ES2663019T3 - Cepa de E. coli F18 no patógena y uso de la misma - Google Patents

Cepa de E. coli F18 no patógena y uso de la misma Download PDF

Info

Publication number
ES2663019T3
ES2663019T3 ES13819873.4T ES13819873T ES2663019T3 ES 2663019 T3 ES2663019 T3 ES 2663019T3 ES 13819873 T ES13819873 T ES 13819873T ES 2663019 T3 ES2663019 T3 ES 2663019T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
coli strain
strain
live
coli
pathogenic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES13819873.4T
Other languages
English (en)
Inventor
John Morris Fairbrother
Éric NADEAU
Clarisse DESAUTELS
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Prevtec Microbia Inc
Original Assignee
Prevtec Microbia Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Prevtec Microbia Inc filed Critical Prevtec Microbia Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2663019T3 publication Critical patent/ES2663019T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • C12R2001/19—Escherichia coli
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Cepa de E. coli aislada depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá (IDAC) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
DESCRIPCION
Cepa de E. coli F18 no patógena y uso de la misma Referencia cruzada a la solicitud relacionada
Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente de EE. UU. provisional 61/674,179, presentada el 20 de julio de 2012.
Campo técnico
Esta solicitud se refiere a una cepa de E. coli F18 no patógena y a su uso.
Antecedentes
La enfermedad de los edemas y la diarrea son típicamente enfermedades comunes entre los animales de cría. Por ejemplo, la enfermedad de los edemas en lechones destetados es producida típicamente por cepas de Escherichia coli codificadas por toxina Shiga (STEC, por sus siglas en inglés) que codifican la toxina Shiga tipo 2e (Stx2e) (MacLeod et al., 1991, Vet Pathol 28:66-73), mientras que la diarrea secretora en lechones recién nacidos y destetados es producida típicamente por cepas de Escherichia coli enterotoxigénicas (ETEC, por sus siglas en inglés) que codifican enterotoxinas termoestables (STa, STb, EAST1) y/o termolábiles (TL) (Gyles and Fairbrother, 2010, Escherichia coli. En: Pathogenesis of bacterial infections in animals, ed. Gyles CL, Prescott JF, Songer G, Thoen CO, 4a ed., pp. 267-308. Blackwell Publishing, Ames, IA; Nagy et al., 1997, Microb Pathog 22:1-11). Algunas cepas patógenas expresan tanto los genes Stx2e como los genes de enterotoxina y por lo tanto pueden ocasionar síntomas de la enfermedad de los edemas y los de la diarrea en el mismo animal (STEC/ETEC) (Barth et al., 2007, Berl Munch Tierarztl Wochenschr 120:307-316).
Una deficiencia asociada a muchas composiciones y a muchos métodos, terapéuticos o profilácticos, convencionales, para infecciones bacterianas intestinales asociadas a síntomas de la enfermedad de los edemas y/o la enfermedad diarreica es su baja fiabilidad o eficacia. Hay por lo tanto necesidad de composiciones y métodos, terapéuticos o profilácticos, mejorados, para la enfermedad de los edemas y/o la enfermedad diarreica.
Resumen
En un aspecto se proporciona una cepa de Escherichia coli aislada depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá (IDAC, por sus siglas en inglés) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01.
En otro aspecto se proporciona un método para prevenir una infección intestinal por Escherichia coli (E. coli) F18 patógena en un animal, que comprende el suministro entérico al animal de una cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá (IDAC) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01.
En otro aspecto se proporciona un método para prevenir la enfermedad de los edemas o diarrea producida por una infección por Escherichia coli (E. coli) F18 patógena en un animal, que comprende el suministro entérico al animal de una cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá (IDAC) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01.
En una realización, la cepa E. coli viva está en forma liofilizada. En otra realización no limitante, la cepa de E. coli viva está asociada a un portador aceptable del alimento, por ejemplo, la cepa de E. coli viva puede diluirse, incorporarse a, o suspenderse en, el portador aceptable del alimento. En otra realización no limitante, la cepa de E. coli viva está en forma congelada.
Estos y otros aspectos y características de la presente invención llegarán a ser evidentes ahora para los expertos en la materia con la revisión de la siguiente descripción de realizaciones específicas de la invención junto con los dibujos adjuntos.
Breve descripción de los dibujos
Se proporciona en la presente memoria a continuación una descripción detallada de las realizaciones de la presente invención con referencia a los dibujos adjuntos en los que:
Figura 1: Es un gráfico no limitante que ilustra la excreción fecal de la cepa F18 no patógena después de la administración de la cepa F18 no patógena, viva, según dosis variables, mostradas como el logaritmo inverso del promedio de las unidades logarítmicas de formación de colonias (UFC).
