:1 de cloroformo/MeOH (0,95 mL), y se agita con i-Pr2NEt (2,0 gL, 0,012 mmoles) y amina 62 (3,1 mg, 0,0025 mmoles) a ta durante 2 días. Después de la concentración de los disolventes a presión reducida, se carga el residuo (como 1:1 de MeOH/disolución acuosa) sobre un cartucho que contiene 200 mg de gel de sílice unido a ciclohexilo terminado en los extremos (Isolute CH(EC)). Después de retirar componentes más polares, se eluye el producto con MeOH/agua (9:1 a 1:0). Más purificación por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 gm, 250 x 10 mm; 40 °C; 2,8 mL/min; fase móvil = 80:20 de IPA/MeOH) da el compuesto del título 63 como un vidrio incoloro (3,2 mg, 53 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCla/CDaOD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 6 H), 0,97 (d, J = 6,8 Hz, 3 H), 0,99 (d, J = 6,8 Hz, 3 H), 1,23-1,35 (m, 68 H), 1,49-1,77 (m, 7 H), 1,88-2,02 (m, 2 H), 2,11-2,18 (m, 1 H), 2,31-2,40 (m, 2 H), 3,07 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 3,10-3,15 (m, 1 H), 3,21-3,26 (m, 1 H), 3,61-3,81 (m, -110 H), 3,85-3,88 (m, 2 H), 4,01 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 4,07 (s, 2 H), 4,25 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 4,55 (dd, J = 5,1, 8,8 Hz, 1 H), 4,85 (d, J = 3,7 Hz, 1 H), 4,93-4,99 (m, 2 H), 5,10-5,15 (m, 1 H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,57 (d, J = 8,4 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 5 14,2, 18,4, 19,1, 19,5, 23,0, 25,4, 25,7, 26,7, 28,3, 29,2, 29,6, 29,7, 29,8, 29,9, 30,0, 30,8, 31,3, 32,3, 35,0, 39,3, 52,6, 53,7, 58,9, 62,3, 66,8, 68,4, 69,4, 70,2, 70,3, 70,5, 70,6, 70,7, 70,8, 70,9, 71,3, 72,3, 74,0, 75,0, 100,4, 120,5, 129,1, 133,0, 138,3, 157,1, 161,1, 171,1, 171,4, 171,6, 172,1, 174,9; HRMS-ESI m/z calculado para C126H236NsNa2O42S [M(n=24)+2Na]2+: 1291,8016, encontrado 1291,7981.
Ejemplo 13.2 - (2S,3S,4fí)-1-0-a-D-Galactopiranosil-4-0-hexacosanoil-2-(W-(wmercapto(poli(etilenooxi))acetil)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN200)
Figure imgf000064_0002
A una disolución de tiocarbonato 63 (3 mg, 1,2 umoles) en MeOH (0,5 mL) se añade hidroxilamina tamponada (0,5 mL, NH2OH.HCl 0,5 M, EDTA 25 mM disuelto en PBS y ajustada hasta pH 7,4 con NaOH 3,0 M). Se incuba el vial de reacción bajo Ar a 40 °C durante 42 h. La mezcla se purifica por paso a través de un cartucho que contiene 1 g de sílice C18 terminada en los extremos, (MeOH/IPA = 1:0 a 1:1) dando la mezcla del compuesto del título CN200 y material de partida sin reaccionar. EM-AR-ESI m/z calcd para C121H228N6Na2O4üS [M(n=24)+2Na]2+: 1241,7754, hallado 1241,7739.
Ejemplo 14 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-1-0-a-D-galactopiranosil-4-0-(4-fluorofenilundecanoil)-2-(W-(6-azidohexanoil)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN213)
Ejemplo 14.1 - (2S,3S,4fí)-2-Amino-1-0-a-D-galactopiranosil-4-0-(4-fluorofenilundecanoil)octadecano-1,3,4-triol (65)
Figure imgf000065_0001
Se calienta una disolución del compuesto 64 (20 mg, 0,027 mmoles) (Li, X., Fujio, M. et al. 2010) en 1,4-dioxano (3 mL) y HCl 1 M (0,6 mL) a 80 °C durante 1 h. Se diluye la mezcla con CHCl3/MeOH (1:1, 30 mL) y se concentra a presión reducida. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3 = 0:10 a 3:7) proporcionando el compuesto del título 65 como un sólido blanco (14 mg, 70 %). 1H RMN (500 MHz, CDCl3/CD3OD 5:1) 50,88 (t, J = 6,9, 6,9 Hz, 3H), 1,24-1,32 (m, 38H), 1,54-1,64 (m, 5H), 1,76-1,83 (m, 1H), 2,34 (dd, J = 7,5, 7,5 Hz, 2H), 2,57 (dd, J = 7,7, 7,7 Hz, 2H), 3,24-3,27 (m, 1H), 3,54 (dd, J = 9,7, 9,7 Hz, 2H), 3,76-3,87 (m, 6 H), 3,97 (a d, J = 2,8 Hz), 4,09 (dd, J = 2,8, 10,6 Hz), 4,88 (d, J = 3,7 Hz), 6,92-6,96 (m, 2H), 7,10-7,14 (m, 2H); Í 3 C RMN (126 MHz, CDCla/CDaOD 5:1) 5 13,0, 21,9, 24,2, 24,4, 28,4, 28,58, 28,63, 28,67, 28,73, 28,77, 28,82, 29,0, 30,4, 30,9, 31,2, 33,7, 34,3, 52,2, 61,0, 64,1, 68,3, 6 8 ,6 , 69,1, 69,3, 70,2, 70,4, 72,5, 99,0, 113,9, 114,1, 128,9, 129,0, 137,8, 159,6, 161,5, 173,4; 19F RMN (470 MHz CDCla/CDaOD 5:1) 5-118,68; HRMS-ESI m/z calculado para C41H73NO9F [m+H]+ 742,5266, encontrado 742,5269.
Ejemplo 14.2 -(2S,3S,4fí)-1-0-a-D-Galactop¡ranos¡l-4-0-(4-fluorofen¡lundecano¡l)-2-(W-(6-az¡dohexano¡l)-Val-Cit-4-aminobenciloxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN213)
Figure imgf000065_0002
A una mezcla de amina 65 (14 mg, 0,018 mmoles) y pNP-carbonato 54 (20 mg, 0,029 mmoles) en piridina anhidra (0,26 mL) bajo Ar se añade Et3N (3,6 pL, 0,026 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 24 h, se añade una porción adicional de Et3N (1,6 pL, 0,012 mmoles). Después de 8 h adicionales, se retiran los volátiles a presión reducida. Se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3 = 0:1 a 3:7) proporcionando el compuesto del título CN213 como un sólido blanco (17 mg, 71 %). 1H RMN (500 MHz, 5:1 CDCl3/CD3OD) 50,88 (t, J = 6,9, 6,9 Hz, 3H), 0,94-0,97 (m, 6 H), 1,25-1,35 (m, 38 H), 1,39-1,45 (m, 2H), 1,52-1,76 (m, 12H), 1,86-1,93 (m, 1H), 2,03-2,10 (m, 1H), 2,29 (ddd, J = 1,3, 7,5. 7,5 Hz, 2H), 2,33-2,37 (m, 2H), 2,57 (dd, J = 7.6, 7,6 Hz, 2H), 3,08-3,13 (m, 1H), 3,20-3,24 (m, 1H), 3,28 (dd, J = 7,0, 7,0 Hz, 2H), 3,65-3,77 (m, 8 H), 3,84-3,87 (m, 2H), 4,52-4,55 (m, 1H), 4,84 (d, 3,8 Hz, 1H), 4,94-4,97 (m, 2H), 5,13-5,15 (m, 1H), 6,93-6,97 (m, 2H), 7,10-7,14 (m, 2H), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 2H); 13C RMN (126 MHz, CDCl3/CD3OD 5:1) 513,6, 17,8, 18,8, 22,3, 24,7, 24,9, 25,0, 26,0, 28,2, 28,6, 28,8, 28,9, 29,0, 29,1, 29,17, 29,23, 29,3, 30,4, 31,3, 31,6, 34,2, 34,7, 35,5, 38.6, 50,9, 51,8, 53,0, 58,7, 61,6, 66,1, 67,7, 68,7, 69,5, 69,9, 70,2, 71,7, 74,3, 99,7, 114,4, 114,5, 119,8, 128,4, 129,27, 129,33, 132,3, 137,5, 138,2, 156,3, 159,9, 160,3, 161,8, 170,3, 172,1, 174,1, 174,2; 19F RMN (470 MHz CDCl3/CD3OD 5:1) 5 -118,86; HRMS-ESI m/z calculado para C66H109N9O15F [M+H]+ 1286,8022, encontrado 1286,8027.