Figura 2: Es un gráfico no limitante que ilustra la excreción fecal de una cepa de exposición patógena F18-STEC: comparación entre animales que han sido tratados con la composición combinada y animales de control.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Figura 3: Es un gráfico no limitante que ilustra la colonización por la cepa de exposición patógena F18-STEC en diferentes segmentos intestinales: comparación entre animales que han sido tratados con la composición combinada y animales de control.
Figura 4: Es un gráfico no limitante que ilustra la detección inmunológica de IgM frente a fimbria F18 en muestras serológicas: comparación entre animales que han sido tratados con la composición combinada y animales de control.
Descripción detallada de las realizaciones
En general, las cepas STEC porcinas y muchas cepas ETEC porcinas expresan el determinante de F18. El determinante de F18 es una fimbria que facilita la colonización bacteriana de la superficie mucosal del intestino (Fairbrother et al. 2006, Postweaning Escherichia coli diarrhea and edema disease. En: Diseases of swine, ed. Straw B, Zimmermann JJ, D'Allaire S, Taylor DJ, 9a ed., pp. 649-662. Blackwell Publishing, Ames, IA). Se cree que la fimbria F18 media la adhesión de una célula bacteriana que expresa F18 a un receptor de enterocitos, el receptor ECF18R, que se expone por los enterocitos del intestino delgado en su membrana citoplasmática apical (Vogeli et al. 1996, Anim Genet 27:321-328; Waddell et al. 1996, Infect Immun 64:1714-1719).
Algunas cepas de STEC y STEC/ETEC porcinas pueden expresar otras fimbrias citoadhesivas o adhesinas no fimbriales además de la fimbria F18, en particular fimbria F4 o F5 o la "adhesina implicada en la adherencia difusa" (AIDA, por sus siglas en inglés) (Barth et al., 2007, Berl Munch Tierarztl Wochenschr 120:307-316; DebRoy et al. 2009, J Vet Diagn Invest 21:359-364; Fairbrother et al., supra; Niewerth et al.: 2001, Clin Diagn Lab Immunol 8:143- 149). Si bien la adhesina AIDA se encuentra con frecuencia en ambos patógenos, las fimbrias F4 o F5 son raras en esas cepas.
En la granja, la diarrea posdestete (DPD) y la enfermedad de los edemas (EE) en cerdos tienen lugar en general en las primeras 2 semanas posdestete y se asocian a infección por cepas de E. coli enterotoxigénicas F4 o F18 (ETEC) para la DPD y por cepas de E. coli productoras de toxina Shiga F18 patógenas (STEC) para la EE. Para las dos cepas, las fimbrias (es decir, F4 o F18) permiten la adhesión de las bacterias a sus receptores específicos, situados en las vellosidades del intestino delgado, seguido por división de las bacterias y colonización del intestino.
En la DPD, los receptores F4 se expresan en aproximadamente el 30 % al 40 % de los cerdos y se detectan receptores F18 en aproximadamente el 70 % al 80 % de los cerdos. Las cepas patógenas producen una combinación de varias toxinas tales como LT, STa y STb. Los cerdos infectados con ETEC-F4 muestran en general una morbilidad muy alta, retraso en el crecimiento, diarrea acuosa y proyectil que con frecuencia conducen a la muerte del animal infectado.
En la EE, los receptores F18 se detectan en aproximadamente el 70 % al 80 % de los cerdos. La toxina asociada a STEC es Stx2e, una vasotoxina que actúa en las células endoteliales vasculares dando como resultado edema y posteriores signos neurológicos incluyendo ataxia, posición de decúbito, y eventualmente, en cuanto a la DPD, con frecuencia conduce a la muerte del animal infectado.
Como se usa en la presente memoria, la expresión "E. coli F18" o "cepa F18" se refiere a una cepa de E. coli que expresa el determinante F18 (fimbria).
Como se usa en la presente memoria, la expresión "E. coli F4" o "cepa F4" se refiere a una cepa de E. coli que expresa el determinante F4 (fimbria).
El experto reconocerá que la cepa F18 no patógena descrita en la presente memoria puede ser manipulada para obtener su cepa mutante o variante, una cepa que presente todas las características identificativas de la cepa descrita en la presente memoria, sin excesivo esfuerzo. Los métodos para crear mutantes o variantes son comunes y se conocen en la técnica. Por ejemplo, la patente de EE. UU. número 7,371,558 describe un resumen de algunos métodos para crear su "mutante o variante". También están bien documentados en la técnica métodos específicos para crear mutantes usando radiación o agentes químicos. Véase, por ejemplo, Thomas D. Brock en Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology, segunda edición (1989) Sinauer Associates, Inc., Sunderland, Mass., o Deshpande, Mukund V., Appl. Biochem. Biotechnol. 36, 227 (1992). También puede identificarse su cepa mutante o variante con un genoma o una parte significativa del mismo que se hibrida en condiciones de alta exigencia al genoma de la cepa descrita en la presente memoria. El experto podrá reconocer cuánto de significativa debe ser una parte de un genoma para considerar si una determinada cepa es "su mutante o variante".
Como se usa en la presente memoria, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad que provocará la respuesta biológica deseada de un tejido, sistema o animal. Dicha cantidad eficaz de la cepa de E. coli F18 viva descrita en la presente memoria puede ser, por ejemplo, pero sin limitación, la cantidad que sea suficiente para prevenir infección bacteriana intestinal, minimizando la excreción bacteriana, previniendo una enfermedad producida por infección bacteriana intestinal y similares. La cantidad eficaz que se tiene que usar puede variar según una serie de factores. Por ejemplo, el número de factores puede seleccionarse del tipo de animal, el peso inicial del animal, la fase de crecimiento del animal, el entorno, el portador aceptable del alimento asociado a la cepa viva, es decir, instalaciones para animales, tipo y gestión de producción, estado higiénico de las instalaciones, estrés de los
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
animales después del destete o la incubación, alimentación y suplementos usados, salud del animal y enfermedades o tratamiento concomitantes y similares. Por ejemplo, la cantidad eficaz puede ser, pero sin limitarse a, cualquier cantidad seleccionada del intervalo de aproximadamente 5x106 a aproximadamente 3x1010 UFC. El experto en la materia podrá determinar una cantidad eficaz adecuada sin un excesivo esfuerzo.
Como se usa en la presente memoria, el término "animal" se refiere a cualquier animal joven o adulto adecuado para usarse según la presente invención. En una realización no limitante, el término "animal" se refiere a un animal porcino. En una realización no limitante, el término "animal" se refiere a un cerdo. En una realización no limitante, el cerdo es un cerdo predestetado. En otra realización no limitante, el cerdo es un cerdo posdestetado. El experto en la materia podrá determinar un animal adecuado sin un excesivo esfuerzo.
Como se usa en la presente memoria, el término "suministro entérico" se refiere a un modo de administración que permite que la cepa alcance eventualmente el tubo digestivo y más preferiblemente los intestinos. En una realización no limitante, el suministro entérico se realiza por administración oral de la cepa. En otra realización no limitante, el suministro entérico se realiza por administración rectal, por ejemplo, mediante un supositorio. El experto en la materia podrá determinar un modo de administración adecuado sin un excesivo esfuerzo.
Como se usa en la presente memoria, la expresión "portador aceptable del alimento" se refiere a cualquier portador, diluyente o excipiente que sea compatible con la cepa descrita en la presente memoria y que pueda darse a un animal sin efectos adversos. Los portadores aceptables de alimentación, adecuados, conocidos en la técnica incluyen, pero no se limitan a, agua, disolución salina, glucosa, dextrosa, disoluciones tamponadas y similares. Dicho portador es ventajosamente no tóxico para la cepa y no perjudicial para el animal. También puede ser biodegradable. El portador puede ser un portador aceptable del alimento sólido o líquido. Un portador aceptable del alimento sólido, adecuado, es un portador ingerible no tóxico. Por ejemplo, este portador aceptable del alimento, sólido, puede ser un pienso sólido común tal como el componente de una dieta animal típica que consista en: productos cereales, tales como harina de cebada, harina de maíz o harina de trigo, productos de frutos secos y semillas, tales como torta de frutos secos molidos pelados o torta de semilla de algodón o torta de semilla de algodón extraída, junto con cantidades minoritarias de, por ejemplo, harina de plumas, harina de algas, comida de huesos, harina de huesos, caliza, sal, urea y vitaminas o puede ser un diluyente o portador sólido inerte sin valor nutricional, por ejemplo, caolín, talco, carbonato de calcio, tierra de batán, arcilla atapulgita, conchas de ostras molidas o piedra caliza molida o puede ser almidón o lactosa. En otra aplicación específica, el portador aceptable del alimento, sólido, puede ser maíz molido, soja triturada, suero, grasa animal y similares. Un portador aceptable del alimento líquido, adecuado, es por ejemplo, agua y preferiblemente agua potable; leche tal como leche entera o desnatada o un medio de cultivo tal como un caldo de triptona de soja (CTS). El experto en la materia podrá determinar un portador aceptable del alimento adecuado sin un excesivo esfuerzo.