Ejemplo 15 - Síntesis de (2S,3S,4fí)-2-am¡no-1-0-a-D-galactop¡ranos¡l-4-0-hexacosanoilnonano-1,3,4-tr¡ol (CN214)
Ejemplo 15.1 -(2S,3S,4fí)-2-Am¡no-1-0-a-D-galactop¡ranos¡l-4-0-hexacosano¡lnonano-1,3,4-tr¡ol (67)
Figure imgf000066_0001
Se calienta el compuesto 66 (Enzo Life Sciences, 10,2 mg, 0,014 mmoles) bajo Ar en 10:1:1,3 de 1,4-dioxano/agua/HCl 1 M (3,57 mL) a 83 °C durante 30 min, luego se enfría hasta ta. Después de la liofilización, se purifica el sólido resultante sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3 = 15:85 a 25:75) proporcionando el compuesto del título 67 como un sólido blanco (6,1 mg, 60 %). 1H RMN (500 MHz, CDCla/CDaOD 2:1) 50,87-0,91 (m, 6 H), 1,22-1,40 (m, 50 H), 1,54-1,67 (m, 3 H), 1,78-1,84 (m, 1 H), 2,35-2,38 (m, 2 H), 3,26-3,29 (m, 1 H), 3,51-3,55 (m, 1 H), 3,71-3,73 (m, 1 H), 3,76 (dd, J = 3,3, 10,0 Hz, 1 H), 3,79-3,81 (m, 2 H), 3,83-3,86 (m, 2 H), 3,97 (d, J = 3,3 Hz, 1 H), 4,11 (dd, J = 3,0, 10,7 Hz, 1 H), 4,88 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 4,93 (dt, J = 3,0, 8,7 Hz, 1H); 13C RMN (126 MHz, CDCla/CDaOD 2:1) 5 14,1, 14,2, 22,8, 23,0, 25,0, 25,4, 29,5, 29,68, 29,71, 29,9, 30,00, 30,03, 30,05, 31,4, 31,9, 32,3, 34,8, 53,1, 62,2, 65,4, 69,4, 70,2, 70,4, 71,2, 71,6, 73,7, 100,0, 174,6; HRMS-ESI [M+H]+ calculado para C41H82NO9 : 732,5990; encontrado 732,5984.
Ejemplo 15.2 - (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-Galactop¡ranos¡l-4-O-hexacosano¡l-2-(W-(6-az¡dohexano¡l)-Val-C¡t-4-aminobenciloxicarbonilamino)nonano-1,3,4-triol (CN214)
Figure imgf000066_0002
A una mezcla de amina 67 (6,1 mg, 0,0083 mmoles) y pNP-carbonato 54(10 mg, 0,015 mmoles) en piridina anhidra (0,12 mL) bajo Ar se añade Et3N (0,7 pL, 0,012 mmoles) y se agita la mezcla a ta. Después de 24 h, se añade Et3N adicional (0,7 pL, 0,005 mmoles) y la agitación continúa durante 8 h adicionales. Se concentra la mezcla a sequedad bajo alto vacío, y se purifica el residuo en bruto por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH/CHCl3 = 2:98 a 20:80) proporcionando el compuesto del título CN214 como un sólido blanco (7,0 mg, 66 %). 1H RMN (500 MHz, 2:1 CDCl3/CD3OD) 50,87-0,90 (m, 6 H), 0,95-0,97 (m, 6 H), 1,23-1,35 (m, 50 H), 1,39-1,46 (m, 2 H), 1,52-1,77 (m, 11 H), 1,87-1,94 (m, 1 H), 2,04-2,11 (m, 1 H), 2,27-2,32 (m, 2 H), 2,33-2,40 (m, 2 H), 3,09-3,14 (m, 1 H), 3,21 -3,26 (m, 1 H), 3,28 (t, J = 6,9 Hz, 2 H), 3,66-3,80 (m, 8 H), 3,84-3,87 (m, 2 H), 4,19 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,54 (dd, J = 5,1,8,7 Hz, 1 H) 4,85 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 4,94-5,01 (m, 2 H), 5,10-5,18 (m, 1 H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 2 H); 13C RMN (126 MHz, 2:1 CDC^CDsOD) 5 14,1, 14,2, 18,5, 19,4, 22,8, 23,0, 25,3, 25,4, 25,6, 26,6, 28,9, 29,0, 29,5, 29,59, 29,63, 29,65, 29,8, 29,95, 29,98, 31,00, 31,9, 32,2, 34,9, 36,2, 39,3, 51,5, 52,5, 53,7, 59,4, 62,3, 66,7, 68,4, 69,4, 70,2, 70,6, 70,9, 72,2, 75,0, 100,3, 120,4, 129,0, 132,9, 138,2, 157,0, 161,0, 171,0, 172,8, 174,91, 174,95; HRMS-ESI [M+Na]+ calculado para C66H117NgNaO15: 1298,8567 encontrado 1298,8553.
Ejemplo_____ 16 - (2S,3S,4fí)-1-O-a-D-Galactop¡ranos¡l-4-hexacosanoil-2-((4-(2-(FFRKSIINFEKL)-2-oxoetoxi)imino)pentanoiloxi)metoxicarbonilamino)octadecano-1,3,4-triol (CN152)
Figure imgf000066_0003
A una suspensión con agitación del péptido 2-(aminooxi)acetil-FFRKSIINFEKL (5,1 mg, 3,16 mmoles) en THF/MeOH (2:1, 600 pL) se añade una mezcla acuosa de agua/anilina/TFA (200:6:4, 300 pL). Una vez disuelto, se añade una disolución de cetona CN146 (2,5 mg, 2,4 mmoles), disuelta en THF/MeOH (1:1, 600 pL), y se agita la mezcla de reacción a 25 °C durante 48 h. Se retira el disolvente y se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 100:0,1 de agua/ TFA; Fase móvil B = 100:0,1 de MeOH/TFA; 0-15 min: 50-100 % de B; 15-23 min: 100 % de B; 23-25 min: 100-50 % de B; 25­ 26 min: 50 % de B) dando el compuesto del título CN152 (2,1 mg, 33 %). 1H RMN (500 MHz, d6 -DMSO) 50,68-0,95 (m, 24H), 1,02-1,45 (m, 74H), 1,70-1,50 (m, 27H), 1,80 (s, 3H), 2,5-2,3 (m, 6 H), 2,90-2,71 (m, 8 H), 3,21-2,92 (m, 6 H), 3,69-3,42 (m, 12H), 4,60-4,08 (m, 18H), 4,63 (s, 1H), 4,76 (s a, 1H), 5,02 (s a, 1H), 5,06 (s a, 1H), 5,68-5,61 (m, 2H), 8,39-7,32 (m, 22H), 7,42 (m, 15H), 6,92 (s, 1H); 13C RMN (126 MHz, d6 -DMSO) 573,1 (C-5'), 79,8 (C-2"), 99,5 (H-1); HRMS (ESI): m/z calculado para C134H226N20O32 [M+2H]2+ 1313,8336, encontrado 1313,8358.