Ejemplos
Ejemplo 1
a) Cepa de E. coli F18 no patógena
La cepa de E. coli depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá (IDAC) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01 se aisló de las heces de un cerdo en 1996 en el laboratorio de referencia de la OIE para Escherichia coli (EcL) en la Facultad de Medicina Veterinaria (FMV), Universidad de Montréal (UdeM), Saint-Hyacinthe, Quebec, Canadá por el Dr. J. M. Fairbrother.
Se realizó una identificación de la cepa usando el sistema API. El código API 20E para cultivo de referencia es 5004552. El establecimiento de serotipo de la cepa reveló un serotipo de O141:K94:H-.
Se realizó un establecimiento de virotipo de la cepa por hibridación de colonias y/o reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés). Los resultados del establecimiento de virotipo mostraron que la cepa era positiva para F18 y AIDA mientras que era negativa para las siguientes toxinas: STa, STb, LT, EAST1, Stx1, Stx2, CNF, F4, F5, F6, F17, F41, P, AFA, Eae, Paa, Tsh, genes de aerobactina. Esta cepa es así una cepa de E. coli no patógena.
La cepa es resistente a los siguientes antimicrobianos: amoxicilina, ampicilina, clindamicina, doxiciclina, eritromicina, neomicina, penicilina, espectinomicina, estreptomicina, sulfacloropiridazina, sulfadimetoxina, sulfatiazol, tiamulina, tilmicosina, tetraciclina (cloro y oxi) y tilosina, si bien es sensible a los siguientes antimicrobianos: apramicina, ceftiofur, colistina, danofloxacina, enrofloxacina y gentamicina.
b) Cepa de E. coli F4 no patógena
También puede usarse una cepa de E. coli F4 no patógena junto con la cepa F18 no patógena descrita en la presente memoria. En una realización no limitante, la cepa de E. coli F4 no patógena es cualquier cepa no patógena que exprese el determinante F4. En una realización no limitante, la cepa de E. coli F4 no patógena es una cepa recombinante, por ejemplo, la cepa pMK005 (Kehoe et a;., J Bacteriol., septiembre de 1983; 155(3):1071-7). En una realización no limitante, la cepa de E. coli F4 no patógena es una cepa natural, por ejemplo, la cepa depositada en la
5
10
15
20
25
30
Autoridad Internacional Depositaría de Canadá el 21 de enero de 2005 y número de registro atribuido IDAC 21010501, como se describe en la patente de EE. UU. 7,981,411.
Ejemplo 2
En un amplio aspecto, el fin de este estudio fue evaluar el impacto de diferentes dosis orales de la cepa F18 no patógena descrita en la presente memoria sobre su excreción fecal y sobre respuestas humorales sistémicas anti- F18.
La siguiente tabla 1 resume en general el plan de estudio:
Día
Suceso
0
Llegada de los cerdos a la unidad experimental y distribución en 3 grupos
0-5
Periodo de aclimatación
2 y 5 a 19
Muestreo fecal para PCR
5
Vacunación
5 a 8, 10, 12, 14, 16, 18 y 19
Muestreo fecal para recuento viable de cepas de la vacuna (basado en colonias hemolíticas)
5, 10, 12, 15 y 19
Muestra de sangre
8
Primera necropsia
19
Necropsia final y fin del experimento
I - Diseño del estudio
a) Animales
Se tomaron muestras de sangre de 50 lechones lactantes para análisis de detección del estado del receptor F18 y se marcaron las orejas de los lechones. Se adquirieron cerdos destetados seleccionados (machos y hembras), con edades comprendidas entre 17 y 20 días, de una granja local situada en Montérégie, Québec, Canadá. Se transportaron los animales a las instalaciones de aislamiento. La granja seleccionada no mostró síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRS, por sus siglas en inglés) ni episodios de enfermedad posdestete recientes (menos de 6 meses). Los cerdos eran cerdos sanos y pesaron entre 4 y 6 kg. Se usó un total de veintiún (21) cerdos, positivos para el estado del receptor F18, separados de manera aleatoria usando números de etiquetas para las orejas en tres (3) grupos de 7 animales (tres dosis diferentes de composición F18). El día 2 posdestete, se tomó una muestra fecal para determinar la colonización existente con cepas positivas a F4 y cepas positivas a F18 usando PCR. No se encontró ningún animal que fuera positivo a las bacterias positivas a F4 o positivas a F18 el día 2 posdestete.
b) Alojamiento y alimentación
Se mantuvieron los grupos de tratamiento en espacios separados. Los animales tuvieron acceso ad líbitum al agua y fueron alimentados dos veces al día durante el estudio. La dieta de los animales estaba constituida por una soja triturada de alto contenido en proteína como se describe en la patente de EE. UU. 6,355,859. No se administró medicación o vacunación concurrente durante el estudio.
c) Preparación y administración de la cepa
Se prepararon dos curvas de crecimiento de la misma manera para evaluar el tiempo requerido por la cepa F18 no patógena para lograr su rendimiento óptimo. Se usó siembra de trabajo (ST) para preparar la curva de crecimiento y el cultivo que se usó para preparar la composición de F18. Se usó un mililitro del ST para inocular 500 ml de caldo tríptico de soja sin materiales de origen animal. Se incubó el cultivo aproximadamente 6,5 horas a 37 °C con agitación (19 rad/s (180 rpm)). Se realizó un recuento viable para evaluar el rendimiento del cultivo de cepa F18 y se usó una reacción PCR para demostrar que se usaba la cepa apropiada durante el análisis. Basándose en los resultados, se ajustó el cultivo para satisfacer las dosis que se tenían que ensayar usando TSB estéril sin materiales de origen animal: Grupo 1, 5 x 108 UFC/dosis; grupo 2, 1 x 109 UFC/dosis y grupo 3, 5 x 109 UFC/dosis.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Se prepararon nueve (9) dosis de composición de cepa F18 no patógena para cada formulación, 2 más que el número de lechones que se tenía que tratar para compensar las pérdidas de composición. Se administraron seis (6) mL de composición de F18 por vía oral a cada lechón. Se administró la composición de F18 el día 5 posdestete usando un tubo esofágico.
II - Observaciones y evaluación
a) Salud general
Se observaron los lechones dos veces al día en cuanto a su salud general: comportamiento, deshidratación, apetito y estado físico general. También se evaluaron la movilidad y el aspecto del pelo.
b) Diarrea
Se valoró la consistencia fecal a diario como sigue: 0, normal; 1, pastosa; 2, presencia de líquido pero más partículas sólidas que líquidas; 3, presencia de más líquido que partículas sólidas y 4, totalmente líquida.
a) Excreción de la cepa F18 no patógena administrada
El día 2 y los días 5 a 19 posdestete, se analizaron las heces por PCR (múltiplex: LT, STa, STb y F4; F18, Stx2e y AIDA) siguiendo enriquecimiento en caldo Luria-Bertoni (LB) para evaluar la presencia de la cepa F18 no patógena administrada en cada grupo. Se consideró positiva una muestra positiva para F18 para la cepa F18 no patógena administrada. Los días 5 a 8, 10, 12, 14, 16, 18 y 19 posdestete, se realizó un recuento viable sobre muestras de heces usando agar de soja tríptico II (TSA II) - sangre ovina al 5 % para evaluar el nivel de la cepa F18 no patógena administrada excretada después de la administración. Sólo se contaron colonias hemolíticas con morfología típica de E. coli.
d) Evaluación de inmunización
Se recogieron muestras de sangre los días 5, 10, 12, 15 y 19 posdestete para evaluar por ELISA la respuesta inmunitaria óptima de acuerdo con la dosis de la cepa F18 no patógena administrada.
III - Necropsia
a) Necropsia
Se realizó una primera necropsia 3 días posvacunación, el día 8 posdesdete en 2 animales elegidos de manera aleatoria y se evaluaron deformidades graves. La segunda necropsia se realizó al final del estudio, por tanto el día 19 posdestete, que era 14 días posvacunación en todos los animales restantes.
b) Consistencia del contenido intestinal
Se valoró la consistencia del contenido intestinal en el yeyuno, íleon, ciego, colon y recto de la siguiente manera: 0, normal; 1, pastosa; 2, presencia de líquido pero más partículas sólidas que líquidas; 3, presencia de más líquido que partículas sólidas o totalmente líquida.
c) Colonización del íleon por la cepa de la vacuna
Se muestreó una porción de 2 centímetros del íleon a 10 cm proximal de la válvula ileocecal. Se llevó a cabo la enumeración de bacterias vivas usando TSA II - sangre ovina al 5 %, donde se contaron sólo colonias hemolíticas con morfología típica de E. coli.