Ejemplo 17 - CN178
Figure imgf000067_0001
A una suspensión con agitación del péptido 2-(aminooxi)acetil-FFRKKAVYNFATM (2 mg, 1,17 gmoles) en THF/MeOH (2:1, 600 gL) se añade una mezcla acuosa de agua/anilina/TFA (200:6:4, 300 gL). Una vez disuelto, se añade una disolución de cetona CN146 (1 mg, 0,97 gmoles) en THF/MeOH (1:1, 600 gL) y se agita la mezcla de reacción a 25 °C durante 48 h. Se retira el disolvente y se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 gm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 100:0,1 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,1 de MeOH/TFA; 0-15 min: 50-100 % de B; 15-23 min: 100 % de B; 23-25 min: 100-50 % de B; 25-26 min: 50 % de B) dando el compuesto del título CN178 (2,0 mg, 0,74 gmoles, 76 %, 94,0 % puro por HPLC). 1H RMN (500 MHz, d6 -DMSO) 50,66-0,78 (m, 6 H), 0,78-0,95 (m, 9H), 0,95-1,42 (m, 79H), 1,42-1,73 (m, 17H), 1,73-1,82 (m, 3H), 1,82-1,93 (m, 2H), 1,93-2,06(m, 5H), 2,23-2,33 (m, 2H), 2,33-2,39 (m, 1H), 2,70-2,89 (m, 6 H), 3,08-3,15 (m, 2H), 3,40-3,73 (m, 14H), 3,75-3,82 (m, 1H), 3,88 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 3,97-4,16 (m, 3H), 4,17-4,40 (m, 9H), 4,40-4,55 (m, 5H), 4,55-4,63 (m, 1H), 4,65 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 4,70-4,74 (m, 2H), 4,77 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 4,83-4,89 (m, 1H), 5,01 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 5,04-5,09 (m, 1H), 5,15 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 5,60-5,69 (m, 2H), 6,60 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,91-6,95 (m, 1H), 6,98 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,05-7,32 (m, 15H), 7,31-8,27 (m, 23H), 9,12 (a, s, 1H); HRMS-ESI m/z calculado para C137H225N21O32S [M+2 H]2+ 1354,3173, encontrado 1354,3180.
Ejemplo 18 - CN185
Figure imgf000067_0002
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKSIINFEKL (4,5 mg, 2,80 gmoles) y CN215 (3,03 mg, 2,16 gmoles) en DMSO (600 gL) y MeOH (280 gL) se añade TBTA (0,33 mg, 0,6 gmoles) en CHCh (280 gL), seguido por una disolución acuosa de CuSO4 0,25 mM (100 gL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a ta durante 18 h. Se concentra la mezcla de reacción pasando una corriente de Ar sobre la mezcla de reacción y se centrifuga el residuo con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (2 x 10 mL) y se liofiliza el residuo restante del agua (3 mL). Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 gm, 250 x 10 mm, 40 °C, 2,1 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-7 min: 80-100 % de B; 7-14 min: 100 % de B; 14-15 min: 100-80 % de B; 15-20 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN185 (2,55 mg, 44 %, 97,8 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C138H232N22O31 [M+2H]2+ 1347,3548, encontrado 1347,3610.
Ejemplo 19 - CN174
Figure imgf000067_0003
A una suspensión con agitación del péptido 2-(aminooxi)acetil-FFRKSIINFEKL (9 mg, 5,57 gmoles) en THF/MeOH (2:1, 600 gL) se añade una mezcla acuosa de agua/anilina/TFA (200:6:4, 300 gL). Una vez disuelto, se añade una disolución de cetona CN171 (5,7 mg, 4,2 gmoles) en THF/MeOH (1:1, 600 gL) a la mezcla de reacción, seguido por una porción adicional de agua/anilina/TFA (200:6:4, 100 gL), y se agita la mezcla a 25 °C durante 48 h. Se retira el disolvente y se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 gm, 250 x 10 mm, 40 °C, 1 , 8 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-5 min: 80­ 100 % de B; 5-15 min: 100 % de B; 15-16 min: 100-80 % de B; 16-20 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN174 (0,3 mg, 2,5 %, 95,1 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C151H251N25O34 [M+2H]2+ 1479,9262, encontrado 1479,9421.
Ejemplo 20 - CN175
Figure imgf000068_0001
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKSIINFEKL (5,03 mg, 3,10 pmoles), CN172 (3,03 mg, 2,16 pmoles) y TBTA (0,80 mg, 1,5 pmoles) en DMSO (280 pL) se añade CHCl3 (280 pL) y MeOH (280 pL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (107 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 48 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,1 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (2 x 10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 pm, 250 x 10 mm, 40 °C, 1,8 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-5 min: 80-100 % de B; 5-15 min: 100 % de B; 15-16 min: 100-80 % de B; 16-20 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN175 (1,6 mg, 25 %, 97,9 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C155H257N27O33 [M+2H]2+ 1512,9553, encontrado 1512,9609
Ejemplo 21 - CN194
Figure imgf000068_0002
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKNLVPMVATV (2,0 mg, 1,25 pmoles), CN172 (1,0 mg, 0,71 pmoles) y TBTA (0,29 mg, 0,55 pmoles) en DMSO (93 pL) se añade CHCl3 (93 pL) y MeOH (93 pL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (31 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 15 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,025 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (2 x 10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 1 0 0 :0 , 1 de agua/TFA; Fase móvil B = 1 0 0 :0 ,1 de MeOH/TFA; 0-15 min: 50-100 % de B; 15-23 min: 100 % de B; 23-25 min: 100-50 % de B; 25-26 min: 50 % de B) dando el compuesto del título CN194 (1,65 mg, 77 %, 94,2 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C152H25sN27O32SNa [M+H+Na]2+ 1513,9439, encontrado 1513,9397.
Ejemplo 22 - CN188
Figure imgf000068_0003
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-ILARNLVPMVATV (2,12 mg, 1,44 pmoles), CN172 (0,99 mg, 0,71 pmoles) y TBTA (0,22 mg, 0,41 pmoles) en DMSO (93 pL) se añade CHCl3 (93 pL) y MeOH (93 pL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (31 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 15 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,025 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (2 x 10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 gm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 100:0,1 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,1 de MeOH/TFA; 0-15 min: 50-100 % de B; 15-23 min: 100 % de B; 23-25 min: 100-50 % de B; 25-26 min: 50 % de B) dando el compuesto del título CN194 (1,00 mg, 50 %, 94,8 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C143H253N26O32SNa [M+H+Na]2+ 1451,4306, encontrado 1451,4269.
Ejemplo 23 - CN197
Figure imgf000069_0001
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKAVGALEGPRNQDWLGVPRQL (7,72 mg, 2,73 gmoles), CN172 (2 , 0 2 mg, 1,44 gmoles) y TBTA (0,42 mg, 0,79 gmoles) en DMSO (186 gL) se añade CHcl3 ( 18 6 gL) y MeOH (186 gL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (62 gL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 13 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (3 x 10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 gm, 250 x 10 mm, 40 °C, 2,0 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-8 min: 80-100 % de B; 8-15 min: 100 % de B; 15-16 min: 100-80 % de B; 16­ 20 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN197 (4,90 mg, 80 %, 95,1 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C206H338N47O48 M+3H]3+ 1413,5073, encontrado 1413,4989.
Ejemplo 24 - CN196
Figure imgf000069_0002
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKDLAQMFFCFKELEGW (7,07 mg, 2,80 gmoles), CN172 (2,02 mg, 1,44 gmoles) y TBTA (0,40 mg, 0,75 gmoles) en DMSO (186 gL) se añade CHCl3 (186 gL) y MeOH (186 gL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (62 gL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 48 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (2 x 10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se disuelve el producto en bruto en DMSO (500 gL) y se trata con TCEP-HCl ( 6 mg, 0,021 mmoles) durante 18 h, luego se purifica por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 gm, 250 x 10 mm, 40 °C, 2 , 0 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-8 min: 80-100 % de B; 8-15 min: 100 % de B; 15-16 min: 100-80 % de B; 16-20 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN197 (2,03 mg, 36 %, 96,2 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C198H306N35043S2 M+3H]3+ 1309,0680, encontrado 1309,0685.