IV - Resultados
No se observó mortalidad tanto en los animales tratados como en los de control durante todo lo estudio. Todos los cerdos seleccionados fueron positivos al receptor F18 según el método PCR-RFLP. En general, los lechones estaban en buen estado de salud a lo largo de todo el estudio. Pocos animales mostraron una movilidad reducida que aparecía antes de la administración de la cepa F18 no patógena o debido a lesiones por tanto no relacionadas con la administración de F18 no patógena.
Durante este estudio, se consideró una puntuación de 2 o más como diarrea. De los 21 animales, 5 mostraron diarrea leve y transitoria después de la administración de F18. Un animal (cerdo 5 del grupo 3) presentó diarrea (puntuación de 3) durante 2 días consecutivos (tablas 2a, 2b y 2c).
Se ensayaron a diario muestras fecales p°r PCR para detectar la presencia de la cepa administrada de F18; 3 animales en el grupo 2 (1 x 10 UFC/dosis) fueron positivos a la cepa administrada de F18, como muy tarde, el día 11 posvacunación, donde el grupo 3 (5 x 109 UFC/dosis) presentó 1 lechón positivo el día 10, 1 el día 8 y 3 el día 7 posvacunación. Para el grupo 1 (5 x 108 UFC/dosis) 1 lechón fue positivo a la cepa administrada de F18 no patógena el día 8 posvacunación, 1 lechón el día 7 y 2 el día 6 posvacunación (tablas 2a, 2b y 2c).

Claims (17)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    REIVINDICACIONES
    1. Cepa de E. coli aislada depositada en la Autoridad Internacional Depositaría de Canadá (IDAC) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01.
  2. 2. La cepa de E. coli aislada según la reivindicación 1, en forma liofilizada.
  3. 3. La cepa E. coli aislada según la reivindicación 1, en forma congelada.
  4. 4. La cepa de E. coli aislada según la reivindicación 1, en la que la cepa está junto con un portador aceptable del alimento.
  5. 5. Una composición que comprende una cepa de E. coli aislada depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá (IDAC) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01 y un portador aceptable del alimento.
  6. 6. La composición según la reivindicación 5, que comprende además una E. coli no patógena, viva, aislada, que expresa la fimbria F4.
  7. 7. La composición según la reivindicación 6, en la que dicha E. coli no patógena que expresa la fimbria F4 es la cepa depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá el 21 de enero de 2005 y número de registro atribuido IDAC 210105-01.
  8. 8. Una cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva depositada en la Autoridad Internacional Depositaria de Canadá (IDAC) el 20 de junio de 2013 y número de registro atribuido 200613-01, para uso, mediante suministro entérico a un animal en la prevención de una infección intestinal por E. coli F18 patógena en el animal.
  9. 9. La cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva, para uso según la reivindicación 8, en la que la cepa de E. coli viva es para suministro entérico por administración oral.
  10. 10. La cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva para uso según la reivindicación 8 o 9 viva está en forma liofilizada.
  11. 11. La cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva, para uso según la reivindicación 8 o 9 viva está en forma congelada.
  12. 12. La cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva para uso según la reivindicación 8 o 9 viva está junto con un portador aceptable del alimento.
  13. 13. La cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, en la que la cantidad eficaz es de al menos 5 x 107 UFC.
  14. 14. La cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva, para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, en la que el animal es un cerdo.
  15. 15. La cantidad eficaz de una cepa de E. coli viva según la reivindicación 8, para uso en la prevención de la enfermedad de los edemas o diarrea producida por la infección por E. coli F18 patógena.
    , en la que la cepa de E. coli , en la que la cepa de E. coli , en la que la cepa de E. coli
    imagen1
    1.00E+08
  16. 5.0ÜE+08
  17. 1 .OOE+09
    1.00E+07
    5,00E+09
    1.00E+06
    CEPA F18
    ADMINISTRADA 1.00E+05
    EXCRETADA
    1.00E+04 —
    (UFC/g)
    1.00E+03
    1,OOE+02
    1.00E+01
    4 A 6
    TIEMPO (DIAS)
    ADMINISTRACION
    DIA 5
    FIG. 1
    imagen2
    imagen3
ES13819873.4T 2012-07-20 2013-07-18 Cepa de E. coli F18 no patógena y uso de la misma Active ES2663019T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261674179P 2012-07-20 2012-07-20
US201261674179P 2012-07-20
PCT/CA2013/000660 WO2014012172A1 (en) 2012-07-20 2013-07-18 Non-pathogenic f18 e. coli strain and use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2663019T3 true ES2663019T3 (es) 2018-04-10

Family

ID=49948133

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES13819873.4T Active ES2663019T3 (es) 2012-07-20 2013-07-18 Cepa de E. coli F18 no patógena y uso de la misma

Country Status (17)

Country Link
US (3) US9453195B2 (es)
EP (1) EP2875121B1 (es)
JP (1) JP6278960B2 (es)
KR (1) KR102171028B1 (es)
CN (1) CN104736695B (es)
BR (1) BR112015001175B1 (es)
CA (1) CA2879155C (es)
DK (1) DK2875121T3 (es)
ES (1) ES2663019T3 (es)
HU (1) HUE036545T2 (es)
MX (1) MX363057B (es)
PH (1) PH12015500091B1 (es)
PL (1) PL2875121T3 (es)
PT (1) PT2875121T (es)
RS (1) RS57056B1 (es)
RU (1) RU2670882C9 (es)
WO (1) WO2014012172A1 (es)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE036545T2 (hu) 2012-07-20 2018-07-30 Prevtec Microbia Inc Nem-patogén F18 E. coli törzs és alkalmazása
JP6731416B2 (ja) * 2015-02-11 2020-07-29 プレヴテック マイクロビア インコーポレイテッド 生きている大腸菌を埋め込むための改良された乾燥マトリクス、その製造方法及びその使用
KR101715625B1 (ko) * 2015-06-02 2017-03-13 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장) 부종병 독소를 생산하는 대장균, 이를 이용한 부종병 독소의 생산방법 및 이를 포함하는 돼지 부종병 예방용 백신 조성물
RU2749883C2 (ru) * 2016-06-14 2021-06-18 Эланко Кэнэда Лимитед Гранулированный корм для животных, содержащий кормовую добавку, способ его получения и применения
WO2019006246A1 (en) * 2017-06-30 2019-01-03 The Rockefeller University N-ACYL AMIDES DERIVED FROM THE HUMAN MICROBIOTE FOR THE TREATMENT OF A HUMAN DISEASE
CN107523529B (zh) * 2017-10-20 2021-03-12 林州中农颖泰生物肽有限公司 一种利用大肠杆菌生产肠杆菌肽的工艺及其应用
CN109628361B (zh) * 2018-11-27 2022-08-19 扬州大学 整合双拷贝功能性f4菌毛操纵子基因猪源益生菌ep1克隆株、构建方法及应用
CN109504643B (zh) * 2018-11-27 2022-06-10 扬州大学 整合四拷贝功能性f18菌毛操纵子基因的益生菌克隆株、构建方法及应用
CN114752531B (zh) * 2022-04-29 2023-05-26 扬州大学 一株同时表达f4和f18菌毛的猪源大肠杆菌无毒分离株及其应用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2125455C1 (ru) * 1996-09-25 1999-01-27 Саратовская научно-исследовательская ветеринарная станция Способ профилактики диареи молодняка сельскохозяйственных животных
US6355859B1 (en) 1997-05-20 2002-03-12 Biotechnology Research And Development Corporation Interactions between genotype and diet in swine that prevent E. coli associated intestinal disease
US5965128A (en) * 1997-08-13 1999-10-12 University Of Georgia Research Foundation Inc. Control of enterohemorrhagic E. coli 0157:H7 in cattle by probiotic bacteria and specific strains of E. coli
WO2000006764A1 (en) * 1998-07-30 2000-02-10 Wisconsin Alumni Research Foundation Gastrointestinal bacterial antibody factories
US6304216B1 (en) 1999-03-30 2001-10-16 Conexant Systems, Inc. Signal detector employing correlation analysis of non-uniform and disjoint sample segments
HU221664B1 (hu) * 1999-03-31 2002-12-28 MTA Állatorvostudományi Kutatóintézete Élő, szájon át adható Escherichia coli vakcina készítésére alkalmas törzs a sertések választási hasmenésének megelőzésére és a törzs előállítására alkalmas eljárás
IL130303A0 (en) * 1999-06-03 2000-06-01 M G Novobiotech Ltd A bacterial strain processed plant extracts and probiotic compositions for human and veterinary use
AU2002221004B2 (en) * 2000-11-30 2007-01-25 The Bio Balance Corp. Preparation of compositions comprising bacterial strains and volatile plant extracts and therapeutic and industrial applications thereof
AU2003287028B2 (en) 2002-10-04 2008-09-04 E.I. Du Pont De Nemours And Company Process for the biological production of 1,3-propanediol with high yield
WO2005074706A1 (en) * 2004-02-03 2005-08-18 Universite De Montreal Use of live bacteria for growth promotion in animals
MXPA06013253A (es) * 2004-05-14 2007-02-28 Agtech Products Inc Metodo y composicion para reducir la enfermedad de e. coli disease y mejorar el rendimiento utilizando bacilos.