Ejemplo 25 - CN203
Figure imgf000069_0003
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKSVYDFFVWLKFFHRTCKCTGNFA (5,1 mg, 1,5 gmoles), CN172 (1,02 mg, 0,73 gmoles) y TbTa (0,21 mg, 0,40 gmoles) en DMSO (90 gL) se añade CHCl3 (90 gL) y MeOH (90 gL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (30 gL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 20 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se añade una disolución acuosa de TCEP-HCl (4,5 mg, 0,016 mmoles) en agua (90 gL) neutralizada con K2CO3 (5 mg) a una disolución del producto en bruto en HFIP (1,2 mL) y Et3N (60 pL). Después de 11 h el producto reducido se purifica por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 pm, 250 x 10 mm, 40 °C, 2 , 0 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-10 min: 80-100 % de B; 10-13 min: 100 % de B; 13-13,5 min: 100-80 % de B; 13,5-17,5 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN203 (1,1 mg, 31 %, 94,8 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C245H370N49O51S2 M+3H]3+ 1626,9024, encontrado 1626,9104.
Ejemplo 26 - CN189
Figure imgf000070_0001
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-SVYDFFVWLKFFHRTCKCTGNFA (1,8 mg, 0,62 pmoles), CN172 (0,51 mg, 0,36 pmoles) y TBTA (0,38 mg, 0,72 pmoles) en DMSO (30 pL) se añade MeOH (60 pL) y CHCh (45 pL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (15 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 48 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se disuelve el producto en bruto en DMSO (900 pL) y se trata con TCEP-HCl (10 mg, 0,034 mmoles) durante 18 h, luego se purifica por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 pm, 250 x 10 mm, 40 °C, 2,0 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-8 min: 80-100 % de B; 8-15 min: 100 % de B; 15-16 min: 100-80 % de B; 16-20 min:
80 % de B) dando el compuesto del título CN189 (0,5 mg, 33 %, 82 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C215H328N41O47S2 M+3H]3+ 1434,1248, encontrado 1434,1223.
Ejemplo 27 - CN191
Figure imgf000070_0002
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKKISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKL-TEWT (5,3 mg, 1,3 pmoles) y CN172 (1 mg, 0,71 pmoles) en DMSO (140 pL) y MeOH (140 pL) se añade TBTA (0,26 mg, 0,49 pmoles) en CHCl3 (140 pL), seguido por una disolución acuosa de CuSO4 0,25 mM (50 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a ta durante 18 h. Se concentra la mezcla de reacción pasando una corriente de Ar sobre la mezcla de reacción y se centrifuga el residuo con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (10 mL) y se liofiliza el residuo restante del agua (3 mL). Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 100:0,1 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,1 de MeOH/TFA; 0-15 min: 50-100 % de B; 15-23 min: 100 % de B; 23-25 min: 100-50 % de B; 25-26 min: 50 % de B) dando el compuesto del título CN191 (2,7 mg, 69 %, 97,6 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C264H426N61O69 M+3H]3+ 1852,3822, encontrado 1852,3904.
Ejemplo 28 - CN206
Figure imgf000070_0003
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKSIINFEKL (6,2 mg, 3,8 pmoles) y CN213 (2,5 mg, 1,9 pmoles) en DMSO (200 pL) y MeOH (200 pL) se añade TBTA (0,74 mg, 1,4 pmoles) en CHCl3 (200 pL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (50 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a ta durante 18 h. Se concentra la mezcla de reacción pasando una corriente de Ar sobre la mezcla de reacción y se centrifuga el residuo con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (10 mL) y se liofiliza el residuo restante del agua (3 mL). Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 40:60:0,05 de agua/MeOH/TFA; Fase móvil B = 100:0,05 MeOH/TFA; 0-14 min: 0-100 % de B; 14-16 min: 100 % de B; 16­ 16,5 min: 100-0 % de B; 16,5-18 min: 0 % de B) dando el compuesto del título CN206 (1,24 mg, 22 %, 95,8 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C146H230FN27O33 [M+2H]2+ 1454,8488, encontrado 1454,8557.
Ejemplo 29 - CN207
Figure imgf000071_0001
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKSIINFEKL (4,8 mg, 3,0 pmoles) y CN214 (2,0 mg, 1,6 pmoles) en DMSO (200 pL) y MeOH (200 pL) se añade TBTA (0,59 mg, 1,1 pmoles) en CHCl3 (200 pL), seguido por una disolución acuosa de 0,25 mM CuSO4 (50 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a ta durante 18 h. Se concentra la mezcla de reacción pasando una corriente de Ar sobre la mezcla de reacción y se centrifuga el residuo con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (10 mL) y se liofiliza el residuo restante del agua (3 mL). Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 40:60:0,05 de agua/MeOH/TFA; Fase móvil B = 100:0,05 MeOH/TFA; 0-14 min: 0-100 % de B; 14-17 min: 100 % de B; 17­ 17,5 min: 100-0 % de B; 17,5-19 min: 0 % de B) dando el compuesto del título CN207 (2,22 mg, 49 %, 94,9 % puro por HPLC); HRMS-ESI m/z calculado para C146H239N27O33 [M+2H]2+ 1449,8849, encontrado 1449,8951.
Ejemplo 30 - CN212
Figure imgf000071_0002
Se disuelven el péptido CFFRKSIINFEKL (1,4 mg, 0,85 pmoles) y CN211 (0,85 mg, 0,58 pmoles) en DMF desoxigenada (75 pL) bajo Ar y se agita a ta durante 4 h. Después de la concentración del disolvente, se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 pm, 250 x 10 mm, 40 °C, 1,8 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeOH/TFA; 0-5 min: 80-100 % de B; 5-15 min: 100 % de B; 15-16 min: 100-80 % de B; 16-20 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN212. HRMS-ESI m/z calculado para C1s7H26oN26O35S [M+2H]2+: 1550,9542, encontrado 1550,9521.
Ejemplo 31 - CN210
Figure imgf000071_0003
A una disolución con agitación del péptido 5-azidopentanoil-FFRKSIINFEKL (0,43 mg, 0,26 pmoles) en DMSO (22 pL) se añade una disolución de CN209 (0,25 mg, 0,17 pmoles) en CHCh/MeOH (1:1, 45 pL), seguido por agua (8 , 6 pL), y se agita la mezcla de reacción a ta durante 24 h. Después de la concentración del disolvente, se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(1), 5 pm, 250 x 10 mm, 40 °C, 1, 8 mL/min; Fase móvil A = 100:0,05 de agua/TFA; Fase móvil B = 100:0,0,05 de MeoH/TFA; 0-5 min: 80-100 % de B; 5-15 min: 100 % de B; 15-16 min: 100-80 % de B; 16-20 min: 80 % de B) dando el compuesto del título CN210. HRMS-ESI m/z calculado para C160H263N27O34 [M+2H]2+: 1553,4840, encontrado 1553,4850.
Ejemplo 32 - CN205
Figure imgf000072_0001
A una disolución con agitación del péptido 4-pentinoil-FFRKRAHYNIVTF (4,6 mg, 2,6 pmoles), CN172 (2 mg, 1,4 pmoles) en DMSO (140 pL) y MeOH (140 pL) se añade una disolución de TBTA (0,54 mg, 0,99 pmoles) en CHCl3 (140 pL), seguido por una disolución acuosa de CuSO40,25 mM (50 pL). Se añade una pequeña cantidad de lámina de cobre (5 mm x 2 mm) y se agita la mezcla de reacción a ta durante 18 h. Se retiran los volátiles a presión reducida dando un residuo que se centrifuga con una disolución acuosa de EDTA 0,05 M (pH 7,7) (2 x 10 mL), agua (10 mL) y se seca el sedimento restante bajo alto vacío. Se purifica el producto en bruto por HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2), 5 pm, 250 x 30 mm, 30 °C, 40 mL/min; Fase móvil A = 40:60:0,05 de agua/MeOH/TFA; Fase móvil B = 100:0,05 MeOH/TFA; 0-10 min: 0-100 % de B; 10-16 min: 100 % de B; 16-16,5 min: 100-0 % de B; 16,5-18 min: 0 % de B) dando el compuesto del título CN205 (2,5 mg, 56 %, 96,7 % puro por HPLC). HRMS-ESI m/z calculado para C162H258N32O33 [M+2H]2+ 1591,4747, encontrado 1591,4823.
Ejemplo 33 - Formulación de compuestos de la divulgación para inyección intravenosa
Los compuestos de la divulgación se formulan análogamente a los métodos informados para a-GalCer. Brevemente, la solubilización de a-GalCer se basa en las proporciones de excipiente descritas por Giaccone et al. (Giaccone, Punt et al. 2002). Así, se añaden 100 pL de una disolución 10 mg/mL de a-GalCer o un compuesto de la divulgación en 9:1 de THF/MeOH a 1,78 mL de una disolución acuosa de Tween 20 (15,9 mg), sacarosa (177 mg) y L-histidina (23,8 mg). Se liofiliza esta mezcla homogénea y la espuma resultante se almacena bajo Ar a -18 °C. Se constituye este material con 1,0 mL de PBS o agua antes de diluciones sucesivas en PBS para lograr disoluciones inyectables finales de a-GalCer o compuestos de la divulgación.
Ejemplo 34 - Cuantificación por HPLC-ESI-EM EM de a-GalCer
Se hace la cuantificación de la cantidad de a-GalCer en diversas muestras de prueba de compuestos de la divulgación por análisis de HPLC-ESI-EM EM usando un espectrómetro de masas en tándem Waters 2795 HPLC y Waters Q-TOF Premier™. La cromatografía usó una columna Phenomenex Kinetex C18 2,6 mm 3,0 x 50 mm eluyendo con metanol isocrático que contenía formiato de amonio 10 mM 0,5 % de ácido fórmico a un caudal de 0,2 mL/min. Se monitoriza a-GalCer por monitorización selectiva de reactantes de 898,7 a 696,7 Da. La estimación de la cantidad de a-GalCer se hace por comparación de las integrales del número de iones con una curva patrón realizada el mismo día o por comparación con muestras de prueba enriquecidas con una cantidad conocida de a-GalCer.
El nivel de a-GalCer se determina en muestras formuladas recién reconstituidas, a menos que se establezca de otro modo.
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Ejemplo 35 - Estudios biológicos
Ratones. Se obtienen parejas reproductoras de las cepas endogámicas C57BL/6 (CD45.2+) y B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ (CD45.1+) de Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME, y del Animal Resource Centre, Canning Vale, Western Australia. También se usan la inactivación lang-DTREGFP y lang-EGFP en ratones, que expresan el receptor de la toxina diftérica (DT) humana y/o proteína verde fluorescente (EGFP) potenciada bajo el control del promotor de langerina, ratones CD1d-/-, que carecen de linfocitos iNKT Va14, ratones TLR2-/- (17), ratones OT-I, que son transgénicos para un TCR que reconoce un epítope restringido a H-2Kb de OVA de pollo (OVA257-264) y ratones OT-II, con un TCR que reconoce el epítope restringido a I-Ab OVA323-339. Para los experimentos de transferencia adoptiva, se cruzan animales OT-I con animales B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ, de manera que se podría usar el marcador congénico CD45.1 para discriminar las células transferidas. Todos los ratones se mantienen en la Unidad de Investigación Biomédica del Instituto Malaghan de Investigación Médica. Los experimentos están autorizados por un Comité de Ética Animal Nacional y se realizaron según normas nacionales establecidas.
Administración de compuestos de la divulgación. Cada compuesto de la divulgación se suministra como producto formulado (véase el Ejemplo 33), y diluido en solución salina tamponada con fosfato (PBS) para inyección (0­ 2,0 nmoles/ratón) por inyección intravenosa en la vena lateral de la cola. En seres humanos, la dosis terapéutica esperada se encuentra en el intervalo 50-4800 (pg/m2) (Giaccone, Punt et al. 2002). Nota, 0,23 nmoles en un ratón es una dosis equivalente humana de 30 pg/m2 para a-GalCer. Son probables dosis más altas para otras vías de administración.
Todo el marcado con anticuerpo se realiza sobre hielo en tampón FACS (PBS complementado con 1 % de FCS, 0,05 % de azida de sodio y EDTA 2 mM). No se bloquea la tinción de anticuerpo mediada por FcR específica por incubación durante 10 min con Ab anti-CD16/32 (24G2, preparado internamente a partir de sobrenadante de hibridoma). Se realiza citometría de flujo en un citómetro de flujo BD Biosciences FACSCalibur o BD LSRII SORP con análisis de datos usando el software FlowJo (Tree Star, Inc., OR, EE.UU.).
Fenotipificación de DCs del bazo. Se usa tinción de anticuerpos y citometría de flujo para examinar la expresión de marcadores de maduración en células dendríticas en el bazo tras la inyección de compuestos de la divulgación. Se preparan preparaciones de esplenocitos por provocación suave de tejido esplénico mediante gasa en medio Dulbecco modificado por Iscove con glutamina 2 mM, 1 % de penicilina-estreptomicina, 5 x 2-mercapto-etanol 10-5 M y 5 % de suero bovino fetal (todos de Invitrogen, Auckland, Nueva Zelanda), seguido por lisis de glóbulos rojos con tampón de lisis RBC (Puregene, Gentra Systems, Minneapolis, MN, EE.UU.). Se realiza tinción de anticuerpos en PBS 2 % de suero bovino fetal y 0,01 % de azida de sodio. Se usa el anticuerpo monoclonal anti-FcgRII 2.4G2 a 10 mg/mL para inhibir la tinción no específica. Se usan anticuerpos monoclonales (todos de BD Biosciences Pharmingen, San Jose, CA, EE.UU.) para examinar la expresión de los marcadores de maduración CD40, CD80 y CD86 en células dendríticas CD11c+.
Análisis de la proliferación de linfocitos T específicos de péptidos in vivo
Se preparan suspensiones de células de ganglios linfáticos reunidas a partir de animales de un cruce entre ratones OT-I, que expresan un receptor transgénico de linfocitos T (TCR) específico para el epítope de ovoalbúmina SIINFEKL en el contexto de moléculas H-2Kb, y ratones B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ, que son congénicos con ratones C57BL/6 para el marcador CD45.1+. Las muestras se enriquecen para células CD8 + usando perlas magnéticas recubiertas de anticuerpo (Miltenyi), y luego se transfieren a ratones receptores (1 x 104 por ratón). Se inmunizan grupos de animales receptores (n = 5) con compuestos de la divulgación un día después. Las dosis se eligen proporcionando los valores molares equivalentes de péptido SIINFEKL. Los animales de control reciben solución salina tamponada con fosfato. Después de siete días, se recogen muestras de sangre de la vena lateral de la cola y se tiñen directamente ex vivo con anticuerpos para TCR Va2, CD45.1 y CD8 para detectar los linfocitos T CD8 + específicos de SIINFEKL por citometría de flujo.