US7927586B2 (en) * 2008-07-08 2011-04-19 South Dakota State University Vaccine for porcine post-weaning diarrhea caused by enterotoxigenic Escherichia coli
HUE036545T2 (hu) 2012-07-20 2018-07-30 Prevtec Microbia Inc Nem-patogén F18 E. coli törzs és alkalmazása

Also Published As

Publication number Publication date
EP2875121A1 (en) 2015-05-27
MX2015000905A (es) 2015-09-28
HUE036545T2 (hu) 2018-07-30
CN104736695B (zh) 2017-05-24
WO2014012172A1 (en) 2014-01-23
US20160361369A1 (en) 2016-12-15
US20180008651A1 (en) 2018-01-11
CA2879155A1 (en) 2014-01-23
RU2670882C2 (ru) 2018-10-25
PT2875121T (pt) 2018-03-14
PH12015500091A1 (en) 2015-03-02
US9775867B2 (en) 2017-10-03
EP2875121B1 (en) 2018-01-03
JP6278960B2 (ja) 2018-02-14
PL2875121T3 (pl) 2018-06-29
KR20150036698A (ko) 2015-04-07
US9453195B2 (en) 2016-09-27
US10258654B2 (en) 2019-04-16
KR102171028B1 (ko) 2020-10-28
BR112015001175B1 (pt) 2022-03-03
RS57056B1 (sr) 2018-05-31
HK1209780A1 (en) 2016-04-08
RU2670882C9 (ru) 2018-12-11
BR112015001175A2 (pt) 2017-06-27
DK2875121T3 (en) 2018-04-16
RU2015105738A (ru) 2016-09-10
CN104736695A (zh) 2015-06-24
US20150152377A1 (en) 2015-06-04
PH12015500091B1 (en) 2015-03-02
CA2879155C (en) 2024-04-30
JP2015525566A (ja) 2015-09-07
EP2875121A4 (en) 2016-01-13
MX363057B (es) 2019-03-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2663019T3 (es) Cepa de E. coli F18 no patógena y uso de la misma
Fairbrother et al. Colibacillosis
Kyriakis et al. The effect of probiotic LSP 122 on the control of post-weaning diarrhoea syndrome of piglets
Hayakawa et al. Dietary administration of probiotics to sows and/or their neonates improves the reproductive performance, incidence of post‐weaning diarrhea and histopathological parameters in the intestine of weaned piglets
Robertson et al. Use of Carnobacterium sp. as a probiotic for Atlantic salmon (Salmo salar L.) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum)
Kunert Filho et al. Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC)-an update on the control
EP1715755B1 (en) Use of live bacteria for growth promotion in animals
ES3033316T3 (en) Lactobacillus salivarus strain and its use in the prevention and treatment of post-weaning diarrhea in piglets
AU2022350478A1 (en) Antimicrobial peptides
WO2004052379A1 (ja) 抗下痢症組成物
Vangroenweghe et al. Application of high energy and protein diets in combination with a live avirulent Escherichia coli F4 vaccine against post-weaning diarrhea
Chaudhary et al. Antagonistic Probioticity of Novel Bacterial Isolates from Pakistan against Fish Pathogen Pseudomonas fluorescens in Labeo rohita Fingerlings
Falkow et al. Increased survival in calves of Escherichia coli K-12 carrying an Ent plasmid
HK1209780B (en) Non-pathogenic f18 e. coli strain and use thereof
Hur et al. Age-dependent competition of porcine enterotoxigenic E. coli (ETEC) with different fimbria genes
Nhi et al. SWINE COLIBACILLOSIS IN PIG
Luppi et al. Escherichia
CN118556072A (zh) 抗菌肽
El Dimerdash et al. Studies on the effect of some probiotics in Rabbits
Duarte et al. Novel Therapeutic Strategies in Veterinary Medicine
Bustillo Early Administration of Probiotics through in Ovo Inoculation and Their Impact on Gut Microflora, Immune Response, and Growth Performance of Broiler Chicks
Sudheendra et al. Potential Application of Probiotics for Human Health Benefits
AQUACULTURE et al. Applied Tropical Agriculture
Amezcua et al. Veterinary Therapeutics• Vol. 8, No. 3, Fall 2007