Análisis de citotoxicidad mediada por linfocitos T específicos de péptidos in vivo
Se mide la capacidad citotóxica de respuestas de linfocitos T CD8 + inducidos por el ensayo VITAL (Hermans, Silk et al. 2004). Se inmunizan ratones con los compuestos de la divulgación, o PBS, y luego se inyectan por vía intravenosa siete días después con dos poblaciones de esplenocitos singénicos; los cargados con 500 nM, péptido SIINFEKL y marcada con éster succinimidílico de carboxifluoresceína (CFSE) 1,65 nM, o los cargados con péptido y marcados con CellTracker Orange (CTO) 10 pM. Se monitoriza la lisis específica de las dianas cargadas con péptido por citometría de flujo de muestras de sangre o bazo 24 h después. Se calcula el porcentaje medio de supervivencia de dianas pulsadas con péptido (CFSE+) con respecto al de la población de control (CTO+), y se expresa la actividad citotóxica como el porcentaje de lisis específica ( 10 0 - porcentaje medio de la supervivencia de dianas pulsadas con péptido).
Análisis de la actividad antitumoral. Grupos de ratones C57BL/6 (n = 5) reciben una inyección subcutánea en el flanco de 1 x 105 células de melanoma B16.OVA, que expresan un ADNc que codifica la secuencia de ovoalbúmina de pollo (OVA). Se tratan los grupos diferentes 7 días después, cuando los tumores se injertan completamente, por inyección intravenosa de uno de lo siguiente; 200 pg de proteína OVA junto con 200 ng de a-GalCer, 200 pg de proteína OVA junto con 200 ng de un compuesto de la divulgación, o PBS. Los ratones se monitorizan para crecimiento tumoral cada 3-4 días, y se calcula el tamaño tumoral para cada grupo como la media de los productos de diámetros bisecantes (± EEM).
Las mediciones se terminan para cada grupo cuando el primer animal desarrolla un tumor que supera 200 mm2. Evaluación de linfocitos T humanos. Se cultivan células mononucleares de sangre periférica de donantes seropositivos para CMV durante 8 d en presencia de a-GalCer, péptido NLVPMVATV, a-GalCer mixto y péptido o el conjugado CN188 en medio completo (IMDM complementado con 5 % de suero AB humano). a-GalCer 500 ng/mL (= 582,5 nM), CN188 y NLVPMVATV usaron el equivalente molar de 582,5 nM.
Se usan citometría de flujo con tetrámero fluorescente HLA-A2/NLVPMVATV (conjugado con PE, Immudex) y anticuerpos para CD3 (Alexa Fluor 700 CD3, Biolegend) y CD8 (APC-H7 Cd8 , BD) para detectar linfocitos T específicos de péptido. Se determinan proporciones de linfocitos T CD8 + específicos de NLVPMVATV por supresión de dobletes y células muertas (con DAPI), por regulación en la población de linfocitos por dispersión frontal y lateral, y luego seleccionando células CD3 positivas y CD19 (FITC CD19, BD) negativas. Se usa un panel de tinción separado con tetrámero CD1d cargado conjugado con PE para detectar linfocitos iNKT.
Donde se ha hecho la referencia de descripción anterior a números enteros que tienen equivalentes conocidos de los mismos, los equivalentes se incorporan en el presente documento como si se expusieran individualmente.
Aunque la invención se ha descrito a propósito de realizaciones preferidas específicas, se debe entender que la invención como se reivindica no debe ser excesivamente limitada a dichas realizaciones específicas.
Se aprecia que se pueden hacer modificaciones adicionales a la invención como se describe en el presente documento sin apartarse del alcance de la invención.
APLICABILIDAD INDUSTRIAL
La invención se refiere a análogos de esfingoglucolípidos y derivados de péptido de los mismos, que son útiles en el tratamiento o la prevención enfermedades o tales como las relacionadas a infección, trastornos atópicos, enfermedades autoinmunitarias o cáncer.
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Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto que es:
A. un compuesto de la fórmula (I):
Figure imgf000213_0001
en donde:
A es un grupo conector auto-inmolativo;
D se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000213_0002
en donde * indica un punto de unión del grupo D al grupo A;
R15 es una cadena lateral de uno de los siguientes aminoácidos: L-lisina, L-citrulina, L-arginina, L-glutamina o L-treonina;
R16 es una cadena lateral de un aminoácido hidrófobo;
R19 es un grupo alquileno;
R32 es un grupo alquileno o un grupo O-alquileno en donde el O está unido al grupo carbonilo de D2; E se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000214_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo E al grupo D;
R20 es H o alquilo C1-C6 ;
R21 es un grupo alquileno;
g es 0 cuando R20 es H o g es 1 cuando R20 es alquilo C1-C6 ;
a condición de que E sea E18 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que E sea E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10, E11, E12, E13, E15, E20, E21, E93, E94 o E96 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4; y a condición de que E sea E91, E92 o E95 solo cuando D sea D5 y a condición de que E sea E97 solo cuando D sea D2;
G está ausente o G es una secuencia de aminoácidos de hasta 6 aminoácidos, unida mediante su extremo N al grupo E y mediante su extremo C al grupo J;
J es un antígeno peptídico, opcionalmente sustituido en sus extremos N y/o C con hasta 6 aminoácidos seleccionados del grupo de restos flanqueantes naturales para el antígeno, y opcionalmente terminado con NH2 en el extremo C de manera que se proporcione una amida de extremo C, y unido al grupo G mediante su extremo N o, en donde G está ausente, unido al grupo E mediante su extremo N;
R1 es H o glucosilo, a condición de que si R1 es glucosilo entonces R2 y R3 sean ambos OH y R4 sea CH2OH;
R 2 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR 10 ; a condición de que si R 2 es H, F u OR 10 , entonces R1 sea H, R3 sea OH y R4 sea CH2OH;
R se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F y OR ; a condición de que si R es H, F u OR , entonces R1 sea H, R2 sea OH y R4 sea CH2OH;
R4 es CH3 , CH2OH, CH2OCOR11, CH2OR10, CH2OR11, CH2OSO3H, CH2SH, CH2SR11, CH2SOR11, CH2SO2R11, CH2PO3 H2 , CH2OP(O)(OH)2 , CH2OP(O)(OH)(OR11), CH2OP(O)(OR11)2 , CO2H, CH2NHCOR11, CH2NHCO2R11, CH2NHCONH2 , CH2NHCONHR11, CH2NHCON(R11)23 CH2N(R11)2 , CH2NHSO2R11; a condición de que si R4 es distinto de CH2OH, entonces R1 es H y R2 y R3 son OH;
R6 es OR12, OH o H;
R 77 es OR 12 ,8OH o H; a condición de que al menos uno de R 6 y R 7 sea OR 12 ; en donde cuando R 6 es OR 12 , R7 es H, R8 es alquilo C1-C15 y X es O, -----— indica un doble enlace opcional que une el carbono adyacente a R7 con el carbono adyacente a 'R ;
R8 es H o alquilo C1-C15 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada, en donde la cadena de carbono incorpora opcionalmente uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, uno o más átomos de oxígeno y/o un grupo arilo opcionalmente sustituido terminal o no terminal;
R10 es glucosilo;
R11 es alquilo C1-C6 , alquenilo C2-C6 o aralquilo;
R12 es acilo C6-C30 que tiene una cadena de carbono lineal o ramificada opcionalmente sustituida con uno o más grupos hidroxi en las posiciones 2 y/o 3 del grupo acilo y/o un grupo arilo de extremo de cadena opcionalmente sustituido y que opcionalmente incorpora uno o más dobles enlaces, uno o más triples enlaces, y/o uno o más grupos arileno opcionalmente sustituidos y en donde la cadena de carbono se sustituye opcionalmente con uno o más átomos de deuterio; en donde los sustituyentes opcionales en los grupos arilo y arileno se pueden seleccionar de halógeno, ciano, dialquilamino,C1-C6 amida, nitro, alcoxi C1-C6 , aciloxi C1-C6 y tioalquilo C1-C6 ;
X es O, CH2 o S;
n es 1 cuando X es O o S; o n es 0 o 1 cuando X es CH2 ;
en donde donde X es CH2 , entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10 o CH2OR11; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R), (2S, 3S, 4S), (2R, 3S, 4S), (2R, 3S, 4R) o (2S, 3R, 4S); o R6 es OR12 y R7 es H, y R8 es C13H27 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
en donde donde X es S, entonces lo siguiente debe ser todo cierto: la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros en la fórmula (I) es a-D-galacto; R1 es H; R2 y R3 son ambos OH; R4 es CH2OH, CH2OR10, CH2OR11 o CO2H; y:
o bien R6 es OH y R7 es OR12 y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 y 4 es (2S, 3S, 4R); o R6 es OR12 y R7 es H y la estereoquímica en los átomos de carbono 2 y 3 es (2S, 3S);
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; o
B. un compuesto de la fórmula (II):
Figure imgf000215_0001
en donde A, D, X, R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R10, R11, R12, R15, R16, R32, y n son todos como se define en la reivindicación 1A;
Z se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000216_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo Z al grupo D, excepto como se define para Z23;
R20 es como se ha definido anteriormente para la fórmula (I);
R23 es arilo, aralquilo o alquilo opcionalmente sustituido;
R24 es alquilo C1-C6 ;
R25 es P-C6H4L en donde L es H, metoxi, COOH, C(O)NHCH2COOH o CH2CH2NMe2 ;
R26 es aralquilo;
R27 es H o alquilo C1-C6 ;
R28 es alquileno;
R31 es (CH2CH2O)k
k es un número entero desde 2 hasta 100;
W es un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido; o W es un sistema de anillos bicíclicos o tricíclicos condensados que comprende un anillo de ciclooctinilo opcionalmente sustituido condensado con uno o más grupos arilo o uno o más grupos cicloalquilo; en donde el anillo de ciclooctinilo contiene opcionalmente un átomo de N dentro del anillo, átomo de N que se sustituye opcionalmente con un grupo acilo; y en donde el anillo de ciclooctinilo se sustituye opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxilo, alcoxi y aralquilo, en donde la parte de arilo de este grupo se sustituye opcionalmente con un ácido carboxílico; y en donde * o uno de los sustituyentes opcionales comprende un punto de unión de Z23 al grupo D;
a condición de que Z sea Z1, Z2, Z3, Z4, Z7, Z8, Z9, Z10, Z11, Z13, Z15, Z16, Z17 o Z18 solo cuando D sea D1, D2, D3 o D4 y a condición de que Z sea Z12 solo cuando D sea D1, D2 o D3 y a condición de que Z sea Z5 o Z20 solo cuando D sea D5, y a condición de que Z sea Z21, Z22 o Z23 solo cuando D sea D2; excluyendo el compuesto que tiene la fórmula
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto según la reivindicación 1A o reivindicación 1B, en donde A se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000217_0001
en donde * indica un punto de unión del grupo A al grupo D;
cada Q1, el mismo o diferente, se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, alquilo, alcoxi, halógeno, nitro, arilo; o, junto con el anillo al que se une, forma un grupo arilo bicíclico condensado;
p es un número entero desde 1 hasta 4;
Alq1 es alquilo C1-C4 de cadena lineal; y
R28 es H o alquilo C1-C6 ;
a condición de que A sea A1 solo cuando D sea D1 y a condición de que A sea A2 solo cuando D sea D2, D3 o D5 y a condición de que A sea A3 solo cuando D sea D1, D3 o D4 y a condición de que A sea A4 solo cuando D sea D2, D3 o D5 y a condición de que A sea A5 solo cuando D sea D1, D3 o D4.
3. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, en donde A es A1 o A2, por ejemplo, en donde A es A1 en donde R28 es H, o en donde A es A2 en donde Q1 es H.
4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde D es D1, D2 o D5.
5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde R15 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000217_0002
y/o
R16 se selecciona del grupo que consiste en:
Figure imgf000217_0003
6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1A y 2 a 5, en donde G es
Figure imgf000217_0004
en donde * indica un punto de unión de grupo G al grupo E.
7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1A y 2 a 5, en donde J se selecciona del grupo que consiste en:
AMLGTHTMEV (SEQ ID NO:1), MLGTHTMEV (SEQ ID NO:2), EAAGIGILTV (SEQ ID NO:3), AAGIGILTV (SEQ ID NO:4), AADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID NO:5), AAGIGILTVILGVL (SEQ ID NO:6), AARAVFLAL (SEQ ID NO:7), ACDPHSGHFV (SEQ ID NO:8), ACYEFLWGPRALVETS (SEQ ID NO:9), ADHRQLQLSISSCLQQL (SEQ ID NO:10), AEEAAGIGILT (SEQ ID NO:11), AEEAAGIGIL (SEQ ID NO:12), AELVHFLLL (SEQ ID NO:13), AELVHFLLLKYRAR (SEQ ID NO:14), AEPINIQTW (SEQ ID NO:15), AFLPWHRLF (SEQ ID NO:16), AGATGGRGPRGAGA (SEQ ID NO:17), ALCRWGLLL (SEQ ID NO:18), ALDVYNGLL (SEQ ID NO:19), ALFDIESKV (SEQ ID NO:20), ALGGHPLLGV (SEQ ID NO:21), ALIHHNTHL (SEQ ID NO:22), ALKDVEERV (SEQ ID NO:23), ALLAVGATK (SEQ ID NO:24), ALLEIASCL (SEQ ID NO:25), ALNFPGSQK (SEQ ID NO:26), ALPYWNFATG (SEQ ID NO:27), ALSVMGVYV (SEQ ID NO:28), ALWPWLLMAT (SEQ ID NO:29), ALWPWLLMA (SEQ ID NO:30), ALYVDSLFFL (SEQ ID NO:31), ANDPIFVVL (SEQ ID NO:32), APPAYEKLSAEQ (SEQ ID NO:33), APRGPHGGAASGL (SEQ ID NO:34), APRGVRMAV (SEQ ID NO:35), ARGPESRLL (SEQ ID NO:36), ASGPGGGAPR (SEQ ID NO:37), ATGFKQSSKALQRPVAS (SEQ ID NO:38), AVCPWTWLR (SEQ ID NO:39), AWISKPPGV (SEQ ID NO:40), AYVCGIQNSVSANRS (SEQ ID NO:41), CATWKVICKSCISQTPG (SEQ ID NO:42), CEFHACWPAFTVLGE (SEQ ID NO:43), CLSRRPWKRSWSAGSCPGMPHL (SEQ ID NO:44), CMTWNQMNL (SEQ ID NO:45), CQWGRLWQL (SEQ ID NO:46), CTACRWKKACQR (SEQ ID NO:47), DPARYEFLW (SEQ ID NO:48), DTGFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRV (SEQ ID NO:49), DVTFNIICKKCG (SEQ ID NO:50), EAAGIGILTV (SEQ ID NO:51), EADPTGHSY (SEQ ID NO:52), EAFIQPITR (SEQ ID NO:53), EDLTVKIGDFGLATEKSRWSGSHQFEQLS (SEQ ID NO:54), EEAAGIGILTVI (SEQ ID NO:55), EEKLIVVLF (SEQ ID NO:56), EFYLAMPFATPM (SEQ ID NO:57), EGDCAPEEK (SEQ ID NO:58), EIIYPNASLLIQN (SEQ ID NO:59), EKIQKAFDDIAKYFSK (SEQ ID NO:60), ELTLGEFLKL (SEQ ID NO:61), ELVRRILSR (SEQ ID NO:62), ESRLLEFYLAMPF (SEQ ID NO:63), ETVSEQSNV (SEQ ID NO:64), EVDPASNTY (SEQ ID NO:65), EVDPIGHLY (SEQ ID NO:66), EVDPIGHVY (SEQ ID NO:67), EVISCKLIKR (SEQ ID NO:68), EVYDGREHSA (SEQ ID NO:69), EYLQLVFGI (SEQ ID NO:70), EYLSLSDKI (SEQ ID NO:71), EYSKECLKEF (SEQ ID NO:72), EYVIKVSARVRF (SEQ ID NO:73), FIASNGVKLV (SEQ ID NO:74), FINDEIFVEL (SEQ ID NO:75), FLDEFMEGV (SEQ ID NO:76), FLEGNEVGKTY (SEQ ID NO:77), FLFLLFFWL (SEQ ID NO:78), FLIIWQNTM (SEQ ID NO:79), FLLHHAFVDSIFEQWLQRHRP (SEQ ID NO:80), FLLLKYRAREPVTKAE (SEQ ID NO:81), FLTPKKLQCV (SEQ ID NO:82), FLWGPRALV (SEQ ID NO:83), FMNKFIYEI (SEQ ID NO:84), FMVEDETVL (SEQ ID NO:85), FPSDSWCYF (SEQ ID NO:86), FRSGLDSYV (SEQ ID NO:87), FSWAMDLDPKGA (SEQ ID NO:88), GARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPL (SEQ ID NO:89), GDNQIMPKAGLLIIV (SEQ ID NO:90), GELIGILNAAKVPAD (SEQ ID NO:91), GFKQSSKAL (SEQ ID NO:92), GLASFKSFLK (SEQ ID NO:93), GLCTLVAML (SEQ ID NO:94), GLPPDVQRV (SEQ ID NO:95), GLYDGMEHLI (SEQ ID NO:96), GRAMLGTHTMEVTVY (SEQ ID NO:97), GVALQTMKQ (SEQ ID NO:98), GVGSPYVSRLLGICL (SEQ ID NO:99), AKFVAAWTLKAAA (SEQ ID NO:100), GVLLKEFTVSGNILTIRLT (SEQ ID NO:101), GVLVGVALI (SEQ ID NO:102), GVYDGREHTV (SEQ ID NO:103), HLFGYSWYK (SEQ ID NO:104), HLIRVEGNLRVE (SEQ ID 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NO:139), KINKNPKYK (SEQ ID NO:140), KISQAVHAAHAEINEAGRESIINFEKLTEWT (SEQ ID NO:141), KKLLTQHFVQENYLEY (SEQ ID NO:142), KMDAEHPEL (SEQ ID NO:143), KNCEPVVPNAPPAYEKLSAE (SEQ ID NO:144), KRYFKLSHLQMHSRKH (SEQ ID NO:145), KSSEKIVYVYMKLNYEVMTK (SEQ ID NO:146), KTWGQYWQV (SEQ ID NO:147), KVAELVHFL (SEQ ID NO:148), KVHPVIWSL (SEQ ID NO:149), KVLEYVIKV (SEQ ID NO:150), KYDCFLHPF (SEQ ID NO:151), KYVGIEREM (SEQ ID NO:152), LAALPHSCL (SEQ ID NO:153), LAAQERRVPR (SEQ ID NO:154), LAGIGILTV (SEQ ID NO:155), LAMPFATPM (SEQ ID NO:156), LGFKVTLPPFMRSKRAADFH (SEQ ID NO:157), LGPGRPYR (SEQ ID NO:158), LHHAFVDSIF (SEQ ID NO:159), LIYRRRLMK (SEQ ID NO:160), LKEFTVSGNILTIRL (SEQ ID NO:161), LKLSGVVRL (SEQ ID NO:162), LLANGRMPTVLQCVN (SEQ ID NO:163), LLDGTATLRL (SEQ ID NO:164), LLEFYLAMPFATPM (SEQ ID NO:165), LLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQ (SEQ ID NO:166), LLFGLALIEV (SEQ ID NO:167), LLGATCMFV (SEQ ID NO:168), LLGPGRPYR (SEQ ID NO:169), LLGRNSFEV (SEQ ID NO:170), LLKYRAREPVTKAE (SEQ ID NO:171), LLLDDLLVSI (SEQ ID NO:172), LLLLTVLTV (SEQ ID NO:173), LLWSFQTSA (SEQ ID NO:174), LLYKLADLI (SEQ ID NO:175), LMLQNALTTM (SEQ ID NO:176), LPAVVGLSPGEQEY (SEQ ID NO:177), LPHSSSHWL (SEQ ID NO:178), LPRWPPPQL (SEQ ID NO:179), LPSSADVEF (SEQ ID NO:180), LSHLQMHSRKH (SEQ ID NO:181), LSRLSNRLL (SEQ ID NO:182), LTDLQPYMRQFVAHL (SEQ ID NO:183), LWWVNNQSLPVSP (SEQ ID NO:184), LYATVIHDI (SEQ ID NO:185), LYSACFWWL (SEQ ID NO:186), LYVDSLFFL (SEQ ID NO:187), MEVDPIGHLY (SEQ ID NO:188), MIAVFLPIV (SEQ ID NO:189), MIFEKHGFRRTTPP (SEQ ID NO:190), MKLNYEVMTKLGFKVTLPPF (SEQ ID NO:191), MLAVISCAV (SEQ ID NO:192), MLLAVLYCL (SEQ ID NO:193), MLMAQEALAFL (SEQ ID NO:194), MPFATPMEA (SEQ ID NO:195), MPREDAHFIYGYPKKGHGHS (SEQ ID NO:196), MSLQRQFLR (SEQ ID NO:197), MVKISGGPR (SEQ ID NO:198), NLVPMVATV (SEQ ID NO:199), NPPSMVAAGSVVAAV (SEQ ID NO:200), NSIVKSITVSASG (SEQ ID NO:201), NSNHVASGAGEAAIETQSSSSEEIV (SEQ ID NO:202), NSQPVWLCL (SEQ ID NO:203), NTYASPRFK (SEQ ID NO:204), NYARTEDFF (SEQ ID NO:205), NYKRCFPVI (SEQ ID 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8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde X es O.
9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde n es 1, la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros de la fórmula (I) es a-D-galacto, R6 es OH y R7 es OR12, o
n es 0, X es CH2 , la estereoquímica del anillo de azúcar de 6 miembros es a-D-galacto, R6 es OH y R7 es OR12, o X es O, R6 es OR12, R7 es H, R8 es alquilo C1-C15 y ........... es un doble enlace que une el carbono adyacente a R7 con el carbono adyacente a R8, y la estereoquímica en los átomos de carbono 2, 3 es (2S, 3S).
10. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde R8 es alquilo C1-C15, y/o
R11 es alquilo, y/o
R12 es acilo que tiene una cadena de carbono lineal desde 6 hasta 30 átomos de carbono de longitud.
11. Un compuesto según la reivindicación 1A seleccionado del grupo que consiste en:
(a)
(d)
Figure imgf000221_0001
(e)
Figure imgf000221_0002
(f)
Figure imgf000221_0003
(g)
Figure imgf000221_0004
(h)
Figure imgf000221_0005
(i)
Figure imgf000222_0001
Figure imgf000223_0001
(p)
Figure imgf000223_0002
(q)
Figure imgf000223_0003
y
(r)
Figure imgf000223_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. Un compuesto según la reivindicación 1B, seleccionado del grupo que consiste en:
(aa)
Figure imgf000223_0005
(bb)
Figure imgf000224_0001
(cc)
Figure imgf000224_0002
(dd)
Figure imgf000224_0003
(ee)
Figure imgf000224_0004
(ff)
Figure imgf000224_0005
(gg)
Figure imgf000224_0006
(hh)
Figure imgf000225_0001
(ii)
Figure imgf000225_0002
(jj)
Figure imgf000225_0003
(kk)
Figure imgf000225_0004
(ll)
Figure imgf000225_0005
(mm)
Figure imgf000226_0001
(nn)
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(oo)
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(pp)
Figure imgf000226_0004
y
(qq)
Figure imgf000226_0005
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
13. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable, por ejemplo en donde la composición farmacéutica es una vacuna que opcionalmente comprende un antígeno.
14. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad infecciosa, un trastorno atópico, una enfermedad autoinmunitaria, diabetes o cáncer en un paciente que requiere tratamiento.
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